JP4426091B2 - サポニンを含有する水中油型エマルション - Google Patents
サポニンを含有する水中油型エマルション Download PDFInfo
- Publication number
- JP4426091B2 JP4426091B2 JP2000508344A JP2000508344A JP4426091B2 JP 4426091 B2 JP4426091 B2 JP 4426091B2 JP 2000508344 A JP2000508344 A JP 2000508344A JP 2000508344 A JP2000508344 A JP 2000508344A JP 4426091 B2 JP4426091 B2 JP 4426091B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- vaccine composition
- composition according
- oil
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 title claims description 33
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 title claims description 17
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 title claims description 17
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 title claims description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 122
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 122
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 122
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 103
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 65
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 60
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 39
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 claims description 36
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 30
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 28
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 16
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 15
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 11
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 11
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 7
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims description 7
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 6
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 claims description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 5
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims description 5
- -1 3D-MPL Chemical compound 0.000 claims description 4
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 claims description 4
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 claims description 4
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 claims description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 2
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 claims 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims 1
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 claims 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 67
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 62
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 44
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 34
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 27
- 230000004044 response Effects 0.000 description 27
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 27
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 27
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 26
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 26
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 23
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 14
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 14
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 8
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 8
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 8
- 230000022023 interleukin-5 production Effects 0.000 description 8
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 7
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 7
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 7
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 108700023315 OspC Proteins 0.000 description 4
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 101100431670 Rattus norvegicus Ybx3 gene Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 3
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 3
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 3
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 description 2
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 description 2
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 2
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000023320 Luma <angiosperm> Species 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 101710105759 Major outer membrane porin Proteins 0.000 description 2
- 101710164702 Major outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 2
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 description 2
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 2
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 2
- ZBNRGEMZNWHCGA-PDKVEDEMSA-N [(2r)-2-[(2r,3r,4s)-3,4-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]oxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC ZBNRGEMZNWHCGA-PDKVEDEMSA-N 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000019432 tissue death Effects 0.000 description 2
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- KPQYDVAFRDWIBW-UHFFFAOYSA-N 5-(dimethylamino)naphthalene-1-sulfonohydrazide Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(=O)(=O)NN KPQYDVAFRDWIBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 1
- 101100162403 Arabidopsis thaliana ALEU gene Proteins 0.000 description 1
- 240000005528 Arctium lappa Species 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000223836 Babesia Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 241000588780 Bordetella parapertussis Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000589978 Borrelia hermsii Species 0.000 description 1
- 241000495356 Borrelia microti Species 0.000 description 1
- 241001148604 Borreliella afzelii Species 0.000 description 1
- 241000142472 Borreliella andersonii Species 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 241001148605 Borreliella garinii Species 0.000 description 1
- 241000589893 Brachyspira hyodysenteriae Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000000907 Condylomata Acuminata Diseases 0.000 description 1
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 201000005171 Cystadenoma Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100031262 Deleted in malignant brain tumors 1 protein Human genes 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000605314 Ehrlichia Species 0.000 description 1
- 241000224431 Entamoeba Species 0.000 description 1
- 241001133638 Entamoeba equi Species 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 208000002476 Falciparum Malaria Diseases 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241001076388 Fimbria Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000844721 Homo sapiens Deleted in malignant brain tumors 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001005728 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001005719 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001057131 Homo sapiens Melanoma-associated antigen D4 Proteins 0.000 description 1
- 101001130441 Homo sapiens Ras-related protein Rap-2a Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 206010071038 Human anaplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108050003117 Influenza non-structural protein (NS1) Proteins 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 241000589929 Leptospira interrogans Species 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100025050 Melanoma-associated antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025082 Melanoma-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000588622 Moraxella bovis Species 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 101100125879 Mus musculus Il5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 1
- 241000187482 Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Species 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCUVEUVIUAJXRB-UHFFFAOYSA-N OC1=C(C=C(CNC(CCCC=2SC=CC=2)=O)C=C1)OC Chemical compound OC1=C(C=C(CNC(CCCC=2SC=CC=2)=O)C=C1)OC HCUVEUVIUAJXRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710099976 Photosystem I P700 chlorophyll a apoprotein A1 Proteins 0.000 description 1
- 101000983333 Plasmodium falciparum (isolate NF54) 25 kDa ookinete surface antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010035500 Plasmodium falciparum infection Diseases 0.000 description 1
- 201000011336 Plasmodium falciparum malaria Diseases 0.000 description 1
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 description 1
- 101710132595 Protein E7 Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102100022851 Rab5 GDP/GTP exchange factor Human genes 0.000 description 1
- 102100031420 Ras-related protein Rap-2a Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101710203837 Replication-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000606695 Rickettsia rickettsii Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 1
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 1
- 241000242680 Schistosoma mansoni Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 108010011834 Streptolysins Proteins 0.000 description 1
- 238000003639 Student–Newman–Keuls (SNK) method Methods 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 1
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 1
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 101710134694 Transcriptional regulator ICP22 homolog Proteins 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- 241000589892 Treponema denticola Species 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- 241000224526 Trichomonas Species 0.000 description 1
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 1
- 241000606834 [Haemophilus] ducreyi Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 1
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 208000025009 anogenital human papillomavirus infection Diseases 0.000 description 1
- 201000004201 anogenital venereal wart Diseases 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000008350 antigen-specific antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940076810 beta sitosterol Drugs 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091016312 choline binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N ethametsulfuron-methyl Chemical compound CCOC1=NC(NC)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(=O)OC)=N1 ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 201000009163 human granulocytic anaplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 208000022340 human granulocytic ehrlichiosis Diseases 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000003866 lung sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 101710130522 mRNA export factor Proteins 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940031462 non-live vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229940099789 ospa protein Drugs 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000010686 shark liver oil Substances 0.000 description 1
- 229940069764 shark liver oil Drugs 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 1
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940093609 tricaprylin Drugs 0.000 description 1
- VLPFTAMPNXLGLX-UHFFFAOYSA-N trioctanoin Chemical compound CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC VLPFTAMPNXLGLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 1
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
本発明は、水中油型エマルションワクチン組成物に関する。特に本発明は、代謝可能油およびサポニンを包含する水中油型エマルションを基礎にしたワクチンアジュバントに関する。本発明は、エマルションの製造方法および医薬品中のその使用にも関する。
【0002】
細胞傷害性T細胞(CTL)応答の誘導は、標的細胞の感染、または腫瘍抗原の非制御化合成中に自然に起こるが、この場合、標的抗原の酵素的分解は、細胞の細胞質中で起こる。この現象は、病原体または腫瘍特異的抗原に由来する細胞質ペプチドをTh1 (内因性抗原プロセッシング)経路に入らせ、そしてMHC クラスI分子に関連した細胞の表面に存在させる。ワクチン抗原が宿主細胞の細胞質中に入らない場合には、それは細胞に取り込まれ、外因性抗原プロセッシング経路に入り、最後にMHC クラスII分子に関連した細胞の表面に存在し得る。この代替路は、一般に、Tヘルパー応答および抗原特異的抗体応答をもたらす。
【0003】
サブユニットまたは非生ワクチンによる従来のワクチン接種後、抗原は一般的に宿主細胞の細胞質に入らず、したがって内因性抗原プロセッシング経路に入らず、最終的にはCTL 応答を誘導しない。CTL 誘導は、Th-1サイトカインプロフィール応答と、特にIFN-γおよびIL-2分泌と相関すると考えられる。IFN-γ分泌は、細胞内病原体、例えば寄生体、細菌およびウイルスに対する防御的応答と関連がある。
【0004】
IFN-γによる白血球の活性化は細胞内病原体の殺害を増強し、Fc受容体の発現を増大する。直接細胞傷害性は、特にリンホトキシン(TH1 細胞のもう一つの生成物質)と共働しても起こり得る。IFN-γは、防御の主要な生得的エフェクターであるNK細胞のインデューサーでありそして生成物でもある。IFN-γまたはその他のメカニズムによるTH1 型応答は、ネズミIgG2a およびヒトIgGIイムノグロブリンイソタイプに対する選択的援助を提供する。
【0005】
国際特許出願WO95/17210は、スクアレン、α−トコフェロールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(トゥイーン80)を基礎にし、免疫刺激剤QS21を、任意に3D-MPLを処方したアジュバントエマルション系を開示する。このアジュバント処方物は、広範囲の免疫応答の非常に強力なインデューサーである。
南米の樹木であるキラヤサポナリアモリナQuillaja Saponaria Molina の樹皮から得られるアジュバント活性を有する免疫学的に活性なサポニン分画(例えばクイルA)が当業界では知られている。
【0006】
クイルAの誘導体、例えばQS21(クイルAのHPLC精製分画誘導体)およびその製造方法は、米国特許第5,057,540 号に開示されている。QS21(QA21として知られている)の中で、その他の分画、例えばQA17も開示されている。単離におけるこのようなサポニンの使用は、局所的壊死、即ち局在性組織死が障害部位で起こり、それにより疼痛をもたらす、という欠点を伴う。
【0007】
南米の樹木であるキラヤサポナリアモリナQuillaja Saponaria Molina の樹皮から得られるアジュバント活性を有する免疫学的に活性なサポニン分画が当業界では知られている。例えば、キラヤサポナリアモリナ木から得られるHPLC精製分画であるQS21およびその製造方法(QA21として既知)は、米国特許第5,057,540 号に開示されている。このようなサポニンの使用は、局所的壊死、即ち局在性組織死が障害部位で起こり、これが疼痛をもたらす、という欠点を伴う。
【0008】
3De-O-アシル化モノホスホリル脂質A(3D-MPL)は、Ribi Immunochem, Montanaにより製造された周知のアジュバントである。化学的には、それはしばしば、3De-O-アシル化モノホスホリル脂質Aと4、5または6つのアシル化鎖との混合物として供給される。それは、GB2122204Bにより教示された方法により製造され得る。3De-O-アシル化モノホスホリル脂質Aの好ましい形態は、直径 0.2μ未満の小粒子サイズを有するエマルションの形態であり、その製造方法は欧州特許EP 0 671 948 B1 に開示されている。
【0009】
ヒトへの投与に適した任意の水中油型組成物のためには、エマルション系の油相は代謝可能油を包含しなければならない。代謝可能油という用語の意味は、当業界では周知である。代謝可能とは、「代謝により転換され得る」と定義される(Dorland's Illustrated Medical Dictionary, W.B.Sanders Company, 25th edition(1974))。油は、受容者に対して有毒でなく、代謝により転換され得る任意の植物油、魚油、動物油または合成油であり得る。木の実、種子および穀物は植物油の一般的供給源である。
【0010】
合成油も本発明の一部であって、市販油、例えばNEOBEE(登録商標)およびその他も含み得る。スクアレン(2,6,10,15,19,23−ヘキサメチル−2,6,10,14,18,22−テトラコサヘキサエン)は、サメ肝油中に大量に、そしてオリーブ油、コムギ胚芽油、米糠油および酵母菌中に少量見出される不飽和油であり、そして本発明で用いるために特に好ましい油である。スクアレンは、それがコレステロールの生合成の中間体である(Meuk index, 10th Edition, entry no. 8619)という事実に基づいて、代謝可能油である。
【0011】
水中油型エマルションは、それ自体、当業界で知られており、アジュバント組成物として有用であることが示唆されてきた(EPO 399843)。
国際特許出願WO95/17210に記載されている水中油型エマルション中に処方された抗原の投与に対する免疫学的応答は、Th2 およびTh1 応答の両方が観察されることを特徴とし得る。多くの場合、Th1 型応答は疾病の予防および治療に重要であると確認されており、したがって、さらなるTh1 寄りのアジュバントが開発されるのが望ましい。これは、非常に意外なことに、余分の免疫刺激剤の付加によるのでなく、本来の構成成分の1つの低減により成し遂げられた。
【0012】
国際特許出願WO95/17210に記載されている水中油型アジュバントエマルションは、240:1 又は1250:1という高比率のスクアレン:サポニン(w/w) を有する。本発明の実施態様は、 1:1〜200:1 の範囲のスクアレン:QS21比を有し、20:1〜200:1 の範囲も好ましいが、好ましくは20:1〜100:1 、最も好ましくは実質的に48:1である。構成成分の1つのこの低減は、その結果生じる免疫応答を定性的に改良するという意外な効果を有する。この新規のアジュバント処方物を用いると、強力なTh-2型応答が保持されるが、さらにその上にこのような処方物は、IFN-γ、T細胞増殖およびCTL 応答を特徴とするTh-1型応答に特に関連した免疫応答増強を発揮する。
【0013】
本発明の好ましい一実施態様は、クイルAまたはその誘導体、例えばQS21を包含するアジュバントまたは製剤処方物、および水中油型エマルションであるが、この場合、水中油型エマルションは代謝可能油、例えばスクアレン、およびポリソルベート(ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、トゥイーン80TMを含む)を包含し、前記のエマルションは、油:QS21比が20:1〜200:1 (w/w) であることを特徴とする。別の好ましい実施態様では、アジュバント処方物はさらに、その他の免疫調節剤、例えばα−トコフェロールおよび3D-MPLを包含する。
【0014】
抗原または抗原製剤と一旦併合されたこのような処方物は、広範囲の一価または多価ワクチンとして適している。さらに、水中油型エマルションは、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート(SPAN85)を含有し得る。3De-O-アシル化モノホスホリル脂質Aは、国際特許出願92116556(SmithKline Beecham Biological s.a.)に開示されている。
【0015】
好ましくは、本発明のワクチン処方物は、抗原またはヒト病原体に対する免疫応答を発揮し得る抗原組成物を含有し、この場合、抗原または抗原組成物はHIV-1 (例えばtat 、nef 、gp120 またはgp160)、ヒトヘルペスウイルス、例えばgDまたはその誘導体、あるいは極初期タンパク質、例えばHSV1またはHSV2からのICP27 、サイトメガロウイルス(特にヒト)(例えばgBまたはその誘導体)、ロタウイルス(例えば生弱毒化ウイルス)、エプスタイン・バーウイルス(例えば、gp350 またはその誘導体)、水痘−帯状疱疹ウイルス(例えばgpI およびIE63)から、
【0016】
あるいは肝炎ウイルス、例えばB型肝炎ウイルス(例えばB型肝炎表面抗原またはその誘導体)、A型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルスおよびE型肝炎ウイルスから、あるいはその他のウイルス性病原体、例えばパラミクソウイルス;RSウイルス(例えばFおよびGタンパク質またはその誘導体)、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス(例えばHPV6、11、16、18、...)、フラビウイルス(例えば黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス)またはインフルエンザウイルス、
【0017】
あるいは細菌性病原体、例えばナイセリア種Neisseria spp.例えばN. gonorrheaおよびN. meningitidis (例えば、莢膜多糖およびその複合体、PsaA、PspA、ストレプトリシン、コリン結合タンパク質)、S. pyogenes (例えば、Mタンパク質またはその断片、C5A プロテアーゼ、リポテイコ酸)、S. agalactiae 、S. mutans ;H. aemophilus spp 、例えばB型H. influenzae (例えばPRP 及びその複合体)、分類不可能なH. influenzae (例えばOMP26 、高分子量アドヘシン、P5、P6、リポタンパク質D)、H. ducreyi;
【0018】
モラクセラの種(Moraxella spp )、例えばブランハメラ亜属のブランハメラ・カタラリス(Branhamella catarrhalis )としても知られているM.カタラリス(M. catarrhalis)(例えば高および低分子量アドヘシンおよびインバシン)、;ボルデテラ種(Bordetella spp)、例えばボルデテラ・ペルツシス(B. pertussis)(例えばペルタクチン、百日咳毒素またはその誘導体、糸状赤血球凝集素、アデニレートシクラーゼ、フィンブリエ)、ボルデテラ・パラペルツシス(B. parapertussis)およびボルデテラ・ブロンキセプチカ(B. bronchiseptica );
【0019】
ミコバクテリウムの種(Mycobacterium spp )、例えばミコバクテリウム・ツベルクロシス(M. tuberculosis )(例えば、ESAT6 、抗原85A 、-Bまたは-C)、ミコバクテリウム・ボビス(M. bovis)、ミコバクテリウム・レプラ(M.leprae)、ミコバクテリウム・アビラム(M. avium)、ミコバクテリウム・パラツベルクロシス(M. paratuberculosis )、ミコバクテリウム・スメグマチス(M. smegmatis);レジオネラの種(Legionella spp)、例えばレジオネラ・ニウモフィラ(L. pneumophila);
【0020】
エシェリキアの種(Escherchia spp)、例えば腸毒素大腸菌(例えばコロニー形成因子、熱不安定性毒素またはその誘導体、熱安定性毒素またはその誘導体)、腸出血性大腸菌、腸病原性大腸菌(例えばベロ毒素様毒素またはその誘導体);
ビブリオの種(Vibrio spp)、例えばビブリオ・コレラ(V. cholera)(例えばコレラ毒素またはその誘導体);シゲラの種(Shigella spp)、例えばシゲラ・ソンネイ(S. sonnei )、シゲラ・ダイセンテリア(S. dysenteriae)、シゲラ・フレキシネリ(S.flexnerii );
エルジニアの種(Yersinia spp)、例えばエルジニア・エンテロコリチカ(Y. enterocolitica )(例えばYop タンパク質)、エルジニア・ペスティス(Y. pestis )、エルジニア・シュードツベルクロシス(Y. pseudotuberculosis );
【0021】
カンピロバクターの種(Campylobacter spp )、例えばカンピロバクター・ジエジュニ(C. jejuni )(例えば毒素、アドヘシンおよびインバシン)およびカンピロバクター・コリ(C.coli);サルモネラの種(Salmonella spp)、例えばサルモネラ・ティフィー(S.typhi )、サルモネラ・パラチフィー(S. paratyphi)、サルモネラ・コレラエスイス(S. choleraesuis )、サルモネラ・エンテリチデス(S. enteritidis);
リステリアの種(Listeria spp)、例えばリステリア・モノシトゲネス(L. monocytogenes);ヘリコバクターの種(Helicobacter spp)、例えばヘリコバクター・ピロリ(H. pylori )(例えばウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素);
シュードモナスの種(Pseudomonas spp )、例えばシュードモナス・アエルギノーサ(P. aeruginosa );
【0022】
スタフィロコッカスの種(Staphylococcus spp)、例えばスタフィロコッカス・アウレウス(S. aureus )、スタフィロコッカス・エピデルミディス(S. epidermidis);
エンテロコッカスの種(Enterococcus spp)、例えばエンテロコッカス・フェカリス(E. faecalis )、エンテロコッカス・フェシウム(E. faecium);
クロストリジウムの種(Clostridium spp )、例えばクロストリジウム・テタニ(C. tetani )(例えば破傷風毒素およびその誘導体)、クロストリジウム・ボツリヌム(C. botulinum)(例えばボツリヌス毒素およびその誘導体);
コリネバクテリウムの種(Corynebacterium spp )、例えばコリネバクテリウム・ジフテリア(C. diphtheriae)(例えばジフテリア毒素またはその誘導体);
【0023】
ボレリアの種(Borrelia spp)、例えばボレリア・ブルガドルフェリ(B. burgdorferi)(例えばOspA、OspC、DbpA、DbpB)、ボレリア・ガリニ(B. garinii)(例えばOspA、OspC、DbpA、DbpB)、ボレリア・アフゼリ(B. afzelii)(例えばOspA、OspC、DbpA、DbpB)、ボレリア・アンデルソニ(B.andersonii)(例えばOspA、OspC、DbpA、DbpB)、ボレリア・ヘルミシー(B. hermsii);
エールリヒアの種(Ehrlichia spp )、例えばエールリヒア・エクイ(E. equi )およびヒト顆粒球性エールリヒア症;
リケッチアの種(Rickettsia spp)、例えばリケッチア・リケッシー(R. rickettsii );
【0024】
クラミジアの種(Chlamydia spp )、例えばクラミジア・トラコマチス(C. trachomatis)(例えばMOMP、ヘパリン結合タンパク質)、クラミジア・ニューモニア(C. pneumoniae )(例えばMOMP、ヘパリン結合タンパク質)、クラミジア・プシタシ(C. psittaci );
レプトスピラの種(Leptospira spp)、例えばレプトスピラ・インテロガンス(L. interrogans);
トレポネマの種(Treponema spp )、例えばトレポネマ・パリダム(T.pallidum)(例えば稀外膜タンパク質)、トレポネマ・デンチコラ(T. denticola)、トレポネマ・ヒオディセンテリア(T. hyodysenteriae )から;
【0025】
または寄生体、例えばプラスモジウムの種(Plasmodium spp)、例えばプラスモジウム・ファルシパルム(P. falciparum );
トキソプラズマの種(Toxoplasma spp)、例えばトキソプラズマ・ゴンディー(T. gondii )(例えばSAG2、SAG3、Tg34);
エントアメーバの種(Entamoeba spp )、例えばエントアメーバ・ヒストリチカ(E. histolytica);
バベシアの種(Babesia spp )、例えばバベシア・ミクロチ(B. microti);
トリパノソーマの種(Trypanosoma spp )、例えばトリパノソーマ・クルジ(T.cruzi );
ジアルジアの種(Giardia spp )、例えばジアルジア・ランブリア(G. lamblia);
【0026】
レシュマニアの種(Leshmania spp )、例えばレシュマニア・マジョー(L. major);ニューモシスティスの種(Pneumocystis spp)、例えばニューモシスティス・カリニ(P. carinii);
トリコモナスの種(Trichomonas spp )、例えばトリコモナス・バギナリス(T. vaginalis);
シストマの種(Schistosoma spp )、例えばシストマ・マンソニ(S. Mansoni)から、
あるいは酵母菌、例えばカンジダの種(Candida spp )、例えばカンジダ・アルビカンス(C. albicans );
クリプトコッカスの種(Cryptococcus spp)、例えばクリプトコッカス・ネオホルマンス(C. neoformans )から得られる。
【0027】
B型肝炎表面抗原の誘導体波頭業界で周知であり、その例としては、とりわけ、例えば欧州特許出願EP-A-414 374、EP-A-0304 578 およびEP-198-474に記載されているPreS1 、PreS2 S抗原が挙げられる。好ましい一局面では、本発明のワクチン処方物は、特にCHO 細胞中で発現される場合には、HIV-1 抗原gp120 を包含する。さらなる実施態様では、本発明のワクチン処方物は、前記のようなgD2tを包含する。
【0028】
本発明の好ましい一実施態様では、特許請求されたアジュバントを含有するワクチンは、性器疣に関与すると考えられるHPV ウイルス(HPV6またはHPV11 等)、および頸部癌に関与するHPV ウイルス(HPV16 、HPV18 等)を包含する。特に好ましい形態のワクチンは、L1粒子またはカプソマー、ならびにHPV6およびHPV11 タンパク質E6、E7、L1およびL2から選択される1つ又はそれ以上の抗原を含む融合タンパク質を包含する。最も好ましい形態の融合タンパク質は、GB95 15478.7に開示されているようなL2E7、およびGB9717953.5 に開示されているようなタンパク質D(1/3)-E7 である。
【0029】
本発明のワクチンは、マラリアを引き起こす寄生虫から得られる抗原も包含する。例えば、熱帯熱マラリア原虫プラスモディア・ファルシパルム(Plasmodia falciparum)からの好ましい抗原としては、RTS ,S およびTRAPが挙げられる。RTS は、B型肝炎表面抗原のプレS2部分の4つのアミノ酸を介してB型肝炎ウイルスの表面(S)抗原に結合されるP. falciparum のサーカムスポロゾイト(CS)タンパク質の実質的にすべてのC末端部分を包含するハイブリッドタンパク質である。その全構造は、国際特許出願PCT/EP92/02591(英国特許出願第9124390.7 号からの優先権を請求するWO93/10152下で公開された)に開示されている。
【0030】
酵母菌中で発現される場合、RTS はリポタンパク質粒子として産生され、それがHBV からのS抗原と同時発現される場合には、それはRTS 、S として既知の混合粒子を産生する。TRAP抗原は、国際特許出願PCT/GB89/00895(WO90/01496下で公開)に記載されている。本発明の好ましい実施態様は、抗原製剤がRTS 、S およびTRAP抗原の組合せを包含するマラリアワクチンである。多段階マラリアワクチンの構成成分であると思われるその他のマラリア原虫抗原は、熱帯熱マラリア原虫P. faciparum MSP1、AMA1、MSP3、EBA 、GLURP 、RAP1、RAP2、セクエストリン、PfEMP1、Pf332 、LSA1、LSA3、STARP 、SALSA 、PfEXP1、Pfs25 、Pfs28 、PFS27/25、Pfs16 、Pfs48/45、Pfs230およびマラリア原虫種におけるそれらの類似体である。
【0031】
処方物は抗腫瘍抗原も含有し、免疫療法的治療癌に有用であり得る。例えば、アジュバント処方物は、例えば前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎臓癌または黒色腫に関する腫瘍拒絶抗原とともに効用を見出す。抗原の例としては、黒色腫の治療のためのMAGE1 およびMAGE3 またはその他のMAGE抗原、PRAME 、BAGEまたはGAGEが挙げられる(Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, pps628-636; Van den Eynde et al.(1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p293 )。
【0032】
実際、これらの抗原は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌といった広範囲の腫瘍型で発現される。その他の腫瘍特異的抗原は本発明のアジュバントと用いるのに適しており、その例としては前立腺特異的抗原(PSA)またはHer-2/neu 、KSA(GA733)、MUC-1 および癌胎児性抗原(CEA)が挙げられるが、これらに限定されない。したがって、本発明の一局面では、本発明のアジュバント組成物および腫瘍拒絶抗原を包含するワクチンが提供される。
【0033】
本発明の組成物は、ボレリア種に由来する抗原を含有するワクチンを処方するために用いられる、と予測される。例えば、抗原としては、核酸、病原体由来の抗原または抗原製剤、組換え的産生タンパク質またはペプチド、ならびにキメラ融合タンパク質が挙げられる。特に、抗原はOspAである。OspAは、(Lipo-OspA )と呼ばれる宿主細胞(大腸菌)による脂質化形態の全成熟タンパク質または非脂質化誘導体であり得る。このような非脂質化誘導体としては、インフルエンザ宇するの非構造タンパク質(NS1)の最初の81個のN末端アミノ酸を有する非脂質化NS1-OspA融合タンパク質および完全OspAタンパク質が挙げられ、そして別のMDP-OspAは、3個の付加的N末端アミノ酸を有する非脂質化形態のOspAである。
【0034】
本発明のワクチンは、アレルギーの予防または治療のために用い得る。このようなワクチンは、アレルゲン特異的(例えばDer p1)およびアレルゲン非特異的抗原(例えばスタンワースデカペプチド)を包含する。
本発明の好ましい実施態様におけるQS21:3D-MPL(w/w) の比率は、典型的には1:10〜10:1、好ましくは 1:5〜5:1 であり、しばしば実質的には1:1 である。最適共働作用のための好ましい範囲は、 2.5:1〜1:1 の3D MPL:QS21である。典型的には、ヒト投与のためのワクチン中のQS21および3D-MPLの用量は、1μg〜1000μg、好ましくは10μg〜500 μg、最も好ましくは10〜100 μg/1投与量である。
【0035】
典型的には、水中油型エマルションは、2〜10%のスクアレン、2〜10%のα−トコフェロールおよび 0.4〜2%のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(トゥイーン80)を包含する。好ましくは、スクアレン:α−トコフェロールの比は、これがモル安定エマルションを提供する場合と等しいかまたはそれより小さい。ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート(SPAN85)も、 0.5〜1%のレベルで存在し得る。いくつかの場合には、本発明のワクチンは安定剤、例えばその他の乳化剤/界面活性剤、例えばカプリル酸(Merck Index 10th Edition, 登録番号1739)をさらに含有するのが有益であり、その中でもトリカプリリンが特に好ましい具体例である。
【0036】
したがって、本発明の別の実施態様は、所望の比率内でQS21および水中油型エマルションを含有するワクチンであって、これは、QS21により付与される局所的反応原性を低減するために、ステロール、好ましくはコレステロールの存在下で処方される。本発明の特定の実施態様中に存在するQS21対コレステロールの比(w/w) は、 1:1〜1:20、実質的には1:10の範囲であるよう意図される。
【0037】
国際特許出願WO95/17210に用いられる先のエマルションは、慣用的非Th1 誘導アジュバントを上回るいくつかの利点を明らかに有する。しかしながら、QS21の含入は、今まで、この強力なアジュバント反応原性を生じさせ、それにより疼痛をもたらしてきた。コレステロール含有リポソーム中へのQS21の処方は、損傷の部位に生じる壊死を防止するのに役立ち得る、ということが観察されている。この観察は、国際特許出願PCT/EP96/01464に従属する。
【0038】
本発明の実施態様では、好ましいステロールはコレステロールである。本発明の実施態様に用いられるその他のステロールとしては、β−シトステロール、スチグマステロール、エルゴステロール、エルゴカルシフェロールおよびコレステロールが挙げられる。ステロールは、当業界で周知である。コレステロールは当業界で周知であって、例えば Merck Index, 11th Edn., page341に、動物脂肪中に見出される天然ステロールとして開示されている。
【0039】
水性溶液中のQS21は、時間が経つとアジュバント不活性形態、即ちQS21-Hに分解することが知られているが、この分解は水性媒質によるOH加水分解により媒介される。このような分解は、QS21が水中油型アジュバントの水性相中に存在する場合に起こり得る。意外にも、水中油型エマルションの油相へのコレステロールの付加はその活性形態のQS21を保持する作用を有する、ということが判明したが、これはアジュバント/ワクチン処方物の保存寿命にとって明らかに有益である。本発明は、QS21が水中油型エマルションベースのアジュバント中に存在する場合、その非加水分解化アジュバント活性形態での、サポニン、好ましくはQS21の製剤の安定化方法を提供する。この方法は、水中油型エマルションの油相中へのステロール、好ましくはコレステロールの付加を包含する。
【0040】
このような製剤は、ワクチンアジュバント系として用いられ、強力ワクチン用に、一旦抗原または抗原製剤と一緒に処方される。それらは選択的にTh1 応答を誘導するのが有益である。
本発明のエマルション系は、μ以下の範囲の小油滴サイズを有する。好ましくは、油小滴サイズは、直径 120〜750nm 、最も好ましくは 120〜600nm の範囲である。
【0041】
各ワクチン投与量中のタンパク質の量は、典型的ワクチンにおいて有意の副作用を伴わずに免疫防御応答を誘導する量として選択される。このような量は、どの特異的免疫原が用いられるか、そしてそれがどのように存在するかによって変わる。一般に、各投与量は、1〜1000μgのタンパク質、好ましくは1〜500 μg、好ましくは1〜100 μg、最も好ましくは1〜50μgのタンパク質を包含する、と予測される。特定のワクチンに関する最適量は、被験者における適切な免疫応答の観察を含む標準試験により確認し得る。最初のワクチン接種後、適切な間隔で、被験者は1回または数回の追加免疫感作を受け得る。
【0042】
本発明の処方物は、予防的および治療的な両目的のために用い得る。本発明のさらなる局面では、医薬品中に用いるための本明細書中に記載したようなワクチンたが提供される。ワクチン製剤は、一般に、New Trends and Developments in Vaccines, edited by Voller et al.. University Park Press, Baltimore,Maryland, U.S.A. 1978に記載されている。
【0043】
本発明の組成物は、広範囲の供給源から得られる抗原を含有するワクチンを処方するために用いられる、と予測される。例えば、抗原としては、ヒト、細菌またはウイルスの核酸、病原体由来の抗原または抗原製剤、腫瘍由来の抗原または抗原製剤、宿主由来の抗原、例えばIgE のヒスタミン放出デカペプチド(スタンワースデカペプチドとして知られている)、組換え的産生タンパク質またはペプチド、ならびにキメラ融合タンパク質が挙げられる。
【0044】
本発明のワクチン製剤は、全身または粘膜経路を介して前記のワクチンを投与することにより、疾病に罹り易いまたは罹患中の哺乳類を予防または治療するために用い得る。これらの投与としては、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路による、あるいは経口的/栄養的、または気道への粘膜投与による注入が挙げられる。
【0045】
実施例1.水中油型エマルションアジュバントの調製
以後の実施例に用いられる水中油型エマルションアジュバント処方物は、各々、以下の水中油型エマルション構成成分を包含して製造される:5%スクアレン、5%α−トコフェロール、 2.0%ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(トゥイーン80)。
エマルションは、2倍濃縮液として以下のように調製された。免疫学的実験に用いられる実施例はすべて、余分量の構成成分および希釈剤の付加により希釈されて、1x濃縮物(240:1 のスクアレン:QS21(w/w) に等しい)、またはそのさらなる希釈液を生じる。
【0046】
要するに、トゥイーン80をリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)中に溶解して、PBS 中の2%溶液とする。100ml の2倍濃縮エマルションを提供するために、5mlのDLαトコフェロールおよび5mlのスクアレンを攪拌して十分混合する。95mlのPBS/トゥイーン溶液を油に付加して、十分混合する。その結果生じたエマルションを次に注射針に通して、最後にM110S ミクロフルイディクス機を用いてミクロ流動体化する。その結果生じた油小滴は、約 145〜180nm (PCSにより測定される平均zとして表される)のサイズを有し、「全投与量」SB62と呼ばれる。
【0047】
その他のアジュバント/ワクチン構成成分(QS21、3D-MPLまたは抗原)は単純混和物中のエマルションに付加される。
本明細書中で用いられる抗原含有ワクチンは、全投与量SB62アジュバントを用いて処方されて高スクアレン:QS21比(240:1 )を生じるか、または低量のSB62を用いて低比率処方物(48:1)を生じ、これらのアジュバント処方物はそれぞれ、SB62およびSB62’と呼ばれる。その他のワクチンは、エマルションの油相へのコレステロールの付加により任意に処方され得る(文字「c」の付加で示される)。
【0048】
実施例2.組換え抗原S,L * による免疫原性試験
種々のS,L* 含有処方物の免疫原性を比較するために、Balb/Cマウスで試験を実施した。S,L* は、ともにB型肝炎ウイルス(HB)から得られる修飾化表面抗原Lタンパク質(L* )およびSタンパク質を包含する複合抗原である。この複合抗原は、欧州特許出願EP0414374 の対象である。この免疫感作計画は、Balb/cマウスにおけるCTL の誘導を支持することが従来示されているHBトランスジェニックマウスモデルで用いられた。
【0049】
スクアレン:QS21の異なる比で、任意にコレステロールを包含して(1:10のQS21:コレステロール比(w/w) )、実施例1に前記したようなエマルション系を用いた異なるアジュバント処方物を、S,L* と組合せて、体液および細胞媒介性免疫応答(サイトカイン産生およびCTL )を誘導するそれらの能力を比較した。水酸化アルミニウム(AlOH3 )上に吸着されたS,L* をTh2 誘導対照として用いた。
【0050】
要するに、10匹のマウスの群を3週間間隔で4回、種々の水中油型エマルション系(SB62)と組合せた2μgの親油性化S,L* で筋注感作した。4回目の免疫感作後14日目に、サイトカイン(IL5 およびIFN-γ)の産生およびCTL 活性を、S,L* 抗原による脾臓およびリンパ節のin vitro再刺激後に分析した。S,L* に対する抗体応答および誘導されたイソタイププロフィールを、II後21日目およびIV後14日目にELISA によりモニタリングした。
【0051】
マウス群
10匹のBalb/Cマウスの群を下記の処方物で筋内的に免疫感作した。SB62を高(240:1 ,SB62)および低(48:1、SB62’)比率のスクアレン:QS21での抗原と一緒に、任意にコレステロール(c)を付加して処方した。
【0052】
【表1】
【0053】
免疫感作計画
0、21、42および63日目に、足に筋肉内注射して、動物を免疫感作した(100μlを注入した第5群以外の全群に対しては50μl)。免疫感作後種々の時点で、眼窩後洞から血液を採取した。77日目に、各群からの動物を屠殺し、脾臓および注射部位を排液するリンパ節(腸骨リンパ節)をin vitro再刺激のために取り出した。各群に関して3または4つの脾臓のプールおよび10LNの1つのプールを得て、in vitro検定において別々に処理した。
【0054】
マウスの血清学的知見
コーティング抗原としてHB表面抗原を用いたElisa により、抗HB抗体の定量を実施した。抗原および抗体溶液は、50μl/ウエルで用いた。抗原をPBS 中1μg/mlの最終濃度で希釈し、4℃で一夜、96ウエルミクロ滴定プレート(Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Denmark)のウエルに吸着させた。次にプレートを、1%ウシ血清アルブミンおよび 0.1%トゥイーン20(飽和緩衝液)を含有するPBS とともに37℃で1時間インキュベートした。飽和緩衝液中の血清(1/100 希釈液で出発)の2倍希釈液をHB被覆プレートに付加し、37℃で1時間30分インキュベートした。
【0055】
プレートを PBS、 0.1%トゥイーン20で4回洗浄し、そして飽和緩衝液中に1/1000希釈したビオチン複合抗マウスIgG1、IgG2a 、IgG2b またはIg(Amersham, UK)を37℃でさらに1時間30分付加した。プレートを前記と同様に洗浄し、 0.1%トゥイーン20、0.05Mクエン酸緩衝液、pH4.5 中のo−フェニレンジアミン(Sigma )0.04% H2O2 0.03%の溶液とともに20分間インキュベートした。2NのH2SO4 で反応を停止させて、492/620nm で読み取った。SoftmaxPro(4パラメーター等式を使用)による参照からELISA 力価を算出し、EU/mlで表した。
【0056】
T細胞増殖
二次免疫感作後2週間目に、マウスを屠殺し、脾臓およびリンパ節をプール(脾臓細胞に関しては3または4器官/プール、LNC に関しては10器官の1プール)中に無菌的に取り出した。2mMのL−グルタミン、抗生物質、5x10-5Mの2−メルカプトエタノールおよび1%同系正常マウス血清を含有するRPMI1640培地(GIBCO )中で、細胞懸濁液を調製した。細胞は、異なる濃度(10〜0.03μg/ml)のS,L* 抗原(25D84)を含有する丸底96ウエルプレート中の 200μl中で最終濃度2x106 細胞/ml(LNC またはSPC に関して)で培養した。
【0057】
各試験は、4回反復実施した。5% CO2中で37℃で96時間培養後、細胞を 0.5μCi/ウエルで3H−チミジン(Amersham, UK、5Ci/mmol)で18時間パルス処理した後、細胞採取器でファイバーグラスフィルター上に採取した。取り込まれた放射能を液体シンチレーションカウンターで測定した。結果はcpm (4回のウエル中の平均cpm ) で、または刺激指数(抗原を含有する細胞培養中での平均 cpm/抗原を含有しない細胞培養中の平均cpm )として表される。
【0058】
サイトカイン産生
二次免疫感作後2週間目に、マウスを屠殺し、脾臓およびリンパ節をプール(脾臓細胞に関しては3または4器官/プール、LNC に関しては10器官の1プール)中に無菌的に取り出した。2mMのL−グルタミン、抗生物質、5x10-5Mの2−メルカプトエタノールおよび5%胎仔ウシ血清を含有するRPMI1640培地(GIBCO )中で、細胞懸濁液を調製した。細胞は、異なる濃度(10〜0.01μg/ml)のS,L* 抗原(25D84 )を含有する平底24ウエル中の1ml中で最終濃度 2.5〜5x106 細胞/ml(それぞれLNC またはSPC に関して)で培養した。上清を96時間後に収穫して、Elisa によりIFNgおよびIL-5の存在に関して試験するまで凍結させた。
【0059】
IFN- γ産生
Genzyme からの試薬を用いたElisa により、 IFNγの定量を実施した。試料および抗体溶液は、50μl/ウエルで用いた。炭酸塩緩衝液、pH9.5 中で 1.5μg/mlに希釈したハムスター抗マウスIFNg 50μlを用いて、4℃で一夜、96ウエルミクロ滴定プレート(Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Denmark)を被覆した。次にプレートを、1%ウシ血清アルブミンおよび 0.1%トゥイーン20(飽和緩衝液)を含有する PBS 100μlとともに37℃で1時間インキュベートした。飽和緩衝液中のin vitro刺激からの上清(1/2で出発)の2倍希釈液を抗IFNg被覆プレートに付加し、37℃で1時間30分インキュベートした。
【0060】
プレートを PBS、 0.1%トゥイーン(洗浄緩衝液)で4回洗浄し、そして最終濃度 0.5μg/mlで飽和緩衝液中に希釈したビオチン複合ヤギ抗マウスIFNgを各ウエルに付加し、37℃で1時間インキュベートした。洗浄工程後、飽和緩衝液中に1/10000 希釈したAMDEX 複合体(Amersham)を37℃で30分間付加した。プレートを前記と同様に洗浄し、50μlのTMB (Biorad)とともに10分間インキュベートした。 0.4NのH2SO4 で反応を停止させて、450nm で読み取った。SoftmaxPro(4パラメーター等式)による標準曲線を用いて濃度を算出し、pg/mlで表した。
【0061】
IL-5 産生
Pharmingenからの試薬を用いたElisa により、IL5 の定量を実施した。試料および抗体溶液は、50μl/ウエルで用いた。炭酸塩緩衝液、pH9.5 中で1μg/mlに希釈したラット抗マウスIL5 50μlを用いて、4℃で一夜、96ウエルミクロ滴定プレート(Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Denmark)を被覆した。次にプレートを、1%ウシ血清アルブミンおよび 0.1%トゥイーン20(飽和緩衝液)を含有する PBS 100μlとともに37℃で1時間インキュベートした。飽和緩衝液中のin vitro刺激からの上清(1/2で出発)の2〜4倍希釈液を抗IL5 被覆プレートに付加し、37℃で1時間30分インキュベートした。
【0062】
プレートを PBS、 0.1トゥイーン(洗浄緩衝液)で4回洗浄し、そして最終濃度1μg/mlで飽和緩衝液中に希釈したビオチン複合ラット抗マウスIL5 を各ウエルに付加し、37℃で1時間インキュベートした。洗浄工程後、飽和緩衝液中に1/10000 希釈したAMDEX 複合体(Amersham)を37℃で30分間付加した。プレートを前記と同様に洗浄し、50μlのTMB (Biorad)とともに15分間インキュベートした。 0.4NのH2SO4 で反応を停止させて、450nm で読み取った。SoftmaxPro(4パラメーター等式)による標準曲線(組換え体マウスIL5 )を用いて濃度を算出し、pg/mlで表した。
【0063】
CTL 誘導
二次免疫感作後2週間目に、マウスを屠殺し、脾臓およびリンパ節を3〜4匹のマウスのプール(1群当たりマウス3匹の2プールおよび4匹の1プール)中に無菌的に取り出した。2mMのL−グルタミン、抗生物質、5x10-5Mの2−メルカプトエタノールおよび5%胎仔ウシ血清を含有するRPMI 1640 培地(GIBCO )中で、細胞懸濁液を調製した。細胞は、2μg/mlのS,L* および1.25%ConA supを含有する(25cm2 ファルコンフラスコ)10ml培地中で最終濃度2x106 細胞/mlで培養し、5% CO2下で37℃で8日間インキュベートした。
【0064】
CTL 検定
CTL 検定前日(7日目)に、10μg/mlでS,L* (バッチ25D84 )またはペプチドS28-39 を用いたP815細胞(106 細胞/ml)のインキュベーションにより、標的細胞を調製した。小容量で15mlファルコン試験管中で1時間インキュベーション後、細胞を24ウエルプレートに移して、37℃でインキュベートした。
検定当日、2x106 のS,L* およびS28-39 パルス処理P815細胞およびP815-Sを遠心分離して、50μlのFCS 中に再懸濁し、75μlの 51Cr (375μCi)とともに37℃で1時間(15分毎に振盪)インキュベートした。次に細胞を10mlの完全培地で4回洗浄し、4回目の洗浄後に4℃で30分間インキュベートした。次に細胞を遠心分離して、2x104 細胞/mlの濃度で再懸濁する。
【0065】
次にエフェクター細胞を遠心分離して、計数し、2x106 細胞/mlで再懸濁する。2x105 細胞/ウエル/100 μlの濃度で出発して、96V 底プレート中でエフェクター細胞の3倍連続希釈を実行する。
100 μl中の2x103 標的細胞をエフェクター細胞に付加した。この操作は3度実施する。それぞれ培地または3%トリトンX100とともに標的細胞をインキュベートすることにより、自発性または最大放出を査定する。
【0066】
プレートを700rpmで3分間遠心分離し、37℃で4時間インキュベートする。インキュベーション時間後、50μlの上清を各ウエルからルーマプレートに移して一夜乾燥後、Top カウントシンチレーションカウンターで計数する。
結果は特異的溶解として表され、以下のように算出される:
%SR=(試料平均 cpm−培地平均 cpm/最大平均 cpm−培地平均cpm)x100
【0067】
結果
血清学的知見
コーティング抗原としてHB表面抗原を用いるELISA により、体液性応答(IgおよびIgG イソタイプ)を測定した。II後21日目からのデータのみを示す。これらの結果は、図1および2に示されている。
図1は、II後14日目に、個々のマウス血清および群平均で測定されたHbs 特異的Ig抗体応答を示す。
図2は、ワクチン接種マウスにおける血清中のHbs 特異的IgG の亜イソタイプ分布を示す。
【0068】
・図1から分かるように、SB62関連処方物は、S,L* Alum処方物よりはるかに高い抗体力価を誘導する。
・個々の血清に関する統計分析(Anoval検定、Newman Keuls)は、SB62およびSB62’により誘導される抗体力価に有意差を示さないか、あるいはSB62およびSB62’により誘導される抗体力価は等しい。その結果生じる抗S,L* 抗体力価は、したがって、スクアレン:QS21比とは無関係である。
・亜イソタイプ分布プロフィール(図2に示したように)は、SB62関連処方物に関して類似する(25〜30% IgG2a)が、一方Alumは4% IgG2aを誘導するだけである。
【0069】
細胞媒介性免疫応答
細胞媒介性免疫応答(リンパ球増殖、 IFNγ/IL5 産生およびCTL )をS,L* 抗原で脾臓および腸骨リンパ節をin vitro再刺激後、IV後14日目に測定した。
サイトカイン産生
S,L* で脾臓細胞および腸骨リンパ節細胞を96時間in vitro再刺激後、サイトカイン産生(IFN-γおよびIL-5)を測定した。これらの結果を図3〜6に示す。
【0070】
図3は、脾臓細胞によるIFN-γ産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
図4は、脾臓細胞によるIL-5産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
図5は、腸骨リンパ節細胞によるIFN-γ産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
図6は、腸骨リンパ節細胞によるIL-5産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
【0071】
【表2】
【0072】
考察
・少量のエマルションはIFN-γ産生に有益である。極高レベルのINF-γが、低比率エマルションを含有する処方物により免疫感作された動物からの脾臓細胞の再刺激により産生される。これらのレベルは、全用量エマルションを用いた対応する処方物によるワクチン接種後に得られるものより有意に大きい。最強IFN-γ産生は、S,L* SB62およびSB62'cにより免疫感作された動物からの脾臓細胞の再刺激後に得られる。
【0073】
・低比率処方物(図5および6の第3および4群)の有益な作用は、脾臓から得られるものと比較して、排液中リンパ節(腸骨リンパ節)から得られる細胞で見た場合に、非常に顕著である。
・IFN-γ:IL-5比>1ということは、前TH1 応答がすべてのSB62関連処方物により誘導されることを明らかに示唆する(表1参照)。
・コレステロールを含有しないS,L* SB62処方物より高レベルのIL-5が、S,L* SB62c 処方物で免疫感作された動物により産生される。S,L* Alum免疫感作動物は、最高レベルのIL-5を産生する。
・より強力なIFN-γ産生は、低比率スクアレン:QS21処方物(SB62’およびSB62'c)が用いられる場合に観察される。
【0074】
細胞傷害性T細胞応答
抗S,L* 応答を図7に示す。
図7は、S,L* 抗原で7日間in vitro刺激された脾臓T細胞のCTL 活性を示す(3プールの特異的溶解の平均%)。
CTL 応答の考察
・すべての水中油型エマルション処方物を用いて、特異的溶解が得られる。
・より強力なCTL 応答は、3/1のような限定E/T 比で見つけた場合に、SB62’エマルションを含有する処方物を用いて得られる。
【0075】
結論
1.最強IFN-γ産生は、SB62’エマルションで免疫感作後に観察される。
2.全用量エマルションを用いる対応する処方物に比してわずかに良好なCTL 応答は、SB62’エマルションを含有する処方物により誘導される。
3.すべてのSB62関連処方物により誘導される免疫応答のTH1 型プロフィールは、IFN-γ/IL-5比によりさらに確証される。
4.SB62c 全用量またはSB62'cによる免疫感作後に誘導される抗体力価間に、有意差は観察されない。
5.SB62c およびSB62’による免疫感作後に誘導される抗体力価間に、有意差は観察されない。
6.比較可能イソタイププロフィール(25〜30% IgG2a)がすべてのSB62関連処方物を用いて得られたが、これはTH1 型HB特異的免疫応答の誘導を示唆する。
【0076】
【表3】
【0077】
実施例3.マラリア抗原 TRAP および RTS, S を用いた免疫原性試験
熱帯熱マラリア原虫Plasmodia falciparumマラリア抗原TRAPおよびRTS, Sを、各々が水中油型エマルション系をベースとする種々のアジュバントと組合せて用いる免疫感作実験。RTS は、B型肝炎表面抗原のプレS2部分の4つのアミノ酸を介してB型肝炎ウイルスの表面(S)抗原に結合されるP. falciparum のサーカムスポロゾイト(CS)タンパク質の実質的にすべてのC末端部分を包含するハイブリッドタンパク質である。
【0078】
その全構造は、国際特許出願PCT/EP92/02591(英国特許出願第9124390.7 号からの優先権を請求するWO93/10152下で公開された)に開示されている。酵母菌中で発現される場合、RTS はリポタンパク質粒子として産生され、それがHBV からのS抗原と同時発現される場合には、それはRTS, Sとして既知の混合粒子を産生する。TRAP抗原は、国際特許出願PCT/GB89/00895(WO90/01496下で公開)に記載されている。TRAP抗原はポリペプチドであり、いわゆるトロンボスポンジン関連無名タンパク質で、これは種々のP. falciparum タンパク質と相同を共有する。
【0079】
実施例1に記載したようなエマルション系を用い、異なる比率のスクアレン:QS21比で、任意にコレステロールを包含する(QS21:コレステロール比1:10)異なるアジュバント処方物を、マラリア抗原と組合せて、体液および細胞媒介性免疫応答(T細胞増殖およびサイトカイン産生)を誘導するそれらの能力を比較した。SB62を、高(240:1 、SB62)または低(48:1、SB62’)比率のスクアレン:QS21比の抗原と一緒に、任意にコレステロール(c)を付加して、処方した。
【0080】
5匹のマウス(6週齢メスマウス、C57/BL6xCBA/J [H-2k]系統)の群を種々の水中油型エマルション系(SB62)と組合せた10μgのRTS, Sまたは4μgのTRAPを用いて、14日間隔で、後足肉趾内に2回(2x50μl容量)免疫感作した。二次免疫感作後14日目に、サイトカイン(IL5 およびIFN-γ)の産生およびT細胞増殖を、マラリア抗原による脾臓およびリンパ節細胞のin vitro再刺激後に分析した。RTS, SおよびTRAPに対する抗体応答および誘導されたイソタイププロフィールを、ELISA により調べた。
【0081】
【表4】
【0082】
脚注:
SB62 −水中油型エマルション全用量
SB62’−SB62の1/5用量として図に例示された水中油型エマルション。
SB62c またはSB62'c−水中油型エマルション(いずれかの用量)+油相中コレステロール。
Vac 、Vir 、3D7 =CSタンパク質を発現し、106PFU/マウスで投与される組換え体ワクシニアウイルス構築物。
【0083】
T細胞増殖
脾臓または膝窩リンパ節細胞を無菌的に取り出して、洗浄した。2x106 /mlの細胞を含有するRPMI培地(1%熱不活性化正常マウス血清、NMS )中の 100μlの細胞を、RTS, SまたはTRAP抗原の存在下で丸底プレート中で培養した。 0.1、0.5 および 2.5μgの抗原で96時間、または2μg/mlのConAで48時間刺激後、細胞を3H−チミジン(1μCi/ウエル)で16時間標識した後、収穫し、β−カウンターで計数した。
【0084】
RPMI培地:
L−グルタミン無含有(Life technologies No.31870025 )、2mMのL−グルタミン(Life technologies No.25030024 )、50μMの2−メルカプトエタノール(Life technologies No.11360039 )、1mMのナトリウムピルベート(Life technologies No.11360039 )、1xMEM 非必須アミノ酸(10xストック、Life technologies No.11140035 )、 100IU/mlのペニシリン− 100μg/mlのストレプトマイシン(Life technologies No.15140114 )含有RPMI。
【0085】
サイトカイン検出
脾臓または膝窩リンパ節細胞を無菌的に取り出して、洗浄した。5x106 /mlの細胞を含有するRPMI培地(5%熱不活性化胎仔ウシ血清、FCS )中の1000μlの細胞を、RTS, SまたはTRAP抗原の存在下で24ウエル平底プレート中で培養した。0.5 および 2.5μgの抗原で、または4μg/mlのConAで何時間も、プレートをインキュベートした(37℃、5% CO2)。
【0086】
細胞がインキュベートされる時間の長さは、検出される特定のサイトカインによっており、IL-2は72時間、IL-5は72または96時間、そしてIFN-γは96時間刺激された。各サイトカインは、市販のELISA キットを用いて検出された(IL-2およびIFN-γはそれぞれDuoset Genzyme No.80-3573-00および80-3931-00;IL-5はPharmingenキットを用いて検出された)。
【0087】
血清学的知見
サンドイッチELISA を用いて、TRAPに向けられる抗体を分析した。ヒツジ抗TRAP抗血清をELISA プレート上に被覆し、これを用いて、 0.5μg/mlで付加されたTRAP抗原を捕捉した。実験群からのプールされた血清の滴定を付加し、インキュベートした。最後に、ビオチニル化抗マウスイソタイプ特異的抗体、その後ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼを用いて、結合TRAP特異的抗体を検出した。
直接ELISA により抗HBV 体液性応答を分析し、HBsAg をELSAプレート上に1μg/mlで被覆した。異なる実験群からのプール血清を滴定し、結合抗体を前記と同様に検出した。
【0088】
結果
抗原に対する応答におけるリンパ様細胞の増殖
抗原に対する増殖応答が、図8〜11で観察される。ワクチン製剤はすべて、抗原に対してin vitro増殖し得た局所的膝窩リンパ節中の細胞を刺激し、その大きさはコレステロールの付加とは無関係であった。
ワクチン製剤はすべて、抗原に対してin vitroで増殖した脾臓細胞を刺激し得た。刺激指数を考察した場合、脾臓中で最高応答を発揮した製剤は、低比率のスクアレン:QS21比(48:1または1/5 用量SB62)を有するものであった。
【0089】
図8は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた膝窩リンパ節細胞の増殖性応答(生数/分(CPM)形態で)を示す。
図9は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた脾臓細胞の増殖性応答(生数/分(CPM)形態で)を示す。
図10は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた膝窩リンパ節細胞の増殖性応答(刺激指数)を示す。
図11は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた脾臓細胞の増殖性応答(刺激指数)を示す。
【0090】
増殖結果の考察
図1および2は、すべてのワクチン処方物が、用量依存的方式で抗原の存在下でin vitroで増殖し得るリンパ様細胞を刺激することを明らかに示す。生cpm データは、アジュバント処方物中のコレステロールの含入が増殖応答の大きさに影響を及ぼさないことを示唆する(例えば、それぞれRTS, S/MPL/QS21/SB62およびRTS, S/MPL/QS21/SB62c と呼ばれる第1群と第6群を比較)。
cpm の実験ならびに刺激指数結果(抗原特異的増殖に関する生cpm を非特異的増殖から得られた値で割って得られる)は、最高増殖応答を生じるワクチン処方物が測定された元のリンパ球によっていることを示す。低比率のスクアレン:QS21(48:1)を含有するアジュバント処方物は、脾臓において最高増殖応答を生じる。
【0091】
抗原による刺激時の in vitro サイトカイン産生
抗原に対してin vitroで測定されるサイトカイン産生は、in vivo の免疫応答の誘導の定量的および定性的測定であり得る。概して、高レベルのIFN-γおよびIL-2はTh1 型免疫応答の測定値であると受け取られ、IL-5はTh2 型サイトカインであると考えられる。以下の図面(図12〜14)は、低比率のスクアレン:QS21を含有するSB62’(SB62 1/5用量と呼ばれる)の使用がIFN-γの産生を増強する場合に顕著な作用を有することを実証する(図6)。さらにコレステロールの付加は、抗原に対してin vitroで産生されるサイトカインプロフィールに定性的または定量的影響を及ぼさないという証拠がある。この作用は、Th1 型免疫応答の誘導、ならびに免疫療法にも有意の結論を有し得る。
【0092】
図12は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIL-2産生を示す。
図13は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIFN-γ産生を示す。
図14は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIL-5産生を示す。
【0093】
血清学的知見
Th1 型あるいはTh2 型免疫応答と相関し得る免疫の別の測定は、発揮されるIgG 亜イソタイプである。IgG1亜イソタイプの選択的刺激は一般に、Th2 型免疫応答の誘導の測定値であり、逆にIgG2a およびIgG2b はTh1 型免疫応答の測定値であると受け取られる。
プールマウス血清に関してELISA 試験を実施し、HBsAg およびTRAP特異的抗体の両方に関する中点力価を確認した。これらの図から、抗原特異的IgG1およびIgG2a 中点力価の比が算出され、体液性免疫応答のTh1/Th2 平衡の測定値であると解釈された(結果は表4に示されている)。
【0094】
【表5】
【0095】
血清学的結果の考察
マウス血清のプールを各群から分析し、HBsAg およびTRAP特異的抗体を首尾よく刺激していることが判明した。概して、HBsAg に対する抗体中点力価は、TRAPに対するものより高かった。イソタイプ分布は、2つの抗体間で異なった。全処方物中のRTS, Sは、IgG1:IgG2a 比が1より低いことにより示されるように、明瞭なTh1 パターンを発揮した。
【0096】
それに対比して、TRAP特異的抗体はTh2 型イソタイプパターンを示した。この観察に対する例外は、SB62’処方物(低比率のスクアレン:QS21を含有。SB62 1/5用量と呼ばれる)中のTRAP単独を摂取した第2群と、TRAP/RTS, Sを摂取した第9群だけであった。したがって、SB62’の使用は、Th2 型免疫応答を選択的に誘導することが分かっている抗原を用いたTh1 誘導ワクチンの設計に有用であり得る。
【0097】
実施例4.ネズミ腫瘍退行モデルを用いた免疫学的試験
この実験は、ヒトパピローマウイルス(HPV)発現腫瘍の治療のための水中油型エマルションの使用の可能性を調べた。HPV16 のE7タンパク質を発現することが知られている腫瘍細胞(TC1)をC57BL/6 の6〜8週齢マウスに接種した。これらの腫瘍細胞は、未処置のまま放置すると測定可能なサイズの腫瘍に成長した。これらの腫瘍を阻止するための水中油型エマルションアジュバントをベースにしたE7包含ワクチンの効力を調べた。ProtD1/3E7HPV16 組換え体抗原と組合せた種々の水中油型エマルション(詳細に関しては実施例1参照)SB62全用量、SB62 1/5、SB62c 全用量およびSB62 1/5の治療効力を、TC1-E7腫瘍モデルで評価した。さらにワクチン接種計画の関与も比較した。
【0098】
要するに、8〜10匹のC57BL/6 マウスの群を、5x105 TC1 腫瘍細胞(側腹部)を用いて試験した。次にマウスの群を種々の処方物と組合せた5μgのProtD1/3E7を用いて、皮下腫瘍試験後7および14日目に、足肉趾を免疫感作した。
その他のワクチン接種案を比較した:SB62中の5μgのProtD1/3E7を用いる2度のワクチン接種(腫瘍試験後14および21日目)とSB62中の5μgのProtD1/3E7を用いる4度のワクチン接種(腫瘍試験後7、14、21、28日目)。
【0099】
E7に対する抗体応答を、二次ワクチン接種後2および4週目の時点でELISA によりモニタリングした。二次ワクチン接種後2および4週目のタンパク質E7(10、1、 0.1μg/ml)による72時間の脾臓およびリンパ節細胞のin vitro再刺激リンパ増殖応答を分析した。CTL 応答は、放射線照射腫瘍細胞(TC1)またはE7−由来ペプチドを用いた脾臓細胞のin vitro再刺激後に測定した。クロム放出検定は、同系腫瘍細胞株:E7由来ペプチドでパルス化またはパルス化されないEL4、あるいはE7組換え体ワクシニアウイルスで、または野生型ワクシニアウイルスに感染したEL4 に関して、TC1 細胞で実施した。
【0100】
【表6】
【0101】
治療実験:プロトコール
・5x105 のTC1-E7発現腫瘍細胞を強い57BL/6免疫担当マウスの側腹部に皮下注射(200μl)した。
・ワクチン接種は、足肉趾内に注入(100μl:50μl/足肉趾)される5μgのProtD1/3E7 HPV16を用いて、腫瘍試験後7、14、21または28日目に実施した。各ワクチンは、異なるアジュバント:SB62、SB62c 、SB62’またはSB62'cの存在下で処方された。
・二次免疫感作後2日4週目に、マウスを屠殺して、脾臓または膝窩リンパ節を取り出し、リンパ増殖またはCTL 検定で検定した。
【0102】
比較リポソームベース処方物(DO)
ProtD1/3E7抗原(5μg)を、10倍濃縮PBS pH7.4 および水の配合物としての緩衝液付加前に、MPL (5μg)とともに30分間インキュベートした。30分後、QS21(5μg)を、1:5 のQS21/コレステロール重量比でリポソームと混合した処方物に付加した(DQと呼ばれる)。QS21の付加後30分に、50μg/mlのチオメルサルを防腐剤として処方物に付加した。インキュベーションはすべて、室温で攪拌しながら実施した。
【0103】
細胞株
TC1 (John Hopkin's University から入手)またはEL4 細胞を、10% FCSおよび添加剤:2mMのL−グルタミン、1%の抗生物質(10000U/mlペニシリン、 10000μg/mlストレプトマイシン)、1%の非必須アミノ酸および 100xの1%ピルビン酸ナトリウム(Gibco )、5 10e-5Mの2−メルカプトエタノールを含有するRPMI1640(Bio Whittaker )中で増殖させた。マウスの側腹部に注入する前に、TC1 細胞をトリプシン処理し、血清無含有培地中で洗浄した。
【0104】
腫瘍増殖
個々の腫瘍増殖を経時的に追跡調査した。2つの主な直径(A、B)を、キャリパーを用いて週に2回測定した。AxBは、「腫瘍表面積」を表し、各群の5つの値の平均として表される。
【0105】
in vitro リンパ増殖
個々の脾臓およびリンパ節プールで、リンパ増殖を実施した。赤血球を溶解するために、細胞懸濁液をトリス緩衝化アンモニウムクロリドとともに4℃で4分間インキュベートした。2x105 脾臓細胞または膝窩リンパ節細胞を、1%正常マウス血清を含有するRPMI培地中で、96ウエルミクロプレートで3回プレート化した。異なる量のE7(10〜1〜0.1 μg/ml)とともに72時間インキュベーション後、 100μlの培養上清を除去し、1μCiの3H−チミジンを含有する新鮮な培地と取り換えた。16時間パルス処理後、細胞をフィルタープレート上に収穫した。取り込まれた放射能をβカウンターで計数した。結果は、計数/分 (CPM 、3回のウエルの平均)で、または刺激指数(抗原を有する培養中の平均CPM ÷抗原を含有しない培養中の平均CPM )として表される。
【0106】
CTL 検定
2x106 脾臓細胞を2x106 放射線照射(18000 ラド)TC1 細胞とともに7日間同時培養した。標的細胞はCr51(DuPont NEN 37MBq/ml)負荷(37℃で1時間)TC1 細胞またはE7組換え体ワクシニアウイルス(John Hopkins University のT.C. Wu から受理)に感染させたEL4 細胞(同系腫瘍細胞)であった。これらの細胞から得られた結果を、野生型ワクシニアウイルスに感染させておいたEL4 標的からの結果と比較した(ワクシニア感染は、CO2 インキュベーター中で37℃で1時間、小容量の血清無含有培地中の10のMOI で実施した。新鮮な培地を付加し、細胞を使用前に一夜kインキュベートした)。
【0107】
細胞のCr51付加中に37℃で1時間、10μg/mlのE7由来ペプチド(49〜57)(QCB)を用いてEL4 細胞をパルス処理した。2000個の標的細胞を96ウエルプレート(V底nunc2-45128 )の各ウエルに付加し、100/l が最高エフェクター/標的比であった。自発的または最大Cr51放出に対する制御を6回実施して、培地中または 1.5%トリトン中に標的を存在させた。プレートはすべて、静かに遠心分離し、7% CO2中で37℃で4時間インキュベートした。50μlの上清を96wルーマプレート(Packard )上に沈着させて、O/N 乾燥させ、トップカウントカウンターで計数した。データは、式(実験的放出−自発的放出)÷(最大放出−自発的放出)x100 によりc.p.m.から算出される特異的溶解%として表される。
【0108】
血清学的知見
コーティング抗原としてE7を用いたElisa により、抗E7抗体の定量を実施した。抗原および抗体溶液は、50μl/ウエルで用いた。抗原を炭酸塩緩衝液、pH9.5 中3μg/mlの最終濃度で希釈し、4℃で一夜、96ウエルミクロ滴定プレート(Maxisorb Immuno-plate, Nunc, Denmark)のウエルに吸着させた。次にプレートを、1%ウシ血清アルブミンおよび 0.1%トゥイーン20(飽和緩衝液)を含有するPBS とともに37℃で1時間インキュベートした。飽和緩衝液中の血清(1/100 希釈液で出発)の2倍希釈液をE7被覆プレートに付加し、37℃で1時間30分インキュベートした。
【0109】
プレートを PBS、 0.1%トゥイーン20で3回洗浄し、そして飽和緩衝液中に1/5000希釈したビオチン複合抗マウスIgG1、IgG2a 、IgG2b またはIgGtot (Amersham, UK)を各ウエルに付加し、37℃でさらに1時間30分インキュベートした。洗浄工程後、飽和緩衝液中に1/5000希釈したストレプトアビジン−ビオチニル化ペルオキシダーゼ複合体(Amersham, UK)を37℃でさらに30分間付加した。プレートを前記と同様に洗浄し、TMB (テトラメチルベンジジン)とともに10分間インキュベートした。4NのH2SO4 で反応を停止させて、450nm で読み取った。SoftmaxPro(4パラメーター等式を使用)により中点希釈を算出した。
【0110】
免疫組織化学的知見
腫瘍を切り出して、アセトンおよびパラホルムアルデヒド中で固定した後、切片とした。次に5μm厚クリオスタット切片を調べ、CD4 、CD8 およびCD3 発現T細胞浸潤に関して染色した。染色モノクローナル抗体の付加前に、切片を洗浄し、PBS 中の 0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)、5%正常ウサギ血清(NRS)をしみこませた。この工程後、ラット抗CD3 、CD4 およびCD8 モノクローナル抗体を付加し、4℃で一夜インキュベートした。
【0111】
次に切片を洗浄し、ラットモノクローナル抗体との結合を、ビオチニル化ウサギ抗ラットIgにより明らかにした。室温(RT)で30分間インキュベーション後、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを付加し、RTでさらに30分間インキュベートした。ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼの結合は、RTで10分間、DAB を用いて明らかにされた。次に切片をヘマトキシリンで後染色して、エタノール、イソプロパノール、そして最後にキシロールで脱水した。
【0112】
結果
腫瘍増殖(平均腫瘍増殖/群の表示のため。図15参照)。
図15は、種々のProtD1/3 E7 含有処方物を用いた7および14日目の試験およびワクチン接種後の平均増殖を示す。
図16は、DQおよびSB62処方物中の抗原を摂取する群に関する4週間の期間に観察された平均腫瘍増殖を示し、そして異なるワクチン接種計画を比較した結果も表す。これらのワクチンは、7および14日目、14および21日目、または7、14、21および28日目に投与された。
【0113】
腫瘍退行試験の考察
ProtD1/3 E7 抗原使用
・ProtD1/3 E7 またはアジュバント単独によるワクチン接種は、TC1-E7発現腫瘍の増殖に影響を及ぼさない。
・個々の腫瘍増殖の分析は、いくつかの群で完全腫瘍拒絶を示した。
【0114】
【表7】
【0115】
腫瘍拒絶を誘導するための最良処方物は、低用量SB62’水中油型エマルションを用いて処方された。
・2回のワクチン接種より良好な治療効果が、4回ワクチン接種後に観察された。個々の腫瘍増殖の分析は、SB62を用いた4回のワクチン接種後に60%の動物がそれらの腫瘍を完全に拒絶したが、一方2回ワクチン接種を受けたマウスで完全拒絶を示したのは40%に過ぎなかった。
・一次ワクチン接種を腫瘍試験後14日目まで遅らせると、完全拒絶は観察されなかった。しかしながら、腫瘍増殖は阻害されていると思われた。
【0116】
増殖結果
・増殖性応答はこの実験では、ProtD1/3 E7 またはアジュバント単独を摂取したマウスからの脾臓またはリンパ節で観察されなかった。
・抗原特異的リンパ増殖は、アジュバントの存在下でProtD1/3 E7 を摂取したマウスの群において増大した。高増殖応答は、脾臓のDQおよびSB62’で観察された(図17および18参照)。
図17は、二次ワクチン接種後2週目に脾臓細胞で観察されたリンパ増殖を示す。
図18は、二次ワクチン接種後2週目に脾臓細胞で観察されたリンパ増殖を示す。
【0117】
血清学的知見
抗E7抗体応答:コーティング抗原としてE7タンパク質を用いたELISA により、IgG の全および亜イソタイプ(IgG1、IgG2a 、IgG2b )を測定した。二次ワクチン接種後2週目に観察された抗E7 Ig 力価を、表6に示す。図19は、二次ワクチン接種後2週目のワクチン接種マウスの血清中の異なるIgG イソタイプの相対%を示す。
【0118】
・ProtD1/3 E7 単独による2度のワクチン接種後に誘導された弱抗体応答は、アジュバントを摂取した動物では強力に増大した。最強抗体応答は、SB62で得られた。
・試験したすべてのワクチン処方物により誘導される優勢なE7特異的抗体サブイソタイプは、IgG2b (全IgG の80〜90%)であった。
【0119】
【表8】
図19は、二次ワクチン接種後2週目のワクチン接種マウスの血清中の異なるIgG イソタイプの相対%を示す。
【0120】
CTL 結果
・CTL 応答は、最終ワクチン接種後2および4週目の時点で検出された。
・マウスがタンパク質またはアジュバント単独を摂取した場合は、溶血は観察されなかった。最良の特異的溶血は、マウスがDQまたはSB62’中の抗原を摂取した場合に観察された(表9参照)。
【表9】
【0121】
免疫組織化学的結果
マウス(2匹/群)から腫瘍を取り出して、切片を凍結させた。腫瘍の凍結切片を抗CD4 および抗CD8 抗体で染色した。CD4 およびCD8+ve細胞により観察された腫瘍浸潤に関する結果を、表10に示す。
【表10】
【0122】
結論
・DQまたはSB62中のProtD-1/3 E7を摂取したマウスの群における腫瘍退行は、CD8+細胞の大量浸潤および少数のCD4+細胞の浸潤を示した。
・PBS 、抗原またはアジュバント単独を摂取した動物から取り出された腫瘍は、いかなるCD8+veリンパ球浸潤も含有しなかった。
・異なるSB62ベースの処方物中の5μgのProtD1/3による2度のワクチン接種(7、14日目)は、遠くの部位に移植された前確定E7発現腫瘍の拒絶を誘導した。
・腫瘍拒絶は抗E7特異的CTL 応答に関連する。それらの腫瘍を拒絶した個体ではわずかに良好なCTL 応答を示す傾向がある。
【0123】
・免疫化学知見は、ProtD1/3 E7+DQおよびSB62によるワクチン接種時に退行した腫瘍中にCD8+T 細胞の大量浸潤を示した。
・SB62中の5μgのProtD1/3 E7HPV16による2度のワクチン接種(腫瘍試験後14および21日目)はこれらの大型腫瘍の増殖を低減したが、しかし完全退行を誘導しなかった。
・SB62中の5μgのProtD1/3 E7HPV16による4度のワクチン接種(腫瘍試験後7、14、21および28日目)は確立された腫瘍の完全拒絶を60%の動物で誘導したが、同一アジュバントによる2度のワクチン接種後では全体で40%の拒絶が観察された。
・低用量SB62’アジュバントの使用は、抗E7抗体力価の大きさに影響を及ぼさなかったが、最高レベルの脾臓リンパ球増殖および抗E7CTL 応答を誘導した。
【0124】
本発明に対する全体的結論:
本発明は、強力なTh1 型免疫応答、特にIFN-γ産生を選択的に誘導する、ということが前記の実施例から明らかである。これらの処方物は、広範な種々の抗原に対する免疫応答を刺激することが実証されており、したがって本発明は、本明細書中に記載したものに限定されない広範な種々の病原体に用途を見出すよう意図される。
【0125】
実施例5.コレステロールの付加による QS21 の安定化
QS21-HはQS21の加水分解生成物であって、アジュバントとしてもはや活性でないと従来記載されている。それは、水性溶液からのOH- によるQS21分子の切断により生成される。この反応は、水性媒質のpHが6.5 という値より高くなると起こり、高温になるほど加速される。本特許出願に記載した水中油型エマルション(例えばSB62)は、QS21のQS21-Hへの加水分解が抑制されるような安定化作用を示すことが知られている。一定QS21の存在下での水中油型エマルションの希釈に際して、それらはこの安定特性を失い、QS21は不活性QS21-H形態に分解する。意外なことに、1/1 の比率ではQS21の改良を示さない付加的コレステロールを含有するエマルションが、1/5 希釈でさえ安定作用を保持する。
【0126】
QS21およびQS21-Hは、エマルション中に直接検定される。これは、完全処方物を化学的に誘導することにより、そしてQS21を溶解するがほとんどの当該マトリックス化合物はそのまま残す選択的抽出工程を実施することにより、成し遂げられる。検定はHPLCベースで、化合物はダンシル化される。ダンシル化は、エマルションの試料を乾燥し、 100μlの3.5mg ダンシルヒドラジン/mlC/M2/1 および 100μlの1:4 酢酸:C/M2/1をその順に付加することにより実行される。混合物をよくかき混ぜて、60℃で2時間インキュベートする。反応混合物をSpeedvac中で乾燥させる。
【0127】
それを水中の30% ACN 500μl中で再構築し、14000rpmで2分間、2回遠心分離する。次に上清を自動試料採取管中に収集する。試験中のエマルションと同一化合物を含有する混合物中にQS21およびQS21-Hを調製することにより、標準曲線を得る。
Vydac218TP54 5μ粒子サイズC18RP カラム、 250* 4.6mm で、HPLC検定を実行する。溶媒は、A:H2O +0.05% TFA(トリフルオロ酢酸)およびB:アセトニトリル+0.05% TFA。勾配表を以下に示す:
【0128】
【表11】
【0129】
流量は1ml/分である。検出は、345nm で励起を、そして515nm で発光を有する蛍光で成される。50μlの試料および標準物質を注入する。カラムヒーターをこの分離のために37℃に設定する。QS21、QS−イソおよびQS-Hに関するピークを、クロマトグラム上で識別する。
以下の組成物を有する一連の試料を分析した:
【0130】
【表12】
【0131】
種々の間隔の時間および温度(4℃および37℃)での試料のインキュベーション後に、QS21/QS21-Hの検定を実施した。このモデルの37℃での1ヶ月間のデータは、4℃で長期(例えば2年)保存後のQS21の安定性とよく相関する。
【0132】
【表13】
【0133】
前記の表に示したこの結果は、QS21の安定性を保持するに際してのこの場合のステロール(この場合はコレステロール)のSB62’への付加の効果を明らかに(7日間および1ヶ月)示している。
【図面の簡単な説明】
【図1】 図1は、II後14日目に、個々のマウス血清および群平均で測定されたHbs 特異的Ig抗体応答を示す。
【図2】 図2は、ワクチン接種マウスにおける血清中のHbs 特異的IgG の亜イソタイプ分布を示す。
【図3】 図3は、脾臓細胞によるIFN-γ産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
【図4】 図4は、脾臓細胞によるIL-5産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
【図5】 図5は、腸骨リンパ節細胞によるIFN-γ産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
【図6】 図6は、腸骨リンパ節細胞によるIL-5産生の結果を示す(3プール/群を用いて得られたデータの平均)。
【図7】 図7は、S,L* 抗原で7日間in vitro刺激された脾臓T細胞のCTL 活性を示す(3プールの特異的溶解の平均%)。
【図8】 図8は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた膝窩リンパ節細胞の増殖性応答(生数/分(CPM)形態で)を示す。
【図9】 図9は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた脾臓細胞の増殖性応答(生数/分(CPM)形態で)を示す。
【図10】 図10は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた膝窩リンパ節細胞の増殖性応答(刺激指数)を示す。
【図11】 図11は、TRAPおよびRTS, S抗原で刺激後に実験群から得られた脾臓細胞の増殖性応答(刺激指数)を示す。
【図12】 図12は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIL-2産生を示す。
【図13】 図13は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIFN-γ産生を示す。
【図14】 図14は、VII 後14日目にTRAPまたはRTS, S抗原による刺激後の脾臓細胞のIL-5産生を示す。
【図15】 図15は、種々のProtD1/3 E7 含有処方物を用いた7および14日目の試験およびワクチン接種後の平均増殖を示す。
【図16】 図16は、DQおよびSB62処方物中の抗原を摂取する群に関する4週間の期間に観察された平均腫瘍増殖を示し、そして異なるワクチン接種計画を比較した結果も表す。これらのワクチンは、7および14日目、14および21日目、または7、14、21および28日目に投与された。
【図17】 図17は、二次ワクチン接種後2週目に脾臓細胞で観察されたリンパ増殖を示す。
【図18】 図18は、二次ワクチン接種後2週目に脾臓細胞で観察されたリンパ増殖を示す。
【図19】 図19は、二次ワクチン接種後2週目のワクチン接種マウスの血清中の異なるIgG イソタイプの相対%を示す。
Claims (27)
- 抗原または抗原製剤、水中油型エマルションおよびサポニンを含むワクチン組成物であって、前記油が代謝可能油であって、代謝可能油:サポニン(w/w)の比が 1:1〜200:1 の範囲であることを特徴とするワクチン組成物。
- 代謝可能油:サポニン(w/w)の比が 1:1〜100:1 の範囲であることを特徴とする請求項1に記載のワクチン組成物。
- 前記サポニンがクイルAに由来する請求項1又は2に記載のワクチン組成物。
- 前記クイルAに由来するサポニンが、QS21である請求項3に記載のワクチン組成物。
- 前記代謝可能油がスクアレンである請求項1〜4のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- ステロールをさらに包含する請求項1〜5のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記ステロールがコレステロールである請求項6に記載のワクチン組成物。
- 1又は複数のその他の免疫調節剤をさらに含む請求項1〜7のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記免疫調節剤が3D-MPL及びα−トコフェロールから成る群から選択される請求項8に記載のワクチン組成物。
- さらに3D-MPLを含んで成りQS21:3D-MPL の比(w/w) が1:10〜10:1である請求項4に記載のワクチン組成物。
- QS21:3D-MPL の比(w/w) が 1:1〜1:2.5 である請求項10に記載のワクチン組成物。
- さらにコレステロールを含んで成り、前記サポニンがQS21であり、QS21:コレステロールの比(w/w) が 1:1〜1:20である請求項1に記載のワクチン組成物。
- 前記抗原または抗原製剤が、ヒト免疫不全ウイルス、1型単純ヘルペスウイルス、2型単純ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、A、B、CもしくはE型肝炎、RSウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、サルモネラ、ナイセリア、ボレリア、クラミジア、ボルデテラ、TB、EBV 、プラスモジウムおよびトキソプラズマから成る群から調製される請求項1〜12のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記抗原または抗原製剤が、マラリア抗原RTS, SおよびTRAPの組合せである請求項1〜12のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記抗原または抗原製剤が、腫瘍または宿主由来抗原であるか、あるいはそれらから得られる請求項1〜12のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 水中油型エマルションが1μ未満の直径を有する油小滴を含んで成る請求項1〜15のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記水中油型エマルションが直径 120〜750nm の範囲である油小滴を含んで成る請求項1〜16のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記水中油型エマルションが直径 120〜600nm の範囲である油小滴を含んで成る請求項1〜17のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 抗原または抗原組成物に対して哺乳類における細胞溶解性T細胞応答を引き起こし得る請求項1〜18のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 抗原または抗原組成物に対して哺乳類におけるインターフェロン−γ産生を刺激し得る請求項1〜18のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 医薬品中に使用するための請求項1〜20のいずれか1項に記載のワクチン組成物。
- 請求項1〜21のいずれか1項に記載のワクチン組成物の製造方法において、抗原または抗原製剤、水中油型エマルションおよびサポニンを混合することを含んで成る方法。
- 水中油型エマルション、QS21、コレステロール、3D-MPL、α−トコフェロール、および抗原または抗原製剤を混合することを含んで成る請求項1〜21のいずれか1項に記載のワクチン組成物の製造方法。
- 疾病に罹り易いまたは罹患中の個体の治療のために適当なワクチンの製造のための、請求項1〜12のいずれか1項に記載されたようなワクチン組成物の使用。
- 前記水中油型エマルションの油相中へのステロールの付加を包含する請求項1〜21のいずれか1項に記載のワクチン組成物中に存在するサポニンの安定化方法。
- 前記サポニンがQS21である請求項25に記載の方法。
- 前記ステロールがコレステロールである請求項25または26記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB9718902.1A GB9718902D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | Vaccine |
GB9718902.1 | 1997-09-05 | ||
GB9720982.9 | 1997-10-02 | ||
GBGB9720982.9A GB9720982D0 (en) | 1997-10-02 | 1997-10-02 | Vaccine |
PCT/EP1998/005715 WO1999011241A1 (en) | 1997-09-05 | 1998-09-02 | Oil in water emulsions containing saponins |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2001514208A JP2001514208A (ja) | 2001-09-11 |
JP2001514208A5 JP2001514208A5 (ja) | 2006-01-05 |
JP4426091B2 true JP4426091B2 (ja) | 2010-03-03 |
Family
ID=26312192
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000508344A Expired - Fee Related JP4426091B2 (ja) | 1997-09-05 | 1998-09-02 | サポニンを含有する水中油型エマルション |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7323182B2 (ja) |
EP (2) | EP1009382B1 (ja) |
JP (1) | JP4426091B2 (ja) |
AU (1) | AU1145699A (ja) |
CA (1) | CA2302554C (ja) |
DE (2) | DE69838992T2 (ja) |
ES (2) | ES2298316T3 (ja) |
WO (1) | WO1999011241A1 (ja) |
Families Citing this family (275)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
ES2283012T3 (es) | 1996-01-04 | 2007-10-16 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Bacterioferritina de helicobacter pylori. |
US6913749B2 (en) | 1998-11-02 | 2005-07-05 | Resistentia Pharmaceuticals Ab | Immunogenic polypeptides for inducing anti-self IgE responses |
EP1574210B1 (en) | 1999-02-26 | 2016-04-06 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Microemulsions with adsorbed macromolecules |
CN1365286A (zh) * | 1999-06-22 | 2002-08-21 | 希龙公司 | 治疗慢性乙型肝炎病毒感染的方法 |
GB9915204D0 (en) * | 1999-06-29 | 1999-09-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
GB9923176D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
JP2003514872A (ja) * | 1999-11-19 | 2003-04-22 | シーエスエル、リミテッド | ワクチン組成物 |
IT1307281B1 (it) * | 1999-11-25 | 2001-10-30 | Simonelli Giuseppe | Uso di ubichinone q10 per il trattamento locale e la prevenzione dipatalogie oftalmologiche secondarie alla terapia fotorefrattiva, |
EP2266603B1 (en) | 2000-10-18 | 2012-09-12 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Tumour vaccines |
MXPA03003690A (es) | 2000-10-27 | 2004-05-05 | Chiron Spa | Acidos nucleicos y proteinas de los grupos a y b de estreptococos. |
CA2430379A1 (en) | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Chiron Corporation | Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer |
MY134424A (en) * | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
US8481043B2 (en) | 2001-06-22 | 2013-07-09 | Cpex Pharmaceuticals, Inc. | Nasal immunization |
CA2451739A1 (en) | 2001-06-29 | 2003-01-09 | Chiron Corporation | Hcv e1e2 vaccine compositions |
GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
US20030138434A1 (en) * | 2001-08-13 | 2003-07-24 | Campbell Robert L. | Agents for enhancing the immune response |
US20030119774A1 (en) * | 2001-09-25 | 2003-06-26 | Marianna Foldvari | Compositions and methods for stimulating an immune response |
US7501134B2 (en) | 2002-02-20 | 2009-03-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules |
GB0210682D0 (en) * | 2002-05-09 | 2002-06-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel use |
AU2008200068B2 (en) * | 2002-06-10 | 2009-10-29 | Novartis Ag | Combinations comprising epothilones and pharmaceutical uses thereof |
AU2003276679A1 (en) | 2002-06-13 | 2003-12-31 | Chiron Corporation | Vectors for expression of hml-2 polypeptides |
WO2004012751A1 (ja) * | 2002-08-02 | 2004-02-12 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | 細菌細胞壁骨格成分製剤 |
OA12915A (en) * | 2002-08-26 | 2006-10-13 | Pfizer Prod Inc | Vaccine for respiratory and reproductive system infections in cattle. |
GB0220194D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Improved vesicles |
WO2004032958A1 (en) | 2002-10-11 | 2004-04-22 | Chiron Srl | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
NZ539509A (en) | 2002-10-23 | 2008-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Priming vaccine comprising a polynucleotide encoding at least one first malarial antigen and a boosting vaccine comprising at least one polypeptide comprising at least one second malarial antigen having at least one epitope in common with the first malarial antigen of the priming vaccine |
EP2279746B1 (en) | 2002-11-15 | 2013-10-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Surface proteins in neisseria meningitidis |
GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
JP2006520746A (ja) | 2002-12-27 | 2006-09-14 | カイロン コーポレイション | リン脂質を含む免疫原性組成物 |
WO2004067030A2 (en) | 2003-01-30 | 2004-08-12 | Chiron Srl | Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups |
CA2520124A1 (en) | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Chiron Corporation | Use of benzazole compounds for immunopotentiation |
WO2004087204A2 (en) | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Pfizer Products Inc. | Microfluidized oil-in-water emulsions and vaccine compositions |
GB0308198D0 (en) | 2003-04-09 | 2003-05-14 | Chiron Srl | ADP-ribosylating bacterial toxin |
PL1631264T5 (pl) | 2003-06-02 | 2018-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Kompozycje immunogenne oparte na biodegradowalnych mikrocząstkach zawierających toksoid błonicy i tężca |
US20060035242A1 (en) | 2004-08-13 | 2006-02-16 | Michelitsch Melissa D | Prion-specific peptide reagents |
ATE506963T1 (de) | 2003-10-02 | 2011-05-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Kombinationsimpfstoffe gegen meningitis |
GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
JP5600375B2 (ja) | 2004-03-09 | 2014-10-01 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス,インコーポレーテッド | インフルエンザウイルスワクチン |
KR20070008625A (ko) * | 2004-04-05 | 2007-01-17 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물 |
JP5041279B2 (ja) * | 2004-04-22 | 2012-10-03 | 株式会社 Mbr | 細菌細胞壁骨格成分を含有する製剤 |
GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
BRPI0510315A (pt) | 2004-04-30 | 2007-10-16 | Chiron Srl | integração de vacinação com conjugado meningocócico |
GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
GB0410866D0 (en) | 2004-05-14 | 2004-06-16 | Chiron Srl | Haemophilius influenzae |
EP2811027A1 (en) | 2004-05-21 | 2014-12-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Alphavirus vectors for RSV and PIV vaccines |
WO2006115509A2 (en) | 2004-06-24 | 2006-11-02 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Small molecule immunopotentiators and assays for their detection |
WO2006002422A2 (en) | 2004-06-24 | 2006-01-05 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Compounds for immunopotentiation |
EP2612679A1 (en) | 2004-07-29 | 2013-07-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae |
GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
NZ555937A (en) | 2005-01-27 | 2009-05-31 | Childrens Hosp & Res Ct Oak | GNA1870-based vesicle vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis |
GB0502095D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
GB0503337D0 (en) | 2005-02-17 | 2005-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions |
CN101203529A (zh) | 2005-02-18 | 2008-06-18 | 诺华疫苗和诊断公司 | 来自脑膜炎/脓毒症相关性大肠杆菌的蛋白质和核酸 |
SI2351772T1 (sl) | 2005-02-18 | 2016-11-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Proteini in nukleinske kisline iz Escherichia coli povezane z meningitisom/sepso |
GB0504436D0 (en) | 2005-03-03 | 2005-04-06 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
JP5869744B2 (ja) | 2005-03-23 | 2016-02-24 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | Cd4t細胞および/または改善された記憶b細胞応答を誘導するためのインフルエンザウイルスおよび水中油型エマルジョンアジュバントの使用 |
GB0513421D0 (en) | 2005-06-30 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
KR20110126726A (ko) * | 2005-10-07 | 2011-11-23 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 개과 동물의 인플루엔자의 치료를 위한 백신 및 방법 |
EP2357000A1 (en) | 2005-10-18 | 2011-08-17 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Mucosal and systemic immunizations with alphavirus replicon particles |
US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
CA2628152C (en) | 2005-11-04 | 2016-02-02 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
GB0522765D0 (en) | 2005-11-08 | 2005-12-14 | Chiron Srl | Combination vaccine manufacture |
WO2007081447A2 (en) | 2005-11-22 | 2007-07-19 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Norovirus and sapovirus antigens |
GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
CA2808919C (en) | 2005-12-22 | 2016-04-19 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Streptococcus pneumoniae capsular saccharide vaccine |
ES2536426T3 (es) | 2006-03-23 | 2015-05-25 | Novartis Ag | Compuestos de imidazoquinoxalina como inmunomoduladores |
EP2476434A1 (en) | 2006-03-30 | 2012-07-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
US10138279B2 (en) | 2006-04-13 | 2018-11-27 | Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for Bacillus anthracis vaccination |
US9839685B2 (en) | 2006-04-13 | 2017-12-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of inducing human immunodeficiency virus-specific immune responses in a host comprising nasally administering compositions comprising a naonemulsion and recombinant GP120 immunogen |
US20110206692A1 (en) | 2006-06-09 | 2011-08-25 | Novartis Ag | Conformers of bacterial adhesins |
KR101696727B1 (ko) | 2006-07-17 | 2017-01-16 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 인플루엔자 백신 |
JP2010500399A (ja) | 2006-08-16 | 2010-01-07 | ノバルティス アーゲー | 尿路病原性大腸菌由来の免疫原 |
EP2468300B1 (en) | 2006-09-26 | 2017-12-20 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
EP2086582B1 (en) | 2006-10-12 | 2012-11-14 | GlaxoSmithKline Biologicals s.a. | Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant |
CN101522218B (zh) | 2006-10-12 | 2012-09-26 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含水包油乳液佐剂的疫苗 |
DK2137210T3 (en) | 2007-03-02 | 2017-01-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hitherto unknown method and compositions |
TW200908994A (en) | 2007-04-20 | 2009-03-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
EP2687228B1 (en) | 2007-06-26 | 2017-07-19 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates |
GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
MX2010001284A (es) * | 2007-08-02 | 2010-08-31 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd | Vacunas contra la influenza con multiepitope multimerico. |
KR20100068390A (ko) | 2007-08-13 | 2010-06-23 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
KR101621837B1 (ko) | 2007-09-12 | 2016-05-17 | 노파르티스 아게 | Gas57 돌연변이 항원 및 gas57 항체 |
AU2008335457B2 (en) | 2007-12-07 | 2015-04-16 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions for inducing immune responses |
GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
CN104292312A (zh) | 2007-12-21 | 2015-01-21 | 诺华股份有限公司 | 链球菌溶血素o的突变形式 |
JP2011507816A (ja) * | 2007-12-21 | 2011-03-10 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | マラリア用ワクチン |
NZ587382A (en) | 2008-02-21 | 2012-01-12 | Novartis Ag | Meningococcal fhbp polypeptides |
EP2631245A1 (en) | 2008-03-10 | 2013-08-28 | Children's Hospital & Research Center at Oakland | Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use |
KR20110009157A (ko) | 2008-04-16 | 2011-01-27 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
US9415006B2 (en) | 2008-05-23 | 2016-08-16 | The Regents Of The University Of Michigan | Immunogenic compositions comprising nanoemulsion and hepatitis B virus immunogen and methods of using the same |
GB0815872D0 (en) | 2008-09-01 | 2008-10-08 | Pasteur Institut | Novel method and compositions |
WO2010036938A2 (en) | 2008-09-26 | 2010-04-01 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same |
EP2356225A1 (en) | 2008-12-03 | 2011-08-17 | Protea Vaccine Technologies Ltd. | GLUTAMYL tRNA SYNTHETASE (GtS) FRAGMENTS |
EP2865389A1 (en) | 2008-12-09 | 2015-04-29 | Pfizer Vaccines LLC | IgE CH3 peptide vaccine |
US8585505B2 (en) | 2008-12-15 | 2013-11-19 | Tetris Online, Inc. | Inter-game interactive hybrid asynchronous computer game infrastructure |
AU2010204139A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-08-11 | Novartis Ag | Cna_B domain antigens in vaccines against gram positive bacteria |
DK2396032T3 (en) | 2009-02-10 | 2016-12-19 | Seqirus Uk Ltd | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
AR075437A1 (es) * | 2009-02-17 | 2011-03-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica que comprende al menos un antigeno del virus del dengue inactivado y un adyuvante sin aluminio, metodo para producir dicha vacuna y su uso para preparar un medicamento |
US8568732B2 (en) | 2009-03-06 | 2013-10-29 | Novartis Ag | Chlamydia antigens |
PL2510947T3 (pl) | 2009-04-14 | 2016-09-30 | Kompozycje do immunizacji przeciwko Staphylococcus aureus | |
WO2010125480A1 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Pneumococcal vaccine and uses thereof |
WO2010132833A1 (en) | 2009-05-14 | 2010-11-18 | The Regents Of The University Of Michigan | Streptococcus vaccine compositions and methods of using the same |
CN102481312B (zh) | 2009-06-05 | 2015-07-15 | 传染性疾病研究院 | 合成的吡喃葡萄糖脂佐剂 |
EP2442826B1 (en) | 2009-06-15 | 2015-07-08 | National University of Singapore | Influenza vaccine, composition, and methods of use |
JP6110140B2 (ja) | 2009-06-16 | 2017-04-05 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン | ナノエマルションワクチン |
SG177533A1 (en) | 2009-07-07 | 2012-02-28 | Novartis Ag | Conserved escherichia coli immunogens |
CN102770443A (zh) | 2009-07-16 | 2012-11-07 | 诺华有限公司 | 脱毒大肠杆菌免疫原 |
KR20130127547A (ko) | 2009-07-30 | 2013-11-22 | 화이자 백신스 엘엘씨 | 항원성 타우 펩타이드 및 이의 용도 |
GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
GB0913681D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
IN2012DN00781A (ja) * | 2009-08-12 | 2015-06-26 | Sigmoid Pharma Ltd | |
WO2011024072A2 (en) | 2009-08-27 | 2011-03-03 | Novartis Ag | Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences |
ES2670576T3 (es) | 2009-09-03 | 2018-05-31 | Pfizer Vaccines Llc | Vacuna de PCSK9 |
WO2011031139A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | An ataq protein or a part thereof as a vaccine |
SG179037A1 (en) * | 2009-09-10 | 2012-04-27 | Merial Ltd | New vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants |
CN102695523A (zh) | 2009-09-10 | 2012-09-26 | 诺华有限公司 | 针对呼吸道疾病的组合疫苗 |
GB0917003D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Purification of bacterial vesicles |
GB0917002D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Improved shigella blebs |
AU2010302344A1 (en) | 2009-09-30 | 2012-04-26 | Novartis Ag | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
CA2779798C (en) | 2009-09-30 | 2019-03-19 | Novartis Ag | Conjugation of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides |
GB0918392D0 (en) | 2009-10-20 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Diagnostic and therapeutic methods |
BR112012010531A2 (pt) | 2009-10-27 | 2019-09-24 | Novartis Ag | "polipeptídeos de modificação meningocócica fhbp" |
GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
GB0919690D0 (en) | 2009-11-10 | 2009-12-23 | Guy S And St Thomas S Nhs Foun | compositions for immunising against staphylococcus aureus |
SA110310855B1 (ar) | 2009-11-13 | 2014-09-16 | Laboratories Leti S L Unipersonal | استخدام مصدر l3 و/ أو l5 كلقاح أو كوسيلة تشخيصية لمرض طفيلي |
WO2011067758A2 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Protea Vaccine Technologies Ltd. | Immunogenic fragments and multimers from streptococcus pneumoniae proteins |
SG10201408505SA (en) | 2009-12-22 | 2015-02-27 | Celldex Therapeutics Inc | Vaccine compositions |
WO2011080595A2 (en) | 2009-12-30 | 2011-07-07 | Novartis Ag | Polysaccharide immunogens conjugated to e. coli carrier proteins |
EP2353609A1 (en) | 2010-02-04 | 2011-08-10 | Sanofi Pasteur | Immunization compositions and methods |
GB201003333D0 (en) | 2010-02-26 | 2010-04-14 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
GB201003920D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method of treatment |
ES2910199T3 (es) | 2010-03-30 | 2022-05-11 | Childrens Hospital & Res Center At Oakland | Proteínas de unión al factor H (fHbp) con propiedades alteradas y métodos de uso de las mismas |
GB201005625D0 (en) | 2010-04-01 | 2010-05-19 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
WO2011127316A1 (en) | 2010-04-07 | 2011-10-13 | Novartis Ag | Method for generating a parvovirus b19 virus-like particle |
BR112012028548B8 (pt) * | 2010-05-07 | 2021-05-25 | Virbac | composição vacinal destinada à prevenção da forma visceral de leishmaniose e seu processo de fabricação |
WO2011154863A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Pfizer Inc. | Her-2 peptides and vaccines |
EP2942061A3 (en) | 2010-06-07 | 2016-01-13 | Pfizer Vaccines LLC | Ige ch3 peptide vaccine |
GB201009671D0 (en) * | 2010-06-10 | 2010-07-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel process |
GB201009861D0 (en) | 2010-06-11 | 2010-07-21 | Novartis Ag | OMV vaccines |
US8658603B2 (en) | 2010-06-16 | 2014-02-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for inducing an immune response |
US20130171185A1 (en) | 2010-07-06 | 2013-07-04 | Ethan Settembre | Norovirus derived immunogenic compositions and methods |
US9192661B2 (en) | 2010-07-06 | 2015-11-24 | Novartis Ag | Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles |
GB201101665D0 (en) | 2011-01-31 | 2011-03-16 | Novartis Ag | Immunogenic compositions |
US9168292B2 (en) | 2010-09-27 | 2015-10-27 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
GB201017519D0 (en) | 2010-10-15 | 2010-12-01 | Novartis Vaccines Inst For Global Health S R L | Vaccines |
SG190222A1 (en) | 2010-11-10 | 2013-06-28 | Leti Sl Lab | New adjuvant |
WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
EP2655389A2 (en) | 2010-12-24 | 2013-10-30 | Novartis AG | Compounds |
CN103517713A (zh) | 2011-02-22 | 2014-01-15 | 彼昂德瓦克斯医药有限公司 | 在改善的季节性和大流行性流感疫苗中的多聚体多表位多肽 |
WO2012131504A1 (en) | 2011-03-02 | 2012-10-04 | Pfizer Inc. | Pcsk9 vaccine |
EA027236B1 (ru) | 2011-04-08 | 2017-07-31 | Иммьюн Дизайн Корп. | Иммуногенные композиции и способы применения таких композиций для индукции гуморального и клеточного иммунного ответа |
EP2736921B1 (en) | 2011-07-25 | 2018-06-27 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Compositions and methods for assessing functional immunogenicity of parvovirus vaccines |
EP2747779A4 (en) | 2011-08-22 | 2015-04-08 | Nanobio Corp | VACCINE AGAINST HERPES SIMPLEX VIRUS IN THE FORM OF NANOEMULSION |
GB201114923D0 (en) | 2011-08-30 | 2011-10-12 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
US9561271B2 (en) | 2011-09-09 | 2017-02-07 | Nanobio Corporation | Nanoemulsion respiratory syncytial virus (RSV) subunit vaccine |
WO2013038375A2 (en) | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Novartis Ag | Methods for making saccharide-protein glycoconjugates |
WO2013038385A2 (en) | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Novartis Ag | Escherichia coli vaccine combination |
EP2758432B1 (en) | 2011-09-16 | 2019-03-06 | UCB Biopharma SPRL | Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile |
EP2780034A1 (en) | 2011-11-14 | 2014-09-24 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime-boost immunization using measles virus-based vaccines |
WO2013083753A2 (en) | 2011-12-07 | 2013-06-13 | Institut Pasteur | Identification of a swine parecho-like virus and applications |
SG11201402375VA (en) | 2011-12-08 | 2014-10-30 | Novartis Ag | Clostridium difficile toxin-based vaccine |
WO2013108272A2 (en) | 2012-01-20 | 2013-07-25 | International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology | Blood stage malaria vaccine |
ES2729967T3 (es) | 2012-02-07 | 2019-11-07 | Infectious Disease Res Inst | Formulaciones de adyuvante mejoradas que comprenden agonistas de TLR4 y métodos para usar las mismas |
AU2013224026A1 (en) | 2012-02-24 | 2014-08-21 | Novartis Ag | Pilus proteins and compositions |
RU2727476C2 (ru) | 2012-04-26 | 2020-07-21 | Новартис Аг | Антигены и антигенные композиции |
US10279026B2 (en) | 2012-04-26 | 2019-05-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antigens and antigen combinations |
EP2659908A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
EP2659906A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
EP2659907A1 (en) | 2012-05-01 | 2013-11-06 | Affiris AG | Compositions |
SG11201406592QA (en) | 2012-05-04 | 2014-11-27 | Pfizer | Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens |
EP3388835B1 (en) | 2012-05-16 | 2020-04-01 | Immune Design Corp. | Vaccines for hsv-2 |
JP2015518845A (ja) | 2012-05-22 | 2015-07-06 | ノバルティス アーゲー | 髄膜炎菌血清群xコンジュゲート |
JP2015524421A (ja) | 2012-07-24 | 2015-08-24 | サノフィ・パスツールSanofipasteur | ワクチン組成物 |
SG11201500439RA (en) | 2012-07-24 | 2015-02-27 | Sanofi Pasteur | Vaccine compositions for prevention against dengue virus infection |
MX363529B (es) | 2012-09-18 | 2019-03-27 | Novartis Ag | Vesículas de membrana externa. |
EA201590427A1 (ru) | 2012-10-02 | 2015-09-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Нелинейные сахаридные конъюгаты |
US9855324B2 (en) | 2012-10-03 | 2018-01-02 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic compositions |
PL2912186T3 (pl) | 2012-10-24 | 2021-06-14 | Platelet Targeted Therapeutics Llc | Leczenie ukierunkowane na płytki krwi |
WO2014083194A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Sanofi Pasteur | Methods for inducing antibodies |
ES2826555T3 (es) | 2012-11-30 | 2021-05-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antígenos de Pseudomonas y combinación de antígenos |
CN105209047B (zh) | 2013-04-18 | 2020-08-18 | 免疫设计股份有限公司 | 用于癌症治疗的gla单一疗法 |
CN112999344A (zh) | 2013-05-15 | 2021-06-22 | 阿尔伯达大学董事会 | E1e2 hcv疫苗及使用方法 |
US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
JP2016535989A (ja) | 2013-11-01 | 2016-11-24 | ファイザー・インク | 前立腺関連抗原を発現させるためのベクター |
KR101977449B1 (ko) | 2013-11-01 | 2019-05-10 | 유니버시티에트 이 오슬로 | 알부민 변이체 및 이의 용도 |
US10357554B2 (en) | 2013-11-11 | 2019-07-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Army | AMA-1 epitopes, antibodies, compositions, and methods of making and using the same |
EP3068426B1 (en) | 2013-11-13 | 2020-02-12 | University Of Oslo | Outer membrane vesicles and uses thereof |
US11452767B2 (en) | 2013-11-15 | 2022-09-27 | Oslo Universitetssykehus Hf | CTL peptide epitopes and antigen-specific t cells, methods for their discovery, and uses thereof |
WO2015077434A2 (en) | 2013-11-20 | 2015-05-28 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Pan pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation |
WO2015077442A2 (en) | 2013-11-20 | 2015-05-28 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Grass pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation |
WO2015092710A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Contralateral co-administration of vaccines |
US11801223B2 (en) | 2013-12-31 | 2023-10-31 | Access To Advanced Health Institute | Single vial vaccine formulations |
US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
MX2016009464A (es) | 2014-01-21 | 2017-01-16 | Immune Design Corp | Composiciones para el uso en el tratamiento de afecciones alergicas. |
PL3096785T3 (pl) | 2014-01-21 | 2021-03-08 | Pfizer Inc. | Kompozycje immunogenne zawierające skoniugowane antygeny sacharydów otoczkowych i ich zastosowania |
WO2015123291A1 (en) | 2014-02-11 | 2015-08-20 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Pcsk9 vaccine and methods of using the same |
WO2015131053A1 (en) | 2014-02-28 | 2015-09-03 | Alk-Abelló A/S | Polypeptides derived from phl p and methods and uses thereof for immune response modulation |
WO2016014719A1 (en) | 2014-07-23 | 2016-01-28 | Children's Hospital & Research Center Oakland | Factor h binding protein variants and methods of use thereof |
ES2924988T3 (es) | 2014-10-10 | 2022-10-13 | Univ Michigan Regents | Composiciones con nanoemulsiones para prevenir, inhibir o eliminar una enfermedad alérgica e inflamatoria |
AR102547A1 (es) | 2014-11-07 | 2017-03-08 | Takeda Vaccines Inc | Vacunas contra la enfermedad de manos, pies y boca y métodos de fabricación y su uso |
AR102548A1 (es) | 2014-11-07 | 2017-03-08 | Takeda Vaccines Inc | Vacunas contra la enfermedad de manos, pies y boca y métodos de fabricación y uso |
EP3244917B1 (en) | 2015-01-15 | 2023-04-19 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines |
CN107530416A (zh) | 2015-03-05 | 2018-01-02 | 西北大学 | 非神经侵染的病毒及其用途 |
AU2016271857B2 (en) | 2015-06-03 | 2020-05-28 | Affiris Ag | IL-23-P19 vaccines |
JP2018522885A (ja) | 2015-07-07 | 2018-08-16 | アフィリス・アクチェンゲゼルシャフトAffiris Ag | IgE介在性疾患の処置および予防のためのワクチン |
MY192183A (en) | 2015-07-21 | 2022-08-05 | Pfizer | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
US20180256633A1 (en) | 2015-09-18 | 2018-09-13 | Rijksuniversiteit Groningen | Long chain inulin for stimulating an immune response |
GB201518668D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic Comosition |
GB201518684D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
JP6884145B2 (ja) | 2015-11-20 | 2021-06-09 | ファイザー・インク | 肺炎連鎖球菌ワクチンにおいて用いるための免疫原性組成物 |
ES2811523T3 (es) | 2016-01-19 | 2021-03-12 | Pfizer | Vacunas contra el cáncer |
WO2017158421A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | University Of Oslo | Anti-viral engineered immunoglobulins |
JP7155008B2 (ja) | 2016-03-14 | 2022-10-18 | ウニヴァーシテテット イ オスロ | 変化されたFcRnを有する改変された免疫グロブリン |
WO2017201390A1 (en) | 2016-05-19 | 2017-11-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Novel adjuvant compositions |
GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
US11780924B2 (en) | 2016-06-21 | 2023-10-10 | University Of Oslo | HLA binding vaccine moieties and uses thereof |
MX2019002178A (es) | 2016-08-23 | 2019-09-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Peptidos de fusion con antigenos enlazados a fragmentos cortos de cadena invariante (cd74). |
GB201614799D0 (en) | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
EP3518966A1 (en) | 2016-09-29 | 2019-08-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection |
WO2018096396A1 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
GB201620968D0 (en) | 2016-12-09 | 2017-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
CN110198735A (zh) | 2017-01-20 | 2019-09-03 | 辉瑞公司 | 用于肺炎球菌疫苗中的免疫原性组合物 |
SG11201911930SA (en) | 2017-06-11 | 2020-01-30 | Molecular Express Inc | Methods and compositions for substance use disorder vaccine formulations and uses thereof |
WO2018232257A1 (en) | 2017-06-15 | 2018-12-20 | Infectious Disease Research Institute | Nanostructured lipid carriers and stable emulsions and uses thereof |
WO2019048928A1 (en) | 2017-09-07 | 2019-03-14 | University Of Oslo | VACCINE MOLECULES |
US12005112B2 (en) | 2017-09-07 | 2024-06-11 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
MX2020004543A (es) | 2017-11-03 | 2020-09-18 | Takeda Vaccines Inc | Vacunas contra el zika, composiciones inmunogenicas y metodos que las utilizan. |
GB201721069D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B Immunisation regimen and compositions |
GB201721068D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B immunisation regimen and compositions |
GB201721582D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | S aureus antigens and immunogenic compositions |
GB201721576D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hla antigens and glycoconjugates thereof |
US11633471B2 (en) | 2018-03-06 | 2023-04-25 | Unm Rainforest Innovations | Compositions and methods for reducing serum triglycerides |
CN112638936A (zh) | 2018-06-12 | 2021-04-09 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 腺病毒多核苷酸和多肽 |
WO2020030572A1 (en) | 2018-08-07 | 2020-02-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Processes and vaccines |
US20210220462A1 (en) | 2018-08-23 | 2021-07-22 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic proteins and compositions |
US11260119B2 (en) | 2018-08-24 | 2022-03-01 | Pfizer Inc. | Escherichia coli compositions and methods thereof |
JP2022512345A (ja) | 2018-12-12 | 2022-02-03 | ファイザー・インク | 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖-タンパク質コンジュゲートおよびその使用 |
EP3897846A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Methods of inducing an immune response |
JP7239509B6 (ja) | 2019-02-22 | 2023-03-28 | ファイザー・インク | 細菌多糖類を精製するための方法 |
CN113573730A (zh) | 2019-03-05 | 2021-10-29 | 葛兰素史密斯克莱生物公司 | 乙型肝炎免疫方案和组合物 |
CA3136278A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
CA3141577A1 (en) | 2019-05-25 | 2020-12-03 | Infectious Disease Research Institute | Composition and method for spray drying an adjuvant vaccine emulsion |
EP3770269A1 (en) | 2019-07-23 | 2021-01-27 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Quantification of bioconjugate glycosylation |
KR20220092572A (ko) | 2019-11-01 | 2022-07-01 | 화이자 인코포레이티드 | 에스케리키아 콜라이 조성물 및 그 방법 |
CN114630671A (zh) * | 2019-11-05 | 2022-06-14 | 佐剂技术公司 | 水痘带状疱疹 |
CN111057738A (zh) * | 2020-01-02 | 2020-04-24 | 浙江大学 | C2c12细胞在疫苗佐剂机制研究中的用途和研究分析方法 |
NL2030835B1 (en) | 2020-01-24 | 2022-12-29 | Aim Immunotech Inc | Methods, compositions, and vaccinces for treating a virus infection |
CA3171864A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Pfizer Inc. | Purification of saccharides |
CN115605498A (zh) | 2020-02-23 | 2023-01-13 | 辉瑞公司(Us) | 大肠杆菌组合物及其方法 |
EP4114848A4 (en) | 2020-02-26 | 2024-04-03 | Versitech Limited | PD-1-BASED VACCINES AGAINST CORONAVIRUS INFECTION |
MX2023004912A (es) | 2020-10-27 | 2023-05-16 | Pfizer | Composiciones de escherichia coli y metodos de las mismas. |
KR20230097160A (ko) | 2020-11-04 | 2023-06-30 | 화이자 인코포레이티드 | 폐렴구균 백신에 사용하기 위한 면역원성 조성물 |
WO2022101745A2 (en) | 2020-11-10 | 2022-05-19 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
US20220202923A1 (en) | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Pfizer Inc. | E. coli fimh mutants and uses thereof |
WO2022147373A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibody-guided pcsk9-mimicking immunogens lacking 9-residue sequence overlap with human proteins |
IL305313A (en) | 2021-02-19 | 2023-10-01 | Sanofi Pasteur | Recombinant meningococcal B vaccine |
EP4310171A1 (en) | 2021-03-16 | 2024-01-24 | Osaka University | Novel medical technique using follicular t-cells |
WO2022196699A1 (ja) | 2021-03-16 | 2022-09-22 | 国立大学法人大阪大学 | SARS-CoV-2ウイルスに特異的な濾胞性ヘルパーT細胞(Tfh) |
BR112023023671A2 (pt) | 2021-05-28 | 2024-02-06 | Pfizer | Composições imunogênicas compreendendo antígenos de sacarídeo capsular conjugados e usos dos mesmos |
TW202306969A (zh) | 2021-05-28 | 2023-02-16 | 美商輝瑞大藥廠 | 包含結合之莢膜醣抗原的免疫原組合物及其用途 |
CA3237496A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Matrivax, Inc. | Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof |
WO2023135515A1 (en) | 2022-01-13 | 2023-07-20 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
WO2023161817A1 (en) | 2022-02-25 | 2023-08-31 | Pfizer Inc. | Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides |
WO2023218322A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Pfizer Inc. | Process for producing of vaccine formulations with preservatives |
WO2024110827A1 (en) | 2022-11-21 | 2024-05-30 | Pfizer Inc. | Methods for preparing conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
WO2024110839A2 (en) | 2022-11-22 | 2024-05-30 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
WO2024116096A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Pfizer Inc. | Pneumococcal conjugate vaccine formulations |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU991634A1 (ru) * | 1980-06-05 | 1995-06-09 | Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт | Способ приготовления противовирусных вакцин |
JPS591405A (ja) * | 1982-06-28 | 1984-01-06 | Shiseido Co Ltd | 乳化組成物 |
US5057540A (en) * | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
GB8819209D0 (en) * | 1988-08-12 | 1988-09-14 | Research Corp Ltd | Polypeptide & dna encoding same |
DK0454735T3 (da) * | 1989-01-23 | 1996-10-07 | Auspharm Int Ltd | Vaccine sammensætning |
US5178862A (en) * | 1989-12-01 | 1993-01-12 | Parhelion Corporation | Canine distemper virus vaccine and method of preparation |
US5585103A (en) | 1991-07-25 | 1996-12-17 | Idec Pharmaceutical Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
FR2713906B1 (fr) | 1993-12-20 | 1996-08-30 | Moulinex Sa | Distributeur automatique de mouture. |
GB9326253D0 (en) * | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
JPH08605A (ja) | 1994-06-16 | 1996-01-09 | Hitachi Medical Corp | X線断層像撮像装置 |
JP3308397B2 (ja) | 1994-07-07 | 2002-07-29 | 住友ベークライト株式会社 | 半導体封止用エポキシ樹脂組成物 |
UA56132C2 (uk) * | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
TR199801531T2 (xx) * | 1996-02-09 | 1998-10-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Zoster vir�s geni ve �r�n�ne kar�� a��lar. |
GB9718901D0 (en) * | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
-
1998
- 1998-09-02 DE DE1998638992 patent/DE69838992T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-02 ES ES02018002T patent/ES2298316T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-02 WO PCT/EP1998/005715 patent/WO1999011241A1/en active IP Right Grant
- 1998-09-02 CA CA 2302554 patent/CA2302554C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-02 ES ES98954264T patent/ES2201551T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-02 AU AU11456/99A patent/AU1145699A/en not_active Abandoned
- 1998-09-02 EP EP19980954264 patent/EP1009382B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-02 JP JP2000508344A patent/JP4426091B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-02 DE DE1998615692 patent/DE69815692T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-02 EP EP20020018002 patent/EP1279401B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-05-06 US US10/139,815 patent/US7323182B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-01-28 US US12/020,719 patent/US20080160047A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1009382A1 (en) | 2000-06-21 |
DE69815692T2 (de) | 2004-04-29 |
AU1145699A (en) | 1999-03-22 |
EP1009382B1 (en) | 2003-06-18 |
ES2201551T3 (es) | 2004-03-16 |
JP2001514208A (ja) | 2001-09-11 |
DE69838992D1 (de) | 2008-02-21 |
EP1279401B1 (en) | 2008-01-09 |
WO1999011241A1 (en) | 1999-03-11 |
DE69815692D1 (de) | 2003-07-24 |
US20030095974A1 (en) | 2003-05-22 |
ES2298316T3 (es) | 2008-05-16 |
US7323182B2 (en) | 2008-01-29 |
CA2302554A1 (en) | 1999-03-11 |
US20080160047A1 (en) | 2008-07-03 |
DE69838992T2 (de) | 2008-12-24 |
CA2302554C (en) | 2007-04-10 |
EP1279401A1 (en) | 2003-01-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4426091B2 (ja) | サポニンを含有する水中油型エマルション | |
US6372227B1 (en) | Vaccines | |
US7169391B2 (en) | Vaccines | |
JP2002504106A (ja) | オイル・イン・ウォーターワクチン組成物 | |
US20040067236A1 (en) | Immunogenic compositions comprising liver stage malarial antigens | |
Siegrist et al. | Antigen-presentation systems, immunomodulators, and immune responses to vaccines | |
MXPA99011439A (en) | Oil in water vaccine compositions | |
CZ447699A3 (cs) | Vakcína typu olej ve vodě | |
MXPA00009887A (en) | Adjuvant compositions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050725 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050725 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090602 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20091110 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20091210 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121218 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131218 Year of fee payment: 4 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |