CZ447699A3 - Vakcína typu olej ve vodě - Google Patents

Vakcína typu olej ve vodě Download PDF

Info

Publication number
CZ447699A3
CZ447699A3 CZ19994476A CZ447699A CZ447699A3 CZ 447699 A3 CZ447699 A3 CZ 447699A3 CZ 19994476 A CZ19994476 A CZ 19994476A CZ 447699 A CZ447699 A CZ 447699A CZ 447699 A3 CZ447699 A3 CZ 447699A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
oil
water emulsion
vaccine
adjuvant
triglyceride
Prior art date
Application number
CZ19994476A
Other languages
English (en)
Inventor
Nathalie Garcon
Patricia Marie Christine Aline Francoise Momin
Original Assignee
Smithkline Beecham Biologicals S. A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Biologicals S. A. filed Critical Smithkline Beecham Biologicals S. A.
Priority to CZ19994476A priority Critical patent/CZ447699A3/cs
Publication of CZ447699A3 publication Critical patent/CZ447699A3/cs

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Toto řešení se zabývá zlepšením stabilních emulsí oleje ve vodě, kde olejové kapky mají střední průměr 300-600 nm, olejová fáze obsahuje squalen, α-tokoferol a triglycerid. Dále se řešení zabývá užitímtěchto emulsíjako pomocných prostředků vakcíny

Description

Oblast techniky
Vynález se týká zdokonalení vakcíny typu olej ve vodě.Zejména se předkládaný vynález týká pomocného prostředku vakcíny, založeném na emulsi oleje ve vodě, která obsahuje metabolisovatelný olej squalen, α-tokoferol, TWEEN 80, který byl zlepšen začleněním tríglycerídu. Dále tyto pomocné prostředky pro vakcínu mohou popřípadě obsahovat imunologicky aktivní složku QuilA ( výhodně QS21 ) a 3D-MPL.
Dosavadní stav techniky
Trikaprylin ( C21H50O6 ) je olej původem z tríglycerídu a je znám v oboru( The Lipid Handbook (1986) Eds. Gunstone, F. Harwood,
J. and Padley, F. vydavatel Chapman and Hal.1, stránky 368-377) .
QS21 je HPLC čištěná netoxická složka saponinu z kůry stromu Quillaja Saponaría Molina z Jižní Ameriky. Způsob jeho výroby je popsán ( také známý jako QA21) v US č.5,057,540.
De-O-acylovaný monofosforyl lipid A je dobře známý pomocný prostředek, vyráběný v Ribi Immunochem v Montaně. Chemicky je zastoupený jako směs 3-De-O-acylovaného monofosforylu lipidu A s 4, 5 nebo 6 acylovanými řetězci. Obdobně může být tento pomocný prostředek vyrobený podle GB 2,220,211 (Ribi). Výhodná forma 3-DEO-acylovaného monofosforylu lipidu A a jeho způsob výroby je popsán v mezinárodní patentové přihlášce č.WO 92/116556.
Emulse oleje ve vodě jsou samy o sobě dobře známy v oboru, jsou navrhovány jako výhodné pomocné prostředky (EPO 399843).
Mezinárodní patentová přihláška č. WO 95/17210 popisuje systém emulse, založený na squalenu, oc-tokoferolu a TWEENU 80, popřípadě sestavený s imunostimulancii QS21 a/nebo 3D-MPL. Toto jsou velmi silní vyvolavatelé z širokého pásma imunitních reakcí, systému.Indukce CTL reakcí probíhají přirozeně během infekce cílových buněk nebo nekontrolované synthese nádorových antígenů, přičemž enzymatická degradace cílových antigenů probíhá v buněčné cytoplasmě. Tento jev umožňuje cytoplasmatickým bílkovinám , které jsou získané z patogenů nebo nádorových specifických antigenů, vstoupit do dráhy Thl a být přítomen na povrchu buněk spojených s molekulou MHC skupiny I. Jestliže antigen vakcíny nevstupuje a nezdvojuje se uvnitř hostitelské buňky, pak vstoupí do dráhy Th2 a nakonec bude přítomen na povrchu buněk spojených s molekulou MHC skupiny II. Tato jiná cesta má hlavně za výsledek reakce pomocných T buněk a vznik protilátek specifických pro antigeny.
Jak zmíněno výše, antigen specifický pro patogen není po vakcinaci v cytoplasmě hostitelské buňky a tudíž nevstoupí do dráhy Thl a nakonec vyvolá reakcí CTL. Zjištěný ukazatel, že reakce Thl je stimulována, je zesílená produkce cytokinů typu Thl, například IFN-γ a IL-2. Sekrece IFN-γ je spojována s ochrannými reakcemi proti nitrobuněčným patogenům, které zahrnují parazity, bakterie a viry. Aktivace leukocytů IFN-γ zesiluje útlum nitrobuněčných patogenů a zvyšuje expresi Fc receptoru. Může se také vyskytovat přímá cytotoxicita, zejména v součinnosti s lymfotoxinem ( jiný produkt Thl buněk) . IFN-γ je také jak vyvolavatel tak produkt NK buněk, které jsou vyššími přirozenými efektory ochrany. Thl typ reakcí, přes IFN-γ nebo jiným způsobem, poskytuje přednostní pomoc IgG2a isotypům imunoglobulínů myší.
Emulse oleje ve vodě, zmíněné ve výše uvedené patentové přihlášce ( mezinárodní patentová přihláška č. WO 95/17210 ), pokud jsou tvořeny s 3D-MPL a QS21, pak jsou mocnými vyvolavateli Thl typu imunitních reakcí. Tudíž, pokud jsou tyto pomocné látky spojovány s antigenem, přednostně stimulují podtyp IgG spojovaný s Thl reakcemi (myší IgG2a) a také budou vyvolávat významné hladiny produkce IFN-γ a reakce antigen specifických cytotoxických T lymfocytů (CTL).
• · • ·
Je významné pozorování, že základní prostředek oleje ve vodě /QS21/3D-MPL může vyvolávat mohutné reakce cytolytických T lymfocytů, protože tyto reakce v určitých modelech na zvířatech ukazují vyvolání ochrany proti nemocím.
Příklady popisované ve výše zmíněné mezinárodní patentové přihlášce č. WO 95/17210, srovnávají různé způsoby zpracování, které vedou k olejovým kapkám odlišných průměrů. Přípravky, které mají částice o průměru kolem 500 nm, jak měřené fotonovou korelační spektroskopií (distribuce hmoty), vykazují lepší pomocné schopnosti. Tato práce osvětlila velký užitek k získání pomocné látky s větším rozměrem olejové kapky, v době zvýšených titrů protilátek IgG2a/b a buňkami zprostředkované imunity.
Emulse dle mezinárodní patentové přihlášky č. WO 95/17210, jejíž užití je probíráno výše, jasně ponechávají velké výhody nad běžnými pomocnými prostředky nevyvolávajícími Thl. Nehledě na skutečnost, že větší částice vyniknou mezi přípravky, ježto mají lepší rozměr kapek k vyvolání imunitních reakcí, trpí nevýhodou z nedostatku stability. Na neštěstí, pro velké rozměry olejových kapek v emulsi, i když jsou užitečné pro indukci imunitních reakcí, emulse se rozrušuje. Ovšem, za účelem dosažení homogenního vakcinačního přípravku, emulse má být vyráběna přímo před užitím.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález řeší problém nestability emulse a zachovává výhodný průměr velikosti olejových kapek ve vodě pro optimální účinnost. Ta může být dosažena prostředkem emulse oleje ve vodě za přítomnosti triglyceridového oleje.
Emulse oleje ve vodě v předkládaném vynálezu jsou stabilní. Průměr olejových kapek tak setrvává v relativně konstantní hladině delší dobu. Výhodou je, že emulse v předkládaném vynálezu nebudou tvořit pěnu nebo se rozdělovat do dvou fází, po období 1 roku, při 4°C a nejvíce výhodně po dobu 2 let. Tudíž v jednom výhodném provedení předkládaný vynález poskytuje vakcínu nebo farmaceutický • · · · « ·
• · · · • · · · • · · · ·· ·* prostředek zahrnující antigen ve spojení s 3-De-O-acylovanm monofosforylem lipidu A, QS21 a triglyceridem a emulsi oleje ve vodě, kde triglyceridem může být trikaprylin a emulsi oleje ve vodě, která zahrnuje metabolisovatelný olej (jako je squalen),atokoferol a TWEEN 80. Takový prostředek je vhodný pro široké rozmezí monovalentních nebo polyvalentních vakcín. Dále emulse oleje ve vodě může obsahovat spán 85. Výhodná forma 3-De-Oacylovaného monofosforylu lipidu A je popsána v Mezinárodní patentové přihlášce vydané pod č. 92116556 SmithKline Beecham Biologicals s.a.
Důležité hledisko vynálezu je rozmezí velikosti olejových kapek, zjištěné ve stabilní emulsí oleje ve vodě. Je uvažováno, že provedení tohoto vynálezu bude v rozmezí 300-600nm, výhodně zejména kolem 350-550nm v průměru a nejvíce výhodně zejména 450500nm v průměru měřeno fotonovou korelační spektroskopií. Ačkoliv mnoho příkladů zde popisovaných má rozměry kapek v rozmezí 500nm, bylo by oceňováno odborníky, že vynález se týká emulsí oleje ve vodě, kde olejové kapky jsou větší než zejména 500nm v průměru, tedy olejové kapky mohou mít rozměry 600nm a více. Tudíž, průměr olejových kapek může být v rozmezí zejména 500-600nm. Je stanoveno zejména ve vztahu k vynálezu, že z daného množství kapek je více jak 80% stanovených rozměrů, výhodně více jak 90% a nejvíce výhodně více jak 95%.
Za účelem k podávání některých prostředků oleje ve vodě člověku, má olejová fáze emulsního systému obsahovat metabolisovatelný olej. Význam pojmu metabolisovatelný olej je v oboru dobře znám. Metabolisovatelný může být definováno jako „mající schopnost transformovat se během metabolismu (Dorlanďs Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 25th edition (1974)) . Tento olej může být rostlinný, rybí, živočišný nebo syntetický. Není toxický pro příjemce a je schopný se během metabolismu transformovat. Obecnými zdroji rostlinného oleje jsou ořechy, semena a obilí. Syntetické oleje jsou také součástí vynálezu a mohou zahrnovat komerčně dostupné oleje jako je NEOBEE® • ·
• ·
a další. Squalen (2,6,10,15,19,23-hexametyl-2, 6,10,14,18,22tetrakosahexaen) je nenasycený olej, který se nachází ve velkém množství v tuku žralocích jater a ve větším množství v olivovém oleji, v oleji zárodku pšenice, v oleji rýžových otrub a v kvasnicích. Pro užití je v tomto vynálezu mimořádně dávána přednost tomuto oleji. Squalen je metabolisovatelný olej a podstatná je skutečnost, že je meziproduktem v biosynthese cholesterolu ( Merck index, 10th Edition, entry no. 8619).
Emulse oleje ve vodě mohou být použity samotné nebo s jinými pomocnými látkami nebo imunostimulancii a tak důležité provedení vynálezu je prostředek oleje ve vodě, který obsahuje squalen nebo jiný metabolisovatelný olej, triglycerid jako je trikaprylin, atokoferol a polyoxyetylen sorbitan monooleat(TWEEN 80(tmi). Emulse oleje ve vodě mohou obsahovat spán 85 a/nebo lecitin. Tak v důležitém provedení, předkládaný vynález obsahuje pomocný prostředek, který zahrnuje emulsi oleje ve vodě. Ta sestává ze squalenu, TWEENU 80(tm| , a-tokoferolu, kde olejové kapky v emulsi mají střední průměr v rozmezí 300-600nm. Předkládaný vynález také poskytuje vakcínu, která obsahuje emulsi oleje ve vodě sestávající ze squalenu, TWEENU 80<trnl, a-tokoferolu, kde olejové kapky mají střední průměr v rozmezí 300-600nm a antigen nebo antigenní přípravek. Pomocný prostředek nebo vakcína (jak popsáno výše), v jiném výhodném provedení vynálezu dále obsahuje QS21 a 3D-MPL.
Výhodné vakcíny v předkládaném vynálezu obsahují antigen nebo antigenní přípravek, který umožňuje vyvolání imunitních reakcí proti lidským patogenům. Tento antigen nebo antigenní přípravek je získán z HIV-1 (tak jako tat, nef, gpl20 nebo gp 160), z lidského herpes viru jako je gD nebo jeho deriváty nebo z časných pohotových proteinů jako je ICP27 z HSV1 nebo HSV2, z cytomegaloviru (zvláště lidského, jako je gB nebo jeho deriváty), z rotaviru (zahrnujícím živé oslabené viry), z viru Epstein Barrové (jako je gp350 nebo jeho deriváty), z viru varicella zoster (jako je gpl, II a IE63), nebo z viru hepatitidy jako je virus hepatitidy B ( například povrchový antigen viru • · · · • · • · hepatitidy B nebo jeho deriváty), virus hepatitidy A, virus hepatitidy B a virus hepatitidy E. Dále mohou být antigeny nebo antigenní prostředky získány z dalších virových patogenů, tak jako z paramyxovirů: respirační syncytiální virus (tak jako F a G proteiny nebo jejich deriváty), virus paraínfluenzy, virus spalniček, virus příušnic; z papillomaviru (např. HPV6, 11, 16,
18, tak jako antigeny LI, L2, E6 nebo E7) ; z flavovirů (např. virus žluté zimnice, virus Dengue, virus klíšťové encefalitidy, virus japonské encefalitidy) nebo z viru chřipky. Antigeny nebo antigenní přípravky mohou být také získány z bakteriálních patogenů jako je Neisseria spp., zahrnující N. gonorhea a N. meningitidis (např. kapsulární polysacharidy a jejich konjugáty, proteiny vázající transferin, proteiny vázající laktoferin, PilC, adhesiny); Streptococcus sp., zahrnující S. pneumoniae (např. kapsulární polysacharidy a jejich konjugáty, PsaA, PspA, streptolysin, proteiny vázající cholin), S. pyogenes (např.M proteiny nebo jejich fragmenty, C5A proteasa, kyseliny lipoteichové), S. agalactiae, S. mutans; Haemophilus spp., zahrnující H. influenzae typu B (např. PRP a jejich konjugáty), netypické H. influenzae (např. OMP26, adhesiny vyšší molekulové hmotnosti, P5, P6, lipoprotein D) , H. ducreyi; Moxarella spp.,
M. catarrhalis, také známou jako Branhamella např. adhesiny a invasiny vyšší a nižší molekulové zahrnující B. pertussis (např.
Bordetella spp., toxin pertusse a jeho deriváty, vláknitý hemaglutínin, zahrnuj ící catharalis hmotnosti; pertactin, adenylátcyklásu, fimbrie), B. parapertussis a B. bronchiseptica;
Mycobacterium spp zahrnující M. tuberculosis antigen 85A, 85B nebo 85C) , M.
paratuberculosis, M. smegmatis;
bovis, M. leprae, (např. ESAT6, M. avium, M.
Legionella spp., zahrnující L.
pneumophila; Escherichia spp., zahrnující enterotoxické E. coli (např. kolonizační faktory, termolabilní toxin nebo jeho deriváty, termostabilní toxin nebo jeho deriváty), enterohemorhagické E. coli, enteropatogenní E. coli (např. toxin podobný toxinu shigely nebo jeho deriváty; Vibrio spp., zahrnující V. cholera (např. toxin cholery nebo jeho deriváty); Shigella spp., zahrnující S.
• · · sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp., zahrnující Y. enterocolitica (např. protein YOP), Y. pestis, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp., zahrnující C. jejuni (např. toxiny, adhesiny a invasiny) a C. coli; Salmonella spp., zahrnující S. typhi, S. paratyphi, S. cholerae suis, S. enteritidis; Listeria spp., zahrnující L. monocytogenes;
Helicobacter spp., zahrnující H. pylori (např. ureasa, katalasa, toxin tvořící vakuoíy); Pseudomonas spp., zahrnující P.
aeruginosa; Staphylococcus spp.
epidermidis; Enterococcus spp., faecium; Clostridium spp., zahrnující S. aureus, S.
zahrnující E. faecalis, E.
zahrnující C. tetani (např. toxin tetanu a jeho deriváty), C. botulinum (např. botulotoxin a jeho deriváty), C. difficile (např. toxiny clostridia A nebo B a jejich deriváty); Baciílus spp., zahrnující B. anthracis (např. toxin anthraxu a jeho deriváty; corynebacterium spp., zahrnující C. diphteriae (např. toxin diphterie a jeho deriváty), Borrelia spp., zahrnující B. burgdorferi (např. OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. garinii (např. OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelii (např. OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. andersonii (např. OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp., zahrnující E. equi vyvolavatele lidské granulocytární Ehrlichiosi; z Rickettsia spp., zahrnující R. rickettsii; Chlamydia spp., zahrnující C. trachomatis (např. MOMP, proteiny vázající heparin), C. pneumoniae (např. MOMP, proteiny vázající heparin), C. psittaci; Leptospira spp., zahrnující L. interrogans; Treponema spp., zahrnující T. pallídum (např. vzácné proteiny vnější membrány), T. denticola, T. hyodysenteriae. Antigeny nebo antigenní přípravky mohou být získány také z parazitů jako je Plasmodium spp., zahrnující P. falciparum; Toxoplasma spp.,zahrnující T. gondíi (např. SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., zahrnující E. histolytica; Babesia spp., zahrnující B. microti; Trypanosoma spp., zahrnující T. cruzi; Giardia spp., zahrnující G. Lamblia; Leshmania spp., zahrnující L. major; Pneumocystis spp., zahrnující P. carinii; Trichomonas spp., zahrnující T. vaginalis; Schistosoma spp., zahrnující S. mansoni. Antigeny nebo antigenní přípravky mohou být také získané ••μ.
: t:
z kvasinek jako je Candida spp., zahrnující C. albicans; Cryptococcus spp., zahrnující C. neoformans.
Deriváty povrchového antigenu hepatitidy B jsou dobře známé v oboru a zahrnují, mezi jinými, soubor vnějších S antigenů PreSl, PreS2, popsaných v evropských patentových přihláškách EP-A-414 374; EP-A-0304 578 a EP 198-474. V jednom výhodném hledisku vynálezu, vakcína obsahuje antigen HIV-1, gp 120, zvláště pokud k jeho expresi dochází v buňkách CHO. V dalším provedení, vakcína podle vynálezu, obsahuje gD2t jak blíže určeno výše.
Ve výhodném provedení tohoto vynálezu, vakcíny obsahují nárokované pomocné prostředky zahrnující víry HPV, které jsou odpovědné za genitální bradavice (HPV 6 nebo HPV 11 a jiné) a HPV viry odpovědné za cervikální rakovinu (HPV 16, HPV 18 a jiné). Zvláště výhodné formy vakcíny zahrnují částice Ll nebo kapsomery a složené proteiny, zahrnující jeden nebo více antigenů vybraných z proteinů E6, E7, L+ a L2 z HPV 6 a HPV 11. Nejvíce výhodnými formami spojovacích proteinů jsou: L2E7 jak popsáno v GB 95
15478.7 a protein D(l/3)-E7 popsaný v GB 9717953.5.
Vakcíny v předkládaném vynálezu dále obsahují antigeny získané z parazitů, způsobujících malárii. Například výhodné antigeny z Plasmodia falciparum zahrnují RTS,S a TRAP. RTS je hybridní protein obsahující zejména všechny C-terminálni části proteinu circumsporozoitu(CS) z P. falciparum vázané přes čtyři aminokyseliny části preS2 povrchového antigenu viru hepatitidy B na povrchový (S) antigen viru hepatitidy C. Tato úplná struktura je popsána v Mezinárodní patentové přihlášce č.PCT/EP92/02591, vydané pod č.WO 93/10152, prioritou z UK patentové přihlášky č.
9124390.7. Pří expresi v kvasinkách je RTS produkováno jako lipoproteinová částice a pokud je exprimováno spolu s S antigenem z HBV,pak je produkovaná smíšená částice známa jako RTS,S. TRAP antigeny jsou popsány v Mezinárodní patentové přihlášce č. PCT/GB89/00895, vydané pod WO 90/01496. Výhodným provedením vynálezu je vakcína proti malárii, kde antigenní přípravek ···· ·· • · • · • · • · obsahuje kombinaci RTS,S a TRAP antigenů. Jiné antigeny plasmodia, které jsou pravděpodobnými uchazeči stát se složkami vícestupňové vakcíny proti malárii, jsou MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAPI, RAP2, Sequestrin, PfEMPl, Pf332, LSAl, LSA3, STARP, SALSA, PfEXPl, Pfs25, Pfs28, PFS 27/25, Pfsl6, Pfs48/45, Pfs230 z P. falciparum a jím analogické antigeny Plasmodia spp.. Prostředky také mohou obsahovat protinádorový antigen a mohou být prospěšné v imunoterapii rakovin. Například, pomocný prostředek nalézá užitek u tumor rejekčních antigenů, tak jako u rakoviny prostaty, prsu, kolorektálního karcinomu, rakoviny plic, slinivky břišní, ledvin a u melanomu. Na ukázku uvedené antigeny zahrnují MAGEl a MAGE3 nebo další MÁGE antigeny pro léčbu melanomu, PRÁME, BAGE nebo GAGE (Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in immunology 8, pps 628-636; Van den Eynde et al., International Journal of Clinical & Laboratory Research (1997); Correale et al. (1997), Journal of the National Cancer Institute 89,p293). Tyto antigeny jsou ovšem exprimovány u širokého pásma typů nádorů jako je melanom, plicní karcinom, sarkom a rakovina močového měchýře. Jiné nádorově specifické antigeny jsou vyhovující pro užití s pomocným prostředkem, podle vynálezu, a zahrnují ale nejsou vyhrazené, specifické antigeny prostaty (PSA) nebo Her-2/neu, KSA(GA733), MUC-la karcinoembryonální antigen (CEA). Tudíž v některém hledisku předkládaného vynálezu je připravována vakcína, která obsahuje pomocný prostředek, podle vynálezu, a tumor rejekční antigen.
Zvláště preferovaným provedením předkládaného vynálezu je vakcína, která obsahuje antigen gonadotropin uvolňujícího hormonu (GnRH). Imunogenní konjugáty tohoto antigeny jsou popsány v WO 95/20600, EP 0117934, US 4,302,386 a US 5,006,334. Takové vakcíny jsou zejména výhodné při léčbě rakoviny.
Je předvídáno, že prostředky v předkládaném vynálezu, budou užívány zejména k přípravě vakcín, které obsahují antigeny získané z Borrelia sp. . Antigeny mohou například obsahovat nukleovou kyselinu, antigen získaný z patogenu nebo antigenní přípravky, rekombinantně vytvářené proteiny nebo peptídy a chiméricky složené proteiny. Zvláštním antigenem je OspA. OspA může být plně zralý protein účinný v lipidové formě hostitelské buňky (E. coli), nazvaný ( Lipo-OspA) nebo v nelipidovém derivátu. Takové nelipidové deriváty obsahuji nelipidový složený protein NSl-OspA, který má prvních 81 N-terminálních aminokyselin nestrukturálního proteinu(NSl) viru chřipky a kompletní OspA protein, a jiný, MDPOspA je nelipidová forma OspA nesoucí 3 přídavné N-terminální aminokyseliny.
Vakcíny, podle vynálezu, mohou být užity pro profylaxi nebo léčbu alergií. Takové vakcíny budou obsahovat specifický alergen (např. Der pl) a alergen nespecifické antigeny (např. stanworth dekapeptid).
V dalším hledisku předkládaného vynálezu je připravována vakcina, jak zde popsáno, pro užití v lékařství.
Je uvažováno, že přípravek vakcíny, podle vynálezu, může být užit prostřednictvím podávání uvedené vakcíny slizniční cestou např. ústy nebo nosem, nebo parenterální cestou, např. nitrosvalově k předcházení nemocím u savců náchylných k nemoci nebo k léčení savců nemocí trpících.
V předkládaném vynálezu poměr trikaprylin:metabolizovatelný olej, především squalen, bude kolem 1:10 až 10:1, výhodně 1:5-5:1. Poměr QS21:3D-MPL bude typicky kolem 1:10 až 10:1, výhodně 1:5 až 5:1, zvláště často 1:1. Výhodný rozsah pro optimální synergii je 2,5:1 až 1:1 3D-MPL:QS21. Pro podávání člověku bude QS21 a 3D-MPL přítomno ve vakcíně typicky v rozmezí lpg-lOOOpg, výhodně 10pg500pg, více výhodně 20-200pg na dávku a nejvíce výhodně 10-50pg na dávku. Olej ve vodě bude typicky obsahovat 2-10% a-tokoferolu a 0,3-3% TWEENU80. Výhodný poměr squalen:a-tokoferol se rovná 1 nebo je menší než 1. Může být také přítomen span85 v 1% hladině. V některých případech může být výhodné, pokud vakcíny, podle vynálezu, budou dále obsahovat další stabilisátor.
• 9 • 9
Přípravek vakcíny je obecně popsán v New Trends and Developments in Vaccines, vydáno Voliér et al., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978. Zapouzdření v liposomech je popsáno, například, Fullertonem, U.S. 4,235,877. Konjugace proteinů do makromolekul je popsána, například, Likhitem, U.S. 4,372,945 a Armor et al., U.S. 4,474,757.
Množství proteinu v každé dávce vakcíny je vybráno jako množství, které v typických vakcínách vyvolá imunoprotektivní reakci bez významných vedlejších nepříznivých účinků. Toto množství se bude měnit v závislosti na specifickém imunogenu a jeho použití. Obecně je očekáváno, že každá dávka bude obsahovat l-1000pg proteinu, výhodně 2-100pg, nejvíce výhodně 4-40pg. Optimální množství pro jednotlivou vakcínu může být stanoveno standardními studiemi, které zahrnují sledování příslušných imunitních reakcí u subjektů. Subjekty, po původní vakcinaci, mohou přijmout jednu nebo více zvyšujících se imunizací, adekvátně rozdělených.
Způsob výroby emulsí oleje ve vodě, popisované v příkladech, zahrnují míchání olejové složky s roztokem PBS/TWEENSO^“1’ s následnou homogenizací za užití homogenizátoru. Odborníkům bude jasné, že způsob zahrnující předcházející míchání dvakrát skrz injekční jehlu, bude vhodný pro homogenizaci malých objemů kapaliny. Stejně, emulsifikační proces v mikrofluidiseru (M110S mikrofluidisační zařízení, maximálně 50 průchodů) po dobu 2 minut při maximálním vstupním tlaku O,6Mpa (výstupní tlak kolem 85Mpa) by mohl být upraven odborníky k výrobě menších nebo větších objemů emulse. Tato úprava by mohla být dosažena běžným prováděním pokusů, které zahrnují měření výsledné emulse, až by byl dosažen přípravek s olejovými kapkami požadovaného průměru. Prostředky, podle vynálezu, mohou být užity pro obojí účel- profylaktický a terapeutický.
Také je, podle vynálezu, poskytnut způsob stabilizace emulse oleje ve vodě. Zmíněná emulse oleje ve vodě nebývá stabilní po ·· * · dobu dvou let, ale přidáním triglycerídů k olejové složce je možno její stabilitu zvýšit. Výhodně užívaným triglyceridem je v této metodě tríkaprylin.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 Pomocný prostředek
Pomocné emulse oleje ve vodě se skládají z organické fáze (atokoferolu, trikaprylinu a squalenu) a vodné fáze (PBS) a jednoho nebo několika emulgátorů (zahrnujících TWEEN 80) a jsou vyráběné v podobných postupech, které jsou popsané v WO 95/17210.
TWEEN 80 je rozpuštěn ve fysiologickém roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem za vzniku 0,4% roztoku PBS. K získání 100 ml emulse je pomalu přidáno 5g DL a-tokoferolu, 0-5ml squalenu a 0-5ml trikaprylinu a pak důkladně mícháno mechanickým míchadlem.
Zatímco je olejová fáze míchána, je přidáno 90ml roztoku PBS, TWEEN 80 v kapkách a důkladně mícháno. Výsledný prostředek je pak homogenizován za užití homogenízátoru (typ ultrathurax).( Malé objemy materiálu mohou být obdobně homogenizovány dvojím průchodem injekční jehlou).
Prostředek je emulgován v mikrofluidiseru (MHO mikrofluidizační přístroj). Emulse snese maximálně 50 průchodů během 2 minut, při maximálním vstupním tlaku 0,6Mpa, výstupní tlak je kolem 85Mpa).Výsledné olejové kapky mají rozměr přibližně 300600nm.
Podrobnosti o emulsi oleje ve vodě k provádění zkoušek viz tabulka 1.
Tabulka 1,prostředek emulsí SB26 popřípadě obsahující tríkaprylin, pro užití ve zkouškách stability.
::
Emulse α-tokoferol(%) Squalen(%) Trikaprylin (%) Tween 80 (%)
SB2 6 5 5 0 0,4
SB26T 5 0 5 0,4
SB26T1 5 4 1 0,4
SB26T2.5 5 2,5 2,5 0,4
SB26T4 5 1 4 0,4
Příklad 2 Stabilita pomocného prostředku 1
Stabilita pomocných prostředků, popsaných ve výše uvedeném příkladu, byla zkoumána po různě dlouhou dobu a při odlišných skladovacích podmínkách. Počáteční rozměry pomocných prostředků byly srovnány se získanými po skladování po dobu 8 hod. při 75°C, po 1 měsíci při 37°C nebo 45°C, po 12 měsících při 4°C nebo po zrychlené zkoušce rozkladu, která zahrnuje centrifugaci při 3000xg.
Průměrný rozměr olejových kapek ve vodě byl měřený korelační fotonovou spektroskopií a vyjádřen jako poměrné číslo(CR), distribuce intensity, distribuce hmoty a střední průměr částic (tabulka 5).
Přidáním trikaprylinu k velkým částicím pomocného prostředku emulse oleje ve vodě, který byl předtím nestabilní, stává se emulse stabilní po dlouhé období. Vynález umožňuje tento účinný laboratorně založený systém k užití po dlouhou dobu v běžném prostředí.
♦♦ *··· • * · • · • « » ···· «.
Příklad 3 Stabilita pomocného prostředku 2
Pokus se stabilitou pomocného prostředku opakován delší dobu. Výsledky viz tabulka 6.
Výsledky ukazují, že emulse oleje ve v trikaprylin, jsou stabilní po delší období ve srovnání s emulsemi, které trikaprylin neobsahují.
Příklad 4 Pokusy s očkováním u myší za použití stabilní pomocné emulse oleje ve vodě
Skupiny myší Balb/C byly imunizovány nitrosvalově ve třech dávkách ( dny 0, 14, 28 ) experimentálními vakcínami, které obsahují antigen malárie RTS,S, HIV gp 120, emulsi oleje ve vodě a popřípadě trikaprylin. Emulse oleje ve vodě SB26, pokud byly použity, byly připraveny podle postupu popsaném v WO 95/17210. Tyto emulse měly střední průměr olejových kapek 500nm a trvanlivost měly 1 měsíc. SB62 ( 150nm- stabilní více než 2 roky) byla také připravena podle postupu popsaném v WO 95/17210 a byla porovnána k zjištění, že výsledky imunitních reakcí nebudou ztíženy přidáním trikaprylinu.
(viz příklad 2) byl zodě, které obsahují
Název Prostředek emulse
SB26T1 a-tokoferol(2,5%),squalen(2%),trikaprylin(0,5%),TWEEN 80(0,2%),QS21(5pg),3D-MPL(5pg)
SB26T2.5 a-tokoferol(2,5%),squalen(1,25%),trikaprylin(1,25%), TWEEN 80(0,2%),QS21(5pg),3D-MPL(5pg)
SB62 SB62 (a-tokoferol(2,5%),squalen(2,5%),TWEEN 80(2%),QS21(5pg),3D-MPL(5pg)
SB26T1 a SB26T2 mají střední průměr částic kolem 500nm a jsou stabilní po dobu 2 let. 3 De-O-acylovaný monofosforyl lipid A (3D15 ·» «· • « · , , • · * « • · ♦ · ♦ • « » · > · · · · ·
.. «Α ··
MPL) je známý z GB2220 211(Ribi). QS21 je HPLC čištěná netoxická frakce saponinu z kůry stromu Quillaja Saponaria Molina z Jižní Ameriky a způsob jeho výroby je popsán (jako QA21) v US 4. 5,057,540.
Výsledky humorálních reakcí 14 dní po třetím očkování jsou udány v tabulce 2. Stručně, SB26T působí jako velmi silný pomocný prostředek vakcíny. Vytvářené reakce byly větší než ty, které byly vytvořené emulsí oleje ve vodě z kapek menšího průměru (SB62) .
Tabulka 2, Reakce protilátek specifických pro HbsAg
Prostředek IgG (celkový) titr
RTS, S/gpl20/3D-MPL/QS21/SB26T1 43004
RTS , S/gpl20/3D-MPL/QS21/SB26T2.5 40287
RTS, S/gp'120/3D-MPL/QS21/SB62 28465
Byly také změněny reakce CTL, vylučovaných jak buňkami sleziny tak buňkami lymfatických uzlin poplitea. Výsledky jsou zobrazeny na obr. 2. Stručně, prostředek SB62 zdárně indukoval činnost specifického CTL pro RTS,S ( jak měřeno CTL antigenem specifickým pro Hbs), měřeno 14 dní po třetím očkování. Dva prostředky SB26T také vyvolávaly srovnatelné hladiny činnosti CTL.
Příklad 5, Zkoumání profilu isotypů protilátek, tvořených pomocnými systémy u myší.
Vzorky byly odebrány během vakcinačního pokusu popsaném v příkladu 4 a 14 dní po posledním očkování. Vzorky byly zkoumány běžně dostupnými standardními zkouškami ELISA k vyhledání profilu subisotypů IgG, které byly vytvořeny. Výsledky jsou ilustrovány na obr. 1 a v tabulce 3. Stručně, stabilní pomocné emulse, stimulované podobnými subisotypy IgG, vyvolávají silné imunitní reakce typu Thl a Th2.
·« ····
Tabulka 3, Poměr isotypů protilátek specifických pro HbsAg
Prostředek IgG2a/IgGl
RTS,S/gpl2O/3D-MPL/QS21/SB26T1 2,13
RTS,S/gpl2O/3D-MPL/QS21/SB26T2.5 1,8
RTS,S/gpl2O/3D-MPL/QS21/SB62 1,56
Příklad 6 Pokusy s očkováním u opic rhesus při použití stabilní pomocné emulse oleje ve vodě.
Skupina 5ti opic rhesus byla imunizována vakcíny ( dny 0, 28 a 8 4 ) , jak udáno v tabulce 4.
a gpl20 byly vyrobeny způsobem dříve popsaným, podávány nitrosvalově jako injekce do zadní části levé (gpl20) nebo pravé (RTS,S) končetiny. Konečný objem každé vakcíny byl 0,5ml.
třemi dávkami Antigeny RTS,S Vakcíny byly
Tabulka 4, Vakcíny použité při pokusech u opic rhesus
Skupina Levá končetina Pravá končetina
Antigen Pomocný prostředek Antigen Pomocný prostředek
1 gpl20(lOOpg) SB62,QS21,3D -MPL RTS,S(50pg) SB62,QS21,3D -MPL
2 gp!20(lOOpg) SB26T,QS21, 3D-MPL RTS,S(50pg) SB26T,QS21, 3D-MPL
Krevní vzorky byly odebrány 14 dní po každém očkování a byly zkoumány antigen specifické humorální reakce a buňkami zprostředkované reakce.
Proliferační reakce specifické pro antigen u periferních ·· ·· * * * · • · © • · · © • · · ··*· ·· krevních opičích mononukleárních buněk (PBMC) užití následujících postupů:
• ·
© ©
© byly zkoumány za • Kultury byly založeny ve čtverém zhotovení ΙΟΟμΙ ficollu isolovaném PBLs o hustotě 2.106/ml (v plotně s 96 vyhloubeními naočkované kulturou z láhve s okrouhlým dnem Falcon) v prostředku RPMI1640, který obsahuje 5%FCS a antibiotika. Znamená to, že tkáňové plotny s rovným dnem jsou užívány pro Eli bodové zkoušky.
• Přidání ΙΟΟμΙ proteinu v ředění na požadovanou koncentraci. Samotné prostředí je zahrnuto jako negativní kontrola a ConA(5pg/ml) jako positivní kontrola.
• Buňky se pěstují 72 hod. před přidáním lpCi/3H-tymidinu na vyhloubení.
• Přidá se 20μ1 3H-T-dR(lmCi/ml zásobního roztoku) ředěného 20x v úplném prostředí po dobu 16-18 hodin.
• Kultura se sklidí pomocí speciálních filtračních desek.
• Určí se radioaktivita v počítači beta záření.
Všechny buněčné kultury jsou inkubovány při 37°C, 7% C.O2, 90% vlhkosti. Humorální reakce anti- RTS,S (jak měřeno užitím antigenu HBs) byly zkoumány použitím postupu ELISA (viz příklad 1) a výsledky jsou zobrazeny na obrázku 3. Humorální reakce anti-gpl20 byly zkoumány užitím postupu ELISA (viz příklad 1) a výsledky jsou zobrazeny na obr. 4. Buňkami zprostředkované reakce anti RTS,S a gpl20, jak měřené proliferací PBMC, jsou zobrazeny na obr. 5.
*· ···· • · · • · « • · · ···· ··
Tabulka 5, Stabilita pomocného prostředku (viz příklad 2)
Emulse Skladovací Rozměr Střední
CR Distr.intensity Distr. hmoty průměr
SB26 Počát.rozměr 81 523 (82%)837(24%) 449(65%)772(43%) NA
5min.3000xg NA
8 hod. 75°C 40 398(61%)727(51%) 451 (16%)832(90%) NA
1 měsíc 37°C 43 458(61%)745 (53%) 503(91%)865 (13%) NA
1 měsíc 45°C 45 425 (66%) 733 (49%) 512(71%)874 (44%) NA
12měs. 4°C Dvě přítomné fáze
SB26T Počát.rozměr 82 384 351 378
5min.3000xg 77 420 487 374
8 hod. 75°C 60 407 493 366
1 měsíc 37°C 60 347 480 309
1 měsíc 45°C 68 395 474 343
12 měs. 4°C 54 275 (55%)503 (54%) 481 307
SB26T1 Počát.rozměr 86 430 428 430
5min. 3000xg 97 4 61 494 412
8 hod. 75°C 66 506 530 440
1 měsíc 37°C 84 434 490 381
1 měsíc 45°C 48 437 475 413
12 měs. 4°C 42 302(44%)546(65%) 491 331
SB26T2.5 Počát.rozměr 91 446 475 394
5 min.3000xg 84 411 494 378
8 hod. 75°C 78 378(67%)602(48%) 494 402
1 měsíc 37°C 68 394 493 335
1 měsíc 45°C 70 378 511 328
12 měs. 4°C 57 290 (42%)497 (68%) 480 311
SB26T4 Počát.rozměr 93 424 489 401
5 min.3000xg 82 368 323 359
8 hod. 75°C 64 434 470 390
1 měsíc 37°C 68 385 467 339
1 měsíc 45°C 78 397 493 345
12 měs. 4°C 52 286(54%)594(52%) 507 336
Poznámka: NA=není k dispozici ·* · * · · • ·
Tabulka 6,
Stabilita pomocného prostředku(viz přiklad 3)
Emulse Časový Rozměr PCS(nm)
Ředění (X) CR Distribuce intensity Distribuce hmoty Střed. průměr
SB26T Počáteční 2000 99 471 493 401
97 434 486(94%)786(10%) 393
5min. 3000g 4000 39 420 487 374
8hod. 75°C 4000 30 407 493 366
lmšsíc 37°C 4000 30 347 480 309
lměsíc 45°C 4000 34 395 474 343
12měs. 4°C 4000 54 275(55%)503 (54%) 481 307
23měs. 4°C 4000 32 272(58%)511 (52%) 488 305
33 272(53%)454(60%) 484 291
2 3měs.20°C 4000 34 259(68%)515(38%) 243 (17%)510(88%) 297
34 257(55%)475(54%) 233(5%)505(96%) 287
SB26T1 Poč.rozměr 2000 86 430 428 430
5mín. 3000g 4000 49 461 494 412
8hod. 75°C 4000 33 506 530 440
lměsíc 37°C 4000 42 434 490 381
lměsíc 45°C 4000 24 437 475 413
12měs. 4°C 4000 42 302 (44%)546(65%) 491 331
23měs. 20°C 4000 36 298 (65%)541(45%) 489 (98%)795(4%) 331
36 284 (53%)566(53%) 492 (92%)791(14%) 326
SB26T2.5 Poč. rozměr 2000 91 446 475 394
5min. 3000g 4000 42 320(56%)501 (44%) 494 378
8hod. 75°C 4000 39 378(67%)602 (48%) 494 (97%)796 (5%) 402
lměsíc 37°C 4000 34 394 493 335
lměsíc 45°C 4000 35 378 511 328
12měs. 4°C 4000 57 290 (42%)497(68%) 480 311
23měs. 4°C 4000 39 296 (69%)491(46%) 482 318
39 373 456 299
23měs. 20°C 4000 36 347 441 305
36 358 445 305
SB26T4 Poč. rozměr 2000 93 424 489 401
5min. 3000g 4000 41 368 323 359
8hod. 37°C 4000 32 434 470 391
lměsíc 37°C 4000 34 385 467 339
lměsíc 45°C 4000 39 397 493 345
12měs. 4°C 4000 52 286 (54%)594 (52%) 507 336
23měs. 4°C 4000 40 274(64%)524(45%) 254 (12%)522(92%) 309
40 285 (56%)495(56%) 474 311
23měs. 20°C 4000 37 275 (66%)475(46%) 463 300
37 268(64%)471(47%) 244 (12%)494(92%) 295
Zastupuje:

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Pomocný prostředek, který obsahuje stabilní emulsi oleje ve vodě, kde olejové kapky mají střední průměr v rozmezí 300600nm, vyznačující se tím, že olejová fáze obsahuje squalen, α-tokoferol a triglycerid.
  2. 2. Pomocný prostředek, který obsahuje stabilní emulsi oleje ve vodě, kde olejové kapky mají střední průměr v rozmezí 300600nm, vyznačující se tím, že emulse oleje ve vodě obsahuje squalen, α-tokoferol, emulgátor zahrnující TWEEN 80(tml a triglycerid.
  3. 3. Pomocný prostředek, který obsahuje stabilní emulsi oleje ve vodě, kde olejové kapky mají střední průměr v rozmezí 300600mn, zmíněná emulse oleje ve vodě obsahuje metabolisovatelný olej a triglycerid, vyznačuj í c í se tím, že pomocný prostředek dále obsahuje imunostimulační látku, zvolenou z QS21 a 3D-MPL.
  4. 4. Pomocný prostředek, podle nároku 3, vyznačuj ící se t í m, ž e zmíněným metabolisovatelným olejem je squalen.
  5. 5. Pomocný prostředek, podle některého z nároků 1-4, vyznačující se tím, že, zmíněným triglyceridem je trikaprylin.
  6. 6. Pomocný prostředek, vyznačuj podle některého z předchozích nároků, ící se tím, že poměr triglycerid:metabolisovatelný olej je v rozmezí 1:10 až 10:1.
    Pomocný prostředek, podle některého z předchozích nároků, vyznačující se tím, že poměr triglycerid:metabolisovatelný olej je v rozmezí 1:5 až 5:1.
    Pomocný prostředek, podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že zmíněná emulse oleje ve vodě dále
  7. 9 · • · · © • · · • · ♦ © • · · ©*·· ©· ··©· ·· ©4 • · · · • © · © • ♦ · © • · ♦ · ·· ©· obsahuje jeden nebo více imunomodulancií.
    9. Pomocný prostředek, podle nároku 8, vyznačuj ící se t í m, ž e uvedená imunomodulancia jsou vybraná ze skupiny, která zahrnuje QS21 a 3D-MPL.
  8. 10. Pomocný prostředek, podle nároku 1 nebo 3, vyznaču jící se tím, že dále obsahuje stabilisátor jako je polyoxyetylen sorbitan monooleát (TWEEN 80(tra)) .
    11. Vakcína z nároků obsahuje obsahující 1 až 10, v y antigen nebo pomocný prostředek, podle některého značující se tím, že dále antigenní přípravek. 12 . Vakcína, podle nároku 11, vyznačující se tím, ž e antigen nebo antigenní přípravek je vybrán ze skupiny,
    která obsahuje: virus lidské imunodeficience, virus herpes simplex typ 1, virus herpes simplex typ 2, Cytomegalovirus, virus hepatitidy A,B,C nebo E, respirační syncytiální virus, lidský papillomavirus, virus chřipky, salmonelu, neisserii, borrelii, chlamydii, bordetellu, plasmodii a toxoplasmu.
  9. 13. Vakcína, podle nároku 11, vyznačující se tím, ž e antigenní přípravek je získán z nádorového antigenu.
  10. 14. Vakcína, podle nároku 11, vyznačující se tím, ž e antigenní přípravek je získán z gonadotropin uvolňujícího hormonu.
  11. 15. Vakcína obsahující emulsi oleje ve vodě, kde olejové kapky mají střední průměr v rozmezí 300-600nm, antigen nebo antigenní přípravek, QS21 a 3D-MPL, vyznačuj ící se t í m, ž e emulse oleje ve vodě obsahuje metabolisovatelný olej, trikaprylin, TWEEN 80(tm) a atokoferol.
    Způsob pro přípravu vakcíny, podle některého z nároků 11-15, vyznačující se tím, že zahrnuje přimíchání
  12. 16.
    ·· ♦· • · · · • · · ·· ··»· • · · • · · • · · • · · · »» »· ·· ·· • · · · • · · · • ♦ · · • · · · ·· ·· emulse oleje ve vodě, trikaprylinu, 3D-MPL, QS21 a antigenu nebo antigenního přípravku.
  13. 17. Ušití vakcíny, podle některého z nároků 11-14, pro výrobu léků vhodných pro léčení osob vnímavých nebo trpících virovým, bakteriálním nebo parazitárním onemocněním.
  14. 18. Užití vakcíny, podle některého z nároků 11-14, pro výrobu léků vhodných pro léčení osob trpících rakovinou.
  15. 19. Způsob stabilizace emulse oleje ve vodě, kde zmíněná olejová fáze obsahuje metabolisovatelný olej a cc-tokoferol, zmíněná emulse není stabilní po dobu 2 let, vyznačuj ící se t í m, ž e obsahuje přídavek triglyceridu k olejové fázi emulse oleje ve vodě.
  16. 20. Způsob stabilizace, podle nároku 19, vyznačuj ící se t í m, ž e triglyceridem je trikaprylin.
  17. 21. Způsob stabilizace, podle nároku 19, vyznačuj ící se t í m, ž e metabolisovatelným olejem je squalen.
CZ19994476A 1998-06-03 1998-06-03 Vakcína typu olej ve vodě CZ447699A3 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19994476A CZ447699A3 (cs) 1998-06-03 1998-06-03 Vakcína typu olej ve vodě

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19994476A CZ447699A3 (cs) 1998-06-03 1998-06-03 Vakcína typu olej ve vodě

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ447699A3 true CZ447699A3 (cs) 2000-06-14

Family

ID=5468120

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19994476A CZ447699A3 (cs) 1998-06-03 1998-06-03 Vakcína typu olej ve vodě

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ447699A3 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU728759B2 (en) Oil in water vaccine compositions
EP1279401B1 (en) Oil in water emulsions containing saponins
US6372227B1 (en) Vaccines
US7169391B2 (en) Vaccines
DE69935598T2 (de) Impfstoff enthaltend ein iscom, bestehend aus sterol und saponin und frei von zusätzlichen detergenzien
AU746163B2 (en) Adjuvant compositions
DE60132474T2 (de) Ein immunostimulierendes nukleotid und ein tocol enthaltende zusammensetzung
DE60014076T2 (de) Adjuvans-zusammensetzung, enthaltend saponin und ein immunstimulatorisches oligonukleotid
US20220280640A1 (en) Formulation containing tlr agonist and methods of use
EP1214053A1 (en) Adjuvant comprising a polyoxyethylene alkyl ether or ester and at least one nonionic surfactant
KR20020067617A (ko) 백신
CZ447699A3 (cs) Vakcína typu olej ve vodě
MXPA99011439A (en) Oil in water vaccine compositions
CZ20003732A3 (cs) Pomocný prostředek
MXPA00009887A (en) Adjuvant compositions
HK1105873A (en) Vaccines

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic