JP2003514872A - ワクチン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免疫原性複合体に関するものであり、一層具体的には本発明は負電荷を帯びた有機キヤリアおよび正電荷を帯びた抗原を含む免疫原性複合体に関する。ここでの荷電抗原はC型肝炎ウイルス（HCV）のポリタンパク質特にHCVのコアタンパク質もしくはそのフラグメントであるか、またはポリタンパク質もしくはそのフラグメントを含む融合タンパク質である。本発明の複合体は、HCV感染の結果である病状の処置において、免疫反応および特に細胞障害性T細胞反応の誘導を容易化するための治療およびまたは予防医薬物質としてのワクチン組成物において特に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、一般的にはワクチン組成物およびこのワクチン組成物に用いる免疫
原性複合体に関する。特に本発明は荷電有機キヤリア、一層具体的には負電荷を
帯びた有機キヤリア、および荷電抗原、一層具体的には正電荷を帯びた抗原を含
む免疫原性抗原に関し、この場合の荷電抗原はポリタンパク質好ましくは肝炎C
ウイルス（HCV）もしくはそのフラグメントのコアタンパク質、または上記ポリ
タンパク質もしくはそのフラグメントを含む融合タンパク質である。本発明のワ
クチン組成物および免疫原性複合体は、HCV感染が原因の病状の処置に際し免疫
反応特に細胞傷害性のT−リンパ球反応の誘導を容易化するための治療および／
または予防医薬物質としてHCV感染が原因の病状の処置に際し特に有用である。

【０００２】

【従来の技術】

肝炎Cウイルス（HCV）は慢性肝臓疾患の主たる原因として今や認識され、推定
170（百万）人がこのウイルスに現在感染している（Armstrong,G.L.,M.J.Alter,
G.M.McQuillan,およびH.S.Margolis、2000.Hepatology 31:777、Cohen、J.1999.
Science 285:26）。これらの驚くべき数値にもかかわらず、処置に役立つ治療法
は極めて少なく、その効果も低い。改良された治療法がひどく必要だが、これら
の開発には感染および疾病に対する小動物モデルの欠如が邪魔しており、かつウ
イルス培養に対する非効率的システムが身動きをとれなくしている。HCV感染に
対するT−細胞媒介免疫反応はHCV感染および疾病の結果に影響を与え得ることは
幾つかの研究が暗示している（Missale,G.R.Bertoni,V.Lamonaca,A.Valli,M.Mas
sari,C.Mori,M.G.Rumi,M.Houghton, .FiaccadoriおよびC.Ferrari.1996.J.Clin.
Invest.98:706,Cooper,S.L.,A.L.Erickson,E.J.Adams,J.Kansopon,A.J.Weiser,D
.Y.Chien,M.Houghton,P.Parham, およびC.M.Walker.1999.Immunity10:439,Lech
ner,F.,D.K.Wong,P.R.Dunbar,R.Chapman,R.T.Chung,P.Dohrenwend,G.Robbins,R.
Phillips,P.Klenerman,およびB.D.Walker,2000.J.Exp.Med.191:1499）。加えて
、HCV特異的細胞傷害性Ｔ−細胞の頻度（CTLｓ）とウイルス負荷との間には逆相
関があり、したがってインターフェロン処置に先立つHCVコア特異性時CTLの存在
は、この治療に対する患者の引き続く反応と関係している（Nelson,D.,C.Marous
is,G,G.Davis,C.Rice,J.Wong,M.Houghton,およびL.Lau.1997.J.Immunol.158:147
3.Nelson,D.R.,C.G.Marousis,T.Ohno,G.L.Davis,およびJ.Y.Lau.1998.Hepatolog
y28:225）。かくしてCTLを誘発し得るワクチンは最近の治療に対する補助役とし
て特にHCVの制御に有用であり得る。ワクチン開発に対するHCVタンパク質の使用
は、すでに記載がある（Houghton, EP特許第0318216号公報）。

【０００３】 サポニンのアジュバント物性は、イムノゲンに対する抗体力価増強能を有する
ものとして古くから知られてきた。ここでの“サポニン”なる用語は、ステロイ
ド構造またはトリテルペノイド構造の疎水性領域と共同した親水性領域（通常,
幾つかの糖類鎖）からなる植物由来界面活性グリコシド群を指す。サポニンは多
数の異なった根源から入手できるが、有用なアジュバント活性を有するサポニン
は南アフリカ樹木Quillaja(Molina)から誘導される。この根源からのサポニンは
“Quil A”と命名する”均一“フラクションの単離に使用された（Dalsgaard、K
.、(1974)、Arch.Gesamteds Virusforsch.44:243）。

【０００４】 ドース・サイト反応性は、ワクチン調製におけるQuil Aの家畜用およびヒト
用の両用途における主要な関心事である。Quil Aのの毒性を避けるための一つ
の方法は、免疫刺激性複合体を使用することである（ISCOM^TMとして知られる）
（immuno stimulating COMplexの略）。この主たる理由は、Quil Aが免疫刺激複
合体中に均一混合されると、これが複合体中のコレステロールと共同して細胞膜
のコレステロールに結合するその能力を低減し、細胞酵素加水分解効果 を低減
するからである。加えて、同類のアジュバント効果を生ずるに要するQuil Aの
量は少なくてすむ。

【０００５】 免疫刺激複合体中に均一混合されるQuil Aサポニンの免疫調節性およびこれ
らのサポニンに由来する追加的恩恵は各種の刊行物に記載がある。例えばCoxお
よびCox,J.C.およびCoulter,A.R.Advances in Adjuvant Technology and Appli
cation in Animal Parasite Control Utilising Biotechnology, Chapter 4,
Edito Yong,W.K.CRC Press (1992);Cox,J.C.およびCoulter,A.R.(1997) Vacci
ne、15(3);248-256;Cox,J.C.およびCoulter,A.R.(1989)BioDrugs 12(6);439-453
);Dalsgaard,(1974)(supra);Moreinら,(1989)”immunostimulating complex (
ISOCOM)”, In“Vaccines;Recent Trends and Progress”.G.Gregoriadis,A.
C.Allison and G.Poster(Eds).Prenium Press, New York, p.153;オーストラリ
ア特許明細書第558258号、仝第 589915 590904号および 仝第 632067号公報。

【０００６】 標準的ISCOMはコレステロール、サポニン、リン脂質およびウイルス外膜タン
パク質等のイムノゲンの組み合わせにより形成される。ISCOMマトリックス組成
物（ISCOMATRIX^TMとして知られる）は全く同じように形成されるが、ウイルスタ
ンパク質なしである。ISOCOMは体液性および細胞性免疫反応の両方を刺激するら
しい。ISOCOMは、HSV-1、CMV、EBV、B型肝炎ウイルス（HBV）.、恐水病ウイルス
、およびインフルエンザウイルスを含む各種ウイルスからのタンパク質を用いて
作られてきた（I.G.Barrらの、Adv.Drug Delivery Reviews、32:247-271 (1998)
.。感染性医薬物質からのむきだしDNAまたはポリペプチドが免疫原性に劣る場合
、ISCOM内の細胞含有物はそれらの免疫原性を増強させることが観察される。ISO
COMを用いて調製した各種タンパク質は、主としてネズミモデルにおいてCTLを誘
導することが判明している。Berzofsky,(1991),Biotechnol.Ther.2:123-135;Hsu
ら,(1996),Vaccine 14:1159-1166;Lipfordらの,(1994),Vaccine 12:73-80;Mowat
ら,(1991),Immunology 72:317-322; Osterhausらの,(1998),Dev.Biol.Stand.92
:49-58;Rimmelzwaanら,(1997),J.Gen.Virol.78(pt.4):757-765;Sambharaら、(19
98),J.Infect.Dis.177:1266-1274; Sambharaら , (1997),Mech.Aging Dev.96:1
57-169;-Sjolanderら,(1997), Vaccine 15:1030-1038; Sjolander,(1998),J.Leu
koc.Biol.,64:713-723;Takahashi,(1990),Nature 344:373-375;Tarpeyら,(1996)
,Vaccine 14:230-236;Trudel,Villacres-Erickson,(1995),Clin.Exp.Immunol.10
2:46-52;Zugelら ,(1995),Eur,J.Immunoll.25:451-458。

【０００７】 抗原とアジュバント間の会合は、免疫反応の最適誘導特にCTLの場合に重要で
あると考えられる（Cox,J.C.およびCoulter,A.R.(1999) BioDrugs、12(6):439-4
45）。ウイロソームおよびISCOMs^TMを用いた研究を含み多数の研究がなされ、こ
の仮説を確認している（Ennis,F.A.,Crux,J.,Jameson,J.,Klein,M.,Burt,D. Thi
pphawong,J.1999.Virology259:256-261.,Zurbriggen,R.,Novak-Hofer,I.,Seelin
g, A.i Gluck、R.(2000)、Progress in lopid reseach 39:3-18.,Voeten、J.t.M
.、Nieuwkoop、N.J.,Lovgren-Bengtsson,K.,Osterhaus, D.M.E.Rimmelzwaan、G.
F.2000.Euro J Imm (Submitted)。一般的にISCOMs^TMと抗原間の会合は、形成中
のISCOMs^TM構造中に両親媒性抗原を均一混合することにより成し遂げる(Morein,
B.,B.sundquist,S.Hoglund,K.Dalsgaard, A.Osterhaus.1984.Nature 308:457)。
均一混合は疎水性相互反応により実施された。しかし、HCVコアタンパク質等の
多くの抗原はこの古典的方法によってはISOCOM中に均一混合できなかった。最近
、タンパク質を含まない予備調製免疫刺激性複合体(ISCOMATRIX^TM)を用いてキレ
ート化および静電相互反応により抗原を均一混合する方法が最近開発された（国
際特許出願PCT/AU98/00080-WO98/36772,および PCT/AU00/00110号）。

【０００８】 HCVのコアタンパク質ならびにE1および E2包膜タンパク質はHCVに対して免疫
化するのに有用であることが判明した（例えば米国特許出願第08/823,980号参照
）。この包膜タンパク質の場合の連鎖も、その超可変ドメインにおいてさえ、あ
る種の保存ドメインを含んでおり、このことが慢性感染の原因である各種突然変
異体に対抗する免疫化に対して相当な実用性を提供する。しかしながら、これら
のタンパク質およびポリペプチドが免疫原性であるべき能力を増強し、HCV感染
に対抗して活性で広範・永続的なCTLの成長を刺激する能力を増強する方法およ
び組成物に対する必要性が相変わらず存在する。

【０００９】 本発明に至る過程で発明者らは、HCVの抗原とアジュバント等の有機キヤリア
との静電的会合に準拠した免疫原性複合体を開発した。この静電的会合によれば
、抗原に対する免疫反応特に細胞傷害性Tリンパ球反応を誘導する目的で、この
抗原および有機キヤリアを免疫システムへと共搬送することが可能になる。

【００１０】 （発明の要約） 文脈上違ったふうに要求されない限り、“を含む”なる用語は、複数完全体ま
たは複数行程の記載完全体または行程または群の包含を意味するものと理解され
るべきであるが、複数完全体または複数行程のいずれか他の完全体または行程ま
たは群の排除を意味するものではない。

【００１１】 本発明の一つの観点は、荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免疫原性複合
体に関し、これらの荷電有機キヤリアおよび荷電抗原は静電的に会合してなり、
かつ,上記荷電抗原はC型肝炎ウイルス（HCV）のポリタンパク質もしくはそのフ
ラグメントであるか。または上記ポリタンパク質もしくはそのフラグメントを含
む融合タンパク質である。ポリタンパク質はHCVのコアタンパク質であることが
好ましい。

【００１２】 本発明の他の観点は、一層具体的には上記のような免疫原性複合体の提供にあ
り、この場合の荷電有機キヤリアは負電荷を帯びた荷電有機キヤリアである。

【００１３】 本発明のさらなる他の観点は、上記のような免疫原性複合体の提供にあり、こ
の場合の荷電有機キヤリアは負電荷を帯びた荷電アジュバントである。

【００１４】 本発明のさらなる他の観点は、上記のような免疫原性複合体の提供にあり、こ
の場合の負電荷を帯びた上記アジュバントは自然に負電荷を帯びたアジュバント
であり、このアジュバントはその負電荷の度合いを増強するべく修飾されてなる
。

【００１５】 本発明のさらなる観点は、荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免疫原性複
合体を活性成分とし、医薬として許容される一種または二種以上のキヤリアおよ
び／または希釈剤と共にこれを含むワクチン組成物に関するものであり、この場
合の有機キヤリアおよび抗原は静電的に会合してなり、かつ、この荷電抗原はC
型肝炎ウイルス（HCV）のポリタンパク質またはそのフラグメントであるか、ま
たは上記ポリタンパク質またはそのフラグメントを含む融合タンパク質である。
このポリタンパク質はHCVのコアタンパク質であるのが好ましい。

【００１６】 本発明のさらなる他の観点は、抗原に対する免疫反応を哺乳類において誘発,
誘導または容易化する方法に関するものであり、上記方法は上記複合体またはワ
クチン組成物の有効量を上記哺乳類に投与することを含む。

【００１７】 本発明のさらなる観点は、哺乳類における病状処置方法に関し、免疫原性複合
体またはワクチン組成物の有効量を上記哺乳類に投与することを含む。上記方法
はこの場合、上記組成物を投与すると、病状の徴候または進行を抑制,停止,遅延
または防止する免疫反応を誘発、誘導または容易化する。

【００１８】 本発明のさらなる他の観点は、病状の徴候または進行を抑制,中止、遅延また
は予防するための薬剤の製造において、上記の免疫原性複合体またはワクチン組
成物を使用することに関するものである。

【００１９】 本発明のさらなる他の観点は、上記のような免疫原性複合体またはワクチン組
成物を含む上記医薬物質を、病状の徴候または進行の抑制、停止または予防のた
めに使用する医薬物質に関するものである。

【００２０】 次ぎに記載するように、本発明の免疫原性複合体はHCVコアヌクレオキヤップ
シドタンパク質、非構造タンパク質、E1包膜タンパク質、E2包膜タンパク質、こ
の種のタンパク質の免疫原性フラグメントのいずれか等のHCVタンパク質を、荷
電有機キヤリアと会合した荷電抗原として含み得る。この種のフラグメントはT
細胞として認識し得るエピトープを含むポリペプチドを一般に含む。好ましいフ
ラグメントは,それら自体で提供されるか、または本発明の免疫原性複合体中に
含まれる際に免疫原性であるようなフラグメントを含む。本明細書を通じて、“
HCVのポリタンパク質”または“HCVタンパク質”なる用語は、完全長タンパク質
ならびにポリペプチドフラグメントを含めるように意図される。このHCVタンパ
ク質は、HCVタンパク質の発現にいかなる方法が選択されるかに応じて融合タン
パク質同様に本発明の免疫原性複合体中にも存在し得る。これらのポリペプチド
およびタンパク質の配列は既知である（例えば米国特許第5,350,671号公報）。
本発明はまたこれらのフラグメントに相同（すなわち同一配列性を有する）なポ
リペプチドも提供する。特定フラグメントに応じて、同一配列性は５０％を超え
て大きい（例えば６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）、
ことが好ましい。

【００２１】 （発明を実施するための最良の形態） 本発明は、HCV抗原およびキヤリアを会合させるために静電相互反応を利用し
た免疫原性複合体配合物に準拠しており、この会合によりこれら両分子の免疫シ
ステム中への共搬送が容易になる。本発明の免疫原性複合体は細胞傷害性のT-リ
ンパ球反応の刺激を容易化する用途に特に適する。

【００２２】 したがって本発明の一つの観点は、荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免
疫原性複合体に関するものであり、これらの有機キヤリアおよび抗原は静電的に
会合してなり、この場合の荷電抗原はC型肝炎ウイルス（HCV）のポリタンパク質
好ましくはHCVのコアタンパク質であるか、もしくはそのフラグメント、または
上記ポリタンパク質もしくはそのフラグメントを含む融合タンパク質である。

【００２３】 “複合体”なる用語は。２種または３種以上の相互反応性化学成分の統一体を
意味する。

【００２４】 “荷電した”有機キヤリアまたは抗原なる用語は、全体として正電荷を帯びた
または全体として不電荷を帯びた有機有機キヤリアまたは抗原を意味する。”全
体として”なる用語は、対照分子が含む個々の正および負電荷の合計を意味する
。個々の正および負電荷の合計が電気的に中性の場合、この分子は本発明の文脈
いないでは“荷電した”ものとは見なされない。有機キヤリアは全体として負電
荷を含むのが好ましい。

【００２５】 したがって一層具体的には本発明は上記のような免疫原性複合体を提供し、こ
の場合の荷電有機有機キヤリアは負電荷を帯びた有機キヤリアである。

【００２６】 “静電的に会合した”なる用語は、静電相互反応を含む手段で連結,結合また
は会合している有機キヤリアおよび抗原を指す。したがって、ある場合には静電
相互反応は抗原および有機キヤリアの複合化をもたらす唯一の誘引力である。し
かし他の場合、静電相互反応の形成は他の相互誘引力の形成に結びつくか、また
は他の相互誘引力の形成に至る。

【００２７】 “ポリタンパク質””タンパク質“および”ポリペプチド“なる用語は、ここ
では互いに交換できるよう用いられ、アミノ酸残基の重合体を意味し、この生成
物の最小の長さは限定されない。したがってペプチド、オリゴペプチド、ダイマ
ー、マルチマーその他は上記定義中に入る。完全長タンパク質およびそのフラグ
メントは上記定義中に含まれる。この用語中には、ポリペプチドの後表現修飾例
えばグリコシル化、アシル化、ホスホリル化その他も含まれる。さらに本発明の
目的の場合、”ポリペプチド“なる用語は、タンパク質が所望の活性を維持する
限り、生来の配列における欠失,付加および置換等の修飾（一般に性質が控えめ
）を含むタンパク質を意味する。これらの修飾は部位指向性突然変異誘発を介し
た意図的なもの、またはタンパク質もしくはPCR増幅に起因するエラーを生ずる
宿主突然変異を介した偶発的なものであり得る。

【００２８】 特に、図９に見られるように幾つかのタンパク質がHCVゲノムによりコードさ
れる。HCVポリタンパク質の開裂生成物の順序および命名は次のようである：NH_{2 -} C-E1-E2-NS2-NS3-NS4a-NS4ｂ−NS5a-NS5ｂ−COOH。ポリタンパク質の最初の開
裂は宿主プロテアーゼにより触媒化され、３種の構造タンパク質N-末端ヌクレオ
キヤップシドタンパク質（“コア”と呼称）およびおび２種の包膜糖等タンパク
質“E1”（Eとしても知られる）および”E2”（ E2/NS1として知られる）、なら
びにウイルス酵素を含む非構造（NS）タンパク質を生ずる。このNS領域はNS2、N
S3、NS4およびNS５と呼称する。NS2はタンパク質加水分解活性を有する内在性膜
タンパク質である。NS2は単独またはNS３との組み合わせのいずれかでNS2-NS3 s
issle結合を開裂し、これが今度はNS3 N-末端列を生じさせ、かつ、セリンプロ
テアーゼ活性およびRNAヘリカーセ活性の両方を含む大きなポリタンパク質を放
出する。このNS3プロテアーゼは残余のポリタンパク質を処理書類するのに役立
つ。ポリタンパク質成熟の完成はNS3セリｎプロテアーゼにより触媒される、NS3
-NS4ａ結合における自己触媒的開裂により開始される。HCVポリタンパク質の引
き続くNS3仲介開裂は、他のポリタンパク質のNS3分子によるポリタンパク質開裂
結合の認識を含むようにみえる。これらの反応においてNS3はNS3共因子（NS4a）
、未知の機能を有する２種のタンパク質（NS4bおよびNS5a）、ならびにRNA依存
性RNAポリメラーゼ (NS5b)遊離させる。

【００２９】 上記のように、HCVポリタンパク質由来の、多数のHCVポリペプチドのいずれも
が、本発明におけるの免疫原性複合体において使用し得る。かくしてこれらの複
合体は、HCVコアヌクレオキヤプシドタンパク質、非構造タンパク質、E1包膜タ
ンパク質、E2包膜タンパク質、この種のタンパク質のいずれかのポリペプチドフ
ラグメント、またはこの種のタンパク質の組み合わせを含み得る。この種フラグ
メントはT細胞により認識可能なエピトープを含むポリペプチドであり得る。好
ましいフラグメントは、これら自体で提供されたり、または本発明における免疫
原性複合体中に含まれる場合に免疫原性であるフラグメントを含むのが好ましい
。

【００３０】 好ましくは本発明の免疫原性複合体は、HCVのコアタンパク質、またはそのフ
ラグメントを含む。HCVのコアタンパク質は１０のplを有し、中性および酸性pH
で著しく正に荷電する。HCVの“コアタンパク質”なる用語は、コアタンパク質
の誘導体および相当品を含むものと理解されるべきである。

【００３１】 本発明における免疫原正複合体に使用されるポリペプチドはHCVから物理的に
誘導される必要はなく、分子生物学、微生物学、組換えDNAおよび免疫学の通常
の技法を用いて合成的もしくは組換え的に生じさせ得る。この種の技法は、文献
中に全貌が説明されている。例えば

【表１】

【００３２】 その上このポリペプチドは、HCVの株１，２，３または４からのような、各種
既知HCV株のいずれかからも誘導できる。これらの株の間には多数の保存および
可変領域が知られており、一般に、これらの領域から誘導されたエピトープのア
ミノ酸配列は高度の配列相同関係を有し、例えば二つの配列が整列するとアミノ
酸配列の相同は３０％以上、好ましくは４０％以上である。このように例えば“
コア”ポリペプチドなる用語は以下にさらに定義されるように、各種HCV株のい
ずれかからの天然型コアタンパク質、ならびにコア類似体、突然変異タンパク質
および免疫原性フラグメントを意味する。

【００３３】 “誘導体および相当物”なる用語は、天然、合成または組換え源からの化学的
相当物、突然変異体、同族体および類似体を意味するものとして理解されるべき
である。誘導体は、アミノ酸の挿入、欠失または置換から誘導され得る。アミノ
酸挿入誘導体中には、アミノおよび／またはカルボキシ末端融合体、ならびにシ
ングルまたはマルチアミノ酸の配列内挿入を含む。挿入アミノ酸配列変異体は、
一つまたは二つ以上のアミノ酸残基がタンパク質中の予め決められた部位中に導
入された場合の変異体であり、生じた生成物の適切なスクリーニングによればラ
ンダム挿入も可能である。欠失による変異体は、配列から一種または二種以上の
アミノ酸の除去により特徴ずけられる。置換によるアミノ酸変異体は、配列中の
一つの残基が除去されて異なった残基がその部位にされたような変異体である。
“相当物”なる用語は、問題の抗原の機能的類似体として作用し得る。化学的相
当物は、必ずしも問題抗原から誘導され得るものではないが、ある種の配座的類
似性を共有する。化学的相当物は問題抗原の物理化学的性質を模造する目的で設
計できる。相当物は化学的に合成されるか、または天然型生成物スクリーニング
に従って検出できる。ここでの相同なる用語には、異なった種から誘導される分
子を含むが,これらには限定されない。

【００３４】 また本発明は上記のような免疫源性複合体にも拡張され、この場合の荷電抗原
はHCVタンパク質である。“フラグメント”なる用語は、無変性完全長タンパク
質配列の一部および構造のみからなるポリペプチドが意図される。このフラグメ
ント中には、天然型ポリペプチドのC末端欠失およびまたはN-末端欠失が含まれ
得る。特定HCVタンパク質の“免疫原フラグメント”は、完全長分子の少なくと
も連続約５−１０のアミノ酸残基、好ましくは完全長分子の少なくとも約％１５
−２５の連続アミノ酸残基、最も好ましくは完全長分子の少なくとも約２０−５
０またはそれ以上のアミノ酸残基を一般的には含み、これがエピトープ、または
５アミノ酸とその完全長配列間のいずれかを定義する。例えば、好ましい免疫原
性フラグメントはHCVのコアタンパク質のフラグメントを含むがこれらのみには
限定されず、このフラグメントは例えばポリタンパク質のアミノ酸１０−４５、
１０−５３．６７−８８、８１−１３０、１８６−１００、１２０−１３０、１
２１−１３５および１２１−１７０を含み、これらはChooらが(1991) Proc、:2
451に発表したHCV-1a配列に関連して、ならびにHCVポリタンパク質のc33c領域由
来の規定エピトープ、ならびにHCVコア、E１、E２、NS3 およびＮＳ４領域から
同定された他の各種エピトープのいずれかに関連して数値付けされた。例えば、
Chienらの Proc.Natl.Aca.Sci.USA (1992) 89:10011-10015; Chien J. Gastro
ent. Hepatol.(1993)0 8:S33-39; Chien International Publ. No. WO第93/0036
5号公報；Chien,D.Y. International Publ. No. WO第94/01778号公報；US特許出
願第08/403,590 号および第08/444,818号公報を参照。

【００３５】 ここで用いる“エピトープ”なる用語は、少なくとも約３から５、好ましくは
約５から１０もしくは１５、および約１０００以上ではない（またはこれらの間
のいずれかの整数）アミノ酸の配列を指し、この配列はそれ自体または一層大き
な配列の一部として、抗原が存在する際には細胞性抗原−特異的免疫反応を、ま
たは体液性抗体免疫反応を生ずるべく宿主免疫システムを刺激するはずである。
本発明はにおいて用いるエピトープは、それが誘導される親タンパク質の部分正
確な配列を有するポリペプチドに限定はされない。事実、各種のゲノムは常時流
動状態にあり、したがって幾つかの可変性領域を含み、これら領域は隔離集団間
で比較的高度の可変性を示す。このように“エピトープ”なる用語は、天然型配
列と同一の配列、ならびに欠失体、付加体（一般的に性質が控えめである）およ
び置換体等の、天然型配列の修飾体も包含する。

【００３６】 エピトープを含む特定ポリペプチドの領域は、多数の公知マップ技法のいずれ
かを用いて同定できる。例えば、EpitopeMapping Protocols in MolecularBiolo
gy,Vol.６６(Glenn E.Morries, Ed.、1996) Humana Press、totowa、New Jersey
参照。例えば、直鎖エピトープは固体支持体上で同時に合成した多数のポリペプ
チドにより決定し測定でき、この際のポリペプチドはタンパク質分子のその部分
に対応し、ポリペプチドが支持体に結合している間に抗体を用いてこのポリペプ
チドと反応させる。この種の技法は既知であり、例えば、米国特許第4,708,871
号公報；Geysenらの(1984) Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3998-4002;方法；Geysen
らの(１９８6) Molec.Immunol. 23:709-715、に記載があり、これらすべてを文
献としてここに組み入れる。同様に配座エピトープは例えばX線結晶学および２
次元核磁気共鳴による等のアミノ酸特有の配座を測定して容易に同定される。例
えば、EpitopeMapping Protocols参照。タンパク質の抗原領域もまた、例えばOm
iga version 1.0ソフトウエアプログラム（Oxford moleculsr Grouop製）を用い
て計算された標準抗原性およに水治療法プロットを用いて同定できる。このコン
ピユタープログラムはHopp/Woods法を採用して抗原性プロファイルを測定し、か
つ水治療法のためにKyte-Doolittle 技法を用いる。ＨｏｏｐらのProc. Natl.
Acad.Sci.USA (1981) 78:3824-3828; KyteらのJ.Mol.Biol.(1982) 157:105-1
32.。

【００３７】 ここで用いる“配座エピトープ”なる用語は、完全長タンパク質の１部分、ま
たはその類似体もしくは変異体を指し、この完全長天然型タンパク質以内のエピ
トープをコードするアミノ酸配列に生え抜きの構造的特徴を有する。天然型構造
的特徴には、グリコシル化および３次元構造が含まれるが、これらに限定されな
い。配座エピトープは組換えにより生じ、細胞中で発現され、例えばそのエピト
ープが変性しないような所望の構造特徴を保持する条件下で細胞から抽出できる
。この種細胞には、バクテリア、酵母、昆虫および哺乳類細胞が含まれる。HCV
ポリタンパク質をからの組換え配座エピトープの単離は,例えば、WO 96/04301
号、WO 94/01778号、 WO95/33053号、 WO92/08734号公報に記載があり、ここに
引例として加入する。

【００３８】 ここに用いる”T−細胞エピトープ“なる用語は、そのエピトープ構造または
会合ハプテンに向かってT−細胞免疫性を誘導し得るペプチド構造の特徴を指す
。T−細胞エピトープは直鎖ペプチド決定因子を一般的に含み、MHC分子のペプチ
ド−結合裂け目内での拡張配座を想定する（Unanue らの Science (1987) 236:
551-557）。ポリペプチドのMHCクラスII−会合直鎖ペプチド決定因子（アミノ酸
長は一般に５−１０）への転化は”抗原プロセシング“と呼称し、抗原提供細胞
（APC）により実施される。一層具体的にはT−細胞エピトープは電荷および疎水
性を含む１次アミノ酸配列物性等の短鎖ペプチド構造の局部的特徴、およびらせ
ん構造等の２次構造の、ある種の型により特徴付けされ、これらのらせん構造は
ポリペプチド全体の折曲がりには依存しない。さらに、ヘルパーT細胞により認
識され得る短鎖ペプチドは一般的に両親媒構造で、疎水性部位（MHC分子との相
互反応のための）および（T細胞受容体との相互反応のための）親水性部位を含
むと信じられ（Margalit らの Computer Prediction of T-cell Epitopes,New g
eneration Vaccines Marcel-Dakker, Inc.ed.G..C. Woodrowらの(1990) pp.109
-116）、さらにこの両親媒性構造はα型らせん配置を有すると信じられる。例え
ば、Spougeらの J. Immunol. (1987) 136:204-212; BerkowerらのJ. Immunol.(
1986) 136:2498-2503)参照。

【００３９】 したがってＴ細胞エピトープを含むタンパク質のセグメントは各種のコンピユ
ータプログラムを用いて容易に予測できる（例えば、Margalit らの Computer P
rediction of T-cell Epitopes, New generation Vaccines Marcel-Dakker, In
c.ed.G..C. Woodrowらの(1990) pp.109-116）参照。この種のプログラムはペプ
チドのアミノ酸配列をT細胞反応を誘導するべく知られた配列と比較し、T細胞エ
ピトープに必要とされるアミノ酸のパターンを探索するのが一般的である。

【００４０】 一般的に、”同一性”なる用語は、２種のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド配列のヌクレオチド対ヌクレオチドまたはアミノ酸対アミノ酸の正確なそれぞ
れの符合を意味する。同一性％は、配列を並べて２種分子間の配列定法を直接比
較し、二つの整列配列間の一致の正確な数を数え、短鎖配列の長さで割り、結果
を１００倍して測定できる。この分析用には、容易に入手できるコンピュタープ
ログラムが使用できる。ALIG, Dayhoff、M.O. in Atlas of Proterin Sequence
and Structure M.O. Dayhoff ed.5 Suppl. 3:353-358;,National biomedical R
esearch Foundation,Washington、DC。このプログラムはペプチド分析にSmith a
nd Waterman Advances in Appl.Math. 2:482-489の局所同一性アルゴリズムを採
用している。ヌクレオチド配列同一性の測定のためのプログラムは、Wisconsin
Sequence analysis Package、Version 8 ( Genetics Computer Group, Madison,
N WI) から例えば、BESTFIT, FASTA および GAPプログラムとして入手でき、こ
れらもSmith and Watermanアルゴリズムを採用している。これらのプログラムは
製造元が推奨し、上記のWisconsin Sequence analysis Packageに記載のデフォ
ールトパラメータを用いて容易に利用できる。例えば、参考配列に対する特定ヌ
クレオチド会い列の同一性％はデフォールトスコアリングテーブルを用いたSmit
h and Waterma同一性アルゴリズムを使用し、かつ６種のヌクレオチド位置のギ
ヤップペナルテイを用いて測定できる。

【００４１】 本発明の文脈において同一性％を確立する他の方法は、University of Edinbu
rg著作権を有するプログラムノMPSRCHパッケージの使用であり、このパッケージ
はJohn F. Collins and Shane s.Sturrokにより開発され、IntelliGenetics、In
c.（Mountain View、CA）により配給される。パッケージのこの組からSmith an
d Watermaアルゴリズムが採用でき、この場合、デフォルト・パラメータがス
コーリング・テーブ用に使用される（例えば、１２のギヤップ・オープンペナル
テイー、1つのギヤップ拡張ペナルテイー、および６のギヤップ）。生じたデー
タから“マッチ”バリユーが“配列同一性”を表わす。配列間の同一性％または
類似性を計算する他の好適なプログラムは業界において既知であり、例えば他の
提携プログラムはデフォルト・パラメータを使用するBLASTである。例えば、BLA
STNおよびBLASTPは次ぎのデフォルト・パラメータを用いて使用できる：属コー
ド＝標準；フイルター＝ナシ；ストランド＝両方；カット・オフ＝６０；エキス
ペクト＝１０；マトリックス＝BLOSUM62; Descriptions=50配列；sort by = HIG
H SCORE; Databases = 非重複、GenBank + EMBL + DDBL + PDB + GenBank CDS
翻訳 + Swiss タンパク質 ＋ Spupdate + PIR。これらのプログラムの詳細は
次ぎのインターネットアドレスで検索できる：。

【００４２】 これらポリペプチドおよびタンパク質の配列は既知である（例えば、米国特許
第5,350,671号、引例としてここに加入）。例えばHCVポリタンパク質を由来の一
般的および特異的免疫原性ポリペプチドが記載される。例えば、欧州公開第318,
216号および第388,232号; ChooらのScience (1989) 244:359-362: KuoらのScien
ce (1989) 244:362-364; Houghtonらの Hepatology(1991) 14:381-388: Chienら
の Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89:10011-10015; Chien らの J. Gastr
oent. Hepatol.(1993) 8:S33-30; Chienらの WO 93/00365 号；Chien,D.Y.、WO
94/01778号公報。 これらの刊行物はHCVならびにHCVポリペプチド免疫原性試薬の製造および用途
に関する広範な背景を提供し、ここに引例としてこれらを加入する。

【００４３】 簡便のため、各種HCV領域はHCV-1aのゲノムによりコードされるポリタンパク
質に関連したアミノ酸数に関して定義されるのが一般的であることを理解される
べきである（Choo らの（１991） Proc Natl Acad Sci USA 88:2451）。.ここで
は開始剤メチオニンはポジション１に明記される。しかし本発明において用いる
ポリペプチドはHCV-1a配列由来のこれらに限定はされない。この事については、
他のHCV分離体中の対応領域は、配列を最高の整列へともたらす態様で二つの分
離体から配列を整列することにより容易に測定できる。

【００４４】 例えば、アミノ酸1-191;アミノ酸 10-53;アミノ酸 10-45;アミノ酸 67-88;ア
ミノ酸86-100;アミノ酸81-130;アミノ酸121-135;アミノ酸120-130;アミノ酸121
−170; および例えばHoughtonらの米国特許第5,350,671号; Chienらの Proc.Nat
l.Acad.Sci. USA (1992) 89:10011-10015；Chienらの J. Gastroent. Hepatol(1
993) 8:S33-39; ChienらのWO93/00365号;Chiennｄ。D.Y.らの WO94/01778; およ
び許可済み米国特許出願第08／402、590号および 同第 08/444,818号公報（これ
らを引例としてここに加入する）において同定されたｋｏａエピトープのいずれ
かは、本発明における免疫原性複合体における使用が見出されるはずである。

【００４５】 Ｅ１およびE2由来のポリペプチドならびにE1およびE2間の融合体を含むHCVの
エンベロープ由来のHCVポリペプチドも本発明はにおいて使用できる。 HCVエンベロープ糖タンパク質E1およびE2は、共免疫沈殿し得る安定な複合体
を形成する（Grakoui らの(1993) J.Virol.67:1385-1395; Lanford らの（1993
）Virology 197:225-135; Ralstonらの(1993) J.. Virol. 67:6753-6761参照）
。このHCV E1およびE2糖タンパク質は霊長類動物の研究で防御性であることが
判明した（Chooらの (1994) Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:1294-1298）。HCV1の成
熟E1領域は、おおよそアミノ酸384−385において始まり、おおよそアミノ酸残基
746である限り拡張する（LinらのJ.Virol.(1994) 68:5063-5073参照）。

【００４６】 加えて,このウイルスの領域の非構造由来のポリペプチドも本発明において使
用し得る。HCVポリタンパク質のNS3/4a領域はYao らの Structure (November 1
999) 7:1353-1363に記載があり、ここには、このタンパク質のアミノ酸配列およ
び総体的構造の開示もある。同じく米国特許第5,843,752号公報の参照。これら
の文献を引例としてここに加入する。上記のように天然型配列または免疫原性類
体のいずれかは主題配合物中に使用できる。Dasmahapatra らの米国特許第5,843
,752号公報およびZhang らの米国特許第5,990,276号公報参照。これらを引例と
してここに加入する。

【００４７】 加えて、国際特許公開WO第97/44469号公報に記載のような多融合抗原（“MEFA
”と呼称）もまた、免疫原性複合体に関連させ得る。この種のMEFAは各種領域の
二つまたはそれ以上から誘導された多エピトープを含む。このエピトープは1つ
以上のHCV株からのものが好ましく、これらは単一ワクチン中のHCV多株から守る
追加的能力を提供する。

【００４８】 その上、本発明における免疫原性複合体に使用するポリペプチドはHCVポリタ
ンパク質のNS3領域から誘導し得る。多数のこの種のポリペプチドが既知であり
、これらの中にはc33cおよび c100領域由来のポリペプチドならびにc２５等のNS
3エピトープを含む融合タンパク質が含まれるが、これらに限定はされない。こ
れらおよび他のNS3ポリペプチドは本発明において有用であり、これらは業界で
既知であり、例えばHoughtonらの米国特許第5,350,5715号; Chienらの Proc.Nat
l. Acad.Sci. USA(1992) 89:10011-10015;ChienらのJ. Gastroent. Hepatol. (
1993) 8:S33-39; Chienらの国際出願WO94/01778号; 許可済みの米国特許出願第0
8/403,590号および同第08/444,818号公報参照。これらの文献を引例としてここ
に加入する。

【００４９】 問題のHCV抗原に対する細胞免疫反応を提供させる目的で、HCVポリペプチドの
多数が本発明はにおける免疫原性複合体配合物中に使用され得るか、またはそれ
と共に投与され得ることが容易に分かる。

【００５０】 本発明はさらに上記のような免疫原性複合体にまで拡張され、この場合の荷電
タンパク質はHCVのコアもしくは他のタンパク質またはそのフラグメントを含む
融合タンパク質である。”融合タンパク質”なる用語は、HCVコアまたは他のタ
ンパク質またはそのフラグメントが他のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク
質に最も適切に結合している場合の融合をさすものと理解されるべきである。”
最も適切に結合“なる用語は、HCVコアもしくは他のタンパク質またはフラグメ
ントおよび他のペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質が直接または間接い
ずれかでリンカーペプチドまたはポリペプチドを介して互いにイン・フレーム融
合することを示すことが意図され、この場合の融合は、HCVコアもしくは他のタ
ンパク質またはフラグメントのN-末端またはC−末端のいずれかにおいてなされ
る。

【００５１】 この融合タンパク質は、ヘキサ−his (His) ₆ 部位、グルタチオン−S−トラ
ンスフエラーゼ(GST)部位またはFLAG部位等の標識タンパク質もしくはポリペプ
チド部位を含んでもよい。

【００５２】 しかし、この融合タンパク質は、免疫学的に第2活性ペプチド,ポリペプチド
またはタンパク質を含むのが好ましく、これらはHCV,またはある種の他のウイ
ルス、バクテリア,黴または類似の生物から誘導され得る。

【００５３】 融合タンパク質中に存在するリンカーペプチドまたはポリペプチドは,1から50
,好ましくは1から20,一層好ましくは１から５アミノ酸の配列を含む。

【００５４】 本明細書を通じた“有機キヤリア”なる用語は、抗原がそれに会合している場
合のいずれかの分子、分子の集合体または複合体、化合物もしくは他の完全をさ
す指すものと理解されるべきであり、このものは免疫反応特に細胞Tリンパ球反
応の抗原への誘導を容易化する。これに関しての主題キヤリアは”有機“であり
、”有機”とは、天然に、組換えによりまたは合成により得られまたは誘導され
たいずれかの炭素化合物として理解されるべきである。特に好ましい実施態様で
は、この有機キヤリアはアジュバントである。“アジュバント”は、免疫反応の
一種または二種以上のいずれかの観点を刺激、増進または別のやりかたで上方調
節するように機能するいずれかの分子、分子集合体もしくは複合体または他の完
全体を意味する。例えば、このアジュバントは炎症を誘導して抗原局部化の部位
へと免疫反応細胞を誘引する。別法として、このアジュバントは抗原を放出し、
これにより免疫システムの継続的刺激を提供する。

【００５５】 本発明における使用に適するアジュバンである荷電有機キヤリアは、サポニン
、サポニン複合体、サポニンの免疫刺激複合体の一種または二種以上のいずれか
、コレステロールおよび ISOMATRIX^TM として知られる脂質（例えばサポニン成
分および／またはリン脂質成分）、リポソームまたは水中油乳化物が含まれるが
これらに限定はされない。ISOMATRIX^TMの組成および調製法は国際特許出願PCT/S
E86/00480、オーストラリア特許第558258号および同第 632067号公報、ならびに
欧州特許出願第0180564号中に詳細な記載があり、これらを引例としてここに加
入する。アジュバントのさらなる例は、Coxおよび Coulterらの1992、1997およ
び 1999の刊行物中に詳細に記載のものが含まれるが、限定はされない。主題の
有機キヤリアは天然に、合成によりまたは組換えにより誘導されてもよい。

【００５６】 加えて、本発明は上記のような免疫原性複合体を一層好ましく提供し、この場
合の荷電有機キヤリアは負電荷を帯びたアジュバントである。

【００５７】 好ましくは上記アジュバントはサポニンまたはサポニン複合体を含む。一層好
ましくは上記サポニンはISCOMATRIX^TMである。

【００５８】 本発明の有機キヤリアはその初期の形態または天然型において負電荷,正電荷
を帯びるか、または中性である。負電荷の増強（例えば有機キヤリアがほんの弱
く負の電荷を帯びている場合）または中性もしくは正の電荷を帯びた有機キヤリ
アを負電荷を帯びたキヤリアに転化するには、業界で既知の適切な方法により成
就する。例えば有機キヤリアが水中油型乳化物の場合、非極性tailを有するアニ
オン型界面活性剤を均一混合すると油滴中への界面活性剤界のtailの挿入により
乳化物に対して総体的負電荷を付与し得て、これにより負電荷を帯びた露出の頭
群が残る。サポ複合体アジュバントの負電荷は例えば複合体形成の過程で負電荷
を帯びた脂質の添加により増強できる。

【００５９】 キヤリアの負電荷を増強できる界面活性剤界の例は、コール酸、デオキシコー
ル酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸が含まれるが限定されない。キ
ヤリアの負電荷を増強できる脂質の例は、リン脂質（好ましくはホスフアチジル
イノシトール、ホスフアチジルセリン、ホスフアチジルグリセロールおよびホス
フアチジ酸最も好ましくはカルジオリピン）およびバクテリア脂質（好ましくは
モノホスホリル脂質A(MPL)ならびに最も好ましくはOM174等のジホスホリル脂質A
（国際特許WO第95/14026合公報に記載）が含まれるが限定されない。

【００６０】 いかなる方法にせよ本発明を限定することなく本発明者らは、主題ダウ有機キ
ヤリアおよび荷電した抗原が天然にそれぞれ負および正の電荷を帯びている場合
は、本発明の目的が達成されることを確認した。しかし、もし負電荷を帯びた天
然型有機キヤリアが一層負電荷を帯びるようになされるならば、（好ましくはカ
ルジオリピンまたはジホスホリル脂質の添加により）さらに一層効率的な免疫原
正複合体が達成でき得る。

【００６１】 したがって、好ましい実施態様の1つにおいては上記免疫原性複合体が提供さ
れるが、この場合の負電荷を帯びたアジュバントは天然に負電荷を帯びたアジュ
バントであるが、その負電荷の度合いを増強すべく修飾されてなる。

【００６２】 “天然に”負電荷を帯びたアジュバントなる用語は、天然型、組換えまたは合
成手段のいずれであっても、その創造物上にその分子が保有する電荷を指すもの
と理解されるべきである。電化の度合いを増強するための修飾は、上記の適切な
いずれかの技法により達成できる。主題のアジュバントはカルジオリピンまたは
ジホスホリル脂質Aの添加により一層負に荷電させるのが好ましい。

【００６３】 本発明は一部において、静電的会合好ましくは負電荷を帯びた有機キヤリアと
性電荷を帯た抗原との免疫原性複合体の形成に準拠している。この種複合体を被
験者に投与すると、非会合型のアジュバントおよび抗原を同時等よするよりも著
しく良好な免疫反応の誘導が容易化される。特に本発明にしたがったアジュバン
トと会合した抗原の投与は、この抗原に反応する細胞傷害性のＴリンパ球反応の
誘導を容易化する。 しかし、体液性または他の細胞反応もまた高められる。

【００６４】 一般的に、本発明はの免疫原性複合体では、荷電抗原に対する荷電有機聞きあ
の比率は、重量基準で５：１から０．５：１であり、好ましくは重量基準で約３
：１、および一層好ましくは重量基準で２：１である。

【００６５】 いずれか1つの理論または活動態様に本発明はを限定せずに、上記抗原を上記
アジュバントと会合させると同一抗原提供細胞へのアジュバントおよび抗原の共
反そうが容易化され、これにより、これらの分子が共反そうされなかった場合に
は生起しないか、または効率的に生起しないか免疫反応の誘導が容易化される。
例えば、ある種ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球反応の誘導は、抗原存在細胞中の
抗原のエンドソーム逸脱が生起すると考えられる。これには、抗原およびアジュ
バントの抗原存在細胞への共搬送が必然的に必要である。

【００６６】 したがって本発明はのさらなる観点は、体液性およびまたは細胞中かい免疫反
応を含む、哺乳類における免疫反応を誘導する目的での本発明の使用に関するが
、限定されない。

【００６７】 したがって本発明はの他の観点は、荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免
疫原性複合体を活性成分として含むワクチン組成物に関し、好ましくは場合の有
機キヤリアおよび抗原は静電的に会合してなり、かつ、荷電抗原はC型肝炎ウイ
ルス（HCV）のポリタンパク質もしくはそのフラグメント、または上記ポリタン
パク質もしくはそのフラグメントを一種または二種以上の医薬として許容される
キヤリアおよびまたは希釈剤と共に含む融合タンパク質である。

【００６８】 好ましくは上記有機キヤリアは、アジュバントであり、一層好ましくはサポニ
ンまたはサポニン複合体である。好ましいサポニン複合体はISCOMATRIX^TMである
。 好ましくは上記有機キヤリアは負電荷を帯びている。

【００６９】 本発明のこの観点にしたがったワクチン組成物は、予防用（感染防止に使用）
または治療用（感染後の疾病の処置に使用）のいずれかであり得る。通常、この
ワクチン組成物は例えば注射により皮下、筋肉内、または経皮のいずれかで、非
経口的に投与される。他の投与態様に適するその他の配合物には、経口もしくは
肺経由配合物、座薬、および経皮性外用薬が含まれる。薬剤投与処置は単回投与
計画または複数回投与計画であり得る。このワクチン組成物は他の免疫調整医薬
物質との組み合わせで投与可能である。

【００７０】 これらのワクチン組成物は、一種または二種以上の医薬として許容されるキヤ
リアおよびまたは希釈剤との組み合わせにおいて本発明における免疫原性複合体
を含み、この種のキヤリアには組成物を受理する患者に有害反応の生成をそれ自
体が誘導しないようないずれかのキヤリアが含まれる。好適なキヤリアは、タン
パク質、ポリサッカリド、ポリアクチン酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸、
アミノ酸共重合体、脂質集合体（油的またはリポソーム等の）、および不活性ウ
イルス粒子等の通常は大きく徐々に代謝される高分子物質である。この種のキヤ
リアは業界で公知である。加えて、これらのキヤリアは免疫原性複合体自体のア
ジュバント効果以外にも、免疫刺激剤またはアジュバントとして機能する。さら
に、この抗原は、ジフテリア、破傷風、コレラ、H.ピロリ等のバクテリア毒素、
病原体に共役できる。

【００７１】 このワクチン組成物は、組成物の有効性を増強するためのさらなるアジュバン
トも含み得る。好適なアジュバント中には、（１）水酸化アルミニウム、リン酸
アルミニウム、硫酸アルミニウム等のアｒミニウム塩（アラム）；（２）ムラミ
ルポリペプチド〔以下参照〕、または例えば（ａ）5％スクアレン、０．５％Twe
en 80、およびサブミクロン粒子へと練り上げた０．５％Span 85(任意に各種の
量の任意、およびサブミクロン粒子へと練り上げた０．５％Span 85(任意に各
種の量の任意のMTP-PE（以下参照）を含む)、（ｂ）１０％スクアレン、０．４
％Tween 80、５％プルロニック・ブロックポリマー、およびサブミクロン乳化物
へとミクロ流動化するか、または大粒子径乳化物を生ずるように長音波処理した
いずれかのthr-MPD(以下参照)、ならびに（ｃ）２％スクアレン、０．２％ Twe
en 80、およびホノホスホリル脂質A（MPL）、トレハロースジマイコレート（TDM
）、および細胞壁骨格（CWS）好ましくはMPL+CWS(Detox^TM); (3) Stimulon^MT〔C
ambridge Bioscience、Worcester、MA〕; (4) 完全Freund‘s アジュバント（C
FA）および不完全Freund‘s アジュバント（IFA）；（５）インターロイキン等
のサイトカイン（例えばIL-1,IL-2,IL-4.IL-5,IL-6,IL-7,IL12,等）、インター
フェロン（例えばγインターフェロン）、マクロフアージコロニー刺激因子（M-
CFS）、腫瘍ネクロシス因子（TNF）；（６）コレラ毒素（CT）等のバクテリアAD
P-リボシル化毒素の無毒化変異体、百日咳毒素（PT）、またはE. Coli熱不安定
性毒素（LT）特にLT-K63、LT-R72、 CT-S109、PT-K9/G129（WO第93/13302号公報
および同第92/19265号公報参照；（７）組成物の硬化を増強する免疫刺激医薬物
質として作用する他の物質；ならびに（８）国際特許出願PCT/US99/17308 号公
報に記載のような吸着高分子を伴うミクロ粒子を不溶性マトリックス固定化界面
活性剤被覆リパーゼ複合体を含むがこれらには限定されない。アラムおよびMF59
が好ましい。

【００７２】 上記のように、適切なムラミルペプチドの中には、N−アセチル−ムラミル−L
−スレオニル−D−イソグルタミン（thr-MDP）、N−アセチル−ノルムラミルL−
アラニル−D−イソグルタミン（nor-MDP）、N−アセチル−L−アラニル−−D−
イソグルタミニル−L−アラニン−２−（１‘−２’−ジパルミトイル− グリ
セロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（MTP−PE）等が含ま
れるが,これらに限定はされない。

【００７３】 このワクチン組成物は通常水、医薬用食塩水、グリセロール、エタノール等の
希釈剤を含む。さらに、湿潤剤もしくは乳化剤、pH緩衝物質等の補助物質も組成
物中に含んでもよい。

【００７４】 注射用に適する処方には、水性滅菌溶液（ここでは水可溶性）または分散剤お
よび滅菌注射溶液もしくは分散剤の調合用調整のための滅菌用粉末が含まれる。
これらは製造および貯蔵条件下で安定であらねばならず、バクテリア、黴類等の
微生物の汚染作用から保存されなければならない。微生物作用の防止は、各種抗
菌剤および抗黴剤例えばパラベン、クロロブタノール、フエノール、ソルビン酸
、チメロサル等により行える。多くの場合、例えば糖類もしくは塩化ナトリウム
等の等張剤を含むのが好ましい。この注射用組成物の長期の吸収は例えばアルミ
ニウムモノステアレートおよびゼラチン等の吸収遅延用医薬物質の組成物中への
使用により行える。

【００７５】 滅菌注射溶液は、適切な溶剤中に他の上記各種任意成分と一緒に所要量の活性
かつを均一混合して調整する。一般的に分散物は、塩基性分散媒体および必要な
他の成分を含む滅菌ビヒクル中に各種の滅菌活性成分を均一混合して調整する。
滅菌注射溶液調整用の滅菌粉末の場合に好ましい調整方法は、減圧乾燥および凍
結乾燥技法であり、これにより活性成分に加えて、予め滅菌濾過した溶液からの
任意の所望追加成分からなる粉末が得られる。

【００７６】 活性成分が適切に保護されている場合、これらは例えば不活性希釈剤もしくは
吸収性食用しキヤリアと共に経口投与でき、またはこれらは硬質もしくは軟質殻
ゼラチン中に封入し、錠剤へと圧縮または栄養補助食品中に直接混合する。経口
治療投与の場合、活性化合物は賦形剤と共に均一混合して摂取用錠剤、頬用錠剤
、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁物、シロップ、ウエハー等の形態で
使用できる。この種の組成物および調整物は少なくとも1重量％の活性化合物を
含むべきである。組成物および調整物の％は当然ながら変更でき、単位重量当り
約5から約８０％の範囲である。治療に有用なこの種組成物中の活性成分の量は
、適切な服用量が得られるような量である。本発明における好ましい組成物およ
び調整物は活性化合物の約０．１μｇから2,000mgを含むように調整する。

【００７７】 錠剤、トローチ、ピル、カプセル等は次ぎに掲げたような成分：ガム、アカシ
ア、コム澱粉またはゼラチン等のバインダー；ジリン酸ジカルシウム等の賦経剤
；トウモロコシ澱粉、馬鈴薯澱粉、アルギン酸等の崩壊剤；ステアリン酸マグネ
シウム等の滑剤；ならびにスクロース、ラクトースまたはサッカリン等の甘味料
、またはペパーミント、ウインターグリーン油、チエリーフレーバー等の味付け
剤も含み得る。一回の経口服用形態がカプセルの場合、上記の型の材料以外に、
液状キヤリアを含んでもよい。他の各種材料もコーテイング剤としてまたは1回
用量単位の物理的形態修飾用に存在させてもよい。例えば錠剤、ピルまたはカプ
セルはシェラック、糖類または両方で被覆できる。シロップ、エリキシル剤は、
活性化合物、甘味料としてのスクロース、保存料としてのメチルおよびプロピル
パラベン、チエリーまたはオレンジフレーバー等の味付け剤を含み得る。1回用
量単位形態の調整に用いる任意材料は、当然ながら医薬的に純粋で,使用料にお
いて実質的非毒性でなければならない。加えて、活性化合物は持続性調整物およ
び配合物中に均一混合できる。

【００７８】 本発明における操作をどんな方法にせよ限定することなしに、本発明はにおけ
る免疫原性複合体の共搬送は、免疫反応および特に細胞傷害性T−リンパ球反応
を抗原へと誘導するのに特に有用である。この種の免疫反応は特異的（T細胞お
よびまたはB細胞）およびまたは非特異的免疫反応であり得る。

【００７９】 したがって本発明のさらなる他の観点は、免疫反応を哺乳類において抗原へと
誘いだし、陽動しまたは容易化する方法に関し、上記方法は、上記免疫原性複合
体またはワクチン組成物の有効量を上記哺乳類に投与することを含む。上記得免
疫反応は細胞傷害性のTリンパ球反応であるのが好ましい。

【００８０】 主題の細胞傷害性のTリンパ球反応は孤立して、または細胞反応、体液性反応
または他の特異的もしくは非特異的免疫反応と共に生起し得る。

【００８１】 本発明のさらなる観点は、本発明はにおける免疫原性複合体を病状の治療てき
およびまたは予防的処置に関連して使用することに関する。本発明はにおける方
法により処置され得る病状の例には、HCV感染からの任意の病状が含まれる。

【００８２】 したがって、本発明のさらに他の観点は、哺乳類における病状処置に関し、上
記方法は、上記の免疫原性複合体またはワクチン組成物の有効量を上記哺乳類に
投与することを含み、本発明の好ましい実施態様において場合の上記組成物投与
は病状の徴候もしくは進行の抑制、停止、遅延または予防する免疫液反応を誘発
,誘導または容易化する。

【００８３】 組成物の直接搬送は、皮下、腹腔内、静脈内、または筋肉内か、または細胞間
組織空間へと搬送するかのいずれかの注射により成し遂げるのが一般的である。
この組成物は組織傷害中にも投与可能である。他の投与態様には、経口および肺
投与、座薬、および経皮性適用が含まれる。服用治療は1回投与計画または複数
回投与計画であり得る。

【００８４】 “有効量”なる意味は、所望の免疫反応を達成するのに、または処理されるべ
き特定病状の徴候もしくは進行を遅延,防止または休止させるのに少なくともに
部分的に必要な量を意味する。量は処理されるべき個々人の健康おおび物理的条
件、処理されるべき個々人の分類学上の郡、合成抗体に対する個々人の免疫径の
能力、所望する保護の度合い、ワクチン組成物の調製、医学的状況の評価、およ
び他の関連因子に応じて変わる。量は比較的広い範囲以内にあり、ルーチン試験
で測定できる。

【００８５】 “哺乳類“なる用語は、ヒト、霊長類、家畜（マウス、ネズミ、ウサギ、ギエ
ナピッグ等）、コンパニオン動物（例えばイヌ、ネコ）および管理野生動物（例
えばカンガルー、シカ、キツネ）を含む。好ましくは哺乳類はヒトまたは実験用
動物である。一層好ましくは哺乳類はヒトである。

【００８６】 処置を受ける哺乳類は病状または潜在的病状の治療処置または予防処置を要す
るヒトまたは動物である。

【００８７】 本発明のさらなる他の観点は、上記の免疫原性複合体またはワクチン組成物を
病状の徴候もしくは進行の抑制、休止、遅延または防止のための医薬の製造に使
用することにある。

【００８８】 本発明のさらなる他の観点は、病状の徴候もしくは進行の抑制、休止、遅延ま
たは防止のための医薬物質に関する。上記の医薬物質は上記免疫原性複合体また
はワクチン組成物を含む。

【００８９】 本発明のさらなる観点は、次ぎの非限定的実施例中に一層詳細に記載される。

【００９０】 “ISCOPREP^TM703”なる用語は、50-90重量%のQuil Aの フラクション A およ
び 50-10重量%の Quil Ａの フラクションＣを含むサポニン調製を指す。フラク
ションＡおよびＣはQuil Aの疎水性フラクションから調製される。フラクショ
ン”Ａ“および”Ｃ“、これらの調整法およびISCOPREP^TM703の調製方法はＷＯ
第96/11711号公報に記載があり、ここにこれを引例として加入する。

【００９１】 異化は本発明を実施するための特定実施態様の例である。この実施例は説明目
的のための提供であり、本発明はの制限することを意図するものではない。この
発明の教示により得られた各種の方法により本発明が実施でき得ることは、当業
者には容易に理解し得るであろう。

【００９２】 使用した数値（例えば温度および量等）に関して正確を期す努力がなされたが
,ある種の実験的誤差、偏差については当然ながら許容されるべきである。

【００９３】 実験材料および方法 動物 Rhesus macaques（Macaca mulatta）はfor Biomedical Research (SFBR, San
Antonio, TX) のためにSouthwest Foundationで飼育した。研究は NIH Guidance
for Care and Use ｏｆ Laboratory Animal (National Institute of Health.
(1985) Guide for the care and use of laboratory animals. US depertment
of Health and Humane services.No 82-23号 National Institute of Health B
ethesda、MD)。この動物の象徴であるClass I 主要組織適合性遺伝子複合体(MHC
) は (Urvaterらの (2000) J. Immunol. 164:1386)に記載のようにい行った。

【００９４】 メスC57BL/6(H-2^b) マウスはCharles River Laboratory から購入し、年齢８
−１０週までを用いた。マウスは病原菌の無い環境下に飼い、動物実験用の国際
ガイドラインに従がって取り扱った。

【００９５】 免疫原およびアジュバント

【００９６】 E. Coli完全長HCV-1a Core組換えタンパク質 (aa:1-191) はGMP条件下に
造り精製し純度98%以上であった。組換えHCV-1aE1E2₈₀₉ タンパク質は CHO細
胞中で造った。修飾 E1E2タンパク質はアミノ酸 192-809を含んでいた。組換え
NS35Core121タンパク質は酵母細胞中で造った。アジュバントLTK63はEscherichi
a Coli の熱不安定性エンテロトキシンの解毒変異体であるのが一般的であり、
位置６３におけるサリンはリシンで置換される（Partidosらの (1999) Immunol
. Lett. 67:209）。Core-ISCOM 調製物はコアタンパク質を予備形成ISCOMATRIX^{T M} (中空ISCOM^TM)と共にイオン相互反応を利用してコアタンパク質と混合して抗
原およびアジュバント間の会合を最大にする。ISCOMATRIX^TM は透析濾過を透析
に変えた以外は上記方法により本質的に調製した（Coulterらの (1998) Vaccin
e 16:1243）。この水中油型アジュバントＭＦ５９は(Ottらの (1995) Pharm.B
iotechnol.6:277)に記載がある。

【００９７】 調製後、調製物をスクロース勾配（10-50%w/v）上で精製し、フラクションン
をSCOMATRIX^TM およびタンパク質について分析し、会合量を測定した。SCOMATR
IX^TM はジフエニルヘキサトリエン（ＤＰＨ）を用いて分析したが、ＤＰＨは脂
質と会合すると蛍光を発する。ＤＰＨＳはアセトン中1mg/mlで溶解し、次いでＰ
ＢＳｐＨ７．２中１：５０に希釈し、次いで各フラクション５０μｌをモチイテ
用いてmicrotitre 皿中で混合した。２０−２５℃で１５０分保温後、蛍光光度
計中で励起３５ｎｍおよび放射４６０ｎｍで皿を判読した。タンパク質は製造元
の指示に従がってPierce Coomassieを用いて検出した。５０μｌCoomassie溶液
をmicrotitre 皿中で各フラクション５０μｌに添加した。皿を混合し、吸光度
は５９５ｎｍで判読した。

【００９８】 粒子径分析 調製物の粒子径をNicomp Submicron Particle Sizer Model 370を用いた動的
光散乱法で分析した。

【００９９】 ポリペプチドおよびワクシナウイルス Rhesus macaques を麻酔下に免疫化した。第１研究は各３匹動物の３群に分け
た動物９匹からなった。第１群（動物BB228、BB232および DV036）を０月の時点
でrVVC/E1の ２×１０^８ プラーク形成器（ｐｆｕ）（１×１０^８ 皮内および
１×１０^８乱切により）を用いて感染させた。この群はCTL初期感染の正の対照
として機能した。第２群からの動物（AY921、BB231, DV037） は０、１、２お
よび６月の時点で左大腿四頭筋の筋肉注射（ＩＭ）により２５μｇのCore-ISCOM
で免疫化した。第３群からの動物（AY922,BB227およびBB230）は0、１、２およ
び６月の時点で２００μｇのLYK63でアジュバント化した２００μgのHCV-Core
タンパク質でIMA注射により免疫化した。第２研究は動物（15860、15861、15862
、15863および 15864）を0, 1および 2月の時点で 左大腿四頭筋の筋肉注射（Ｉ
Ｍ）により５０μｇのCore-ISCOMで免疫化した。いくらかのコア免疫化動物（表
参照）も最終ワクチン免疫化後９また１２週でrVVC/E1の２×１０^８ ｐｆｕ（
１×１０^８ 皮内および１×１０^８乱切により）を受けた。

【０１００】 マウス（群当り動物１０匹）を組換えE1E2タンパク質単独の２μｇ（服用量当
り）、またはMF59(V:V)の存在下の組換えE1E2タンパク質の２μｇ（服用量当り
）、または組換えタンパク質の２μg（服用量当り）＋ Core-ISCOM２μｇ（服
用量当り）を用いて０,４および８週においてtibialis 前方筋肉（筋肉当り５０
μｌ）で免疫化した。

【０１０１】 細胞および細胞ライン 動物の麻酔下に周辺部血液を大腿骨から抜き出した。PBMCはFicoll-hypaque
勾配上の遠心分離後に得られ、ウエル当り５×１０^６ 細胞で２４かけるウエル
皿中で培養した。これらの細胞中１×１０^６ は１０μMのペプチドプール（こ
このペプチドからなる）を用いて３７℃で１時間感作し、洗浄し、１０ｎg／ml
のＩＬ−７（R & D, Minneapolis）で補足し培養基(PRMI 1640、10%熱非活性化
ウシ胎児血清、および１％抗生物質)２ｍｌ中の残留４×１０^６ 未処理PBMC中
に添加した。４８時間後、上澄み済み液（PHAを含まないT-STIM、Collaborateti
ve Biomedical Products, Bedford, MA）を含む５％（最終）インターロイキン
−２および５０U/ml｛最終｝の組換えIL-2（Chiron Corporation、Emeryville、
CA）をこの培養基に加えた。培養基は３−４日ごとに加えた。培養１０日後、CD
8+T細胞を磁気ビーズ（Dynal、Oslo、Norway）に結合したCD8抗体を用いて単離
した。精製CD8+細胞（流動血球計算で測定した純度９３％以上）を細胞毒性評定
に先立ちさらに２−３日培養した。これらのCD8＋T細胞をB-LCLおよびペプチド
を用いて定期的に再刺激するとペプチド特異的CD8+ラインが得られた。

【０１０２】 B-LCLはH. papio producer cell line S394からの上澄み液を用いて各動物か
ら誘導された。

【０１０３】 CTL検定 細胞傷害活性を公知の標準^５１Cr放出検定法で定量した（Paliardらの (2000
) AIDS Res. Hum. Retroviruses 16:273）。簡単に言えば、B-LCLをｒVVC/E1ま
たはVVｗｔを用いて１時間１０：１の感染重複度｛MOI｝で感染させ、洗浄し、
^５１Cr で標識化するに先立って一昼夜培養した。CD8+細胞は３種の異なったE:
T比で重複してプレートし、ウエル当り２×１０５の未標識標的細胞（冷細胞）
の存在下に４時間標的細胞と共に保温し、H. papio または内因性ウイルス（例
えばfoamy ウイルス）−特異的CTLLによりB-LCLの溶解が最小になるようにこれ
を添加した。CTL反応は、二つの最高E:T比における比溶解％が対照標的プラス１
０の比溶解％以上かまたは等しい場合にポジテイブとした。

【０１０４】 リンパ増殖検定 この検定は以前に記載がある（Hongらの (1997) J. Virol。７１：６４２７）
。 要約すると、新鮮に単離したPBMCを、９６ウエル丸底皿中ウエル当り2×１０
^５ 細胞で3回重複してプレートし、５μｇ／ｍｌの組換えコアタンパク質また
は0.05μｇ／mlのE. coli 対照の存在下に培養した。皿を３H-チミジンおウエル
当り１μCiで５日間パルズし、6−8時間後に収穫した。結果は、（平均実験ｃｐ
ｍ）／（E. coli対照下の平均ｃｐｍ）として計算した刺激指数（SI）として表
わす。SI＞＝３．０が正の評価であった。

【０１０５】 ＦＡＣＳ分析 新鮮に単離したPBMCまたはin vitro でペプチドで再刺激したＰＢＭＣを培地
単独中で培養するか、またはコアタンパク質の5μｇ／ｍｌ、０．０５μｇｍｌ
のE. coli対照、5μｇｍｌのペプチド、またはＶＶ−感染もしくはペプチド 感
作オートロガスＢ−ＣＬ（１：１）をもちいて12時間培養基中で再刺激したが、
この際の培養基は５０Ｕ／ｍｌのｒＩＬ−２（Chiron Corporation, CA）および
３μＭモネンシン（Pharmingen、San Diego,f CA）を含む。細胞をPharmingenの
プロトコルに従がって表面ＣＤ４およびＣＤ８はＡＰＣ−共役抗ヒトーＣＤ４お
よびＰｅｒＣＰ共役抗ヒトＣＤ８で、細胞内ＩＮＦ−γおよびＴＮＦ−αはＰＥ
共役抗ヒトＩＮＦ−γおよびＦＩＴＣ−共役抗ヒトＴＮＦ−αを用いて染色した
。抗体はPharmingenおよびBecton-Deckinsonk (San Jose, CA)からのものであっ
た。細胞はＦＡＣＳcaliburを用いて分析した。データファイルはCellquest ソ
フトウエアを用いて分析した。

【０１０６】 サイトカインＥＬＩＳＡ 新しく単離したRhesus macaque’ PBMCを、全コアタンパク質を含むペプチド
で再刺激した。48時間無細胞培養上澄み液中に存在するRhesusサルIL-2、L-5、
IL-10 およびIFN-γの水準を製造元の規格に従がって特異的ＥＬＩＳＡ（U-Cyte
ch, Utrecht, the Netherlands）により測定した。

【０１０７】 ＨＣＶ抗体 ＨＣＶコアおよびＨＣＶ Ｅ２抗体の血清水準は、Chien らの (1992) Proc N
atl Acad Sci USA 89:10011の記載のようにＥＬＩＳＡにより定量化した。Ｅ２
が推定ＨＣＶ受容体ＣＤ８１（Pilieri らの (1998) Science 282-938）。

【０１０８】 実施例１ Ｃｏｒｅ−ＩＳＣＯＭのスクロース勾配分析 コアタンパク質はフラクション５から１１（図１Ａ）中に、ISCOMATRIX^TM
はフラクション9から１３（図１Ｂ）中に見出された。Core-ISCOMはフラクシ
ョン１４−１７中に見出され、ISCOMTNおよびタンパク質ピークは重複し、会合
を示している｛図１Ｃ｝。

【０１０９】 実施例２ Ｃｏｒｅ−ＩＳＣＯＭの安定性 Core-ISCOM^TM の安定性を11月間評価した、粒子径および会合は２−８℃で少
なくとも11月間不変に維持された。

【０１１０】 実施例３ ワクチン化動物中のコア特異性ＣＴＬ 上記のように、HCV-Core-特異性ＣＴＬの誘発を狙う２種の異なった原型ワク
チン（Core-ISCOMおよび Core+LTK63）を3匹のHCV-ナイーブRhesus macaques (
動物指定、服用量および免疫計画)は表ＩＩ参照）にそれぞれ投与した。Rhesus
macaquesのＭＨＣクラスＩ分子が結合できてHCV-Core由来のペプチドを提供し得
るかいなか、ならびにこれらの動物において正にに選択したＣＤ８＋Ｔ細胞レパ
ートリーが、この種のＭＨＣ Class 1 −Core由来のペプチド複合体を認識可能
であるかいなかは未知であったので、3匹の追加動物を正の対象として機能させ
るべく2×１０^８ｐｆｕのｒＶＶＣ／Ｅ１を用いて予防摂取した｛表ＩＩ｝。

【０１１１】 動物9匹いずれもが、免疫時点（週０；表ＩＩＩおよびデータは示さず）にお
いて検出可能ＣＴＬをなんら有しなかった。この事実は、これらの動物がこれま
でにＨＣＶコアに曝されたことがなく、かつ材料および方法に記載された条件下
でのＰＢＭＣの再刺激は in vitro では本来のＣＴＬ反応を生じなかったを確認
するものである。ｒＶＶＣ／Ｅ１感染後2週で、動物3匹中2匹（ＢＢ２３２ お
よびＤＣ０３６）コアペプチドプール4（aa:121-170）およびプール 3 (aa:81-1
30) それぞれ（表ＩＩＩ）に対して検出可能なＣＴＬを有した。これらのペプ
チドプールを解析することにより、BB232CTLがエピトープペプチド121-135を認
識し、DV036CTLがポリペプチド86-100を認識したことが決定された。121-135 お
よび 86-100特異的ＣＴＬがこれらのｒＶＶＣ／Ｅ１種痘動物中に存在すること
は、両ペプチドが天然に処理されたことを示した。その他のｒＶＶＣＥ１接種動
物（ＢＢ２２８）にはなんらのＣＴＬ反応も検出し得なかった。このことは、コ
ア特異性ＣＴＬは少なくともいくらかのRhesus monkey において誘発され得るこ
とを示した。ＬＴＫ６３を用いてアジュバント化したコアを受理した動物3匹（
表ＩＩ）のうち一匹（ＢＢ２３０）だけがコアに対するＣＴＬ反応を示した。プ
ール２(aa:41-90)に対して向けられた反応は、一時的なものであり、3回目免疫
化後2週で検出可能であったが、3回目免疫化後6週では検出不能であった。さら
に、これらのＣＴＬは4回目の免疫化（表ＩＩＩ）似よって増幅されず、認識さ
れたここのペプチドは同定され得なかった。3匹のCore-ISCOM免疫化動物のうち2
匹｛ＡＹ921およびＢＢ231；表ＩＩ｝は検出可能なコア特異性ＣＴＬ反応を高め
なかった。対照的に、他のCore-ISCOM免疫化動物（ＤＶ０３７）では、プール４
（aa:121-170）を認識するＣＴＬが2回目免疫後2週という早さで検出可能であっ
た。この反応はエピトープペプチドaa；２１−１３５に向けられ、かつ、3回目
後および4回目後にも存在した（表ＩＩＩ）

【０１１２】 Core＋LTK63原型ワクチンを受けた動物とは対照的に、Core-ISCOM原型ワクチ
ンで免疫化した動物は、2回目免疫化後に検出可能なＣＴＬをゆうし、これらの
ＣＴＬは3回目および4回目免疫化後にも存在した（表ＩＩＩ）。かくして後者ワ
クチンは前者ワクチンよりもRhesus macaques におけるＣＴＬ反応誘発性が一
層強くみえる。しかしながら、この配合物は動物3匹中１匹のみにおいてCore特
異的ＣＴＬを特発した。この理由は、非比反応動物のＭＨＣクラスＩ分子が結合
し得ずに、この比較的小さなタンパク質（１９１aa）由来のペプチドが存在する
という事実によるらしい。この仮説を試験するために、ペプチド１２１−１３５
および86−100に特異的なＣＴＬラインを反応動物から取得した。図２Ａに示す
ように、ペプチド１２１−１３５特異的ＣＴＬラインはＤＶ037由来のペプチド
感作Ｂ−ＬＣＬを溶解したが、2匹の非反応動物（ＡＹ９２１１およびＢＢ２３
１）来のペプチド１２１−１３５感作Ｂ−ＬＣＬを殺さなかった。同様に、ＡＹ
９２１またはＢＢ２３１でなくてＤＶ０３６から由来Ｂ−ＬＣＬはＣＤ８＋ＣＴ
Ｌに対してペプチド８６−１００を提供し得た。これらのデータは、ＡＴ９２１
およびＢＢ２３１のＭＨクラスＩ分子はこれらのペプチドをＣＤ８＋Ｔ細胞に提
供しなかったこと、および、ＭＨＣクラスＩ仮説はRhesus monkey がＨＣＶ−コ
アに対するＣＴＬ反応を特発し得たかどうかを測定して決定したことを暗示した
。

【０１１３】 異なったＭＨＣクラスＩアレレは結合可能で異なったペプチドのセットを提供
し得るので、これらのデータはCore-ISCOM配合物が次善ではなかったことを否定
はしなかった、すなわちこれらの動物は８６−１００および121-135以外のペプ
チドに対して向かうコア特異的ＣＴＬ反応を特発できた可能性が残った。この可
能性を調べるために、ＡＹ９２１およびＢＢ231を、Core-ISCOMを用いた4回目の
免疫化後11週でｒＶＶＣ／Ｅ１の2×１０^８ pfuを用いて試みた。コア特異性得
ＣＴＬをｒＶＶＣ／Ｅ１感染後2週でコア特異性ＣＴＬを有したＢＢ２３２およ
びＤＶ０３６（表ＩＩＩ）とは反対に、ＡＹ９２１またはＢＢ２３１のいずれも
ｒＶＶＣＥ１接種ご検出可能ＣＴＬをなんら有しなかった。この事実は、これら
の動物のCore-ISCOM免疫化後に検出可能なコア特異的ＣＴＬの存在は次善のワク
チン配合物に起因するのではなく、これらの動物はこの種の反応を特発する本来
の能力に欠けることに起因ことを強く暗示する。恐らくこれら動物のＭＨＣクラ
スＩハプロ型の結果に起因がある。

【０１１４】 Core-ISCOMによる免疫化が長期活性のＣＴＬを誘導するかいなかを研究するた
めに、4回目の免疫化後51週（１年）までにＤＶ０３７を追跡した。ペプチド121
-135特異的ＣＴＬは最終免疫化後１０，１５，３１，３８，４５および51週で検
出された（図3Ａ）。反対に、ＢＢ２３２中のｒＶＶＣＥ１でプライムされた121
-135特異性ＣＴＬ反応はワクチン処置後14週でかろうじて検出可能であった《図
３Ｂ》。同様にｒＶＶＣＥ１によりＤＶ０３６中ｆｒプライムされた８６−１０
００特異性ＣＴＬはワクチン接種後14週で検出不能になった。

【０１１５】 最後のブースト受領後１年でＤV０３７中に存在するペプチド１２１−１３５
ＣＴＬの数を定量する目的で、動物のＰＢＭＣを ex vivo で１２１−１３５で
再刺激し、億位的ＣＤ9＋Ｔ細胞の％をＩＦＮ−γおよびまたはＴＮＦ−αに対
する細胞内染色法により評価した。図3Ｃ（左パネル）に示すように、周辺ＣＤ
８＋Ｔ細胞の０．４９％（または１０^５ＣＤ８＋Ｔ細胞当り490細胞）で表わさ
れる１２１−１３５特異的ＣＴＬは、ex vivo での12時間のペプチド刺激後ＩＮ
Ｆ−γおよびまたはＴＮＦ−αを分泌した。対照的に、ペプチド121-135を用い
てin vitro で再刺激後、これらのＣＤ８＋Ｔ細胞の７１％が、このペプチドに
特異的であり、このことはＩＮＦ−γおよびまたはＴＮＦ−αを分泌するこれら
の能力により測定される（図３Ｃ，右パネル）。

【０１１６】 実施例４ Core-ISCOMで免疫化したRhesus monkey における細胞性および体液性反応の
特徴 Core-ISCOM免疫化動物3匹中僅か壱域のみが検出可能ＣＴＬを有するが、この
反応動物においてコアト特異的ＣＴＬは僅か2回の免疫化後（表ＩＩＩ）にされ
、これらのＣＴＬが長寿であった事実（図３Ａ）は、Core-ISCOMを用いて追加5
匹の動物（１５８６０−４）を免疫化する理由を形成した（用量おいび免疫計画
は表ＩＩ参照）。全ての動物はワクチン接種の時点でナイーブであった。この研
究ではコア特異的ＣＴＬおよびコア特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞両方のプライミングお
よび抗体を追跡した。

【０１１７】 免疫時点（0週、表ＩＶ）ではいずれの動物も検出可能なコア特異的ＣＤ４ま
たはＣＤ８＋Ｔ細胞を有しなかった。コア特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、リンパ球増
殖検定により測定されるように、二回目免疫化後15861以外のすべての動物で検
出されたが、この動物は3回目免疫化後検出可能なＣＤ４＋反応を有した（表Ｉ
Ｖ）。１５８６２および１５８６３の場合、3回目免疫化後観察された低いＳＩ
（表ＩＶ）は、これらの動物中におよびE. Coli 対象の場合のこの特定の時点で
強力な増殖が観察されたので3回目免疫化後観察された低いＳＩはＣＤ4＋Ｔ細胞
反応の不在が原因である可能性はない。免疫化に先立ってはいずれの動物もコア
に対する抗体は有しない。しかし全ての動物は二回の免疫化後にコウに血清変換
された、コアに対する抗体の水準は3回目の免疫化によりブーストされた（図４
）。 これらの動物間の平均コア抗体力価は慢性患者の結成中に存在する力価に
比べて二回目免疫化後は同等（１９３１）であり、3回の免疫価後（４５６６）
（図４）は一層高く、通常は同一検定中で実施した高い抗コア抗体力価（2358；
示さず）を伴う。

【０１１８】 これらのサルにおいてCore-ISCOMがＴｈ１またはＴｈ２型の反応を誘発するか
どうかを研究するために、ワクチン接種に先立ちならびに２回目および3回目免
疫価後2週であたらしく単離したＰＢＭＣにつき試験し、コアタンパク質の全長
をスパンするコアペプチドを用いた刺激に応じて48時間でサイトカインを生ずる
能力を試験した。図5Ａおよび５Ｂに示すように、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＦＮ
−γおよびＩＬ−２）の顕著な増加が観察免疫価語すべての動物で観察されたが
、１５８６０１５８６１ １５８６２の場合に観察された反応の大きさは動物１
５８６３および１５８６４で観察された場合より小さかった。同様に、Ｔｈ２型
サイトカイン（Ｉｌ−５およびＩＬ−１０）の増加がワクチン接種後に全ての動
物で観察され、ＩＬ−５およびＩＬ−１０の最高量も１５８６３および15864（
図5Ｃおよび5Ｄ）で検出された。分泌されたＴｈ２型サイトカインの量はＴｈ１
型サイトカインの場合に検出された量よりも少なかったが、これらのデータはCo
re-ISCOMがRhesus monkey においてＴｈ0型反応を誘発することを示した。

【０１１９】 ２回目および3回目の免疫化後、動物3匹（１５８６２、１５８６３および１５
８６４）はプールＢ（aa:60-140）に対して向かう検出可能ＣＴＬ反応を有し、
一方、他の２匹（１５８６０および15861）は有さなかった（表ＩＶ）。このＣ
ＴＬ反応は動物１５８６４の場合はペプチド８６−１００に、動物15862の場合
はペプチド１２１−１３５に対して指向した。８６−１００および１２１特異的
ＣＴＬはＤＶ０３６（８６−１００）、ＤＶ０３７（１２１−１３５）およびＢ
Ｂ２３２（１２１−１３５）（表ＩＩＩ）中でもプライムされるので、全ての８
６−１００および１２１−１３５特異的ＣＴＬがそれぞれ単ＭＨＣクラスＩアレ
レにより制限されるかいなかを測定するのは重要である。 動物１５８６４に由来する８６−１００特異的ＣＴＬラインは１５８６４由来
のペプチド８６−１００感作Ｂ−ＬＣＬを効率よく溶解するが、動物ＤＶ０３６
由来のペプチド感作Ｂ−ＬＣＬはしからず、異なった（未特定）ＭＨＣクラスＩ
アレレがこのペプチドをＣＴＬに提供することを示す（図６Ａ）。これらを総合
すると、上記動物のＭＨＣクラスＩハプロ型はこれらがコア特定ＣＴＬを特発す
るかどうかを指令したことを暗示する。

【０１２０】 上記の動物中でプライムされたコア特定ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の数を
定量する目的で、新しく単離したＰＢＭＣをex vivo で刺激後に細胞内ＩＮＦ−
γおよびＴＮＦ−αに対して染色した。天然に処理されたペプチドに対するＣＤ
８＋Ｔ細胞反応は、対照としてのｒＶＶＣ／Ｅ１またはＶＶｗｔで感染させたオ
ートローガスＢ−ＬＣＬを用いてex vivo で再刺激後定量した。天然に処理され
たペプチドに対するＣＤ４＋Ｔ細胞反応は、組換えコアタンパク質またはE. col
i 対照を用いてex vivo で再刺激後に定量した。 細胞内染色反応によれば、上記いずれの動物も免疫化時点では検出可能なコア
特定ＣＤ８＋Ｔ細胞を有さない一方、１５８６２、１５８６３，１５８６４の周
辺ＣＤ８＋Ｔ細胞は天然に処理されたコア誘導ペプチドに対し二回目の免疫化後
に特異的であることが明らかになった（図７Ａ）。しかし特定ＣＴＬの数は、３
回目の免疫化後にも増加せず、これは細胞内染色法で判定された。コアへの反応
においてＩＦＮ−γおよびまたはＴＮＦ−αを分泌するいずれのＣＤ８＋Ｔ細胞
もこの二匹の動物（１５８６０および１５８６１）中には検出されず、これらの
動物に対しては^５１Ｃｒ放出検定（図７Ａおよび表ＩＶ）によってはなんらのコ
ア特異的ＣＴＬ活性は観察されなかった。コア特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の定量によ
り、リンパ球増殖検定により得られたデータを確認（表ＩＶ）したが、５匹全て
の動物由来の０．３２−２．２１％のＣＤ４＋Ｔ細胞は天然コアペプチド《図７
Ｂ》に対して特異的であった。さらに、動物１５８６２および１５８６３由来の
０．５３％および０．２８％のＣＤ４＋Ｔ細胞は３回目免疫後サイトカインに対
しポジテイブであり、この時点（表ＩＶ）で観察されたネガテイブＳＩは実際の
ところ“虚偽のネガテイブ”であって、E. coli 対照に応答して観察される高い
増殖に起因する可能性がある。このことは、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αに対す
る細胞内染色は抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞反応を評価する目的のロンパ球増殖法
よりも一層敏感な検定であることを暗示する。事実、動物１５８６１の場合、２
回目免疫化後２週ではなんらのＣＤ４＋Ｔ細胞がリンパ球増殖検定では検出され
なかった。反対に、コア特定的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α
（図７Ｂ）に対する細胞内染色によりこの動物（２回目免疫後２週）中で検出さ
れた。

【０１２１】 実施例５ ＨＣＰポリペプチドに対するアジュバントとしてのＣｏｒｅ−ＩＳＣＯＭの使
用 組換えＨＣＶエンベロープタンパク質およびアジュバントを用いるワクチン接
種は、ある場合には感染および疾病結果に影響（Choo らの(1994) Proc, Ｎａｔ
ｌ。Ａｃａｄ。Ｓｃｉ。ＵＳＡ91:1294）するので、発明者らは上記Core-ISCOM
がヘテロ２量体エンベロープタンパク質Ｅ１Ｅ２等の、他のＨＣＶポリペプチド
のアジュバントとして役立ち得るかどうかを研究した。この目的で、マウス）群
当り１０匹）を２μｇの可溶性Ｅ１Ｅ２タンパク質単独、またはアジュバントＭ
Ｆ５９の存在下もしくは２μｇのCore-ISCOM存在下２μｇの可溶性Ｅ１Ｅ２を用
いて免疫化した。図８に示すように、Ｅ１Ｅ２単独で免疫化したマウスは意味あ
る抗E２抗体力価を有さない。反対に、E１E２＋Core-ISCOMで免疫価したマウス
は３回の免疫化後に有意抗E2抗体力価を有し、これらの力価はE1E2+MF59により
免疫価したマウス中に観察された力価に匹敵する。その上、E1E2+Mf59およびE１
E2+Core-ISCOMにより免疫化したマウス中で誘発される抗体の性質は、マウス両
群においてHCV−１ E2がHCT推定受容体CD８１に結合するのを抑制し得る抗体力
価に比較されるようにみえる（図９）。

【０１２２】 上記の例は、HCVポリペプチドISCOMを用いたワクチン接種は強力なHCVポリペ
プチド特異的CD８＋およびCD4+T細胞をプライムし得る。その上、これらのISCOM
配合物は他のHCVタンパク質に対する抗体を誘発する目的のアジュバントとして
役立ち得る。かくしてHCV／ISCOMは慢性病の確立を防止し、およびまたは抗ウイ
ルス治療に対する応答速度を増加できる。

【０１２３】 実施例６ NS35Cコア１２１−ISCOMのスクロース勾配分析 NS35Core121タンパク質は勾配を横断して広いピークに見出された（図１０A）
。このNS３５Core121 ISCOMはフラクション１５−２０中に本質的に見出され、
これはISCOMATRIX^TMピークに相当して会合が生じたことを示す（図１０B）。興
味あることにISCOMATRIX^TM はフラクション５〜１０中にも見出され、無会合タ
ンパク質を伴うISCOMATRIX^TM 部分があったことを示した。

【０１２４】 したがって、新規HCV／ＩＳCOM 組成物およびこの組成物を用いた方法が開示
される。以上から、本発明の特定実施態様は説明目的で記載されたが、付録の特
許請求の範囲の記載の精神と範囲とから逸脱することなく各種修飾がなし得る理
解されるであろう。

【表２】

【表３】

【表４】

【図面の簡単な説明】

【図１】 Core-ISCOM^TM配合物のコアタンパク質（図１A）、ISCOMATRIX^TM（図１B）、お
よびCore-ISCOM^TM(図１C)のスクロース勾配分析のグラフ的教示である。

【図２】 二種の非免疫応答動物、ＨＣＶ Ｃｏｒｅ−ISCOM免疫化動物からのB-LCLはCo
re由来のペプチド121-135 および86-100を表わし得ない。 動物DV037から確立した121-135-特定CTLラインは、ペプチド121-135（黒四角
）または無関係ペプチド（白四角）で感作したDV０３７B-LCL標的細胞を溶解す
る能力について、 ペプチド121-135(黒四角)または無関係ペプチド（白丸）で感
作したAY921 B-LCL標的細胞、およびペプチド121-135(黒三角)または無関係ペプ
チド（白三角）で感作したBB231B-LCL標的細胞を溶解する能力を標準Cr放出検定
法を用いて試験した。 86-100-特定CTLラインは、ペプチド86-100（黒四角）または無関係ペプチド（
白四角）で感作したDV０３6B-LCL標的細胞、 ペプチド86-100(黒丸)または無関
係ペプチド（白丸）で感作したAY921 B-LCL標的細胞、およびペプチド86-100(黒
三角)または無関係ペプチド（白三角）で感作したBB231 B-LCL標的細胞を溶解す
る能力を標準^５１Cr放出検定法で試験した。

【図３】 ワクチン化感作CTL反応の寿命を示す。DV037(図3A) および BB232(図3B)から
のPBMCはエピトープペプチド121-135を用いてin vitroで再感作した。CD8+精製
後、エピトープペプチド121-135(黒丸)または無関係ペプチド(白丸)で感作した
オートロガスB-LCLに対する細胞傷害活性を試験した。 最終免疫化（二つの左パネル）後51週でDV037から新しく単離したPBMC,または
同一時間点（二つの右パネル）からのin-vitro-再感作PBMCを、ペプチド121-135
または対照ペプチドを用いて１２時間再感作し、表面CD8および細胞内IFN-γ TN
F-αを染色した。リンパ球は側方vs.前方散乱光によりゲートし、次いでCD8-Per
CPに対してゲートした。プロットはTNF-α −FITECおよびIFN-γ-の場合のlog蛍
光強度を示す。

【図４】 免疫化動物の血清中のCoreに対抗する抗体力価を示す。白棒は免疫化前；縞模
様棒は２回目免疫化後２週間；黒棒は３回目免疫化後２週間。

【図５】 Core-ISCOM-免疫化動物におけるTh1およびTh2-型サイトカインを示す。IFN−
γ（図５A）、IL-2(図５B) 、IL-5 (図５C)および IL-10(図５D)は実施例に記載
のように４８時間感作し新しく単離したPBMCの無細胞上澄みにおける特有ELISA
により測定した。白棒は予備免疫化；縞模様棒は2回目免疫化後２週間；黒棒は
３回目免疫化後２週間；NTは試験せずの場合である。

【図６】 ペプチド121-135および 86-100CTLのMHCクラス１制限を示す。図６Aは、動物1
5864由来のペプチド86-100特定CTLラインを、動物DV036(黒四角)、15864（黒丸
）、15860（黒三角）および15851(白丸)から誘導したペプチド 86-100-感作B-LCL標的細胞を溶解する能力を標準^５１Cr放出検定法を用いて試験
した。 動物15862由来のペプチド121-135-特有CTLラインを、動物DV036(黒四角)、BB2
32（黒三角）、15862（黒逆三角）、15863(黒丸)。15861(白四角)および15860（
白逆三角）から誘導したペプチド121-135-感作B-LCL標的細胞を溶解する能力を
標準^５１Cr放出検定法で試験した結果を実験結果を示す。

【図７】 Core-ISCOM-免疫化動物におけるCD8+および CD4+T細胞反応の定量化を示す。
新しく単離したPBMCをrVVC/E1 または VVwt-感染オートロガスB-LCL（図７A）を
用いex vivoで再感作した。次いで表面CD8もしくは CD4、および細胞内IFN-γお
よび TNF−αに対して実施例記載のように細胞を染色した。リンパ球は側方vs.
前方散乱光によりゲートし、次いでCD8-PerCP（図７A）またはCD4-APC(図７B)に
対してゲートした。図７Aでは、検出し得るIFN-γおよび／またはTNF−αプロッ
トはTNF-α を用いたCD8＋細胞の補正％（%CD8+VVwtで再感作したT細胞すなはち
ＩFN-γおよび／またはTNF-α＋）−（%CD８+ VVwtで再感作したT細胞すなはち
ＩFN-γおよび／またはTNF-α＋）として計算された。図７Bでは、検出可能ＩFN
-γおよび／またはTNF-α＋を用いて補正されたCD4+T細胞の補正％は（%CD4+Cor
eで再感作したT細胞すなはちＩFN-γおよび／またはTNF-α＋）−（%CD4+ E. c
oliで再感作したT細胞すなはちＩFN-γおよび／またはTNF-α＋）として計算さ
れた。白棒は予備免疫化；縞模様棒は２回目免疫化後二週間、黒棒は３^rd免疫化
後二週間である。

【図８】 Core-ISCOMがE1E2に対するアジュバントとして役立ち得ることを示す。ネズミ
（群当り１０匹）を、２ｇの可溶性E1E2単独、２ｇの可溶性E1E2＋２ｇのCore-I
SCOM、またはMF59を用いてアジュバント化した２ｇの可溶性E1E2を用いて免疫化
した。３回目の免疫化後２週間でネズミを放血した。アンチ−E2 (黒棒)および
アンチ−CD81力価(白棒)は各群からの個々のネズミから得られた力価の幾何平均
として示す。NT:試験せず。

【図９】 HCVゲノムの輪郭を示す説明図であり、ポリタンパク質の各種領域を描写し、
ISOCOMを用いて使用に供されるタンパク質はこのポリタンパク質由来のもである
。

【図１０】 NS35Core121-ISCOM^TM(図１０A)およびNS35Core121タンパク質(図１０B)のため
のNS35Core121-ISCOM^TM配合物のスクロース勾配分析のグラフである。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年１２月２４日（２００２．１２．２４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１１９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【０１１９】 ２回目および3回目の免疫化後、動物3匹（１５８６２、１５８６３および１５
８６４）はプールＢ（aa:60-140）に対して向かう検出可能ＣＴＬ反応を有し、
一方、他の２匹（１５８６０および15861）は有さなかった（表ＩＶ）。このＣ
ＴＬ反応は動物１５８６４の場合はペプチド８６−１００に、動物15862の場合
はペプチド１２１−１３５に対して指向した。８６−１００および１２１−１３
５特異的ＣＴＬはＤＶ０３６（８６−１００）、ＤＶ０３７（１２１−１３５）
およびＢＢ２３２（１２１−１３５）（表ＩＩＩ）中でもプライムされたので、
全ての８６−１００および１２１−１３５特異的ＣＴＬがそれぞれ単ＭＨＣクラ
スＩアレレ（allele）により制限されたかいなかを測定するのは重要であった。
動物１５８６４に由来する８６−１００特異的ＣＴＬラインは１５８６４由来の
ペプチド８６−１００感作Ｂ−ＬＣＬを効率よく溶解したが、動物ＤＶ０３６由
来のペプチド感作Ｂ−ＬＣＬはしからず、異なった（未特定）ＭＨＣクラスＩア
レレがこのペプチドをＣＴＬに提供することを示す（図６Ａおよび表II）。対照
的に、動物１５８６２、１５８６３、ＢＢ２３２およびＤＶ０３７からのペプチ
ド１２１−１３５に特異的なＣＴＬは、これら全動物に共有された単一、未同定
のＭＨＣクラスＩアレレにより制限された（図６Bおよび表ＩＩ）。これらのデ
ータは、１５８６０および１５８６１のＭＨＣクラスＩ分子はぺプチド（８６−
１００および１２１−１３５）のいずれも特異的ＣＴＬ（図６Aおよび６B）に提
示できないことを示した。最初の検討で観察されたように、コア−ＩＳＣＯＭで
の３回目感作９週後の二匹の非応答動物（１５８６０および１５８６１）のｒVV
C／Ｅ１感染は、これらの動物においてコア特異的ＣＴＬのプライミングに至ら
なかった。これらを総合すると、上記動物のＭＨＣクラスＩハプロ型はこれらが
コア特定ＣＴＬを提示するかどうかを指令したことを暗示する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ジョン、コックス オーストラリア連邦ビクトリア州、ブレン ガルーク、ダンズ、ロード、140 (72)発明者 マイケル、ハフトン アメリカ合衆国カリフォルニア州、エメリ ービル、ホートン、ストリート、4560‐ア ール440、チロン、コーポレーション内 (72)発明者 ザビアー、パリアード アメリカ合衆国カリフォルニア州、エメリ ービル、ホートン、ストリート、4560‐ア ール440、チロン、コーポレーション内 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA14 BA01 BA08 BA23 BA50 CA01 MA05 NA01 NA14 ZB072 ZB332 4C085 AA03 BA92 CC08 CC21 EE01 EE06 FF12 FF14 FF17 GG01

Claims (49)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免疫原性複合体であって、有機キヤリ
   アおよび抗原が静電的に会合し、この電荷抗原がＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の
   ポリタンパク質もしくはそのフラグメントであるか、または上記ポリタンパク質
   もしくはそのフラフメントを含む融合タンパク質である免疫原性複合体。
2. 【請求項２】 上記ポリタンパク質がＨＣＶのコアタンパク質である、請求項１に記載の免疫
   原性性複合体。
3. 【請求項３】 上記キヤリアが負に帯電してなる、請求項１に記載の免疫原性複合体。
4. 【請求項４】 上記キヤリアがアジュバントである、請求項１に記載の免疫原性複合体。
5. 【請求項５】 上記キヤリアが負電荷を帯びたアジュバントである、請求項４に記載の免疫原
   性複合体。
6. 【請求項６】 負電荷を帯びた上記アジュバントが、天然に負電荷を帯びたアジュバントであ
   る、請求項５に記載の免疫原性複合体。
7. 【請求項７】 負電荷を帯びたアジュバントが、負電荷の度合いを増加するように修飾されて
   なる、天然に負電荷を帯びたアジュバントである、請求項５に記載の免疫原性複
   合体。
8. 【請求項８】 上記アジュバントがサポニンを含む、請求項４に記載の免疫原性複合体。
9. 【請求項９】 上記アジュバントがサポニン複合体を含む、請求項４に記載の免疫原性複合体
   。
10. 【請求項１０】 上記サポニン複合体がISCOMATRIX^TMである、請求項９に記載の免疫原性複合体
    。
11. 【請求項１１】 上記アジュバントがリン脂質を含む、請求項４に記載の免疫原性複合体。
12. 【請求項１２】 上記リン脂質がホスホグリセリドである、請求項１１に記載の免疫原性複合体
    。
13. 【請求項１３】 ホスフアチジル・イノシトール、ホスフアチジル・グリセロール、ホスフアチ
    ジン酸およびカルジオリピンからなる群から選択される、請求項１２に記載の免
    疫原性複合体。
14. 【請求項１４】 上記リン脂質が脂質Ａである、請求項１１に記載の免疫原性複合体。
15. 【請求項１５】 脂質Aが、ジホスホリル脂質Aおよびモノホスホリル脂質Aからなる群から選択
    される、請求項１４に記載の免疫原性複合体。
16. 【請求項１６】 上記複合体が細胞傷害性のT−リンパ球反応を誘発する、請求項１に記載の免
    疫原性複合体。
17. 【請求項１７】 荷電有機キヤリアおよび荷電抗原を含む免疫原性複合体を、医薬として許容さ
    れる一種もしくは２種以上のキヤリアおよび／または希釈剤と共に、活性成分と
    して含むワクチン組成物であって、キヤリアおよび抗原が静電的に会合してなり
    、かつ、この荷電抗原がＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のポリタンパク質もしくは
    そのフラグメントであるか、または上記ポリタンパク質もしくはそのフラフメン
    トを含む融合タンパク質であるワクチン組成物。
18. 【請求項１８】 上記ポリタンパク質がHCVのコアタンパク質である、請求項１７に記載のワク
    チン組成物。
19. 【請求項１９】 上記キヤリアが負の電荷を帯びて成る、請求項１７に記載のワクチン組成物。
20. 【請求項２０】 上記キヤリアがアジュバントである、請求項１７に記載のワクチン組成物。
21. 【請求項２１】 上記キヤリアが負の電荷を帯びてなるアジュバントである、請求項２０に記載
    のワクチン組成物。
22. 【請求項２２】 負の電荷を帯びた上記アジュバントが天然に負の電荷を帯びたアジュバントで
    ある、請求項２１に記載のワクチン組成物。
23. 【請求項２３】 負の電荷を帯びた上記アジュバントが、負電荷の度合いを高めるように修飾さ
    れてなる、天然に負の電荷を帯びたアジュバントである、請求項２１に記載のワ
    クチン組成物。
24. 【請求項２４】 上記アジュバントがサポニン複合体を含む、請求項２０に記載のワクチン組成
    物。
25. 【請求項２５】 上記アジュバントがサポニン複合体である、請求項２０に記載の免疫原性複合
    体。
26. 【請求項２６】 上記サポニン複合体がISCOMATRIX^TMである、請求項２５に記載のワクチン組成
    物。
27. 【請求項２７】 上記アジュバントがリン脂質を含む、請求項２０に記載のワクチン組成物。
28. 【請求項２８】 上記リン脂質がホスホグリセリドである、請求項２７に記載のワクチン組成物
    。
29. 【請求項２９】 ホスホグリセリドが、ホスフアチジル・イノシトール、ホスフアチジル・グリ
    セロール、ホスフアチジン酸およびカルジオリピンからなる群から選択される、
    請求項２８に記載のワクチン組成物。
30. 【請求項３０】 上記リン脂質が脂質Aである、請求項２７に記載のワクチン組成物。
31. 【請求項３１】 脂質Aがジホスホリル脂質Aおよびモノホスホリル脂質Aからなる群から選択さ
    れる、請求項３０に記載のワクチン組成物。
32. 【請求項３２】 上記組成物が細胞傷害性のT−リンパ球反応を誘発する、請求項１７に記載の
    ワクチン組成物
33. 【請求項３３】 一種または２種以上の追加HCVタンパク質をさらに含む、請求項１７に記載の
    ワクチン組成物。
34. 【請求項３４】 追加HCVタンパク質が、非構造タンパク質、E1外膜タンパク質、E2外膜タンパ
    ク質、これらタンパク質の一つの免疫原性フラグメント、およびこれらのタンパ
    ク質およびフラグメントの組み合わせからなる群から選択される、請求項３３に
    記載のワクチン組成物
35. 【請求項３５】 抗原に対する免疫反応を哺乳類において誘発,誘導もしくは容易化する方法で
    あって、上記方法が請求項１に記載の免疫原性複合体の有効量を上記哺乳類に投
    与することを含む方法。
36. 【請求項３６】 抗原に対する免疫反応を哺乳類において誘発,誘導もしくは容易化する方法で
    あって、上記方法が請求項１７に記載のワクチン組成物の有効量を上記哺乳類に
    投与することを含む方法。
37. 【請求項３７】 上記免疫反応が細胞傷害性のT−リンパ球反応を含む、請求項３８または３９
    に記載の方法。
38. 【請求項３８】 哺乳類における病状を処置する方法であって、上記方法が請求項１に記載の免
    疫原性複合体の有効量を上記哺乳類に投与することを含み、上記複合体の投与が
    上記病状の徴候もしくは悪化を抑制、停止、遅延もしくは予防する免疫反応を誘
    発,誘導または容易化する方法。
39. 【請求項３９】 哺乳類における病状を処置する方法であって、上記方法が請求項１７に記載の
    ワクチン組成物の有効量を上記哺乳類に投与することを含み、上記組成物の投与
    が上記病状の徴候もしくは悪化を抑制、停止、遅延もしくは予防する免疫反応を
    誘発,誘導または容易化する方法。
40. 【請求項４０】 上記免疫反応が細胞傷害性のT−リンパ球反応を含む、請求項３８または３９
    に記載の方法
41. 【請求項４１】 上記処置が、上記病状の治療処置である、請求項３８または３９に記載の方法
    。
42. 【請求項４２】 上記処置が上記病状の予防上の処置である、請求項３８または３９に記載の方
    法。
43. 【請求項４３】 上記病状がHCV感染の結果である、請求項３８または３９に記載の方法。
44. 【請求項４４】 病状の徴候または悪化を抑制、停止、遅延または予防するための薬剤の製造に
    おける、請求項１に記載の免疫原性複合体の使用。
45. 【請求項４５】 病状の徴候または悪化を抑制、停止,遅延または予防するための薬剤の製造に
    おける、請求項１７に記載のワクチン組成物の使用。
46. 【請求項４６】 上記病状がHCV感染の結果である、請求項４４または４５に記載の方法。
47. 【請求項４７】 病状の徴候または悪化を抑制、停止,遅延または予防するために用いる医薬物
    質であって、上記医薬物質が請求項１に記載の免疫原性複合体を含む医薬物質。
48. 【請求項４８】 病状の徴候または悪化を抑制、停止,遅延または予防するために用いる医薬物
    質であって、上記医薬物質が請求項１７に記載のワクチン組成物を含む医薬物質
    。
49. 【請求項４９】 上記病状がHCV感染の結果である、請求項４７または４８に記載の医薬物質。