JP2024512669A

JP2024512669A - タノトランスミッションポリペプチド及び癌の処置におけるそれらの使用

Info

Publication number: JP2024512669A
Application number: JP2023560357A
Authority: JP
Inventors: シュミット，ダービー，ライ; ナガラジャン，ニランジャナ，アディティ; カイザー，ウィリアム，ジョゼフ; ガフ，ピーター，ジョゼフ; ダカル，サビン; ユボー，アレクシ，ブノワ
Original assignee: フラグシップパイオニアリングイノベーションズブイ，インコーポレーテッド
Priority date: 2021-03-31
Filing date: 2022-03-31
Publication date: 2024-03-19
Also published as: WO2022212784A1; AU2022246895A9; KR20230165276A; US20220325287A1; AU2022246895A1; CA3214085A1; EP4313109A1

Abstract

特定の態様において、本開示は、２つ以上の異なるタノトランスミッション（ｔｈａｎｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）ポリペプチドをコードする核酸分子に関する。タノトランスミッションは、細胞間の連絡であり、これは、標的細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果起こり、これが、応答細胞にシグナル伝達して、生物学的応答を受けるようにする。また、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子を含むベクター（例えば、操作されたウイルス、プラスミド、及びトランスポゾン）、細胞並びに医薬組成物も開示される。さらには、標的細胞によるタノトランスミッションを促進する方法、対象における免疫応答を促進する方法、及び対象の癌を処置する方法も開示される。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０２１年３月３１日に出願された米国仮特許出願第６３／１６９，１６７号明細書、２０２１年６月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２１６，４９９号明細書、及び２０２１年１２月２２日に出願された米国仮特許出願第６３／２９２，６６７号明細書に対する優先権を主張し、これらの内容の各々は、その全体が本明細書に組み込まれる。

配列表の提出
本出願に関連する配列表は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子形式で提出され、参照により明細書全体に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、１２９９８３＿０１２２０＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇである。テキストファイルのサイズは、７２，６６７バイトで、テキストファイルは、２０２２年３月２２日に作成された。

後生動物において、プログラム細胞死は、不可欠な遺伝的にプログラムされたプロセスであり、これは、組織の恒常性を維持すると共に、潜在的に有害な細胞を排除する。

特定の態様において、本開示は、２つ以上の異なるタノトランスミッション（ｔｈａｎｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）ポリペプチドをコードする組換え核酸分子に関し、ここで、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドは、以下：ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン（Ｓｈａｒｐｉｎ）、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされる２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドは、融合タンパク質中に含まれる。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＴＲＩＦ又はその変異体と、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、１つ又は複数のリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写産物として転写される。一部の実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡ分子である。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、ＮＦ－ｋＢを活性化する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、外因性アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、プログラム壊死を促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つはプログラム壊死を促進する。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進し、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する。一部の実施形態では、プログラム壊死は、ネクロトーシスを含む。一部の実施形態では、プログラム壊死は、パイロトーシスを含む。

一部の実施形態では、ＮＦ－ｋＢを活性化するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、外因性アポトーシスを促進するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、プログラム壊死を促進するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン、及びそれらの変異体からなる群から選択される。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の６８８～６９１位のＲＨＩＭ四分子（ｔｅｔｒａｄ）の１つ又は複数のアミノ酸残基に変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質に対してＱ６８８Ａ、Ｌ６８９Ａ、Ｇ６９０Ａ及びＬ６９１Ａからなる群から選択される１つ又は複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｃ末端に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４１～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含む野生型ヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、１つ又は複数のＴＢＫ１リン酸化部位の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｓ２１０Ａ、Ｓ２１２Ａ及びＴ２１４Ａからなる群から選択される１つ又は複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、４３４位にアミノ酸残基の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質に対するＰ４３４Ｈ置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質に対してＮ末端における１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～３１１位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号１２からなる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～３８６位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０及び２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位、２１７～３８６位及び５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２から構成される。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。

一部の実施形態では、核酸分子は、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはｃＦＬＩＰである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはｖＩＣＡである。

一部の実施形態では、核酸分子は、少なくとも１つのガスダーミン又はその変異体をコードする。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体を含む。一部の実施形態では、ガスダーミンは、ガスダーミンＥ又はその変異体である。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその変異体を含む。

一部の実施形態では、核酸分子は、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる。一部の実施形態では、二量体化ドメインは、タノトランスミッションポリペプチドに対して異種である。

特定の態様において、本開示は、本明細書に記載の核酸分子の１つ又は複数を含むリポソームに関する。

特定の態様では、本開示は、本明細書に記載される核酸分子の１つ又は複数を含むベクターに関する。一部の実施形態では、ベクターは、操作されたウイルス、プラスミド、又はトランスポゾンである。

特定の態様では、本開示は、本明細書に記載される核酸分子のいずれか１つによってコードされるポリペプチドに関する。

特定の態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター及び／又はポリペプチドの１つ若しくは複数を含む細胞に関する。

特定の態様では、本開示は、異なるタノトランスミッションポリペプチドを各々コードする２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む細胞に関し、タノトランスミッションポリペプチドの各々は、以下：ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される。

一部の実施形態では、２つ以上の外因性ポリヌクレオチドは、同じ核酸分子内に含まれる。一部の実施形態では、２つ以上の外因性ポリヌクレオチドの各々は、個別の核酸分子中に含まれる。一部の実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、プラスミド又はトランスポゾンである。一部の実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡ分子である。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子は、環状ＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又は変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又は変異体を含む。

一部の実施形態では、細胞は、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｃＦＬＩＰである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｖＩＣＡである。

一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体を含む。一部の実施形態では、ガスダーミンは、ガスダーミンＥである。

一部の実施形態では、細胞は、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる。一部の実施形態では、二量体化ドメインは、タノトランスミッションポリペプチドに対して異種である。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の６８８～６９１位におけるＲＨＩＭ四分子の１つ若しくは複数のアミノ酸残基に変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｑ６８８Ａ、Ｌ６８９Ａ、Ｇ６９０Ａ及びＬ６９１Ａからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｃ末端側に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４１～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、１つ又は複数のＴＢＫ１リン酸化部位の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｓ２１０Ａ、Ｓ２１２Ａ及びＴ２１４Ａからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、４３４位にアミノ酸残基の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｐ４３４Ｈ置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｎ末端に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～３１１位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号１２から成る。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～３８６位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０及び２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位、２１７～３８６位及び５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２からなる。

特定の態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸分子、リポソーム、ベクター、又は細胞のいずれか１つと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。

特定の態様において、本開示は、以下：
（ａ）異なるタノトランスミッションポリペプチドを各々コードする２つ以上のポリヌクレオチドであって、タノトランスミッションポリペプチドの各々が、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、それらの変異体、及びそれらの変異体からなる群から選択される、２つ以上のポリヌクレオチドと；（ｂ）薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物に関する。

一部の実施形態では、医薬組成物中の２つ以上のポリヌクレオチドは、同じ核酸分子内に含まれる。一部の実施形態では、医薬組成物中の２つ以上のポリヌクレオチドの各々は、個別の核酸分子中に含まれる。一部の実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、プラスミド又はトランスポゾンである。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、操作されたウイルス内に含まれる。一部の実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。

一部の実施形態では、医薬組成物は、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｃＦＬＩＰである。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｖＩＣＡである。

一部の実施形態では、医薬組成物は、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる。一部の実施形態では、二量体化ドメインは、タノトランスミッションポリペプチドに対して異種である。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の６８８～６９１位におけるＲＨＩＭ四分子の１つ又は複数のアミノ酸残基に変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｑ６８８Ａ、Ｌ６８９Ａ、Ｇ６９０Ａ及びＬ６９１Ａからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｃ末端に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４１～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、１つ又は複数のＴＢＫ１リン酸化部位の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質に対してＳ２１０Ａ、Ｓ２１２Ａ及びＴ２１４Ａからなる群から選択される１つ若しくは複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、４３４位にアミノ酸残基の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｐ４３４Ｈ置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｎ末端に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～３１１位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号１２からなる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～３８６位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０及び２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位、２１７～３８６位及び５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２からなる。

特定の態様において、本開示は、１つ若しくは複数の核酸分子を対象に送達する方法に関し、この方法は、上記医薬組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む。一部の実施形態では、１つ若しくは複数の核酸分子は、リポフェクションを介して対象に送達される。一部の実施形態では、リポフェクションは、ＲＮＡリポフェクションである。一部の実施形態では、リポフェクションは、ＤＮＡリポフェクションである。

特定の態様では、本開示は、対象においてタノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、タノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間で、上記医薬組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む。

特定の態様では、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を増大する方法に関し、この方法は、対象の免疫応答を増大するのに十分な量及び時間で、上記医薬組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む。

一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を対象に投与すると、１つのタノトランスミッションポリペプチドだけをコードする核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答が増大する。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする組換え核酸分子の投与は、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答を増大する。一部の実施形態では、免疫応答の増大は、ＮＦｋＢ活性及びＩＲＦ活性の１つ若しくは複数を増大することを含む。

特定の態様において、本開示は、それを必要とする対象の癌を処置する方法に関し、この方法は、癌を処置するのに十分な量及び時間で、上記医薬組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む。

一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を対象に投与すると、１つのタノトランスミッションポリペプチドだけをコードする核酸分子を投与された対象と比較して、生存期間を増加させ、且つ／又は腫瘍増殖を低減する。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする組換え核酸分子を投与すると、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、生存期間を増加させ、且つ／又は腫瘍増殖を低減する。

一部の実施形態では、医薬組成物中の２つ以上のポリヌクレオチドは、同じ核酸分子内に含まれる。一部の実施形態では、医薬組成物中の２つ以上のポリヌクレオチドの各々は、個別の核酸分子中に含まれる。一部の実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、プラスミド又はトランスポゾンである。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、操作されたウイルス内に含まれる。一部の実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡ分子である。

一部の実施形態では、医薬組成物を対象に静脈内投与する。一実施形態では、医薬組成物を対象に投与すると、対象における癌細胞の増殖が低減する。一実施形態では、癌細胞の増殖は、対象に投与された癌治療から生じる癌細胞の過増殖である。一実施形態では、医薬組成物を対象に投与すると、対象における癌細胞の転移が低減する。一実施形態では、医薬組成物を対象に投与すると、対象における腫瘍の新生血管形成が低減する。一実施形態では、癌の処置は、腫瘍量の減少、腫瘍サイズの縮小、腫瘍増殖の阻害、処置前の進行癌を有する対象における安定な癌の達成、癌の進行までの時間の増加、及び生存期間の増加のうちのいずれか１つ又は複数を含む。一実施形態では、医薬組成物は、対象に腫瘍内投与される。一実施形態では、対象は、以前に免疫療法で処置されている。一実施形態では、癌は、免疫療法に応答性ではない。一実施形態では、癌は、免疫療法に応答性の癌である。一実施形態では、対象への医薬組成物の投与は、免疫療法を施されているが、ウイルスを投与されていない対象と比較して、免疫療法に対する癌の応答を改善する。一実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント療法である。一実施形態では、免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイント阻害剤療法である。

一実施形態では、癌は、癌腫、肉腫、リンパ腫、黒色腫、及び白血病から選択される。一実施形態では、癌は、固形腫瘍である。一実施形態では、癌は、以下：黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、大腸腺癌、胃腸間質腫瘍、胃食道癌、大腸癌、膵臓癌、腎臓癌、肝細胞癌、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、移行上皮癌、神経芽細胞腫、形質細胞腫、ウィルムス腫瘍、及び肝細胞癌からなる群から選択される。一実施形態では、癌は大腸癌である。一実施形態では、癌は、ＲＩＰＫ３発現の低減を示す。

一実施形態では、癌は、大腸癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌、副腎皮質癌及び乳癌からなる群から選択される。一実施形態では、ＲＩＰＫ３発現の低減を示す癌は、大腸癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌、副腎皮質癌及び乳癌からなる群から選択される。

一実施形態では、本方法は、抗腫瘍薬を対象に投与することをさらに含む。一実施形態では、抗腫瘍薬は、化学療法薬である。一実施形態では、抗腫瘍薬は、生物学的製剤である。一実施形態では、生物学的製剤は、抗原結合タンパク質である。一実施形態では、抗腫瘍薬は、免疫療法薬である。一実施形態では、免疫療法薬は、以下：Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベース療法、サイトカイン、癌ワクチン、及び免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターからなる群から選択される。一実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、コーリー毒素及びカルメット・ゲラン桿菌（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）から選択される。一実施形態では、細胞ベース療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）療法である。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡから選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、刺激性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、阻害性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、小分子、阻害性ＲＮＡ、アンチセンス分子、及び免疫チェックポイント分子結合タンパク質から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＳＨＲ－１２１０、ＭＥＤＩ０６８０Ｒ０１、ＢＢｇ－Ａ３１７、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０及びＰＦ－０６８０１５９１から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＡＭＰ－２２４及びＬＹ３３０００５４から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。一実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＪＭＷ－３Ｂ３及びＡＧＥＮ１８８４から選択される。一実施形態では、抗腫瘍薬は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤である。一実施形態では、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ヒドロキサム酸、ベンズアミド、環状テトラペプチド、デプシペプチド、求電子ケトン、又は脂肪族化合物である。一実施形態では、ヒドロキサム酸は、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＬＡＱ８２４、トリコスタチンＡ、又はパノビンオスタット（ＬＢＨ５８９）である。一実施形態では、ベンズアミドは、エンチノスタット（ＭＳ－２７５）、０１９９４、又はモセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）である。一実施形態では、環状テトラペプチドは、トラポキシンＢである。一実施形態では、脂肪族酸は、フェニル酪酸又はバルプロ酸である。

一実施形態において、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、標的細胞で誘導される。一実施形態では、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、ネクロトーシス、外因性アポトーシス、パイロトーシス及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、標的細胞は、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路が欠損している。一実施形態では、標的細胞は、以下：受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ１）をコードする遺伝子、受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）をコードする遺伝子、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）をコードする遺伝子、混合系統キナーゼドメイン様プソイドキナーゼ（ＭＬＫＬ）をコードする遺伝子、ガスダーミンをコードする遺伝子、及びＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）－ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）をコードする遺伝子の１つ若しくは複数に、不活性化変異を有する。一実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、ガスダーミン、及びＭＬＫＬのうちの１つ若しくは複数の発現又は活性が低減している。一実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１をコードする遺伝子、ＲＩＰＫ３をコードする遺伝子、ＺＢＰ１をコードする遺伝子、ＴＲＩＦをコードする遺伝子、ガスダーミンをコードする遺伝子、及びＭＬＫＬをコードする遺伝子のうち１つ若しくは複数のコピー数減少を有する。一実施形態では、ガスダーミンは、ガスダーミンＤ及びガスダーミンＥから選択される。

一実施形態では、標的細胞は、癌細胞、免疫細胞、内皮細胞及び線維芽細胞からなる群から選択される。一実施形態では、標的細胞は、癌細胞である。一実施形態では、癌は転移性癌である。

一部の実施形態では、操作ウイルスは、アデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない。一部の実施形態では、操作ウイルスは、細胞溶解性である。一部の実施形態では、操作ウイルスは、分裂細胞に優先的に感染する。一部の実施形態では、操作ウイルスは、過去に感染した宿主に再感染することができる。一部の実施形態では、操作ウイルスは、合成多量体化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない。一部の実施形態では、操作ウイルスは、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）ではない。一部の実施形態では、操作ウイルスは、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドを含まない。

一実施形態では、ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、レトロウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、複製性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、非複製性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡ複製ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡ複製性腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、アネロウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、標的細胞に優先的に感染する。一実施形態では、ウイルスは、癌細胞によるタノトランスミッションを阻害する１つ又は複数の内因性ウイルス遺伝子に不活性化変異を含む。一実施形態では、ウイルスは、少なくとも４ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞内に輸送することができる。一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）（ＨＳＶ）、ポクシーウイルス（ｐｏｘｙｖｉｒｕｓ）（例えば、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ））、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（ＭｅａｓｌｅｓＶｉｒｕｓ）、粘液腫症（Ｍｙｘｏｍａｔｏｓｉｓ）、ポリオウイルス（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、レンチウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶｅｓｉｃｕｌａｒＳｔｏｍａｔｉｔｉｓ）、レトロウイルス、泡沫状ウイルス、ファーミントン（ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ）ウイルス、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、及びインフルエンザウイルスからなる群から選択される。一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルスである。一実施形態では、アデノウイルスは、血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）である。一実施形態では、アデノウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３５である。一実施形態では、アデノウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３である。一実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）（ＨＳＶ）である。一実施形態では、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。一実施形態では、ＨＳＶ１は、Ｋｏｓ、Ｆ１、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ、ＭｃＫｒａｅ及び関連株からなる群から選択される。一実施形態では、ＨＳＶは、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ＵＬ２４、ＵＬ５５、ＵＬ５６からなる群から選択される１つ又は複数の遺伝子が欠損している。一実施形態では、各ＩＣＰ３４．５コード遺伝子は、最初期（ＩＥ）プロモーターに作動可能に連結されたＵＳ１１コード遺伝子を含むポリヌクレオチドカセットによって置換される。一実施形態では、ＨＳＶは、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）Ｅ３Ｌ遺伝子のΔＺα変異型を含む。一実施形態では、ＨＳＶは、ＩＣＰ６の１つ又は複数の機能が欠損している。一実施形態では、ＩＣＰ６は、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）ドメインの変異を有する。一実施形態では、ＩＣＰ６は、カスパーゼ－８結合を阻害する１つ若しくは複数の変異をＣ末端に有する。一実施形態では、ＨＳＶは、最初期遺伝子としてＵＳ１１遺伝子を発現する。一実施形態では、ＵＳ１１遺伝子がＩＣＰ４７最初期プロモーターの制御下にあるように、ＩＣＰ４７遺伝子は欠失されている。一実施形態では、操作ウイルスは、ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）に属する。一実施形態では、ポックスウイルス（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）科に属する操作ウイルスは、粘液腫ウイルス、ヤバ類似疾患ウイルス、アライグマポックスウイルス、ｏｒｆウイルス及び牛痘ウイルスからなる群から選択される。一実施形態では、操作ウイルスは、ポックスウイルス（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）科のコードポックスウイルス（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｉｎａｅ）亜科に属する。一実施形態では、操作ウイルスは、コードポックスウイルス（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｉｎａｅ）亜科のオルトポックスウイルス（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）属に属する。一実施形態では、操作ウイルスは、オルトポックスウイルス（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）属のワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）種に属する。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｄａｉｒｅｎｌ、ＩＨＤ－Ｊ、Ｌ－ＩＰＶ、ＬＣ１６Ｍ８、ＬＣ１６ＭＯ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＬＩＶＰ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＷＲ６５－１６、Ｗｙｅｔｈ、Ａｎｋａｒａ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＴｉａｎＴａｎ及びＷＲからなる群から選択される株である。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、チミジンキナーゼ（ＴＫ）活性を欠失するように操作される。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｊ２Ｒ遺伝子の不活性化変異若しくは欠失を有し、これは、ＴＫ活性を低下又は排除する。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を欠失するように操作される。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｉ４Ｌ及びＦ４Ｌ遺伝子から選択される遺伝子に不活性化変異又は欠失を有し、これは、ＲＲ活性を低減又は排除する。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子が欠損している。一実施形態では、Ｅ３Ｌ遺伝子は、癌細胞にネクロトーシスの誘導をもたらす突然変異を有する。

タノトランスミッションの誘導後のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞の相対生存率を示す。タノトランスミッションの誘導後のＣＴ－２６マウス大腸癌細胞の相対生存率を示す。マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する、タノトランスミッションポリペプチド発現（例えば、ＴＲＩＦ発現単独又はＲＩＰＫ３（ｃＲ３）及び／若しくはガスダーミンＥ（ｃＧＥ）と組み合わせて）後にＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から産生された細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の誘導の影響を示す。図２Ａにおいて、Ｔｅｔ誘導性ＲＩＰＫ３は「ＲＩＰＫ３」と称され、構成的ＰＧＫプロモーターを含むＲＩＰＫ３構築物は「ＰＧＫ＿ＲＩＰＫ３」と称される。図２Ｂでは、各タノトランスミッションモジュールについて、処置群は、左から右に、対照（ＣＴＬ）、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、及びドキシサイクリン＋Ｂ／Ｂホモ二量体化剤（Ｄｏｘ＋Ｄｉｍｅｒｉｚｅｒ）である。マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する、タノトランスミッションポリペプチド発現（例えば、ＴＲＩＦ発現単独又はＲＩＰＫ３（ｃＲ３）及び／若しくはガスダーミンＥ（ｃＧＥ）と組み合わせて）後にＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から産生された細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の誘導の影響を示す。図２Ｂでは、各タノトランスミッションモジュールについて、処置群は、左から右に、対照（ＣＴＬ）、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、及びドキシサイクリン＋Ｂ／Ｂホモ二量体化剤（Ｄｏｘ＋Ｄｉｍｅｒｉｚｅｒ）である。骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）における活性化マーカーの発現の刺激に対する、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３発現の誘導後にＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から産生された細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の影響を示す。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存に対するタノトランスミッションポリペプチド発現の影響を示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦだけを発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３だけを発現する細胞を表す。図４Ｂでは、すべてのマウスを抗ＰＤ１抗体で処置した。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存に対するタノトランスミッションポリペプチド発現の影響を示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦだけを発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３だけを発現する細胞を表す。図４Ｂでは、すべてのマウスを抗ＰＤ１抗体で処置した。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存に対するタノトランスミッションポリペプチド発現の影響を示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦだけを発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３だけを発現する細胞を表す。図５Ａは、様々なタノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞からの細胞培養物で処置され、且つ、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）単独、又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせて処置したＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞における相対ＮＦ－ｋＢ活性を示す。図５Ｂ及び５Ｃは、様々なタノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物で処置され、且つ、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）単独で、又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせて処置されたＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞における相対ＩＲＦ活性を示す。Ｕ９３７細胞はまた、タノトランスミッションポリペプチド発現を誘導するためにドキシサイクリン単独で、又は二量体化を誘導するためのＢ／Ｂホモ二量体化剤と組み合わせて処置された。図５Ａ～５Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂホモ二量体化剤で処置したＵ９３７細胞を示す。図５Ｂ及び５Ｃは、様々なタノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物で処置され、且つ、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）単独で、又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせて処置されたＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞における相対ＩＲＦ活性を示す。Ｕ９３７細胞はまた、タノトランスミッションポリペプチド発現を誘導するためにドキシサイクリン単独で、又は二量体化を誘導するためのＢ／Ｂホモ二量体化剤と組み合わせて処置された。図５Ａ～５Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂホモ二量体化剤で処置したＵ９３７細胞を示す。図５Ｂ及び５Ｃは、様々なタノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物で処置され、且つ、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）単独で、又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせて処置されたＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞における相対ＩＲＦ活性を示す。Ｕ９３７細胞はまた、タノトランスミッションポリペプチド発現を誘導するためにドキシサイクリン単独で、又は二量体化を誘導するためのＢ／Ｂホモ二量体化剤と組み合わせて処置された。図５Ａ～５Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂホモ二量体化剤で処置したＵ９３７細胞を示す。６Ａは、タノトランスミッションポリペプチドを単独で、又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせて発現するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞の相対生存能力を示す。図６Ｂは、マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する、単独で、又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせて、タノトランスミッションポリペプチド発現の誘導後にＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から産生された細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の影響を示す。図６Ｃは、ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存期間に対する、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現単独、又はカスパーゼ阻害剤との組み合わせの効果を示す。図６Ｂは、マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する、単独で、又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせて、タノトランスミッションポリペプチド発現の誘導後にＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から産生された細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の影響を示す。図６Ｃは、ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存期間に対する、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現単独、又はカスパーゼ阻害剤との組み合わせの効果を示す。ＴＲＩＦ変異体及び対照の発現後のＨＴ２９細胞における細胞生存能力を示す。図８Ａは、特異的ＴＲＩＦ変異体を発現するＨＴ２９細胞の上清と一緒に培養したＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞におけるＩＲＦ活性を示す。図８Ｂは、特異的ＴＲＩＦ変異体を発現するＨＴ２９細胞の上清で培養したＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞におけるＮＦｋＢ活性を示す。図８Ｂは、特異的ＴＲＩＦ変異体を発現するＨＴ２９細胞の上清で培養したＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞におけるＮＦｋＢ活性を示す。ＴＲＩＦ変異体及び対照を発現するＡ３７５細胞における細胞生存能力を示す。特異的ＴＲＩＦ変異体を発現するＡ３７５細胞の上清と一緒に培養したＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞におけるＩＲＦ活性（上パネル）及びＮＦｋＢ活性（下パネル）を示す。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスにおける腫瘍増殖に対するｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ発現の効果を示す。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存に対するｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ発現の効果を示す。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスにおける腫瘍増殖に対するｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現の効果を示す。ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞を移植したマウスの生存に対するｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現の影響を示す。マウス乳癌４Ｔ１細胞における細胞死（左パネル）、及び癌細胞由来の培地で処置したＪ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（右パネル）におけるＩＲＦ活性を示す。癌細胞は、ｍＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３－ｖＩＣＡをコードする複製不全アデノウイルス５（Ｅ１及びＥ３領域が欠失）、又は模擬アデノウイルス対照で処置した。マウス大腸癌ＭＣ３８細胞における細胞死（左パネル）、及び癌細胞由来の培地で処置したＪ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（右パネル）におけるＩＲＦ活性を示す。癌細胞は、ｍＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３－ｖＩＣＡをコードする複製不全アデノウイルス５（Ｅ１及びＥ３領域が欠失）、又は模擬アデノウイルス対照で処置した。マウス膵臓癌Ｐａｎ０２細胞における細胞死（左パネル）、及び癌細胞由来の培地で処置したＪ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（右パネル）におけるＩＲＦ活性を示す。癌細胞は、ｍＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ－ｍＲＩＰＫ３－ｖＩＣＡをコードする複製不全アデノウイルス５（Ｅ１及びＥ３領域が欠失）、又は模擬アデノウイルス対照で処置した。

本開示は、標的細胞によるタノトランスミッション（ｔｈａｎｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）を促進する２つ以上の異なるポリペプチドをコードする核酸分子に関する。タノトランスミッションは、細胞間、例えば、標的シグナル伝達細胞と応答細胞との間の連絡のプロセスであり、これは、標的細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果起こり、応答細胞にシグナル伝達して、生物学的応答を受けるようにする。例えば、本明細書に記載のタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子と標的細胞を接触させることによる細胞ターンオーバー経路遺伝子の調節によって、タノトランスミッションを標的細胞に誘導することができる。細胞ターンオーバー経路が活性化された標的細胞は、標的細胞によって能動的に放出される因子を介して、又は標的細胞のターンオーバー（例えば、細胞死）中に応答細胞に曝露される標的細胞の細胞内因子を介して、応答細胞にシグナル伝達することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドは、融合タンパク質内に含まれる。一部の実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの各々は、個別のポリペプチドとして発現される。

本開示はまた、対象においてタノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、タノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間でタノトランスミッションポリペプチド及び／又はタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子を対象に投与することを含む。さらに、タノトランスミッションポリペプチド及び／又はタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子を投与するステップを含む、免疫応答を増大する方法並びに癌を治療する方法も記載される。

Ｉ．定義
「投与する」、「投与すること」又は「投与」という用語は、医薬組成物又は薬剤を対象の系に、又は対象の内部若しくは外部の特定の領域に送達するあらゆる方法を含む。

本明細書で使用される「併用投与」、「同時投与」、若しくは「併用療法」は、個別の製剤若しくは単一の医薬製剤を用いた２種以上の活性剤の投与、又は両方（若しくはすべて）の活性剤がそれらの生物学的活性を発揮する期間が重なるような任意の順序での連続投与として理解される。本明細書では、１つの活性剤（例えば、１つ又は複数のタノトランスミッションポリヌクレオチドを含む医薬組成物）が、第２の治療薬（例えば、免疫療法薬）の活性を改善することができる、例えば、標的細胞、例えば癌細胞を第２の治療薬の活性に感作させることができる、又は第２の治療薬と相乗効果を有し得ることが企図される。「併用投与」は、薬剤が同時に、同じ頻度で、又は同じ投与経路によって投与される必要はない。本明細書で使用される「併用投与」、「同時投与」、又は「併用療法」には、１又は複数種の追加の治療薬、例えば、免疫療法薬（例えば、免疫チェックポイントモジュレーター）と共に、標的細胞によるタノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスの投与が含まれる。免疫療法薬の例は、本明細書に提供される。

本明細書において使用される「アネロベクター」という用語は、タンパク質性外殻（例えば、カプシド）へのパッケージングを可能にするように、アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ゲノム配列若しくはその隣接部分に由来するか、又は高度に類似する（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一の）十分な核酸配列を含み、異種配列をさらに含むベクターを指す。一部の実施形態では、アネロベクターは、ウイルスベクター又はネイキッド核酸である。一部の実施形態では、アネロベクターは、天然アネロウイルス配列又はそれに高度に類似した（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一の）配列の少なくとも約５０、６０、７０、７１、７２、７３、７４、７５、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２５００、３０００、又は３５００の連続したヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、アネロベクターは、アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１、ＯＲＦ２、又はＯＲＦ３の１つ若しくは複数をさらに含む。一部の実施形態では、異種配列は、多重クローニング部位を含み、異種プロモーターを含み、治療用タンパク質のコード領域を含むか、又は治療用核酸をコードする。一部の実施形態では、カプシドは、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）カプシドである。アネロベクターは、例えば、米国特許第１１，１６６，９９６号明細書に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される場合、「環状ＲＮＡ」という用語は、共有結合又は非共有結合を介して環状構造を形成するポリリボヌクレオチドを指す。環状ＲＮＡは、例えば、米国特許第１１，１６０，８２２号明細書に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される「上昇する」及び「低下する」という用語はそれぞれ、参照と比較してパラメータの量、機能、又は活性をより上昇させる又はより低下させる調節を指す。例えば、本明細書に記載の組成物の投与に続いて、パラメータ（例えば、ＩＲＦの活性化、ＮＦ－ｋＢの活性化、マクロファージの活性化、腫瘍のサイズ又は増殖）は、投与前のパラメータ量に対して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上対象で上昇又は低下し得る。一般に、測定基準は、投与に続いて、投与の効果が現れた時点、例えば、治療計画が開始されてから少なくとも１日後、１週間後、１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後に測定される。同様に、前臨床パラメータ（インビトロでの細胞のＮＦ－ｋＢ又はＩＲＦの活性化、及び／又は本明細書に記載の組成物による試験哺乳動物の腫瘍負荷の低下など）は、投与前のパラメータの量と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上上昇又は低下し得る。

本明細書で使用される「抗腫瘍剤」は、癌の処置に使用される薬物を指す。抗腫瘍剤には、化学療法剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、及び酵素）、生物学的抗癌剤、及び免疫チェックポイント調節剤が含まれる。

「癌治療計画」又は「抗腫瘍療法」は、特定のスケジュールで対象への特定の量の１つ又は複数の抗腫瘍剤の投与を含む、癌の処置のための臨床的に認められた投薬プロトコルである。

本明細書において「融合誘導（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）タンパク質」とは、ウイルスに感染した細胞から別の細胞への融合を促進することができる任意の異種タンパク質を指す。融合誘導タンパク質の例としては、ＶＳＶ－Ｇ、シンシチン－１（ヒト内因性レトロウイルス－Ｗ（ＨＥＲＶ－Ｗ）由来）又はシンシチン－２（ＨＥＲＶＦＲＤＥ１由来）、パラミクソウイルスＳＶ５－Ｆ、麻疹ウイルス－Ｈ、麻疹ウイルス－Ｆ、ＲＳＶ－Ｆ、テナガザル（ｇｉｂｂｏｎａｐｅ）白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、マソン・ファイザーサルウイルス（Ｍａｓｏｎ－Ｐｆｉｚｅｒｍｏｎｋｅｙｖｉｒｕｓ）（ＭＰＭＶ）及びＲ膜貫通ペプチドが除去された（Ｒ－バージョン）ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）などのレトロウイルス又はレンチウイルス由来の糖タンパク質が挙げられる。

本明細書において使用される「異種」という用語は、組み合わせて自然に存在しない要素の組合せを指す。例えば、ウイルス若しくは標的細胞に対して異種であるポリヌクレオチドとは、ウイルス若しくは標的細胞において天然に存在しないポリヌクレオチド、又はウイルス若しくは標的細胞において自然界に存在する位置とは異なる位置に存在するポリヌクレオチドを指す。標的細胞に対して異種であるポリペプチドとは、標的細胞において天然に存在しないポリペプチド、又は標的細胞に対して異種であるポリヌクレオチドから発現されるポリペプチドを指す。

本明細書で使用される「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイント分子」は、シグナルを調節する免疫系の分子である。免疫チェックポイント分子は、刺激性チェックポイント分子である、即ちシグナルを上昇させるか、又は抑制性チェックポイント分子である、即ちシグナルを低下させることができる。本明細書で使用される「刺激性チェックポイント分子」は、シグナルを上昇させる又は共刺激性である免疫系の分子である。本明細書で使用される「抑制性チェックポイント分子」は、シグナルを低下させる又は共抑制性である免疫系の分子である。

本明細書で使用される「免疫チェックポイントモジュレーター」は、対象における免疫チェックポイントの活性を変化させることができる薬剤である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡを含む、１つ又は複数の免疫チェックポイント分子の機能を変化させる。免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイントのアゴニスト又はアンタゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは小分子である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、又は抗ＣＴＬＡ－４結合タンパク質、例えば、抗体又は抗体断片である。

本明細書で使用される「免疫療法剤」は、免疫応答を誘導又は増強する、薬学的に許容される化合物、組成物、又は療法剤を指す。免疫療法剤には、限定されるものではないが、免疫チェックポイントモジュレーター、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、及び癌ワクチンが含まれる。

本明細書で使用される「腫瘍性障害」又は「癌」又は「新生物」は、限定されるものではないが：白血病、リンパ腫、黒色腫、癌腫、及び肉腫を含む、ヒトに見られるすべての種類の癌又は新生物を指す。本明細書で使用される「腫瘍性障害」、「癌」、及び「新生物」という用語は、互換的に、そして単数形又は複数形のいずれかで使用され、宿主生物にとって細胞を異常にする悪性形質転換を受けた細胞を指す。原発性癌細胞（即ち、悪性形質転換部位の近くから得られた細胞）は、十分に確立された技術、特に組織学的検査によって非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく、癌幹細胞、並びに、癌前駆細胞又は癌細胞の祖先に由来する任意の細胞が含まれる。これには、転移した癌細胞、並びに癌細胞に由来するインビトロ培養物及び細胞株が含まれる。

癌のステージ分類の特定の基準は、腫瘍サイズ、組織学的特徴、腫瘍マーカー、及び当業者に公知の他の基準に基づく特定の癌の種類に依存する。一般に、癌のステージは次のように説明することができる：（ｉ）ステージ０、上皮内癌；（ｉｉ）ステージＩ、ステージＩＩ、及びステージＩＩＩ（数値が大きいほど、腫瘍のサイズ、並びに／又は癌がリンパ節及び／若しくは組織の近くで最初に発生した臓器若しくは原発腫瘍の位置に隣接する臓器を超えた癌の転移を含む、より広範な疾患を示す）；並びに（ｉｉｉ）ステージＩＶ（癌が遠隔の組織又は臓器に転移している）。

「固形腫瘍」は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波、又は触診などの方法によって腫瘍量に基づいて検出可能であり、且つ／又は患者から入手可能なサンプル中の１つ又は複数の癌特異的抗原の発現のために検出可能である腫瘍である。腫瘍は、測定可能な寸法である必要はない。

本発明の方法によって処置される「対象」は、ヒト又は非ヒト動物のいずれか、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味し得る。一部の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物である。一部の実施形態では、非ヒト哺乳動物は、非ヒト霊長類（例えば、サル、類人猿）、有蹄類（例えば、ウシ、スイギュウ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ラクダ、ラマ、アルパカ、シカ、ウマ、ロバ）、肉食動物（例えば、イヌ、ネコ）、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、又はウサギ目（例えば、ウサギ）である。特定の実施形態において、対象は、本発明の方法を用いる処置の開始前に、検出可能な癌又は診断された癌を有する。特定の実施形態では、対象は、本発明の方法を用いる処置の開始前に、検出可能な感染症又は診断された感染症、例えば、慢性感染症を有する。

本明細書で使用される「自殺遺伝子」とは、薬物の非毒性前駆体を細胞傷害性化合物に変換するタンパク質（例えば、酵素）をコードする遺伝子を指す。

本明細書で使用される「細胞ターンオーバー」は、細胞内の物質を再構成して拡散させ、最終的に細胞死をもたらし得る動的プロセスを指す。細胞ターンオーバーは、細胞ターンオーバー因子の産生及び細胞からの放出を含む。一部の実施形態では、細胞ターンオーバーは、細胞死をもたらさない。

本明細書で使用される「細胞ターンオーバー因子」は、細胞ターンオーバーを受けている細胞によって産生される分子及び細胞断片であり、最終的に細胞から放出され、他の細胞の生物学的活性に影響を及ぼす。細胞ターンオーバー因子は、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、核酸、小分子、及び細胞断片（例えば、小胞及び細胞膜断片）を含み得る。

本明細書で使用される「細胞ターンオーバー経路遺伝子」は、細胞ターンオーバー経路を促進、誘導、又はそうでなければそれに寄与するポリペプチドをコードする遺伝子を指す。

本明細書で使用される「タノトランスミッション」は、細胞間の連絡であり、これは、標的シグナル伝達細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果起こり、応答細胞にシグナル伝達して、生物学的応答を受けるようにする。タノトランスミッションは、例えば、そのような経路を促進する遺伝子の標的シグナル伝達細胞へのウイルス又は他の遺伝子療法送達を介して、上記細胞における細胞ターンオーバー経路遺伝子の調節により標的シグナル伝達細胞に誘導され得る。表１、２、３及び４は、様々な細胞ターンオーバー経路を促進することができる例示的なポリヌクレオチド又はポリペプチドを記載する。細胞ターンオーバー経路がこのように活性化された標的シグナル伝達細胞は、シグナル伝達細胞によって能動的に放出される因子を介して、又はシグナル伝達細胞の細胞ターンオーバー（例えば、細胞死）中に応答細胞に曝露されるようになるシグナル伝達細胞の細胞内因子を介して、応答細胞にシグナル伝達することができる。特定の実施形態では、活性化シグナル伝達細胞は、応答細胞（例えば、免疫細胞）における免疫刺激応答（例えば、炎症誘発性応答）を促進する。

本明細書で使用される「免疫調節性タノトランスミッション」は、活性化されたシグナル伝達細胞が、応答細胞（例えば、免疫細胞）において免疫調節応答（例えば、炎症誘発性応答）を促進するタノトランスミッションを指す。

「タノトランスミッションを促進するポリヌクレオチド」及び「タノトランスミッションポリヌクレオチド」という用語は、本明細書において互換的に使用され、標的細胞におけるその発現が、標的細胞による免疫調節タノトランスミッションの増大をもたらすポリヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、タノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、タノトランスミッションを促進するポリペプチド、即ち、標的細胞におけるその発現が、標的細胞による免疫調節タノトランスミッションを増大するポリペプチドをコードする。用語「タノトランスミッションを促進するポリペプチド」及び「タノトランスミッションポリペプチド」は、本明細書において互換的に使用される。

本明細書において使用される用語「組換え核酸分子」は、２つ以上のポリヌクレオチドを組み合わせて、天然では存在しない核酸分子を形成することによって調製される核酸分子を指す。従って、組換え核酸分子は、それらが天然では共有結合的に結合していない核酸配列に共有結合している少なくとも２つのポリヌクレオチドを含む。例えば、一部の実施形態では、組換え核酸分子は、各々が、異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする２つ以上のポリヌクレオチドを含み、ここで、２つ以上のポリヌクレオチドは、それらが天然では共有結合的に結合していない核酸配列に共有結合している。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、天然では同じ核酸分子内に見出されない少なくとも２つのポリヌクレオチドを含む。

「治療有効量」とは、疾患を処置するために患者に投与されると、その疾患のそのような処置を有効にするのに十分な化合物の量を意味する。疾患を予防するために投与される場合、その量は、疾患の発症を回避又は遅らせるのに十分である。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに処置される患者の年齢、体重などによって異なる。治療有効量は治癒的である必要はない。治療有効量は、疾患又は状態の発生を防ぐ必要はない。代わりに治療有効量は、疾患又は状態の発症、重症度、又は進行を少なくとも遅延又は軽減する量である。

本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及びその同源語は、疾患、病的状態、又は障害を改善する、和らげる、安定化させる、予防する、又は治癒することを目的とした対象の医学的管理を指す。この用語には、積極的処置（疾患、病的状態、又は障害を改善することを目的とした処置）、原因処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の原因を対象とした処置）、緩和処置（症状を軽減するように設計された処置）、予防的処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の発症を最小限に抑えるか、又は部分的若しくは完全に阻害することを目的とした処置）；及び支援処置（別の療法を補完するために使用される処置）が含まれる。

ポリペプチドに関して本明細書で使用される「変異体」という用語は、対応する野生型ポリペプチドから少なくとも１つのアミノ酸残基だけ異なるポリペプチドを指す。一部の実施形態では、変異体ポリペプチドは、対応する天然に存在するポリペプチドとは異なる少なくとも１つの活性を有する。ポリヌクレオチドに関して本明細書で使用される用語「変異体」は、対応する野生型ポリヌクレオチドから少なくとも１ヌクレオチドだけ異なるポリヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、変異体ポリペプチド又は変異体ポリヌクレオチドは、対応する野生型ポリペプチド又はポリヌクレオチドに対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、且つ、少なくとも１アミノ酸残基だけ異なる。一部の実施形態では、変異体は、ポリペプチドの機能性断片である。

ポリペプチドに関して本明細書で使用される「機能性断片」という用語は、ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性、例えば、タノトランスミッションを促進する能力を保持するポリペプチドの一部を指す。一部の実施形態では、機能性断片は、ポリペプチドのドメイン、例えば、ポリペプチドのデスフォールドドメイン、デスドメイン、ピリンドメイン、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、又はＣ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）である。一部の実施形態では、ポリペプチドの機能性断片は、ドメインの少なくとも１つの生物学的活性を保持するドメインの一部である。

本明細書で使用される「５’非翻訳領域」（５’ＵＴＲ）は、ポリペプチドをコードしない開始コドン（即ち、リボソームによって翻訳されたｍＲＮＡ転写産物の最初のコドン）から直接上流（即ち、５’）にあるｍＲＮＡの領域を指す。

「３’非翻訳領域」（３’ＵＴＲ）は、ポリペプチドをコードしない終止コドン（即ち、翻訳の終了をシグナル伝達するｍＲＮＡ転写物のコドン）の直接下流（即ち、３’）にあるｍＲＮＡの領域を指す。

「オープンリーディングフレーム」（ＯＲＦ）は、開始コドン（例えば、メチオニン（ＡＴＧ））で始まり、終止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ又はＴＧＡ）で終わり、且つ、ポリペプチドをコードするＤＮＡ又はＲＮＡの連続した区間である。

「ポリＡテール」は、複数の連続したアデノシン一リン酸を含む３’ＵＴＲの下流、例えば、直接下流（即ち、３’）にあるｍＲＮＡの領域である。ポリＡテールは、１０～３００のアデノシン一リン酸を含み得る。例えば、ポリＡテールは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０又は３００のアデノシン一リン酸を含有し得る。一部の実施形態では、ポリＡテールは、５０～２５０のアデノシン一リン酸を含有する。関連する生物学的環境（例えば、細胞内、インビボ）において、ポリ（Ａ）テールは、例えば、細胞質中で、ｍＲＮＡを酵素分解から保護するように機能し、また、転写終結、核からのｍＲＮＡの輸出及び翻訳を補助する。

ＩＩ．細胞ターンオーバー経路
本明細書に提供されるように、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子を用いて、標的細胞における細胞ターンオーバー経路を調節することができる。例えば、一部の実施形態では、標的細胞における核酸分子及びコードされたポリペプチドの発現は、標的細胞における免疫刺激性細胞ターンオーバー経路を誘導する。免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、細胞内で活性化されると、免疫細胞などの応答細胞において免疫刺激応答を促進する細胞ターンオーバー経路である。免疫刺激性細胞ターンオーバー経路として、限定はされないが、プログラム壊死（例えば、パイロトーシス及びネクロトーシス）、外因性アポトーシス、及びこれらの組み合わせが挙げられる。

プログラム壊死
本明細書で使用される「プログラム壊死」は、遺伝的に制御された細胞死を指し、これは、アポトーシス中に起こる膜の完全性の保持とは対照的に、細胞腫脹（腫瘍症）、膜破裂、及び細胞内容物の放出などの形態学的特徴を伴う。一部の実施形態では、プログラム壊死はパイロトーシスである。一部の実施形態では、プログラム壊死は、ネクロトーシスである。

パイロトーシス
本明細書で使用される「パイロトーシス」は、カスパーゼ１－、カスパーゼ４－、又はカスパーゼ５－依存性プログラム細胞死に固有の炎症過程を指す。パイロトーシスの最も特徴的な生化学的特徴は、カスパーゼ－１の早期誘導媒介性媒介活性化である。カスパーゼ－１、４、又は５のパイロトーシス活性化は、カスパーゼ－１活性化を促進するアダプタータンパク質ＡＳＣを動員するＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、又はメラノーマ２には存在しない（ＡＩＭ２）細胞質ＤＮＡセンサーなどの他のセンサーを含む、インフラマソームとして知られる多重タンパク質プラットフォームの状況下で発生し得る。カスパーゼ－４／５は、ＬＰＳによって直接活性化され得る。どちらの場合も、活性カスパーゼ－１は、タンパク質分解性成熟並びに発熱性インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）及びＩＬ－１８の放出を触媒する。さらに、一部の（しかし、すべてではない）事例では、カスパーゼ活性化は、孔形成タンパク質ＧＳＤＭ－Ｄの切断及び活性化を誘導して、膜破裂及び細胞死を駆動する。Ｇａｌｌｕｚｚｉｅｔａｌ．，２０１８，ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照されたい。本開示の方法において、パイロトーシスは、標的細胞にパイロトーシスを誘導するポリペプチドをコードする１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスとの接触又は感染を介して標的細胞に誘導され得る。標的細胞においてパイロトーシスを誘導し得るポリペプチドとしては、限定するものではないが、ＮＬＲ、ＡＳＣ、ＧＳＤＭ－Ｄ、ＡＩＭ２、及びＢＩＲＣ１が挙げられる。

いくつかの方法が当技術分野で知られており、それらを使用して、パイロトーシスを受けている細胞を同定すると共に、特定のマーカーの検出による他のタイプの細胞分解及び／又は細胞死から区別することができる。パイロトーシスは、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、又はカスパーゼ－５活性を必要とし、通常、プロ－ＩＬ－１ｂ及び／又はプロＩＬ－１８のプロセシング、これらの成熟サイトカインの放出、並びにＧＳＤＭ－Ｄのカスパーゼ－１／４／５切断断片による膜透過処置を伴う。

ネクロトーシス
本明細書において使用される用語「ネクロトーシス」は、受容体相互作用プロテインキナーゼ１及び／又は３（ＲＩＰＫ１－及び／又はＲＩＰＫ３）／混合系統キナーゼ様（ＭＬＫＬ）依存性壊死を指す。アルキル化ＤＮＡ損傷、興奮性毒素及び細胞死受容体のライゲーションを含め、いくつかのトリガーが、ネクロトーシスを引き起こし得る。例えば、カスパーゼ（特に、カスパーゼ－８又はカスパーゼ－１０）が遺伝子操作（例えば、遺伝子ノックアウト若しくはＲＮＡ干渉、ＲＮＡｉ）によって阻害されるか、又は薬理学的物質（例えば、化学的カスパーゼ阻害剤）によって遮断されると、ＲＩＰＫ３は、ＭＬＫＬをリン酸化し、ＭＬＫＬを膜孔にアセンブリングし、それが、最終的に壊死性細胞死の実行を活性化する。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇａｌｌｕｚｚｉｅｔａｌ．，２０１８，ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照されたい。

免疫原性アポトーシスを駆動するのと同じ経路が、ＲＩＰＫ３を活性化することができるが、通常、カスパーゼ８（及び潜在的にカスパーゼ１０）は、ＲＩＰＫ３活性化を抑制する。ＲＩＰＫ３は、典型的に、カスパーゼ８損傷の状況でしか活性化されない。ｖＩＣＡなどのウイルスタンパク質又はＦＡＤＤドミナントネガティブ（ＤＮ）などの細胞変異体は、カスパーゼ８経路をターゲティングし、ＲＩＰＫ３が存在すれば、ＲＩＰＫ３活性を解放する。ＲＩＰＫ３が存在しなければ、ｖＩＣＡ又はＦＡＤＤ－ＤＮは単にアポトーシスを阻止する。ネクロトーシスは、（ａ）膜破裂及び（ｂ）炎症性転写プログラム（例えば、ＮＦ－ｋＢ及びＩＲＦ３）が同時に活性化されるため、免疫原性である。

本開示の方法では、ネクロトーシスは、標的細胞にネクロトーシスを誘導する２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの発現を介して、標的細胞に誘導され得る。標的細胞にネクロトーシスを誘発し得るポリペプチドとしては、限定はされないが、以下のものが挙げられる：Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ＴＬＲ４、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロンβ（ＴＲＩＦ）、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）、受容体相互作用セリン／トレオニン－タンパク質キナーゼ１（ＲＩＰＫ１）、受容体相互作用セリン／トレオニン－タンパク質キナーゼ３（ＲＩＰＫ３）、混合系統キナーゼドメイン様プソイドキナーゼ（ＭＬＫＬ）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、ＦＳ－７関連表面抗原（ＦＡＳ）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド受容体（ＴＲＡＩＬＲ）及び腫瘍壊死因子受容体１型関連死ドメインタンパク質（ＴＲＡＤＤ）。

いくつかの方法が当技術分野で知られており、それらを使用して、ネクロトーシスを受けている細胞を同定すると共に、特定のマーカーの検出による他のタイプの細胞分解及び／又は細胞死から区別することができる。これらには、これらの翻訳後修飾を検出する抗体によるＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、及びＭＬＫＬのリン酸化が含まれ、典型的には、細胞のイムノブロット又は免疫染色によって行う。ネクロトーシスは、カスパーゼ活性化の非存在、急速な膜透過化、膜へのＭＬＫＬ再局在化、界面活性剤不溶性画分へのＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬの蓄積、ＲＩＰＫ３／ＭＬＫＬ複合体形成、及びＭＬＫＬオリゴマー化によって、アポトーシス及びパイロトーシスから区別することができる。ネクロトーシスは、ＲＩＰＫ３とＭＬＫＬの両方の要件、並びにそれらの活性化によって遺伝的及び薬理学的に定義することができる。

外因性アポトーシス
本明細書において使用される用語「外因性アポトーシス」は、特定の膜貫通受容体によって感知及び伝播される細胞外ストレスシグナルによって誘導されるアポトーシス細胞死の例を指す。外因性アポトーシスは、ＦＡＳ／ＣＤ９５リガンド（ＦＡＳＬ／ＣＤ９５Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、及びＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド、ＴＲＡＩＬとして最もよく知られている）などのリガンドが、様々な細胞死受容体（即ち、それぞれ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＴＮＦα受容体１（ＴＮＦＲ１）、及びＴＲＡＩＬ受容体（ＴＲＡＩＬＲ）１－２）との結合によって開始され得る。或いは、外因性アポトーシス促進シグナルは、ネトリン受容体（例えば、ＵＮＣ５Ａ－Ｄであり、大腸癌で欠失している、ＤＣＣ）を含むいわゆる「依存性受容体」によって送達され得るが、それらは、それらの特異的リガンドの濃度が臨界閾値レベルを下回った場合にのみ致死的機能を発揮する。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇａｌｌｕｚｚｉｅｔａｌ．，２０１８，ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照されたい。

本開示の方法において、外因性アポトーシスは、標的細胞において外因性アポトーシスを誘導する２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの発現を介して標的細胞で誘導され得る。標的細胞に外因性アポトーシスを誘導し得るポリペプチドとして、限定はされないが、ＴＮＦ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＴＲＡＩＬ（及びその同族受容体）、ＴＲＡＤＤ、細胞死ドメインを有するＦａｓ関連タンパク質（ＦＡＤＤ）、トランスフォーミング増殖因子β活性化キナーゼ１（Ｔａｋ１）、カスパーゼ－８、ＸＩＡＰ、ＢＩＤ、カスパーゼ－９、ＡＰＡＦ－１、ＣｙｔｏＣ、カスパーゼ－３及びカスパーゼ－７が挙げられる。標的細胞において外因性アポトーシスを阻害し得るポリペプチドとしては、アポトーシスタンパク質１の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ１）、ｃＩＡＰ２、Ｉｋｋａ及びＩｋｋｂが挙げられる。いくつかの方法が当技術分野で知られており、これらを使用して、アポトーシスを受けている細胞を同定すると共に、特定のマーカーの検出により他のタイプの細胞分解及び／又は細胞死と区別することができる。アポトーシスは、カスパーゼ活性化を必要とするため、カスパーゼ活性化の阻害剤及び／又はカスパーゼ－８若しくはカスパーゼ－９などのカスパーゼの非存在による細胞死の阻止によって抑制することができる。カスパーゼ活性化は、ＰＡＲＰ及びＤＦＦ４５などの特定の基質、並びに６００を超える追加タンパク質の切断によって細胞を体系的に分解する。アポトーシス細胞膜は、最初はホスホチジル－セリンの外在化及び付随する膜ブレビングに際して無傷のままである。ミトコンドリアの外膜は、典型的には破壊されて、ＣｙｔｏＣ及びＨＴＲＡ２などの細胞質ゾルタンパク質中に放出される。核ＤＮＡは、離散断片に切断され、これらは、当技術分野で公知のアッセイによって検出され得る。

ＩＩＩ．ペイロード
特定の態様において、本開示は、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチド、及びこれらのタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子の組み合わせに関する。２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドは、単一の核酸分子によって、又は２つ以上の核酸分子によってコードされ得る。例えば、いくつかの態様において、本開示は、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子に関する。いくつかの態様において、本開示は、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする２つ以上の組換え核酸分子の組合せに関する。一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子は、医薬組成物、ベクター、（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）又は細胞内に含まれる。一部の実施形態では、医薬組成物、ベクター、（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）又は細胞は、少なくとも２、３、４若しくは５つの核酸分子を含み、これらは各々タノトランスミッションポリペプチドをコードする。

一部の実施形態では、組換え核酸分子は、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０又は１０ｋｂ未満を含む。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｋｂを含む。これらの値のいずれも、組換え核酸分子のサイズに関する範囲を定義するために使用され得る。例えば、一部の実施形態では、組換え核酸分子は、１０～１００ｋｂ又は１０～５０ｋｂを含む。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のタノトランスミッションポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、１０、９、８、７、６、５、４又は３未満のタノトランスミッションポリペプチドをコードする。これらの値のいずれも、組換え核酸分子によってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの数に関する範囲を定義するために使用され得る。例えば、一部の実施形態では、組換え核酸分子は、２～３、２～４又は２～１０のタノトランスミッションポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、２つのタノトランスミッションポリペプチドしかコードしない。一部の実施形態では、組換え核酸分子は、３つのタノトランスミッションポリペプチドしかコードしない。

一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドは、以下：ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される。

好適なカスパーゼとしては、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１及びカスパーゼ－１２が挙げられる。

例示的なＴＮＦＳＦタンパク質を以下の表１に記載する。

タノトランスミッションポリペプチドをコードする例示的なポリヌクレオチド配列を以下の表２に記載する。表２のタノトランスミッションポリペプチドをコードする（又はそれと少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一のポリペプチドをコードする）任意の他のポリヌクレオチド配列も、本明細書に記載の方法及び組成物で使用することができる。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、野生型タンパク質、又はその機能性断片である。一部の実施形態では、機能性断片は、野生型タンパク質、例えば、本明細書に記載の野生型タノトランスミッションポリペプチドのＮ末端又はＣ末端切断体である。一部の実施形態では、本明細書に記載のタノトランスミッションポリペプチドは、例えば、タノトランスミッションを促進するそれらの能力をさらに増強するように変異されていてもよい。例えば、一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチド又はその機能性断片は、野生型タンパク質に対して１つ又は複数の変異を含む。

ＴＲＩＦ変異体
一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦタンパク質の変異体、例えば、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の６８８～６９１位におけるＲＨＩＭ四分子の１つ又は複数のアミノ酸残基に変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質に対して、Ｑ６８８Ａ、Ｌ６８９Ａ、Ｇ６９０Ａ及びＬ６９１Ａからなる群から選択される１つ又は複数の置換を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質に対して、置換Ｑ６８８Ａ、Ｌ６８９Ａ、Ｇ６９０Ａ及びＬ６９１Ａを含む。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質に対して、例えば、ヒト野生型ＴＲＩＦタンパク質に対して、Ｃ末端における１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の５４１～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含む野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、ＴＢＫ１によってリン酸化される１つ又は複数のアミノ酸残基の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｓ２１０Ａ、Ｓ２１２Ａ及びＴ２１４Ａからなる群から選択される１つ又は複数の置換を含む。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、４３４位にアミノ酸残基の変異を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｐ４３４Ｈ置換を含む。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、対応する野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、例えば、ヒト野生型ＴＲＩＦタンパク質と比較して、Ｎ末端に１つ又は複数のアミノ酸残基の欠失を含む。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～３１１位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号１２、又は配列番号１２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するポリペプチドからなる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の２１７～３８６位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位及び２１７～６５８位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～１８０位、２１７～３８６位及び５４６～７１２位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０若しくは配列番号２２、又は配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０若しくは配列番号２２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０又は配列番号２２からなる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０又は配列番号２２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有するポリペプチドからなる。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９又は配列番号２１を含むポリヌクレオチドによってコードされる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９又は配列番号２１に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９又は配列番号２１から構成されるポリヌクレオチドによってコードされる。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ変異体は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０又は配列番号２２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列から構成されるポリヌクレオチドによってコードされる。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドは、個別のポリペプチドとして発現されてもよいし、又は融合タンパク質内に含まれていてもよい。一部の実施形態では、タノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドの少なくとも１つは、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写物として転写される。一部の実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする上記単一転写産物は、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドを含む単一のポリペプチド（例えば、融合タンパク質）として翻訳される。一部の実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする上記単一転写産物は、個別のタノトランスミッションポリペプチドとして翻訳され、例えば、本明細書に記載の２Ａペプチドの含有によって、タノトランスミッションポリペプチドを分離する。

一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＴＲＩＦ又はその変異体と、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列、又は配列番号１２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列、又は配列番号２２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、融合タンパク質は、１つ若しくは複数のリンカー、例えば、融合タンパク質を含むタノトランスミッションポリペプチドの間に位置する１つ若しくは複数のリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２５を含むか、又はそれから構成される。

本明細書に記載のタノトランスミッションポリペプチドは、限定はされないが、ＮＦ－κＢの活性化、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７の活性化、アポトーシスの促進、並びにプログラム壊死（例えば、ネクロトーシス若しくはパイロトーシス）の促進を含め、様々な機構を介してタノトランスミッションを促進し得る。２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの組み合わせが使用される場合、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの各々は、類似の機構を介し、又は異なる機構を介してタノトランスミッションを促進し得る。例えば、一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、ＮＦ－κＢを活性化する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドのうち少なくとも２つは、プログラム壊死（例えば、ネクロトーシス又はパイロトーシス）を促進する。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドが異なる機構を介してタノトランスミッションを促進する場合、様々な組み合わせの機構を使用することができる。例えば、一部の実施形態では、１つ又は複数のタノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－κＢを活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－κＢを活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－κＢを活性化し、１つ若しくは複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死（例えば、ネクロトーシス又はパイロトーシス）を促進する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進する。一部の実施形態では、１つ又は複数のタノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死（例えば、ネクロトーシス又はパイロトーシス）を促進する。一部の実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進し、１つ又は複数のタノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるタノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死（例えば、ネクロトーシス又はパイロトーシス）を促進する。

一部の実施形態では、ＮＦ－κＢを活性化するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質、及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される。一部の実施形態では、アポトーシスを促進するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される。一部の実施形態では、プログラムされた壊死を促進するタノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン、及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの組み合わせは、以下から選択される：ＴＲＡＤＤとＴＲＡＦ２、ＴＲＡＤＤとＴＲＡＦ６、ＴＲＡＤＤとｃＩＡＰ１、ＴＲＡＤＤとｃＩＡＰ２、ＴＲＡＤＤとＸＩＡＰ、ＴＲＡＤＤとＮＯＤ２、ＴＲＡＤＤとＭｙＤ８８、ＴＲＡＤＤとＴＲＡＭ、ＴＲＡＤＤとＨＯＩＬ、ＴＲＡＤＤとＨＯＩＰ、ＴＲＡＤＤとシャーピン、ＴＲＡＤＤとＩＫＫｇ、ＴＲＡＤＤとＩＫＫａ、ＴＲＡＤＤとＩＫＫｂ、ＴＲＡＤＤとＲｅｌＡ、ＴＲＡＤＤとＭＡＶＳ、ＴＲＡＤＤとＲＩＧＩ、ＴＲＡＤＤとＭＤＡ５、ＴＲＡＤＤとＴａｋ１、ＴＲＡＤＤとＴＢＫ１、ＴＲＡＤＤとＩＫＫｅ、ＴＲＡＤＤとＩＲＦ３、ＴＲＡＤＤとＩＲＦ７、ＴＲＡＤＤとＩＲＦ１、ＴＲＡＤＤとＴＲＡＦ３、ＴＲＡＤＤとカスパーゼ、ＴＲＡＤＤとＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤとＴＮＦＲ１、ＴＲＡＤＤとＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＤＤとＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＤＤとＦＡＳ、ＴＲＡＤＤとＢａｘ、ＴＲＡＤＤとＢａｋ、ＴＲＡＤＤとＢｉｍ、ＴＲＡＤＤとＢｉｄ、ＴＲＡＤＤとＮｏｘａ、ＴＲＡＤＤとＰｕｍａ、ＴＲＡＤＤとＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤとＺＢＰ１、ＴＲＡＤＤとＲＩＰＫ１、ＴＲＡＤＤとＲＩＰＫ３、ＴＲＡＤＤとＭＬＫＬ、ＴＲＡＤＤとガスダーミンＡ、ＴＲＡＤＤとガスダーミンＢ、ＴＲＡＤＤとガスダーミンＣ、ＴＲＡＤＤとガスダーミンＤ、ＴＲＡＤＤとガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ２とＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ２とｃＩＡＰ１、ＴＲＡＦ２とｃＩＡＰ２、ＴＲＡＦ２とＸＩＡＰ、ＴＲＡＦ２とＮＯＤ２、ＴＲＡＦ２とＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ２とＴＲＡＭ、ＴＲＡＦ２とＨＯＩＬ、ＴＲＡＦ２とＨＯＩＰ、ＴＲＡＦ２とシャーピン、ＴＲＡＦ２とＩＫＫｇ、ＴＲＡＦ２とＩＫＫａ、ＴＲＡＦ２とＩＫＫｂ、ＴＲＡＦ２とＲｅｌＡ、ＴＲＡＦ２とＭＡＶＳ、ＴＲＡＦ２とＲＩＧＩ、ＴＲＡＦ２とＭＤＡ５、ＴＲＡＦ２とＴａｋ１、ＴＲＡＦ２とＴＢＫ１、ＴＲＡＦ２とＩＫＫｅ、ＴＲＡＦ２とＩＲＦ３、ＴＲＡＦ２とＩＲＦ７、ＴＲＡＦ２とＩＲＦ１、ＴＲＡＦ２とＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ２とカスパーゼ、ＴＲＡＦ２とＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ２とＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ２とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ２とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ２とＦＡＳ、ＴＲＡＦ２とＢａｘ、ＴＲＡＦ２とＢａｋ、ＴＲＡＦ２とＢｉｍ、ＴＲＡＦ２とＢｉｄ、ＴＲＡＦ２とＮｏｘａ、ＴＲＡＦ２とＰｕｍａ、ＴＲＡＦ２とＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ２とＺＢＰ１、ＴＲＡＦ２とＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ２とＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ２とＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ２とガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ２とガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ２とガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ２とガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ２とガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ６とｃＩＡＰ１、ＴＲＡＦ６とｃＩＡＰ２、ＴＲＡＦ６とＸＩＡＰ、ＴＲＡＦ６とＮＯＤ２、ＴＲＡＦ６とＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ６とＴＲＡＭ、ＴＲＡＦ６とＨＯＩＬ、ＴＲＡＦ６とＨＯＩＰ、ＴＲＡＦ６とシャーピン、ＴＲＡＦ６とＩＫＫｇ、ＴＲＡＦ６とＩＫＫａ、ＴＲＡＦ６とＩＫＫｂ、ＴＲＡＦ６とＲｅｌＡ、ＴＲＡＦ６とＭＡＶＳ、ＴＲＡＦ６とＲＩＧＩ、ＴＲＡＦ６とＭＤＡ５、ＴＲＡＦ６とＴａｋ１、ＴＲＡＦ６とＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６とＩＫＫｅ、ＴＲＡＦ６とＩＲＦ３、ＴＲＡＦ６とＩＲＦ７、ＴＲＡＦ６とＩＲＦ１、ＴＲＡＦ６とＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ６とカスパーゼ、ＴＲＡＦ６とＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ６とＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ６とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ６とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ６とＦＡＳ、ＴＲＡＦ６とＢａｘ、ＴＲＡＦ６とＢａｋ、ＴＲＡＦ６とＢｉｍ、ＴＲＡＦ６とＢｉｄ、ＴＲＡＦ６とＮｏｘａ、ＴＲＡＦ６とＰｕｍａ、ＴＲＡＦ６とＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ６とＺＢＰ１、ＴＲＡＦ６とＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ６とＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ６とＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ６とガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ６とガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ６とガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ６とガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ６とガスダーミンＥ、ｃＩＡＰ１とｃＩＡＰ２、ｃＩＡＰ１とＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１とＮＯＤ２、ｃＩＡＰ１とＭｙＤ８８、ｃＩＡＰ１とＴＲＡＭ、ｃＩＡＰ１とＨＯＩＬ、ｃＩＡＰ１とＨＯＩＰ、ｃＩＡＰ１とシャーピン、ｃＩＡＰ１とＩＫＫｇ、ｃＩＡＰ１とＩＫＫａ、ｃＩＡＰ１とＩＫＫｂ、ｃＩＡＰ１とＲｅｌＡ、ｃＩＡＰ１とＭＡＶＳ、ｃＩＡＰ１とＲＩＧＩ、ｃＩＡＰ１とＭＤＡ５、ｃＩＡＰ１とＴａｋ１、ｃＩＡＰ１とＴＢＫ１、ｃＩＡＰ１とＩＫＫｅ、ｃＩＡＰ１とＩＲＦ３、ｃＩＡＰ１とＩＲＦ７、ｃＩＡＰ１とＩＲＦ１、ｃＩＡＰ１とＴＲＡＦ３、ｃＩＡＰ１とカスパーゼ、ｃＩＡＰ１とＦＡＤＤ、ｃＩＡＰ１とＴＮＦＲ１、ｃＩＡＰ１とＴＲＡＩＬＲ１、ｃＩＡＰ１とＴＲＡＩＬＲ２、ｃＩＡＰ１とＦＡＳ、ｃＩＡＰ１とＢａｘ、ｃＩＡＰ１とＢａｋ、ｃＩＡＰ１とＢｉｍ、ｃＩＡＰ１とＢｉｄ、ｃＩＡＰ１とＮｏｘａ、ｃＩＡＰ１とＰｕｍａ、ｃＩＡＰ１とＴＲＩＦ、ｃＩＡＰ１とＺＢＰ１、ｃＩＡＰ１とＲＩＰＫ１、ｃＩＡＰ１とＲＩＰＫ３、ｃＩＡＰ１とＭＬＫＬ、ｃＩＡＰ１とガスダーミンＡ、ｃＩＡＰ１とガスダーミンＢ、ｃＩＡＰ１とガスダーミンＣ、ｃＩＡＰ１とガスダーミンＤ、ｃＩＡＰ１とガスダーミンＥ、ｃＩＡＰ２とＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２とＮＯＤ２、ｃＩＡＰ２とＭｙＤ８８、ｃＩＡＰ２とＴＲＡＭ、ｃＩＡＰ２とＨＯＩＬ、ｃＩＡＰ２とＨＯＩＰ、ｃＩＡＰ２とシャーピン、ｃＩＡＰ２とＩＫＫｇ、ｃＩＡＰ２とＩＫＫａ、ｃＩＡＰ２とＩＫＫｂ、ｃＩＡＰ２とＲｅｌＡ、ｃＩＡＰ２とＭＡＶＳ、ｃＩＡＰ２とＲＩＧＩ、ｃＩＡＰ２とＭＤＡ５、ｃＩＡＰ２とＴａｋ１、ｃＩＡＰ２とＴＢＫ１、ｃＩＡＰ２とＩＫＫｅ、ｃＩＡＰ２とＩＲＦ３、ｃＩＡＰ２とＩＲＦ７、ｃＩＡＰ２とＩＲＦ１、ｃＩＡＰ２とＴＲＡＦ３、ｃＩＡＰ２とカスパーゼ、ｃＩＡＰ２とＦＡＤＤ、ｃＩＡＰ２とＴＮＦＲ１、ｃＩＡＰ２とＴＲＡＩＬＲ１、ｃＩＡＰ２とＴＲＡＩＬＲ２、ｃＩＡＰ２とＦＡＳ、ｃＩＡＰ２とＢａｘ、ｃＩＡＰ２とＢａｋ、ｃＩＡＰ２とＢｉｍ、ｃＩＡＰ２とＢｉｄ、ｃＩＡＰ２とＮｏｘａ、ｃＩＡＰ２とＰｕｍａ、ｃＩＡＰ２とＴＲＩＦ、ｃＩＡＰ２とＺＢＰ１、ｃＩＡＰ２とＲＩＰＫ１、ｃＩＡＰ２とＲＩＰＫ３、ｃＩＡＰ２とＭＬＫＬ、ｃＩＡＰ２とガスダーミンＡ、ｃＩＡＰ２とガスダーミンＢ、ｃＩＡＰ２とガスダーミンＣ、ｃＩＡＰ２とガスダーミンＤ、ｃＩＡＰ２とガスダーミンＥ、ＸＩＡＰとＮＯＤ２、ＸＩＡＰとＭｙＤ８８、ＸＩＡＰとＴＲＡＭ、ＸＩＡＰとＨＯＩＬ、ＸＩＡＰとＨＯＩＰ、ＸＩＡＰとシャーピン、ＸＩＡＰとＩＫＫｇ、ＸＩＡＰとＩＫＫａ、ＸＩＡＰとＩＫＫｂ、ＸＩＡＰとＲｅｌＡ、ＸＩＡＰとＭＡＶＳ、ＸＩＡＰとＲＩＧＩ、ＸＩＡＰとＭＤＡ５、ＸＩＡＰとＴａｋ１、ＸＩＡＰとＴＢＫ１、ＸＩＡＰとＩＫＫｅ、ＸＩＡＰとＩＲＦ３、ＸＩＡＰとＩＲＦ７、ＸＩＡＰとＩＲＦ１、ＸＩＡＰとＴＲＡＦ３、ＸＩＡＰとカスパーゼ、ＸＩＡＰとＦＡＤＤ、ＸＩＡＰとＴＮＦＲ１、ＸＩＡＰとＴＲＡＩＬＲ１、ＸＩＡＰとＴＲＡＩＬＲ２、ＸＩＡＰとＦＡＳ、ＸＩＡＰとＢａｘ、ＸＩＡＰとＢａｋ、ＸＩＡＰとＢｉｍ、ＸＩＡＰとＢｉｄ、ＸＩＡＰとＮｏｘａ、ＸＩＡＰとＰｕｍａ、ＸＩＡＰとＴＲＩＦ、ＸＩＡＰとＺＢＰ１、ＸＩＡＰとＲＩＰＫ１、ＸＩＡＰとＲＩＰＫ３、ＸＩＡＰとＭＬＫＬ、ＸＩＡＰとガスダーミンＡ、ＸＩＡＰとガスダーミンＢ、ＸＩＡＰとガスダーミンＣ、ＸＩＡＰとガスダーミンＤ、ＸＩＡＰとガスダーミンＥ、ＮＯＤ２とＭｙＤ８８、ＮＯＤ２とＴＲＡＭ、ＮＯＤ２とＨＯＩＬ、ＮＯＤ２とＨＯＩＰ、ＮＯＤ２とシャーピン、ＮＯＤ２とＩＫＫｇ、ＮＯＤ２とＩＫＫａ、ＮＯＤ２とＩＫＫｂ、ＮＯＤ２とＲｅｌＡ、ＮＯＤ２とＭＡＶＳ、ＮＯＤ２とＲＩＧＩ、ＮＯＤ２とＭＤＡ５、ＮＯＤ２とＴａｋ１、ＮＯＤ２とＴＢＫ１、ＮＯＤ２とＩＫＫｅ、ＮＯＤ２とＩＲＦ３、ＮＯＤ２とＩＲＦ７、ＮＯＤ２とＩＲＦ１、ＮＯＤ２とＴＲＡＦ３、ＮＯＤ２とカスパーゼ、ＮＯＤ２とＦＡＤＤ、ＮＯＤ２とＴＮＦＲ１、ＮＯＤ２とＴＲＡＩＬＲ１、ＮＯＤ２とＴＲＡＩＬＲ２、ＮＯＤ２とＦＡＳ、ＮＯＤ２とＢａｘ、ＮＯＤ２とＢａｋ、ＮＯＤ２とＢｉｍ、ＮＯＤ２とＢｉｄ、ＮＯＤ２とＮｏｘａ、ＮＯＤ２とＰｕｍａ、ＮＯＤ２とＴＲＩＦ、ＮＯＤ２とＺＢＰ１、ＮＯＤ２とＲＩＰＫ１、ＮＯＤ２とＲＩＰＫ３、ＮＯＤ２とＭＬＫＬ、ＮＯＤ２とガスダーミンＡ、ＮＯＤ２とガスダーミンＢ、ＮＯＤ２とガスダーミンＣ、ＮＯＤ２とガスダーミンＤ、ＮＯＤ２とガスダーミンＥ、ＭｙＤ８８とＴＲＡＭ、ＭｙＤ８８とＨＯＩＬ、ＭｙＤ８８とＨＯＩＰ、ＭｙＤ８８とシャーピン、ＭｙＤ８８とＩＫＫｇ、ＭｙＤ８８とＩＫＫａ、ＭｙＤ８８とＩＫＫｂ、
ＭｙＤ８８とＲｅｌＡ、ＭｙＤ８８とＭＡＶＳ、ＭｙＤ８８とＲＩＧＩ、ＭｙＤ８８とＭＤＡ５、ＭｙＤ８８とＴａｋ１、ＭｙＤ８８とＴＢＫ１、ＭｙＤ８８とＩＫＫｅ、ＭｙＤ８８とＩＲＦ３、ＭｙＤ８８とＩＲＦ７、ＭｙＤ８８とＩＲＦ１、ＭｙＤ８８とＴＲＡＦ３、ＭｙＤ８８とカスパーゼ、ＭｙＤ８８とＦＡＤＤ、ＭｙＤ８８とＴＮＦＲ１、ＭｙＤ８８とＴＲＡＩＬＲ１、ＭｙＤ８８とＴＲＡＩＬＲ２、ＭｙＤ８８とＦＡＳ、ＭｙＤ８８とＢａｘ、ＭｙＤ８８とＢａｋ、ＭｙＤ８８とＢｉｍ、ＭｙＤ８８とＢｉｄ、ＭｙＤ８８とＮｏｘａ、ＭｙＤ８８とＰｕｍａ、ＭｙＤ８８とＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８とＺＢＰ１、ＭｙＤ８８とＲＩＰＫ１、ＭｙＤ８８とＲＩＰＫ３、ＭｙＤ８８とＭＬＫＬ、ＭｙＤ８８とガスダーミンＡ、ＭｙＤ８８とガスダーミンＢ、ＭｙＤ８８とガスダーミンＣ、ＭｙＤ８８とガスダーミンＤ、ＭｙＤ８８とガスダーミンＥ、ＴＲＡＭとＨＯＩＬ、ＴＲＡＭとＨＯＩＰ、ＴＲＡＭとシャーピン、ＴＲＡＭとＩＫＫｇ、ＴＲＡＭとＩＫＫａ、ＴＲＡＭとＩＫＫｂ、ＴＲＡＭとＲｅｌＡ、ＴＲＡＭとＭＡＶＳ、ＴＲＡＭとＲＩＧＩ、ＴＲＡＭとＭＤＡ５、ＴＲＡＭとＴａｋ１、ＴＲＡＭとＴＢＫ１、ＴＲＡＭとＩＫＫｅ、ＴＲＡＭとＩＲＦ３、ＴＲＡＭとＩＲＦ７、ＴＲＡＭとＩＲＦ１、ＴＲＡＭとＴＲＡＦ３、ＴＲＡＭとカスパーゼ、ＴＲＡＭとＦＡＤＤ、ＴＲＡＭとＴＮＦＲ１、ＴＲＡＭとＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＭとＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＭとＦＡＳ、ＴＲＡＭとＢａｘ、ＴＲＡＭとＢａｋ、ＴＲＡＭとＢｉｍ、ＴＲＡＭとＢｉｄ、ＴＲＡＭとＮｏｘａ、ＴＲＡＭとＰｕｍａ、ＴＲＡＭとＴＲＩＦ、ＴＲＡＭとＺＢＰ１、ＴＲＡＭとＲＩＰＫ１、ＴＲＡＭとＲＩＰＫ３、ＴＲＡＭとＭＬＫＬ、ＴＲＡＭとガスダーミンＡ、ＴＲＡＭとガスダーミンＢ、ＴＲＡＭとガスダーミンＣ、ＴＲＡＭとガスダーミンＤ、ＴＲＡＭとガスダーミンＥ、ＨＯＩＬとＨＯＩＰ、ＨＯＩＬとシャーピン、ＨＯＩＬとＩＫＫｇ、ＨＯＩＬとＩＫＫａ、ＨＯＩＬとＩＫＫｂ、ＨＯＩＬとＲｅｌＡ、ＨＯＩＬとＭＡＶＳ、ＨＯＩＬとＲＩＧＩ、ＨＯＩＬとＭＤＡ５、ＨＯＩＬとＴａｋ１、ＨＯＩＬとＴＢＫ１、ＨＯＩＬとＩＫＫｅ、ＨＯＩＬとＩＲＦ３、ＨＯＩＬとＩＲＦ７、ＨＯＩＬとＩＲＦ１、ＨＯＩＬとＴＲＡＦ３、ＨＯＩＬとカスパーゼ、ＨＯＩＬとＦＡＤＤ、ＨＯＩＬとＴＮＦＲ１、ＨＯＩＬとＴＲＡＩＬＲ１、ＨＯＩＬとＴＲＡＩＬＲ２、ＨＯＩＬとＦＡＳ、ＨＯＩＬとＢａｘ、ＨＯＩＬとＢａｋ、ＨＯＩＬとＢｉｍ、ＨＯＩＬとＢｉｄ、ＨＯＩＬとＮｏｘａ、ＨＯＩＬとＰｕｍａ、ＨＯＩＬとＴＲＩＦ、ＨＯＩＬとＺＢＰ１、ＨＯＩＬとＲＩＰＫ１、ＨＯＩＬとＲＩＰＫ３、ＨＯＩＬとＭＬＫＬ、ＨＯＩＬとガスダーミンＡ、ＨＯＩＬとガスダーミンＢ、ＨＯＩＬとガスダーミンＣ、ＨＯＩＬとガスダーミンＤ、ＨＯＩＬとガスダーミンＥ、ＨＯＩＰとシャーピン、ＨＯＩＰとＩＫＫｇ、ＨＯＩＰとＩＫＫａ、ＨＯＩＰとＩＫＫｂ、ＨＯＩＰとＲｅｌＡ、ＨＯＩＰとＭＡＶＳ、ＨＯＩＰとＲＩＧＩ、ＨＯＩＰとＭＤＡ５、ＨＯＩＰとＴａｋ１、ＨＯＩＰとＴＢＫ１、ＨＯＩＰとＩＫＫｅ、ＨＯＩＰとＩＲＦ３、ＨＯＩＰとＩＲＦ７、ＨＯＩＰとＩＲＦ１、ＨＯＩＰとＴＲＡＦ３、ＨＯＩＰとカスパーゼ、ＨＯＩＰとＦＡＤＤ、ＨＯＩＰとＴＮＦＲ１、ＨＯＩＰとＴＲＡＩＬＲ１、ＨＯＩＰとＴＲＡＩＬＲ２、ＨＯＩＰとＦＡＳ、ＨＯＩＰとＢａｘ、ＨＯＩＰとＢａｋ、ＨＯＩＰとＢｉｍ、ＨＯＩＰとＢｉｄ、ＨＯＩＰとＮｏｘａ、ＨＯＩＰとＰｕｍａ、ＨＯＩＰとＴＲＩＦ、ＨＯＩＰとＺＢＰ１、ＨＯＩＰとＲＩＰＫ１、ＨＯＩＰとＲＩＰＫ３、ＨＯＩＰとＭＬＫＬ、ＨＯＩＰとガスダーミンＡ、ＨＯＩＰとガスダーミンＢ、ＨＯＩＰとガスダーミンＣ、ＨＯＩＰとガスダーミンＤ、ＨＯＩＰとガスダーミンＥ、シャーピンとＩＫＫｇ、シャーピンとＩＫＫａ、シャーピンとＩＫＫｂ、シャーピンとＲｅｌＡ、シャーピンとＭＡＶＳ、シャーピンとＲＩＧＩ、シャーピンとＭＤＡ５、シャーピンとＴａｋ１、シャーピンとＴＢＫ１、シャーピンとＩＫＫｅ、シャーピンとＩＲＦ３、シャーピンとＩＲＦ７、シャーピンとＩＲＦ１、シャーピンとＴＲＡＦ３、シャーピンとカスパーゼ、シャーピンとＦＡＤＤ、シャーピンとＴＮＦＲ１、シャーピンとＴＲＡＩＬＲ１、シャーピンとＴＲＡＩＬＲ２、シャーピンとＦＡＳ、シャーピンとＢａｘ、シャーピンとＢａｋ、シャーピンとＢｉｍ、シャーピンとＢｉｄ、シャーピンとＮｏｘａ、シャーピンとＰｕｍａ、シャーピンとＴＲＩＦ、シャーピンとＺＢＰ１、シャーピンとＲＩＰＫ１、シャーピンとＲＩＰＫ３、シャーピンとＭＬＫＬ、シャーピンとガスダーミンＡ、シャーピンとガスダーミンＢ、シャーピンとガスダーミンＣ、シャーピンとガスダーミンＤ、シャーピンとガスダーミンＥ、ＩＫＫｇとＩＫＫａ、ＩＫＫｇとＩＫＫｂ、ＩＫＫｇとＲｅｌＡ、ＩＫＫｇとＭＡＶＳ、ＩＫＫｇとＲＩＧＩ、ＩＫＫｇとＭＤＡ５、ＩＫＫｇとＴａｋ１、ＩＫＫｇとＴＢＫ１、ＩＫＫｇとＩＫＫｅ、ＩＫＫｇとＩＲＦ３、ＩＫＫｇとＩＲＦ７、ＩＫＫｇとＩＲＦ１、ＩＫＫｇとＴＲＡＦ３、ＩＫＫｇとカスパーゼ、ＩＫＫｇとＦＡＤＤ、ＩＫＫｇとＴＮＦＲ１、ＩＫＫｇとＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫｇとＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫｇとＦＡＳ、ＩＫＫｇとＢａｘ、ＩＫＫｇとＢａｋ、ＩＫＫｇとＢｉｍ、ＩＫＫｇとＢｉｄ、ＩＫＫｇとＮｏｘａ、ＩＫＫｇとＰｕｍａ、ＩＫＫｇとＴＲＩＦ、ＩＫＫｇとＺＢＰ１、ＩＫＫｇとＲＩＰＫ１、ＩＫＫｇとＲＩＰＫ３、ＩＫＫｇとＭＬＫＬ、ＩＫＫｇとガスダーミンＡ、ＩＫＫｇとガスダーミンＢ、ＩＫＫｇとガスダーミンＣ、ＩＫＫｇとガスダーミンＤ、ＩＫＫｇとガスダーミンＥ、ＩＫＫａとＩＫＫｂ、ＩＫＫａとＲｅｌＡ、ＩＫＫａとＭＡＶＳ、ＩＫＫａとＲＩＧＩ、ＩＫＫａとＭＤＡ５、ＩＫＫａとＴａｋ１、ＩＫＫａとＴＢＫ１、ＩＫＫａとＩＫＫｅ、ＩＫＫａとＩＲＦ３、ＩＫＫａとＩＲＦ７、ＩＫＫａとＩＲＦ１、ＩＫＫａとＴＲＡＦ３、ＩＫＫａとカスパーゼ、ＩＫＫａとＦＡＤＤ、ＩＫＫａとＴＮＦＲ１、ＩＫＫａとＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫａとＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫａとＦＡＳ、ＩＫＫａとＢａｘ、ＩＫＫａとＢａｋ、ＩＫＫａとＢｉｍ、ＩＫＫａとＢｉｄ、ＩＫＫａとＮｏｘａ、ＩＫＫａとＰｕｍａ、ＩＫＫａとＴＲＩＦ、ＩＫＫａとＺＢＰ１、ＩＫＫａとＲＩＰＫ１、ＩＫＫａとＲＩＰＫ３、ＩＫＫａとＭＬＫＬ、ＩＫＫａとガスダーミンＡ、ＩＫＫａとガスダーミンＢ、ＩＫＫａとガスダーミンＣ、ＩＫＫａとガスダーミンＤ、ＩＫＫａとガスダーミンＥ、ＩＫＫｂとＲｅｌＡ、ＩＫＫｂとＭＡＶＳ、ＩＫＫｂとＲＩＧＩ、ＩＫＫｂとＭＤＡ５、ＩＫＫｂとＴａｋ１、ＩＫＫｂとＴＢＫ１、ＩＫＫｂとＩＫＫｅ、ＩＫＫｂとＩＲＦ３、ＩＫＫｂとＩＲＦ７、ＩＫＫｂとＩＲＦ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＦ３、ＩＫＫｂとカスパーゼ、ＩＫＫｂとＦＡＤＤ、ＩＫＫｂとＴＮＦＲ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫｂとＦＡＳ、ＩＫＫｂとＢａｘ、ＩＫＫｂとＢａｋ、ＩＫＫｂとＢｉｍ、ＩＫＫｂとＢｉｄ、ＩＫＫｂとＮｏｘａ、ＩＫＫｂとＰｕｍａ、ＩＫＫｂとＴＲＩＦ、ＩＫＫｂとＺＢＰ１、ＩＫＫｂとＲＩＰＫ１、ＩＫＫｂとＲＩＰＫ３、ＩＫＫｂとＭＬＫＬ、ＩＫＫｂとガスダーミンＡ、ＩＫＫｂとガスダーミンＢ、ＩＫＫｂとガスダーミンＣ、ＩＫＫｂとガスダーミンＤ、ＩＫＫｂとガスダーミンＥ、ＩＫＫｂとＲｅｌＡ、ＩＫＫｂとＭＡＶＳ、ＩＫＫｂとＲＩＧＩ、ＩＫＫｂとＭＤＡ５、ＩＫＫｂとＴａｋ１、ＩＫＫｂとＴＢＫ１、ＩＫＫｂとＩＫＫｅ、ＩＫＫｂとＩＲＦ３、ＩＫＫｂとＩＲＦ７、ＩＫＫｂとＩＲＦ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＦ３、ＩＫＫｂとカスパーゼ、ＩＫＫｂとＦＡＤＤ、ＩＫＫｂとＴＮＦＲ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫｂとＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫｂとＦＡＳ、ＩＫＫｂとＢａｘ、ＩＫＫｂとＢａｋ、ＩＫＫｂとＢｉｍ、ＩＫＫｂとＢｉｄ、ＩＫＫｂとＮｏｘａ、ＩＫＫｂとＰｕｍａ、ＩＫＫｂとＴＲＩＦ、ＩＫＫｂとＺＢＰ１、ＩＫＫｂとＲＩＰＫ１、ＩＫＫｂとＲＩＰＫ３、ＩＫＫｂとＭＬＫＬ、ＩＫＫｂとガスダーミンＡ、ＩＫＫｂとガスダーミンＢ、ＩＫＫｂとガスダーミンＣ、ＩＫＫｂとガスダーミンＤ、ＩＫＫｂとガスダーミンＥ、ＲｅｌＡとＭＡＶＳ、ＲｅｌＡとＲＩＧＩ、ＲｅｌＡとＭＤＡ５、ＲｅｌＡとＴａｋ１、ＲｅｌＡとＴＢＫ１、ＲｅｌＡとＩＫＫｅ、ＲｅｌＡとＩＲＦ３、ＲｅｌＡとＩＲＦ７、ＲｅｌＡとＩＲＦ１、ＲｅｌＡとＴＲＡＦ３、ＲｅｌＡとカスパーゼ、ＲｅｌＡとＦＡＤＤ、ＲｅｌＡとＴＮＦＲ１、ＲｅｌＡとＴＲＡＩＬＲ１、ＲｅｌＡとＴＲＡＩＬＲ２、ＲｅｌＡとＦＡＳ、ＲｅｌＡとＢａｘ、ＲｅｌＡとＢａｋ、ＲｅｌＡとＢｉｍ、ＲｅｌＡとＢｉｄ、ＲｅｌＡとＮｏｘａ、ＲｅｌＡとＰｕｍａ、ＲｅｌＡとＴＲＩＦ、ＲｅｌＡとＺＢＰ１、ＲｅｌＡとＲＩＰＫ１、ＲｅｌＡとＲＩＰＫ３、ＲｅｌＡとＭＬＫＬ、ＲｅｌＡとガスダーミンＡ、ＲｅｌＡとガスダーミンＢ、ＲｅｌＡとガスダーミンＣ、ＲｅｌＡとガスダーミンＤ、ＲｅｌＡとガスダーミンＥ、ＭＡＶＳとＲＩＧＩ、ＭＡＶＳとＭＤＡ５、ＭＡＶＳとＴａｋ１、ＭＡＶＳとＴＢＫ１、ＭＡＶＳとＩＫＫｅ、ＭＡＶＳとＩＲＦ３、ＭＡＶＳとＩＲＦ７、ＭＡＶＳとＩＲＦ１、ＭＡＶＳとＴＲＡＦ３、ＭＡＶＳとカスパーゼ、ＭＡＶＳとＦＡＤＤ、ＭＡＶＳとＴＮＦＲ１、ＭＡＶＳとＴＲＡＩＬＲ１、ＭＡＶＳとＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＶＳとＦＡＳ、ＭＡＶＳとＢａｘ、ＭＡＶとＢａｋ、ＭＡＶとＢｉｍ、ＭＡＶＳとＢｉｄ、ＭＡＶＳとＮｏｘａ、ＭＡＶＳとＰｕｍａ、ＭＡＶＳとＴＲＩＦ、ＭＡＶＳとＺＢＰ１、ＭＡＶＳとＲＩＰＫ１、ＭＡＶＳとＲＩＰＫ３、ＭＡＶＳとＭＬＫＬ、ＭＡＶＳとガスダーミンＡ、ＭＡＶＳとガスダーミンＢ、ＭＡＶＳとガスダーミンＣ、ＭＡＶＳとガスダーミンＤ、ＭＡＶＳとガスダーミンＥ、ＲＩＧＩとＭＤＡ５、ＲＩＧＩとＴａｋ１、ＲＩＧＩとＴＢＫ１、ＲＩＧＩとＩＫＫｅ、ＲＩＧＩとＩＲＦ３、ＲＩＧＩとＩＲＦ７、ＲＩＧＩとＩＲＦ１、ＲＩＧＩとＴＲＡＦ３、ＲＩＧＩとカスパーゼ、ＲＩＧＩとＦＡＤＤ、ＲＩＧＩとＴＮＦＲ１、ＲＩＧＩとＴＲＡＩＬＲ１、ＲＩＧＩとＴＲＡＩＬＲ２、ＲＩＧＩとＦＡＳ、ＲＩＧＩとＢａｘ、ＲＩＧＩとＢａｋ、ＲＩＧＩとＢｉｍ、ＲＩＧＩとＢｉｄ、ＲＩＧＩとＮｏｘａ、ＲＩＧＩとＰｕｍａ、ＲＩＧＩとＴＲＩＦ、ＲＩＧＩとＺＢＰ１、ＲＩＧＩとＲＩＰＫ１、ＲＩＧＩとＲＩＰＫ３、ＲＩＧＩとＭＬＫＬ、ＲＩＧＩとガスダーミンＡ、ＲＩＧＩとガスダーミンＢ、ＲＩＧＩとガスダーミンＣ、ＲＩＧＩとガスダーミンＤ、ＲＩＧＩとガスダーミンＥ、ＭＤＡ５とＴａｋ１、ＭＤＡ５とＴＢＫ１、ＭＤＡ５とＩＫＫｅ、ＭＤＡ５とＩＲＦ３、ＭＤＡ５とＩＲＦ７、ＭＤＡ５とＩＲＦ１、ＭＤＡ５とＴＲＡＦ３、ＭＤＡ５とカスパーゼ、ＭＤＡ５とＦＡＤＤ、ＭＤＡ５とＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５とＴＲＡＩＬＲ１、ＭＤＡ５とＴＲＡＩＬＲ２、ＭＤＡ５とＦＡＳ、ＭＤＡ５とＢａｘ、ＭＤＡ５とＢａｋ、ＭＤＡ５とＢｉｍ、ＭＤＡ５とＢｉｄ、ＭＤＡ５とＮｏｘａ、ＭＤＡ５とＰｕｍａ、ＭＤＡ５とＴＲＩＦ、ＭＤＡ５とＺＢＰ１、ＭＤＡ５とＲＩＰＫ１、ＭＤＡ５とＲＩＰＫ３、ＭＤＡ５とＭＬＫＬ、ＭＤＡ５とガスダーミンＡ、ＭＤＡ５とガスダーミンＢ、ＭＤＡ５とガスダーミンＣ、ＭＤＡ５とガスダーミンＤ、ＭＤＡ５とガスダーミンＥ、Ｔａｋ１とＴＢＫ１、Ｔａｋ１とＩＫＫｅ、Ｔａｋ１とＩＲＦ３、Ｔａｋ１とＩＲＦ７、Ｔａｋ１とＩＲＦ１、Ｔａｋ１とＴＲＡＦ３、Ｔａｋ１とカスパーゼ、Ｔａｋ１とＦＡＤＤ、Ｔａｋ１とＴＮＦＲ１、Ｔａｋ１とＴＲＡＩＬＲ１、Ｔａｋ１とＴＲＡＩＬＲ２、Ｔａｋ１とＦＡＳ、Ｔａｋ１とＢａｘ、
Ｔａｋ１とＢａｋ、Ｔａｋ１とＢｉｍ、Ｔａｋ１とＢｉｄ、Ｔａｋ１とＮｏｘａ、Ｔａｋ１とＰｕｍａ、Ｔａｋ１とＴＲＩＦ、Ｔａｋ１とＺＢＰ１、Ｔａｋ１とＲＩＰＫ１、Ｔａｋ１とＲＩＰＫ３、Ｔａｋ１とＭＬＫＬ、Ｔａｋ１とガスダーミンＡ、Ｔａｋ１とガスダーミンＢ、Ｔａｋ１とガスダーミンＣ、Ｔａｋ１とガスダーミンＤ、Ｔａｋ１とガスダーミンＥ、ＴＢＫ１とＩＫＫｅ、ＴＢＫ１とＩＲＦ３、ＴＢＫ１とＩＲＦ７、ＴＢＫ１とＩＲＦ１、ＴＢＫ１とＴＲＡＦ３、ＴＢＫ１とカスパーゼ、ＴＢＫ１とＦＡＤＤ、ＴＢＫ１とＴＮＦＲ１、ＴＢＫ１とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＢＫ１とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＢＫ１とＦＡＳ、ＴＢＫ１とＢａｘ、ＴＢＫ１とＢａｋ、ＴＢＫ１とＢｉｍ、ＴＢＫ１とＢｉｄ、ＴＢＫ１とＮｏｘａ、ＴＢＫ１とＰｕｍａ、ＴＢＫ１とＴＲＩＦ、ＴＢＫ１とＺＢＰ１、ＴＢＫ１とＲＩＰＫ１、ＴＢＫ１とＲＩＰＫ３、ＴＢＫ１とＭＬＫＬ、ＴＢＫ１とガスダーミンＡ、ＴＢＫ１とガスダーミンＢ、ＴＢＫ１とガスダーミンＣ、ＴＢＫ１とガスダーミンＤ、ＴＢＫ１とガスダーミンＥ、ＩＫＫｅとＩＲＦ３、ＩＫＫｅとＩＲＦ７、ＩＫＫｅとＩＲＦ１、ＩＫＫｅとＴＲＡＦ３、ＩＫＫｅとカスパーゼ、ＩＫＫｅとＦＡＤＤ、ＩＫＫｅとＴＮＦＲ１、ＩＫＫｅとＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫｅとＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫｅとＦＡＳ、ＩＫＫｅとＢａｘ、ＩＫＫｅとＢａｋ、ＩＫＫｅとＢｉｍ、ＩＫＫｅとＢｉｄ、ＩＫＫｅとＮｏｘａ、ＩＫＫｅとＰｕｍａ、ＩＫＫｅとＴＲＩＦ、ＩＫＫｅとＺＢＰ１、ＩＫＫｅとＲＩＰＫ１、ＩＫＫｅとＲＩＰＫ３、ＩＫＫｅとＭＬＫＬ、ＩＫＫｅとガスダーミンＡ、ＩＫＫｅとガスダーミンＢ、ＩＫＫｅとガスダーミンＣ、ＩＫＫｅとガスダーミンＤ、ＩＫＫｅとガスダーミンＥ、ＩＲＦ３とＩＲＦ７、ＩＲＦ３とＩＲＦ１、ＩＲＦ３とＴＲＡＦ３、ＩＲＦ３とカスパーゼ、ＩＲＦ３とＦＡＤＤ、ＩＲＦ３とＴＮＦＲ１、ＩＲＦ３とＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ３とＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ３とＦＡＳ、ＩＲＦ３とＢａｘ、ＩＲＦ３とＢａｋ、ＩＲＦ３とＢｉｍ、ＩＲＦ３とＢｉｄ、ＩＲＦ３とＮｏｘａ、ＩＲＦ３とＰｕｍａ、ＩＲＦ３とＴＲＩＦ、ＩＲＦ３とＺＢＰ１、ＩＲＦ３とＲＩＰＫ１、ＩＲＦ３とＲＩＰＫ３、ＩＲＦ３とＭＬＫＬ、ＩＲＦ３とガスダーミンＡ、ＩＲＦ３とガスダーミンＢ、ＩＲＦ３とガスダーミンＣ、ＩＲＦ３とガスダーミンＤ、ＩＲＦ３とガスダーミンＥ、ＩＲＦ７とＩＲＦ１、ＩＲＦ７とＴＲＡＦ３、ＩＲＦ７とカスパーゼ、ＩＲＦ７とＦＡＤＤ、ＩＲＦ７とＴＮＦＲ１、ＩＲＦ７とＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ７とＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ７とＦＡＳ、ＩＲＦ７とＢａｘ、ＩＲＦ７とＢａｋ、ＩＲＦ７とＢｉｍ、ＩＲＦ７とＢｉｄ、ＩＲＦ７とＮｏｘａ、ＩＲＦ７とＰｕｍａ、ＩＲＦ７とＴＲＩＦ、ＩＲＦ７とＺＢＰ１、ＩＲＦ７とＲＩＰＫ１、ＩＲＦ７とＲＩＰＫ３、ＩＲＦ７とＭＬＫＬ、ＩＲＦ７とガスダーミンＡ、ＩＲＦ７とガスダーミンＢ、ＩＲＦ７とガスダーミンＣ、ＩＲＦ７とガスダーミンＤ、ＩＲＦ７とガスダーミンＥ、ＩＲＦ１とＴＲＡＦ３、ＩＲＦ１とカスパーゼ、ＩＲＦ１とＦＡＤＤ、ＩＲＦ１とＴＮＦＲ１、ＩＲＦ１とＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ１とＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ１とＦＡＳ、ＩＲＦ１とＢａｘ、ＩＲＦ１とＢａｋ、ＩＲＦ１とＢｉｍ、ＩＲＦ１とＢｉｄ、ＩＲＦ１とＮｏｘａ、ＩＲＦ１とＰｕｍａ、ＩＲＦ１とＴＲＩＦ、ＩＲＦ１とＺＢＰ１、ＩＲＦ１とＲＩＰＫ１、ＩＲＦ１とＲＩＰＫ３、ＩＲＦ１とＭＬＫＬ、ＩＲＦ１とガスダーミンＡ、ＩＲＦ１とガスダーミンＢ、ＩＲＦ１とガスダーミンＣ、ＩＲＦ１とガスダーミンＤ、ＩＲＦ１とガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ３とカスパーゼ、ＴＲＡＦ３とＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ３とＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ３とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ３とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ３とＦＡＳ、ＴＲＡＦ３とＢａｘ、ＴＲＡＦ３とＢａｋ、ＴＲＡＦ３とＢｉｍ、ＴＲＡＦ３とＢｉｄ、ＴＲＡＦ３とＮｏｘａ、ＴＲＡＦ３とＰｕｍａ、ＴＲＡＦ３とＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ３とＺＢＰ１、ＴＲＡＦ３とＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ３とＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ３とＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ３とガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ３とガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ３とガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ３とガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ３とガスダーミンＥ、カスパーゼとＦＡＤＤ、カスパーゼとＴＮＦＲ１、カスパーゼとＴＲＡＩＬＲ１、カスパーゼとＴＲＡＩＬＲ２、カスパーゼとＦＡＳ、カスパーゼとＢａｘ、カスパーゼとＢａｋ、カスパーゼとＢｉｍ、カスパーゼとＢｉｄ、カスパーゼとＮｏｘａ、カスパーゼとＰｕｍａ、カスパーゼとＴＲＩＦ、カスパーゼとＺＢＰ１、カスパーゼとＲＩＰＫ１、カスパーゼとＲＩＰＫ３、カスパーゼとＭＬＫＬ、カスパーゼとガスダーミンＡ、カスパーゼとガスダーミンＢ、カスパーゼとガスダーミンＣ、カスパーゼとガスダーミンＤ、カスパーゼとガスダーミンＥ、ＦＡＤＤとＴＮＦＲ１、ＦＡＤＤとＴＲＡＩＬＲ１、ＦＡＤＤとＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＤＤとＦＡＳ、ＦＡＤＤとＢａｘ、ＦＡＤＤとＢａｋ、ＦＡＤＤとＢｉｍ、ＦＡＤＤとｂｉｄ、ＦＡＤＤとＮｏｘａ、ＦＡＤＤとＰｕｍａ、ＦＡＤＤとＴＲＩＦ、ＦＡＤＤとＺＢＰ１、ＦＡＤＤとＲＩＰＫ１、ＦＡＤＤとＲＩＰＫ３、ＦＡＤＤとＭＬＫＬ、ＦＡＤＤとガスダーミンＡ、ＦＡＤＤとガスダーミンＢ、ＦＡＤＤとガスダーミンＣ、ＦＡＤＤとガスダーミンＤ、ＦＡＤＤとガスダーミンＥ、ＴＮＦＲ１とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＮＦＲ１とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＮＦＲ１とＦＡＳ、ＴＮＦＲ１とＢａｘ、ＴＮＦＲ１とＢａｋ、ＴＮＦＲ１とＢｉｍ、ＴＮＦＲ１とＢｉｄ、ＴＮＦＲ１とＮｏｘａ、ＴＮＦＲ１とＰｕｍａ、ＴＮＦＲ１とＴＲＩＦ、ＴＮＦＲ１とＺＢＰ１、ＴＮＦＲ１とＲＩＰＫ１、ＴＮＦＲ１とＲＩＰＫ３、ＴＮＦＲ１とＭＬＫＬ、ＴＮＦＲ１とガスダーミンＡ、ＴＮＦＲ１とガスダーミンＢ、ＴＮＦＲ１とガスダーミンＣ、ＴＮＦＲ１とガスダーミンＤ、ＴＮＦＲ１とガスダーミンＥ、ＴＲＡＩＬＲ１とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ１とＦＡＳ、ＴＲＡＩＬＲ１とＢａｘ、ＴＲＡＩＬＲ１とＢａｋ、ＴＲＡＩＬＲ１とＢｉｍ、ＴＲＡＩＬＲ１とＢｉｄ、ＴＲＡＩＬＲ１とＮｏｘａ、ＴＲＡＩＬＲ１とＰｕｍａ、ＴＲＡＩＬＲ１とＴＲＩＦ、ＴＲＡＩＬＲ１とＺＢＰ１、ＴＲＡＩＬＲ１とＲＩＰＫ１、ＴＲＡＩＬＲ１とＲＩＰＫ３、ＴＲＡＩＬＲ１とＭＬＫＬ、ＴＲＡＩＬＲ１とガスダーミンＡ、ＴＲＡＩＬＲ１とガスダーミンＢ、ＴＲＡＩＬＲ１とガスダーミンＣ、ＴＲＡＩＬＲ１とガスダーミンＤ、ＴＲＡＩＬＲ１とガスダーミンＥ、ＴＲＡＩＬＲ２とＦＡＳ、ＴＲＡＩＬＲ２とＢａｘ、ＴＲＡＩＬＲ２とＢａｋ、ＴＲＡＩＬＲ２とＢｉｍ、ＴＲＡＩＬＲ２とＢｉｄ、ＴＲＡＩＬＲ２とＮｏｘａ、ＴＲＡＩＬＲ２とＰｕｍａ、ＴＲＡＩＬＲ２とＴＲＩＦ、ＴＲＡＩＬＲ２とＺＢＰ１、ＴＲＡＩＬＲ２とＲＩＰＫ１、ＴＲＡＩＬＲ２とＲＩＰＫ３、ＴＲＡＩＬＲ２とＭＬＫＬ、ＴＲＡＩＬＲ２とガスダーミンＡ、ＴＲＡＩＬＲ２とガスダーミンＢ、ＴＲＡＩＬＲ２とガスダーミンＣ、ＴＲＡＩＬＲ２とガスダーミンＤ、ＴＲＡＩＬＲ２とガスダーミンＥ、ＦＡＳとＢａｘ、ＦＡＳとＢａｋ、ＦＡＳとＢｉｍ、ＦＡＳとＢｉｄ、ＦＡＳとＮｏｘａ、ＦＡＳとＰｕｍａ、ＦＡＳとＴＲＩＦ、ＦＡＳとＺＢＰ１、ＦＡＳとＲＩＰＫ１、ＦＡＳとＲＩＰＫ３、ＦＡＳとＭＬＫＬ、ＦＡＳとガスダーミンＡ、ＦＡＳとガスダーミンＢ、ＦＡＳとガスダーミンＣ、ＦＡＳとガスダーミンＤ、ＦＡＳとガスダーミンＥ、ＢａｘとＢａｋ、ＢａｘとＢｉｍ、ＢａｘとＢｉｄ、ＢａｘとＮｏｘａ、ＢａｘとＰｕｍａ、ＢａｘとＴＲＩＦ、ＢａｘとＺＢＰ１、ＢａｘとＲＩＰＫ１、ＢａｘとＲＩＰＫ３、ＢａｘとＭＬＫＬ、ＢａｘとガスダーミンＡ、ＢａｘとガスダーミンＢ、ＢａｘとガスダーミンＣ、ＢａｘとガスダーミンＤ、ＢａｘとガスダーミンＥ、ＢａｋとＢｉｍ、ＢａｋとＢｉｄ、ＢａｋとＮｏｘａ、ＢａｋとＰｕｍａ、ＢａｋとＴＲＩＦ、ＢａｋとＺＢＰ１、ＢａｋとＲＩＰＫ１、ＢａｋとＲＩＰＫ３、ＢａｋとＭＬＫＬ、ＢａｋとガスダーミンＡ、ＢａｋとガスダーミンＢ、ＢａｋとガスダーミンＣ、ＢａｋとガスダーミンＤ、ＢａｋとガスダーミンＥ、ＢｉｍとＢｉｄ、ＢｉｍとＮｏｘａ、ＢｉｍとＰｕｍａ、ＢｉｍとＴＲＩＦ、ＢｉｍとＺＢＰ１、ＢｉｍとＲＩＰＫ１、ＢｉｍとＲＩＰＫ３、ＢｉｍとＭＬＫＬ、ＢｉｍとガスダーミンＡ、ＢｉｍとガスダーミンＢ、ＢｉｍとガスダーミンＣ、ＢｉｍとガスダーミンＤ、ＢｉｍとガスダーミンＥ、ＢｉｄとＮｏｘａ、ＢｉｄとＰｕｍａ、ＢｉｄとＴＲＩＦ、ＢｉｄとＺＢＰ１、ＢｉｄとＲＩＰＫ１、ＢｉｄとＲＩＰＫ３、ＢｉｄとＭＬＫＬ、ＢｉｄとガスダーミンＡ、ＢｉｄとガスダーミンＢ、ＢｉｄとガスダーミンＣ、
ＢｉｄとガスダーミンＤ、ＢｉｄとガスダーミンＥ、ＮｏｘａとＰｕｍａ、ＮｏｘａとＴＲＩＦ、ＮｏｘａとＺＢＰ１、ＮｏｘａとＲＩＰＫ１、ＮｏｘａとＲＩＰＫ３、ＮｏｘａとＭＬＫＬ、ＮｏｘａとガスダーミンＡ、ＮｏｘａとガスダーミンＢ、ＮｏｘａとガスダーミンＣ、ＮｏｘａとガスダーミンＤ、ＮｏｘａとガスダーミンＥ、ＰｕｍａとＴＲＩＦ、ＰｕｍａとＺＢＰ１、ＰｕｍａとＲＩＰＫ１、ＰｕｍａとＲＩＰＫ３、ＰｕｍａとＭＬＫＬ、ＰｕｍａとガスダーミンＡ、ＰｕｍａとガスダーミンＢ、ＰｕｍａとガスダーミンＣ、ＰｕｍａとガスダーミンＤ、ＰｕｍａとガスダーミンＥ、ＴＲＩＦとＺＢＰ１、ＴＲＩＦとＲＩＰＫ１、ＴＲＩＦとＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦとＭＬＫＬ、ＴＲＩＦとガスダーミンＡ、ＴＲＩＦとガスダーミンＢ、ＴＲＩＦとガスダーミンＣ、ＴＲＩＦとガスダーミンＤ、ＴＲＩＦとガスダーミンＥ、ＺＢＰ１とＲＩＰＫ１、ＺＢＰ１とＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１とＭＬＫＬ、ＺＢＰ１とガスダーミンＡ、ＺＢＰ１とガスダーミンＢ、ＺＢＰ１とガスダーミンＣ、ＺＢＰ１とガスダーミンＤ、ＺＢＰ１とガスダーミンＥ、ＲＩＰＫ１とＲＩＰＫ３、ＲＩＰＫ１とＭＬＫＬ、ＲＩＰＫ１とガスダーミンＡ、ＲＩＰＫ１とガスダーミンＢ、ＲＩＰＫ１とガスダーミンＣ、ＲＩＰＫ１とガスダーミンＤ、ＲＩＰＫ１とガスダーミンＥ、ＲＩＰＫ３とＭＬＫＬ、ＲＩＰＫ３とガスダーミンＡ、ＲＩＰＫ３とガスダーミンＢ、ＲＩＰＫ３とガスダーミンＣ、ＲＩＰＫ３とガスダーミンＤ、ＲＩＰＫ３とガスダーミンＥ、ＭＬＫＬとガスダーミンＡ、ＭＬＫＬとガスダーミンＢ、ＭＬＫＬとガスダーミンＣ、ＭＬＫＬとガスダーミンＤ、ＭＬＫＬとガスダーミンＥ、ガスダーミンＡとガスダーミンＢ、ガスダーミンＡとガスダーミンＣ、ガスダーミンＡとガスダーミンＤ、ガスダーミンＡとガスダーミンＥ、ガスダーミンＢとガスダーミンＣ、ガスダーミンＢとガスダーミンＤ、ガスダーミンＢとガスダーミンＥ、ガスダーミンＣとガスダーミンＤ、ガスダーミンＣとガスダーミンＥ、ガスダーミンＤとガスダーミンＥ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＦ２、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＦ６、ＴＮＦＳＦタンパク質とｃＩＡＰ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とｃＩＡＰ２、ＴＮＦＳＦタンパク質とＸＩＡＰ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＮＯＤ２、ＴＮＦＳＦタンパク質とＭｙＤ８８、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＭ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＨＯＩＬ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＨＯＩＰ、ＴＮＦＳＦタンパクとシャーピン、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＫＫｇ、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＫＫａ、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＫＫｂ、ＴＮＦＳＦタンパクとＲｅｌＡ、ＴＮＦＳＦタンパクとＭＡＶＳ、ＴＮＦＳＦタンパクとＲＩＧＩ、ＴＮＦＳＦタンパクとＭＤＡ５、ＴＮＦＳＦタンパクとＴａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパクとＴＢＫ１、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＫＫｅ、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＲＦ３、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＲＦ７、ＴＮＦＳＦタンパクとＩＲＦ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＦ３、ＴＮＦＳＦタンパク質とカスパーゼ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＦＡＤＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＮＦＲ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＩＬＲ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＡＩＬＲ２、ＴＮＦＳＦタンパク質とＦＡＳ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＢａｘ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＢａｋ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＢｉｍ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＢｉｄ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＮｏｘａ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＰｕｍａ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＴＲＩＦ、ＴＮＦＳＦタンパク質とＺＢＰ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とＲＩＰＫ１、ＴＮＦＳＦタンパク質とＲＩＰＫ３、ＴＮＦＳＦタンパク質とＭＬＫＬ、ＴＮＦＳＦタンパク質とガスダーミンＡ、ＴＮＦＳＦタンパク質とガスダーミンＢ、ＴＮＦＳＦタンパク質とガスダーミンＣ、ＴＮＦＳＦタンパク質とガスダーミンＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質とガスダーミンＥ、並びにそれらの変異体（例えば、機能性断片）。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。一部の実施形態では、タノトランスフォーメーションポリペプチドは、配列番号２から成る。一部の実施形態では、タノトランスフォーメーションポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、又はそれから成る。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、配列番号１を含むか、又はそれから成るポリヌクレオチドによってコードされる。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、配列番号１に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）である。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、配列番号３０を含むか、又はそれから成る。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、配列番号３０に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、又はそれから成る。一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、配列番号３１を含むか、又はそれから成るポリヌクレオチドによってコードされる。一部の実施形態では、タノトランスフォーメーションポリペプチドは、配列番号３１に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能性断片若しくは変異体であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＬＫＬ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、Ｂｉｄの機能性断片は、短縮型Ｂｉｄ（ｔＢＩＤ）である。ＴＮＦＲ１／Ｆａｓの関与により、細胞質ゾルＢｉｄの切断が起こり、短縮型のｔＢＩＤが形成され、これは、ミトコンドリアに転位する。ｔＢＩＤポリペプチドは、膜標的細胞死リガンドとして機能する。Ｂａｋ欠損ミトコンドリア及び遮断抗体により、ｔＢＩＤがそのミトコンドリアパートナーＢＡＫに結合して、シトクロムｃを放出することが明らかにされる。活性化されたｔＢＩＤは、ＢＡＫのアロステリック活性化をもたらし、その膜内オリゴマー化をシトクロムｃ放出のために提示された細孔に誘導し、細胞死受容体から細胞死までの経路を統合する。Ｗｅｉｅｔａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．１４：２０６０－２０７１を参照。

特定の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｔＢＩＤ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、又はその変異体（例えば、機能性断片）ではない。

タノトランスミッションを促進する融合タンパク質
一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子は、融合タンパク質をコードし得る。融合タンパク質は、上記の表２に開示されているいずれか２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチド、又はその変異体（例えば、機能性断片）を含み得る。一部の実施形態では、機能性断片は、タノトランスミッションポリペプチドのドメイン、例えば、ＲＨＩＭドメイン、デスドメイン（ＤＤ）、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）、大サブユニット／小サブユニット（Ｌ／Ｓ）ドメイン、ＲＩＰＫ由来キナーゼドメイン、又はＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメインである。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＲＩＰＫ３ＲＨＩＭドメイン及びカスパーゼ大サブユニット／小サブユニット（Ｌ／Ｓ）ドメインを含む。この融合タンパク質は、カスパーゼの構成的活性化を駆動し、表３に示すように、選択されたカスパーゼＬ／Ｓドメインに応じて異なるタイプの細胞死を引き起こす。一部の実施形態では、融合タンパク質は、ＴＲＩＦＴＩＲドメイン、ＴＲＩＦＲＨＩＭドメイン及びＦＡＤＤデスドメイン（ＦＡＤＤ－ＤＤ）を含む。この融合タンパク質は、アポトーシスを阻止するが、ネクロトーシスを誘発すると予想される。

カスパーゼ阻害剤
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子、又はベクター（例えば、ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、標的細胞におけるカスパーゼ活性を阻害する１つ若しくは複数のポリヌクレオチドをさらに含み得る。

一部の実施形態では、標的細胞においてカスパーゼ活性を阻害するポリヌクレオチドは、標的細胞に内因性である１つ又は複数のカスパーゼの発現を低減する。カスパーゼの発現を低減するポリヌクレオチドとして、限定するものではないが、アンチセンスＤＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、二本鎖ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はクラスター化され、規則的に間隔をあけて配置された短い回文配列の反復（ＣＲＩＳＰＲ）－ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）（ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ）システムガイドＲＮＡを含み得る。

一部の実施形態では、標的細胞においてカスパーゼ活性を阻害するポリヌクレオチドは、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ウイルスタンパク質又はその変異体（例えば、機能性断片）である。例示的なウイルスタンパク質カスパーゼ阻害剤は、以下の表４に提供される。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ヒトタンパク質又はその変異体（例えば、機能性断片）である。一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９及びカスパーゼ１０からなる群から選択される１つ又は複数のカスパーゼを阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ８を阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ１０を阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ８及びカスパーゼ１０を阻害する。

一部の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、以下：Ｆａｓ関連死ドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）ドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、カスパーゼ８活性化のウイルス阻害剤（ｖＩＣＡ）、細胞ＦＬＩＣＥ（ＦＡＤＤ様ＩＬ－１β変換酵素）－阻害性タンパク質（ｃＦＬＩＰ）、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、アポトーシスタンパク質－１の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ１）、アポトーシスタンパク質－２の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ２）、アポトーシスのＸ連鎖阻害剤（ＸＩＡＰ）、ＴＧＦβ活性化キナーゼ１（Ｔａｋ１）、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）、及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される。

特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）は、ＦＡＤＤなどのアダプタータンパク質とカスパーゼ８などの誘導型カスパーゼを動員する。Ｍｏｒｇａｎｅｔａｌ．，２００１，ＣｅｌｌＤｅａｔｈ＆Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅ８，ｐａｇｅ６９６－７０５を参照されたい。ＤＩＳＣへのカスパーゼ８の凝集は、カスパーゼカスケード及びアポトーシスの活性化をもたらす。ＦＡＤＤは、デスドメインとデスエフェクタードメインの２つのタンパク質相互作用ドメインから構成される。ＦＡＤＤは、ＤＩＳＣの必須成分であるため、細胞死ドメインを含むが、細胞死エフェクタードメインを含まないドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）は、細胞死受容体誘発アポトーシスの研究で広く使用されている。ＦＡＤＤ－ＤＮは、受容体に結合するが、カスパーゼ８を動員することができないため、ドミナントネガティブ阻害剤として機能する。

特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｖＩＣＡである。ｖＩＣＡタンパク質は、ＵＬ３６遺伝子によってコードされるヒトサイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）（ＣＭＶ）タンパク質である。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｋａｌｅｔｓｋａｙａｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＪｕｌｙ３，２００１９８（１４）７８２９－７８３４を参照されたい。ｖＩＣＡタンパク質は、カスパーゼ－８のプロドメインに結合して、その活性化を妨げることにより、Ｆａｓ媒介性アポトーシスを阻害する。一部の実施形態では、ｖＩＣＡタンパク質は、配列番号３２を含むか、又はそれから成る。一部の実施形態では、ｖＩＣＡタンパク質は、配列番号３２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから成る。一部の実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸分子は、配列番号３２をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸分子は、配列番号３２に対して少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む。

特定の実施形態において、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｃＦＬＩＰである。ｃＦＬＩＰタンパク質は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、Ｆａｓ－Ｌ、及びＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）誘発アポトーシスを抑制するマスター抗アポトーシス調節因子及び耐性因子である。参照により本明細書に全体が組み込まれる、Ｓａｆａ，２０１２，ＥｘｐＯｎｃｏｌＯｃｔ；３４（３）：１７６－８４を参照されたい。ｃＦＬＩＰタンパク質は、ヒト細胞において長鎖（ｃＦＬＩＰ（Ｌ））、短鎖（ｃＦＬＩＰ（Ｓ））、及びｃＦＬＩＰ（Ｒ）スプライス変異体として発現される。ｃＦＬＩＰタンパク質は、リガンド依存性及び非依存性様式で、ＦＡＤＤ及び／又はカスパーゼ－８若しくは１０及びＴＲＡＩＬ受容体５（ＤＲ５）に結合し、アポトーシス阻害性複合体（ＡＩＣ）を形成する。この相互作用は、次に、細胞死誘導グナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の形成と、それに続くカスパーゼカスケードの活性化を阻止する。ｃ－ＦＬＩＰ（Ｌ）及びｃ－ＦＬＩＰ（Ｓ）は、様々なシグナル伝達経路で多機能な役割を果たすことも知られている。特定の実施形態では、ｃＦＬＩＰは、ｃＦＬＩＰ（Ｌ）である。特定の実施形態では、ｃＦＬＩＰは、ｃＦＬＩＰ（Ｓ）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｖＩＣＡ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｃＦＬＩＰ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

ガスダーミン
ガスダーミンは、膜透過及びパイロトーシスを引き起こす孔形成エフェクタータンパク質のファミリーである。ガスダーミンタンパク質には、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ及びガスダーミンＥが含まれる。ガスダーミンは、柔軟なリンカーによって連結された細胞傷害性Ｎ末端ドメインとＣ末端リプレッサードメインを含む。これら２つのドメイン間のタンパク質分解的切断は、細胞傷害性ドメインに対する分子内阻害を解除し、それを細胞膜内に挿入して、大きなオリゴマー孔の形成を可能にするが、これにより、イオン恒常性が崩壊して、細胞死が誘導される。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｒｏｚｅｔａｌ．，２０２０，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０：１４３－１５７を参照されたい。例えば、ガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ、別名：ＤＦＮＡ５）は、カスパーゼ３によって切断され得るが、それにより、ＧＳＤＭＥ発現細胞において非炎症性アポトーシスがパイロトーシスに変換される。同様に、カスパーゼ１、４及び５は、ガスダーミンＤを切断して活性化する。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子、又はベクター（例えば、ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、ガスダーミン又はその変異体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、機能性断片）を含んでもよい。一部の実施形態では、ガスダーミンの機能性断片は、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ又はガスダーミンＥのＮ末端ドメインである。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つはＲＩＰＫ３又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＤＮ末端ドメイン又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥＮ末端ドメイン又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

一部の実施形態では、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｔＢＩＤ又はその変異体（例えば、機能性断片）であり、タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその変異体（例えば、機能性断片）である。

免疫刺激タンパク質
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子、又はベクター（例えば、ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、免疫刺激タンパク質をコードする１つ若しくは複数のポリヌクレオチドをさらに含み得る。一実施形態では、免疫刺激タンパク質は、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）のアンタゴニスト、コロニー刺激因子、サイトカイン、免疫チェックポイントモジュレーター、ｆｌｔ３リガンド、又はｆｌｔ３の抗体アゴニストである。

コロニー刺激因子は、顆粒球－マクロファージコロニー－刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）であってもよい。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦをコードするポリヌクレオチドは、ＩＣＰ３４．５遺伝子座に挿入される。

サイトカインは、インターロイキンであってもよい。一実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β及びＩＬ－３６γからなる群から選択される。さらに別の好適なサイトカインとしては、Ｉ型インターフェロン、インターフェロンγ、ＩＩＩ型インターフェロン及びＴＮＦαが挙げられる。

一部の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、阻害性免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。阻害性免疫チェックポイントタンパク質の例として、限定するものではないが、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＢＴＬＡ及びＣＴＬＡ４が挙げられる。一部の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストである。刺激性免疫チェックポイントタンパク質の例として、限定するものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢが挙げられる。一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳリガンド、ＧＩＴＲリガンド、４－１－ＢＢリガンド、ＯＸ４０リガンド及びそれらのいずれかの修飾形態から選択される。一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４－１－ＢＢ及び０Ｘ４０から選択されるタンパク質の抗体アゴニストである。

自殺遺伝子
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子、又はベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、自殺遺伝子をさらに含み得る。用語「自殺遺伝子」とは、薬物の非毒性前駆体を細胞傷害性化合物に変換するタンパク質（例えば、酵素）をコードする遺伝子を指す。一部の実施形態では、自殺遺伝子は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）－ＦＡＳ、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－８、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－９、シトシンデアミナーゼ（ＣＤａｓｅ）活性を有するポリペプチド、チミジンキナーゼ活性を有するポリペプチド、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＵＰＲＴａｓｅ）活性を有するポリペプチド、及びプリンヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする。

一部の実施形態では、ＣＤａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＣＹ１、ＦＣＡ１又はＣｏｄＡである。

一部の実施形態では、ＵＰＲＴａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＵＲ１又はその変異体、例えば、ＦＵＲ１Δ１０５である。ＦＵＲ１Δ１０５は、コード領域の５’領域の最初の１０５ヌクレオチドを欠失したＦＵＲ１遺伝子であり、これは、Ｎ末端で最初の３５アミノ酸残基が欠失したＵＰＲＴａｓｅの合成を可能にする。ＦＵＲ１Δ１０５は、天然タンパク質の３６位のメチオニンから開始する。

自殺遺伝子は、融合タンパク質、例えば、ＣＤａｓｅ及びＵＰＲＴａｓｅ活性を有する融合タンパク質をコードし得る。一部の実施形態では、融合タンパク質は、以下：ｃｏｄＡ：：ｕｐｐ、ＦＣＹ１：：ＦＵＲ１、ＦＣＹｌ：：ＦＵＲ１Δ１０５（ＦＣＵ１）及びＦＣＵ１－８ポリペプチドから選択される。

２Ａペプチド
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子、又はベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み得る。２Ａペプチドは、タンパク質の翻訳中にリボソームスキッピングを誘導して、同じｍＲＮＡ転写物によってコードされる２つのタンパク質を個別のタンパク質として発現できるようにする。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｉｕｅｔａｌ．，２０１７，ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ．７（１）：２１９３を参照されたい。これらのペプチドは、コア配列モチーフを共有し、約１８～２２アミノ酸残基長であり、多種多様なウイルスに見出される。例示的な２Ａペプチドとして、限定はされないが、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ及びＦ２Ａが挙げられる。特定の実施形態において、２Ａペプチドは、Ｐ２Ａペプチドである。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドは、各タノトランスミッションポリペプチドの個別の発現を可能にするように、２つの異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド間に位置し得る。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号２６のＴ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号２７のＰ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号２８のＥ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号２９のＦ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。２Ａペプチドは、Ｎ末端にＧＳＧリンカーをさらに含んでもよい。

一部の実施形態では、核酸分子は、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチド、ＲＩＰＫ３をコードするポリヌクレオチド、及びＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドとＲＩＰＫ３をコードするポリヌクレオチドとの間に位置する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＴＲＩＦ－２Ａ－ＲＩＰＫ３）を含む。一部の実施形態では、核酸分子は、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチド、ＲＩＰＫ３をコードするポリヌクレオチド、ｖＩＣＡをコードするポリヌクレオチド、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドとＲＩＰＫ３をコードするポリヌクレオチドとの間に位置する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＲＩＰＫ３をコードするポリヌクレオチドとｖＩＣＡをコードするポリヌクレオチドとの間の２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＴＲＩＦ－２Ａ－ＲＩＰＫ３－２Ａ－ｖＩＣＡ）を含む。特定の実施形態において、２Ａペプチドは、Ｐ２Ａである。

ＩＶ．標的細胞
本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドの組み合わせを様々な標的細胞で発現させて、標的細胞によるタノトランスミッションを促進することができる。標的細胞のタイプとしては、癌細胞、免疫細胞、内皮細胞、及び線維芽細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される癌のいずれかの細胞は、操作ウイルスの標的細胞として好適であり得る。一部の実施形態では、標的細胞は、転移性癌細胞である。

一部の実施形態では、標的細胞は、肥満細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞）並びに本明細書に記載の他の免疫細胞のいずれかから選択される免疫細胞である。

一部の実施形態では、標的細胞（例えば、癌細胞）は、細胞ターンオーバー経路が欠損している。例えば、標的細胞は、細胞ターンオーバー経路に寄与するタンパク質をコードする遺伝子の不活性化変異又はコピー数減少を有し得る。一部の実施形態では、標的細胞は、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路、例えば、ネクロトーシス、外因性アポトーシス、フェロトーシス、パイロトーシス又はそれらの組み合わせが欠損している。一部の実施形態では、標的細胞は、以下：受容体相互作用セリン／トレオニンプロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ１）をコードする遺伝子、受容体相互作用セリン／トレオニンプロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）をコードする遺伝子、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）をコードする遺伝子、混合系統キナーゼドメイン様プソイドキナーゼ（ＭＬＫＬ）をコードする遺伝子、ガスダーミン（例えば、ガスダーミンＤ及び／又はガスダーミンＥ）をコードする遺伝子、並びにＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）をコードする遺伝子のうちの１つ又は複数の不活性化変異を有し得る。一部の実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、ガスダーミン（例えば、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ）、及びＭＬＫＬのうちの１つ若しくは複数の発現又は活性の低減を有する。一部の実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１をコードする遺伝子、ＲＩＰＫ３をコードする遺伝子、ＺＢＰ１をコードする遺伝子、ＴＲＩＦをコードする遺伝子、ガスダーミンをコードする遺伝子（例えば、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ）及びＭＬＫＬをコードする遺伝子のうちの１つ又は複数のコピー数減少を有する。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドは、標的細胞において細胞ターンオーバー経路を改変し得る。例えば、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドは、標的細胞の正常な細胞ターンオーバー経路を、例えば、ネクロトーシス、外因性アポトーシス、フェロトーシス又はパイロトーシスなどのタノトランスミッションを促進する細胞ターンオーバー経路に変化させることができる。

Ｖ．核酸分子の投与方法
特定の態様において、本開示は、１つ又は複数の核酸分子を対象に送達する方法に関し、この方法は、ａ）本明細書に記載される２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子と、ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子は、ウイルス内に含まれる。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、プラスミド又はトランスポゾン内に含まれる。従って、本明細書に記載される２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子は、限定はされないが、１つ若しくは複数の核酸分子を含むように操作されたＤＮＡ分子として、ＲＮＡ分子として、又はウイルス（例えば、ＤＮＡウイルス若しくはレトロウイルス）としてなど、様々な投与方法により対象に送達され得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の核酸分子は、リポフェクションによって対象に送達される。「脂質トランスフェクション」又は「リポソームベースのトランスフェクション」としても知られるリポフェクションは、脂質複合体（リポソームなど）を使用して、核酸分子（ＤＮＡやＲＮＡなど）を細胞に送達する。一部の実施形態では、リポフェクションは、ＲＮＡリポフェクションである。一部の実施形態では、リポフェクションは、ＤＮＡリポフェクションである。

Ａ．ＤＮＡ送達方法
一部の実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子は、ＤＮＡとして対象に送達される。一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子は、ウイルス、細菌、又は他の生物内に含まれない。

例えば、一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数のＤＮＡ分子は、ＤＮＡプラスミド内に含まれる。一部の実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数のＤＮＡ分子は、トランスポゾン内に含まれる。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数のＤＮＡ分子は、各々がプロモーターに作動可能に連結されていてもよい。一部の実施形態では、プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ（ＰｏｌＩＩ）プロモーターである。好適なＰｏｌＩＩプロモーターとして、限定はされないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター又はＳＶ４０プロモーター（例えば、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＶＡＸ１、ｐＶＩＶＯ２、ｐＣＩ、ｐＣＭＶ及びｐＳＶ２）が挙げられる。特定の実施形態では、プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、又はＵＢＣ１プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。一部の実施形態では、プロモーターは、合成プロモーターである。ＤＮＡ送達のための好適なプロモーターは、当技術分野で公知であり、例えば、Ｌｉ，Ｌ，ｅｔａｌ．，２０１６，ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１５：３１３－２９に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、プロモーターは、以下：ＣＭＶプロモーター（例えば、ｍｉｎｉ－ＣＭＶプロモーター）、ＥＦ１αプロモーター（例えば、ｍｉｎｉ－ＥＦ１αプロモーター）、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ポリユビキチンＣ（ＵＢＣ）遺伝子プロモーター、ヒトβアクチンプロモーター、及びＣＭＶエンハンサー／ニワトリβアクチン／ウサギβグロビン（ＣＡＧ）ハイブリッドプロモーターからなる群から選択される。一部の実施形態では、プロモーターは、癌特異的プロモーター、例えば、腫瘍特異的プロモーターである。好適な腫瘍特異的プロモーターとして、限定はされないが、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）プロモーター及びＥ２Ｆプロモーターが挙げられる。ｈＴＥＲＴプロモーターは、テロメラーゼの発現を増加させて細胞（癌細胞など）における遺伝子発現を促進する。Ｅ２Ｆプロモーターは、改変したＲｂ経路を有する細胞に特異的な遺伝子発現を促進する。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数のＤＮＡ分子は、各々、３’ポリアデニル化（ｐｏｌｙＡ）シグナルに作動可能に連結され得る。一部の実施形態では、ポリＡシグナルは、ウサギβ－グロビンポリＡシグナル又はウシ成長ホルモンポリＡシグナルである。ポリＡシグナルは、転写産物ｍＲＮＡの核輸送、翻訳及び安定性に関与している。Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ＪＡ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅｓ１：２２５－４９を参照のこと。

対象への送達のためにＤＮＡを製剤化する方法として、限定するものではないが、カチオン性脂質及びコレステロールを含有する脂質ナノ粒子への被包、ポリエチレンイミンなどのポリマーへの吸着、及びポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）又はキトサンなどの生分解性ナノ粒子への吸着又は被包が挙げられる。ＤｏｎｎｅｌｌｙＪＪ，ｅｔａｌ．，２００５，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１７５：６３３－９を参照されたい。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子の配列は、例えば、ＧＣ含量の濃縮（ＴｈｅｓｓＡ，ｅｔａｌ．，２０１５，ＭｏｌＴｈｅｒ．２３：１４５６－６４；ＰｅｔｓｃｈＢｅｔａｌ．，２０１２，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１２１０－６；ＫｕｄｌａＧｅｔａｌ．，２００６，ＰＬｏＳＢｉｏｌ．４：ｅ１８０．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００４０１８０を参照）を使用することにより、及び／又は希少コドンの置換により、コドン最適化され得る。一部の実施形態では、コドン最適化を使用して、適正なフォールディングを確実にするように、標的生物及び宿主生物におけるコドン頻度を一致させる；ｍＲＮＡの安定性を高めるか、若しくは二次構造を低減するように、ＧＣ含量に偏りを生じさせる；遺伝子の構築若しくは発現を損ない得るタンデム反復コドン又は塩基ランを最小限に抑える；転写及び翻訳制御領域をカスタマイズする；タンパク質輸送配列を挿入又は除去する；コードされたタンパク質の翻訳後修飾部位（グリコシル化部位など）を除去／付加する；タンパク質ドメインを付加、除去、若しくはシャッフルする；制限部位を挿入又は欠失させる；リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾する；タンパク質の様々なドメインが適正にフォールディングされるのを可能にするように、翻訳速度を調節する；或いは、ポリヌクレオチド内の障害二次構造を低減又は排除することができる。コドン最適化ツール、アルゴリズム及びサービスは、当技術分野において公知であり－非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（ＭｅｎｌｏＰａｒｋＣａｌｉｆ）からのサービス及び／又は専有の方法が挙げられる。一部の実施形態では、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、最適化アルゴリズムを用いて最適化される。

一部の実施形態では、コドン最適化ＤＮＡは、例えば、Ｇ／Ｃのレベルを高めるものであってもよい。核酸分子のＧ／Ｃ含有量は、対応するＲＮＡの安定性に影響を与え得る。グアニン（Ｇ）及び／又はシトシン（Ｃ）残基の量が増加したＲＮＡは、大量のアデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ）ヌクレオチドを含む核酸よりも機能的に安定であり得る。国際公開第０２／０９８４４３号パンフレットは、翻訳領域における配列修飾によって安定化されたｍＲＮＡを含有する医薬組成物を開示している。遺伝暗号の縮重のために、修飾は、結果として生じるアミノ酸を変えることなく、より大きなＲＮＡ安定性を促進するものの代わりに既存のコドン用いることによって機能する。この手法は、ＤＮＡ／ＲＮＡのコード領域に限定される。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数のＤＮＡ分子は、脂質ナノ粒子などの合成送達ビヒクルを用いて対象に送達され得る。ＤＮＡ分子送達に好適な脂質ナノ粒子は、当技術分野において公知であり、例えば、ＲｅｉｃｈｍｕｔｈＡＭ、ｅｔａｌ．，２０１６，ＴｈｅｒＤｅｌｉｖ．７（５）：３１９－３３４；ＧｅａｌｌＡＪ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１０９：１４６０４－９；及び米国特許第１０，７０２，６００号明細書に記載されており、これらは、各々その全体が参照により本明細書に組み込まれる。脂質ナノ粒子での使用に好適な脂質及び脂質複合体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：ＤＬｉｎＤＭＡ：１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン；ＤＯＰＥ：１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン；ＤＯＴＡＰ：１，２－ジオレイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン塩化物塩；ＤＳＰＣ：１，２－ジアステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン；ヒスチジル化リポプレックス：ヒスチジル化ポリリジンとＬ－ヒスチジン－（Ｎ，Ｎ－ジ－ｎ－ヘキサデシルアミン）エチルアミドリポソームのペグ化誘導体；ＨＶＪ－リポソーム：日本赤血球凝集ウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇｖｉｒｕｓｏｆＪａｐａｎ）（ＨＶＪ）由来の融合タンパク質を含むリポソーム：Ｍａｎ１１－ＬＰＲ１００：ｍＲＮＡ－ＰＥＧ化ヒスチジル化ポリリジンポリプレックスにマンノシル化及びヒスチジル化リポソームを付加することによって得られるマンノシル化及びヒスチジル化リポポリプレックス（Ｍａｎ１１－ＬＰＲ１００）；ＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；コレステロール、ＰＥＧＤＭＧ２０００：１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］；ＰＳ：ホスファチジルセリン；Ｓｐａｎ８５：ソルビタントリオレエート；ユニフェクチン；並びにスクアレン。以下を参照されたい：ＭａｒｔｉｎｏｎＦ，ｅｔａｌ．，１９９３、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（７），１７１９－１７２２；ＨｅｓｓＰＲ，ｅｔａｌ．２００５，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５５（６），６７２－６８３．ＺｈｏｕＷ－Ｚ，ｅｔａｌ．，１９９９．Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１０（１６），２７１９－２７２４；ＰｏｌｌａｒｄＣ，ｅｔａｌ．，２０１３，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２１（１），２５１－２５９；ＨｏｅｒｒＩ，ｅｔａｌ．，２０００，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１），１－７；ＭｏｃｋｅｙＭ，ｅｔａｌ．，２００７，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．１４（９），８０２－８１４；ＰｅｒｃｈｅＦ，ｅｔａｌ．，２０１１，ＲＮＡ．Ｎａｎｏｍｅｄ．Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．７（４），４４５－４５３；ＰｈｕａＫＫＬ，ｅｔａｌ．，２０１４，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．４，５１２８；ＧｅａｌｌＡＪ，ｅｔａｌ．，２０１２，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０９（３６），１４６０４－１４６０９；及びＢｒｉｔｏＬＡ，ｅｔａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２２（１２），２１１８－２１２９。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、ＰＥＧ修飾脂質、ステロール及び非カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、カチオン性脂質はイオン化カチオン性脂質であり、非カチオン性脂質は中性脂質であり、ステロールはコレステロールである。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、以下：２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノブチラート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ジ（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）、（１２Ｚ，１５Ｚ）－－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン（Ｌ６０８）、及びＮ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン－８－アミン（Ｌ５３０）からなる群から選択される。一部の実施形態では、脂質は、（Ｌ６０８）である。

また、リポソームを用いてＤＮＡ分子を製剤化してもよい。リポソームは人工的に調製された小胞であり、これは、主に脂質二重層から構成され得、栄養素及び医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用され得る。リポソームは、限定はされないが、直径が数百ナノメートルで、狭い水性区画によって分離された一連の同心二重層を含み得る、多重層小胞（ＭＬＶ）、直径が５０ｎｍ未満であり得る小さな単細胞小胞（ＳＵＶ）、及び直径が５０～５００ｎｍであり得る大きな単層小胞（ＬＵＶ）など、様々なサイズのものであってよい。リポソーム設計は、不健康な組織へのリポソームの付着を改善するため、又は限定はされないが、エンドサイトーシスなどの事象を活性化するために、オプソニン又はリガンドを含み得るが、これらに限定されるわけではない。リポソームは、医薬製剤の送達を改善するために、低又は高ｐＨを含んでもよい。

リポソームの形成は、封入された医薬製剤及びリポソーム成分、脂質小胞が分散している媒体の性質、封入された物質の有効濃度及びその潜在的な毒性、小胞の適用及び／又は送達中に関与する任意の追加的プロセス、目的の用途に合わせたベシクルの最適化サイズ、多分散性及び貯蔵寿命、バッチ間の再現性、並びに安全且つ効率的なリポソーム製品のラージスケール生産の可能性などの物理化学的特性に依存し得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定はされないが、以下を含み得る：１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、ＭａｒｉｎａＢｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，Ｗａｓｈ．）からのＤｉＬａ２リポソーム、１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、及びＭＣ３（米国特許出願公開第２０１００３２４１２０号明細書；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）並びに小分子薬物を送達することができるリポソーム、例えば、限定はされないが、ＪａｎｓｓｅｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｈｏｒｓｈａｍ，Ｐａ．）製のＤＯＸＩＬ（登録商標）。

一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定はされないが、安定化プラスミド脂質粒子（ＳＰＬＰ）又は安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるものなどのリポソームを含んでもよく、これらは以前に記載されており、インビトロ及びインビボでのオリゴヌクレオチド送達に好適であることが明らかにされている（以下を参照：Ｗｈｅｅｌｅｒｅｔａｌ．ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ．１９９９６：２７１－２８１；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ．１９９９６：１４３８－１４４７；Ｊｅｆｆｓｅｔａｌ．ＰｈａｒｍＲｅｓ．２００５２２：３６２－３７２；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５２：１００２－１００７；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６４４１：１１１－１１４；Ｈｅｙｅｓｅｔａｌ．ＪＣｏｎｔｒＲｅｌ．２００５１０７：２７６－２８７；Ｓｅｍｐｌｅｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．２０１０２８：１７２－１７６；Ｊｕｄｇｅｅｔａｌ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．２００９１１９：６６１－６７３；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００８１９：１２５－１３２；米国特許公開第２０１３０１２２１０４号明細書；これらはすべて、その全体が本明細書に組み込まれる）。

一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、脂質小胞中に製剤化されてもよく、脂質小胞は、官能化脂質二重層間に架橋を有し得る。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、脂質－ポリカチオン複合体中に製剤化され得る。脂質－ポリカチオン複合体の形成は、当技術分野において公知の方法及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１７８７０２号明細書（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるような方法によって達成することができる。非限定的な例として、ポリカチオンは、カチオン性ペプチド、又はポリペプチド、例えば、限定はされないが、ポリリジン、ポリオルニチン及び／又はポリアルギニンを含み得る。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、脂質－ポリカチオン複合体中に製剤化されてもよく、これは、非カチオン性脂質、例えば、限定するものではないが、コレステロール又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）をさらに含み得る。

他の実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数のＤＮＡ分子は、トランスでカプシド及び糖タンパク質遺伝子を付与するヘルパー細胞株によって産生されるウイルス様レプリコン粒子（ＶＲＰ）にパッケージングして、送達することもできる。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、遊離ＤＮＡとして対象に送達され、つまり、それらは別の分子と複合体化されない。一部の実施形態では、ＤＮＡ分子は、プロタミン複合体ＤＮＡとして対象に送達される。プロタミンは、精巣に発現する天然のカチオン性核タンパク質である。これは、精子中のＤＮＡの最終凝縮中にヒストンを置換する高度に特殊化された分子であり、核酸を安定化させることが知られている。これは、アルギニンリッチ配列を有し、インビトロで核酸と自発的に会合する。プロタミン複合体化ＤＮＡは、強力な遺伝子発現と免疫刺激の両方を提供する。ＳｃｈｅｅｌＢｅｔａｌ．，２００５，ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．３５：１５５７－６６；Ｆｏｔｉｎ－ＭｌｅｃｚｅｋＭ，２０１１，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１－１５；Ｆｏｔｉｎ－ＭｌｅｃｚｅｋＭ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＪＧｅｎｅＭｅｄ．１４：４２８－３９；及びＫｏｗａｌｃｚｙｋＡ，ｅｔａｌ．，２０１６，Ｖａｃｃｉｎｅ３４：３８８２－９３を参照されたい。

Ｂ．ＲＮＡ送達法
一部の実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子は、ＲＮＡとして対象に送達される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、ウイルス、細菌、又は他の生物内に含まれない。一部の実施形態では、ＲＮＡは、精製、例えば、ＨＰＬＣ精製される。一部の実施形態では、ＲＮＡは、環状ＲＮＡである。

一部の実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡである。２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数のｍＲＮＡは、５’及び／又は３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に作動可能に連結され得る。真核生物又はウイルス起源のＵＴＲは、ｍＲＮＡの半減期及び安定性を増加し、コードされたタノトランスミッションポリペプチドのより高度の発現をもたらす（ＲｏｓｓＪ，ｅｔａｌ．，１９８５，Ｂｌｏｏｄ６６：１１４９－５４；ＧａｌｌｉｅＤＲ，ｅｔａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ１６５：２３３－８；ＫａｒｉｋｏＫ，ｅｔａｌ．，２０１２ＭｏｌＴｈｅｒ．２０：９４８－５３；及びＶｉｖｉｎｕｓＳ，ｅｔａｌ．２００１，ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ．２６８：１９０８－１７）。

キャップ構造は、ｍＲＮＡの５’末端に作動可能に連結され得る。キャップ構造は、逆５’と５’三リン酸結合を介してｍＲＮＡの最初のヌクレオチドに連結したＮ７－メチル化グアノシンである。ｍＲＮＡキャップは、キャップ依存的なタンパク質合成の開始におけるその役割に加えて、５’から３’エキソヌクレアーゼ切断の保護基、さらには、ｍＲＮＡスプライシング前、ポリアデニル化及び核輸送のためのタンパク質因子を動員するためのユニークな識別子としても機能する。ＲａｍａｎａｔｈａｎＡ，ｅｔａｌ．，２０１６，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．４４（１６）：７５１１－７５２６を参照。５’キャップ構造は、安定した成熟ｍＲＮＡの作製に重要であり、真核生物の翻訳開始因子４Ｅへの結合を介してタンパク質翻訳を増大する。Ｇａｌｌｉｅ，ＤＲ．，１９９１，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．５：２１０８－１６を参照。５’キャップは、反応物にキャップアナログ又はアンチリバースキャップ（ＡＲＣＡ）を含有させて転写中に付加する（ＳｔｅｐｉｎｓｋｉＪ，ｅｔａｌ．，２００１，ＲＮＡ７：１４８６－９５を参照）か、又は後に、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）キャッピング複合体を使用するかのいずれによって付加することができる（ＶｅｎｋａｔｅｓａｎＳ，ｅｔａｌ．１９８０，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２５５，９０３－９０８参照）。一部の実施形態では、５’末端キャップは、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐである。

ポリ（Ａ）テールは、ｍＲＮＡの３’末端に作動可能に連結され得る。ポリＡテールは、翻訳を増強するための重要な調節要素であり、ＤＮＡテンプレートによってコードされるか、或いは、転写後に酵素により付加される（Ｇａｌｌｉｅ，ＤＲ．，１９９１，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．５：２１０８－１６）。

タノトランスミッションポリペプチドをコードするｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧＣ含量の濃縮（以下を参照：ＴｈｅｓｓＡ，ｅｔａｌ．，２０１５，ＭｏｌＴｈｅｒ．２３：１４５６－６４；ＰｅｔｓｃｈＢｅｔａｌ．，２０１２，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１２１０－６；及びＫｕｄｌａＧｅｔａｌ．，２００６，ＰＬｏＳＢｉｏｌ．４：ｅ１８０．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．００４０１８０）、又は希少コドンの置換のいずれかを使用することにより、コドン最適化することができる。一部の実施形態では、コドン最適化を使用して、適正なフォールディングを確実にするように、標的生物及び宿主生物におけるコドン頻度を一致させる；ｍＲＮＡの安定性を高めるか、若しくは二次構造を低減するように、ＧＣ含量に偏りを生じさせる；遺伝子の構築若しくは発現を損ない得るタンデム反復コドン又は一連の塩基を最小限に抑える；転写及び翻訳制御領域をカスタマイズする；タンパク質輸送配列を挿入又は除去する；コードされたタンパク質の翻訳後修飾部位（グリコシル化部位など）を除去／付加する；タンパク質ドメインを付加、除去、若しくはシャッフルする；制限部位を挿入又は欠失させる；リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾する；タンパク質の様々なドメインが適正にフォールディングされるのを可能にするように、翻訳速度を調節する；或いは、ポリヌクレオチド内の障害二次構造を低減又は排除することができる。コドン最適化ツール、アルゴリズム及びサービスは、当技術分野において公知であり－非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（ＭｅｎｌｏＰａｒｋＣａｌｉｆ）からのサービス及び／又は専有の方法が挙げられる。一部の実施形態では、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、最適化アルゴリズムを用いて最適化される。

一部の実施形態では、コドン最適化ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、例えば、Ｇ／Ｃのレベルを高めるものであってもよい。核酸分子のＧ／Ｃ含有量は、ＲＮＡの安定性に影響を与え得る。グアニン（Ｇ）及び／又はシトシン（Ｃ）残基の量増加を有するＲＮＡは、大量のアデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ）ヌクレオチドを含む核酸よりも機能的に安定であり得る。国際公開第０２／０９８４４３号パンフレットは、翻訳領域における配列修飾によって安定化されたｍＲＮＡを含有する医薬組成物を開示している。遺伝暗号の縮重のために、修飾は、結果として生じるアミノ酸を変えることなく、より大きなＲＮＡ安定性を促進するものの代わりに既存のコドン用いることによって機能する。この手法は、ＲＮＡのコード領域に限定される。

例えば、自然免疫活性化を低減し、且つ／又はＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）の翻訳を増大するために、化学修飾ヌクレオシドをＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）に付加してもよい。ＫａｒｉｋｏＫ，ｅｔａｌ．，２００８，ＭｏｌＴｈｅｒ．１６：１８３３－４０；及び米国特許第１０，７０２，６００号明細書を参照されたい。一部の実施形態では、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、少なくとも１つの化学修飾を含む、少なくとも１つのポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する。

「化学修飾」及び「化学修飾（された）」という用語は、それらの位置、パターン、パーセント又は集団のうち少なくとも１つにおけるアデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）若しくはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシド又はデオキシリブヌクレオシドに対する修飾を指す。一般に、これらの用語は、天然に存在する５’末端ｍＲＮＡキャップ部分におけるリボヌクレオチド修飾は指さない。ポリペプチドに関して、用語「修飾」は、２０アミノ酸の標準セットに対する修飾を指す。本明細書に提供されるポリペプチドは、アミノ酸置換、挿入、又は置換と挿入の組み合わせを含む場合、そうしたポリペプチドも「修飾」とも見なされる。

ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、一部の実施形態では、様々な（１つ若しくは複数の）異なる修飾を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの特定の領域は、１つ、２つ又はそれ以上の（任意選択で異なる）ヌクレオシド又はヌクレオチド修飾を含む。一部の実施形態では、細胞又は生物に導入された修飾ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、未修飾ポリヌクレオチドに対して、細胞又は生物においてそれぞれ低減した分解を示す。一部の実施形態では、細胞又は生物に導入された修飾ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、細胞又は生物においてそれぞれ免疫原性の低下（例えば、自然応答の低下）を示し得る。

ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、天然に存在する、天然に存在しない修飾を含んでもよいし、又はポリヌクレオチドは、天然に存在する修飾と天然に存在しない修飾の組み合わせを含んでもよい。ポリヌクレオチドは、任意の有用な修飾、例えば、糖、核酸塩基、又はヌクレオシド間結合（例えば、連結リン酸、ホスホジエステル結合又はホスホジエステル骨格）を含み得る。

ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、一部の実施形態では、所望の機能若しくは特性を達成するためにポリヌクレオチドの合成中又は合成後に導入される非天然修飾ヌクレオチドを含む。修飾は、ヌクレオチド間結合、プリン若しくはピリミジン塩基、又は糖に存在し得る。修飾は、化学合成又はポリメラーゼ酵素を用いて鎖の末端又は鎖内のいずれか他の場所に導入することができる。ポリヌクレオチドのいずれの領域を化学修飾してもよい。

本開示は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。「ヌクレオシド」とは、有機塩基（例えば、プリン若しくはピリミジン）又はその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）と組み合わせて、糖分子（例えば、ペントース若しくはリボース）又はその誘導体を含む化合物を指す。「ヌクレオチド」とは、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾ヌクレオチドは、１つ若しくは複数の修飾された又は非天然ヌクレオシドを含むように、任意の有用な方法によって、例えば、化学的に、酵素的に、又は組換えにより、合成することができる。ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの１又は複数の領域を含み得る。そのような領域は、可変性バックボーン結合を有し得る。結合は、標準的なホスホジエステル結合であってもよく、その場合、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドの領域を含むことになる。

修飾ヌクレオチド塩基対形成は、標準的なアデノシン－チミン、アデノシン－ウラシル、又はグアノシン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／又は非標準塩基若しくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチド間で形成される塩基対も含み、ここで、水素結合供与体及び水素結合受容体の配置は、非標準塩基と標準塩基間、又は２つの相補的な非標準塩基構造間の水素結合を可能にする。このような非標準塩基対形成の一例は、修飾ヌクレオチドイノシンとアデニン、シトシン又はウラシルとの間の塩基対形成である。塩基／糖又はリンカーの任意の組み合わせが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。

本開示のＲＮＡ分子に有用であるポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾物として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－イソペンテニルアデノシン；Ｎ６－メチルアデノシン；Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；１－メチルアデノシン；２’－Ｏ－メチルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸塩）；２－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６イソペンテニルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；２’－Ｏ－メチルアデノシン；２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸塩）；イソペンテニルアデノシン；Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン；Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン；Ｎ６－アセチルアデノシン；Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン；Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン；２－メチルアデノシン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニラデノシン；７－デアザ－アデノシン；Ｎ１－メチル－アデノシン；Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン；Ｎ６－ｃｉｓ－ヒドロキシ－イソペンテニル－アデノシン；α－チオ－アデノシン；２（アミノ）アデニン；２（アミノプロピル）アデニン；２（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン；２－（アルキル）アデニン；２－（アミノアルキル）アデニン；２－（アミノプロピル）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（ハロ）アデニン；２－（プロピル）アデニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＡＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドアデノシンＴＰ；６（アルキル）アデニン；６（メチル）アデニン；６－（アルキル）アデニン；６－（メチル）アデニン；７（デアザ）アデニン；８（アルケニル）アデニン；８（アルキニル）アデニン；８（アミノ）アデニン；８（チオアルキル）アデニン；８－（アルケニル）アデニン；８－（アルキル）アデニン；８－（アルキニル）アデニン；８－（アミノ）アデニン；８－（ハロ）アデニン；８－（ヒドロキシル）アデニン；８－（チオアルキル）アデニン；８－（チオール）アデニン；８－アジド－アデノシン；アザアデニン；デアザアデニン；Ｎ６（メチル）アデニン；Ｎ６－（イソペンチル）アデニン；７－デアザ－８－アザ－アデノシン；７－メチルアデニン；１－デアザアデノシンＴＰ；２’フルオロ－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ＯＭｅ－２－アミノ－ＡＴＰ；２’Ｏ－メチル－Ｎ６－Ｂｚ－デオキシアデノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルアデノシンＴＰ；２－アミノアデニン；２－アミノアデノシンＴＰ；２－アミノ－ＡＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－アジドアデノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルアデノシンＴＰ；２－ブロモアデノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；２－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトアデノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシアデノシンＴＰ；２－フルオロアデノシンＴＰ；２－ロドアデノシンＴＰ；２－メルカプトアデノシンＴＰ；２－メトキシ－アデニン；２－メチルチオ－アデニン；２－トリフルオロメチルアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ブロモアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－クロロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－フルオロアデノシンＴＰ；３－デアザ－３－ヨードアデノシンＴＰ；３－デアザアデノシンＴＰ；４’－アジドアデノシンＴＰ；４’－炭素環式アデノシンＴＰ；４’－エチニルアデノシンＴＰ；５’－ホモ－アデノシンＴＰ；８－アザ－ＡＴＰ；８－ブロモ－アデノシンＴＰ；８－トリフルオロオメチルアデノシンＴＰ；９－デアザアデノシンＴＰ；２－アミノプリン；７－デアザ－２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン；２，６－ジアミノプリン；７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン；２－チオシチジン；３－メチルシチジン；５－ホルミルシチジン；５－ヒドロキシメチルシチジン；５－メチルシチジン；Ｎ４－アセチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；５，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン；リシジン；Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチルシチジン；Ｎ４－メチルシチジン；Ｎ４，Ｎ４－ジメチル－２’－ＯＭｅ－シチジンＴＰ；４－メチルシチジン；５－アザ－シチジン；プソイド－イソ－シチジン；ピロロ－シチジン；α－チオ－シチジン；２－（チオ）シトシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＣＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドシチジンＴＰ；３（デアザ）５（アザ）シトシン；３（メチル）シトシン；３－（アルキル）シトシン；３－（デアザ）５（アザ）シトシン；３－（メチル）シチジン；４，２’－Ｏ－ジメチルシチジン；５（ハロ）シトシン；５（メチル）シトシン；５（プロピニル）シトシン；５（トリフルオロメチル）シトシン；５－（アルキル）シトシン；５－（アルキニル）シトシン；５－（ハロ）シトシン；５－（プロピニル）シトシン；５－（トリフルオロメチル）シトシン；５－ブロモ－シチジン；５－ヨード－シチジン；５－プロピニルシトシン；６－（アゾ）シトシン；６－アザ－シチジン；アザシトシン；デアザシトシン；Ｎ４（アセチル）シトシン；１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン；１－メチル－プソイドイソシチジン；２－メトキシ－５－メチル－シチジン；２－メトキシ－シチジン；２－チオ－５－メチル－シチジン；４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン；４－メトキシ－プソイドイソシチジン；４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン；４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン；４－チオ－プソイドイソシチジン；５－アザゼブラリン；５－メチル－ゼブラリン；ピロロ－プソイドイソシチジン；ゼブラリン；（Ｅ）－５－（２－ブロモビニル）シチジンＴＰ；２，２’－アンヒドロ－シチジンＴＰ塩酸塩；２’フルオロ－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’フルオロ－Ｎ４－アセチルシチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－アセチル－シチジンＴＰ；２’Ｏ－メチル－Ｎ４－Ｂｚ－シチジンＴＰ；２’－ａ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルシチジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトシチジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシシチジンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）シチジンＴＰ；３’－エチニルシチジンＴＰ；４’－アジドシチジンＴＰ；４’－炭素環式シチジンＴＰ；４’－エチニルシチジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラ－シチジンＴＰ；５－（２－クロロ－フェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－（４－アミノ－フェニル）－２－チオシチジンＴＰ；５－アミノアリル－ＣＴＰ；５－シアノシチジンＴＰ；５－エチニルアラ－シチジンＴＰ；５－エチニルシチジンＴＰ；５’－ホモ－シチジンＴＰ；５－メトキシシチジンＴＰ；５－トリフルオロメチル－シチジンＴＰ；Ｎ４－アミノ－シチジンＴＰ；Ｎ４－ベンゾイル－シチジンＴＰ；プソイドイソシチジン；７－メチルグアノシン；Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；Ｎ２－メチルグアノシン；ワイオシン；１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン；１－メチルグアノシン；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸塩）；２’－Ｏ－メチルグアノシン；２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸塩）；７－アミノメチル－７－デアザグアノシン；７－シアノ－７－デアザグアノシン；アルカエオシン（Ａｒｃｈａｅｏｓｉｎｅ）；メチルワイオシン；Ｎ２，７－ジメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン；Ｎ２，７，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン；６－チオ－グアノシン；７－デアザ－グアノシン；８－オキソ－グアノシン；Ｎ１－メチル－グアノシン；α－チオ－グアノシン；２（プロピル）グアニン；２－（アルキル）グアニン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＧＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドグアノシンＴＰ；６（メチル）グアニン；６－（アルキル）グアニン；６－（メチル）グアニン；６－メチル－グアノシン；７（アルキル）グアニン；７（デアザ）グアニン；７（メチル）グアニン；７－（アルキル）グアニン；７－（デアザ）グアニン；７－（メチル）グアニン；８（アルキル）グアニン；８（アルキニル）グアニン；８（ハロ）グアニン；８（チオアルキル）グアニン；８－（アルケニル）グアニン；８－（アルキル）グアニン；８－（アルキニル）グアニン；８－（アミノ）グアニン；８－（ハロ）グアニン；８－（ヒドロキシル）グアニン；８－（チオアルキル）グアニン；８－（チオール）グアニン；アザグアニン；デアザグアニン；Ｎ（メチル）グアニン；Ｎ－（メチル）グアニン；１－メチル－６－チオ－グアノシン；６－メトキシ－グアノシン；６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン；６－チオ－７－デアザ－グアノシン；６－チオ－７－メチル－グアノシン；
７－デアザ－８－アザ－グアノシン；７－メチル－８－オキソ－グアノシン；Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン；Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン；１－Ｍｅ－ＧＴＰ；２’フルオロ－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－Ｏ－メチル－Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；２’－ａ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－エチニルグアノシンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオログアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトグアノシンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシグアノシンＴＰ；４’－アジドグアノシンＴＰ；４’－炭素環式グアノシンＴＰ；４’－エチニルグアノシンＴＰ；５’－ホモ－グアノシンＴＰ；８－ブロモ－グアノシンＴＰ；９－デアザグアノシンＴＰ；Ｎ２－イソブチル－グアノシンＴＰ；１－メチルイノシン；イノシン；１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；７－メチルイノシン；２’－Ｏ－メチルイノシン；エポキシキューオシン；ガラクトシル－キューオシン；マンノシルキューオシン；キューオシン；アリルアミノ－チミジン；アザチミジン；デアザチミジン；デオキシ－チミジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオウリジン；３－メチルウリジン；５－カルボキシメチルウリジン；５－ヒドロキシウリジン；５－メチルウリジン；５－タウリノメチル－２－チオウリジン；５－タウリノメチルウリジン；ジヒドロウリジン；プソイドウリジン；（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；１－メチル－３－（３－アミノ－５－カルボキシプロピル）プソイドウリジン；１－メチルプソイドウリジン；１－メチル－プソイドウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２’－Ｏ－メチルウリジン；２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン；３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；３－メチル－プソイド－ウリジンＴＰ；４－チオウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン；５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル；５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン；５，６－ジヒドロ－ウリジン；５－アミノメチル－２－チオウリジン；５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジン；５－カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル；５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；５－カルバモイルメチルウリジンＴＰ；５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン；５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン；５－メトキシカルボニルメチルウリジン；５－メトキシウリジン；５－メチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチル－２－セレノリジン；５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－メチルアミノメチルウリジン；５－メチルジヒドロウリジン；５－オキシ酢酸－ウリジンＴＰ；５－オキシ酢酸－メチルエステル－ウリジンＴＰ；Ｎ１－メチル－プソイド－ウリジン；ウリジン５－オキシ酢酸；ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）－ウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジンＴＰ；５－（イソ－ペンテニルアミノメチル）ウリジンＴＰ；５－プロピニルウラシル；α－チオ－ウリジン；１（アミノアルキルアミノ－カルボニルエチレニル）－２（チオ）－プソイドウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）プソイドウラシル；１（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）－プソイドウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）－２（チオ）－プソイドウラシル；１（アミノカルボニルエチル）－２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）－４（チオ）プソイドウラシル；１（アミノカルボニルエチレニル）－プソイドウラシル；１置換２（チオ）－プソイドウラシル；１置換２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；１置換４（チオ）プソイドウラシル；１置換プソイドウラシル；１－（アミノアルキルアミノ－カルボニルエチレニル）－２－（チオ）－プソイドウラシル；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ；１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－プソイドＵＴＰ；２（チオ）プソイドウラシル；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２－（チオ）ウラシル；２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ－グアノシン；２’－アミノ－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジド－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－アジド－デオキシウリジンＴＰ；２’－Ｏ－メチルプソイドウリジン；２’デオキシウリジン；２’フルオロウリジン；２’－デオキシ－２’－ａ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－アジドウリジンＴＰ；２－メチルプソイドウリジン；３（３アミノ－３カルボキシプロピル）ウラシル；４（チオ）プソイドウラシル；４－（チオ）プソイドウラシル；４－（チオ）ウラシル；４－チオウラシル；５（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５（２－アミノプロピル）ウラシル；５（アミノアルキル）ウラシル；５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５（メトキシカルボニル－メチル）ウラシル；５（メチル）２（チオ）ウラシル；５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチル）４（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２（チオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－２，４（ジチオ）ウラシル；５（メチルアミノメチル）－４（チオ）ウラシル；５（プロピニル）ウラシル；５（トリフルオロメチル）ウラシル；５－（２－アミノプロピル）ウラシル；５－（アルキル）－２－（チオ）プソイドウラシル；５－（アルキル）－２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；５－（アルキル）－４（チオ）プソイドウラシル；５－（アルキル）プソイドウラシル；５－（アルキル）ウラシル；５－（アルキニル）ウラシル；５－（アリルアミノ）ウラシル；５－（シアノアルキル）ウラシル；５－（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル；５－（ジメチルアミノアルキル）ウラシル；５－（グアニジニウムアルキル）ウラシル；５－（ハロ）ウラシル；５－（１，３－ジアゾール－１－アルキル）ウラシル；５－（メトキシ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）－２－（チオ）ウラシル；５－（メトキシカルボニルメチル）ウラシル；５－（メチル）２（チオ）ウラシル；５－（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル；５－（メチル）４（チオ）ウラシル；５－（メチル）－２－（チオ）プソイドウラシル；５－（メチル）－２，４－（ジチオ）プソイドウラシル；５－（メチル）－４（チオ）プソイドウラシル；５－（メチル）プソイドウラシル；５－（メチルアミノメチル）－２－（チオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－２，４（ジチオ）ウラシル；５－（メチルアミノメチル）－４－（チオ）ウラシル；５－（プロピニル）ウラシル；５－（トリフルオロメチル）ウラシル；５－アミノアリル－ウリジン；５－ブロモ－ウリジン；５－ヨード－ウリジン；５－ウラシル；６（アゾ）ウラシル；６－（アゾ）ウラシル；６－アザ－ウリジン；アリアミノ－ウラシル；アザウラシル；デアザウラシル；Ｎ３（メチル）ウラシル；プソイド－ＵＴＰ－１－２－エタン酸；プソイドウラシル；４－チオ－プソイド－ＵＴＰ；１－カルボキシメチル－プソイドウリジン；１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン；１－プロピニル－ウリジン；１－タウリノメチル－１－メチルウリジン；１－タウリノメチル－４－チオウリジン；１－タウリノメチル－プソイドウリジン；２－メトキシ－４－チオ－プソイドウリジン；２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン；２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン；２－チオ－５－アザウリジン；２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン；２－チオ－ジヒドロウリジン；２－チオ－プソイドウリジン；４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン；４－メトキシ－プソイドウリジン；４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン；４－チオ－プソイドウリジン；５－アザ－ウリジン；ジヒドロプソイドウリジン；（±）１－（２－ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ；（２Ｒ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ；（２Ｓ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｅ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）アラ－ウリジンＴＰ；（Ｚ）－５－（２－ブロモ－ビニル）ウリジンＴＰ；１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－プソイド－ＵＴＰ；１－（２，２，３，３，３－ペンタフルオロプロピル）プソイドウリジンＴＰ；１－（２，２－ジエトキシエチル）プソイドウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（２，４，６－トリメチルベンジル）プソイド－ＵＴＰ；１－（２，４，６－トリメチル－フェニル）プソイド－ＵＴＰ；１－（２－アミノ－２－カルボキシエチル）プソイド－ＵＴＰ；１－（２－アミノエチル）プソイド－ＵＴＰ；１－（２－ヒドロキシエチル）プソイドウリジンＴＰ；１－（２－メトキシエチル）プソイドウリジンＴＰ；１－（３，４－ビス－トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（３，４－ジメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイド－ＵＴＰ；１－（３－アミノ－プロピル）プソイド－ＵＴＰ；１－（３－シクロプロピル－プロプ－２－イニル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－アミノ－４－カルボキシブチル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－アミノ－ベンジル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－アミノ－ブチル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－アミノ－フェニル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－アジドベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－ブロモベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－クロロベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－フルオロベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－ヨードベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－メタンスルホニルベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－メトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－メトキシ－ベンジル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－メトキシ－フェニル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－メチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ；
１－（４－メチル－ベンジル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－ニトロベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－ニトロ－ベンジル）プソイド－ＵＴＰ；１（４－ニトロ－フェニル）プソイド－ＵＴＰ；１－（４－チオメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（４－トリフルオロメチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ；１－（５－アミノ－ペンチル）プソイド－ＵＴＰ；１－（６－アミノ－ヘキシル）プソイド－ＵＴＰ；１，６－ジメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－［３－（２－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－エトキシ｝－エトキシ）－プロピオニル］プソイドウリジンＴＰ；１－｛３－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－プロピオニル｝プソイドウリジンＴＰ；１－アセチルプソイドウリジンＴＰ；１－アルキル－６－（１－プロピニル）－プソイド－ＵＴＰ；１－アルキル－６－（２－プロピニル）－プソイド－ＵＴＰ；１－アルキル－６－アリル－プソイド－ＵＴＰ；１－アルキル－６－エチニル－プソイド－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ホモアリル－プソイド－ＵＴＰ；１－アルキル－６－ビニル－プソイド－ＵＴＰ；１－アリルプソイドウリジンＴＰ；１－アミノメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－ベンゾイルプソイドウリジンＴＰ；１－ベンジルオキシメチルプソイドウリジンＴＰ；１－ベンジル－プソイド－ＵＴＰ；１－ビオチニル－ＰＥＧ２－プソイドウリジンＴＰ；１－ビオチニルプソイドウリジンＴＰ；１－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シアノメチルプソイドウリジンＴＰ；１－シクロブチルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロブチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロヘプチルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロヘプチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロヘキシルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロヘキシル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロオクチルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロオクチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロペンチルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロペンチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロプロピルメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－シクロプロピル－プソイド－ＵＴＰ；１－エチル－プソイド－ＵＴＰ；１－ヘキシル－プソイド－ＵＴＰ；１－ホモアリルプソイドウリジンＴＰ；１－ヒドロキシメチルプソイドウリジンＴＰ；１－イソ－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；１－Ｍｅ－２－チオ－プソイド－ＵＴＰ；１－Ｍｅ－４－チオ－プソイド－ＵＴＰ；１－Ｍｅ－α－チオ－プソイド－ＵＴＰ；１－メタンスルホニルメチルプソイドウリジンＴＰ；１－メトキシメチルプソイドウリジンＴＰ；１－メチル－６－（２，２，２－トリフルオロエチル）プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－（４－モルホリノ）－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－（４－チオモルホリノ）－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－（置換フェニル）プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－アミノ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－アジド－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ブロモ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－クロロ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－シアノ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ジメチルアミノ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－エトキシ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－エチルカルボキシレート－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－エチル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－フルオロ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ホルミル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシアミノ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヒドロキシ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ヨード－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－イソ－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－メトキシ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－メチルアミノ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－フェニル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－ｔｅｒｔ－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメトキシ－プソイド－ＵＴＰ；１－メチル－６－トリフルオロメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－モルホリノメチルプソイドウリジンＴＰ；１－ペンチル－プソイド－ＵＴＰ；１－フェニル－プソイド－ＵＴＰ；１－ピバロイルプソイドウリジンＴＰ；１－プロパルギルプソイドウリジンＴＰ；１－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；１－プロピニル－プソイドウリジン；１－ｐ－トリル－プソイド－ＵＴＰ；１－ｔｅｒｔ－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；１－チオメトキシメチルプソイドウリジンＴＰ；１－チオモルホリノメチルプソイドウリジンＴＰ；１－トリフルオロアセチルプソイドウリジンＴＰ；１－トリフルオロメチル－プソイド－ＵＴＰ；１－ビニルプソイドウリジンＴＰ；２，２’－アンヒドロ－ウリジンＴＰ；２’－ブロモ－デオキシウリジンＴＰ；２’－Ｆ－５－メチル－２’－デオキシ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－５－Ｍｅ－ＵＴＰ；２’－ＯＭｅ－プソイド－ＵＴＰ；２’－ａ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ａ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－ｂ－エチニルウリジンＴＰ；２’－ｂ－トリフルオロメチルウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－メルカプトリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ａ－チオメトキシウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アミノウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－アジドウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ブロモウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－クロロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－フルオロウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－ヨードウリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－メルカプトリジンＴＰ；２’－デオキシ－２’－ｂ－チオメトキシウリジンＴＰ；２－メトキシ－４－チオウリジン；２－メトキシウリジン；２’－Ｏ－メチル－５－（１－プロピニル）ウリジンＴＰ；３－アルキル－プソイド－ＵＴＰ；４’－アジドウリジンＴＰ；４’－炭素環式ウリジンＴＰ；４’－エチニルウリジンＴＰ；５－（１－プロピニル）アラ－ウリジンＴＰ；５－（２－フラニル）ウリジンＴＰ；５－シアノウリジンＴＰ；５－ジメチルアミノウリジンＴＰ；５’－ホモ－ウリジンＴＰ；５－ヨード－２’－フルオロ－デオキシウリジンＴＰ；５－フェニルエチニルウリジンＴＰ；５－トリジューテロメチル－６－ジューテロウリジンＴＰ；５－トリフルオロメチル－ウリジンＴＰ；５－ビニルアラウリジンＴＰ；６－（２，２，２－トリフルオロエチル）－プソイド－ＵＴＰ；６－（４－モルホリノ）－プソイド－ＵＴＰ；６－（４－チオモルホリノ）－プソイド－ＵＴＰ；６－（置換フェニル）－プソイド－ＵＴＰ；６－アミノ－プソイド－ＵＴＰ；６－アジド－プソイド－ＵＴＰ；６－ブロモ－プソイド－ＵＴＰ；６－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；６－クロロ－プソイド－ＵＴＰ；６－シアノ－プソイド－ＵＴＰ；６－ジメチルアミノプソイド－ＵＴＰ；６－エトキシ－プソイド－ＵＴＰ；６－エチルカルボキシレート－プソイド－ＵＴＰ；６－エチル－プソイド－ＵＴＰ；６－フルオロ－プソイド－ＵＴＰ；６－ホルミル－プソイド－ＵＴＰ；６－ヒドロキシアミノ－プソイド－ＵＴＰ；６－ヒドロキシ－プソイド－ＵＴＰ；６－ヨード－プソイド－ＵＴＰ；６－イソ－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；６－メトキシ－プソイド－ＵＴＰ；６－メチルアミノ－プソイド－ＵＴＰ；６－メチル－プソイド－ＵＴＰ；６－フェニル－プソイド－ＵＴＰ；６－フェニル－プソイド－ＵＴＰ；６－プロピル－プソイド－ＵＴＰ；６－ｔｅｒｔ－ブチル－プソイド－ＵＴＰ；６－トリフルオロメトキシ－プソイド－ＵＴＰ；６－トリフルオロメチル－プソイド－ＵＴＰ；α－チオ－プソイド－ＵＴＰ；プソイドウリジン１－（４－メチルベンゼンスルホン酸）ＴＰ；プソイドウリジン１－（４－メチル安息香酸）ＴＰ；プソイドウリジンＴＰ１－［３－（２－エトキシ）］プロピオン酸；プソイドウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－（２－エトキシ）－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；プソイドウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ｝－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；プソイドウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－［２－エトキシ］－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；プソイドウリジンＴＰ１－［３－｛２－（２－エトキシ）－エトキシ｝］プロピオン酸；プソイドウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸；プソイドウリジンＴＰ１－メチルホスホン酸ジエチルエステル；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－３－プロピオン酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－４－ブタン酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－５－ペンタン酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－６－ヘキサン酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－７－ヘプタン酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－メチル－ｐ－安息香酸；プソイド－ＵＴＰ－Ｎ１－ｐ－安息香酸；ワイブトシン；ヒドロキシワイブトシン；イソワイブトシン；ペルオキシワイブトシン；不十分修飾（ｕｎｄｅｒｍｏｄｉｆｉｅｄ）ヒドロキシワイブトシン；４－デメチルワイオシン；２，６－（ジアミノ）プリン；１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル：１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；１，３，５－（トリアザ）－２，６－（ジオキサ）－ナフタレン；２（アミノ）プリン；２，４，５－（トリメチル）フェニル；２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ－シチジン、２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’－フルロ－アデニン；２’メチル、２’アミノ、２’－アジド、２’－フルロ－ウリジン；２’－アミノ－２’－デオキシリボース；２－アミノ－６－クロロプリン；２－アザ－イノシニル；２’－アジド－２’－デオキシリボース；２’フルオロ－２’－デオキシリボース；２’－フルオロ－修飾塩基；２’－Ｏ－メチル－リボース；２－オキソ－７－アミノピリドピリミジン－３－イル；２－オキソ－ピリドピリミジン－３－イル；２－ピリジノン；３ニトロピロール；３－（メチル）－７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；３－（メチル）イソカルボスチリリル；４－（フルオロ）－６－（メチル）ベンゾイミダゾール；４－（メチル）ベンズイミダゾール；４－（メチル）インドリル；４，６－（ジメチル）インドリル；５ニトロインドール；５置換ピリミジン；５－（メチル）イソカルボスチリリル；５－ニトロインドール；６－（アザ）ピリミジン；６－（アゾ）チミン；６－（メチル）－７－（アザ）インドリル；６－クロロ－プリン；６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（アミノアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（アザ）インドリル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジンｌ－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；
７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェンチアジン－１－イル；７－（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）－１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル；７－（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル－７－（アザ）インドリル；７－デアザ－イノシニル；７－置換１－（アザ）－２－（チオ）－３－（アザ）－フェノキサジン－１－イル；７－置換１，３－（ジアザ）－２－（オキソ）－フェノキサジン－１－イル；９－（メチル）－イミジゾピリジニル；アミノインドリル；アントラセニル；ビス－オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ビス－オルト－置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ジフルオロトリル；ヒポキサンチン；イミジゾピリジニル；イノシニル；イソカルボスチリル；イソグアニシン；Ｎ２－置換プリン；Ｎ６－メチル－２－アミノ－プリン；Ｎ６－置換プリン；Ｎ－アルキル化誘導体；ナフタレニル；ニトロベンズイミダゾリル；ニトロイミダゾリル；ニトロインダゾリル；ニトロピラゾリル；ヌブラリン；０６－置換プリン；Ｏ－アルキル化誘導体；オルト－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；オルト置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；オキソホルマイシンＴＰ；パラ－（アミノアルキルヒドロキシ）－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；パラ－置換－６－フェニル－ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ペンタセニル；フェナントラセニル；フェニル；プロピニル－７－（アザ）インドリル；ピレニル；ピリドピリミジン－３－イル；ピリドピリミジン－３－イル、２－オキソ－７－アミノ－ピリドピリミジン－３－イル；ピロロ－ピリミジン－２－オン－３－イル；ピロロピリミジニル；ピロロピリジニル；スチルベンジル；置換１，２，４－トリアゾール；テトラセニル；ツベルシジン；キサンチン；キサントシン－５’－ＴＰ；２－チオ－ゼブラリン；５－アザ－２－チオ－ゼブラリン；７－デアザ－２－アミノ－プリン；ピリジン－４－オンリボヌクレオシド；２－アミノ－リボシド－ＴＰ；ホルマイシンＡＴＰ；ホルマイシンＢＴＰ；ピロロシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－アデノシンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－シチジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－ウリジンＴＰ；２’－ＯＨ－アラ－グアノシンＴＰ；５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジンＴＰ；Ｎ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）アデノシンＴＰ。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、前述の修飾核酸塩基のうちの少なくとも２つ（例えば、２、３、４又はそれ以上）の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）中の修飾核酸塩基は、以下：プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ^１ψ）、Ｎ１－エチルプソイドウリジン、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、４－チオ－プソイドウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５－メトキシウリジン及び２’－Ｏ－メチルウリジンからなる群から選択される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなど）は、上に挙げた修飾核酸塩基のうち少なくとも２つ（例えば、２、３、４つ又はそれ以上）の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）中の修飾核酸塩基は、以下：１－メチル－プソイドウリジン（ｍ^１ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）、プソイドウリジン（ψ）、α－チオ－グアノシン及びα－チオ－アデノシンからなる群から選択される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、上に挙げた修飾核酸塩基のうち少なくとも２つ（例えば、２、３、４つ又はそれ以上）の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、プソイドウリジン（ｖ）と５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ^１ψ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ^１ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、２－チオウリジン（ｓ^２Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、メトキシ－ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）と５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、２’－Ｏ－メチルウリジンと５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ^６Ａ）を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ^６Ａ）と５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。

一部の実施形態では、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）は、特定の修飾のために均一に修飾される（例えば、完全に修飾され、配列全体を通して修飾される）。例えば、ＲＮＡ分子は、５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）で均一に修飾することができ、これは、ｍＲＮＡ配列中のすべてのシトシン残基が５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）で置換されることを意味する。同様に、ＲＮＡ分子は、上に記載されるものなどの修飾残基で置換することによって、配列中に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基に対して均一に修飾され得る。

修飾されたシトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、及び２－チオ－５－メチル－シチジンが挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウリジンである。例示的な核酸塩基及び一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾ウリジンを有するヌクレオシドとしては、５－シアノウリジン、及び４’－チオウリジンが挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、及びＮ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、以下：イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱＯ）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチルグアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍｌＧ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンが挙げられる。

本開示の核酸分子は、分子の全長に沿って部分的又は完全に修飾されていてもよい。例えば、１つ若しくは複数又はすべての、或いは所与のタイプのヌクレオチド（例えば、プリン若しくはピリミジン、又はＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ若しくは複数若しくはすべて）は、本開示の核酸分子において、又はその所定の配列領域において（例えば、ポリＡテールを含むか又は除外するｍＲＮＡにおいて）均一に修飾され得る。一部の実施形態では、本開示の核酸分子（又はその所与の配列領域）中のすべてのヌクレオチドＸは、修飾ヌクレオチドであり、ここで、Ｘは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃ、又は組み合わせＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋Ｃ又はＡ＋Ｇ＋Ｃのいずれか１つであり得る。

核酸分子は、（総ヌクレオチド含量に関して、又は１つ若しくは複数のタイプのヌクレオチド、即ち、Ａ、Ｇ、Ｕ若しくはＣのいずれか１つ若しくは複数に関して）約１％～約１００％の修飾ヌクレオチド、又はそれらの間の任意の介在パーセンテージ（例えば、１％～２０％、１％～２５％、１％～５０％、１％～６０％、１％～７０％、１％～８０％、１％～９０％、１％～９５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～９５％、１０％～１００％、２０％～２５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～９５％、２０％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～９５％、５０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～９５％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～９５％、８０％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、及び９５％～１００％）を含み得る。残りのパーセンテージは、修飾されていないＡ、Ｇ、Ｕ、又はＣの存在から成る。

従って、一部の実施形態では、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子は、５’ＵＴＲエレメント、任意選択でコドン最適化されたオープンリーディングフレーム、並びに３’ＵＴＲエレメント、ポリ（Ａ）配列及び／又はポリアデニル化シグナルを含み、ここで、ＲＮＡは化学修飾されていない。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドを以下に挙げる：プソイドウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ^２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ^４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ^５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン又は５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ^３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ^５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ^５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチルウリジン（ｃｈｍ^５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチル－エステル（ｍｃｈｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチルウリジン（ｍｃｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ^５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ^５ｓｅ^２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチルウリジン（τｍ^５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍ^５ｓ^２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ^５Ｕ、即ち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ^１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ^２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ^１ｓ^４ψ）、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ^３ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ^５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ^３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ^３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍｓＵｍ）、２’－Ｏ－メチル－プソイドウリジン（Ｗｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｓ^２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｍｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｎｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ^３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｉｎｍ^５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジン。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドを以下に挙げる：５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、プソイドイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ^３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ^４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ^５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ^４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ^５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ^５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ^２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチルシチジン、４－メトキシ－プソイドイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ_２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ^５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ^４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ^４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ^５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ^４２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジン。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドを以下に挙げる：２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチルアデノシン（ｍ^１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ^２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ^２ｍ^６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ^２ｉ^６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ^２ｉｏ^６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ^６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ^６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ^６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ^２ｇ^６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ^６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ^６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ^２ｈｎ^６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ^６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ^６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ^６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ^１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸塩）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチルプリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシン。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドを以下に挙げる：イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ^１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ_２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、不十分修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ_０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ_１）、アルカエオシン（Ｇ^＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオグアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ^７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍＧ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ^２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ^２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチルグアノシン（ｍ^２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ^{２，２，７}Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍＧｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ^２’７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ^１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、０６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシン。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、非複製ｍＲＮＡである。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、自己増幅ｍＲＮＡである。自己増幅ｍＲＮＡは、アルファウイルスＲＮＡ複製機構をコードする遺伝子を含むが、感染性アルファウイルス粒子を作製するのに必要なウイルス構造タンパク質をコードする遺伝子を欠いたアルファウイルスゲノムをベースとするものであってよい。ＧｅａｌｌＡＪｅｔａｌ．，２０１２，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０９（３６）：１４６０４－１４６０９を参照。アルファウイルスの構造タンパク質遺伝子は、これらの自己増幅ＲＮＡを導入した細胞の細胞質におけるサブゲノムｍＲＮＡから豊富に発現される２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子で置換され得る。自己増幅ｍＲＮＡは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用いた直鎖状ｐＤＮＡテンプレートからの酵素転写反応によってインビトロで産生することができることから、生ウイルスワクチン、組換えサブユニットタンパク質、及びウイルスベクターの細胞培養生産に関連する安全性の懸念や複雑な製造上の課題を回避することができる。免疫後、ｍＲＮＡ分子の複製及び増幅は、トランスフェクト細胞の細胞質内でしか起こらないため、ゲノム組込み及び細胞形質転換のリスクが排除される。ＢｒｉｔｏＬＡ，ｅｔａｌ．２０１５，ＡｄｖＧｅｎｅｔ．８９：１７９－２３３；ＰｅｒｒｉＳ，ｅｔａｌ．２００３，ＪＶｉｒｏｌ．７７：１０３９４－４０３；ＧｅａｌｌＡＪ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１０９：１４６０４－９を参照されたい。

自己増幅ｍＲＮＡの完全長ｍＲＮＡは、非複製ｍＲＮＡよりも実質的に大きい（アルファウイルス系では約９～１０ｋｂ）が、前述したようなキャップ、５’及び３’ＵＴＲ、並びにポリＡテールなどの必須エレメントを含む。自己増幅ｍＲＮＡをコードするＤＮＡは、サブゲノムプロモーターと、非構造ウイルスタンパク質をコードする大きなＯＲＦとを含み、これは、細胞質ゾルへのＤＮＡの送達後、コードされたＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲＤＲＰ）により、４つの機能性成分（ｎｓＰ１、ｎｓＰ２、ｎｓＰ３、及びｎｓｐ４）に転写される（ＩａｖａｒｏｎｅＣ，ｅｔａｌ．，２０１７，ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１６：８７１－８１を参照）。次に、ＲＤＲＰは、２つの正鎖ＲＮＡ分子：ゲノムｍＲＮＡと短いサブゲノムｍＲＮＡのテンプレートとして機能するゲノムのネガティブセンスコピーを生成する。このサブゲノムｍＲＮＡは、非常に高いレベルで転写され、選択ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの増幅を可能にする。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、それらの安定性を調節するようにコドン最適化されてもよい。例えば、一部の実施形態では、コドン最適化ｍＲＮＡは、コドン最適化されていない対応するｍＲＮＡと比較して、高い安定性を有する。一部の実施形態では、コドン最適化ｍＲＮＡは、コドン最適化されていない対応するｍＲＮＡと比較して、低い安定性を有する。例えば、タノトランスミッションポリペプチドをコードするｍＲＮＡをコドン最適化して、その安定性を高めることができる。安定性を調節するためにｍＲＮＡをコドン最適化する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、以下に記載されている：ＢｉｃｋｎｅｌｌＡＡｅｔａｌ．，２０１７，ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．４５（２）：３３９－３５１；ＲａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎＡ，ｅｔａｌ，２０１６，ＪＭｏｌＢｉｏｌ．４２８（１８）：３５５８－３５６４；ＣｈｅｎＹＨ，ｅｔａｌ．，２０１６，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．２０１６；３２（１１）：６８７－６８８；ａｎｄＨａｎｓｏｎＧ，ｅｔａｌ．，２０１８，ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９（１）：２０－３０。

ｍＲＮＡは、例えばその安定性を調節するために、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含まない対応するｍＲＮＡと比較して、ｍＲＮＡの安定性を高める。一部の実施形態では、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含まない対応するｍＲＮＡと比較して、ｍＲＮＡの安定性を低下させる。好適な修飾ヌクレオチドとして、限定はされないが、Ｎ６－メチルアデノシン（ｍ６Ａ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ６Ａｍ）、５－メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、イノシン（Ｉ）、プソイドウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチルアデノシン（ｍ１Ａ）、５－ヒドロキシルメチルシチジン（ｈｍ５Ｃ）、２’－Ｏ－メチル化（Ｎｍ）、及びＮ４－アセチルシチジンが挙げられる。ＲｏｕｎｄｔｒｅｅＩＡ，ｅｔａｌ．，２０１７，Ｃｅｌｌ１６９（７）：１１８７－１２００；及びＬｉＸ，ｅｔａｌ．，２０１９、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ５８（１２）：１５５３－１５５４を参照。

ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲにおけるタンパク質結合部位を含み得る。タンパク質結合部位は、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得る。一部の実施形態では、タンパク質結合部位は、スタウフェン（Ｓｔａｕｆｅｎ）１（ＳＴＡＵ１）媒介結合部位（ＳＢＳ）である。ＰａｒｋＥ，ｅｔａｌ．，２０１３，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐＲｅｖＲＮＡ．４（４）：４２３－４３５；及びＣｈｅｎＹＨ，ｅｔａｌ．，２０１６，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．３２（１１）：６８７－６８８を参照されたい。スタウフェン１（ＳＴＡＵ１）媒介性ｍＲＮＡ分解（ＳＭＤ）は、哺乳類細胞におけるｍＲＮＡ分解プロセスであり、これは、標的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）内のＳＴＡＵ１結合部位（ＳＢＳ）へのＳＴＡＵ１の結合によって媒介される。ＳＭＤの間、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ結合タンパク質であるＳＴＡＵ１は、３’－ＵＴＲ配列の分子内塩基対形成、又は部分的に相補的なＡｌｕエレメントを介した３’－ＵＴＲ配列と長鎖ノンコーディングＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）との分子間塩基対形成のいずれかによって形成されるｄｓＲＮＡ構造を認識する。ＳＴＡＵ１は、重要なＳＭＤ因子であるＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＵＰＦ１と直接相互作用し、そのヘリカーゼ活性を増強して、効果的なＳＴＡＵ１媒介性ｍＲＮＡ分解を促進する。一部の実施形態では、組成物は、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数のｍＲＮＡを含み、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）又はｍｉＲＮＡをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。ｍｉＲＮＡはｍＲＮＡの安定性を低下させ得る。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡは、タノトランスミッションポリペプチドをコードするｍＲＮＡに相補的である。ｍｉＲＮＡは、タノトランスミッションポリペプチドをコードするｍＲＮＡと共発現されていてもよい。

タノトランスミッションポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子は、脂質ナノ粒子などの合成送達ビヒクルを用いて対象に送達され得る。ｍＲＮＡ分子送達のための脂質ナノ粒子は、当技術分野において公知であり、例えば、ＲｅｉｃｈｍｕｔｈＡＭ，ｅｔａｌ．，２０１６，ＴｈｅｒＤｅｌｉｖ．７（５）：３１９－３３４；ＧｅａｌｌＡＪ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１０９：１４６０４－９；米国特許第１０，７０２，６００号明細書（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。脂質ナノ粒子に使用するのに好適な脂質及び脂質複合体として、限定はされないが、以下のものが挙げられる：ＤＬｉｎＤＭＡ：１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン；ＤＯＰＥ：１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン；ＤＯＴＡＰ：１，２－ジオレイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパンクロリド塩；ＤＳＰＣ：１，２－ジアステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン；ヒスチジル化リポプレックス：ヒスチジル化ポリリジンとＬ－ヒスチジン－（Ｎ，Ｎ－ジ－ｎ－ヘキサデシルアミン）エチルアミドリポソームのペグ化誘導体；ＨＶＪ－リポソーム：日本赤血球凝集ウイルス（ＨＶＪ）由来の融合タンパク質を有するリポソーム；Ｍａｎ１１－ＬＰＲ１００：ｍＲＮＡ－ペグ化ヒスチジル化ポリリジンポリプレックスにマンノシル化及びヒスチジル化リポソームを付加することによって得られるマンノシル化及びヒスチジル化リポポリプレックス（Ｍａｎ１１－ＬＰＲ１００）；ＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；コレステロール、ＰＥＧＤＭＧ２０００：１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］；ＰＳ：ホスファチジルセリン；Ｓｐａｎ８５：ソルビタントリオレエート；ユニフェクチン；並びにスクアレン。以下を参照されたい：ＭａｒｔｉｎｏｎＦ，ｅｔａｌ．，１９９３，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（７），１７１９－１７２２；ＨｅｓｓＰＲ，ｅｔａｌ．，２００５，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５５（６），６７２－６８３．ＺｈｏｕＷ－Ｚ，ｅｔａｌ．，１９９９．Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１０（１６），２７１９－２７２４；ＰｏｌｌａｒｄＣ，ｅｔａｌ．，２０１３，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２１（１），２５１－２５９；ＨｏｅｒｒＩ，ｅｔａｌ．，２０００，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１），１－７；ＭｏｃｋｅｙＭ，ｅｔａｌ．，２００７，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．１４（９），８０２－８１４；ＰｅｒｃｈｅＦ，ｅｔａｌ．，２０１１，ＲＮＡ．Ｎａｎｏｍｅｄ．Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．７（４），４４５－４５３；ＰｈｕａＫＫＬ，ｅｔａｌ．，２０１４，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．４，５１２８；ＧｅａｌｌＡＪ，ｅｔａｌ．，２０１２，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０９（３６），１４６０４－１４６０９；及びＢｒｉｔｏＬＡ，ｅｔａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２２（１２），２１１８－２１２９。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質、ＰＥＧ修飾脂質、ステロール及び非カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、カチオン性脂質はイオン化カチオン性脂質であり、非カチオン性脂質は中性脂質であり、ステロールはコレステロールである。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、以下：２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノ酪酸（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ジ（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）、（１２Ｚ，１５Ｚ）－－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン（Ｌ６０８）、及びＮ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン－８－アミン（Ｌ５３０）からなる群から選択される。一部の実施形態では、脂質は（Ｌ６０８）である。

ＲＮＡ分子は、リポソームを用いて製剤化することもできる。リポソームは、人工的に調製された小胞であり、これは、主に脂質二重層から構成されており、栄養素及び医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用され得る。リポソームは、限定はされないが、直径が数百ナノメートルであり、且つ狭い水性区画によって分離された一連の同心二重層を含み得る多重層小胞（ＭＬＶ）、直径が５０ｎｍ未満であり得る小さな単細胞小胞（ＳＵＶ）、及び直径が５０～５００ｎｍであり得る大きな単層小胞（ＬＵＶ）など、様々なサイズであってよい。リポソーム設計は、不健康な組織へのリポソームの付着を改善するために、又は限定はされないが、エンドサイトーシスなどの事象を活性化するために、オプソニン又はリガンドを含み得るが、これらに限定されるわけではない。リポソームは、医薬製剤の送達を改善するために、低又は高ｐＨを含有してもよい。

リポソームの形成は、封入された医薬製剤とリポソーム成分、脂質小胞が分散している媒体の性質、封入された物質の有効濃度及びその潜在的な毒性、小胞の適用及び／又は送達中に関与する任意の追加プロセス、目的の用途に合わせた小胞の最適化サイズ、多分散性及び貯蔵寿命、バッチ間の再現性、並びに安全且つ効率的なリポソーム製品のラージスケール生産の可能性といった物理化学的特性に依存し得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定はされないが、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、ＭａｒｉｎａＢｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，Ｗａｓｈ．）製のＤｉＬａ２リポソーム、１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、及びＭＣ３（米国特許出願公開第２０１００３２４１２０号明細書；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）並びに限定はされないが、ａｎｓｓｅｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｈｏｒｓｈａｍ，Ｐａ．）からのＤＯＸＩＬ（登録商標）など、小分子薬物を送達し得るリポソームから形成されるものなどのリポソームを含み得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定はされないが、安定化プラスミド脂質粒子（ＳＰＬＰ）又は安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるものなどのリポソームを含んでもよく、これらは以前に記載されており、インビトロ及びインビボでのオリゴヌクレオチド送達に適していることが証明されている（以下を参照：Ｗｈｅｅｌｅｒｅｔａｌ．ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ．１９９９６：２７１－２８１；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ．１９９９６：１４３８－１４４７；Ｊｅｆｆｓｅｔａｌ．ＰｈａｒｍＲｅｓ．２００５２２：３６２－３７２；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５２：１００２－１００７；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６４４１：１１１－１１４；Ｈｅｙｅｓｅｔａｌ．ＪＣｏｎｔｒＲｅｌ．２００５１０７：２７６－２８７；Ｓｅｍｐｌｅｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．２０１０２８：１７２－１７６；Ｊｕｄｇｅｅｔａｌ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．２００９１１９：６６１－６７３；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓＨｕｍＧｅｎｅＴｈｅｒ．２００８１９：１２５－１３２；米国特許公開第ＵＳ２０１３０１２２１０４号明細書；これらはすべて、本明細書にその全体が組み込まれる）。

一部の実施形態では、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子は、機能化された脂質二重膜間に架橋を有し得る脂質小胞中に製剤化してもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子は、脂質－ポリカチオン複合体中に製剤化され得る。脂質－ポリカチオン複合体の形成は、当技術分野で公知の方法及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１７８７０２号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるような方法によって達成することができる。非限定的な例として、ポリカチオンは、カチオン性ペプチド、又はポリペプチド、例えば、限定はされないが、ポリリジン、ポリオルニチン及び／又はポリアルギニンを含み得る。一部の実施形態では、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子は、脂質－ポリカチオン複合体中に製剤化されてもよく、これは、限定するものではないが、コレステロール又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などの非カチオン性脂質をさらに含み得る。

他の実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、トランスでカプシド及び糖タンパク質遺伝子を提供するヘルパー細胞株によって産生されるウイルス様レプリコン粒子（ＶＲＰ）内にパッケージングされて、送達され得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、遊離ｍＲＮＡとして対象に送達され、即ち、別の分子と複合化されない。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、プロタミン複合体化ｍＲＮＡとして対象に送達される。プロタミンは、精巣で発現する天然のカチオン性核タンパク質である。これは、精子中のＤＮＡの最終凝縮中にヒストンを置換する非常に特殊な分子であり、核酸を安定化させることが知られている。これは、アルギニンリッチ配列を有し、インビトロで核酸と自発的に会合する。プロタミン複合体化ｍＲＮＡは、強力な遺伝子発現と免疫刺激の両方をもたらす。ＳｃｈｅｅｌＢｅｔａｌ．，２００５，ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．３５：１５５７－６６；Ｆｏｔｉｎ－ＭｌｅｃｚｅｋＭ，２０１１，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１－１５；Ｆｏｔｉｎ－ＭｌｅｃｚｅｋＭ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＪＧｅｎｅＭｅｄ．１４：４２８－３９；ＫｏｗａｌｃｚｙｋＡ，ｅｔａｌ．，２０１６，Ｖａｃｃｉｎｅ３４：３８８２－９３を参照されたい。

Ｃ．ウイルス送達法
特定の態様において、本開示は、本明細書に記載される２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチド又はその変異体（例えば、機能性断片）をコードする１つ若しくは複数の核酸分子を含むように操作されたウイルスに関する。２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子を標的細胞に導入する能力を有する任意のウイルスを使用してもよい。例えば、一部の実施形態では、ウイルスは、少なくとも４、５、６、７、８、９又は１０ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞に輸送することができる。一部の実施形態では、ウイルスは、４～１２ｋｂの間の異種ポリヌクレオチドを標的細胞に輸送することができる。一部の実施形態では、ウイルスは細胞溶解性であり、即ち、標的細胞を溶解することができる。一部の実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性であり、即ち、癌細胞に優先的に感染し、且つ／又は癌細胞を溶解するウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、標的細胞に優先的に感染する。一部の実施形態では、ウイルスは、急速に分裂する細胞（例えば、癌細胞）に優先的に感染する。

ウイルスは、ＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルス（例えば、レトロウイルス）であり得る。一部の実施形態では、ウイルスは、ＲＮＡウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＤＮＡウイルスである。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＲＮＡウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、複製ウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、非複製ウイルスである。一部の実施形態では、ＤＮＡウイルスは、ＤＮＡ複製ウイルス、例えば、ＤＮＡ複製腫瘍溶解性ウイルスである。一部の実施形態では、ＲＮＡウイルスは、ＲＮＡ複製ウイルス、例えば、ＲＮＡ複製腫瘍溶解性ウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、アネロウイルスである。

一部の実施形態では、ウイルスは、以前にウイルスに感染した宿主に再感染することができる。この特性により、対象へのウイルスの複数回投与が可能になる。一部の実施形態では、ウイルスは、先天的にＺ－ＮＡ認識を誘発する。特定の実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない。別の特定の実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメイン、即ち、ドメインが互いに近接して保持されるように十分な親和性を備えた他のそうしたドメインと物理的に会合する非天然に存在するドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない。

一部の実施形態では、ウイルスが１つ若しくは複数の内因性ウイルス遺伝子に不活性化変異を含むことが有利である。一部の実施形態では、不活性化変異は、ウイルスの毒性に寄与する内因性ウイルス遺伝子（例えばＩＣＰ３４．５）中にあり、不活性化変異が毒性を減じるようにする。一部の実施形態では、不活性化変異は、感染細胞のターンオーバーを制限する内因性ウイルス遺伝子（例えば、ＨＳＶのＩＣＰ６；ワクシニアウイルスのＥ３Ｌ）中にあり、これにより、不活性化変異は、感染時に細胞のターンオーバーを促進又は増加させる。一部の実施形態では、ウイルス遺伝子における不活性化変異は、毒性又は細胞ターンオーバーを調節する追加のポリヌクレオチド又はポリペプチドの発現と組み合わせてもよい。例えば、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）Ｅ３ＬのΔ－Ｚα１変異型の発現をＩＣＰ３４．５の完全な欠失と組み合わせて、複製能力を回復することができる。

不活性化のために標的となり得る好適なウイルス及び内因性ウイルス遺伝子の例を、以下の表に挙げる。

一部の実施形態では、タノトランスミッションを促進する１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスは、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）（ＨＳＶ）、ポクシーウイルス（ｐｏｘｙｖｉｒｕｓ）（例えば、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ））、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ）、ニューカッスル病ウイルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（ＭｅａｓｌｅｓＶｉｒｕｓ）、粘液腫症（Ｍｙｘｏｍａｔｏｓｉｓ）、ポリオウイルス（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、レンチウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶｅｓｉｃｕｌａｒＳｔｏｍａｔｉｔｉｓ）、レトロウイルス、泡沫状ウイルス、ファーミントン（ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ）ウイルス、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、及びインフルエンザウイルスからなる群から選択される。

一部の実施形態では、タノトランスミッションを促進する１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスは、アデノウイルスである。一部の実施形態では、アデノウイルスは、血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）である。一部の実施形態では、アデノウイルスは、血清型１９Ａアデノウイルス（Ａｄ１９Ａ）である。一部の実施形態では、アデノウイルスは、血清型２６アデノウイルス（Ａｄ２６）である。１血清型のアデノウイルスは、異なるアデノウイルス血清型由来の繊維タンパク質を含むように操作することができる。例えば、一部の実施形態では、Ａｄ５は、血清型３５アデノウイルス（Ａｄ３５）由来の繊維タンパク質を置換するように操作される。このキメラウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３５と呼ばれる。（その全体が参照により本明細書に組み込まれるＹｏｔｎｄａｅｔａｌ．，２００１，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ８：９３０－９３７を参照されたい）。一部の実施形態では、Ａｄ５は、アデノウイルス血清型３（Ａｄ３）由来の繊維タンパク質を置換するように操作される。このキメラウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３と呼ばれる。

一部の実施形態では、アデノウイルスは、対応する野生型アデノウイルスに対して１つ若しくは複数の変異（例えば、１つ若しくは複数の置換、付加又は欠失）を含む。例えば、一部の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、アデノウイルス初期領域１Ａ（Ｅ１Ａ）に欠失を含む。一部の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ａに２４ｂｐ欠失を含む。この欠失は、ウイルス複製を、Ｒｂ経路が改変された胞に対して特異的にする。一部の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、アデノウイルス初期領域１Ｂ（Ｅ１Ｂ）に欠失を含む。一部の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ｂに８２７ｂｐ欠失を含む。この欠失により、Ｐ５３改変を有する細胞内でウイルスを複製することにする。特定の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ａに２４ｂｐの欠失及びＥ１Ｂに８２７ｂｐの欠失を含む。一部の実施形態では、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、ファイバー－Ｈループに操作されたＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）－モチーフを有する。この修飾により、アデノウイルスは、αｖβ３及びαｖβ５インテグリン（癌細胞で発現される）を用いて細胞に侵入する。（その全体が参照により本明細書に組み込まれるＲｅｙｎｏｌｄｓｅｔａｌ．，１９９９，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ６：１３３６－１３３９を参照されたい）。

一部の実施形態では、アデノウイルスは、修飾又は変異したファイバー領域を含有する。修飾又は変異した繊維領域は、ウイルス向性及び受容体結合を増強又は変化させ得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、タノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、アデノウイルスのＥ１領域、例えば、Ｅ１Ａ又はＥ１Ｂに挿入され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｅ１領域が除去され、ポリヌクレオチドで置換される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるようなプロモーター、例えば、ウイルスに対して異種であるプロモーターに作動可能に連結されてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、タノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）を内因性ウイルスプロモーターの下流に挿入して、ポリヌクレオチドの発現を駆動することができる。例えば、一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、アデノウイルス主要後期プロモーター下流のアデノウイルスに挿入され、Ｌ５タンパク質発現を駆動する。アデノウイルス主要後期プロモーターは、後期ウイルス遺伝子発現と同時に起こる発現をもたらす。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｌ５タンパク質をコードする内因性ウイルス遺伝子が下流に挿入されている。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの発現物は、ポリヌクレオチドと、Ｌ５タンパク質をコードする遺伝子との間に配置された２Ａリンカーを用いてＬ５発現物に連結される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの発現物は、アデノウイルス主要後期プロモーターの制御下にあるアデノウイルススプライスアクセプターを有するポリヌクレオチドの前に存在することにより、Ｌ５発現に連結される。

一部の実施形態では、タノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、例えば、ＨＳＶ１である。一部の実施形態では、ＨＳＶ１は、Ｋｏｓ、Ｆ１、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ、ＭｃＫｒａｅ及び関連株からなる群から選択される。ＨＳＶは、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ＵＬ２４、ＵＬ５５、及びＵＬ５６からなる群から選択される１つ又は複数の遺伝子が欠損している可能性がある。特定の実施形態では、ＩＣＰ３４．５コード遺伝子は、最初期（ＩＥ）プロモーターに作動可能に連結されたＵＳ１１コード遺伝子を含むポリヌクレオチドカセットによって置換される。別の特定の実施形態では、ＨＳＶは、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）Ｅ３Ｌ遺伝子のΔＺα変異型を含む。

一実施形態では、ＨＳＶは、ＩＣＰ６の１つ又は複数の機能が欠損している。例えば、ＩＣＰ６遺伝子の変異は、変異に応じて異なる機能喪失をもたらし得る。一部の実施形態では、ＩＣＰ６は、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）ドメインの１つ若しくは複数の変異を含む。一部の実施形態では、ＩＣＰ６は、カスパーゼ－８結合を阻害するＣ末端に１つ若しくは複数の変異を含む。一部の実施形態では、ＩＣＰ６は、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を低減又は排除する１つ若しくは複数の変異を含む。

一部の実施形態では、ＨＳＶは、最初期遺伝子としてＵＳ１１遺伝子を発現する。ＵＳ１１タンパク質は、ウイルスのライフサイクル後期のタンパク質翻訳調節に必要である。ＵＳ１１の最初期発現は、ＩＣＰ３４．５の機能喪失変異を補償し、それによりＩＣＰ３４．５の欠失を伴う変異型ウイルスのタンパク質合成の遮断に対抗して、低弱毒化ウイルスをもたらすことができる。

他の実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）科に属し、例えば、粘液腫ウイルス、ヤバ類似疾患ウイルス、アライグマポックスウイルス、ｏｒｆウイルス及び牛痘ウイルスから選択されるウイルスである。一部の実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）科のコードポックスイルス（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｉｎａｅ）亜科に属する。一部の実施形態では、ウイルスは、コードポックスイルス（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｉｎａｅ）亜科のオルトポックスウイルス（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）属に属する。一部の実施形態では、ウイルスは、オルトポックスウイルス（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）属のワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）種に属する。一部の実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｄａｉｒｅｎｌ、ＩＨＤ－Ｊ、Ｌ－ＩＰＶ、ＬＣ１６Ｍ８、ＬＣ１６ＭＯ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＬＩＶＰ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＷＲ６５－１６、Ｗｙｅｔｈ、Ａｎｋａｒａ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＴｉａｎＴａｎ及びＷＲからなる群から選択される株である。

一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、チミジンキナーゼ（ＴＫ）活性を欠失するように操作される。一実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｊ２Ｒ遺伝子の不活性化変異若しくは欠失を有し、これは、ＴＫ活性を低減又は排除する。Ｊ２Ｒ遺伝子は、ピリジミンデオキシリボヌクレオチド合成のサルベージ経路の一部を形成するＴＫをコードする。一部の実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を欠失するように操作される。一部の実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、ＲＲ活性を低減又は排除する、Ｉ４Ｌ及びＦ４Ｌ遺伝子から選択される遺伝子に不活性化変異又は欠失を有する。ＴＫ活性又はＲＲ活性が低減すると、形質転換細胞（例えば、癌細胞）におけるウイルスの複製が増加する。

ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、アポトーシス、ネクロトーシス及びパイロトーシスシグナル伝達を妨害する複数のタンパク質をコードする。例えば、Ｅ３Ｌ遺伝子によってコードされるＥ３はまた、ワクシニア（Ｖａｃｃｉｎｉａ）宿主域に影響を及ぼすと共に、毒性に寄与する重要なインターフェロンアンタゴニストである。Ｅ３は、インターフェロン誘導性ｄｓＲＮＡ結合タンパク質ＰＫＲの抗ウイルス活性に拮抗し、Ｃ末端ｄｓＲＮＡ結合ドメインを有する２５－ｋＤａｄｓＲＮＡ結合タンパク質として最初に特徴付けられた。Ｅ３のＮ末端領域は、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質と類似性を有する個別のドメインを形成し、Ｎ末端ドメインとＣ末端ドメインの両方がウイルス毒性に寄与する。Ｅ３はまた、Ｅ３Ｌ遺伝子を欠く変異型ワクシニア（Ｖａｃｃｉｎｉａ）に感染したＨｅＬａ細胞が急速な細胞死を引き起こしたとき、アポトーシス阻害剤として記載されている。Ｖｅｙｅｒｅｔａｌ．，２０１７，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ１８６：６８－８０を参照されたい。従って、一部の実施形態では、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）は、Ｅ３Ｌ遺伝子が欠損している。一部の実施形態では、Ｅ３Ｌ遺伝子は、癌細胞の感染時にネクロトーシスの誘導をもたらす突然変異を有する。

一部の実施形態では、ウイルス（例えば、ＨＳＶ）は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列を含む。ｍｉＲ標的配列は、腫瘍細胞におけるウイルス複製を妨げることなく、正常細胞におけるウイルス病原性を予防する。ｍｉＲ標的配列は、１つ又は複数のウイルス遺伝子座、例えば、正常な（例えば、非癌性）細胞におけるウイルスの複製に必要な１つ又は複数のウイルス遺伝子に挿入され得る。ウイルスに含有させる例示的なマイクロＲＮＡ標的配列は、ｍｉＲ－１２４であり、これは、神経への適用に特に用途がある。他のタイプの組織を保護するために、他のマイクロＲＮＡ標的配列を代わりに使用することもでき、所望の組織又は細胞型を保護するのに好適なマイクロＲＮＡ標的配列を選択することは、当業者の通常の技術の範囲内である。例えば、ｍｉＲ－１２２及びｍｉＲ－１９９は正常な肝細胞では発現するが、原発性肝癌には発現しない；従って、ｍｉＲ－１２２及び／又はｍｉＲ－１９９マイクロＲＮＡ標的配列の１つ若しくは組み合わせを、肝臓癌の治療のためのウイルスの実施形態に使用することができる。同様に、ｍｉＲ－１２８及び／又はｍｉＲ－１３７マイクロＲＮＡの標的配列を、正常な脳の保護の目的でウイルスに使用することができる。例示的なマイクロＲＮＡ標的配列は、マイクロＲＮＡの逆相補配列であってもよい。

一部の実施形態では、マイクロＲＮＡ標的配列は、ＨＳＶ遺伝子の３’非翻訳領域（「ＵＴＲ」）に含まれ、マイクロＲＮＡの存在下でその遺伝子をサイレンシングする。マイクロＲＮＡ標的配列の複数のコピー（例えば、２コピー、３コピー、４コピー、５コピー、６コピー、又はそれ以上）をタンデムに挿入してもよい。マイクロＲＮＡ標的配列の複数のコピーは、４つ以上のヌクレオチド（例えば、８つ以上のヌクレオチド）のスペーサーによって隔てられていてもよい。理論に縛られることは望まないが、間隔が大きい（例えば、約８ヌクレオチド超）ほど、高い安定性をもたらすと考えられる。

ＨＳＶ感染の溶解作用から非癌性細胞を保護するのを助けるために、マイクロＲＮＡ標的配列の複数のコピーを、非癌性細胞での複製に不可欠なＨＳＶ遺伝子の３’ＵＴＲに挿入するが、このことは、当業者には周知である。上記部位は、ＨＳＶゲノム内の正常（又は天然）遺伝子座におけるマイクロＲＮＡ標的遺伝子の３’ＵＴＲであってよい。特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ４遺伝子の両ネイティブコピーを有するウイルス中に、ＩＣＰ４遺伝子、例えば、ＩＣＰ４遺伝子の一方又は両方のコピーの３’ＵＴＲに挿入されたマイクロＲＮＡ標的配列の複数のコピーを含むＨＳＶである。

特定の実施形態では、ウイルスのゲノムは、ＩＣＰ４７遺伝子のプロモーターと一緒に、二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ及びＩＣＰ４の各々につき１コピーを含む内部反復（接合部）領域の欠失を含む。他の実施形態では、接合部を欠失する代わりに、接合部領域における遺伝子、特にＩＣＰ０及び／又はＩＣＰ４７の発現を、これらの遺伝子を欠失させるか、そうでなければそれらの限定的な突然変異誘発によってサイレンシングすることができる。

一部の実施形態では、ウイルスは、標的細胞、例えば、癌細胞の表面に存在する分子（例えば、タンパク質、脂質又は炭水化物）に特異的なリガンドを含む。リガンドを、ウイルス表面に露出した糖タンパク質（例えば、ＨＳＶのｇＤ又はｇＣ）に組み込むことによって、リガンドによる所望の細胞のターゲティングを容易にすることができる。例えば、ｇＤの残基１と２５の間に、リガンドを組み込むことができる。ＧＢＭ及び他の癌細胞をターゲティングするための例示的なリガンドとしては、ＥＧＦＲ及びＥＧＦＲＶＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＣＸＣＲ４、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣｌＣ－３／アネキシン－２／ＭＭＰ－２、ヒトトランスフェリン受容体並びにＥｐＣＡＭをターゲティングするものが挙げられる。リガンドは、そのような受容体又は細胞表面分子をターゲティングすることができ、即ち、リガンドは、そのような受容体又は細胞表面分子と特異的に結合することができる。ＥＧＦＲ及びＥＧＦＲＶＩＩＩ特異的リガンド、例えば、抗体（例えば、一本鎖抗体）及びＶＨＨ（単一ドメイン抗体）は、文献に記載されている（Ｋｕａｎｅｔａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８８，９６２－６９（２０００）；Ｗｉｃｋｓｔｒａｎｄｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５５（１４）：３１４０－８（１９９５）；Ｏｍｉｄｆａｒｅｔａｌ．，ＴｕｍｏｒＢｉｏｌｏｇｙ，２５：２９６－３０５（２００４）；また、Ｕｃｈｉｄａｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ，２１：５６１－９（２０１３）も参照；さらに、Ｂｒａｉｄｗｏｏｄｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｎ，１５，１５７９－９２（２００８）も参照のこと）。

ウイルスはまた、又は代替的に、必ずしも癌に関連していない他の細胞表面分子若しくは受容体にリガンドを組み込むことによってターゲティングさせることができる。例えば、リガンドは、天然リガンドからの結合ドメイン（例えば、増殖因子（例えば、ＥＧＦＲをターゲティングすることができるＥＧＦ、ｔｒｋＡをターゲティングすることができるＮＧＦなど））、ペプチド又は非ペプチドホルモン、結合するために標的分子を選択するペプチド（例えば、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ））などを含み得る。ウイルスはまた、非古典的受容体を介したベクター侵入を容易にするｇＢ及び／又はｇＤの変異体を含むことができる（さらには、ＨＳＶゲノム内のこれらの遺伝子の一方又は両方にそのような変異を有してもよい）。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子を含むウイルスは、膠芽腫の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）及び基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンを分解するマトリックスメタロプロテイナーゼ、例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（「ＭＭＰ９」）をコードするポリヌクレオチドをさらに含んでもよい（Ｍａｍｍａｔｏｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８３（４）：１２９３－１３０５（２０１３），ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｐａｔｈ．２０１３．０６．０２６．Ｅｐｕｂ２０１３Ａｕｇ．５）。改変されたウイルスによるマトリックスメタロプロテイナーゼの発現は、側方拡散及び腫瘍殺傷活性の増強のために、ウイルスによる腫瘍細胞の感染を増強する。ウイルスの側方拡散を増強する他の遺伝子をコードするポリヌクレオチドもまた使用され得る。

本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ若しくは複数の核酸分子は、ウイルス遺伝子における変異を含むウイルス内に含まれ得る。例えば、特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ３４．５及びＩＣＰ４７遺伝子の不活性化変異（例えば、欠失）、ＩＣＰ６のＲＨＩＭドメインの不活性化変異、並びにＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドを含むＨＳＶ１である。別の特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ４７の不活性化変異（例えば、欠失）、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）Ｅ３Ｌ遺伝子のデルタ－Ｚα１変異体によるＩＣＰ３４．５の置換、並びにＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドを含むＨＳＶ１である。さらに別の特定の実施形態では、ウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子のＺα１ドメインの変異と、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドとを含むワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）である。

Ｄ．ポリペプチドの送達方法
一部の実施形態では、本明細書に記載される２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドの組み合わせを対象に直接投与してもよい。例えば、特定の態様において、本開示は、以下：２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドであって、タノトランスミッションポリペプチドの各々が、ＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体（例えば、機能性断片）からなる群から選択される、タノトランスミッションポリペプチドと；薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。

特定の態様において、本開示は、対象においてタノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドを含む医薬組成物を、タノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。

特定の態様において、本開示は、それを必要とする対象における免疫応答を高める方法に関し、この方法は、本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドを含む医薬組成物を、対象における免疫応答を増大させるのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。

特定の態様において、本開示は、それを必要とする対象における癌を治療する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドを含む医薬組成物を、癌を治療するのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。

Ｅ．担体
本開示により提供される組成物、方法、及び送達系（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルス及びポリペプチド送達系）は、任意の好適な担体を使用することができる。担体及び医薬品の送達に関する一般的な考慮事項は、例えば、以下：ＤｅｌｉｖｅｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｆｏｒＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓ（ＬｅｎｅＪｏｒｇｅｎｓｅｎａｎｄＨａｎｎｅＭｏｒｃｋＮｉｅｌｓｏｎ，Ｅｄｓ．）Ｗｉｌｅｙ；１ｓｔｅｄｉｔｉｏｎ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２１，２００９）；及びＶａｒｇａｓｏｎｅｔａｌ．２０２１．ＮａｔＢｉｏｍｅｄＥｎｇ５，９５１－９６７に見出すことができる。

担体の非限定的な例としては、炭水化物担体（例えば、無水物修飾フィトグリコーゲン又はグリコーゲン型物質、ＧａｌＮＡｃ）、ナノ粒子（例えば、構築物を被包するか又はそれと共有結合で連結されたナノ粒子、金ナノ粒子、シリカナノ粒子）、脂質粒子（例えば、リポソーム、脂質ナノ粒子）、カチオン性担体（例えば、カチオン性リポポリマー又はトランスフェクション試薬）、フソソーム、無核細胞（例えば、エクスビボ分化網赤血球）、有核細胞、エキソソーム、タンパク質担体（例えば、構築物に共有結合で連結されたタンパク質）、ペプチド（例えば、細胞透過性ペプチド）、材料（例えば、酸化グラフェン）、単一の純粋な脂質（例えば、コレステロール）、ＤＮＡオリガミ（例えば、ＤＮＡ四面体）が挙げられる。

一実施形態では、本明細書に記載の組成物、構築物及び系は、リポソーム又は他の類似の小胞中に製剤化することができる。リポソームは、内部水性区画を取り囲む単層又は多層脂質二重層と、比較的不透過性の外側親油性リン脂質二重層とから構成される球状小胞構造である。リポソームは、アニオン性、中性又はカチオン性であってよい。リポソームは、生体適合性、非毒性であり、親水性及び親油性の薬物分子の両方を送達し、血漿酵素による分解からカーゴを保護し、生体膜及び血液脳関門（ＢＢＢ）を通過してそれらの負荷を輸送することができる（例えば、再調査のために、ＳｐｕｃｈａｎｄＮａｖａｒｒｏ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ，ｖｏｌ．２０１１，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ４６９６７９，１２ｐａｇｅｓ，２０１１．ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／４６９６７９を参照されたい）。

小胞は、いくつかの異なる種類の脂質から作製され得る：しかし、薬物担体としてのリポソームを生成する目的で、リン脂質が最も一般的に使用される。多重層小胞脂質の調製方法は、当技術分野において公知である（例えば、米国特許第６，６９３，０８６号明細書を参照、尚、その多重層小胞脂質調製に関する教示は、参照により本明細書に組み込まれる）。小胞形成は、脂質膜が水溶液と混合されると自発的に起こり得るが、ホモジナイザー、超音波破砕装置、又は押出装置を用いて振盪の形態で力を加えることによって促進することもできる（例えば、再調査のために、ＳｐｕｃｈａｎｄＮａｖａｒｒｏ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ，ｖｏｌ．２０１１，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ４６９６７９，１２ｐａｇｅｓ，２０１１．ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／４６９６７９を参照されたい）。押出し脂質は、Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ，１５：６４７－６５２，１９９７（押出し脂質調製に関するその教示は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、サイズを縮小するフィルターを通して押し出すことによって調製することができる。

また、本明細書に記載される組成物及び系のための薬物送達ビヒクルとして、エキソソームを使用することもできる。再調査のために、Ｈａｅｔａｌ．Ｊｕｌｙ２０１６．ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａＳｉｎｉｃａＢ．Ｖｏｌｕｍｅ６，Ｉｓｓｕｅ４，Ｐａｇｅｓ２８７－２９６；ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ａｐｓｂ．２０１６．０２．００１を参照されたい。

さらに、エクスビボ分化赤血球を本明細書に記載の薬剤の担体として使用することもできる。例えば、以下を参照されたい：国際公開第２０１５０７３５８７号パンフレット；同第２０１７１２３６４６号パンフレット；同第２０１７１２３６４４号パンフレット；同第２０１８１０２７４０号パンフレット；同第２０１６１８３４８２号パンフレット；同第２０１５１５３１０２号パンフレット；同第２０１８１５１８２９号パンフレット；同第２０１８００９８３８号パンフレット；Ｓｈｉｅｔａｌ．２０１４．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１１１（２８）：１０１３１－１０１３６；米国特許第９，６４４，１８０号明細書；Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．２０１７．ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ８：４２３；Ｓｈｉｅｔａｌ．２０１４．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１１１（２８）：１０１３１－１０１３６。

フソソーム組成物は、例えば、国際公開第２０１８２０８７２８号パンフレットに記載されるように、本明細書に記載の組成物及び構築物を送達するための担体として使用することもできる。

脂質ナノ粒子
特定の実施形態において、担体は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。脂質ナノ粒子は、一部の実施形態では、１つ若しくは複数のイオン性脂質、例えば、非カチオン性脂質（例えば、中性若しくはアニオン性、又は双性イオン性脂質）；１つ若しくは複数の複合脂質（その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９２１７９４１号パンフレットの表５に記載されるＰＥＧ複合脂質又はポリマーと共役した脂質など）；１つ若しくは複数のステロール（例えば、コレステロール）を含む。

ナノ粒子形成（例えば、脂質ナノ粒子）に用いることができる脂質は、例えば、参照により組み込まれる国際公開第２０１９２１７９４１号パンフレットの表４に記載されるものを含み、例えば、脂質含有ナノ粒子は、国際公開第２０１９２１７９４１号パンフレットの表４に記載の脂質のうち１つ又は複数を含むことができる。脂質ナノ粒子は、参照により組み込まれる、国際公開第２０１９２１７９４１号パンフレットの表５に記載されるポリマーなどの追加の要素を含み得る。

一部の実施形態では、複合脂質は、存在する場合、以下：ＰＥＧ－ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）（例えば、ｌ－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ））、ＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ－リン脂質、ＰＥＧ－セラミド（Ｃｅｒ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧＳ－ＤＡＧ）（例えば、４－０－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－０－（ｗ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ））、ＰＥＧジアルコキシプロピルカルバム、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンナトリウム塩、及び国際公開第２０１９０５１２８９号パンフレットの表２に記載のもの（参照により組み込まれる）、並びにこれらの組み合わせの１つ若しくは複数を含み得る。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子に組み込むことができるステロールは、参照により組み込まれる、国際公開第２００９／１２７０６０号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１０／０１３０５８８号明細書に記載のものなど、コレステロール若しくはコレステロール誘導体の１つ若しくは複数を含む。別の例示的なステロールとしては、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｙｇｅｒｉｓｅｔａｌ．（２０２０），ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０２１／ａｃｓ．ｎａｎｏｌｅｔｔ．０ｃ０１３８６に記載のものなどのフィトステロールがある。

一部の実施形態では、脂質粒子は、イオン化脂質、非カチオン性脂質、粒子の凝集を阻害する複合脂質、及びステロールを含む。これらの成分の量は、独立して、且つ所望の特性を達成するために、変えることができる。例えば、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、総脂質の約２０ｍｏｌ％～約９０ｍｏｌ％の量のイオン化脂質（他の実施形態では、これは、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の２０～７０％（ｍｏｌ）、３０～６０％（ｍｏｌ）若しくは４０～５０％（ｍｏｌ）；約５０ｍｏｌ％～約９０ｍｏｌ％であり得る）、総脂質の約５ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の量の非カチオン性脂質、総脂質の約０．５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％の量の複合脂質、及び総脂質の約２０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の量のステロールを含む。核酸に対する総脂質の比は、所望されるように変えることができる。例えば、総脂質：核酸（質量又は重量）比は、約１０：１～約３０：１であり得る。

一部の実施形態では、脂質：核酸比（質量／質量比；ｗ／ｗ比）は、約１：１～約２５：１、約１０：１～約１４：１、約３：１～約１５：１、約４：１～約１０：１、約５：１～約９：１、又は約６：１～約９：１の範囲であり得る。脂質及び核酸の量は、所望のＮ／Ｐ比、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＮ／Ｐ比を提供するように調整することができる。一般に、脂質ナノ粒子製剤の全体的脂質含量は、約５ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る。

本明細書に記載される組成物、例えば、本明細書に記載の核酸（例えば、ＲＮＡ又はＤＮＡ）の送達のための脂質ナノ粒子を形成するために（例えば、他の脂質成分と組み合わせて）使用され得る脂質化合物のいくつかの非限定的な例は、以下：

を含む。

一部の実施形態では、式（ｉ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ又はＤＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｉｉ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ又はＤＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｉｉｉ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｖ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｖｉ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｖｉｉｉ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｉｘ）を含むＬＮＰを用いて、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

（式中、
Ｘ^１は、Ｏ、ＮＲ^１、又は直接結合であり、Ｘ^２は、Ｃ２～５アルキレンであり、Ｘ^３は、Ｃ（＝Ｏ）又は直接結合であり、Ｒ^１は、Ｈ又はＭｅであり、Ｒ^３は、Ｃ１～３アルキルであり、Ｒ^２は、Ｃ１～３アルキルであるか、又はＲ^２は、それが結合している窒素原子と一緒になって４－、５－、若しくは６員環を形成するか、或いは、Ｘ^１は、ＮＲ^１であり、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって５又は６員環を形成するか、或いは、Ｒ^２は、Ｒ^３及びそれらが結合している窒素原子と一緒になって５、６、若しくは７員環を形成し、Ｙ^１は、Ｃ２～１２アルキレンであり、Ｙ^２は、以下：

から選択され、
ｎは、０～３であり、Ｒ^４は、Ｃ１～１５アルキルであり、Ｚ^１は、Ｃ１～６アルキレン又は直接結合であり、
Ｚ^２は、

（いずれかの配向で）であるか、又は存在せず、但し、Ｚ^１が直接結合であれば、Ｚ^２は存在せず；
Ｒ^５は、Ｃ５～９アルキル又はＣ６～１０アルコキシであり、Ｒ^６は、Ｃ５～９アルキル又はＣ６～１０アルコキシであり、Ｗは、メチレン又は直接結合であり、Ｒ^７は、Ｒ^３とＲ^２がＣ２アルキルである場合、Ｈ若しくはＭｅ、又はその塩であり、Ｘ^１は、Ｏであり、Ｘ^２は、直鎖Ｃ３アルキレンであり、Ｘ^３は、Ｃ（＝０）であり、Ｙ^１は、直鎖Ｃｅアルキレンであり、（Ｙ^２）ｎ－Ｒ^４は、以下：

であり、Ｒ^４は、直鎖Ｃ５アルキルであり、Ｚ^１は、Ｃ２アルキレンであり、Ｚ^２は、存在せず、Ｗはメチレンであり、Ｒ^７は、Ｈであり、Ｒ^５及びＲ^６は、Ｃｘアルコキシではない）。

一部の実施形態では、式（ｘｉｉ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｘｉ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

式中、

一部の実施形態では、ＬＮＰは、式（ｘｉｉｉ）の化合物及び式（ｘｉｖ）の化合物を含む。

一部の実施形態では、式（ｘｖ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

一部の実施形態では、式（ｘｖｉ）の製剤を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。

式中、Ｘ＝

一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物、例えば，本明細書に記載される核酸（例えば、ＲＮＡ又はＤＮＡ）の送達のための脂質ナノ粒子を形成するために使用される脂質化合物は、以下の反応のうちの１つによって作製される：

一部の実施形態では、式（ｘｘｉ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。一部の実施形態では、式（ｘｘｉ）のＬＮＰは、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットに記載されるＬＮＰ（例えば、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットの表１の脂質などの式（１）の脂質）である。

（式中、
各ｎは、独立に、２～１５の整数であり；Ｌ_１及びＬ_３は、各々独立に、ＯＣ（Ｏ）－＊又は－Ｃ（Ｏ）Ｏ－＊であり、ここで、「＊」は、Ｒ_１又はＲ_３との結合点を示し；
Ｒ_１及びＲ_３は、各々独立に、直鎖若しくは分岐Ｃ_９～Ｃ_２０アルキル又はＣ_９～Ｃ_２０アルケニルであり、任意選択により、以下：オキソ、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルケニル、アルデヒド、ヘテロシクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアミノアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、（ヘテロシクリル）（アルキル）アミノアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、アルキニル、アルコキシ、アミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキルカルボニルアミノ、アミノカルボニルアルキルアミノ、（アミノカルボニルアルキル）（アルキル）アミノ、アルケニルカルボニルアミノ、ヒドロキシカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アミノアルキルアミノカルボニル、アルキルアミノアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノアルキルアミノカルボニル、ヘテロシクリルアルキルアミノカルボニル、（アルキルアミノアルキル）（アルキル）アミノカルボニル、アルキルアミノアルキルカルボニル、ジアルキルアミノアルキルカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、アルキルスルホキシド、アルキルスルホキシドアルキル、アルキルスルホニル、及びアルキルスルホンアルキルから成る群から選択される１つ又は複数の置換基で置換され；
Ｒ_２は、以下：

からなる群から選択される）。

一部の実施形態では、式（ｘｘｉｉ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。一部の実施形態では、式（ｘｘｉｉ）のＬＮＰは、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットにより記載されるＬＮＰ（例えば、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットの表２の脂質などの式（２）の脂質）である。

（式中、
各ｎは、独立に、１～１５の整数であり；
Ｒ_１及びＲ_２は、各々独立に、以下：

からなる群から選択され、
Ｒ_３は、以下：

からなる群から選択される）。

一部の実施形態では、式（ｘｘｉｉｉ）を含むＬＮＰを使用して、本明細書に記載のポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）組成物を細胞に送達する。一部の実施形態では、式（ｘｘｉｉｉ）のＬＮＰは、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットにより記載されるＬＮＰ（例えば、国際公開第２０２１１１３７７７号パンフレットの表３の脂質などの式（３）の脂質）である。

（式中、
Ｘは、－Ｏ－、－Ｓ－、又はＯＣ（Ｏ）－＊から選択され、ここで、＊は、Ｒ_１との結合点を示し；
Ｒ_１は、以下：

からなる群から選択され；
Ｒ_２は、以下：

からなる群から選択される）。

一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、核酸（例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ）又はタンパク質）は、イオン化脂質を含むＬＮＰ中で提供される。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、米国特許第９，８６７，８８８号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１に記載されるように；ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタノエート（ＳＭ－１０２）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット（その全体が、参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１３で合成されるような、９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート（ＬＰ０１）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、米国特許出願公開第２０１２／００２７８０３号明細書（その全体が、参照により組み込まれる）の実施例７、８、又は９において合成されるような、ジ（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）９－（（４－ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１０／０５３５７２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１４及び１６で合成されるような、１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、イミダゾールコレステロールエステル（ＩＣＥ）脂質（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－ｌＨ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）プロパノエート、例えば、国際公開第２０２０／１０６９４６号パンフレット（その全体が本明細書に参照により組み込まれる）の構造（Ｉ）である。

一部の実施形態では、イオン化脂質は、カチオン性脂質、イオン化カチオン性脂質、例えば、ｐＨに応じて正荷電した又は中性形態で存在し得るカチオン性脂質、又は容易にプロトン化され得るアミン含有脂質であってもよい。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、例えば、生理学的条件下で正荷電することができる脂質である。例示的なカチオン性脂質は、正電荷を帯びた１つ又は複数のアミン基を含む。一部の実施形態では、脂質粒子は、中性脂質、イオン化アミン含有脂質、生分解性アルキン脂質、ステロイド、多価不飽和脂質、構造脂質（例えば、ステロール）、ＰＥＧ、コレステロール、及びポリマー複合脂質を含むリン脂質のうち１つ又は複数と一緒に、製剤中にカチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、イオン化カチオン性脂質であってもよい。本明細書に開示される例示的なカチオン性脂質は、６．０超の有効ｐＫａを有し得る。複数の実施形態において、脂質ナノ粒子は、第１のカチオン性脂質とは異なる（例えば、第１の有効ｐＫａより大きい）有効ｐＫａを有する第２のカチオン性脂質を含み得る。脂質ナノ粒子は、脂質ナノ粒子内に被包されるか、又は脂質ナノ粒子と結合した、４０～６０ｍｏｌパーセントのカチオン性脂質、中性脂質、ステロイド、ポリマー複合脂質、及び治療薬、例えば、本明細書に記載される核酸（例えば、ＲＮＡ（例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ））を含み得る。一部の実施形態では、核酸は、カチオン性脂質と共製剤化される。核酸は、ＬＮＰ、例えば、カチオン性脂質を含むＬＮＰの表面に吸着されてもよい。一部の実施形態では、核酸は、ＬＮＰ、例えば、カチオン性脂質を含むＬＮＰに被包され得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、ターゲティング部分、例えば、ターゲティング剤で被覆された部分を含んでもよい。複数の実施形態において、ＬＮＰ製剤は、生分解性である。一部の実施形態では、本明細書に記載される１つ若しくは複数の脂質、例えば、式（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉ）、（ｖｉｉ）及び／又は（ｉｘ）を含む脂質ナノ粒子は、ＲＮＡ分子の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は１００％を被包する。

脂質ナノ粒子製剤に使用され得る例示的なイオン化脂質としては、限定はされないが、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９０５１２８９号パンフレットの表１に列挙されるものが挙げられる。追加の例示的な脂質としては、限定するものではないが、以下の式：米国特許出願公開第２０１６／０３１１７５９号明細書のＸ；米国特許出願公開第２０１５０３７６１１５号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／０３７６２２４号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１６０１５１２８４号明細書のＩ、ＩＩ又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１７０２１０９６７号明細書のＩ、ＩＡ、ＩＩ、又はＩＩＡ；米国特許出願公開第２０１５０１４００７０号明細書のＩ－ｃ；米国特許出願公開第２０１３／０１７８５４１号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１３／０３０３５８７号明細書又は同第２０１３／０１２３３３８号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１５／０１４１６７８号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１５／０２３９９２６号明細書のＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、又はＶ；米国特許出願公開第２０１７／０１１９９０４号明細書のＩ；国際公開第２０１７／１１７５２８号パンフレットのＩ又はＩＩ；米国特許出願公開第２０１２／０１４９８９４号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１５／００５７３７３号明細書のＡ；国際公開第２０１３／１１６１２６号パンフレットのＡ；米国特許出願公開第２０１３／００９０３７２号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１３／０２７４５２３号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１３／０２７４５０４号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１３／００５３５７２号明細書のＡ；国際公開第２０１３／０１６０５８号パンフレットのＡ；国際公開第２０１２／１６２２１０号パンフレットのＡ；米国特許出願公開第２００８／０４２９７３号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１２／０１２８７６７０号明細書のＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ；米国特許出願公開第２０１４／０２００２５７号明細書のＩ又はＩＩ；米国特許出願公開第２０１５／０２０３４４６号明細書のＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１５／０００５３６３号明細書のＩ又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１４／０３０８３０４号明細書のＩ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＣ、ＩＩＤ、又はＩＩＩ－ＸＸＩＶ；米国特許出願公開第２０１３／０３３８２１０号明細書の；国際公開第２００９／１３２１３１号パンフレットのＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ；米国特許出願公開第２０１２／０１０１１４７８号明細書のＡ；米国特許出願公開第２０１２／００２７７９６号明細書のＩ又はＸＸＸＶ；米国特許出願公開第２０１２／００５８１４４号明細書のＸＩＶ又はＸＶＩＩ；米国特許出願公開第２０１３／０３２３２６９号明細書の；米国特許出願公開第２０１１／０１１７１２５号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１７５号明細書のＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１２／０２０２８７１号明細書のＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ；米国特許出願公開第２０１１／００７６３３５号明細書のＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、Ｘ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、又はＸＶＩ；米国特許出願公開第２００６／００８３７８号明細書のＩ又はＩＩ；米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３８号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１５／００６４２４２号明細書のＩ又はＸ－Ａ－Ｙ－Ｚ；米国特許出願公開第２０１３／００２２６４９号明細書のＸＶＩ、ＸＶＩＩ、又はＸＶＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１３／０１１６３０７号明細書のＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１３／０１１６３０７号明細書のＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ；米国特許出願公開第２０１０／００６２９６７号明細書のＩ又はＩＩ；米国特許出願公開第２０１３／０１８９３５１号明細書のＩ～Ｘ；米国特許出願公開第２０１４／００３９０３２号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１８／００２８６６４号明細書のＶ；米国特許出願公開第２０１６／０３１７４５８号明細書のＩ；米国特許出願公開第２０１３／０１９５９２０号明細書のＩ；米国特許第１０，２２１，１２７号明細書の５、６、又は１０；国際公開第２０１８／０８１４８０号パンフレットのＩＩＩ－３；国際公開第２０２０／０８１９３８号パンフレットのＩ－５又はＩ－８；米国特許第９，８６７，８８８号明細書の１８又は２５；米国特許出願公開第２０１９／０１３６２３１号明細書のＡ；国際公開第２０２０／２１９８７６号パンフレットのＩＩ；米国特許出願公開第２０１２／００２７８０３号明細書の１；米国特許出願公開第２０１９／０２４０３４９号明細書のＯＦ－０２；米国特許第１０，０８６，０１３号明細書の２３；Ｍｉａｏｅｔａｌ（２０２０）のｃＫＫ－Ｅ１２／Ａ６；国際公開第２０１０／０５３５７２号パンフレットのＣ１２－２００；Ｄａｈｌｍａｎｅｔａｌ（２０１７）の７Ｃ１；Ｗｈｉｔｅｈｅａｄｅｔａｌの３０４－Ｏ１３又は５０３－Ｏ１３；米国特許第９，７０８，６２８号明細書のＴＳ－Ｐ４Ｃ２；国際公開第２０２０／１０６９４６号パンフレットのＩ；国際公開第２０２０／１０６９４６号パンフレットのＩ；並びに国際公開第２０２１／１１３７７７号パンフレットの（１）、（２）、（３）、又は（４）のうちの１つ若しくは複数が挙げられる。例示的な脂質として、さらに、国際公開第２０２１／１１３７７７号パンフレットの表１～１６のいずれか１つに記載される脂質が挙げられる。

一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１９０５１２８９Ａ９号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９に記載されるように、ＭＣ３（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３ｌＺ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３ｌ－テトラエン－ｌ９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ又はＭＣ３）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１９０５１２８９Ａ９号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１０に記載されるように、脂質ＡＴＸ－００２である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１９０５１２８９Ａ９号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１１に記載されるように、（ｌ３Ｚ，ｌ６Ｚ）－Ａ，Ａ－ジメチル－３－ノニルドコサ－ｌ３，ｌ６－ジエン－１－アミン（化合物３２）である。一部の実施形態では、イオン化脂質は、例えば、国際公開第２０１９０５１２８９Ａ９号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１２に記載されるように、化合物６又は化合物２２である。

例示的な非カチオン性脂質を、限定はしないが、以下に挙げる：ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－モノメチルＰＥなど）、ジメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－ジメチルＰＥなど）、ｌ８－ｌ－ｔｒａｎｓＰＥ、ｌ－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、水添大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジエライドイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、セレブロシド、リン酸ジセチル、リゾホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、又はこれらの混合物。他のジアシルホスファチジルコリン及びジアシルホスファチジルエタノールアミンリン脂質も使用できることが理解される。これらの脂質におけるアシル基は、好ましくは、Ｃ１０～Ｃ２４炭素鎖を有する脂肪酸から得られるアシル基、例えば、ラウロイル、ミリストイル、パイミトイル、ステアロイル、又はオレオイルである。別の例示的な脂質は、特定の実施形態において、参照により本明細書に組み込まれるＫｉｍｅｔａｌ．（２０２０）ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０２１／ａｃｓ．ｎａｎｏｌｅｔｔ．０ｃ０１３８６に記載されているものを含むが、これらに限定されない。こうした脂質は、一部の実施形態では、ｍＲＮＡによる肝臓トランスフェクションを向上させることが判明した植物脂質（例えば、ＤＧＴＳ）を含む。

脂質ナノ粒子における使用に適した非カチオン性脂質の他の例として、限定はされないが、非リン脂質、例えば、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、アセチルパルミテート、リシノレイン酸グリセロール、ステアリン酸ヘキサデシル、ミリスチン酸イソプロピル、両性アクリルポリマー、トリエタノールアミン－ラウリル硫酸塩、アルキル－アリール硫酸塩ポリエチルオキシル化脂肪酸アミド、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド、セラミド、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。他の非カチオン性脂質は、国際公開第２０１７／０９９８２３号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１８／００２８６６４号明細書に記載されており、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態では、非カチオン性脂質は、オレイン酸又は米国特許出願公開第２０１８／００２８６６４号明細書（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の式Ｉ、ＩＩ、又はＩＶの化合物である。非カチオン性脂質は、例えば、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の０～３０％（ｍｏｌ）を含むことができる。一部の実施形態では、非カチオン性脂質含量は、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の５～２０％（ｍｏｌ）又は１０～１５％（ｍｏｌ）である。複数の実施形態において、イオン化脂質と中性脂質のモル比は、約２：１～約８：１（例えば、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、又は８：１）の範囲である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、いかなるリン脂質も含まない。

いくつかの態様では、脂質ナノ粒子は、膜の完全性を提供するために、ステロールなどの成分をさらに含み得る。脂質ナノ粒子に使用することができる１つの例示的なステロールは、コレステロール及びその誘導体である。コレステロール誘導体の非限定的な例としては、極性類似体、例えば、５ａ－コレスタノール、５３－コプロスタノール、コレステリル－（２^，－ヒドロキシ）－エチルエーテル、コレステリル－（４’－ヒドロキシ）－ブチルエーテル、及び６－ケトコレスタノール；非極性類似体、例えば、５ａ－コレスタン、コレステノン、５ａ－コレスタノン、５ｐ－コレスタノン、及びデカン酸コレステリルなど；並びにこれらの混合物が挙げられる。一部の実施形態では、コレステロール誘導体は、極性類似体、例えば、コレステリル－（４’－ヒドロキシ）－ブチルエーテルである。例示的なコレステロール誘導体は、国際公開第２００９／１２７０６０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１０／０１３０５８８号明細書に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態では、膜の完全性を提供する成分、例えば、ステロールは、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の０～５０％（ｍｏｌ）（例えば、０～１０％、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、又は４０～５０％）を含むことができる。一部の実施形態では、このような成分は、脂質ナノ粒子の総脂質含量の２０～５０％（ｍｏｌ）～３０～４０％（ｍｏｌ）である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又は複合脂質分子を含むことができる。一般に、これらは、脂質ナノ粒子の凝集を阻害し、且つ／又は立体安定化を提供するために使用される。例示的な複合脂質として、限定はされないが、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）－脂質コンジュゲート、ポリアミド－脂質コンジュゲート（ＡＴＴＡ－脂質コンジュゲートなど）、カチオン性ポリマー脂質（ＣＰＬ）コンジュゲート、並びにこれらの混合物が挙げられる。一部の実施形態では、複合脂質分子は、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート、例えば、（メトキシポリエチレングリコール）－複合脂質である。

例示的なＰＥＧ－脂質コンジュゲートとして、限定はされないが、ＰＥＧ－ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）（例えば、ｌ－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ））、ＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ－リン脂質、ＰＥＧ－セラミド（Ｃｅｒ）、ペグ化ホスファチジルエタノロアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧＳ－ＤＡＧ）（例えば、４－０－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－０－（ｗ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ））、ＰＥＧジアルコキシプロピルカルバム、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンナトリウム塩、又はこれらの混合物が挙げられる。別の例示的なＰＥＧ－脂質コンジュゲートは、例えば、米国特許第５，８８５，６ｌ３号明細書、同第６，２８７，５９ｌ号明細書、米国特許出願公開第２００３／００７７８２９号明細書、同第２００３／００７７８２９号明細書、同第２００５／０１７５６８２号明細書、同第２００８／００２００５８号明細書、同第２０１１／０１１７１２５号明細書、同第２０１０／０１３０５８８号明細書、同第２０１６／０３７６２２４号明細書、同第２０１７／０１１９９０４号明細書、及び同第／０９９８２３号明細書に記載されており、これらのすべての内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、米国特許出願公開第２０１８／００２８６６４号明細書（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の式ＩＩＩ、ＩＩＩ－ａ－Ｉ、ＩＩＩ－ａ－２、ＩＩＩ－ｂ－１、ＩＩＩ－ｂ－２、又はＶの化合物である。一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、米国特許出願公開第２０１５０３７６１１５号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／０３７６２２４号明細書（いずれの内容も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の式ＩＩのものである。一部の実施形態では、ＰＥＧ－ＤＡＡコンジュゲートは、例えば、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル、ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル、ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル、又はＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピルであってよい。ＰＥＧ－脂質は、以下：ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ジラウリルグリセロール、ＰＥＧ－ジパルミトイルグリセロール、ＰＥＧ－ジステリルグリセロール、ＰＥＧ－ジラウリルグリカミド、ＰＥＧ－ジミリスチルグリカミド、ＰＥＧ－ジパルミトイルグリカミド、ＰＥＧ－ジステリルグリカミド、ＰＥＧ－コレステロール（１－［８’－（コレスト－５－エン－３［β］－オキシ）カルボキサミド－３’，６’－ジオキサオクタニル］カルバモイル－［ω］－メチル－ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧ－ＤＭＢ（３，４－ジテトラデコキシルベンジル－［ω］－メチル－ポリ（エチレングリコール）エーテル）、及び１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］のうちの１つ又は複数であり得る。一部の実施形態では、ＰＥＧ－脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧ、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、以下：

から選択される構造を含む。

一部の実施形態では、ＰＥＧ以外の分子と結合した脂質を、ＰＥＧ脂質の代わりに使用することもできる。例えば、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）－脂質コンジュゲート、ポリアミド－脂質コンジュゲート（ＡＴＴＡ－脂質コンジュゲートなど）、及びカチオン－ポリマー脂質（ＧＰＬ）コンジュゲートを、ＰＥＧ－脂質の代わりに、又はＰＥＧ－脂質に加えて使用することができる。

例示的な複合脂質、即ち、ＰＥＧ－脂質、（ＰＯＺ）－脂質コンジュゲート、ＡＴＴＡ－脂質コンジュゲート及びカチオン性ポリマー－脂質は、国際公開第２０１９０５１２８９Ａ９号パンフレットの表２に列挙されるＰＣＴ及びＬＩＳ特許出願に記載されており、これらのすべての内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態では、ＰＥＧ又は複合脂質は、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の０～２０％（ｍｏｌ）を含むことができる。一部の実施形態では、ＰＥＧ又は複合脂質含量は、脂質ナノ粒子中に存在する総脂質の０．５～１０％又は２～５％（ｍｏｌ）である。イオン化脂質、非カチオン性脂質、ステロール、及びＰＥＧ／複合脂質のモル比は、必要に応じて変えることができる。例えば、脂質粒子は、組成物のモル又は総重量に基づき３０～７０％のイオン化脂質、組成物のモル又は総重量に基づき０～６０％のコレステロール、組成物のモル又は総重量に基づき０～３０％の非カチオン性脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき１～１０％の複合脂質を含み得る。好ましくは、組成物は、組成物のモル又は総重量に基づき３０～４０％のイオン化性脂質、組成物のモル又は総重量に基づき４０～５０％のコレステロール、及び組成物のモル又は総重量に基づき１０～２０％の非カチオン性脂質を含む。いくつかの他の実施形態では、組成物は、組成物のモル又は総重量に基づき５０～７５％のイオン化脂質、組成物のモル又は総重量に基づき２０～４０％のコレステロール、及び組成物のモル又は総重量に基づき５～１０％の非カチオン性脂質、組成物のモル又は総重量に基づき１～１０％の複合脂質である。組成物は、組成物のモル又は総重量に基づき６０～７０％のイオン化性脂質、組成物のモル又は総重量に基づき２５～３５％のコレステロール、及び組成物のモル又は総重量に基づき５～１０％の非カチオン性脂質を含有し得る。組成物はまた、組成物のモル又は総重量に基づき最大９０％のイオン化脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき２～１５％の非カチオン性脂質を含有し得る。さらに、製剤は、例えば、以下：組成物のモル又は総重量に基づき８～３０％のイオン化脂質、組成物のモル又は総重量に基づき５～３０％の非カチオン性脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき０～２０％のコレステロール；組成物のモル又は総重量に基づき４～２５％のイオン化脂質、組成物のモル又は総重量に基づき４～２５％の非カチオン性脂質、組成物のモル又は総重量に基づき２～２５％のコレステロール、組成物のモル又は総重量に基づき１０～３５％のコンジュゲート脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき５％のコレステロール；或いは、組成物のモル又は総重量に基づき２～３０％のイオン化脂質、組成物のモル又は総重量に基づき２～３０％の非カチオン性脂質、組成物のモル又は総重量に基づき１～１５％のコレステロール、組成物のモル又は総重量に基づき２～３５％のコンジュゲート脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき１～２０％のコレステロール；或いは、組成物のモル又は総重量に基づき最大９０％のイオン化脂質、及び組成物のモル又は総重量に基づき２～１０％の非カチオン性脂質、或いはまた組成物のモル又は総重量に基づき１００％のカチオン性脂質を含む脂質ナノ粒子製剤であってもよい。一部の実施形態では、脂質粒子製剤は、イオン化脂質、リン脂質、コレステロール及びＰＥＧ化脂質を５０：１０：３８．５：１．５のモル比で含む。いくつかの他の実施形態において、脂質粒子製剤は、イオン化脂質、コレステロール及びＰＥＧ化脂質を６０：３８．５：１．５のモル比で含む。

一部の実施形態では、脂質粒子は、イオン化脂質、非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、ステロール（例えば、コレステロール）及びＰＥＧ化脂質を含み、ここで、脂質のモル比は、イオン化脂質については２０～７０モルパーセントの範囲で、目標は４０～６０であり、非カチオン性脂質のモルパーセントは０～３０の範囲で、目標は０～１５であり、ステロールのモルパーセントは２０～７０の範囲で、目標は３０～５０であり、ＰＥＧ化脂質のモルパーセントは１～６の範囲で、目標は２～５である。

一部の実施形態では、脂質粒子は、イオン化脂質／非カチオン性脂質／ステロール／複合脂質を５０：１０：３８．５：１．５のモル比で含む。

或る態様において、本開示は、リン脂質、レシチン、ホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールアミンを含む脂質ナノ粒子製剤を提供する。

一部の実施形態では、１つ又は複数の追加の化合物も含み得る。それらの化合物は、個別に投与してもよいし、又は追加の化合物を本発明の脂質ナノ粒子に含有させてもよい。換言すれば、脂質ナノ粒子は、核酸に加えて、又は少なくとも、第１のものとは異なる第２の核酸に加えて他の化合物を含有することができる。限定するものではないが、他の追加化合物は、小若しくは大有機又は無機分子、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、ペプチド、タンパク質、ペプチド類似体及びその誘導体、ペプチド模倣物、核酸、核酸類似体及び誘導体、生物学的材料から作製された抽出物、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択することができる。

一部の実施形態では、ＬＮＰは、生分解性、イオン化性脂質を含む。一部の実施形態では、ＬＮＰは、（９Ｚ，ｌ２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，ｌ２－ジエノエート、別名：３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピル（９Ｚ，ｌ２Ｚ）－オクタデカ－９，ｌ２－ジエノエート）又は別のイオン化脂質を含む。例えば、国際公開第２０１９／０６７９９２号パンフレット、同第２０１７／１７３０５４号パンフレット、同第２０１５／０９５３４０号パンフレット、及び同第２０１４／１３６０８６号パンフレットの脂質、並びにそこに記載される参考文献を参照されたい。一部の実施形態では、ＬＮＰ脂質と関連して、カチオン性及びイオン化という用語は、置き換え可能であり、例えば、この場合、イオン化脂質は、ｐＨに応じてカチオン性である。

一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定して、数１０ｎｍ～数１００ｎｍであってよい。一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、又は１５０ｎｍであってよい。一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍから約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約６０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍから約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、又は約９０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約７０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。特定の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約８０ｎｍであり得る。一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約１００ｎｍであり得る。一部の実施形態では、ＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ径は、約ｌｍｍ～約５００ｍｍ、約５ｍｍ～約２００ｍｍ、約１０ｍｍ～約１００ｍｍ、約２０ｍｍ～約８０ｍｍ、約２５ｍｍ～約６０ｍｍ、約３０ｍｍ～約５５ｍｍ、約３５ｍｍ～約５０ｍｍ、又は約３８ｍｍ～約４２ｍｍの範囲である。

ＬＮＰは、場合によっては、比較的均質であり得る。多分散性指数を用いて、ＬＮＰの均質性、例えば、脂質ナノ粒子の粒度分布を示すことができる。小さい（例えば、０．３未満の）多分散性指数は、概して、狭い粒度分布を示す。ＬＮＰは、約０～約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、又は０．２５などの多分散性指数を有し得る。一部の実施形態では、ＬＮＰの多分散性指数は約０．１０～約０．２０であり得る。

ＬＮＰのゼータ電位を用いて、組成物の界面動電位を示すことができる。一部の実施形態では、ゼータ電位は、ＬＮＰの表面電荷を記述し得る。より高度に荷電された種は、体内の細胞、組織、及び他の要素と望ましくない相互作用をする可能性があるため、正又は負にかかわらず、比較的低い電荷を帯びた脂質ナノ粒子が一般的に望ましい。一部の実施形態では、ＬＮＰのゼータ電位は、約－１０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約－５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－５ｍＶ～約０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約０ｍＶから約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、又は約＋５ｍＶ～約＋１０ｍＶであってよい。

タンパク質及び／若しくは核酸の被包の効率は、調製後にＬＮＰで被包されるか、又はそれと結合したタンパク質及び／又は核酸の量を、提供された最初の量と比較して表す。被包効率は、高いことが望ましい（例えば、１００％近く）。被包効率は、例えば、１若しくは複数種の有機溶媒又は界面活性剤により脂質ナノ粒子を分解する前と後で、脂質ナノ粒子を含有する溶液中のタンパク質又は核酸の量を比較することによって測定され得る。アニオン交換樹脂を使用して、溶液中の遊離タンパク質又は核酸（ＲＮＡ）の量を測定することができる。蛍光を使用して、溶液中の遊離タンパク質及び／又は核酸（例えば、ＲＮＡ）の量を測定することができる。本明細書に記載される脂質ナノ粒子の場合、タンパク質及び／又は核酸の被包効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であり得る。一部の実施形態では、被包効率は、少なくとも８０％であり得る。一部の実施形態では、被包効率は、少なくとも９０％であり得る。一部の実施形態では、被包効率は、少なくとも９５％であり得る。

ＬＮＰは、場合により、１つ若しくは複数のコーティングを含み得る。一部の実施形態では、ＬＮＰは、コーティングを有するカプセル、フィルム、又は錠剤中に製剤化され得る。本明細書に記載の組成物を含むカプセル、フィルム、又は錠剤は、任意の有用なサイズ、引張強度、硬度、又は密度を有し得る。

ＬＮＰの別の例示的な脂質、製剤、方法、及び特性決定は、国際公開第２０２０／０６１４５７号パンフレット及び同第２０２１／１１３７７７号パンフレットによって教示され、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＬＮＰのさらに別の例示的な脂質、製剤、方法、及び特性決定は、Ｈｏｕｅｔａｌ．ＬｉｐｉｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒｍＲＮＡｄｅｌｉｖｅｒｙ．ＮａｔＲｅｖＭａｔｅｒ（２０２１）．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５７８－０２１－００３５８－０（例えば、Ｈｏｕｅｔａｌ．の図２の例示的な脂質及び脂質誘導体を参照されたい）によって教示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

一部の実施形態では、インビトロ又はエクスビボ細胞リポフェクションは、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）又はＴｒａｎｓＩＴ－ｍＲＮＡＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ（ＭｉｒｕｓＢｉｏ）を用いて実施される。特定の実施形態において、ＬＮＰは、ＧｅｎＶｏｙ＿ＩＬＭｉｏｎｉｚａｂｌｅｌｉｐｉｄｍｉｘ（イオン化脂質ミックス）（ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ）を用いて製剤化される。特定の実施形態において、ＬＮＰは、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）又はジリノレイルメチル－４－ジメチルアミノ酪酸（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ又はＭＣ３）を用いて製剤化され、その製剤及びインビボでの使用は、Ｊａｙａｒａｍａｎｅｔａｌ．ＡｎｇｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄＥｎｇｌ５１（３４）：８５２９－８５３３（２０１２）に教示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、例えば、Ｃａｓ９－ｇＲＮＡ、ｇＲＮＡ、Ｃａｓ９ｍＲＮＡの送達のために最適化されたＬＮＰ製剤は、国際公開第２０１９０６７９９２号パンフレット及び同第２０１９０６７９１０号パンフレット（いずれも参照により組み込まれる）に記載されており、これらは、本明細書に記載のＤＮＡ又はＲＮＡ組成物の送達に有用である。

核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ）の送達に有用なさらなる特定のＬＮＰ製剤は、米国特許第８１５８６０１号明細書及び同第８１６８７７５号明細書（いずれも参照により組み込まれる）に記載されており、こうしたものとして、ＯＮＰＡＴＴＲＯの商品名で販売されているパチシランに使用される製剤がある。

ポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）ＬＮＰの例示的な用量設定は、約０．１、０．２５、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、８、１０、若しくは１００ｍｇ／ｋｇ（ＲＮＡ）を含み得る。ポリリボヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を含むＡＡＶの例示的な用量設定は、約１０^１１、１０^１２、１０^１３、及び１０^１４ｖｇ／ｋｇのＭＯＩを含み得る。

ＶＩ．タノトランスミッションを促進する方法
特定の態様では、本開示は、対象におけるタノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物を、タノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。例えば、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドの発現によって、標的細胞を誘導して、標的細胞により活発に放出されるか、又は標的細胞のターンオーバー（例えば細胞死）中に露出される因子を産生させる。これらの因子は、応答細胞（例えば、免疫細胞）に生物学的応答（例えば、免疫活性の増大）を受けるようにシグナル伝達する。

Ａ．免疫活性を高める方法
いくつかの態様では、本明細書に記載のタノトランスミッションポリペプチドを用いて、対象、例えば、免疫活性の増大から利益を被り得る対象の免疫活性を増大することができる。特定の態様では、本開示は、それを必要とする対象の免疫応答を増大する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物のいずれか１つを、対象の免疫応答を増大するのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。例えば、タノトランスミッションポリペプチドの発現時に標的細胞によって産生される因子は、応答細胞（例えば、免疫細胞）に免疫刺激応答（例えば、炎症誘発性応答）を誘導し得る。一実施形態では、免疫応答は抗癌応答である。

本開示の方法によれば、免疫活性は、標的細胞と多種多様な免疫細胞との相互作用によって調節され得るが、こうした免疫細胞は、例えば、肥満細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好塩基球、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞、好酸球、リンパ球（Ｂリンパ球（Ｂ細胞））、及びＴリンパ球（Ｔ細胞））のいずれか１つ又は複数を含む。

免疫細胞のタイプ
肥満細胞は、ヒスタミンと抗凝固剤であるヘパリンが豊富な顆粒を含む顆粒球の一種である。活性化されると、肥満細胞は、炎症性化合物を顆粒から局所微小環境に放出する。肥満細胞は、アレルギー、アナフィラキシー、創傷治癒、血管新生、免疫寛容、病原体に対する防御、及び血液脳関門機能において役割を果たす。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、一切の事前の刺激も免疫化もなしに特定の腫瘍及びウイルス感染細胞を溶解する細胞傷害性リンパ球である。ＮＫ細胞はまた、様々なサイトカイン、例えば、ＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮγ）、ＴＮＦ－アルファ（ＴＮＦα）、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＩＬ－３の強力な産生細胞である。従って、ＮＫ細胞は、免疫系の制御性細胞としても機能し、他の細胞及び反応に影響を与えるとも考えられている。ヒトでは、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－リンパ球として広く定義されている。ＮＫ細胞の細胞毒性は、細胞表面の受容体からの活性化シグナルと抑制性シグナルのバランスによって厳密に制御されている。ＮＫ細胞の活性化を阻害する主な受容体群は、抑制性キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）である。標的細胞上の自己ＭＨＣクラスＩ分子を認識すると、これらの受容体は、シグナル伝達カスケードの活性化を停止する阻害シグナルを伝達し、正常なＭＨＣクラスＩ発現を示す細胞をＮＫ細胞溶解から保護する。活性化受容体には、標的細胞表面上の様々なリガンドとの結合を介して細胞溶解作用に向けてバランスを押し上げる天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）及びＮＫＧ２Ｄが含まれる。従って、標的細胞のＮＫ細胞の認識は、複数の活性化及び抑制性受容体から送達されるシグナルの統合を含むプロセスによって厳密に制御される。

単球は、組織に動員されるまで数時間／数日の間血中を循環する骨髄由来単核食細胞である。Ｗａｃｌｅｃｈｅｅｔａｌ．，２０１８，Ｖｉｒｕｓｅｓ（１０）２：６５を参照されたい。単球の表面での様々なケモカイン受容体及び細胞接着分子の発現により、これらが、骨髄を出て血中に入り、その後、血液から組織内に動員されるのが可能となる。単球は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、又は寄生虫感染に対する応答を提供する免疫系の生得的な武器（ｉｎｎａｔｅａｒｍ）に属する。それらの機能には、食作用による病原体の死滅、活性酸素種（ＲＯＳ）、一酸化窒素（ＮＯ）、ミエロペルオキシダーゼ、及び炎症性サイトカインの産生が含まれる。特定の条件下では、単球は、癌並びに感染症及び自己免疫疾患の際にＴ細胞応答を刺激又は阻害し得る。単球はまた、組織の修復及び血管新生に関与する。

マクロファージは、食作用と呼ばれるプロセスで、細胞残屑、異物、微生物、癌細胞などの物質を飲み込んで消化する。食作用に加えて、マクロファージは、非特異的防御（自然免疫）において重要な役割を果たし、リンパ球などの他の免疫細胞を動員することによって特定の防御機構（適応免疫）を開始するのにも役立つ。例えば、マクロファージは、Ｔ細胞への抗原プレゼンター（ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）として重要である。マクロファージは、炎症を増加させ、免疫系を刺激するだけでなく、重要な抗炎症の役割も果たし、サイトカインの放出を介して免疫反応を低下させ得る。炎症を促進するマクロファージは、Ｍ１マクロファージと呼ばれ、炎症を軽減して組織の修復を促進するマクロファージは、Ｍ２マクロファージと呼ばれる。

樹状細胞（ＤＣ）は、病原体に対する免疫応答を刺激し、無害な抗原に対する免疫恒常性を維持する上で重要な役割を果たす。ＤＣは、免疫応答の誘導及び調節に不可欠な、特殊な抗原感知細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の異種群を表す。末梢血では、ヒトＤＣは、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）、Ｂ細胞（ＣＤ１９、ＣＤ２０）、及び単球マーカー（ＣＤ１４、ＣＤ１６）を欠いているが、ＨＬＡ－ＤＲ及び他のＤＣ系統マーカー（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｃ）を高度に発現する細胞として特徴づけられる。Ｍｕｒｐｈｙｅｔａｌ．，Ｊａｎｅｗａｙ’ｓＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．８ｔｈｅｄ．ＧａｒｌａｎｄＳｃｉｅｎｃｅ；ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ：２０１２．８６８ｐを参照されたい。

「リンパ球」という用語は、体全体のリンパ組織及び正常な成人で形成される小さな白血球を指し、疾患から体を防御するのに大きな役割を果たす、循環血液中の白血球の総数の約２２～２８％を占める。個々のリンパ球は、（例えば、Ｔ細胞受容体とＢ細胞受容体を形成するために）それらの遺伝物質の組換えを介して、構造的に関連する抗原の限られたセットに応答することにコミットしているという点で特殊化されている。免疫系が所与の抗原と最初に接触する前に存在するこのコミットメントは、リンパ球の表面膜における抗原上の決定基（エピトープ）に特異的な受容体の存在によって表される。各リンパ球は、受容体のユニークな集団を有しており、そのすべてが同一の結合部位を有する。リンパ球の１つのセット又はクローンは、その受容体の結合領域の構造が別のクローンとは異なるため、認識できるエピトープが異なる。リンパ球は、それらの受容体の特異性だけでなく、それらの機能も互いに異なる（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９），ａｔｐ．１０２）。

リンパ球には、抗体分泌細胞の前駆細胞であるＢリンパ球（Ｂ細胞）、及びＴリンパ球（Ｔ細胞）が含まれる。

Ｂリンパ球（Ｂ細胞）
Ｂリンパ球は、骨髄の造血細胞に由来する。成熟したＢ細胞は、その細胞表面によって認識されるエピトープを発現する抗原で活性化することができる。活性化プロセスは、抗原による膜Ｉｇ分子の架橋に依存し、直接的である（架橋依存性Ｂ細胞活性化）、又は同族支援（ｃｏｇｎａｔｅｈｅｌｐ）と呼ばれるプロセスにおけるヘルパーＴ細胞との相互作用を介し、間接的であり得る。多くの生理学的状況では、受容体架橋刺激及び同族支援は、相乗作用を助けてより活発なＢ細胞応答を引き起こす（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

各Ｂ細胞は、同一の可変領域を有するＩｇ分子を発現するため、架橋依存性Ｂ細胞活性化には、抗原が細胞表面受容体の結合部位に相補的なエピトープの複数のコピーを発現する必要がある。このような要件は、微生物の莢膜多糖又はウイルスエンベロープタンパク質などの、反復エピトープを有する他の抗原によって満たされる。架橋依存性Ｂ細胞活性化は、これらの微生物に対して開始される主要な防御免疫応答である（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

同族支援により、Ｂ細胞は、受容体を架橋できない抗原に対する応答を開始することができ、同時に、弱い架橋事象によって刺激されたときにＢ細胞を不活化から救う共刺激シグナルを提供する。同族支援は、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）による抗原の結合、抗原のエンドサイトーシス、及び細胞のエンドソーム／リソソーム区画内のペプチドへのその断片化に依存する。得られたペプチドのいくつかは、クラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子として知られている特殊な一連の細胞表面タンパク質の溝にロードされる。得られたクラスＩＩ／ペプチド複合体は、細胞表面で発現され、ＣＤ４^＋Ｔ細胞と呼ばれる一連のＴ細胞の抗原特異的受容体のリガンドとして機能する。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、Ｂ細胞クラスＩＩ／ペプチド複合体に特異的な受容体をその表面に有する。Ｂ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介したＴ細胞の結合に依存するだけでなく、この相互作用により、Ｔ細胞上の活性化リガンド（ＣＤ４０リガンド）が、Ｂ細胞活性化をシグナル伝達するＢ細胞（ＣＤ４０）上の受容体に結合することも可能になる。加えて、Ｔヘルパー細胞は、Ｂ細胞上のサイトカイン受容体に結合することによって、刺激されたＢ細胞の成長及び分化を調節するいくつかのサイトカインを分泌する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

抗体産生の同族支援の間に、ＣＤ４０リガンドは、活性化されたＣＤ４^＋Ｔヘルパー細胞で一過性に発現され、抗原特異的Ｂ細胞上のＣＤ４０に結合し、それにより第２の共刺激シグナルを変換する。後者のシグナルは、抗原に遭遇した胚中心Ｂ細胞のアポトーシスを防止することによるＢ細胞の増殖及び分化並びにメモリーＢ細胞の生成に不可欠である。Ｂ細胞及びＴ細胞の両方でのＣＤ４０リガンドの過剰発現は、ヒトＳＬＥ患者の病原性自己抗体産生に関係している（Ｄｅｓａｉ－Ｍｅｈｔａ，Ａ．ｅｔａｌ．，“ＨｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ４０ｌｉｇａｎｄｂｙＢａｎｄＴｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｌｕｐｕｓａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．９７（９），２０６３－２０７３，（１９９６））。

Ｔリンパ球（Ｔ細胞）
造血組織の前駆体に由来するＴリンパ球は、胸腺で分化し、末梢リンパ組織及びリンパ球の再循環プールに撒かれる。Ｔリンパ球又はＴ細胞は、幅広い免疫機能を仲介する。免疫機能には、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助ける能力、単球／マクロファージの殺菌作用を高める能力、特定のタイプの免疫応答の阻害、標的細胞の直接的な死滅、及び炎症反応の動員が含まれる。これらの効果は、特定の細胞表面分子のＴ細胞発現及びサイトカインの分泌に依存する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

Ｔ細胞は、Ｂ細胞とは抗原認識のメカニズムが異なる。Ｂ細胞の受容体である免疫グロブリンは、可溶性分子又は粒子表面の個々のエピトープに結合する。Ｂ細胞受容体は、天然分子の表面に発現するエピトープを認識する。抗体及びＢ細胞受容体は、細胞外液中の微生物に結合して防御するように進化したが、Ｔ細胞は、他の細胞の表面にある抗原を認識し、これらの抗原提示細胞（ＡＰＣ）と相互作用してその挙動を変化させることによってそれらの機能を仲介する。Ｔ細胞を活性化できる末梢リンパ器官には、主要な３種類のＡＰＣ：樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞が存在する。これらの中で樹状細胞が最も強力であり、その唯一の機能は外来抗原をＴ細胞に提示することである。未熟な樹状細胞は、皮膚、腸、気道を含む体全体の組織に存在する。未熟な樹状細胞は、これらの部位で侵入微生物に遭遇すると、病原体及びその産物を取り込み、リンパを介して局所リンパ節又は腸関連リンパ器官に輸送する。病原体との遭遇により、樹状細胞が、抗原捕捉細胞からＴ細胞を活性化できるＡＰＣに成熟するように誘導される。ＡＰＣは、Ｔ細胞を活性化してエフェクター細胞にする際に役割を果たす３種類のタンパク質分子：（１）Ｔ細胞受容体に外来抗原を提示するＭＨＣタンパク質；（２）Ｔ細胞表面の相補的受容体に結合する共刺激タンパク質；及び（３）活性化するまで十分に長くＴ細胞をＡＰＣに結合することを可能にする細胞間接着分子を表面に提示する（“Ｃｈａｐｔｅｒ２４：Ｔｈｅａｄａｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ，”ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＣｅｌｌ，Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ｅｔａｌ．，ＧａｒｌａｎｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ，（２００２））。

Ｔ細胞は、それらが発現する細胞表面受容体に基づいて２つの異なるクラスに細分される。Ｔ細胞の大部分は、α鎖とβ鎖からなるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。Ｔ細胞の小群は、γ鎖とδ鎖からなる受容体を発現する。α／β Ｔ細胞には、２つの亜系統：補助受容体分子ＣＤ４を発現するＴ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）；及びＣＤ８を発現するＴ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）が存在する。これらの細胞は、抗原を認識する方法と、エフェクター及び調節機能が異なる。

ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、免疫系の主要な制御性細胞である。それらの制御機能は、Ｔ細胞が活性化されると発現が誘導されるＣＤ４０リガンドなどのそれらの細胞表面分子の発現、及び活性化されると分泌する様々なサイトカインの発現の両方に依存する。

Ｔ細胞はまた、重要なエフェクター機能を媒介し、そのいくつかは、それらが分泌するサイトカインのパターンによって決定される。サイトカインは、標的細胞に対して直接的に毒性であり得、強力な炎症メカニズムを動員し得る。

加えて、Ｔ細胞、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識される抗原を発現する標的細胞を効率的に溶解できるＣＴＬに成長し得る（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、クラスＩＩ又はクラスＩＭＨＣタンパク質の特殊な溝に結合した抗原のタンパク質分解によって得られるペプチドからなる複合体を認識する。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩＩ複合体のみを認識し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩ複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

ＴＣＲのリガンド（即ち、ペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）はＡＰＣ内で生成される。一般に、クラスＩＩＭＨＣ分子は、エンドサイトーシスプロセスを介してＡＰＣに取り込まれたタンパク質に由来するペプチドに結合する。次に、これらのペプチドがロードされたクラスＩＩ分子が細胞の表面に発現され、これらは、発現した細胞表面複合体を認識できるＴＣＲを有するＣＤ４^＋Ｔ細胞によって結合され得る。従って、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、細胞外供給源に由来する抗原と反応するように特殊化されている（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

対照的に、クラスＩＭＨＣ分子には、ウイルスタンパク質などの内部合成タンパク質に由来するペプチドが主にロードされている。これらのペプチドは、プロテオソームによるタンパク質分解によって細胞質タンパク質から生成され、粗面小胞体に移動する。このようなペプチドは、一般に、９アミノ酸長から構成されており、クラスＩＭＨＣ分子に結合して細胞表面に運ばれ、適切な受容体を発現するＣＤ８^＋Ｔ細胞によって認識され得る。これにより、Ｔ細胞系、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞に、生物の残りの細胞のタンパク質（例えば、ウイルス抗原）又は変異抗原（活性腫瘍遺伝子産物など）とは異なるタンパク質、又はこれらよりもはるかに大量に産生されるタンパク質を発現する細胞を、これらのタンパク質が無傷の形で細胞表面に発現も分泌もされなくても、検出する能力が付与される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

Ｔ細胞はまた、機能に基づいてヘルパーＴ細胞；細胞性免疫の誘導に関与するＴ細胞；サプレッサーＴ細胞；及び細胞傷害性Ｔ細胞として分類することができる。

ヘルパーＴ細胞
ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞を刺激してタンパク質及びその他のＴ細胞依存性抗原に対する抗体反応を引き起こすＴ細胞である。Ｔ細胞依存性抗原は、個々のエピトープが１回のみ又は限られた回数しか出現しないため、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）を架橋できないか、非効率的にしか架橋できない免疫原である。Ｂ細胞は、それらの膜Ｉｇを介して抗原に結合し、この複合体は、エンドサイトーシスを受ける。エンドソーム及びリソソーム区画内で、抗原は、タンパク質分解酵素によってペプチドに断片化され、生成されたペプチドの１つ又は複数がクラスＩＩＭＨＣ分子にロードされ、この小胞区画を通過する。次に、得られたペプチド／クラスＩＩＭＨＣ複合体は、Ｂ細胞表面膜に輸送される。ペプチド／クラスＩＩ分子複合体に特異的な受容体を有するＴ細胞は、Ｂ細胞表面でこの複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９））。

Ｂ細胞の活性化は、そのＴＣＲを介したＴ細胞の結合、及びＴ細胞ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用の両方に依存する。Ｔ細胞は、ＣＤ４０Ｌを構成的に発現しない。むしろ、ＣＤ４０Ｌの発現は、Ｔ細胞のＴＣＲによって認識される同族抗原及びＣＤ８０又はＣＤ８６の両方を発現するＡＰＣとの相互作用の結果として誘導される。ＣＤ８０／ＣＤ８６は、一般に、Ｂ細胞の休止状態ではなく活性化によって発現されるため、活性化Ｂ細胞及びＴ細胞を伴うヘルパーの相互作用が、効率的な抗体産生をもたらし得る。しかしながら、多くの場合、Ｔ細胞上のＣＤ４０Ｌの最初の誘導は、樹状細胞などのＣＤ８０／８６を構成的に発現するＡＰＣの表面での抗原の認識に依存する。次に、このような活性化ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞と効率的に相互作用して支援することができる。Ｂ細胞上の膜Ｉｇの架橋は、たとえ非効率的であっても、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０相互作用と相乗作用して、活発なＢ細胞の活性化をもたらし得る。増殖、Ｉｇの分泌、及び発現しているＩｇクラスのクラスの切り替えを含む、Ｂ細胞応答におけるその後の事象は、Ｔ細胞由来サイトカインの作用に依存するか、又はその作用によって増強される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、主にサイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０を分泌する細胞（Ｔ_Ｈ２細胞）、又は主にＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びリンホトキシンを産生する細胞（Ｔ_Ｈ１細胞）に分化する傾向がある。Ｔ_Ｈ２細胞は、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助けるのに非常に効果的であり、Ｔ_Ｈ１細胞は、単球及びマクロファージの殺菌活性の増強に関与し、結果として細胞内の小胞区画の微生物の溶解効率を向上させる、細胞免疫応答の効果的な誘導因子である。Ｔ_Ｈ２細胞の表現型（即ち、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０）を有するＣＤ４^＋Ｔ細胞は効率的なヘルパー細胞であるが、Ｔ_Ｈ１細胞はヘルパーになる能力も有する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

細胞性免疫誘導へのＴ細胞の関与
Ｔ細胞はまた、単球及びマクロファージの能力を増強して、細胞内微生物を破壊するように作用し得る。特に、ヘルパーＴ細胞によって産生されるインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）は、単核食細胞が、一酸化窒素の生成及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）産生の誘導を含む、細胞内細菌及び寄生虫を破壊するいくつかのメカニズムを促進する。Ｔ_Ｈ１細胞は、ＩＦＮ－γを産生するため、殺菌作用を高めるのに効果的である。対照的に、Ｔ_Ｈ２細胞によって産生される２つの主要なサイトカインであるＩＬ－４及びＩＬ－１０は、これらの活性をブロックする（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ１：Ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ：ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。

制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞
免疫恒常性は、免疫応答の開始とダウンレギュレーションとの間の制御されたバランスによって維持される。アポトーシス及びＴ細胞アネルギーの両方のメカニズム（抗原との遭遇後にＴ細胞が本質的に機能的に不活性化される耐性メカニズム（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．，“Ｔｃｅｌｌａｎｅｒｇｙ”，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２１：３０５－３３４（２００３））は、免疫応答のダウンレギュレーションに寄与する。第３のメカニズムは、サプレッサー又は制御性ＣＤ４^＋Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による活性化Ｔ細胞の能動的抑制によって提供される（ＲｅｖｉｅｗｅｄｉｎＫｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．ｅｔａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｉｔｙｂｙｓｅｌｆ－ｒｅａｃｔｉｖｅＴｃｅｌｌｓ”，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４３５：５９８－６０４（２００５））。ＩＬ－２受容体アルファ（ＩＬ－２Ｒα）鎖を構成的に発現するＣＤ４^＋Ｔｒｅｇ（ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋）は、アネルギー性及び抑制性である天然に存在するＴ細胞のサブセットである（Ｔａａｍｓ，Ｌ．Ｓ．ｅｔａｌ．，“Ｈｕｍａｎａｎｅｒｇｉｃ／ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｃｅｌｌｓ：ａｈｉｇｈｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｐｒｏｎｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ”，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．３１：１１２２－１１３１（２００１））。ヒトＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇは、マウスの対応物と同様に胸腺で生成され、細胞間接触依存性メカニズムを介してレスポンダーＴ細胞の増殖を抑制する能力、ＩＬ－２を産生できないこと、及びインビトロでのアネルギー表現型によって特徴づけられる。ヒトＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞は、ＣＤ２５の発現レベルに応じて抑制性（ＣＤ２５^ｈｉｇｈ）細胞及び非抑制性（ＣＤ２５^ｌｏｗ）細胞に分割することができる。転写因子のフォークヘッドファミリーのメンバーであるＦＯＸＰ３は、マウス及びヒトＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇで発現することが示され、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇの発生を制御するマスター遺伝子であると考えられる（Ｂａｔｔａｇｌｉａ，Ｍ．ｅｔａｌ．，“ＲａｐａｍｙｃｉｎｐｒｏｍｏｔｅｓｅｘｐａｎｓｉｏｎｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒＴｃｅｌｌｓｏｆｂｏｔｈｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓａｎｄｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１７７：８３３８－８３４７，（２００６））。従って、いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞の活性化又は増殖の欠如に関連し得る。

細胞傷害性Ｔリンパ球
標的細胞内で産生されたタンパク質からペプチドを認識するＣＤ８^＋Ｔ細胞は、標的細胞の溶解を引き起こすという点で細胞傷害性を有する。ＣＴＬ誘導性溶解のメカニズムには、標的細胞の膜に挿入してその細胞の溶解を促進できる分子であるパーフォリンのＣＴＬによる産生が含まれる。パーフォリンを介した溶解は、活性化されたＣＴＬによって産生される一連の酵素であるグランザイムによって促進される。多くの活性ＣＴＬはまた、それらの表面に大量のｆａｓリガンドを発現する。ＣＴＬの表面のｆａｓリガンドと標的細胞の表面のｆａｓとの相互作用は、標的細胞のアポトーシスを開始し、これらの細胞の死をもたらす。ＣＴＬを介した溶解は、ウイルスに感染した細胞を破壊するための主要なメカニズムであると考えられる。

リンパ球の活性化
「活性化」又は「リンパ球の活性化」という用語は、ＲＮＡ、タンパク質、及びＤＮＡの合成及びリンホカインの産生をもたらし；その後、様々なエフェクター細胞及びメモリー細胞の増殖及び分化が生じる、特定の抗原、非特異的マイトジェン、又は同族異系細胞によるリンパ球の刺激を指す。Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、クラスＩ又はクラスＩＩＭＨＣ分子の溝に結合したペプチドであるその同族リガンドとの相互作用に依存する。受容体の結合によって引き起こされる分子事象は複雑である。初期のステップでは、チロシンキナーゼの活性化が、いくつかのシグナル伝達経路を制御する一連の基質のチロシンリン酸化をもたらすと考えられる。これらには、ＴＣＲをｒａｓ経路に連結する一連のアダプタータンパク質、ホスホリパーゼＣγ１が含まれ、そのチロシンリン酸化は、その触媒活性を高め、イノシトールリン脂質代謝経路に関与し、細胞内遊離カルシウム濃度の上昇、並びにプロテインキナーゼＣと、細胞の成長及び分化を制御する他の一連の酵素の活性化をもたらす。Ｔ細胞の完全な応答性には、受容体の関与に加えて、アクセサリー細胞が提供する共刺激活性、例えば、ＡＰＣ上のＣＤ８０及び／又はＣＤ８６によるＴ細胞上のＣＤ２８の関与が必要である。

Ｔメモリー細胞
適応免疫応答による病原体の認識と根絶に続いて、Ｔ細胞の大部分（９０～９５％）が、残りの細胞と共にアポトーシスを受け、メモリーＴ細胞、指定セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、及び常在メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）のプールが形成される（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“ＲｅｓｉｄｅｎｔｍｅｍｏｒｙＴｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。

標準的なＴ細胞と比較して、これらのメモリーＴ細胞は、特定の表面マーカーの発現、様々なサイトカインプロファイルの迅速な産生、直接エフェクター細胞機能の能力、独自のホーミング分布パターンなどの異なる表現型で長寿命である。メモリーＴ細胞は、オフェンダー（ｏｆｆｅｎｄｅｒ）の再感染を排除し、それにより免疫系のバランスを迅速に回復するために、それぞれの抗原に再曝露されると迅速な応答を示す。自己免疫メモリーＴ細胞が自己免疫疾患の処置又は治癒のほとんどの試みを妨げることを実証する証拠が増えている（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“ＲｅｓｉｄｅｎｔｍｅｍｏｒｙＴｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。

免疫活性の増加
本明細書に記載の２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドは、本明細書に記載される免疫細胞、例えば、組織又は対象におけるマクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のいずれか１つ若しくは複数のレベル若しくは活性を増大することによって、組織又は対象の免疫活性を増加させることができる。例えば、一実施形態では、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子は、以下：マクロファージのレベル若しくは活性、単球のレベル若しくは活性、樹状細胞のレベル若しくは活性、Ｔ細胞のレベル若しくは活性、Ｂ細胞のレベル若しくは活性、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えば、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のレベル若しくは活性の１つ若しくは複数を組織又は対象において増加させるのに十分な量で投与される。

いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象におけるマクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及び／又は樹状細胞のレベル若しくは活性を増加させる方法に関し、これは、上記組織又は対象に、核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含み、ここで、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物で処置されていない組織又は対象と比較して、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及び／又は樹状細胞のレベル若しくは活性を増加させるのに十分な量で投与される。

一実施形態では、対象は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、及び／又はＴ細胞のレベル若しくは活性の増加を必要としている。

一実施形態では、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞又は樹状細胞のレベル若しくは活性は、操作ウイルスで処置されていない組織又は対象と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍増加する。

いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象におけるＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル若しくは活性を増加させる方法に関し、これは、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物で処置されていない組織又は対象と比較して、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル若しくは活性を増加させるのに十分な量で、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を対象に投与することを含む。

一態様では、対象は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル若しくは活性の増加を必要としている。

一実施形態において、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ３＋細胞のレベル若しくは活性は、操作ウイルスで処置されていない組織又は対象と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍増加する。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドはまた、免疫細胞によって産生される免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を増加させることによって、細胞、組織又は対象の免疫活性を増加させ得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物は、免疫細胞によって産生される免疫促進性サイトカインのレベル若しくは活性を細胞、組織又は対象において増加させるのに十分な量で投与される。一実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７及びＧＭＣＳＦから選択される。

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の免疫細胞において炎症誘発性転写応答を誘導する方法、例えば、組織又は対象の免疫細胞においてＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達、及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導する方法に関し、これは、組織又は対象に、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を、免疫細胞におけるＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達、及び／又は免疫細胞におけるＳＴＡＴシグナル伝達の炎症誘発性転写応答を誘導するのに十分な量で投与することを含む。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドはまた、核酸の細胞内センサー、例えば、インターフェロン遺伝子の刺激物質（ＳＴＩＮＧ）を介したシグナル伝達の調節によって、細胞、組織又は対象の免疫活性を増加させることができる。

いくつかの態様では、本開示は、核酸の細胞内センサー、例えば、インターフェロン遺伝子の刺激物質（ＳＴＩＮＧ）を介したシグナル伝達の調節によって細胞、組織又は対象の免疫活性を増加させる方法に関し、これは、組織又は対象に、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を、核酸の細胞内センサー、例えば、インターフェロン遺伝子の刺激物質（ＳＴＩＮＧ）を介したシグナル伝達の調節によって細胞、組織又は対象の免疫活性を増加させるのに十分な量で投与することを含む。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドはまた、本明細書に記載の免疫細胞において炎症誘発性転写応答を誘導することによって、例えば、活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦｋＢ）経路、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）シグナル伝達、及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導することによって、細胞、組織又は対象の免疫活性を増加させ得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物は、免疫細胞においてＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達、及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導するに十分な量で投与される。

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の免疫細胞において炎症誘発性転写応答を誘導する方法、例えば、組織又は対象の免疫細胞においてＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達、及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導する方法に関し、これは、組織又は対象に、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を投与することを含み、ここで、上記核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、免疫細胞におけるＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達、及び／又は免疫細胞におけるＳＴＡＴシグナル伝達の炎症誘発性転写応答を誘導するのに十分な量で投与される。特定の実施形態において、免疫応答の増加は、ＩＲＦ活性の増加を含む。特定の実施形態では、免疫応答の増加は、ＮＦｋＢ活性の増加を含む。

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドはまた、抗体応答の誘導又は調節によって組織又は対象の免疫活性を増加させることもできる。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物は、組織又は対象において抗体応答を誘導又は調節するのに十分な量で投与される。

いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象の免疫細胞における抗体応答の誘導又は調節によって組織又は対象の免疫活性を増加させる方法に関し、これは、組織又は対象に、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を投与することを含み、ここで、上記核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、上記核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物で処置されていない組織又は対象と比較して、組織又は対象の免疫活性を増加させるのに十分な量で投与される。

いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織又は対象における免疫促進性サイトカインのレベル若しくは活性を増加させる方法に関し、これは、細胞、組織又は対象に、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物を投与することを含み、ここで、上記核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、上記核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物で処置されていない細胞、組織又は対象と比較して、免疫促進性サイトカインのレベル若しくは活性を増加させるのに十分な量で投与される。

一実施形態では、対象は、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の増加を必要としている。

一実施形態では、免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物で処置されていない組織又は対象と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍、若しくは１０倍増加する。

一実施形態では、免疫促進性サイトカインは、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７及びＧＭＣＳＦから選択される。

本明細書に記載の２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの組み合わせは、各タノトランスミッションポリペプチド単独と比較して免疫応答を増加させ得る。例えば、一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を対象に投与すると、１つのタノトランスミッションポリペプチドしかコードしない核酸分子を投与される対象と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。例えば、一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦだけをコードする組換え核酸分子を投与される対象と比較して且つ／又はＲＩＰＫ３だけをコードする組換え核酸分子を投与される対象と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。

カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドを２種以上のタノトランスミッションポリペプチドに付加すると、２種以上のタノトランスミッションポリペプチド単独と比較して、免疫応答が増大し得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のように２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードすると共に、本明細書に記載のようにカスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする組換え核酸分子を対象に投与すると、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはコードしない核酸分子を投与される対象と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。例えば、一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、及びカスパーゼ活性を阻害するポリペプチド（例えば、ｖＩＣＡ、ＦＡＤＤ－ＤＮ若しくはｃＦＬＩＰ）をコードする組換え核酸分子を投与すると、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びｖＩＣＡをコードする組換え核酸分子を投与すると、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードするが、ｖＩＣＡをコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＩＲＦ活性を増加させる）。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドに１つ若しくは複数のガスダーミンポリペプチドを含有させると、ガスダーミンを含まない１つ若しくは複数のタノトランスミッションポリペプチドと比較して、免疫応答が増大し得る。例えば、一部の実施形態では、少なくとも１つのガスダーミンと１つ若しくは複数の追加のタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を投与すると、１つ若しくは複数の追加のタノトランスミッションポリペプチドだけをコードする核酸分子と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及び少なくとも１つのガスダーミン（例えば、ガスダーミンＥ）をコードする組換え核酸分子を投与すると、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３だけをコードする核酸分子と比較して、免疫応答が増大する（例えば、ＮＦｋＢ活性を増加させる、ＩＲＦ活性を増加させる、且つ／又は本明細書に記載される免疫細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋若しくはＣＤ３＋Ｔ細胞）のうちのいずれか１つ又は複数のレベル若しくは活性を増加させる）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＥをコードする組換え核酸分子を投与すると、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３だけをコードする核酸分子と比較して、ＩＲＦ活性を増加させる。

一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物を投与する前に、以下：マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、若しくはＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；Ｂ細胞のレベル又は活性、及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の１つ若しくは複数について、細胞、組織又は対象を評価するステップをさらに含む。

一部の実施形態では、本発明の方法は、さらに、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は医薬組成物の投与後に、以下：ＮＦｋＢ、ＩＲＦ若しくはＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞若しくはＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；免疫促進性サイトカインのレベル又は活性の１つ若しくは複数について、細胞、組織又は対象を評価するステップをさらに含む。

ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を測定する方法は当技術分野で公知である。

例えば、ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのタンパク質のレベル又は活性は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット又はインサイチューハイブリダイゼーションを含む当技術分野で公知の適切な技術によって測定することができる。ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）のレベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅反応、逆転写酵素ＰＣＲ分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、一本鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、ミスマッチ切断検出、ヘテロ二重鎖分析、ノーザンブロット分析、インサイチューハイブリダイゼーション、アレイ分析、デオキシリボ核酸配列決定、制限断片長多型分析、及びそれらの組み合わせ又は部分的な組み合わせを含む当技術分野で公知の適切な技術を用いて測定することができる。

マクロファージのレベル及び活性を測定するための方法は、例えば、Ｃｈｉｔｕｅｔａｌ．，２０１１，ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＩｍｍｕｎｏｌ１４：１－３３に記載されている。単球のレベル及び活性は、例えば、Ｈｅｎｎｉｎｇｅｔａｌ．，２０１５，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ４２３：７８－８４に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。樹状細胞のレベル及び活性は、例えば、Ｄｉｘｏｎｅｔａｌ．，２００１，ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ．６９（７）：４３５１－４３５７に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。これらの参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Ｔ細胞のレベル又は活性は、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞ベースの増殖アッセイを使用して評価することができる。例えば、細胞は、蛍光色素５，６－カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識されている。増殖するこれらの細胞は、フローサイトメトリーによって直接測定されるＣＦＳＥ蛍光強度の低下を示す。別法では、放射性チミジンの取り込みを使用して、Ｔ細胞の増殖速度を評価することができる。

いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化の低下に関連し得る。機能的活性Ｔｒｅｇは、インビトロでのＴｒｅｇ抑制アッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイは、ＣｏｌｌｉｎｓｏｎａｎｄＶｉｇｎａｌｉに記載されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ．２０１１；７０７：２１－３７）。

免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞で定量することができる。実施形態では、免疫促進性サイトカインは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ－α）、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、ＩＬ－１７、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）から選択される。定量は、抗原刺激に応答して所与のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α）を分泌するＴ細胞を検出するＥＬＩＳＰＯＴ（酵素結合免疫スポット）技術を使用して行うことができる。Ｔ細胞は、例えば抗ＩＦＮ－α抗体でコーティングされたウェル内で抗原提示細胞と共に培養される。分泌されたＩＦＮ－αは、コーティングされた抗体によって捕捉され、発色基質に結合した二次抗体で明らかになる。従って、局所的に分泌されたサイトカイン分子はスポットを形成し、各スポットは１つのＩＦＮ－α分泌細胞に対応する。スポットの数により、分析されたサンプル中の所与の抗原に特異的なＩＦＮ－α分泌細胞の頻度を決定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＴＮＦ－α、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、及びＧＭＣＳＦの検出についても説明されている。

ＶＩＩ．癌の治療方法
本明細書に提供されるように、標的細胞を２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドと接触させると、例えば、標的細胞における２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドの発現を通して、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することができ、そのため、例えば、癌の治療のための免疫療法に関与するものなどの免疫細胞機能を増強することができる。従って、特定の態様において、本開示は、それを必要とする対象の癌を治療する方法に関し、この方法は、核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞、又は本明細書に記載の医薬組成物を、癌を治療するのに十分な量及び時間で対象に投与することを含む。

免疫系が自己と非自己を区別するのを防止する、様々な複雑で重複するメカニズムを利用する癌細胞の能力は、免疫監視を回避するための癌の基本的なメカニズムを表している。メカニズムには、抗原提示の阻害、Ｔ細胞の活性化又は阻害を制御する調節経路の破壊（免疫チェックポイント調節）、免疫抑制に寄与する細胞（Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ）の動員、又は免疫活性に影響を与える因子（ＩＤＯ、ＰＧＥ２）の放出が含まれる（それぞれの内容がその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｒｉｓｅｔａｌ．，２０１３，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＣａｎｃｅｒ１：１２；Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，２０１３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３９：１；Ｐａｒｄｏｌｌ，ｅｔａｌ．，２０１２，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ：Ｃａｎｃｅｒ１２：２５２；ａｎｄＳｈａｒｍａｅｔａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ１６１：２０５を参照）。

本明細書に記載の方法を用いた処置の対象となる癌は、例えば、哺乳動物に見出されるあらゆる種類の癌又は新生物又は悪性腫瘍を含み、限定はされないが、肉腫、黒色腫、癌腫、白血病、及びリンパ腫を含む。

「肉腫」という用語は、一般に胚性結合組織のような物質から成り、且つ、概して線維状又は均質な物質に埋め込まれた密集した細胞から構成される腫瘍を指す。本発明の方法で処置することができる肉腫の例としては、例えば、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシ肉腫（Ａｂｅｍｅｔｈｙ’ｓｓａｒｃｏｍａ）、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、肺巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫（ｃｈｌｏｒｏｍａｓａｒｃｏｍａ）、絨毛膜癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢肉腫（ｓｅｒｏｃｙｓｔｉｃｓａｒｃｏｍａ）、滑膜肉腫、子宮肉腫、粘液性脂肪肉腫、平滑筋肉腫、紡錘細胞肉腫、線維形成性肉腫（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃｓａｒｃｏｍａ）、及び毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。

「黒色腫」という用語は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。本発明の方法で処置することができる黒色腫には、例えば、末端黒子型黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング－パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、及び表在拡大型黒色腫が含まれる。

「癌腫」という用語は、周囲の組織に浸潤して転移を引き起こす傾向がある上皮細胞からなる悪性の悪性新生物を指す。本明細書に記載されるように本発明の方法で処置することができる癌腫として、例えば、以下のものが挙げられる：腺房癌、腺房細胞癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺腫様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質癌、肺胞上皮癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、肺類基底細胞癌（ｂａｓａｌｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底扁平上皮癌（ｂａｓｏｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支肺胞上皮癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏａｌｖｅｏｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛膜癌、コロイド癌、結腸の結腸腺癌、面疱癌、子宮体癌（ｃｏｒｐｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、篩状癌（ｃｒｉｂｒｉｆｏｒｍｃａｒｃｉｎｏｍａ）、鎧状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｅｎｃｕｉｒａｓｓｅ）、皮膚癌、円柱状癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱状細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺管癌、硬膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｄｕｒｕｍ）、胎児性癌（ｅｍｂｒｙｏｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脳様癌（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、類表皮癌（ｅｐｉｅｒｍｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮性腺様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、外向発育癌（ｅｘｏｐｈｙｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ）、潰瘍癌、線維性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｆｉｂｒｏｓｕｍ）、膠様癌、膠様腺癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨大細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血様癌（ｈｅｍａｔｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子質癌（ｈｙａｌｉｎｅｃａｒｃｉｎｏｍａ）、副腎様癌（ｈｙｐｅｍｅｐｈｒｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小児胎児性癌（ｉｎｆａｎｔｉｌｅｅｍｂｒｙｏｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ’ｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クルキツキー細胞癌（Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ－ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫性癌（ｌｉｐｏｍａｔｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄質癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｏｌｌｅ）、メルケル細胞癌、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液分泌癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、粘膜表皮癌、粘液性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｏｓｕｍ）、粘膜癌、粘液腫様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｙｘｏｍａｔｏｄｅｓ）、鼻咽腔癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲性癌種（ｐｅｒｉｐｏｒｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、前浸潤癌、棘細胞癌、粥状癌種（ｐｕｌｔａｃｅｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓の腎細胞癌、貯蔵細胞癌、肉腫性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｓａｒｃｏｍａｔｏｄｅｓ）、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞精巣癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、紐様癌（ｓｔｒｉｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣贅性癌（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮頸部扁平上皮癌、扁桃扁平上皮細胞癌（ｔｏｎｓｉｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、及び絨毛癌。特定の実施形態では、癌は腎細胞癌である。

「白血病」という用語は、「芽球」と呼ばれる未熟白血球の異常な増加を特徴とする血液又は骨髄の癌の一種を指す。白血病は、様々な疾患を網羅する広義の用語である。次に、白血病は、血液、骨髄、及びリンパ系に影響を与えるさらに広範な疾患群の一部であり、これらはすべて血液学的腫瘍として知られている。白血病は、急性リンパ性（又はリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（又は骨髄性又は非リンパ性）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の４つの主要な区分に分類することができる。白血病のさらなる種類には、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、及び成人Ｔ細胞白血病が含まれる。特定の実施形態では、白血病は急性白血病を含む。特定の実施形態では、白血病は慢性白血病を含む。

「リンパ腫」という用語は、リンパ細胞に由来する血球腫瘍群を指す。リンパ腫の２つの主要な種類は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）と非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。リンパ腫には、リンパ組織のあらゆる腫瘍が含まれる。主なクラスは、リンパ液及び血液の両方に属し、両方に広がる白血球の一種であるリンパ球の癌である。

一部の実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド又はトランスポゾン）、細胞及び医薬組成物は、様々なタイプの固形腫瘍、例えば、乳癌（例えば、三重陰性乳癌）、膀胱癌、泌尿生殖器癌、大腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（腎細胞）癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌）、皮膚癌、骨癌、脳腫瘍、子宮頸癌、肝臓癌、胃癌、口腔癌（ｍｏｕｔｈａｎｄｏｒａｌｃａｎｃｅｒ）、食道癌、腺様嚢胞癌、神経芽細胞腫、精巣癌、子宮癌、甲状腺癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、中皮腫、卵巣癌、肉腫、胃癌、子宮癌、子宮頸癌、髄芽細胞腫、及び外陰癌の処置に使用される。特定の実施形態では、皮膚癌には、黒色腫、扁平上皮癌、及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）が含まれる。

特定の実施形態では、癌は、「免疫学的に冷たい」癌、例えば、浸潤Ｔ細胞をほとんど含まない腫瘍、又は認識されず、免疫系による強い応答を引き起こさず、そのため、既存の免疫療法での治療が困難な癌であってもよい。例えば、一実施形態では、癌は、以下：黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍、胃食道癌、大腸癌、膵臓癌、腎臓癌、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、移行細胞癌、神経芽細胞腫、形質細胞腫、ウィルムス腫瘍、及び肝細胞癌（例えば、肝細胞癌）からなる群から選択される。

一部の実施形態では、癌は、免疫療法に応答する癌である。例えば、一部の実施形態では、癌は、免疫チェックポイントモジュレーター療法、例えば、免疫チェックポイント阻害剤療法に応答する。一部の実施形態では、免疫療法に応答性である癌は、以下：頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、メルケル細胞癌、肝細胞癌、進行腎細胞癌、転移性高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）又はミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌（例えば、ＭＳＩ－Ｈ又はｄＭＭＲ大腸癌）、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、トリプルネガティブ乳癌、胃及び食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、ホジキンリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、及び尿路上皮癌（例：局所進行性又は転移性尿路上皮癌）からなる群から選択される。

一実施形態では、癌は、低減したＲＩＰＫ３発現を示す。ＲＩＰＫ３発現の低減は、大腸癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌、副腎皮質癌及び乳癌などのいくつかの癌において報告されている。例えば、ＲＩＰＫ３ｍＲＮＡレベルは、大腸癌、胃癌、及び卵巣癌患者の腫瘍増殖中に徐々に低下し、ＲＩＰＫ３発現の低減は、ヒト前立腺腫瘍、並びに悪性度の高い副腎皮質及び乳房腫瘍における転移への進行にも関連していた。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｎａｊａｆｏｖｅｔａｌ．，２０１８，ＰＬｏＳＢｉｏｌ１６（８）：ｅ２００５７５６を参照されたい。一部の実施形態では、癌は、対応する非癌性細胞と比較して、低下したＲＩＰＫ３発現を示し、例えば、非癌性卵巣細胞と比較して、低下したＲＩＰＫ３発現を示す卵巣癌細胞である。一部の実施形態では、癌は、例えば、癌の進行のために、同じ種類の癌細胞と比較して、低下したＲＩＰＫ３発現を示す。一実施形態では、ＲＩＰＫ３発現の低減を示す癌は、大腸癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌、副腎皮質癌及び乳癌からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療法は、別の抗腫瘍（例えば免疫療法）療法による癌の治療に以前失敗した対象に施すことができる。「抗腫瘍療法に失敗した対象」とは、ＲＥＣＩＳＴ１．１基準に基づく抗腫瘍療法による処置に応答しない、若しくは応答しなくなった、即ち、標的病変における完全寛解、部分寛解、若しくは安定した疾患を達成しないか；又は、抗腫瘍療法の最中又は完了後のいずれかで、単独で又は外科手術及び／又は放射線療法と組み合わせて、非標的病変の完全寛解又は非ＣＲ／非ＰＤを達成しない癌対象であり、この外科手術及び／又は放射線療法は、可能であれば、多くの場合、抗腫瘍療法と組み合わせて臨床的に必要である。ＲＥＣＩＳＴ１．１基準は、例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒｅｔａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４５：２２８－２４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、以下でより詳細に論じられる。失敗した抗腫瘍療法は、例えば、腫瘍の増殖、腫瘍量の増加、及び／又は腫瘍の転移をもたらす。本明細書で使用される失敗した抗腫瘍療法には、用量制限毒性、例えば、抗腫瘍剤による処置の継続若しくは再開を可能にするために解決できないグレードＩＩＩ若しくはグレードＩＶ毒性のために終了した治療計画、又は毒性を引き起こした療法が含まれる。一実施形態では、対象は、１つ又は複数の抗血管新生剤の投与を含む抗腫瘍療法による処置に失敗している。

失敗した抗腫瘍療法には、長期間、例えば、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、又は臨床的に定義される治癒よりも短い任意の期間にわたって、すべての標的及び非標的病変に対して少なくとも疾患の安定が得られない治療計画が含まれる。失敗した抗腫瘍療法には、抗腫瘍剤による処置中に少なくとも１つの標的病変の進行性疾患が生じる治療計画、又は治療計画の終了から２週間未満、１ヶ月未満、２ヶ月未満、３ヶ月未満、４ヶ月未満、５ヶ月未満、６ヶ月未満、１２ヶ月未満、若しくは１８ヶ月未満で、又は臨床的に定義される治癒よりも短い任意の期間未満で進行性疾患が生じる治療計画が含まれる。

失敗した抗腫瘍療法には、癌の処置を受けた対象が臨床的に定義される治癒、例えば治療計画の終了から５年間で完全寛解を達成し、その後、対象が、例えば、治療計画の終了から５年超、６年超、７年超、８年超、９年超、１０年超、１１年超、１２年超、１３年超、１４年超、又は１５年超してから異なる癌と診断される治療計画は含まれない。

ＲＥＣＩＳＴ基準は、臨床的に認められた評価基準であり、固形腫瘍測定への標準的なアプローチを提供するため、及び臨床試験で使用するための腫瘍サイズの変化の客観的評価の定義を提供するために使用される。このような基準は、固形腫瘍の処置を受けている個人の寛解を監視するためにも使用することができる。ＲＥＣＩＳＴ１．１基準については、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒｅｔａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ４５：２２８－２４で詳細に議論されている。標的病変の寛解基準は次の通りである。

完全寛解（ＣＲ）：すべての標的病変の消失。あらゆる病理学的リンパ節（標的又は非標的）が、短軸において１０ｍｍ未満まで縮小しなければならない。

部分寛解（ＰＲ）：ベースラインの合計直径を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも３０％減少する。

進行性疾患（ＰＤ）：試験における最小合計を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも２０％増加する（これには、試験における最小の場合、ベースライン合計が含まれる）。２０％の相対的な増加に加えて、合計は少なくとも５ｍｍの絶対的な増加も示さなければならない（注：１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる）。

安定した疾患（ＳＤ）：試験中の最小の合計直径を基準として、ＰＲを満たす十分な収縮もＰＤを満たす十分な増加もない。

ＲＥＣＩＳＴ１．１基準では、測定可能であり得るが、測定する必要がなく、所望の時点でのみ定性的に評価する必要がある病変として定義される非標的病変も考慮される。非標的病変の寛解基準は次の通りである。

完全寛解（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失と腫瘍マーカーレベルの正常化。すべてのリンパ節は、そのサイズが非病理学的でなければならない（短軸で１０ｍｍ未満）。

非ＣＲ／非ＰＤ：１つ又は複数の非標的病変の持続及び／又は正常限界を超える腫瘍マーカーレベルの維持。

進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明確な進行。１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる。非標的疾患に基づく「明確な進行」を達成するには、たとえ標的疾患にＳＤ又はＰＲが存在したとしても、治療法の中止に値するのに十分に全腫瘍量が増加するように、非標的疾患の全体的なレベルが大幅に悪化する必要がある。１つ又は複数の非標的病変のサイズの中程度の「増加」は、通常は明確な進行状態を満たすのに十分ではない。従って、標的疾患におけるＳＤ又はＰＲにもかかわらず、非標的疾患の変化のみに基づく全体的な進行の決定は非常にまれである。

一部の実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物及び併用療法は、難治性癌を有する対象に投与することができる。「難治性癌」とは、外科手術が効果的ではない悪性腫瘍であり、最初から化学療法若しくは放射線療法に反応しないか、又は時間の経過と共に化学療法若しくは放射線療法に反応しなくなるかのいずれかである。

本発明はさらに、対象の腫瘍細胞増殖を阻害する方法も提供し、これは、腫瘍細胞増殖が阻害されるように、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、癌の処置は、対照、例えば、本明細書に記載の核酸分子、ベクター、細胞又は医薬組成物で処置されていない対象と比較して、生存期間を延長するか、又は腫瘍進行までの時間を延長することを含む。特定の実施形態では、対象はヒト対象である。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の初回用量の投与前に、癌（例えば腫瘍）を有すると識別される。特定の実施形態では、対象は、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の初回投与時に、癌（例えば、腫瘍）を有する。

一実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、以下：癌細胞の増殖の抑制、癌細胞の転移の抑制、腫瘍の新生血管形成の抑制、腫瘍量の減少、腫瘍サイズ、重量若しくは体積の減少、腫瘍成長の阻害、癌の進行までの時間の増加、及び／又は腫瘍性障害を有する対象の生存期間の延長のうちの１つ若しくは複数をもたらす。特定の実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、核酸分子、ベクター、細胞又は医薬組成物を投与されていない対応する対照対象と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％若しくは５００％、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は対象の生存期間を延長する。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、核酸分子、ベクター、細胞又は医薬組成物を投与されていない腫瘍性障害に罹患した対照対象の対応する集団と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％若しくは５００％、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は腫瘍性障害に罹患した対象の集団の生存期間を延長する。一部の実施形態では、癌細胞の増殖は、対象に施された癌療法から起こる癌細胞の過剰増殖である。一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、処置前に進行性腫瘍性障害を有する対象の腫瘍性障害を安定化させる。

本明細書に記載されるような２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドの組み合わせは、各タノトランスミッションポリペプチド単独よりも大幅に癌治療を改善し得る。例えば、一部の実施形態では、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を対象に投与すると、１つのタノトランスミッションポリペプチドだけをコードする核酸分子を投与された対象と比較して、癌治療が改善される（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。例えば、一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦだけをコードする組換え核酸分子を投与される対象と比較して、及び／又はＲＩＰＫ３だけをコードする組換え核酸分子を投与される対象と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦだけをコードする組換え核酸分子を投与される対象と比較して、癌（例えば、大腸癌）治療を改善する（例えば、生存期間を延長する）。

カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドを２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドに付加すると、２つ以上のタノトランスミッションポリペプチド単独と比べて癌治療が改善され得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載される２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードし、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする組換え核酸分子の対象への投与は、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする核酸分子を投与するが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはコードしない核酸を投与された対象と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。例えば、一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びカスパーゼ活性を阻害するポリペプチド（例えば、ｖＩＣＡ、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はｃＦＬＩＰ）をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びｖＩＣＡをコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードするが、ｖＩＣＡをコードしない核酸分子を投与される対象と比較して、癌（例えば、大腸癌）治療を改善する（例えば、腫瘍増殖を低減する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びＦＡＤＤ－ＤＮをコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３をコードするが、ＦＡＤＤ－ＤＮはコードしない核酸分子を投与される対象と比較して、癌（例えば、大腸癌）治療を改善する（例えば、腫瘍増殖を低減する）。

２つ以上のタノトランスミッションポリペプチドに１つ又は複数のガスダーミンポリペプチドを含有させると、ガスダーミンを含まない１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドと比較して癌治療を改善し得る。例えば、一部の実施形態では、少なくとも１つのガスダーミン（例えば、ガスダーミンＥ）と１つ又は複数の追加のタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子の投与は、１つ又は複数の追加のタノトランスミッションポリペプチドだけをコードする核酸分子と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びガスダーミン（例えば、ガスダーミンＥ）をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦだけをコードする核酸分子と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及び少なくとも１つのガスダーミン（例えば、ガスダーミンＥ）をコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３だけをコードする核酸分子と比較して、癌治療を改善する（例えば、癌細胞の増殖を抑制し、癌細胞の転移を抑制し、腫瘍の新生血管形成を抑制し、腫瘍量を減少させ、腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、腫瘍増殖を阻害し、癌の進行までの時間を増加させ、且つ／又は癌を有する対象の生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＥをコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦだけをコードする組換え核酸分子の投与と比較して、癌（例えば、大腸癌）の治療を改善する（例えば、生存期間を延長する）。一部の実施形態では、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３及びガスダーミンＥをコードする組換え核酸分子の投与は、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３だけをコードする組換え核酸分子の投与と比較して、癌（例えば、大腸癌）治療を改善する（例えば、生存期間を延長する）。

本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物、及び追加の治療薬の併用療法
「組み合わせて投与する」、「併用療法」、「同時に投与する」又は「同時投与」という用語は、１又は複数種の追加の治療薬と組み合わせた本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与を指し得る。１又は複数種の追加の治療薬は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与の前、それと同時若しくは実質的に同時、その後、又は間を置いて投与され得る。特定の実施形態では、１又は複数種の追加の治療薬は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与前に投与される。特定の実施形態では、１又は複数種の追加の治療薬は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と同時に投与される。特定の実施形態では、１又は複数種の追加の治療薬は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与後に投与される。

１又は複数種の追加の治療薬と、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、相加的又は相乗的に作用する。一実施形態において、１又は複数種の追加の治療薬と、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、相乗的に作用する。いくつかの実施形態では、相乗効果は、腫瘍性障害又は感染症の処置に際して生じる。例えば、一実施形態において、１又は複数種の追加の治療薬と、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物との組み合わせは、癌に対する免疫応答の持続性を向上させ、即ち、その持続時間を延長する。一部の実施形態では、１又は複数種の追加の治療薬と、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物は、相加的に作用する。

１．免疫チェックポイントモジュレーター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と組み合わせて投与される追加の治療薬は、免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターである。免疫チェックポイント分子の例を以下に挙げる：ＬＡＧ－３（Ｔｒｉｅｂｅｌｅｔａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５）、ＴＩＭ－３（Ｓａｋｕｉｓｈｉｅｔａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１８７－２１９４）、ＶＩＳＴＡ（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７－５９２）、ＩＣＯＳ（Ｆａｎｅｔａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１：７１５－７２５）、ＯＸ４０（Ｃｕｒｔｉｅｔａｌ．，２０１３，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．７３：７１８９－７１９８）及び４－１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏｅｔａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：６８２－６８５）。

免疫チェックポイントは、刺激性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を刺激する分子）又は抑制性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を抑制する分子）であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイントのアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、２つ以上の免疫チェックポイントに結合するか、又はその活性を調節することができる。刺激性及び抑制性免疫チェックポイントの例、並びに本発明の方法で使用できるこれらの免疫チェックポイントを調節する分子の例が以下に示される。

ｉ．刺激性免疫チェックポイント分子
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を支援し、Ｔ細胞記憶の生成に不可欠である（例えば、Ｈｅｎｄｒｉｋｓｅｔａｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１（５）：４３３－４０を参照）。ＣＤ２７は、Ｂ細胞の記憶マーカーでもある（例えば、Ａｇｅｍａｔｓｕｅｔａｌ．（２０００）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１５（２）：５７３－６を参照）。ＣＤ２７活性は、リンパ球及び樹状細胞上のそのリガンドであるＣＤ７０の一時的な有効性によって支配される（例えば、Ｂｏｒｓｔｅｔａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（３）：２７５－８１を参照）。ＣＤ２７に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２７抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、バリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）（ＣｅｌｌｄｅｘＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）である。追加のＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２４８，１８３号明細書、同第９，１０２，７３７号明細書、同第９，１６９，３２５号明細書、同第９，０２３，９９９号明細書、同第８，４８１，０２９号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１８５８７０号明細書、同第２０１５／０３３７０４７号明細書、同第２０１５／０２９９３３０号明細書、同第２０１４／０１１２９４２号明細書、同第２０１３／０３３６９７６号明細書、同第２０１３／０２４３７９５号明細書、同第２０１３／０１８３３１６号明細書、同第２０１２／０２１３７７１号明細書、同第２０１２／００９３８０５号明細書、同第２０１１／０２７４６８５号明細書、同第２０１０／０１７３３２４号明細書；並びに国際公開第２０１５／０１６７１８号パンフレット、同第２０１４／１４０３７４号パンフレット、同第２０１３／１３８５８６号パンフレット、同第２０１２／００４３６７号パンフレット、同第２０１１／１３０４３４号パンフレット、同第２０１０／００１９０８号パンフレット、及び同第２００８／０５１４２４号パンフレットに開示されている。

ＣＤ２８．分化抗原群２８（ＣＤ２８）は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供するＴ細胞で発現するタンパク質の１つである。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に加えてＣＤ２８を介したＴ細胞刺激は、様々なインターロイキン（特にＩＬ－６）の産生のための強力なシグナルを提供することができる。樹状細胞で発現するその２つのリガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６との結合は、Ｔ細胞の増殖を促進する（例えば、Ｐｒａｓａｄｅｔａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（７）：２８３４－８を参照）。ＣＤ２８に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｄ２８結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＡＢ０８（ＴｈｅｒａＭａｂＬＬＣ）、ルリズマブ（ｌｕｌｉｚｕｍａｂ）（ＢＭＳ－９３１６９９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）としても知られている）、及びＦＲ１０４（ＯＳＥＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択される。追加のＣＤ２８結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１１９，８４０号明細書、同第８，７０９，４１４号明細書、同第９，０８５，６２９号明細書、同第８，０３４，５８５号明細書、同第７，９３９，６３８号明細書、同第８，３８９，０１６号明細書、同第７，５８５，９６０号明細書、同第８，４５４，９５９号明細書、同第８，１６８，７５９号明細書、同第８，７８５，６０４号明細書、同第７，７２３，４８２号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００１７０３９号明細書、同第２０１５／０２９９３２１号明細書、同第２０１５／０１５０９６８号明細書、同第２０１５／００７１９１６号明細書、同第２０１５／０３７６２７８号明細書、同第２０１３／００７８２５７号明細書、同第２０１３／０２３０５４０号明細書、同第２０１３／００７８２３６号明細書、同第２０１３／０１０９８４６号明細書、同第２０１３／０２６６５７７号明細書、同第２０１２／０２０１８１４号明細書、同第２０１２／００８２６８３号明細書、同第２０１２／０２１９５５３号明細書、同第２０１１／０１８９７３５号明細書、同第２０１１／００９７３３９号明細書、同第２０１０／０２６６６０５号明細書、同第２０１０／０１６８４００号明細書、同第２００９／０２４６２０４号明細書、同第２００８／００３８２７３号明細書；並びに国際公開第２０１５１９８１４７号パンフレット、同第２０１６／０５４２１号パンフレット、同第２０１４／１２０９１６８号パンフレット、同第２０１１／１０１７９１号パンフレット、同第２０１０／００７３７６号パンフレット、同第２０１０／００９３９１号パンフレット、同第２００４／００４７６８号パンフレット、同第２００２／０３０４５９号パンフレット、同第２００２／０５１８７１号パンフレット、及び同第２００２／０４７７２１号パンフレットに開示されている。

ＣＤ４０．分化抗原群４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５としても知られている）は、抗原提示細胞を含む様々な免疫系細胞に見られる。別名ＣＤ１５４として知られているＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０のリガンドであり、活性化されたＣＤ４^＋Ｔ細胞の表面に一過性に発現する。ＣＤ４０シグナル伝達は、樹状細胞を「許可（ｌｉｃｅｎｓｅ）して」成熟させ、それによりＴ細胞の活性化及び分化を引き起こすことが知られている（例えば、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎｅｔａｌ．（２００３）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（１）：８３－１０７を参照）。ＣＤ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ダセツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）、ＣＰ－８７０、８９３（Ｐｆｉｚｅｒ）、ブレセルマブ（ＡｓｔｅｌｌａｓＰｈａｒｍａ）、ルカツムマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＦＺ５３３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；例えば、Ｃｏｒｄｏｂａｅｔａｌ．（２０１５）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１５（１１）：２８２５－３６を参照）、ＲＧ７８７６（ＧｅｎｅｎｔｅｃｈＩｎｃ．）、ＦＦＰ１０４（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｂ．Ｖ．）、ＡＰＸ００５（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）、ＢＩ６５５０６４（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＣｈｉＬｏｂ７／４（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＵＫ；例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｔａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２１（６）：１３２１－８を参照）、ＡＤＣ－１０１３（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ＳＥＡ－ＣＤ４０（ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓ）、ＸｍＡｂ５４８５（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＰＧ１２０（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓＢ．Ｖ．）、テネリキシマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ；例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎｅｔａｌ．（２０１１）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１１（５）：９４７－５７を参照）、及びＡＫＨ３（Ｂｉｏｇｅｎ；例えば、国際公開第２０１６／０２８８１０号パンフレットを参照）からなる群から選択されるＣＤ４０結合タンパク質である。追加のＣＤ４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２３４，０４４号明細書、同第９，２６６，９５６号明細書、同第９，１０９，０１１号明細書、同第９，０９０，６９６号明細書、同第９，０２３，３６０号明細書、同第９，０２３，３６１号明細書、同第９，２２１，９１３号明細書、同第８，９４５，５６４号明細書、同第８，９２６，９７９号明細書、同第８，８２８，３９６号明細書、同第８，６３７，０３２号明細書、同第８，２７７，８１０号明細書、同第８，０８８，３８３号明細書、同第７，８２０，１７０号明細書、同第７，７９０，１６６号明細書、同第７，４４５，７８０号明細書、同第７，３６１，３４５号明細書、同第８，９６１，９９１号明細書、同第８，６６９，３５２号明細書、同第８，９５７，１９３号明細書、同第８，７７８，３４５号明細書、同第８，５９１，９００号明細書、同第８，５５１，４８５号明細書、同第８，４９２，５３１号明細書、同第８，３６２，２１０号明細書、同第８，３８８，９７１号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００４５５９７号明細書、同第２０１６／０１５２７１３号明細書、同第２０１６／００７５７９２号明細書、同第２０１５／０２９９３２９号明細書、同第２０１５／００５７４３７号明細書、同第２０１５／０３１５２８２号明細書、同第２０１５／０３０７６１６号明細書、同第２０１４／００９９３１７号明細書、同第２０１４／０１７９９０７号明細書、同第２０１４／０３４９３９５号明細書、同第２０１４／０２３４３４４号明細書、同第２０１４／０３４８８３６号明細書、同第２０１４／０１９３４０５号明細書、同第２０１４／０１２０１０３号明細書、同第２０１４／０１０５９０７号明細書、同第２０１４／０２４８２６６号明細書、同第２０１４／００９３４９７号明細書、同第２０１４／００１０８１２号明細書、同第２０１３／００２４９５６号明細書、同第２０１３／００２３０４７号明細書、同第２０１３／０３１５９００号明細書、同第２０１２／００８７９２７号明細書、同第２０１２／０２６３７３２号明細書、同第２０１２／０３０１４８８号明細書、同第２０１１／００２７２７６号明細書、同第２０１１／０１０４１８２号明細書、同第２０１０／０２３４５７８号明細書、同第２００９／０３０４６８７号明細書、同第２００９／０１８１０１５号明細書、同第２００９／０１３０７１５号明細書、同第２００９／０３１１２５４号明細書、同第２００８／０１９９４７１号明細書、同第２００８／００８５５３１号明細書、同第２０１６／０１５２７２１号明細書、同第２０１５／０１１０７８３号明細書、同第２０１５／００８６９９１号明細書、同第２０１５／００８６５５９号明細書、同第２０１４／０３４１８９８号明細書、同第２０１４／０２０５６０２号明細書、同第２０１４／０００４１３１号明細書、同第２０１３／００１１４０５号明細書、同第２０１２／０１２１５８５号明細書、同第２０１１／００３３４５６号明細書、同第２０１１／０００２９３４号明細書、同第２０１０／０１７２９１２号明細書、同第２００９／００８１２４２号明細書、同第２００９／０１３００９５号明細書、同第２００８／０２５４０２６号明細書、同第２００８／００７５７２７号明細書、同第２００９／０３０４７０６号明細書、同第２００９／０２０２５３１号明細書、同第２００９／０１１７１１１号明細書、同第２００９／００４１７７３号明細書、同第２００８／０２７４１１８号明細書、同第２００８／００５７０７０号明細書、同第２００７／００９８７１７号明細書、同第２００７／０２１８０６０号明細書、同第２００７／００９８７１８号明細書、同第２００７／０１１０７５４号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９９１９号パンフレット、同第２０１６／０２３９６０号パンフレット、同第２０１６／０２３８７５号パンフレット、同第２０１６／０２８８１０号パンフレット、同第２０１５／１３４９８８号パンフレット、同第２０１５／０９１８５３号パンフレット、同第２０１５／０９１６５５号パンフレット、同第２０１４／０６５４０３号パンフレット、同第２０１４／０７０９３４号パンフレット、同第２０１４／０６５４０２号パンフレット、同第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１３／０３４９０４号パンフレット、同第２０１２／１２５５６９号パンフレット、同第２０１２／１４９３５６号パンフレット、同第２０１２／１１１７６２号パンフレット、同第２０１２／１４５６７３号パンフレット、同第２０１１／１２３４８９号パンフレット、同第２０１０／１２３０１２号パンフレット、同第２０１０／１０４７６１号パンフレット、同第２００９／０９４３９１号パンフレット、同第２００８／０９１９５４号パンフレット、同第２００７／１２９８９５号パンフレット、同第２００６／１２８１０３号パンフレット、同第２００５／０６３２８９号パンフレット、同第２００５／０６３９８１号パンフレット、同第２００３／０４０１７０号パンフレット、同第２００２／０１１７６３号パンフレット、同第２０００／０７５３４８号パンフレット、同第２０１３／１６４７８９号パンフレット、同第２０１２／０７５１１１号パンフレット、同第２０１２／０６５９５０号パンフレット、同第２００９／０６２０５４号パンフレット、同第２００７／１２４２９９号パンフレット、同第２００７／０５３６６１号パンフレット、同第２００７／０５３７６７号パンフレット、同第２００５／０４４２９４号パンフレット、同第２００５／０４４３０４号パンフレット、同第２００５／０４４３０６号パンフレット、同第２００５／０４４８５５号パンフレット、同第２００５／０４４８５４号パンフレット、同第２００５／０４４３０５号パンフレット、同第２００３／０４５９７８号パンフレット、同第２００３／０２９２９６号パンフレット、同第２００２／０２８４８１号パンフレット、同第２００２／０２８４８０号パンフレット、同第２００２／０２８９０４号パンフレット、同第２００２／０２８９０５号パンフレット、同第２００２／０８８１８６号パンフレット、及び同第２００１／０２４８２３号パンフレットに開示されている。

ＣＤ１２２．ＣＤ１２２は、インターロイキン－２受容体ベータサブユニットであり、ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞の増殖を増加させることが知られている。例えば、Ｂｏｙｍａｎｅｔａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２（３）：１８０－１９０を参照されたい。ＣＤ１２２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ１２２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ１２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ヒト化ＭｉＫ－ベータ－１（Ｒｏｃｈｅ；例えば、参照により組み込まれるＭｏｒｒｉｓｅｔａｌ．（２００６）ＰｒｏｃＮａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０３（２）：４０１－６を参照されたい）。追加のＣＤ１２２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，０２８，８３０号明細書に開示されている。

ＯＸ４０．ＯＸ４０受容体（ＣＤ１３４としても知られている）は、エフェクター及びメモリーＴ細胞の増殖を促進する。ＯＸ４０はまた、Ｔ制御性細胞の分化及び活性を抑制し、サイトカインの産生を調節する（例えば、Ｃｒｏｆｔｅｔａｌ．（２００９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９（１）：１７３－９１を参照）。ＯＸ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＯＸ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ６４６９（ＡｇｏｎＯｘ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ポガリズマブ（ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＯＸＲ０９１６及びＲＧ７８８８としても知られている；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、タボリキシズマブ（ｔａｖｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ０５６２としても知られている；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、及びＧＳＫ３１７４９９８（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）からなる群から選択されるＯＸ４０結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＯＸ－４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１６３，０８５号明細書、同第９，０４０，０４８号明細書、同第９，００６，３９６号明細書、同第８，７４８，５８５号明細書、同第８，６１４，２９５号明細書、同第８，５５１，４７７号明細書、同第８，２８３，４５０号明細書、同第７，５５０，１４０号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００６８６０４号明細書、同第２０１６／００３１９７４号明細書、同第２０１５／０３１５２８１号明細書、同第２０１５／０１３２２８８号明細書、同第２０１４／０３０８２７６号明細書、同第２０１４／０３７７２８４号明細書、同第２０１４／００４４７０３号明細書、同第２０１４／０２９４８２４号明細書、同第２０１３／０３３０３４４号明細書、同第２０１３／０２８０２７５号明細書、同第２０１３／０２４３７７２号明細書、同第２０１３／０１８３３１５号明細書、同第２０１２／０２６９８２５号明細書、同第２０１２／０２４４０７６号明細書、同第２０１１／０００８３６８号明細書、同第２０１１／０１２３５５２号明細書、同第２０１０／０２５４９７８号明細書、同第２０１０／０１９６３５９号明細書、同第２００６／０２８１０７２号明細書；並びに国際公開第２０１４／１４８８９５号パンフレット、同第２０１３／０６８５６３号パンフレット、同第２０１３／０３８１９１号パンフレット、同第２０１３／０２８２３１号パンフレット、同第２０１０／０９６４１８号パンフレット、同第２００７／０６２２４５号パンフレット、及び同第２００３／１０６４９８号パンフレットに開示されている。

ＧＩＴＲ．糖質コルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）は、Ｔｒｅｇ、ＣＤ４、及びＣＤ８Ｔ細胞で構成的又は条件付きで発現する腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＧＩＴＲは、ＴＣＲのライゲーション及び活性化に続いて、エフェクターＴ細胞で急速にアップレギュレートされる。ヒトＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）は、二次リンパ器官及び一部の非リンパ組織のＡＰＣで構成的に発現する。ＧＩＴＲ：ＧＩＴＲＬの相互作用の下流効果は、Ｔｒｅｇ活性の減弱を誘発し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性を増強し、結果としてＴｒｅｇを介した免疫抑制が逆転し、免疫刺激が増加する。ＧＩＴＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲに結合する薬剤（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＲＸ５１８（ＬｅａｐＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＭＫ－４１６６（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．）、ＭＥＤＩ－１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＩＮＣＡＧＮ１８７６（Ａｇｅｎｕｓ／Ｉｎｃｙｔｅ）、及びＦＰＡ１５４（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３０９，３２１号明細書、同第９，２５５，１５２号明細書、同第９，２５５，１５１号明細書、同第９，２２８，０１６号明細書、同第９，０２８，８２３号明細書、同第８，７０９，４２４号明細書、同第８，３８８，９６７号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４２号明細書、同第２０１５／０３５３６３７号明細書、同第２０１５／００６４２０４号明細書、同第２０１４／０３４８８４１号明細書、同第２０１４／００６５１５２号明細書、同第２０１４／００７２５６６号明細書、同第２０１４／００７２５６５号明細書、同第２０１３／０１８３３２１号明細書、同第２０１３／０１０８６４１号明細書、同第２０１２／０１８９６３９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０５４６３８号パンフレット、同第２０１６／０５７８４１号パンフレット、同第２０１６／０５７８４６号パンフレット、同第２０１５／１８７８３５号パンフレット、同第２０１５／１８４０９９号パンフレット、同第２０１５／０３１６６７号パンフレット、同第２０１１／０２８６８３号パンフレット、及び同第２００４／１０７６１８号パンフレットに開示されている。

ＩＣＯＳ．誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られている）は、活性化されたＴ細胞で発現される。そのリガンドはＩＣＯＳＬであり、主にＢ細胞及び樹状細胞で発現される。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞エフェクター機能において重要である。ＩＣＯＳの発現は、Ｔ細胞の活性化時にアップレギュレートされる（例えば、Ｆａｎｅｔａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１（４）：７１５－２５を参照）。ＩＣＯＳに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳに結合する薬剤（例えば、抗ＩＣＯＳ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ－５７０（ＪＭａｂ－１３６としても知られている、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＧＳＫ３３５９６０９（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／ＩＮＳＥＲＭ）、及びＪＴＸ－２０１１（ＪｏｕｎｃｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７６，４９３号明細書、同第７，９９８，４７８号明細書、同第７，４６５，４４５号明細書、同第７，４６５，４４４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０２３９９７８号明細書、同第２０１２／００３９８７４号明細書、同第２００８／０１９９４６６号明細書、同第２００８／０２７９８５１号明細書；並びに国際公開第２００１／０８７９８１号パンフレットに開示されている。

４－１ＢＢ．４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーである。４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）は、プライミングされたＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＤＣ、及び好中球で誘導的に発現されるＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、活性化マクロファージ、Ｂ細胞、及びＤＣに見られる４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）に結合するとＴ細胞共刺激分子として機能する。４－１ＢＢ受容体のライゲーションは、ＮＦ－κＢ、ｃ－Ｊｕｎ、及びｐ３８シグナル伝達経路の活性化をもたらし、特に、抗アポトーシス遺伝子ＢｃＬ－ｘ（Ｌ）及びＢｆｌ－１の発現をアップレギュレートすることによってＣＤ８^＋Ｔ細胞の生存を促進することが示されている。このように、４－１ＢＢは、最適以下の免疫応答を促進する、又は救済さえもするように機能する。４－１ＢＢに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢに結合する薬剤（例えば、抗４－１ＢＢ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４－１ＢＢアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４－１ＢＢアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）又はウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）（Ｐｆｉｚｅｒ）である４－１ＢＢ結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）である。４－１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３８２，３２８号明細書、同第８，７１６，４５２号明細書、同第８，４７５，７９０号明細書、同第８，１３７，６６７号明細書、同第７，８２９，０８８号明細書、同第７，６５９，３８４号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００８３４７４号明細書、同第２０１６／０１５２７２２号明細書、同第２０１４／０１９３４２２号明細書、同第２０１４／０１７８３６８号明細書、同第２０１３／０１４９３０１号明細書、同第２０１２／０２３７４９８号明細書、同第２０１２／０１４１４９４号明細書、同第２０１２／００７６７２２号明細書、同第２０１１／０１７７１０４号明細書、同第２０１１／０１８９１８９号明細書、同第２０１０／０１８３６２１号明細書、同第２００９／００６８１９２号明細書、同第２００９／００４１７６３号明細書、同第２００８／０３０５１１３号明細書、同第２００８／０００８７１６号明細書；及び国際公開第２０１６／０２９０７３号パンフレット、同第２０１５／１８８０４７号パンフレット、同第２０１５／１７９２３６号パンフレット、同第２０１５／１１９９２３号パンフレット、同第２０１２／０３２４３３号パンフレット、同第２０１２／１４５１８３号パンフレット、同第２０１１／０３１０６３号パンフレット、同第２０１０／１３２３８９号パンフレット、同第２０１０／０４２４３３号パンフレット、同第２００６／１２６８３５号パンフレット、同第２００５／０３５５８４号パンフレット、同第２００４／０１０９４７号パンフレット；並びにＭａｒｔｉｎｅｚ－Ｆｏｒｅｒｏｅｔａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０（１２）：６６９４－７０６，ａｎｄＤｕｂｒｏｔｅｔａｌ．（２０１０）ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５９（８）：１２２３－３３に開示されている。

ｉｉ．抑制性免疫チェックポイント分子
ＡＤＯＲＡ２Ａ．アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａ４）は、７回膜貫通型アルファヘリックスを有するＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）ファミリーのメンバーであり、癌の治療法における重要なチェックポイントと見なされている。Ａ２Ａ受容体は、過剰反応性免疫細胞を負に調節することができる（例えば、Ｏｈｔａｅｔａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ４１４（６８６６）：９１６－２０を参照）。ＡＤＯＲＡ２Ａに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａに結合する薬剤（例えば、抗ＡＤＯＲＡ２Ａ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＡＤＯＲＡ２Ａアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａアンタゴニストである。ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２３６号明細書に開示されている。

Ｂ７－Ｈ３．Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）は、Ｔ細胞応答を共刺激又は下方調節する分子群であるＢ７スーパーファミリーに属している。Ｂ７－Ｈ３は、ヒトＴ細胞応答を強力且つ一貫して下方調節する（例えば、Ｌｅｉｔｎｅｒｅｔａｌ．（２００９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９（７）：１７５４－６４を参照）。Ｂ７－Ｈ３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７－Ｈ３抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＤＳ－５５７３（ＤａｉｉｃｈｉＳａｎｋｙｏ，Ｉｎｃ．）、エノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、及び８Ｈ９（ＳｌｏａｎＫｅｔｔｅｒｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ａｈｍｅｄｅｔａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０（５０）：３００１８－２９）からなる群から選択される抗Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）である。Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７１，３９５号明細書、同第９，１５０，６５６号明細書、同第９，０６２，１１０号明細書、同第８，８０２，０９１号明細書、同第８，５０１，４７１号明細書、同第８，４１４，８９２号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３５２２２４号明細書、同第２０１５／０２９７７４８号明細書、同第２０１５／０２５９４３４号明細書、同第２０１５／０２７４８３８号明細書、同第２０１４／０３２８７５号明細書、同第２０１４／０１６１８１４号明細書、同第２０１３／０２８７７９８号明細書、同第２０１３／００７８２３４号明細書、同第２０１３／０１４９２３６号明細書、同第２０１２／０２９４７９６０号明細書、同第２０１０／０１４３２４５号明細書、同第２００２／０１０２２６４号明細書；国際公開第２０１６／１０６００４号パンフレット、同第２０１６／０３３２２５号パンフレット、同第２０１５／１８１２６７号パンフレット、同第２０１４／０５７６８７号パンフレット、同第２０１２／１４７７１３号パンフレット、同第２０１１／１０９４００号パンフレット、同第２００８／１１６２１９号パンフレット、同第２００３／０７５８４６号パンフレット、同第２００２／０３２３７５号パンフレット；並びにＳｈｉｅｔａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｐ．１４（１）：９４３－８に開示されている。

Ｂ７－Ｈ４．Ｂ７－Ｈ４（Ｏ８Ｅ、ＯＶ０６４、及びＶセットドメインを含むＴ細胞活性化阻害剤（ＶＴＣＮ１）としても知られている）は、Ｂ７スーパーファミリーに属している。細胞周期を停止させることにより、Ｔ細胞のＢ７－Ｈ４ライゲーションは、増殖、サイトカインの分泌、及び細胞毒性の発生に対して顕著な抑制効果を有する。マウスへのＢ７－Ｈ４Ｉｇの投与は、抗原特異的Ｔ細胞応答を阻害するが、特定のモノクローナル抗体による内因性Ｂ７－Ｈ４の阻害は、Ｔ細胞応答を促進する（例えば、Ｓｉｃａｅｔａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１８（６）：８４９－６１を参照）。Ｂ７－Ｈ４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７－Ｈ４抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ４アンタゴニストである。Ｂ７－Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２９６，８２２号明細書、同第８，６０９，８１６号明細書、同第８，７５９，４９０号明細書、同第８，３２３，６４５号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１５９９１０号明細書、同第２０１６／００１７０４０号明細書、同第２０１６／０１６８２４９号明細書、同第２０１５／０３１５２７５号明細書、同第２０１４／０１３４１８０号明細書、同第２０１４／０３２２１２９号明細書、同第２０１４／０３５６３６４号明細書、同第２０１４／０３２８７５１号明細書、同第２０１４／０２９４８６１号明細書、同第２０１４／０３０８２５９号明細書、同第２０１３／００５８８６４号明細書、同第２０１１／００８５９７０号明細書、同第２００９／００７４６６０号明細書、同第２００９／０２０８４８９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０４０７２４号パンフレット、同第２０１６／０７０００１号パンフレット、同第２０１４／１５９８３５号パンフレット、同第２０１４／１００４８３号パンフレット、同第２０１４／１００４３９号パンフレット、同第２０１３／０６７４９２号パンフレット、同第２０１３／０２５７７９号パンフレット、同第２００９／０７３５３３号パンフレット、同第２００７／０６７９９１号パンフレット、及び同第２００６／１０４６７７号パンフレットに開示されている。

ＢＴＬＡ．ＣＤ２７２としても知られているＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）は、そのリガンドとしてＨＶＥＭ（ＨｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓＥｎｔｒｙＭｅｄｉａｔｏｒ）を有する。ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞がナイーブ細胞からエフェクター細胞の表現型に分化する際に徐々にダウンレギュレートされるが、腫瘍特異的なヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞は高レベルのＢＴＬＡを発現する（例えば、Ｄｅｒｒｅｅｔａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２０（１）：１５７－６７を参照）。ＢＴＬＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡに結合する薬剤（例えば、抗ＢＴＬＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアンタゴニストである。ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３４６，８８２号明細書、同第８，５８０，２５９号明細書、同第８，５６３，６９４号明細書、同第８，２４７，５３７号明細書；米国特許出願公開第２０１４／００１７２５５号明細書、同第２０１２／０２８８５００号明細書、同第２０１２／０１８３５６５号明細書、同第２０１０／０１７２９００号明細書；並びに国際公開第２０１１／０１４４３８号パンフレット及び同第２００８／０７６５６０号パンフレットに開示されている。

ＣＴＬＡ－４．細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）は、免疫調節性ＣＤ２８－Ｂ７免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ナイーブ及び休止Ｔリンパ球に作用して、Ｂ７依存性経路及びＢ７非依存性経路の両方を介して免疫抑制を促進する（例えば、Ｋｉｍｅｔａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ４６８３６０７，１４ｐｐ．を参照）。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ１５２とも呼ばれることが知られている。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞活性化の閾値を調節する。例えば、Ｇａｊｅｗｓｋｉｅｔａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（６）：３９００－７を参照されたい。ＣＴＬＡ－４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４に結合する薬剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ－４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ；Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ；Ｐｆｉｚｅｒ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＪＭＷ－３Ｂ３（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｂｅｒｄｅｅｎ）、及びＡＧＥＮ１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）からなる群から選択されるＣＴＬＡ－４結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＣＴＬＡ－４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６９７，８４５号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０１０５９１４号明細書、同第２０１３／０２６７６８８号明細書、同第２０１２／０１０７３２０号明細書、同第２００９／０１２３４７７号明細書；並びに国際公開第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１２／１２０１２５号パンフレット、同第２０１６／０１５６７５号パンフレット、同第２０１０／０９７５９７号パンフレット、同第２００６／０６６５６８号パンフレット、及び同第２００１／０５４７３２号パンフレットに開示されている。

ＩＤＯ．インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、免疫抑制性を有するトリプトファン異化酵素である。もう１つの重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇ及び骨髄由来サプレッサー細胞を生成して活性化し、そして腫瘍の血管新生を促進することが知られている。参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔｅｔａｌ．，２０１４，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３（７）：７２１－３５。

ＩＤＯに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯに結合する薬剤（例えば、抗ＩＤＯ抗体などのＩＤＯ結合タンパク質）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ノルハルマン、ロスマリン酸、ＣＯＸ－２阻害剤、アルファ－メチル－トリプトファン、及びエパカドスタットからなる群から選択される。一実施形態では、モジュレーターはエパカドスタットである。

ＫＩＲ．キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を負に調節して、ＮＫを介した細胞溶解から細胞を保護するＭＨＣＩ結合分子の多様なレパートリーを含む。ＫＩＲは、一般的にはＮＫ細胞で発現されるが、腫瘍特異的ＣＴＬでも検出されている。ＫＩＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲに結合する薬剤（例えば、抗ＫＩＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）である。追加のＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，９８１，０６５号明細書、同第９，０１８，３６６号明細書、同第９，０６７，９９７号明細書、同第８，７０９，４１１号明細書、同第８，６３７，２５８号明細書、同第８，６１４，３０７号明細書、同第８，５５１，４８３号明細書、同第８，３８８，９７０号明細書、同第８，１１９，７７５号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３４４５７６号明細書、同第２０１５／０３７６２７５号明細書、同第２０１６／００４６７１２号明細書、同第２０１５／０１９１５４７号明細書、同第２０１５／０２９０３１６号明細書、同第２０１５／０２８３２３４号明細書、同第２０１５／０１９７５６９号明細書、同第２０１４／０１９３４３０号明細書、同第２０１３／０１４３２６９号明細書、同第２０１３／０２８７７７０号明細書、同第２０１２／０２０８２３７号明細書、同第２０１１／０２９３６２７号明細書、同第２００９／００８１２４０号明細書、同第２０１０／０１８９７２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９５８９号パンフレット、同第２０１５／０６９７８５号パンフレット、同第２０１４／０６６５３２号パンフレット、同第２０１４／０５５６４８号パンフレット、同第２０１２／１６０４４８号パンフレット、同第２０１２／０７１４１１号パンフレット、同第２０１０／０６５９３９号パンフレット、同第２００８／０８４１０６号パンフレット、同第２００６／０７２６２５号パンフレット、同第２００６／０７２６２６号パンフレット、及び同第２００６／００３１７９号パンフレットに開示されている。

ＬＡＧ－３．リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３、ＣＤ２２３としても知られている）は、ＭＨＣＩＩに競合的に結合して、Ｔ細胞活性化の共阻害チェックポイントとして機能するＣＤ４関連膜貫通タンパク質である（例えば、ＧｏｌｄｂｅｒｇａｎｄＤｒａｋｅ（２０１１）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４４：２６９－７８を参照）。ＬＡＧ－３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ－３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ－３に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ－３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ－３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ－１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／ＪｉａｎｇｓｕＨｅｎｇｒｕｉＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４としても知られている；ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅＩｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅＬｔｄ．）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＬＡＧ－３結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。

ＰＤ－１．プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９及びＰＤＣＤ１としても知られている）は、免疫系を負に調節する抑制性受容体である。主にナイーブＴ細胞に影響を与えるＣＴＬＡ－４とは対照的に、ＰＤ－１は、免疫細胞でより広く発現され、末梢組織及び腫瘍微小環境で成熟Ｔ細胞活性を調節する。ＰＤ－１は、Ｔ細胞受容体シグナル伝達を妨げることによってＴ細胞応答を阻害する。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の２つのリガンドを有する。ＰＤ－１に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ－１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／ＪｉａｎｇｓｕＨｅｎｇｒｕｉＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４としても知られている；ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅＩｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅＬｔｄ．）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。

ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２．ＰＤリガンド１（ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ１としても知られている）及びＰＤリガンド２（ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、及びＢ７－ＤＣとしても知られている）はＰＤ－１受容体に結合する。両方のリガンドは、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ－４と相互作用するＢ７－１及びＢ７－２タンパク質と同じＢ７ファミリーに属している。ＰＤ－Ｌ１は、例えば、上皮細胞、内皮細胞、免疫細胞を含む多くの細胞型で発現し得る。ＰＤＬ－１のライゲーションは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ－２の産生を減少させ、Ｔ細胞の反応性及び増殖の低下並びに抗原特異的Ｔ細胞アネルギーに関連する抗炎症性サイトカインであるＩＬ１０の産生を刺激する。ＰＤＬ－２は、主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現される。ＰＤＬ２ライゲーションもまたＴ細胞の抑制をもたらすが、ＰＤＬ－１－ＰＤ－１相互作用がＧ１／Ｇ２期での細胞周期停止を介して増殖を阻害する場合、ＰＤＬ２－ＰＤ－１結合は、低い抗原濃度でＢ７：ＣＤ２８シグナルをブロックして、高い抗原濃度でサイトカインの産生を減少させることによって、ＴＣＲを介したシグナル伝達を阻害することが示されている。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６としても知られている；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／ＣｅｌｇｅｎｅＣｏｒｐ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ；ＭＰＤＬ３２８０Ａ及びＲＧ７４４６としても知られている；ＧｅｎｅｔｅｃｈＩｎｃ．）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られている；ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＭＤＸ－１１０５（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｅｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ，ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＬＹ３３０００５４（ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏ．）からなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１結合タンパク質（例えば、抗体又はＦｃ融合タンパク質）である。追加のＰＤ－Ｌ１結合タンパク質は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００８４８３９号明細書、同第２０１５／０３５５１８４号明細書、同第２０１６／０１７５３９７号明細書、及び国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、同第２０１６／０３０３５０号パンフレット、同第２０１３１８１６３４号パンフレットに開示されている。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ２に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ２アンタゴニストである。ＰＤ－Ｌ２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２５５，１４７号明細書、同第８，１８８，２３８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１２２４３１号明細書、同第２０１３／０２４３７５２号明細書、同第２０１０／０２７８８１６号明細書、同第２０１６／０１３７７３１号明細書、同第２０１５／０１９７５７１号明細書、同第２０１３／０２９１１３６号明細書、同第２０１１／０２７１３５８号明細書；並びに国際公開第２０１４／０２２７５８号パンフレット、及び同第２０１０／０３６９５９号パンフレットに開示されている。

ＴＩＭ－３．Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（ＴＩＭ－３、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体（ＨＡＶＣＲ２）としても知られている）は、Ｓ型レクチンガレクチン－９（Ｇａｌ－９）に結合するＩ型糖タンパク質受容体である。ＴＩＭ－３は、リンパ球、肝臓、小腸、胸腺、腎臓、脾臓、肺、筋肉、網状赤血球、及び脳組織に広く発現されるリガンドである。Ｔｉｍ－３は当初、ＩＦＮ－γを分泌するＴｈ１及びＴｃ１細胞で選択的に発現されるとして同定された（Ｍｏｎｎｅｙｅｔａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ４１５：５３６－４１）。ＴＩＭ－３受容体によるＧａｌ－９の結合は、下流のシグナル伝達を引き起こしてＴ細胞の生存及び機能を負に調節する。ＴＩＭ－３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ－３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ－３に結合する薬剤である（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ－３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ－３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ－０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択される抗ＴＩＭ－３抗体である。追加のＴＩＭ－３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１０３，８３２号明細書、同第８，５５２，１５６号明細書、同第８，６４７，６２３号明細書、同第８，８４１，４１８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０２００８１５号明細書、同第２０１５／０２８４４６８号明細書、同第２０１４／０１３４６３９号明細書、同第２０１４／００４４７２８号明細書、同第２０１２／０１８９６１７号明細書、同第２０１５／００８６５７４号明細書、同第２０１３／００２２６２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６８８０２号パンフレット、同第２０１６／０６８８０３号パンフレット、同第２０１６／０７１４４８号パンフレット、同第２０１１／１５５６０７号パンフレット、及び同第２０１３／００６４９０号パンフレットに開示されている。

ＶＩＳＴＡ．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ、血小板受容体Ｇｉ２４としても知られている）は、Ｔ細胞応答を負に調節するＩｇスーパーファミリーリガンドである。例えば、Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７－９２を参照されたい。ＡＰＣで発現したＶＩＳＴＡはＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの産生を直接抑制する（Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１０）ＪＥｘｐＭｅｄ．２０８（３）：５７７－９２）。ＶＩＳＴＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡに結合する薬剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ－０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択されるＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。ＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９１号明細書、同第２０１６／００９６８９１号明細書；並びに国際公開第２０１４／１９０３５６号パンフレット、同第２０１４／１９７８４９号パンフレット、同第２０１４／１９０３５６号パンフレット、及び同第２０１６／０９４８３７号パンフレットに開示されている。

腫瘍性障害を処置するための方法は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物を少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせて対象に投与することによって提供される。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、対象の免疫応答を刺激する。例えば、いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、又は４－１ＢＢ）の発現若しくは活性を刺激又は増加させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイント（例えば、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、又はＶＩＳＴＡ）の発現若しくは活性を阻害又は減少させる。

特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－１からなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。さらに特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－１から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。

いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上）の免疫チェックポイントモジュレーターが対象に投与される。２つ以上の免疫チェックポイントモジュレーターが投与される場合、モジュレーターは、それぞれが刺激性免疫チェックポイント分子を標的とするか、又はそれぞれが抑制性免疫チェックポイント分子を標的とすることができる。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターには、刺激性免疫チェックポイントを標的とする少なくとも１つのモジュレーター、及び抑制性免疫チェックポイント分子を標的とする少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターが含まれる。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、結合タンパク質、例えば抗体である。本明細書で使用される「結合タンパク質」という用語は、標的分子、例えば免疫チェックポイント分子に特異的に結合することができるタンパク質又はポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合部分であり、標的分子は、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、標的分子（例えば、免疫チェックポイント分子）に特異的に結合するタンパク質又はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質はリガンドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は受容体である。本発明の方法で使用され得る結合タンパク質の例としては、限定されるものではないが、ヒト化抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、及び四価抗体が挙げられる。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又は任意の機能的断片、突然変異体、変異体、若しくはそれらの誘導体を指す。そのような突然変異体、変異体、又は誘導体の抗体型は当技術分野で公知である。完全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインから構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域から構成されている。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成されている。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。他の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。キメラ及びヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト化アプローチ（例えば、米国特許第５，８４３，７０８号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；及び同第５，５３０，１０１号明細書を参照）、チェーンシャッフリング戦略（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；Ｒａｄｅｒｅｔａｌ．（１９９８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ９５：８９１０－８９１５を参照）、及び分子モデリング戦略（米国特許第５，６３９，６４１号明細書）などを含む当業者に周知の方法によって調製することができる。

本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって果たされ得ることが示されている。そのような抗体の実施形態はまた、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｄｕａｌｓｐｅｃｉｆｉｃ）、又は多重特異性の形態であり得；２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｒｄｅｔａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ３４１：５４４－５４６；及び国際公開第９０／０５１４４Ａ１号パンフレット）；並びに（ｖｉ）分離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬとＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてこれらを作製できる合成リンカーによって、組換え法を使用して結合することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ２４２：４２３－４２６；ａｎｄＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３を参照）。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれることを意図している。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も含まれる。抗原結合部分はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、及びｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒａｎｄＨｕｄｓｏｎ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照）。

本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域ごとにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書で使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一可変領域に存在する３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、方式によって定義が異なっている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））によって記述された方式は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基付番方式を提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと呼ばれることもある。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚らは、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性があるにもかかわらず、ＫａｂａｔＣＤＲ内の特定の小部分がほぼ同一のペプチド骨格構造を採用していることを見出した（Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．（１９８７）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．１９６：９０１－９１７、及びＣｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ３４２：８７７－８８３）。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３又はＨ１、Ｈ２、及びＨ３として指定され、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を示す。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと呼ばれることがあり、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎｅｔａｌ．（１９９５）ＦＡＳＥＢＪ．９：１３３－１３９、及びＭａｃＣａｌｌｕｍｅｔａｌ．（１９９６）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２６２（５）：７３２－４５に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記の方式の１つに厳密には従わない場合もあるが、それでもＫａｂａｔＣＤＲと重複する。ただし、ＫａｂａｔＣＤＲは、特定の残基又は残基群、又はＣＤＲ全体でさえも抗原結合に大きな影響を与えないという予測又は実験結果に照らして短縮又は延長することができる。本明細書で使用される方法は、これらの方式のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用できるが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ方式で定義されたＣＤＲを使用する。

本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は他の抗体の抗原結合サブ配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの変更により、抗体又は抗体断片の性能をさらに改善して最適化することができる。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、ＦＲ領域のすべて又は大部分は、ヒト免疫グロブリン配列の領域である。ヒト化抗体又は抗体断片はまた、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部を含み得る。さらなる詳細については、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．（１９８６）ＮＡＴＵＲＥ３２１：５２２－５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．（１９８８）ＮＡＴＵＲＥ３３２：３２３－３２９；ａｎｄＰｒｅｓｔａ（１９９２）ＣＵＲＲ．ＯＰ．ＳＴＲＵＣＴ．ＢＩＯＬ．２：５９３－５９６を参照されたい。

本明細書で使用される「免疫コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」という用語は、抗体又はその抗原結合断片と、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、及びイメージングプローブなどの別の薬剤との結合を指す。結合は、共有結合、又は静電力などによる非共有相互作用であり得る。免疫コンジュゲートを形成するために、当技術分野で知られている様々なリンカーを使用することができる。加えて、免疫コンジュゲートは、免疫コンジュゲートをコードするポリヌクレオチドから発現され得る融合タンパク質の形態で提供することができる。

本明細書で使用される「融合タンパク質」は、元々は別個のタンパク質（ペプチド及びポリペプチドを含む）をコードする２つ以上の遺伝子又は遺伝子断片の結合によって作製されたタンパク質を指す。融合遺伝子の翻訳により、元のタンパク質のそれぞれに由来する機能特性を備えた単一のタンパク質が生じる。

「二価抗体」は、２つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。２つの抗原結合部位は、同じ抗原に結合するか、又はそれぞれが異なる抗原に結合することができ、その場合、抗体又は抗原結合断片は、「二重特異性」として特徴づけられる。「四価抗体」は、４つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。特定の実施形態では、四価抗体は二重特異性である。特定の実施形態では、四価抗体は、多重特異性、即ち、３つ以上の異なる抗原に結合する。

Ｆａｂ（抗原結合断片）抗体断片は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）及び重鎖定常領域１（Ｃ_Ｈ１）部分からなるポリペプチドと、軽鎖可変（Ｖ_Ｌ）及び軽鎖定数（Ｃ_Ｌ）部分かなるポリペプチドとから構成される抗体の一価抗原結合ドメインを含む免疫反応性ポリペプチドであり、Ｃ_Ｌ及びＣ_Ｈ１部分は、好ましくはＣｙｓ残基間のジスルフィド結合によって１つに結合される。

免疫チェックポイントモジュレーター抗体には、限定されるものではないが、少なくとも４つの主要な種類：（ｉ）Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞における阻害経路を直接ブロックする抗体（例えば、ニボルマブ及びペンブロリズマブなどのＰＤ－１標的抗体、ＴＩＭ－３を標的とする抗体、並びにＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＣＤ１６０、Ａ２ａＲ、ＢＴＬＡ、ＣＧＥＮ－１５０４９、及びＫＩＲを標的とする抗体）、（ｉｉ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞における直接刺激経路を活性化する抗体（例えば、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び４－１ＢＢを標的とする抗体）、（ｉｉｉ）免疫細胞における抑制経路をブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して免疫細胞の抑制集団を枯渇させる抗体（例えば、イピリムマブなどのＣＴＬＡ－４標的抗体、ＶＩＳＴＡを標的とする抗体、及びＰＤ－Ｌ２、Ｇｒ１、及びＬｙ６Ｇを標的とする抗体）、並びに（ｉｖ）癌細胞における抑制経路を直接ブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して癌細胞に対する細胞毒性を強める抗体（例えば、リツキシマブ、ＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体、並びにＢ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｇａｌ－９、及びＭＵＣ１を標的とする抗体）が含まれる。チェックポイント阻害剤の例としては、例えば、イピリムマブ又はトレメリムマブなどのＣＴＬＡ－４の阻害剤；抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体などのＰＤ－１経路の阻害剤が挙げられる。例示的な抗ＰＤ－１抗体は、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット、同第２００８／１５６７１２号パンフレット、同第２０１２／１４５４９３号パンフレット、同第２００９／０１４７０８号パンフレット、及び同第２００９／１１４３３５号パンフレットに記載されている。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレット、同第２０１０／０７７６３４号パンフレット、及び同第２０１１／０６６３８９号パンフレットに記載されており、例示的な抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、国際公開第２００４／００７６７９号パンフレットに記載されている。

特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、融合タンパク質、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの活性を調節する融合タンパク質である。

一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、治療用核酸分子、例えば、免疫チェックポイントタンパク質又はｍＲＮＡの発現を調節する核酸である。核酸治療薬は当技術分野で周知である。核酸治療薬には、細胞内の標的配列に相補的な一本鎖及び二本鎖（即ち、少なくとも１５ヌクレオチド長の相補的領域を有する核酸治療薬）核酸の両方が含まれる。特定の実施形態では、核酸治療薬は、免疫チェックポイントタンパク質をコードする核酸配列を標的とする。

アンチセンス核酸治療薬は、典型的には約１６～３０ヌクレオチド長の一本鎖核酸治療薬であり、培養物内又は生物内のいずれかの標的細胞の標的核酸配列に相補的である。

別の態様では、薬剤は、一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子である。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡ内の配列に相補的である。アンチセンスＲＮＡは、ｍＲＮＡと塩基対を形成し、翻訳機構を物理的に妨害することによって化学量論的に翻訳を阻害することができる。Ｄｉａｓ，Ｎ．ｅｔａｌ．，（２００２）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ１：３４７－３５５を参照されたい。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡに相補的な約１５～３０ヌクレオチドを有し得る。アンチセンス核酸、化学修飾、及び治療用途に関する特許には、例えば：化学修飾されたＲＮＡ含有治療化合物に関する米国特許第５，８９８，０３１号明細書；これらの化合物を治療薬としての使用方法に関する米国特許第６，１０７，０９４号明細書；一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を投与することによって患者を処置する方法に関する米国特許第７，４３２，２５０号明細書；及び一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を含む医薬組成物に関する米国特許第７，４３２，２４９号明細書が含まれる。米国特許第７，６２９，３２１号明細書は、複数のＲＮＡヌクレオシド及び少なくとも１つの化学修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを用いて標的ｍＲＮＡを切断する方法に関する。この段落に記載されている各特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明の方法で使用するための核酸治療薬には、二本鎖核酸治療薬も含まれる。本明細書で互換的に使用される「ｄｓＲＮＡ剤」、「ｄｓＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「ｉＲＮＡ剤」とも呼ばれる「ＲＮＡｉ剤」、「二本鎖ＲＮＡｉ剤」、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、以下に定義されるように２つの逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。本明細書で使用されるＲＮＡｉ剤はまた、ｄｓｉＲＮＡを含み得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００７０１０４６８８号明細書を参照されたい）。一般に、各鎖のヌクレオチドの大部分はリボヌクレオチドであるが、本明細書に記載されるように、各鎖又は両鎖はまた、１つ又は複数の非リボヌクレオチド、例えばデオキシリボヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含み得る。加えて、本明細書で使用されるように、「ＲＮＡｉ剤」は、化学修飾を有するリボヌクレオチドを含み得；ＲＮＡｉ剤は、複数のヌクレオチドに実質的な修飾を含み得る。そのような修飾は、本明細書に開示される又は当技術分野で公知のあらゆるタイプの修飾を含み得る。ｓｉＲＮＡ型の分子で使用されるいずれの修飾も、本明細書及び特許請求の範囲のために「ＲＮＡｉ剤」に含まれる。本発明の方法で使用されるＲＮＡｉ剤は、例えば、それぞれその全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第／２０１２／０３７２５４号パンフレット及び同第２００９／０７３８０９号パンフレットに開示されるような化学修飾を有する薬剤を含む。

免疫チェックポイントモジュレーターは、例えば標準投与量を使用することによって、腫瘍性障害を処置するために適切な投与量で投与することができる。当業者は、日常的な実験によって、腫瘍性障害を処置する目的で、免疫チェックポイントモジュレーターの効果的で非毒性の量がどの程度であるかを決定することができるであろう。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量は、当業者に公知であり、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの製造業者によって提供される製品の説明書から得ることができる。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の例が以下の表３に示される。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、特定の腫瘍性障害の処置のための標準治療の下で腫瘍性障害を処置するために使用される免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量とは異なる（例えば、より低い）投与量で投与される。

特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量よりも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低い。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも１つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも２つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも３つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターのすべては、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。

標的細胞によるタノトランスミッションを促進する１つ若しくは複数のポリヌクレオチドを含むように操作されたウイルスと組み合わせて投与することができる追加の免疫療法として、限定はされないが、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン及び癌ワクチンが挙げられる。

２．ＴＬＲアゴニスト
ＴＬＲは、微生物に由来する構造的に保存された分子を認識する単回膜貫通非触媒受容体である。ＴＬＲは、インターロイキン１受容体と共に、「インターロイキン１受容体／Ｔｏｌｌ様受容体スーパーファミリー」として知られている受容体スーパーファミリーを形成する。このファミリーのメンバーは、細胞外ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメイン、膜近傍システイン残基の保存されたパターン、並びにＭｙＤ８８、ＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＡＰ）、及びＩＦＮβを誘導するＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＩＦ）を含むＴＩＲドメイン含有アダプターを動員することによって下流シグナル伝達のプラットフォームを形成する細胞質内シグナル伝達ドメインによって構造的に特徴付けられる（Ｏ’Ｎｅｉｌｌｅｔａｌ．，２００７，ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ７，３５３）。

ＴＬＲには、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、及びＴＬＲ１０が含まれる。ＴＬＲ２は、ペプチドグリカン、細菌性リポペプチド、リポテイコ酸、マイコバクテリアリポアラビノマンナン、及び酵母の細胞壁成分を含む多数の微生物産物に対する細胞応答を仲介する。ＴＬＲ４は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）ファミリーに属する膜貫通タンパク質である。その活性化は、細胞内シグナル伝達経路ＮＦ－κＢ、及び自然免疫系の活性化に関与する炎症性サイトカインの産生をもたらす。ＴＬＲ５は、移動性細菌の侵入から細菌フラジェリンを認識することが知られており、炎症性腸疾患を含む多くの疾患の発症に関与していることが示されている。

ＴＬＲアゴニストは当技術分野で公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００３０２９４号明細書に記載されている。例示的なＴＬＲ２アゴニストには、マイコバクテリア細胞壁糖脂質、リポアラビノマンナン（ＬＡＭ）及びマンノシル化ホスファチジルイノシトール（ＰＩＩＭ）、ＭＡＬＰ－２、及びＰａｍ３Ｃｙｓ、及びそれらの合成変異体が含まれる。例示的なＴＬＲ４アゴニストには、リポ多糖又はその合成変異体（例えば、ＭＰＬ及びＲＣ５２９）及びリピドＡ又はその合成変異体（例えば、アミノアルキルグルコサミニド４－ホスフェート）が含まれる。例えば、Ｃｌｕｆｆｅｔａｌ．，２００５，ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ，ｐ．３０４４－３０５２：７３；Ｌｅｍｂｏｅｔａｌ．，２００８，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１８０，７５７４－７５８１；及びＥｖａｎｓｅｔａｌ．，２００３，ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ２：２１９－２９を参照されたい。例示的なＴＬＲ５アゴニストには、フラジェリン又はその合成変異体（例えば、ＴＬＲ５活性化に必須ではないフラジェリンの部分を除去することによって作製された、免疫原性が低下した薬理学的に最適化されたＴＬＲ５アゴニスト（ＣＢＬＢ５０２など））が含まれる。

追加のＴＬＲアゴニストには、コーリーの毒（Ｃｏｌｅｙ’ｓｔｏｘｉｎ）及びカルメット・ゲラン桿菌（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）が含まれる。コーリーの毒は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）種及びセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）種の死滅菌からなる混合物である。Ｔａｎｉｇｕｃｈｉｅｔａｌ．，２００６，ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓ．２６（６Ａ）：３９９７－４００２を参照のこと。ＢＣＧは、弱毒化された生きたウシ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ）の菌株から調製される。Ｖｅｎｋａｔａｓｗａｍｙｅｔａｌ．，２０１２，Ｖａｃｃｉｎｅ．３０（６）：１０３８－１０４９を参照のこと。

３．細胞ベースの治療法
癌処置のための細胞ベースの治療法には、対象への免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ及び樹状細胞）の投与が含まれる。自家細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、それらが投与される同じ対象に由来する。同族異系細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、ある対象に由来し、別の対象に投与される。免疫細胞は、対象に投与する前に、例えばサイトカインでの処置によって活性化してもよい。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞免疫療法でのように、対象への投与の前に遺伝子組換えされている。

いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、養子細胞移植（ＡＣＴ）を含む。ＡＣＴは、典型的には３つの部分：リンパ球枯渇、細胞投与、及び高用量のＩＬ－２による治療法から構成される。ＡＣＴで投与することができる細胞の種類には、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）導入Ｔ細胞、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が含まれる。

腫瘍浸潤リンパ球は、乳癌を含む多くの固形腫瘍に観察されている免疫細胞である。腫瘍浸潤リンパ球は、細胞傷害性Ｔ細胞とヘルパーＴ細胞の混合物、並びにＢ細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞を含む細胞の集団である。自家ＴＩＬ治療法の一般的な手順は次の通りである：（１）切除された腫瘍を消化して断片にする；（２）各断片をＩＬ－２で増殖させ、リンパ球の増殖によって腫瘍を破壊する；（３）リンパ球の純粋な集団の存在の確認後、これらのリンパ球を増殖させる；及び（４）１０^１１個の細胞まで増殖させた後、リンパ球を患者に注入する。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８（６２３０）：６２－６８を参照されたい。

ＴＣＲが形質導入されたＴ細胞は、腫瘍特異的ＴＣＲの遺伝子誘導を介して作製される。これは、多くの場合、特定の抗原特異的ＴＣＲをレトロウイルス骨格にクローニングすることによって行われる。血液を患者から採取し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を抽出する。ＩＬ－２の存在下、ＰＢＭＣをＣＤ３で刺激し、抗原特異的ＴＣＲをコードするレトロウイルスで形質導入する。これらの形質導入ＰＢＭＣをインビトロでさらに増殖させた後、患者に注入する。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｂｂｉｎｓｅｔａｌ．，２０１５，ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２１（５）：１０１９－１０２７を参照されたい。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原認識ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、及び４－１ＢＢなど）を含む組換え受容体である。ＣＡＲは、抗原結合機能及びＴ細胞活性化機能の両方を備える。従って、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、糖脂質、炭水化物、及びタンパク質を含む多様な細胞表面抗原を認識し、細胞質共刺激の活性化を介してこれらの抗原を発現する悪性細胞を攻撃することができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐａｎｇｅｔａｌ．，２０１８，ＭｏｌＣａｎｃｅｒ１７：９１を参照されたい。

いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞ベースの治療法である。ＮＫ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の発現の事前のいかなる感作又は制限なしに、腫瘍細胞を殺傷する能力を有する大顆粒リンパ球である。Ｕｐｐｅｎｄａｈｌｅｔａｌ．，２０１７，ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ８：１８２５を参照されたい。高用量ＩＬ－２治療法による自家リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の養子移入は、ヒトの臨床試験で評価されている。ＬＡＫ免疫療法と同様に、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞は、抗ＣＤ３ｍＡｂ、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の刺激による末梢血単核細胞培養から生じる。ＣＩＫ細胞は、混合Ｔ－ＮＫ表現型（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）を特徴とし、卵巣癌及び子宮頸癌に対してＬＡＫ細胞と比較して細胞毒性の増強を示す。一次腫瘍減量手術及び補助カルボプラチン／パクリタキセル化学療法後の自家ＣＩＫ細胞の養子移入を調べるヒト臨床試験も行われている。Ｌｉｕｅｔａｌ．，２０１４，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ３７（２）：１１６－１２２を参照されたい。

いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、樹状細胞ベースの免疫療法である。腫瘍溶解物で処置された樹状細胞（ＤＣ）を用いたワクチン接種は、インビトロ及びインビボの両方で治療的抗腫瘍免疫応答を高めることが証明されている。Ｊｕｎｇｅｔａｌ．，２０１８，ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ１１（３）：６８６－６９０を参照されたい。ＤＣは、抗原を捕捉して処理し、リンパ器官に移動し、リンパ球共刺激分子を発現し、免疫応答を開始するサイトカインを分泌する。ＤＣはまた、腫瘍関連抗原に特異的な受容体を発現する免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞）を刺激し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞などの免疫抑制因子の数を減少させる。例えば、腫瘍細胞溶解物－ＤＣハイブリッドに基づく腎細胞癌（ＲＣＣ）のＤＣワクチン接種戦略は、前臨床及び臨床試験において治療可能性を示した。Ｌｉｍｅｔａｌ．，２００７，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ５６：１８１７－１８２９を参照されたい。

いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、間葉系幹細胞（ＭＳＣｓ）を含む。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、自己再生能及び多分化能を併せ持つ成体幹細胞である。ＭＳＣの治療上の利点によって、癌を含む様々な疾患を治療するための細胞ベースの戦略におけるそれらの使用が推進されている。腫瘍は、ＭＳＣに化学誘引作用を及ぼし、これが、腫瘍部位へのそれらの動員に影響を与える。腫瘍環境に到達すると、ＭＳＣは、腫瘍の発生に影響を及ぼす直接的及び間接的な機構を介して癌細胞と相互作用する。ＭＳＣのパラクリン機能は、癌の調節に関わる主要な機構の１つであり、増殖因子やサイトカインを含む複数の因子によって媒介される。これらのパラクリン因子は、腫瘍細胞周期（即ち、細胞増殖）、細胞生存、血管新生、及び免疫抑制／免疫調節を含む細胞プロセスに影響を及ぼし、ＭＳＣが癌を調節することを可能にする。ＭＳＣと腫瘍細胞周期の相互作用は、ＭＳＣが治療効果を発揮する方法の１つである。ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ／プロテインキナーゼＢ（ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ）などの増殖関連のシグナル伝達経路を阻害することにより、ＭＳＣは、細胞周期停止を誘導し、癌の増殖を抑えることができる。さらに、ＭＳＣは、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）などの他の細胞型に分化して、癌の進行に直接寄与し得る。Ｈｍａｄｃｈａｅｔａｌ．，２０２０，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ８（４３）：１－１３；ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｂｉｏｅ．２０２０．０００４３を参照されたい。

いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、線維芽細胞、例えば、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）を含む。これらの細胞は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の合成及びリモデリング、並びに増殖因子の産生を通して癌転移を調節し、血管新生、腫瘍力学、薬物アクセス、及び治療応答に影響を与える。ＣＡＦはまた、免疫系を調節することもできる。その数、サブタイプ又は機能性を変えることによるＣＡＦのターゲティングが、癌治療法を改善する方法を提供する。Ｓａｈａｉｅｔａｌ．，２０２０，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗＣａｎｃｅｒ２０：１７４－１８６参照されたい。

４．サイトカイン
ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、及びＩＬ－２１を含むいくつかのサイトカインは、ＮＫ細胞及びＴ細胞などの免疫細胞の活性化のための癌の処置に使用されてきた。ＩＬ－２は、抗腫瘍免疫を誘導することを期待して、臨床的に使用された最初のサイトカインの１つであった。高用量の単剤として、ＩＬ－２は、腎細胞癌（ＲＣＣ）及び転移性黒色腫を有する一部の患者に寛解をもたらす。低用量のＩＬ－２も調べられ、生物学的活性を維持しながら毒性を低減するように、ＩＬ－２αβγ受容体（ＩＬ－２Ｒαβγ）を選択的に連結することが目標とされた。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｍｅｅｅｔａｌ．，２０１４，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ，Ｖｏｌｕｍｅ２０１４，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ２０５７９６，１８ｐａｇｅｓを参照されたい。

インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）と構造的に類似したサイトカインである。ＩＬ－２と同様に、ＩＬ－１５は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）及び共通のガンマ鎖（ガンマ－Ｃ、ＣＤ１３２）から構成される複合体に結合し、この複合体を介してシグナルを伝達する。組換えＩＬ－１５は、固形腫瘍（例えば、黒色腫、腎細胞癌）の処置のために、並びに癌患者の養子移入後のＮＫ細胞を支持するために、評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅｅｔａｌ．を参照されたい。

ＩＬ－１２は、ｐ３５及びｐ４０サブユニット（ＩＬ－１２α及びβ鎖）から構成されるヘテロ二量体サイトカインであり、ＮＫ細胞の細胞毒性を増強する能力に基づいて、最初は「ＮＫ細胞刺激因子（ＮＫＳＦ）」として同定された。病原体に接触すると、ＩＬ－１２は、活性化樹状細胞及びマクロファージによって放出され、主に活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞で発現するその同族受容体に結合する。多くの前臨床試験により、ＩＬ－１２は抗腫瘍候補であることが示唆されている。上で引用したＲｏｍｅｅｅｔａｌ．を参照されたい。

ＩＬ－１８は、炎症性ＩＬ－１ファミリーのメンバーであり、ＩＬ－１２と同様に、活性化食細胞から分泌される。ＩＬ－１８は、前臨床動物モデルで有意な抗腫瘍活性を示し、ヒトの臨床試験で評価されている。Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎｅｔａｌ．，２００６，ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１２：４２６５－４２７３を参照されたい。

ＩＬ－２１は、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激する能力があるため、抗腫瘍免疫療法に使用されてきた。エクスビボでのＮＫ細胞の増殖では、膜結合型ＩＬ－２１がＫ５６２刺激細胞で発現され、効果的な結果が得られている。Ｄｅｎｍａｎｅｔａｌ．，２０１２，ＰＬｏＳＯｎｅ７（１）ｅ３０２６４を参照されたい。組換えヒトＩＬ－２１は、可溶性ＣＤ２５を増加させ、ＣＤ８＋細胞上でのパーフォリン及びグランザイムＢの発現を誘導することも示された。ＩＬ－２１は、固形腫瘍の処置に関するいくつかの臨床試験で評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅｅｔａｌ．を参照されたい。

５．癌ワクチン
治療用癌ワクチンは、適切なアジュバントの助けを借りて、癌に対する患者自身の免疫応答、特にＣＤ８＋Ｔ細胞媒介応答を強化することによって癌細胞を除去する。癌ワクチンの治療効果は、正常細胞に対する腫瘍細胞による腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の差次的発現に依存している。ＴＡＡは、細胞タンパク質に由来し、免疫寛容又は自己免疫効果のいずれかを回避するために、主に又は選択的に癌細胞に発現させる必要がある。Ｃｉｒｃｅｌｌｉｅｔａｌ．，２０１５，Ｖａｃｃｉｎｅｓ３（３）：５４４－５５５を参照されたい。癌ワクチンには、例えば、樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチン、ペプチド／タンパク質ワクチン、遺伝子ワクチン、及び腫瘍細胞ワクチンが含まれる。Ｙｅｅｔａｌ．，２０１８，ＪＣａｎｃｅｒ９（２）：２６３－２６８を参照されたい。

本発明の併用療法は、腫瘍性疾患の処置に利用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と、追加の治療薬の併用療法は、腫瘍細胞増殖を阻害する。従って、本発明はさらに、対象の腫瘍細胞増殖を阻害する方法を提供し、これは、腫瘍細胞増殖が阻害されるように、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と、少なくとも１種の追加の治療薬を対象に投与することを含む。特定の実施形態において、癌を処置することは、対照と比較して生存期間を延長するか、又は腫瘍進行までの時間を延長することを含む。一部の実施形態では、対照は、追加の治療薬で処置されるが、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物による処置を受けていない対象である。一部の実施形態では、対照は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物で処置されるが、追加の治療薬による処置を受けていない対象である。一部の実施形態では、対照は、追加の治療薬、或いは本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物による処置を受けていない対象である。特定の実施形態において、対象は、ヒト対象である。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の初回用量の投与前、又は追加の治療薬の初回用量の投与前に、腫瘍を有するものとして識別される。特定の実施形態では、対象は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の初回投与時、或いは追加の治療薬の初回投与時に腫瘍を有する。

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と、１又は複数種の追加の治療薬を含む併用療法の少なくとも１、２、３、４、又は５サイクルが対象に施される。対象は、各サイクルの終わりに寛解基準について評価される。対象はまた、治療計画が十分に認容されていることを確認するために、有害事象（例えば、凝固、貧血、肝臓及び腎臓機能など）についてサイクル毎に終始モニターされる。

２種以上の追加の治療薬、例えば、２、３、４、５、又はそれ以上の追加の治療薬を、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と組み合わせて投与してもよいことに留意すべきである。

一実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と、本明細書に記載の追加の治療薬の投与は、以下：腫瘍のサイズ、重量若しくは体積の減少、進行までの時間の増加、腫瘍成長の阻害、及び／又は腫瘍性障害を有する対象の生存期間の延長のうちの１つ若しくは複数をもたらす。特定の実施形態では、本明細書に記載される核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、核酸分子、ベクター、細胞又は医薬組成物を投与されたが、追加の治療薬は投与されていない対応する対照対象と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％若しくは５００％、対象の腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は生存期間を延長する。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物の投与は、核酸分子、ベクター、細胞又は医薬組成物を投与されたが、追加の治療薬は投与されていない腫瘍性障害に罹患した対照対象の対応する集団と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％若しくは５００％、腫瘍性障害に罹患した対象の集団の腫瘍のサイズ、重量若しくは体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は生存期間を延長する。他の実施形態では、タノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドと追加の治療薬を含むように操作されたウイルスは、治療前に進行性腫瘍性障害を有する対象の腫瘍性障害を安定化させる。

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物と、追加の治療薬（例えば、免疫治療薬）による処置は、例えば、１つ又は複数の抗腫瘍（例えば化学療法薬）剤の標準用量を投与することによって、処置しようとする具体的な癌の処置のための標準治療などのさらに別の抗腫瘍剤と組み合わせる。特定の癌の種類の標準治療は、例えば、癌の種類及び重症度、対象の年齢、体重、性別、及び／若しくは病歴、並びに以前の処置の成功又は失敗に基づいて、当業者によって決定することができる。本発明の特定の実施形態では、標準治療は、外科手術、放射線、ホルモン療法、抗体療法、成長因子による治療法、サイトカイン、及び化学療法のいずれか１つ又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態では、追加の抗腫瘍剤は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び／又は免疫チェックポイントモジュレーターでもない。

本明細書に開示される方法での使用に適した追加の抗腫瘍剤には、限定されるものではないが、化学療法剤（例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサリプラチン、テモゾロミド、チオテパなどのアルキル化剤；５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）などの代謝拮抗剤；カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、シタラビン（Ａｒａ－Ｃ（登録商標））、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン、イダルビシン）、アクチノマイシン－Ｄ、ブレオマイシン、マイトマイシン－Ｃ、ミトキサントロン（トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としても機能する）などの抗腫瘍抗生物質；トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、エトポシド（ＶＰ－１６）、テニポシド、ミトキサントロン（抗腫瘍抗生物質としても機能する）などのトポイソメラーゼ阻害剤；ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤；プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））などのコルチコステロイド；Ｌ－アスパラギナーゼ及びボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））などの酵素が含まれる。抗腫瘍剤にはまた、生物学的抗癌剤、例えば、抗ＴＮＦ抗体、例えば、アダリムマブ又はインフリキシマブ；リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体、ベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；パリビズマブなどの抗ＲＳＶが含まれる。

ＶＩＩＩ．医薬組成物及び投与方法
特定の態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸分子、ベクター（例えば、操作ウイルス、プラスミド若しくはトランスポゾン）、細胞又は医薬組成物を含む医薬組成物に関する。本明細書に記載の医薬組成物は、任意の好適な製剤で対象に投与することができる。これらには、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療用途に応じて変わる。

特定の実施形態において、医薬組成物は経口投与に適している。特定の実施形態では、医薬組成物は、局所投与並びに静脈内、腹腔内、筋肉内、及び皮下注射を含む非経口投与に適している。特定の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与に適している。さらに別の特定の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内投与に適している。

非経口投与用の医薬組成物には、水溶性形態の活性化合物の水溶液が含まれる。静脈内投与の場合、製剤は水溶液であり得る。水溶液には、ハンクス液、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水緩衝液、又は非経口的に送達される製剤の適切なｐＨ及び浸透圧を達成する他の適切な塩又は組み合わせが含まれ得る。水溶液を使用して、投与用の製剤を所望の濃度に希釈することができる。水溶液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの、溶液の粘度を増加させる物質を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、及び注射用水を含むリン酸緩衝生理食塩水を含む。

局所投与に適した製剤には、塗布剤、ローション、クリーム、軟膏、又はペーストなどの皮膚への浸透に適した液体又は半液体の製剤、及び目、耳、又は鼻への投与に適した点滴剤が含まれる。経口投与に適した製剤には、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体を含む製剤が含まれる。経口投与用の製剤は、ハードシェル又はソフトシェルのゼラチンカプセルに封入してもよいし、又は錠剤に圧縮してもよいし、又は飲食物の食品に直接含めてもよい。単位剤形がカプセルである場合、単位剤形は、上記のタイプの材料に加えて、液体担体を含み得る。様々な他の材料が、コーティングとして又は他の方法で投与単位の物理的形態を変更するために存在し得る。本発明で使用するのに適した医薬組成物は、有効成分（即ち、本明細書に記載されるような１つ又は複数の組換え核酸分子）が、例えば、タノトランスミッションの促進、免疫応答の増加、又は癌の治療を含め、その意図される目的を達成するように、有効量で含有される組成物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載される１つ又は複数の組換え核酸分子を治療有効量で含む。有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示を考慮すると、当業者の能力の十分に範囲内である。活性成分に加えて、これらの医薬組成物には、薬学的に使用できる調製物への活性化合物の処理を容易にする賦形剤及び助剤を含む適切な薬学的に許容される担体が含まれ得る。

当業者には容易に明らかであるように、投与される有用なインビボ投与量及び特定の投与方式は、年齢、体重、苦痛の重症度、及び処置される哺乳動物種、利用される特定の化合物、及びこれらの化合物が利用される特定の用途に応じて異なる。有効な投与量レベル、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量レベルの決定は、例えば、ヒト臨床試験、動物モデル、及びインビトロ試験などの日常的な方法を使用して当業者が行うことができる。

特定の実施形態では、医薬組成物は経口的に送達される。特定の実施形態では、組成物は非経口的に投与される。特定の実施形態では、組成物は、注射又は注入によって送達される。特定の実施形態では、組成物は、経粘膜を含めて局所的に送達される。特定の実施形態では、組成物は、吸入によって送達される。一実施形態では、本明細書で提供される組成物は、腫瘍に直接注射することによって投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注射又は静脈内注入によって投与することができる。特定の実施形態では、投与は全身性である。特定の実施形態では、投与は局所的である。

本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、これらを限定するものとして解釈すべきではない。本出願全体を通して引用されたすべての参考文献、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号及び遺伝子番号、並びに公開特許及び特許出願の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。当業者は、本発明が、開示される構造、材料、組成物及び方法に対する変形と共に実施され得ることを認識され、また、そのような変形は本発明の範囲内とみなされる。

実施例１．１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞における細胞死の誘導。
ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ－２６３８）を、ｐＬＶＸ－Ｔｅｔ３Ｇベクター（Ｔａｋａｒａ；６３１３５８）由来のレンチウイルスで形質導入し、ヒトＰＧＫプロモーターによる安定したＴｅｔ－Ｏｎトランスアクチベーター発現を達成した。Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、遺伝子発現は、ドキシサイクリンによって誘導可能である。すべてのレンチウイルス形質導入は、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ－３２１６）及びレンチウイルスパッケージングミックス（ＬｅｎｔｉｖｉｒｕｓＰａｃｋａｇｉｎｇＭｉｘ）（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ；ｐＬＶ－ＰＡＣＫ）を使用する標準的な生成プロトコルを用いて実施した。次に、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞を、ｐＬＶＸ－ＴＲＥ３Ｇ（Ｔａｋａｒａ；６３１１９３）においてヒトＴＲＩＦＯＲＦ（アクセッション番号：ＮＭ＿１８２９１９）を発現するレンチウイルスで形質導入した。これに代わり、又は加えて、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞は、マウスＲＩＰＫ３ＯＲＦ（アクセッション番号：ＮＭ＿０１９９５５．２）を発現するベクターを用いて形質導入した；ＲＩＰＫ３発現は、ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｈｙｇ（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ；ｃＤＮＡ－ｐＬＶ０２）の構成性ＰＧＫプロモーター誘導体によって駆動した。両方のＯＲＦは、Ｂ－Ｂリガンド（Ｔａｋａｒａ；６３５０５９）に結合すると、オリゴマー化する２つのタンデムＤｍｒＢドメインの付加により修飾して、Ｂ／Ｂホモ二量体化剤（１μＭ）を用いたタンパク質活性化によってオリゴマー化を促進することができるようにした。最初の検査の後、Ｂ／Ｂを用いた二量体化は、ＴＲＩＦ構築物の活性に実質的な影響を及ぼさなかったが、ＲＩＰＫ３発現構築物の活性を促進した。従って、その後のすべての実験において、Ｂ／Ｂ誘導による二量体化は、ＴＲＩＦを含むどの構築物を活性化するためにも使用せず、ＲＩＰＫ３を発現する単一構築物を活性化するためだけに使用した。このように、実験条件がすべての群で同等であることを確実にするために、Ｂ／Ｂ二量体化剤を実験セットアップに含めたが、これは、ＴＲＩＦ誘導による活性に影響を及ぼさなかった。例えば、図２Ｂに示され、且つ実施例２に記載されるように、二量体化剤の添加は、前述した操作ＣＴ－２６細胞からの細胞培養物で処置したマクロファージのＩＲＦ活性にほとんど影響を及ぼさなかった。

表示されるタノトランスミッションモジュールを発現するＣＴ２６マウス大腸癌細胞を播種し、その後、ドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、０２１９８９５５２５）及びＢ／Ｂホモ二量体化剤（１μＭ）で２４ｈ処置することにより、オリゴマー化を介して発現及びタンパク質活性化を促進した。相対細胞生存率は、製造業者の指示に従い、ＲｅａｌＴｉｍｅ－ＧｌｏＭＴＣｅｌｌＶｉａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ９７１２）を用いて、処置後２４ｈ時点で決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）により測定された相対生存率を示すグラフを作成した。

図１Ａに示すように、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の誘導された発現及びオリゴマー化は、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ（Ｔｅｔ３Ｇ）親細胞株と比較して細胞生存率の低下を誘導した。これらの結果は、癌細胞における１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドの発現が癌細胞の生存率を低下させることを実証している。

別の実験では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現する癌細胞におけるガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ）の発現の影響を調べた。ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞を、ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏベクター（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ）にクローニングしたヒトＧＳＤＭＥ（ＮＭ＿００４４０３．３）で形質導入した。また、前述したＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ－ＴＲＩＦ及びＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ－ＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３細胞にもＧＳＤＭＥを形質導入した。これらの細胞を播種した後、ドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、０２１９８９５５２５）で２４ｈ処置することにより、発現を促進した。相対細胞生存率は、製造業者の指示に従い、ＲｅａｌＴｉｍｅ－ＧｌｏＭＴＣｅｌｌＶｉａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ９７１２）を用いて、処置後２４ｈ時点で決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）により測定された相対生存率を示すグラフを作成した。これらの実験には、Ｂ／Ｂ二量体化剤を使用しなかった。

図１Ｂに示されるように、ＴＲＩＦ、及びＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の発現は、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ親細胞株と比較して細胞生存率を低下させ、図１Ａに提示される結果が確認された。さらに、ＧＳＤＭＥ発現細胞におけるＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３タンパク質発現の誘導も、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ親細胞と比較して細胞生存率を低下させた。まとめると、これらの結果は、癌細胞におけるＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びＧＳＤＭＥなどの１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドの発現が、癌細胞の生存率を低下させることを実証している。

実施例２．１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞由来の細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）がマクロファージのインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）レポーターに及ぼす影響
Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｊ７７４－ＮＦＩＳ）を９６ウェル培養プレートに１００，０００細胞／ウェルで播種した。Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、２つの誘導性レポーター構築物の安定な組込みにより、マウスＪ７７４．１マクロファージ様細胞株から誘導した。これらの細胞は、５コピーのＮＦ－κＢ転写応答エレメントと３コピーのｃ－Ｒｅｌ結合部位に融合したＩＦＮ－β最小プロモーターの制御下で分泌された胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞はまた、５つのインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）と一緒にＩＳＧ５４最小プロモーターの制御下で、分泌されたルシフェラーゼをコードするルシア（Ｌｕｃｉａ）ルシフェラーゼ遺伝子も発現する。その結果、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、ＳＥＡＰの活性を評価することによりＮＦ－κＢ経路と、ルシア・ルシフェラーゼの活性をモニターすることによりインターフェロン制御因子（ＩＲＦ）経路の同時研究を可能にする。

細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）を含む培養培地は、上記の実施例１に記載したようにＣＴ－２６マウス大腸癌細胞から作製した。実施例１に記載したタノトランスミッションモジュールに加えて、完全Ｔｅｔ誘導性プロモーターを含む追加のＲＩＰＫ３構築物も評価した。このＴｅｔ誘導性ＲＩＰＫ３は、図２Ａで「ＲＩＰＫ３」と称され、ＰＧＫプロモーターを含むＲＩＰＫ３構築物（実施例１に記載）は、図２Ａで「ＰＧＫ＿ＲＩＰＫ３」と称される。

また、免疫刺激性タノトランスミッションなしで、細胞死を誘導すると予測される対照も加えた。これらの対照構築物は、ｉ）ヒトＢｉｄのＣ末端カスパーゼ切断（ＮＭ＿１９７９６６．３）、ｉｉ）ヒトＧＳＤＭＤのＮ末端カスパーゼ切断（ＮＭ＿００１１６６２３７．１）、ｉｉｉ）合成により二量体化可能な形態のヒトカスパーゼ－８（ＤｍｒＢ－カスパーゼ－８）、又はｉｖ）ＤｍｒＢ－カスパーゼ－８及びヒトＧＳＤＭＥの両方（ＮＭ＿００４４０３．３）を発現する。次に、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞を、表示されるＣＴＦで２４ｈ刺激した。細胞培地を収集し、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｌｃ１）アッセイを用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）プロモーター活性化を、対照細胞株ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇと比較してグラフ化した。

図２Ａに示すように、調べたＣＴ－２６細胞株のうち、ＴＲＩＦを発現する細胞から収集した培地（単独で、又はＲＩＰＫ３と組み合わせて）のみが、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞においてＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化を誘導した。

別の実験では、ガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ）とＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３との組み合わせ発現の効果を調べた。ＣＴＦを含む培地は、実施例１に記載したように、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３を発現するＣＴ－２６細胞から、さらにはＴＲＩＦ＋ガスダーミンＥ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ガスダーミンＥを発現するＣＴ－２６細胞から作製した。図２Ｂに示すように、ＴＲＩＦ（ｉＴＲＩＦ）、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３（ｉＴＲＩＦ＿ｃＲ３）、ＴＲＩＦ＋ガスダーミンＥ（ｉＴＲＩＦ＿ｃＧＥ）、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ガスダーミンＥ（ｉＴＲＩＦ＿ｃＲ３＿ｃＧＥ）を発現するＣＴ－２６細胞の培地は各々、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞においてＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化を誘導した。実施例１で論じたように、二量体化剤の添加は、ＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化にほとんど影響を及ぼさなかった。

まとめると、これらの結果は、１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドを発現する癌細胞から産生されるＣＴＦが、免疫細胞における免疫刺激経路（即ち、ＩＲＦ経路）を活性化することを示している。

実施例３．１つ又は複数のタノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞由来の細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）が、骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）に及ぼす影響
骨髄細胞は、ＧＭ－ＣＳＦが十分なＲＰＭＩ培地を用いて、８日にわたり樹状細胞に分化させた。２ｍＬ当たり４００，０００細胞を６ウェルプレートに播種した。８日目に、骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を採取し、１００，０００細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種した。次いで、ＢＭＤＣを、実施例１に記載した操作ＣＴ－２６細胞由来のＣＴＦを含む培地で刺激した。２４時間時点で、刺激した細胞を採取し、細胞表面マーカーＣＤ８６、ＣＤ４０及びＰＤ－Ｌ１の発現をフローサイトメトリーによって測定し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＴｅｔ３Ｇ対照と比較してグラフ化した。抗体の供給源は以下の通りであった：ＣＤ８６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０５０４２）；ＣＤ４０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１０２９１０）；ＰＤ－Ｌ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１２４３１２）。細胞表面マーカーＣＤ８６、ＣＤ４０及びＰＤ－Ｌ１の発現は、樹状細胞の成熟を示す。

図３に示すように、調べたＣＴ－２６細胞株のうち、ＴＲＩＦ（単独又はＲＩＰＫ３と組み合わせたいずれでも）を発現するように操作された細胞から採取した培養培地のみが、ＣＤ８６、ＣＤ４０、又はＰＤ－Ｌ１の細胞表面発現を増大した。これらの結果は、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦとＲＩＰＫ３の両方を発現するように操作されたＣＴ－２６細胞からのＣＴＦが、樹状細胞の成熟を誘導したことを示している。樹状細胞におけるＣＤ８６及びＣＤ４０の上方制御は、Ｔ細胞を活性化する能力の増加を示している。従って、結果は、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現するように操作された癌細胞からのＣＴＦが樹状細胞の成熟を誘導し、Ｔ細胞を活性化する能力を高めることを示すものである。

実施例４．タノトランスミッションポリペプチド発現が単独で又は抗ＰＤ１抗体との組み合わせで、大腸癌のマウスモデルにおける腫瘍増殖及び生存率に及ぼす影響。
実施例１に記載したＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３タノトランスミッションモジュールを担持するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞をトリプシン処置し、１×１０^６細胞／ｍＬの無血清培地に再懸濁した。細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの右側皮下脇腹に注射（１００ｍＬ）した。ＣＴ－２６細胞注入後１１日目から１８日目まで、通常の飲料水にドキシサイクリン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｄ９８９１）を２ｍｇ／ｍｌで補給して、タノトランスミッションポリペプチド発現を誘導し、１１日目から１８日目まで、Ｂ／Ｂホモ二量体化剤（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６３２６２２）２ｍｇ／ｋｇを毎日のＩＰ注射により投与した。抗ＰＤ１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ番号ＢＰ０２７３）及びアイソタイプ対照を１４日目、１７日目及び２１日目に投与した。ＩＡＣＵＣガイドラインに従って腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したとき、又は実験終了時にマウスを安楽死させた。

図４Ａに示すように、ＴＲＩＦ単独（ＣＴ２６－ＴＦ）の発現は、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ対照（Ｔｅｔ３Ｇ－アイソタイプ対照）及びＣＴ２６－ＲＩＰＫ３細胞（ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３）と比較して生存率を増加させ、ＴＲＩＦとＲＩＰＫ３（Ｔｒｉｆ＿ＲＩＰＫ３－アイソタイプ対照）の組み合わせでさらに大きな利益が観察された。図４Ｂに示すように、ＴＲＩＦを有するＣＴ－２６細胞（ＣＴ２６－ＴＦ）又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３（ＴＲＩＦ＿ＲＩＰＫ３）を有するＣＴ－２６細胞を注射したマウスの生存率は、抗ＰＤ－１抗体による処置によって増強され、これらの処置群はいずれも１００％の生存率を示した（線が重なっている）。

別の実験では、実施例２に記載したＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ及びＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ＧＳＤＭＥタノトランスミッションモジュールを有するＣＴ－２６マウス大腸癌細胞をトリプシン処置し、１×１０^６細胞／ｍＬの無血清培地に再懸濁した。この実験にＢ／Ｂホモ二量体化剤は使用しなかった。細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの右側皮下脇腹に注射（１００ｍＬ）した。ＣＴ－２６細胞注射後１５日目から２１日目まで、マウスに６２５ｍｇ／ｋｇのドキシサイクリン塩酸塩（ＥｎｖｉｇｏＴＤ．０１３０６）を補充したＴｅｋｌａｄ標準飼料を給餌した。ＩＡＣＵＣガイドラインに従って腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したとき、又は実験終了時にマウスを安楽死させた。

図４Ｃに示すように、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と組み合わせたＧＳＤＭＥの発現は、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３をそれぞれ単独で発現する腫瘍を移植したマウスに比べて生存率をさらに高めた。

実施例５．化学カスパーゼ阻害剤が、タノトランスミッションポリペプチドを発現するＵ９３７ヒト骨髄性白血病細胞に及ぼす影響
Ｕ９３７ヒト骨髄性白血病細胞及びＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、それぞれＡＴＣＣ及びＩｎｖｉｖｏｇｅｎから取得した。Ｕ９３７は骨髄性白血病細胞株である。ヒトタノトランスミッションポリペプチド（ｔＢｉｄ、Ｃａｓｐａｓｅ８、ＲＩＰＫ３又はＴＲＩＦ）を発現するＵ９３７細胞を、実施例１及び２に記載の方法、並びに実施例１に記載のドキシサイクリン誘導性発現系を用いて作製した。

ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、ＮＦ－ｋＢ又はＩＲＦ経路いずれかの活性化時にレポータータンパク質を誘導するヒト単球細胞株である。これは、５コピーのＮＦ－κＢコンセンサス転写応答エレメントと３コピーのｃ－Ｒｅｌ結合部位に融合したＩＦＮ－β最小プロモーターによって駆動される分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞はまた、５つのＩＦＮ刺激応答エレメントと一緒に、ＩＳＧ５４最小プロモーターの制御下にあるＬｕｃｉａ遺伝子、即ち、分泌型ルシフェラーゼレポーター遺伝子を特徴とする。その結果として、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、ＳＥＡＰの活性のモニタリングによるＮＦ－ｋＢ経路、並びに分泌型ルシフェラーゼ（Ｌｕｃｉａ）の活性の評価によるＩＲＦ経路の同時研究を可能にする。

馴化培地を作製するために、５００万個のＵ９３７－ｔｅｔ３Ｇ、Ｕ９３７－ｔＢｉｄ、Ｕ９３７－カスパーゼ８、Ｕ９３７－ＲＩＰＫ３又はＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞を１０ｃｍディッシュ内のＲＰＭＩ中に播種し、その後ドキシサイクリン（１μｇ／ｍＬ）で２４ｈ処置して発現を誘導した。Ｕ９３７－カスパーゼ８、Ｕ９３７－ＲＩＰＫ３、及びＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞培養物にＢ／Ｂホモ二量体化剤（１００ｎＭ）を添加し、オリゴマー化による発現及びタンパク質活性化を促進した。さらには、４μＭＱ－ＶＤ－Ｏｐｈ（汎カスパーゼ阻害剤）、１０μＭＧＳＫ８７２（ＲＩＰＫ３阻害剤）、又は両方の組み合わせで、Ｕ９３７－ＴＲＩＦ細胞をさらに処置した。細胞を２４時間インキュベートした後、馴化培地を回収し、滅菌濾過した。

ＮＦ－ｋＢ又はＩＲＦレポーター発現に対するタノトランスミッションポリペプチドの効果を測定するために、１００，０００個のＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞／ウェルを１００μｌ容積の９６ウェル平底プレートに播種した。タノトランスミッションモジュールを発現するＵ９３７細胞から作製した１００μｌの馴化培地を各ウェルに添加した。２４時間のインキュベーション期間の後、２０μｌのＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞培養上清を平底９６ウェル白色（不透明）アッセイプレートに移し、プレートリーダーで発光を読み取る直前に、５０μｌのＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃアッセイ溶液を各ウェルに添加した。ＮＦ－ｋＢ活性を測定するために、２０μｌのＴＨＰ１－Ｄｕａｌ培養上清を平底９６ウェル透明アッセイプレートに移し、１８０μｌの再懸濁ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ溶液を各ウェルに添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、プレートリーダーを用いて６５５ｎｍでＳＥＡＰレベルを測定した。

図５Ａ及び５Ｂに示すように、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）単独で、又はＲＩＰＫ３阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ＋ＧＳＫ８７２）と組み合わせて処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞からの細胞培養物によるＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞の処置は、ＮＦ－ｋＢ活性化及びＩＲＦ活性を大幅に増加させた。（図５Ａ～５Ｃにおいて、＋はドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋はドキシサイクリン及びＢ／Ｂホモ二量体で処置したＵ９３７細胞を示す）。ＲＩＰＫ３阻害剤単独で処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞の細胞培地は、ＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞のＮＦ－ｋＢ活性化にほとんど影響を及ぼさなかったため、ＮＦ－ｋＢ活性化の増加が、カスパーゼ阻害によるものであることを示している。図５Ｂ及び５Ｃに示されるように、カスパーゼ阻害剤で処置しなかったＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞からの細胞培養培地によるＴＨＰ－１Ｄｕａｌ細胞の処置もまた、カスパーゼ阻害剤で処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞よりも程度は低いものの、ＩＲＦ活性を増加した。

総合すると、これらの結果は、ＴＲＩＦを発現するヒト癌細胞から産生されるＣＴＦが、免疫細胞の免疫刺激経路（即ち、ＮＦ－ｋＢ経路及びＩＲＦ経路）を活性化すること、並びにカスパーゼ阻害がこの効果を高めることを実証するものである。

実施例６．カスパーゼ阻害剤タンパク質を含む組み合わせタノトランスミッションポリペプチドを発現させることによるＣＴ－２６マウス大腸癌細胞におけるタノトランスミッションの調節。
この実施例に記載される実験では、カスパーゼ阻害剤タンパク質の発現が、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現する癌細胞におけるタノトランスミッションに及ぼす影響を調べた。

実施例１に記載されるように、タノトランスミッションポリペプチドＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現するＣＴ２６マウス大腸癌細胞を、以下のものをコードする遺伝子で形質導入した：（ｉ）デスドメインを有するヒトＦａｓ関連タンパク質のドミナントネガティブバージョン（ＦＡＤＤ；アクセッション番号ＮＭ＿００３８２４）；（ｉｉ）ヒト細胞ＦＬＩＣＥ様阻害性タンパク質（ｃＦＬＩＰ；アクセッション番号ＮＭ＿００１１２７１８４．４）；又は（ｉｉｉ）カスパーゼ活性を阻害することによりタノトランスミッションを調節することを目的とするカスパーゼのウイルス阻害剤（ｖＩＣＡ、ＨＣＭＶ遺伝子ＵＬ３６；アクセッション番号ＮＣ＿００６２７３．２）。ＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰｓ及びｖＩＣＡを各々ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏベクター（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ）にクローニングし、これを使用して、ＣＴ２６－ＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３発現細胞を形質導入した。

これらの細胞を播種した後、発現を促進するために、ドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、０２１９８９５５２５）で２４ｈ処置した。Ｂ／Ｂホモ二量体化剤は本実験では使用しなかった。相対細胞生存率は、製造業者の指示に従い、ＲｅａｌＴｉｍｅ－ＧｌｏＭＴＣｅｌｌＶｉａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ９７１２）を用いて、処置後２４ｈ時点で決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）により測定された相対生存率を示すグラフを作成した。

図６Ａに示すように、ＣＴ２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞におけるＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰｓ又はｖＩＣＡのいずれの発現も、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現によって誘導される癌細胞の生存率の低下を減弱させた。しかし、ＣＴ２６細胞におけるｃＦＬＩＰｓ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３又はｖＩＣＡ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の発現は、親株ＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞株と比較して、ＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３単独よりもわずかに低い程度で、依然として癌細胞の生存率を低下させた。図６Ａを参照されたい。

次に、上の実施例５に記載したように、ＣＴ－２６マウス大腸癌細胞からＣＴＦを含む培地を作製した。続いて、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞を、表示されるＣＴＦで２４ｈ刺激した。細胞培地を収集し、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｌｃ１）アッセイを用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）プロモーター活性化を、対照細胞株Ｔｅｔ３Ｇと比較してグラフ化した。図６Ｂに示すように、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３を発現するＣＴ２６細胞株から回収した培地は、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ細胞においてＩＲＦレポーター発現を誘導した。さらに、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３に加えてＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰｓ又はｖＩＣＡを発現するＣＴ２６細胞由来の培地も、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ細胞でＩＲＦレポーター活性化を誘導した。

上記のＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰｓ又はｖＩＣＡタノトランスミッションモジュールを有するＣＴ－２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３マウス大腸癌細胞をトリプシン処置し、１×１０^６細胞／ｍＬの無血清培地に再懸濁した。この実験では、Ｂ／Ｂホモ二量体化剤を使用しなかった。免疫正常ＢＡＬＢ／ｃマウスの右側皮下脇腹に細胞（１００μＬ）を注射した。ＣＴ－２６細胞注射後１５日目から２１日目まで、マウスに６２５ｍｇ／ｋｇのドキシサイクリン塩酸塩（ＥｎｖｉｇｏＴＤ．０１３０６）を補充したＴｅｋｌａｄ標準飼料を給餌した。ＩＡＣＵＣガイドラインに従って腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したとき、又は実験終了時にマウスを安楽死させた。

図６Ｃに示すように、タノトランスミッションモジュール（即ち、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ＦＡＤＤ－ＤＮ、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ｃＦＬＩＰＳ、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡ）を発現するすべての腫瘍の増殖は、対照ＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞と比較して低減した。特に、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と組み合わせたＦＡＤＤ－ＤＮ又はｖＩＣＡの発現は、親ＣＴ２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞と比較して、腫瘍増殖をさらに低減した。興味深いことに、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３に加えてＦＡＤＤ－ＤＮ又はｖＩＣＡを含むタノトランスミッションモジュールは、インビボでの腫瘍増殖の抑制に最も効果的であったが、ＦＡＤＤ－ＤＮ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３は、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞と比較してインビトロでのＣＴ２６癌細胞の生存率にほとんど影響を与えなかったのに対し、ｖＩＣＡ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３共発現は、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と比較してインビトロでの細胞殺傷を増強した。これらの結果は、タノトランスミッションモジュールによる癌細胞殺傷の規模に加えて、これらのモジュールの発現により癌細胞によって産生される明確な細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）プロファイルも、インビボでの腫瘍細胞に対する免疫応答に寄与し得ることを示唆している。

実施例７．ヒトＴＲＩＦ変異体が、インビトロでの癌細胞の生存率並びにＩＲＦ及びＮＦｋＢ活性に及ぼす影響。
この研究の目的は、ヒト癌細胞株の生存率並びにヒト単球株におけるＩＲＦ及びＮＦｋＢ経路の誘導に対するヒトＴＲＩＦタンパク質の様々な変異体の効果を決定することであった。

構築物を試験するために、ヒトＴＲＩＦ変異体の配列を設計、コドン最適化、合成し、市販のレンチウイルスベクター（ｐＬＶＸ－ＴｅｔＯＮＥ－Ｐｕｒｏ、Ｔａｋａｒａ）にクローニングした。２つのコントロール細胞株、ＴＥＴＯＮ３Ｇ及びｔＢＩＤも調製した。ＴｅｔＯＮ３Ｇ細胞株は、細胞死誘導遺伝子の異種発現なしで、ドキシサイクリン誘導のためのトランスアクチベーターを発現する陰性対照である。ｔＢＩＤ細胞株は、細胞毒性の陽性対照であり、ｔＢＩＤは、ドキシサイクリン非依存的に発現される。ＴＲＩＦ構築物は、タンパク質発現をモニタリングするためのＣ末端にＦＬＡＧタグも含有していた。ＴＲＩＦ構築物をヒト大腸腺癌ＨＴ２９細胞及びヒト黒色腫Ａ３７５細胞に形質導入した。ＴＲＩＦ構築物の発現は、ドキシサイクリン誘導性系（ＴｅｔＯＮｓｙｓｔｅｍ，Ｔａｋａｒａ）を介して誘導した。ドキシサイクリン処置から１日後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ２．０アッセイ（「ＣＴＧ」、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、細胞生存率を評価し、上清をＴＨＰ１－Ｄｕａｌ単球（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に移した。ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ単球は、分泌型ルシフェラーゼと分泌型アルカリホスファターゼをそれぞれ使用するＩＲＦ及びＮＦｋＢ活性の２つのレポーターを含有していた。この研究で評価したＴＲＩＦ構築物を以下の表７に記載する。

結果：
図７及び９に示すように、ＴＩＲドメイン単独（「ＴＩＲドメイン」構築物）の発現にはある程度の細胞溶解活性があり、ＴＩＲドメイン（「ＴＲＩＲ」構築物）にＴＲＩＦ断片ａａ１８１－ａａ２１６を付加することにより、この細胞溶解活性は増強された。予想外なことに、ＲＨＩＭ四分子の欠失（「ＴＲＩＦ＿ｍｕｔＲＨＩＭ」構築物）又はＲＨＩＭドメインを含むＴＲＩＦのＣ末端領域の切断（「ＴＲＩＦ＿Ｔｒｕｎｃ」構築物）によって示されるように、ＲＨＩＭドメインは細胞溶解活性に必要ではなかった。ＴＢＫ１によってリン酸化された３つのアミノ酸残基の変異を有するＴＲＩＦ変異体（「ＴＲＩＦ＿ＰｈｏｓｐｈｏＭ」構築物）の発現は、ＨＴ２９細胞においてほとんど細胞傷害活性を示さず、Ａ３７５細胞では細胞傷害活性を全く示さなかった。意外なことに、このＴＲＩＦ変異体は、ＩＲＦ及びＮＦｋＢ活性を維持しており、細胞死の脱共役及びこれらの経路の活性化の可能性を示唆している。この結果は、ＨＴ２９細胞におけるＩＲＦアッセイ（図８を参照）によって補強され、このアッセイでは、細胞死とＩＲＦ活性化は、低用量のドキシサイクリンでの変異体に応じて切り離すことができる。ｍｉｎｉＴＲＩＦ変異体の発現は、細胞死に関して非常に強力である（図７及び９を参照）が、ＴＨＰ１－ＤｕａｌアッセイにおけるＮＦｋＢ及びＩＲＦ経路の誘導は低くなる（図８及び１０を参照）。断片ａａ１８１－ａａ３１０をｍｉｎｉＴＲＩＦに付加する（「ＴＲＩＦ＿ｄ１－１８０」構築物）と、細胞死の高い効力を維持しながら、ＮＦｋＢ及びＩＲＦ経路を強力に活性化する。ＴＲＩＲとヒトＲＩＰＫ３との融合物から成るＴＲＩＦ変異体（「ＴＲＩＲ３」構築物）の発現は、細胞死を誘導すると共に、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＲ単独よりも低いレベルでＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞におけるＩＲＦ及びＮＦｋＢ経路を活性化することができる。ＲＨＩＭドメインを有する断片ａａ１８１－ａａ２１６を含むＴＲＩＳ変異体の発現は、以前に発表された知見（Ｈａｎｅｔａｌ．，ＪＢＣ２８５：１２５４３－１２５５０（２０１０））とは逆に、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞の細胞死又は活性化をもたらさなかった。

総合すると、これらの結果は、以下のことを示している：ｉ）ＴＩＲドメインは、細胞死を誘導するための最小断片であると思われるが、タンパク質の他のドメイン（例えば、ＲＨＩＭドメイン）は、細胞死の様式及び規模を多様化することができること；ｉｉ）ＴＲＩＦのＴＢＫ１リン酸化部位（Ｓ２１０Ａ、Ｓ２１２Ａ及びＴ２１４Ａ）は、特にＡ３７５細胞における細胞死の重要な寄与因子であること；ｉｉｉ）ａａ１８１－ａａ２１６断片とＴＩＲドメインの組み合わせは、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌアッセイにおいて高レベルのＩＲＦ誘導をもたらすこと；ｉｖ）ＴＲＩＦタンパク質のＴＩＲドメインとＲＩＰＫ３タンパク質を含む融合構築物（「ＴＲＩＲ３」）は、高い細胞毒性、中程度のＩＲＦ誘導、及び低いＮＦｋＢ誘導／その非存在という予想外の特徴を有すること。

実施例８．大腸癌のモデルマウスにおけるｍｉｎｉＴＲＩＦを含む組み合わせタノトランスミッションポリペプチドの評価
実施例１に記載のドキシサイクリン誘導性発現のためのＴｅｔ－Ｏｎ３Ｇトランスアクチベーターを発現するＣＴ２６マウス大腸癌細胞を、以下のものをコードする遺伝子で形質導入した：（ｉ）ｍｉｎｉＴＲＩＦ（表７参照）＋マウスＲＩＰＫ３（実施例１、アクセッション番号：ＮＭ＿０１９９５５．２；又はｉｉ）ｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ（アクセッション番号：ＮＭ＿００１１２７４５３．２）。前述したようにＴｅｔ－Ｏｎ３Ｇアクチベーター単独、ｍｉｎｉＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３（＋Ｔｅｔ－Ｏｎ３Ｇアクチベーター）、又はＭｉｎｉＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ（＋Ｔｅｔ－Ｏｎ３Ｇアクチベーター）モジュールを発現するＣＴ２６細胞をトリプシン処置し、１×１０^６細胞／ｍＬで無血清培地に再懸濁した。この実験では、Ｂ／Ｂホモ二量体化剤は使用しなかった。免疫正常ＢＡＬＢ／ｃマウスの右側皮下脇腹に細胞（１００μＬ）を注射した。ＣＴ－２６細胞注射後１３日目から１９日目まで、マウスに６２５ｍｇ／ｋｇのドキシサイクリン塩酸塩（ＥｎｖｉｇｏＴＤ．０１３０６）を補充したＴｅｋｌａｄ標準飼料を給餌した。ＩＡＣＵＣガイドラインに従って腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したとき、又は実験終了時にマウスを安楽死させた。

結果
図１１に示すように、ｍｉｎｉＴＲＩＦとＧＳＤＭＥの組み合わせは、対照と比較して腫瘍サイズを大幅に縮小した。また、ｍｉｎｉＴＲＩＦとＧＳＤＭＥの組み合わせは、図１２に示すように、対照と比較して生存率も大幅に増加させた。例えば、ｍｉｎｉＴＲＩＦとＧＳＤＭＥの組み合わせを発現するＣＴ２６細胞を含むすべてのマウスは、３４日目にまだ生存していたが、対照動物はすべて死んでいた。ｍｉｎｉＴＲＩＦとＲＩＰＫ３の組み合わせも、図１３及び１４に示すように、腫瘍サイズを大幅に縮小すると共に、生存率を大幅に増加させた。

まとめると、これらの結果は、癌細胞におけるタノトランスミッションポリペプチドの発現が、腫瘍増殖を低減すると共に、生存率を増加し得ることを示している。

実施例９．アデノウイルスから発現させたＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ及びｖＩＣＡが、インビトロで癌細胞の生存率及びＩＲＦ活性に及ぼす影響。
この研究の目的は、単独で、又は複製不全アデノウイルス５から発現させたＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ｖＩＣＡと組み合わせたＲＩＰＫ３の、ヒト癌細胞株の生存率及びＪ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｊ７７４－ＮＦＩＳ）におけるＩＲＦ経路の誘導に対する効果を決定することであった。

Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、誘導性レポーター構築物の安定な組込みにより、マウスＪ７７４．１マクロファージ様細胞株から取得した。例えば、これらの細胞は、５つのインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）と一緒に、ＩＳＧ５４最小プロモーターの制御下で、分泌型ルシフェラーゼをコードするルシア・ルシフェラーゼ遺伝子を発現する。その結果、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、ルシア・ルシフェラーゼの活性をモニターすることにより、インターフェロン制御因子（ＩＲＦ）経路の研究を可能にする。

この実験では、マウスＲＩＰＫ３（ｍＲＩＰＫ３）、ヒトＴＲＩＦ－Ｐ２Ａ－ｍＲＩＰＫ３、又はヒトＴＲＩＦ－Ｐ２Ａ－ｍＲＩＰＫ３－Ｐ２Ａ－ｖＩＣＡを発現する複製不全アデノウイルス５（Ｅ１及びＥ３領域を欠失）が、野生型マウス癌細胞株４Ｔ１（乳癌）、ＭＣ３８（大腸癌）、Ｐａｎ０２（膵臓癌）におけるタノトランスミッションに及ぼす影響を調べた。ＲＩＰＫ３に種特異性があるため、マウスモデルにはマウスＲＩＰＫ３を使用した。ＴＲＩＦには種特異性がないため、ヒトＴＲＩＦを使用した。Ｐ２Ａペプチドは翻訳中にリボソームスキッピングを誘導するため、ＴＲＩＦ、ｍＲＩＰＫ３及びｖＩＣＡは個別のタンパク質として発現させた。

癌細胞株４Ｔ１、ＭＣ３８及びＰａｎ０２を播種した後、模擬対照、ｍＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ－Ｐ２Ａ－ｍＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ－Ｐ２Ａ－ｍＲＩＰＫ３－Ｐ２Ａ－ｖＩＣＡを発現するアデノウイルス５で、多重感染（ＭＯＩ）５０（即ち、癌細胞当たり５０個のアデノウイルス）で７２時間処置した。細胞死は、ＳＹＴＯＸグリーン（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｓ７０２０）を用いて測定し、全細胞数は、Ｈｏｅｃｈｓｔ（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｈ１３９９）を用いて核染色により測定した。

細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）を含む馴化培地は、アデノウイルスで処置した後４８時間細胞を培養することにより、ほぼ実施例５に記載したように上記の組換えアデノウイルスで処置した細胞から作製した。４８時間のインキュベーション後、馴化培地を回収し、滅菌濾過した。ＩＲＦ活性の測定のために、続いて、表示のＣＴＦでＪ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞を２４ｈ刺激した。具体的には、１００，０００個のＪ７７４－Ｄｕａｌ細胞／ウェルを１００μｌ容積の９６ウェル平底プレートに播種した。タノトランスミッションモジュールを発現する様々な癌細胞から生成した１００μｌの馴化培地を各ウェルに添加した。Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞から細胞培養培地を回収し、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｌｃ１）アッセイを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）プロモーター活性化を、対照細胞株、Ｔｅｔ３Ｇに対してグラフ化し、ＩＲＦ活性を示した。

結果
図１５～１７は、７２時間にわたり生存細胞と比較した細胞死を示す。図１５の左側パネルに示すように、ＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡの組み合わせは、４Ｔ１マウス乳癌細胞の細胞死を大幅に増加させたが、ｍＲＩＰＫ３単独、ＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３、及び模擬対照は細胞死をほとんど又は全く示さなかった。図１６及び１７に示すように、ＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡ及びＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３はいずれも、ｍＲＩＰＫ３単独及び模擬対照と比較して、ＭＣ３８大腸癌細胞（図１６、左パネル）及びＰａｎ０２膵臓癌細胞（図１７、左側パネル）の細胞死を大幅に増加させ、ＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡの発現は、より高度且つより迅速な細胞死をもたらした。

図１５～１７、右側パネルに示すように、ＴＲＩＦ＋ｍＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡを発現する４Ｔ１、ＭＣ３８及びＰａｎ０２細胞から収集された培地は、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞においてＩＲＦレポーター発現を強く誘導したが、ｍＲＩＰＫ３単独及びｍＲＩＰＫ３＋ＴＲＩＦの発現はＩＲＦ活性にほとんど影響を及ぼさなかった。

Ａｄ５－ｈＴＲＩＦ－Ｐ２Ａ－ｍＲＩＰＫ３で処置したＭＣ３８、４Ｔ１及びＰａｎ０２細胞から収集した培地に関するこの後者の結果は、ｈＴＲＩＦ及びｍＲＩＰＫ３を発現したＣＴ２６細胞から収集した培地がＪ７７４細胞でＩＲＦ活性を誘導した前述のｄｏｘ誘導性タノスイッチの結果とは異なる。この相違の理由はまだ明らかにされていないが、アデノウイルス発現系におけるＩＲＦ活性の欠如は、ｄｏｘ誘導性系と比較してＲＩＰＫ３及びＴＲＩＦ発現レベルが低いことによると考えられる。或いは、この実験における感染性アデノウイルス粒子の用量は、ｍＲＩＰＫ３＋ＴＲＩＦがＩＲＦ活性を誘導するのに十分ではなかった可能性もある。

Claims

２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子であって、前記２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドが、以下：ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン（Ｓｈａｒｐｉｎ）、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される、組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＭＡＶＳ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子が、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする、請求項１～５のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドが、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項６に記載の組換え核酸分子。
前記カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドが、ＦＡＤＤ－ＤＮである、請求項６に記載の組換え核酸分子。
前記カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドが、ｃＦＬＩＰである、請求項６に記載の組換え核酸分子。
前記カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドが、ｖＩＣＡである、請求項６に記載の組換え核酸分子。
前記組換え核酸分子が、少なくとも１つのガスダーミン又はその変異体をコードする、請求項１～５のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＭＡＶＳ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記ガスダーミンが、ガスダーミンＥ又はその変異体である、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミンＥ又はその変異体を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子が、前記２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写産物として転写される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子が、ＲＮＡ分子である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つが、ＮＦ－ｋＢを活性化する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つが、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つが、外因性アポトーシスを促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つが、プログラム壊死を促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、外因性アポトーシスを促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、プログラム壊死を促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、外因性アポトーシスを促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、プログラム壊死を促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、外因性アポトーシスを促進し、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、プログラム壊死を促進する、請求項１に記載の組換え核酸分子。
前記プログラム壊死が、ネクロトーシスを含む、請求項２２、２５、２７及び２８のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記プログラム壊死が、パイロトーシスを含む、請求項２２、２５、２７及び２８のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
ＮＦ－ｋＢを活性化する前記タノトランスミッションポリペプチドが、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項１９及び２３～２５のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する前記タノトランスミッションポリペプチドが、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項２０、２３、２６及び２７のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
外因性アポトーシスを促進する前記タノトランスミッションポリペプチドが、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項２１、２４、２６及び２８のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
プログラム壊死を促進する前記タノトランスミッションポリペプチドが、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項２２、２５、２７及び２８のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドが、融合タンパク質に含まれる、請求項１～３４のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記融合タンパク質が、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む、請求項３５に記載の組換え核酸分子。
前記融合タンパク質が、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項３５に記載の組換え核酸分子。
前記融合タンパク質が、ＴＲＩＦ又はその変異体とＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項３５に記載の組換え核酸分子。
前記融合タンパク質が、１つ又は複数のリンカーをさらに含む、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記融合タンパク質が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子が、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる、請求項１～４０のいずれか１項に記載の組換え核酸分子。
前記二量体化ドメインが、前記タノトランスミッションポリペプチドに対して異種である、請求項４１又は４２に記載の組換え核酸分子。
請求項１～４３のいずれか１項に記載の組換え核酸分子の１つ又は複数を含むリポソーム。
請求項１～４３のいずれか１項に記載の組換え核酸分子の１つ又は複数を含むベクター。
前記ベクターが、操作されたウイルス、プラスミド、又はトランスポゾンである、請求項４５に記載のベクター。
前記ウイルスが、アデノウイルスである、請求項４６に記載のベクター。
請求項１～４３のいずれか１項に記載の組換え核酸分子のいずれか１つによりコードされるポリペプチド。
請求項１～４８のいずれか１項に記載の核酸分子、ベクター、及び／又はポリペプチドの１つ又は複数を含む細胞。
異なるタノトランスミッションポリペプチド各々をコードする２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む細胞であって、前記タノトランスミッションポリペプチドの各々が、以下：ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、及びそれらの変異体からなる群から選択される細胞。
前記２つ以上の外因性ポリヌクレオチドが、同じ核酸分子内に含まれる、請求項５０に記載の細胞。
前記２つ以上の外因性ポリヌクレオチドの各々が、個別の核酸分子中に含まれる、請求項５０に記載の細胞。
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子である、請求項５１又は５２に記載の細胞。
前記ＤＮＡ分子が、プラスミド又はトランスポゾンである、請求項５３に記載の細胞。
前記核酸分子が、ＲＮＡ分子である、請求項５１又は５２に記載の細胞。
前記ＲＮＡ分子が、環状ＲＮＡである、請求項５５に記載の細胞。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の細胞。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の細胞。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の細胞。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の細胞。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項５０～５６のいずれか１項に記載の細胞。
前記ガスダーミンが、ガスダーミンＥである、請求項６１に記載の細胞。
前記細胞が、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項５０～６２のいずれか１項に記載の細胞。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項６３に記載の細胞。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ＦＡＤＤ－ＤＮである、請求項６３に記載の細胞。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ｃＦＬＩＰである、請求項６３に記載の細胞。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ｖＩＣＡである、請求項６３に記載の細胞。
ａ）請求項１～６７のいずれか１項に記載の組換え核酸分子、リポソーム、ベクター、又は細胞のいずれか１つと、ｂ）薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物。
以下：
（ａ）異なるタノトランスミッションポリペプチドを各々コードする２つ以上のポリヌクレオチドであって、前記タノトランスミッションポリペプチドの各々が、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、シャーピン、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、それらの変異体、及びそれらの変異体からなる群から選択される、２つ以上のポリヌクレオチドと；
（ｂ）薬学的に許容される担体と
を含む医薬組成物。
前記医薬組成物中の前記２つ以上のポリヌクレオチドが、同じ核酸分子内に含まれる、請求項６９に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物中の前記２つ以上のポリヌクレオチドの各々が、個別の核酸分子中に含まれる、請求項６９に記載の医薬組成物。
前記核酸分子が、ＤＮＡ分子である、請求項７０又は７１に記載の医薬組成物。
前記ＤＮＡ分子が、プラスミド又はトランスポゾンである、請求項７２に記載の医薬組成物。
前記ＤＮＡ分子が、操作されたウイルス内に含まれる、請求項７２に記載の医薬組成物。
前記ウイルスが、アデノウイルスである、請求項７４に記載の医薬組成物。
前記核酸分子が、ＲＮＡ分子である、請求項７０又は７１に記載の医薬組成物。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含む、請求項６９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項６９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含む、請求項６９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項６９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＴＲＩＦ又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ＲＩＰＫ３又はその変異体を含み、前記核酸分子によってコードされる前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、ガスダーミン又はその変異体を含む、請求項６９～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記ガスダーミンが、ガスダーミンＥである、請求項８１に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物が、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項６９～８２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ＦＡＤＤドミナントネガティブ変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びそれらの変異体からなる群から選択される、請求項８３に記載の医薬組成物。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ＦＡＤＤ－ＤＮである、請求項８３に記載の医薬組成物。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ｃＦＬＩＰである、請求項８３に記載の医薬組成物。
カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドが、ｖＩＣＡである、請求項８３に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物が、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む、請求項６９～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記タノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つが、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる、請求項６９～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記二量体化ドメインが、前記タノトランスミッションポリペプチドに対して異種である、請求項８９に記載の医薬組成物。
前記ＴＲＩＦ変異体が、配列番号２の野生型ヒトＴＲＩＦタンパク質の１～３１１位にアミノ酸残基の欠失を含むヒトＴＲＩＦ変異体である、請求項６９～９０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記ＴＲＩＦ変異体が、配列番号１２から構成される、請求項６９～９０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１つ又は複数の核酸分子を対象に送達する方法であって、前記方法が、請求項６８～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物のいずれか１つを前記対象に投与することを含む方法。
対象においてタノトランスミッションを促進する方法であって、前記方法が、タノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間で、請求項６８～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物のうちのいずれか１つを前記対象に投与することを含む方法。
それを必要とする対象の免疫応答を増大する方法であって、前記方法が、前記対象の免疫応答を増大するのに十分な量及び時間で、請求項６８～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物のいずれか１つを前記対象に投与することを含む方法。
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする組換え核酸分子を前記対象に投与すると、前記タノトランスミッションポリペプチドの１つだけをコードする核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答が増大する、請求項９５に記載の方法。
カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする組換え核酸分子の投与が、２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするが、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはさらにコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、免疫応答を増大する、請求項９５に記載の方法。
免疫応答の増大が、ＮＦｋＢ活性及びＩＲＦ活性の１つ又は複数を増大することを含む、請求項９５～９７のいずれか１項に記載の方法。
それを必要とする対象の癌を処置する方法であって、前記方法が、前記癌を処置するのに十分な量及び時間で、請求項６８～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物のいずれか１つを前記対象に投与することを含む方法。
前記医薬組成物が、前記対象に静脈内投与される、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ又は複数の核酸分子が、リポフェクションによって前記対象に送達される、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
前記リポフェクションが、ＲＮＡリポフェクションである、請求項１０１に記載の方法。
前記リポフェクションが、ＤＮＡリポフェクションである、請求項１０１に記載の方法。
前記医薬組成物の前記対象への投与が、前記対象の癌細胞の増殖を抑制する、請求項９９～１０３のいずれか１項に記載の方法。
前記癌細胞の増殖が、前記対象に投与される癌療法から起こる癌細胞の過剰増殖である、請求項１０４に記載の方法。
前記医薬組成物の前記対象への投与が、前記対象の癌細胞の転移を抑制する、請求項９９～１０５のいずれか１項に記載の方法。
前記医薬組成物の前記対象への投与が、前記対象の腫瘍の新生血管形成を抑制する、請求項９９～１０６のいずれか１項に記載の方法。
癌の処置が、以下：腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、処置前に進行性癌を有する対象における癌の安定化の達成、癌が進行するまでの時間の延長、及び生存期間の延長のうちのいずれか１つ又は複数を含む、請求項９９～１０７のいずれか１項に記載の方法。
前記癌が、低減したＲＩＰＫ３発現を示す、請求項９９～１０８のいずれか１項に記載の方法。
前記癌が、固形腫瘍である、請求項９９～１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記癌が、大腸癌、胃癌、卵巣癌、前立腺癌、副腎皮質癌及び乳癌からなる群から選択される、請求項９９～１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記癌が、大腸癌である、請求項９９～１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記方法が、抗腫瘍薬を前記対象に投与することをさらに含む、請求項９９～１１２のいずれか１項に記載の方法。
２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードする前記組換え核酸分子の前記対象への投与が、前記タノトランスミッションポリペプチドの１つだけをコードする核酸分子を投与された対象と比較して、生存期間を延長し、且つ／又は腫瘍増殖を抑制する、請求項９９～１１３のいずれか１項に記載の方法。
カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする前記組換え核酸分子の投与が、前記２つ以上の異なるタノトランスミッションポリペプチドをコードするが、カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドはさらにコードしない核酸分子を投与された対象と比較して、生存期間を延長し、且つ／又は腫瘍増殖を抑制する、請求項９９～１１３のいずれか１項に記載の方法。