JP2021520829A

JP2021520829A - ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲＡＦｃ融合タンパク質およびＴＩＭ−３抗原結合ドメインを含む、ＴＩＭ−３標的化ヘテロ二量体融合タンパク質

Info

Publication number: JP2021520829A
Application number: JP2020556782A
Authority: JP
Inventors: バーネット，マシュー; デスジャルレイス，ジョン; ラシッド，ルマナ; ヴァルマ，ラジャット; ボンゾン，クリスティーン
Original assignee: ゼンコアインコーポレイテッド
Priority date: 2018-04-18
Filing date: 2019-04-18
Publication date: 2021-08-26
Also published as: WO2019204655A9; US11505595B2; WO2019204655A1; US20230331813A1; KR20210003814A; CA3097741A1; EP3781598A1; AU2019256529A1; US20190359684A1; CN112437777A; IL278089A

Abstract

本発明は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα Ｆｃ融合タンパク質およびＴＩＭ−３抗体フラグメント−Ｆｃ融合タンパク質を含む、新規な標的化ヘテロ二量体融合タンパク質に関する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／６５９，６２６号および２０１８年１２月２０日に出願された第６２／７８３，１１０号に対する優先権を主張し、これらは、特に、その中の図面、説明文および請求の範囲を参照しつつ、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。

癌免疫療法における２つの非常に有望な手法には、サイトカインに基づく治療、およびＰＤ−１などの免疫チェックポイントタンパク質の遮断が含まれる。

ＩＬ−２およびＩＬ−１５などのサイトカインは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖および分化を補助することにおいて機能する。このサイトカインは両方とも、２つの共有する受容体である共通γ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）、およびＩＬ−２受容体ベータ鎖（ＩＬ−２Ｒβ、ＣＤ１２２）、ならびに各サイトカインに固有のアルファ鎖受容体であるＩＬ−２受容体アルファ（ＩＬ−２Ｒα、ＣＤ２５）またはＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα、ＣＤ２１５）からなる三量体複合体への結合を通して、それらの細胞シグナル伝達機能を発揮する。このサイトカインは両方とも、腫瘍学において潜在的に価値のある治療薬と考えられており、ＩＬ−２は、転移性腎細胞癌および悪性黒色腫の患者への使用が承認されている。現在、いくつかの臨床試験が進行中であるが、組換えＩＬ−１５の承認された用途はない。しかしながら、有望な薬物として、このサイトカインは両方とも、数分単位で測定される半減期を有し、クリアランスが非常に速いことが問題となっている。ＩＬ−２免疫療法は、速いクリアランスを克服するために高用量で投与されるときの全身毒性と関連している。このような全身毒性は、最近の臨床試験において、ＩＬ−１５免疫療法でも報告されている（Ｇｕｏら、ＪＩｍｍｕｎｏｌ、２０１５、１９５（５）：２３５３−６４）。

ＰＤ−１などの免疫チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞活性化に続いて上方制御され、ＰＤ−Ｌ１などの免疫チェックポイントリガンドと結合すると、活性化Ｔ細胞を疲弊させることによって自己免疫を排除する。しかしながら、免疫チェックポイントタンパク質は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）においても上方制御され、免疫チェックポイントリガンドが腫瘍細胞で過剰発現し、腫瘍細胞による免疫逃避の原因となる。Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ）およびＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ）などの薬物による免疫チェックポイント相互作用の遮断によるＴＩＬの抑制解除は、癌の治療に非常に効果的であることが証明されている。ニボルマブおよびペムブロリズマブなどのチェックポイント遮断療法の有望さにもかかわらず、多くの患者は、依然としてチェックポイント遮断単独では十分な応答を達成することに失敗している。

したがって、高用量を必要とせず、かつ全身毒性を回避するために腫瘍を標的とするサイトカインによる治療戦略のための腫瘍治療における満たされていない必要性が残っている。さらに、患者の応答率を増加させ得るチェックポイント遮断と合った追加の治療様式を特定する必要性がある。

本発明は、安全性プロファイルを改善するために半減期が延長され、ＴＩＬをより選択的に標的とし、チェックポイント遮断抗体と相乗的に結合する、新規なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５ヘテロ二量体融合タンパク質を提供することによって、これらの要望と注意事項に対処する（図１）。

一態様では、本発明は、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質であって、（ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５ｓｕｓｈｉドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）バリアントＩＬ−１５ドメイン、ｉｖ）第２のドメインリンカー、ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、（ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）第３のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含み、ｓｃＦｖドメインが、第１の可変重鎖ドメインと、ｓｃＦｖリンカーと、第１の可変軽鎖ドメインと、を含む、第２の単量体と、を含み、ｓｃＦｖドメインはヒトＴＩＭ−３に結合する、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質を提供する。

本発明の他の態様では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質であって、（ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５ｓｕｓｈｉドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、（ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）第３のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含み、ｓｃＦｖドメインが、第１の可変重鎖ドメインと、ｓｃＦｖリンカーと、第１の可変軽鎖ドメインと、を含む、第２の単量体と、（ｃ）バリアントＩＬ−１５ドメインを含む第３の単量体と、を含み、ｓｃＦｖドメインはヒトＴＩＭ−３に結合する、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質が、本明細書で提供される。

一態様では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が提供される。このような「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＩＬ−１５バリアント、ｉｖ）第２のドメインリンカー、ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体と、を含む。ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、第２のドメインリンカーは、抗体ヒンジである。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質の特定の実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質の例示的な実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＩＬ−１５バリアント、ｉｖ）ヒンジ、ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体と、を含む。ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。例示的な実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体タンパク質のＩＬ−１５バリアントは、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、Ｑ１０８Ｅ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤおよびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

例示的な実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ＸＥＮＰ２７９７４、ＸＥＮＰ２７９７９、ＸＥＮＣ１０００、ＸＥＮＣ１００１、ＸＥＮＣ１００２またはＸＥＮＣ１００３である。

特定の実施形態では、本明細書で提供される「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のＶＨおよびＶＬは、図１２および１３のＴＩＭ−３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変ドメインである。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、３Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

一態様では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットを有するヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。一実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＩＬ−１５バリアント、ｉｖ）第２のドメインリンカー、およびｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）第３のドメインリンカー、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第２のドメインリンカーおよび第３のドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジである。

特定の実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのいくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＩＬ−１５バリアント、ｉｖ）ヒンジ、およびｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）ヒンジ、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このようなヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第２のドメインリンカー、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、を含む。ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。一実施形態では、第１のドメインリンカーおよび第２のドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジである。

「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）ヒンジ、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）ヒンジ、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、を含む。さらに、ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むバリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）第２のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、を含む。ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインのシステイン残基と、ＩＬ−１５バリアントのシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。特定の実施形態では、第１のドメインリンカーおよび第２のドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジである。

「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むバリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）ヒンジ、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ｓｃＦｖドメイン、ｉｉ）ヒンジ、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、を含む。ｓｃＦｖドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と、ｓｃＦｖリンカーと、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、を含み、バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインのシステイン残基と、ＩＬ−１５バリアントのシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ｓｃＦｖドメインは、ヒトＴＩＭ−３に結合する。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓを含む。

一態様では、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このようなヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む軽鎖を含む第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含む。ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、第１のドメインリンカーは、抗体ヒンジである。

「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）ヒンジ、ｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む軽鎖を含む第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含む。ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このような「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むバリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）第１のドメインリンカー、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体と、ｄ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含む。さらに、バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインのシステイン残基と、ＩＬ−１５バリアントのシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、第１のドメインリンカーは、抗体ヒンジである。

「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ｉ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むバリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ｉｉ）ヒンジ、およびｉｉｉ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体と、ｄ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含む。さらに、バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインのシステイン残基と、ＩＬ−１５バリアントのシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。このような実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

一態様では、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体および第４の単量体と、を含む。さらに、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成する。

「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。このような実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このようなヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む第４および第５の単量体と、を含む。第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成する。

「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質の別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」ヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このような「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」ヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含み、バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインシステイン残基を置換したアミノ酸、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基を置換したアミノ酸を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、

ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む第４および第５の単量体と、を含む。バリアントＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインのシステイン残基と、ＩＬ−１５バリアントのシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成する。

いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」ヘテロ二量体タンパク質の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」ヘテロ二量体タンパク質の別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、ａ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含むか、ｂ）第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含むか、またはｃ）第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、さらに、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

一態様では、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このような「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアント−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む第３および第４の単量体と、を含む。第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成する。

「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。

「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体の−第２のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

別の態様では、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が本明細書で提供される。このような「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアント−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む第３および第４の単量体と、を含む。第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のヒトＴＩＭ−３結合ドメインを形成する。

「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質のいくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメイン第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、以下のスキューバリアントセット：Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのうちの１つを含む。例示的な実施形態では、スキューバリアントセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。

特定の実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体タンパク質のいずれかのＶＨおよびＶＬは、図１２および１３のＴＩＭ−３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変ドメインである。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、３Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体タンパク質のＩＬ−１５バリアントは、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、Ｑ１０８Ｅ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤおよびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

一態様では、本明細書で開示されるヘテロ二量体タンパク質のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が本明細書で提供される。

別の態様では、本明細書に開示されるヘテロ二量体タンパク質または医薬組成物のいずれか１つを患者に投与することを含む、治療することを必要とする患者においてそれを行う方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体を投与することをさらに含み、抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＭ−３抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体である。

別の態様では、本明細書で開示されるヘテロ二量体タンパク質のいずれかをコードする１つ以上の核酸を含む核酸組成物、この核酸を含む発現ベクター、この核酸または発現ベクターを含む宿主細胞が、本明細書で提供される。適切な条件下で宿主細胞を培養し、ヘテロ二量体タンパク質を回収することによる、対象のヘテロ二量体タンパク質を作製する方法も、本明細書で提供される。

ＰＤ−１を発現する腫瘍反応性腫瘍浸潤リンパ球に対するＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の選択性、およびこれとＰＤ−１遮断抗体との組み合わせを示す。ＩＬ−１５とその受容体の配列を示す。臨床開発を容易にするために、ヒトおよびカニクイザル両方に結合する抗原結合ドメインの開発を促進するためのヒトおよびカニクイザル（予測）を含む、ＴＩＭ−３の配列を示す。Ｆｃヘテロ二量体化バリアントセットの有用な対を示す（スキューバリアントおよびｐＩバリアントを含む）。対応する「単量体２」バリアントが存在しないバリアントがあり、これらはいずれの単量体でも単独で使用できるｐＩバリアントである。等配電子バリアント抗体の定常領域およびそれらのそれぞれの置換の一覧を示す。ｐＩ＿（−）は、ｐＩが低いバリアントを示し、一方、ｐＩ＿（＋）は、ｐＩが高いバリアントを示す。これらは、任意選択的に独立して、本発明の他のヘテロ二量体化バリアント（および本明細書に概説される他のバリアント種）と組み合わせることができる。ＦｃγＲ結合をアブレーションする有用なアブレーションバリアントを示す（時に、「ノックアウト」または「ＫＯ」バリアントと称される）。一般に、切除バリアントは両方の単量体に見られるが、場合によっては、それらは一方の単量体のみにあってもよい。本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の「非サイトカイン」／「非Ｆｖ」構成要素の特に有用な実施形態を示す。ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に使用するためのいくつかの例示的な可変長リンカーを示す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＣ末端をＦｃ領域のＮ末端に連結するのに使用される。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合するのに使用される。構成要素として１つ以上のｓｃＦｖを利用するヘテロ二量体抗体のｐＩを増加または減少させる用途が見出されている、いくつかの帯電したｓｃＦｖリンカーを示す。（＋Ｈ）正のリンカーは、本明細書において特に使用される。単一電荷を有する単一の先行技術ｓｃＦｖリンカーは、Ｗｈｉｔｌｏｗｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ６（８）：９８９−９９５（１９９３）からの「Ｗｈｉｔｌｏｗ」と称される。このリンカーは、ｓｃＦｖにおける凝集を減少させ、タンパク質分解安定性を高めるために使用されたことに留意すべきである。サイトカイン配列（例えば、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ））またはＶＨを含まず、さらに図１１に示す軽鎖骨格を除く、ヒトＩｇＧ１に基づくいくつかの有用なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合フォーマットの骨格の配列を示す。骨格１はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｃ２２０Ｓ、およびＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切除バリアントを有する。骨格２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｃ２２０Ｓ、両方の鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのバリアント、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切除バリアントを有する。骨格３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６ＫのｐＩバリアントを有し、両方の鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのバリアント、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切除バリアントを有する。このような骨格配列は、例えば、本明細書に記載の「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質に含めることができる。）．いくつかの実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０の骨格配列（配列番号ＸＸＸ−ＸＸＸ）のいずれかの「鎖２」のアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０の骨格配列（配列番号ＸＸＸ−ＸＸＸ）のいずれか１つの「鎖１」のアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＣは、図１１（配列番号ＸＸＸ−ＸＸＸ）の「定常軽鎖−κ」または「定常軽鎖−λ」の配列を有する、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、図１２および１３Ａ〜Ｃで提供されるＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

特定の実施形態では、これらの配列は、３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプのものであり得る。他の実施形態では、これらの配列は、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｓ置換のいずれかを含み得る。いくつかの他の実施形態において、これらの配列はＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳのＸｔｅｎｄ変異を含み得る。さらに他の実施形態では、これらの配列は代わりにヒトＩｇＧ４に基づくことができ、当技術分野で既知のように両方の鎖にＦａｂアーム交換を切除するＳ２２８Ｐ（ＥＵ付番、ＫａｂａｔではＳ２４１Ｐである）バリアントを含む。なおさらなる実施形態において、これらの配列は代わりにヒトＩｇＧ２に基づき得る。さらに、これらの配列は、代わりに、図面に示される他のスキューバリアント、ｐＩバリアントおよびアブレーションバリアントを利用し得る。

当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、図２１に概略的に示されるように、限定されないが、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα、ｎｃＩＬ−１５／ＲαおよびｄｓＩＬ−１５Ｒαを含む、本明細書に概説される任意のＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）の対とともに使用することができる。さらに当業者には理解されそして以下に概説されるように、任意のＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントがこれらの骨格に組み込まれ得る。さらに、当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、ｓｃＦｖまたはＦａｂのいずれかを含む、本明細書に概説された任意のＶＨおよびＶＬ対とともに使用することができる。

これらのバックボーンのそれぞれに含まれるのは、列挙された配列に対して（本明細書で定義されるように）９０、９５、９８、および９９％同一である配列であり、かつ／または（当業者には理解されるように、親ヒトＩｇＧ１（またはバックボーンに応じたＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４）と比べていくつかのアミノ酸修飾をすでに含む、図の「親」と比べて）１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の追加のアミノ酸置換を含む。すなわち、列挙されたバックボーンは、この図のバックボーン内に含まれるスキューバリアント、ｐＩバリアントおよび切除バリアントに加えて、さらなるアミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換）を含み得る。
本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質において用途が見出される軽鎖の「非Ｆｖ」骨格（すなわち、定常軽鎖）を示す。選択された数の抗ＴＩＭ−３抗体結合ドメインの可変領域配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列はｓｃＦｖフォーマットまたはＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質において用途が見出され得る、さらなるＴＩＭ−３ＡＢＤの可変領域を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列はｓｃＦｖフォーマットまたはＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。操作されたジスルフィド結合対の位置を示すＩＬ−１５／Ｒαヘテロ二量体の構造モデルを示す。システイン残基を操作するための足場として機能するように、Ｃ末端で、さらなる残基を用いて操作された例示的なＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントの配列を示す。システインで操作されたＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントとともに、ジスルフィド共有結合を形成するためにシステインで操作された例示的なＩＬ−１５バリアントの配列を示す。システインで操作されたＩＬ−１５バリアントとともに、ジスルフィド共有結合を形成するためにシステインで操作された例示的なＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントの配列を示す。ＩＬ−１５と、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、および共通γ鎖との複合体の構造を示す。効力を低減するために設計された置換の位置が示されている。低減された効力のために操作された例示的なＩＬ−１５バリアントの配列を示す。列挙された配列と（本明細書で定義されるように）９０、９５、９８および９９％同一であり、かつ／または１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のさらなるアミノ酸置換を含む配列がこれらのバリアントＩＬ−１５配列のそれぞれに含まれる。非限定的な例において、列挙された配列は、図１６および図１７に示されるようにジスルフィド共有結合の形成に寄与するものなど、さらなるアミノ酸修飾を含んでいてもよい。バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質によるＮＫおよびＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖の誘導のＥＣ５０、およびＸＥＮＰ２０８１８、野生型に対するＥＣ５０の減少倍率を示す。これらの融合タンパク質は、ＴＩＭ−３ＡＢＤを含まない。本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のいくつかのフォーマットを示す。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘｓｃＦｖ」フォーマット（図２１Ａ）は、可変長リンカー（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）によってＩＬ−１５に融合し、次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したｓｃＦｖを含む。「ｓｃＦｖｘｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｂ）は、ヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したｓｃＦｖを含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｃ）は、「ｓｃＦｖｘｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｄ）は、可変長リンカー（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）によってＩＬ−１５に融合し、次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合した可変重鎖（ＶＨ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｅ）は、ヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＶＨを含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｆ）は、「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｇ）は、第１および第２のヘテロ二量体ＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合し、次いで、このヘテロ二量体Ｆｃ領域の一方のＣ末端にさらに融合したＩＬ−１５を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｈ）は、第１および第２のヘテロ二量体ＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、このヘテロ二量体Ｆｃ領域の一方のＣ末端にさらに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｉ）は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｊ）は、ＩＬ−１５のＮ末端に組換え融合され、次いで、ヘテロ二量体Ｆｃの一方の側にさらに融合したＶＨと、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に組換え融合され、次いで、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側にさらに融合したＶＨとを含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｋ）は、ＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に組換え融合され、次いで、ヘテロ二量体Ｆｃの一方の側にさらに融合したＶＨと、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側にさらに融合したＶＨとを含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマットの例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質であるＸＥＮＰ２７９７４の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付されるが、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。アブレーションバリアント（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、「ＩｇＧ１＿ＰＶＡ＿／Ｓ２６７ｋ」）を有する二価抗ＰＤ−１ｍＡｂであるＸＥＮＰ１６４３２の配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。示された試験物品の初回投与後、Ａ）６日後およびＢ）１０日後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの全血中のＣＤ８^＋Ｔ細胞数を示す。示された試験物品の初回投与後、Ａ）６日後およびＢ）１０日後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの全血中のＣＤ４^＋Ｔ細胞数を示す。示された試験物品の初回投与後、Ａ）６日後およびＢ）１０日後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの全血中のＣＤ４５^＋Ｔ細胞数を示す。示された試験物品の初回投与後、Ａ）６日後およびＢ）１０日後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの全血中のＣＤ１６^＋ＣＤ５６^＋ＮＫ細胞数を示す。示された試験物品を投与した後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重変化（初期の体重の百分率として）を示す。両ＦｃドメインにＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むＸＥＮＰ２７９７９の配列を示す。増殖細胞の割合（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＡ）ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＢ）ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の誘導を示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を両方とも誘導する際に、より強力であることを示す。増殖細胞の割合（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＡ）ＣＤ８メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ８メモリーＴ細胞の増殖を誘導する際に、かなり強力であることを示す。特に、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ＣＤ８ナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ８メモリーＴ細胞の増殖を誘導するのにも強力である。細胞数で示されるように、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＡ）ＣＤ８メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。増殖細胞の割合（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＡ）ＣＤ４メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖を誘導する際に、かなり強力であることを示す。特に、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ＣＤ４ナイーブＴ細胞と比較して、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖を誘導するのにも強力である。細胞数で示されるように、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＡ）ＣＤ４メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。Ａ）増殖細胞の割合（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって、Ｂ）細胞数によって示されるように、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）によるＮＫ細胞増殖の誘導を示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＮＫ細胞の増殖を誘導する際に、かなり強力であることを示す。ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）とともにインキュベートした後のＡ）ＣＤ２５を発現するＣＤ８メモリーＴ細胞の割合、Ｂ）ＣＤ２５を発現するＣＤ８ナイーブＴ細胞の割合、Ｃ）ＣＤ２５を発現するＣＤ４メモリーＴ細胞の割合、およびＤ）ＣＤ２５を発現するＣＤ４ナイーブＴ細胞の割合によって示されるような、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ８メモリーＴ細胞およびＣＤ８ナイーブＴ細胞においてＣＤ２５をより強力に上方制御するようにみえることを示す。ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）とともにインキュベートした後のＡ）ＣＤ８メモリーＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲＭＦＩ、Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ８メモリーＴ細胞の割合、Ｃ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲＭＦＩ、およびＤ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ８ナイーブＴ細胞の割合によって示されるような、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示す。ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照）とともにインキュベートした後のＡ）ＣＤ４メモリーＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲＭＦＩ、Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ４メモリーＴ細胞の割合、Ｃ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲＭＦＩ、およびＤ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ４ナイーブＴ細胞の割合によって示されるような、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を示す。野生型ＩＬ−１５およびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合物であるＸＥＮＰ２２８５３の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付されるが、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカーおよび定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合物であるＸＥＮＰ２４１１３の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付されるが、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカーおよび定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）置換を含むｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物であるＸＥＮＰ２４２９４の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付されるが、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカーおよび定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）置換を含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合物であるＸＥＮＰ２４３０６の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付されるが、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカーおよび定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。示された相対濃度での初回投与後のカニクイザルにおける、経時的な示された試験物品の血清濃度を示す。さらなるＩＬ−１５の強力なバリアントを含む例示的なｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、そのいくつかが図９および図１０に示されている）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。示された試験物品とともにＰＢＭＣを３日間インキュベートした後のＡ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−、Ｂ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｃ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−、Ｄ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｅ）ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、Ｆ）ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、およびＧ）γδ細胞発現Ｋｉ６７の割合を示す。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、かつ本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示すように使用する付番によってわずかに異なっていてもよく、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図９および図１０に示されている）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、かつ本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示すように使用する付番によってわずかに異なっていてもよく、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図９および図１０に示されている）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。血清半減期を向上させるためのＸｔｅｎｄ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）置換を含む例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、かつ本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示すように使用する付番によってわずかに異なっていてもよく、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図９および図１０に示されている）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。本明細書に示される配列のいずれも、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を含んでいてもよく、または除外されていてもよいことに留意されたい。ＸＥＮＰ２６００７、ＸＥＮＰ２９４８１およびＸＥＮＰ３０４３２、対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記され、かつ本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示すように使用する付番によってわずかに異なっていてもよく、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）にはイタリック体で示され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、他のリンカーによって置き換えられてもよく、そのいくつかが図に示されており、そのいくつかが図９および図１０に示されている）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。

Ｉ．定義
本発明をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。

本明細書において「除去」とは、活性の低下または排除を意味する。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を切除する」とは、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、その特定のバリアントを含まないＦｃ領域と比較して５０％未満の開始結合を有することを意味し、７０−８０−９０−９５−９８％未満の活性喪失が好ましく、一般に、活性はＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて検出可能な活性のレベル未満である。ＦｃγＲ結合のアブレーションにおいて特に有用なものは、図６に示される。しかしながら、他に断らない限り、本発明のＦｃ単量体はＦｃＲｎ受容体への結合を保持している。

本明細書で使用される「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関し、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。本明細書で論じるように、本発明の多くの実施形態はＡＤＣＣ活性を完全に除去する。

本明細書で用いられる「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞媒介食作用とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。

本明細書において「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察される標的抗原と特異的に結合する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。したがって、「ＴＩＭ−３抗原結合ドメイン」は、本明細書に概説されるように、ヒトＴＩＭ−３抗原に結合する。当該技術分野で知られているように、これらのＣＤＲは、可変重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲまたはＶ_ＨＣＤＲ）の第１のセットおよび可変軽鎖ＣＤＲの第２のセット（ｖｌＣＤＲまたはＶ_ＬＣＤＲ）として一般に存在し、各々が３つのＣＤＲ、すなわち重鎖についてｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖についてｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、可変重および可変軽ドメインにそれぞれ存在し、一緒になってＦｖ領域を形成する。したがって、いくつかの場合において、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲには、可変重および可変軽鎖が寄与される。「Ｆａｂ」フォーマットにおいて、６つのＣＤＲのセットは、２つの異なるポリペプチド配列、可変重鎖ドメイン（ＶＨまたはｖｈまたはＶ_Ｈ；ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２およびｖｈＣＤＲ３を含む）および可変軽鎖ドメイン（ＶＬまたはｖｌまたはＶ_Ｌ；ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む）によるものであり、ＶＨドメインのＣ末端は、重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端に接続し、ＶＬドメインのＣ末端は、定常軽鎖ドメインのＮ末端に接続する（したがって、軽鎖を形成する）。ｓｃＦｖフォーマットでは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、一般的に本明細書に概説されるリンカーの使用によって、単一ポリペプチド配列に共有結合し、この配列は、（Ｎ末端から開始して）ＶＨ−リンカー−ＶＬまたはＶＬ−リンカー−ｖｈのいずれかであってもよく、前者が一般的に好ましい（使用されるフォーマットに依存して、片側に任意選択的なドメインリンカーを含む）（例えば、ＵＳ６２／３５３，５１１の図１から）。

本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、および／もしくは欠失、またはタンパク質に化学的に連結された部分への改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物またはＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ中にコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。

本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置換することを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、またはいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｅ２７２Ｙは、２７２位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はＦｃバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、出発アミノ酸を変化させない（例えば、宿主生物発現レベルを上昇させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（なおもアルギニンをコードする）に交換する）ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではなく、すなわち、同一のタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始する特定の位置に同一のアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。

本明細書で使用される「アミノ酸挿入」または「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、−２３３Ｅまたは２３３Ｅは、２３３位の後、および２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。さらに、−２３３ＡＤＥまたはＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後、かつ２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。

本明細書で使用される「アミノ酸欠失」または「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３−またはＥ２３３＃、Ｅ２３３（）またはＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。さらに、ＥＤＡ２３３−またはＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。

本明細書で使用される「バリアントタンパク質」または「タンパク質バリアント」または「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ配列を指し得る。好ましくは、タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して約１〜約７０個のアミノ酸修飾、および好ましくは約１〜約５個のアミノ酸修飾を有する。以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４由来のＦｃ領域などのヒト野生型配列である。本明細書のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５−９８−９９％の同一性を有する。変異型タンパク質は、変異型タンパク質それ自体、タンパク質バリアントを含む組成物、またはそれをコードするＤＮＡ配列を指すことができる。

したがって、本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」または「バリアントＦｃ」とは、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。本発明のＦｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓまたは４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して４３４位に置換セリンを有するＦｃバリアントであり、ここで付番はＥＵインデックスに従う。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓを有するＦｃ変異を定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは４２８Ｌ／４３４Ｓと呼ばれる。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば４２８Ｌ／４３４ＳはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓと同一のＦｃバリアントなどである。抗体に関連する本発明において論じられる全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置の付番はＥＵインデックスに従う。ＥＵインデックス、またはＫａｂａｔもしくはＥＵ付番スキームと同様のＥＵインデックスは、ＥＵ抗体の付番を指す（Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８−８５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。置換には、天然に存在するアミノ酸および場合によっては合成アミノ酸が含まれ得る。例としては、米国特許第６，５８６，２０７号；ＷＯ９８／４８０３２；ＷＯ０３／０７３２３８；ＵＳ２００４−０２１４９８８Ａ１；ＷＯ０５／３５７２７Ａ２；ＷＯ０５／７４５２４Ａ２；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎら、（２００２）、ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ１２４：９０２６−９０２７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ、＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ、（２００２）、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ１１：１１３５−１１３７；Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎら、（２００２）、ＰＩＣＡＳＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ９９：１１０２０−１１０２４；およびＬ．Ｗａｎｇ、＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ、（２００２）、Ｃｈｅｍ．１−１０が挙げられ、全てが全体的に参照により組み込まれる。

本明細書で使用される場合、本明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。

「残基」とは、本明細書で使用されるとき、タンパク質における位置およびその関連するアミノ酸素性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。

本明細書で使用される「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、単離におけるこの領域、または、全長抗体に関連するこの領域、抗体断片、またはＦａｂ融合タンパク質を指し得る。

本明細書で使用される「Ｆｖ」または「Ｆｖ断片」または「Ｆｖ領域」とは、単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。当業者には理解されるように、これらは一般に、２つの鎖で構成されているか、または組み合わさって（一般に、本明細書で論じられるようなリンカーによって）、ｓｃＦｖを形成することができる。

本明細書における「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は概して、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用してｓｃＦｖまたはｓｃＦｖドメインを形成する、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端（ＶＨ−リンカー−ＶＬまたはＶＬ−リンカー−ＶＨ）まで、いずれの向きであってもよい。

本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」または「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。

本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」とは、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧのうちのいずれも４３４位にセリンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（またはそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは、天然に生じない修飾であると見なされる。

本明細書で使用される「アミノ酸」および「アミノ酸同一性」は、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。

本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、または「ＦｃガンマＲ」とは、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームであるＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、およびＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームであるＦｃγＲＩＩａ（アロタイプであるＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームであるＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプであるＶ１５８およびＦ１５８を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプであるＦｃγＲＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩｂ−ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（参照により全体が組み込まれるＪｅｆｆｅｒｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ８２：５７−６５）、ならびに任意の発見されていないヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」または「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。当該技術分野において既知のように、機能的ＦｃＲｎタンパク質は、しばしば重鎖および軽鎖と称される２つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ−２−ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされている。本明細書において別段の記載がない限り、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とβ−２−ミクログロブリンとの複合体を指す。ＦｃＲｎ受容体への結合を増加させるために、そしていくつかの場合には血清半減期を増加させるために使用される様々なＦｃＲｎ変異が使用できる。一般に、別段の記載がない限り、本発明のＦｃ単量体は、ＦｃＲｎ受容体への結合を保持する（そして、下記のように、ＦｃＲｎ受容体への結合を増大させるためのアミノ酸変異を含み得る）。

本明細書で使用される「親ポリペプチド」とは、バリアントを生成するようにその後修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、または天然に存在するポリペプチドのバリアントもしくは改変されたバージョンであってもよい。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指してもよい。

本明細書で使用されるとき、「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」とは、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）を除く抗体の定常領域、および場合によってはヒンジの一部を含む、ポリペプチドを意味する。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは免疫グロブリンドメインＣＨ２およびＣＨ３（Ｃγ２およびＣγ３）と、ＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）の間の下部ヒンジ領域を含む。したがって、いくつかの場合では、Ｆｃドメインは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＣＨ２−ＣＨ３およびヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４からのものであり、ＩｇＧ１ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３およびＩｇＧ４ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３は、多くの実施形態において特定の用途が見出される。さらに、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインである特定の実施形態では、ヒンジは、Ｃ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。さらに、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ４Ｆｃドメインであるいくつかの実施形態では、ヒンジは、Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、カルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むように定義され、付番は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従っている。したがって、ＩｇＧに関連して「ＣＨ」ドメインは次のとおりである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って位置１１８〜２１５を指す。「ヒンジ」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って位置２１６〜２３０を指す。「ＣＨ２」はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って位置２３１−３４０に、「ＣＨ３」はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って位置３４１−４４７を指す。したがって、「Ｆｃドメイン」には−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインおよび、任意選択的にヒンジドメイン（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）が含まれる。

当業者には理解されるように、重定常領域ドメインの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。ＥＵおよびＫａｂａｔによる重定常領域の付番の有用な比較は以下のとおり、Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８−８５、およびＫａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ（参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。

本明細書の実施形態では、ｓｃＦｖまたはＩＬ−１５複合体がＦｃドメインに接続する場合、ドメインリンカー（例えば、図８に示されるようなヒンジドメイン）を介してＦｃドメインに接続するのは、ｓｃＦｖ、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα構築物のＣ末端である。いくつかの実施形態では、以下により詳細に記載されるように、例えば本明細書に概説されるように、１つ以上のＦｃγＲ受容体またはＦｃＲｎ受容体への結合を変化させるために、およびヘテロ二量体の形成および精製を可能にするために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。

本明細書における「重鎖定常領域」とは、抗体のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３部分を意味する。

本明細書における「Ｆｃ融合タンパク質」または「イムノアドヘシン」とは、一般に（任意選択で本明細書に記載されるようなリンカー部分を介して）異なるタンパク質、例えば本明細書に記載されるようなＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒに連結したＦｃ領域を含むタンパク質を意味する。いくつかの例では、２つのＦｃ融合タンパク質がホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体融合タンパク質を形成することができ、後者が好ましい。いくつの場合では、ヘテロ二量体融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃドメインのみ（例えば、空のＦｃドメイン）を含み、他方の単量体は、バリアントＦｃドメインおよび受容体、リガンド、または他の結合パートナーなどのタンパク質ドメインを含むＦｃ融合物である。

本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順番に付番されるか、または確立されたフォーマット、例えば、抗体付番のためのＥＵインデックスによって付番されてもよい。

本明細書中の本発明のヘテロ二量体抗体の単量体に関連して「撚り度（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は、「マッチ」する２本鎖ＤＮＡと同様に、「マッチ」してヘテロ二量体を形成する能力を保持するようにヘテロ二量体化変異を各単量体に組み込むことを意味する。例えば、いくつかのｐＩ変異が単量体Ａへと操作される（例えば、ｐＩをより高くする）場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体変異はｐＩ変異を妨害せず、例えば、ｐＩを高くした電荷変異が同一の「鎖」または「単量体」に置かれ、両方の機能を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー」バリアントついて、当業者は、対の１つのセットを組み入れる鎖または単量体がどちらに入るかを決定する際に、同様にスキューのｐＩを使用してｐＩ分離を最大化するようにｐＩを考慮する。

「標的細胞」は、本明細書で使用される場合、標的抗原（この場合には、ＴＩＭ−３）を発現する細胞を意味する。

本明細書で使用される「可変領域」とは、κ、λ、および重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するＶκ、Ｖλ、および／またはＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含む免疫グロブリンの領域を意味する。

本明細書における「野生型またはＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。

本発明のＴＩＭ−３標的化ヘテロ二量体タンパク質は、一般に、単離されるか、または組換え体である。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用されるとき、「単離された」とは、それが発現された細胞または細胞培養物から特定および分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程によって調製される。「単離されたタンパク質」とは、異なる結合特異性を有する他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いてタンパク質が生成されることを意味する。

タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列を整合し、必要ならギャップを導入した後の、特定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義され、そして配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野の範囲内である様々な方法で達成できる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整合を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、整合を測定するための適切なパラメータを決定することができる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６０２４４５２５号の段落番号［０２７９］〜［０２８０］に概説されているＡＬＩＧＮ−２プログラムである。

本発明のアミノ酸配列（「本発明の配列」）と親アミノ酸配列との間の同一性の程度は、「本発明の配列」の長さまたは親配列の長さのうちの短い方で割った、２つの配列の整合における正確な一致の数として計算される。結果は同一性パーセントで表される。

ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である。ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、さらには１００％まで同一である。

特定の抗原またはエピトープとの「特異的結合」もしくは「〜に特異的に結合する」または特定の抗原またはエピトープ（この場合には、ヒトＴＩＭ−３）「〜に対して特異的である」とは、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有さない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と同様である対照分子との競合によって決定することができる。

特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０^−４Ｍ、少なくとも約１０^−５Ｍ、少なくとも約１０^−６Ｍ、少なくとも約１０^−７Ｍ、少なくとも約１０^−８Ｍ、少なくとも約１０^−９Ｍ、代替的に少なくとも約１０^−１０Ｍ、少なくとも約１０^−１１Ｍ、少なくとも約１０^−１２Ｍ、またはそれ以上のＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。

また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対するＫＡまたはＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡまたはＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は一般に、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイを用いて測定される。

ＩＩ．導入
本発明は、一方の側にＩＬ−１５複合体を含み、他方の側に抗ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを含むヘテロ二量体融合タンパク質を提供する。したがって、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、チェックポイントＴＩＭ−３抗原に結合することができ、共通γ鎖（γｃ；ＣＤ１３２）および／またはＩＬ−２受容体β鎖（ＩＬ−２Ｒβ；ＣＤ１２２）と複合体を形成し得る。一般に、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、本明細書で一般に「ＩＬ−１５複合体」と称されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）構成要素、ＴＩＭ−３を発現する細胞に対して融合タンパク質を持ってくることによって「標的化」部分として機能する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤ構成要素、Ｆｃ構成要素といった３つの機能的構成要素を有し、各々が異なる形態をとることができ、各々が任意の構成で他の構成要素と組み合わせることができる。

一般に、本明細書でより完全に説明されるように、本発明の融合タンパク質は、抗体Ｆｃドメインの会合に基づくヘテロ二量体タンパク質である。すなわち、ホモ二量体よりもヘテロ二量体の形成を促進するように設計された２つの異なるバリアントＦｃドメインを使用することにより、ヘテロ二量体タンパク質が形成される。この場合、バリアントＦｃドメインの片方が、ＩＬ−１５／ＲＡ複合体に融合され、もう一方は、本明細書により完全に概説されているように、ＴＩＭ−３ＡＢＤを有する。任意選択的にｐＩバリアントを含めることによって、ヘテロ二量体は、ホモ二量体からさらに簡単に精製することができる。さらに、アブレーションバリアントを含むことで、Ｆｃドメインのエフェクター機能が失われる。

Ａ．ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン
図に示すように、ＩＬ−１５複合体はいくつかの形態をとることができる。上述のように、ＩＬ−１５タンパク質それ自体は、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質と複合体を形成するときよりも安定性が低い。当該技術分野において既知であるように、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は「ｓｕｓｈｉドメイン」を含み、これはＩＬ−１５結合活性を保持する受容体の最も短い領域である。したがって、全ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を含むヘテロ二量体融合タンパク質を作製することができるが、本明細書における好ましい実施形態は、ｓｕｓｈｉドメインのみを使用する複合体を含み、その配列を図に示す。

したがって、ＩＬ−１５複合体は、一般的に、ＩＬ−１５タンパク質と、ＩＬＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインとを含む（全長配列が使用されるという別段の記載がない限り、「ＩＬ−１５Ｒα」、「ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）」、「ＩＬ−１５ＲＡ」および「ｓｕｓｈｉ」は、全体を通じて相互に置き換え可能に使用される）。

重要なことに、ＩＬ−１５構成要素は、一般的に、その効力を低下させるように設計される。多くの実施形態では、野生型ＩＬ−１５は強力すぎて、望ましくない毒性を引き起こす可能性がある。したがって、ＩＬ−１５複合体のＩＬ−１５構成要素は、活性を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を有し得る。様々なアミノ酸置換が行われ（図１９を参照）、試験された（図２０を参照）。いくつかの実施形態において特に興味深いのは、二重バリアントであるＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、または三重バリアントであるＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄである。

本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）−Ｆｃ融合単量体を含む。２０１７年１０月１６日に出願されたＵＳ２０１８／０１１８８２８号、２０１６年１０月１４日に出願された米国特許出願第６２／４０８，６５５号、２０１６年１０月１１月１日に出願された米国特許出願第６２／４１６，０８７号、２０１７年１月６日に出願された米国特許出願第６２／４４３，４６５号、２０１７年３月２８日に出願された米国特許出願第６２／４７７，９２６号、および２０１８年４月１８日に出願された米国特許出願第６２／６５９，５７１号が参照され、その全体が、特に、本明細書に概説される配列が、参照により本明細書に組み込まれる。場合によっては、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）タンパク質ドメインは異なる向きにある。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合単量体の例示的な実施形態は、例えば、ＵＳ２０１８／０１１８８２８号に記載されるように、ＸＥＮＰ２１４８０（鎖１、図６４Ａ）、ＸＥＮＰ２２０２２（鎖１、図６４Ｄ）、ＸＥＮＰ２２１１２（鎖１および３、図６４Ｅ）、ＸＥＮＰ２２６４１（鎖２および４、図６４Ｆ）、ＸＥＮＰ２２６４２（鎖１および４、図６４Ｈ）、ならびにＸＥＮＰ２２６４４（鎖１および４、図６４Ｉ）に提示される。

１．ＩＬ−１５バリアント
いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、図２に示されるようなＮＣＢＩ基準配列番号ＮＰ＿０００５７６．１に示されるアミノ酸配列を有する。場合によっては、ヒトＩＬ−１５のコード配列を、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＭ＿０００５８５に示す。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロ二量体タンパク質の例示的なＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸４９〜１６２を有し得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２に対して少なくとも９０％、例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、アミノ酸置換Ｎ７２Ｄを有することを除き、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、Ｃ４２Ｓ、Ｌ４５Ｃ、Ｑ４８Ｃ、Ｖ４９Ｃ、Ｌ５２Ｃ、Ｅ５３Ｃ、Ｅ８７ＣおよびＥ８９Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有することを除き、配列番号２のアミノ酸配列を有する。ある態様では、ＩＬ−１５タンパク質は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５ＤおよびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。他の実施形態では、アミノ酸置換はＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄである。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換はＱ１０８Ｅである。特定の実施形態では、アミノ酸置換はＮ６５Ｄである。他の実施形態では、アミノ酸置換はＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄである。特定の実施形態では、アミノ酸置換はＮ６５Ｄである。いくつかの事例においては、アミノ酸置換はＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄである。いくつかの事例においては、アミノ酸置換はＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄである。場合により、ＩＬ−１５タンパク質はまたＮ７２Ｄ置換を有する。Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個のアミノ酸置換を有することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５タンパク質は、Ｄ３０Ｎ置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５タンパク質は、Ｎ６５Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合物のＩＬ−１５タンパク質は、ＩＬ−１５：ＣＤ１３２界面に１つ以上のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＦｃ融合タンパク質は、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を誘導する。

いくつかの実施形態において、ヒトＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）タンパク質は、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＰ＿００２１８０．１または配列番号３に示したアミノ酸配列を有する。場合によっては、ヒトＩＬ−１５Ｒαのコード配列を、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＭ＿００２１８９．３に示す。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロ二量体タンパク質の例示的なＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号３のｓｕｓｈｉドメイン（例えば、配列番号３のアミノ酸３１〜９５）、換言すると、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなることができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列ならびにＤ９６、Ｐ９７、Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７、Ｄ９６／Ｃ９７、Ｄ９６／Ｐ９７／Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、およびＤ９６／Ｃ９７／Ａ９８からなる群から選択されるアミノ酸挿入を有し、アミノ酸位置は完全長ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質または配列番号３に対してである。例えば、Ｄ（例えばＡｓｐ）、Ｐ（例えばＰｒｏ）、Ａ（例えばＡｌａ）、ＤＰ（例えばＡｓｐ−Ｐｒｏ）、ＤＣ（例えばＡｓｐ−Ｃｙｓ）、ＤＰＡ（例えば、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）、ＤＰＣ（例えば、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ）、またはＤＣＡ（例えば、Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｌａ）のようなアミノ酸は、配列番号４のＩＬ−１５Ｒαタンパク質のＣ末端に付加され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列ならびにＫ３４Ｃ、Ａ３７Ｃ、Ｇ３８Ｃ、Ｓ４０Ｃ、およびＬ４２Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有し、ここでアミノ酸位置は配列番号４に対してである。ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入および／または欠失）を有することができる。

２．ＩＬ−１５／ＲＡ複合体
本明細書に概説されるように、ＩＬ−１５バリアントおよびｓｕｓｈｉドメインは、少なくとも３つの異なる方法で複合体化することができる。

いくつかの実施形態では、図２１Ｂに示されるように、例えば、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）は、共有結合しているのではなく、むしろ通常のリガンド−リガンド相互作用によって自己集合している。本明細書でより十分に説明されるように、Ｆｃドメインに共有結合的に連結されるのはＩＬ−１５ドメインまたはｓｕｓｈｉドメインのいずれかであり得る（一般に任意選択のドメインリンカーを使用する）。この場合も、この実施形態で特に使用されるのは、二重バリアントであるＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、または三重バリアントであるＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄであり、野生型ｓｕｓｈｉドメインとともに使用される。

代替的な実施形態では、バリアントＩＬ−１５は、ドメインリンカーを用いてｓｕｓｈｉドメインと複合体を形成することができ、その結果、これらは一般的に図２１Ｄに示されるように共有結合する。この図は、Ｎ末端ドメインとしてのｓｕｓｈｉドメインを示すが、これが逆になっていてもよい。この場合も、この実施形態で特に使用されるのは、二重バリアントであるＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、または三重バリアントであるＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄであり、野生型ｓｕｓｈｉドメインとともに使用される。

これに代えて、ＩＬ−１５ドメインおよびｓｕｓｈｉドメインは各々、システインアミノ酸を含むように操作され、ジスルフィド結合を形成して、概して図２１Ｃに示されるように、Ｆｃドメインに（任意選択のドメインリンカーを使用して）共有結合しているＩＬ−１５ドメインまたはｓｕｓｈｉドメインのいずれかとともに複合体を形成してもよい。この場合も、この実施形態で特に使用されるのは、二重バリアントであるＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ（さらにシステインへのアミノ酸置換を含む）、または三重バリアントであるＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ（さらにシステインへのアミノ酸置換を含む）であり、システインを提供するためのアミノ酸置換も含むｓｕｓｈｉドメインとともに使用される。

さらなる特定の実施形態を以下に概説する。

Ｂ．抗ＴＩＭ−３の構成要素
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体融合タンパク質は、いくつかの抗体構成要素を含む。

従来の抗体構造単位は、典型的には四量体を含む。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（典型的には、約２５ｋＤａの分子量）と、１本の「重」鎖（典型的には、約５０〜７０ｋＤａの分子量）とを有する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。本発明は概して、ＩｇＧクラスに基づく抗体または抗体断片（抗体単量体）に関し、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。一般に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。ＩｇＧ１は、３５６（ＤまたはＥ）および３５８（ＬまたはＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に図示される配列は３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプが本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｅ／３５８Ｌを有することができる。

それに加え、本明細書の単量体配列の多くは、ジスルフィド形成を減少させるために、位置２２０の少なくとも１つのシステインがセリンで置き換えられている。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方または両方が置換されたもの（Ｃ２２０Ｓ）である。

したがって、本明細書で使用されるとき、「アイソタイプ」は、それらの定常領域の化学的および抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。

各鎖のアミノ末端部分は、「Ｆｖドメイン」または「Ｆｖ領域」として当該技術分野および本明細書では一般に称される、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。可変領域において、重鎖および軽鎖のＶドメインの各々について３つのループが集約されて、抗原結合部位を形成する。ループの各々は、相補性決定領域（これ以降「ＣＤＲ」と称される）と称され、ここではアミノ酸配列における変形が最も顕著である。「可変」とは、可変領域のある特定のセグメントが抗体間で配列において大きく異なるという事実を指す。可変領域内の可変性は均一に分布していない。その代わり、Ｖ領域は、各々が９〜１５アミノ酸長またはそれ以上長い「超可変領域」と称される極可変性のより短い領域によって隔てられた１５〜３０のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変の区間からなる。

各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配列された３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）および４つのＦＲで構成される。

超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域においておよそ、アミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を表す）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域においてはおよそ約３１〜３５Ｂ（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を表す）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）からのアミノ酸残基（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）および／または超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域中の残基２６−３２（ＬＣＤＲ１）、５０−５２（ＬＣＤＲ２）および９１−９６（ＬＣＤＲ３）および重鎖可変領域中の２６−３２（ＨＣＤＲ１）、５３−５５（ＨＣＤＲ２）および９６−１０１（ＨＣＤＲ３）；ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を包含する。本発明の特定のＣＤＲを以下に記載する。

当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。しかしながら、可変重鎖および／または可変軽鎖配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。

ＣＤＲ付番の有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７（２００３）を参照されたい。

本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は一般に、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７および重鎖可変領域の残基１〜１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．、上述（１９９１））。

本発明は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合において、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖および３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれより大きな可変軽または可変重鎖ドメインの一部であり得る。さらに、本明細書により完全に概説されているように、可変重および可変軽鎖ドメインは、重鎖および軽鎖が使用されるとき（例えば、Ｆａｂが使用されるとき）には別個のポリペプチド鎖上に、またはｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。

ＣＤＲは、抗原結合の形成、またはより具体的には、抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。

エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。

エピトープは、立体配座または直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって作り出される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって作り出されるものである。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。

エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８〜１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメインおよび本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。

各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づき、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲおよびフレームワークに分類し、そのリストを作成した（参照により全体が組み込まれるＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔｅｔａｌ．を参照されたい）。

免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、各々、３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの関連における「ＣＨ」ドメインは以下の通りである。「ＣＨ１」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って１１８〜２２０位を指す。「ＣＨ２」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って２３７〜３４０位を指し、「ＣＨ３」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って３４１〜４４７位を指す。本明細書において示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、ＣＨ領域、および以下に論じられるように、ヒンジ領域のうちの１つ以上に存在し得る。

重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において、「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第１および第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造に関して、ＩｇＧＣＨ１ドメインはＥＵの２２０位で終了し、ＩｇＧＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３７位で開始する。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、位置２２１（ＩｇＧ１中のＤ２２１）から２３６（ＩｇＧ１中のＧ２３６）を含むように本明細書で定義され、付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に関連して、下側ヒンジが含まれ、「下側ヒンジ」は一般に位置２２６または２３０を指す。本明細書に記載のとおり、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。

軽鎖は、一般に、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重鎖ドメインとともにＦｖ領域を形成する）、および定常軽領域（しばしばＣＬまたはＣκと称される）の２つのドメインを含む。

以下に概説される追加の置換のための別の目的とする領域は、Ｆｃ領域である。

したがって、本明細書で提供される本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、１つ以上の抗体ドメインを含む。本明細書中に記載され、当技術分野において既知のとおり、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、重鎖および軽鎖の中に異なるドメインを含み、同様に重複していてもよい。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１−ヒンジ−ＦｃドメインまたはＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、およびｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。

本明細書で一般的に概説されるように、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＴＩＭ−３に結合する１つ以上のＦｖを含む。「Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２」、「ＨＡＶＣＲ２」、「Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有−３」、「ＴＩＭ−３」、「ＴＩＭ３」、「ＣＤ３６６」（例えば、Ｇｅｎｅｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０３２７８２およびＮＰ＿１１６１７１（ヒト））は、ＴＩＭファミリー細胞表面受容体タンパク質に属する免疫チェックポイントを指す。ＴＩＭ−３は、ＰＤ−１およびＬＡＧ−３とともに、ＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇を媒介する。ＴＩＭ−３の発現は、肺、胃、頭頸部癌、神経鞘腫、黒色腫および濾胞Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫における腫瘍浸潤リンパ球において上方制御され、癌におけるＣＤ８＋およびＴｒｅｇの機能不全においてＰＤ−１経路と相互作用する可能性がある。ＴＩＭ−３の例示的な配列を図３に示す。

このＦｖ、すなわち、対象のヘテロ二量体融合タンパク質の抗ＴＩＭ−３構成要素（抗ＴＩＭ−３抗原結合ドメインまたはＴＩＭ−３ＡＢＤ）は、一般的に、６つのＣＤＲのセット、および／またはヒトＴＩＭ−３を結合し得るＦｖドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。本明細書に記載されるように、一般的に本明細書に概説されるｓｃＦｖまたはＦａｂのいずれかを用いることによって、使用可能ないくつかの異なるフォーマットが存在する。

特定の実施形態では、本発明のＡＢＤは、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来のフレームワークを有する重鎖可変領域および／または特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、このようなＡＢＤは、特定の生殖細胞系列配列「の産物」または特定の生殖細胞系列配列「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域を含むヒトＡＢＤを含んでいてもよく、またはこれらからなっていてもよい。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」またはヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「に由来する」ＡＢＤは、ＡＢＤのアミノ酸配列を、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ＡＢＤの配列に対し、配列中で最も近い（すなわち、最も大きな同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を選択することによって、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」または特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「に由来する」ＡＢＤは、例えば、ＣＤＲ、天然に存在する体細胞変異または部位特異的突然変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系配列と比較して、アミノ酸の違いを含んでいてもよい。しかしながら、ヒト化ＡＢＤは、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に対し、アミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較すると、ヒト配列に由来するものとしてＡＢＤを特定するアミノ酸残基を含む。特定の場合には、ヒト化ＡＢＤは、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に対し、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８または９９％、またはさらに少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一であってもよい。典型的には、特定のヒト生殖細胞系列配列に由来するヒト化ＡＢＤは、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは１０〜２０以下のアミノ酸の違いを示す（本明細書の任意のスキュー、ｐＩおよびアブレーションバリアントの導入前、すなわち、バリアントの数は、本発明のバリアントの導入前に、一般的に少ない）。特定の場合には、ヒト化ＡＢＤは、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５以下、またはさらに４、３、２または１以下のアミノ酸の違いを示し得る（この場合にも、本明細書の任意のスキュー、ｐＩおよびアブレーションバリアントの導入前に、すなわち、バリアントの数は、本発明のバリアントの導入前に、一般的に少ない）。一実施形態では、親ＡＢＤは、当技術分野で既知のとおり、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、米国特許出願第１１／００４，５９０号に記載されているように、ヒト化および親和性成熟のために用いられ得る。選択に基づく方法を使用して、抗体可変領域をヒト化および／または親和性成熟してもよく、限定されないが、Ｗｕら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２；Ｂａｃａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｓｏｋら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１−２２６１８；Ｒａｄｅｒら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０−８９１５；Ｋｒａｕｓｓら、２００３、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１６（１０）：７５３−７５９に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみを移植することを含んでいてもよく、限定されないが、米国特許出願第０９／８１０，５１０号；Ｔａｎら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５；ＤｅＰａｓｃａｌｉｓら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６−３０８４に記載される方法を含む。

本明細書に示されるように、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤは、ＦａｂまたはｓｃＦｖのいずれかの形態であってもよい。

いくつかの実施形態では、例えば、図２１ＢおよびＣに示されるように、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤは、ｓｃＦｖであり、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、ｓｃＦｖリンカーを用いて接続され、ｓｃＦｖリンカーは、任意選択的に、帯電したｓｃＦｖリンカーであってもよい。当業者には理解されるように、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、Ｎ−ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬ−Ｃとして、またはＮ−ＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨ−Ｃとして組み立てられてもよく、ｓｃＦｖドメインのＣ末端は、一般的に、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３Ｆｃドメインに連結しており、ヒンジは、この場合には、ドメインリンカーとして機能する。適切なＦｖ（ＣＤＲセットおよび可変重鎖／可変軽鎖ドメインを含む）は、ｓｃＦｖフォーマットで使用されてもよく、またはＦａｂ形態は、図に示され、およびＷＯ２０１７／２１８７０７号に開示され、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が、特に、ＴＩＭ−３ＡＢＤについては、図１３、図２１および図２２のデータ、ならびに配列表の配列番号２０７６５〜２０８８４、配列番号３７５８７〜３７６９８および配列番号３６３４７〜３６７０６の配列において、本明細書に組み込まれる。

当業者にはさらに理解されるように、ヒンジ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４由来の野生型ヒンジ、またはＩｇＧ４ヒンジポリペプチドに対して２２８位に置換プロリンを有するＩｇＧ４Ｓ２４１ＰもしくはＳ２２８Ｐヒンジバリアントなどのそれらのバリアントでもあり得る（付番Ｓ２２８ＰはＥＵインデックスに従い、Ｓ２４１ＰはＫａｂａｔ付番である））の全部または一部が、ｓｃＦｖドメインとＣＨ２−ＣＨ３ドメインとの間のドメインリンカーとして使用することができ、または、図に示すようなドメインリンカーを使用することができる。

または、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、Ｆａｂフラグメントの形態であってもよい。この実施形態では、ＡＢＤは、重鎖によって与えられる可変重鎖ドメインと、軽鎖によって与えられる可変軽鎖ドメインとから構成される。適切なＦｖ（ＣＤＲセットおよび可変重鎖／可変軽鎖ドメインを含む）は、ｓｃＦｖフォーマットで使用されてもよく、またはＦａｂ形態は、図に示され、およびＷＯ２０１７／２１８７０７号に開示され、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が、特に、ＴＩＭ−３ＡＢＤについては、図１３、図２１および図２２のデータ、ならびに配列表の配列番号２０７６５〜２０８８４、配列番号３７５８７〜３７６９８および配列番号３６３４７〜３６７０６の配列において、本明細書に組み込まれる。

当業者によって理解されるように、適切なＴＩＭ−３結合ドメインは、下線が引かれている／太字で記載されているように、または、本明細書に記載され、表２に示されるように異なる付番スキームが使用される場合には、図面（例えば、図１２および１３Ａ〜Ｃ）および配列表に示されるものの可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン配列内で他のアルゴリズムを用いて特定されるＣＤＲとして、配列表および図面（例えば、図１２および１３）に示されるような６つのＣＤＲのセットを含んでいてもよい。対象の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質での用途が見出される適切なＴＩＭ−３ＡＢＤは、ｓｃＦｖまたはＦａｂとして使用される、これらの配列および図に示されるＶＨ配列およびＶＬ配列全体を含むこともできる。

一実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、図１２および１３Ａ〜Ｃまたは配列表に記載されているＴＩＭ−３結合ドメインのいずれかの６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１−３およびｖｌＣＤＲ１−３）を含む。

ＴＩＭ−３に対するＡＢＤを形成する図および配列表に開示される親ＣＤＲセットに加えて、本明細書（例えば、図１２および１３Ａ〜Ｃ）に開示されるＴＩＭ−３ＡＢＤＣＤＲの少なくとも１つの修飾を含むＣＤＲを有するバリアントＴＩＭ−３ＡＢＤＳが本明細書で提供される。一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、図１１２および３Ａ〜Ｃまたは配列表に示されるＴＩＭ−３ＡＢＤの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のアミノ酸修飾を有する６つのＣＤＲのセットを含むＴＩＭ−３ＡＢＤを含む。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）および／またはＢＬＩ（生体層干渉法、例えば、Ｏｃｔｅｔアッセイ）のうちの少なくとも１つによって測定される場合に、ＴＩＭ−３抗原に結合することができ、後者は、多くの実施形態で特定の用途を見出す。

一実施形態では、対象の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質のＴＩＭ−３ＡＢＤは、図１２および１３Ａ〜Ｃまたは配列表に示されるＴＩＭ−３ＡＢＤの６つのＣＤＲに対して少なくとも９０、９５、９７、９８または９９％同一である６つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）および／またはＢＬＩ（生体層干渉法、例えば、Ｏｃｔｅｔアッセイ）のうちの少なくとも１つによって測定される場合に、ＴＩＭ−３に結合することができ、後者は、多くの実施形態で特定の用途を見出す。

対象の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロに量体融合タンパク質の一実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１−３およびｖｌＣＤＲ１−３）を含む：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

一実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１−３およびｖｌＣＤＲ１−３）を含むバリアントＴＩＭ−３抗原結合ドメインであり、６つのＣＤＲは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の修飾を含む：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

一実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質のＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１−３およびｖｌＣＤＲ１−３）を含むバリアントＴＩＭ−３抗原結合ドメインであり、６つのＣＤＲは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと比較して、少なくとも９０、９５、９７、９８または９９％同一である：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質のＴＩＭ−３ＡＢＤは、図１２および１３Ａ〜Ｃに開示されるものを含むが、これに限定されない、本明細書に開示されるＬＡＧ−ＡＢＤのいずれかの可変重鎖ドメイン（ＶＨ）および可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む。本明細書に開示される親のＴＩＭ−３可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインに加えて、本明細書に開示されるＴＩＭ−３ＡＢＤのＶＨドメインおよびＶＬドメインのバリアントである可変重鎖ドメインおよび／または可変軽鎖ドメインを含む１つ以上のＴＩＭ−３ＡＢＤを有する、対象となる標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質が本明細書で提供される。一実施形態では、バリアントＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインは、図１２、１３Ａ〜Ｃ、または配列表に示されているＴＩＭ−３ＡＢＤのＶＨおよび／またはＶＬドメインから、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸が変更されている。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）および／またはＢＬＩ（生体層干渉法、例えば、Ｏｃｔｅｔアッセイ）のうちの少なくとも１つで測定される場合に、ＴＩＭ−３に結合することができ、後者は、多くの実施形態で特定の用途を見出す。

一実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質のバリアントＶＨおよび／またはＶＬドメインは、図１２および１３Ａ〜Ｃ、または配列表に示されているＴＩＭ−３ＡＢＤのＶＨおよび／またはＶＬドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８または９９％同一である。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）および／またはＢＬＩ（生体層干渉法、例えば、Ｏｃｔｅｔアッセイ）のうちの少なくとも１つによって測定される場合に、ＴＩＭ−３に結合することができ、後者は、多くの実施形態で特定の用途を見出す。

いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つのＶＨおよびＶＬを含む：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

一実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つのＶＨおよび／またはＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸修飾を含む：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

特定の実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、以下のＴＩＭ−３ＡＢＤのうちの１つのＶＨおよび／またはＶＬと比較して、少なくとも９０、９５、９７、９８または９９％同一である：３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ０＿Ｌ０、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１、ＡＰＥ１３７［ＴＩＭ−３］、ＡＰＥ５１２１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１［ＴＩＭ−３］、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１［ＴＩＭ−３］、４１７７［ＴＩＭ−３］、４５４５［Ｔｉｍ−３］、８２１３［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ１５［ＴＩＭ−３］、ｍＡｂ５８［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３３［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３４［ＴＩＭ−３］、ＴＩＭ３−０４３８［ＴＩＭ３］およびＴＩＭ３−０４４３［ＴＩＭ３］（例えば、図１２および図１３Ａ〜Ｃを参照）。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１である。

Ｃ．Ｆｃドメイン
本発明のＦｃドメイン構成要素は本明細書に記載の通りであり、それは概して、スキュー変異および／または任意選択のｐＩ変異を含み、および／または除去変異が本明細書において概説される。例えば、第ＩＶ．Ａ、ＩＶ．Ｂ、ＩＶ．Ｃ、ＩＶ．Ｄ、ＩＶ．Ｅ、ＩＶ．Ｆ、ＩＶ．Ｇ、ＩＶ．Ｈ、およびＩＶ．Ｉ章を含む、「ＩＶヘテロ二量体抗体」という見出しでのＷＯ２０１７／２１８７０７の開示を参照（参照によりその全体が明示的に組み込まれる）。本発明のヘテロ二量体タンパク質において特に使用されるのは、そこに概説されているように、「スキューバリアント」、「ｐＩバリアント」、「アブレーションバリアント」およびＦｃＲｎバリアントを含むＦｃドメインである。このようなバリアントの特に有用な組み合わせが、例えば、図７Ａ〜Ｆに示されている。

Ｆｃドメインは、ＩｇＧＦｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃドメインに由来するものであってもよい。例示的な実施形態では、本明細書で提供される主題のヘテロ二量体融合タンパク質は、ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む。以下に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＦｃ融合単量体および標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質の抗ＴＩＭ−３抗体フラグメントに有用なＦｃドメインについて説明する。

したがって、「Ｆｃドメイン」は、−ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン、および任意選択でヒンジドメインを含み、ＩｇＧ１由来のＦｃドメインとともに、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来であり得る。本明細書の実施形態のいくつかでは、タンパク質フラグメント、例えば、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＲαがＦｃドメインに結合しているとき、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα構築物のＣ末端が、Ｆｃドメインのヒンジの全てまたは一部に接続する。他の実施形態では、タンパク質断片、例えば、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＲαがＦｃドメインに結合しているとき、それは、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＲαコンストラクトのＣ末端であり、ＦｃドメインのＣＨ１ドメインに結合している。

本明細書に概説したＦｃドメインタンパク質の構築物および配列のいくつかにおいて、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質フラグメントのＣ末端はドメインリンカーのＮ末端に結合し、そのＣ末端は定常ＦｃドメインのＮ末端に結合している（Ｎ−ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質フラグメント−リンカー−Ｆｃドメイン−Ｃ）が、これはスイッチできる（Ｎ−Ｆｃドメイン−リンカー−ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質フラグメント−Ｃ）。本明細書に概説される他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して、第２のタンパク質断片のＮ末端に結合し、第２のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して定常ＦｃドメインのＮ末端に結合する。本明細書に概説されるさらに他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片または第２のタンパク質断片に結合していない定常Ｆｃドメインが提供される。ヘテロ二量体融合タンパク質は、本明細書に記載の２つ以上の例示的な単量体Ｆｃドメインタンパク質を含み得る。任意のドメインリンカーを使用して、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質フラグメントを、本明細書で提供されるヘテロ二量体融合タンパク質のＦｃドメインに接続することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、図８のリンカーのいずれか１つである。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメイン（例えば、Ｆｃドメインに対するＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質フラグメント、またはＦｃドメインに対するｓｃＦｖ）を共に連結するために使用される「ドメインリンカー」であり、そのいくつかは図７Ｃおよび８に示されている。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（一般に１〜２〜３〜４〜５）の整数である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン−セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。いくつかの場合において、以下に概説するように、「撚り度」に注意を払って、荷電ドメインリンカーである。

一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩ操作など、ヘテロ二量体を生成するように操作することができる、少なくとも２つの定常ドメインを含む。使用され得る他のＦｃドメインは、ｐＩ操作された本発明のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびヒンジドメインのうちの１つ以上を含む断片を含む。特に、図２１に示すフォーマットは、ヘテロ二量体融合タンパク質であり、これは、このタンパク質が、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに自己集合した２つの結合したＦｃ配列と、以下にさらに完全に記載される少なくとも１つの融合タンパク質（例えば、１、２またはそれ以上のタンパク質）とを有することを意味する。いくつかの場合では、第１の融合タンパク質は、第１のＦｃに連結し、第２の融合フラグメントは、第２のＦｃに連結する。他の場合では、第１の融合タンパク質は第１のＦｃに連結し、第１の融合タンパク質は、Ｆｃに連結していない第２の融合タンパク質に非共有結合により接続する。いくつかの場合では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、第１のＦｃ配列に連結する第２の融合タンパク質に連結する第１の融合タンパク質、および第１または第２の融合タンパク質のいずれかに連結しない第２のＦｃ配列を含む。

したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、自己集合してヘテロ二量体Ｆｃドメイン融合ポリペプチドを形成する、２つの異なる重鎖バリアントＦｃ配列の使用に依存するヘテロ二量体融合タンパク質を提供する。

本発明は、１つ以上の結合パートナー、リガンド、または受容体への結合を可能にするヘテロ二量体融合タンパク質を提供するための新規構築物に関する。ヘテロ二量体融合構築物は、抗体の重鎖の２つのＦｃドメイン、例えば、集合して「二量体」になる２つの「単量体」の自己集合性に基づく。ヘテロ二量体Ｆｃ融合体は、以下でさらに詳しく説明するとおり、各単量体のアミノ酸配列を変えることによって作製される。したがって、本発明は概して、結合パートナー（複数可）またはリガンド（複数可）または受容体（複数可）をいくつかの方法で共結合することができるヘテロ二量体融合タンパク質の生成に関し、ヘテロダ二量体形成を促進するために、かつ／またはホモ二量体よりもヘテロ二量体の精製を容易にするために、各鎖で異なる定常領域中のアミノ酸バリアントに依存している。主題のヘテロ二量体融合タンパク質の特定の実施形態のＦｃドメインに含まれる特定のバリアントを、以下により詳細に記載する。

１．ヘテロ二量体化バリアント
本発明は、様々なフォーマットのヘテロ二量体融合タンパク質を含む、ヘテロ二量体タンパク質を提供する。このようなヘテロ二量体タンパク質は、第１および第２の単量体のヘテロ二量体化を促進し、および／またはホモ二量体よりもヘテロ二量体の精製を容易にする修飾を含む２つの異なるＦｃドメイン（第１の単量体および第２の単量体に対してそれぞれ１つ）を含み、本明細書ではまとめて「ヘテロ二量体化バリアント」と称される。以下で論じるように、ヘテロ二量体化バリアントは、スキューバリアント（例えば、以下に記載される「ノブアンドホール」および「電荷対」バリアント）、ならびにヘテロ二量体からのホモ二量体の分離を促進する「ｐＩバリアント」を含んでいてもよい。その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号に一般的に記載されるように、また、具体的には、ヘテロ二量体化バリアントの議論について以下のように、ヘテロ二量体化に有用な機構としては、米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号に記載される「ノブアンドホール」（「ＫＩＨ」）、米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号に記載される「静電ステアリング」または「電荷対」、米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号に記載されるｐＩバリアント、および米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号および以下に概説される一般的なさらなるＦｃバリアントが挙げられる。

ａ．スキューバリアント
いくつかの実施形態では、対象のヘテロ二量体タンパク質は、スキューバリアントを含み、これは、Ｆｃホモ二量体（第１のＦｃドメインの２つまたは第２のＦｃドメインの２つを含むＦｃ二量体；Ａ−ＡまたはＢ−Ｂ）よりもヘテロ二量体（第１および第２のＦｃドメインを含むＦｃ二量体；Ａ−Ｂ）の形成を促進する第１のＦｃドメイン（Ａ）および／または第２のＦｃドメイン（Ｂ）における１つ以上のアミノ酸修飾である。適切なスキューバリアントは、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図２９に含まれ、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、および図４において、参照により本明細書に組み込まれている。

スキューバリアントの１つの機構は、一般的に、当該技術分野において「ノブアンドホール」と呼ばれ、米国特許出願第６１／５９６，８４６号、Ｒｉｄｇｗａｙら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９（７）：６１７（１９９６）；Ａｔｗｅｌｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７２７０：２６；米国特許第８，２１６，８０５号（その全てが、全体的に、特に、「ノブアンドホール」変異の開示について、参照により本明細書に組み込まれている）に記載されるように、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しないような立体的影響を作り出すアミノ酸操作を指す。これは、本明細書では、「立体バリアント」と称されることがある。これらの図は、「ノブアンドホール」に依存するいくつかの「単量体Ａ−単量体Ｂ」対を特定する。さらに、Ｍｅｒｃｈａｎｔら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブアンドホール」変異をジスルフィド結合と組み合わせ、Ｆｃヘテロ二量体の生成をさらに促進することができる。

ヘテロ二量体の生成において用途が見出されるスキューバリアントのさらなる機構は、参照によりその全てが本明細書に組み込まれるＧｕｎａｓｅｋａｒａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）に記載されるように、「静電ステアリング」と称されることもある。これは、本明細書において、時に「電荷対」と称される。この実施形態では、静電学を使用して、その生成をヘテロ二量体化の方へ曲げる。当業者には理解されるように、これらは、ｐＩ、すなわち精製にも影響を及ぼす可能性があり、したがって場合によってはｐＩバリアントと見なすこともできる。しかし、これらは、ヘテロ二量体化を強制するために作られ、精製ツールとしては使用されなかったため、これらは、「スキューバリアント」と分類される。これらには、これらに限定されないが、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ（例えば、これらは「単量体の対応するセット」である）、およびＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが含まれる。

いくつかの実施形態では、スキューバリアントは、有利かつ同時に、上述の「ノブアンドホール」機構および「静電ステアリング」機構の両方に基づくヘテロ二量体化を促進する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、このようなヘテロ二量体化スキューバリアントの１つ以上のセットを含む。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、この対の一方のセットは、第１の単量体に組み込まれ、この対の他方のセットは、第２の単量体に組み込まれる。このカテゴリーの例示的な「スキューバリアント」は、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ；Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；またはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択的に、架橋ジスルフィドを含み、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ）「スキュー」バリアントアミノ酸置換セットを含む。命名法に関して、「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」の対は、単量体の１つが、アミノ酸置換Ｓ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含むＦｃドメインを含み、他方の単量体が、アミノ酸置換Ｌ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含むＦｃドメインを含むことを意味する。上述のように、これらの対の「撚り度」は、開始時のｐＩに依存する。これらのセットは、必ずしも「ノブアンドホール」バリアントとして挙動するわけではなく、一方の単量体の残基と他方の単量体の残基との間の一対一の対応を有することを留意すべきである。すなわち、セットのこれらの対は、その代わりに、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しない２つの単量体間の界面を形成する可能性があり、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合は、予想される５０％（２５％ホモ二量体Ａ／Ａ：５０％ヘテロ二量体Ａ／Ｂ：２５％ホモ二量体Ｂ／Ｂ）ではなく、９０％を超える。

例示的な実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ；Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；またはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択的に、架橋ジスルフィドを含み、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ）「スキュー」バリアントアミノ酸置換セットを含む。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」アミノ酸置換セットを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるスキューバリアントは、ヘテロ二量体融合タンパク質の第１および第２のＦｃドメインの片方または両方に、他のスキューバリアント（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号の図３７、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれるものを参照）、ｐＩバリアント、アイソタイプバリアント、ＦｃＲｎバリアント、アブレーションバリアントなどを含むがこれらに限定されない他の修飾とともに独立して組み込まれる。さらに、個々の修飾はまた、独立して、かつ任意選択的に、主題のヘテロ二量体融合タンパク質に含まれるか、または主題のヘテロ二量体融合タンパク質から除外され得る。

ｂ．ヘテロ二量体のｐＩ（等電点）バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体融合タンパク質の分離を有利に可能にする精製バリアント（「ｐＩバリアント」）を含む。

一般に、当業者には理解されるように、ｐＩ変異には２つの一般的なカテゴリーがある：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）。本明細書中に記載されるように、これらの変異の全ての組み合わせがなされ得る：一方の単量体は野生型、または野生型と顕著に異なるｐＩを示さない変異であり得、他方がより塩基性またはより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各単量体は、１つがより塩基性に、１つがより酸性へと変化する。

ヘテロ二量体タンパク質の精製を容易にし得るいくつかの基本的な機構が存在する。このような機構の１つは、融合タンパク質の単量体の片方または両方の等電点に影響を与える１つ以上の修飾を含むｐＩバリアントの使用に依存し、その結果、各単量体、続いて各二量体種は、異なるｐＩを有し、そのため、Ａ−Ａ、Ａ−ＢおよびＢ−Ｂ二量体タンパク質の等電点精製を可能にする。代替的に、いくつかのフォーマットはまた、サイズに基づいて分離することも可能にする。以下にさらに概説するように、スキューバリアントを用い、ホモ二量体よりもヘテロ二量体を形成するように「曲げる（ｓｋｅｗ）」こともできる。したがって、ヘテロ二量体化スキューバリアントおよびｐＩバリアントの組み合わせは、本明細書で提供される対象のヘテロ二量体融合タンパク質において特定の用途が見出される。

さらに、以下により完全に概説されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質のフォーマットに応じて、ｐＩバリアントは単量体の定常ドメインおよび／またはＦｃドメイン内に含まれるか、またはドメインリンカーが使用されるかのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、代替機能のための追加の修飾を含み、Ｆｃ、ＦｃＲｎおよびＫＯバリアントなどのｐＩ変化を作り出すこともできる。

ヘテロ二量体融合タンパク質の精製を可能にする分離機構としてｐＩを利用する実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質の単量体の片方または両方にアミノ酸修飾が導入されてもよい。すなわち、単量体の１つ（単純化のため本明細書では「単量体Ａ」と称される）のｐＩは、単量体Ｂとは離れるように操作されてもよく、または単量体ＡのｐＩを増加させ、単量体ＢのｐＩを減少させつつ、単量体ＡおよびＢが両方とも変更されてもよい。論じられるように、いずれかまたは両方の単量体のｐＩ変化は、荷電残基を除去または付加することによって（例えば中性アミノ酸を正または負に荷電したアミノ酸残基で置換する、例えばグルタミンからグルタミン酸）、正または負から反対の電荷への荷電残基の変更によって（例えばアスパラギン酸からリジンへ）、または荷電残基の中性残基への変更によって（例えば電荷の消失、リジンからセリン）、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを、図４および５を含む図面に示す。

ヘテロ二量体をホモ二量体から分離することを可能にするように、単量体の少なくとも１つにおいてｐＩの十分な変化を作り出すことは、「野生型」重鎖定常領域と、そのｐＩを増加または減少させるように操作されたバリアント領域を用いることによって（ｗｔＡ：Ｂ＋またはｗｔＡ：Ｂ−）、またはある領域を増加させ、他の領域を減少させることによって（Ａ＋：Ｂ−またはＡ−：Ｂ＋）、行うことができる。

したがって、一般に、本発明の対象となる融合タンパク質のいくつかの実施形態の構成要素は、単量体の片方または両方にアミノ酸置換（「ｐＩバリアント」または「ｐＩ置換」）を組み込むことによって、二量体タンパク質の単量体のうち、両方ではない場合には、少なくとも１つの等電点（ｐＩ）を変えることを目的とするＦｃドメインまたは定常ドメイン領域中のアミノ酸バリアントである。本明細書中の２つのホモ二量体からのヘテロ二量体の分離は、２つの単量体のｐＩが０．１ｐＨ単位とわずかに異なる場合に達成でき、０．２、０．３、０．４、および０．５以上異なるものがすべて本発明において使用される。

当業者には理解されるように、良好な分離を達成するためにヘテロ二量体融合タンパク質の各々または両方の単量体（複数可）に含まれるｐＩバリアントの数は、一部には、構成要素の開始時のｐＩに依存するだろう。すなわち、どの単量体を操作するか、またはどの「方向」（例えば、より肯定的またはより否定的）かを決定するために、各単量体に含まれるＦｃドメインおよび任意のＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒαまたはリンカーの配列が計算され、その単量体のｐＩに基づき、それらから決定がなされる。当技術分野で知られているように、異なるＦｃドメイン、リンカーＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαは、異なる開始時のｐＩを有するだろう。概して、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各単量体の総ｐＩ差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように０．２〜０．５が好ましい。

一般に、当業者には理解されるように、タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）と、タンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）といった、ｐＩに影響を与えるアミノ酸修飾の２つの一般的なカテゴリーが存在する。本明細書に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせを使用することができる。一方の単量体は野生型、または野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであってもよく、もう一方の単量体は、より塩基性またはより酸性のいずれかであるＦｃドメインを含む。あるいは、各単量体は、１つはより塩基性に、１つはより酸性へと変化し得る。

ｐＩバリアントを使用してヘテロ二量体化を達成する場合、ヘテロ二量体融合タンパク質を設計および精製するための、よりモジュール方式の手法が提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化バリアント（スキューバリアントおよびｐＩバリアントを含む）を操作しなければならない。さらに、いくつかの実施形態では、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくｐＩが変化するように、異なるＩｇＧアイソタイプからのｐＩバリアントを移入することによって著しく低減される（以下のアイソタイプバリアントを参照）。したがって、解決されるべきさらなる問題は、高いヒト配列含有量を有する低ｐＩの定常ドメインの解明、例えば、任意の特定の位置における非ヒト残基の最小化または回避である。アイソタイプ置換に代えて、またはこれに加え、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、等配電子置換（例えば、ＡｓｎからＡｓｐおよびＧｌｎからＧｌｕ）を利用することによって、大幅に減少する。

このｐＩ操作で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長およびＦｃＲｎ結合の増加である。すなわち、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００２８３０４号（その全体が、具体的には、さらなる機能を与えるｐＩバリアントの開示について、参照により組み込まれる）に記載されるように、抗体定常ドメイン（Ｆｃ融合物中にみられるものを含む）のｐＩの低下によって、インビボでの血清保持が長くなる可能性がある。血清半減期の増加のためのこれらのｐＩバリアントはまた、精製のためのｐＩ変化を促進する。

さらに、ヘテロ二量体化バリアントのｐＩバリアントは、ホモ二量体が存在するとき、排除、最小化、および区別する能力が顕著であるので、Ｆｃ融合タンパク質の分析および品質管理プロセスにさらなる利益を与える。同様に、ヘテロ二量体融合タンパク質産生の再現性を確実に試験する能力が重要である。

ｐＩバリアントの例示的な組み合わせは、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図４および５、および図３０に示されており、これらの全ては、全体的に、特に、ｐＩバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、すべてのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２〜４に由来する場合、Ｒ１３３ＥおよびＲ１３３Ｑもまた使用され得る。

いくつかの実施形態では、修飾は、ＥＵ付番に基づき、位置２０８、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９および２３０を含む、Ｆｃドメインのヒンジドメインで生じる。したがって、ｐＩバリアント、特に置換は、位置２１６〜２３０の１つ以上で行うことができ、用途を見出す１、２、３、４または５個の変異を有する。同様に、すべての可能な組み合わせが、単独で、または他のドメイン中の他のｐＩバリアントとともに企図されている。

ヒンジドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２２１位の欠失、２２２位の非天然バリンまたはトレオニン、２２３位の欠失、２２４位の非天然グルタミン酸、２２５位の欠失、２３５位の欠失、および２３６位の欠失または非天然アラニンが含まれるがこれらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはｐＩ置換のみが行われ、他の例では、これらの置換（複数可）は他のドメイン内の他のｐＩバリアントに任意の組み合わせで加えられる。

いくつかの実施形態では、ＥＵ付番に基づき、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２７４、２９６、３００、３０９、３２０、３２２、３２６、３２７、３３４および３３９を含むＣＨ２領域内に変異を生じさせることができる。２３３〜２３６における変化は、ＩｇＧ２骨格における（３２７Ａとともに）エフェクター機能を増加させるためになされ得ることに留意されたい。この場合も、これら１４個の位置の全ての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、ヘテロ二量体融合タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のＣＨ２のｐＩ置換を有するバリアントＦｃドメインを含んでいてもよい。

ＣＨ２ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２７４位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、２９６位の非天然フェニルアラニン、３００位の非天然フェニルアラニン、３０９位の非天然バリン、３２０位の非天然グルタミン酸、３２２位の非天然グルタミン酸、３２６位の非天然グルタミン酸、３２７位の非天然グリシン、３３４位の天然グルタミン酸、３３９位の非天然トレオニン、およびＣＨ２内および他のドメインとの全ての可能な組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

この実施形態では、修飾は、ＣＨ３領域の位置３５５、３５９、３６２、３８４、３８９、３９２、３９７、４１８、４１９、４４４および４４７（ＥＵ付番）から独立して、かつ任意選択的に選択され得る。ＣＨ３ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、３５５位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、３８４位の非天然セリン、３９２位の非天然アスパラギンまたはグルタミン酸、３９７位の非天然メチオニン、４１９位の非天然グルタミン酸、３５９位の非天然グルタミン酸、３６２位の非天然グルタミン酸、３８９位の非天然グルタミン酸、４１８位の非天然グルタミン酸、４４４位の非天然グルタミン酸、および４４７位の欠失または非天然アスパラギン酸が含まれるが、これらに限定されない。ｐＩバリアントの例示的な実施形態を図５に示す。

一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩバリアント修飾２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ（ヒトＩｇＧ１に関してＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を有するバリアントＦｃドメインを有する単量体を含む。一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩバリアント修飾２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ（ヒトＩｇＧ１に関してＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を有するバリアントＦｃドメインを有する単量体を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩバリアント修飾２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ（ヒトＩｇＧ１に関してＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を有するバリアントＦｃドメインを有する単量体を含む。一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩバリアント修飾１９６Ｋ／１９９Ｔ／２１７Ｒ／２２８Ｒ／２７６Ｋ（ヒトＩｇＧ１に関してＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ）を有するバリアントＦｃドメインを有する単量体を含む。

一実施形態では、ヘテロ二量体融合タンパク質は、ｐＩバリアント修飾２１７Ｒ／２２８Ｒ／２７６Ｋ（ヒトＩｇＧ１に関してＰ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ）を有するバリアントＦｃドメインを有する単量体を含む。対象のＦｃドメインに組み込むことができるさらなる例示的なｐＩバリアント修飾を図５に示す。

２．さらなる機能のためのさらなるＦｃバリアント
ｐＩアミノ酸変異に加えて、１つ以上のＦｃγＲ受容体への結合の改変、ＦｃＲｎ受容体への結合の改変等を含むがこれらに限定されない、様々な理由で実施することができるいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾が存在する。

したがって、本発明のタンパク質は、ｐＩバリアントおよび立体バリアントを含む、本明細書に概説したヘテロ二量体化バリアントを含むアミノ酸修飾を含むことができる。バリアントの各セットは独立して任意選択的に特定のヘテロ二量体タンパク質に含み得るかまたはそれから除外し得る。

ａ．ＦｃγＲバリアント
ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。結合の増加ならびに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応）の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（抑制性受容体）への結合の減少も有益であり得る。本発明で使用されるアミノ酸置換には、米国特許出願第１１／１２４，６２０号（特に図４１）、同第１１／１７４，２８７、同第１１／３９６，４９５、同第１１／５３８，４０６に列挙されるものが含まれ、それらのすべてはその全体が、具体的にはそこで開示されるバリアントが参照により、明示的に本明細書に組み込まれる。使用される特定のバリアントには、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ、および２９９Ｔが含まれるがこれらに限定されない。

さらに、ＦｃγＲＩＩｃに対する親和性を増加させるアミノ酸置換もまた、本明細書に概説されるＦｃドメインバリアントに含まれ得る。例えば、米国特許出願第１１／１２４，６２０号および米国特許出願第１４／５７８，３０５号に記載される置換は有用である。

さらに、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第１２／３４１，７６９号に具体的に開示されているように、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６ＩまたはＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、および２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むがこれらに限定されない、ＦｃＲｎ受容体への結合の増加および血清半減期の増加に使用される追加のＦｃ置換が存在する。

ｂ．アブレーションバリアント
同様に、機能性バリアントの別のカテゴリーは「ＦｃγＲ切除バリアント」または「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯまたはＫＯ）」バリアントである。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、さらなる作用機序を回避するために、１つ以上または全てのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減または除去することが望ましい。これは、例えば、多くの実施形態において、特に、Ｆｃドメインのうちの１つが１つ以上のＦｃγ受容体除去変異を含むように、ＦＣγＲＩＩＩａ連結を除去してＡＤＣＣ活性を除去または顕著に減少させることが望ましい二重特異性免疫調節抗体の使用においてである。これらの除去変異は、それらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第１５／１４１，３５０号の図３１に示されており、ＥＵインデックスに従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される除去変異を用いる好ましい態様で、各々が独立して任意選択で含まれるか除外することができる。本明細書で言及される切除バリアントは、ＦｃγＲ結合を切除するが、ＦｃＲｎ結合を切除しないことに留意されたい。

例示的なアブレーションバリアントを図５に示す。

ｃ．ヘテロ二量体とＦｃバリアントとの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント（スキューバリアントおよび／またはｐＩバリアントを含む）はすべて、それらの「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」または「単量体分割」を保持する限り、任意の方法で任意選択的にかつ独立して組み合わせることができる。さらに、これらのバリアントはすべて、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。

ｐＩバリアントの場合、特に使用される実施形態が図面に示されているが、精製を促進するために２つの単量体間のｐＩの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成できる。

さらに、ヘテロ二量体化変異、スキュー、およびｐＩのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Ｆｃ除去変異、Ｆｃ変異、ＦｃＲｎ変異と独立して任意選択的に組み合わせることができる。

さらに、単量体Ｆｃドメインは、Ｃ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳまたはＣ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含むアミノ酸置換のセットを含み得る。

これに加えて、ヘテロ二量体融合タンパク質は、スキューバリアント（例えば、米国特許出願第１５／１４１，３５０号の図１Ａ〜１Ｃに示されるアミノ酸置換のセット、その全てが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含んでいてもよく、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６ＷおよびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択され、任意選択的にアブレーションバリアント、任意選択的に帯電したドメインリンカーを含んでいてもよく、重鎖は、ｐＩバリアントを含む。

いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、２３６Ｒ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２４３Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｖ２５９Ｉ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２９８Ａ、Ｖ３０８Ｆ、３２８Ｆ、３２８Ｒ、３３０Ｌ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｓ、２３６Ｒ／３２８Ｒ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、２３６Ｒ／３２８Ｆ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｙ４３６Ｉ／Ｍ４２８Ｌ、Ｙ４３６Ｖ／Ｍ４２８Ｌ、Ｙ４３６Ｉ／Ｎ４３４Ｓ、Ｙ４３６Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、およびＰＶＡ／Ｓ２６７Ｋからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの場合では、Ｆｃドメインはアミノ酸置換２３９Ｄ／３３２Ｅを含む。他の場合において、Ｆｃドメインはアミノ酸置換Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８ＲまたはＰＶＡ／Ｓ２６７Ｋを含む。

一実施形態では、本発明で使用されるスキューおよびｐＩ変異の特定の組み合わせは、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択で、架橋ジスルフィドＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）であり、一方の単量体がＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４８１Ｄを含み他方が正に荷電したドメインリンカーである。当技術分野において理解されるように、「ノブインホール」バリアントはｐＩを変化させず、したがってどちらの単量体にも使用することができる。本発明の特定のフォーマットで使用可能なバリアントの有用な組み合わせは、図７Ａ〜７Ｆに含まれている。

ＩＩＩ．標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα Ｆｃ融合物ｘＴＩＭ−３ＡＢＤヘテロ二量体タンパク質
チェックポイント阻害剤ＴＩＭ−３抗原に結合することができ、共通γ鎖（γｃ；ＣＤ１３２）および／またはＩｌ−２受容体β鎖（ＩＬ−２Ｒβ；ＣＤ１２２）と複合体を形成し得る、ヘテロ二量体融合タンパク質が本明細書で提供される。ヘテロ二量体融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および抗体融合タンパク質を含み得る。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−１５Ｒαに共有結合したＩＬ−１５タンパク質（一般的に、アミノ酸置換を含む）およびＦｃドメインを含み得る。任意選択で、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質は非共有結合している。

ＩＶ．本発明の有用なフォーマット
図２１に示すように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質のいくつかの有用なフォーマットが存在する。一般に、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）構成要素、抗ＴＩＭ−３構成要素およびＦｃ構成要素といった３つの機能的構成要素を有し、各々が本明細書に概説される異なる形態をとることができ、各々が任意の構成で他の構成要素と組み合わせることができる。

第１および第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、ａ）Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、ｂ）Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｃ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｄ）Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｅ）Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、ｆ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌおよびｇ）Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し得る。例示的な実施形態では、スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓである。

いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは、以下のｐＩバリアントから選択されるｐＩアミノ酸置換のさらなるセットを有する：ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｎ２０８／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤまたはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ。

任意選択的に、第１および／または第２のＦｃドメインは、以下のＦｃＫＯバリアントから選択されるアブレーション（「ＦｃＫＯ」）バリアントのさらなるセットを有する：ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ。

任意選択的に、第１および／または第２のＦｃドメインは、半減期延長のために４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する。

ヒンジまたは部分ヒンジを使用して、ＦｃドメインをｓｃＦｖ、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαドメインに連結する実施形態では、ヒンジは、ヒンジが任意の軽鎖と望ましくないジスルフィド結合を形成するのを防ぐためのＣ２２０Ｓ置換を、任意選択的に含んでいてもよい。

対象となるヘテロ二量体融合タンパク質の例示的なフォーマットを以下に提供する。

Ａ．ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ
一実施形態は、図２１Ａに示され、２つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み（２番目のドメインリンカーは、ヒンジドメインであることが多い）、第２の単量体は、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含むが、いずれの向きにも、ドメインリンカーは、ヒンジを置換することができる。これは、一般的に「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」と呼ばれ、「ｓｃ」は、共有結合リンカーを用いたＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインの接続を指す「一本鎖」を表す。この実施形態のためのバリアントの好ましい組み合わせは、図２１ＡおよびＢに見出される。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、を含む。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントを第１のＦｃドメインに接続し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジドメインである。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖリンカーによって可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に接続した可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図９Ａ〜Ｃ）を参照。一実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬである。別の実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨである。抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖのＣ末端は、ドメインリンカー（例えば、抗体ヒンジドメイン）によって、第１のＦｃドメインのＮ末端に接続する。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２および１３Ａ〜Ｃに示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、抗ＴＩＭｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキュー変異対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントであり、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ａのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、を含み、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントであり、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

Ｂ．ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｂに示され、３つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の単量体は、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含むが、いずれの向きにも、ドメインリンカーは、ヒンジを置換することができる。第３の単量体は、バリアントＩＬ−１５ドメインである。これは、一般的に「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」または「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」は、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインの自己集合型非共有接続を指す「非共有」を表す。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖを第１のＦｃドメインに接続し、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジドメインである。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、抗ＴＩＭｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、抗ＴＩＭｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、抗ＴＩＭｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｂのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

Ｃ．ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｃに示され、３つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインは、操作されたシステイン残基を有し、第２の単量体は、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含むが、いずれの向きにも、ドメインリンカーは、ヒンジを置換することができる。第３の単量体は、バリアントＩＬ−１５であり、これもシステインバリアントアミノ酸を有するように操作されており、そのため、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインとバリアントＩＬ−１５ドメインとの間にジスルフィド架橋を形成することが可能になる。これは、一般的に「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」または「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖ」と呼ばれ、「ｄｓ」は、「ジスルフィド」を表す。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖを第１のＦｃドメインに接続し、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジドメインである。

任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖを第１のＦｃドメインに接続し、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジドメイン（例えば、抗体ヒンジドメイン）である。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２および１３Ａ〜Ｃに示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ならびに適切なシステイン置換を利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステイン置換を有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキュー変異対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステイン置換を有する、ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ｓｃＦｖは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含み、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ＸｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｃのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＦｖＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖ−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、抗ＴＩＭｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体および第２の単量体のヒンジは、各々、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

Ｄ．ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ
この実施形態は、図２１Ｄに示され、３つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−バリアントＩＬ−１５−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３の単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは一般に「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂフォーマット（図２１Ｄを参照）は、その後でヘテロ二量体Ｆｃ領域（ヒンジを含む）のＮ末端に融合する可変長リンカー（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）によってバリアントＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含む。第２の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３であり、一方、対応する軽鎖（第３の単量体）は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成する、軽鎖と、を含む。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントを第１のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、抗体ヒンジドメイン（例えば、抗体ヒンジドメイン）である。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２および１３Ａ〜Ｃに示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、２Ａ１１＿Ｈ１．１４４＿Ｌ２．１４２標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα Ｘフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む、軽鎖と、を含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキュー変異対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、軽鎖と、を含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成する、軽鎖と、を含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｄのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ｓｃＦｖは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を含む。

Ｅ．ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｅに示され、４つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖である。第４の単量体は、バリアントＩＬ−１５ドメインである。これは、一般的に「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」は、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインの自己集合型非共有接続を指す「非共有」を表す。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、抗体ヒンジドメイン（例えば、抗体ヒンジドメイン）である。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｆａｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキュー変異対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｅのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）ＩＬ−１５バリアントを含む第４の単量体と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｆ．ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｆに示され、４つの単量体を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインは、システイン残基を含むように操作されており、第２の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３の単量体は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）および定常軽鎖ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖である。第４の単量体は、バリアントＩＬ−１５ドメインであり、これもシステイン残基を含むように操作されており、その結果、天然の細胞条件でジスルフィド架橋が形成する。これは、一般的に「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｄｓ」は、「ジスルフィド」を表す。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、抗体ヒンジドメイン（例えば、抗体ヒンジドメイン）である。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成する。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、適切なシステインアミノ酸置換を有する、ＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステインアミノ酸置換を有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステイン置換を有する、ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｆのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ＦａｂＸｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインであり、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがシステイン残基のアミノ酸置換を含む、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３の単量体と、ｄ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントと、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第２の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｇ．ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｇに示され、３つの単量体を含む（しかし、融合タンパク質は、四量体である）。第１の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２の単量体は、ｓｃＩＬ−１５複合体を有する重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアントを含む。第３の（および第４の）単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは一般に「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。これは、ＴＩＭ−３分子に二価で結合する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」形態のヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＥ３５７Ｑ、Ｌ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインのヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｇのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアントを含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインのヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｈ．ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｈに示され、４つの単量体を含む（しかし、ヘテロ二量体融合タンパク質は、五量体である）。第１の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２の単量体は、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを有する重鎖、例えば、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含む。第３の単量体は、バリアントＩＬ−１５ドメインである。第４の（および第５の）単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは一般に「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。これは、ＴＩＭ−３にも二価で結合する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第５の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第５の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｈのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメイン

および可変軽鎖ドメインである。

Ｉ．ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｉに示され、４つの単量体を含む（しかし、ヘテロ二量体融合タンパク質は、五量体である）。第１の単量体は、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２の単量体は、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを有する重鎖、例えば、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインは、システイン残基を含むように設計される。第３の単量体は、バリアントＩＬ−１５ドメインであり、これもシステイン残基を含むように操作されており、その結果、生理学的条件でＩＬ−１５複合体が形成する。第４の（および第５の）単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは、一般的に「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｄｓ」は、「ジスルフィド」を表し、ＴＩＭ−３に二価で結合する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第５の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成する。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、適切なシステインアミノ酸置換を有する、ＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステインアミノ酸置換を有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第５の単量体のＶＬは、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステイン置換を有する、ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｉのフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄおよび／またはＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＱ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体のヒンジ−第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２７１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）を含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインが、システイン残基のアミノ酸置換を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）システイン残基のアミノ酸置換を含むＩＬ−１５バリアントを含む第３の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、第４および第５の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第５の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアント上のシステイン残基と、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン上のシステイン残基とが、ジスルフィド結合を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のヒンジ−第２のバリアントＦｃドメインは、ＰＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６

５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｊ．セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｊに示され、４つの単量体を含み、四量体を形成する。第１の単量体は、ＶＨ−ＣＨ１−［任意選択のドメインリンカー］−ＩＬ−１５バリアント−［任意選択のドメインリンカー］−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の任意選択のドメインリンカーは、時に、ヒンジドメインである。第２の単量体は、ＶＨ−ＣＨ１−［任意選択のドメインリンカー］−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−［任意選択のドメインリンカー］−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の任意選択のドメインリンカーは、時に、ヒンジドメインである。第３の（および第４の）単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは、一般的に「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」と称される。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントを第１のＦｃドメインに接続し、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを第２のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、各々、抗体ヒンジドメインである。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。

「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｃｅｎｔｒａｌ−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有し、適切なシステイン置換を有する、ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含む。別の例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体の第２のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｋでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体の第２のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｄ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｋ．セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図２１Ｋに示され、４つの単量体を含み、四量体を形成する。第１の単量体は、ＶＨ−ＣＨ１−［任意選択のドメインリンカー］−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアント−［任意選択のドメインリンカー］−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の任意選択のドメインリンカーは、時に、ヒンジドメインである。第２の単量体は、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３の（および第４の）単量体は軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは、一般的に「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。任意の有用なドメインリンカーを使用して、限定されないが、図８および図９Ａ〜Ｃのものを含むヘテロ二量体タンパク質の種々の構成要素を接続してもよい。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントを第１のＦｃドメインに接続するドメインリンカーは、抗体ヒンジドメインである。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対のいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示されるような３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、７Ｇ８＿Ｈ３．３０＿Ｌ１．３４の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成する。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含むＩＬ−１５バリアントを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＬＡＧ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

ｃｅｎｔｒａｌ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬとが、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬとが、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨおよび第３の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第２の単量体のＶＨおよび第４の単量体のＶＬが、それぞれ、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４ＫおよびＥ３５７Ｑを含む。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対と、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓとを有し、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントまたはＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントのいずれかを有する抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを利用し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１２に示される３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインの対を有し、図２１Ｋフォーマットでは、第１の単量体および第２の単量体両方に、スキューバリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、アブレーションバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを有し、任意選択的に、第１の単量体および第２の単量体両方に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを利用する。

一実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｄ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、各々ＶＬ−ＣＬを含む、第３および第４の単量体と、を含み、第１の単量体のＶＨと第３の単量体のＶＬは、第１のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、第２の単量体のＶＨと第４の単量体のＶＬは、第２のＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントとＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインがＩＬ−１５複合体を形成し、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１の単量体のヒンジは、バリアントＣ２２０Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。一実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。別の実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含み、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。

Ｖ．本発明の特に有用な実施形態
本発明は、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体タンパク質であって、少なくとも２つの単量体を含み、その１つが、抗ＴＩＭ−３ＡＢＤを含み、他方がＩＬ−１５／ＲＡ複合体を含み、ヘテロ二量体Ｆｃドメインを用いて接続された、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質を提供する。

いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７ＬおよびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有する。

いくつかの例では、第１および／または第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むさらなるアミノ酸置換のセットを有する。いくつかの場合では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる追加の一組のアミノ酸置換を有する。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号１（全長ヒトＩＬ−１５）および配列番号２（短縮化ヒトＩＬ−１５）からなる群から選択されるポリペプチド配列を有し、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質が、配列番号３（全長ヒトＩＬ−１５Ｒα）および配列番号４（ヒトＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン）からなる群から選択されるポリペプチド配列を有する。

複数の実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、それぞれ、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８；Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｃ９７／Ａ９８；Ｖ４９Ｃ：Ｓ４０Ｃ；Ｌ５２Ｃ：Ｓ４０Ｃ；Ｅ８９Ｃ：Ｋ３４Ｃ；Ｑ４８Ｃ：Ｇ３８Ｃ；Ｅ５３Ｃ：Ｌ４２Ｃ；Ｃ４２Ｓ：Ａ３７ＣおよびＬ４５Ｃ：Ａ３７Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有していてもよい。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、効力を低下させるために、図１９および図２０から選択される配列を有するバリアントタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、ＩＬ−１５：ＣＤ１３２界面に１つ以上のアミノ酸置換を有するバリアントタンパク質である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合ドメインは、抗ＴＩＭ−３ｓｃＦｖまたは抗ＴＩＭ−３Ｆａｂを含む。例示的な実施形態では、ＴＩＭ−３ＡＢＤは、図１２および１３Ａ〜Ｃに示されるＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬを含む。

例示的な実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである（図１２）。

例示的な実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである（図１２）。

例示的な実施形態では、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体タンパク質は、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質であり、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ドメインリンカー）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＣＨ２−ＣＨ３が第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、ＶＨとＶＬはＴＩＭ−３結合ドメインを形成し、ＩＬ−１５バリアントは、ＩＬ−１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントであり、第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている。いくつかの実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含む。特定の実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。特定の実施形態では、第１の単量体のヒンジは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓも含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、半減期延長バリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、３Ｈ３［ＴＩＭ−３］＿Ｈ１＿Ｌ２．１の可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである（図１２）。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質に含まれ得る有用な「骨格」配列を図１０に示す。いくつかの実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格１」の鎖２のアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格１」の鎖１のアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＣは、図１１（配列番号ＸＸＸ）の「定常軽鎖−κ」の配列を有する、軽鎖と、を含む。特定の実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格２」の鎖２のアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格２」の鎖１のアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＣは、図１１（配列番号ＸＸＸ）の「定常軽鎖−κ」の配列を有する、軽鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質は、ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン−（ドメインリンカー）−ＩＬ−１５バリアント−（ヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格３」の鎖２のアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ＶＨが可変重鎖ドメインであり、ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３が、図１０（配列番号ＸＸＸ）の「骨格３」の鎖１のアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＬ−ＶＣを含み、ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、ＶＣは、図１１（配列番号ＸＸＸ）の「定常軽鎖−κ」の配列を有する、軽鎖と、を含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。さらに別の例示的な実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、図１２および１３Ａ〜ＣのＴＩＭ−３ＡＢＤのいずれかのＶＨおよびＶＬであり、ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。

特に好ましいＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質としては、ＸＥＮＰ２７９７４、ＸＥＮＰ２７９７９、ＸＥＮＣ１０００、ＸＥＮＣ１００１、ＸＥＮＣ１００２およびＸＥＮＣ１００３の「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ＸＦａｂ」フォーマットのヘテロ二量体タンパク質が挙げられる。ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質の例示的な実施形態は、それぞれ図２２および図２９、図４６、図４７ならびに図４８ＡおよびＢに記載されているように示されている。

ＶＩ．本発明の核酸
本発明は、さらに、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質をコードする核酸組成物（または、単量体Ｆｃドメインタンパク質の場合には、同様にこれらをコードする核酸）を提供する。

当業者には理解されるように、核酸組成物は、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質のフォーマットに依存するだろう。したがって、例えば、フォーマットが３つのアミノ酸配列を必要とするとき、３つの核酸配列を発現のために１つ以上の発現ベクターに組み込むことができる。同様に、いくつかのフォーマットは２つの核酸のみを必要とし、この場合も、それらの核酸を、１つまたは２つ、または４つまたは５つの発現ベクターに入れることができる。本明細書に記載されているように、いくつかの構築物は、例えば、軽鎖の２つのコピーを有する。

当該技術分野において既知であるように、本発明の構成要素をコードする核酸は、当該技術分野において既知であるように、また、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質を産生するために使用される宿主細胞に応じて、発現ベクターに組み込むことができる。一般に、核酸は任意の数の調節エレメント（プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクターまたは組み込みベクターであり得る。

次いで、本発明の核酸および／または発現ベクターを、多くの実施形態において使用される、哺乳動物、細菌、酵母、昆虫および／または真菌細胞を含む当技術分野において周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）で形質転換する。

ある実施形態では、各単量体をコードする核酸は、フォーマットに応じて適用可能なように、それぞれ一般に異なるまたは同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内に含まれる。本発明において特に使用される実施形態では、これら２つまたは３つの核酸の各々は異なる発現ベクターに含まれる。

本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質は、当該技術分野において周知のように、発現ベクター（複数可）を含む宿主細胞を培養することによって作製される。産生されると、イオン交換クロマトグラフィー工程を含む、従来の融合タンパク質または抗体精製工程が実施される。本明細書で考察されるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることが、イオン交換クロマトグラフィーもしくは等電点電気泳動、または等電点に高感度な他の方法による分離を可能する。すなわち、各単量体の等電点（ｐＩ）が異なるｐＩを有し、かつヘテロ二量体も異なるｐＩを有するようになるように各単量体の等電点（ｐＩ）を変化させるｐＩ置換を含むことによって、ヘテロ二量体の等電点精製（例えば、陰イオン交換カラム、陽イオン交換カラム）を促進する。これらの置換はまた、精製後の任意の混入したホモ二量体の特定およびモニタリングにも役立つ（例えば、ＩＥＦゲル、ｃＩＥＦ、および分析用ＩＥＸカラム）。

ＶＩＩ．ＴＩＭ−３抗体ｘＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体免疫調節融合タンパク質の生物学的機能性および生化学的機能性
一般に、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質は、癌を有する患者に投与され、有効性は、本明細書に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、癌量、腫瘍のサイズ、転移の存在または程度の評価等の、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、生体外アッセイおよび生体内アッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。例えば、腫瘍量、サイズ、侵襲性、ＬＮ関与、転移などの「古典的な」測定と併せて、免疫状態の評価を行うことができる。したがって、以下のいずれかまたは全てを評価することができる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化または増殖、ＣＤ８^＋Ｔ（ＣＴＬ）細胞の活性化または増殖、ＣＤ８^＋Ｔ細胞が媒介する細胞障害活性および／またはＣＴＬが媒介する細胞枯渇、ＮＫ細胞活性およびＮＫが媒介する細胞枯渇に対するヘテロ二量体タンパク質の阻害効果、Ｔｒｅｇ細胞の分化および増殖、およびＴｒｅｇまたは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が媒介する免疫抑制または免疫寛容に対するヘテロ二量体タンパク質の効果、および／または免疫細胞による炎症性サイトカイン産生（例えば、Ｔ細胞または他の免疫細胞によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γまたはＴＮＦ−α産生）に対するヘテロ二量体タンパク質の効果。

いくつかの実施形態では、処理の評価は、例えば、ＣＦＳＥ希釈法、免疫エフェクター細胞のＫｉ６７細胞内染色、および^３Ｈ−チミジン取り込み法を使用して、免疫細胞の増殖を評価することによって実施される。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、およびＣＤ１０７Ａの表面発現によって測定される細胞脱顆粒のうちの１つ以上を含む、遺伝子発現の増加または活性化関連マーカーの増加したタンパク質レベルを評価することによって行われる。

一般に、遺伝子発現アッセイは、当該技術分野で既知であるように行われる。

一般に、タンパク質発現測定も同様に、当該技術分野で知られているように実施される。

いくつかの実施形態において、治療の評価は、酵素活性（プロテアーゼ活性を含む）、細胞膜透過性、細胞接着、ＡＴＰ産生、補酵素産生、およびヌクレオチド取り込み活性などの多数の細胞パラメータを推測することを通した標的細胞生存検出によって測定される細胞傷害性活性を評価することによって行なわれる。これらのアッセイの具体的な例としては、トリパンブルーまたはＰＩ染色、^５１Ｃｒまたは^３５Ｓ放出法、ＬＤＨ活性、ＭＴＴおよび／またはＷＳＴアッセイ、カルセイン−ＡＭアッセイ、発光系アッセイ、ならびに他のものが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、サイトカイン産生によって測定されるＴ細胞活性を評価することによって行われ、周知の技法を使用して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ１０、ＩＬ１３を含むがこれらに限定されないサイトカインを使用して、培養上清液中で細胞内のいずれかで測定する。

したがって、治療の評価は、以下のうちの１つ以上を評価するアッセイを使用して実施することができる。（ｉ）免疫応答を増加させること、（ｉｉ）αβおよび／またはγδのＴ細胞の活性化を増加させること、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性を増加させること、（ｉｖ）ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性を増加させること、（ｖ）αβおよび／またはγδのＴ細胞抑制を軽減させること、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌を増加させること、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌を増加させること、（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生を増加させること、（ｉｘ）Ｔｈ１応答を増加させること、（ｘ）Ｔｈ２応答を減少させること、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるかまたは排除すること。

Ａ．有効性を測定するためのアッセイ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、当該技術分野において既知のように、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価される。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、異なる因子のリン酸化または脱リン酸化によって、または他の翻訳後修飾を測定することによって測定される、免疫応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞の活性化の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、またはＣＤ１０７ａ等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞抑制の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはマルチプレックスビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔ等によって測定される、炎症促進性サイトカイン分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定されるＩＬ−２分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔ等によって測定されるインターフェロン−γ産生の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ２応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｍ２マクロファージ細胞数の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｍ２マクロファージ腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｎ２好中球増加の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定されるＮ２好中球腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔ細胞活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＣＴＬ活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞枯渇の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等の例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、抗原特異的メモリー応答の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、癌細胞のアポトーシスまたは溶解の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、癌細胞の細胞傷害性または細胞増殖抑制性の効果の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、癌細胞の直接殺傷の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイ測定は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１７活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、補体依存性細胞傷害性および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性の誘導の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、Ｔ細胞活性化は、例えば、標的細胞、例えば癌細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。Ｔ細胞については、増殖、活性化の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＰＤ１）、細胞傷害性（標的細胞を殺傷する能力）、およびサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ）の増加が、癌細胞の強化された殺傷と一致する免疫調節の指標となり得る。

一実施形態では、ＮＫ細胞活性化は、例えば、癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、またはＣＤ１０７ａなどの例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。ＮＫ細胞については、増殖、細胞傷害性（標的細胞を殺傷し、ＣＤ１０７ａ、グランザイム、およびパーフォリン発現を増加させる能力）、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよびＴＮＦ）、および細胞表面受容体発現（例えば、ＣＤ２５）の増加が、癌細胞殺傷の増強と一致する免疫調節を示し得る。

一実施形態では、γδ Ｔ細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。

一実施形態では、Ｔｈ１細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。

活性または応答の適切な増加（または上で概説されるように適切な場合には、減少）は、参照サンプルまたは対照サンプルのいずれか、例えば、本発明のヘテロ二量体タンパク質を含まない試験サンプルにおけるシグナルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％から９９％までの増加である。同様に、参照対象または対照サンプルと比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍または５倍の増加が有効性を示す。

ＶＩＩＩ．治療
作製されると、本発明の組成物は、癌を治療することによって、一般的には、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質の結合によってＴ細胞活性化を促進する（例えば、Ｔ細胞は抑制されない）ことによって、いくつかの腫瘍学用途における用途が見出される。

したがって、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体組成物は、これらの癌の治療において用途が見出される。

Ａ．インビボ投与のための標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体タンパク質組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］に一般に概説されるような）と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。許容される担体、緩衝剤、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

Ｂ．併用療法
いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、例えば、ＴＩＭ−３抗体ではなく、異なるチェックポイントタンパク質に結合する抗体との併用療法で使用することができる。このように、さらなる抗体の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ結合ドメインは、標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体タンパク質との結合と競合しない。このように、３つの受容体が関与する（２つは標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃヘテロ二量体タンパク質から、１つはさらなる抗体から）ため、一種の「三重併用」療法が達成される。本明細書で論じられるように、ヘテロ二量体タンパク質は、本明細書で概説されるように、異なる原子価および特異性を有し得る。

驚くべきことに、本明細書に示されるように、これらの組み合わせは、同時投与された場合に相乗効果をもたらす可能性がある。この文脈において、「同時投与」は、２つの部分が同時にまたは連続して投与され得ることを意味する。つまり、いくつかの場合では、薬物を同時に投与してもよいが、一般的には、２つの別個のＩＶ注入の使用によって行われ、すなわち、薬物は、一般的に、単一投薬単位に組み合わされない。または、同時投与は、１日または別々の日（経時的に別々の日を含む）のいずれかでの２つの別個の薬物の連続投与を含む。

１．同時投与療法で使用するための抗ＰＤ−１抗体
当技術分野で知られているように、現在承認されている抗ＰＤ−１抗体は、２つ存在し、臨床試験ではさらに多く存在する。したがって、本明細書に概説される併用療法で使用するのに適切な抗ＰＤ−１抗体としては、限定されないが、２つの現在ＦＤＡで承認されている抗体であるペムブロリズマブおよびニボリズマブ、および現在臨床試験中のもの、限定されないが、チスレリズマブ、Ｓｙｍ０２１、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｎｇｅｎｅｒｏｎによって開発された）、ＪＮＪ−６３７２３２８３（ＪａｎｄＪによって開発された）、ＳＨＲ−１２１０、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩｏ６８０、ＰＤＲ００１およびＣＴ−００１、ならびにＬｉｕら、Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆Ｏｎｃｏｌ．（２０１７）１０：１３６に概説されているものが挙げられ、その中の抗体は、参照により明示的に組み込まれる。上述のように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が、ＰＤ−１に結合する抗原結合ドメインを有しない場合、抗ＰＤ−１抗体が組み合わせて使用される。

２．同時投与療法で使用するための抗ＰＤ−Ｌ１抗体
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が組み合わせて使用される。当技術分野で知られているように、現在承認されている抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、３つ存在し、臨床試験ではさらに多く存在する。したがって、本明細書に概説される併用療法で使用するのに適切な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、限定されないが、３つの現在ＦＤＡで承認されている抗体であるアテゾリズマブ、アベルマブ、ダルバルマブ、および現在臨床試験中のもの、限定されないが、ＬＹ３３００００５４およびＣＳ１００１、ならびにＬｉｕら、Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆Ｏｎｃｏｌ．（２０１７）１０：１３６に概説されているものが挙げられ、その中の抗体は、参照により明示的に組み込まれる。上述のように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有しない場合、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が組み合わせて使用される。

３．同時投与療法で使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。ＢＭＳ−９８６２０７、ＯＭＰ−３１３Ｍ３２およびＭＴＩＧ７１９２Ａである、臨床開発中のいくつかのＴＩＧＩＴ抗体が存在する。上述のように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が、ＴＩＧＩＴに結合する抗原結合ドメインを有しない場合、抗ＴＩＧＩＴ抗体が組み合わせて使用される。

４．同時投与療法で使用するための抗ＣＴＬＡ−４抗体
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。イピリムマブは承認されており、ＣＰ−６７５、２０６およびＡＧＥＮ−１８８４を含め、開発中のさらにいくつかのものがある。上述のように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＴＬＡ−４に結合する抗原結合ドメインを有しない場合、抗ＣＴＬＡ−４抗体が組み合わせて使用される。

５．同時投与療法で使用するための抗ＴＩＭ−３抗体
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体は、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。ＢＭＳ−９８６０１６、ＬＡＧ５２５およびＲＥＧＮ３７６７を含む、臨床開発中のいくつかのＴＩＭ−３抗体が存在する。上述のように、本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が、ＴＩＭ−３に結合する抗原結合ドメインを有しない場合、抗ＴＩＭ−３抗体が組み合わせて使用される。

Ｃ．投与様式
本発明の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与またはある期間にわたる連続注入などの既知の方法に従って、対象に投与される。

Ｄ．治療様式
本発明の方法において、治療は、疾患または病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」は、疾患もしくは病状の改善、および／または疾患または病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの１つ以上を指し得る：（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、および（７）疾患または病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放。

任意の所与の疾患または病状における肯定的な治療応答は、その疾患または病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、ならびに骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。

これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。

本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量および期間で有効な量をいう。

治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体または抗体部分のいずれの毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。

腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化する能力によっても測定することができる。癌を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。

あるいは、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、またはアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。

投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少または増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性および投薬量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単一投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。

本発明の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。

本発明で使用される標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の効率的な投薬量および投薬レジメンは、治療される疾患または病状に依存し、当業者によって決定され得る。

本発明で使用される治療有効量の標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の例示的な非限定的な範囲は、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。

すべての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。

本発明の特定の実施形態を例示の目的で上述のように説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。

本発明を説明するために実施例を以下に提供する。これらの実施例は、本発明を任意の特定の用途または動作理論に限定することを意味するものではない。本発明で論じられるすべての定常領域位置について、付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、参照により全体が組み込まれる）と同様のＥＵインデックスに従う。抗体の技術分野の当業者は、この規則が免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な付番からなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置への標準的な基準を可能にすることを理解するであろう。したがって、ＥＵインデックスによって定義されるような任意の所与の免疫グロブリンの位置は必ずしもその連続配列に対応しない。

一般的および具体的な科学技術は、米国特許出願公開第２０１５／０３０７６２９号、同第２０１４／０２８８２７５号、およびＷＯ２０１４／１４５８０６に概説されており、それらは全て、特にその中に概説されている技術に関して、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。２０１６年１１月１日に出願された米国特許出願第６２，４１６，０８７号の実施例１および２は、対応する図も含め、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。さらに、米国特許出願第６２／４０８，６５５号、同第６２／４４３，４６５号、同第６２／４７７，９２６号、同第１５／７８５，４０１号、同第６２／４１６，０８７号および同第１５／７８５，３９３号は、その全体で、特に、その中の配列、図面および凡例全てについて、参照により明示的に組み込まれる。

Ａ．実施例１：抗ＴＩＭ−３ＡＢＤ
ＴＩＭ−３に結合する抗原結合ドメインの例は、本明細書に参照により組み込まれるＷＯ２０１７／２１８７０７号に記載され、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が、特に、ＴＩＭ−３ＡＢＤについては、図１３、図２１および図２２のデータ、ならびに配列表の配列番号２０７６５〜２０８８４、配列番号３７５８７〜３７６９８および配列番号３６３４７〜３６７０６の配列において、本明細書に組み込まれる（これらおよび本明細書で議論されるように、ｓｃＦｖまたはＦａｂのいずれかとしてフォーマットされてもよい）。抗ＴＩＭ−３Ｆｖのさらなる例示的な配列を図１２および図１３に示す。本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質での用途が見出され得るＴＩＭ−３ＡＢＤのさらなる例示的な例は、図１６および配列表に示される。

Ｂ．実施例２：ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物
図９および図３９に一般的に示されているように、ＡＢＤを含まないＩＬ−１５／ＲＡ−Ｆｃ融合物を記載しているＷＯ２０１８／０７１９１９号を参照する。ＷＯ２０１８／０７１９１９号は、参照により本明細書に明示的に組み込まれ、具体的には、その中の全ての配列、フォーマット、図面および凡例について組み込まれる。

２Ａ：ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の生成
ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメインまたは抗ＴＩＭ−３可変領域をコードするプラスミドは、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図１３に示される定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築された。例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物のイラストによる概略図を図２１に示す。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘｓｃＦｖ」フォーマット（図２１Ａ）は、可変長リンカー（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）によってＩＬ−１５に融合し、次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したｓｃＦｖを含む。

「ｓｃＦｖｘｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｂ）は、ヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したｓｃＦｖを含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。

「ｓｃＦｖｘｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｃ）は、「ｓｃＦｖｘｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。

「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｄ）は、可変長リンカー（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）によってＩＬ−１５に融合し、次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合した可変重鎖（ＶＨ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図６１に示す。

「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｅ）は、ヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合したＶＨを含み、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。

「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマット（図２１Ｆ）は、「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα ｘＦａｂ」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。

「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｇ）は、第１および第２のヘテロ二量体ＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合し、次いで、このヘテロ二量体Ｆｃ領域の一方のＣ末端にさらに融合したＩＬ−１５を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。

「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｈ）は、第１および第２のヘテロ二量体ＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、このヘテロ二量体Ｆｃ領域の一方のＣ末端にさらに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は、非共有ＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別個にトランスフェクトされる。

「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｉ）は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同じであるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は、操作されたシステインの結果として、共有結合する。

「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｊ）は、ＩＬ−１５のＮ末端に組換え融合され、次いで、ヘテロ二量体Ｆｃの一方の側にさらに融合したＶＨと、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に組換え融合され、次いで、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側にさらに融合したＶＨとを含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。

「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図２１Ｋ）は、ＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に組換え融合され、次いで、ヘテロ二量体Ｆｃの一方の側にさらに融合したＶＨと、このヘテロ二量体Ｆｃのもう一方の側にさらに融合したＶＨとを含み、一方、対応する軽鎖は、ＶＨを有するＦａｂを形成するように別個にトランスフェクトされる。

２Ｂ：ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ＧＶＨＤを向上させ、抗ＰＤ−１抗体と相乗的に結合する
例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質であるＸＥＮＰ２７９７４を単独で、または（エフェクター機能がアブレーションされた、ニボルマブに基づく二価抗ＰＤ−１ｍＡｂ、図２３に示される配列）と組み合わせて、ＮＳＧ（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ）免疫不全マウスで実施された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）モデルで評価された。ＮＳＧマウスにヒトＰＢＭＣを注射すると、ヒトＰＢＭＣはマウス細胞に対して自己免疫応答を引き起こす。ＮＳＧマウスにヒトＰＢＭＣを注射し、その後、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を投薬すると、移植されたＴ細胞が増殖し、移植を促進する。

１０００万個のヒトＰＢＭＣを、−１日目にＩＶ−ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて０、７、１４、および２１日目に示された濃度で示された試験物質を投与した。様々なリンパ球集合体の数測定が６日目と１０日目に行われ、そのデータが図２４〜図２７に示される。マウスの体重を経時的に測定し、初期体重の百分率として図２８に示した。このデータは、ヒトＰＢＭＣを移植した後に、ＸＥＮＰ２７９７４を投薬すると、ＰＢＭＣ単独を移植した場合と比較して、Ｔ細胞（ＣＤ８＋およびＣＤ４＋）、ＮＫ細胞およびＣＤ４５＋細胞数の増加、ならびに体重の減少によって示されるように、ＧＶＨＤが向上したことを示す。特に、ＸＥＮＰ２７９７４は、ＸＥＮＰ１６４３２のみを投与するよりも大幅にＧＶＨＤを向上させた。さらに、データは、ＸＥＮＰ２７９７４とＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせを投与した後の１９日目までに全てのマウスが死亡したことによって示されるように、ＸＥＮＰ２７９７４がＸＥＮＰ１６４３２と相乗的に組み合わされてＧＶＨＤを増強したことを示す。このことは、免疫腫瘍学の状況において、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を単独で、またはチェックポイント遮断抗体と組み合わせて治療すると、腫瘍浸潤リンパ球が増殖し、抗腫瘍活性が向上することを示唆している。

２Ｃ：ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物のインビトロ特性決定
ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、細胞増殖アッセイでさらに特性決定された。ヒトＰＢＭＣを、５００ｎｇ／ｍｌのプレートに結合した抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を用いて４８時間刺激し、次いで、ＣＦＳＥで標識し、以下の試験物品とともに３７℃で４時間インキュベートした。ＸＥＮＰ２７９７４（２Ａ５Ｂ４に基づき、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤＩＬ−１５バリアントを有する、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物；ＸＥＮＰ２４３０６（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５ＤＩＬ−１５バリアントを有する、対照である非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物）；およびＸＥＮＰ２６００７（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５ＤＩＬ−１５バリアントを有する、対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）。細胞を以下の抗体：抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ＳＫ１）、抗ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ７（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４５ＲＯ−ＡＰＣ−Ｆｉｒｅ７５０（ＵＣＨＬ１）、抗ＨＬＡ−ＤＲ−Ａｌｅｘａ７００（Ｌ２４３）、抗ＣＤ１６−ＢＶ６０５（３Ｇ６）、抗ＣＤ５６−ＢＶ６０５（ＨＣＤ５６）、抗ＣＤ２５−ＢＶ７１１（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ７８５（ＨＩ１００）、抗ＣＤ４−ＢＵＶ３９５（ＳＫ３）、およびＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ−ＢＶ５１０で染色し、種々の細胞集合体のためのフローによって分析した。

ＣＦＳＥ希釈（死細胞を除外するためのＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ）に基づく、様々なＴ細胞の集合体の増殖を調べ、そのデータを図３０〜３５に示す。このデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を両方とも誘導する際に、かなり強力であることを示す。特に、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ナイーブＴ細胞よりもメモリーＴ細胞を優先的に標的とし、このことは、臨床現場において、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、腫瘍環境において活性化された腫瘍浸潤リンパ球にとって選択的であることを示唆している。さらに、図３５に示すように、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ＮＫ細胞の増殖を誘導するのにかなり強力である。

ＣＤ２５（後期Ｔ細胞活性化マーカー）およびＨＬＡ−ＤＲ（別の活性化マーカー）の発現に基づく種々のＴ細胞集合体の活性化も調べ、そのデータを図３６〜３８に示す。図３６に示されるデータは、ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合物（および対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物）と比較して、ＣＤ８Ｔ細胞集合体の活性化を誘導する際に、より強力にみえることを示す。

Ｃ．実施例３：調整されたＩＬ−１５効力を有するＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物
３Ａ：ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアント
Ｘｔｅｎｄを有するＩＬ−１５−Ｆｃ効力バリアントの薬物動態を調べる試験において、カニクイザルに、種々の濃度で、ＸＥＮＰ２２８５３（Ｘｔｅｎｄを有するＷＴＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ、図３９に示される配列）、ＸＥＮＰ２４３０６（Ｘｔｅｎｄを有するＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−ヘテロＦｃ、図４２に示される配列）、ＸＥＮＰ２４１１３（Ｘｔｅｎｄを有するＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−ヘテロＦｃ、図４０に示される配列）、およびＸＥＮＰ２４２９４（Ｘｔｅｎｄを有するｓｃＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ、図４１に示される配列）の１回目の単回静脈（ｉ．ｖ．）投与を行った。

図４３は、初回投与の後の経時的な試験物品の血清濃度を示す。予想される通り、Ｘｔｅｎｄ置換（ＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ２４１１３のように）に加えて効力バリアントを組み込むと、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合物の薬物動態が大幅に改善される（ＸＥＮＰ２２５８３と比較して）。しかし、予想されないことだが、ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合物ＸＥＮＰ２４１１３およびｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物ＸＥＮＰ２４２９４（同じＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）効力バリアントを有する）は、ＸＥＮＰ２４３０６と比較して、薬物動態の低下を示した。このことは、薬物動態の低下が、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合物のフォーマットではなく、特定のＩＬ−１５効力バリアントに起因することを示唆している。ＸＥＮＰ２４１１３およびＸＥＮＰ２４２９４の薬物動態の減少は、ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ−１５−Ｆｃ融合物が、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ−１５−Ｆｃ融合物よりも大きなインビトロ効力を有することを示した以前の知見に基づいて予測されたが、薬物動態の低下は、効力の増加に対して、予想外に不釣り合いなものであった。したがって、本発明のＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５−Ｆｃ融合物において使用するための代替的なＩＬ−１５効力バリアントの特定が行われた。

なお、ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）は、ＣＤ１２２への結合を担うＩＬ−１５界面にその置換を両方とも有しており、一方、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）は、ＩＬ−１５：ＣＤ１２２界面に２つの置換（Ｅ６４ＱおよびＮ６５Ｄ）を有し、ＣＤ１３２への結合を担うＩＬ−１５界面に１つの置換（Ｄ３０Ｎ）を有する。したがって、ＩＬ−１５：ＣＤ１３２界面での修飾が、ＸＥＮＰ２４３０６について観察された優れた薬物動態の一因であり得ると考えられる。特に、図４５に示すように、ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物が、インビトロで非常によく似た効力を示すことが観察された。上述の観点で、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５−Ｆｃ融合物が考案され、その配列を図４６に示す。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有する対照であるＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２９４８１も作成し、その配列を図４９に示す。

３Ｂ：ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアント
ＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物は、ＴＩＭ−３標的化アームを介した腫瘍環境を標的とすることを目的として設計されたが、そのサイトカイン部分は、依然として、腫瘍部位に到達する前にシグナル伝達する可能性があり、全身毒性の原因となる可能性がある。したがって、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む、ＩＬ−１５効力をさらに減らしたＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物を構築すると、実施例２Ｃに示されるように、ＩＬ−１５効力がさらに低下し、図４５において、活性が顕著に低下した。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の配列は、図４７に示される。さらに、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物であるＸＥＮＰ３０４３２（その配列は、図４９に示される）を、腫瘍環境の外側でＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むＴＩＭ−３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合物の挙動を調べるための代理物として機能するように構築した。

Claims

ヘテロ二量体融合タンパク質であって、
ａ）第１の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、
ｉｉｉ）ＩＬ−１５バリアント、
ｉｖ）ヒンジ、および
ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１の単量体と、
ｂ）第２の単量体であって、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、前記ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む第３の単量体と、を含み、
前記ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、ヒトＴＩＭ−３抗原結合ドメインを形成する可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインであり、
前記第１のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、前記第２のバリアントＦｃドメインは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、
前記第１および第２のバリアントＦｃドメインは、各々、ＦｃＫＯバリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第１のバリアントＦｃドメインは、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている、ヘテロ二量体融合タンパク質。
前記第１の単量体の前記ヒンジが、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓを含み、付番は、ＥＵ付番に従っている、請求項１に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記第１および第２のバリアントＦｃドメインが、各々、半減期延長バリアントＭ４２８：／Ｎ４３４Ｓをさらに含む、請求項１または２に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記ＩＬ−１５バリアントが、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、Ｑ１０８Ｅ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤおよびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記ＩＬ−１５バリアントが、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５ＤまたはＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む、請求項４に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記ＶＨおよびＶＬが、図１２および１３のＴＩＭ−３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメインおよび可変ドメインである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記ＴＩＭ−３抗原結合ドメインが、３Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ２．１である、請求項６に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
前記ヘテロ二量体融合タンパク質が、ＸＥＮＰ２７９７４、ＸＥＮＰ２７９７９、ＸＥＮＣ１０００、ＸＥＮＣ１００１、ＸＥＮＣ１００２およびＸＥＮＣ１００３からなる群から選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体融合タンパク質。
核酸組成物であって、
ａ）請求項１〜８のいずれかに記載の前記第１の単量体をコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項１〜８のいずれかに記載の前記第２の単量体をコードする第２の核酸と、
ｃ）請求項１〜８のいずれかに記載の前記第３の単量体をコードする第３の核酸と、をそれぞれ含む、核酸組成物。
発現ベクター組成物であって、
ａ）請求項９に記載の前記第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項９に記載の前記第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）請求項９に記載の前記第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
請求項１０に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
ヘテロ二量体融合タンパク質を作製する方法であって、請求項１１に記載の宿主細胞を培養することと、細胞培養物から前記ヘテロ二量体融合タンパク質を回収することと、を含む、方法。
治療を必要とする患者を治療する方法であって、請求項１〜８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体融合タンパク質を患者に投与することを含む、方法。