JP2007505627A - eIF4E発現の調整 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、eIF4Eをコードする核酸分子にターゲットされ、かつeIF4Eの発現を阻害するアンチセンス化合物およびこれらの薬学的に許容される塩などのオリゴマー化合物に向けられる。オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドを含むRNA様またはDNA様のオリゴマー化合物であってもよい。オリゴマー化合物は、一本鎖または部分的に、もしくは完全に二本鎖オリゴマー化合物であってもよく、化学的に修飾されていても、または修飾されていなくてもよい。また、これらの化合物を含む薬学的組成物およびその他の組成物も提供される。
A. 本発明の概要
本発明は、eIF4Eをコードする核酸分子の機能または効果を調整するために使用するための、アンチセンス化合物、一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド、および同様の種などのオリゴマー化合物を使用する。これは、eIF4Eをコードする1つまたは複数の核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴマー化合物を提供することによって達成される。本明細書に使用される「標的核酸」および「eIF4Eをコードする核酸分子」という用語は、便宜上、eIF4EをコードするDNA、このようなDNAから転写されるRNA(これらのプレmRNAおよびmRNAまたは一部を含む)、更にはこのようなRNAに由来するcDNAを包含するために使用した。これにハイブリダイズする化合物による、この標的核酸の機能の調整は、一般に「アンチセンス」といわれている。
本発明の状況において、「オリゴマー化合物」という用語は、核酸分子の領域にハイブリダイズすることができる重合体構造をいう。この用語は、これらのオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド擬態、およびキメラ組み合わせを含む。オリゴマー化合物は、通常直線状に調製されるが、環状に連結すること、またはさもなければ調製することができ、また分枝を含んでいてもよい。オリゴマー化合物は、たとえば、ハイブリダイズして二本鎖化合物を形成する2つの鎖、または十分な自己相補性をもち、完全に、もしくは部分的に二本鎖化合物のハイブリダイゼーションおよび形成が可能な一本鎖などの二本鎖構築物を含むことができる。本発明の一つの態様において、二本鎖アンチセンス化合物は、短い干渉RNA(siRNAs)を包含する。本明細書で使用される「siRNA」という用語は、第1および第2の鎖を有する二本鎖化合物として定義され、前記第1と第2の鎖の間の中心的相補的部分と、任意に前記第1と第2の鎖の間に、または標的mRNAと相補である末端部とを含む。それぞれの鎖は、約8〜約80核酸塩基の長さ、10〜50核酸塩基の長さ、12もしくは13〜30核酸塩基の長さ、12もしくは13〜24核酸塩基の長さ、または19〜23核酸塩基の長さであってもよい。中心的相補的部分は、約8〜約80核酸塩基の長さ、10〜50核酸塩基の長さ、12もしくは13〜30核酸塩基の長さ、12もしくは13〜24核酸塩基の長さ、または19〜23核酸塩基の長さであってもよい。末端部は、1〜6核酸塩基の長さであることができる。また、siRNAsは、末端部を有していなくてもよい。siRNAの2本の鎖は、内部に3’もしくは5’末端を残したままで連結することができ、または連続的なヘアピン構造もしくはループを形成するように連結することができる。ヘアピン構造は、5’または3’末端のいずれかに一本鎖文字の伸張を生じるオーバーハングを含んでいてもよい。
特定の核酸分子にオリゴマー化合物を「ターゲットする」ことは、本発明の状況において、多段階プロセスであることができる。本プロセスは、通常、その機能が調整される標的核酸を同定することから始まる。この標的核酸は、たとえば、その発現が特定の障害もしくは疾病状態と関連する細胞遺伝子(または遺伝子から転写されるmRNA)、または感染因子に由来する核酸分子であってもよい。本発明において、標的核酸は、eIF4Eをコードする。
さらなる態様において、本明細書において同定された「適切な標的セグメント」は、eIF4Eの発現を調整するさらなる化合物をスクリーンする際に使用してもよい。「モジュレーター」は、eIF4Eをコードする核酸分子の発現を減少または増大し、適切な標的セグメントに対して相補的(すなわち、アンチセンス)である少なくとも8核酸塩基部分を含む化合物である。スクリーニング法は、eIF4Eをコードする核酸分子の適切な標的セグメントを、1つまたは複数の候補モジュレーターと接触させる工程、およびeIF4Eをコードする核酸分子の発現を減少または増大する1つもしくは複数の候補モジュレーターを選択する工程を含む。一旦、候補モジュレーターがeIF4Eをコードする核酸分子の発現を調整する(たとえば減少するか、または増大する)ことができることが示されれば、次いでモジュレーターは、eIF4Eの機能のさらなる調査研究において、または本発明の研究薬、診断薬、もしくは治療薬として使用するために使用してもよい。
本発明のオリゴマー化合物は、診断、治療、予防のために、並びに研究試薬およびキットとして利用することができる。さらにまた、洗練された特異性で遺伝子発現を阻害することができるオリゴマー化合物は、特定の遺伝子の機能を解明するために、または生物学的経路の種々のメンバーの機能間を区別するために、当業者によって使用されることが多い。
周知のとおり、ヌクレオシドは、塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの塩基部分は、通常、複素環塩基(時に「核酸塩基」または単に「塩基」とも称される)である。このような複素環塩基の2つの最も一般的な分類は、プリンおよびピリミジンである。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合性に連結されたリン酸基を更に含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドに関して、リン酸基は、糖の2’、3’、または5’ヒドロキシル部分のいずれに対しても連結することができる。オリゴヌクレオチドを形成する際には、リン酸基を互いに隣接したヌクレオシドを共有結合性に連結して、直鎖状の重合体化合物を形成する。次に、この直鎖状重合体化合物のそれぞれの末端をさらに連結して、環状の化合物を形成することができるが、一般に直鎖状化合物が望まれる。加えて、直鎖状化合物は、内部核酸塩基相補性を有してもよく、従って、完全に、または部分的に二本鎖化合物を生じる様な方法で折りたたまれてもよい。オリゴヌクレオチド内では、リン酸基は、一般にオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間バックボーンを形成するものといわれる。RNAおよびDNAの正常な結合またはバックボーンは、5’に対する3’のホスホジエステル結合である。
本発明に有用なオリゴマー・アンチセンス化合物の具体例は、修飾された、たとえば天然に存在しないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを含む。本明細書において定義したように、修飾されたヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合およびリン原子を有さないヌクレオシド間結合を含む。本明細書の目的のために、および時に当技術分野において参照されるとおり、これらのヌクレオシド間バックボーンにおけるリン原子を有しない修飾されたオリゴヌクレオチドもオリゴヌクレオシドであるとみなすことができる。
また、オリゴマー化合物は、核酸塩基(当技術分野において、複素環塩基として、または単に「塩基」といわれることが多い)の修飾または置換を含んでいてもよい。本明細書に使用される、「無修飾」または「天然の」核酸塩基は、プリン塩基のアデニン(A)およびグアニン(G)、並びにピリミジン塩基のチミン(T)、シトシン(C)、およびウラシル(U)を含む。修飾された核酸塩基は、5‐メチルシトシン(5−me−C)、5‐ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2−アミノアデニン、6−メチル並びにアデニンおよびグアニンのその他のアルキル誘導体、2−プロピル並びにアデニンおよびグアニンのその他のアルキル誘導体、2−チオウラシル、2−チオチミンおよび2−チオシトシン、5−ハロウラシルおよびシトシン、5−プロピニル(−C≡C−CH3)ウラシルおよびシトシン並びにピリミジン塩基のその他のアルキニル誘導体、6−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、5−ウラシル(プソイドウラシル)、4−チオウラシル、8−ハロ、8−アミノ、8−チオール、8−チオアルキル、8−ヒドロキシル、並びにその他の8置換されたアデニンおよびグアニン、5−ハロ、特に5−ブロモ、5−トリフルオロメチル、並びにその他の5置換されたウラシルおよびシトシン、7−メチルグアニンおよび7−メチルアデニン、2−F−アデニン、2−アミノ−アデニン、8−アザグアニンおよび8−アザアデニン、7−デアザグアニンおよび7−デアザアデニン、並びに3−デアザグアニンおよび3−デアザアデニンなどのその他の合成および天然の核酸塩基を含む。さらに修飾された核酸塩基は、フェノキサジンシチジン(1H−ピリミド(5,4−b)(1,4)ベンゾキサジン−2(3H)−オン)、フェノチアジンシチジン(1H−ピリミド(5,4−b)(1,4)ベンゾチアジン−2(3H)−オン)、置換されたフェノキサジンシチジン(たとえば、9−(2−アミノエトキシ)−H−ピリミド(5,4−b)(1,4)ベンゾキサジン−2(3H)−オン)などのG−クランプ、カルバゾールシチジン(2H−ピリミド(4,5−b)インドール−2−オン)、ピリドインドールシチジン(H−ピリド(3’,2’:4,5)ピロロ(2,3−d)ピリミジン−2−オン)などの三環系のピリミジンを含む。また、修飾された核酸塩基は、プリンまたはピリミジン塩基が、その他の複素環、たとえば7−デアザ−アデニン、7−デアザグアノシン、2−アミノピリジン、および2−ピリドンで置換されたものを含んでもよい。さらなる核酸塩基は、米国特許第3,687,808号に開示されたもの、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,pages 858−859,Kroschwitz,J.I.,ed.John Wiley & Sons,1990に開示されたもの、Englischら、Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613によって開示されたもの、およびSanghvi,Y.S.,Chapter 15,Antisense Research and Applications,pages 289−302,Crooke,S.T.and Lebleu,B.,ed.,CRC Press,1993によって開示されたものを含む。一定のこれらの核酸塩基は、特に本発明の化合物の結合親和性を増大するために有用である。これらは、5−置換されたピリミジン、6−アザピリミジン、並びに2−アミノプロピルアデニン、5−プロピニルウラシル、および5−プロピニルシトシンを含むN−2、N−6、およびO−6置換されたプリンを含む。5−メチルシトシン置換は、0.6〜1.2℃まで核酸二重鎖安定性を増大すること、および特に2’−O−メトキシメチル糖修飾と組み合わせたときに、現在適切な塩基置換であることが示された。
本発明のアンチセンス化合物のもう一つの修飾は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、もしくは細胞取り込みを増強する1つまたは複数の部分または抱合体をオリゴマー化合物に対して化学的に連結することを含む。これらの部分または抱合体は、一級または二級ヒドロキシル基などの官能基に共有結合された基を含むことができる。本発明の抱合体基は、インターカレーター、リポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬力学的性質を増強する基、およびオリゴマーの薬物動態学的性質を増強する基を含む。典型的な抱合基は、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレッセイン、ローダミン、クマリン、および染料を含む。薬力学的性質を増強する基は、本発明の状況において、取り込みを改善する基、耐崩壊性を増強する基、および/または標的核酸との配列特異的ハイブリダイゼーションを強化する基を含む。薬物動態学的性質を増強する基は、本発明の状況において、本発明の化合物の取り込み、分布、代謝、または排出を改善する基を含む。代表的抱合体基は、1992年10月23日に出願された国際特許出願第PCT/US92/09196号および米国特許第6,287,860号(その全ての開示が、参照として本明細書に組み入れられる)に開示されている。抱合体部分は、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、たとえば、ヘキシル−S−トリチルチオール、チオコレステロール、脂肪族鎖、たとえば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基、リン脂質、たとえば、ジ−ヘキサデシル−rac−グリセロールまたはトリエチルアンモニウム、1,2−ジ−O−ヘキサデシル−rac−グリセロ−3−H−ホスホナート、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖、またはアダマンタン酢酸、パルミチル部分、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノカルボニル−オキシコレステロール部分などの脂質部分を含むが、これらに限定されない。また、本発明のアンチセンス化合物は、活性な原体、例えばアスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、(S)−(+)−プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、2,3,5−トリヨード安息香酸、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾサイアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン(indomethicin)、バルビツール剤、セファロスポリン、サルファ剤、抗糖尿病薬、抗菌薬、または抗生物質に対して抱合してもよい。オリゴヌクレオチド−薬物複合体およびこれらの調製は、米国特許出願第09/334130号(1999年6月15日に出願された)に記載されており、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
所与のアンチセンス化合物の全ての位置を均一に修飾することは必要とされず、実際に、上述した修飾のうちの1つ以上が、単一化合物に、またはアンチセンス化合物内の単一のヌクレオシド内にさえ組み入れてもよい。
本発明のアンチセンス化合物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、もしくはこのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物に対して投与することにより、これらの生物学的に活性な代謝産物または残基を(直接または間接的に)提供することができる任意のその他の化合物を包含する。従って、たとえば、本開示は、本発明の化合物のプロドラッグおよび薬学的に許容される塩、このようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、およびその他の生物学的同等物ももたらす。
また、本発明の化合物は、取り込み、分布、および/または吸収を助けるために、混合され、カプセル化され、抱合され、またはさもなければその他の分子、分子構造、もしくは化合物の混合物、たとえばリポソーム、受容体にターゲットされる分子、経口、直腸、局所的、またはその他の製剤と結合されていてもよい。このような取り込み、分布、および/または吸収を助ける製剤の調製を教示する代表的な米国特許は、以下の米国特許を含むが、これらに限定されず、そのそれぞれが、本明細書に参照として組み入れられる:第5,108,921号;第5,354,844号;第5,416,016号;第5,459,127号;第5,521,291号;第5,543,158号;第5,547,932号;第5,583,020号;第5,591,721号;第4,426,330号;第4,534,899号;第5,013,556号;第5,108,921号;第5,213,804号;第5,227,170号;第5,264,221号;第5,356,633号;第5,395,619号;第5,416,016号;第5,417,978号;第5,462,854号;第5,469,854号;第5,512,295号;第5,527,528号;第5,534,259号;第5,543,152号;第5,556,948号;第5,580,575号;および第5,595,756号。
本明細書に使用される「患者」という用語は、eIF4E発現または過剰発現と関連する1つもしくは複数の障害で苦しむ哺乳類をいう。最も望まれる患者は、ヒトであることが理解される。また、本発明は、哺乳類eIF4E発現または過剰発現の特異的阻害に関することが理解される。
アミダイトおよびこれらの中間体を含む以下の化合物は、米国特許第6,426,220号および発行されたPCT国際公開公報第02/36743号に記載されているように調製した;5−メチルdCアミダイトのための5’−O−ジメトキシトリチル−チミジン中間体、5−メチル−dCアミダイトのための5’−O−ジメトキシトリチル−2’−デオキシ−5−メチルシチジン中間体、5−メチルdCアミダイトのための5’−O−ジメトキシトリチル−2’−デオキシ−N4−ベンゾイル−5−メチルシチジン最後から2番目の中間体、(5’−O−(4,4’−ジメトキシトリフェニルメチル)−2’−デオキシ−N4−ベンゾイル−5−メチルシチジン−3’−O−イル)−2−シアノエチル−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト(5−メチルdCアミダイト)、2’−フルオロデオキシアデノシン、2’−フルオロデオキシグアノシン、2’−フルオロウリジン、2’−フルオロデオキシシチジン、2’−O−(2−メトキシメチル)修飾アミダイト、2’−O−(2−メトキシエチル)−5−メチルウリジン中間体、5’−O−DMT−2’−O−(2−メトキシエチル)−5−メチルウリジン最後から2番目の中間体、5’−O−(4,4’−ジメトキシトリフェニルメチル)−2’−O(2−メトキシエチル)−5−メチルウリジン−3’−O−イル)−2−シアノエチル−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト(MOE Tアミダイト)、5’−O−ジメトキシトリチル−2’−O−(2−メトキシエチル)−5−メチルシチジン中間体、5’−O−ジメトキシトリチル−2’−O−(2−メトキシエチル)−N4−ベンゾイル−5−メチル−シチジン最後から2番目の中間体、5’−O−(4,4’−ジメトキシトリフェニルメチル)−2’−O−(2−メトキシエチル)−N4−ベンゾイル−5−メチルシチジン−3’−O−イル)−2−シアノエチル−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト(MOE 5−Me−Cアミダイト)、(5’−O−(4,4’−ジメトキシトリフェニルメチル)−2’−O−(2−メトキシエチル)−N6−ベンゾイルアデノシン−3’−O−イル)−2−シアノエチル−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト(MOE A アミダイト)、(5’−O−(4,4’−ジメトキシトリフェニルメチル)−2’−O−(2−メトキシエチル)−N4−イソブチルグアノシン−3’−O−イル)−2−シアノエチル−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト(MOE Gアミダイト)、2’−O−(アミノオキシエチル)ヌクレオシドアミダイト、および2’−O−(ジメチルアミノオキシエチル)ヌクレオシドアミダイト、2’−(ジメチルアミノオキシエトキシ)ヌクレオシドアミダイト、5’−O−tert−ブチルジフェニルシリル−O2−2’−アンヒドロ−5−メチルウリジン、5’−O−tert−ブチルジフェニルシリル−2’−O−(2−ヒドロキシエチル)−5−メチルウリジン、2’−O−((2−フタリミドオキシ)エチル)−5’−t−ブチルジフェニルシリル−5−メチルウリジン、5’−O−tert−ブチルジフェニルシリル−2’−O−((2−ホルマドキシミノオキシ)エチル)−5−メチルウリジン、5’−O−tert−ブチルジフェニルシリル−2’−O−(N,N ジメチルアミノオキシエチル)−5−メチルウリジン、2’−O−(ジメチルアミノオキシエチル)−5−メチルウリジン、5’−O−DMT−2’−O−(ジメチルアミノオキシエチル)−5−メチルウリジン、5’−O−DMT−2’−O−(2−N,N−ジメチルアミノオキシエチル)−5−メチルウリジン−3’−((2−シアノエチル)−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト)、2’−(アミノオキシエトキシ)ヌクレオシドアミダイト、N2−イソブチリル−6−O−ジフェニルカルバモイル−2’−O−(2−エチルアセチル)−5’−O−(4,4’−ジメトキシトリチル)グアノシン−3’−((2−シアノエチル)−N,N−ジイソプロピルホスホラミダイト)、2’−ジメチルアミノエトキシエトキシ(2’−DMAEOE)ヌクレオシドアミダイト、2’−O−(2(2−N,N−ジメチルアミノエトキシ)エチル)−5−メチルウリジン、5’−O−ジメトキシトリチル−2’−O−(2(2−N,N−ジメチルアミノエトキシ)−エチル))−5−メチルウリジン、および5’−O−ジメトキシトリチル−2’−O−(2(2−N,N−ジメチルアミノエトキシ)−エチル))−5−メチルウリジン−3’−O−(シアノエチル−N,N−ジイソプロピル)ホスホラミダイト。
2’−デオキシおよび2’−メトキシβ−シアノエチルジイソプロピルホスホラミダイトは、市販の供与源(たとえば、Chemgenes,Needham,MA または Glen Research,Inc.Sterling,VA)から購入した。その他の2’−O−アルコキシ置換されたヌクレオシドアミダイトは、米国特許第5,506,351号(これは、本明細書に参照として組み入れられる)に記載されているように調製した。2’−アルコキシアミダイトを使用して合成されるオリゴヌクレオチドについては、テトラゾールおよび塩基のパルス・デリバリー後の待機工程を360秒まで増大したことを除いて、無修飾オリゴヌクレオチドのための標準的なサイクルは利用した。
2’−フルオロ・オリゴヌクレオチドは、以前(Kawasakiら、J.Med.Chem.,1993,36,831−841)および米国特許第5,670,633号(本明細書に参照として組み入れられる)に記載されているとおりに合成した。簡潔には、保護されたヌクレオシドN6−ベンゾイル−2’−デオキシ−2’−フルオロアデノシンを、出発原料として商業的に入手可能な9−β−D−アラビノフラノシルアデニンを利用して、文献手順を修飾することによって合成し、これにより、2’−α−フルオロ原子が2’−β−トリチル基のSN2−置換によって導入される。こうして、N6−ベンゾイル−9−β−D−アラビノフラノシルアデニンを3’,5’−ジテトラヒドロピラニル(THP)中間体として適度な収率で選択的に保護した。THPおよびN6−ベンゾイル基の脱保護は、標準的な方法論を使用して達成し、5’−ジメトキシトリチル−(DMT)および5’−DMT−3’−ホスホラミダイト中間体を得るために標準的な方法を使用した。
2’−O−メトキシメチル置換されたヌクレオシドアミダイトは、Martin,Helvetica Chimica Acta,1995,78,486−50.の方法に従って調製される。
アミノオキシエチルおよびジメチルアミノオキシエチルアミダイトは、米国特許出願第6,127,533号(本明細書に参照として組み入れられる)の方法に従って調製される。
本発明に従って使用されるオリゴマー化合物は、周知の固相合成の技術を介して、便利かつルーチンで作製してもよい。このような合成のための設備は、たとえば、Applied Biosystems(Foster City,CA)を含むいくつかの売り手によって販売されている。加えて、またはあるいは、当技術分野において公知のこのような合成のための任意のその他の手段を使用してもよい。ホスホロチオアートおよびアルキル化誘導体などのオリゴヌクレオチドを調製するために同様の技術を使用することも周知である。
オリゴヌクレオチド:非置換および置換されたリン酸ジエステル(P=O)オリゴヌクレオチドは、ヨウ素による酸化での標準的なホスホラミダイト化学を使用して自動化DNA合成装置(Applied Biosystemsモデル394)で合成される。
ペプチド核酸(PNAs)は、Peptide Nucleic Acids(PNA):Synthesis,Properties and Potential Applications,Bioorganic&Medicinal Chemistry,1996,4,5−23において言及される種々の手順のいずれかに従って調製される。これらは、また米国特許第5,539,082号、第5,700,922号、および第5,719,262号に従って調製してもよく、これらは、本明細書に参照として組み入れられる。
一般に、RNA合成化学は、ストラテジーの中間反応において、種々の保護基を選択的に組み入れることに基づく。当技術分野の当業者であれば、有機合成において、シリルエーテルを含む保護基の有用なクラスの保護基の使用を理解するであろう。特に大きなシリルエーテルが、2’−ヒドロキシル上の酸に不安定なオルソエステル保護基と組み合わせて、5’−ヒドロキシルを保護するために使用される。次いで、この保護基のセットを標準的な固相合成技術と共に使用する。他の全ての合成工程後に、最後に酸に不安定なオルソエステル保護基を除去することが重要である。さらに、合成の間にシリル保護基を早めに使用すると、必要に応じて、2’ヒドロキシルの望まれない脱保護を伴わずに安易な除去が確実になる。
本発明のキメラ・オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、または混合されたオリゴヌクレオチド/オリゴヌクレオシドは、いくつかの異なるタイプのものであることができる。これらは、連結されたヌクレオシドの「ギャップ」セグメントが、連結されたヌクレオシドの5’および3’「ウイング」セグメントの間に位置する第1型と、「ギャップ」セグメントがオリゴマー化合物の3’または5’末端のいずれかに位置する第2の「開放末端」を含む。また、第1型のオリゴヌクレオチドは、「ギャップマー」またはギャップド・オリゴヌクレオチドとして当技術分野において公知である。また、第2型のオリゴヌクレオチドは「ヘミマー(hemimers)」、または「ウイングマー(wingmers)」として当技術分野において公知である。
2’−O−アルキルホスホロチオアートおよび2’−デオキシホスホロチオアート・オリゴヌクレオチド・セグメントを有するキメラ・オリゴヌクレオチドは、上記のように、Applied Biosystems自動DNA合成装置モデル394を使用して合成する。オリゴヌクレオチドは、自動合成機、並びにDNA部分のための2’−デオキシ−5’−ジメトキシトリチル−3’−O−ホスホラミダイトおよび2’−O−アルキル部分のための5’−ジメトキシトリチル−2’−O−メチル−3’−O−ホスホラミダイトを使用して合成される。標準的な合成サイクルは、5’−ジメトキシトリチル−2’−O−メチル−3’−O−ホスホラミダイトのために反応時間を増大したカップリング工程を組み入れることによって修飾されている。完全に保護されたオリゴヌクレオチドを支持体から切断し、55℃で12〜16時間、濃アンモニア(NH4OH)中で脱保護する。次いで、脱保護されたオリゴを適切な方法によって回収する(沈澱、カラムクロマトグラフィー、真空中での体積の減少、およびキャピラリー電気泳動法による、および質量分析による収率についての、および純度についての質量測光法(spetrophotometrically)による解析)。
(2’−O−(2−メトキシエチル))(−−(2’−デオキシ)−−(−2’−O(メトキシエチル))キメラ・ホスホロチオアート・オリゴヌクレオチドは、2’−O−メチルキメラ・オリゴヌクレオチドについての上記の手順に従って、2’−O−メチルアミダイトについての2’−O−(メトキシエチル)アミダイトの置換により調製した。
(2’−O−(2−メトキシエチル)ホスホジエステル)−−(2’−デオキシホスホロチオアート)−−(2’−O−(メトキシエチル)ホスホジエステル)キメラ・オリゴヌクレオチドは、2’−O−メチルキメラ・オリゴヌクレオチドについての上記手順に従って、2’−O−メチルアミダイトに対する2’−O−(メトキシエチル)アミダイトの置換、キメラ構造のウイング部分内のリン酸ジエステルヌクレオチド間結合を生じさせるためのヨウ素で酸化、中心のギャップに対してホスホロチオアートヌクレオチド間結合を生じさせるための3,H−1,2 ベンゾジチオール−3−オン1,1ジオキシド(Beaucage Reagent)を利用した硫化で調製した。
本発明によれば、本発明のアンチセンス化合物およびこれらの相補体を含む一連の核酸二重鎖を、eIF4Eをターゲットするようにデザインすることができる。二重鎖アンチセンス鎖の核酸塩基配列は、少なくとも表1のオリゴヌクレオチドの8−核酸塩基部分を含む。鎖の末端は、オーバーハングを形成するように1つもしくは複数の天然または修飾された核酸塩基を付加することによって修飾してもよい。次いで、dsRNAのセンス鎖は、アンチセンス鎖の相補体としてデザインし、および合成し、また、いずれかの末端に修飾または付加を含んでいてもよい。たとえば、一つの態様において、dsRNA二重鎖の両方の鎖は、中心的核酸塩基を通して相補で、それぞれ一方または両方の末端にオーバーハングを有する。二重鎖の一端を平滑にすること、および他端にオーバーハング核酸塩基を有することができる。一つの態様において、オーバーハング核酸塩基の数は、二重鎖のそれぞれの鎖の3’末端上の1〜6個である。もう一つの態様において、オーバーハング核酸塩基の数は、二重鎖の一方の鎖のみの3’末端上の1〜6個である。さらなる態様において、オーバーハング核酸塩基の数は、二重化された鎖の一方または両方の5’末端上の1〜6個である。もう一つの態様において、オーバーハング核酸塩基の数は、ゼロである。
制御された細孔ガラス固体支持体からの切断および濃水酸化アンモニウム溶液中において55℃で12〜16時間デブロッキング後、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドを>3体積のエタノールで1M NH4OAcから沈澱することによって回収する。合成されたオリゴヌクレオチドをエレクトロスプレー質量分析(分子量の決定)によって、およびキャピラリーゲル電気泳動によって解析し、少なくとも70%の全長材料であると判断した。合成で得られたホスホロチオアートおよびホスホジエステル結合の相対量は、−16原子質量単位産物(+/−32 +/−48)と比較して正確な分子量比によって決定した。いくつかの研究については、オリゴヌクレオチドをChiangら、J.Biol.Chem.1991,266,18162−18171によって記載されているとおりにHPLCによって精製した。HPLCで精製した材料で得られた結果は、HPLCで精製されていない材料で得られたものと同じであった。
オリゴヌクレオチドは、96ウェル形式で同時に96配列を構築することができる自動合成機で固相P(III)ホスホラミダイト化学を介して合成した。ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、水性ヨウ素での酸化によって得た。ホスホロチオアートヌクレオチド間結合は、3,H−1,2 ベンゾジチオール−3−オン1,1ジオキシド(Beaucage Reagent)のアセトニトリル無水物溶液を利用する硫化によって作製した。標準的な塩基で保護されたβ−シアノエチル−ジイソ−プロピルホスホラミダイトは、市販の売り手(たとえば、PE−Applied Biosystems,Foster City,CA,またはPharmacia,Piscataway,NJ)から購入した。非標準的ヌクレオシドは、標準的または特許を受けた方法に従って合成する。これらは、塩基で保護されたβ−シアノエチルジイソプロピルホスホラミダイトを利用する。
それぞれのウェルにおけるオリゴヌクレオチドの濃度を試料およびUV吸収分光学の希釈によって評価した。個々の産物の全長完全性は、96ウェル形式(Beckman P/ACETMMDQ)か、または個々に調製された試料については、市販のCE装置(たとえば、Beckman P/ACETM5000、ABI 270)で、いずれかでキャピラリー電気泳動法(CE)によって評価した。塩基およびバックボーン組成物は、エレクトロスプレー−質量分光法を利用する化合物の質量分析によって確認した。全てのアッセイ試験プレートは、単一およびマルチ・チャンネル・ロボット・ピペッターを使用してマスタープレートから希釈した。プレートは、プレート上の化合物の少なくとも85%で、少なくとも85%が全長である場合に許容されると判断した。
標的核酸発現に対するアンチセンス化合物の効果は、標的核酸が測定可能なレベルで存在することを条件として、任意の種々の細胞型で試験することができる。これは、たとえば、PCRまたはノーザンブロット解析を使用してルーチンで決定することができる。以下の細胞型は、例示の目的で提供されるが、その他の細胞型も、標的が選択される細胞型に発現されていることを条件として、ルーチンで使用することができる。これは、当技術分野においてルーチンの方法、たとえばノーザンブロット解析、リボヌクレアーゼ保護アッセイ法、またはRT−PCRによって容易に決定することができる。
ヒト移行細胞膀胱癌腫細胞株T−24は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)(Manassas,VA)から得た。T−24細胞は、10% ウシ胎児血清(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)、1mLにつき100ユニットのペニシリンおよび1mLにつき100マイクログラムのストレプトマイシン(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)を補った完全マッコイ5A基本培地(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)中でルーチンで培養した。細胞は、これらが90%のコンフルエンスに到達したときに、トリプシン処置および希釈によってルーチンで継代した。細胞は、RT−PCR解析に使用するために、7000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレート(Falcon−Primaria #353872)に接種した。
ヒト肺癌腫細胞株A549は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)(Manassas,VA)から得た。A549細胞は、10%のウシ胎児血清(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)、1mLにつき100ユニットのペニシリン、および1mLにつき100マイクログラムのストレプトマイシン(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)を補ったDMEM基本培地(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)中でルーチンで培養した。細胞は、これらが90%のコンフルエンスに到達したときに、トリプシン処置および希釈によってルーチンで継代した。
ヒト新生児の真皮性線維芽細胞(NHDF)は、Clonetics Corporation(Walkersville,MD)から得た。NHDFは、供給元によって推奨されるとおりに補った線維芽細胞成長培地(Clonetics Corporation,Walkersville,MD)中でルーチンで維持した。細胞は、供給元によって推奨されるとおりに最高10継代の間維持した。
ヒト胚ケラチのサイト(HEK)は、Clonetics Corporation(Walkersville,MD)から得た。HEKは、供給元によって推奨されるとおりに処方されたケラチノサイト増殖培地(Clonetics Corporation,Walkersville,MD)中でルーチンで維持した。細胞は、供給元によって推奨されるとおりに最高10継代の間維持した。
マウス脳内皮細細胞株b.ENDは、Max Plank Instititute (Bad Nauheim,Germany)で、Dr.Werner Risauから得た。b.END細胞は、DMEM(10%のウシ胎児血清(Gibco/Life Technologies,Gaithersburg,MD)を補った高グルコース(Gibco/Life Technologies,Gaithersburg,MD))中でルーチンで培養した。細胞は、これらが90%のコンフルエンスに到達したときに、トリプシン処置および希釈によってルーチンで継代した。細胞は、RT−PCR解析に使用するために、3000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレート(Falcon−Primariaa #3872)にまいた。ノーザンブロッティングまたはその他の解析については、細胞を、100mmまたはその他の標準的組織培養プレート上にまいてもよく、培地およびオリゴヌクレオチドの適切な量を使用して、同様に処置してもよい。
ヒト上皮癌腫細胞株HeLaは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から得た。HeLa細胞は、DMEM(10%のウシ胎児血清(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)を補った高グルコース(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA))中でルーチンで培養した。細胞は、これらが90%のコンフルエンスに到達したときに、トリプシン処置および希釈によってルーチンで継代した。細胞は、約50,000細胞/ウェルの密度で24ウェル・プレート(Falcon−Primaria #3846)に、またはRT−PCR解析に使用するためには、約5,000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまいた。ノーザンブロッティングまたはその他の解析については、これらが約90%のコンフルエンスに到達したときに、細胞を集めた。
ヒト・グリア芽細胞腫U−87 MG細胞株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から得た。U−87 MG細胞は、10%のウシ胎児血清(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)および抗生物質を補ったDMEM(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)中で培養した。細胞は、これらが適切なコンフルエンスに到達したときに、トリプシン処置および希釈によってルーチンで継代した。細胞は、RT−PCR解析に使用するために、約10,000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレート(Falcon−Primaria #3872)にまいた。
マウスMH−S細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から購入した。細胞は、10%の熱で不活性化したウシ胎児血清(FCS)(Hyclone Laboratories,Logan,UT)を含むRPMI 1640培地中で維持した。細胞は、5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにおいてプレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。
細胞が65〜75%のコンフルエンシーに到達したときに、これらをオリゴヌクレオチドで処置した。96ウェル・プレート中で培養した細胞については、ウェルを100μLのOPTI−MEMTM−1減少血清培地(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)で一旦洗浄し、次いで3.75g/mLのLIPOFECTINTM(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)および所望の濃度のオリゴヌクレオチドを含む130μLのOPTI−MEMTM−1で処置した。細胞を処置し、データを三通りで得る。37℃での処置の4〜7時間後、培地を新しい培地と置き換えた。オリゴヌクレオチド処置の16〜24時間後に細胞を集めた。
eIF4E発現のアンチセンス調整は、当技術分野において公知の種々の方法でアッセイすることができる。たとえば、eIF4E mRNAレベルは、とえば、ノーザンブロット解析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応法(PCR)、またはリアルタイムPCR(RT−PCR)によって定量化することができる。リアルタイム定量的PCRは、現在適している。RNA解析は、総細胞RNAまたはポリ(A)+ mRNAに対して行うことができる。本発明のRNA解析の1つの方法は、本明細書のその他の実施例に記載されているように、総細胞RNAの使用である。RNA単離の方法は、当該技術分野において周知である。また、ノーザンブロット解析も当技術分野においてルーチンである。リアルタイム定量的(PCR)は、便利には、PE−Applied Biosystems,Foster City,CAから入手可能な、商業的に入手可能なABI PRISMTM7600、7700、または7900配列検出システムをおよび使用して達成することができ、製造業者の説明書に従って使用される。
一旦、本明細書に開示される方法によってeIF4E阻害剤が同定したら、化合物を、それぞれ、予測的な特定の疾病状態または症状の治療における有効性を予測する測定可能な指標を有する1つまたは複数の表現型アッセイ法でさらに調査する。
ポリ(A)+mRNAは、Miuraら、(Clin.Chem.,1996,42,1758−1764)に従って単離した。ポリ(A)+mRNA単離のためのその他の方法は、当技術分野においてルーチンのものである。簡単には、96ウェル・プレート上で培養した細胞については、増殖培地を細胞から除去して、それぞれのウェルを200μLの冷却PBSで洗浄した。60μLの溶解緩衝液(10mMトリス−HCl、pH7.6、1mM EDTA、0.5M NaCl、0.5% NP−40、20mMバナジル−リボヌクレオシド複合体)をそれぞれのウェルに添加し、プレートを穏やかに撹拌して、室温で5分間インキュベートした。55μLの可溶化液をOligo d(T)被覆された96ウェル・プレート(AGCT Inc.,Irvine CA)へ移した。プレートを室温で60分間インキュベートして、200μLの緩洗浄衝液(10mM トリス−HCl pH7.6、1mM EDTA、0.3M NaCl)で3回洗浄した。最後の洗浄の後、プレートを紙タオル上で吸い取って過剰な洗浄緩衝液を除去し、5分間風乾させた。70℃に予熱した60μLの溶離緩衝液(5mMトリス−HCl pH7.6)をそれぞれのウェルに添加し、プレートを90℃ホットプレート上で5分間インキュベートして、次いで溶出液を新たな96ウェル・プレートに移した。
総RNAは、Qiagen Inc.(Valencia,CA)から購入したRNEASY96TMキットおよび緩衝液を使用して、製造業者の推奨される手順にしたがって単離した。簡単には、96ウェル・プレート上で培養した細胞については、増殖培地を細胞から除去し、それぞれのウェルを200μLの冷却PBSで洗浄した。150μL 緩衝液 RLTをそれぞれのウェルに添加して、プレートを20秒間激しく撹拌した。次いで、150μLの70%のエタノールをそれぞれのウェルに添加し、上下に3回をピペッティングすることによって内容物を混合した。次いで、廃物の収集トレイと共に装着されたQIAVACTMマニフォールドに付着され、かつ負圧源に付着されたRNEASY96TMウェル・プレートに試料を移した。真空は、1分間適用した。500μLの緩衝液RW1をRNEASY96TMプレートのそれぞれのウェルに添加して、15分間インキュベートし、再び真空を1分間適用した。さらに500μLの緩衝液RW1をRNEASY96TMプレートのそれぞれのウェルに添加して、真空を2分間適用した。次いで、1mLの緩衝液RPEをRNEASY96TMプレートのそれぞれのウェルに添加して、真空を90秒間適用した。次いで、緩衝液RPE洗浄を繰り返して、真空をさらに3分間適用した。次いで、プレートをQIAVACTMマニフォールドから除去して、紙タオル上で吸い取って乾燥させた。次いで、プレートを、1.2mLの収集管を含む収集管ラックに装着されたQIAVACマニフォールドに再び付けた。次いで、それぞれのウェル内で140μLのRNAseのない水をピペッティングすること、1分インキュベートすること、次いで3分間真空を適用することによってRNAを溶出した。
eIF4E mRNAレベルの定量化は、製造業者の説明書に従ってABI PRISMTM7600、7700、または7900のSequence Detection System(PE−Applied Biosystems,Foster City,CA)を使用してリアルタイム定量的PCRによって達成した。これは、閉管の、ゲルに基づかない蛍光検出システムであり、リアルタイムにポリメラーゼ連鎖反応法(PCR)産物の高スループットの定量化が可能である。増幅産物が、PCRの完了後に定量化される標準的なPCRに対して、リアルタイム定量的PCRの産物は、これらが蓄積するにつれて定量化される。これは、PCR反応に、フォワードおよびリバースのPCRプライマー間で特異的にアニールし、かつ2つの蛍光色素を含むオリゴヌクレオチドプローブを含むことによって達成される。レポーター色素(たとえば、PE−Applied Biosystems,Foster City,CA,Operon Technologies Inc.,Alameda,CAもしくはIntegrated DNA Technologies Inc.,Coralville,IAのいずれかから得られるFAMまたはJOE)がプローブの5’末端に付着されており、クエンチャー色素(たとえばPE−Applied Biosystems,Foster City,CA,Operon Technologies Inc.,Alameda,CAまたはIntegrated DNA Technologies Inc.,Coralville,IAのいずれかから得られるTAMRA)がプローブの3’末端に付着されている。プローブおよび色素が無処置のときには、レポーター色素発光が、近くの3’クエンチャー色素によってクエンチされる。増幅の間に、標的配列に対するプローブのアニーリングにより、Taqポリメラーゼの5’−エキソヌクレアーゼ活性によって切断することができる基質を生じる。PCR増幅サイクルの伸張期の間に、Taqポリメラーゼによるプローブの切断により、プローブの残部(およびそれ故、クエンチャー部分)からレポーター色素が放出され、配列特異的蛍光性シグナルが生じる。それぞれのサイクルで、さらなるレポーター色素分子がこれらのそれぞれのプローブから切断され、蛍光強度は、ABI PRISMTMSequence Detection Systemに組み込まれたレーザー光学によって規則的な間隔でモニターされる。それぞれのアッセイ法において、無処置の対照試料に由来するmRNAの段階希釈を含む一連の平行反応により検量線を作製し、これを試験試料のアンチセンス・オリゴヌクレオチド処置後のパーセント阻害を定量化するために使用する。
フォワードプライマー:TGGCGACTGTCGAACCG(配列番号:5)、
リバースプライマー:AGATTCCGTTTTCTCCTCTTCTGTAG(配列番号:6)、
およびPCRプローブは:FAM−AAACCACCCCTACTCCTAATCCCCCG−TAMRA(配列番号:7)であって、FAMは蛍光色素であり、TAMRAはクエンチャー色素である。ヒトGAPDHについては、PCRプライマーは:
フォワードプライマー:GAAGGTGAAGGTCGGAGTC(配列番号:8)、
リバースプライマー:GAAGATGGTGATGGGATTTC(配列番号:9)、
およびPCRプローブは:5’JOE−CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC−TAMRA 3’(配列番号:10)であって、JOEは蛍光レポーター色素であり、TAMRAはクエンチャー色素である。
フォワードプライマー:AGGACGGTGGCTGATCACA(配列番号:12)、
リバースプライマー:TCTCTAGCCAGAAGCGATCGA(配列番号:13)、
およびPCRプローブは:FAM−TGAACAAGCAGCAGAGACGGAGTGA−TAMRA(配列番号:14)であって、FAMは蛍光色素であり、TAMRAはクエンチャー色素である。マウスGAPDHについては、PCRプライマーは:
フォワードプライマー:GGCAAATTCAACGGCACAGT(配列番号:15)、
リバースプライマー:GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT(配列番号:16)、
およびPCRプローブは:5’JOE−AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC−TAMRA 3’(配列番号:17)であって、JOEは蛍光レポーター色素であり、TAMRAはクエンチャー色素である。
アンチセンス処置の18時間後に、細胞単層を冷却PBSで2回洗浄し、1mLのRNAZOLTM(TEL−TEST“B”Inc.,Friendswood,TX)に溶解する。総RNAは、製造業者の推奨プロトコルに従って調製する。20マイクログラムの総RNAをMOPS緩衝系(AMRESCO,Inc.Solon,OH)を使用して1.1%のホルムアルデヒドを含む1.2%のアガロースゲルによる電気泳動法によって分画する。RNAは、ノーザン/サザン・トランスファー・緩衝系(TEL−TEST“B”Inc.,Friendswood,TX)を使用して、一晩キャピラリー転移によってゲルからHYBONDTM−N+ナイロン膜(Amersham Pharmacia Biotech,Piscataway,NJ)に移す。RNA転移は、UV視覚化によって確認する。膜をSTRATALINKERTMUV Crosslinker2400(Stratagene,Inc,La Jolla,CA)を使用してUV架橋によって固定して、ストリンジェント条件についての製造業者の推奨を使用してQUICKHYBTMハイブリダイゼーション溶液(Stratagene,La Jolla,CA)を使用してプローブした。
本発明に従って、公表された配列(GenBankアクセッション番号NM_007917.1、配列番号:4として本明細書に組み入れられる)を使用して、一連のアンチセンス化合物をヒトeIF4E RNAの異なる領域をターゲットするようにデザインした。化合物は、表1に示してある。「標的部位」は、化合物が結合する特定のヒトeIF4E標的配列上の最初の(最も5’の)ヌクレオチド番号を示す。表1の全ての化合物は、20ヌクレオチドの長さのキメラ・オリゴヌクレオチド(「ギャップマー」)であり、5ヌクレオチド「ウイング」に両側(5’および3’方向)で隣接する10個の2’−デオキシヌクレオチドからなる中心の「ギャップ」領域からなる。ウイングは、2’−メトキシエチル(2’−MOE)ヌクレオチドで構成されている。ヌクレオシド間(バックボーン)結合は、オリゴヌクレオチドの全体にわたってホスホロチオアート(P=S)である。全てのシチジン残基は、5−メチルシチジンである。
本発明に従って、ヒトおよびマウスeIF4E(たとえば、マウスeIF4E GenBankアクセッション番号NM_007917.1、配列番号:11として本明細書に組み入れられる)の両方に対して相補的である表1の中の化合物を、本明細書のその他の実施例に記載されているように、定量的リアルタイムPCRによってマウスeIF4E mRNAレベルに対するこれらの効果についてさらに解析した。表2において、「標的部位」は、化合物が結合する特定のマウスeIF4E標的核酸上の最初の(最も5’の)ヌクレオチド番号を示す。表2に示したデータは、b.END細胞を本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドで処置した3回の実験からの平均である。それぞれのデータポイントに対する陽性対照は、表において配列番号によって同定される。存在する場合、「N.D.」は「データなし」を示す。
ウエスタンブロット分析(免疫ブロット分析)は、標準的な方法を使用することによって行ってもよい。細胞をオリゴヌクレオチド処置の16〜20時間後に集め、PBSで一度洗浄し、Laemmli緩衝液(100μl/ウェル)に懸濁して、5分間煮沸し、16%のSDS−PAGEゲルに充填する。ゲルを150Vで1.5時間流し、ウエスタンブロッティングのための膜に転写した。eIF4Eに向けられた適切な一次抗体を、一次抗体種に向けられた放射ラベルされたか、または蛍光ラベルされた二次抗体と共に使用する。バンドをPHOSPHORIMAGERTM(Molecular Dynamics,Sunnyvale CA)を使用して視覚化する。
HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)、1×106細胞/100μlを、3.25、7.5、15、および30μMオリゴヌクレオチドで電気穿孔した。使用したeIF4E ISISのアンチセンス阻害剤は、ISIS 183750(配列番号:40)およびISIS 298815(配列番号:97)であった。使用した対照オリゴヌクレオチドは、ISIS 29848(NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN;配列番号:207であって、Nは、A、C、G、およびTの混合物である)および無関係な対照オリゴヌクレオチドISIS 129688(TTCGCGGCTGGACGATTCAG;配列番号:208)であった。ニセものをトランスフェクトした対照も使用した。細胞増殖は、CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit(Molecular Probes,Inc.,Eugene OR)を使用して15μMオリゴヌクレオチドで処置した細胞において測定した。ヒトeIF4E ISIS 183750およびISIS 298815のアンチセンス・オリゴヌクレオチド阻害剤は、ニセもので処置した対照と比較して、72時間後の細胞増殖をそれぞれ31%および36%まで阻害した。対照オリゴヌクレオチドで処置した細胞は、少なくともニセもので処置した対照と同程度で増殖する。
細胞周期に対するeIF4Eアンチセンス化合物の効果を検査した。HeLa細胞を30μMアンチセンス・オリゴヌクレオチド(ISIS 183750または299815)もしくは対照オリゴヌクレオチド(ISIS 29848またはISIS 129688)で電気穿孔するか、またはニセものをトランスフェクトした。フローサイトメトリを使用して48時間でのDNA含量を測定するために、蛍光性のDNAインターカレーターヨウ化プロピジウム(PI)を使用した。結果(2回行った)を表4に示してある。
血管形成は、互いに、および細胞外基質分子で内皮細胞の相互作用を促進する多数の因子によって刺激されて、毛細管の形成を生じる。このプロセスは、組織培養において、内皮細胞による管状構造の形成によって再生することができる。インビトロでの管形成の減少は、インビボでの血管形成の阻害と関連があり(Carmelietら、Nature,2000,407,249−257;およびZhangら、Cancer Research,2002,62,2034−42)、これは、血管形成の指標としてのインビトロでの管形成の使用を支持する。
8週齢のC57BL6マウスに、毎週2回3週間(合計6用量)、40mg/kgのオリゴヌクレオチド濃度でオリゴヌクレオチドの塩類溶液を腹腔内に注射した。使用した化合物は、eIF4Eアンチセンス化合物ISIS 183750(配列番号:40)、ISIS 299815(配列番号:97)、ISIS 298797(配列番号:80)、およびISIS 298823(配列番号:105)であった。全てが、ヒトおよびマウスeIF4Eに対して交差−種アンチセンス・オリゴヌクレオチドである。ISIS 141923は、無関係な(対照)オリゴヌクレオチドである(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC;配列番号:211)。塩類(媒体)対照も使用した。塩類対照と比較して、ISIS 183750は、マウス肝臓におけるeIF4E mRNAレベルを対照の20%未満に減少させた(80%以上の阻害)。また、ISIS 298815は、対照の約20%までeIF4E mRNAレベルを減少させた。ISIS 298797処置は、対照の約30%にeIF4E mRNAレベルを減少させ(70%の阻害)、ISIS 298823処置は、対照の約37%にeIF4E mRNAレベルを減少させた(63%の阻害)。対照的に、ISIS 141923での処置は、eIF4E mRNAレベルを減少させず、実際にこれらを塩類対照の約140%に増大した。
雄のヌードマウスには、5×106 PC−3ヒト前立腺癌腫細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)を横腹に皮下注射した。腫瘍が100mm3の平均サイズに到達したときに(移植後約3〜3.5週)、アンチセンス処置を開始した。マウスには、最初の投与でeIF4Eに対するアンチセンス、ISIS 183750(配列番号:40)または対照オリゴヌクレオチドISIS 141923(配列番号:211)の静脈内注射によって50mg/kgを、次いで、その後に月曜日、水曜日、および金曜日ごとに25mg/kgを与えた。腫瘍移植後の54日まで、ISIS 183750で処置したマウスにおける腫瘍は、サイズが約450mm3で、対照ISIS 141923(約930mm3)で処置したマウスの腫瘍と比較してほぼ50%の減少であった。この減少のレベルは、57日目の研究の終わりまで続いた。
dsRNAオリゴヌクレオチドの設計および合成
ヒトeIF−4E配列Genbank #M15353の配列を照会した。選択された配列のG+C含量は、30%〜70%に及ぶ。eIF−4Eに特異的で、下記に示した各々のdsRNA配列は、RNAオリゴヌクレオチド二重鎖のそれぞれの鎖の3’末端に2つのデオキシチミジン・ヌクレオチドを含む(図示せず)。遺伝子特異的siRNAsの合成、二重鎖形成、および精製は、Dharmacon Research Inc.によって行われた。3つのeIF−4E siRNA配列を選択して試験し、以下に示してある:
eIF4E_1:
遺伝子配列の位置:141−159
GC含量:53%
5’−CAGAUGGGCACUCUGGUUU−3’ 配列番号:212
3’−GUCUACCCGUGAGACCAAA−5’配列番号:213
eIF4E_2:
遺伝子配列の位置:195−213
GC含量:63%
5’−CCUGCGGCUGAUCUCCAAG−3’ 配列番号:214
3’−GGACGCCGACUAGAGGUUC−5’ 配列番号:215
eIF4E_3:
遺伝子配列の位置:1010−1028
GC含量:37%
5’−CAACUUGGCAUUUCUAUAC−3’ 配列番号:216
3’−GUUGAACCGUAAAGAUAUG−5’ 配列番号:217。
対照:
5’−CUUACGCUGAGUACUUCGA−3’ 配列番号:218
3’−GAAUGCGACUCAUGAAGCU−5’ 配列番号:219
LNCaP、PC3、HCT116、MDA−231、MCF−7、T24、およびCWR22RV1細胞株は、ATCCを介して得て、L−グルタミンを含み、フェノールレッド(Gibco)を含まない10%のFBS(Hyclone)を含むRPMI Medium 1640中で培養する。
トランスフェクションの24時間前に、哺乳類細胞株を24ウェル・プレート内に1×105細胞でプレートにまく。一過性トランスフェクションは、オリゴフェクトアミン(Invitrogen)を使用して行う。簡単には、5〜500nM(最終量)の間の濃度の個々のdsRNAをOptiMEM(Invitrogen)に希釈し、一方でOptiMEMおよびオリゴフェクトアミンの別々の溶液を室温で5分間インキュベートする。2つの溶液を混合して、続いて室温で30分インキュベーションする。血清含有培地を、0.5ml/ウェルの最終量に向けてトランスフェクション複合体に添加する。既存の細胞培地を吸引し、トランスフェクション複合体と置き換えて、37℃(5%のCO2)で48〜72時間インキュベートする。
72時間後、トランスフェクション混合物を穏やかに吸引し、細胞を完全タブレットプロテアーゼ阻害剤(Complete tablet protease inhibitors:Roche Molecular Biochemicals)、1mMの活性化された Na3VO5を含む150μlの氷冷RIPA緩衝液(50mM トリス−HCl、pH 7.4、150mM NaCl、1%NP−40、0.25%Na−デオキシコレート、1mM EDTA)に溶解し、室温で30分間インキュベートし、−20℃で1〜24時間貯蔵する。30μlの解凍した可溶化液を0.2MのDTTを含む10μlの4×NuPage試料緩衝液(Invitrogen)に添加する。試料を85℃で5分間加熱し、4〜20%のトリス−グリシン・ポリアクリルアミドゲル(Invitrogen)に充填する。ゲルを1×転写緩衝液/20%のメタノール中で1100mAHでHybond−P PVDF膜(Amersham Pharmacia Biotech)に転写する。膜を5%の脱脂乳を含むPBS中で1時間ブロックする。一次抗体、抗eIF4E(BD Biosciences)および抗アクチン(Sigma)をそれぞれ1:500および1:10,000でブロッキング緩衝液に希釈して、4℃で16時間インキュベートした。膜をPBS中で3×洗浄し、続いて室温で2時間の抗マウス二次抗体(Santa Cruz)をインキュベーションする。ブロットをPBS中で3×洗浄し、SuperSignal West Pico化学発光基質(Pierce)で1分間処置する。捕獲されたシグナルをLumi−Imager F1(Roche Molecular Biochemicals)で記録する。eIF4Eおよびアクチンに対応するバンドをLumiAnalystソフトウエアを使用して定量化し、ゲル充填および転写を調節するためにアクチンに対して規準化した後にeIF4E発現レベルを決定する。
細胞をトランスフェクションの24時間前に1.5〜3.0×103細胞/ウェルの間の細胞密度でポリ−D−リジン被覆した96ウェル・プレート(Becton Dickinson)にまく。eIF−4Eおよび対照siRNAsのトランスフェクションは、5nM〜500nMまでの範囲のsiRNA濃度で三通りに行う。細胞を50μg/ml終濃度でヨウ化プロピジウム(Sigma)を添加することによって3、6、および8日に集め、光から保護して室温で30分間インキュベーションする。プレートを凍結前および後にVictor2 1420多重ラベルカウンター(Wallac)で測定する。凍結後から凍結前の測定を減算することによって修正した合計を得る。
下記の表5に示される二重化したオリゴマーRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用した培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。比較のために、いくつかの一本鎖キメラ・アンチセンスオリゴヌクレオチドも試験した。
「標的部位」は、化合物が特異的にハイブリダイズするGenbankアクセッション番号M15353.1の標的部位の最も5’のヌクレオチド位置を示す。
「種」は、アンチセンス配列が完全にヒト(h)、ラット(h)、マウス(m)、および/またはウサギ(rab)eIF4Eに対して相補的であるかどうかを示す、
以前の表中のsiRNA化合物のほとんど全ては、完全にマウスおよびヒトeIF4E mRNAに対して相補的である。本明細書において、これらをマウスMH−Sネズミ肺胞マクロファージ細胞株で試験する。マウスMH−S細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から購入した。細胞は、10%の熱不活性化されたウシ胎児血清(FCS)(Hyclone Laboratories,Logan,UT)を含むRPMI 1640培地中で維持した。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまいて、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL OPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いでオリゴマー化合物の鎖につき20nMの濃度の所望のdsRNAと2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)とを含むOPTI−MEM−1TMの130μLで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置き換えた。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離し、標的減少を測定した。
さらなる遺伝子歩行により、eIF4Eを阻害するさらなるsiRNAsを同定した。構築物は、HeLa細胞において50nMの濃度でスクリーニングした。
「標的部位」は、化合物が特異的にハイブリダイズするGenbankアクセッション番号M15353.1の標的部位の最も5’のヌクレオチド位置を示す。
「種」は、アンチセンス配列が完全にヒト(h)、ラット(h)、マウス(m)、および/またはウサギ(rab)eIF4Eに対して相補的であるかどうかを示す。
以前の表におけるsiRNA化合物のほとんど全ては、完全にマウスおよびヒトeIF4E mRNAに対して相補的である。本明細書において、これらをマウスMH−Sネズミ肺胞マクロファージ細胞株で試験する。マウスMH−S細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から購入した。細胞は、10%の熱不活性化されたウシ胎児血清(FCS)(Hyclone Laboratories,Logan,UT)を含むRPMI 1640培地中で維持した。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまいて、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL OPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いでオリゴマー化合物の鎖につき50nMの濃度の所望のdsRNAと2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)とを含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置き換えた。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離し、標的減少を測定した。結果を表8に示してある。示したsiRNA構築物は、1つのアンチセンス鎖および1つのセンス鎖からなる。アンチセンス鎖(AS)を示してあり;センス鎖、標的部位、種、化学、および配列を以前の表と同じである。RNA配列については、U(ウラシル)は、一般に、DNAまたはDNA様配列において通常見いだされるT(チミン)に置き換わることが、当技術分野において十分に理解されている。
「標的部位」は、化合物が特異的にハイブリダイズするGenbankアクセッション番号M15353.1の標的部位の最も5’のヌクレオチド位置を示す。
「種」は、アンチセンス配列が完全にヒト(h)、ラット(h)、マウス(m)、および/またはウサギ(rab)eIF4Eに対して相補的であるかどうかを示す。
用量反応実験を上記の処置方法および0.1nM、1.0nM、10nM、および100nMのsiRNA濃度を使用して、HeLa細胞において行い、IC50(未処置の制御と比較したeIF4Eの50%の阻害を生じる化合物の濃度)を上記化合物において確実に算出した。結果を表9に示してある。アンチセンス鎖同一性を示してある。センス鎖、標的部位、種、化学、および配列は、以前の表に記載してある。
「338918の構築物」
センス:5’−UAGAGCUAAAGGUGAUAAGA−3’ ISIS 338943(配列番号:237)
AS:3’−AUCUCGAUUUCCACUAUUCU−5 ISIS 338918(配列番号:236)
「338910の構築物」
センス:5’−AAGGAUCCAGGAAUAUGACA−3’ ISIS 338935(配列番号:221)
AS:3’−UUCCUAGGUCCUUAUACUGU−5’ ISIS 338910(配列番号:220)
「338927の構築物」
センス:5’−AGAAGACACCUUCUGAGUAU−3’ ISIS 338952(配列番号:255)
AS:3’−UCUUCUGUGGAAGACUCAUA−5’ ISIS 338927(配列番号:254)
「338914の構築物」
センス:5’−CAUUGGUGAAGGAUCCAGGA−3’ ISIS 338939(配列番号:229)
AS:3’−GUAACCACUUCCUAGGUCCU−5’ ISIS 338914(配列番号:228)。
以前の実施例において選択した4つのsiRNA構築物(「親」構築物)を他の2’−O−メチル(2’−O−Meまたは2’OMe)および2’−フルオロ(2’−F)修飾を有するsiRNA構築物と比較した。
通常のタイプの大文字=(NORMAL UYPE UPPER CASE =リン酸バック)ボーンで修飾されていないRNA。
2’−O−メチルヌクレオシドは、太字で示してあり;2’−フルオロは、下線を引いてある。
無処置の二重鎖RNAは、前述したものと同様の抽出およびキャピラリー電気泳動法を使用して、希釈したマウス血漿から解析した(Leedsら、Anal.Biochem.,1996,235,36−43;Gearyら、Anal.Biochem.,1999,274,241−248)。3〜6ヵ月の雌のBalb/cマウス(Charles River Lab)由来のヘパリン処置したマウス血漿を−80℃から融解し、リン酸緩衝食塩水(140mM NaCl、3mM KCl、2mM リン酸カリウム、10mM リン酸ナトリウム)で25%(v/v)に希釈した。約10nmolのプレ・アニールされたsiRNAを、100μMの濃度で25%の血漿に添加し、0、15、30、45、60、120、180、240、360、および420分間37℃でインキュベートした。一定分量を示した時間に除去し、EDTAで処置して2mMの終濃度にし、キャピラリーゲル電気泳動(eCap DNA キャピラリーチューブでのBeckman P/ACE MDQ−UV)によって解析するまで0℃で氷上に置いた。siRNA二重鎖ピークの領域を測定して、残っている無処置のsiRNAの割合を算出するために使用した。内部較正標準のように、アデノシン三リン酸(ATP)をそれぞれの注射に対して2.5mMの濃度で添加した。0時間点を、リン酸緩衝食塩水中にsiRNAを希釈し、続いてキャピラリー電気泳動法によって採取した。パーセント無処置のsiRNAを時間に対してプロットし、疑似一次半減期を算出した。結果を表11に示してある。
種々の修飾をもつさらなるsiRNA構築物を調製し、以前の実施例に記載されているように試験した。
太字=リン酸バックボーンをもつ2’−O−メチルRNA;
下線=リン酸バックボーンをもつ2’−フルオロRNA、
小文字=リン酸バックボーンをもつ4’−チオRNA、
「%阻害」は、無処置の対照細胞と比較した、siRNA二重鎖(または、示したとおりのその他の化合物)で処置した細胞におけるeIF4E RNAの%減少を示す。
2’−O−メチルヌクレオシドは、太字で示してあり;2’−フルオロは下線を引いてある。
さらなるsiRNA構築物をHeLa細胞において試験した。下記の表13に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用した培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL のOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.1、1、10、および100nMの濃度の所望のdsRNAと2.5μ/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)とを含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
太字=リン酸バックボーンをもつ2’−O−メチルRNA;
下線=リン酸バックボーンをもつ2’−フルオロRNA、
小文字=リン酸バックボーンをもつ4’−チオRNA、
「%阻害」は、無処置の対照細胞と比較した、siRNA二重鎖(または、示したとおりのその他の化合物)で処置した細胞におけるeIF4E RNAの%減少を示す。
2’−O−メチルヌクレオシドは、太字で示してあり;2’−フルオロは下線を引いてある。
下記の表14に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.2、2、および20nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表15に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL のOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.2、2、および20nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表16に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL のOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.2、2、および20nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表17に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.5、5、および50nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表18に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1% ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μL のOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.5、5、および50nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表19に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.5、5、および50nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表20に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.5、5、および50nMの濃度の所望のds鎖RNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
下記の表21に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。HeLa細胞のために使用する培養方法は、ATCCから入手可能であり、たとえば、www.atcc.orgで見いだしてもよい。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10%FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.02、0.2、2、および20nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
以前の表に示した修飾されたか、または無修飾siRNA構築物は、上に記載された方法を使用して、これらがU−87 MG細胞においてヒトeIF4E mRNAのレベルを減少させる能力について試験する。U−87ヒト・グリア芽細胞腫細胞株は、ATCC(Rockville Md.)から得て、熱不活性化した10%ウシ胎児血清を補ったIscove’s DMEM培地中で維持する。用量反応の実験は、IC50値を得るための以前の実施例に記載したとおりに行う。
さらなるsiRNAsをヒトeIF4E mRNAに対してデザインした(Genbankアクセッション番号M15353.1、配列番号:4)。全て、アンチセンス鎖に他の2’−O−メチル/2’−OHがあり、センス鎖に他の2’−OH/2’−O−メチルがある。バックボーンはホスフェート(P=O)であり、かつ5’末端は、5’−OHであるが、これらおよびその他のsiRNA構築物も、5’−リン酸基で合成してもよいことが理解されるであろう。
全てがeIF4E mRNAの5’キャップ領域、すなわち5’キャップに隣接したmRNAの極5’末端にターゲットされる、均一な2’−O−メトキシメチル(2’−MOE)ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドのセットを合成した。これらを表23に示してある。全てのシトシンは、5−メチルシトシンである。理論によって拘束されることは望まないが、完全には、2’−MOEオリゴヌクレオチドは、RNAse Hのための基質であると考えられておらず、したがって、mRNA標的の分解を経る以外に、占有のみ、または立体的妨害メカニズムを経てタンパク質翻訳を妨害すると考えられる。「標的部位」は、eIF4E mRNA上の位置(示したとおりの配列番号:4または11)をいう。
下記の表14に示した二重化されたオリゴマーのRNA(dsRNA)化合物は、以前の実施例に記載されているように調製し、HeLa細胞(American Type Culture Collection,Manassas VA)において評価した。細胞を5000細胞/ウェルの密度で96ウェル・プレートにまき、高グルコース、10% FBS、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM中で培養した。ウェルを200μLのOPTI−MEM−1TM減少血清培地(Gibco BRL)で一度洗浄し、次いで、オリゴマー化合物の鎖につき0.2、2、および20nMの濃度の所望のdsRNAプラス2.5μl/mlのLIPOFECTINTM(Gibco BRL)を含む130μLのOPTI−MEM−1TMで処置した。処置は、二回行った。処置の4または5時間後、培地を新しい培地と置換した。dsRNA処置の16または18時間後に細胞を集め、その時に、以前の実施例に記載されているようにRT−PCRによってRNAを単離して標的減少を測定した。
表22からのsiRNAsを、HeLa細胞においてeIF4E RNAレベルを減少させる能力について試験した。これらの化合物は、ヒトeIF4E mRNAに対してデザインされた(Genbankアクセッション番号M15353.1、配列番号:4)。強調されない限り、アンチセンス鎖は、位置1の2’−O−メチルで開始する他の2’−O−メチル/リボースであり(すなわち、奇数の位置は、2’−O−メチルであり、偶数の位置はリボースである)、センス鎖は、位置1のリボースで開始するほかのリボース/2’−O−メチルである(すなわち、奇数の位置はリボースであり、偶数の位置は2’−O−メチルである)。バックボーンはホスフェート(P=O)であり、かつ5’末端は、5’−OHであるが、これらおよびその他のsiRNA構築物も、5’−リン酸基で合成してもよいことが理解されるであろう。ISIS 351831_351832構築物は、345847_345849構築物と同じ配列を有するが、前者のものは、他の2’−O−メチル/2’−フルオロであることに留意されたい(アンチセンス鎖は、奇数の位置に2’−O−メチルを、偶数に2’−フルオロを有し;センス鎖は、奇数の位置に2’Fを、偶数に2’−O−メチルを有する)。
ヒトeIF4E(配列番号:4)にターゲットされる一連の一本鎖RNAアンチセンス・オリゴヌクレオチドを合成した。全てが、全体にホスホロチオアート・バックボーン結合および5’リン酸・キャップをもつRNA(リボース糖)である。ヒト臍静脈内皮細胞株HuVECは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Manassas,VA)から得られる。HuVEC細胞は、SingleQuots supplements (Clonetics Corporation,Walkersville,MD)を補ったEBM(Clonetics Corporation Walkersville,MD)中でルーチンで培養する。細胞は、これらが90%のコンフルエンスに到達するときに、トリプシン処置して希釈することによってルーチンで継代し、15継代まで維持する。細胞をRNAオリゴヌクレオチド(30nMオリゴヌクレオチド濃度)で処置するために、10000細胞/ウェルの密度、96ウェル・プレート(Falcon−Primaria #3872)にまく。処置(eIF4E RNAレベルの減少)の順序および結果を表27に示してある。RNA配列については、U(ウラシル)は、一般に、DNAまたはDNA様配列において通常見いだされるT(チミン)に置き換わることが、当技術分野において十分に理解されている。上記の実施例のように、「標的部位」は、オリゴヌクレオチドがターゲットされるM15353.1ヒトeIF4E配列(配列番号:4)上の標的領域の最も5’の位置をいう。「%阻害」は、eIF4E RNAのパーセント減少をいう(示した±標準偏差)。
以前の実施例と同様に二本鎖RNA化合物を調製した。二重鎖のアンチセンス鎖は、配列が、以前の実施例に使用した一本鎖アンチセンスRNA化合物と同一であるが、リン酸ジエステル(P=O)バックボーンで作製した。センス鎖は、完全にアンチセンス鎖に対して相補的であって(したがって、平滑末端20mer二重鎖を形成する)、さらにP=Oバックボーンを有する。両方の鎖とも無修飾RNAである。siRNA二重鎖を25nMの濃度で使用し、以前のsiRNA実施例に記載されたとおりにHeLa細胞を処置した。HeLa細胞におけるeIF4E RNAレベルに対する処置の効果は、表28に示したとおりである。「%阻害」は、eIF4E RNAのパーセント減少をいう(示した±標準偏差)。アンチセンス鎖の配列のみを表28に示してある。RNA配列については、U(ウラシル)は、一般に、DNAまたはDNA様配列において通常見いだされるT(チミン)に置き換わることが、当技術分野において十分に理解されている。
Claims (54)
- オリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩であって:
8〜80核酸塩基の長さであり;
8〜80核酸塩基の長さのアンチセンス部分を有し;
eIF4Eをコードする核酸分子にターゲットされ;および、
これは、eIF4Eの発現を調整し、
前記オリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、核酸塩基配列5’−AGTCGCCATCTTAGATCGAT−3’または5’−AGUCGCCAUCUUAGAUCGAU−3’を含まないことを条件とし、および、
前記調整がeIF4Eの発現阻害であるときは、前記阻害の程度は、少なくとも約50%であるオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。 - 19〜23核酸塩基の長さであり、かつ前記アンチセンス部分が19〜23核酸塩基の長さである、請求項1記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- オリゴヌクレオチドを含む、請求項1もしくは2記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- キメラ・オリゴヌクレオチドを含む、請求項1〜3のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 一本鎖である、請求項1〜4のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 完全に、または部分的に二本鎖である、請求項1〜4のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記eIF4Eをコードする核酸分子の5’非翻訳領域、開始領域、コード領域、停止領域、もしくは3’非翻訳領域と特異的にハイブリダイズするアンチセンス核酸分子を含む、請求項1〜6のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 少なくとも1つの化学的に修飾されたヌクレオシド間結合、糖残基、もしくは核酸塩基を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項1〜7のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化学的に修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアート結合であるオリゴヌクレオチドを含む、請求項8記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化学的に修飾された糖残基が、2’−O−メトキシメチル置換基を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項8記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化学的に修飾された糖残基が、2’−O−メチル、2’−フルオロ、または4’−チオ置換基を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項8記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化学的に修飾された核酸塩基が、シトシンであるオリゴヌクレオチドを含み、前記シトシンが、5−位置でメチル置換基を有する、請求項8記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 一本鎖20核酸塩基オリゴヌクレオチドを含む、請求項1〜5もしくは7〜12のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩であって、すべてのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合であり、5’末端から3’末端に読んでヌクレオチド1〜5および16〜20は、2’−O−メトキシメチル糖を含み、ヌクレオチド6〜15は、2’−デオキシヌクレオチドであり、すべてのシトシン残基は、5−メチル−シトシンである、オリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 少なくとも1つのペプチド核酸部分を含む、請求項1〜12のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 少なくとも1つのロックされた核酸部分を含む、請求項1〜12のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化合物の少なくとも1つの末端が平滑である、siRNA化合物である請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物。
- 前記化合物の少なくとも1つの鎖が、1つまたは複数のオーバーハンギング・ヌクレオシドを含む、siRNA化合物である請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物。
- オーバーハンギング・ヌクレオシドの数が1〜6である、請求項17記載の化合物。
- オーバーハンギング・ヌクレオシドまたはヌクレオシドが、デオキシチミジン(dT)ヌクレオシドである、請求項17記載の化合物。
- ナトリウム塩の形態である、請求項1〜19のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記eIF4Eをコードする核酸分子と少なくとも約95%の相補性を有する、請求項1〜20のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
こと。 - 配列番号:20、21、22、23、24、25、26、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、42、43、44、45、46、47、51、52、54、56、57、58、59、60、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、110、111、112、114、115、116、117、118、119、120、もしくは122の少なくとも8つの核酸塩基部分を含む、請求項1〜21のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 配列番号:20、21、22、23、24、25、26、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、42、43、44、45、46、47、51、52、54、56、57、58、59、60、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、110、111、112、114、115、116、117、118、119、120、および122からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項1〜21のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- すべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオアート結合である、請求項22もしくは23記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 5’末端から3’末端に読んでヌクレオチド1〜5および16〜20は、2’−O−メトキシメチル糖を含み、ヌクレオチド6〜15は、2’−デオキシヌクレオチドである、請求項22もしくは23記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- すべてのシトシン残基が5−メチルシトシン残基である、請求項22もしくは23記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 配列番号:40もしくは配列番号:97を含む、請求項23記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 請求項22〜27のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩であって、すべてのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合であり、5’末端から3’末端に読んでヌクレオチド1〜5および16〜20は、2’−O−メトキシメチル糖を含み、ヌクレオチド6〜15は、2’−デオキシヌクレオチドであり、すべてのシトシン残基は、5‐メチルシトシンである、オリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 前記化合物のアンチセンス鎖が、配列番号:213、215、217、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、260、262、264、266、268、270、272、274、283、285、287、289、291、293、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、もしくは337の少なくとも8つの核酸塩基部分を含む、請求項1〜21または24のいずれか一項記載の化合物。
- 前記化合物のアンチセンス鎖が、配列番号:213、215、217、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、260、262、264、266、268、270、272、274、283、285、287、289、291、293、297、299、301、303、305、307、309、311、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、もしくは337を含む、請求項1〜21または24のいずれか一項記載の化合物。
- 前記化合物のアンチセンス鎖が、配列番号339〜394のうちの1つの少なくとも8つの核酸塩基部分を含む、請求項1〜21または24のいずれか一項記載の化合物。
- ナトリウム塩の形態である、請求項22〜31のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩。
- 請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物もしくはこれらの薬学的に許容される塩と、薬学的または生理的に許容されるキャリア、賦形剤、もしくは希釈液とを含む、薬学的または獣医学的組成物。
- 細胞、組織、または器官におけるeIF4Eの発現を阻害する方法であって、eIF4Eの発現が阻害されるように、前記細胞、組織、または器官と、前記請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量とを接触させることを含む方法。
- eIF4Eが発現される細胞の増殖を減少する方法であって、前記細胞の増殖が阻害されるように、前記細胞と前記請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量とを接触させることを含む方法。
- eIF4E発現もしくは過剰発現と関連する症状または疾患を予防または処置する方法であって、患者に対して請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量を投与することを含む方法。
- 前記症状または疾患が、過剰増殖症状または疾患である、請求項36記載の方法。
- 前記過剰増殖症状または疾患が、感受性の癌、腫瘍、または異常もしくは不必要な血管形成によって特徴づけられる症状である、請求項37記載の方法。
- 前記eIF4E発現もしくは過剰発現と関連する過剰増殖症状または疾患が、乳癌、頭頚部癌、結直腸癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、卵嚢癌、腎癌、およびグリア芽細胞腫からなる群より選択される、請求項37記載の方法。
- 血管形成を予防または減少させる方法であって、患者に対して前記請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量を投与することを含む方法。
- 患者における腫瘍成長を予防または減少させる方法であって、患者に対して請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量を投与することを含む方法。
- 前記患者が哺乳類である、請求項36〜41のいずれか一項記載の方法。
- 前記患者がヒトである、請求項36〜41のいずれか一項記載の方法。
- 配列番号:40および配列番号:97からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス・オリゴヌクレオチドであって、
すべてのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合であり、5’末端から3’末端に読んでヌクレオチド1〜5および16〜20は、2’−O−メトキシメチル糖を含み、ヌクレオチド6〜15は、2’−デオキシヌクレオチドであり、すべてのシトシン残基は、5−メチルシトシンであり、かつ、
ナトリウム塩の形態である、アンチセンス・オリゴヌクレオチド。 - 前記請求項44記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチドと、薬学的または生理的に許容されるキャリア、賦形剤、もしくは希釈液とを含む、薬学的または獣医学的組成物。
- eIF4E発現もしくは過剰発現と関連する症状を予防または処置する方法であって、患者に対して請求項44記載のオリゴヌクレオチドの有効な量を投与することを含む方法。
- 前記eIF4E発現または過剰発現と関連する症状が、乳癌、頭頚部癌、大腸癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、卵嚢癌、腎癌、およびグリア芽細胞腫からなる群より選択される、請求項46記載の方法。
- 血管形成を減少する方法であって、患者に対して請求項44記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量を投与することを含む方法。
- 細胞、組織、または器官におけるeIF4Eの発現を阻害する方法であって、前記細胞、組織、または器官と、前記請求項44記載のオリゴマー化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の有効な量とを接触させること、およびeIF4Eの発現を阻害することを含む方法。
- eIF4E発現もしくは過剰発現と関連する症状の予防または処置のための薬物の製造のための、請求項1〜32のいずれか一項記載のオリゴマー化合物もしくはこれらの薬学的に許容される塩、または請求項44記載のアンチセンス・オリゴヌクレオチドの使用。
- 前記化合物が、eIF4Eをコードする核酸分子の5’−キャップ領域に特異的にハイブリダイズできるアンチセンス核酸分子を含む、請求項1記載の化合物。
- 少なくとも1つのPNAまたは2’−O−メトキシメチル部分を有する一本鎖化合物である、請求項51記載の化合物。
- 均一にPNAまたは均一に2’−O−メトキシメチルである、請求項52記載の化合物。
- 配列番号:395、396、397、または398の少なくとも8つの核酸塩基部分を含む、請求項51記載の化合物。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012509878A (ja) * | 2008-11-21 | 2012-04-26 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | ドセタキセルおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、抗腫瘍併用療法 |
JP2016526018A (ja) * | 2013-05-01 | 2016-09-01 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 共役アンチセンス化合物およびそれらの使用 |
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---|---|---|---|---|
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US20100021914A1 (en) * | 2006-11-23 | 2010-01-28 | Querdenker Aps | Oligonucleotides for modulating target rna activity |
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CN102482677B (zh) | 2009-03-16 | 2017-10-17 | 库尔纳公司 | 通过抑制nrf2的天然反义转录物治疗核因子(红细胞衍生2)‑样2(nrf2)相关疾病 |
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CA2761142C (en) | 2009-05-06 | 2021-06-08 | Opko Curna, Llc | Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp |
CA2761152A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-11 | Opko Curna, Llc | Treatment of lipid transport and metabolism gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a lipid transport and metabolism gene |
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KR101702689B1 (ko) | 2009-06-16 | 2017-02-06 | 큐알엔에이, 인크. | Pon1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(pon1) 관련된 질환의 치료 |
KR101801404B1 (ko) | 2009-06-16 | 2017-12-20 | 큐알엔에이, 인크. | 콜라겐 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 콜라겐 유전자 관련된 질환의 치료 |
ES2618894T3 (es) | 2009-06-24 | 2017-06-22 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor del factor de necrosis tumoral 2 (tnfr2) por inhibición del transcrito natural antisentido para tnfr2 |
CN102482672B (zh) | 2009-06-26 | 2016-11-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病 |
JP2013500017A (ja) | 2009-07-24 | 2013-01-07 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | サ−チュイン(sirt)への天然アンチセンス転写物の阻止によるサ−チュイン(sirt)関連疾患の治療 |
CN102762731B (zh) | 2009-08-05 | 2018-06-22 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病 |
JP6189594B2 (ja) | 2009-08-11 | 2017-08-30 | クルナ・インコーポレーテッド | アディポネクチン(adipoq)に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるアディポネクチン(adipoq)関連疾患の治療 |
EP2982755B1 (en) | 2009-08-21 | 2020-10-07 | CuRNA, Inc. | Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip |
EP2470657B1 (en) | 2009-08-25 | 2019-10-23 | CuRNA, Inc. | Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap |
CN101671669B (zh) * | 2009-08-27 | 2012-05-02 | 浙江大学 | 一种肝癌靶向性基因表达元件ae及其应用 |
NO2480669T3 (ja) | 2009-09-25 | 2018-04-07 | ||
US20150025122A1 (en) | 2009-10-12 | 2015-01-22 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro |
RU2639550C2 (ru) | 2009-12-16 | 2017-12-21 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с сайт-1 мембраносвязанной пептидазой транскрипционных факторов (mbtps1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к mbtps1 |
EP2515947B1 (en) | 2009-12-23 | 2021-10-06 | CuRNA, Inc. | Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2 |
RU2609631C2 (ru) | 2009-12-23 | 2017-02-02 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с фактором роста гепатоцитов (фрг), посредством ингибирования природного антисмыслового транскрипта к фрг |
KR101838305B1 (ko) | 2009-12-29 | 2018-03-13 | 큐알엔에이, 인크. | NRF1(Nuclear Respiratory Factor 1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 핵 호흡 인자 1 관련된 질환의 치료 |
CN102770540B (zh) | 2009-12-29 | 2017-06-23 | 库尔纳公司 | 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病 |
US20120289583A1 (en) | 2009-12-31 | 2012-11-15 | Curna, Inc. | Treatment of insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irs2 and transcription factor e3 (tfe3) |
CN102906264B (zh) | 2010-01-04 | 2017-08-04 | 库尔纳公司 | 通过抑制干扰素调节因子8(irf8)的天然反义转录物而治疗irf8相关疾病 |
WO2011085066A2 (en) | 2010-01-06 | 2011-07-14 | Curna, Inc. | Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene |
US9200277B2 (en) | 2010-01-11 | 2015-12-01 | Curna, Inc. | Treatment of sex hormone binding globulin (SHBG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to SHBG |
ES2671877T3 (es) | 2010-01-25 | 2018-06-11 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con la RNASA (H1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a RNASA H1 |
KR101838308B1 (ko) | 2010-02-22 | 2018-03-13 | 큐알엔에이, 인크. | 피롤린-5-카르복실레이트 환원효소 1(pycr1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 pycr1과 관련된 질환의 치료 |
WO2011106689A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of smad3 expression |
CN106074591B (zh) * | 2010-03-24 | 2020-01-14 | 菲奥医药公司 | 眼部症候中的rna干扰 |
RU2612884C2 (ru) | 2010-04-02 | 2017-03-13 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с колониестимулирующим фактором 3 (csf3), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта k csf3 |
KR101900962B1 (ko) | 2010-04-09 | 2018-09-20 | 큐알엔에이, 인크. | 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 섬유아세포 성장 인자 21 (fgf21) 관련된 질환의 치료 |
SG184860A1 (en) * | 2010-04-27 | 2012-11-29 | Agency Science Tech & Res | Eif4e binding peptides |
US9089588B2 (en) | 2010-05-03 | 2015-07-28 | Curna, Inc. | Treatment of sirtuin (SIRT) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (SIRT) |
TWI531370B (zh) | 2010-05-14 | 2016-05-01 | 可娜公司 | 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病 |
RU2620978C2 (ru) | 2010-05-26 | 2017-05-30 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с метионинсульфоксидредуктазой а (msra), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена msra |
DK2576783T3 (en) | 2010-05-26 | 2018-03-12 | Curna Inc | TREATMENT OF ATONAL HOMOLOGY 1- (ATOH1) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTS AT ATOH1 |
US8722731B2 (en) * | 2010-06-07 | 2014-05-13 | Novomedix, Llc | Furanyl compounds and the use thereof |
PL2585596T3 (pl) | 2010-06-23 | 2021-06-28 | Curna, Inc. | Leczenie chorób związanych z podjednostką alfa kanału sodowego bramkowanego napięciem (SCNA) poprzez hamowanie naturalnego transkryptu antysensownego SCNA |
CN101914536B (zh) * | 2010-07-09 | 2011-11-16 | 四川大学 | 靶向丝-苏氨酸蛋白激酶极光激酶a的锁核酸核酶与应用 |
EP2593547B1 (en) | 2010-07-14 | 2017-11-15 | CuRNA, Inc. | Treatment of discs large homolog (dlg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlg |
EP2412724A1 (en) | 2010-07-29 | 2012-02-01 | Centre National de la Recherche Scientifique (C.N.R.S) | Regulation of Glypican 4 activity to modulate the fate of stem cells and uses thereof |
US9243246B2 (en) | 2010-08-24 | 2016-01-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | Single-stranded RNAi agents containing an internal, non-nucleic acid spacer |
US8993533B2 (en) | 2010-10-06 | 2015-03-31 | Curna, Inc. | Treatment of sialidase 4 (NEU4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NEU4 |
CA2815212A1 (en) | 2010-10-22 | 2012-04-26 | Curna, Inc. | Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua |
WO2012058462A2 (en) * | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for the treatment of cancer |
WO2012068340A2 (en) | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Opko Curna Llc | Antagonat compositions and methods of use |
KR102010598B1 (ko) | 2010-11-23 | 2019-08-13 | 큐알엔에이, 인크. | Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료 |
EP3067421B1 (en) | 2011-02-08 | 2018-10-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
JP6188686B2 (ja) | 2011-06-09 | 2017-08-30 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | フラタキシン(fxn)への天然アンチセンス転写物の阻害によるfxn関連疾患の治療 |
WO2013022966A1 (en) | 2011-08-11 | 2013-02-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Linkage modified gapped oligomeric compounds and uses thereof |
EA029151B1 (ru) | 2011-09-06 | 2018-02-28 | Курна, Инк. | ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ |
CA2752008A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-13 | Universite De Montreal | Combination therapy using ribavirin as elf4e inhibitor |
CA2859581C (en) | 2011-12-16 | 2022-03-22 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental University | Chimeric double-stranded nucleic acid |
US9073960B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-07-07 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
DK2825648T3 (en) | 2012-03-15 | 2018-10-15 | Curna Inc | TREATMENT OF BRAIN-DERIVATIVE NEUROTROPHIC FACTOR (BDNF) -related DISEASES BY INHIBITATION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTION TO BDNF |
US9441007B2 (en) | 2012-03-21 | 2016-09-13 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
USRE48171E1 (en) | 2012-03-21 | 2020-08-25 | Janssen Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
EP3336189A1 (en) | 2012-04-20 | 2018-06-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
WO2014022357A1 (en) * | 2012-07-30 | 2014-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for the treatment of cancer |
US9695418B2 (en) | 2012-10-11 | 2017-07-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof |
EP2992112B1 (en) | 2013-04-22 | 2020-06-03 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Mutations in pdgfrb and notch3 as causes of autosomal dominant infantile myofibromatosis |
US20140323543A1 (en) * | 2013-04-25 | 2014-10-30 | Jeremy Richard Graff | Treatment of Prostate Cancer with eIF4E Antisense Compounds |
MX2016002044A (es) * | 2013-08-16 | 2016-08-17 | Rana Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para modular el acido ribonucleico. |
WO2015179693A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
JP2017535552A (ja) * | 2014-11-17 | 2017-11-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | アポリポタンパク質C3(APOC3)iRNA組成物およびその使用方法 |
KR102254728B1 (ko) | 2014-12-23 | 2021-05-24 | 인제대학교 산학협력단 | Clast4를 포함하는 세포 증식 억제용 조성물 |
EP3256591A4 (en) | 2015-02-13 | 2018-08-08 | Translate Bio Ma, Inc. | Hybrid oligonucleotides and uses thereof |
US10633653B2 (en) | 2015-08-14 | 2020-04-28 | University Of Massachusetts | Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery |
EP3371211A4 (en) | 2015-11-04 | 2019-08-21 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | METHOD FOR THE TREATMENT OF TUMORS AND CANCER AND IDENTIFICATION OF CANDIDATE PATIENTS FOR SUCH TREATMENT |
KR20180071362A (ko) * | 2015-11-16 | 2018-06-27 | 올릭스 주식회사 | MyD88 또는 TLR3을 타겟팅하는 RNA 복합체를 이용한 연령-관련 황반 변성의 치료 |
EP3408391A4 (en) | 2016-01-31 | 2019-08-28 | University of Massachusetts | BRANCHED OLIGONUCLEOTIDES |
WO2017189730A1 (en) | 2016-04-26 | 2017-11-02 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Treatment of hippo pathway mutant tumors and methods of identifying subjects as candidates for treatment |
CA3033368A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | University Of Massachusetts | Conjugated oligonucleotides |
JP2019532027A (ja) * | 2016-08-17 | 2019-11-07 | ソルスティス バイオロジクス,リミティッド | ポリヌクレオチド構築物 |
CN107177598B (zh) * | 2016-08-18 | 2019-12-27 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 用于抑制BIRC5靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物 |
WO2018067900A1 (en) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method of conjugating oligomeric compounds |
WO2018130582A1 (en) * | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating rel expression |
JP7406793B2 (ja) | 2017-06-23 | 2023-12-28 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | 2テイル自己デリバリー型siRNAおよび関連方法 |
CA3102779A1 (en) * | 2018-06-08 | 2019-12-12 | Locanabio, Inc. | Rna-targeting fusion protein compositions and methods for use |
CN112566640A (zh) | 2018-06-18 | 2021-03-26 | 罗切斯特大学 | 治疗精神分裂症和其他神经精神病症的方法 |
US11279930B2 (en) | 2018-08-23 | 2022-03-22 | University Of Massachusetts | O-methyl rich fully stabilized oligonucleotides |
JP7518547B2 (ja) | 2018-12-11 | 2024-07-18 | ユニバーシティー オブ ロチェスター | 統合失調症及び他の神経精神障害の治療方法 |
JP2021008453A (ja) | 2019-07-02 | 2021-01-28 | エフェクター・セラピューティクス,インコーポレーテッド | 翻訳阻害剤およびその使用 |
EP3999627A2 (en) | 2019-07-18 | 2022-05-25 | University of Rochester | Cell-type selective immunoprotection of cells |
JP2022547790A (ja) | 2019-08-09 | 2022-11-16 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | Snpを標的とする化学修飾オリゴヌクレオチド |
CN110283906A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-09-27 | 徐州医科大学 | 人类早期动脉粥样硬化检测分子标记物及其应用 |
KR102238095B1 (ko) * | 2019-09-03 | 2021-04-13 | 소바젠 주식회사 | eIF4E 저해제를 포함하는 eIF4E 활성증가와 관련된 상태의 진단 또는 치료용 조성물 |
CA3176210A1 (en) * | 2020-04-21 | 2021-10-28 | Nathan Wilson STEBBINS | Bifunctional molecules and methods of using thereof |
BR112023026862A2 (pt) | 2021-06-23 | 2024-03-05 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Compostos de oligonucleotídeos anti-flt1 otimizados para tratamento de pré-eclâmpsia e outros distúrbios angiogênicos |
CN114875065B (zh) * | 2022-05-06 | 2023-10-27 | 广东医科大学 | 一种eIF4E/c-Myc基因正反馈环自控性shRNA沉默载体的设计及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5898031A (en) * | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
JP2002509732A (ja) * | 1998-03-27 | 2002-04-02 | アフィメトリックス インコーポレイテッド | p53により調節される遺伝子 |
US20030087852A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-05-08 | Debenedetti Arrigo | Cancer gene therapy based on translational control of a suicide gene |
Family Cites Families (242)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US228597A (en) * | 1880-06-08 | Flexible band for bending wood | ||
US318440A (en) * | 1885-05-19 | Fence-lock | ||
US53519A (en) * | 1866-03-27 | Improved bed-bottom | ||
US1329502A (en) | 1914-05-26 | 1920-02-03 | First Trust & Savings Company | Ironing-machine |
US1329501A (en) | 1919-06-24 | 1920-02-03 | Franklin W Britton | Rotary router and boring mechanism |
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US4469863A (en) | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US4426330A (en) | 1981-07-20 | 1984-01-17 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US4534899A (en) | 1981-07-20 | 1985-08-13 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4476301A (en) | 1982-04-29 | 1984-10-09 | Centre National De La Recherche Scientifique | Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon |
JPS5927900A (ja) | 1982-08-09 | 1984-02-14 | Wakunaga Seiyaku Kk | 固定化オリゴヌクレオチド |
FR2540122B1 (fr) | 1983-01-27 | 1985-11-29 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application |
US4605735A (en) | 1983-02-14 | 1986-08-12 | Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha | Oligonucleotide derivatives |
US4948882A (en) | 1983-02-22 | 1990-08-14 | Syngene, Inc. | Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis |
US4824941A (en) | 1983-03-10 | 1989-04-25 | Julian Gordon | Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems |
US4587044A (en) | 1983-09-01 | 1986-05-06 | The Johns Hopkins University | Linkage of proteins to nucleic acids |
US5118800A (en) | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide |
US5118802A (en) | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside |
US5550111A (en) | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
FR2567892B1 (fr) | 1984-07-19 | 1989-02-17 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons |
DE3430108C2 (de) * | 1984-08-16 | 1987-03-12 | Dynamit Nobel Ag, 5210 Troisdorf | Verfahren zum Herstellen von geschlossenzellig verschäumten Formkörpern aus vernetzten Polyolefinen |
US5258506A (en) | 1984-10-16 | 1993-11-02 | Chiron Corporation | Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains |
US5367066A (en) | 1984-10-16 | 1994-11-22 | Chiron Corporation | Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites |
US5430136A (en) | 1984-10-16 | 1995-07-04 | Chiron Corporation | Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites |
US4828979A (en) | 1984-11-08 | 1989-05-09 | Life Technologies, Inc. | Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection |
FR2575751B1 (fr) | 1985-01-08 | 1987-04-03 | Pasteur Institut | Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques |
US5166315A (en) | 1989-12-20 | 1992-11-24 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
US5235033A (en) | 1985-03-15 | 1993-08-10 | Anti-Gene Development Group | Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof |
US5405938A (en) | 1989-12-20 | 1995-04-11 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US5185444A (en) | 1985-03-15 | 1993-02-09 | Anti-Gene Deveopment Group | Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages |
US4762779A (en) | 1985-06-13 | 1988-08-09 | Amgen Inc. | Compositions and methods for functionalizing nucleic acids |
US5317098A (en) | 1986-03-17 | 1994-05-31 | Hiroaki Shizuya | Non-radioisotope tagging of fragments |
JPS638396A (ja) | 1986-06-30 | 1988-01-14 | Wakunaga Pharmaceut Co Ltd | ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体 |
DE3788914T2 (de) | 1986-09-08 | 1994-08-25 | Ajinomoto Kk | Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere. |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US4904582A (en) | 1987-06-11 | 1990-02-27 | Synthetic Genetics | Novel amphiphilic nucleic acid conjugates |
WO1988010264A1 (en) | 1987-06-24 | 1988-12-29 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology | Nucleoside derivatives |
US5585481A (en) | 1987-09-21 | 1996-12-17 | Gen-Probe Incorporated | Linking reagents for nucleotide probes |
US4924624A (en) | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
US5188897A (en) | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
US5525465A (en) | 1987-10-28 | 1996-06-11 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same |
DE3738460A1 (de) | 1987-11-12 | 1989-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Modifizierte oligonukleotide |
ATE151467T1 (de) | 1987-11-30 | 1997-04-15 | Univ Iowa Res Found | Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene |
US5403711A (en) | 1987-11-30 | 1995-04-04 | University Of Iowa Research Foundation | Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved |
US5082830A (en) | 1988-02-26 | 1992-01-21 | Enzo Biochem, Inc. | End labeled nucleotide probe |
WO1989009221A1 (en) | 1988-03-25 | 1989-10-05 | University Of Virginia Alumni Patents Foundation | Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US5109124A (en) | 1988-06-01 | 1992-04-28 | Biogen, Inc. | Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine |
US5216141A (en) | 1988-06-06 | 1993-06-01 | Benner Steven A | Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages |
US5175273A (en) | 1988-07-01 | 1992-12-29 | Genentech, Inc. | Nucleic acid intercalating agents |
US5262536A (en) | 1988-09-15 | 1993-11-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides |
US5194599A (en) | 1988-09-23 | 1993-03-16 | Gilead Sciences, Inc. | Hydrogen phosphonodithioate compositions |
US5512439A (en) | 1988-11-21 | 1996-04-30 | Dynal As | Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof |
US5599923A (en) | 1989-03-06 | 1997-02-04 | Board Of Regents, University Of Tx | Texaphyrin metal complexes having improved functionalization |
US5457183A (en) | 1989-03-06 | 1995-10-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hydroxylated texaphyrins |
US5354844A (en) | 1989-03-16 | 1994-10-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Protein-polycation conjugates |
US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
US5391723A (en) | 1989-05-31 | 1995-02-21 | Neorx Corporation | Oligonucleotide conjugates |
US5256775A (en) | 1989-06-05 | 1993-10-26 | Gilead Sciences, Inc. | Exonuclease-resistant oligonucleotides |
US4958013A (en) | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
US5227170A (en) | 1989-06-22 | 1993-07-13 | Vestar, Inc. | Encapsulation process |
US5451463A (en) | 1989-08-28 | 1995-09-19 | Clontech Laboratories, Inc. | Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides |
US5134066A (en) | 1989-08-29 | 1992-07-28 | Monsanto Company | Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs |
US5254469A (en) | 1989-09-12 | 1993-10-19 | Eastman Kodak Company | Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures |
US5591722A (en) | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
US5527528A (en) | 1989-10-20 | 1996-06-18 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Solid-tumor treatment method |
US5356633A (en) | 1989-10-20 | 1994-10-18 | Liposome Technology, Inc. | Method of treatment of inflamed tissues |
US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5721218A (en) | 1989-10-23 | 1998-02-24 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5399676A (en) | 1989-10-23 | 1995-03-21 | Gilead Sciences | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5264564A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
EP0942000B1 (en) | 1989-10-24 | 2004-06-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-Modified oligonucleotides |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5292873A (en) | 1989-11-29 | 1994-03-08 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe |
US5177198A (en) | 1989-11-30 | 1993-01-05 | University Of N.C. At Chapel Hill | Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates |
US5130302A (en) | 1989-12-20 | 1992-07-14 | Boron Bilogicals, Inc. | Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same |
US5469854A (en) | 1989-12-22 | 1995-11-28 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods of preparing gas-filled liposomes |
US5580575A (en) | 1989-12-22 | 1996-12-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Therapeutic drug delivery systems |
US5486603A (en) | 1990-01-08 | 1996-01-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide having enhanced binding affinity |
US5506351A (en) | 1992-07-23 | 1996-04-09 | Isis Pharmaceuticals | Process for the preparation of 2'-O-alkyl guanosine and related compounds |
US5587470A (en) | 1990-01-11 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5681941A (en) | 1990-01-11 | 1997-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted purines and oligonucleotide cross-linking |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US5623065A (en) | 1990-08-13 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped 2' modified oligonucleotides |
US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5220007A (en) | 1990-02-15 | 1993-06-15 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides |
US5149797A (en) | 1990-02-15 | 1992-09-22 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides |
AU7579991A (en) | 1990-02-20 | 1991-09-18 | Gilead Sciences, Inc. | Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers |
US5214136A (en) | 1990-02-20 | 1993-05-25 | Gilead Sciences, Inc. | Anthraquinone-derivatives oligonucleotides |
US5321131A (en) | 1990-03-08 | 1994-06-14 | Hybridon, Inc. | Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
GB9009980D0 (en) | 1990-05-03 | 1990-06-27 | Amersham Int Plc | Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides |
ES2116977T3 (es) | 1990-05-11 | 1998-08-01 | Microprobe Corp | Soportes solidos para ensayos de hibridacion de acidos nucleicos y metodos para inmovilizar oligonucleotidos de modo covalente. |
US5677437A (en) | 1990-07-27 | 1997-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5218105A (en) | 1990-07-27 | 1993-06-08 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5614617A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5688941A (en) | 1990-07-27 | 1997-11-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5138045A (en) | 1990-07-27 | 1992-08-11 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
US5541307A (en) | 1990-07-27 | 1996-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
US5223618A (en) | 1990-08-13 | 1993-06-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5618704A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-08 | Isis Pharmacueticals, Inc. | Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling |
US5378825A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5610289A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogues |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5245022A (en) | 1990-08-03 | 1993-09-14 | Sterling Drug, Inc. | Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides |
ES2083593T3 (es) | 1990-08-03 | 1996-04-16 | Sterling Winthrop Inc | Compuestos y metodos para inhibir la expresion de genes. |
US5177196A (en) | 1990-08-16 | 1993-01-05 | Microprobe Corporation | Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof |
US5512667A (en) | 1990-08-28 | 1996-04-30 | Reed; Michael W. | Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides |
US5646009A (en) | 1990-09-10 | 1997-07-08 | The University Of Kentucky Research Foundation | Hybrid vector and method resulting in protein overproduction by eukaryotic cells |
US5214134A (en) | 1990-09-12 | 1993-05-25 | Sterling Winthrop Inc. | Process of linking nucleosides with a siloxane bridge |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
WO1992005186A1 (en) | 1990-09-20 | 1992-04-02 | Gilead Sciences | Modified internucleoside linkages |
US5432272A (en) | 1990-10-09 | 1995-07-11 | Benner; Steven A. | Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases |
CA2095212A1 (en) | 1990-11-08 | 1992-05-09 | Sudhir Agrawal | Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides |
US6582908B2 (en) * | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
US5672697A (en) | 1991-02-08 | 1997-09-30 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleoside 5'-methylene phosphonates |
JP3220180B2 (ja) | 1991-05-23 | 2001-10-22 | 三菱化学株式会社 | 薬剤含有タンパク質結合リポソーム |
US5719262A (en) | 1993-11-22 | 1998-02-17 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having amino acid side chains |
US5714331A (en) | 1991-05-24 | 1998-02-03 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5371241A (en) | 1991-07-19 | 1994-12-06 | Pharmacia P-L Biochemicals Inc. | Fluorescein labelled phosphoramidites |
US5571799A (en) | 1991-08-12 | 1996-11-05 | Basco, Ltd. | (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response |
US5521291A (en) | 1991-09-30 | 1996-05-28 | Boehringer Ingelheim International, Gmbh | Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells |
NZ244306A (en) | 1991-09-30 | 1995-07-26 | Boehringer Ingelheim Int | Composition for introducing nucleic acid complexes into eucaryotic cells, complex containing nucleic acid and endosomolytic agent, peptide with endosomolytic domain and nucleic acid binding domain and preparation |
ES2103918T3 (es) | 1991-10-17 | 1997-10-01 | Ciba Geigy Ag | Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios. |
US5594121A (en) | 1991-11-07 | 1997-01-14 | Gilead Sciences, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines |
TW393513B (en) | 1991-11-26 | 2000-06-11 | Isis Pharmaceuticals Inc | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines |
JP3739785B2 (ja) | 1991-11-26 | 2006-01-25 | アイシス ファーマシューティカルズ,インコーポレイティド | 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形 |
US5484908A (en) | 1991-11-26 | 1996-01-16 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines |
US5792608A (en) | 1991-12-12 | 1998-08-11 | Gilead Sciences, Inc. | Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
US5700922A (en) | 1991-12-24 | 1997-12-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules |
US5565552A (en) | 1992-01-21 | 1996-10-15 | Pharmacyclics, Inc. | Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis |
US5595726A (en) | 1992-01-21 | 1997-01-21 | Pharmacyclics, Inc. | Chromophore probe for detection of nucleic acid |
FR2687679B1 (fr) | 1992-02-05 | 1994-10-28 | Centre Nat Rech Scient | Oligothionucleotides. |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
FR2692265B1 (fr) | 1992-05-25 | 1996-11-08 | Centre Nat Rech Scient | Composes biologiquement actifs de type phosphotriesters. |
US5434257A (en) | 1992-06-01 | 1995-07-18 | Gilead Sciences, Inc. | Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages |
EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
US5272250A (en) | 1992-07-10 | 1993-12-21 | Spielvogel Bernard F | Boronated phosphoramidate compounds |
US5652355A (en) | 1992-07-23 | 1997-07-29 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
RU95104940A (ru) | 1992-07-27 | 1997-01-10 | Хайбрайдон | Способ введения в олигонуклеотид алкилфосфонотиоатной или арилфосфонотиоатной межнуклеотидной связи, способ получения олигонуклеотида, олигонуклеотиды, способ ингибирования генной экспрессии, способ лечения |
US5583020A (en) | 1992-11-24 | 1996-12-10 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Permeability enhancers for negatively charged polynucleotides |
US5574142A (en) | 1992-12-15 | 1996-11-12 | Microprobe Corporation | Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery |
JP3351476B2 (ja) | 1993-01-22 | 2002-11-25 | 三菱化学株式会社 | リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム |
JPH08508714A (ja) | 1993-01-25 | 1996-09-17 | ハイブライドン インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチド・アルキルホスホネートおよびアルキルホスホノチオエート |
US5476925A (en) | 1993-02-01 | 1995-12-19 | Northwestern University | Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups |
US5395619A (en) | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
GB9304618D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Chemical compounds |
GB9304620D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Compounds |
DK0691968T3 (da) | 1993-03-30 | 1998-02-23 | Sanofi Sa | Acykliske nukleosid-analoge og oligonukleotidsekvenser indeholdende disse |
AU6412794A (en) | 1993-03-31 | 1994-10-24 | Sterling Winthrop Inc. | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
DE4311944A1 (de) | 1993-04-10 | 1994-10-13 | Degussa | Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen |
US5462854A (en) | 1993-04-19 | 1995-10-31 | Beckman Instruments, Inc. | Inverse linkage oligonucleotides for chemical and enzymatic processes |
FR2705099B1 (fr) | 1993-05-12 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Oligonucléotides phosphorothioates triesters et procédé de préparation. |
US5534259A (en) | 1993-07-08 | 1996-07-09 | Liposome Technology, Inc. | Polymer compound and coated particle composition |
US5543158A (en) | 1993-07-23 | 1996-08-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable injectable nanoparticles |
US5417978A (en) | 1993-07-29 | 1995-05-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Liposomal antisense methyl phosphonate oligonucleotides and methods for their preparation and use |
US5502177A (en) | 1993-09-17 | 1996-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5932680A (en) * | 1993-11-16 | 1999-08-03 | Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien | Moisture-curing polyurethane hot-melt adhesive |
US5457187A (en) | 1993-12-08 | 1995-10-10 | Board Of Regents University Of Nebraska | Oligonucleotides containing 5-fluorouracil |
US5446137B1 (en) | 1993-12-09 | 1998-10-06 | Behringwerke Ag | Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides |
PT733059E (pt) | 1993-12-09 | 2001-03-30 | Univ Jefferson | Compostos e metodos para mutacoes dirigidas ao local em celulas eucarioticas |
US5595756A (en) | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
EP0679501A1 (en) * | 1994-03-14 | 1995-11-02 | YMOS AKTIENGESELLSCHAFT Industrieprodukte | Composite material with foamable core |
US5596091A (en) | 1994-03-18 | 1997-01-21 | The Regents Of The University Of California | Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides |
US5627053A (en) | 1994-03-29 | 1997-05-06 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid |
US5625050A (en) | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US5646269A (en) | 1994-04-28 | 1997-07-08 | Gilead Sciences, Inc. | Method for oligonucleotide analog synthesis |
US5525711A (en) | 1994-05-18 | 1996-06-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes |
US5575526A (en) * | 1994-05-19 | 1996-11-19 | Novamax Technologies, Inc. | Composite laminate beam for radiator support |
US5543152A (en) | 1994-06-20 | 1996-08-06 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Sphingosomes for enhanced drug delivery |
US5597696A (en) | 1994-07-18 | 1997-01-28 | Becton Dickinson And Company | Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates |
US5597909A (en) | 1994-08-25 | 1997-01-28 | Chiron Corporation | Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use |
US5580731A (en) | 1994-08-25 | 1996-12-03 | Chiron Corporation | N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith |
US5591721A (en) | 1994-10-25 | 1997-01-07 | Hybridon, Inc. | Method of down-regulating gene expression |
US5512295A (en) | 1994-11-10 | 1996-04-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Synthetic liposomes for enhanced uptake and delivery |
US5792747A (en) | 1995-01-24 | 1998-08-11 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Highly potent agonists of growth hormone releasing hormone |
US5755486A (en) * | 1995-05-23 | 1998-05-26 | Novamax Technologies Holdings, Inc. | Composite structural reinforcement member |
US5652356A (en) | 1995-08-17 | 1997-07-29 | Hybridon, Inc. | Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides |
EP0886641A2 (en) | 1996-01-16 | 1998-12-30 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis of methoxy nucleosides and enzymatic nucleic acid molecules |
WO2005121370A2 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds that facilitate risc loading |
WO2005121368A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric gapped oligomeric compositions |
ES2192672T3 (es) | 1996-11-18 | 2003-10-16 | Takeshi Imanishi | Nuevos analogos de nucleotidos. |
AU5800998A (en) | 1996-12-20 | 1998-07-17 | Emory University | Purified eukaryotic-initiation factor 4e |
US6127533A (en) | 1997-02-14 | 2000-10-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-aminooxy-modified oligonucleotides |
JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
EP1557424A1 (en) | 1997-09-12 | 2005-07-27 | Exiqon A/S | Bi-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues |
US6007992A (en) | 1997-11-10 | 1999-12-28 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
US6028183A (en) | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
DE19856255C1 (de) * | 1998-03-20 | 2000-01-20 | Moeller Plast Gmbh | Hohlprofil mit Innenversteifung |
US20030203862A1 (en) * | 1998-03-26 | 2003-10-30 | Miraglia Loren J. | Antisense modulation of MDM2 expression |
US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
US6335194B1 (en) * | 1998-09-29 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of survivin expression |
CA2296792A1 (en) | 1999-02-26 | 2000-08-26 | Genset S.A. | Expressed sequence tags and encoded human proteins |
US6131897A (en) * | 1999-03-16 | 2000-10-17 | L & L Products, Inc. | Structural reinforcements |
US5998148A (en) * | 1999-04-08 | 1999-12-07 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression |
AU2135401A (en) | 1999-12-02 | 2001-06-12 | Mcgill University | Method of modulating proapoptotic and antiapoptotic pathways in cells |
US6287860B1 (en) | 2000-01-20 | 2001-09-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibition of MEKK2 expression |
US6199940B1 (en) * | 2000-01-31 | 2001-03-13 | Sika Corporation | Tubular structural reinforcing member with thermally expansible foaming material |
WO2001096389A2 (en) | 2000-06-09 | 2001-12-20 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of colon cancer |
CA2412223A1 (en) | 2000-06-09 | 2001-12-20 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of colon cancer |
US6277640B1 (en) * | 2000-07-31 | 2001-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of Her-3 expression |
US6426220B1 (en) | 2000-10-30 | 2002-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of calreticulin expression |
WO2002044321A2 (en) * | 2000-12-01 | 2002-06-06 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
FR2826621B1 (fr) * | 2001-07-02 | 2003-09-26 | Hutchinson | Dispositif d'isolation acoustique destine a etre monte dans une piece tubulaire, en particulier d'une piece de carrosserie automobile |
JP2005504020A (ja) | 2001-07-03 | 2005-02-10 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド |
EP1470247A2 (en) | 2001-11-05 | 2004-10-27 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Novel genetic markers for leukemias |
US6846559B2 (en) * | 2002-04-01 | 2005-01-25 | L&L Products, Inc. | Activatable material |
US7077460B2 (en) * | 2002-04-30 | 2006-07-18 | L&L Products, Inc. | Reinforcement system utilizing a hollow carrier |
FR2841848B1 (fr) * | 2002-07-03 | 2005-02-11 | Joint Francais | Assemblage d'isolation acoustique destine a etre monte dans une piece tubulaire et piece tubulaire equipee de tels assemblages, en particulier piece automobile |
DK2284266T3 (da) | 2002-11-14 | 2014-01-13 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53 |
US7250496B2 (en) * | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
JP4233018B2 (ja) * | 2003-01-17 | 2009-03-04 | 本田技研工業株式会社 | 発泡体を充填した閉断面構造体の製造方法 |
US20040177580A1 (en) * | 2003-03-10 | 2004-09-16 | Innovative Construction Technologies, Inc. | Reinforced foam articles |
US7790691B2 (en) * | 2003-06-20 | 2010-09-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded compositions comprising a 3′-endo modified strand for use in gene modulation |
US7199165B2 (en) * | 2003-06-26 | 2007-04-03 | L & L Products, Inc. | Expandable material |
US7469459B2 (en) * | 2003-09-18 | 2008-12-30 | Zephyros, Inc. | System and method employing a porous container for sealing, baffling or reinforcing |
US7621373B2 (en) * | 2004-12-15 | 2009-11-24 | Sika Technology Ag | Acoustic drain |
GB0506404D0 (en) * | 2005-03-30 | 2005-05-04 | L & L Products Inc | Improvements in or relating to components |
US7494179B2 (en) * | 2005-04-26 | 2009-02-24 | Zephyros, Inc. | Member for baffling, reinforcement or sealing |
US7503620B2 (en) * | 2005-05-12 | 2009-03-17 | Zephyros, Inc. | Structural reinforcement member and method of use therefor |
DE202005008426U1 (de) | 2005-05-31 | 2005-09-15 | Ricon Sieb Und Foerdertechnik | Fördervorrichtung mit Fördertuch |
US7597382B2 (en) * | 2005-06-07 | 2009-10-06 | Zephyros, Inc. | Noise reduction member and system |
US20070149040A1 (en) * | 2005-12-23 | 2007-06-28 | L&L Products, Inc. | Electrical/pneumatic cable lockout device |
KR20140092296A (ko) | 2011-08-25 | 2014-07-23 | 디비 이큅먼트 에이에스 | 강화 측벽과 가변 길이를 구비하는 액세서리 가방 |
WO2013080784A1 (ja) | 2011-11-30 | 2013-06-06 | シャープ株式会社 | メモリ回路とその駆動方法、及び、これを用いた不揮発性記憶装置、並びに、液晶表示装置 |
US10867398B2 (en) | 2017-11-21 | 2020-12-15 | Reliance Core Consulting LLC | Methods, systems, apparatuses and devices for facilitating motion analysis in an environment |
-
2004
- 2004-09-17 EP EP10176928A patent/EP2256200A3/en not_active Withdrawn
- 2004-09-17 US US10/571,339 patent/US7425544B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-17 CN CNB2004800269169A patent/CN100558893C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-17 EP EP10176942A patent/EP2256201A3/en not_active Withdrawn
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5898031A (en) * | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US20020165189A1 (en) * | 1996-06-06 | 2002-11-07 | Crooke Stanley T. | Oligoribonucleotides and ribonucleases for cleaving RNA |
JP2002509732A (ja) * | 1998-03-27 | 2002-04-02 | アフィメトリックス インコーポレイテッド | p53により調節される遺伝子 |
US20030087852A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-05-08 | Debenedetti Arrigo | Cancer gene therapy based on translational control of a suicide gene |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6010027776, Mol. Cell. Biol., 1991, Vol.11, No.11, p.5435−5445 * |
JPN6010027778, Hepatology, Jul.2003, Vol.38, p.158−166 * |
JPN6010027781, Int. J. Biochem. Cell Biol., 1999, Vol.31, p.59−72 * |
JPN6010027782, J. Biol. Chem., 1992, Vol.267, No.16, p.11495−11499 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012509878A (ja) * | 2008-11-21 | 2012-04-26 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | ドセタキセルおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、抗腫瘍併用療法 |
JP2016526018A (ja) * | 2013-05-01 | 2016-09-01 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 共役アンチセンス化合物およびそれらの使用 |
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