HU227640B1

HU227640B1 - Kappa receptor opioid tetra peptides and pharmaceutical compositions comprising thereof

Info

Publication number: HU227640B1
Application number: HU0100626A
Authority: HU
Inventors: Jean-Louis Junien; Pierre J M Riviere; Claudio D Schteingart; Javier Sueiras Diaz; Jerzy A Trojnar; Todd W Vanderah
Original assignee: Cara Therapeutics
Priority date: 1997-12-23
Filing date: 1998-12-22
Publication date: 2011-10-28
Also published as: HUP0100626A3; ZA9811801B; WO1999032510A9; TW580502B; BR9814499A; KR100629548B1; UA68366C2; PL195842B1; CZ20002382A3; ES2247735T3; AU747806B2; RU2217437C2; JP2001526295A; EE04440B1; CN1283201A; WO1999032510A1; NO20003245L; DE69831176D1; SK9602000A3; EP1042359A1

Description

MEGADÁS ALAPJÁUL SZOLGÁLÓ VÁLTOZAT

A találmány szintetikus opioid peptidekre vonatkozik, amelyek négy amínosavat tartalmaznak és affinitást mutatnak a kapna opioid receptor iránt. Esek as opioid peptidek nagy hatású szelektív kapna receptor agonisták. Ezek közé tartoznak azok az agonisták, melyek La), nem szivárognak ba as agyba és íb) hosszantartó fájdalomcsillapító .ak.tivitá-S'öak in vivő.

A kappa opioid receptorok (KOR-ok) az agyban, gerincvelőben, és a központi és perifériális idegvégződésekben és az elsődleges érző afferensek sejtteste iben, valamint az immunsejteken vannak jelen. A KC>R-okat aktiváló molekulákat általánosságban kappa agonistáknak hívjuk,

Az agyban elhelyezkedő KOR-ok aktivációjárói kimutatták, hogy fájdalomcsillapító hatást hoznak létre.. Ez a felismerés vezetett olyan agyba behatoló, nem pepiid típusú kappa agonisták kifejlesztését célzó kísérletekhez, eredeti fájdalomcsillapítóként való alkalmazás céljából, melyek a mű opioid receptorokra (MOR-okra) ható morfinanalőgok nem kívánt mellékhatásait {székrekedés, légzésgyengüiés, depe.nd.ence és sddietionfüggoség*) nem mutatják. Ennek a vegyületosztálynak a fájdalomcsillapító hatását valamint a mű-opioid-szerű mellékhatások hiányát állatokban, és emberben ís megállapították. Azonban a szisztémás kappa agonisták kifejlesztését nem folyatták, mivel kimutatták róluk, hogy szintén specifikus mellékhatásokat, mint például fokozott vizelet-kiválasztást, szedáiást és depressziót közvetítenek az agyban lévő kappa • <

* «

receptorokon keresztül.

A szupraspinális KOR-ok mellett a periférián vagy a gerincvelőben elhelyezkedő KOR-ok szintén fa jdaloiacsíllapítást hozhatnak létre. Azonban sem a perifériás, sem. a gerincvelői KOR-okhoz nem kapcsolódnak a szisztémás kappa antagonisták mellékhatásai. Ezért feltéve, hogy lehetséges olyan kappa receptor opioid agonistákat létrehozni, melyek, nem jutnak be az agyba (a perifériás vagy gerincvelői beadást kővetően), lehetségessé válik biztonságos és eredeti fájdalomcsillapítók létrehozása.

A kappa agonisták perifériás fájdalomcsillapítást hoznak létre az enyhe és lokális gyulladás által kiváltott intesztinális valamint vastagbél hipera.lgézia (fokozott fájdaiomérzékenység) modellekben, és az. irritálható Bowel szindróma (IBS), mely fokozott zsigeri fájdalommal jár egy valószínűleg lokális gyulladáshoz kapcsolódó zsigeri túlérzékenységnek köszönhetően, szintén célpontja a perifériális kappa agonlstáknak. A gyomor-bér rendszer mellett más olyan patológiás állapotot mutató csigerek, melyek részt vesznek a primer érző aíferensek aktivedé j áfoan és/vagy érzékenyítésében (azaz lokális gyulladásban), szintén egy ilyen kappa receptor opioid megfelelő célpontjának tekinthetőek. A kappa. agonisták a neurogén gyulladást is gátolják a szomatikus szövetekben a P anyag primer érző afferensekfoői való felszabadulásának gátlásával, és az is ismert, hogy az immunrendszerre is hatnak, és elsődlegesen egy inhibitor hatást mutatnak az immnnsejtekre.

Különösen előnyösek azok a peptidek, melyek nem lépnek be az agyba, a RŐR-rai nem, de a KOR-rai szemben nagy affinitásnak.

* \·

·.} ««>> ♦ »** ««♦* » * φ * « Φ « »« χ«« «Φ» Φ

XX φφ ΦΦΦ ΜΦΦ

nagy a potenciáljuk és a hatékonyságtik,	és hosszantartó a
hatásuk in vívó. Az 5 61.0 271 szám	ú amerikai egyesült
államokbeli szabadalmi leírás négy D-izom	ar aminosav-maradókot
tartalmazó betrapeptidekrs vonatkozik,	melyek a KOR-okhoz

felsorolt kívánatos jellemzőt.

A peptidek egy olyan csoportját fedeztük fel, szelektivitást mutatnak a ROR-ral szemben, bosszant hatásúak, és nem. mutatnak jelentős agyi penetrációt.

Ezek a peptidek négy D~~izomer am	inosav szekvenciáját
tartalmazzák, melyeknek egyszeresen	vagy kétszeresen
szubsztitnáit amidből álló C-terminális	végük van. Ezek a
vegyületek. a kővetkező általános készletnek	fele: Inek mea:

H~Xaa? -Xaag-Xaa^-Xaa^-szufosztitűéit amid,

D-Tíc vagy (cikiopentil vagy tieníl)-D-A)	La, ahol A jelentése
hidrogénatom, nitrocsoport, fluor a tos;	g klőratom vagy
metílcsoport; Xaa? jelentése (A')D-Rhe, t	Hidal, D-2daI, D-Tyr
vagy D-Trp, ahol A* jelentése A vagy 3-	-as és 4-es helyzetű
klőratom; Xaa-j jelentése D-Mle, (B)D-Leu, D-	-Hie, D-Met, D-Val, u-

éhe, vagy cifclopentil-D-Ala, ahol 8 jelentése hidrogénatom va

metílcsoport a C_tt~n; Xaa^ jelentése D-Arg,	D-Har, D-nArq, D-Lys,
D-liy, D-Arg (Et:?) , O-HaríEt?!, D-Amf, D-Gmf,	_r D-Dfou, 0-örn vagy 8-

lor .

Előnyös amidók közé tartozik az	etilamid, morfoüd,
tiomorfoüd, 4-pikolii-amid, piperazid, pr<	ap í1amiά, c1k1op ropi1-

Előnyös amidók közé tartozik az	etilamid, morfoüd,
tiomorfoüd, 4-píkolii-amid, piperazid, pr<	op í 1 ami d, c 1 k 1 op rop i 1 -
amid, dietilamid és szubsztitnáit benziiami	d .

4 fcfc * X fc X« fcfcfc fcfc'fc fc** > fc fc « fc * fc

XX fcfc fcfc* W** fc*

A találmány egyik tárgyában a találmány olyan szintetikus opioíd. peptíd-amidokat vagy gyógyászatílag elfogadható sölt biztosítja, melyeknek akkora affinitása van a kappa opíoid receptorokkal szemben, ami legalább 10G^:Q~s terese a mű opioid receptorokkal szembeni affinitásának, és mely hosszantartó hatást mutat, amikor in vivő beadjuk, és mely peptídek a következő általános képletnek felelnek meg:

H-Xaa-j -Xasrj-Xaag-Xaa.j-Q, (l) mely képletben Xaai jelentése (AjD-Phe, tC_aMe)D-Phe, D-Tyr, D-Tlc vagy (ciklopentil vagy tienil)-D-Ala, ahol A jelentése hidrogénatom, nitrocsoport, fluoratom, kiöratom vagy metilesöpört; Xaa₂ jelentése (A^f)D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D~Tyr vagy D~Trp, ahol A^? jelentése A vagy 3-as és 4-as helyzetű klóratom.; Xaa^ jelentése D-Nle, (B)D-Leu, D-HIe, D-Met, D-Vai, D~ Hhe, vagy D-ci.k.Íopentil-Aia, ahol B jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport a C_a~n; Xaa₄ jelentése D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys,

D-Ily, D-ArgiEt^), D-Har ( Et^) , D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Orn vagy Dlor; és Q jelentése NHR3R2, morfolínil-, ttomért olinil-, (C)piperidlnil-, píperazinil-, 4-mono-vagy 4,4-diszubsztituált píperazinil-, vagy e-iizilcsoport, ahol R_A jelentése kis Szénatomszámú aikil-, szubsztítuált kis szénatomszámú aikil-, benzil-, szubsztítuált benzil-, amino-eiklohexii-, 2-tíazolil-, 2~pí.kolil~, 3-pikoiil-, 4-pikolíl-, egy y>~ (acílamíno)polimetilén- vagy egy poii(oxíetiíén)-csoport, és R₂jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámü alkilcsoport; és C jelentése hidrogénatom, 4-hidroxi- vagy 4-oxo-csoport.

A találmány további tárgya ezeknek a vegyületeknek az alkalmazása zsigeri fájdalmakban és hasonlónkban, húgyhólyag ♦ « » * » * Α *Φ *ΦΦ *ΦΦ #

V « β Φ * * * *♦ Φ» Φ** »»-* instabilitásban és hason!óakfean, vagy IBD-ben vagy autoimmun rendellenességekben szenvedő humán betegek kezelésére vagy nem humán emlősök hasonló kezelésére.

Az előnyös megvalósítási módok rövid ismertetés©

A peptidek meghatározására használt nevezéktant Schroeder és

Luhke adta meg (The Peptides, Aca.demic Press, (1365;], melyben a hagyományos ábrázolásnak megfelelően az ^-terminális vég a baloldalon és a C-terminálís vég a jobb oldalon található. Ahol az aminosav-maradéknak izomer formái vannak, ez az amínosav Lizomer formáját jelenti, hacsak nem azt kifejezetten másként nem jelöljük.

Ahogy fentebb jeleztük, a találmány olyan peptideket biztosit, melyek szelektívek a KOR~ra, és nem csak erős KOR affinitást mutatnak, hanem hosszantartó in vivő biosktivitást is, Ezeknek a kappa szelektív opíoid peptideknek legalább 1000szer nagyobb a kötési affinitása a KÖR-rai szemben, mint a MÓRral szemben, ahol számot vegyület legalább 10 ööO-szer nagyobb affinitást mutat, és néhány vegyület 20 ÖÖÖ-szer vagy még többször nagyobb affinitást mutat. Ezen kívül számos indikációnál fontos, hogy az ilyen nagymértékű szelektivitással együtt a kappa aqonistáknak nem szabad jelentős agyi beszivárgást mutatniuk, és egy meghosszabbodott időtartamú ín vivő fájdalomcsillapító hatással kell rendelkezniük.

Ezért a fentebb említett szelektivitás mellett az előnyben részesített vegyületek nem mutatnak jelentős agyi beszivárgást, míg alapvető aktivitásukat legalább egy órán át megőrzik, ahol a még előnyösebb vegyületek jelentősen, aktívak maradnak legalább 2 órán át, és a legelőnyösebb vegyületek ezt a jelentős aktivitást

Φ JÍ φ « φ

Φ »$· **Φ ΦΦ* χ Φ ♦ χ * X * »* ΦΦ φ*«· »**' *>

három órán óh vagy tovább ís kifejezik.

Az alábbi rövidítéseket használjuk a leírás egészében. D-NIe jelentése D-norleucín, és D-Hle ö-horao lene int képvisel. D-Har •jelentése D~homQargini.fi, és D-nArg jelentése D-norargínin, mely egy szénatommal rövidebb, mint a D-Arg. o-Nal az alanin olyan Dizoraerjét jelenti, moly naftil-csoporttal szubsztituált a βszéna tömön. Előnyösen D-~2Nal-t. alkalmazunk, azaz a naftáién a györuszerkezet 2-es helyzetű atomjához kapcsolódik; mindemellett D-lNal ís használható. A D-Cpa klór-O-Phe-t és a D-Fpa fluor-OPhe-t jelent, os a D-4Cpa-t, D~2Fpa-é, D-3-Fpa-t és a D-4Fpa-t részesítjük előnyben. D-Npa jelentése nitro-D-Phe, és D-Mpa metil-D-Phe-t jelont. D-3,4Cpa jelentése 3,4-diklór-D-Phe. D-Acp jelentése D-cáklopentíl-Ala. D—örn jelentése D-ornítin, és D-Dfeu alfa,gamma-diamino-vaj savat jelent, CML jelentése C_a-motíl~Leu, és CMP jelentése C_aMe~Pho. A D-lAmf D~4~ (NH2CH2) Phe-t jelent, és a D-Gmf D-amf(amídino}-t, mely olyan D-Phe, melyben a 4-es szénatom CH^NHC(KH·Klb-csoporttal szabsztituált. D-Tíc jelentése D-l,2,3,4-tétrabidro-ízofcínolin-3-karboxiIsav. Az Alá(Thí)-ben Thi tíenii-csoportot jelent, mely előnyösön a 2-es helyzetű szénatomon keresztül kötődik az alaninhoz, bár a 3-tÍenilcsoport is egyenértékű vele. Ily jelentése ízopropil-Lys, és ior isopropil-Orn, melyben az amínocsoport oldallánc ízopropiicsoporttal alkilezett.

A kis szénatomszámú alkilcsoport jelentése 1-8 széntóraszámú alkilcsoport, magában foglalva a cikloai ki lesoportot. is, és az

1-6 széntomszáraű alkilcsoport előnyösen ciklopropii- és cíkiobutílesöpört. Me jelentése metilesöpört, Et-é etilcsoport, Pr-é propi lesöpört, Ipr-é i zopropilesöpört, Bu-é betűcsoport, '?

* *

Pn-é ponti lesöpört és Bzl~é benzilcsoport. Cyp jelentése eikiopropilcsoport, és Cyfo jelentése cikiobut1lesöpört. Bár a kapcsolódás előnyösen az alkil lánc egyik végénél található, az. lehet bárhol a láncon, ilyen például a 3-pentilesöpört, melyre etil-propil-CsSoportként hivatkozunk. Az Ahx jelentése S-amínohexii-csoport, azaz ~ {CH?) y-NHj. A 4Acx jelentése 4-aminocikiohexil-csoport, és hEt jelentése hidroxietil-csoport, azaz -CH^CHjOH. A szübsztituált benzilcsoportok közé tartozik a 4Nbz és 4A.bz, mely jelentése 4-nitro-benzll- és 4-amino-benzi.lesoport, és Aeb jelentése 4-(2-amino-2-karboxi~stil}-benziiO 55 O jp ό X t.l· 3. Z3 d.

2-, 3- és 4-piköiii-osoport (2Pic, 3Píc és 4Pic) jelentése metilpirídin-csoport, melyeknél a kapcsolódások, a 2-, 3~ vagy 4ss helyzetű szénatomnál találhatóak. Mór jelentése morfolínilcsoport, azaz / \ ~N 0 \_/ , és Tmo jelentése tiomorfoiinii-esoport /-\

Pip jelentése píperídinilcsoport (piperidilesöpört), és 4HyP jelentése 4~h.idro-xi-piperidin-í-il-esoport és 4-oxo-píperiöin~l~ il-csoport. Ppz jelentése piperazínilesöpört. Ecp jelentése 4etíl-karbamo.ii-piperazin-1-il-oaoport; Pop jelentése 4-fenilkarbamoil-piperazin-1-il-csoport. AlkaImazhatunk kvaterner ammoniumcsoportokat, mint például 4, 4-dímetíi-piperazin-l-í.icsoportot (Bmp)~t vagy más kétszeres kis szénatomszámű *00» 000 * 0 0 *4« 0 00

CH

CH tí helyettesítéseket szintén, alkalmazhatunk.

2Tzi jelentése c-tiazolíl-csoport, azaz

Eiy jelentése s-l..izi..lcsoport, melyben az L-lizin amínocsoport oldallánca egy amidkötéssel csatlakozik a Ctermínális véghez.

Ahogy f entebb említettük, R* egy ω- (aeilamino·)poiimetiléncsoport vagy egy polí(oxietilén)-csoport, mint például Aao, Aoo, Hoh, Ghx vagy Gao lehet. Aoo jelentése 3~(aeetiiamíno)~3,6~ dioxa-okt-l-ii-csoport, azaz ~CHy3H₂“O~CH.₂CR2~G~Ch₂CH₂~NH~Ac. Aoo jelentése 8~amino~3,6-dioxa—okt~l~il-csoport, azaz -CH2CH2-OCHgCHj-O-CH.gCHa-NHg. Hoh jelentése 6- (L-hidro-orotíl-amino) -hex-1i.l-csoport, azaz - (0¾) s~NH~ (L-hirdo~orot.il) ; az L-hidroorotilsav C₄N?H₅ (Oj ₂-COOK. Ghx jelentése 6-(D-glükonil-amino) haxii-csoport, azaz ~ (1¾) §~NH~CO~ (CHOH) ₄-CH₂OH. Gao jelentése 6(D~glükonil~amino) -3, 6-díoxa-okfc-l-il-csoport, azaz -Cf^CH^-’OCHzCH₂-NH-CO (CHOH) ₄-CH₂OH.

A D-Phe-t vagy a szubsztituált D-Phe-fc részesítjük előnyben az 1—as helyzetben. A feniigyürö szubsztituált lehet a 2-es, 3as és/vagy 4-es helyzetű szénatomnál, ás általában a 2-es vagy 4-es helyzetű klórt vagy fluort tekintjük előnyösnek. Az aszénatom metilezett is lehet. Más, a D-Phe-hez hasonló ekvivalens csoportok is alkalmazhatóak, ezek közé tartozik a tienil-O-Ala, cíkiopentil-D-AIa, D-lyr és D-Tic. A 2-es helyzetű csoport előnyösen szintén D-Phe vagy szubsztituált D-Phe, ahol a ο *_y ..

φ « « φ Φ X φ ♦ * * Φ»« X *:♦.

«-*« « Φ * « «· »> φΧ·* ΦβΦ* ** szubsztitúciókat előnyösen a fanilgyűrű 4-es helyzetű szénatomján vagy a 3-as és 4-es helyzetben lévő szubsztítuensek képviselik. Alternatív lehetőségként neftil-csoportta.1 szubsztituált D-alanin alkalmazható, valamint D-Trp és D-Tyr, A

3-as helyzetet előnyösen egy D-Nle, D-Leu, D-CML, D-Hle, D-Met vagy D-Val foglalja el; mindemellett cíklopentil-D-Ala vagy D~ Phe szintén alkalmazható. A D-Arg-ot (mely dietilcsoporttai lehet szubszt .ítuálva) és a D-Orn-t (mely delte-aminocsoportján alkilezve lehet, például ízopropilcsopottai) általában előnyben részesítjük a 4-es helyzetben; mindemellett D-nArg és más ekvivalens csoportok is alkalmazhatók, igy D-Lys (mely szintén alkilezett lehet az epszilon aminccsoport j árr) és a D-Har (mely dietilcsoporttai lehet szubsztítuálva). Ezenfelül D-Gmf, D-Dbu,

D-iAmf és D-Hís is alkalmazható·.

Bár az volt várható, hogy a biológiai hatás időtartama meghosszabbodik a 4 D-izomer aminosavból siló szekvencia alkalmazásával, meglepő módon, azt találtuk, hogy a hatóidő általában egészen rövid a szubsztituálatian araidnál, és hosszú hatöidőt csak akkor kaptunk, amikor a C-terminális végen egy szubsztituált amid volt. Az egyszeri szubsztitúció etil·, metii, propiI~, cikiopropii- és pikolil-csoport valamint más egyenértékű csoport lehet, igy hidroxi-etii-, tiazollr-, aminociklohexii-.

benziΙszubsztituált benzilesöpört. Általánosságban a kis szénatomszámú alkil- vagy pikoiiiszubsztíteensoket részesítjük előnyben az egyszeresen szubsztituált amidók esetében. Az egyszeresen szubsztituált amidok helyett egy diaikíI-szubsztitúciő, például dietii-amínocsoport jelent alternatívát; mindemellett kétszeresen « «X *$·* φ * * < ♦ * , φ* *** ♦ * szubsztituált C-terminá.lis végen egy morfoiinii-, tiomorfolinilvagy piperidlnii-csoport lehet, az utóbbi szubsztituálatlan vagy

4-hidroxi- vagy 4-oxocsoporttal szubsztituált. Alkalmazhatunk egy piperazinii- vagy 4-mono- vagy 4,.4-diszubsztituált piperazinil-csopo-rtot is, mint például e-iizil-csoportot.

Megállapítottuk, hogy a kötődés általában a tetrapeptid aminosav-szekvenciá jának tulajdonsága, és előnyösen a szslekiv kappa receptor opioid peptídek akkor mutatnak kötési affinitást a kappa receptorral szemben, ha a Ej-jük körülbelül 2 nM vagy kevesebb. A hosszú hatóidé, melyről úgy gondoljuk, hegy elsődlegesen at C-terminális véghez kapcsolódó amid szerkezetének tulajdonsága, hatásosan tesztelhető a későbbiekben ismertetett fájdalomcsillapító mérövízsgálattai, és a legelőnyösebb peptídek alapvető biológiai aktivitást mutatnak két vagy három órán át, és nincs szignifikáns hatásuk az agyra.

Az opioid peptídek korábban ismertetett csoportjának előnyben részesített alcsoportja a következő képlettel rendelkezik;

H-Xaat-Xaa2~Xaá3-Xaa4-Q_< 1. ^/1 ahol Xaai jelentése D-Rhe {szubszf.ítuáiatlan vagy metilcsoporttal a C_a-n, 2-es helyzetű fluoratommai, 4-es helyzetű íinoratommal vagy 4~es helyzetű klóratommal szubsztituált) vagy {ciklopentii vagy tienil}~D~Ala; Xaa<· jelentése (A')D~?he, SINal, D-2Xal vagy D-Trp, ahol A' jelentése hidrogénatom, 4-es helyzetű fluoratom, 4-es helyzetű klóratóm, 4-nltro- vagy 3-as és 4-es helyzetű klóratom; Xaa^ jelentése D-Nle, D-Len, D-CM.L, DMet vagy D-Acp; Xaa₄ jelentése O-Arg, D-ArgCEfcs), D-Lys, D-Ily, D-har, D-HaríEt^f, D-nArg, D-Orn, D-lor, D-Dbu, D-Amf és D-Gmf; és Q jelentése Nfhlb, Mór, Tmo, Pip, i-hyP, OxP vagy Ppz, ahol Pn * Φ Φ Φ X φ $Χ *^«φ *·♦ φ ♦ ·♦ * * » φ ί

Φ«Χ Φ<Ρ* Φ^·<·' ** jelentése Me, Et, Pr, Be, hEt, Cyp, Bzl vagy 4-plkol 11 -csoport, és R-? hidrogénatom vagy Et.

A kappa opxoid peptidek egy további előnyös aiesopotja a következő képlettel rendelkezik:

H—Xaa·: —’Xaaz—Xaaj—hsa?;—Q, ( X í ahol Xaai jelentése D~Phe, D~4Fpa, D-2Epa, D-4Cpa, D-Acp vagy D-Ala(Thí; ; Xaa? jelentése D-Phe, D-4Epa, D-4Cpa, D-3, 4Cpa, Dihal, D-2bal vagy D-Trp; Xaa, jelentése D-Kle, D-Met, D-CML vagy ö~Leu; Xaa₄ jelentése D-Arg, D-Lys, D-Har, D-nArg vagy D—Orn; és Q jelentése DRiRj, Mór, Tmo, Pip, 4Hyp vagy Ppz, ahol íq jelentése Et, Pr, Bn, Cyp, hEt, Bzl vagy 4Píc és Rj jelentése hidrogénatom vagy Et.

A kappa opioíd peptidek egy további előnyös alcsoportja a következő képletű:

n—Xaa^—Xaag—Xasj·-kas ,:-0, t X } ahol Xaa_}_ jelentése D-Phe, D-4Fpa, D-zEpa, Ώ-Acp vagy D~ Aia(2Thí); Xaa₂ jelentése (A)D-Phe, D-lNal, D~2Nai vagy D-Trp, ahol A jelentése i-es helyzetű fluoratom vagy 4-es helyzetű kioratom.; Xaa^ jelentése D-hle, D~Met vagy D-Leu; Xaa,_5: jelentése D-Arg, D-Har, D-nArg, D~Lys, D-örn vagy D-Cnf; és Q jelentése HHRj, Mór, Tmo, Píp vagy Ppz, ahol Rt jelentése Et, Pr vagy Pic.

A kappa opioíd peptidek egy másik előnyös alcsoportja a következő képlettel rendelkezik:

H-Xaa4.-Xa—Xaa? — Xaa.«—Q, At^v) ahol Xaa·; jelentése D-Phe, D~4Ppa, D-zEpa vagy D-Ala(2Thi); Xaa₂ jelentése(A!D-Phe, D-lhal, D-2Nal vagy D-Trp, ahol A jelentése 3-as és 4-es helyzetű klőratom vagy 4-es helyzetű klőratom; Xa«₃ jelentése D~Rle vagy D-Leu; Xaa$ jelentése D-Axg, ·*^ ν

Φ *** *** *»

X λ * * Φ -* Φ «« $* *9* *** *

D-őrn vagy D~Gmf; és Q jelentése NHR_íf Mór, Tmo, Pop, kpz vagy N(St;_s, ahol Rí jelentése Et, Pr, Cyp, íPíc, Aeb vagy Hoh.

Megállapítottuk, hogy az opioíd peptidek előző csoportjának es alcsoportjainak meghosszabbodott in vivő fájdalomcsillapító aktivitása van a 4-es helyzetű aminosav-maradék C~ierminális végénél történt szubsztituált amid beépítősének követ kertében. Ez a bizonyos nem várt tulajdonság ezeket a peptideket különösen értékessé teszi, mivel ezek közül van, amelyik ín vívó három órán át vagy ennél is hosszabb ideig aktív marad. Azok a tetrapeptidek, melyek a fentebb említett szekvenciával rendelkeznek, de egyszerű €~terminális amidjuk van, szintén nagy szelektivitást mutatnak a KOR felé, összehasoniitva a MOR-ral;

azonban csak rövid hatóidéjnek. Teljesen érthető, hogy az ilyen epreid peptldek megnövekedett hatóidőt mutatnak, amikor úgy szintetizáljuk őket, hogy egy szubsztltuált amiddel, úgymint morfoliddal rendelkezzenek a C-terminális végen. Következetesen úgy találtuk, hogy amikor egy ietrapspfcid primer amid nagy és szelektív KOR kötést mutat, a megfelelő szubsztltuált amidók, mint például az etilamid és a mcrfolid, a szintetizálás után fájdalomcsillapító aktivitással rendelkeznek majd meghosszabbodott, órákban mért ideig, azaz legalább 1 órán át, anélkül, hogy az agyba szignifikáns mennyiségben bejutnának.

Bár az előnyben részesített aminosav-szekvencíákat az előzőekben ismertetett képletekkel bemutattuk, a peptidkémia szakterületén átlagosan képzettek számára érthető, hogy egy vagy több felsorolt aminosav-maradék konzervatív aminosav-sznfcsztitúciőkkai helyettesíthető, például egy bázikus aminossv egy * « β * 0 > Λ«* **« *Λ* * Φ < * _Λ * ., * * * χ» 4* 4<*fc •ί®^ *’ másikkal, vagy egy hidrofób aminosav egy másikkal, például D~!Ie lehet D~Lau helyett. hasonló módon a különböző aminosavmaradékok a szakterületen általánosan ismert módon módosíthatók, például a D~?he (ahogy korábban jeleztük) egy haiogénatom vagy nitrocsoport beépítésével módosítható a 3-as vagy 4-es helyzetben, vagy mindkettőben, vagy az alfa szénatom metilezhető. Az ilyen módositások úgy tekintendöek, hogy ekvivalens kappa receptor apróid pepfcideket hoznak létre..

A peptidek bármilyen megfelelő eljárással színtet.izálhatóak., mint. például kizárólag szilárd fázisú módszerekkel vagy klasszikus oldat addioiős eljárással vagy alternatív lehetőségként részleges szilárd fázisú technikákkal vagy fragmentum kondenzációs módszerekkel. Például a kizárólagos szilárd fázisú peptid szintézist (SPPS) Steward és Yoong SolídPhase Pepti.de Synthesis könyvében, 2. kiadás (Pieroe Chemical Company, Rockford, Illinois (1984) Írják le, és példákkal ismerteti a 4 105 603 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A szintézis fragmentum kondenzációs eljárására ad példát a 3 972 859 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, és egyéb alkalmas szintézisekre mutat példát a 3 842 067 és 3 8 62 925 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A klasszikus oldat addíciós szintézist részletesen ismerteti Bodanzsky és munkatársai a

Peptíde Synthesis című könyvben [2. kiadás, John Wíley & Sons,

New York, (1976)1.

A peptidek összekapcsolásos típusú kémiai szintézisében általános az aminosavhoz kapcsolt labilis oidallánc védelme, és általában az a-aminocsoport védelme is, úgy, hogy a hozzáadandó

X **«* * * * * * tf tf* $0*0 0\. tftftf tffrv. $*tf * „_Λ* *tf »$? «$$ *' egyedülálló aminosav vagy dipeptíd vagy tripeptid karboxiicsoportjánál egy addiciőt hajtőnk végre. Ezek a védőcsoportok jól ismertek a szakterületen, és a terc-batil-oxikarboníl(Boc), benziloxi-karbordl- (Z) és 9~fluorenil-metoxí-karboniicsopo^rtot (Franc) alkalmazzák előnyös a-araino-csoport védöcsoportként az SPPS ^vagy klasszikus oldat szintézisben, bár egy sor különböző más amino-védőcsoport létezik, melyek alternatív megoldásként alkalmazhatóak.

Amikor SPPS-t alkalmazunk, a C~termi.ná.lis araino-sav-gyököt egy szilárd gyantahordozóhoz, mint például O-CFb-poiisztirén hordozóhoz, O-CH₂-benzii-poliamid gyanta hordozóhoz, -NHbenzhidriX-amín (BEA) gyanta hordozóhoz, vagy -BH-pararaetilbenzhidri1-amin (MBHA) gyanta hordozóhoz kapcsoljuk. A. BHA vagy MBBA gyanták alkalmazása gyakran előnyös, mikor szufosztituálatlan amidót kívánónk létrehozni, mivel a hasítás közvetlenül a C-terminális amidot eredményezi. Amikor egy Nmetil-amidet szeretnénk kapni, az agy N-matil-SHA gyantáról állítható- elő. Egyéb egyszeresen szubsztituált arai dob szintatizálhatők W. Kornreích és munkatársai cikkében ismertetek szerint (Int. J. Peptide Protein Rés. 25, 414-420 (1985)} és a 4 7öl 499 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint. A C-termínálís végen kétszeresen szubsztituált amidokkal rendelkező peptideket előnyösen klasszikus oldat szintézissel vagy oldatban végzett fragmentum-kondenzációval állítjuk elő.

Ha már megszintetizáltuk ezeket a te trap-ept iáeket, azok könnyen tisztíthatok a rövid peptidek tisztítására szolgáid, technika állásából jói ismert módszerekkel, például reverz fázisú nagyteljesítményű folyadékkromabogréfIával (RP-HRLC), vagy más megfelelő módszerekkel. Ilyen tisztítási eljárásokat ismertetnek részletesen Rivier és munkatársai [J. Chromatography 288, 303-328 (1334)], ás C, Miller és J. Rivier sReptide

Science, Riopolymers 40, 265-317 (1996)], és a szilárd fázisú szintézist vagy hasonló szintézist követé tisztítást mutat be az

098 995 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.

Különböző vizsgálati eljárások alkalmazhatóak annak tesztelésére, hogy a tetrapeptidek nagy szelektívitásúak-e a KOR-rai szemben, erős fájdalomcsillapító bioaktívitásűak-e, hosszú Időtartamú-e az: in vivő bioaktivitás, és níncs-e agyi beszivárgás. A receptor mérőéijárások a szakterületen jól ismertek, és a közelmúltban kiónozták az egér (mKOR), patkány (rKOR), tengeri malac (gpKOR) és emberi (hKOR) KOR-okat. A gpKOR kivételével a klónozott KOR-ok nagyon hasonlóak, mindegyik körülbelül 380 amínosavat tartalmaz. A hKOR aminosavszekvenciája 93,9 %-ban homológ az rKOR-ral és 93,4 %-foan homológ az mKOR-ral. Ezzel szemben a hKOR szignifikánsan különbözik a hKOR-tói és a humán delta opioid receptortól (hDOR), mellyel csak 60,2 %-os illetőleg 59,1 %-os amínosavazonosságot mutat. A KOR-ok valamint az egyéb opioid receptorok klasszikus, hét transzmemforánon áthidaló, G~prote.inh.es kapcsolt receptorok (Gr). Ezekkel a klónozott receptorokkal könnyen lehetséges egy adott kiválasztott pepiid szűrése; például KORrai és MOR-ral szembeni szűrést hajthatunk végre abból a célból, hogy meghatározzuk a szelektivitást. A humán KOR, KOR és DÓR stabilan expresszálödik egy nippokampusz neurofolasztőmából (HN.9.10) származó egér rákos sejtvonalban, és alkalmas arra,

Ί 6 *··♦-* ♦ ♦ ♦* « » «»♦* φ φ ·*, ««.

.. ...·.....>» hogy in vítro szkrinelésben alkalmazzuk. Számos jól bevett ín vívó teszt is rendelkezésre áll, melyek általános standardokká váltak egy opioid vegyület fájdalomcsillapító aktivitásának meghatározásához. Ezek a tesztekhez általában egereket használnak, ás „farokcsapás teszt, mancsnyomási teszt, ecetsavas ingerlést teszt, farok csípés! teszt és farok merítéses teszt. Vonvoigtlander, P. F. és munkatársai (J. Pharm. Exper. Therapestics, 224, 7-12 (1983)] számos ilyen tesztet ismertetnek az opioid végyületekhez.

A kötési affinitás a iigandum és a receptor közötti kölcsönhatás erősségére vonatkozik. Az op.ioid receptorok kötési affinitásának demonstrálására a találmány szerinti peptideket kompetíciós kötési vizsgálatokat alkalmazva értékeltük. Ezeket a vizsgálatokat stabilan transzfaktált sejtvonalakban (HN.9.I0, mely egy egér híppokampusz neurobiasztőmábői származó) expresszált kiónozott honán kappa (hKOR) és mű opioid (hMOR) receptorokat használva végeztük el. Ezekben a vizsgálatokban a tesztvegyületeket (jelöletlen vagy hideg Iigandum) növekvő koncentrációban alkalmazzuk, hogy azok radioaktivan jelölt, a vizsgált receptorral szemben nagy affinítású és sselektivításü lígandumot a specifikus kötésből kiszorítsák. ^H-U-SS,593-t illetőleg ^K-DAMGO-t alkalmaztuk Ugandámként a hKOR illetőleg HMOR vizsgálatokban. Mindkét iigandum kereskedelmi forgalomban hozzáférhető (NEM-Dupont) . A DAMGO a. rry-Ala/’, MeEhe”, Gly-οΙ'Ίenk.efa.lin mozaikszava. A radioaktivan jelölt iigandumok affinitását úgy határoztuk meg, hogy az a radioligandum azon koncentrációja, mely féimaximáiis specifikus kötést (¾} eredményez: a telítési vizsgálatokban. A ~Ή~υ~69,593 Κπ-je a hKOR1 nál körülbelül 0,3 nM és a H-DAMGO Kp-je a hMOR-nál körülbelül 3,0 nH. A tesztvegyület (jelöletlen vagy hideg Ugandára) affinitását kompetíciós kötési vizsgálatokban, határoztuk meg a gátlás! állandó (K<) kiszámításával a következő képlet szerint:

mror

Ahol IC_So^::: a hideg ligandum koncentrációja, mely a radioaktivan jelölt ligandum specifikus kötődését 50%-ban meggátolja

F ~ Szabad radiokativan jelölt ligandum konoentrációja

Kp ^::: a radioaktivan jelölt ligandum telítési vizsgálatokban meghatározott affinitása

Amikor ezeket a mérési eljárásokat viszonylag kis receptor koncentrációkat tartalmazó specifikus körülmények között hajtjuk végre, a tesztvegyület .számított K—je a K_D disszociáeiós állandójának jó megközelítését adja, mely a ligandumnak azt a koncentrációját képviseli, mely a kötési helyek felének (50%; elfoglalásához szükséges. A nanomóios és szubnanomőlos nagyságrendbe eső alacsony Sj érteket úgy tekintjük, hogy egy nagy affinitásé ügandumot azonosítottunk az opioidok körében. Az előnyben részesített analógok tü~je a KOR-nál körülbelül 2 nH vagy kevesebb, mig a még előnyösebb analógok íG-je körülbelül· 1 nH vagy kevesebb. Mivel a KOR receptorok a test egészében szétoszolva találhatók, a kappa receptor opioid peptideknek lényeges hatása lesz számos perifériális hatás módosításában, és ha erősen KOR szelektívek, minimális mellékhatásuk lesz, és fiziológiailag nagyon jó gyógyszerekké válnak.

Ezeket a KOR-okat és MOH.-okát alkalmazó kötési mérőéi járásokat egyszerű végrehajtani, és könnyen, elvégezhetjük .13 a kezdetben azonosított vagy szintetizált peptidekkei, hogy meghatározzuk, vajon ezek a peptidek KOE-szelektivek~e és nagy affinitásnak-e. Ezeket a kötési vizsgálatokat számos, a szakterületen jártasak számára jói ismert mádon végrehajthatjuk, és egy ilyen általános típusú mérőeljárás részletes példáját Ismertetik Perrín M. és munkatársai [Endocrinology 118, 11711179 (1986)].

A találmányt a következő példákon keresztül ismertetjük tovább. Ereket a példákat azonban nem azért készítettük, hogy bármely módon korlátozzuk a találmány lényegét vagy a leírás végén lévő igénypontok által leirt oltalmi körét.

A H-D-Phe-D-Phe-D-hie-D-Arg-MHEt képletü pepiidet megfelelő módon, a peptidszintézís szakterületén ismert módon szintetizáljuk. Például először az (a-amino-védőcsoport)~D~Phe~ D-Phe-D-Nle-(karboxii-védőcsoport) éripeptidet klasszikus oldat kémiát alkalmazva szintetizáljuk. Például a tripeptíd ügy készíthető el, hogy a H-D-Nle-OMe-t DMF-ben oldjuk, és h-etilmorfolínt (NEM) vagy hasonlót adunk hozzá a pH beállítására. Szt az oldatot ezután, a Boe-cai védett D-Fhe-OH NEM-et tartalmazó

DME oldatával elegyítjük. Ehhez a reakoioelegyhez egy aktiváló vagy kapcsoló ágenst adunk, mint például benzotriazol-~l-í l~oxi~ tris-(dímetil-amino}-foszfőníum-hexafluor-foszfátot (EOF) vagy

N, N^f-diizopropil-karbodíimid (D1C) és M-hidroxí-bensőtriazol (HGSt) elegyet. A reakció befejeződését követően a közeget szárazra pároljuk, és a terméket ezután megfelelően tisztítjuk és üjrakristályosiéjuk. A Soc-védöcsoportot trifl.uor-ecet savval. (TEA) eltávolítjuk, és a dipeptidet DMF-ben újra feloldjuk. NEM19

et tartalmazó, DMF-ben oldott Boc-védett D-Phe oldatát adjuk hozzá. A reakciót ΒΟΡ-ot alkalmazva a fentebb leírt módon megismételjük, hogy trípeptidet hozzunk létre, melyet miután az oldatot szárazra pároltnak, tisztítunk, es újra kristályosítunk. A kapott termék a Boc-D-Phe-D-Phe-D-hie-OCH^. A metiiésztert ezután megfelelő módon szabad savvá alakítjuk, p-éldá.ul dioxán vagy DMSO és víz oldatában feloldjuk, és nátrium-hidroxídot adunk hozzá. Miután a reakció lejátszódott, elkülönítéssel, tisztítással és űjrakrístályosításssal Boc-D-Bhe-D-Phe-D-hle-OHt nyerünk, ki.

A trípeptidet NEM~et tartalmazó DMF-ben oldjuk, és DArg(Tos)~NHEt-tel reagáltakjuk, ismét ΒΟΡ-ot alkalmazva kapcsolószerként. Alternatív megoldásként kívánt esetben a tripeptld metllésztert azlddá alakíthatjuk egy 80%-os hidrazínhidrát oldattal kezelve, hogy hidrazidot hozzunk létre, melyet izolálunk, majd nátrium-nitrittei és ásványi savval kezelünk DMF-foen. Az azídot közvetlenül reagáltatjnk a D-Arg(Tos)-NHSitel trietílamint tartalmazó DMF oldatban. A reakció befejeződése után az elegyet szárazra pároljuk, majd megfelelő módon tisztítjuk, és újra kristályosítjuk. Az ^-terminális véget és a D-Arg oidallánc védelmét megszüntetjük, és újra tisztítjuk és kristályosítjuk, a kívánt tetrapeptid-etíiamídot létrehozva (1. számú peptíd).

A peptid homogenitását reverz fázisú HPuC-vel igazoljuk két eltérő mobil fázist alkalmazva; 0,1. % trifiuor-ecetsavat tartalmazó vízben lévő acetonítril gradienssel és 7-es pH-jú trietílamin-foszfát pufíerben lévő acetonltríí gradienssel, és fuzionált szilikávai, kapíiiár-eiektroforézissel is, melyhez

2,5-ös ρΗ-jú foszfát-puffért alkalmazunk. Ezekkel a módszerekkel a pepiid tisztaságát >99%-nak mérjük. Elektrospray ionizációt alkalmazó tömegspektrometriával és ion csapda (trap) analízissel

4· egy pszeudomoiekuiaris [ΜΗΓ iont mutattunk ki 603,4-es m/z-néi, mely megfelel a tetrapeptid számított 609,5-ös m/z tömegének. A pszeudomolekaláris ion fragmentáclős analízise egy olyan m/z arányú ion-sorozatot mutatott ki, mely az előállított szerkezetnél várt amlnosav-szekveneiának felel meg.

Humán KC-R-t és MOR-t kifejező sejtekkel kötési vizsgálatokat hajtunk végre, ahogy fentebb említettük. A tesztpeptid affinitását az egér hipokampusz neurohlasztőms (HE.9.10) sejtekben stabilan expresszált hROR-rai és hMOR-ral. szemben határoztuk meg hKGR-nál a ^H-U-69 593, hMOR-nál a Η-ΠΑΜ60 kompétítív helyettesítésével a már leírt módon. Legalább 3 kísérlet adatait gyűjtöttük össze, és a gátlási dísszociációs konstans (K>) értékeket (95%-cs konfidenciahatárnái) egy megfelelő program:, mint például Mnnson és Rodbard L1GAMD programmal (Anal. Biochem. 107, 220-239 (1930)1 számítottuk ki.

A klónozott KOR az 1. számú pepiidet nagy affinitással kötötte, ahogy azt a kötött radi©aktívan jelzett ligandum kompétitiv helyettesítésével meghatároztuk, és a K< értékét körülbelül 0,05 ± 0,02 nM-nak határoztuk meg. Az affinitásban maglévő különbség drámai, összehasonlítva a hasonló humán MOR-t expresszáló, stabilan transzfektált rák sejtekkel, ahol. a 1890 t 990 nM.

Tehát az 1. számú pepiid sokkal erősebben kötődik a hKOR-boz, mint a nMOR-hoz, körülbelül 38 OöG-szererősebben,

A pepiid tesztelése egér ecetsav ingerlés! vizsgálatban (ahogy később leírjuk) körülbelül 0,09 mg/kg-os ED$o értéket ad, ♦ fcfc ♦

és a peptid. három óra múlva még fájdalomcsillapító hatást fejez ki. Tehát tekinthető, hogy nagyon hosszá ideig tartó hőbb „ mint 50 %-os I az 1. számú peptid úgy hatást mutat.

Az Ά. táblázatban bemutatott H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Atg-Q általános képletű opioid peptideket szintetizáltuk, és az 1 példában leírt módon teszteltük.

&. táblázat
Sksss	δ	KOR ihiM}	& ÜOR <rsM} :	μ/'Κ	Tösaegspektr os zkópia	Wt~K0₅., jsg/kg
Szá&ítobt	Mért
2.	NHMe	ú,G6	3 620	ft'Ö V 0 ü	593, 4	595, 5	0, 14
3,	Ní-U?r	0, 09	1 640	18 000	623, 4	623, 5	0,076
4.	ÜHSu	0,19	1 210	7 200	637, 4	637, 5	0 , 30
S,	üH(Cvp;	0, IS	3 520	20 000	621,4	621, 5	0 , 04
6.	Kor	0 ; 0 6	2 510	42 000	651,4	651,4	0,014
7,	UitfcZ;	0, 11	1 000	17 000:	637,4	637,5	0,02
6.	thKfPich	0 , 14	3 040	2 6 000:	672,4	672,4	hl, 01
9,	MOhtt.	04 0	1 010	2 300	625,4	625, 5	0,03
it.	Ontó	0, OS	2 260	2 5 0 O'O	667,4	667,3	0, 067
u.	4-Hy?	0,06	3 700	62 000	665, 4	665, 4	0,0 73
12.	i?ip	0, Hí	1 ölti	7 Ott	64 9 _y 4	64 9, 5	0,67
13.	OH:2?;h;3	0, 5 9	I 3 90	2 7 00	664,3	664 _f 4	0,44
14.	hiühhl	0,14	9 90	2 000	671,4	671, 4	0,14
13.	?;:;z	0,16	9 100	37 000	650, 4	£50, 5	0,017

Úgy találtuk, hogy a 2-15, peptídek hosszá ideig tartó fájdalomcsillapító bioaktivitást. mutatnak.

3. példa * * ♦ «k *»«* «««« » ♦ ♦ **♦ ♦ *«« _ * * ♦ » S·»* »»* »»

A B. táblázatban bemutatott H-Xaaj-Xaaj-Xaay-Xaa^-O általános képletű opioid peptídsket cégszintét!záltuk, és az 1. példában leírt módon teszteltük.

*>.♦ « .»<* 4 * X

B táblázat
Szám	Xaa .·	Xaa₂	•Á3 3 7	Xaa^	Q
IS,	D-4Fpa.	D-Phe	D-Nl.e	D-Arg	NHEt
17.	D-Acp	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NHEt
18.	D-Ala (2Thi)	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NHEt
18.	D-Tyr	D-Phe	D-Nle	D-arg	Mot
20.	D-Phe	D-Trp	D-Nle	D-Arg	Mór
21.	D-Phe	D-4Npa	D-Nle	D-Arg	Mer
22.	D~ Phe	D~4Cpa	D-Nle	D-arg	Mór
23.	D-Phe	D-lNal	D-Hle	D-Arg	NH(4Pic)
24.	D-Phe	D-2Nal	D-NIe	D-Arg	OH (4Pic)
25.	D-Phe	D-Tyr	D-hie	D-Arg	OH(4 Plc)
26,	D-Phe	D- Phe	D-Leu	D-Arq	Mór
27 .	D-Phe	D- Phe	D-Val	D-Arg	Mór
23 ,	D-Phe	D-Phe	D-Aop	D-Arg	Mór
29,	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Lys	Mór
30,	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har	NHEt
31.	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har (Et₂)	NHEt
32.	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Orn	NHEt
33.	D-Phe	D-Phe	D~Nle	D-Am.f	NH(4Pie)
34 .	D-Phe	D- Phe	D-Nle	D-Dfou	NH(4Pío)
35.	D-Phe	D-Phe	D-Lea	D-Orn	Ppz
: J 6 ,	D-Phe	D-Phe	D—Phe	D-Arg	NH(4Píc)
37.	D-Phe	D-Phe	D-hle	D-rry	EH(4Pro)
38,	D-Phe	D-Phe	D-Nie	D-lor	NH (4Pro)
39.	D~ Phe	D-iMpa	D-Nie	D-nArg	Mór

* *t _Λ** ***« ***♦ ív * ’ * * ·* A

V XX A A W Φ X Α Α Α

X X ♦ Α ♦** *♦♦ t** *'* ** ίχί »*χ ,φ *

Úgy találtuk, hogy a 16-39. peptidek hős a;

fájdalomcsíilaoitó foioaktivitást mutatnak.

iöeia rartö

A C. táblázatban bemutatott H-Xaai-Xaag-Xaag-Xaa^-Q általános képletű opioid peptidekst leirt módon teszteltük.

szintetizáltuk, és az példában

		c.	táblásat			Tössaacspsk fcr.	Kötés
Saá®		Xa®2	Xaag			S	Sssátó.ico'fcfc	Mért	μ/Κ arány
40.	D-Phe	ö-Phs	0-ále		Λ .....	NH(4.Sb.2)	71 6, 4	716, 5	3 80U
γΐ ·:	D-Fhe	ít— p}*t£5:	a	a-	. lk v?v \·^ύκΛ. ű;	Í4S í4Ab;O	68 δ, 4	686, 4	12 000
4.2 a	D-Phe	Γ)- Fka	U-Ul-e		Arg	Ecp	721,4	721,5	27 660
43.	n-cmp	D-ttu	D-Nla	ii'	•Arg	NH·4Plc!	686, 4	68 o, 5	2 500
44.	O-Phe	O-Ptí:	fű — :3 Γ’··;-	f' —	•Arg	NHiAPic;	692> 4	ma u	.>dv
45.	a-rte	imm-e	0-Hle	D~	Arg	Mid 4Pici	'686, 4	6 86, 5	11 630
4 6.	O-PSk	S-Pzc	L-CMt	D-	•Orn	Uor	<52 3,4	623, 4	14 666
47.	O-Phe	D-Phe	O-t.au	D-	•Lys	NP{4Pic;	64 4,4	644,3	30 606
Λ p	[)-Phe	i-ibc	T .- \ ·»	0-	•Lys	UHPr	233 , 4	c tű c,. a	16 300
4 9 a	D'-Fhe	0“Phe	L·—L-eu	o-	Lys	b/' q y-	623,4	623,3	52 000
50.	C-'Phe	0-Phe	O-Nla	o-	Ή&27	NH(4FlCi	68 6, 4	666, 5	9 306
SÍ .	D-Phe	O-Fhs	ü-Nls	c-		Mar	5 <t	665, 5	12 660
52..	D~Fhe	0~Phe	D-Leu	D~	•Dtau	UH <4píc)	öl6, 4	61.6’ 8	52 00 0
53.	r>~ Fka	G-Phe	D-Leu	$..·*'	*űJkH1	Kor	S O S, 4	89 5,, 3	85 000
	Úgy ta	Iái tűk,	hogy	a	4 0-	53. pept.	idek hc-ss	cí. ti z. tzl	2-ig tar
fájdalomosi	1lapító	bioakt		,’ítás	t mutatna	k.
	5. péld
	M' ÍZ A	rabi	ázathan		ben	áltatott	H-D-0he-	•Xaag—X.	cí5 v X5 5
ál ta	3.1ános	képletű	oploi<	4	pept	idekét s	z int efc i zá ?	.tűk,	és 5 2

ne íahan módon

0 táblázat
Szása	Xaa_a		Xaa«	g	Ki HCR&sa)	ug MmpnEp	μ/Κ arány	Töaegspektrr, Oeeiúesí -jzSSSrC	E%> sg/kg
51	t— Phs	U-UIe	D-Arg	mnpicj	5,53	1 220	3 100	672, 4	67 2, 5
SS	U-Pha	D-Uie	D~Aiaf	Kilát	0,14	1 75 Ö	12 300	623, 4	62 9, 3	2,083
56	h-Phe	>-· Leu	ö-Orr,	KKEfc	2, 31	4 150	13 000	567,4	567,4	0, 037
57	b-Phe	D-Leu	D-O.rti	Mer	0,19	5 255	28 000	603, 4	603,3	0,026

Ögy találtuk, hogy az 54-58. peptidek hosszú ideig tartó fájdalomcsillapító bioaktivitást mutatnak.

táblázatban bemutatott H-Xaa-j.-Xaag-Xaa^-D-Arg-Q általános képlete opioíd. peptideket szintetizáltuk,. és az 1.

példában leírt módon teszteltük.

X. táblásat.
Sz	Xaa _f	Xas₃	Xaa₄	<2	Ki	Ki	μ/Κ	Zcwagspsktr.	«29- 2¾
áss					KKpsp	MStCnsO	arány	Szásüí tott bfert	ag/kg
33.	K-ALs (21:01)	MQa	O-ua:	tfor	0,25	3 360	13 000	691,3	691,1	0,052
60.	Mis (2101)	!>-3,4q»	O-tse	H8®ici	0,4	765	1 900	748, 3	746,3	0,083
61.	)>M;· ;?7b.L;		D~Leu	bbr	0,13	1 560	10 400	725, 3	725,4	0,010
62.	LVate	D~tbe	0-tls	Cx?	0,11	2 070	27 000	663, 4	663,5	0,18
£3:.	b-Matmüj	0-2tfel	!>lau	't:	0,2	3 170	16 000	707,4	707,4	0,04
64..	D-íte	D-Ete-	U-Kla	Π·ρ	0,21	7 680	37 000	6 7'6 , 4	6?6,3	0,032
63.	i>- 4 Has	EMCtoa	b-Ina	Kbr	0,17	1 000	11 000	703,4	703,4	0,15

Úgy találtuk, hogy a 59-65. peptidek hosszú ideig tartó f á j daIomo s i11api tó bΪo a k t i v i t á at műt a tna k.

Az fluoratom táblázatban bemutatott H-Xaai-Xaaj-Xaa^-Xaai-Q . Λ, «»·, ♦». Σ»ν.

<’ Χ.> ♦.‘.χ· általános képletű opioid peptidsket megszintetizál tűk, és az 1. példában leirt módon teszteltük.

F. táblázat,
Szám	X&&1	Xaa₂	Xaa₃		Q
66.	D~4Cpa	D-iCpa	D-Leu	D-Lys	hHPr
67.	D-4Fpa	D~2Mai	D-Met	D-Aaf	MHBu
68.	D~4Cpa	D-Trp	D-Acp	D-Amf	Pip
69.	D-Phe	D-Phe	D-Vai	D-Orn	Lep
70.	D-Ala(2Thi)	D-4Fpa	D~N.le	D-Dbu	NH(4Abz}
71.	D-Acp	D-Phe	D-Leu	D-Har	4-HyP
72.	D-CMP	D-Trp	D-Phe	D-Arg {Et.2)	NHSzl
73.	D~4Cpa	D-3,4Cpa	D-Met	D-Orn	Tmo
74.	D-Acp?	D-lMal	D-Nie	D-Har(Eta)	MH(3Pic)
75.	D~4Fpa	D-4Cpa	D-Leu	D-Gmf	HHhEt
76.	D-CMP	D-Tyr	D-Acp	D-Dbu	DHIpr
77.	D-Phe	D-2Nal	D-Acp	D-Ily	HHPn
78.	D-Tic	D-4 Fpa	D-Phe	D-Lys	NH(4Piu)
79.	D~4Npa	D-Trp	D-CML	D-lor	N(Et}₂
80.	D-CMP	D-Phe	D-Met	D- lor	Mer
81.	D-sia(3Thi)	D-ldai	D-NXe	D-Lys	NH(2Tzl)
82.	D~Fbe	D-4Npa	D-Nle	D-Arg	NHCyp
83.	D-Aop	D-2Nai	D-Hle	D-Har	DHCyb
84.	D-Tyr	D-2Sal	D-Phe	D-Lys	ppz
85.	D-Phe	D-lhai	D-Met	D-lor	OxP
86.	D-Phe	D-Trp	D-Mét	D-Arg	Dmp
87.	D-Phe	D-Trp	D-hle	D-Orn	Mór

Úgy találtuk, hogy sz F. táblázat peptidiei nagy *»»» ►»<.» * \ .’t »♦ ♦- »w'w-‘*.· szelektivitást mutatnak a KOR-ral szemben a MOR-boz képest, és ín vivő fájdalomesillapítő bioaktivitást fejeznek ki.

8, példa: A G. táblázatban bemutatott H-Xaaj-Xaar-Xaag-Xaa.^-O általános képletű opioid pepiidekét szintetizáltuk, és az 1. példában leirt módon teszteltük.

\| j G, táblásat.	p/k arány	i WT~ ®sö \| wAv ΐ
S’jsSxS	JCsíS’.		Xasu		2
88,	ί ί D-48p«	O-POe	t-M.le	O-Arg	kHÍÍPl.O;	16 000	0, 04
89.	D-3Fpa	n-phö	0-Rte	O-Arp	NH(4Pic)	24 000	O_; 11
90.	S-2Fps	O-Fbe		O-Arg	kH í4Pic)	38 OGÖ	0, 1 4
91 .	S~4Fpa	t-Fhe	t-Sie	D-Har	MHí4Pic)
92.	D-4Cpa	o-Ehe	0-Mi e	E—Arg	ME(4Pie;	2 900
93.	t-4Ppa	,D-4Npa	O-Mie	S-Arg	NH{4Pic)	1 200
94 .	il-Phe	0- PPe	O- Mié	O-Arg	Elv	70 00©	0,02
95.	D Pfo®	D- Phe	O-kle	D-ixAx’g	kit; 4 Pl c;	IS 000'	0,009
96.	D-- PPe	D~ PPe	0-0 le	D-Ax'g	Pop	12 OöO	0,098
37,.	D-- P:Pe	D- Pb 8	D-kle	D-Ax'g	kf-j (4Acxj	S 400
98,.	D- PPe	D-PPe	D-öeu	D-Οχτ·	k9CA~b)	24 000	0,014
99,	D-Aíaí2TPi}	Γ,—-3,40pa	ö-tea	D-Orxi	NOX'	10 OOP	0,08.3
ISO.	D-AIa Í2TP10	D-2Ka 1	O-tea	D-Orn	kor	31 00(1	0,07 9
101 .	A-Ala Í2TP13	0-4Cpa	0-tea	,0~Qrn	Mór	36 Óit-;	0, 112
102.	b-Al.a {2Thí ·	O-4Cpa	O-tea	ö-Orn	kH(4Pic5	24 000	0,032
103.	D~Phe	O- Phe	0-kle	ü~Arg	kPiaanl	>40 000	0,101
104 .	D-PPs	O-Phe	0-0 le	D-Arg	k3(Aoo)	0 300'
105.	t - PPe	D-Pbe	ö-kle	D-Arg	kiRHnb}	SO 000	0,010
100.	O~PPe	t-Phe	D-kle	D~Ax;«	kpíenzí	10 000^:	0,050
107 .	0 PO ci	D-Fbe	o- kb?	O-Arg	kH·G0z;	22 000	0, 032

.08.	n-Phe	1D-?he	kW?	le		L_Sao\| 1	........1 67 OÖÖ ί
							!

* X « X 0 0 0 Φ 0 » · * * 0 0 • « 0 0 0 0* 00 0 .0 0 ügy találtuk, hogy a 88-108. számú peptidek hosszú Ideig tartő· fá jdalomcsi.il api tő bioaktivitást mutatnak.

9. példa

Az A-G. táblázatokban azonosítható, kiválasztott peptideket a továbbiakban.

in vivő tesztelésnek vetettük sí a e z én tulajdonságok a hatóidejének meghatározására, és az eredményekről a H. táblázatban számolunk be. A korábbi táblázatokban található megfelelő peptiászámokat és a u/K arányszámokat egyszerűen átvettük a hivatkozás céljából. Az in vivő teszelést egy egér vonaglási tesztet (WT) alkalmazva hajtjuk végre, mely igen alkalmas arra, hogy a fájdalomcsillapító biológiai aktivitás időtartamát meghatározzuk. Ezt a tesztet, részletesen leírja G. A. Bectley és munkatársai cikke [BR. J. Pharmac. 73, 325-332 (1981)], és tudatuknál lévő him 1CR egereket használunk hozzá, melyet

Harlant.ól szereztünk be, és 20-30 gramm töxaegűek. Az egereket a teszt megkezdése előtt 12-16 órára elzárjuk. A megfigyelendő fájdalomra adott magatartást, azaz az vonaglást hígított ecetsav intraperitoneélis (í.p.) beadásával váltjuk ki. Testtömeg kilogrammonként 10 milliliter 0,6 %-os vizes ecetsav oldatot alkalmazunk. Az első lépésben a vegyületeket 3-4 növekvő dózisban, egyetlen kezelés előtti időpontban intravénásán beadva vizsgáljuk (5 perccel az eoetsav injekció előtt) .. Ezt a lépést arra használjuk fel, hogy meghatározzuk a potenciált (s%T- ED-cg), valamint egy szufomaximálisan hatékony dózist (körülbelül 80-90 %-os fájdalomcsillapítás). Második lépésben ezt a szufomaximálisan hatékony dózist mindegyik specifikus peptidnél

9

ΦΦ «Χ«Φ ΦΦ > Φ * φ X « tr * * * Φ ♦ φ » * χ « «

Φ * X » A « Α

ΦΦ Α· ♦»·♦: χφΦ φα különböző előkezelési időben adjuk be (azaz -5. percben, -90. percben, -1.20. percben és -ISO, percben) az ecetsav beadása előtt azért, hogy meghatározzuk a hatóidőt. A tesztben végig egy kontroli egércsoportot alkalmazunk, melyeknek csak a hordozót adjuk be a vizsgálandó peptidek nélkül, a vonaglások számát egy 15 perces időszakon át mértük, kezdve az ecetsav injekció beadásával, és a bioaktivitást, azaz a fájdalomcsillapítást százalékosan fejezzük kí, és a következőképpen számoljuk ki:

IOüx(vonaglás a kontroll csop,~ban - vonagiás a kezelt cs.-ban) vonagiás a kontroll, csoportban.

Mivel mindegyik szubmax.imálís dózis nagyon hasonló módon változik, így közvetlenül nem hasonlítható össze, az erdmenyeket matematikailag normáliséijuk a szakterületen ismert módon, hogy összehasonlítható értékeket kapjunk, melyeket a H. táblázatban mutatunk be, A H. táblázatban az 1, 2, 3 óra után megmaradt fájdalomcsillapító aktivitást a -5. percben talált aktivitás százalékaként fejezzük ki. A 100 %-nái nagyobb értékek a kísérlet megkezdésekor mértnél nagyobb fájdalomcsillapításé jeleznek. Ögy tűnik, hogy az opioíd pepiidnek legalább 25%-kai keli csökkentenie a vonagiást 1 óra múlva ahhoz, hogy hosszú in vívó hatásúnak tekinthessük.

Ezt a tesztet, amellett hogy a fájdaiomcslilapitő aktivitás időtartamának meghatározására használjuk, arra is alkalmaztuk, hogy mérjük a pepiid ín vivő (rövid idejű) biopotencíáiját. Ezt az értéket a WT-EDxo fejléc alatt a táblázatban milligramm per kg testtömegben adjuk meg. Az érték annak a dózisnak a mértéke, mely a tesztelt egérben a vonaglások számának 50%-os csökkenéséhez (egy kontroll egérrel összehasonlítva) szükséges φ Μ φ φ ♦ φ

Φ »Χ *»:♦ «*♦ φ.φφ * * Φ X φ * φ *Φ ΦΦ ΦΦ» φφφ φ.φ egy 15 perces időtartam után..

B. táblázat
Fapfeid	p/k	WT~ SD 5 0	% fájdalomcsillapítás
száma	arány	mg/kg	1 óra	2 óra	3 óra
1	38 000	0, 09	33, 9	75, 5	61,3
2	60 000	0, 14	70,5	29,8
3	18 000	0,078	48,6	39,8
4	7 200	0,3	49,3
5	20 000	0,04	66,0	34,5
6	42 000	0,014	105,7	52, 7
7	17 000	0, 02	67,5	36, 8
8	26 000	0,01	66, 9	45,1
9	2 500	0, 03	72,5	3 9,5
10	25 000	0,17	81,6	47,5
11	62 000	0,07	61,8	36,9
12	7 000	0,07	60,6	5 3, 6
13	2 7 00	0,44	80,7
14	2 000	0,14	36, 0
15	57 00ö	0, 017	60,0
42	27 000	0,06	45,3	2 9, 4
43	2 500	0,2
44	8 300	0,2
4 6	14 000	0,083
47	30 000	0,09
4 8	18 000	0,065	53,7
4 9	92 000	0,02	65, 5	69,2	38,3

* 0 4 4

4* * «λ» 4 « ** « 4« 4 k 4> » Κ·% * 0 ί X «· Λ

Α 4 0 .» * S44- 4 # >

50	9 300	0, 077	35,6
51	12 000	0,018	32,5
52	92 000	0, 019	30,6
53	85 000	0, 026	4 7,7	32,6
56	13 000	0, 057	7 7,4	59,3
57	28 000	Q, 026	100	67,2	58,2
58	6 500	0,04	93,4	4 5,7
59	13 000	0,052	83,3	59,7
60	1 900	0,083	83,8	35,5
61	10 400	0, 019	57,5	60,3
62	27 000	0,18	38
63	16 000	0 jr 0 4	51,8	3 6,1
64	37 000	0,032	74,7
65	11 000	0,031	39, 5
88	16 0 0 0	0,04	56, 6	28,9
94	7 0 000	0,02	58,8
95	16 000	0,08	45,8
96	12 000	0,098	56,7
98	24 000	0,014	85,5	4 0,8
99	19 000	0,083	50,3	69,3
100	31 000	0,07 9	82,8	27,6
101	38 000	0,112	89,9	45,6
102	24 000	0,032	63, 9
103	140 000	0,101	37,1.
105	6 6 0 0 0	0,015	4 8,2
106	0, 055	46, 7
107	22 000	0,032	29, 0

•ΦΦ Χφ-Φ»

108

67 000

0,034

84, 3

32,9

Az opioid peptídek fájdalomcsillapító szerként és más a KOR rendszerhez kapcsolódó patológiák kezelésére szolgáló gyógyászati alkalmazásokra használhatók fel. Ezek előnyösek a μ agonista fájdalomcsillapítókkal, például morfinnal szemben, melyek nemkívánatos mellékhatásokat, mint például székrekedést, légzési gyengülést és viszketést okoznak. Nagyon előnyös, hogy ezek az opíoid peptídek szignifikánsan nem hatolnak keresztül a vér/agy gáton, meggátolva az ebből adódó potenciális mellékhatásokat. Ezeknek a vegyületeknek a biztonságosságát az agyi penetráció szempontjáből ágy mérjük, hogy összehasonlítjuk azt a képességüket, hogy megszüntetik a perifériás hatásokat, azzal, hogy képesek-e megszüntetni a központi idegrendszeri hatásokat. A perifériális hatásokat egér vonaglási tesztet (WT) alkalmazva mérjük a korábban leírt módon. Az agyban elhelyezkedő kappa receptorok hatása miatti központi hatásokat egér farokcsapási tesztet (TF) alkalmazva határozzuk meg.

A farokcsapási teszt az akut szomatikus fájdalom mérő-eljárása, melyet arra terveztek, hogy a központi idegrendszerre ható analgetíkumok potenciálját és hatóidéjét mérjék. A farok forró vízbe (52°C) merítésével indukált fájdalom egy gyors farokkihúzást eredményez, mely farokcspásként is ismert. Várható, hogy a központi idegrendszerre ható fájdalomcsillapító vegyületek dózisfüggő módon megnövelik a farok-kihúzás látenciáját. A teszteljárást Wanderah, T. W. és munkatársai Írták le ?J. Pharm. Exper. Therapeutics, 262, 190197 (1992)5.

A biztonságosságot egy Agy Penetrációs index (BPI)

Φ* « « φ χ ΦΦ Φ * » κ * φ « φ φ • * « »* «φφ ΦΦΦ

Φ X Φ ♦ Φ segítségével mérjük, melyet a következőképpen határozunk meg.

BPT^::: TF-EDso / W-ED'so , ahol az £D$o értékek azok a dózisok, melyek félmaximális hatást hoznak létre az egervonaglási tesztben (WT-EDjm), illetőleg az egér íarokcsapásl tesztben {TF~.ED-_S0), amikor azt intravénásán adjuk be. Egy magas BPI érték alacsony agyi penetrációt jelez., és azt mutatja, hogy a vegyulet valószínűleg egy széles biztonsági határt fejez ki (agyi mellékhatások hiánya), amikor a bejelentésben leírt célokra alkalmazzuk. Az előnyös opioíd peptidek löö vagy magasabb értékű PPX-vel rendelkeznek, előnyösebben 300-nél magasabb Bal-vei rendelkeznek. A szisztémás nem peptíd típusú kappa agonisták (például az Enadolín és az U-69 593) 5-nél kisebb BPI értékűek, mely azt jelzi, hogy jelentős agyi penetráció fordul elő, mint ahogy azt a klinikai alkalmazásnál létrejött mellékhatások (díurézís, nehéz légzés, lenyugvás) bizonyítják. Néhány reprezentatív opioid pepiid BPI értékét a következő X.

táblázatban tatjuk be

J.. táblázat.

φ φ » fc *κ »*:«« **'♦* Φφ

* κ mérőéijárásokban is felhasználhatóak a receptorok vizsgálatára, és annak meghatározáséra, hogy melyik receptorok lehetnek jelen egy adott szövetmintában. Tehát. ebből a szempontból.

felhasználhatóak diagnózis céljára és potenciálisan felhasználhatóak in vivő diagnózisra is.

Általánosságban ezek az opioid peptídek felhasználhatók fájdalomcsillapításra a zsigeri fájdalmak kezelésében és a rheumatoid arthrítisz kezelésére is. Különösen hasznosak az hasi műtétek utáni tünetek, így az emésztési rendelienesséeek és fájdalom kezelésében. Hatásosnak tartjuk az IBS, húgyhólyag instabilitás, inkontinenoia és más olyan indikációk kezelésére, ahol a helyi gyulladás fájdalmi állapotokat eredményez a bélben vagy más csigerben, például gyulladásos bél betegség (IBD) és menstruációs fájdalmak kezelésére. Az opioid peptideknek az a képessége, hogy csökkentik az immunválaszt, előnyős lehet az IBD és más indikációk, mint például autoimmun betegségek elleni küzdelemben.

« * 0 « « « » ♦ ♦ »♦« «χχ « 0 » « « X « ♦ ♦ *Χ >Λ-ί .*0 0 «»

A peptidek beadását alkalmazhatjuk lokális fájdalomcsillapító hatás létrehozására, akut és krónikus gyulladásos állapotoknál ís. Alkalmazható bélelzárödás kezelésére, melyre olyan tünetek jellemzőek, mint a felfúvódás, hányinger vagy a bél fájdalommal járó tápiálékszállítási. gátlásai, például alkalmazható- a valószínűleg a görcsös összehúzódások által okozott bélelzáródásnál. Az opioíd peptidek szintén hatásosak perifériás fájdalomcsillapítás létrehozására, és az operáció utáni fájdalom valamint a krónikus fájdalom enyhítésére, mint például a gyomorból rendszer és zsigeri szövetek által okozott fájdalmak enyhítésére, és enyhülést nyújt a kábítószer-elvonás alatt. A találmány .szerinti vegyületek gyógyászatilag elfogadható formában, nem toxikus sók, mint például savaddíelős sók formájában adhatók be, ahogy az a szakterületen jól ismert.

Ilyen savaddleiós sók szemléltetésképpen a hidroklorid,

h.ldrobromid, szulfát, foszfát, nitrát, oxaiát, fumarát, glükonát, tannát, pamoát, maisát, aeetát, cifrát, bensőét, szukcínát, algínát, maiét, aszkorbát, tartanát, és hasonlóak. Ha a hatóanyagot tabletta formájában adjuk be, a tabletta egy gyógyászatilag elfogadható nemtoxikus oldószert tartalmazhat, Ide tartozik egy kötőanyag, mint. például tragantmézga, kukoricakemény!tő vagy zselatin. Tzotőníás só-oldatban, foszfát pufferben, manóit- vagy glükóz-oldatban történő intravénás beadás is végrehajtható.

A gyógyászati készítmények általában a pepiid egy hatásos mennyiségét tartalmazzák egy hagyományos gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy oldószerrel együtt. Általában a készítmény egy fájdalomcsillapító mennyiséget tartalmaz, azaz

3 * »· >·> , ·. χ ,.

» Φ * Χ· V φ * ΦΦ Φ*Χ ί,Χλ X#

Φ Φ ,- ν >. ν <

·*ν »*.·· «( ·· V egy olyan, mennyiséget, mely hatásos a fájdalom meggátlására. Általában a dózis körülbelül a peptíd 1-10 mikrogrammgálq terjed a beteg testtömeg kilöcrammjaíra nézve, intravénás beadáskor. A készítmény szükség szerint adható be; például 3-6 órás időtartamonként megismételve is beadható. Ezeknek a vegyülsteknek a természete valószínűleg lehetővé teszi a hatékony orális beadást; viszont az orális dózisok nagyobbak lehetnek. Ha azt kívánjuk elérni, hogy az opíoid pepiidet meghosszabbodott időtartam, alatt juttassuk be, például egy beadással egy héten át vagy tovább, lassú felszabadulásé, depó vagy ínpl.antátum dőzisformákat alkalmazhatunk, Például egy alkalmas lassú kibocsátású injekciós depó-készítmény a pepiidet vagy sóját egy lassan lebomlő, nem toxikus vagy nem antigén polimerbe diszpergálva vagy kapszulázva tartalmazhatja, mint például egy politejsav/poliglikolsav polimerben, ahogy a 3 773 919 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban leírták. Az is ismert, hogy lassú felszabadulásé beadás hajtható végre egy szilikon ímplantátumon keresztül.

Ezeket a vegyüieteket az emlősöknek, ide értve az embereket is, intravénásán, szubkután, intramaszkulárisan, perRután, íniranazálisan, intrapuimonárísan, orálisan, topíkáiisan, íntrarektálísan, intravagínálísan, vagy a gerincvelőbe adagolva adhatjuk be, hogy fájdalomcsillapítást érjünk, el, például azért hogy megfordítsuk a gasztrointesztinális szállítás gátlását, melyet perítoneális irritá-ció vált ki. Arra is alkalmazhatók, hogy a műtét utáni fájdalmat enyhítsük, A hatásos dózisok, a beadás módjától és az adott kezelendő emlős fajától függően változnak. Egy jellemző dózísforma például egy olyan pepiidet tartalmazó bakteriosztatikus vizes oldat, mely 3-8-as pH~jű, körülbelül €-os pH-jü, mely oldatot parenterálisan adjuk be, 'körülbelül 0,3 ng--3 mg/test tömeg kg dózist biztosítva naponta. Úgy véljük, hogy ezek a vegyületek in vivő jói tolerálhatok, és különösen alkalmasnak tartjuk. szubkután .injekcióval való beadásra egy bakteriosztatikus vizes oldatban vagy hasonlóban.

Bér a találmányt az előnyös megvalósítási módok alapján ismertettük, érthető, hogy a ezen a szakterületen szokásos jártassággal rendelkezők számára nyilvánvaló, hogy változtatások és módosítások tehetők anélkül, hogy a találmány csatolt igénypontokban ismertetett oltalmi körétől eltérnének, Például más olyan szubsztitúciók alkalmazhatók a találmány szerinti peptidekben, melyek a peptídek hatékonyságát szignifikánsan nem csökkentik. Más szubsztituált D~Phe gyökök, mint például 4-Sr-DPhe vagy 2, 4-díklór-Ö-Phe -alkalmazható a 2~es helyzetben. A DLys{Bu>-t és a Ü-LysCEt^) mindegyikét ekvivalensnek tekintjük a D-Ily-vei és a D-Arg{Etj;-vei. Kívánt esetben a tetrapeptid N~ terminális vége átmet idézhető, ahogy az a szakterületen ismert. Díamino-vegyületek alkalmazhatóak linkenként két tetrapeptid amid dimerjelnek létrehozására. Sikeresen alkalmazott linkerek közé tartozik az 1,€~diamino-hesán, 1,5-diamino-oxa—pentán és 1,8~diamino-3,ü-díoxa-oktán. A kapott dimereket ekvivalensnek tekintjük a megfelelő monomerekkel.

««tv ?Ö.634/ΡΑ FG10Ο52S 2006. április

V « » *«« ··*·.» «« »»«#

Rövidítések jegyzéke

j Rövidítés	Jelentés
;D-Phe	D-fenil-alanin
D-Tyr	D-ti.ro zin
D-Tíc	D-l,2,3,«~t&trahidro-izokinolin-3-karboxílsav
D-Ala	D-alanín
D-ldal	D-alanín, amelyben a naftilcsoport a gyűrű 1-helyzetével kapcsolódik a béta-szénatomhoz
D~2NaI	D-aianin, amelyben a naftilesöpört a gyűrű 2-helyzetével kapcsolódik a béta-szénatomhoz
D-Trp	D-tríptofán
D-die	D-norlenein
D~beu	D-lesein
D—Hle	; D-homo l ene in
D-Met	D-metionin
S-Val	D-valin
D-Arg	D—arginin
D-Har	D-homoarginin
D-nArg	D-norarginin
D-Lys	D~lizin
D-Jiy	izopropil-B-lizin
D-Arg (Et?;	dietil-D-arginin
D-Har (Et? Ϊ	dietil-D-homoargínin
D-Amf	D- (NH?CH?)-fenilaianin
D-Gmf	D- (CH₂KHC (NH)ΝΉ?1 -fenilaianin
D-Dbu	alfa,gamma-diami no-vajsav
D~Orn	D-ornitin
D-Ior	r zopropi 1-D-orni fin.
Aeb	4~(2~amino-2~karboxi-etil)-benzil
Ppz	piperazinil
C“teeti 1	az amínosav a szénatomjához kapcsolódó .Betűcsoport
(ej piperidil	H, 4-hidroxi- vagy i-oxo-piperídil-cscport

70.634/PA. 3030062 6 2006. április

Claims

1. Szintetikus opioid peptid-amid vagy gyógyászatilag elfogadható sója, mely a kappa opioid receptorokkal szembeni affinitása legalább 1000-szer nagyobb, mint a mü opioid receptorokkal szembeni affinitása, és mely hosszantartó hatást fejt ki in vivő beadva, mely pepiid

H-Xaai“Xaa2“X.aa3-Xaa4-Q' (1) általános képletü, mely képletben

Xaa.i jelentése D-fenil-alanin, metál-D~fenil-alanin, nitro-D- f e n i 1 - a 1 a n i n, fluor - D -fen i 1 - a 1 a n i n, k 16 r - D~ f e n i 1 - a 1 a n i n, (CTtetil)-D-fenil-alanin, D-tirozin, D-l,2,3,i-tetrahidrcizokinolin-á-ks.rbonssv, ciklopentil-D-alanin vagy tienil-D-alanin,

Xaas jelentése D-feníl-alanin, metil-D-fenil-aianin, nitro-D-f enil-alanin., fluor-D-fenil-alanin, kiór-D-fenil-alanin, 3,4-diklór-D-fenil-alanín, naftiIcsoporttai helyettesített D-aianin, amelyben a naftalcsoport a gyűrű 1- vagy ^-helyzetével kapcsolódik a béta-szénatomhoz, D-tirozin vagy D-triptofan;

Xaa-j jelentése D-ncrleuein, D-ieucin, (C^ametil;-D-leucin, D-homo! evein, D-met ionin, D-valin, D-f enü-alanin vagy eiklopont i1-D-a1a η í n;

Xaa,< jelentése D-arginin, D-homoarginin, D-norarginin, D-lízin, izopropil-D-lizín, dieti1-0-arolnin, dietíX-D~homo~arginin, D-/NH₂CH₂/~fenil-alanin, D-/CH₂NHC (NK; NH₂/-íenil-aianín_f alfa,gamma-diamino-vajsav, O-ornitin vagy izopropii-D-crnitin; és

Q jelentése NRíRj, morfolínil-, ticmorfo-iiníl-, piperidiníl-,

4-hidroxi-piperidin.il-, 4-oxo-piperidinil-, piperaz.ini.l-, 4-mono~ ?G·. öM/PA/OKj svi ji ♦·»·* »*» « X «

7Ö. 634 /FA Föl ¢)0 62 δ 200ö. április

Φ > »·♦ » **'*·* vagy 4,4-diszubszfiiuált piperazíni1- vagy e-lizilcsoport, ahol Rí jelentése 1-6 szénatomos alkil-, szubsztitnáit 1-6 szénatomos alkil-, benzii-, szubsztitnáit benzii-, amino-ciklohexil-, 2-tíazolíl-, 2-pikolil-, 3-pikoíiI-, 4-píkoIíi-csoport, egy ω~(aciiamino)poiimetilén- vagy egy poii(oxietilén)-csoport, ahol az alkil-, benzii- vagy piperazinil-csoport helyettesítőíe OH, Cl, F, 3r, I, amlno-, karbamoil-, feni 1-aianinil-, karboxí-/l-4 szénatomosZ-alkii, aoetíΙ-amino-, glukonil-amino vagy 1-4 szénatomos alkílcsoport és

Rj. jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkílcsoport.

2. Az 1. igénypont szerinti szintetikus pepiid, amelyben Xaa^ jelentése D-feníl-alanin,

Xaaj jelentése D-leucin vagy D-norlentin,

Xaa,₃, jelentése D-arginin vagy D-ornitin Q jelentése HnRi csoport és

R, jelentése etil.-, propil-, butil-, ciklopropil- vagy ciklobutii-osoport.

3. Az 1. igénypont szerinti szintetikus peptid, amelyben

Q jelentése morfolinil-, tiomorfoiinil- vagy hH-Zé-píkolil/-csoport.

4. Az 1. igénypont szerinti szintetikus peptid, amelyben Q jelentése: dietí1-amino-, NH-/4-(2~amíno-2-karboxi~etiI)~

-benzil/-, piperazinil-, 4-fenil-karbamoil-píperazin-l-il- vagy XHRi csoport, ahol

Rj jelentése S-acetil-amino-3,6-díoxaokt-l-il-, S-amino-3,6-dioxaokt-l-iI-, S-ZL-hidroorotii-amj.no/-hex-i-il-, 6-/G-g1ukon11-amino/~hexi1- vau y 6 ~/D-g i a ko n i1-ami no- 3,6 - d ioxaokt-173 . í 3«/ se /GX j S vip

70..04/PA 00 0062 6 2006. április * ··.«

X ♦ 4»

-il-csoport.

5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti szintetikus peptid, amelyben

Xaa-i jelentése ü-fenil-alanin, 2-tienil-D-alanin vagy 4f 1 u o r - G - f e n 11 - a I a n i n .

6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti szintetikus peptid, a me1yb en.

Xaa₂ jelentése 4-kiór-O-feníl-aIanin vagy 3,4-diklór-D-fenii-alanin vagy

X.aa<t jelentése D^:-/CHaNHC(NH)NHa/-fen:il~al.an.in..

7. Az 1. igénypont szerinti szintetikus opiold peptid, amelynek WT-Ebj.o-e Ö, 5 mg/kg vagy kevesebb, mely peptid általános

H—Xaa—Xaa?—X.aa3—áss.·;—Q (1) , anoi

Xas· jelentése G-fenil-aianin, tCÜsetil)-G-fenil-aianin, 2-fluor-D-feni1-alanin, 4-fluor-D-fení1-alanin, 4-klór-0~fenil-alanin, eiklopentil-D-alanín vagy tleni1-D-alanin;

Xaa₂ jelentése D~fenil-aianin, 4-fluor-D-fenii-alanin, 4-klór-D-feni1-alanin, 4-nítro-G-feni1-alanin, 3,4-diklór-G-fenil-alanin, naftiícsoporttai helyettesített G-aianln, amelyben a naftílesöpört a gyűrű 1- vagy 2-heIyzetéveI kapcsolódik a béta-szénatomhoz vagy G-triptofán;

Xaa^ jelentése G-ncriescin, G-leucin, (C^&m-et.i 1)-G-ieuoin, D-metil-tionin vagy oíkiopentii-D-alanin;

Xaa; jelentése 0-arginin, dietil-D-arginin, D-iizin, iropropl1-D-ii sin, D-homoarginin, D-norarginín, diétái-D homoarginín,

G-Zkön/W-fenil-alanin, G-ZClyMHC (PH) PHg-ieni 1-aianin, alfa, gamma♦:*·· « « »Λ * *

70.633/61 33300636 2ö06> április

-diamino-vajsav, D-ornitin vagy izopropil-D-ornitin; és

Q jelentése NRj.R/_f morfolinil-, tiomorfoiinil-, piperidini 1-, 4-hidroxi-piper idin-l-il-, 4-oxo-piperidin-l-il-, 4-fenii -karbamoil-oxo-piperazin-l-íl- vagy piperazinil- csoport, ahol

Rí jelentése meti.l~, etil---, propil-, bntil-, hidroxi~et.il, 4- / 2 - ar ι ί η o - 2 - k a r b ο x i - e t i 1 / - b e n z i 1 -, ciklepropil-, benzil-, 6-/L~hidroxi~o.rotil-ainino/~hex-i.-il~ vagy 4-p-ikolxl és

R₂ jelentése hidrogénatom vagy -etilcsoport.

8. Az 1. igénypont szerinti szintetikus opioid pepiid, amelynek WT~SD«g~e 0,5 mg/kg vagy kevesebb, mely pepiid

H-Xaa₂-Xaa₂-Xaa₂-Xaa4~Q (I) általános képletű, ahol

Xsai jelentése D-íenil-alanin, 2-fluor-D-fenil-alanin, 4-fluor“D-fenil-alanín, ciklopenfil-D-aianin vagy 2~tlenil-D-alanin;

Kas? jelentése 4-fluor-D-fenil-alanin, i-kiőr-D-íenii-alanin naft ílcsop-orttal helyettesített D-alan.in, amelyben nafti lesöpört a gyűrű 1- vagy 2-helyzetével kapcsolódik a béta szénatomhoz vagy D-tríptofán;

Xaaa jelentése D-noriencin, D-leucín vagy D-metionin;

Xaa$ jelentése D-arginin, D-lizin, D-homoargínin, D-nor arginin, D-ornitin vagy D-ZClbNöC (NH) NH₂/~f enil-alanin? és

Q jelentése NRtRgz morfolínii-, tioracrfolinil-, píperídiníl vagy pip-eraziníl-csoport, ahol

R; jelentése etil-, propil- vagy 4-píkolil-csoport.

9. Az 1. igénypont szerinti szintetikus op.io.id pepiid amelynek W?~EDj.o—e 0,5 mg/kg vagy kevesebb, mely pepiid

H-Xaa >.~Xaa₂~Xaa3~Xaa,$~Q (1) -általános képletű, ahol

Xaa-χ jelentés-e D-fenil-alanin, 2-tluor-D-fenil-alanin, 4-fit

3,030 ZA/Smyváp

7Ö.634/PA 4 3

C-l 00 6z)6 a ♦♦:<« ** * dü6„ április **\ **% *’ ;4* * ♦·♦* ♦·♦ ** * or-D-fenil-alanin vagy 2-t.ienil-D-aianín?

Xaa2 jelentése 4-klór-O'.fenil-aianin, 3,4-diklór—D-fenil-alanin, naftílcsoportral helyettesített D-alanin, amelyben a naftilcsoport a gyűrű 1- vagy 2-he.lyzetéve.Í kapcsolódik a béta-szénatomhoz vagy D-triptofán;

Xaaj jelentése D-norleucin vagy D-leucin,

Xasá jelentése D-arginin, D-ornitin vagy D-ZCH^NHC(EH)NRoZ-íe·nii-alanin; és

Q jelentése NHFh, morfolinil-, t.tömöriolinil-, piperazinil-, dietil-araino- vagy 4-fenil-karbamoil-piperazin-l-il-csoport, ahol

Ri jelentése etil-, propil-, 4^:~/2-'amino-2~karboxi-etii/~benzil-, ciklopropil-, 6-/L-híároxi-orotil~arúno/-h&x~Í-í 1- vagy 4~pikolíl-csoporé,

2 0.. Az 1. igénypont szerinti szintetikus peptídek körébe tartozó következő vegyületek:

H-D-fanil-alanin-D-feníl-alanin-D-norleucín-D-arginin-etil-aHlid. *

H-D-fenü-alanin-D-fenil-alanin-D-norleucin-D-arginin-morfolid,

H~D~feníl-alanin-D-fenil-aIanin-D~norieucin-D-arginin-4-píkclil-amid,

H-D-fenii-alanin-D~fenil-alanin-D-norleucin-D-argirdn-propi1-amíd,

R -· D - f e η í i - a 1 an i n - D- f eni 1 - a I a ni n - D~ nor 1 eu c i n- D- a r g i n i n -t i omo r folid,

H-D~feni1-slanin-D-fenil-alanin-D-norleucin-D-arginin-dietí170, OU/PA/Og-svip ♦ * * Φ *

7Ö.634ZPA 0)100626 0006. április

-amid,

H-D~fen.il -a.la.nin~D~.feni i-aianin-D-nor leocin-D~arolnin-met il-amid,

H - D - f e n i 1 - a 1 a n .1 n - D - f e n i 1 - a 1 a n i n - D -1 e u c i n - D - ο τη i t i n - ruo r £ ο 1 í d.,

B~4~£ iuor-D-feni 1-a.lanin-D- feni i-alanitt-D-norleocin-D-arg i n i n~4-p í ko i iI-amid,

H~D~ feni l-aiaíiin-D-f en.il-a ianin-D~nor isucín-D-ar ginin-ciklopropi 1-amid,

H-D-aianin- (2~tíenii) -al.att.in~3, 4-diklóz-D-fsnil-alanin-D--lenein-D-arginin-morfolíd,

H~D~rení l~alanin~D~f eni l-alanín-D-norleucin-D·-- íCogNHC (ÓH) Non) - Ö - f e n i 1 - a 1 a n i n - mo r f ο 1 i d,,

B~D-feni1-a 1 anin-D-fenil-alattín-D-ieucin-D~orn.itin- (4 - (2-amitto~2-karboxi-et.il > -benzil) -amid,

H - D - fen i 1 - a 1 a η í n - D- f e n i 1 ~ a 1 an i n - D - i e u c i n - D - .1 i z i n - mez f ο 1 i d,

H-D-r enil -a lanin-D-f enil-alanin-D-nor lene in-D-ar ginin.·· pipere zínid, és

H - D - f e n i 1 - a 1 a n i n - D --- f e n i 1 - a 1 a ni n - D - η o r 1 e u c 1 n - D ~ a r g í n i n - S - (L -h idrο ortí1-amino)-heκ-1-í1-ami d.

11, Gyógyászati készítmény_f mely az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti szintetikus pepiidet, fájdalomcsillapító mennyiségben, és egy gyógyászatílag elfogadható folyékony vagy -szilárd hordozóját tartalmazza.