KR102375543B1

KR102375543B1 - 펩티드 아미드류 화합물 및 이의 제조 방법과 의약에서의 용도

Info

Publication number: KR102375543B1
Application number: KR1020207002720A
Authority: KR
Inventors: 천 장; 안방 황; 페이 예; 룽빈 황; 정강 황; 지엔민 왕; 융강 웨이; 팡커 옌; 웨이 정
Original assignee: 스촨 하이스코 파마수티컬 씨오., 엘티디
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-19
Publication date: 2022-03-16
Also published as: EP3656782B1; BR112020001157A2; PT3656782T; MY200925A; CN110637025A; AU2018303080B2; ES2905164T3; US11014964B2; US20200172573A1; EP3656782A4; EP3656782A1; AU2018303080A1; TW201920231A; CN110637025B; JP2020526571A; KR20200031114A; TWI712615B; CA3069820A1; WO2019015644A1; ZA202000491B

Abstract

본 발명은 구조가 새롭고, 생물 활성이 더 좋고, 진통 효과가 더 우수한 통식(I)로 표시되는 펩티드 아미드류 화합물 및 이의 제조방법 및 의약에서의 용도를 제공한다.

Description

펩티드 아미드류 화합물 및 이의 제조 방법과 의약에서의 용도

본 발명은 진통 작용을 갖는 펩티드 아미드류 화합물 및 이의 제조 방법과 의약에서의 용도에 관한 것이다.

아편류 약물은 수천년 전부터 통증 치료에 사용되며 주로 알려진 3 종류의 고전적인　아편 수용체 μ, δ 및 κ 와 서로 결합하여 생리 역할을 발휘한다. 이들 3종류의 수용체는 모두 G 단백질 결합 수용체 패밀리의 맴머 중 하나로, 주로 중추신경계에 분포하는 동시에 많은 외주조직에도 존재한다. 그중 가장 고전적인 약물로는 모르핀이며, 이는 주로 μ 아편 수용체의 작용에 의해 진통 효과를 발휘한다.

또한 범용적인 임상 진통약물은 디하이드로모르폰 및 펜타닐을 대표로 하는 전통적인 아편약물과 같은 다른 μ 아편 수용체 약물을 추가로 포함한다.

그러나 μ 아편 수용체류 약물은 장기간 사용하면 내성, 의존성, 호흡 억제 및 위장 운동에 미치는 영향과 같은 다양한 부작용을 일으켜 이로 인해 치료 비용을 증가시킬뿐만 아니라 환자의 재활주기에도 영향을 준다. 하지만 아세트아미노펜, NSAIDs (비스테로이드항염증약)와 같은 일부 비 아편류 주사제는 진통 효과가 떨어지므로 그 사용범위 및 제량이 제한되며 또한, 일정한 부작용이 있다(예를 들면, 아세트아미노펜은 간 독성을 증가시키고 NSAIDs (비스테로이드항염증약)은 다양한 위장질환을 초래한다).

현대사회의 생활 및 업무 스트레스의 끊임없는 증가 및 고령사회에 진입함에 따라,　더욱이 아편 수용체가 다양한 종류의 통증 치료에 매우 중요한 역할을 하므로 진통 활성이 높고 독성 부작용이 낮은 신규 아편을 찾아내는 것은 중요한 과학적 및 사회적 의미를 가지고 있다.

연구에 따르면 κ 아편 수용체 작용제를 사용함으로써 κ 아편 수용체를 개입의 타깃으로 하여　통증의 치료 및 다양한 종류의 질환 및 병증의 예방에 이용되는 것을 발견했다. 예하면, 1993 년 Woold등은 Anesthesia and Analgesia (1993, 77,362-379) 에 κ 아편 수용체 작용제를 통각 과민을 포함한 통증 치료에 사용하는 것을 공개했다; 1999 년 Wu등은 Circulation Res (1999,84,1388-1395)에 κ 아편 수용체 작용제를 심혈관 질환을 예방 및 치료하기 위한 타깃으로 하는 것을 제안했다; 2003년 Kaushik등은 J. Postgraduate Medicine (2003, 49 (1) ,90-95) 에 κ 아편 수용체 작용제의 신경 보호 작용을 공개했다; 2004년 Potter등은 Pharmacol.Exp.Ther (2004, 209,548-553) 에 κ 아편 수용체 작용제가 안부 장애와 안부 통증에서의 응용을 공개했다; 2005년 Wikstrom등은 J. Am. Soc.Nephrol (2005,16, 3742-3747. )에 κ 작용제가 요독증과 아편에 의한 가려움을 위한 치료에서의 응용을 공개했다; 2006년 Bileviciute-Ljungar등은 Rheumatology (2006,45, 295-302) 에 κ 아편 수용체 작용제가 골관절염, 류마티스성관절염 등의 염증성 질환에 사용되는 성질을 평가했다; 2006년 Lembo는 Diges.Dis. (2006,24,91-98) 에 κ아편 수용체 작용제가 위장도 질환에서의 응용을 평가했다; 2006년 Jolivalt등은 Diabetologia (2006,49 (11), 2775-2785) 에　κ 아편 수용체 작용제인 아시마돌린이 설치류 동물의 당뇨병 신경병증에서의 작용을 공개했다; 2008년 카라 테라피 유한주식회사의 Schteingart,Claudio,D등은 WO2008057608A2에 κ 아편 수용체 작용제가 내장 통증, pH민감형 침해수용기 활성화 관련 통증, 및 캡사이신에 의한 안부 통증에서의 작용을 평가했다.

본 발명의 목적은 구조가 새롭고, 생물 활성이 더 좋고, 진통 효과가 더 우수한 κ 아편 수용체 작용제 및 이의 제조 방법 및 의약에서의 용도를 제공하는 데있다.

본 발명은 통식(I)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정을 제공한다.

그중,

R¹은

로부터 선택되고;

m₁, m₂는 각각 독립적으로 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고;

m₃, m₄는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고(단, m₃과 m₄는 동시에 0 이 될 수 없다);

n₁, n₂는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, -C(=O)-C_1-6알킬기, -(CH₂)_q-C(=O)O-C_1-6알킬기, -(CH₂)_q-NR^1eR^1f, -(CH₂)_q-COOH, -(CH₂)_q-CONH₂, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알콕시기, 알케닐기, 알키닐기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, =O, 카르복실기, 니트로기, 시아노기, 아미노기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고, 상기 헤테로 원자가 S로부터 선택된 경우, 선택적으로 추가로는 S, S=O 또는 S(=O)₂이고;

R^1e, R^1f는 각각 독립적으로 H, C_1-6알킬기, -C(=O)O-C_1-6알킬기, -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-8카르보시클릭기 또는-C(=O)O-(CH₂)_q-3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

또는 R^z1및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 3 내지 10원 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, =O, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고;

R^1a, R^1b는 각각 독립적으로 F, CF₃, C_1-6알킬기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알케닐기, 알키닐기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R^z3은 독립적으로 H, -C(=O)-C_1-6알킬기, -C(=O)O-C_1-6알킬기, -C(=O)-C_3-8카르보시클릭기, -C(=O)O-C_3-8카르보시클릭기, -C(=O)O-(3 내지 8원 헤테로시클릭기), -S(=O)_p-C_1-6알킬기, -S(=O)_p-C_3-8카르보시클릭기, -S(=O)_p-(3 내지 8원 헤테로시클릭기), -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R^1g, R^1h, R¹ⁱ, R^1j는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬기로부터 선택되고;

또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 3 내지 10원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기 또는 -S(=O)_p-C_1-6알킬기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고;

q는 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고;

p는 0, 1 또는 2로부터 선택되고;

a는 0, 1, 2 또는 3로부터 선택되고;

R⁴는 독립적으로 H, C_1-6알킬기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기 또는 -(CH₂)_q-C_3-8카르보시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알케닐기, 알키닐기 또는 카르보시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, CF₃, NO₂, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, C_1-6알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-8카르보시클릭기, -C(=O)O-(CH₂)_q-3 내지 8원 헤테로시클릭기 또는

로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기 또는 3 내지 8원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

b는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5 로부터 선택되고;

c는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5 로부터 선택되고;

R⁵, R⁶은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-4알킬기, -OR^5a, -C(O)OR^5b, -SR^5c, -S(O)R^5d, -S(O)₂R^5e 또는 -NR^5fR^5g로부터 선택되고;

R^5a, R^5b, R^5c, R^5d, R^5e, R^5f 및 R^5g는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;

또는 R^5f, R^5g는 이들에 연결하는 질소 원자와 5 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유한다.

본 발명의 바람직한 양태로서, 통식(I)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정에 있어서,

R¹은

로부터 선택되고;

m₁, m₂, m₃, m₄는 각각 독립적으로 1 또는 2로부터 선택되고;

n₁, n₂는 각각 독립적으로 0, 1 또는 2로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로H, F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, -C(=O)-C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-C(=O)O-C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-NR^1eR^1f, -(CH₂)_q-COOH, -(CH₂)_q-CONH₂, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기, 바람직하게는 H, C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-C(=O)O-C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-NR^1eR^1f, -(CH₂)_q-COOH, -(CH₂)_q-CONH₂, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알콕시기, 알케닐기, 알키닐기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, =O, 카르복실기, 시아노기, 아미노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고, 상기 헤테로 원자가 S로부터 선택된 경우, 선택적으로 추가로는 S, S=O 또는 S(=O)₂이고;

R^1e, R^1f는 각각 독립적으로H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기 또는 -C(=O)O-(CH₂)_q-3 내지 6원 헤테로시클릭기, 바람직하게는 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기 또는 -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 3 내지 10원 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 바람직하게는 4 내지 6원 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, =O, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고;

R^1a, R^1b 는 각각 독립적으로 F, CF₃, C_1-6알킬기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기, 바람직하게는 F, CF₃, C_2-4알케닐기 또는 C_2-4알키닐기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알케닐기, 알키닐기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R^z3은 독립적으로H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-4카르보시클릭기, -C(=O)O-C_3-6카르보시클릭기 또는 -C(=O)O-(3 내지 6원 헤테로시클릭기), -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -S(=O)_p-(3 내지 6원 헤테로시클릭기), -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는3 내지 6원 헤테로시클릭기, 바람직하게는 H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)NR^1gR^1h또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알케닐기, 알키닐기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되며, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R^1g, R^1h, R¹ⁱ, R^1j는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6알킬기, 바람직하게는 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;

또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 3 내지 10원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 바람직하게는 4 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기 또는 -S(=O)_p-C_1-4알킬기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

q는 0, 1, 2, 3 또는 4; 바람직하게는 0 또는 1로부터 선택되고;

p는 0, 1 또는 2; 바람직하게는 2로부터 선택되고;

a는 0, 1, 2 또는 3; 바람직하게는 3로부터 선택되고;

R⁴는 독립적으로 H, C_1-4알킬기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기 또는 -(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기, 바람직하게는 C_1-4알킬기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 알케닐기, 알키닐기 또는 카르보시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, CF₃, NO₂, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-(CH₂)_q-3 내지 6원 헤테로시클릭기 또는

, 바람직하게는 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 3 개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

b는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5, 바람직하게는 0 또는 1로부터 선택되고;

c는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5, 바람직하게는 0 또는 1로부터 선택되고;

R⁵, R⁶은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-4알킬기 또는 -NR^5fR^5g, 바람직하게는 F, CF₃ 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;

R^5f 및 R^5g는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택된다.

n₁, n₂는 각각 독립적으로 0, 1 또는 2로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-C(=O)O-C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-NR^1eR^1f , -(CH₂)_q-COOH, -(CH₂)_q-CONH₂, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, =O, 카르복실기, 니트로기, 시아노기, 아미노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택된 0 내지 5 개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고, 상기 헤테로 원자가 S로부터 선택된 경우, 선택적으로 추가로는 S, S=O 또는 S(=O)₂이고;

R^1e, R^1f는 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기 또는 -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기 또는 카르보시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 4 내지 6원 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있으며, 상기 고리는 선택적으로 =O 치환기로 추가로 치환되고;

R^1a, R^1b는 독립적으로F, CF₃, 메틸기, 에틸기, 프로필기 또는 이소프로필기로부터 선택되고;

R^z3은 각각 독립적으로 H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 시클로프로필기 또는 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

R^1g, R^1h, R¹ⁱ, R^1j는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;

또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 4 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기 또는 -S(=O)_p-C_1-4알킬기(바람직하게는 -S(=O)_p-메틸기, 바람직하게는 -S(=O)_p-에틸기)로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

p는 2로부터 선택되고;

q는 0 또는 1로부터 선택되고;

a는 3로부터 선택되고;

R⁴는 프로필기 또는 이소프로필기로부터 선택되고;

R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기 또는 -C(=O)O-벤질기로부터 선택되고;

b는 0으로부터 선택되고;

c는 0으로부터 선택된다.

본 발명의 바람직한 양태로서, 본 발명은 통식 (I)로 표시되는 화합물을 제공하되, 그 화합물은 통식(II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정으로부터 선택되는 것이다.

그중,

R¹은

로부터 선택되고;

n₁, n₂는 각각 독립적으로 0 또는 2로부터 선택되고;

R^1a , R^1b는 독립적으로 F로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, 카르복실기,

,

,

,

,

,

, 아미노기, -CH₂NH₂ 또는

로부터 선택되고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 락탐

을 형성할 수 있으며;

R^z3는 각각 독립적으로 H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 시클로프로필기 또는 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 4 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, CF₃, 메틸기, 메톡시기 또는 -S(=O)_p-C_1-4알킬기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;

p는 2로부터 선택되고;

R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, 메틸기 또는 -C(=O)O-t-부틸기로부터 선택된다.

본 발명의 바람직한 양태로서, 본 발명은 통식(II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정을 제공한다.

그중,

R¹은

로부터 선택되고;

n₁, n₂는 각각 독립적으로 0 또는 2로부터 선택되고;

R^1a, R^1b는F로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, 카르복실기,

아미노기, -CH₂NH₂ 또는

로부터 선택되고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 락탐

을 형성할 수 있으며;

R^z3은 각각 독립적으로 H,

또는

로부터 선택되고;

그중,

R¹은

또는

로부터 선택되고;

Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;

R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, 카르복실기,

아미노기, -CH₂NH₂ 또는

로부터 선택되고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 락탐

을 형성할 수 있으며;

R^z3은 각각 독립적으로 H,

또는

로부터 선택되고;

본 발명의 바람직한 양태로서, 본 발명은 하기 구조식으로 표시되는 화합물 중 하나를 포함 하나 이에 제한되지 않는 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정을 제공한다.

본 발명의 바람직한 양태로서, 본 발명은 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 트리플루오로아세트산염으로부터 선택되는 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정을 제공한다.

본 발명은 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정 및 1종 또는 여러종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약물 조성물을 제공한다.

본 발명은 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정, 또는 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정을 포함하는 약물 조성물이 포유 동물의 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증의 치료 및 예방을 위한 약물의 제조에 있어서의 응용을 제공한다.

본 발명의 바람직한 양태에 있어서, 상기 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증은 통증, 염증, 가려움, 수종, 저나트륨혈증, 저칼륨혈증, 장폐색, 기침 및 녹내장으로 이루어진 군에서 선택된다.

본 발명의 바람직한 양태에 있어서, 상기 통증은 신경성 통증, 체성 통증, 내장 통증 및 피부 통증으로 이루어진 군에서 선택된다.

본 발명의 바람직한 양태에 있어서, 상기 통증은 관절염 통증, 신장결석 통증, 자궁 경련, 생리통, 자궁내막이위증, 소화불량, 외과수술 후 통증, 의료처리 후 통증, 안부 통증, 이염 통증, 폭발적인 암통증 및 GI 혼란 관련 통증으로 이루어진 군에서 선택된다.

본 발명은 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정, 또는 통식(I) 또는 (II)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 대사 산물, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정의 약물 조성물을 부여하는 것을 포함하는 포유 동물의 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하고, 상기 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증은 통증, 염증, 가려움, 수종, 저나트륨혈증, 저칼륨혈증, 장폐색, 기침 및 녹내장으로 이루어진 군에서 선택되는 것이 바람직하고, 상기 통증은 신경성 통증, 체성 통증, 내장 통증 및 피부 통증으로 이루어진 군에서 선택되는 것이 바람직하고; 혹은 상기 통증은 관절염 통증, 신장결석 통증, 자궁 경련, 생리통, 자궁내막이위증, 소화불량, 외과수술 후 통증, 의료처리 후 통증, 안부 통증, 이염 통증, 폭발적인 암통증 및 GI 혼란(위장 혼란) 관련 통증으로 이루어진 군에서 선택되는 것이 바람직하다.

상반된 기재가 없는 한 명세서 및 청구 범위에 사용되는 용어는 아래의 의미를 포함한다.

본 발명에 기재된 기 및 화합물에 관련된 탄소, 수소, 산소, 황, 질소 또는 할로겐은 모두 이들의 동위원소를 포함하고, 본 발명에 기재된 기 및 화합물에 관련된 탄소, 수소, 산소, 황, 질소 또는 할로겐은 선택적으로 1개 또는 복수 개의 대응하는 동위 원소로 추가로 치환되고, 그중 탄소 동위 원소는 ¹²C, ¹³C및¹⁴C를 포함하고, 수소 동위 원소는 프로튬 (H), 듀테륨 (D, 일명 중수소), 트리튬 (T, 일명 과중수소)를 포함하고, 산소 동위 원소는¹⁶O, ¹⁷O및 ¹⁸O를 포함하고, 황 동위 원소는 ³²S, ³³S, ³⁴S및³⁶S를 포함하고, 질소 동위 원소는 ¹⁴N및¹⁵N을 포함하고, 불소 동위 원소는 ¹⁹F를 포함하고, 염소 동위 원소는 ³⁵Cl 및 ³⁷Cl을 포함하며 브롬 동위 원소는 ⁷⁹Br 및 ⁸¹Br을 포함한다.

"알킬기"는 직쇄 및 분기쇄의 1가 포화탄화수소기를 의미하며, 주사슬은 탄소수 1 내지 10, 바람직하게는 탄소수 1 내지 8, 보다 바람직하게는 탄소수 1 내지 6, 더욱 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 직쇄 및 분기쇄의 기를 포함하고, 탄소수 1내지 2 가 가장 바람직하고, 알킬기의 예로는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, s-부틸기, t-부틸기, n-펜틸기, 2-펜틸기, 3-펜틸기, 2-메틸-2-부틸기, 3-메틸-2-부틸기, n-헥실기, n-헵틸기, n-옥틸기, n-노닐기 및 n-데실기 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않으며; 상기 알킬기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있으며, 그중 R¹⁹ 및 R^19a는 각각 독립적으로 H, 하이드록실기, 아미노기, 카르복실기、C_1-8알킬기, C_1-8알콕시기, C_2-8알케닐기, C_2-8알키닐기, 3 내지 10원 카르보시클릭기, 4 내지 10원 헤테로시클릭기, 3 내지 10원 카르보시클릭기옥시기 또는 4 내지 10원 헤테로시클릭기옥시기로부터 선택되고，k는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5로부터 선택되고, j는 0, 1 또는 2로부터 선택된다. 본원에 기재된 알킬기, k, j, R¹⁹ 및 R^19a, 그정의는 상기와 같다.

"알킬렌기"는 직쇄 및 분기쇄의 2가 포화탄화수소기를 의미하며, -(CH₂)_v-(v는 1내지 10의 정수)를 포함하고, 알킬렌기의 실시예로는 메틸렌기, 에틸렌기, 프로필렌기 및 부틸렌기 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않으며; 상기 알킬렌기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹ 또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있으며, 알킬렌기의 치환기 수가 2 개 이상인 경우, 치환기가 함께 융합되어 환상 구조를 형성 할 수있다. 본원에 기재된 알킬렌기, 그 정의는 상기와 같다.

"알콕시기"는 O-알킬기의 1가 기를 의미하며, 그 중 알킬기는 본원에 정의된 바와 같다. 알콕시기의 실시예로는 메톡시기, 에톡시기, 1-프로폭시기, 2-프로폭시기, 1-부톡시기, 2-메틸-1-프로폭시기, 2-부톡시기, 2-메틸-2-프로폭시기, 1-펜틸옥시기, 2-펜틸옥시기, 3-펜틸옥시기, 2-메틸-2-부톡시기, 3-메틸-2-부톡시기, 3-메틸-1-부톡시기 및 2-메틸-1-부톡시기 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

"알케닐기"는 직쇄 및 분기쇄의 1가 불포화탄화수소기를 의미하며, 적어도 1개, 일반적으로 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 구비하고, 주사슬은 탄소수 2내지 10, 보다 바람직하게는 탄소수 2내지 6, 더욱 바람직하게는 탄소수 2내지 4를 포함하고, 알케닐기의 실시예로는 비닐기, 알릴기, 1-프로페닐기, 2-프로페닐기, 1-부테닐기, 2-부테닐기, 3-부테닐기, 1-펜테닐기, 2-펜테닐기, 3-펜테닐기, 4-펜테닐기, 1-메틸-1-부테닐기, 2-메틸-1-부테닐기, 2-메틸-3-부테닐기, 1-헥세닐기, 2-헥세닐기, 3-헥세닐기, 4-헥세닐기, 5-헥세닐기, 1-메틸-1-펜테닐기, 2-메틸-1-펜테닐기, 1-헵테닐기, 2-헵테닐기, 3-헵테닐기, 4-헵테닐기, 1-옥테닐기, 3-옥테닐기, 1-노네닐기, 3-노네닐기, 1-데세닐기, 4-데세닐기, 1,3-부타디엔, 1,3-펜타디엔, 1,4-펜타디엔 및 1,4-헥사디엔 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않으며; 상기 알케닐기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹ 또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 본원에 기재된 알케닐기, 그 정의는 상기와 같다.

"알키닐기"는 직쇄 및 분기쇄의 1가 불포화탄화수소기를 의미하며, 적어도1개, 일반적으로 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 삼중 결합을 구비하고, 주사슬은 탄소수 2내지 10, 보다 바람직하게는 탄소수 2내지 6, 더욱 바람직하게는 탄소수 2내지 4를 포함하고, 알키닐기의 실시예로는 에티닐기, 1-프로피닐기, 2-프로피닐기, 부티닐기, 2-부티닐기, 3-부티닐기, 1-메틸-2-프로피닐기, 4-펜티닐기(pentynyl), 3-펜티닐기, 1-메틸-2-부티닐기, 2-헥시닐기(hexynyl), 3-헥시닐기, 2-헵티닐기(heptynyl), 3-헵티닐기, 4-헵티닐기, 3-옥티닐기(octynyl), 3-노니닐기(nonynyl) 및 4-데시닐기(decynyl)등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않으며; 상기 알키닐기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 본원에 기재된 알키닐기, 그 정의는 상기와 같다.

"시클로알킬기"는1가 포화 카르보시클릭 탄화수소기를 의미하며, 일반적으로 탄소수 3내지10를 구비하고, 비제한적인 실시예로는 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시클로헥실기 또는 시클로헵틸기 등을 포함한다. 상기 시클로알킬기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 본원에 기재된 시클로알킬기, 그 정의는 상기와 같다.

"카르보시클릭"은 포화 또는 불포화의 방향족 고리 또는 비방향족 고리를 의미하며, 방향족 고리 또는 비방향족 고리는 3 내지 10 원 모노시클릭고리, 4 내지 12 원 비시클릭고리, 또는 10 내지 15 원 트리시클릭고리 체계 일 수 있으며, 카르보시클릭기는 가교 고리 또는 스피로 고리가 연결되어 있을 수 있다. 비제한적인 실시예로는 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 1-시클로펜틸-1-알케닐기, 1-시클로펜틸-2-알케닐기, 1-시클로펜틸-3-알케닐기, 시클로헥실기, 1-시클로헥실-2-알케닐기, 1-시클로헥실-3-알케닐기, 시클로헥세닐기, 시클로헥사다이에닐기, 시클로헵틸기, 시클로옥틸기, 시클로노닐기(cyclononyl), 시클로데실기(cyclodecyl), 시클로운데실기(cycloundecyl), 시클로도데실기(cyclododecyl), 페닐기 또는 나프틸기를 포함한다. 상기 카르보시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 본원에 기재된 카르보시클릭, 그 정의는 상기와 같다.

"헤테로시클릭"은 포화 또는 불포화의 방향족 고리 또는 비방향족 고리를 의미하며, 방향족 고리 또는 비방향족 고리는 3 내지 10 원 모노시클릭고리, 4 내지 12 원 비시클릭고리, 또는 10 내지 15 원 트리시클릭고리 체계 일 수 있으며, N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 4 개의 헤테로 원자를 포함하고, 3 내지 8원 헤테로시클릭기가 바람직하고, 헤테로시클릭기의 고리에서 선택적으로 치환된 N, S는 다양한 산화 상태로 산화 될 수있다. 헤테로시클릭기는 헤테로원자 또는 탄소원자에 연결되어 있을 수 있고, 헤테로시클릭기는 가교 고리 또는 스피로 고리가 연결되어 있을 수 있다. 비제한적인 실시예로는 에폭시에틸기, 에폭시프로필기, 아지리디닐기, 옥세타닐기, 아제티디닐기, 티에타닐기, 1,3-디옥소릴기(1,3-dioxolyl), 1,4-디옥소릴기, 1,3-디옥사닐기(1,3-dioxohexyl), 아제파닐기(azacycloheptyl), 옥세파닐기(oxepanyl), 티에파닐기(thiocycloheptyl), 옥사제피닐기(oxazepinyl), 디아제피닐기(diazepinyl), 티아제피닐기(thiazepinyl), 피리딜기, 피페리딜기, 호모피페리딜기, 푸라닐기, 티에닐기, 피라닐기, N-알킬피롤릴기, 피리미디닐기, 피라지닐기, 피리다지닐기, 피페라지닐기, 호모피페라지닐기, 이미다졸릴기, 피페리딜기, 모르폴리닐기, 티오모르폴리닐기, 티오사닐기(thioxanyl), 디히드로푸라닐기, 디히드로피라닐기, 디티오라닐기(dithiolanyl), 테트라히드로푸라닐기, 테트라히드로티에닐기, 테트라히드로피라닐기, 테트라히드로티오피라닐기, 테트라히드로피롤릴기, 테트라히드로이미다졸릴기, 테트라히드로티아졸일기, 테트라히드로피라닐기, 벤즈이미다졸릴기, 벤조피리딜기, 피롤로피리딜기, 벤조디히드로푸라닐기, 2-피롤리닐기, 3-피롤리닐기, 디히드로인돌릴기, 2H-피라닐기, 4H-피라닐기, 디옥솔라닐기(dioxane), 1,3-디옥소시클로펜틸기, 피라졸리닐기, 디티아닐기(dithianyl), 디티오펜타닐기(dithiopentanyl), 디히드로티에닐기, 피라졸리딜기, 이미다졸리닐기, 이미다졸리디닐기, 1,2,3,4- 테트라히드로이소퀴놀리닐기, 3-아자비시클로[3.1.0]헥실기, 3-아자비시클로[4.1.0]헵틸기, 아자비시클로[2.2.2]헥실기, 3H-인돌릴퀴놀리지닐, N-피리딜우레아, 1,1-디옥소티오모르폴리닐기, 아자비시클로[3.2.1]옥틸기, 아자비시클로[5.2.0]노닐기, 옥사트리시클로[5.3.1.1]도데실기, 아자아다만틸기(azaadamantyl) 및 옥사스피로[3.3]헵틸기를 포함한다. 상기 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, =O, 하이드록실기, -SR¹⁹, 니트로기, 시아노기, C_1-6알킬기, C_1-6하이드록시알킬기, C_1-6알콕시기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_3-8카르보시클릭기, 3 내지 8원 헤테로시클릭기, -(CH₂)_a-C(=O)-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-O-R¹⁹, -(CH₂)_k-C(=O)-NR¹⁹R^19a, -(CH₂)_k-S(=O)_j-R¹⁹, -O-C(=O)-O-R¹⁹또는 -NR¹⁹R^19a로부터 선택된 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 본원에 기재된 헤테로시클릭, 그 정의는 상기와 같다.

"선택적" 또는 "선택적으로"는 이후 기재된 사건 또는 환경이 발생 가능하지만 반드시 발생하는 것이 아닌 것을 의미하며, 해당 설명은 해당 사건 또는 환경이 발생하거나 또는 발생하지 않는 상황을 모두 포함한다. 예를 들어, "선택적으로 F로 치환된 알킬기"는 알킬기가F로 치환 될 수 있지만, 반드시 치환되는 것이 아닌 것을 의미하며, 설명은 알킬기가 F로 치환 된 경우 및 알킬 기가 F로 치환되지 않은 경우를 모두 포함한다.

"약물 조성물"은 한 종류 또는 여러 종류의 본원에 기재된 화합물 또는 이의 생리학/약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 입체 이성질체, 용매화물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 공정과 다른 조성 성분의 혼합물을 의미하며, 그중 다른 조성은 생리학/약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제를 포함한다.

"입체 이성질체"는 분자에서 원자의 입체배치의 차이로 의한 이성질체를 의미하며, 시스-트랜스 이성질체, 거울상 이성질체 및 형태 이성질체를 포함한다.

"유효 제량"은 조직, 시스템 또는 피험자의 생리학적 또는 의학적 반응을 일으키는 화합물의 양을 의미하며, 해당 양은 얻고 싶은 것이며, 피험자에게 투여되었을 때 치료하는 질환 또는 병증의 하나 또는 여러 증상의 발생을 예방하거나 또는 어느 정도로 완화하기에 충분한 화합물의 양을 포함한다.

"용매화물"은 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 의미하고, 이들은 분자간비공유결합력에 의해 결합된 화학량론 또는 비화학량론의 용매도 포함한다. 용매가 물인 경우, 수화물이다.

이하, 도면 및 실시예를 결합하여 본 발명의 기술 방안을 상세히 설명하지만, 본 발명의 보호 범위는 이에 한정되는 것은 아니다.

화합물의 구조는 핵자기 공명 (NMR) 또는 (및) 질량 분석(MS)에 의해 결정된다. NMR 변위 (δ)는 10^-6 (ppm)의 단위로 나타난다. NMR의 측정은(Bruker Avance III 400 및 Bruker Avance 300)핵자기 기기를 사용하여 수행되었으며, 측정 용매는 중수소화 디메틸술폭시드(DMSO-d₆), 중수소화 클로로포름 (CDCl₃), 중수소화 메탄올 (CD₃OD)이며 내부 기준 물질은 테트라메틸실란 (TMS)이다.

MS의 측정은 (Agilent 6120B(ESI) 및 Agilent 6120B(APCI)) 를 사용하여 수행되었다.

HPLC의 측정은 애질런트 1260DAD 고압 액체 크로마토그래피(Zorbax SB-C18 100Х4.6 mm) 를 사용하여 수행되었다.

박층 크로마토그래피 실리카겔 플레이트는 Yantai Huanghai HSGF254 또는 Qingdao GF254 실리카겔 플레이트를 사용하고, 박층 크로마토그래피 (TLC)에 사용되는 실리카겔 플레이트이 적용한 사양은 0.15 mm ~ 0.20 mm이며, 박층 크로마토그래피에 의한 제품의 분리 정제의 사양으로는 0.4 mm ~ 0.5 mm이다.

칼럼 크로마토그래피는 일반적으로 Yantai Huanghai 실리카겔 200-300 메쉬 실리카겔을 담체로 사용한다.

본 발명의 알려진 개시원료는 본 분야에서 알려진 방법에 의해 또는 본 분야에서 알려진 방법에 따라 합성 될 수 있고, 혹은 Titan Technology, Energy Chemical, Shanghai Demo, Chengdu Kelon Chemical, Shaoyuan Chemical Technology, J&K Chemicals Technology등 회사로부터 구입할 수있다.

질소 분위기는 반응 플라스크에 약 1L 용적의 질소 풍선을 연결하는 것을 의미한다.

수소 분위기는 반응 플라스크에 약 1L 용적의 수소 풍선을 연결하는 것을 의미한다.

수소화 반응은 일반적으로 진공으로 배기하고 수소 가스를 충전하며, 작업을 3 회 반복한다.

실시예에 특별한 설명이 없는 한, 반응은 질소 분위기 하에서 수행된다.

실시예에 특별한 설명이 없는 한, 용액은 수용액을 의미한다.

실시예에 특별한 설명이 없는 한, 반응 온도는 실온이다.

실온은 가장 적합한 반응 온도로 20 ℃ ~ 30 ℃이다.

실시예에 특별한 설명이 없는 한, M는 mol/L이다.

Boc：t-부틸옥시카르보닐기를 의미한다.

Cbz：벤질옥시카르보닐기를 의미한다.

THP: 테트라히드로피라닐기.

중간체1:

(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로판올]아미노]-3-페닐-프로판올]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노익산(중간체1)

(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoic acid

제1단계: 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트(1b)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

실온에서, 메틸(2R)-2-아미노-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1a) (2.6 g, 10 mmol)를 에틸아세테이트(50 mL)에 용해시키고 0°C로 강온하였다. 자기 교반하에서 (2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-발레르산 (2.8 g, 11 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (1.62 g, 12 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(2.3 g, 12 mmol)을 반응액에 순차적으로 첨가하고, 25℃로 승온하고, 해당 온도에서 15h 반응하였다. 반응액에 1M 염산수용액(25mL)을 첨가하여 세척하고 분액하였다. 유기상에 포화탄산수소나트륨 수용액(25 mL)을 첨가하여 30분 교반하고 분액하였다. 유기상을 1M 염산수용액 (25 mL), 포화탄산수소나트륨 수용액 (25 mL), 포화염화나트륨 수용액 (25 mL)로 순차적으로 세척하고, 무수황산나트륨 (2 g)으로 건조하였다. 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1b), 백색포상고체 (5.0 g, 수율99%)를 얻었다.

제2단계: 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1c)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

실온에서 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1b) (5.0 g, 10 mmol)를 에틸아세테이트(50 mL)에 용해시키고, 10% 팔라듐탄소(1 g, 20% w/w)를 반응액에 첨가하고 수소로 3회 치환하여 수소 분위기에서 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 규조토(3g)로 여과하고 여과액을 감압 농축하여 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1c) 조품, 백색포상고체 (3.7g, 수율99%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1d)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

실온에서 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1c) 조품 (3.7 g, 9.9 mmol) 을 에틸아세테이트(50 mL)에 용해시키고 0°C로 강온하였다. (2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로피온산 (3.3 g, 11 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (1.62 g, 12 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (2.3 g, 12 mmol)을 반응액에 순차적으로 첨가하고, 25℃로 승온하고, 해당 온도에서 5 h 반응하였다. 1M 염산수용액 (25 mL) 을 첨가하여 세척하고 분액하였다. 유기상에 포화탄산수소나트륨 수용액 (25 mL)을 첨가하여 30분 교반하고 분액하였다. 유기상을 1M 염산수용액 (25 mL), 포화탄산수소나트륨 수용액 (25 mL), 포화염화나트륨 수용액 (25 mL) 로 순차적으로 세척하고, 무수황산나트륨 (2g)으로 건조하였다. 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1d) 조품, 백색포상고체(3.0g, 수율46%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1e)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

실온에서 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1d) 조품 (3.0 g, 4.58 mmol)을 에틸아세테이트(50 mL)에 용해시키고, 10%팔라듐탄소 (1g, 33% w/w)를 반응액에 첨가하고 수소로 3회 치환하여 수소 분위기(풍선)에서 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 규조토(3g)로 여과하고 여과액을 건조되게 감압 농축하였다. 에틸아세테이트 (6mL)를 첨가하고, 가열하여 용해시키고, 석유 에테르 (6mL)를 첨가한 후 천천히 실온으로 강온하여 고체를 석출하여 여과하고, 필터 케이크를 50℃에서 감압 건조하여 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1e), 백색포상고체 (2.1 g, 수율88%)를 얻었다.

제5단계: 메틸(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노에이트 (1f)

methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoate

실온에서 메틸(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-6-(t-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트 (1e) (2.1 g, 4.0 mmol)를 에틸아세테이트(30 mL)에 용해시키고 0°C로 강온하였다. (2R)-2-(t-부톡시카르보닐)-3-페닐-프로피온산 (1.3 g, 4.9 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (0.65 g, 4.8 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(1.1 g, 5.7 mmol) 을 반응액에 순차적으로 첨가하고, 25℃로 승온하고, 해당 온도에서 5h 반응하였다. 1M 염산수용액 (15 mL)을 첨가하여 세척하고 분액하였다. 유기상에 포화탄산수소나트륨 수용액(15 mL) 을 첨가하여 30분 교반하고 분액하였다. 유기상을 1M 염산수용액 (15 mL), 포화탄산수소나트륨 수용액 (15 mL), 포화염화나트륨 수용액 (15 mL) 로 순차적으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조하였다. 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르/에틸아세테이트(v/v)=100:1~5:1), 메틸(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노에이트 (1f), 백색포상고체 (2.3 g, 수율74%)를 얻었다.

제6단계: (2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로판올]아미노]-3-페닐-프로판올]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노익산 (중간체1)

실온에서 메틸(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노에이트 (1f) (2.3 g, 3.0 mmol) 를 메탄올 (20 mL)에 용해시키고, 수산화나트륨 (200 mg, 5.0 mmol)의 수용액(20 mL)을 반응액에 첨가하여, 해당 온도에서 5h 반응하였다. 1M 염산수용액으로 반응액을 pH<4가되도록 조절하고, 에틸아세테이트 (40 mL)로 추출하여 분액하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축한 후 (2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로판올]아미노]-3-페닐-프로판올]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노익산 (중간체1), 백색포상고체(2.1g, 수율93%)를 얻었다.

Ms m/z (ESI):752.5 [M-H]^-;

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.27 (m, 3H), 7.25 - 7.07 (m, 7H), 4.82 - 4.62 (m, 1H), 4.61 - 4.41 (m, 2H), 4.37 - 4.18 (m, 1H), 3.37 - 2.67 (m, 6H), 2.00 - 1.65 (m, 3H), 1.59 - 1.37 (m, 15H), 1.35 - 1.26 (m, 9H), 0.90 - 0.80 (m, 6H).

실시예1:

2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실산; 트리트리플루오로아세테이트

2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid；tri-trifluoroacetate

제1단계: t-부틸2-[ (1S)-1-페닐에틸]이미노-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(2B)

tert-butyl 2-[(1S)-1-phenylethyl]imino-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

실온에서 t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(2A) (7.2 g, 30 mmol)、(1S)-1-페닐에틸아민 (3.7 g, 31 mmol)을 톨루엔(100 mL)에 용해시키고, 파라-톨루엔 설폰산(300 mg, 1.74 mmol)을 첨가하고, Dean-Stark환류하여 분수하였다. 6h후, 반응액을 건조되게 감압 농축하여, t-부틸2-[ (1S)-1-페닐에틸]이미노-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (2B) 조품, 황색포상고체 (10 g, 수율97%)를 얻었다.

제2단계: t-부틸2-시아노-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (2C)

tert-butyl 2-cyano-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

실온에서 t-부틸2-[ (1S)-1-페닐에틸]이미노-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (2B) 조품(10 g, 29.2 mmol)을 메탄올 (90 mL)에 용해시키고, 얼음욕에서 0℃로 냉각하였다. 교반하면서 염화아연 (210mg, 1.54mmol)을 첨가하고, 시아노트리메틸실란 (3g, 30.2mmol)을 천천히 적가하여, 0℃를 유지하면서 3h 반응하였다. 반응액을 여과하고, 여과액을 감압농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v/v)=4:1), t-부틸2-시아노-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (2C), 황색포상고체 (4.7 g, 수율44%)를 얻었다.

제3단계: 2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2D)

2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid

실온에서 t-부틸2-시아노-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (2C) (2 g, 5.4 mmol) 를 진한 염산(20 mL)에 용해시킨 다음, 40 h 환류반응 하였다. 실온으로 강온하고 반응액을 감압농축하여 2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2D) 조품, 황색유상액체 (1.5 g, 수율96%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: 7-t-부톡시카르보닐-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2E)

7-tert-butoxycarbonyl-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid

실온에서 2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2D)조품 (1 g, 3.47 mmol)을 테트라히드로푸란 (10 mL)에 용해시키고, 수산화나트륨 (0.5 g, 12.5 mmol)의 수(10 mL)용액을 첨가한 다음, 디-t-부틸디카보네이트 (908 mg, 4.16 mmol)를 첨가하고, 실온에서 6h 반응하였다. 반응액을 여과하여, 7-t-부톡시카르보닐-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2E) 조품, 백색고체 (0.8 g, 수율60%)를 얻었다.

제5단계: O7-t-부틸O2-메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (2F)

O7-tert-butyl O2-methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate

실온에서 7-t-부톡시카르보닐-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 (2E) (775 mg, 2.0 mmol)을 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고, 메탄올 (10 mL)을 첨가하였다. 실온에서 교반하면서 1-하이드록시벤조트리아졸 (270 mg, 2.0 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (0.6 g, 3.13 mmol)을 순차적으로 추가하여, 15h 반응하였다. 반응액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제 하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:1), O7-t-부틸O2-메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트(2F), 담황색포상고체 (560 mg, 수율70%)를 얻었다.

제6단계: 메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-메틸카르복실레이트(2G)

methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

실온에서 O7-t-부틸O2-메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트(2F) (500 mg, 1.24 mmol)를 디클로로메탄 (4.5 mL)에 용해시키고, 0℃로 강온하였다. 트리플루오로아세트산 (1.5 mL)을 첨가하여, 실온에서 3h 반응하고, 반응액을 감압 농축하여 메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-메틸카르복실레이트 (2G), 황색유상액체 (320 mg, 수율85%)를 얻었다.

제7단계: 메틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트

methyl 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

실온에서 메틸2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자스피로[3.5]노난-2-메틸카르복실레이트(2G) (300 mg, 1.0 mmol)를 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고, 중간체1 (753 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 교반하면서 1-하이드록시벤조트리아졸 (135 mg, 1.0 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (0.23 g, 1.2 mmol)을 순차적으로 첨가하여, 15h 반응하였다. 반응액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제 하고 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 용리제를 수집하고 감압농축하여, 백색포상고체의 메틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (2H) (710 mg, 수율69%)를 얻었다.

제8단계: 메틸2-아미노-7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- (t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (2I)

methyl 2-amino-7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

실온에서 메틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2-[[(1S)-1-페닐에틸]아미노]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (2H) (700 mg, 0.7 mmol)를 에틸아세테이트(10 mL)에 용해시켰다. 팔라듐탄소 (0.1 g, 20 wt%)를 첨가하고, 수소로 3회 치환하여 수소 분위기(풍선)에서 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 규조토로 여과하고 여과액을 건조되게 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 메틸2-아미노-7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- (t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(2I), 백색포상고체(370 mg, 수율60%)를 얻었다.

제9단계: 2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 트리트리플루오로아세테이트 (2J)

methyl 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate; 2,2,2-trifluoroacetic acid

실온에서 메틸2-아미노-7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- (t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(2I) (370 mg, 0.4 mmol)를 디클로로메탄 (3 mL)에 용해시키고, 0℃로 강온하였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하고, 실온으로 승온하여, 3h 반응하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하여 2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 트리트리플루오로아세테이트 (2J) 조품, 황색유상액체(305 mg,수율 72%)를 얻었다.

제10단계: 2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 트리트리플루오로아세테이트 (화합물2)

2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid; tri-trifluoroacetic acid

실온에서 수산화나트륨 (50 mg, 1.25 mmol)을 물(2mL)에 용해시키고, 2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 트리트리플루오로아세테이트 (2J) 조품 (305 mg, 0.288 mmol)을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하고 분취액상에 의해 분리 젱제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150mmol)[[(2R)-2-met; 이동상: A for ACN and B for H2O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 2-아미노-7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-카복실산 트리트리플루오로아세테이트 (화합물2) (92 mg, 수율31%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):360.8[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ7.44 - 7.18 (m, 10H), 4.65 (t, 1H), 4.33 - 4.18 (m, 2H), 3.58 (br, 2H), 3.52-3.41 (m, 1H), 3.41 - 3.29 (m, 1H), 3.17 (d, 2H), 3.10-2.90 (m, 4H), 2.70-2.46 (m, 2H), 2.32-2.18 (m, 2H), 2.05 - 1.28 (m, 14H), 0.98-0.84 (m, 6H).

화합물2-1(유리형태의 화합물2):

화합물2 (7.3 g, 6.88mmo)를 이온교환수지(300 mL)에 통해 (물~3.3%암모니아수로 용리), 얻어진 용리용액을 감압 농축하고(수온60℃에서 100 mL로 감압농축), 나아가 동결 건조하여 화합물2-1, 백색고체(4,5g, 수율90.8 %)를 얻었다.

MS m/z =720.5 [M+2H]⁺;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.34 - 7.22 (m, 6H), 7.18-7.06 (m, 4H), 4.78-4.72 (m, 1H), 4.55 (t, 1H), 4.25 (t, 1H), 3.65-3.46 (m, 3H), 3.45 - 3.25 (m, 2H), 3.09-2.97 (m, 1H), 2.95 - 2.84 (m, 3H), 2.85-2.73 (m, 2H), 2.51 - 2.33 (m, 2H), 2.00 - 1.83 (m, 2H), 1.82 - 1.25 (m, 13H), 0.96-0.78 (m, 6H).

실시예2:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물3)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸2- (2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3B)

tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

테트라히드로푸란 (50 mL)을 반응 플라스크에 넣고, 질소 보호에서 수소화나트륨 (1.3 g, 54.2 mmol)을 첨가하고, 빙수욕에서 0℃로 냉각시키고, 트리에틸포스포노아세테이트 (6.9 g, 31 mmol)를 천천히 적가하고, 적가 완료 후 0℃에서 20 min 반응하였다. -5 내지 0℃로 냉각시키고, t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3A) (5 g, 20.9 mmol) 의 테트라히드로푸란 (20 mL)용액을 천천히 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하여 1h 반응하였다. 포화염화나트륨 수용액 (50 mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트 (50 mL Х 2)로 추출하고 유기층을 합병하고, 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여, t-부틸2- (2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3B) 조품, 담황색유상액체 (6.0 g, 수율92.8%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제2단계: t-부틸2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-(니트로메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3C)

tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-(nitromethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

t-부틸2- (2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3B)를 반응 플라스크에 넣고, 테트라히드로푸란 (60 mL)을 첨가하고, 실온에서 교반하여 완전히 용해시킨 다음, 니트로메탄 (6.0 g, 98.3 mmol) 및 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (7.85 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 첨가 완료 후 승온하고 5h 환류반응 하였다. 반응액을 실온으로 냉각시키고, 에틸아세테이트 (150 mL), 포화염화나트륨 수용액 (100 mL Х 1)을 첨가하여 세척하고 분액 하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 건조되게 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=10:1), t-부틸2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-(니트로메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3C), 무색투명한 유상액체 (6.5 g, 수율90%)를 얻었다.

제3단계: t-부틸2-(아미노메틸)-2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3D)

tert-butyl 2-(aminomethyl)-2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

t-부틸2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-(니트로메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3C) (6.5 g, 18 mmol) 를 반응 플라스크에 넣고, 에탄올(75 mL) 및 물(25 mL), 철분(4.9 g, 88 mmol) 및 염화 암모늄 (4.7 g, 88.00 mmol)을 첨가한 다음 5h 환류반응 하였다. 실온으로 강온하고, 반응 시스템을 20mL로 농축하고, 물 (30mL)을 첨가하고, 암모니아수로 pH>10가 되도록 조절하고, 디클로로메탄 (50mL Х 2)으로 추출하고 유기상을 합병하고 유기상을 건조되게 감압농축하여 t-부틸2-(아미노메틸)-2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (3D), 담황색유상액체 (5.1 g, 수율85%)를 얻었다.

제4단계: t-부틸2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-t-부틸카르복실레이트(3E)

tert-butyl 2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carboxylate

t-부틸2-(아미노메틸)-2-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3D) (3 g, 8.8 mmol) 를 반응 플라스크에 넣고, 수산화나트륨 (400 mg, 10 mmol)의 수 (30mL)용액을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 여과하여 t-부틸2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-t-부틸카르복실레이트 (3E), 백색고체 (2.10 g, 수율81%)를 얻었다.

제5단계: 3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-2-온(3F)

3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecan-2-one

t-부틸2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-t-부틸카르복실레이트(3E) (1 g, 3.4 mmol)를 디클로로메탄 (9mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (3mL)을 첨가하여 실온에서 5h 반응하여 완전히 반응 하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하고, 물(20mL)을 첨가하고, 2 M수산화나트륨 수용액으로 시스템 PH>10가 되도록 조절하고, 디클로로메탄 (20mL Х 2)으로 추출하여 분리하고 유기상을 합병하고 유기상을 감압농축하여 3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-2-온(3F)조품, 황색유상액체 (0.6 g, 수율85%)를 얻었다.

제6단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (3G)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

질소 보호에서 디클로로메탄 (30 mL) 을 반응 플라스크에 넣고, 중간체1 (2.25g, 2.98mmol), 3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-2-온 (3F) 조품 (0.6g, 2.88mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (0.39g, 2.89mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (0.83g, 4.33mmol)을 첨가하여, 실온에서 15h 반응하였다. 다음 물(20mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트 (30 mL Х 3) 로 추출하여 분액하고, 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=20:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (3G)，백색포상고체 (1.77g, 수율73.2%)를 얻었다.

제7단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물3)

질소 보호에서 t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (3G) (0.90g,1mmol) 및 디클로로메탄 (21mL)을 반응 플라스크에 넣고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(7mL)을 첨가하여, 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하고 잔류물을 조제용 크로마토그래피에 의해 분리 젱제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-옥소-3,10-디아자스피로[4.1.5^{7}.1^{5}]트리데칸-10-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트(화합물3), 백색고체 (0.98g, 율54%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):365.9[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.86 - 8.67 (m, 1H), 8.40 - 8.23 (m, 1H), 8.14 - 8.01 (m, 3H), 7.84-7.72 (m, 2H), 7.52 - 7.42 (m, 1H), 7.37 - 7.15 (m, 10H), 4.76 - 3.94 (m, 4H), 3.59 - 2.65 (m, 12H), 2.29 - 2.15 (m, 2H), 1.93 - 1.19 (m, 17H), 0.88 (dd, 6H).

실시예3:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물4)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (4B)

tert-butyl tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

테트라히드로푸란 (50 mL) 을 반응 플라스크에 넣고, 수소화나트륨(2.5 g, 59.2 mmol)을 첨가하여, 빙수욕에서 0℃로 냉각시키고, 트리에틸포스포노아세테이트 (7.96 g, 35.5 mmol) 를 천천히 적가하고, 적가 완료 후 0℃에서 20min 반응하였다. 이어서 -5 내지 0 ℃로 냉각시키고, t-부틸6-옥소-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (4A) (5 g, 23.7 mmol)의 테트라히드로푸란 (20 mL)용액을 천천히 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 1h 반응하였다. 다음 반응액에 포화염화나트륨 수용액 (50 mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트 (50 mL Х 2)로 추출하여 분액하고, 유기상을 합병하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여, t-부틸t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (4B)조품, 황색유상액체 (5.5 g, 수율83%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제2단계: t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-6-(니트로메틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (4C)

tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-6-(nitromethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

t-부틸t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸리덴)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (4B)조품을 반응 플라스크에 넣고, 테트라히드로푸란 (60 mL)을 첨가하여, 실온에서 교반하여 완전히 용해시킨 다음, 니트로메탄 (6.0 g, 98.3 mmol) 및 테트라부틸암모늄 플루오라이드(7.85 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 첨가 완료 후 승온하고 5h 환류반응 하였다. 반응액을 실온으로 냉각시키고, 에틸아세테이트 (150 mL)를 첨가하고, 포화염화나트륨 수용액 (100 mL)으로 세척하고 분액하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-6-(니트로메틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트(4C), 무색투명한 유상액체 (5.1 g, 수율76%)를 얻었다.

제3단계: t-부틸6-(아미노메틸)-6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트(4D)

tert-butyl 6-(aminomethyl)-6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

t-부틸6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-6-(니트로메틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트(4C) (5.1g, 15 mmol) 을 반응 플라스크에 넣고, 에탄올 (75 mL) 및 물 (25 mL), 철분(4.2 g, 74 mmol) 및 염화 암모늄 (4.0 g, 74 mmol)을 첨가하여, 승온하고 5h 환류반응 하였다. 실온으로 강온하고, 반응 시스템을 20mL로 농축시키고, 물 (30mL)을 첨가하고, 이어서 암모니아수로 pH>10가 되도록 조절하고, 디클로로메탄 (50mL x 2)으로 추출하여 분액하고, 유기상을 합병하고 유기상을 감압농축하여, t-부틸6-(아미노메틸)-6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트(4D) 조품, (4.6 g, 수율99% )를 얻어 그대로 단계에 적용하였다.

제4단계: t-부틸9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-t-부틸카르복실레이트 (4E)

tert-butyl 9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carboxylate

t-부틸6-(아미노메틸)-6-(2-에톡시-2-옥소-에틸)-2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트(4D) 조품(4.6 g, 15 mmol)을 반응 플라스크에 넣고, 수산화나트륨 (600 mg, 15 mmol)의 수(45mL)용액을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 여과하여 t-부틸9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-t-부틸카르복실레이트 (4E), 백색고체 (2.90 g, 수율74%)를 얻었다.

제5단계: 2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-9-온 염산염(4F)

2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecan-9-one;hydrochloride

t-부틸9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-t-부틸카르복실레이트 (4E) (2 g, 7.5 mmol)를 4N HCl-이소프로판올용액(9mL)에 용해시키고, 실온에서5h 반응하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하여 2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-9-온 염산염 (4F) 조품, 백색고체 (0.95 g, 수율62%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제6단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (4G)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate;

질소 보호에서 디클로로메탄(30 mL)을 반응 플라스크에 넣고, 중간체1(2.25g, 2.98mmol), 2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-9-온 염산염(4F) (0.6g, 3.0mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸(0.39g, 2.89mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.83g, 4.33mmol)음 첨가하여, 실온에서 15h 반응하였다. 다음 물(20mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트 (30 mLХ3)로 추출하여 분액하고, 유기상을 합병하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고，잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=10:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (4G), 백색포상고체 (1.9g, 수율70%)를 얻었다.

제7단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물4)

질소 보호에서 t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (4G) (1.7g,1.9mmol) 및 디클로로메탄 (21mL) 을 반응 플라스크에 넣고, 교반하면서 트리플루오로아세트산(7mL)을 첨가하여, 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 건조되게 감압농축하고 잔류물을 조제용 크로마토그래피에 의해 분리 젱제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(9-옥소-2,8-디아자스피로[3.1.4^{6}.1^{4}]운데칸-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물4), 백색고체 (0.7g, 수율40%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):351.8[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.76 (d, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.11 - 7.97 (m, 4H), 7.85 - 7.69 (m, 3H), 7.50 (s, 1H), 7.33 - 7.18 (m,10H), 4.74 - 3.74 (m, 8H), 3.24 - 2.63 (m, 8H), 2.27 - 2.05 (m, 6H), 1.71 - 1.17 (m, 9H), 0.89 (dd, 6H).

실시예4:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 (화합물6)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide

제1단계: 7-벤질2-t-부틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (6B)

7-benzyl 2-tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate

0°C에서 50 mL 단구플라스크에 트리에틸아민(0.15mL,1.1mmol)을 t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (0.23g,1mmol)의 테트라히드로푸란(5mL)용액에 적가하고, 적가 완료 후, 벤질클로로포르메이트 (340 mg, 2 mmol)를 첨가하여, 10min 교반하였다. 실온으로 승온하고, 1h 계속 교반하고, 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 7-벤질2-t-부틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (6B), 무색유상생성물 (362mg, 수율99%)을 얻었다.

MS m/z =383.2 [M+Na]⁺;

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34-7.32 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.64 (s, 4H), 3.43 (dd, 4H), 1.77 - 1.61 (m, 4H), 1.44 (s, 9H).

제2단계: 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6C)

benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 7-벤질2-t-부틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (6B) (0.36 g, 1mmol) 및 디클로로메탄 (7mL)을 첨가하고, 실온에서 트리플루오로아세트산 (1mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) 조품, 황색유상액체 (260mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

MS m/z =261.2 [M+H]⁺;

제3단계: 벤질2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6D)

benzyl 2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6C) 조품 (260mg, 1mmol), 트리에틸아민 (200mg, 2 mmol) 및 디클로로메탄 (7mL)을 첨가하였다. 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 시클로프로필술포닐 클로라이드(170mg, 1.2mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하고 4h 반응하였다. 다음 반응 시스템을 포화탄산수소나트륨 (10 mL)으로 ??칭하고, 에틸아세테이트 (5mL Х 3)로 추출하고 유기상을 합병하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고，잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), 벤질2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트화합물 (6D), 백색고체 (360mg, 수율99%)을 얻었다.

MS m/z =365.2 [M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.43 - 7.28 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.70 (s, 4H), 3.53 - 3.36 (m, 4H), 2.41 - 2.22 (m, 1H), 1.85 - 1.69 (m, 4H), 1.19 - 1.09 (m, 2H), 1.04 - 0.93 (m, 2H).

제4단계: 2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (6E)

2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, 벤질2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6D) (360 mg, 0.99mmol), 팔라듐탄소(72mg, 20wt%) 및 에틸아세테이트(10 mL)를 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 규조토로 여과하고 여과액을 감압 농축하여 2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(6E), 담황색고체(210mg, 수율92%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제5단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (6F)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(6E) (161mg, 0.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (124mg, 0.8mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (108mg, 0.8mmol), 중간체1 (500 mg, 0.7 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하여 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (6F), 백색고체 (610 mg, 수율95%)를 얻었다.

제6단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 (화합물6)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (6F) (300 mg，0.31 mmol) 및 트리플루오로아세트산(2mL)을 첨가하여, 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 백색분말상화합물을 얻었다. 또한 이온교환수지(물~3.3%암모니아수로 용리)를 통해, 얻어진 용리용액을 감압 농축하고 (수온60℃에서 25 mL로 감압농축), 나아가 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-시클로프로필술포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드(화합물6), 백색고체(153mg, 수율63%)를 얻었다.

MS m/z =383.8 [M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.40 - 7.24 (m, 6H), 7.16 (dd, 4H), 4.72-4.73 (m, 1H),4.58 - 4.52 (m, 1H), 4.25 (t, 1H), 3.84 (dd, , 4H), 3.67-3.55 (m, 3H), 3.46-3.45 (m, 1H), 3.35-3.34 (m, 1H), 3.03 (dd, 1H), 2.91 (dd, 3H), 2.82 (d, 2H), 2.69 (ddd, 1H), 1.85-1.86 (m, 3H), 1.670-1.66 (m, 5H), 1.51-1.49 (m, 3H), 1.38-1.36 (m, 2H), 1.23 - 1.06 (m, 4H), 0.88 (dd, 6H).

실시예5:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물7)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetate

제1단계: 벤질2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (7A)

benzyl 2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (330mg，1.3 mmol), 트리에틸아민 (263mg，2.6 mmol) 및 디클로로메탄 (20mL)을 첨가하고 교반하여 용해시켰다. -10℃로 냉각시키고, 메탄설포닐 클로라이드 (164mg, 1.43mmol)를 적가하고 4h 반응하였다. 다음 실온으로 승온하고, 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3N염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고， 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:1), 벤질2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (7A), 담황색유상물질(236mg, 수율54.6%)을 얻었다.

MS m/z =339.0 [M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.68 (s, 4H), 3.50-3.38 (m, 4H), 2.86 (s, 3H), 1.83 - 1.70 (m, 4H).

제2단계: 2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (7B)

2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, 벤질2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(7A) (236 mg, 0.7 mmol), 팔라듐탄소 (40 mg, 20wt%) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토(3g)를 통해 여과하고 여과액을 감압 농축하여 2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (7B)조품, 담황색고체 (133mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =205.1 [M+1]⁺;

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (7C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(7B)조품 (133mg，0.65 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (374 mg, 1.95mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (96.6mg，0.72 mmol), 중간체1 (490 mg, 0.65 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(7C), 담황색고체 (317 mg, 수율52%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 (화합물7)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(7C) (317 mg, 0.34 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)를 첨가하여, 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압 농축하고 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 수집하고, 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 (화합물7), 백색분말 (217 mg, 수율66.5%)을 얻었다.

MS m/z =370.8 [M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.27 (m, 6H), 7.25 - 7.20 (m, 4H), 4.67-4.62 (m, 2H), 4.33-4.20 (m, 2H), 3.87-3.71 (m, 4H), 3.69 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.41 (m, 1H), 3.40 - 3.29 (m, 1H), 3.23 - 3.12 (m, 2H), 3.11 - 3.07 (m, 3H), 3.07 - 2.91 (m, 4H), 1.94 - 1.78 (m, 3H), 1.78 - 1.60 (m, 5H), 1.58-1.48 (m, 3H), 1.46-1.28 (m, 2H), 0.98 - 0.82 (m, 6H).

실시예6:

(2R)-N-[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물8)

(2R)-N-[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (8A)

benzyl 2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6C) (520 mg, 2.0 mmol)를 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 교반하면서 트리에틸아민 (607 mg, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 다음 -20℃로 강온하고, 아세틸 클로라이드(314 mg, 4.0 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 자연적으로 실온으로 승온하고 2h 교반 하였다. 이어서, 반응에 0.5M 묽은 염산 수용액 (20mL)을 첨가하고, 교반 분층하여 분액하고, 디클로로메탄으로 물층(20 mL x 2)을 추출하고, 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고，잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(순에틸아세테이트), 벤질2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트화합물 (8A), 담황색유상액체 (440 mg, 수율 72.8%)를 얻었다.

제2단계: 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)에타논 (8B)

1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethanone

50 mL반응 플라스크에, 벤질2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (8A) (440 mg, 1.46 mmol)를 에틸아세테이트 (5 mL) 와 메탄올 (2 mL) 의 혼합용액에 첨가하였다. 다음 팔라듐탄소(80 mg, 20 wt%)첨가하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 2h 교반하였다. 이어서 반응액을 여과하고, 여과액을 감압농축하여 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)에타논 (8B) 조품, 담황색유상액체 (250 mg, 수율99%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난--7-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (8C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)에타논 (8B)조품 (200 mg, 1.19 mmol)을 에틸아세테이트 (10 mL)에 첨가하였다. 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 중간체1 (867 mg, 1.15 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (331 mg, 1.73 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (186 mg, 1.38 mmol)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 1.5h 반응하였다. 이어서 반응액에 1N 염산수용액 (15mL)을 첨가하고, 교반한 후 분액하였다. 유기상에 포화탄산나트륨 수용액 (15 mL)을 넣고 30분 교반한 후 분액하였다. 유기상을 포화염화나트륨 수용액 (15 mL)으로 세척하고 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압농축하여 t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난--7-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (8C) 조품, 담황색포상고체 (1.04 g, 수율99%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물8)

t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난--7-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(8C)조품 (1.04 g, 1.15 mmol)의 조품을 디클로로메탄 (7.5 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (3.5 mL)을 첨가하여, 실온에서 1h 교반하였다. 이어서 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제한 후 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 수집하고, 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-1-(2-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물8), 백색고체 (460 mg, 2단계 수율 42.9%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):352.8[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.49 - 7.00 (m, 10H), 4.66 - 4.49 (m, 2H), 4.30 - 3.93 (m, 4H), 3.79 - 3.54 (m, 4H), 3.52 - 3.25 (m, 2H), 3.22 - 2.90 (m, 6H), 1.92 - 1.27 (m, 16H), 1.02 - 0.75 (m, 6H).

화합물8-1:

화합물8 (1.0 g, 1.07mmo)을 이온교환수지 (60 mL) (물~3.3%암모니아수로 용리)에 통해, 얻어진 용리용액을 감압 농축하고 (수온60℃에서 100 mL로 감압농축), 나아가 동결 건조하여 화합물8의 유리형태, 즉 화합물8-1, 백색고체(451 mg, 수율60.0 %)를 얻었다.

MS m/z (ESI):352.8[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.45-7.32 (m, 6H), 7.23 (dd, 4H), 4.85-4.75(m,1H), 4.64 (t, 1H), 4.35 (t, 1H), 4.07 (d, 2H), 3.83 (d, 2H), 3.74-3.63 (m, 3H), 3.62-3.50 (m, 1H), 3.50-3.39 (m, 1H), 3.17-2.65 (m, 6H), 2.01-1.66 (m, 9H), 1.65-1.30 (m, 7H), 0.96 (dd, 6H).

실시예7:

이소프로필7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 디트리플루오로아세테이트(화합물9)

isopropyl 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate;di-trifluoroacetic acid

제1단계: O7-벤질O-이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트(9A)

O7-benzyl O2-isopropyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (310 mg, 1.2 mmol), 트리에틸아민 (364 mg, 3.6 mmol) 및 디클로로메탄 (20mL)을 첨가하고, 실온에서 교반하며 용해시켰다. 다음 -10℃로 냉각시키고 이소프로필 클로로카보네이트 (146mg, 1.2mmol)를 적가하고, 적가 완료 후, 실온으로 승온하고 4h 반응하였다. 반응 시스템을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3M염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:1), O7-벤질O-이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트화합물 (9A), 담황색유상액체 (279 mg, 수율68%)를 얻었다.

MS m/z =347.2 [M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.30 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.95-4.80 (m, 1H), 3.68 (s, 4H), 3.47-3.39 (m, 4H), 1.75 - 1.68 (m, 4H), 1.23 (d, 6H).

제2단계: 이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (9B)

isopropyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50mL 단구플라스크에, O7-벤질O-이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (9A) (260 mg, 0.75 mmol), 팔라듐탄소 (52 mg，20wt%l) 및 메탄올 (20mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고 여과액을 감압 농축하여 이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(9B) 조품, 담황색고체(159mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =213.2 [M+1].

제3단계: 이소프로필7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(9C)

isopropyl 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- (tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 이소프로필2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (9B)조품 (159 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (374 mg, 1.95 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (110 mg, 0.81 mmol), 중간체1 (565 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), 이소프로필7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(9C), 담황색고체 (556 mg, 수율78%)를 얻었다.

제4단계: 이소프로필7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 디트리플루오로아세테이트 (화합물9)

50mL 단구플라스크에, 이소프로필7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(9C) (317 mg, 0.334 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하여, 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, 이소프로필7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 디트리플루오로아세테이트 (화합물9), 백색분말상생성물(326 mg, 수율98%)을 얻었다.

MS m/z =374.9[M+2H]⁺/2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.50 - 7.14 (m, 10H), 4.89 - 4.78 (m, 1H), 4.66 (t,1H), 4.30 (t, 1H), 4.22 (t, 1H), 3.89-3.74 (m, 4H), 3.69 - 3.54 (m, 2H), 3.54 - 3.41 (m, 1H), 3.41 - 3.28 (m, 1H), 3.21 - 3.11 (m, 2H), 3.11 - 2.90 (m, 4H), 1.93 - 1.30 (m, 14H), 1.27 (d, 6H), 0.93 (q, 6H).

실시예8:

((2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물10)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (10A)

tert-butyl7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50mL 단구플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (6A) (0.11 g, 0.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(115 mg，0.6mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (81 mg, 0.6 mmol), 중간체1 (378 mg, 0.5 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (10A) 백색고체 (450 mg, 수율93%)를 얻었다.

제2단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물10)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

50mL 단구플라스크에, t-부틸7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (10A) (450 mg, 0.468 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 참가하여 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물10) 백색분말상생성물 (358 mg, 수율76%)을 얻었다.

MS m/z =331.8[M-2CF₃COOH+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.48 - 7.10 (m, 10H), 4.65-4.61 (m, 2H), 4.28-4.20 (m, 2H), 3.93 (d, 4H), 3.70 - 3.57 (m, 2H), 3.52 - 3.39 (m, 1H), 3.39 - 3.27 (m, 1H), 3.15 (d, 2H), 3.02-2.94 (m, 4H), 1.98-1.87 (m, 3H), 1.82 - 1.60 (m, 5H), 1.51-1.50 (m, 3H), 1.44 - 1.36 (m, 2H), 0.89 (dd, 6H).

실시예9:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물11)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (11A)

Benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- (tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6C) (0.26 g, 1 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (230mg, 1.2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (162mg, 1.2 mmol), 중간체1 (0.75g, 1 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하여, 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (11A), 백색고체 (850 mg, 수율85%)를 얻었다.

제2단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (11B)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (11A) (850 mg, 0.85 mmol), 팔라듐탄소 (170 mg, 20wt%) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (11B) 조품, 백색고체 (580 mg, 수율79%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물11)

50mL 단구플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (11B) (0.5 g, 0.58 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하여 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물11), 백색분말상생성물 (380 mg, 수율66%)을 얻었다.

MS m/z =331.8[M-2CF₃COOH+2H]⁺/2;

1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.43 - 7.13 (m, 10H), 4.61 (t, 1H), 4.28 - 4.06 (m, 5H), 3.84 - 3.74 (m, 2H), 3.19-3.14 (m, 6H), 2.99-2.95 (m, 4H), 2.09 - 1.94 (m, 4H), 1.79 - 1.61 (m, 4H), 1.55 - 1.31 (m, 5H), 0.89 (dd, 6H).

실시예10:

2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물12)

2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (12A)

tert-butyl 7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (6A) (0.23 g, 1 mmol), 트리에틸아민 (210 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 교반하여 용해시켰다. -10℃로 냉각시키고, 메탄설포닐 클로라이드 (140 mg, 1.2 mmol)를 적가하여, 4h 반응하였다. 다음 실온으로 승온한 후 반응 시스템을 포화탄산수소나트륨 수용액 (10 mL)으로 ??칭하고, 에틸아세테이트 (5 mL Х 3) 로 추출하고 유기상을 합병하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (12A), 담황색유상물질 (250 mg, 수율81%)을 얻었다.

MS m/z =327.2[M+Na]⁺.

제2단계: 7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (12B)

7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(12A) (0.25 g, 0.81 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여, 7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (12B) 조품, 담황색유상액체 (165 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (12C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(12B)조품 (165 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (192 mg, 1 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (135mg, 1 mmol), 중간체1 (610mg, 0.81 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하여 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (12C), 백색고체 (630 mg, 수율82.7%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물12)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (12C) (630 mg, 0.34 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하여 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트(화합물12), 백색분말 (410 mg, 수율63.2%)을 얻었다.

MS m/z =370.8[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.15 (m, 10H), 4.61 (t, 1H), 4.33 - 3.96 (m, 5H), 3.79 - 3.69 (m, 2H), 3.25 - 3.13 (m, 7H), 3.02 - 2.93 (m, 6H), 1.91-1.86 (m, 3H), 1.70-1.64 (m, 3H), 1.56 - 1.31 (m, 5H), 1.25 (t,2H), 0.89 (dd, 6H).

실시예11:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물13)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: 피롤리딘-1-카르보닐 클로라이드(13B)

pyrrolidine-1-carbonyl chloride

50mL 단구플라스크에 NaHCO₃(5.04g, 60 mmol), 트라이포스겐 (5.94g, 20 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고, 반응액을 -10℃로 냉각시킨 다음 피롤리딘 (2.16 g，30.4 mmol)을 천천히 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 회복하여 밤새 반응하였다. 반응액을 여과하고, 여과액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=3:1), 피롤리딘-1-카르보닐 클로라이드 (13B), 무색유상물질 (2.07 g,수율51.65%)을 얻었다.

¹HNMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.62-3.56 (m, 2H), 3.54-3.44 (m, 2H),2.02-1.90 (m, 4H).

제2단계: 벤질2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(13C)

benzyl 2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (350 mg, 1.3 mmol), 트리에틸아민 (408 mg, 4.03 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고, 실온에서 교반하여 용해하였다. 다음 반응액을 0℃로 냉각시키고 피롤리딘-1-카르보닐 클로라이드(13B) (123 mg, 0.92 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하고 4h 반응하였다. 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3 mol/L염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 벤질2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(13C)조품, 담황색유상액체 (460 mg, 수율100%)를 얻었다.

MS m/z =358.2 [M+H]⁺.

제3단계: 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일(피롤리딘-1-일)메타논(13D)

2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl(pyrrolidin-1-yl)methanone

50mL 단구플라스크에, 벤질2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(13C) 조품 (460 mg, 1.3 mmol), 수산화팔라듐/탄소 (100 mg, 20wt%) 및 이소프로판올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 오일 배스에서 100℃로 가열하고 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고 여과액을 감압농축하여, 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일(피롤리딘-1-일)메타논 (13D) 조품, 담황색고체 (290 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =224.3 [M+H]⁺.

제4단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (13E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일(피롤리딘-1-일)메타논(13D) 조품(167 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (374 mg, 1.95 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (108 mg, 0.81 mmol), 중간체1 (556 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (13E), 백색고체(360 mg, 수율29%)를 얻었다.

제5단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물13)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (13E) (360 mg, 0.38 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)적가하고, 적가 완료 후 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(피롤리딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트(화합물13), 백색고체(169mg, 수율45.6%)를 얻었다.

MS m/z =380.4 [M+2H]⁺/2.

¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.75 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.01 (br, 3H), 7.73 (br, 3H), 7.34 - 7.17 (m, 10H), 4.71 - 4.60 (m, 2H), 4.40-4.32 (m, 1H), 4.08-3.96 (m, 2H), 3.73 -3.23 (m, 8H), 3.16-3.01 (m, 3H), 2.98-2.86 (m, 1H), 2.85 - 2.69 (m, 3H), 1.82 - 1.69 (m, 4H), 1.69 - 1.42 (m, 11H), 1.36-1.22 (m, 2H), 0.89 (dd, 6H).

실시예12:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물14)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: 3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐 클로라이드 (14B)

3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl chloride

50mL 단구플라스크에 NaHCO₃(756 mg, 9.0 mmol), 트라이포스겐 (0.89 g, 4.5 mmol) 및 디클로로메탄 (8 mL)을 첨가하고 반응액을 -10℃로 냉각시킨 다음 3-메틸설포닐아제티딘염산염 (772 mg,4.5 mmol)을 천천히 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 회복하여 밤새 반응하였다. 반응액을 여과하고, 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:1), 무색유상물질 3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐 클로라이드 (14B) (494 mg,수율50%)를 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.62 - 4.32 (m, 4H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 2.93 (s, 3H).

제2단계: 벤질2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (14C)

benzyl 2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (350 mg, 1.3 mmol), 트리에틸아민 (406 mg, 4.01 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 교반하여 용해하였다. 다음 반응액을 0℃로 냉각시키고 3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐 클로라이드(14B) (293 mg, 1.48 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하고 4h 반응하였다. 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3 mol/L염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하여(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 벤질2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (14C), 백색고체 (300 mg, 수율55%)를 얻었다.

MS m/z =422.2 [M+H]⁺;

¹HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.30 - 4.19 (m, 4H), 4.00 - 3.89 (m, 1H), 3.69 (s, 4H), 3.49 - 3.36 (m, 4H), 2.90 (s, 3H), 1.79 - 1.67 (m, 4H).

제3단계: 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일-(3-메틸설포닐아제티딘-1-일)메타논(14D)

2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl-(3-methylsulfonylazetidin-1-yl)methanone

50mL 단구플라스크에, 벤질2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(14C) (300 mg, 0.7 mmol), 수산화팔라듐/탄소 (60 mg, 20wt%) 및 이소프로판올 (20 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 오일 배스에서 100℃로 가열하고 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일-(3-메틸설포닐아제티딘-1-일)메타논 (14D) 조품, 담황색고체 (202 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =288.1 [M+H]⁺.

제4단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (14E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일-(3-메틸설포닐아제티딘-1-일)메타논 (14D)조품(202 mg, 0.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (402 mg, 2.10 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (115 mg, 0.85 mmol), 중간체1 (536 mg, 0.71 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 순차적으로 첨가하고 첨가 완료 후 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=40:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (14E), 담황색고체 (686 mg, 수율96%)를 얻었다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물14)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (14E) (680 mg, 0.66 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(3-메틸설포닐아제티딘-1-카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물14), 백색고체 (330 mg, 수율41.3%)를 얻었다.

MS m/z =412.3 [M+2H]⁺/2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.18 (m, 10H), 4.66 (t, 1H), 4.47 - 4.16 (m, 7H), 3.90-3.72 (m, 4H), 3.69-3.55 (m, 2H), 3.53-3.41 (m, 1H), 3.39 - 3.27 (m, 1H), 3.24-3.14 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 3.09 - 2.90 (m, 4H), 1.94 - 1.26 (m, 14H), 0.92 (d, 6H).

실시예13:

7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물15)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino] -3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(15B)

benzyl 2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (310 mg, 1.2 mmol), 트리에틸아민 (364 mg, 3.6 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 교반하여 용해하였다. 다음 반응액을0℃로 냉각시키고 메틸아미노포르밀클로라이드 (15A) (123 mg, 1.32 mmol)을 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하고 4h 반응하였다. 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3 mol/L염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 벤질2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (15B) 조품, 황색유상 (440 mg, 수율100%)을 얻었다.

MS m/z =318.2 [M+H]⁺;

¹HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 - 7.28 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.66 (s, 4H), 3.50 - 3.36 (m, 4H), 2.79 (s, 3H), 1.82 - 1.63 (m, 4H).

제2단계: N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드(15C)

N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide

50mL 단구플라스크에, 벤질2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (15B) 조품 (260 mg, 0.82 mmol), 수산화팔라듐/탄소 (50 mg, 20wt%) 및 이소프로판올 (20 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 오일 배스에서 100℃로 가열하고 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 (15C) 조품, 담황색고체 (150 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =184.3 [M+H]⁺.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (15D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드(15C) 조품 (150 mg, 0.82 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (374 mg, 1.95 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (110 mg, 0.81 mmol), 중간체1 (565 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=40:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (15D), 담황색고체(480 mg, 수율63%)를 얻었다.

제4단계: 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물15)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino] -3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (15D) (480 mg，0.52 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물15), 백색고체 (260 mg, 수율53%)를 얻었다.

MS m/z =360.3 [M+2H]⁺/2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.28 (m, 6H), 7.27 - 7.21 (m, 4H), 4.66 (t, 1H), 4.30 (t, 1H), 4.21 (t, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 2H), 3.55 - 3.43 (m, 1H), 3.41-3.31 (m, 1H), 3.24-3.12(m, 2H), 3.11 - 2.92 (m, 4H), 2.69 (s, 3H), 1.94 - 1.27 (m, 14H), 0.93 (dd, 6H).

실시예14:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물16)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

제1단계: O7-벤질O2-t-부틸5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트(16B)

O7-benzyl O2-tert-butyl 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxyl ate

50mL 단구플라스크에, 트리에틸아민 (0.85 mL,8.4 mmol), t-부틸5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (16A) (2.1 g, 8.0 mmol) 및 테트라히드로푸란 (15 mL)을 순차적으로 첨가하고 반응액을 0℃로 냉각시킨 다음 벤질클로로포르메이트 (1.5 g, 8.8 mmol)를 천천히 적가하고, 적가 완료 후 0℃를 유지하면서 10분간 반응하고 다시 실온으로 승온하여 5h 계속 교반하였다. 반응액을 여과하고 여과액을 감압농축하여 O7-벤질O2-t-부틸5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트(16B) , 담황색유상생성물 (3.5 g, 수율100%)을 얻었다.

MS m/z =419.3 [M+Na]⁺;

제2단계: 벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (16C)

benzyl 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, O7-벤질O2-t-부틸5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2,7-디카르복실레이트 (16B) (3.17 g，8.0 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (6.0 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 암모니아수로 pH가 약 13이 되도록 조절한 후 분액하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(16C), 황색유상액체 (2.43 g, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

MS m/z =297.1 [M+H]⁺;

제3단계: 벤질5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (16D)

benzyl 5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(16C) (310 mg, 1.05 mmol), 트리에틸아민 (318 mg, 3.14 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 메탄설포닐 클로라이드 (156 mg, 1.36 mmol)적가하여 4시간 반응하였다. 다음 실온으로 승온하고 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (60 mL), 3M염산수용액 (60 mL)으로 순차적으로 세척하여 분액하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=60:1), 벤질5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (16D), 백색고체 (233 mg, 수율59%)를 얻었다.

MS m/z =397.2[M+Na]⁺;

¹HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.29 (m, 5H), 5.15 (s, 2H), 4.09 (d,2H), 3.78-3.59 (m, 4H), 3.51 (t, 2H), 2.89 (s, 3H), 2.08 (s, 2H).

제4단계: 5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(16E)

5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, 벤질5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (16D) (230 mg，0.5 mmol), 팔라듐/탄소 (40 mg，20wt%) 및 이소프로판올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 오일 배스에서 100℃로 가열하고 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (16E), 담황색고체 (155 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =241.1 [M+H]⁺;

제5단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (16F)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난 (16E) (155 mg, 0.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (300 mg, 2.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (115 mg, 0.85 mmol), 중간체1 (377 mg, 0.5 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하고 실온에서 5시간 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=40:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (16F), 백색고체 (380 mg, 수율78%)를 얻었다.

제6단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물16)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (16F) (380 mg，0.34 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(5,5-디플루오로-2-메틸설포닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물16), 백색분말 (270 mg, 수율71%)을 얻었다.

MS m/z =388.8 [M+2H]⁺/2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44-7.17 (m, 10H), 4.66 (t, 1H), 4.42 - 4.13 (m, 4H), 4.13 - 3.49 (m, 7H), 3.25 - 2.92 (m, 9H), 2.30-2.00 (m, 2H), 1.91 - 1.26 (m, 9H), 0.93 (q, 6H)..

실시예15:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물17)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

제1단계: (2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로판산(17B)

(2R-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoic acid

250 mL반응 플라스크에, D-알라닌 (17A) (10 g, 112.24 mmol) 및 물(56 mL)을 첨가하고 반응액을 0℃로 냉각시킨 다음 수산화나트륨 (6.73 g, 168.36 mmol)을 첨가하고 첨가 완료 후 0℃를 유지하면서 10분간 반응하고 다시 디-t-부틸디카보네이트 (31.85 g, 145.91 mmol) 의 테트라히드로푸란 (50 mL) 용액을 적가하고, 적가 완료 후 실온으로 승온하여 밤새 교반하였다. 반응액을 석유 에테르(100 mL Х 2)로 추출하고 유기상을 제거하고 수상을 4M의 염산 용액으로 pH가 약 1이 되도록 산성화 한 다음, 에틸아세테이트 (100 mL Х 4)로 추출하고 유기상을 합병하고 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 (2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로판산 (17B), 무색유상 (21.2 g, 수율: 100%)을 얻었다.

MS m/z =212.1 [M+Na]⁺;

¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.34 (br, 1H), 7.05 (d, 1H), 3.98 - 3.87 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.22 (d, 3H).

제2단계: 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (17C)

benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (335 mg, 1.3 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (748 mg, 3.9 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (211 mg, 1.56 mmol), (2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로판산 (17B) (246 mg, 1.3 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=3:1), 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (17C), 백색고체 (510 mg, 수율91%)를 얻었다.

MS m/Z= 454.3[M+Na]⁺;

제3단계: t-부틸N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(17D)

tert-butyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (17C) (460 mg, 1.1 mmol), 수산화팔라듐/탄소 (92 mg, 20wt%) 및 이소프로판올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 오일 배스에서100℃로 가열하고 8h 반응하였다. 다음 실온으로 강온하고 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 t-부틸N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(17D)조품, 담황색고체 (252 mg, 수율77%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =298.3 [M+H]⁺;

제4단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (17E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트 (17D)조품 (223 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (374 mg, 1.95 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (110 mg, 0.81 mmol), 중간체1 (565 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 순차적으로 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=40:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (17E), 담황색고체 (560 mg, 수율69%)를 얻었다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물17)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트 (17E) (560 mg，0.52 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물17), 백색분말 (310 mg, 수율45%)을 얻었다.

MS m/z =367.3 [M+2H]⁺/2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.28 (m, 6H), 7.26 - 7.20 (m, 4H), 4.65 (t, 2H), 4.33-4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.01 (m, 3H), 3.96 - 3.78 (m, 2H), 3.75 - 3.59 (m, 2H), 3.56 - 3.42 (m, 1H), 3.42 - 3.30 (m, 1H), 3.24-3.12(m, 2H), 3.10 - 2.92 (m, 4H), 1.99 - 1.79 (m, 3H), 1.80-1.63(m, 5H), 1.53 (d, 3H), 1.50-1.30 (m, 5H), 0.92 (dd, 6H).

실시예16:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물18)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18B)

benzyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (0.45g, 2mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(780 mg, 4.1mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (340 mg, 2.5 mmol), (2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)프로판산 (446 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18B), 백색고체 (860 mg, 수율99%)를 얻었다.

MS m/Z= 454.2 [M+Na]⁺.

제2단계: 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18C)

benzyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18B) (0.86 g，2mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18C)조품, 황색유상액체 (660mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

MS m/z =332.2 [M+H]⁺;

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(18D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2- (benzyloxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

100 mL 반응 플라스크에, 벤질N-[(1R)-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(18C) (243 mg, 0.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (300 mg, 2.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (200 mg, 1.0 mmol), 중간체1 (500 mg, 0.7 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=30:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(18D), 담황색고체 (740 mg, 수율99%)를 얻었다.

제4단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (18E)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl] carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(18D) (700 mg, 0.7 mmol), 팔라듐탄소 (140 mg, 20wt%) 및 메탄올 (15 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소분위기에서 실온에서 8h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-1,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (18E)조품, 담황색유상물질(650mg, 수율99%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드; 트리트리플루오로아세트산(화합물18)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane -2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-1,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (18E) 조품(650 mg, 0.7 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드; 트리트리플루오로아세트산(화합물18), 백색분말 (170 mg, 수율19%)을 얻었다.

MS m/z =733.5 [M+H]⁺;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.28 (m, 6H), 7.27 - 7.20 (m, 4H), 4.64 (t, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 4.32-4.23 (m, 2H), 4.21-4.05 (m, 3H), 3.86-3.71 (m, 2H), 3.63 - 3.40 (m, 4H), 3.25-3.10 (m, 2H), 3.10 - 2.90 (m, 4H), 2.00 - 1.60 (m, 8H), 1.60 - 1.29 (m, 8H), 0.92 (dd,6H).

실시예17:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물19)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(19A)

benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

100 mL 반응 플라스크에, 에틸벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (16C) (797 mg, 2.69 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (1.04 g, 5.4 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (400 mg, 3 mmol), 중간체1(2.03 g, 2.69 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=30:1), 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(19A), 담황색고체 (2.49 g, 수율89.6%)를 얻었다.

제2단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19B)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert- butoxycarbonylamino)-1-(5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 벤질2-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(19A) (2.49 g, 2.41 mmol), 팔라듐탄소 (500 mg, 20wt%) 및 메탄올 (25 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 4h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고 여과액을 감압농축하여, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19B)조품, 담황색유상물질(2.16 g, 수율99%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z =899.5 [M+H]+;

제3단계: t-부틸N-(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19B)조품 (400 mg, 0.4 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (0.23 g, 1.2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (70 mg, 0.5 mmol), Boc-D-알라닌(78 mg, 0.41 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여, t-부틸N-(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19C), 담황색고체 (340 mg, 수율79%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물19)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19C)(340 mg, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노프로파노일]-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물19), 백색분말 (170 mg, 수율48%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):385.3[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.29 (m, 6H), 7.27-7.21 (m, 4H), 4.67 - 4.47 (m, 3H), 4.31 - 4.09 (m,5H), 4.09 - 3.76 (m, 3H), 3.74-3.46 (m, 2H), 3.18 (d, 2H), 3.10 - 2.91 (m, 4H), 2.33 - 1.97 (m, 2H), 1.84 - 1.61 (m, 4H), 1.61 - 1.26 (m, 8H), 0.92 (dd, 6H).

실시예18:

(2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드; 디트리플루오로아세트산(화합물20)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (20B)

tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (450 mg, 2.0 mmol)를 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시키고, 교반하면서 트리에틸아민 (606 mg, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 다음 -20°로 강온하고, 아세틸 클로라이드(310 mg, 4.0 mmol)을 적가하고, 적가 완료 후 자연적으로 실온으로 승온하고 2h 교반하였다. 이어서 반응에 0.5M 묽은 염산 수용액 (20mL)을 첨가하고, 교반 분층하여 분액하고 디클로로메탄으로 물층 (20mL Х 2)을 추출하고 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(순에틸아세테이트), t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(20B), 담황색유상액체 (520 mg, 수율 97.0%)를 얻었다.

제2단계: 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)에타논 (20C)

1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethanone

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(20B) (520 mg, 1.9 mmol) 및 디클로로메탄 (6 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 첨가하고 첨가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하고 잔류물에 진한 암모니아수4 mL를 첨가하고 또한 무수황산나트륨을 첨가하여 건조하고 메탄올(20 mL)로 세척하고, 세척액을 농축하여 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)에타논 (20C)조품, 황색유상액체 (250 mg, 수율77%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (20D)

tert-butylN-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)에타논 (20C) (250 mg, 1.49 mmol)을 에틸아세테이트 (10 mL)에 용해시켰다. 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 중간체1 (800 mg, 1.06 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (305 mg, 1.6 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (172 mg, 1.27 mmol)첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 1.5h 반응하였다. 이어서, 반응액에 1M염산수용액 (15 mL)을 첨가하고, 교반한 후 분액하였다. 유기상에 포화탄산나트륨 수용액 (15 mL) 을 첨가하고 30분간 교반한 후 분액하였다. 유기상을 포화염화나트륨 수용액 (15 mL)로 세척하고 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 여과액을 감압농축하여 N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (20D)조품, 담황색포상고체 (0.85 g, 수율88%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: ((2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드; 디트리플루오로아세트산(화합물20)

N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 (20D)조품 (0.85 g, 0.94 mmol)의 조품을 디클로로메탄 (7.5 mL)에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (3.5 mL)을 첨가하여 실온에서 1h 교반하였다. 이어서 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제한 후 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 ((2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드; 디트리플루오로아세트산(화합물20), 백색고체 (310 mg, 수율 40.0%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):352.8[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.46 - 7.17 (m, 10H), 4.64 (t, 1H), 4.29 - 4.05 (m, 5H), 3.83 - 3.74 (m, 2H), 3.57 - 3.35 (m, 4H), 3.24 - 3.11 (m, 2H), 3.09 - 2.93 (m, 4H), 2.17 - 1.29 (m, 16H), 0.92 (dd, 6H).

실시예19:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물21)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(21A)

tert-butyl 2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3A) (129mg, 0.54mmol), 아세트산 (65mg, 1.08mmol), 1,4-티아지난1,1-디옥사이드(72mg, 0.54 mmol), 소듐트리아세톡시보로하이드라이드 (229m g, 1.08mmol) 및 디클로로메탄(20 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 16h 반응하였다. 반응액을 흡인여과하고 여과액을 포화탄산수소나트륨용액(50 mL)으로 세척하고, 분액한 후 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 흡인여과하고, 여과액을 감압 농축하여 (1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(21A), 백색분말 (147mg, 수율76%)을 얻었다.

제2단계: 4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-1,4-티아지난-1,1-디옥사이드(21B)

4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1,4-thiazinane 1,1-dioxide

50 mL반응 플라스크에, (1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(21A)(147mg, 0.41mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-1,4-티아지난-1,1-디옥사이드(21B)조품, 황색유상액체 (106mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(21C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-1,4-티아지난-1,1-디옥사이드(21B)조품(106mg, 0.41 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(94mg, 0.49 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (66 mg, 0.49mmol), 중간체1 (309 mg, 0.41 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(21C), 백색고체(367 mg, 수율90%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물21)

50 mL반응 플라스크에, (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(21C)(367mg, 0.37 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)-7-아자-스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물21), 백색분말 (295 mg, 수율70%)을 얻었다.

MS m/z =397.9 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.36-7.19 (m, 10H), 4.63-4.60 ( m , 1H ) , 4.32-4.16 (m, 3H), 3.92 - 3.78 (m, 1H), 3.63 (d, 9H), 3.53 - 3.22 (m, 3H), 3.15 (d, 2H), 3.01-2.91 (m, 4H), 2.48-2.32 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 2H), 1.75 - 1.23 (m, 13H), 0.89 (dd, 6H).

실시예20:

7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물22)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(22B)

tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 2-Boc-2,7-디아자-스피로[4.4]노난 (22A) (452 mg, 2.0 mmol), 트리에틸아민 (400 mg, 4.0 mmol) 및 디클로로메탄 (15 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 메틸아미노포르밀클로라이드(188 mg, 2.01 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3시간 반응하였다. 반응액에 3 M 묽은 염산(50 mL)을 첨가한 후 디클로로메탄 (60 mL×2) 으로 추출하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(22B), 백색고체 (570 mg, 수율65.5%)를 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.51 - 3.16 (m, 8H), 2.82 (s, 3H), 1.98 - 1.74 (m, 4H), 1.46 (s, 9H).

제2단계: N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드(22C)

N-methyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(22B)(161 mg, 0.568 mmol), 디클로로메탄(10 mL) 및 트리플루오로아세트산 (1.2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하여 N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드(22C)조품, 담황색유상물질를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(22D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드(22C)조품(81 mg, 0.44 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.288 g, 1.5 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (81 mg, 0.6 mmol), 중간체1(330 mg, 0.44 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 순차적으로 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=30:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(22D), 담황색고체 (420 mg, 수율98%)를 얻었다.

제4단계: 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물22)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(22D)(400 mg, 0.44 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물22), 백색분말 (130 mg, 수율31.5%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):360.3[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43-7.19 (m, 10H), 4.68-4.60 (m, 1H), 4.50 - 4.19 (m, 3H), 3.93 - 3.62 (m, 2H), 3.55-3.27 (m, 5H), 3.24 (s, 1H), 3.18 (d, 2H), 3.09 - 2.94 (m, 4H), 2.74-2.66 (m, 3H), 2.10-1.85 (m, 4H), 1.84-1.62 (m, 4H), 1.59-1.43 (m, 4H), 1.43-1.29 (m, 1H), 0.92 (dd, 6H).

실시예21:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물23)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(23A)

tert-butyl 2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(0.48 g, 2 mmol), 피페리딘(0.25 g, 3 mmol) 및 디클로로메탄(10 mL)을 반응 플라스크에 넣고 30min 교반한 후 0-5℃로 냉각시키고, 소듐시아노보로하이드라이드(0.13g, 4mmol)를 첨가하고; 첨가 완료 후 실온에서 4h 반응하고 TLC로 반응이 완전히됨을 모니터링 하였다. 디클로로메탄(10 mL) 및 물 (10 mL)을 첨가하여 5min 교반하고 방치하여 분층하고 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하고 감압농축하여 t-부틸2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(23A)조품, 담황색고체(0.53g, 수율86%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제2단계: 2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난 트리플루오로아세테이트(23B)

2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane;2,2,2-trifluoroacetic acid

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에서, t-부틸2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(23A, 0.53 g, 1.7 mmol)를 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하고 교반하면서 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 2h 반응하였다. TLC로 반응이 완전히됨을 모니터링 하고, 건조되게 감압농축하여 2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난 트리플루오로아세테이트(23B), 담황색유상물질(0.50 g, 수율90%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(23C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, 2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난 트리플루오로아세테이트(23B, 0.50 g, 1.60 mmol)를 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하였다. 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 중간체1(0.50 g, 0.66 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (190 mg, 0.99 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸(110 mg, 0.81 mmol)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 이어서 반응액에 1M 염산수용액(15 mL)을 첨가하고 교반한 후 분액하였다. 유기상에 포화탄산나트륨 수용액(15 mL)을 첨가하고 30min 교반한 후 분액하였다. 유기상을 포화염화나트륨 수용액(15 mL)으로 세척하고 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하고 여과액을 감압농축하여, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(23C)조품, 담황색포상고체(0.45 g, 수율72%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물23)

t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(23C)조품 (0.45 g, 0.48 mmol)의 조품을 디클로로메탄 (7.5 mL)에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (3.5 mL)을 첨가하여 실온에서 1h 교반하였다. 이어서 반응액을 감압농축하고 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제한 후(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(1-피페리딜)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물23), 백색고체 (260 mg, 수율56%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):372.9[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ7.48 - 7.09 (m, 10H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.34 - 4.17 (m, 2H), 3.73 - 3.52 (m, 3H), 3.52 - 2.92 (m, 10H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.47 - 2.24 (m, 2H), 2.05 - 1.88 (m, 4H), 1.88 - 1.20 (m, 18H), 1.00 - 0.81 (m, 6H).

실시예22:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난2-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드트리트리플루오로아세테이트 (화합물24)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (24A)

tert-butyl7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.4]노난-2-카르복실레이트 (6A) (0.452 g, 2 mmol), 테트라하이드로-4H-피란-4-온(200 mg, 2 mmol), 아세트산 (120 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로에탄 (7 mL)을 첨가하고 0.5h 교반하고 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(0.636g，3mmol)첨가하고 5h 반응한 후 반응액을 물(10 mL)로 ??칭하고 에틸아세테이트 (5 mL Х 3)로 추출하고 유기상을 합병하고 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고，잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (24A), 담황색유상물질 (500 mg, 수율80.64%)를 얻었다.

MS m/z =311.2[M+H]⁺.

제2단계: 7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난(24B)

7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (24A) (0.5 g, 1.61 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난(24B) 조품, 담황색유상액체 (338 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2옥소에틸]카바메이트 (24C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난(24B)조품(338mg, 1.61 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (384 mg, 2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (270mg, 2 mmol), 중간체1 (400mg, 0.53 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2옥소에틸]카바메이트 (24C), 백색고체 (200 mg, 수율39.93%)를 얻었다.

제4단계: 2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난2-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드트리트리플루오로아세테이트(화합물24)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2옥소에틸]카바메이트 (24C) (200 mg, 0.21 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-테트라하이드로피란-4-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난2-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드트리트리플루오로아세테이트(화합물24), 백색분말 (135 mg, 수율86.1%)을 얻었다.

MS m/z =373.9[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.46 - 7.29 (m, 10H), 4.71 (t, 1H), 4.27 - 4.16 (m, 7H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.66 - 3.53(m, 5H), 3.25-3.05 (m, 8H), 2.34-2.13 (m, 6H), 1.79-1.43(m，11H), 1.02-0.95 (m, 6H).

실시예23:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물25)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(25A)

tert-butyl 2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3A) (131mg，0.55 mmol), 아세트산 (66 mg, 1.1 mmol), 피롤리딘(39 mg, 0.55mmol), 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(233 mg, 1.1 mmol) 및 디클로로메탄(20 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 6h 반응하였다. 반응액을 흡인여과하고 여과액을 포화탄산수소나트륨용액(30 mL)으로 세척하고 분액한 후 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 흡인여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(25A)), 백색분말 (120 mg, 수율75%)을 얻었다.

제2단계: 2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난(25B)

2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, t-부틸(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(25A)(120 mg，0.41mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난(25B)조품, 황색유상액체 (80mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 （25C）

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난(25B)조품(80 mg, 0.41 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(96 mg, 0.5 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (67.5 mg, 0.5 mmol), 중간체1 (309 mg, 0.41 mmol) 및 디클로로메탄 (20mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트（25C）, 담황색고체(344 mg, 수율90%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물25)

50 mL반응 플라스크에, (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트（25C）(344mg，0.37 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 ((2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물25), 백색분말 (249 mg, 수율70%)을 얻었다.

MS m/z =365.8 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.13 (m, 10H), 4.71-4.70 ( m , 1H), 4.62 (t,1H), 4.30 - 4.17 (m, 2H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 3.68 - 3.39 (m, 5H), 3.38 - 3.21 (m, 1H), 3.15 (d, 2H), 3.06-2.90 (m, 6H), 2.43 - 2.25 (m, 2H), 2.16 - 1.89 (m, 6H), 1.78 - 1.27 (m, 13H), 0.89 (dd, 6H).

실시예24:

(2R)-1-[7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산 트리트리플루오로아세테이트(화합물26)

(2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸2-[(2R)-2-메톡시카르보닐피롤리딘-1-일]-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 26A

tert-butyl2-[(2R)-2-methoxycarbonylpyrrolidin-1-yl]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(3A) (287 mg, 1.2 mmol), 아세트산 (144 mg, 2.4 mmol), D-프롤린메틸에스테르(154 mg, 1.2 mmol), 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(233 mg, 2.4 mmol) 및 디클로로메탄(30 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 6h 반응하였다. 반응액을 흡인여과하고, 여과액을 포화탄산수소나트륨용액(50 mL)으로 세척하고 분액한 후 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 흡인여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸2-피롤리딘-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(26A)), 백색분말 (275 mg, 수율65%)을 얻었다.

제2단계: 메틸(2R)-1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피롤리딘-2-카르복실레이트 (26B)

methyl (2R)-1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)pyrrolidine-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-[(2R)-2-메톡시카르보닐피롤리딘-1-일]-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 26A(275 mg, 0.78mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 메틸(2R)-1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피롤리딘-2-카르복실레이트 (26B), 황색유상액체 (196 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: 메틸(2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실레이트 (26C)

Methyl (2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R) -2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl] amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 메틸(2R)-1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피롤리딘-2-카르복실레이트 26B (196 mg, 0.78 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (180 mg, 0.94 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (127 mg, 0.94 mmol), 중간체1 (587 mg, 0.78 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 메틸(2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실레이트 (26C), 백색고체(385 mg, 수율50%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산 （26D）

(2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid

실온에서 메틸(2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실레이트26C (385 mg, 0.39 mmol)를 메탄올 (5 mL)에 용해시키고 수산화나트륨 (16 mg, 0.4 mmol)의 수용액(10 mL)을 반응액에 첨가하여 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 1M 염산수용액으로 pH<4가 되도록 조절하고, 에틸아세테이트 (20 mL)로 추출하여 분액하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축한 후 (2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산（26D）, 백색고체(345 mg, 수율93%)를 얻었다.

제5단계: (2R)-1-[7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산 트리트리플루오로아세테이트(화합물26)

50 mL반응 플라스크에, (2R)-1-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일)아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자-스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산（26D） (345mg, 0.36 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-1-[7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피롤리딘-2-카르복실산 트리트리플루오로아세테이트(화합물26) , 백색분말 (240 mg, 수율60%)을 얻었다.

MS m/z =387.8 [M+2H]⁺ /2;

1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.44 - 7.09 (m, 10H), 4.27-4.19 (m, 3H), 3.96-3.84 (m, 2H), 3.67-3.50 (m, 3H), 3.48-3.21 (m, 3H), 3.19 - 2.89 (m, 7H), 2.50 - 2.22 (m, 3H), 2.18 - 1.91 (m, 5H), 1.78 - 1.24 (m, 13H), 0.88 (dd, 6H).

실시예25:

2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물27)

2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로-[3.5]노난-2-카르복실레이트(27A)

tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

질소 보호에서 2-t-부톡시카르보닐-2,7-디아자스피로[3.5]노난(0.45 g, 2 mmol), 디클로로메탄(10 mL) 및 트리에틸아민(0.30 g, 3 mmol)을 반응 플라스크에 첨가하고; 0-5℃로 냉각시키고 메틸아미노포르밀클로라이드(0.20 g, 2.2 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 냉각을 제거하고 실온으로 승온하여 1h 반응하였다. TLC로 반응이 완전히됨을 모니터링하고 디클로로메탄(10 mL) 및 물(10 mL)을 첨가하고 5min 교반한 후 방치하여 분층하고; 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하고 감압농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄/메탄올= (v/v)20/1), t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로-[3.5]노난-2-카르복실레이트(27A), 담황색유상물질(0.48 g, 수율85%)을 얻었다.

제2단계: N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드트리플루오로아세테이트(27B)

N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로-[3.5]노난-2-카르복실레이트(27A, 0.48 g, 1.7 mmol)를 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하고 교반하면서 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 2h 반응하였다. TLC로 반응이 완전히됨을 모니터링하고 건조되게 감압농축하여 N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드트리플루오로아세테이트(27B), 담황색유상물질(0.49 g, 수율97%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(27C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert- butoxycarbonylamino)-1-[7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

질소 보호에서 50 mL반응 플라스크에, N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드트리플루오로아세테이트(27B)조품(0.48 g, 2.60 mmol)을 디클로로메탄(10 mL)에 첨가하였다. 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 중간체1(0.50 g, 0.66 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (200 mg, 1.73 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸(125 mg, 0.93 mmol)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 이어서 반응액에 1M 염산수용액(15 mL)을 첨가하고 교반한 후 분액하였다. 유기상에 포화탄산나트륨 수용액(15 mL)을 첨가하고 30분간 교반한 후 분액하였다. 유기상을 포화염화나트륨 수용액(15 mL)으로 세척하고 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하고 여과액을 감압농축하여 t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(27C)조품, 담황색포상고체(0.5 g, 수율80%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제4단계: 2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물27)

t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(27C)조품 (0.5 g, 0.5 mmol)의 조품을 디클로로메탄 (7.5 mL)에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (3.5 mL)첨가하고 실온에서 1h 교반하였다. 이어서 반응액을 감압농축하고 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제한 후(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여, 동결 건조하여 2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물27), 백색고체 (220mg, 수율40%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):360.3[M+1H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.45 - 7.16 (m, 10H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.19 - 3.99 (m, 3H), 3.83 - 3.66 (m, 2H), 3.40 - 3.22 (m, 4H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 3.06 - 2.99(m, 4H), 2.69 (s, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 8H), 1.58 - 1.27 (m, 5H), 1.03 - 0.79 (m, 6H).

실시예26:

7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물28)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(28A)

benzyl 5,5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 에틸벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(16C) (330 mg, 1.11 mmol), 트리에틸아민 (364 mg, 3.6 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 메틸아미노포르밀클로라이드(104 mg，1.11 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3시간 반응하였다. 반응액에 3 M묽은 염산(50 mL)을 첨가하고 디클로로메탄 (60 mL×2)으로 추출하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 벤질5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(28A), 백색고체 (268 mg, 수율68.6%)를 얻었다.

MS m/z (ESI):354.1[M+H]+;

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 - 7.28 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 4.09 (d,2H), 3.65 (dd, 4H), 3.51 - 3.44 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.01 (s, 2H).

제2단계: 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드(28B)

5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide

50 mL반응 플라스크에, 벤질5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(28A)(269 mg, 0.76 mmol), 팔라듐탄소 (54 mg, 20wt%) 및 메탄올 (5 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 다음 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드(28B)조품, 담황색유상물질(164 mg, 수율98.55%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

MS m/z (ESI):220.2[M+H]+;

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(28C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[5,5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드(28B)조품(164 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.374 g, 1.95 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (110 mg, 0.81 mmol), 중간체1(565 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 순차적으로 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(28C), 담황색고체 (600 mg, 수율84%)를 얻었다.

제4단계: 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물28)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide;ditrifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-2-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(28C)(600 mg, 0.6 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 7-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복사미드 디트리플루오로아세트산(화합물28), 백색분말 (100 mg, 수율13%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):755.5[M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.18 (m, 10H), 4.86 - 4.75 (m, 1H), 4.65 (t, 1H), 4.39 - 4.17 (m, 2H), 4.15-4.05 (m, 2H), 4.04 - 3.45 (m, 6H), 3.24 - 3.10 (m, 2H), 3.10 - 2.90 (m, 4H), 2.77 - 2.60 (m, 3H), 2.06 (d, 2H), 1.85-1.61 (m, 4H), 1.60-1.46 (m, 3H), 1.45-1.27 (m, 2H), 0.92 (dt, 6H).

실시예27:

2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물29)

2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide ditrifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(29B)

tert-butyl5,5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 에틸벤질5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(16C) (113 mg, 0.43 mmol), 트리에틸아민 (43 mg, 0.43 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 메틸아미노포르밀클로라이드(42 mg，0.45 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3시간 반응하였다. 반응액에 0.3 M묽은 염산(10 mL)을 첨가한 후 디클로로메탄 (5 mL×2)으로 추출하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(29B), 백색고체 (96 mg, 수율70%)를 얻었다.

제2단계 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드（29C）

5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide

50 mL반응 플라스크에, t-부틸5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(29B) (96 mg, 0.3mmol) 및 디클로로메탄 (8 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 (29C), 황색유상액체 (66mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트（29D）

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[5,5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 （29C）(66mg, 0.3 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (239 mg, 0.36 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (49 mg, 0.36 mmol), 중간체1 (226 mg, 0.3 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(29D), 백색고체(286mg, 수율90%)를 얻었다.

제4단계: 2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물29)

50 mL반응 플라스크에, (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[5,5-디플루오로-7-(메틸카르바모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트（29D）(286mg, 0.3 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 2-[(2R)-6-아미노-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]헥사노일]-5,5-디플루오로-N-메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복사미드 디트리플루오로아세테이트(화합물29), 백색분말 (192 mg, 수율65%)을 얻었다.

MS m/z =378.3 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.46 - 7.12 (m, 10H), 4.64-4.58 (m, 1H), 4.53-4.43 (m, 1H), 4.26-4.19 (m, 2H), 4.17 - 4.02 (m, 3H), 3.80-3.76 (m, 1H), 3.72-3.57 (m, 2H), 3.36 (s, 2H), 3.19-3.11 (m, 2H), 3.03-2.95(m, 4H), 2.68 (s, 3H), 2.03-1.99 (m 2H), 1.75-1.63 (m, 4H), 1.54 - 1.26 (m, 5H), 0.89 (dd, 6H).

실시예28:

(2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물30)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (30A)

tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트(A) (0.414 g, 2 mmol), 트리에틸아민 (420 mg, 4.0 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 아세틸 클로라이드 (188 mg, 2.4 mmol)를 적가하고 10min 반응하였다. 다음 실온으로 승온하고 3h 교반한 후, 반응 시스템을 포화탄산수소나트륨 수용액 (10 mL)으로 ??칭하고, 에틸아세테이트 (5 mL Х 3)로 추출하고 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (30A), 담황색유상물질 (411 mg, 수율81%)을 얻었다.

MS m/z =255.2[M+H]⁺.

제2단계: 7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(30B)

7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (30A) (0.41 g, 1.62 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(30B) 조품, 담황색유상액체 (249 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (30C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4] octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(30B) 조품 (249mg, 1.62 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (384 mg, 2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (270 mg, 2 mmol), 중간체1 (400 mg, 0.53 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (30C), 백색고체 (200 mg, 수율42.3%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물30)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (30C) (200 mg, 0.22 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물30), 백색분말 (120 mg, 수율79.1%)을 얻었다.

MS m/z =345.9[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.45 - 7.29 (m, 10H), 4.71 (t, 1H), 4.37 - 4.2 (m, 5H), 4.05-4.00 (m, 2H), 3.82 - 3.52 (m, 4H), 3.26-3.05 (m, 6H), 2.32-2.11 (m, 5H), 1.8-1.76 (m, 4H), 1.61-1.45 (m, 5H), 1.02-0.96 (dd, 6H).

실시예29:

(2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물31)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(31A)

tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, 2-Boc-2,7-디아자-스피로[4.4]노난 (22A) (452 mg, 2.0 mmol), 트리에틸아민 (400 mg, 4.0 mmol) 및 디클로로메탄 (15 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 아세틸 클로라이드(160 mg，2.0 mmol)를 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 4시간 반응하였다. 반응액에 1 M묽은 염산(50 mL)을 첨가하고 디클로로메탄 (60 mL×2)으로 추출하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(31A), 담황색유상물질 (392 mg, 수율73%)을 얻었다.

MS m/z =291.2[M+Na]⁺.

제2단계: 1-(2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-일)에타논(31B)

1-(2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl)ethanone

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트(31A)(161 mg, 0.6 mmol), 디클로로메탄(10 mL) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하여 1-(2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-일)에타논(31B)조품, 담황색유상물질 (100 mg, 수율99%)을 얻었다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(31C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4] nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-일)에타논(31B)조품(100 mg, 0.6 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.288 g, 1.5 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (81 mg, 0.6 mmol), 중간체1(400 mg, 0.5 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 순차적으로 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=30:1), t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(31C), 담황색고체 (120 mg, 수율22%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물31)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(31C)(120 mg, 0.22 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물31), 백색분말 (77 mg, 수율85%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):352.7[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43-7.18 (m, 10H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.47 - 4.19 (m, 3H), 3.91 - 3.27 (m, 8H), 3.18 (d, 2H), 3.08-2.92 (m, 4H), 2.13 - 1.86 (m, 7H), 1.85-1.63 (m, 4H), 1.62-1.27 (m, 5H), 0.92 (dd,6H).

실시예30:

(2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물32)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(32A)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro [3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(19B) (430 mg, 0.48 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(0.18 g, 0.94 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (71 mg, 0.53 mmol), 아세트산(28.8 mg, 0.48 mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 순차적으로 첨가하고 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(32A), 백색고체 (430 mg, 수율95%)를 얻었다.

제2단계: (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물32)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(32A)(430 mg, 0.46 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-1-(7-아세틸-5,5-디플루오로-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐)-5-아미노-펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물32), 백색분말 (273 mg, 수율61%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):370.8[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.43 - 7.19 (m, 10H), 4.67-4.60 (m, 1H), 4.58-4.47 (m, 1H), 4.31 - 4.08 (m, 5H), 3.98 - 3.70 (m, 3H), 3.70-3.43 (m, 2H), 3.18 (d, 2H), 3.06 - 2.94 (m, 4H), 2.23 - 1.94 (m, 5H), 1.80-1.63 (m, 4H), 1.56 - 1.29 (m, 5H), 0.91 (dd, 6H).

실시예31:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물33)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; tri-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(33A)

tert-butyl 7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL 반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (0.452 g, 2.0 mmol), 아세트산 (0.24 g, 4.0 mmol), 3-옥세타논(0.288 g, 4.0 mmol), 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(1.48 g, 6.98 mmol) 및 디클로로메탄(20 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 16h 반응하였다. 반응액을 여과하고 여과액을 포화탄산수소나트륨용액(50 mL)으로 세척하고 분액한 후 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(33A), 백색분말 (432 mg, 수율76%)을 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.67-4.55 (m, 4H), 3.61 (s, 4H), 3.41 (p, 1H), 2.19 (s, 4H), 1.78 (t, 4H), 1.44 (s, 9H).

제2단계: 7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난(33B)

7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(33A)(0.14 g, 0.5 mmol) 및 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (57 mg,ㅠ0.5 mmol)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난(33B)조품, 황색유상액체 (70.5 mg, 수율88%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(33C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

100 mL 반응 플라스크에, 7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난(33B)조품(70.5 mg, 0.44 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (288 mg, 1.5 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (81 mg, 0.60 mmol), 중간체1 (330 mg, 0.44 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(33C), 담황색고체 (400 mg, 수율99%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물33)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-일]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(33C)(400 mg, 0.40 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 다음 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(옥세탄-3-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물33), 백색분말 (160 mg, 수율56%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):359.8[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.42 - 7.20 (m, 10H), 4.96 (t, 2H), 4.85 (dd, 2H), 4.66 - 4.56 (m, 2H), 4.48 - 4.35 (m, 2H), 4.30-4.10 (m, 5H), 3.84 (s, 2H), 3.43(br, 1H),3.17 (d, 2H), 3.14(s,1H),3.07-2.93 (m, 4H), 2.12 (br, 4H), 1.80 - 1.60 (m, 4H), 1.58 - 1.29 (m, 5H), 0.91 (dd, 6H).

실시예32:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물34)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(34A)

tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (0.452 g, 2 mmol), 트리에틸아민 (400 mg, 4.0 mmol) 및 디클로로메탄 (15 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 디메틸술파모일 클로라이드(287 mg, 2.0 mmol)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3시간 반응하였다. 반응액에 3M묽은 염산(50 mL)을 첨가한 후 디클로로메탄 (60 mL×2)으로 추출하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여 t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(34A)조품, 담황색고체 (440mg, 수율66%)를 얻었다.

제2단계: N,N-디메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-술폰아미드(34B)

N,N-dimethyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-sulfonamide

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(34A)조품(0.22 g, 0.66 mmol) 및 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 N,N-디메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-술폰아미드(34B)조품, 황색유상액체 (103 mg, 수율76%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(34C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

100 mL 반응 플라스크에, N,N-디메틸-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-술폰아미드(34B)조품(103 mg, 0.44 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (288 mg, 1.5 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (81 mg, 0.60 mmol), 중간체1 (330 mg, 0.44 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(34C), 담황색고체 (240 mg, 수율56%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물34)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(34C)(400 mg, 0.4 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물34), 백색분말 (130 mg, 수율29%)을 얻었다.

MS m/z (ESI):385.3[M+2H]^+/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.46 - 7.29 (m, 6H), 7.29 - 7.18 (m, 4H), 4.65 (t, 1H), 4.32 - 3.99 (m, 5H), 3.85 - 3.68 (m, 2H), 3.35 - 3.11 (m, 6H), 3.11 - 2.92 (m, 4H), 2.81 (d, 6H), 1.96 - 1.79 (m, 4H), 1.71 (dd, 4H), 1.60 - 1.32 (m, 5H), 0.93 (dd, 6H).

실시예33:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물35)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (35A)

tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (A) (0.414 g, 2 mmol), 트리에틸아민 (420 mg, 4.0 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 교반하여 용해하였다. -10℃로 냉각시키고 디메틸술파모일 클로라이드 (343 mg, 2.4 mmol)을 적가하고 10분간 반응하였다. 다음 실온으로 승온하고 3 h 교반하고 반응액을 포화탄산수소나트륨 수용액 (10 mL)으로 ??칭하고 에틸아세테이트 (5 mL Х 3)로 추출하고 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (35A), 담황색유상물질 (414 mg, 수율0.65%)을 얻었다.

MS m/z =320.2[M+H]⁺;

제2단계: 7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(35B)

7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane

50 mL 반응 플라스크에, t-부틸7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (35A) (0.41 g, 1.3 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(35B) 조품, 담황색유상액체 (284 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-디메틸술파모일-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (35C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-dimethylsulfamoyl-2,7- diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄(35B) 조품 (284mg, 1.3 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (384 mg, 2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (270mg, 2 mmol), 중간체1 (400mg, 0.53 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (35C), 백색고체 (201 mg, 수율39.7%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물35)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-아세틸-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐)-5(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소에틸]아미노]-1-벤질-2옥소에틸]카바메이트 (35C) (201 mg, 0.17 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-(7-(디메틸술파모일)-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세테이트 (화합물35), 백색분말 (115 mg, 수율89.7%)을 얻었다.

MS m/z =378.3[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.46 - 7.29 (m, 10H), 4.71 (t, 1H), 4.38 - 4.21 (m, 5H), 4.07-4.05 (m, 2H), 3.60 - 3.46 (m, 4H), 3.23-3.05 (m, 6H), 2.9-2.89 (d, 6H), 2.32-2.26(m，2H)1.8-1.59 (m, 9H), 1.02-0.96 (dd, 6H).

실시예34:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드테트라트리플루오로아세테이트(화합물36)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tetra -trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸2-(4-벤질옥시카르보닐피페라진-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (36A)

tert-butyl2-(4-benzyloxycarbonylpiperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (C) (0.478 g, 2 mmol), 벤질-1-피페라진카보네이트(440 mg, 2 mmol), 아세트산 (120 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로에탄 (7 mL)을 첨가하고 반시간 교반하고 소듐트리아세톡시보로하이드라이드(0.636g, 3mmol)를 첨가하고 5h 반응시키고 반응 시스템을 물(10 mL)로 ??칭하고 에틸아세테이트 (5 mL Х 3) 로 추출하고 유기상을 합병하고 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 농축하고 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=4:1), t-부틸2-(4-벤질옥시카르보닐피페라진-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (36A), 담황색유상물질 (450mg, 수율50.79%)을 얻었다.

MS m/z =444.2[M+H]⁺;

제2단계: 벤질4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(36B)

benzyl 4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2-(4-벤질옥시카르보닐피페라진-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (36A) (0.45 g, 1.20 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 벤질4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(36B)조품, 담황색유상액체 (411 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: 벤질4-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피페라진-1-카르복실레이트 (36C)

benzyl4-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]piperazine-1-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질4-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(36B)조품 (411 mg, 1. 2 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (384 mg, 2 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (270 mg, 2 mmol), 중간체1 (400 mg, 0.53 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), 벤질4-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피페라진-1-카르복실레이트 (36C), 백색고체 (300mg, 수율52.4%)를 얻었다.

제4단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(36D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert- butoxycarbonylamino)-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, 벤질4-[7-[(2R)-6-(t-부톡시카르보닐아미노)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸펜타노일]아미노]헥사노일]-7-아자스피로[3.5]노난-2-일]피페라진-1-카르복실레이트 (36C) (300 mg, 0.27 mmol) 및 메탄올 (5 mL), 및Pd/C(30 mg)을 첨가하고 수소 분위기에서 실온에서 4h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 감압농축하여 t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(36D)(255 mg, 100%)를 얻어 그대로 다음 단계에 적용하였다.

제5단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드테트라트리플루오로아세테이트(화합물36)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tetra-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(36D)조품 (255 mg, 0.27 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-피페라진-1-일-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드테트라트리플루오로아세테이트(화합물36), 백색분말 (160 mg, 수율77.6%)을 얻었다.

MS m/z =373.4[M+2H]⁺/2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.47 - 7.30 (m, 10H), 4.71 (t, 1H), 4.36 - 4.29 (m, 2H), 3.90-3.86 (m, 1H), 3.85 - 3.24 (m, 12H), 3.23-3.04 (m, 6H), 2.52-2.44 (m, 2H), 2.14-2.12(m,2H),1.77-1.47(m，14H), 1.03-0.96 (dd, 6H).

실시예35:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물37)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri- trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (37A)

tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (83 mg, 0.35 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (80 mg, 0.42 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (57 mg, 0.42 mmol), (2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로피온산 (105 mg, 0.35 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (37A), 백색고체 (177 mg, 수율80%)를 얻었다.

제2단계: 벤질N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-옥소-에틸]카바메이트 (37B)

Benzyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트（37A）(177mg, 0.35mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 벤질N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-옥소-에틸]카바메이트 （37B）, 황색유상액체 (143 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(37C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 벤질N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-옥소-에틸]카바메이트 （37B）(143 mg, 0.35 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (80 mg, 0.42 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (57 mg, 0.42mmol), 중간체1 (264 mg, 0.35 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트（37C）, 백색고체(400 mg, 수율99%)를 얻었다.

제4단계: t-부틸N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트(37D)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino) pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트37C (400 mg, 0.35mmol), 팔라듐탄소 (80 mg, 20wt%l) 및 메탄올 (20mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트（37D）조품, 담황색고체(353 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물37)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트（37D）(353mg, 0.35 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고(분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트 (화합물37), 백색분말 (282 mg, 수율70%)을 얻었다.

MS m/z =405.3 [M+2H]⁺ /2;

1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.52 - 7.09 (m, 15H), 4.78-4.74 ( m,1H ) ,4.64-4.58 ( m , 1H ), 4.26-4.19 (m, 2H), 4.15 - 3.96 (m, 3H), 3.83 (d, 1H), 3.71-3.63 (m, 1H), 3.59-3.50(m, 1H)3.43 - 2.90 (m, 11H), 1.90 - 1.18 (m, 13H), 0.98 - 0.80 (m, 6H).

실시예36:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물38)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

제1단계 t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (38A)

tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-2-carboxylate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (93mg, 0.41mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (94mg, 0.49 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (66 mg, 0.49 mmol), (2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)프로판산 (446 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (38A), 백색고체 (175 mg, 수율90%)를 얻었다.

제2단계 벤질N-[(1R)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-3-메틸-부틸]카바메이트（38B）

Benzyl N-[(1R)-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-3-methyl-butyl] carbamate

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 （38A）(175mg, 0.37mmol) 및 디클로로메탄 (20 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (2mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 벤질N-[(1R)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-3-메틸-부틸]카바메이트（38B）, 황색유상액체 (138mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계 t-부틸N-(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트 (38C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 벤질N-[(1R)-1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)-3-메틸-부틸]카바메이트(38B) (138mg, 0.37 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(84 mg, 0.44 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸(59 mg, 0.44 mmol), 중간체1 (279 mg, 0.37 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(38C), 백색고체(366 mg, 수율90%)를 얻었다.

제4단계: t-부틸N-(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트 38D

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, (1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(벤질옥시카르보닐)-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐아미노)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트（38C）(366 mg, 0.33mmol), 팔라듐탄소 (73 mg, 20wt%l) 및 메탄올(20mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 (1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트（38D）조품, 담황색고체(322 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물38)

50 mL반응 플라스크에, (1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]-5-(t-부톡시카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]아미노]-1-벤질-2-옥소-에틸]카바메이트（38D）(322mg, 0.33 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-[(2R)-2-아미노-4-메틸-펜타노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세테이트(화합물38) , 백색분말 (240 mg, 수율65%)을 얻었다.

MS m/z =388.3 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.14 (m, 10H), 4.61 (t, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.28 - 4.02 (m, 5H), 3.83 - 3.70 (m, 2H), 3.66 - 3.36 (m, 4H), 3.14 (t, 2H), 2.97 (t, 4H), 1.94 - 1.64 (m, 10H), 1.54-1.30(m, 6H), 1.01-0.81 (m, 12H).

실시예37:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물39)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(39A)

benzyl 2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (390 mg, 1.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (760 mg, 4.9 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (300 mg, 2.0 mmol), 시클로프로판카르복실산 (172 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 벤질2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(39A), 담황색유상물질(320 mg, 수율65%)을 얻었다.

제2단계: 시클로프로필(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)메타논(39B)

cyclopropyl(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methanone

50mL 단구플라스크에, 벤질2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(39A) (320 mg, 0.97 mmol), 팔라듐탄소 (64 mg, 20wt%l) 및 메탄올 (10mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 시클로프로필(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)메타논(39B) 조품, 담황색고체(189mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(39C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 시클로프로필(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)메타논(39B) 조품 (189 mg, 0.75 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (216 mg, 1.13 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (122 mg, 0.9 mmol), 중간체1 (565 mg, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (30mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(39C), 담황색고체 (410 mg, 수율45%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물39)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(39C)(410 mg, 0.44 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물39), 백색분말 (330 mg, 수율78%)을 얻었다.

MS m/z =365.8 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.45-7.18 (m, 10H), 4.66 (t, 1H), 4.26 (dt, 2H), 4.13 (d, 2H), 3.78 (d, 2H), 3.71-3.61 (m, 2H), 3.56-3.45 (m, 1H), 3.42-3.31 (m, 1H), 3.18 (d, 2H), 3.10-2.93 (m, 4H), 1.99 - 1.30 (m, 15H), 1.01-0.77 (m, 10H).

실시예38:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물40)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: t-부틸7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(40A)

tert-butyl 7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

50mL 단구플라스크에, t-부틸2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(6A) (0.453 g, 2.0 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (767 mg, 4.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (324 mg, 2.4 mmol), 시클로프로판카르복실산 (176 mg, 2.2 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(40A), 담황색유상물질(590 mg, 수율96%)을 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.68 (s, 4H), 3.62 - 3.52 (m, 4H), 1.81 - 1.69 (m, 5H), 1.45 (s, 9H), 1.00 - 0.93 (m, 2H), 0.78 - 0.71 (m, 2H).

제2단계: 시클로프로필(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)메타논(40B)

cyclopropyl(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)methanone

50 mL반응 플라스크에, t-부틸7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트(40A)(0.25 g, 0.83 mmol) 및 디클로로메탄 (7 mL)을 첨가하고 실온에서 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 적가하고, 적가 완료 후 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 직접 감압농축하여 시클로프로필(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)메타논(40B)조품, 황색유상액체 (161 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 적용하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(40C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, (2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)메타논(40B)조품(0.16 g, 0.83 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (239 mg, 1.25 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (135 mg, 1.0 mmol), 중간체1 (625 mg, 0.83 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(40C), 담황색고체(700 mg, 수율90%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물40)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(40C)(700 mg, 0.75 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[7-(시클로프로판카르보닐)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물40), 백색분말 (200 mg, 수율28%)을 얻었다.

MS m/z =365.8 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.40 -7.17 (m, 10H), 4.62 (t, 1H), 4.32-4.00 (m, 5H), 3.82-3.60 (m, 4H), 3.48 (br, 2H), 3.23 - 3.08 (m, 2H), 3.07-2.91 (m, 4H), 2.01 - 1.61 (m, 9H), 1.58 - 1.27 (m, 5H), 0.97 - 0.67 (m, 10H).

실시예39:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물41)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; tri-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(41A)

benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (390 mg, 1.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (760 mg, 4.9 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (300 mg, 2.0 mmol), Boc-D-페닐알라닌 (530 mg, 2.0 mmol) 및 디클로로메탄 (50mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여(디클로로메탄:메탄올(v:v)=50:1), 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(41A), 백색고체(514 mg, 수율67%)를 얻었다.

제2단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-옥소-에틸]카바메이트(41B)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 벤질2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(41A) (514 mg, 1.01 mmol), 팔라듐탄소 (100 mg, 20wt%) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-옥소-에틸]카바메이트(41B) 조품, 담황색고체(377 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(41C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-옥소-에틸]카바메이트(41B) 조품 (377 mg, 1.01 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (290 mg, 1.52 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (164 mg, 1.21 mmol), 중간체1 (761 mg, 1.01 mmol) 및 디클로로메탄 (30 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (석유 에테르 : 에틸아세테이트(v:v)=1:2), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(41C), 담황색고체 (410 mg, 수율36.6%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물41)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide;tri-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-[(2R)-2-(t-부톡시카르보닐아미노)-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소에틸]카바메이트(41C)(410 mg, 0.37 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 트리트리플루오로아세트산(화합물41), 백색분말 (298 mg, 수율70%)을 얻었다.

MS m/z =405.4 [M+2H]⁺ /2;

¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.52 - 7.28 (m, 11H), 7.28-7.20 (m, 4H), 4.67 - 4.62 (m, 1H), 4.32 - 4.15 (m, 3H), 3.85 - 3.38 (m, 6H), 3.37 - 3.22 (m, 2H), 3.22-3.13 (m, 2H), 3.12 - 2.90 (m, 6H), 2.65 (dd,1H), 1.83 - 1.48 (m, 9H), 1.47-1.28 (m, 3H), 1.25-1.11 (m, 1H), 0.92 (dd, 6H).

실시예40:

(2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2-하이드록시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물42)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-hydroxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세트산(42B)

2-tetrahydropyran-2-yloxyacetic acid

250 mL 단구 플라스크에, 3,4-디하이드로-2H-피란(840 mg, 10 mmol), 하이드록시메틸아세테이트(42A) (900 mg, 10 mmol), 파라-톨루엔설폰산모노수화물(100 mg, 0.5 mmol) 및 디클로로메탄 (100 mL)을 순차적으로 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고 잔류물에 수산화리튬 용액 (75 mL메탄올+25mL물의 혼합용액)을 첨가하고, 첨가 완료 후 실온에서 밤새 반응하였다. 반응액에 0.1M 묽은 염산(12 mL)을 적가하고 반응액의 pH가 2-3으로 측정되고 반응액을 디클로로메탄(100 mL×2)으로 추출하고 유기층을 무수황산나트륨으로 건조하고, 흡인여과하고, 여과액을 감압 농축하여 2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세트산(42B), 담황색유상물질, (510 mg , 수율30%)을 얻었다.

MS m/z =183.1 [M+Na]⁺;

제2단계: 에틸2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(42C)

benzyl 2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세트산(42B) (510 mg, 3.2 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(1.2 g, 6.3 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (516 mg, 3.82 mmol), 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C) (830 mg, 3.2 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), 에틸2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(42C), 담황색고체 (580 mg, 수율45%)를 얻었다.

제3단계: 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-테트라하이드로피란-2-일옥시-에타논(42D)

1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-tetrahydropyran-2-yloxy-ethanone

50mL 단구플라스크에, 에틸2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(42C) (580 mg, 1.4 mmol), 팔라듐탄소 (120 mg, 20wt%l) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-테트라하이드로피란-2-일옥시-에타논(42D)조품, 담황색고체(387 mg, 수율100%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제4단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(42E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2-테트라하이드로피란-2-일옥시-에타논(42D)조품(387 mg, 1.4 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(553 mg, 2.88 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (233 mg, 1.72 mmol), 중간체1 (1.09 g, 1.45 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(42E), 담황색고체 (590 mg, 수율41%)를 얻었다.

제5단계: (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2-하이드록시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물42)

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2-테트라하이드로피란-2-일옥시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(42E)(590 mg, 0.59 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (4 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2-하이드록시아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐-프로파노일]아미노]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물42), 백색분말 (286 mg, 수율67%)을 얻었다.

MS m/z =720.3 [M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.29 (m, 6H), 7.24 (d, 4H), 4.66 (t, 1H), 4.34-4.20 (m, 2H), 4.14 (d, 2H), 4.02 (d, 2H), 3.83 (d, 2H), 3.72-3.60 (m, 2H), 3.56-3.42 (m, 1H), 3.42 - 3.30 (m, 1H), 3.18 (d, 2H), 3.10-2.94 (m, 4H), 1.96 - 1.29 (m, 14H), 0.92 (dd, 6H).

실시예41:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물43)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(43A)

benzyl 2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(6C)(390 mg, 1.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(575 mg, 3.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (243 mg, 1.80 mmol), 프로판산 (122 mg, 1.65 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), 벤질2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(43A), 담황색고체 (245 mg, 수율52%)를 얻었다.

제2단계: 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)프로판-1-온(43B)

1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)propan-1-one

50mL 단구플라스크에, 벤질2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(43A) (245 mg, 0.775 mmol), 팔라듐탄소 (49 mg, 20wt%l) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)프로판-1-온(43B)조품, 담황색고체(141 mg, 수율99.8%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(43C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)프로판-1-온(43B)조품(141 mg, 0.774 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(383 mg, 2.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (135 mg, 1.0 mmol), 중간체1 (0.565 g, 0.75 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(43C), 담황색고체 (500 mg, 수율72.7%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물43)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(43C)(260 mg, 0.28 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (1.3 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-(2-프로파노일-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐)펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물43), 백색분말 (125 mg, 수율51%)을 얻었다.

MS m/z =359.8 [M+2H]⁺ /2;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.45 - 7.28 (m, 6H), 7.24 (d, 4H),4.80-4.75(m, 1H) 4.66 (t, 1H), 4.29 (t, 1H), 4.27 (t, 1H), 4.01 (d, 2H), 3.77 (d, 2H),3.71-3.60 (m,2H), 3.55-3.42 (m, 1H), 3.41 - 3.27 (m, 1H), 3.18 (dd, 2H), 3.11-2.93 (m, 4H), 2.19 (qd, 2H), 1.95 - 1.63 (m, 8H), 1.61 - 1.49 (m, 3H), 1.48-1.30 (m, 2H), 1.07 (td, 3H), 0.92 (dd, 6H).

실시예42:

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물44)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide; di-trifluoroacetic acid

제1단계: 벤질2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(44A)

benzyl 2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

50mL 단구플라스크에, 벤질2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (6C)(390 mg, 1.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(575 mg, 3.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (243 mg, 1.80 mmol), 트리플루오로아세트산 (171 mg, 1.5 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), 벤질2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(44A), 담황색고체 (224 mg, 수율63%)를 얻었다.

제2단계: 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2,2,2-트리플루오로-에타논(44B)

1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2,2,2-trifluoro-ethanone

50mL 단구플라스크에, 벤질2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트(44A)(223 mg, 0.63 mmol), 팔라듐탄소 (46 mg, 20wt%l) 및 메탄올 (20 mL)을 첨가하였다. 수소로 3회 치환하고 수소(풍선)분위기에서 실온에서 3h 반응하였다. 반응액을 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압농축하여 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2,2,2-트리플루오로-에타논(44B)조품, 담황색고체(116 mg, 수율83%)를 얻어 그대로 다음 반응에 투여하였다.

제3단계: t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(44C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

50mL 단구플라스크에, 1-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)-2,2,2-트리플루오로-에타논(44B)조품(116 mg, 0.52 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염(575 mg, 3.7 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (240 mg, 1.3 mmol), 중간체1 (0.47 g, 0.626 mmol) 및 디클로로메탄 (50 mL)을 첨가하고 실온에서 5h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리 정제하여 (디클로로메탄:메탄올(v:v)=50：1), t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(44C), 담황색고체 (216 mg, 수율42%)를 얻었다.

제4단계: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물44)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide;di-trifluoroacetic acid

50 mL반응 플라스크에, t-부틸N-[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-벤질-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(t-부톡시카르보닐아미노)-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]카르바모일]-3-메틸-부틸]아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(44C)(210 mg, 0.22 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고 실온에서 2h 반응하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔류물을 분취액상에 의해 분리 정제하고 (분취조건: 기기: Gilson GX-281; 칼럼: Xbridge C18, 150Х30 mm I.D., 5μm; 이동상: A for ACN and B for H₂O; 등용매: A 65%; 유량: 30 mL /min; 배압: 1000 PSI; 칼럼 온도: 30℃; 파장: 210 nm; 주기: 18min; 샘플분취: 화합물을 12mL메탄올에 용해시키는 것; 주사: 0.9 mL/대), 분취액을 감압 농축하여 용매를 대부분 제거하고, 동결 건조하여 (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-아미노-3-페닐-프로파노일]아미노]-3-페닐프로파노일]아미노]-N-[(1R)-5-아미노-1-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카르보닐]펜틸]-4-메틸-펜탄아미드 디트리플루오로아세트산(화합물44), 백색분말 (111 mg, 수율51%)을 얻었다.

MS m/z =758.3 [M+H]⁺;

¹H NMR (400 MHz, D₂O) δ 7.44 - 7.28 (m, 6H), 7.24 (d, 4H), 4.64 (t, 1H), 4.38 - 4.21 (m, 4H), 3.97 (d, 2H), 3.73 - 3.58 (m, 2H), 3.56-3.43 (m, 1H), 3.40 - 3.32 (m, 1H), 3.25 - 3.11 (m, 2H), 3.11-2.93 (m, 4H), 1.99 - 1.63 (m, 9H), 1.53 (d, 3H), 1.49-1.33 (m, 2H), 0.93 (dd, 6H).

생물학적 실험예

실험1：인체 κ-아편 수용체에 대한 작용 활성

Forskolin (포스콜린)은 인체 κ-아편 수용체 고발현 세포주-OPRK1세포 (DiscoveRx) cAMP의 방출을 자극 할 수 있지만, κ-아편 수용체 작용제는 forskolin 자극의 cAMP 방출을 억제할 수 있다. forskolin 자극의 cAMP 방출에 대한 시험 화합물의 억제 효과를 검출함으로써 인체 κ-아편 수용체에 대한 화합물의 작용 활성을 측정할 수 있다. 우선, 일정한 농도의 forskolin 및 다른 농도의 시험 화합물을 이용하여 인체 κ-아편 수용체 고발현 세포주와 함께 배양하였다. 시간 분해 형광 공명 에너지 전달 (TR-FRET)에 기반한 cAMP 면역측정법(LANCE®, PerkinElmer)을 사용하여 자극된 OPRK1 세포에서의 cAMP 수준을 확정하였다. 구체적인 방법은 다음과 같다.

고발현 인체 κ-아편 수용체의 OPRK1 세포 (DiscoveRx)를 10 % FBS (Gibco 10099-141)가 포함된 McCoy's 5A (Gibco 16600-082) 배양기에서 배양하였다. 실험 당일 지수적 성장주기에 있는 세포를 PBS/5mM EDTA 로 헹구어 분리하고, 원심 수집하고 Stimulation Buffer로 세포를 다시 현탁시켜 카운팅하고 세포의 농도를 3*10⁵cells/ml으로 조절하였다. 모액 농도가 모두 10 mM이 되도록 DMSO를 이용하여 Forskolin 및 시험 화합물을 각각 용해시키고 또한 Stimulation Buffer를 이용하여 Forskolin을 4μM으로 희석하고, 농도가 상이한 시험 화합물 (농도 차례로는 80, 16, 3.2, 0.64, 0.128, 0.0256, 0.00512, 0.001024, 0μM)을 첨가하고, 오리피스 당 5μl으로 384 오리피스 플레이트에 첨가하였다. 또한 각 오리피스에 5μl 세포 현탁액을 첨가하여 실온에서 30min 배양하였다. 이어 각 오리피스에 각각 5 μl 4 x Eu-cAMP tracer 작동 용액 (cAMP Detection Buffer를 이용하여 Eu- cAMP stock solution을 50배 희석 한 것) 및 5 μl 4 x Ulight-anti-cAMP작동 용액 (cAMP Detection Buffer를 이용하여 ULight-anti-cAMP stock solution을 150 배 희석 한 것)을 첨가하여 실온에서 1 시간 배양하였다. 384 오리피스 플레이트를 마이크로 플레이트 리더 (Perkin Elmer，Envision)를 이용하여 TR-FRET 방법에 의해 cAMP 수준을 측정하였다. 얻어진 데이터를 origin7.5 소프트웨어로 프로세싱하고 EC50을 피팅하였다. 인체 κ-아편 수용체에 대한 본 발명 화합물의 작용 활성은 상기의 실험에 의해 측정되고 측정된 EC50 값을 표 1에 나타내었다.

Stimulation Buffer 조제 방법: 14 mL 1*HBSS (invitrogen, cat.# 14025-092), 75 mL 1 M HEPES (Invitrogen, cat. # 15630-080), 30 mL 250 mM IBMX를 DMSO (Sigma, cat. # 17018)에 용해시켜 200 mL 7.5% BSA Stabilizer와 혼합하고, 0.1 N NaOH로 용액pH를 7.4으로 조절하고, 1*HBSS을 이용하여 15mL으로 정용하였다.

[표 1] 인체 κ-아편 수용체에 대한 시험 화합물의 작용 활성

결론: 본 발명 화합물은 인체 κ-아편 수용체에 대해 현저한 작용제 작용을 나타낸다.

실험2: 생쥐 핫 플레이트 테스트

암컷C57생쥐18-22g는 Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd.에서 구입하였다. 핫 플레이트의 온도를 56℃로 설정하고 승온한 후 30min 안정시키고 테스트를 시작하였다. 동물을 차례로 핫 플레이트에 넣어 실험하고, 동물이 뒷발을 핥는 반응을 관찰하고 이를 통증 반응 지표로 하고; 동물이 핫 플레이트에 들어가서부터 열자극을 받아 뒷발을 핥는 반응을 초래하기까지의 시간을 기록하고, 표준(뒷발을 핥는 반응시간은 25s미만)에 부합하는 동물을 그룹화하여 번호 붙였다. 베이스라인역치에 따라 그룹화하고 그룹 당 10마리로 하였다. 상이한 농도의 화합물을 10ml/kg으로 피하 투여하고, 투여한 15min 후 검출하고, 30초를 종료시간으로 하고, 반응 시간을 기록 하였다. 결과에 대해 통계 분석하고 하기 공식에 따라 % MPE 값을 산출하였다. %MPE=(Tn-T0)/(30-T0), (Tn은 투여 후 동물이 뒷발을 핥는 시간，T0는 투여 전 동물이 발을 핥는 시간). 실험 결과를 표 2에 나타내었다

[표 2]

결론: 본 발명 화합물의 진통 작용은 말초 κ아편 수용체에 의해 작용한다.

실험3： 생쥐 몸부림 테스트

생쥐의 복강에 아세트산을 주사한 후 생쥐의 몸부림 행동을 일으킬수 있다. 몸부림 반응이란 생쥐가 전형적인 복부 근육의 수축 또는 신장 특성을 나타내는 행동 반응을 의미한다. 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 화합물의 억제작용을 검출함으로써 화합물의 진통 활성을 반영할 수 있다. 구체적인 방법은 다음과 같다.

8주령 ICR생쥐(Chengdu Dashuo Biotechnology Company로 부터 구입, 라이센스 번호: SCXK(천)2008-24(NO: 51203500002150)). 랜덤으로　그룹화하고, 각 그룹에 10마리 동물로 수컷과 암컷이 반반이며; 실험 전 12h이내에 단수하지 않고 단식하였다. 실험 당일에, 각각 정맥에　1.0 mg/kg의 시험 화합물을 투여하고, 대조군으로 공백 시약을 투여하였다. 투여한 15min, 0.6%(v/v)초산 용액을 0.4mL/마리의 제량으로 복강 내에 주사 하였다. 초산 주사 후 15 min 및 6 h 내의 생쥐의 몸부림 횟수를 각각 기록하고, 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 시험 화합물의 억제 백분율을 각각 계산하고, 분석 결과 표 3에 표시된 바와 같다.

억제 백분율%=(대조군 몸부림 횟수-투여군 몸부림 횟수)/ 대조군 몸부림 횟수.

[표 3] 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 시험 화합물의 억제 백분율

NQ는 측정하지 않는 것을 의미한다.

대조로는

이고, CN101627049A에 공개된 화합물25는 그의 프리베이스이다.

결론: 본 발명 화합물은 명백한 진통 작용을 구비하는 것을 나타낸다.

일부 시험 화합물에 대해서, 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 장기 시험을 추가로 실험하였으며, 상기와 같은 시험방법에 따라, 투여방식은 정맥주사이고 투여제량은 3 mg/kg 또는 10 mg/kg이며 초산 주사후 18h 내의 생쥐의 몸부림 횟수를 기록하고, 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 시험 화합물의 억제 백분율을 각각 계산하고 그 결과 표 4에 표시된 바와 같다.

[표 4] 아세트산에 인한 생쥐의 몸부림 행동에 대한 시험 화합물의 18h-post억제 백분율

CR845구조는

이다.

결론: 본 발명의 일부 화합물은 명백한 진통 작용을 구비하고 또한 장기간의 장점도 구비하는 것을 나타낸다.

4. 쥐PK시험

[표 5] 쥐PK결과(1mg/kg)

5. 생쥐PK시험

[표 6] 생쥐PK결과(1mg/kg)

Claims

일반식(I)로 표시되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로서,

R¹은
로부터 선택되고;
m₁, m₂, m₃, m₄는 각각 독립적으로 1 또는 2로부터 선택되고;
n₁, n₂는 각각 독립적으로 0, 1 또는 2로부터 선택되고;
Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;
R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-C(=O)O-C_1-4알킬기, -(CH₂)_q-NR^1eR^1f , -(CH₂)_q-COOH , -(CH₂)_q-CONH₂, C_3-6카르보시클릭기 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, =O, 카르복실기, 니트로기, 시아노기, 아미노기, C_1-4알킬기, C_1-4알콕시기, C_2-4알케닐기, C_2-4알키닐기 또는 C_3-6카르보시클릭기로부터 선택된 0 내지 5개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 임의적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고, 상기 헤테로 원자가 S로부터 선택된 경우, 선택적으로 추가로는 S, S=O 또는 S(=O)₂이고;
R^1e, R^1f는 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기 또는 -C(=O)O-(CH₂)_q-C_3-6카르보시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기 또는 카르보시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고;
또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 4 내지 6원 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있으며, 상기 고리는 선택적으로 =O 치환기로 추가로 치환되고;
R^1a, R^1b는 독립적으로 F, CF₃, 메틸기, 에틸기, 프로파노일기 또는 이소프로필기로부터 선택되고;
R^z3은 각각 독립적으로 H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 시클로프로필기 또는 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;
R^1g, R^1h, R¹ⁱ, R^1j는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;
또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 4 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 시아노기, 니트로기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기 또는 -S(=O)_p-C_1-4알킬기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;
p는 2이고;
q는 0 또는 1로부터 선택되고;
a는 3이고;
R⁴는 프로파노일기 또는 이소프로필기로부터 선택되고;
R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, C_1-4알킬기, -C(=O)O-C_1-4알킬기 또는 -C(=O)O-벤질기로부터 선택되고;
b는 0이고;
c는 0이고;
R⁵, R⁶은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, CF₃, 시아노기, 니트로기, C_1-4알킬기, -OR^5a, -SR^5c 또는 -NR^5fR^5g로부터 선택되고;
R^5a, R^5b, R^5c, R^5d, R^5e, R^5f 및 R^5g는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 일반식(II)로 표시되는 화합물로부터 선택되고,

R¹은
로부터 선택되고;
m₁, m₂, m₃, m₄는 각각 독립적으로 1 또는 2로부터 선택되고;
n₁, n₂는 각각 독립적으로 0 또는 2로부터 선택되고;
R^1a , R^1b는 독립적으로 F로부터 선택되고;
Z는 CR^z1R^z2 또는 NR^z3로부터 선택되고;
R^z1, R^z2는 각각 독립적으로 H, 카르복실기,
,
,
,
,
,
,
,
, 아미노기, -CH₂NH₂ 또는
로부터 선택되고;

또는 R^z1 및 R^z2는 이들에 연결하는 탄소 원자와 락탐
을 형성할 수 있으며;
R^z3은 각각 독립적으로 H, -C(=O)-C_1-4알킬기, -C(=O)-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)O-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_1-4알킬기, -S(=O)_p-C_3-6카르보시클릭기, -C(=O)NR^1gR^1h, -S(=O)_p-NR¹ⁱR^1j 또는 3 내지 6원 헤테로시클릭기로부터 선택되고, 상기 알킬기, 카르보시클릭기 또는 헤테로시클릭기는 선택적으로 F, Cl, Br, I, OH, CF₃, 니트로기, 시아노기, 아미노기, 메틸기, 에틸기, 메톡시기, 에톡시기, 시클로프로필기 또는 페닐기로부터 선택된 0 내지 3개의 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;
R^1g, R^1h, R¹ⁱ, R^1j는 각각 독립적으로 H 또는 C_1-4알킬기로부터 선택되고;
또는 R^1g, R^1h는 이들에 연결하는 질소 원자와 4 내지 6원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 상기 고리는 선택적으로 F, CF₃, 메틸기, 메톡시기 또는 -S(=O)_p-C_1-4알킬기로부터 선택된 치환기로 추가로 치환되고, 상기 헤테로시클릭기는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 함유하고;
p는 2로부터 선택되고;
R², R³, R⁷, R⁸은 각각 독립적으로 H, 메틸기 또는 -C(=O)O-t-부틸기로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제2항에 있어서,
상기 화합물은 일반식(II)로 표시되는 화합물로부터 선택되고,
R^z3은 각각 독립적으로 H,

또는

로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제3항에 있어서,
R¹은

또는
로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제4항에 있어서,
상기 화합물은 다음 구조 중 하나로부터 선택되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
상기 약학적으로 허용 가능한 염은 트리플루오로아세트산염으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 따른 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제 중 1종 이상을 포함하는 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증의 치료 또는 예방용 약물 조성물로서, 상기 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증은 통증, 염증, 가려움, 수종, 저나트륨혈증, 저칼륨혈증, 장폐색, 기침 및 녹내장으로 이루어진 군에서 선택되는, 약물 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
포유 동물에서 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증의 치료 또는 예방을 위해 사용되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제8항에 있어서,
상기 κ 오피오이드 수용체 관련 질환 또는 병증은 통증, 염증, 가려움, 수종, 저나트륨혈증, 저칼륨혈증, 장폐색, 기침 및 녹내장으로 이루어진 군에서 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제9항에 있어서,
상기 통증은 신경성 통증, 체성 통증, 내장 통증 및 피부 통증으로 이루어진 군에서 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제9항에 있어서,
상기 통증은 관절염 통증, 신장결석 통증, 자궁 경련, 생리통, 자궁내막이위증, 소화불량, 외과수술 후 통증, 의료처리 후 통증, 안부 통증, 이염 통증, 폭발적인 암통증 및 GI 혼란 관련 통증으로 이루어진 군에서 선택되는, 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제7항에 있어서,
상기 통증은 신경성 통증, 체성 통증, 내장 통증 및 피부 통증으로 이루어진 군에서 선택되는, 약물 조성물.
제7항에 있어서,
상기 통증은 관절염 통증, 신장결석 통증, 자궁 경련, 생리통, 자궁내막이위증, 소화불량, 외과수술 후 통증, 의료처리 후 통증, 안부 통증, 이염 통증, 폭발적인 암통증 및 GI 혼란 관련 통증으로 이루어진 군에서 선택되는, 약물 조성물.
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