BR112020001157A2

BR112020001157A2 - compostos de peptídeo amida, método de preparação dos mesmos e uso em medicina

Info

Publication number: BR112020001157A2
Application number: BR112020001157-6A
Authority: BR
Inventors: Chen Zhang; Anbang HUANG; Fei Ye; Longbin Huang; Zhenggang HUANG; Jianmin Wang; Yonggang Wei; Pangke Yan; Wei Zheng
Original assignee: Sichuan Haisco Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-19
Publication date: 2020-07-21
Also published as: CA3069820C; KR102375543B1; TWI712615B; CN110637025A; EP3656782A4; AU2018303080B2; US20200172573A1; MY200925A; TW201920231A; WO2019015644A1; ES2905164T3; AU2018303080A1; PT3656782T; KR20200031114A; ZA202000491B; CN110637025B; JP2020526571A; US11014964B2; CA3069820A1; JP7008787B2

Abstract

A invenção fornece um composto de peptídeo amida representado pela fórmula geral (I), um método de preparação do mesmo, e uma aplicação médica do mesmo. O composto tem uma nova estrutura, melhor atividade biológica, e melhor efeito analgésico.

Description

“COMPOSTOS DE PEPTÍDEO AMIDA, MÉTODO DE PREPARAÇÃO DOS MESMOS E USO EM MEDICINA” Campo da Técnica

[0001] A presente invenção refere-se a um composto de peptídeo amida tendo um efeito analgésico, um método de preparação do mesmo e uso em medicina. Fundamentos

[0002] Os fármacos opióides foram usados para o tratamento de dor durante milhares de anos e desempenham um papel fisiológico principalmente ligando-se aos três receptores opióides clássicos conhecidos μ, δ e κ. Esses três receptores são membros da família do receptor acoplado à proteína G, principalmente distribuída no sistema nervoso central, e também em muitos tecidos periféricos. Um dos fármacos mais clássicos é a morfina, que exerce um efeito analgésico principalmente através da ação de receptores opióides μ.

[0003] Além disso, os analgésicos clínicos comumente usados incluem outro fármacos receptores opióides μ, como opióides tradicionais representados por di-hidromorfinona e fentanil.

[0004] Entretanto, os fármacos receptores opióides μ produzem uma variedade de efeitos colaterais após o uso a longo prazo, como tolerância, dependência e depressão respiratória, e efeitos na motilidade gastrointestinal, que não apenas aumentam o custo do tratamento, mas também afetam o ciclo de recuperação do paciente. Algumas injeções não opióides, como acetaminofeno e AINEs (fármacos anti-inflamatórios não esteróides), têm uso e dosagem limitados devido ao seu baixo efeito analgésico. Além disso, eles têm certos efeitos colaterais, como o acetaminofeno aumenta a toxicidade do fígado e os AINEs (fármacos anti-inflamatórios não esteróides) causam várias doenças gastrointestinais.

[0005] Com a crescente pressão da vida e do trabalho na sociedade moderna e a chegada da sociedade idosa, e tendo em vista o papel crítico dos receptores opióides no tratamento de diferentes tipos de dor, a busca de novos opióides com alta atividade analgésica e baixa efeitos colaterais tóxicos tem um significado científico e social importante.

[0006] Estudos descobriram que usando-se agonistas do receptor opióide κ, receptores opióides κ podem ser usados como alvos para intervenção para tratar dor e prevenção de uma ampla variedade de doenças e condições. Por exemplo, em 1993, Woold et al. descreveu o uso de agonistas do receptor opióide κ para o tratamento de sensibilização à dor (Anasthesia and Analgesia, 1993, 77, 362-379); em 1999, Wu et al. propôs agonistas do receptor opióide κ como alvos para a prevenção e tratamento de doenças cardiovasculares (Circulation Res 1999, 84, 1388-1395); em 2003, Kaushik et al. descreveu os efeitos neuroprotetores de agonistas do receptor opióide κ (J. Postgraduate Medicine 2003, 49 (1), 90-95); em 2004, Potter et al. descreveu o uso de agonistas do receptor opióide κ em transtornos oculares e dor ocular (Pharmacol. Exp. Ther 2004, 209, 548-553); em 2005, Wikstrom et al. descreveu o uso de agonistas κ no tratamento de uremia e prurido induzido por ópio (J. Am. Soc.Nephrol 2005, 16, 3742-3747.); em 2006, Bileviciute-Ljungar et al. avaliou as propriedades de agonistas do receptor opióide κ para doenças inflamatórias como osteoartrite e artrite reumatoide (Rheumatology 2006, 45, 295-302); em 2006, Lembo avaliou o uso de agonistas do receptor opióide κ em doenças gastrointestinais (Diges.Dis. 2006, 24,

91-98); em 2006, Jolivalt et al. descreveu o papel do agonista do receptor opióide k acimadrine na neuropatia diabética de roedores (Diabetologia 2006,49 (11), 2775-2785); em 2008, Schteingart, Claudio, D et al. De Cara Therapeutics Co., Ltd. avaliou os efeitos de agonistas do receptor opióide κ na dor visceral, dor relacionada à ativação do nociceptor sensível ao pH e dor ocular induzida pela capsaicina no documento WO2008057608A2. Sumário

[0007] O objetivo da presente invenção é fornecer um agonista do receptor opióide κ que tem nova estrutura, melhor atividade biológica e melhor efeito analgésico, e um método de preparação dos mesmos e uso em medicina.

[0008] A presente invenção fornece um composto da fórmula geral (I) ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo: em que R1 é selecionado de ;

cada um de m1, e m 2 é independentemente selecionado de 1, 2, 3 ou 4; cada um de m3, e m 4 é independentemente selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; com a condição que m3 e m4 não podem ser 0 ao mesmo tempo; cada um de n1, e n2 é independentemente selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, e Rz2 é independentemente selecionado de H, F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, alquila -C(=O)-C1-6, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-6, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo alquila, alcóxi, alquenila, alquinila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, =O, carboxila, nitro, ciano, amino, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S, e quando o heteroátomo é selecionado de S, é opcionalmente em forma de S, S=O ou S(=O)2; cada um de R1e, R1f é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, alquila -C(=O)O-C1-6, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-8 ou -C(=O)O-(CH2)q- 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; alternativamente, Rz1 e Rz2 formam um anel heterocíclico contendo nitrogênio de 3 a 10 membros com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, =O, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico; cada um de R1a, R1b é independentemente selecionado de F, CF3, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo alquila, alquenila, alquinila ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; Rz3 é independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-6, alquila -C(=O)O-C1-6, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-8, grupo carbocíclico -C(=O)O-C3-8, -C(=O)O-(3 a 8 membros do grupo heterocíclico), alquila -S(=O)p-C1-6, -Grupo carbocíclico S(=O)p-C3-8, -S(=O)p-(3 a 8 membros do grupo heterocíclico), -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou

3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-6; alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 3 a 10 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou alquila -S(=O)p-C1-6. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; q é selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; p é selecionado de 0, 1 ou 2; a é selecionado de 0, 1, 2 ou 3; R4 é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou grupo carbocíclico -(CH2)q-C3-8. O grupo alquila, alquenila, alquinila ou carbocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CN, CF3, NO2, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, -C(=O)O-C1 - 4 alquila, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-8, -C(=O)O-(CH2)q-3 a 8 membros do grupo heterocíclico ou . O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou 3 a 8 membros do grupo heterocíclico. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; b é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; c é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; Cada um de R5, R6 é cada um independentemente selecionado de F, Cl, Br, I, CF3, ciano, nitro, alquila C1-4, -OR5a, -C(O)OR5b, -SR5c, -S(O)R5d, -S(O)2R5e ou -NR5fR5g; cada um de R5a, R5b, R5c, R5d, R5e, R5f e R5g é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4; alternativamente, R5f, R5g formam um anel heterocíclico de 5 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S.

[0009] Em uma modalidade preferível da modalidade, um composto da fórmula geral (I) ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é selecionado de ; cada um de m1, m2, m3, m4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n2 é independentemente selecionado de 0, 1 ou 2;

Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, alquila -C(=O)-C1-4, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-4, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, preferivelmente H, alquila C1-4, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-4, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo alquila, alcóxi, alquenila, alquinila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, =O, carboxila, ciano, amino, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S, e quando o heteroátomo é selecionado de S, é opcionalmente em forma de S, S=O ou S(=O)2; cada um de R1e, R1f é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6 ou grupo heterocíclico -C(=O)O-(CH2)q-3 a 6 membros, preferivelmente H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4 ou grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6. O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; alternativamente, Rz1 e Rz2 formam um anel heterocíclico contendo nitrogênio de 3 a 10 membros, preferivelmente formam um 4 a 6 membro nitrogênio-contendo anel heterocíclico, com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, =O, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros; cada um de R1a, R1b é independentemente selecionado de F, CF3, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, preferivelmente F, CF3, alquenila C2-4 ou alquinila C2-4. O grupo alquila, alquenila, alquinila ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; Rz3 é independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-6, alquila -C(=O)O-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-4, grupo carbocíclico -C(=O)O-C3-6 ou -C(=O)O-(grupo heterocíclico de 3 a 6 membros), alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -S(=O)p-(grupo heterocíclico de 3 a 6 membros), -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, preferivelmente H, alquila -C(=O)-C1-4, alquila

-C(=O)O-C1-4, alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -C(=O)NR1gR1h ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo alquila, alquenila, alquinila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-6, preferivelmente H ou alquila C1-4; alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 3 a 10 membros, preferivelmente formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4 ou alquila -S(=O)p-C1-4. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; q é selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; preferivelmente 0 ou 1; p é selecionado de 0, 1 ou 2; preferivelmente 2; a é selecionado de 0, 1, 2 ou 3; preferivelmente 3; R4 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4 ou grupo carbocíclico -(CH2)q-C3-6, preferivelmente alquila C1-4. O grupo alquila, alquenila, alquinila ou carbocíclico é opcionalmente ainda substituído com

0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CN, CF3, NO2, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6, -C(=O)O-(CH2)q- um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros ou , preferivelmente H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6. O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; b é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, preferivelmente 0 ou 1; c é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, preferivelmente 0 ou 1; Cada um de R5, R6 é cada um independentemente selecionado de F, Cl, Br, I, CF3, ciano, nitro, alquila C1-4, ou -NR5fR5g, preferivelmente F, CF3 ou alquila C1-4; cada um de R5f e R5g é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4.

[0010] Em uma modalidade preferível da modalidade, um composto da fórmula geral (I) ou um estereoisômero, hidrato,

metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: cada um de m1, m2, m3, m4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n2 é independentemente selecionado de 0, 1 ou 2; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-4, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, =O, carboxila, nitro, ciano, amino, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S, e quando o heteroátomo é selecionado de S, é opcionalmente em forma de S, S=O ou S(=O)2; cada um de R1e, R1f é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4 ou grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6. O grupo alquila ou carbocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, metila, etila, metóxi, etóxi, fenila; alternativamente, Rz1 e Rz2 são capazes de formar um anel heterocíclico contendo nitrogênio de 4 a 6 membros com um átomo de carbono ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte de =O; R1a, R1b são independentemente selecionados de F, CF3,

metila, etila, propanoila ou isopropila; Rz3 é cada um independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-6, alquila -C(=O)O-C1-4, alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros.

O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, metila, etila, metóxi, etóxi, ciclopropila ou fenila.

O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4; Alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados.

O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, metila, etila, metóxi, etóxi ou alquila -S(=O)p-C1-4 (preferivelmente -S(=O)p-metila, preferivelmente etila -S(=O)p-). O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; p é selecionado de 2; q é selecionado de 0 ou 1; a é selecionado de 3; R4 é selecionado de propanoila ou isopropila; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4 ou -C(=O)O-benzila; b é selecionado de 0;

c é selecionado de 0.

[0011] Em uma modalidade preferível da modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula geral (I), em que o composto é selecionado a partir do composto da fórmula geral (II) ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é selecionado de ; cada um de m1, m2, m3, m4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n2 é independentemente selecionado de 0 ou 2; R1a, R1b são independentemente selecionados de F; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, carboxila, , , , , , , , , amino, -CH2NH2 ou ;

alternativamente, Rz1 e Rz2 são capazes de formar um lactama com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados; Rz3 é cada um independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-6, alquila -C(=O)O-C1-4, alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros. O grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, metila, etila, metóxi, etóxi, ciclopropila ou fenila. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4; Alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados. O anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, CF3, metila, metóxi ou alquila -S(=O)p-C1-4. O grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; p é selecionado de 2; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, metila ou -C(=O)O-terc-butila.

[0012] Em uma modalidade preferível da modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula geral (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que

R1 é selecionado de ; cada um de m1, m2, m3, m4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n2 é independentemente selecionado de 0 ou 2; R1a, R1b são selecionado de F; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, carboxila, , , , ,

, , , , amino, -CH2NH2 ou ; Alternativamente, Rz1 e Rz2 são capazes de formar um lactama com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados; Rz3 é cada um independentemente selecionado de H,

, , , , , , ,

, , , , , ,

, , , ou ; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, metila ou -C(=O)O-terc-butila.

[0013] Em uma modalidade preferível da modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula geral (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é selecionado de , , , , , , , , ou ; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, carboxila, , , , , , , , , amino, -CH2NH2 ou ; alternativamente, Rz1 e Rz2 são capazes de formar um lactama com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados; Rz3 é cada um independentemente selecionado de H, , , , , , , , , , , , , , , , , ou ; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, metila ou -C(=O)O-terc-butila.

[0014] Em uma modalidade preferível da modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula geral (I) ou (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o composto inclui, mas não é limitado a, um dos compostos representados pela seguinte fórmula estrutural: composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto composto .

[0015] Em uma modalidade preferível da modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula geral (I) ou (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O sal farmaceuticamente aceitável é selecionado de um trifluoroacetato.

[0016] A invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula geral (I) ou (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal compostofarmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais composto portadores e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0017] O uso de um composto da fórmula geral (I) ou (II) da presente invenção, ou um estereoisômero, hidrato,

metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou uma composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula geral (I) ou (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada com um receptor opióide κ em um mamífero.

[0018] Em uma modalidade preferível da modalidade, em que a doença ou condição associada com o receptor opióide κ é selecionada a partir do grupo consistindo em dor, inflamação, prurido, edema, hiponatremia, hipocalemia, íleo, tosse e glaucoma.

[0019] Em uma modalidade preferível da modalidade, em que a dor é selecionada a partir do grupo consistindo em dor neuropática, dor física, dor visceral e dermatalgia.

[0020] Em uma modalidade preferível da modalidade, em que a dor é selecionada a partir do grupo consistindo em dor de artrite, dor de cálculo renal, histerospasma, dismenorreia, endometriose, dispepsia, dor pós-cirúrgica, dor pós-tratamento médico, dor ocular, dor na otite, dor fulminante do câncer e dor associada com transtornos de GI.

[0021] A invenção fornece um método para tratar ou prevenir uma doença ou condição associada com um receptor opióide κ em um mamífero, o método compreendendo administrar o composto da fórmula geral (I) ou (II) ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula geral (I) ou (II), ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A doença ou condição associada com o receptor opióide κ é preferivelmente selecionada a partir do grupo consistindo em dor, inflamação, prurido, edema, hiponatremia, hipocalemia, íleo, tosse e glaucoma. A dor é preferivelmente selecionada a partir do grupo consistindo em dor neuropática, dor somática, dor visceral e dermatalgia; ou a dor é preferivelmente selecionada a partir do grupo consistindo em dor de artrite, dor de cálculo renal, histerospasma, dismenorreia, endometriose, dispepsia, dor pós-cirúrgica, dor pós-tratamento médico, dor ocular, dor na otite, dor fulminante do câncer e dor associada com transtornos de GI (transtornos gastrointestinais).

[0022] A menos que de outro modo estabelecido, os termos usados no relatório descritivo e reivindicações têm os seguintes significados.

[0023] O carbono, hidrogênio, oxigênio, enxofre, nitrogênio ou halogênio envolvido nos grupos e compostos da presente invenção incluem seus isótopos, e o carbono, hidrogênio, oxigênio, enxofre, nitrogênio ou halogênio envolvido nos grupos e compostos da presente invenção é opcionalmente ainda substituído por um ou mais de seus isótopos 12 13 correspondentes, em que os isótopos de carbono incluem C, C 14 e C, os isótopos de hidrogênio incluem prótio (H), deutério (D, também conhecido como hidrogênio pesado), trítio (T, também conhecido como hidrogênio super-pesado), os isótopos de 16 17 18 oxigênio incluem O, O e O, os isótopos de enxofre incluem 32 33 34 36 14 15 S, S, S e S, os isótopos de nitrogênio incluem N e N, 19 os isótopos de flúor incluem F, os isótopos de cloro incluem 35 37 79 81 Cl e Cl, os isótopos de bromo incluem Br e Br.

[0024] Uma “alquila” significa uma grupo hidrocarboneto saturado monovalente de cadeia linear e cadeia ramificada, e o grupo de cadeia linear e ramificada tem uma cadeia principal compreendendo 1 a 10 átomos de carbono, preferivelmente 1 a 8 átomos de carbono, ainda preferivelmente 1 a 6 átomos de carbono, mais preferivelmente 1 a 4 átomos de carbono, o mais preferivelmente 1 a 2 átomos de carbono. Exemplos de alquila incluem, mas não são limitados a metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, 2-pentila, 3-pentila, 2-metil-2-butila, 3-metil-2-butila, n-hexila, n-heptila, n-octila, n-nonila e n-decila, etc. A alquila pode ser ainda mais opcionalmente substituída com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a, em que cada um de R19 e R19a é independentemente selecionado de H, hidroxila, amino, carboxila, alquila C1-8, alcóxi C1-8, alquenila C2-8, alquinila C2-8, 3 a 10 membros do grupo carbocíclico, 4 a 10 membros do grupo heterocíclico, 3 a 10 membros do grupo carbociclilóxi ou 4 a 10 membros do grupo óxi heterocíclico, k é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, j é selecionado de 0, 1 ou 2. A alquila, k, j, R19 e R19a, aqui são como definidas acima.

[0025] Um “alquileno” significa uma grupo hidrocarboneto saturado divalente de cadeia linear ou cadeia ramificada, incluindo -(CH2)v-(v é um número inteiro de 1 a 10), e Exemplos de alquileno incluem, mas não são limitados a, metileno, etileno, propileno, butileno ou semelhantes. O alquileno pode ser ainda mais opcionalmente substituído com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. Quando o número de substituinte(s) no grupo alquileno é 2 ou mais, o(s) substituinte(s) pode(m) ser fundido(s) em conjunto para formar uma estrutura cíclica. O alquileno aqui é como definido acima.

[0026] Um “alcóxi” significa um grupo monovalente de um Grupo O-alquila, em que alquila é como definida aqui, e exemplos de alcóxi incluem, mas não são limitados a metóxi, etóxi, 1-propóxi, 2-propóxi, 1-butóxi, 2-metil-1-propóxi, 2-butóxi, 2-metil-2-propóxi,1-pentilóxi, 2-pentilóxi, 3-pentilóxi, 2-metil-2-butóxi, 3-metil-2-butóxi, 3-metil-1-butóxi e 2-metil-1-butóxi e semelhantes.

[0027] Uma “alquenila” significa uma grupo hidrocarboneto insaturado monovalente de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo pelo menos 1, usualmente 1, 2 ou 3 ligações duplas carbono-carbono, com uma cadeia principal do mesmo compreendendo 2 a 10 átomos de carbono, ainda preferivelmente 2 a 6 átomos de carbono, mais preferivelmente 2 a 4 átomos de carbono na cadeia principal. Exemplos de alquenila incluem, mas não são limitados a vinila, alila, 1-propenila, 2-propenila, 1-butenila, 2-butenila, 3-butenila, 1-pentenila, 2-pentenila, 3-pentenila, 4-pentenila, 1-metil-1-butenila, 2-metil-1-butenila, 2-metil-3-butenila, 1-hexenila, 2-hexenila, 3-hexenila, 4-hexenila, 5-hexenila,

1-metil-1-pentenila, 2-metil-1-pentenila, 1-heptenila, 2-heptenila, 3-heptenila, 4-heptenila, 1-octenila, 3-octenila, 1-nonenila, 3-nonenila, 1-decenila, 4-decenila, 1,3-butadieno, 1,3-pentadieno, 1,4-pentadieno e 1,4-hexadieno e semelhantes; A alquenila pode ser ainda mais opcionalmente substituída com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. A alquenila aqui é como definida acima.

[0028] Uma “alquinila” significa uma grupo hidrocarboneto insaturado monovalente de cadeia linear ou cadeia ramificada tendo pelo menos 1, usualmente 1, 2 ou 3 ligações triplas carbono-carbono, com uma cadeia principal compreendendo 2 a 10 átomos de carbono, ainda preferivelmente 2 a 6 átomos de carbono, mais preferivelmente 2 a 4 átomos de carbono na cadeia principal. Exemplos de alquinila incluem, mas não são limitados a etinila, 1-propinila, 2-propinila, butinila, 2-butinila, 3-butinila, 1-metil-2-propinila, 4-pentinila, 3-pentinila, 1-metil-2-butinila, 2-hexinila, 3-hexinila, 2-heptinila, 3-heptinila, 4-heptinila, 3-octinila, 3-noninila e 4-decinila e semelhantes; A alquinila pode ser ainda mais opcionalmente substituída com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a,

-(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. A alquinila aqui é como definida acima.

[0029] Uma “cicloalquila” significa um grupo hidrocarboneto carbocíclico saturado monovalente, usualmente tendo de 3 a 10 átomos de carbono, e exemplos não limitativos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila ou ciclo-heptila e semelhantes. A cicloalquila pode ser ainda mais opcionalmente substituída com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. A cicloalquila aqui é como definida acima.

[0030] Um “carbocíclico” significa um anel aromático ou não aromático, saturado ou insaturado. O anel aromático ou não aromático pode ser um anel monocíclico de 3 a 10 membros, um anel bicíclico de 4 a 12 membros ou um sistema de anel tricíclico de 10 a 15 membros. O grupo carbocíclico pode ser ligado a um anel ligado em ponte ou um anel espiro. Exemplos não limitativos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 1-ciclopentil-1-alquenila, 1-ciclopentil-2-alquenila, 1-ciclopentil-3-alquenila, ciclo-hexila, 1-ciclo-hexil-2-alquenila, 1-ciclo-hexil-3-alquenila, ciclo-hexenila, ciclo-hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, ciclononila, ciclodecila, ciclo-undecila, ciclododecila, fenila ou naftila. O grupo carbocíclico pode ser ainda mais opcionalmente substituído com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, 3 a 8 membros do grupo heterocíclico, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. O carbociclo aqui é como definido acima.

[0031] Um “heterociclo” significa um anel aromático ou não aromático, saturado ou insaturado, e o anel aromático ou não aromático pode ser um monocíclico de 3 a 10 membros, um bicíclico de 4 a 12 membros ou um sistema tricíclico de 10 a 15 membros, e inclui 1 a 4 hetero átomos selecionados de N, O ou S, preferivelmente um grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e opcionalmente substituído N, S no anel do grupo heterocíclico pode ser oxidado para vários estados de oxidação. O grupo heterocíclico pode ser ligado a um hetero átomo ou um átomo de carbono, e o grupo heterocíclico pode ser ligado a um anel ligado em ponte ou espiro. Exemplos não limitativos incluem epoxietila, epoxipropila, azaciclopropila, oxeciclobutila, azaciclobutila, tio-heterobutila, 1,3-dioxolanila, 1,4-dioxolanila, 1,3-dioxohexila, azaciclo-heptila, oxepanila, tiociclo-heptila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, piridila, piperidinila, homopiperidinila, furila, tienila, piranila, N-alquilpirrolila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, piperazinila, homopiperazinila, imidazolila, piperidinila, morfolinila, tiomorfolinila, Oxatianila, di-hidrofuranila, di-hidropiranila, di-tiapentanila, tetra-hidrofuranila, tetra-hidrotienila, tetra-hidropiranila, tetra-hidrotiranila, tetra-hidropirrolila, tetra-hidroimidazolila, tetra-hidrotiazolila, tetra-hidropiranila, benzimidazolila,

benzopiridila, pirrolopiridila, benzodi-hidrofurila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, di-hidroindolila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxano, 1,3-dioxolila, pirazolinila, di-tia-alquila, di-tiacenila, di-hidrotienila, pirazolidinila, imidazolinila, imidazolidinila, 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolinila, 3-azabiciclo [3,1,0]hexila, 3-azabiciclo[4,1,0]heptila, azabiciclo[2,2,2]hexila, 3H-indolilquinazinila, N-piridil ureia, 1,1-dioxotiomorfolinila, azabiciclo[3,2,1]octila, azabiciclo[5,2,0]nonanila, oxatriciclo[5,3,1,1]dodecila, aza-adamantila e oxaspiro[3,3]heptila. O grupo heterocíclico pode ser ainda mais opcionalmente substituído com 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, =O, hidroxila, -SR19, nitro, ciano, alquila C1-6, hidroxil alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8, grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, -(CH2)a-C(=O)-R19, -(CH2)k-C(=O)-O-R19, -(CH2)k-C(=O)-NR19R19a, -(CH2)k-S(=O)j-R19, -O-C(=O)-O-R19 ou -NR19R19a. Os heterociclos aqui são definidos como descrito acima.

[0032] O “opcional” ou “opcionalmente” significa que o evento ou ambiente subsequentemente descrito pode, mas não necessário ocorrer, indicando um caso onde o evento ou ambiente ocorre ou não ocorre. Por exemplo, “grupo alquila opcionalmente substituído com F” significa que o grupo alquila pode, mas não necessita ser substituído com F, indicando um caso onde o grupo alquila é substituído com F e um caso onde o grupo alquila não é substituído com F.

[0033] “Composição farmacêutica” significa uma mistura de um ou mais dos compostos descritos aqui ou um sal fisiologicamente/farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou um estereoisômero, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outros constituintes. Onde outros componentes compreendem portadores e excipientes fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis.

[0034] “Estereoisômero” significa isômeros resultantes a partir do arranjo espacial de átomos em uma molécula, incluindo isômeros cis e trans, enantiômeros e isômeros conformacionais.

[0035] “Dose eficaz” significa a quantidade de um composto que causa uma resposta fisiológica ou médica a um tecido, sistema ou sujeito, que quantidade é procurada. Quando administrada a um sujeito, é suficiente para impedir a ocorrência ou redução de um ou mais sintomas das doenças ou condições sendo tratadas até certo ponto.

[0036] “Solvato” significa um composto da modalidade ou um sal do mesmo, que também inclui uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de solvente ligada por forças não covalentes intermoleculares. Quando o solvente é água, é um hidrato. Descrição Detalhada

[0037] As soluções técnicas da presente invenção são descritas em detalhe abaixo com referência aos desenhos anexos e exemplos, mas o escopo da presente invenção os inclui mas não os limita.

[0038] A estrutura do composto é determinada por ressonância magnética nuclear (RMN) ou (e) espectrometria de massa (MS). O desvio de RMN (δ) é dada em unidades de 10 - 6 (ppm). A RMN foi medida usando um aparelho magnético nuclear (Bruker Avance III 400 e Bruker Avance 300), e o solvente para medição foi dimetil sulfóxido deuterado (DMSO-d6), clorofórmio deuterado (CDCl3), metanol deuterado (CD3OD), e o padrão interno é tetrametilsilano (TMS).

[0039] MS é medido usando (Agilent 6120B (ESI) e Agilent 6120B (APCI)).

[0040] A HPLC é medida usando um cromatógrafo líquido de alta pressão Agilent 1260DAD (Zorbax SB-C18 100 × 4,6 mm).

[0041] A placa de gel de sílica para cromatografia de camada fina é placa de gel de sílica Yantai Yellow Sea HSGF254 ou Qingdao GF254. A placa de gel de sílica usada para cromatografia de camada fina (TLC) tem uma especificação de 0,15 mm~0,20 mm, e o produto de separação e purificação de cromatografia de camada fina tem um especificação de 0,4 mm~0,5 mm.

[0042] A cromatografia em coluna geralmente usa gel de sílica Yantai Huanghai 200~300 gel de sílica em malha como a portadora.

[0043] Os materiais de partida conhecidos da presente invenção podem ser sintetizados por ou de acordo com os métodos conhecidos na técnica, ou podem ser adquiridos de Titan Technology, Energy Chemical, Shanghai DEMO, Chengdu Kelong Chemical, Accela ChemBio Co. Ltd e J&K Scientific Ltd, e semelhantes.

[0044] A atmosfera de nitrogênio refere-se ao frasco de reação conectado a um balão de nitrogênio de cerca de 1L de volume.

[0045] A atmosfera de hidrogênio refere-se ao frasco de reação conectado a um balão de hidrogênio de cerca de 1L de volume.

[0046] A reação de hidrogenação é usualmente evacuada e carregada com hidrogênio, e a operação é repetida 3 vezes.

[0047] A menos que especialmente indicado nos exemplos, toda a reação foi deixada prosseguir sob uma atmosfera de nitrogênio.

[0048] A menos que especialmente indicado nos exemplos, toda a solução significa uma solução aquosa.

[0049] A menos que especialmente indicado nos exemplos, toda a reação temperatura é temperatura ambiente.

[0050] A temperatura ambiente é temperatura de reação ótima, variando de 20 ºC a 30 ºC.

[0051] A menos que especialmente indicado nos exemplos, todo o M é mol/L.

[0052] Boc refere-se ao grupo terc-butiloxicarbonila.

[0053] Cbz refere-se ao grupo benziloxicarbonila.

[0054] THP refere-se ao grupo tetra-hidropiranilo. Intermediário 1:

[0055] Ácido de (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanóico (Intermediário 1)

Etapa Etapa

Intermediário

Etapa 1: (2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil- pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoato de metila(1b)

[0056] (2R)-2-amino-6-(terc-butoxicarbonilamin o) hexanoato de metila (1a) (2,6 g, 10 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (50 mL) na temperatura ambiente, e a temperatura foi arrefecida a 0 ºC.

Ácido de (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanóico (2,8 g, 11 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (1,62 g, 12 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (2,3 g, 12 mmol) foram sequencialmente adicionados à solução de reação, e a temperatura foi elevada à 25 ºC, e a reação foi deixada prosseguir nesta temperatura durante 15 h.

A solução clorídrica de ácido aquoso 1M (25 mL) foi adicionada à solução de reação para lavar a reação e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido.

Uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (25 mL) foi adicionada à fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido.

A fase orgânica foi lavada com solução clorídrica de ácido aquoso 1M (25 mL), solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (25 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (25 mL) nesta ordem, e seca sob sulfato de sódio anidro (2 g). Foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanoil] amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino) hexanoato de metila (1b)

como um sólido espumoso branco (5,0 g, rendimento de 99 %). Etapa 2: (2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-6- (terc-butoxicarbonilamino) hexanoato de metila (1c)

[0057] (2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino )-4-metil-pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino)hexa noato de metila (1b) (5,0 g, 10 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (50 mL) na temperatura ambiente, e 10 % de paládio em carbono (1 g, 20 % p/p) foram adicionados à solução de reação, e a atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes. A reação foi deixada prosseguir em uma atmosfera de hidrogênio na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi filtrada através de diatomita (3 g), e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-6-(terc-buto xicarbonilamino)hexanoato de metila bruto (1c) como um sólido espumoso branco (3,7 g, rendimento de 99 %) e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino) -3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]-6-(terc- butoxicarbonilamino)hexanoato de metila (1d)

[0058] (2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-metil-pentanoil ]amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino) hexanoato de metila bruto (1c) (3,7 g, 9,9 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (50 mL) na temperatura ambiente, e a temperatura foi arrefecida a 0 ºC.

Ácido de (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanóico (3,3 g, 11 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (1,62 g, 12 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (2,3 g, 12 mmol) foram sequencialmente adicionados à solução de reação, e a temperatura foi elevada à 25ºC, e a reação foi deixada prosseguir nesta temperatura durante 5 h.

Ácido clorídrico aquoso 1M (25 mL) foram adicionados para lavar a reação e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido.

A fase orgânica foi lavada com solução clorídrica de ácido aquoso 1M (25 mL), solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (25 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (25 mL) nesta ordem, e seca sob sulfato de sódio anidro (2 g). Foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-p ropanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicarb onilamino)hexanoato de metila bruto (1d) como um sólido espumoso branco (3,0 g, rendimento de 46 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-4-m etil-pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoato de metila (1e)

[0059] (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benziloxicarb onilamino)-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino ]-6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoato de metila bruto (1d) (3,0 g, 4,58 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (50 mL) na temperatura ambiente, 10 % de paládio em carbono (1 g, 33 % p/p) foi adicionado à solução de reação, e a atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes. A reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 5 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita (3 g), e o filtrado foi concentrado à secura sob pressão reduzida. O acetato de etila (6 mL) foi adicionado nela e a mistura foi aquecida até dissolver. Após adicionar éter de petróleo (6 mL), a temperatura foi lentamente reduzida até a temperatura ambiente para precipitar um sólido, e filtrado. O bolo do filtro foi seco a 50 ºC sob pressão reduzida para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-4-m etil-pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicarbonilamino)hexanoato de metila (1e) como um sólido espumoso branco (2,1 g, redimento de 88 %). Etapa 5: (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2 R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hex anoato de metila (1f)

[0060] (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]-6-(terc-butoxicar bonilamino)hexanoato de metila (1e) (2,1 g, 4,0 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (30 mL) na temperatura ambiente, e a temperatura foi reduzida a 0 ºC. Ácido de (2R)-2-(terc-butoxigencarbonil)-3-fenil-propanóico (1,3 g, 4,9 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (0,65 g, 4,8 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (1,1 g, 5,7 mmol) foram sequencialmente adicionados à solução de reação, e a temperatura foi elevada à 25ºC, e a reação foi deixada prosseguir nesta temperatura durante 5 h. Ácido clorídrico aquoso 1M (15 mL) foi adicionado para lavar a reação e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. Uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (15 mL) foi adicionada à fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. A fase orgânica foi lavada com solução clorídrica de ácido aquoso 1M (15 mL), solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (15 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (15 mL) nesta ordem, e seca sob sulfato de sódio anidro. Foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo/acetato de etila (v/v) = 100:1~5:1) para obter (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoato de metila (1f) como um sólido espumoso branco (2,3 g, rendimento de 74 %). Etapa 6: Ácido de (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanóico (Intermediário 1)

[0061] (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil ]amino]hexanoato de metila (1f) (2,3 g, 3,0 mmol) foram dissolvidos em metanol (20 mL) na temperatura ambiente. Uma solução de hidróxido de sódio aquosa (200 mg, 5,0 mmol) (20 mL)

foi adicionada à solução de reação, e a reação foi deixada prosseguir nesta temperatura durante 5 h.

A solução de reação foi ajustada a pH <4 com solução clorídrica de ácido aquoso 1M, e então foi extraída com acetato de etila (40 mL), e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido.

A fase orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter ácido de (2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanóico (Intermediário 1) como um sólido espumoso branco(2,1 g, rendimento de 93 %). Ms m/z (ESI):752,5 [M-H]-; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,38 - 7,27 (m, 3H), 7,25 - 7,07 (m, 7H), 4,82 - 4,62 (m, 1H), 4,61 - 4,41 (m, 2H), 4,37 - 4,18 (m, 1H), 3,37 - 2,67 (m, 6H), 2,00 - 1,65 (m, 3H), 1,59 - 1,37 (m, 15H), 1,35 - 1,26 (m, 9H), 0,90 - 0,80 (m, 6H). Exemplo 1: Ácido de 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxílic o; tri-trifluoroacetato

Etapa Etapa

Etapa

Etapa Etapa Etapa

Etapa Etapa

Etapa

Etapa Etapa composto

Etapa 1: 2-[(1S)-1-feniletil]imino-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxil ato de terc-butila (2B)

2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (2A) (7,2 g, 30 mmol), (1S)-1-fenetilamina (3,7 g, 31 mmol) foram dissolvidos em tolueno (100 mL), e ácido p-tolueno sulfônico (300 mg, 1,74 mmol) foi adicionado.

Um aparelho Dean-Stark foi usado para refluxar o sistema para separar água.

Após 6 h, a solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida para obter 2-[(1S)-1-feniletil]imino-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila bruto (2B) como sólido espumoso amarelo (10 g, rendimento de 97 %). Etapa 2: 2-ciano-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-7 -carboxilato de terc-butila (2C)

2-[(1S)-1-feniletil]imino-7-azaspiro[3,5]nonano-7 -carboxilato de terc-butila bruto (2B) (10 g, 29,2 mmol) foram dissolvidos em metanol (90 mL) na temperatura ambiente e arrefecido a 0 ºC em um banho de gelo.

Cloreto de zinco (210 mg, 1,54 mmol) foi adicionado sob agitação, e cianeto de trimetilsilila (3 g, 30,2 mmol) foi lentamente adicionado às gotas.

A reação foi mantida a 0 ºC durante 3 h.

A solução de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida.

O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v/v) = 4:1) para obter 2-ciano-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-7 -carboxilato de terc-butila (2C) como sólido espumoso amarelo (4,7 g, rendimento de 44 %). Etapa 3: Ácido de 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxí lico (2D)

2-ciano-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3, 5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (2C) (2 g, 5,4 mmol) foram dissolvidos em ácido clorídrico concentrado (20 mL) na temperatura ambiente e, em seguida, a mistura foi submetida ao refluxo durante 40 h.

A temperatura foi reduzida até a temperatura ambiente, e a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter ácido de 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxí lico bruto (2D) como líquido oleoso amarelo (1,5 g, rendimento de 96 %), e usado diretamente na próxima reação.

Etapa 4: Ácido de 7-terc-butoxicarbonil-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspir o[3,5]nonano-2-carboxílico (2E)

Ácido de 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxí lico bruto (2D) (1 g, 3,47 mmol) foram dissolvidos em tetraidrofurano (10 mL) na temperatura ambiente.

Um hidróxido de sódio aquoso (0,5 g, 12,5 mmol) solução (10 mL) foi adicionado, em seguida, dicarbonato de di-terc-butila (908 mg, 4,16 mmol) foi adicionado, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 6 h.

A solução de reação foi filtrada para obter ácido de 7-terc-butoxicarbonil-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspir o[3,5]nonano-2-carboxílico bruto (2E) como sólido branco (0,8 g, rendimento de 60 %). Etapa 5: 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2,7-dicar boxilato de O7-terc-butila O2-metila (2F)

Ácido de 7-terc-butoxicarbonil-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspir o[3,5]nonano-2-carboxílico (2E) (775 mg, 2,0 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (10 mL) na temperatura ambiente, e metanol (10 mL) foi adicionado. 1-hidroxibenzotriazol (270 mg, 2,0 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,6 g, 3,13 mmol) foram sequencialmente adicionados a solução sob agitação na temperatura ambiente, e o sistema foi deixado reagir durante 15 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:1) para obter 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2,7-dicar boxilato de O7-terc-butil O2-metila (2F) como sólido espumoso amarelo claro (560 mg, rendimento de 70 %). Etapa 6: 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxi lato de metila (2G)

2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano -2,7-dicarboxilato de O7-terc-butil O2-metila (2F) (500 mg, 1,24 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (4,5 mL) na temperatura ambiente, e a temperatura foi reduzida a 0 ºC.

Ácido trifluoroacético (1,5 mL) foi adicionado, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxi lato de metila (2G) como líquido oleoso amarelo (320 mg, rendimento de 85 %). Etapa 7: 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[ [(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propano il]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino] hexanoil]-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano -2-carboxilato de metila

2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-azaspiro[3,5]nonano -2-carboxilato de metila (2G) (300 mg, 1,0 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (10 mL) na temperatura ambiente, e intermediário 1 (753 mg, 1,0 mmol) foi adicionado. 1-hidroxibenzotriazol (135 mg, 1,0 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,23 g, 1,2 mmol) foram sequencialmente adicionados sob agitação na temperatura ambiente, e o sistema foi deixado reagir durante 15 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50:1).

O eluente foi coletado e concentrado sob pressão reduzida para obter 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[ [(2R)fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanoil]amino]hexanoil]-2-[[(1S)-1-feniletil]amino]-7-a zaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de metila (2H) como um sólido espumoso branco (710 mg, rendimento de 69 %). Etapa 8: 2-amino-7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil ]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]he xanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de metila (2I)

7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[ [(2R))-2-[[(2R)fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]ami no]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil]-2-[[(1S)-1-feniletil] amino]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de metila (2H) (700 mg, 0,7 mmol) foram dissolvidos em acetato de etila (10 mL) na temperatura ambiente, e paládio em carbono (0,1 g, 20 % em peso) foi adicionado à solução de reação.

A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 5 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado à secura.

O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50:1), para obter

2-amino-7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil ]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]he xanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de metila (2I) como um sólido espumoso branco(370 mg, rendimento de 60 %). Etapa 9: 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilat o de metila; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (2J)

2-amino-7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil -propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoi l]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de metila (2I) (370 mg, 0,4 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (3 mL) na temperatura ambiente, e a temperatura foi reduzida a 0 ºC.

Ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado e a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e o sistema foi deixado reagir durante 3 h.

A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida para obter 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilat o bruto; ácido tri-trifluoroacético (2J) como líquido oleoso amarelo(305 mg, rendimento de 72 %). Etapa 10: Ácido de 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxílic o; ácido tri-trifluoroacético (composto 2)

[0062] Hidróxido de sódio (50 mg, 1,25 mmol) foram dissolvidos em água (2 mL) na temperatura ambiente, e 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxilat o bruto; ácido tri-trifluoroacético (2J) (305 mg, 0,288 mmol) foi adicionado. O sistema foi deixado reagir durante 5 h na temperatura ambiente. A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, e separada e purificada por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 mmol)[[(2R)-2-met; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A solução de preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter ácido de 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-carboxílic o; ácido tri-trifluoroacético (composto 2) (92 mg, rendimento de 31 %). MS m/z (ESI):360,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ7,44 - 7,18 (m, 10H), 4,65 (t, 1H), 4,33 - 4,18 (m, 2H), 3,58 (br, 2H), 3,52 - 3,41 (m, 1H), 3,41 - 3,29 (m, 1H), 3,17 (d, 2H), 3,10 - 2,90 (m, 4H), 2,70 - 2,46 (m, 2H), 2,32 - 2,18 (m, 2H), 2,05 - 1,28 (m, 14H), 0,98 - 0,84 (m, 6H). composto 2 - 1 (composto 2 em forma livre):

[0063] O composto 2 (7,3 g, 6,88 mmol) foi passado através de uma resina de troca iônica (300 mL) (eluído por água ~ 3,3 % de amônia), e a solução de eluição recebida foi concentrada sob pressão reduzida (concentrada sob pressão reduzida a 100 mL a 60 ºC) e ainda liofilizada para obter o composto 2 - 1 como sólido branco (4,5g, rendimento de 90,8 %). MS m/z =720,5 [M+2H]+; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,34 - 7,22 (m, 6H), 7,18 - 7,06 (m, 4H), 4,78 - 4,72 (m, 1H), 4,55 (t, 1H), 4,25 (t, 1H), 3,65 - 3,46 (m, 3H), 3,45 - 3,25 (m, 2H), 3,09 - 2,97 (m, 1H), 2,95 - 2,84 (m, 3H), 2,85 - 2,73 (m, 2H), 2,51 - 2,33 (m, 2H), 2,00 - 1,83 (m, 2H), 1,82 - 1,25 (m, 13H), 0,96 - 0,78 (m, 6H). Exemplo 2:

[0064] (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diaz adispiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano-10-carbonil)pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético

(composto 3) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto Etapa 1: 2-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-7-azaspiro[3,5]nonano -7-carboxilato de terc-butila (3B)

[0065] Tetraidrofurano (50 mL) foi adicionado a um frasco de reação, e hidreto de sódio (1,3 g, 54,2 mmol) foi adicionado sob proteção de nitrogênio. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de água gelada, e fosfonoacetato de trietila (6,9 g, 31 mmol) foi lentamente adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi realizada a 0 ºC durante 20 minutos. Foi arrefecido a -5 a 0 ºC e 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3A) (5 g, 20,9 mmol) em tetraidrofurano (20 mL) foi lentamente adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e reagida durante 1 h. Uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL × 2). As camadas orgânicas foram combinadas, e as camadas orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxi lato de terc-butila bruto (3B) como líquido oleoso amarelo claro (6,0 g, rendimento de 92,8 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 2: 2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2-(nitrometil)-7-azaspiro[ 3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3C)

[0066] 2-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-7-azaspiro[ 3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3B) foi adicionado a um frasco de reação, e tetraidrofurano (60 mL) foi adicionado. Foi dissolvido completamente na temperatura ambiente sob agitação, em seguida, nitrometano (6,0 g, 98,3 mmol) e fluoreto de tetrabutilamônio (7,85 g, 30 mmol) foram adicionados. Após a adição, a reação foi aquecida a refluxo durante 5 h. A solução de reação foi arrefecida até a temperatura ambiente, e acetato de etila (150 mL) foi adicionado, e uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 mL × 1) foi usada para lavar e separar. A fase orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 10:1) para obter 2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2-(nitrometil)-7-azaspiro[3,5]nonano -7-carboxilato de terc-butila (3C) como líquido oleoso transparente incolor (6,5 g, rendimento de 90 %). Etapa 3: 2-(aminometil)-2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-7-azaspiro[ 3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3D)

[0067] 2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2-(nitrometil)-7 -azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3C) (6,5 g, 18 mmol) foi adicionado a um frasco de reação, e etanol (75 mL) e água (25 mL), pó de ferro (4,9 g, 88 mmol) e cloreto de amônio (4,7 g, 88,00 mmol) foram adicionados, e a reação foi submetida ao refluxo durante 5 h. A temperatura foi arrefecida até a temperatura ambiente, e o sistema de reação foi concentrado a 20 mL. Água (30 mL) foi adicionada, o pH foi ajustado para mais do que 10 com água amoniacal, e extraída com diclorometano (50 mL × 2). As fases orgânicas foram combinadas, e as fases orgânicas foram concentradas à secura sob pressão reduzida para obter 2-(aminometil)-2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-7-azaspiro[3,5]nonano

-7-carboxilato de terc-butila (3D) como líquido oleoso amarelo claro (5,1 g, rendimento de 85 %). Etapa 4: 2-oxo-3,10-diazadispiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano -10-carboxilato de terc-butila (3E)

[0068] 2-(aminometil)-2-(2-etóxi-2-oxo-etil)-7 -azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (3D) (3 g, 8,8 mmol) foi adicionado a um frasco de reação, solução de hidróxido de sódio aquosa (400 mg, 10 mmol) (30 mL) foi adicionado, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi filtrada para obter 2-oxo-3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano-10-carboxil ato de terc-butila (3E) como sólido branco (2,10 g, rendimento de 81 %). Etapa 5: 3,10-diazadispiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecan-2-a (3F)

[0069] 2-oxo-3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^{5}]t ridecano-10-carboxilato de terc-butila (3E) (1 g, 3,4 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (9 mL), e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado. A reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 5 h para reagir completamente. A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, água (20 mL) foi adicionada, e o sistema foi ajustado a pH> 10 com uma solução de hidróxido de sódio aquosa de 2 M. Foi extraído com diclorometano (20 mL × 2) e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para obter 3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano-2-a bruto (3F) como líquido oleoso amarelo (0,6 g, rendimento de 85 %). Etapa 6: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4,1,5^{7} ,1^{5}]tridecano-10-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (3G)

[0070] Diclorometano (30 mL) foi adicionado a um frasco de reação sob proteção de nitrogênio, e intermediário 1 (2,25 g, 2,98 mmol), 3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano-2-a bruto (3F) (0,6 g, 2,88 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (0,39 g, 2,89 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida

(0,83 g, 4,33 mmol) foram adicionados. O sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 15 h. Em seguida, a água (20 mL) foi adicionada, e foi extraída com acetato de etila (30 mL × 3), e as camadas foram separadas e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 20:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)1-(2-oxo-3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^ {5}]tridecano-10-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]a mino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (3G) como um sólido espumoso branco (1,77g, rendimento de 73,2 %). Etapa 7: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4 ,1,5^{7},1^{5}]tridecano-10-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 3)

[0071] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)1-(2-oxo-3,10-dia zaspiro[4,1,5^{7},1^{5}]tridecano-10-carbonil)pentil]carbam oil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carb amato de terc-butila (3G) (0,90 g, 1 mmol) e diclorometano (21 mL) foram adicionados a um frasco de reação sob proteção de nitrogênio, e ácido trifluoroacético (7 mL) foi adicionado sob agitação.

A reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h.

A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazaspiro[4,1,5^{7},1^{ 5}]tridecano-10-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 3) como sólido branco (0,98g, rendimento de 54 %). MS m/z (ESI):365,9[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,86 - 8,67 (m, 1H), 8,40 - 8,23 (m, 1H), 8,14 - 8,01 (m, 3H), 7,84 - 7,72 (m, 2H), 7,52 - 7,42 (m, 1H), 7,37 - 7,15 (m, 10H), 4,76 - 3,94 (m, 4H), 3,59 - 2,65 (m, 12H), 2,29 - 2,15 (m, 2H), 1,93 - 1,19 (m, 17H), 0,88 (dd, 6H). Exemplo 3: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3, 1,4^{6},1^{4}]undecano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R) -2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-

4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 4) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto Etapa 1: 6-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-2-azaspiro[3,3]heptano-2-carbox ilato de terc-butila (4B)

[0072] Tetraidrofurano (50 mL) foi adicionado a um frasco de reação, e hidreto de sódio (2,5 g, 59,2 mmol) foi adicionado. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de água gelada, e fosfonoacetato de trietila (7,96 g, 35,5 mmol) foi lentamente adicionado às gotas. A reação foi deixada prosseguir a 0 ºC durante 20 min após a adição. Em seguida foi arrefecida a -5 a 0 ºC, e 6-oxo-2-azaspiro[3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (4A) (5 g, 23,7 mmol) em tetraidrofurano (20 mL) foi lentamente adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 1 h. Em seguida, uma solução aquosa de cloreto de sódio saturada (50 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL × 2), e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram combinadas. A fase orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 6-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-2-azaspiro[3,3]heptano-2-carbox ilato de terc-butila bruto (4B) como líquido oleoso amarelo (5,5 g, rendimento de 83 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 2: 6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-6-(nitrometil)-2-azaspiro[ 3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (4C)

[0073] 6-(2-etóxi-2-oxo-etilideno)-2-azaspiro[ 3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila bruto (4B) foi adicionado a um frasco de reação, e tetraidrofurano (60 mL) foi adicionado. O sistema foi agitado para dissolver completamente na temperatura ambiente, em seguida, nitrometano (6,0 g, 98,3 mmol) e fluoreto de tetrabutilamônio (7,85 g, 30 mmol) foram adicionados. Após a adição ser concluída, a reação foi aquecida a refluxo durante 5 h. A solução de reação foi arrefecida até a temperatura ambiente, acetato de etila (150 mL) foi adicionado a esta, e a mistura foi lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 mL) e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. A fase orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1), para obter 6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-6-(nitrometil)-2-azaspiro[3,3]heptan o-2-carboxilato de terc-butila (4C) como líquido oleoso transparente incolor (5,1 g, rendimento de 76 %). Etapa 3: 6-(aminometil)-6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2-azaspiro[ 3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (4D)

[0074] 6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-6-(nitrometil)-2 -azaspiro[3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (4C) (5,1g, 15 mmol) foi adicionado a um frasco de reação, etanol (75 mL), água (25 mL), pó de ferro (4,2 g, 74 mmol) e cloreto de amônio (4,0 g, 74 mmol) foram adicionados, e a reação foi aquecida a refluxo durante 5 h. A temperatura foi reduzida até a temperatura ambiente, e o sistema de reação foi concentrado a cerca de 20 mL. Água (30 mL) foi adicionado, em seguida, o pH foi ajustado para mais do que 10 com amônia, extraiu-se com diclorometano (50 mL x 2), e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram combinadas e as fases orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida para obter 6-(aminometil)-6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2-azaspiro[3,3]heptan o-2-carboxilato de terc-butila bruto (4D) (4,6 g, rendimento de 99 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 4: 9-oxo-2,8-diazadispiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecano-2 -carboxilato de terc-butila (4E)

[0075] 6-(aminometil)-6-(2-etóxi-2-oxo-etil)-2 -azaspiro[3,3]heptano-2-carboxilato de terc-butila bruto (4D) (4,6 g, 15 mmol) foi adicionado a um frasco de reação. Uma solução de hidróxido de sódio aquosa (600 mg, 15 mmol) (45 mL) foi adicionada, e a mistura foi reagida na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi filtrada para obter 9-oxo-2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecano-2-carboxilato de terc-butila (4E) como sólido branco (2,90 g, rendimento de 74 %). Etapa 5: 2,8-diazadispiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecan-9-a; cloridreto (4F)

[0076] 9-oxo-2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{4}]un decano-2-carboxilato de terc-butila (4E) (2 g, 7,5 mmol) foram dissolvidos em solução de HCl isopropanol 4N (9 mL), e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, para obter bruto 2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecano-9-a; cloridreto (4F) como sólido branco (0,95 g, rendimento de 62 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 6: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[ 3,1,4^{6},1^{4}]undecano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-met il-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (4G);

[0077] Diclorometano (30 mL) foi adicionado a um frasco de reação sob proteção de nitrogênio, e intermediário 1 (2,25 g, 2,98 mmol), 2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecano-9-a; cloridreto (4F) (0,6 g, 3,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol(0,39 g, 2,89 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,83 g, 4,33 mmol) foram adicionados. A reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 15 h. Em seguida, a água (20 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (30 mL × 3) e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram combinadas, e as fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 10:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)1-(9-oxo-2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{ 4}]undecano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amin o]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (4G) como um sólido espumoso branco (1,9 g, rendimento de 70 %). Etapa 7: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3,1,4^{6},1^ {4}]undecano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3 -fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pe ntanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 4)

[0078] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)1-(9-oxo-2,8-diaz aspiro[3,1,4^{6},1^{4}]undecano-2-carbonil)pentil]carbamoil ]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbama to de terc-butila (4G) (1,7 g, 1,9 mmol) e diclorometano (21 mL) foram adicionados a um frasco de reação sob proteção de nitrogênio. Ácido trifluoroacético (7 mL) foi adicionado sob agitação, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazaspiro[3,1,4^{6},1^{4 }]undecano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 4) como sólido branco (0,7 g, rendimento de 40 %). MS m/z (ESI):351,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,76 (d, 1H), 8,32 (d, 1H), 8,11 - 7,97 (m, 4H), 7,85 - 7,69 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,33 - 7,18 (m, 10H), 4,74 - 3,74 (m, 8H), 3,24 - 2,63 (m, 8H), 2,27 - 2,05 (m, 6H), 1,71 - 1,17 (m, 9H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-ciclopropilsulfonil-2,7 -diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R) -2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]- 4-metil-pentanamida (composto 6)

Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto Etapa 1: 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxilato de 7-benzil 2-terc-butila (6B)

[0079] Trietilamina (0,15 mL, 1,1 mmol) foi adicionada às gotas em um 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,23 g, 1 mmol) em uma solução de tetraidrofurano (5 mL) em um frasco de gargalo único de 50 mL a 0 ºC. Após a adição às gotas, cloroformiato de benzila (340 mg, 2 mmol) foi adicionado e agitado durante 10 min. A temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e agitação foi continuada durante 1 h. A solução de reação foi filtrada através de diatomita e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-terc-butil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxilato de 7-benzila (6B) como produto oleoso incolor (362 mg, rendimento de 99 %). MS m/z =383,2 [M+Na]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,34 - 7,32 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,64 (s, 4H), 3,43 (dd, 4H), 1,77 - 1,61 (m, 4H), 1,44 (s, 9H). Etapa 2: 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C)

[0080] 2-terc-butil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 2,7-dicarboxilato de 7-benzila (6B) (0,36 g, 1 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila bruto (6C) como líquido oleoso amarelo (260 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =261,2 [M+H]+; Etapa 3: 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7

-carboxilato de benzila (6D)

[0081] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila bruto (6C) (260 mg, 1 mmol), trietilamina (200 mg, 2 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A solução foi arrefecida a 0 ºC em um banho de gelo, e cloreto de ciclopropilsulfonila (170 mg, 1,2 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente durante 4 h. O sistema de reação depois foi arrefecido rapidamente com bicarbonato de sódio saturado (10 mL), extraído com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter composto de 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de benzila (6D) como sólido branco (360 mg, rendimento de 99 %). MS m/z =365,2 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,43 - 7,28 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,70 (s, 4H), 3,53 - 3,36 (m, 4H), 2,41 - 2,22 (m, 1H), 1,85 - 1,69 (m, 4H), 1,19 - 1,09 (m, 2H), 1,04 - 0,93 (m, 2H).

Etapa 4: 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (6E)

[0082] 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-7-carboxilato de benzila (6D) (360 mg, 0,99 mmol), paládio em carbono(72 mg, 20 % em peso) e acetato de etila (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 2 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (6E) como sólido amarelo claro (210 mg, rendimento de 92 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 5: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-ciclopropilsulfonil-2 ,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-met il-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (6F)

[0083] 2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano (6E) (161 mg, 0,7 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (124 mg, 0,8 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (108 mg, 0,8 mmol), intermediário 1 (500 mg, 0,7 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]a mino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (6F) como sólido branco (610 mg, rendimento de 95 %). Etapa 6: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-ciclopropilsulfonil-2,7 -diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R) -2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]- 4-metil-pentanamida (composto 6)

Composto

[0084] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)1-(2-ciclopropils ulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamo il]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carba mato de terc-butila(6F) (300 mg, 0,31 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente e liofilizada para obter um composto em pó branco. Em seguida, a resina de troca iônica (eluída com água a 3,3 % de amônia) foi usada para concentrar a solução de eluição recebida sob pressão reduzida (concentrada sob pressão reduzida a 25 mL a 60 ºC), e ainda liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-ciclopropilsulfonil-2,7-diazaspir o[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3

-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pe ntanamida (composto 6) como sólido branco (153 mg, rendimento de 63 %). MS m/z =383,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,40 - 7,24 (m, 6H), 7,16 (dd, 4H), 4,72 - 4,73 (m, 1H),4,58 - 4,52 (m, 1H), 4,25 (t, 1H), 3,84 (dd, 4H), 3,67 - 3,55 (m, 3H), 3,46 - 3,45 (m, 1H), 3,35 - 3,34 (m, 1H), 3,03 (dd, 1H), 2,91 (dd, 3H), 2,82 (d, 2H), 2,69 (ddd, 1H), 1,85 - 1,86 (m, 3H), 1,670 - 1,66 (m, 5H), 1,51 - 1,49 (m, 3H), 1,38 - 1,36 (m, 2H), 1,23 - 1,06 (m, 4H), 0,88 (dd, 6H). Exemplo 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-metilsulfonil-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; di-trifluoroacetato (composto 7)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto

Etapa 1: 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbo xilato de benzila (7A)

[0085] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (330 mg, 1,3 mmol), trietilamina (263 mg, 2,6 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL e agitado para dissolver.

Após arrefecer a -10 ºC, cloreto de metanossulfonila (164 mg, 1,43 mmol) foi adicionado às gotas, e a reação foi deixada prosseguir durante 4 h.

Em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente.

A solução de reação foi lavada com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa 3N (60 mL), e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido.

As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida.

O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:1) para obter 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (7A) como substância oleosa amarela clara (236 mg, rendimento de 54,6 %). MS m/z =339,0 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,41 - 7,28 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,68 (s, 4H), 3,50 - 3,38 (m, 4H), 2,86 (s, 3H), 1,83 - 1,70 (m, 4H). Etapa 2: 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (7B)

[0086] 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nona no-7-carboxilato de benzila (7A) (236 mg, 0,7 mmol), paládio em carbono (40 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação depois foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano bruto (7B) como sólido amarelo claro (133 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =205,1 [M+1]+; Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-metilsulfonil-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-but il]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (7C)

[0087] 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nona no bruto (7B) (133 mg, 0,65 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (374 mg, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (96,6 mg, 0,72 mmol), intermediário 1 (490 mg, 0,65 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]- 2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (7C) como sólido amarelo claro (317 mg, rendimento de 52 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-metilsulfonil-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida (composto 7) Composto

[0088] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)1-(2-metilsulfoni l-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3- metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (7C) (317 mg, 0,34 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi coletada, e concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente orgânico, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5] nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil -propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanam ida (composto 7) como pó branco (217 mg, rendimento de 66,5 %). MS m/z =370,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,27 (m, 6H), 7,25 - 7,20 (m, 4H), 4,67 - 4,62 (m, 2H), 4,33 - 4,20 (m, 2H), 3,87 - 3,71 (m, 4H), 3,69 - 3,56 (m, 2H), 3,53 - 3,41 (m, 1H), 3,40 - 3,29 (m, 1H), 3,23 - 3,12 (m, 2H), 3,11 - 3,07 (m, 3H), 3,07 - 2,91 (m, 4H), 1,94 - 1,78 (m, 3H), 1,78 - 1,60 (m, 5H), 1,58 - 1,48 (m, 3H), 1,46 - 1,28 (m, 2H), 0,98 - 0,82 (m, 6H). Exemplo 6: (2R)-N-[(1R)-1-(2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-7-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 8)

Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 8 Etapa 1: 2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (8A)

[0089] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (520 mg, 2,0 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (5 mL) sob proteção de nitrogênio em um frasco de reação de 50 mL e trietilamina (607 mg, 6,0 mmol) foi adicionado sob agitação. Em seguida, a temperatura foi reduzida a -20 ºC, e cloreto de acetila (314 mg, 4,0 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada naturalmente até a temperatura ambiente e agitada durante 2 h. Em seguida, uma solução de ácido clorídrico aquosa diluída 0,5 M (20 mL) foi adicionada à reação, e as camadas foram separadas sob agitação e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. The camada aquosa foi extraída com diclorometano (20 mL x 2), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (acetato de etila puro) para obter composto de 2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (8A) como líquido oleoso amarelo claro (440 mg, rendimento de 72,8 %). Etapa 2: 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)etanona (8B)

[0090] 2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-ca rboxilato de benzila (8A) (440 mg, 1,46 mmol) foi adicionado a uma solução mista de acetato de etila (5 mL) e metanol (2 mL) em um frasco de reação de 50 mL. Em seguida, paládio em carbono (80 mg, 20 % em peso) foi adicionado, e o sistema foi agitado sob uma atmosfera de hidrogênio (balão) na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação depois foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)etanona bruta (8B) como líquido oleoso amarelo claro (250 mg, rendimento de 99 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetil-2, 7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonila mino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo- etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (8C)

[0091] 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)etanon a bruta (8B) (200 mg, 1,19 mmol) foi adicionado em acetato de etila (10 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de gelo, em seguida, intermediário 1 (867 mg, 1,15 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (331 mg, 1,73 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (186 mg, 1,38 mmol) foram adicionados. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 1,5 h. Subsequentemente, uma solução de ácido clorídrico aquosa 1N (15 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. Uma solução de carbonato de sódio aquoso saturada (15 mL) foi adicionada a a fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. A fase orgânica foi lavada com uma solução aquosa de cloreto de sódio saturada (15 mL), seca sob sulfato de sódio anidro, filtrado, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetil-2,7-diazaspi ro[3,5]nonano--7-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonilamino)pent il]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amin o]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (8C) como sólido espumoso amarelo claro (1,04 g, rendimento de 99 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-1-(2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-7-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 8) Composto

[0092] N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2 -acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano--7-carbonil)-5-(terc-buto xicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-be nzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (8C) (1,04 g, 1,15 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (7,5 mL), e ácido trifluoroacético (3,5 mL) foi adicionado. O sistema foi agitado na temperatura ambiente durante 1 h. Subsequentemente, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Após o resíduo ser separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha), a preparação foi coletada, e concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente orgânico, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-1-(2-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbon il)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 8) como sólido branco (460 mg, two-etapa rendimento de 42,9 %). MS m/z (ESI):352,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,49 - 7,00 (m, 10H), 4,66 - 4,49 (m, 2H), 4,30 - 3,93 (m, 4H), 3,79 - 3,54 (m, 4H), 3,52 - 3,25 (m, 2H), 3,22 - 2,90 (m, 6H), 1,92 - 1,27 (m, 16H), 1,02 - 0,75 (m, 6H). composto 8 - 1:

[0093] O composto 8 (1,0 g, 1,07 mmol) foi passado através uma resina de troca iônica (60 mL) (eluído por água ~ 3,3 % de amônia), e a solução de eluição recebida foi concentrada sob pressão reduzida (concentrada sob pressão reduzida a 100 mL a 60 ºC) e ainda liofilizada para obter o composto 8 - 1 como a forma livre de composto 8 como sólido branco (451 mg, rendimento de 60,0 %). MS m/z (ESI):352,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,45-7,32 (m, 6H), 7,23 (dd, 4H), 4,85 - 4,75(m, 1H), 4,64 (t, 1H), 4,35 (t, 1H), 4,07 (d, 2H), 3,83 (d, 2H), 3,74-3,63 (m, 3H), 3,62-3,50 (m, 1H), 1H 3,50-3,39 (m, ), 3,17-2,65 (m, 6H), 2,01-1,66 (m, 9H), 1,65-1,30 (m, 7H), 0,96 (dd, 6H). Exemplo 7: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil

-pentanoil]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carb oxilato de isopropila; ácido di-trifluoroacético (composto 9) Etapa Etapa Etapa Etapa 4 Composto Etapa 1: 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxilato de O7-benzil O2-isopropila (9A)

[0094] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (310 mg, 1,2 mmol), trietilamina (364 mg, 3,6 mmol) e diclorometano (20mL) foram adicionados em um frasco de único gargalo de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação na temperatura ambiente. Em seguida foram arrefecido a -10 ºC, e cloroformiato de isopropila (146 mg, 1,2 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e a reação foi deixada prosseguir durante 4 h. O sistema de reação foi sequencialmente lavado com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa 3M (60 mL) e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:1) para obter composto de 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxilato de O7-benzil O-isopropila (9A) como líquido oleoso amarelo claro (279 mg, rendimento de 68 %). MS m/z =347,2 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,38 - 7,30 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,95 - 4,80 (m, 1H), 3,68 (s, 4H), 3,47 - 3,39 (m, 4H), 1,75 - 1,68 (m, 4H), 1,23 (d, 6H). Etapa 2: 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila (9B)

[0095] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxi lato de O7-benzil O-isopropila (9A) (260 mg, 0,75 mmol), paládio em carbono (52 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila bruto (9B) como sólido amarelo claro (159 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =213,2 [M+1]. Etapa 3: 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[

[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propano il]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino] hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila (9C)

[0096] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila bruto (9B) (159 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (374 mg, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (110 mg, 0,81 mmol), intermediário 1 (565 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]- 3-fenil-propanoil]amino]-4-metilpentanoil]amino]hexanoil]-2 ,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila (9C) como sólido amarelo claro (556 mg, rendimento de 78 %). Etapa 4: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carb oxilato de isopropila; ácido di-trifluoroacético (composto 9)

[0097] 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2- [[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fen il-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metilpentano il]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila (9C) (317 mg, 0,334 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil ]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de isopropila; ácido di-trifluoroacético (composto 9) como produto em pó branco (326 mg, rendimento de 98 %). MS m/z =374,9[M+2H]+/2;

RMN de 1H(400 MHz, D2O) δ 7,50 - 7,14 (m, 10H), 4,89 - 4,78 (m, 1H), 4,66 (t, 1H), 4,30 (t, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,89 - 3,74 (m, 4H), 3,69 - 3,54 (m, 2H), 3,54 - 3,41 (m, 1H), 3,41 - 3,28 (m, 1H), 3,21 - 3,11 (m, 2H), 3,11 - 2,90 (m, 4H), 1,93 - 1,30 (m, 14H), 1,27 (d, 6H), 0,93 (q, 6H). Exemplo 8: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano -7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 10)

Etapa Etapa

Composto 10

Etapa 1: 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[ [(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propano il]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino] hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (10A)

[0098] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,11 g, 0,5 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (115 mg, 0,6 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (81 mg, 0,6 mmol), intermediário 1 (378 mg, 0,5 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]- 3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil]- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (10A) como sólido branco (450 mg, rendimento de 93 %). Etapa 2: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano -7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 10) Composto 10

[0099] 7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2- [[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fen il-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentan oil]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (10A) (450 mg, 0,468 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h.

Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboni l)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino ]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 10) como produto em pó branco (358 mg, rendimento de 76 %). MS m/z =331,8[M-2CF3COOH+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,48 - 7,10 (m, 10H), 4,65 - 4,61 (m, 2H), 4,28 - 4,20 (m, 2H), 3,93 (d, 4H), 3,70 - 3,57 (m, 2H), 3,52 - 3,39 (m, 1H), 3,39 - 3,27 (m, 1H), 3,15 (d, 2H), 3,02 - 2,94 (m, 4H), 1,98 - 1,87 (m, 3H), 1,82 - 1,60 (m, 5H), 1,51 - 1,50 (m, 3H), 1,44 - 1,36 (m, 2H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 9: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano -2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 11)

Etapa Etapa Etapa Composto 11 Etapa 1: 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[ [(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propano il]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino] hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (11A)

[0100] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (0,26 g, 1 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (230 mg, 1,2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (162 mg, 1,2 mmol), intermediário 1 (0,75g, 1 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[ [(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino]-3-fenil-propanoil]amino] -3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil] -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (11A) como sólido branco (850 mg, rendimento de 85 %). Etapa 2: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nona no-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo- etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (11B)

[0101] 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2- [[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino]-3-fe nil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-penta noil]amino]hexanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilat o de benzila (11A) (850 mg, 0,85 mmol), paládio em carbono (170 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo nil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino ]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (11B) como sólido branco (580 mg, rendimento de 79 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano -2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 11) Composto 11

[0102] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2,7-diazaspir o[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]ami no]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (11B) (0,5 g, 0,58 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção:

0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboni l)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino ]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 11) como produto em pó branco (380 mg, rendimento de 66 %). MS m/z =331,8[M-2CF3COOH+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,13 (m, 10H), 4,61 (t, 1H), 4,28 - 4,06 (m, 5H), 3,84 - 3,74 (m, 2H), 3,19 - 3,14 (m, 6H), 2,99 - 2,95 (m, 4H), 2,09 - 1,94 (m, 4H), 1,79 - 1,61 (m, 4H), 1,55 - 1,31 (m, 5H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 10: 2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-metilsulfonil-2,7-diazas piro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 12) Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 12

Etapa 1: 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo xilato de terc-butila (12A)

[0103] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,23 g, 1 mmol), trietilamina (210 mg, 2,0 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de metanossulfonila (140 mg, 1,2 mmol) foi adicionado às gotas, e o sistema foi deixado reagir durante 4 h. Em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e o sistema de reação foi arrefecido rapidamente com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (10 mL), e extraída com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (12A) como substância oleosa amarela clara (250 mg, rendimento de 81 %). MS m/z =327,2[M+Na]+. Etapa 2: 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (12B)

[0104] 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nona no-2-carboxilato de terc-butila (12A) (0,25 g, 0,81 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano bruto (12B) como líquido oleoso amarelo claro (165 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(7-metilsulfonil-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-but il]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (12C)

[0105] 7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nona no bruto (12B) (165 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (192 mg, 1 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (135 mg, 1 mmol), intermediário 1 (610 mg, 0,81 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-

2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (12C) como sólido branco (630 mg, rendimento de 82,7 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-metilsulfonil-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 12) Composto 12

[0106] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(7-metilsulfon il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3 -metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (12C) (630 mg, 0,34 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]

nonano-2-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil -propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanam ida; ácido di-trifluoroacético (composto 12) como pó branco (410 mg, rendimento de 63,2 %). MS m/z =370,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,15 (m, 10H), 4,61 (t, 1H), 4,33 - 3,96 (m, 5H), 3,79 - 3,69 (m, 2H), 3,25 - 3,13 (m, 7H), 3,02 - 2,93 (m, 6H), 1,91 - 1,86 (m, 3H), 1,70 - 1,64 (m, 3H), 1,56 - 1,31 (m, 5H), 1,25 (t,2H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 11: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pirro lidin-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pent il]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 13) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 13 Etapa 1: cloreto de pirrolidin-1-carbonila (13B)

[0107] NaHCO3 (5,04g, 60 mmol), trifosgênio (5,94g, 20 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A solução de reação foi arrefecida a 10 ºC e em seguida, pirrolidina (2,16 g, 30,4 mmol) foi lentamente adicionada às gotas. Após a adição, a temperatura foi retornada até a temperatura ambiente e reagida durante a noite. A solução de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo: acetato de etila (v:v) = 3:1), para obter cloreto de pirrolidina-1-carbonila (13B) como substância oleosa incolor (2,07 g, rendimento de 51,65 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,62 - 3,56 (m, 2H), 3,54 - 3,44 (m, 2H),2,02 - 1,90 (m, 4H). Etapa 2: 2-(pirrolidina-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]non ano-7-carboxilato de benzila (13C)

[0108] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (350 mg, 1,3 mmol), trietilamina (408 mg, 4,03 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação na temperatura ambiente. Em seguida, a solução de reação foi arrefecida a 0 ºC, e cloreto de pirrolidina-1-carbonila (13B) (123 mg, 0,92 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e a reação foi deixada prosseguir durante 4 h. A solução de reação foi sequencialmente lavado com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa de

3 mol/L (60 mL) e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-(pirrolidina-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carb oxilato de benzila bruto (13C) como líquido oleoso amarelo claro (460 mg, rendimento de 100 %). MS m/z =358,2 [M+H]+. Etapa 3: 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il(pirrolidina-1-il)me tanona (13D)

[0109] 2-(pirrolidina-1-carbonil)-2,7-diazaspi ro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila bruto (13C) (460 mg, 1,3 mmol), hidróxido de paládio/carbono (100 mg, 20 % em peso) e isopropanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e foi aquecida a 100 ºC no banho de óleo durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il(pirrolidina-1-il)metanona bruto (13D) como sólido amarelo claro (290 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =224,3 [M+H]+. Etapa 4: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(pirrolidina-1-carbon il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]- 3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (13E)

[0110] 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il(pirrolidi na-1-il)metanona bruto (13D) (167 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (374 mg, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (108 mg, 0,81 mmol), intermediário 1 (556 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(pirrolidina-1-carbonil)-2,7-di azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-bu til]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (13E) como sólido branco (360 mg, rendimento de 29 %). Etapa 5: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pirrolidina-1-c arbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-met il-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 13)

Composto 13

[0111] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(pirrolidin a-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]c arbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil ]carbamato de terc-butila (13E) (360 mg, 0,38 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pirrolidina-1-c arbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-met il-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 13) como sólido branco (169 mg, rendimento de 45,6 %). MS m/z =380,4 [M+2H]+/2.

[0112] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,75 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 8,01 (br, 3H), 7,73 (br, 3H), 7,34 - 7,17 (m, 10H), 4,71 - 4,60 (m, 2H), 4,40 - 4,32 (m, 1H), 4,08 - 3,96 (m, 2H), 3,73 - 3,23 (m, 8H), 3,16 - 3,01 (m, 3H), 2,98 - 2,86 (m, 1H), 2,85 - 2,69 (m, 3H), 1,82 - 1,69 (m, 4H), 1,69 - 1,42 (m, 11H), 1,36 - 1,22 (m, 2H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 12: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-metilsulfonilazetidi na-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil] -2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil -propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 14) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 14 Etapa 1: cloreto de 3-metilsulfonilazetidina-1-carbonila (14B)

[0113] NaHCO3 (756 mg, 9,0 mmol), trifosgênio (0,89 g, 4,5 mmol) e diclorometano (8 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A solução de reação foi arrefecida a -10 ºC, e em seguida, 3-metilsulfonilazetidina cloridreto (772 mg, 4,5 mmol) foi lentamente adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi retornada to a temperatura foi retornada até a temperatura ambiente e reagida durante a noite. A solução de reação foi filtrada, concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo: acetato de etila (v:v) = 1:1) para obter como substância oleosa incolor, cloreto de 3-metilsulfonilazetidina-1-carbonila (14B) (494 mg, rendimento de 50 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,62 - 4,32 (m, 4H), 4,07 - 3,92 (m, 1H), 2,93 (s, 3H). Etapa 2: 2-(3-metilsulfonilazetidina-1-carbonil)-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (14C)

[0114] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (350 mg, 1,3 mmol), trietilamina (406 mg, 4,01 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação na temperatura ambiente. Em seguida, a solução de reação foi arrefecida a 0 ºC, e cloreto de 3-metilsulfonilazetidina-1-carbonila (14B) (293 mg, 1,48 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e o sistema foi deixado reagir durante 4 h. A solução de reação foi sequencialmente lavado com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa de 3 mol/L (60 mL) e seperated. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha) para obter 2-(3-metilsulfonilazetidina-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5] nonano-7-carboxilato de benzila (14C) como sólido branco (300 mg, rendimento de 55 %). MS m/z =422,2 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,41 - 7,28 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,30 - 4,19 (m, 4H), 4,00 - 3,89 (m, 1H), 3,69 (s, 4H), 3,49 - 3,36 (m, 4H), 2,90 (s, 3H), 1,79 - 1,67 (m, 4H). Etapa 3: 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il-(3-metilsulfonilaze tidin-1-il)metanona (14D)

[0115] 2-(3-metilsulfonilazetidina-1-carbonil) -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (14C) (300 mg, 0,7 mmol), hidróxido de paládio/carbono (60 mg, 20 % em peso) e isopropanol (20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e foi aquecida a 100 ºC no banho de óleo e reagida durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il-(3-metilsulfonilazetidina-1-i l)metanona bruto (14D) como sólido amarelo claro (202 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =288,1 [M+H]+. Etapa 4: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(3-metilsulfonilazeti dina-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]penti l]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-e til]carbamato de terc-butila (14E)

[0116] 2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il-(3-metils ulfonilazetidina-1-il)metanona bruto (14D) (202 mg, 0,7 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (402 mg, 2,10 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (115 mg, 0,85 mmol), intermediário 1 (536 mg, 0,71 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 40:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(3-metilsulfonilazetidina-1-car bonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoi l]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbam ato de terc-butila (14E) como sólido amarelo claro (686 mg, rendimento de 96 %). Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-metilsulfonilazetidi na-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil] -2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil -propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (composto 14) Composto 14

[0117] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(3-metilsul fonilazetidina-1-carbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carb onil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amin o]-2-oxo-etilcarbamato de terc-butila (14E) (680 mg, 0,66 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda:

210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-metilsulfonilazetidina-1-carbo nil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)- 2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil ]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 14) como sólido branco (330 mg, rendimento de 41,3 %). MS m/z =412,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,18 (m, 10H), 4,66 (t, 1H), 4,47 - 4,16 (m, 7H), 3,90 - 3,72 (m, 4H), 3,69 - 3,55 (m, 2H), 3,53 - 3,41 (m, 1H), 3,39 - 3,27 (m, 1H), 3,24 - 3,14 (m, 2H), 3,10 (s, 3H), 3,09 - 2,90 (m, 4H), 1,94 - 1,26 (m, 14H), 0,92 (d, 6H). Exemplo 13: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-2-carboxamida; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (composto 15)

Etapa Etapa Etapa

Etapa 4

Composto 15

Etapa 1: 2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-ca rboxilato de benzila (15B)

[0118] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (310 mg, 1,2 mmol), trietilamina (364 mg, 3,6 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação na temperatura ambiente. Em seguida, a solução de reação foi arrefecida a 0 ºC, e cloreto de metilaminoformila (15A) (123 mg, 1,32 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e a reação foi deixada prosseguir durante 4 h. A solução de reação foi sequencialmente lavado com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa de 3 mol/L (60 mL) e separada. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila bruto (15B) como substância oleosa amarela (440 mg, rendimento de 100 %). MS m/z =318,2 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,39 - 7,28 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 3,66 (s, 4H), 3,50 - 3,36 (m, 4H), 2,79 (s, 3H), 1,82 - 1,63 (m, 4H). Etapa 2: N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxamida (15C)

[0119] 2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]n onano-7-carboxilato de benzila bruto (15B) (260 mg, 0,82 mmol), hidróxido de paládio/carbono (50 mg, 20 % em peso) e isopropanol (20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi aquecida a 100 ºC no banho de óleo e reagida durante 8 h sob atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxamida bruto (15C) como sólido amarelo claro (150 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =184,3 [M+H]+. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarbamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (15D)

[0120] N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-car boxamida bruto (15C) (150 mg, 0,82 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (374 mg, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (110 mg, 0,81 mmol),

intermediário 1 (565 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 40:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amin o]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (15D) como sólido amarelo claro (480 mg, rendimento de 63 %). Etapa 4: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-2-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 15) Composto 15

[0121] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarba moil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil ]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbama to de terc-butila (15D) (480 mg, 0,52 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir durante

2 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil ]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbox amida; ácido di-trifluoroacético (composto 15) como sólido branco (260 mg, rendimento de 53 %). MS m/z =360,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,28 (m, 6H), 7,27 - 7,21 (m, 4H), 4,66 (t, 1H), 4,30 (t, 1H), 4,21 (t, 1H), 3,74 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 3,69 - 3,59 (m, 2H), 3,55 - 3,43 (m, 1H), 3,41 - 3,31 (m, 1H), 3,24 - 3,12(m, 2H), 3,11 - 2,92 (m, 4H), 2,69 (s, 3H), 1,94 - 1,27 (m, 14H), 0,93 (dd, 6H). Exemplo 14: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-metilsulfo nil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil] amino]-4-metil-pentanamida; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (composto 16)

Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 16 Etapa Etapa Composto 16 Etapa 1: 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarb oxilato de O7-benzil O2-terc-butila (16B)

[0122] Trietilamina (0,85 mL, 8,4 mmol), 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (16A) (2,1 g, 8,0 mmol) e tetraidrofurano (15 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de gargalo único de 50 mL. A solução de reação foi arrefecida a 0 ºC, e em seguida, cloroformiato de benzila (1,5 g, 8,8 mmol) foi lentamente adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi mantida a 0 ºC durante 10 minutos, e em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente novamente e continuada a agitar durante 5 h. A solução de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter

5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2,7-dicarboxilato de O7-benzil O2-terc-butila (16B) como produto oleoso amarelo claro (3,5 g, rendimento de 100 %). MS m/z =419,3 [M+Na]+; Etapa 2: 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxil ato de benzila (16C)

[0123] 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 2,7-dicarboxilato de O7-benzil O2-terc-butila (16B) (3,17 g, 8,0 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (6,0 mL) foram adicionados às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi ajustada a um pH de cerca de 13 com água amoniacal, e em seguida, a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter benzila 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato (16C) como líquido oleoso amarelo (2,43 g, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =297,1 [M+H]+; Etapa 3: 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]n onano-7-carboxilato de benzila (16D)

[0124] 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carboxilato de benzila (16C) (310 mg, 1,05 mmol), trietilamina (318 mg, 3,14 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e dissolvidos sob agitação.

Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de metanossulfonila (156 mg, 1,36 mmol) foi adicionado às gotas e o sistema foi deixado reagir durante 4 h.

Em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente, e a solução de reação foi sequencialmente lavado com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (60 mL), solução de ácido clorídrico aquosa 3M (60 mL), e separada.

O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 60:1) para obter 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-ca rboxilato de benzila (16D) como sólido branco (233 mg, rendimento de 59 %). MS m/z =397,2[M+Na]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,42 - 7,29 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 4,09 (d,2H), 3,78 - 3,59 (m, 4H), 3,51 (t, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,08 (s, 2H). Etapa 4: 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]n onano (16E)

[0125] 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazas piro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (16D) (230 mg, 0,5 mmol), paládio/carbono (40 mg, 20 % em peso) e isopropanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi aquecida a 100 ºC no banho de óleo e reagida durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação depois foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (16E) como sólido amarelo claro (155 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =241,1 [M+H]+; Etapa 5: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro-2-metilsul fonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil ]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbama to de terc-butila (16F)

[0126] 5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-diazas piro[3,5]nonano (16E) (155 mg, 0,5 mmol), cloridreto de

1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (300 mg, 2,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (115 mg, 0,85 mmol), intermediário 1 (377 mg, 0,5 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica(diclorometano: metanol(v:v) = 40:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (16F) como sólido branco (380 mg, rendimento de 78 %). Etapa 6: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-metilsulfo nil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil] amino]-4-metil-pentanamida; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (composto 16) Composto 16

[0127] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro- 2-metilsulfonil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil ]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-et il]carbamato de terc-butila (16F) (380 mg, 0,34 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente.

Após a adição, o sistema foi deixado reagir durante 2 h.

Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-metilsulfonil-2,7-di azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-m etil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 16) como pó branco (270 mg, rendimento de 71 %). MS m/z =388,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,17 (m, 10H), 4,66 (t, 1H), 4,42 - 4,13 (m, 4H), 4,13 - 3,49 (m, 7H), 3,25 - 2,92 (m, 9H), 2,30 - 2,00 (m, 2H), 1,91 - 1,26 (m, 9H), 0,93 (q, 6H). Exemplo 15: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoil] -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]ami no]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 17)

Etapa Etapa 2 Etapa Etapa Etapa Composto 17 Etapa 1: ácido de (2R-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanóico (17B)

[0128] D-alanina (17A) (10 g, 112,24 mmol) e água (56 mL) foram adicionados em um 2frasco de reação de 50 mL, e a solução de reação foi arrefecida a 0 ºC e em seguida, hidróxido de sódio (6,73 g, 168,36 mmol) foi adicionado. Após a adição, a reação foi mantida a 0 ºC durante 10 minutos, e em seguida, uma solução de dicarbonato de di-terc-butila (31,85 g, 145,91 mmol) em tetraidrofurano (50 mL) foi adicionada às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A solução de reação foi extraída com éter de petróleo (100 mL × 2) e a fase orgânica foi descartada. A fase aquosa foi acidificada com solução de ácido clorídrico 4M a um pH de cerca de 1, e em seguida, extraída com acetato de etila (100 mL × 4). As fases orgânicas foram combinadas e secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter ácido de (2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanóico (17B) como substância oleosa incolor (21,2 g, rendimento de: 100 %). MS m/z =212,1 [M+Na]+; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,34 (br, 1H), 7,05 (d, 1H), 3,98 - 3,87 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,22 (d, 3H). Etapa 2: 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]-2, 7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (17C)

[0129] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (335 mg, 1,3 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (748 mg, 3,9 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (211 mg, 1,56 mmol), ácido de (2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanóico (17B) (246 mg, 1,3 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 3:1) para obter 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]-2,7-diazaspi ro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (17C) como sólido branco (510 mg, rendimento de 91 %). MS m/Z= 454,3[M+Na]+; Etapa 3: N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-1-metil -2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (17D)

[0130] 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)pro panoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (17C) (460 mg, 1,1 mmol), hidróxido de paládio/carbono (92 mg, 20 % em peso) e isopropanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a reação foi aquecida a 100 ºC no banho de óleo durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). Em seguida, foi arrefecida até a temperatura ambiente, a solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-1-metil-2-oxo-eti l]carbamato de terc-butila bruto (17D) como sólido amarelo claro (252 mg, rendimento de 77 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =298,3 [M+H]+; Etapa 4: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(terc-butoxic arbonilamino)propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboni l]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]- 2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (17E)

[0131] N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-i l)-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (17D) (223 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (374 mg, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (110 mg, 0,81 mmol), intermediário 1 (565 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica(diclorometano: metanol(v:v) = 40:1) para obter terc-butila N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilami no)propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]c arbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil ]carbamato (17E) como sólido amarelo claro (560 mg, rendimento de 69 %). Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoil] -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]ami no]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 17) Composto 17

[0132] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(te rc-butoxicarbonilamino)propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano -7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-et il]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (17E) (560 mg, 0,52 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foram adicionados às gotas na temperatura ambiente.

Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h.

Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoil]-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 17) como pó branco (310 mg, rendimento de 45 %). MS m/z =367,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,28 (m, 6H), 7,26 - 7,20 (m, 4H), 4,65 (t, 2H), 4,33 - 4,21 (m, 2H), 4,19 - 4,01 (m, 3H), 3,96 - 3,78 (m, 2H), 3,75 - 3,59 (m, 2H), 3,56 - 3,42 (m, 1H), 3,42 - 3,30 (m, 1H), 3,24 - 3,12(m, 2H), 3,10 - 2,92 (m, 4H), 1,99 - 1,79 (m, 3H), 1,80 - 1,63(m, 5H), 1,53 (d, 3H), 1,50 - 1,30 (m, 5H), 0,92 (dd, 6H).

Exemplo 16: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil] -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]ami no]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 18) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 18 Etapa 1: N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)-1-metil -2-oxo-etil]carbamato de benzila (18B)

[0133] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,45g, 2 mmol), cloridreto de

1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (780 mg, 4,1 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (340 mg, 2,5 mmol), ácido de (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)propanóico (446 mg, 2,0 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)-1-metil-2-oxo-eti l]carbamato de benzila (18B) como sólido branco (860 mg, rendimento de 99 %). MS m/Z= 454,2 [M+Na]+. Etapa 2: N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)-1-metil -2-oxo-etil]carbamato de benzila (18C)

[0134] N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-i l)-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de benzila (18B) (0,86 g, 2 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)-1-metil-2-oxo-eti l]carbamato de benzila bruto (18C) como líquido oleoso amarelo (660 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z =332,2 [M+H]+; Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-1-[7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)propanoil]-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino) pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2- oxo-etil]carbamato de terc-butila (18D)

[0135] N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-i l)-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de benzila (18C) (243 mg, 0,7 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (300 mg, 2,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (200 mg, 1,0 mmol), intermediário 1 (500 mg, 0,7 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 100 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 30:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[ (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)propanoil]-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil]car bamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]c arbamato de terc-butila (18D) como sólido amarelo claro (740 mg, rendimento de 99 %). Etapa 4: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-a minopropanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(ter c-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino ]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (18E)

[0136] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)propanoi l]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarb onilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil ]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (18D) (700 mg, 0,7 mmol), paládio em carbono (140 mg, 20 % em peso) e metanol (15 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 8 h sob uma atmosfera de hidrogênio. A solução de reação depois foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil ]-1,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbo nil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-e til]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (18E) como substância oleosa amarela clara (650 mg, rendimento de 99 %), e usada diretamente na próxima reação.

Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil] -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]ami no]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 18)

[0137] (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil ]-1,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbo nil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-e til]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (18E) (650 mg, 0,7 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil]-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 18) como pó branco (170 mg, rendimento de 19 %). MS m/z =733,5 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,28 (m, 6H), 7,27 - 7,20 (m, 4H), 4,64 (t, 1H), 4,55 - 4,46 (m, 1H), 4,32 - 4,23 (m, 2H), 4,21 - 4,05 (m, 3H), 3,86 - 3,71 (m, 2H), 3,63 - 3,40 (m, 4H), 3,25 - 3,10 (m, 2H), 3,10 - 2,90 (m, 4H), 2,00 - 1,60 (m, 8H), 1,60 - 1,29 (m, 8H), 0,92 (dd,6H). Exemplo 17: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil] -5,5-difluoro-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3- fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pen tanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 19)

Etapa 1 Etapa

Etapa Etapa

Composto 19

Etapa 1: 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[ [(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propano il]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]

hexanoil]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxil ato de benzila (19A)

[0138] 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carboxilato de benzila (16C) (797 mg, 2,69 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (1,04 g, 5,4 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (400 mg, 3 mmol), intermediário 1 (2,03 g, 2,69 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 100 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 30:1) para obter 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[ (2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amino]- 3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil]- 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (19A) como sólido amarelo claro (2,49 g, rendimento de 89,6 %). Etapa 2: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]n onano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-o xo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (19B)

[0139] 2-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2- [[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fen il-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentan oil]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carboxilato de benzila (19A) (2,49 g, 2,41 mmol), paládio em carbono (500 mg, 20 % em peso) e metanol (25 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL.

A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 4 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação depois foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]n onano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-o xo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (19B) como sólido oleoso amarelo claro (2,16 g, rendimento de 99 %), e usado diretamente na próxima reação.

MS m/z =899,5 [M+H]+; Etapa 3: N-(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc -butoxicarbonilamino)-1-[7-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamin o)propanoil]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo nil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino ]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (19C)

[0140] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-me til-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (19B) (400 mg, 0,4 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,23 g, 1,2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (70 mg, 0,5 mmol), Boc-D-alanina(78 mg, 0,41 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 30:1) para obter N-(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc -butoxicarbonilamino)-1-[7-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamin o)propanoil]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo nil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino ]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (19C) como sólido amarelo claro (340 mg, rendimento de 79 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil] -5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]- 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-

propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 19) Composto 19

[0141] N-(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[( 1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-[(2R)-2-(ter c-butoxicarbonilamino)propanoil]-5,5-difluoro-2,7-diazaspir o[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]ami no]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (19C) (340 mg, 0,32 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoil]-5,5-diflu oro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]

amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 19) como pó branco (170 mg, rendimento de 48 %). MS m/z (ESI):385,3[M+2H]+/2; 1H RMN de (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,29 (m, 6H), 7,27 - 7,21 (m, 4H), 4,67 - 4,47 (m, 3H), 4,31 - 4,09 (m, 5H), 4,09 - 3,76 (m, 3H), 3,74 - 3,46 (m, 2H), 3,18 (d, 2H), 3,10 - 2,91 (m, 4H), 2,33 - 1,97 (m, 2H), 1,84 - 1,61 (m, 4H), 1,61 - 1,26 (m, 8H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 18: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 20) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 20 Etapa 1: 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (20B)

[0142] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (450 mg, 2,0 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (5 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio, e trietilamina (606 mg, 6,0 mmol) foi adicionada sob agitação. Em seguida, a temperatura foi reduzida a -20 ºC, e cloreto de acetila (310 mg, 4,0 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a temperatura foi elevada naturalmente até a temperatura ambiente e o sistema foi agitado durante 2 h. Subsequentemente, uma solução aquosa de ácido clorídrico diluída 0,5M (20 mL) foi adicionada à reação, e as camadas foram separadas agitando-se e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido. A camada aquosa foi extraído com diclorometano (20 mL x 2), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (acetato de etila puro), para obter 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (20B) como líquido oleoso amarelo claro (520 mg, rendimento de 97,0 %). Etapa 2: 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)etanona (20C) 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)etanona

[0143] 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-ca rboxilato de terc-butila (20B) (520 mg, 1,9 mmol) e diclorometano (6 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida, e 4 mL de água amoniacal concentrada foram adicionados ao resíduo, seguido por secagem com sulfato de sódio anidro, lavando com metanol (20 mL), e concentrando a solução de lavagem para obter 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)etanona bruto (20C) como líquido oleoso amarelo (250 mg, rendimento de 77 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspir o[3,5]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil ]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino] -1-benzil-2-oxo-etil]carbamato (20D)

[0144] 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)etanon a (20C) (250 mg, 1,49 mmol) foi adicionado no acetato de etila (10 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de gelo, e intermediário 1 (800 mg, 1,06 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (305 mg, 1,6 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (172 mg, 1,27 mmol) foram adicionados. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 1,5 h. Subsequentemente, uma solução clorídrica de ácido aquoso 1M (15 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. Uma solução de carbonato de sódio aquoso saturada (15 mL) foi adicionada a a fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. A fase orgânica foi lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada (15 mL), seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspir o[3,5]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil ]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino] -1-benzil-2-oxo-etil]carbamato bruto (20D) como sólido espumoso amarelo claro (0,85 g, rendimento de 88 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 20) Composto 20

[0145] N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7- acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxi carbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benz il-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato bruto

(20D) (0,85 g, 0,94 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (7,5 mL), e ácido trifluoroacético (3,5 mL) foi adicionado.

O sistema foi agitado na temperatura ambiente durante 1 h.

Subsequentemente, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida.

Após o resíduo ser separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha), a preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter ((2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo nil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-prop anoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 20) como sólido branco (310 mg, rendimento de 40,0 %). MS m/z (ESI):352,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,46 - 7,17 (m, 10H), 4,64 (t, 1H), 4,29 - 4,05 (m, 5H), 3,83 - 3,74 (m, 2H), 3,57 - 3,35 (m, 4H), 3,24 - 3,11 (m, 2H), 3,09 - 2,93 (m, 4H), 2,17 - 1,29 (m, 16H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 19: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan a-4-il)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil] amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 21)

Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 21 Etapa 1: 2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il)-7-azaspiro[3,5]no nano-7-carboxilato de terc-butila (21A)

[0146] 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila (3A) (129 mg, 0,54 mmol), ácido acético (65 mg, 1,08 mmol), 1,4-tiazinana 1,1-dióxido(72 mg, 0,54 mmol), triacetoxiborohidreto de sódio (229 mg, 1,08 mmol) e diclorometano(20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 16 h. A solução de reação foi filtrada por sucção, e o filtrado foi lavado com uma solução de bicarbonato de sódio saturado (50 mL). Após separação, a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada por sucção, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, para obter

(1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbo xilato de terc-butila (21A) como pó branco (147 mg, rendimento de 76 %). Etapa 2: 4-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)-1,4-tiazinano 1,1-dióxido (21B)

[0147] (1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il)-7-azaspir o[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (21A)(147 mg, 0,41 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 4-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)-1,4-tiazinana-1,1-dióxido bruto (21B) como líquido oleoso amarelo (106 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazin an-4-il)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil] -3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamat o de terc-butila (21C)

[0148] 4-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)-1,4-tiazi nana-1,1-dióxido bruto (21B) (106 mg, 0,41 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida(94 mg, 0,49 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (66 mg, 0,49 mmol), intermediário 1 (309 mg, 0,41 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1), para obter (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-b utoxicarbonilamino)-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il)-7-az aspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (21C) como sólido branco (367 mg, rendimento de 90 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan -4-il)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2- [[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]a mino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 21)

Composto 21

[0149] (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-b utoxicarbonilamino)-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il)-7-az aspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (21C) (367 mg, 0,37 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-tiazinan-4-il )-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino] -4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 21) como pó branco (295 mg, rendimento de 70 %). MS m/z =397,9 [M+2H]+/2;

[0150] RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,36 - 7,19 (m, 10H), 4,63 - 4,60 (m, 1H), 4,32 - 4,16 (m, 3H), 3,92 - 3,78 (m, 1H), 3,63 (d, 9H), 3,53 - 3,22 (m, 3H), 3,15 (d, 2H), 3,01 - 2,91 (m, 4H), 2,48 - 2,32 (m, 2H), 1,98 - 2,06 (m, 2H), 1,75 - 1,23 (m, 13H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 20: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonan o-2-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 22) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 22 Etapa 1: 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-ca rboxilato de terc-butila (22B)

[0151] 2-Boc-2,7-diazaspiro[4,4]nonano (22A) (452 mg, 2,0 mmol), trietilamina (400 mg, 4,0 mmol) e diclorometano (15 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, cloreto de metil amino formila (188 mg, 2,01 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. O ácido clorídrico diluído 3M (50 mL) foi adicionado à solução de reação, e em seguida, extraiu-se com diclorometano (60 mL × 2). As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carboxilato de terc-butila (22B) como sólido branco (570 mg, rendimento de 65,5 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,51 - 3,16 (m, 8H), 2,82 (s, 3H), 1,98 - 1,74 (m, 4H), 1,46 (s, 9H). Etapa 2: N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carboxamida (22C)

[0152] 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[4,4]n onano-2-carboxilato de terc-butila (22B) (161 mg, 0,568 mmol), diclorometano (10 mL) e ácido trifluoroacético (1,2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carboxamida bruto (22C) como substância oleosa amarela clara, e usado diretamente na próxima reação.

Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarbamoil)-2,7- diazaspiro[4,4]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (22D)

[0153] N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-car boxamida bruto (22C) (81 mg, 0,44 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,288 g, 1,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (81 mg, 0,6 mmol), intermediário 1 (330 mg, 0,44 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 30:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro [4,4]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amin o]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (22D) como sólido amarelo claro (420 mg, rendimento de 98 %).

Etapa 4: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonan o-2-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 22)

[0154] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(metilcarba moil)-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil ]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbama to de terc-butila (22D) (400 mg, 0,44 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil

]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carbox amida; ácido di-trifluoroacético (composto 22) como pó branco (130 mg, rendimento de 31,5 %). MS m/z (ESI):360,3[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,19 (m, 10H), 4,68 - 4,60 (m, 1H), 4,50 - 4,19 (m, 3H), 3,93 - 3,62 (m, 2H), 3,55 - 3,27 (m, 5H), 3,24 (s, 1H), 3,18 (d, 2H), 3,09 - 2,94 (m, 4H), 2,74 - 2,66 (m, 3H), 2,10 - 1,85 (m, 4H), 1,84 - 1,62 (m, 4H), 1,59 - 1,43 (m, 4H), 1,43 - 1,29 (m, 1H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 21: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-pip eridinil)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-metil- pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 23) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 23 Etapa 1: 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxi lato de terc-butila (23A)

[0155] 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila(0,48 g, 2 mmol), piperidina (0,25 g, 3 mmol) e diclorometano(10 mL) foram adicionados a um frasco de reação, agitados durante 30 minutos, arrefecidos a 0 - 5ºC, e cianoborohidreto de sódio (0,13 g, 4 mmol) foi adicionado. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 4 h, e TLC foi usado para monitorar a conclusão da reação para conclusão. Diclorometano (10 mL) e água (10 mL) foram adicionados e agitados durante 5 min. As camadas foram deixadas repousar, e a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, concentrada sob pressão reduzida para obter 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila bruto (23A) como sólido amarelo claro (0,53g, rendimento de 86 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 2: 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (23B)

[0156] 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano -7-carboxilato de terc-butila (23A, 0,53 g, 1,7 mmol) foi adicionado a diclorometano (5 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado sob agitação. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. TLC foi usado para monitorar a conclusão da reação e a reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida para obter 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano; ácido trifluoroacético (23B) como substância oleosa amarela clara

(0,50 g, rendimento de 90 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(1-piperidinil)-7-aza spiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil ]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (23C)

[0157] Ácido de 2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5]nonano trifluoroacético (23B, 0,50 g, 1,60 mmol) foi adicionado a diclorometano(10 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de gelo, e intermediário 1 (0,50 g, 0,66 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (190 mg, 0,99 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (110 mg, 0,81 mmol) foram adicionados. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. Subsequentemente, uma solução clorídrica de ácido aquoso 1M (15 mL) foi adicionada à solução de reação, e a mistura foi agitada e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. Uma solução de carbonato de sódio aquoso saturada (15 mL) foi adicionada a a fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. A fase orgânica foi lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada

(15 mL), seca sob sulfato de sódio anidro, filtrado, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(1-piperidinil)-7-azaspiro[3,5] nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2- oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (23C) como sólido espumoso amarelo claro (0,45 g, rendimento de 72 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-pip eridinil)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-metil- pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 23) Composto 23

[0158] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(1-piperidi nil)-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-m etil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (23C) (0,45 g, 0,48 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (7,5 mL), e ácido trifluoroacético (3,5 mL) foi adicionado, e o sistema foi agitado na temperatura ambiente durante 1 h. Subsequentemente, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Após o resíduo ser separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O;

isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha), a preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidinil)- 7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-metilpentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 23) como sólido branco (260 mg, rendimento de 56 %). MS m/z (ESI):372,9[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ7,48 - 7,09 (m, 10H), 4,68 - 4,60 (m, 1H), 4,34 - 4,17 (m, 2H), 3,73 - 3,52 (m, 3H), 3,52 - 2,92 (m, 10H), 2,80 - 2,64 (m, 2H), 2,47 - 2,24 (m, 2H), 2,05 - 1,88 (m, 4H), 1,88 - 1,20 (m, 18H), 1,00 - 0,81 (m, 6H). Exemplo 22: Ácido de (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetra-hidropiran -4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]-4-metil- pentanamida tri-trifluoroacético (composto 24) Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 24

Etapa 1: 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano -2-carboxilato de terc-butila (24A)

[0159] 2,7-diazaspiro[3,4]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,452 g, 2 mmol), tetra-hidropirona (200 mg, 2 mmol), ácido acético (120 mg, 2,0 mmol) e dicloroetano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e agitados durante 0,5 h. Triacetoxiborohidreto de sódio (0,636 g, 3 mmol) foi adicionado, e o sistema foi deixado reagir durante 5 h. A solução de reação depois foi arrefecida rapidamente com água (10 mL), extraída com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas, secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxi lato de terc-butila (24A) como substância oleosa amarela clara (500 mg, rendimento de 80,64 %). MS m/z =311,2[M+H]+. Etapa 2: 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (24B)

[0160] 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[ 3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (24A) (0,5 g, 1,61 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano bruto (24B) como líquido oleoso amarelo claro (338 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(7-tetra-hidropiran-4-il -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-m etil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (24C)

[0161] 7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diazaspiro[ 3,5]nonano bruto (24B)(338 mg, 1,61 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (384 mg, 2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (270 mg, 2 mmol), intermediário 1 (400 mg, 0,53 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(7-tetra-hidropiran-4-il-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil ]amino]-2-oxo-etil]amino]-2oxo-etil]carbamato de terc-butila (24C) como sólido branco (200 mg, rendimento de 39,93 %) Etapa 4: Ácido de (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-il-7 -azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanamida tri-trifluoroacético (composto 24) Composto 24

[0162] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(7-tetra-hidro piran-4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carb amoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2oxo-etil]car bamato de terc-butila (24C) (200 mg, 0,21 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm;

período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter ácido de (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetra-hidropiran -4-il-2,7-diazaspiro[3,5]nonane2-carbonil)pentil]-4-metil-p entanamida; tri-trifluoroacético (composto 24) como pó branco (135 mg, rendimento de 86,1 %). MS m/z =373,9[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,46 - 7,29 (m, 10H), 4,71 (t, 1H), 4,27 - 4,16 (m, 7H), 3,93 - 3,86 (m, 2H), 3,66 - 3,53(m, 5H), 3,25 - 3,05 (m, 8H), 2,34 - 2,13 (m, 6H), 1,79 - 1,43(m, 11H), 1,02 - 0,95 (m, 6H). Exemplo 23: Ácido de (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pirrolidina-1-il -7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanami da tri-trifluoroacético (composto 25)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 25

Etapa 1: 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbox ilato de terc-butila (25A)

[0163] 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila (3A) (131 mg, 0,55 mmol), ácido acético (66 mg, 1,1 mmol), pirrolidina (39 mg, 0,55 mmol), triacetoxiborohidreto de sódio (233 mg, 1,1 mmol) e diclorometano(20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 6 h. A solução de reação foi filtrada por sucção, e o filtrado foi lavado com uma solução de bicarbonato de sódio saturado (30 mL). Após a separação líquida, a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada por sucção, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (25A)) como pó branco (120 mg, rendimento de 75 %). Etapa 2: 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano (25B)

[0164] (2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (25A) (120 mg, 0,41 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano bruto (25B) como líquido oleoso amarelo (80 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-pirrolidina-1-il-7-az aspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (25C)

[0165] 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonan o bruto (25B) (80 mg, 0,41 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida(96 mg, 0,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (67,5 mg, 0,5 mmol), intermediário 1 (309 mg, 0,41 mmol) e diclorometano (20mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter 1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-bu toxicarbonilamino)-1-(2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]non ano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo

-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (25C) como sólido amarelo claro (344 mg, rendimento de 90 %). Etapa 4: Ácido de (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pirrolidina-1-il -7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanami da tri-trifluoroacético (composto 25) Composto 25

[0166] (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-b utoxicarbonilamino)-1-(2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]no nano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-ox o-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (25C) (344 mg, 0,37 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção:

0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter ((2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil)amino)-3- fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pirrolidina-1-i l-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanam ida; ácido tri-trifluoroacético (composto 25) como pó branco (249 mg, rendimento de 70 %). MS m/z =365,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,13 (m, 10H), 4,71 - 4,70 (m, 1H), 4,62 (t,1H), 4,30 - 4,17 (m, 2H), 3,82 - 3,74 (m, 1H), 3,68 - 3,39 (m, 5H), 3,38 - 3,21 (m, 1H), 3,15 (d, 2H), 3,06 - 2,90 (m, 6H), 2,43 - 2,25 (m, 2H), 2,16 - 1,89 (m, 6H), 1,78 - 1,27 (m, 13H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 24: Ácido de (2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolid ina-2-carboxílico ácido tri-trifluoroacético (composto 26)

Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 26 Etapa 1: 2-[(2R)-2-metoxicarbonilpirrolidin-1-il]-7-azaspi ro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (26A)

[0167] 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila (3A) (287 mg, 1,2 mmol), ácido acético (144 mg, 2,4 mmol), éster metílico de D-prolina (154 mg, 1,2 mmol), triacetoxiborohidreto de sódio (233 mg, 2,4 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 6 h. A solução de reação foi filtrada por sucção, e o filtrado foi lavado com uma solução de bicarbonato de sódio saturado (50 mL). Após a separação líquida, a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada por sucção, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 2-pirrolidina-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (26A)) como pó branco (275 mg, rendimento de 65 %). Etapa 2: (2R)-1-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)pirrolidina-2-c arboxilato de metila (26B)

[0168] 2-[(2R)-2-metoxicarbonilpirrolidin-1-il ]-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (26A)(275 mg, 0,78 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter (2R)-1-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)pirrolidina-2-carboxilato de metila (26B) como líquido oleoso amarelo (196 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil -propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoi l]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-c arboxilato de metila (26C)

[0169] (2R)-1-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)pirrolidina-2-carboxilato de metila (26B) (196 mg, 0,78 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (180 mg, 0,94 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (127 mg, 0,94 mmol), intermediário 1 (587 mg, 0,78 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano:metanol (v:v) = 50:1) para obter (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil)amino)- 3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil]- 7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-carboxilato de metila (26C) como sólido branco (385 mg, rendimento de 50 %). Etapa 4: Ácido de (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil ]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]he xanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-carboxílico (26D)

[0170] (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil)amino)- 3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoil]- 7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-carboxilato de metila (26C) (385 mg, 0,39 mmol) foram dissolvidos em metanol (5 mL) na temperatura ambiente, e uma solução de hidróxido de sódio aquoso (16 mg, 0,4 mmol) (10 mL) foi adicionada à solução de reação.

O sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h.

A solução de reação foi ajustada a pH <4 com uma solução clorídrica de ácido aquoso 1M, extraída com acetato de etila (20 mL), e a mistura foi submetida a um processo de separação de líquido As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil )amino)-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]he xanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-carboxilato de metila (26D) como sólido branco (345 mg, rendimento de 93 %). Etapa 5: Ácido de (2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolid ina-2-carboxílico; ácido tri-trifluoroacético (composto 26) Composto 26

[0171] Ácido de (2R)-1-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil )amino)-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]he xanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-carboxílico (26D) (345 mg, 0,36 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha), A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter ácido de (2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenila propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil ]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]pirrolidina-2-ca rboxílico; ácido tri-trifluoroacético (composto 26) como pó branco (240 mg, rendimento de 60 %). MS m/z =387,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,09 (m, 10H), 4,27 - 4,19 (m, 3H), 3,96 - 3,84 (m, 2H), 3,67 - 3,50 (m, 3H), 3,48 - 3,21 (m, 3H), 3,19 - 2,89 (m, 7H), 2,50 - 2,22 (m, 3H), 2,18 - 1,91 (m, 5H), 1,78 - 1,24 (m, 13H), 0,88 (dd, 6H). Exemplo 25: 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-7-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 27) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 27 Etapa 1: 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-ca rboxilato de terc-butila (27A)

[0172] 2-terc-butoxigencarbonil-2,7-diazaspiro

[3,5]nonano (0,45 g, 2 mmol), diclorometano (10 mL) e trietilamina (0,30 g, 3 mmol) foram adicionados a um frasco de reação sob proteção de nitrogênio; Foram arrefecidos a 0 - 5ºC, e cloreto de metilaminoformila (0,20 g, 2,2 mmol) foi adicionado. Após a adição, o arrefecimento foi removido, e a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e reagida durante 1 h. TLC foi usado para monitorar a conclusão da reação. Diclorometano (10 mL) e água (10 mL) foram adicionados, e após agitação durante 5 minutos, as camadas foram deixadas em separado; a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano/metanol=(v/v)20/1) para obter 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro-[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (27A) como substância oleosa amarela clara (0,48 g, rendimento de 85 %). Etapa 2: N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxamida; ácido de 2,2,2-trifluoroacético (27B)

[0173] 7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro-[3,5] nonano-2-carboxilato de terc-butila (27A, 0,48 g, 1,7 mmol) foi adicionado a diclorometano (5 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado sob agitação. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. TLC foi usado para monitorar a conclusão da reação, e a reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida para obter

N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxamida; ácido trifluoroacético (27B) como substância oleosa amarela clara (0,49 g, rendimento de 97 %), e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(metilcarbamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (27C)

[0174] N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-car boxamida bruto; ácido trifluoroacético (27B) (0,48 g, 2,60 mmol) foi adicionado em diclorometano (10 mL) em um frasco de reação de 50 mL sob proteção de nitrogênio. Foi arrefecido a 0 ºC em um banho de gelo, e intermediário 1 (0,50 g, 0,66 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (200 mg, 1,73 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (125 mg, 0,93 mmol) foram adicionados. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. Subsequentemente, uma solução clorídrica de ácido aquoso 1M (15 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi agitada e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido. Uma solução de carbonato de sódio aquoso saturada (15 mL) foi adicionada a a fase orgânica, e a mistura foi agitada durante 30 minutos e em seguida, submetida a um processo de separação de líquido.

A fase orgânica foi lavada com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada (15 mL), seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amin o]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (27C) como sólido espumoso amarelo claro (0,5 g, rendimento de 80 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-7-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 27)

[0175] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(metilcarba moil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil ]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbama to de terc-butila bruto (27C) (0,5 g, 0,5 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (7,5 mL), e ácido trifluoroacético (3,5 mL) foi adicionado. O sistema foi agitado na temperatura ambiente durante 1 h. Subsequentemente, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metilpentanoil] amino]hexanoil]-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxa mida; ácido di-trifluoroacético (composto 27) como sólido branco (220 mg, rendimento de 40 %). MS m/z (ESI):360,3[M+1H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,45 - 7,16 (m, 10H), 4,66 - 4,57 (m, 1H), 4,32 - 4,19 (m, 2H), 4,19 - 3,99 (m, 3H), 3,83 - 3,66 (m, 2H), 3,40 - 3,22 (m, 4H), 3,22 - 3,12 (m, 2H), 3,06 - 2,99(m, 4H), 2,69 (s, 3H), 1,80 - 1,62 (m, 8H), 1,58 - 1,27 (m, 5H), 1,03 - 0,79 (m, 6H). Exemplo 26: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 28)

Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 28 Etapa 1: 5,5-difluoro-2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-7-carboxilato de benzila (28A)

[0176] 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carboxilato de benzila (16C) (330 mg, 1,11 mmol), trietilamina (364 mg, 3,6 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de metilaminoformila (104 mg, 1,11 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. Um ácido clorídrico diluído 3M (50 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi extraída com diclorometano (60 mL × 2). As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 5,5-difluoro-2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7 -carboxilato de benzila (28A) como sólido branco (268 mg, rendimento de 68,6 %). MS m/z (ESI):354,1[M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,41 - 7,28 (m, 5H), 5,14 (s, 2H), 4,09 (d,2H), 3,65 (dd, 4H), 3,51 - 3,44 (m, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,01 (s, 2H). Etapa 2: 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2- carboxamida (28B)

[0177] 5,5-difluoro-2-(metilcarbamoil)-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (28A) (269 mg, 0,76 mmol), paládio em carbono (54 mg, 20 % em peso) e metanol (5 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagida sob uma atmosfera de hidrogênio (balão) na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação depois foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxamid a bruto (28B) como substância oleosa amarela clara (164 mg, rendimento de 98,55 %), e usado diretamente na próxima reação. MS m/z (ESI):220,2[M+H]+;

Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro-2-(metilca rbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbam oil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carb amato de terc-butila (28C)

[0178] 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5 ]nonano-2-carboxamida bruto (28B) (164 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,374 g, 1,95 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (110 mg, 0,81 mmol), intermediário 1 (565 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano:metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro-2-(metilcarbamoil)-2 ,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-met il-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (28C) como sólido amarelo claro (600 mg, rendimento de 84 %). Etapa 4: 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carboxamida; ácido ditrifluoroacético (composto 28) Composto 28

[0179] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro- 2-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pen til]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo -etil]carbamato de terc-butila (28C) (600 mg, 0,6 mmol) e ácido trifluoroacético (3 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil

]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]no nano-2-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 28) como pó branco (100 mg, rendimento de 13 %). MS m/z (ESI):755,5[M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,18 (m, 10H), 4,86 - 4,75 (m, 1H), 4,65 (t, 1H), 4,39 - 4,17 (m, 2H), 4,15 - 4,05 (m, 2H), 4,04 - 3,45 (m, 6H), 3,24 - 3,10 (m, 2H), 3,10 - 2,90 (m, 4H), 2,77 - 2,60 (m, 3H), 2,06 (d, 2H), 1,85 - 1,61 (m, 4H), 1,60 - 1,46 (m, 3H), 1,45 - 1,27 (m, 2H), 0,92 (dt, 6H). Exemplo 27: 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-7-carboxamida; ácido ditrifluoroacético (composto 29)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 29

Etapa 1: 5,5-difluoro-7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (29B)

[0180] 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carboxilato de benzila (16C) (113 mg, 0,43 mmol), trietilamina (43 mg, 0,43 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de metilaminoformila (42 mg, 0,45 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. Um ácido clorídrico diluído 0,3M (10 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi extraída com diclorometano (5 mL × 2). As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter terc-butila 5,5-difluoro-7-(metilcarbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2 -carboxilato (29B) como sólido branco (96 mg, rendimento de 70 %). Etapa 2: 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7- carboxamida (29C)

[0181] 5,5-difluoro-7-(metilcarbamoil)-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (29B) (96 mg, 0,3 mmol) e diclorometano (8 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxamid a (29C), como líquido oleoso amarelo (66 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro-7-(metilca rbamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbam oil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carb amato de terc-butila (29D)

[0182] 5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5 ]nonano-7-carboxamida (29C) (66 mg, 0,3 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (239 mg, 0,36 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (49 mg, 0,36 mmol), intermediário 1 (226 mg, 0,3 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-b utoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro-7-(metilcarbamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (29D) como sólido branco (286 mg, rendimento de 90 %).

Etapa 4: 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanoil]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-7-carboxamida ácido ditrifluoroacético (composto 29) Composto 29

[0183] (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(terc-b utoxicarbonilamino)-1-[5,5-difluoro-7-(metilcarbamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil- butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (29D) (286 mg, 0,3 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil ]amino]hexanoil]-5,5-difluoro-N-metil-2,7-diazaspiro[3,5]no nano-7-carboxamida; ácido di-trifluoroacético (composto 29) como pó branco (192 mg, rendimento de 65 %). MS m/z =378,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,46 - 7,12 (m, 10H), 4,64 - 4,58 (m, 1H), 4,53 - 4,43 (m, 1H), 4,26 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 4,02 (m, 3H), 3,80 - 3,76 (m, 1H), 3,72 - 3,57 (m, 2H), 3,36 (s, 2H), 3,19 - 3,11 (m, 2H), 3,03 - 2,95(m, 4H), 2,68 (s, 3H), 2,03 - 1,99 (m 2H), 1,75 - 1,63 (m, 4H), 1,54 - 1,26 (m, 5H), 0,89 (dd, 6H). Exemplo 28: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 30)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 30

Etapa 1: 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carboxilato de terc-butila (30A)

[0184] 2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carboxilato de terc-butila (A) (0,414 g, 2 mmol), trietilamina (420 mg, 4,0 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de acetila (188 mg, 2,4 mmol) foi adicionado e o resultante reagiu durante 10 min. Em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e o sistema foi agitado durante 3 h. A reação depois foi arrefecido rapidamente com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (10 mL) e extraída com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carboxilato de terc-butila (30A) como substância oleosa amarela clara (411 mg, rendimento de 81 %). MS m/z =255,2[M+H]+. Etapa 2: 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano (30B)

[0185] 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-ca rboxilato de terc-butila (30A) (0,41 g, 1,62 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter bruto 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano (30B) como líquido oleoso amarelo claro (249 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2, 7-diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonila mino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo- etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (30C)

[0186] 7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano bruto (30B) (249 mg, 1,62 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (384 mg, 2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (270 mg, 2 mmol), intermediário 1 (400 mg, 0,53 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]oc tano-2-carbonil)-5(terc-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoi l]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil -2oxo-etil]carbamato de terc-butila (30C) como sólido branco (200 mg, rendimento de 42,3 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 30) Composto 30

[0187] N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2 ,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil)-5(terc-butoxicarbonila mino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo- etil]amino]-1-benzil-2oxo-etil]carbamato de terc-butila (30C) (200 mg, 0,22 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carbon il)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 30) como pó branco (120 mg, rendimento de 79,1 %). MS m/z =345,9[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,45 - 7,29 (m, 10H), 4,71 (t, 1H), 4,37 - 4,2 (m, 5H), 4,05 - 4,00 (m, 2H), 3,82 - 3,52 (m, 4H), 3,26 - 3,05 (m, 6H), 2,32 - 2,11 (m, 5H), 1,8 - 1,76 (m, 4H), 1,61 - 1,45 (m, 5H), 1,02 - 0,96 (dd, 6H). Exemplo 29: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 31) Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 31

Etapa 1: 7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carboxilato de tec-butila (31A)

[0188] 2-Boc-2,7-diazaspiro[4,4]nonano (22A) (452 mg, 2,0 mmol), trietilamina (400 mg, 4,0 mmol) e diclorometano (15 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de acetila (160 mg, 2,0 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 4 h. Em seguida, um ácido clorídrico diluído 1M (50 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi extraída com diclorometano (60 mL × 2). As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carboxilato de tec-butila (31A) como substância oleosa amarela clara (392 mg, rendimento de 73 %). MS m/z =291,2[M+Na]+. Etapa 2: 1-(2,7-diazaspiro[4,4]nonan-2-il)etanona (31B)

[0189] 7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-ca rboxilato de tec-butila (31A) (161 mg, 0,6 mmol), diclorometano (10 mL) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter 1-(2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-il)etanona bruto (31B) como substância oleosa amarela clara (100 mg, rendimento de 99 %). Etapa 3: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2, 7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonila mino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo- etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (31C)

[0190] 1-(2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-il)etano na bruto (31B) (100 mg, 0,6 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,288 g, 1,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (81 mg, 0,6 mmol), intermediário 1 (400 mg, 0,5 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 30:1) para obter N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspi ro[4,4]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonilamino)penti l]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino ]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (31C) como sólido amarelo claro (120 mg, rendimento de 22 %).

Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonan o-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-f enil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pent anamida; ácido di-trifluoroacético (composto 31) Composto 31

[0191] N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7 -acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butox icarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-ben zil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (31C) (120 mg, 0,22 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[4,4]nonano-2-carbon il)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propa noil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 31) como pó branco (77 mg, rendimento de 85 %). MS m/z (ESI):352,7[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,18 (m, 10H), 4,68 - 4,60 (m, 1H), 4,47 - 4,19 (m, 3H), 3,91 - 3,27 (m, 8H), 3,18 (d, 2H), 3,08 - 2,92 (m, 4H), 2,13 - 1,86 (m, 7H), 1,85 - 1,63 (m, 4H), 1,62 - 1,27 (m, 5H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 30: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-5,5-difluoro-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino] -4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 32)

Etapa

Composto 32

Etapa 1: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-5, 5-difluoro-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil] carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]- 1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (32A)

[0192] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(5,5-difluoro- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)pentil]carbamoil]-3-me til-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (19B) (430 mg, 0,48 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (0,18 g, 0,94 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (71 mg, 0,53 mmol), ácido acético (28,8 mg, 0,48 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-5,5-difluoro -2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)-5-(terc-butoxicarbon ilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-o xo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (32A) como sólido branco (430 mg, rendimento de 95 %). Etapa 2: (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-5,5-difluoro-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R )-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino] -4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 32)

Composto 32

[0193] N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7 -acetil-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil)- 5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil ]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carb amato de terc-butila (32A) (430 mg, 0,46 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-1-(7-acetil-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3,5]no nano-2-carbonil)-5-amino-pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino- 3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-p entanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 32) como pó branco (273 mg, rendimento de 61 %). MS m/z (ESI):370,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,43 - 7,19 (m, 10H), 4,67

- 4,60 (m, 1H), 4,58 - 4,47 (m, 1H), 4,31 - 4,08 (m, 5H), 3,98 - 3,70 (m, 3H), 3,70 - 3,43 (m, 2H), 3,18 (d, 2H), 3,06 - 2,94 (m, 4H), 2,23 - 1,94 (m, 5H), 1,80 - 1,63 (m, 4H), 1,56 - 1,29 (m, 5H), 0,91 (dd, 6H). Exemplo 31: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-il)-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 33) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 33 Etapa 1: 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbo xilato de terc-butila (33A)

[0194] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,452 g, 2,0 mmol), ácido acético (0,24 g, 4,0 mmol), 3-oxetanona (0,288 g, 4,0 mmol), triacetoxiborohidreto de sódio (1,48 g, 6,98 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de reação de 50 mL. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 16 h. A solução de reação foi filtrada, e o filtrado foi lavado com uma solução de bicarbonato de sódio saturado (50 mL). Após a separação líquida, a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (33A) como pó branco (432 mg, rendimento de 76 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,67 - 4,55 (m, 4H), 3,61 (s, 4H), 3,41 (p, 1H), 2,19 (s, 4H), 1,78 (t, 4H), 1,44 (s, 9H). Etapa 2: 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano (33B)

[0195] 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nona no-2-carboxilato de terc-butila (33A)(0,14 g, 0,5 mmol) e diclorometano (5 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (57 mg, 0,5 mmol) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano bruto (33B) como líquido oleoso amarelo (70,5 mg, rendimento de 88 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(

1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(oxetan-3-il)-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-but il]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (33C)

[0196] 7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5]nona no bruto (33B) (70,5 mg, 0,44 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (288 mg, 1,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (81 mg, 0,60 mmol), intermediário 1 (330 mg, 0,44 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 100 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]- 2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (33C) como sólido amarelo claro (400 mg, rendimento de 99 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-il)-2,7-diaza spiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-ami no-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-meti l-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 33)

Composto 33

[0197] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(oxetan-3-i l)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3 -metil-il]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (33C) (400 mg, 0,40 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-il)-2,7-diazaspiro[3,5] nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil -propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanam ida ácido tri-trifluoroacético (composto 33) como pó branco (160 mg, rendimento de 56 %). MS m/z (ESI):359,8[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,42 - 7,20 (m, 10H), 4,96

(t, 2H), 4,85 (dd, 2H), 4,66 - 4,56 (m, 2H), 4,48 - 4,35 (m, 2H), 4,30 - 4,10 (m, 5H), 3,84 (s, 2H), 3,43(br, 1H), 3,17 (d, 2H), 3,14(s, 1H),3,07 - 2,93 (m, 4H), 2,12 (br, 4H), 1,80 - 1,60 (m, 4H), 1,58 - 1,29 (m, 5H), 0,91 (dd, 6H). Exemplo 32: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)- 2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4 -metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 34) Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 34 Etapa 1: 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2- carboxilato de terc-butila (34A)

[0198] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,452 g, 2 mmol), trietilamina (400 mg, 4,0 mmol) e diclorometano (15 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, o cloreto de dimetilaminossulfonila (287 mg, 2,0 mmol) foi adicionado às gotas. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante 3 h. Um ácido clorídrico diluído 3M (50 mL) foi adicionado à solução de reação, seguido por extração com diclorometano (60 mL × 2). As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilat o de terc-butila bruto (34A) como sólido amarelo claro (440 mg, rendimento de 66 %). Etapa 2: N,N-dimetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-sulfonami da (34B)

[0199] 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,5 ]nonano-2-carboxilato de terc-butila bruto (34A) (0,22 g, 0,66 mmol) e diclorometano (5 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter N,N-dimetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-sulfonamida bruto (34B) como líquido oleoso amarelo (103 mg, rendimento de 76 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2, 7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-meti l-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (34C)

[0200] N,N-dimetil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7 -sulfonamida bruto (34B) (103 mg, 0,44 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (288 mg, 1,5 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (81 mg, 0,60 mmol), intermediário 1 (330 mg, 0,44 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 100 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspi ro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]am ino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (34C) como sólido amarelo claro (240 mg, rendimento de 56 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7- diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)- 2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4 -metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 34)

[0201] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(dimetilsul famoil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamo il]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carba mato de terc-butila (34C) (400 mg, 0,4 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3- fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pen tanamida ácido di-trifluoroacético (composto 34) como pó branco (130 mg, rendimento de 29 %). MS m/z (ESI):385,3[M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,46 - 7,29 (m, 6H), 7,29

- 7,18 (m, 4H), 4,65 (t, 1H), 4,32 - 3,99 (m, 5H), 3,85 - 3,68 (m, 2H), 3,35 - 3,11 (m, 6H), 3,11 - 2,92 (m, 4H), 2,81 (d, 6H), 1,96 - 1,79 (m, 4H), 1,71 (dd, 4H), 1,60 - 1,32 (m, 5H), 0,93 (dd, 6H). Exemplo 33: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7- diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)- 2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4 -metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 35) Etapa Etapa Etapa Etapa 4 Composto 35 Etapa 1: 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2- carboxilato de terc-butila (35A)

[0202] 2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carboxilato de terc-butila (A) (0,414 g, 2 mmol), trietilamina (420 mg, 4,0 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e foram dissolvidos sob agitação. Após arrefecer a -10 ºC, cloreto de dimetilsulfamoila (343 mg, 2,4 mmol) foi adicionado às gotas, e a reação foi deixada prosseguir durante 10 minutos. Em seguida, a temperatura foi elevada até a temperatura ambiente e agitada durante 3 h. A solução de reação foi arrefecida rapidamente com uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (10 mL), extraída com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carboxilat o de terc-butila (35A) como substância oleosa amarela clara (414 mg, rendimento de 0,65 %). MS m/z =320,2[M+H]+; Etapa 2: 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4]octano (35B)

[0203] 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4 ]octano-2-carboxilato de terc-butila (35A) (0,41 g, 1,3 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4]octano bruto (35B) como líquido oleoso amarelo claro (284 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação.

Etapa 3: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-dimetilsu lfamoil-2,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil)-5-(terc-butox icarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-ben zil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (35C)

[0204] 7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro[3,4 ]octano bruto (35B) (284 mg, 1,3 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (384 mg, 2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (270 mg, 2 mmol), intermediário 1 (400 mg, 0,53 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2,7-diazaspiro[3,4]oc tano-2-carbonil)-5(terc-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoi l]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil -2oxo-etil]carbamato de terc-butila (35C) como sólido branco (201 mg, rendimento de 39,7 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimetilsulfamoil)-2,7- diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)- 2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4

-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 35) Composto 35

[0205] N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetil-2 ,7-diazaspiro[3,4]octano-2-carbonil)-5(terc-butoxicarbonila mino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil-2-oxo- etil]amino]-1-benzil-2oxo-etil]carbamato de terc-butila (35C) (201 mg, 0,17 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-(dimetilsulfamoil)-2,7-diazaspiro [3,4]octano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3- fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pen tanamida ácido di-trifluoroacético (composto 35) como pó branco (115 mg, rendimento de 89,7 %). MS m/z =378,3[M+2H]+/2;

RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,46 - 7,29 (m, 10H), 4,71 (t, 1H), 4,38 - 4,21 (m, 5H), 4,07 - 4,05 (m, 2H), 3,60 - 3,46 (m, 4H), 3,23 - 3,05 (m, 6H), 2,9 - 2,89 (d, 6H), 2,32 - 2,26(m, 2H)1,8 - 1,59 (m, 9H), 1,02 - 0,96 (dd, 6H). Exemplo 34: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pipera zin-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-p entanamida; tetra-ácido trifluoroacético(composto 36) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa 5 Composto 36 Etapa 1: 2-(4-benziloxicarbonilpiperazin-1-il)-7-azaspiro[ 3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (36A)

[0206] 2-oxo-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de terc-butila (C) (0,478 g, 2 mmol), carbonato de benzil-1-piperazina (440 mg, 2 mmol), ácido acético (120 mg, 2,0 mmol) e dicloroetano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi agitado por meia hora. Triacetoxiborohidreto de sódio (0,636 g, 3 mmol) foi adicionado e o resultante reagiu durante 5 h. O sistema de reação foi arrefecido rapidamente com água (10 mL), extraído com acetato de etila (5 mL × 3), e as fases orgânicas foram combinadas. As fases orgânicas foram secas sob sulfato de sódio anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 4:1) para obter 2-(4-benziloxicarbonilpiperazin-1-il)-7-azaspiro[3,5]nonano -7-carboxilato de terc-butila (36A) como substância oleosa amarela clara (450 mg, rendimento de 50,79 %). MS m/z =444,2[M+H]+; Etapa 2: 4-(7-azaspiro[3,5]nonan-2-il)piperazina-1-carboxi lato de benzila (36B)

[0207] 2-(4-benziloxicarbonilpiperazin-1-il)-7 -azaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (36A) (0,45 g, 1,20 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter 4-(7-azaspiro[3,5]nonano-2-il)piperazina-1-carboxilato de benzila bruto (36B) como líquido oleoso amarelo claro (411 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação.

Etapa 3: 4-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amin o]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanoil]amino]hexanoi l]-7-azaspiro[3,5]nonan-2-il]piperazina-1-carboxilato de benzila (36C)

[0208] 4-(7-azaspiro[3,5]nonano-2-il)piperazin a-1-carboxilato de benzila bruto (36B) (411 mg, 1,2 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (384 mg, 2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (270 mg, 2 mmol), intermediário 1 (400 mg, 0,53 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter 4-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2 -[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]amin o]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metilpentanoil]amino]hexanoil ]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-il]piperazina-1-carboxilato de benzila (36C) como sólido branco (300 mg, rendimento de 52,4 %). Etapa 4: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-piperazin-1-il-7-azas piro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil] amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (36D)

[0209] 4-[7-[(2R)-6-(terc-butoxicarbonilamino) -2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metilpent anoil]amino]hexanoil]-7-azaspiro[3,5]nonano-2-il]piperazina -1-carboxilato de benzila (36C) (300 mg, 0,27 mmol) e metanol (5 mL), e Pd/C(30 mg) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 4 h sob uma atmosfera de hidrogênio. A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e concentrada sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2-piperazina-1-il-7-azaspiro[3,5] nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2- oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (36D) (255 mg, 100 %) e usado diretamente na próxima etapa. Etapa 5: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pipera zin-1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-p entanamida ácido tetra-trifluoroacético (composto 36)

Composto 36

[0210] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-piperazina- 1-il-7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-m etil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (36D) (255 mg, 0,27 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazina-1-il- 7-azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanamid a ácido tetra-trifluoroacético (composto 36) como pó branco (160 mg, rendimento de 77,6 %). MS m/z =373,4[M+2H]+/2;

RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,47 - 7,30 (m, 10H), 4,71 (t, 1H), 4,36 - 4,29 (m, 2H), 3,90 - 3,86 (m, 1H), 3,85 - 3,24 (m, 12H), 3,23 - 3,04 (m, 6H), 2,52 - 2,44 (m, 2H), 2,14 - 2,12(m, 2H),1,77 - 1,47(m, 14H), 1,03 - 0,96 (dd, 6H). Exemplo 35: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-fenil-p ropanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 37)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 37

Etapa 1: 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propan oil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (37A)

[0211] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (83 mg, 0,35 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (80 mg, 0,42 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (57 mg, 0,42 mmol), ácido de (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanóico (105 mg, 0,35 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7-d iazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (37A) como sólido branco (177 mg, rendimento de 80 %). Etapa 2: N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il )-2-oxo-etil]carbamato de benzila (37B)

[0212] 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fe nil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (37A)(177 mg, 0,35 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente.

Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h.

A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)-2-oxo-et il]carbamato de benzila (37B) como líquido oleoso amarelo (143 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação.

Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-1-[7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil ]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbo nilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil] amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (37C)

[0213] N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5] nonan-7-il)-2-oxo-etil]carbamato de benzila (37B) (143 mg, 0,35 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (80 mg, 0,42 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (57 mg, 0,42 mmol), intermediário 1 (264 mg, 0,35 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R )-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pent il]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo- etil]carbamato de terc-butila (37C) como sólido branco (400 mg, rendimento de 99 %). Etapa 4: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-a mino-3-fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboni l]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-bu til]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]c arbamato de terc-butila (37D)

[0214] (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R

)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pent il]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo- etil]carbamato de terc-butila (37C) (400 mg, 0,35 mmol), paládio em carbono (80 mg, 20 % em peso) e metanol (20mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-3-fenil- propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-bu toxicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1- benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruno (37D) como sólido amarelo claro (353 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-fenil-p ropanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida ácido tri-trifluoroacético (composto 37) Composto 37

[0215] (1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-3-fenil-

propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-bu toxicarbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzi l-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (37D)(353 mg, 0,35 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 37) como pó branco (282 mg, rendimento de 70 %). MS m/z =405,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,52 - 7,09 (m, 15H), 4,78 - 4,74 (m, 1H),4,64 - 4,58 (m, 1H), 4,26 - 4,19 (m, 2H), 4,15 - 3,96 (m, 3H), 3,83 (d, 1H), 3,71 - 3,63 (m, 1H), 3,59 - 3,50 (m, 1H) 3,43 - 2,90 (m, 11H), 1,90 - 1,18 (m, 13H), 0,98 - 0,80 (m, 6H). Exemplo 36: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-metil-p entanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 38) Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Etapa 5 Etapa 4 Composto 38 Etapa 1 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentan oil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (38A)

[0216] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (93 mg, 0,41 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (94 mg, 0,49 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (66 mg, 0,49 mmol), ácido de (2R)-2-(benziloxicarbonilamino)propanóico (446 mg, 2,0 mmol) e diclorometano (10 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter terc-butila 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanoil]-2,7-d iazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato (38A) como sólido branco (175 mg, rendimento de 90 %). Etapa 2 N-[(1R)-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)- 3-metil-butil]carbamato de benzila (38B)

[0217] 7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-me til-pentanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (38A)(175 mg, 0,37 mmol) e diclorometano (20 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (2 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)-3-metil-bu til]carbamato de benzila (38B) como líquido oleoso amarelo (138 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3 N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-1-[7-[(2R)-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanoil

]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbo nilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil] amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (38C)

[0218] N-[(1R)-1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7- carbonil)-3-metil-butil]carbamato de benzila (38B) (138 mg, 0,37 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida(84 mg, 0,44 mmol), 1-hidroxibenzotriazol(59 mg, 0,44 mmol), intermediário 1 (279 mg, 0,37 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50:1) para obter (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R )-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanoil]-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pent il]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo- etil]carbamato de terc-butila (38C) como sólido branco (366 mg, rendimento de 90 %). Etapa 4: N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-a mino-4-metil-pentanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboni l]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pentil]carbamoil]-3-metil-bu til]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]c arbamato de terc-butila (38D)

[0219] (1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R )-2-(benziloxicarbonilamino)-4-metil-pentanoil]-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-butoxicarbonilamino)pent il]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo- etil]carbamato de terc-butila (38C)(366 mg, 0,33 mmol), paládio em carbono (73 mg, 20 % em peso) e metanol (20mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio. A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter (1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-4-metil-p entanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-but oxicarbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil -2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (38D) como sólido amarelo claro (322 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-metil-p entanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 38) Composto 38

[0220] (1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-4-metil-p entanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]-5-(terc-but oxicarbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-1-benzil -2-oxo-etil]amino]-1-benzil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (38D) (322 mg, 0,33 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-metil-pentanoil]- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 38) como pó branco (240 mg, rendimento de 65 %). MS m/z =388,3 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,14 (m, 10H), 4,61 (t, 1H), 4,50 - 4,42 (m, 1H), 4,28 - 4,02 (m, 5H), 3,83 - 3,70 (m, 2H), 3,66 - 3,36 (m, 4H), 3,14 (t, 2H), 2,97 (t, 4H), 1,94 - 1,64 (m, 10H), 1,54 - 1,30(m, 6H), 1,01 - 0,81 (m, 12H). Exemplo 37: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(ciclopropanecarbonil)- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 39)

Etapa Etapa Etapa

Etapa

Composto 39

Etapa 1: 2-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-7-carboxilato de benzila (39A)

[0221] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (390 mg, 1,5 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (760 mg, 4,9 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (300 mg, 2,0 mmol), ciclopropilácido carboxílico (172 mg, 2,0 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50:1) para obter 2-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbox ilato de benzila (39A) como substância oleosa amarela clara (320 mg, rendimento de 65 %). Etapa 2: ciclopropil(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)metanon a (39B)

[0222] 2-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (39A) (320 mg, 0,97 mmol), paládio em carbono (64 mg, 20 % em peso) e metanol (10mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e reagida na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter ciclopropil(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)metanona bruto (39B) como sólido amarelo claro (189 mg, rendimento de 100 %),

e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(ciclopropanecarbonil )-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3- metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (39C)

[0223] ciclopropil(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2- il)metanona bruto (39B) (189 mg, 0,75 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (216 mg, 1,13 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (122 mg, 0,9 mmol), intermediário 1 (565 mg, 0,75 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diaz aspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (39C) como sólido amarelo claro (410 mg, rendimento de 45 %).

Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(ciclopropanecarbonil)- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 39) Composto 39

[0224] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(ciclopropa necarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]car bamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]c arbamato de terc-butila (39C) (410 mg, 0,44 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazas piro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 39) como pó branco (330 mg, rendimento de 78 %). MS m/z =365,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,45 - 7,18 (m, 10H), 4,66 (t, 1H), 4,26 (dt, 2H), 4,13 (d, 2H), 3,78 (d, 2H), 3,71 - 3,61 (m, 2H), 3,56 - 3,45 (m, 1H), 3,42 - 3,31 (m, 1H), 3,18 (d, 2H), 3,10 - 2,93 (m, 4H), 1,99 - 1,30 (m, 15H), 1,01 - 0,77 (m, 10H). Exemplo 38: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(ciclopropanecarbonil)- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 40) Etapa Etapa Etapa 1

Etapa

Composto 40

Etapa 1: 7-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonan o-2-carboxilato de terc-butila (40A)

[0225] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (6A) (0,453 g, 2,0 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (767 mg, 4,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (324 mg, 2,4 mmol), ciclopropilácido carboxílico (176 mg, 2,2 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter 7-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbox ilato de terc-butila (40A) como substância oleosa amarela clara (590 mg, rendimento de 96 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,68 (s, 4H), 3,62 - 3,52 (m, 4H), 1,81 - 1,69 (m, 5H), 1,45 (s, 9H), 1,00 - 0,93 (m, 2H), 0,78 - 0,71 (m, 2H). Etapa 2: ciclopropil(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)metanon a (40B)

[0226] 7-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazaspiro [3,5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (40A) (0,25 g, 0,83 mmol) e diclorometano (7 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado às gotas na temperatura ambiente. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 3 h. A solução de reação foi diretamente concentrada sob pressão reduzida para obter ciclopropil(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)metanona bruto (40B) como líquido oleoso amarelo (161 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(ciclopropanecarbonil )-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3- metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (40C)

[0227] (2,7-diazaspiro[3,5]nonan-7-il)metanona bruto (40B) (0,16 g, 0,83 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (239 mg, 1,25 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (135 mg, 1,0 mmol), intermediário 1 (625 mg, 0,83 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50:1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[7-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diaz aspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-buti l]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (40C) como sólido amarelo claro (700 mg, rendimento de 90 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(ciclopropanecarbonil)- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 40) Composto 40

[0228] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[7-(ciclopropa necarbonil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]car bamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]c arbamato de terc-butila (40C) (700 mg, 0,75 mmol) e ácido trifluoroacético (3 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(ciclopropanecarbonil)-2,7-diazas piro[3,5]nonano-2-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amin o-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil -pentanamida ácido di-trifluoroacético (composto 40) como pó branco (200 mg, rendimento de 28 %). MS m/z =365,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,40 -7,17 (m, 10H), 4,62 (t, 1H), 4,32-4,00 (m, 5H), 3,82 - 3,60 (m, 4H), 3,48 (br, 2H), 3,23 - 3,08 (m, 2H), 3,07 - 2,91 (m, 4H), 2,01 - 1,61 (m, 9H), 1,58 - 1,27 (m, 5H), 0,97 - 0,67 (m, 10H). Exemplo 39:

[0229] (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino -3-fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pe ntil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3- fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 41) Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 41 Etapa 1: 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-prop anoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (41A)

[0230] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (390 mg, 1,5 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (760 mg, 4,9 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (300 mg, 2,0 mmol), Boc-D-Fenilalanina (530 mg, 2,0 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50:1) para obter 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7 -diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (41A), como sólido branco (514 mg, rendimento de 67 %). Etapa 2: N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il )-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (41B)

[0231] 2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (41A) (514 mg, 1,01 mmol), paládio em carbono (100 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2-oxo-et il]carbamato de terc-butila bruto (41B) como sólido amarelo claro (377 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(terc-butoxic arbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano- 7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-eti l]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (41C)

[0232] N-[(1R)-1-benzil-2-(2,7-diazaspiro[3,5] nonan-2-il)-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila bruto (41B) (377 mg, 1,01 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (290 mg, 1,52 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (164 mg, 1,21 mmol), intermediário 1 (761 mg, 1,01 mmol) e diclorometano (30 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (éter de petróleo:acetato de etila (v:v) = 1:2) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(terc-butoxicarbonilami no)-3-fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil ]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2 -oxo-etil]carbamato de terc-butila (41C), como sólido amarelo claro (410 mg, rendimento de 36, 6 %). Etapa 4: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-fenil-p ropanoil]-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[ (2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-prop anoil]amino]-4-metil-pentanamida; ácido tri-trifluoroacético (composto 41) Composto 41

[0233] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-[(2R)-2-(te rc-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propanoil]-2,7-diazaspiro[3 ,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino] -2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (41C) (410 mg, 0,37 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna:

Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]- 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[( 2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amin o]-4-metil-pentanamida ácido tri-trifluoroacético (composto 41) como pó branco (298 mg, rendimento de 70 %). MS m/z =405,4 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,52 - 7,28 (m, 11H), 7,28 - 7,20 (m, 4H), 4,67 - 4,62 (m, 1H), 4,32 - 4,15 (m, 3H), 3,85 - 3,38 (m, 6H), 3,37 - 3,22 (m, 2H), 3,22 - 3,13 (m, 2H), 3,12 - 2,90 (m, 6H), 2,65 (dd, 1H), 1,83 - 1,48 (m, 9H), 1,47 - 1,28 (m, 3H), 1,25 - 1,11 (m, 1H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 40: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-hydroxiacetil)-2,7-d iazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2 -amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4- metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 42)

Etapa Etapa Etapa Etapa Etapa 5 Composto 42 Etapa 1: Ácido de 2-tetra-hidropiran-2-iloxiacético (42B)

[0234] 3,4-di-hidro-2H-pirano (840 mg, 10 mmol), glicolato de metil (42A) (900 mg, 10 mmol), ácido p-tolueno sulfônico monoidrato (100 mg, 0,5 mmol) e diclorometano (100 mL) foram adicionados sequencialmente em um frasco de gargalo único de 250 mL. Após a adição, o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e uma solução de hidróxido de lítio (uma solução mista de 75 mL de metanol + 25 mL de água) foi adicionada ao resíduo. Após a adição, a reação foi deixada prosseguir na temperatura ambiente durante a noite. O ácido clorídrico diluído 0,1M (12 mL) foi adicionado às gotas à solução de reação, e o pH da solução de reação foi testado para ser 2 a 3. A solução de reação foi extraída com diclorometano (100 mL × 2), a camada orgânica foi seca sob sulfato de sódio anidro, filtrada por sucção, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzidapara obter ácido de 2-tetra-hidropiran-2-iloxiacético (42B) como substância oleosa amarela clara (510 mg, rendimento de 30 %).

MS m/z =183,1 [M+Na]+; Etapa 2: 2-(2-tetra-hidropiran-2-iloxiacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]non ano-7-carboxilato de benzila (42C)

[0235] Ácido de 2-tetra-hidropiran-2-iloxiacético (42B) (510 mg, 3,2 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (1,2 g, 6,3 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (516 mg, 3,82 mmol), 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (830 mg, 3,2 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50: 1) para obter 2-(2-tetra-hidropiran-2-iloxiacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]non ano-7-carboxilato de benzila (42C) como sólido amarelo claro (580 mg, rendimento de 45 %). Etapa 3: 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2-tetra-hidropi ran-2-ilóxi-etanona (42D)

[0236] 2-(2-tetra-hidropiran-2-iloxiacetil)-2, 7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (42C) (580 mg, 1,4 mmol), paládio em carbono (120 mg, 20 % em peso) e metanol

(20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2-tetra-hidropiran-2-ilóx i-etanona bruto (42D) como sólido amarelo claro (387 mg, rendimento de 100 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 4: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2-tetra-hidropiran-2 -iloxiacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]c arbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil ]carbamato de terc-butila (42E)

[0237] 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2-tet ra-hidropiran-2-ilóxi-etanona bruto (42D) (387 mg, 1,4 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida(553 mg, 2,88 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (233 mg, 1,72 mmol), intermediário 1 (1,09 g, 1,45 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida,

e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50: 1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2-tetra-hidropiran-2-iloxiacet il)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]- 3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (42E) como sólido amarelo claro (590 mg, rendimento de 41 %). Etapa 5: (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-Hidroxietil)-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-a mino-3-fenil-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-me til-pentanamida ácido di-trifluoroacético (composto 42) Composto 42

[0238] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2-tetra-hi dropiran-2-iloxiacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboni l]pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]- 2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (42E) (590 mg, 0,59 mmol) e ácido trifluoroacético (4 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação:

instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-Hidroxietil)-2,7-diazaspiro[3, 5]nonano-7-carbonil]pentil]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fen il-propanoil]amino]-3-fenil-propanoil]amino]-4-metil-pentan amida ácido di-trifluoroacético (composto 42) como pó branco (286 mg, rendimento de 67 %). MS m/z =720,3 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,29 (m, 6H), 7,24 (d, 4H), 4,66 (t, 1H), 4,34 - 4,20 (m, 2H), 4,14 (d, 2H), 4,02 (d, 2H), 3,83 (d, 2H), 3,72 - 3,60 (m, 2H), 3,56 - 3,42 (m, 1H), 3,42 - 3,30 (m, 1H), 3,18 (d, 2H), 3,10 - 2,94 (m, 4H), 1,96 - 1,29 (m, 14H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 41: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propan oil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pe ntanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 43)

Etapa Etapa Etapa Etapa Composto 43 Etapa 1: 2-propanoil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxila to de benzila (43A)

[0239] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (390 mg, 1,5 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida(575 mg, 3,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (243 mg, 1,80 mmol), ácido propanóico (122 mg, 1,65 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50: 1) para obter 2-propanoil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (43A) como sólido amarelo claro (245 mg, rendimento de 52 %).

Etapa 2: 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)propan-1-a (43B)

[0240] 2-propanoil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7 -carboxilato de benzila (43A) (245 mg, 0,775 mmol), paládio em carbono (49 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio. A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)propan-1-a bruto (43B) como sólido amarelo claro (141 mg, rendimento de 99,8 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-propanoil-2,7-diazasp iro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]a mino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (43C)

[0241] 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)propan -1-a bruto (43B) (141 mg, 0,774 mmol), cloridreto de

1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (383 mg, 2,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (135 mg, 1,0 mmol), intermediário 1 (0,565 g, 0,75 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol (v:v) = 50: 1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-(2-propanoil-2,7-diazaspiro[3,5]no nano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-ox o-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (43C) como sólido amarelo claro (500 mg, rendimento de 72,7 %). Etapa 4: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propan oil-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pe ntanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 43) Composto 43

[0242] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-(2-propanoil-2 ,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]carbamoil]-3-met il-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (43C) (260 mg, 0,28 mmol) e ácido trifluoroacético (1,3 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante

2 h.

A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoil-2,7-di azaspiro[3,5]nonano-7-carbonil)pentil]-4-metil-pentanamida ácido di-trifluoroacético (composto 43) como pó branco (125 mg, rendimento de 51 %). MS m/z =359,8 [M+2H]+/2; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,45 - 7,28 (m, 6H), 7,24 (d, 4H),4,80 - 4,75(m, 1H) 4,66 (t, 1H), 4,29 (t, 1H), 4,27 (t, 1H), 4,01 (d, 2H), 3,77 (d, 2H),3,71 - 3,60 (m, 2H), 3,55 - 3,42 (m, 1H), 3,41 - 3,27 (m, 1H), 3,18 (dd, 2H), 3,11 - 2,93 (m, 4H), 2,19 (qd, 2H), 1,95 - 1,63 (m, 8H), 1,61 - 1,49 (m, 3H), 1,48 - 1,30 (m, 2H), 1,07 (td, 3H), 0,92 (dd, 6H). Exemplo 42: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2 -trifluoroacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pent il]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 44)

Etapa Etapa 1 Etapa Etapa Composto 44 Etapa 1: 2-(2,2,2-trifluoroacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nona no-7-carboxilato de benzila (44A)

[0243] 2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (6C) (390 mg, 1,5 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (575 mg, 3,0 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (243 mg, 1,80 mmol), ácido trifluoroacético (171 mg, 1,5 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50: 1) para obter 2-(2,2,2-trifluoroacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbo xilato de benzila (44A) como sólido amarelo claro (224 mg,

rendimento de 63 %). Etapa 2: 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2,2,2-trifluoro -etanona (44B)

[0244] 2-(2,2,2-trifluoroacetil)-2,7-diazaspir o[3,5]nonano-7-carboxilato de benzila (44A) (223 mg, 0,63 mmol), paládio em carbono (46 mg, 20 % em peso) e metanol (20 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL. A atmosfera foi substituída com hidrogênio 3 vezes, e a mistura reagiu na temperatura ambiente durante 3 h sob uma atmosfera de hidrogênio (balão). A solução de reação foi filtrada através de diatomita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2,2,2-trifluoro-etanona bruto (44B) como sólido amarelo claro(116 mg, rendimento de 83 %), e usado diretamente na próxima reação. Etapa 3: N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[( 1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2,2,2-trifluoroaceti l)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3 -metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (44C)

[0245] 1-(2,7-diazaspiro[3,5]nonan-2-il)-2,2,2 -trifluoro-etanona bruto (44B) (116 mg, 0,52 mmol), cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (575 mg, 3,7 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (240 mg, 1,3 mmol), intermediário 1 (0,47 g, 0,626 mmol) e diclorometano (50 mL) foram adicionados em um frasco de gargalo único de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 5 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (diclorometano: metanol(v:v) = 50: 1) para obter N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(ter c-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetil)-2,7-dia zaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]carbamoil]-3-metil-but il]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butila (44C) como sólido amarelo claro (216 mg, rendimento de 42 %). Etapa 4: (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil] amino]-3-fenil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2 -trifluoroacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pent il]-4-metil-pentanamida; ácido di-trifluoroacético (composto 44) Composto 44

[0246] N-[(1R)-1-benzil-2-[[(1R)-1-benzil-2-[[ (1R)-1-[[(1R)-5-(terc-butoxicarbonilamino)-1-[2-(2,2,2-trif luoroacetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]ca rbamoil]-3-metil-butil]amino]-2-oxo-etil]amino]-2-oxo-etil] carbamato de terc-butila (44C) (210 mg, 0,22 mmol) e ácido trifluoroacético (2 mL) foram adicionados em um frasco de reação de 50 mL, e o sistema foi deixado reagir na temperatura ambiente durante 2 h. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi separado e purificado por cromatografia líquida preparativa (condições de preparação: instrumento: Gilson GX-281; coluna: Xbridge C18, 150 × 30 mm I.D., 5 µm; fase móvel: A para ACN e B para H2O; isocrático: A 65 %; taxa de fluxo: 30 mL/min; contrapressão: 1000 PSI; temperatura da coluna: 30 ºC; comprimento de onda: 210 nm; período: 18 min; preparação da amostra: o composto dissolvido em 12 mL de metanol; injeção: 0,9 mL/agulha). A preparação foi concentrada sob pressão reduzida para remover a maioria do solvente, e liofilizada para obter (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-fenil-propanoil]amino]-3-f enil-propanoil]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2-trifluoro acetil)-2,7-diazaspiro[3,5]nonano-7-carbonil]pentil]-4-meti l-pentanamida ácido di-trifluoroacético (composto 44) como pó branco (111 mg, rendimento de 51 %). MS m/z =758,3 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 7,44 - 7,28 (m, 6H), 7,24 (d, 4H), 4,64 (t, 1H), 4,38 - 4,21 (m, 4H), 3,97 (d, 2H), 3,73 - 3,58 (m, 2H), 3,56 - 3,43 (m, 1H), 3,40 - 3,32 (m, 1H), 3,25 - 3,11 (m, 2H), 3,11 - 2,93 (m, 4H), 1,99 - 1,63 (m, 9H), 1,53 (d, 3H), 1,49 - 1,33 (m, 2H), 0,93 (dd, 6H). Exemplos de Teste Biológico Teste 1: Atividade agonista em receptores opióides κ humanos

[0247] A forskolina pode estimular a liberação de cAMP a partir de uma linha celular humana superexpressora de receptores opióides κ humanos, células OPRK1 (DiscoveRx) e agonistas de receptores opióides κ podem inibir a liberação de cAMP estimulada pela forscolina. Ao detectar o efeito inibidor do composto de teste na liberação de cAMP estimulada pela forscolina, a atividade agonística do composto no receptor β-opióide humano pode ser determinada. Primeiro, uma certa concentração de forscolina e diferentes concentrações do composto de teste foram incubadas com linhas celulares de sobre-expressão de receptores opióides κ humanos. Um imunoensaio de cAMP (LANCE®, PerkinElmer) com base na transferência de energia de ressonância de fluorescência resolvida no tempo (TR-FRET) foi usado para determinar os níveis de cAMP nas células OPRK1 estimuladas. O método específico é o seguinte:

[0248] Células OPRK1 (DiscoveRx) que expressam altamente receptores opióides κ humanos foram cultivadas em meio 5A de McCoy (Gibco 16600-082) contendo 10 % de FBS (Gibco 10099-141). No dia do experimento, as células na fase de crescimento exponencial foram lavadas e separadas com PBS/EDTA 5 mM, coletadas por centrifugação, ressuspensas em tampão de estimulação e contadas. A concentração de células foi ajustada para 3 * 105 células/ml. O DMSO foi usado para dissolver a forskolina e o composto de teste, respectivamente, de modo que a concentração de licor mãe era 10 mM e depois diluiu a forskolina a 4 μM com tampão de estimulação e diferentes concentrações do composto de teste (as concentrações foram 80, 16, 3,2, 0,64, 0,128, 0,0256, 0,00512, 0,001024, 0 μM), 5 mL por poço foram adicionados a uma placa de 384 poços. Foram adicionados 5 μl de suspensão de células a cada poço e incubados em temperatura ambiente por 30 min. Posteriormente, 5 μl de solução de trabalho de traçador de 4 x Eu-cAMP (diluição de 50 vezes da solução mãe de Eu-cAMP com tampão de detecção de cAMP) e 5 μl de 4 x de solução mãe de Ulight-anti-cAMP (diluição de 150 vezes de solução-mãe de ULight-anti-cAMP com tampão de detecção de cAMP) foram adicionados a cada poço e incubados à temperatura ambiente durante 1 hora. As placas de 384 poços foram testadas quanto aos níveis de cAMP usando um método TR-FRET de leitor de microplacas (Perkin Elmer, Envision). Os dados obtidos foram processados e ajustados ao EC50 utilizando o software original

7.5. A atividade agonística do receptor opióide κ humano do composto da presente invenção foi medida através das experiências acima, e os valores de EC50 medidos são mostrados na Tabela 1.

[0249] Método de preparação do tampão de estimulação: 14 mL 1 * HBSS (invitrogênio, cat. # 14025-092), 75 L de HEPES 1 M (Invitrogen, cat. # 15630-080), 30 μL de IBMX 250 mM foram dissolvidos em DMSO (Sigma, cat. # 17018) e misturado com 200 μL de estabilizador BSA a 7,5 %. O pH da solução foi ajustado para 7,4 com NaOH 0,1 N e perfazer 15 mL com 1 * HBSS. Tabela 1 Atividade agonista de compostos teste de em receptores opióides κ humanos Composto Nº EC50(nM) Composto 2 0,41 Composto 4 0,0159 Composto 8 0,0112 Composto 12 0,067

Composto 13 0,00682 Composto 14 0,0155 Composto 15 0,0117 Composto 17 0,00919 Composto 18 0,04 Composto 19 0,044 Composto 20 0,086 Composto 22 0,0112 Composto 23 0,023 Composto 30 0,071 Composto 31 0,0136 Composto 33 0,05 Conclusão: Os compostos da modalidade têm significante agonistic efeitos em receptores opióides κ humanos. Teste 2: Experimento de quente do camundongo

[0250] 18 - 22 g de camundongos C57 fêmeas foram adquiridos da Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd. A temperatura do instrumento de placa quente foi ajustada para 56 ºC e, após atingir 56 ºC, a temperatura foi estabilizada por 30 minutos antes da experiência. Os animais foram submetidos a um teste de placa quente, a fim de observar a reação de lambida nas patas traseiras, que foi utilizada como indicador de resposta à dor. Foi registrado o tempo desde a entrada do animal até a placa quente até a lambida induzida pelo calor dos pés traseiros. Os animais que atendem aos critérios de inclusão (o tempo de resposta para lamber a pata traseira é inferior a 25 s) são incluídos no número do grupo. Os animais foram agrupados pelo limite basal, com 10 em cada grupo. Os compostos de concentrações diferentes foram administrados por via subcutânea a 10 mL/kg, e uma detecção foi realizada após 15 minutos de administração, com 30 segundos como tempo de corte e o tempo de reação foi registrado. Os resultados foram analisados estatisticamente e o valor de % de MPE foi calculado de acordo com a fórmula: % de MPE = (Tn-T0)/(30-T0), (Tn é o tempo para o animal lamber a pata traseira após a administração, T0 é a hora do animal lamber o pata antes da administração). Os resultados experimentais são mostrados na Tabela 2. Tabela 2 Composto Nº MPE (%) Composto 2 -17,20 Composto 4 -19,62 Composto 8 -18,61 Composto 15 -13,29 Conclusão: O efeito analgésico dos compostos da presente invenção é obtido através dos receptores opióides κ periféricos. Teste 3: Experiência de contorção do camundongo

[0251] A injeção intraperitoneal de ácido acético em camundongos pode causar contorção em camundongos. Resposta de contorção refere-se a camundongos que exibem respostas comportamentais típicas que são características da contração ou extensão dos músculos abdominais. A atividade analgésica do composto pode ser refletida pela detecção do efeito inibitório do composto no comportamento de contorção de camundongos causado pelo ácido acético. O método específico é o seguinte:

[0252] Camundongos ICR com 8 semanas de idade (adquiridos da Chengdu Dashuo Biotechnology Company, número da licença: SCXK (Sichuan) 2008-24 (NO: 51203500002150)). Os camundongos foram divididos aleatoriamente em grupos de 10 animais, metade macho e metade fêmea; em jejum, mas de livre acesso à água por 12 horas antes do experimento. No dia da experiência, 1,0 mg/kg do composto de teste foi administrado por via intravenosa e o grupo controle recebeu um reagente em branco. 15 minutos após a administração, uma solução de ácido acético a 0,6 % (v/v) foi injetada intraperitonealmente na dose de 0,4 mL/camundongo. O número de contorções de camundongos em 15 min e 6 h após a injeção de ácido acético foi registrado respectivamente, e a inibição percentual da contorção causada por ácido acético em camundongos pelo composto foi calculada respectivamente. Os resultados da análise são mostrados na Tabela 3.

[0253] Porcentagem de inibição % = (número de contorções no grupo controle - número de contorções no grupo de administração)/número de contorções no grupo de controle.

[0254] Tabela 3 Porcentagem de inibição dos compostos de teste ao comportamento de contorção induzido por ácido acético de camundongos. Composto Nº Porcentagem de Porcentagem de inibição pós 15 inibição pós 6 h min (%) (%) Composto 2 98,07 80,58 Composto 3 86,44 NQ Composto 4 95,76 81,27 Composto 8 90,68 90,82

Composto 9 81,92 NQ Composto 12 91,04 NQ Composto 13 88,98 NQ Composto 14 92,87 NQ Composto 15 94,50 87,14 Composto 17 95,43 97,89 Composto 18 99,37 95,69 Composto 19 99,71 84,74 Composto 20 97,47 83,41 Composto 22 90,38 88,71 Composto 23 88,46 87,93 Composto 24 94,89 80,51 Composto 25 98,08 85,03 Composto 26 94,25 92,94 Composto 27 94,00 NQ Composto 28 84,29 NQ Composto 30 97,36 NQ Composto 31 99,28 90,03 Composto 33 89,42 NQ Composto 36 89,14 75,71 Composto 37 95,85 NQ Composto 42 99,33 75,14 Composto 43 98,00 76,57 Composto 44 93,32 NQ Controle 61,11 28,96 NQ significa que não há teste.

[0255] O controle é ,o composto 25 divulgado em CN101627049A é sua base livre.

[0256] Conclusão: Os compostos da presente invenção têm efeitos analgésicos significantes.

[0257] Alguns compostos de teste foram posteriormente testados para um teste de ação prolongada no comportamento de contorção induzido por ácido acético em camundongos. De acordo com o mesmo método de teste descrito acima, o método de administração foi a injeção intravenosa e a dosagem foi de 3 mg/kg ou 10 mg/kg. O número de vezes que o camundongo se contorcia dentro de 18 h após a injeção de ácido acético foi registrado e a porcentagem de inibição no comportamento de contorção induzido pelo ácido acético de ratos pelos compostos de teste foi calculada respectivamente. Os resultados são mostrados na Tabela 4.

[0258] Tabela 4 Percentagem de inibição pós 18h dos compostos de teste ao comportamento de contorção induzido por ácido acético de camundongos Composto Nº Dosagem Porcentagem de inibição pós 18 h (%) Cr-845 10 mg/kg 49,11 Composto 8 3 mg/kg 83,86

Composto 10 3 mg/kg 72,30 Composto 17 10 mg/kg 78,11 Composto 18 3 mg/kg 54,00 Composto 23 10 mg/kg 73,37 Composto 25 10 mg/kg 74,26 Composto 26 10 mg/kg 69,82 Composto 31 10 mg/kg 75,44 Composto 42 10 mg/kg 61,69 Composto 43 3 mg/kg 70,19 Estrutura de CR845 é

[0259] Conclusão: Alguns compostos da presente invenção têm efeitos analgésicos significantes e têm a vantagem de efeitos duradouros.

4. Teste de PK em ratos Propósitos do Uma dose única da substância de teste foi teste administrada por via intravenosa em ratos SD, a concentração da substância de teste no plasma de ratos foi medida e as características farmacocinéticas e a biodisponibilidade da substância de teste no rato foram avaliadas. Método de Injeção intravenosa administração Dosagem 1 mg/kg((calculado em forma livre)) Animal de Ratos SD machos, com cerca de 180 ~ 220g, 6 ~ teste 8 semanas de idade, 12 no total, divididos em 2 grupos, adquiridos da Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd. Conteúdo de Foram retirados 0,20 ml de sangue de rato da teste órbita antes e após a administração e colocados no tubo de centrifugação ETDAK2. Foi centrifugado a 5000 rpm e 4 ºC por 10 min para coletar plasma. Pontos de tempo de coleta de sangue IV: 0, 5, 15, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h. Antes da análise, todas as amostras de plasma foram armazenadas a -80 ºC.

Tabela 5 Resultados de PK de camundongo (1 mg/kg) composto Método de t1/2 Cl Vdss AUC0-t Nº administração (h) (ml/kg (L/kg) (ng/ml·h) min) CR-845 iv 3,90 8,29 1,56 1959 composto iv 4,22 5,97 1,47 2664 2

5. Teste de PK em Camundongo Propósitos do Uma dose única da substância de teste foi teste administrada por via intravenosa em camundongos ICR, a concentração da substância de teste no plasma dos camundongos foi medida e as características farmacocinéticas da substância de teste nos camundongos foram avaliadas.

Método de Injeção intravenosa administração Dosagem 1 mg/kg (calculado em forma livre) Animal de Camundongos ICR machos, com cerca de 18 a 22 g, teste 6 a 8 semanas de idade, total de 6 camundongos, divididos em 2 grupos, adquiridos da Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd.

Conteúdo de Foram retirados 20 µl de sangue da órbita de teste camundongos anestesiados com isoflurano antes e após a administração e colocados no tubo de anticoagulação ETDAK2. Foi centrifugado a 5000 rpm e 4 ºC por 10 min para coletar plasma.

Pontos de tempo de coleta de sangue IV: 0, 5, 15, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h.

Antes da análise, todas as amostras de plasma foram armazenadas a -80 ºC.

Tabela 6 Resultados de PK de camundongo (1 mg/kg) composto Método de t1/2 AUC0-t Nº administração (h) (ng/ml·h) CR-845 iv 0,388 1117 composto iv 5,77 1220 8 composto iv 3,88 2244 17

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto da fórmula geral (I) ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo: em que R1 é selecionado de ; cada um de m1, m 2 é independentemente selecionado de 1, 2, 3 ou 4; cada um de m3, m 4 é independentemente selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; com a condição que m3 e m 4 não pode ser 0 ao mesmo tempo; cada um de n1, n 2 é independentemente selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, alquila -C(=O)-C1-6, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-6, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo alquila, alcóxi, alquenila, alquinila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, =O, carboxila, nitro, ciano, amino, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S, e quando o heteroátomo é selecionado de S, é opcionalmente em forma de S, S=O ou S(=O)2; cada um de R1e, R1f é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, alquila -C(=O)O-C1-6, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-8 ou grupo heterocíclico -C(=O)O-(CH2)q-3 a 8 membros, o grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; alternativamente, Rz1 e Rz2 formam um anel heterocíclico contendo nitrogênio de 3 a 10 membros com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados, e o anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, =O, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros; cada um de R1a, R1b é independentemente selecionado de F, CF3, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo alquila, alquenila, alquinila ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; Rz3 é independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-6, alquila -C(=O)O-C1-6, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-8, grupo carbocíclico -C(=O)O-C3-8, -C(=O)O-(grupo heterocíclico de 3 a 8 membros), alquila -S(=O)p-C1-6, -Grupo carbocíclico S(=O)p-C3-8, -S(=O)p-(grupo heterocíclico de 3 a 8 membros), -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-6; alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 3 a 10 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, o anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou alquila -S(=O)p-C1-6, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; q é selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4;

p é selecionado de 0, 1 ou 2; a é selecionado de 0, 1, 2 ou 3; R4 é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6 ou grupo carbocíclico -(CH2)q-C3-8, o grupo alquila, alquenila, alquinila ou carbocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CN, CF3, NO2, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, alquila C1-6, alquila -C(=O)O-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-8, grupo heterocíclico

-C(=O)O-(CH2)q-3 a 8 membros ou , e o grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, alquila C1-6, alcóxi C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, grupo carbocíclico C3-8 ou grupo heterocíclico de 3 a 8 membros, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S; b é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; c é selecionado de 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; cada um de R5, R6 é independentemente selecionado de F, Cl, Br, I, CF3, ciano, nitro, alquila C1-4, -OR5a, -C(O)OR5b, -SR5c, -S(O)R5d, -S(O)2R5e ou -NR5fR5g; cada um de R5a, R5b, R5c, R5d, R5e, R5f e R5g é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4;

alternativamente, R5f, R5g formam um anel heterocíclico de 5 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S.

2. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, em que cada um de m1, m 2, m3, m4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n 2 é independentemente selecionado de 0, 1 ou 2; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -(CH2)q-C(=O)O-C1-4, -(CH2)q-NR1eR1f, -(CH2)q-COOH, -(CH2)q-CONH2, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, e o grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 5 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, =O, carboxila, nitro, ciano, amino, alquila C1-4, alcóxi C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, grupo carbocíclico C3-6 ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) opcionalmente selecionado(s) de N, O ou S, e quando o heteroátomo é selecionado de S, é opcionalmente em forma de S, S=O ou S(=O)2; cada um de R1e, R1f é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4 ou grupo carbocíclico -C(=O)O-(CH2)q-C3-6, o grupo alquila ou carbocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I,

OH, CF3, nitro, ciano, metila, etila, metóxi, etóxi, fenila; alternativamente, Rz1 e Rz2 são capazes de formar um anel heterocíclico contendo nitrogênio de 4 a 6 membros com um átomo de carbono ao qual eles estão ligados, e o anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) de =O; R1a, R1b são independentemente selecionados de F, CF3, metila, etila, propanoila ou isopropila; Rz3 é cada um independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-6, alquila -C(=O)O-C1-4, alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, o grupo alquila, carbocíclico ou heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, metila, etila, metóxi, etóxi, ciclopropila ou fenila, e o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4; alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, e o anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, ciano, nitro, metila, etila, metóxi, etóxi ou alquila -S(=O)p-C1-4, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; p é selecionado de 2; q é selecionado de 0 ou 1; a é selecionado de 3;

R4 é selecionado de propanoila ou isopropila; cada um de R2, R3 , R7, R8 é independentemente selecionado de H, alquila C1-4, alquila -C(=O)O-C1-4 ou -C(=O)O-benzila; b é selecionado de 0; c é selecionado de 0.

3. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 2, em que o composto é selecionado a partir do composto da fórmula geral (II): R1 é selecionado de ; cada um de m1, m2, m3, m 4 é independentemente selecionado de 1 ou 2; cada um de n1, n2 é independentemente selecionado de 0 ou 2; R1a, R1b são independentemente selecionados de F; Z é selecionado de CRz1Rz2 ou NRz3; cada um de Rz1, Rz2 é independentemente selecionado de H, carboxila, , , , ,

, , , , amino, -CH2NH2 ou ; z1 z2 alternativamente, R e R são capazes de formar um lactama com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados

; Rz3 cada um é independentemente selecionado de H, alquila -C(=O)-C1-4, grupo carbocíclico -C(=O)-C3-6, alquila -C(=O)O-C1-4, alquila -S(=O)p-C1-4, grupo carbocíclico -S(=O)p-C3-6, -C(=O)NR1gR1h, -S(=O)p-NR1iR1j ou um grupo heterocíclico de 3 a 6 membros, alquila, carbocíclico ou grupo heterocíclico é opcionalmente ainda substituído com 0 a 3 substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, Cl, Br, I, OH, CF3, nitro, ciano, amino, metila, etila, metóxi, etóxi, ciclopropila ou fenila, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S; cada um de R1g, R1h, R1i, R1j é independentemente selecionado de H ou alquila C1-4; alternativamente, R1g, R1h formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, e o anel é opcionalmente ainda substituído com substituinte(s) selecionado(s) a partir do grupo consistindo em F, CF3, metila, metóxi ou alquila -S(=O)p-C1-4, o grupo heterocíclico contém 1 a 3 heteroátomo(s) selecionado(s) de N, O ou S;

p é selecionado de 2; cada um de R2, R3, R7, R8 é independentemente selecionado de H, metila ou -C(=O)O-terc-butila.

4. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, em que o composto é selecionado a partir do composto da fórmula geral (II): Rz3 é cada um independentemente selecionado de H, , , , , , , , , , , , , , , , , ou .

5. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, R1 é selecionado de , , , , , , , , ou .

6. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 5, em que o composto é selecionado a partir das seguintes estruturas:

Composto Composto

Composto

Composto Composto

Composto Composto Composto Composto Composto Composto Composto Composto

7. Composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que os sais farmaceuticamente aceitáveis são selecionados de trifluoroacetatos.

8. Composição farmacêutica compreendendo o composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, e uma ou mais portadores e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

9. Uso do composto ou um estereoisômero, hidrato, metabólito, solvato, sal ou cocristal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou a composição farmacêutica de acordo com reivindicação 8 na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou condição associada ao receptor opióide κ em um mamífero.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, em que a doença ou condição associada ao receptor opióide κ é selecionada a partir do grupo consistindo em dor, inflamação, prurido, edema, hiponatremia, hipocalemia, íleo, tosse e glaucoma.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 9, em que a dor é selecionada a partir do grupo consistindo em dor neuropática, dor somática, dor visceral e dermatalgia.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 9, em que a dor é selecionada a partir do grupo consistindo em dor de artrite, dor de cálculo renal, histerospasma, dismenorreia, endometriose, dispepsia, dor pós-cirúrgica, dor pós-tratamento médico, dor ocular, dor na otite, dor fulminante do câncer e dor associada aos transtornos de GI.