CN110637025B

CN110637025B - 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途

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Publication number: CN110637025B
Application number: CN201880031309.3A
Authority: CN
Inventors: 张晨; 黄安邦; 叶飞; 黄龙彬; 黄正刚; 王健民; 魏用刚; 严庞科; 郑伟
Original assignee: Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-19
Publication date: 2023-07-18
Anticipated expiration: 2038-07-19
Also published as: BR112020001157A2; JP2020526571A; EP3656782A4; CN110637025A; AU2018303080B2; CA3069820C; EP3656782A1; JP7008787B2; KR102375543B1; AU2018303080A1; KR20200031114A; PT3656782T; WO2019015644A1; US20200172573A1; TWI712615B; MY200925A; CA3069820A1; ES2905164T3; ZA202000491B; EP3656782B1

Abstract

通式(I)所示的肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途，化合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况。

Description

肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途

技术领域

本发明涉及一种具有镇痛作用的肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途。

背景技术

阿片类药物用于疼痛的治疗已有数千年的历史，其主要通过与已知的三种经典阿片受体μ，δ和κ相互结合而发挥生理作用。这三种受体都是G蛋白偶联受体家族的一员，主要分布在中枢神经系统，同时也存在于很多外周组织中。其中最为经典的药物属吗啡，其主要通过μ阿片受体的作用发挥镇痛效果。

此外常用的临床镇痛药物还包含其他μ阿片受体药物，如以二氢吗啡酮、芬太尼为代表的传统类阿片药物。

然而μ阿片受体类药物在长期使用后会产生多种副作用，例如耐受、依赖和呼吸抑制以及对胃肠运动的影响等，这不仅增加了治疗费用，更影响了患者康复周期。而一些非阿片类注射剂，如对乙酰氨基酚、NSAIDs(非甾体抗炎药)，由于其镇痛效果差，限制了其使用范围和剂量；此外也有一定的副作用，如对乙酰氨基酚增加肝脏毒性，NSAIDs(非甾体抗炎药)导致各种胃肠道疾病。

随着现代社会生活工作压力的不断增大和老年社会的到来，以及阿片受体对于治疗不同类型的疼痛有着至关重要的作用，寻找具有高镇痛活性且低毒副作用的新型阿片药物具有重要的科学及社会意义。

研究发现通过使用κ阿片受体激动剂，可以将κ阿片受体作为干预的靶标以治疗疼痛和预防种类繁多的疾病和病况。如1993年Woold等在Anesthesia and Analgesia(1993，77，362-379)描述了将κ阿片受体激动剂用于治疗痛觉增敏在内的疼痛；1999年Wu等在Circulation Res(1999，84，1388-1395)提出将κ阿片受体激动剂作为预防和治疗心血管疾病的靶标；2003年Kaushik等在J.Postgraduate Medicine(2003，49(1)，90-95)阐述了κ阿片受体激动剂的神经保护作用；2004年Potter等在.Pharmacol.Exp.Ther(2004，209，548-553)描述了κ阿片受体激动剂在眼部紊乱和眼部疼痛中的应用；2005年Wikstrom等在J.Am.Soc.Nephrol(2005，16，3742-3747.)描述了κ激动剂在治疗尿毒症和阿片引起的瘙痒的应用；2006年Bileviciute-Ljungar等在Rheumatology(2006，45，295-302)评估了κ阿片受体激动剂用于骨关节炎，类风湿性关节炎等炎性疾病的性质；2006年Lembo在Diges.Dis.(2006，24，91-98)中评估了κ阿片受体激动剂胃肠道疾病中的应用；2006年Jolivalt等在Diabetologia(2006，49(11)，2775-2785)描述了κ阿片受体激动剂阿西马朵林在啮齿动物糖尿病神经病变中的作用；2008年卡拉治疗学股份有限公司的Schteingart，Claudio，D等在WO2008057608A2中评估了κ阿片受体激动剂在内脏疼痛、pH敏感型伤害感受器活化的相关疼痛以及辣椒素引起的眼部疼痛中的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种结构新颖，生物活性更好、镇痛效果更佳的κ阿片受体激动剂，及其制备方法和在医药上的用途。

本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：

其中，

R¹选自

m₁、m₂各自独立选自1、2、3或4；

m₃、m₄各自独立选自0、1、2、3或4；条件是，m₃和m₄不能同时为0；

n₁、n₂各自独立选自0、1、2、3或4；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、-C(＝O)-C_1-6烷基、-(CH₂)_q-C(＝O)O-C_1-6烷基、-(CH₂)_q-NR^1eR^1f、-(CH₂)_q-COOH、-(CH₂)_q-CONH₂、C_3-8碳环基或3至8元杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、＝O、羧基、硝基、氰基、氨基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O)₂；

R^1e、R^1f各自独立地选自H、C_1-6烷基、-C(＝O)O-C_1-6烷基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH₂)_q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

或者，R^z1和R^z2与其连接的碳原子形成3至10元含氮杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、＝O、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代；

R^1a、R^1b各自独立选自F、CF₃、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或3至8元杂环基，所述烷基、烯基、炔基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

R^z3独立选自H、-C(＝O)-C_1-6烷基、-C(＝O)O-C_1-6烷基、-C(＝O)-C_3-8碳环基、-C(＝O)O-C_3-8碳环基、-C(＝O)O-(3至8元杂环基)、-S(＝O)_p-C_1-6烷基、-S(＝O)_p-C_3-8碳环基、-S(＝O)_p-(3至8元杂环基)、-C(＝O)NR^1gR^1h、-S(＝O)_p-NR¹ⁱR^1j或3至8元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、氨基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-6烷基；

或者，R^1g、R^1h与其连接的氮原子形成3至10元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或-S(＝O)_p-C_1-6烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

q选自0、1、2、3或4；

p选自0、1或2；

a选自0、1、2或3；

R4独立选自H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或-(CH₂)_q-C_3-8碳环基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF₃、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、C_1-6烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-8碳环基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-3至8元杂环基或所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

b选自0、1、2、3、4或5；

c选自0、1、2、3、4或5；

R⁵、R⁶每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF₃、氰基、硝基、C_1-4烷基、-OR^5a、-C(O)OR^5b、-SR^5c、-S(O)R^5d、-S(O)₂R^5e或-NR^5fR^5g；

R^5a、R^5b、R^5c、R^5d、R^5e、R^5f和R^5g各自独立选自H或C_1-4烷基；

或者，R^5f、R^5g与其连接的氮原子形成5至6元杂环，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子。

本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：

R¹选自

m₁、m₂、m₃、m₄各自独立选自1或2；

n₁、n₂各自独立选自0、1或2；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、-C(＝O)-C_1-4烷基、-(CH₂)_q-C(＝O)O-C_1-4烷基、-(CH₂)_q-NR^1eR^1f、-(CH₂)_q-COOH、-(CH₂)_q-CONH₂、C_3-6碳环基或3至6元杂环基，优选H、C_1-4烷基、-(CH₂)_q-C(＝O)O-C_1-4烷基、-(CH₂)_q-NR^1eR^1f、-(CH₂)_q-COOH、-(CH₂)_q-CONH₂、C_3-6碳环基或3至6元杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、＝O、羧基、氰基、氨基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O)₂；

R^1e、R^1f各自独立地选自H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-6碳环基或-C(＝O)O-(CH₂)_q-3至6元杂环基，优选H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基或-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-6碳环基，所述的烷基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

或者，R^z1和R^z2与其连接的碳原子形成3至10元含氮杂环，优选形成4至6元含氮杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、＝O、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代；

R^1a、R^1b各自独立选自F、CF₃、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或3至6元杂环基，优选F、CF₃、C_2-4烯基或C_2-4炔基，所述烷基、烯基、炔基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

R^z3独立选自H、-C(＝O)-C_1-4烷基、、-C(＝O)-C_3-6碳环基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-C(＝O)-C_3-4碳环基、-C(＝O)O-C_3-6碳环基或-C(＝O)O-(3至6元杂环基)、-S(＝O)_p-C_1-4烷基、-S(＝O)_p-C_3-6碳环基、-S(＝O)_p-(3至6元杂环基)、-C(＝O)NR^1gR^1h、-S(＝O)_p-NR¹ⁱR^1j或3至6元杂环基，优选H、-C(＝O)-C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-S(＝O)_p-C_1-4烷基、-S(＝O)_p-C_3-6碳环基、-C(＝O)NR^1gR^1h或3至6元杂环基，所述烷基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、氨基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-6烷基，优选H或C_1-4烷基；

或者，R^1g、R^1h与其连接的氮原子形成3至10元杂环，优选形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基或-S(＝O)_p-C_1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

q选自0、1、2、3或4；优选0或1；

p选自0、1或2；优选2；

a选自0、1、2或3；优选3；

R⁴独立选自H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基或-(CH₂)_q-C_3-6碳环基，优选C_1-4烷基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF₃、NO₂、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-6碳环基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-3至6元杂环基或优选H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-6碳环基，所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；

b选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；

c选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；

R⁵、R⁶每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF₃、氰基、硝基、C_1-4烷基、或-NR^5fR^5g，优选F、CF₃或C_1-4烷基；

R^5f和R^5g各自独立选自H或C_1-4烷基。

m₁、m₂、m₃、m₄各自独立选自1或2；

n₁、n₂各自独立选自0、1或2；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、C_1-4烷基、-(CH₂)_q-C(＝O)O-C_1-4烷基、-(CH₂)_q-NR^1eR^1f、-(CH₂)_q-COOH、-(CH₂)_q-CONH₂、C_3-6碳环基或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、＝O、羧基、硝基、氰基、氨基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O)₂；

R^1e、R^1f各自独立地选自H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基或-C(＝O)O-(CH₂)_q-C_3-6碳环基，所述的烷基或碳环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、苯基的取代基所取代；

或者，R^z1和R^z2能够与其连接的碳原子形成4至6元含氮杂环，所述的环任选进一步被＝O的取代基所取代；

R^1a、R^1b独立选自F、CF₃、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R^z3各自独立选自H、-C(＝O)-C_1-4烷基、-C(＝O)-C_3-6碳环基、-C(＝O)O-C_1-4烷基、-S(＝O)_p-C_1-4烷基、-S(＝O)_p-C_3-6碳环基、-C(＝O)NR^1gR^1h、-S(＝O)_p-NR¹ⁱR^1j或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、硝基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、环丙基或苯基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-4烷基；

或者，R^1g、R^1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或-S(＝O)_p-C_1-4烷基(优选-S(＝O)_p-甲基、优选-S(＝O)_p-乙基)的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

p选自2；

q选自0或1；

a选自3；

R⁴选自丙基或异丙基；

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、C_1-4烷基、-C(＝O)O-C_1-4烷基或-C(＝O)O-苄基；

b选自0；

c选自0。

本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)所示化合物，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：

R¹选自

m₁、m₂、m₃、m₄各自独立选自1或2；

n₁、n₂各自独立选自0或2；

R^1a、R^1b独立选自F；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、羧基、氨基、-CH₂NH₂或/>

或者，R^z1和R^z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-4烷基；

或者，R^1g、R^1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、CF₃、甲基、甲氧基或-S(＝O)_p-C_1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

p选自2；

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。

本发明优选方案，本发明提供一种通式(II)所示化合物，或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中

R¹选自

m₁、m₂、m₃、m₄各自独立选自1或2；

n₁、n₂各自独立选自0或2；

R^1a、R^1b选自F；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、羧基、氨基、-CH₂NH₂或/>

或者，R^z1和R^z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺

R^z3各自独立选自H、

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。

本发明优选方案，本发明提供一种通式(II)所示化合物，或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：

R¹选自

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^z1、R^z2各自独立选自H、羧基、氨基、-CH₂NH₂或/>

或者，R^z1和R^z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺

R^z3各自独立选自H、

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。

本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)或(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物包括但不限于如下结构式所示化合物之一：

/>

本发明的一种优选方案，本发明提供一种通式(I)或(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述的药学上可接受的盐选自三氟乙酸盐。

本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。

本发明通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶或包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物的应用。

本发明的优选方案，其中所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。

本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。

本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。

本发明提供一种治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的方法，所述方法包括给予通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物，所述的所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况优选下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼，所述疼痛优选以下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛；或者所述疼痛优选以下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱(胃肠道紊乱)相关的疼痛。

除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括¹²C、¹³C和¹⁴C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又称为重氢)、氚(T，又称为超重氢)，氧的同位素包括¹⁶O、¹⁷O和¹⁸O，硫的同位素包括³²S、³³S、³⁴S和³⁶S，氮的同位素包括¹⁴N和¹⁵N，氟的同位素¹⁹F，氯的同位素包括³⁵Cl和³⁷Cl，溴的同位素包括⁷⁹Br和⁸¹Br。

“烷基”是指直链和支链的一价饱和烃基，主链包括1至10个碳原子，优选为1至8个碳原子，进一步优选为1至6个碳原子，更优选为1至4个碳原子的直链与支链基团，最优选1至2个碳原子，烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代，其中R¹⁹和R^19a各自独立选自H、羟基、氨基、羧基、C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、3至10元碳环基、4至10元杂环基、3至10元碳环基氧基或者4至10元杂环基氧基，k选自0、1、2、3、4或者5，j选自0、1或者2。本文中出现的烷基、k、j、R¹⁹和R^19a，其定义如上所述。

“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(CH₂)_v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代，当亚烷基中的取代基数量大于等于2个时，取代基可以稠合在一起形成环状结构。本文中出现的亚烷基，其定义如上所述。

“烷氧基”是指O-烷基的一价基团，其中，烷基如本文所定义，烷氧基实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。

“烯基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1，3-丁二烯、1，3-戊二烯、1，4-戊二烯和1，4-己二烯等；所述的烯基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代。本文中出现的烯基，其定义如上所述。

“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义如上所述。

“环烷基”是指一价饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。所述的环烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。

“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，碳环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、苯基或萘基。所述的碳环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代。本文中出现的碳环，其定义如上所述。

“杂环”是指饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1至4个选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1，3-二氧戊环基、1，4-二氧戊环基、1，3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1，3-二氧环戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1，1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR¹⁹、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH₂)_a-C(＝O)-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-O-R¹⁹、-(CH₂)_k-C(＝O)-NR¹⁹R^19a、-(CH₂)_k-S(＝O)_j-R¹⁹、-O-C(＝O)-O-R¹⁹或者-NR¹⁹R^19a的取代基所取代。本文中出现的杂环，其定义如上所述。

“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。

“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶与其他组成成分的混合物，其中其它组分包含生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。

“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。

“有效剂量”指引起组织、系统或受试者生理或医学翻译的化合物的量，此量是所寻求的，包括在受治疗者身上施用时足以预防受治疗的疾患或病症的一种或几种症状发生或使其减轻至某种程度的化合物的量。

“溶剂化物”指本发明化合物或其盐，它们还包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂为水时，则为水合物。

具体实施方式

以下结合附图及实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，氘代氯仿(CDCl₃)，氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。

HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。

氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。

室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。

实施例中无特殊说明，M为mol/L。

Boc：是指叔丁基氧基羰基。

Cbz：是指苄氧羰基。

THP：四氢吡喃基。

中间体1：

(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)

(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoic acid

第一步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

/>

室温下，将甲基(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1a)(2.6g，10mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，降温至0℃。磁力搅拌下，将(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酸(2.8g，11mmol)，1-羟基苯并三唑(1.62g，12mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.3g，12mmol)依次加至反应液中，升温至25℃，并于该温度下反应15h。向反应液中加入1M盐酸水溶液(25mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)搅拌30分钟、分液。有机相依次用1M盐酸水溶液(25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，无水硫酸钠(2g)干燥。过滤，滤液减压浓缩得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)，白色泡状固体(5.0g，产率99％)。

第二步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)

methyl(2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)(5.0g，10mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，将10％钯碳(1g，20％w/w)加至反应液中，置换氢气3次，氢气氛围室温反应5h。将反应液用硅藻土(3g)过滤，滤液减压浓缩，得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)粗品，白色泡状固体(3.7g，产率99％)，并直接用于下一步反应。

第三步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)

methyl (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pe ntanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)粗品(3.7g，9.9mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，降温至0℃。将(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酸(3.3g，11mmol)、1-羟基苯并三唑(1.62g，12mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.3g，12mmol)依次加至反应液中，升温至25℃，于该温度下反应5h。加入1M盐酸水溶液(25mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)搅拌30分钟、分液。有机相依次用1M盐酸水溶液(25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，无水硫酸钠(2g)干燥。过滤，滤液减压浓缩得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)粗品，白色泡状固体(3.0g，产率46％)，并直接用于下一步反应。

第四步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)

methyl (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate

室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)粗品(3.0g，4.58mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，将10％钯碳(1g，33％w/w)加至反应液中，置换氢气3次，氢气氛围下(气球)室温反应5h。将反应液用硅藻土(3g)过滤，滤液减压浓缩至干。加入乙酸乙酯(6mL)加热溶解，加入石油醚(6mL)后缓慢降至室温析出固体，过滤，滤饼于50℃减压烘干，得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)，白色泡状固体(2.1g，产率88％)。

第五步：甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)

methyl (2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoate

室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)(2.1g，4.0mmol)溶于乙酸乙酯(30mL)中，降温至0℃。将(2R)-2-(叔丁氧羰基)-3-苯基-丙酸(1.3g，4.9mmol)，1-羟基苯并三唑(0.65g，4.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.1g，5.7mmol)依次加至反应液中，升温至25℃，于该温度下反应5h。加入1M盐酸水溶液(15mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)搅拌30分钟、分液。有机相用依次用1M盐酸水溶液(15mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)、饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100∶1～5∶1)，得到甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)，白色泡状固体(2.3g，产率74％)。

第六步：(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)

室温下，将甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)(2.3g，3.0mmol)溶于甲醇(20mL)中，将氢氧化钠(200mg，5.0mmol)的水溶液(20mL)加至反应液中，于该温度下反应5h。用1M盐酸水溶液调节反应液pH＜4，用乙酸乙酯(40mL)萃取、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)，白色泡状固体(2.1g，产率93％)。

Ms m/z(ESI)：752.5[M-H]-；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.38-7.27(m，3H)，7.25-7.07(m，7H)，4.82-4.62(m，1H)，4.61-4.41(m，2H)，4.37-4.18(m，1H)，3.37-2.67(m，6H)，2.00-1.65(m，3H)，1.59-1.37(m，15H)，1.35-1.26(m，9H)，0.90-0.80(m，6H)。

实施例1：

2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸；三三氟乙酸盐

2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid；tri-trifluoroacetate

第一步：2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)

tert-butyl 2-[(1S)-1-phenylethyl]imino-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

室温下，将2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(2A)(7.2g，30mmol)、(1S)-1-苯乙胺(3.7g，31mmol)溶于甲苯(100mL)中，加入对甲苯磺酸(300mg，1.74mmol)，Dean-Stark回流分水。6h后，将反应液减压浓缩至干，得到2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)粗品，黄色泡状固体(10g，产率97％)。

第二步：2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)

tert-butyl 2-cyano-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

/>

室温下，将2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)粗品(10g，29.2mmol)溶于甲醇(90mL)中，冰浴冷却至0℃。搅拌下加入氯化锌(210mg，1.54mmol)，缓慢滴入氰基三甲基硅烷(3g，30.2mmol)，保持0℃反应3h。将反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v/v)＝4∶1)，得到2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)，黄色泡状固体(4.7g，产率44％)。

第三步：2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)

2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid

室温下，将2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)(2g，5.4mmol)溶于浓盐酸(20mL)中，然后回流反应40h。降至室温，并将反应液减压浓缩，得到2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)粗品，黄色油状液体(1.5g，产率96％)，直接用于下一步反应。

第四步：7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)

7-tert-butoxycarbonyl-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid

室温下，将2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)粗品(1g，3.47mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入氢氧化钠(0.5g，12.5mmol)的水(10mL)溶液，然后加入二碳酸二叔丁酯(908mg，4.16mmol)，并于室温下反应6h。将反应液过滤，得到7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)粗品，白色固体(0.8g，产率60％)。

第五步：O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(2F)

O7-tert-butyl O2-methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2，7-dicarboxylate

室温下，将7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)(775mg，2.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入甲醇(10mL)。室温下，搅拌下依次加入1-羟基苯并三唑(270mg，2.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.6g，3.13mmol)，反应15h。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶1)，得到O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(2F)，淡黄色泡状固体(560mg，产率70％)。

第六步：甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)

methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

室温下，将O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(2F)(500mg，1.24mmol)溶于二氯甲烷(4.5mL)中，降温至0℃。加入三氟乙酸(1.5mL)，室温下反应3h，将反应液减压浓缩，得到甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)，黄色油状液体(320mg，产率85％)。

第七步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯

methyl 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

室温下，将甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)(300mg，1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入中间体1(753mg，1.0mmol)。室温下，搅拌下依次加入1-羟基苯并三唑(135mg，1.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.23g，1.2mmol)，反应15h。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，收集洗脱剂减压浓缩，得到白色泡状固体的7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2H)(710mg，产率69％)。

第八步：2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)

methyl 2-amino-7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

室温下，将7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2H)(700mg，0.7mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中。加入钯碳(0.1g，20wt％)，置换氢气3次，氢气氛围下(气球)室温反应5h。将反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩至干，残留物用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)，白色泡状固体(370mg，产率60％)。

第九步：2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)

methyl 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-p henyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carbo xylate；2，2，2-trifluoroacetic acid

室温下，将2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)(370mg，0.4mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，降温至0℃。加入三氟乙酸(1mL)，升至室温，反应3h。将反应液减压浓缩至干，得到2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)粗品，黄色油状液体(305mg，产率72％)。

第十步：2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物2)

2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid；tri-trifluoroacetic acid

室温下，将氢氧化钠(50mg，1.25mmol)溶于水(2mL)中，加入2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)粗品(305mg，0.288mmol)，室温下反应5h。将反应液减压浓缩至干，制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150mmol)[[(2R)-2-met；流动相：A for ACNand B for H2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物2)(92mg，产率31％)。

MS m/z(ESI)：360.8[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.18(m，10H)，4.65(t，1H)，4.33-4.18(m，2H)，3.58(br，2H)，3.52-3.41(m，1H)，3.41-3.29(m，1H)，3.17(d，2H)，3.10-2.90(m，4H)，2.70-2.46(m，2H)，2.32-2.18(m，2H)，2.05-1.28(m，14H)，0.98-0.84(m，6H)。

化合物2-1(游离形式的化合物2)：

将化合物2(7.3g，6.88mmo)通过离子交换树脂(300mL)(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至100mL)，进一步冻干得到化合物2-1，白色固体(4，5g，产率90.8％)。

MS m/z＝720.5[M+2H]⁺；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.34-7.22(m，6H)，7.18-7.06(m，4H)，4.78-4.72(m，1H)，4.55(t，1H)，4.25(t，1H)，3.65-3.46(m，3H)，3.45-3.25(m，2H)，3.09-2.97(m，1H)，2.95-2.84(m，3H)，2.85-2.73(m，2H)，2.51-2.33(m，2H)，2.00-1.83(m，2H)，1.82-1.25(m，13H)，0.96-0.78(m，6H)。

实施例2：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3，10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)

tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

将四氢呋喃(50mL)加入反应瓶中，氮气保护下加入氢化钠(1.3g，54.2mmol)，冰水浴冷却至0℃，缓慢滴入膦酰基乙酸三乙酯(6.9g，31mmol)，加完后0℃反应20min。冷却至-5至0℃，缓慢滴入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(5g，20.9mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，加完后升至室温反应1h。加入饱和氯化钠水溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)粗品，淡黄色油状液体(6.0g，产率92.8％)，直接用于下一步。

第二步：2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)

tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-(nitromethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

将2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)加入反应瓶中，加入四氢呋喃(60mL)，室温搅拌溶解完全，然后加入硝基甲烷(6.0g，98.3mmol)和四丁基氟化铵(7.85g，30mmol)。加完后，升温回流反应5h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(150mL)，饱和氯化钠水溶液(100mL×1)洗涤、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析分离提纯(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝10∶1)，得到2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)，无色透明油状液体(6.5g，产率90％)。

第三步：2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)

tert-butyl 2-(aminomethyl)-2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

将2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)(6.5g，18mmol)加入到反应瓶中，加入乙醇(75mL)和水(25mL)，铁粉(4.9g，88mmol)和氯化铵(4.7g，88.00mmol)，然后回流反应5h。降温至室温，并将反应体系浓缩至20mL，加入水(30mL)，用氨水调节pH至大于10，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩至干，得到2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)，淡黄色油状液体(5.1g，产率85％)。

第四步：叔丁基2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)

tert-butyl 2-oxo-3，10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carboxylate

/>

将2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)(3g，8.8mmol)加入到反应瓶中，加入氢氧化钠(400mg，10mmol)的水(30mL)溶液，室温反应5h。将反应液过滤，得到叔丁基2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)，白色固体(2.10g，产率81％)。

第五步：3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)

3，10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecan-2-one

将叔丁基2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)(1g，3.4mmol)，溶于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温反应5h反应完全。将反应液减压浓缩至干，加入水(20mL)，用2M氢氧化钠水溶液调节体系PH＞10，用二氯甲烷(20mL×2)萃取、分液，合并有机相，有机相减压浓缩，得到3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)粗品，黄色油状液体(0.6g，产率85％)。

第六步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-oxo-3，10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

氮气保护下将二氯甲烷(30mL)加入到反应瓶中，加入中间体1(2.25g，2.98mmol)、3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)粗品(0.6g，2.88mmol)，1-羟基苯并三唑(0.39g，2.89mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.83g，4.33mmol)，室温反应15h。然后加入水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取、分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝20∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)，白色泡状固体(1.77g，产率73.2％)。

第七步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3，10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbony1)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

氮气保护下，将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)(0.90g，1mmol)和二氯甲烷(21mL)加入到反应瓶中，搅拌下加入三氟乙酸(7mL)，室温反应3h。将反应液减压浓缩至干，残留物制备分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3，10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)，白色固体(0.98g，率54％)。

MS m/z(ESI)：365.9[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.86-8.67(m，1H)，8.40-8.23(m，1H)，8.14-8.01(m，3H)，7.84-7.72(m，2H)，7.52-7.42(m，1H)，7.37-7.15(m，10H)，4.76-3.94(m，4H)，3.59-2.65(m，12H)，2.29-2.15(m，2H)，1.93-1.19(m，17H)，0.88(dd，6H)。

实施例3：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2，8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)

tert-butyl tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

将四氢呋喃(50mL)加入反应瓶中，加入氢化钠(2.5g，59.2mmol)，冰水浴冷却至0℃，缓慢滴入膦酰基乙酸三乙酯(7.96g，35.5mmol)，加完后0℃反应20min。接着冷却至-5至0℃，缓慢滴加6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4A)(5g，23.7mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，加完后室温反应1h。然后向反应液中加入饱和氯化钠水溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取、分液，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)粗品，黄色油状液体(5.5g，产率83％)，直接用于下一步。

第二步：6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)

tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-6-(nitromethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

将叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)粗品加入到反应瓶中，加入四氢呋喃(60mL)，室温搅拌溶解完全，然后加入硝基甲烷(6.0g，98.3mmol)和四丁基氟化铵(7.85g，30mmol)。加完后，升温回流反应5h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(150mL)，饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)，无色透明油状液体(5.1g，产率76％)。

第三步：6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)

tert-butyl 6-(aminomethyl)-6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate

将6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)(5.1g，15mmol)加入到反应瓶中，加入乙醇(75mL)和水(25mL)，铁粉(4.2g，74mmol)和氯化铵(4.0g，74mmol)，升温回流反应5h。降至室温，将反应体系浓缩至约20mL，加入水(30mL)，接着用氨水调节pH至大于10，用二氯甲烷(50mL x 2)萃取、分液，合并有机相，将有机相减压浓缩，得到6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)粗品，(4.6g，产率99％)，并直接用于下一步。

第四步：叔丁基9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)

tert-butyl 9-oxo-2，8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carboxylate

将6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)粗品(4.6g，15mmol)加入到反应瓶中，加入氢氧化钠(600mg，15mmol)的水(45mL)溶液，室温反应5h。将反应液过滤，得到叔丁基9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)，白色固体(2.90g，产率74％)。

第五步：2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)

2，8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecan-9-one；hydrochloride

将叔丁基9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)(2g，7.5mmol)，溶于4N HCl-异丙醇溶液(9mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩至干，得到2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)粗品，白色固体(0.95g，产率62％)，并直接用于下一步。

第六步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(9-oxo-2，8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate；

氮气保护下将二氯甲烷(30mL)加入到反应瓶中，加入中间体1(2.25g，2.98mmol)，2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)(0.6g，3.0mmol)，1-羟基苯并三唑(0.39g，2.89mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.83g，4.33mmol)，室温反应15h。然后加入水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取、分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝10∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)，白色泡状固体(1.9g，产率70％)。

第七步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)

氮气保护下，将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)(1.7g，1.9mmol)和二氯甲烷(21mL)加入到反应瓶中，搅拌下加入三氟乙酸(7mL)，室温反应3h。将反应液减压浓缩干，残留物用制备色谱分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2，8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)，白色固体(0.7g，产率40％)。

MS m/z(ESI)：351.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.76(d，1H)，8.32(d，1H)，8.11-7.97(m，4H)，7.85-7.69(m，3H)，7.50(s，1H)，7.33-7.18(m，10H)，4.74-3.74(m，8H)，3.24-2.63(m，8H)，2.27-2.05(m，6H)，1.71-1.17(m，9H)，0.89(dd，6H)。

实施例4：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide

第一步：7-苄基2-叔丁基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(6B)

7-benzyl 2-tert-butyl 2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2，7-dicarboxylate

0℃下，50mL单口瓶中，将三乙胺(0.15mL，1.1mmol)滴入到2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.23g，1mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，滴毕，加入氯甲酸苄酯(340mg，2mmol)，搅拌10min。升至室温继续搅拌1h，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩后得到7-苄基2-叔丁基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(6B)，无色油状产物(362mg，产率99％)。

MS m/z＝383.2[M+Na]⁺；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.34-7.32(m，5H)，5.12(s，2H)，3.64(s，4H)，3.43(dd，4H)，1.77-1.61(m，4H)，1.44(s，9H)。

第二步：2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)

benzyl 2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

/>

在50mL反应瓶中，加入7-苄基2-叔丁基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(6B)(0.36g，1mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)粗品，黄色油状液体(260mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

MS m/z＝261.2[M+H]⁺；

第三步：2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6D)

benzyl 2-cyclopropylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)粗品(260mg，1mmol)、三乙胺(200mg，2mmol)和二氯甲烷(7mL)。冰浴冷却至0℃，滴加环丙基磺酰氯(170mg，1.2mmol)，加完后升至室温反应4h。然后反应体系用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯化合物(6D)，白色固体(360mg，产率99％)。

MS m/z＝365.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.43-7.28(m，5H)，5.12(s，2H)，3.70(s，4H)，3.53-3.36(m，4H)，2.41-2.22(m，1H)，1.85-1.69(m，4H)，1.19-1.09(m，2H)，1.04-0.93(m，2H)。

第四步：2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)

2-cyclopropylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6D)(360mg，0.99mmol)、钯碳(72mg，20wt％)和乙酸乙酯(10mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应2h。反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)，淡黄色固体(210mg，产率92％)，并直接投入下一步反应。

第五步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)(161mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.8mmol)、1-羟基苯并三唑(108mg，0.8mmol)、中间体1(500mg，0.7mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)，白色固体(610mg，产率95％)。

第六步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)(300mg，0.31mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干得到白色粉末状化合物。再通过离子交换树脂(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，进一步冻干得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)，白色固体(153mg，产率63％)。

MS m/z＝383.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.40-7.24(m，6H)，7.16(dd，4H)，4.72-4.73(m，1H)，4.58-4.52(m，1H)，4.25(t，1H)，3.84(dd，，4H)，3.67-3.55(m，3H)，3.46-3.45(m，1H)，3.35-3.34(m，1H)，3.03(dd，1H)，2.91(dd，3H)，2.82(d，2H)，2.69(ddd，1H)，1.85-1.86(m，3H)，1.670-1.66(m，5H)，1.51-1.49(m，3H)，1.38-1.36(m，2H)，1.23-1.06(m，4H)，0.88(dd，6H)。

实施例5：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物7)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetate

第一步：2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)

benzyl 2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(330mg，1.3mmol)、三乙胺(263mg，2.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(164mg，1.43mmol)，反应4h。然后升至室温，反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3N盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶1)，得到2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)，淡黄色油状物(236mg，产率54.6％)。

MS m/z＝339.0[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.41-7.28(m，5H)，5.12(s，2H)，3.68(s，4H)，3.50-3.38(m，4H)，2.86(s，3H)，1.83-1.70(m，4H)。

第二步：2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)

2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)(236mg，0.7mmol)、钯碳(40mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)粗品，淡黄色固体(133mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝205.1[M+1]⁺；

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)粗品(133mg，0.65mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(96.6mg，0.72mmol)、中间体1(490mg，0.65mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)，淡黄色固体(317mg，产率52％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物7)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)(317mg，0.34mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，收集制备液，减压浓缩除去大部分有机溶剂，并冻干得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物7)，白色粉末(217mg，产率66.5％)。

MS m/z＝370.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.27(m，6H)，7.25-7.20(m，4H)，4.67-4.62(m，2H)，4.33-4.20(m，2H)，3.87-3.71(m，4H)，3.69-3.56(m，2H)，3.53-3.41(m，1H)，3.40-3.29(m，1H)，3.23-3.12(m，2H)，3.11-3.07(m，3H)，3.07-2.91(m，4H)，1.94-1.78(m，3H)，1.78-1.60(m，5H)，1.58-1.48(m，3H)，1.46-1.28(m，2H)，0.98-0.82(m，6H)。

实施例6：

(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)

(2R)-N-[(1R)-1-(2-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(8A)

benzyl 2-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(520mg，2.0mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三乙胺(607mg，6.0mmol)。然后降温至-20℃，滴加乙酰氯(314mg，4.0mmol)，加完后自然升温至室温并搅拌2h。接着向反应中加入0.5M稀盐酸水溶液(20mL)，并搅拌分层、分液，用二氯甲烷萃取水层(20mL x 2)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(纯乙酸乙酯)，得到2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯化合物(8A)，淡黄色油状液体(440mg，产率72.8％)。

第二步：1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)

1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethanone

在50mL反应瓶中，将2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(8A)(440mg，1.46mmol)加入到乙酸乙酯(5mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中。然后加入钯碳(80mg，20wt％)，氢气(气球)氛围下室温搅拌2h。接着将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)粗品，淡黄色油状液体(250mg，收率99％)，直接用于下一步反应。

第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)

tert-butyl

N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)粗品(200mg，1.19mmol)加入到乙酸乙酯(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(867mg，1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(331mg，1.73mmol)、1-羟基苯并三唑(186mg，1.38mmol)，加完后室温反应1.5h。随后向反应液中加入1N盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)粗品，淡黄色泡状固体(1.04g，产率99％)，直接用于下一步反应。

第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)

将叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)粗品(1.04g，1.15mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，收集制备液，减压浓缩除去大部分有机溶剂，并冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)，白色固体(460mg，两步产率42.9％)。

MS m/z(ESI)：352.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.49-7.00(m，10H)，4.66-4.49(m，2H)，4.30-3.93(m，4H)，3.79-3.54(m，4H)，3.52-3.25(m，2H)，3.22-2.90(m，6H)，1.92-1.27(m，16H)，1.02-0.75(m，6H).

化合物8-1：

将化合物8(1.0g，1.07mmo)通过离子交换树脂(60mL)(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至100mL)，进一步冻干得到化合物8的游离形式即化合物8-1，白色固体(451mg，产率60.0％)。

MS m/z(ESI)：352.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.45-7.32(m，6H)，7.23(dd，4H)，4.85-4.75(m，1H)，4.64(t，1H)，4.35(t，1H)，4.07(d，2H)，3.83(d，2H)，3.74-3.63(m，3H)，3.62-3.50(m，1H)，3.50-3.39(m，1H)，3.17-2.65(m，6H)，2.01-1.66(m，9H)，1.65-1.30(m，7H)，0.96(dd，6H).

实施例7：

7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)

isopropyl

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate；di-trifluoroacetic acid

/>

第一步：O7-苄基O-异丙基2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(9A)

O7-benzyl O2-isopropyl 2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2，7-dicarboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(310mg，1.2mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后冷却至-10℃，滴加氯甲酸异丙酯(146mg，1.2mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应体系依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3M盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶1)，得到O7-苄基O-异丙基2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯化合物(9A)，淡黄色油状液体(279mg，产率68％)。

MS m/z＝347.2[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.38-7.30(m，5H)，5.12(s，2H)，4.95-4.80(m，1H)，3.68(s，4H)，3.47-3.39(m，4H)，1.75-1.68(m，4H)，1.23(d，6H)。

第二步：2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)

isopropyl 2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入O7-苄基O-异丙基2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(9A)(260mg，0.75mmol)、钯碳(52mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)粗品，淡黄色固体(159mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝213.2[M+1]。

第三步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)

isopropyl 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

/>

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)粗品(159mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)，淡黄色固体(556mg，产率78％)。

第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)

isopropyl

在50mL单口瓶中，加入7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)(317mg，0.334mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and Bfor H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)，白色粉末状产物(326mg，产率98％)。

MS m/z＝374.9[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.50-7.14(m，10H)，4.89-4.78(m，1H)，4.66(t，1H)，4.30(t，1H)，4.22(t，1H)，3.89-3.74(m，4H)，3.69-3.54(m，2H)，3.54-3.41(m，1H)，3.41-3.28(m，1H)，3.21-3.11(m，2H)，3.11-2.90(m，4H)，1.93-1.30(m，14H)，1.27(d，6H)，0.93(q，6H)。

实施例8：

((2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)

tert-butyl7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.11g，0.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(115mg，0.6mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(378mg，0.5mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)白色固体(450mg，产率93％)。

第二步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)

在50mL单口瓶中，加入7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)(450mg，0.468mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and Bfor H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)白色粉末状产物(358mg，产率76％)。

MS m/z＝331.8[M-2CF₃COOH+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.48-7.10(m，10H)，4.65-4.61(m，2H)，4.28-4.20(m，2H)，3.93(d，4H)，3.70-3.57(m，2H)，3.52-3.39(m，1H)，3.39-3.27(m，1H)，3.15(d，2H)，3.02-2.94(m，4H)，1.98-1.87(m，3H)，1.82-1.60(m，5H)，1.51-1.50(m，3H)，1.44-1.36(m，2H)，0.89(dd，6H)。

实施例9：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)

Benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(0.26g，1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(230mg，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(162mg，1.2mmol)、中间体1(0.75g，1mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)，白色固体(850mg，产率85％)。

第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)

tert-butyl

N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)(850mg，0.85mmol)、钯碳(170mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)粗品，白色固体(580mg，产率79％)，直接投入下一步反应。

第三步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)

在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)(0.5g，0.58mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and Bfor H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)，白色粉末状产物(380mg，产率66％)。

MS m/z＝331.8[M-2CF₃COOH+2H]⁺/2；

1H NMR(400MHz，D2O)δ7.43-7.13(m，10H)，4.61(t，1H)，4.28-4.06(m，5H)，3.84-3.74(m，2H)，3.19-3.14(m，6H)，2.99-2.95(m，4H)，2.09-1.94(m，4H)，1.79-1.61(m，4H)，1.55-1.31(m，5H)，0.89(dd，6H)。

实施例10：

2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)

2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：7-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)

tert-butyl 7-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.23g，1mmol)、三乙胺(210mg，2.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(140mg，1.2mmol)，反应4h。然后升至室温，然后反应体系用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到7-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)，淡黄色油状物(250mg，产率81％)。

MS m/z＝327.2[M+Na]⁺。

第二步：7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)

7-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入7-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)(0.25g，0.81mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)粗品，淡黄色油状液体(165mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)粗品(165mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(192mg，1mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1mmol)、中间体1(610mg，0.81mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)，白色固体(630mg，产率82.7％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)(630mg，0.34mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：Afor ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)，白色粉末(410mg，产率63.2％)。

MS m/z＝370.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.15(m，10H)，4.61(t，1H)，4.33-3.96(m，5H)，3.79-3.69(m，2H)，3.25-3.13(m，7H)，3.02-2.93(m，6H)，1.91-1.86(m，3H)，1.70-1.64(m，3H)，1.56-1.31(m，5H)，1.25(t，2H)，0.89(dd，6H)。

实施例11：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：吡咯烷-1-碳酰氯(13B)

pyrrolidine-1-carbonyl chloride

在50mL单口瓶中，加入NaHCO₃(5.04g，60mmol)、三光气(5.94g，20mmol)和二氯甲烷(10mL)，反应液冷却至-10℃，然后缓慢滴加吡咯烷(2.16g，30.4mmol)，加完后恢复室温反应过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝3∶1)，得到吡咯烷-1-碳酰氯(13B)，无色油状物(2.07g，产率51.65％)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ3.62-3.56(m，2H)，3.54-3.44(m，2H)，2.02-1.90(m，4H)。

第二步：2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)

benzyl 2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(350mg，1.3mmol)、三乙胺(408mg，4.03mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加吡咯烷-1-碳酰氯(13B)(123mg，0.92mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)粗品，淡黄色油状液体(460mg，产率100％)。

MS m/z＝358.2[M+H]⁺。

第三步：2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)

2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl(pyrrolidin-1-yl)methanone

在50mL单口瓶中，加入2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)粗品(460mg，1.3mmol)、氢氧化钯/碳(100mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)粗品，淡黄色固体(290mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝224.3[M+H]⁺。

第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)

tert-butyl

N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)粗品(167mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(108mg，0.81mmol)、中间体1(556mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)，白色固体(360mg，产率29％)。

第五步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)(360mg，0.38mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)，白色固体(169mg，产率45.6％)。

MS m/z＝380.4[M+2H]⁺/2。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.75(d，1H)，8.35(d，1H)，8.09(d，1H)，8.01(br，3H)，7.73(br，3H)，7.34-7.17(m，10H)，4.71-4.60(m，2H)，4.40-4.32(m，1H)，4.08-3.96(m，2H)，3.73-3.23(m，8H)，3.16-3.01(m，3H)，2.98-2.86(m，1H)，2.85-2.69(m，3H)，1.82-1.69(m，4H)，1.69-1.42(m，11H)，1.36-1.22(m，2H)，0.89(dd，6H)。

实施例12：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)

3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl chloride

在50mL单口瓶中，加入NaHCO₃(756mg，9.0mmol)、三光气(0.89g，4.5mmol)和二氯甲烷(8mL)，反应液冷切至-10℃，然后缓慢滴加3-甲基磺酰基氮杂环丁烷盐酸盐(772mg，4.5mmol)，加完后恢复室温反应过夜。将反应液过滤，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v∶v)＝1∶1)，得到无色油状物3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)(494mg，产率50％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.62-4.32(m，4H)，4.07-3.92(m，1H)，2.93(s，3H)。

第二步：2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(14C)

benzyl 2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(350mg，1.3mmol)、三乙胺(406mg，4.01mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)(293mg，1.48mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A forACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，得到2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(14C)，白色固体(300mg，产率55％)。

MS m/z＝422.2[M+H]⁺；

¹HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.41-7.28(m，5H)，5.12(s，2H)，4.30-4.19(m，4H)，4.00-3.89(m，1H)，3.69(s，4H)，3.49-3.36(m，4H)，2.90(s，3H)，1.79-1.67(m，4H)。

第三步：2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)

2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl-(3-methylsulfonylazetidin-1-yl)methanone

在50mL单口瓶中，依次加入2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(14C)(300mg，0.7mmol)、氢氧化钯/碳(60mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)粗品，淡黄色固体(202mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝288.1[M+H]⁺。

第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)粗品(202mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(402mg，2.10mmol)、1-羟基苯并三唑(115mg，0.85mmol)、中间体1(536mg，0.71mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)，淡黄色固体(686mg，产率96％)。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；2，2，2-trifluoroacetic acid

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)(680mg，0.66mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B forH₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)，白色固体(330mg，产率41.3％)。

MS m/z＝412.3[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.18(m，10H)，4.66(t，1H)，4.47-4.16(m，7H)，3.90-3.72(m，4H)，3.69-3.55(m，2H)，3.53-3.41(m，1H)，3.39-3.27(m，1H)，3.24-3.14(m，2H)，3.10(s，3H)，3.09-2.90(m，4H)，1.94-1.26(m，14H)，0.92(d，6H)。

实施例13：

7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；2，2，2-trifluoroacetic acid

第一步：2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)

benzyl 2-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(310mg，1.2mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加甲胺基甲酰氯(15A)(123mg，1.32mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)粗品，黄色油状(440mg，产率100％)。

MS m/z＝318.2[M+H]⁺；

¹HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.28(m，5H)，5.12(s，2H)，3.66(s，4H)，3.50-3.36(m，4H)，2.79(s，3H)，1.82-1.63(m，4H)。

第二步：N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)

N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide

在50mL单口瓶中，依次加入2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)粗品(260mg，0.82mmol)、氢氧化钯/碳(50mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)粗品，淡黄色固体(150mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝184.3[M+H]⁺。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)粗品(150mg，0.82mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)，淡黄色固体(480mg，产率63％)。

第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroaceticacid

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)(480mg，0.52mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)，白色固体(260mg，产率53％)。

MS m/z＝360.3[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.28(m，6H)，7.27-7.21(m，4H)，4.66(t，1H)，4.30(t，1H)，4.21(t，1H)，3.74(s，2H)，3.70(s，2H)，3.69-3.59(m，2H)，3.55-3.43(m，1H)，3.41-3.31(m，1H)，3.24-3.12(m，2H)，3.11-2.92(m，4H)，2.69(s，3H)，1.94-1.27(m，14H)，0.93(dd，6H)。

实施例14：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5，5-difluoro-2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；2，2，2-trifluoroaceticacid

第一步：O7-苄基O2-叔丁基5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(16B)

O7-benzyl O2-tert-butyl 5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2，7-dicarboxyl ate

在50mL单口瓶中，依次加入三乙胺(0.85mL，8.4mmol)、5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(16A)(2.1g，8.0mmol)和四氢呋喃(15mL)，将反应液冷却至0℃，然后缓慢滴加氯甲酸苄酯(1.5g，8.8mmol)，加完后保持0℃下反应10分钟，再升至室温继续搅拌5h。反应液过滤，滤液减压浓缩得到O7-苄基O2-叔丁基5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(16B)，淡黄色油状产物(3.5g，产率100％)。

MS m/z＝419.3[M+Na]⁺；

第二步：5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)

benzyl 5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入O7-苄基O2-叔丁基5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2，7-二羧酸酯(16B)(3.17g，8.0mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温下滴加三氟乙酸(6.0mL)，加完后室温反应3h。将反应液用氨水调节pH约为13后分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)，黄色油状液体(2.43g，产率100％)，并直接用于下一步反应。

MS m/z＝297.1[M+H]⁺；

第三步：5，5-二氟-2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)

benzyl 5，5-difluoro-2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)(310mg，1.05mmol)、三乙胺(318mg，3.14mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(156mg，1.36mmol)，反应4小时。然后升至室温，反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3M盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝60∶1)，得到5，5-二氟-2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)，白色固体(233mg，产率59％)。

MS m/z＝397.2[M+Na]⁺；

¹HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.42-7.29(m，5H)，5.15(s，2H)，4.09(d，2H)，3.78-3.59(m，4H)，3.51(t，2H)，2.89(s，3H)，2.08(s，2H)。

第四步：5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)

5，5-difluoro-2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2-甲基磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)(230mg，0.5mmol)、钯/碳(40mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)，淡黄色固体(155mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝241.1[M+H]⁺；

第五步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(5，5-difluoro-2-methylsulfonyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)(155mg，0.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(115mg，0.85mmol)、中间体1(377mg，0.5mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5小时。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)，白色固体(380mg，产率78％)。

第六步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)(380mg，0.34mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5，5-二氟-2-甲磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)，白色粉末(270mg，产率71％)。

MS m/z＝388.8[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.17(m，10H)，4.66(t，1H)，4.42-4.13(m，4H)，4.13-3.49(m，7H)，3.25-2.92(m，9H)，2.30-2.00(m，2H)，1.91-1.26(m，9H)，0.93(q，6H).。

实施例15：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroaceticacid

第一步：(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)

(2R-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoic acid

在250mL反应瓶中，加入D-丙氨酸(17A)(10g，112.24mmol)和水(56mL)，将反应液冷却至0℃，然后加入氢氧化钠(6.73g，168.36mmol)，加完后保持0℃反应10分钟，再滴加二碳酸二叔丁酯(31.85g，145.91mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，加完后升温至室温搅拌过夜。反应液用石油醚(100mL×2)萃取并弃去有机相，水相用4M的盐酸溶液酸化至pH约为1，然后用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)，无色油状(21.2g，收率：100％)。

MS m/z＝212.1[M+Na]⁺；

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.34(br，1H)，7.05(d，1H)，3.98-3.87(m，1H)，1.38(s，9H)，1.22(d，3H)。

第二步：2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)

benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(335mg，1.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(748mg，3.9mmol)、1-羟基苯并三唑(211mg，1.56mmol)、(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)(246mg，1.3mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v：v)＝3：1)，得到2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)，白色固体(510mg，产率91％)。

MS m/Z＝454.3[M+Na]⁺；

第三步：N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)

tert-butyl N-[(1R)-2-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)(460mg，1.1mmol)、氢氧化钯/碳(92mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后降至室温，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)粗品，淡黄色固体(252mg，产率77％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝298.3[M+H]⁺；

第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)粗品(223mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)，淡黄色固体(560mg，产率69％)。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)(560mg，0.52mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN andB for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)，白色粉末(310mg，产率45％)。

MS m/z＝367.3[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.28(m，6H)，7.26-7.20(m，4H)，4.65(t，2H)，4.33-4.21(m，2H)，4.19-4.01(m，3H)，3.96-3.78(m，2H)，3.75-3.59(m，2H)，3.56-3.42(m，1H)，3.42-3.30(m，1H)，3.24-3.12(m，2H)，3.10-2.92(m，4H)，1.99-1.79(m，3H)，1.80-1.63(m，5H)，1.53(d，3H)，1.50-1.30(m，5H)，0.92(dd，6H)。

实施例16：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物18)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroaceticacid

第一步：N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18B)

benzyl N-[(1R)-2-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.45g，2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(780mg，4.1mmol)、1-羟基苯并三唑(340mg，2.5mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)丙酸(446mg，2.0mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18B)，白色固体(860mg，产率99％)。

MS m/Z＝454.2[M+Na]⁺。

第二步：N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18B)(0.86g，2mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)粗品，黄色油状液体(660mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

MS m/z＝332.2[M+H]⁺；

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在100mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)(243mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(200mg，1.0mmol)、中间体1(500mg，0.7mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)，淡黄色固体(740mg，产率99％)。

第四步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)(700mg，0.7mmol)、钯碳(140mg，20wt％)和甲醇(15mL)。氢气置换3次，在氢气氛围下，室温反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-1，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)粗品，淡黄色油状物(650mg，产率99％)，直接投入下一步反应。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；三三氟乙酸(化合物18)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroaceticacid

在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-1，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)粗品(650mg，0.7mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；三三氟乙酸(化合物18)，白色粉末(170mg，产率19％)。

MS m/z＝733.5[M+H]⁺；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.28(m，6H)，7.27-7.20(m，4H)，4.64(t，1H)，4.55-4.46(m，1H)，4.32-4.23(m，2H)，4.21-4.05(m，3H)，3.86-3.71(m，2H)，3.63-3.40(m，4H)，3.25-3.10(m，2H)，3.10-2.90(m，4H)，2.00-1.60(m，8H)，1.60-1.29(m，8H)，0.92(dd，6H)。

实施例17：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)

benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5，5-difluoro-2，.7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在100mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(797mg，2.69mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.04g，5.4mmol)、1-羟基苯并三唑(400mg，3mmol)、中间体1(2.03g，2.69mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1)，得到2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)，淡黄色固体(2.49g，产率89.6％)。

第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoy1]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)(2.49g，2.41mmol)、钯碳(500mg，20wt％)和甲醇(25mL)。氢气置换3次，在氢气(气球)氛围下，室温反应4h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)粗品，淡黄色油状物(2.16g，产率99％)，直接投入下一步反应。

MS m/z＝899.5[M+H]+；

第三步：N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)粗品(400mg，0.4mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.23g，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(70mg，0.5mmol)、Boc-D-丙氨酸(78mg，0.41mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1)，得到N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)，淡黄色固体(340mg，产率79％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)

在50mL反应瓶中，加入N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)(340mg，0.32mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)，白色粉末(170mg，产率48％)。

MS m/z(ESI)：385.3[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.29(m，6H)，7.27-7.21(m，4H)，4.67-4.47(m，3H)，4.31-4.09(m，5H)，4.09-3.76(m，3H)，3.74-3.46(m，2H)，3.18(d，2H)，3.10-2.91(m，4H)，2.33-1.97(m，2H)，1.84-1.61(m，4H)，1.61-1.26(m，8H)，0.92(dd，6H)。

实施例18：

(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)

tert-butyl 7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(450mg，2.0mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三乙胺(606mg，6.0mmol)。然后降温至-20℃，滴加乙酰氯(310mg，4.0mmol)，加完后自然升温至室温并搅拌2h。接着向反应中加入0.5M稀盐酸水溶液(20mL)，并搅拌分层、分液，用二氯甲烷萃取水层(20mL x 2)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(纯乙酸乙酯)，得到7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)，淡黄色油状液体(520mg，产率97.0％)。

第二步：1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)

1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethanone

在50mL反应瓶中，加入7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)(520mg，1.9mmol)和二氯甲烷(6mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，往残留物中加入浓氨水4mL，再加入无水硫酸钠干燥，用甲醇(20mL)洗涤，洗涤液浓缩得到1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)粗品，黄色油状液体(250mg，产率77％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)

tert-butylN-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)(250mg，1.49mmol)加入到乙酸乙酯(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(800mg，1.06mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(305mg，1.6mmol)、1-羟基苯并三唑(172mg，1.27mmol)，加完后室温反应1.5h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)粗品，淡黄色泡状固体(0.85g，产率88％)，直接用于下一步反应。

第四步：((2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)

将N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)粗品(0.85g，0.94mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到((2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)，白色固体(310mg，产率40.0％)。

MS m/z(ESI)：352.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.46-7.17(m，10H)，4.64(t，1H)，4.29-4.05(m，5H)，3.83-3.74(m，2H)，3.57-3.35(m，4H)，3.24-3.11(m，2H)，3.09-2.93(m，4H)，2.17-1.29(m，16H)，0.92(dd，6H)。

实施例19：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1，1-dioxo-1，4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroaceticacid

第一步：(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)

tert-butyl 2-(1，1-dioxo-1，4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(129mg，0.54mmol)、乙酸(65mg，1.08mmol)、1，4-噻嗪烷1，1-二氧化物(72mg，0.54mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(229m g，1.08mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应16h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)，白色粉末(147mg，产率76％)。

第二步：4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1，4-噻嗪烷-1，1-二氧化物(21B)

4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1，4-thiazinane 1，1-dioxide

在50mL反应瓶中，加入(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)(147mg，0.41mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1，4-噻嗪烷-1，1-二氧化物(21B)粗品，黄色油状液体(106mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1，1-dioxo-1，4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1，4-噻嗪烷-1，1-二氧化物(21B)粗品(106mg，0.41mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(94mg，0.49mmol)、1-羟基苯并三唑(66mg，0.49mmol)、中间体1(309mg，0.41mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)，白色固体(367mg，产率90％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)

在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)(367mg，0.37mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1，1-二氧代-1，4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)，白色粉末(295mg，产率70％)。

MS m/z＝397.9[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.36-7.19(m，10H)，4.63-4.60(m，1H)，4.32-4.16(m，3H)，3.92-3.78(m，1H)，3.63(d，9H)，3.53-3.22(m，3H)，3.15(d，2H)，3.01-2.91(m，4H)，2.48-2.32(m，2H)，1.98-2.06(m，2H)，1.75-1.23(m，13H)，0.89(dd，6H)。

实施例20：

7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroaceticacid

/>

第一步：7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)

tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2-Boc-2，7-二氮杂-螺[4.4]壬烷(22A)(452mg，2.0mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(188mg，2.01mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，然后用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)，白色固体(570mg，产率65.5％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.51-3.16(m，8H)，2.82(s，3H)，1.98-1.74(m，4H)，1.46(s，9H)。

第二步：N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)

N-methyl-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide

在50mL反应瓶中，加入7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)(161mg，0.568mmol)、二氯甲烷(10mL)和三氟乙酸(1.2mL)，在室温反应2h。然后将反应液减压浓缩得到N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)粗品，淡黄色油状物，直接投入下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)粗品(81mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.288g，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)，淡黄色固体(420mg，产率98％)。

第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)(400mg，0.44mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)，白色粉末(130mg，产率31.5％)。

MS m/z(ESI)：360.3[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.19(m，10H)，4.68-4.60(m，1H)，4.50-4.19(m，3H)，3.93-3.62(m，2H)，3.55-3.27(m，5H)，3.24(s，1H)，3.18(d，2H)，3.09-2.94(m，4H)，2.74-2.66(m，3H)，2.10-1.85(m，4H)，1.84-1.62(m，4H)，1.59-1.43(m，4H)，1.43-1.29(m，1H)，0.92(dd，6H)。

实施例21：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A)

tert-butyl 2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

将2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(0.48g，2mmol)、哌啶(0.25g，3mmol)和二氯甲烷(10mL)加入反应瓶中，搅拌30min后，冷却至0-5℃，加入氰基硼氢化钠(0.13g，4mmol)；加完室温反应4h，TLC监控反应完全。加入二氯甲烷(10mL)和水(10mL)搅拌5min，静置分层，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A)粗品，淡黄色固体(0.53g，产率86％)，直接用于下一步。

第二步：2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B)

2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane；2，2，2-trifluoroacetic acid

/>

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A，0.53g，1.7mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应2h。TLC监控反应完全，减压浓缩干，得2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B)，淡黄色油状物(0.50g，产率90％)，直接用于下一步。

第三步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B，0.50g，1.60mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(0.50g，0.66mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(190mg，0.99mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)，加完后室温反应3h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)粗品，淡黄色泡状固体(0.45g，产率72％)，直接用于下一步反应。

第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)

将叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)粗品(0.45g，0.48mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)，白色固体(260mg，产率56％)。

MS m/z(ESI)：372.9[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.48-7.09(m，10H)，4.68-4.60(m，1H)，4.34-4.17(m，2H)，3.73-3.52(m，3H)，3.52-2.92(m，10H)，2.80-2.64(m，2H)，2.47-2.24(m，2H)，2.05-1.88(m，4H)，1.88-1.20(m，18H)，1.00-0.81(m，6H)。

实施例22：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)

tert-butyl7-tetrahydropyran-4-yl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g，2mmol)、四氢吡喃酮(200mg，2mmol)、乙酸(120mg，2.0mmol)和二氯乙烷(7mL)，搅拌0.5h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.636g，3mmol)，反应5h，然后反应液用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)，淡黄色油状物(500mg，产率80.64％)。

MS m/z＝311.2[M+H]⁺。

第二步：7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)

7-tetrahydropyran-4-yl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)(0.5g，1.61mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)粗品，淡黄色油状液体(338mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)

tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)粗品(338mg，1.61mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)，白色固体(200mg，产率39.93％)

第四步：2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)(200mg，0.21mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)，白色粉末(135mg，产率86.1％)。

MS m/z＝373.9[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.46-7.29(m，10H)，4.71(t，1H)，4.27-4.16(m，7H)，3.93-3.86(m，2H)，3.66-3.53(m，5H)，3.25-3.05(m，8H)，2.34-2.13(m，6H)，1.79-1.43(m，11H)，1.02-0.95(m，6H)。

实施例23：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

第一步：2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A)

tert-butyl 2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(131mg，0.55mmol)、乙酸(66mg，1.1mmol)、吡咯烷(39mg，0.55mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(233mg，1.1mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应6h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A))，白色粉末(120mg，产率75％)。

第二步：2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)

2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A)(120mg，0.41mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)粗品，黄色油状液体(80mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)粗品(80mg，0.41mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(96mg，0.5mmol)、1-羟基苯并三唑(67.5mg，0.5mmol)、中间体1(309mg，0.41mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)，淡黄色固体(344mg，产率90％)。

第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)

在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)(344mg，0.37mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：Afor ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到((2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)，白色粉末(249mg，产率70％)。

MS m/z＝365.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.13(m，10H)，4.71-4.70(m，1H)，4.62(t，1H)，4.30-4.17(m，2H)，3.82-3.74(m，1H)，3.68-3.39(m，5H)，3.38-3.21(m，1H)，3.15(d，2H)，3.06-2.90(m，6H)，2.43-2.25(m，2H)，2.16-1.89(m，6H)，1.78-1.27(m，13H)，0.89(dd，6H)。

实施例24：

(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物26)

(2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid tri-trifluoroacetic acid

第一步：2-[(2R)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯26A

tert-butyl2-[(2R)-2-methoxycarbonylpyrrolidin-1-yl]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(287mg，1.2mmol)、乙酸(144mg，2.4mmol)、D-脯氨酸甲酯(154mg，1.2mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(233mg，2.4mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应6h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(26A))，白色粉末(275mg，产率65％)。

第二步：(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(26B)

methyl(2R)-1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)pyrrolidine-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯26A(275mg，0.78mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(26B)，黄色油状液体(196mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(26C)

Methyl(2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯26B(196mg，0.78mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(180mg，0.94mmol)、1-羟基苯并三唑(127mg，0.94mmol)、中间体1(587mg，0.78mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(26C)，白色固体(385mg，产率50％)。

第四步：(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)

(2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid

室温下，(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯26C(385mg，0.39mmol)溶于甲醇(5mL)中，将氢氧化钠(16mg，0.4mmol)的水溶液(10mL)加至反应液中，室温反应5h。用1M盐酸水溶液调节反应液pH＜4，用乙酸乙酯(20mL)萃取、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)，白色固体(345mg，产率93％)。

第五步：(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-甲酸三三氟乙酸盐(化合物26)

在50mL反应瓶中，加入(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)(345mg，0.36mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：Afor ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-甲酸三三氟乙酸盐(化合物26)，白色粉末(240mg，产率60％)。

MS m/z＝387.8[M+2H]⁺/2；

1H NMR(400MHz，D2O)δ7.44-7.09(m，10H)，4.27-4.19(m，3H)，3.96-3.84(m，2H)，3.67-3.50(m，3H)，3.48-3.21(m，3H)，3.19-2.89(m，7H)，2.50-2.22(m，3H)，2.18-1.91(m，5H)，1.78-1.24(m，13H)，0.88(dd，6H)。

实施例25：

2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)

2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide；di-trifluoroaceticacid

第一步：叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A)

tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

氮气保护下，将2-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(0.45g，2mmol)、二氯甲烷(10mL)和三乙胺(0.30g，3mmol)加入反应瓶中；冷却至0-5℃，滴入甲胺基甲酰氯(0.20g，2.2mmol)，加完移去冷却，升至室温反应1h。TLC监控反应完全，加入二氯甲烷(10mL)和水(10mL)，搅拌5min后，静置分层；有机层无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷/甲醇＝(v/v)20/1)，得叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A)，淡黄色油状物(0.48g，产率85％)。

第二步：N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)

N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide；2，2，2-trifluoroacetic acid

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A，0.48g，1.7mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应2h。TLC监控反应完全，减压浓缩干，得N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)，淡黄色油状物(0.49g，产率97％)，直接用于下一步。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

氮气保护下，在50mL反应瓶中，将N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)粗品(0.48g，2.60mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(0.50g，0.66mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(200mg，1.73mmol)、1-羟基苯并三唑(125mg，0.93mmol)，加完后室温反应3h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)粗品，淡黄色泡状固体(0.5g，产率80％)，直接用于下一步反应。

第四步：2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)

将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)粗品(0.5g，0.5mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，冻干，得到2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)，白色固体(220mg，产率40％)。

MS m/z(ESI)：360.3[M+1H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.45-7.16(m，10H)，4.66-4.57(m，1H)，4.32-4.19(m，2H)，4.19-3.99(m，3H)，3.83-3.66(m，2H)，3.40-3.22(m，4H)，3.22-3.12(m，2H)，3.06-2.99(m，4H)，2.69(s，3H)，1.80-1.62(m，8H)，1.58-1.27(m，5H)，1.03-0.79(m，6H)。

实施例26：

7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5，5-difluoro-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)

benzyl 5，5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(330mg，1.11mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(104mg，1.11mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)，白色固体(268mg，产率68.6％)。

MS m/z(ESI)：354.1[M+H]+；

¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41-7.28(m，5H)，5.14(s，2H)，4.09(d，2H)，3.65(dd，4H)，3.51-3.44(m，2H)，2.79(s，3H)，2.01(s，2H)。

第二步：5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)

5，5-difluoro-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)(269mg，0.76mmol)、钯碳(54mg，20wt％)和甲醇(5mL)。氢气置换3次，在氢气(气球)氛围下，室温反应3h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)粗品，淡黄色油状物(164mg，产率98.55％)，直接投入下一步反应。

MS m/z(ESI)：220.2[M+H]+；

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[5，5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)粗品(164mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.374g，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)，淡黄色固体(600mg，产率84％)。

第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)

7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5，5-difluoro-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；ditrifluoroacetic acid

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)(600mg，0.6mmol)和三氟乙酸(3mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)，白色粉末(100mg，产率13％)。

MS m/z(ESI)：755.5[M+H]+；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.18(m，10H)，4.86-4.75(m，1H)，4.65(t，1H)，4.39-4.17(m，2H)，4.15-4.05(m，2H)，4.04-3.45(m，6H)，3.24-3.10(m，2H)，3.10-2.90(m，4H)，2.77-2.60(m，3H)，2.06(d，2H)，1.85-1.61(m，4H)，1.60-1.46(m，3H)，1.45-1.27(m，2H)，0.92(dt，6H)。

实施例27：

2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)

2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5，5-difluoro-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamideditrifluoroacetic acid

第一步：5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)

tert-butyl5，5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(113mg，0.43mmol)、三乙胺(43mg，0.43mmol)和二氯甲烷(10mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(42mg，0.45mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入0.3M稀盐酸(10mL)，然后用二氯甲烷(5mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)，白色固体(96mg，产率70％)。

第二步5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)

5，5-difluoro-N-methyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide

在50mL反应瓶中，加入5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)(96mg，0.3mmol)和二氯甲烷(8mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)，黄色油状液体(66mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[5，5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)(66mg，0.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(239mg，0.36mmol)、1-羟基苯并三唑(49mg，0.36mmol)、中间体1(226mg，0.3mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)，白色固体(286mg，产率90％)。

第四步：2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)

在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5，5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)(286mg，0.3mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5，5-二氟-N-甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)，白色粉末(192mg，产率65％)。

MS m/z＝378.3[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.46-7.12(m，10H)，4.64-4.58(m，1H)，4.53-4.43(m，1H)，4.26-4.19(m，2H)，4.17-4.02(m，3H)，3.80-3.76(m，1H)，3.72-3.57(m，2H)，3.36(s，2H)，3.19-3.11(m，2H)，3.03-2.95(m，4H)，2.68(s，3H)，2.03-1.99(m 2H)，1.75-1.63(m，4H)，1.54-1.26(m，5H)，0.89(dd，6H)。

实施例28：

(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)

tert-butyl 7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入叔丁基2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(A)(0.414g，2mmol)、三乙胺(420mg，4.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加乙酰氯(188mg，2.4mmol)，反应10min。然后升至室温搅拌3h，然后反应体系用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到叔丁基7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)，淡黄色油状物(411mg，产率81％)。

MS m/z＝255.2[M+H]⁺。

第二步：7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)

7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.4]octane

在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)(0.41g，1.62mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)粗品，淡黄色油状液体(249mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)粗品(249mg，1.62mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)，白色固体(200mg，产率42.3％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)

在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)(200mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and Bfor H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)，白色粉末(120mg，产率79.1％)。

MS m/z＝345.9[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.45-7.29(m，10H)，4.71(t，1H)，4.37-4.2(m，5H)，4.05-4.00(m，2H)，3.82-3.52(m，4H)，3.26-3.05(m，6H)，2.32-2.11(m，5H)，1.8-1.76(m，4H)，1.61-1.45(m，5H)，1.02-0.96(dd，6H)。

实施例29：

(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)

tert-butyl 7-acetyl-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2-Boc-2，7-二氮杂-螺[4.4]壬烷(22A)(452mg，2.0mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加乙酰氯(160mg，2.0mmol)，加完后在室温反应4小时。反应液中加入1M稀盐酸(50mL)，用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)，淡黄色油状物(392mg，产率73％)。

MS m/z＝291.2[M+Na]⁺。

第二步：1-(2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)

1-(2，7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl)ethanone

在50mL反应瓶中，加入7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)(161mg，0.6mmol)、二氯甲烷(10mL)和三氟乙酸(2mL)，在室温反应2h。将反应液减压浓缩得到1-(2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)粗品，淡黄色油状物(100mg，产率99％)。

第三步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2，7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入1-(2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)粗品(100mg，0.6mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.288g，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(400mg，0.5mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1)，得到N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)，淡黄色固体(120mg，产率22％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)(120mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：Afor ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)，白色粉末(77mg，产率85％)。

MS m/z(ESI)：352.7[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.18(m，10H)，4.68-4.60(m，1H)，4.47-4.19(m，3H)，3.91-3.27(m，8H)，3.18(d，2H)，3.08-2.92(m，4H)，2.13-1.86(m，7H)，1.85-1.63(m，4H)，1.62-1.27(m，5H)，0.92(dd，6H)。

实施例30：

(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)

(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methvl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-5，5-difluoro-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，依次加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)(430mg，0.48mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.18g，0.94mmol)、1-羟基苯并三唑(71mg，0.53mmol)、乙酸(28.8mg，0.48mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应3h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)，白色固体(430mg，产率95％)。

第二步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)(430mg，0.46mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5，5-二氟-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)，白色粉末(273mg，产率61％)。

MS m/z(ESI)：370.8[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.43-7.19(m，10H)，4.67-4.60(m，1H)，4.58-4.47(m，1H)，4.31-4.08(m，5H)，3.98-3.70(m，3H)，3.70-3.43(m，2H)，3.18(d，2H)，3.06-2.94(m，4H)，2.23-1.94(m，5H)，1.80-1.63(m，4H)，1.56-1.29(m，5H)，0.91(dd，6H)。

实施例31：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-yl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)

tert-butyl 7-(oxetan-3-yl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，依次加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g，2.0mmol)、乙酸(0.24g，4.0mmol)、3-氧杂环丁酮(0.288g，4.0mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(1.48g，6.98mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应16h。将反应液过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)，白色粉末(432mg，产率76％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.67-4.55(m，4H)，3.61(s，4H)，3.41(p，1H)，2.19(s，4H)，1.78(t，4H)，1.44(s，9H)。

第二步：7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)

7-(oxetan-3-yl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane

在50mL反应瓶中，加入7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)(0.14g，0.5mmol)和二氯甲烷(5mL)，室温下滴加三氟乙酸(57mg，0.5mmol)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)粗品，黄色油状液体(70.5mg，产率88％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(oxetan-3-yl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在100mL反应瓶中，加入7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)粗品(70.5mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(288mg，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.60mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)，淡黄色固体(400mg，产率99％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)(400mg，0.40mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)，白色粉末(160mg，产率56％)。

MS m/z(ESI)：359.8[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.42-7.20(m，10H)，4.96(t，2H)，4.85(dd，2H)，4.66-4.56(m，2H)，4.48-4.35(m，2H)，4.30-4.10(m，5H)，3.84(s，2H)，3.43(br，1H)，3.17(d，2H)，3.14(s，1H)，3.07-2.93(m，4H)，2.12(br，4H)，1.80-1.60(m，4H)，1.58-1.29(m，5H)，0.91(dd，6H)。

实施例32：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：7-(二甲基氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)

tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g，2mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加二甲氨基磺酰氯(287mg，2.0mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，然后用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-(二甲基氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)粗品，淡黄色固体(440mg，产率66％)。

第二步：N，N-二甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)

N，N-dimethyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-sulfonamide

在50mL反应瓶中，加入7-(二甲基氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)粗品(0.22g，0.66mmol)和二氯甲烷(5mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N，N-二甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)粗品，黄色油状液体(103mg，产率76％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在100mL反应瓶中，加入N，N-二甲基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)粗品(103mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(288mg，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.60mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)，淡黄色固体(240mg，产率56％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)(400mg，0.4mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)，白色粉末(130mg，产率29％)。

MS m/z(ESI)：385.3[M+2H]^+/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.46-7.29(m，6H)，7.29-7.18(m，4H)，4.65(t，1H)，4.32-3.99(m，5H)，3.85-3.68(m，2H)，3.35-3.11(m，6H)，3.11-2.92(m，4H)，2.81(d，6H)，1.96-1.79(m，4H)，1.71(dd，4H)，1.60-1.32(m，5H)，0.93(dd，6H)。

实施例33：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)

tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入叔丁基2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(A)(0.414g，2mmol)、三乙胺(420mg，4.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加二甲氨磺酰氯(343mg，2.4mmol)，反应10分钟。然后升至室温搅拌3h，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)，淡黄色油状物(414mg，产率0.65％)。

MS m/z＝320.2[M+H]⁺；

第二步：7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)

7-(dimethylsulfamoyl)-2，7-diazaspiro[3.4]octane

在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)(0.41g，1.3mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)粗品，淡黄色油状液体(284mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-二甲氨磺酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-dimethylsulfamoyl-2，7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)粗品(284mg，1.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)，白色固体(201mg，产率39.7％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)

在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)(201mg，0.17mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and Bfor H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2，7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)，白色粉末(115mg，产率89.7％)。

MS m/z＝378.3[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.46-7.29(m，10H)，4.71(t，1H)，4.38-4.21(m，5H)，4.07-4.05(m，2H)，3.60-3.46(m，4H)，3.23-3.05(m，6H)，2.9-2.89(d，6H)，2.32-2.26(m，2H)1.8-1.59(m，9H)，1.02-0.96(dd，6H)。

实施例34：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tetra-trifluoroacetic acid

第一步：叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(36A)

tert-butyl2-(4-benzyloxycarbonylpiperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入叔丁基2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(C)(0.478g，2mmol)、苄基-1-哌嗪碳酸酯(440mg，2mmol)、乙酸(120mg，2.0mmol)和二氯乙烷(7mL)，搅拌半小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.636g，3mmol)，反应5h，反应体系用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝4∶1)，得到叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(36A)，淡黄色油状物(450mg，产率50.79％)。

MS m/z＝444.2[M+H]⁺；

第二步：苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)

benzyl 4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(36A)(0.45g，1.20mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)粗品，淡黄色油状液体(411mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)

benzyl4-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]piperazine-1-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)粗品(411mg，1.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)，白色固体(300mg，产率52.4％)

第四步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)(300mg，0.27mmol)和甲醇(5mL)，和Pd/C(30mg)，氢气氛室温反应4h。将反应液硅藻土过滤，减压浓缩，得叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-yl-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)(255mg，100％)直接用于下一步。

第五步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)

在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-yl-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)粗品(255mg，0.27mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)，白色粉末(160mg，产率77.6％)。

MS m/z＝373.4[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.47-7.30(m，10H)，4.71(t，1H)，4.36-4.29(m，2H)，3.90-3.86(m，1H)，3.85-3.24(m，12H)，3.23-3.04(m，6H)，2.52-2.44(m，2H)，2.14-2.12(m，2H)，1.77-1.47(m，14H)，1.03-0.96(dd，6H)。

实施例35：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

第一步：7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)

tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(83mg，0.35mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(80mg，0.42mmol)、1-羟基苯并三唑(57mg，0.42mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸(105mg，0.35mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)，白色固体(177mg，产率80％)。

第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)

Benzyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)(177mg，0.35mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到：N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)，黄色油状液体(143mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(37C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)(143mg，0.35mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(80mg，0.42mmol)、1-羟基苯并三唑(57mg，0.42mmol)、中间体1(264mg，0.35mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(37C)，白色固体(400mg，产率99％)。

第四步：N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯37C(400mg，0.35mmol)、钯碳(80mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)粗品，淡黄色固体(353mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)

在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)(353mg，0.35mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)，白色粉末(282mg，产率70％)。

MS m/z＝405.3[M+2H]⁺/2；

1H NMR(400MHz，D2O)δ7.52-7.09(m，15H)，4.78-4.74(m，1H)，4.64-4.58(m，1H)，4.26-4.19(m，2H)，4.15-3.96(m，3H)，3.83(d，1H)，3.71-3.63(m，1H)，3.59-3.50(m，1H)3.43-2.90(m，11H)，1.90-1.18(m，13H)，0.98-0.80(m，6H)。

实施例36：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid

第一步 7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)

tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL反应瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(93mg，0.41mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(94mg，0.49mmol)、1-羟基苯并三唑(66mg，0.49mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)丙酸(446mg，2.0mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)，白色固体(175mg，产率90％)。

第二步 N-[(1R)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)

Benzyl N-[(1R)-1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-3-methyl-butyl]carbamate

在50mL反应瓶中，加入7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)(175mg，0.37mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N-[(1R)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)，黄色油状液体(138mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步 N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)(138mg，0.37mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(84mg，0.44mmol)、1-羟基苯并三唑(59mg，0.44mmol)、中间体1(279mg，0.37mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)，白色固体(366mg，产率90％)。

第四步：N-(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯38D

tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基)-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)(366mg，0.33mmol)、钯碳(73mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(38D)粗品，淡黄色固体(322mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)

在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(38D)(322mg，0.33mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)，白色粉末(240mg，产率65％)。

MS m/z＝388.3[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.14(m，10H)，4.61(t，1H)，4.50-4.42(m，1H)，4.28-4.02(m，5H)，3.83-3.70(m，2H)，3.66-3.36(m，4H)，3.14(t，2H)，2.97(t，4H)，1.94-1.64(m，10H)，1.54-1.30(m，6H)，1.01-0.81(m，12H)。

实施例37：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)

benzyl 2-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(760mg，4.9mmol)、1-羟基苯并三唑(300mg，2.0mmol)、环丙基甲酸(172mg，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)，淡黄色油状物(320mg，产率65％)。

第二步：环丙基(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)

cyclopropyl(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methanone

在50mL单口瓶中，加入2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)(320mg，0.97mmol)、钯碳(64mg，20wt％l)和甲醇(10mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到环丙基(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)粗品，淡黄色固体(189mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入环丙基(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)粗品(189mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(216mg，1.13mmol)、1-羟基苯并三唑(122mg，0.9mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)，淡黄色固体(410mg，产率45％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)(410mg，0.44mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)，白色粉末(330mg，产率78％)。

MS m/z＝365.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.45-7.18(m，10H)，4.66(t，1H)，4.26(dt，2H)，4.13(d，2H)，3.78(d，2H)，3.71-3.61(m，2H)，3.56-3.45(m，1H)，3.42-3.31(m，1H)，3.18(d，2H)，3.10-2.93(m，4H)，1.99-1.30(m，15H)，1.01-0.77(m，10H)。

实施例38：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)

tert-butyl 7-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.453g，2.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(767mg，4.0mmol)、1-羟基苯并三唑(324mg，2.4mmol)、环丙基甲酸(176mg，2.2mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)，淡黄色油状物(590mg，产率96％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.68(s，4H)，3.62-3.52(m，4H)，1.81-1.69(m，5H)，1.45(s，9H)，1.00-0.93(m，2H)，0.78-0.71(m，2H)。

第二步：环丙基(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)

cyclopropyl(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)methanone

在50mL反应瓶中，加入7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)(0.25g，0.83mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到环丙基(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)粗品，黄色油状液体(161mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)粗品(0.16g，0.83mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(239mg，1.25mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1.0mmol)、中间体1(625mg，0.83mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)，淡黄色固体(700mg，产率90％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)(700mg，0.75mmol)和三氟乙酸(3mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)，白色粉末(200mg，产率28％)。

MS m/z＝365.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.40-7.17(m，10H)，4.62(t，1H)，4.32-4.00(m，5H)，3.82-3.60(m，4H)，3.48(br，2H)，3.23-3.08(m，2H)，3.07-2.91(m，4H)，2.01-1.61(m，9H)，1.58-1.27(m，5H)，0.97-0.67(m，10H)。

实施例39：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid

第一步：2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)

benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(760mg，4.9mmol)、1-羟基苯并三唑(300mg，2.0mmol)、Boc-D-苯丙氨酸(530mg，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)，白色固体(514mg，产率67％)。

第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)(514mg，1.01mmol)、钯碳(100mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)粗品，淡黄色固体(377mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)粗品(377mg，1.01mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(290mg，1.52mmol)、1-羟基苯并三唑(164mg，1.21mmol)、中间体1(761mg，1.01mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝1∶2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)，淡黄色固体(410mg，产率36.6％)。

第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)(410mg，0.37mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：XbridgeC18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)，白色粉末(298mg，产率70％)。

MS m/z＝405.4[M+2H]⁺/2；

¹HNMR(400MHz，D₂O)δ7.52-7.28(m，11H)，7.28-7.20(m，4H)，4.67-4.62(m，1H)，4.32-4.15(m，3H)，3.85-3.38(m，6H)，3.37-3.22(m，2H)，3.22-3.13(m，2H)，3.12-2.90(m，6H)，2.65(dd，1H)，1.83-1.48(m，9H)，1.47-1.28(m，3H)，1.25-1.11(m，1H)，0.92(dd，6H)。

实施例40：

(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)

(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-hydroxyacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)

2-tetrahydropyran-2-yloxyacetic acid

在250mL单口瓶中，依次加入3，4-二氢-2H-吡喃(840mg，10mmol)、羟基乙酸甲酯(42A)(900mg，10mmol)、对甲基苯磺酸一水合物(100mg，0.5mmol)和二氯甲烷(100mL)，加完后在室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物中加入氢氧化锂溶液(75mL甲醇+25mL水的混合溶液)，加完后在室温反应过夜。向反应液中滴加0.1M稀盐酸(12mL)，测试反应液pH为2-3，反应液用二氯甲烷(100mL×2)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)，淡黄色油状物，(510mg，产率30％)。

MS m/z＝183.1[M+Na]⁺；

第二步：2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(42C)

benzyl 2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)(510mg，3.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.2g，6.3mmol)、1-羟基苯并三唑(516mg，3.82mmol)、2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(830mg，3.2mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(42C)，淡黄色固体(580mg，产率45％)。

第三步：1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)

1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-tetrahydropyran-2-yloxy-ethanone

在50mL单口瓶中，加入2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(42C)(580mg，1.4mmol)、钯碳(120mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)粗品，淡黄色固体(387mg，产率100％)，直接投入下一步反应。

第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)粗品(387mg，1.4mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(553mg，2.88mmol)、1-羟基苯并三唑(233mg，1.72mmol)、中间体1(1.09g，1.45mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)，淡黄色固体(590mg，产率41％)。

第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)(590mg，0.59mmol)和三氟乙酸(4mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mmI.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)，白色粉末(286mg，产率67％)。

MS m/z＝720.3[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.29(m，6H)，7.24(d，4H)，4.66(t，1H)，4.34-4.20(m，2H)，4.14(d，2H)，4.02(d，2H)，3.83(d，2H)，3.72-3.60(m，2H)，3.56-3.42(m，1H)，3.42-3.30(m，1H)，3.18(d，2H)，3.10-2.94(m，4H)，1.96-1.29(m，14H)，0.92(dd，6H)。

实施例41：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)

benzyl 2-propanoyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.0mmol)、1-羟基苯并三唑(243mg，1.80mmol)、丙酸(122mg，1.65mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)，淡黄色固体(245mg，产率52％)。

第二步：1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)

1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)propan-1-one

在50mL单口瓶中，加入2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)(245mg，0.775mmol)、钯碳(49mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)粗品，淡黄色固体(141mg，产率99.8％)，直接投入下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-propanoyl-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)粗品(141mg，0.774mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(383mg，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1.0mmol)、中间体1(0.565g，0.75mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)，淡黄色固体(500mg，产率72.7％)。

第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)(260mg，0.28mmol)和三氟乙酸(1.3mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)，白色粉末(125mg，产率51％)。

MS m/z＝359.8[M+2H]⁺/2；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.45-7.28(m，6H)，7.24(d，4H)，4.80-4.75(m，1H)4.66(t，1H)，4.29(t，1H)，4.27(t，1H)，4.01(d，2H)，3.77(d，2H)，3.71-3.60(m，2H)，3.55-3.42(m，1H)，3.41-3.27(m，1H)，3.18(dd，2H)，3.11-2.93(m，4H)，2.19(qd，2H)，1.95-1.63(m，8H)，1.61-1.49(m，3H)，1.48-1.30(m，2H)，1.07(td，3H)，0.92(dd，6H)。

实施例42：

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)

(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2，2，2-trifluoroacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid

第一步：2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)

benzyl 2-(2，2，2-trifluoroacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate

在50mL单口瓶中，加入2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.0mmol)、1-羟基苯并三唑(243mg，1.80mmol)、三氟乙酸(171mg，1.5mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)，淡黄色固体(224mg，产率63％)。

第二步：1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2，2，2-三氟-乙酮(44B)

1-(2，7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2，2，2-trifluoro-ethanone

在50mL单口瓶中，加入2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)(223mg，0.63mmol)、钯碳(46mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2，2，2-三氟-乙酮(44B)粗品，淡黄色固体(116mg，产率83％)，直接投入下一步反应。

第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)

tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(2，2，2-trifluoroacetyl)-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate

在50mL单口瓶中，加入1-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2，2，2-三氟-乙酮(44B)粗品(116mg，0.52mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.7mmol)、1-羟基苯并三唑(240mg，1.3mmol)、中间体1(0.47g，0.626mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)，淡黄色固体(216mg，产率42％)。

第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)

在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)(210mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18，150×30mm I.D.，5μm；流动相：A for ACN and B for H₂O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2，2，2-三氟乙酰基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)，白色粉末(111mg，产率51％)。

MS m/z＝758.3[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ7.44-7.28(m，6H)，7.24(d，4H)，4.64(t，1H)，4.38-4.21(m，4H)，3.97(d，2H)，3.73-3.58(m，2H)，3.56-3.43(m，1H)，3.40-3.32(m，1H)，3.25-3.11(m，2H)，3.11-2.93(m，4H)，1.99-1.63(m，9H)，1.53(d，3H)，1.49-1.33(m，2H)，0.93(dd，6H)。

生物测试例

测试1：对人κ-阿片受体的激动活性

Forskolin(毛喉素)能够刺激人κ-阿片受体高表达细胞株-OPRK1细胞(DiscoveRx)cAMP的释放，而κ-阿片受体激动剂能够抑制forskolin刺激的cAMP释放。通过检测受试化合物对forskolin刺激的cAMP释放的抑制作用，能够测定化合物对人κ-阿片受体的激动活性。首先用一定浓度的forskolin和不同浓度的受试化合物与人κ-阿片受体高表达细胞株一起孵育。使用基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的cAMP免疫测试法(PerkinElmer)来确定所激发的OPRK1细胞中的cAMP水平。具体方法如下：

高表达人κ-阿片受体的OPRK1细胞(DiscoveRx)培养于含10％FBS(Gibco 10099-141)的McCoy′s 5A(Gibco 16600-082)培养基中。实验当天，将在指数生长期的细胞，用PBS/5mM EDTA冲洗分离，离心收集，并用Stimulation Buffer重悬细胞并计数，调整细胞浓度至3*10⁵cells/ml。用DMSO分别溶解Forskolin和受试化合物，使其母液浓度均为10mM，再用Stimulation Buffer稀释Forskolin至4μM，加入不同浓度受试化合物(浓度依次为80、16、3.2、0.64、0.128、0.0256、0.00512、0.001024、0μM)，以每孔5μl加入384孔板。再向每孔中加入5μl细胞悬液，室温孵育30min。随后，每孔分别加入5μl 4x Eu-cAMP tracer工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释Eu-cAMP stock solution 50倍)和5μl 4x Ulight-anti-cAMP工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释ULight-anti-cAMP stock solution150倍)，室温下孵育1小时。384孔板用酶标仪(Perkin Elmer，Envision)TR-FRET方法检测cAMP水平。所得数据用origin7.5软件处理和拟合EC50。本发明化合物人κ-阿片受体的激动活性通过以上的实验进行测定，测得的EC50值见表1。

Stimulation Buffer配制方法：将14mL 1*HBSS(invitrogen，cat.#14025-092)、75μL 1M HEPES(Invitrogen，cat.#15630-080)、30μL 250mM IBMX溶于DMSO(Sigma，cat.#17018)和200μL 7.5％BSA Stabilizer混合，用0.1N NaOH调节溶液pH到7.4，并用1*HBSS定容到15mL。

表1受试化合物对人κ-阿片受体的激动活性

结论：本发明化合物对人κ-阿片受体具有明显激动作用。

测试2：小鼠热板实验

雌性C57小鼠18-22g购自成都达硕实验动物有限公司。将热板仪温度设定为56℃，升温后稳定30min开始实验。将动物依次放入热板仪测试，观察动物舔后足反应，以此作为痛反应指标；记录下动物从进入热板至受热刺激引起舔后足反应的时间，符合入组标准(舔后足反应时间低于25s)的动物入组编号。按基线阈值分组，每组10只。以10ml/kg皮下给与不同浓度化合物，给药15min后检测，以30秒作为截止时间，记录反应时间。对结果进行统计分析，按公式计算出％MPE值：％MPE＝(T_n-T₀)/(30-T₀)，(T_n为给药后动物舔后足时间，T₀为给药前动物舔足时间)。实验结果见表2。

表2

化合物编号	MPE(％)
		化合物2	-17.20
化合物4	-19.62
		化合物8	-18.61
化合物15	-13.29

结论：本发明化合物的镇痛作用是通过外周κ阿片受体起作用的。

测试3：小鼠扭体实验

小鼠腹腔注射乙酸后，能够引起小鼠扭体行为。扭体反应指小鼠表现出典型的腹部肌肉收缩或伸张特征性的行为反应。通过检测化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制作用，可以反应化合物的镇痛活性。具体方法如下：

8周龄ICR小鼠(购自成都达硕生物科技公司，许可证号：SCXK(川)2008-24(NO：51203500002150))。随机分组，每组10只动物，雌雄各半；实验前12h禁食不禁水。实验当天，分别静脉给予1.0mg/kg受试化合物，对照组给予空白试剂。给药后15min，以0.4mL/只的剂量腹腔内注射0.6％(v/v)醋酸溶液。分别记录注射醋酸后15min和6h内的小鼠扭体次数，并分别计算受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率，分析结果如表3所示。

抑制百分率％＝(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数。

表3受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率

/>

NQ表示没有测试。

对照为CN101627049A中公开化合物25为其游离碱。

结论：本发明化合物具有明显镇痛作用。

部分受试化合物进一步测试了对乙酸引起的小鼠扭体行为的长效试验，按照上述相同的试验方法，给药方式为静脉注射，给药剂量为3mg/kg或10mg/kg，记录注射醋酸后18h内的小鼠扭体次数，并分别计算受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率，结果如表4所示。

表4受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的18h-post抑制百分率

/>

CR845结构为

结论：本发明部分化合物具有明显镇痛作用，且具有长效的优点。

4.大鼠PK试验

表5大鼠PK结果(1mg/kg)

5.小鼠PK试验

表6小鼠PK结果(1mg/kg)

化合物编号	给药方式	t_1/2(h)	AUC_0-t(ng/ml·h)
				CR-845	iv	0.388	1117
化合物8	iv	5.77	1220
				化合物17	iv	3.88	2244

Claims

1.一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：

其中，

R¹选自

m₁、m ₂各自独立选自1、2、3或4；

m₃、m ₄各自独立选自0、1、2、3或4；条件是，m₃和m ₄不能同时为0；

n₁、n ₂各自独立选自0、1、2、3或4；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-6烷基；

q选自0、1、2、3或4；

p选自0、1或2；

a选自0、1、2或3；

R⁴独立选自H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或-(CH₂)_q-C_3-8碳环基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF₃、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

b选自0、1、2、3、4或5；

c选自0、1、2、3、4或5；

2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，

m₁、m ₂、m₃、m ₄各自独立选自1或2；

n₁、n ₂各自独立选自0、1或2；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R^1a、R^1b独立选自F、CF₃、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-4烷基；

或者，R^1g、R^1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF₃、氰基、硝基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或-S(＝O)_p-C_1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；

p选自2；

q选自0或1；

a选自3；

R⁴选自丙基或异丙基；

b选自0；

c选自0。

3.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，该化合物选自通式(II)所示的化合物：

R¹选自

m₁、m ₂、m₃、m ₄各自独立选自1或2；

n₁、n ₂各自独立选自0或2；

R^1a、R^1b独立选自F；

Z选自CR^z1R^z2或NR^z3；

R ^z1、R^z2各自独立选自H、羧基、氨基、-CH₂NH₂或/>

或者，R^z1和R^z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺

R^1g、R^1h、R¹ⁱ、R^1j各自独立选自H或C_1-4烷基；

p选自2；

R²、R³、R⁷、R⁸各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。

4.根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，该化合物选自通式(II)所示的化合物：

R^z3各自独立选自H、

5.根据权利要求4所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、要学上可接受的盐或共晶，

R¹选自

6.根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述化合物选自如下结构之一：

7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述溶剂化物为水合物。

8.根据权利要求1-6任一项所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述的药学上可接受的盐选自三氟乙酸盐。

9.根据权利要求8所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述溶剂化物为水合物。

10.一种药物组合物，所述的药物组合物包含权利要求1～9任一项所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。

11.权利要求1～9任一项所述的化合物或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或者权利要求10所述的药物组合物在制造用于治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物中的应用，其中所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。

12.根据权利要求11所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。

13.根据权利要求11所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。