PT2064228E

PT2064228E - Amidas peptídicas sintéticas

Info

Publication number: PT2064228E
Application number: PT78708773T
Authority: PT
Inventors: Guangcheng Jiang; Claudio D Schteingart; Frederique Menzaghi; Roberta Vezza Ander; Javier Sueiras-Diaz; Robert H Spencer; Derek T Mers; Zhiyong Luo
Original assignee: Cara Therapeutics Inc
Priority date: 2006-11-10
Filing date: 2007-11-12
Publication date: 2012-12-10
Also published as: DK2064228T3; LTPA2022522I1; US20130012448A1; ES2394377T3; CA2667155C; WO2008057608A3; ZA200903054B; BRPI0718651B8; US10138270B2; IL197923A; KR20090085096A; CY2022032I1; RU2500685C2; JP2010509343A; US20090075907A1; CA2667155A1; CY1116760T1; BRPI0718651A2; NL301199I1; NZ577107A

Description

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DESCRIÇÃO "AMIDAS PEPTÍDICAS SINTÉTICAS"

CAMPO DA INVENÇÃO A invenção refere-se a amidas peptídicas sintéticas que incorporam D-aminoácidos na cadeia peptidica e mais particularmente aquelas amidas peptídicas sintéticas que são agonistas do recetor opióide kapa, e o seu uso como agentes profiláticos e terapêuticos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Os recetores opióides kapa foram sugeridos como alvos para intervenção no tratamento ou prevenção de uma ampla variedade de doenças e condições por administração de agonistas do recetor opióide kapa. Ver, por exemplo, Jolivalt e cols., Diabetologia, 49 (11) :2775-85; Epub Aug. 19, 2006), que descreve a eficácia da asimadolina, um agonista do recetor kapa em neuropatia diabética de roedor; e Bileviciute-Ljungar e cols., Eur. J. Pharm. 494:139-46 (2004) que descreve a eficácia de agonista kapa U-50,488 no modelo de danos de constrição crónica (CCI) de rato da dor neuropática e o bloqueio de seus efeitos pelo antagonista do opióide, naloxona. Estas observações sustentam o uso de agonistas do recetor opióide kapa no tratamento da dor neuropática diabética, virai e induzida por quimioterapia. O uso de agonistas do recetor kapa para o tratamento ou prevenção da dor visceral que inclui condições ginecológicas como dismenorréia e endometriose também foi revisto. Ver, por exemplo, Riviere, Br. J. Pharmacol. 141:1331-4 (2004) .

Os agonistas do recetor opióide kapa também foram propostos para o tratamento da dor, incluindo hiperalgesia. 2

Acredita-se que a hiperalgesia seja causada por mudanças no ambiente do terminal sensorial periférico que ocorrem secundárias ao dano tecidular local. Dano tecidular (por exemplo, abrasões, queimaduras) e inflamação podem produzir aumentos significativos na excitabilidade dos nociceptores polimodais (fibras C) e o alto limiar de mecano-recetores (Handwerker e cols. (1991) Proceeding of the VI th World Congress on Dor, Bond e cols., eds., Elsevier Science Publishers BV, pp. 59-70; Schaible e cols. (1993) Dor 55:5— 54). Acredita-se que essa excitabilidade aumentada e respostas exageradas de aferentes sejam a base da hiperalgesia, em que a resposta da dor é o resultado de uma resposta exagerada a um estimulo. A importância do estado hiperalgésico no estado da dor pós-dano tem sido demonstrada repetidamente e parece responder por uma grande proporção do estado da dor pós-dano/inflamatória. Ver, por exemplo, Woold e cols. (1993) Anesthesia and Analgesia 77:362-79; Dubner e cols. (1994) In, Textbook of Dor, Melzack e cols., eds., Churchill-Livingstona, London, pp. 225-242.

Os recetores opióides kapa foram sugeridos como alvos para a prevenção e tratamento da doença cardiovascular. Ver, por exemplo, Wu e cols. "Cardioprotection of Preconditioning by Metabolic Inhibition in the Rat Ventricular Myocyte — Involvement of kappa Opioid Recetor" (1999) Circulation Res vol. 84: pp. 1388-1395. Ver também Yu e cols. "Anti-Arrhythmic Effect of kappa Opioid Recetor Stimulation in the Perfused Rat Heart: Involvement of a cAMP-Dependent Pathway" (1999) J Mol Cell Cardiol. vol. 31 (10) : pp. 1809-1819.

Também foi constado que o desenvolvimento ou progressão dessas doenças e condições que envolvem a 3 neurodegeneração ou morte da célula neuronal pode ser evitado, ou pelo menos retardado, por tratamento com agonistas do recetor opióide kapa. Acredita-se que esse melhor resultado seja devido à neuroproteção pelos agonistas do recetor opióide kapa. Ver, por exemplo, Kaushik e cols. "Neuroprotection in Glaucoma" (2003) J. Postgraduate Medicine vol. 49 (1): pp. 90-95. A presença de recetores opióides kapa em células imunes (Bidlak e cols., (2000) Clin. Diag. Lab. Immunol. 7(5):719-723) tem sido implicada na ação inibidora de um agonista do recetor opióide kapa, que mostrou suprimir a expressão de HIV-1. Ver, Peterson PK e cols., Biochem Pharmacol. 2001, 61(19):1145-51.

Walker, Adv. Exp. Med. Biol. 521:148-60 (2003) avaliou as propriedades antiinflamatórias de agonistas kapa para o tratamento de osteoartrite, artrite reumatóide, doença inflamatória intestinal e eczema. Bileviciute-Ljungar e cols., Rheumatology 45:295-302 (2006) descrevem a redução da dor e degeneração em artrite induzida por adjuvante de Freund pelo agonista kapa U-50,488.

Wikstrom e cols., J. Am. Soc. Nephrol. 16:3742-7 (2005) descrevem o uso do agonista kapa, TRK-820 para o tratamento de prurido urémico e induzido por opiáceos, e Ko e cols., J. Pharmacol. Exp. Ther. 305:173-9 (2003) descrevem a eficácia de U50,488 em prurido induzido por morfina em macaco. A aplicação de opióides periféricos incluindo agonistas kapa para o tratamento de doenças gastrointestinais também foi extensivamente revisto. Ver, por exemplo, Lembo, Diges. Dis. 24:91-8 (2006) para uma 4 discussão sobre o uso de opióides no tratamento de distúrbios digestivos, incluindo sindrome do cólon irritável (IBS), obstrução intestinal, e dispepsia funcional.

Distúrbios oftálmicos, que incluem inflamação ocular e glaucoma também são passíveis de tratamento por opióides kapa. Ver, Potter e cols., J. Pharmacol. Exp. Ther. 309:548-53 (2004), que descrevem o papel do potente agonista do recetor opióide kapa, bremazocina, na redução de pressão intraocular e bloqueio desse efeito por norbinaltorfimina (norBNI), o protótipo de antagonista do recetor opióide kapa; e Dortch-Carnes e cols., CNS Drug Rev. 11(2):195-212 (2005). Patente U.S. 6.191.126 para Gamache revela o uso de agonistas opióides kapa para tratar a dor ocular. Também foi constatado que a dor de ouvido pode ser tratada por administração de agonistas opióides kapa. Ver a Patente U.S. 6.174.878 também para Gamache.

Os agonistas opióides kapa aumentam a excreção renal de água e diminuem a excreção de sódio pela urina (ou seja, produzida numa diurese seletiva de água, também referida como aquarese). Vários, mas não todos os investigadores atribuem esse efeito a uma supressão da secreção de vasopressina a partir da pituitária. Estudos que comparam opióides kapa seletivos de ação central e aparentemente periférica levaram à conclusão de que os recetores opióides kapa na barreira hematoencefálica são responsáveis pela mediação desse efeito. Outros investigadores propuseram tratar a hiponatremia com peptídeos de nociceptina ou conjugados de peptídeos carregados que agem perifericamente no recetor de nociceptina, que é relacionado, porém distinto do recetor opióide kapa (D. R. Kapusta, Life Sei., 60:15-21, 1997) (Pat. U.S. No. 5.840.696). Pedido de Pat 5 U.S. 20060052284. O documento WO9932510 divulga os antagonistas KOR com uma estrutura quimica relacionada, p.ex., H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-piperazinil.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção fornece amidas peptídicas sintéticas que têm a fórmula I abaixo, e estereoisómeros, misturas de estereoisómeros, sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos, hidratos de sal de ácido, N-óxidos e formas cristalinas isomórficas das amidas peptídicas sintéticas de fórmula I:

Rr(V)A

Fórmula I

Na fórmula I, o Xaai representa um aminoácido N-terminal que pode ser qualquer um de (A) (A' ) D-Phe, (A) (A') (α-Me)D-Phe, D-Tyr, ácido D-l,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-carboxílico, D-terc-leucina, D- neopentilglicina, D-fenilglicina, D-homofenilalanina, ou P(E)D-Ala, em que cada (A) e cada (A') são substituintes de anel fenilo independentemente escolhidos de -H, -F, -Cl, -N02, -CH3, -CF3, -CN, e -CONH2, e em que cada (E) é independentemente escolhido dos seguintes substituintes: ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, piridilo, tienilo e tiazolilo.

Xaa2 é um segundo aminoácido que pode ser qualquer um de (A)(A')D-Phe, 3,4-dicloro-D-Phe, (A)(A')(α-Me)D-Phe, D-1-naftilalanina, D-2-naftilalanina, D-Tyr, (E)D-Ala ou D-Trp; em que (A) , (A' ) e (E) são independentemente 6 escolhidos dos substituintes listados acima para cada um de (A), (A') e (E) • Xaa3 é um terceiro aminoácido que pode ser qualquer um D-norleucina, D-Phe, (E)D- Ala, D-Leu, (α-Me)D-Leu, D- homoleucina, D-Val, ou D-Met, em que (E) é independentemente escolhido dos substituintes listados acima para (E).

Xaa4 é um quarto aminoácido que pode ser qualquer um de (B)2D-arginina, (B)2D-norarginina, (B)2D-homoarginina, ζ-(B)D-homolisina, ácido D-2,3-diaminopropiónico, ε-(B)D-Lys, ε-(B)2-D-Lys, D-aminometilfenilalanina, amidino-D-aminometil-fenilalanina, ácido γ- (B) 2D-y-diamino butírico, δ-(B)2α-(B')D-Orn, ácido D-2-amino-3(4-piperidil) propiónico, ácido D-2-amino-3(2-aminopirrolidil)propiónico, ácido D-a-amino-p-amidinopropiónico, ácido a-amino-4-piperidinoacético, ácido cis-a,4-diaminociclo-hexano acético, ácido trans-a,4-diaminociclo-hexanoacético, ácido cis-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido trans-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido a-amino-1-amidino-4-piperidinaacético, ácido cis-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, ou ácido trans-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, em que cada (B) é independentemente H ou C1-C4 alquilo, e (B' ) é -H ou (a-Me) . A porção de ligação, W pode ser qualquer uma das seguintes três alternativas: (i) Nulo, desde que quando W é nulo, Y é N e é ligado ao terminal C de Xaa4 para formar uma amida (ii)-NH-(CH2) b- com b igual a zero, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; ou (iii) -NH- (CH2) C-0- com c igual a 2, ou 3, 7 desde que Y é C. Em cada uma das alternativas anteriores, (ii) e (iii) o átomo N de W é ligado ao terminal C de Xaa4 para formar uma amida. A porção

na fórmula I é uma porção de anel heterociclico de 4 a 8 membros opcionalmente substituído em que todos os heteroátomos de anel na porção de anel são N, e em que Y e Z são cada um independentemente C ou N. No entanto, quando essa porção de anel heterociclico é um anel de seis, sete ou oito membros, Y e Z são separados por pelo menos dois átomos de anel. Além disso, quando essa porção de anel heterociclico num heteroátomo de anel único que é N, então a porção de anel é não aromática. A porção V na fórmula I é Ci~C6 alquilo. 0 operador "e" é zero ou 1, de modo que quando "e" é zero, então V é nulo e Ri e R2 são diretamente ligados aos mesmos átomos de anel ou diferentes.

Na primeira de quatro formas de realização alternativas, a porção RI na fórmula I pode ser qualquer um dos seguintes grupos: -H, -OH, halo, -CF3, -NH2, -COOH, Ci~ C 6 alquilo, amidino, Ci-Cô alquilo-substituído amidino, arilo, heterociclilo opcionalmente substituído, Pro-amida, Pro, Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Lys, Arg, Orn, Ser, Thr, CN, C0NH2, COR', S02R', CONR'R", NHCOR' , OR', ou S02NR'R"; em que o heterociclilo opcionalmente substituído é opcionalmente unicamente ou duplamente substituído com substituíntes independentemente escolhidos de Ci-C6 alquilo, Ci~C6 alcoxi, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, - COOH, e amidino. As porções R' e R" são independentemente H, Ci-Cs alquilo, arilo, ou heterociclilo. Alternativamente, R' e R" podem ser combinados para formar um anel de 4 a 8 membros, cujo anel é opcionalmente substituído unicamente ou duplamente com substituintes independentemente escolhidos de C1-C6 alquilo, C1-C6 alcoxi, -OH, -Cl, -F, -NH2, -NO2, -CN, -COOH e amidino. A porção R2 pode ser qualquer uma da -H, amidino, C1-C6 alquilo-substituído amidino unicamente ou duplamente, -CN, -CONH2, -CONR'R", -NHCOR', - S02NR'R", ou -COOH.

Numa segunda forma de realização alternativa, as porções Ri e R2 juntas, podem formar uma porção de anel heterociclico monociclico ou biciclico de 4 a 9 membros opcionalmente substituído que é ligado a um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z.

Numa terceira forma de realização alternativa, as porções Ri e R2 juntas com um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z podem formar uma porção de anel heterociclico de 4 a 8 membros opcionalmente substituído para formar uma estrutura espiro.

Numa quarta forma de realização alternativa, as porções Ri e R2 juntas com dois ou mais átomos de anel adjacentes da porção de anel que contém Y e Z podem formar uma porção de anel heterociclico monociclico ou biciclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros fundida à porção de anel que contém Y e Z.

Na fórmula I, cada uma das porções de anel heterociclico opcionalmente substituído de 4, 5, 6, 7, 8 e 9 membros que compreende Ri e R2 pode ser unicamente ou duplamente substituída com substituintes independentemente escolhidos de C1-C6 alquilo, Ci-Cê alcoxi, fenilo 9 opcionalmente substituído, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH e amidino. Além disso, quando a porção de anel que contém Y e Z de fórmula I é um anel de seis ou sete membros que tem um heteroátomo de anel único, e e é zero, então Ri não pode ser -OH, e Ri e R2 não são -H.

Quando a porção de anel que contém Y e Z na fórmula I é um anel de seis membros em que há dois heteroátomos de anel em que tanto Y quanto Z são N, e W é nulo, então a porção — (V)eRiR2 é anexada a um átomo de anel diferente de Z. Além disso, sob as condições anteriores, se e é zero, então Ri e R2 não podem ser -H. Enfim, quando Xaa3 é D-Nle, então Xaa4 não pode ser (B) 2D-Arg; e quando Xaa3 é D-Leu ou (aMe)D-Leu, então Xaa4 não pode ser δ- (B) 2α- (B' ) D-Orn. A invenção também fornece um agonista do recetor de opióide seletivo Kapa (referido de modo imtercambiável nessa como um agonista do recetor kapa ou simplesmente como um agonista kapa) que é uma amida peptídica sintética da invenção, como acima descrito. A invenção também fornece uma composição farmacêutica, que inclui uma amida peptídica sintética da invenção e um diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Também é fornecida uma amida peptídica sintética da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa, num mamífero. 0 método inclui a administração a um mamífero de uma composição que inclui uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção. A invenção também fornece usos das amidas peptídicas sintéticas da invenção para a preparação de medicamentos e composições 10 farmacêuticas úteis para o tratamento de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa num mamífero. A invenção fornece adicionalmente amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa, num mamífero, em que uma amida peptídica sintética da invenção é co-administrada com uma dose reduzida de um composto analgésico agonista opióide mu para produzir um efeito analgésico terapêutico, o composto analgésico agonista opióide mu contendo um efeito colateral associado, (especialmente depressão respiratória, sedação, euforia, antidiurese, náusea, vómitos, obstipação e tolerância física, dependência e adição). A dose reduzida do composto analgésico agonista opióide mu administrada por este método tem menos efeitos colaterais associados que os efeitos colaterais associados à dose do composto analgésico agonista opióide mu necessária para atingir o mesmo efeito analgésico terapêutico, quando administrada isoladamente. A invenção também proporciona amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção da hiperalgesia periférica, em que o método inclui a aplicação tópica ou a administração local a um mamífero em necessidade de tratamento, uma quantidade eficaz de uma composição que inclui uma quantidade anti-hiperalgesicamente eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção num veículo formulado para aplicação tópica ou administração local. A invenção também fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção da hiponatremia ou hipocalemia, e assim tratando ou prevenindo a doença ou condição associada com a hiponatremia ou hipocalemia, tal como a insuficiência 11 cardíaca congestiva, cirrose hepática, síndrome nefrótica, hipertensão, ou edema, e preferivelmente em que a secreção aumentada de vasopressina está associada com a referida doença ou distúrbio, em que o método inclui a administração a um mamífero de uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção num diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1: Mostra o esquema geral usado na síntese de compostos (1), (6), (7), (10) e (11). Etapas a — s foram realizadas com os seguintes reagentes ou condições: a) homopiperazina, DCM; b) Fmoc-D-Dap(ivDde)-OH ou Fmoc-DDab(ivDde)-OH ou Fmoc-D-Orn(Aloc)-OH ou Fmoc-D-Orn(Cbz)-OH ou Fmoc-DLys(Dde)-OH ou Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, DIC, HOBt, DMF; c) 25% piperidina em DMF; d) Fmoc-D-Leu-OH ou Fmoc-D-Nle-OH, DIC, HOBt, DMF; e) Fmoc-D-Phe-OH, DIC, HOBt, DMF; Cbz-D-Phe-OH, DIC, HOBt, DMF; f) Cbz-D-Phe-OH, DIL, HOBt, DMF; g) 4% hidrazina em DMF; h) Pd(PPh3)4, CHC13/AcOH/NMM; i) 0-NBS-C1, colidina, NMP; j) dimetil-sulf ato, DBU, NMR; k) mercaptoetanol, DBU, NMP; 1) Cbz-OSu, DMF; m) acetona, AcOH, NaBH(0Ac)3, TMOF; n) lH-pirazol-l-carboxamidina, DIEA, DMF; o) 50% TFA/DCM; p) S-Metilo-N-metilisotio-uréia hidroiodeto, DIEA, DMF; q) 2-metiltio-2-imidazolina hidroiodeto, DIEA, DMF; r) iodoetano, DIEA, DMF; s) TMSOTf/TFA/m-cresol.

Figura 2: Esquema geral usado na síntese de compostos (2) - (5), (8), (9) e (12) - (14). Etapas a — k foram realizadas com os seguintes reagentes ou condições: a) N-(l-Fmoc-piperidin-4-il)-L-prolina, DIEA, DCM; b) 25% piperidina/DMF; c) Fmoc-D-Lys(Dde)-OH, DIC, HOBt, DMF; d) Fmoc-D-Leu-OH, DIC, HOBt, DMF; e) Fmoc-D-Phe-OH, DIC, HOBt, DMF; f) Boc-D-Phe-OH, DIC, HOBt, DMF; g) 4% hidrazina em 12 DMF; h) o-NBS-Cl, colidina, NMP; i) dimetilsulfato, DBU, NMP; j) mercaptoetanol, DBU, NMP; k) TFA/TIS/H20.

Figura 3: Esquema geral usado na síntese de compostos (15)-(24). Etapas a — n foram realizadas com os seguintes reagentes ou condições: a) 35% piperidina, DMF; b) ácido 1-Boc-4-N-Fmoc-amino-piperidina-4-carboxílico, PyBOP, DIEA, DMF; c) (i) 35% piperidina, DMF; (ii) O-NBS-Cl, colidina, NMP; d) 30% TFA em DCM; e) Boc-D-Dap (Fmoc)-OH ou Boc-D-Dab(Fmoc)-OH ou Boc-DOrn(Fmoc)-OH, PyBOP, DIEA, DMF; f) Boc-D-Leu-OH, PyBOP, DIEA, DMF; g) Boc-D-Phe-OH, PyBOP, DIEA, DMF; h) Boc-D-Phe-OH, PyBOP, DIEA, DMF; i) 2% DBU/DMF; j) lH-pirazol-l-carboxamidina, DIEA, DMF; k) (i) acetona, TMOF, (ii) NaBH(OAc)3, DMF; 1) mercaptoetanol, DBU, NMP; m) Cu(OAc)2, Piridina, DBU, DMF/H20; n) 95% TFA/H20.

Figura 4: Esquema geral usado na síntese de compostos (25)-(37) . Etapas a — h foram realizadas com os seguintes reagentes ou condições: a) EDCI, HOBt, DIEA, THF; b) TFA, DCM; c) Boc-D-Phe-OH, EDCI, HOBt, DIEA; d) H2, Pd/C; e) D-Lys (Boc)-OA11, TBTU, DIEA, DMF; f) Pd(PPh3)4, pirrolidina; g) HNRaRb, HBTU; h) HC1, dioxano.

Figura 5: Concentração detectada no plasma e cérebro de ratos após administração de 3 mg/kg de composto (2) por um período de infusão de 5 minutos através de um cateter na veia jugular. Concentração de composto (2) em ng/ml: círculos abertos: plasma, círculos sólidos: cérebro.

Figura 6: Concentrações plasmáticas de composto (6) após administração subcutânea de um bolo único de 1 mg/kg do composto a ratinhos ICR. Foi feita amostra de plasma em 5, 10, 15, 20, 30 60, 90 120, e 180 minutos após a injeção. 13

Figura 7: Concentrações plasmáticas de composto (3) depois de administração intravenosa de um bolo único de 0,56 mg/kg do composto a macacos cynomolgus. Foi feita amostra de plasma em 2, 5, 10, 15, 30, 60, 120, e 240 minutos após a injeção.

Figura 8: Curvas dose-resposta para composto (3) em ratinhos ICR no ensaio de contorção induzida por ácido acético (circulos sólidos) e no ensaio de locomoção (quadrados sólidos).

Figura 9: Dose resposta de supressão mediada por composto (2) de contorção induzida por ácido acético em ratinhos quando libertado pela via intravenosa.

Figura 10: Efeitos do composto (2) sobre a hipersensibilidade mecânica induzida pela laqueação do nervo espinhal L5/L6 em ratos. Circulos abertos - veiculo isoladamente; Circulos sólidos — composto (2) a 0,1 mg/kg; quadrados abertos - composto (2) a 0,3 mg/kg; quadrados sólidos - composto (2) a 1,0 mg/kg. ** denota p < 0,01; *** denota p < 0,001 vs. Veiculo (ANOVA de 2 vias, Bonferroni).

Figura 11: Efeito do Composto (2) em diferentes concentrações sobre hipersensibilidade abdominal induzida por pancreatite em ratos. Cloridrato de dibutilina ou veiculo isoladamente foi administrado por via intravenosa e hipersensibilidade foi avaliada por teste abdominal com um filamento de von Frey em intervalos de 30 minutos. A hipersensibilidade é expressa como número de retiradas dos dezx testes. Circulos abertos — veiculo isoladamente; círculos sólidos — composto (2) a 0,1 mg/kg; quadrados abertos - composto (2) a 0,3 mg/kg; quadrados sólidos -composto (2) a 1,0 mg/kg. ** denota p < 0,01; *** denota p < 0,001 vs. Veículo (ANOVA de 2 vias, Bonferroni) . 14

Figura 12: Bloqueio do efeito do composto (2) sobre hipersensibilidade abdominal induzida por pancreatite por nor-BNI e metiodeto de naloxona em ratos. Coluna aberta column — veiculo isoladamente, coluna sólida— composto (2) a 1 mg/kg com metiodeto de naloxona ou norBNI como indicado. *** denota p < 0,001 vs. Veiculo + Veiculo (ANOVA de 2 vias, Bonferroni).

DESCRIÇÃO DETALHADA

Como usado em toda a presente descrição, o termo "amida peptídica sintética" significa um composto da invenção de acordo com a fórmula I, ou um estereoisómero, mistura de estereoisómeros, pró-fármacos, sal farmaceuticamente aceitável, hidrato , solvato, hidrato de sal de ácido, N-óxido ou forma cristalina isomórfica desses. Em que Xaa4, Xaa2, Xaa3, € í Xaa4 especificam D- aminoácidos em compostos da invenção, estereoisómeros de um composto da invenção de acordo com fórmula I são limitados àqueles compostos que têm aminoácidos na configuração D que são especificados na fórmula I. Estereoisómeros da invenção incluem compostos que têm configuração D ou L em centros quirais diferente dos carbonos alfa dos quatro aminoácidos Xaai, Xaa2, Xaa3, e Xaa4. Misturas de estereoisómeros referem-se a misturas de tais estereoisómeros da invenção. Como aqui usado, o termo "racematos" refere-se a misturas de estereoisómeros que têm proporções iguais de compostos com configuração D e L num ou mais dos centros quirais diferentes dos carbonos alfa de Xaa4, Xaa2, Xaa3, e Xaa4 sem variar a quiralidade dos carbonos alfa de Xaa4, Xaa2, Xaa3, e Xaa4. A nomenclatura usada aqui para definir peptídeos é especificada por Schroder & Lubke, The Peptides, Academic Press, 1965, em que, de acordo com a representação 15 convencional, o terminal N aparece na esquerda e o terminal C na direita. Quando um residuo de aminoácido tem formas isoméricas tanto a forma de L-isómero quanto a forma de D-isómero do aminoácido devem ser abrangidas a menos que indicado de outra forma. Aminoácidos são comumente identificados nessa pelo código padrão de três letras. 0 D-isómero de um aminoácido é especificado pelo prefixo "D-" como em "D-Phe" que representa D-fenilalanina, o D-isómero de fenilalanina. De modo similar, o L-isómero é especificado pelo prefixo "L-" como em "L-Phe." Peptideos são representados nessa de acordo com a convenção usual como sequências de aminoácidos da esquerda para direita: terminal N para terminal C, a menos que especificado de outro modo.

Como aqui usado, D-Arg representa D-arginina, D-Har representa D-homoarginina, que tem um grupo metileno de cadeia lateral mais longo que D-Arg, e D-Nar representa D-norarginina, que tem um grupo metileno de cadeia lateral mais curto que D-Arg. De modo similar, D-Leu significa D-leucina, D-Nle significa D-norleucina, e DHle representa D-homoleucina. D-Ala significa D-alanina, D-Tyr significa D-tirosina, D-Trp significa D-triptofano, e D-Tic significa ácido D-l,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-carboxílico. D-Val significa D-valina e D-Met significa D-metionina. D-Pro significa D-prolina, Pro-amida significa a forma D ou L de prolina amida. D-Pro amida representa D-prolina com uma amida formada em sua porção carboxi em que o azoto da amida pode ser alquilo substituído, como em —NRaRb, em que Ra e Rb são independentemente um grupo Ci-Cô alquilo, ou um de Ra e Rb é -H. Gly significa glicina, D-Ile significa D-isoleucina, D-Ser significa D-serina, e D-Thr significa D-treonina. (E)DAla significa o D-isómero de alanina que é substituído pelo substituínte (E) no carbono 16 β. Exemplos de tais grupos substituínte (E) incluem ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, piridilo, tienilo e tiazoilo. Portanto, ciclopentil-D-Ala significa o D-isómero de alanina que é substituido por ciclopentilo no carbono β. De modo similar, DAla(2-tienil) e (2-tienil)D-Ala são intercambiáveis e ambos significam o D-isómero de alanina substituido no carbono β com tienilo que é anexado na posição 2 do anel.

Como aqui usado, D-Nal significa o D-isómero de alanina substituido por naftilo no carbono β. D-2Nal significa D-alanina substituída com naftilo em que a anexação ao naftaleno é na posição 2 na estrutura de anel e D-lNal significa D-alanina substituída com naftilo em que a anexação ao naftaleno é na posição 1 na estrutura de anel. Por (A)(A')D-Phe entende-se D-fenilalanina substituída no anel fenilo com um ou dois substituíntes independentemente escolhidos de halo, nitro, metilo, halometilo (como, por exemplo, trifluormetil) , per-halometilo, ciano e carboxamida. Por D-(4-F)Phe entende-se D-fenilalanina que é flúor-substituída na posição 4 do anel fenilo. Por D-(2-F)Phe entende-se D-fenilalanina que é flúor-substituída na posição 2 do anel fenilo. Por D-(4-Cl)Phe entende-se D-fenilalanina que é substituída com cloro na posição 4 do anel fenilo. Por (a-Me)D-Phe entende-se D-fenilalanina que é substituída com metilo no carbono alfa. Por (a-Me)D-Leu entende-se D-leucina que é substituída com metilo no carbono alfa.

As designações (B)2D-Arg, (B)2D-Nar, e (B)2D-Har representam D-arginina, e D-norarginina D-homoarginina, respetivamente, cada uma tendo dois grupos substituíntes (B) na cadeia lateral. D-Lys significa D-lisina e D-Hlys 17 significa D-homolisina. ζ-(Β)ϋ-Η1γ3, s-(B)D-Lys, e ε-(Β)2- D-Lys representam D-homolisina e D-lisina cada uma tendo um grupo amino de cadeia lateral substituído com ou dois grupos substituintes (B), como indicado. D-Orn significa D-ornitina e δ-(B)α-(B')D-Orn significa D-ornitina substituída com (B') no carbono alfa e substituída com (B) no grupo δ-amino de cadeia lateral. D-Dap significa ácido D-2,3-diaminopropiónico. D-Dbu representa o D-isómero de ácido alfa, gama-diamino butírico e (B)2D-Dbu representa ácido alfa, gama-diamino butirico que é substituído com dois grupos substituintes (B) no grupo amino gama. A menos que determinado de outro modo, cada um dos grupos (B) de tais residuos duplamente substituídos são independentemente escolhidos de H- e Ci-C4-alquilo. Como aqui usado, D-Amf significa D-(NH2CH2-) Phe, ou seja, o D-isómero de fenilalanina substituído com aminometil em seu anel fenilo e D-4Amf representa a D-Amf particular em que o aminometil é anexado na posição 4 do anel. D-Gmf significa D-Amf(amidino) que representa D-Phe em que o anel fenilo é substituído com -CH2NHC (NH) NH2. Amd representa amidino,-C(NH)NH2, e as designações (Amd)D-Amf e D-Amf(Amd) são também usadas de modo intercambiável para DGmf. As designações Ily e Ior são respetivamente usadas para significar isopropilo Lys e isopropilo Orn, em que o grupo amino de cadeia lateral é alquilado com um grupo isopropilo.

Alquilo significa um radical alcano que pode ser um grupo alquilo linear, ramificado e cíclico como, sem limitação, metilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, t-butilo, sec-butilo, pentilo, ciclopentilo, hexilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexiletilo. Ci a Cs alquilo refere-se a grupos alquilo que têm entre um e 18 oito átomos de carbono. De modo similar, Ci-Cô alquilo refere-se a grupos alquilo que têm entre um e seis átomos de carbono. Do mesmo modo, C1-C4 alquilo refere-se a grupos alquilo que têm entre um e quatro átomos de carbono. Por alquilo inferior entende-se C1-C6 alquilo. Me, Et, Pr, Ipr, Bu, e Pn são usados de modo intercambiável para representar os grupos alquilo comuns: metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, e pentilo, respetivamente. Embora a ligação por um grupo alquilo seja tipicamente numa extremidade de uma cadeia de alquilo, a ligação pode ser em qualquer outra parte da cadeia, por exemplo 3-pentilo que também pode ser referido como etilpropil, ou 1-etilprop-l-il. Alquilo-substituido, como Ci a Ce alquilo-substituido amidino, indica que a porção relevante é substituída com um ou mais grupos alquilo.

Quando uma porção especificada é nula, a porção é ausente e se tal porção é indicada como sendo anexada a duas outras porções, tais duas outras porções são conectadas por uma ligação covalente. Quando uma porção de conexão é aqui mostrada como anexada a um anel em qualquer posição no anel, e anexada a duas outras porções, como Ri e R2, no caso em que a porção de contato é especificada para ser nula, então as porções Ri e R2 podem ser independentemente anexadas a qualquer posição no anel. 0 termos "heterociclo", "anel heterocíclico" e "heterociclilo" são usados de forma intercambiável nessa e referem-se a um anel ou porção de anel que tem pelo menos um átomo de anel não carbono, também chamado um heteroátomo, que pode ser um átomo de azoto, enxofre, ou oxigénio. Quando um anel é especificado como tendo um certo número de membros, o número define o número de átomos de anel sem referência a quaisquer substituintes ou átomos de hidrogénio ligados aos átomos de anel. Heterociclos, anéis 19 heterocíclicos e porções heterociclilo podem incluir múltiplos heteroátomos independentemente selecionados de átomo de azoto, enxofre, ou oxigénio no anel. Os anéis podem ser substituídos em qualquer posição disponível. Por exemplo, mas sem limitação, anéis de 6 e 7 membros são frequentemente substituídos na posição 4 do anel e anéis de 5 membros são comumente substituídos na posição 3, em que o anel é anexado à cadeia de amida do peptídeo na posição 1 do anel. 0 termo 'saturado' refere-se a uma ausência de ligações duplas ou triplas e o uso do termo em conexão com anéis descreve anéis que não têm ligações duplas ou triplas no anel, mas não impedem que estejam presentes ligações duplas ou triplas em substituíntes anexados ao anel. 0 termo "não aromático" refere-se no contexto de um anel particular a uma ausência de aromaticidade naquele anel, mas não impede a presença de ligações duplas no anel, incluindo ligações duplas que são parte de um anel aromático fundido ao anel em questão. Nor é um átomo de anel de uma porção de anel heterocíclico saturado impedido de ser ligado de forma dupla a um não átomo de anel, como, por exemplo, um átomo de enxofre de anel sendo duplamente ligado a um substituínte de átomo de oxigénio. Como aqui usado, heterociclos, anéis heterocíclicos e porções heterociclilo também incluem anéis saturados, parcialmente insaturados e heteroaromáticos e estruturas de anel bicíclico fundidas a menos que especificado de outra maneira. Um heterociclo, anel heterocíclico ou porção heterociclilo pode ser fundido a um segundo anel, que pode ser um anel saturado, parcialmente insaturado, ou aromático, cujo anel pode ser um heterociclo ou um carbociclo. Quando indicado, dois substituíntes podem ser opcionalmente unidos para formar um anel adicional. Anéis podem ser substituídos em qualquer posição disponível. Um 20 heterociclo, anel heterocíclico e porção heterociclilo podem, quando indicado, ser opcionalmente substituídos numa ou mais posições do anel com um ou mais substituíntes independentemente selecionados, como, por exemplo, Ci-C6 alquilo, C3-C8 cicloalquil, Ci-C6 alcoxi, halo Ci-C6 alquilo, fenilo opcionalmente substituído, aril, heterociclilo, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH e amidino.

Substituíntes opcionais adequados do substituínte de fenilo incluem, por exemplo, sem limitação, um ou mais grupos selecionados de C1-C3 alquilo, C1-C3 alcoxi, halo C1-C3 alquilo, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH e amidino. D-Phe e D-Phe substituída são exemplos de um aminoácido adequado para o resíduo Xaai na fórmula I. O anel fenilo pode ser substituído em qualquer uma das posições 2, 3 e/ou 4. Exemplos particulares de substituições permitidas incluem, por exemplo, cloro ou flúor nas posições 2 ou 4. Também o átomo de carbono alfa pode ser metilado. Outros resíduos equivalentes que representam mudanças conservadoras para D-Phe também podem ser usados. Esses incluem D-Ala(ciclopentil), D-

Ala(tienil), D-Tyr e D-Tic. O resíduo na segunda posição, Xaa2 também pode ser D-Phe ou D-Phe substituída com tais substituições que inclunum substituínte na posição 4 do carbono do anel fenilo, ou nas posições 3 e 4. Alternativamente, Xaa2 pode ser D-Trp, D-Tyr ou D-alanina substituída por naftilo. O resíduo de terceira posição, Xaa3 pode ser qualquer resíduo de aminoácido não polar, como, por exemplo, D-Nle, D-Leu, (a-Me)D-Leu, DHle, D-Met ou D-Val. No entanto, D-Ala(ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil ou ciclohexil) ou D-Phe também podem ser usados como Xaa3. O resíduo de quarta posição Xaa4 pode ser qualquer resíduo de aminoácido positivamente carregado, 21 como, por exemplo, D-Arg e D-Har, que podem ser opcionalmente substituídos com grupos alquilo inferior, como um ou dois grupos etilo. Alternativamente, D-Nar e quaisquer outros resíduos equivalentes podem ser usados, como, por exemplo, D-Lys ou D-Orn (cada um deles pode ser grupo co-amino alquilado, por exemplo, por grupos metilo ou isopropilo, ou metilados no grupo α-carbono). Além disso, D-Dbu, D-4-Amf (que pode ser opcionalmente substituído com amidino), e D-Hlys são também aminoácidos adequados nessa posição.

Compostos da invenção contêm um ou mais centros quirais, cada um deles tem dois possíveis arranjos espaciais tridimensionais (configurações) dos quatro substituíntes ao redor do átomo de carbono central. Esses são conhecidos como estereoisómeros, e mais especificamente como enantiómeros (todos os centros quirais invertidos) ou diaestereoisómeros (dois ou mais centros quirais, pelo menos um centro quiral permanecendo o mesmo). Numa forma de realização específica da invenção, os aminoácidos que compõem a estrutura do tetrapeptídeo, XaaiXaa2Xaa3Xaa4 são especificados como sendo D-aminoácidos, ou seja, a configuração oposta àquela geralmente encontrada em mamíferos. Referência a estereoisómeros das amidas peptídicas sintéticas da invenção relaciona-se a centros quirais diferentes dos carbonos alfa dos D-aminoácidos que compõem Xaai~Xaa4. Portanto, estereoisómeros de amidas peptídicas sintéticas que são formas de realização da invenção em que Xaai~Xaa4 são especificados como sendo D-aminoácidos, não incluem L-aminoácidos ou misturas racêmicas dos aminoácidos nessas posições. De modo similar, referência a racematos refere-se a um centro diferente dos carbonos alfa dos D-aminoácidos que compõem Xaai-Xaa4. Centros quirais nas amidas peptídicas sintéticas da 22 invenção para as quais um estereoisómero pode ter a configuração R ou S incluem centros quirais numa porção anexada ao terminal carboxi de Xaa4, e também centros quirais em quaisquer substituintes de cadeia lateral do aminoácido de Xaai-Xaa4.

As amidas peptidicas sintéticas da invenção aqui descritas (também referidas como compostos de amida peptidica sintética, compostos da invenção, composto (número), ou simplesmente "os compostos") podem ser usadas ou preparadas em formas alternadas. Por exemplo, vários compostos que contêm amino podem ser usados ou preparados como um sal de ácido. Frequentemente tais sais melhoram as propriedades de isolação e manuseio do composto. Por exemplo, dependendo dos reagentes, das condições reação e outros, os compostos como as amidas peptidicas sintéticas aqui descritas podem ser usados ou preparados, por exemplo, como os sais de cloridrato ou tosilato. Formas cristalinas isomórficas, todas formas quirais e racêmicas, N-óxido, hidratos, solvatos, e hidratos de sal de ácido, são também contempladas como dentro do âmbito da presente invenção.

Certas amidas peptidicas sintéticas ácidas ou básicas da presente invenção podem existir como zwiteriões. Todas as formas desses compostos de amida peptidica sintética, incluindo o ácido livre, base livre e zwiteriões, são contempladas como estando dentro do âmbito da presente invenção. É bem conhecido na técnica que os compostos que contêm grupos amino e carboxilo existem frequentemente em equilíbrio com suas formas zwiteriónicas. Portanto, para qualquer composto aqui descrito que contém, por exemplo, grupos amino e carboxilo, deve-se incluir o zwiterion correspondente. 23

Em certas formas de realização as amidas peptidicas sintéticas da invenção estão de acordo com a Fórmula I:

Fórmula I

Em tais formas de realização Xaai-Xaa2-Xaa3-Xaa4 é uma porção de tetrapeptídeo em que Xaai é o aminoácido no terminal amino, que pode ser (A) (A')D-Phe, (A) (A') (a-Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic, D-terc-leucina, D-neopentilglicina, D-fenilglicina, D-homofenilalanina, ou β-(E)D-Ala, em que cada (A) e cada (A' ) são substituintes de anel fenilo independentemente selecionados de -H, -F, -Cl, -NO2, -CH3, -CF3, -CN, e -CONH2, e (E) é selecionado de qualquer um de ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, tienilo, piridilo, ou tiazolilo. 0 segundo aminoácido na cadeia do tetrapeptideo, Xaa2, pode ser qualquer um da (A) (A')D-Phe, 3,4-dicloro-D-Phe, (A) (A' ) (α-Me)D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Tyr, (E)D-Ala ou D-Trp. 0 terceiro aminoácido na cadeia do tetrapeptideo, Xaa3 pode ser D-Nle, D-Phe, (E)D-Ala, D-Leu, (a-Me)D-Leu, DHle, D-Val, ou D-Met. 0 quarto aminoácido na cadeia do tetrapeptideo, Xaa4 pode ser qualquer um dos seguintes: (B) 2D-Arg, (B) 2D-Nar, (B)2D-Har, ζ-(Β)ϋ-Η^3, D-Dap, s-(B)D-Lys, ε-(B)2-D-Lys, D-Amf, amidino-D-Amf, γ-(B)2D-Dbu, δ-(Β)2α-(B')D-Orn, ácido D-2-amino-3(4-piperidil)propiónico, ácido D-2-amino-3(2-aminopirrolidil)propiónico, ácido D-a-amino-β-amidinopropiónico, ácido a-amino-4-piperidinaacético, ácido cis-a,4-diaminociclo-hexano acético, ácido trans-a,4-diaminociclo-hexanoacético, ácido cis-α-amino-4- 24 metilaminociclo-hexano acético, ácido trans-a-amino-4- metilaminociclo-hexano acético, ácido a-amino-l-amidino-4-piperidinaacético, ácido cis-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, ou ácido trans-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, em que cada (B) pode ser separadamente escolhido de -H e um C1-C4 alquilo, e (B' ) pode ser -H ou um grupo (α-Me).

Em certas formas de realização da invenção, o grupo W ligando opcional é ausente (ou seja, nulo), desde que em tal caso, Y é N. Em outras formas de realização, W é -N-(CH2)b com b igual a zero, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6. Ainda em outras formas de realização, W é -N-(CH2)c-0- com c igual a 2, ou 3, desde que em tais formas de realização, Y seja C.

Em formas de realização particulares da invenção, a porção

na fórmula I é uma porção de anel heterociclico de 4 a 8 membros opcionalmente substituído em que todos os heteroátomos de anel na porção de anel são N, e em que Y e Z são cada um independentemente C ou N e não são átomos de anel adjacentes. Em tais formas de realização, quando essa porção de anel heterociclico é um anel de seis, sete ou oito membros, os átomos do anel Y e Z são separados por pelo menos dois átomos de anel. Em tais formas de realização, quando essa porção de anel heterociclico tem um heteroátomo de anel único que é N, então a porção de anel é não aromática. 25

Em certas formas de realização particulares da invenção, a porção de conexão, V é diretamente ligada ao anel que contém Y e Z. V é a C1-C6 alquilo que pode ser substituído com grupos RI e R2. 0 substituinte RI pode ser qualquer um da -H, -OH, halo, -CF3, -NH2, -COOH, C1-C6 alquilo, amidino, C1-C6 alquilo-substituido amidino, aril, heterociclilo opcionalmente substituído, Pro-amida, Pro, Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Lys, Arg, Orn, Ser, Thr, -CN, -C0NH2, -COR', -S02R', -CONR'R", -NHCOR', OR', ou -S02NR'R". 0 heterociclilo opcionalmente substituído pode ser unicamente ou duplamente substituído com substituíntes independentemente escolhidos de C1-C6 alquilo, C1-C6 alcoxi, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH, e amidino. As porções R' e R" são independentemente H, C1-C8 alquilo, aril, ou heterociclilo. Alternativamente, R' e R" podem ser combinados para formar um anel de 4 a 8 membros, cujo anel é opcionalmente substituído unicamente ou duplamente com substituíntes independentemente escolhidos de C1-C6 alquilo, C1-C6 alcoxi, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH, e amidino. 0 substituinte R2 pode ser qualquer um da -H, amidino, C1-C6 alquilo-substituido amidino unicamente ou duplamente, -CN, - C0NH2, -CONR'R", -NHCOR', -S02NR'R", ou -COOH.

Em outras formas de realização particulares, V é ausente e os grupos substituíntes RI e R2 são diretamente ligados aos mesmos átomos de anel ou diferentes do anel heterocíclico que contém Y e Z.

Num aspeto alternativo de certas formas de realização, as porções RI e R2 juntas podem formar uma porção de anel heterocíclico monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros que é ligado a um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z. Numa forma de realização particular, as porções RI e R2 formam uma n 26 porção de anel heterocíclico monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros que é diretamente ligado a um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z.

Num segundo aspeto alternativo de certas formas de realização, as porções RI e R2 juntas com um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z podem formar uma porção de anel heterociclico opcionalmente substituído de 4 a 8 membros para formar uma estrutura espiro.

Num terceiro aspeto alternativo de certas formas de realização, as porções RI e R2 juntas com dois ou mais átomos de anel adjacentes da porção de anel que contém Y e Z podem formar uma porção de anel heterociclico monociclico ou biciclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros fundida à porção de anel que contém Y e Z.

Em formas de realização particulares, cada uma das porções de anel heterociclico opcionalmente substituído de 4, 5, 6, 7, 8 e 9 membros que compreende RI e R2 pode ser unicamente ou duplamente substituída com substituíntes independentemente escolhidos de C1-C6 alquilo, C1-C6 alcoxi, fenilo opcionalmente substituído, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH e amidino.

Em certas formas de realização particulares, quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis ou sete membros que inclui um heteroátomo de anel único, e quando umdeYeZéCeo outro deYeZéN, eeé zero, então RI não pode ser -OH, e Rl e R2 não são -H. Além disso, quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis membros que inclui dois heteroátomos de anel em que tanto Y quanto Z são N, e W é nulo, então a porção -(V)eRlR2 é anexada a um átomo de anel diferente de Z. Além disso, se e 27 é zero, então RI e R2 não podem ser -H. Enfim, quando Xaa3 é D-Nle, então Xaa4 não pode ser (B)2D-Arg; e quando Xaa3 é D-Leu ou (aMe)D-Leu, então Xaa4 não pode ser δ-(B)2a-(3')D-

Orn.

Em certas formas de realização, a presente invenção também fornece uma amida peptidica sintética que tem a fórmula:

Xaá

ou um estereoisómero, racemato, sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato, hidrato de sal de ácido, N-óxido ou forma cristalina isomórfica desses; em que Xaal é selecionado do grupo que consiste em (A) (A')D-Phe, (a-Me)D-Phe, D-Tyr, D- Tic, D-fenilglicina, D-homofenilalanina, e P-(E)D-Ala, em que (A) e (A') são substituíntes de anel fenilo independentemente selecionados do grupo que consiste em -H, -F, -Cl, -N02, -CH3, -CF3, -CN, e -C0NH2, e em que (E) é selecionado do grupo que consiste em ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, piridil, tienil e tiazolil; Xaa2 é selecionado do grupo que consiste em (A)(A')D-Phe, (a-Me)D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Tyr, (E)D-Ala e D-Trp; Xaa3 é selecionado do grupo que consiste em D-Nle, D-Phe, (E)D-Ala, D-Leu, (α-Me)D-Leu, D-Hle, D-Val, e DMet; Xaa4 é selecionado do grupo que consiste em (B)2D-Arg, (B)2D-Nar, (B)2D-Har, ζ-(Β)ϋ-Βγ3, D-Dap, s-(B)D-Lys, ε-(B) 2-D-Lys, D-Amf, amidino-D-Amf, γ-(B)2D-Dbu, δ-(B)2α-(B')D-Orn, ácido D-2-amino-3(4-piperidil)propiónico, ácido D-2-amino-3(2-aminopirrolidil)propiónico, ácido D-a-amino-β-amidinopropiónico, ácido (R)a-amino-4-piperidinaacético, ácido cis-a,4-diaminociclo-hexano acético, ácido trans-a,4- 28 diaminociclo-hexanoacético, ácido cís-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido trans-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido a-amino-l-amidino-4-piperidinaacético, ácido cís-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, e ácido trans-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, em que cada (B) é selecionado do grupo que consiste em H e C1-C4 alquilo, e (B' ) é H ou (α-Me) . 0 grupo W é selecionado do grupo que consiste em:

Nulo, desde que quando W é nulo, Y é N; -N-(CH2)b com b igual a zero, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; e -N-(CH2)c-0- com c igual a 2, ou 3, desde que Y é C; e a porção

Y Z

é uma porção de anel heterocíclico de 4 a 8 membros opcionalmente substituído saturado mono ou dinitrogênio em que nenhum átomo de anel diferente de Y e Z é um heteroátomo, Y é C ou N, Z é C ou N, e pelo menos um de Y e Z é N, e desde que no caso de um anel heterociclico de 4 ou 5 membros, Y ou Z é C, e no caso de um heterociclo de dinitrogênio, Y e Z são separados por dois ou mais átomos de carbono de anel; V é C1-C6 alquilo, e e é zero ou 1, em que quando e é zero, então V é nulo e RI e R2 são diretamente ligados aos mesmos átomos de anel ou diferentes;

Rl é H, OH, -NH2, -COOH, C1-C6 alquilo, amidino, C1-C6 alquilo-substituido amidino, dihidroimidazol, Pro-amida, Pro, Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Lys, Arg, Orn, Ser, Thr, -CN, -C0NH2, -CONR'R", -NHCOR', -0R', ou -S02NR'R", em que R' e R" são independentemente H, ou C1-C8 alquilo, ou R' e R" são combinados para formar um anel de 4 a 8 membros cujo anel é opcionalmente substituído unicamente ou duplamente 29 com substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em C1-C6 alquilo, C1-C6 alcoxi, -OH, - Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, e -COOH, amidino; e R2 é H, amidino, unicamente ou duplamente C1-C6 alquilo-substituído amidino, -CN, -C0NH2, -CONR'R", -NHCOR', -S02NR'R", ou -COOH; desde que quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis ou sete membros e quando um deYeZéCeeé zero então RI não é -OH, e RI e R2 não são -H; desde que quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis membros, tanto Y quanto Z são N, e W é nulo, então a porção —(V)eRlR2 é anexada a um átomo de anel diferente de Z; e se e é zero, então RI e R2 não são -H; e enfim, desde que quando Xaa3 é D-Nle, então Xaa4 não pode ser (B) 2D-Arg; e quando Xaa3 é D-Leu ou (aMe)D-Leu, então Xaa4 não pode ser δ-(B)2α-(B')D-Orn.

Numa forma de realização, a presente invenção fornece uma amida peptídica sintética de fórmula I, em que XaalXaa2 é D-Phe-D-Phe, Xaa3 é D-Leu ou D-Nle e Xaa4 é escolhido de (B)2D-Arg, D-Lys, (B)2D-Har, ζ-(B)D-Lys, D-Dap, ε-(B)D-Lys, s-(B)2-D-Lys, D-Amf, amidino-D-Amf, y-(B)2D-Dbu e δ-(B)2a-(B')D-Orn. Num aspeto particular da forma de realização acima, Xaa4 é escolhidos de D-Lys, (B)2D-Har, ε-(B)D-Lys, e ε-(B)2-D-Lys.

Em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptídica sintética de fórmula I, em que W é nulo, Y é N e Z é C. Num aspeto particular da forma de realização acima, a porção de anel que contém Y e Z é um anel saturado de seis membros que compreende um heteroátomo de anel único.

Em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptídica sintética de fórmula I, em que Y e Z são N 30 e são os únicos heteroátomos de anel na porção de anel que contém Y e Z.

Em outra forma de realização, quando porção de anel que contém Y e Z é um anel saturado de seis membros que inclui dois heteroátomos de anel e W é nulo, então Z é um átomo de carbono.

Ainda em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, em que RI e R2 junto com zero, um ou dois átomos de anel da porção de anel que contém Y e Z compreendnuma porção de anel heterociclico monociclico ou biciclico de 4 a 9 membros. Num aspeto particular da forma de realização acima, RI e R2 junto com um átomo de anel da porção de anel que contém Y e Z compreendnuma porção de anel heterociclico de 4 a 8 membros que com a porção de anel que contém Y e Z de anel forma uma estrutura espiro e W é nulo.

Ainda em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, em que e é zero e RI e R2 são ligados diretamente ao mesmo átomo de carbono de anel.

Numa forma de realização adicional, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, em que RI é H, OH, -NH2, -COOH, -CH2C00H, C1-C3 alquilo, amidino, C1-C3 alquilo-substituído amidino, dihidroimidazol, D-Pro, D-Pro amida, ou -CONH2 e em que R2 é H, -COOH, ou C1-C3 alquilo. Em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, em que a porção: 31

lríV'VR2 é selecionada do grupo que consiste em:

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Ainda numa outra forma de realização, a invenção fornece i,a amida peptidica sintética de fórmula I em que a porção:

Não é uma porção de prolina, nnuma porção de prolina substituída, nem é uma porção de prolina em que RI ou R2 contém uma porção amida.

Ainda em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, em que quando W é nulo, a porção de anel que contém Y e Z de anel é um anel saturado de 5 membros com apenas um heteroátomo de anel 33 único, e é zero e RI ou R2 é anexado a um carbono de anel adjacente a Y, então RI é selecionado do grupo que consiste em -H, -OH, halo, -CF3, -NH2, C1-C6 alquilo, amidino, C1-C6 alquilo-substituído amidino, aril, Pro, Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Lys, Arg, Orn, Ser, Thr, CN, -S02R' , -NHCOR' , -0R' e -S02NR'R" e R2 é selecionado do grupo que consiste em -H, amidino, C1-C6 alquilo- substituído amidino unicamente ou duplamente, -CN, -NHCOR', e -S02NR'R".

Ainda em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I que tem uma EC50 inferior a cerca de 500 nM para um recetor opióide kapa. Num aspeto particular, a amida peptidica sintética pode ter uma EC50 inferior a cerca de 100 nM para um recetor opióide kapa. Num aspeto mais particular, a amida peptidica sintética pode ter uma EC50 inferior a cerca de 20 nM para um recetor opióide kapa. Num aspeto mais particular, a amida peptidica sintética pode ter uma EC50 inferior a cerca de 1 nM para um recetor opióide kapa. Os compostos das formas de realização anteriores podem ter uma EC50 que é pelo menos 10 vezes maior para um recetor opióide mu e delta que para um recetor opióide kapa, preferivelmente pelo menos 100 vezes maior e mais preferivelmente pelo menos 1.000 vezes maior (por exemplo, uma EC50 inferior a cerca de 1 nM para um recetor opióide kapa, e valores de EC50 superiores a cerca de 1.000 nM para um recetor opióide mu e um recetor opióide delta).

Ainda em outra forma de realização, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I que numa concentração eficaz exibe não mais que cerca de 50% de inibição de qualquer um de P450 CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 ou CYP 2D6 pela amida peptidica sintética numa concentração de 10 uM depois de 60 minutos de incubação com microssomas hepáticos humanos. 34

Numa forma de realização adicional, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I, que numa dose de cerca de 3 mg/kg em rato atinge uma concentração plasmática de pico da amida peptidica sintética que é pelo menos cerca de cinco vezes maior que a concentração de pico no cérebro. Num aspeto particular da forma de realização acima, a amida peptidica sintética tem uma ED50 para um efeito sedativo num ensaio de redução da locomoção num ratinho de pelo menos cerca de dez vezes que a ED50 da amida peptidica sintética para um efeito analgésico num ensaio de contorção num ratinho.

Numa forma de realização adicional, a invenção fornece uma amida peptidica sintética de fórmula I que tem pelo menos cerca de 50% da eficácia máxima em cerca de 3 horas após a administração da dose de cerca de 3 mg/kg da amida peptidica sintética num rato.

Numa forma de realização, a invenção fornece uma composição farmacêutica que inclui a amida peptidica sintética de fórmula I e um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.

Em outra forma de realização, a invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa num mamifero; o método inclui a administração ao mamifero de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma amida peptidica sintética de acordo com a fórmula I suficiente para tratar ou evitar a doença ou condição associada ao recetor opióide kapa.

Uma variedade de ensaios pode ser empregue para testar se as amidas peptídicas sintéticas da invenção exibem alta afinidade e seletividade para o recetor opióide kapa, longa 35 duração da bioatividade in vivo, e ausência de efeitos colaterais sobre o SNC. Ensaios do recetor são bem conhecidos na técnica e foram clonados recetores opióides kapa de várias espécies, assim como foram os recetores opióides mu e delta. Os recetores opióides kapa bem como recetores opióides mu e delta são sete recetores clássicos ligados à proteína G, que atravessam a transmembrana. Embora esses recetores clonados permitam o rastreamento fácil de um composto candidato particular, por exemplo, um peptídeo ou derivado de peptídeo, fontes naturais dos recetores opióides de mamífero são também úteis para o rastreamento, como é bem conhecido na técnica (Dooley CT e cols. Selective ligands for the mu, delta, and kappa opioid receptors identified from a single mixture based tetrapeptide positional scanning combinatorial library. J. Biol. Chem. 273:18848-56, 1998). Portanto, o rastreamento contra recetores opióides kapa e mu, seja de origem recombinante ou natural, pode ser realizado para determinar a seletividade das amidas peptídicas sintéticas da invenção para o recetor opióide kapa sobre o mu.

Numa forma de realização particular, as amidas peptídicas sintéticas da invenção são agonistas do recetor de opióide Kapa seletivo. A potência das amidas peptídicas sintéticas da invenção como agonistas para um recetor particular pode ser medida como uma concentração em que a metade do efeito máximo é atingida e expressa como um valor de EC50. A potência das amidas peptídicas sintéticas da invenção como agonistas opióides kapa, expressa como a percentagem de efeito máximo observável, pode ser determinada por vários métodos bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Endoh T e cols., 1999, Potent Antinociceptive Effects of TRK-820, a Novel k—Opioid Recetor Agonist, Life Sei. 65 (16) 1685-94; e Kumar V e 36 cols., Synthesis and Evaluation of Novel peripherally Restricted κ—Opioid Recetor Agonists, 2005 Bioorg Med Chem Letts 15: 1.091-1.095.

Exemplos de tais técnicas de ensaio para a determinação de valores de EC50 são fornecidos abaixo. Vários métodos padrão de ensaio para a caracterização de ligandos de opióide são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Ver, por exemplo, Waldhoer e cols., (2004) Ann. Rev. Biochem. 73:953-990, e Satoh & Minami (1995) Pharmac. Ther. 68(3):343-364 e referências aqui citadas.

Em certas formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção são agonistas do recetor de opióide kapa com uma EC50 inferior a cerca de 500 nM. Em outras formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas têm uma EC50 inferior a cerca de 100 nM como agonistas do recetor opióide kapa. Ainda em outras formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma EC50 inferior a cerca de 10 nM como agonistas do recetor opióide kapa. Em formas de realização particulares as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma EC50 inferior a cerca de 1,0 nM, inferior a cerca de 0,1 nM, ou inferior a cerca de 0,1 nM, ou ainda inferior a cerca de 0,01 nM como agonistas do recetor opióide kapa.

Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção são altamente seletivas para recetores opióides kapa sobre recetores opióides mu. Em certas formas de realização as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm valores de EC50 para o recetor opióide mu que são pelo menos cerca de cem vezes maiores que os valores correspondentes de EC50 para o recetor 37 opióide kapa. Em formas de realização particulares, as amidas peptídicas sintéticas da invenção têm valores de EC50 para o recetor opióide mu que são pelo menos cerca de mil vezes maiores que os valores correspondentes de EC50 para o recetor opióide kapa. Alternativamente, a seletividade das amidas peptidicas sintéticas da invenção pode ser expressa como uma maior EC50 para um recetor opióide mu do que para um recetor opióide kapa. Portanto, em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm valores de EC50 superiores a cerca de 10 μΜ para o recetor opióide mu e valores de EC50 inferior a cerca de 10 nM, e em outras formas de realização inferior a cerca de 1,0 nM, ou ainda inferior a cerca de 0,01 nM para o recetor opióide kapa. Em outra forma de realização, a amida peptídica sintética particular pode ter uma EC50 inferior a cerca de 1 nM para um recetor opióide kapa e uma EC50 superior a cerca de 1.000 nM para um recetor opióide mu, ou para um recetor opióide delta.

Uma outra propriedade das amidas peptidicas sintéticas da invenção é sua propriedade caracteristica de baixa inibição das isozimas de citocromo P450. As isozimas de citocromo P450 constituem uma grande superfamília de proteínas heme-tiolato responsáveis pela inativação oxidativa metabólica de vários agentes terapêuticos e outros compostos bioativos. Comumente, elas agem como oxidases terminais em cadeias de transferência de eletrões multicomponentes, também referidas como sistemas de mono-oxigenase que contêm citocromo P450.

Mais de cinquenta diferentes isozimas de citocromo P450 foram identificadas e foram classificadas em famílias, agrupadas por relação genética, tal como avaliado por homologia de sequência dos ácidos nucleicos. Mais abundantes entre as isozimas de citocromo P450 em células 38 humanas são as isozimas 1A2 e 3A4, embora as isozimas 2B6, 2C9, 2C19, 2D6, e 2E1 também contribuam significativamente para a inativação oxidativa dos agentes terapêuticos administrados. Embora a inibição das isozimas do citocromo P450 possa ser útil no prolongamento de tempo após a administração in vivo durante a qual uma concentração eficaz das amidas peptidicas sintéticas da invenção é mantida, ela também prolonga a persistência de qualquer composto terapêutico co-administrado que é submetido à oxidação pelo citocromo P450. Esse aumento na persistência pode fazer com que o agente terapêutico co-administrado persista além do periodo que é ótimo para a terapia, ou pode fazer a concentração in vivo exceder os niveis desejados ou os niveis tolerados. Tais aumentos na persistência e/ou aumentos na concentração são de dificil quantificação precisa e são preferivelmente evitados. Os agentes terapêuticos que mostram pouca ou nenhuma inibição da atividade das isozimas do citocromo P450 não têm esse problema potencial e podem ser mais co-administrados de forma mais segura com outros agentes terapêuticos sem o risco de afetar a taxa de inativação do composto terapêutico co-administrado pelas isozimas de citocromo P450 . sintéticas numa

As formas de realização particulares das amidas peptidicas sintéticas da invenção mostram baixa inibição das isozimas de citocromo P450 em concentrações terapêuticas das amidas peptidicas sintéticas, embora outras não mostrem essencialmente qualquer inibição das isozimas de citocromo P450 em concentrações terapêuticas. Em algumas formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas numa concentração de 10 μΜ mostram inferior a cerca de 50% de inibição de isozimas de citocromo P450 CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 ou CYP2D6. Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas _ ' - 1 '1 ~ ~ 39 concentração de 10 μΜ mostram menos de cerca de 20% de inibição de qualquer uma dessas isozimas do citocromo P450. Em formas de realização particulares, as amidas peptídicas sintéticas numa concentração de 10 μΜ mostram menos de cerca de 10% de inibição de qualquer uma dessas isozimas do citocromo P450.

Em outra forma de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção numa concentração eficaz exibem não mais do que cerca de 50% de inibição de qualquer um de P450 CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 ou CYP 2D6 pela amida peptídica sintética numa concentração de 10 μΜ após 60 minutos de incubação com microssomas hepáticos humanos.

As amidas peptidicas sintéticas da invenção quando administradas a um mamífero ou um paciente humano numa concentração terapeuticamente eficaz exibem baixa ou essencialmente nenhuma penetração através da barreira hematoencefálica. Recetores opióides kapa (aqui referidos como recetores kapa) são distribuídos em tecidos periféricos incluindo a pele e tecidos somáticos, bem como as vísceras em humanos e outros mamíferos. Os recetores kapa são também encontrados no cérebro. A ativação dos recetores kapa em tecidos periféricos causa a supressão da dor e respostas inflamatórias, embora a ativação dos recetores kapa no cérebro cause efeitos sedativos e também possa levar a disforia severa e alucinações. Em certas formas de realização, a amida peptídica sintética da invenção quando administrada em concentrações terapeuticamente eficazes exibe essencialmente nenhuma penetração através da barreira hematoencefálica e portanto minimiza ou até mesmo evita completamente os efeitos sedativos, alucinogénicos de vários outros agonistas kapa que mostram alguma penetração através da barreira hematoencefálica. 40

Uma medida útil da extensão em que as amidas peptidicas sintéticas da invenção cruzam a barreira hematoencefálica é a proporção da concentração plasmática de pico para a concentração no tecido cerebral. Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção quando administradas numa dose de cerca de 3 mg/kg, exibem concentrações pelo menos cerca de cinco vezes menores da amida peptidica sintética no cérebro, do que no plasma, no momento em que a concentração plasmática de pico é atingida.

Uma outra medida segura da extensão em que as amidas peptidicas sintéticas da invenção cruzam a barreira hematoencefálica é a proporção da dose necessária para atingir um efeito sedativo e a dose necessária para atingir um efeito analgésico. Os efeitos analgésicos e sedativos da estimulação do recetor kapa pelos agonistas do recetor kapa podem ser medidos por ensaios padrão bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica.

Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma ED50 para um efeito sedativo que é pelo menos cerca de dez vezes a ED50 para um efeito analgésico. Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma ED50 para um efeito sedativo que é pelo menos cerca de trinta vezes a ED50 para um efeito analgésico. Ainda em outras formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma ED50 para um efeito sedativo que é pelo menos cerca de cinquenta vezes a ED50 para um efeito analgésico.

Em outra forma de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma ED50 para um efeito sedativo num ensaio de redução da locomoção num ratinho pelo menos 41 cerca de dez vezes a ED50 da amida peptídica sintética para um efeito analgésico num ensaio de contorção num ratinho.

Um outro indicador útil da extensão em que as amidas peptidicas sintéticas da invenção cruzam a barreira hematoencefálica é fornecido pelos valores de permeabilidade em membrana das amidas peptidicas sintéticas numa célula humana ou outra célula de mamifero quando libertada numa concentração terapeuticamente relevante. Em certas formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção em concentrações terapeuticamente relevantes exibem baixa ou essencialmente nenhuma capacidade de penetrar uma monocamada de células humanas adequadamente cultivadas ou outras células de mamifero. Esse parâmetro de permeabilidade pode ser expresso como uma permeabilidade aparente, Papp, que representa a permeabilidade particular das monocamadas de células a um composto de interesse. Qualquer monocamada de células de mamifero adequadamente cultivável pode ser usada para determinar sua permeabilidade para um composto de interesse particular, embora certas linhas de células sejam frequentemente usadas para esse objetivo. Por exemplo, a linha de células Caco-2 é um adenocarcinoma de cólon humano que pode ser usada como um sistema de teste de cultura em monocamada para a determinação da permeabilidade da membrana aos compostos da invenção. Em certas formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma Papp inferior a cerca de IO”6 cm/seg. Em outras certas formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm uma Papp inferior a cerca de 10”7 cm/seg.

Numa forma de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção numa dose de cerca de 3 mg/kg em rato atinge uma concentração plasmática de pico da amida peptídica sintética e exibe uma concentração pelo menos 42 cerca de cinco vezes menor no cérebro que a referida concentração plasmática de pico.

Em outra forma de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção têm pelo menos cerca de 50% da eficácia máxima em cerca de 3 horas após a administração da dose de cerca de 3 mg/kg da amida peptidica sintética num rato.

Numa forma de realização a amida peptidica sintética da invenção exibe um tempo de ação de longa duração num mamifero, como um humano. Num aspeto, a amida peptidica sintética tem uma duração de ação que é pelo menos cerca de 50% da eficácia máxima em 3 horas após a administração de 0,1 mg/kg da amida peptidica sintética. Em outro aspeto a amida peptidica sintética tem uma duração de ação que é pelo menos cerca de 75% da eficácia máxima, 3 horas após a administração de 0,1 mg/kg da amida peptidica sintética. Num aspeto particular a amida peptidica sintética tem uma duração de ação que é pelo menos cerca de 90% da eficácia máxima 3 horas após a administração de 0,1 mg/kg da amida peptidica sintética. Num aspeto específico, a amida peptidica sintética tem uma duração de ação que é pelo menos cerca de 95% da eficácia máxima 3 horas após a administração de 0,1 mg/kg da amida peptidica sintética.

Em outra forma de realização, a invenção fornece uma composição farmacêutica que inclui uma amida peptidica sintética de acordo com qualquer uma das formas de realização acima e um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. A invenção fornece métodos, composições, ou formas de dosagem que empregam e/ou contêm amidas peptidicas sintéticas da invenção que são seletivas para o recetor opióide kapa. Em formas de realização particulares, as amidas peptidicas sintéticas da invenção 43 exibem uma forte afinidade pelo recetor opióide kapa e têm uma alta potência como agonistas do recetor opióide kapa.

Um pró-fármaco de um composto como as amidas peptidicas sintéticas da invenção inclui derivados farmaceuticamente aceitáveis que, após a administração, podem converter-se através do metabolismo ou de outro processo numa forma biologicamente ativa do composto. São particularmente desejáveis os pró-fármacos em que o pró-fármaco tem propriedades mais favoráveis que o composto ativo com relação à biodisponibilidade, estabilidade ou adequação para uma formulação em particular.

Como aqui usado, o termo doença, condição ou distúrbio associado ao recetor opióide kapa é qualquer doença, condição ou distúrbio que é evitável ou tratável pela ativação de um recetor opióide kapa. Num aspeto, as amidas peptidicas sintéticas da invenção são agonistas do recetor opióide kapa que ativam o recetor opióide kapa. Em algumas formas de realização, uma dose particular e a via de administração da amida peptidica sintética da invenção podem ser escolhidas por um clinico para evitar completamente ou curar a doença, condição ou distúrbio. Em outras formas de realização uma dose particular e a via de administração da amida peptidica sintética da invenção escolhidas pelo clinico melhoram ou reduzem um ou mais sintomas da doença, condição ou distúrbio.

Como aqui usado, o termo "quantidade eficaz" ou "quantidade suficiente" da amida peptidica sintética da invenção refere-se a uma quantidade do composto como aqui descrito que pode ser terapeuticamente eficaz para inibir, prevenir ou tratar um sintoma de uma doença, distúrbio, condição particular, ou efeitos colaterais. Como aqui usado, uma "dose reduzida" de um composto analgésico do 44 agonista opióide mu refere-se a uma dose que quando usada em combinação com um agonista de opióide kapa, como a amida peptidica sintética da invenção, é menor do que seria comumente fornecida a um paciente em particular, para o objetivo de redução de um ou mais efeitos colaterais do composto. A redução da dose pode ser escolhida de modo que a diminuição no efeito analgésico ou outro efeito terapêutico do composto seja um acordo aceitável tendo em vista a redução dos efeitos colaterais, em que a referida diminuição no referido efeito analgésico ou outro efeito terapêutico do agonista opióide mu seja pelo menos parcial, e mais preferivelmente total, compensada pelo efeito analgésico ou outro efeito terapêutico da amida peptidica sintética da invenção. A co-administração de um composto analgésico do agonista opióide mu com a amida peptidica sintética da invenção que age como um agonista opióide kapa também permite a incorporação de uma dose reduzida da amida peptidica sintética e/ou o composto analgésico de agonista opióide mu para atingir o mesmo efeito terapêutico como uma maior dose da amida peptidica sintética ou o composto analgésico de agonista opióide um, se administrado isoladamente.

Como aqui usado, o termo "farmaceuticamente aceitável" refere-se a compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito da avaliação clinica, adequados para contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outras complicações severas, proporcionais com uma proporção risco-beneficio que é razoável para a condição médica a ser tratada.

Como aqui usado, o termo "unidade de dosagem" refere-se a i, a unidade fisicamente distinta apropriada como dosagens unitárias para um individual particular ou 45 condição a ser tratada. Cada unidade pode conter uma quantidade predeterminada de composto ativo de amida peptidica sintética calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, opcionalmente em associação com um veiculo farmacêutico. A especificação para as formas de dosagem unitárias pode ser estipulada pelas (a) caracteristicas únicas do composto ou compostos ativos, e o efeito terapêutico particular a ser atingido, e (b) limitações inerentes à técnica da composição de tal composto ou compostos ativos. A unidade de dosagem é frequentemente expressa como peso do composto por unidade de peso corporal, por exemplo, em miligramas do composto por quilograma de peso corporal do individuo ou paciente (mg/kg). Alternativamente, a dosagem pode ser expressa como a quantidade do composto por unidade de peso corporal, por unidade de tempo, (mg/kg/dia) num regime de dosagem particular. Em alternativas adicionais, a dosagem pode ser expressa como a quantidade do composto por unidade de área de superfície corporal (mg/m2) ou por unidade de área de superfície corporal por unidade de tempo (mg/m2/dia) . Para formulações tópicas, a dosagem pode ser expressa numa maneira que é convencional para aquela formulação, por exemplo, 1,27 centímetros de pomada aplicada no olho, em que a concentração do composto na formulação é expressa como uma percentagem da formulação.

Como aqui usado, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a derivados dos compostos em que o composto parente é modificado ao fazer os seus sais ácidos ou básicos. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação, sais minerais ou de ácido orgânico de resíduos básicos como aminas, sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos, como ácidos carboxílicos e outros. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amónio 46 quaternário do composto parente formado, por exemplo, de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem os derivados de ácidos inorgânicos tais como o ácido clorídrico, hidrobrómico, sulfúrico, sulfâmico, fosfórico, nítrico e outros; e os sais preparados a partir de ácidos orgânicos tais como o ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, lático, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamóico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzóico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzóico, fumárico, toluenossulfónico, metanossulfónico, etano dissulfónico, oxálico, isetiónico e outros. Esses sais fisiologicamente aceitáveis são preparados por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, por dissolução das bases de amina livres com um excesso do ácido em álcool aquoso, ou neutralização de um ácido carboxílico livre com uma base de metal alcalino como um hidróxido, ou com uma amina. Portanto, um sal farmaceuticamente aceitável da amida peptídica sintética pode ser formado a partir de qualquer amida peptídica que tenha grupos funcionais ácidos, básicos ou ambos. Por exemplo, uma amida peptídica que tem um grupo e ácido carboxílico pode, na presença de uma base farmaceuticamente adequada, formar um anião de carboxilato emparelhado com um catião como um catião de sódio ou potássio. De modo similar, uma amida peptídica que tem um grupo funcional de amina pode, na presença de um ácido farmaceuticamente adequado como o HC1, formar um sal.

Um exemplo de um solvato farmaceuticamente aceitável da amida peptídica sintética é uma combinação de uma amida peptídica com moléculas de solvente que geram um complexo de tais moléculas de solvente em associação com a amida peptídica. Hidratos particularmente adequados dos compostos são hidratos tais que têm atividade comparável ou hidratos 47 que são convertidos de volta ao composto ativo após a administração. Um N-óxido farmaceuticamente aceitável da amida peptídica sintética que contém uma amina é um composto em que o átomo de azoto da amina é ligado a um átomo de oxigénio.

Uma forma cristalina, cristalina isomórfica ou amorfa farmaceuticamente aceitável da amida peptídica sintética da invenção pode ser qualquer forma cristalina ou não cristalina de uma forma ácida, básica, zwiteriónica, de sal, hidrato farmaceuticamente aceitável ou qualquer outra forma compatível adequadamente estável, fisiologicamente compatível da amida peptídica sintética de acordo com a invenção.

As amidas peptídicas sintéticas da invenção podem ser incorporadas em composições farmacêuticas. As composições podem incluir uma quantidade eficaz da amida peptídica sintética num diluente, excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Excipientes, veículos e/ou diluentes convencionais para uso nas composições farmacêuticas são geralmente inertes e constituem a maior parte da preparação.

Numa forma de realização particular, a amida peptídica sintética é um agonista do recetor opióide kapa. Em outra forma de realização, a amida peptídica sintética é um agonista do recetor de opióide seletivo kapa. 0 sítio alvo pode ser um recetor kapa no paciente ou pessoa que necessita de tal tratamento ou prevenção. Certos agonistas do recetor opióide kapa de amidas peptídicas sintéticas da invenção são de ação periférica e mostram pouco ou nenhum efeito sobre o SNC em doses terapeuticamente eficazes. 48 0 excipiente farmacêutico ou veículo pode ser qualquer substância compatível, não tóxica, adequada como um veículo para libertação da amida peptídica sintética da invenção. Excipientes ou veículos incluem, sem limitação, água estéril (preferivelmente isenta de agente pirogénico), solução salina, solução salina tamponada por fosfato (PBS), água/etanol, água/glicerol, água/sorbitol, água/polietileno glicol, propilenoglicol, álcool cetilstearílico, carboximetilcelulose, amido de milho, lactose, glicose, celulose microcristalina, estearato de magnésio, polivinilpirrolidona (PVP), ácido cítrico, ácido tartárico, óleos, substâncias gordurosas, ceras ou misturas adequadas de qualquer um dos anteriores. A composição farmacêutica de acordo com a invenção pode ser formulada como uma forma de dosagem líquida, semi-sólida ou sólida. Por exemplo, a composição farmacêutica pode estar na forma de uma solução para injeção, gotas, xarope, vaporizador, suspensão, comprimido, emplastro, cápsula, penso, supositório, pomada, creme, loção, gel, emulsão, aerossol ou numa forma particulada, como pastilhas ou grânulos, opcionalmente prensada em comprimidos ou pastilhas, embalada em cápsulas ou suspensa num líquido. Os comprimidos podem conter ligandos, lubrificantes, diluentes, agentes corantes, agentes aromatizantes, agentes umectantes e podem ter revestimento entérico para sobreviver ao ambiente ácido do estômago e dissolver nas condições mais alcalinas do lúmen intestinal. Alternativamente, os comprimidos podem ser revestidos com açúcar ou revestidos com uma película hidrossolúvel. Adjuvantes, agentes de tamponamento, agentes de dispersão, farmaceuticamente aceitáveis e outros, também podem ser incorporados nas composições farmacêuticas. 49

Os ligandos incluem, por exemplo, amido, mucilagem, gelatina e sacarose. Lubrificantes incluem talco, licopódio, estearato de magnésio e cálcio/ácido esteárico. Diluentes incluem lactose, sacarose, manitol, sal, amido e caolino. Agentes umectantes incluem propilenoglicol e monoestearato de sorbitano.

Como aqui usado, o termo aplicação ou administração local refere-se à administração da composição farmacêutica de acordo com a invenção no local, como uma articulação inflamada, que exibe a condição dolorosa e/ou inflamada. Tal aplicação local inclui a aplicação intra-articular, por meio de injeção, aplicação via catéter ou libertação como parte de um dispositivo biocompativel. Portanto, a aplicação local refere-se à aplicação numa área interna distinta do corpo, como, por exemplo, uma articulação, área de tecido mole (como músculo, tendão, ligamentos, intra-ocular ou outras áreas internas gordas), ou outra área interna do corpo. Em particular, como aqui usado, a aplicação local refere-se à aplicação que não fornece libertação sistémica e/ou administração sistémica dos agentes ativos nas presentes composições. Também, como aqui usado, aplicação local deve referir-se a aplicações em áreas distintas do corpo, ou seja, diferente das várias cavidades corporais grandes (como, por exemplo, as cavidades peritoneais e/ou pleurais).

Como aqui usado, o termo aplicação tópica refere-se à aplicação na superfície do corpo, como a pele, olhos, mucosa e lábios, que pode ser em qualquer parte do corpo, incluindo, sem limitação, a epiderme, qualquer outra derme, ou qualquer outro tecido corporal. A administração ou aplicação tópica significa o contato direto da composição farmacêutica de acordo com a invenção com o tecido, tal como pele ou membrana, particularmente a córnea, ou mucosa 50 oral, vaginal ou ano-retal. Portanto, para os objetivos dessa, a aplicação tópica refere-se à aplicação no tecido de uma superfície corporal acessível, como, por exemplo, a pele (o tegumento externo ou revestimento) e a mucosa (as superfícies que produzem, secretam e/ou contêm muco). Em particular, a aplicação tópica refere-se a aplicações que fornecem pouca ou substancialmente nenhuma libertação sistémica dos compostos ativos nas presentes composições. Os exemplos de superfícies mucosas incluem as superfícies mucosas dos olhos, boca (como os lábios, língua, gengivas, bochechas, área sublingual e do céu da boca), laringe, esófago, brônquio, traqueia, passagens nasais, vagina e reto/ânus.

Para administração oral, um ingrediente ativo pode ser administrado em formas de dosagem sólidas, tais como cápsulas, comprimidos, e pós, ou em formas de dosagem líquidas, como elixires, xaropes, e suspensões. Componentes ativos podem ser encapsulados em cápsulas de gelatina junto com ingredientes inativos e veículos em pó, como glicose, lactose, sacarose, manitol, amido, celulose ou derivados da celulose, estearato de magnésio, ácido esteárico, sacarina sódica, talco, carbonato de magnésio e outros. Exemplos de ingredientes inativos adicionais que podem ser adicionados para fornecer cor, sabor, estabilidade, capacidade de tamponamento, dispersão desejáveis ou outras características desejáveis conhecidas são óxido de ferro vermelho, sílica gel, laurilssulfato de sódio, dióxido de titânio, tinta branca comestível e outros. Diluentes similares podem ser usados para a confeção de comprimidos prensados. Tanto os comprimidos como as cápsulas podem ser fabricados como produtos de libertação sustentada para fornecer uma libertação contínua da medicação ao longo de um período horário. Os comprimidos prensados podem ser revestidos com açúcar ou revestidos com película para 51 mascarar qualquer sabor desagradável e proteqer o comprimido da atmosfera, ou revestimento entérico para desintegração seletiva no trato gastrointestinal. Formas de dosagem liquidas para administração oral podem conter corantes e aromatizantes para aumentar a aceitação pelo paciente. Para facilitar a estabilidade e absorção do fármaco, peptídeos da invenção podem ser libertados a partir de uma cápsula depois de passar através do ambiente proteolítico hostil do estômago. Métodos para melhorar a estabilidade e absorção do peptideo após administração oral são bem conhecidos na técnica (por exemplo, Mahato RI. Emerging trends in oral delivery of peptide and protein drugs. Criticai Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems. 20:153-214, 2003).

Formas de dosagem como pastilhas, comprimidos mastigáveis e goma de mascar permite uma ação terapêutica mais rápida quando comparada com a de formas de dosagem per-orais dos compostos da amida peptidica sintética da invenção que têm absorção bucal significativa. Formulações em goma de mascar são preparações sólidas, de dose única com uma base que consiste principalmente de goma, que devem ser mastigadas mas não engolidas, e contêm um ou mais compostos da invenção que são libertados por mastigação e devem ser usados para tratamento local da dor e inflamação da boca ou libertação sistémica após absorção através da mucosa bucal. Ver, por exemplo, a Patente U.S. 6.322.828 para Athanikar e Gubler intitulada: Process for manufacturing a pharmaceutical chewing gum.

Para administração nasal, os agonistas do recetor de opióide Kapa perifericamente seletivos podem ser formulados como aerossóis. O termo "aerossol" inclui qualquer fase suspensa em gás dos compostos da atual invenção que é capaz 52 de ser inalada para os bronquíolos ou passagens nasais. Especificamente, o aerossol inclui uma suspensão em gás das goticulas dos compostos da atual invenção, que pode ser produzida num inalador de dose medida ou nebulizador, ou num vaporizador. 0 aerossol também inclui uma composição de pó seco de um composto da atual invenção suspensa no ar ou outro gás de veiculo, que pode ser libertada por insuflação a partir de um dispositivo inalador, por exemplo. Ver, Ganderton & Jones, Drug Delivery to the Respiratory Tract, Ellis Horwood (1987); Gonda (1990) Criticai Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 6:273-313; e Raeburn e cols. (1992) J. Pharmacol. Toxicol. Methods 27:143-159.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser preparadas numa formulação adequada para libertação sistémica, como, por exemplo, por libertação intravenosa, subcutânea, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, transdérmica, intravaginal, intra-retal, intrapulmonar ou oral. Alternativamente, as composições farmacêuticas da invenção podem ser adequadamente formuladas para libertação local, como, por exemplo, para libertação tópica, ou iontoforética, ou para libertação transdérmica por um emplastro revestido, difundido ou impregnado com a formulação, e aplicação local às articulações, como por injeção intra-articular.

As preparações para administração parentérica incluem soluções estéreis prontas para injeção, produtos secos solúveis estéreis prontos para serem combinados com um solvente logo antes do uso, incluindo comprimidos hipodérmicos, suspensões estéreis prontas para injeção, produtos secos insolúveis estéreis prontos para serem combinados com um veiculo logo antes do uso e emulsões estéreis. As soluções podem ser aquosas ou não aquosas, e assim formuladas para libertação por injeção, infusão, ou 53 com o uso de bombas implantáveis. Para administração intravenosa, subcutânea e intramuscular, formulações úteis da invenção incluem preparações de microcápsulas com propriedades de libertação controlada (R. Pwar e cols. Protein and peptide parenteral controlled delivery. Expert Opin Biol Ther. 4(8):1203-12, 2004) ou encapsulação em lipossomas, com uma forma exemplar sendo lipossomas revestidos com polietileno, que são conhecidos na técnica por ter um periodo prolongado de circulação na vasculatura (por exemplo Koppal, T. "Drug delivery technologies are right on target", Drug Discov. Dev. 6, 49-50, 2003).

Para administração oftálmica, a presente invenção fornece um método de tratamento do glaucoma ou dor oftálmica e inflamação, que compreende a administração ao olho do paciente em necessidade de tratamento de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma amida peptidica sintética da invenção. A amida peptidica sintética pode ser administrada por via tópica com um veiculo farmacêutico compatível com o olho ou por via não sistémica com o uso de uma lente de contato ou implante intra-ocular que pode conter opcionalmente polímeros que proporcionam a libertação sustentada da amida peptidica sintética. Tais veiculos farmacêuticos compatíveis com o olho podem incluir adjuvantes, conservantes antimicrobianos, tensioativos e agentes de viscosidade etc. É conhecido na técnica que altas concentrações de vários compostos são irritantes para o olho e baixas concentrações são menos irritantes; portanto, a formulação é frequentemente desenhada para incluir as menores concentrações eficazes do composto ativo, conservante, tensioativo e/ou agentes de viscosidade, o referido agente de viscosidade tendo preferivelmente uma alta tensão de superfície para reduzir a irritação do olho embora aumente a retenção de soluções oftálmicas na superfície do olho. Tal libertação controlada 54 das amidas peptídicas sintéticas da invenção pode durar desde 6 meses a um ano para implantes, ou por periodos mais curtos (3-14 dias) para lentes de contato. Tais implantes podem ser bombas osmóticas, matrizes biodegradáveis, ou dispositivos de libertação sustentada intra-oculares. Tais composições tópicas podem incluir uma solução salina tamponada com ou sem lipossomas.

Soluções poliméricas aquosas, suspensões aquosas, pomadas e géis podem ser usados para formulações tópicas das amidas peptidicas sintéticas da invenção para aplicações oculares. As formulações aquosas também podem conter lipossomas para criar um reservatório da amida peptidica sintética. Algumas dessas formulações tópicas são géis que aumentam a retenção pré-corneana sem o inconveniente nem a deterioração da visão associada a pomadas. 0 veiculo farmacêutico compatível com o olho também pode incluir um polímero sintético biodegradável. Composições de microesferas biodegradáveis aprovadas para uso humano incluem polilactidas: ácido poli(lático), ácido poli(glicólico) e ácido poli(lático-coglicólico). Formulações biodegradáveis adicionais incluem, mas não são limitadas a: poli(anidrido co-imida), ácido poli(lático-glicólico), polietil-2-cianoacrilato, policaprolactona, poli-hidroxibutirato valerato, poliortoéster e polietileno-óxido/polibutileno teraftalato. Implante ou injeção intra-ocular de composições de libertação sustentada que incluem a amida peptidica sintética da invenção podem fornecer controle de longa duração (que varia de meses a anos) de pressão intra-ocular, e dessa forma evitando ou reduzindo a necessidade por preparações tópicas. Os métodos úteis para a formulação e libertação de medicações oftálmicas são divulgados na Patente U.S. 7.122.579 para Schwartz e cols., e em U.S. 7.105.512 para Morizono e cols.. Métodos para a formulação de medicações oftálmicas em lentes de contato 55 são divulgados por Gulsen and Chauhan, Ophthalmic drug delivery through contact lenses. Investigative Ophthalmology and Visual Science, (2004) 45:2.342-2.347.

As preparações para libertação transdérmica são incorporadas num dispositivo adequado para a referida libertação, o referido dispositivo utilizando, por exemplo, iontoforese (Kalia YN e cols. Iontophoretic Drug delivery. Adv Drug Deliv Rev. 56:619-58, 2004) ou uma superfície de penetração na derme (Prausnitz MR. Microneedles for Transdermal Drug Delivery. Adv Drug Deliv Rev. 56:581-7, 2004), conhecidos na técnica como sendo úteis para melhorar a libertação transdérmica de fármacos. Um dispositivo de eletrotransporte e seus métodos de operação são divulgados na Patente U.S. 6.718.201. Métodos para o uso de iontoforese para promover a libertação transdérmica de peptídeos são divulgados na Patente U.S. 6.313.092 e Patente U.S. 6.743.432.

Como aqui usados os termos "eletrotransporte", "iontoforese", e "iontoforético" referem-se à libertação através de uma superfície corporal (por exemplo, pele ou mucosa) de um ou mais compostos farmaceuticamente ativos por meio de uma força eletromotora aplicada a um reservatório que contém o agente. O composto pode ser libertado por eletromigração, eletroporação, eletro-osmose ou qualquer sua combinação. A eletro-osmose também tem sido referida como eletro-hidrocinese, eletroconvecção e osmose eletricamente induzida. Em geral, a eletro-osmose de um composto num tecido resulta da migração de solvente em que o composto está contido, como um resultado da aplicação de força eletromotora ao reservatório da espécie terapêutica, como, por exemplo, o fluxo de solvente induzido por eletromigração de outras espécies iónicas. Durante o 56 processo de eletrotransporte, certas modificações ou alterações da pele podem ocorrer, como a formação de poros transitoriamente existentes na pele, também referidos como "eletroporação". Qualquer transporte eletricamente assistido das espécies aumentado por modificações ou alterações às superfícies corporais (por exemplo, formação de poros na pele) são também incluídos no termo "eletrotransporte" como aqui usado. Portanto, como aqui usado, aplicado aos compostos da atual invenção, os termos "eletrotransporte", "iontoforese" e "iontoforético" referem-se a (1) libertação de agentes carregados por eletromigração, (2) libertação de agentes não carregados pelo processo de eletro-osmose, (3) libertação dos agentes carregados ou não carregados por eletroporação, (4) libertação dos agentes carregados pelos processos combinados de eletromigração e eletro-osmose, e/ou (5) a libertação de uma mistura de agentes carregados ou não carregados pelos processos combinados de eletromigração e eletro-osmose. Dispositivos de eletrotransporte geralmente empregam dois elétrodos, ambos posicionados em contato elétrico próximo com alguma porção da pele do corpo. Um elétrodo, chamado o elétrodo ativo ou doador, é o elétrodo do qual o agente terapêutico é libertado para o corpo. 0 outro elétrodo, chamado o elétrodo contra ou de retorno, serve para fechar o circuito elétrico no corpo. Junto com a pele do paciente, o circuito é completado por conexão dos elétrodos a uma fonte de energia elétrica, por exemplo, uma bateria, e comumente a um sistema de circuitos capaz de controlar a corrente que passa através do dispositivo.

Dependendo da carga elétrica do composto a ser libertado por via transdérmica, o ânodo ou cátodo pode ser o elétrodo ativo ou doador. Assim, se o composto a ser transportado for positivamente carregado, por exemplo, o composto exemplificado no Exemplo 1 nessa, então o elétrodo 57 positivo (o ânodo) será o elétrodo ativo e o elétrodo negativo (o cátodo) servirá como o elétrodo contra, completando o circuito. No entanto, se o composto a ser libertado for negativamente carregado, então o elétrodo catódico será o elétrodo ativo e o elétrodo anódico será o elétrodo contra. Os dispositivos de eletrotransporte adicionalmente requerem um reservatório ou fonte do agente terapêutico que será libertado no corpo. Tais reservatórios de fármacos são ligados ao ânodo ou ao cátodo do dispositivo de eletrotransporte para fornecer uma fonte fixa ou renovável de uma ou mais espécies ou agentes desejados. Cada conjunto de elétrodo compreende um elétrodo eletricamente condutor em relação à transmissão de iões com um reservatório liquido ionicamente condutor que em uso é colocado em contato com a pele do paciente. Reservatórios de gel como aqueles descritos em Webster (Patente U.S. 4.383.52 9) são uma forma de reservatório uma vez que os geis hidratados são de mais fácil manuseio e manufatura que os recipientes preenchidos com liquido. A água é um solvente liquido que pode ser usado em tais reservatórios, em parte porque os sais dos compostos peptídicos da invenção são hidrossolúveis e em parte porque a água é não irritante para a pele, assim permitindo um contato prolongado entre o reservatório de hidrogel e a pele. Para o eletrotransporte, os peptídeos sintéticos da invenção podem ser formulados com intensificadores de fluxo como tensioativos iónicos ou co-solventes diferentes de água (Ver, por exemplo, Patente U.S. 4.722.726 e Pedido de Patente Europeia 278.473, respetivamente). Alternativamente, a camada externa (ou seja, o estrato córneo) da pele pode ser mecanicamente rompida antes da libertação do eletrotransporte através dela, por exemplo, como descrito na Patente U.S. 5.250.023. 58

As amidas peptídicas sintéticas periféricas que são bem adequadas para o eletrotransporte podem ser selecionadas por medição de seu fluxo de eletrotransporte através da superfície corporal (por exemplo, a pele ou mucosa), por exemplo, quando comparada com um peptídeo de teste padronizado com caracteristicas de fluxo de eletrotransporte conhecidas, por exemplo a hormona de libertação de tireotrofina (R. Burnette e cols. J. Pharm. Sei. (1986) 75:738) ou vasopressina (Nair e cols. Pharmacol Res. 48:175-82, 2003). O fluxo de eletrotransporte transdérmico pode ser determinado com o uso de inúmeros métodos in vivo ou in vitro bem conhecidos na técnica. Os métodos in vitro incluem a fixação de um pedaço de pele de um mamifero adequado (por exemplo, pele de cadáver humano) entre os compartimentos doador e recetor de uma célula de fluxo de eletrotransporte, com o lado do estrato córneo do pedaço de pele em contato com o compartimento doador. Uma solução liquida ou gel que contém o fármaco a ser libertado é colocada em contato com o estrato córneo, e uma corrente elétrica é aplicada aos elétrodos, um elétrodo em cada compartimento. O fluxo transdérmico é calculado por amostragem da quantidade de fármaco no compartimento recetor. Dois modelos bem-sucedidos usados para otimizar a libertação de fármaco de eletrotransporte transdérmico são o modelo de retalho de pele de porco isolado (Heit MC e cols. Transdermal iontophoretic peptide delivery: in vitro and in vivo studies with luteinizing hormone releasing hormone. J. Pharm. Sei. 82:240-243, 1993), e o uso de pele sem pelos isolada de roedores sem pelos ou porquinhos da índia, por exemplo. Ver, Hadzija BW e cols. Effect of freezing on iontophoretic transport through hairless rat skin. J. Pharm. Pharmacol. 44, 387-390, 1992. Compostos da invenção para libertação iontoforética transdérmica podem 59 ter um, ou tipicamente, dois azotos carregados, para facilitar sua libertação.

Outros dispositivos de libertação transdérmica úteis empregam a libertação de alta velocidade sob pressão para atingir a penetração na pele sem o uso de uma agulha. A libertação transdérmica pode ser aumentada, como é conhecida na técnica, pelo uso de intensificadores quimicos, algumas vezes referidos na técnica como "intensificadores de permeação", ou seja, compostos que são administrados juntamente com o fármaco (ou em alguns casos usados para pré-tratar a pele, antes da administração do fármaco) para aumentar a permeabilidade do estrato córneo, e assim fornecer uma melhor penetração do fármaco através da pele. Os intensificadores de penetração quimicos são compostos que são inócuos e servem apenas para facilitar a difusão do fármaco através do estrato córneo, por difusão passiva ou por um processo dirigido por energia, como o eletrotransporte. Ver, por exemplo, Meidan VM e cols. Enhanced iontophoretic delivery of buspirone hidrochloride across human skin using Chemical enhancers. Mt. J. Pharm. 264:73-83, 2003.

As formas de dosagem farmacêuticas para administração retal incluem supositórios, cápsulas e comprimidos retais para efeito sistémico. Os supositórios retais como aqui usados significam corpos sólidos para inserção no reto que derretem ou amolecem à temperatura corporal libertando um ou mais ingredientes farmacologicamente ou terapeuticamente ativos. Substâncias farmaceuticamente aceitáveis utilizadas em supositórios retais incluem bases ou veículos e agentes que elevam o ponto de fusão dos supositórios. Exemplos de bases incluem manteiga de cacau (óleo de teobroma), glicerina-gelatina, carbocera, (polioxietilenoglicol) e misturas adequadas de mono, di e triglicerídeos de ácidos 60 gordos. Combinações das várias bases também podem ser usadas. Agentes que elevam o ponto de fusão dos supositórios incluem espermacete e cera. Supositórios retais podem ser preparados pelo método de compressão ou por moldagem. Supositórios retais pesam tipicamente cerca de 2 g a cerca de 3 g. Os comprimidos e cápsulas para administração retal são produzidos com o uso das mesmas substâncias farmaceuticamente aceitáveis e pelos mesmos métodos que de formulações para administração oral.

Os veiculos farmaceuticamente aceitáveis usados em preparações parentéricas incluem veículos aquosos, veículos não aquosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, tampões, antioxidantes, anestésicos locais, agentes de suspensão e dispersão, agentes emulsificantes, agentes sequestrantes ou de quelação e outras substâncias farmaceuticamente aceitáveis.

Os exemplos de veículos aquosos incluem cloreto de sódio para injeção, solução de Ringer para injeção, dextrose isotónica para injeção, água estéril para injeção, dextrose e solução de Ringer lactato para injeção. Veículos parenterais não aquosos incluem óleos fixados de origem vegetal, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de gergelim e óleo de amendoim. Agentes antimicrobianos em concentrações em bacteriostáticas ou fungistáticas devem ser adicionadas a preparações parenterais embaladas em recipientes de dose múltipla que incluem fenóis ou cresóis, mercuriais, álcool benzílico, clorobutanol, ésteres de ácido metilo e propilo p-hidroxibenzóico, timerosal, cloreto de benzalcónio e cloreto de benzetónio. Agentes isotónicos incluem cloreto de sódio e dextrose. Tampões incluem fosfato e citrato. Antioxidantes incluem bissulfito de sódio. Anestésicos locais incluem cloridrato de procaína. Agentes de suspensão e dispersão incluem sódio 61 carboximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose e polivinilpirrolidona. Agentes emulsificantes incluem Polissorbato 80 (Tween 80) . Um agente sequestrante ou de quelação de iões metálicos como o EDTA também podem ser incorporados. Veículos farmacêuticos também incluem álcool etílico, polietilenoglicol e propilenoglicol para veículos miscíveis em água e o pH pode ser ajustado a um pH fisiologicamente compatível por adição de hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico ou ácido lático. O ingrediente ativo pode ser administrado todo de uma vez, ou pode ser dividido em inúmeras doses menores a serem administradas em intervalos de tempo, ou como uma formulação de libertação controlada. O termo "formulação de libertação controlada" engloba formulações que permitem a libertação contínua de uma amida peptídica sintética da invenção a um indivíduo por um período de tempo, por exemplo, vários dias a semanas. Tais formulações podem ser administradas por via subcutânea ou intramuscular e permitem a libertação de estado estável contínua de uma quantidade predeterminada do composto no indivíduo pelo tempo. A formulação de libertação controlada da amida peptídica sintética pode ser, por exemplo, uma formulação de fármaco que contém microcápsulas poliméricas, como aquelas descritas nas Patentes U.S. Nos. 4.677.191 e 4.728.721, aqui incorporadas por referência. A concentração do composto farmaceuticamente ativo é ajustada de modo que a administração fornece uma quantidade eficaz para produzir um efeito desejado. A dose exata depende da idade, peso e condição do paciente ou animal, como é conhecido na técnica. Para qualquer indivíduo em particular, regimes de dosagem específicos podem ser ajustados pelo tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das formulações. Portanto, as faixas de 62 concentração aqui apresentadas são exemplos apenas e não devem limitar o âmbito ou prática da invenção reivindicada.

As preparações parenterais de dose unitária incluem embalagem numa ampola ou são pré-embaladas numa seringa com ou sem uma agulha para libertação. Todas as preparações para administração parenteral são tipicamente estéreis, como é praticado na técnica. Ilustrativamente, a infusão intravenosa de uma solução tamponada aquosa estéril que contém um composto ativo é um modo eficaz de administração. Em outra forma de realização uma solução ou suspensão aquosa ou oleosa estéril que contém o material ativo pode ser injetada como necessário para produzir o efeito farmacológico desejado.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser libertadas ou administradas por via intravenosa, transdérmica, transmucosa, intranasal, subcutânea, intramuscular, oral ou tópica (como, por exemplo, ao olho). As composições podem ser administradas para tratamento profilático de indivíduos que sofrem, ou estão em risco de adquirir, uma doença ou um distúrbio. Para aplicações terapêuticas, a composição farmacêutica é tipicamente administrada a um indivíduo que sofre da doença ou distúrbio, numa quantidade suficiente para inibir, prevenir, ou melhorar a doença ou distúrbio. Uma quantidade adequada para atingir isso é definida como uma "dose terapeuticamente eficaz".

As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas a um mamífero para objetivos profiláticos ou terapêuticos em qualquer uma das formulações e modos de libertação acima descritos. 0 mamífero pode ser qualquer mamífero, como um mamífero domesticado ou até mesmo um mamífero selvagem. 0 mamífero pode ser qualquer primata, 63 ungulado, canino ou felino. Por exemplo, e sem limitação, o mamifero pode ser um animal de estimação ou de companhia, como um cão ou gato; um mamifero mais valioso como um cavalo de puro sangue ou um animal de show; um animal de fazenda como uma vaca, um cabra, um carneiro ou porco; ou um primata como um simio, gorila, orangotango, lémur, macaco ou chimpanzé. Um mamifero adequado para profilaxia ou tratamento com o uso das composições farmacêuticas da invenção é um humano.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas a um mamifero que tem uma doença ou condição tratável pela ativação do recetor opióide kapa. Alternativamente, as composições farmacêuticas podem ser administradas como profiláticos a um mamifero que está em risco de contrair ou desenvolver uma doença ou condição que pode ser prevenida pela ativação do recetor opióide kapa. Doenças ou condições que podem ser tratadas ou prevenidas por administração das composições farmacêuticas da invenção incluem, sem limitação, qualquer condição que possa ser melhorada pela ativação do recetor opióide kapa, que incluem condições como dor, inflamação, prurido, hiponatremia, hipocalemia, insuficiência cardíaca congestiva, cirrose hepática, síndrome nefrótica, hipertensão, edema, obstrução intestinal, tosse e glaucoma.

Numa forma de realização particular, as composições farmacêuticas da invenção podem ser co-administradas ou podem incluir um ou mais de outros compostos terapêuticos ou adjuvantes, como, sem limitação, outros opióides, canabinóides, anti-depressivos, anti-convulsivos, neurolépticos, anti-histamínicos, acetaminofeno, corticosteróides, agentes de bloqueio do canal iónico, fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDs), e 64 diuréticos, vários dos quais têm efeito sinérgico com as amidas peptidicas sintéticas da invenção.

Os opióides adequados incluem, sem limitação, alfentanil, alfaprodina, anileridina, bremazocina, buprenorfina, butorfanol, codeina, conorfona, dextromoramida, dextropropoxifeno, dezocina, diamorfina, di-hidrocodeina, di-hidromorfina, difenoxilato, dipipanona, doxpicomina, eoeptazina, etilcetazocina, etilmorfina, etorfina, fentanil, hidrocodona, hidromorfona, cetobemidona, levometadil, levorfanol, lofentanil, loperandida, meperidina (petidina), meptazinol, metadona, morfina, morfina-6-glicuronida, nalbufina, nalorfina, nicomorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, fenazocina, fenoperidina, piritramida, propiram, propoxifeno, remifentanil, sufentanil, tilidato, tonazocina e tramadol.

Uma forma de realização da invenção é a co-formulação e/ou co-administração de um opióide com atividade agonista substancial no recetor opióide mu, como morfina, fentanil, hidromorfona, ou oxicodona, junto com a amida peptidica sintética da invenção, para o objetivo de um efeito poupador de dose de opióide mu, em que a dose do opióide mu é reduzida para minimizar efeitos colaterais comuns do opióide mu, particularmente em pacientes que nunca tiveram contato com opióides. Tais efeitos colaterais incluem obstipação, náusea, vómitos, sedação, depressão respiratória, prurido, confusão mental, desorientação e dano cognitivo, retenção urinária, espasmo biliar, delírio, espasmos mioclónicos e convulsões. A seleção da dose reduzida do opióide mu requer avaliação clínica especializada e depende das características únicas dos vários opióides mu, bem como das características do paciente como intensidade da dor, idade do paciente, doença 65 coexistente, regime atual do fármaco e interações medicamentosas potenciais, resultados de tratamento anterior e preferência do paciente e (McCaffery, M. and Pasero, C., Pain Clinicai Manual, Segunda Edição, Mosby, 1999).

Os canabinóides adequados para administração com, ou incorporação nas composições farmacêuticas da invenção, incluem qualquer canabinóide natural, como por exemplo, tetra-hidrocanabinol (THC) , ou um derivado de THC, ou um canabinóide sintético, como, por exemplo, levonantradol, marinol, nabilona, rimonabant ou savitex.

Os antidepressivos adequados que podem ser co-administrados ou incorporados nas composições farmacêuticas da invenção, incluem, por exemplo, antidepressivos triciclicos como imipramina, desipramina, trimipramina, protriptilina, nortriptilina, amitriptilina, doxepina, e clomipramina; antidepressivos atípicos como amoxapina, maprotilina, trazodona, bupropiona, e venlafaxina; inibidores de recaptação específicos para serotonina como fluoxetina, sertralina, paroxetina, citalopram e fluvoxamina; inibidores de recaptação específicos para norepinefrina como reboxetina; ou antidepressivos de ação dupla como nefazodona e mirtazapina.

Neurolépticos adequados que podem ser co-administrados ou incorporados nas composições farmacêuticas da invenção, incluem qualquer neurolético, por exemplo, um composto com atividade antagonista do recetor de dopamina D2 como domperidona, metaclopramida, levosulpirida, sulpirida, tietilperazina, ziprasidona, zotepina, clozapina, clorpromazina, acetofenazina, carfenazina, clorprotixeno, flufenazina, loxapina, mesoridazina, molindona, perfenazina, pimozida, piperacetazina, perclorperazina, 66 tioridazina, tiotixeno, trifluoperazina, triflupromazina, pipamperona, amperozida, quietiapina, melperona, remoxiprida, haloperidol, rispiridona, olanzepina, sertindol, ziprasidona, amisulprida, proclorperazina, e tiotixeno.

Anticonvulsivos como fenobarbital, fenitoina, primidona, carbamazepina, etossuximida, lamotrigina, ácido valpróico, vigabatrina, felbamato, gabapentina, levetiracetam, oxcarbazepina, remacemida, tiagabina, e topiramato também podem ser incorporados nas composições farmacêuticas da invenção.

Relaxantes musculares tais como metocarbamol, orfenadrina, carisoprodol, meprobamato, carbamato de clorfenosina, diazepam, clordiazepóxido e clorzoxazona; agentes anti-cefaleia como sumitriptano, analépticos como cafeina, metilfenidato, anfetamina e modafinil; anti-histamínicos como clorfeniramina, cipro-heptadina, prometazina e pirilamina, bem como corticosteróides como metilprednisolona, betametasona, hidrocortisona, prednisolona, cortisona, dexametasona, prednisona, alclometasona, clobetasol, clocortrolona, desonida, desoximetasona, diflorasona, fluocinolona, fluocinonida, flurandrenolida, fluticasona, florometalona, halcinonida, halobetasol, loteprednol, mometasona, prednicarbato, e triamcinolona também podem ser incorporados nas composições farmacêuticas da invenção.

Os agentes de bloqueio do canal iónico como, por exemplo, o bloqueador de canal do ião sódio, carbamazepina, como comumente usado no tratamento de zumbido, arritmia, AVC isquémico e epilepsia podem ser co-administrados ou incorporados nas composições farmacêuticas da invenção. Alternativamente, ou em adição, os bloqueadores de canal do 67 ião cálcio, como ziconotida, também podem ser usados, assim como antagonistas do canal de ião associados ao recetor NMDA, como cetamina. Há evidência de que pelo menos alguns desses bloqueadores de canal iónico podem potenciar os efeitos analgésicos do agonista kapa e desse modo reduzir a dose necessária para um alivio eficaz da dor. Ver, por exemplo, Wang e cols., 2000, Pain 84: 271-81.

Os NSAIDs adequados, ou outros compostos não opióides com atividade anti-inflamatória e/ou analgésica, que podem ser co-administrados ou incorporados nas composições farmacêuticas da invenção incluem, mas não são limitados a um ou mais dos seguintes: derivados do ácido aminoarilcarboxilico como etofenamato, ácido meclofenâmico, ácido mefanâmico, ácido niflúmico; derivados de ácido arilacético como acemetacina, amfenac, cinmetacina, clopiraco, diclofenaco, fenclofenaco, fencloraco, ácido fenclózico, fentiazaco, glucametacina, isoxepaco, lonazolaco, ácido metiazinico, naproxina, oxametacina, proglumetacina, sulindaco, tiaramida e tolmetina; derivados de ácido arilbutirico como butibufeno e fenbufeno; ácidos arilcarboxilicos como clidanaco, cetorolaco e tinoridina. Derivados de ácido arilpropiónico como ácido buclóxico, carprofeno, fenoprofeno, flunoxaprofeno, ibuprofeno, ibuproxam, oxaprozina, derivados de ácido fenilalcanóico como flurbiprofeno, picetoprofeno, pirprofeno, pranoprofeno, ácido protizinico e ácido tiaprofénico; ácidos piranocarboxilicos como etodolaco; pirazóis como mepirizol; pirazolonas como clofezona, feprazona, mofebutazona, oxifinbutazona, fenilbutazona, fenilo pirazolidininonas, suxibuzona e tiazolinobutazona; derivados de ácido salicilico como aspirina, bromosaligenina, diflusinal, fendosal, glicol salicilato, mesalamina, 1-naftilo salicilato, salicilato de magnésio, olsalazina e salicilamida, salsalato, e sulfasalazina; 68 tiazinacarboxamidas como droxicam, isoxicam e piroxicam outros como ácido ε-acetamidocapróico, acetaminofen, s-adenosilmetionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, bendazac, bucolomo, carbazonas, cromolina, difenpiramida, ditazol, hidroxicloroquina, indometacina, cetoprofeno e seu metabolito ativo ácido 6-metoxi-2-naftilacético; guaiazuleno, aminoalquil ésteres heterociclicos do ácido micofenólico e derivados, nabumetona, nimesulida, orgoteina, oxaceprol, derivados de oxazol, paranilina, pifoxima, 2-substituída-4,6-di-terciária-butilo-s-hidroxi-1,3-pirimidinas, proquazona e tenidap, e inibidores da cox-2 (ciclooxigenase II), como celecoxib ou rofecoxib.

Diuréticos adequados que podem ser co-administrados com ou incorporados nas preparações farmacêuticas da invenção incluem, por exemplo, inibidores da anidrase carbónica, como acetazolamida, diclorfenamida e metazolamida; diuréticos osmóticos, como glicerina, isosorbida, manitol e uréia; inibidores do contratransporte de Na+-K+-2C1- (diuréticos de alça ou diuréticos high-ceiling), como furosemida, bumetanida, ácido etacrinico, torsemida, axosemida, piretanida e tripamida; inibidores do contratransporte de Na+-Cl- (tiazida e diuréticos semelhantes à tiazida), como bendroflumetiazida, clorotiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetazida, meticlotiazida, politiazida, triclormetiazida, clortalidona, indapamida, metolazona e quinetazona; e, além disso, inibidores de canais de Na+ do epitélio renal, como amilorida e triamtereno e antagonistas de recetores de mineralocorticóide (antagonistas da aldosterona) como por exemplo, espironolactona, canrenona, canrenoato de potássio e eplerenona, os quais, em conjunto, são também classificados como diuréticos poupadores de K+. Uma forma 69 de realização é a co-formulação e/ou co-administração de um diurético de alça ou tiazida junto com uma amida peptidica sintética da invenção visando um efeito de reduzir a dose do diurético de alça ou tiazida dose, em que a dose do diurético de alça ou tiazida é reduzida para minimizar a retenção hidrica indesejada e evitar ou reduzir a hiponatremia, particularmente no contexto de insuficiência cardiaca congestiva, além de outras condições médicas nas quais a diminuição da retenção de liquidos corporais e a normalização do equilíbrio de sódio seriam benéficas para um paciente que delas necessita. Ver R.M. Reynolds e cols. "Disorders of sodium balance" Brit. Med. J. 2006; 332: 702-705. A hiponatremia associada ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição na qual a hiponatremia (condição de sódio reduzido) está presente, por exemplo, em seres humanos, quando a concentração de sódio no plasma cai abaixo de 135 mmol/L, uma anormalidade que pode ocorrer isoladamente ou, mais frequentemente, como uma complicação de outras condições médicas, ou em consequência da utilização de medicações que podem causar a depleção de sódio.

Uma forma de realização adicional é a co-formulação e/ou a co-administração de um diurético poupador de potássio, por exemplo, um antagonista do recetor de mineralocorticóide como, por exemplo, espironolactona ou eplerenona, junto com uma amida peptidica sintética da invenção, a fim de permitir uma dose reduzida do referido diurético poupador de potássio, em que a dose do referido diurético é reduzida para minimizar hipercalemia ou acidose metabólica, por exemplo, em pacientes com cirrose hepática. 70

Em formas de realização particulares, as amidas peptídicas sintéticas da invenção exibnum tempo de ação de longa duração quando administradas em doses terapeuticamente relevantes in vivo. Por exemplo, em algumas formas de realização, as amidas peptidicas sintéticas da invenção, quando administradas a um mamífero numa dose de 3 mg/kg da amida peptídica sintética, mantêm pelo menos cerca de 50% da eficácia máxima num ensaio dependente do recetor opióide kapa em 3 horas pós-administração. Em outras formas de realização, as amidas peptídicas sintéticas da invenção, quando administradas a um mamífero numa dose de 0,1 mg/kg da amida peptídica sintética, mantêm pelo menos cerca de 50% da eficácia máxima num ensaio dependente do recetor opióide kapa em 3 horas pós-administração. A eficácia máxima é operacionalmente definida como o nível mais elevado de eficácia determinado pelo ensaio dependente do recetor opióide kapa em particular para todos os agonistas testados.

Em certas formas de realização, as amidas peptídicas sintéticas da invenção, quando administradas a um mamífero numa dose de 0,1 mg/kg, mantêm pelo menos cerca de 75% da eficácia máxima em 3 horas pós-administração. Ainda em outras formas de realização, as amidas peptídicas sintéticas da invenção, quando administradas a um mamífero numa dose de 0,1 mg/kg, mantêm pelo menos cerca de 90% da eficácia máxima em 3 horas pós-administração. Em outras formas de realização, as amidas peptídicas sintéticas da invenção, quando administradas a um mamífero numa dose de 0,1 mg/kg, mantêm pelo menos cerca de 95% da eficácia máxima em três horas pós-administração. A invenção ainda fornece um método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor 71 opióide kapa num mamífero, em que o método inclui a administração ao mamífero de uma composição que contém uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção. 0 mamífero pode ser qualquer mamífero como, por exemplo, um mamífero domesticado ou feroz, ou mesmo um mamífero selvagem. Alternativamente, o mamífero pode ser um primata, um ungulado, um canino ou um felino. Por exemplo, e sem limitação, o mamífero pode ser um animal de estimação ou de companhia como, por exemplo, um mamífero de alto valor, por exemplo, um animal de puro sangue ou animal de exibição; um animal de criação, por exemplo, uma vaca, uma cabra, um carneiro ou um porco; ou um primata como, por exemplo, um gorila ou um macaco. Num aspeto em particular, o mamífero é um ser humano. A quantidade eficaz pode ser determinada de acordo com métodos rotineiros por aqueles habilitados na técnica. Por exemplo, uma quantidade eficaz pode ser determinada como uma unidade de dosagem suficiente para evitar ou tratar uma doença ou condição associada ao kappa recetor no mamífero. Alternativamente, a quantidade eficaz pode ser determinada como uma quantidade suficiente para aproximar a concentração EC50 ou uma quantidade suficiente para aproximar duas ou três vezes ou até cerca de cinco ou até mesmo cerca de dez vezes a concentração EC50 num líquido corporal terapeuticamente relevante do mamífero, por exemplo, em que o líquido corporal está em aposição direta a um tecido-alvo como, por exemplo, o líquido sinovial de uma articulação inflamada num paciente que sofre de artrite reumatóide.

Numa forma de realização, a amida peptídica sintética da invenção é uma composição farmacêutica que inclui uma quantidade eficaz da amida peptídica sintética da invenção e um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Num 72 aspeto, a composição farmacêutica inclui uma amida peptidica sintética da invenção numa quantidade eficaz para tratar ou evitar uma condição associada ao recetor opióide kapa num mamífero como, por exemplo, um ser humano. Em outro aspeto, a condição associada ao recetor opióide kapa é dor, inflamação, prurido, edema, obstrução intestinal, tosse ou glaucoma.

Numa forma de realização, a composição farmacêutica da invenção ainda inclui um ou mais dos seguintes compostos: um opióide, um canabinóide, um antidepressivo, um anticonvulsivo, um neuroléptico, um corticosteróide, um agente de bloqueio de canal de ião ou um fármaco anti-inflamatório não esteróide (NSAID).

Composições farmacêuticas que incluem uma amida peptidica sintética da invenção e um veículo ou transportador farmaceuticamente aceitável podem ser usadas para tratar ou evitar um ou mais diversas doenças, distúrbios ou condições associadas ao recetor opióide kapa. A doença, distúrbios ou condição associada ao recetor opióide kapa evitável ou tratável com as amidas peptídicas sintéticas da invenção pode ser qualquer condição associada ao recetor opióide kapa, incluindo, sem limitação, dor aguda e crónica, inflamação, prurido, hiponatremia, edema, obstrução intestinal, tosse e glaucoma. Por exemplo, a dor associada ao recetor opióide kapa pode ser dor neuropática, dor somática, dor visceral ou dor cutânea. Algumas doenças, distúrbios ou condições estão associadas a mais de uma forma da dor, por exemplo, a dor pós-operatória pode ter qualquer um ou todos os componentes da dor neuropática, somática, visceral e cutânea, dependendo do tipo e da extensão do procedimento cirúrgico empregue. 73 A inflamação associada ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição inflamatória incluindo, sem limitação, sinusite, artrite reumatóide tenosinovite, bursite, tendinite, epicondilite lateral, capsulite adesiva, osteomielite, inflamação osteoartritica, doença inflamatória intestinal (IBD), sindrome do cólon irritável (IBS), inflamação ocular, inflamação por otite ou inflamação autoimune. 0 prurido associado ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição pruriginosa como, por exemplo, prurido ocular, por exemplo, associado à conjuntivite, prurido por otite, prurido associado com doença renal terminal, em que muitos pacientes recebem diálise renal e outras formas de colestase, incluindo cirrose biliar primária, colestase intra-hepática da gravidez, doença hepática colestática crónica, uremia, colestase maligna, ictericia, além de condições dermatológicas como, por exemplo, eczema (dermatite), incluindo dermatite atópica ou de contato, psoriase, policitemia vera, líquen plano, líquen simples crónico, pediculose (piolhos), tireotoxicose, tinea pedis, urticária, escabiose, vaginite, prurido anal associado às hemorroidas, além de prurido por picada de insetos e prurido induzido por fármacos como, por exemplo, prurido induzido por opióide mu. 0 edema associado ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição edematosa como, por exemplo, edema causado por doença cardíaca congestiva ou por uma sindrome de secreção inadequada de hormona antidiurética (ADH). A obstrução intestinal associada ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição que cause obstrução intestinal incluindo, sem limitação, obstrução intestinal pós-operatória ou disfunção intestinal induzida por opióide. A dor neuropática associada ao recetor opióide kapa pode ser qualquer dor neuropática, como, por exemplo, neuralgia do trigémeo, dor diabética, dor virai como, por exemplo, dor associada ao herpes zoster, dor induzida por quimioterapia, dor de cancro metastático por invasão nervosa, dor neuropática associada a lesões traumáticas e procedimentos cirúrgicos, bem como variantes de cefaleia que supostamente possuem um componente neuropático, por exemplo, enxaqueca. A dor associada ao opióide kapa também inclui dor ocular, por exemplo, após ceratectomia foto-refrativa (PRK), laceração ocular, fratura do assoalho da órbita, queimaduras químicas, abrasão ou irritação corneana ou associada à conjuntivite, úlceras corneanas, esclerite, episclerite, escleroceratite, herpes zoster oftálmico, ceratite intersticial, irite aguda, ceratoconjuntivite seca, celulite orbitária, pseudotumor orbitário, pênfigo, tracoma ou uveíte. A dor associada ao kapa opióide também inclui dor de garganta, particularmente associada a condições inflamatórias como, por exemplo, rinite alérgica, bronquite aguda, constipação comum, úlceras de contato, lesões virais por herpes simplex, mononucleose infecciosa, influenza, cancro de laringe, laringite aguda, gengivite ulcerativa necrotizante aguda, abscesso periamigdaliano, queimaduras faríngeas, faringite, laringofaringite de refluxo, sinusite aguda e amidalite.

Além disso, a dor associada ao recetor opióide kapa pode ser dor artrítica, litíase renal, litíase do trato 75 urinário, dor por litiase da vesícula biliar e do dueto biliar, cólica uterina, dismenorréia, endometriose, mastite, dispepsia, dor pós-cirúrgica (como, por exemplo, por apendicectomia, cirurgia cólon-retal aberta, reparação da hérnia, prostatectomia, resseção de cólon, gastrectomia, esplenectomia, colectomia, colostomia, laparoscopia pélvica, laqueação das trompas, histerectomia, vasectomia ou colecistectomia), dor após procedimentos médicos (como, por exemplo, após colonoscopia, cistoscopia, histeroscopia ou biópsia cervical ou endometrial), dor por otite, dor disruptiva por progressão do cancro e dor associada a um distúrbio gastrintestinal como, por exemplo, IBD ou IBS ou outras condições inflamatórias, particularmente das vísceras (por exemplo, doença por refluxo gastresofágico, pancreatite, polinefrite aguda, colite ulcerativa, pielonefrite aguda, colecistite, cirrose, abcesso hepático, hepatite, úlcera duodenal ou gástrica, esofagite, gastrite, gastrenterite, colite, diverticulite, obstrução intestinal, quisto do ovário, doença pélvica inflamatória, úlcera perfurada, peritonite, prostatite, cistite intersticial), ou exposição a agentes tóxicos como, por exemplo, toxinas de insetos ou fármacos como, por exemplo, salicilatos ou NSAIDs. A presente invenção fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa num mamífero como, por exemplo, um ser humano, em que o método inclui a administração ao mamífero de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção. Em outra forma de realização a condição associada ao recetor opióide kapa é dor, inflamação (como, por exemplo, inflamação por artrite reumatóide, inflamação osteoartrítica, inflamação por doença inflamatória do intestino, inflamação por síndrome 76 do cólon irritável, inflamação ocular, inflamação por otite ou inflamação autoimune), prurido (como, por exemplo, dermatite atópica, prurido associado à diálise renal, prurido ocular, prurido por otite, prurido por picadas de insetos e prurido induzido por opióide), edema, obstrução intestinal, tosse ou glaucoma. Num aspeto, a dor é a dor neuropática (como, por exemplo, neuralgia do trigémeo, enxaqueca, dor diabética, dor virai, dor induzida por quimioterapia ou dor de cancro metastático), uma dor somática, uma dor visceral ou uma dor cutânea. Em outro aspeto, a dor é dor artrítica, dor por litíase renal, cólica uterina, dismenorréia, endometriose, dispepsia, dor pós-cirúrgica, dor após procedimentos médicos, dor ocular, dor por otite, dor disruptiva por progressão do cancro ou dor associada a um distúrbio gastrintestinal, como IBD ou IBS. Em outro aspeto, a dor é dor associada à cirurgia, em que a cirurqia é laparoscopia pélvica, laqueação de trompas, histerectomia e colecistectomia. Alternativamente, a dor pode ser uma dor associada a um procedimento médico como, por exemplo, colonoscopia, cistoscopia, histeroscopia ou biópsia de endométrio. Num aspeto específico, a dermatite atópica pode ser psoríase, eczema ou dermatite de contato. Em outro aspeto específico, a obstrução intestinal é obstrução intestinal pós-operatória ou disfunção intestinal induzida por opióide.

Bond e cols. eds. A dor associada ao recetor opióide kapa inclui hiperalgesia, que supostamente é causada por alterações no meio do terminal sensorial periférico que ocorrem de forma secundária ao dano tecidular local. 0 dano tecidular (por exemplo, abrasões, queimaduras) e a inflamação podem produzir aumentos significativos da excitabilidade de nociceptores polimodais (fibras C) e mecanorrecetores de limiar elevado (Handwerker e cols. (1991) "Proceeding of the VIth World Congress on Pain", 77

Elsevier Science Publishers BV, pp. 59-70; Schaible e cols. (1993) Dor 55:5-54). Acredita-se que esta excitabilidade aumentada e respostas exageradas de aferentes sensoriais fundamentem a hiperalgesia, em que a resposta à dor é o resultado de uma resposta exagerada a um estimulo. A importância do estado hiperalgésico no estado da dor pós-lesão foi demonstrada repetidamente, e parece ser responsável por uma proporção importante do estado da dor pós-lesão/inflamatória. Ver, por exemplo, Woold e cols. (1993) Anesthesia and Analgesia 77: 362-79; Dubner e cols. (1994) Em, "Textbook of Pain", Melzack e cols., eds., Churchill-Livingstona, Londres, pp. 225-242.

Em outra forma de realização, a condição associada ao recetor opióide kapa é dor, inflamação (como, por exemplo, inflamação por artrite reumatóide, inflamação osteoartritica, inflamação por doença inflamatória do intestino, inflamação por sindrome do cólon irritável, inflamação ocular, inflamação por otite ou inflamação autoimune), prurido (como, por exemplo, dermatite atópica, prurido associado à diálise renal, prurido ocular, prurido por otite, prurido por picada de insetos ou prurido induzido por opióide), edema, obstrução intestinal, tosse ou glaucoma. Num aspeto, a dor é uma dor neuropática (como, por exemplo, neuralgia do trigémeo, enxaqueca, dor diabética, dor virai, dor induzida por quimioterapia ou dor por cancro metastático), uma dor somática, uma dor visceral ou uma dor cutânea. Em outro aspeto, a dor é dor artrítica, dor por litiase renal, cólica uterina, dismenorréia, endometriose, dispepsia, dor pós-cirúrgica, dor após procedimentos médicos, dor ocular, dor por otite, dor disruptiva por progressão do cancro ou dor associada a um distúrbio gastrintestinal, como IBD ou IBS. Em outro aspeto, uma dor é dor associada à cirurgia, em que a cirurgia é laparoscopia pélvica, laqueação de trompas, 78 histerectomia e colecistectomia. Alternativamente, a dor pode ser dor associada a um procedimento médico como, por exemplo, colonoscopia, cistoscopia, histeroscopia ou biópsia do endométrio. Num aspeto especifico, a dermatite atópica pode ser psoriase, eczema ou dermatite de contato. Em outro aspeto especifico, a obstrução intestinal é obstrução intestinal pós-operatória ou disfunção intestinal induzida por opióide.

Em outra forma de realização, a condição associada ao recetor opióide kapa é uma condição associada ao recetor opióide kapa evitável ou tratável por diurese poupadora de sódio e potássio, também conhecida como aquarese. Um exemplo destas condições associadas ao recetor opióide kapa evitável ou tratável por administração uma amida peptídica sintética da invenção inclui edema. 0 edema pode ser causado por qualquer uma entre diversas doenças ou condições como, por exemplo, doença cardíaca congestiva ou síndrome de secreção inadequada de ADH.

Em outra forma de realização, a condição associada ao recetor opióide kapa é hiponatremia ou outras doenças edematosas. A hiponatremia ou o edema associado ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição hiponatrémica ou edematosa como, por exemplo, hiponatremia e edema associado à insuficiência cardíaca congestiva ou uma síndrome de secreção inadequada da hormona antidiurética (ADH), ou hiponatremia que está associada à terapia diurética intensiva com tiazidas e/ou diuréticos de alça. As amidas peptídicas sintéticas da invenção exibem um efeito aquarético poupador de sódio e potássio significativo, o que é benéfico no tratamento de condições patológicas formadoras de edema associadas à hiponatremia e/ou hipocalemia. Consequentemente, as amidas peptídicas sintéticas da invenção também são úteis em métodos de 79 tratamento ou prevenção de condições relacionadas à hiponatremia, cujos exemplos serão fornecidos abaixo. Condições relacionadas à hiponatremia podem ser categorizadas de acordo com o estado de volume como hipervolémicas, euvolémicas ou hipovolémicas. A hiponatremia hipervolémica é normalmente causada por um aumento no nivel de água corporal total, como pode ser observado em casos de insuficiência cardíaca congestiva, síndrome nefrótica e cirrose hepática. A hiponatremia euvolémica é encontrada frequentemente na síndrome de secreção inadequada de hormona antidiurética (ADH), e também pode estar associada à pneumonia, cancro de pulmão de pequena célula, polidipsia, casos de trauma craniano e causas orgânicas (por exemplo, uso de certos fármacos como, por exemplo, haloperidol) ou uma causa psicogénica. A hiponatremia hipovolémica é causada por uma diminuição relativa no nível de sódio corporal total, e pode estar associada ao uso de diurético, casos de nefrite intersticial ou sudorese excessiva.

Essas formas de hiponatremia podem ainda ser classificadas de acordo com a concentração de sódio na urina (ou seja, se a concentração é maior ou igual a trinta milimoles por litro. Ver: R.M. Reynolds e cols. "Disorders of sodium balance", Brit. Med. J. 2006; 332: 702-705. A hiponatremia associada ao recetor opióide kapa pode ser qualquer doença ou condição em que a hiponatremia (condição de sódio reduzido) esteja presente, por exemplo, em seres humanos, quando a concentração de sódio no plasma cai abaixo de 135 mmol/L, uma anormalidade que pode ocorrer 80 isoladamente ou, mais frequentemente, como uma complicação de outras condições médicas, ou em consequência da utilização de medicações que podem causar a depleção de sódio.

Além dessas condições, várias outras condições estão associadas à hiponatremia incluindo, sem limitação: causas neoplásicas de secreção de ADH em excesso, incluindo carcinomas do pulmão, duodeno, pâncreas, ovário, bexiga e ureter, timoma, mesotelioma, adenoma brônquico, carcinóide, gangliocitoma e sarcoma de Ewing; infeções como, por exemplo: pneumonia (bacteriana ou virai), abscessos (pulmonares ou cerebrais), cavitação (aspergilose), tuberculose (pulmonar ou cerebral), meningite (bacteriana ou virai), encefalite e AIDS; causas vasculares como, por exemplo: oclusões ou hemorragias cerebrovasculares e trombose do seio cavernoso; causas neurológicas como, por exemplo: sindrome de Guillan-Barré, esclerose múltipla, delirium tremens, esclerose lateral amiotrófica, hidrocefalia, psicose, neuropatia periférica, trauma craniano (fechado e penetrante), tumores ou infeções do sistema nervoso central (SNC) e lesões do SNC que afetam osmorrecetores hipotalâmicos; malformações congénitas, incluindo: agenesia do corpo caloso, fenda palatina e outros defeitos da linha média; causas metabólicas como, por exemplo: porfiria intermitente aguda, asma, pneumotórax e respiração com pressão positiva; fármacos como, por exemplo: diuréticos tiazida, acetaminofeno, barbituratos, agentes colinérgicos, estrogênio, agentes hipoglicémicos oral, vasopressina ou desmopressina, oxitocina em alta dose, clorpropamida, vincristina, carbamazepina, nicotina, fenotiazinas, ciclofosfamida, antidepressivos triciclicos, inibidores da monoamina oxidase e inibidores da re-captação de serotonina; administração de líquidos hipotónicos em excesso, por exemplo, durante hospitalização, cirurgia, ou 81 durante ou após eventos atléticos (ou seja, hiponatremia associada ao exercício) , bem como o uso de suplementos nutricionais com baixo teor de sódio em indivíduos idosos. Ver, por exemplo, "Harrison's Principies of Internai Medicine", 16a Ed. (2005), p. 2.102.

Outras condições associadas à hiponatremia incluem insuficiência renal, síndrome nefrótica (nefropatia membranosa e doença de alteração mínima), caquexia, subnutrição, rabdomiólise, procedimentos cirúrgicos, cateterização cardíaca eletiva, perda sanguínea, além de hipercalcemia, hipocalemia e hiperglicemia com consequente glicosúria levando à diurese osmótica. A invenção também fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição neurodegenerativa num mamífero tal como, por exemplo, um ser humano, em que o método inclui a administração ao mamífero de uma composição que inclui uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética, como descrito acima. A doença ou condição neurodegenerativa pode ser qualquer doença ou condição neurodegenerativa como, por exemplo, isquemia, anóxia, acidente vascular cerebral, lesão cerebral, lesão da medula vertebral ou lesão por re-perfusão. Alternativamente, a doença ou condição neurodegenerativa pode ser uma doença neurodegenerativa do olho. Doenças neurodegenerativas oculares específicas tratáveis ou evitáveis pelo método da invenção incluem glaucoma, degeneração macular, doença retiniana isquémica e neuropatia diabética.

Em certas formas de realização, a invenção fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso em métodos de prevenção ou tratamento de certas doenças e condições neuronais como, por exemplo, doenças e condições 82 contendo uma componente neurodegenerativa. As amidas peptídicas sintéticas da invenção podem ser administradas numa quantidade eficaz para proteger as células neuronais contra os efeitos de patologias ou lesões que levariam à neurodegeneração e/ou morte da célula neuronal das células não tratadas. Por exemplo, várias doenças ou condições do olho que possuem um componente neurodegenerativo podem ser evitadas ou tratadas pela administração de uma quantidade eficaz das amidas peptidicas sintéticas da invenção. Estas doenças e condições do olho incluem glaucoma, degeneração macular, doença retiniana isquémica e neuropatia diabética. Acredita-se que a progressão dessas doenças e condições envolva neurodegeneração ou morte da célula neuronal, por exemplo, por morte celular programada (apoptose), em que as células neuronais estão comprometidas com uma via que, sem intervenção, levaria à morte celular. Verificou-se que o desenvolvimento ou a progressão dessas doenças e condições pode ser evitado, ou pelo menos tornado mais lento, por tratamento com agonistas do recetor opióide kapa. Acredita-se que esse melhor resultado seja causado pela neuroproteção pelos agonistas do recetor opióide kapa. Ver, por exemplo, Kaushik e cols. "Neuroprotection in Glaucoma" (2003) J. Postgraduate Medicine vol. 49 (1): pp. 90-95.

No caso do glaucoma, acredita-se que a profilaxia e o tratamento por administração de agonistas do recetor opióide kapa seja mediada por pelo menos duas atividades distintas induzidas por ativação do recetor opióide kapa: neuroproteção e redução da pressão intra-ocular (PIO). Embora sem se prender a uma teoria, acredita-se que a neuroproteção seja causada, pelo menos em parte, pela indução de peptídeo atrial natriurético (ANP) no olho, levando à proteção contra dano oxidativo e outras agressões. 83

Acredita-se também que a pressão intra-ocular normalmente elevada seja um fator que leve ao desenvolvimento de qlaucoma. A pressão intra-ocular elevada também pode ser evitada ou tratada por administração de aqonistas do recetor opióide kapa por três atividades separadas desencadeadas por ativação do recetor: redução da secreção de humor aquoso, fluxo de saida aumentado de humor aquoso e aquaresis (diurese poupadora de sódio e potássio, resultando na perda de áqua). A invenção também fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso num método de tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor kapa do olho de um mamífero, tal como a pressão intra-ocular (PIO) elevada. 0 método inclui a administração ao mamífero de uma composição que inclui uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética, como descrito acima. Num aspeto da invenção, a amida peptídica sintética é administrada topicamente. Em outro aspeto, a amida peptídica sintética é administrada como um implante.

Em outras formas de realização, a invenção fornece amidas peptídicas sintéticas da invenção para uso em métodos de prevenção ou tratamento de certas doenças e condições cardiovasculares que possuem um componente degenerativo celular. Amidas peptídicas sintéticas da invenção podem ser administradas numa quantidade eficaz para proteger as células miocárdicas contra os efeitos de patologias ou lesões que levariam à degeneração e/ou morte celular das células não tratadas. Por exemplo, várias doenças ou condições cardiovasculares podem ser evitadas ou tratadas por administração de uma quantidade eficaz das amidas peptídicas sintéticas da invenção. Estas doenças e condições cardiovasculares incluem, sem limitação, doença cardíaca coronária, isquemia, enfarte cardíaco, lesão por 84 re-perfusão e arritmia. Ver, por exemplo, Wu e cols. "Cardioprotection of Preconditioning by Metabolic Inhibition in the Rat Ventricular Myocyte — Involvement of kappa Opioid Recetor" (1999) Circulation Res. vol. 84: pp. 1.388-1.395. Ver também Yu e cols. "Anti-Arrhythmic Effect of kappa Opioid Recetor Stimulation in the Perfused Rat Heart: Involvement of a cAMP-Dependent Pathway" (1999) J. Mol. Cell. Cardiol. vol. 31(10): pp. 1.809-1.819.

Doenças e condições de outros tecidos e órgãos que podem ser evitadas ou tratadas por administração de uma quantidade eficaz das amidas peptidicas sintéticas da invenção incluem, sem limitação, isquemia, anóxia, acidente vascular cerebral, lesão cerebral ou da medula vertebral e lesão por re-perfusão.

Outra forma da dor associada ao recetor opióide kapa tratável ou evitável com as amidas peptidicas sintéticas da invenção é hiperalgesia. Numa forma de realização, o método inclui a administração de uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção a um mamífero que sofre ou em risco para o desenvolvimento de hiperalgesia para evitar, melhorar ou aliviar completamente a hiperalgesia.

As amidas peptidicas sintéticas da invenção podem ser administradas por métodos aqui divulgados para o tratamento ou a prevenção de qualquer condição hiperalgésica como, sem limitação, uma condição hiperalgésica associada à dermatite alérgica, dermatite de contato, úlceras cutâneas, inflamação, erupções, irritação fúngica e condições hiperalgésicas associadas a agentes infecciosos, queimaduras, abrasões, escoriações, contusões, ulcerações causadas por frio intenso, erupções, acne, picadas/ferroadas de insetos, úlceras cutâneas, mucosite, 85 gengivite, bronquite, laringite, dor de garganta, herpes zoster, irritação fúngica, herpes labial, furúnculos, verrugas plantares, procedimentos cirúrgicos ou lesões vaginais. Por exemplo, as amidas peptidicas sintéticas da invenção podem ser administradas topicamente e uma superfície mucosa como, por exemplo, a boca, o esófago ou laringe, ou às vias brônquicas ou nasais. Alternativamente, as amidas peptidicas sintéticas da invenção podem ser administradas topicamente na vagina ou no reto/ânus.

Além disso, as amidas peptidicas sintéticas da invenção podem ser administradas por métodos aqui divulgados para o tratamento ou a prevenção de qualquer condição hiperalgésica associada com queimaduras, abrasões, escoriações, abrasões (como, por exemplo, abrasões corneanas), contusões, ulcerações causadas por frio intenso, erupções, acne, picadas/ferroadas de insetos, úlceras cutâneas (por exemplo, úlceras diabéticas ou úlceras de decúbito), mucosite, inflamação, gengivite, bronquite, laringite, dor de garganta, herpes zoster, irritação fúngica (como, por exemplo, pé de atleta ou coceira de atleta) , herpes labial, furúnculos, verrugas plantares ou lesões vaginais (como, por exemplo, lesões vaginais associadas a micoses ou doenças sexualmente transmitidas). Os métodos contemplados para administração das amidas peptidicas sintéticas da invenção para o tratamento ou a prevenção de hiperalgesia incluem aqueles nos quais o composto é topicamente aplicado a uma superficie dos olhos, boca, laringe, esófago, brônquio, vias nasal, vagina ou reto/ânus.

As condições hiperalgésicas associadas à recuperação pós-cirúrgica também podem ser tratadas pela administração das amidas peptidicas sintéticas da invenção. As condições hiperalgésicas associadas a recuperação pós-cirúrgica podem 86 ser quaisquer condições hiperalgésicas associadas à recuperação pós-cirúrgica como, por exemplo, ceratectomia radial, extração dentária, mastectomia, episiotomia, laparoscopia e artroscopia.

As condições hiperalgésicas associadas à inflamação também são tratáveis pela administração das amidas peptidicas sintéticas da invenção. Inflamação periodontal, inflamação ortodôntica, conjuntivite inflamatória, hemorroidas e inflamações venéreas podem ser tratadas ou evitadas por administração tópica ou local das amidas peptidicas sintéticas da invenção. A invenção também fornece amidas peptidicas sintéticas da invenção para uso num método de indução da diurese num mamifero que dela necessita. 0 método inclui a administração ao mamífero de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção, como descrito acima. A invenção ainda fornece amidas peptidicas sintéticas da invenção para uso num método de indução da secreção de prolactina num mamífero. 0 método inclui a administração ao mamífero de uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da invenção, como descrito acima. 0 método de indução de secreção de prolactina é adequado para o tratamento de um mamífero como, por exemplo, um ser humano que sofre de lactação insuficiente, lactação inadequada, lactação sub-ótima, motilidade reduzida de espermatozóides, um distúrbio relacionado à idade, diabetes do tipo I, insónia ou sono REM inadequado. Num aspeto em particular, o método inclui a co-administração da amida peptídica sintética com uma dose reduzida de um composto analgésico de agonista opióide mu para produzir um efeito analgésico terapêutico, o composto 87 possuindo um efeito colateral associado no qual a dose reduzida do composto possui um efeito colateral associado menor do que o efeito colateral associado à dose do composto analgésico de agonista opióide mu necessário para obter o efeito analgésico terapêutico quando administrada isoladamente. A presente invenção também fornece amidas peptidicas sintéticas da invenção para uso num método de ligação de um recetor opióide kapa num mamífero, o método incluindo a etapa de administração ao mamífero de uma composição que contém uma quantidade eficaz de uma amida peptídica sintética da presente invenção. A quantidade eficaz pode ser determinada de acordo com métodos rotineiros por aqueles habilitados na técnica. Por exemplo, a quantidade eficaz pode ser determinada como uma unidade de dosagem suficiente para ligar recetores opióides kapa num mamífero e causar um afeito antinociceptivo, um efeito anti-inflamatório, um efeito aquarético ou uma elevação dos níveis plasmáticos de prolactina ou qualquer outro efeito que responda ao recetor opióide kapa. Alternativamente, a quantidade eficaz pode ser determinada como uma quantidade suficiente para aproximar a EC50 num líquido corporal do mamífero, ou uma quantidade suficiente para aproximar dois ou três, ou até cerca de cinco ou cerca de dez vezes a EC50 num líquido terapeuticamente relevante corporal do mamífero.

SÍNTESE DAS AMIDAS DE PEPTÍDEO DA INVENÇÃO

Como aqui usada, a designação química "tetrapeptídeo-[co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico) ] " é usada para indicar a porção aminoacil das amidas peptidicas sintéticas da invenção derivadas do ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico, em que o átomo de azoto do anel piperidina está ligado ao carbonil-carbono do terminal C do fragmento do tetrapeptídeo, a menos que indicado de forma diferente. A Figura 1 mostra o esquema sintético geral usado na preparação dos compostos (1) (6), (7), (10) e (11); a Figura 2 mostra o esquema sintético geral usado na preparação dos compostos (2) a (5), (8), (9) e (12) - (14); a Figura 3 mostra o esquema sintético geral usado na preparação de amidas peptidicas sintéticas (15) - (24); e a Figura 4 mostra o esquema usado na preparação das amidas peptidicas sintéticas (25) - (37):

Composto (1): D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me)D-Lys-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 1):

Composto (2): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[ω(ácido 4- aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (3): D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me)D-Lys-[ω (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N°: 1): 89

Composto (4): piperidinil)-L-prolina]-OH D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[N-(4-(Id. de Seq. N°: 2):

Composto (5): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[N-(4- piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N°: 3):

T NB*

Composto (6): D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-Me)D-Lys-[N-(4- piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N°: 1):

90 Composto homopiperazina] (7) : D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida (Id. de Seq. N°: 4): de

4-

Composto (8): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har- [co (ácido aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N°: 3):

Composto (9): D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-iPr) D-Lys-[co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH, (Id. de Seq. N°: 5):

91

Composto (10): D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-Dap- [co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico) ] -OH (Id. de Seq. N° : 6) :

Composto (11): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar- [co (ácido 4- aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N°: 7):

Composto (12): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dbu-[N-(4- piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N°: 8):

Composto (13): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar-[N-(4- piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N°: 7): 92

Composto (14): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dap(amidino)-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N°: 6):

Composto (15): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (16): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 3): 93

Composto (17): D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-iPr)D-Lys-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 5):

Composto (18): D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-Dap- [amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 6):

Composto (19): D-Phe-D-Phe-D-Nle-(β-amidino)D-Dap- [amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 6): 94 94

,ms í

HH

Composto (20): D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-

Dap[amida de homopiperazina] (Id. de Seq. N°: 6):

Composto (21): D-Phe-D-Phe-D-Nle-(β-amidino)D-Dap- [amida de homopiperazina] (Id. de Seq. N°: 6):

de 4-

Composto (22): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dbu-[amida amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 8):

95

Composto (23): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 7):

Composto (24): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N°: 4):

Composto (25): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona] (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (26): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 2-metilo-2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona] (Id. de Seq. N°: 2): 96

Composto (27): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1,3,8-triazaspiro[4,5]decano-2,4-diona] (Id. de Seq. N° : 2) :

Composto (28): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 5-cloro-1-(piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3)H-ona] (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (29): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de morfolino(piperidin-4-il)metanona] (Id. de Seq. N°: 2): 97

Composto (30): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4-fenilo-1-(piperidin-il-lH-imidazol-2(3H)-ona] (Id. de Seq. N° : 2) :

Composto (31): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4-(3,5-dimetil-4H-l,2,4-triazol-4-il)piperidina] (Id. de Seq. N° : 2) :

Composto (32): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1-(piperidin-4-il)indolin-2-ona] (Id. de Seq. N°: 2): 98

Composto (33): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1-fenilo-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-ona] (Id. de Seq. N°: 2) :

Composto (34): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de imidazo[1,2-a]piridina-2-ilmetil] (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (35) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de (5-metilpirazin-2-il)metilo] (Id. de Seq. N°: 2): 99

Composto (36): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1-(piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona] (Id. de Seq. N°: 2):

Composto (37): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4,5,6,7-tetrahidro-lH-pirazolo[4,3-c]piridina] (Id. de Seq. N° : 2) :

EXEMPLOS Métodos sintéticos experimentais gerais:

Os derivados de aminoácidos e resinas foram adquiridos a fornecedores comerciais (Novabiochem, Bachem, Peptide 100

International and PepTech Corporation). Outras substâncias quimicas e solventes foram adquiridos na Siqma-Aldrich, Fisher Scientific e VWR. Os compostos aqui apresentados foram sintetizados por métodos padronizados na química de peptídeo de fase sólida com a metodologia Fmoc e Boc. A menos que especificado de forma diferente, todas as reações foram realizadas em temperatura ambiente.

As seguintes referências padronizadas fornecem um guia sobre estrutura experimental geral e a disponibilidade de materiais de iniciação e reagentes necessários: Kates, S. A., Albericio, F., Eds., Solid Phase Synthesis, A Practical Guide, Mareei Dekker, New York, Basel, (2000); Bodanszky, M., Bodanszky, A., Eds., The Practice of Peptide Synthesis, Segunda Edição, Springer-Verlag, (1994); Atherton, E., Sheppard, R. C., Eds., Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach, IRL Press at Oxford University Press, (1989); Stewart, J. M., Young, J. D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, (1984); Bisello, e cols., J. Biol. Chem. 273, 22498-22505 (1998); e

Merrifield, R. B., J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963).

Abreviações adicionais aqui usadas: ACN: acetonitrilo Aloc: allloxicarbonil Boc: terc-butoxicarbonil BOP: hexafluorfosfato de benzotriazol-l-il-oxi- tris(dimetilamino)-fosfónio Cbz: benziloxicarbonil.

Cbz-OSu: Na-(Benziloxicarboniloxi) succinimida DBU:l,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCM: Diclorometano

Dde: 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohex-l-ilideno)etilo DIC: N,N'-diisopropilcarbodiimida 101 DIEA: N,N-diisopropiletilamina DMF: N,N-dimetilformamida Fmoc: 9-fluorenilmetoxicarbonil HATU: hexafluorfosfato de 2-(ΙΗ-9-azabenzotriazol-l-il)- 1.1.3.3- tetrametilurónio HBTU: hexafluorfosfato de 2-(lH-benzotriazole-l-il) - 1.1.3.3- tetrametilurónio HOBt: 1-hidroxibenzotriazol HPLC: cromatografia liquida de alta performance i: iso ivDde: 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohex-l-ilideno)-3- metilbutil NMM: 4-metilo morfolino NMP: N-metilpirrolidinona All: alil o-NBS-Cl: cloreto de o-nitrobenzenossulfonila

Pbf: 2,2,4,6,7-pentametildihidro-benzofuran-5-sulfonil

PyBOP: hexafluorfosfato de benzotriazol-l-iloxi-tris- pirrolidino-fosfónio RP: fase reversa TBTU: tetrafluorborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1, 1,3, 3- tetrametilurónio TEAP: fosfato de trietilamónio TFA: ácido trifluoracético TIS: triisopropilsilano TMOF: trimetil ortoformato TMSOTf: trimetilsilil triflúormetanossulfonato Trt: tritil

Peptideos sintetizados por metodologia de Fmoc foram clivados com uma mistura de TFA/TIS/H20 (v/v/v = 95:2,5:2,5). A etapa de clivagem na metodologia de Boc foi realizada com uma mistura de HF/anisol (v/v = 9:1) ou com uma mistura de TMSOTf/TFA/m-cresol (v/v/v = 2:7:1). 102

Reações de ligação em alongamento de cadeia de peptideo foram realizadas manualmente num sintetizador de peptideo e mediadas por reagentes de ligação com um excesso de 2 a 4 vezes de derivados de aminoácido. Os reagentes usados na sintese dos vários compostos da invenção foram escolhidos das seguintes combinações: DIC/HOBt, HATU/DIEA, HBTU/DIEA, TBTU/DIEA, PyBOP/DIEA e BOP/DIEA. A desproteção da cadeia lateral do aminoácido na posição No. 4 (designada Xaa4 no produto final da amida peptidica sintética) dos peptideos ligados à resina foi realizada como se segue: os peptideos foram montados iniciando a partir de Xaa4 e progressivamente adicionando Xaa3, então Xaa2 e finalmente, Xaai. Os grupos de proteção de cadeia lateral do diaminoácido introduzidos em Xaa4 foram seletivamente removidos como se segue: (i) grupos N-Dde ou NivDde foram removidos por 2-4% hidrazina em DMF. Ver, Chabra, S. R., e cols., Tetrahedron Lett. 39:1.603-1.606 (1998) e Rohwedder, B., e cols., Tetrahedron Lett., 39: 1.175 (1998); (ii) N-Aloc: removido por 3 equivalentes de (Ph3P) 4Pd em CHCl3/AcOH/NMM (v/v/v = 37:2:1). Ver, Kates, S. A., e cols. em "Peptides Chemistry, Structure and Biology, Proc. 13th American Peptideo Symposium", Hodges, R. S. e Smith, J. A. (Eds), ESCOM, Leiden, 113-115 (1994).

Quando os peptideos foram montados com metodologia de proteção de Boc, o grupo de proteção de cadeia lateral dos diaminoácidos introduzidos em Xaa4 foi N-Fmoc, que foi removido por 20-30% piperidina em DMF.

Isopropilação do nitrogénio terminal na cadeia lateral do aminoácido em Xaa4 dos peptideos ligados à resina foi realizada como se segue: Depois de desproteção, o peptideo ligado à resina com a função livre de ω-amino em Xaa4 103 reagiu com uma mistura de acetona e NaBH(OAc)3 em TMOF produzindo o peptideo Νω-isopropilo ligado à resina.

Monometilação do azoto na cadeia lateral do aminoácido em Xaa4 dos peptideos ligados à resina: Para sintetizar peptideos Νω-metilo ligados à resina, a função livre de ω-amino foi primeiramente derivatizada com cloreto de o-nitrobenzeno-sulfonila (oNBS-Cl; Biron, E.; Chatterjee, J.; Kessler, H. Optimized selective N-metilation of peptides on solid support. J. Pep. Sei. 12:213-219 (2006). A sulfonamida resultante foi então metilada com uma mistura de dimetilsulfato e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno em NMP. 0 grupo de proteção de o-NBS foi subsequentemente removido por uma mistura de mercaptoetanol e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno em NMP.

Guanilação do azoto na cadeia lateral do aminoácido em Xaa4 dos peptideos ligados à resina: Depois de desproteção, o peptideo ligado à resina com a função livre de co-amino na posição No. 4 reagiu com uma mistura de cloridrato de lH-pirazol-l-carboxamidina (Bernatowicz, M. S., e cols., J. Org. Chem. 57, 2.497- 2.502 (1992)) e DIEA em DMF produzindo o peptideo Νω-guanidino ligado à resina.

Os peptideos foram purificados por HPLC preparatória em tampões de fosfato de trietilamónio (TEAP) ou ácido trifluoracético (TFA). Quando necessário, os compostos foram finalmente convertidos a trifluoracetato ou sais de acetato com o uso de metodologia convencional de HPLC. Frações com pureza que excede 97% foram reunidas e liofilizadas. A pureza dos peptideos sintetizados foi determinada por RP-HPLC analitica. 104 RP-HPLC analítica foi realizada num sistema de liberacao de multi-solvente Waters 600 com um detector de absorvência de UV ajustado Waters 486 e um módulo de dados Waters 746. As análises de HPLC dos peptídeos foram realizadas com o uso de uma coluna Vydac C18 (0,46 x 25 cm, tamanho de partícula 5 μιη, tamanho de poro 300 Â) numa taxa de fluxo de 2,0 mL/min. Solventes A e B foram 0,1% TFA em H20 e 0,1% TFA em 80% ACN/20% H20, respetivamente. Os tempos de retenção (tR) são dados em minutos. RP-HPLC preparatória foi realizada com o uso de um cartucho preparatório Vydac C18 (5 x 30 cm, tamanho de partícula 15-20 μιη, tamanho de poro 300 Â) numa taxa de fluxo de 100 mL/min, num sistema de cromatografia preparatória Waters Prep LC 2000 com um detector de absorvência de UV ajustado Waters 486 e um gravador de gráfico em tiras Servogor 120.

Os tampões A e B foram 0,1% TFA em H20 e 0,1% TFA em 60% ACN/40% Η20, respetivamente. Análise de HPLC do composto final foi realizada num Cromatógrafo Líquido Hewlett Packard 1090 com o uso de uma coluna Fenomenex Synergi MAX-RP C12 (2,0 x 150 mm, tamanho de partícula 4 μιη, tamanho de poro 80 Â) numa taxa de fluxo de 0,3 mL/min a 40°C. Os tampões A e B foram 0,01% TFA em H20 e 0,01% TFA em 70% ACN/30% H20, respetivamente. A identidade das amidas peptídicas sintéticas foi confirmada por espectrometria de massa de eletrovaporização. Os espectros de massa foram registrados num espectrômetro de massa Finnigan LCQ com uma fonte ESI. EXEMPLO 1: Síntese de composto (1) D-Phe-D-Phe-D-Leu- (s-Me)D-Lys- [amida de 4-amidinohomo piperazina] (Id. de Seq. N° 1). 105

Ver o esquema mostrado na Figura 1. Os derivados de aminoácido usados foram Bcz-D-Phe-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Leu-OH e Fmoc-D-Lys(Dde)-OH. O peptideo ligado à resina totalmente protegido foi sintetizado manualmente partindo de resina p-nitrofenilcarbonato de Wang (5,0 g, 4,4 mmol; Novabiochem). A adesão de homopiperazina à resina foi obtida por sua mistura com uma solução de homopiperazina (8,7 g, 87 mmol; Acros Organics) em DCM (100 mL) de um dia para o outro em temperatura ambiente. A resina foi lavada com DMF e DCM e seca in vacuo. A resina carbamato de homopiperazina de Wang resultante (5,1 g; homopiperazina[resina carbamato de Wang]) foi dividida em várias porções, e uma porção de 1,5 g (1,3 mmol) foi usada para continuar a sintese peptidica. Acoplamentos simples mediados por DIC/HOBt foram feitos com um excesso de 3 vezes de derivados de aminoácido. O grupo Fmoc foi removido com piperidina 25% em DMF. Com o término do alongamento da cadeia peptidica, a resina foi tratada com hidrazina 4% em DMF por 3x3 min para remoção de Dde. A resina foi lavada com DMF e DCM e seca in vacuo. A resina peptidica resultante (2,4 g; Bcz-D-Phe-D-Phe-DLeu-DLys- homopiperazina[resina carbamato de Wang]) foi dividida novamente, e uma porção de 0,6 g (0,3 mmol) foi usada para derivatização subsequente (N-metilação). A Metilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4 foi realizada em três etapas: (i) [Proteção de o-NBS] : o peptideo ligado à resina (0,3 mmol) foi primeiro tratado com uma solução de o-NBS-Cl (0,4 g, 2 mmol) e colidina (0,7 mL, 5 mmol) em NMP (7 mL) em temperatura ambiente por 30 min. A resina foi então lavada com NMP. (ii) [N-Metilação] : 0 peptideo ligado à resina protegido por o-NBS foi então reagido com uma solução de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,5 mL, 3 mmol) e dimetilsulf ato (1,0 mL, 10 mmol; 106

Aldrich) em NMP (7 mL) em temperatura ambiente por 5 min. A resina foi então lavada com NMP e o processo de lavagem foi repetido uma vez. (iii) [Desproteção de o-NBS]: a resina peptidica foi tratada com uma solução de mercaptoetanol (0,7 mL, 10 mmol) e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,8 mL, 5 mmol) em NMP (7 mL) em temperatura ambiente por 5 min. A resina foi então lavada com NMP e o processo de lavagem foi repetido uma vez.

Para proteger a N-metilo amina secundária resultante de D-Lys em Xaa4, o peptideo metilado ligado à resina foi reagido com uma solução de Bcz-OSu (6 mmol) em DMF (7 mL) . A resina foi lavada com DMF e DCM e seca in vacuo. O peptideo foi então clivado da resina por tratamento com uma solução de TFA/DCM (15 mL, v/v = 1:1) em temperatura ambiente por 2 horas. A resina foi então filtrada e lavada com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo e o peptideo bruto (0,3 mmol; Bcz-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys(Me,Bcz)-[amida de homopiperazina]) foi precipitado por éter dietilico.

Para guanilação da homopiperazina no terminal C, o peptideo acima (0,3 mmol) foi tratado com uma solução de cloridrato de lH-pirazol-l-carboxamidina (0,4 g, 3,0 mmol) e DIEA (0,5 mL, 6 mmol) em DMF (3 mL) de um dia para o outro em temperatura ambiente. Ácido acético e H20 foram adicionados para extinguir a reação, e a solução foi congelada e seca num liofilizador, para gerar o peptideo protegido desejado, Bcz-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys(Me,Z)-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (0,6 g) .

Para desproteção/hidrólise final, o peptideo acima (0,6 g) foi tratado com uma mistura de TMSOTf/TFA/m-cresol (10 mL, v/v/v = 2:7:1) em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi evaporada, e o peptideo bruto (0,6 g) foi precipitado por éter dietilico. 107

Para purificação, o peptideo bruto derivado acima (0,6 g) foi dissolvido em TFA 0,1% em H20 (50 mL) , e a solução foi carregada numa coluna de HPLC e purificada usando o sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H20 e B = TFA 0,1% em ACN 60%/H2O 40%) . O composto foi eluido com um gradiente linear de tampão B, 25% B até 75% B ao longo de 30 min, tR = 37% de B. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e secas num liofilizador, para gerar o peptideo purificado como um pó amorfo branco (153 mg) . Análise por HPLC: tR = 14,41 min, pureza de 99,8%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 692,5, observada - 692,5. EXEMPLO 2: Síntese de composto (2) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys- [co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N° 2):

Ver o esquema da Figura 2 e Biron e cols., "Optimized selective N-metilation of peptides on solid support". J. Peptide Science 12: 213-219 (2006). Os derivados de aminoácido usados foram Boc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-D-LeuOH, Fmoc-D-Lys(Dde)-OH e ácido N-Boc-amino-(4-N-Fmoc-piperidinil) carboxilico. Foram realizadas análises de HPLC e MS, como descrito na síntese do composto (1) descrita acima. O peptideo totalmente protegido ligado à resina foi sintetizado manualmente partindo de resina cloreto 2-clorotritila (1,8 g, 0,9 mmol; Peptide International). A adesão de ácido N-Boc-amino-(4-N-Fmoc-piperidinil) carboxilico seguida por alongamento da cadeia peptídica e desproteção de Dde em D-Lys (Dde) em Xaa4 foi realizada de 108 acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (1) . Ver acima. A resina peptídica resultante (0,9 mmol; Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-(ácido NBoc-amino-4-piperidinil-carboxílico)-[resina 2-Cl-Trt]) foi dividida, e uma porção de 0,3 mmol foi usada para clivagem subsequente. A resina peptidica (0,3 mmol) foi então tratada com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 min. A resina foi então filtrada e lavada com TFA. 0 filtrado foi evaporado in vacuo e o peptideo bruto (0,3 mmol; D-Phe-D-Phe-DLeu-D-Lys-[co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxilico) ]-OH) foi precipitado por éter dietilico.

Para purificação, o peptideo bruto (0,3 mmol) foi dissolvido em ácido acético 2% em H20 (50 mL), e a solução foi carregada numa coluna de HPLC e purificada usando o sistema de tamponamento de TEAP com um pH de 5,2 (tampões A = TEAP 5,2 e B = TEAP 5,2 20% em ACN 80%). O composto foi eluido com um gradiente linear de tampão B, 7% de B até 37% de B ao longo de 60 min. As frações com pureza acima de 95% foram reunidas em reservatório, e a solução resultante foi diluida com dois volumes de água. A solução diluída foi então carregada numa coluna de HPLC para troca de sal e purificação adicional com um sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H20 e B = TFA 0,1% em ACN 80%/H2O 20%), e um gradiente linear de tampão B, 2% de B até 75% de B ao longo de 25 min. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e secas num liofilizador, para gerar o peptideo purificado como um pó amorfo branco (93 mg). Análise por HPLC: tR = 16,43 min, pureza de 99,2%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 680,4, observada - 680,3. 109 O Composto (2) também foi preparado usando um esquema de reação análogo àquele mostrado na figura 2, com os seguintes derivados de aminoácido: Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Leu-OH, Fmoc-D-Lys(Boc)-OH e ácido Boc-4-amino-l-Fmoc-(piperidina)-4-carboxílico. O peptideo totalmente protegido ligado à resina foi sintetizado manualmente partindo de resina cloreto 2-clorotritila (PS DVB 1%, 500 g, 1 meq/g) . A resina foi tratada com ácido Boc-4-amino-l-Fmoc-4-(piperidina)-4-carboxílico (280 g, 600 mmol) numa mistura de DMF, DCM e DIEA (260 mL de cada) foi adicionada. A mistura foi agitada por 4 horas, e então a resina foi coberta por 1 hora pela adição de MeOH (258 mL) e DIEA (258 mL) . A resina foi isolada e lavada com DMF (3x3 litros). A resina contendo o primeiro aminoácido foi tratada com piperidina em DMF (3 x 3 litros de 35%), lavada com DMF (9x3 litros) e Fmoc-D-Lys (Boc) -OH (472 g) foi acoplado usando PyBOP (519 g) na presença de HOBt (153 g) e DIEA (516 mL) e em DCM/DMF (500 mL/ 500 mL) com agitação por 2,25 horas. O dipeptideo contendo resina foi isolado e lavado com DMF (3 x 3,6 litros) . O grupo Fmoc foi removido por tratamento com piperidina em DMF (3 x 3,6 litros de 35%) e a resina foi lavada com DMF (9 x 3,6 litros) e tratada com Fmoc-D-Leu-OH (354 g) , DIC (157 mL) e HOBt (154 g) em DCM/DMF (500 mL / 500 mL) e agitada por 1 hora. A lavagem subsequente com DMF (3 x 4,1 litros), seguida por clivagem do grupo Fmoc com piperidina em DMF (3 x 4,2 litros de 35%) e então lavagem da resina com DMF (9 x 4,2 litros), forneceu o tripeptideo ligado à resina. Esse material foi tratado com Fmoc-D-Phe-OH (387 g) , DIC (157 mL) e HOBt (153 g) em DCM/DMF (500 mL / 500 mL) e agitado de um dia para o outro. A resina foi isolada, lavada com DMF (3 x 4,7 litros), e então tratada com piperidina em DMF (3 x 4,7 litros de 35%) para clivar o grupo Fmoc, e então lavada novamente com DMF (9 x 4,7 110 litros). A resina carregada com tetrapeptideo foi tratada com Fmoc-D-Phe-OH (389 g) , DIC (157 mL) e HOBt (154 g) em DCM/DMF (500 mL / 500 mL) e agitada por 2,25 horas. A resina foi isolada, lavada com DMF (3 x 5,2 litros) e então tratada com piperidina (3 x 5,2 litros de 35%) em DMF. A resina foi isolada e lavada sequencialmente com DMF (9 x 5,2 litros) então DCM (5 x 5,2 litros). Ela foi seca para gerar um rendimento de 90,4% de peptideo protegido ligado à resina. O peptideo foi clivado da resina usando TFA/ água (4,5 litros, 95/5), o que também serviu para remover os grupos de proteção Boc. A mistura foi filtrada, concentrada (1/3) e então precipitada por adição a MTBE (42 litros) . 0 sólido foi coletado por filtração e seco sob pressão reduzida para gerar o peptideo bruto.

Para purificação, o peptideo bruto foi dissolvido em TFA 0,1% em H20, e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (C18) usando um gradiente de TFA 0,1%/água - ACN como a fase móvel. As frações com pureza acima de 95% foram reunidas em reservatório, concentradas e liofilizadas para fornecer peptideo puro (> 95,5% puro). Foi efetuada troca iónica usando uma resina de troca iónica Dowex, eluindo com água. A fase aquosa foi filtrada (cápsula de filtro de 0,22 μπι) e liofilizada, para gerar o sal de acetato do peptideo (rendimento global, 71,3%, >99% puro). EXEMPLO 3: Síntese de composto (3) Ácido D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me)D-Lys-[ω(4- aminopiperidina-4-carboxilico)]-OH (Id. de Seq. N° 1): 2-Cl-Trt] que A sintese foi iniciada com 0,3 mmol da resina peptidica: Boc-D-PheD-Phe-D-Leu-D-Lys-(ácido N-Boc-amino-4-piperidinil-carboxilico)-[resina 2-Cl-Trt], que foi 111 preparada durante a síntese do composto (2), como descrito abaixo. Também foram realizadas análises de HPLC e MS, como descrito na síntese do composto (2) acima.

Para a metilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4, foi seguido um procedimento de três etapas como descrito na síntese do composto (1). Ver a descrição acima. 0 peptídeo metilado ligado à resina (Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu (ε-Me)D-Lys-(ácido N-Boc-amino-4-piperidinil-carboxílico)-[resina 2-C1-Trt] ) foi então tratado com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 min. A resina foi então filtrada e lavada com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo e o peptídeo bruto (0,3 mmol; D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me) D-Lys- [co (ácido 4-amino-piperidina-4- carboxílico)]-OH) foi precipitado por éter dietílico. O peptídeo bruto (0,3 mmol) foi purificado por HPLC preparativa de acordo com o protocolo descrito na síntese do composto (2). Ver acima. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e secas num liofilizador, para gerar o peptídeo purificado como um pó amorfo branco (185 mg). Análise por HPLC: tR = 16,93 min, pureza de 99,2%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 694,4, observada - 694,4. EXEMPLO 4: Sintese de composto (4) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 2):

Os derivados de aminoácido usados foram Boc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Leu-OH, Fmoc-D-Lys(Dde)-OH e N-(l-Fmoc-piperidin-4-il)-L-prolina. Foram realizadas análises 112 de HPLC e MS, como descrito na síntese do composto (1). Ver descrição detalhada acima. 0 esquema seguido foi substancialmente como mostrado na Figura 2, exceto que os acoplamentos foram mediados por HATU/DIEA, ao invés de DIC. 0 peptídeo totalmente protegido ligado à resina foi sintetizado manualmente partindo de resina cloreto 2-clorotritila (3,2 g, 2,4 mmol; NeoMPS). A adesão do primeiro aminoácido à resina foi obtida por tratamento com uma mistura de N-(l-Fmoc-piperidin-4-il)-L-prolina (2,0 g, 4,8 mmol) e DIEA (3,3 mL, 19,2 mmol) em DCM (40 mL) e DMF (10 mL) em temperatura ambiente por 4 horas. A resina foi lavada com 3x DCM/MeOH/DIEA (v/v/v = 17:2:1) e 3x DCM e seca in vacuo. A resina resultante (3,7 g; N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt]) foi dividida em várias porções e uma porção de 1,9 g (1,2 mmol) foi usada para continuar a síntese peptídica. Foram feitos acoplamentos simples mediados por HATU/DIEA com um excesso de 3 vezes de derivados de aminoácido. O grupo Fmoc foi removido com piperidina 25% em DMF. Com o término de alongamento da cadeia peptídica, a resina foi tratada com hidrazina 4% em DMF três vezes por 3 min cada para remover Dde. A resina foi lavada com DMF e DCM e seca in vacuo. A resina peptídica resultante (2,1 g; Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt]) foi dividida novamente, e uma porção de 0,7 g (0,4 mmol) foi usada para clivagem subsequente. A resina peptídica foi tratada com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 min. A resina foi filtrada e lavada com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo e o peptídeo bruto (220 mg, D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH) foi precipitado por éter dietílico. 113

Para purificação, o peptideo bruto acima (220 mg) foi dissolvido em TFA 0,1% em H2O (50 mL) e a solução foi carregada numa coluna de HPLC e purificada usando o sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H2O e B = TFA 0,1% em ACN 60%/H2O 40%) . O composto foi eluido com um gradiente linear de tampão B, 25% B até 75% B ao longo de 25 min, tR = 43% de B. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e secas num liofilizador, para gerar o peptideo purificado como um pó amorfo branco (89 mg) . Análise por HPLC: tR = 18,22 min, pureza de 99,5%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 734,5, observada - 734,4. EXEMPLO 5: Síntese de composto (5) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]- OH (Id. de Seq. N°: 3): A resina peptidica Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt], que foi preparada durante a síntese do composto (4) descrita acima, foi usada como o material de partida. Foram realizadas análises de HPLC e MS, como descrito na síntese do composto (1) acima.

Para guanilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4, a resina peptidica (0,7 g, 0,4 mmol) foi tratada com uma mistura de cloridrato de lH-pirazol-l-carboxamidina (0,6 g, 4,0 mmol) e DIEA (0,7 mL, 4,0 mmol) em DMF (15 mL) de um dia para o outro em temperatura ambiente. A resina foi lavada com DMF e DCM e seca in vacuo. O peptideo foi então clivado da resina por tratamento com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 min. A resina foi então filtrada e lavada 114 com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo, e o peptídeo bruto (170 mg; D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH) foi precipitado por éter dietilico.

Para purificação, o peptideo bruto acima (170 mg) foi dissolvido em TFA 0,1% em H20 (50 mL) , e a solução foi carregada numa coluna de HPLC e purificada usando um sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H20 e B = TFA 0,1% em ACN 60%/H2O 40%) . O composto foi eluido com um gradiente linear de tampão B, 25% B até 75% B ao longo de 25 min, tR = 46% de B. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e liofilizadas para gerar o peptideo purificado como um pó amorfo branco (81 mg) . Análise por HPLC: tR = 19,42 min, pureza de 100%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 776,5, observada - 776,5. EXEMPLO 6: Síntese de composto (6) D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-Me) D-Lys-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 1): A sintese foi iniciada com 0,7 g (0,4 mmol) da resina peptidica, Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt], que foi preparada durante a sintese do composto (4), como descrito acima. Foram realizadas análises de HPLC e MS, como descrito na sintese do composto (1) acima. Nesse caso, o peptideo Xaai-Xaa4 foi pré-sintetizado e acoplado, ao contrário à montagem em etapas do peptideo mostrada na Figura 2.

Para a metilação da função co-amino de D-Lys em Xaa4, foi seguido um procedimento de três etapas, como descrito 115 na síntese do composto (1) acima. 0 peptídeo metilado ligado à resina (Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me)D-Lys-N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt]) foi então tratado com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 minutos. A resina foi filtrada e lavada com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo, e o peptídeo bruto (200 mg; D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-Me)D-Lys-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH) foi precipitado por éter dietílico.

Para purificação, o peptídeo bruto acima (200 mg) foi dissolvido em TFA 0,1% em H20 (50 mL), e a solução carregada numa coluna de HPLC e purificada usando um sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H20 e B = TFA 0,1% em ACN 60%/H2O 40%) . O composto foi eluído com um gradiente linear de tampão B 25% a 75%, ao longo de 30 min, tR = 42% de B. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e secas num liofilizador, para gerar o peptídeo purificado como um pó amorfo branco (41 mg) . Análise por HPLC: tR = 18,66 min, pureza de 98,1%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 748,5, observada - 748,5. EXEMPLO 7: Síntese de composto (7) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida de homopiperazina] (Id. de Seq. N° 4):

Os derivados de aminoácido usados foram Boc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-D-Leu-OH e Fmoc-D-Arg (Pbf)-OH. Foram realizadas análises de HPLC e MS, como na síntese do composto (1) descrita acima. O peptídeo ligado à resina totalmente protegido foi sintetizado num Sintetizador 116 Múltiplo SYMPHONY (Protein Technology Inc.) partindo da resina carbamato de homopiperazina de Wang (0,35 mmol; homopiperazina-[resina carbamato de Wang]) que foi preparada durante a sintese do composto (1) . Foram feitos acoplamentos simples mediados por HBTU/DIEA com um excesso de 4 vezes de derivados de aminoácido. O grupo Fmoc foi removido com piperidina 25% em DMF. Com o término da sintese automatizada, a resina peptidica (Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg(Pbf)-[amida de homopiperazina]) foi transferida para um vaso de sintese peptidica manual, e tratada com uma mistura de TFA/TIS/H20 (15 mL, v/v/v = 95:2,5:2,5) em temperatura ambiente por 90 min. A resina foi filtrada e lavada com TFA. O filtrado foi evaporado in vacuo, e o peptideo bruto (380 mg; D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida de homopiperazina]) foi precipitado por éter dietilico.

Para purificação, o peptideo bruto acima (380 mg) foi dissolvido em TFA 0,1% em H20 (50 mL) e a solução foi carregada numa coluna de HPLC e purificada usando um sistema de tamponamento de TFA (tampões A = TFA 0,1% em H20 e B = TFA 0,1% em ACN 60%/H2O 40%) . O composto foi eluido com um gradiente linear de tampão B, 25% B até 75% B ao longo de 25 min, tR = 36% de B. As frações com pureza acima de 97% foram reunidas em reservatório, congeladas e liofilizadas para gerar o peptideo purificado como um pó amorfo branco (222 mg). Análise por HPLC: tR = 16,75 min, pureza de 100%, gradiente 2% de B até 22% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 664,4, observada - 664,5. EXEMPLO 8: Sintese de composto (8) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[ω(ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico]-OH (Id. de Seq. N° 3): 117

Esse composto foi preparado basicamente de acordo com o procedimento descrito acima para a síntese do composto (5), exceto que ácido N-Boc-amino-(4-N-Fmoc-piperidinil) carboxílico serviu de substituto para N-(1-Fmoc-piperidin-4-il)-L-prolina na adesão à resina 2-Cl-Trt. Peptídeo purificado final: pó amorfo, 85 mg em rendimento numa escala de síntese de 1 mmol. Análise por HPLC: tR = 17,87 min, pureza de 100%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 722,4, observada - 722,5. EXEMPLO 9: Síntese de composto (9) D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-iPr) D-Lys-[ω(ácido 4- aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N° 5): A síntese foi iniciada a partir de 0,15 mmol da resina peptídica Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-(ácido N-Boc-amino-4-piperidinil-carboxílico)-[resina 2-Cl-Trt], que foi preparada durante a síntese do composto (2) acima. Para isopropilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4, a resina peptídica foi tratada com uma mistura de triacetoxiborohidreto de sódio (3 mmol) e acetona (6 mmol) em TMOF (10 mL) por 4 horas em temperatura ambiente. As etapas de clivagem e purificação subsequentes foram realizadas de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (2). Peptídeo purificado final: pó amorfo, 67 mg em rendimento. Análise por HPLC: tR = 19,29 min, pureza de 98,4%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 722,5, observada - 722,5. EXEMPLO 10: Síntese de composto (10): 118 D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-Dap-[ω(ácido 4- aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N° 6):

Ver o esquema da Figura 3. Os derivados de aminoácido usados foram Boc-D-Phe-OH, Boc-D-Phe-OH, Boc-D-Leu-OH, Boc-D-Dap(Fmoc)-OH e ácido N-Fmoc-amino-(4-N-Boc-piperidinil) carboxilico. Foram realizadas análises de HPLC e MS, como descrito na sintese do composto (1). 0 peptideo totalmente protegido ligado à resina foi sintetizado manualmente começando com a resina 4-Fmoc-hidrazinobenzoil AM NovaGel (3 mmol; Novabiochem). Primeiro o grupo de proteção Fmoc na resina de partida foi removido por piperidina 25% em DMF, e a resina foi então tratada com uma mistura de ácido N-Fmoc-amino- (4-N-Boc-piperidinil) carboxilico (7,5 mmol), PyBOP (7,5 mmol) e DIEA (15 mmol) em DMF de um dia para o outro em temperatura ambiente. 0 grupo Fmoc no aminoácido anexado foi substituído por o-NBS em duas etapas: (i) remoção Fmoc por piperidina 25% em DMF. (ii) proteção de o-NBS de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (1) . A resina peptídica resultante, ácido N-o-NBS-amino-(4-N-Boc-piperidinil) carboxilico-[resina hidrazinobenzoil AM NovaGel], foi dividida em várias porções, e uma porção de 1 mmol foi usada para continuar a síntese peptídica. Foram feitos acoplamentos simples mediados por PyBOP/DIEA com um excesso de 3 vezes de derivados de aminoácido. 0 grupo Boc foi removido com TFA 30% em DCM. Com o término de alongamento da cadeia peptídica, a resina foi tratada com DBU 2% em DMF por 2x8 min para remoção de Fmoc, seguida por guanilação da função ω-amino de D-Dap em Xaa4 de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (5), acima. A desproteção de o-NBS final foi realizada de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (D · 119

Para clivagem oxidativa, a resina peptídica seca foi misturada com uma mistura de Cu(OAc)2 (1 mmol), piridina (4 mmol) e DBU (2 mmol) em H20 5% em DMF e foi borbulhado ar através da resina por 6 h em temperatura ambiente. A resina foi filtrada e lavada com DMF, e o filtrado foi evaporado in vacuo. 0 residuo, Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-

Dap-[co (ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico) ] -OH, foi tratado com 95% TFA em H20 para remoção de Boc. A solução foi evaporada in vacuo e o peptideo bruto (1 mmol; D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-Dap-[ω(ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH) foi precipitado por éter dietilico. A purificação do peptideo bruto acima foi obtida de acordo com o protocolo descrito na síntese do composto (2). 0 peptideo purificado era um pó amorfo (16 mg). Análise por HPLC: tR = 16,97 min, pureza de 99,9%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 680,4, observada - 680,4. EXEMPLO 11: Sintese de composto (11) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar-[ω(ácido 4-aminopiperidina-4-carboxílico)]-OH (Id. de Seq. N° 7):

Esse composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (10), exceto que Boc-D-Dbu(Fmoc)-OH serviu de substituto para Boc-D-Dap(Fmoc)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4. Peptideo purificado final: pó amorfo, 23 mg em rendimento numa escala de síntese de 1 mmol. Análise por HPLC: tR = 17,12 min, pureza de 99,2%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 694,4, observada - 694,5. 120 EXEMPLO 12: Sintese de composto (12) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dbu-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 8):

Esse composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (4), como descrito acima. A variação foi a substituição de Fmoc-D-Dbu(ivDde)-OH para Fmoc-D-Lys(Dde)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4. Peptideo purificado final: pó amorfo, 7 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,4 mmol. Análise por HPLC: tR = 18,15 min, pureza de 98,9%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 706,4, observada - 706,4. EXEMPLO 13: Sintese de composto (13) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 7): A sintese foi iniciada a partir de 0,4 mmol da resina peptidica Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dbu-N-(4-piperidinil)-L-prolina-[resina 2-Cl-Trt], que foi preparada durante a sintese do composto (12) . A guanilação da função co-amino de D-Dbu em Xaa4 foi obtida de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (5), acima. As etapas de clivagem e purificação subsequentes foram realizadas de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (1). Peptideo purificado final: pó amorfo, 7 mg em rendimento. Análise por HPLC: tR = 18,68 min, pureza de 97,3%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 748,5, observada - 748,5. 121 EXEMPLO 14: Síntese de composto (14) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dap(amidino)-[N-(4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 6): 0 composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (13), exceto que Fmoc-D-Dap(ivDde)-OH serviu de substituto para Fmoc-D-Dbu(ivDde)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4. Peptideo purificado final: pó amorfo, 12 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,4 mmol. Análise por HPLC: tR = 18,55 min, pureza de 98,0%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 734,4, observada - 734,4. EXEMPLO 15: Sintese de composto (15) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4- amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 2): O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (1), exceto que a metilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4 foi omitida. Peptideo purificado final: pó amorfo, 140 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 14,02 min, pureza de 99,3%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 678,4, observada - 678,5. EXEMPLO 16: Sintese de composto (16) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Har-[amida de 4- amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 3): 122 0 composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (1), exceto que a etapa de guanilação serviu de substituto para a metilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa4. A guanilação foi obtida de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (5) , acima. Peptideo purificado final: pó amorfo, 173 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 15,05 min, pureza de 98,6%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 720,5, observada - 720,5. EXEMPLO 17: Sintese de composto (17) D-Phe-D-Phe-D-Leu-(ε-iPr)D-Lys-[amida de 4-amidino-homopiperazina] (Id. de Seq. N° 5): O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (1) , exceto que uma etapa de isopropilação substituiu a metilação da função ω-amino de D-Lys em Xaa^. A isopropilação foi obtida de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (9). Peptideo purificado final: pó amorfo, 233 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 16,16 min, pureza de 94,5%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 720,5, observada - 720,5. EXEMPLO 18: Sintese de composto (18) D-Phe-D-Phe-D-Leu-(β-amidino)D-Dap-[amida de 4-amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 6): 0 composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (16), exceto para a 123 substituição de Fmoc-D-Dap(ivDde)-OH para Fmoc-D-Lys(Dde)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4. Peptideo purificado final: pó amorfo, 155 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 14,44 min, pureza de 99,1%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 678,4, observada - 678,5. EXEMPLO 19: Sintese de composto (19) D-Phe-D-Phe-D-Nle-((β-amidino)D-Dap[amida de 4- amidino-homopiperazina] (Id. de Seq. N° 6): O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na sintese do composto (18) acima, exceto para a substituição de Fmoc-D-Nle-OH para Fmoc-D-Leu-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa3. Peptideo purificado final: pó amorfo, 190 mg em rendimento numa escala de sintese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 14,69 min, pureza de 98,9%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 678,2, observada - 678,5. EXEMPLO 20: Sintese de composto (20) D-Phe-D-Phe-D-Leu-((3-amidino)D-Dap-[amida de homopiperazina] (Id. de Seq. N° 6):

O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (18) acima, exceto que a guanilação da homopiperazina no terminal C foi omitida. Peptideo purificado final: pó amorfo, 172 mg em rendimento numa escala de síntese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 13,84 min, pureza de 99,1%, gradiente 5% de B até 25% de B 124 ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 636,4, observada - 636,5. EXEMPLO 21: Sintese de composto (21) D-Phe-D-Phe-D-Nle-(β-amidino)D-Dap-[amida de homopiperazina] (Id. de Seq. N° 6): O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (19), exceto que a guanilação da homopiperazina no terminal C foi omitida. Peptídeo purificado final: pó amorfo, 149 mg em rendimento numa escala de síntese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 14,06 min, pureza de 98,5%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 636,4, observada - 636,5. EXEMPLO 22: Sintese de composto (22) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Dbu-[amida de 4- amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 8): O composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (15), exceto para a substituição de Fmoc-D-Dbu(ivDde)-OH para Fmoc-D-Lys(Dde)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4. Peptídeo purificado final: pó amorfo, 152 mg em rendimento numa escala de síntese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 14,03 min, pureza de 98,1%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 650,4, observada - 650,5. EXEMPLO 23: Sintese de composto (23) 125 D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Nar-[amida de 4- amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 7): 0 composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (16), exceto para a substituição de Fmoc-D-Dbu(ivDde)-OH para Fmoc-D-Lys(Dde)-OH no acoplamento do derivado de aminoácido em Xaa4.

Peptídeo purificado final: pó amorfo, 227 mg em rendimento numa escala de síntese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR =

14,37 min, pureza de 99,3%, gradiente 5% de B até 25% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+) : massa do ião molecular esperada - 664,4, observada - 664,5. EXEMPLO 24: Síntese de composto (24) D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida de 4- amidinohomopiperazina] (Id. de Seq. N° 4): O composto foi preparado por guanilação da homopiperazina no terminal C de Bcz-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Arg-[amida de homopiperazina], que foi sintetizada de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (7), descrita acima. A clivagem e purificação subsequentes foram realizadas de acordo com o procedimento descrito na síntese do composto (1), acima. Peptídeo purificado final: pó amorfo, 102 mg em rendimento numa escala de síntese de 0,3 mmol. Análise por HPLC: tR = 17,34 min, pureza de 98,4%, gradiente 2% de B até 22% de B ao longo de 20 min; MS (M+H+): massa do ião molecular esperada - 706,5, observada - 706,5. EXEMPLO 25: Síntese de composto (25): 126 D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona] (Id. de Seq. N° 2):

Essas sínteses foram realizadas de acordo com o esquema mostrado na Figura 4. Os intermediários descritos abaixo correspondem àqueles mostrados na Figura 4. A uma suspensão de Boc-D-Phe-OH, intermediário 1-1 (7,96 g, 30,0 mmol) , D-Leu-OBn p-TsOH, intermediário 1-2 (11,80 g, 30,0 irtmol) , monoidrato de HOBt (4,46 g, 33,0 mmol) e DIEA (8,53 g, 66,0 mmol) em THF anidra (250 mL) resfriada num banho-maria gelado foi adicionada EDCI (6,33 g, 33,0 mmol) em quatro porções ao longo de 20 minutos com 5 minutos entre cada adição. A suspensão foi agitada de um dia para o outro a partir de uma temperatura de partida de 0°C até a temperatura ambiente. Após evaporação da THF, o residuo foi dissolvido em acetato de etila e lavado sequencialmente com ácido cítrico 10%, NaHCCq saturado e água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM, passado através de um tampão de gel de sílica e eluído com acetato de etila 20% em hexanos. O eluente foi evaporado, para gerar o produto puro, Boc-D-Phe-D-Leu-OBn, intermediário 1-3 (12,40 g, 88%) como um óleo transparente. LC-MS: m/z = 469 (M+H). O Intermediário 1-3 (12,40 g, 26,5 mmol) foi dissolvido em DCM (50 mL) . TFA (25 mL) foi adicionada, e a solução foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. Após evaporação de DCM e TFA, o resíduo foi submetido à azeotropia com tolueno duas vezes, para gerar o sal de TFA de D-Phe-Leu-OBn, intermediário 1-4. Esse dipeptídeo bruto dói suspenso em THF, ao qual Boc-D-Phe-OH (6,36 g, 24 mmol), monoidrato de HOBt (4,04 g, 26,4 mmol) e DIEA (8,7 mL, 50,0 mmol) foram adicionados a 0°C. EDCI (6,33 g, 6,4 mmol) foi adicionado em quatro porções ao longo de 20 minutos com 5 minutos entre cada adição. A suspensão foi agitada de 0°C até a temperatura ambiente de um dia para o 127 outro. Após evaporação da THF, o resíduo foi dissolvido em acetato de etila e lavado sequencialmente com ácido cítrico 10%, NaHC03 saturado e água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi recristalizado por 400 mL de acetona/hexanos (1:3) para gerar 9,1 g de produto puro. O licor-mãe foi evaporado e novamente recristalizado por acetona/hexanos (1:3) para gerar 2,0 g de produto. O rendimento total foi de 11,1 g (68% para duas etapas). LC-MS: m/z = 616 (M+H). Num frasco lavado com azoto foram adicionados paládio sobre carbono seco (1,8 g) e uma solução de Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-OBn, intermediário 1-5 (11,1 g, 18,05 mmol) em metanol (50 mL) . A mistura foi agitada sob um balão de hidrogénio de um dia para o outro. Após filtração através de celite, o metanol foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetona (20 mL) e adicionado lentamente a 500 mL de água com 25 mL de HC1 1 N sob agitação vigorosa. O produto puro Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-OH, intermediário 1-6, foi obtido por filtração 9,4 g (99%). LC-MS: m/z = 526 (M+H). A uma solução de intermediário 1-6 (2,06 g, 3,90 mmol), cloridrato de D-Lys(Boc)-OA11 (1,26 g, 3,90 mmol) e DIEA (1,7 mL, 9,8 mmol) em DMF, foi adicionada TBTU (1,56 g, 4,88 mmol) em três porções ao longo de 15 min a 0°C. Após agitação de um dia para o outro a partir de uma temperatura de partida de 0°C até a temperatura ambiente, DMF foi evaporada sob alto vácuo. A mistura de reação bruta foi precipitada em 400 mL de água gelada e filtrada para coletar o precipitado, Boc-D-Phe-D-Phe-D-Leu-DLys(Boc)-OA11 intermediário 1-7 (2,60 g) , que foi usado sem purificação adicional para a etapa seguinte. A uma solução de intermediário 1-7 (2,60 g, 3,3 mmol) em MeCN (75 mL) foram adicionados pirrolidina (1,1 mL, 13,3 128 mmol) e paládio tetrakis(trifenilfosfina) (400 mg, 0,35 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas e evaporada até secar. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna de fase reversa com MeCN 30%/água até MeCN 90%/água, para gerar o ácido puro, intermediário 1-8 (2,0 g, 80%), após evaporação de acetonitrilo/água. LC-MS: m/z = 754 (M+H). A uma solução do ácido, intermediário 1-8 (150 mg, 0,20 mmol), da amina HNRaRb, 2,8-diazaspiro [4,5]decan-1-ona (57 mg, 0,30 mmol) e DIEA (175 μΐ, 1,0 mmol) em DMF (5 mL) , foi adicionada HBTU (11,3 mg, 3,0 mmol) a 0°C. Após agitação de um dia para o outro a partir de uma temperatura de partida de 0°C até a temperatura ambiente, DMF foi evaporada sob pressão reduzida. O residuo foi agitado com HC1 4 N em 1,4-dioxano (2,0 mL) em temperatura ambiente por 1 hora. Após remoção do dioxano, o residuo foi dissolvido em água e purificado por cromatograf ia em coluna de fase reversa com um gradiente de MeCN 10%/água até MeCN 60%/água em 30 minutos, para gerar o produto puro, composto (25) (108 mg, 78% de rendimento para as duas etapas) após evaporação de solvente. LC-MS: m/z = 690 (M+H). EXEMPLO 26: Sintese de composto (26): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 2-metilo-2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (26) foi preparado basicamente como descrito para o composto 25 acima, exceto que a amina (HNRaRb no esquema da Figura 4) na etapa de acoplamento final da amida foi 2-metilo-2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona no lugar de 2,8-diazaspiro[4,5]decan-l-ona. LC-MS: m/z = 704 (M+H). 129 EXEMPLO 27: Sintese de composto (27): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1,3,8- triazaspiro[4,5] decano-2,4-diona] (Id. de Seq. N° 2): 0 Composto (27) foi preparado basicamente como descrito para o composto 25 acima, exceto que a amina 1,3,8-triazaspiro[4,5]decano-2,4-diona foi usada na etapa final. LC-MS: m/z = 705 (M+H). EXEMPLO 28: Sintese de composto (28): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 5-cloro-l- (piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3)H-ona] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (28) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 5-cloro-l-(piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3)H-ona foi usada. LC-MS: m/z = 394. EXEMPLO 29: Sintese de composto (29): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de morfolino(piperidin-4-il)metanona] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (29) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina morfolino(piperidin-4-il)metanona foi usada. LC-MS: m/z = 366. EXEMPLO 30: Sintese de composto (30): 130 D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4-fenilo-l- (piperidin-il-lH-imidazol-2(3H)-ona] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (30) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 4-fenilo-l-(piperidin-il-lH-imidazol-2(3H)-ona foi usada. LC-MS: m/z = 779 (M+H). EXEMPLO 31: Síntese de composto (31): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4-(3,5-dimetil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piperidina] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (31) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 4-(3,5-dimetil-4H-l,2,4-triazol-4-il)piperidina foi usada. LC-MS: m/z =716 (M+H). EXEMPLO 32: Síntese de composto (32): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1-(piperidin-4-il) indolin-2-ona] (Id. de Seq. N° 2): O Composto (32) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 1-(piperidin-4-il)indolin-2-ona foi usada. LC-MS: m/z = 752 (M+H). EXEMPLO 33: Síntese de composto (33): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[1-fenilo-l, 3, 8-triazaspiro[4.5] decan-4-ona amida] (Id. de Seq. N° 2): 131 0 Composto (33) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 1-fenilo-l,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-ona foi usada. LC-MS: m/z = 767 (M+H). EXEMPLO 34: Sintese de composto (34): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de imidazo[l,2- a]piridina-2-ilmetanamina] (Id. de Seq. N° 2): 0 Composto (34) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina imidazo[1,2-a]piridina-2-ilmetanamina foi usada. LC-MS: m/z = 683 (M+H). EXEMPLO 35: Sintese de composto (35): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys[amida de (5-metilpirazin-2-il) metilamina] (Id. de Seq. N° 2): 0 Composto (35) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina (5-metilo pirazin-2-il)metanamina foi usada na etapa final. LC-MS: m/z = 659 (M+H). EXEMPLO 36: Sintese de composto (36): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 1-(piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona] (Id. de Seq. N° 2): 0 Composto (36) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 1-(piperidin-4-il)-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona foi usada. LC-MS: m/z = 753 (M+H). 132 EXEMPLO 37: Síntese de composto (37): D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[amida de 4,5,5,7-tetrahidro-ΙΗ-pirazolo[4,3-c]piridina] (Id. de Seq. N° 2): 0 Composto (37) foi preparado basicamente como descrito acima para o composto 25 acima, exceto que a amina 4,5,6,7-tetrahidro-lH-pirazolo[4,3-c]piridina foi usada. LC-MS: m/z = 659 (M+H). EXEMPLO 38: Confirmação de estruturas de amidas peptídicas sintéticas 1-24 A Tabela I mostra o peso molecular calculado do ião molecular, MH+ para cada composto, e o peso molecular real observado por espectrometria de massa. Também é mostrado o tipo de fase sintética usada na síntese de cada composto: fase sólida, ou mista; e o tipo de resina usada na síntese, seja uma resina 2-clorotritila "2-Cl-Trt", uma resina hidrazinobenzoil "hidrazina" ou uma resina p-nitrofenil-carbonato (Wang) "carbonato". 0 número da figura que mostra o esquema sintético relevante para a síntese de cada composto é mostrado na última coluna. 133

Tabela I - Sintese e confirmação de estruturas de compostos (1)-(24) MH+ MH+ FASE COMPOSTO CALCULADO OBSERVADO SINTÉTICA RESINA FIGURA 1 692,5 692,5 mista Carbonato 1 2 680,4 680,3 sólida 2-Cl-Trt 2 3 694,4 694,4 sólida 2-Cl-Trt 2 4 734,5 734,4 sólida 2-Cl-Trt 2 5 776, 5 776, 5 sólida 2-Cl-Trt 2 6 748,5 748,5 sólida 2-Cl-Trt 2 7 664,4 664,5 sólida Carbonato 1 8 722,4 722,5 sólida 2-Cl-Trt 2 9 722,5 722,5 sólida 2-Cl-Trt 2 10 680,4 680,4 sólida hidrazina 3 11 694,4 694,5 sólida hidrazina 3 12 706, 4 706, 4 sólida 2-Cl-Trt 2 13 748,5 748,5 sólida 2-Cl-Trt 2 14 734,4 734,4 sólida 2-Cl-Trt 2 15 678,4 678,5 mista Carbonato 1 16 720,5 720,5 mista Carbonato 1 17 720,5 720,5 mista Carbonato 1 18 678,4 678,5 mista Carbonato 1 19 678,4 678,5 mista Carbonato 1 20 636, 4 636, 5 sólida Carbonato 1 21 636, 4 636, 5 sólida Carbonato 1 22 650,4 650,5 mista Carbonato 23 692,4 692,5 mista Carbonato 1 24 706, 5 706, 5 mista Carbonato 1 EXEMPLO 39: Inibição de produção de cAMP por estimulação do recetor opióide kapa endógeno de ratinho em células RI.G1 A potência das amidas de peptídeos sintéticos como agonistas do recetor opióide kapa foi determinada por 134 medida da inibição da atividade de adenilato ciclase estimulada por forscolina. Células Rl.Gl (uma linhagem de células de timoma de ratinho que só expressa o recetor opióide kapa e nenhum outro subtipo do recetor opióide) foram inicialmente expostas à forscolina (para induzir cAMP) mais a amida peptídica sintética na concentração de teste. Após incubação, o nivel de cAMP nas células Rl.Gl atacadas foi determinado usando um imunoensaio de cAMP baseado em transferência de energia de ressonância de fluorescência tempo-resolvida (TR-FRET) (LANCETM, Perkin Elmer). 0 método detalhado é descrito abaixo: Células Rl.Gl de ratinho (ATCC, Manassas, VA) foram desenvolvidas em suspensão em DMEM com glicose elevada (meio de Eagle modificado por Dulbecco, Cellgro, Herndon, VA) contendo soro de cavalo 10% e glutaMax 2% (Invitrogen, Carlsbad. CA), sem a adição de antibióticos. No dia do ensaio, as células foram centrifugadas a 1.000 rpm por 5 minutos em temperatura ambiente, e então lavadas uma vez com HBSS (solução salina tamponada HEPES, Invitrogen, Carlsbad, CA) . As células foram então centrifugadas novamente, e ressuspensas em tampão de estimulação (HBSS com FAF-BSA 0,05% (albumina sérica bovina, sem ácido gordo, Roche Applied Science, Indianapolis, IN), 5 mM HEPES) até 2 milhões de células por mL. O anticorpo fornecido com o kit de imunoensaio de cAMP LANCETM foi então adicionado às células de acordo com as instruções do fabricante, e 12.000 células por poço foram então adicionadas aos poços contendo forscolina até uma concentração final fixa predeterminada (tipicamente cerca de 2,5 μΜ) e a quantidade determinada previamente da amida peptídica sintética a ser testada. As amidas peptídicas sintéticas foram testadas numa gama de concentrações para determinar a potência. As células foram incubadas com a amida peptídica sintética mais forscolina 135 por cerca de 20 minutos em temperatura ambiente. Após incubação, as células são lisadas por adição de 12 μΐ de mistura de detecção, como fornecido com o kit LANCETM, seguido por incubação por uma hora em temperatura ambiente. A fluorescência tempo-resolvida foi lida usando um filtro de excitação de 330 - 380 nm, um filtro de emissão de 665 nm, espelho dicróico 380 e Z = 1 mm. Uma curva-padrão para a concentração de cAMP nesse ensaio permitiu a determinação da quantidade de cAMP presente em cada poço. Foi produzida uma curva por tabulação da concentração de amida peptidica sintética contra os niveis de cAMP nas células de teste e submetida a uma regressão não linear usando um algoritmo de ajuste de uma curva de quatro parâmetros para calcular a EC50, a concentração da amida peptidica sintética necessária para produzir 50% da supressão máxima da produção de cAMP pela amida peptidica sintética. A Tabela II mostra os valores de EC50 obtidos nesse ensaio com compostos de amida peptidica sintética (1) a (36) .

Tabela II - Atividade e eficácia agonista de opióide kapa mKOR hKOR Composto N° EC50 (nM) Eficácia (%) EC50 (nM) Eficácia (%) (D 0,043 103 0,15 97 (2) 0,048 96 0,16 99 (3) 0,052 96 0,16 100 (4) 0,075 94 0,15 92 (5) 0,034 89 0,17 98 (6) 0,036 89 0,13 100 (7) 0,012 98 0,11 100 (8) 0,043 90 0,12 96 (9) 0,078 96 0,17 100 (10) 0,826 90 0,30 86 136 mKOR hKOR Composto N° EC50 (nM) Eficácia (%) EC50 (nM) Eficácia (%) (11) 0, 052 92 0,15 82 (12) 0,055 89 0,17 100 (13) 0,032 88 0,13 90 (14) 0,349 86 0,21 81 (15) 0,028 92 0,11 92 (16) 0,021 105 0,11 96 (17) 0,039 103 0,10 102 (18) 1,02 103 1,15 93 (19) 2,152 99 nd nd (20) 0,491 102 0,39 84 (21) 0,732 103 1,06 99 (22) 0,095 103 0,18 86 (23) 0,091 104 0,17 84 (24) 0,036 97 0,09 93 (25) 0,0314 82 0,0027 101 (26) 0,0194 86 0,0083 99 (27) 0,0056 87 <0,001 88 (28) 0,0582 83 0,0083 100 (29) 0,0464 86 0,0145 100 (30) 0,1293 88 0,0116 95 (31) 0,0216 86 0,0042 95 (32) 0,0485 92 0,005 102 (33) 0,0767 86 0,0165 101 (34) 0,3539 90 0,0208 101 (35) 0,0359 86 0,0064 99 (36) 0,0234 87 0,0052 100 nd — não c kapa de rat .eterminado; mKOR e hKOR - recetores opióide inho e humanos EXEMPLO 40: Potência de amidas peptidicas sintéticas sobre o recetor opióide kapa humano 137 Células de rim embrionário humano (células HEK-293, ATCC, Manassas, VA) em placas de 100 mm foram transfetadas com reagente de transfeção, Fugeneô (Roche Molecular Biochemicals) e construções de ADN numa proporção de 3,3 para 1. As construções de ADN usadas na transfeção foram as seguintes: (i) um vetor de expressão para o recetor opióide kapa humano, (ii) um vetor de expressão para uma proteina G quimérica humana e (iii) um constructo repórter de luciferase na qual a expressão de luciferase é induzido pelo fator de transcrição sensível ao cálcio NFAT. O vetor de expressão contendo o recetor opióide kapa humano foi construído da seguinte forma: o gene OPRK1 humano foi clonado a partir do ARN total do gânglio da raiz dorsal humana por PCR, e o gene inserido no vetor de expressão pcDNA3 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para construir o vetor de expressão mamífero humano de OPRK1 pcDNA3-hOPRKl.

Para construir o vetor de expressão de proteína G quimérica humana, primeiro foi construído o Gaqi5 de proteína G quimérica por substituição dos últimos 5 aminoácidos de Gaq humano com a sequência dos últimos 5 aminoácidos de Gai por PCR. Uma segunda mutação foi introduzida a esse gene Gaqi5 humano na posição de aminoácido 66 para substituir uma glicina (G) com um ácido aspártico (D) por mutagênese sitio-dirigida. Esse gene foi então subclonado num vetor de expressão mamífero pcDNA5/FRT (Invitrogen) para gerar o vetor de expressão de proteína G quimérica humana, pcDNA5/FRT-hGNAq-G66Di5.

Para preparar o constructo do gene repórter de luciferase, elementos de resposta sintéticos, incluindo 3 cópias de TRE (elementos responsivos a 12-0- 138 tetradecanoilforbol-13-acetato) e 3 cópias de NFAT (fator nuclear de células T ativadas) foram incorporados acima de um promotor mínimo c-fos. Esse cassete de elemento de resposta e promotor foi então inserida num vetor de gene repórter de luciferase pGL3-basic (Promega) para construir o constructo de plasmídeo do gene repórter de luciferase pGL3b-3TRE-3NFAT-cfos-Luc. A mistura de transfeção para cada placa de células incluía 6 microgramas de pcDNA3-hOPRKl, 6 microgramas de pcDNA5/FRT-hGNAq-G66D-i5 e 0,6 micrograma de pGL3b-3TRE-3NFAT-cfos-Luc. As células foram incubadas por um dia a 37°C numa atmosfera umidifiçada contendo C02 5% após transfeção e plaqueadas em placas opacas de 96 poços a 45.000 células por poço em 100 microlitros de meio. No dia seguinte, compostos de teste e de referência foram adicionados às células em poços individuais. Uma gama de concentrações de compostos de teste foi adicionada a um conjunto de poços, e uma gama similar de concentrações de compostos de referência foi adicionada a um conjunto de poços de controle. As células foram então incubadas por 5 horas a 37°C. Ao final da incubação, a células foram Usadas por adição de 100 microlitros de mistura de

detecção contendo substrato de luciferase (AMP (22 μρ/ηϋΐ) , ATP (1,1 mg/mL), ditiotreitol (3,85 mg/mL), HEPES (concentração final de 50 mM) , EDTA (0,2 mg/mL), Triton N-101 (4 μΙ/mL), ácido fenilacético (45 μg/mL), ácido oxálico (8,5 μg/mL) , luciferina (28 μρ/ηϋΐ) , pH 7,8). As placas foram lacradas e a luminescência lida em até 30 minutos. A concentração de cada um dos compostos foi tabulada contra as contagens de luminescência por segundo (cps), e as curvas de resposta resultantes submetidas à regressão não linear usando um algoritmo de ajuste de curva de quatro parâmetros para calcular a EC50 (a concentração de composto 139 necessária para produzir 50% do aumento máximo na atividade de luciferase) e a eficácia (a ativação percentual máxima comparada com a indução plena por qualquer um dos agonistas do recetor opióide kapa bem conhecidos, por exemplo, asimadolina (EMD-61753: Ver Joshi e cols., 2000, J. Neurosci. 20(15): 5.874-9) ou U-69593: Ver Heidbreder e cols., 1999, Brain Res. 616(1-2):335-8). A Tabela II mostra os valores de EC50 obtidos pelo ensaio de inibição de cAMP com os compostos exemplificados sintetizados de acordo com a presente invenção e testados no recetor opióide kapa de ratinho (mKOR) com replicação confirmatória dos resultados sobre o recetor opióide kapa humano (hKOR) pelos métodos descritos acima.

As amidas peptidicas sintéticas da invenção foram testadas num ensaio similar quanto à potência no recetor opióide humano mu. Cada composto testado teve uma EC50 para o recetor opióide humano mu maior ou igual a 1 μΜ. EXEMPLO 41: Permeabilidade da membrana das amidas peptidicas sintéticas A linhagem de células Caco-2 é uma linhagem de células de adenocarcinoma de cólon humano que se diferencia em cultura e é usada como modelo para o revestimento epitelial do intestino delgado humano. Os compostos da presente invenção foram testados num ensaio de permeabilidade da membrana usando o subclone TC7 de Caco-2 num ensaio-padrão (Cerep, Seattle, WA). Resumidamente, o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) foi determinado na direção apical-para-basolateral (A-B) através de monocamadas de células cultivada em filtros de membrana de policarbonato de 96 poços. 140

Os compostos foram testados numa concentração de 10 uM em pH 6,5 em DMSO 1%, com o lado recetor mantido em pH 7,4. A placa do ensaio foi incubada por 60 minutos a 37°C com agitação suave. Foram coletadas amostras no momento zero do lado doador e ao final do período de incubação tanto do lado doador quanto do lado recetor. As amostras foram analisadas por HPLC-MS/MS. O valor de Papp (expresso como 10-6 cm/sec) foi então calculado com base na taxa de surgimento de composto no lado recetor. O Papp foi calculado com a equação:

em que Papp é a permeabilidade aparente; S é a área de superfície da membrana, C0 é a concentração doadora no momento 0 e dQ/dt é a quantidade de fármaco transportada por tempo. Quatro compostos de referência (labetalol, propranolol, ranitidina e vinblastina) foram testados concomitantemente para assegurar a validade do ensaio, bem como asimadolina, que supostamente é um opióide kapa que atua perifericamente. Os resultados são mostrados na Tabela III.

Tabela III - Permeabilidade da membrana

Composto Permeabilidade média (cm-6/sec) (D <0,10 (3) <0,02 (6) <0,02 Asimadolina 37,5 Labetalol 9, 9 Propranolol 53, 8 Ranitidina 0,5 Vinblastina <0,2 141

Acredita-se que os compostos que exibem baixa permeabilidade nesse tipo de ensaio tenham um potencial reduzido para atravessar a barreira hematoencefálica in vivo, na medida em que uma alta permeabilidade passiva parece ser um fator crucial de fármacos que atuam no sistema nervoso central (SNC) (Mahar Doan e cols. "Passive permeability and P-glycoprotein-mediated efflux differentiate central nervous system (CNS) and non-CNS marketed drugs". J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002; 303: 1.029-37) . EXEMPLO 42: Inibição de citocromo P450 oxidases A inibição das isozimas citocromo P450 oxidase CYP1A, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 e CYP3A4 por compostos de amida peptidica sintética da invenção foi determinada de acordo com os seguintes métodos realizados por Cerep (Seattle, WA) :

No ensaio de citocromo P450 CYP1A, microssomas de fígado humano (0,2 mg/mL de proteína) foram incubados por 15 minutos a 37°C com 10 uM do composto de teste, 1 uM de etoxiresoruf ina, 1,3 mM de NADP, 3,3 mM de glicose-6-fosfato e 0,4 U/mL de glicose-6-fosfato desidrogenase. Na ausência de composto de teste, a etoxiresorufina adicionada como substrato é oxidada em resorufina, e na presença de um inibidor da isozima CYP, a quantidade de resorufina produzida é reduzida. Furafilina foi usada como inibidor de referência. A mistura de reação do ensaio de citocromo P450 CYP2C9 contendo microssomas de fígado humano (0,2 mg/mL de proteína) foi incubada por 15 minutos a 37°C com 10 uM de composto de teste, 10 uM de tolbutamida, 1,3 mM de NADP, 142 3,3 mM de glicose-6-fosfato e 0,4 U/mL de glicose-6-fosfato desidrogenase. Na ausência de composto de teste, a tolbutamida é oxidada em 4-hidroxitolbutamida, e na presença de um inibidor da isozima CYP, a quantidade de 4-hidroxitolbutamida produzida é reduzida. Sulfafenazol (IC50: 0,35 uM) foi o inibidor de referência.

Para o ensaio de citocromo P450 CYP2C19, microssomas de figado humano (0,2 mg/mL de proteina) foram incubados por 15 minutos a 37°C, com 10 uM de composto de teste, 10 uM de omeprazol, 1,3 mM de NADP, 3,3 mM de glicose-6-fosfato e 0,4 U/mL de glicose-6-fosfato desidrogenase. Na ausência de composto de teste, o omeprazol é oxidado em 5-hidroxi-omeprazol, e na presença de um inibidor da isozima CYP, a quantidade de 5-hidroxi-omeprazol produzida é reduzida. Oxibutinina (IC50: 7,1 uM) foi o inibidor de referência. A reação do ensaio de citocromo P450 CYP2D6 contendo microssomas de figado humano (0,2 mg/mL de proteina) foi incubada por 15 minutos a 37°C, com 10 μΜ de composto de teste, 5 uM de dextrometorfano, 1,3 mM de NADP, 3,3 mM de glicose-6-fosfato e 0,4 U/L de glicose-6-fosfato desidrogenase. Na ausência de composto de teste, o dextrometorfano é oxidado, e na presença de um inibidor da isozima CYP, a quantidade de produto da oxidação é reduzida. Quinidina (IC50: 0,093 uM) foi o inibidor de referência.

Para o ensaio de citocromo P450 CYP2C19, microssomas de figado humano (0,2 mg/mL de proteina) foram incubados por 20 minutos a 37°C, com 10 μΜ de composto de teste, 5 uM de midazolam, 1,3 mM de NADP, 3,3 mM de glicose-6-fosfato e 0,4 U/mL de glicose-6-fosfato desidrogenase. Na ausência de 143 composto de teste, o midazolam é oxidado, e na presença de um inibidor da isozima recombinante, a quantidade de produto da oxidação é reduzida. 0 produto da oxidação é determinado a partir da área sob a curva após separação por HPLC-MS/MS. Cetoconazol (IC50: 0,55 uM) foi o inibidor de referência.

Em cada ensaio, a inibição percentual da isozima citocromo P450 CYP P450 foi determinada como cem vezes a proporção de (1 - a quantidade de produto na amostra na presença do composto de teste) dividida pela quantidade de produto na amostra contendo isozima não tratada. Os resultados de ensaios em duplicata (expressos como atividade de CYP percentual restante) são mostrados na Tabela IV.

Tabela IV - Atividade percentual de isozimas citocromo P450

CYP

Composto (D (3) (6) Isozima P450 CYP1A 89, 8 93,1 89, 5 CYP2C9 93,2 97,4 92,1 CYP2C19 98,5 103,2 97,2 CYP2D6 96, 0 99, 5 93, 9 CYP3A4 92,5 94,3 93, 6 EXEMPLO 43: Estabilidade do composto (2) aos microssomas de figado humano

Microssomas de figado humano (concentração final de 0,3 mg/mL de proteina) em 0,1 M de tampão fosfato pH 7,4 e sistema de regeneração NADPH (1 mM de NADP, 5 mM de glicose-6-fosfato e 1 Unidade/mL de glicose-6-fosfato desidrogenase) foram pré-incubados a 37°C, antes da adição 144 de substrato, composto (2), para gerar uma concentração final de substrato de 1 μΜ; e uma concentração final de metanol de 0,6%. Foram removidas aliquotas em 0 e 60 minutos. Um volume igual de 50/50 acetonitrilo/metanol foi adicionado, as amostras foram centrifugadas e a quantidade de composto remanescente no sobrenadante foi medida por meio de HPLC acoplada a espectrometria de massa em tandem por comparação de áreas de pico geradas das amostras de 0 e 60 minutos. Amostras em duplicata mostraram 96% e 118% de composto (2) restantes após incubação de 60 minutos com microssomas de figado humano. EXEMPLO 44: Farmacocinética do composto (2) em ratos

Para determinar as proporções entre a concentração cerebral e a plasmática do composto (2), um grupo de 6 ratos conscientes com cateter na veia jugular recebeu a administração de 3 mg/kg de peptideo ao longo de um período de infusão de 5 minutos no cateter da veia jugular. Trinta, 60 e 180 minutos após o início da infusão, foram coletadas amostras de sangue de 2 animais em cada ponto do tempo por punção cardíaca terminal e cérebros inteiros foram removidos rapidamente. O plasma foi isolado por centrifugação. Espectrometria de massa/cromatografia líquida em tandem (LC-MS/MS) foi usada para quantificar a concentração de fármaco no plasma e cérebro de ratos. Os resultados são mostrados na Figura 5. EXEMPLO 45: Farmacocinética do composto (6) em ratinhos e macacos Cynomolgus

Um bolo único do composto de amida peptídica sintética foi administrado por injeção subcutânea aos ratinhos ICR (n = 6, machos, peso corporal 23-37 g, Charles River, 145

Wilmington, MA) e amostras de plasma coletadas em 5, 10, 15, 20, 30 60, 90, 120 e 180 minutos pós-injeção. A Figura 6 mostra os resultados obtidos após injeção subcutânea de uma dose de 1 mg/kg de composto (6) em ratinhos ICR. A "meia-vida" para esse foi determinada como o tempo necessário para que a concentração plasmática caia em 50% após a concentração máxima no plasma foi obtida; espera-se que a meia-vida de eliminação computada, com base na constante da taxa de eliminação da fase de eliminação mais lenta, seja mais longa. Ver a Tabela V abaixo. EXEMPLO 46: Farmacocinética do composto de amida peptídica sintética em macacos

Foram administradas amostras a machos de macacos Macaca fascicularis (SNBL USA, Ltd., Everett, WA, macacos Cynomolgus purpose-bred, intimamente relacionados aos seres humanos, tanto filogenética quanto fisiologicamente), com idade de 3-7 anos e pesando 3-5 quilogramas. As amostras foram administradas numa veia superficial do braço ou da perna (por exemplo, braquial ou safena) em solução salina 0,9% para injeção, USP (Baxter Healthcare, Deerfield, 111.) da seguinte forma: uma amostra contendo 4 mg de composto (6) da presente invenção a ser testado foi preparada em 2 mL de solução salina 0,9% para injeção. A dose de 2 mL foi administrada como um bolo intravenoso ao animal de teste, resultando numa dose de aproximadamente 0,4 a 0,65 mg/kg, dependendo do peso corporal do animal. Foram coletadas amostras de sangue de 0,6 mL por punção venosa de uma veia periférica em 2, 5, 10, 15 e 30 minutos após a injeção da dose, e então em 1, 2 e 4 horas. Cada amostra foi colocada num tubo de ensaio de viro pré-resfriado contendo heparina litio e imediatamente resfriada no gelo. O plasma foi coletado após centrifugação a 2.000 g por quinze minutos a 146 2-8°C. As camadas de plasma de cada amostra foram transferidas para tubos de polipropileno e armazenadas congeladas a -60°C ou menos até serem testadas.

Alíquotas de 100 microlitros de plasma descongelado foram salpicadas com 5 microlitros de uma solução de 400 ng/mL de um padrão interno apropriado (nesse caso um composto de amida peptidica sintética padronizado conhecido) em TFA 0,1%, e as proteínas foram precipitadas com 100 microlitros de TFA 0,1% em acetonitrilo. As amostras foram centrifugadas a 1.000 x g por 5 minutos, e os sobrenadantes analisados por LC-MS. A análise por LC-MS foi realizada num espectrômetro de massa Finnigan LCQ Deca que faz interface com um sistema de HPLC Surveyor (Thermo Electron Corporation, Waltham, Massachusetts, USA) . A análise por HPLC foi realizada em colunas de fase reversa C18 de 2,1 x 150 mm, com um gradiente de TFA 0,01% em acetonitrilo em TFA 0,01% em água. A detecção de massa foi realizada no modo de monitoramento de reação selecionado (SRM). A quantificação foi realizada contra uma curva de calibração do analito em plasma em branco de macaco Cynomolgus usando o mesmo padrão interno. A análise dos dados e a extração de parâmetros farmacocinéticos foram realizadas com o programa "PK Solutions 2,0" (Summit Research Services, Ashland, Ohio, USA). A Tabela V, abaixo, mostra a meia-vida em ratinhos ICR após injeção subcutânea de composto (6) e a meia-vida para esse composto após administração intravenosa em bolo em macacos Cynomolgus. 147

Tabela V - Meia-vida in vivo de composto de amida peptídica sintética (6)

Ratinhos ICR Macacos Cynomolgus Via de administração Subcutânea Intravenosa Meia-vida (min) 22,0 58, 6 *Composto (6) é D-Phe-D-Phe-D-Leu- (ε-Me)D-Lys-[N- (4-piperidinil)-L-prolina]-OH (Id. de Seq. N° 1). A persistência de composto (3) no plasma de macacos Cynomolgus após administração intravenosa de um bolo de 0,56 mg/kg é mostrada na Figura 7. EXEMPLO 47: Ensaio de contorção induzida por ácido acético em ratinhos

Este teste identifica compostos que exibem atividade analgésica contra dor visceral ou dor associada à ativação de nociceptores sensíveis ao pH baixo [Ver Barber e Gottschlich (1986) Med. Res. Rev. 12: 525-562; Ramabadran e Bansinath (1986) Pharm. Res. 3: 263-270]. A administração intraperitoneal de solução diluida de ácido acético causa um comportamento de contorção em ratinhos. Uma contorção é definida como uma contração dos músculos abdominais, acompanhada por uma extensão das patas dianteiras e alongamento do corpo. O número de contorções observadas na presença e ausência de compostos de teste é contado para determinar a atividade analgésica dos compostos.

Em cada dia que era feito um ensaio de contorção, sempre era incluido um grupo de ratinhos de controle de veiculo (n = 6-8) que foi tratado de forma idêntica ao 148 grupo de teste (exceto que o composto de teste foi omitido da dose de injeção), e o número total médio de contorções nesse grupo era usado como o ponto de referência absoluto que define 0% de diminuição da percepção da dor para todos os outros ratinhos que recebnum composto de teste naquele dia. Especificamente, o número total de contorções de cada ratinho que recebe o composto de teste foi convertido em % de diminuição na percepção da dor de acordo com a seguinte equação:

% de diminuição da percepção da dor = em que Wv é o número médio de contorções no grupo tratado com veiculo e Wc é o número de contorções no ratinho tratado com composto. Os dados foram analisados usando a equação de 2 parâmetros de Hill (também conhecida como modelo Emax) , em que se presume que Emax seja 100% de antinoci-percepção (ou seja, sem contorções ao longo dos 15 min pós-administração de ácido acético).

Machos de ratinhos ICR, com 23-37 gramas de peso, foram pesados e colocados em câmaras individuais de observação (normalmente uma proveta de vidro de 4.000 mL) com uma camada delgada de colchão de roedores SANI-CHIPS no fundo. Para determinar a atividade e a potência dos compostos de teste, diferentes doses da solução de composto ou veiculo foram injetadas por via subcutânea na parte posterior do pescoço 15 ou 180 minutos antes da administração da solução de ácido acético. Após administração do composto ou controle de veiculo, os ratinhos retornavam às suas câmaras de individuais de observação aguardando a administração intraperitoneal da solução de ácido acético. Quinze minutos ou três horas mais tarde, de acordo com o tempo de intervalo definido em cada 149 ensaio entre a libertação do composto e a injeção de ácido acético, uma dose que corresponde a 10 mL/kg de uma solução de ácido acético 0,6% (v/v) foi então injetada no quadrante inferior direito do abdome. Imediatamente após a injeção, o ratinho retornava para sua câmara de observação e o registro do número de contorções começava imediatamente. O número de contorções foi contado ao longo de um periodo de 15 minutos, começando no momento da injeção de ácido acético, os dados sendo coletados ao longo de três periodos de tempo separados de 5 minutos (0-5 min, 5-10 min e 10-15 min) .

Os dados foram relatados como ED50 e coeficiente de Hill. A ED50 é expressa como média ± desvio padrão da média (SEM) (ED50 +/- SEM) ou como média geométrica com intervalos de confiança de 95% (Cl de 95%) usando pontuações t. O coeficiente de Hill é expresso como a média aritmética ± SEM calculado a partir dos valores obtidos pelos animais. Os resultados para o composto (2) são mostrados na Figura 8 (círculos sólidos).

Para análise dose-resposta, os dados brutos foram convertidos em % do efeito máximo possível (%MPE) usando a fórmula: %MPE = ((pontuação de teste — pontuação dos tratados com veículo) / (0 — pontuação dos tratados com veículo)) * 100. Os dados brutos foram analisados usando um ANOVA de uma via, seguido por pós-testes de Dunnett. A dose que despertava 50% de atenuação da hipersensibilidade (ED50) foi determinada usando análise de regressão linear. Os compostos foram administrados pela via intravenosa. A Tabela VI resume os resultados desses ensaios. 150

Tabela VI - Efeitos dos Compostos (2) e (5) sobre a contorção induzida por ácido acético em ratinhos.

Composto ED50 (mg/kg, iv, 15 min pós-dose) % MPE (180 mln pós-ED90) % MPE (240 mln pós-ED90) % MPE (300 mln pós-ED90) (2) 0,07 (0,06-0,1) 77 ± 5% 81 ± 4% 84 ± 4% (5) 0,01 (0,01-0,02) 54 ± 10% NT NT NT = não testado

Foi gerada uma dose-resposta para o composto (2) no modelo de contorção induzida por ácido acético em ratinhos usando doses de 0,01, 0,03, 0,1 e 0,3 mg/kg administradas por via intravenosa, como descrito acima. Usando o método acima, foi determinado um relacionamento dose-resposta linear para o composto (2) para doses que variam de 0,01 mg/kg a 0,3 mg/kg, como mostrado na Figura 9. EXEMPLO 48: Inibição da locomoção em ratinhos para medir a sedação por compostos após injeção subcutânea (ensaio de redução da locomoção)

Compostos que exibem atividade de sedação inibem a locomoção espontânea de ratinhos numa câmara de teste. Para determinar o efeito sedativo potencial de compostos de teste, a extensão da redução da locomoção após a administração do composto de teste ou de controle de veiculo pode ser determinada e comparada com um aparelho especializado projetado para essa finalidade ("Opto-Varimex Activity Meter"). No começo de cada ensaio, cada ratinho foi pesado e examinado para determinar a boa saúde. Para determinar a atividade e a potência de compostos, diferentes doses de solução do composto ou de veiculo foram 151 injetadas por via subcutânea 15 ou 180 minutos antes do inicio da coleta de dados. A injeção subcutânea foi realizada na parte posterior do pescoço do ratinho, picada como uma "tenda" para permitir o acesso adequado à agulha da seringa. Após injeção, cada animal foi colocado individualmente em caixas de Plexiglass (43 cm x 43 cm) dentro do aparelho "Opto-Varimex Astivity Meter". Antes de o animal ser colocado no aparelho, uma camada fina de colchão para roedores SANI-CHIPS foi colocada no fundo da caixa de Plexiglass para fornecer um ambiente confortável. Cada aparelho "Opto-Varimex Activity Meter" foi então ligado e aquisição de dados se iniciava pelo sistema "ATM3 Auto-Track". Os dados foram processados, e os resultados expressos da mesma forma descrita para os dados do ensaio de contorção no Exemplo 47. EXEMPLO 49: Efeito analgésico vs. efeito sedativo de amida peptidica sintética (3) A inibição da contorção induzida por ácido acético por um composto é uma indicação de um efeito analgésico (também denominado efeito antinociceptivo). Similarmente, uma redução da locomoção causada pela administração do composto pode ser usada como uma medida de seu efeito sedativo geral. A ED50 determinada no ensaio de contorção induzida por ácido acético em ratinhos ICR foi de 52 μρ/]<:ρ, quando a amida peptidica sintética (3) foi administrada por via subcutânea, como descrito no Exemplo 34 e mostrado na Figura 8 (circulos sólidos). O valor de ED50 determinado no ensaio de inibição de locomoção descrito no Exemplo 35 foi de 2.685 μρ/kg para a mesma ame amida peptidica sintética administrada por via subcutânea. Ver a Figura 8 (quadrados 152 sólidos). A proporção terapêutica do efeito analgésico em relação ao efeito sedativo é o número de vezes maior da ED50 necessário para se obter uns efeitos sedativos, comparados como a ED50 necessária para se obter um efeito analgésico. Dessa forma, o composto (3) exibe uma proporção de aumento de (2.685/52), ou seja, 51,6 vezes. Dessa forma, a proporção terapêutica é aproximadamente de 52 vezes para o composto (3). EXEMPLO 50: Modelo de ligação de nervo medular (SNL)

0 modelo de SNL (Kim e Chung 1992) foi usado para induzir dor neuropática crónica. Os ratos foram anestesiados com isofluorano, o processo transverso esquerdo de L5 foi removido e os nervos medulares L5 e L6 fora fortemente ligados com sutura de seda 6-0. A ferida foi então fechada com suturas internas e grampos externos. Catorze dias após o SNL, os valores basais, pós-lesão e pós-tratamento para a sensibilidade mecânica não nociva foram avaliados usando 8 filamentos de Semmes-Weinstein (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) com rigidez variável (0,4, 0,7, 1,2, 2,0, 3,6, 5,5, 8,5 e 15 g) de acordo com o método up-down (Chaplan e cols. 1994). Os animais foram colocados numa plataforma metálica perfurada e deixou-se que eles se aclimatassem ao ambiente por um minimo de 30 minutos antes do teste. A média e o erro padrão da média (SEM) foram determinados para cada pata em cada grupo de tratamento. Como esse estímulo normalmente não é considerado doloroso, aumentos significativos induzidos por lesão na responsividade nesse teste são interpretados como uma medida de alodinia mecânica. A dose que despertou 50% de atenuação da hipersensibilidade mecânica (ED50) foi determinada com o uso de análise de regressão linear. O composto (2) foi administrado pela via intravenosa. A 153

Figura 10 resume os resultados desses ensaios. A ED50 calculada para o composto (2) nesse modelo foi de 0,38 mg/kg (0,31-0,45; intervalo de confiança de 95%). EXEMPLO 51: Analgesia ocular induzida por compostos (2), (3) e (4) A analgesia ocular foi avaliada por instilação de cinco volumes do composto de teste, 50 microlitros cada, em soro fisiológico, na concentração a ser testada, no olho direito de coelhos albinos virgens da cepa Nova Zelândia dentro de um período de vinte minutos. Quinze minutos após a última instilação do composto de teste, cada animal recebeu a administração uma única instilação de 30 microlitros de 10 mg/mL de capsaicina (33 mM) no olho tratado. Capsaicina é conhecida por induzir dor corneana. A dor corneana foi avaliada por medida da abertura palpebral medida em milímetros usando uma régua transparente sobre os olhos tratados e não tratados. Nesse modelo animal, a redução do tamanho da abertura palpebral após instilação de capsaicina é uma indicação do grau da dor ocular. Dessa forma, qualquer restauração observada (aumento) do tamanho da abertura palpebral após tratamento com composto de teste é considerada uma medida de alívio da dor ocular induzida por capsaicina.

Essas avaliações foram feitas antes do tratamento com o composto de teste (pré-teste), imediatamente antes da instilação de capsaicina e depois 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 e 60 minutos após a instilação de capsaicina. A Tabela VII mostra a média das medidas da abertura palpebral (em relação ao olho não tratado, expressa como percentual de controle) considerada ao longo do período de 10-30 minutos após instilação de capsaicina em coelhos pré- 154 instilados com um agonista de opióide kapa da invenção e após pré-instilação com uma concentração-padrão de diltiazem, um bloqueador do canal de cálcio benzotiazepinico com efeitos anestésicos locais. Ver Gonzalez e cols., (1993) Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 34: 3.329-3.335.

Tabela VII - Efeito de compostos (2), (3) e (4) na redução da dor ocular

Composto Tempo (pós-capsaicina) Média (% do controle) SEM (% do controle) Nenhum (soro fisiológico) 10-30 min 61,2 6, 5 Diltiazem a 10 mM 10-30 min 74, 6 5, 5 (2) a 10 mg/mL 10-30 min 82,7 5, 3 (3) a 10 mg/mL 10-30 min 76, 0 5,2 (4) a 10 mg/mL 10-30 min 56, 7 8,4 Média de cinco animais; SEM: erro padrão da média EXEMPLO 52: Dose-resposta do Composto (2) na dor ocular induzida por capsaicina A analgesia ocular induzida pelo Composto (2) em várias concentrações instiladas no olho direito de coelhos albinos virgens da cepa Nova Zelândia foi avaliada, como descrito acima. Os resultados foram comparados com a analgesia induzida por 10 mg/mL de morfina (um agonista opióide não seletivo) como controle ativo sistémico e com 10 mM de diltiazem como controle ativo tópico no mesmo ensaio e sob as mesmas condições. A Tabela VIII abaixo mostra os resultados acumulados. 155

Tabela VIII - Dose-Resposta do Composto (2) na dor ocular induzida por capsaicina

Composto Tempo (pós- capsaicina) Média (% do controle) SEM (% do controle) Morfina a 10 mg/mL 10-30 min 74,8 11,1 Diltiazem a 10 mM 10-30 min 77, 6 7,4 (2) a 1 mg/mL 10-30 min 60,5 9, 9 (2) a 10 mg/mL 10-30 min 5 6,6 9,3 (2) a 25 mg/mL 10-30 min 75,5 7,1 (2) a 50 mg/mL 10-30 min 87,5 4,8 Média de dez animais; SEM: erro padrão em relação à média EXEMPLO 53: Efeito do Composto (2) num modelo de pancreatite em ratos

Inflamação pancreática crónica foi induzida em ratos por administração intravenosa de dicloreto de dibutilina (DBTC, Aldrich Milwaukee, WI) dissolvida em etanol 100% numa dose de 8 mg/kg sob anestesia por isofluorano (2-3 litros/min, 4%/vol até anestesiado, depois 2,5%/vol por todo o procedimento). Os animais d controle receberam o mesmo volume de veiculo (etanol 100%) isoladamente. A dor da pancreatite foi avaliada por determinação da sensibilidade abdominal por sondagem do de ratos com um filamento de von Frey calibrado (4 g) . Deixou-se que os ratos se aclimatassem em gaiolas com trama de arame suspensas por 30 minutos antes do teste. Uma resposta era indicada pela retirada súbita do abdome, lambidas da área abdominal ou retirada de todo o corpo. Um ensaio único consistiu em 10 aplicações do filamento de von Frey aplicado uma vez a cada 10 segundos para permitir que o 156 animal cesse qualquer resposta e retorne a uma posição relativamente inativa. A ocorrência média de eventos de retirada em cada ensaio é expressa como o número de respostas a 10 aplicações. Os ratos sem inflamação do pâncreas tipicamente exibem frequências de retiradas à sondagem com filamento de von Frey de 0-1. Deixou-se que os animais se recuperassem por 6 dias após a administração de DBTC, antes de quaisquer manipulações farmacológicas. Animais que não demonstraram hipersensibilidade abdominal suficiente (ou seja, ratos com menos de 5 respostas positivas de 10 possíveis) foram excluídos do estudo. O número de respostas positivas após sondagem abdominal (de 10 possíveis) foi registrado em cada ponto do tempo. Os dados são apresentados como número médio de retiradas (± SEM) para cada grupo de dosagem em cada ponto do tempo correspondente. Para análise da dose-resposta, os dados brutos foram convertidos em % do efeito máximo possivel (%MPE) usando a fórmula: %MPE = ((pontuação de teste — pontuação pós-DBTC) / (pontuação pré-DBTC — pontuação pós-DBTC)) * 100. Os dados brutos foram analisados usando um ANOVA de duas vias com medidas repetidas, seguido por pós-testes de Bonferroni. A dose que despertou 50% de atenuação da hipersensibilidade (ED50) foi determinada usando análise de regressão linear. Os compostos foram administrados pela via intraperitoneal. A Figura 11 resume os resultados desses ensaios. A ED50 calculada para o composto (2) nesse modelo foi de 0,03 mg/kg (0,006-0,14; intervalo de confiança de 95%).

Para determinar se a eficácia of Composto (2) (1 mg/kg) é mediada por meio da ativação de recetores opióide kapa periféricos, grupos de oito ratos foram pré-tratados com o antagonista seletivo do recetor opióide kapa nor-BNI (1 mg/kg) ou com um antagonista não seletivo do recetor 157 opióide, metiodeto de naloxona (10 mg/kg), que não atravessa a barreira hematoencefálica, antes do tratamento com o composto (2). A Figura 12 resume os resultados desses estudos. EXEMPLO 54: Modelo de prurido em ratinhos

Foram usados grupos de 10 (e, num caso, 11) machos de ratinhos Swiss Webster (25-30 g). Cada animal foi pesado e deixou-se que se aclimatasse por pelo menos uma hora em caixas de observação retangulares individuais. Os rabos dos ratinhos foram imersos por 30 segundos em água morna para dilatar as veias do rabo, e os animais então receberam uma injeção intravenosa de veiculo (soro fisiológico) ou composto (2) (0,01, 0,03, 0,10 e 0,30 mg de base livre/kg). Quinze minutos mais tarde, cada ratinho recebeu dicloridrato de GNTI (Tocris) (0,30 mg/kg; 0,25 mL/25 g) ou composto 48/80 (Sigma) (50 pg em 0,10 mL de oro fisiológico) por via subcutânea atrás do pescoço. Os animais foram então observados em pares (ocasionalmente em três), e o número de movimentos da pata traseira dirigidos ao pescoço foi contado por 30 minutos. O percentual de inibição médio da coceira causada pelo composto (2) foi tabulado, e a dose associada a 50% de inibição foi obtida por análise de regressão linear (PharmProTools). A Tabela IX resume os resultados desses ensaios.

Tabela IX - Efeitos do Composto (2) sobre o prurido induzido pelo Composto 48/80 ou por GNTI em ratinhos.

Composto # Modelo do Composto 48/80 ED50 (mg/kg, iv, 15 min pós-dose) Modelo do GNTI ED50 (mg/kg, iv,15 min pós-dose) (2) 0,08 (0,04-0,2) 0,05 (0,02-0,1) 158

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Car a Therapeutics, Inc. Schteingart, Cláudio D. Menzaghi, Frederique Ji ang, Guangcheng Alexander,

Roberta V. Suei r as- Di az, Javi er Spencer, Robert H. Chalmers, Der ek T. Luo, Zhi yong <120> Amidas Peptidicas Sintéticas <130> 016408-0366471 <140> a atribuir <141 > 2007- 11- 12 <150> 60/ 858, 109 <151 > 2006-11-10 <150> 60/928, 550 <151> 2007- 05- 10 <160> 8 <170> Patent In version 3.4

<210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição da Sequência Artificial: Sequência de D-aminoácidos <22 0> <221> PEPTIDO <222> (1) .. (4) 159 <223> Todas as Sequências de D-aminoácidos <22 0> <221> VARI ANT <222> (4)..(4) <223> Xaa é D-alfametil-Lisina ligado a - W (anel Y-Z) -VeRlR2 <4 0 0> 1 PJie Ria Leu Xaa 1

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Rie Phe Ley Xãâ 1

Lisboa, 23 de Novembro de 2012

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Amida peptídica sintética caracterizada por ter a fórmula:

ou um seu estereoisómero, mistura de estereoisómeros, sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato, hidrato de sal de ácido, N-óxido ou uma amida peptídica sintética contendo uma amina em que o átomo de azoto da amina se encontra ligado a um átomo de oxigénio, ou uma sua forma cristalina isomórfica; em que Xaai é selecionado do grupo que consiste em (A)(A')D-Phe, (A)(A')(a-Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic, D-terc-leucina, D-neopentilglicina, D-fenilglicina, D- homofenilalanina, e p-(E)D-Ala, em que cada (A) e cada (A' ) são substituíntes no anel fenilo independentemente selecionados do grupo que consiste em -H, -F, Cl, -N02, -CH3, -CF3, -CN, e -CONH2, e em que cada (E) é independentemente selecionado do grupo que consiste em ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, piridilo, tienilo e tiazolilo; Xaa2 é selecionado do grupo que consiste em (A)(A')D-Phe, 3,4-dicloro-D-Phe, (A)(AM (α-Me)D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Tyr, (E)D-Ala e D-Trp; Xaa3 é selecionado do grupo que consiste em D-Nle, D-Phe, (E)D-Ala, D-Leu, (a-Me)D-Leu, D-Hle, D-Val, e D-Met; 2 Xaa4 é selecionado do grupo que consiste em (B)2D-Arg, (B)2D-Nar, (B)2D-Har, Ç-(B)D-Hlys, D-Dap, s-(B)D-Lys, ε- (B)2-D-Lys, D-Amf, amidino-D-Amf, y-(B)2D-Dbu, δ-(B)2α-(B')D-Orn, ácido D-2-amino-3 (4- piperidil)propiónico, ácido D-2-amino-3 (2- aminopirrolidil)propiónico, ácido D-a-amino-β- amidinopropiónico, ácido a-amino-4-piperidinacético, ácido cis-a,4-diaminociclo-hexano acético, ácido trans-a,4-diaminociclo-hexanoacético, ácido cis-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido trans-a-amino-4-metilaminociclo-hexano acético, ácido a-amino-l-amidino-4-piperidinacético, ácido cis-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, e ácido trans-a-amino-4-guanidinociclo-hexano acético, em que cada (B) é independentemente selecionado do grupo que consiste em H e C1-C4 alquilo, e (B') é H ou (α-Me); W é selecionado do grupo que consiste em: Nulo, desde que quando W é nulo, Y é N; -NH-(CH2)b- com b igual a zero, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; e -NH- (CH2) c-0- com c igual a 2, ou 3, desde que Y seja C;

é uma porção de anel heterociclico de 4 a 8 membros opcionalmente substituído em que todos os heteroátomos de anel na referida porção de anel são N; em que Y e Z são cada um independentemente C ou N; desde que quando tal porção de anel é um anel de seis, sete ou oito membros, Y e Z são separados por pelo menos dois átomos de anel; e desde que quando tal porção de anel 3 tem um heteroátomo de anel único que é N, então tal porção de anel é não aromática; V é Ci-C6 alquilo, e "e" é zero ou 1, em que quando "e" é zero, então V é nulo e Ri e R2 são diretamente ligados aos mesmos átomos de anel ou diferentes; em que (i) Ri é selecionado do grupo que consiste em -H, -OH, halo, -CF3, -NH2, -COOH, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 alcoxi, amidino, Ci-C6 alquilo-substituído amidino, aril, heterociclilo opcionalmente substituído, Pro-amida, Pro, Gly, Ala, Vai, Leu, Ile, Lys, Arg, Orn, Ser, Thr, -CN, -CONH2, -COR', -S02R', -CONR'R", -NHCOR', OR' e S02NR'R"; em que o referido heterociclilo opcionalmente substituído é opcionalmente, unicamente ou duplamente, substituído com substituíntes independentemente selecionados do grupo que consiste em C^-Cq alquilo, Ci~Cç alcoxilo, oxo, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH, e amidino; em que R' e R" são cada um independentemente -H, Ci-C8 alquilo, arilo, ou heterociclilo ou R' e R" são combinados para formar um anel de 4 a 8 membros, cujo anel é opcionalmente, unicamente ou duplamente, substituído com substituíntes independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci-C6 alquilo, -C1-C6 alcoxi, -OH, -Cl, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH e amidino; e R2 é selecionado do grupo que consiste em -H, amidino, Ci-C6 alquilo-substituído amidino unicamente ou duplamente, -CN, -CONH2, -CONR'R", NHCOR', -S02NR'R" e -COOH; ou (ii) Ri e R2 juntos podem formar uma porção de anel heterocíclico monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros que é ligado a um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z; ou (iii) Ri e R2 juntos com um átomo de anel único da porção de anel que contém Y e Z de anel podem formar uma porção de anel heterocíclico opcionalmente 4 substituído de 4 a 8 membros para formar uma estrutura espiro; ou (iv) Ri e R2 juntos com dois ou mais átomos de anel adjacentes da porção de anel que contém Y e Z podem formar uma porção de anel heterocíclico monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído de 4 a 9 membros fundida à porção de anel que contém Y e Z; em que cada uma das referidas porções de anel heterocíclico opcionalmente substituído de 4, 5, 6, 7, 8 e 9 membros que compreende Ri e R2 é opcionalmente unicamente ou duplamente substituída com substituíntes independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci-C6 alquilo, Ci-C6 alcoxi, fenilo opcionalmente substituído, oxo, -OH, -F, -NH2, -N02, -CN, -COOH, e amidino; desde que quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis ou sete membros que tem um heteroátomo de anel único e e é zero, então Ri não é -OH, e Ri e R2 não são -H; desde que também quando a porção de anel que contém Y e Z é um anel de seis membros que tem dois heteroátomos de anel, Y e Z são N e W é nulo, então -(V)eRiR2 é anexado a um átomo de anel diferente de Z; e se e é zero, então Ri e R2 não são -H; e por último, desde que quando Xaa3 é D-Nle, então Xaa4 não é (B)2D-Arg, e quando Xaa3 é D-Leu ou (aMe)D-Leu, então Xaa4 não é δ-(B) 2α-(B' )D-Orn.

2. Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por Xaa4 ser selecionado do grupo que consiste em (B)2D-Arg, D-Lys, (B)2D-Har, ζ-(B)DHlys, D-Dap, ε-(B)D-Lys, ε-(B)2-D-Lys, D-Amf, amidino-D-Amf, y-(B)2D-Dbu e δ- (B) 2ct- (B' ) D-Orn . 5

3. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada por Xaa3 ser selecionado do grupo consistindo D-Nle e D-Leu.

4. Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 3 caracterizada por Xaa3 ser D-Leu e Xaa4 ser selecionado do grupo consistindo em D-Arg, D-Nar, D-Har, D-Lys, s-(isopropilo)-D-Lys e s-(metilo)-D-Lys.

5. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizada por Xaal-Xaa2 ser D-Phe-D-Phe.

6. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizada por W ser nulo.

7. Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por Y ser N e Z ser C.

8. Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 33, caracterizada por a porção de anel contendo Y e Z ser um anel saturado com 6 membros, compreendendo um único anel heteroatómico.

9 D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-[ω(ácido 4-aminopiperidino-4-carboxílico)]-OH.

9. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6, caracterizada por Y e Z serem ambos N e serem os únicos anéis heteroatómicos na porção de anel contendo Y e Z.

10. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, caracterizada por "e" ser zero. 6

11 Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por Ri e R2 serem ligados ao mesmo átomo do anel.

12 Amida peptídica sintética de acordo com as reivindicações 10 ou 11, caracterizada por Ri ser -H, -OH, -NH2, -COOH, C1-C3 alquilo, amidino, C1-C3 alquilo-substituido amidino, di-hidroimidazol, D-Pro, D-Pro amida, ou CONH2 e em que R2 é H, -COOH, ou C1-C3 alquilo.

13. Amida peptídica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizada por a porção:

ser selecionada do grupo consistindo em: 7

14. Amida peptídica sintética de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por conter a estrutura do Composto (2) :

15. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz da amida peptidica sintética de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14 e de um excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.

16. Uso da amida peptidica sintética, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado por se destinar à produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa num mamífero, preferencialmente em que a condição associada ao recetor opióide kapa é selecionada do qrupo que consiste em inflamação, prurido, edema, hiponatremia, hipocalemia, obstrução intestinal, tosse, glaucoma e dor, preferencialmente em que a dor é selecionada do grupo que consiste em dor neuropática, dor somática, dor visceral e dor cutânea, dor artrítica, dor associada a cálculo renal, câimbras uterinas, dismenorreia, endometriose, dispepsia, dor pós-intervenção médica, dor ocular, dor ótica, dor disruptiva por progressão do cancro, dor associada a um distúrbio GI e dor pós-cirúrgica, preferencialmente em que a cirurgia é uma laparoscopia pélvica, laqueação das trompas, histerectomia e colecistectomia.

17. Amida peptidica sintética, de acordo com quanlquer uma das reivindicações 1-14, para uso no tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada ao recetor opióide kapa num mamífero, preferencialmente em que a condição associada ao 10 recetor opióide kapa é selecionada do grupo consistindo em inflamação, prurido, edema, hiponatremia, hipocalemia, obstrução intestinal, tosse, glaucoma e dor, preferencialmente em que a dor é selecionada do grupo que consiste em dor neuropática, dor somática, dor visceral e dor cutânea, dor artritica, dor associada a cálculo renal, câimbras uterinas, dismenorreia, endometriose, dispepsia, dor pós-intervenção médica, dor ocular, dor ótica, dor disruptiva por progressão do cancro, dor associada a um distúrbio GI e dor pós-cirúrgica, preferencialmente em que a cirurgia é uma laparoscopia pélvica, laqueação das trompas, histerectomia e colecistectomia. Lisboa, 23 de Novembro de 2012