WO2019015644A1 - 肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 - Google Patents

肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 Download PDF

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WO2019015644A1
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alkyl
tert
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张晨
黄安邦
叶飞
黄龙彬
黄正刚
王健民
魏用刚
严庞科
郑伟
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四川海思科制药有限公司
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    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the present invention relates to a peptide amide compound having an analgesic action, a process for the preparation thereof and use thereof in medicine.
  • Opioids have been used for the treatment of pain for thousands of years, and they play a physiological role mainly by binding to the known three classical opioid receptors ⁇ , ⁇ and ⁇ . These three receptors are members of the G-protein coupled receptor family, mainly distributed in the central nervous system, and also in many peripheral tissues. The most classic drug is morphine, which exerts an analgesic effect mainly through the action of ⁇ opioid receptors.
  • ⁇ opioid receptor drugs such as traditional opioids represented by dihydromorphone and fentanyl.
  • ⁇ opioid receptors produce a variety of side effects after long-term use, such as tolerance, dependence and respiratory depression, and the effects on gastrointestinal motility, which not only increases the cost of treatment, but also affects the patient's recovery cycle.
  • Some non-opioid injections such as acetaminophen, NSAIDs (Non-steroidal anti-inflammatory drugs), because of their poor analgesic effect, limit the scope of use and dosage; in addition, there are certain side effects, such as increased acetaminophen Hepatotoxicity, NSAIDs (non-steroidal anti-inflammatory drugs) cause various gastrointestinal diseases.
  • kappa opioid receptors can be used as targets for intervention to treat pain and prevent a wide variety of diseases and conditions.
  • Woold et al., Anasthesia and Analgesia (1993, 77, 362-379) describe the use of kappa opioid receptor agonists for the treatment of pain sensitization; in 1999, Wu et al., Circulation Res (1999, 84, 1388- 1395)
  • Proposed ⁇ opioid receptor agonists as targets for the prevention and treatment of cardiovascular diseases; in 2003, Kaushik et al., J. Postgraduate Medicine (2003, 49(1), 90-95) described ⁇ opioid receptor agonists.
  • ⁇ opioid receptor agonists are used for the properties of inflammatory diseases such as osteoarthritis and rheumatoid arthritis; in 2006 Lembo evaluated ⁇ opioid receptor agonists in Diges.Dis. (2006, 24, 91-98) Application in gastrointestinal diseases; Jolivalt et al., 2006, in Diabetologia (2006, 49(11), 2775-2785) describes ⁇ The role of the opioid receptor agonist acimadrine in rodent diabetic neuropathy; in 2008, Schteingart, Claudio, D et al. in WO2008057608A2 evaluated visceral pain in visceral agonists, The pain associated with pH-sensitive nociceptor activation and the role of capsaicin-induced eye pain.
  • the object of the present invention is to provide a ⁇ opioid receptor agonist which has novel structure, better biological activity and better analgesic effect, and a preparation method thereof and use thereof in medicine.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or co-crystal thereof:
  • R 1 is selected from
  • n 1 , m 2 are each independently selected from 1 , 2 , 3 or 4;
  • n 3 , m 4 are each independently selected from 0, 1, 2, 3 or 4; with the proviso that m 3 and m 4 cannot be 0 at the same time;
  • n 1 , n 2 are each independently selected from 0, 1 , 2 , 3 or 4;
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R 1a and R 1b are each independently selected from the group consisting of F, CF 3 , C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl or a 3 to 8 membered heterocyclic group, said alkyl group, alkenyl group Or alkynyl or heterocyclyl optionally further selected from 0 to 5 selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CF 3 , nitro, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy Substituted with a substituent of a C 2-6 alkenyl group, a C 2-6 alkynyl group, a C 3-8 carbocyclic group or a 3 to 8 membered heterocyclic group, the heterocyclic group having 1 to 3 selected from a hetero atom of N, O or S;
  • R 1g , R 1h , R 1i , R 1j are each independently selected from H or C 1-6 alkyl;
  • q is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • p is selected from 0, 1 or 2;
  • a is selected from 0, 1, 2 or 3;
  • R 4 is independently selected from H, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl or -(CH 2 ) q -C 3-8 carbocyclyl, said alkyl, alkene Or alkynyl or carbocyclyl optionally further selected from 0 to 5 selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CN, CF 3 , NO 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy Substituted with a substituent of a C 2-6 alkenyl group, a C 2-6 alkynyl group, a C 3-8 carbocyclic group or a 3 to 8 membered heterocyclic group, the heterocyclic group having 1 to 3 selected from N a hetero atom of O or S;
  • Q- C 3-8 carbocyclic group, -C( O)O-(CH 2 ) q -3 to 8 membered heterocyclic group or
  • the alkyl, carbocyclic or heterocyclic group is further optionally 0-5 selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CF 3 , nitro, cyano, C 1-6 alkyl, C Substituted with a substituent of a 1-6 alkoxy group, a C 2-6 alkenyl group, a C 2-6 alkynyl group, a C 3-8 carbocyclic group or a 3 to 8 membered heterocyclic group, the heterocyclic group having 1 Up to 3 heteroatoms selected from N, O or S;
  • b is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5;
  • c is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5;
  • R 5 and R 6 are each independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, CF 3 , cyano, nitro, C 1-4 alkyl, -OR 5a , -C(O)OR 5b , -SR 5c , -S(O)R 5d , -S(O) 2 R 5e or -NR 5f R 5g ;
  • R 5a , R 5b , R 5c , R 5d , R 5e , R 5f and R 5g are each independently selected from H or C 1-4 alkyl;
  • R 5f and R 5g form a 5- to 6-membered heterocyclic ring with a nitrogen atom to which they are bonded, and the heterocyclic group contains 1 to 3 hetero atoms optionally selected from N, O or S.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I): or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or eutectic thereof, wherein:
  • R 1 is selected from
  • n 1 , m 2 , m 3 , m 4 are each independently selected from 1 or 2;
  • n 1 , n 2 are each independently selected from 0, 1 or 2;
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R 1a and R 1b are each independently selected from the group consisting of F, CF 3 , C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl or a 3 to 6 membered heterocyclic group, preferably F, CF 3 , C 2-4 alkenyl or C 2-4 alkynyl, said alkyl, alkenyl, alkynyl or heterocyclyl optionally further selected from 0 to 3 selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CF 3 , Nitro, cyano, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy, C 2-4 alkenyl, C 2-4 alkynyl, C 3-6 carbocyclyl or 3 to 6 membered heterocyclic Substituted by a substituent, the heterocyclic group containing 1 to 3 heteroatoms selected from N, O or S;
  • heterocyclic group containing 1 to 3 hetero atoms optionally selected from N, O or S;
  • R 1g , R 1h , R 1i , R 1j are each independently selected from H or C 1-6 alkyl, preferably H or C 1-4 alkyl;
  • q is selected from 0, 1, 2, 3 or 4; preferably 0 or 1;
  • p is selected from 0, 1 or 2; preferably 2;
  • a is selected from 0, 1, 2 or 3; preferably 3;
  • R 4 is independently selected from H, C 1-4 alkyl, C 2-4 alkenyl, C 2-4 alkynyl or -(CH 2 ) q -C 3-6 carbocyclyl, preferably C 1-4 alkyl Said alkyl, alkenyl, alkynyl or carbocyclic group optionally further from 0 to 3 selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CN, CF 3 , NO 2 , C 1-4 alkyl Substituted with a substituent of a C 1-4 alkoxy group, a C 2-4 alkenyl group, a C 2-4 alkynyl group, a C 3-6 carbocyclic group or a 3 to 6 membered heterocyclic group, said heterocyclic group Containing 1 to 3 heteroatoms selected from N, O or S;
  • b is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5, preferably 0 or 1;
  • c is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5, preferably 0 or 1;
  • R 5 and R 6 are each independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, CF 3 , cyano, nitro, C 1-4 alkyl, or -NR 5f R 5g , preferably F, CF 3 or C 1 -4 alkyl;
  • R 5f and R 5g are each independently selected from H or C 1-4 alkyl.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I): or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or eutectic thereof, wherein:
  • n 1 , m 2 , m 3 , m 4 are each independently selected from 1 or 2;
  • n 1 , n 2 are each independently selected from 0, 1 or 2;
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R 1a , R 1b are independently selected from the group consisting of F, CF 3 , methyl, ethyl, propyl or isopropyl;
  • R 1g , R 1h , R 1i , R 1j are each independently selected from H or C 1-4 alkyl;
  • R 1g , R 1h form a 4- to 6-membered heterocyclic ring with the nitrogen atom to which it is attached, and the ring is optionally further selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, CF 3 , cyano, nitro,
  • p is selected from 2;
  • q is selected from 0 or 1;
  • a is selected from 3;
  • R 4 is selected from propyl or isopropyl
  • b is selected from 0;
  • c is selected from 0.
  • the present invention provides a compound of the formula (I), wherein the compound is selected from the group consisting of a compound represented by the formula (II) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate thereof, pharmaceutical An acceptable salt or eutectic, wherein:
  • R 1 is selected from
  • n 1 , n 2 are each independently selected from 0 or 2;
  • R 1a , R 1b are independently selected from F;
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R z1 and R z2 are each independently selected from H, carboxyl, Amino, -CH 2 NH 2 or
  • R z1 and R z2 can form a lactam with the carbon atom to which they are attached
  • R 1g , R 1h , R 1i , R 1j are each independently selected from H or C 1-4 alkyl;
  • p is selected from 2;
  • the present invention provides a compound of the formula (II), or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or co-crystal thereof, wherein
  • R 1 is selected from
  • n 1 , m 2 , m 3 , m 4 are each independently selected from 1 or 2;
  • n 1 , n 2 are each independently selected from 0 or 2;
  • R 1a , R 1b are selected from F;
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R z1 and R z2 are each independently selected from H, carboxyl, Amino, -CH 2 NH 2 or
  • R z1 and R z2 can form a lactam with the carbon atom to which they are attached
  • R z3 are each independently selected from H,
  • the present invention provides a compound of the formula (II), or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or co-crystal thereof, wherein:
  • R 1 is selected from
  • Z is selected from CR z1 R z2 or NR z3 ;
  • R z1 and R z2 are each independently selected from H, carboxyl, Amino, -CH 2 NH 2 or
  • R z1 and R z2 can form a lactam with the carbon atom to which they are attached
  • R z3 are each independently selected from H,
  • the present invention provides a compound represented by the formula (I) or (II) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt or cocrystal thereof, wherein
  • the compound includes, but is not limited to, one of the compounds shown by the following structural formula:
  • the present invention provides a compound represented by the formula (I) or (II) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutically acceptable salt thereof or the like.
  • Crystalline, the pharmaceutically acceptable salt is selected from the group consisting of trifluoroacetate.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate thereof, pharmaceutically acceptable Salt or eutectic, and one or more pharmaceutically acceptable carriers and/or excipients.
  • the disease or condition associated with the kappa opioid receptor is selected from the group consisting of pain, inflammation, itching, edema, hyponatremia, hypokalemia, intestinal obstruction, Cough and glaucoma.
  • the pain is selected from the group consisting of neuropathic pain, somatic pain, visceral pain and skin pain.
  • the pain is selected from the group consisting of arthritis pain, kidney stone pain, uterine fistula, dysmenorrhea, endometriosis, dyspepsia, post-surgical pain, and medical treatment Pain, eye pain, otitis pain, fulminant cancer pain, and pain associated with GI disorders.
  • the present invention provides a method for treating or preventing a disease or condition associated with a kappa opioid receptor in a mammal, the method comprising administering a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer thereof, a hydrate, a metabolite, a solvate, a pharmaceutically acceptable salt or a eutectic, or a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer, hydrate, metabolite, solvate, pharmaceutical thereof
  • An acceptable acceptable salt or eutectic pharmaceutical composition wherein said kappa opioid receptor-related disease or condition is preferably a group consisting of: pain, inflammation, itching, edema, hyponatremia, Hypokalemia, intestinal obstruction, cough, and glaucoma, the pain is preferably a group consisting of: neuropathic pain, somatic pain, visceral pain, and skin pain; or the pain is preferably a group consisting of: arthritis Pain, kidney stone
  • the carbon, hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen or halogen involved in the groups and compounds of the present invention include their isotopes, and the carbon, hydrogen, oxygen, sulfur, and the groups and compounds involved in the present invention.
  • the nitrogen or halogen is optionally further replaced by one or more of their corresponding isotopes, wherein the carbon isotopes include 12 C, 13 C, and 14 C, and the hydrogen isotopes include helium (H), helium (D, also known as heavy hydrogen ), ⁇ (T, also known as super heavy hydrogen), oxygen isotopes include 16 O, 17 O and 18 O, sulfur isotopes include 32 S, 33 S, 34 S and 36 S, nitrogen isotopes including 14 N and 15 N, the fluorine isotope 19 F, the chlorine isotope includes 35 Cl and 37 Cl, and the bromine isotopes include 79 Br and 81 Br.
  • Alkyl means a straight-chain and branched monovalent saturated hydrocarbon group, and the main chain includes 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 8 carbon atoms, further preferably 1 to 6 carbon atoms, more preferably 1 Straight and branched groups of up to 4 carbon atoms, most preferably 1 to 2 carbon atoms, examples of which include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, iso Butyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, 2-methyl-2-butyl, 3-methyl-2-butyl, n-hexyl, n-glycol a base, n-octyl, n-decyl and n-decyl, etc.; the alkyl group may be further optionally 0, 1, 2, 3, 4 or 5 selected from the group consisting of F,
  • Alkoxy means a monovalent group of an O-alkyl group, wherein alkyl is as defined herein, and alkoxy embodiments include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, 1-propoxy, 2 -propoxy, 1-butoxy, 2-methyl-1-propoxy, 2-butoxy, 2-methyl-2-propoxy, 1-pentyloxy, 2-pentyloxy , 3-pentyloxy, 2-methyl-2-butoxy, 3-methyl-2-butoxy, 3-methyl-1-butoxy and 2-methyl-1-butoxy Wait.
  • alkenyl means a straight-chain or branched monovalent unsaturated hydrocarbon group having at least 1, usually 1, 2 or 3 carbon-carbon double bonds, the main chain comprising 2 to 10 carbon atoms, further preferably 2 Up to 6 carbon atoms, more preferably 2 to 4 carbon atoms in the main chain, and alkenyl examples include, but are not limited to, vinyl, allyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl , 2-butenyl, 3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-methyl-1-butenyl, 2- Methyl-1-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-hexenyl, 1-methyl-1-pentenyl, 2-methyl-1-pentenyl, 1-heptenyl, 2-heptenyl, 3-hep
  • Alkynyl means a straight-chain or branched monovalent unsaturated hydrocarbon group having at least 1, usually 1, 2 or 3 carbon-carbon triple bonds, the main chain comprising 2 to 10 carbon atoms, further preferably 2 Up to 6 carbon atoms, more preferably 2 to 4 carbon atoms in the main chain
  • alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, butynyl, 2-butyl Alkynyl, 3-butynyl, 1-methyl-2-propynyl, 4-pentynyl, 3-pentynyl, 1-methyl-2-butynyl, 2-hexynyl, 3 -hexynyl, 2-heptynyl, 3-heptynyl, 4-heptynyl, 3-octynyl, 3-decynyl and 4-decynyl, etc.; the alkynyl group
  • Cycloalkyl means a monovalent saturated carbocyclic hydrocarbon group, usually having from 3 to 10 carbon atoms, and non-limiting examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl or cycloheptyl.
  • the cycloalkyl groups appearing herein are as defined above.
  • Carbocycle means a saturated or unsaturated aromatic or non-aromatic ring.
  • the aromatic or non-aromatic ring may be a 3 to 10 membered monocyclic ring, a 4 to 12 membered bicyclic ring or a 10 to 15 membered tricyclic ring system.
  • the group may be attached to a bridged ring or a spiro ring, and non-limiting examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, 1-cyclopentyl-1-enyl, 1-cyclopentyl-2-alkenyl, 1-cyclopentyl-3-alkenyl, cyclohexyl, 1-cyclohexyl-2-alkenyl, 1-cyclohexyl-3-alkenyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, ring Octyl, cyclodecyl, cyclodecyl, cycloundecyl, cyclododecyl, phenyl or naphthyl.
  • the carbocyclic rings appearing herein are defined as described above.
  • Heterocycle means a saturated or unsaturated aromatic or non-aromatic ring, and the aromatic or non-aromatic ring may be a 3 to 10 membered monocyclic, 4 to 12 membered bicyclic or 10 to 15 membered tricyclic system, and includes 1 to 4 hetero atoms selected from N, O or S, preferably a 3 to 8 membered heterocyclic group, and optionally substituted N, S in the ring of the heterocyclic group may be oxidized to various oxidation states.
  • the heterocyclic group may be bonded to a hetero atom or a carbon atom, and the heterocyclic group may be bonded to a bridged or spiro ring, and non-limiting examples include an epoxyethyl group, a glycidyl group, an azacyclopropyl group, and an oxocyclic ring.
  • the heterocycles appearing herein are defined as described above.
  • alkyl group optionally substituted by F means that the alkyl group may, but need not, be substituted by F, indicating a case where the alkyl group is substituted by F and a case where the alkyl group is not substituted by F.
  • “Pharmaceutical composition” means one or more of the compounds described herein or a physiologically/pharmaceutically acceptable salt thereof, or a stereoisomer, solvate, pharmaceutically acceptable salt thereof or a mixture of eutectic and other constituents. Where other components comprise physiologically/pharmaceutically acceptable carriers and excipients.
  • Stepoisomer refers to isomers resulting from the spatial arrangement of atoms in a molecule, including cis and trans isomers, enantiomers and conformational isomers.
  • Effective dose refers to an amount of a compound that causes a physiological or medical translation of a tissue, system or subject, which amount is sought, and includes one or more of the conditions or conditions sufficient to prevent treatment when administered to a subject. The amount of a compound that occurs or reduces it to some extent.
  • Solvate means a compound of the invention or a salt thereof, which also includes a stoichiometric or non-stoichiometric amount of solvent bound by intermolecular non-covalent forces.
  • solvent is water, it is a hydrate.
  • the structure of the compound is determined by nuclear magnetic resonance (NMR) or (and) mass spectrometry (MS).
  • NMR shift ( ⁇ ) is given in units of 10 -6 (ppm).
  • the NMR was measured using a (Bruker Avance III 400 and Bruker Avance 300) nuclear magnetic apparatus, and the solvent was deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), deuterated chloroform (CDCl 3 ), deuterated methanol (CD 3 OD). ), the internal standard is tetramethylsilane (TMS).
  • the HPLC was measured using an Agilent 1260 DAD high pressure liquid chromatograph (Zorbax SB-C18 100 x 4.6 mm).
  • Thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Yellow Sea HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • the specification of silica gel plate used for thin layer chromatography (TLC) is 0.15mm ⁇ 0.20mm.
  • the specification for thin layer chromatography separation and purification is 0.4mm. ⁇ 0.5mm.
  • the known starting materials of the present invention may be synthesized by or according to methods known in the art, or may be purchased from Titan Technology, Anheji Chemical, Shanghai Demer, Chengdu Kelon Chemical, Suiyuan Chemical Technology, and Belling Technology. And other companies.
  • the nitrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a nitrogen balloon having a volume of about 1 L.
  • the hydrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a hydrogen balloon of about 1 L volume.
  • the hydrogenation reaction is usually evacuated, charged with hydrogen, and operated three times.
  • reaction was carried out under a nitrogen atmosphere.
  • the solution means an aqueous solution.
  • reaction temperature is room temperature.
  • the room temperature is an optimum reaction temperature of 20 ° C to 30 ° C.
  • M is mol/L.
  • Boc means a tert-butyloxycarbonyl group.
  • Cbz means benzyloxycarbonyl.
  • THP tetrahydropyranyl
  • EtOAc EtOAc
  • EtOAc EtOAc
  • concentration of the filtrate under reduced pressure afforded methyl(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-4 -Methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate (1d) as a crude, white foamy solid (3.0 g, yield 46%).
  • Step 5 Methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxy) Carbonylamino)-3-phenyl-propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoate (1f)
  • Step 6 (2R)-6-(tert-Butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino) )-3-phenyl-propyl]amino]-3-phenyl-propyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoic acid (intermediate 1)
  • Step 5 O7-tert-butyl O2-methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]decane-2,7-dicarboxylate (2F)
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified and purified eluted eluted eluted eluted elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut )-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]decane-2,7-dicarboxylate (2F), pale yellow foamy solid (560 mg, yield 70%).
  • Step 6 methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]decane-2-carboxylic acid methyl ester (2G)
  • Step 7 7-[(2R)-6-(tert-Butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)phenylpropanoyl) Amino]-3-phenylpropionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-aza - snail [3.5] decane-2-carboxylic acid methyl ester
  • Step 8 2-Amino-7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-) 2-(tert-Butoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro [3.5] Methyl decane-2-carboxylate (2I)
  • the ninth step 2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-benzene -propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]decane-2-carboxylate III Trifluoroacetate (2J)
  • Step 10 2-Amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-benzene) -propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]decane-2-carboxylic acid tris Fluoroacetate (Compound 2)
  • Tetrahydrofuran 50 mL was added to a reaction flask, sodium hydride (1.3 g, 54.2 mmol) was added under a nitrogen atmosphere, cooled to 0 ° C in an ice water bath, and triethyl phosphonoacetate (6.9 g, 31 mmol) was slowly added dropwise. The reaction was carried out at 0 ° C for 20 min.
  • Step 4 tert-Butyl 2-oxo-3,10-diazaspiro[4.1.5 ⁇ 7 ⁇ .1 ⁇ 5 ⁇ ]tridecane-10-carboxylic acid tert-butyl ester (3E)
  • the seventh step (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazaspiro[4.1.5 ⁇ 7 ⁇ .1 ⁇ 5 ⁇ ] Tridecane-10-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino ]-4-methyl-pentanamide ditrifluoroacetate (compound 3)
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was separated and purified (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; Isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle), The preparation was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazaspiro[4.1.5.
  • Tetrahydrofuran 50 mL was added to a reaction flask, sodium hydride (2.5 g, 59.2 mmol) was added, and the mixture was cooled to 0 ° C in an ice water bath, and triethyl phosphonoacetate (7.96 g, 35.5 mmol) was slowly added dropwise. Reaction for 20 min. After cooling to -5 to 0 ° C, a solution of 6-oxo-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (4A) (5 g, 23.7 mmol) in tetrahydrofuran (20 mL) was slowly added dropwise.
  • 4-A 6-oxo-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylic acid tert-butyl ester
  • 6-(2-Ethoxy-2-oxo-ethyl)-6-(nitromethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (4C) ( 5.1 g, 15 mmol) was added to a reaction flask, and ethanol (75 mL) and water (25 mL), iron powder (4.2 g, 74 mmol) and ammonium chloride (4.0 g, 74 mmol) were added, and the mixture was refluxed for 5 h.
  • the seventh step (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazaspiro[3.1.4 ⁇ 6 ⁇ .1 ⁇ 4 ⁇ ] Undecyl-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino ]-4-methyl-pentanamide ditrifluoroacetate (compound 4)
  • reaction liquid was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative chromatography (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O Equivalence: A 65%; Flow rate: 30 mL/min; Back pressure: 1000 PSI; Column temperature: 30 ° C; Wavelength: 210 nm; Period: 18 min; Sample preparation: Compound dissolved in 12 mL of methanol; Injection: 0.9 mL/needle) The preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazaspiro[3.1.
  • Triethylamine (0.15 mL, 1.1 mmol) was added dropwise to a 2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (6A) (0.23 g) in a 50 mL single-mouth flask at 0 °C.
  • a solution of 1 mmol) in tetrahydrofuran (5 mL) was added dropwise, and benzyl chloroacetate (340 mg, 2 mmol) was added and stirred for 10 min. After stirring to room temperature, stirring was continued for 1 h, and the reaction mixture was filtered through celite, and then filtered, and then evaporated to ethylamine.
  • Carboxylic ester (6B) colorless oily product (362 mg, yield 99%).
  • the fifth step N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-( tert-butyl) Oxycarbonylamino)-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl Amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamic acid tert-butyl ester (6F)
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified mjjjjjjjjjjjjj [(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2, 7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxo- tert-Butyl ethyl carbamate (6F), white solid (610 mg, yield 95%).
  • Step 6 (2R)-N-[(1R)-5-Amino-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl ]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-Amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide ( Compound 6)
  • the reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O Equivalence: A 65%; Flow rate: 30 mL/min; Back pressure: 1000 PSI; Column temperature: 30 ° C; Wavelength: 210 nm; Period: 18 min; Sample preparation: Compound dissolved in 12 mL of methanol; Injection: 0.9 mL/needle) The preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give a white powdery compound.
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (330 mg, 1.3 mmol), triethylamine (263 mg, 2.6 mmol) and dichloromethane (20 mL), stirred and dissolved. After cooling to -10 ° C, methanesulfonyl chloride (164 mg, 1.43 mmol) was added dropwise and reacted for 4 h. The mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (60 mL), EtOAc.
  • reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was evaporated to drynessielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielie
  • EtOAc mjjjjjjj [[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-methylsulfonyl-2, 7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxo- tert-Butyl ethyl carbamate (7C), light yellow solid (317 mg, yield 52%).
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was collected, concentrated under reduced pressure to remove most of the organic solvent, and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diaza Heterospiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropan
  • 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid benzyl ester (520 mg, 2.0 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL) in a 50 mL reaction flask. Triethylamine (607 mg, 6.0 mmol) was added with stirring. Then, the temperature was lowered to -20 ° C, and acetyl chloride (314 mg, 4.0 mmol) was added dropwise. After the addition, the mixture was warmed to room temperature and stirred for 2 h.
  • the third step tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetyl-2,7- Diazaspiro[3.5]decane--7-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl- 2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate (8C)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / Needle), the preparation liquid was collected, concentrated to remove most of the organic solvent under reduced pressure, and lyophilized to obtain (2R)-N-[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5 ]decane-7-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propano
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (310 mg, 1.2 mmol), triethylamine (364 mg, 3.6 mmol) and dichloromethane (20 mL) and dissolved by stirring at room temperature. Then, it was cooled to -10 ° C, and isopropyl chloroformate (146 mg, 1.2 mmol) was added dropwise. After the addition, the mixture was warmed to room temperature and reacted for 4 h. The reaction system was washed with aq. EtOAc EtOAc.
  • O7-benzyl O-isopropyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate 9A (260 mg, 0.75 mmol), palladium on carbon was added. (52 mg, 20 wt%) and methanol (20 mL). The hydrogen was replaced three times, and the reaction was carried out for 8 hours at room temperature under a hydrogen (balloon) atmosphere. The reaction mixture was filtered through celite (EtOAc) (EtOAc) 100%), directly invest in the next step.
  • the third step 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-) Butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propionyl 1]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diaza Spirogen [3.5] decane-2-carboxylic acid isopropyl ester (9C)
  • tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylate (0.11 g, 0.5 mmol), 1-(3-dimethylaminopropyl) was added.
  • 3-ethylcarbodiimide hydrochloride (115 mg, 0.6 mmol), 1-hydroxybenzotriazole (81 mg, 0.6 mmol), Intermediate 1 (378 mg, 0.5 mmol) The reaction was carried out for 5 h at room temperature.
  • tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylate (6A) (0.23 g, 1 mmol), triethylamine (210 mg, 2.0 mmol) and dichloro Methane (7 mL) was dissolved by stirring. After cooling to -10 ° C, methanesulfonyl chloride (140 mg, 1.2 mmol) was added dropwise and the mixture was reacted for 4 h. After the temperature was raised to room temperature, the reaction mixture was dried over EtOAc EtOAc m. The residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc (EtOAc:EtOAc:EtOAc) tert-Butyl carboxylic acid (12A), light yellow oil (250 mg, yield 81%).
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methanesulfonyl-2,7-diazaspiro[ 3.5]decane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoy
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (6C) (350 mg, 1.3 mmol), triethylamine (408 mg, 4.03 mmol) and dichloromethane (20 mL) and dissolved by stirring at room temperature.
  • the reaction solution was then cooled to 0 ° C, and pyrrolidine-1-carbonyl chloride (13B) (123 mg, 0.92 mmol) was added dropwise, and the mixture was warmed to room temperature and reacted for 4 h.
  • the reaction mixture was washed with saturated aqueous sodium hydrogen sulfate (60 mL), EtOAc.
  • Benzyl carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate 13C as a pale yellow oily liquid (460 mg, yield 100%).
  • reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was evaporated to dryness toielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielie
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O Equivalence: A 65%; Flow rate: 30 mL/min; Back pressure: 1000 PSI; Column temperature: 30 ° C; Wavelength: 210 nm; Period: 18 min; Sample preparation: Compound dissolved in 12 mL of methanol; Injection: 0.9 mL/needle) The preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino] -3-phenyl-propionyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pyrrolidin-1-carbonyl)-2,7-
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (350 mg, 1.3 mmol), triethylamine (406 mg, 4.01 mmol) and dichloromethane (20 mL) and dissolved by stirring at room temperature. Then, the reaction liquid was cooled to 0 ° C, and 3-methylsulfonylazetidin-1-carbonyl chloride (14B) (293 mg, 1.48 mmol) was added dropwise, and the mixture was warmed to room temperature and reacted for 4 h. The reaction mixture was washed with saturated aqueous sodium hydrogen sulfate (60 mL), EtOAc.
  • the fifth step (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidin-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro [3.5] decane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl- Propionyl]amino]-4-methyl-pentanamide ditrifluoroacetate (Compound 14)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O Equivalence: A 65%; Flow rate: 30 mL/min; Back pressure: 1000 PSI; Column temperature: 30 ° C; Wavelength: 210 nm; Period: 18 min; Sample preparation: Compound dissolved in 12 mL of methanol; Injection: 0.9 mL/needle) The preparation was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidin-1 -carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (6C) (310 mg, 1.2 mmol), triethylamine (364 mg, 3.6 mmol) and dichloromethane (20 mL) and dissolved by stirring at room temperature.
  • the reaction solution was then cooled to 0 ° C, and methylcarbamoyl chloride (15A) (123 mg, 1.32 mmol) was added dropwise, and the mixture was warmed to room temperature and reacted for 4 h.
  • the reaction mixture was washed with aq.
  • EtOAc EtOAc EtOAc
  • Benzyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (15B) as a yellow oil (440 mg, yield 100%).
  • reaction mixture was filtered through celite (EtOAc) (EtOAc) (HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O Equivalence: A 65%; Flow rate: 30 mL/min; Back pressure: 1000 PSI; Column temperature: 30 ° C; Wavelength: 210 nm; Period: 18 min; Sample preparation: Compound dissolved in 12 mL of methanol; Injection: 0.9 mL/needle) The preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2) -2-amino-3-phenyl-propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexano
  • reaction solution was adjusted to a pH of about 13 with aqueous ammonia, and the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5] Benzyl-7-carboxylate (16C), a yellow oily liquid (2.43 g, yield 100%).
  • benzyl 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (16C) (310 mg, 1.05 mmol), triethylamine (318 mg, 3.14 mmol) and dichloromethane (20 mL) were dissolved by stirring. After cooling to -10 ° C, methanesulfonyl chloride (156 mg, 1.36 mmol) was added dropwise and reacted for 4 hours. The mixture was then warmed to room temperature. The mixture was washed with EtOAc EtOAc EtOAc.
  • benzyl 5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (16D) (230 mg, 0.5 mmol) was added.
  • Palladium on carbon 40 mg, 20 wt%) and isopropanol (20 mL).
  • the hydrogen was replaced 3 times, and the reaction was heated to 100 ° C for 8 h in a hydrogen (balloon) atmosphere.
  • the reaction solution was filtered through celite, and the filtrate was evaporated to ethylamine. , yield 100%), directly into the next reaction.
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-methanesulfonyl-2, 7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-
  • the aqueous phase was acidified to pH 1 with 4M hydrochloric acid, and then extracted with ethyl acetate (100 mL ⁇ 4).
  • the sodium was dried, filtered, and the filtrate was evaporated to dryness, mjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj
  • benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (6C) (335 mg, 1.3 mmol), 1-(3-dimethylaminopropyl)-3 was added.
  • -ethylcarbodiimide hydrochloride (748 mg, 3.9 mmol), 1-hydroxybenzotriazole (211 mg, 1.56 mmol), (2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propionic acid (17B) (246 mg, 1.3 mmol) and dichloromethane (30 mL).
  • Step 5 (2R)-N-[(1R)-5-Amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]decane- 7-Carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]- 4-methyl-pentanamide trifluoroacetate (compound 17)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2 ,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-pheny
  • N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]fluoren-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamic acid was added.
  • Benzyl ester (18B) (0.86 g, 2 mmol) and dichloromethane (20 mL), trifluoroacetic acid (2 mL) was added dropwise at room temperature, and the mixture was reacted at room temperature for 3 h.
  • the third step N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7- [(2R-yl)-2-(benzyloxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl] Tert-butyl carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]carbamate (18D)
  • the fifth step (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]decane- 2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]- 4-methyl-pentanamide; trifluoroacetic acid (compound 18)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2 ,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phen
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified and purified mjjjjjjjjjjjjjj )-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3- Phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid benzyl ester (19A), pale yellow solid (2.49 g, yield 89.6%).
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5 ,5-Difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)
  • 2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (450 mg, 2.0 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL) in a 50 mL reaction flask. Triethylamine (606 mg, 6.0 mmol) was added with stirring. Then, the temperature was lowered to -20 ° C, and acetyl chloride (310 mg, 4.0 mmol) was added dropwise. After the addition, the mixture was warmed to room temperature and stirred for 2 h.
  • tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylate (20B) (520 mg, 1.9 mmol) and dichloromethane (6 mL).
  • Trifluoroacetic acid (3 mL) was added dropwise at room temperature, and the mixture was reacted at room temperature for 3 h.
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, and 4 mL of concentrated aqueous ammonia was added to the residue, and then dried over anhydrous sodium sulfate, and washed with methanol (20mL), and the mixture was concentrated to give 1-(2,7-diazaspiro[3.5] ⁇ -7-yl) Ethyl ketone (20C) crude, yellow oily liquid (250 mg, yield 77%) and used directly in the next reaction.
  • the third step N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro) [3.5] decane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo- Ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate (20D)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / Needle), the preparation liquid is concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to obtain ((2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5] ⁇ Alkyl-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propan
  • 2-oxo-7-azaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester (3A) (129 mg, 0.54 mmol), acetic acid (65 mg, 1.08 mmol), 1 4-thiazinidine 1,1-dioxide (72 mg, 0.54 mmol), sodium triacetoxyborohydride (229 g, 1.08 mmol) and dichloromethane (20 mL).
  • the reaction solution was suction filtered, and the filtrate was washed with saturated sodium hydrogen sulfate (50 mL).
  • 4-thiazin-4-yl)-7-azaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester (21A), white powder (147 mg, yield 76%).
  • Step 2 4-(7-Azaspiro[3.5]indol-2-yl)-1,4-thiazinidine-1,1-dioxide (21B)
  • tert-butyl (1,1-dioxo-1,4-thiazin-4-yl)-7-azaspiro[3.5]decane-7-carboxylate (21A) was added. (147 mg, 0.41 mmol) and dichloromethane (10 mL), trifluoroacetic acid (2 mL) was added dropwise at room temperature. The reaction solution was directly concentrated under reduced pressure to give 4-(7-azaspiro[3.5]indole-2-yl)-1,4-thiazinidine-1,1-dioxide (21B) as a crude oil. (106 mg, yield 100%) and used directly in the next reaction.
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4- Thiazin-4-yl)-7-aza-spiro[3.5]decane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3)
  • 2-Boc-2,7-diaza-spiro[4.4]decane (22A) (452 mg, 2.0 mmol), triethylamine (400 mg, 4.0 mmol) and dichloromethane (15 mL) ), stir and dissolve. After cooling to -10 ° C, methylaminocarbonyl chloride (188 mg, 2.01 mmol) was added dropwise, and the mixture was reacted at room temperature for 3 hours. 3M dilute hydrochloric acid (50 mL) was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with methylene chloride (60 mL ⁇ 2). , 7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester (22B), white solid (570 mg, yield 65.5%).
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified and purified mjjjjjjjjj (1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2) ,7-diazaspiro[4.4]decane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxo Tert-butyl ethyl]carbamate (22D), pale yellow solid (420 mg, yield 98%).
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2 -2-amino-3-phenyl-propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexan
  • the third step tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5- (tert-Butoxycarbonylamino)-1-[2-(1-piperidinyl)-7-azaspiro[3.5]decane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl Amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate (23C)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / Needle), the preparation liquid is concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino ]-3-phenylpropionyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidinyl)-7-azaspiro
  • tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.4]nonane-2-carboxylate (6A) (0.452 g, 2 mmol), tetrahydropyranone (200 mg, 2 mmol), acetic acid (120 mg, 2.0 mmol) and dichloroethane (7 mL), stirred for 0.5 h, then added sodium triacetoxyborohydride (0.636 g, 3 mmol), and reacted for 5 h, then quenched with water (10 mL) (5 mL ⁇ 3), the organic phase was combined and dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was evaporated.
  • tert-butyl 7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carboxylate 24A (0.5 g, 1.61 mmol) was added.
  • dichloromethane 7 mL
  • trifluoroacetic acid (1 mL) was added dropwise at room temperature, and the mixture was reacted at room temperature for 3 h.
  • the reaction solution was directly concentrated under reduced pressure to give crude crystals of 7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]decane (24B) as a pale yellow oily liquid (338 mg, yield 100%) And used directly in the next reaction.
  • EtOAc EtOAc:EtOAc:EtOAc -2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-tetrahydropyran)- 4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxoethyl]amino] -2Oxoethyl]carbamate (24C), white solid (200mg, yield 39.93%)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give (2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino] 3-phenylpropionyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazas
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give ((2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl)amino) )-3-phenylpropionyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[
  • 2-oxo-7-azaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester (3A) (287 mg, 1.2 mmol), acetic acid (144 mg, 2.4 mmol), D -Proline methyl ester (154 mg, 1.2 mmol), sodium triacetoxyborohydride (233 mg, 2.4 mmol) and dichloromethane (30 mL).
  • the reaction mixture was suction filtered, and the ⁇ Azaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester (26A)), white powder (275 mg, yield 65%).
  • reaction solution was directly concentrated under reduced pressure to give (2H)-l-(7-azaspiro[3.5]indol-2-yl)pyrrolidine-2-carboxylic acid methyl ester (26B) as a yellow oily liquid (196 mg, yield 100%) and used directly in the next reaction.
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give (2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2) -2-[[(2R)-2-Amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amin
  • the third step N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-() Oxycarbonylamino)-1-[7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]decane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl Amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamic acid tert-butyl ester (27C)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / Needle), the preparation is concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, lyophilized, and lyophilized to give 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2- [[(2R)-2-Amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropionyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent, and lyophilized to give 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2 -2-amino-3-phenyl-propionyl]amino]-3-phenyl-propionyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexan
  • the second step is 5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxamide (29C)
  • reaction liquid was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by preparative liquid phase (preparation conditions: instrument: Gilson GX-281; column: Xbridge C18, 150 ⁇ 30 mm ID, 5 ⁇ m; mobile phase: A for ACN and B for H 2 O; isocratic: A 65%; flow rate: 30 mL/min; back pressure: 1000 PSI; column temperature: 30 ° C; wavelength: 210 nm; period: 18 min; sample preparation: compound dissolved in 12 mL of methanol; injection: 0.9 mL / needle
  • the preparation liquid was concentrated under reduced pressure to remove most of the solvent and lyophilized to give 2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2 -2-amino-3-phenyl-propionyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoy

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Abstract

通式(I)所示的肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途，化合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况。

Description

肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途 技术领域
本发明涉及一种具有镇痛作用的肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途。
背景技术
阿片类药物用于疼痛的治疗已有数千年的历史，其主要通过与已知的三种经典阿片受体μ,δ和κ相互结合而发挥生理作用。这三种受体都是G蛋白偶联受体家族的一员,主要分布在中枢神经系统，同时也存在于很多外周组织中。其中最为经典的药物属吗啡，其主要通过μ阿片受体的作用发挥镇痛效果。
此外常用的临床镇痛药物还包含其他μ阿片受体药物，如以二氢吗啡酮、芬太尼为代表的传统类阿片药物。
然而μ阿片受体类药物在长期使用后会产生多种副作用,例如耐受、依赖和呼吸抑制以及对胃肠运动的影响等,这不仅增加了治疗费用，更影响了患者康复周期。而一些非阿片类注射剂，如对乙酰氨基酚、NSAIDs(非甾体抗炎药),由于其镇痛效果差，限制了其使用范围和剂量；此外也有一定的副作用，如对乙酰氨基酚增加肝脏毒性，NSAIDs(非甾体抗炎药)导致各种胃肠道疾病。
随着现代社会生活工作压力的不断增大和老年社会的到来,以及阿片受体对于治疗不同类型的疼痛有着至关重要的作用,寻找具有高镇痛活性且低毒副作用的新型阿片药物具有重要的科学及社会意义。
研究发现通过使用κ阿片受体激动剂，可以将κ阿片受体作为干预的靶标以治疗疼痛和预防种类繁多的疾病和病况。如1993年Woold等在Anesthesia and Analgesia(1993，77,362-379)描述了将κ阿片受体激动剂用于治疗痛觉增敏在内的疼痛；1999年Wu等在Circulation Res(1999,84,1388-1395)提出将κ阿片受体激动剂作为预防和治疗心血管疾病的靶标；2003年Kaushik等在J.Postgraduate Medicine(2003，49(1),90-95)阐述了κ阿片受体激动剂的神经保护作用；2004年Potter等在.Pharmacol.Exp.Ther(2004，209,548-553)描述了κ阿片受体激动剂在眼部紊乱和眼部疼痛中的应用；2005年Wikstrom等在J.Am.Soc.Nephrol(2005,16，3742-3747.)描述了κ激动剂在治疗尿毒症和阿片引起的瘙痒的应用；2006年Bileviciute-Ljungar等在Rheumatology(2006,45，295-302)评估了κ阿片受体激动剂用于骨关节炎，类风湿性关节炎等炎性疾病的性质；2006年 Lembo在Diges.Dis.(2006,24,91-98)中评估了κ阿片受体激动剂胃肠道疾病中的应用；2006年Jolivalt等在Diabetologia(2006,49(11)，2775-2785)描述了κ阿片受体激动剂阿西马朵林在啮齿动物糖尿病神经病变中的作用；2008年卡拉治疗学股份有限公司的Schteingart,Claudio,D等在WO2008057608A2中评估了κ阿片受体激动剂在内脏疼痛、pH敏感型伤害感受器活化的相关疼痛以及辣椒素引起的眼部疼痛中的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种结构新颖，生物活性更好、镇痛效果更佳的κ阿片受体激动剂，及其制备方法和在医药上的用途。
本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：
Figure PCTCN2018096271-appb-000001
其中，
R 1选自
Figure PCTCN2018096271-appb-000002
m 1、m 2各自独立选自1、2、3或4；
m 3、m 4各自独立选自0、1、2、3或4；条件是，m 3和m 4不能同时为0；
n 1、n 2各自独立选自0、1、2、3或4；
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C(＝O)-C 1-6烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-6烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-8碳环基或3至8元杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、＝O、羧 基、硝基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O) 2；
R 1e、R 1f各自独立地选自H、C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-6烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH 2) q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
或者，R z1和R z2与其连接的碳原子形成3至10元含氮杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、＝O、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代；
R 1a、R 1b各自独立选自F、CF 3、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或3至8元杂环基，所述烷基、烯基、炔基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R z3独立选自H、-C(＝O)-C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-6烷基、-C(＝O)-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-(3至8元杂环基)、-S(＝O) p-C 1-6烷基、-S(＝O) p-C 3-8碳环基、-S(＝O) p-(3至8元杂环基)、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至8元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-6烷基；
或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成3至10元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-S(＝O) p-C 1-6烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
q选自0、1、2、3或4；
p选自0、1或2；
a选自0、1、2或3；
R 4独立选自H、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-(CH 2) q-C 3-8碳环基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF 3、NO 2、C 1-6烷 基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-(CH 2) q-3至8元杂环基或
Figure PCTCN2018096271-appb-000003
所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
b选自0、1、2、3、4或5；
c选自0、1、2、3、4或5；
R 5、R 6每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF 3、氰基、硝基、C 1-4烷基、-OR 5a、-C(O)OR 5b、-SR 5c、-S(O)R 5d、-S(O) 2R 5e或-NR 5fR 5g；
R 5a、R 5b、R 5c、R 5d、R 5e、R 5f和R 5g各自独立选自H或C 1-4烷基；
或者，R 5f、R 5g与其连接的氮原子形成5至6元杂环，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子。
本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R 1选自
Figure PCTCN2018096271-appb-000004
m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
n 1、n 2各自独立选自0、1或2；
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、-C(＝O)-C 1-4烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-4烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-6碳环基或3至6元杂环基，优选H、C 1-4烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-4烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-6碳环基或3至6元杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、＝O、羧基、氰基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷 氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O) 2；
R 1e、R 1f各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳环基或-C(＝O)O-(CH 2) q-3至6元杂环基，优选H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基或-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳环基，所述的烷基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
或者，R z1和R z2与其连接的碳原子形成3至10元含氮杂环，优选形成4至6元含氮杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、＝O、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代；
R 1a、R 1b各自独立选自F、CF 3、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或3至6元杂环基，优选F、CF 3、C 2-4烯基或C 2-4炔基，所述烷基、烯基、炔基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R z3独立选自H、-C(＝O)-C 1-4烷基、、-C(＝O)-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)-C 3-4碳环基、-C(＝O)O-C 3-6碳环基或-C(＝O)O-(3至6元杂环基)、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-S(＝O) p-(3至6元杂环基)、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至6元杂环基，优选H、-C(＝O)-C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-C(＝O)NR 1gR 1h或3至6元杂环基，所述烷基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-6烷基，优选H或C 1-4烷基；
或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成3至10元杂环，优选形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基或-S(＝O) p-C 1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
q选自0、1、2、3或4；优选0或1；
p选自0、1或2；优选2；
a选自0、1、2或3；优选3；
R 4独立选自H、C 1-4烷基、C 2-4烯基、C 2-4炔基或-(CH 2) q-C 3-6碳环基，优选C 1-4烷基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF 3、NO 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-(CH 2) q-3至6元杂环基或
Figure PCTCN2018096271-appb-000005
优选H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳环基，所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
b选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；
c选自0、1、2、3、4或5，优选0或1；
R 5、R 6每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF 3、氰基、硝基、C 1-4烷基、或-NR 5fR 5g，优选F、CF 3或C 1-4烷基；
R 5f和R 5g各自独立选自H或C 1-4烷基。
本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
n 1、n 2各自独立选自0、1或2；
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、C 1-4烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-4烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-6碳环基或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、＝O、羧基、硝基、氰基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O) 2；
R 1e、R 1f各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基或-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳 环基，所述的烷基或碳环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、苯基的取代基所取代；
或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成4至6元含氮杂环，所述的环任选进一步被＝O的取代基所取代；
R 1a、R 1b独立选自F、CF 3、甲基、乙基、丙基或异丙基；
R z3各自独立选自H、-C(＝O)-C 1-4烷基、-C(＝O)-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、环丙基或苯基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-4烷基；
或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或-S(＝O) p-C 1-4烷基(优选-S(＝O) p-甲基、优选-S(＝O) p-乙基)的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
p选自2；
q选自0或1；
a选自3；
R 4选自丙基或异丙基；
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基或-C(＝O)O-苄基；
b选自0；
c选自0。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)所示化合物，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
Figure PCTCN2018096271-appb-000006
R 1选自
Figure PCTCN2018096271-appb-000007
m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
n 1、n 2各自独立选自0或2；
R 1a、R 1b独立选自F；
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、羧基、
Figure PCTCN2018096271-appb-000008
Figure PCTCN2018096271-appb-000009
氨基、-CH 2NH 2或
Figure PCTCN2018096271-appb-000010
或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺
Figure PCTCN2018096271-appb-000011
R z3各自独立选自H、-C(＝O)-C 1-4烷基、-C(＝O)-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、环丙基或苯基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-4烷基；
或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、CF 3、甲基、甲氧基或-S(＝O) p-C 1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
p选自2；
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(II)所示化合物，或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中
R 1选自
Figure PCTCN2018096271-appb-000012
m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
n 1、n 2各自独立选自0或2；
R 1a、R 1b选自F；
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、羧基、
Figure PCTCN2018096271-appb-000013
Figure PCTCN2018096271-appb-000014
氨基、-CH 2NH 2或
Figure PCTCN2018096271-appb-000015
或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺
Figure PCTCN2018096271-appb-000016
R z3各自独立选自H、
Figure PCTCN2018096271-appb-000017
Figure PCTCN2018096271-appb-000018
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(II)所示化合物，或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中：
R 1选自
Figure PCTCN2018096271-appb-000019
Figure PCTCN2018096271-appb-000020
Z选自CR z1R z2或NR z3；
R z1、R z2各自独立选自H、羧基、
Figure PCTCN2018096271-appb-000021
Figure PCTCN2018096271-appb-000022
氨基、-CH 2NH 2或
Figure PCTCN2018096271-appb-000023
或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺
Figure PCTCN2018096271-appb-000024
R z3各自独立选自H、
Figure PCTCN2018096271-appb-000025
Figure PCTCN2018096271-appb-000026
R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。
本发明优选方案，本发明提供一种通式(I)或(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物包括但不限于如下结构式所示化合物之一：
Figure PCTCN2018096271-appb-000027
Figure PCTCN2018096271-appb-000028
Figure PCTCN2018096271-appb-000029
Figure PCTCN2018096271-appb-000030
Figure PCTCN2018096271-appb-000031
本发明的一种优选方案，本发明提供一种通式(I)或(II)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述的药学上可接受的盐选自三氟乙酸盐。
本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶或包含通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物用于制造治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物的应用。
本发明的优选方案，其中所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。
本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。
本发明的优选方案，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。
本发明提供一种治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的方法，所述方法包括给予通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物，所述的所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况优选下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼，所述疼痛优选以下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛；或者所述疼痛优选以下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、 医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱(胃肠道紊乱)相关的疼痛。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括 12C、 13C和 14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又称为重氢)、氚(T，又称为超重氢)，氧的同位素包括 16O、 17O和 18O，硫的同位素包括 32S、 33S、 34S和 36S，氮的同位素包括 14N和 15N，氟的同位素 19F，氯的同位素包括 35Cl和 37Cl，溴的同位素包括 79Br和 81Br。
“烷基”是指直链和支链的一价饱和烃基，主链包括1至10个碳原子，优选为1至8个碳原子，进一步优选为1至6个碳原子，更优选为1至4个碳原子的直链与支链基团，最优选1至2个碳原子，烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代，其中R 19和R 19a各自独立选自H、羟基、氨基、羧基、C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、C 2-8炔基、3至10元碳环基、4至10元杂环基、3至10元碳环基氧基或者4至10元杂环基氧基，k选自0、1、2、3、4或者5，j选自0、1或者2。本文中出现的烷基、k、j、R 19和R 19a，其定义如上所述。
“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(CH 2) v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代，当亚烷基中的取代基数量大于等于2个时，取代基可以稠合在一起形成环状结构。本文中出现的亚烷基，其定义如上所述。
“烷氧基”是指O-烷基的一价基团，其中，烷基如本文所定义，烷氧基实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、 2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
“烯基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代。本文中出现的烯基，其定义如上所述。
“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义如上所述。
“环烷基”是指一价饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。所述的环烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。
“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，碳环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、苯基或萘基。所述的碳环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所取代。本文中出现的碳环，其定义如上所述。
“杂环”是指饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1至4个选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧环戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、-SR 19、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6羟基烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基、3至8元杂环基、-(CH 2) a-C(＝O)-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-O-R 19、-(CH 2) k-C(＝O)-NR 19R 19a、-(CH 2) k-S(＝O) j-R 19、-O-C(＝O)-O-R 19或者-NR 19R 19a的取代基所 取代。本文中出现的杂环，其定义如上所述。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或其立体异构体、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶与其他组成成分的混合物，其中其它组分包含生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“有效剂量”指引起组织、系统或受试者生理或医学翻译的化合物的量，此量是所寻求的，包括在受治疗者身上施用时足以预防受治疗的疾患或病症的一种或几种症状发生或使其减轻至某种程度的化合物的量。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐，它们还包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂为水时，则为水合物。
具体实施方式
以下结合附图及实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10 -6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代氯仿(CDCl 3)，氘代甲醇(CD 3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。
HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
实施例中无特殊说明，M为mol/L。
Boc：是指叔丁基氧基羰基。
Cbz：是指苄氧羰基。
THP:四氢吡喃基。
中间体1：
(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)
(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000032
Figure PCTCN2018096271-appb-000033
第一步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
Figure PCTCN2018096271-appb-000034
室温下，将甲基(2R)-2-氨基-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1a)(2.6g,10mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，降温至0℃。磁力搅拌下，将(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酸(2.8g,11mmol)，1-羟基苯并三唑(1.62g,12mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.3g,12mmol)依次加至反应液中，升温至25℃，并于该温度下反应15h。向反应液中加入1M盐酸水溶液(25mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)搅拌30分钟、分液。有机相依次用1M盐酸水溶液(25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，无水硫酸钠(2g)干燥。过滤，滤液减压浓缩得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)，白色泡状固体(5.0g，产率99％)。
第二步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
Figure PCTCN2018096271-appb-000035
室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1b)(5.0g,10mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，将10％钯碳(1g,20％w/w)加至反应液中，置换氢气3次，氢气氛围室温反应5h。将反应液用硅藻土(3g)过滤，滤液减压浓缩，得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)粗品，白色泡状固体(3.7g，产率99％)，并直接用于下一步反应。
第三步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
Figure PCTCN2018096271-appb-000036
室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1c)粗品(3.7g,9.9mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，降温至0℃。将(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酸(3.3g,11mmol)、1-羟基苯并三唑(1.62g,12mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.3g,12mmol)依次加至反应液中，升温至25℃，于该温度下反应5h。加入1M盐酸水溶液(25mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)搅拌30分钟、分液。有机相依次用1M盐酸水溶液(25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，无水硫酸钠(2g)干燥。过滤，滤液减压浓缩得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)粗品，白色泡状固体(3.0g，产率46％)，并直接用于下一步反应。
第四步：甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨 基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)
methyl(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-6-(tert-butoxycarbonylamino)hexanoate
Figure PCTCN2018096271-appb-000037
室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1d)粗品(3.0g,4.58mmol)溶于乙酸乙酯(50mL)中，将10％钯碳(1g,33％w/w)加至反应液中，置换氢气3次，氢气氛围下(气球)室温反应5h。将反应液用硅藻土(3g)过滤，滤液减压浓缩至干。加入乙酸乙酯(6mL)加热溶解，加入石油醚(6mL)后缓慢降至室温析出固体，过滤，滤饼于50℃减压烘干，得到甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)，白色泡状固体(2.1g，产率88％)。
第五步：甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)
methyl(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoate
Figure PCTCN2018096271-appb-000038
室温下，将甲基(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸酯(1e)(2.1g,4.0mmol)溶于乙酸乙酯(30mL)中，降温至0℃。将(2R)-2-(叔丁氧羰基)-3-苯基-丙酸(1.3g,4.9mmol)，1-羟基苯并三唑(0.65g,4.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.1g,5.7mmol)依次加至反应液 中，升温至25℃，于该温度下反应5h。加入1M盐酸水溶液(15mL)洗涤、分液。有机相中加入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)搅拌30分钟、分液。有机相用依次用1M盐酸水溶液(15mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)、饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，硅胶柱层析分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝100:1～5:1)，得到甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)，白色泡状固体(2.3g，产率74％)。
第六步：(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)
(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000039
室温下，将甲基(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸酯(1f)(2.3g,3.0mmol)溶于甲醇(20mL)中，将氢氧化钠(200mg,5.0mmol)的水溶液(20mL)加至反应液中，于该温度下反应5h。用1M盐酸水溶液调节反应液pH<4，用乙酸乙酯(40mL)萃取、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙基]氨基]-3-苯基-丙基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酸(中间体1)，白色泡状固体(2.1g，产率93％)。
Ms m/z(ESI):752.5[M-H] -；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.38-7.27(m,3H),7.25-7.07(m,7H),4.82-4.62(m,1H),4.61-4.41(m,2H),4.37-4.18(m,1H),3.37-2.67(m,6H),2.00-1.65(m,3H),1.59-1.37(m,15H),1.35-1.26(m,9H),0.90-0.80(m,6H)。
实施例1：
2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸；三三氟乙酸盐
2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid；tri-trifluoroacetate
Figure PCTCN2018096271-appb-000040
第一步：2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)
tert-butyl 2-[(1S)-1-phenylethyl]imino-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000041
室温下，将2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(2A)(7.2g,30mmol)、(1S)-1-苯乙胺(3.7g,31mmol)溶于甲苯(100mL)中，加入对甲苯磺酸(300mg,1.74mmol)，Dean-Stark回流分水。6h后，将反应液减压浓缩至干，得到2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)粗品，黄色泡状固体(10g,产率97％)。
第二步：2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)
tert-butyl 2-cyano-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000042
室温下，将2-[(1S)-1-苯基乙基]亚氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2B)粗品(10g,29.2mmol)溶于甲醇(90mL)中，冰浴冷却至0℃。搅拌下加入氯化锌(210mg,1.54mmol)，缓慢滴入氰基三甲基硅烷(3g,30.2mmol)，保持0℃反应3h。将反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)，黄色泡状固体(4.7g,产率44％)。
第三步：2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)
2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000043
室温下，将2-氰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2C)(2g,5.4mmol)溶于浓盐酸(20mL)中，然后回流反应40h。降至室温，并将反应液减压浓缩，得到2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)粗品，黄色油状液体(1.5g,产率96％)，直接用于下一步反应。
第四步：7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)
7-tert-butoxycarbonyl-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylicacid
Figure PCTCN2018096271-appb-000044
室温下，将2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2D)粗品(1g,3.47mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入氢氧化钠(0.5g,12.5mmol)的水(10mL)溶液，然后加入二碳酸二叔丁酯(908mg,4.16mmol)，并于室温下反应6h。将反应液过滤，得到7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)粗品，白色固体(0.8g,产率60％)。
第五步：O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(2F)
O7-tert-butyl O2-methyl
2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000045
室温下，将7-叔丁氧基羰基-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(2E)(775mg,2.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入甲醇(10mL)。室温下，搅拌下依次加入1-羟基苯并三唑(270mg,2.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.6g,3.13mmol)，反应15h。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:1)，得到O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(2F)，淡黄色泡状固体(560mg,产率70％)。
第六步：甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)
methyl 2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000046
室温下，将O7-叔丁基O2-甲基2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(2F)(500mg,1.24mmol)溶于二氯甲烷(4.5mL)中，降温至0℃。加入三氟乙酸(1.5mL)，室温下反应3h，将反应液减压浓缩，得到甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)，黄色油状液体(320mg,产率85％)。
第七步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯
methyl
7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2-[[(1S)-1-phenylethyl]amino]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000047
室温下，将甲基2-[[(1S)-1-苯乙基]氨基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2G)(300mg,1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入中间体1(753mg,1.0mmol)。室温下，搅拌下依次加入1-羟基苯并三唑(135mg,1.0mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.23g,1.2mmol)，反应15h。将反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，收集洗脱剂减压浓缩，得到白色泡状固体的7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2H)(710mg,产率69％)。
第八步：2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)
methyl
2-amino-7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000048
室温下，将7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2-[[(1S)-1-苯基乙基]氨基]-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2H)(700mg,0.7mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中。加入钯碳(0.1g，20wt％)，置换氢气3次，氢气氛围下(气球)室温反应5h。将反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩至干，残留物用硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)，白色泡状固体(370mg,产率60％)。
第九步：2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)
methyl
2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000049
室温下，将2-氨基-7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸甲酯(2I)(370mg,0.4mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，降温至0℃。加入三氟乙酸(1mL)，升至室温，反应3h。将反应液减压浓缩至干，得到2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)粗品，黄色油状液体(305mg,产率72％)。
第十步：2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物2)
2-amino-7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000050
室温下，将氢氧化钠(50mg，1.25mmol)溶于水(2mL)中，加入2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯三三氟乙酸盐(2J)粗品(305mg,0.288mmol)，室温下反应5h。将反应液减压浓缩至干，制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150mmol)[[(2R)-2-met；流动相：A for ACN and B for  H2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到2-氨基-7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物2)(92mg,产率31％)。
MS m/z(ESI):360.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.18(m,10H),4.65(t,1H),4.33–4.18(m,2H),3.58(br,2H),3.52-3.41(m,1H),3.41–3.29(m,1H),3.17(d,2H),3.10-2.90(m,4H),2.70-2.46(m,2H),2.32-2.18(m,2H),2.05–1.28(m,14H),0.98-0.84(m,6H)。
化合物2-1(游离形式的化合物2)：
将化合物2(7.3g,6.88mmo)通过离子交换树脂(300mL)(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至100mL)，进一步冻干得到化合物2-1，白色固体(4,5g，产率90.8％)。
MS m/z＝720.5[M+2H] +；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.34–7.22(m,6H),7.18-7.06(m,4H),4.78-4.72(m,1H),4.55(t,1H),4.25(t,1H),3.65-3.46(m,3H),3.45–3.25(m,2H),3.09-2.97(m,1H),2.95–2.84(m,3H),2.85-2.73(m,2H),2.51–2.33(m,2H),2.00–1.83(m,2H),1.82–1.25(m,13H),0.96-0.78(m,6H)。
实施例2：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000051
Figure PCTCN2018096271-appb-000052
第一步：2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)
tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000053
将四氢呋喃(50mL)加入反应瓶中，氮气保护下加入氢化钠(1.3g，54.2mmol)，冰水浴冷却至0℃，缓慢滴入膦酰基乙酸三乙酯(6.9g，31mmol)，加完后0℃反应20min。冷却至-5至0℃，缓慢滴入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(5g，20.9mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，加完后升至室温反应1h。加入饱和氯化钠水溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)粗品，淡黄色油状液体(6.0g，产率92.8％)，直接用于下一步。
第二步：2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)
tert-butyl 2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-(nitromethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000054
将2-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3B)加入反应瓶中，加入四氢呋喃(60mL)，室温搅拌溶解完全，然后加入硝基甲烷(6.0g，98.3mmol)和四丁基氟化铵(7.85g，30mmol)。加完后，升温回流反应5h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(150mL)，饱和氯化钠水溶液(100mL×1)洗涤、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1)，得到2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)，无色透明油状液体(6.5g，产率90％)。
第三步：2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)
tert-butyl 2-(aminomethyl)-2-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000055
将2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-(硝基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3C)(6.5g，18mmol)加入到反应瓶中，加入乙醇(75mL)和水(25mL)，铁粉(4.9g，88mmol)和氯化铵(4.7g，88.00mmol)，然后回流反应5h。降温至室温，并将反应体系浓缩至20mL，加入水(30mL)，用氨水调节pH至大于10，用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩至干，得到2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)，淡黄色油状液体(5.1g，产率85％)。
第四步：叔丁基2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)
tert-butyl 2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000056
将2-(氨基甲基)-2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3D)(3g，8.8mmol)加入到反应瓶中，加入氢氧化钠(400mg，10mmol)的水(30mL)溶液，室 温反应5h。将反应液过滤，得到叔丁基2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)，白色固体(2.10g，产率81％)。
第五步：3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)
3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecan-2-one
Figure PCTCN2018096271-appb-000057
将叔丁基2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羧酸叔丁酯(3E)(1g，3.4mmol)，溶于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温反应5h反应完全。将反应液减压浓缩至干，加入水(20mL)，用2M氢氧化钠水溶液调节体系PH>10，用二氯甲烷(20mL×2)萃取、分液，合并有机相，有机相减压浓缩，得到3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)粗品，黄色油状液体(0.6g,产率85％)。
第六步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000058
氮气保护下将二氯甲烷(30mL)加入到反应瓶中，加入中间体1(2.25g，2.98mmol)、3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-2-酮(3F)粗品(0.6g，2.88mmol)，1-羟基苯并三唑(0.39g，2.89mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.83g，4.33mmol)，室温反应15h。然后加入水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取、分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝20:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基 羰基氨基)1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)，白色泡状固体(1.77g，产率73.2％)。
第七步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-oxo-3,10-diazadispiro[4.1.5^{7}.1^{5}]tridecane-10-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000059
氮气保护下，将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(3G)(0.90g,1mmol)和二氯甲烷(21mL)加入到反应瓶中，搅拌下加入三氟乙酸(7mL)，室温反应3h。将反应液减压浓缩至干，残留物制备分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-氧代-3,10-二氮杂螺[4.1.5^{7}.1^{5}]十三烷-10-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物3)，白色固体(0.98g，率54％)。
MS m/z(ESI):365.9[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.86-8.67(m,1H),8.40-8.23(m,1H),8.14-8.01(m,3H),7.84-7.72(m,2H),7.52-7.42(m,1H),7.37-7.15(m,10H),4.76-3.94(m,4H),3.59-2.65(m,12H),2.29-2.15(m,2H),1.93-1.19(m,17H),0.88(dd,6H)。
实施例3：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊 基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000060
第一步：叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)
tert-butyl tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethylidene)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000061
将四氢呋喃(50mL)加入反应瓶中，加入氢化钠(2.5g，59.2mmol)，冰水浴冷却至0℃，缓慢滴入膦酰基乙酸三乙酯(7.96g，35.5mmol)，加完后0℃反应20min。接着冷却至-5至0℃，缓慢滴加6-氧代-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4A)(5g，23.7mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，加完后室温反应1h。然后向反应液中加入饱和氯化钠水溶液(50mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取、分液，合并有机相。有机相用无水硫酸 钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)粗品，黄色油状液体(5.5g，产率83％)，直接用于下一步。
第二步：6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)
tert-butyl 6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-6-(nitromethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000062
将叔丁基6-(2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4B)粗品加入到反应瓶中，加入四氢呋喃(60mL)，室温搅拌溶解完全，然后加入硝基甲烷(6.0g，98.3mmol)和四丁基氟化铵(7.85g，30mmol)。加完后，升温回流反应5h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(150mL)，饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)，无色透明油状液体(5.1g，产率76％)。
第三步：6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)
tert-butyl 6-(aminomethyl)-6-(2-ethoxy-2-oxo-ethyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000063
将6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-(硝基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4C)(5.1g，15mmol)加入到反应瓶中，加入乙醇(75mL)和水(25mL)，铁粉(4.2g，74mmol)和氯化铵(4.0g，74mmol)，升温回流反应5h。降至室温，将反应体系浓缩至约20mL，加入水(30mL)，接着用氨水调节pH至大于10，用二氯甲烷(50mL x 2)萃取、分液，合并有机相，将有机相减压浓缩，得到6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)粗品，(4.6g，产率99％)，并直接用于下一步。
第四步：叔丁基9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)
tert-butyl 9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000064
将6-(氨基甲基)-6-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(4D)粗品(4.6g，15mmol)加入到反应瓶中，加入氢氧化钠(600mg，15mmol)的水(45mL)溶液，室温反应5h。将反应液过滤，得到叔丁基9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)，白色固体(2.90g，产率74％)。
第五步：2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)
2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecan-9-one；hydrochloride
Figure PCTCN2018096271-appb-000065
将叔丁基9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羧酸叔丁酯(4E)(2g，7.5mmol)，溶于4N HCl-异丙醇溶液(9mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩至干，得到2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)粗品，白色固体(0.95g，产率62％)，并直接用于下一步。
第六步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate；
Figure PCTCN2018096271-appb-000066
氮气保护下将二氯甲烷(30mL)加入到反应瓶中，加入中间体1(2.25g，2.98mmol)，2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-9-酮盐酸盐(4F)(0.6g，3.0mmol)，1-羟基苯并三唑(0.39g，2.89mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.83g，4.33mmol)，室温反应15h。然后加入水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取、分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝10:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)，白色泡状固体(1.9g,产率70％)。
第七步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(9-oxo-2,8-diazadispiro[3.1.4^{6}.1^{4}]undecane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000067
氮气保护下，将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4G)(1.7g,1.9mmol)和二氯甲烷(21mL)加入到反应瓶中，搅拌下加入三氟乙酸(7mL)，室温反应3h。将反应液减压浓缩干，残留物用制备色谱分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于 12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(9-氧代-2,8-二氮杂螺[3.1.4^{6}.1^{4}]十一烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物4)，白色固体(0.7g，产率40％)。
MS m/z(ESI):351.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.76(d,1H),8.32(d,1H),8.11-7.97(m,4H),7.85-7.69(m,3H),7.50(s,1H),7.33-7.18(m,10H),4.74-3.74(m,8H),3.24-2.63(m,8H),2.27-2.05(m,6H),1.71-1.17(m,9H),0.89(dd,6H)。
实施例4：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000068
第一步：7-苄基2-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(6B)
7-benzyl 2-tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000069
0℃下，50mL单口瓶中，将三乙胺(0.15mL,1.1mmol)滴入到2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.23g,1mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，滴毕，加入氯甲酸苄酯(340mg,2mmol)，搅拌10min。升至室温继续搅拌1h，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩后得到7-苄基2-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(6B)，无色油状产物(362mg，产率99％)。
MS m/z＝383.2[M+Na] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.34-7.32(m,5H),5.12(s,2H),3.64(s,4H),3.43(dd,4H),1.77-1.61(m,4H),1.44(s,9H)。
第二步：2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)
benzyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000070
在50mL反应瓶中，加入7-苄基2-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(6B)(0.36g，1mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)粗品，黄色油状液体(260mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
MS m/z＝261.2[M+H] +；
第三步：2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6D)
benzyl 2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000071
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)粗品(260mg，1mmol)、三乙胺(200mg，2mmol)和二氯甲烷(7mL)。冰浴冷却至0℃，滴加环丙基磺酰氯(170mg，1.2mmol)，加完后升至室温反应4h。然后反应体系用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯化合物(6D)，白色固体(360mg，产率99％)。
MS m/z＝365.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.43-7.28(m,5H),5.12(s,2H),3.70(s,4H),3.53-3.36(m,4H),2.41-2.22(m,1H),1.85-1.69(m,4H),1.19-1.09(m,2H),1.04-0.93(m,2H)。
第四步：2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)
2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000072
在50mL反应瓶中，加入2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6D)(360mg,0.99mmol)、钯碳(72mg,20wt％)和乙酸乙酯(10mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应2h。反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)，淡黄色固体(210mg，产率92％)，并直接投入下一步反应。
第五步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]ami no]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000073
在50mL反应瓶中，加入2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(6E)(161mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.8mmol)、1-羟基苯并三唑(108mg，0.8mmol)、中间体1(500mg，0.7mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)，白色固体(610mg，产率95％)。
第六步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-cyclopropylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000074
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(6F)(300mg，0.31mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将 制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干得到白色粉末状化合物。再通过离子交换树脂(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至25mL)，进一步冻干得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-环丙基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物6)，白色固体(153mg，产率63％)。
MS m/z＝383.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.40-7.24(m,6H),7.16(dd,4H),4.72-4.73(m,1H),4.58-4.52(m,1H),4.25(t,1H),3.84(dd,,4H),3.67-3.55(m,3H),3.46-3.45(m,1H),3.35-3.34(m,1H),3.03(dd,1H),2.91(dd,3H),2.82(d,2H),2.69(ddd,1H),1.85-1.86(m,3H),1.670-1.66(m,5H),1.51-1.49(m,3H),1.38-1.36(m,2H),1.23-1.06(m,4H),0.88(dd,6H)。
实施例5：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物7)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetate
Figure PCTCN2018096271-appb-000075
第一步：2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)
benzyl 2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000076
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(330mg，1.3mmol)、三乙胺(263mg，2.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(164mg，1.43mmol)，反应4h。然后升至室温，反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3N盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:1)，得到2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)，淡黄色油状物(236mg，产率54.6％)。
MS m/z＝339.0[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.41-7.28(m,5H),5.12(s,2H),3.68(s,4H),3.50-3.38(m,4H),2.86(s,3H),1.83-1.70(m,4H)。
第二步：2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)
2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000077
在50mL反应瓶中，加入2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(7A)(236mg，0.7mmol)、钯碳(40mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)粗品，淡黄色固体(133mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝205.1[M+1] +；
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000078
在50mL反应瓶中，加入2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(7B)粗品(133mg，0.65 mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg,1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(96.6mg，0.72mmol)、中间体1(490mg，0.65mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)，淡黄色固体(317mg，产率52％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物7)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000079
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(7C)(317mg，0.34mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，收集制备液，减压浓缩除去大部分有机溶剂，并冻干得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺(化合物7)，白色粉末(217mg，产率66.5％)。
MS m/z＝370.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43-7.27(m,6H),7.25-7.20(m,4H),4.67-4.62(m,2H),4.33-4.20(m,2H),3.87-3.71(m,4H),3.69-3.56(m,2H),3.53-3.41(m,1H),3.40-3.29(m, 1H),3.23-3.12(m,2H),3.11-3.07(m,3H),3.07-2.91(m,4H),1.94-1.78(m,3H),1.78-1.60(m,5H),1.58-1.48(m,3H),1.46-1.28(m,2H),0.98-0.82(m,6H)。
实施例6：
(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)
(2R)-N-[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000080
第一步：2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(8A)
benzyl 2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000081
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(520mg,2.0mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三乙胺(607mg,6.0mmol)。然后降温 至-20℃，滴加乙酰氯(314mg,4.0mmol)，加完后自然升温至室温并搅拌2h。接着向反应中加入0.5M稀盐酸水溶液(20mL)，并搅拌分层、分液，用二氯甲烷萃取水层(20mL x 2)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(纯乙酸乙酯)，得到2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯化合物(8A)，淡黄色油状液体(440mg,产率72.8％)。
第二步：1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)
1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000082
在50mL反应瓶中，将2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(8A)(440mg,1.46mmol)加入到乙酸乙酯(5mL)和甲醇(2mL)的混合溶液中。然后加入钯碳(80mg,20wt％)，氢气(气球)氛围下室温搅拌2h。接着将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)粗品，淡黄色油状液体(250mg,收率99％)，直接用于下一步反应。
第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000083
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮(8B)粗品(200mg，1.19mmol)加入到乙酸乙酯(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(867mg,1.15mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(331mg,1.73mmol)、1-羟基苯并三 唑(186mg,1.38mmol)，加完后室温反应1.5h。随后向反应液中加入1N盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)粗品，淡黄色泡状固体(1.04g,产率99％)，直接用于下一步反应。
第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)
(2R)-N-[(1R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000084
将叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷--7-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(8C)粗品(1.04g,1.15mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，收集制备液，减压浓缩除去大部分有机溶剂，并冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(2-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物8)，白色固体(460mg,两步产率42.9％)。
MS m/z(ESI):352.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.49-7.00(m,10H),4.66-4.49(m,2H),4.30-3.93(m,4H),3.79-3.54(m,4H),3.52-3.25(m,2H),3.22-2.90(m,6H),1.92-1.27(m,16H),1.02-0.75(m,6H).
化合物8-1：
将化合物8(1.0g,1.07mmo)通过离子交换树脂(60mL)(水～3.3％氨水洗脱)，减压浓缩所接收到的洗脱溶液(水温60℃下减压浓缩至100mL)，进一步冻干得到化合物8的游离形式即化合物8-1，白色固体(451mg，产率60.0％)。
MS m/z(ESI):352.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.45–7.32(m,6H),7.23(dd,4H),4.85-4.75(m,1H),4.64(t,1H),4.35(t,1H),4.07(d,2H),3.83(d,2H),3.74–3.63(m,3H),3.62–3.50(m,1H),3.50–3.39(m,1H),3.17–2.65(m,6H),2.01–1.66(m,9H),1.65–1.30(m,7H),0.96(dd,6H).
实施例7：
7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)
isopropyl 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000085
第一步：O7-苄基O-异丙基2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(9A)
O7-benzyl O2-isopropyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000086
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(310mg，1.2mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后冷却至-10℃，滴加氯甲酸异丙酯(146mg，1.2mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应体系依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3M盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:1)，得到O7-苄基O-异丙基2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯化合物(9A)，淡黄色油状液体(279mg，产率68％)。
MS m/z＝347.2[M+H] +；
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.38-7.30(m,5H),5.12(s,2H),4.95-4.80(m,1H),3.68(s,4H),3.47-3.39(m,4H),1.75-1.68(m,4H),1.23(d,6H)。
第二步：2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)
isopropyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000087
在50mL单口瓶中，加入O7-苄基O-异丙基2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(9A)(260mg，0.75mmol)、钯碳(52mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)粗品，淡黄色固体(159mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝213.2[M+1]。
第三步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)
isopropyl 7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000088
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9B)粗品(159mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)，淡黄色固体(556mg，产率78％)。
第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)
isopropyl 7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000089
在50mL单口瓶中，加入7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基l]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯(9C)(317mg，0.334mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇 中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸异丙酯二三氟乙酸盐(化合物9)，白色粉末状产物(326mg，产率98％)。
MS m/z＝374.9[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.50–7.14(m,10H),4.89–4.78(m,1H),4.66(t,1H),4.30(t,1H),4.22(t,1H),3.89-3.74(m,4H),3.69–3.54(m,2H),3.54–3.41(m,1H),3.41–3.28(m,1H),3.21–3.11(m,2H),3.11–2.90(m,4H),1.93–1.30(m,14H),1.27(d,6H),0.93(q,6H)。
实施例8：
((2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000090
第一步：7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)
tert-butyl7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000091
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.11g,0.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(115mg，0.6mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(378mg，0.5mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)白色固体(450mg，产率93％)。
第二步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000092
在50mL单口瓶中，加入7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(10A)(450mg，0.468mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7- 羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物10)白色粉末状产物(358mg，产率76％)。
MS m/z＝331.8[M-2CF 3COOH+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.48-7.10(m,10H),4.65-4.61(m,2H),4.28-4.20(m,2H),3.93(d,4H),3.70-3.57(m,2H),3.52-3.39(m,1H),3.39-3.27(m,1H),3.15(d,2H),3.02-2.94(m,4H),1.98-1.87(m,3H),1.82-1.60(m,5H),1.51-1.50(m,3H),1.44-1.36(m,2H),0.89(dd,6H)。
实施例9：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000093
第一步：2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)
Benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000094
在50mL单口瓶中，2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(0.26g，1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(230mg，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(162mg，1.2mmol)、中间体1(0.75g，1mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)，白色固体(850mg，产率85％)。
第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000095
在50mL单口瓶中，加入2-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R))-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(11A)(850mg，0.85mmol)、钯碳(170mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)粗品，白色固体(580mg，产 率79％)，直接投入下一步反应。
第三步:(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000096
在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(11B)(0.5g，0.58mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物11)，白色粉末状产物(380mg，产率66％)。
MS m/z＝331.8[M-2CF 3COOH+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D2O)δ7.43-7.13(m,10H),4.61(t,1H),4.28-4.06(m,5H),3.84-3.74(m,2H),3.19-3.14(m,6H),2.99-2.95(m,4H),2.09-1.94(m,4H),1.79-1.61(m,4H),1.55-1.31(m,5H),0.89(dd,6H)。
实施例10：
2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)
2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]- 2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000097
第一步：7-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)
tert-butyl 7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000098
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.23g,1mmol)、三乙胺(210mg，2.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(140mg，1.2mmol)，反应4h。然后升至室温，然后反应体系用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到7-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)，淡黄色油状物(250mg，产率81％)。
MS m/z＝327.2[M+Na] +。
第二步：7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)
7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000099
在50mL反应瓶中，加入7-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(12A)(0.25g，0.81mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)粗品，淡黄色油状液体(165mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2- 氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)
tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000100
在50mL单口瓶中，加入7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(12B)粗品(165mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(192mg，1mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1mmol)、中间体1(610mg，0.81mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)，白色固体(630mg，产率82.7％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(7-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000101
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(12C)(630mg，0.34mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN  and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物12)，白色粉末(410mg，产率63.2％)。
MS m/z＝370.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43-7.15(m,10H),4.61(t,1H),4.33-3.96(m,5H),3.79-3.69(m,2H),3.25-3.13(m,7H),3.02-2.93(m,6H),1.91-1.86(m,3H),1.70-1.64(m,3H),1.56-1.31(m,5H),1.25(t,2H),0.89(dd,6H)。
实施例11：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000102
第一步：吡咯烷-1-碳酰氯(13B)
pyrrolidine-1-carbonyl chloride
Figure PCTCN2018096271-appb-000103
在50mL单口瓶中，加入NaHCO 3(5.04g，60mmol)、三光气(5.94g，20mmol)和二氯甲烷(10mL)，反应液冷却至-10℃，然后缓慢滴加吡咯烷(2.16g，30.4mmol)，加 完后恢复室温反应过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝3:1)，得到吡咯烷-1-碳酰氯(13B)，无色油状物(2.07g,产率51.65％)。
1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ3.62-3.56(m,2H),3.54-3.44(m,2H),2.02-1.90(m,4H)。
第二步：2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)
benzyl 2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000104
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(350mg，1.3mmol)、三乙胺(408mg，4.03mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加吡咯烷-1-碳酰氯(13B)(123mg，0.92mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)粗品，淡黄色油状液体(460mg，产率100％)。
MS m/z＝358.2[M+H] +。
第三步：2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)
2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl(pyrrolidin-1-yl)methanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000105
在50mL单口瓶中，加入2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(13C)粗品(460mg，1.3mmol)、氢氧化钯/碳(100mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)粗品，淡黄色固体(290mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝224.3[M+H] +。
第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)
tert-butyl  N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000106
在50mL反应瓶中，依次加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基(吡咯烷-1-基)甲酮(13D)粗品(167mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(108mg，0.81mmol)、中间体1(556mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)，白色固体(360mg，产率29％)。
第五步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(pyrrolidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000107
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(13E)(360mg，0.38mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18, 150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(吡咯烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物13)，白色固体(169mg，产率45.6％)。
MS m/z＝380.4[M+2H] +/2。
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.75(d,1H),8.35(d,1H),8.09(d,1H),8.01(br,3H),7.73(br,3H),7.34-7.17(m,10H),4.71-4.60(m,2H),4.40-4.32(m,1H),4.08-3.96(m,2H),3.73-3.23(m,8H),3.16-3.01(m,3H),2.98-2.86(m,1H),2.85-2.69(m,3H),1.82-1.69(m,4H),1.69-1.42(m,11H),1.36-1.22(m,2H),0.89(dd,6H)。
实施例12：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000108
第一步：3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)
3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl chloride
Figure PCTCN2018096271-appb-000109
在50mL单口瓶中，加入NaHCO 3(756mg，9.0mmol)、三光气(0.89g，4.5mmol)和二氯甲烷(8mL)，反应液冷切至-10℃，然后缓慢滴加3-甲基磺酰基氮杂环丁烷盐酸盐(772mg，4.5mmol)，加完后恢复室温反应过夜。将反应液过滤，减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v:v)＝1:1)，得到无色油状物3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)(494mg,产率50％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.62-4.32(m,4H),4.07-3.92(m,1H),2.93(s,3H)。
第二步：2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(14C)
benzyl 2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000110
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(350mg，1.3mmol)、三乙胺(406mg，4.01mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-碳酰氯(14B)(293mg，1.48mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，得到2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(14C)，白色固体(300mg，产率55％)。
MS m/z＝422.2[M+H] +；
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.28(m,5H),5.12(s,2H),4.30-4.19(m,4H),4.00-3.89(m,1H),3.69(s,4H),3.49-3.36(m,4H),2.90(s,3H),1.79-1.67(m,4H)。
第三步：2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)
2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl-(3-methylsulfonylazetidin-1-yl)methanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000111
在50mL单口瓶中，依次加入2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5] 壬烷-7-羧酸苄酯(14C)(300mg，0.7mmol)、氢氧化钯/碳(60mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)粗品，淡黄色固体(202mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝288.1[M+H] +。
第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000112
在50mL反应瓶中，依次加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(14D)粗品(202mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(402mg，2.10mmol)、1-羟基苯并三唑(115mg，0.85mmol)、中间体1(536mg，0.71mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)，淡黄色固体(686mg，产率96％)。
第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(3-methylsulfonylazetidine-1-carbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000113
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(14E)(680mg，0.66mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(3-甲基磺酰基氮杂环丁烷-1-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物14)，白色固体(330mg，产率41.3％)。
MS m/z＝412.3[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.18(m,10H),4.66(t,1H),4.47–4.16(m,7H),3.90-3.72(m,4H),3.69-3.55(m,2H),3.53-3.41(m,1H),3.39–3.27(m,1H),3.24-3.14(m,2H),3.10(s,3H),3.09–2.90(m,4H),1.94–1.26(m,14H),0.92(d,6H)。
实施例13：
7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000114
第一步：2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)
benzyl 2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000115
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(310mg，1.2mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，并在室温下搅拌溶解。然后将反应液冷却至0℃，滴加甲胺基甲酰氯(15A)(123mg，1.32mmol)，加完后升至室温，并反应4h。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3mol/L盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)粗品，黄色油状(440mg，产率100％)。
MS m/z＝318.2[M+H] +；
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.28(m,5H),5.12(s,2H),3.66(s,4H),3.50-3.36(m,4H),2.79(s,3H),1.82-1.63(m,4H)。
第二步：N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)
N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000116
在50mL单口瓶中，依次加入2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(15B)粗品(260mg，0.82mmol)、氢氧化钯/碳(50mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)粗品，淡黄色固体(150mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝184.3[M+H] +。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000117
在50mL反应瓶中，依次加入N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(15C)粗品(150mg，0.82mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)，淡黄色固体(480mg，产率63％)。
第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000118
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15D)(480mg，0.52mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物15)，白色固体(260mg，产率53％)。
MS m/z＝360.3[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.43-7.28(m,6H),7.27-7.21(m,4H),4.66(t,1H),4.30(t,1H),4.21(t,1H),3.74(s,2H),3.70(s,2H),3.69-3.59(m,2H),3.55-3.43(m,1H),3.41-3.31(m,1H),3.24-3.12(m,2H),3.11-2.92(m,4H),2.69(s,3H),1.94-1.27(m,14H),0.93(dd,6H)。
实施例14：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000119
Figure PCTCN2018096271-appb-000120
第一步：O7-苄基O2-叔丁基5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(16B)
O7-benzyl O2-tert-butyl 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2,7-dicarboxyl ate
Figure PCTCN2018096271-appb-000121
在50mL单口瓶中，依次加入三乙胺(0.85mL,8.4mmol)、5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(16A)(2.1g,8.0mmol)和四氢呋喃(15mL)，将反应液冷却至0℃，然后缓慢滴加氯甲酸苄酯(1.5g,8.8mmol)，加完后保持0℃下反应10分钟，再升至室温继续搅拌5h。反应液过滤，滤液减压浓缩得到O7-苄基O2-叔丁基5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(16B)，淡黄色油状产物(3.5g，产率100％)。
MS m/z＝419.3[M+Na] +；
第二步：5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)
benzyl 5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000122
在50mL反应瓶中，加入O7-苄基O2-叔丁基5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(16B)(3.17g，8.0mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温下滴加三氟乙酸(6.0mL)，加完后室温反应3h。将反应液用氨水调节pH约为13后分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)，黄色油状液体(2.43g，产率100％)，并直接用于下一步反应。
MS m/z＝297.1[M+H] +；
第三步：5,5-二氟-2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)
benzyl 5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000123
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16C)(310mg，1.05mmol)、三乙胺(318mg，3.14mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲磺酰氯(156mg，1.36mmol)，反应4小时。然后升至室温，反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)、3M盐酸水溶液(60mL)洗涤、分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝60:1)，得到5,5-二氟-2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)，白色固体(233mg，产率59％)。
MS m/z＝397.2[M+Na] +；
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.29(m,5H),5.15(s,2H),4.09(d,2H),3.78-3.59(m,4H),3.51(t,2H),2.89(s,3H),2.08(s,2H)。
第四步：5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)
5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000124
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2-甲基磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(16D)(230mg，0.5mmol)、钯/碳(40mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)，淡黄色固体(155mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝241.1[M+H] +；
第五步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000125
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(16E)(155mg，0.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg,2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(115mg，0.85mmol)、中间体1(377mg，0.5mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5小时。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)，白色固体(380mg，产率78％)。
第六步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-(5,5-difluoro-2-methylsulfonyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000126
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(16F)(380mg，0.34mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品 制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(5,5-二氟-2-甲磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物16)，白色粉末(270mg，产率71％)。
MS m/z＝388.8[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.44-7.17(m,10H),4.66(t,1H),4.42–4.13(m,4H),4.13–3.49(m,7H),3.25–2.92(m,9H),2.30-2.00(m,2H),1.91–1.26(m,9H),0.93(q,6H).。
实施例15：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000127
第一步：(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)
(2R-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000128
在250mL反应瓶中，加入D-丙氨酸(17A)(10g，112.24mmol)和水(56mL)，将反应液冷却至0℃，然后加入氢氧化钠(6.73g，168.36mmol)，加完后保持0℃反应10分钟，再滴加二碳酸二叔丁酯(31.85g,145.91mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，加完后升温至室温搅拌过夜。反应液用石油醚(100mL×2)萃取并弃去有机相，水相用4M的盐酸溶液酸化至pH约为1，然后用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，合并有机相并用无 水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)，无色油状(21.2g，收率：100％)。
MS m/z＝212.1[M+Na] +；
1HNMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.34(br,1H),7.05(d,1H),3.98-3.87(m,1H),1.38(s,9H),1.22(d,3H)。
第二步：2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)
benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000129
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(335mg，1.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(748mg,3.9mmol)、1-羟基苯并三唑(211mg，1.56mmol)、(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(17B)(246mg，1.3mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝3:1)，得到2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)，白色固体(510mg，产率91％)。
MS m/Z＝454.3[M+Na] +；
第三步：N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)
tert-butyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000130
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(17C)(460mg，1.1mmol)、氢氧化钯/碳(92mg，20wt％)和异丙醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，油浴加热至100℃反应8h。然后降至室温，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)粗品，淡黄色固体(252mg，产率77％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝298.3[M+H] +；
第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000131
在50mL反应瓶中，依次加入N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17D)粗品(223mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(374mg,1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)，淡黄色固体(560mg，产率69％)。
第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000132
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(17E)(560mg，0.52mmol)和二氯甲烷(10mL)，在室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物17)，白色粉末(310mg，产率45％)。
MS m/z＝367.3[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.44-7.28(m,6H),7.26-7.20(m,4H),4.65(t,2H),4.33-4.21(m,2H),4.19-4.01(m,3H),3.96-3.78(m,2H),3.75-3.59(m,2H),3.56-3.42(m,1H),3.42-3.30(m,1H),3.24-3.12(m,2H),3.10-2.92(m,4H),1.99-1.79(m,3H),1.80-1.63(m,5H),1.53(d,3H),1.50-1.30(m,5H),0.92(dd,6H)。
实施例16：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物18)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000133
Figure PCTCN2018096271-appb-000134
第一步：N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18B)
benzyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000135
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.45g,2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(780mg,4.1mmol)、1-羟基苯并三唑(340mg，2.5mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)丙酸(446mg，2.0mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18B)，白色固体(860mg，产率99％)。
MS m/Z＝454.2[M+Na] +。
第二步：N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)
benzyl N-[(1R)-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-methyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000136
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基] 氨基甲酸苄酯(18B)(0.86g，2mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)粗品，黄色油状液体(660mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
MS m/z＝332.2[M+H] +；
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000137
在100mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(18C)(243mg，0.7mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(200mg，1.0mmol)、中间体1(500mg，0.7mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)，淡黄色固体(740mg，产率99％)。
第四步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl] carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000138
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(18D)(700mg，0.7mmol)、钯碳(140mg，20wt％)和甲醇(15mL)。氢气置换3次，在氢气氛围下，室温反应8h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-1,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)粗品，淡黄色油状物(650mg，产率99％)，直接投入下一步反应。
第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；三三氟乙酸(化合物18)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000139
在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-1,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(18E)粗品(650mg，0.7mmol) 和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；三三氟乙酸(化合物18)，白色粉末(170mg，产率19％)。
MS m/z＝733.5[M+H] +；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.28(m,6H),7.27–7.20(m,4H),4.64(t,1H),4.55–4.46(m,1H),4.32-4.23(m,2H),4.21-4.05(m,3H),3.86-3.71(m,2H),3.63–3.40(m,4H),3.25-3.10(m,2H),3.10–2.90(m,4H),2.00–1.60(m,8H),1.60–1.29(m,8H),0.92(dd,6H)。
实施例17：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000140
第一步：2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5,5-二氟-2,7- 二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)
benzyl 2-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000141
在100mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(797mg，2.69mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.04g，5.4mmol)、1-羟基苯并三唑(400mg，3mmol)、中间体1(2.03g，2.69mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)，得到2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)，淡黄色固体(2.49g，产率89.6％)。
第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000142
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基] 己酰]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(19A)(2.49g，2.41mmol)、钯碳(500mg，20wt％)和甲醇(25mL)。氢气置换3次，在氢气(气球)氛围下，室温反应4h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)粗品，淡黄色油状物(2.16g，产率99％)，直接投入下一步反应。
MS m/z＝899.5[M+H]+；
第三步：N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000143
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)粗品(400mg，0.4mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.23g，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(70mg，0.5mmol)、Boc-D-丙氨酸(78mg，0.41mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)，得到N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)，淡黄色固体(340mg，产率79％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基] -4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-aminopropanoyl]-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000144
在50mL反应瓶中，加入N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基基〕氨基〕-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19C)(340mg，0.32mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基丙酰基]-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物19)，白色粉末(170mg，产率48％)。
MS m/z(ESI):385.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43–7.29(m,6H),7.27-7.21(m,4H),4.67–4.47(m,3H),4.31–4.09(m,5H),4.09–3.76(m,3H),3.74-3.46(m,2H),3.18(d,2H),3.10–2.91(m,4H),2.33–1.97(m,2H),1.84–1.61(m,4H),1.61–1.26(m,8H),0.92(dd,6H)。
实施例18：
(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000145
第一步：7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)
tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000146
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(450mg,2.0mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三乙胺(606mg,6.0mmol)。然后降温至-20℃，滴加乙酰氯(310mg,4.0mmol)，加完后自然升温至室温并搅拌2h。接着向反应中加入0.5M稀盐酸水溶液(20mL)，并搅拌分层、分液，用二氯甲烷萃取水层(20mL x 2)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(纯乙酸乙酯)，得到7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)，淡黄色油状液体(520mg,产率97.0％)。
第二步：1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)
1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000147
在50mL反应瓶中，加入7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(20B)(520mg，1.9mmol)和二氯甲烷(6mL)，室温下滴加三氟乙酸(3mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，往残留物中加入浓氨水4mL，再加入无水硫酸钠干燥，用甲醇(20mL)洗涤，洗涤液浓缩得到1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)粗品，黄色油状液 体(250mg，产率77％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)
tert-butylN-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000148
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酮(20C)(250mg，1.49mmol)加入到乙酸乙酯(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(800mg,1.06mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(305mg,1.6mmol)、1-羟基苯并三唑(172mg,1.27mmol)，加完后室温反应1.5h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)粗品，淡黄色泡状固体(0.85g,产率88％)，直接用于下一步反应。
第四步：((2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000149
将N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(20D)粗品(0.85g,0.94mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到((2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺；二三氟乙酸(化合物20)，白色固体(310mg,产率40.0％)。
MS m/z(ESI):352.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.46–7.17(m,10H),4.64(t,1H),4.29–4.05(m,5H),3.83–3.74(m,2H),3.57–3.35(m,4H),3.24–3.11(m,2H),3.09–2.93(m,4H),2.17–1.29(m,16H),0.92(dd,6H)。
实施例19：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000150
第一步：(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)
tert-butyl 2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000151
在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(129mg，0.54mmol)、乙酸(65mg，1.08mmol)、1,4-噻嗪烷1,1-二氧化物(72mg，0.54mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(229m g，1.08mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应16h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)，白色粉末(147mg，产率76％)。
第二步：4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1,4-噻嗪烷-1,1-二氧化物(21B)
4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-1,4-thiazinane 1,1-dioxide
Figure PCTCN2018096271-appb-000152
在50mL反应瓶中，加入(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(21A)(147mg，0.41mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1,4-噻嗪烷-1,1-二氧化物(21B)粗品，黄色油状液体(106mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基- 丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)
tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000153
在50mL单口瓶中，加入4-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1,4-噻嗪烷-1,1-二氧化物(21B)粗品(106mg，0.41mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(94mg，0.49mmol)、1-羟基苯并三唑(66mg，0.49mmol)、中间体1(309mg，0.41mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)，白色固体(367mg，产率90％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1,1-dioxo-1,4-thiazinan-4-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000154
在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(21C)(367mg，0.37 mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1,1-二氧代-1,4-噻嗪烷-4-基)-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基〕氨基〕-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物21)，白色粉末(295mg，产率70％)。
MS m/z＝397.9[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.36-7.19(m,10H),4.63-4.60(m,1H),4.32-4.16(m,3H),3.92–3.78(m,1H),3.63(d,9H),3.53–3.22(m,3H),3.15(d,2H),3.01-2.91(m,4H),2.48-2.32(m,2H),1.98-2.06(m,2H),1.75–1.23(m,13H),0.89(dd,6H)。
实施例20：
7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000155
第一步：7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)
tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000156
在50mL反应瓶中，加入2-Boc-2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷(22A)(452mg，2.0mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(188mg，2.01mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，然后用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)，白色固体(570mg，产率65.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.51–3.16(m,8H),2.82(s,3H),1.98–1.74(m,4H),1.46(s,9H)。
第二步：N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)
N-methyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000157
在50mL反应瓶中，加入7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(22B)(161mg，0.568mmol)、二氯甲烷(10mL)和三氟乙酸(1.2mL)，在室温反应2h。然后将反应液减压浓缩得到N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)粗品，淡黄色油状物，直接投入下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000158
在50mL反应瓶中，依次加入N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺(22C)粗品(81mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.288g，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)，淡黄色固体(420mg，产率98％)。
第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000159
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(22D)(400mg，0.44mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI； 柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物22)，白色粉末(130mg，产率31.5％)。
MS m/z(ESI):360.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43-7.19(m,10H),4.68-4.60(m,1H),4.50–4.19(m,3H),3.93–3.62(m,2H),3.55-3.27(m,5H),3.24(s,1H),3.18(d,2H),3.09–2.94(m,4H),2.74-2.66(m,3H),2.10-1.85(m,4H),1.84-1.62(m,4H),1.59-1.43(m,4H),1.43-1.29(m,1H),0.92(dd,6H)。
实施例21：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000160
第一步：叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A)
tert-butyl 2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000161
将2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(0.48g，2mmol)、哌啶(0.25g，3mmol) 和二氯甲烷(10mL)加入反应瓶中，搅拌30min后，冷却至0-5℃，加入氰基硼氢化钠(0.13g，4mmol)；加完室温反应4h，TLC监控反应完全。加入二氯甲烷(10mL)和水(10mL)搅拌5min，静置分层，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A)粗品，淡黄色固体(0.53g，产率86％)，直接用于下一步。
第二步：2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B)
2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000162
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将叔丁基2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷-7-羧酸酯(23A，0.53g，1.7mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应2h。TLC监控反应完全，减压浓缩干，得2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B)，淡黄色油状物(0.50g，产率90％)，直接用于下一步。
第三步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000163
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺环[3.5]壬烷三氟乙酸盐(23B，0.50g，1.60mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(0.50g，0.66mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(190mg，0.99mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)，加完后室温反应3h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩， 得到叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)粗品，淡黄色泡状固体(0.45g,产率72％)，直接用于下一步反应。
第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(1-piperidyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000164
将叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸酯(23C)粗品(0.45g,0.48mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(1-哌啶基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物23)，白色固体(260mg,产率56％)。
MS m/z(ESI):372.9[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.48–7.09(m,10H),4.68–4.60(m,1H),4.34–4.17(m,2H),3.73–3.52(m,3H),3.52–2.92(m,10H),2.80–2.64(m,2H),2.47–2.24(m,2H),2.05–1.88(m,4H),1.88–1.20(m,18H),1.00–0.81(m,6H)。
实施例22：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000165
第一步：叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)
tert-butyl7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000166
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g,2mmol)、四氢吡喃酮(200mg，2mmol)、乙酸(120mg，2.0mmol)和二氯乙烷(7mL)，搅拌0.5h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.636g，3mmol)，反应5h，然后反应液用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)，淡黄色油状物(500mg，产率80.64％)。
MS m/z＝311.2[M+H] +。
第二步：7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)
7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000167
在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(24A)(0.5g，1.61mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)粗 品，淡黄色油状液体(338mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)
tert-butylN-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(7-tetrahydropyran-4-yl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000168
在50mL单口瓶中，加入7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(24B)粗品(338mg，1.61mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)，白色固体(200mg，产率39.93％)
第四步：2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000169
在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基 -2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2氧代乙基]氨基甲酸酯(24C)(200mg，0.21mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-四氢吡喃-4-基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷2-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物24)，白色粉末(135mg，产率86.1％)。
MS m/z＝373.9[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.46-7.29(m,10H),4.71(t,1H),4.27–4.16(m,7H),3.93-3.86(m,2H),3.66-3.53(m,5H),3.25-3.05(m,8H),2.34-2.13(m,6H),1.79-1.43(m，11H),1.02-0.95(m,6H)。
实施例23：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000170
第一步：2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A)
tert-butyl 2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000171
在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(131mg，0.55mmol)、乙酸(66mg，1.1mmol)、吡咯烷(39mg，0.55mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(233mg，1.1mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应6h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A))，白色粉末(120mg，产率75％)。
第二步：2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)
2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000172
在50mL反应瓶中，加入(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(25A)(120mg，0.41mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)粗品，黄色油状液体(80mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000173
在50mL单口瓶中，加入2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷(25B)粗品(80mg，0.41 mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(96mg，0.5mmol)、1-羟基苯并三唑(67.5mg，0.5mmol)、中间体1(309mg，0.41mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)，淡黄色固体(344mg，产率90％)。
第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-pyrrolidin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000174
在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(25C)(344mg，0.37mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到((2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物25)，白色粉末(249mg，产率70％)。
MS m/z＝365.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43–7.13(m,10H),4.71-4.70(m,1H),4.62(t,1H),4.30–4.17(m,2H),3.82–3.74(m,1H),3.68–3.39(m,5H),3.38–3.21(m,1H),3.15(d,2H),3.06-2.90(m,6H),2.43–2.25(m,2H),2.16–1.89(m,6H),1.78–1.27(m,13H),0.89(dd, 6H)。
实施例24：
(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸三三氟乙酸盐(化合物26)
(2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000175
第一步：2-[(2R)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯26A
tert-butyl2-[(2R)-2-methoxycarbonylpyrrolidin-1-yl]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000176
在50mL反应瓶中，依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3A)(287mg，1.2mmol)、乙酸(144mg，2.4mmol)、D-脯氨酸甲酯(154mg，1.2mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(233mg，2.4mmol)和二氯甲烷(30mL)，加完后在室温反应6h。将反应液抽滤， 滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到2-吡咯烷-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(26A))，白色粉末(275mg，产率65％)。
第二步：(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(26B)
methyl(2R)-1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)pyrrolidine-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000177
在50mL反应瓶中，加入2-[(2R)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯26A(275mg，0.78mmol)和二氯甲烷(10mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(26B)，黄色油状液体(196mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(26C)
Methyl(2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000178
在50mL单口瓶中，加入(2R)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯26B(196mg,0.78mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(180mg，0.94mmol)、1-羟基苯并三唑(127mg，0.94mmol)、中间体1(587mg，0.78mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰 基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(26C)，白色固体(385mg，产率50％)。
第四步：(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)
(2R)-1-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000179
室温下，(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸甲酯26C(385mg,0.39mmol)溶于甲醇(5mL)中，将氢氧化钠(16mg,0.4mmol)的水溶液(10mL)加至反应液中，室温反应5h。用1M盐酸水溶液调节反应液pH<4，用乙酸乙酯(20mL)萃取、分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩后得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)，白色固体(345mg，产率93％)。
第五步:(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-甲酸三三氟乙酸盐(化合物26)
(2R)-1-[7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxylic acid tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000180
在50mL反应瓶中，加入(2R)-1-[7-[(2R)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基)氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂-螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-羧酸(26D)(345mg，0.36mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-1-[7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]吡咯烷-2-甲酸三三氟乙酸盐(化合物26)，白色粉末(240mg，产率60％)。
MS m/z＝387.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D2O)δ7.44–7.09(m,10H),4.27-4.19(m,3H),3.96-3.84(m,2H),3.67-3.50(m,3H),3.48-3.21(m,3H),3.19–2.89(m,7H),2.50–2.22(m,3H),2.18–1.91(m,5H),1.78–1.24(m,13H),0.88(dd,6H)。
实施例25：
2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)
2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000181
第一步：叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A)
tert-butyl 7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000182
氮气保护下，将2-叔丁氧羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(0.45g，2mmol)、二氯甲烷(10mL)和三乙胺(0.30g，3mmol)加入反应瓶中；冷却至0-5℃，滴入甲胺基甲酰氯(0.20g，2.2mmol)，加完移去冷却，升至室温反应1h。TLC监控反应完全，加入二氯甲烷(10mL)和水(10mL)，搅拌5min后，静置分层；有机层无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(二氯甲烷/甲醇＝(v/v)20/1)，得叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A)，淡黄色油状物(0.48g，产率85％)。
第二步：N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)
N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide；2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000183
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将叔丁基7-(甲氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺-[3.5]壬烷-2-羧酸酯(27A，0.48g，1.7mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，搅拌下加入三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应2h。TLC监控反应完全，减压浓缩干，得N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)，淡黄色油状物(0.49g，产率97％)，直接用于下一步。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基] 氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000184
氮气保护下，在50mL反应瓶中，将N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺三氟乙酸盐(27B)粗品(0.48g，2.60mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中。冰浴冷却至0℃，加入中间体1(0.50g，0.66mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(200mg，1.73mmol)、1-羟基苯并三唑(125mg，0.93mmol)，加完后室温反应3h。随后向反应液中加入1M盐酸水溶液(15mL)，搅拌后分液。有机相中加入饱和碳酸钠水溶液(15mL)，搅拌30分钟后分液。有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)粗品，淡黄色泡状固体(0.5g,产率80％)，直接用于下一步反应。
第四步：2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)
2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000185
将N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-[7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙 基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(27C)粗品(0.5g,0.5mmol)的粗品溶于二氯甲烷(7.5mL)中，加入三氟乙酸(3.5mL)，室温下搅拌1h。接着将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化后(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，冻干，得到2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物27)，白色固体(220mg,产率40％)。
MS m/z(ESI):360.3[M+1H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.45–7.16(m,10H),4.66–4.57(m,1H),4.32–4.19(m,2H),4.19–3.99(m,3H),3.83–3.66(m,2H),3.40–3.22(m,4H),3.22–3.12(m,2H),3.06–2.99(m,4H),2.69(s,3H),1.80–1.62(m,8H),1.58–1.27(m,5H),1.03–0.79(m,6H)。
实施例26：
7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000186
第一步：5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)
benzyl 5,5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000187
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(330mg，1.11mmol)、三乙胺(364mg，3.6mmol)和二氯甲烷(20mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(104mg，1.11mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)，白色固体(268mg，产率68.6％)。
MS m/z(ESI):354.1[M+H]+；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41–7.28(m,5H),5.14(s,2H),4.09(d,2H),3.65(dd,4H),3.51–3.44(m,2H),2.79(s,3H),2.01(s,2H)。
第二步：5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)
5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000188
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(28A)(269mg，0.76mmol)、钯碳(54mg，20wt％)和甲醇(5mL)。氢气置换3次，在氢气(气球)氛围下，室温反应3h。然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)粗品，淡黄色油状物(164mg，产率98.55％)，直接投入下一步反应。
MS m/z(ESI):220.2[M+H]+；
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[5,5-difluoro-2-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000189
在50mL反应瓶中，依次加入5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺(28B)粗品(164mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.374g，1.95mmol)、1-羟基苯并三唑(110mg，0.81mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)，淡黄色固体(600mg，产率84％)。
第四步：7-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)
7-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxamide；ditrifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000190
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-2-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28C)(600mg，0.6mmol)和三氟乙酸(3mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到7-[(2R)-6-氨基 -2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰基]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酰胺二三氟乙酸(化合物28)，白色粉末(100mg，产率13％)。
MS m/z(ESI):755.5[M+H] +；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43–7.18(m,10H),4.86–4.75(m,1H),4.65(t,1H),4.39–4.17(m,2H),4.15-4.05(m,2H),4.04–3.45(m,6H),3.24–3.10(m,2H),3.10–2.90(m,4H),2.77–2.60(m,3H),2.06(d,2H),1.85-1.61(m,4H),1.60-1.46(m,3H),1.45-1.27(m,2H),0.92(dt,6H)。
实施例27：
2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)
2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide ditrifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000191
第一步:5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)
tert-butyl5,5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000192
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸乙酯苄酯(16C)(113mg，0.43mmol)、三乙胺(43mg，0.43mmol)和二氯甲烷(10mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加甲胺基甲酰氯(42mg，0.45mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加 入0.3M稀盐酸(10mL)，然后用二氯甲烷(5mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)，白色固体(96mg，产率70％)。
第二步5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)
5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000193
在50mL反应瓶中，加入5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(29B)(96mg，0.3mmol)和二氯甲烷(8mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)，黄色油状液体(66mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步:(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[5,5-difluoro-7-(methylcarbamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000194
在50mL单口瓶中，加入5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺(29C)(66mg，0.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(239mg，0.36mmol)、1-羟基苯并三唑(49mg，0.36mmol)、中间体1(226mg，0.3mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)，白色固体(286mg，产率90％)。
第四步：2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)
2-[(2R)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-5,5-difluoro-N-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide ditrifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000195
在50mL反应瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[5,5-二氟-7-(甲基氨基甲酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(29D)(286mg，0.3mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到2-[(2R)-6-氨基-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]己酰]-5,5-二氟-N-甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺二三氟乙酸盐(化合物29)，白色粉末(192mg，产率65％)。
MS m/z＝378.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.46–7.12(m,10H),4.64-4.58(m,1H),4.53-4.43(m,1H),4.26-4.19(m,2H),4.17–4.02(m,3H),3.80-3.76(m,1H),3.72-3.57(m,2H),3.36(s,2H),3.19-3.11(m,2H),3.03-2.95(m,4H),2.68(s,3H),2.03-1.99(m 2H),1.75-1.63(m,4H),1.54–1.26(m,5H),0.89(dd,6H)。
实施例28：
(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000196
第一步：叔丁基7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)
tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000197
在50mL反应瓶中，加入叔丁基2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(A)(0.414g,2mmol)、三乙胺(420mg，4.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加乙酰氯(188mg，2.4mmol)，反应10min。然后升至室温搅拌3h，然后反应体系用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到叔丁基7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)，淡黄色油状物(411mg，产率81％)。
MS m/z＝255.2[M+H] +。
第二步：7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)
7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane
Figure PCTCN2018096271-appb-000198
在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(30A)(0.41g，1.62mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)粗品，淡黄色 油状液体(249mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000199
在50mL单口瓶中，加入7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(30B)粗品(249mg，1.62mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)，白色固体(200mg，产率42.3％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000200
在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代 乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(30C)(200mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物30)，白色粉末(120mg，产率79.1％)。
MS m/z＝345.9[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.45-7.29(m,10H),4.71(t,1H),4.37–4.2(m,5H),4.05-4.00(m,2H),3.82-3.52(m,4H),3.26-3.05(m,6H),2.32-2.11(m,5H),1.8-1.76(m,4H),1.61-1.45(m,5H),1.02-0.96(dd,6H)。
实施例29：
(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000201
第一步：7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)
tert-butyl 7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000202
在50mL反应瓶中，加入2-Boc-2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷(22A)(452mg，2.0mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加乙酰氯(160mg，2.0mmol)，加完后在室温反应4小时。反应液中加入1M稀盐酸(50mL)，用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)，淡黄色油状物(392mg，产率73％)。
MS m/z＝291.2[M+Na] +。
第二步：1-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)
1-(2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl)ethanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000203
在50mL反应瓶中，加入7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯(31A)(161mg，0.6mmol)、二氯甲烷(10mL)和三氟乙酸(2mL)，在室温反应2h。将反应液减压浓缩得到1-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)粗品，淡黄色油状物(100mg，产率99％)。
第三步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000204
在50mL反应瓶中，依次加入1-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙酮(31B)粗品(100mg， 0.6mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.288g，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.6mmol)、中间体1(400mg，0.5mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)，得到N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)，淡黄色固体(120mg，产率22％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000205
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(31C)(120mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物31)，白色粉末(77mg，产率85％)。
MS m/z(ESI):352.7[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43-7.18(m,10H),4.68–4.60(m,1H),4.47–4.19(m,3H),3.91–3.27(m,8H),3.18(d,2H),3.08-2.92(m,4H),2.13–1.86(m,7H),1.85-1.63(m,4H),1.62-1.27(m,5H),0.92(dd,6H)。
实施例30：
(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000206
第一步：N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-acetyl-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000207
在50mL反应瓶中，依次加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(19B)(430mg，0.48mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.18g，0.94mmol)、1-羟基苯并三唑(71mg，0.53mmol)、乙酸(28.8mg，0.48mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温反应3h。将反应液减压浓 缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)，白色固体(430mg，产率95％)。
第二步：(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)
(2R)-N-[(1R)-1-(7-acetyl-5,5-difluoro-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl)-5-amino-pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000208
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(32A)(430mg，0.46mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-1-(7-乙酰基-5,5-二氟-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基)-5-氨基-戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物32)，白色粉末(273mg，产率61％)。
MS m/z(ESI):370.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.43–7.19(m,10H),4.67-4.60(m,1H),4.58-4.47(m,1H),4.31–4.08(m,5H),3.98–3.70(m,3H),3.70-3.43(m,2H),3.18(d,2H),3.06–2.94(m,4H),2.23–1.94(m,5H),1.80-1.63(m,4H),1.56–1.29(m,5H),0.91(dd,6H)。
实施例31：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000209
第一步：7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)
tert-butyl 7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000210
在50mL反应瓶中，依次加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g，2.0mmol)、乙酸(0.24g，4.0mmol)、3-氧杂环丁酮(0.288g，4.0mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(1.48g，6.98mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温反应16h。将反应液过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)，白色粉末(432mg，产率76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.67-4.55(m,4H),3.61(s,4H),3.41(p,1H),2.19(s,4H),1.78(t,4H),1.44(s,9H)。
第二步：7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)
7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane
Figure PCTCN2018096271-appb-000211
在50mL反应瓶中，加入7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(33A)(0.14g，0.5mmol)和二氯甲烷(5mL)，室温下滴加三氟乙酸(57mg，0.5mmol)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)粗品，黄色油状液体(70.5mg，产率88％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000212
在100mL反应瓶中，加入7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷(33B)粗品(70.5mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(288mg，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.60mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)，淡黄色固体(400mg，产率99％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(oxetan-3-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2 -[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000213
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(33C)(400mg，0.40mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。然后将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(氧杂环丁烷-3-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物33)，白色粉末(160mg，产率56％)。
MS m/z(ESI):359.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.42–7.20(m,10H),4.96(t,2H),4.85(dd,2H),4.66–4.56(m,2H),4.48–4.35(m,2H),4.30-4.10(m,5H),3.84(s,2H),3.43(br,1H),3.17(d,2H),3.14(s,1H),3.07-2.93(m,4H),2.12(br,4H),1.80–1.60(m,4H),1.58–1.29(m,5H),0.91(dd,6H)。
实施例32：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000214
第一步：7-(二甲基氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)
tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000215
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.452g，2mmol)、三乙胺(400mg，4.0mmol)和二氯甲烷(15mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加二甲氨基磺酰氯(287mg，2.0mmol)，加完后在室温反应3小时。反应液中加入3M稀盐酸(50mL)，然后用二氯甲烷(60mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到7-(二甲基氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)粗品，淡黄色固体(440mg，产率66％)。
第二步：N，N-二甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)
N,N-dimethyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-sulfonamide
Figure PCTCN2018096271-appb-000216
在50mL反应瓶中，加入7-(二甲基氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(34A)粗品(0.22g，0.66mmol)和二氯甲烷(5mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N，N-二甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)粗品，黄色油状液体(103mg，产率76％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨 基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000217
在100mL反应瓶中，加入N，N-二甲基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-磺酰胺(34B)粗品(103mg，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(288mg，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(81mg，0.60mmol)、中间体1(330mg，0.44mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)，淡黄色固体(240mg，产率56％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000218
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(34C)(400mg，0.4mmol)和 三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(二甲基氨磺酰)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物34)，白色粉末(130mg，产率29％)。
MS m/z(ESI):385.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.46–7.29(m,6H),7.29–7.18(m,4H),4.65(t,1H),4.32–3.99(m,5H),3.85–3.68(m,2H),3.35–3.11(m,6H),3.11–2.92(m,4H),2.81(d,6H),1.96–1.79(m,4H),1.71(dd,4H),1.60–1.32(m,5H),0.93(dd,6H)。
实施例33：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000219
第一步：叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)
tert-butyl 7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000220
在50mL反应瓶中，加入叔丁基2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(A)(0.414g,2mmol)、三乙胺(420mg，4.0mmol)和二氯甲烷(7mL)，搅拌溶解。冷却至-10℃，滴加二甲氨磺酰氯(343mg，2.4mmol)，反应10分钟。然后升至室温搅拌3h，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)，淡黄色油状物(414mg，产率0.65％)。
MS m/z＝320.2[M+H] +；
第二步：7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)
7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane
Figure PCTCN2018096271-appb-000221
在50mL反应瓶中，加入叔丁基7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羧酸酯(35A)(0.41g，1.3mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)粗品，淡黄色油状液体(284mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-二甲氨磺酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-dimethylsulfamoyl-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl)-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000222
在50mL单口瓶中，加入7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷(35B)粗品(284mg，1.3mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯 (v:v)＝1:2)，得到叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)，白色固体(201mg，产率39.7％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(dimethylsulfamoyl)-2,7-diazaspiro[3.4]octane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000223
在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-(7-乙酰基-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基)-5(叔丁氧羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代乙基]氨基]-1-苄基-2氧代乙基]氨基甲酸酯(35C)(201mg，0.17mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-(7-(二甲氨磺酰基)-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸盐(化合物35)，白色粉末(115mg，产率89.7％)。
MS m/z＝378.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.46-7.29(m,10H),4.71(t,1H),4.38–4.21(m,5H),4.07-4.05(m,2H),3.60-3.46(m,4H),3.23-3.05(m,6H),2.9-2.89(d,6H),2.32-2.26(m，2H)1.8-1.59(m,9H),1.02-0.96(dd,6H)。
实施例34：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨 基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tetra-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000224
第一步：叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(36A)
tert-butyl2-(4-benzyloxycarbonylpiperazin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000225
在50mL反应瓶中，加入叔丁基2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(C)(0.478g,2mmol)、苄基-1-哌嗪碳酸酯(440mg，2mmol)、乙酸(120mg，2.0mmol)和二氯乙烷(7mL)，搅拌半小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.636g，3mmol)，反应5h，反应体系用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1)，得到叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(36A)，淡黄色油状物(450mg，产率50.79％)。
MS m/z＝444.2[M+H] +；
第二步：苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)
benzyl 4-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000226
在50mL反应瓶中，加入叔丁基2-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸 酯(36A)(0.45g，1.20mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)粗品，淡黄色油状液体(411mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)
benzyl4-[7-[(2R)-6-(tert-butoxycarbonylamino)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]hexanoyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl]piperazine-1-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000227
在50mL单口瓶中，加入苄基4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(36B)粗品(411mg，1.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(384mg，2mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2mmol)、中间体1(400mg，0.53mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)，白色固体(300mg，产率52.4％)
第四步：叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000228
在50mL反应瓶中，加入苄基4-[7-[(2R)-6-(叔丁氧羰基氨基)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基戊酰基]氨基]己酰基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]哌嗪-1-羧酸酯(36C)(300mg，0.27mmol)和甲醇(5mL)，和Pd/C(30mg)，氢气氛室温反应4h。将反应液硅藻土过滤，减压浓缩，得叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-yl-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)(255mg，100％)直接用于下一步。
第五步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-piperazin-1-yl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide tetra-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000229
在50mL反应瓶中，加入叔丁基N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧羰基氨基)-1-(2-哌嗪-1-yl-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(36D)粗品(255mg，0.27mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-哌嗪-1-基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺四三氟乙酸盐(化合物36)，白色粉末(160mg，产率77.6％)。
MS m/z＝373.4[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.47-7.30(m,10H),4.71(t,1H),4.36–4.29(m,2H),3.90-3.86(m,1H),3.85-3.24(m,12H),3.23-3.04(m,6H),2.52-2.44(m,2H),2.14-2.12(m,2H),1.77-1.47(m，14H),1.03-0.96(dd,6H)。
实施例35：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000230
第一步：7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)
tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000231
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(83mg,0.35mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(80mg,0.42mmol)、1-羟基苯并三唑(57mg，0.42mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸(105mg，0.35mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)，白色固体(177mg，产率80％)。
第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)
Benzyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000232
在50mL反应瓶中，加入7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(37A)(177mg，0.35mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到：N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)，黄色油状液体(143mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(37C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000233
在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸苄酯(37B)(143mg，0.35mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(80mg，0.42mmol)、1-羟基苯并三唑(57mg，0.42mmol)、中间体1(264mg，0.35mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(37C)，白色固体(400mg，产率99％)。
第四步:N-(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000234
在50mL单口瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨 基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯37C(400mg，0.35mmol)、钯碳(80mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)粗品，淡黄色固体(353mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
第五步:(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000235
在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(37D)(353mg，0.35mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物37)，白色粉末(282mg，产率70％)。
MS m/z＝405.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D2O)δ7.52–7.09(m,15H),4.78-4.74(m,1H),4.64-4.58(m,1H),4.26-4.19(m,2H),4.15–3.96(m,3H),3.83(d,1H),3.71-3.63(m,1H),3.59-3.50(m,1H)3.43–2.90(m,11H),1.90–1.18(m,13H),0.98–0.80(m,6H)。
实施例36：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000236
第一步7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)
tert-butyl 7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000237
在50mL反应瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(93mg,0.41mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(94mg,0.49mmol)、1-羟基苯并三唑(66mg，0.49mmol)、(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)丙酸(446mg，2.0mmol)和二氯甲 烷(10mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)，白色固体(175mg，产率90％)。
第二步N-[(1R)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)
Benzyl N-[(1R)-1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-3-methyl-butyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000238
在50mL反应瓶中，加入7-[(2R)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(38A)(175mg，0.37mmol)和二氯甲烷(20mL)，室温下滴加三氟乙酸(2mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到N-[(1R)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)，黄色油状液体(138mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步N-(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000239
在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苄酯(38B)(138mg，0.37mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(84mg，0.44mmol)、1-羟基苯并三唑(59mg，0.44mmol)、中间体1(279mg，0.37mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二 氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基氨基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)，白色固体(366mg，产率90％)。
第四步:N-(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯38D
tert-butyl N-[(1R)-2-[[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]-5-(tert-butoxycarbonylamino)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]amino]-1-benzyl-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000240
在50mL单口瓶中，加入(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R基)-2-(苄氧羰基)-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(38C)(366mg，0.33mmol)、钯碳(73mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(38D)粗品，淡黄色固体(322mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
第五步:(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-[(2R)-2-amino-4-methyl-pentanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000241
在50mL反应瓶中，加入(1R)-2-[(1R)-2-[[(1R)-1-[[(1R)-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]-5-(叔丁氧基羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基]-1-苄基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(38D)(322mg，0.33mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-[(2R)-2-氨基-4-甲基-戊酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸盐(化合物38)，白色粉末(240mg，产率65％)。
MS m/z＝388.3[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.14(m,10H),4.61(t,1H),4.50–4.42(m,1H),4.28–4.02(m,5H),3.83–3.70(m,2H),3.66–3.36(m,4H),3.14(t,2H),2.97(t,4H),1.94–1.64(m,10H),1.54-1.30(m,6H),1.01-0.81(m,12H)。
实施例37：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000242
Figure PCTCN2018096271-appb-000243
第一步：2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)
benzyl 2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000244
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(760mg，4.9mmol)、1-羟基苯并三唑(300mg，2.0mmol)、环丙基甲酸(172mg，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)，淡黄色油状物(320mg，产率65％)。
第二步：环丙基(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)
cyclopropyl(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000245
在50mL单口瓶中，加入2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(39A)(320mg，0.97mmol)、钯碳(64mg，20wt％l)和甲醇(10mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到环丙基(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)粗品，淡黄色固体(189mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxy carbonylamino)-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000246
在50mL单口瓶中，加入环丙基(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲酮(39B)粗品(189mg，0.75mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(216mg，1.13mmol)、1-羟基苯并三唑(122mg，0.9mmol)、中间体1(565mg，0.75mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)，淡黄色固体(410mg，产率45％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000247
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(39C)(410mg，0.44mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN  and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物39)，白色粉末(330mg，产率78％)。
MS m/z＝365.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.45-7.18(m,10H),4.66(t,1H),4.26(dt,2H),4.13(d,2H),3.78(d,2H),3.71-3.61(m,2H),3.56-3.45(m,1H),3.42-3.31(m,1H),3.18(d,2H),3.10-2.93(m,4H),1.99–1.30(m,15H),1.01-0.77(m,10H)。
实施例38：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000248
第一步：7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)
tert-butyl 7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000249
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(6A)(0.453g，2.0 mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(767mg，4.0mmol)、1-羟基苯并三唑(324mg，2.4mmol)、环丙基甲酸(176mg，2.2mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)，淡黄色油状物(590mg，产率96％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ3.68(s,4H),3.62–3.52(m,4H),1.81–1.69(m,5H),1.45(s,9H),1.00–0.93(m,2H),0.78–0.71(m,2H)。
第二步：环丙基(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)
cyclopropyl(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)methanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000250
在50mL反应瓶中，加入7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(40A)(0.25g，0.83mmol)和二氯甲烷(7mL)，室温下滴加三氟乙酸(1mL)，加完后室温反应3h。将反应液直接减压浓缩，得到环丙基(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)粗品，黄色油状液体(161mg，产率100％)，并直接用于下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000251
在50mL单口瓶中，加入(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲酮(40B)粗品(0.16g，0.83mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(239mg，1.25mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1.0mmol)、中间体1(625mg，0.83mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得 到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)，淡黄色固体(700mg，产率90％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[7-(cyclopropanecarbonyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000252
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(40C)(700mg，0.75mmol)和三氟乙酸(3mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[7-(环丙烷羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物40)，白色粉末(200mg，产率28％)。
MS m/z＝365.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.40–7.17(m,10H),4.62(t,1H),4.32–4.00(m,5H),3.82-3.60(m,4H),3.48(br,2H),3.23–3.08(m,2H),3.07-2.91(m,4H),2.01–1.61(m,9H),1.58–1.27(m,5H),0.97–0.67(m,10H)。
实施例39：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000253
第一步：2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)
benzyl 2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000254
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(760mg，4.9mmol)、1-羟基苯并三唑(300mg，2.0mmol)、Boc-D-苯丙氨酸(530mg，2.0mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)，得到2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)，白色固体(514mg，产率67％)。
第二步：N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000255
在50mL单口瓶中，加入2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸苄酯(41A)(514mg，1.01mmol)、钯碳(100mg，20wt％)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)粗品，淡黄色固体(377mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-[(2R)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000256
在50mL单口瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(41B)粗品(377mg，1.01mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(290mg，1.52mmol)、1-羟基苯并三唑(164mg，1.21mmol)、中间体1(761mg，1.01mmol)和二氯甲烷(30mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝1:2)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)，淡黄色固体(410mg，产率36.6％)。
第四步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基 -戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-methyl-pentanamide；tri-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000257
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(41C)(410mg，0.37mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺三三氟乙酸(化合物41)，白色粉末(298mg，产率70％)。
MS m/z＝405.4[M+2H] +/2；
1HNMR(400MHz,D 2O)δ7.52–7.28(m,11H),7.28-7.20(m,4H),4.67–4.62(m,1H),4.32–4.15(m,3H),3.85–3.38(m,6H),3.37–3.22(m,2H),3.22-3.13(m,2H),3.12–2.90(m,6H),2.65(dd,1H),1.83–1.48(m,9H),1.47-1.28(m,3H),1.25-1.11(m,1H),0.92(dd,6H)。
实施例40：
(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)
(2R)-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2-hydroxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-4-meth yl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000258
第一步：2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)
2-tetrahydropyran-2-yloxyacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000259
在250mL单口瓶中，依次加入3,4-二氢-2H-吡喃(840mg，10mmol)、羟基乙酸甲酯(42A)(900mg，10mmol)、对甲基苯磺酸一水合物(100mg，0.5mmol)和二氯甲烷(100mL)，加完后在室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物中加入氢氧化锂溶液(75mL甲醇+25mL水的混合溶液)，加完后在室温反应过夜。向反应液中滴加0.1M稀盐酸(12mL)，测试反应液pH为2-3，反应液用二氯甲烷(100mL×2)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)，淡黄色油状物，(510mg，产率30％)。
MS m/z＝183.1[M+Na] +；
第二步：2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(42C)
benzyl 2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000260
在50mL单口瓶中，加入2-四氢吡喃-2-基氧基乙酸(42B)(510mg，3.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.2g，6.3mmol)、1-羟基苯并三唑(516mg，3.82mmol)、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(830mg，3.2mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50：1)，得到2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯 (42C)，淡黄色固体(580mg，产率45％)。
第三步：1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)
1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-tetrahydropyran-2-yloxy-ethanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000261
在50mL单口瓶中，加入2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸乙酯(42C)(580mg，1.4mmol)、钯碳(120mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)粗品，淡黄色固体(387mg，产率100％)，直接投入下一步反应。
第四步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(2-tetrahydropyran-2-yloxyacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000262
在50mL单口瓶中，加入1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-四氢吡喃-2-基氧基-乙酮(42D)粗品(387mg，1.4mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(553mg，2.88mmol)、1-羟基苯并三唑(233mg，1.72mmol)、中间体1(1.09g，1.45mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50：1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)，淡黄色固体(590mg，产率41％)。
第五步：(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊 基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)
Figure PCTCN2018096271-appb-000263
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(42E)(590mg，0.59mmol)和三氟乙酸(4mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2-羟基乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基-丙酰基]氨基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物42)，白色粉末(286mg，产率67％)。
MS m/z＝720.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.29(m,6H),7.24(d,4H),4.66(t,1H),4.34-4.20(m,2H),4.14(d,2H),4.02(d,2H),3.83(d,2H),3.72-3.60(m,2H),3.56-3.42(m,1H),3.42–3.30(m,1H),3.18(d,2H),3.10-2.94(m,4H),1.96–1.29(m,14H),0.92(dd,6H)。
实施例41：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000264
第一步：2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)
benzyl 2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000265
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.0mmol)、1-羟基苯并三唑(243mg，1.80mmol)、丙酸(122mg，1.65mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50：1)，得到2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)，淡黄色固体(245mg，产率52％)。
第二步：1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)
1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)propan-1-one
Figure PCTCN2018096271-appb-000266
在50mL单口瓶中，加入2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(43A)(245mg，0.775mmol)、钯碳(49mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)粗品，淡黄色固体(141mg，产率99.8％)，直接投入下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000267
在50mL单口瓶中，加入1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮(43B)粗品(141mg，0.774mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(383mg，2.0mmol)、1-羟基苯并三唑(135mg，1.0mmol)、中间体1(0.565g，0.75mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50：1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)，淡黄色固体(500mg，产率72.7％)。
第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-(2-propanoyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000268
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(43C)(260mg，0.28mmol)和三氟乙酸(1.3mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长： 210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-(2-丙酰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物43)，白色粉末(125mg，产率51％)。
MS m/z＝359.8[M+2H] +/2；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.45–7.28(m,6H),7.24(d,4H),4.80-4.75(m,1H)4.66(t,1H),4.29(t,1H),4.27(t,1H),4.01(d,2H),3.77(d,2H),3.71-3.60(m,2H),3.55-3.42(m,1H),3.41–3.27(m,1H),3.18(dd,2H),3.11-2.93(m,4H),2.19(qd,2H),1.95–1.63(m,8H),1.61–1.49(m,3H),1.48-1.30(m,2H),1.07(td,3H),0.92(dd,6H)。
实施例42：
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000269
第一步：2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)
benzyl 2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
Figure PCTCN2018096271-appb-000270
在50mL单口瓶中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(6C)(390mg，1.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.0mmol)、1-羟基苯并三唑(243mg，1.80mmol)、三氟乙酸(171mg，1.5mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50：1)，得到2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)，淡黄色固体(224mg，产率63％)。
第二步：1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2,2,2-三氟-乙酮(44B)
1-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2,2,2-trifluoro-ethanone
Figure PCTCN2018096271-appb-000271
在50mL单口瓶中，加入2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(44A)(223mg，0.63mmol)、钯碳(46mg，20wt％l)和甲醇(20mL)。氢气置换3次，氢气(气球)氛围下，室温反应3h。将反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2,2,2-三氟-乙酮(44B)粗品，淡黄色固体(116mg，产率83％)，直接投入下一步反应。
第三步：N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)
tert-butyl N-[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-benzyl-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(tert-butoxycarbonylamino)-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]carbamoyl]-3-methyl-butyl]amino]-2-oxo-ethyl]amino]-2-oxo-ethyl]carbamate
Figure PCTCN2018096271-appb-000272
在50mL单口瓶中，加入1-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2,2,2-三氟-乙酮(44B)粗品(116mg，0.52mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(575mg，3.7mmol)、1-羟基苯并三唑(240mg，1.3mmol)、中间体1(0.47g，0.626mmol)和二氯甲烷(50mL)，室温反应5h。将反应液减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析分离纯化(二氯甲烷:甲醇 (v:v)＝50：1)，得到N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)，淡黄色固体(216mg，产率42％)。
第四步：(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenyl-propanoyl]amino]-3-phenyl-propanoyl]amino]-N-[(1R)-5-amino-1-[2-(2,2,2-trifluoroacetyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl]pentyl]-4-methyl-pentanamide；di-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2018096271-appb-000273
在50mL反应瓶中，加入N-[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-苄基-2-[[(1R)-1-[[(1R)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]氨基甲酰基]-3-甲基-丁基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(44C)(210mg，0.22mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温反应2h。将反应液减压浓缩，残留物通过制备液相分离纯化(制备条件：仪器：Gilson GX-281；柱：Xbridge C18,150×30mm I.D.,5μm；流动相：A for ACN and B for H 2O；等度：A 65％；流量：30mL/min；背压：1000PSI；柱温：30℃；波长：210nm；周期：18min；样品制备：化合物溶解于12mL甲醇中；注射：0.9mL/针)，将制备液减压浓缩除去大部分溶剂，冻干，得到(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-氨基-3-苯基-丙酰基]氨基]-3-苯基丙酰基]氨基]-N-[(1R)-5-氨基-1-[2-(2,2,2-三氟乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基]戊基]-4-甲基-戊酰胺二三氟乙酸(化合物44)，白色粉末(111mg，产率51％)。
MS m/z＝758.3[M+H] +；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ7.44–7.28(m,6H),7.24(d,4H),4.64(t,1H),4.38–4.21(m,4H),3.97(d,2H),3.73–3.58(m,2H),3.56-3.43(m,1H),3.40–3.32(m,1H),3.25–3.11(m,2H),3.11-2.93(m,4H),1.99–1.63(m,9H),1.53(d,3H),1.49-1.33(m,2H),0.93(dd,6H)。
生物测试例
测试1：对人κ-阿片受体的激动活性
Forskolin(毛喉素)能够刺激人κ-阿片受体高表达细胞株-OPRK1细胞(DiscoveRx)cAMP的释放，而κ-阿片受体激动剂能够抑制forskolin刺激的cAMP释放。通过检测受试化合物对forskolin刺激的cAMP释放的抑制作用，能够测定化合物对人κ-阿片受体的激动活性。首先用一定浓度的forskolin和不同浓度的受试化合物与人κ-阿片受体高表达细胞株一起孵育。使用基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的cAMP免疫测试法(
Figure PCTCN2018096271-appb-000274
PerkinElmer)来确定所激发的OPRK1细胞中的cAMP水平。具体方法如下：
高表达人κ-阿片受体的OPRK1细胞(DiscoveRx)培养于含10％FBS(Gibco 10099-141)的McCoy's 5A(Gibco 16600-082)培养基中。实验当天，将在指数生长期的细胞，用PBS/5mM EDTA冲洗分离，离心收集，并用Stimulation Buffer重悬细胞并计数，调整细胞浓度至3*10 5cells/ml。用DMSO分别溶解Forskolin和受试化合物，使其母液浓度均为10mM，再用Stimulation Buffer稀释Forskolin至4μM，加入不同浓度受试化合物(浓度依次为80、16、3.2、0.64、0.128、0.0256、0.00512、0.001024、0μM)，以每孔5μl加入384孔板。再向每孔中加入5μl细胞悬液，室温孵育30min。随后，每孔分别加入5μl 4x Eu-cAMP tracer工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释Eu-cAMP stock solution 50倍)和5μl 4x Ulight-anti-cAMP工作溶液(用cAMP Detection Buffer稀释ULight-anti-cAMP stock solution 150倍)，室温下孵育1小时。384孔板用酶标仪(Perkin Elmer，Envision)TR-FRET方法检测cAMP水平。所得数据用origin7.5软件处理和拟合EC50。本发明化合物人κ-阿片受体的激动活性通过以上的实验进行测定，测得的EC50值见表1。
Stimulation Buffer配制方法：将14mL 1*HBSS(invitrogen,cat.#14025-092)、75μL 1M HEPES(Invitrogen,cat.#15630-080)、30μL 250mM IBMX溶于DMSO(Sigma,cat.#17018)和200μL 7.5％BSA Stabilizer混合，用0.1N NaOH调节溶液pH到7.4，并用1*HBSS定容到15mL。
表1受试化合物对人κ-阿片受体的激动活性
化合物编号 EC 50(nM)
化合物2 0.41
化合物4 0.0159
化合物8 0.0112
化合物12 0.067
化合物13 0.00682
化合物14 0.0155
化合物15 0.0117
化合物17 0.00919
化合物18 0.04
化合物19 0.044
化合物20 0.086
化合物22 0.0112
化合物23 0.023
化合物30 0.071
化合物31 0.0136
化合物33 0.05
结论：本发明化合物对人κ-阿片受体具有明显激动作用。
测试2：小鼠热板实验
雌性C57小鼠18-22g购自成都达硕实验动物有限公司。将热板仪温度设定为56℃，升温后稳定30min开始实验。将动物依次放入热板仪测试，观察动物舔后足反应，以此作为痛反应指标；记录下动物从进入热板至受热刺激引起舔后足反应的时间，符合入组标准(舔后足反应时间低于25s)的动物入组编号。按基线阈值分组，每组10只。以10ml/kg皮下给与不同浓度化合物，给药15min后检测，以30秒作为截止时间，记录反应时间。对结果进行统计分析，按公式计算出％MPE值：％MPE＝(T n-T 0)/(30-T 0)，(T n为给药后动物舔后足时间，T 0为给药前动物舔足时间)。实验结果见表2。
表2
化合物编号 MPE(％)
化合物2 -17.20
化合物4 -19.62
化合物8 -18.61
化合物15 -13.29
结论：本发明化合物的镇痛作用是通过外周κ阿片受体起作用的。
测试3：小鼠扭体实验
小鼠腹腔注射乙酸后，能够引起小鼠扭体行为。扭体反应指小鼠表现出典型的腹部肌肉收缩或伸张特征性的行为反应。通过检测化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制作用，可以反应化合物的镇痛活性。具体方法如下：
8周龄ICR小鼠(购自成都达硕生物科技公司，许可证号：SCXK(川)2008-24(NO：51203500002150))。随机分组，每组10只动物，雌雄各半；实验前12h禁食不禁水。实验当天，分别静脉给予1.0mg/kg受试化合物，对照组给予空白试剂。给药后15min，以0.4mL/只的剂量腹腔内注射0.6％(v/v)醋酸溶液。分别记录注射醋酸后15min和6h内的小鼠扭体次数，并分别计算受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率，分析结果如表3所示。
抑制百分率％＝(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数。
表3受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率
化合物编号 15min_post抑制百分率(％) 6h_post抑制百分率(％)
化合物2 98.07 80.58
化合物3 86.44 NQ
化合物4 95.76 81.27
化合物8 90.68 90.82
化合物9 81.92 NQ
化合物12 91.04 NQ
化合物13 88.98 NQ
化合物14 92.87 NQ
化合物15 94.50 87.14
化合物17 95.43 97.89
化合物18 99.37 95.69
化合物19 99.71 84.74
化合物20 97.47 83.41
化合物22 90.38 88.71
化合物23 88.46 87.93
化合物24 94.89 80.51
化合物25 98.08 85.03
化合物26 94.25 92.94
化合物27 94.00 NQ
化合物28 84.29 NQ
化合物30 97.36 NQ
化合物31 99.28 90.03
化合物33 89.42 NQ
化合物36 89.14 75.71
化合物37 95.85 NQ
化合物42 99.33 75.14
化合物43 98.00 76.57
化合物44 93.32 NQ
对照 61.11 28.96
NQ表示没有测试。
对照为
Figure PCTCN2018096271-appb-000275
CN101627049A中公开化合物25为其游离碱。
结论：本发明化合物具有明显镇痛作用。
部分受试化合物进一步测试了对乙酸引起的小鼠扭体行为的长效试验，按照上述相同的试验方法，给药方式为静脉注射，给药剂量为3mg/kg或10mg/kg，记录注射醋酸后18h内的小鼠扭体次数，并分别计算受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的抑制百分率，结果如表4所示。
表4受试化合物对乙酸引起的小鼠扭体行为的18h-post抑制百分率
化合物编号 给药剂量 18h-post抑制百分率(％)
CR-845 10mg/kg 49.11
化合物8 3mg/kg 83.86
化合物10 3mg/kg 72.30
化合物17 10mg/kg 78.11
化合物18 3mg/kg 54.00
化合物23 10mg/kg 73.37
化合物25 10mg/kg 74.26
化合物26 10mg/kg 69.82
化合物31 10mg/kg 75.44
化合物42 10mg/kg 61.69
化合物43 3mg/kg 70.19
CR845结构为
Figure PCTCN2018096271-appb-000276
结论：本发明部分化合物具有明显镇痛作用，且具有长效的优点。
4.大鼠PK试验
Figure PCTCN2018096271-appb-000277
表5大鼠PK结果(1mg/kg)
Figure PCTCN2018096271-appb-000278
5.小鼠PK试验
Figure PCTCN2018096271-appb-000279
表6小鼠PK结果(1mg/kg)
化合物编号 给药方式 t 1/2(h) AUC 0-t(ng/ml·h)
CR-845 iv 0.388 1117
化合物8 iv 5.77 1220
化合物17 iv 3.88 2244

Claims (16)

  1. 一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶：
    Figure PCTCN2018096271-appb-100001
    其中，
    R 1选自
    Figure PCTCN2018096271-appb-100002
    m 1、m 2各自独立选自1、2、3或4；
    m 3、m 4各自独立选自0、1、2、3或4；条件是，m 3和m 4不能同时为0；
    n 1、n 2各自独立选自0、1、2、3或4；
    Z选自CR z1R z2或NR z3；
    R z1、R z2各自独立选自H、F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C(＝O)-C 1-6烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-6烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-8碳环基或3至8元杂环基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、＝O、羧基、硝基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O) 2；
    R 1e、R 1f各自独立地选自H、C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-6烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-8碳环基或-C(＝O)O-(CH 2) q-3至8元杂环基，所述的烷基、碳环基或者杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    或者，R z1和R z2与其连接的碳原子形成3至10元含氮杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、＝O、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代；
    R 1a、R 1b各自独立选自F、CF 3、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或3至8元杂环基，所述烷基、烯基、炔基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
    R z3独立选自H、-C(＝O)-C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-6烷基、-C(＝O)-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-(3至8元杂环基)、-S(＝O) p-C 1-6烷基、-S(＝O) p-C 3-8碳环基、-S(＝O) p-(3至8元杂环基)、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至8元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
    R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-6烷基；
    或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成3至10元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-S(＝O) p-C 1-6烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    q选自0、1、2、3或4；
    p选自0、1或2；
    a选自0、1、2或3；
    R 4独立选自H、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基或-(CH 2) q-C 3-8碳环基，所述的烷基、烯基、炔基或碳环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CN、CF 3、NO 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-6烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-8碳环基、-C(＝O)O-(CH 2) q-3至8元杂环基或
    Figure PCTCN2018096271-appb-100003
    所述的烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8碳环基或3至8元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子；
    b选自0、1、2、3、4或5；
    c选自0、1、2、3、4或5；
    R 5、R 6每个各自独立选自F、Cl、Br、I、CF 3、氰基、硝基、C 1-4烷基、-OR 5a、-C(O)OR 5b、-SR 5c、-S(O)R 5d、-S(O) 2R 5e或-NR 5fR 5g；
    R 5a、R 5b、R 5c、R 5d、R 5e、R 5f和R 5g各自独立选自H或C 1-4烷基；
    或者，R 5f、R 5g与其连接的氮原子形成5至6元杂环，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，
    m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
    n 1、n 2各自独立选自0、1或2；
    Z选自CR z1R z2或NR z3；
    R z1、R z2各自独立选自H、C 1-4烷基、-(CH 2) q-C(＝O)O-C 1-4烷基、-(CH 2) q-NR 1eR 1f、-(CH 2) q-COOH、-(CH 2) q-CONH 2、C 3-6碳环基或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-5个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、＝O、羧基、硝基、氰基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 3-6碳环基或3至6元杂环基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个任选自N、O或S的杂原子，所述杂原子选自S时，任选进一步为S、S＝O或S(＝O) 2；
    R 1e、R 1f各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基或-C(＝O)O-(CH 2) q-C 3-6碳环基，所述的烷基或碳环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、苯基的取代基所取代；
    或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成4至6元含氮杂环，所述的环任选进一步被＝O的取代基所取代；
    R 1a、R 1b独立选自F、CF 3、甲基、乙基、丙基或异丙基；
    R z3各自独立选自H、-C(＝O)-C 1-4烷基、-C(＝O)-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、环丙基或苯基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-4烷基；
    或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、氰基、硝基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或-S(＝O) p-C 1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    p选自2；
    q选自0或1；
    a选自3；
    R 4选自丙基或异丙基；
    R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基、-C(＝O)O-C 1-4烷基或-C(＝O)O-苄基；
    b选自0；
    c选自0。
  3. 根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，该化合物选自通式(II)所示的化合物：
    Figure PCTCN2018096271-appb-100004
    R 1选自
    Figure PCTCN2018096271-appb-100005
    m 1、m 2、m 3、m 4各自独立选自1或2；
    n 1、n 2各自独立选自0或2；
    R 1a、R 1b独立选自F；
    Z选自CR z1R z2或NR z3；
    R z1、R z2各自独立选自H、羧基、
    Figure PCTCN2018096271-appb-100006
    Figure PCTCN2018096271-appb-100007
    氨基、-CH 2NH 2或
    Figure PCTCN2018096271-appb-100008
    或者，R z1和R z2能够与其连接的碳原子形成一个内酰胺
    Figure PCTCN2018096271-appb-100009
    R z3各自独立选自H、-C(＝O)-C 1-4烷基、-C(＝O)-C 3-6碳环基、-C(＝O)O-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 1-4烷基、-S(＝O) p-C 3-6碳环基、-C(＝O)NR 1gR 1h、-S(＝O) p-NR 1iR 1j或3至6元杂环基，所述烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0-3个选自F、Cl、Br、I、OH、CF 3、硝基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、环丙基或苯基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    R 1g、R 1h、R 1i、R 1j各自独立选自H或C 1-4烷基；
    或者，R 1g、R 1h与其连接的氮原子形成4至6元杂环，所述的环任选进一步被选自F、CF 3、甲基、甲氧基或-S(＝O) p-C 1-4烷基的取代基所取代，所述的杂环基含有1至3个选自N、O或S的杂原子；
    p选自2；
    R 2、R 3、R 7、R 8各自独立地选自H、甲基或-C(＝O)O-叔丁基。
  4. 根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，其中，该化合物选自通式(II)所示的化合物：
    R z3各自独立选自H、
    Figure PCTCN2018096271-appb-100010
    Figure PCTCN2018096271-appb-100011
  5. 根据权利要求4所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、要学上可接受的盐或共晶，
    R 1选自
    Figure PCTCN2018096271-appb-100012
    Figure PCTCN2018096271-appb-100013
  6. 根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述化合物选自如下结构之一：
    Figure PCTCN2018096271-appb-100014
    Figure PCTCN2018096271-appb-100015
    Figure PCTCN2018096271-appb-100016
    Figure PCTCN2018096271-appb-100017
  7. 根据权利要求1-6任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，所述的药学上可接受的盐选自三氟乙酸盐。
  8. 一种药物组合物，所述的药物组合物包含权利要求1～7任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，和一种或多种以上的药学上可接受的载体和/或赋形剂。
  9. 权利要求1～7任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或者权利要求8所述的药物组合物在制造用于治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的药物中的应用。
  10. 根据权利要求9所述的应用，其中所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况选自 下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。
  11. 根据权利要求9所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。
  12. 根据权利要求9所述的应用，其中所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。
  13. 一种治疗或预防哺乳动物的κ阿片样物质受体相关的疾病或病况的方法，所述的方法包括给予权利要求1～7任一项所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐或共晶，或者权利要求8所述的药物组合物。
  14. 根据权利要求13所述的方法，所述κ阿片样物质受体相关的疾病或病况选自下组，其构成为：疼痛、炎症、瘙痒、水肿、低钠血症、低钾血症、肠梗阻、咳嗽和青光眼。
  15. 根据权利要求14所述的方法，所述疼痛选自下组，其构成为：神经性疼痛、躯体痛、内脏痛和皮肤痛。
  16. 根据权利要求14所述的方法，所述疼痛选自下组，其构成为：关节炎疼痛、肾结石疼痛、子宫痉挛、痛经、子宫内膜异位症、消化不良、外科手术后疼痛、医疗处理后疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆发性癌症疼痛和GI紊乱相关的疼痛。
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