TWI777236B - 肽醯胺類化合物及其中間體的製備方法 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及一種式(N)所示肽醯胺類化合物及其中間體的製備方法，該方法反應條件溫和，操作簡單，反應產率高，產品純度高，後處理方便，適合於工業化生產。

Description

肽醯胺類化合物及其中間體的製備方法
本發明涉及醫藥領域，具體的說，本發明涉及一種肽醯胺類化合物及其中間體的製備方法。
鴉片類藥物用於疼痛的治療已有數千年的歷史，其主要通過與已知的三種經典鴉片受體μ,δ和κ相互結合而發揮生理作用。這三種受體都是G蛋白偶聯受體家族的一員，主要分佈在中樞神經系統，同時也存在於很多外周組織中。其中最為經典的藥物屬嗎啡，其主要通過μ鴉片受體的作用發揮鎮痛效果。此外常用的臨床鎮痛藥物還包含其他μ鴉片受體藥物，如以二氫嗎啡酮、芬太尼為代表的傳統類鴉片藥物。
然而μ鴉片受體類藥物在長期使用後會產生多種副作用，例如耐受、依賴和呼吸抑制以及對胃腸運動的影響等，這不僅增加了治療費用，更影響了患者康復週期。而一些非鴉片類注射劑，如對乙醯氨基酚、NSAIDs(非甾體抗炎藥)，由於其鎮痛效果差，限制了其使用範圍和劑量；此外也有一定的副作用，如對乙醯氨基酚增加肝臟毒性，NSAIDs(非甾體抗炎藥)導致各種胃腸道疾病。
隨著現代社會生活工作壓力的不斷增大和老年社會的到來，以及鴉片受體對於治療不同類型的疼痛有著至關重要的作用，尋找具有高鎮痛活性且低毒副作用的新型鴉片藥物具有重要的科學及社會意義。
WO2019015644公開了一種式(N)所示的κ鴉片受體激動劑，其結構新穎、鎮痛效果佳，因此，對其製備工藝進行研究，具有重要意義。
Figure 109131022-A0305-02-0003-1
本發明的目的在於提供一種式(N)所示肽醯胺類化合物及其中間體的製備方法，該方法反應起始物價格低廉、反應條件溫和、操作簡單、產率高、產品純度高、後處理方便、適合於工業化生產。
本發明較WO2019015644公開的式(N)所示的化合物製備方法而言，具有如下優化：
(1)本發明優化了式(G)化合物生成式(I)化合物的工藝，現有技術中採用2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯作為起始原料，需要先對其乙醯化、再脫去N-苄氧羰基，才能進行縮合反應。本發明在此步驟中，直接採用1-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)乙酮鹽酸鹽作為起始原料，省去了脫N-苄氧羰基保護基的步驟，避免了保護基脫去過程中貴重金屬(鈀碳)的使用，減少了反應步驟、節約了成本。
(2)優化了式(G)化合物製備式(I)化合物、式(J)化合物製備式(L)化合物、式(D)化合物製備式(F)化合物及式(A)化合物製備式(C)化合物的反應條件，在反應中加入了0.3-1.2當量氯化銅，有利於掌性化合物構型保持，使得生成的中間體的非對映異構體得到有效控制。
(3)優化了後處理工藝，避免了現有技術中使用高效液相色譜製備分析法和離子交換樹脂工藝分離產物的操作。雖然純化方式仍有柱層析，但採用快速矽膠柱層析，矽膠使用量大大減少且能快速純化，適於工業化生產。
本發明通過優化各反應步驟的後處理，使用常規簡單的操作步驟，更適合工業化生產。反應產率提高，操作過程和產物易於控制和監控，且環境友 好。
一方面，本發明提供了一種式(N)所示化合物的製備方法，該方法不需要經過製備色譜純化，
Figure 109131022-A0305-02-0004-2
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法包括以下步驟：(1)將式(M)化合物溶解於水(較佳為純化水)中，加入有機溶劑萃取、分液，收集水相；(2)滴加鹼性試劑至步驟(1)所得的水相，調節水相pH至鹼性(較佳為pH為9-10)；(3)將步驟(2)得到的水相(調節pH為鹼性的水相)用有機溶劑萃取、分液，有機相經過濾後濃縮(無明顯餾分為止)，即得化合物(N)；
Figure 109131022-A0305-02-0004-3
其中，HA為鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸。n選自1、2或3，較佳為2。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括以下進一步純化步驟：(4)將步驟(3)得到的化合物(N)經矽膠柱層析分離純化(快速分離純化)，收集沖提流份，濃縮； (5)將步驟(4)中得到的濃縮液用有機溶劑和/或純化水混合溶液(有機溶劑、或有機溶劑和純化水的混合溶液)溶解、過濾、濃縮，得到純化後的化合物(N)。
根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(1)和(3)所述的有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、2-甲基-四氫呋喃、三氯甲烷或乙酸異丙酯；步驟(2)所述的鹼性試劑選自氨水、或者碳酸氫鈉、氫氧化鈉或氫氧化鉀的溶液(較佳為水溶液)；根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(4)中的沖提液(步驟(4)中矽膠柱層析分離純化所用的沖提液)選自二氯甲烷和/或無水甲醇混合溶液(二氯甲烷、或二氯甲烷和無水甲醇的混合溶液)；根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(4)中的矽膠目數為200-300目。
根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(5)所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。
根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(4)中的沖提液選自二氯甲烷和無水甲醇(體積比=50：1~5：1)的混合溶液；根據本發明一些具體實施方案，其中，步驟(5)中使用的有機溶劑和/或純化水混合溶液選自甲醇和純化水(體積比=1：8~1：5)的混合溶液。
根據本發明一些具體實施方案，其中，式(N)所示化合物的製備方法包括以下步驟：(1)10±10℃、較佳10±5℃條件下，將式(M)化合物溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；(2)10±10℃、較佳10±5℃條件下，滴加氨水至步驟(1)所得的水相，調節水相pH=10-11；定時用pH計測定反應液pH值，如果pH值下降則向反應液中補加氨水，使反應液pH值維持在9-10；(3)靜置分層，水相用二氯甲烷溶液萃取、分液，有機相經過濾(矽藻土過 濾)，濾液於30±5℃減壓濃縮，得到濃縮液；(4)取矽膠(較佳200-300目矽膠)、二氯甲烷濕法裝柱，以二氯甲烷和無水甲醇(體積比=50：1~5：1)作為沖提液，將步驟(3)得到的濃縮液柱層析分離純化；收集沖提流份，控溫在30±5℃以下減壓濃縮流份，得到濃縮液；(5)20±10℃、較佳20±5℃條件下，將步驟(4)中得到的濃縮液用甲醇和純化水(體積比=1：8~1：5)的混合溶液溶解、過濾(玻砂漏斗過濾)、合併濾液，濾液轉入凍乾機中凍乾，得到所示化合物(N)；
Figure 109131022-A0305-02-0006-4
 其中，HA為鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸。n選自1、2或3，較佳為2。
在某些實施方案中，步驟(1)的水與化合物(M)的質量比為9：1~12：1，較佳為10：1。
在某些實施方案中，步驟(2)滴加的鹼性試劑為氨水，氨水與化合物(M)的質量比為1.5：1~1：1，較佳1.15：1。
在某些實施方案中，步驟(4)中矽膠品質為步驟(3)得到的濃縮液品質的2.5~3倍。
在某些實施方案中，所述方法還包括以下進一步純化步驟：(a)將步驟(5)得到的化合物(N)在有機溶劑中與HA進行反應；並再結晶得到晶體；(b)將步驟(a)得到的晶體溶解於水中，加有機溶劑萃取、分液，收集水相；滴加鹼性試劑至水相，調節水相pH至鹼性；將調節pH為鹼性的水相用有機溶劑萃取、分液，有機相經過濾後濃縮(無明顯餾分為止)，即得化合物 (N)。
在某些實施方案中，(a)是將步驟(4)得到的濃縮液在有機溶劑中與HA進行反應；並再結晶得到晶體；在某些實施方案中，步驟(a)的再結晶包括利用反溶劑(較佳為甲基叔丁基醚)析出晶體。
在某些實施方案中，步驟(b)的有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、2-甲基-四氫呋喃、三氯甲烷或乙酸異丙酯；所述的鹼性試劑選自氨水、碳酸氫鈉、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
在某些實施方案中，所述方法還包括以下進一步純化步驟：(a)15±5℃條件下，將步驟(4)得到的濃縮液溶解於有機溶劑中，滴加HA進行反應；20±5℃、攪拌條件下，向反應液中滴加甲基叔丁基醚，析出晶體，氮氣保護下過濾，濾餅用甲基叔丁基醚洗滌；(b)10±5℃條件下，將步驟(a)得到的濾餅溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；滴加氨水至水相，調節水相pH=10-11，使反應液pH值維持在9-10；反應完畢，靜置分層，水相用二氯甲烷溶液萃取、分液，有機相經矽藻土過濾，濾液於30±5℃減壓濃縮，得到濃縮液；20±5℃條件下，將該濃縮液用甲醇和純化水(體積比=1：8-1：5)的混合溶液溶解、玻砂漏斗過濾、合併濾液，濾液轉入凍乾機中凍乾，得到所示化合物(N)。
在某些實施方案中，步驟(a)的有機溶劑為乙醇。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括以式(L)為原料，在酸性試劑與二氯甲烷的體系存在下進行反應，製備得到式(M)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0007-5
 其中，P為氨基保護基；較佳為叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更佳為叔丁氧羰基。
在某些實施方案中，所述的酸性試劑選自鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸。
在某些實施方案中，反應溫度為15℃±10℃。
在某些實施方案中，所述的酸性試劑選自三氟乙酸，化合物(L)與三氟乙酸的質量比為1.6：1~1.8：1；較佳為1.7：1。
第二個方面，本發明提供了一種式(L)化合物的製備方法，所述方法包括以式(J)化合物和式(K)化合物為原料，在縮合劑和氯化銅(較佳為二水氯化銅)存在下製備得到式(L)化合物
Figure 109131022-A0305-02-0008-6
 反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮(DHOBT)或BOP中的任一種或任幾種的混合物；較佳為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；較佳為N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物。
反應溫度選自-5~30℃；較佳0~20℃；P為氨基保護基；較佳為叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更佳為叔丁氧羰基。
在某些實施例中，化合物(J)與化合物(K)的質量比為3：1~4：1；較佳為3.32：1和3.69：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-羥基苯並三唑(HOBT)，化合物(J)與HOBT的質量比為4：1~6：1；較佳為5.24：1和4.61：1。
在某些實施例中，化合物(J)與氯化銅(二水)的質量比為2：1~3：1；較佳為2.57：1和2.59：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)，化合物(J)與EDC.HCl的質量比為2.5：1~3.5：1；較佳為3.28：1和3.34：1。
在某些實施例中，式(J)化合物和式(K)化合物是在縮合劑、氯化銅(較佳二水氯化銅)和鹼的存在下製備得到式(L)化合物。
在某些實施例中，所述鹼選自三乙胺或N,N-二異丙基乙胺。
在某些實施例中，化合物(J)與鹼的質量比為3：1~5：1；較佳為4.5：1和4.95：1。
在某些實施例中，反應使用的溶劑選自二氯甲烷，化合物(J)與二氯甲烷的質量比為20：1~25：1；較佳為23.66：1。
在某些實施例中，化合物(J)與二氯甲烷的質量體積比為1：10~1：15；較佳為1：13。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(J)化合物的製備，包括：以式(I)化合物為原料製備式(J)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0009-7
反應使用的鹼選自有機鹼或無機鹼；較佳為KOH、NaOH、氫氧 化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、甲醇鈉、乙醇鈉；更佳為氫氧化鋰(一水)。
反應使用的溶劑選自乙醇、甲醇、四氫呋喃、二甲硫醚、乙酸乙酯、水中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-10~10℃；較佳-5~5℃；P為氨基保護基；較佳為叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更較佳為叔丁氧羰基。
在某些實施例中，反應使用的鹼為氫氧化鋰(一水)，化合物(I)和氫氧化鋰(一水)的質量比為1：65~1：67；較佳為1：67。
在某些實施例中，反應使用的溶劑為四氫呋喃，化合物(I)和四氫呋喃的質量比為8：1~9：1，較佳為8.5：1。
在某些實施例中，氫氧化鋰(一水)和水的質量比為20：1~25：1；較佳為22.75：1。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(I)化合物的製備，包括：在縮合劑和氯化銅(較佳二水氯化銅)存在下，以式(G)化合物和式(H)化合物為原料製備得到式(I)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0010-8
 反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或N,N'-羰基二咪唑或BOP中的任一種或任幾種的混合物；較佳為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物。
反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞 碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；較佳為N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物。
反應溫度選自-5~30℃；較佳為0~20℃。
P為氨基保護基；較佳為叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更佳為叔丁氧羰基。
在某些實施例中，化合物(G)與化合物(H)的質量比為1.5：1~2：1；較佳為1.78：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-羥基苯並三唑(HOBT)，化合物(G)與HOBT的質量比為3：1~4：1；較佳為3.2：1和3.85：1。
在某些實施例中，化合物(G)與氯化銅(二水)的質量比為2：1~3：1；較佳為2.57：1和2.59：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)，化合物(G)與EDC.HCl的質量比為2：1~2.5：1，較佳為2.29：1。
在某些實施例中，是在縮合劑、氯化銅和鹼存在條件下，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物。
在某些實施例中，所述鹼選自三乙胺或N,N-二異丙基乙胺。
在某些實施例中，化合物(G)與N,N-二異丙基乙胺的質量比為2.5：1~3.5：1；較佳為2.72：1和3.16：1。
在某些實施例中，化合物(G)與三乙胺的質量比為3：1~5：1；較佳為4.5：1和4.95：1。
在某些實施例中，反應使用的溶劑選自二氯甲烷，化合物(G)與二氯甲烷的質量比為15：1~20：1；較佳為18.6：1。
在某些實施例中，化合物(G)與二氯甲烷的質量體積比為1：15~1：25；較佳1：19。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(G)化 合物的製備，包括：以式(F)化合物為原料製備式(G)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0012-9
 反應使用的鹼選自有機鹼或無機鹼；較佳KOH、NaOH、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、甲醇鈉、乙醇鈉；更較佳為氫氧化鋰(一水)。
反應使用的溶劑選自乙醇、甲醇、四氫呋喃、二甲硫醚、乙酸乙酯、乙腈或水中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-10~10℃；較佳-5~5℃；P為氨基保護基；較佳為叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更較佳為叔丁氧羰基。
在某些實施方案中，反應使用的鹼選自氫氧化鋰(一水)，化合物(F)與氫氧化鋰(一水)的質量比為90：1~95：1；較佳為93.4：1。
在某些實施例中，反應使用的溶劑選自四氫呋喃，化合物(F)和四氫呋喃的質量比為8：1~9：1；較佳為8.8：1。
在某些實施例中，氫氧化鋰(一水)和水的質量比為20：1~30：1；較佳為28.4：1
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(F)化合物的製備方法，包括：在縮合劑存在下，以式(D)化合物為原料製備式(F)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0012-10
反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3- 乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；較佳1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物。
反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；較佳為N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物。
反應溫度選自-5~30℃；較佳為0~20℃。
HA選自鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸；較佳為三氟乙酸。
在某些實施方案中，化合物(D)和化合物(E)的質量比為1.2：1~1.8：1；較佳為1.53：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-羥基苯並三唑(HOBT)，化合物(D)與HOBT的質量比為2.5：1~3：1；較佳為2.87：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)，化合物(D)與EDC.HCl的質量比為1.5：1~2：1；較佳為1.78：1。
在某些實施例中，是在縮合劑和鹼存在條件下，以式(D)化合物為原料製備式(F)化合物。
在某些實施例中，所述鹼選自三乙胺或N,N-二異丙基乙胺。
在某些實施例中，化合物(D)與N,N-二異丙基乙胺的質量比為2：1~3：1；較佳為2.64：1。
在某些實施例中，化合物(D)與三乙胺的質量比為3：1~5：1；較佳為4.5：1和4.95：1。
在某些實施例中，反應使用的溶劑選自二氯甲烷，化合物(D)與二氯甲烷的質量比為1：10~1：15；較佳為1：13.26。
在某些實施例中，式(F)化合物的製備方法包括：以式(D)化合物 和式(E)化合物為原料製備式(F)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0014-11
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(D)化合物的製備，包括：以式(C)化合物為原料製備式(D)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0014-12
 該方法包括：式(C)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸的存在下，製備得到式(D)化合物。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(D)化合物的製備，包括：以式(C)化合物為原料製備式(D)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0014-13
 該方法包括：將式(C)化合物溶解於二氯甲烷中，滴加三氟乙酸，製備得到式(D)化合物。
在某些實施例中，該方法包括：將式(C)化合物溶解於二氯甲烷中，0±5℃條件下，滴加三氟乙酸，保持15±5℃條件反應製備得到式(D)化合物。
在某些實施例中，化合物(C)和三氟乙酸的質量比為1：2~1：2.5；較佳為1：2.33。
在某些實施例中，化合物(C)和二氯甲烷的質量比為6：1~3：1；較 佳為4：1。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述方法還包括式(C)所示的化合物的製備，包括：在縮合劑存在下，以式(A)化合物為原料製備式(C)化合物
Figure 109131022-A0305-02-0015-14
 反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；較佳1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物。
反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；較佳N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物。
反應溫度選自-5~30℃；較佳0~20℃。
在某些實施方案中，化合物(A)和化合物(B)的質量比為1.2：1~1.8：1；較佳1.46：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自HOBT(1-羥基苯並三唑)，化合物(A)與HOBT的質量比為1：1~1.5：1；較佳為1.27：1。
在某些實施例中，反應使用的縮合劑選自EDC.HCl(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)，化合物(A)與EDC.HCl的質量比為1：1.1~1：1.5；較佳為1：1.27。
在某些實施例中，是在縮合劑、氯化銅(較佳二水氯化銅)和鹼存在下，以式(A)化合物為原料製備式(C)化合物。
在某些實施例中，所述鹼選自三乙胺或N,N-二異丙基乙胺。
在某些實施例中，化合物(A)與鹼的質量比為1：1~1.5：1；較佳為1.17：1。
在某些實施例中，反應使用的溶劑選自二氯甲烷，化合物(A)與二氯甲烷的質量比為1：25~1：35；較佳為1：33。
在某些實施例中，式(C)化合物的製備方法包括：以式(A)化合物和式(B)化合物為原料製備式(C)化合物，
Figure 109131022-A0305-02-0016-15
在第三個方面，本發明涉及一種式(N)所示化合物的製備方法，其中所述的方法包括以下步驟：第一步，式(A)化合物與式(B)化合物發生縮合反應生成式(C)化合物；第二步，式(C)化合物氮原子上保護基(氨基保護基)脫去後生成式(D)化合物(在酸性試劑存在下脫去保護基)；第三步，式(D)化合物與式(E)化合物發生縮合反應生成式(F)化合物；第四步，式(F)化合物水解得到式(G)化合物；第五步，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物；第六步，式(I)化合物水解得到式(J)化合物；第七步，式(J)化合物與式(K)化合物反應生成式(L)化合物；第八步，式(L)化合物氮原子上保護基(氨基保護基)脫去後生成式(M)化合物(在酸性試劑存在下脫去保護基)；第九步，式(M)化合物經鹼游離後生成化合物(N)。
Figure 109131022-A0305-02-0017-17
 其中，HA選自鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸；較佳三氟乙酸；n選自1、2或3，較佳2；P為氨基保護基；較佳選自叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更佳為叔丁氧羰基。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述的方法包括以下步驟：第一步，縮合劑和鹼存在條件下，式(A)化合物與式(B)化合物發生縮合反應生成式(C)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基 丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第二步，式(C)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸存在下，製備得到式(D)化合物；第三步，縮合劑和鹼存在條件下，式(D)化合物與式(E)化合物發生縮合反應生成式(F)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第四步，式(F)化合物在四氫呋喃和氫氧化鋰存在下，製備得到式(G)化合物；第五步，縮合劑、氯化銅和鹼存在條件下，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第六步，式(I)化合物在四氫呋喃和氫氧化鋰的存在下，製備得到式(J)化合物；第七步，縮合劑、氯化銅和鹼存在條件下，式(J)化合物與式(K)化合物反應生成式(L)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基 丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第八步，式(L)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸的存在下，製備得到式(M)化合物；第九步，將式(M)化合物溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；滴加氨水至水相，調節水相pH=10-11，使反應液pH值維持在9-10，製得化合物(N)。
根據本發明一些具體實施方案，其中，所述的方法包括以下步驟：第一步，縮合劑和鹼存在條件下，式(A)化合物與式(B)化合物發生縮合反應生成式(C)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第二步，將式(C)化合物溶解於二氯甲烷中，滴加三氟乙酸，製備得到式(D)化合物；第三步，縮合劑和鹼存在條件下，式(D)化合物與式(E)化合物發生縮合反應生成式(F)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙 基乙胺；第四步，式(F)化合物溶解於四氫呋喃中，加入氫氧化鋰水溶液，製備得到式(G)化合物；第五步，縮合劑、氯化銅(較佳為二水氯化銅)和鹼存在條件下，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第六步，式(I)化合物溶解於四氫呋喃中，加入氫氧化鋰水溶液，製備得到式(J)化合物；第七步，縮合劑、氯化銅(較佳二水氯化銅)和鹼存在條件下，式(J)化合物與式(K)化合物反應生成式(L)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第八步，式(L)化合物溶解於二氯甲烷中，滴加三氟乙酸，製備得到式(M)化合物；第九步，將式(M)化合物溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；滴加氨水至水相，調節水相pH=10-11，使反應液pH值維持在9-10，製得化合物(N)。
根據本發明一些具體實施方案，其中，第一步、第三步、第五步和第七步中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、 1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物，反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為N,N-二異丙基乙胺；反應溫度選自-5~30℃； 根據本發明一些具體實施方案，其中，第九步在反應結束後還包括後處理的步驟，所述後處理步驟包括：(1)將第九步的反應結束後的反應液靜置分層，水相用二氯甲烷溶液萃取、分液，有機相經矽藻土過濾，濾液於30±5℃減壓濃縮，得到濃縮液；(2)取矽膠(較佳200-300目矽膠)、二氯甲烷濕法裝柱，以二氯甲烷和無水甲醇(體積比=50：1~5：1)作為沖提液，將步驟(1)得到的濃縮液柱層析沖提(梯度沖提)；收集沖提流份，控溫在30±5℃以下減壓濃縮流份，得到濃縮液；(3)15±5℃條件下，將步驟(2)得到的濃縮液溶解於乙醇中，滴加HA進行反應；20±5℃、攪拌條件下，向反應液中滴加甲基叔丁基醚，析出晶體，氮氣保護下過濾，濾餅用甲基叔丁基醚洗滌；(4)10±5℃條件下，將步驟(3)得到的濾餅溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；滴加氨水至水相，調節水相pH=10-11，使反應液pH值維持在9-10；反應完畢，靜置分層，水相用二氯甲烷溶液萃取、分液，有機相經矽藻土過濾，濾液於30±5℃減壓濃縮，得到濃縮液；20±5℃條件下，將該濃縮液用甲醇和純化水(體積比=1：8-1：5)的混合溶液溶解、玻砂漏斗過濾、合併濾液，濾液轉入凍乾機中凍乾，得到所示化合物(N)。
P為氨基保護基；較佳選自叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基；更較佳為叔丁氧羰基。
除非有相反的陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
本發明中反應的後處理中使用萃取的方法為本領域常規方法，萃取的溶劑可根據產物的溶解度以及有機溶劑在水中的溶解度進行選擇，常見的 萃取溶劑包括但不限於二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸異丙酯、乙醚、異丙醚、甲基叔丁基醚、甲醇和乙醇中的一種或兩種以上的混合溶劑。萃取的次數可根據產物殘留在水相中的量適當的增減。萃取後的有機相任選進一步採用本領域常規的洗滌或/和乾燥處理。
本發明所述基團和化合物中所涉及的元素碳、氫、氧、硫、氮或鹵素均包括它們的同位素情況，及本發明所述基團和化合物中所涉及的元素碳、氫、氧、硫或氮任選進一步被1至5個它們對應的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氫)、氚(T，又叫超重氫)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“可選擇性地”或“作為選擇”，意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，包括該事件或環境發生或不發生的場合。
本發明中，HATU，是2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。COMU，是(1-氰基-2-乙氧基-2-氧乙基亞甲氧基)二甲氨基嗎啉碳六氟磷酸鹽。BOP，是苯並三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽。
本發明反應過程通過HPLC、HNMR或薄層色譜法跟蹤反應進程，判斷反應是否結束。
本發明中，所述內溫表示反應體系溫度。
以下結合實施例詳細說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但是不限於此。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或(和)質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用(BrukerAvance III 400和BrukerAvance 300)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，氘代乙腈(CD3CN)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI)。
HPLC的測定使用安捷倫1260DAD高壓液相色譜儀(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
本發明的己知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買於泰坦科技、安耐吉化學、上海德默、成都科隆化工、韶遠化學科技、百靈威科技等公司。
本發明矽膠柱層析所示比例為體積比。
室溫為20℃~30℃。
Boc為叔丁基羰基。
HOBT為1-羥基苯並三唑。
EDC.HCl為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。DHOBT或者DHOBt：3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮，CAS號為28230-32-2。
HATU：2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，CAS號為148893-10-1。
COMU：(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基氨基氧基)二甲基氨基-嗎啉-碳鎓六氟磷酸鹽，CAS號為1075198-30-9。
BOP：苯並三氮唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸鹽，CAS號為56602-33-6。
實施例1
7-(D-苯丙氨醯基-D-苯丙氨醯基-D-亮氨醯-D-賴氨醯)-2-乙醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷(N)
(R)-N-((R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-6-amino-1-oxohexan-2-yl)-2-((R)-2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanamide(N)
Figure 109131022-A0305-02-0024-18
第一步：(R)-甲基2-((R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯基丙氨基)-4-甲基戊二酸(C)
(R)-methyl 2-((R)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanoate(C)
Figure 109131022-A0305-02-0024-19
向反應釜中依次加入化合物(A)0.362kg，化合物(B)0.53kg，0.284kg HOBT和12.00kg二氯甲烷，攪拌降溫至5±5℃。保溫至5±5℃，加入0.46kg EDC.HCl。加畢，滴加0.31kgN,N-二異丙基乙胺。加畢，使其自然升溫15±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(B)含量)，直到化合物(B)含量
Figure 109131022-A0305-02-0024-43
0.5%，停止反應。反應完畢，用7.0%碳酸氫鈉水溶液5.00kg淬滅反應。靜 置分層，合併有機相轉入反應釜中，依次用5.00kg 1mol/L鹽酸溶液，5.00kg 7.0%碳酸氫鈉溶液洗滌。攪拌下向有機相中加入3.00kg純化水，攪拌後靜置分液。合併有機相在35±5℃減壓濃縮。向濃縮液加入乙酸乙酯0.73kg溶解，加入正己烷4.22kg，攪拌析晶，過濾，濾餅用0.66kg正己烷淋洗。收集濾餅並稱重得化合物(C)類白色固體0.665kg，收率83.4%。
HPLC：99.56%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.28-7.20(m,5H),4.53-4.46(m,1H),4.33-4.30(m,1H),3.68(s,3H),3.12-3.09(m,1H),3.07-2.80(m,1H),1.68-1.58(m,3H),1.36(s,9H),0.95-0.90(m,6H)。
LCMS m/z=393.2[M+1]。
第二步：(R)-甲基2-((R)-2-氨基-3-苯丙醯胺基)-4-甲基戊二酸2,2,2-三氟乙酸(D)
(R)-methyl 2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanoate 2,2,2-trifluoroacetate(D)
Figure 109131022-A0305-02-0025-20
向反應釜中加入2.62kg二氯甲烷和0.662kg化合物(C)，攪拌降溫至5±5℃。保溫5±5℃下，滴加1.54kg三氟乙酸。加畢，自然升溫15±5℃反應約4小時後取樣中控(監測化合物(C)含量)，直到化合物(C)含量
Figure 109131022-A0305-02-0025-44
0.5%，停止反應。將反應液控溫在35±5℃以下減壓濃縮。攪拌下，將濃縮剩餘物轉入盛有5.30kg甲基叔丁基醚的反應釜中。攪拌析晶，過濾，用甲基叔丁基醚0.70kg洗滌濾餅。合併濾餅真空乾燥約12小時。得化合物(D)0.66kg類白色固體，收率95%。
HPLC：99.70%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.38-7.31(m,5H),4.52-4.50(m,1H),4.14- 4.12(m,1H),3.71(s,3H),3.31-3.30(m,1H),3.05-3.03(m,1H),1.65-1.61(m,3H),0.97-0.92(m,6H)。
LCMS m/z=293.2[M+1]。
第三步：(6R,9R,12R)-甲基6,9-二苄基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三氧雜-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三-13-酸(F)
(6R,9R,12R)-methyl 6,9-dibenzyl-12-isobutyl-2,2-dimethyl-4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-oate(F)
Figure 109131022-A0305-02-0026-21
向反應釜中依次加入0.66kg化合物(D)，0.43kg化合物(E)，0.23kg HOBT和8.75kg二氯甲烷，加畢，攪拌降溫至5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加0.25kg N,N-二異丙基乙胺。保溫5±5℃下，加入0.37kg EDC.HCl。加畢，升溫15±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(D)含量)直到化合物(D)含量
Figure 109131022-A0305-02-0026-45
0.3%，停止反應。反應完畢，用7.0%碳酸氫鈉水溶液5.00kg淬滅反應。靜置分層，合併有機相轉入反應釜中，依次用5.00kg 1mol/L鹽酸水溶液和5.00kg 7.0%碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機相中加入2.50kg純化水，攪拌後靜置分液。合併有機相在35±5℃減壓濃縮。向濃縮液加入1.62kg乙酸乙酯，加入5.94kg正己烷攪拌析晶。過濾，濾餅用0.66kg正己烷洗滌，收集濾餅。合併濾餅減壓乾燥得化合物(F)類白色固體0.780kg，收率89%。
HPLC：99.28%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.28-7.16(m,10H),4.67-4.66(m,1H),4.46-4.43(m,1H),4.23-4.22(m,1H),3.68(s,3H),3.12-3.09(m,1H),2.99-2.98(m,1H),2.97-2.95(m,1H),1.66-1.58(m,3H),1.34(s,9H),0.94-0.89(m,6H)。
LCMS m/z=540.2[M+1]。
第四步：(6R,9R,12R)-6,9-二苄基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三 氧雜-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三烷-13-酸(G)
(6R,9R,12R)-6,9-dibenzyl-12-isobutyl-2,2-dimethyl-4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11-triazatridecan-13-oic acid(G)
Figure 109131022-A0305-02-0027-22
向反應釜中加入6.66kg四氫呋喃和0.76kg化合物(F)，攪拌降溫至0±5℃。保溫0±5℃，滴加71.00g氫氧化鋰(一水)和2.50kg純化水混合液。約1小時滴加完全。加畢，繼續保溫0±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(F)含量)，直到化合物(F)含量
Figure 109131022-A0305-02-0027-41
0.2%，停止反應。保溫0±5℃，加入6.31kg乙酸乙酯，用3.0mol/L鹽酸水溶液調節反應液pH至3-4左右。分液，有機相用10%氯化鈉溶液(3.00kg×1)洗滌。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥。過濾，用0.90kg乙酸乙酯洗滌濾餅，合併濾液。將濾液控溫在40±5℃以下減壓濃縮。精製：向濃縮液加入3.33kg乙酸乙酯，加入4.88kg正己烷攪拌析晶。過濾，濾餅用0.66kg正己烷洗滌，收集濾餅。取樣檢測有關物質和異構體，如果異構體>0.3%，則重新精製直至異構體
Figure 109131022-A0305-02-0027-42
0.3%。合併濾餅真空乾燥。得化合物類白色固體(G)0.716kg，收率95%。
HPLC：99.50%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.25-7.16(m,10H),4.68-4.66(m,1H),4.25-4.23(m,1H),4.12-4.10(m,1H),3.15-3.12(m1H),3.02-3.01(m,1H),2.98-2.93(m,1H),1.64-1.61(m,3H),1.33(s,9H),0.94-0.88(m,6H)。
LCMS m/z=526.4[M+1]。
第五步：(6R,9R,12R,15R)-甲基6,9-二苄基-15-(4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四氧代-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸鹽(I)
(6R,9R,12R,15R)-methyl 6,9-dibenzyl-15-(4-((tert-butoxycarbonyl) amino)butyl)-12-isobutyl-2,2-dimethyl-4,7,10,13-tetraoxo-3-oxa-5,8,11,14-tetraazahexadecan-16-oate(I)
Figure 109131022-A0305-02-0028-23
向反應釜中加入化合物(G)0.508kg，化合物(H)0.30kg,HOBT 0.132kg和二氯甲烷9.45kg。開啟攪拌並降溫到5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加N,N-二異丙基乙胺0.187kg。加畢，加入氯化銅(二水)0.198kg。保溫5±5℃，加入EDC.HCl 0.223kg。加畢，繼續保溫攪拌約10分鐘。升溫15±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(G)含量)，直到HPLC檢測化合物(G)
Figure 109131022-A0305-02-0028-48
0.3%，停止反應。反應完畢用稀氨水溶液(3.50kg×2)淬滅反應。靜置，分出有機相。攪拌下向有機相中加入2.50kg 1mol/L鹽酸水溶液，攪拌後靜置分液。用7.0%碳酸氫鈉水溶液2.50kg洗滌有機相。靜置分層，合併有機相轉入反應釜中。取樣有機相檢測化合物(G)，如果化合物(G)>0.2%，再用7.0%碳酸氫鈉(2.0kg×1)洗一次。攪拌下向有機相中加入3.00kg純化水，攪拌後靜置分液。合併有機相在30±5℃減壓濃縮。精製：將濃縮液用二氯甲烷4.65kg加熱至30±5℃溶解後，轉入反應釜中。降溫至5±5℃，滴加正己烷5.80kg，攪拌析晶。過濾，濾餅用0.66kg正己烷淋洗，收集濾餅。取樣中控至化合物(G)
Figure 109131022-A0305-02-0028-49
0.1%；否則，繼續化合物(I)精製工藝再次精製直至符合品質標準。合併濾餅控溫減壓乾燥。得化合物(I)類白色固體0.686kg，收率94%計算。
HPLC：99.54%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.25-7.18(m,10H),4.68(m,1H),4.42(m,1H),4.36(m,1H),4.23(m,1H),3.70(s,3H),3.12-3.01(m,5H),2.73-2.71(m,1H),1.68-1.58(m,5H),1.36(s,22H),0.93-0.92(m,6H)。
LCMS m/z=768.4[M+1]。
本發明對化合物(G)製備化合物(I)步驟中加入氯化銅(二水)的條件進行了篩選優化，具體見表1所示。
向反應釜中加入化合物(G)1.58g，化合物(H)0.89g，HOBT 0.49g和二氯甲烷30ml。開啟攪拌並降溫到5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加N,N-二異丙基乙胺0.50g。加畢，加入氯化銅(二水)0.61g。保溫5±5℃，加入EDC.HCl 0.69g。加畢，繼續保溫攪拌約10分鐘。升溫15±5℃，反應約2小時後取樣開始中控，分別記錄2、4、6小時內化合物(I)有關物質變化情況。
向反應釜中加入化合物(G)2.63g，化合物(H)1.43g，HOBT 0.68g和二氯甲烷30ml。開啟攪拌並降溫到5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加N,N-二異丙基乙胺0.78g。加畢，加入EDC.HCl 1.00g。加畢，繼續保溫攪拌約10分鐘。升溫15±5℃，反應約2小時後取樣開始中控，分別記錄2、4、6小時內化合物(I)有關物質變化情況。
Figure 109131022-A0305-02-0029-24
Figure 109131022-A0305-02-0030-25
通過上表資料表明：在反應中加入了1.0-1.2當量氯化銅(二水)，有利於掌性化合物構型保持，使得生成中間體的非對映異構體得到有效控制，隨著肽鏈的增加異構體純化除去難度加大。
第六步：(6R,9R,12R,15R)-6,9-二苄基-15-(4-((叔丁氧羰基)氨基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四氧代-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-酸(J)
(6R,9R,12R,15R)-6,9-dibenzyl-15-(4-((tert-butoxycarbonyl)amino)butyl)-12-isobutyl-2,2-dimethyl-4,7,10,13-tetraoxo-3-oxa-5,8,11,14-tetraazahexadecan-16-oic acid(J)
Figure 109131022-A0305-02-0030-26
向反應釜中加入四氫呋喃5.80kg和化合物(I)0.68kg。開啟攪拌並降溫到0±5℃。滴加氫氧化鋰(一水)45.50g和純化水2.00kg混合液，滴加過程中保溫0±5℃。加畢，繼續保溫0±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(I)含量)，直到HPLC檢測到化合物(I)含量
Figure 109131022-A0305-02-0030-50
0.2%，停止反應。保溫0±5℃，加入6.30kg乙酸乙酯並滴加3.0mol/L鹽酸水溶液1.20kg，調節反應液pH至3-4。分液，水相再用乙酸乙酯(2.70kg×1)萃取一次。合併有機相，用10%氯化鈉水溶液(3.00kg×l)洗滌。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥有機相。過濾，用乙酸乙酯1.50kg洗滌濾餅，合併濾液。將濾液減壓濃縮。向20L濃縮瓶中加入乙酸乙酯6.10kg攪拌溶解後，加入正己烷4.86kg攪拌析晶，過濾，收集濾餅。合併濾餅於減壓乾燥。得到化合物(J)類白色固體0.636kg，收率92%。
HPLC：99.26%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.25-7.17(m,10H),4.64(m,1H),4.44(m,1H),4.35(m,1H),4.24(m,1H),3.70(s,3H),3.10-3.01(m,5H),2.99-2.98(m,1H),1.63-1.45(m,5H),1.36(s,22H),0.95-0.91(m,6H)。
LCMS m/z=754.2[M+1]。
第七步：(L)叔丁基((10R,13R,16R,19R)-10-(2-乙醯基-2,7-二氮螺環[3.5]壬烷-7-羰基)-16-苄基-13-異丁基-2,2-二甲基-4,12,15,18-四氧代-20-苯基-3-氧代-5,11,14,17-四氮雜基-19-基)氨基甲酸酯化合物(L)
(L)tert-butyl((10R,13R,16R,19R)-10-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-16-benzyl-13-isobutyl-2,2-dimethyl-4,12,15,18-tetraoxo-20-phenyl-3-oxa-5,11,14,17-tetraazaicosan-19-yl)carbamate
Figure 109131022-A0305-02-0031-27
向反應釜中加入化合物(J)0.634kg，化合物(K)0.191kg，HOBT 0.121kg和二氯甲烷15.00kg。開啟攪拌並降溫到5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加N,N-二異丙基乙胺0.128kg。加畢，加入氯化銅(二水)0.171kg。保持內溫5±5℃，加入EDC.HCl 0.19kg。加畢並繼續攪拌約10分鐘。升溫15±5℃，反應約3小時後取樣中控(監測化合物(J)含量)，中控反應液待兩次取樣檢測結果變化不超過1.0%時停止反應。反應完畢，用稀氨水溶液(2.80kg×2)淬滅反應。靜置，分出有機相。攪拌下向有機相中加入2.50kg 1mol/L鹽酸水溶液，靜置分液，有機相轉入反應釜中。用7.0%碳酸氫鈉水溶液2.50kg洗滌有機相。靜置分層，合併有機相轉入反應釜中。攪拌下向有機相中加入3.00kg純化水，攪拌後靜置分液。有機相加入活性炭80.00g脫色。墊矽藻土0.5kg，過濾，用二氯甲烷1.50kg洗滌濾餅，合併濾液。合併有機相在30±5℃減壓濃縮。向20L濃縮瓶中加入二氯甲烷1.23kg，攪拌下加入甲基叔丁基醚4.15kg，攪拌打漿。再加入正己烷3.20kg 攪拌打漿。過濾，濾餅用正己烷1.20kg洗滌，收集濾餅。合併濾餅減壓乾燥。得化合物(L)淺黃色固體0.642kg，收率92%。
HPLC：95.13%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.28-7.16(m,10H),4.62(m,1H),4.41(m,1H),4.21(m,1H),3.60-3.48(m,2H),3.45-3.43(m,4H),3.31-3.30(m,2H),3.10-3.01(m,5H),2.99-2.98(m,1H),,1.83(m,4H),1.74(m,3H),1.7(m,4H),1.36(s,22H),0.93-0.90(m,6H)。
LCMS m/z=904.5[M+1]。
第八步：(M)7-(D-苯丙氨醯基-D-苯丙氨醯基-D-亮氨醯-D-賴氨醯)-2-乙醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷二三氟乙酸鹽(M)
(M)(R)-N-((R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-6-amino-1-oxohexan-2-yl)-2-((R)-2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanamide Ditrifluoroacetic acid(M)
Figure 109131022-A0305-02-0032-28
向反應釜中加入二氯甲烷9.28kg，然後加入化合物(L)0.70kg。保持內溫15℃±5℃，滴加三氟乙酸5.37kg到反應釜中，約1小時滴加完畢。升溫至20℃±5℃，反應約4小時後取樣中控(監測化合物(L)含量)，直到HPLC檢測化合物(L)
Figure 109131022-A0305-02-0032-46
0.5%，停止反應。將反應液於30±5℃減壓濃縮將濃縮液用無水甲醇5.54kg溶解後，滴加甲基叔丁基醚15.54kg攪拌析晶。氮氣保護下過濾，濾餅用甲基叔丁基醚0.74kg洗滌，得到化合物(M)0.61kg，收率85%。
HPLC：99.05%。
本發明對化合物(J)製備化合物(L)，再由化合物(L)製備化合物(M)的步驟加入氯化銅(二水)的條件進行了篩選優化，具體見表2所示。
化合物(J)合成化合物(L)：向反應釜中加入化合物(J)2.26g，化合物(K)0.612g，HOBT 0.49g和二氯甲烷30ml。開啟攪拌並降溫到5±5℃。保持內溫5±5℃，滴加N,N-二異丙基乙胺0.50g。加畢，加入氯化銅(二水)0.61g。保持內溫5±5℃，加入EDC.HCl 0.69g。加畢並繼續攪拌約10分鐘。升溫15±5℃，反應約3小時後取樣中控，中控反應液待兩次取樣檢測結果變化不超過1.0%時停止反應。反應完畢，用稀氨水溶液(40ml×2)淬滅反應。靜置，分出有機相。攪拌下向有機相中加入25ml 1mol/L鹽酸水溶液，靜置分液，有機相轉入反應釜中。用7.0%碳酸氫鈉水溶液25ml洗滌有機相。靜置分層，合併有機相轉入反應釜中。攪拌下向有機相中加入30ml純化水，攪拌後靜置分液。墊矽藻土5.00g，過濾，用二氯甲烷20ml洗滌濾餅，合併濾液。合併有機相在30±5℃減壓濃縮。向濃縮瓶中加入二氯甲烷10ml，攪拌下加入甲基叔丁基醚40ml，攪拌打漿。再加入正己烷60ml攪拌打漿。過濾，濾餅用正己烷20ml洗滌，收集濾餅。合併濾餅減壓乾燥。得化合物(L)3.60g，收率95%。
化合物(L)合成化合物(M)：向反應釜中加入二氯甲烷10ml，然後加入化合物(L)1.50g。保持內溫15℃±5℃，滴加三氟乙酸5.0ml到反應釜中，約1小時滴加完畢。升溫至20℃±5℃，反應約4小時後取樣中控，取樣檢測有關物質變化情況，資料統計見下表。
Figure 109131022-A0305-02-0033-29
通過上表資料表明：在反應中加入了0.3-1.2當量氯化銅(二水)，有利於掌性化合物構型保持，使得生成中間體的非對映異構體得到有效控制，隨 著肽鏈的增加異構體純化除去難度加大，異構體含量越多精製純化收率越低，綜合考慮合成五肽時加入加入0.3-1.2當量氯化銅(二水)保持異構體構型。
第九步：7-(D-苯丙氨醯基-D-苯丙氨醯基-D-亮氨醯-D-賴氨醯)-2-乙醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷(N)
(R)-N-((R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-6-amino-1-oxohexan-2-yl)-2-((R)-2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanamide(N)
Figure 109131022-A0305-02-0034-30
開啟攪拌，將5.20kg純化水抽入反應釜中，控溫10±5℃。加入上步化合物(M)的濕品(未乾燥)0.52Kg。用二氯甲烷(2.50kg×2)萃取水相。保溫10±5℃，滴加氨水溶液0.60kg到反應釜中，調節水相pH=10-11，用pH計測定反應液pH值，如果pH值降低後，及時補加氨水使反應液pH值維持在9-10。靜置分層，水相用二氯甲烷(3.00kg×3次)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌有機相一次。有機相用無水硫酸鈉乾燥、矽藻土過濾，濾餅用二氯甲烷2.50kg洗滌。合併有機相在30±5℃減壓濃縮。稱取200-300目矽膠重量約濃縮液質量的2.5-3.0倍，採用二氯甲烷濕法裝柱，將濃縮液倒入矽膠柱中，依次用二氯甲烷約6.12kg、二氯甲烷和無水甲醇(體積比50：1~5：1)混合溶液梯度沖提(先用二氯甲烷和無水甲醇(體積比50：1約6.02kg)沖提，然後用二氯甲烷和無水甲醇(體積比20：1約3.06kg)沖提，分別收集。此為前組分，主要是雜質。再用二氯甲烷和無水甲醇(體積比20：1約3.06kg)沖提後，將沖提液變為二氯甲烷和無水甲醇(體積比10：1約15.30kg)，二氯甲烷和無水甲醇(體積比8：1約9.18kg)，二氯甲烷和無水甲醇(體積比7：1約9.18kg)，二氯甲烷和無水甲醇(體積比6：1約9.18kg)，二氯甲烷和無水甲醇(體積比5：1約6.15kg)沖提。用5L燒杯依次收集洗滌液，送檢有關物質。將符合收集標準的洗滌液合併，控溫在30±5℃ 以下減壓濃縮至無明顯餾分流出)。收集沖提液控溫在30±5℃以下減壓濃縮。控溫在20±5℃，將濃縮液控溫用甲醇和純化水(300ml：2400ml)混合溶液攪拌溶解，通過玻砂漏斗過濾，用純化水和甲醇(體積比=10：1)混合溶液洗滌濾餅。合併濾液，轉入凍乾機中凍乾，得到類白色粉末化合物(N)0.262kg，收率26.40%。
HPLC：99.46%。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.27-7.20(m,10H),4.86-4.84(m,1H),4.69-4.66(m,1H),4.45-4.41(m,1H),3.96-3.92(m,2H),3.73-3.63(m,4H),3.54-3.40(m,3H),3.15-3.11(m,1H),2.96-2.88(m,2H),2.64-2.57(m,3H),1.87(s,3H),1.83-1.74(m,5H),1.63-1.57(m,4H),1.52-1.36(m,4H),0.95-0.90(m,6H)。
LCMS m/z=352.8,704.5[M+1]。
實施例2
第一步：(L)叔丁基((10R,13R,16R,19R)-10-(2-乙醯基-2,7-二氮螺環[3.5]壬烷-7-羰基)-16-苄基-13-異丁基-2,2-二甲基-4,12,15,18-四氧代-20-苯基-3-氧代-5,11,14,17-四氮雜基-19-基)氨基甲酸酯化合物(L)
(L)tert-butyl((10R,13R,16R,19R)-10-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carbonyl)-16-benzyl-13-isobutyl-2,2-dimethyl-4,12,15,18-tetraoxo-20-phenyl-3-oxa-5,11,14,17-tetraazaicosan-19-yl)carbamate
Figure 109131022-A0305-02-0035-31
向反應瓶中加入化合物(J)0.634g，化合物(K)0.191g，DHOBt0.165g和二氯甲烷25mL。開啟磁力攪拌並降溫至0-5℃。保持內溫0-5℃，滴加2,2,6,6-四甲基呱啶0.38mL。保持內溫0-5℃，加入COMU 0.433g的DMF溶液2.0mL。加畢後，保持內溫0-5℃，繼續反應2小時後取樣中控(監測化合物(J)含量)，中控反應液中原料小於0.5%後，停止反應。反應完畢後，向體系中加 入7%碳酸氫鈉水溶液25mL，淬滅反應。靜置，分液，收集有機相。以1N鹽酸水溶液25mL洗滌有機相，靜置，分液，收集有機相。再以飽和食鹽水20mL洗滌有機相，靜置，分液，收集有機相，以無水硫酸鈉乾燥。減壓移除溶劑，向濃縮瓶中加入二氯甲烷3.0mL，攪拌溶解。攪拌下向其中加入甲基叔丁基醚12.0mL，攪拌打漿，再加入正己烷12.0mL攪拌打漿。抽濾，濾餅以正己烷3.0mL洗滌，收集濾餅，減壓乾燥，得化合物(L)白色固體0.67g，收率88%。
HPLC：98.85%。
第二步：(M)7-(D-苯丙氨醯基-D-苯丙氨醯基-D-亮氨醯-D-賴氨醯)-2-乙醯基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷二三氟乙酸鹽(M)
(M)(R)-N-((R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-6-amino-1-oxohexan-2-yl)-2-((R)-2-((R)-2-amino-3-phenylpropanamido)-3-phenylpropanamido)-4-methylpentanamide Ditrifluoroacetic acid
Figure 109131022-A0305-02-0036-32
向反應瓶中加入化合物(L)0.20g，然後加入二氯甲烷10mL，開啟攪拌。室溫下，向反應瓶中加入三氟乙酸1.0mL。滴畢，反應4小時後取樣中控(監測化合物(L)含量)，至HPLC檢測化合物(L)
Figure 109131022-A0305-02-0036-47
0.5%，停止反應。減壓移除溶劑，向濃縮瓶中加入甲醇3.0mL，攪拌溶解，滴加甲基叔丁基醚9mL，攪拌析晶。抽濾，收集濾餅，以甲基叔丁基醚1.0mL洗滌濾餅，真空乾燥，得化合物(M)0.18g，收率87%。
HPLC：99.02%。
實施例3
第一步：向反應釜中加入實施例1步驟九得到的化合物(N) 0.36kg和無水乙醇2.84kg，控溫15±5℃。開啟攪拌，攪拌約1.0小時使固體完全溶解。保溫15±5℃下，滴加三氟乙酸0.13kg。加畢繼續攪拌約0.5小時。控溫20±5℃，滴加甲基叔丁基醚8.0kg約1.5小時滴加完畢。攪拌、析晶約0.5小時。氮氣保護下過濾，濾餅用甲基叔丁基醚0.74kg洗滌。取樣送檢測，如果化合物(N)三氟乙酸鹽粗品有關物質不符合品質標準，繼續再結晶工藝(無水乙醇溶解，並滴加甲基叔丁醚析出結晶)再次再結晶(質量記為0.40kg收率以理論幹品重量85%計)送檢有關物質，如果不符合濃縮液標準繼續以下操作。向反應釜中加入前面得到的化合物(N)三氟乙酸鹽粗品0.40kg和無水乙醇3.16kg，控溫至15±5℃，攪拌約0.5小時。降溫15±5℃，滴加甲基叔丁基醚8.88kg，約2小時滴加完畢。攪拌析晶約0.5小時。氮氣保護下過濾，濾餅用甲基叔丁基醚0.74kg洗滌。取樣送檢測，如果仍不符合濃品質標準，繼續重複精製純化操作得到化合物(N)三氟乙酸精濕品3.2kg。
第二步：開啟攪拌，將3.2kg純化水抽入反應釜中，控溫10±5℃。加入上步化合物(N)三氟乙酸精濕品0.32kg。攪拌約0.5小時使固體完全溶解。用二氯甲烷(0.96kg×2)萃取水相。保溫10±5℃，滴加氨水溶液0.16kg到反應釜中，調節水相pH=9-10並攪拌約0.5小時。每隔約20分鐘用pH計測定反應液pH值，如果pH值降低後，及時補加氨水使反應液pH值維持在9-10。靜置分層，水相用二氯甲烷(3.2kg×3)次萃取。合併有機相，用1.00kg食鹽水(配製方法：0.1kg氯化鈉+0.90kg純化水)洗滌有機相一次。有機相中無水硫酸鈉0.50kg乾燥約0.5小時。濾餅用二氯甲烷1.50kg洗滌。合併洗滌液，控溫在30±5℃以下減壓濃縮至無明顯餾分流出。控溫在20±5℃，將濃縮液控溫用甲醇和純化水(體積比=1：8-1：5)約1.50kg攪拌約0.5小時後完全溶解，通過玻砂漏斗過濾，用純化水和甲醇(體積比=10：1)洗滌濾餅。合併濾液，轉入凍乾機中凍乾。(分4個2L單口瓶，每個瓶子約400mL)凍乾機參數設定，取樣中控，控制水分含量<2%。(凍乾過程中約每4小時記錄一次溫度、真空度；約120小時取樣檢測水分含量)。取樣送檢測，如果水分不符合品質標準，則用繼續凍乾直到符合 精品品質標準。取樣送檢測，如果水分不符合品質標準，則用繼續凍乾直到符合精品品質標準。得化合物(N)成品(0.16kg，收率26%)HPLC：99.7%。
Figure 109131022-A0101-11-0001-2

Claims (15)

  1. 一種式(L)化合物的製備方法，所述方法包括以式(J)化合物和式(K)化合物為原料，在縮合劑和氯化銅存在下製備得到式(L)化合物
    Figure 109131022-A0305-02-0039-33
     反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；P為氨基保護基。
  2. 根據請求項1所述的製備方法，其中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-5~30℃。
  3. 根據請求項1所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(J)化合物的製備，包括：以式(I)化合物為原料製備式(J)化合物，
    Figure 109131022-A0305-02-0040-34
     反應使用的鹼選自KOH、NaOH、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、甲醇鈉或乙醇鈉；反應使用的溶劑選自乙醇、甲醇、四氫呋喃、二甲硫醚、乙酸乙酯、乙腈或水中的任一種或任幾種的混合物；P為氨基保護基。
  4. 根據請求項3所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(I)化合物的製備，包括：在縮合劑和氯化銅存在下，以式(G)化合物和式(H)化合物為原料製備得到式(I)化合物，
    Figure 109131022-A0305-02-0040-35
     反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、N,N'-羰基二咪唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；P為氨基保護基。
  5. 根據請求項4所述的製備方法，其中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-5~30℃。
  6. 根據請求項4所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(G)化合物的製備，包括：以式(F)化合物為原料製備式(G)化合物，
    Figure 109131022-A0305-02-0041-36
     反應使用的鹼選自KOH、NaOH、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、甲醇鈉或乙醇鈉；反應使用的溶劑選自乙醇、甲醇、四氫呋喃、二甲硫醚、乙酸乙酯、乙腈或水中的任一種或任幾種的混合物；P為氨基保護基。
  7. 根據請求項6所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(F)化合物的製備，包括：在縮合劑存在下，以式(D)化合物為原料製備式(F)化合物，
    Figure 109131022-A0305-02-0041-37
     反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺 鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；HA選自鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸。
  8. 根據請求項7所述的製備方法，其中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-5~30℃；HA選自三氟乙酸。
  9. 根據請求項7所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(D)化合物的製備，包括：以式(C)化合物為原料製備式(D)化合物，
    Figure 109131022-A0305-02-0042-38
     該方法包括：式(C)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸的存在下，製備得到式(D)化合物。
  10. 根據請求項7所述的製備方法，其中，所述方法還包括式(C)所示的化合物的製備，包括：在縮合劑存在下，以式(A)化合物為原料製備式(C)化合物
    Figure 109131022-A0305-02-0043-39
     反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物。
  11. 根據請求項10所述的製備方法，其中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應溫度選自-5~30℃。
  12. 一種式(N)所示化合物的製備方法，其中所述的方法包括以下步驟：第一步，式(A)化合物與式(B)化合物發生縮合反應生成式(C)化合物；第二步，式(C)化合物氮原子上氨基保護基脫去後生成式(D)化合物；第三步，式(D)化合物與式(E)化合物發生縮合反應生成式(F)化合物；第四步，式(F)化合物水解得到式(G)化合物；第五步，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物；第六步，式(I)化合物水解得到式(J)化合物；第七步，式(J)化合物與式(K)化合物反應生成式(L)化合物；第八步，式(L)化合物氮原子上氨基保護基脫去後生成式(M)化合物； 第九步，式(M)化合物經鹼游離後生成化合物(N)；
    Figure 109131022-A0305-02-0044-40
     其中，HA選自鹽酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸，苯磺酸或甲磺酸；n選自1、2或3；P為氨基保護基。
  13. 根據請求項12所述的製備方法，其中，所述的方法包括以下步驟：第一步，縮合劑和鹼存在條件下，式(A)化合物與式(B)化合物發生縮合反應 生成式(C)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第二步，式(G)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸存在下，製備得到式(D)化合物；第三步，縮合劑和鹼存在條件下，式(D)化合物與式(E)化合物發生縮合反應生成式(F)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第四步，式(F)化合物在四氫呋喃和氫氧化鋰存在下，製備得到式(G)化合物；第五步，縮合劑、氯化銅和鹼存在條件下，式(G)化合物與式(H)化合物發生縮合反應生成式(I)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第六步，式(I)化合物在四氫呋喃和氫氧化鋰的存在下，製備得到式(J)化合物；第七步，縮合劑、氯化銅和鹼存在條件下，式(J)化合物與式(K)化合物反應生成式(L)化合物；反應使用的縮合劑選自HATU、COMU、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑、2,2,6,6-四甲基呱啶、3-羥基-1,2,3-苯並三嗪-4(3H)-酮或者BOP中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷、二甲基亞碸、四氫呋喃或乙腈中的任 一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為三乙胺或N,N-二異丙基乙胺；第八步，式(L)化合物在二氯甲烷和三氟乙酸的存在下，製備得到式(M)化合物；第九步，將式(M)化合物溶解於水中，加入二氯甲烷溶液萃取、分液，收集水相；滴加氨水至水相，調節水相pH=10-11，使反應液pH值維持在9-10，製得化合物(N)。
  14. 根據請求項13所述的製備方法，其中，第一步、第三步、第五步和第七步中，反應使用的縮合劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯並三唑中的任一種或任幾種的混合物，反應使用的溶劑選自N,N-二甲基甲醯胺、二氯甲烷中的任一種或任幾種的混合物；反應使用的鹼為N,N-二異丙基乙胺；反應溫度選自-5~30℃。
  15. 根據請求項14所述的方法，其中P選自叔丁氧羰基、N-苄氧羰基或9-芴甲氧羰基。
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