CN109069869B - 双环pad4抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可用作PAD4抑制剂的化合物、其组合物以及治疗PAD4相关病症的方法。

Description

双环PAD4抑制剂
发明背景
PAD4是能够在肽序列内催化精氨酸到瓜氨酸的瓜氨酸化的酶的肽基精氨酸去亚胺酶(PAD)家族的成员。PAD4负责各种蛋白质在体外和体内的去亚胺化或瓜氨酸化，其结果为产生各种疾病中的不同功能反应(JonesJ.E.等人，Curr.Opin.DrugDiscov.Devel.,12(5),(2009),616-627)。示例性疾病的实例包括类风湿性关节炎、嗜中性细胞对发病具有贡献的疾病(例如血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎)以及肿瘤学适应症。PAD4抑制剂还作为经由后生机制用于人类疾病的工具及治疗剂具有较宽适应性。
PAD4抑制剂具有针对类风湿性关节炎(RA)的用途。RA是影响大约1％的群体的自体免疫疾病(WegnerN.等人，Immunol.Rev.,233(1)(2010),34-54)。其特征在于导致骨和软骨衰弱性破坏的关节炎症。尽管不一致，已在诸多群体研究中展现PAD4多型性与RA易感性之间的弱基因相关性(Kochi Y.等人，Ann.Rheum.Dis.,70,(2011),512-515)。已在滑液组织中检测到PAD4(以及家族成员PAD2)，其中其负责各种接头蛋白的去亚胺化。猜想此过程导致对RA关节中的瓜氨酸化底物(例如纤维蛋白原、波形蛋白和胶原)的耐受性消失且引发其免疫反应。这样的抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)有助于疾病发病且还可用作用于RA的诊断测试(例如市售CCP2或环状瓜氨酸化蛋白2测试)。另外，经由能够直接影响若干关节和炎症性媒介(例如纤维蛋白原、抗凝血酶、多种趋化因子)的功能，增加的瓜氨酸化还可向疾病发病提供额外直接贡献。在较小子组的RA患者中，可测量抗PAD4抗体且可与疾病的更具侵蚀性形式建立关联。
PAD4抑制剂还可用于减小各种疾病中的病理学嗜中性粒细胞活性。研究表明，嗜中性粒细胞细胞外捕集(NET)形成(嗜中性粒细胞能够固定并杀灭病原体的先天性防御机制)与组蛋白瓜氨酸化有关且在PAD4敲除小鼠中缺失(NeeliI.等人，J.Immunol.,180,(2008),1895-1902和LiP.等人，J.Exp.Med.,207(9),(2010),1853-1862)。PAD4抑制剂可由此适用于组织中的NET形成有助于局部损伤和疾病病理学的疾病。这样的疾病包括但不限于小血管炎(KessenbrockK.等人，Nat.Med.,15(6),(2009),623-625)、全身性红斑狼疮(HakkimA.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,107(21),(2010),9813-9818和Villanueva E.等人，J.Immunol.,187(1),(2011),538-52)、溃疡性结肠炎(SavchenkoA.等人，Pathol.Int.,61(5),(2011),290-7)、囊性纤维化、哮喘(DworskiR.等人，J.AllergyClin.Immunol.,127(5),(2011),1260-6)、深层静脉血栓形成(Fuchs T.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,107(36),(2010),15880-5)、牙周炎(VitkovL.等人，UltrastructuralPathol.,34(1),(2010),25-30)、败血症(ClarkS.R.等人，Nat.Med.,13(4),(2007),463-9)、阑尾炎(Brinkmann V.等人，Science,303,(2004),1532-5)和中风。另外，有证据表明，NET可有助于影响皮肤的疾病(例如皮肤红斑狼疮(Villanueva E.等人，J.Immunol.,187(1),(2011),538-52)和牛皮癣(LinA.M.等人，J.Immunol.,187(1),(2011),490-500))中的病理学，因此PAD4抑制剂在藉由全身性或皮肤途径给予时可展示解决NET皮肤病的益处。PAD4抑制剂可影响嗜中性粒细胞内的其他功能且对嗜中性粒细胞疾病具有较宽适应性。
研究已证实工具性PAD抑制剂(例如氯-脒)在诸多动物疾病模型(包含胶原诱发的关节炎(Willis V.C.等人，J.Immunol.,186(7),(2011),4396-4404)、硫酸右旋糖酐钠(DSS)诱发的实验结肠炎(Chumanevich A.A.等人，Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.,300(6),(2011),G929-G938)、骨髓修复(Lange S.等人，Dev.Biol.,355(2),(2011),205-14)和实验自体免疫脑脊髓炎(EAE))中的效能。DSS结肠炎报告还证实，氯-脒驱动炎症性细胞在体外和活体内的细胞凋亡，从而表明PAD4抑制剂可更通常有效用于广泛的炎症性疾病中。
PAD4抑制剂还可用于治疗癌症(Slack.J.L.等人，Cell.Mol.Life Sci.,68(4),(2011),709-720)。PAD4的过表达显示于诸多癌症中(Chang X.等人，BMC Cancer,9,(2009),40)。已根据如下观察提出PAD4抑制剂的抗增殖性作用：PAD4使p53-靶基因(例如p21)的启动子处的组蛋白中的精氨酸残基瓜氨酸化，这样的靶基因参与细胞周期停滞和细胞凋亡的诱导(Li P.等人，Mol.Cell Biol.,28(15),(2008),4745-4758)。
PAD4在使组蛋白中的精氨酸残基去亚胺化中的上述作用可指示PAD4在基因表达的后生调控中的作用。PAD4是所观察存在于细胞核以及细胞质中的主要PAD家族成员。PAD4可用作组蛋白去甲基亚胺酶以及去亚胺酶的早期证据不一致且未证实。然而，可经由藉由转化成瓜氨酸以消耗可用精氨酸残基来间接减小组蛋白精氨酸甲基化(并由此与此标志有关的后生调控)。PAD4抑制剂可用作影响其他疾病环境中的不同靶基因的表达的后生工具或治疗剂。经由这样的机制，PAD4抑制剂还可有效控制干细胞中的瓜氨酸化水平且可由此在治疗上影响不同干细胞(包括但不限于胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞和癌症干细胞)的多能状态和分化潜力。因此，仍存在未满足的鉴别和研发用于治疗PAD4介导的病症的PAD4抑制剂的需要。
发明概述
现已发现，式I化合物或其药学上可接受的盐可用作PAD4抑制剂：
Figure GDA0001834773910000021
其中环A、R1、R2、R3、R4、X1和X2中的每个如本文所定义。
还已发现，式I’化合物或其药学上可接受的盐可用作PAD4抑制剂：
Figure GDA0001834773910000022
其中环A、环B、R1和R3中的每个如本文所定义。
在一些实施方案中，所提供化合物相对于PAD2显示出对PAD4的选择性。本发明还提供包括所提供化合物的药学上可接受的组合物。所提供化合物可用于治疗各种与PAD4有关的病症。这样的病症详细描述于本文中且包含例如类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。
发明详述
1.本发明的某些方面的一般描述
在一些实施方案中，这样的化合物包含具有本文所描述的式的那些或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义且描述于实施方案中。这样的化合物具有式I结构：
Figure GDA0001834773910000031
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
Figure GDA0001834773910000032
Figure GDA0001834773910000033
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
R1是氢、-CN、-OR或任选地被1-4个选自氟、-CN或OR的基团取代的C1-6脂族基团；
R2是氢或任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1和X2中的每个独立地选自N或C(R4)；
R3和R4中的每个独立地是卤素、-CN、-R或-OR；
n为0-4；且
各R独立地是氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
在一些实施方案中，这样的化合物包含具有本文所描述的式的那些或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义且描述于实施方案中。这样的化合物具有式I’结构：
Figure GDA0001834773910000041
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
Figure GDA0001834773910000042
Figure GDA0001834773910000043
Figure GDA0001834773910000051
Figure GDA0001834773910000061
Figure GDA0001834773910000062
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B是
Figure GDA0001834773910000063
Figure GDA0001834773910000064
R1是氢、-CN、-OR、
Figure GDA0001834773910000065
Figure GDA0001834773910000071
或任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
R2是氢或任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1和X2中的每个独立地选自N或C(R4)；
R3是卤素、-CN、-R、
Figure GDA0001834773910000072
或-OR；
各R4独立地是卤素、-CN、-R、
Figure GDA0001834773910000073
Figure GDA0001834773910000074
Figure GDA0001834773910000075
或-OR；
R5是氢或卤素；
n为0-4；且
各R独立地是氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
2.定义
本发明化合物包含概述于本文中的那些，且进一步由本文所公开的种类、子类和物质予以阐释。如本文中所使用，除非另外指示，否则下列定义应适用。出于本发明目的，根据元素周期表，CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第75版来鉴别化学元素。另外，有机化学的一般原则描述于“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,UniversityScience Books,Sausalito:1999和“March's Advanced Organic Chemistry”，第5版，编者：Smith,M.B.和March,J.,John Wiley&Sons,New York:2001中，这样的文献的全部内容皆以引用方式并入本文中。
如本文中所使用，术语“脂族”或“脂族基团”是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即非支链)或具支链、经取代或未经取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不为芳香族的单环烃或双环烃(在本文中还称为“碳环”、“环脂族”或“环烷基”)，其具有至分子的其余部分的单一附接点。除非另外指定，否则脂族基团含有1至6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1至5个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基团含有1至4个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基团含有1至3个脂族碳原子，且在其他实施方案中，脂族基团含有1至2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“环脂族”(“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不为芳香族的单环C3-C6烃，其具有附接至分子的其余部分的单一点。适宜脂族基团包括但不限于直链或支链、经取代或未经取代的烷基、烯基、炔基和其杂合体，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文中所使用，术语“药学上可接受的盐”是指那些在合理医学判断范围内适于接触人类和低等动物的组织而无过度毒性、刺激、过敏反应等且与合理效益/风险比相称的盐。药学上可接受的盐已为业内所熟知。举例而言，S.M.Berge等人在J.PharmaceuticalSciences,1977,66：1-19中详细描述药学上可接受的盐，其以引用方式并入本文中。本发明化合物的药学上可接受的盐包含衍生自适宜无机和有机酸以及碱者。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或有机酸(例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的或藉由使用本技术领域内所用的其他方法(例如离子交换)形成的。其他药学上可接受的盐包含己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天门冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
自适当碱衍生的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐及N+(C1-4烷基)4盐。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐及诸如此类。在适当时，其他药学上可接受的盐包括无毒铵、季铵和胺阳离子，其是使用诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根和芳基磺酸根等抗衡离子来形成。
除非另外陈述，否则本文所绘示的结构还意欲包含该结构的所有异构体(例如对映异构体、非对映异构体和几何异构体(或构象异构体))形式；例如每一不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(构象)混合物皆属本发明范围内。除非另外陈述，否则本发明化合物的所有互变异构体形式皆属本发明范围内。另外，除非另外陈述，否则本文所绘示的结构还欲包含不同之处仅在于一个或多个同位素富集原子的不同化合物。举例而言，具有包含使用氘或氚替代氢或使用13C或14C富集碳替代碳的本发明结构的化合物在本发明范围内。根据本发明，这样的化合物可用作(例如)分析工具、作为生物分析中的探针或作为治疗剂。
本文所用的术语“可测量亲和力”和“可测量地抑制”意指包括本发明化合物或其组合物和AD4的样品与包括PAD4但缺少该化合物或其组合物的同样样品之间的PAD4活性的可测量变化。
3.示例性化合物的描述
根据一方面，本发明提供式I化合物：
Figure GDA0001834773910000091
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
Figure GDA0001834773910000092
Figure GDA0001834773910000093
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
R1是氢、-CN、-OR或任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
R2是氢或任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1和X2中的每个独立地选自N或C(R4)；
R3和R4中的每个独立地是卤素、-CN、-R或-OR；
n为0-4；且
各R独立地是氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
根据另一方面，本发明提供式I’化合物：
Figure GDA0001834773910000094
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
Figure GDA0001834773910000101
Figure GDA0001834773910000102
Figure GDA0001834773910000111
Figure GDA0001834773910000121
Figure GDA0001834773910000122
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B是
Figure GDA0001834773910000123
Figure GDA0001834773910000124
R1是氢、-CN、-OR、
Figure GDA0001834773910000125
Figure GDA0001834773910000131
或任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
R2是氢或任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1和X2中的每个独立地选自N或C(R4)；
R3是卤素、-CN、-R、
Figure GDA0001834773910000132
或-OR；
各R4独立地是卤素、-CN、-R、
Figure GDA0001834773910000133
Figure GDA0001834773910000134
Figure GDA0001834773910000135
或-OR；
R5是氢或卤素；
n为0-4；且
各R独立地是氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
如上文所定义和本文所描述，R1是氢、-CN、-OR或任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R1是氢。在一些实施方案中，R1是-CN。在一些实施方案中，R1是-OR。在一些实施方案中，R1是任选地被1-4个选自氟、-CN或OR的基团取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R1是C1-3脂族基团。在一些实施方案中，R1是甲基。在一些实施方案中，R1是乙基。在一些实施方案中，R1是丙基。在一些实施方案中，R1是任选地被甲基和-OH取代的-CH2-环丁基。在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000136
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000137
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000141
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000142
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000143
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000144
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000145
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000146
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000147
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000148
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000149
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001410
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001411
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001412
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001413
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001414
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001415
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA00018347739100001416
在一些实施方案中，R1是
Figure GDA0001834773910000151
在某些实施方案中，R1是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，R2是氢或任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是氢。在一些实施方案中，R2是任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是甲基。在一些实施方案中，R2是乙基。在一些实施方案中，R2是丙基。在一些实施方案中，R2是丁基。在一些实施方案中，R2是戊基。在一些实施方案中，R2是己基。在一些实施方案中，R2是环丙基。在一些实施方案中，R2是环丁基。在一些实施方案中，R2是环戊基。在一些实施方案中，R2是环己基。在一些实施方案中，R2是环丙基甲基。在一些实施方案中，R2是环丁基甲基。在一些实施方案中，R2是环戊基甲基。在一些实施方案中，R2是环己基甲基。在一些实施方案中，R2是环丙基乙基。在一些实施方案中，R2是环丁基乙基。在一些实施方案中，R2是环戊基乙基。在一些实施方案中，R2是环己基乙基。在一些实施方案中，R2是-CH2-环丙基或-CH2-环丁基。在一些实施方案中，R1是任选地被甲基和-OH取代的-CH2-环丁基。
在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被1个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被2个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被3个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被4个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2是被1-3个氟原子取代的甲基。在一些实施方案中，R2是三氟甲基。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的乙基。在一些实施方案中，R2是2,2,2-三氟乙基。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的丙基。在一些实施方案中，R2是3,3,3-三氟丙基。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的丁基。在一些实施方案中，R2是4,4,4-三氟丁基。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的戊基。在一些实施方案中，R2是5,5,5-三氟戊基。在一些实施方案中，R2是被1-5个氟原子取代的己基。在一些实施方案中，R2是6,6,6-三氟己基。在某些实施方案中，R2是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，X1和X2各自独立地选自N或C(R4)。在一些实施方案中，X1和X2都是N。在一些实施方案中，X1是N，且X2是CH。在一些实施方案中，X1是CH，且X2是N。在一些实施方案中，X1和X2都是CH。在一些实施方案中，X1是N，且X2是C(R4)。在一些实施方案中，X1是C(R4)，且X2是N。在一些实施方案中，X1和X2都是C(R4)。在某些实施方案中，X1和X2是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，R3是卤素、-CN、-R或-OR且R各自独立地是氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
在一些实施方案中，R3是氢。在一些实施方案中，R3是卤素。在一些实施方案中，R3是-CN。在一些实施方案中，R3是C1-3脂族基团。在一些实施方案中，R3是甲基。在一些实施方案中，R3是乙基。在一些实施方案中，R3是丙基。在一些实施方案中，R3是□OR。在一些实施方案中，R3是-OCH3。在一些实施方案中，R3是-OCH2CH3。在一些实施方案中，R3是-OCH2CH2CH3。在某些实施方案中，R3是-OCH(F)2。
在一些实施方案中，R3是
Figure GDA0001834773910000161
在一些实施方案中，R3是
Figure GDA0001834773910000162
在一些实施方案中，R3是
Figure GDA0001834773910000163
在某些实施方案中，R3是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，R4各自独立地是卤素、-CN、-R、
Figure GDA0001834773910000164
Figure GDA0001834773910000165
或-OR。
在一些实施方案中，R4是氢。在一些实施方案中，R4是卤素。在一些实施方案中，R4是-CN。在一些实施方案中，R4是C1-6脂族基团或-OR。在一些实施方案中，R4是-OCH3。在一些实施方案中，R4是乙基。
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000166
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000167
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000168
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000169
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA00018347739100001610
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000171
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000172
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000173
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000174
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000175
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000176
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000177
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000178
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA0001834773910000179
在一些实施方案中，R4是
Figure GDA00018347739100001710
在某些实施方案中，R4是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义，环A是
Figure GDA00018347739100001711
Figure GDA00018347739100001712
Figure GDA00018347739100001713
其中环A任选地被1-4个选自氟或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100001714
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100001715
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100001716
Figure GDA0001834773910000181
Figure GDA0001834773910000182
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000183
Figure GDA0001834773910000184
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000185
Figure GDA0001834773910000186
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000187
Figure GDA0001834773910000191
Figure GDA0001834773910000192
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000193
Figure GDA0001834773910000194
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000201
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000202
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000203
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000204
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000205
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000206
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000207
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000208
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000209
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002010
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002011
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002012
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002013
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002014
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000211
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000212
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000213
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000214
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000215
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000216
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000217
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000218
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000219
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002110
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002111
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002112
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002113
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002114
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002115
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000221
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000222
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000223
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000224
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000225
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000226
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000227
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000228
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000229
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002210
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002211
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002212
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002213
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002214
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002215
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000231
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000232
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000233
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000234
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000235
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000236
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000237
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000238
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000239
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002310
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002311
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002312
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002313
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002314
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA00018347739100002315
在某些实施方案中，环A是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，环B是
Figure GDA0001834773910000241
Figure GDA0001834773910000242
在一些实施方案中，环B是
Figure GDA0001834773910000243
在一些实施方案中，环B是
Figure GDA0001834773910000244
在一些实施方案中，环B是
Figure GDA0001834773910000245
在一些实施方案中，环B是
Figure GDA0001834773910000246
在某些实施方案中，环B是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，R5是氢或卤素。在一些实施方案中，R5是氢。在一些实施方案中，R5是卤素。在一些实施方案中，R5是氟。在某些实施方案中，R5是选自示于下表1中的那些。
如上文所定义和本文所描述，n为0-4。在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，n为4。在某些实施方案中，n是选自示于下表1中的那些。
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是乙基，X1是N，X2是CH，R3是氢，且环A是
Figure GDA0001834773910000247
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是2,2,2-三氟乙基，X1是N，X2是CH，且环A是
Figure GDA0001834773910000248
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是N，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000249
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是乙基，X1是N，X2是CH，R3是氢，且环A是
Figure GDA0001834773910000251
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是N，R3是氢，且环A是
Figure GDA0001834773910000252
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是2,2,2-三氟乙基，X1是N，X2是CH，且环A是
Figure GDA0001834773910000253
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是N，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000254
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是2,2,2-三氟乙基，X1是N，X2是CH，且环A是
Figure GDA0001834773910000255
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是N，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000256
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，且环A是
Figure GDA0001834773910000257
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是乙基，X1是N，X2是CH，R3是氢，且环A是
Figure GDA0001834773910000258
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000259
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA00018347739100002510
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3且环A是
Figure GDA00018347739100002511
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3且环A是
Figure GDA0001834773910000261
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000262
在一些实施方案中，R1是甲基，R2是环丙基甲基，X1是N，X2是CH，R3是-OCH3，且环A是
Figure GDA0001834773910000263
在一些实施方案中，环A是
Figure GDA0001834773910000264
在一些实施方案中，式I化合物是选自示于下表1中的那些。
表1.式I的示例性化合物
Figure GDA0001834773910000271
Figure GDA0001834773910000281
Figure GDA0001834773910000291
Figure GDA0001834773910000301
Figure GDA0001834773910000311
Figure GDA0001834773910000321
Figure GDA0001834773910000331
Figure GDA0001834773910000341
Figure GDA0001834773910000351
Figure GDA0001834773910000361
Figure GDA0001834773910000371
Figure GDA0001834773910000381
Figure GDA0001834773910000391
Figure GDA0001834773910000401
Figure GDA0001834773910000411
Figure GDA0001834773910000421
Figure GDA0001834773910000431
Figure GDA0001834773910000441
Figure GDA0001834773910000451
Figure GDA0001834773910000461
Figure GDA0001834773910000471
Figure GDA0001834773910000481
Figure GDA0001834773910000491
Figure GDA0001834773910000501
Figure GDA0001834773910000511
Figure GDA0001834773910000521
Figure GDA0001834773910000531
Figure GDA0001834773910000541
Figure GDA0001834773910000551
Figure GDA0001834773910000561
Figure GDA0001834773910000571
Figure GDA0001834773910000581
Figure GDA0001834773910000591
Figure GDA0001834773910000601
Figure GDA0001834773910000611
Figure GDA0001834773910000621
Figure GDA0001834773910000631
Figure GDA0001834773910000641
在某些实施方案中，本发明提供上文及本文所描述的任一化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供如上表1中所绘示的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供呈分离形式的上文及本文所描述的任一化合物。
4.用途、配制和给予
药学上可接受的组合物
根据另一实施方案，本发明提供一种组合物，其包括本发明化合物或其药学上可接受的衍生物及药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中的化合物的量使得有效可测量地抑制生物试样或患者中的PAD4。在某些实施方案中，本发明组合物中的化合物的量使得有效可测量地抑制生物试样或患者中的PAD4。在某些实施方案中，本发明组合物经调配用于给予需要此组合物的患者。在一些实施方案中，本发明组合物经调配用于经口给予患者。
本文所用的术语“受试者”可与术语“患者”互换使用且意指动物、优选哺乳动物。在一些实施方案中，受试者或患者是人类。在其他实施方案中，受试者(或患者)是家畜受试者(或患者)。在一些实施方案中，家畜受试者(或患者)是犬、猫或马受试者。
术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”是指不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可用于本发明组合物中的药学上可接受的载剂、佐剂和媒剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人类血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。
本发明组合物可经口、胃肠外、藉由吸入喷雾、经局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入型储库给予。本文所用的术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。优选地，经口、腹膜腔内或静脉内给予这样的组合物。本发明组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这样的悬浮液可根据业内已知技术使用适宜分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配。无菌可注射制剂还可为在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可用的可接受媒剂和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
出于此目的，可使用任一温和不挥发性油，包含合成单-或二-甘油酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)可用于制备可注射物，比如天然药学上可接受的油类，例如橄榄油或蓖麻油，其尤其呈其聚氧乙烯化形式。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或通常用于调配包括乳液及悬浮液的药学上可接受的剂型的类似分散剂。还可将其他常用表面活性剂用于调配目的，例如Tween、Spans及其他通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其他剂型的乳化剂或生物可用性增强剂。
本发明的药学上可接受的组合物可以任何经口可接受剂型经口给予，这样的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在经口使用的片剂情形下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口给予而言，可用稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。在需口服使用水性悬浮液时，可将活性成份与乳化剂和悬浮剂组合。若需要，还可添加某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以用于直肠给予的栓剂形式给予。可通过将药剂与适当非刺激性赋形剂混合来制备这样的组合物，该赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，且因此将在直肠中融化而释放药物。这样的材料包含可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物还可局部给予，尤其在治疗靶包括可通过局部施加易于达到的区域或器官(包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病)时。可容易地制备用于这样的区域或器官中的每个的适宜的局部制剂。
可以直肠栓剂制剂(参见上文)或适合的灌肠制剂来实现下肠道的局部施加。还可使用局部透皮贴片。
对于局部施加而言，可将所提供的药学上可接受的组合物调配成含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的适宜软膏。用于局部给予本发明化合物的载剂包括但不限于矿物油、液体石蜡、白石蜡、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡及水。或者，可将所提供的药学上可接受的组合物调配成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的适合洗剂或乳霜。适合的载剂包括但不限于矿物油、山梨糖醇酐单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼部使用而言，可将所提供的药学上可接受的组合物调配成在等渗、pH经调节的无菌盐水中的微粒化悬浮液，或优选调配成在等渗、pH经调节的无菌盐水中的溶液，其含有或不含防腐剂，例如氯苄烷铵(benzylalkonium chloride)。或者，对于眼部使用而言，可将药学上可接受的组合物调配于软膏(例如石蜡)中。
还可通过经鼻气溶胶或吸入来给予本发明的药学上可接受的组合物。根据药学调配领域熟知的技术来制备这样的组合物且可将其制备为在盐水中的溶液，其使用苯甲醇或其他适合的防腐剂、吸收促进剂(用于增强生物可用性)、碳氟化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂。
更优选地，本发明的药学上可接受的组合物经调配用于经口给予。这样的制剂可与食物一起或不与食物一起给予。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物在没有食物的情况下给予。在其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物在有食物的情况下给予。
本发明的药学上可接受的组合物可经口、经直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜腔内、局部(如通过粉剂、软膏或滴剂)、经颊、作为口或鼻喷雾等给予人类和其他动物，这取决于所治疗感染的严重程度。在某些实施方案中，本发明化合物可以每天约0.01mg/kg受试者体重至每天约50mg/kg受试者体重且优选每天约1mg/kg受试者体重至每天约25mg/kg受试者体重/的剂量每天一或多次经口或胃肠外给予以获得期望治疗效应。
用于经口给予的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有本技术领域内常用的惰性稀释剂(例如水或其他溶剂)、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体而言为棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨醇的脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂外，经口组合物还可包含佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂还可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如于1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受媒剂和溶剂是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用包含合成单甘油酯或二甘油酯的任何温和的不挥发性油。另外，在可注射制剂中使用诸如油酸的脂肪酸。
例如，可注射制剂可通过经由细菌截留过滤器过滤或通过加入灭菌剂来灭菌，这样的灭菌剂呈可在使用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。
为了延长本发明化合物的效果，通常期望减缓来自皮下或肌内注射的该化合物的吸收。这可通过使用具有较差水溶性的结晶或非晶材料的液体悬浮液来实现。因此，化合物的吸收速率取决于其溶解速率，此溶解速率进而可取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油性媒剂中来实现胃肠外给予化合物形式的延迟吸收。通过在生物可降解聚合物(例如聚乳酸-聚乙交酯)中形成化合物的微囊基质来制备可注射的储库形式。取决于化合物对聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可控制化合物的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包含聚(原酸酯)及聚(酐)。还可通过将化合物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库型可注射制剂。
用于直肠或阴道给予的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载剂(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，这样的赋形剂或载剂在环境温度下为固体但在体温下为液体且因此其可在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。
经口给予的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载剂(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基酸纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯啶酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情形下，剂型还可包括缓冲剂。
在使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软质和硬质填充明胶胶囊中，还可采用类似类型的固体组合物作为填充剂。片剂、糖衣锭、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可使用包衣和包壳制备，例如肠溶包衣和药物调配技术中熟知的其他包衣。其可任选地含有遮光剂且还可为任选地以延迟方式仅(或优先)在肠道的某一部分中释放活性成份的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。在使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软质和硬质填充明胶胶囊中，还可采用相似类型的固体组合物作为填充剂。
活性化合物还可与一种或多种如上文所述的赋形剂形成微囊化形式。片剂、糖衣锭、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可使用包衣和包壳来制备，例如肠溶包衣、释放控制包衣和药物调配技术中熟知的其他包衣。在这样的固体剂型中，可将活性化合物与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。这样的剂型还可如同通常实践一样包括非惰性稀释剂的其他物质，例如压片润滑剂及其他压片助剂(例如硬脂酸镁和微晶纤维素)。在胶囊、片剂和丸剂的情形下，这样的剂型还可包括缓冲剂。其任选地含有遮光剂且还可为任选以延迟方式仅(或优先)在肠道的某一部分中释放活性成份的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。
用于局部或经皮给予本发明化合物的剂型包括软膏、糊膏、乳霜、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。若需要，则可在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载剂和任何所需防腐剂或缓冲剂混合。眼部制剂、滴耳剂和滴眼剂也涵盖于本发明范围内。另外，本发明涵盖使用透皮贴片，其具有提供化合物至身体的控制递送的额外优点。这样的剂型可通过将化合物溶解或分配于合适介质中来制备。还可使用吸收促进剂来增加该化合物穿过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
可与载剂材料组合以制造单一剂型的组合物的本发明化合物的量将视所治疗主体、特定给予模式而变化。优选地，所提供的组合物应当经调配以使得可将介于0.01mg/kg体重/天至100mg/kg体重/天之间的抑制剂的剂量给予接受这样的组合物的患者。
本发明化合物可单独或与一种或多种其他治疗化合物组合给予，可能的组合疗法采用固定组合的形式或本发明化合物与一种或多种其他治疗化合物交错给予或彼此独立地给予，或组合给予固定组合与一种或多种其他治疗化合物。本发明化合物可此外或另外与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光疗法、手术干预或这样的方式的组合给予以尤其用于肿瘤疗法。长期疗法在其他治疗方案的情形下同样地可能作为辅助疗法，如上文所描述。其他可能治疗是肿瘤消退后用以维持患者状态的疗法或甚至化学防癌疗法，例如在处于风险下的患者中。
那些其他药剂可作为多剂量方案的一部分与含有本发明化合物的组合物分开给予。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，其与本发明化合物混合成单一组合物。若作为多剂量方案的一部分给予，则两种活性剂可同时、依序或彼此间隔一定时间内、通常彼此间隔5小时内递送。
如本文中所使用，术语“组合”、“经组合”和相关术语是指同时或依序给予本发明的治疗剂。举例而言，本发明化合物可与另外的治疗剂同时或依序以分开的单位剂型或一起作为单一单位剂型给予。因此，本发明提供包括本发明化合物、另外的治疗剂和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂的单一单位剂型。
可与载剂物质组合以产生单一剂型的本发明化合物和另外的治疗剂二者的量(在如上文所描述包括另外的治疗剂的那些组合物中)将根据所治疗的宿主和特定给予方式而变。优选地，本发明组合物应经调配以便可给予介于0.01mg/kg体重/天至100mg/kg体重/天之间的本发明化合物。
在包括另外的治疗剂的那些组合物中，另外的治疗剂和本发明化合物可协同起作用。因此，另外的治疗剂在这样的组合物中的量将小于仅利用该治疗剂的单一疗法中所需要的量。
存在于本发明组合物中的另外的治疗剂的量将不超过在包括该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中正常给予的量。优选地，本文所公开组合物中另外的治疗剂的量将在包括该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中所正常存在量的约50％至100％范围内。
还应理解，用于任一特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包含所采用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给予时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的判断以及所治疗具体疾病的严重程度。本发明化合物在组合物中的量还将视组合物中的特定化合物而定。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
本文所描述的化合物和组合物通常可用于抑制PAD4。
可在活体外、在活体内或在细胞系中分析在本发明中用作PAD4抑制剂的化合物的活性。活体外分析包含测定PAD4抑制的分析。分析本发明所用作为PAD4抑制剂化合物的详细情况描述于下文实施例中。在一些实施方案中，所提供化合物较PAD2选择性抑制PAD4。
如本文中所使用，术语“治疗(treatment、treat及treating)”是指如本文所描述逆转、减轻疾病或病症或其一种或多种症状、延迟其发作或抑制其进展。在一些实施方案中，治疗剂可在已发生一种或多种症状之后给予。在其他实施方案中，治疗剂可在无症状的情况下给予。举例而言，可在症状发作之前将治疗剂给予易感个体(例如根据症状历史和/或根据遗传或其他敏感因子)。还可在症状消退之后继续治疗例如以防止或延迟其复发。
所提供化合物是PAD4抑制剂且因此可用于治疗一种或多种与PAD4活性有关的病症。因此，在某些实施方案中，本发明提供治疗PAD4介导的病症的方法，其包括向有需要的患者给予本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在一个实施方案中，PAD4介导的病症是通过不当PAD4活性介导的疾病、病状或病症。在一些实施方案中，PAD4介导的病症选自：类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。在另一个实施方案中，通过不当PAD4活性介导的病症是类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，通过不当PAD4活性介导的病症是全身性狼疮。在另一个实施方案中，通过不当PAD4活性介导的病症是血管炎。在另一个实施方案中，通过不当PAD4活性介导的病症是皮肤红斑狼疮。在另一个实施方案中，通过不当PAD4活性介导的病症是牛皮癣。
在一个实施方案中，提供治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供治疗类风湿性关节炎的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗全身性狼疮的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗血管炎的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗皮肤红斑狼疮的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供治疗牛皮癣的方法，该方法包括向有需要的人类受试者给予治疗有效量的所提供化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PAD4介导的病症选自：酸诱发的肺损伤、痤疮(PAPA)、急性淋巴细胞白血病、急性呼吸窘迫综合征、艾迪生病(Addison’s disease)、肾上腺增生、肾上腺皮质功能不全、衰老、AIDS、酒精性肝炎、酒精性肝炎、酒精性肝病、过敏原诱发的哮喘、过敏性支气管肺炎、曲霉菌病、过敏性结膜炎、脱发、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、淀粉样变性、萎缩性脊髓侧索硬化和体重减轻、心绞痛、血管性水肿、无汗外胚层发育不全-ID、强直性脊柱炎、前段(anterior segment)、炎症(inflammation)、抗磷脂综合征、口疮性口炎、阑尾炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、异位性皮炎、自体免疫疾病、自体免疫性肝炎、蜂螫伤诱发的炎症、贝切特氏病(Behcet’s disease)、贝切特氏综合征(Behcet’ssyndrome)、贝尔氏麻痹症(Bells Palsey)、铍中毒、布劳综合征(Blau syndrome)、骨疼痛、细支气管炎、烧伤、滑囊炎、癌症、心肥大、腕管综合征、异化代谢病症、白内障、脑动脉瘤、化学刺激物诱发的炎症、脉络膜视网膜炎、慢性心力衰竭、早产儿慢性肺病、慢性淋巴细胞白血病、慢性阻塞性肺病、结肠炎、复杂性区域疼痛综合征、结缔组织疾病、角膜溃疡、克罗恩氏病(crohn’s disease)、Cryopyrin蛋白(cryopyrin)相关周期性综合征、隐球菌病、囊性纤维化、白介素-1-受体拮抗剂(DIRA)缺乏、皮炎、皮炎内毒素血症、皮肌炎、弥漫型内因性脑桥胶质瘤、子宫内膜异位症、内毒素血症、上髁炎、成红色素细胞减少症、家族性淀粉样多发性神经病、家族性冷荨麻疹、家族性地中海热、胎儿生长迟滞、青光眼、肾小球疾病、肾小球肾炎、痛风、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、肠病、头损伤、头痛、听力损失、心脏病、溶血性贫血、亨舍二氏紫癜(Henoch-Scholein purpura)、肝炎、遗传性周期性发热综合征、带状疱疹和单纯疱疹、HIV-1、霍奇金病(Hodgkin’s disease)、亨廷顿氏病(Huntington’sdisease)、透明膜病、高氨血症、高钙血症、高胆固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反复发热(HIDS)、发育不全和其他贫血、发育不全性贫血、特发性血小板减少紫癜、色素失禁症、感染性单核细胞增多症、炎症性肠病、炎症性肺病、炎症性神经病变、炎症性疼痛、昆虫咬伤诱发的炎症、虹膜炎、刺激物诱发的炎症、缺血/再灌注、青少年型类风湿性关节炎、角膜炎、肾疾病、由寄生虫感染引起的肾损伤、由寄生虫感染引起的肾损伤、肾移植排斥预防、钩端螺旋体病、白血病、吕弗勒氏综合征(Loeffler’s syndrome)、肺损伤、肺损伤、狼疮、狼疮、狼疮性肾炎、淋巴瘤、脑膜炎、间皮瘤、混合结缔组织疾病、穆-韦二氏综合征(Muckle-Wellssyndrome)(荨麻疹耳聋淀粉样变性)、多发性硬化、肌肉萎缩、肌营养不良症、重症肌无力、心肌炎、蕈样霉菌病、蕈样霉菌病、骨髓发育不良综合征、肌炎、鼻窦炎、坏死性小肠结肠炎、新生儿期发病的多系统炎性疾病(NOMID)、肾病综合征、神经炎、神经病理学疾病、非过敏原诱发的哮喘、肥胖症、眼睛过敏、视神经炎、器官移植、骨关节炎、中耳炎、佩吉特氏病(paget’s disease)、疼痛、胰脏炎、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、天疱疮、心包炎、周期性发热、牙周炎、腹膜型子宫内膜异位症、百日咳、咽炎和腺炎(PFAPA综合征)、植物刺激物诱发的炎症、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、肺囊虫(pneumosysts)感染、毒葛(poison ivy)/漆酚油诱发的炎症、结节性多动脉炎、多软骨炎、多囊性肾疾病、多发性肌炎、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、心理社会压力疾病、肺病、肺高血压、肺纤维化、坏疽性脓皮病、化脓性无菌关节炎、肾疾病、视网膜疾病、风湿性心炎、风湿性疾病、类风湿性关节炎、类肉瘤病、皮脂溢、败血症、严重疼痛、镰状细胞、镰状细胞贫血、二氧化硅诱发的疾病、薛格连氏综合征(Sjogren’s syndrome)、皮肤病、睡眠呼吸中止、实体瘤、骨髓损伤、史蒂芬-强森综合征(Stevens-Johnson syndrome)、中风、蛛网膜下出血、晒伤、颞动脉炎、腱鞘炎、血小板减少症、甲状腺炎、组织移植、TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)、弓虫症、移植、创伤性脑损伤、肺结核、1型糖尿病、2型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、眼色素层炎和韦格纳氏肉芽肿(Wegener’s granulomatosis)。
在一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法中。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗由不当PAD4活性介导的病症。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗全身性狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗血管炎。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗皮肤红斑狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗牛皮癣。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗由不当PAD4活性介导的病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗全身性狼疮的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗血管炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗皮肤红斑狼疮的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供所提供化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗牛皮癣的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防由不当PAD4活性介导的病症的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防类风湿性关节炎的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防全身性狼疮的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防血管炎的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防皮肤红斑狼疮的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗或预防牛皮癣的药物组合物，其包括所提供化合物或其药学上可接受的盐
本发明的每一方面的所有特征经适合变通后适用于所有其他方面。
为了可以更全面地理解本文所描述的本发明，陈述下列实施例。应理解，这样的实施例仅出于阐释目的且不应解释为以任何方式限制本发明。
实例
如下文实施例中所示，在某些示例性实施方案中，根据下列一般程序制备化合物。应了解，尽管一般方法示出了本发明某些化合物的合成，但下列一般方法和本领域技术人员所已知的其他方法可适用于本文中所描述的所有化合物和这样的化合物中的每个的亚类和种类。
方法A
MET/u-HPLC(低pH 7min方法)
管柱：Phenomenex Kinetex-XB C18,2.1mm×100mm,1.7μm
流速：0.6ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(MeCN)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.30-100
5.80-100
5.82-5
方法B
MET/CR/1600(高pH 7min方法)
管柱：Phenomenex Gemini C18,2.0mm×100mm,3μm
流速：0.5ml/min
流动相：
A：2mM碳酸氢铵，于HPLC等级水中，pH10
B：HPLC等级MeCN
注入体积：3μl
温度：50℃
检测：215nm
梯度时间：(分钟)-％B
0.0-5
5.50-100
5.90-100
5.92-5
9.00-5
方法C
METCR 1416(低pH Shimadzu 7min方法)
管柱：WatersAtlantis dC18,2.1mm×100mm，3μm管柱
流速：0.6ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(乙腈)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.00-100
5.40-100
5.42-5
方法D
METCR 1410(低pH Shimadzu 2min方法)
管柱：Kinetex Core-Shell C18,2.1mm×50mm，5μm管柱
流速：1.2ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(乙腈)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
1.20-100
1.30-100
1.31-5
方法E：
手性HPLC制备型方法
管柱：Chiralpak IC 250mm×4.6mm，5μm管柱
流速：15ml/min
流动相：35％乙醇：65％CO2
试样稀释剂：乙醇
温度：40℃
检测：215nm(标称)
方法F：
手性纯度分析方法
管柱：Chiralpak IC 250mm×4.6mm，5μm管柱
流速：4ml/min
注入体积：10μL
温度：40℃
检测：215nm
等度条件：40％乙醇：60％CO2
方法G
手性(对掌性)HPLC制备型方法
管柱：XSelect CSH C1850×2.1mm,1.7um
流速：0.6ml/min
流动相：水(0.1％v/v TFA),MecN(0.1％v/v TFA)
试样稀释剂：乙醇
温度：40℃
检测：240nm(标称)
方法H
MET/u-HPLC(高pH MS167min方法)
管柱：Waters UPLC CSH C18,2.1mm×100mm 5μm管柱
流速：0.6ml/min
流动相：A，使用氢氧化铵改变至pH 10的2mM碳酸氢铵(水溶液)；和B，乙腈
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.30-100
5.80-100
5.82-5
方法I
手性纯度分析方法
管柱：Lux C4(21.2mm×250mm,5um)
流速：21ml/min
注入体积：350μL
检测：222nm
等度条件：MeOH(0.1％v/vNH3)
方法J
MET/CR/0990(高pH 3min方法)
管柱：Phenomenex Gemini C18,2.0mm×100mm,3μm
流速：1ml/min
流动相A：2mM碳酸氢铵，于HPLC等级水中，pH10
B HPLC等级MeCN
注入体积：3μl
温度：60℃
检测：215nm
梯度时间(分钟)-％B
0.0-1
1.80-100
2.10-100
2.30-1
方法K：
手性HPLC制备型方法
管柱：Amy-C 20mm×250mm,5um
流速：21ml/min
流动相：4:6庚烷:乙醇(0.1％v/v氨)
试样稀释剂：甲醇
温度：环境温度
检测：254nm
方法L
手性纯度分析方法
管柱：Amy-C 4.6mm×250mm,5um
流速：21ml/min
注入体积：1.0μL
温度：环境温度
UV检测：254nm
等度条件：4:6庚烷:乙醇(0.1％v/v氨)
根据下文的流程1来制备本发明的某些化合物。
流程1
Figure GDA0001834773910000761
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0076-002(EOAI3428370)I-13的合成。
Figure GDA0001834773910000762
3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002-步骤1
向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8,2.0g,8.14mmol)于DMF(10ml)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(99％,1.37g,9.81mmol)。向此溶液中添加甲胺盐酸盐(1:1)(0.62g,9.18mmol)且将混合物在氮气和80℃下于密封管中搅拌16h。在真空中浓缩反应粗制物并分配于DCM(100ml)与水(10ml)之间。使用水(2×10ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)进一步洗涤有机层。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以提供橙色粉末，通过快速柱层析(15-40％EtOAc/庚烷)纯化以获得1.49g(76％)橙色粉末形式的3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.13min,M/z＝241(M+1)。
3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002-步骤2
在氮气气氛下，向3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0065-002,1.49g,6.20mmol)于乙醇(100ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(0.18g,0.17mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。经由硅藻土(Kieseguhr)过滤反应混合物且经由使用甲醇(150ml)洗涤滤器。在真空中浓缩滤液以提供1.21g(89％)浅紫色粉末形式的3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002。LCMS(方法D)：停留时间：0.63min,M/z＝211(M+1)。
1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001-步骤3
在室温下，将氢化钠(60％,59mg,1.47mmol)逐份添加至1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0,200mg,1.05mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌悬浮液中。将混合物搅拌20分钟，然后添加碘乙烷(197mg,1.26mmol)。将反应混合物搅拌20h。将混合物分配于EtOAc(20ml)与水(20ml)之间。使用EtOAc(1×20ml)进一步萃取水层，使用水(20ml)洗涤合并的有机物并蒸发至干燥。通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷)纯化粗产物以获得135mg(57.1％)无色油状物形式的1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.18min,M/z＝219(M+1)。
1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001-步骤4
向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AQ1957-001,135mg,0.62mmol)于THF(2ml)中的搅拌溶液中添加在水(2ml)中的氢氧化锂(74mg,3.09mmol)。将混合物在50℃搅拌2.5h。使用1M HCl(3ml)酸化混合物并使用DCM(2×5ml)萃取。使用水洗涤合并的有机物并蒸发至干燥，得到120mg(99％)白色固体的1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.92min,M/z＝191(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003-步骤5
向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AQ1960-001,120mg,0.63mmol)于DMF(2ml)中的搅拌溶液中添加DIPEA(116μl,0.70mmol)，随后添加HATU(236mg,0.62mmol)且将所得混合物在室温搅拌15分钟。添加3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR0068-002,148mg,0.70mmol)且将所得混合物在室温搅拌6h。反应混合物在真空中浓缩，溶于乙酸(3ml)中并在70℃搅拌16h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(25-40％EtOAc/庚烷)纯化剩余物质，获得150mg(63％)白色粉末的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003。LCMS(方法D)：停留时间：1.18min,M/z＝365(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002-步骤6
向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0070-003,150mg,0.41mmol)于THF(3ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(30mg,1.25mmol)于水(3ml)中的溶液且将混合物在室温搅拌16h。反应混合物在真空中浓缩，吸收于水(5ml)中并在搅拌下使用5N HCl(0.5ml)酸化。将所得悬浮液搅拌10分钟，然后通过真空过滤收集沉淀物并干燥，获得130mg(89％)白色粉末的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.03min,M/z＝351(M+1)。
6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002-步骤7
向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR0072-002,130mg,0.37mmol)于2:1DMSO/MeCN(4.5ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(65μl,0.39mmol)和HATU(148mg,0.39mmol)。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后添加八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 949559-11-9,88mg,0.39mmol)且将混合物在室温下搅拌4h。使用3:2MeCN/水(1.5ml)稀释反应混合物并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得142mg(81％)白色粉末形式的6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002。LCMS(方法A)：停留时间：3.41min,M/z＝559(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0076-002(EOAI3428370)，I-13-步骤8
向6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0074-002,20mg,0.04mmol)于甲醇(1ml)中的经搅拌溶液中添加于1,4-二噁烷中的4M HCl(0.5ml)且将所得溶液在室温下搅拌4h。在真空中浓缩反应混合物且自水(4ml)冻干残余物以获得13.4mg(75％)黄色固体形式的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AR0076-002，I-13。LCMS(方法A)：停留时间：1.80min,M/z＝459(M+1)。
手性HPLC，获得(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-001和(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-002，-步骤9
将107mg 6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002溶于乙醇中且然后通过手性HPLC(方法E)纯化以获得46.6mg(43.6％)(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-001(绝对立体化学任意指定)和36.8mg(33.4％)(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-002(绝对立体化学任意指定)。
EV-AR0090-001，手性纯度(UV,254nm)：100％，停留时间：6.30min(方法F)
EV-AR0090-002，手性纯度(UV,254nm)：97％，停留时间：9.96min(方法F)
5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0091-002(EOAI3432499，绝对立体化学任意指定)I-3-步骤8
如流程1的步骤8中来处理(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0090-001,46mg,0.08mmol)以获得40mg(97％)橙色粉末形式的5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AR0091-002，I-3。LCMS(方法A)：停留时间：1.83min,M/z＝459(M+1)。
5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002(EOAI3432500，绝对立体化学任意指定)I-14-步骤8
如流程1的步骤8中来处理(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0090-002,36.8mg,0.07mmol)以获得31mg(92.7％)橙色粉末形式的5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002，I-14。LCMS(方法A)：停留时间：1.82min,M/z＝459(M+1)。
流程2
Figure GDA0001834773910000801
1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺EV-AS1585-001(EOAI3436357)，I-62的合成
Figure GDA0001834773910000802
1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AR3164-001-步骤1
向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0,4.40g,23.1mmol)于DMF(50ml)中的经搅拌溶液中添加氢化钠(60％,1.05g,26.3mmol)。将混合物在氮气和室温下搅拌45分钟且添加(溴甲基)环丙烷(CAS 7051-34-5,2.70ml,27.8mmol)。将混合物在室温下搅拌2.5h且在真空中去除溶剂。将残余物悬浮于THF(40ml)中且添加5M氢氧化钠水溶液(22ml,110mmol)。将混合物在50℃下搅拌3.5h。添加额外THF(20ml)和5M氢氧化钠水溶液(22ml,110mmol)且将反应液在50℃下搅拌16h。在真空中浓缩反应粗制物且添加水(10ml)和5M盐酸(100ml)。过滤掉固体，使用水(2×100ml)洗涤并在真空烘箱中干燥以获得3.46g(69.2％)白色粉末形式的1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AR3164-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.03min,M/z＝217(M+1)。
4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯EV-AR3152-001-步骤2
向4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(CAS 329-59-9,5.00g,25.1mmol)于DMF(50ml)中的经搅拌溶液中添加甲胺盐酸盐(1:1)(2.00g,29.6mmol)和碳酸钾(4.50g,32.6mmol)。将混合物在室温和氮气下搅拌18h。在真空中浓缩反应粗制物且将残余物分配于EtOAc(350ml)与1N盐酸水溶液(250ml)之间。使用1N盐酸水溶液(150ml)和氯化钠饱和水溶液(100ml)进一步洗涤有机层。通过硫酸镁干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以获得5.30g(定量)黄色粉末形式的4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯EV-AR3152-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.07min,M/z＝211(M+1)。
3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR3155-001-步骤3
在氮气下，向4-(甲基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR3152-001,5.30g,25.2mmol)于乙醇(100ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(1.30g,0.05mmol)。然后将反应液置于氢气气氛下并在室温下搅拌4h。使用甲醇(100ml)稀释反应混合物且添加硅藻土。将混合物在室温下搅拌10分钟并在真空下过滤。使用甲醇(3×50ml)洗涤滤器且在真空中浓缩滤液以获得4.39g(96.6％)褐色粉末形式的3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR3155-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.75min,M/z＝181(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR3167-001-步骤4
向1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AR3164-001,2.20g,10.2mmol)于无水DMF(40ml)中的溶液中添加HATU(4.95g,12.8mmol)和DIPEA(2.25ml,12.8mmol)。将混合物在室温下搅拌1h，然后添加3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR3155-001,2.02g,11.2mmol)。将混合物在室温下搅拌16h。在真空中去除溶剂且将残余物溶于乙酸中并在80℃下搅拌2h，然后在85℃下搅拌30分钟，然后在90℃下搅拌1h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(12-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得3.08g(83.2％)粉红色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR3167-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.20min,M/z＝361(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR3168-002-步骤5
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR3167-001,3.08g,8.46mmol)于甲醇(60ml)中的悬浮液中添加2M氢氧化钠水溶液(30ml,60.0mmol)。然后将混合物在50℃下搅拌2h。将反应液冷却至室温且在真空中去除溶剂。添加水(50ml)，随后添加2M HCl水溶液直至达到pH 3为止。将混合物搅拌15分钟并经由烧结物质过滤。使用水(2×50ml)洗涤固体并风干64h以提供1.81g(61.2％)灰棕色固体形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR3168-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.05min,M/z＝347(M+1)。通过添加2M HCl水溶液来进一步酸化滤液直至开始形成沉淀为止。将混合物静置1h并经由烧结物质过滤。使用水(2×20ml)洗涤固体并在真空下风干3h以获得460mg(15.7％)灰白色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR3168-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.06min,M/z＝347(M+1)。
(3S,4R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲氧基哌啶-1-甲酸苄酯EV-AT1700-001-步骤6
在0℃和氮气下，向(3S,4R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(EV-AQ1997-001，如WO2014/015905中合成，450mg,1.28mmol)于无水THF(10ml)中的经搅拌溶液中添加氢化钠(60％,62mg,1.54mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后添加碘甲烷(83.94μl,1.35mmol)且将混合物在室温下搅拌16h。添加氯化铵饱和水溶液(2ml)且将混合物搅拌10分钟。在真空中浓缩混合物并分配于水(50ml)与DCM(50ml)之间。使用DCM(2×50ml)进一步萃取水层且在真空中浓缩合并的有机物。通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗产物以获得248mg(52.9％)无色油状物形式的(3S,4R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲氧基哌啶-1-甲酸苄酯EV-AT1700-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.29min,M/z＝387(M+23)。
N-[(3S,4R)-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT1701-001-步骤7
在氮气下，向(3S,4R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲氧基哌啶-1-甲酸苄酯(EV-AT1700-001,235mg,0.64mmol)于乙醇(10ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(34mg,0.03mmol)。将反应液置于氢气气氛下并在室温下搅拌16h。经由硅藻土过滤反应混合物且经由使用乙醇(20ml)洗涤滤器。在真空中浓缩滤液以获得135mg(68.0％)无色油状物形式的N-[(3S,4R)-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT1701-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.79min,M/z＝231(M+1)。
N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS-1581-001-步骤8
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR3168-002,150mg,0.43mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌溶液中添加HATU(197.6mg,0.52mmol)，随后添加DIPEA(0.15ml,0.87mmol)。将混合物搅拌1h，然后添加N-[(3S,4R)-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AT1701-001,99.7mg,0.43mmol)。将反应液在室温下搅拌16h。在真空中去除溶剂且将残余物分配于DCM(30ml)与碳酸氢钠饱和水溶液(30ml)之间。使用DCM(20ml)萃取水层且使用水(20ml)和氯化钠饱和水溶液(20ml)洗涤合并的有机物。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以提供橙色油状物，通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得205mg(82.9％)白色结晶固体形式的N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-001。LCMS(方法A)：停留时间：3.36min,M/z＝559(M+1)。
1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺EV-AS1585-001(EOAI3436357)I-62-步骤9
向N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS1581-001,30mg,0.05mmol)于DCM(2ml)中的经搅拌溶液中添加三氟乙酸(1ml,13.0mmol)。将混合物在室温下搅拌3h。在氮气流下去除溶剂且自乙腈:水(1:1,4ml)冻干残余物以获得9.6mg(96.3％)白色粉末形式的1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1585-001I-62。LCMS(方法A)：停留时间：1.86min,M/z＝459(M+1)。
手性HPLC，获得N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-002和N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-003-步骤10
将90.4mgN-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-001溶于甲醇中且然后通过手性HPLC(方法K)纯化以获得36.2mgN-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-002(绝对立体化学任意指定)和34.4mgN-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AS1581-003(绝对立体化学任意指定)。
EV-AS1581-002手性纯度(UV,254nm)：100％，停留时间：7.58min(方法L)
EV-AS1581-003手性纯度(UV,254nm)：100％，停留时间：10.07min(方法L)
(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺EV-AS1592-001(EOAI3438020，绝对立体化学任意指定)I-64-步骤9
如流程1的步骤9中来处理N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS1581-002,36.2mg,0.07mmol)以获得37.1mg(64.6％)白色粉末形式的(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1592-001I-64。LCMS(方法A)：停留时间：1.86min,M/z＝459(M+1)。
(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺EV-AS1593-001(EOAI3437979，绝对立体化学任意指定)I-65-步骤9
如流程1的步骤9中来处理N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS1581-003,34.4mg,0.06mmol)以获得33.6mg(94.3％)白色粉末形式的(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基哌啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1593-001I-65。LCMS(方法A)：停留时间：1.86min,M/z＝459(M+1)。
根据流程2中所描述的程序经由流程2.1中所描述5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯EV-AR0054-002的合成来合成5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AS5709-003(EOAI3434977)I-116和5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AS5710-003(EOAI3434978)I-117：
流程2.1
Figure GDA0001834773910000841
向5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(CAS 6636-06-2,500mg,2.67mmol)于甲苯(10ml)和甲醇(3ml)中的经搅拌溶液中添加于己烷中的2M(重氮甲基)(三甲基)硅烷(2ml)且将混合物在氮气和室温下搅拌30分钟。向反应混合物中添加乙酸(1ml)且在真空中浓缩混合物以提供530mg(99％)浅黄色粉末形式的5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AR0054-002)。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝202(M+1)。
根据流程1中所描述的程序经由流程2.2中所描述1-[(3-羟基-3-甲基环丁基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU7265-001的合成来合成3-[(2-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-2-基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)甲基]-1-甲基环丁烷-1-醇EV-AU7275-001(EOAI3455096)I-110：
流程2.2
Figure GDA0001834773910000842
3-(羟基甲基)-1-甲基环丁烷-1-醇EV-AU7264-001-步骤1
在-78℃下，向3-羟基-3-甲基环丁烷甲酸(CAS 16286-86-5,950mg,7.30mmol)于THF(30ml)中的经搅拌溶液中逐滴添加BH3.Me2S(4.96ml,9.93mmol)。将反应液升温至室温并搅拌16h。使用无水MeOH(20ml)猝灭反应。将所得混合物减少至干燥以获得200mg(23.2％)无色油状物形式的3-(羟基甲基)-1-甲基环丁烷-1-醇EV-AU7264-001。
1-[(3-羟基-3-甲基环丁基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸酯EV-AU7265-001-步骤2
在氮气气氛和-20℃下，向DIAD(1.10ml,5.26mmol)于无水THF(10ml)中的经搅拌溶液中添加三苯基膦(1.39g,5.26mmol)于THF(10ml)中的溶液。将反应混合物搅拌30分钟，然后添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0,500mg,2.63mmol)于THF(10ml)中的溶液。在-20℃下进一步继续搅拌30min。在此时段之后，在-20℃下逐滴添加3-(羟基甲基)-1-甲基环丁烷-1-醇(EV-AU7264-001,458mg,3.94mmol)于THF(5ml)中的溶液，将反应混合物升温至室温并搅拌16h。在真空中浓缩混合物且通过快速柱层析(5-80％EtOAc/庚烷)纯化残余物以获得200mg(23.2％)浅黄色油状物形式的1-[(3-羟基-3-甲基环丁基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU7265-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.10min,M/z＝289(M+1)。
N-(2-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-2-基}-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙酰胺EV-AT0096-001(EOAI3447170)I-69得自N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-乙酰氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0094-001[根据流程2.3以N-[(3R)-1-{2-[4-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0086-001(根据流程2中所描述的程序来合成)为原料获得]的Boc-去保护。
流程2.3
Figure GDA0001834773910000851
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-[(二苯基亚甲基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0090-001-步骤1
将N-[(3R)-1-{2-[4-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AT0086-001,150mg,0.24mmol)、1,1-二苯基甲胺(53.2mg,0.29mmol)、Pd2dba3(5.6mg,0.006mmol)、BINAP(11.4mg,0.018mmol)和Cs2CO3(111.5mg,0.34mmol)于甲苯(4.0ml)中的混合物在密封管中在100℃下搅拌5h。将反应液冷却至室温并经由硅藻土过滤，使用EtOAc洗涤。将滤液蒸发至干燥，将剩余残余物溶于DMSO中并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得128mg(73.2％)黄色固体形式的N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-[(二苯基亚甲基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0090-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.38min,M/z＝708(M+1)。
N-[(3R)-1-{2-[4-氨基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0092-001-步骤2
将羟基胺盐酸盐(1:1)(58.3mg,0.839mmol)及NaOAc(90mg,1.09mmol)添加至N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-[(二苯基亚甲基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AT0090-001,120mg,0.168mmol)于MeOH(8ml)中的悬浮液中。将所得混合物在室温搅拌16h。在真空中去除溶剂，将剩余残余物溶于DMSO中并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化，获得86mg(94.3％)白色固体的N-[(3R)-1-{2-[4-氨基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0092-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.95min,M/z＝544(M+1)。
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-乙酰氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0094-001-步骤3
在室温下，向N-[(3R)-1-{2-[4-氨基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AT0092-001,80mg,0.15mmol)于DCM(4ml)中的溶液中添加乙酸酐(18mg,0.18mmol)和三乙胺(30mg,0.29mmol)且将反应液在室温下搅拌16h，然后在50℃下搅拌24h。在真空中去除溶剂，将剩余残余物溶于DMSO中并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得82mg(95.1％)白色泡沫形式的N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-乙酰氨基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AT0094-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.09min,M/z＝586(M+1)。
根据流程2中所描述的程序经由流程2.4中所描述N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(羟基甲基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9641-002的合成来合成{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-基}甲醇EV-AV9647-001(EOAI3455579)I-128。
根据流程2中所描述的程序经由流程2.4中所描述N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺酰基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9652-001的合成来合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺酰基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV9654-001(EOAI3455786)I-131：
流程2.4
Figure GDA0001834773910000861
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(羟基甲基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9641-002-步骤1
在-78℃下，向N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AV9639-001,50mg,0.08mmol)于无水THF(5.0ml)中的经搅拌溶液中逐滴添加正丁基锂(1.6M于己烷中，0.11ml,0.17mmol)。将反应液在-78℃下搅拌10分钟且一次性添加无水DMF(0.01ml,0.16mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟并经1h升温至室温。然后将反应混合物冷却至0℃且添加氯化铵饱和水溶液(1ml)。将双相混合物搅拌30分钟且然后分离各层。使用EtOAc(2×3ml)再萃取水相且通过硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。将粗制物质在0℃下溶于甲醇(5ml)中且添加硼氢化钠(6mg,0.16mmol)。将反应液在室温下搅拌16h且通过添加水(2ml)来猝灭并在真空中浓缩。将残余物分配于EtOAc(5ml)与水(2ml)之间，使用EtOAc(2×2ml)进一步萃取水层且通过硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(碱性方法)纯化粗制物以获得20mg(43％)灰白色粉末形式的N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(羟基甲基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9641-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.10min,M/z＝559(M+1)。
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺酰基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9652-001-步骤2
在氮气气氛下，向压力管中添加三氟甲磺酸铜(II)(45mg,0.12mmol)、甲烷亚磺酸钠(25mg,0.25mmol)和N,N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.03ml,0.26mmol)和DMSO(2.0ml)。将深蓝色反应液在室温下搅拌5分钟且添加N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AV9639-001,75mg,0.12mmol)。密封容器并在120℃下加热2h。使用水(15ml)稀释经冷却反应液并使用EtOAc(2×10ml)萃取。通过硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化残余物以获得20mg(27％)灰白色粉末形式的N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺酰基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9652-001。LCMS(方法D):1.18min,M/z＝607(M+1)。
流程3
Figure GDA0001834773910000871
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0076-002(EOAI3428370)I-13的合成
Figure GDA0001834773910000881
3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002-步骤1
向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8,2.00g,8.14mmol)于DMF(10ml)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(99％,1.37g,9.81mmol)。向此溶液中添加甲胺盐酸盐(1:1)(0.62g,9.18mmol)且将混合物在氮气和80℃下于密封管中搅拌16h。在真空中浓缩反应粗制物并分配于DCM(100ml)与水(10ml)之间。使用水(2×10ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)进一步洗涤有机层。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以提供橙色粉末，通过快速柱层析(15-40％EtOAc/庚烷)纯化以获得1.49g(76％)橙色粉末形式的3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.13min,M/z＝241(M+1)。
3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002-步骤2
在氮气下，向3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0065-002,1.49g,6.20mmol)于乙醇(100ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(0.18g,0.17mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。经由硅藻土过滤反应混合物且经由使用甲醇(150ml)洗涤滤器。在真空中浓缩滤液以提供1.21g(89％)浅紫色粉末形式的3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002。LCMS(方法D)：停留时间：0.63min,M/z＝211(M+1)。
1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001-步骤3
在室温下，将氢化钠(60％,59mg,1.47mmol)逐份添加至1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0,200mg,1.05mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌悬浮液中。将混合物搅拌20分钟，然后添加碘乙烷(197mg,1.26mmol)。将反应混合物搅拌20h。将混合物分配于EtOAc(20ml)与水(20ml)之间。使用EtOAc(1×20ml)进一步萃取水层，使用水(20ml)洗涤合并的有机物并蒸发至干燥。通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷)纯化粗产物以获得135mg(57.1％)无色油状物形式的1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.18min,M/z＝219(M+1)。
1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001-步骤4
向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AQ1957-001,135mg,0.62mmol)于THF(2ml)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(74mg,3.09mmol)的水溶液(2ml)。将混合物在50℃下搅拌2.5h，使用1M HCl(3ml)酸化并使用DCM(2×5ml)萃取。使用水洗涤合并的有机物并蒸发至干燥以得到120mg(99％)白色固体形式的1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.92min,M/z＝191(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003-步骤5
向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AQ1960-001,120mg,0.63mmol)于DMF(2ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(116μl,0.70mmol)，随后添加HATU(236mg,0.62mmol)且将所得混合物在室温下搅拌15分钟。添加3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR0068-002,148mg,0.70mmol)且将所得混合物在室温下搅拌6h。在真空中浓缩反应混合物，溶于乙酸(3ml)中并在70℃下搅拌16h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(25-40％EtOAc/庚烷)纯化剩余物质以获得150mg(63％)白色粉末形式的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003。LCMS(方法D)：停留时间：1.18min,M/z＝365(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002-步骤6
向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0070-003,150mg,0.41mmol)于THF(3ml)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(30mg,1.25mmol)的水溶液(3ml)且将混合物在室温下搅拌16h。在真空中浓缩反应混合物，吸收于水(5ml)中并在搅拌的同时使用5N HCl(0.5ml)酸化。将所得悬浮液搅拌10分钟，然后通过真空过滤收集沉淀物并干燥以获得130mg(89％)白色粉末形式的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.03min,M/z＝351(M+1)。
6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002-步骤7
向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR0072-002,130mg,0.37mmol)于2:1DMSO/MeCN(4.5ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(65μl,0.39mmol)和HATU(148mg,0.39mmol)。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，然后添加八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 949559-11-9,88mg,0.39mmol)且将混合物在室温下搅拌4h。使用3:2MeCN/水(1.5ml)稀释反应混合物并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得142mg(81％)白色粉末形式的6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002。LCMS(方法A)：停留时间：3.41min,M/z＝559(M+1)。
2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0076-002(EOAI3428370)I-13-步骤8
向6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0074-002,20mg,0.04mmol)于甲醇(1ml)中的经搅拌溶液中添加于1,4-二噁烷中的4M HCl(0.5ml)且将所得溶液在室温下搅拌4h。在真空中浓缩反应混合物且自水(4ml)冻干残余物以获得13.4mg(75％)黄色固体形式的2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AR0076-002I-13。LCMS(方法A)：停留时间：1.80min,M/z＝459(M+1)。
手性HPLC，获得(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-001和(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-002-步骤9
将107mg 6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0074-002溶于乙醇中且然后通过手性HPLC(方法E)纯化以获得46.6mg(43.6％)(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-001(绝对立体化学任意指定)和36.8mg(33.4％)(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AR0090-002(绝对立体化学任意指定)。
EV-AR0090-001，手性纯度(UV,254nm)：100％，停留时间：6.30min(方法F)
EV-AR0090-002，手性纯度(UV,254nm)：97％，停留时间：9.96min(方法F)
5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0091-002(EOAI3432499，绝对立体化学任意指定)I-3-步骤8
如流程2的步骤8中来处理(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0090-001,46mg,0.08mmol)以获得40mg(97％)橙色粉末形式的5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AR0091-002I-3。LCMS(方法A)：停留时间：1.83min,M/z＝459(M+1)。
5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002(EOAI3432500，绝对立体化学任意指定)I-14-步骤8
如流程2的步骤8中来处理(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-2-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AR0090-002,36.8mg,0.07mmol)以获得31mg(92.7％)橙色粉末形式的5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002I-14。LCMS(方法A)：停留时间：1.82min,M/z＝459(M+1)。
流程3的特殊情形
根据流程2中所描述的程序经由流程3.1中所描述1-[(1-甲基环丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3682-002的合成来合成(3S,5S)-5-氟-1-(7-甲氧基-1-甲基-2-{1-[(1-甲基环丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)哌啶-3-胺EV-AV3056-001(EOAI3454078)I-93：
流程3.1
Figure GDA0001834773910000911
在氮气和-20℃下，向DIAD(0.44ml,2.10mmol)于无水THF(5ml)中的溶液中添加三苯基膦(557mg,2.10mmol)于THF(5ml)中的溶液且将反应混合物搅拌30分钟。在-20℃下，向反应混合物中添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 394223-02-0,200mg,1.05mmol)于THF(7.5ml)中的溶液且将反应混合物在-20℃下进一步搅拌30分钟。在-20℃下，逐滴添加(1-甲基环丙基)甲醇(CAS 2746-14-7,0.15ml,1.58mmol)且将反应混合物升温至室温并搅拌1h 15min。在真空中浓缩反应混合物并通过快速柱层析(0-100％EtOAc)纯化以获得240mg(87％)黄色胶形式的1-[(1-甲基环丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3682-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.35min,M/z＝259(M+1)。
根据流程2中所描述的程序经由流程3.2中所描述的1-(1-环丙基乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3682-001的合成来合成(3R)-1-(2-{1-[(1R)-1-环丙基乙基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)哌啶-3-胺EV-AV3097-001(EOAI3454812)I-101和(3R)-1-(2-{1-[(1S)-1-环丙基乙基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)哌啶-3-胺EV-AV3098-001(EOAI3454813)I-102：
流程3.2
Figure GDA0001834773910000912
在氮气和-20℃下，向DIAD(0.44ml,2.1mmol)于无水THF(5ml)中的溶液中添加三苯基膦(557.18mg,2.1mmol)于THF(5ml)中的溶液且将反应混合物搅拌30分钟。在-20℃下，向反应混合物中添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 394223-02-0,200mg,1.05mmol)于THF(7.5ml)中的溶液且将反应混合物在-20℃下进一步搅拌30分钟。在-20℃下，逐滴添加1-环丙基乙烷-1-醇(CAS 765-42-4,0.15mL,1.58mmol)且将反应混合物升温至室温并搅拌1h 15分钟。在真空中浓缩反应混合物并通过使用通过快速柱层析(0-100％EtOAc)纯化来进行纯化以获得205mg(75％)黄色胶形式的1-(1-环丙基乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3682-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.35min,M/z＝259(M+1)。
根据流程2中所描述的程序经由流程3.3中所描述2-[1-(环丙基甲基)-6-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4834-002的合成来合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV4845-001(EOAI3454972)I-105：
流程3.3
Figure GDA0001834773910000921
向2-[6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4831-001(根据流程2来合成，150mg,0.31mmol)于无水THF(5ml)中的溶液中添加Fe(acac)3(6mg,0.02mmol)和NMP(150μl)。经1分钟逐滴添加乙基溴化镁的溶液(0.9M于THF中，411μl,0.37mmol)且将反应混合物在室温下搅拌3h。添加其他Fe(acac)3(6mg,0.02mmol)和乙基溴化镁(0.9M于THF中，411μl,0.37mmol)且将反应混合物在室温下搅拌16h。通过添加1M HCl(约1ml)来猝灭反应混合物并使用DCM(3×15ml)萃取。使用盐水(20ml)洗涤合并的有机物，通过硫酸镁干燥并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化粗制残余物以获得81mg(55％)无色玻璃形式的2-[1-(环丙基甲基)-6-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4834-002。LCMS(方法A)：停留时间：4.59min,M/z＝433(M+1)。
根据流程3.4来合成1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲基氨基)哌啶-3-醇EV-AV4609-001(EOAI3451154)I-77：
流程3.4
Figure GDA0001834773910000931
Rel-(3R,5R)-3-羟基-5-(甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4600-001-步骤1注意：起始材料和产物都是反式-外消旋物。
在0℃下，向rel-(3R,5R)-3-氨基-5-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯盐酸盐(100mg,0.40mmol)于无水THF(5ml)中的溶液中添加氢化钠(60％,35mg,0.87mmol)且将混合物在0℃下搅拌30分钟。向反应混合物中添加碘甲烷(26μl,0.41mmol)且将混合物升温至室温并搅拌16h。将反应混合物分配于乙酸乙酯(20ml)与水(20ml)之间。使用其他乙酸乙酯(2×15ml)洗涤水性萃取物，通过硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩以获得91mg(定量)黄色油状物形式的rel-(3R,5R)-3-羟基-5-(甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4600-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.23min,M/z＝231(M+1)。
Rel-(3R,5R)-3-{[(苄基氧基)羰基](甲基)氨基}-5-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4602-001-步骤2注意：起始材料和产物是反式-外消旋物
向rel-(3R,5R)-3-羟基-5-(甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4600-001(91mg,0.40mmol)于DCM(2ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(103μl,0.59mmol)，随后添加氯甲酸苄酯(56μl,0.40mmol)。将反应混合物搅拌1.5h，使用DCM(20ml)稀释并使用水(15ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机萃取物，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得58mg(18％)透明油状物形式的rel-(3R,5R)-3-{[(苄基氧基)羰基](甲基)氨基}-5-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4602-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.12min,M/z＝387(M+Na)。
Rel-N-[(3R,5R)-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯盐酸盐EV-AV4603-001-步骤3注意：起始材料和产物是反式-外消旋物
在氮气下，向rel-(3R,5R)-3-{[(苄基氧基)羰基](甲基)氨基}-5-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV4602-001(58mg,0.16mmol)于二噁烷(1ml)中的溶液中添加于二噁烷中的4MHCl(0.16ml,0.64mmol)。将混合物在室温下静置16h。向反应混合物中添加甲醇(0.5ml)和于二噁烷中的4M HCl(0.16ml,0.64mmol)且将混合物在室温下静置4h。然后在真空中浓缩反应混合物以获得59mg(43％)灰白色固体形式的rel-N-[(3R,5R)-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯盐酸盐EV-AV4603-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.76min,M/z＝265(M+1)。
N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯EV-AV4604-001-步骤4
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AU3032-001(根据流程2合成，60mg,0.16mmol)于DMF(3ml)中的溶液中添加DIPEA(31μl,0.18mmol)、HATU(67mg,0.18mmol)和rel-N-[(3R,5R)-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯盐酸盐EV-AV4603-001(48mg,0.16mmol)且将反应混合物在室温下搅拌1h。然后将混合物分配于EtOAc(40ml)与水(40ml)之间且通过硫酸钠干燥有机萃取物，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(碱性方法)纯化粗制残余物以获得22mg(22％)灰白色固体形式的N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯EV-AV4604-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.17min,M/z＝623(M+1)。
Rel-(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲基氨基)哌啶-3-醇盐酸盐EV-AV4609-001，I-77-步骤5注意：起始材料和产物是反式外消旋物
在氮气下，向rel-N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羟基哌啶-3-基]-N-甲基氨基甲酸苄酯EV-AV4604-001(22mg,0.04mmol)于乙醇(1ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(2.3mg,0.001mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。经由玻璃纤维烧结物质过滤反应混合物且然后使用于乙醇中的1.25M HCl(0.2ml)处理滤液。将混合物在室温下静置30分钟，在真空中浓缩并冻干以获得10.2mg(52％)灰白色粉末形式的rel-(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲基氨基)哌啶-3-醇盐酸盐EV-AV4609-001I-77。LCMS(方法A)：停留时间：1.93min,M/z＝489(M+1)。
根据流程3.5来合成1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-胺EV-AV4627-001(EOAI3452884)I-86：
流程3.5
Figure GDA0001834773910000951
外消旋-(3R,4R)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3800-001-步骤1(反式外消旋物)
在0℃下，向外消旋-(3R,4R)-3-氨基-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 1523530-23-5,750mg,3.47mmol)于DCM(10ml)中的溶液中添加三乙胺(1.45ml,10.4mmol)和氯甲酸苄酯(0.59ml,4.16mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟且然后升温至室温并进一步搅拌4h。然后使用水(10ml)将反应混合物猝灭并使用DCM(3×10mL)萃取。使用硫酸钠干燥合并的有机级分，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(20-80％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得615mg(52％)白色固体形式的外消旋-(3R,4R)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3800-001(反式-外消旋物)。LCMS(方法D)：停留时间：1.08min,M/z＝373(M+Na)。
外消旋-N-[(3R,4R)-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3801-001-步骤2(反式外消旋物)
将外消旋-(3R,4R)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3800-001(610mg,1.74mmol)溶于二噁烷(4M于二噁烷中，8.7ml)中并在室温下搅拌1h。在真空中浓缩反应混合物以获得408mg(82％)白色固体形式的外消旋-N-[(3R,4R)-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3801-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.48min,M/z＝251(M+1)。
外消旋-N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3805-001-步骤3(反式外消旋物)
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3032-001(535mg,1.42mmol)于DMF(5ml)中的溶液中添加HATU(595mg,1.57mmol)和DIPEA(0.59ml,3.56mmol)且将反应液在室温下搅拌30分钟。然后添加外消旋-N-[(3R,4R)-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3801-001(根据流程2来合成，408mg,1.42mmol)且将反应液在室温下进一步搅拌2h。然后使用EtOAc(10ml)稀释反应混合物，使用水(3×10ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤。然后干燥(硫酸钠)有机级分，过滤并在真空中浓缩以获得775mg(79％)橙色固体形式的外消旋-N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3805-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.12min,M/z＝609(M+1)。
外消旋-苯甲酸(3R,4S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-4-基酯EV-AV3814-001-步骤4(顺式外消旋物)
在0℃下，向三苯基膦(411mg,1.55mmol)于THF(1mol)中的溶液中添加DIAD(325μl,1.55mmol)。将反应混合物搅拌5分钟且添加外消旋-N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3805-001(675mg,1.11mmol)和苯甲酸(190mg,1.55mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h且然后使用EtOAc(15ml)稀释。使用水(10ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤混合物。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(50-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得743mg(49％)外消旋-苯甲酸(3R,4S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-4-基酯EV-AV3814-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.36min,M/z＝713(M+1)。
外消旋-N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3819-001-步骤5(顺式外消旋物)
向外消旋-苯甲酸(3R,4S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-4-基酯EV-AV3814-001(0.74g,0.54mmol)于乙醇(10ml)和水(5ml)中的溶液中添加K2CO3(0.11g,0.81mmol)且将溶液在室温下搅拌3h。然后在真空中浓缩反应混合物，将粗制残余物溶于DCM(10ml)中并使用水(10ml)洗涤。然后使用氯化钠饱和水溶液(10mL)洗涤有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-20％甲醇/EtOAc)纯化粗制物以获得214mg(64％)白色固体形式的外消旋-N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV3819-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝609(M+1)。
外消旋-N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV4626-001-步骤6(顺式外消旋物)
在压力管中，向外消旋-N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯(EV-AV3819-001,214mg,0.35mmol)和碘化铜(I)(13.4mg,0.070mmol)于乙腈(2ml)中的经搅拌悬浮液中添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(125mg,0.70mmol)。密封容器且将反应混合物在80℃下搅拌2h。向经冷却反应混合物中添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(125mg,0.70mmol)，密封容器且将反应混合物在80℃下进一步搅拌2h。再次冷却反应混合物且添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(125mg,0.70mmol)，密封容器且将反应混合物在80℃下进一步搅拌2h。然后在真空中浓缩反应混合物且通过快速柱层析(20-100％EtOAc/庚烷)纯化残余物，随后通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得33mg(14％)白色固体形式的外消旋-N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯EV-AV4626-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.27min,M/z＝659(M+1)。
外消旋-(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-胺EV-AV4627-001(EOAI3452884)I-86-步骤7(顺式外消旋物)
在氮气下，向外消旋-N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯(EV-AV4626-001,33mg,0.05mmol)于乙醇(2ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(3.2mg,0.002mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌5h。经由玻璃纤维烧结物质过滤反应混合物且然后使用于乙醇中的1.25M HCl(0.3ml)处理滤液。将混合物在室温下静置30分钟，在真空中浓缩并冻干以获得28.2mg(98％)灰白色粉末形式的外消旋-(3R,4S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)哌啶-3-胺EV-AV4627-001(I-86)。LCMS(方法A)：停留时间：2.20min,M/z＝524(M+1)。
根据流程3.6中所描述的程序来合成1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-胺EV-AV3807-001(EOAI3451007)I-75：
流程4.6
Figure GDA0001834773910000971
甲烷磺酸1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-基酯EV-AV3803-001-步骤1
在0℃下，向1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-醇(EV-AU3293-001，根据流程2合成，570mg,1.19mmol)于DCM(10ml)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25ml,1.79mmol)和甲磺酰氯(0.11ml,1.43mmol)。将反应液在室温下搅拌2h。向混合物中添加水(5ml)且收集有机层，通过硫酸钠干燥并在真空中浓缩以获得663mg(定量)甲烷磺酸1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-基酯EV-AV-3803-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝556(M+1)。
5-(3-叠氮基-4-氟哌啶-1-羰基)-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AV3804-001-步骤2
向甲烷磺酸1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-基酯(EV-AV-3803-001,610mg,1.10mmol)于DMSO(10ml)中的经搅拌溶液中添加叠氮化钠(285mg,4.39mmol)。将反应液在120℃下搅拌14h。将反应液冷却至室温，然后使用EtOAc(20ml)稀释，使用水(3×20ml)洗涤且然后使用氯化钠饱和水溶液(20ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(50-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得191mg(34.6％)橙色固体形式的5-(3-叠氮基-4-氟哌啶-1-羰基)-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AU3804-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.19min,M/z＝503(M+1)。
1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-胺EV-AV3807-001(EOAI3451007)I-75-步骤3
在氮气下，向5-(3-叠氮基-4-氟哌啶-1-羰基)-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑(EV-AU3804-001,191mg,0.38mmol)于EtOAc(5ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(81mg,0.04mmol)。将混合物置于氢气气氛下并在室温下搅拌12h。经由玻璃纤维过滤器过滤混合物并使用甲醇洗涤滤器。在真空中浓缩滤液且通过制备型HPLC(碱性方法)纯化残余物以获得80mg(44.2％)白色固体形式的1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟哌啶-3-胺EV-AV3807-001(I-75)。LCMS(方法A)：停留时间：2.01min,M/z＝477(M+1)。
根据流程3.7中所描述的程序经由1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯EV-AT8698-001来合成5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲腈EV-AV4621-001(EOAI3452077)I-82。这根据流程3的步骤7中所描述的程序使用5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯来制备。5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯根据流程3的步骤7中所描述的程序自5-羟基哌啶-1,3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(CAS1095010-45-9)来制备。
流程3.7
Figure GDA0001834773910000991
1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲烷磺酰基氧基)哌啶-3-甲酸甲酯EV-AT8699-001-步骤1
在0℃下，向1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯(EV-AT8698-001,275mg,0.53mmol)于DCM(8ml)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.11ml,0.80mmol)和甲磺酰氯(49μl,0.64mmol)。将混合物在冰冷却下搅拌2h。添加其他甲磺酰氯(25μl,0.32mmol)且将反应液在室温下搅拌16h。向混合物中添加水(5ml)且收集有机层，通过硫酸钠干燥并在真空中浓缩以获得316mg(定量)黄色油状物形式的1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲烷磺酰基氧基)哌啶-3-甲酸甲酯EV-AT8699-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.12min,M/z＝596(M+1)。
5-叠氮基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4601-001-步骤2
向1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲烷磺酰基氧基)哌啶-3-甲酸甲酯(EV-AT8699-001,316mg,0.53mmol)于DMSO(2ml)中的经搅拌溶液中添加叠氮化钠(86mg,1.33mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌16h。将反应液冷却至室温并分配于EtOAc(40ml)与水(30ml)之间。通过硫酸钠干燥有机层并在真空中浓缩。通过快速柱层析(50-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得141mg(43.1％)灰白色固体形式的5-叠氮基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4601-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.19min,M/z＝543(M+1)。
5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4605-001-步骤3
在氮气下，向5-叠氮基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4601-001,131mg,0.24mmol)于乙醇中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(0.15g,0.01mmol)。将反应混合物置于氢气气氛下并在室温下搅拌16h。经由玻璃纤维过滤器过滤反应液且在真空中浓缩滤液以获得98mg(46.0％)黄色油状物形式的5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4605-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.92min,M/z＝517(M+1)。
5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4610-001-步骤4
向5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4605-001,77mg,0.15mmol)于二噁烷(1ml)中的经搅拌溶液中添加碳酸氢钠饱和水溶液(1ml)和boc酐(39mg,0.18mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1h。将混合物分配于EtOAc(20ml)与水(20ml)之间。使用EtOAc(15ml)萃取水层且通过硫酸钠干燥合并的有机物并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得62mg(63.2％)灰白色粉末形式的5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯EV-AV4610-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.20min,M/z＝617(M+1)。
5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸EV-AV4611-001-步骤5
向5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4610-001,62mg,0.10mmol)于甲醇(1ml)中的经搅拌溶液中添加1M氢氧化钠水溶液(0.5ml)。将所得混合物在室温下搅拌16h。在真空中浓缩混合物以去除甲醇。使用1M盐酸水溶液将所得水溶液酸化至pH～4-5直至形成沉淀为止。过滤掉固体并在真空下干燥以获得58mg(89.4％)灰白色粉末形式的5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸EV-AV4611-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.13min,M/z＝603(M+1)。
N-(5-氨基甲酰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯EV-AV4612-001-步骤6
向5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲酸(EV-AV4611-001,58mg,0.96mmol)于DMF(1ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(34μl,0.19mmol)、HATU(46mg,0.12mmol)和氯化铵(10mg,0.19mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1h。将混合物分配于EtOAc(40ml)与水(40ml)之间。使用EtOAc(40ml)进一步萃取水层且通过硫酸钠干燥合并的有机物并在真空中浓缩以获得65mg(97.7％)黄色油状物形式的N-(5-氨基甲酰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯EV-AV4612-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.09min,M/z＝602(M+1)。
N-(5-氰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯EV-AV4615-004-步骤7
向N-(5-氨基甲酰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(EV-AV4612-001,65mg,0.10mmol)于无水二噁烷(1ml)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(44.3μl,0.32mmol)和三氟乙酸酐(30μl,0.22mmol)。将反应液在室温下搅拌5h。使用三乙胺(44.3μl,0.32mmol)和三氟乙酸酐(30μl,0.22mmol)再处理混合物并在室温下搅拌16h。使用三乙胺(44.3μl,0.32mmol)和三氟乙酸酐(30μl,0.22mmol)再处理混合物并在室温下搅拌2h。使用三乙胺(44.3μl,0.32mmol)和三氟乙酸酐(30μl,0.22mmol)再处理混合物并搅拌2h。使用三乙胺(44.3μl,0.32mmol)和三氟乙酸酐(30μl,0.22mmol)再处理混合物并在室温下搅拌2h。将混合物分配于EtOAc(20ml)与氯化铵饱和水溶液(20ml)之间。使用EtOAc(20ml)萃取水层且通过硫酸钠干燥合并的有机物并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得2批产物，通过制备型HPLC(碱性方法)单独纯化以获得9mg(14.3％)灰白色粉末形式的N-[(3R,5S)-5-氰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV4615-003。任意指定为外消旋顺式-非对映异构体。LCMS(方法D)：停留时间：1.21min,M/z＝584(M+1)。还获得11mg(17.5％)灰白色粉末形式的N-[(3R,5S)-5-氰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV4615-004。任意指定为外消旋反式-非对映异构体。LCMS(方法D)：停留时间：1.19min,M/z＝584(M+1)。
5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲腈EV-AV4621-001(EOAI3452077)I-82-步骤8
将N-(5-氰基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(EV-AV4615-004,11mg,0.02mmol)于10％三氟乙酸于DCM中的溶液(1ml)在室温下静置1h。在真空中浓缩反应液且自1:1乙腈:水(4ml)冻干残余物以获得11.6mg(定量)白色粉末形式的5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-甲腈三氟乙酸EV-AV4621-001(I-82)。LCMS(方法A)：停留时间：2.08min,M/z＝484(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由如流程3.8中所描述2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-羟基-3-乙基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX8640-001的氘代甲基化来获得(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[3-(2H3)甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY5000-002(EOAI3462946)I-238：
流程3.8
Figure GDA0001834773910001021
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-(2H3)甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX2096-001-步骤1
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-羟基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AX8640-001,85％,250mg,0.45mmol)于DMF(2.0ml)中的经搅拌溶液中添加氢化钠(60％,36mg,0.90mmol)。将所得混合物在室温下搅拌10分钟且添加碘(2H3)甲烷(CAS 865-50-9,84μl,1.34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4.5h并在真空中浓缩。将残余物分配于EtOAc(20ml)与水(15ml)之间。使用EtOAc(2×10ml)再萃取水层且使用水(10ml)、氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤合并的有机物，通过硫酸钠干燥并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷)纯化所得材料以获得184mg(75％)浅黄色固体形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-(2H-3-)甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX2096-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.43min,M/z＝492(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.9中所描述2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5361-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5368-001(EOAI3460286)I-189：
流程3.9
Figure GDA0001834773910001022
2-{6-乙烯基-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5353-002-步骤1
向2-{6-氯-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AW5326-001,500mg,1.25mmol)于二噁烷(10ml)中的溶液中添加三丁基(乙烯基)锡烷(477mg,1.50mmol)。使用氮气将反应混合物吹扫15min，然后添加Xantphos(54mg,0.04mmol)和Pd2dba3(29mg,0.03mmol)。将所得混合物在110℃下搅拌16h。在真空中浓缩反应液且通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得340mg(66％)白色固体形式的2-{6-乙烯基-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5353-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.34min,M/z＝391(M+1)。
2-{1-乙基-6-甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5355-001-步骤2
向2-{6-乙烯基-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AW5353-002,89％,470mg,1.07mmol)于THF:水(2:1,9ml)中的溶液中添加叔丁醇(0.10ml)、4-甲基吗啉4-氧化物(188mg,1.61mmol)及OsO4(0.10ml于水中，0.02mmol)。将反应液在室温下搅拌5h，添加NaIO4(687mg,3.20mmol)并在室温下继续搅拌16h。经由硅藻土垫过滤反应混合物并使用EtOAc洗涤。使用水(20ml)稀释滤液并使用EtOAc(3×20ml)萃取。使用氯化钠饱和水溶液洗涤合并的有机萃取物，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-40％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得270mg(62％)黄色固体形式的2-{1-乙基-6-甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5355-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.24min,M/z＝393(M+1)。
2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5361-001-步骤3
在室温下，向2-{1-乙基-6-甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(200mg,0.50mmol)于DCM(10ml)中的溶液中添加2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-(三氟-λ～4～-硫烷基)乙胺(CAS,202289-38-1,0.45ml,1.24mmol)。将反应混合物在45℃下搅拌16h，冷却至室温并倾倒于冰/水上。使用饱和碳酸氢钠中和水层并使用DCM(3×20ml)萃取。通过硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-40％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得105mg(49％)白色固体形式的2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5361-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.33min,M/z＝415(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.10中所描述6-(二氟甲氧基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW9553-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(二氟甲氧基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW9564-001(EOAI3460927)I-200：
流程3.10
Figure GDA0001834773910001041
将2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(CAS 1717-59-5,912mg,5.12mmol)添加至N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羟基哌啶-3-基]氨基甲酸苄酯(EV-AW9553-001，根据流程3.18来合成，451mg,2.05mmol)和硫酸钠(291mg,2.05mmol)于乙腈(10ml)中的经搅拌悬浮液中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在真空中浓缩反应粗制物且通过快速柱层析(0-60％EtOAc/庚烷)纯化残余物以获得327mg(59％)灰白色固体形式的6-(二氟甲氧基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW9553-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.30min,M/z＝271(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.11中所描述2-[7-(环丙基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX1646-002的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[7-(环丙基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AX1665-002(EOAI3460929)I-202：
流程3.11
Figure GDA0001834773910001042
向2-[2-氯-7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AX1644-002,134mg,0.31mmol)于DME(5ml)中的溶液中添加碳酸钾(87mg,0.63mmol)、PdCl2dppf(26mg,0.03mmol)和三甲基硼氧六环(3.5M于THF中，0.36ml,1.26mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌15h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷，然后0-40％甲醇/EtOAc)纯化粗制残余物以获得94mg(70％)灰白色固体形式的2-[7-(环丙基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX1646-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.05min,M/z＝406(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.12中所描述1-(环丙基甲基)-6-(2-羟基丙烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6273-002的合成来合成2-(2-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-2-基}-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)丙烷-2-醇EV-AW6283-001(EOAI3461372)I-210：
流程3.12
Figure GDA0001834773910001051
6-乙酰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6271-002-步骤1
向6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(EV-AW6269-001,90％,1.16g,3.93mmol)于无水二噁烷(3ml)中的溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(1.59ml,4.71mmol)、Xantphos(0.17g,0.29mmol)和Pd2dba3(0.09g,0.10mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌17h。在真空中去除溶剂且向残余物中添加1M HCl(50ml)和DCM(50ml)。将双相混合物搅拌20分钟，然后分离有机层并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-10％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得0.512g(47％)灰白色固体形式的6-乙酰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6271-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.40min,M/z＝273(M+1)。
1-(环丙基甲基)-6-(2-羟基丙烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6273-002-步骤2
在-78℃下，将甲基氯化镁(3M于THF中,642μl)逐滴添加至6-乙酰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(EV-AW6271-002,510mg,1.84mmol)于无水THF(5ml)中的经搅拌溶液中。将反应液在-78℃下搅拌2.5h。在-78℃下添加其他甲基氯化镁(3M于THF中，61μl)并继续搅拌30分钟。使用水(20ml)猝灭反应且在真空中去除THF。将1MHCl添加至水层中直至pH 3。使用EtOAc(2×30ml)萃取水层。通过硫酸镁干燥合并的萃取物，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-35％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得410mg(76％)灰白色固体形式的1-(环丙基甲基)-6-(2-羟基丙烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6273-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.23min,M/z＝289(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.13中所描述2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0016-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY0021-001(EOAI3461556)I-214。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.13中所描述2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亚磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0014-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亚磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY0020-001(EOAI3461555)I-213。
流程3.13
Figure GDA0001834773910001061
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亚磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0014-001-步骤1
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AY0013-001,260mg,0.52mmol)于甲醇(8ml)和水(2ml)中的经搅拌溶液中添加NaIO4(122mg,0.57mmol)。将反应液在室温下搅拌18h。在真空中去除溶剂且将残余物分配于EtOAc(20ml)与水(50ml)之间。使用EtOAc(2×20ml)进一步萃取水层。使用氯化钠饱和水溶液(20ml)洗涤合并的有机物，通过硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷，然后1-10％甲醇/DCM)纯化残余物以获得220mg(91％)红色泡沫形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亚磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0014-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.08min,M/z＝467(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0016-001-步骤2
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亚磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AY0014-001,135mg,0.29mmol)于甲醇(40ml)中的经搅拌溶液中添加KMnO4(50mg,0.32mmol)。将反应液在室温下搅拌15分钟。通过添加硫酸氢钠饱和水溶液(20ml)来猝灭反应。通过硅藻土过滤混合物并在真空中浓缩滤液。在EtOAc(20ml)和水(50ml)中稀释残余物且使用EtOAc(2×20ml)萃取水层。使用氯化钠饱和水溶液(20ml)洗涤合并的有机物，通过硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发以获得115mg(81％)褐色固体形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺酰基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0016-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.15min,M/z＝483(M+1)。
分别遵循流程3及3.14中所描述的程序自外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-001和外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-002的Boc-去保护来获得外消旋-[(2R,5S)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4303-001(EOAI3462115)I-220和外消旋-[(2R,5R)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4304-001(EOAI3462116)I-221：
流程3.14
Figure GDA0001834773910001071
5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-2-甲酸甲酯EV-AX4571-001-步骤1
在氮气气氛下，向5-氨基吡啶-2-甲酸甲酯(CAS 67515-76-8,1.8g,11.83mmol)于DCM(40ml)中的经搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(2.84g,13.01mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.14g,1.18mmol)且将反应液在室温下搅拌5h。过滤反应混合物(使用DCM冲洗滤器)，使用DCM(100ml)稀释滤液并使用水(2×100ml)洗涤。使用硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以获得2.73g(60％)灰白色固体形式的5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-2-甲酸甲酯EV-AX4571-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.01min,M/z＝253(M+1)。
N-[6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4573-001-步骤2
在0℃和氮气气氛下，向5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-2-甲酸甲酯(EV-AX4571-001,2.73g,10.82mmol)于THF(60ml)中的经搅拌溶液中逐滴添加于乙醚中的4M四氢合铝酸锂(1-)(4.1ml)，将反应液升温至室温并进一步搅拌12h。通过添加THF:水(9:1,15ml)、随后10％氢氧化钠(10ml)且然后水(10ml)来猝灭反应。然后经由硅藻土垫过滤反应混合物，使用THF(3×50ml)冲洗。在真空中浓缩滤液且通过快速柱层析(50-100％EtOAc/庚烷，然后0-10％甲醇/EtOAc)纯化粗制物以获得1.50g(60％)灰白色固体形式的N-[6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4573-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.70min,M/z＝224(M+1)。
乙酸N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4576-001-步骤3
向压力容器中添加N-[6-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX4573-001,1.50g,6.69mmol)于乙醇(25ml)和乙酸(1.5ml)中的溶液。添加PtO2(266mg,1.17mmol)且使用氮气吹扫压力容器，然后密封反应液并在氢气气氛(55psi,3.75atm)和65℃下搅拌16h。经由硅藻土垫过滤反应混合物并在真空中浓缩以获得2.40g(99％)橙色油状物形式的乙酸N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4576-001。无LCMS数据。
5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-2-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸苄酯EV-AX4584-001-步骤4
在0℃下，向乙酸N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX4576-001,70％,2.00g,4.82mmol)于THF(40ml)和水(12ml)中的经搅拌溶液中添加碳酸氢钠(1.22g,14.47mmol)和氯甲酸苄酯(0.62ml,4.34mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌15分钟，将溶液升温至室温并继续搅拌4h。使用水(10ml)稀释反应混合物并使用EtOAc(3×5ml)萃取。通过硫酸镁干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(40-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制物以获得1.40g(80％)白色固体形式的5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-2-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸苄酯EV-AX4584-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.12min,M/z＝387(M+23)。
N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4591-001-步骤5
向5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-2-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(EV-AX4584-001,1.40g,3.84mmol)于乙醇(20ml)中的溶液中添加披钯碳(5％,0.82g,0.38mmol)且将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌14h。经由硅藻土垫(使用甲醇洗涤)过滤混合物且在真空中浓缩滤液以获得0.82g(93％)无色油状物形式的N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4591-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.20min,M/z＝231(M+1)。
外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-001和外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-002-步骤6
在室温下，向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AX2063-001,200mg,0.53mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(463μl,2.66mmol)、HATU(222mg,0.58mmol)和N-[6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX4591-001,122mg,0.53mmol)。将反应混合物搅拌1h并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性)纯化粗制物以获得2种产物：
70mg(22％)灰白色固体形式的外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.18min,M/z＝589(M+1)；
220mg(70％)灰白色固体形式的外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.19min,M/z＝589(M+1)。
自外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-001的手性拆分、随后如流程3中所描述实施Boc-去保护来获得[(2S,5R)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4308-001(EOAI3462646)I-226和[(2R,5S)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4309-001(EOAI3462647)I-227。任意指定两种产物的绝对构型。
自外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AX4594-002的手性拆分、随后如流程3中所描述实施Boc-去保护来获得[(2R,5R)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4310-001(EOAI3462648)I-228和[(2S,5S)-5-氨基-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-2-基]甲醇EV-AY4311-001(EOAI3462649)I-229。任意指定两种产物的绝对构型。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.15中所描述7-(环丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-006的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[7-(环丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AX5554-001(EOAI3468827)I-239：
流程3.15
Figure GDA0001834773910001091
7-(环丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-006-步骤1
在0℃下，经1分钟向2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(EV-AX2018-001,1.00g,4.68mmol)于无水DMF(20ml)中的经搅拌溶液中逐份添加氢化钠(60％,0.28g,7.02mmol)。在30分钟之后，在0℃下添加(溴甲基)环丙烷(680μl,7.01mmol)。使反应液升温至室温并搅拌60h。在真空中浓缩反应混合物且将所得残余物分配于EtOAc(50ml)与水(30ml)之间。分离各层且使用0.5M HCl(30ml)和氯化钠饱和水溶液(30ml)洗涤有机相。通过硫酸镁干燥有机层，过滤并在减压下浓缩。通过快速柱层析(5-40％EtOAc/庚烷)纯化粗制物以获得4种产物：
113mg(8％)灰白色粉末形式的2-氯-7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸环丙基甲基酯EV-AX5535-003。LCMS(方法D)：停留时间：1.38min,M/z＝306/308(M+1)；
256mg(20％)灰白色结晶固体形式的2-氯-7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-004。LCMS(方法D):1.24min,M/z＝266/268(M+1)；
93mg(6％)黄色胶形式的7-(环丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸环丙基甲基酯EV-AX5535-005。LCMS(方法D)：停留时间：1.32min,M/z＝302(M+1)；
197mg(16％)黄色结晶固体形式的7-(环丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-006。LCMS(方法D)：停留时间：1.20min,M/z＝262(M+1)。
遵循流程3中所描述的程序经由流程3.16中所描述1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX4144-003的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AX4151-006(EOAI3476815)I-269：
流程3.16
Figure GDA0001834773910001101
6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4139-001-步骤1
将6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AU7974-001,500mg,1.99mmol)于甲苯(30ml)中的经搅拌悬浮液加热至85℃，然后逐滴添加N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(2.0ml,8.34mmol)。将反应液在85℃下搅拌2h且添加其他N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(2.0ml,8.34mmol)。在85℃下继续搅拌18h，然后在100℃下搅拌3h。在冷却之后，使用EtOAc(200ml)稀释反应混合物，使用氯化钠饱和水溶液(50ml)洗涤，通过硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-10％EtOAc/庚烷)纯化粗制物以获得366mg(60％)无色油状物形式的6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4139-005。LCMS(方法D)：停留时间：1.66min,M/z＝307/309(M+1)
1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4142-001-步骤2
向6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯(EV-AX4139-005,366mg,1.19mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌溶液中添加四甲基氟化铵(CAS 373-68-2,250mg,2.68mmol)且将混合物在80℃下搅拌18h。在冷却之后，将反应混合物分配于DCM(200ml)、水(100ml)和氯化钠饱和水溶液(100ml)之间。分离有机层，使用氯化钠饱和水溶液(50mL)进一步洗涤，通过硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-10％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得112mg(32％)无色油状物形式的1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4142-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.61min,M/z＝291(M+1)。
1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX4144-003-步骤3
将1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯(EV-AX4142-001,100mg,0.34mmol)于TFA(2.0ml,26.2mmol)中的溶液在室温下搅拌3h。在真空中浓缩之后，将残余物吸收于DCM并浓缩以得到80mg(89％)黄色固体形式的1-(环丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX4144-003。LCMS(方法D)：停留时间：1.15min,M/z＝235(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.17中所描述1-(环丙基甲基)-6-(氧杂环己烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AY7184-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-6-(氧杂环己烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY7194-001(EOAI3477013)I-275：
流程3.17
Figure GDA0001834773910001111
1-(环丙基甲基)-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AY7182-001-步骤1
将6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7177-001,90％,950mg,3.07mmol)和2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CAS 287944-16-5,709mg,3.37mmol)溶于THF:甲苯(4:1,10ml)中且添加2M碳酸钠(3.07ml)。使用氮气将反应混合物吹扫5分钟且添加Pd(dppf)Cl2(449mg,0.61mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌4h，冷却至室温并在真空中浓缩。将所得残余物溶于EtOAc(20ml)中并使用水(2×10ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机层并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-50％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得587mg(56％)橙色油状物形式的1-(环丙基甲基)-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AY7182-001。LCMS(方法D):1.52min,M/z＝327(M+1)。
1-(环丙基甲基)-6-(氧杂环己烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AY7184-001-步骤2
向1-(环丙基甲基)-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7182-001,587mg,1.71mmol)于EtOAc:乙醇(1:1,30ml)中的经搅拌溶液中添加Pd/C(10％,91mg,0.09mmol)。将反应液置于氢气气氛下并在室温下搅拌18h。经由硅藻土垫过滤反应液并经由使用甲醇(30ml)洗涤。在真空中浓缩滤液以获得516mg(83％)灰白色粉末形式的1-(环丙基甲基)-6-(氧杂环己烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AY7184-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.51min,M/z＝329(M+1)。
遵循流程3中所描述的程序经由流程3.18中所描述1-(环丙基甲基)-6-(2H3)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AZ5103-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-6-(2H3)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AZ5120-001(EOAI3478073)I-285：
流程3.18
Figure GDA0001834773910001121
1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX5573-002-步骤1
将6-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7167-001,90％,1.45g,4.68mmol)、Pd2(dba)3(214mg,0.23mmol)、tBu-BippyPhos(237mg,0.47mmol)和氢氧化钾(788mg,14.0mmol)合并于压力管中的二噁烷(7ml)和水(7ml)中。使用氮气将反应混合物吹扫5分钟，然后密封容器并在70℃下加热1.5h。将反应混合物冷却至室温并经由玻璃纤维滤纸过滤。将滤液分配于水(10ml)与EtOAc(30ml)之间。使用2MHCl将水层酸化至pH5且过滤所得沉淀物并干燥以获得0.80g(62％)灰白色粉末形式的1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX5573-002。LCMS(方法D)：停留时间：0.95min,M/z＝233(M+1)。
1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AY4950-002-步骤2
在氮气气氛下，向1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AX5573-002,73％,550mg,1.73mmol)于无水甲苯(6ml)和无水甲醇(2ml,49.44mmol)中的经搅拌悬浮液中添加2M(重氮甲基)(三甲基)硅烷(1.73ml，于乙醚中)。将所得混合物在室温下搅拌1.5h。添加乙酸(约0.7ml)直至亮黄色消失为止。在真空中浓缩反应混合物并使用DCM(5ml)研磨。过滤掉固体并干燥以提供131mg(28％)浅灰棕色固体形式的1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AY4950-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.13min,M/z＝247(M+1)。
1-(环丙基甲基)-6-(2H3)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AZ5013-001-步骤3
向1-(环丙基甲基)-6-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AY4950-001,100mg,0.40mmol)于DMF(30ml)中的经搅拌溶液中添加氢化钠(60％,32mg,0.80mmol)。将反应液在室温下搅拌10分钟，然后添加碘(2H3)甲烷(74μl,1.19mmol)。将反应混合物在室温下搅拌17h，使用EtOAc(20ml)稀释，使用水(2×20ml)和氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤。干燥有机相并在真空中浓缩以获得黄色粉末形式的1-(环丙基甲基)-6-(2H3)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AZ5013-001(85mg,75％)。LCMS(方法D)：停留时间：1.36min,M/z＝264(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.19中所描述1-(环丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ5111-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AZ5131-001(EOAI3478196)I-292：
流程3.19
Figure GDA0001834773910001131
1-(环丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ5111-001-步骤1
向1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AZ5106-001,1.00g,4.09mmol)于DMF(20ml)中的经搅拌溶液中添加
Figure GDA0001834773910001133
(CAS 140681-55-6,1.45g,4.09mmol)。将所得混合物在室温下搅拌60h。在真空中浓缩反应混合物且将残余物溶于EtOAc(20ml)中并使用水(3×20ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机相并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-50％DCM/庚烷)纯化粗制物以获得245mg(22％)黄色油状物形式的1-(环丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ5111-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.33min,M/z＝263(M+1)。
遵循流程3中所描述的程序经由流程3.16和3.20中所描述1-(环丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4168-003的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY4588-001(EOAI3478689)I-294：
流程3.20
Figure GDA0001834773910001132
1-(环丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4168-003-步骤1
向4-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯(EV-AX4167-001,820mg,2.67mmol)于无水DMF(10ml)中的经搅拌溶液中添加四甲基氟化铵(500mg,5.36mmol)且将混合物在80℃下搅拌18h。将反应混合物分配于DCM(200ml)与碳酸氢钠饱和水溶液(200ml)之间。使用DCM(2×100ml)洗涤水层且使用氯化钠饱和水溶液(100ml)洗涤合并的有机物，通过硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-10％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得401mg(52％)无色油状物形式的1-(环丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸叔丁酯EV-AX4168-003。LCMS(方法D)：停留时间：1.48min,M/z＝291(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程3.21中所描述1-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ2525-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AX5592-001(EOAI3478190)I-287：
流程3.21
Figure GDA0001834773910001141
1-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ2525-001-步骤1
将吗啉(74μl,0.86mmol)、Pd2(dba)3(33mg,0.04mmol)、Xantphos(41mg,0.07mmol)和叔丁醇钠(103mg,1.07mmol)添加至含有6-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AZ2517-001,231mg,0.71mmol)于甲苯(6ml)中的氮气吹扫溶液的压力管中。在氮气环境下密封压力管。将反应混合物在110℃下加热2h，冷却至室温，使用水(10ml)稀释并使用EtOAc(3×10ml)萃取。使用氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤合并的有机层，通过硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-20％EtOAc/庚烷)纯化粗制物以获得60mg(25％)黄色固体形式的1-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ2525-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.35min,M/z＝330(M+1)。
流程4
Figure GDA0001834773910001151
5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AV3043-001(EOAI3452073，绝对立体化学任意指定)I-24的合成
Figure GDA0001834773910001152
4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AU3635-002-步骤1
请注意：在相同组条件下一式两份实施反应。在甲醇猝灭之后如下文所描述合并来自每一反应的粗制物。
在0℃和氮气下，经20分钟向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8,5.00g,20.4mmol)于无水DCM(20ml)中的经搅拌溶液中逐滴添加BBr3(1M于DCM中，40.71ml,2.81mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟且然后升温至室温并搅拌15h。将反应混合物冷却至0℃，使用甲醇小心猝灭，合并并在真空中浓缩。将残余物溶于甲醇(300ml)中，添加浓硫酸(10滴)并将反应混合物在75℃下搅拌5h。在真空中浓缩经冷却混合物且向残余物中小心添加水(50ml)和饱和NaHCO3(50mL)以实现碱性pH。将悬浮液超音波处理15分钟并进一步搅拌30分钟，然后收集所得固体并在真空过滤下干燥。使用水(25ml)洗涤固体并干燥以提供8.14g(82.9％)浅褐色粉末形式的4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AU3635-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.11min,M/z＝230(M+1)。
4-氯-3-(二氟甲氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AT8693-001-步骤2
请注意：在相同组条件下一式三份实施反应。如下文所描述合并来自每一反应的粗制物以用于后处理。
在压力管中，向4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AU3635-002,333mg,4.32mmol)和碳酸钾(7.17g,155.4mmol)于乙腈:水(1:1,20ml)中的溶液中添加2-氯-2,2-二氟-1-苯基乙酮(1.06ml,21.6mmol)。密封容器并在80℃下加热16h。合并经冷却反应混合物并分配于EtOAc(200ml)与2M HCl(水溶液)之间。使用更多的EtOAc(2×100ml)反萃取水性部分(在约pH5下)。通过硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。将残余物溶于甲醇(150ml)中，添加浓硫酸(3滴)并将反应液在75℃下搅拌40h。在真空中浓缩冷却混合物且向残余物中小心添加饱和NaHCO3以实现碱性pH。使用EtOAc(3×100ml)萃取水层且通过硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-20％EtOAc/庚烷)纯化粗制残余物以获得775mg(60％)黄色固体形式的4-氯-3-(二氟甲氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AT8693-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.20min，未观察到质量离子。
3-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3021-001-步骤3
向4-氯-3-(二氟甲氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AT8693-001,400mg,1.34mmol)于THF(10ml)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(1.29g,9.35mmol)和甲胺(2.0M于THF中，1ml,2.00mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24h，在真空中浓缩并分配于EtOAc(30ml)与1M HCl(15ml)之间。使用额外1M HCl(15ml)、氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤有机级分，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩以获得橙色粉末形式的3-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3021-001(370mg,88％)。LCMS(方法D)：停留时间：1.17min,M/z＝277(M+1)。
3-氨基-5-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AV3024-001-步骤4
在氮气下，向3-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV3021-001,370mg,1.18mmol)于EtOAc:EtOH(1:120ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(62.7mg,0.06mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。经由硅藻土过滤反应混合物并经由使用EtOAc洗涤滤饼。在真空中浓缩滤液以获得296mg(93％)浅褐色粉末形式的3-氨基-5-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AV3024-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.97min,M/z＝247(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3026-001-步骤5
在0℃下，向1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AS5740-003，根据流程1的步骤1来合成，139mg,0.55mmol)于DMF(5ml)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.08ml,0.47mmol)，随后添加HATU(177mg,0.47mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌10分钟，添加3-氨基-5-(二氟甲氧基)-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯(EV-AV3024-001,150mg,0.55mmol)且将反应混合物在室温下搅拌16h。然后将反应混合物在50℃下搅拌22h且然后在真空中浓缩。将粗制残余物溶于乙酸(3ml)中并在80℃下于密封管中加热2h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(0-70％EtOAc/庚烷)纯化剩余物质以获得131mg(48％)浅褐色粉末白色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3026-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.29min,M/z＝427(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3032-001-步骤6
向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AV3026-001,131mg,0.26mmol)于THF:MeOH(4ml:1ml)中的经搅拌溶液中添加2M氢氧化锂(528μl,1.06mmol)且将反应混合物在40℃下搅拌16h。在真空中浓缩反应混合物，悬浮于水(2ml)中并使用2M HCl酸化至pH 2。将所得悬浮液搅拌10分钟且通过真空过滤收集所得沉淀物并干燥以获得108mg(97％)橙色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3032-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.15min,M/z＝413(M+1)。
6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-001-步骤7
在0℃下，向2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AV3032-001,108mg,0.26mmol)于DMSO(2ml)中的溶液中添加HATU(117.1mg,0.31mmol)和DIPEA(87.87μl,0.51mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，添加八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 949559-11-9,61mg,0.27mmol)且将反应混合物在室温下搅拌16h。使用水(1ml)稀释反应混合物并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得125mg(79％)白色粉末形式的6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-001。LCMS(方法A)：停留时间：3.96min,M/z＝621(M+1)。
手性HPLC，获得(3aS,7aR)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-002和(3aR,7aS)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-003-步骤8
将125mg 6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-001溶于甲醇中且然后通过手性HPLC(方法G)纯化以获得47.6mg(27％)(3aS,7aR)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-002和50.1mg(29％)(3aS,7aS)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯EV-AV3033-003，二者皆呈无色胶形式(绝对立体化学任意指定)。
EV-AV3033-002手性纯度(UV,254nm):100％，停留时间：5.46min(方法I)
EV-AV3033-003手性纯度(UV,254nm):100％，停留时间：7.87min(方法I)
5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AV3043-001(EOAI3452073，绝对立体化学任意指定)I-24-步骤9
将(3aS,7aR)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AV3033-002,47.6mg,0.07mmol)溶于1.25M HCl(于EtOH中，1ml)中并在40℃下搅拌6h。在真空下浓缩反应混合物，溶于水(2ml)中并冻干以获得29mg(71％)黄色粉末形式的5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AV3043-001(I-24)。LCMS(方法A)：停留时间：2.23min,M/z＝521(M+1)。
5-[(3aR,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AV3044-001(EOAI3452074，绝对立体化学任意指定)I-25-步骤9
将(3aS,7aS)-6-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁酯(EV-AV3033-003,50.1mg,0.08mmol)溶于1.25M HCl(于EtOH中，1ml)中并在40℃下搅拌6h。在真空下浓缩反应混合物，溶于(2ml)水中并冻干以获得37mg(87％)黄色粉末形式的5-[(3aR,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑盐酸盐EV-AV3044-001(I-25)。LCMS(方法A)：停留时间：2.26min,M/z＝521(M+1)。
流程5
Figure GDA0001834773910001181
2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AS3796-002-步骤1
在0℃下，向4-氯-2-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 109069-75-2,1.50g,6.11mmol)于DMF(15ml)中的溶液中添加甲胺(2.0M于THF中，3.66ml,7.33mmol)，将所得反应混合物升温至室温并搅拌20h。添加碳酸钾(1.01g,7.33mmol)且将反应混合物在室温下搅拌1h，然后添加额外甲胺(2.0M于THF中，3.66ml,7.33mmol)。将反应液在室温下进一步搅拌5h。在真空中浓缩反应混合物且通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷，随后50％EtOAc/甲醇)纯化粗制残余物以获得905mg(56％)黄色粉末形式的2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AS3796-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.04min,M/z＝241(M+1)。
5-氨基-2-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AS3799-003-步骤2
在氮气下，向2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AS3796-002,905mg,3.77mmol)于乙醇:EtOAc(1:2,60ml)中的经搅拌溶液中添加Pd/C(10％,200mg,0.19mmol)且将反应混合物在氢气气氛下搅拌5.5h。经由硅藻土过滤反应混合物并经由使用EtOAc、乙醇和DCM洗涤滤饼。在真空中浓缩滤液且将残余物溶于DCM:乙醇(6:1,70ml)中。在氮气下添加Pd/C(10％,200mg,0.19mmol)且将反应混合物在氢气气氛下搅拌6.5h。经由硅藻土过滤反应混合物并经由使用乙醇和DCM洗涤滤饼。在真空中浓缩滤液且将残余物溶于DCM:乙醇(1:1,120ml)中。在氮气下添加Pd/C(10％,200mg,0.19mmol)且将反应混合物在氢气气氛下搅拌22h。经由硅藻土过滤反应混合物并经由使用乙醇和DCM洗涤滤饼。在真空中浓缩滤液获得656mg(76％)暗褐色粉末形式的5-氨基-2-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AS3799-003。LCMS(方法A)：停留时间：0.90min,M/z＝211(M+1)。
根据流程1中所描述的程序，使用EV-AS3799-003合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-6-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐EV-AV3612-001(EOAI3447040)I-68。
流程6
Figure GDA0001834773910001191
2-甲基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV4643-001-步骤1
向4-氟-2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 1163287-01-1,1.00g,4.69mmol)于THF(12ml)的经搅拌溶液中添加甲胺(2.0M于THF中，5.4ml,10.8mmol)且将反应混合物在室温下搅拌10分钟。将反应混合物分配于乙酸乙酯(250ml)与NaHCO3饱和水溶液(100ml)之间。使用水(100ml)洗涤有机萃取物，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩以获得1.07g(定量)黄色粉末形式的2-甲基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV4643-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝225(M+1)。
5-氨基-2-甲基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AV4644-001-步骤2
在氮气下，向2-甲基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV4643-001,1.07g,4.77mmol)于乙醇(100ml)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(102mg,0.048mmol)且将所得混合物在室温和氢气气氛下搅拌16h。经由玻璃纤维烧结物质过滤反应混合物且在真空中浓缩滤液以获得1.02g(98％)浅褐色结晶固体形式的5-氨基-2-甲基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AV4644-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.77min,M/z＝195(M+1)。
根据流程2中所描述的程序，使用5-氨基-2-甲基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AV4644-001合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1,6-二甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐EV-AV4649-001(EOAI3454825)I-103。
流程6
Figure GDA0001834773910001201
5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酰胺盐酸盐EV-AV9635-001(EOAI3455108)I-112的合成
Figure GDA0001834773910001202
5-[(3R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酸苯基酯EV-AV9626-002-步骤1
在压力管中，将Pd(OAc)2(6mg,0.03mmol)和Xantphos(30mg,0.05mmol)于乙腈(20ml)中的溶液脱气5分钟且添加N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AV9622-001，根据流程1来合成，520mg,0.86mmol)、甲酸苯基酯(0.19ml,1.71mmol)和三乙胺(0.24ml,1.71mmol)。密封反应容器并加热至80℃保持4h。使用EtOAc稀释经冷却反应混合物并使用水洗涤。通过硫酸钠干燥有机级分，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-100％EtOAc)纯化粗制残余物以获得220mg(39％)灰棕色固体形式的5-[(3R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酸苯基酯EV-AV9626-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.35min,M/z＝649(M+1)。
N-[(3R)-1-{7-氨基甲酰基-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9632-002-步骤2
在压力管中，向5-[(3R)-3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酸苯基酯(EV-AV9626-002,110mg,0.17mmol)于二噁烷(5ml)中的溶液中添加氢氧化铵(35％w/w,0.1ml,2.54mmol)。密封容器并在50℃下加热2.5h。添加额外氢氧化铵(35％w/w,0.5ml)且密封容器并在50℃下加热17h。添加额外氢氧化铵(35％w/w,0.5ml)且密封容器并在50℃下进一步加热23h。在真空中浓缩反应混合物，再溶于DCM中并使用5％NaOH(水溶液)洗涤。使有机级分通过相分离柱筒并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(碱性方法)纯化粗制残余物以获得75mg(77％)灰白色粉末形式的N-[(3R)-1-{7-氨基甲酰基-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AV9632-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.08min,M/z＝572(M+1)。
5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酰胺盐酸盐EV-AV9635-001(I-112)-步骤3
向N-[(3R)-1-{7-氨基甲酰基-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AV9632-002,75mg,0.13mmol)中添加于乙醇中的1.25M HCl(3ml)且将反应混合物在40℃下搅拌1.5h。在真空中浓缩反应混合物且自水(3mL)冻干残余物以获得57.6mg(84％)灰白色粉末形式的5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酰胺盐酸盐EV-AV9635-001(I-112)。LCMS(方法A)：停留时间：1.53min,M/z＝472(M+1)。
特定情形
根据流程1中所描述的程序来合成2-[7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AQ4191-002(EOAI3434971)I-9，根据流程2中所描述的程序经由流程7中所描述7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AQ1970-001的合成来合成2-[7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑EV-AS1566-001(EOAI3435740)I-15、5-[(3aR,7aR)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AS1590-001(EOAI3437977)I-12和5-[(3aS,7aS)-八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[7-(环丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AS1591-001(EOAI3437978)I-4：
流程7
Figure GDA0001834773910001211
在0℃和氮气气氛下，向7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(CAS 1016241-64-7,0.50g,3.06mmol)于甲醇(10ml)中的经搅拌悬浮液中逐滴添加亚硫酰二氯(0.56ml,7.66mmol)。将所得混合物升温至室温且然后加热至回流保持24h。添加额外甲醇(15ml)以有助于溶解，将混合物冷却至0℃且在氮气气氛下逐滴添加其他亚硫酰二氯(0.56ml,7.66mmol)。将混合物再次加热至回流保持3h并蒸发至干燥以获得0.66g(定量)粉红色粉末形式的7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AQ1970-001。LCMS(方法J)：停留时间：1.02min,M/z＝178(M+1)。
根据流程1中所描述的程序来合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AU3631-001(EOAI3447868)I-70，根据流程2中所描述的程序来合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2,2-二氟乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV3086-001(EOAI3454400)I-94和(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV4830-003(EOAI3454405)I-33，根据流程3中所描述的程序经由流程8中所描述6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3621-002的合成来合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV3852-001(EOAI3454816)I-104和(3R,5R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氟哌啶-3-胺EV-AV4849-001(EOAI3455105)I-109：
流程8
Figure GDA0001834773910001221
1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶EV-AT6244-001-步骤1
在0℃和氮气气氛下，向6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(CAS 896722-53-5,300mg,2.02mmol)于THF(15ml)中的经搅拌溶液中逐份添加氢化钠(60％,121mg,3.04mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌30分钟，然后添加苯磺酰氯(0.31ml,2.44mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物倾倒至水(20ml)中并使用EtOAc(3×10ml)萃取。使用氯化钠饱和水溶液(20ml)洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩以提供607mg(97.7％)灰棕色固体形式的1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶EV-AT6244-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.26min,M/z＝289(M+1)。
1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3618-002-步骤2
在-78℃和氮气气氛下，经10分钟向二异丙胺(0.15ml,1.04mmol)于无水THF(5ml)中的经搅拌溶液中逐滴添加正丁基锂(2.5M于己烷中，0.37ml,0.94mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，升温至室温并搅拌1h。然后使用无水THF(5ml)稀释混合物并冷却至-30℃。经由套管经20分钟添加1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(EV-AT6244-001,200mg,0.69mmol)和TMEDA(0.16ml,1.04mmol)于无水THF(10ml)中的溶液。将所得混合物在-30℃与-20℃之间搅拌2.5h。经10分钟逐滴添加氯甲酸乙酯(CAS 541-41-3,0.20ml,2.08mmol)，将混合物在-30℃下搅拌2h，然后经16h升温至室温。将反应混合物冷却至0℃并使用水(15ml)猝灭。使用DCM(3×15ml)萃取水层，使用水(3×10ml)洗涤合并的层，通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗产物以获得93mg(36.5％)灰白色固体形式的1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3618-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.31min,M/z＝361(M+1)。
注意：重复反应以获得额外批次的1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(165mg,29.6％,EV-AU3619-002)，将其与EV-AU3618-002组合以实施步骤3。
6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3621-002-步骤3
向1-(苯磺酰基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AU3618-002和EV-AU3619-002,84％,258mg,0.60mmol)于THF(10ml)中的经搅拌溶液中添加TBAF(1M于THF中，0.78ml,0.78mmol)且将混合物在70℃下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩至约1/4体积并通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化以获得95mg(71.7％)灰白色粉末形式的6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3621-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝221(M+1)。
流程9
Figure GDA0001834773910001231
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV3085-001(EOAI 3449644)I-119的合成
Figure GDA0001834773910001232
4-(乙基氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3036-001-步骤1
将乙胺(2M于THF中，18.3ml)和碳酸钾(21.1g,152.7mmol)添加至4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8,7.50g,30.5mmol)于THF(100ml)中的经搅拌溶液中。将反应混合物在50℃下搅拌16h，然后在60℃下搅拌7h。添加其他碳酸钾(21.1g,152.7mmol)和乙胺(2M在THF中，7.63ml)且在室温下继续搅拌60h。在真空中去除挥发物且使用EtOAc(150ml)稀释所得残余物，使用水(2×50ml)和氯化钠饱和水溶液(50ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机层，过滤并在真空中浓缩以获得6.88g(85％)橙色粉末形式的4-(乙基氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3036-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.21min,M/z＝255(M+1)。
3-氨基-4-(乙基氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯EV-AV3040-001-步骤2
将SnCl2(19.7g,103.9mmol)和2M HCl(52ml)添加至4-(乙基氨基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV3036-001,6.88g,26.0mmol)于乙醇(150ml)中的经搅拌悬浮液中。将反应混合物在回流下搅拌1h且在真空中去除挥发物。使用5M氢氧化钠水溶液(50ml)碱化所得残余物，然后使用EtOAc(150ml)稀释并搅拌15分钟。然后经由硅藻土过滤混合物且使用EtOAc洗涤滤液。分离滤液的有机相并使用氯化钠饱和水溶液(50ml)洗涤。通过硫酸钠干燥有机层并在真空中浓缩以获得4.20g(71％)褐色粉末形式的3-氨基-4-(乙基氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯EV-AV3040-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.70min,M/z＝225(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3079-001-步骤3
在0℃下，向1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AR6674-001，根据流程1的步骤1来合成，300mg,1.36mmol)于DMF(5ml)中的溶液中添加HATU(620mg,1.63mmol)和DIPEA(0.47ml,2.72mmol)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，然后添加3-氨基-4-(乙基氨基)-5-甲氧基苯甲酸酯(EV-AV3040-001,311mg,1.36mmol)。将混合物加热至50℃并搅拌3h。在真空中去除溶剂，将残余物溶于乙酸(3ml)中并在80℃下于密封管中加热2h。在真空中去除溶剂且通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化粗制物质以获得488mg(76％)黄色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3079-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.31min,M/z＝405(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3081-001-步骤4
将2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AV3079-001,488mg,1.04mmol)溶于THF/甲醇(4ml/1ml)中且添加2M氢氧化锂水溶液(5.19ml)。将混合物在40℃下搅拌16h且在真空中去除溶剂。将所得残余物溶于水(2ml)中并使用2M HCl酸化至pH 2。将混合物在室温下搅拌10分钟，在真空下过滤所形成沉淀物并干燥以得到350mg(80％)白色粉末形式的2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3081-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.14min,M/z＝391(M+1)。
N-(1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯EV-AV3083-001-步骤5
在0℃下，将HATU(217mg,0.57mmol)和DIPEA(163μl,0.95mmol)添加至2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AV3081-001,200mg,0.48mmol)于DMSO(2ml)中的经搅拌溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌10分钟，然后添加N-[(3R)-哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS 309956-78-3,100mg,0.50mmol)。将混合物升温至室温并搅拌20分钟。通过制备型HPLC(碱性方法)纯化粗制物以获得211mg(74％)白色粉末形式的N-(1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯EV-AV3083-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.25min,M/z＝573(M+1)。
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AV3085-001(EOAI3449644)-步骤6
将N-(1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(EV-AV3083-001,210mg,0.35mmol)溶于DCM(2ml)中且添加于乙醚中的2M HCl(2ml)。将反应混合物在室温下搅拌2h且在真空中去除溶剂。将残余物再溶于水/乙腈(2ml/0.5ml)中，在真空中浓缩且进一步干燥以得到147mg(81％)黄色粉末形式的(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸EV-AV3085-001。LCMS(方法A)：停留时间：2.19min,M/z＝473(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW5569-001的合成来合成(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-醇EV-AW5575-001(EOAI3459241)I-162：
流程10
Figure GDA0001834773910001261
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW5577-001的合成来合成(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-甲氧基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5584-001(EOAI3459405)I-167。
(1R,4R,6S,7R)-7-溴-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷EV-AW5568-001-步骤1(流程10)
将(4R,6R)-3-溴-1-[(1S)-1-苯基乙基]-1-氮杂三环[2.2.1.0]庚烷-1-溴化鎓(EV-AW8588-001,1.00g,3.58mmol)溶于甲醇:乙腈(1:1,40ml)中且将所得悬浮液加热至65℃保持12h。在真空中浓缩反应液并通过快速柱层析(0-30％EtOAc/庚烷)纯化以提供0.85g(98％)橙色油状物形式的(1R,4R,6S,7R)-7-溴-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷EV-AW5568-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.73min,M/z＝312(M+1)。
(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5570-001-步骤2(流程10)
向(1R,4R,6S,7R)-7-溴-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷(EV-AW5568-001,0.84g,2.71mmol)中添加在甲醇中的7M氨(7.74ml)。将溶液在80℃下搅拌2h。在真空中浓缩反应混合物以提供0.82g(98％)橙色固体形式的(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5570-001。LCMS(方法D)：停留时间：0.27min,M/z＝247(M+1)。
N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW5572-001-步骤3(流程10)
根据流程10步骤19中所描述的程序自(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AW5570-001)来合成标题化合物。LCMS(方法D)：停留时间：0.86min,M/z＝347(M+1)。
N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW5577-001-步骤4(流程10)
根据流程10步骤20中所描述的程序自N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AW5572-001)来合成标题化合物。1HNMR(500MHz，氯仿-d)δ5.78-5.48(m,1H),3.94(d,J＝7.6Hz,1H),3.49(d,J＝6.1Hz,1H),3.34(s,3H),3.22(s,1H),2.99(d,J＝9.2Hz,1H),2.47(d,J＝9.5Hz,1H),2.41(s,1H),1.90(dd,J＝13.5,7.1Hz,1H),1.75-1.63(m,2H),1.44(s,9H)。无LCMS数据。
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯EV-AY4514-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-N-甲基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY4518-001(EOAI3462944)I-237。
(1R,4R,7R)-7-溴-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷EV-AX4162-002-步骤5(流程10)
在-10℃至-15℃下，向(4R,6R)-3-溴-1-[(1S)-1-苯基乙基]-1-氮杂三环[2.2.1.0]庚烷-1-溴化鎓(EV-AW8588-001,3.10g,8.63mmol)于无水THF(60ml)中的溶液中添加于乙醚中的4M氢化锂铝(2.5ml,10mmol)。将混合物在-10℃至-15℃下搅拌2h并使用碳酸氢钠饱和水溶液(60ml)猝灭。将混合物添加至水(200ml)中并使用乙酸乙酯(4×100ml)萃取。使用氯化钠饱和水溶液(100ml)洗涤合并的萃取物，通过硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩以得到2.11g(87％)褐色油状物形式的(1R,4R,7R)-7-溴-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷EV-AX4162-002。LCMS(方法D)：停留时间：0.81min,M/z＝279.95/281.85(M+1)。
(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5552-001-步骤6(流程10)
根据流程10步骤2中所描述的程序自(1R,4R,7R)-7-溴-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷(EV-AX4162-002)来合成标题化合物。LCMS(方法D)：停留时间：0.20min,M/z＝217(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW5553-001-步骤9(流程10)
根据流程10步骤19中所描述的程序自(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AW5552-001)来合成标题化合物。LCMS(方法D)：停留时间：0.83min,M/z＝317(M+1)。
N-甲基-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY4510-001-步骤10(流程10)
在氮气气氛下，向N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AW5553-001,100mg,0.32mmol)于DMF(2ml)中的经搅拌溶液中添加氢化钠(60％,15mg,0.38mmol)，随后添加碘甲烷(39μL,0.63mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h，使用水(30ml)稀释并使用EtOAc(2×30ml)萃取。通过硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩以获得110mg(定量)无色黏性油状物形式的N-甲基-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY4510-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.06min,M/z＝331(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯EV-AY4514-001-步骤11(流程10)
根据流程10步骤20中所描述的程序自N-甲基-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY4510-001)来合成标题化合物。1HNMR(500MHz，甲醇-d4)δ4.56(s,1H),4.33(s,1H),3.61(s,1H),3.22(d,J＝10.9Hz,1H),2.98(d,J＝11.1Hz,1H),2.92-2.87(m,3H),2.82(s,1H),1.98-1.83(m,2H),1.81-1.72(m,1H),1.63-1.56(m,1H),1.48(s,9H)。无LCMS数据。
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯EV-AY4523-001的合成来合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-N,N-二甲基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY4524-001(EOAI3468840)I-243：
(1R,4R,7R)-N,N-二甲基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AY4521-001-步骤7(流程10)
在氮气气氛下，向(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺二盐酸盐(EV-AY4519-001,210mg,0.73mmol)(在流程10的步骤6中合成)于DCM(10ml)中的经搅拌溶液中添加甲醛水溶液(37％,0.27ml,3.63mmol)，随后添加STAB(923mg,4.36mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h，使用水(30ml)稀释并使用EtOAc(2×30ml)萃取。通过硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩以获得189mg(定量)无色黏性油状物形式的(1R,4R,7R)-N,N-二甲基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AY4521-001)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.39-7.12(m,6H),3.57(s,1H),3.01(s,1H),2.84(s,1H),2.31-2.12(m,3H),2.07-1.95(m,6H),1.67(s,2H),1.36(s,1H),1.23-1.12(m,3H)。无LCMS数据。
N-[(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯EV-AY4523-001-步骤8(流程10)
根据流程10步骤20中所描述的程序自(1R,4R,7R)-N,N-二甲基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AY4521-001)来合成标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.41(s,1H),2.12(dt,J＝9.8,3.0Hz,1H),1.79(d,J＝9.8Hz,1H),1.49(s,1H),1.47-1.37(m,7H),1.10-0.99(m,2H),0.71-0.61(m,1H),0.58-0.48(m,1H)。无LCMS数据。
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-氰基乙氧基)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY4931-001的合成来合成3-{[(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-基]氧基}丙腈EV-AY4932-001(EOAI3472707)I-256。根据流程1中所描述的程序实施最终去保护。
N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-氰基乙氧基)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY4931-001-步骤22(流程10)
在0℃，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY5029-001,120mg,0.18mmol)于DMF(3ml)中的搅拌溶液中添加氢化钠(60％,7.8mg,0.20mmol)。将反应液搅拌5分钟，然后添加丙-2-烯腈(12μl,0.18mmol)。将反应液在室温搅拌2h。在真空中去除溶剂且将残余物分配于EtOAc(10ml)与水(10ml)之间。使用EtOAc(2×5ml)萃取水层且使用水(5ml)洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化粗制物，获得80mg(67％)无色油状物形式的N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-氰基乙氧基)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY4931-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.28min,M/z＝640(M+1)。
根据流程10步骤22中所述的程序使用溴乙腈来合成2-{[(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-基]氧基}乙腈EV-AY4925-001(EOAI3470051)I-246。根据流程1中所述的程序实施最终去保护。LCMS(方法A)：停留时间：2.05min,M/z＝526(M+1)。
经由流程10中所述N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亚氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸酯EV-AZ4420-002的合成根据流程3中所述的N-Boc去保护程序来合成1S,4R,6E,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亚氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AZ4422-001(EOAI3482317)I-307：
N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AZ4415-001-步骤23(流程10)
在0℃，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY5029-001,490mg,0.84mmol)于DCM(10ml)中的溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(Dess-Martinperiodinane)(710mg,1.67mmol)且将反应液升温至室温。将反应混合物搅拌24h，使用硫代硫酸钠饱和水溶液(10ml)猝灭并使用DCM(3×20ml)萃取。合并的有机层通过硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化剩余残余物，提供471mg(89％)白色固体的N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AZ4415-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.25min,M/z＝585(M+1)。
N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亚氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸酯EV-AZ4420-002-步骤24(流程10)
向N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AZ4415-001,50mg,0.08mmol)于甲醇(1ml)中的悬浮液中添加O-甲基羟基胺HCl(6.7mg,0.08mmol)和碳酸氢钠(6.6mg,0.08mmol)。将反应液在65℃下加热15h，然后冷却至室温。在2h之后添加其他O-甲基羟基胺HCl(6.7mg,0.08mmol)和碳酸氢钠(6.6mg,0.08mmol)且在65℃下再继续反应6h。将温度降至60℃且将反应液搅拌16h。将反应混合物冷却至室温且在真空中去除溶剂。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化所得黄色油状物以提供12mg(26％)白色固体形式的N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亚氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸酯EV-AZ4420-002。LCMS(方法D)：停留时间：1.30min,M/z＝614(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由流程10中所描述N-[(1R,4R,6S,7R)-6-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8585-005的合成来合成(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6,7-二胺EV-AY5019-001(EOAI3469927)I-245。
N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8584-001-步骤25(流程10)
在氮气气氛和0℃下，将DIAD(107μl,0.51mmol)添加至三苯基膦烷(134mg,0.51mmol)于无水THF(5ml)中的经搅拌溶液中。将反应液在0℃下搅拌5分钟，然后添加N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY5029-001,200mg,0.34mmol)于无水THF(5ml)中的溶液，随后添加1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(41μl,0.34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h，在真空中浓缩并通过快速柱层析(0-100％EtOAc/庚烷)纯化以获得138mg(48％)白色泡沫形式的N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8584-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.28min,M/z＝716(M+1)。
N-[(1R,4R,6S,7R)-6-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8585-005-步骤26(流程10)
向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AW8584-001,134mg,0.19mmol)于DCM(3ml)中的溶液中添加水合肼(1:1)(27μl,0.56mmol)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟并在50℃下搅拌18h，过滤且在真空中浓缩滤液。向残余物中添加EtOAc(10ml)且将混合物搅拌5分钟，然后过滤。在真空中浓缩滤液并通过快速柱层析(20-100％EtOAc/庚烷)纯化以获得75mg(63％)白色泡沫形式的N-[(1R,4R,6S,7R)-6-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8585-005。LCMS(方法D)：停留时间：1.05min,M/z＝586(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由如流程10中所描述N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(二甲基氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8594-001的合成来合成(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-N6,N6-二甲基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6,7-二胺EV-AW8596-002(EOAI3476814)I-268。
N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(二甲基氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8594-001-步骤27(流程10)
在室温下，向N-[(1R,4R,6S,7R)-6-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AW8585-005,80mg,0.12mmol)于DCM(1ml)中的经搅拌混合物中添加3M甲醛溶液(37％于水中，10μl)。将反应混合物搅拌15分钟，然后添加三(乙酸根合-κO)(氢合)硼酸钠(1-)(37mg,0.18mmol)。继续反应17h。添加额外三(乙酸根合-κO)(氢合)硼酸钠(1-)(37mg,0.18mmol)并继续反应2h。在真空中去除溶剂且通过制备型HPLC(酸性方法)纯化残余物以提供20mg(28％)白色固体形式的N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(二甲基氨基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8594-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.16min,M/z＝614(M+1)。
根据流程3中所描述的程序经由如流程10中所描述N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-丙酰氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8590-002的合成来合成N-[(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-基]丙酰胺EV-AW8592-002(EOAI3476589)I-264。
N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-丙酰氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8590-002-步骤28(流程10)
向N-[(1R,4R,6S,7R)-6-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AW8585-005,62mg,0.10mmol)于二噁烷(3ml)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(16μl,0.12mmol)，随后添加丙酰氯(10μl,0.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。在真空中浓缩反应混合物并通过制备型HPLC(酸性方法)纯化以提供34mg(50％)白色固体形式的N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-丙酰氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AW8590-002。LCMS(方法D):1.19min,M/z＝642(M+1)。
根据流程10中所描述的程序来合成(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氧杂-3,10-二氮杂三环[4.4.0.02,8]癸烷-4-酮EV-AX4517-002(EOAI3460130)I-187：
(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-醇EV-AX4510-001-步骤29(流程10)
根据流程9步骤6中所描述的程序自N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸叔丁酯EV-AY5029-001来合成标题化合物。LCMS(方法D)：停留时间：0.92min,M/z＝487.15(M+1)。
N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯EV-AX4513-001-步骤30(流程10)
在0℃下，向(1S,4R,6S,7R)-7-氨基-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-6-醇(EV-AX4510-001,112mg,0.21mmol)于DCM(2ml)中的溶液中添加DIPEA(0.11ml,0.64mmol)和FMOC氯化物(83mg,0.32mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌2h，添加碳酸氢钠饱和水溶液(1ml)且使用DCM(2×1ml)萃取水层。通过硫酸镁干燥合并的有机级分，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(酸性方法)纯化粗制物以获得47mg(31％)白色固体形式的N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯EV-AX4513-001。LCMS(方法D)：停留时间：1.33min,M/z＝409.4(M+1)。
(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氧杂-3,10-二氮杂三环[4.4.0.02,8]癸烷-4-酮EV-AX4517-002-步骤31(流程10)
在-78℃和氮气气氛下，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(EV-AX4513-001,46mg,0.06mmol)于DCM(1ml)中的溶液中添加N-乙基-N-(三氟-λ～4～-硫烷基)乙胺(34μl,0.26mmol)且将反应液在-78℃下搅拌1h。将反应液升温至室温并进一步搅拌12h。添加碳酸氢钠饱和水溶液(5ml)且使用DCM(2×5ml)萃取水层。通过硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空中浓缩。将所得残余物溶于20％哌啶(于DMF中，2ml)中并将溶液在室温和氮气气氛下搅拌2h。在真空中浓缩反应混合物并通过制备型HPLC(碱性方法)纯化以获得16mg(55％)白色固体形式的(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氧杂-3,10-二氮杂三环[4.4.0.02,8]癸烷-4-酮EV-AX4517-002。LCMS(方法A)：停留时间：2.90min,M/z＝513.2(M+1)。
根据流程10.1中所描述的程序来合成N-[(7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]乙脒EV-AZ7933-001(EOAI3669061)I-340：
流程10.1
Figure GDA0001834773910001331
N-[(7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]乙脒EV-AZ7933-001-步骤1
向(7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-胺盐酸盐(EV-AU9363-001，根据流程3中所描述的程序来合成，140mg,0.28mmol)于甲醇(5ml)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(153mg,1.10mmol)且将反应混合物在室温下搅拌24h。过滤混合物且在真空中浓缩滤液。通过制备型HPLC(首先使用碱性方法，随后使用酸性方法再纯化)纯化残余物以获得27mg(18％)白色粉末形式的N-[(7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1，3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基]乙脒甲酸盐EV-AZ7933-001。LCMS(方法A)：停留时间：2.05min，M/z＝512.3(M+1)。
根据上述程序合成下列化合物：
Figure GDA0001834773910001341
Figure GDA0001834773910001351
Figure GDA0001834773910001361
Figure GDA0001834773910001371
Figure GDA0001834773910001381
Figure GDA0001834773910001391
Figure GDA0001834773910001401
Figure GDA0001834773910001411
Figure GDA0001834773910001421
Figure GDA0001834773910001431
Figure GDA0001834773910001441
Figure GDA0001834773910001451
Figure GDA0001834773910001461
Figure GDA0001834773910001471
Figure GDA0001834773910001481
Figure GDA0001834773910001491
Figure GDA0001834773910001501
Figure GDA0001834773910001511
Figure GDA0001834773910001521
Figure GDA0001834773910001531
Figure GDA0001834773910001541
Figure GDA0001834773910001551
Figure GDA0001834773910001561
Figure GDA0001834773910001571
Figure GDA0001834773910001581
Figure GDA0001834773910001591
Figure GDA0001834773910001601
Figure GDA0001834773910001611
Figure GDA0001834773910001621
Figure GDA0001834773910001631
Figure GDA0001834773910001641
Figure GDA0001834773910001651
Figure GDA0001834773910001661
Figure GDA0001834773910001671
Figure GDA0001834773910001681
Figure GDA0001834773910001691
Figure GDA0001834773910001701
Figure GDA0001834773910001711
Figure GDA0001834773910001721
Figure GDA0001834773910001731
Figure GDA0001834773910001741
Figure GDA0001834773910001751
Figure GDA0001834773910001761
Figure GDA0001834773910001771
Figure GDA0001834773910001781
(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((顺式)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮，I-349注意：起始材料是顺式-外消旋物。
以类似于流程1的方式进行制备。分子量＝486.57；LC/MS停留时间＝1.19min。
(管柱：Waters XBridge C18,2.1mm×50mm,1.7μm颗粒；流动相A：5:95含有0.1％三氟乙酸的乙腈:水；流动相B：含有0.1％三氟乙酸的95:5乙腈:水；温度：50℃；梯度：在3min内0％B至100％B，然后在0.75min内保持100％B；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm))。M/Z(+)＝487.12；盐＝游离碱。
手性HPLC，获得(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aR,7aS)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮和(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aS,7aR)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮。注意：起始材料是顺式-外消旋物。绝对立体化学任意指定。
以类似于流程1的方式进行制备。将(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((顺式)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮溶于乙醇中且然后通过手性HPLC(Chiralcel OD 21×250mm 10u，波长：254，流速：15ml/min，溶剂A：100％庚烷，溶剂B：100％乙醇，通过UV等度收集，％B:35)纯化以获得25.7mg(50.4％)异构体A形式的(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aR,7aS)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮和25.4mg(97.0％)异构体形式的(2-(1-(环丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aS,7aR)-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮(绝对立体化学任意指定)。
Figure GDA0001834773910001782
异构体AI-350手性纯度(UV,254nm):100％，停留时间：17.36min(Chiralcel OD21×250mm 10u，波长：254，流速：15ml/min，溶剂A：100％庚烷，溶剂B：100％乙醇，通过UV等度收集，％B:35)。盐＝游离碱。
Figure GDA0001834773910001791
异构体BI-351手性纯度(UV,254nm):100％，停留时间：27.17min(Chiralcel OD21×250mm 10u，波长：254，流速：15ml/min，溶剂A：100％庚烷，溶剂B：100％乙醇，通过UV等度收集，％B:35)。盐＝游离碱。
用于流程9和10的LC-MS条件：
Figure GDA0001834773910001793
((3R,6S)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯I-352。使用流程11制备。
Figure GDA0001834773910001792
流程11
Figure GDA0001834773910001801
2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-5-甲酸甲酯-步骤2
将1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(5g,20.30mmol)(遵循流程2自EV-AR3621-002制得)与六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物(HATU,7.72g,20.30mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(DIPEA,3.90mL,22.33mmol)合并于二甲基甲酰胺(DMF,80mL)中。将反应液搅拌15分钟且然后向反应液中添加3-氨基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯EV-AR3155-001(4.02g,22.33mmol)。将反应液在室温下搅拌2小时。在完成反应后，在真空中去除溶剂。向残余物中添加乙酸(AcOH,120mL)且将容器升温至70℃并搅拌3小时。去除溶剂且使用自动化层析纯化反应液，产物在于己烷中的40％乙酸乙酯下脱离管柱，从而得到2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(6.9g,17.67mmol,87％产率)。LCMS：停留时间：0.95min,M/z＝391.0(M+1)。
2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸-步骤3
向2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(500mg,1.281mmol)于THF(7mL)和甲醇(3.50mL)中的溶液中添加水(3.50mL)和单水合氢氧化锂的水溶液(3M,1.281mL,3.84mmol)。在30分钟之后，起始材料自溶液脱离，添加额外THF(9mL)且将反应液搅拌过夜。在真空中浓缩反应液且然后使用盐酸(1M于水中，3.84mL,3.84mmol)中和。向悬浮液中添加水且在超音波处理之后过滤悬浮液并风干固体以提供产物2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(470mg,1.249mmol，98％产率)。LCMS：停留时间：0.85min,M/z＝376.8(M+1)。
((3R,6S)-1-(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯，I-352-步骤4
将2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(30mg,0.080mmol)、((3R,6S)-6-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(25.6mg,0.120mmol)、HATU(36.4mg,0.096mmol)和DIPEA(0.042mL,0.239mmol)合并于DMF(1
mL)中并将反应液搅拌30分钟。在完成酰胺形成(如通过LCMS所测量)后，向反应液中添加HCl(4M于二噁烷中，1mL,4mmol)。将反应液升温至50℃并搅拌3小时。将反应液冷却至室温，过滤且然后使用制备型HPLC纯化以提供((2S,5R)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-352,(22.6mg,0.047mmol，59.4％产率，99％纯度)LCMS：停留时间：0.73min,M/z＝472.9(M+1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)位移8.04-8.00(m,1H),7.78-7.72(m,2H),7.40-7.33(m,1H),7.11-7.02(m,2H),6.72-6.63(m,1H),4.54-4.42(m,2H),4.01-3.96(m,3H),3.96-3.91(m,3H),3.03-2.91(m,1H),1.95-1.82(m,1H),1.79-1.68(m,2H),1.66-1.51(m,1H),1.26-1.13(m,4H),0.36-0.29(m,2H),0.25-0.19(m,2H)。
Figure GDA0001834773910001811
((1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-353
遵循流程11中的程序提供I-353(95％产率，97％纯度)。LCMS：停留时间：0.71min,M/z＝470.9(M+1)。(若干信号表现为隐藏于水峰下)1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.02(br d,J＝8.25Hz,2H),7.81(s,1H),7.67-7.78(m,1H),7.42-7.55(m,1H),7.12-7.33(m,1H),7.07(br s,2H),6.68(d,J＝8.41Hz,1H),4.41-4.59(m,2H),3.97(br s,3H),3.94(s,3H),3.08-3.28(m,1H),2.66(br s,1H),1.79-2.04(m,3H),1.55-1.72(m,1H),1.09-1.28(m,1H),0.31(br d,J＝7.83Hz,2H),0.22(br s,2H)。
Figure GDA0001834773910001812
((3S,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮
遵循流程11中的程序可提供I-354(90％产率，96％纯度)。LCMS：停留时间：0.72min,M/z＝476.9(M+1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)位移8.03-7.96(m,1H),7.80-7.70(m,2H),7.44-7.36(m,1H),7.06-7.02(m,1H),6.71-6.60(m,1H),4.56-4.36(m,2H),4.01-3.94(m,3H),3.94-3.89(m,3H),3.48-3.33(m,1H),3.07-2.87(m,1H),2.42-2.28(m,1H),1.93-1.72(m,1H),1.21-1.04(m,1H),0.35-0.24(m,2H),0.22-0.08(m,2H)。
((2S,5R)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I 355。根据流程12来制备。
Figure GDA0001834773910001821
流程12
Figure GDA0001834773910001822
2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯-步骤2
将1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(5g,20.30mmol)、HATU(7.72g,20.30mmol)和DIPEA(10.64ml,60.9mmol)添加至DMF(80ml)中。将反应液在室温下搅拌15分钟，此时添加3-氨基-5-甲氧基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯HCl盐(5.51g,22.33mmol)且将反应液搅拌过夜。在真空下去除溶剂且向残余物中添加AcOH(120mL)。将反应液在70℃下搅拌4小时且然后在真空中去除AcOH且将粗产物吸收于硅藻土上并使用自动化层析纯化以提供2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(6.5g,15.46mmol，76％产率)。LCMS：停留时间：0.98min,M/z＝421.0(M+1)。
2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸-步骤3
将2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(500mg,1.189mmol)溶于THF(10mL)、MeOH(5.00mL)和水(2.500mL)中，且向反应液中添加氢氧化锂的水溶液(3M,1.189mL,3.57mmol)。添加额外THF直至反应均质为止。将反应液在室温下搅拌两天。在真空下浓缩反应液且添加HCl水溶液(1M,3.6mL,3.6mmol)以将pH调节至约6。收集所得固体以提供产物2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(435mg,1.07mmol，90％产率)。LCMS：停留时间：0.89min,M/z＝406.8(M+1)。
((2S,5R)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-355-步骤4
遵循流程12中的程序步骤4来制备((2S,5R)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-355,(68.7％产率，100％纯度)。LCMS：停留时间：0.76min,M/z＝502.9(M+1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)位移8.03-7.98(m,1H),7.28-7.22(m,1H),7.01-6.94(m,1H),6.83-6.77(m,1H),6.70-6.61(m,1H),4.48-4.38(m,2H),4.17-4.06(m,3H),4.00-3.96(m,3H),3.96-3.93(m,3H),2.70-2.62(m,1H),2.56-2.52(m,3H),1.90-1.88(m,2H),1.76-1.62(m,2H),1.58-1.39(m,2H),1.26-1.12(m,4H),0.38-0.27(m,2H),0.25-0.14(m,2H)。
Figure GDA0001834773910001831
((3S,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-356
遵循流程12中的程序提供((3S,5S)-3-氨基-5-氟哌啶-1-基)(2-(1-(环丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-356(56.7％产率，99％纯度)。LCMS：停留时间：0.75min,M/z＝506.9(M+1)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)位移8.06-7.96(m,1H),7.36-7.25(m,1H),7.01-6.93(m,1H),6.87-6.79(m,1H),6.70-6.61(m,1H),4.44-4.37(m,2H),4.14-4.08(m,3H),4.01-3.95(m,3H),3.95-3.92(m,3H),3.54-3.43(m,1H),3.31-3.21(m,1H),3.06-2.96(m,1H),2.23-2.10(m,1H),1.94-1.84(m,2H),1.65-1.43(m,1H),1.21-1.06(m,1H),0.37-0.24(m,2H),0.23-0.11(m,2H)。
流程13
Figure GDA0001834773910001832
((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯：5使用流程13.1制备
Figure GDA0001834773910001841
流程13.1
Figure GDA0001834773910001842
5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲醛：2
使用NaH(0.196g,4.91mmol)逐份处理市售5-溴-1H-吲哚-2-甲醛1(1g,4.46mmol)于DMF中的冷(0℃)溶液。然后将反应液在0℃下再搅拌30min。然后添加(溴甲基)环丙烷(0.723g,5.36mmol)，且去除冰浴。在14hr之后，使用H2O(2mL)猝灭反应，然后使用EtOAc稀释并使用H2O、盐水萃取，干燥(MgSO4)并浓缩以得到橙色蜡。然后通过Biotage(80g柱,0-60％EtOAc/己烷，12CV)纯化蜡以得到浅黄色油状物形式的期望产物(800mg，64％)。LCMS(方法A)：停留时间：2.18min,M/z＝280.10(M+2)。
2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯：3
使用亚硫酸氢钠(4.13g,23.73mmol)的H2O溶液(10mL)一次性处理5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲醛2(2.2g,7.91mmol)和3-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(WO 2014/015905A1，中间体23)(1.900g,7.91mmol)于乙醇(30mL)中的悬浮液。然后将反应液加热至回流保持18hr。然后使用DCM(150ml)稀释反应液，干燥(MgSO4)，并浓缩以得到橙色固体。通过Biotage(80g柱,0-30％EtOAc/己烷，12CV)纯化固体以得到1g回收醛、1.4g回收硝基化合物。且得到430mg(12％)黄色固体形式的期望产物，LCMS(方法A)：停留时间：2.25min,M/z＝470.20(M+2)。
2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸：4
使用LiOH(0.225g,9.39mmol)的H2O溶液(6mL)处理2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯3(1.1g,2.349mmol)于THF(15mL)中的室温溶液。然后将反应液加热至回流保持1.5hr。使用冰冷却悬浮液，然后使用1N HCl(大约25ml)变为酸性。过滤掉所得红色固体，使用H2O洗涤，并干燥(高真空)。然后将固体吸收于EtOAc/DCM中并再次使用MgSO4干燥，过滤，然后浓缩以得到红色固体。940mg(88％),LCMS(方法A)：停留时间：1.27min,M/z＝456.20(M+2)。
((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯：5
使用HATU(865mg,2.276mmol)一次性处理2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸4(940mg,2.069mmol)、DIEA(0.542mL,3.10mmol)于DCM(50mL)中的室温溶液。添加(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基氨基甲酸叔丁酯(483mg,2.276mmol)并继续搅拌18hr。使用DCM稀释反应液，并使用H2O、饱和碳酸氢盐、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩以得到橙色油状物。然后通过Biotage(80g柱,50-90％EtOAc/己烷，12CV，然后90％EtOAc/己烷，2CV)纯化油状物以得到1.07g浅橙色油状物形式的期望产物(80％),LCMS(方法A)：停留时间：1.09min,M/z＝649.50(M+1)。M/z＝650.13(M+2)。
程序A
Figure GDA0001834773910001851
((1S,4R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)(2-(1-(环丙基甲基)-5-((E)-4-(三氟甲基)苯乙烯基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-361：
向((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯5(50mg,0.077mmol)、(E)-(4-(三氟甲基)苯乙烯基)硼酸(16.65mg,0.077mmol)和磷酸三钾水溶液(0.5M)(0.925mL,0.463mmol)于THF(5mL)中的悬浮液中一次性添加2-二环己基膦基-2’,6’-二-异丙氧基-1,1’-联苯(21.58mg,0.046mmol)和氯化钯(II)(2.73mg,0.015mmol)。将所得微红色悬浮液加热至80℃保持4hr。使用EtOAc稀释反应液，使用H2O、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩以得到浅橙色蜡。通过LCMS获知蜡足够清洁(MW＝739)以用于去保护步骤。将蜡吸收于DCM(2mL)中，然后使用4M HCl(0.5mL,2.000mmol)(4M于二噁烷中)处理。在1hr之后，浓缩反应液，吸收于DCM中并过滤，干燥(MgSO4)，浓缩，然后纯化，32mg，于2ml DMF中。经由制备型LC/MS纯化粗制物质：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm颗粒；流动相A：5:95含有10-mM乙酸铵的乙腈:水；流动相B：含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水；梯度：在19分钟内50％-90％B，然后在4分钟内保持于100％B；流速：20mL/min。合并含有期望产物的级分并经由离心蒸发来干燥。产物的产量为20.3mg(34％产率)，且其通过LCMS分析估计的纯度为100％。LCMS(方法B)：停留时间：2.42min,M/z＝640.14(M+1)。
程序B
Figure GDA0001834773910001861
((1S,4R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)(2-(5-((2-环丙基乙基)氨基)-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮，I-374：
使用氮气将5(50mg,0.077mmol)、2-环丙基乙胺(6.56mg,0.077mmol)、X-PHOS(7.35mg,0.015mmol)于甲苯(15mL)中的悬浮液脱气15min。然后添加Pd2(dba)3(7.06mg,7.71μmol)和叔丁醇钠(14.82mg,0.154mmol)且将悬浮液加热至80℃保持4hr。将反应液冷却，使用EtOAc稀释，然后使用H2O、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩以得到浅棕色蜡。通过LCMS展示，蜡含有期望产物(通过LCMS，MW＝652)，然后直接去保护。
将材料吸收于DCM(0.5mL)中，然后使用HCl(0.5mL,2mmol，4M于二噁烷中)处理。在1hr之后，浓缩反应液，然后自DCM(2×)蒸发。将粗制物质溶于MeOH中(过滤)并蒸发以得到37mg红色固体。经由制备型LC/MS纯化粗制物质：管柱：XBridgeC18，19×200mm，5μm粒径；流动相A：5:95含有10-mM乙酸铵的乙腈:水；流动相B：含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水；梯度：在20分钟内35％-75％B，然后在7分钟内保持于100％B；流速：20mL/min。合并含有期望产物的级分并经由离心蒸发来干燥。产物的产量为10.9mg(16％)，且其通过LCMS分析估计的纯度为98％。LCMS(方法B)：停留时间：1.84min,M/z＝553.26(M+1)。
程序C
Figure GDA0001834773910001862
步骤1：((1S,4R)-2-(2-(5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯：
将((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.154mmol)5、氰化锌(18.10mg,0.154mmol)、Pd2dba3(7.06mg,7.71μmol)和DPPF(10.26mg,0.019mmol)于DMF(4mL)和水(0.4mL)中的悬浮液加热至120℃保持18hr。添加额外氰化锌(18.10mg,0.154mmol)、Pd2dba3(7.06mg,7.71μmol)和DPPF(10.26mg,0.019mmol)，并在120℃下继续搅拌4hr。冷却反应液，使用EtOAc稀释，使用H2O、饱和碳酸氢盐洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩以得到黑色蜡。通过Biotage(40g柱,20-100％EtOAc/己烷，12CV，然后100％EtOAc，4CV)纯化蜡以得到浅黄色蜡形式的期望产物：89mg(97％产率)，LCMS(方法A)：停留时间：min 2.11min,M/z＝595.65(M+1)。
步骤2：2-(5-((1S,4R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-5-甲腈，I-370：
使用HCl(0.5ml,2mmol，4M于二噁烷中)逐滴处理((1S,4R)-2-(2-(5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯(35mg,0.059mmol)于DCM(1mL)中的溶液。在1hr之后，浓缩反应液，然后依序溶于DCM中并浓缩(2×)。将粗制物质溶于MeOH中(过滤)并蒸发以得到22mg红色固体，溶于1.5ml DMF中并经由制备型LC/MS纯化：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm颗粒；流动相A：5:95含有10-mM乙酸铵的乙腈:水；流动相B：含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水；梯度：在20分钟内15％-55％B，然后在5分钟内保持于100％B；流速：20mL/min。合并含有期望产物的级分并经由离心蒸发来干燥。产物的产量为14.4mg(38％产率)，且其通过LCMS分析估计的纯度为100％。LCMS(方法B)：停留时间(min)：1.81min,M/z＝495.07(M+1)。
流程14
Figure GDA0001834773910001871
((1S,4R)-2-(2-(6-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯6：
如流程13.1中所描述自市售6-溴-1H-吲哚-2-甲醛开始来制备溴化物以得到橙色蜡，LCMS(方法A)：停留时间：1.29min,M/z＝650.30(M+2)。
所有6-取代的-1H-吲哚-2-基化合物都是自((1S,4R)-2-(2-(6-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)氨基甲酸叔丁酯6使用与针对5-取代的化合物所描述相同的程序(流程13)来制得。
用于流程13和14的HPLC方法
方法A
(低pH Shimadzu 3min方法)
管柱：WatersAcquity UPLC BEH dC18,2.1mm×50mm，1.7μm管柱
流速：0.6ml/min
流动相：A，0.05％TFA(水溶液)；和B，0.05％TFA(乙腈)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：220nm(标称)
梯度-0-100％B
方法B
管柱：Water Xbridge C18,2.1mm×50mm，1.7μm管柱
流速：0.6ml/min
流动相：乙腈:水，含有10mM乙酸铵；流动相B：95:5乙腈:水，含有10mM乙酸铵；温度：
50℃；梯度：在3min内0％B至100％B，然后在0.75min内保持于100％B
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：220nm(标称)
使用方法A、B或C如流程13和14中所描述来制备下列化合物：
Figure GDA0001834773910001881
Figure GDA0001834773910001891
Figure GDA0001834773910001901
生物分析
使用下文所描述的分析方案分析作为PAD4抑制剂的本发明化合物。
将化合物溶于100％DMSO中以实现100mM的最终化合物浓度。将化合物储备溶液储存于室温下。在DMSO中制备一系列稀释液且以20μL混合体积混合8次。最终分析条件如下：
反应体积：20μl
分析缓冲液(如上所述)：100mM Tris-HCl(pH 7.6),2mM DTT,1mM CaCl2
最终浓度：
-100nM hPAD4酶
-50μM(8倍子-Km)底物肽
-0.5％DMSO
总培育时间：65min，在37℃下
终止溶液：40μl于ACN中(含5％TCA)
将0.25μL化合物溶液添加至10μL在分析缓冲液(100mM pH 7.6 Tris-HCl,2mMDTT)中的200nM PAD4中。在5min之后，添加10μL在缓冲液(100mM pH 7.6 Tris-HCl,2mMDTT,2mM CaCl2)中的100μM底物且将反应液在37℃下培育60min。通过添加40μl在ACN中的5％TCA(1.7％TCA最终浓度)猝灭溶液来终止酶促反应。在Agilent RapidFire(RF)300系统上对含精氨酸底物和含瓜氨酸产物(+1Da质量位移)实施固相萃取且在耦合三相四极Agilent 6460 QQQ质谱(MS)装置上在应用多反应监测(MRM)以用于量化下进行检测。
针对PAD同工酶的IC50测定
使用质谱分析测量给定测试化合物的IC50，该质谱分析检测BAEE在与苯基乙二醛反应之后的瓜氨酸化产物。将测试化合物溶于100％DMSO中且将0.125uL递送至384孔REMP聚丙烯板中，然后添加酶。将酶和化合物在37℃下预培育30min且通过添加BAEE底物来引发反应，从而每一分析孔中的最终浓度等于BAEE在饱和钙浓度(250uM)下的Km值。用于反应的缓冲液含有25mMpH 7.5 Hepes、5mMNaCl、1mM DTT、0.01％Chaps、0.2mg/mL BSA和50uM或1mM CaCl2(其分别对应于Ca2+的K0.5的五分之一或对应于的Ca2+的20×K0.5，如在BAEE的10倍Km下所测量)。最终反应中的所用典型酶浓度是5nM且总反应体积为25uL。使反应在37℃下进行1.5小时，然后添加BAEE，随后使用15ul 6.1 N TCA和35ul 8.5mM苯基乙二醛猝灭。苯基乙二醛的最终浓度为4mM。将混合物在37℃和搅动下再培育30min以通过苯基乙二醛完全修饰瓜氨酸化产物。将猝灭的反应板在5000×g下离心3分钟且向每一孔中添加等体积的含有内标(苯基乙二醛修饰的瓜氨酸)的甲醇。将内容物转移至新384孔REMP板中以用于rapidfire MS分析。
将试样装载于RapidFire RF300系统(Agilent)上，其中首先将其吮吸1000ms且然后直接装载至使用含有0.01％甲酸的乙腈的混合物的C18分离柱中去盐3000ms。流动相的流速为1.5ml/min。在试样从柱洗脱后，使用含有0.01％甲酸的乙腈的流动相以1.25ml/min的流速将试样移动至质谱仪中保持4000ms。使用配备有ESI的Sciex API4000三相四极质谱仪(Applied Biosystems)分析肽基瓜氨酸和内标离子。分别在m/z 424.5至350.4和m/z293至247下监测产物和内标的MRM转变。将每一转变的留置时间设定于200ms，并使用5500V的ESI电压且源温度为400℃。使用rapidfire积分软件对每一转变的萃取离子峰进行积分。针对内标将峰面积标准化。
对于IC50测定而言，将化合物3倍连续稀释于DMSO中且在11个不同浓度下进行测试。通过将分析物的峰面积除以内标的峰面积来计算峰面积比率。使用来自DMSO对照和无酶背景的峰面积比率来计算出现于每一抑制剂浓度下的抑制百分比，且使用下列方程式计算IC50：
Figure GDA0001834773910001911
其中Y＝每一抑制剂浓度下的抑制％，A＝最小Y值，B＝最大Y值，C＝logIC50，D＝希尔斜率(hill slope)，且x＝抑制剂浓度。
下表2展示所选本发明化合物在上述PAD4分析中的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。具有指定为“A”的活性的化合物提供≤1μM的IC50；具有指定为“B”的活性的化合物提供1.0-5.0μM的IC50；具有指定为“C”的活性的化合物提供5.0-10.0μM的IC50；且具有指定为“D”的活性的化合物提供≥10.0μM的IC50。术语pIC50＝-log(IC50)。具有指定为“E”的活性的化合物提供≤4的pIC50；具有指定为“F”的活性的化合物提供4.0-5.0的pIC50；具有指定为“G”的活性的化合物提供5.0-6.0的pIC50；且具有指定为“H”的活性的化合物提供≥6的pIC50。“NA”代表“未分析”。
表2.PAD4活性
Figure GDA0001834773910001912
Figure GDA0001834773910001921
Figure GDA0001834773910001931
Figure GDA0001834773910001941
Figure GDA0001834773910001951
Figure GDA0001834773910001961

Claims (28)

1.一种式I’化合物，
Figure FDF0000017116560000011
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
Figure FDF0000017116560000012
Figure FDF0000017116560000021
或
Figure FDF0000017116560000022
其中环A任选地被1至4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1至3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B是
Figure FDF0000017116560000023
或
Figure FDF0000017116560000024
R1是氢、-CN、-OR、
Figure FDF0000017116560000025
Figure FDF0000017116560000026
或任选地被1至4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
R2是氢或任选地被1至5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1和X2各自独立地选自N或C(R4)；
R3是卤素、-CN、-R、
Figure FDF0000017116560000031
或-OR；
R4各自独立地是卤素、-CN、-R、
Figure FDF0000017116560000032
或-OR；
R5是氢或卤素；
n为0至4；和
R各自独立地是氢或任选地被1至3个氟原子取代的C1-6脂族基团。
2.根据权利要求1的化合物，其中环A是
Figure FDF0000017116560000033
3.根据权利要求1的化合物，其中环A是
Figure FDF0000017116560000034
或
Figure FDF0000017116560000035
4.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R1是甲基、乙基或丙基。
5.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R2是任选地被1至5个氟原子取代的C1-10脂族基团。
6.根据权利要求5的化合物，其中R2是甲基、乙基或-CH2-环丙基。
7.根据权利要求5的化合物，其中R2是被1至5个氟原子取代的C1-10脂族基团。
8.根据权利要求7的化合物，其中R2是-CH2CF3。
9.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中X1和X2二者都是N。
10.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中X1是N，且X2是CH。
11.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中X1是CH，且X2是N。
12.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中X1和X2二者都是CH。
13.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R4是C1-6脂族基团或-OR。
14.根据权利要求13的化合物，其中R4是乙基或-OCH3。
15.一种药学上可接受的组合物，其包括根据权利要求1至14中任一项的化合物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。
16.根据权利要求15的组合物，其与另外的治疗剂组合。
17.根据权利要求1至14中任一项的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中或生物样品中抑制PAD4。
18.根据权利要求15的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗有需要受试者的PAD4介导的疾病、病症或病状。
19.根据权利要求18的用途，其中所述受试者是人类受试者。
20.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自：痤疮、急性呼吸窘迫综合征、艾迪生病、肾上腺增生、肾上腺皮质功能不全、衰老、AIDS、酒精性肝病、曲霉菌病、脱发、阿尔茨海默病、萎缩性脊髓侧索硬化和体重减轻、心绞痛、血管性水肿、无汗外胚层发育不全-ID、前段、炎症、抗磷脂综合征、动脉粥样硬化、自体免疫疾病、贝尔氏麻痹症、铍中毒、布劳综合征、骨疼痛、烧伤、癌症、心肥大、腕管综合征、异化代谢病症、白内障、脑动脉瘤、慢性心力衰竭、结缔组织疾病、角膜溃疡、克罗恩氏病、冷吡啉相关周期性综合征、隐球菌病、囊性纤维化、白介素-1-受体拮抗剂缺乏、皮炎内毒素血症、子宫内膜异位症、内毒素血症、成红色素细胞减少症、家族性淀粉样多发性神经病、家族性冷荨麻疹、家族性地中海热、胎儿生长迟滞、青光眼、痛风、肠病、头损伤、听力损失、心脏病、溶血性贫血、亨舍二氏紫癜、遗传性周期性发热综合征、带状疱疹和单纯疱疹、HIV-1、霍奇金病、亨廷顿氏病、透明膜病、高氨血症、高钙血症、高胆固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反复发热、发育不全、发育不全性贫血、特发性血小板减少紫癜、色素失禁症、感染性单核细胞增多症、炎症性肠病、炎症性神经病变、缺血/再灌注、肾疾病、钩端螺旋体病、吕弗勒氏综合征、间皮瘤、混合结缔组织疾病、穆-韦二氏综合征、多发性硬化、肌肉萎缩、肌营养不良症、重症肌无力、蕈样霉菌病、骨髓发育不良综合征、肾病综合征、神经病理学疾病、非过敏原诱发的哮喘、肥胖症、眼睛过敏、佩吉特氏病、疼痛、帕金森氏病、天疱疮、周期性发热、腹膜型子宫内膜异位症、百日咳、肺囊虫感染、牛皮癣、心理社会压力疾病、肺病、坏疽性脓皮病、视网膜疾病、风湿性疾病、类肉瘤病、皮脂溢、败血症、镰状细胞、镰状细胞贫血、二氧化硅诱发的疾病、薛格连氏综合征、皮肤病、睡眠呼吸中止、实体瘤、骨髓损伤、史蒂芬-强森综合征、中风、蛛网膜下出血、晒伤、血小板减少症、TNF受体相关周期性综合征、弓虫症、移植、创伤性脑损伤、肺结核、2型糖尿病、荨麻疹和韦格纳氏肉芽肿。
21.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自：急性淋巴细胞白血病、过敏原诱发的哮喘、过敏性结膜炎、淀粉样变性、强直性脊柱炎、口疮性口炎、阑尾炎、关节炎、哮喘、异位性皮炎、蜂螫伤诱发的炎症、贝切特氏病、细支气管炎、滑囊炎、化学刺激物诱发的炎症、脉络膜视网膜炎、早产儿慢性肺病、慢性淋巴细胞白血病、慢性阻塞性肺病、结肠炎、皮炎、上髁炎、肾小球疾病、移植物抗宿主病、头痛、肝炎、炎症性疼痛、昆虫咬伤诱发的炎症、虹膜炎、刺激物诱发的炎症、角膜炎、由寄生虫感染引起的肾损伤、肾移植排斥预防、肺损伤、狼疮性肾炎、脑膜炎、肌炎、鼻窦炎、坏死性小肠结肠炎、新生儿期发病的多系统炎性疾病、神经炎、器官移植、中耳炎、胰腺炎、心包炎、牙周炎、咽炎和腺炎、植物刺激物诱发的炎症、肺炎、毒葛/漆酚油诱发的炎症、结节性多动脉炎、多软骨炎、多囊性肾疾病、风湿性心脏炎、严重疼痛、颞动脉炎、腱鞘炎、甲状腺炎、组织移植和1型糖尿病。
22.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自复杂性区域疼痛综合征、白血病、狼疮、视神经炎、肺高血压、肺纤维化和眼色素层炎。
23.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自酸诱发的肺损伤、酒精性肝炎、过敏性支气管肺炎、自体免疫性肝炎、痛风性关节炎、炎症性肺病、骨关节炎、多发性肌炎、化脓性无菌关节炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎。
24.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状是青少年型类风湿性关节炎。
25.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。
26.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自弥漫型内因性脑桥胶质瘤或淋巴瘤。
27.根据权利要求18的用途，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自皮肌炎、肾小球肾炎或心肌炎。
28.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
Figure FDF0000017116560000061
Figure FDF0000017116560000071
Figure FDF0000017116560000081
Figure FDF0000017116560000091
Figure FDF0000017116560000101
Figure FDF0000017116560000111
Figure FDF0000017116560000121
Figure FDF0000017116560000131
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