TW201726674A - 雙環pad4抑制劑 - Google Patents

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TW201726674A
TW201726674A TW105140709A TW105140709A TW201726674A TW 201726674 A TW201726674 A TW 201726674A TW 105140709 A TW105140709 A TW 105140709A TW 105140709 A TW105140709 A TW 105140709A TW 201726674 A TW201726674 A TW 201726674A
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pyridine
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愛德華 布蒙特
李 伯里斯
史蒂夫 伯朗布里吉
蘇菲 庫柏
拉傑許 戴弗拉
艾萊斯 加杜雷
蘿拉 吉利芙
菲利浦 凱瑞
亞德瑞恩 克堤
湯瑪士 克魯勒
吉那娜桑班丹 庫馬瑞佛
克莉絲堤娜 蕾奇
普伊 羅柯
麥爾柯 梅尼柯尼
那特 孟克
卡爾 諾斯
喬丹 帕爾弗瑞
麥可 Ｆ 帕克
雪莉 帕洛特
馬克 利得吉爾
海瑟 戴
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Abstract

本發明提供可用作PAD4抑制劑之化合物、其組合物及治療PAD4相關病症之方法。

Description

雙環PAD4抑制劑
本發明係關於可用作PAD4抑制劑之化合物、其組合物及治療PAD4相關病症之方法。
PAD4係能夠在肽序列內催化精胺酸至瓜胺酸之瓜胺酸化之酶之肽基精胺酸去亞胺酶(PAD)家族的成員。PAD4負責各種蛋白質在活體外及活體內之去亞胺化或瓜胺酸化，其結果為產生各種疾病中之不同功能反應(Jones J.E. 等人 ， Curr. Opin. Drug Discov. Devel., 12(5), (2009),616-627 )。實例性疾病之實例包含類風濕性關節炎、對發病具有嗜中性貢獻之疾病(例如血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎)以及腫瘤學適應症。PAD4抑制劑亦作為經由後生機制用於人類疾病之工具及治療劑具有較寬適應性。 PAD4抑制劑具有針對類風濕性關節炎(RA)之用途。RA係影響大約1%之群體之自體免疫疾病(Wegner N. 等人 ， Immunol. Rev., 233(1) (2010), 34-54) ，其特徵在於導致骨及軟骨衰弱性破壞之關節發炎。儘管不一致，已在諸多群體研究中展現PAD4多型性與RA易感性之間之弱基因相關性(Kochi Y. 等人 ， Ann. Rheum. Dis., 70, (2011),512-515 )。已在滑液組織中檢測到PAD4 (以及家族成員PAD2)，其中其負責各種接頭蛋白之去亞胺化。此過程假設為導致對RA關節中之瓜胺酸化受質(例如纖維蛋白原、波形蛋白及膠原)之耐受性消失且引發其免疫反應。該等抗瓜胺酸化蛋白抗體(ACPA)有助於疾病發病且亦可用作用於RA之診斷測試(例如市售CCP2或環狀瓜胺酸化蛋白2測試)。另外，經由能夠直接影響若干關節及發炎性媒介(例如纖維蛋白原、抗凝血酶、多種趨化介素)之功能，增加之瓜胺酸化亦可向疾病發病提供額外直接貢獻。在較小子組之RA患者中，可量測抗PAD4抗體且可與疾病之較侵蝕形式建立關聯。 PAD4抑制劑亦可用於減小各種疾病中之病理學嗜中性球活性。研究表明，嗜中性球細胞外捕集(NET)形成(嗜中性球能夠固定並殺滅病原體之先天性防禦機制)與組織蛋白瓜胺酸化有關且在PAD4剔除小鼠中缺失(Neeli I. 等人 ， J. Immunol., 180, (2008), 1895-1902 及 Li P. 等人 ， J. Exp. Med., 207(9), (2010), 1853-1862 )。PAD4抑制劑可由此適用於組織中之NET形成有助於局部損傷及疾病病理學之疾病。該等疾病包含(但不限於)小血管炎(Kessenbrock K. 等人 ， Nat. Med., 15(6), (2009), 623-625) 、全身性紅斑狼瘡 (Hakkim A. 等人 ， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(21), (2010), 9813-9818 及Villanueva E. 等人 ， J. Immunol., 187(1), (2011), 538-52) 、 潰瘍性結腸炎(Savchenko A. 等人 ， Pathol. Int., 61(5), (2011), 290-7) 、囊性纖維化、氣喘(Dworski R. 等人 ， J. Allergy Clin. Immunol., 127(5), (2011), 1260-6) 、深層靜脈血栓形成(Fuchs T. 等人 ， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(36), (2010), 15880-5) 、齒根骨膜炎(Vitkov L. 等人 ， Ultrastructural Pathol., 34(1), (2010), 25-30) 、敗血症(Clark S.R. 等人 ， Nat. Med., 13(4), (2007), 463-9) 、闌尾炎(Brinkmann V. 等人 ， Science, 303, (2004), 1532-5) 及中風。另外，有證據表明，NET可有助於影響皮膚之疾病(例如皮膚紅斑狼瘡(Villanueva E. 等人 ， J. Immunol., 187(1), (2011), 538-52) 及牛皮癬(Lin A.M. 等人 ， J. Immunol., 187(1), (2011), 490-500 ))中之病理學，因此PAD4抑制劑在藉由全身性或皮膚途徑投與時可展示解決NET皮膚病之益處。PAD4抑制劑可影響嗜中性球內之其他功能且對嗜中性疾病具有較寬適應性。 研究已證實工具性PAD抑制劑 (例如氯-脒)在諸多動物疾病模型(包含膠原誘發之關節炎(Willis V.C. 等人 ， J. Immunol., 186(7), (2011), 4396-4404 )、硫酸右旋糖酐鈉(DSS)誘發之實驗結腸炎(Chumanevich A.A. 等人 ， Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 300(6), (2011), G929-G938 )、骨髓修復(Lange S. 等人 ， Dev. Biol., 355(2), (2011), 205-14) 及實驗自體免疫腦脊髓炎(EAE))中之效能。DSS結腸炎報告亦證實，氯-脒驅動發炎性細胞在活體外及活體內之細胞凋亡，從而表明PAD4抑制劑可更通常有效用於廣泛之發炎性疾病中。 PAD4抑制劑亦可用於治療癌症(Slack.J.L. 等人 ， Cell. Mol. Life Sci., 68(4), (2011), 709-720 )。PAD4之過表現顯示於諸多癌症中(Chang X. 等人 ， BMC Cancer, 9, (2009), 40 )。已根據如下觀察提出PAD4抑制劑之抗增殖性作用：PAD4使p53-靶基因(例如p21)之啟動子處的組織蛋白中之精胺酸殘基瓜胺酸化，該等靶基因參與細胞週期停滯及細胞凋亡之誘導(Li P. 等人 ， Mol. Cell Biol., 28(15), (2008), 4745-4758 )。 PAD4在使組織蛋白中之精胺酸殘基去亞胺化中之上述作用可指示PAD4在基因表現之後生調控中的作用。PAD4係所觀察貯存於細胞核以及細胞質中之主要PAD家族成員。PAD4可用作組織蛋白去甲基亞胺酶以及去亞胺酶之早期證據不一致且未證實。然而，可經由藉由轉化成瓜胺酸以消耗可用精胺酸殘基來間接減小組織蛋白精胺酸甲基化(及由此與此標誌有關之後生調控)。PAD4抑制劑可用作影響其他疾病環境中之不同靶基因之表現之後生工具或治療劑。經由該等機制，PAD4抑制劑亦可有效控制幹細胞中之瓜胺酸化含量且可由此在治療上影響不同幹細胞(包含(但不限於)胚胎幹細胞、神經幹細胞、造血幹細胞及癌症幹細胞)之多能狀態及分化潛力。因此，仍未滿足性地需要鑑別及研發用於治療PAD4介導之病症之PAD4抑制劑。
現已發現，式I 化合物可用作PAD4抑制劑：或其醫藥上可接受之鹽，其中環A、R1 、R2 、R3 、R4 、X1 及X2 中之每一者係如本文所定義。 亦已發現，式I’ 化合物可用作PAD4抑制劑：或其醫藥上可接受之鹽，其中環A、環B、R1 及R3 中之每一者係如本文所定義。 在一些實施例中，所提供化合物顯示PAD4相對於PAD2之選擇性。本發明亦提供包括所提供化合物之醫藥上可接受之組合物。所提供化合物可用於治療各種與PAD4有關之病症。該等病症詳細闡述於本文中且包含(例如)類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡及牛皮癬。
1. 本發明之某些態樣之一般闡述 在一些實施例中，該等化合物包含具有本文所闡述之式者或其醫藥上可接受之鹽，其中每一變量係如本文中所定義且闡述於實施例中。該等化合物具有式I 結構：或其醫藥上可接受之鹽，其中： 環A係、或其中環A視情況經1-4個選自氟、-CN、-OR或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團之基團取代； R1 係氫、-CN、-OR或視情況經1-4個選自氟、-CN或OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團； R2 係氫或視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團； X1 及X2 中之每一者獨立地選自N或C(R4 )； R3 及R4 中之每一者獨立地係鹵素、-CN、-R或-OR； n為0-4；且 每一R獨立地係氫或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。 在一些實施例中，該等化合物包含具有本文所闡述之式者或其醫藥上可接受之鹽，其中每一變量係如本文中所定義且闡述於實施例中。該等化合物具有式I’ 結構：或其醫藥上可接受之鹽，其中： 環A係， ，或，其中環A視情況經1-4個選自氟、-CN、-OR或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團之基團取代； 環B係或； R1 係氫、-CN、-OR、 或視情況經1-4個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團； R2 係氫或視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團； X1 及X2 中之每一者獨立地選自N或C(R4 )； R3 係鹵素、-CN、-R、或-OR； 每一R4 獨立地係鹵素、-CN、-R、 或-OR； R5 係氫或鹵素； n為0-4；且 每一R獨立地係氫或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。 2. 定義 本發明化合物包含概述於本文中者，且進一步由本文所揭示之種類、子類及物質予以闡釋。如本文中所使用，除非另外指示，否則下列定義應適用。出於本發明目的，根據元素週期表，CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第75版來鑑別化學元素。另外，有機化學之一般原則闡述於「Organic Chemistry」, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999及「March's Advanced Organic Chemistry」，第5版，編者：Smith, M.B.及March, J., John Wiley & Sons, New York:  2001中，該等文獻之全部內容皆以引用方式併入本文中。 如本文中所使用，術語「脂肪族」或「脂肪族基團」係指完全飽和或含有一或多個不飽和單元之直鏈(亦即不飽和)或具支鏈、經取代或未經取代之烴鏈，或完全飽和或含有一或多個不飽和單元但不為芳香族之單環烴或雙環烴(在本文中亦稱為「碳環」、「環脂族」或「環烷基」)，其具有至分子之其餘部分之單一附接點。除非另外指定，否則脂肪族基團含有1至6個脂肪族碳原子。在一些實施例中，脂肪族基團含有1至5個脂肪族碳原子。在其他實施例中，脂肪族基團含有1至4個脂肪族碳原子。在其他實施例中，脂肪族基團含有1至3個脂肪族碳原子，且在其他實施例中，脂肪族基團含有1至2個脂肪族碳原子。在一些實施例中，「環脂族」 (「碳環」或「環烷基」)係指完全飽和或含有一或多個不飽和單元但不為芳香族之單環C3 -C6 烴，其具有附接至分子之其餘部分之單一點。適宜脂肪族基團包含(但不限於)直鏈或具支鏈、經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基及其雜合體，例如(環烷基)烷基、(環烯基)烷基或(環烷基)烯基。 如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之鹽」係指彼等在合理醫學判斷範圍內適於接觸人類及低等動物之組織而無過度毒性、刺激、過敏反應等且與合理效益/風險比相稱之鹽。醫藥上可接受之鹽已為業內所熟知。舉例而言，S. M. Berge等人在J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66：1-19中詳細闡述醫藥上可接受之鹽，其以引用方式併入本文中。本發明化合物之醫藥上可接受之鹽包含衍生自適宜無機及有機酸及鹼者。醫藥上可接受之無毒酸加成鹽之實例係無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)或與有機酸(例如乙酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸)或藉由使用本技術領域內所用之其他方法(例如離子交換)與胺基形成之鹽。其他醫藥上可接受之鹽包含己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。 自適當鹼衍生之鹽包含鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽及N+ (C1-4 烷基)4 鹽。代表性鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽包含鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及諸如此類。在適當時，其他醫藥上可接受之鹽包含無毒銨、四級銨及胺陽離子，其係使用諸如鹵離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根及芳基磺酸根等抗衡離子來形成。 除非另外陳述，否則本文所繪示之結構亦意欲包含該結構之所有異構體(例如對映異構體、非對映異構體及幾何異構體(或構象異構體))形式；例如每一不對稱中心之R及S構形、Z及E雙鍵異構體以及Z及E構象異構體。因此，本發明化合物之單一立體化學異構體以及對映異構體、非對映異構體及幾何(構象)混合物皆屬本發明範圍內。除非另外陳述，否則本發明化合物之所有互變異構體形式皆屬本發明範圍內。另外，除非另外陳述，否則本文所繪示之結構亦欲包含僅在一或多個同位素富集原子存在時不同之化合物。舉例而言，具有包含使用氘或氚替代氫或使用13 C或14 C富集碳替代碳之本發明結構之化合物在本發明範圍內。根據本發明，該等化合物可用作(例如)分析工具、作為生物分析中之探針或作為治療劑。 本文所用之術語「可測量親和力」及「可測量地抑制」意指包括本發明化合物或其組合物及PAD4之試樣與包括PAD4但缺少該化合物或其組合物之等效試樣間之PAD4活性的可測量變化。 3. 實例性化合物之闡述 根據一態樣，本發明提供式I 化合物：或其醫藥上可接受之鹽，其中： 環A係 或，其中環A視情況經1-4個選自氟、-CN、-OR或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團之基團取代； R1 係氫、-CN、-OR或視情況經1-4個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團； R2 係氫或視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團； X1 及X2 中之每一者獨立地選自N或C(R4 )； R3 及R4 中之每一者獨立地係鹵素、-CN、-R或-OR； n為0-4；且 每一R獨立地係氫或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。 根據另一態樣，本發明提供式I’ 化合物：或其醫藥上可接受之鹽，其中： 環A係 或，其中環A視情況經1-4個選自氟、-CN、-OR或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團之基團取代； 環B係或； R1 係氫、-CN、-OR、 或視情況經1-4個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團； R2 係氫或視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團； X1 及X2 中之每一者獨立地選自N或C(R4 )； R3 係鹵素、-CN、-R、或-OR； 每一R4 獨立地係鹵素、-CN、-R、, 或-OR； R5 係氫或鹵素； n為0-4；且 每一R獨立地係氫或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。 如上文所定義及本文所闡述，R1 係氫、-CN、-OR或視情況經1-4個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團。在一些實施例中，R1 係氫。在一些實施例中，R1 係-CN。在一些實施例中，R1 係-OR。在一些實施例中，R1 係視情況經1-4個選自氟、-CN或OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團。在一些實施例中，R1 係C1-3 脂肪族基團。在一些實施例中，R1 係甲基。在一些實施例中，R1 係乙基。在一些實施例中，R1 係丙基。在一些實施例中，R1 係視情況經甲基及-OH取代之-CH2 -環丁基。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。 在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在一些實施例中，R1 係。在某些實施例中，R1 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，R2 係氫或視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係氫。在一些實施例中，R2 係視情況經1-5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係甲基。在一些實施例中，R2 係乙基。在一些實施例中，R2 係丙基。在一些實施例中，R2 係丁基。在一些實施例中，R2 係戊基。在一些實施例中，R2 係己基。在一些實施例中，R2 係環丙基。在一些實施例中，R2 係環丁基。在一些實施例中，R2 係環戊基。在一些實施例中，R2 係環己基。在一些實施例中，R2 係環丙基甲基。在一些實施例中，R2 係環丁基甲基。在一些實施例中，R2 係環戊基甲基。在一些實施例中，R2 係環己基甲基。在一些實施例中，R2 係環丙基乙基。在一些實施例中，R2 係環丁基乙基。在一些實施例中，R2 係環戊基乙基。在一些實施例中，R2 係環己基乙基。在一些實施例中，R2 係-CH2 -環丙基或-CH2 -環丁基。在一些實施例中，R1 係視情況經甲基及-OH取代之-CH2 -環丁基。 在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經1個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經2個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經3個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經4個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經5個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。在一些實施例中，R2 係經1-3個氟原子取代之甲基。在一些實施例中，R2 係三氟甲基。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之乙基。在一些實施例中，R2 係2,2,2-三氟乙基。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之丙基。在一些實施例中，R2 係3,3,3-三氟丙基。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之丁基。在一些實施例中，R2 係4,4,4-三氟丁基。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之戊基。在一些實施例中，R2 係5,5,5-三氟戊基。在一些實施例中，R2 係經1-5個氟原子取代之己基。在一些實施例中，R2 係6,6,6-三氟己基。在某些實施例中，R2 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，X1 及X2 各自獨立地選自N或C(R4 )。在一些實施例中，X1 及X2 皆係N。在一些實施例中，X1 係N，且X2 係CH。在一些實施例中，X1 係CH，且X2 係N。在一些實施例中，X1 及X2 皆係CH。在一些實施例中，X1 係N，且X2 係C(R4 )。在一些實施例中，X1 係C(R4 )，且X2 係N。在一些實施例中，X1 及X2 係C(R4 )。在某些實施例中，X1 及X2 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，R3 係鹵素、-CN、-R或-OR且每一R獨立地係氫或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。 在一些實施例中，R3 係氫。在一些實施例中，R3 係鹵素。在一些實施例中，R3 係-CN。在一些實施例中，R3 係C1-3 脂肪族基團。在一些實施例中，R3 係甲基。在一些實施例中，R3 係乙基。在一些實施例中，R3 係丙基。在一些實施例中，R3 係□OR。在一些實施例中，R3 係-OCH3 。在一些實施例中，R3 係-OCH2 CH3 。在一些實施例中，R3 係‑OCH2 CH2 CH3 。在某些實施例中，R3 係‑OCH(F)2 。 在一些實施例中，R3 係。在一些實施例中，R3 係。在一些實施例中，R3 係。在某些實施例中，R3 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，每一R4 獨立地係鹵素、-CN、-R、 或-OR。 在一些實施例中，R4 係氫。在一些實施例中，R4 係鹵素。在一些實施例中，R4 係-CN。在一些實施例中，R4 係C1-6 脂肪族基團或-OR。在一些實施例中，R4 係-OCH3 。在一些實施例中，R4 係乙基。 在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在一些實施例中，R4 係。在某些實施例中，R4 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義，環A係 或，其中環A視情況經1-4個選自氟或視情況經1-3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團之基團取代。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係 或。在一些實施例中，環A係 或。在一些實施例中，環A係或。在一些實施例中，環A係 或。在一些實施例中，環A係 或。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在一些實施例中，環A係。在某些實施例中，環A係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，環B係,或。在一些實施例中，環B係。在一些實施例中，環B係。在一些實施例中，環B係。在一些實施例中，環B係。在某些實施例中，環B係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，R5 係氫或鹵素。在一些實施例中，R5 係氫。在一些實施例中，R5 係鹵素。在一些實施例中，R5 係氟。在某些實施例中，R5 係選自繪示於下表1中者。 如上文所定義及本文所闡述，n為0-4。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為4。在某些實施例中，n係選自繪示於下表1中者。 在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係乙基，X1 係N，X2 係CH，R3 係氫，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係2,2,2-三氟乙基，X1 係N，X2 係CH，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係N，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係乙基，X1 係N，X2 係CH，R3 係氫，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係N，R3 係氫，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係2,2,2-三氟乙基，X1 係N，X2 係CH，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係N，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係2,2,2-三氟乙基，X1 係N，X2 係CH，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係N，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係乙基，X1 係N，X2 係CH，R3 係氫，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，R1 係甲基，R2 係環丙基甲基，X1 係N，X2 係CH，R3 係-OCH3 ，且環A係。在一些實施例中，環A係。 在一些實施例中，式I 化合物係選自繪示於下表1中者。表 1. 式 I 之實例性化合物 在某些實施例中，本發明提供上文及本文所闡述之任一化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供如上表1中所繪示之化合物或其醫藥上可接受之鹽。 在一些實施例中，本發明提供呈分離形式之上文及本文所闡述之任一化合物。 4. 用途、調配及投與 醫藥上可接受之組合物 根據另一實施例，本發明提供一種組合物，其包括本發明化合物或其醫藥上可接受之衍生物及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。本發明組合物中之化合物之量應使得有效可量測地抑制生物試樣或患者中之PAD4。在某些實施例中，本發明組合物中之化合物之量應使得有效可測量地抑制生物試樣或患者中之PAD4。在某些實施例中，本發明組合物經調配用於投與需要此組合物之患者。在一些實施例中，本發明組合物經調配用於經口投與患者。 本文所用之術語「個體」可與術語「患者」互換使用且意指動物、較佳地哺乳動物。在一些實施例中，個體或患者係人類。在其他實施例中，個體(或患者)係家畜個體(或患者)。在一些實施例中，家畜個體(或患者)係犬、貓或馬個體。 術語「醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑」係指不會破壞與其一起調配之化合物之藥理學活性之無毒載劑、佐劑或媒劑。可用於本發明組合物中之醫藥上可接受之載劑、佐劑和媒劑包含(但不限於)離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽)、膠體二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯基吡咯烷酮、纖維素基物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。 本發明組合物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、經局部、經直腸、經鼻、經頰(buccally)、經陰道或經由植入型藥盒(implanted reservoir)投與。本文所用之術語「非經腸」包含皮下、靜脈內、肌內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病灶內及顱內注射或輸注技術。較佳地，經口、腹膜腔內或靜脈內投與該等組合物。本發明組合物之無菌可注射形式可為水性或油性懸浮液。該等懸浮液可根據業內已知技術使用適宜分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，例如作為溶於1,3-丁二醇中之溶液。可用之可接受媒劑及溶劑係水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液。另外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。 出於此目的，可使用任一溫和不揮發性油，包含合成單-或二-甘油酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)可用於製備可注射物，例如天然醫藥上可接受之油類，例如橄欖油或蓖麻油，其尤其呈其聚氧乙烯化形式。該等油溶液或懸浮液亦可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如羧甲基纖維素或通常用於調配包含乳液及懸浮液之醫藥上可接受之劑型的類似分散劑。亦可將其他常用表面活性劑用於調配目的，例如Tween、Spans及其他通常用於製備醫藥上可接受之固體、液體或其他劑型乳化劑或生物可用性增強劑。 本發明之醫藥上可接受之組合物可以任何經口可接受劑型經口投與，該等劑型包含(但不限於)膠囊、錠劑、水性懸浮液或溶液。在經口使用之錠劑情形下，常用載劑包含乳糖及玉米澱粉。通常亦添加潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式經口投與而言，可用稀釋劑包含乳糖及乾玉米澱粉。在需口服使用水性懸浮液時，可將活性成份與乳化劑及懸浮劑組合。若需要，亦可添加某些甜味劑、矯味劑或著色劑。 或者，本發明之醫藥上可接受之組合物可以用於直腸投與之栓劑形式投與。可藉由將藥劑與適當非刺激性賦形劑混合來製備該等組合物，該賦形劑在室溫下為固體但在直腸溫度下為液體，且因此將在直腸中融化而釋放藥物。該等材料包含可可脂、蜂蠟及聚乙二醇。 本發明之醫藥上可接受之組合物亦可局部投與，尤其在治療靶包含可藉由局部施加易於達到之區域或器官(包含眼睛、皮膚或下腸道之疾病)時。可容易地製備用於該等區域或器官中之每一者之適宜局部調配物。 可以直腸栓劑調配物(參見上文)或適宜灌腸調配物來實現腸道下部之局部施加。亦可使用局部真皮貼片。 對於局部施加而言，可將所提供之醫藥上可接受之組合物調配成含有懸浮或溶解於一或多種載劑中之活性組份之適宜軟膏。用於局部投與本發明化合物之載劑包含(但不限於)礦物油、液體石蠟、白石蠟、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯化合物、乳化蠟及水。或者，可將所提供之醫藥上可接受之組合物調配成含有懸浮或溶解於一或多種醫藥上可接受之載劑中之活性組份之適當洗劑或乳霜。適宜載劑包含(但不限於)礦物油、山梨糖醇酐單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇及水。 對於眼部使用而言，可將所提供之醫藥上可接受之組合物調配成於等滲、pH經調節之無菌鹽水中之微粒化懸浮液，或較佳地調配成於等滲、pH經調節之無菌鹽水中之溶液，其含有或不含防腐劑，例如氯苄烷銨(benzylalkonium chloride)。或者，對於眼部應用而言，可將醫藥上可接受之組合物調配於軟膏(例如石蠟)中。 亦可藉由經鼻氣溶膠或吸入劑來投與本發明之醫藥上可接受之組合物。根據醫藥調配領域熟知之技術來製備該等組合物且可將其製備為鹽水溶液，其使用苯甲醇或其他適宜防腐劑、吸收促進劑(用於增強生物可用性)、碳氟化合物及/或其他習用增溶劑或分散劑。 最佳地，本發明之醫藥上可接受之組合物經調配用於經口投與。該等調配物可與食物一起或不與食物一起投與。在一些實施例中，本發明之醫藥上可接受之組合物係在沒有食物之情況下投與。在其他實施例中，本發明之醫藥上可接受之組合物係在有食物之情況下投與。 本發明之醫藥上可接受之組合物可經口、經直腸、非經腸、腦池內、陰道內、腹膜腔內、局部(如藉由粉劑、軟膏或滴劑)、口腔、作為口或鼻噴霧等投與人類及其他動物，此取決於所治療感染之嚴重程度。在某些實施例中，本發明化合物可以約0.01 mg/kg個體體重/天至約50 mg/kg個體體重/天且較佳約1 mg/kg個體體重/天至約25 mg/kg個體體重/天之劑量量每天一或多次經口或非經腸投與以獲得期望治療效應。 用於經口投與之液體劑型包含(但不限於)醫藥上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性化合物外，液體劑型可含有本技術領域內常用之惰性稀釋劑(例如水或其他溶劑)、增溶劑及乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(特定而言為棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇及山梨醇酐之脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀釋劑外，經口組合物亦可包含佐劑，例如潤濕劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑。 可根據已知技術使用適宜分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配可注射製劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射製劑亦可為於無毒之非腸道可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如於1,3-丁二醇中之溶液。可採用之可接受媒劑及溶劑係水、林格氏溶液、U.S.P.及等滲氯化鈉溶液。另外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用包含合成單甘油酯或二甘油酯之任何溫和不揮發性油。另外，在可注射製劑中使用諸如油酸等脂肪酸。 舉例而言，可注射調配物可藉由過濾經由細菌截留過濾器或藉由納入滅菌劑來滅菌，該等滅菌劑呈可在使用前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中之無菌固體組合物形式。 為延長本發明化合物之效應，通常期望自皮下或肌內注射來減緩該化合物之吸收。此可藉由使用具有較差水溶性之結晶或非晶型材料之液體懸浮液來達成。因此，化合物之吸收速率取決於其溶解速率，此溶解速率進而可取決於晶體大小及結晶形式。或者，藉由將化合物溶解或懸浮於油性媒劑中來達成非經腸投與化合物形式之延遲吸收。藉由在生物可降解聚合物(例如聚乳酸-聚乙交酯)中形成化合物之微囊基質來製備可注射之儲積物形式。端視化合物對聚合物之比率及所用特定聚合物之性質，可控制化合物之釋放速率。其他生物可降解聚合物之實例包含聚(原酸酯)及聚(酐)。亦可藉由將化合物裝入與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備儲積物可注射調配物。 用於直腸或陰道投與之組合物較佳為栓劑，其可藉由將本發明化合物與適宜無刺激性賦形劑或載劑(例如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟)混合來製備，該等賦形劑或載劑在環境溫度下為固體但在體溫下為液體且因此其可在直腸或陰道腔內融化並釋放活性化合物。 經口投與之固體劑型包含膠囊、錠劑、丸劑、粉劑及顆粒。在該等固體劑型中，活性化合物與至少一種醫藥上可接受之惰性賦形劑或載劑(例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)及/或以下物質混合：a)填充劑或增量劑，例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及矽酸，b)黏合劑，例如羧甲基酸纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯啶酮、蔗糖及阿拉伯膠，c)保濕劑，例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、海藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉，e)溶液阻滯劑，例如石蠟，f)吸收促進劑，例如四級銨化合物，g)潤濕劑，例如鯨蠟硬脂醇及甘油單硬脂酸酯，h)吸收劑，例如高嶺土及膨潤土，及i)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠囊、錠劑及丸劑之情形下，劑型亦可包括緩衝劑。 在使用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及諸如此類等賦形劑之軟質及硬質填充明膠膠囊中，亦可採用類似類型之固體組合物作為填充劑。錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑及顆粒之固體劑型可使用包膜及包殼製備，例如腸溶包膜及醫藥調配技術中熟知之其他包膜。其可視情況含有遮光劑且亦可為視情況以延遲方式僅(或優先)在腸道之某一部分中釋放活性成份之組合物。可使用之包埋用組合物之實例包含聚合物質及蠟。在使用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及諸如此類等賦形劑之軟質及硬質填充明膠膠囊中，亦可採用相似類型之固體組合物作為填充劑。 活性化合物亦可與一或多種如上文所述之賦形劑形成微囊化形式。錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑及顆粒之固體劑型可使用包膜及包殼來製備，例如腸溶包膜、釋放控制包膜及醫藥調配技術中熟知之其他包膜。在該等固體劑型中，可將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑(例如蔗糖、乳糖或澱粉)混合。該等劑型除惰性稀釋劑外亦可如同通常實踐一般包括其他物質，例如壓錠潤滑劑及其他壓錠助劑(例如硬脂酸鎂及微晶纖維素)。在膠囊、片劑及丸劑之情形下，該等劑型亦可包括緩衝劑。其可視情況含有遮光劑且亦可為視情況以延遲方式僅(或優先)在腸道之某一部分中釋放活性成份之組合物。可使用之包埋用組合物之實例包含聚合物質及蠟。 用於局部或經皮投與本發明化合物之劑型包含軟膏、膏糊、乳霜、洗劑、凝膠、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼片。若需要，則可在無菌條件下將活性組份與醫藥上可接受之載劑及任何所需防腐劑或緩衝劑混合。眼部調配物、滴耳劑及滴眼劑亦涵蓋於本發明範圍內。另外，本發明涵蓋使用透皮貼片，其具有提供化合物至身體之控制遞送之額外優點。該等劑型可藉由將化合物溶解或分配於合適介質中來製備。亦可使用吸收促進劑來增加該化合物穿過皮膚之通量。速率可藉由提供速率控制膜或藉由將化合物分散於聚合物基質或凝膠中來控制。 可與載劑材料組合以製造單一劑型之組合物之本發明化合物之量將視所治療主體、特定投與模式而變化。較佳地，將所提供組合物經調配以使得可將介於0.01 mg/kg體重/天至100 mg/kg體重/天之間之抑制劑之劑量投與接受該等組合物的患者。 本發明化合物可單獨或與一或多種其他治療化合物組合投與，可能之組合療法採用固定組合之形式或本發明化合物與一或多種其他治療化合物交錯投與或彼此獨立地給予，或組合投與固定組合與一或多種其他治療化合物之固定形式。本發明化合物可此外或另外與化學療法、放射療法、免疫療法、光療法、手術干預或該等方式之組合投與以尤其用於腫瘤療法。長期療法在其他治療方案之情形下同樣地可能作為輔助療法，如上文所闡述。其他可能治療係腫瘤消退後用以維持患者狀態之療法或甚至化學防癌療法，例如在處於風險下之患者中。 彼等其他藥劑可作為多劑量方案之一部分與含有本發明化合物之組合物分開投與。或者，彼等藥劑係單一劑型之一部分，其與本發明化合物混合成單一組合物。若作為多劑量方案之一部分投與，則兩種活性劑可同時、依序或彼此在一定時間內、通常彼此在5小時內呈遞。 如本文中所使用，術語「組合」、「經組合」及相關術語係指同時或依序投與本發明之治療劑。舉例而言，本發明化合物可與另一治療劑同時或依序以分開之單位劑型或一起作為單一單位劑型投與。因此，本發明提供包括本發明化合物、另一治療劑及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑之單一單位劑型。 可與載劑物質組合以產生單一劑型之本發明化合物及另一治療劑二者之量(在如上文所闡述包括另一治療劑之彼等組合物中)將隨所治療之宿主及特定投與方式而變。較佳地，本發明組合物應經調配以便可投與介於0.01 mg/kg體重/天至100 mg/kg體重/天之間之本發明化合物。 在包括另一治療劑之彼等組合物中，另一治療劑及本發明化合物可協同起作用。因此，另一治療劑在該等組合物中之量將小於僅利用該治療劑之單一療法中所需要的量。 存在於本發明組合物中之另一治療劑之量將不超過在包括該治療劑作為唯一活性劑之組合物中正常投與之量。較佳地，本文所揭示組合物中另一治療劑之量將在包括該藥劑作為唯一治療活性劑之組合物中所正常存在量之約50％至100％範圍內。 亦應理解，用於任一特定患者之具體劑量及治療方案將取決於多種因素，包含所採用特定化合物之活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、投與時間、排泄速率、藥物組合及治療醫師之判斷以及所治療具體疾病之嚴重程度。本發明化合物在組合物中之量亦將視組合物中之特定化合物而定。 化合物及醫藥上可接受之組合物之用途 本文所闡述之化合物及組合物通常可用於抑制PAD4。 可在活體外、在活體內或在細胞系中分析在本發明中用作PAD4抑制劑之化合物之活性。活體外分析包含測定PAD4抑制之分析。分析本發明所用作為PAD4抑制劑化合物之詳細情況闡述於下文實例中。在一些實施例中，所提供化合物較PAD2選擇性抑制PAD4。 如本文中所使用，術語「治療(treatment、treat及treating)」係指如本文所闡述逆轉、減輕疾病或病症或其一或多種症狀、延遲其發作或抑制其進展。在一些實施例中，治療劑可在已發生一或多種症狀之後投與。在其他實施例中，治療劑可在無症狀之情況下投與。舉例而言，可在症狀發作之前將治療劑投與易感個體(例如根據症狀歷史及/或根據遺傳或其他敏感因子)。亦可在症狀消退之後繼續治療以(例如)防止或延遲其復發。 所提供化合物係PAD4抑制劑且由此可用於治療一或多種與PAD4活性有關之病症。因此，在某些實施例中，本發明提供治療PAD4介導之病症之方法，其包含向有需要之患者投與本發明化合物或其醫藥上可接受之組合物之步驟。 在一實施例中，PAD4介導之病症係藉由不適當PAD4活性介導之疾病、病狀或病症。在一些實施例中，PAD4介導之病症係選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡及牛皮癬。在另一實施例中，藉由不適當PAD4活性介導之病症係類風濕性關節炎。在另一實施例中，藉由不適當PAD4活性介導之病症係全身性狼瘡。在另一實施例中，藉由不適當PAD4活性介導之病症係血管炎。在另一實施例中，藉由不適當PAD4活性介導之病症係皮膚紅斑狼瘡。在另一實施例中，藉由不適當PAD4活性介導之病症係牛皮癬。 在一實施例中，提供治療類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡或牛皮癬之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。 在一實施例中，提供治療類風濕性關節炎之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一實施例中，提供治療全身性狼瘡之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一實施例中，提供治療血管炎之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一實施例中，提供治療皮膚紅斑狼瘡之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在一實施例中，提供治療牛皮癬之方法，該方法包括向有需要之人類個體投與治療有效量之所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。 在一些實施例中，PAD4介導之病症係選自由以下組成之群：酸誘發之肺損傷、痤瘡(PAPA)、急性淋巴球性白血病、急性呼吸窘迫症候群、阿狄森氏病(Addison’s disease)、腎上腺增生、腎上腺皮質功能不全、老化、AIDS、酒精性肝炎、酒精性肝炎、酒精性肝病、過敏原誘發之氣喘、過敏支氣管肺、麴菌病(aspergillosis)、過敏結膜炎、脫髮、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、類澱粉變性、萎縮性脊髓側索硬化及重量損失、心絞痛、血管性水腫、無汗外胚層發育不全-ID、關節黏連性脊椎炎、前段發炎、抗磷脂症候群、口瘡口炎、闌尾炎、關節炎、氣喘、動脈粥樣硬化、異位性皮膚炎、自體免疫疾病、自體免疫肝炎、蜂螯傷誘發之發炎、貝切特氏病(Behcet’s disease)、貝切特氏症候群(Behcet’s syndrome)、貝爾氏麻痺症(Bells Palsey)、鈹中毒、布勞症候群(Blau syndrome)、骨疼痛、細支氣管炎、燒傷、滑囊炎、癌症、心肥大、腕隧道症候群、異化代謝病症、白內障、腦動脈瘤、化學刺激物誘發之發炎、脈絡膜視網膜炎、慢性心臟衰竭、早產兒慢性肺病、慢性淋巴球性白血病、慢性阻塞性肺病、結腸炎、複雜性區域疼痛症候群、結締組織疾病、角膜潰瘍、克羅恩氏病(crohn’s disease)、隱熱蛋白相關週期性症候群、隱球菌病、囊性纖維化、介白素-1-受體拮抗劑(DIRA)缺陷、皮膚炎、皮膚炎內毒素血症、皮肌炎、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、子宮內膜異位症、內毒素血症、上髁炎、紅血球母細胞減少症、家族性澱粉樣多發性神經病變、家族性冷性蕁麻疹、家族性地中海熱、胎兒生長遲滯、青光眼、腎小球疾病、腎小球腎炎、痛風、痛風性關節炎、移植物抗宿主病、腸病、頭損傷、頭痛、聽力損失、心臟病、溶血性貧血、亨舍二氏紫癜(Henoch-Scholein purpura)、肝炎、遺傳性週期性發熱症候群、帶狀疱疹及單純疱疹、HIV-1、何傑金氏病(Hodgkin’s disease)、亨廷頓氏病(Huntington’s disease)、透明膜病、高胺血症、高鈣血症、高膽固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反覆發熱(HIDS)、發育不全及其他貧血、發育不全性貧血、特發性血小板減少紫斑症、色素失調症、感染性單核細胞增多症、發炎性腸病、發炎性肺病、發炎性神經病變、發炎性疼痛、昆蟲咬傷誘發之發炎、虹膜炎、刺激物誘發之發炎、缺血/再灌注、青少年型類風濕性關節炎、角膜炎、腎疾病、由寄生蟲感染引起之腎損傷、由寄生蟲感染引起之腎損傷、腎移植排斥預防、鉤端螺旋體病、白血病、呂弗勒氏症候群(Loeffler’s syndrome)、肺損傷、肺損傷、狼瘡、狼瘡、狼瘡性腎炎、淋巴瘤、腦膜炎、間皮瘤、混合結締組織疾病、穆-韋二氏症候群(Muckle-Wells syndrome) (蕁麻疹耳聾類澱粉變性)、多發性硬化、肌肉消瘦、肌肉營養不良症、重症肌無力、心肌炎、蕈樣黴菌病、蕈樣黴菌病、骨髓發育不良症候群、肌炎、鼻竇炎、壞死性小腸結腸炎、新生兒發作多系統發炎性疾病(NOMID)、腎病症候群、神經炎、神經病理學疾病、非過敏原誘發之氣喘、肥胖症、眼睛過敏、視神經炎、器官移植、骨關節炎、中耳炎、佩吉特氏病(paget’s disease)、疼痛、胰臟炎、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、天皰瘡、心包炎、週期性發熱、齒根骨膜炎、腹膜型子宮內膜異位症、百日咳、咽炎及腺炎(PFAPA症候群)、植物刺激物誘發之發炎、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、肺囊蟲感染、野葛/漆酚油誘發之發炎、結節性多動脈炎、多軟骨炎、多囊性腎疾病、多發性肌炎、牛皮癬、牛皮癬、牛皮癬、牛皮癬、心理社會壓力疾病、肺病、肺高血壓、肺纖維化、壞疽性膿皮病、化膿性無菌關節炎、腎疾病、視網膜疾病、風濕性心炎、風濕性疾病、類風濕性關節炎、類肉瘤病、皮脂溢、敗血症、嚴重疼痛、鐮狀細胞、鐮狀細胞貧血、二氧化矽誘發之疾病、薛格連氏症候群(Sjogren’s syndrome)、皮膚病、睡眠呼吸中止、實體腫瘤、骨髓損傷、史蒂芬-強森症候群(Stevens-Johnson syndrome)、中風、蛛網膜下出血、曬傷、顳動脈炎、腱鞘炎、血小板減少症、甲狀腺炎、組織移植、TNF受體相關週期性症候群(TRAPS)、弓蟲症、移植、創傷性腦損傷、肺結核、1型糖尿病、2型糖尿病、潰瘍性結腸炎、蕁麻疹、眼色素層炎及韋格納氏肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)。 在一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療由不適當PAD4活性介導之病症。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡或牛皮癬。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療類風濕性關節炎。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療全身性狼瘡。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療血管炎。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療皮膚紅斑狼瘡。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療牛皮癬。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療由不適當PAD4活性介導之病症之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡或牛皮癬之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療類風濕性關節炎之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療全身性狼瘡之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療血管炎之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療皮膚紅斑狼瘡之藥劑。在另一實施例中，本發明提供所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用以製造用於治療牛皮癬之藥劑。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防由不適當PAD4活性介導之病症之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡或牛皮癬之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防類風濕性關節炎之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防全身性狼瘡之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防血管炎之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防皮膚紅斑狼瘡之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防牛皮癬之醫藥組合物，其包括所提供化合物或其醫藥上可接受之鹽 本發明之每一態樣之所有特徵經適當變通後適用於所有其他態樣。 為可更全面地理解本文所闡述之本發明，陳述下列實例。應理解，該等實例僅出於闡釋目的且不應解釋為以任何方式限制本發明。例示 如下文實例中所繪示，在某些實例性實施例中，根據下列一般程序製備化合物。應瞭解，儘管一般方法繪示本發明某些化合物之合成，但下列一般方法及熟習此項技術者所已知之其他方法可適用於本文中所闡述之所有化合物及該等化合物中之每一者之亞類及種類。方法 A MET/u-HPLC (低pH 7 min方法) 管柱：Phenomenex Kinetex-XB C18, 2.1 mm × 100 mm, 1.7 µm 流速：0.6 ml/min 移動相：A，0.1%甲酸(水溶液)；及B，0.1%甲酸(MeCN) 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：215 nm (標稱) 梯度時間(分鐘) -% B 0.00 - 5 5.30 - 100 5.80 - 100 5.82 - 5方法 B MET/CR/1600 (高pH 7 min方法) 管柱：Phenomenex Gemini C18, 2.0mm×100mm, 3µm 流速：0.5ml/min 移動相： A：2mM碳酸氫銨，於HPLC等級水中，pH10 B：HPLC等級MeCN 注入體積：3 μl 溫度：50℃ 檢測：215nm 梯度時間(分鐘) -%B 0.0 - 5 5.50 - 100 5.90 - 100 5.92 - 5 9.00 - 5方法 C METCR 1416 (低pH Shimadzu 7min方法) 管柱：Waters Atlantis dC18, 2.1mm×100mm，3µm管柱 流速：0.6 ml/min 移動相：A，0.1%甲酸(水溶液)；及B，0.1%甲酸(乙腈) 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：215 nm (標稱) 梯度時間(分鐘) -% B 0.00 - 5 5.00 - 100 5.40 - 100 5.42 - 5方法 D METCR 1410 (低pH Shimadzu 2min方法) 管柱：Kinetex Core-Shell C18, 2.1mm×50mm，5µm管柱 流速：1.2 ml/min 移動相：A，0.1%甲酸(水溶液)；及B，0.1%甲酸(乙腈) 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：215 nm (標稱) 梯度時間(分鐘) -% B 0.00 - 5 1.20 - 100 1.30 - 100 1.31 - 5方法 E ： 對掌性HPLC製備型方法 管柱：Chiralpak IC 250mm × 4.6mm，5µm管柱 流速：15 ml/min 移動相：35%乙醇：65%CO2 試樣稀釋劑：乙醇 溫度：40℃ 檢測：215 nm (標稱)方法 F ： 對掌性純度分析方法 管柱：Chiralpak IC 250mm × 4.6mm，5µm管柱 流速：4 ml/min 注入體積：10 µL 溫度：40℃ 檢測：215 nm 等梯度條件：40%乙醇：60%CO2方法 G 對掌性HPLC製備型方法 管柱：XSelect CSH C18 50×2.1 mm, 1.7um 流速：0.6 ml/min 移動相：水(0.1% v/v TFA), MecN (0.1% v/v TFA) 試樣稀釋劑：乙醇 溫度：40℃ 檢測：240 nm (標稱)方法 H MET/u-HPLC (高pH MS16 7 min方法) 管柱：Waters UPLC CSH C18, 2.1mm×100mm 5µm管柱 流速：0.6 ml/min 移動相：A，使用氫氧化銨改質至pH 10之2mM碳酸氫銨(水溶液)；及B，乙腈 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：215 nm (標稱) 梯度時間(分鐘) -% B 0.00 - 5 5.30 - 100 5.80 - 100 5.82 - 5方法 I 對掌性純度分析方法 管柱：Lux C4 (21.2mm × 250mm, 5um) 流速：21 ml/min 注入體積：350 µL 檢測：222 nm 等梯度條件：MeOH (0.1% v/v NH3)方法 J MET/CR/0990 (高pH 3min方法) 管柱：Phenomenex Gemini C18, 2.0mm×100mm, 3µm 流速：1ml/min 移動相A：2mM碳酸氫銨，於HPLC等級水中，pH10 B HPLC等級MeCN 注入體積：3 μl 溫度：60℃ 檢測：215nm 梯度時間(分鐘) -%B 0.0- 1 1.80 - 100 2.10 - 100 2.30 - 1方法 K ： 對掌性HPLC製備型方法 管柱：Amy-C 20mm × 250mm, 5um 流速：21 ml/min 移動相：4:6庚烷:乙醇(0.1% v/v氨) 試樣稀釋劑：甲醇 溫度：環境溫度 檢測：254 nm方法 L 對掌性純度分析方法 管柱：Amy-C 4.6mm × 250mm, 5um 流速：21 ml/min 注入體積：1.0 µL 溫度：環境溫度 UV檢測：254 nm 等梯度條件：4:6庚烷:乙醇(0.1% v/v氨) 根據下文之反應圖1來製備本發明之某些化合物。反應圖 1 2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13 之合成。 3- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AR0065-002 - 步驟 1 向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8, 2.0 g, 8.14 mmol)於DMF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加K2 CO3 (99%, 1.37 g, 9.81 mmol)。向此溶液中添加甲胺鹽酸鹽(1:1) (0.62 g, 9.18 mmol)且將混合物在氮及80℃下於密封管中攪拌16h。在真空中濃縮反應粗製物並分配於DCM (100ml)與水(10ml)之間。使用水(2 × 10ml)及氯化鈉飽和水溶液(10ml)進一步洗滌有機層。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以提供橙色粉末，藉由急速管柱層析(15-40% EtOAc/庚烷)純化以獲得1.49 g (76%)橙色粉末形式之3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002。LCMS (方法D)：滯留時間：1.13min, M/z = 241 (M + 1)。3- 胺基 -5- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AR0068-002 - 步驟 2 在氮下，向3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0065-002 , 1.49 g, 6.20 mmol)於乙醇(100ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (0.18 g, 0.17 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌16h。經由矽藻土過濾反應混合物且經由使用甲醇(150ml)洗滌過濾液。在真空中濃縮濾液以提供1.21 g (89%)淺紫色粉末形式之3-胺基-5-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002。LCMS (方法D)：滯留時間：0.63min, M/z = 211 (M + 1)。1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AQ1957-001 - 步驟 3 在室溫下，將氫化鈉(60%, 59 mg, 1.47 mmol)逐份添加至1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0, 200 mg, 1.05 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌懸浮液中。將混合物攪拌20分鐘，然後添加碘乙烷(197 mg, 1.26 mmol)。將反應混合物攪拌20h。將混合物分配於EtOAc (20ml)與水(20ml)之間。使用EtOAc (1 × 20ml)進一步萃取水層，使用水(20ml)洗滌合併之有機物並蒸發至乾燥。藉由急速管柱層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化粗產物以獲得135 mg (57.1%)無色油狀物形式之1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001。LCMS (方法D)：滯留時間：1.18min, M/z = 219 (M + 1)。1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 EV-AQ1960-001- 步驟 4 向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AQ1957-001, 135 mg, 0.62 mmol)於THF (2 ml)中之攪拌溶液中添加含氫氧化鋰(74 mg, 3.09 mmol)之水(2 ml)。將混合物在50℃攪拌2.5 h。使用1M HCl (3 ml)酸化混合物並使用DCM (2 × 5 ml)萃取。使用水洗合併之有機物並蒸發至乾燥，得到120 mg (99%)白色固體之1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001。LCMS (方法D)：滯留時間：0.92min, M/z = 191 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AR0070-003- 步驟 5 向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AQ1960-001, 120 mg, 0.63 mmol)於DMF (2ml)中之攪拌溶液中添加DIPEA (116 µl, 0.70 mmol)，隨後添加HATU (236 mg, 0.62 mmol)且將所得混合物在室溫攪拌15分鐘。添加3-胺基-5-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯(EV-AR0068-002, 148 mg, 0.70 mmol)且將所得混合物在室溫攪拌6h。反應混合物在真空中濃縮，溶於乙酸(3ml)中並在70℃攪拌16h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(25-40% EtOAc/庚烷)純化剩餘材料，獲得150 mg (63%)白色粉末之2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003。LCMS (方法D)：滯留時間：1.18min, M/z = 365 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸 EV-AR0072-002 - 步驟 6 向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0070-003, 150 mg, 0.41 mmol)於THF (3ml)中之攪拌溶液中添加氫氧化鋰 (30 mg, 1.25 mmol)於水(3ml)中之溶液且將混合物在室溫攪拌16h。反應混合物在真空中濃縮，吸收於水(5ml)中並在攪拌時使用5N HCl (0.5ml)酸化。將所得懸浮液攪拌10分鐘，然後藉由真空過濾收集沈澱物並乾燥，獲得130 mg (89%)白色粉末之2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002。LCMS (方法D)：滯留時間：1.03min, M/z = 351 (M + 1)。6-(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0074-002 - 步驟 7 向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR0072-002, 130 mg, 0.37 mmol)於2:1 DMSO/MeCN (4.5ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (65 µl, 0.39 mmol)及HATU (148 mg, 0.39 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘，然後添加八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(CAS 949559-11-9, 88 mg, 0.39 mmol)且將混合物在室溫下攪拌4h。使用3:2 MeCN/水(1.5ml)稀釋反應混合物並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得142 mg (81%)白色粉末形式之6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0074-002。LCMS (方法A)：滯留時間：3.41min, M/z = 559 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13 - 步驟 8 向6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0074-002, 20 mg, 0.04 mmol)於甲醇(1ml)中之經攪拌溶液中添加於1,4-二噁烷中之4M HCl (0.5 ml)且將所得溶液在室溫下攪拌4h。在真空中濃縮反應混合物且自水(4ml)凍乾殘餘物以獲得13.4 mg (75%)黃色固體形式之 2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AR0076-002I-13 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.80min, M/z = 459 (M + 1)。對掌性 HPLC ， 獲得 (3aR,7aS)-6 -(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0090-001 及 (3aS,7aR)-6-(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0090-002 ， - 步驟 9 將107mg 6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0074-002溶於乙醇中且然後藉由對掌性HPLC (方法E)純化以獲得46.6 mg (43.6%) (3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0090-001(絕對立體化學任意分配)及36.8 mg (33.4%) (3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0090-002(絕對立體化學任意分配)。 EV-AR0090-001，對掌性純度(UV, 254nm)：100%，滯留時間：6.30min (方法F) EV-AR0090-002，對掌性純度(UV, 254nm)：97%，滯留時間：9.96min (方法F)5-[(3aS,7aS)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0091-002 (EOAI3432499 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-3 - 步驟 8 如反應圖1之步驟8中來處理(3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0090-001, 46 mg, 0.08 mmol)以獲得40 mg (97%)橙色粉末形式之5-[(3aS,7aS)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AR0091-002I-3 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.83min, M/z = 459 (M + 1)。5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0092-002 (EOAI3432500 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-14 - 步驟 8 如反應圖1之步驟8中來處理(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0090-002,36.8 mg, 0.07 mmol)以獲得31 mg (92.7%)橙色粉末形式之5-[(3aR,7aR)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002I-14 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.82min, M/z = 459 (M + 1)。反應圖 2 1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 胺 EV-AS1585-001 (EOAI3436357) I-62 之合成 1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 EV-AR3164-001 - 步驟 1 向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0, 4.40 g, 23.1 mmol)於DMF (50 ml)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 1.05 g, 26.3 mmol)。將混合物在氮及室溫下攪拌45分鐘且添加(溴甲基)環丙烷(CAS 7051-34-5, 2.70 ml, 27.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2.5h且在真空中去除溶劑。將殘餘物懸浮於THF (40 ml)中且添加5M氫氧化鈉水溶液(22 ml, 110 mmol)。將混合物在50℃下攪拌3.5 h。添加額外THF (20 ml)及5M氫氧化鈉水溶液(22 ml, 110 mmol)且將反應液在50℃下攪拌16h。在真空中濃縮反應粗製物及水(10 ml)且添加5M鹽酸水溶液(100 ml)。過濾掉固體，使用水(2 × 100 ml)洗滌並在真空烘箱中乾燥以獲得3.46 g (69.2%)白色粉末形式之1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AR3164-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.03min, M/z = 217 (M + 1)。4-( 甲基胺基 )-3- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AR3152-001 - 步驟 2 向4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(CAS 329-59-9, 5.00 g, 25.1 mmol)於DMF (50 ml)中之經攪拌溶液中添加甲胺鹽酸鹽(1:1) (2.00 g, 29.6 mmol)及碳酸鉀(4.50 g, 32.6 mmol)。將混合物在室溫及氮下攪拌18h。在真空中濃縮反應粗製物且將殘餘物分配於EtOAc (350 ml)與1N鹽酸水溶液(250 ml)之間。使用1N鹽酸水溶液(150 ml)及氯化鈉飽和水溶液(100 ml)進一步洗滌有機層。藉由硫酸鎂乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以獲得5.30 g (定量)黃色粉末形式之4-(甲基胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯EV-AR3152-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.07min, M/z = 211 (M + 1)。3- 胺基 -4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AR3155-001 - 步驟 3 在氮下，向4-(甲基胺基)-3-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR3152-001 , 5.30 g, 25.2 mmol)於乙醇(100 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (1.30 g, 0.05 mmol)。然後將反應液置於氫氣氛下並在室溫下攪拌4h。使用甲醇(100 ml)稀釋反應混合物且添加矽藻土。將混合物在室溫下攪拌10分鐘並在真空下過濾。使用甲醇(3 × 50 ml)洗滌過濾液且在真空中濃縮濾液以獲得4.39g (96.6%)褐色粉末形式之3-胺基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AR3155-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.75min, M/z = 181 (M + 1)。2-[1- ( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 - 5- 甲酸甲酯 EV-AR3167-001 - 步驟 4 向1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AR3164-001 , 2.20 g, 10.2 mmol)於無水DMF (40 ml)中之溶液中添加HATU (4.95 g, 12.8 mmol)及DIPEA (2.25 ml, 12.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1h，然後添加3-胺基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯(EV-AR3155-001 , 2.02 g, 11.2 mmol)。將混合物在室溫下攪拌16h。在真空中去除溶劑且將殘餘物溶於乙酸中並在80℃下攪拌2h，然後在85℃下攪拌30分鐘，然後在90℃下攪拌1h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(12-100% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得3.08 g (83.2%)粉紅色粉末形式之2-[1- (環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑- 5-甲酸甲酯EV-AR3167-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.20min, M/z = 361 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸 EV-AR3168-002 - 步驟 5 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR3167-001 , 3.08 g, 8.46 mmol)於甲醇(60 ml)中之懸浮液中添加2M氫氧化鈉水溶液(30 ml, 60.0 mmol)。然後將混合物在50℃下攪拌2h。將反應液冷卻至室溫且在真空中去除溶劑。添加水(50 ml)，隨後添加2M HCl水溶液直至達到pH 3為止。將混合物攪拌15分鐘並經由燒結物質過濾。使用水(2 × 50 ml)洗滌固體並風乾64h以提供1.81g (61.2%)灰棕色固體形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR3168-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.05min, M/z = 347 (M + 1)。藉由添加2M HCl水溶液來進一步酸化濾液直至開始形成沈澱為止。將混合物靜置1h並經由燒結物質過濾。使用水(2 × 20 ml)洗滌固體並在真空下風乾3h以獲得460 mg (15.7%)灰白色粉末形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR3168-002 LCMS (方法D)：滯留時間：1.06min, M/z = 347 (M + 1)。(3S,4R)-3-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -1- 甲酸苄基酯 EV-AT1700-001 - 步驟 6 在0℃及氮下，向(3S,4R)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸苄基酯(EV-AQ1997-001 ，如WO2014/015905中合成，450 mg, 1.28 mmol)於無水THF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 62 mg, 1.54 mmol)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後添加碘甲烷(83.94 µl, 1.35 mmol)且將混合物在室溫下攪拌16h。添加氯化銨飽和水溶液(2 ml)且將混合物攪拌10分鐘。在真空中濃縮混合物並分配於水(50 ml)與DCM (50 ml)之間。使用DCM (2 × 50 ml)進一步萃取水層且在真空中濃縮合併之有機物。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗產物以獲得248 mg (52.9%)無色油狀物形式之(3S,4R)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-4-甲氧基六氫吡啶-1-甲酸苄酯EV-AT1700-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.29min, M/z = 387 (M + 23)。N-[(3S,4R)-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AT1701-001 - 步驟 7 在氮下，向(3S,4R)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-4-甲氧基六氫吡啶-1-甲酸苄基酯(EV-AT1700-001 , 235 mg, 0.64 mmol)於乙醇(10 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (34 mg, 0.03 mmol)。將反應液置於氫氣氛下並在室溫下攪拌16h。經由矽藻土過濾反應混合物且經由使用乙醇(20 ml)洗滌過濾液。在真空中濃縮濾液以獲得135 mg (68.0%)無色油狀物形式之N-[(3S,4R)-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT1701-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.79min, M/z = 231 (M + 1)。N-[(3S,4R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AS-1581-001 - 步驟 8 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR3168-002 , 150 mg, 0.43 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌溶液中添加HATU (197.6 mg, 0.52 mmol)，隨後添加DIPEA (0.15 ml, 0.87 mmol)。將混合物攪拌1h，然後添加N-[(3S,4R)-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AT1701-001 , 99.7 mg, 0.43 mmol)。將反應液在室溫下攪拌16h。在真空中去除溶劑且將殘餘物分配於DCM (30 ml)與碳酸氫鈉飽和水溶液(30 ml)之間。使用DCM (20 ml)萃取水層且使用水(20 ml)及氯化鈉飽和水溶液(20 ml)洗滌合併之有機物。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以提供橙色油狀物，藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得205 mg (82.9%)白色結晶固體形式之N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AS1581-001 。LCMS (方法A)：滯留時間：3.36min, M/z = 559 (M + 1)。1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 胺 EV-AS1585-001 (EOAI3436357) I-62 - 步驟 9 向N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AS1581-001 , 30 mg, 0.05 mmol)於DCM (2 ml)中之經攪拌溶液中添加三氟乙酸(1 ml, 13.0 mmol)。將混合物在室溫下攪拌3h。在氮流下去除溶劑且自乙腈:水(1:1, 4 ml)凍乾殘餘物以獲得9.6 mg (96.3%)白色粉末形式之1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1585-001 I-62 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.86min, M/z = 459 (M + 1)。對掌性 HPLC ， 獲得 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AS1581-002 及 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AS1581-003 - 步驟 10 將90.4mg N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AS1581-001 溶於甲醇中且然後藉由對掌性HPLC (方法K)純化以獲得36.2 mg N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AS1581-002 (絕對立體化學任意分配)及34.4 mg N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AS1581-003 (絕對立體化學任意分配)。EV-AS1581-002 對掌性純度(UV, 254nm)：100%，滯留時間：7.58min (方法L)EV-AS1581-003 對掌性純度(UV, 254nm)：100%，滯留時間：10.07min (方法L)(3S,4R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 胺 EV-AS1592-001 (EOAI3438020 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-64 - 步驟 9 如反應圖1之步驟9中來處理N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AS1581-002, 36.2 mg, 0.07 mmol)以獲得37.1 mg (64.6%)白色粉末形式之(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1592-001 I-64 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.86min, M/z = 459 (M + 1)。(3R,4S)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 甲氧基六氫吡啶 -3- 胺 EV-AS1593-001 (EOAI3437979 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-65 - 步驟 9 如反應圖1之步驟9中來處理N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)- 1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AS1581-003 , 34.4 mg, 0.06 mmol)以獲得33.6 mg (94.3%)白色粉末形式之(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-甲氧基六氫吡啶-3-胺三氟乙酸EV-AS1593-001 I-65 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.86min, M/z = 459 (M + 1)。 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖2.1中所闡述5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯EV-AR0054-002 之合成來合成5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-5- 苯基 -1H- 吡咯 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AS5709-003 (EOAI3434977 )I-116 及5-[(3aS,7aS)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AS5710-003 (EOAI3434978 )I-117 ： 反應圖 2.1 向5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(CAS 6636-06-2, 500 mg, 2.67 mmol)於甲苯(10 ml)及甲醇(3 ml)中之經攪拌溶液中添加於己烷中之2M (重氮甲基)(三甲基)矽烷(2 ml)且將混合物在氮及室溫下攪拌30分鐘。向反應混合物中添加乙酸(1 ml)且在真空中濃縮混合物以提供530 mg (99%)淺黃色粉末形式之5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AR0054-002) 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14min, M/z = 202 (M + 1)。 根據反應圖1中所闡述之程序經由反應圖2.2中所闡述1-[(3-羥基-3-甲基環丁基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU7265-001 之合成來合成3-[(2-{5-[(3R)-3- 胺基六氫吡啶 -1- 羰基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -2- 基 }-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 甲基環丁烷 -1- 醇 EV-AU7275-001 (EOAI3455096 )I-110 ：反應圖 2.2 3-( 羥基甲基 )-1- 甲基環丁烷 -1- 醇 EV-AU7264-001 - 步驟 1 在-78℃下，向3-羥基-3-甲基環丁烷甲酸(CAS 16286-86-5, 950 mg, 7.30 mmol)於THF (30 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加BH3 .Me2 S (4.96 ml, 9.93 mmol)。將反應液升溫至室溫並攪拌16h。使用無水MeOH (20 ml)終止反應。將所得混合物減少至乾燥以獲得200 mg (23.2%)無色油狀物形式之3-(羥基甲基)-1-甲基環丁烷-1-醇EV-AU7264-001 。1-[(3- 羥基 -3- 甲基環丁基 ) 甲基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸酯 EV-AU7265-001 - 步驟 2 在氮氣氛及-20℃下，向DIAD (1.10 ml, 5.26 mmol)於無水THF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加三苯基膦(1.39 g, 5.26 mmol)於THF (10 ml)中之溶液。將反應混合物攪拌30分鐘，然後添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0, 500 mg, 2.63 mmol)於THF (10 ml)中之溶液。在-20℃下進一步繼續攪拌30 min。在此時段之後，在-20℃下逐滴添加3-(羥基甲基)-1-甲基環丁烷-1-醇(EV-AU7264-001 , 458 mg, 3.94 mmol)於THF (5 ml)中之溶液，將反應混合物升溫至室溫並攪拌16h。在真空中濃縮混合物且藉由急速管柱層析(5-80% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以獲得200 mg (23.2%)淺黃色油狀物形式之1-[(3-羥基-3-甲基環丁基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AU7265-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.10min, M/z = 289 (M + 1)。 自根據反應圖2.3所獲得N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-4-乙醯胺基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT0094-001 之Boc-去保護且自N-[(3R)-1-{2-[4-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT0086-001 (根據反應圖2中所闡述之程序來合成)開始來獲得N-(2-{5-[(3R)-3- 胺基六氫吡啶 -1- 羰基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -2- 基 }-1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 ) 乙醯胺 EV-AT0096-001 (EOAI3447170 )I-69 ：反應圖 2.3 N-[(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-4-[( 二苯基亞甲基 ) 胺基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AT0090-001 - 步驟 1 將N-[(3R)-1-{2-[4-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AT0086-001 , 150 mg, 0.24 mmol)、1,1-二苯基甲胺(53.2 mg, 0.29 mmol)、Pd2 dba3 (5.6 mg, 0.006 mmol)、BINAP (11.4 mg, 0.018 mmol)及Cs2 CO3 (111.5 mg, 0.34 mmol)於密封管中之甲苯(4.0 ml)中之混合物在100℃下攪拌5h。將反應液冷卻至室溫並經由矽藻土過濾，使用EtOAc洗滌。將濾液蒸發至乾燥，將剩餘殘餘物溶於DMSO中並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得128 mg (73.2%)黃色固體形式之N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-4-[(二苯基亞甲基)胺基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT0090-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.38min, M/z = 708 (M + 1)。N-[(3R)-1-{2-[4- 胺基 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AT0092-001 - 步驟 2 將羥基胺鹽酸鹽(1:1) (58.3 mg, 0.839 mmol)及NaOAc (90 mg, 1.09 mmol)添加至N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-4-[(二苯基亞甲基)胺基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AT0090-001 , 120 mg, 0.168 mmol)於MeOH (8 ml)中之懸浮液中。將所得混合物在室溫攪拌16h。在真空中去除溶劑，將剩餘殘餘物溶於DMSO中並藉由製備型HPLC (基本方法)純化，獲得86 mg (94.3%)白色固體之N-[(3R)-1-{2-[4-胺基-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT0092-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.95min, M/z = 544 (M + 1)。N-[(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-4- 乙醯胺基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AT0094-001 - 步驟 3 在室溫下，向N-[(3R)-1-{2-[4-胺基-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AT0092-001 , 80 mg, 0.15 mmol)於DCM (4 ml)中之溶液中添加乙酸酐(18 mg, 0.18 mmol)及三乙胺(30 mg, 0.29 mmol)且將反應液在室溫下攪拌16h，然後在50℃下攪拌24h。在真空中去除溶劑，將剩餘殘餘物溶於DMSO中並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得82 mg (95.1%)白色發泡體形式之N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-4-乙醯胺基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AT0094-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.09min, M/z = 586 (M + 1)。 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖2.4中所闡述N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(羥基甲基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV9641-002 之合成來合成{5-[(3R)-3- 胺基六氫吡啶 -1- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -7- 基 } 甲醇 EV-AV9647-001 (EOAI3455579 )I-128 。 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖2.4中所闡述N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺醯基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV9652-001 之合成來合成(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲烷磺醯基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV9654-001 (EOAI3455786 )I-131 ： 反應圖 2.4 N-[(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 羥基甲基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV9641-002 - 步驟 1 在-78℃下，向N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV9639-001 , 50 mg, 0.08 mmol)於無水THF (5.0 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加正丁基鋰(1.6M於己烷中，0.11 ml, 0.17 mmol)。將反應液在-78℃下攪拌10分鐘且一次性添加無水DMF (0.01 ml, 0.16 mmol)。將反應混合物在-78℃下攪拌10分鐘並經1h升溫至室溫。然後將反應混合物冷卻至0℃且添加氯化銨飽和水溶液(1 ml)。將雙相混合物攪拌30分鐘且然後分離各層。使用EtOAc (2 × 3 ml)再萃取水相且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。將粗製材料在0℃下溶於甲醇(5 ml)中且添加硼氫化鈉(6 mg, 0.16 mmol)。將反應液在室溫下攪拌16h且藉由添加水(2 ml)來淬滅並在真空中濃縮。將殘餘物分配於EtOAc (5 ml)與水(2 ml)之間，使用EtOAc (2 × 2 ml)進一步萃取水層且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (基本方法)純化粗製物以獲得20 mg (43%)灰白色粉末形式之N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(羥基甲基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV9641-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.10min, M/z = 559 (M + 1)。N-[(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲烷磺醯基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV9652-001 - 步驟 2 在氮氣氛下，向壓力管中添加三氟甲磺酸銅(II) (45 mg, 0.12 mmol)、甲烷亞磺酸鈉(25 mg, 0.25 mmol)及N,N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.03 ml, 0.26 mmol)及DMSO (2.0 ml)。將深藍色反應液在室溫下攪拌5分鐘且添加N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV9639-001 , 75 mg, 0.12 mmol)。密封器皿並在120℃下加熱2h。使用水(15 ml)稀釋經冷卻反應液並使用EtOAc (2 × 10 ml)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化殘餘物以獲得20 mg (27%)灰白色粉末形式之N-[(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲烷磺醯基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV9652-001 。LCMS (方法D): 1.18min, M/z = 607 (M + 1)。反應圖 3 2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13 之合成 3- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AR0065-002 - 步驟 1 向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8, 2.00 g, 8.14 mmol)於DMF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加K2 CO3 (99%, 1.37 g, 9.81 mmol)。向此溶液中添加甲胺鹽酸鹽(1:1) (0.62 g, 9.18 mmol)且將混合物在氮及80℃下於密封管中攪拌16h。在真空中濃縮反應粗製物並分配於DCM (100ml)與水(10ml)之間。使用水(2 × 10ml)及氯化鈉飽和水溶液(10ml)進一步洗滌有機層。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以提供橙色粉末，藉由急速管柱層析(15-40% EtOAc/庚烷)純化以獲得1.49 g (76%)橙色粉末形式之3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AR0065-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.13min, M/z = 241 (M + 1)。3- 胺基 -5- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AR0068-002 - 步驟 2 在氮下，向3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0065-002 , 1.49 g, 6.20 mmol)於乙醇(100ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (0.18 g, 0.17 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌16h。經由矽藻土過濾反應混合物且經由使用甲醇(150ml)洗滌過濾液。在真空中濃縮濾液以提供1.21 g (89%)淺紫色粉末形式之3-胺基-5-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AR0068-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.63min, M/z = 211 (M + 1)。1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AQ1957-001 - 步驟 3 在室溫下，將氫化鈉(60%, 59 mg, 1.47 mmol)逐份添加至1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 221675-35-0, 200 mg, 1.05 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌懸浮液中。將混合物攪拌20分鐘，然後添加碘乙烷(197 mg, 1.26 mmol)。將反應混合物攪拌20h。將混合物分配於EtOAc (20ml)與水(20ml)之間。使用EtOAc (1 × 20ml)進一步萃取水層，使用水(20ml)洗滌合併之有機物並蒸發至乾燥。藉由急速管柱層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化粗產物以獲得135 mg (57.1%)無色油狀物形式之1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AQ1957-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.18min, M/z = 219 (M + 1)。1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 EV-AQ1960-001 - 步驟 4 向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AQ1957-001 , 135 mg, 0.62 mmol)於THF (2 ml)中之經攪拌溶液中添加氫氧化鋰(74 mg, 3.09 mmol)之水溶液(2 ml)。將混合物在50℃下攪拌2.5h，使用1M HCl (3 ml)酸化並使用DCM (2 × 5 ml)萃取。使用水洗滌合併之有機物並蒸發至乾燥以得到120 mg (99%)白色固體形式之1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AQ1960-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.92min, M/z = 191 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AR0070-003 - 步驟 5 向1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AQ1960-001 , 120 mg, 0.63 mmol)於DMF (2ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (116 µl, 0.70 mmol)，隨後添加HATU (236 mg, 0.62 mmol)且將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘。添加3-胺基-5-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯(EV-AR0068-002, 148 mg, 0.70 mmol)且將所得混合物在室溫下攪拌6h。在真空中濃縮反應混合物，溶於乙酸(3ml)中並在70℃下攪拌16h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(25-40% EtOAc/庚烷)純化剩餘材料以獲得150 mg (63%)白色粉末形式之2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AR0070-003 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.18min, M/z = 365 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸 EV-AR0072-002 - 步驟 6 向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0070-003 , 150 mg, 0.41 mmol)於THF (3ml)中之經攪拌溶液中添加氫氧化鋰 (30 mg, 1.25 mmol)之水溶液(3ml)且將混合物在室溫下攪拌16h。在真空中濃縮反應混合物，吸收於水(5ml)中並在攪拌的同時使用5N HCl (0.5ml)酸化。將所得懸浮液攪拌10分鐘，然後藉由真空過濾收集沈澱物並乾燥以獲得130 mg (89%)白色粉末形式之2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AR0072-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.03min, M/z = 351 (M + 1)。6-(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0074-002 - 步驟 7 向2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AR0072-002, 130 mg, 0.37 mmol)於2:1 DMSO/MeCN (4.5ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (65 µl, 0.39 mmol)及HATU (148 mg, 0.39 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘，然後添加八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(CAS 949559-11-9, 88 mg, 0.39 mmol)且將混合物在室溫下攪拌4h。使用3:2 MeCN/水(1.5ml)稀釋反應混合物並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得142 mg (81%)白色粉末形式之6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0074-002 。LCMS (方法A)：滯留時間：3.41min, M/z = 559 (M + 1)。2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13 - 步驟 8 向6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0074-002 , 20 mg, 0.04 mmol)於甲醇(1ml)中之經攪拌溶液中添加於1,4-二噁烷中之4M HCl (0.5 ml)且將所得溶液在室溫下攪拌4h。在真空中濃縮反應混合物且自水(4ml)凍乾殘餘物以獲得13.4 mg (75%)黃色固體形式之2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-5-{八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基}-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AR0076-002 I-13 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.80min, M/z = 459 (M + 1)。對掌性 HPLC ， 獲得 (3aR,7aS)-6-(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0090-001 及 (3aS,7aR)-6-(2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 )- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AR0090-002 ， - 步驟 9 將107mg 6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0074-002 溶於乙醇中且然後藉由對掌性HPLC (方法E)純化以獲得46.6 mg (43.6%) (3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0090-001 (絕對立體化學任意分配)及36.8 mg (33.4%) (3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AR0090-002 (絕對立體化學任意分配)。EV-AR0090-001 ，對掌性純度(UV, 254nm)：100%，滯留時間：6.30min (方法F)EV-AR0090-002 ，對掌性純度(UV, 254nm)：97%，滯留時間：9.96min (方法F)5-[(3aS,7aS)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0091-002 (EOAI3432499 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-3 - 步驟 8 如反應圖2之步驟8中來處理 (3aR,7aS)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0090-001, 46 mg, 0.08 mmol)以獲得40 mg (97%)橙色粉末形式之5-[(3aS,7aS)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AR0091-002 I-3 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.83min, M/z = 459 (M + 1)。5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-{1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AR0092-002 (EOAI3432500 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-14 - 步驟 8 如反應圖2之步驟8中來處理(3aS,7aR)-6-(2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-2-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AR0090-002 ,36.8 mg, 0.07 mmol)以獲得31 mg (92.7%)橙色粉末形式之5-[(3aR,7aR)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑EV-AR0092-002 I-14 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.82min, M/z = 459 (M + 1)。反應圖 3 之特殊情形 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖3.1中所闡述1-[(1-甲基環丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AU3682-002 之合成來合成(3S,5S)-5-氟-1-(7-甲氧基-1-甲基-2-{1-[(1-甲基環丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基)六氫吡啶-3-胺EV-AV3056-001 (EOAI3454078 )I-93 ：反應圖 3.1 在氮及-20℃下，向DIAD (0.44 ml, 2.10 mmol)於無水THF (5 ml)中之溶液中添加三苯基膦(557 mg, 2.10 mmol)於THF (5 ml)中之溶液且將反應混合物攪拌30分鐘。在-20℃下，向反應混合物中添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 394223-02-0, 200 mg, 1.05 mmol)於THF (7.5 ml)中之溶液且將反應混合物在-20℃下進一步攪拌30分鐘。在-20℃下，逐滴添加(1-甲基環丙基)甲醇(CAS 2746-14-7, 0.15 ml, 1.58 mmol)且將反應混合物升溫至室溫並攪拌1 h 15min。在真空中濃縮反應混合物並藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc)純化以獲得240 mg (87%)黃色膠形式之1-[(1-甲基環丙基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AU3682-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.35min, M/z = 259 (M + 1)。 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖3.2中所闡述1-(1-環丙基乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AU3682-001 之合成來合成(3R)-1-(2-{1-[(1R)-1- 環丙基乙基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 ) 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3097-001 (EOAI3454812 )I-101 及(3R)-1-(2-{1-[(1S)-1- 環丙基乙基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 ) 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3098-001 (EOAI3454813 )I-102 ：反應圖 3.2 在氮及-20℃下，向DIAD (0.44 ml, 2.1 mmol)於無水THF (5 ml)中之溶液中添加三苯基膦(557.18 mg, 2.1 mmol)於THF (5 ml)中之溶液且將反應混合物攪拌30分鐘。在-20℃下，向反應混合物中添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(CAS 394223-02-0, 200 mg, 1.05 mmol)於THF (7.5 ml)中之溶液且將反應混合物在-20℃下進一步攪拌30分鐘。在-20℃下，逐滴添加1-環丙基乙烷-1-醇(CAS 765-42-4, 0.15 mL, 1.58 mmol)且將反應混合物升溫至室溫並攪拌1h 15分鐘。在真空中濃縮反應混合物並藉由使用藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc)純化來進行純化以獲得205 mg (75%)黃色膠形式之1-(1-環丙基乙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AU3682-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.35min, M/z = 259 (M + 1)。 根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖3.3中所闡述2-[1-(環丙基甲基)-6-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3- 苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4834-002 之合成來合成(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV4845-001 (EOAI3454972 )I-105 ：反應圖 3.3 向2-[6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4831-001 (根據反應圖2來合成，150 mg, 0.31 mmol)於無水THF (5 ml)中之溶液中添加Fe(acac)3 (6 mg, 0.02 mmol)及NMP (150 µl)。經1分鐘逐滴添加乙基溴化鎂之溶液(0.9M於THF中，411 µl, 0.37 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌3h。添加其他Fe(acac)3 (6 mg, 0.02 mmol)及乙基溴化鎂(0.9M於THF中，411 µl, 0.37 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16h。藉由添加1M HCl (約1 ml)來淬滅反應混合物並使用DCM (3 × 15 ml)萃取。使用鹽水(20 ml)洗滌合併之有機物，藉由硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化粗製殘餘物以獲得81 mg (55%)無色玻璃形式之2-[1-(環丙基甲基)-6-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3- 苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV4834-002 。LCMS (方法A)：滯留時間：4.59min, M/z = 433 (M + 1)。 根據反應圖3.4來合成1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5-( 甲基胺基 ) 六氫吡啶 -3- 醇 EV-AV4609-001 (EOAI3451154 )I-77 ： 反應圖 3.4 Rel-(3R,5R)-3- 羥基 -5-( 甲基胺基 ) 六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV4600-001 - 步驟 1 注意：起始材料及產物皆係反式-外消旋物。 在0℃下，向rel-(3R,5R)-3-胺基-5-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯鹽酸鹽(100 mg, 0.40 mmol)於無水THF (5 ml)中之溶液中添加氫化鈉(60%, 35 mg, 0.87 mmol)且將混合物在0℃下攪拌30分鐘。向反應混合物中添加碘甲烷(26 µl, 0.41 mmol)且將混合物升溫至室溫並攪拌16h。將反應混合物分配於乙酸乙酯(20 ml)與水(20 ml)之間。使用其他乙酸乙酯(2 × 15 ml)洗滌水性萃取物，藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物，過濾並在真空中濃縮以獲得91 mg (定量)黃色油狀物形式之rel-(3R,5R)-3-羥基-5-(甲基胺基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV4600-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.23min, M/z = 231 (M + 1)。Rel-(3R,5R)-3-{[( 苄基氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 }-5- 羥基六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV4602-001 - 步驟 2 注意：起始材料及產物係反式-外消旋物 向rel-(3R,5R)-3-羥基-5-(甲基胺基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV4600-001 (91 mg, 0.40 mmol)於DCM (2 ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (103 µl, 0.59 mmol)，隨後添加氯甲酸苄基酯(56 µl, 0.40 mmol)。將反應混合物攪拌1.5h，使用DCM (20 ml)稀釋並使用水(15 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機萃取物，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得58 mg (18%)透明油狀物形式之rel-(3R,5R)-3-{[(苄基氧基)羰基](甲基)胺基}-5-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV4602-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.12min, M/z = 387 (M + Na)。Rel-N-[(3R,5R)-5- 羥基六氫吡啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸苄基酯鹽酸鹽 EV-AV4603-001 - 步驟 3 注意：起始材料及產物係反式-外消旋物 在氮下，向rel-(3R,5R)-3-{[(苄基氧基)羰基](甲基)胺基}-5-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV4602-001 (58 mg, 0.16 mmol)於二噁烷(1 ml)中之溶液中添加於二噁烷中之4M HCl (0.16 ml, 0.64 mmol)。將混合物在室溫下靜置16h。向反應混合物中添加甲醇(0.5 ml)及於二噁烷中之4M HCl (0.16 ml, 0.64 mmol)且將混合物在室溫下靜置4h。然後在真空中濃縮反應混合物以獲得59 mg (43%)灰白色固體形式之rel-N-[(3R,5R)-5-羥基六氫吡啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸苄基酯鹽酸鹽EV-AV4603-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.76min, M/z = 265 (M + 1)。N-[(3R,5R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5- 羥基六氫吡啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸苄基酯 EV-AV4604-001 - 步驟 4 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AU3032-001 (根據反應圖2來合成，60 mg, 0.16 mmol)於DMF (3 ml)中之溶液中添加DIPEA (31 μl, 0.18 mmol)、HATU (67 mg, 0.18 mmol)及rel-N-[(3R,5R)-5-羥基六氫吡啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸苄基酯鹽酸鹽EV-AV4603-001 (48 mg, 0.16 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1h。然後將混合物分配於EtOAc (40 ml)與水(40 ml)之間且藉由硫酸鈉乾燥有機萃取物，過濾並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (基本方法)純化粗製殘餘物以獲得22 mg (22%)灰白色固體形式之N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羥基六氫吡啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸苄基酯EV-AV4604-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.17min, M/z = 623 (M + 1)。Rel-(3R,5R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5-( 甲基胺基 ) 六氫吡啶 -3- 醇鹽酸鹽 EV-AV4609-001 I-77 - 步驟 5 注意：起始材料及產物係反式外消旋物 在氮下，向rel-N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羥基六氫吡啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸苄基酯EV-AV4604-001 (22 mg, 0.04 mmol)於乙醇(1 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (2.3 mg, 0.001 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌16h。經由玻璃纖維燒結物質過濾反應混合物且然後使用於乙醇中之1.25M HCl (0.2 ml)處理濾液。將混合物在室溫下靜置30分鐘，在真空中濃縮並凍乾以獲得10.2 mg (52%)灰白色粉末形式之rel-(3R,5R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲基胺基)六氫吡啶-3-醇鹽酸鹽EV-AV4609-001 I-77 。LCMS (方法A)：滯留時間：1.93min, M/z = 489 (M + 1)。 根據反應圖3.5來合成1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4-( 二氟甲氧基 ) 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV4627-001 (EOAI3452884) I-86 ：反應圖 3.5 外消旋 -(3R,4R)-3-{[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 羥基六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV3800-001 - 步驟 1 (反式外消旋物) 在0℃下，向外消旋-(3R,4R)-3-胺基-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(CAS 1523530-23-5, 750 mg, 3.47 mmol)於DCM (10 ml)中之溶液中添加三乙胺(1.45 ml, 10.4 mmol)及氯甲酸苄基酯(0.59 ml, 4.16 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌15分鐘且然後升溫至室溫並進一步攪拌4h。然後使用水(10 ml)將反應混合物淬滅並使用DCM (3 × 10 mL)萃取。使用硫酸鈉乾燥合併之有機部分，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(20-80% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得615 mg (52%)白色固體形式之外消旋-(3R,4R)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3800-001 (反式-外消旋物)。LCMS (方法D)：滯留時間：1.08min, M/z = 373 (M + Na)。外消旋 -N-[(3R,4R)-4- 羥基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 EV-AV3801-001 - 步驟 2 (反式外消旋物) 將外消旋-(3R,4R)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3800-001 (610 mg, 1.74 mmol)溶於二噁烷(4M於二噁烷中，8.7 ml)中並在室溫下攪拌1h。在真空中濃縮反應混合物以獲得408 mg (82%)白色固體形式之外消旋-N-[(3R,4R)-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV3801-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.48min, M/z = 251 (M + 1)。外消旋 -N-[(3R,4R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 羥基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 EV-AV3805-001 - 步驟 3 (反式外消旋物) 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3032-001 (535 mg, 1.42 mmol)於DMF (5 ml)中之溶液中添加HATU (595 mg, 1.57 mmol)及DIPEA (0.59 ml, 3.56 mmol)且將反應液在室溫下攪拌30分鐘。然後添加外消旋-N-[(3R,4R)-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV3801-001 (根據反應圖2來合成，408 mg, 1.42 mmol)且將反應液在室溫下進一步攪拌2h。然後使用EtOAc (10 ml)稀釋反應混合物，使用水(3 × 10 ml)及氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌。然後乾燥(硫酸鈉)有機部分，過濾並在真空中濃縮以獲得775 mg (79%)橙色固體形式之外消旋-N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV3805-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.12min, M/z = 609 (M + 1)。外消旋 -(3R,4S)-3-{[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -4- 基苯甲酸酯 EV-AV3814-001 - 步驟 4 (順式外消旋物) 在0℃下，向三苯基膦(411 mg, 1.55 mmol)於THF (1 mol)中之溶液中添加DIAD (325 µl, 1.55 mmol)。將反應混合物攪拌5分鐘且添加外消旋-N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV3805-001 (675 mg, 1.11 mmol)及苯甲酸(190 mg, 1.55 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3h且然後使用EtOAc (15 ml)稀釋。使用水(10 ml)及氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌混合物。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(50-100% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得743 mg (49%)外消旋-(3R,4S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-4-基苯甲酸酯EV-AV3814-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.36min, M/z = 713 (M + 1)。外消旋 -N-[(3S,4R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 羥基六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 EV-AV3819-001 - 步驟 5 (順式外消旋物) 向外消旋-(3R,4S)-3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-4-基苯甲酸酯EV-AV3814-001 (0.74 g, 0.54 mmol)於乙醇(10 ml)及水(5 ml)中之溶液中添加K2 CO3 (0.11 g, 0.81 mmol)且將溶液在室溫下攪拌3h。然後在真空中濃縮反應混合物，將粗製殘餘物溶於DCM (10 ml)中並使用水(10 ml)洗滌。然後使用氯化鈉飽和水溶液(10 mL)洗滌有機層，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-20%甲醇/EtOAc)純化粗製物以獲得214mg (64%)白色固體形式之外消旋-N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV3819-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14min, M/z = 609 (M + 1)。外消旋 -N-[(3R,4S)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4-( 二氟甲氧基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 EV-AV4626-001 - 步驟 6 (順式外消旋物) 在壓力管中，向外消旋-N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯(EV-AV3819-001 , 214 mg, 0.35 mmol)及碘化銅(I) (13.4 mg, 0.070 mmol)於乙腈(2 ml)中之經攪拌懸浮液中添加2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸(125 mg, 0.70 mmol)。密封器皿且將反應混合物在80℃下攪拌2h。向經冷卻反應混合物中添加2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸(125 mg, 0.70 mmol)，密封器皿且將反應混合物在80℃下進一步攪拌2h。再次冷卻反應混合物且添加2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸(125 mg, 0.70 mmol)，密封器皿且將反應混合物在80℃下進一步攪拌2h。然後在真空中濃縮反應混合物且藉由急速管柱層析(20-100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物，隨後藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得33 mg (14%)白色固體形式之外消旋-N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯EV-AV4626-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.27min, M/z = 659 (M + 1)。外消旋 -(3R,4S)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4-( 二氟甲氧基 ) 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV4627-001 (EOAI3452884) I-86 - 步驟 7 (順式外消旋物) 在氮下，向外消旋-N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯(EV-AV4626-001, 33 mg, 0.05 mmol)於乙醇(2 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (3.2 mg, 0.002 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌5h。經由玻璃纖維燒結物質過濾反應混合物且然後使用於乙醇中之1.25M HCl (0.3 ml)處理濾液。將混合物在室溫下靜置30分鐘，在真空中濃縮並凍乾以獲得28.2 mg (98%)灰白色粉末形式之外消旋-(3R,4S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-(二氟甲氧基)六氫吡啶-3-胺EV-AV4627-001 (I-86 )。LCMS (方法A)：滯留時間：2.20min, M/z = 524 (M + 1)。 根據反應圖3.6中所闡述之程序來合成1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 氟六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3807-001 (EOAI3451007 )I-75 ：反應圖 4.6 1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 氟六氫吡啶 -3- 基甲烷磺酸酯 EV-AV3803-001 - 步驟 1 在0℃下，向1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟六氫吡啶-3-醇(EV-AU3293-001 ，根據反應圖2來合成，570 mg, 1.19 mmol)於DCM (10 ml)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(0.25 ml, 1.79 mmol)及甲磺醯氯(0.11 ml, 1.43 mmol)。將反應液在室溫下攪拌2h。向混合物中添加水(5ml)且收集有機層，藉由硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮以獲得663 mg (定量) 1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟六氫吡啶-3-基甲烷磺酸酯EV-AV-3803-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14min, M/z = 556 (M + 1)。5-(3- 疊氮基 -4- 氟六氫吡啶 -1- 羰基 )-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AV3804-001 - 步驟 2 向1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟六氫吡啶-3-基甲烷磺酸酯(EV-AV-3803-001, 610 mg, 1.10 mmol)於DMSO (10 ml)中之經攪拌溶液中添加疊氮化鈉(285 mg, 4.39 mmol)。將反應液在120℃下攪拌14h。將反應液冷卻至室溫，然後使用EtOAc (20 ml)稀釋，使用水(3 × 20 ml)洗滌且然後使用氯化鈉飽和水溶液(20 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(50-100% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得191 mg (34.6%)橙色固體形式之5-(3-疊氮基-4-氟六氫吡啶-1-羰基)-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二二唑EV -AU3804-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.19min, M/z = 503 (M + 1)。1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-4- 氟六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3807-001 (EOAI3451007) I-75 - 步驟 3 在氮下，向5-(3-疊氮基-4-氟六氫吡啶-1-羰基)-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑(EV-AU3804-001, 191mg, 0.38 mmol)於EtOAc (5 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (81 mg, 0.04 mmol)。將混合物置於氫氣氛下並在室溫下攪拌12h。經由玻璃纖維過濾器過濾混合物並使用甲醇洗滌過濾液。在真空中濃縮濾液且藉由製備型HPLC (基本方法)純化殘餘物以獲得80 mg (44.2%)白色固體形式之1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-氟六氫吡啶-3-胺EV-AV3807-001 (I-75 )。LCMS (方法A)：滯留時間：2.01min, M/z = 477 (M + 1)。 根據反應圖3.7中所闡述之程序經由1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羥基六氫吡啶-3-甲酸甲酯EV-AT8698-001 來合成5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲腈 EV-AV4621-001 (EOAI3452077) I-82 。此係根據反應圖3之步驟7中所闡述之程序使用5-羥基六氫吡啶-3-甲酸甲酯來製備。根據反應圖3之步驟7中所闡述之程序自5-羥基六氫吡啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-甲基酯(CAS 1095010-45-9)來製備5-羥基六氫吡啶-3-甲酸甲酯。反應圖 3.7 1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5-( 甲烷磺醯基氧基 ) 六氫吡啶 -3- 甲酸甲酯 EV-AT8699-001 - 步驟 1 在0℃下，向1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-羥基六氫吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AT8698-001 , 275 mg, 0.53 mmol)於DCM (8 ml)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(0.11 ml, 0.80 mmol)及甲磺醯氯(49 µl, 0.64 mmol)。將混合物在冰冷卻下攪拌2h。添加其他甲磺醯氯(25 µl, 0.32 mmol)且將反應液在室溫下攪拌16h。向混合物中添加水(5 ml)且收集有機層，藉由硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮以獲得316 mg (定量)黃色油狀物形式之1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲烷磺醯基氧基)六氫吡啶-3-甲酸甲酯EV-AT8699-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.12min, M/z = 596 (M + 1)。5- 疊氮基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲酸甲酯 EV-AV4601-001 - 步驟 2 向1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-(甲烷磺醯基氧基)六氫吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AT8699-001 , 316 mg, 0.53 mmol)於DMSO (2 ml)中之經攪拌溶液中添加疊氮化鈉(86 mg, 1.33 mmol)。將所得混合物在90℃下攪拌16h。將反應液冷卻至室溫並分配於EtOAc (40 ml)與水(30 ml)之間。藉由硫酸鈉乾燥有機層並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(50-100% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得141 mg (43.1%)灰白色固體形式之5-疊氮基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯EV-AV4601-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.19min, M/z = 543 (M + 1)。5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲酸甲酯 EV-AV4605-001 - 步驟 3 在氮下，向5-疊氮基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4601-001 , 131 mg, 0.24 mmol)於乙醇中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (0.15 g, 0.01 mmol)。將反應混合物置於氫氣氛下並在室溫下攪拌16h。經由玻璃纖維過濾器過濾反應液且在真空中濃縮濾液以獲得98mg (46.0%)黃色油狀物形式之5-胺基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯EV-AV4605-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.92min, M/z = 517 (M + 1)。5-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲酸甲酯 EV-AV4610-001 - 步驟 4 向5-胺基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4605-001 , 77 mg, 0.15 mmol)於二噁烷(1 ml)中之經攪拌溶液中添加碳酸氫鈉飽和水溶液 (1 ml)及boc酐(39 mg, 0.18 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。將混合物分配於EtOAc (20 ml)與水(20 ml)之間。使用EtOAc (15 ml)萃取水層且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得62 mg (63.2%)灰白色粉末形式之5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯EV-AV4610-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.20min, M/z = 617 (M + 1)。5-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲酸 EV-AV4611-001 - 步驟 5 向5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AV4610-001 , 62 mg, 0.10 mmol)於甲醇(1 ml)中之經攪拌溶液中添加1M氫氧化鈉水溶液(0.5 ml)。將所得混合物在室溫下攪拌16h。在真空中濃縮混合物以去除甲醇。使用1M鹽酸水溶液將所得水溶液酸化至pH ~4-5直至形成沈澱為止。過濾掉固體並在真空下乾燥以獲得58mg (89.4%)灰白色粉末形式之5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸EV-AV4611-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.13min, M/z = 603 (M + 1)。N-(5- 胺甲醯基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV4612-001 - 步驟 6 向5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲酸(EV-AV4611-001, 58mg, 0.96 mmol)於DMF (1 ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (34 μl, 0.19 mmol)、HATU (46 mg, 0.12 mmol)及氯化銨(10 mg, 0.19 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1h。將混合物分配於EtOAc (40 ml)與水(40 ml)之間。使用EtOAc (40 ml)進一步萃取水層且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物並在真空中濃縮以獲得65 mg (97.7%)黃色油狀物形式之N-(5-胺甲醯基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯EV-AV4612-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.09min, M/z = 602 (M + 1)。N-(5- 氰基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV4615-004 - 步驟 7 向N-(5-胺甲醯基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV4612-001 , 65 mg, 0.10 mmol)於無水二噁烷(1 ml)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(44.3 µl, 0.32 mmol)及三氟乙酸酐(30 µl, 0.22 mmol)。將反應液在室溫下攪拌5h。使用三乙胺(44.3 µl, 0.32 mmol)及三氟乙酸酐(30 µl, 0.22 mmol)再處理混合物並在室溫下攪拌16h。使用三乙胺(44.3 µl, 0.32 mmol)及三氟乙酸酐(30 µl, 0.22 mmol)再處理混合物並在室溫下攪拌2h。使用三乙胺(44.3 µl, 0.32 mmol)及三氟乙酸酐(30 µl, 0.22 mmol)再處理混合物並攪拌2h。使用三乙胺(44.3 µl, 0.32 mmol)及三氟乙酸酐(30 µl, 0.22 mmol)再處理混合物並在室溫下攪拌2h。將混合物分配於EtOAc (20 ml)與氯化銨飽和水溶液(20 ml)之間。使用EtOAc (20 ml)萃取水層且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得2批產物，藉由製備型HPLC (基本方法)單獨純化以獲得9 mg (14.3%)灰白色粉末形式之N-[(3R,5S)-5-氰基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV4615-003 。任意分配為外消旋順式-非對映異構體。LCMS (方法D)：滯留時間：1.21min, M/z = 584 (M + 1)。亦獲得11mg (17.5%)灰白色粉末形式之N-[(3R,5S)-5-氰基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV4615-004 。任意分配為外消旋反式-非對映異構體。LCMS (方法D)：滯留時間：1.19min, M/z = 584 (M + 1)。5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 甲腈 EV-AV4621-001 (EOAI3452077) I-82 - 步驟 8 將N-(5-氰基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV4615-004 , 11 mg, 0.02 mmol)於10%三氟乙酸(1 ml，於DCM中)中之溶液在室溫下靜置1h。在真空中濃縮反應液且自1:1乙腈:水(4 ml)凍乾殘餘物以獲得11.6 mg (定量)白色粉末形式之5-胺基-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-甲腈三氟乙酸EV-AV4621-001 (I-82 )。LCMS (方法A)：滯留時間：2.08min, M/z = 484 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由如反應圖3.8中所闡述2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-羥基-3-乙基環丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX8640-001 之氘代甲基化來獲得(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1-{[3-(²H ₃ ) 甲氧基 -3- 甲基環丁基 ] 甲基 }-1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY5000-002 (EOAI3462946 )I-238 ：反應圖 3.8 2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1-{[(1r,3s)-3-(²H ₃ ) 甲氧基 -3- 甲基環丁基 ] 甲基 }-1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AX2096-001 - 步驟 1 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-羥基-3-甲基環丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AX8640-001 , 85%, 250 mg, 0.45 mmol)於DMF (2.0 ml)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 36 mg, 0.90 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌10分鐘且添加碘(2 H3 )甲烷(CAS 865-50-9, 84 µl, 1.34 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4.5h並在真空中濃縮。將殘餘物分配於EtOAc (20 ml)與水(15 ml)之間。使用EtOAc (2 × 10 ml)再萃取水層且使用水(10 ml)、氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌合併之有機物，藉由硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0 - 50% EtOAc/庚烷)純化所得材料以獲得184 mg (75%)淺黃色固體形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1r,3s)-3-(2H-3-)甲氧基-3-甲基環丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX2096-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.43min, M/z = 492 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.9中所闡述2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5361-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[6-( 二氟甲基 )-1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AW5368-001 (EOAI3460286) I-189 ：反應圖 3.9 2-{6- 乙烯基 -1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AW5353-002 - 步驟 1 向2-{6-氯-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AW5326-001 , 500 mg, 1.25 mmol)於二噁烷(10 ml)中之溶液中添加三丁基(乙烯基)錫烷(477 mg, 1.50 mmol)。使用氮將反應混合物吹掃15 min，然後添加Xantphos (54 mg, 0.04 mmol)及Pd2 dba3 (29 mg, 0.03 mmol)。將所得混合物在110℃下攪拌16h。在真空中濃縮反應液且藉由急速管柱層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得340mg (66%)白色固體形式之2-{6-乙烯基-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶 -2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5353-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.34min, M/z = 391 (M + 1)。2-{1- 乙基 -6- 甲醯基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 }-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AW5355-001 - 步驟 2 向2-{6-乙烯基-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AW5353-002 , 89%, 470 mg, 1.07 mmol)於THF:水(2:1, 9 ml)中之溶液中添加第三丁醇(0.10 ml)、4-甲基嗎啉4-氧化物(188 mg, 1.61 mmol)及OsO4 (0.10 ml於水中，0.02 mmol)。將反應液在室溫下攪拌5h，添加NaIO4 (687 mg, 3.20 mmol)並在室溫下繼續攪拌16h。經由矽藻土墊過濾反應混合物並使用EtOAc洗滌。使用水(20 ml)稀釋濾液並使用EtOAc (3 × 20 ml)萃取。使用氯化鈉飽和水溶液洗滌合併之有機萃取物，藉由硫酸鈉亁燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-40% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得270mg (62%)黃色固體形式之2-{1-乙基-6-甲醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5355-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.24min, M/z = 393 (M + 1)。2-[6-( 二氟甲基 )-1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AW5361-001 - 步驟 3 在室溫下，向2-{1-乙基-6-甲醯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(200 mg, 0.50 mmol)於DCM (10 ml)中之溶液中添加2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-(三氟-λ~4~-硫烷基)乙胺(CAS, 202289-38-1, 0.45 ml, 1.24 mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌16h，冷卻至室溫並傾倒於冰/水上。使用飽和碳酸氫鈉中和水層並使用DCM (3 × 20 ml)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-40% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得105mg (49%)白色固體形式之2-[6-(二氟甲基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AW5361-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.33min, M/z = 415 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.10中所闡述6-(二氟甲氧基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW9553-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[6-( 二氟甲氧基 )-1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AW9564-001 (EOAI3460927 )I-200 ：反應圖 3.10 將2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸(CAS 1717-59-5, 912 mg, 5.12 mmol)添加至N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-4-羥基六氫吡啶-3-基]胺基甲酸苄基酯(EV-AW9553-001 ， 根據反應圖3.18來合成，451 mg, 2.05 mmol)及硫酸鈉(291 mg, 2.05 mmol)於乙腈(10 ml)中之經攪拌懸浮液中。將所得混合物在室溫下攪拌16h。在真空中濃縮反應粗製物且藉由急速管柱層析(0-60% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以獲得327 mg (59%)灰白色固體形式之6-(二氟甲氧基)-1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW9553-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.30min, M/z = 271 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.11中所闡述2-[7-(環丙基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX1646-002 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[7-( 環丙基甲基 )-2- 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AX1665-002 (EOAI3460929 )I-202 ：反應圖 3.11 向2-[2-氯-7-(環丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AX1644-002 , 134 mg, 0.31 mmol)於DME (5 ml)中之溶液中添加碳酸鉀(87 mg, 0.63 mmol)、PdCl2 dppf (26 mg, 0.03 mmol)及三甲基硼氧六環(3.5M於THF中，0.36 ml, 1.26 mmol)。將反應混合物在100℃下攪拌15h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷，然後0-40%甲醇/EtOAc)純化粗製殘餘物以獲得94 mg (70%)灰白色固體形式之2-[7-(環丙基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-7-甲氧基-1-甲基- 1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AX1646-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.05min, M/z = 406 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.12中所闡述1-(環丙基甲基)-6-(2-羥基丙烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6273-002 之合成來合成2-(2-{5-[(1R,4R,7R)-7- 胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -2- 羰基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -2- 基 }-1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -6- 基 ) 丙烷 -2- 醇 EV-AW6283-001 (EOAI3461372) I-210 ：反應圖 3.12 6- 乙醯基 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 EV-AW6271-002 - 步驟 1 向6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(EV-AW6269-001 , 90%, 1.16 g, 3.93 mmol)於無水二噁烷(3 ml)中之溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(1.59 ml, 4.71 mmol)、Xantphos (0.17 g, 0.29 mmol)及Pd2 dba3 (0.09 g, 0.10 mmol)。將反應混合物在90℃下攪拌17h。在真空中去除溶劑且向殘餘物中添加1M HCl (50 ml)及DCM (50 ml)。將雙相混合物攪拌20分鐘，然後分離有機層並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-10% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得0.512 g (47%)灰白色固體形式之6-乙醯基-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6271-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.40min, M/z = 273 (M + 1)。1-( 環丙基甲基 )-6-(2- 羥基丙烷 -2- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 EV-AW6273-002 - 步驟 2 在-78℃下，將甲基氯化鎂(3M in THF, 642 µl)逐滴添加至6-乙醯基-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(EV-AW6271-002, 510 mg, 1.84 mmol)於無水THF (5 ml)中之經攪拌溶液中。將反應液在‑78℃下攪拌2.5h。在-78℃下添加其他甲基氯化鎂(3M於THF中，61 µl)並繼續攪拌30分鐘。使用水(20 ml)終止反應且在真空中去除THF。將1M HCl添加至水層中直至pH 3。使用EtOAc (2 × 30 ml)萃取水層。藉由硫酸鎂乾燥合併之萃取物，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-35% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得410 mg (76%)灰白色固體形式之1-(環丙基甲基)-6-(2-羥基丙烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AW6273-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.23min, M/z = 289 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.13中所闡述2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺醯基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0016-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1-(2- 甲烷磺醯基乙基 )-7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY0021-001 (EOAI3461556 )I-214 。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.13中所闡述2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亞磺醯基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0014-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1-(2- 甲烷亞磺醯基乙基 )-7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY0020-001 (EOAI3461555 )I-213 。反應圖 3.13 2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1-(2- 甲烷亞磺醯基乙基 )-7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AY0014-001 - 步驟 1 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-[2-(甲基硫烷基)乙基]-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AY0013-001 , 260 mg, 0.52 mmol)於甲醇(8 ml)及水(2 ml)中之經攪拌溶液中添加NaIO4 (122 mg, 0.57 mmol)。將反應液在室溫下攪拌18h。在真空中去除溶劑且將殘餘物分配於EtOAc (20 ml)與水(50 ml)之間。使用EtOAc (2 × 20 ml)進一步萃取水層。使用氯化鈉飽和水溶液(20 ml)洗滌合併之有機物，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發。藉由急速管柱層析(0-50% EtOAc/庚烷，然後1-10%甲醇/DCM)純化殘餘物以獲得220 mg (91%)紅色發泡體形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亞磺醯基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0014-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.08min, M/z = 467 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1-(2- 甲烷磺醯基乙基 )-7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AY0016-001 - 步驟 2 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷亞磺醯基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AY0014-001 , 135 mg, 0.29 mmol)於甲醇(40 ml)中之經攪拌溶液中添加KMnO4 (50 mg, 0.32 mmol)。將反應液在室溫下攪拌15分鐘。藉由添加硫酸氫鈉飽和水溶液(20 ml)來終止反應。藉由矽藻土過濾混合物並在真空中濃縮濾液。在EtOAc (20 ml)及水(50 ml)中稀釋殘餘物且使用EtOAc (2 × 20 ml)萃取水層。使用氯化鈉飽和水溶液(20 ml)洗滌合併之有機物，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發以獲得115 mg (81%)褐色固體形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2-甲烷磺醯基乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AY0016-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.15min, M/z = 483 (M + 1)。 分別遵循反應圖3及3.14中所闡述之程序自外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-001 及外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-002 之Boc-去保護來獲得外消旋 -[(2R,5S)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4303-001 (EOAI3462115 )I-220 及外消旋 -[(2R,5R)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4304-001 (EOAI3462116 )I-221 ：反應圖 3.14 5-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 } 吡啶 -2- 甲酸甲酯 EV-AX4571-001 - 步驟 1 在氮氣氛下，向5-胺基吡啶-2-甲酸甲酯(CAS 67515-76-8, 1.8 g, 11.83 mmol)於DCM (40 ml)中之經攪拌溶液中添加二碳酸二-第三丁基酯(2.84 g, 13.01 mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.14 g, 1.18 mmol)且將反應液在室溫下攪拌5h。過濾反應混合物(使用DCM沖洗過濾液)，使用DCM (100 ml)稀釋濾液並使用水(2 × 100 ml)洗滌。使用硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以獲得2.73 g (60%)灰白色固體形式之5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}吡啶-2-甲酸甲酯EV-AX4571-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.01min, M/z = 253 (M + 1)。N-[6-( 羥基甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AX4573-001 - 步驟 2 在0℃及氮氣氛下，向5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}吡啶-2-甲酸甲基酯(EV-AX4571-001, 2.73 g, 10.82 mmol)於THF (60 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加於二乙醚中之4M四氫合鋁酸鋰(1-) (4.1 ml)，將反應液升溫至室溫並進一步攪拌12h。藉由添加THF:水(9:1, 15 ml)、隨後10%氫氧化鈉(10 ml)且然後水(10 ml)來終止反應。然後經由矽藻土墊過濾反應混合物，使用THF (3 × 50 ml)沖洗。在真空中濃縮濾液且藉由急速管柱層析(50-100% EtOAc/庚烷，然後0-10%甲醇/EtOAc)純化粗製物以獲得1.50 g (60%)灰白色固體形式之N-[6-(羥基甲基)吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4573-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.70min, M/z = 224 (M + 1)。乙酸 N-[6-( 羥基甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AX4576-001 - 步驟 3 向壓力器皿中添加N-[6-(羥基甲基)吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AX4573-001 , 1.50 g, 6.69 mmol)於乙醇(25 ml)及乙酸(1.5 ml)中之溶液。添加PtO2 (266 mg, 1.17 mmol)且使用氮吹掃壓力器皿，然後密封反應液並在氫氣氛(55psi, 3.75 atm)及65℃下攪拌16h。經由矽藻土墊過濾反應混合物並在真空中濃縮以獲得2.40 g (99%)橙色油狀物形式之乙酸N-[6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4576-001 。無LCMS數據。5-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 }-2-( 羥基甲基 ) 六氫吡啶 -1- 甲酸苄基酯 EV-AX4584-001 - 步驟 4 在0℃下，向乙酸N-[6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AX4576-001 , 70%, 2.00 g, 4.82 mmol)於THF (40 ml)及水(12 ml)中之經攪拌溶液中添加碳酸氫鈉(1.22 g, 14.47 mmol)及氯甲酸苄基酯(0.62 ml, 4.34 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌15分鐘，將溶液升溫至室溫並繼續攪拌4h。使用水(10 ml)稀釋反應混合物並使用EtOAc (3 × 5 ml)萃取。藉由硫酸鎂乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(40-100% EtOAc/庚烷)純化粗製物以獲得1.40 g (80%)白色固體形式之5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-2-(羥基甲基)六氫吡啶-1-甲酸苄基酯EV-AX4584-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.12min, M/z = 387 (M + 23)。N-[6-( 羥基甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AX4591-001 - 步驟 5 向5-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}-2-(羥基甲基)六氫吡啶-1-甲酸苄基酯(EV-AX4584-001 , 1.40 g, 3.84 mmol)於乙醇(20 ml)中之溶液中添加碳載鈀(5%, 0.82 g, 0.38 mmol)且將反應混合物在室溫及氫氣氛下攪拌14h。經由矽藻土墊(使用甲醇洗滌)過濾混合物且在真空中濃縮濾液以獲得0.82 g (93%)無色油狀物形式之N-[6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4591-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.20min, M/z = 231 (M + 1)。外消旋 -N-[(3R,6S)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-( 羥基甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AX4594-001 及外消旋 -N-[(3R,6R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-( 羥基甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AX4594-002 - 步驟 6 在室溫下，向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AX2063-001 , 200 mg, 0.53 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (463 µl, 2.66 mmol)、HATU (222 mg, 0.58 mmol)及N-[6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AX4591-001 , 122 mg, 0.53 mmol)。將反應混合物攪拌1h並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性)純化粗製物以獲得2種產物： 70 mg (22%)灰白色固體形式之外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.18min, M/z = 589 (M + 1)。 220 mg (70%)灰白色固體形式之外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.19min, M/z = 589 (M + 1)。 自外消旋-N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-001 之對掌性拆分、隨後如反應圖3中所闡述實施Boc-去保護來獲得[(2S,5R)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4308-001 (EOAI3462646 )I-226 及[(2R,5S)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4309-001 (EOAI3462647 )I-227 。任意分配兩種產物之絕對構形。 自外消旋-N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(羥基甲基)六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AX4594-002 之對掌性拆分、隨後如反應圖3中所闡述實施Boc-去保護來獲得[(2R,5R)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4310-001 (EOAI3462648 )I-228 及[(2S,5S)-5- 胺基 -1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -2- 基 ] 甲醇 EV-AY4311-001 (EOAI3462649 )I-229 。任意分配兩種產物之絕對構形。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.15中所闡述7-(環丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-006 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[7-( 環丙基甲基 )-2- 甲氧基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AX5554-001 (EOAI3468827 )I-239 ： 反應圖 3.15 7-( 環丙基甲基 )-2- 甲氧基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 甲酸甲酯 EV-AX5535-006 - 步驟 1 在0℃下，經1分鐘向2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(EV-AX2018-001 , 1.00 g, 4.68 mmol)於無水DMF (20 ml)中之經攪拌溶液中添加逐份氫化鈉(60%, 0.28 g, 7.02 mmol)。在30分鐘之後，在0℃下添加(溴甲基)環丙烷(680 µl, 7.01 mmol)。使反應液升溫至室溫並攪拌60h。在真空中濃縮反應混合物且將所得殘餘物分配於EtOAc (50 ml)與水(30 ml)之間。分離各層且使用0.5M HCl (30 ml)及氯化鈉飽和水溶液(30ml)洗滌有機相。藉由硫酸鎂乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由急速管柱層析(5-40% EtOAc/庚烷)純化粗製物以獲得4種產物： 113 mg (8%)灰白色粉末形式之2-氯-7-(環丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸環丙基甲基酯EV-AX5535-003 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.38min, M/z = 306/308 (M + 1)。 256 mg (20%)灰白色結晶固體形式之2-氯-7-(環丙基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-004 。LCMS (方法D): 1.24min, M/z = 266/268 (M + 1)。 93 mg (6%)黃色膠形式之7-(環丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸環丙基甲基酯EV-AX5535-005 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.32min, M/z = 302 (M + 1)。 197 mg (16%)黃色結晶固體形式之7-(環丙基甲基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AX5535-006 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.20min, M/z = 262 (M + 1)。 遵循反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.16中所闡述1-(環丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX4144-003 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AX4151-006 (EOAI3476815 )I-269 ： 反應圖 3.16 6- 氯 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸第三丁基酯 EV-AX4139-001 - 步驟 1 將6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AU7974-001 , 500 mg, 1.99 mmol)於甲苯(30 ml)中之經攪拌懸浮液加熱至85℃，然後逐滴添加N,N-二甲基甲醯胺二-第三丁基縮醛(2.0 ml, 8.34 mmol)。將反應液在85℃下攪拌2h且添加其他N,N-二甲基甲醯胺二-第三丁基縮醛(2.0 ml, 8.34 mmol)。在85℃下繼續攪拌18h，然後在100℃下攪拌3h。在冷卻之後，使用EtOAc (200 ml)稀釋反應混合物，使用氯化鈉飽和水溶液(50 ml)洗滌，藉由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-10% EtOAc/庚烷)純化粗製物以獲得366 mg (60%)無色油狀物形式之6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯EV-AX4139-005 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.66min, M/z = 307/309 (M + 1)1-( 環丙基甲基 )-6- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸第三丁基酯 EV-AX4142-001 - 步驟 2 向6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯(EV-AX4139-005 , 366 mg, 1.19 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌溶液中添加四甲基氟化銨(CAS 373-68-2, 250 mg, 2.68 mmol)且將混合物在80℃下攪拌18h。在冷卻之後，將反應混合物分配於DCM (200 ml)、水(100 ml)及氯化鈉飽和水溶液(100 ml)之間。分離有機層，使用氯化鈉飽和水溶液(50 mL)進一步洗滌，藉由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-10% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得112 mg (32%)無色油狀物形式之1-(環丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯EV-AX4142-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.61 min, M/z = 291 (M + 1)。1-( 環丙基甲基 )-6- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 EV-AX4144-003 - 步驟 3 將1-(環丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯(EV-AX4142-001 , 100 mg, 0.34 mmol)於TFA (2.0 ml, 26.2 mmol)中之溶液在室溫下攪拌3h。在真空中濃縮之後，將殘餘物吸收於DCM並濃縮以得到80 mg (89%)黃色固體形式之1-(環丙基甲基)-6-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX4144-003 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.15min, M/z = 235 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.17中所闡述1-(環丙基甲基)-6-(環氧乙烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AY7184-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6-( 環氧乙烷 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY7194-001 (EOAI3477013 )I-275 ：反應圖 3.17 1-( 環丙基甲基 )-6-(3,6- 二氫 -2H- 吡喃 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AY7182-001 - 步驟 1 將6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7177-001, 90%, 950 mg, 3.07 mmol)及2-(3,6-二氫-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦(CAS 287944-16-5, 709 mg, 3.37 mmol)溶於THF:甲苯(4:1, 10 ml)中且添加2M碳酸鈉(3.07 ml)。使用氮將反應混合物吹掃5分鐘且添加Pd(dppf)Cl2 (449 mg, 0.61 mmol)。將反應混合物在100℃下攪拌4h，冷卻至室溫並在真空中濃縮。將所得殘餘物溶於EtOAc (20 ml)中並使用水(2 × 10 ml)及氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機層並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得587 mg (56%)橙色油狀物形式之1-(環丙基甲基)-6-(3,6-二氫-2H-吡喃-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AY7182-001 。LCMS (方法D): 1.52min, M/z = 327 (M + 1)。1-( 環丙基甲基 )-6-( 環氧乙烷 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AY7184-001 - 步驟 2 向1-(環丙基甲基)-6-(3,6-二氫-2H-吡喃-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7182-001 , 587 mg, 1.71 mmol)於EtOAc:乙醇(1:1, 30 ml)中之經攪拌溶液中添加Pd/C (10%, 91 mg, 0.09 mmol)。將反應液置於氫氣氛下並在室溫下攪拌18h。經由矽藻土墊過濾反應液並經由使用甲醇(30 ml)洗滌。在真空中濃縮濾液以獲得516 mg (83%)灰白色粉末形式之1-(環丙基甲基)-6-(環氧乙烷-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AY7184-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.51min, M/z = 329 (M + 1)。 遵循反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.18中所闡述1-(環丙基甲基)-6-(²H₃)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AZ5103-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6-(²H ₃ ) 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AZ5120-001 (EOAI3478073 )I-285 ： 反應圖 3.18 1-( 環丙基甲基 )-6- 羥基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 EV-AX5573-002 - 步驟 1 將6-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AY7167-001 , 90%, 1.45 g, 4.68 mmol)、Pd2 (dba)3 (214 mg, 0.23 mmol)、 t Bu-BippyPhos (237 mg, 0.47 mmol)及氫氧化鉀(788 mg, 14.0 mmol)合併於壓力管中之二噁烷(7 ml)及水(7 ml)中。使用氮將反應混合物吹掃5分鐘，然後密封器皿並在70℃下加熱1.5h。將反應混合物冷卻至室溫並經由玻璃纖維濾紙過濾。將濾液分配於水(10 ml)與EtOAc (30 ml)之間。使用2M HCl將水層酸化至pH 5且過濾所得沈澱物並乾燥以獲得0.80 g (62%)灰白色粉末形式之1-(環丙基甲基)-6-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AX5573-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.95min, M/z = 233 (M + 1)。1-( 環丙基甲基 )-6- 羥基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 EV-AY4950-002 - 步驟 2 在氮氣氛下，向1-(環丙基甲基)-6-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AX5573-002 , 73%, 550 mg, 1.73 mmol)於無水甲苯(6 ml)及無水甲醇(2 ml, 49.44 mmol)中之經攪拌懸浮液中添加2M (重氮甲基)(三甲基)矽烷(1.73 ml，於二乙醚中)。將所得混合物在室溫下攪拌1.5h。添加乙酸(約0.7 ml)直至亮黃色消失為止。在真空中濃縮反應混合物並使用DCM (5 ml)研磨。過濾掉固體並乾燥以提供 131 mg (28%)淺灰棕色固體形式之1-(環丙基甲基)-6-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸EV-AY4950-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.13min, M/z = 247 (M + 1)。1-( 環丙基甲基 )-6-(²H ₃ ) 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 EV-AZ5013-001 - 步驟 3 向1-(環丙基甲基)-6-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AY4950-001, 100 mg, 0.40 mmol)於DMF (30ml)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 32 mg, 0.80 mmol)。將反應液在室溫下攪拌10分鐘，然後添加碘(2 H3 )甲烷(74 µl, 1.19 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌17h，使用EtOAc (20 ml)稀釋，使用水(2 × 20 ml)及氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌。乾燥有機相並在真空中濃縮以獲得黃色粉末形式之1-(環丙基甲基)-6-(²H₃)甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯EV-AZ5013-001 (85 mg, 75%)。LCMS (方法D)：滯留時間：1.36min, M/z = 264 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.19中所闡述1-(環丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AZ5111-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-3- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AZ5131-001 (EOAI3478196 )I-292 ：反應圖 3.19 1-( 環丙基甲基 )-3- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AZ5111-001 - 步驟 1 向1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AZ5106-001 , 1.00 g, 4.09 mmol)於DMF (20 ml)中之經攪拌溶液中添加Selectfluor® (CAS 140681-55-6, 1.45 g, 4.09 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌60h。在真空中濃縮反應混合物且將殘餘物溶於EtOAc (20 ml)中並使用水(3 × 20 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機相並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-50% DCM/庚烷)純化粗製物以獲得245 mg (22%)黃色油狀物形式之1-(環丙基甲基)-3-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AZ5111-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.33min, M/z = 263 (M + 1)。 遵循反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.16及3.20中所闡述1-(環丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯EV-AX4168-003 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-4- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY4588-001 (EOAI3478689 )I-294 ：反應圖 3.20 1-( 環丙基甲基 )-4- 氟 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸第三丁基酯 EV-AX4168-003 - 步驟 1 向4-氯-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯(EV-AX4167-001 , 820 mg, 2.67 mmol)於無水DMF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加四甲基氟化銨(500 mg, 5.36 mmol)且將混合物在80℃下攪拌18h。將反應混合物分配於DCM (200 ml)與碳酸氫鈉飽和水溶液(200 ml)之間。使用DCM (2 × 100 ml)洗滌水層且使用氯化鈉飽和水溶液(100 ml)洗滌合併之有機物，藉由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-10% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得401 mg (52%)無色油狀物形式之1-(環丙基甲基)-4-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸第三丁基酯EV-AX4168-003 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.48min, M/z = 291 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖3.21中所闡述1-(環丙基甲基)-6-(嗎啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AZ2525-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6-( 嗎啉 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AX5592-001 (EOAI3478190 )I-287 ：反應圖 3.21 1-( 環丙基甲基 )-6-( 嗎啉 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AZ2525-001 - 步驟 1 將嗎啉(74 µl, 0.86 mmol)、Pd2 (dba)3 (33 mg, 0.04 mmol)、Xantphos (41 mg, 0.07 mmol)及第三丁醇鈉(103 mg, 1.07 mmol)添加至含有6-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AZ2517-001 , 231 mg, 0.71 mmol)於甲苯(6 ml)中之氮吹掃溶液之壓力管中。在氮環境下密封壓力管。將反應混合物在110℃下加熱2h，冷卻至室溫，使用水(10 ml)稀釋並使用EtOAc (3 × 10 ml)萃取。使用氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌合併之有機層，藉由硫酸鎂亁燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-20% EtOAc/庚烷)純化粗製物以獲得60 mg (25%)黃色固體形式之1-(環丙基甲基)-6-(嗎啉-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV -AZ2525-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.35min, M/z = 330 (M + 1)。反應圖 4 5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑鹽酸鹽 EV-AV3043-001 (EOAI3452073 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-24 之合成 4- 氯 -3- 羥基 -5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AU3635-002 - 步驟 1 請注意：在相同組條件下一式兩份實施反應。在甲醇淬滅之後如下文所闡述合併來自每一反應之粗製物。 在0℃及氮下，經20分鐘向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8, 5.00 g, 20.4 mmol)於無水DCM (20 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加BBr3 (1M於DCM中，40.71 ml, 2.81 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且然後升溫至室溫並攪拌15h。將反應混合物冷卻至0℃，使用甲醇小心淬滅，合併並在真空中濃縮。將殘餘物溶於甲醇(300 ml)中，添加濃硫酸(10滴)並將反應混合物在75℃下攪拌5h。在真空中濃縮經冷卻混合物且向殘餘物中小心添加水(50 ml)及飽和NaHCO3 (50 mL)以達成鹼性pH。將懸浮液超音波處理15分鐘並進一步攪拌30分鐘，然後收集所得固體並在真空過濾下乾燥。使用水(25 ml)洗滌固體並乾燥以提供8.14 g (82.9%)淺褐色粉末形式之4-氯-3-羥基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AU3635-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.11min, M/z = 230 (M + 1)。4- 氯 -3-( 二氟甲氧基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AT8693-001 - 步驟 2 請注意：在相同組條件下一式三份實施反應。如下文所闡述合併來自每一反應之粗製物以用於處理。 在壓力管中，向4-氯-3-羥基-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AU3635-002, 333 mg, 4.32 mmol)及碳酸鉀(7.17 g, 155.4 mmol)於乙腈:水(1:1, 20 ml)中之溶液中添加2-氯-2,2-二氟-1-苯基乙酮(1.06 ml, 21.6 mmol)。密封器皿並在80℃下加熱16h。合併經冷卻反應混合物並分配於EtOAc (200 ml)與2M HCl (水溶液)之間。使用額外EtOAc (2× 100 ml)反萃取水性部分(在約pH5下)。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。將殘餘物溶於甲醇(150 ml)中，添加濃硫酸(3滴)並將反應液在75℃下攪拌40h。在真空中濃縮冷卻混合物且向殘餘物中添加小心飽和NaHCO3 以達成鹼性pH。使用EtOAc (3× 100 ml)萃取水層且藉由硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-20% EtOAc/庚烷)純化粗製殘餘物以獲得775 mg (60%)黃色固體形式之4-氯-3-(二氟甲氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AT8693-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.20min，未觀察到質量離子。3-( 二氟甲氧基 )-4-( 甲基胺基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AV3021-001 - 步驟 3 向4-氯-3-(二氟甲氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AT8693-001, 400 mg, 1.34 mmol)於THF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加K2 CO3 (1.29 g, 9.35 mmol)及甲胺(2.0M於THF中，1 ml, 2.00 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌24h，在真空中濃縮並分配於EtOAc (30 ml)與1M HCl (15 ml)之間。使用額外1M HCl (15 ml)、氯化鈉飽和水溶液(10 ml)洗滌有機部分，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮以獲得橙色粉末形式之3-(二氟甲氧基)-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3021-001 (370 mg, 88%)。LCMS (方法D)：滯留時間：1.17min, M/z = 277 (M + 1)。3- 胺基 -5-( 二氟甲氧基 )-4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AV3024-001 - 步驟 4 在氮下，向3-(二氟甲氧基)-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV3021-001 ,370 mg, 1.18 mmol)於EtOAc: EtOH (1:1 20 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (62.7 mg, 0.06 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌16h。經由矽藻土過濾反應混合物並經由使用EtOAc洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液以獲得296 mg (93%)淺褐色粉末形式之3-胺基-5-(二氟甲氧基)-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AV3024-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.97min, M/z = 247 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AV3026-001 - 步驟 5 在0℃下，向1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AS5740-003 ， 根據反應圖1之步驟1來合成，139 mg, 0.55 mmol)於DMF (5 ml)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (0.08 ml, 0.47 mmol)，隨後添加HATU (177 mg, 0.47 mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌10分鐘，添加3-胺基-5-(二氟甲氧基)-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯(EV-AV3024-001, 150 mg, 0.55 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16h。然後將反應混合物在50℃下攪拌22h且然後在真空中濃縮。將粗製殘餘物溶於乙酸(3ml)中並在80℃下於密封管中加熱2h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(0-70% EtOAc/庚烷)純化剩餘材料以獲得131 mg (48%)淺褐色粉末白色粉末形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3026-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.29min, M/z = 427 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸 EV-AV3032-001 - 步驟 6 向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AV3026-001 , 131 mg, 0.26 mmol)於THF: MeOH (4 ml: 1 ml)中之經攪拌溶液中添加2M氫氧化鋰(528 µl, 1.06 mmol)且將反應混合物在40℃下攪拌16h。在真空中濃縮反應混合物，懸浮於水(2 ml)中並使用2M HCl酸化至pH 2。將所得懸浮液攪拌10分鐘且藉由真空過濾收集所得沈澱物並乾燥以獲得108 mg (97%)橙色粉末形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3032-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.15min, M/z = 413 (M + 1)。6-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV3033-001 - 步驟 7 在0℃下，向2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AV3032-001, 108 mg, 0.26 mmol)於DMSO (2 ml)中之溶液中添加HATU (117.1 mg, 0.31 mmol)及DIPEA (87.87 µl, 0.51 mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘，添加八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(CAS 949559-11-9, 61 mg, 0.27 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16h。使用水(1 ml)稀釋反應混合物並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得125 mg (79%)白色粉末形式之6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3033-001 。LCMS (方法A)：滯留時間：3.96min, M/z = 621 (M + 1)。對掌性 HPLC ， 獲得 (3aS,7aR)-6-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV3033-002 及 (3aR,7aS)-6-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 EV-AV3033-003 - 步驟 8 將125mg 6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3033-001 溶於甲醇中且然後藉由對掌性HPLC (方法G)純化以獲得47.6 mg (27%) (3aS,7aR)-6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3033-002 及50.1 mg (29%) (3aS,7aS)-6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯EV-AV3033-003 ， 二者皆呈無色膠形式(絕對立體化學任意分配)。EV-AV3033-002 對掌性純度(UV, 254nm): 100%，滯留時間：5.46min (方法I)EV-AV3033-003 對掌性純度(UV, 254nm): 100%，滯留時間：7.87min (方法I)5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑鹽酸鹽 EV-AV3043-001 (EOAI3452073 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-24 - 步驟 9 將(3aS,7aR)-6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AV3033-002, 47.6 mg, 0.07 mmol)溶於1.25M HCl (於EtOH中，1 ml)中並在40℃下攪拌6h。在真空下濃縮反應混合物，溶於水(2 ml)中並凍乾以獲得29 mg (71%)黃色粉末形式之5-[(3aR,7aR)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AV3043-001 (I-24 )。LCMS (方法A)：滯留時間：2.23min, M/z = 521 (M + 1)。5-[(3aR,7aS)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7-( 二氟甲氧基 )-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑鹽酸鹽 EV-AV3044-001 (EOAI3452074 ， 絕對立體化學任意分配 ) I-25 - 步驟 9 將(3aS,7aS)-6-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸第三丁基酯(EV-AV3033-003, 50.1 mg, 0.08 mmol)溶於1.25M HCl (於EtOH中，1 ml)中並在40℃下攪拌6h。在真空下濃縮反應混合物，溶於(2 ml)水中並凍乾以獲得37 mg (87%)黃色粉末形式之5-[(3aR,7aS)-八氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑鹽酸鹽EV-AV3044-001 (I-25 )。LCMS (方法A)：滯留時間：2.26min, M/z = 521 (M + 1)。反應圖 5 2- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AS3796-002 - 步驟 1 在0℃下，向4-氯-2-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 109069-75-2, 1.50 g, 6.11 mmol)於DMF (15 ml)中之溶液中添加甲胺(2.0M於THF中，3.66 ml, 7.33 mmol)，將所得反應混合物升溫至室溫並攪拌20h。添加碳酸鉀(1.01 g, 7.33 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1h，然後添加額外甲胺(2.0M於THF中，3.66 ml, 7.33 mmol)。將反應液在室溫下進一步攪拌5h。在真空中濃縮反應混合物且藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷，隨後50% EtOAc/甲醇)純化粗製殘餘物以獲905 mg (56%)黃色粉末形式之2-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AS3796-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.04min, M/z = 241 (M + 1)。5- 胺基 -2- 甲氧基 -4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AS3799-003 - 步驟 2 在氮下，向2-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AS3796-002, 905 mg, 3.77 mmol)於乙醇: EtOAc (1:2, 60ml)中之經攪拌溶液中添加Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)且將反應混合物在氫氣氛下攪拌5.5h。經由矽藻土過濾反應混合物並經由使用EtOAc、乙醇及DCM洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液且將殘餘物溶於DCM:乙醇(6:1, 70 ml)中。在氮下添加Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)且將反應混合物在氫氣氛下攪拌6.5h。經由矽藻土過濾反應混合物並經由使用乙醇及DCM洗滌濾餅。在真空中濃縮濾液且將殘餘物溶於DCM:乙醇(1:1, 120 ml)中。在氮下添加Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)且將反應混合物在氫氣氛下攪拌22h。經由矽藻土過濾反應混合物並經由使用乙醇及DCM洗滌濾餅。在真空中濃縮過濾液以獲得656 mg (76%)暗褐色粉末形式之5-胺基-2-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AS3799-003 。LCMS (方法A)：滯留時間：0.90min, M/z = 211 (M + 1)。 根據反應圖1中所闡述之程序，使用EV-AS3799-003 合成(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-6-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺鹽酸鹽EV-AV3612-001 (EOAI3447040 )I-68 。反應圖 6 2- 甲基 -4-( 甲基胺基 )-5- 硝基苯甲酸甲酯 EV-AV4643-001 - 步驟 1 向4-氟-2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 1163287-01-1, 1.00 g, 4.69 mmol)於THF (12 ml)之經攪拌溶液中添加甲胺(2.0M於THF中，5.4 ml, 10.8 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌10分鐘。將反應混合物分配於乙酸乙酯(250 ml)與NaHCO3 飽和水溶液(100 ml)之間。使用水(100 ml)洗滌有機萃取物，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮以獲得1.07 g (定量)黃色粉末形式之2-甲基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV4643-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14min, M/z = 225 (M + 1)。5- 胺基 -2- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 苯甲酸甲酯 EV-AV4644-001 - 步驟 2 在氮下，向2-甲基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV4643-001, 1.07 g, 4.77 mmol)於乙醇(100 ml)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (102 mg, 0.048 mmol)且將所得混合物在室溫及氫氣氛下攪拌16h。經由玻璃纖維燒結物質過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液以獲得1.02 g (98%)淺褐色結晶固體形式之5-胺基-2-甲基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AV4644-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.77min, M/z = 195 (M + 1)。 根據反應圖2中所闡述之程序，使用5-胺基-2-甲基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AV4644-001 合成(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1,6-二甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺鹽酸鹽EV-AV4649-001 (EOAI3454825 )I-103 。反應圖 6 5-[(3R)-3- 胺基六氫吡啶 -1- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3- b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -7- 甲醯胺鹽酸鹽 EV-AV9635-001 (EOAI3455108) I-112 之合成 5-[(3R)-3-{[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 } 六氫吡啶 -1- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -7- 甲酸苯基酯 EV-AV9626-002 - 步驟 1 在壓力管中，將Pd(OAc)2 (6 mg, 0.03 mmol)及Xantphos (30 mg, 0.05 mmol)於乙腈(20 ml)中之溶液脫氣5分鐘且添加N-[(3R)-1-{7-溴-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV9622-001 ， 根據反應圖1來合成，520 mg, 0.86 mmol)、甲酸苯基酯(0.19 ml, 1.71 mmol)及三乙胺(0.24 ml, 1.71 mmol)。密封反應器皿並加熱至80℃保持4h。使用EtOAc稀釋經冷卻反應混合物並使用水洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機部分，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc)純化粗製殘餘物以獲得220 mg (39%)灰棕色固體形式之5-[(3R)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}六氫吡啶-1-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)- 1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酸苯基酯EV-AV9626-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.35min, M/z = 649 (M + 1)。N-[(3R)-1-{7- 胺甲醯基 -2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV9632-002 - 步驟 2 在壓力管中，向5-[(3R)-3-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}六氫吡啶-1-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)-1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲酸苯基酯(EV-AV9626-002, 110 mg, 0.17 mmol)於二噁烷(5 ml)中之溶液中添加氫氧化銨(35% w/w, 0.1 ml, 2.54 mmol)。密封器皿並在50℃下加熱2.5h。添加額外氫氧化銨(35% w/w, 0.5 ml)且密封器皿並在50℃下加熱17h。添加額外氫氧化銨(35% w/w, 0.5 ml)且密封器皿並在50℃下進一步加熱23h。在真空中濃縮反應混合物，再溶於DCM中並使用5% NaOH (水溶液)洗滌。使有機部分通過相分離筒並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (基本方法)純化粗製殘餘物以獲得75 mg (77%)灰白色粉末形式之N-[(3R)-1-{7-胺甲醯基-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基- 1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AV9632-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.08min, M/z = 572 (M + 1)。5-[(3R)-3- 胺基六氫吡啶 -1- 羰基 ]-2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]- 1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -7- 甲醯胺鹽酸鹽 EV-AV9635-001 (I-112) - 步驟 3 向N-[(3R)-1-{7-胺甲醯基-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-甲基-1H-1,3- 苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV9632-002, 75 mg, 0.13 mmol)中添加於乙醇中之1.25 M HCl (3 ml)且將反應混合物在40℃下攪拌1.5h。在真空中濃縮反應混合物且自水(3 mL)凍乾殘餘物以獲得57.6 mg (84%)灰白色粉末形式之5-[(3R)-3-胺基六氫吡啶-1-羰基]-2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]- 1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-7-甲醯胺鹽酸鹽EV-AV9635-001 (I-112 )。LCMS (方法A)：滯留時間：1.53min, M/z = 472 (M + 1)。特殊情形 根據反應圖1中所闡述之程序來合成2-[7-( 環丙基甲基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AQ4191-002 (EOAI3434971) I-9 ，根據反應圖2中所闡述之程序經由反應圖7中所闡述7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AQ1970-001 之合成來合成2-[7-( 環丙基甲基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -5-{ 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 }-1H-1,3- 苯并二唑 EV-AS1566-001 (EOAI3435740) I-15 、 5-[(3aR,7aR)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[7-( 環丙基甲基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AS1590-001 (EOAI3437977) I-12 及5-[(3aS,7aS)- 八氫 -1H- 吡咯并 [2,3-c] 吡啶 -6- 羰基 ]-2-[7-( 環丙基甲基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -6- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 EV-AS1591-001 (EOAI3437978 )I-4 ：反應圖 7 在0℃及氮氣氛下，向7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(CAS 1016241-64-7, 0.50 g, 3.06 mmol)於甲醇(10ml)中之經攪拌懸浮液中逐滴添加亞硫醯二氯(0.56 ml, 7.66 mmol)。將所得混合物升溫至室溫且然後加熱至回流保持24h。添加額外甲醇(15ml)以有助於溶解，將混合物冷卻至0℃且在氮氣氛下逐滴添加其他亞硫醯二氯(0.56 ml, 7.66 mmol)。將混合物再次加熱至回流保持3h並蒸發至乾燥以獲得0.66 g (定量)粉紅色粉末形式之7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯EV-AQ1970-001 。LCMS (方法J)：滯留時間：1.02min, M/z = 178 (M + 1)。 根據反應圖1中所闡述之程序來合成(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AU3631-001 (EOAI3447868 )I-70 ，根據反應圖2中所闡述之程序來合成(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-(2,2-二氟乙基)-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺EV-AV3086-001 (EOAI3454400 )I-94 及(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺EV-AV4830-003 (EOAI3454405 )I-33 ，根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖8中所闡述6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3621-002 之合成來合成(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺EV-AV3852-001 (EOAI3454816 )I-104 及(3R,5R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-(二氟甲氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氟六氫吡啶-3-胺EV-AV4849-001 (EOAI3455105 )I-109 ： 反應圖 8 1-( 苯磺醯基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 EV-AT6244-001 - 步驟 1 在0℃及氮氣氛下，向6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(CAS 896722-53-5, 300 mg, 2.02 mmol)於THF (15 ml)中之經攪拌溶液中逐份添加氫化鈉(60%, 121 mg, 3.04 mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後添加苯磺醯氯(0.31 ml, 2.44 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2h。將反應混合物傾倒至水(20 ml)中並使用EtOAc (3 × 10ml)萃取。使用氯化鈉飽和水溶液(20ml)洗滌合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮以提供607 mg (97.7%)灰棕色固體形式之1-(苯磺醯基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶EV-AT6244-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.26 min, M/z = 289 (M + 1)。1-( 苯磺醯基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AU3618-002 - 步驟 2 在-78℃及氮氣氛下，經10分鐘向二異丙胺(0.15 ml, 1.04 mmol)於無水THF (5 ml)中之經攪拌溶液中逐滴添加正丁基鋰(2.5M於己烷中，0.37 ml, 0.94 mmol)。將所得混合物攪拌30分鐘，升溫至室溫並攪拌1h。然後使用無水THF (5 ml)稀釋混合物並冷卻至-30℃。經由套管經20分鐘添加1-(苯磺醯基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(EV-AT6244-001 , 200 mg, 0.69 mmol)及TMEDA (0.16 ml, 1.04 mmol)於無水THF (10ml)中之溶液。將所得混合物在-30℃與-20℃之間攪拌2.5h。經10分鐘逐滴添加氯甲酸乙酯(CAS 541-41-3, 0.20 ml, 2.08 mmol)，將混合物在-30℃下攪拌2h，然後經16h升溫至室溫。將反應混合物冷卻至0℃並使用水(15ml)淬滅。使用DCM (3 × 15ml)萃取水層，使用水(3× 10 ml)洗滌合併之層，藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗產物以獲得93 mg (36.5%)灰白色固體形式之1-(苯磺醯基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3618-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.31 min, M/z = 361 (M + 1)。 注意：重複反應以獲得額外批次之1-(苯磺醯基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(165 mg, 29.6%,EV-AU3619-002 )， 將其與EV-AU3618-002 組合以實施步驟3。6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯 EV-AU3621-002 - 步驟 3 向1-(苯磺醯基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(EV-AU3618-002 及EV-AU3619-002 ,84%, 258 mg, 0.60 mmol)於THF (10 ml)中之經攪拌溶液中添加TBAF (1M於THF中，0.78 ml, 0.78 mmol)且將混合物在70℃下攪拌30分鐘。將反應混合物濃縮至約1/4體積並藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化以獲得95 mg (71.7%)灰白色粉末形式之6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯EV-AU3621-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14 min, M/z = 221 (M + 1)。反應圖 9 (3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3085-001 (EOAI 3449644) I-119 之合成 4-( 乙基胺基 )-3- 甲氧基 -5- 硝基苯甲酸甲酯 EV- AV3036-001 - 步驟 1 將乙胺(2M於THF中，18.3 ml)及碳酸鉀(21.1 g, 152.7 mmol)添加至4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8, 7.50 g, 30.5 mmol)於THF (100 ml)中之經攪拌溶液中。將反應混合物在50℃下攪拌16h，然後在60℃下攪拌7h。添加其他碳酸鉀(21.1 g, 152.7 mmol)及乙胺(2M in THF, 7.63 ml)且在室溫下繼續攪拌60h。在真空中去除揮發物且使用EtOAc (150 ml)稀釋所得殘餘物，使用水(2 × 50 ml)及氯化鈉飽和水溶液(50 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮以獲得6.88g (85%)橙色粉末形式之4-(乙基胺基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯EV-AV3036-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.21min, M/z = 255 (M + 1)。3- 胺基 -4-( 乙基胺基 )-5- 甲氧基苯甲酸甲酯 EV-AV3040-001 - 步驟 2 將SnCl2 (19.7 g, 103.9 mmol)及2M HCl (52 ml)添加至4-(乙基胺基)-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AV3036-001 , 6.88 g, 26.0 mmol)於乙醇(150 ml)中之經攪拌懸浮液中。將反應混合物在回流下攪拌1h且在真空中去除揮發物。使用5M氫氧化鈉水溶液(50 ml)鹼化所得殘餘物，然後使用EtOAc (150 ml)稀釋並攪拌15分鐘。然後經由矽藻土過濾混合物且使用EtOAc洗滌濾液。分離濾液之有機相並使用氯化鈉飽和水溶液(50 ml)洗滌。藉由硫酸鈉乾燥有機層並在真空中濃縮以獲得4.20 g (71% )褐色粉末形式之3-胺基-4-(乙基胺基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯EV-AV3040-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.70min, M/z = 225 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸甲酯 EV-AV3079-001 - 步驟 3 在0℃下，向1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(EV-AR6674-001 ，根據反應圖1之步驟1來合成，300 mg, 1.36 mmol)於DMF (5 ml)中之溶液中添加HATU (620 mg, 1.63 mmol)及DIPEA (0.47 ml, 2.72 mmol)。將混合物在0℃下攪拌10分鐘，然後添加3-胺基-4-(乙基胺基)-5-甲氧基苯甲酸酯(EV-AV3040-001 ,311 mg, 1.36 mmol)。將混合物加熱至50℃並攪拌3h。在真空中去除溶劑，將殘餘物溶於乙酸(3 ml)中並在80℃下於密封管中加熱2h。在真空中去除溶劑且藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化粗製材料以獲得488mg (76%)黃色粉末形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯EV-AV3079-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.31min, M/z = 405 (M + 1)。2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 甲酸 EV-AV3081-001 - 步驟 4 將2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸甲酯(EV-AV3079-001 , 488 mg, 1.04 mmol)溶於THF/甲醇(4 ml/ 1 ml)中且添加2M氫氧化鋰水溶液(5.19 ml)。將混合物在40℃下攪拌16h且在真空中去除溶劑。將所得殘餘物溶於水(2 ml)中並使用2M HCl酸化至pH 2。將混合物在室溫下攪拌10分鐘，在真空下過濾所形成沈澱物並乾燥以得到350 mg (80%)白色粉末形式之2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸EV-AV3081-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.14min, M/z = 391 (M + 1)。N-(1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AV3083-001 - 步驟 5 在0℃下，將HATU (217 mg, 0.57 mmol)及DIPEA (163 µl, 0.95 mmol)添加至2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-甲酸(EV-AV3081-001 , 200 mg, 0.48 mmol)於DMSO (2 ml)中之經攪拌溶液中。將反應混合物在0℃下攪拌10分鐘，然後添加N-[(3R)-六氫吡啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(CAS 309956-78-3, 100 mg, 0.50 mmol)。將混合物升溫至室溫並攪拌20分鐘。藉由製備型HPLC (基本方法)純化粗製物以獲得211 mg (74%)白色粉末形式之N-(1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯EV-AV3083-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.25min, M/z = 573 (M + 1)。(3R)-1-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-1- 乙基 -7- 甲氧基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 } 六氫吡啶 -3- 胺 EV-AV3085-001 (EOAI3449644) - 步驟 6 將N-(1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(EV-AV3083-001 , 210 mg, 0.35 mmol)溶於DCM (2 ml)中且添加於二乙醚中之2M HCl (2 ml)。將反應混合物在室溫下攪拌2h且在真空中去除溶劑。將殘餘物再溶於水/乙腈(2 ml/0.5 ml)中，在真空中濃縮且進一步乾燥以得到147 mg (81%)黃色粉末形式之(3R)-1-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}六氫吡啶-3-胺鹽酸EV-AV3085-001 。LCMS (方法A)：滯留時間：2.19min, M/z = 473 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW5569-001 之合成來合成(1S,4R,6S,7R)-7- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6- 醇 EV-AW5575-001 (EOAI3459241) I-162 ：反應圖 10 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW5577-001 之合成來合成(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6- 甲氧基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AW5584-001 (EOAI3459405) I-167 。(1R,4R,6S,7R)-7- 溴 -6- 甲氧基 -2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 EV-AW5568-001 - 步驟 1 ( 反應圖 10) 將(4R,6R)-3-溴-1-[(1S)-1-苯基乙基]-1-氮雜三環[2.2.1.0]庚烷-1-溴化鎓(EV-AW8588-001 , 1.00 g, 3.58 mmol)溶於甲醇:乙腈(1:1, 40 ml)中且將所得懸浮液加熱至65℃保持12h。在真空中濃縮反應液並藉由急速管柱層析(0-30% EtOAc/庚烷)純化以提供0.85 g (98%)橙色油狀物形式之(1R,4R,6S,7R)-7-溴-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷EV-AW5568-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.73min, M/z = 312 (M + 1)。(1S,4R,6S,7R)-6- 甲氧基 -2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AW5570-001 - 步驟 2 ( 反應圖 10) 向(1R,4R,6S,7R)-7-溴-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷(EV-AW5568-001 , 0.84 g, 2.71 mmol)中添加於甲醇中之7M氨(7.74 ml)。將溶液在80℃下攪拌2h。在真空中濃縮反應混合物以提供0.82 g (98%)橙色固體形式之(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺EV-AW5570-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.27min, M/z = 247 (M + 1)。N-[(1S,4R,6S,7R)-6- 甲氧基 -2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW5572-001 - 步驟 3 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟19中所闡述之程序自(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AW5570-001 )來合成標題化合物。LCMS (方法D)：滯留時間：0.86min, M/z = 347 (M + 1)。N-[(1S,4R,6S,7R)-6- 甲氧基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW5577-001 - 步驟 4 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟20中所闡述之程序自N-[(1S,4R,6S,7R)-6-甲氧基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AW5572-001 )來合成標題化合物。1 H NMR (500 MHz，氯仿-d ) δ 5.78 - 5.48 (m, 1H), 3.94 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 3.49 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H), 3.22 (s, 1H), 2.99 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 2.47 (d,J = 9.5 Hz, 1H), 2.41 (s, 1H), 1.90 (dd,J = 13.5, 7.1 Hz, 1H), 1.75 - 1.63 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。無LCMS數據。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1R,4R,7R)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯EV-AY4514-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-N- 甲基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY4518-001 (EOAI3462944) I-237 。(1R,4R,7R)-7- 溴 -2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 EV-AX4162-002 - 步驟 5 ( 反應圖 10) 在-10℃至-15℃下，向(4R,6R)-3-溴-1-[(1S)-1-苯基乙基]-1-氮雜三環[2.2.1.0]庚烷-1-溴化鎓(EV-AW8588-001 , 3.10 g, 8.63 mmol)於無水THF (60 ml)中之溶液中添加於二乙醚中之4M氫化鋰鋁(2.5 ml, 10 mmol)。將混合物在-10℃至-15℃下攪拌2h並使用碳酸氫鈉飽和水溶液(60 ml)淬滅。將混合物添加至水(200 ml)中並使用乙酸乙酯(4 × 100 ml)萃取。使用氯化鈉飽和水溶液(100 ml)洗滌合併之萃取物，藉由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮以得到2.11 g (87%)褐色油狀物形式之(1R,4R,7R)-7-溴-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷EV-AX4162-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：0.81min, M/z = 279.95/281.85 (M + 1)。(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AW5552-001 - 步驟 6 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟2中所闡述之程序自(1R,4R,7R)-7-溴-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷(EV-AX4162-002 )來合成標題化合物。LCMS (方法D)：滯留時間：0.20min, M/z = 217 (M + 1)。N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW5553-001 - 步驟 9 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟19中所闡述之程序自(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AW5552-001 ) 來合成標題化合物。LCMS (方法D)：滯留時間：0.83min, M/z = 317 (M + 1)。N- 甲基 -N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AY4510-001 - 步驟 10 ( 反應圖 10) 在氮氣氛下，向N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AW5553-001 ,100 mg, 0.32 mmol)於DMF (2 ml)中之經攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 15 mg, 0.38 mmol)，隨後添加碘甲烷(39 µL, 0.63 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16h，使用水(30 ml)稀釋並使用EtOAc (2 × 30 ml)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物，過濾並在真空中濃縮以獲得110 mg (定量)無色黏性油狀物形式之N-甲基-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AY4510-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.06min, M/z = 331 (M + 1)。N-[(1R,4R,7R)-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯 EV-AY4514-001 - 步驟 11 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟20中所闡述之程序自N-甲基-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AY4510-001 )來合成標題化合物。1 H NMR (500 MHz，甲醇-d4 ) δ 4.56 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.61 (s, 1H), 3.22 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.98 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 2.92 - 2.87 (m, 3H), 2.82 (s, 1H), 1.98 - 1.83 (m, 2H), 1.81 - 1.72 (m, 1H), 1.63 - 1.56 (m, 1H), 1.48 (s, 9H)。無LCMS數據。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1R,4R,7R)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯EV-AY4523-001 之合成來合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-N,N- 二甲基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY4524-001 (EOAI3468840) I-243 ：(1R,4R,7R)-N,N- 二甲基 -2-[(1S)-1- 苯基乙基 ]-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AY4521-001 - 步驟 7 ( 反應圖 10) 在氮氣氛下，向(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺二鹽酸鹽(EV-AY4519-001 , 210 mg, 0.73 mmol) (在反應圖10之步驟6中合成)於DCM (10 ml)中之經攪拌溶液中添加甲醛水溶液(37%, 0.27 ml, 3.63 mmol)，隨後添加STAB (923 mg, 4.36 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16h，使用水(30 ml)稀釋並使用EtOAc (2 × 30 ml)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物，過濾並在真空中濃縮以獲得189 mg (定量)無色黏性油狀物形式之(1R,4R,7R)-N,N-二甲基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AY4521-001)。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.39 - 7.12 (m, 6H), 3.57 (s, 1H), 3.01 (s, 1H), 2.84 (s, 1H), 2.31 - 2.12 (m, 3H), 2.07 - 1.95 (m, 6H), 1.67 (s, 2H), 1.36 (s, 1H), 1.23 - 1.12 (m, 3H)。無LCMS數據。N-[(1R,4R,7R)-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯 EV-AY4523-001 - 步驟 8 ( 反應圖 10) 根據反應圖10步驟20中所闡述之程序自(1R,4R,7R)-N,N-二甲基-2-[(1S)-1-苯基乙基]-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺(EV-AY4521-001 )來合成標題化合物。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.41 (s, 1H), 2.12 (dt,J = 9.8, 3.0 Hz, 1H), 1.79 (d,J = 9.8 Hz, 1H), 1.49 (s, 1H), 1.47 - 1.37 (m, 7H), 1.10 - 0.99 (m, 2H), 0.71 - 0.61 (m, 1H), 0.58 - 0.48 (m, 1H)。無LCMS數據。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-氰基乙氧基)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AY4931-001 之合成來合成3-{[(1S,4R,6S,7R)-7- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6- 基 ] 氧基 } 丙腈 EV-AY4932-001 (EOAI3472707 )I-256 。根據反應圖1中所闡述之程序實施最終去保護。N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2- 氰基乙氧基 )-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AY4931-001 - 步驟 22 ( 反應圖 10) 在0℃，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AY5029-001 , 120 mg, 0.18 mmol)於DMF (3 ml)中之攪拌溶液中添加氫化鈉(60%, 7.8 mg, 0.20 mmol)。將反應液攪拌5分鐘，然後添加丙-2-烯腈(12 µl, 0.18 mmol)。將反應液在室溫攪拌2h。在真空中去除溶劑且將殘餘物分配於EtOAc (10 ml)與水(10 ml)之間。使用EtOAc (2 × 5 ml)萃取水層且使用水(5 ml)洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化粗製物，獲得80 mg (67%)無色油狀物之N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-氰基乙氧基)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AY4931-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.28min, M/z = 640 (M + 1)。 根據反應圖10步驟22中所述之程序使用溴乙腈來合成2-{[(1S,4R, 6S,7R)-7- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6- 基 ] 氧基 } 乙腈 EV-AY4925-001 (EOAI3470051 )I-246 。根據反應圖1中所述之程序實施最終去保護。LCMS (方法A)：滯留時間：2.05min, M/z = 526 (M + 1)。 經由反應圖10中所述N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亞胺基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸酯EV-AZ4420-002 之合成根據反應圖3中所述之N-Boc去保護程序來合成1S,4R,6E,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-( 甲氧基亞胺基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 胺 EV-AZ4422-001 (EOAI3482317) I-307 ：N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6- 側氧基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AZ4415-001 - 步驟 23 ( 反應圖 10) 在0℃，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AY5029-001 , 490 mg, 0.84 mmol)於DCM (10 ml)中之溶液中添加戴斯-馬丁過碘烷(Dess-Martin periodinane) (710 mg, 1.67 mmol)且將反應液升溫至室溫。將反應混合物攪拌24h，使用硫代硫酸鈉飽和水溶液(10 ml)淬滅並使用DCM (3 × 20 ml)萃取。合併之有機層藉由硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化剩餘殘餘物，提供 471 mg (89%)白色固體之N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-側氧基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AZ4415-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.25min, M/z = 585 (M + 1)。N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-( 甲氧基亞胺基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸酯 EV-AZ4420-002 - 步驟 24 ( 反應圖 10) 向N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-側氧基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AZ4415-001 , 50 mg, 0.08 mmol)於甲醇(1 ml)中之懸浮液中添加O-甲基羥基胺HCl (6.7 mg, 0.08 mmol)及碳酸氫鈉(6.6 mg, 0.08 mmol)。將反應液在65℃下加熱15h，然後冷卻至室溫。在2h之後添加其他O-甲基羥基胺HCl (6.7 mg, 0.08 mmol)及碳酸氫鈉(6.6 mg, 0.08 mmol)且在65℃下再繼續反應6h。將溫度降至60℃且將反應液攪拌16h。將反應混合物冷卻至室溫且在真空中去除溶劑。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化所得黃色油狀物以提供12 mg (26%)白色固體形式之N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(甲氧基亞胺基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸酯EV-AZ4420-002 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.30 min, M/z = 614 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由反應圖10中所闡述N-[(1R,4R,6S,7R)-6-胺基-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8585-005 之合成來合成(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6,7- 二胺 EV-AY5019-001 (EOAI3469927 )I-245 。N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-(1,3- 二側氧基 -2,3- 二氫 -1H- 異吲哚 -2- 基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW8584-001- 步驟 25 ( 反應圖 10) 在氮氣氛及0℃下，將DIAD (107 µl, 0.51 mmol)添加至三苯基磷烷(134 mg, 0.51 mmol)於無水THF (5 ml)中之經攪拌溶液中。將反應液在0℃下攪拌5分鐘，然後添加N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AY5029-001 , 200 mg, 0.34 mmol)於無水THF (5 ml)中之溶液，隨後添加1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮(41 µl, 0.34 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18h，在真空中濃縮並藉由急速管柱層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化以獲得138 mg (48%)白色發泡體形式之N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(1,3-二側氧基-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8584-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.28min, M/z = 716 (M + 1)。N-[(1R,4R,6S,7R)-6- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW8585-005 - 步驟 26 ( 反應圖 10) 向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(1,3-二側氧基-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AW8584-001 , 134 mg, 0.19 mmol)於DCM (3 ml)中之溶液中添加水合肼(1:1) (27 µl, 0.56 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌45分鐘並在50℃下攪拌18h，過濾且在真空中濃縮濾液。向殘餘物中添加EtOAc (10 ml)且將混合物攪拌5分鐘，然後過濾。在真空中濃縮濾液並藉由急速管柱層析(20-100% EtOAc/庚烷)純化以獲得75 mg (63%)白色發泡體形式之N-[(1R,4R,6S,7R)-6-胺基-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8585-005 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.05min, M/z = 586 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由如反應圖10中所闡述N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(二甲基胺基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8594-001 之合成來合成(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-N6,N6- 二甲基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6,7- 二胺 EV-AW8596-002 (EOAI3476814 )I-268 。N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6-( 二甲基胺基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW8594-001 - 步驟 27 ( 反應圖 10) 在室溫下，向N-[(1R,4R,6S,7R)-6-胺基-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AW8585-005 , 80 mg, 0.12 mmol)於DCM (1 ml)中之經攪拌混合物中添加3M甲醛溶液(37%於水中，10 µl)。將反應混合物攪拌15分鐘，然後添加參(乙醯基-κO)(氫合)硼酸鈉(1-) (37 mg, 0.18 mmol)。繼續反應17h。添加額外參(乙醯基-κO)( 氫合)硼酸鈉(1-) (37 mg, 0.18 mmol)並繼續反應2h。在真空中去除溶劑且藉由製備型HPLC (酸性方法)純化殘餘物以提供20 mg (28%)白色固體形式之N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-(二甲基胺基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8594-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.16min, M/z = 614 (M + 1)。 根據反應圖3中所闡述之程序經由如反應圖10中所闡述N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-丙醯胺基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8590-002 之合成來合成N-[(1S,4R,6S,7R)-7- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6- 基 ] 丙醯胺 EV-AW8592-002 (EOAI3476589 )I-264 。N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6- 丙醯胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 EV-AW8590-002 - 步驟 28 ( 反應圖 10) 向N-[(1R,4R,6S,7R)-6-胺基-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯(EV-AW8585-005 , 62 mg, 0.10 mmol)於二噁烷(3 ml)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(16 µl, 0.12 mmol)，隨後添加丙醯氯(10 µl, 0.12 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。在真空中濃縮反應混合物並藉由製備型HPLC (酸性方法)純化以提供 34 mg (50%)白色固體形式之N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-丙醯胺基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AW8590-002 。LCMS (方法D): 1.19min, M/z = 642 (M + 1)。 根據反應圖10中所闡述之程序來合成(1S,2R,8R)-10-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5- 氧雜 -3,10- 二氮雜三環 [4.4.0.0², ⁸ ] 癸烷 -4- 酮 EV-AX4517-002 (EOAI3460130) I-187 ：(1S,4R,6S,7R)-7- 胺基 -2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -6- 醇 EV-AX4510-001 - 步驟 29 ( 反應圖 10) 根據反應圖9步驟6中所闡述之程序自N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸第三丁基酯EV-AY5029-001 來合成標題化合物。LCMS (方法D)：滯留時間：0.92min, M/z = 487.15 (M + 1)。N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-6- 羥基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 胺基甲酸 9H- 茀 -9- 基甲基酯 EV-AX4513-001 - 步驟 30 ( 反應圖 10) 在0℃下，向(1S,4R,6S,7R)-7-胺基-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-6-醇(EV-AX4510-001 , 112 mg, 0.21 mmol)於DCM (2 ml)中之溶液中添加DIPEA (0.11 ml, 0.64 mmol)及FMOC氯化物(83 mg, 0.32 mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌2h，添加碳酸氫鈉飽和水溶液(1 ml)且使用DCM (2 × 1 ml)萃取水層。藉由硫酸鎂乾燥合併之有機部分，過濾並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (酸性方法)純化粗製物以獲得47 mg (31%)白色固體形式之N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲基酯EV-AX4513-001 。LCMS (方法D)：滯留時間：1.33min, M/z = 409.4 (M + 1)。(1S,2R,8R)-10-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-5- 氧雜 -3,10- 二氮雜三環 [4.4.0.0², ⁸ ] 癸烷 -4- 酮 EV-AX4517-002 - 步驟 31 ( 反應圖 10) 在-78℃及氮氣氛下，向N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-6-羥基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲基酯(EV-AX4513-001 , 46 mg, 0.06 mmol)於DCM (1 ml)中之溶液中添加N-乙基-N-(三氟-λ~4~-硫烷基)乙胺(34 µl, 0.26 mmol)且將反應液在-78℃下攪拌1h。將反應液升溫至室溫並進一步攪拌12h。添加碳酸氫鈉飽和水溶液(5 ml)且使用DCM (2 × 5 ml)萃取水層。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃取物，過濾並在真空中濃縮。將所得殘餘物溶於20%六氫吡啶(於DMF中，2 ml)中並將溶液在室溫及氮氣氛下攪拌2h。在真空中濃縮反應混合物並藉由製備型HPLC (基本方法)純化以獲得16 mg (55%)白色固體形式之(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-5-氧雜-3,10-二氮雜三環[4.4.0.0²,⁸]癸烷-4-酮EV-AX4517-002 。LCMS (方法A)：滯留時間：2.90min, M/z = 513.2 (M + 1)。 根據反應圖10.1中所闡述之程序來合成N-[(7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 乙脒 EV-AZ7933-001 (EOAI3669061) I-340 ：反應圖 10.1 N-[(7R)-2-{2-[1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 ]-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H-1,3- 苯并二唑 -5- 羰基 }-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ] 乙脒 EV-AZ7933-001 - 步驟 1 向(7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-胺鹽酸鹽(EV-AU9363-001 ，根據反應圖3中所闡述之程序來合成，140 mg, 0.28 mmol)於甲醇(5 ml)中之經攪拌溶液中添加碳酸鉀(153 mg, 1.10 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌24h。過濾混合物且在真空中濃縮濾液。藉由製備型HPLC (首先使用基本方法，隨後使用酸性方法再純化)純化殘餘物以獲得27 mg (18%)白色粉末形式之N-[(7R)-2-{2-[1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-5-羰基}-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基]乙脒甲酸鹽EV-AZ7933-001 。LCMS (方法A)：滯留時間：2.05min, M/z = 512.3 (M + 1)。 根據上述程序合成下列化合物： (2-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 )(( 順式 )- 六氫吡咯并 [3,4-b][1,4] 噁嗪 -6(2H)- 基 ) 甲酮。 I-349 注意：起始材料係順式-外消旋物。 以類似於反應圖1之方式進行製備。分子量= 486.57； LC/MS滯留時間 = 1.19 min。 (管柱：Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 μm顆粒；移動相A：5:95乙腈:含有0.1%三氟乙酸之水；移動相B：95:5乙腈:含有0.1%三氟乙酸之水；溫度：50℃； 梯度：在3 min內0%B至100%B，然後在0.75 min內保持於100%B；流速：1 mL/min；檢測：MS及UV (220 nm))。M/Z (+) = 487.12；鹽 =游離鹼。 對掌性HPLC，獲得(2-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 )((4aR,7aS)- 六氫吡咯并 [3,4-b][1,4] 噁嗪 -6(2H)- 基 ) 甲酮及 (2-(1-( 環丙基甲基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 )((4aS,7aR)- 六氫吡咯并 [3,4-b][1,4] 噁嗪 -6(2H)- 基 ) 甲酮。 注意：起始材料係順式-外消旋物。絕對立體化學任意分配。 以類似於反應圖1之方式進行製備。將(2-(1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((順式)-六氫吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮溶於乙醇中且然後藉由對掌性HPLC (Chiralcel OD 21 × 250mm 10u，波長：254，流速：15 ml/min，溶劑A：100%庚烷，溶劑B：100%乙醇，藉由UV等梯度收集，%B: 35)純化以獲得25.7 mg (50.4%)異構體A形式之(2-(1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aR,7aS)-六氫吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮及25.4 mg (97.0%)異構體形式之(2-(1-(環丙基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)((4aS,7aR)-六氫吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基)甲酮(絕對立體化學任意分配)。 異構體 A I-350 對掌性純度(UV, 254nm): 100%，滯留時間：17.36 min (Chiralcel OD 21 × 250mm 10u，波長：254，流速：15 ml/min，溶劑A：100%庚烷，溶劑B：100%乙醇，藉由UV等梯度收集，%B: 35)。鹽 =游離鹼。 異構體 B I-351 對掌性純度(UV, 254nm): 100%，滯留時間：27.17 min (Chiralcel OD 21 × 250mm 10u，波長：254，流速：15 ml/min，溶劑A：100%庚烷，溶劑B：100%乙醇，藉由UV等梯度收集，%B: 35)。鹽 =游離鹼。 ((3R,6S)-1-(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-6- 甲基六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯。 使用反應圖11製備I-352 。 反應圖 11 2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲哚 -5- 甲酸甲酯 - 步驟 2 將1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(5 g, 20.30 mmol) (遵循反應圖2自EV-AR3621-002製得)與六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物(HATU, 7.72 g, 20.30 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA, 3.90 mL, 22.33 mmol)合併於二甲基甲醯胺(DMF, 80 mL)中。將反應液攪拌15分鐘且然後向反應液中添加3-胺基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯EV-AR3155-001 (4.02 g, 22.33 mmol)。將反應液在室溫下攪拌2小時。在完成反應後，在真空中去除溶劑。向殘餘物中添加乙酸(AcOH, 120 mL)且將器皿升溫至70℃並攪拌3小時。去除溶劑且使用自動化層析純化反應液，產物在於己烷中之40%乙酸乙酯下脫離管柱，從而得到2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(6.9 g, 17.67 mmol, 87%產率)。LCMS：滯留時間：0.95 min, M/z = 391.0 (M + 1)。2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸 - 步驟 3 向2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(500 mg, 1.281 mmol)於THF (7 mL)及甲醇(3.50 mL)中之溶液中添加水(3.50 mL)及單水合氫氧化鋰之水溶液(3 M, 1.281 mL, 3.84 mmol)。在30分鐘之後，起始材料自溶液脫離，添加額外THF (9 mL)且將反應液攪拌過夜。在真空中濃縮反應液且然後使用鹽酸(1 M於水中，3.84 mL, 3.84 mmol)中和。向懸浮液中添加水且在超音波處理之後過濾懸浮液並風乾固體以提供產物2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(470 mg, 1.249 mmol，98%產率)。LCMS：滯留時間：0.85 min, M/z = 376.8 (M + 1)。((3R,6S)-1-(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-6- 甲基六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 I-352 - 步驟 4 將2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(30 mg, 0.080 mmol)、((3R,6S)-6-甲基六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(25.6 mg, 0.120 mmol)、HATU (36.4 mg, 0.096 mmol)及DIPEA (0.042 mL, 0.239 mmol)合併於DMF (1 mL)中並將反應液攪拌30分鐘。在完成醯胺形成(如藉由LCMS所量測)後，向反應液中添加HCl (4 M於二噁烷中，1 mL, 4 mmol)。將反應液升溫至50℃並攪拌3小時。將反應液冷卻至室溫，過濾且然後使用製備型HPLC純化以提供((2S,5R)-5-胺基-2-甲基六氫吡啶-1-基)(2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮I-352 , (22.6 mg, 0.047 mmol，59.4%產率，99%純度) LCMS：滯留時間：0.73 min, M/z = 472.9 (M + 1)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)位移 8.04 - 8.00 (m, 1H), 7.78 - 7.72 (m, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.11 - 7.02 (m, 2H), 6.72 - 6.63 (m, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.01 - 3.96 (m, 3H), 3.96 - 3.91 (m, 3H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.66 - 1.51 (m, 1H), 1.26 - 1.13 (m, 4H), 0.36 - 0.29 (m, 2H), 0.25 - 0.19 (m, 2H) ((1R,4R,7R)-7- 胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -2- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 I-353 遵循反應圖11中之程序可提供I-353 (95%產率，97%純度)。LCMS：滯留時間：0.71 min, M/z = 470.9 (M + 1)。(若干信號表現為隱藏於水峰下)1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6 ) δ 8.02 (br d,J =8.25 Hz, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.67-7.78 (m, 1H), 7.42-7.55 (m, 1H), 7.12-7.33 (m, 1H), 7.07 (br s, 2H), 6.68 (d,J =8.41 Hz, 1H), 4.41-4.59 (m, 2H), 3.97 (br s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.08-3.28 (m, 1H), 2.66 (br s, 1H), 1.79-2.04 (m, 3H), 1.55-1.72 (m, 1H), 1.09-1.28 (m, 1H), 0.31 (br d,J =7.83 Hz, 2H), 0.22 (br s, 2H)。 ((3S,5S)-3- 胺基 -5- 氟六氫吡啶 -1- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 遵循反應圖11中之程序可提供I-354 (90%產率，96%純度)。LCMS：滯留時間：0.72 min, M/z = 476.9 (M + 1)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)位移 8.03 - 7.96 (m, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 1H), 7.06 - 7.02 (m, 1H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 2H), 4.01 - 3.94 (m, 3H), 3.94 - 3.89 (m, 3H), 3.48 - 3.33 (m, 1H), 3.07 - 2.87 (m, 1H), 2.42 - 2.28 (m, 1H), 1.93 - 1.72 (m, 1H), 1.21 - 1.04 (m, 1H), 0.35 - 0.24 (m, 2H), 0.22 - 0.08 (m, 2H)((2S,5R)-5- 胺基 -2- 甲基六氫吡啶 -1- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮。 根據反應圖12來製備I 355 。 反應圖 12 2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸甲酯 - 步驟 2 將1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(5 g, 20.30 mmol)、HATU (7.72 g, 20.30 mmol)及DIPEA (10.64 ml, 60.9 mmol)添加至DMF (80 ml)中。將反應液在室溫下攪拌15分鐘，然後添加3-胺基-5-甲氧基-4-(甲基胺基)苯甲酸甲酯HCl鹽(5.51 g, 22.33 mmol)且將反應液攪拌過夜。在真空下去除溶劑且向殘餘物中添加AcOH (120 mL)。將反應液在70℃下攪拌4小時且然後在真空中去除AcOH且將粗產物吸收於矽藻土上並使用自動化層析純化以提供2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(6.5 g, 15.46 mmol，76%產率)。LCMS：滯留時間：0.98 min, M/z = 421.0 (M + 1)。2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸 - 步驟 3 將2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(500 mg, 1.189 mmol)溶於THF (10 mL)、MeOH (5.00 mL)及水(2.500 mL)中，且向反應液中添加氫氧化鋰之水溶液(3M, 1.189 mL, 3.57 mmol)。添加額外THF直至反應均質為止。將反應液在室溫下攪拌兩天。在真空下濃縮反應液且添加HCl水溶液(1 M, 3.6 mL, 3.6 mmol)以將pH調節至約6。收集所得固體以提供產物2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(435 mg, 1.07 mmol，90%產率)。LCMS：滯留時間：0.89 min, M/z = 406.8 (M + 1)。((2S,5R)-5- 胺基 -2- 甲基六氫吡啶 -1- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 I-355 - 步驟 4 遵循反應圖12中之程序步驟4來製備((2S,5R)-5-胺基-2-甲基六氫吡啶-1-基)(2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮I-355 , (68.7%產率，100%純度)。LCMS：滯留時間：0.76 min, M/z = 502.9 (M + 1)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)位移 8.03 - 7.98 (m, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.01 - 6.94 (m, 1H), 6.83 - 6.77 (m, 1H), 6.70 - 6.61 (m, 1H), 4.48 - 4.38 (m, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 4.00 - 3.96 (m, 3H), 3.96 - 3.93 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.56 - 2.52 (m, 3H), 1.90 - 1.88 (m, 2H), 1.76 - 1.62 (m, 2H), 1.58 - 1.39 (m, 2H), 1.26 - 1.12 (m, 4H), 0.38 - 0.27 (m, 2H), 0.25 - 0.14 (m, 2H) ((3S,5S)-3- 胺基 -5- 氟六氫吡啶 -1- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-6- 甲氧基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮。 I-356 遵循反應圖12中之程序可提供((3S,5S)-3-胺基-5-氟六氫吡啶-1-基)(2-(1-(環丙基甲基)-6-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲酮I-356 (56.7%產率，99%純度)。LCMS：滯留時間：0.75 min, M/z = 506.9 (M + 1)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)位移 8.06 - 7.96 (m, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 1H), 7.01 - 6.93 (m, 1H), 6.87 - 6.79 (m, 1H), 6.70 - 6.61 (m, 1H), 4.44 - 4.37 (m, 2H), 4.14 - 4.08 (m, 3H), 4.01 - 3.95 (m, 3H), 3.95 - 3.92 (m, 3H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 1H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.23 - 2.10 (m, 1H), 1.94 - 1.84 (m, 2H), 1.65 - 1.43 (m, 1H), 1.21 - 1.06 (m, 1H), 0.37 - 0.24 (m, 2H), 0.23 - 0.11 (m, 2H)反應圖 13 ((1S,4R)-2-(2-(5- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 ： 5 使用反應圖13.1製備 反應圖 13.1 5- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 甲醛 ： 2 使用NaH (0.196 g, 4.91 mmol)逐份處理市售5-溴-1H-吲哚-2-甲醛1 (1 g, 4.46 mmol)於DMF中之冷(0℃)溶液。然後將反應液在0℃下再攪拌30 min。然後添加(溴甲基)環丙烷(0.723 g, 5.36 mmol)，且去除冰浴。在14 hr之後，使用H2 O (2 mL)終止反應，然後使用EtOAc稀釋並使用H2 O、鹽水萃取，乾燥(MgSO4 )並濃縮以得到橙色蠟。然後藉由Biotage (80g col, 0-60% EtOAc/己烷，12 CV)純化蠟以得到淺黃色油狀物形式之期望產物(800mg，64%) LCMS (方法A)：滯留時間：2.18min, M/z = 280.10 (M + 2)。甲基 -2-(5- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸酯： 3 使用亞硫酸氫鈉(4.13 g, 23.73 mmol)之H2 O溶液(10 mL)一次性處理5-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲醛2 (2.2 g, 7.91 mmol)及甲基-3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸酯(WO 2014/015905 A1，中間體 23) (1.900 g, 7.91 mmol)於乙醇(30 mL)中之懸浮液。然後將反應液加熱至回流保持18 hr。然後使用DCM (150 ml) 稀釋反應液，乾燥(MgSO4 )，並濃縮以得到橙色固體。藉由Biotage (80g col, 0-30% EtOAc/己烷，12 CV)純化固體以得到1g回收醛、1.4 g回收硝基化合物。且得到430 mg (12%)黃色固體形式之期望產物，LCMS (方法A)：滯留時間：2.25min, M/z = 470.20 (M + 2)。2-(5- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 甲酸： 4 使用LiOH (0.225 g, 9.39 mmol)之H2 O溶液(6 mL)處理2-(5-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯3 (1.1 g, 2.349 mmol)於THF (15 mL)中之室溫溶液。然後將反應液加熱至回流保持1.5hr。使用冰冷卻懸浮液，然後使用1N HCl (大約25 ml)變為酸性。過濾掉所得紅色固體，使用H2 O洗滌，並乾燥(高真空)。然後將固體吸收於EtOAc / DCM中並再次使用MgSO4 乾燥，過濾，然後濃縮以得到紅色固體。940mg (88%), LCMS (方法A)：滯留時間：1.27min, M/z = 456.20 (M + 2)。((1S,4R)-2-(2-(5- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 ： 5 使用HATU (865 mg, 2.276 mmol)一次性處理2-(5-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸4 (940 mg, 2.069 mmol)、DIEA (0.542 mL, 3.10 mmol)於DCM (50 mL)中之室溫溶液。添加(1R, 4R, 7R)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基胺基甲酸第三丁基酯(483 mg, 2.276 mmol)並繼續攪拌18 hr。使用DCM稀釋反應液，並使用H2 O、飽和碳酸氫鹽、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4 )並濃縮以得到橙色油狀物。然後藉由Biotage ( 80g col, 50--90% EtOAc/己烷，12 CV，然後90% EtOAc /己烷，2 CV)純化油狀物以得到1.07 g淺橙色油狀物形式之期望產物(80%), LCMS (方法A)：滯留時間：1.09min, M/z = 649.50 (M + 1)。M/z = 650.13 (M + 2)。程序 A ((1S,4R)-7- 胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -2- 基 )(2-(1-( 環丙基甲基 )-5-((E)-4-( 三氟甲基 ) 苯乙烯基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 I-361 ： 向((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)胺基甲酸第三丁基酯5 (50 mg, 0.077 mmol)、(E)-(4-(三氟甲基)苯乙烯基)酸(16.65 mg, 0.077 mmol)及磷酸三鉀水溶液(0.5M) (0.925 mL, 0.463 mmol)於THF (5 mL)中之懸浮液中一次性添加2-二環己基膦基-2’,6’-二-I-丙氧基-1,1’聯苯(21.58 mg, 0.046 mmol)及氯化鈀(II) (2.73 mg, 0.015 mmol)。將所得微紅色懸浮液加熱至80℃保持4hr。使用EtOAc稀釋反應液，使用H2 O、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4 )並濃縮以得到淺橙色蠟。藉由LCMS獲知蠟足夠清潔(MW = 739)以用於去保護步驟。將蠟吸收於DCM (2 mL)中，然後使用4M HCl (0.5 mL, 2.000 mmol) (4M於二噁烷中)處理。在1hr之後，濃縮反應液，吸收於DCM中並過濾，乾燥(MgSO4 )，濃縮，然後純化，32 mg，於2ml DMF中。經由製備型LC/MS純化粗製材料：管柱：XBridge C18，19 × 200 mm，5 μm顆粒；移動相A：5:95乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；移動相B：95:5乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；梯度：在19分鐘內50%-90% B，然後在4分鐘內保持於100% B；流速：20 mL/min。合併含有期望產物之部分並經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為20.3 mg (34%產率)，且其藉由LCMS分析估計之純度為100%。LCMS (方法B)：滯留時間：2.42min, M/z = 640.14 (M + 1)。程序 B ((1S,4R)-7- 胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -2- 基 )(2-(5-((2- 環丙基乙基 ) 胺基 )-1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 基 ) 甲酮 I-374 ： 使用氮將5 (50 mg, 0.077 mmol)、2-環丙基乙胺(6.56 mg, 0.077 mmol)、X-PHOS (7.35 mg, 0.015 mmol)於甲苯(15 mL)中之懸浮液脫氣15 min。然後添加Pd2 (dba)3 (7.06 mg, 7.71 µmol)及第三丁醇鈉(14.82 mg, 0.154 mmol)且將懸浮液加熱至80℃保持4 hr。將反應液冷卻，使用EtOAc稀釋，然後使用H2 O、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4 )並濃縮以得到淺棕色蠟。藉由LCMS展示，蠟含有期望產物(藉由LCMS，MW = 652)，然後直接去保護。 將材料吸收於DCM (0.5mL)中，然後使用HCl (0.5 mL, 2 mmol，4M於二噁烷中)處理。在1hr之後，濃縮反應液，然後自DCM (2×)蒸發。將粗製材料溶於MeOH中(過濾)並蒸發以得到37 mg紅色固體。經由製備型LC/MS純化粗製材料：管柱：XBridge C18，19 × 200 mm，5 μm粒徑；移動相A：5:95乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；移動相B：95:5乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；梯度：在20分鐘內35%-75% B，然後在7分鐘內保持於100% B；流速：20 mL/min。合併含有期望產物之部分並經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為10.9 mg (16%)，且其藉由LCMS分析估計之純度為98%。LCMS (方法B)：滯留時間：1.84min, M/z = 553.26 (M + 1)。程序 C 步驟 1 ： ((1S,4R)-2-(2-(5- 氰基 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 ： 將((1S,4R)-2-(2-(5-溴-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)胺基甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.154 mmol)5 、氰化鋅(18.10 mg, 0.154 mmol)、Pd2 dba3 (7.06 mg, 7.71 µmol)及DPPF (10.26 mg, 0.019 mmol)於DMF (4 mL)及水(0.4 mL)中之懸浮液加熱至120℃保持18hr。添加額外氰化鋅(18.10 mg, 0.154 mmol)、Pd2 dba3 (7.06 mg, 7.71 µmol)及DPPF (10.26 mg, 0.019 mmol)，並在120℃下繼續攪拌4 hr。冷卻反應液，使用EtOAc稀釋，使用H2 O、飽和碳酸鹽洗滌，乾燥(MgSO4 )並濃縮以得到黑色蠟。藉由Biotage (40g col, 20-100% EtOAc/己烷，12 CV，然後100% EtOAc，4 CV)純化蠟以得到淺黃色蠟形式之期望產物：89 mg (97%產率)，LCMS (方法A)：滯留時間：min 2.11 min, M/z = 595.65 (M + 1)。步驟 2 ： 2-(5-((1S,4R)-7- 胺基 -2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -2- 羰基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -2- 基 )-1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -5- 甲腈 I-370 ： 使用HCl (0.5 ml, 2 mmol，4M於二噁烷中)逐滴處理((1S,4R)-2-(2-(5-氰基-1-(環丙基甲基)-1H-吲哚-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-羰基)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)胺基甲酸第三丁基酯(35 mg, 0.059 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液。在1hr之後，濃縮反應液，然後依序溶於DCM中並濃縮(2×)。將粗製材料溶於MeOH中(過濾)並蒸發以得到22 mg紅色固體，溶於1.5 ml DMF中並經由製備型LC/MS純化：管柱：XBridge C18，19 × 200 mm，5 μm顆粒；移動相A：5:95乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；移動相B：95:5乙腈:含有10-mM乙酸銨之水；梯度：在20分鐘內15%-55% B，然後在5分鐘內保持於100% B；流速：20 mL/min。合併含有期望產物之部分並經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為14.4 mg (38%產率)，且其藉由LCMS分析估計之純度為100%。LCMS (方法B)：滯留時間：min 1.81 min, M/z = 495.07 (M + 1)。反應圖 14 ((1S,4R)-2-(2-(6- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 6 ： 如反應圖13.1中所闡述自市售6-溴-1H-吲哚-2-甲醛開始來製備溴化物以得到橙色蠟，LCMS (方法A)：滯留時間：1.29min, M/z = 650.30 (M + 2)。 所有6取代-1H-吲哚-2基化合物皆係自((1S,4R)-2-(2-(6- 溴 -1-( 環丙基甲基 )-1H- 吲哚 -2- 基 )-7- 甲氧基 -1- 甲基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -5- 羰基 )-2- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚烷 -7- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 6 使用與針對5-取代化合物所闡述相同之程序(反應圖13)來製得。用於反應圖 13 及 14 之 HPLC 方法 方法 A (低pH Shimadzu 3min方法) 管柱：Waters Acquity UPLC BEH dC18, 2.1mm×50mm，1.7µm管柱 流速：0.6 ml/min 移動相：A，0.05% TFA (水溶液)；及B，0.05% TFA (乙腈) 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：220 nm (標稱) 梯度- 0-100% B方法 B 管柱：Water Xbridge C18, 2.1mm×50mm，1.7 µm管柱 流速：0.6 ml/min 移動相：乙腈:含有10 mM乙酸銨之水；移動相B：95:5乙腈:含有10 mM乙酸銨之水；溫度： 50℃；梯度：在3 min內0%B至100%B，然後在0.75 min內保持於100%B 注入體積：3 μl 溫度：40℃ 檢測：220 nm (標稱) 使用方法A、B或C如反應圖13及14中所闡述來製備下列化合物： 生物分析 使用下文所闡述之分析方案分析作為PAD4抑制劑之本發明化合物。 將化合物溶於100% DMSO中以達成100 mM之最終化合物濃度。將化合物儲備溶液儲存於室溫下。在DMSO中製備一系列稀釋液且以20 mL混合體積混合8次。最終分析條件如下： 反應體積：20 µl 分析緩衝液(上述)：100 mM Tris-HCl (pH 7.6), 2 mM DTT, 1 mM CaCl2 最終濃度： -100 nM hPAD4酶 -50 µM (8倍子Km )受質肽 -0.5% DMSO 培育時間：65 min，在37℃下 終止溶液：40 µl於ACN中之5% TCA 將0.25 µL化合物溶液添加至10 µL於分析緩衝液(100 mM pH 7.6 Tris-HCl, 2 mM DTT)中之200 nM PAD4中。在5 min之後，添加10 µL於緩衝液(100 mM pH 7.6 Tris-HCl, 2 mM DTT, 2 mM CaCl2)中之100 µM受質且將反應液在37℃下培育60 min。藉由添加40 µl於ACN中之5% TCA (1.7% TCA最終濃度)停止溶液來終止酶促反應。在Agilent RapidFire (RF) 300系統上對含精胺酸受質及含瓜胺酸產物(+1 Da質量位移)實施固相萃取且在耦合三相四極Agilent 6460 QQQ質譜(MS)裝置上在應用多反應監測(MRM)以用於量化下進行檢測。針對 PAD 同工酶之 IC50 測定 使用質譜分析量測給定測試化合物之IC50，該質譜分析檢測BAEE在與苯基乙二醛反應之後之瓜胺酸化產物。將測試化合物溶於100% DMSO中且將0.125 uL遞送至384孔REMP聚丙烯板中，然後添加酶。將酶及化合物在37℃下預培育30 min且藉由添加BAEE受質來引發反應，從而每一分析孔中之最終濃度等於BAEE在飽和鈣濃度(250 uM)下之Km值。用於反應之緩衝液含有25 mM pH 7.5 Hepes、5 mM NaCl、1 mM DTT、0.01% Chaps、0.2 mg/mL BSA及50 uM或1 mM CaCl2 (其分別對應於Ca2+ 之K0.5 之五分之一或之20 ×Ca2+ 之K0.5 ，如在BAEE之10倍Km下所量測)。最終反應中之所用典型酶濃度係5 nM且總反應體積為25 uL。使反應在37℃下進行1.5小時，然後添加BAEE，隨後使用15 ul 6.1 N TCA及35 ul 8.5 mM苯基乙二醛淬滅。苯基乙二醛之最終濃度為4 mM。將混合物在37℃及攪動下再培育30 min以藉由苯基乙二醛完全修飾瓜胺酸化產物。將淬滅反應板在5000 × g下離心3分鐘且向每一孔中添加等體積含有內部標準(苯基乙二醛修飾之瓜胺酸)之甲醇。將內容物轉移至新384孔REMP板中以用於rapidfire MS分析。 將試樣裝載於RapidFire RF300系統(Agilent)上，其中首先將其吮吸1000 ms且然後直接裝載至使用含有0.01%甲酸之乙腈之混合物之C18分離柱中用於3000 ms去鹽。移動相之流速為1.5 ml/min。在試樣洗脫自柱後，使用含有0.01%甲酸之乙腈之移動相以1.25 ml/min之流速將試樣移動至質譜儀中保持4000 ms。使用配備有ESI之Sciex API4000三相四極質譜儀(Applied Biosystems)分析肽基瓜胺酸及內部標準離子。分別在m/z 424.5至350.4及m/z 293至247下監測產物及內部標準之MRM轉變。將每一轉變之留置時間設定於200 ms，並使用5500 V之ESI電壓且源溫度為400℃。使用rapidfire積分軟體對每一轉變之萃取離子峰進行積分。針對內部標準將峰面積正規化。 對於IC50測定而言，將化合物3倍連續稀釋於DMSO中且在11個不同濃度下進行測試。藉由將分析物之峰面積除以內部標準之峰面積來計算峰面積比率。使用來自DMSO對照及無酶背景之峰面積比率來計算出現於每一抑制劑濃度下之抑制百分比，且使用下列方程式計算IC50：其中Y =每一抑制劑濃度下之抑制%，A =最小Y值，B =最大Y值，C= logIC50，D =希爾斜率(hill slope)，且x =抑制劑濃度。 下表 2 展示所選本發明化合物在上述PAD4分析中之活性。化合物編號對應於表 1 中之化合物編號。具有指定為「A」之活性之化合物提供≤ 1 μM之IC50 ；具有指定為「B」之活性之化合物提供1.0 - 5.0 μM之IC50 ；具有指定為「C」之活性之化合物提供5.0 - 10.0 μM之IC50 ；且具有指定為「D」之活性之化合物提供≥ 10.0 μM之IC50 。術語pIC50 = -log(IC50 )。具有指定為「E」之活性之化合物提供≤ 4之pIC50 ；具有指定為「F」之活性之化合物提供4.0-5.0之pIC50 ；具有指定為「G」之活性之化合物提供5.0-6.0之pIC50 ；且具有指定為「H」之活性之化合物提供≥6之pIC50 。「NA」代表「未分析」。表 2.PAD4 活性
無

Claims (21)

  1. 一種式I’ 化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中： 環A係 或，其中環A視情況經1至4個選自氟、-CN、-OR或視情況經1至3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基之基團取代； 環B係或； R1 係氫、-CN、-OR、 或視情況經1至4個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-6 脂肪族基團； R2 係氫或視情況經1至5個選自氟、-CN或-OR之基團取代之C1-10 脂肪族基團； 各X1 及X2 獨立地選自N或C(R4 )； R3 係鹵素、-CN、-R、或-OR； 各R4 獨立地係鹵素、-CN、-R、 或-OR； R5 係氫或鹵素； n為0至4；及 各R獨立地係氫或視情況經1至3個氟原子取代之C1-6 脂肪族基團。
  2. 如請求項1之化合物，其中環A係 或。
  3. 如請求項1之化合物，其中環A係或。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R1 係甲基、乙基或丙基。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中R2 係視情況經1至5個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。
  6. 如請求項5之化合物，其中R2 係甲基、乙基或-CH2 -環丙基。
  7. 如請求項5之化合物，其中R2 係經1至5個氟原子取代之C1-10 脂肪族基團。
  8. 如請求項7之化合物，其中R2 係-CH2 CF3 。
  9. 如請求項1至8中任一項之化合物，其中X1 及X2 二者皆係N。
  10. 如請求項1至8中任一項之化合物，其中X1 係N，且X2 係CH。
  11. 如請求項1至8中任一項之化合物，其中X1 係CH，且X2 係N。
  12. 如請求項1至8中任一項之化合物，其中X1 及X2 二者皆係CH。
  13. 如請求項1至12中任一項之化合物，其中R4 係C1-6 脂肪族基團或-OR。
  14. 如請求項13之化合物，其中R4 係乙基或-OCH3 。
  15. 一種醫藥上可接受之組合物，其包括如請求項1至14中任一項之化合物及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。
  16. 如請求項15之組合物，其與另一治療劑組合。
  17. 一種抑制個體中或生物試樣中之PAD4之方法，其包括使該PAD4與如請求項1至14中任一項之化合物接觸之步驟。
  18. 一種治療有需要個體之PAD4介導之疾病、病症或病狀之方法，其包括向該個體投與如請求項15之組合物之步驟。
  19. 如請求項18之方法，其中該個體係人類個體。
  20. 如請求項18之方法，其中該PAD4介導之疾病、病症或病狀係選自由以下組成之群：酸誘發之肺損傷、痤瘡(PAPA)、急性淋巴球性白血病、急性呼吸窘迫症候群、阿狄森氏病(Addison’s disease)、腎上腺增生、腎上腺皮質功能不全、老化、AIDS、酒精性肝炎、酒精性肝炎、酒精性肝病、過敏原誘發之氣喘、過敏支氣管肺、麴菌病(aspergillosis)、過敏性結膜炎、脫髮、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、類澱粉變性、萎縮性脊髓側索硬化及重量損失、心絞痛、血管性水腫、無汗外胚層發育不全-ID、關節黏連性脊椎炎、前段發炎、抗磷脂症候群、口瘡口炎、闌尾炎、關節炎、氣喘、動脈粥樣硬化、異位性皮膚炎、自體免疫疾病、自體免疫性肝炎、蜂螫傷誘發之發炎、貝切特氏病(Behcet’s disease)、貝切特氏症候群(Behcet’s syndrome)、貝爾氏麻痺症(Bells Palsey)、鈹中毒、布勞症候群(Blau syndrome)、骨疼痛、細支氣管炎、燒傷、滑囊炎、癌症、心肥大、腕隧道症候群、異化代謝病症、白內障、腦動脈瘤、化學刺激物誘發之發炎、脈絡膜視網膜炎、慢性心臟衰竭、早產兒慢性肺病、慢性淋巴球性白血病、慢性阻塞性肺病、結腸炎、複雜性區域疼痛症候群、結締組織疾病、角膜潰瘍、克羅恩氏病(crohn’s disease)、隱熱蛋白(cryopyrin)相關週期性症候群、隱球菌病、囊性纖維化、介白素-1-受體拮抗劑(DIRA)缺陷、皮膚炎、皮膚炎內毒素血症、皮肌炎、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、子宮內膜異位症、內毒素血症、上髁炎、紅血球母細胞減少症、家族性澱粉樣多發性神經病變、家族性冷性蕁麻疹、家族性地中海熱、胎兒生長遲滯、青光眼、腎小球疾病、腎小球腎炎、痛風、痛風性關節炎、移植物抗宿主病、腸病、頭損傷、頭痛、聽力損失、心臟病、溶血性貧血、亨舍二氏紫癜(Henoch-Scholein purpura)、肝炎、遺傳性週期性發熱症候群、帶狀疱疹及單純疱疹、HIV-1、何傑金氏病(Hodgkin’s disease)、亨廷頓氏病(Huntington’s disease)、透明膜病、高胺血症、高鈣血症、高膽固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反覆發熱(HIDS)、發育不全及其他貧血、發育不全性貧血、特發性血小板減少紫斑症、色素失調症、感染性單核細胞增多症、發炎性腸病、發炎性肺病、發炎性神經病變、發炎性疼痛、昆蟲咬傷誘發之發炎、虹膜炎、刺激物誘發之發炎、缺血/再灌注、青少年型類風濕性關節炎、角膜炎、腎疾病、由寄生蟲感染引起之腎損傷、由寄生蟲感染引起之腎損傷、腎移植排斥預防、鉤端螺旋體病、白血病、呂弗勒氏症候群(Loeffler’s syndrome)、肺損傷、肺損傷、狼瘡、狼瘡、狼瘡性腎炎、淋巴瘤、腦膜炎、間皮瘤、混合結締組織疾病、穆-韋二氏症候群(Muckle-Wells syndrome) (蕁麻疹耳聾類澱粉變性)、多發性硬化、肌肉消瘦、肌肉營養不良症、重症肌無力、心肌炎、蕈樣黴菌病、蕈樣黴菌病、骨髓發育不良症候群、肌炎、鼻竇炎、壞死性小腸結腸炎、新生兒發作多系統發炎性疾病(NOMID)、腎病症候群、神經炎、神經病理學疾病、非過敏原誘發之氣喘、肥胖症、眼睛過敏、視神經炎、器官移植、骨關節炎、中耳炎、佩吉特氏病(paget’s disease)、疼痛、胰臟炎、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、天皰瘡、心包炎、週期性發熱、齒根骨膜炎(periodontitis)、腹膜型子宮內膜異位症、百日咳、咽炎及腺炎(PFAPA症候群)、植物刺激物誘發之發炎、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、肺囊蟲感染、野葛(poison ivy)/漆酚油誘發之發炎、結節性多動脈炎、多軟骨炎、多囊性腎疾病、多發性肌炎、牛皮癬、牛皮癬、牛皮癬、牛皮癬、心理社會壓力疾病、肺病、肺高血壓、肺纖維化、壞疽性膿皮病、化膿性無菌關節炎、腎疾病、視網膜疾病、風濕性心炎、風濕性疾病、類風濕性關節炎、類肉瘤病、皮脂溢、敗血症、嚴重疼痛、鐮狀細胞、鐮狀細胞貧血、二氧化矽誘發之疾病、薛格連氏症候群(Sjogren’s syndrome)、皮膚病、睡眠呼吸中止、實體腫瘤、骨髓損傷、史蒂芬-強森症候群(Stevens-Johnson syndrome)、中風、蛛網膜下出血、曬傷、顳動脈炎、腱鞘炎、血小板減少症、甲狀腺炎、組織移植、TNF受體相關週期性症候群(TRAPS)、弓蟲症、移植、創傷性腦損傷、肺結核、1型糖尿病、2型糖尿病、潰瘍性結腸炎、蕁麻疹、眼色素層炎及韋格納氏肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)。
  21. 如請求項18之方法，其中該PAD4介導之疾病、病症或病狀係選自類風濕性關節炎、血管炎、全身性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、癌症、囊性纖維化、氣喘、皮膚紅斑狼瘡及牛皮癬。
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