KR20180098574A - Pad4의 비시클릭 억제제 - Google Patents

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그나나삼반담 쿠마라벨
마이클 에프. 파커
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리 보울스
스티브 브롬브리지
소피 쿠퍼
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Abstract

본 발명은 PAD4의 억제제로서 유용한 화합물, 그의 조성물, 및 PAD4-관련 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

Description

PAD4의 비시클릭 억제제
PAD4는 펩티드 서열 내에서 아르기닌의 시트룰린으로의 시트룰린화를 촉매할 수 있는 효소의 펩티딜아르기닌 데이미나제 (PAD) 패밀리의 구성원이다. PAD4는 시험관내 및 생체내에서 다양한 단백질의 탈이미노화 또는 시트룰린화를 담당하여, 다양한 질환에서의 다양한 기능적 반응의 결과를 갖는다 (Jones J.E. et al., Curr. Opin. Drug Discov. Devel., 12(5), (2009),616-627). 예시적인 질환의 예는 류마티스 관절염, 발병기전에 대한 호중구성 기여를 갖는 질환 (예를 들어, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염)에 더하여 종양학 적응증을 포함한다. PAD4 억제제는 또한 후성적 메카니즘을 통해 인간 질환을 위한 도구 및 치료제로서 보다 넓은 적용성을 갖는다.
PAD4의 억제제는 류마티스 관절염 (RA)에 대해 유용성을 갖는다. RA는 인구의 대략 1%에 영향을 미치는 자가면역 질환이다 (Wegner N. et al., Immunol. Rev., 233(1) (2010), 34-54). 이는 골 및 연골의 쇠약화 파괴를 일으키는 관절의 염증을 특징으로 한다. 비록 일관되지는 않지만 다수의 집단 연구에서 PAD4 다형성과 RA에 대한 감수성 사이의 약한 유전적 연관을 시사하였다 (Kochi Y. et al., Ann. Rheum. Dis., 70, (2011),512-515). PAD4 (패밀리 구성원 PAD2와 함께)는 활막 조직에서 검출되었으며, 여기서 이것은 다양한 관절 단백질의 탈이미노화를 담당한다. 이 과정은 RA 관절에서 시트룰린화된 기질 예컨대 피브리노겐, 비멘틴 및 콜라겐에 대한 관용의 파괴, 및 그에 대한 면역 반응의 개시로 이어지는 것으로 추정된다. 이들 항-시트룰린화된 단백질 항체 (ACPA)는 질환 발병기전에 기여하고, 또한 RA에 대한 진단 시험 (예를 들어, 상업적으로 입수가능한 CCP2 또는 시클릭 시트룰린화된 단백질 2 시험)으로서 사용될 수 있다. 또한, 증가된 시트룰린화는 또한 여러 관절 및 염증 매개체 (예를 들어, 피브리노겐, 항트롬빈, 다중 케모카인)의 기능에 직접적으로 영향을 미치는 그의 능력을 통해 질환 발병기전에 추가의 직접적인 기여를 제공할 수 있다. RA 환자의 보다 작은 하위세트에서, 항-PAD4 항체는 측정될 수 있고, 질환의 보다 더 미란성인 형태와 상관관계가 있을 수 있다.
PAD4 억제제는 또한 다양한 질환에서의 병리학적 호중구 활성의 감소에 유용하다. 연구는, 호중구가 병원체를 고정화 및 사멸시킬 수 있는 선천성 방어 메카니즘인 호중구 세포외 트랩 (NET) 형성의 과정이 히스톤 시트룰린화와 연관되고, PAD4 녹아웃 마우스에서 결핍되어 있음을 시사한다 (Neeli I. et al., J. Immunol., 180, (2008), 1895-1902 및 Li P. et al., J. Exp. Med., 207(9), (2010), 1853-1862). 따라서, PAD4 억제제는 조직에서의 NET 형성이 국부 손상 및 질환 병리상태에 기여하는 질환에 대한 적용성을 가질 수 있다. 이러한 질환은 소혈관 혈관염 (Kessenbrock K. et al., Nat. Med., 15(6), (2009), 623-625), 전신 홍반성 루푸스 (Hakkim A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(21), (2010), 9813-9818 및 Villanueva E. et al., J. Immunol., 187(1), (2011), 538-52), 궤양성 결장염 (Savchenko A. et al., Pathol. Int., 61(5), (2011), 290-7), 낭성 섬유증, 천식 (Dworski R. et al., J. Allergy Clin. Immunol., 127(5), (2011), 1260-6), 심부 정맥 혈전증 (Fuchs T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(36), (2010), 15880-5), 치주염 (Vitkov L. et al., Ultrastructural Pathol., 34(1), (2010), 25-30), 패혈증 (Clark S.R. et al., Nat. Med., 13(4), (2007), 463-9), 충수염 (Brinkmann V. et al., Science, 303, (2004), 1532-5) 및 졸중을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한, NET가 피부에 영향을 미치는 질환, 예를 들어 피부 홍반성 루푸스 (Villanueva E. et al., J. Immunol., 187(1), (2011), 538-52) 및 건선 (Lin A.M. et al., J. Immunol., 187(1), (2011), 490-500)에서의 병리상태에 기여할 수 있다는 증거가 존재하므로, PAD4 억제제는 전신 또는 피부 경로에 의해 투여되는 경우에 NET 피부 질환을 다루는 데 이익을 나타낼 수 있다. PAD4 억제제는 호중구 내의 추가의 기능에 영향을 미치고, 호중구성 질환에 보다 넓은 적용성을 가질 수 있다.
연구는 콜라겐-유발된 관절염 (Willis V.C. et al., J. Immunol., 186(7), (2011), 4396-4404), 덱스트란 술페이트 나트륨 (DSS)-유발된 실험적 결장염 (Chumanevich A.A. et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 300(6), (2011), G929-G938), 척수 복구 (Lange S. et al., Dev. Biol., 355(2), (2011), 205-14) 및 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE)을 포함한 질환의 다수의 동물 모델에서 도구 PAD 억제제 (예를 들어, 클로로-아미딘)의 효능을 입증하였다. DSS 결장염 보고는 또한 클로로-아미딘이 시험관내 및 생체내 둘 다에서 염증 세포의 아폽토시스를 유도한다는 것을 입증하며, 이는 PAD4 억제제가 광범위 염증성 질환에서 보다 일반적으로 효과적일 수 있음을 시사한다.
PAD4 억제제는 또한 암의 치료에 유용하다 (Slack.J.L. et al., Cell. Mol. Life Sci., 68(4), (2011), 709-720). PAD4의 과다-발현은 수많은 암에서 입증되었다 (Chang X. et al., BMC Cancer, 9, (2009), 40). PAD4가 세포 주기 정지 및 아폽토시스의 유도에 수반되는 p53-표적 유전자 예컨대 p21의 프로모터에서 히스톤 내 아르기닌 잔기를 시트룰린화시킨다는 관찰로부터, PAD4 억제제에 대한 항증식 역할이 제안되었다 (Li P. et al., Mol. Cell Biol., 28(15), (2008), 4745-4758).
히스톤 내 아르기닌 잔기를 탈이미노화시키는 데 있어서 상기 언급된 PAD4의 역할은 PAD4의 유전자 발현의 후성적 조절에서의 역할을 나타낼 수 있다. PAD4는 핵뿐만 아니라 세포질에 상주하는 것으로 관찰된 주요 PAD 패밀리 구성원이다. PAD4가 히스톤 데메틸이미나제뿐만 아니라 데이미나제로서 작용할 수 있다는 초기 증거는 일관되지 않고, 입증되지 않았다. 그러나, 이는 시트룰린으로의 전환에 의한 이용가능한 아르기닌 잔기의 고갈을 통해 간접적으로 히스톤 아르기닌 메틸화 (및 따라서 이 마크와 연관된 후성적 조절)를 감소시킬 수 있다. PAD4 억제제는 추가의 질환 환경에서 다양한 표적 유전자의 발현에 영향을 미치기 위한 후성적 도구 또는 치료제로서 유용하다. 이러한 메카니즘을 통해, PAD4 억제제는 또한 줄기 세포에서 시트룰린화 수준을 제어하는 데 효과적일 수 있고, 따라서 배아 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 조혈 줄기 세포 및 암 줄기 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 줄기 세포의 다능성 상태 및 분화 잠재력에 치료적으로 영향을 미칠 수 있다. 따라서, PAD4-매개 장애의 치료를 위한 PAD4 억제제를 확인하고 개발하는 것에 대한 미충족 필요가 존재한다.
이제, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 PAD4의 억제제로서 유용한 것으로 밝혀졌다.
Figure pct00001
여기서 각각의 고리 A, R1, R2, R3, R4, X1 및 X2는 본원에 정의된 바와 같다.
또한, 화학식 I'의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 PAD4의 억제제로서 유용한 것으로 밝혀졌다.
Figure pct00002
여기서 각각의 고리 A, 고리 B, R1 및 R3은 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 제공된 화합물은 PAD2에 대하여 PAD4에 대한 선택성을 입증한다. 본 발명은 또한 제공된 화합물을 포함하는 제약상 허용되는 조성물을 제공한다. 제공된 화합물은 PAD4와 연관된 다양한 장애의 치료에 유용하다. 이러한 장애는 본원에 상세하게 기재되고, 예를 들어 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 및 건선을 포함한다.
1. 본 발명의 특정 측면의 일반적 설명
일부 실시양태에서, 이러한 화합물은 본원에 기재된 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 각각의 가변기는 본원에 정의되고 실시양태에 기재된 바와 같다. 이러한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 I의 구조를 갖는다.
Figure pct00003
여기서:
고리 A는
Figure pct00004
이며, 여기서 고리 A는 플루오린, -CN, -OR, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환되고;
R1은 수소, -CN, -OR, 또는 플루오린, -CN 또는 OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이고;
R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이고;
각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택되고;
각각의 R3 및 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R 또는 -OR이고;
n은 0-4이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
일부 실시양태에서, 이러한 화합물은 본원에 기재된 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 각각의 가변기는 본원에 정의되고 실시양태에 기재된 바와 같다. 이러한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 I'의 구조를 갖는다.
Figure pct00005
여기서:
고리 A는
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
이며, 여기서 고리 A는 플루오린, -CN, -OR, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환되고;
고리 B는
Figure pct00009
이고;
R1은 수소, -CN, -OR,
Figure pct00010
, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이고;
R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이고;
각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택되고;
R3은 할로겐, -CN, -R,
Figure pct00011
이고;
각각의 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R,
Figure pct00012
이고;
R5는 수소 또는 할로겐이고;
n은 0-4이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
2. 정의
본 발명의 화합물은 본원에 일반적으로 기재된 것들을 포함하고, 본원에 개시된 부류, 하위부류 및 종에 의해 추가로 예시된다. 본원에 사용된 바와 같이, 달리 나타내지 않는 한 하기 정의가 적용될 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 화학 원소는 원소 주기율표, CAS 버전, 문헌 [Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.]에 따라 확인된다. 추가적으로, 유기 화학의 일반적 원리는 문헌 ["Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, 및 "March's Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001]에 기재되어 있으며, 이들 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "지방족" 또는 "지방족 기"는, 완전 포화이거나 또는 1개 이상의 불포화 단위를 함유하는 직쇄 (즉, 비분지형) 또는 분지형, 치환 또는 비치환된 탄화수소 쇄, 또는 완전 포화이거나 또는 1개 이상의 불포화 단위를 함유하지만 방향족이 아니고 분자의 나머지에 대해 단일 부착 지점을 갖는 모노시클릭 탄화수소 또는 비시클릭 탄화수소 (또한 본원에서 "카르보사이클", "시클로지방족" 또는 "시클로알킬"로도 지칭됨)를 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, 지방족 기는 1-6개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 지방족 기는 1-5개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 다른 실시양태에서, 지방족 기는 1-4개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 또 다른 실시양태에서, 지방족 기는 1-3개의 지방족 탄소 원자를 함유하고, 또 다른 실시양태에서, 지방족 기는 1-2개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, "시클로지방족" (또는 "카르보사이클" 또는 "시클로알킬")은, 완전 포화이거나 또는 1개 이상의 불포화 단위를 함유하지만 방향족이 아니고 분자의 나머지에 대해 단일 부착 지점을 갖는 모노시클릭 C3-C6 탄화수소를 지칭한다. 적합한 지방족 기는 선형 또는 분지형, 치환 또는 비치환된 알킬, 알케닐, 알키닐 기, 및 그의 하이브리드 예컨대 (시클로알킬)알킬, (시클로알케닐)알킬 또는 (시클로알킬)알케닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은, 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등 없이 인간 및 하등 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며 합리적 이익/위험 비에 상응하는 이들 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 에스. 엠. 베르그(S. M. Berge) 등은 본원에 참조로 포함된 문헌 [J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19]에 제약상 허용되는 염을 상세하게 기재한다. 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염은 적합한 무기 및 유기 산 및 염기로부터 유래된 것들을 포함한다. 제약상 허용되는 비독성 산 부가염의 예는 무기 산 예컨대 염산, 브로민화수소산, 인산, 황산 및 과염소산을 사용하거나 또는 유기 산 예컨대 아세트산, 옥살산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산을 사용하여 형성되거나, 또는 관련 기술분야에서 사용되는 다른 방법 예컨대 이온 교환을 사용함으로써 형성된 아미노 기의 염이다. 다른 제약상 허용되는 염은 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 글루코네이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다.
적절한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄 및 N+(C1-4알킬)4 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 추가의 제약상 허용되는 염은 적절한 경우에, 반대이온 예컨대 할라이드, 히드록시드, 카르복실레이트, 술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 저급알킬 술포네이트 및 아릴 술포네이트를 사용하여 형성된 비독성 암모늄, 4급 암모늄 및 아민 양이온을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 도시된 구조는 또한 구조의 모든 이성질체 (예를 들어, 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 기하 이성질체 (또는 형태 이성질체)) 형태; 예를 들어 각각의 비대칭 중심에 대한 R 및 S 배위, Z 및 E 이중 결합 이성질체, 및 Z 및 E 형태 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 본 발명의 화합물의 단일 입체화학적 이성질체뿐만 아니라 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 기하 이성질체 (또는 형태 이성질체) 혼합물은 본 발명의 범주 내에 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본 발명의 화합물의 모든 호변이성질체 형태는 본 발명의 범주 내에 있다. 추가적으로, 달리 언급되지 않는 한, 본원에 도시된 구조는 또한 단지 1개 이상의 동위원소 농축 원자의 존재만이 상이한 화합물을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 수소의 중수소 또는 삼중수소에 의한 대체, 또는 탄소의 13C- 또는 14C-농축 탄소에 의한 대체를 포함한 본 발명의 구조를 갖는 화합물은 본 발명의 범주 내에 있다. 이러한 화합물은, 예를 들어 분석 도구로서, 생물학적 검정에서의 프로브로서, 또는 본 발명에 따른 치료제로서 유용하다.
본원에 사용된 용어 "측정가능한 친화성" 및 "측정가능하게 억제한다"는, 본 발명의 화합물 또는 그의 조성물 및 PAD4를 포함하는 샘플과 상기 화합물 또는 그의 조성물의 부재 하에 PAD4를 포함하는 동등한 샘플 사이의 PAD4 활성에서의 측정가능한 변화를 의미한다.
3. 예시적인 화합물의 기재
한 측면에 따르면, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00013
여기서:
고리 A는
Figure pct00014
이며, 여기서 고리 A는 플루오린, -CN, -OR, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환되고;
R1은 수소, -CN, -OR, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이고;
R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이고;
각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택되고;
각각의 R3 및 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R 또는 -OR이고;
n은 0-4이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 화학식 I'의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00015
여기서:
고리 A는
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
이며, 여기서 고리 A는 플루오린, -CN, -OR, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환되고;
고리 B는
Figure pct00019
이고;
R1은 수소, -CN, -OR,
Figure pct00020
, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이고;
R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이고;
각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택되고;
R3은 할로겐, -CN, -R,
Figure pct00021
이고;
각각의 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R,
Figure pct00022
이고;
R5는 수소 또는 할로겐이고;
n은 0-4이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, R1은 수소, -CN, -OR, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다. 일부 실시양태에서, R1은 수소이다. 일부 실시양태에서, R1은 -CN이다. 일부 실시양태에서, R1은 -OR이다. 일부 실시양태에서, R1은 플루오린, -CN 또는 OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다. 일부 실시양태에서, R1은 C1-3 지방족이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이다. 일부 실시양태에서, R1은 에틸이다. 일부 실시양태에서, R1은 프로필이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸 및 -OH로 임의로 치환된 -CH2-시클로부틸이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00023
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00024
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00025
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00026
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00027
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00028
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00029
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00030
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00031
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00032
이다.
일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00033
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00034
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00035
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00036
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00037
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00038
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00039
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00040
이다. 일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00041
이다. 특정 실시양태에서, R1은 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 수소이다. 일부 실시양태에서, R2는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 펜틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 헥실이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로펜틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로부틸메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로펜틸메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로헥실메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로부틸에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로펜틸에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로헥실에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 -CH2-시클로프로필 또는 -CH2-시클로부틸이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸 및 -OH로 임의로 치환된 -CH2-시클로부틸이다.
일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 1개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 2개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 3개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 4개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 5개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-3개의 플루오린 원자로 치환된 메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 트리플루오로메틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 2,2,2-트리플루오로에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 3,3,3-트리플루오로프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 4,4,4-트리플루오로부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 펜틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 5,5,5-트리플루오로펜틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 헥실이다. 일부 실시양태에서, R2는 6,6,6-트리플루오로헥실이다. 특정 실시양태에서, R2는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, 각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, X1 및 X2는 둘 다 N이다. 일부 실시양태에서, X1은 N이고, X2는 CH이다. 일부 실시양태에서, X1은 CH이고, X2는 N이다. 일부 실시양태에서, X1 및 X2는 둘 다 CH이다. 일부 실시양태에서, X1은 N이고, X2는 C(R4)이다. 일부 실시양태에서, X1은 C(R4)이고, X2는 N이다. 일부 실시양태에서, X1 및 X2는 둘 다 C(R4)이다. 특정 실시양태에서, X1 및 X2는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, R3은 할로겐, -CN, -R 또는 -OR이고, 각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
일부 실시양태에서, R3은 수소이다. 일부 실시양태에서, R3은 할로겐이다. 일부 실시양태에서, R3은 -CN이다. 일부 실시양태에서, R3은 C1-3 지방족이다. 일부 실시양태에서, R3은 메틸이다. 일부 실시양태에서, R3은 에틸이다. 일부 실시양태에서, R3은 프로필이다. 일부 실시양태에서, R3은 -OR이다. 일부 실시양태에서, R3은 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, R3은 -OCH2CH3이다. 일부 실시양태에서, R3은 -OCH2CH2CH3이다. 특정 실시양태에서, R3은 -OCH(F)2이다.
일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00042
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00043
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00044
이다. 특정 실시양태에서, R3은 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, 각각의 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R,
Figure pct00045
Figure pct00046
이다.
일부 실시양태에서, R4는 수소이다. 일부 실시양태에서, R4는 할로겐이다. 일부 실시양태에서, R4는 -CN이다. 일부 실시양태에서, R4는 C1-6 지방족 또는 -OR이다. 일부 실시양태에서, R4는 -OCH3이다. 일부 실시양태에서, R4는 에틸이다.
일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00047
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00048
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00049
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00050
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00051
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00052
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00053
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00054
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00055
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00056
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00057
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00058
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00059
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00060
이다. 일부 실시양태에서, R4는
Figure pct00061
이다. 특정 실시양태에서, R4는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의된 바와 같이, 고리 A는
Figure pct00062
이며, 여기서 고리 A는 플루오린, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00063
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00064
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00065
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00066
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00067
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00068
Figure pct00069
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00070
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00071
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00072
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00073
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00074
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00075
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00076
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00077
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00078
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00079
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00080
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00081
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00082
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00083
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00084
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00085
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00086
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00087
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00088
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00089
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00090
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00091
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00092
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00093
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00094
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00095
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00096
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00097
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00098
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00099
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00100
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00101
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00102
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00103
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00104
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00105
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00106
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00107
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00108
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00109
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00110
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00111
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00112
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00113
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00114
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00115
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00116
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00117
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00118
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00119
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00120
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00121
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00122
이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00123
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00124
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00125
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00126
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00127
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00128
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00129
이다. 특정 실시양태에서, 고리 A는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, 고리 B는
Figure pct00130
이다. 일부 실시양태에서, 고리 B는
Figure pct00131
이다. 일부 실시양태에서, 고리 B는
Figure pct00132
이다. 일부 실시양태에서, 고리 B는
Figure pct00133
이다. 일부 실시양태에서, 고리 B는
Figure pct00134
이다. 특정 실시양태에서, 고리 B는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, R5는 수소 또는 할로겐이다. 일부 실시양태에서, R5는 수소이다. 일부 실시양태에서, R5는 할로겐이다. 일부 실시양태에서, R5는 플루오로이다. 특정 실시양태에서, R5는 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
상기 정의되고 본원에 기재된 바와 같이, n은 0-4이다. 일부 실시양태에서, n은 0이다. 일부 실시양태에서, n은 1이다. 일부 실시양태에서, n은 2이다. 일부 실시양태에서, n은 3이다. 일부 실시양태에서, n은 4이다. 특정 실시양태에서, n은 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 수소이고, 고리 A는
Figure pct00135
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 2,2,2-트리플루오로에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, 고리 A는
Figure pct00136
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 N이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00137
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 수소이고, 고리 A는
Figure pct00138
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 N이고, R3은 수소이고, 고리 A는
Figure pct00139
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 2,2,2-트리플루오로에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, 고리 A는
Figure pct00140
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 N이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00141
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 2,2,2-트리플루오로에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, 고리 A는
Figure pct00142
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 N이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00143
이다. 일부 실시양태에서 R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, 고리 A는
Figure pct00144
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 에틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 수소이고, 고리 A는
Figure pct00145
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00146
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00147
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00148
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00149
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00150
이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이고, R2는 시클로프로필메틸이고, X1은 N이고, X2는 CH이고, R3은 -OCH3이고, 고리 A는
Figure pct00151
이다. 일부 실시양태에서, 고리 A는
Figure pct00152
이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 하기 표 1에 도시된 것들로부터 선택된다.
표 1. 화학식 I의 예시적인 화합물
Figure pct00153
Figure pct00154
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특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 및 본원에 기재된 임의의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 표 1에 도시된 바와 같은 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 및 본원에 기재된 임의의 화합물을 단리된 형태로 제공한다.
4. 용도, 제제 및 투여
제약상 허용되는 조성물
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 유도체 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물 중 화합물의 양은 생물학적 샘플 또는 환자에서 PAD4를 측정가능하게 억제하는 데 효과적인 정도이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물 중 화합물의 양은 생물학적 샘플 또는 환자에서 PAD4를 측정가능하게 억제하는 데 효과적인 정도이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 이러한 조성물을 필요로 하는 환자에 대한 투여를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 환자에 대한 경구 투여를 위해 제제화된다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 용어 "환자"와 상호교환가능하게 사용되고, 동물, 바람직하게는 포유동물을 의미한다. 일부 실시양태에서, 대상체 또는 환자는 인간이다. 다른 실시양태에서, 대상체 (또는 환자)는 수의학적 대상체 (또는 환자)이다. 일부 실시양태에서, 수의학적 대상체 (또는 환자)는 개, 고양이 또는 말 대상체이다.
용어 "제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클"은 그와 함께 제제화되는 화합물의 약리학적 활성을 파괴하지 않는 비-독성 담체, 아주반트 또는 비히클을 지칭한다. 본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충제 물질 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모 지방을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 조성물은 경구로, 비경구로, 흡입 스프레이에 의해, 국소로, 직장으로, 비강으로, 협측으로, 질로 또는 이식된 저장소를 통해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활막내, 흉골내, 척수강내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 경구로, 복강내로 또는 정맥내로 투여된다. 본 발명의 조성물의 멸균 주사가능한 형태는 수성 또는 유질 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 관련 기술분야에 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 비-독성 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용된다.
이 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 지방산, 예컨대 올레산 및 그의 글리세리드 유도체는 주사제의 제조에 유용하고, 특히 그의 폴리옥시에틸화된 버전의 천연 제약상-허용되는 오일, 예컨대 올리브 오일 또는 피마자 오일도 유용하다. 이들 오일 용액 또는 현탁액은 또한 에멀젼 및 현탁액을 포함한 제약상 허용되는 투여 형태의 제제화에 통상적으로 사용되는 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제, 예컨대 카르복시메틸 셀룰로스 또는 유사한 분산제를 함유할 수 있다. 다른 통상적으로 사용되는 계면활성제, 예컨대 트윈(Tween), 스팬(Span) 및 다른 유화제, 또는 제약상 허용되는 고체, 액체 또는 다른 투여 형태의 제조에 통상적으로 사용되는 생체이용률 증진제가 또한 제제화 목적을 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 제약상 허용되는 조성물은, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 경구로 허용되는 투여 형태로 경구로 투여될 수 있다. 경구 사용을 위한 정제의 경우에, 통상적으로 사용되는 담체는 락토스 및 옥수수 전분을 포함한다. 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘이 또한 전형적으로 첨가된다. 캡슐 형태로의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 락토스 및 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁액이 경구 사용에 요구되는 경우에, 활성 성분은 유화제 및 현탁화제와 조합된다. 원하는 경우에, 특정 감미제, 향미제 또는 착색제가 또한 첨가될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 직장 투여를 위한 좌제 형태로 투여될 수 있다. 이들은 실온에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이며, 따라서 직장에서 용융되어 약물을 방출하는 적합한 비-자극성 부형제와 작용제를 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.
본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 또한, 특히 눈, 피부 또는 하부 장관의 질환을 포함한 치료 표적이 국소 적용에 의해 용이하게 접근가능한 부위 또는 기관을 포함하는 경우에 국소로 투여될 수 있다. 적합한 국소 제제가 각각의 이들 부위 또는 기관에 대해 용이하게 제조된다.
하부 장관에 대한 국소 적용은 직장 좌제 제제 (상기 참조) 또는 적합한 관장제 제제로 실시될 수 있다. 국소-경피 패치가 또한 사용될 수 있다.
국소 적용을 위해, 제공된 제약상 허용되는 조성물은 1종 이상의 담체 중에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 연고로 제제화될 수 있다. 본 발명의 화합물의 국소 투여를 위한 담체는 미네랄 오일, 액체 페트롤라툼, 백색 페트롤라툼, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 제공된 제약상 허용되는 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 중에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 로션 또는 크림으로 제제화될 수 있다. 적합한 담체는 미네랄 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜 및 물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
안과 용도를 위해, 제공된 제약상 허용되는 조성물은 보존제 예컨대 벤질알코늄 클로라이드의 존재 또는 부재 하에, 등장성인 pH 조정된 멸균 염수 중 마이크로화 현탁액으로서, 또는 바람직하게는 등장성인 pH 조정된 멸균 염수 중 용액으로서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 안과 용도를 위해, 제약상 허용되는 조성물은 연고로 예컨대 페트롤라툼 중에 제제화될 수 있다.
본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 제약 제제 기술분야에 널리 공지된 기술에 따라 제조되고, 벤질 알콜 또는 다른 적합한 보존제, 생체이용률을 증진시키기 위한 흡수 촉진제, 플루오로카본, 및/또는 다른 통상적인 가용화제 또는 분산제를 사용하여 염수 중 용액으로서 제조될 수 있다.
가장 바람직하게는, 본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 경구 투여를 위해 제제화된다. 이러한 제제는 음식물과 함께 또는 음식물 없이 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 음식물 없이 투여된다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 음식물과 함께 투여된다.
본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 치료될 감염의 중증도에 따라, 인간 및 다른 동물에게 경구로, 직장으로, 비경구로, 수조내로, 질내로, 복강내로, 국소로 (분말, 연고 또는 점적제에 의한 것으로서), 협측으로, 경구 또는 비강 스프레이 등으로서 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 1일에 대상체 체중 기준으로 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 및 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg의 투여량 수준으로 1일 1회 이상 경구로 또는 비경구로 투여되어 목적하는 치료 효과를 얻을 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 활성 화합물 이외에도, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸르푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다. 불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 또한 아주반트 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다.
주사가능한 제제, 예를 들어 멸균 주사가능한 수성 또는 유질 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한, 비독성 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액, 현탁액 또는 에멀젼, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P. 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 지방산 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용된다.
주사가능한 제제는, 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해 또는 분산시킬 수 있는 멸균 고체 조성물 형태에 멸균제를 혼입시킴으로써 멸균될 수 있다.
본 발명의 화합물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터의 화합물의 흡수를 늦추는 것이 종종 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이때, 화합물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 따라 달라지며, 이는 또한 결정 크기 및 결정질 형태에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여된 화합물 형태의 지연된 흡수는 화합물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다. 주사가능한 데포 형태는 생분해성 중합체 예컨대 폴리락티드-폴리글리콜리드 중 화합물의 마이크로캡슐화 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 화합물 대 중합체의 비 및 사용되는 특정한 중합체의 성질에 따라, 화합물 방출의 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 주사가능한 데포 제제는 또한 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼 중에 화합물을 포획함으로써 제조된다.
직장 또는 질 투여를 위한 조성물은 바람직하게는, 주위 온도에서는 고체이지만 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되고 활성 화합물을 방출하는 적합한 비-자극성 부형제 또는 담체 예컨대 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 좌제 왁스와 본 발명의 화합물을 혼합함으로써 제조될 수 있는 좌제이다.
경구 투여를 위한 고체 투여 형태는 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립을 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 화합물은 적어도 1종의 불활성, 제약상 허용되는 부형제 또는 담체 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘 및/또는 a) 충전제 또는 증량제 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산, b) 결합제 예컨대, 예를 들어, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리디논, 수크로스 및 아카시아, c) 함습제 예컨대 글리세롤, d) 붕해제 예컨대 한천--한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨, e) 용해 지연제 예컨대 파라핀, f) 흡수 촉진제 예컨대 4급 암모늄 화합물, g) 습윤제 예컨대, 예를 들어, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트, h) 흡수제 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토, 및 i) 윤활제 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 및 그의 혼합물과 혼합된다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 투여 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제 예컨대 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐 내의 충전제로서 사용될 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘 예컨대 장용 코팅 및 제약 제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 불투명화제를 임의로 함유할 수 있고, 또한 활성 성분(들)을 단독으로, 또는 우선적으로, 장관의 특정 부분에서, 임의로, 지연된 방식으로 방출하는 조성을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 부형제 예컨대 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐 내의 충전제로서 사용될 수 있다.
활성 화합물은 또한 상기 언급된 바와 같은 1종 이상의 부형제를 사용하여 마이크로캡슐화된 형태일 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘 예컨대 장용 코팅, 방출 제어 코팅, 및 제약 제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 고체 투여 형태에서 활성 화합물은 적어도 1종의 불활성 희석제 예컨대 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합될 수 있다. 이러한 투여 형태는 또한 통상적인 실시와 같이, 불활성 희석제 이외의 추가의 물질, 예를 들어 윤활제 및 다른 정제화 보조제 예컨대 스테아르산마그네슘 및 미세결정질 셀룰로스를 포함할 수 있다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 투여 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다. 이들은 불투명화제를 임의로 함유할 수 있고, 또한 활성 성분(들)을 단독으로, 또는 우선적으로, 장관의 특정 부분에서, 임의로, 지연된 방식으로 방출하는 조성을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다.
본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 또는 패치를 포함한다. 활성 성분은 필요할 수 있는 경우에, 멸균 조건 하에 제약상 허용되는 담체 및 임의의 필요한 보존제 또는 완충제와 혼합된다. 안과용 제제, 점이제 및 점안제는 또한 본 발명의 범주 내인 것으로 고려된다. 추가적으로, 본 발명은 화합물의 신체로의 제어 전달을 제공하는 부가된 이점을 갖는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 투여 형태는 화합물을 적절한 매질 중에 용해 또는 분배함으로써 제조될 수 있다. 흡수 증진제는 또한 피부를 가로지르는 화합물의 유동을 증가시키는 데 사용될 수 있다. 속도는 속도 제어 막을 제공하거나 또는 화합물을 중합체 매트릭스 또는 겔 중에 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
조성물을 단일 투여 형태로 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 본 발명의 화합물의 양은 치료되는 숙주, 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 바람직하게는, 제공된 조성물은 이들 조성물을 받는 환자에게 0.01 - 100 mg/kg 체중/일의 억제제의 투여량이 투여될 수 있도록 제제화되어야 한다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 1종 이상의 다른 치료 화합물과 조합되어 투여될 수 있으며, 가능한 조합 요법은 고정 조합물의 형태, 또는 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 다른 치료 화합물을 교대로 또는 서로 독립적으로 투여하는 형태, 또는 고정된 조합물 및 1종 이상의 다른 치료 화합물의 조합 투여를 취한다. 본 발명의 화합물은 게다가 또는 추가로, 특히 종양 요법을 위해 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 광선요법, 외과적 개입 또는 이들의 조합과 조합되어 투여될 수 있다. 장기 요법이 상기 기재된 바와 같은 다른 치료 전략의 상황에서 보조 요법과 동일하게 가능하다. 다른 가능한 치료는 종양 퇴행 후에 환자의 상태를 유지하기 위한 요법, 또는 심지어 예를 들어 위험이 있는 환자에서의 화학예방 요법이다.
이들 추가의 작용제는 다중 투여 요법의 일부로서 본 발명의 화합물-함유 조성물과 개별적으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 이들 작용제는 단일 조성물로 본 발명의 화합물과 함께 혼합된 단일 투여 형태의 일부일 수 있다. 다중 투여 요법의 일부로서 투여되는 경우, 2종의 활성제는 동시에, 순차적으로, 또는 서로 기간을 두고, 통상적으로는 서로 5시간 이내에 제공될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "조합", "조합된" 및 관련 용어는 본 발명에 따른 치료제의 동시 또는 순차적 투여를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 또 다른 치료제와 함께 개별 단위 투여 형태로 동시에 또는 순차적으로, 또는 단일 단위 투여 형태로 함께 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 추가의 치료제, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클을 포함하는 단일 단위 투여 형태를 제공한다.
단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제 둘 다의 (상기 기재된 바와 같은 추가의 치료제를 포함하는 이들 조성물 중) 양은 치료되는 숙주 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 0.01 - 100 mg/kg 체중/일의 본 발명의 화합물의 투여량이 투여될 수 있도록 제제화되어야 한다.
추가의 치료제를 포함하는 이들 조성물에서, 그 추가의 치료제 및 본 발명의 화합물은 상승작용적으로 작용할 수 있다. 따라서, 이러한 조성물 중 추가의 치료제의 양은 오직 그 치료제만을 이용하는 단독요법에서 필요로 하는 것보다 더 적을 것이다.
본 발명의 조성물에 존재하는 추가의 치료제의 양은 그 치료제를 유일한 활성제로서 포함하는 조성물 중에서 통상적으로 투여될 양 이하일 것이다. 바람직하게는 본원에 개시된 조성물 중 추가의 치료제의 양은 작용제를 유일한 치료 활성제로서 포함하는 조성물에 통상적으로 존재하는 양의 약 50% 내지 100% 범위일 것이다.
또한, 임의의 특정한 환자에 대한 구체적 투여량 및 치료 요법은 사용되는 구체적 화합물의 활성, 연령, 체중, 전반적 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 배출 속도, 약물 조합물, 및 치료 의사의 판단 및 치료될 특정한 질환의 중증도를 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 것임이 이해되어야 한다. 조성물 중 본 발명의 화합물의 양은 또한 조성물 중 특정한 화합물에 따라 달라질 것이다.
화합물 및 제약상 허용되는 조성물의 용도
본원에 기재된 화합물 및 조성물은 일반적으로 PAD4의 억제에 유용하다.
본 발명에서 PAD4의 억제제로서 이용되는 화합물의 활성은 시험관내, 생체내 또는 세포주 내에서 검정될 수 있다. 시험관내 검정은 PAD4의 억제를 결정하는 검정을 포함한다. 본 발명에서 PAD4의 억제제로서 이용되는 화합물을 검정하기 위한 상세한 조건은 하기 실시예에 제시된다. 일부 실시양태에서, 제공된 화합물은 PAD2에 비해 선택적으로 PAD4를 억제한다.
본원에 사용된 용어 "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은 본원에 기재된 바와 같은 질환 또는 장애, 또는 그의 1종 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그의 발병을 지연시키거나, 또는 그의 진행을 억제하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료는 1종 이상의 증상이 발생한 후에 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 치료는 증상의 부재 하에 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료는 증상의 발병 전에 (예를 들어, 증상의 병력에 비추어 및/또는 유전적 또는 다른 감수성 인자에 비추어) 걸리기 쉬운 개체에게 투여될 수 있다. 치료는 또한 증상이 해결된 후에, 예를 들어 그의 재발을 방지 또는 지연시키기 위해 계속될 수 있다.
제공된 화합물은 PAD4의 억제제이고, 따라서 PAD4의 활성과 연관된 1종 이상의 장애를 치료하는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명은 PAD4-매개 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, PAD4-매개 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, PAD4-매개 장애는 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 질환, 상태 또는 장애이다. 일부 실시양태에서, PAD4-매개 장애는 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 및 건선으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 실시양태에서, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애는 류마티스 관절염이다. 추가 실시양태에서, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애는 전신 루푸스이다. 추가 실시양태에서, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애는 혈관염이다. 추가 실시양태에서, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애는 피부 홍반성 루푸스이다. 추가 실시양태에서, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애는 건선이다.
한 실시양태에서, 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 또는 건선의 치료 방법이 제공되며, 방법은 그를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함한다.
한 실시양태에서, 류마티스 관절염의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 류마티스 관절염의 치료 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 전신 루푸스의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 전신 루푸스의 치료 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 혈관염의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 혈관염의 치료 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 피부 홍반성 루푸스의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 피부 홍반성 루푸스의 치료 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 건선의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 치료 유효량의 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 건선의 치료 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, PAD4-매개 장애는 산-유발된 폐 손상, 여드름 (PAPA), 급성 림프구성 백혈병, 급성, 호흡 곤란 증후군, 애디슨병, 부신 증식증, 부신피질 기능부전, 노화, AIDS, 알콜성 간염, 알콜성 간염, 알콜성 간 질환, 알레르겐 유발된 천식, 알레르기성 기관지폐, 아스페르길루스증, 알레르기성 결막염, 탈모증, 알츠하이머병, 아밀로이드증, 근위축성 측삭 경화증, 및 체중 감소, 협심증, 혈관부종, 무한성 외배엽 이형성증-ID, 강직성 척추염, 앞 구역, 염증, 항인지질 증후군, 아프타성 구내염, 충수염, 관절염, 천식, 아테롬성동맥경화증, 아토피성 피부염, 자가면역 질환, 자가면역 간염, 벌 침-유발된 염증, 베체트병, 베체트 증후군, 벨 마비, 베릴륨중독증, 블라우 증후군, 골통, 세기관지염, 화상, 윤활낭염, 암, 심장 비대, 손목 터널 증후군, 이화 장애, 백내장, 뇌 동맥류, 화학적 자극-유발된 염증, 맥락망막염, 만성 심부전, 미숙아 만성 폐 질환, 만성 림프구성 백혈병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 결장염, 복합 부위 통증 증후군, 결합 조직 질환, 각막 궤양, 크론병, 크리오피린-연관 주기성 증후군, 크립토코쿠스증, 낭성 섬유증, 인터류킨-1-수용체 길항제 (DIRA)의 결핍, 피부염, 피부염 내독소혈증, 피부근염, 미만성 내재성 뇌교 신경교종, 자궁내막증, 내독소혈증, 상과염, 적모구감소증, 가족성 아밀로이드성 다발신경병증, 가족성 한랭 두드러기, 가족성 지중해열, 태아 성장 지연, 녹내장, 사구체 질환, 사구체 신염, 통풍, 통풍성 관절염, 이식편-대-숙주 질환, 장 질환, 두부 손상, 두통, 청각 상실, 심장 질환, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쉔라인 자반증, 간염, 유전성 주기성 발열 증후군, 대상 포진 및 단순 포진, HIV-1, 호지킨병, 헌팅턴병, 유리질 막 질환, 고암모니아혈증, 고칼슘혈증, 고콜레스테롤혈증, 회귀열을 동반한 고이뮤노글로불린혈증 D (HIDS), 형성부전성 및 다른 빈혈, 형성부전성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 색소실조증, 감염성 단핵구증, 염증성 장 질환, 염증성 폐 질환, 염증성 신경병증, 염증성 통증, 곤충 교상-유발된 염증, 홍채염, 자극-유발된 염증, 허혈/재관류, 소아 류마티스 관절염, 각막염, 신장 질환, 기생충 감염에 의해 유발된 신장 손상, 기생충 감염에 의해 유발된 신장 손상, 신장 이식 거부 프로필락시스, 렙토스피라증, 백혈병, 뢰플러 증후군, 폐 손상, 폐 손상, 루푸스, 루푸스, 루푸스 신염, 림프종, 수막염, 중피종, 혼합 결합 조직 질환, 머클-웰즈 증후군 (두드러기 난청 아밀로이드증), 다발성 경화증, 근육 소모, 근육 이영양증, 중증 근무력증, 심근염, 균상 식육종, 균상 식육종, 골수이형성 증후군, 근염, 코 부비동염, 괴사성 소장결장염, 신생아 발병 다기관 염증성 질환 (NOMID), 신증후군, 신경염, 신경병리학적 질환, 비-알레르겐 유발된 천식, 비만, 안구 알레르기, 시신경염, 기관 이식, 골관절염, 중이염, 파제트병, 통증, 췌장염, 파킨슨병, 천포창, 심막염, 주기열, 치주염, 복막 자궁내막증, 백일해, 인두염 및 선염 (PFAPA 증후군), 식물 자극-유발된 염증, 폐렴, 폐장염, 폐포자충 감염, 덩굴 옻나무/ 우루시올 오일-유발된 염증, 결절성 다발동맥염, 다발연골염, 다낭성 신장 질환, 다발근염, 건선, 건선, 건선, 건선, 정신사회적 스트레스 질환, 폐 질환, 폐고혈압, 폐 섬유증, 괴저성 농피증, 화농성 멸균 관절염, 신질환, 망막 질환, 류마티스성 심장염, 류마티스성 질환, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 지루, 패혈증, 중증 통증, 겸상 적혈구, 겸상 적혈구성 빈혈, 실리카-유발된 질환, 쇼그렌 증후군, 피부 질환, 수면 무호흡, 고형 종양, 척수 손상, 스티븐스-존슨 증후군, 졸중, 지주막하 출혈, 일광화상, 측두 동맥염, 건활막염, 혈소판감소증, 갑상선염, 조직 이식, TNF 수용체 연관 주기성 증후군 (TRAPS), 톡소플라스마증, 이식, 외상성 뇌 손상, 결핵, 제1형 당뇨병, 제2형 당뇨병, 궤양성 결장염, 두드러기, 포도막염 및 베게너 육아종증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 또는 건선의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 전신 루푸스의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈관염의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 피부 홍반성 루푸스의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 건선의 치료에 사용하기 위한 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 또는 건선의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 전신 루푸스의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈관염의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 피부 홍반성 루푸스의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 건선의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서, 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 부적절한 PAD4 활성에 의해 매개되는 장애의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 또는 건선의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 류마티스 관절염의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 전신 루푸스의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 혈관염의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 피부 홍반성 루푸스의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 건선의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 각각의 측면의 모든 특색은 모든 다른 측면에 필요한 변경을 가하여 적용한다.
본원에 기재된 발명이 보다 완전히 이해될 수 있도록, 하기 실시예가 제시된다. 이들 실시예는 단지 예시적 목적을 위한 것이고, 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 되는 것으로 이해되어야 한다.
실시예
하기 실시예에 도시된 바와 같이, 특정 예시적인 실시양태에서, 화합물은 하기 일반적 절차에 따라 제조된다. 일반적 방법이 본 발명의 특정 화합물의 합성을 도시하지만, 하기 일반적 방법 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 방법이 본원에 기재된 바와 같은 모든 화합물 및 각각의 이들 화합물의 하위부류 및 종에 적용될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
방법 A
MET/u-HPLC (저 pH 7분 방법)
칼럼: 페노메넥스 키네텍스(Phenomenex Kinetex)-XB C18, 2.1 mm x 100 mm, 1.7 μm
유량: 0.6 ml/분
이동상: A, 포름산 (수성) 0.1% 및 B, 포름산 (MeCN) 0.1%
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 215 nm (공칭)
구배 시간 (분) - % B
0.00 - 5
5.30 - 100
5.80 - 100
5.82 - 5
방법 B
MET/CR/1600 (고 pH 7분 방법)
칼럼: 페노메넥스 제미니(Phenomenex Gemini) C18, 2.0mmx100mm, 3μm
유량: 0.5ml/분
이동상:
A: HPLC 등급 물 pH10 중 2mM 중탄산암모늄
B: HPLC 등급 MeCN
주입 부피: 3 μl
온도: 50℃
검출: 215nm
구배 시간: (분) - %B
0.0 - 5
5.50 - 100
5.90 - 100
5.92 - 5
9.00 - 5
방법 C
METCR 1416 (저 pH 시마즈(Shimadzu) 7분 방법)
칼럼: 워터스 아틀란티스(Waters Atlantis) dC18, 2.1mmx100mm, 3μm 칼럼
유량: 0.6 ml/분
이동상: A, 포름산 (수성) 0.1% 및 B, 포름산 (아세토니트릴) 0.1%
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 215 nm (공칭)
구배 시간 (분) - % B
0.00 - 5
5.00 - 100
5.40 - 100
5.42 - 5
방법 D
METCR 1410 (저 pH 시마즈 2분 방법)
칼럼: 키네텍스 코어-쉘(Kinetex Core-Shell) C18, 2.1mmx50mm, 5μm 칼럼
유량: 1.2 ml/분
이동상: A, 포름산 (수성) 0.1% 및 B, 포름산 (아세토니트릴) 0.1%
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 215 nm (공칭)
구배 시간 (분) - % B
0.00 - 5
1.20 - 100
1.30 - 100
1.31 - 5
방법 E:
키랄 HPLC 정제용 방법
칼럼: 키랄팩(Chiralpak) IC 250mm x 4.6mm, 5μm 칼럼
유량: 15 ml/분
이동상: 35% 에탄올:65% CO2
샘플 희석제: 에탄올
온도: 40℃
검출: 215 nm (공칭)
방법 F:
키랄 순도 분석 방법
칼럼: 키랄팩 IC 250mm x 4.6mm, 5μm 칼럼
유량: 4 ml/분
주입 부피: 10 μL
온도: 40℃
검출: 215 nm
등용매 조건 40% 에탄올:60% CO2
방법 G
키랄 HPLC 정제용 방법
칼럼: 엑스셀렉트(XSelect) CSH C18 50x2.1 mm, 1.7um
유량: 0.6 ml/분
이동상: 물 (0.1% v/v TFA), MecN (0.1% v/v TFA)
샘플 희석제: 에탄올
온도: 40℃
검출: 240 nm (공칭)
방법 H
MET/u-HPLC (고 pH MS16 7분 방법)
칼럼: 워터스 UPLC CSH C18, 2.1mmx100mm 5μm 칼럼
유량: 0.6 ml/분
이동상: A, pH 10으로 변형된 2mM 중탄산암모늄, 수산화암모늄 (수성) 함유, 및 B, 아세토니트릴
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 215 nm (공칭)
구배 시간 (분) - % B
0.00 - 5
5.30 - 100
5.80 - 100
5.82 - 5
방법 I:
키랄 순도 분석 방법
칼럼: 룩스(Lux) C4 (21.2mm x 250mm, 5um)
유량: 21 ml/분
주입 부피: 350 μL
검출: 222 nm
등용매 조건: MeOH (0.1% v/v NH3)
방법 J
MET/CR/0990 (고 pH 3분 방법)
칼럼: 페노메넥스 제미니 C18, 2.0mmx100mm, 3μm
유량: 1ml/분
이동상: A, HPLC 등급 물 pH10 중 2mM 중탄산암모늄
B HPLC 등급 MeCN
주입 부피: 3 μl
온도: 60℃
검출: 215nm
구배 시간: (분) - %B
0.0- 1
1.80 - 100
2.10 - 100
2.30 - 1
방법 K:
키랄 HPLC 정제용 방법
칼럼: Amy-C 20mm x 250mm, 5um
유량: 21 ml/분
이동상: 4:6 헵탄:에탄올 (0.1% v/v 암모니아)
샘플 희석제: 메탄올
온도: 주위
검출: 254 nm
방법 L:
키랄 순도 분석 방법
칼럼: Amy-C 4.6mm x 250mm, 5um
유량: 21 ml/분
주입 부피: 1.0 μL
온도: 주위
UV 검출: 254 nm
등용매 조건 4:6 헵탄:에탄올 (0.1% v/v 암모니아)
본 발명의 특정 화합물을 하기 반응식 1에 따라 제조하였다.
반응식 1
Figure pct00191
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0076-002 (EOAI3428370), I-13의 합성.
Figure pct00192
메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AR0065-002 - 단계 1
DMF (10 ml) 중 메틸 4-클로로-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 (CAS 63603-09-8, 2.0 g, 8.14 mmol)의 교반 용액에 K2CO3 (99%, 1.37 g, 9.81 mmol)을 첨가하였다. 이 용액에 메탄아민 히드로클로라이드 (1:1) (0.62 g, 9.18 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브에서 질소 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 조 물질을 진공 하에 농축시키고, DCM (100ml)과 물 (10ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물 (2 x 10ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10ml)으로 추가로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 분말을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (15-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 1.49 g (76%)의 메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AR0065-002를 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.13분, M/z = 241 (M + 1).
메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR0068-002 - 단계 2
질소 하에 에탄올 (100ml) 중 메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (EV-AR0065-002, 1.49 g, 6.20 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (0.18 g, 0.17 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터를 메탄올 (150ml)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 1.21 g (89%)의 메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR0068-002를 연자주색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.63분, M/z = 211 (M + 1).
에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b] 피리딘-2-카르복실레이트 EV-AQ1957-001 - 단계 3
수소화나트륨 (60%, 59 mg, 1.47 mmol)을 DMF (5 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 221675-35-0, 200 mg, 1.05 mmol)의 교반 현탁액에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아이오다이드 (197 mg, 1.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (20ml)와 물 (20ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (1 x 20ml)로 추가로 추출하고, 합한 유기부를 물 (20ml)로 세척하고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 135 mg (57.1%)의 에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b] 피리딘-2-카르복실레이트 EV-AQ1957-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.18분, M/z = 219 (M + 1).
1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AQ1960-001 - 단계 4
THF (2 ml) 중 에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AQ1957-001, 135 mg, 0.62 mmol)의 교반 용액에 물 (2 ml) 중 수산화리튬 (74 mg, 3.09 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1M HCl (3 ml)을 사용하여 산성화시키고, DCM (2 x 5 ml)으로 추출하였다. 합한 유기부를 물로 세척하고, 증발 건조시켜 120 mg (99%)의 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AQ1960-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.92분, M/z = 191 (M + 1).
메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR0070-003 - 단계 5
DMF (2ml) 중 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AQ1960-001, 120 mg, 0.63 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (116 μl, 0.70 mmol)에 이어서 HATU (236 mg, 0.62 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 (EV-AR0068-002, 148 mg, 0.70 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 아세트산 (3ml) 중에 용해시키고, 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (25-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 150 mg (63%)의 메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR0070-003을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.18분, M/z = 365 (M + 1).
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR0072-002 - 단계 6
THF (3ml) 중 메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AR0070-003, 150 mg, 0.41 mmol)의 교반 용액에 물 (3ml) 중 수산화리튬 (30 mg, 1.25 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (5ml)에 녹이고, 5N HCl (0.5ml)을 사용하여 교반하면서 산성화시켰다. 생성된 현탁액을 10분 동안 교반한 다음, 침전물을 진공 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 130 mg (89%)의 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR0072-002를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.03분, M/z = 351 (M + 1).
tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002 - 단계 7
2:1 DMSO/MeCN (4.5ml) 중 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AR0072-002, 130 mg, 0.37 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (65 μl, 0.39 mmol) 및 HATU (148 mg, 0.39 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, tert-부틸 옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (CAS 949559-11-9, 88 mg, 0.39 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 3:2 MeCN/물 (1.5ml)로 희석하고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 142 mg (81%)의 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 3.41분, M/z = 559 (M + 1).
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0076-002 (EOAI3428370), I-13 - 단계 8
메탄올 (1ml) 중 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0074-002, 20 mg, 0.04 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산 중 4M HCl (0.5 ml)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (4ml)로부터 동결-건조시켜 13.4 mg (75%)의 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AR0076-002, I-13을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.80분, M/z = 459 (M + 1).
tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-001, 및 tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-002를 수득하기 위한 키랄 HPLC - 단계 9
107mg의 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002를 에탄올 중에 용해시킨 다음, 키랄 HPLC (방법 E)에 의해 정제하여 46.6 mg (43.6%)의 tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-001 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) 및 36.8 mg (33.4%)의 tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-002 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨)를 수득하였다.
EV-AR0090-001, 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 6.30분 (방법 F)
EV-AR0090-002, 키랄 순도 (UV, 254nm): 97%, 체류 시간: 9.96분 (방법 F)
5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0091-002 (EOAI3432499, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-3 - 단계 8
tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0090-001, 46 mg, 0.08 mmol)를 단계 8, 반응식 1에서와 같이 처리하여 40 mg (97%)의 5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AR0091-002, I-3을 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.83분, M/z = 459 (M + 1).
5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0092-002 (EOAI3432500, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-14 - 단계 8
tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0090-002, 36.8 mg, 0.07 mmol)를 단계 8, 반응식 1에서와 같이 처리하여 31 mg (92.7%)의 5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0092-002, I-14를 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.82분, M/z = 459 (M + 1).
반응식 2
Figure pct00193
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 EV-AS1585-001 (EOAI3436357), I-62의 합성
Figure pct00194
1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AR3164-001 - 단계 1
DMF (50 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 221675-35-0, 4.40 g, 23.1 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 1.05 g, 26.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 실온에서 45분 동안 교반하고, (브로모메틸)시클로프로판 (CAS 7051-34-5, 2.70 ml, 27.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 THF (40 ml) 중에 현탁시키고, 5M 수성 수산화나트륨 (22 ml, 110 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 추가의 THF (20 ml) 및 5M 수성 수산화나트륨 (22 ml, 110 mmol)을 첨가하고, 반응물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 조 물질을 진공 하에 농축시키고, 물 (10 ml) 및 5M 수성 염산 (100 ml)을 첨가하였다. 고체를 여과하고, 물 (2 x 100 ml)로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 3.46 g (69.2%)의 1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AR3164-001을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.03분, M/z = 217 (M + 1).
메틸 4-(메틸아미노)-3-니트로벤조에이트 EV-AR3152-001 - 단계 2
DMF (50 ml) 중 메틸 4-플루오로-3-니트로벤조에이트 (CAS 329-59-9, 5.00 g, 25.1 mmol)의 교반 용액에 메탄아민 히드로클로라이드 (1:1) (2.00 g, 29.6 mmol) 및 탄산칼륨 (4.50 g, 32.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 조 물질을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc (350 ml)와 1N 수성 염산 (250 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 1N 수성 염산 (150 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (100 ml)으로 추가로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 5.30 g (정량적)의 메틸 4-(메틸아미노)-3-니트로벤조에이트 EV-AR3152-001을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.07분, M/z = 211 (M + 1).
메틸 3-아미노-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR3155-001 - 단계 3
질소 하에 에탄올 (100 ml) 중 메틸 4-(메틸아미노)-3-니트로벤조에이트 (EV-AR3152-001, 5.30 g, 25.2 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (1.30 g, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 수소 분위기 하에 두고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올 (100 ml)로 희석하고, 규조토를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 진공 하에 여과하였다. 필터를 메탄올 (3 x 50 ml)로 세척하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 4.39g (96.6%)의 메틸 3-아미노-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR3155-001을 갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.75분, M/z = 181 (M + 1).
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR3167-001 - 단계 4
건조 DMF (40 ml) 중 1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AR3164-001, 2.20 g, 10.2 mmol)의 용액에 HATU (4.95 g, 12.8 mmol) 및 DIPEA (2.25 ml, 12.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 메틸 3-아미노-4-(메틸아미노)벤조에이트 (EV-AR3155-001, 2.02 g, 11.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 아세트산 중에 용해시키고, 80℃에서 2시간 동안, 이어서 85℃에서 30분 동안, 이어서 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 3.08 g (83.2%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR3167-001을 분홍색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.20분, M/z = 361 (M + 1).
2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR3168-002 - 단계 5
메탄올 (60 ml) 중 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AR3167-001, 3.08 g, 8.46 mmol)의 현탁액에 2M 수성 수산화나트륨 (30 ml, 60.0 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 물 (50 ml)에 이어서 2M 수성 HCl을 pH 3이 달성될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 소결을 통해 여과하였다. 고체를 물 (2 x 50 ml)로 세척하고, 64시간 동안 공기 건조시켜 1.81g (61.2%)의 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR3168-001을 베이지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.05분, M/z = 347 (M + 1). 여과물을 침전물이 형성되기 시작할 때까지 2M 수성 HCl의 첨가에 의해 추가로 산성화시켰다. 혼합물을 1시간 동안 정치되도록 하고, 소결을 통해 여과하였다. 고체를 물 (2 x 20 ml)로 세척하고, 진공 하에 3시간 동안 공기 건조시켜 460 mg (15.7%)의 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR3168-002를 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.06분, M/z = 347 (M + 1).
벤질 (3S,4R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-4-메톡시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AT1700-001 - 단계 6
질소 하에 0℃에서 무수 THF (10 ml) 중 벤질 (3S,4R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (EV-AQ1997-001, WO2014/015905에서와 같이 합성됨, 450 mg, 1.28 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 62 mg, 1.54 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (83.94 μl, 1.35 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄 (2 ml)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (50 ml)과 DCM (50 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 추가로 DCM (2 x 50 ml)으로 추출하고, 합한 유기부를 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 248 mg (52.9%)의 벤질 (3S,4R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-4-메톡시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AT1700-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.29분, M/z = 387 (M + 23).
tert-부틸 N-[(3S,4R)-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT1701-001 - 단계 7
질소 하에 에탄올 (10 ml) 중 벤질 (3S,4R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-4-메톡시피페리딘-1-카르복실레이트 (EV-AT1700-001, 235 mg, 0.64 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (34 mg, 0.03 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 하에 두고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터를 에탄올 (20 ml)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 135 mg (68.0%)의 tert-부틸 N-[(3S,4R)-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT1701-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.79분, M/z = 231 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS-1581-001 - 단계 8
DMF (5 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AR3168-002, 150 mg, 0.43 mmol)의 교반 용액에 HATU (197.6 mg, 0.52 mmol)에 이어서 DIPEA (0.15 ml, 0.87 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, tert-부틸 N-[(3S,4R)-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AT1701-001, 99.7 mg, 0.43 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM (30 ml)과 포화 수성 탄산수소나트륨 (30 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM (20 ml)으로 추출하고, 합한 유기부를 물 (20 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (20 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 205 mg (82.9%)의 tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-001을 백색 결정질 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 3.36분, M/z = 559 (M + 1).
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 EV-AS1585-001 (EOAI3436357) I-62 - 단계 9
DCM (2 ml) 중 tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AS1581-001, 30 mg, 0.05 mmol)의 교반 용액에 트리플루오로아세트산 (1 ml, 13.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 질소의 스트림 하에 제거하고, 잔류물을 아세토니트릴:물 (1:1, 4 ml)로부터 동결건조시켜 9.6 mg (96.3%)의 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 트리플루오로아세트산 EV-AS1585-001, I-62를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.86분, M/z = 459 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-002 및 tert-부틸 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-003을 수득하기 위한 키랄 HPLC - 단계 10
90.4mg의 tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-001을 메탄올 중에 용해시킨 다음, 키랄 HPLC (방법 K)에 의해 정제하여 36.2 mg의 tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-002 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) 및 34.4 mg의 tert-부틸 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AS1581-003 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨)을 수득하였다.
EV-AS1581-002 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 7.58분 (방법 L)
EV-AS1581-003 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 10.07분 (방법 L)
(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 EV-AS1592-001 (EOAI3438020, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-64 - 단계 9
tert-부틸 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AS1581-002, 36.2 mg, 0.07 mmol)를 단계 9, 반응식 1에서와 같이 처리하여 37.1 mg (64.6%)의 (3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 트리플루오로아세트산 EV-AS1592-001, I-64를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.86분, M/z = 459 (M + 1).
(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 EV-AS1593-001 (EOAI3437979, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-65 - 단계 9
tert-부틸 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AS1581-003, 34.4 mg, 0.06 mmol)를 단계 9, 반응식 1에서와 같이 처리하여 33.6 mg (94.3%)의 (3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-메톡시피페리딘-3-아민 트리플루오로아세트산 EV-AS1593-001, I-65를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.86분, M/z = 459 (M + 1).
5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-5-페닐-1H-피롤-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AS5709-003 (EOAI3434977) I-116 및 5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-5-페닐-1H-피롤-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AS5710-003 (EOAI3434978) I-117을 반응식 2.1에 기재된 메틸 5-페닐-1H-피롤-2-카르복실레이트 EV-AR0054-002의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 2.1
Figure pct00195
톨루엔 (10 ml) 및 메탄올 (3 ml) 중 5-페닐-1H-피롤-2-카르복실산 (CAS 6636-06-2, 500 mg, 2.67 mmol)의 교반 용액에 헥산 (2 ml) 중 2M (디아조메틸)(트리메틸)실란을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 질소 하에 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 아세트산 (1 ml)을 첨가하고, 혼합물을 진공 하에 농축시켜 530 mg (99%)의 메틸 5-페닐-1H-피롤-2-카르복실레이트 (EV-AR0054-002)를 연황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 202 (M + 1).
3-[(2-{5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)메틸]-1-메틸시클로부탄-1-올 EV-AU7275-001 (EOAI3455096) I-110을 반응식 2.2에 기재된 에틸 1-[(3-히드록시-3-메틸시클로부틸)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU7265-001의 합성을 통해 반응식 1에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 2.2
Figure pct00196
3-(히드록시메틸)-1-메틸시클로부탄-1-올 EV-AU7264-001 - 단계 1
THF (30 ml) 중 3-히드록시-3-메틸시클로부탄카르복실산 (CAS 16286-86-5, 950 mg, 7.30 mmol)의 교반 용액에 BH3.Me2S (4.96 ml, 9.93 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 무수 MeOH (20 ml)로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 건조되도록 하여 200 mg (23.2%)의 3-(히드록시메틸)-1-메틸시클로부탄-1-올 EV-AU7264-001을 무색 오일로서 수득하였다.
1-[(3-히드록시-3-메틸시클로부틸)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU7265-001 - 단계 2
질소의 분위기 하에 건조 THF (10 ml) 중 DIAD (1.10 ml, 5.26 mmol)의 교반 용액에 -20℃에서 THF (10 ml) 중 트리페닐포스핀 (1.39 g, 5.26 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, THF (10 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 221675-35-0, 500 mg, 2.63 mmol)의 용액을 첨가하였다. -20℃에서의 교반을 추가의 30분 동안 계속하였다. 이 기간 후에 THF (5 ml) 중 3-(히드록시메틸)-1-메틸시클로부탄-1-올 (EV-AU7264-001, 458 mg, 3.94 mmol)의 용액을 -20℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (5-80% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 200 mg (23.2%)의 에틸 1-[(3-히드록시-3-메틸시클로부틸)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU7265-001을 연황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.10분, M/z = 289 (M + 1).
N-(2-{5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-2-일}-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)아세트아미드 EV-AT0096-001 (EOAI3447170) I-69를 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성된 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[4-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0086-001로부터 출발하여 반응식 2.3에 따라 수득된 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-아세트아미도-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0094-001의 Boc-탈보호로부터 수득하였다:
반응식 2.3
Figure pct00197
tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-[(디페닐메틸리덴)아미노]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0090-001 - 단계 1
밀봉된 튜브 내의 톨루엔 (4.0 ml) 중 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[4-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AT0086-001, 150 mg, 0.24 mmol), 1,1-디페닐메탄이민 (53.2 mg, 0.29 mmol), Pd2dba3 (5.6 mg, 0.006 mmol), BINAP (11.4 mg, 0.018 mmol) 및 Cs2CO3 (111.5 mg, 0.34 mmol)의 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 세척하면서 규조토를 통해 여과하였다. 여과물을 증발 건조시키고, 나머지 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 128 mg (73.2%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-[(디페닐메틸리덴)아미노]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0090-001을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.38분, M/z = 708 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[4-아미노-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0092-001 - 단계 2
히드록실아민 히드로클로라이드 (1:1) (58.3 mg, 0.839 mmol) 및 NaOAc (90 mg, 1.09 mmol)를 MeOH (8 ml) 중 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-[(디페닐메틸리덴)아미노]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AT0090-001, 120 mg, 0.168 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 86 mg (94.3%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[4-아미노-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0092-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.95분, M/z = 544 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-아세트아미도-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0094-001 - 단계 3
DCM (4 ml) 중 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[4-아미노-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AT0092-001, 80 mg, 0.15 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산 무수물 (18 mg, 0.18 mmol) 및 트리에틸아민 (30 mg, 0.29 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간에 이어서 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 82 mg (95.1%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-아세트아미도-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AT0094-001을 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.09분, M/z = 586 (M + 1).
{5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-일}메탄올 EV-AV9647-001 (EOAI3455579) I-128을 반응식 2.4에 기재된 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(히드록시메틸)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9641-002의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메탄술포닐-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV9654-001 (EOAI3455786) I-131을 반응식 2.4에 기재된 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메탄술포닐-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9652-001의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 2.4
Figure pct00198
tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(히드록시메틸)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9641-002 - 단계 1
-78℃에서 무수 THF (5.0 ml) 중 tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-브로모-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV9639-001, 50 mg, 0.08 mmol)의 교반 용액에 n-부틸리튬 (헥산 중 1.6M, 0.11 ml, 0.17 mmol)을 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 10분 동안 교반하고, 무수 DMF (0.01 ml, 0.16 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반하고, 1시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 염화암모늄 용액 (1 ml)을 첨가하였다. 2상 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 층을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (2 x 3 ml)로 재추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 0℃에서 메탄올 (5 ml) 중에 용해시키고, 수소화붕소나트륨 (6 mg, 0.16 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 물 (2 ml)의 첨가에 의해 켄칭하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (5 ml)와 물 (2 ml) 사이에 분배하고, 수성 층을 추가로 EtOAc (2 x 2 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 20 mg (43%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(히드록시메틸)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9641-002를 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.10분, M/z = 559 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메탄술포닐-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9652-001 - 단계 2
질소의 분위기 하에 압력 튜브에 트리플산구리 (II) (45 mg, 0.12 mmol), 소듐 메탄술피네이트 (25 mg, 0.25 mmol) 및 N,N'-디메틸에탄-1,2-디아민 (0.03 ml, 0.26 mmol) 및 DMSO (2.0 ml)를 첨가하였다. 진청색 반응물을 실온에서 5분 동안 교반하고, tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-브로모-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV9639-001, 75 mg, 0.12 mmol)를 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 120℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응물을 물 (15 ml)로 희석하고, EtOAc (2 x 10 ml)로 추출하였다. 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 20 mg (27%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메탄술포닐-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9652-001을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 1.18분, M/z = 607 (M + 1).
반응식 3
Figure pct00199
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13의 합성
Figure pct00200
메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AR0065-002 - 단계 1
DMF (10 ml) 중 메틸 4-클로로-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 (CAS 63603-09-8, 2.00 g, 8.14 mmol)의 교반 용액에 K2CO3 (99%, 1.37 g, 9.81 mmol)을 첨가하였다. 이 용액에 메탄아민 히드로클로라이드 (1:1) (0.62 g, 9.18 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 질소 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 조 물질을 진공 하에 농축시키고, DCM (100ml)과 물 (10ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물 (2 x 10ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10ml)으로 추가로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 분말을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (15-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 1.49 g (76%)의 메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AR0065-002를 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.13분, M/z = 241 (M + 1).
메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR0068-002 - 단계 2
질소 하에 에탄올 (100ml) 중 메틸 3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (EV-AR0065-002, 1.49 g, 6.20 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (0.18 g, 0.17 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터를 메탄올 (150ml)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 1.21 g (89%)의 메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR0068-002를 연자주색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.63분, M/z = 211 (M + 1).
에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AQ1957-001 - 단계 3
수소화나트륨 (60%, 59 mg, 1.47 mmol)을 DMF (5 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 221675-35-0, 200 mg, 1.05 mmol)의 교반 현탁액에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 에틸 아이오다이드 (197 mg, 1.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (20ml)와 물 (20ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (1 x 20ml)로 추가로 추출하고, 합한 유기부를 물 (20ml)로 세척하고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 135 mg (57.1%)의 에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AQ1957-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.18분, M/z = 219 (M + 1).
1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AQ1960-001 - 단계 4
THF (2 ml) 중 에틸 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AQ1957-001, 135 mg, 0.62 mmol)의 교반 용액에 물 (2 ml) 중 수산화리튬 (74 mg, 3.09 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 2.5시간 동안 교반하고, 1M HCl (3 ml)을 사용하여 산성화시키고, DCM (2 x 5 ml)으로 추출하였다. 합한 유기부를 물로 세척하고, 증발 건조시켜 120 mg (99%)의 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AQ1960-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.92분, M/z = 191 (M + 1).
메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR0070-003 - 단계 5
DMF (2ml) 중 1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AQ1960-001, 120 mg, 0.63 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (116 μl, 0.70 mmol)에 이어서 HATU (236 mg, 0.62 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 (EV-AR0068-002, 148 mg, 0.70 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 아세트산 (3ml) 중에 용해시키고, 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (25-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 150 mg (63%)의 메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AR0070-003을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.18분, M/z = 365 (M + 1).
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR0072-002 - 단계 6
THF (3ml) 중 메틸 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AR0070-003, 150 mg, 0.41 mmol)의 교반 용액에 물 (3ml) 중 수산화리튬 (30 mg, 1.25 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (5ml)에 녹이고, 5N HCl (0.5ml)을 사용하여 교반하면서 산성화시켰다. 생성된 현탁액을 10분 동안 교반한 다음, 침전물을 진공 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 130 mg (89%)의 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AR0072-002를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.03분, M/z = 351 (M + 1).
tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002 - 단계 7
2:1 DMSO/MeCN (4.5ml) 중 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AR0072-002, 130 mg, 0.37 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (65 μl, 0.39 mmol) 및 HATU (148 mg, 0.39 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, tert-부틸 옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (CAS 949559-11-9, 88 mg, 0.39 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 3:2 MeCN/물 (1.5ml)로 희석하고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 142 mg (81%)의 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002를 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 3.41분, M/z = 559 (M + 1).
2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0076-002 (EOAI3428370) I-13 - 단계 8
메탄올 (1ml) 중 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0074-002, 20 mg, 0.04 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산 중 4M HCl (0.5 ml)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (4ml)로부터 동결건조시켜 13.4 mg (75%)의 2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AR0076-002, I-13을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.80분, M/z = 459 (M + 1).
tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-001 및 tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-002를 수득하기 위한 키랄 HPLC - 단계 9
107mg의 tert-부틸 6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0074-002를 에탄올 중에 용해시킨 다음, 키랄 HPLC (방법 E)에 의해 정제하여 46.6 mg (43.6%)의 tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]-피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-001 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) 및 36.8 mg (33.4%)의 tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]-피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AR0090-002 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨)를 수득하였다.
EV-AR0090-001 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 6.30분 (방법 F)
EV-AR0090-002 키랄 순도 (UV, 254nm): 97%, 체류 시간: 9.96분 (방법 F)
5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0091-002 (EOAI3432499, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-3 - 단계 8
tert-부틸 (3aR,7aS)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0090-001, 46 mg, 0.08 mmol)를 단계 8, 반응식 2에서와 같이 처리하여 40 mg (97%)의 5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AR0091-002, I-3을 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.83분, M/z = 459 (M + 1).
5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0092-002 (EOAI3432500, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-14 - 단계 8
tert-부틸 (3aS,7aR)-6-(2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b] 피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AR0090-002, 36.8 mg, 0.07 mmol)를 단계 8, 반응식 2에서와 같이 처리하여 31 mg (92.7%)의 5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-6-카르보닐]-2-{1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AR0092-002, I-14를 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.82분, M/z = 459 (M + 1).
반응식 3에 대한 특수한 경우
(3S,5S)-5-플루오로-1-(7-메톡시-1-메틸-2-{1-[(1-메틸시클로프로필)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)피페리딘-3-아민 EV-AV3056-001 (EOAI3454078) I-93을 반응식 3.1에 기재된 에틸 1-[(1-메틸시클로프로필)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3682-002의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.1
Figure pct00201
-20℃에서 질소 하에 건조 THF (5 ml) 중 DIAD (0.44 ml, 2.10 mmol)의 용액에 THF (5 ml) 중 트리페닐포스핀 (557 mg, 2.10 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 -20℃에서 THF (7.5 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 394223-02-0, 200 mg, 1.05 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 -20℃에서 추가의 30분 동안 교반하였다. (1-메틸시클로프로필)메탄올 (CAS 2746-14-7, 0.15 ml, 1.58 mmol)을 -20℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 240 mg (87%)의 에틸 1-[(1-메틸시클로프로필)메틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3682-002를 황색 검으로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.35분, M/z = 259 (M + 1).
(3R)-1-(2-{1-[(1R)-1-시클로프로필에틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)피페리딘-3-아민 EV-AV3097-001 (EOAI3454812) I-101 및 (3R)-1-(2-{1-[(1S)-1-시클로프로필에틸]-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐)피페리딘-3-아민 EV-AV3098-001 (EOAI3454813) I-102를 반응식 3.2에 기재된 에틸 1-(1-시클로프로필에틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3682-001의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.2
Figure pct00202
-20℃에서 질소 하에 건조 THF (5 ml) 중 DIAD (0.44 ml, 2.1 mmol)의 용액에 THF (5 ml) 중 트리페닐포스핀 (557.18 mg, 2.1 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 -20℃에서 THF (7.5 ml) 중 에틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 394223-02-0, 200 mg, 1.05 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 -20℃에서 추가의 30분 동안 교반하였다. 1-시클로프로필에탄-1-올 (CAS 765-42-4, 0.15 mL, 1.58 mmol)을 -20℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 205 mg (75%)의 에틸 1-(1-시클로프로필에틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3682-001을 황색 검으로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.35분, M/z = 259 (M + 1).
(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV4845-001 (EOAI3454972) I-105를 반응식 3.3에 기재된 메틸 2-[1-(시클로프로필 메틸)-6-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV4834-002의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.3
Figure pct00203
무수 THF (5 ml) 중 메틸 2-[6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV4831-001 (반응식 2에 따라 합성됨, 150 mg, 0.31 mmol)의 용액에 Fe(acac)3 (6 mg, 0.02 mmol) 및 NMP (150 μl)를 첨가하였다. 에틸마그네슘 브로마이드 (THF 중 0.9M, 411 μl, 0.37 mmol)의 용액을 1분에 걸쳐 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 추가의 Fe(acac)3 (6 mg, 0.02 mmol) 및 에틸마그네슘 브로마이드 (THF 중 0.9M, 411 μl, 0.37 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1M HCl (~1 ml)의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM (3 x 15 ml)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 ml)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 81 mg (55%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필 메틸)-6-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV4834-002를 무색 유리질로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 4.59분, M/z = 433 (M + 1).
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메틸아미노)피페리딘-3-올 EV-AV4609-001 (EOAI3451154) I-77을 반응식 3.4에 따라 합성하였다:
반응식 3.4
Figure pct00204
rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-히드록시-5-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4600-001 - 단계 1 주: 출발 물질 및 생성물은 모두 트랜스-라세미체이다.
0℃에서 무수 THF (5 ml) 중 rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-아미노-5-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 히드로클로라이드 (100 mg, 0.40 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (60%, 35 mg, 0.87 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 메틸 아이오다이드 (26 μl, 0.41 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반되도록 두었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 ml)와 물 (20 ml) 사이에 분배하였다. 수성 추출물을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 15 ml)로 세척하고, 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 91 mg (정량적)의 rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-히드록시-5-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4600-001을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.23분, M/z = 231 (M + 1).
rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐](메틸)아미노}-5-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4602-001 - 단계 2 주: 출발 물질 및 생성물은 트랜스-라세미체이다
DCM (2 ml) 중 rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-히드록시-5-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4600-001 (91 mg, 0.40 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (103 μl, 0.59 mmol)에 이어서 벤질 클로로포르메이트 (56 μl, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, DCM (20 ml)으로 희석하고, 물 (15 ml)로 세척하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 58 mg (18%)의 rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐](메틸)아미노}-5-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4602-001을 투명한 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.12분, M/z = 387 (M + Na).
rel-벤질 N-[(3R,5R)-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 히드로클로라이드 EV-AV4603-001 - 단계 3 주: 출발 물질 및 생성물은 트랜스-라세미체이다
질소 하에 디옥산 (1 ml) 중 rel-tert-부틸 (3R,5R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐](메틸)아미노}-5-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV4602-001 (58 mg, 0.16 mmol)의 용액에 디옥산 (0.16 ml, 0.64 mmol) 중 4M HCl을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 정치되도록 두었다. 반응 혼합물에 메탄올 (0.5 ml) 및 디옥산 중 4M HCl (0.16 ml, 0.64 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 정치되도록 두었다. 이어서, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 59 mg (43%)의 rel-벤질 N-[(3R,5R)-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 히드로클로라이드 EV-AV4603-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.76분, M/z = 265 (M + 1).
벤질 N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AV4604-001 - 단계 4
DMF (3 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AU3032-001 (반응식 2에 따라 합성됨, 60 mg, 0.16 mmol)의 용액에 DIPEA (31 μl, 0.18 mmol), HATU (67 mg, 0.18 mmol) 및 rel-벤질 N-[(3R,5R)-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 히드로클로라이드 EV-AV4603-001 (48 mg, 0.16 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 EtOAc (40 ml)와 물 (40 ml) 사이에 분배하고, 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 22 mg (22%)의 벤질 N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AV4604-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.17분, M/z = 623 (M + 1).
rel-(3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메틸아미노)피페리딘-3-올 히드로클로라이드 EV-AV4609-001, I-77 - 단계 5 주: 출발 물질 및 생성물은 트랜스 라세미체이다
질소 하에 에탄올 (1 ml) 중 rel-벤질 N-[(3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-히드록시피페리딘-3-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AV4604-001 (22 mg, 0.04 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (2.3 mg, 0.001 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 유리 섬유 소결을 통해 여과한 다음, 여과물을 에탄올 (0.2 ml) 중 1.25M HCl로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 정치되도록 두고, 진공 하에 농축시키고, 동결건조시켜 10.2 mg (52%)의 rel-(3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메틸아미노)피페리딘-3-올 히드로클로라이드 EV-AV4609-001, I-77을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.93분, M/z = 489 (M + 1).
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-아민 EV-AV4627-001 (EOAI3452884) I-86을 반응식 3.5에 따라 합성하였다:
반응식 3.5
Figure pct00205
rac-tert-부틸 (3R,4R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3800-001 - 단계 1 (트랜스 라세미체)
0℃에서 DCM (10 ml) 중 rac-tert-부틸 (3R,4R)-3-아미노-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (CAS 1523530-23-5, 750 mg, 3.47 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.45 ml, 10.4 mmol) 및 벤질 클로로포르메이트 (0.59 ml, 4.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 추가의 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물 (10 ml)로 켄칭하고, DCM (3 x 10 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20-80% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 615 mg (52%)의 rac-tert-부틸 (3R,4R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3800-001을 백색 고체 (트랜스-라세미체)로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.08분, M/z = 373 (M + Na).
rac-벤질 N-[(3R,4R)-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3801-001 - 단계 2 (트랜스 라세미체)
rac-tert-부틸 (3R,4R)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-4-히드록시피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3800-001 (610 mg, 1.74 mmol)을 디옥산 중에 용해시키고 (디옥산 중 4M, 8.7 ml), 실온에서 1시간 동안 교반되도록 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 408 mg (82%)의 rac-벤질 N-[(3R,4R)-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3801-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.48분, M/z = 251 (M + 1).
rac-벤질 N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3805-001 - 단계 3 (트랜스 라세미체)
DMF (5 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AV3032-001 (535 mg, 1.42 mmol)의 용액에 HATU (595 mg, 1.57 mmol) 및 DIPEA (0.59 ml, 3.56 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 두었다. 이어서, rac-벤질 N-[(3R,4R)-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3801-001 (반응식 2에 따라 합성됨, 408 mg, 1.42 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 추가의 2시간 동안 교반되도록 두었다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc (10 ml)로 희석하고, 물 (3 x 10 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하였다. 이어서, 유기 분획을 건조시키고 (황산나트륨), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 775 mg (79%)의 rac-벤질 N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3805-001을 오렌지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.12분, M/z = 609 (M + 1).
rac-(3R,4S)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-4-일 벤조에이트 EV-AV3814-001 - 단계 4 (시스 라세미체)
0℃에서 THF (1 mol) 중 트리페닐포스핀 (411 mg, 1.55 mmol)의 용액에 DIAD (325 μl, 1.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되도록 하고, rac-벤질 N-[(3R,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3805-001 (675 mg, 1.11 mmol) 및 벤조산 (190 mg, 1.55 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, EtOAc (15 ml)로 희석하였다. 혼합물을 물 (10 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 743 mg (49%)의 rac-(3R,4S)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-4-일 벤조에이트 EV-AV3814-001을 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.36분, M/z = 713 (M + 1).
rac-벤질 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3819-001 - 단계 5 (시스 라세미체)
에탄올 (10 ml) 및 물 (5 ml) 중 rac-(3R,4S)-3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-4-일 벤조에이트 EV-AV3814-001 (0.74 g, 0.54 mmol)의 용액에 K2CO3 (0.11 g, 0.81 mmol)을 첨가하고, 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 DCM (10 ml) 중에 용해시키고, 물 (10 ml)로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-20% 메탄올/EtOAc)에 의해 정제하여 214mg (64%)의 rac-벤질 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV3819-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 609 (M + 1).
rac-벤질 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV4626-001 - 단계 6 (시스 라세미체)
압력 튜브 내의 아세토니트릴 (2 ml) 중 rac-벤질 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV3819-001, 214 mg, 0.35 mmol) 및 아이오딘화구리 (I) (13.4 mg, 0.070 mmol)의 교반 현탁액에 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (125 mg, 0.70 mmol)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각된 반응 혼합물에 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (125 mg, 0.70 mmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응 혼합물을 80℃에서 추가의 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다시 냉각시키고, 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (125 mg, 0.70 mmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응 혼합물을 80℃에서 추가의 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20-100% EtOAc/헵탄)에 이어서 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 33 mg (14%)의 rac-벤질 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV4626-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.27분, M/z = 659 (M + 1).
rac-(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-아민 EV-AV4627-001 (EOAI3452884) I-86 - 단계 7 (시스 라세미체)
질소 하에 에탄올 (2 ml) 중 rac-벤질 N-[(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV4626-001, 33 mg, 0.05 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (3.2 mg, 0.002 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 유리 섬유 소결을 통해 여과한 다음, 여과물을 에탄올 중 1.25M HCl (0.3 ml)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 정치되도록 두고, 진공 하에 농축시키고, 동결건조시켜 28.2 mg (98%)의 rac-(3R,4S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-(디플루오로메톡시)피페리딘-3-아민 EV-AV4627-001 (I-86)을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.20분, M/z = 524 (M + 1).
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-아민 EV-AV3807-001 (EOAI3451007) I-75를 반응식 3.6에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.6
Figure pct00206
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-일 메탄술포네이트 EV-AV3803-001 - 단계 1
0℃에서 DCM (10 ml) 중 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-올 (EV-AU3293-001, 반응식 2에 따라 합성됨, 570 mg, 1.19 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (0.25 ml, 1.79 mmol) 및 메실 클로라이드 (0.11 ml, 1.43 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (5ml)을 혼합물에 첨가하고, 유기 층을 수집하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 663 mg (정량적)의 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-일 메탄술포네이트 EV-AV-3803-001을 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 556 (M + 1).
5-(3-아지도-4-플루오로피페리딘-1-카르보닐)-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AV3804-001 - 단계 2
DMSO (10 ml) 중 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-일 메탄술포네이트 (EV-AV-3803-001, 610 mg, 1.10 mmol)의 교반 용액에 아지드화나트륨 (285 mg, 4.39 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 120℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 한 다음, EtOAc (20 ml)로 희석하고, 물 (3 x 20 ml)에 이어서 포화 수성 염화나트륨 (20 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 191 mg (34.6%)의 5-(3-아지도-4-플루오로피페리딘-1-카르보닐)-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AU3804-001을 오렌지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.19분, M/z = 503 (M + 1).
1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-아민 EV-AV3807-001 (EOAI3451007) I-75 - 단계 3
질소 하에 EtOAc (5 ml) 중 5-(3-아지도-4-플루오로피페리딘-1-카르보닐)-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 (EV-AU3804-001, 191mg, 0.38 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (81 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 두고, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 유리 섬유 필터를 통해 여과하고, 필터를 메탄올로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 80 mg (44.2%)의 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-플루오로피페리딘-3-아민 EV-AV3807-001 (I-75)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.01분, M/z = 477 (M + 1).
5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르보니트릴 EV-AV4621-001 (EOAI3452077) I-82를 메틸 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-히드록시피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AT8698-001을 통해 반응식 3.7에 기재된 절차에 따라 합성하였다. 이를 메틸 5-히드록시피페리딘-3-카르복실레이트를 사용하여 반응식 3, 단계 7에 기재된 절차에 따라 제조하였다. 메틸 5-히드록시피페리딘-3-카르복실레이트를 반응식 3, 단계 7에 기재된 절차에 따라 1-벤질 3-메틸 5-히드록시피페리딘-1,3-디카르복실레이트 (CAS 1095010-45-9)로부터 제조하였다.
반응식 3.7
Figure pct00207
메틸 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메탄술포닐옥시)피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AT8699-001 - 단계 1
0℃에서 DCM (8 ml) 중 메틸 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-히드록시피페리딘-3-카르복실레이트 (EV-AT8698-001, 275 mg, 0.53 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (0.11 ml, 0.80 mmol) 및 메실 클로라이드 (49 μl, 0.64 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 빙냉 하에 2시간 동안 교반하였다. 추가의 메실 클로라이드 (25 μl, 0.32 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (5 ml)을 혼합물에 첨가하고, 유기 층을 수집하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 316 mg (정량적)의 메틸 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메탄술포닐옥시)피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AT8699-001을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.12분, M/z = 596 (M + 1).
메틸 5-아지도-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4601-001 - 단계 2
DMSO (2 ml) 중 메틸 1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-(메탄술포닐옥시)피페리딘-3-카르복실레이트 (EV-AT8699-001, 316 mg, 0.53 mmol)의 교반 용액에 아지드화나트륨 (86 mg, 1.33 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, EtOAc (40 ml)와 물 (30 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 141 mg (43.1%)의 메틸 5-아지도-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4601-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.19분, M/z = 543 (M + 1).
메틸 5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4605-001 - 단계 3
질소 하에 에탄올 중 메틸 5-아지도-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 (EV-AV4601-001, 131 mg, 0.24 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (0.15 g, 0.01 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 두고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 유리 섬유 필터를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 98mg (46.0%)의 메틸 5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4605-001을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.92분, M/z = 517 (M + 1).
메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4610-001 - 단계 4
디옥산 (1 ml) 중 메틸 5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 (EV-AV4605-001, 77 mg, 0.15 mmol)의 교반 용액에 포화 수성 탄산수소나트륨 (1 ml) 및 boc 무수물 (39 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (20 ml)와 물 (20 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (15 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 62 mg (63.2%)의 메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 EV-AV4610-001을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.20분, M/z = 617 (M + 1).
5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실산 EV-AV4611-001 - 단계 5
메탄올 (1 ml) 중 메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실레이트 (EV-AV4610-001, 62 mg, 0.10 mmol)의 교반 용액에 1M 수성 수산화나트륨 (0.5 ml)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 메탄올을 제거하였다. 생성된 수용액을 침전물이 형성될 때까지 1M 수성 염산을 사용하여 pH ~4-5로 산성화시켰다. 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 58mg (89.4%)의 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실산 EV-AV4611-001을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.13분, M/z = 603 (M + 1).
tert-부틸 N-(5-카르바모일-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 EV-AV4612-001 - 단계 6
DMF (1 ml) 중 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르복실산 (EV-AV4611-001, 58mg, 0.96 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (34 μl, 0.19 mmol), HATU (46 mg, 0.12 mmol) 및 염화암모늄 (10 mg, 0.19 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (40 ml)와 물 (40 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 추가로 EtOAc (40 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 65 mg (97.7%)의 tert-부틸 N-(5-카르바모일-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 EV-AV4612-001을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.09분, M/z = 602 (M + 1).
tert-부틸 N-(5-시아노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 EV-AV4615-004 - 단계 7
무수 디옥산 (1 ml) 중 tert-부틸 N-(5-카르바모일-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 (EV-AV4612-001, 65 mg, 0.10 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (44.3 μl, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (30 μl, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 트리에틸아민 (44.3 μl, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (30 μl, 0.22 mmol)로 재처리하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 트리에틸아민 (44.3 μl, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (30 μl, 0.22 mmol)로 재처리하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 (44.3 μl, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (30 μl, 0.22 mmol)로 재처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 트리에틸아민 (44.3 μl, 0.32 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (30 μl, 0.22 mmol)로 재처리하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (20 ml)와 포화 수성 염화암모늄 (20 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (20 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 2 배치의 생성물을 수득하였으며, 이를 개별적으로 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 9 mg (14.3%)의 tert-부틸 N-[(3R,5S)-5-시아노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV4615-003을 회백색 분말로서 수득하였다. 임의적으로 라세미 시스-부분입체이성질체로서 배정하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.21분, M/z = 584 (M + 1). 11mg (17.5%)의 tert-부틸 N-[(3R,5S)-5-시아노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV4615-004를 또한 회백색 분말로서 수득하였다. 임의적으로 라세미 시스-부분입체이성질체로서 배정하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.19분, M/z = 584 (M + 1).
5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르보니트릴 EV-AV4621-001 (EOAI3452077) I-82 - 단계 8
DCM (1 ml) 중 10% 트리플루오로아세트산 중 tert-부틸 N-(5-시아노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 (EV-AV4615-004, 11 mg, 0.02 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 정치되도록 두었다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 1:1 아세토니트릴:물 (4 ml)로부터 동결건조시켜 11.6 mg (정량적)의 5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-카르보니트릴 트리플루오로아세트산 EV-AV4621-001 (I-82)을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.08분, M/z = 484 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-{[3-(2H3)메톡시-3-메틸시클로부틸]메틸}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY5000-002 (EOAI3462946) I-238을 반응식 3.8에 기재된 바와 같은 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-{[(1r,3s)-3-히드록시-3-에틸시클로부틸]메틸}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AX8640-001의 듀테로메틸화를 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 수득하였다:
반응식 3.8
Figure pct00208
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-{[(1r,3s)-3-(2H3)메톡시-3-메틸시클로부틸]메틸}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AX2096-001 - 단계 1
DMF (2.0 ml) 중 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-{[(1r,3s)-3-히드록시-3-메틸시클로부틸]메틸}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AX8640-001, 85%, 250 mg, 0.45 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 36 mg, 0.90 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 아이오도(2H3)메탄 (CAS 865-50-9, 84 μl, 1.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (20 ml)와 물 (15 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 10 ml)로 재추출하고, 합한 유기부를 물 (10 ml), 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0 - 50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 184 mg (75%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-{[(1r,3s)-3-(2H-3-)메톡시-3-메틸시클로부틸]메틸}-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AX2096-001을 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.43분, M/z = 492 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(디플루오로메틸)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW5368-001 (EOAI3460286) I-189를 반응식 3.9에 기재된 메틸 2-[6-(디플루오로메틸)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5361-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.9
Figure pct00209
메틸 2-{6-에테닐-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5353-002 - 단계 1
디옥산 (10 ml) 중 메틸 2-{6-클로로-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AW5326-001, 500 mg, 1.25 mmol)의 용액에 트리부틸(에테닐)스탄난 (477 mg, 1.50 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 15분 동안 퍼징한 다음, Xantphos (54 mg, 0.04 mmol) 및 Pd2dba3 (29 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 340mg (66%)의 메틸 2-{6-에테닐-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5353-002를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.34분, M/z = 391 (M + 1).
메틸 2-{1-에틸-6-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5355-001 - 단계 2
THF : 물 (2:1, 9 ml) 중 메틸 2-{6-에테닐-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AW5353-002, 89%, 470 mg, 1.07 mmol)의 용액에 t-부탄올 (0.10 ml), 4-메틸모르폴린 4-옥시드 (188 mg, 1.61 mmol) 및 OsO4 (물 중 0.10 ml, 0.02 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, NaIO4 (687 mg, 3.20 mmol)를 첨가하고, 실온에서의 교반을 16시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 물 (20 ml)로 희석하고, EtOAc (3 x 20 ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 270mg (62%)의 메틸 2-{1-에틸-6-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5355-001을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.24분, M/z = 393 (M + 1).
메틸 2-[6-(디플루오로메틸)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5361-001 - 단계 3
DCM (10 ml) 중 메틸 2-{1-에틸-6-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일}-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (200 mg, 0.50 mmol)의 용액에 실온에서 2-메톡시-N-(2-메톡시에틸)-N-(트리플루오로-람다~4~-술파닐)에탄아민 (CAS, 202289-38-1, 0.45 ml, 1.24 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 얼음/물에 부었다. 수성 층을 포화 중탄산나트륨으로 중화시키고, DCM (3 x 20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 105mg (49%)의 메틸 2-[6-(디플루오로메틸)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AW5361-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.33분, M/z = 415 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(디플루오로메톡시)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW9564-001 (EOAI3460927) I-200을 반응식 3.10에 기재된 메틸 6-(디플루오로메톡시)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW9553-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.10
Figure pct00210
2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (CAS 1717-59-5, 912 mg, 5.12 mmol)을 아세토니트릴 (10 ml) 중 벤질 N-[(3S,4R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-4-히드록시피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AW9553-001, 반응식 3.18에 따라 합성됨, 451 mg, 2.05 mmol) 및 황산나트륨 (291 mg, 2.05 mmol)의 교반 현탁액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 조 물질을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-60% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 327 mg (59%)의 메틸 6-(디플루오로메톡시)-1-에틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW9553-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.30분, M/z = 271 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[7-(시클로프로필메틸)-2-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AX1665-002 (EOAI3460929) I-202를 반응식 3.11에 기재된 메틸 2-[7-(시클로프로필메틸)-2-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AX1646-002의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.11
Figure pct00211
DME (5 ml) 중 메틸 2-[2-클로로-7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AX1644-002, 134 mg, 0.31 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (87 mg, 0.63 mmol), PdCl2dppf (26 mg, 0.03 mmol) 및 트리메틸보록신 (THF 중 3.5M, 0.36 ml, 1.26 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄에 이어서 0-40% 메탄올/EtOAc)에 의해 정제하여 94 mg (70%)의 메틸 2-[7-(시클로프로필메틸)-2-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AX1646-002를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.05분, M/z = 406 (M + 1).
2-(2-{5-[(1R,4R,7R)-7-아미노-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르보닐]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-2-일}-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-6-일)프로판-2-올 EV-AW6283-001 (EOAI3461372) I-210을 반응식 3.12에 기재된 메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW6273-002의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.12
Figure pct00212
메틸 6-아세틸-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW6271-002 - 단계 1
무수 디옥산 (3 ml) 중 메틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AW6269-001, 90%, 1.16 g, 3.93 mmol)의 용액에 트리부틸(1-에톡시에테닐)스탄난 (1.59 ml, 4.71 mmol), Xantphos (0.17 g, 0.29 mmol) 및 Pd2dba3 (0.09 g, 0.10 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 17시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 1M HCl (50 ml) 및 DCM (50 ml)을 잔류물에 첨가하였다. 2상 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 유기 층을 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 0.512 g (47%)의 메틸 6-아세틸-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW6271-002를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.40분, M/z = 273 (M + 1).
메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW6273-002 - 단계 2
메틸마그네슘 클로라이드 (THF 중 3M, 642 μl)를 -78℃에서 무수 THF (5 ml) 중 메틸 6-아세틸-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AW6271-002, 510 mg, 1.84 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 추가의 메틸마그네슘 클로라이드 (THF 중 3M, 61 μl)를 -78℃에서 첨가하고, 교반을 30분 동안 계속하였다. 반응물을 물 (20 ml)로 켄칭하고, THF를 진공 하에 제거하였다. 1M HCl을 pH 3까지 수성 층에 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 30 ml)로 추출하였다. 합한 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-35% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 410 mg (76%)의 메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AW6273-002를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.23분, M/z = 289 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술포닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY0021-001 (EOAI3461556) I-214를 반응식 3.13에 기재된 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술포닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0016-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술피닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY0020-001 (EOAI3461555) I-213을 반응식 3.13에 기재된 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술피닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0014-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
반응식 3.13
Figure pct00213
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술피닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0014-001 - 단계 1
메탄올 (8 ml) 및 물 (2 ml) 중 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-[2-(메틸술파닐)에틸]-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AY0013-001, 260 mg, 0.52 mmol)의 교반 용액에 NaIO4 (122 mg, 0.57 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc (20 ml)와 물 (50 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 추가로 EtOAc (2 x 20 ml)로 추출하였다. 합한 유기부를 포화 수성 염화나트륨 (20 ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄에 이어서 1-10% 메탄올/DCM)에 의해 정제하여 220 mg (91%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술피닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0014-001을 적색 발포체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.08분, M/z = 467 (M + 1).
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술포닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0016-001 - 단계 2
메탄올 (40 ml) 중 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술피닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AY0014-001, 135 mg, 0.29 mmol)의 교반 용액에 KMnO4 (50 mg, 0.32 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 중황산나트륨 (20 ml)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (20 ml) 및 물 (50 ml)로 희석하고, 수성 층을 EtOAc (2 x 20 ml)로 추출하였다. 합한 유기부를 포화 수성 염화나트륨 (20 ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 115 mg (81%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2-메탄술포닐에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AY0016-001을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.15분, M/z = 483 (M + 1).
rac-[(2R,5S)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4303-001 (EOAI3462115) I-220 및 rac-[(2R,5R)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4304-001 (EOAI3462116) I-221을 각각 반응식 3 및 3.14에 기재된 절차를 따라 rac-tert-부틸 N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-001 및 rac-tert-부틸 N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-002의 Boc-탈보호로부터 수득하였다:
반응식 3.14
Figure pct00214
메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4571-001 - 단계 1
질소의 분위기 하에 DCM (40 ml) 중 메틸 5-아미노피리딘-2-카르복실레이트 (CAS 67515-76-8, 1.8 g, 11.83 mmol)의 교반 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (2.84 g, 13.01 mmol) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민 (0.14 g, 1.18 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 (필터를 DCM으로 헹굼), 여과물을 DCM (100 ml)으로 희석하고, 물 (2 x 100 ml)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 2.73 g (60%)의 메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4571-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.01분, M/z = 253 (M + 1).
tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4573-001 - 단계 2
질소의 분위기 하에 0℃에서 THF (60 ml) 중 메틸 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AX4571-001, 2.73 g, 10.82 mmol)의 교반 용액에 디에틸 에테르 (4.1 ml) 중 4M 리튬 테트라히드라이도알루미네이트(1-)를 적가하고, 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 추가의 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 THF:물 (9:1, 15 ml)에 이어서 10% 수산화나트륨 (10 ml)에 이어서 물 (10 ml)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 이어서, 반응 혼합물을 규조토의 패드를 통해 THF (3 x 50 ml)로 헹구면서 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (50-100% EtOAc/헵탄에 이어서 0-10% 메탄올/EtOAc)에 의해 정제하여 1.50 g (60%)의 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4573-001을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.70분, M/z = 224 (M + 1).
아세트산 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4576-001 - 단계 3
압력 용기에 에탄올 (25 ml) 중 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AX4573-001, 1.50 g, 6.69 mmol)의 용액 및 아세트산 (1.5 ml)을 첨가하였다. PtO2 (266 mg, 1.17 mmol)를 첨가하고, 압력 용기를 질소로 퍼징한 후, 반응물을 밀봉하고, 수소 분위기 (55psi, 3.75 atm) 하에 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 2.40 g (99%)의 아세트산 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4576-001을 오렌지색 오일로서 수득하였다. LCMS 데이터 없음.
벤질 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-2-(히드록시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AX4584-001 - 단계 4
0℃에서 THF (40 ml) 및 물 (12 ml) 중 아세트산 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AX4576-001, 70%, 2.00 g, 4.82 mmol)의 교반 용액에 중탄산나트륨 (1.22 g, 14.47 mmol) 및 벤질 카르보노클로리데이트 (0.62 ml, 4.34 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 용액을 실온으로 가온되도록 하고, 교반을 4시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 물 (10 ml)로 희석하고, EtOAc (3 x 5 ml)로 추출하였다. 합한 유기부를 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 1.40 g (80%)의 벤질 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-2-(히드록시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 EV-AX4584-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.12분, M/z = 387 (M + 23).
tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4591-001 - 단계 5
에탄올 (20 ml) 중 벤질 5-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-2-(히드록시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (EV-AX4584-001, 1.40 g, 3.84 mmol)의 용액에 탄소 상 팔라듐 (5%, 0.82 g, 0.38 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토의 패드를 통해 여과하고 (메탄올로 세척함), 여과물을 진공 하에 농축시켜 0.82 g (93%)의 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4591-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.20분, M/z = 231 (M + 1).
rac-tert-부틸 N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-001 및 rac-tert-부틸 N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-002 - 단계 6
DMF (5 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AX2063-001, 200 mg, 0.53 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DIPEA (463 μl, 2.66 mmol), HATU (222 mg, 0.58 mmol) 및 tert-부틸 N-[6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AX4591-001, 122 mg, 0.53 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC (산성)에 의해 정제하여 2종의 생성물을 수득하였다:
회백색 고체로서 70 mg (22%)의 rac-tert-부틸 N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-001. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.18분, M/z = 589 (M + 1).
회백색 고체로서 220 mg (70%)의 rac-tert-부틸 N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-002. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.19분, M/z = 589 (M + 1).
[(2S,5R)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4308-001 (EOAI3462646) I-226 및 [(2R,5S)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4309-001 (EOAI3462647) I-227을 둘 다 반응식 3에 기재된 바와 같이 rac-tert-부틸 N-[(3R,6S)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-001의 키랄 분해에 이어서 Boc-탈보호로부터 수득하였다. 생성물 둘 다의 절대 배위를 임의적으로 배정하였다.
[(2R,5R)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4310-001 (EOAI3462648) I-228 및 [(2S,5S)-5-아미노-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-2-일]메탄올 EV-AY4311-001 (EOAI3462649) I-229를 둘 다 반응식 3에 기재된 바와 같이 rac-tert-부틸 N-[(3R,6R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(히드록시메틸)피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AX4594-002의 키랄 분해에 이어서 Boc-탈보호로부터 수득하였다. 생성물 둘 다의 절대 배위를 임의적으로 배정하였다.
(1R,4R,7R)-2-{2-[7-(시클로프로필메틸)-2-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AX5554-001 (EOAI3468827) I-239를 반응식 3.15에 기재된 메틸 7-(시클로프로필메틸)-2-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-006의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.15
Figure pct00215
메틸 7-(시클로프로필메틸)-2-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-006 - 단계 1
0℃에서 무수 DMF (20 ml) 중 메틸 2-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 (EV-AX2018-001, 1.00 g, 4.68 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 0.28 g, 7.02 mmol)을 조금씩 1분에 걸쳐 첨가하였다. (브로모메틸)시클로프로판 (680 μl, 7.01 mmol)을 0℃에서 30분 후에 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 60시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc (50 ml)와 물 (30 ml) 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 유기 상을 0.5M HCl (30 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (30ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (5-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4종의 생성물을 수득하였다:
회백색 분말로서 113 mg (8%)의 시클로프로필메틸 2-클로로-7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-003. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.38분, M/z = 306/308 (M + 1).
회백색 결정질 고체로서 256 mg (20%)의 메틸 2-클로로-7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-004. LCMS (방법 D): 1.24분, M/z = 266/268 (M + 1).
황색 검으로서 93 mg (6%)의 시클로프로필메틸 7-(시클로프로필메틸)-2-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-005. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.32분, M/z = 302 (M + 1).
황색 결정질 고체로서 197 mg (16%)의 메틸 7-(시클로프로필메틸)-2-메톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AX5535-006. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.20분, M/z = 262 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AX4151-006 (EOAI3476815) I-269를 반응식 3.16에 기재된 1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AX4144-003의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차를 따라 합성하였다:
반응식 3.16
Figure pct00216
tert-부틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4139-001 - 단계 1
톨루엔 (30 ml) 중 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AU7974-001, 500 mg, 1.99 mmol)의 교반 현탁액을 85℃로 가온한 후, N,N-디메틸포름아미드 디-tert-부틸 아세탈 (2.0 ml, 8.34 mmol)을 적가하였다. 반응물을 85℃에서 2시간 동안 교반하고, 추가의 N,N-디메틸포름아미드 디-tert-부틸 아세탈 (2.0 ml, 8.34 mmol)을 첨가하였다. 교반을 85℃에서 18시간에 이어서 100℃에서 3시간 동안 계속하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (200 ml)로 희석하고, 포화 수성 염화나트륨 (50 ml)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 366 mg (60%)의 tert-부틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4139-005를 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.66분, M/z = 307/309 (M + 1)
tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4142-001 - 단계 2
DMF (5 ml) 중 tert-부틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AX4139-005, 366 mg, 1.19 mmol)의 교반 용액에 테트라메틸암모늄 플루오라이드 (CAS 373-68-2, 250 mg, 2.68 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 DCM (200 ml), 물 (100 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (100 ml) 중에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 수성 염화나트륨 (50 ml)으로 추가로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 112 mg (32%)의 tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4142-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.61분, M/z = 291 (M + 1).
1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AX4144-003 - 단계 3
TFA (2.0 ml, 26.2 mmol) 중 tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AX4142-001, 100 mg, 0.34 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 농축시킨 후, 진공 하에 잔류물을 DCM에 녹이고, 농축시켜 80 mg (89%)의 1-(시클로프로필메틸)-6-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AX4144-003을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.15분, M/z = 235 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-(옥산-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY7194-001 (EOAI3477013) I-275를 반응식 3.17에 기재된 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(옥산-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY7184-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.17
Figure pct00217
에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY7182-001 - 단계 1
에틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AY7177-001, 90%, 950 mg, 3.07 mmol) 및 2-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (CAS 287944-16-5, 709 mg, 3.37 mmol)을 THF:톨루엔 (4:1, 10 ml) 중에 용해시키고, 2M 탄산나트륨 (3.07 ml)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 5분 동안 퍼징하고, Pd(dppf)Cl2 (449 mg, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc (20 ml) 중에 용해시키고, 물 (2 x 10 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 587 mg (56%)의 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY7182-001을 오렌지색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 1.52분, M/z = 327 (M + 1).
에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(옥산-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY7184-001 - 단계 2
EtOAc:에탄올 (1:1, 30 ml) 중 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(3,6-디히드로-2H-피란-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AY7182-001, 587 mg, 1.71 mmol)의 교반 용액에 Pd/C (10%, 91 mg, 0.09 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 하에 두고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 규조토의 패드를 통해 여과하고, 메탄올 (30 ml)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 516 mg (83%)의 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(옥산-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY7184-001을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.51분, M/z = 329 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-(2H3)메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AZ5120-001 (EOAI3478073) I-285를 반응식 3.18에 기재된 메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2H3)메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5103-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차를 따라 합성하였다:
반응식 3.18
Figure pct00218
1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AX5573-002 - 단계 1
에틸 6-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AY7167-001, 90%, 1.45 g, 4.68 mmol), Pd2(dba)3 (214 mg, 0.23 mmol), tBu-BippyPhos (237 mg, 0.47 mmol) 및 수산화칼륨 (788 mg, 14.0 mmol)을 압력 튜브 내의 디옥산 (7 ml) 및 물 (7 ml)중에서 합하였다. 반응 혼합물을 질소로 5분 동안 퍼징한 다음, 용기를 밀봉하고, 70℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 유리 섬유 여과지를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (10 ml)과 EtOAc (30 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 2M HCl을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 생성된 침전물을 여과하고, 건조시켜 0.80 g (62%)의 1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AX5573-002를 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.95분, M/z = 233 (M + 1).
메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AY4950-002 - 단계 2
질소의 분위기 하에 무수 톨루엔 (6 ml) 및 무수 메탄올 (2 ml, 49.44 mmol) 중 1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AX5573-002, 73%, 550 mg, 1.73 mmol)의 교반 현탁액에 2M (디아조메틸)(트리메틸)실란 (디에틸에테르 중 1.73 ml)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 아세트산 (~0.7 ml)을 밝은 황색이 사라질 때까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (5 ml)으로 연화처리하였다. 고체를 여과하고, 건조시켜 131 mg (28%)의 1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 EV-AY4950-001을 연베이지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.13분, M/z = 247 (M + 1).
메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2H₃)메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5013-001 - 단계 3
DMF (30ml) 중 1-(시클로프로필메틸)-6-히드록시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AY4950-001, 100 mg, 0.40 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 32 mg, 0.80 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 아이오도(2H3)메탄 (74 μl, 1.19 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하고, EtOAc (20 ml)로 희석하고, 물 (2 x 20 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 (85 mg, 75%)의 메틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(2H3)메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5013-001을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.36분, M/z = 264 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-3-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AZ5131-001 (EOAI3478196) I-292를 반응식 3.19에 기재된 에틸 1-(시클로프로필메틸)-3-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5111-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.19
Figure pct00219
에틸 1-(시클로프로필메틸)-3-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5111-001 - 단계 1
DMF (20 ml) 중 에틸 1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AZ5106-001, 1.00 g, 4.09 mmol)의 교반 용액에 셀렉트플루오르(Selectfluor)® (CAS 140681-55-6, 1.45 g, 4.09 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 60시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc (20 ml) 중에 용해시키고, 물 (3 x 20 ml)로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-50% DCM/헵탄)에 의해 정제하여 245 mg (22%)의 에틸 1-(시클로프로필메틸)-3-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ5111-001을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.33분, M/z = 263 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-4-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY4588-001 (EOAI3478689) I-294를 반응식 3.16 및 3.20에 기재된 tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-4-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4168-003의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차를 따라 합성하였다:
반응식 3.20
Figure pct00220
tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-4-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4168-003 - 단계 1
무수 DMF (10 ml) 중 tert-부틸 4-클로로-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AX4167-001, 820 mg, 2.67 mmol)의 교반 용액에 테트라메틸암모늄 플루오라이드 (500 mg, 5.36 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (200 ml)과 포화 수성 중탄산나트륨 (200 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 DCM (2 x 100 ml)으로 세척하고, 합한 유기부를 포화 수성 염화나트륨 (100 ml)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 401 mg (52%)의 tert-부틸 1-(시클로프로필메틸)-4-플루오로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AX4168-003을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.48분, M/z = 291 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AX5592-001 (EOAI3478190) I-287을 반응식 3.21에 기재된 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ2525-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 3.21
Figure pct00221
에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ2525-001 - 단계 1
모르폴린 (74 μl, 0.86 mmol), Pd2(dba)3 (33 mg, 0.04 mmol), Xantphos (41 mg, 0.07 mmol) 및 소듐 tert 부톡시드 (103 mg, 1.07 mmol)를 톨루엔 (6 ml) 중 에틸 6-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AZ2517-001, 231 mg, 0.71 mmol)의 질소-퍼징된 용액을 함유하는 압력 튜브에 첨가하였다. 압력 튜브를 질소 환경 하에 밀봉하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 물 (10 ml)로 희석하고, EtOAc (3 x 10 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-20% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 60 mg (25%)의 에틸 1-(시클로프로필메틸)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AZ2525-001을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.35분, M/z = 330 (M + 1).
반응식 4
Figure pct00222
5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AV3043-001 (EOAI3452073, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-24의 합성
Figure pct00223
메틸 4-클로로-3-히드록시-5-니트로벤조에이트 EV-AU3635-002 - 단계 1
주: 반응을 조건의 동일한 세트 하에 이중으로 수행하였다. 각각의 반응으로부터의 조 물질을 하기 기재된 바와 같이 메탄올 켄칭 후에 합하였다.
질소 하에 0℃에서 무수 DCM (20 ml) 중 메틸 4-클로로-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 (CAS 63603-09-8, 5.00 g, 20.4 mmol)의 교반 용액에 BBr3 (DCM 중 1M, 40.71 ml, 2.81 mmol)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 메탄올로 조심스럽게 켄칭하고, 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (300 ml) 중에 용해시키고, 진한 황산 (10 방울)을 첨가하고, 반응 혼합물을 75℃에서 5시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물에 물 (50 ml) 및 포화 NaHCO3 (50 mL)을 조심스럽게 첨가하여 염기성 pH를 달성하였다. 현탁액을 15분 동안 초음파처리하고, 추가의 30분 동안 교반한 후, 생성된 고체를 수집하고, 진공 여과 하에 건조시켰다. 고체를 물 (25 ml)로 세척하고, 건조시켜 8.14 g (82.9%)의 메틸 4-클로로-3-히드록시-5-니트로벤조에이트 EV-AU3635-002를 담갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.11분, M/z = 230 (M + 1).
메틸 4-클로로-3-(디플루오로메톡시)-5-니트로벤조에이트 EV-AT8693-001 - 단계 2
주: 반응을 조건의 동일한 세트 하에 삼중으로 수행하였다. 각각의 반응으로부터의 조 물질을 하기 기재된 바와 같이 후처리를 위해 합하였다.
압력 튜브 내의 아세토니트릴:물 (1:1, 20 ml) 중 메틸 4-클로로-3-히드록시-5-니트로벤조에이트 (EV-AU3635-002, 333 mg, 4.32 mmol) 및 탄산칼륨 (7.17 g, 155.4 mmol)의 용액에 2-클로로-2,2-디플루오로-1-페닐에타논 (1.06 ml, 21.6 mmol)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 합하고, EtOAc (200 ml)와 2M HCl (수성) 사이에 분배하였다. 수성 분획 (~pH5)을 추가의 EtOAc (2x 100 ml)로 역추출하였다. 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 (150 ml) 중에 용해시키고, 진한 황산 (3 방울)을 첨가하고, 반응물을 75℃에서 40시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물에 포화 NaHCO3을 조심스럽게 첨가하여 염기성 pH를 달성하였다. 수성 층을 EtOAc (3x 100 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-20% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 775 mg (60%)의 메틸 4-클로로-3-(디플루오로메톡시)-5-니트로벤조에이트 EV-AT8693-001을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.20분, 질량 이온은 관찰되지 않았다.
메틸 3-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AV3021-001 - 단계 3
THF (10 ml) 중 메틸 4-클로로-3-(디플루오로메톡시)-5-니트로벤조에이트 (EV-AT8693-001, 400 mg, 1.34 mmol)의 교반 용액에 K2CO3 (1.29 g, 9.35 mmol) 및 메탄아민 (THF 중 2.0M, 1 ml, 2.00 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, EtOAc (30 ml)와 1M HCl (15 ml) 사이에 분배하였다. 유기 분획을 추가의 1M HCl (15 ml), 포화 수성 염화나트륨 (10 ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 메틸 3-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AV3021-001 (370 mg, 88%)을 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.17분, M/z = 277 (M + 1).
메틸 3-아미노-5-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AV3024-001 - 단계 4
질소 하에 EtOAc:EtOH (1:1 20 ml) 중 교반 용액 메틸 3-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (EV-AV3021-001, 370 mg, 1.18 mmol)에 10% Pd/C (62.7 mg, 0.06 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 296 mg (93%)의 메틸 3-아미노-5-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AV3024-001을 연갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.97분, M/z = 247 (M + 1).
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV3026-001 - 단계 5
DMF (5 ml) 중 1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AS5740-003, 반응식 1, 단계 1에 따라 합성됨, 139 mg, 0.55 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 DIPEA (0.08 ml, 0.47 mmol)에 이어서 HATU (177 mg, 0.47 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 메틸 3-아미노-5-(디플루오로메톡시)-4-(메틸아미노)벤조에이트 (EV-AV3024-001, 150 mg, 0.55 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 22시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 아세트산 (3ml) 중에 용해시키고, 밀봉된 튜브에서 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-70% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 131 mg (48%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV3026-001을 연갈색 분말 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.29분, M/z = 427 (M + 1).
2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AV3032-001 - 단계 6
THF:MeOH (4 ml:1 ml) 중 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AV3026-001, 131 mg, 0.26 mmol)의 교반 용액에 2M 수산화리튬 (528 μl, 1.06 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (2 ml) 중에 현탁시키고, 2M HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다. 생성된 현탁액을 10분 동안 교반하고, 생성된 침전물을 진공 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 108 mg (97%)의 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AV3032-001을 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.15분, M/z = 413 (M + 1).
tert-부틸 6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-001 - 단계 7
0℃에서 DMSO (2 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AV3032-001, 108 mg, 0.26 mmol)의 용액에 HATU (117.1 mg, 0.31 mmol) 및 DIPEA (87.87 μl, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, tert-부틸 옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (CAS 949559-11-9, 61 mg, 0.27 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1 ml)로 희석하고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 125 mg (79%)의 tert-부틸 6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-001을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 3.96분, M/z = 621 (M + 1).
tert-부틸 (3aS,7aR)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-002 및 tert-부틸 (3aR,7aS)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-003을 수득하기 위한 키랄 HPLC - 단계 8
125mg의 tert-부틸 6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-001을 메탄올 중에 용해시킨 다음, 키랄 HPLC (방법 G)에 의해 정제하여 47.6 mg (27%)의 tert-부틸 (3aS,7aR)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-002 및 50.1 mg (29%)의 tert-부틸 (3aS,7aS)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 EV-AV3033-003을 둘 다 무색 검으로서 수득하였다 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨).
EV-AV3033-002 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 5.46분 (방법 I)
EV-AV3033-003 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 7.87분 (방법 I)
5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AV3043-001 (EOAI3452073, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-24 - 단계 9
tert-부틸 (3aS,7aR)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AV3033-002, 47.6 mg, 0.07 mmol)를 EtOH 중 1.25M HCl (1 ml)에 용해시키고, 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (2 ml) 중에 용해시키고, 동결건조시켜 29 mg (71%)의 5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AV3043-001 (I-24)을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.23분, M/z = 521 (M + 1).
5-[(3aR,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AV3044-001 (EOAI3452074, 절대 입체화학은 임의적으로 배정됨) I-25 - 단계 9
tert-부틸 (3aS,7aS)-6-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 (EV-AV3033-003, 50.1 mg, 0.08 mmol)를 EtOH 중 1.25M HCl (1 ml)에 용해시키고, 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (2 ml) 중에 용해시키고, 동결건조시켜 37 mg (87%)의 5-[(3aR,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 히드로클로라이드 EV-AV3044-001 (I-25)을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.26분, M/z = 521 (M + 1).
반응식 5
Figure pct00224
메틸 2-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AS3796-002 - 단계 1
0℃에서 DMF (15 ml) 중 메틸 4-클로로-2-메톡시-5-니트로벤조에이트 (CAS 109069-75-2, 1.50 g, 6.11 mmol)의 용액에 메틸아민 (THF 중 2.0M, 3.66 ml, 7.33 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 20시간 동안 교반하였다. 탄산칼륨 (1.01 g, 7.33 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 추가의 메틸아민 (THF 중 2.0M, 3.66 ml, 7.33 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 추가의 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄에 이어서 50% EtOAc/메탄올)에 의해 정제하여 905 mg (56%)의 메틸 2-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AS3796-002를 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.04분, M/z = 241 (M + 1).
메틸 5-아미노-2-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AS3799-003 - 단계 2
질소 하에 에탄올:EtOAc (1:2, 60ml) 중 메틸 2-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (EV-AS3796-002, 905 mg, 3.77 mmol)의 교반 용액에 Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 수소의 분위기 하에 5.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc, 에탄올 및 DCM으로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 DCM:에탄올 (6:1, 70 ml) 중에 용해시켰다. Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)를 질소 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 수소의 분위기 하에 6.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에탄올 및 DCM으로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 DCM:에탄올 (1:1, 120 mL) 중에 용해시켰다. Pd/C (10%, 200 mg, 0.19 mmol)를 질소 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 수소의 분위기 하에 22시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에탄올 및 DCM으로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 656 mg (76%)의 메틸 5-아미노-2-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AS3799-003을 암갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 0.90분, M/z = 211 (M + 1).
EV-AS3799-003을 사용하여 반응식 1에 기재된 절차에 따라 (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-6-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 히드로클로라이드 EV-AV3612-001 (EOAI3447040) I-68을 합성하였다.
반응식 6
Figure pct00225
메틸 2-메틸-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AV4643-001 - 단계 1
THF (12 ml) 중 메틸 4-플루오로-2-메틸-5-니트로벤조에이트 (CAS 1163287-01-1, 1.00 g, 4.69 mmol)의 교반 용액에 메틸아민 (THF 중 2.0M, 5.4 ml, 10.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (250 ml)와 포화 수성 NaHCO3 (100 ml) 사이에 분배하였다. 유기 추출물을 물 (100 ml)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 1.07 g (정량적)의 메틸 2-메틸-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 EV-AV4643-001을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 225 (M + 1).
메틸 5-아미노-2-메틸-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AV4644-001 - 단계 2
질소 하에 에탄올 (100 ml) 중 메틸 2-메틸-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (EV-AV4643-001, 1.07 g, 4.77 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C (102 mg, 0.048 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 수소의 분위기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 유리 섬유 소결을 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 1.02 g (98%)의 메틸 5-아미노-2-메틸-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AV4644-001을 담갈색 결정질 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.77분, M/z = 195 (M + 1).
메틸 5-아미노-2-메틸-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AV4644-001을 사용하여 반응식 2에 기재된 절차에 따라 (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1,6-디메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 히드로클로라이드 EV-AV4649-001 (EOAI3454825) I-103을 합성하였다.
반응식 6
Figure pct00226
5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복스아미드 히드로클로라이드 EV-AV9635-001 (EOAI3455108) I-112의 합성
Figure pct00227
페닐 5-[(3R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복실레이트 EV-AV9626-002 - 단계 1
압력 튜브 내의 아세토니트릴 (20 ml) 중 Pd(OAc)2 (6 mg, 0.03 mmol) 및 Xantphos (30 mg, 0.05 mmol)의 용액을 5분 동안 탈기시키고, tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-브로모-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV9622-001, 반응식 1에 따라 합성됨, 520 mg, 0.86 mmol), 페닐 포르메이트 (0.19 ml, 1.71 mmol) 및 트리에틸아민 (0.24 ml, 1.71 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 80℃로 4시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 분획을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 220 mg (39%)의 페닐 5-[(3R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복실레이트 EV-AV9626-002를 베이지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.35분, M/z = 649 (M + 1).
tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-카르바모일-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9632-002 - 단계 2
압력 튜브 내의 디옥산 (5 ml) 중 페닐 5-[(3R)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복실레이트 (EV-AV9626-002, 110 mg, 0.17 mmol)의 용액에 수산화암모늄 (35% w/w, 0.1 ml, 2.54 mmol)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 50℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 추가의 수산화암모늄 (35% w/w, 0.5 ml)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 50℃에서 17시간 동안 가열하였다. 추가의 수산화암모늄 (35% w/w, 0.5 ml)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 50℃에서 추가의 23시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM 중에 재용해시키고, 5% NaOH (수성)로 세척하였다. 유기 분획을 상 분리기 카트리지에 통과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 75 mg (77%)의 tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-카르바모일-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 EV-AV9632-002를 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.08분, M/z = 572 (M + 1).
5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]- 1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복스아미드 히드로클로라이드 EV-AV9635-001 (I-112) - 단계 3
tert-부틸 N-[(3R)-1-{7-카르바모일-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일]카르바메이트 (EV-AV9632-002, 75 mg, 0.13 mmol)에 에탄올 중 1.25 M HCl (3 ml)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (3 mL)로부터 동결건조시켜 57.6 mg (84%)의 5-[(3R)-3-아미노피페리딘-1-카르보닐]-2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-7-카르복스아미드 히드로클로라이드 EV-AV9635-001 (I-112)을 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 1.53분, M/z = 472 (M + 1).
특수한 경우
2-[7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AQ4191-002 (EOAI3434971) I-9를 반응식 1에 기재된 절차에 따라 합성하고, 2-[7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-5-{옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐}-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AS1566-001 (EOAI3435740) I-15, 5-[(3aR,7aR)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AS1590-001 (EOAI3437977) I-12 및 5-[(3aS,7aS)-옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6-카르보닐]-2-[7-(시클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸 EV-AS1591-001 (EOAI3437978) I-4를 반응식 7에 기재된 메틸 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AQ1970-001의 합성을 통해 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 7
Figure pct00228
0℃에서 메탄올 (10ml) 중 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실산 (CAS 1016241-64-7, 0.50 g, 3.06 mmol)의 교반 현탁액에 질소의 분위기 하에 티오닐 디클로라이드 (0.56 ml, 7.66 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되도록 한 다음, 환류 하에 24시간 동안 가열하였다. 추가의 메탄올 (15ml)을 용해를 돕기 위해 첨가하고, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 추가의 티오닐 디클로라이드 (0.56 ml, 7.66 mmol)를 질소의 분위기 하에 적가하였다. 혼합물을 다시 3시간 동안 환류 가열하고, 증발 건조시켜 0.66 g (정량적)의 메틸 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카르복실레이트 EV-AQ1970-001을 분홍색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 J): 체류 시간 1.02분, M/z = 178 (M + 1).
(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AU3631-001 (EOAI3447868) I-70을 반응식 1에 기재된 절차에 따라 합성하고, (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-(2,2-디플루오로에틸)-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV3086-001 (EOAI3454400) I-94 및 (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV4830-003 (EOAI3454405) I-33을 반응식 2에 기재된 절차에 따라 합성하고, (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV3852-001 (EOAI3454816) I-104 및 (3R,5R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-(디플루오로메톡시)-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-플루오로피페리딘-3-아민 EV-AV4849-001 (EOAI3455105) I-109를 반응식 8에 기재된 에틸 6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3621-002의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 8
Figure pct00229
1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 EV-AT6244-001 - 단계 1
0℃에서 THF (15 ml) 중 6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (CAS 896722-53-5, 300 mg, 2.02 mmol)의 교반 용액에 질소의 분위기 하에 수소화나트륨 (60%, 121 mg, 3.04 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 벤젠술포닐 클로라이드 (0.31 ml, 2.44 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 ml)에 붓고, EtOAc (3 x 10ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 (20ml)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 607 mg (97.7%)의 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 EV-AT6244-001을 베이지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.26분, M/z = 289 (M + 1).
에틸 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3618-002 - 단계 2
-78℃에서 무수 THF (5 ml) 중 디이소프로필아민 (0.15 ml, 1.04 mmol)의 교반 용액에 질소의 분위기 하에 n-부틸리튬 (헥산 중 2.5M, 0.37 ml, 0.94 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고, 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 무수 THF (5 ml)로 희석하고, -30℃로 냉각시켰다. 무수 THF (10ml) 중 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (EV-AT6244-001, 200 mg, 0.69 mmol) 및 TMEDA (0.16 ml, 1.04 mmol)의 용액을 캐뉼라를 통해 20분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -30℃ 내지 -20℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 에틸 클로로포르메이트 (CAS 541-41-3, 0.20 ml, 2.08 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하고, 혼합물을 -30℃에서 2시간 동안 교반한 후, 실온으로 16시간에 걸쳐 가온하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 물 (15ml)로 켄칭하였다. 수성 층을 DCM (3 x 15ml)으로 추출하고, 합한 층을 물 (3x 10 ml)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 93 mg (36.5%)의 에틸 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3618-002를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.31분, M/z = 361 (M + 1).
주: 반응을 반복하여 추가의 배치의 에틸 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (165 mg, 29.6%, EV-AU3619-002)를 수득하였으며, 이를 EV-AU3618-002와 합하여 단계 3을 수행하였다.
에틸 6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3621-002 - 단계 3
THF (10 ml) 중 에틸 1-(벤젠술포닐)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (EV-AU3618-002 및 EV-AU3619-002, 84%, 258 mg, 0.60 mmol)의 교반 용액에 TBAF (THF, 0.78 ml 중 1M, 0.78 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 약 1/4 부피로 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 95 mg (71.7%)의 에틸 6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 EV-AU3621-002를 회백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 221 (M + 1).
반응식 9
Figure pct00230
1 (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV3085-001 (EOAI3449644) I-119의 합성
Figure pct00231
메틸 4-(에틸아미노)-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 EV- AV3036-001 - 단계 1
에틸아민 (THF 중 2M, 18.3 ml) 및 탄산칼륨 (21.1 g, 152.7 mmol)을 THF (100 ml) 중 메틸 4-클로로-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 (CAS 63603-09-8, 7.50 g, 30.5 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 60℃에서 7시간 동안 교반하였다. 추가의 탄산칼륨 (21.1 g, 152.7 mmol) 및 에틸아민 (THF 중 2M, 7.63 ml)을 첨가하고, 교반을 실온에서 60시간 동안 계속하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 EtOAc (150 ml)로 희석하고, 물 (2 x 50 ml) 및 포화 수성 염화나트륨 (50 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 6.88g (85%)의 메틸 4-(에틸아미노)-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 EV-AV3036-001을 오렌지색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.21분, M/z = 255 (M + 1).
메틸 3-아미노-4-(에틸아미노)-5-메톡시벤조에이트 EV-AV3040-001 - 단계 2
SnCl2 (19.7 g, 103.9 mmol) 및 2M HCl (52 ml)을 에탄올 (150 ml) 중 메틸 4-(에틸아미노)-3-메톡시-5-니트로벤조에이트 (EV-AV3036-001, 6.88 g, 26.0 mmol)의 교반 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류로 1시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 5M 수성 수산화나트륨 (50 ml)을 사용하여 염기성화시킨 다음, EtOAc (150 ml)로 희석하고, 15분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터를 EtOAc로 세척하였다. 여과물의 유기 상을 분리하고, 포화 수성 염화나트륨 (50 ml)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 4.20 g (71%)의 메틸 3-아미노-4-(에틸아미노)-5-메톡시벤조에이트 EV-AV3040-001을 갈색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.70분, M/z = 225 (M + 1).
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV3079-001 - 단계 3
0℃에서 DMF (5 ml) 중 1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (EV-AR6674-001, 반응식 1, 단계 1에 따라 합성됨, 300 mg, 1.36 mmol)의 용액에 HATU (620 mg, 1.63 mmol) 및 DIPEA (0.47 ml, 2.72 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, 3-아미노-4-(에틸아미노)-5-메톡시벤조에이트 (EV-AV3040-001, 311 mg, 1.36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 아세트산 (3 ml) 중에 용해시키고, 밀봉된 튜브에서 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 488mg (76%)의 메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 EV-AV3079-001을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.31분, M/z = 405 (M + 1).
2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AV3081-001 - 단계 4
메틸 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실레이트 (EV-AV3079-001, 488 mg, 1.04 mmol)를 THF/메탄올 (4 ml/1 ml) 중에 용해시키고, 2M 수성 수산화리튬 (5.19 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 물 (2 ml) 중에 용해시키고, 2M HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시켰다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 형성된 침전물을 진공 하에 여과하고, 건조시켜 350 mg (80%)의 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 EV-AV3081-001을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.14분, M/z = 391 (M + 1).
tert-부틸 N-(1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 EV-AV3083-001 - 단계 5
HATU (217 mg, 0.57 mmol) 및 DIPEA (163 μl, 0.95 mmol)를 0℃에서 DMSO (2 ml) 중 2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르복실산 (EV-AV3081-001, 200 mg, 0.48 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, tert-부틸 tert-부틸 N-[(3R)-피페리딘-3-일]카르바메이트 (CAS 309956-78-3, 100 mg, 0.50 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 20분 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 211 mg (74%)의 tert-부틸 N-(1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 EV-AV3083-001을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.25분, M/z = 573 (M + 1).
(3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 EV-AV3085-001 (EOAI3449644) - 단계 6
tert-부틸 N-(1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-일)카르바메이트 (EV-AV3083-001, 210 mg, 0.35 mmol)를 DCM (2 ml) 중에 용해시키고, 디에틸 에테르 중 2M HCl (2 ml)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 물/아세토니트릴 (2 ml/0.5 ml)에 재용해시키고, 진공 하에 농축시키고, 추가로 건조시켜 147 mg (81%)의 (3R)-1-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-1-에틸-7-메톡시-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}피페리딘-3-아민 염산 EV-AV3085-001을 황색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.19분, M/z = 473 (M + 1).
(1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-올 EV-AW5575-001 (EOAI3459241) I-162를 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW5569-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 10
Figure pct00232
(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-메톡시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW5584-001 (EOAI3459405) I-167을 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW5577-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
(1R,4R,6S,7R)-7-브로모-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 EV-AW5568-001 - 단계 1 (반응식 10)
(4R,6R)-3-브로모-1-[(1S)-1-페닐에틸]-1-아자트리시클로[2.2.1.0]헵탄-1-윰 브로마이드 (EV-AW8588-001, 1.00 g, 3.58 mmol)를 메탄올:아세토니트릴 (1:1, 40 ml) 중에 용해시키고, 생성된 현탁액을 65℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-30% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 0.85 g (98%)의 (1R,4R,6S,7R)-7-브로모-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 EV-AW5568-001을 오렌지색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.73분, M/z = 312 (M + 1).
(1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW5570-001 - 단계 2 (반응식 10)
(1R,4R,6S,7R)-7-브로모-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 (EV-AW5568-001, 0.84 g, 2.71 mmol)에 메탄올 중 7M 암모니아 (7.74 ml)를 첨가하였다. 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 0.82 g (98%)의 (1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW5570-001을 오렌지색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.27분, M/z = 247 (M + 1).
tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW5572-001 - 단계 3 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 19에 기재된 절차에 따라 (1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 (EV-AW5570-001)으로부터 합성하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.86분, M/z = 347 (M + 1).
tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW5577-001 - 단계 4 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 20에 기재된 절차에 따라 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-메톡시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AW5572-001)로부터 합성하였다. 1H NMR (500 MHz, 클로로포름-d) δ 5.78 - 5.48 (m, 1H), 3.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H), 3.22 (s, 1H), 2.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.47 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.41 (s, 1H), 1.90 (dd, J = 13.5, 7.1 Hz, 1H), 1.75 - 1.63 (m, 2H), 1.44 (s, 9H). LCMS 데이터 없음.
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-N-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY4518-001 (EOAI3462944) I-237을 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AY4514-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
(1R,4R,7R)-7-브로모-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 EV-AX4162-002 - 단계 5 (반응식 10)
무수 THF (60 ml) 중 (4R,6R)-3-브로모-1-[(1S)-1-페닐에틸]-1-아자트리시클로[2.2.1.0]헵탄-1-윰 브로마이드 (EV-AW8588-001, 3.10 g, 8.63 mmol)의 용액에 -10 내지 -15℃에서 디에틸 에테르 (2.5 ml, 10 mmol) 중 4M 수소화알루미늄리튬을 첨가하였다. 혼합물을 -10 내지 -15℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 수성 중탄산나트륨 (60 ml)으로 켄칭하였다. 혼합물을 물 (200 ml)에 첨가하고, 에틸 아세테이트 (4 x 100 ml)로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 수성 염화나트륨 (100 ml)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 2.11 g (87%)의 (1R,4R,7R)-7-브로모-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 EV-AX4162-002를 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.81분, M/z = 279.95/281.85 (M + 1).
(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AW5552-001 - 단계 6 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 2에 기재된 절차에 따라 (1R,4R,7R)-7-브로모-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄 (EV-AX4162-002)으로부터 합성하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.20분, M/z = 217 (M + 1).
tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW5553-001 - 단계 9 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 19에 기재된 절차에 따라 (1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 (EV-AW5552-001)으로부터 합성하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.83분, M/z = 317 (M + 1).
tert-부틸 N-메틸-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY4510-001 - 단계 10 (반응식 10)
질소의 분위기 하에 DMF (2 ml) 중 tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AW5553-001, 100 mg, 0.32 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 15 mg, 0.38 mmol)에 이어서 아이오도메탄 (39 μL, 0.63 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 물 (30 ml)로 희석하고, EtOAc (2 x 30 ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 110 mg (정량적)의 tert-부틸 N-메틸-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY4510-001을 무색 점성 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.06분, M/z = 331 (M + 1).
tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AY4514-001 - 단계 11 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 20에 기재된 절차에 따라 tert-부틸 N-메틸-N-[(1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AY4510-001)로부터 합성하였다. 1H NMR (500 MHz, 메탄올-d4) δ 4.56 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.61 (s, 1H), 3.22 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.98 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 2.92 - 2.87 (m, 3H), 2.82 (s, 1H), 1.98 - 1.83 (m, 2H), 1.81 - 1.72 (m, 1H), 1.63 - 1.56 (m, 1H), 1.48 (s, 9H). LCMS 데이터 없음.
(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-N,N-디메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY4524-001 (EOAI3468840) I-243을 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AY4523-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
(1R,4R,7R)-N,N-디메틸-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AY4521-001 - 단계 7 (반응식 10)
질소의 분위기 하에 DCM (10 ml) 중 (1R,4R,7R)-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 디히드로클로라이드 (EV-AY4519-001, 210 mg, 0.73 mmol) (반응식 10, 단계 6에서 합성됨)의 교반 용액에 포름알데히드의 수용액 (37%, 0.27 ml, 3.63 mmol)에 이어서 STAB (923 mg, 4.36 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 물 (30 ml)로 희석하고, EtOAc (2 x 30 ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 189 mg (정량적)의 (1R,4R,7R)-N,N-디메틸-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 (EV-AY4521-001)을 무색 점성 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.39 - 7.12 (m, 6H), 3.57 (s, 1H), 3.01 (s, 1H), 2.84 (s, 1H), 2.31 - 2.12 (m, 3H), 2.07 - 1.95 (m, 6H), 1.67 (s, 2H), 1.36 (s, 1H), 1.23 - 1.12 (m, 3H). LCMS 데이터 없음.
tert-부틸 N-[(1R,4R,7R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]-N-메틸카르바메이트 EV-AY4523-001 - 단계 8 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 10 단계 20에 기재된 절차에 따라 (1R,4R,7R)-N,N-디메틸-2-[(1S)-1-페닐에틸]-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 (EV-AY4521-001)으로부터 합성하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.41 (s, 1H), 2.12 (dt, J = 9.8, 3.0 Hz, 1H), 1.79 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 1.49 (s, 1H), 1.47 - 1.37 (m, 7H), 1.10 - 0.99 (m, 2H), 0.71 - 0.61 (m, 1H), 0.58 - 0.48 (m, 1H). LCMS 데이터 없음.
3-{[(1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-일]옥시}프로판니트릴 EV-AY4932-001 (EOAI3472707) I-256을 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-시아노에톡시)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY4931-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다. 최종 탈보호를 반응식 1에 기재된 절차에 따라 수행하였다.
tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-시아노에톡시)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY4931-001 - 단계 22 (반응식 10)
0℃에서 DMF (3 ml) 중 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AY5029-001, 120 mg, 0.18 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (60%, 7.8 mg, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 교반한 다음, 프로프-2-엔니트릴 (12 μl, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc (10 ml)와 물 (10 ml) 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 5 ml)로 추출하고, 합한 유기부를 물 (5 ml)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 80 mg (67%)의 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-6-(2-시아노에톡시)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY4931-001을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.28분, M/z = 640 (M + 1).
2-{[(1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-일]옥시}아세토니트릴 EV-AY4925-001 (EOAI3470051) I-246을 반응식 10 단계 22에 기재된 절차에 따라 브로모아세토니트릴을 사용하여 합성하였다. 최종 탈보호를 반응식 1에 기재된 절차에 따라 수행하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.05분, M/z = 526 (M + 1).
(1S,4R,6E,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(메톡시이미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 EV-AZ4422-001 (EOAI3482317) I-307을 반응식 10에 기재된 N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(메톡시이미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AZ4420-002의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 N-Boc 탈보호 절차에 따라 합성하였다:
tert-부틸 N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-옥소-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AZ4415-001 - 단계 23 (반응식 10)
0℃에서 DCM (10 ml) 중 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AY5029-001, 490 mg, 0.84 mmol)의 용액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (710 mg, 1.67 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반하고, 포화 수성 티오황산나트륨 (10 ml)으로 켄칭하고, DCM (3 x 20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 나머지 잔류물을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 471 mg (89%)의 tert-부틸 N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-옥소-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AZ4415-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.25분, M/z = 585 (M + 1).
N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(메톡시이미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AZ4420-002 - 단계 24 (반응식 10)
메탄올 (1 ml) 중 tert-부틸 N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-옥소-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AZ4415-001, 50 mg, 0.08 mmol)의 현탁액에 O-메틸히드록실아민 HCl (6.7 mg, 0.08 mmol) 및 중탄산나트륨 (6.6 mg, 0.08 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 15시간 동안 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 추가의 O-메틸히드록실아민 HCl (6.7 mg, 0.08 mmol) 및 중탄산나트륨 (6.6 mg, 0.08 mmol)을 2시간 후에 첨가하고, 반응을 65℃에서 추가의 6시간 동안 계속하였다. 온도를 60℃로 감소시키고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성된 황색 오일을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 12 mg (26%)의 N-[(1S,4R,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(메톡시이미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AZ4420-002를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.30분, M/z = 614 (M + 1).
(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6,7-디아민 EV-AY5019-001, (EOAI3469927) I-245를 반응식 10에 기재된 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-6-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8585-005의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8584-001 - 단계 25 (반응식 10)
DIAD (107 μl, 0.51 mmol)를 무수 THF (5 ml) 중 트리페닐포스판 (134 mg, 0.51 mmol)의 교반 용액에 질소의 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 무수 THF (5 ml) 중 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AY5029-001, 200 mg, 0.34 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (41 μl, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 138 mg (48%)의 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8584-001을 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.28분, M/z = 716 (M + 1).
tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-6-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8585-005 - 단계 26 (반응식 10)
DCM (3 ml) 중 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AW8584-001, 134 mg, 0.19 mmol)의 용액에 히드라진 수화물 (1:1) (27 μl, 0.56 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 및 50℃에서 18시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. EtOAc (10 ml)를 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 75 mg (63%)의 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-6-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8585-005를 백색 발포체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.05분, M/z = 586 (M + 1).
(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-N6,N6-디메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6,7-디아민 EV-AW8596-002 (EOAI3476814) I-268을 반응식 10에 기재된 바와 같은 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(디메틸아미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8594-001의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(디메틸아미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8594-001 - 단계 27 (반응식 10)
실온에서 DCM (1 ml) 중 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-6-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AW8585-005, 80 mg, 0.12 mmol)의 교반 혼합물에 3M 포름알데히드 용액 (물 중 37%, 10 μl)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 소듐 트리스(아세테이토-카파O)(히드라이도)보레이트(1-) (37 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 반응을 17시간 동안 계속하였다. 추가의 소듐 트리스(아세테이토-카파O)(히드라이도)보레이트(1-) (37 mg, 0.18 mmol)를 첨가하고, 반응을 2시간 동안 계속하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 20 mg (28%)의 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-(디메틸아미노)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8594-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.16분, M/z = 614 (M + 1).
N-[(1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-일]프로판아미드 EV-AW8592-002 (EOAI3476589) I-264를 반응식 10에 기재된 바와 같은 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-프로판아미도-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8590-002의 합성을 통해 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성하였다.
tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-프로판아미도-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8590-002 - 단계 28 (반응식 10)
디옥산 (3 ml) 중 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-6-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AW8585-005, 62 mg, 0.10 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (16 μl, 0.12 mmol)에 이어서 프로파노일 클로라이드 (10 μl, 0.12 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 34 mg (50%)의 tert-부틸 N-[(1R,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-프로판아미도-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AW8590-002를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 1.19분, M/z = 642 (M + 1).
(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-옥사-3,10-디아자트리시클로[4.4.0.02,8]데칸-4-온 EV-AX4517-002 (EOAI3460130) I-187을 반응식 10에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
(1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-올 EV-AX4510-001 - 단계 29 (반응식 10)
표제 화합물을 반응식 9 단계 6에 기재된 절차에 따라 tert-부틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AY5029-001로부터 합성하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 0.92분, M/z = 487.15 (M + 1).
9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AX4513-001 - 단계 30 (반응식 10)
DCM (2 ml) 중 (1S,4R,6S,7R)-7-아미노-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-6-올 (EV-AX4510-001, 112 mg, 0.21 mmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (0.11 ml, 0.64 mmol) 및 FMOC 클로라이드 (83 mg, 0.32 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 수성 중탄산나트륨 (1 ml)을 첨가하고, 수성 층을 DCM (2 x 1 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC (산성 방법)에 의해 정제하여 47 mg (31%)의 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 EV-AX4513-001을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 D): 체류 시간 1.33분, M/z = 409.4 (M + 1).
(1S,2R,8R)-10-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-옥사-3,10-디아자트리시클로[4.4.0.02,8]데칸-4-온 EV-AX4517-002 - 단계 31 (반응식 10)
DCM (1 ml) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S,4R,6S,7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-6-히드록시-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]카르바메이트 (EV-AX4513-001, 46 mg, 0.06 mmol)의 용액에 -78℃에서 질소의 분위기 하에 N-에틸-N-(트리플루오로-람다~4~-술파닐)에탄아민 (34 μl, 0.26 mmol)을 첨가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 추가의 12시간 동안 교반하였다. 포화 수성 중탄산나트륨 (5 ml)을 첨가하고, 수성 층을 DCM (2 x 5 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DMF 중 20% 피페리딘 (2 ml)에 용해시키고, 용액을 질소의 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 정제용 HPLC (염기성 방법)에 의해 정제하여 16 mg (55%)의 (1S,2R,8R)-10-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-5-옥사-3,10-디아자트리시클로[4.4.0.02,8]데칸-4-온 EV-AX4517-002를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.90분, M/z = 513.2 (M + 1).
N-[(7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]에탄이미드아미드 EV-AZ7933-001 (EOAI3669061) I-340을 반응식 10.1에 기재된 절차에 따라 합성하였다:
반응식 10.1
Figure pct00233
N-[(7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]에탄이미드아미드 EV-AZ7933-001 - 단계 1
메탄올 (5 ml) 중 (7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-아민 히드로클로라이드 (EV-AU9363-001, 반응식 3에 기재된 절차에 따라 합성됨, 140 mg, 0.28 mmol)의 교반 용액에 탄산칼륨 (153 mg, 1.10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (처음에 염기성 방법에 이어서 산성 방법으로 재정제)에 의해 정제하여 27 mg (18%)의 N-[(7R)-2-{2-[1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일]-7-메톡시-1-메틸-1H-1,3-벤조디아졸-5-카르보닐}-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일]에탄이미드아미드 포르메이트 염 EV-AZ7933-001을 백색 분말로서 수득하였다. LCMS (방법 A): 체류 시간 2.05분, M/z = 512.3 (M + 1).
하기 화합물을 상기 기재된 절차에 따라 합성하였다:
Figure pct00234
Figure pct00235
Figure pct00236
Figure pct00237
Figure pct00238
Figure pct00239
Figure pct00240
Figure pct00241
Figure pct00242
Figure pct00243
Figure pct00244
Figure pct00245
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Figure pct00249
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Figure pct00286
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Figure pct00288
Figure pct00289
Figure pct00290
Figure pct00291
Figure pct00292
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Figure pct00294
Figure pct00295
Figure pct00296
Figure pct00297
Figure pct00298
Figure pct00299
Figure pct00300
Figure pct00301
Figure pct00302
Figure pct00303
Figure pct00304
(2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((시스)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논. I-349 주: 출발 물질은 시스-라세미체였다.
반응식 1에 유사한 방식으로 제조하였다. 분자량 = 486.57; LC/MS 체류 시간 = 1.19분.
(칼럼: 워터스 엑스브리지(Waters XBridge) C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 포함; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0% B에서 100% B, 이어서 100% B에서 0.75분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm)). M/Z (+) = 487.12; 염 = 유리 염기.
(2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((4aR,7aS)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논 및 (2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((4aS,7aR)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논을 수득하기 위한 키랄 HPLC. 주: 출발 물질은 시스-라세미체였다. 절대 입체화학을 임의적으로 배정하였다.
반응식 1에 유사한 방식으로 제조하였다. (2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((시스)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논을 에탄올 중에 용해시킨 다음, 키랄 HPLC (키랄셀(Chiralcel) OD 21 x 250mm 10u, 파장: 254, 유량: 15 ml/분, 용매 A: 100% 헵탄, 용매 B: 100% 에탄올, UV에 의한 등용매 수집, %B: 35)에 의해 정제하여 25.7 mg (50.4%)의 (2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((4aR,7aS)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논을 이성질체 A로서, 및 25.4 mg (97.0%)의 (2-(1-(시클로프로필메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)((4aS,7aR)-헥사히드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메타논을 이성질체로서 수득하였다 (절대 입체화학은 임의적으로 배정됨).
Figure pct00305
이성질체 A I-350 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 17.36분 (키랄셀 OD 21 x 250mm 10u, 파장: 254, 유량: 15 ml/분, 용매 A: 100% 헵탄, 용매 B: 100% 에탄올, UV에 의한 등용매 수집, %B: 35). 염 = 유리 염기.
Figure pct00306
이성질체 B I-351 키랄 순도 (UV, 254nm): 100%, 체류 시간: 27.17분 (키랄셀 OD 21 x 250mm 10u, 파장: 254, 유량: 15 ml/분, 용매 A: 100% 헵탄, 용매 B: 100% 에탄올, UV에 의한 등용매 수집, %B: 35). 염 = 유리 염기.
Figure pct00307
tert-부틸 ((3R,6S)-1-(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-6-메틸피페리딘-3-일)카르바메이트. I-352 반응식 11을 사용하여 제조됨.
Figure pct00308
반응식 11
Figure pct00309
메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-인돌-5-카르복실레이트 - 단계 2
1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (5 g, 20.30 mmol) (반응식 2에 따른 EV-AR3621-002로부터 제조됨)을 디메틸포름아미드 (DMF, 80 mL) 중 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 7.72 g, 20.30 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA, 3.90 mL, 22.33 mmol)과 합하였다. 반응물을 15분 동안 교반한 다음, 메틸 3-아미노-4-(메틸아미노)벤조에이트 EV-AR3155-001 (4.02 g, 22.33 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응의 완료 시에 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물에 아세트산 (AcOH, 120 mL)을 첨가하고, 용기를 70℃로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 반응물을 자동화 크로마토그래피를 사용하여 정제하고, 생성물을 헥산 중 40% 에틸 아세테이트의 칼럼에서 분리하여 메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 (6.9 g, 17.67 mmol, 87% 수율)를 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.95분, M/z = 391.0 (M + 1).
2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 - 단계 3
THF (7 mL) 및 메탄올 (3.50 mL) 중 메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 (500 mg, 1.281 mmol)의 용액에 물 (3.50 mL) 및 물 중 수산화리튬 일수화물의 용액 (3 M, 1.281 mL, 3.84 mmol)을 첨가하였다. 30분 후, 출발 물질을 용액에서 짜내고, 추가의 THF (9 mL)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시킨 다음, 염산 (물 중 1 M, 3.84 mL, 3.84 mmol)을 사용하여 중화시켰다. 물을 현탁액에 첨가하고, 초음파처리 후에 현탁액을 여과하고, 고체를 공기 건조시켜 생성물 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 (470 mg, 1.249 mmol, 98% 수율)을 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.85분, M/z = 376.8 (M + 1).
tert-부틸 ((3R,6S)-1-(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-6-메틸피페리딘-3-일)카르바메이트, I-352 - 단계 4
2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 (30 mg, 0.080 mmol), tert-부틸 ((3R,6S)-6-메틸피페리딘-3-일)카르바메이트 (25.6 mg, 0.120 mmol), HATU (36.4 mg, 0.096 mmol) 및 DIPEA (0.042 mL, 0.239 mmol)를 DMF (1 mL) 중에서 합하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 아미드 형성의 완료 시에 (LCMS에 의해 측정된 바와 같음), HCl (디옥산 중 4 M, 1 mL, 4 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 반응물을 50℃로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과한 다음, 정제용 HPLC를 사용하여 정제하여 ((2S,5R)-5-아미노-2-메틸피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-352 (22.6 mg, 0.047 mmol, 59.4% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.73분, M/z = 472.9 (M + 1).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 이동 8.04 - 8.00 (m, 1H), 7.78 - 7.72 (m, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.11 - 7.02 (m, 2H), 6.72 - 6.63 (m, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.01 - 3.96 (m, 3H), 3.96 - 3.91 (m, 3H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.66 - 1.51 (m, 1H), 1.26 - 1.13 (m, 4H), 0.36 - 0.29 (m, 2H), 0.25 - 0.19 (m, 2H)
Figure pct00310
((1R,4R,7R)-7-아미노-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-353
반응식 11에서의 절차를 따라 I-353 (95% 수율, 97% 순도)을 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.71분, M/z = 470.9 (M + 1). (여러 신호가 물 피크 하에 가려진 것으로 보임) 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (br d, J=8.25 Hz, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.67-7.78 (m, 1H), 7.42-7.55 (m, 1H), 7.12-7.33 (m, 1H), 7.07 (br s, 2H), 6.68 (d, J=8.41 Hz, 1H), 4.41-4.59 (m, 2H), 3.97 (br s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.08-3.28 (m, 1H), 2.66 (br s, 1H), 1.79-2.04 (m, 3H), 1.55-1.72 (m, 1H), 1.09-1.28 (m, 1H), 0.31 (br d, J=7.83 Hz, 2H), 0.22 (br s, 2H).
Figure pct00311
((3S,5S)-3-아미노-5-플루오로피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논
반응식 11에서의 절차를 따라 I-354 (90% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.72분, M/z = 476.9 (M + 1). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 이동 8.03 - 7.96 (m, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 1H), 7.06 - 7.02 (m, 1H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 2H), 4.01 - 3.94 (m, 3H), 3.94 - 3.89 (m, 3H), 3.48 - 3.33 (m, 1H), 3.07 - 2.87 (m, 1H), 2.42 - 2.28 (m, 1H), 1.93 - 1.72 (m, 1H), 1.21 - 1.04 (m, 1H), 0.35 - 0.24 (m, 2H), 0.22 - 0.08 (m, 2H)
((2S,5R)-5-아미노-2-메틸피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논. I 355 반응식 12에 따라 제조됨.
Figure pct00312
반응식 12
Figure pct00313
메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 - 단계 2
1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (5 g, 20.30 mmol), HATU (7.72 g, 20.30 mmol) 및 DIPEA (10.64 ml, 60.9 mmol)를 DMF (80 ml)에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 이 때 메틸 3-아미노-5-메톡시-4-(메틸아미노)벤조에이트 HCl 염 (5.51 g, 22.33 mmol)을 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, AcOH (120 mL)를 잔류물에 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 4시간 동안 교반한 다음, AcOH을 진공 하에 제거하고, 조 생성물을 셀라이트 상에 흡수시키고, 자동화 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 (6.5 g, 15.46 mmol, 76% 수율)를 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.98분, M/z = 421.0 (M + 1).
2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 - 단계 3
메틸 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 (500 mg, 1.189 mmol)를 THF (10 mL), MeOH (5.00 mL) 및 물 (2.500 mL) 중에 용해시키고, 물 중 수산화리튬의 용액 (3M, 1.189 mL, 3.57 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 추가의 THF를 반응물이 균질해질 때까지 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 물 중 HCl (1 M, 3.6 mL, 3.6 mmol)을 첨가하여 pH를 약 6으로 조정하였다. 생성된 고체를 수집하여 생성물 2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 (435 mg, 1.07 mmol, 90% 수율)을 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.89분, M/z = 406.8 (M + 1).
((2S,5R)-5-아미노-2-메틸피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-355 - 단계 4
절차 반응식 12에서의 단계 4를 따라 ((2S,5R)-5-아미노-2-메틸피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-355 (68.7% 수율, 100% 순도)를 제조하였다. LCMS: 체류 시간 0.76분, M/z = 502.9 (M + 1).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 이동 8.03 - 7.98 (m, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.01 - 6.94 (m, 1H), 6.83 - 6.77 (m, 1H), 6.70 - 6.61 (m, 1H), 4.48 - 4.38 (m, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 4.00 - 3.96 (m, 3H), 3.96 - 3.93 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.56 - 2.52 (m, 3H), 1.90 - 1.88 (m, 2H), 1.76 - 1.62 (m, 2H), 1.58 - 1.39 (m, 2H), 1.26 - 1.12 (m, 4H), 0.38 - 0.27 (m, 2H), 0.25 - 0.14 (m, 2H)
Figure pct00314
((3S,5S)-3-아미노-5-플루오로피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논. I-356
반응식 12에서의 절차를 따라 ((3S,5S)-3-아미노-5-플루오로피페리딘-1-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-6-메톡시-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-356 (56.7% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. LCMS: 체류 시간 0.75분, M/z = 506.9 (M + 1).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 이동 8.06 - 7.96 (m, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 1H), 7.01 - 6.93 (m, 1H), 6.87 - 6.79 (m, 1H), 6.70 - 6.61 (m, 1H), 4.44 - 4.37 (m, 2H), 4.14 - 4.08 (m, 3H), 4.01 - 3.95 (m, 3H), 3.95 - 3.92 (m, 3H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 1H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.23 - 2.10 (m, 1H), 1.94 - 1.84 (m, 2H), 1.65 - 1.43 (m, 1H), 1.21 - 1.06 (m, 1H), 0.37 - 0.24 (m, 2H), 0.23 - 0.11 (m, 2H)
반응식 13
Figure pct00315
tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트: 5 반응식 13.1을 사용하여 제조됨
Figure pct00316
반응식 13.1
Figure pct00317
5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-카르브알데히드: 2
DMF 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-1H-인돌-2-카르브알데히드 1 (1 g, 4.46 mmol)의 차가운 (0℃) 용액을 NaH (0.196 g, 4.91 mmol)로 조금씩 처리하였다. 이어서, 반응물을 0℃에서 추가의 30분 동안 교반하였다. 이어서, (브로모메틸)시클로프로판 (0.723 g, 5.36 mmol)을 첨가하고, 빙조를 제거하였다. 14시간 후, 반응물을 H2O (2 mL)로 켄칭한 다음, EtOAc로 희석하고, H2O, 염수로 추출하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 오렌지색 왁스를 수득하였다. 이어서, 왁스를 바이오타지(Biotage) (80g col, 0-60% EtOAc/헥산, 12 CV)에 의해 정제하여 목적 생성물, 800mg (64%)을 연황색 오일로서 수득하였다, LCMS (방법 A): 체류 시간 2.18분, M/z = 280.10 (M + 2).
메틸-2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트: 3
에탄올 (30 mL) 중 5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-카르브알데히드 2 (2.2 g, 7.91 mmol), 및 메틸-3-메톡시-4-(메틸아미노)-5-니트로벤조에이트 (WO 2014/015905 A1, 중간체 23) (1.900 g, 7.91 mmol)의 현탁액을 H2O (10 mL) 중 차아황산나트륨 (4.13 g, 23.73 mmol)의 용액으로 1 부분으로 처리하였다. 이어서, 반응물을 환류 하에 18시간 동안 가열하였다. 그 후, 반응물을 DCM (150 ml)으로 희석하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 고체를 수득하였다. 고체를 바이오타지 (80g col, 0-30% EtOAc / 헥산, 12 CV)에 의해 정제하여 1g의 회수된 알데히드, 1.4 g의 회수된 니트로 화합물을 수득하였다. 황색 고체로서의 430 mg (12%) 목적 생성물과 함께, LCMS (방법 A): 체류 시간 2.25분, M/z = 470.20 (M + 2).
2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산: 4
THF (15 mL) 중 메틸 2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실레이트 3 (1.1 g, 2.349 mmol)의 실온 용액을 H2O (6 mL) 중에서 LiOH (0.225 g, 9.39 mmol)의 용액으로 처리하였다. 이어서, 반응물을 환류 하에 1.5시간 동안 가열하였다. 현탁액을 얼음으로 냉각시킨 다음, 1N HCl (대략 25 ml)을 사용하여 산성으로 만들었다. 생성된 적색 고체를 여과하고, H2O로 세척하고, 건조시켰다 (고진공). 이어서, 고체를 EtOAc / DCM에 녹이고, MgSO4로 다시 건조시키고, 여과한 다음, 농축시켜 적색 고체를 수득하였다. 940mg (88%), LCMS (방법 A): 체류 시간 1.27분, M/z = 456.20 (M + 2).
tert-부틸((1S,4R)-2-(2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트: 5
DCM (50 mL) 중 2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르복실산 4 (940 mg, 2.069 mmol), DIEA (0.542 mL, 3.10 mmol)의 실온 용액을 HATU (865 mg, 2.276 mmol)로 1 부분으로 처리하였다. tert-부틸 (1R,4R,7R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일카르바메이트 (483 mg, 2.276 mmol)를 첨가하고, 교반을 18시간 동안 계속하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, H2O, 포화 비카르브, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. 이어서, 오일을 바이오타지 (80g col, 50--90% EtOAc/헥산, 12 CV, 이어서 90% EtOAc/헥산, 2 CV)에 의해 정제하여 목적 생성물을 담오렌지색 오일, 1.07 g (80%)으로서 수득하였다, LCMS (방법 A): 체류 시간 1.09분, M/z = 649.50 (M + 1). M/z = 650.13 (M + 2).
절차 A
Figure pct00318
((1S,4R)-7-아미노-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)(2-(1-(시클로프로필메틸)-5-((E)-4-(트리플루오로메틸)스티릴)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-361:
THF (5 mL) 중 tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트 5 (50 mg, 0.077 mmol), (E)-(4-(트리플루오로메틸)스티릴)보론산 (16.65 mg, 0.077 mmol), 및 삼염기성 인산칼륨 (0.925 mL, 0.463 mmol)의 수용액 (0.5M)의 현탁액을 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디-I-프로폭시-1,1'비페닐 (21.58 mg, 0.046 mmol) 및 염화팔라듐 (II) (2.73 mg, 0.015 mmol)에 1 부분으로 첨가하였다. 생성된 적색빛 현탁액을 80℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 EtOAc로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 담오렌지색 왁스를 수득하였다. 왁스는 LCMS (MW = 739)에 의해 탈보호 단계를 수행하기에 충분히 깨끗하였다. 왁스를 DCM (2 mL)에 녹인 다음, 4M HCl (0.5 mL, 2.000 mmol) (디옥산 중 4M)로 처리하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시키고, DCM에 녹이고, 여과하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시킨 다음 정제하여 2ml DMF 중 32 mg을 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 19분에 걸쳐 50-90% B에 이어서 100% B에서 4-분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 20.3 mg (34% 수율)이고, LCMS 분석에 의한 그의 추정되는 순도는 100%였다. LCMS (방법 B): 체류 시간 2.42분, M/z = 640.14 (M + 1).
절차 B
Figure pct00319
((1S,4R)-7-아미노-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-일)(2-(5-((2-시클로프로필에틸)아미노)-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)메타논, I-374:
톨루엔 (15 mL) 중 5 (50 mg, 0.077 mmol), 2-시클로프로필에탄아민 (6.56 mg, 0.077 mmol), X-PHOS (7.35 mg, 0.015 mmol)의 현탁액을 질소로 15분 동안 탈기시켰다. 이어서, Pd2(dba)3 (7.06 mg, 7.71 μmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (14.82 mg, 0.154 mmol)를 첨가하고, 현탁액을 80℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, EtOAc로 희석한 다음, H2O, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 황갈색 왁스를 수득하였다. 왁스는 LCMS (MW = 652)에 의해 목적 생성물을 함유하는 것으로 LCMS에 의해 제시되었으며, 이는 이어서 직접 탈보호되었다.
물질을 DCM (0.5mL)에 녹인 다음, HCl (0.5 mL, 2 mmol, 디옥산 중 4M)로 처리하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시킨 다음, DCM (2x)으로부터 증발시켰다. 조 물질을 MeOH (여과됨) 중에 용해시키고, 증발시켜 적색 고체: 37 mg을 수득하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자 크기; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 20분에 걸쳐 35-75% B, 이어서 100% B에서 7분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 10.9 mg (16%)이었고, LCMS에 의한 그의 추정되는 순도는 98%였다. LCMS (방법 B): 체류 시간 1.84분, M/z = 553.26 (M + 1).
절차 C
Figure pct00320
단계 1: tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(5-시아노-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트:
DMF (4 mL) 및 물 (0.4 mL) 중 tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(5-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트 (100 mg, 0.154 mmol) 5, 시안화아연 (18.10 mg, 0.154 mmol), Pd2dba3 (7.06 mg, 7.71 μmol) 및 DPPF (10.26 mg, 0.019 mmol)의 현탁액을 120℃로 18시간 동안 가열하였다. 추가의 시안화아연 (18.10 mg, 0.154 mmol), Pd2dba3 (7.06 mg, 7.71 μmol) 및 DPPF (10.26 mg, 0.019 mmol)를 첨가하고, 120℃에서의 교반을 4시간 동안 계속하였다. 반응물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, H2O, 포화 비카르브로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 흑색 왁스를 수득하였다. 왁스를 바이오타지 (40g col, 20-100% EtOAc/헥산, 12 CV에 이어서 100% EtOAc, 4 CV)에 의해 정제하여 목적 생성물을 담황색 왁스: 89 mg (97% 수율)로서 수득하였다, LCMS (방법 A): 체류 시간 분 2.11분, M/z = 595.65 (M + 1).
단계 2: 2-(5-((1S,4R)-7-아미노-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르보닐)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-5-카르보니트릴, I-370:
DCM (1 mL) 중 tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(5-시아노-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트 (35 mg, 0.059 mmol)의 용액을 HCl (0.5 ml, 2 mmol, 디옥산 중 4M) 적가 처리하였다. 1시간 후, 반응물을 농축시킨 다음, 순차적으로 DCM 중에 용해시키고, 농축시켰다 (2x). 조 물질을 MeOH (여과됨) 중에 용해시키고, 증발시켜 적색 고체, 22 mg을 수득하였으며, 이를 1.5 ml의 DMF 중에 용해시키고, 정제용 LC/MS를 통해 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10-mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 20분에 걸쳐 15-55% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 14.4 mg (38% 수율)이었고, LCMS에 의한 그의 추정되는 순도는 100%였다. LCMS (방법 B): 체류 시간 분 1.81분, M/z = 495.07 (M + 1).
반응식 14
Figure pct00321
tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(6-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트 6:
브로마이드를 상업적으로 입수가능한 6-브로모-1H-인돌-2-카르브알데히드로부터 출발하여 반응식 13.1에 기재된 바와 같이 제조하여 오렌지색 왁스를 수득하였다, LCMS (방법 A): 체류 시간 1.29분, M/z = 650.30 (M + 2).
모든 6종의 치환된 -1H-인돌-2일 화합물을 5- 치환된 화합물에 대해 기재된 바와 동일한 절차 (반응식 13)를 사용하여 tert-부틸 ((1S,4R)-2-(2-(6-브로모-1-(시클로프로필메틸)-1H-인돌-2-일)-7-메톡시-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-7-일)카르바메이트 6으로부터 제조하였다.
반응식 13 및 14에 대한 HPLC 방법
방법 A
(저 pH 시마즈 3분 방법)
칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH dC18, 2.1mmx50mm, 1.7μm 칼럼
유량: 0.6 ml/분
이동상: A, TFA (수성) 0.05% 및 B, TFA (아세토니트릴) 0.05%
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 220 nm (공칭)
구배 - 0-100% B
방법 B
칼럼: 워터 엑스브리지 C18, 2.1mmx50mm, 1.7 μm 칼럼
유량: 0.6 ml/분
이동상: 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도:
50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0% B에서 100% B, 이어서 100% B에서 0.75분 유지
주입 부피: 3 μl
온도: 40℃
검출: 220 nm (공칭)
하기 화합물을 반응식 13 및 14에 기재된 바와 같은 방법 A, B 또는 C를 사용하여 제조하였다:
Figure pct00322
Figure pct00323
생물학적 검정
본 발명의 화합물을 PAD4의 억제제로서 하기 기재된 검정 프로토콜을 사용하여 검정하였다.
화합물을 100% DMSO에서 가용화시켜 100 mM 최종 화합물 농도를 달성하였다. 화합물 원액을 RT에서 저장하였다. 일련의 희석물을 DMSO에서 제조하고, 20 μL 혼합 부피로 8회 혼합하였다. 최종 검정 조건은 하기와 같았다:
반응 부피: 20 μl
검정 완충제 (상기 언급된 바와 같음): 100 mM 트리스-HCl (pH 7.6), 2 mM DTT, 1 mM CaCl2
최종 농도:
-100 nM hPAD4 효소
-50 μM (8배 서브-Km) 기질 펩티드
-0.5% DMSO
총 인큐베이션 시간: 37℃에서 65분
정지 용액: ACN 중 40 μl 5% TCA
0.25 μL의 화합물 용액을 검정 완충제 (100 mM 트리스-HCl pH 7.6, 2 mM DTT) 중 200 nM PAD4 10 μL에 첨가하였다. 5분 후에, 완충제 (100 mM 트리스-HCl pH 7.6, 2 mM DTT, 2 mM CaCl2) 중 100 μM의 기질 10 μL를 첨가하고, 반응물을 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 효소적 반응을 ACN 정지 용액 중 5% TCA (1.7% TCA 최종 농도) 40 μl의 첨가에 의해 켄칭하였다. 아르기닌 함유 기질 및 시트룰린 함유 생성물 (+1 Da 질량 이동)을 애질런트 래피드파이어(Agilent RapidFire) (RF) 300 시스템 상에서 고체 상 추출에 적용하고, 정량화를 위한 다중 반응 모니터링 (MRM)의 적용 하에 결합된 삼중 사중극자 애질런트 6460 QQQ 질량 분광측정법 (MS) 장치 상에서 검출하였다.
PAD 동종효소에 대한 IC50 결정
주어진 시험 화합물에 대한 IC50을 질량 분광 검정을 사용하여 측정하였으며, 이는 페닐글리옥살과의 반응 후에 BAEE의 시트룰린화 생성물을 검출하였다. 시험 화합물을 100% DMSO 중에 용해시키고, 0.125 uL를 384 웰 REMP 폴리프로필렌 플레이트에 전달한 후, 효소를 첨가하였다. 효소 및 화합물을 37℃에서 30분 동안 사전-인큐베이션하고, 반응을 BAEE 기질의 첨가에 의해 개시하여 각각의 검정 웰에서의 최종 농도가 포화 칼슘 농도 (250 uM)의 BAEE에 대한 Km 값과 동등하도록 하였다. 반응에 사용된 완충제는 25 mM Hepes pH 7.5, 5 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.01% Chaps, 0.2 mg/mL BSA, 및 BAEE의 10배 Km에서 측정된 바와 같이, 각각 Ca2+에 대한 K0.5의 1/5 또는 Ca2+에 대한 20 x K0.5에 상응하는 50 uM 또는 1 mM CaCl2를 함유하였다. 사용된 전형적인 효소 농도는 최종 반응에서 5 nM이고, 총 반응 부피는 25 uL이었다. BAEE의 첨가 후에 반응을 37℃에서 1.5시간 동안 진행되도록 한 후, 15 ul의 6.1 N TCA 및 35 ul의 8.5 mM 페닐글리옥살로 켄칭하였다. 페닐 글리옥살의 최종 농도는 4 mM이었다. 혼합물을 37℃에서 추가의 30분 동안 교반하면서 인큐베이션되도록 하여 페닐 글리옥살에 의한 시트룰린화 생성물의 완전 개량을 가능하게 하였다. 켄칭된 반응 플레이트를 3분 동안 5000 x g에서 원심분리하고, 내부 표준 (페닐글리옥살 변형된 시트룰린)을 함유하는 메탄올의 동일한 부피를 각각의 웰에 첨가하였다. 내용물을 래피드파이어 MS 분석을 위해 새로운 384-웰 REMP 플레이트로 옮겼다.
샘플을 래피드파이어 RF300 시스템 (애질런트) 상에 로딩하였으며, 여기서 이들을 먼저 1000 ms에 대해 시핑(sipping)한 다음, 3000 ms 탈염에 대해 0.01% 포름산을 함유하는 아세토니트릴의 혼합물을 사용하여 C18 분리 카트리지에 직접 로딩하였다. 이동상의 유량은 1.5 ml/분이었다. 샘플이 카트리지로부터 용리되면, 0.01% 포름산을 함유하는 아세토니트릴의 이동상을 사용하여 1.25 ml/분의 유량의 4000 ms에 대한 질량 분광계 내로 샘플을 이동시켰다. ESI가 구비된 사이엑스(Sciex) API4000 삼중 사중극자 질량 분광계 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems))를 사용하여 펩티딜 시트룰린 및 내부 표준 이온을 분석하였다. 생성물 및 내부 표준의 MRM 전이를 각각 m/z 424.5 내지 350.4 및 m/z 293 내지 247에서 모니터링하였다. 각각의 전이에 대한 체류 시간은 200 ms로 설정하였고, ESI 전압은 400℃의 소스 온도 하에 5500 V로 사용하였다. 각각의 전이에 대한 추출된 이온 피크를 래피드파이어 인테그레이터 소프트웨어를 사용하여 통합하였다. 피크 면적을 내부 표준에 대해 정규화하였다.
IC50 결정에 대해, 화합물을 DMSO 중에 3배 연속 희석하였고, 11개의 상이한 농도에서 시험하였다. 피크 면적 비는 분석물의 피크 면적을 내부 표준의 피크 면적으로 나눔으로써 계산하였다. DMSO 대조군 및 효소 무함유 배경으로부터의 피크 면적 비를 사용하여 억제제의 각각의 농도에서 발생하는 퍼센트 억제를 계산하고, IC50은 하기 방적식을 사용하여 계산하였다.
Figure pct00324
여기서 Y = 각각의 억제제 농도에서의 % 억제, A = 최소 Y 값, B = 최대 Y 값, C = logIC50, D = 힐 기울기, 및 x = 억제제의 농도이다.
하기 표 2는 상기 기재된 PAD4 검정에서 본 발명의 선택된 화합물의 활성을 보여준다. 화합물 번호는 표 1에서의 화합물 번호에 상응한다. "A"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 IC50 ≤ 1 μM을 제공하고; "B"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 1.0 - 5.0 μM의 IC50을 제공하고; "C"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 5.0 - 10.0 μM의 IC50을 제공하고; "D"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 ≥ 10.0 μM의 IC50을 제공하였다. 용어 pIC50 = -log(IC50)이다. "E"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 pIC50 ≤ 4를 제공하고; "F"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 4.0-5.0의 pIC50을 제공하고; "G"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 5.0-6.0의 pIC50을 제공하고; "H"로 지정된 활성을 갖는 화합물은 ≥ 6의 pIC50을 제공하였다. "NA"는 "검정되지 않음"을 나타낸다.
표 2. PAD4 활성
Figure pct00325
Figure pct00326
Figure pct00327
Figure pct00328
Figure pct00329
Figure pct00330

Claims (21)

  1. 화학식 I'의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00331

    여기서:
    고리 A는
    Figure pct00332

    Figure pct00333

    Figure pct00334
    이며, 여기서 고리 A는 플루오린, -CN, -OR, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족으로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환되고;
    고리 B는
    Figure pct00335
    이고;
    R1은 수소, -CN, -OR,
    Figure pct00336
    , 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-4개의 기로 임의로 치환된 C1-6 지방족이고;
    R2는 수소, 또는 플루오린, -CN 또는 -OR로부터 선택되는 1-5개의 기로 임의로 치환된 C1-10 지방족이고;
    각각의 X1 및 X2는 독립적으로 N 또는 C(R4)로부터 선택되고;
    R3은 할로겐, -CN, -R,
    Figure pct00337
    이고;
    각각의 R4는 독립적으로 할로겐, -CN, -R,
    Figure pct00338
    이고;
    R5는 수소 또는 할로겐이고;
    n은 0-4이고;
    각각의 R은 독립적으로 수소, 또는 1-3개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-6 지방족이다.
  2. 제1항에 있어서, 고리 A는
    Figure pct00339
    인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 고리 A는
    Figure pct00340
    인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 메틸, 에틸 또는 프로필인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 임의로 치환된 C1-10 지방족인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, R2는 메틸, 에틸 또는 -CH2-시클로프로필인 화합물.
  7. 제5항에 있어서, R2는 1-5개의 플루오린 원자로 치환된 C1-10 지방족인 화합물.
  8. 제7항에 있어서, R2는 -CH2CF3인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 둘 다 N인 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 N이고, X2는 CH인 화합물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 CH이고, X2는 N인 화합물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 둘 다 CH인 화합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 C1-6 지방족 또는 -OR인 화합물.
  14. 제13항에 있어서, R4는 에틸 또는 -OCH3인 화합물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클을 포함하는 제약상 허용되는 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 추가의 치료제와 조합된 조성물.
  17. PAD4를 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 대상체 또는 생물학적 샘플에서 PAD4를 억제하는 방법.
  18. PAD4-매개 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제15항에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 PAD4-매개 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 대상체가 인간 대상체인 방법.
  20. 제18항에 있어서, PAD4-매개 질환, 장애 또는 상태가 산-유발된 폐 손상, 여드름 (PAPA), 급성 림프구성 백혈병, 급성, 호흡 곤란 증후군, 애디슨병, 부신 증식증, 부신피질 기능부전, 노화, AIDS, 알콜성 간염, 알콜성 간염, 알콜성 간 질환, 알레르겐 유발된 천식, 알레르기성 기관지폐, 아스페르길루스증, 알레르기성 결막염, 탈모증, 알츠하이머병, 아밀로이드증, 근위축성 측삭 경화증, 및 체중 감소, 협심증, 혈관부종, 무한성 외배엽 이형성증-ID, 강직성 척추염, 앞 구역, 염증, 항인지질 증후군, 아프타성 구내염, 충수염, 관절염, 천식, 아테롬성동맥경화증, 아토피성 피부염, 자가면역 질환, 자가면역 간염, 벌 침-유발된 염증, 베체트병, 베체트 증후군, 벨 마비, 베릴륨중독증, 블라우 증후군, 골통, 세기관지염, 화상, 윤활낭염, 암, 심장 비대, 손목 터널 증후군, 이화 장애, 백내장, 뇌 동맥류, 화학적 자극-유발된 염증, 맥락망막염, 만성 심부전, 미숙아 만성 폐 질환, 만성 림프구성 백혈병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 결장염, 복합 부위 통증 증후군, 결합 조직 질환, 각막 궤양, 크론병, 크리오피린-연관 주기성 증후군, 크립토코쿠스증, 낭성 섬유증, 인터류킨-1-수용체 길항제 (DIRA)의 결핍, 피부염, 피부염 내독소혈증, 피부근염, 미만성 내재성 뇌교 신경교종, 자궁내막증, 내독소혈증, 상과염, 적모구감소증, 가족성 아밀로이드성 다발신경병증, 가족성 한랭 두드러기, 가족성 지중해열, 태아 성장 지연, 녹내장, 사구체 질환, 사구체 신염, 통풍, 통풍성 관절염, 이식편-대-숙주 질환, 장 질환, 두부 손상, 두통, 청각 상실, 심장 질환, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쉔라인 자반증, 간염, 유전성 주기성 발열 증후군, 대상 포진 및 단순 포진, HIV-1, 호지킨병, 헌팅턴병, 유리질 막 질환, 고암모니아혈증, 고칼슘혈증, 고콜레스테롤혈증, 회귀열을 동반한 고이뮤노글로불린혈증 D (HIDS), 형성부전성 및 다른 빈혈, 형성부전성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 색소실조증, 감염성 단핵구증, 염증성 장 질환, 염증성 폐 질환, 염증성 신경병증, 염증성 통증, 곤충 교상-유발된 염증, 홍채염, 자극-유발된 염증, 허혈/재관류, 소아 류마티스 관절염, 각막염, 신장 질환, 기생충 감염에 의해 유발된 신장 손상, 기생충 감염에 의해 유발된 신장 손상, 신장 이식 거부 프로필락시스, 렙토스피라증, 백혈병, 뢰플러 증후군, 폐 손상, 폐 손상, 루푸스, 루푸스, 루푸스 신염, 림프종, 수막염, 중피종, 혼합 결합 조직 질환, 머클-웰즈 증후군 (두드러기 난청 아밀로이드증), 다발성 경화증, 근육 소모, 근육 이영양증, 중증 근무력증, 심근염, 균상 식육종, 균상 식육종, 골수이형성 증후군, 근염, 코 부비동염, 괴사성 소장결장염, 신생아 발병 다기관 염증성 질환 (NOMID), 신증후군, 신경염, 신경병리학적 질환, 비-알레르겐 유발된 천식, 비만, 안구 알레르기, 시신경염, 기관 이식, 골관절염, 중이염, 파제트병, 통증, 췌장염, 파킨슨병, 천포창, 심막염, 주기열, 치주염, 복막 자궁내막증, 백일해, 인두염 및 선염 (PFAPA 증후군), 식물 자극-유발된 염증, 폐렴, 폐장염, 폐포자충 감염, 덩굴 옻나무/ 우루시올 오일-유발된 염증, 결절성 다발동맥염, 다발연골염, 다낭성 신장 질환, 다발근염, 건선, 건선, 건선, 건선, 정신사회적 스트레스 질환, 폐 질환, 폐고혈압, 폐 섬유증, 괴저성 농피증, 화농성 멸균 관절염, 신질환, 망막 질환, 류마티스성 심장염, 류마티스성 질환, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 지루, 패혈증, 중증 통증, 겸상 적혈구, 겸상 적혈구성 빈혈, 실리카-유발된 질환, 쇼그렌 증후군, 피부 질환, 수면 무호흡, 고형 종양, 척수 손상, 스티븐스-존슨 증후군, 졸중, 지주막하 출혈, 일광화상, 측두 동맥염, 건활막염, 혈소판감소증, 갑상선염, 조직 이식, TNF 수용체 연관 주기성 증후군 (TRAPS), 톡소플라스마증, 이식, 외상성 뇌 손상, 결핵, 제1형 당뇨병, 제2형 당뇨병, 궤양성 결장염, 두드러기, 포도막염 및 베게너 육아종증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  21. 제18항에 있어서, PAD4-매개 질환, 장애 또는 상태가 류마티스 관절염, 혈관염, 전신 홍반성 루푸스, 궤양성 결장염, 암, 낭성 섬유증, 천식, 피부 홍반성 루푸스 및 건선으로부터 선택되는 것인 방법.
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