TWI762769B - 肽醯精胺酸脫亞胺酶抑制劑及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及式（I）所示的肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4抑制劑化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，以及它們的藥物組合物、藥物製劑及用途。X、Y、R₁ 、R₂ 、R₃ 、R₄ 、R₅ 、R₇ 、R₈ 、R₉ 、環B和m如說明書中所定義。本發明所涉及的化合物對肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4具有抑制作用，可以用於治療多種病症，例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬，

Description

肽醯精胺酸脫亞胺酶抑制劑及其用途

本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及通式(I)所表示的肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4抑制劑化合物及其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，以及它們的藥物組合物、藥物製劑及用途。本發明所涉及的化合物對肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4具有抑制作用，可以用於治療多種病症，例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。

PAD4是肽醯精胺酸脫亞胺酶(peptidylarginine deiminase，PAD)家族的一員，具有同型二聚體的結構，是Ca²⁺依賴性酶，每個單體含有5個鈣離子結合位點，由663個胺基酸殘基組成，分子量為74kDa，在Ca²⁺的存在下將蛋白多肽中的精胺酸殘基催化生成瓜胺酸。瓜胺酸化後的蛋白質往往改變其原有分子構象，從而導致蛋白質的生化活性亦發生改變，並參與多種生理和病理反應。比如，類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、血管炎、癌症等。

類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性、炎性、系統性的自體免疫疾病，主要臨床表現為小關節滑膜所致的關節腫痛，繼而軟骨破壞、關節間隙變窄、關節僵直、畸形等功能性障礙。世界範圍內的發 病率為0.4%-1%，其中，中國約有500萬名類風濕性關節炎患者。該疾病在女性人群中更加高發，女性與男性發病率比值為3：1，發病年齡主要集中在25-55周歲。研究發現RA患者血清中PAD4含量明顯升高，患者機體可產生自身抗PAD4抗體，並且PAD4瓜胺酸化多種蛋白質，引起機體自身的免疫反應，參與RA的發生與發展。如波形蛋白發生瓜胺酸化後，瓜胺酸肽段被HLA-DR分子識別，引發T細胞免疫反應。

另外，多發性硬化症(multiple sclerosis，MS)患者腦中PAD4表達升高，因此，PAD4抑制劑也可以用於治療多發性硬化症。同時組蛋白瓜胺酸化與嗜中性粒細胞細胞外Trap(NET)的形成(先天性免疫反應機制)有關，而PAD4抑制劑可以降低多種疾病病理學下的嗜中性粒細胞活性。因此，PAD4抑制劑可以用於因NET形成所導致的組織損傷疾病。這些疾病包括，但不限於系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、血管炎、囊性纖維化和哮喘等。另外，NET形成與皮膚疾病的病理學相關，比如乾癬和皮膚型紅斑狼瘡等。因此，PAD4抑制劑也可以用於治療由於NET形成引起的皮膚疾病。除此之外，PAD4抑制劑也可以用於治療癌症，目前已在眾多癌症中證實了PAD4的過表達。

目前靶向PAD的抑制劑均處於臨床前研究階段，都是針對其催化活性位點，主要分為不可逆抑制劑和可逆抑制劑兩大類：第一類主要是PAD酶底物類似物，即模擬肽，為非選擇性抑制劑，包括鹵脒類、O-鹵脒類和三肽類。第二類主要為PAD4選擇性可逆抑制劑，WO2014/015905A1公開了如下結構的化合物(GSK199)。GSK199目前處於臨床前研究階段，主要的適應症是類風濕性關節炎(RA)，但其體外酶學活性仍未達到理想水準。

目前在研的PAD4抑制劑品種較少，為了更好的滿足巨大的臨床需求，我們旨在開發出具有較高活性、成藥性更好的PAD4抑制劑。

本發明的目的是提供一類肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4抑制劑的化合物及其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體。本發明化合物具有良好的肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4激酶抑制活性，可用於治療或者預防由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病。

本發明採用的技術方案如下：通式(I)表示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體：

其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、3-6元環烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基； R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、-L₁-Cy₁，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₁不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₁為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₁可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₂-Cy₂，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷基硫基、C_1-6烷基磺醯胺基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₂不存在或者為C_1-6亞烷基、C_1-6亞烷氧基、C_2-6亞烯基、C_1-6亞烷胺基，Cy₂為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₂可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₆為氫、C_1-6烷基或C_3-6環烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基、C_2-6亞烯基， Cy₃為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、6-11元駢雜環基、7-12元螺雜環基、6-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基、-L₄-Cy₄，L₄不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₄為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基； 環B為

、

、

、

或5元雜芳基；其中，環B與

的稠合，*端向上，#端向下，未指明*端和#端的，可以任意方向稠合；條件是，當環B為

，且R₈和R₉與所連接的N形成

時，X為N；當環B為

，且X為CR₆時，R₈和R₉與所連接的N形成

m為0-4的整數。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，Y為CR₆，X為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為CR₆。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在一個實施方案中，R₁為氫。

在一個實施方案中，R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₂為氫、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₂為C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₂為甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基或第三丁氧基。在另一個實施方案中，R₂為甲氧基。

在一個實施方案中，R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₃為氫或C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₃為C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₃為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。在另一個實施方案中，R₃為甲基。

在一個實施方案中，R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₄為氫，或未被取代或被鹵素、環丙基或環丁基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₄為未被取代或被鹵素、環丙基或環丁基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₄為未被取代或被鹵素、環丙基或環丁基取代的甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。在另一個實施方案中，R₄為未被取代或被鹵素、環丙基或環丁基取代的甲基或乙 基。在另一個實施方案中，R₄為乙基、異丁基、三氟乙基、環丙基甲基或環丁基甲基。在另一個實施方案中，R₄為環丁基甲基或環丙基甲基。

在一個實施方案中，R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₅為氫、鹵素，或未被取代或被鹵素取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫、氟、氯、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基或第三丁氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫、氟、甲基或甲氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫、氟、甲基或甲氧基。在另一個實施方案中，R₅為氫。

在一個實施方案中，R₆為氫或C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₆為氫。

在一個實施方案中，R₇為氫。

在一個實施方案中，R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代。在另一個實施方案中，R₈為氫，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₈為-L₃-Cy₃，L₃不存在，Cy₃為3-6元環烷基，Cy₃被胺基取代。在另一個實施方案中，R₈為-L₃-Cy₃，L₃不存在，Cy₃為環丁基，Cy₃被胺基取代。

在一個實施方案中，R₉為C_1-6烷基。在另一個實施方案中，R₉為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。在另一個實施方案中，R₉為甲基。

在一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基、7-10元駢雜環基、7-11元螺雜環基、7-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基，所述取代基選自胺基。在一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自胺基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的氮雜環丁基、氮雜環庚基、吡咯烷基、哌啶基、哌

基、嗎啉基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌

基、嗎啉基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的吡咯烷基、哌啶基、氮雜環庚基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的哌啶基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被 取代基取代的

、

、

、

、

、

、

、

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個 實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的

。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的

、

、

、

、

或

。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的

。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。在另一個實施方案中，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的

。

在一個實施方案中，環B為

、

、

、

或5元雜芳基。在另一個實施方案中，環B為5元雜芳基。在另一個實施方案 中，環B為

、

或

。在另一個實施方案中，環B為

或

。在另一個實施方案中，環B為

。當環B為5元雜芳基時，優選以雜原子向上的方向與

稠合。

在一個實施方案中，m為0、1、2、3或4。在另一個實施方案中，m為0、1、2或3。在另一個實施方案中，m為0、1或2。在另一個實施方案中，m為0或1。在另一個實施方案中，m為0。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、3-6元環烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、-L₁-Cy₁，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₁不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₁為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₁可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代； R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₂-Cy₂，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷基硫基、C_1-6烷基磺醯胺基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₂不存在或者為C_1-6亞烷基、C_1-6亞烷氧基、C_2-6亞烯基、C_1-6亞烷胺基，Cy₂為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₂可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₆為氫、C_1-6烷基或C_3-6環烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基、C_2-6亞烯基，Cy₃為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、6-11元駢雜環基、7-12元螺雜環基、6-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基胺基、(C_{1- 6}烷基)₂胺基、-L₄-Cy₄，L₄不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₄為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基； 環B為5元雜芳基；優選地，環B為

、

或

；更優選地，環B為

或

；進一步優選地，環B為

。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，Y為CR₆，X為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為CR₆。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基； R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基、7-10元駢雜環基、7-11元螺雜環基、7-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基； 環B為5元雜芳基；優選地，環B為

、

或

；更優選地，環B為

或

；進一步優選地，環B為

；m為0-4的整數。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，Y為CR₆，X為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為CR₆。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N； R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、-L₃-Cy₃，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基，L₃不存在，Cy₃為任選被胺基取代的3-6元環烷基；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、7-12元螺雜環基，所述取代基為胺基；環B為

、

、

或5元雜芳基；其中，環B與

的稠合，*端向上，#端向下，未指明*端和#端的，可以任意方向稠合；條件是，當環B為

，且R₈和R₉與所連接的N形成

時，X為N； 當環B為

，且X為CR₆時，R₈和R₉與所連接的N形成

m為0或1。

優選地，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的哌啶基。

優選地，環B為5元雜芳基；更優選地，環B為

、

或

；進一步優選地，環B為

或

；再進一步優選地，環B為

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，Y為CR₆，X為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為CR₆。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基； R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基，所述取代基選自胺基；環B為5元雜芳基；m為0-4的整數。

優選地，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的哌啶基。

優選地，環B為

、

或

；更優選地，環B為

或

；進一步優選地，環B為

。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基； R₄為氫，或未被取代或被鹵素、環丙基或環丁基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、C_1-6烷基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基，所述取代基選自胺基；環B為

、

或

；m為0-4的整數。

優選地，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的哌啶基。

優選地，環B為

或

；更優選地，環B為

。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌

基、嗎啉基，所述取代基為胺基。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

或

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-8元雜環基，Cy₃可任選被鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基； R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自氫、胺基、C_1-6烷基；優選地，所述5-6元飽和含氮雜環基為哌啶基； 環B為

或

；優選地，環B為

；m為0-4的整數。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基； R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自氫、胺基、C_1-6烷基；優選地，所述5-6元飽和含氮雜環基為哌啶基； 環B為

或

；優選地，環B為

；m為0-4的整數。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、環丙基、環丁基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基； R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自胺基；優選地，所述5-6元飽和含氮雜環基為哌啶基； 環B為

或

；優選地，環B為

；m為0或1，優選地，m為0。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為乙基、異丁基、三氟乙基、環丙基甲基或環丁基甲基。

R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自胺基；優選地，所述5-6元飽和含氮雜環基為哌啶基； 環B為

或

；優選地，環B為

； m為0或1，優選地，m為0。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫；R₂為甲氧基；R₃為甲基；R₄為乙基、異丁基、三氟乙基、環丙基甲基或環丁基甲基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫；R₇為氫；R₈為氫、-L₃-Cy₃，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基；L₃不存在，Cy₃為環丁基，Cy₃被胺基取代；R₉為甲基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的吡咯烷基、哌啶基或氮雜環庚基，被胺基取代的

，或被胺基取代的

； 環B為

、

、

、

或

；m為0或1。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

在另一優選例中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫；R₂為甲氧基；R₃為甲基；R₄為乙基、異丁基、三氟乙基、環丙基甲基或環丁基甲基，優選地，R₄為環丙基甲基或環丁基甲基；R₆為氫；R₇為氫；R₈和R₉與所連接的N形成被胺基取代的哌啶基；環B為

；m為0。

在一個實施方案中，X為CR₆，Y為N。

在一個實施方案中，X和Y分別獨立地為N。

本發明的部分化合物如下表所示：

本發明還要求保護含有本發明的一種或多種化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體的藥物組合物，其可以任選含有一種或多種藥用載體並任選被製成藥學上可接受的任一劑型。

本發明所述的藥用載體可以是一種或多種適合於人使用的固體或液體載體。所述藥用載體優選具有足夠的純度和足夠低的毒性，並且與本發 明活性成分具有相容性且不明顯減低活性成分的藥效。例如，藥用載體可以選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、水性溶劑或非水性溶劑等。

本發明所述的藥物組合物，可以任選被製成藥學上可接受的任一劑型，以任何合適的給藥方式，例如通過口服、腸胃外、直腸或經肺給藥等方式施用於需要這種治療的患者或受試者。用於口服給藥時，可以製成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等。用於腸胃外給藥時，可以製成注射液、注射用無菌粉末等。用於直腸給藥時，可以製成栓劑等。用於經肺給藥時，可以製成氣霧劑、噴霧劑和粉霧劑等。

本發明涉及本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體或者它們的藥物組合物在製備用於治療或者預防由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病(包括由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4異常表達所導致的疾病)的藥物中的用途，所述疾病例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。

本發明進一步涉及本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體或者它們的藥物組合物用於治療或者預防由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病(包括由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4異常表達所導致的疾病)的用途，所述疾病例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。

本發明進一步涉及本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體或者它們的藥物組合物，其用於治療或者預防疾病。在 一個實施方案中，所述疾病為由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病(包括由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4異常表達所導致的疾病)，例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。

本發明進一步涉及一種治療或者預防疾病的方法，所述方法包括給需要其的患者施用本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體或者它們的藥物組合物。在一個實施方案中，所述疾病為由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病(包括由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4異常表達所導致的疾病)，例如類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。在一個實施方案中，所述患者為哺乳動物，優選為人。

本發明的其它實施方案

本發明還涉及以下實施方案：

1．通式(I)表示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體：

其中，X和Y分別為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基； R₂為氫、C_1-6烷基、3-6元環烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、-L₁-Cy₁，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₁不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₁為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₁可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₂-Cy₂，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷基硫基、C_1-6烷基磺醯胺基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₂不存在或者為C_1-6亞烷基、C_1-6亞烷氧基、C_2-6亞烯基、C_1-6亞烷胺基，Cy₂為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₂可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₆為氫、C_1-6烷基或C_3-6環烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺 基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基、C_2-6亞烯基，Cy₃為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、6-11元駢雜環基、7-12元螺雜環基、6-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基、-L₄-Cy₄，L₄不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₄為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基； 環B為

、

、

、

、

、

；m為0-4的整數。

2．如實施方案1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基； R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基、7-10元駢雜環基、7-11元螺雜環基、7-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基； 環B為

、

、

；m為0-4的整數。

3．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌

基、嗎啉基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

4．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體， R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

、

、

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

5．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

6．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體， R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

、

、

、

，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

7．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-8元雜環基，Cy₃可任選被鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基。

8．如實施方案1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，選自如下結構的化合物：

9．含有實施方案1-8任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體的藥物組合物，可以任選含有一種或多種藥用載體，製成藥學上可接受的任一劑型。

10．如實施方案9所述的藥物組合物，還可以包括一種或多種第二活性治療劑，所述的第二治療活性劑為抗代謝物、生長因數抑制劑、有絲分類抑制劑、抗腫瘤激素類、烷化劑類、金屬類、拓撲異構酶抑制劑、激素藥、免疫調節劑、腫瘤抑制基因、癌疫苗、免疫檢查點或腫瘤免疫治療相關的抗體或小分子藥物。

11．實施方案1-8任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體和實施方案9所述的藥物組合物在製備治療或者預防由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病的藥物中的用途。

12．實施方案11所述的用途，肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病為類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。

13．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基； R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素，或未被取代或被鹵素取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基，所述取代基選自胺基；環B為

、

、

；m為0-4的整數。

14．如實施方案2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的氮雜環丁基、氮雜環庚基、吡咯烷基、哌啶基、哌

基、嗎啉基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

本發明所述的“鹵素”是指氟、氯、溴、碘等，優選氟原子、氯原子。

本發明所述的“鹵代”是指取代基中的一個或多個氫原子被一個或多個相同或不同的鹵素原子取代。“鹵素”如前文所定義。

本發明所述的“C_1-6烷基”指含有1-6個碳原子的烴部分去除一個氫原子衍生的直鏈或支鏈的烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基和1-甲基-2-甲基丙基等。所述“C_1-4烷基”指含有1-4個碳原子的上述實例，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基。

本發明所述的“C_2-8烯基”指含有至少一個碳碳雙鍵的2-8個碳原子的烯烴部分去除一個氫原子衍生的直鏈或支鏈的烯烴基，如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二-1-烯基、1-戊烯-3-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、3-戊烯-2-基、1,3-戊二烯-1-基、1,4-戊二烯-3-基、1-己烯-3-基、1,4-己二烯-1-基。優選地，“C_2-8烯基”中含有一個碳碳雙鍵。

本發明所述的“C_1-6烷氧基”是指前文所定義的“C_1-6烷基”通過氧原子與母體分子連接的基團，即“C_1-6烷基-O-”基團，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、新戊氧基和正己氧基等。所述的“C_1-4烷氧基”指含有1-4個碳原子的上述實例，即“C_1-4烷基-O-”基團，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第三丁氧基。

本發明所述的“C_1-6烷氧基C_1-6烷基”是指C_1-6烷氧基取代C_1-6烷基所形成的基團。

本發明所述的“C_1-6烷氧基羰基”是指以C_1-6烷氧基-C(O)-方式所形成的基團。

本發明所述的“C_1-6烷基胺基”、“(C_1-6烷基)₂胺基”、“C_1-6烷基羰基胺基”、“C_1-6烷基磺醯胺基”、“C_1-6烷基磺醯基”、“C_1-6烷基硫基”、“C_1-6烷基羰基”分別指以C_1-6烷基-NH-、(C_1-6烷基)(C_1-6烷基)N-、C_1-6烷基-C(O)-NH-、C_1-6烷基-S(O)₂-NH₂-、C_1-6烷基-S(O)₂-、C_1-6烷基-S-、C_1-6烷基-C(O)-方式所形成的基團。

本發明所述的“C_1-6亞烷基、C_2-6亞烯基、C_1-6亞烷氧基、C_1-6亞烷胺基”的“亞”分別是指C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷胺基基團去除兩個氫原子衍生的二價基團。

本發明所述的“稠環”是指由兩個或兩個以上環狀結構以駢、螺、橋的連接方式所形成的多環系結構。所述的駢環是指由兩個或兩個以上環狀結構彼此共用兩個相鄰的環原子(即共用一個鍵)所形成的稠環結構。所述的橋環是指由兩個或兩個以上環狀結構彼此共用兩個非相鄰的環原子所形成的稠環結構。所述的螺環是指由兩個或兩個以上環狀結構彼此共用一個環原子所形成的稠環結構。

本發明所述的“3-12元環烷基”，是指從3-12元環烷烴衍生得到的一價基團或(根據需要的)二價基團，其可以是單環、雙環、或者多環環烷基系統。在不特別指明的情況下，包括可能形成的所有單環、稠環(包括以駢、螺、橋的形式稠合)的情形。單環系統通常是含3-12個碳原子如3-8個或3-6個碳原子的環烴基團。環烷基實例包括但不限於：環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環己烷基、環庚烷基、環辛烷基、環戊烷-1,3-二基、環己烷-1,4-二基、環 庚烷-1,4-二基等。稠環環烷基包括駢環烷基、橋環烷基、螺環烷基。駢環烷基可以為6-11元駢環烷基如7-10元駢環烷基，其代表性例子包括但不限於雙環[3.1.1]庚烷、雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷、雙環[3.2.2]壬烷、雙環[3.3.1]壬烷和雙環[4.2.1]壬烷基。螺環烷基可以為7-12元螺環烷基如7-11元螺環烷基，其實例包括但不限於：

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基。橋環烷基可以是6-10元橋環烷基如7-10元橋環烷基，其實例包括但不限於：

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基。

本發明所述的“3-12元環烯基”，是指在上述3-12元環烷基的基團中具有至少一個雙鍵而得的基團，如環丁烯基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基等。因此，本發明所述的“3-12元環烯基”，在不特別指明的情況下，包括可能形成的所有單環、稠環(包括以駢、螺、橋的形式稠合)的情形，例如3-8元環烯基、7-11元螺環烯基、7-11元駢環烯基、6-11元橋環烯基等。螺環烯基可以為7-12元螺環烯基如7-11元螺環烯基，其實例包括但不限於：

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基。橋環烯基可以是6-10元橋環烯基如7-10元橋環烯基，其實例包括但不限於：

基。

本發明所述的“3-12元雜環基”，是指從3-12元雜環烷烴衍生得到的一價基團或(根據需要的)二價基團，即3-12元的至少一個環碳原子被選自O、S、S(O)、S(O)₂、C(O)、N的雜原子替代的非芳香性的環狀基團，其優選含有1-3個雜原子。“3-12元雜環基”包括單環雜環基、雙環雜環基系統或多環雜環基系 統，其中一個或多個環可以是飽和或部分飽和的，但不包括芳環。在不特別指明的情況下，包括可能形成的所有單環、稠環(包括以駢、螺、橋的形式稠合)、飽和和部分飽和的情形。

單環雜環基可以為3-8元雜環基如3-6元雜環基、4-7元雜環基或5-6元雜環基，3-8元含氮雜環基如4-7元含氮雜環基或5-6元含氮雜環基，3-8元飽和雜環基如5-6元飽和雜環基等。其實例包括但不限於氮雜環丙烷基、氧雜環丙烷基、硫雜環丙烷基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡咯基、四氫噻吩基、咪唑烷基、吡唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、1,2-噻唑烷基、1,3-噻唑烷基、四氫-2H-吡喃基、四氫-2H-噻喃基、哌啶基、哌

基、嗎啉基、1,4-二氧雜環己烷基、1,4-氧硫雜環己烷基，4,5-二氫異噁唑基、4,5-二氫噁唑基、2,5-二氫噁唑基、2,3-二氫噁唑基、3,4-二氫-2H-吡咯基、2,3-二氫-1H-吡咯基、2,5-二氫-1H-咪唑基、4,5-二氫-1H-咪唑基、4,5-二氫-1H-吡唑基、4,5-二氫-3H-吡唑基、4,5-二氫噻唑基、2,5-二氫噻唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、2H-噻喃基、4H-噻喃基、2,3,4,5-四氫吡啶基、1,2-異噁嗪基、1,4-異噁嗪基或6H-1,3-噁嗪基等。

稠雜環基包括駢雜環基、螺雜環基和橋雜環基，其可以是飽和的、部分飽和的或不飽和的，但不是芳香性的。稠雜環基可以是稠合到苯環、5-6元單環環烷基、5-6元單環環烯基、5-6元單環雜環基或5-6元單環雜芳基的5-6元單環雜環基環。

所述的駢雜環基可以為6-12元駢雜環基如6-11元駢雜環基或7-10元駢雜環基，6-11元飽和駢雜環基，6-11元含氮駢雜環基，其代表性實例包括但不限於：3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、3,6-二氮雜雙環[3.2.0]庚烷基、3,8-二氮雜 雙環[4.2.0]辛烷基、3,7-二氮雜雙環[4.2.0]辛烷基、八氫吡咯駢[3,4-c]吡咯基、八氫吡咯駢[3,4-b]吡咯基、八氫吡咯駢[3,4-b][1,4]噁嗪基、八氫-1H-吡咯駢[3,4-c]吡啶基、2,3-二氫苯駢呋喃-2-基、2,3-二氫苯駢呋喃-3-基、二氫吲哚-1-基、二氫吲哚-2-基、二氫吲哚3-基、2,3-二氫苯駢噻吩-2基、八氫-1H-吲哚基、八氫苯駢呋喃基。

所述的螺雜環基可以為6-12元螺雜環基如7-12元螺雜環基、7-12元飽和螺雜環基、7-12元含氮螺雜環基，其實例包括但不限於：

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所述的橋雜環基可以為6-12元橋雜環基如6-10元橋雜環基、7-10元橋雜環基，其實例包括但不限於：

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本發明所述“芳基”，是指含有6-14個碳原子的從芳香性的碳環烴衍生得到的一價或根據需要的二價環狀芳香性基團，包括，苯基、萘基、菲基等。

本發明所述“5-10元雜芳基”是指至少一個環碳原子被選自O、S、N的雜原子替代的芳香性的5-10元環狀基團，優選含有1-3個雜原子，同時包括碳原子、硫原子被氧代、氮代的情況，例如碳原子被C(O)替代，硫原子被S(O)、S(O)₂替代。雜芳基包括單雜芳基和稠雜芳基，在不特別指明的情況下， 某元雜芳基，包括可能形成的所有單環、稠環、全部芳香、部分芳香的情形。單雜芳基可以為5-7元雜芳基如5-6元雜芳基，其實例包括但不僅限於呋喃基、咪唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻吩基、三唑基和三嗪基。在某些實施方案中，稠雜芳基是指單環雜芳環稠合到苯基、環烯基、雜芳基、環烷基或雜環基所形成的基團。在某些實施方案中，稠雜芳基可以為8-12元駢雜芳基如9-10元駢雜芳基，例子包括但不限於苯駢咪唑基、苯駢呋喃基、苯駢噻吩基、苯駢噁二唑基、苯駢噻二唑基、苯駢噻唑基、噌啉基、5,6-二氫喹啉-2-基、5,6-二氫異喹啉-1-基、呋喃駢吡啶基、吲唑基、吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、萘啶基、嘌呤基、喹啉基、5,6,7,8-四氫喹啉-2-基、5,6,7,8-四氫喹啉基、5,6,7,8-四氫喹啉-4-基、5,6,7,8-四氫異喹啉-1-基、噻吩駢吡啶基、4,5,6,7-四氫駢[c][1,2,5]噁二唑基和6,7-二氫駢[c][1,2,5]噁二唑-4(5H)酮基。

本發明所述的“藥學上可接受的鹽”是指藥學上可接受的酸或鹼的加成鹽或其溶劑化物。這樣的藥學上可接受的鹽包括諸如以下的酸的加成鹽：鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸、亞硫酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、馬來酸、氫碘酸和鏈烷酸(諸如乙酸、HOOC-(CH₂)n-COOH(其中n是0~4))等。這樣的藥學上可接受的鹽還包括諸如以下的鹼的鹽：鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和銨鹽等。本領域技術人員知曉多種無毒的藥學上可接受的加成鹽。

立體異構體是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體。當化合物存在不對稱碳原子時，會產生對映異構體；當化合物存在碳 碳雙鍵或環狀結構時，會產生順反異構體；所有式(I)化合物的對映異構體、非對映異構體、外消旋體、順反異構體、幾何異構體、差向異構體及其混合物，均包括在本發明範圍中。

“互變異構體”是指因分子中某一原子在兩個位置迅速移動而產生的一種特殊的官能團異構體。其實例包括含有α-H的羰基化合物的互變異構，具體如

(T、T₁、T₂分別獨立地為任意符合化合物成鍵規律的基團)和其它其它質子遷移互變異構，具體如酚-酮互變異構、亞硝基-肟互變異構、亞胺-烯胺互變異構。

本發明中提及的所有數值範圍，均表示包括該範圍的兩個端點、該範圍之內的所有整數以及由這些整數形成的子範圍。例如“3-12元”包括3、4、5、6、7、8、9、10、11或12元，以及“5-10元”、“10元”等等。

說明書中給出的本發明的通式化合物中所涉及的所有變數，包括X、Y、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇、R₈、R₉、環B和m都是獨立地選擇的。說明書中所列舉的這些變數的各種不同層次的定義之間可以相互組合，並且本發明包括由這些組合中的任意一種所構成的通式化合物的定義。

化合物製備

通過標準化學方法在內的多種方法，可以製備本發明的化合物。除非另外指出，否則任何前面定義的變數將繼續具有前面定義的含義。示例性的一般合成方法闡述在下述方案中，並且可以很容易的改進以製備本發明的其它化合物。在實施例部分中製備本發明的具體化合物。

式(I)的化合物可以通過式(II)的化合物去保護來製備。下述提供了由式(II)的化合物去保護來製備式(I)的化合物的方法：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇、R₈、R₉、環B、X、Y和m如上文中所定義，PG為胺的合適保護基，如第三丁氧羰基(Boc)或苄氧羰基(Cbz)，此後，如果需要的話，製備如此形成的化合物的鹽。

例如，向式(II)的化合物在合適溶劑(如二氯甲烷、乙醇、甲醇或乙腈)中的溶液中，加入合適的反應試劑(如三氟乙酸、氯化氫乙醇溶液、三甲基碘矽烷或三氟甲磺酸三甲基矽酯，某些實施方案加入苯酚)，在合適的溫度(0℃或環境溫度)攪拌合適的時間段(如10分鐘到10小時)。反應結束後，向反應液中加入合適的鹼(如飽和碳酸氫鈉水溶液或氨水)將反應混合物調節pH值至中性，或將反應混合物在減壓下濃縮，粗品用水溶解後加入合適的鹼(如飽和碳酸氫鈉水溶液或氨水)調節pH值至中性，用合適的萃取劑(如二氯甲烷或乙酸乙酯)萃取，減壓濃縮後，通過合適的純化方法(如矽膠柱層析、製備薄層層析或反相柱層析等)分離得到式(I)的化合物。

當Y為N時，式(II)的化合物可以通過式(III)的化合物

其中R₁、R₂、R₃、R₇、R₈和R₉如上文中所定義，PG為胺的合適保護基，如第三丁氧羰基(Boc)或苄氧羰基(Cbz)，與式(IV)的化合物反應來製備。

其中R₄、環B、R₅和m如上文中所定義。

下面提供了由式(III)的化合物和式(IV)的化合物反應來製備式(II)的化合物的方法： 例如，將式(III)的化合物和式(IV)的化合物加入合適溶劑(如乙醇和水)中，加入合適的還原劑(如連二亞硫酸鈉)，在合適的溫度(如90℃~100℃)加熱或微波攪拌合適的時間段(如4~8小時)。反應結束後，將反應液倒入適量的水中，用合適的萃取劑(如乙酸乙酯)萃取，減壓濃縮後，通過合適的純化方法(如矽膠柱層析、製備薄層層析等)分離得到式(II)的化合物。

其中式(III)的化合物可由式(VII)的化合物

其中R₁、R₂、R₃和R₇如上文中所定義，與式(VIII)的化合物反應來製備。

其中R₈和R₉如上文中所定義，PG為胺的合適保護基，如第三丁氧羰基(Boc)或苄氧羰基(Cbz)。

下面提供了由式(VII)的化合物和式(VIII)的化合物反應來製備式(III)的化合物的方法：例如，將式(VII)的化合物和式(VIII)的化合物加入合適的溶劑(如四氫呋喃、DMF)中，加入合適的肽偶聯劑(如2-(7-氧化苯駢三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽)，再加入合適的鹼(如N,N-二異丙基乙胺)，在適當的溫度(如環境溫度)攪拌合適的時間段(如2~10小時)。將反應液減壓濃縮，加入適量的水，用合適的萃取劑(如乙酸乙酯)萃取，將萃取液濃縮，粗品經傳統的純化方法(如矽膠柱層析)分離得到式(III)的化合物。

在某些實施方案中，式(IV)的化合物可由式(IX)的化合物

其中R₄、X、環B、R₅和m如上文中所定義，通過氧化製備。

下面提供了由式(IX)的化合物通過氧化來製備式(IV)的化合物的方法： 例如，將式(IX)的化合物加入合適的溶劑(如二氯甲烷)中，加入合適的氧化劑(如二氧化錳)，在適當的溫度(如迴流)攪拌合適的時間段(如2小時)。將反應物過濾，濾餅用適量的溶劑淋洗，濾液減壓濃縮，得到式(IV)的化合物。

其中，式(IX)的化合物可由式(X)的化合物

其中R₄、X、環B、R₅和m如上文中所定義，R₁₀為甲基或乙基，通過還原製備。

下面提供了由式(X)的化合物通過還原來製備式(IX)的化合物的方法：例如，將式(X)的化合物加入合適的溶劑(如四氫呋喃)中，加入合適的還原劑(如四氫鋁鋰或二異丁基氫化鋁)，在適當的溫度(如環境溫度)攪拌合適的時間段(如2~10小時)。加入合適的淬滅試劑(如水)，過濾，加入乾燥劑(如無水硫酸鈉)乾燥，濾液減壓濃縮，得到式(IX)的化合物。

其中，式(X)的化合物可由式(XI)的化合物

與R₄L通過烷基化反應製備，其中，R₄、X、環B、R₅、R₁₀和m如上文中所定義，L為離去基團(如鹵素、三氟甲磺酸酯)。

下面提供了由式(XI)的化合物通過烷基化來製備式(X)的化合物的方法：例如，將式(XI)的化合物和R₄L加入合適的溶劑(如乙腈)中，加入合適的鹼(如碳酸鉀或碳酸銫)，在適當的溫度(如環境溫度至90℃)攪拌合適的時間段(如1~35小時)。反應完全後，過濾，濾液減壓濃縮，粗品經傳統的純化方法(如矽膠柱層析)分離得到式(X)的化合物。

在某些實施方案中，式(IV)的化合物可由式(XII)的化合物

與R₄L通過烷基化反應製備，其中X、環B、R₅和m如上文中所定義，L為離去基團(如鹵素、三氟甲磺酸酯)。

下面提供了由式(XII)的化合物通過烷基化來製備式(IV)的化合物的方法：例如，將式(XII)的化合物和R₄L加入合適的溶劑(如DMF)中，加入合適的鹼(如氫化鈉或碳酸鉀)，在適當的溫度(如-20℃~40℃)攪拌合適的時間段(如1~2小時)。反應完全後，加入水，用合適的萃取劑(如乙酸乙酯)萃取，萃取液減壓濃縮，粗品經傳統的純化方法(如矽膠柱層析)分離得到式(IV)的化合物。

當X為CR₆時，式(XI)的化合物可由以下方案來製備

其中R₆、環B、R₅、R₁₀和m如上文中所定義。

當X為N時，式(IV)的化合物可由以下方案來製備

其中R₄、環B、R₅和m如上文中所定義。

式(XII)的化合物可由以下方案來製備

其中X、環B、R₅和m如上文中所定義。

具體實施方式

本文中使用的縮寫，“DMF”是指二甲基甲醯胺；“THF”是指四氫呋喃；“EA”是指乙酸乙酯；“DCM”是指二氯甲烷；“TMEDA”是指四甲基乙二胺；“LDA”是指二異丙基胺基鋰；“PE”是指石油醚；“DIPEA”是指N,N-二異丙基乙胺；“HATU”是指2-(7-氧化苯駢三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽；“DMSO”是指二甲基亞碸。

實施例1：中間體3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯的合成

步驟1：4-羥基-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯的合成

將4-羥基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(25.4g,0.139mol)溶於冰醋酸(100mL)，冰浴下緩慢滴加硝酸(10.2mL)和醋酸(52mL)混合溶液，約1小時滴加完。反應液緩慢升至室溫攪拌4小時。過濾，濾餅依次用水、正己烷和乙醚洗滌，乾燥得到黃色固體狀產物(21.0g，產率：66%)。

步驟2：4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯的合成

將4-羥基-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(21g,0.095mol)溶於DMF(200mL)，冷卻到-20℃，緩慢滴加草醯氯(23.7mL)，滴完升溫至80℃攪拌3小時。反應液冷卻至室溫，倒入冰水，攪拌過夜。過濾，濾餅溶於二氯甲烷，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品 溶於乙酸乙酯，用食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品經甲醇重結晶得到目標產物(14.5g，產率：63.9%)。

步驟3：3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯的合成

將4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(14g,0.057mol)溶於DMF(140mL)，冷卻至0℃，氮氣保護下，滴加甲胺溶液(2mol/L四氫呋喃溶液，114mL)，加完後反應液加熱至80℃攪拌3小時，降至室溫，加水稀釋，過濾得到橘色固體狀產品(11.1g，產率81%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.07(d,J=1.6Hz,1H),7.80-7.76(m,1H),7.38(s,1H),3.91(s,3H),3.83(s,3H),2.94(t,J=5.6Hz,3H)。

實施例2：中間體1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛的合成

步驟1：1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶的合成

氮氣保護下，室溫下將氫化鈉(質量分數60%,0.8g,20mmol,2.0eq)分批加入到無水THF(30mL)中，將1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶(1.19g,10mmol,1.0eq)溶於無水THF(10mL)，緩慢滴加至體系中，滴畢，保溫反應30分鐘。將苯磺醯氯(3.5g,20mmol,2.0eq)溶於THF(10mL)中，緩慢滴加至體系中，15分鐘滴加完畢，室溫下反應4小時。LC-MS檢測反應完全，緩慢滴加0.1mol/L HCl水溶液(20mL)淬滅反應，加水(30mL)，EA萃取(50mL×2)，有機相合併，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得類白色固體狀產物(1.5g，產率：57.7%)。

步驟2：1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛的合成

氮氣保護下，將二異丙胺(1.48g,14.5mmol,2.5eq)加入到無水THF(15mL)中，降溫至-45℃，滴加正丁基鋰(2.4mol/L,6mL,14.5mmol,2.5eq)，滴畢保溫30分鐘，降溫至-78℃，滴加1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶(1.5g,5.8mmol,1.0eq)的THF(15mL)溶液，滴畢保溫1小時，滴加DMF(0.85g,11.6mmol,2.0eq)，滴畢保溫30分鐘，滴加飽和氯化銨水溶液(20mL)淬滅反應，EA(50mL×3)萃取，有機相合併，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得類白色固體狀產物(1.2g，產率：72.3%)。

步驟3：1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛的合成

室溫下將1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛(1.2g,4.1mmol,1.0eq)溶解在無水THF(15mL)中，降溫至0℃，滴加氫氧化鈉(1.67g,41mmol,10eq)的甲醇/水混合溶液(1：1 v/v,30mL)。滴加完畢後，緩慢恢復至室溫反應1小時。LC-MS和TLC檢測反應完全，滴加飽和氯化銨水溶液(20mL)淬滅反應，DCM萃取(50mL×2)，有機相合併，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(300mg，產率：48.9%)。

步驟4：1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛的合成

室溫下將1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛(294mg,2mmol,1.0eq)溶解在無水DMF(5mL)中，加入碳酸鉀(552.8mg,4mmol,2.0eq)和碘乙烷(375mg,2.4mmol,1.2eq)，加熱至40℃反應2小時。LC-MS和TLC檢測反應完全，倒入冰水(10mL)中，EA萃取(20mL×2)，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得白色固體狀產物(150mg，產率：42.8%)。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：10.01(s,1H),8.54(d,J=4.2Hz,1H),8.14(d,J=8.1Hz,1H),7.58(s,1H),7.42-7.37(m,1H),4.58(q,J=7.2Hz,2H),1.27(t,J=6.9Hz,3H).

LC-MS：175.1.[M+H]⁺

實施例3：中間體5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛的合成

步驟1：3-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺的合成

氮氣保護下，將3-氯吡嗪-2-胺(12.9g,0.1mol,1.0eq)溶於DMF(150mL)中，依次加入CuI(9.5g,0.05mol,0.5eq)、四(三苯基膦)鈀(11.55g,0.01mol,0.1eq)和三乙胺(30.3g,0.3mol,3.0eq)，降溫至0℃，緩慢滴加三甲基矽乙炔(14.7g,0.15mol,1.5eq)，滴加完畢後加熱至70℃攪拌反應12小時。TLC和LC-MS檢測反應完全，將反應液倒入水(300mL)中，加入EA(500mL)，抽濾，濾餅用EA洗(50mL×2)，濾液分液，有機相用飽和食鹽水洗，乾燥，抽濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得灰白色固體狀產物(9.2g，收率：48%)。

步驟2：5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪的合成

氮氣保護下，將3-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)吡嗪-2-胺(9.55g,0.05mol,1.0eq)溶於THF(100mL)中，加入第三丁醇鉀(11.2g,0.1mol,2.0eq)，加熱至迴流，攪拌反應8小時。TLC和LC-MS檢測反應完全，降至室溫，加水(100mL)，EA萃取(200mL×3)，有機相合併，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得類白色固體狀產物(3.5g，收率：59%)。

步驟3：5-(苯基磺醯基)-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪的合成

氮氣保護下，室溫下將氫化鈉(質量分數60%,0.8g,20mmol,2.0eq)分批加入到無水THF(30mL)中，將5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪(1.19g,10mmol,1.0eq)溶於無水THF(10mL)，緩慢滴加至體系中，滴完室溫反應30分鐘。將苯磺醯氯(3.5g,20mmol,2.0eq)溶於THF(10mL)中，緩慢滴加至體系中，20分鐘滴加完畢，室溫下反應4小時。LC-MS檢測反應完全，緩慢滴加0.1mol/L HCl水溶液(20mL)淬滅反應，加水(30mL)，EA萃取(50mL×2)，有機相合併，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得類白色固體狀產物(1.5g，產率：58%)。

步驟4：5-(苯基磺醯基)-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛的合成

氮氣保護下，將二異丙胺(1.48g,14.5mmol,2.5eq)加入到無水THF(15mL)中，降溫至-45℃，滴加正丁基鋰(2.4mol/L,6mL,14.5mmol,2.5eq)，滴畢保溫30分鐘，降溫至-78℃，滴加5-(苯基磺醯基)-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪(1.5g,5.8mmol,1.0eq)的THF(15mL)溶液，滴畢保溫1小時，滴加DMF(0.85g,11.6mmol,2.0eq)，滴畢保溫30分鐘，滴加飽和氯化銨水溶液(20mL)淬滅反應，EA(50mL×3)萃取，有機相合併，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得類白色固體狀產物(1.2g，產率：73%)。

步驟5：5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛的合成

室溫下將5-(苯基磺醯基)-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛(1.2g,4.1mmol,1.0eq)溶解在無水THF(15mL)中，降溫至0℃，滴加氫氧化鈉(1.67g,41mmol,10eq)的甲醇/水混合溶液(1：1 v/v,30mL)。滴加完畢後，緩慢升至室溫反應1小時。LC-MS和TLC檢測反應完全，滴加飽和氯化銨水溶液(20mL)淬滅反應，DCM萃取(50mL×2)，有機相合併，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(300mg，產率：49%)。

步驟6：5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛的合成

室溫下將5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛(294mg,2mmol,1.0eq)溶解在無水DMF(5mL)中，加入碳酸鉀(552.8mg,4mmol,2.0eq)和碘乙烷(375 mg,2.4mmol,1.2eq)，加熱至40℃反應2小時。LC-MS和TLC檢測反應完全，倒入冰水(10mL)中，EA萃取(20mL×2)，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得白色固體狀產物(150mg，產率：43%)。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：10.00(s,1H),8.53(d,J=1.2Hz,1H),8.41(s,1H),7.37(s,1H),6.25(d,J=2.7Hz,1H),4.69(q,J=7.2Hz,2H),1.35(t,J=6.9Hz,3H).

LC-MS：176.1[M+H]⁺.

實施例4：中間體1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛的合成

步驟1：1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶的合成

將1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶(10g,85mmol,1.0eq)溶於無水THF(150mL)，冰浴下將氫化鈉(質量分數60%,5g,125mmol,1.5eq)分批加入，反應30分鐘。緩慢滴加苯磺醯氯，滴加完畢，升至室溫反應2小時。TLC檢測反應完 全，加水(100mL)，EA萃取，有機相合併，食鹽水洗，乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得產物(14g，產率：65%)。

步驟2：1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛的合成

氮氣保護下，將二異丙胺(4.13mL,0.029mol)加入到無水THF(50mL)中，降溫至-78℃，滴加正丁基鋰(2.4mol/L,10.42mL,0.026mol)，升至室溫反應1小時。將1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶(5g,0.019mol)和TMEDA(4.38mL)溶於無水THF(50mL)溶液，降溫至-30℃，氮氣保護下，滴加上面製備的LDA溶液，滴畢反應2.5小時，緩慢滴加DMF(3mL)，滴畢反應2小時。TLC和LCMS監控反應完全，加入飽和氯化銨水溶液(100mL)和EA(100mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(4g，產率：72%)。

步驟3：1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛的合成

將1-(苯基磺醯基)-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛(2.5g,8.73mmol)溶解在甲醇(50mL)中，氮氣保護下，滴加氫氧化鉀(1.46g,26mmol)的水溶液(5mL)，攪拌反應0.5小時。TLC檢測反應完全，加入水(150mL)，DCM萃取，有 機相合併，食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(1.0g，產率：55%)。

步驟4：1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛的合成

室溫下將1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛(1.0g,6.8mmol)和碳酸鉀(2.8g,20mmol)溶解在DMF(20mL)中，氮氣保護下，-20℃滴加碘乙烷(1.2mL)，反應液緩慢升至室溫反應1小時。TLC檢測反應完全，加入水(50mL)，DCM萃取(50mL×3)，有機相合併，食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得白色固體狀產物(380mg，產率：32%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：9.96(s,1H),8.54(dd,J 1=4.8Hz,J 2=1.6Hz,1H),8.24(dd,J 1=8.0Hz,J 2=1.6Hz,1H),7.49(s,1H),7.26-7.23(m,1H),4.64(q,J=7.2Hz,2H),1.28(t,J=7.2Hz,3H).

實施例5：中間體6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

步驟1：2-疊氮基乙酸乙酯的合成

將2-溴乙酸乙酯(200g,1.2mol,1.0eq)加入到丙酮(1250mL)中，降溫至0℃，滴加疊氮化鈉(194.5g,3.0mol,2.5eq)的水(1000mL)溶液。滴畢加熱至迴流反應1h，冷卻至室溫，DCM萃取(1000mL×3)，有機相合併，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(800mL×2)，水洗(800mL×2)，乾燥，低溫減壓濃縮得到產品(145g，產率：93%)，直接用於下一步反應。

步驟2：6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯的合成

氮氣保護下，將鈉屑(7.64g,0.33mol,4.0eq)加入到無水乙醇(400mL)中，攪拌至反應完全，降溫至0℃，滴加2-疊氮基乙酸乙酯(43g,0.33mol,4.0eq)和呋喃-3-甲醛(8g,0.083mol,1.0eq)的乙醇(40mL)溶液。滴畢0℃下反應1h，然後升至室溫反應1h。TLC檢測反應完全，滴加飽和氯化銨水溶液(200mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(300mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗(300mL×3)，乾燥，濃縮得到粗品。將所得粗品加入到二甲苯(100mL)中，加熱至迴流攪拌反應4h。TLC和LC-MS檢測反應完全，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(5.14g，收率：33%)。

步驟3：6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯的合成

氮氣保護下，將氫化鈉(質量分數60%,1.5g,60.2mmol,2.0eq)加入到DMF(126mL)中，然後分批加入6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(5.4g, 30.1mmol,1.0eq)。加完室溫攪拌20分鐘，滴加碘乙烷(14.1g,90.3mmol,3.0eq)。滴畢室溫攪拌30分鐘，TLC檢測反應完全，降溫至0℃，滴加飽和氯化銨水溶液(100mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(100mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗滌(100mL×3)，乾燥，濃縮得到黃色油狀產物(5.4g粗品)，不經純化直接用於下一步。

步驟4：(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

氮氣保護下，將氫化鋁鋰(0.83g,21.9mmol,1.5eq)加入到THF(30mL)中，0℃滴加6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(3.01g,14.5mmol,1.0eq)的THF(30mL)溶液，滴完0℃攪拌反應2h。TLC檢測反應完全，0℃下滴加水(1.04mL)、15w/w%的氫氧化鈉水溶液(1.04mL)和水(3.12mL)，加入無水硫酸鈉攪拌15分鐘，抽濾，濾液濃縮得到產物(2.4g粗品)，直接用於下一步反應。

步驟5：6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(2.4g粗品)溶於DCM(120mL)中，加入二氧化錳(12.63g,10eq)，加熱至迴流反應1h。HPLC檢測反應完全，加入矽藻土，抽濾，濾餅用DCM(20mL×3)洗，濾液濃縮得到產品(1.2g)。

¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.48(s,1H),7.34(s,1H),6.79(s,1H),6.56(s,1H),4.51(q,J=7.2Hz,2H),1.47(t,J=7.2Hz,3H).

LC-MS：164.1[M+H]⁺.

實施例6：中間體6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

步驟：

步驟1：6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯的合成

氮氣保護下，將鈉屑(7.64g,0.33mol,4.0eq)加入到無水乙醇(400mL)中，攪拌至反應完全，降溫至0℃，滴加2-疊氮基乙酸乙酯(43g,0.33mol,4.6eq)和噻吩-3-甲醛(8g,0.071mol,1.0eq)的乙醇(40mL)溶液。滴畢0℃下反應1h，然後升至室溫反應1h。TLC檢測反應完全，滴加飽和氯化銨水溶液(200mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(300mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗(300mL×3)，乾燥，濃縮得到粗品。將所得粗品加入到二甲苯(100mL) 中，加熱至迴流攪拌反應4h。TLC和LC-MS檢測反應完全，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得黃色固體狀產物(2.0g，收率：15%)。

步驟2：6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯的合成

氮氣保護下，將氫化鈉(質量分數60%,0.83g,20.6mmol,2.0eq)加入到DMF(47mL)中，然後分批加入6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(2.0g,10.3mmol,1.0eq)。加完室溫攪拌20分鐘，滴加碘乙烷(4.8g,30.9mmol,3.0eq)。滴畢室溫攪拌30分鐘，TLC檢測反應完全，降溫至0℃，滴加飽和氯化銨水溶液(50mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(50mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗滌(50mL×3)，乾燥，濃縮得到黃色油狀產物(2.0g粗品)，不經純化直接用於下一步。

步驟3：(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

氮氣保護下，將6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(2.0g,8.96mmol,1.0eq)加入到THF(20mL)中，降溫至0℃，滴加二異丁基氫化鋁(2M的甲苯溶液，16.2mL,22.4mmol,2.5eq)，滴畢0℃攪拌反應2h。TLC檢測反應全，0℃下依次滴加水(1mL)、15w/w%的氫氧化鈉水溶液(1mL)和水(2.4mL)。滴完加入無水硫酸鈉，攪拌15分鐘，抽濾，固體用乙酸乙酯洗，濾液濃縮得到粗品(1.68g)，直接用於下一步反應。

步驟4：6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(1.68g粗品)溶於DCM(84mL)中，加入二氧化錳(8.06g,10eq)，加熱至迴流反應1h。HPLC檢測反應完全，加入矽藻土，抽濾，濾餅用DCM(20mL×3)洗，濾液濃縮得到產品(1.2g)。

¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.56(s,1H),7.04(d,J=7.2Hz,1H),6.96(d,J=7.2Hz,1H),4.52(q,J=7.2Hz,2H),1.46(t,J=7.2Hz,3H).

LC-MS：180.1[M+H]⁺.

實施例7：中間體6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

步驟1：2-甲基噻吩-4-甲醛的合成

將4-溴-2-甲基噻吩(25g,141.2mmol,1.0eq)加入到乙醚(170mL)中，然後降溫至-78℃，滴加正丁基鋰(2.5mol/L的正己烷溶液，84.72mL,211.8mmol,1.5eq)。滴畢，保溫反應1h，滴加DMF(15.48g,211.8mmol,1.5eq)的乙醚(56mL)溶液。滴畢，保溫反應1h。HPLC檢測反應完畢後，-78℃下滴加飽和氯化銨(300mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(200mL×3)，有機相飽和食鹽水洗(300mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得粗品(23.28g)，用油泵減壓蒸餾得產品(10.9g，收率：61%)。

步驟2：2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

氮氣保護下，將鈉屑(5g,217.4mmol,5.5eq)加入到無水乙醇(250mL)中，攪拌至溶解，滴加疊氮乙酸乙酯(20.47g,158.50mmol,4.0eq)和2-甲基噻吩-4-甲醛(5g,39.63mmol,1.0eq)的乙醇(25mL)溶液。滴畢，0℃下攪拌反應1h，然後升至室溫攪拌反應1h。TLC檢測反應完畢，滴加飽和氯化銨水溶液(300mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(300mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗(300mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗品，加入至甲基第三丁基醚(30mL)中，飽和食鹽水洗(30mL×3)，乾燥，減壓濃縮，將得到的中間體加入到二甲苯(65mL)中，加熱至迴流反應2h。TLC、LC-MS檢測反應完畢，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得到產品(4.1g，收率：49%)。

步驟3：6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

氮氣保護下，將氫化鈉(0.94g,39.19mmol,2.0eq)加入到DMF(96mL)中，分批加入2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(4.1g,19.59mmol,1.0eq)。加畢，室溫攪拌20分鐘，滴加碘乙烷(9.17g,58.78mmol,3.0eq)，滴畢，室溫攪拌反應30分鐘，TLC檢測反應完畢，降溫至0℃，滴加飽和氯化銨水溶液(50mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(50mL×3)，有機相合 併，用飽和食鹽水洗滌(100mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得產品(4.25g粗品)。

步驟4：(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

氮氣保護下，6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(4.25g,17.91mmol,1.0eq)加入到THF(45mL)中，降溫至0℃，滴加二異丁基氫化鋁(1.5mol/L的甲苯溶液，29.85mL,44.77mmol,2.5eq)。滴畢，0℃攪拌反應2h。TLC檢測反應完畢，0℃下依次滴加水(1.8mL)、15w/w%的氫氧化鈉水溶液(1.8mL)和水(4.5mL)。滴畢，加入無水硫酸鈉，攪拌15分鐘，抽濾，濾餅用乙酸乙酯洗，濾液濃縮得到粗品(3.25g)，用PE(30mL)漿洗，抽濾得產品(2.3g，收率：65.9%)。

步驟5：6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(2.3g,11.78mmol,1.0eq)溶於DCM(115mL)中，加入二氧化錳(10.24g,117.78mmol,10eq)，加熱至迴流反應2h。HPLC檢測反應完畢，加矽藻土抽濾，固體用DCM(50mL×3)洗，濾液減壓濃縮得到產品(1.95g，收率：85%)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.49(s,1H),6.92(s,1H),6.67(d,J=1.2Hz,1H),4.49(q,J=7.2Hz,2H),2.52(d,J=1.2Hz,3H),1.42(t,J=7.2Hz,3H).

分子式：C10H11NOS 分子量：193.26 LC-MS(Pos，m/z)=194.1[M+H]⁺

實施例8：中間體6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

步驟1：4-甲基噻吩-3-甲醛的合成

將3-溴-4-甲基噻吩(30g,169.43mmol,1.0eq)加入到乙醚(200mL)中，降溫至-78℃，滴加正丁基鋰(2.5mol/L正己烷溶液，102mL,254.15mmol,1.5eq)。滴畢，保溫反應1h，滴加DMF(18.58g,254.15mmol,1.5eq)的乙醚(67mL)溶液，滴畢，保溫反應1h，HPLC檢測反應完畢，-78℃下滴加飽和氯化銨水溶液(400mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(300mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗(300mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗品(28.5g)，用油泵減壓蒸餾得產品(9.4g，收率：44%)。

步驟2：3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

氮氣保護下，將鈉屑(6.86g,297.99mmol,4.0eq)加入到無水乙醇(470mL)中，攪拌至溶解，滴加疊氮乙酸乙酯(38.48g,297.99mmol,4.0eq)和4-甲基噻吩-3-甲醛(9.4g,74.50mmol,1.0eq)的乙醇(47mL)溶液。滴畢，0℃下 攪拌反應1h，升至室溫攪拌反應1h。TLC檢測反應完畢，滴加飽和氯化銨水溶液(500mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(500mL×3)，合併有機相，飽和食鹽水洗(500mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗品，加入至甲基第三丁基醚(100mL)中，飽和食鹽水洗(50mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，將中間體加入到二甲苯(120mL)中，加熱至迴流反應2h。TLC、LC-MS檢測反應完畢，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化得產品(7.7g，收率：49.3%)。

步驟3：6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

氮氣保護下，將氫化鈉(1.77g,73.59mmol,2.0eq)加入DMF(180mL)中，然後分批加入3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(7.7g,36.80mmol,1.0eq)。加畢，室溫攪拌20分鐘，然後滴加碘乙烷(17.22g,110.39mmol,3.0eq)，滴畢，室溫攪拌30分鐘，TLC檢測反應完畢，降至0℃，滴加飽和氯化銨水溶液(50mL)淬滅反應，甲基第三丁基醚萃取(200mL×3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌(200mL×5)，乾燥，減壓濃縮得到產品(9.8g，粗品)。

步驟4：(6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

氮氣保護下，將6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(9.8g,41.29mmol,1.0eq)加入到THF(100mL)中，降溫至0℃，滴加二異丁基氫化鋁(1.5mol/L的甲苯溶液，69mL,103.24mmol,2.5eq)。滴畢，0℃攪拌反應2h。TLC檢測反應完畢，0℃下依次滴加水(4.2mL)、15w/w%的氫氧化鈉水溶液 (4.2mL)和水(10.3mL)。滴畢，加入無水硫酸鈉，攪拌15分鐘，抽濾，固體用乙酸乙酯洗，濾液減壓濃縮得到粗品(13.1g)，用PE(30mL)漿洗，抽濾得產品(6.1g，收率：75.6%)。

步驟5：6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(6.1g,31.24mmol,1.0eq)溶於DCM(300mL)中，加入二氧化錳(27.16g,312.37mmol,10eq)，加熱至迴流反應2h。HPLC檢測反應完畢，加矽藻土抽濾，濾餅用DCM(100mL×3)洗，濾液減壓濃縮得到產品(4.5g，收率：74%)。

¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ(ppm)：δ 9.52(s,1H),7.00(s,1H),6.52(s,1H),4.49(q,J=7.2Hz,2H),2.32(s,3H),1.45(t,J=7.2Hz,3H).

分子式：C₁₀H₁₁NOS 分子量：193.26 LC-MS(Pos，m/z)=194.1[M+H]⁺

實施例9：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物1)的合成

步驟1：3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸的合成

將3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(1.0g,4.16mmol,1.0eq)溶於甲醇(5mL)和四氫呋喃(5mL)中，加入一水合氫氧化鋰(500mg，11.9mmol，2.9eq)的水(5mL)溶液，50℃攪拌2h。TLC監測反應完全，減壓濃縮除去大部分有機溶劑，用鹽酸(1mol/L)調節pH值至5，過濾得棕黃色固體3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸(600.0mg，收率：63.7%)。

步驟2：(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸(500.0mg,2.21mmol,1.0eq)溶解於四氫呋喃(30mL)和N,N-二甲基甲醯胺(1mL)的混合溶劑中，冰浴 下加入N,N-二異丙基乙胺(570.8mg,4.42mmol,2.0eq)和2-(7-氧化苯駢三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(923.9mg,2.43mmol,1.1eq)，冰浴下攪拌40分鐘，滴加(R)-哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(530.7mg,2.65mmol,1.2eq)的四氫呋喃溶液(5mL)，滴加完畢逐漸升至室溫攪拌10小時。TLC顯示反應完全，將體系濃縮，加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=40：1 v/v)得到產物(960.3mg，收率：100%)。

步驟3：(R)-(1-(2-(5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(580.7mg,1.42mmol,1.0eq)溶於乙醇(7mL)中，加入5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-甲醛(250.0mg,1.42mmol,1.0eq)、連二亞硫酸鈉(742.7mg,4.26mmol,3.0eq)和水(4mL)，微波100℃反應5小時。TLC顯示反應完全，減壓濃縮，加入水(30mL)和二氯甲烷(70mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析分離(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=60：1 v/v)得到產物(513.7mg，收率：67.8%)。

步驟4：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(513.7mg,0.96mmol,1.0eq)溶解在二氯甲烷(4mL)中，滴加三氟乙酸(2mL)，滴加完畢室溫反應2h，TLC監測反應完全，冰浴下加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)調節pH值至7~8，用二氯甲烷(15mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，粗品經製備薄層層析純化得到(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(5-乙基-5H-吡咯駢[2,3-b]吡嗪-6-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(20.0mg，產率：4.8%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.45(d,J=2.4Hz,1H),7.37(s,1H),7.32(s,1H),6.91(s,1H),4.60-4.65(m,2H),4.17(s,3H),3.99(s,3H),2.97-3.05(m,2H),2.80-2.90(m,2H),1.98-2.02(m,1H),1.90-1.92(m,2H),1.65-1.80(m,2H),1.47-1.55(m,2H),1.25-1.40(m,3H).

分子式：C₂₃H₂₇N₇O₂ 分子量：433.52 LC-MS(Pos,m/z)=434.2[M+H]⁺.

實施例10：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物2)的合成

步驟1：(R)-(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(245.0mg,0.60mmol,1.5eq)溶於乙醇(10mL)中，加入1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-甲醛(70.1mg,0.40mmol,1.0eq)、連二亞硫酸鈉(208.9mg,1.20mmol,3.0eq)和水(2mL)，微波100℃反應5小時。TLC顯示反應完全，減壓濃縮，加入水(15mL)和二氯甲烷(30mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析分離(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=50：1 v/v)得產品(213.6mg，收率：87.2%)。

步驟2：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[3,2-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(213.6mg,0.40mmol,1.0 eq)溶解在乙醇(3mL)中，滴加氯化氫的乙醇溶液(30w/w%,3mL)，滴加完畢室溫反應10小時，TLC監測反應完全，濃縮，用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值至7~8，用二氯甲烷(15mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經製備薄層層析純化得到產品(16.8mg，產率：9.7%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.46-8.47(m,1H),8.07-8.09(m,2H),7.34(s,1H),7.27-7.30(m,1H),7.18(s,1H),6.86-6.88(m,1H),4.52-4.56(m,2H),4.13(s,3H),3.98(s,3H),2.79-2.87(m,2H),1.97-2.00(m,2H),1.89-1.92(m,2H),1.65-1.75(m,2H),1.45-1.48(m,2H),1.20-1.31(m,3H).

分子式：C₂₄H₂₈N₆O₂ 分子量：432.53 LC-MS(Pos,m/z)=433.1[M+H]⁺.

實施例11：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物3)的合成

步驟1：(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(469.7mg,1.150mmol,1.0eq)溶解於乙醇(16mL)中，加入6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(200.0mg,1.15mmol)、水(2mL)和連二亞硫酸鈉(600.65mg,3.45mmol)，微波100℃反應5小時。TLC檢測反應完全，減壓濃縮，加入水(10mL)和乙酸乙酯(20mL)，分液，有機相濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=60：1 v/v)純化得白色固體狀產物(300.0mg，得率：48.6%)。

步驟2：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(150.0mg,0.28mmol,1.0eq)溶於二氯甲烷(4mL)中，冰浴下加入氯化氫乙醇溶液(30w/w%,2mL)，室溫反應2h。TLC監測反應完全，濃縮，用碳酸氫鈉水溶液調節pH值至7~8，用乙酸乙酯萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經製備薄層層析純化(DCM：MeOH=8：1 v/v)得產物(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(15.0mg，產率：12.3%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.26(s,1H),7.17-7.16(d,1H),7.12-7.11(d,1H),6.90-6.86(d,1H),6.63(s,1H),4.40-4.38(d,2H),4.09(s,3H),3.96(s,3H),2.02-1.84(m,4H),1.47(s,2H),1.35-1.31(t,3H).

分子式：C₂₃H₂₇N₅O₂S 分子量：437.19 LC-MS(Pos,m/z)=438.1[M+H]⁺.

實施例12：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物4)的合成

步驟1：(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(600.7mg,1.47mmol,1.2eq)溶於乙醇(6mL)中，加入6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(200.0mg,1.22mmol,1.0eq)、連二亞硫酸鈉(639.8mg,3.67mmol,3.0eq)和水(2mL)，微波100℃反應5小時。TLC顯示反應完全，減壓濃縮，加入水(25mL)和二氯甲烷(60mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析分離(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=100：1 v/v)得到產物(60.3mg，收率：1.6%)。

步驟2：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(32.5mg,0.06mmol,1.0eq)溶解在二氯甲烷(4mL)中，冰浴下滴加2,6-二甲基吡啶(40.0mg,0.37mmol,6.0eq)，滴加完畢冰浴下攪拌30分鐘，滴加三氟甲磺酸三甲基矽酯(41.3mg,0.18mmol,2.0eq)，冰浴下反應4h。TLC監測反應完全，加入飽和氯化銨水溶液(5mL)，用二氯甲烷(15mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經製備薄層層析純化得產品(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(1.8mg，產率：6.9%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.25(brs,3H),7.62(s,1H),7.33(s,1H),6.86(s,1H),6.72(s,1H),6.63(s,1H),4.40-4.42(m,2H),4.11(s,3H),3.97(s,3H),3.15-3.24(m,2H),1.98-2.07(m,1H),1.75-1.77(m,1H),1.49-1.65(m,2H),1.32-1.35(m,3H).

分子式：C₂₃H₂₇N₅O₃ 分子量：421.50 LC-MS(Pos,m/z)=422.0[M+H]⁺.

實施例13：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(3-乙基-3H-噻吩駢[2,3-d]咪唑-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物8)的合成

步驟1：(R)-(1-(3-胺基-5-甲氧基-4-(甲胺基)苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(500.0mg,1.224mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(639.0mg,3.672mmol,3.0eq)溶於乙醇(6.0ml)和水(3.0ml)，氮氣保護下，90℃反應過夜，TLC顯示未反應完全，補加連二亞硫酸鈉(211.0mg,1.224mmol,1.0eq)，1h後TLC顯示反應完全。將反應液減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=200：1~60：1 v/v)純化得產品(450.0mg，收率：97.2%)。

步驟2：(R)-(1-(2-(3-乙基-3H-噻吩駢[2,3-d]咪唑-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-胺基-5-甲氧基-4-(甲胺基)苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(250.0mg,0.660mmol,1.0eq)、3-乙基-3H-噻吩駢[2,3-d]咪唑-2-甲醛(143.0mg,0.793mmol,1.2eq)和碳酸鉀(274.0mg,1.982mmol,3.0eq)溶於1,4-二氧六環(3.0mL)和水(0.5mL)，升溫至110℃反應過夜，TLC顯示反應完全。將 反應液減壓濃縮，加水(50.0mL)，乙酸乙酯(20.0mL)萃取，乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(DCM：MeOH=100：1~20：1 v/v)得產品(125.0mg，收率：35.1%)。

步驟3：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(3-乙基-3H-噻吩駢[2,3-d]咪唑-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(3-乙基-3H-噻吩駢[2,3-d]咪唑-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(125.0mg,0.232mmol,1.0eq)溶於二氯甲烷中，降溫至0℃，加入三氟乙酸(1.5mL)，2h後TLC顯示反應完全。將反應液減壓濃縮，加水(10.0mL)，用氨水調pH值至9~10，乙酸乙酯(10.0mL×2)萃取，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=60：1~11：1 v/v)純化得產品(90.0mg，收率：88.4%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：7.44-7.42(m,1H),7.31-7.29(m,2H),6.87(s,1H),4.76-4.70(m,2H),4.38(s,3H),3.98(s,3H),2.93(m,1H),2.68-2.67(m,2H),1.89-1.85(m,2H),1.75-1.65(m,2H),1.50-1.46(m,3H),1.26-1.24(m,2H).

分子式：C₂₂H₂₆N₆O₂S 分子量：438.55 LC-MS(Pos,m/z)=439.36[M+H]⁺.

實施例14：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物9)的合成

步驟1：3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(10.0g,41mmol,1.0eq)溶解於四氫呋喃(200mL)中，滴加一水合氫氧化鋰(7.0g,166mmol,4.0eq)的水溶液(40mL)，45℃攪拌1小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加水(200mL)，冰浴下用2mol/L鹽酸調節pH值至2~3，用二氯甲烷(150mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得產品(8.1g，收率：87.9%)。

步驟2：(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸(2.23g,9.85mmol,1.0eq)加入到DMF(15mL)和四氫呋喃(60mL)混合溶液中，冰浴下加入DIPEA(2.54g,19.7mmol,2.0eq)和HATU(4.12g,10.83mmol,1.1eq)，反應2小時，加入(R)-哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(2.36g,11.83mmol,1.2eq)，加畢，逐漸升至室溫攪拌過夜，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(150mL)和水(200mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得產品(4.7g粗品)。

步驟3：(R)-(1-(2-(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(721.6,1.51mmol,1.0eq.)加入到乙醇(9.0mL)中，加入6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(291.82mg,1.51mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(788.67mg,4.53mmol,3.0eq)的水溶液(3.0mL)，微波100℃反應4小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入二氯甲烷(20mL)和水(15mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=80：1 v/v)純化得產品(353.7mg，收率：42.4%)。

步驟4：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(300.0mg,0.54mmol,1.0eq)加入到二氯甲烷(6mL)中，冰浴下滴加入三氟乙酸(3mL)，升至室溫攪拌2小時。TLC監測反應完全，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)，調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(15mL)，萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得產品(177.9mg，收率：72.9%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.24(s,1H),6.81(m,2H),6.77(s,1H),4.33-4.38(m,2H),4.09(s,3H),3.96(s,3H),2.86-2.92(s,1H),2.67-2.69(s,3H),2.50-2.51(s,2H),1.85-1.87(m,1H),1.67(s,1H),1.43-1.49(m, 3H),1.31-1.33(m,3H),1.24-1.29(m,1H).

分子式：C₂₄H₂₉N₅O₂S分子量：451.59LC-MS(Pos,m/z)=452.9[M+H]⁺.

實施例15：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物10)的合成

步驟1：(R)-(1-(2-(6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(347.0mg,0.84mmol,1.0eq)溶解於乙醇(5.0mL)，加入6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(164.1mg,0.84mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(438.7mg,2.52mmol,3.0eq)的水溶液(2.0mL)，微波100℃反應5小時，TLC監 測反應完全，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=100：1v/v)純化得產物(170.0mg，收率：36.7%)。

步驟2：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-乙基-3-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-乙基-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(170.0mg,0.3mmol,1.0eq)溶解於二氯甲烷(3.0mL)中，冰浴下滴加三氟乙酸(1.5mL)，升至室溫攪拌1小時。TLC監測反應完全，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)，調節體系pH值至7~8，加入二氯甲烷(10mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到產品(75.1mg，收率：54.0%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.25(s,1H),6.87(s,1H),6.82(s,1H),6.74-6.75(s,1H),4.34-4.39(m,2H),4.11(s,3H),3.97(s,3H),2.92(s,1H),2.66(s,2H),2.32(s,3H),1.85-1.88(d,1H),1.59(m,3H),1.54(m,1H),1.29-1.32(m,3H).

分子式：C₂₄H₂₉N₅O₂S 分子量：451.59 LC-MS(Pos,m/z)=452.4[M+H]⁺.

實施例16：N-(3-胺基環丁基)-2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-N,1-二甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物13)的合成

步驟1：(3-((4-甲氧基苄基)(甲基)胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(3-氧代環丁基)胺基甲酸第三丁酯(2.69g,14.5mmol,1.1eq)溶解於二氯甲烷(10.0mL)，加入1-(4-甲氧基苯基)-N-甲基甲胺(2.0g,13.2mmol,1.0eq)和冰醋酸(0.2mL)，升至室溫攪拌2小時，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(5.6g,26.4mmol,2.0eq)，室溫反應過夜。TLC監測反應完全，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)，調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(100mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=140：3 v/v)純化得到產物(2.1g，收率：49.6%)。

步驟2：(3-(甲胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(3-((4-甲氧基苄基)(甲基)胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯(2.1g,6.55mmol,1.0eq)溶解於甲醇(20.0mL)，加入鈀碳(525.0mg)，氫氣置換3次，室溫攪拌過夜，TLC監測反應完全，過濾，濾液減壓濃縮得產品(1.83g粗品)。

步驟3：(3-(3-甲氧基-N-甲基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸(1.72g,6.15mmol,1.0eq)溶於DMF(10mL)，冰浴下加入DIPEA(1.97g,12.31mmol,2.0eq)和HATU(3.19g,6.76mmol,1.1eq)，攪拌2小時，加入(3-(甲胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯(1.53g,6.15mmol,1.0eq)的DMF溶液(10mL)，逐漸升至室溫攪拌2小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(150mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=200：1 v/v)得到產品(1.7g，兩步收率：67.7%)。

步驟4：(3-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-N,1-二甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-甲醯胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(3-(3-甲氧基-N-甲基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯(1.17g,2.87mmol,1.0eq)溶於乙醇(9.0mL)，加入6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(515.1mg,2.87mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(1.50g,8.61mmol,3.0eq)的水溶液(4.5mL)，100℃反應過夜。TLC監測反應完全，減壓濃 縮，粗品用二氯甲烷(100mL)溶解，過濾，濾液無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=100：1 v/v)得產品(1.01g，收率：65.5%)。

步驟5：N-(3-胺基環丁基)-2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-N,1-二甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-甲醯胺的合成

將(3-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-N,1-二甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-甲醯胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁酯(300.0mg,0.55mmol,1.0eq)溶解於二氯甲烷(3.0mL)，冰浴下滴加三氟乙酸(1.5mL)，升至室溫攪拌2小時。TLC監測反應完全，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(15mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到產品(109.3mg，收率：44.8%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.21(s,1H),7.16-7.17(m,1H),7.11-7.13(m,1H),6.90(s,1H),6.76(s,1H),4.76(s,1H),4.37-4.42(m,2H),4.10(s,3H),3.97(s,3H),3.42-3.45(m,1H),2.97-2.98(s,3H),2.43-2.46(m,2H),2.41(m,1H),1.90-1.95(m,1H),1.81(m,2H),1.31-1.39(m,3H).

分子式：C₂₃H₂₇N₅O₂S分子量：437.56LC-MS(Pos,m/z)=338.6[M+H]⁺.

實施例17：(4-胺基-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物14)的合成

步驟1：3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸甲酯(3.0g,12.4mmol,1.0eq)溶解於四氫呋喃(30mL)中，滴加一水合氫氧化鋰(2.0g,49.9mmol,4.0eq)的水溶液(6mL)，45℃加熱攪拌過夜，TLC監測反應完全，減壓濃縮，向反應液中加水(60mL)，冰浴下用2mol/L鹽酸調節pH值至2~3，加入二氯甲烷(50mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到產品(2.6g，收率：92.8%)。

步驟2：(6-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸(150.0mg,0.66mmol,1.0eq)加入DMF(1.5mL)和四氫呋喃(12mL)的混合溶液中，冰浴下加入DIPEA(171.2mg,1.32mmol,2.0eq)和HATU(277.1mg,0.72mmol,1.1eq)，反應2小時，加入(6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(165.0mg,0.72mmol,1.1eq)，加畢，逐漸升至室溫攪拌過夜，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入乙 酸乙酯(15mL)和飽和氯化鈉水溶液(20mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=160：1 v/v)得產品(200.6mg，收率：69.4%)。

步驟3：(6-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(6-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(200.0mg,0.46mmol,1.0eq)溶於乙醇(8.0mL)中，加入6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(82.5mg,0.46mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(240.2mg,1.38mmol,3.0eq)的水溶液(1.5mL)，微波100℃反應5小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加二氯甲烷(20mL)和水(15mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=80：1 v/v)純化得產品(130.1mg，收率：50.1%)。

步驟4：(4-胺基-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(6-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(130.1mg,0.23mmol,1.0eq)加入到乙醇(4mL)中，冰浴下滴加氯化氫乙醇溶液(30w/w%,4mL)，升至室溫攪拌2小時。TLC監測反應完全後，減壓濃縮除去乙醇，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(15mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經製備薄層層析(二氯甲烷：甲醇=15：1 v/v)純化得到產物(20.1mg，收率：18.8%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.35(s,1H),7.16-7.18(m,1H),7.11-7.13(m,1H),6.90(s,2H),4.37-4.42(m,2H),4.10(s,3H),3.97(s,3H),3.54(m,2H),3.51(m,1H),1.74(m,2H),1.32-1.35(m,3H),1.19-1.24(m,2H),0.57(s,2H),0.22-0.30(m,2H).

分子式：C₂₅H₂₉N₅O₂S分子量：463.60LC-MS(Pos,m/z)=464.2[M+H]⁺.

實施例18：(3-胺基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物15)的合成

步驟1：3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯氯的合成

將3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸(600.0mg,2.65mmol,1.0eq)溶於二氯亞碸(10mL)中，常溫攪拌0.5h，反應液減壓濃縮得黃色固體狀產物(540mg粗品)，直接用於下一步反應。

步驟2：(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)-1,2,3,4-四氫喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯氯(300mg,1.23mmol,1.0eq)、(1,2,3,4-四氫喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯(305mg,1.23mmol,1.0eq)、三乙胺(269mg,2.69mmol,3.0eq)和DMAP(15mg,0.12mmol,0.1eq)溶解於二氯甲烷(10mL)中，常溫攪拌1h。加水(5mL)淬滅，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，有機相合併，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=30：1 v/v)得到紅色固體狀產物(150mg，產率：26.7%)。

步驟3：(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-1,2,3,4-四氫喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(1-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)-1,2,3,4-四氫喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯(50.0mg,0.1mmol,1.0eq)和1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡 啶-2-甲醛(17.4mg,0.1mmol,1.0eq)溶於乙醇(2mL)和水(1mL)，加入連二亞硫酸鈉(53mg,0.3mmol,1.0eq)，100℃微波反應5h。反應液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1 v/v)得到無色油狀產物(35mg，產率：60.3%)。

步驟4：(3-胺基-3,4-二氫喹啉-1(2H)-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(1-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-1,2,3,4-四氫喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯(35mg)溶於三氟乙酸(1mL)，常溫下攪拌1h，反應液濃縮，粗品經反相柱層析純化(乙腈：水：氨水=30：100：0.05 v/v)得到白色固體狀產物(4.4mg，產率：26.6%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.46(m,1H),8.04(m,1H),7.50(s,1H),7.31(s,2H),7.13-7.26(m,1H),6.91-7.09(m,3H),6.77(s,1H),4.62-4.73(m,2H),4.22(m,1H),4.13(s,3H),3.93(s,3H),3.68(m,1H),3.57(m,1H),3.21(m,1H),2.73(m,1H),1.20-1.41(m,3H).

分子式：C₂₈H₂₈N₆O₂ 分子量：480.23 LC-MS(Pos,m/z)=481.21[M+H]⁺.

實施例19：(4-胺基-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮鹽酸鹽(化合物16的鹽酸鹽)的合成

步驟1：(6-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲酸(150.0mg,0.663mmol,1.0eq)溶解於四氫呋喃(4mL)和N,N-二甲基甲醯胺(2mL)的混合溶劑中，冰浴下加入N,N-二異丙基乙胺(171.2mg,1.326mmol,2.0eq)和2-(7-氧化苯駢三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(277.3mg,0.729mmol,1.1eq)，冰浴下攪拌40分鐘，滴加(6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(165.0mg,0.729mmol,1.1eq)的四氫呋喃溶液(2mL)，滴加完畢逐漸升至室溫攪拌10小時。TLC顯示反應完全，將體系濃縮，加入水(15mL)和二氯甲烷(30mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析分離(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=40：1 v/v)得到黃色固體狀產物(200.3mg，產率：69.4%)。

步驟2：(6-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(6-(3-甲氧基-4-(甲基胺基)-5-硝基苯甲醯基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(200.0mg,0.46mmol,1.0eq)溶於乙醇(8mL)中，加入1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-甲醛(80.1mg,0.46mmol,1.0eq)、連二亞硫酸鈉 (240.2mg,1.38mmol,3.0eq)和水(1mL)，微波100℃反應5小時。TLC顯示反應完全，減壓濃縮，加入水(10mL)和二氯甲烷(20mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析分離(200-300目矽膠，二氯甲烷：甲醇=80：1 v/v)得到產物(135.1mg，產率：52.7%)。

步驟3：(4-胺基-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮鹽酸鹽的合成

將(6-(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)-6-氮雜螺[2.5]辛烷-4-基)胺基甲酸第三丁酯(121.7mg,0.217mmol,1.0eq)溶解在乙醇(4mL)中，滴加氯化氫的乙醇溶液(30w/w%,4mL)，滴加完畢室溫反應4h。TLC監測反應完全，濃縮，粗品用石油醚(4ml)和甲基第三丁基醚(2mL)漿洗得到產物(4-胺基-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)(2-(1-乙基-1H-吡咯駢[2,3-b]吡啶-2-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮鹽酸鹽(124.4mg，產率：100%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：8.48(d,J=4.4Hz,1H),8.37(brs,2H),8.21(d,J=7.8Hz,1H),7.59(brs,1H),7.27-7.29(m,1H),7.18(s,2H),4.58-4.63(m,2H),4.16(s,3H),4.03(s,3H),3.16-3.25(m,1H),3.04-3.06(m,1H),2.67-2.73(m,1H),2.25-2.41(m,1H),1.23-1.26(m,3H),0.82-0.84(m,2H),0.65-0.68(m,1H),0.42-0.52(m,2H).

分子式：C₂₆H₃₀N₆O₂ 分子量：458.57 LC-MS(Pos,m/z)=459.3[M+H]⁺.

實施例20：(R)-(3-胺基吡咯烷-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物17)的合成

步驟1：(R)-(1-(3-甲氧基-4-甲胺基-5-硝基苯甲醯基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將3-甲氧基-4-甲胺基-5-硝基苯甲酸(500.0mg,2.21mmol,1.0eq)加入到DMF(5mL)中，冰浴降溫至0℃，加入HATU(1260.8mg,3.32mmol,1.5eq)和DIPEA(857.1mg,6.63mmol,3.0eq)，0℃下攪拌60min後加入(R)-吡咯烷-3-基胺基甲酸第三丁酯(370.5mg,1.99mmol,0.9eq)，室溫攪拌反應過夜。TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(10mL)，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)、飽和氯化銨水溶液(10mL)、水(10mL×4)和飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，減壓濃縮，粗品經製備薄層層析純化(PE：EA=1：1,0：1 v/v)得產品(508.0mg，收率：64.7%)。

步驟2：(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-甲胺基-5-硝基苯甲醯基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯(306.0mg,0.78mmol,1.5eq)溶於水(2mL)和乙醇(10mL)的混合液中，加入6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(92.7mg,0.52mmol,1.0eq.)和Na₂S₂O₄(270.2mg,1.55mmol,3.0eq.)，微波100℃反應5h。TLC監測反應完全，減壓濃縮，過濾，濾液加入二氯甲烷(5mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=50：1~30：1 v/v)純化得產品(250mg，收率：92.3%)。

步驟3：(R)-(3-胺基吡咯烷-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

冰浴下，將(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯(245.0mg,0.47mmol)溶於氯化氫的乙醇溶液(30w/w%,17mL)中，緩慢慢升至室溫攪拌反應2h。TLC監測反應完全，減壓濃縮，固體加水(10mL)溶解，用10w/w% NaHCO₃水溶液調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(5mL×3)萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液減壓濃縮，粗品經製備薄層層析純化(DCM：MeOH=20：1,10：1 v/v)得產品(108mg，收率：54.2%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.46-7.42(d,1H),7.18-7.12(q,2H),6.96-6.91(d,2H),4.41-4.39(d,2H),4.11(s,3H),3.98(s,3H),3.66-3.64(d,3H),3.51(s,2H),2.06-2.03(d,1H),1.73-1.72(d,1H),1.36-1.32(t,3H).

分子式：C₂₂H₂₅N₅O₂S 分子量：423.54 LC-MS(Pos,m/z)=424.38[M+H]⁺.

實施例21：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物18)的合成

步驟1：6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將金屬鈉(3.0g,130.0mmol,4.86eq.)加入到無水乙醇(60mL)中，攪拌至溶解後滴加噻吩-3-甲醛(3.0g,26.7mmol,1.0eq)和疊氮乙酸乙酯(15.0g,116.0mmol,4.3eq.)的乙醇溶液(40mL)，逐漸升至室溫攪拌過夜，TLC監測反應完全，冰浴下加飽和氯化銨水溶液(200mL)，加入甲基第三丁基醚(200mL×3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，加入二甲苯(50mL)迴流攪拌過夜，TLC檢測反應完全，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1 v/v)純化得到產品(435.0mg，收率：8.3%)。

步驟2：6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(435.0mg,2.22mmol,1.0eq)溶解於DMF(5mL)，加入(溴甲基)環丙烷(449.5mg,3.33mmol,1.5eq)和無水碳 酸鉀(613.6mg,4.44mmol,2.0eq)，50℃反應3小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(15mL)和水(40mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=100：1 v/v)純化得到產品(507.6mg，收率：91.7%)。

步驟3：(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(507.6mg,2.03mmol,1.0eq)溶於THF(2.5mL)中，冰浴下加入二異丁基氫化鋁的甲苯溶液(1.5mol/L,4.66mL)，冰浴反應2小時，TLC監測反應完全，加入飽和硫酸鈉水溶液(20mL)，攪拌半小時，抽濾，濾液用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得產品(430.9mg粗品)。

步驟4：6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(430.9mg粗品)加入到二氯甲烷(12.5mL)中，加入二氧化錳(1.8g,20.3mmol,10.0eq)，40℃反應1小時，TLC監測反應完全，過濾，濾液減壓濃縮得到產品(371.7mg，兩步收率：89.2%)。

步驟5：(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(701.0mg,1.71mmol,1.0eq)加入到乙醇(10.0mL)中，再加入6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(371.7mg,1.81mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(945.3mg,5.43mmol,3.0eq)的水溶液(5mL)，微波100℃反應5小時，TLC監測反應完全，減壓濃縮，加入水(15mL)和二氯甲烷(20mL)，分液，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=100：1~80：1 v/v)純化得產品(440.0mg，收率：44.0%)。

步驟6：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(440.0mg,0.78mmol,1.0eq)加入二氯甲烷(2.0mL)攪拌溶解，冰浴下滴加三氟乙酸(2.0mL)，升至室溫攪拌2小時。TLC監測反應完全，冰浴下滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，調節pH值至7~8，加入二氯甲烷(15mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過柱，二氯甲烷：甲醇=40：1~30：1~20：1 v/v分離純化得到(R)-(3-胺基哌啶-1- 基)(2-(6-(環丙基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮，減壓濃縮得到產品(208.2mg，收率：57.6%)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.25-7.26(s,1H),7.15-7.16(m,1H),7.10-7.11(m,1H),6.90(s,1H),6.82(s,1H),4.24-4.26(m,2H),4.09(s,3H),3.97(s,3H),2.92(s,1H),2.67(s,2H),1.85-1.88(m,1H),1.58-1.67(m,3H),1.39-1.46(m,1H),1.19-1.25(m,2H),0.45-0.48(m,2H),0.26(m,2H).

分子式：C₂₅H₂₉N₅O₂S分子量：463.60LC-MS(Pos,m/z)=464.38[M+H]⁺.

實施例22：(R)-(3-胺基氮雜環庚烷-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物19)的合成

步驟1：(R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯的合成

將(R)-3-胺基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯(500.0mg,2.33mmol,1.0eq)和三乙胺(472.0mg,4.67mmol,2.0eq)溶於二氯甲烷(5.0mL)中，0℃下加入氯甲酸苄酯(517.0mg,3.03mmol,1.3eq)，氮氣保護下室溫反應2h，TLC顯示反應完全。將二氯甲烷減壓濃縮得產品(1.0g粗品)。

步驟2：(R)-氮雜環庚烷-3-基胺基甲酸苄酯的合成

將(R)-3-(((苄氧基)羰基)胺基)氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯(1.0g)溶於乙醇(2.5mL)中，加入氯化氫的乙醇溶液(30w/w%,2.5mL)，室溫過夜，TLC顯示反應完全。將反應液減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(DCM：MeOH=100：1~20：1 v/v)得產品(200.0mg，兩步收率：34.54%)。

步驟3：(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)氮雜環庚烷-3-基)胺基甲酸苄基酯的合成

將3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲酸(200.0mg,0.805mmol,1.0eq)和DIPEA(312.0mg,2.42mmol,3.0eq)溶於DMF(2.0mL)，0℃氮氣保護下，加入HATU(459.0mg,1.21mmol,1.5eq)，攪拌0.5h後，加入(R)-氮雜環庚烷-3-基胺基甲酸苄酯(200.0mg,0.805mmol)，室溫反應2h，TLC顯示反應完全。加入水(40.0mL)，乙酸乙酯(15.0mL×2)萃取，合併有機相，依次用飽和碳酸鈉水溶液(2.0mL)、飽和氯化銨水溶液(2.0mL)和飽和氯化鈉溶液(2.0mL)洗，乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=200：1~100：1 v/v)得產品(323.0mg，收率：87.9%)。

步驟4：(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)氮雜環庚烷-3-基)胺基甲酸苄酯的合成

將(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)氮雜環庚烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(300.0mg,0.657mmol,1.0eq)、6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(118.0mg,0.657mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(344.0mg,1.98mmol,3.0eq)溶於乙醇(6.0mL)和水(3.0mL)，氮氣保護下，微波100℃反應5h，TLC顯示反應完全。將反應液減壓濃縮，加入乙酸乙酯，抽濾，濾液減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=100：1~60：1 v/v)純化得產品(260.0mg，收率：67.5%)。

步驟5：(R)-(3-胺基氮雜環庚烷-1-基)(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-乙基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)氮雜環庚烷-3-基)胺基甲酸苄酯(340.0mg,0.580mmol,1.0eq)溶於乙腈(8.0mL)中，氮氣保護下，加入三甲基碘矽烷(290.0mg,1.45mmol,2.5eq)，反應3h，TLC顯示反應完全。加入三乙胺(2.0mL)淬滅，加入水(30.0mL)，乙酸乙酯(10.0mL×3)萃取，合併有機相，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(2.0mL)和飽和氯化鈉溶液(2.0mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品經矽膠柱層析(DCM：MeOH=100：1~11：1 v/v)純化得產品(230.0mg，收率：87.8%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：7.24(s,1H),7.18-7.16(m,1H),7.13-7.11(m,1H),6.90(s,1H),6.80(s,1H),4.43-4.37(m,2H),4.10(s,3H),3.97(s,3H),3.41-3.17(m,4H),2.98-2.81(m,2H),1.85-1.72(m,4H),1.36-1.32(m,4H).

分子式：C₂₄H₂₉N₅O₂S 分子量：451.59 LC-MS(Pos,m/z)=452.37[M+H]⁺.

實施例23：化合物(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物20)的合成

步驟1：中間體6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將中間體6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(1.50g,7.68mmol,1.0eq)、碳酸銫(3.75g,11.52mmol,1.5eq)和1-溴-2-甲基丙烷(1.58g,11.52mmol,1.5eq)依次加入到乙腈(25mL)中，加熱至90℃反應1.5h，TLC顯示反應完全，冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(乙酸乙酯：石油醚=3：100 v/v)得產品(1.52g，產率：78.7%)。

步驟2：中間體(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(1.50g,5.97mmol,1.0eq)溶於THF(25mL)中，冰水浴冷卻至0℃左右，將氫化鋁鋰(227mg,5.97mmol,1.0eq)加入到上述溶液中，攪拌0.5h，然後室溫反應2h。TLC顯示反應完全，依次加入水(0.23mL)、15w/w%氫氧化鈉溶液(0.23mL)和水(0.69mL)到上述反應液中，有大量白色絮狀固體析出，加入無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液濃縮得產品(1.15g，產率：92.1%)。

步驟3：中間體6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(500mg,2.39mmol,1.0eq)加入到二氯甲烷(20mL)中，再加入二氧化錳(2.08g,23.89mmol,10eq)，室溫攪拌反應16h，TLC顯示反應完全，矽藻土過濾，濾液濃縮得棕色油狀產物(390mg，產率：78.8%)。

步驟4：中間體(R)-(1-(2-(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(365mg,1.76mmol,1.2eq)、(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(600mg,1.47mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(1.28g,7.34mmol,5.0eq)依次加入到乙醇(15mL)和水(7.5mL)的混合溶劑中，加熱至90℃反應10h，TLC顯示反應完全，將反應液倒入水(50mL)中，乙酸乙酯(30mL)萃取，有機相用依次用水(20mL)和飽和食鹽水洗(20mL)，乾燥(Na₂SO₄)，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=50：1 v/v)得產品(550mg，產率：66.2%)。

步驟5：中間體(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將中間體(R)-(1-(2-(6-異丁基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(300mg,0.53mmol,1.0eq)和苯酚(149.72mg,1.59mmol,3.0eq)溶於甲醇(5mL)中，加入氯化氫乙醇溶液(5mL)，室溫攪拌反應2h，TLC顯示反應完全，將反應液濃縮，加入二氯甲烷(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(15mL)、水(15mL)和飽和食鹽水(15mL)洗，乾燥(Na₂SO₄)，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=50：1~10：1 v/v)得產品(130mg，產率：52.7%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.27(m,1H),7.16(d,1H),7.11(d,1H),6.91(s,1H),6.82(s,1H),4.10-4.40(m,3H),4.09(s,3H),3.97(s,3H), 3.60-3.80(m,1H),2.90-3.00(m,1H),2.60-2.75(m,2H),2.00-2.30(m,3H),1.80-1.95(m,1H),1.60-1.75(m,1H),1.40-1.50(m,1H),1.20-1.35(m,1H),0.71(d,6H).

分子式：C₂₅H₃₁N₅O₂S 分子量：465.62 LC-MS(m/z)=465.94[M+H]⁺.

實施例24：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物21)的合成

步驟1：2,2,2-三氟乙基4-甲基苯磺酸酯的合成

將2,2,2-三氟乙醇(5.77g,57.70mmol,1.1eq)、對甲苯磺醯氯(10.0g,52.45mmol,1.0eq)和三乙胺(10.62g,104.91mmol,2.0eq)溶於二氯甲烷(150mL)中，常溫攪拌18小時，反應完畢。水洗(40mL)，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=30：1v/v)得到無色油產物(4.7g，產率：34.8%)。

步驟2：6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(500mg,2.56mmol,1.0eq)、2,2,2-三氟乙基4-甲基苯磺酸酯(846mg,3.33mmol,1.3eq)和碳酸銫(1.25g,3.84mmol,1.5eq)加入乙腈(15mL)中，加熱迴流35小時，TLC顯示反應完全。過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=50：1 v/v)得產品(580mg，產率：81.8%)。

步驟3：(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將四氫鋁鋰(79.39mg,2.09mmol,1.0eq)置於四氫呋喃(20mL)中，冷卻至0℃。將6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(580mg,2.09mmol,1.0eq)溶於四氫呋喃(4mL)，緩慢加入到四氫鋁鋰的四氫呋喃懸濁液中，維持反應體系溫度在0℃左右。加畢，繼續攪拌2小時，TLC顯示反應完畢。依次緩慢加入水(80mg)、15w/w%氫氧化鈉水溶液(80mg)和水(240mg)，加入無水硫酸鈉乾燥過夜。過濾，濾液濃縮得產品(490mg，產率：99.6%)。

步驟4：6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(250mg,1.06mmol,1.0eq)溶於四氫呋喃(4mL)中，加入二氧化錳(1.0g,10.6mmol,10.0eq)，室溫攪拌18小時。過濾，濾液濃縮，得到產品(240mg粗品)，直接用於下步反應。

步驟5：(R)-(1-(7-甲氧基-1-甲基-2-(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(240mg粗品)和(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(324mg,0.79mmol)溶於乙醇(4mL)，連二亞硫酸鈉(748mg,4.3mmol)溶於水(2mL)，兩者混合後90℃下加熱攪拌4小時，原料反應完畢。濃縮，加入乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)，將有機相用水洗(10mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=60：1 v/v)得到產品(380mg，產率：80.9%)。

步驟6：化合物(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(7-甲氧基-1-甲基-2-(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(7-甲氧基-1-甲基-2-(6-(2,2,2-三氟乙基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(380mg,0.64mmol,1.0eq)溶於二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)中，加入苯酚(302mg,3.2mmol,5.0eq)，常溫攪拌10分鐘，TLC顯示反應完畢。低溫濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，用15w/w%氫氧化鈉水溶液洗(20mL×2)，有機相乾燥，濃縮，加入乙酸乙酯(0.5mL)和石油醚(1mL)，析出固體，過濾得產品(230mg，產率：73.2%)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：7.41(s,1H),7.08(d,J=5.28Hz,1H),7.01(d,J=5.28Hz,1H),6.86(s,1H),6.83(s,1H),5.23-5.39(m,2H),4.18(s,3H),4.02(s,3H),2.72-3.15(m,4H),2.07(s,1H),1.42-1.89(m,4H).

分子式：C₂₃H₂₄F₃N₅O₂S 分子量：491.16 LC-MS(Pos,m/z)=492.23[M+H]⁺.

實施例25：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物22)的合成

步驟1：中間體6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(1.50g,7.68mmol,1.0eq)、碳酸銫(3.75g,11.52mmol,1.5eq)和溴甲基環丁烷(1.72g,11.52mmol,1.5eq)依次加入到乙腈(25mL)中，加熱至90℃反應1.5h，TLC顯示反應完全，冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚=3：100 v/v)純化得產品(1.45g，產率：71.7%)。

步驟2：中間體(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(1.45g,5.51mmol,1.0eq)溶於THF(25mL)中，冰水浴冷卻至0℃左右，將氫化鋁鋰(209mg,5.51mmol,1.0eq)加入到上述溶液中，攪拌反應0.5h，然後室溫反應2h。TLC顯示反應完全。依次將水(0.21mL)、15w/w%氫氧化鈉溶液(0.21mL)、水(0.63mL)加入到上述反應液中，有大量白色絮狀固體析出，加入無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液濃縮得產品(1.2g，產率：98.5%)。

步驟3：中間體6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(500mg,2.26mmol,1.0eq)加入到二氯甲烷(20mL)中，再加入二氧化錳(1.96g,22.59mmol,10eq)，室溫攪拌反應15h，TLC顯示反應完全，過濾，濾液濃縮得產物(420mg，產率：84.8%)。

步驟4：中間體(R)-(1-(2-(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(387mg,1.76mmol,1.2eq)、(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(600mg,1.47mmol,1.0eq)和連二亞硫酸鈉(1.28g,7.34mmol,5.0eq)依次加入到乙醇(15mL)和水(7.5mL)的混合溶劑中，加熱至90℃反應8h，TLC顯示反應完全，將反應液倒入水(30mL)中，乙酸乙酯(30mL)萃取，有機相用水洗(20mL)，飽和食鹽水洗(20mL)，乾燥(Na₂SO₄)，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷：甲醇=50：1 v/v)得產品(540mg，產率：63.6%)。

步驟5：化合物(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-(環丁基甲基)-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(300mg,0.52mmol,1.0eq)和苯酚(146.61mg,1.56mmol,3.0eq)溶於甲醇(5mL)中，加入氯化氫的乙醇溶液(30w/w%,5mL)，室溫攪拌反應2h，TLC顯示反應完全，反應液濃縮，加入二氯甲烷(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(15mL)、水(15mL)和飽和食鹽水洗(15mL)，乾燥(Na₂SO₄)，過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=50：1~10：1 v/v)得產品(135mg，產率：54.4%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.28(m,1H),7.16(d,1H),7.10(d,1H),6.89(s,1H),6.82(s,1H),4.10-4.40(m,3H),4.09(s,3H),3.97(s,3H),3.60-3.80(m,1H),2.90-3.00(m,1H),2.60-2.75(m,2H),2.00-2.30(m,2H),1.60-1.95(m,6H),1.40-1.55(m,3H),1.20-1.30(m,2H).

分子式：C₂₆H₃₁N₅O₂S 分子量：477.63 LC-MS(m/z)=477.93[M+H]⁺.

實施例26：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物23)的合成

步驟1：5-甲基噻吩-3-甲醛的合成

將4-溴-2-甲基噻吩(20.0g,0.11mol,1.0eq)溶於四氫呋喃(200mL)，氮氣保護，-80℃下緩慢滴加正丁基鋰(1.6mol/L,76.0mL,0.12mol,1.1eq)，滴加完畢，攪拌10分鐘。將DMF(12.4g,0.17mol,1.5eq)溶於四氫呋喃(10mL)，-75℃滴加入反應液中，加畢，緩慢升至室溫，冰浴下加入氯化銨飽和水溶液(30mL)，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，有機相合併，乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=100：1 v/v)得產品(3.5g，收率：24.7%)。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.81(s,1H),7.89(s,1H),7.20(s,1H),2.51(s,3H).

分子式：C₆H₆OS 分子量：126.01 LC-MS(Pos,m/z)=127.23[M+H]⁺.

步驟2：2-疊氮基-3-(5-甲基噻吩-3-基)丙烯酸乙酯的合成

取鈉(2.5g,110mmol,4.0eq)溶解於乙醇(100mL)中製成乙醇鈉溶液，降溫至-5℃，將5-甲基噻吩-3-甲醛(3.5g,28mmol,1.0eq)和疊氮乙酸乙酯(14.3g,110mmol,4.0eq)溶解於乙醇(20mL)中，緩慢滴加入新制的乙醇鈉溶液中，保持溫度在-3℃左右，滴畢，保持溫度在0℃以下，繼續攪拌1小時。加入飽和氯化銨水溶液(30mL)，將反應液倒入冰水中，攪拌十分鐘，過濾，粗品溶解於乙酸乙酯，乾燥，濃縮得到產品(4.0g，產率：60.7%)。

步驟3：2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將2-疊氮基-3-(5-甲基噻吩-3-基)丙烯酸乙酯(4.0g,17mmol,1.0eq)溶於甲苯(110mL)，迴流1小時，TLC顯示反應完畢。濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(PE：EA=30：1 v/v)得到產品(3.5g，產率：99.2%)。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.22(s,1H),6.95(s,1H),6.67(s,1H),4.30-4.41(m,2H),2.51(s,3H),1.42-1.37(m,3H).

步驟4：6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(3.0g,14.35mmol,1.0eq)、碳酸銫(11.4g,35mmol,2.5eq)和環丙基甲基溴(2.5g,19mmol,1.3eq)溶於乙腈(100mL)，迴流1小時，TLC顯示反應完畢。反應液濃縮，加入水(30 mL)和乙酸乙酯(200mL)，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=100：1 v/v)得產品(3.5g，產率：92.6%)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：7.06(s,1H),6.67(s,1H),4.29-4.36(m,4H),2.51(s,3H),1.42-1.37(m,4H),0.55-0.58(m,2H),0.45-0.48(m,2H).

分子式：C₁₄H₁₇NO₂S 分子量：263.10 LC-MS(Pos,m/z)=264.23[M+H]⁺.

步驟5：(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將四氫鋁鋰(0.78g,20.5mmol,1.5eq)懸浮於四氫呋喃(40mL)中，冷卻至0℃，將6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(3.6g,13.67mmol,1.0eq)溶於四氫呋喃(20mL)，緩慢加入到四氫鋁鋰中，維持反應體系溫度在0℃左右。加畢，繼續攪拌2小時，TLC顯示反應完畢。依次緩慢加入水(1.3g)、15w/w%氫氧化鈉水溶液(1.3g)和水(3.9g)，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得產品(3g，產率：99.1%)。

步驟6：6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(200mg,0.9mmol,1.0eq)溶於四氫呋喃(3mL)，加入二氧化錳(787mg,9.0mmol,10.0eq)，室溫攪拌18小時，TLC顯示反應完畢，過濾，濾液濃縮得產品(280mg粗品)，直接用於下步反應。

步驟7：(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(280mg粗品)和(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(401mg,0.98mmol)溶於乙醇(4mL)，將連二亞硫酸鈉(870mg,5.0mmol)溶於水(2mL)，加入反應液中。90℃反應4小時，TLC顯示反應完畢。濃縮，加入乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=50：1 v/v)得到產品(450mg，產率：79.6%)。

步驟8：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-2-甲基-6H-噻吩駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-第三丁基-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(420mg,0.73mmol,1.0eq)溶於二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(4mL)，加入苯酚(342mg,3.64mmol,5.0eq)，常溫攪拌10分鐘，TLC顯示反應完畢，濃縮，加入二氯甲烷(100mL)，用15w/w%氫氧化鈉洗(20mL×2)，有機相乾燥，濃縮，加入乙酸乙酯(0.5mL)和石油醚(1mL)，析出固體，過濾得產品(250mg，產率：71.8%)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：7.40(s,1H),6.85(s,1H),6.72(s,1H),6.60(s,1H),4.22(d,J=7.0Hz,2H),4.14(s,3H),4.00(s,3H),2.61-3.19(m,4H),2.57(s,3H),1.98-2.09(m,1H),1.25-1.83(m,5H),0.42-0.52(m,2H),0.15-0.22(m,2H).

分子式：C₂₆H₃₁N₅O₂S 分子量：477.22 LC-MS(Pos,m/z)=478.32[M+H]⁺.

實施例27：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮(化合物24)的合成

步驟1：呋喃-3-基甲醇的合成

將呋喃-3-羧酸(25g,0.22mmol,1.0eq)溶解於四氫呋喃(330mL)，冰浴下緩慢滴加硼烷-四呋喃溶液(1mol/L,330mL)，滴加完畢，常溫攪拌2小時，TLC顯示反應完畢，冰浴下緩慢滴加甲醇(40mL)淬滅反應。減壓濃縮，加入乙酸乙酯(500mL)，用2mol/L稀鹽酸(40mL×2)洗，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=4：1 v/v)得到產品(12g，產率：55.7%)。

步驟2：呋喃-3-甲醛的合成

將呋喃-3-基甲醇(12.0g,0.12mol,1.0eq)溶於四氫呋喃(500mL)，加入二氧化錳(156.4g,1.2mol,10.0eq)，室溫攪拌18小時，TLC顯示反應完畢。過濾，濾液濃縮得產品(9.0g粗品)，直接用於下步反應。

步驟3：2-疊氮基-3-(呋喃-3-基)丙烯酸乙酯的合成

取鈉(8.6g,0.38mol,4.0eq)溶解於乙醇(300mL)中，降溫至-5℃。將呋喃-3-甲醛(9.0g,0.1mol,1.0eq)和疊氮乙酸乙酯(48.3g,0.38mol,4.0eq)溶解於乙醇(60mL)中，緩慢滴加至前述新制的乙醇鈉溶液中，保持溫度在-3℃左右，滴畢，保持溫度在0℃以下，繼續攪拌1小時。加入飽和氯化銨水溶液(30mL)，將反應液倒入冰水中，攪拌十分鐘，過濾，濾餅溶於乙酸乙酯，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到產品(8.4g，產率：40.6%)。

步驟4：6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將2-疊氮基-3-(呋喃-3-基)丙烯酸乙酯(8.4g,0.04mol,1.0eq)溶於甲苯(200mL)，迴流1小時，TLC顯示反應完畢。濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(PE：EA=30：1 v/v)得到產品(4.24g，產率：59.2%)。

分子式：C₉H₉NO₃ 分子量：179.06 LC-MS(Pos,m/z)=180.23[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：9.22(s,1H),6.85(s,1H),6.55(s,1H),4.30-4.41(m,2H),1.36-1.42(m,3H).

步驟5：6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯的合成

將6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(4.24g,0.024mol,1.0eq)、碳酸銫(20.0g,0.06mmol,2.5eq)和環丙基甲基溴(4.1g,0.03mmol,1.3eq)溶於乙腈(120mL)，80℃迴流1小時，TLC顯示反應完畢。濃縮，加入水(30mL)和乙 酸乙酯(200mL)，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=100：1 v/v)得產品(5.3g粗品)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm)：7.30(s,1H),6.92(s,1H),6.53(s,1H),4.21-4.36(m,4H),1.35-1.42(m,4H),0.51-0.58(m,2H),0.41-0.52(m,2H).

步驟6：(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇的合成

將四氫鋁鋰(1.3g,34.1mmol,1.5eq)置於四氫呋喃(100mL)中，冷卻至0℃，將6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-羧酸乙酯(5.3g粗品)溶於四氫呋喃(20mL)，緩慢加入到前述四氫鋁鋰懸濁液中，維持反應體系溫度<-5℃。加畢，繼續攪拌2小時，TLC顯示反應完畢。依次緩慢加入水(1.3g)、15w/w%氫氧化鈉水溶液(1.3g)和水(3.9g)，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮得產品(4.1g，兩步產率：90.6%)。

步驟7：6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛的合成

將(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)甲醇(3g,0.016mol,1.0eq)溶於四氫呋喃(100mL)，加入二氧化錳(13.6g,0.16mol,10.0eq)，室溫攪拌18小時，TLC顯示反應完畢。過濾，濾液濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷洗脫)得產品(330mg，產率：11.1%)。

步驟8：(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯的合成

將6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-甲醛(310mg,1.64mmol,1.0eq)和(R)-(1-(3-甲氧基-4-(甲胺基)-5-硝基苯甲醯基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(578mg,1.4mmol,1.0eq)溶於乙醇(2mL)，將連二亞硫酸鈉(1.2g,7.0mmol,5.0eq)溶於水(2mL)中，加入到反應液中。90℃反應4小時，TLC顯示反應完畢。濃縮，加入乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)，有機相乾燥，濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=50：1 v/v)得到產品(130mg，產率：14.5%)。

步驟9：(R)-(3-胺基哌啶-1-基)(2-(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-基)甲酮的合成

將(R)-(1-(2-(6-(環丙基甲基)-6H-呋喃駢[2,3-b]吡咯-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-苯駢[d]咪唑-5-羰基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(110mg,0.2mmol)溶於二氯甲烷(2mL)，冰浴下加入2,6-二甲基吡啶(214.0mg,2.0mmol,10eq)和三氟甲磺酸三甲基矽酯(222mg,1.0mmol,5.0eq)，常溫攪拌6小時，TLC 顯示反應完畢。低溫濃縮，粗品經矽膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=40：1 v/v)得產品(39.0mg，產率：43.6%)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)：7.61(d,J=1.96,1H),7.28(s,1H),6.83(s,1H),6.72(d,J=1.96,1H),6.64(s,1H),4.25(d,J=7.0Hz,2H),4.11(s,3H),3.97(s,3H),3.35(s,4H),1.88-1.97(m,1H),1.60-1.79(m,1H),1.30-1.49(m,2H),1.15-1.29(m,2H),0.38-0.49(m,2H),0.19-0.28(m,2H).

分子式：C₂₅H₂₉N₅O₃ 分子量：447.23 LC-MS(Pos,m/z)=448.32[M+H]⁺.

根據下述實驗例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實驗例所描述的內容僅用於說明本發明，而不應當也不會限制申請專利範圍中所詳細描述的本發明。

實驗例一：測定化合物的酶抑制活性測試

測試物：本發明化合物，按照實施例方法製備

(1)試劑與耗材

肽醯精胺酸脫亞胺酶4(PAD4)：Cayman，Cat.No.10500，Lot.No.0519694；羧基螢光素標記肽(Peptide FAM-AcH4(1-5))：GL Biochem，Cat.No.0200046，Lot.No.P161110-TL545976；二甲基亞碸(DMSO)：Sigma，Cat.No.D2650，Lot.No.474382； 乙二胺四乙酸(EDTA)：Sigma，Cat.No.E5134，CAS No.60-00-4；96孔板：Corning，Cat.No.3365，Lot.No.22008026；384孔板：Corning，Cat.No.3573，Lot.No.12608008。

(2)5×濃度化合物配製

取待測化合物適量，DMSO溶解至10mM。取適量10mM待測化合物母液用DMSO稀釋至1.5mM溶液，然後用DMSO進行3倍梯度稀釋，得到50×濃度化合物梯度溶液。最後用反應緩衝液(含有0.01% v/v Triton的100mM HEPES(4-羥乙基哌

乙硫磺酸)的水溶液，其pH值為8.0)進行10倍稀釋，得到5×濃度化合物梯度溶液(150、50、16.667、5.556、1.852、0.617、0.206、0.069、0.023和0.008μM)。

(3)溶液配製

1)反應緩衝液：含有0.01% v/v Triton的100mM HEPES(4-羥乙基哌

乙硫磺酸)的水溶液，其pH值為8.0；2)終止液：含有0.015% w/v Brij-35、0.2% v/v Coating Reagent(包被液)#3(PE，部件號760050)和50mM EDTA的100mM HEPES(4-羥乙基哌

乙硫磺酸)的水溶液，其pH值為8.0；3)2.5×酶溶液：取PAD4酶適量，用反應緩衝液稀釋至2.5×(終濃度10nM)；4)2.5×多肽溶液：取羧基螢光素標記肽(FAM-AcH4(1-5)peptide)和CaCl₂溶液適量，用反應緩衝液稀釋至2.5×(多肽終濃度5μM，Ca²⁺終濃度0.1mM)。

(4)實驗方法

首先向384孔板中加入5μL不同濃度的5×化合物溶液或溶劑，然後加入10μL 2.5×酶溶液，室溫孵育10min。然後每孔加入10μL 2.5×多肽溶液，28℃孵育一定時間，加入25μL終止液，終止反應。用Caliper進行檢測。抑制率按照如下公式計算：抑制百分比=(max-轉化)/(max-min)*100。

“max”表示DMSO對照；“min”表示低對照。

實驗結果

由表1實驗結果可見，本發明的化合物對PAD4酶具有良好的抑制活性，對於治療由PAD4酶異常介導的疾病方面具有較好的臨床應用潛力。

實驗例二：本發明化合物的人/犬肝微粒體穩定性評價

溫孵體系的構成：

受試物配製：

精確稱取適量化合物，用DMSO溶解配成5.0mM儲備液。將5.0mM的儲備液，用DMSO稀釋成1.0mM，最後用水稀釋成10μM的化合物工作溶液，待用(反應體系中DMSO含量為0.1v/v%)。

試驗步驟：

(1).從-80℃冰箱中取出肝微粒體(20mg蛋白/mL)，置於37℃水浴恒溫振盪器上預溫孵3min，融化待用。

(2).按照上面“溫孵體系的構成”比例，製備溫孵體系混合溶液(不含化合物和β-NADPH)，置於37℃水浴恒溫振盪器上預孵育2min。

3).對照組(不含β-NADPH)：分別取30μL水和30μL化合物工作溶液(10μM)加入到240μL步驟(2)所述溫孵體系混合溶液中，渦旋30s，混勻，反應總體積300μL，平行樣2份。放入到37℃水浴恒溫振盪器中進行孵育，並開始計時，取樣時間點為0min和60min。

4).樣品組：分別取70μL β-NADPH溶液(10mM)和70μL化合物工作溶液(10μM)加入560μL步驟(2)所述溫孵體系混合溶液中，反應總體積700μL，渦旋30s，混勻，平行樣2份。放入到37℃水浴恒溫振盪器中進行孵育，並開始計時，取樣時間點為計時後0min、5min、10min、20min、30min和60min。

(5).渦旋3min後，12000rpm離心5min。

(6).取上清液50μL加入150μL水，渦旋混勻，LC/MS/MS進樣分析。

資料分析：

用下列一級動力學公式計算半衰期(t_1/2)和清除率(Cl)：Ct=C₀ * e^-kt

t_1/2=ln2/k=0.693/k

Cl_int=V_d * k

V_d=1/肝微粒體中蛋白含量

註：k為化合物剩餘量的對數與時間作圖的斜率，V_d為表觀分佈容積，C₀表示0h藥物濃度，Ct為t時刻藥物濃度，t為時間，e為自然數，Cl_int為固有清除率。

結果：

由表2-3可知，本發明化合物在人和犬肝微粒體中穩定性較好，清除率較低。

實驗例三：化合物的大鼠藥代動力學(PK)評價

動物給藥及樣品採集：

實驗用化合物用5 v/v % DMSO+20 v/v %(30 v/v %solutol(聚乙二醇-15羥基硬脂酸酯，購自BASF，批號84773247G0))+75 v/v %鹽水溶解製備溶液劑，將化合物的溶液劑以5.0mg/kg的劑量灌胃給予SD大鼠，采血時間點為：15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和24h。

實驗用化合物用5 v/v % DMSO+20 v/v %(30 v/v %solutol)+75 v/v %鹽水溶解製備溶液劑，將化合物的溶液劑以1mg/kg的劑量靜脈推注給予SD大鼠，采血時間點為：5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和24h。

固定動物，每個時間點前10min用水浴鍋加熱尾部，通過尾靜脈採集100μL左右的血液，血液採集後放置到含有EDTA-K₂的抗凝管中。血液樣品在4℃條件下8000rpm離心6min得到血漿樣品，血漿在血液採集後的30min內製備。血漿測試前存放在-80℃冰箱內。

樣品分析方法：

從-80℃冰箱中取出待測樣品，室溫自然融化後渦旋5min，精密吸取20μL血漿樣品至1.5mL離心管中；加入200μL濃度為100ng/mL的內標工作溶液(甲苯磺丁脲的甲醇溶液)，混勻；渦旋5min後，12000rpm離心5min；精密吸取50μL上清液至預先加有150μL水/孔的96孔板中；渦旋混勻5min，進行LC-MS/MS測定分析。

資料處理方法：

受試物濃度使用AB公司的Analyst 1.6.3輸出結果。採用Microsoft Excel計算均值、標準差、變異係數等參數(Analyst 1.6.3直接輸出的不用計 算)，PK參數採用Pharsight Phoenix 6.1軟體NCA計算(T_max為中位數)。

結果：

由表4可知，本發明化合物和對照藥GSK199相比具有較高的暴露量和低清除率。

實驗例四：本發明化合物的小鼠/大鼠肝微粒體穩定性評價

目的：評價本發明化合物的小鼠/大鼠肝微粒體穩定性。

溫孵體系的構成：

化合物3、化合物9和化合物18的配製：

精確稱取適量化合物，用DMSO溶解配成5.0mM儲備液。將5.0mM的儲備液，用DMSO稀釋成1.0mM，最後用水稀釋成10μM的化合物工作溶液，待用(反應體系中DMSO含量為0.1 v/v%)。

化合物20、化合物21、化合物22和化合物23的配製：

精確稱取適量化合物，用甲醇溶解配成5.0mM儲備液。將5.0mM的儲備液，用甲醇稀釋成1.0mM，最後用10%甲醇-水(v/v)溶液稀釋成10μM的化合物工作溶液，待用(反應體系中甲醇含量為1.1v/v%)。

試驗步驟：

(1).從-80℃冰箱中取出肝微粒體(20mg蛋白/mL)，置於37℃水浴恒溫振盪器上預溫孵3min，融化待用。

(2).按照上面“溫孵體系的構成”比例，製備溫孵體系混合溶液(不含化合物和β-NADPH)，置於37℃水浴恒溫振盪器上預孵育2min。

3).對照組(不含β-NADPH)：分別取30μL水和30μL化合物工作溶液(10μM)加入到240μL步驟(2)所述溫孵體系混合溶液中，渦旋30s，混勻，反應總體積300μL，平行樣2份。放入到37℃水浴恒溫振盪器中進行孵育，並開始計時，取樣時間點為0min和60min。

4).樣品組：分別取70μL β-NADPH溶液(10mM)和70μL化合物工作溶液(10μM)加入560μL步驟(2)所述溫孵體系混合溶液中，反應總體積700μL，渦旋30s，混勻，平行樣2份。放入到37℃水浴恒溫振盪器中進行孵育，並開始計時，取樣時間點為計時後0min、5min、10min、20min、30min和60min。

(5).渦旋3min後，12000rpm離心5min。

(6).取上清液50μL加入150μL水，渦旋混勻，LC/MS/MS進樣分析。

資料分析：

用下列一級動力學公式計算半衰期(t_1/2)和清除率(Cl)：Ct=C₀ * e^-kt

t_1/2=ln2/k=0.693/k

Cl_int=V_d * k

Vd=1/肝微粒體中蛋白含量

註：k為化合物剩餘量的對數與時間作圖的斜率，V_d為表觀分佈容積，C₀表示0h藥物濃度，Ct為t時刻藥物濃度，t為時間，e為自然數，Cl_int為固有清除率。

結果：

“-”表示未測。

由表5可知，本發明化合物在小鼠和大鼠肝微粒體中穩定性較好，清除率較低。

Claims (15)

1. 一種通式(I)表示的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，

   

   其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、3-6元環烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、-L₁-Cy₁，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₁不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₁為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₁可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₂-Cy₂，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺 基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基磺醯基、C_1-6烷基硫基、C_1-6烷基磺醯胺基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基，L₂不存在或者為C_1-6亞烷基、C_1-6亞烷氧基、C_2-6亞烯基、C_1-6亞烷胺基，Cy₂為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₂可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₆為氫、C_1-6烷基或C_3-6環烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基胺基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧羰基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基、C_2-6亞烯基，Cy₃為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、6-11元駢雜環基、7-12元螺雜環基、6-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基胺基、(C_1-6烷基)₂胺基、-L₄-Cy₄，L₄不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₄為3-12元環烷基、3-12元環烯基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基；環B為含有一個選自O或S的雜原子的5元雜芳基；m為0-4的整數。
2. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體， 其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷基或鹵代C_1-6烷氧基；R₃為氫、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基；R₄為氫、氰基、3-6元環烷基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-12元雜環基、芳基、5-10元雜芳基，Cy₃可任選被氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基、7-10元駢雜環基、7-11元螺雜環基、7-10元橋雜環基，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；環B為含有一個選自O或S的雜原子的5元雜芳基；m為0-4的整數。
3. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元雜環基，所述取代基選自胺基；環B為含有一個選自O或S的雜原子的5元雜芳基；m為0-4的整數。
4. 如請求項2或3所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中環B為

   

   、或

   

   。
5. 如請求項3所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌

   

   基、嗎啉基，所述取代基為胺基。
6. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

   

   、

   

   、

   

   

   、

   

   或

   

   ，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。
7. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N；R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

   

   、

   

   

   、

   

   、

   

   、

   

   或

   

   ，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。
8. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N； R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的

   

   、

   

   、

   

   或

   

   ，所述取代基選自氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。
9. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N；R₈為氫、鹵素、氰基、胺基、羥基、-L₃-Cy₃，或未被取代或被鹵素、氰基、胺基、羥基取代的C_1-6烷基，L₃不存在或者為C_1-6亞烷基，Cy₃為3-6元環烷基、3-8元雜環基，Cy₃可任選被鹵素、氰基、胺基、羥基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基取代；R₉為氫或C_1-6烷基。
10. 如請求項3所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X為CR₆，Y為N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基； R₈為氫，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基；R₉為氫或C_1-6烷基；或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的5-6元飽和含氮雜環基，所述取代基選自胺基；環B為

    

    ；m為0或1。
11. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，其中，X和Y分別獨立地為CR₆或者N；R₁為氫或C_1-6烷基；R₂為氫、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₃為氫、C_1-6烷基；R₄為氫，或未被取代或被鹵素、3-6元環烷基取代的C_1-6烷基；R₅為氫、鹵素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；R₆為氫或C_1-6烷基；R₇為氫或C_1-6烷基；R₈為氫、-L₃-Cy₃，或未被取代或被胺基取代的C_1-6烷基，L₃不存在，Cy₃為任選被胺基取代的3-6元環烷基；R₉為氫或C_1-6烷基； 或者，R₈和R₉與所連接的N形成未被取代或被取代基取代的4-7元雜環基、7-12元螺雜環基，所述取代基為胺基；環B為含有一個選自O或S的雜原子的5元雜芳基；m為0或1。
12. 一種如下所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體，

    

    
13. 一種含有如請求項1-12中任一項所述的一種或多種化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體的藥物組合物，其可以任選含有一種或多種藥用載體並任選被製成藥學上可接受的任一劑型。
14. 一種如請求項1-12中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體和互變異構體或請求項13所述的藥物組合物在製備治療或者預防由肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病的藥物中的用途。
15. 如請求項14所述的用途，肽醯精胺酸脫亞胺酶PAD4介導的疾病選自類風濕性關節炎、血管炎、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、囊性纖維化、癌症、皮膚型紅斑狼瘡、哮喘和乾癬。