SK286135B6

SK286135B6 - Syntetický opiátový peptidový amid a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom

Info

Publication number: SK286135B6
Application number: SK960-2000A
Authority: SK
Inventors: Jean-Louis Junien; Pierre J. M. Riviere; Claudio D. Schteingart; Javier Sueiraz Diaz; Jerzy A. Trojnar; W. Vanderah Todd
Original assignee: Cara Therapeutics, Inc.
Priority date: 1997-12-23
Filing date: 1998-12-22
Publication date: 2008-04-07
Also published as: CN1154655C; AU747806B2; DE69831176D1; CZ297281B6; HUP0100626A2; AR014167A1; BRPI9814499A; BRPI9814499B1; NO20003245L; HRP20000415A2; AU1940299A; DE69831176T2; CZ20002382A3; NO327080B1; EP1042359B1; CA2315878C; CN1283201A; WO1999032510A1; HU227640B1; TW580502B

Abstract

Peptidy, ktoré vykazujú vysokú selektivitu proti kapa opiátovému receptoru (KOR) a dlhotrvajúci periférny účinok bez toho, aby významne vstupovali domozgu, a ktoré sú tvorené sekvenciami štyroch D-izomérnych aminokyselinových zvyškov, ktoré majú C-koniec vo forme mono- alebo disubstituovaného amidu. Reprezentatívne zlúčeniny, ktoré majú afinitu proti KOR najmenej 1000-krát vyššiu, ako je ich afinita proti mu opiátového receptoru, a ktorých ED50hodnota nie je vyššia ako približne 0,5 mg/kg, zahŕňajú H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHEt, H-D-Phe-D-Phe-D- Nle-D-Arg-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHPr, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg- tiomorfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NEt2, H-D-Phe-D-Phe-D- Nle-D-Arg-NHMe, H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn-morfolinyl, H-D-4Fpa-D- Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH- cyklopropyl, H-D-Ala(2Thi)-D-3,4Cpa-D-Leu-D-Arg-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Gmf-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn- NH(Aeb),H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D- Nle-D-Arg-piperazinyl a H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH(Hoh).

Description

Oblasť techniky

Vynález sa vo všeobecnosti týka syntetických opiátových peptidov, konkrétne opiátových peptidov, ktoré sú vysokoselektívnymi kapa receptorovými agonistmi, konkrétnejšie agonistmi, ktoré a) nepenetrujú do mozgu a b) vykazujú dlhotrvajúci analgetický účinok in vivo.

Doterajší stav techniky

Kapa opiátové receptory (KORs) sa nachádzajú v mozgu, mieche a v centrálnych a periférnych zakončeniach a v bunkových telieskach primárnych senzorických aferentných dráh (somatických alebo orgánových) alebo na imunitných bunkách. Molekuly, ktoré aktivujú KORs, sa bežne označujú ako kapa agonisty.

Ukázalo sa, že aktivácia KORs, ktoré sa nachádzajú v mozgu vyvoláva analgetický účinok. Toto zistenie viedlo k pokusom vyvinúť nepeptidové kapa agonisty penetrujúce do mozgu, na použitie ako pôvodné analgetiká, ktoré by nemali nežiaduce vedľajšie účinky (zápcha, respiračná depresia, závislosť a toxikománia) morfínových analógov, ktoré fungujú na mu opiátových receptoroch (MORs). Tak u zvierat, ako aj u ľudí bol potvrdený analgetický účinok, ako aj chýbanie vedľajších účinkov podobných vedľajším účinkom muopiátov pre túto triedu zlúčenín. Ale vývoj systémových kapa agonistov bol prerušený, pretože sa ukázalo, že tiež indukujú špecifické vedľajšie účinky, ako diuréza, účinky podobné sedatívam a stav úzkosti, ktoré sú sprostredkované kapa receptormi umiestnenými v mozgu.

Okrem supraspinálnych KORs, majú analgetický účinok aj KORs lokalizované buď v periférnych nervoch, alebo v mieche. Ale ani periférne, ani miechové KORs nie sú spojené so žiadnymi vedľajšími účinkami systémových kapa agonistov. Preto, za predpokladu, že je možné vytvoriť kapa receptorové opiátové agonisty, ktoré nevstupujú do mozgu (po ich periférnom alebo miechovom podaní), malo by byť možné získať bezpečné a originálne analgetická.

Kapa agonisty vytvárajú periférnu analgéziu v modeloch hyperplázie tenkého, ako aj hrubého čreva, ktorá je indukovaná miernym a lokálnym zápalom, a v modeli iritabilného vnútomostného syndrómu (IBS), ktorý zahŕňa zveličenú bolesť útrob spôsobenú hyperscnzitivitou vnútorností, ktorá je možno spojená s lokálnym zápalom, pričom tieto sú tiež cieľmi pre periférne kapa agonisty. Okrem gastrointestinálneho traktu, sú aj iné vnútornosti, ktoré vykazujú patologický stav zahŕňajúci aktiváciu a/alebo senzitizáciu (tzn. lokálny zápal) primárnych senzorických aferentných dráh, považované za vhodné ciele pre takýto kapa receptorový opiát. Kapa agonisty blokujú aj neurogénny zápal v somatických tkanivách inhibíciou vylučovania látky P z primárnych senzorických aferentných dráh, a vie sa o nich tiež, že vplývajú na imunitný systém a majú primárne inhibičnú úlohu v imunitných bunkách.

Žiaduce sú najmä peptidy, ktoré nevstupujú do mozgu, ktoré vykazujú vysokú afinitu proti KOR v porovnaní s afinitou proti MOR, ktoré majú vysoký potenciál a účinnosť, a ktoré vykazujú dlhotrvajúci účinok in vivo. US patent č. 5 610 271 opisuje tetrapeptidy, ktoré obsahujú štyri D-izomérne aminokyselinové zvyšky, ktoré sa viažu na KORs, ale takéto peptidy nevykazujú všetky uvedené vlastnosti.

Bola nájdená trieda peptidov, ktorá vykazuje vysokú selcktivitu proti KOR a dlhotrvajúci účinok in vivo, a ktorá nevykazuje žiadnu signifikantnú penetráciu do mozgu.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ, ktorý má afinitu proti kapa opiátovému receptoru najmenej 1000-krát vyššiu, ako je jeho afinita proti opiátovému receptom, ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, a ktorý má vzorec:

Η-Xaa¹ -Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-substituovaný amid, kde Xaa¹ je (A)D-Phe, (C“Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, C1 alebo CH3: Xaa² je (A')D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Tyr alebo D-Trp, kde A' je A alebo 3,4C12; Xaa³ je D-Nle, (B)D-Ľeu, D-Hle, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C“Me; Xaa⁴ je D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Ily, D-Arg(Et₂), D-Har(Et₂), D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Om alebo D-Ior. Výhodné amidy zahŕňajú etylamid, morfolid, tiomorfolid, 4-pikolylamid, piperazid, propylamid, cyklopropylamid, dietylamid a substituovaný benzylamid.

Tieto peptidy obsahujú sekvenciu štyroch D-izomérnych aminokyselín, ktoré majú C-koniec, ktorý je buď mono, alebo disubstitovaný amid.

Iné konkrétne uskutočnenie vynálezu poskytuje syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ, ktorý má afinitu proti kapa opiátovému receptom, ktorá je najmenej 1 000-krát vyššia

SK 286135 Β6 ako jeho afinita proti mu opiátovému receptoru, a ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, pričom peptid má nasledujúci vzorec:

Η-Xaa¹ -Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je (A)D-Phe, (C“Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, C1 alebo CH3; Xaa² je (A')D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Tyr alebo D-Trp, kde A' je A alebo 3,4C12; Xaa³ je D-Nle, (B)D-Leu, D-Hle, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C^aMe; Xaa⁴ je D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Ily, D-Arg(Et₂), D-Har(Et₂), D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Om alebo D-Ior; a Q je NR'R², morfolinyl, tiomorfolinyl, (C)piperidinyl, piperazinyl, 4-mono- alebo 4,4-di-substituovaný piperazinyl, alebo ε-lyzyl, kde R¹ je nižší alkyl, substituovaný nižší alkyl, benzyl, substituovaný benzyl, aminocyklohexyl, 2-tiazolyl, 2-pikolyl, 3-pikolyl, 4-pikolyl, (o-(acylamino)-polymetylén alebo poly(oxyetylén)ová skupina; a R² je H alebo nižší alkyl; a C je H, 4-hydroxyskupina alebo 4-oxoskupina.

V ďalšom uskutočnení vynález zahŕňa použitie týchto zlúčenín na liečbu ľudských pacientov, ktorý trpia bolesťami vnútorností a podobne, nestabilitou močového mechúra alebo podobne, alebo IBD alebo autoimunitnými ochoreniami, ako aj na podobnú liečbu iných ako humánnych cicavcov.

Tu použité názvoslovie pre peptidy je rovnaké, ako je uvedené v Schroder & Lubke, The Peptides, Academic Press, 1965, kde, v súlade s bežným zobrazovaním, sú N-konce naľavo a C-konce napravo. Tam, kde má amino-kyselinový zvyšok izoméme formy, je zobrazená L-izoméma forma aminokyseliny, ak nie je uvedené inak.

Ako je uvedené, vynález poskytuje peptidy, ktoré sú selektívne proti KOR a nie len, že vykazujú silnú afinitu proti KOR, ale vykazujú aj dlhotrvajúcu in vivo biologickú aktivitu. Tieto kapa selektívne opiátové peptidy majú najmenej 1 OOO-krát vyššiu väzobnú afinitu proti KOR ako proti MOR, pričom veľa zlúčenín má najmenej 10 OOO-krát vyššiu afinitu a niektoré zlúčeniny vykazujú afinitu 20 OOO-krát alebo viac-krát vyššiu. Ale na základe mnohých indikácií je dôležité, aby zároveň s takouto vysokou selektivitiou vykazovali kapa agonisty nedostatok signifikantnej penetrácie do mozgu a predĺžené trvanie in vivo analgetického účinku. Preto, okrem uvedenej selektivity, výhodné zlúčeniny neprenikajú významne do mozgu, pričom si zachovávajú podstatný účinok najmenej približne jednu hodinu, pričom výhodnejšie zlúčeniny vykazujú takýto významný účinok tri hodiny alebo dlhšie.

Tu vysvetlené skratky sú používané v celom tomto dokumente. D-Nle znamená D-norleucín, a D-Hle znamená D-homoleucín. D-Har znamená D- homoarginín, a D-nArg znamená D-norarginín, ktorý je o jeden uhlík kratší ako D-Arg. D-Nal znamená D-izomér alanínu, ktorý je substituovaný naftylom na β-uhlíku. Výhodne je použitý D-2Nal, tzn., že naftalén je pripojený v polohe 2 kruhovej štruktúry; ale môže byť použitý aj D-lNal. D-Cpa a D-Fpa sú použité na označenie chlór-D-Phe, respektíve fluór-D-Phe, pričom výhodné sú D-4Cpa, D-2Fpa, D-3Fpa a D-4Fpa. D-Npa znamená nitro-D-Phe, a D-Mpa je používaný na označenie metyl-D-Phe. D-3,4Cpa znamená 3,4-dichlór-D-Phe. D-Acp znamená D-Ala(cyklopentyl). D-Om znamená Domitín, a D-Dbu znamená kyselinu alfa,gama-diaminobutyrovú. CML znamená C“metyl Leu, a CMP znamená C“Me Phe. D-4Amf znamená D-4(NH₂CH₂)Phe, a D-Gmťznamená D-Amť(amidino), ktorý predstavuje D-Phe, kde je poloha 4 substituovaná s CH₂NHC(NH)NH₂. D-Tic znamená kyselinu D-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylovú. V Ala(Thi) Thi znamená tienylovú skupinu, ktorá je výhodne v polohe 2 spojená s alanínom, hoci 3-tienyl je ekvivalent. íly a Ior znamenajú izopropyl Lys, respektíve izopropyl Om, kde bočné reťazce aminoskupiny sú alkylované s izopropylom.

Nižší alkyl znamená C_rC₆alkyl a zahŕňa cykloalkyl a výhodný je Ci-C₄alkyl, ktorý zahŕňa cyklopropyl a cyklobutyl. Tu použité skratky Me, Et, Pr, Ipr, Bu, Pn a Bzl znamenajú postupne metyl, etyl, propyl, izopropyl, butyl, pentyl a benzyl. Cyp znamená cyklopropyl a Cyb znamená cyklobutyl. Hoci sa väzba výhodne nachádza na jednom konci alkylového reťazca, môže byť hocikde v reťazci, napr. 3-pentyl, ktorý môže byť označený aj ako etylpropyl. Ahx znamená 6-amino-hexyl, tzn. (CH₂)₆NH₂. 4Acx znamená 4-aminocyklohexyl a hEt znamená hydroxyetyl, tzn. -CH₂CH₂OH. Substituovaný benzyl zahŕňa 4Nbz a 4Abz, ktoré znamenajú 4-nitrobenzyl, respektíve 4-aminobenzyl, a Aeb znamená 4-(2-amino-2-karboxyetyl)-benzyl, tzn.

-CH

CH.-CH

COOH

2-, 3- a 4-pikolyl (2Pic, 3Pic a 4Pic) znamenajú metylpyridínové skupiny, ktoré sú pripojené cez metylén v polohe 2, 3, respektíve 4. Mor znamená morfolinyl, tzn.

a Tmo znamená tiomorfolinyl

Pip znamená piperidinyl (piperidyl) a 4-HyP a OxP znamenajú 4-hydroxypiperidin-l-yl, respektíve 4-oxo-piperidin-l-yl. Ppz znamená piperazinyl. Ecp znamená 4- etylkarbamoyl-piperazin-l-yl; Pcp znamená 4-fenylkarbamoylpiperazin-l-yl. Použité môžu byť aj kvartéme amónne substituenty, ako napríklad 4,4-dimetylpiperazin-l-yl (Dmp) alebo iné di-nižší alkyl substitúcie.

2Tzl znamená 2-tiazolyl, napríklad

S / \

-C CH

U II

N - CH

Ely znamená ε-lyzyl, v ktorom je bočný reťazec aminoskupiny L-lyzínu spojený amidovou väzbou s C-koncom.

Ako bolo uvedené, R¹ môže byť ©(acylamino)polymetylénová skupina alebo poly(oxyetylén)ová skupina, ako Aao, Aoo, Hoh, Ghx alebo Gao. Aao znamená 8-(acetylamino)-3,6-dioxaokt-l-yl, tzn. CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-Ac. Aoo znamená 8-amino-3,6-dioxaokt-l-yl, tzn. CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH₂. Hoh znamená 6-(L-hydroorotylamino)-hex-l-yl, tzn. (CH₂)₆-NH-(L-hydroorotyl); kyselina L-hydroorotová je C4N₂H5(O)₂-COOH. Ghx znamená 6-(D-glukonylamino)-hexyl, tzn. (CH₂)₆-NH-C.O-(CHOH)₄-CH₂OH. Gao znamená 6-(D-glukonylamino)-3,6-dioxaokt-l-yl, tzn. CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-CO(CHOH)₄-CH₂OH.

D-Phe alebo substituovaný D-Phe sú výhodné v polohe 1. Fenylový kruh môže byť substituovaný v polohách 1, 3 a/alebo 4, a výhodné sú bežné substitúcie s chlórom alebo fluórom v polohe 2 alebo 4. a-uhlíkový atóm môže byť aj metylovaný. Použité môžu byť aj iné ekvivalentné zvyšky, ktoré sa podobajú s D-Phe, a ktoré zahŕňajú D-Ala(tienyl), D-Ala(cyklopentyl), D-Tyr a D-Tic. Zvyškami s polohou 2 sú výhodne tiež D-Phe alebo substituovaný D-Phe, pričom takéto substitúcie výhodne zahŕňajú substituent v polohe 4 fenylového kruhu alebo v polohách 3 a 4. Alternatívne môže byť použitý D-alanín substituovaný naftylom, ako aj D-Trp a D-Tyr. V polohe 3 sú výhodne umiestnené zvyšky D-Nle, D-Leu, D-CML, D-Hle, D-Met alebo D-Val; ale môže byť použitý aj D-Ala(cyklopentyl) alebo D-Phe. Pre polohu 4 je vo všeobecnosti výhodný D-Arg (ktorý môže byť substituovaný dietylom) a D-Om (ktorý môže byť alkylovaný na svojej delta aminoskupine, akou je izopropyl); ale môže byť použitý aj D-nArg a iné ekvivalentné zvyšky, ako D-Lys (ktorý môže byť aj alkylovaný na svojej epsilon-aminoskupine) a D-Har (ktorý môže byť substituovaný dietylom). Navyše môžu byť použité aj D-Gmf, D-Dbu, D-4Amf a D-His.

Hoci by sa dalo očakávať, že trvanie biologického účinku sa bude zvyšovať použitím sekvencie 4 D-izomérnych aminokyselín, prekvapujúco sa zistilo, že trvanie účinku je vo všeobecnosti dosť krátke pri nesubstituovanom amide, a že dlhé trvanie účinku sa získalo len prostredníctvom zavedenia substituovaného amidu na C-koniec. Jednoduché substitúcie môžu byť vo forme etylu, metylu, propylu, cyklopropylu a pikolylu, ako aj vo forme iných ekvivalentných zvyškov, ako sú hydroxyetyl, tiazolyl, aminocyklohexyl, benzyl a substituovaný benzyl. Vo všeobecnosti sú výhodné substituenty nižší alkyl a pikolyl pre jednoducho substituované amidy. Alternatívou namiesto jednoducho substituovaného amidu je substitúcia dialkylom, napr. die tylamino; ale výhodne je na takto disubstituovanom C-konci umiestnený morfolinyl, tiomorfolinyl alebo piperidinyl, pričom piperidinyl je nesubstituovaný alebo substituovaný so 4-hydroxy alebo 4-oxo. Použitý môže byť aj piperazinyl alebo 4-mono- alebo 4,4-disubstitutovaný piperazinyl, ako ε-lyzyl.

Zistilo sa, že viazanie sa je vo všeobecnosti charakteristickou vlastnosťou aminokyselinovej sekvencie tetrapeptidu, a že selektívne kapa receptorové opiátové peptidy by mali vykazovať väzobnú afinitu ku kapa receptoru, ktorá je taká, že K_; sa rovná približne 2 nM alebo je nižšia. Dlhotrvajúci účinok, ktorý je považovaný v prvom rade za závislý od štruktúry amidu pripojeného na C-koniec, sa môže účinne testovať analgetickým testom, opísaným neskôr, a najvýhodnejšie peptidy vykazujú podstatný biologický účinok dve alebo tri hodiny a nemajú žiadny významný vplyv na mozog.

Výhodná podtrieda triedy opiátových peptidov uvedených má vzorec:

H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe (nesubstituovaný alebo substituovaný s CaMe, 2F, 4F alebo 4C1) alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl); Xaa² znamená (A')D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A' je H, 4F, 4C1, 4NO2 alebo 3,4C1₂; Xaa³ je D-Nle, D-Leu, D-CML, D-Met alebo D-Acp; Xaa⁴ je D-Arg, D-Arg(Et₂), D-Lys, D-Ily, D-Har, D-Har(Et₂), D-nArg, D-Om, D-Ior, D-Dbu, D-Amf, a D-Gmf; a Q je NR'R², Mor, Tmo, Pip, 4-HyP, OxP alebo Ppz, kde R¹ znamená Me, Et, Pr, Bu, hEt, Cyp, Bzl alebo 4-pikolyl, a R² znamená H alebo Et.

Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec:

H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa, D-4Cpa, D-Acp alebo D-Ala(Thi); Xaa² je D-Phe, D-4Fpa, D-4Cpa, D-3,4Cpa, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp; Xaa³ je D-Nle, D-Met, D-CML alebo D-Leu; Xaa⁴ je D-Arg, D-Lys, D-Har, D-nArg alebo D-Om; a Q znamená NR'R², Mor, Tmo, Pip, 4-HyP alebo Ppz, kde R¹ znamená Et, Pr, Bu, Cyp, hEt, Bzl alebo 4Pic, a R² je H alebo Et.

Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec:

H-Xaa‘-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa, D-Acp alebo D-Ala(2Thi); Xaa² je (A)D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A znamená 4F alebo 4C1; Xaa³ znamená D-Nle, D-Met alebo D-Leu; Xaa⁴ znamená D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Om alebo D-Gmf; a Q je NHR¹, Mor, Tmo, Pip alebo Ppz, kde R¹ znamená Et, Pr alebo 4Pic.

Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec:

H-Xaa’-Xaa²-Xaa³- Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa alebo D-Ala(2Thi); Xaa² znamená (A)D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A znamená 3,4C12 alebo 4C1; Xaa³ znamená D-Nle alebo D-Leu; Xaa⁴ je D-Arg, D-Om alebo D-Gmf; a Q je NHR¹, Mor, Tmo, Pcp, Ppz alebo N(Et)2, kde R¹ znamená Et, Pr, Cyp, 4Pic, Aeb alebo Hoh.

Zistilo sa, že uvedená trieda a podtriedy opiátových peptidov predĺžili trvanie analgetického účinku in vivo, ako výsledok zavedenia substituovaného amidu na C-koniec v polohe 4 aminokyselinového zvyšku. Táto veľmi neočakávaná vlastnosť dáva takýmto peptidom výnimočnú hodnotu, keďže niektoré z nich ostávajú in vivo aktívne počas troch hodín a dlhšie. Určité tetrapeptidy, ktoré majú uvedenú sekvenciu, a ktoré ale majú jednoduchý C-koncový amid, tiež vykazujú vysokú selektivitu proti KOR, v porovnaní so selektivitou proti MOR; ale majú vo všeobecnosti len krátkotrvajúci účinok. Jednoznačne sa očakáva, že takéto opiátové peptidy budú vykazovať predĺžený účinok, keď sa budú syntetizovať tak, aby mali substituovaný amid, ako napríklad morfolid, na svojom C-konci. Systematicky sa zistilo, že keď sa tetrapeptidový primárny amid silno a selektívne viaže na KOR, budú, keď sa nasyntetizujú, zodpovedajúce substituované amidy, ako napríklad etylamid a morfolid, vykazovať analgetický účinok dlhší čas meraný v hodinách, tzn. najmenej 1 hodinu, bez toho, aby významne prenikali do mozgu.

Hoci sú výhodné aminokyselinové sekvencie opísané v uvedených vzorcoch, je potrebné zobrať do úvahy, že pre priemerného odborníka v oblasti peptidovej chémie je zrejmé, že jeden alebo viaceré aminokyselinové zvyšky by mohli byť nahradené prostredníctvom konzervatívnej aminokyselinovej substitúcie, napr. náhradou jednej zásaditej aminokyseliny inou, alebo náhradou jednej hydrofóbnej aminokyseliny inou, napr. náhradou D-Ile za D-Leu. Podobne môžu byť rôzne zvyšky modifikované spôsobom všeobecne známym v oblasti; napríklad D- Phe (ako je uvedené) môže byť modifikovaný zavedením halogénu alebo nitroskupiny, zvyčajne v polohe 3, 5 alebo 4 alebo môžu byť metylované oba α-uhlíky. Takéto modifikácie sú považované za modifikácie, ktoré vytvárajú rovnaké kapa receptorové opiátové peptidy.

Peptidy môžu byť syntetizované akýmkoľvek vhodným spôsobom, ako napríklad výlučnými technikami na pevnej fáze alebo klasickou adíciou v roztoku alebo alternatívne čiastočnými technikami na pevnej fáze alebo technikami fragmentovej kondenzácie. Techniky výlučnej peptidovej syntézy na pevnej fáze (SPPS) sú uvedené napríklad v učebnici Stewart & Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2, vyd., Pierce Chemical Company, Rockford, lllinois, 1984, a príklady sú uvedené v opise US patentu č. 4 105 603. Príklad spôsobu syntézy fragmentovou kondenzáciou je uvedený v US patente č. 3 972 859, a príklady iných vhodných syntéz sú uvedené v US patentoch č. 3 842 067 a 3 862 925. Klasická syntéza adíciou v roztoku je podrobne opísaná v publikácii Bodanzsky a ďalší, Peptide Synthesis, 2. vyd., John Wiley & Sons, New York, 1976.

Bežnou pri chemickej syntéze peptidov párovacieho typu je ochrana akéhokoľvek nestabilného bočného reťazca aminokyseliny prostredníctvom párovania, a zvyčajne aj ochrana α-anúnoskupiny, takže adícia sa uskutočňuje na karboxylovej skupine jednotlivých aminokyselín alebo dipeptidov alebo tripeptidov, ktoré sa pridávajú. Takéto ochranné skupiny sú v oblasti dobre známe a ako výhodné ot-amino ochranné skupiny pri SPPS alebo na klasickú syntézu v roztoku sú často použité terc-butyloxykarbonyl(Boc), benzyloxykarbonyl(Z) a fluorenyl-metoxy-karbonyl(Fmoc), hoci existuje veľké množstvo iných α-amino ochranných skupín, ktoré môžu byť alternatívne použité.

Ak sa použije SPPS, C-koncový aminokyselinový zvyšok sa pripája na pevný živicový podklad, akým je napríklad O-CH₂-polystyrénový podklad, O-CH₂-benzyl-polyamidový živicový podklad -NH-benzhydrylamínový (BHA) živicový podklad alebo -NH-para-metylbenzhydrylamínový (MBHA) živicový podklad. Použitie BHA alebo MBHA živíc je výhodné často vtedy, keď je želateľný nesubstituovaný amid, pretože výsledkom štiepenia je priamo C-koncový amid. Ak je želateľný N-metylamid, je možné ho vytvoriť z N-metyl BHA živice. Iné jednoducho substituované amidy môžu byť syntetizované postupom uvedeným v W. Komreich a ďalší, Int. J. Peptide Proteín Res., 25:414-420, 1985, a aj v U.S. patente č. 4 701 499. Peptidy, ktoré majú na C-konci di-substituované amidy, ako napríklad N-morfolinyl alebo N-piperidinyl, sa výhodne pripravujú klasickou syntézou v roztoku alebo fragmentovou kondenzáciou v roztoku.

Keď sa tieto tetrapeptidy nasyntetizujú, je možné ich jednoducho purifíkovať použitím metód na purifikáciu krátkych peptidov, ktoré sú v oblasti dobre známe, ako napríklad reverzná fázová kvapalná chromatografia s vysokou rozlišovacou schopnosťou (RP-HPLC), alebo iné vhodné spôsoby. Takáto purifikácia je podrobne opísaná v J. Riviér a ďalší, J. Chromatography, 288:303-328,1984, a C. Miller a J. Rivicr, Peptide Science, Biopolymers, 40:265-317 (1996), a špecifické príklady purifikácie, ktorá nasleduje po syntéze na pevnej fáze sú uvedené v U.S. patent č. 5 098 995.

Na otestovanie toho, či tetrapetidy vykazujú vysokú selektivitu proti KOR, silný analgetický biologický účinok, dlhotrvajúci in vivo biologický účinok, a či nepenetrujú do mozgu, je možné použiť rôzne testy. V oblasti sú dobre známe receptorové testy, a v súčasnosti boli klonované myšie, potkanie, morčacie a ľudské KORs. Okrem morčacieho KOR (gpKOR), sú klonované KORs veľmi podobné, a všetky obsahujú približne 380 aminokyselín. Aminokyselinová sekvencia ľudského KOR (hKOR) je na 93,9 % homologická so sekvenciou potkanieho KOR (rKOR) a na 93,4% homologická so sekvenciou myšacieho KOR (mKOR). Na druhej strane sa hKOR významne líši od hMOR a od ľudského opiátového receptora (hDOR), s ktorými má len 60,2 %, respektíve 59,1 % zhodu v aminokyselinovej sekvencii. KORs, ako aj iné opiátové receptory sú klasickými receptormi spojenými s G-proteínom, ktoré obsahujú sedem transmembránových premostení (Gi). Tieto klonované receptory jednoducho umožňujú vyhľadávanie konkrétnych kandidátových peptidov; môže sa napríklad uskutočňovať vyhľadávanie tak KOR, ako aj MOR, aby sa stanovila selektivita. Ľudský KOR, MOR a DOR sa stabilne exprimovali v myšacej nádorovej bunkovej línii odvodenej od hypokampálneho neuroblastu (HN.9.10) a sú prístupné na použitie na in vitro vyhľadávanie. Existuje aj množstvo dobre prijateľných in vivo testov, ktoré sa vo všeobecnosti stali štandardnými na stanovenie analgetického účinku opiátovej zlúčeniny. Tieto testy sa vo všeobecnosti používajú na myšiach a zahŕňajú test švihania chvostom, labkový stláčaci test, zvíjací test s kyselinou octovou, test prištipávania chvosta a chvostový imerzný test. Vonvoigtlander, P. F. a ďalší, J. Pharm. Exper. Therapeutics, 224: 7-12 (1983) opisuje množstvo takýchto testov pre opiátové zlúčeniny.

Väzobná afinita predstavuje silu interakcie medi ligandom a receptorom. Aby sa stanovila väzobná afinita opiátových receptorov, zhodnotili sa peptidy podľa vynálezu použitím kompetičných väzobných štúdií. Tieto štúdie sa uskutočňovali použitím klonovaného ľudského kapa receptora (hKOR) a mu opiátového receptora (hMOR), ktoré sa exprimovali v stabilných transfekovaných bunkových líniách (HN.9.10, odvodených od myšieho hipokampálneho neuroblastómu). V týchto testoch boli použité testovacie zlúčeniny (neznačený alebo studený ligand) vo vzrastajúcich koncentráciách na vytesnenie špecifického viazania sa rádioaktívne značeného ligandu, ktorý má vysokú afinitu a selektivitu proti študovanému receptoru. Ako ligandy boli použité ³H-U-69,593 v hKOR testoch a ³H-DAMG0 v hMOR testoch. Oba ligandy sú komerčne dostupné (NEN-Dupont). DAMGO je akronym pre [D-Ala²,MePhe⁴,Gly-ol⁵]-enkefalín. Afinita rádioaktívnych ligandov je definovaná koncentráciou rádioaktívneho ligandu, ktorej výsledkom je polovica maximálneho špecifického naviazania (K_a) v saturačných testoch. K_a pre ³H-U-69,593 pri hKOR je približne 0,3 nM a pre ³H-DAMGO pri hMOR je približne 3,0 nM. Afinita testovanej zlúčeniny (neznačený alebo studený ligand) je stanovená v kompetičných väzobných testoch vypočítaním inhibičnej konštanty (K_;) podľa nasledujúceho vzorca:

IC₅₀ + (F/Kp) kde

IC₅₀ = koncentrácia studeného ligandu, ktorý inhibuje 50 % špecifického viazania sa rádioaktívneho ligandu, F =koncentrácia voľného rádioaktívneho ligandu,

K_a = afinita rádioaktívneho ligandu stanovená v saturačných testoch.

Keď sa tieto testy uskutočňujú v špecifických podmienkach s relatívne nízkymi koncentráciami receptora, je vypočítané K, testovanej zlúčeniny dobrou aproximáciou jej disociačnej konštanty K_a, ktorá predstavuje koncentráciu ligandu nevyhnutnú na zaujatie polovice (50 %) väzobných miest. Nízka K, hodnota v nanomolámom a subnanomolámom rozsahu je považovaná za takú, ktorá identifikuje ligand s vysokou afinitou v oblasti opiátov. Výhodné analógy majú K, pre KOR približne 2 nanomoly (nM) alebo nižšie, pričom výhodné analógy majú K; približne 1 nM alebo nižšie. Pretože sú KOR receptory distribuované po celom tele, budú mať kapa receptorové opiátové peptidy podstatný účinok pri modulovaní mnohých periférnych dejov, a keď sú vysoko KOR-selektívne, budú mať minimálne vedľajšie účinky a mali by byť dobrými fyziologickými liečivami.

Tieto väzobné testy, ktoré používajú KORs a MORs nie sú komplikované a môžu sa jednoducho uskutočňovať s počiatočné identifikovanými alebo syntetizovanými peptidmi, aby sa stanovilo, či sú takéto peptidy KOR selektívne a či majú vysokú afinitu. Takéto väzobné testy sa môžu uskutočňovať rôznymi spôsobmi, ktoré sú pre priemerného odborníka v oblasti dobre známe a jeden podrobný príklad testu tohto všeobecného typuje uvedený v Perrin, M., a ďalší, Endocrmology, 118:1171-1179, 1986.

Vynález bude ďalej opísaný prostredníctvom nasledujúcich príkladov. Tieto príklady, však žiadnym spôsobom neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý je opísaný nárokmi na konci prihlášky.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Peptid vzorca: H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHEt sa vhodne syntetizuje technikami peptidovej syntézy dobre známymi v danej oblasti. Napríklad tripeptid: (α-amino ochranná skupina)D-Phe-D-Phe-D-Nle(karboxylová ochranná skupina), sa najprv syntetizuje použitím klasickej chemickej techniky v roztoku. Tripeptid môže byť pripravený napríklad rozpustením H-D-Nle-OMe v DMF a pridaním 7V-etyl-morfolínu (NEM) alebo podobnej látky na nastavenie pH. Tento roztok sa potom spojí s roztokom Boc-chráneného D-Phe-OH v DMF, ktorý obsahuje NEM. K tejto reakčnej zmesi sa potom pridá aktivačné alebo párovacie činidlo, ako benzotriazol-l-yl-oxy-tris-(dimetylamino)-fosfónium-hexafluórfosfát (BOP) alebo zmes N, N'- diizopropylkarbodiimidu (DIC) a /V-hydroxybenzotnazolu (HOBt). Po ukončení reakcie sa médium dosucha evaporuje a produkt sa potom príslušným spôsobom purifikuje a rekryštalizuje. Boc-ochranná skupina sa potom odstráni kyselinou trifluóroctovou, a dipeptid sa znovu rozpustí v DMF. Roztok Boc-chráneného D-Phe sa rozpustí v DMF a pridá sa NEM. Reakcia sa opakuje použitím BOP, ako je uvedené, čím sa vytvorí tripeptid, ktorý, po evaporovaní roztoku dosucha, sa purifikuje a rekryštalizuje. Výsledným produktom je Boc-D-Phe-D-Phe-D-Nle-OCH₃. Metylester sa potom vhodne konvertuje na voľnú kyselinu, rozpustením zmesi v dioxáne alebo v DMSO a vode a pridaním hydroxidu sodného. Po ukončení reakcie je výsledkom separácie, purifikácie a rekryštalizácie tripeptid Boc-D-Phe-D-Phe-D-Nle-OH.

Tripeptid sa rozpustí v DMF s obsahom NEM a reaguje s D-Arg(Tos)-NHEt, opäť použitím BOP ako párovacieho činidla. Alternatívne sa tripeptid-metylester môže konvertovať na azid, ak je to želateľné, ošetrením s 80% roztokom hydrazínového hydrátu, čím sa vytvorí hydrazid, ktorý sa izoluje a potom sa ošetrí s dusitanom sodným a anorganickou kyselinou v DMF. Azid okamžite reaguje s D-Arg(Tos)-NHEt v DMF roztoku s obsahom trietylamínu. Po ukončení reakcie sa zmes dosucha evaporuje a potom sa vhodne purifikuje a rekryštalizuje. Z N-konca a bočného reťazca D-Arg sa odstráni ochranná skupina a znovu sa uskutoční purifikácia a rekryštalizácia, čím sa vytvorí požadovaný tetrapeptidetylamid (peptid č. 1).

Homogénnosť peptidu sa zhodnotí reverznou fázovou HPLC použitím rozdielnych mobilných fáz: gradient acetonitrilu vo vode obsahujúcej 0,1% kyselinu trifluóroctovú a gradient acetonitrilu v trietylamínfosfátovom tlmivom roztoku s pH 7, a aj fuzovaným kremičitanom, kapilárnou elektroforézou použitím fosfátového tlmivého roztoku s pH 2,5. Týmito metódami je stanovená čistota peptidu na >98 %. Prostredníctvom hmotnostnej spektrometrie použitím elektrosprejovej ionizácie a analýzy zachytávania iónov sa dokázal pseudomolekulový ión [MH]' s hodnotou m/z 609,4, ktorá je v súlade s vypočítanou hmotnosťou pre tento tetrapeptid m/z 609,5. Fragmentačná analýza pseudomolekulového iónu dokázala sériu iónov s m/z pomermi, ktoré sú v súlade so sekvenciou očakávanou pre pripravenú štruktúru.

Väzobné testy s bunkami exprimujúcimi ľudský KOR a MOR sa uskutočňujú nasledovne. Afinity testovaného peptidu proti hKOR a hMOR, ktoré sú stabilne exprimované v myších hipokampálnych neuroblastómových (HN.9.10) bunkách, sa stanoví kompetitívnym vytesnením ^JH-U-69,593 za hKOR alebo ³H-DAMGO za hMOR ako je opísané. Zozbierané sú údaje z najmenej 3 experimentov a hodnoty inhibičnej disociačnej konštanty (Κ;) (95 % hranice dôveryhodnosti) sa vypočítajú použitím vhodného programu, ako napríklad LIGAND programu od Munson a Rodbard, Anál. Biochem, 107:220-239, 1980. Klonovaný KOR sa viaže na peptid č. 1 s vysokou afinitou, ako bolo stanovené kompetitívnym vytesnením naviazaného rádioaktívneho ligandu, a Kj hodnota je stanovená na približne 0,05 ± 0,02 nM. Rozdiely v afinite sú dramatické v porovnaní s podobne stabilne transfekovanými nádorovými bunkami, ktoré exprimujú ľudský MOR, kde Ki je 1890 ± 990 nM. Takže peptid č. 1 sa viaže silnejšie na hKOR ako na hMOR s faktorom približne 38 000.

Testovanie peptidu v myšacom teste zvíjania sa s kyselinou octovou (ako bol opísaný) dokazuje ED50 s hodnotou približne 0,09 mg/kg a tiež to, že peptid vykazuje pokračujúci analgetický účinok vyšší ako 50 % po troch hodinách. Takže peptid č. 1 je považovaný za peptid, ktorý má dlhotrvajúci účinok.

Príklad 2

Opiátové peptidy všeobecného vzorca: H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-Q, uvedené v tabuľke A, sa syntetizujú a testujú, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka A

Č.	Q	Ki KOR (nM)	Ki MOR (nM)	μ/κ pomer	Hmotn. spektroskopia	WT-ED50 mg/kg
Vypočítané	Zmerané
2	NHMe	0,06	3 620	60 000	595,4	595,5	0,14
3	NHPr	0,09	1 640	18 000	623,4	623,5	0,078
4	NHBu	0,19	1 370	7 200	637,4	637,5	0,30
5	NH(Cyp)	0,18	3 520	10 000	611,4	621,5	0,04
6	Mor	0,06	1 510	41 000	651,4	651,4	0,014
7	N(Et₂)	0,11	1 900	17 000	637,4	637,5	0,02
8	NH(4Pic)	0,14	3 640	26 000	672,4	672,4	0,01
9	NHhEt	0,40	1 010	2 500	625,4	625,5	0,03
10	Tmo	0,09	2 260	25 000	667,4	667,3	0,067
11	4-HyP	0,06	3 700	62 000	665,4	665,4	0,073
12	Pip	0,15	1 050	7 000	649,4	649,5	0,07
13	NH(2Tzl)	0,59	1 590	1 700	664,3	664,4	0,44
14	NHBzl	0,44	890	2 000	671,4	671,4	0,14
15	Ppz	0,16	9 100	57 000	650,4	650,5	0,017

Peptidy 2 až 15 sú považované za peptidy, ktoré vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 3

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, ako sú uvedené v tabuľke B, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka B

Č.	Xaä¹	Xaľ	Xa?	Xaä⁵	Q
16	D-4Fpa	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NHEt
17	D-Acp	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NHEt
18	D-Ala(2Thi)	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NHEt
19	D-Tyr	D-Phe	D-Nle	D-Arg	Mor
20	D-Phe	D-Trp	D-Nle	D-Arg	Mor
21	D-Phe	D-4Npa	D-Nle	D-Arg	Mor
22	D-Phe	D-4Cpa	D-Nle	D-Arg	Mor
23	D-Phe	D-lNal	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)
24	D-Phe	D-2Nal	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)

č.	Xaä¹	Xa?	Xaa³	Xaa⁴	Q
25	D-Phe	D-Tyr	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)
26	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Arg	Mor
27	D-Phe	D-Phe	D-Val	D-Arg	Mor
28	D-Phe	D-Phe	D-Acp	D-Arg	Mor
29	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Lys	Mor
30	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har	NHEt
31	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har(Et₂)	NHEt
32	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Om	NHEt
33	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Amf	NH(4Pic)
34	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Dbu	NH(4Pic)
35	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Om	Ppz
36	D-Phe	D-Phe	D-Phe	D-Arg	NH(4Pic)
37	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Ily	NH(4Pic)
38	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Ior	NH(4Pic)
39	D-Phe	D-4Mpa	D-Nle	D-nArg	Mor

Peptidy 16 až 39 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 4

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, ako sú uvedené v tabuľke C, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka C	Hmotn. s	aektrosk	Väzba
Č.	Xaa¹	Xaa²	Xaa³	Xaa⁴	Q	Vyp.	Zmer.	(μ/κ pomer)
40	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Nbz)	716,4	716,5	3 800
41	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Abz)	686,4	686,4	12 000
42	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	Ecp	721,4	721,5	27 000
43	D-CMP	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	686,4	686,5	2 500
44	D-Phe	D-Phe	D-Acp	D-Arg	NH(4Pic)	698,4	698,5	8 300
45	D-Phe	D-Phe	D-Hle	D-Arg	NH(4Pic)	686,4	686,5	11 000
46	D-Phe	D-Phe	D-CML	D-Om	Mor	623,4	623,4	14 000
47	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Lys	NH(4Pic)	644,4	644,3	30 000
48	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Lys	NHPr	595,4	595,3	18 000
49	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Lys	Mor	623,4	623,3	92 000
50	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har	NH(4Pic)	686,4	686,5	9 300
51	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Har	Mor	665,4	665,5	12 000
52	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Dbu	NH(4Pic)	616,4	616,3	92 000
53	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Dbu	Mor	595,4	595,3	85 000

Peptidy 40 až 53 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 5

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-D-Phe-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, ako sú uvedené v tabuľke D, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka D

					Kí	K,	μ/κ	Hmotn. spekt.	WT- ED₅o
č.	Xaa²	Xaa³	Xaa⁴	Q	KOR (nM)	MOR (nM)	pomer	Vyp.	Mer.	mg/kg
54	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(3Pic)	0,39	1 220	3 100	672,4	672,3
55	D-Phe	D-Nle	D-Amf	NHEt	0,14	1 750	12 500	629,4	629,3	0,083
56	D-Phe	D-Leu	D-Orn	NHEt	0,31	4 150	13 000	567,4	567,4	0,057
57	D-Phe	D-Leu	D-Om	Mor	0,19	5 260	28 000	609,4	609,3	0,026

Peptidy 54 až 58 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 6

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-D-Arg-Q, ako sú uvedené v tabuľke E, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka E

Č.	Xaa¹	Xaa²	Xaa³	Q	K; KOR (nM)	Kj MOR (nM)	μ/κ pomer	Hmotn. spekt.	WT-ED₅o mg/kg
Vyp.	Mer.
59	D-Ala(2Thi)	D-4Cpa	D-Leu	Mor	0,25	3 360	13 000	691,3	691,1	0,052
60	D-Ala(2Thi)	D-3,4Cpa	D-Leu	NH(4Pic)	0,4	769	1 900	746,3	746,3	0,083
61	D-Ala(2Thi)	D-3,4Cpa	D-Leu	Mor	0,15	1 560	10 400	725,3	725,4	0,019
62	D-Phe	D-Phe	D-Nle	OxP	0,11	2 970	27 000	663,4	663,5	0,18
63	D-Ala(2Thi)	D-2Nal	D-Leu	Mor	0,2	3 170	16 000	707,4	707,4	0,04
64	D-Phe	D-Phe	D-Nle	Dmp	0,21	7 680	37 000	678,4	678,5	0,032
65	D-4Fpa	D-4Cpa	D-Leu	Mor	0,17	1 900	11 000	703,4	703,4	0,15

Peptidy 59 až 65 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 7

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa’-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, ako sú uvedené v tabuľke F, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka F

Č.	Xaa¹	Xaä³	Xaä³	Xa?	Q
66	D-4Cpa	D-4Cpa	D-Leu	D-Lys	NHPr
67	D-4Fpa	D-2Nal	D-Met	D-Amf	NHBu
68	D-4Cpa	D-Trp	D-Acp	D-Amf	Pip
69	D-Phe	D-Phe	D-Val	D-Om	Ecp
70	D-Ala(2Ti)	D-4Fpa	D-Nle	D-Dbu	NH(4Abz)
71	D-Acp	D-Phe	D-Leu	D-Har	4-HyP
72	D-CMP	D-Trp	D-Phe	D-Arg(Et₂)	NHBzl
73	D-4Cpa	D-3,4Cpa	D-Met	D-Orn	Tmo
74	D-Acp	D-lNal	D-Nle	D-Har(Et₂)	NH(3Pic)
75	D-4Fpa	D-4Cpa	D-Leu	D-Gmf	NHhEt
76	D-CMP	D-Tyr	D-Acp	D-Dbu	NHIpr
77	D-Phe	D-2Nal	D-Acp	D-Ily	NHPn
78	D-Tic	D-4Fpa	D-Phe	D-Lys	NH(4Pic)
79	D-4Npa	D-Trp	D-CML	D-Ior	N(Et)₂
80	D-CMP	D-Phe	D-Met	D-Ior	Mor
81	D-Ala(3Thi)	D-lNal	D-Nle	D-Lys	NH(2Tzl)
82	D-Phe	D-4Npa	D-Nle	D-Arg	NHCyp
83	D-Acp	D-2Nal	D-Hle	D-Har	NHCyb
84	D-Tyr	D-2Nal	D-Phe	D-Lys	Ppz
85	D-Phe	D-lNal	D-Met	D-Ior	OxP
86	D-Phe	D-Trp	D-Met	D-Arg	Dmp
87	D-Phe	D-Trp	D-Nle	D-Om	Mor

Opiátové peptidy v tabuľke F vykazujú vysokú selektivitu proti KOR, v porovnaní so selektivitiou proti

MOR, a vykazujú analgetický biologický účinok in vivo.

Príklad 8

Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, ako sú uvedené v tabuľke G, sa syntetizovali a testovali, ako je opísané v príklade 1.

Tabuľka G

Č.	Xaa¹	Xa?	Xaa^J	Xaa⁴	Q	μ/κ pomer	WT-ED₅o mg/kg
88	D-4Fpa	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	16 000	0,04
89	D-3Fpa	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	24 000	0,11
90	D-2Fpa	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	38 000	0,14
91	D-4Fpa	D-Phe	D-Nle	D-Har	NH(4Pic)
92	D-4Cpa	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	2 900
93	D-4Fpa	D-4Npa	D-Nle	D-Arg	NH(4Pic)	1 200
94	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	Ely	70 000	0,02
95	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-nArg	NH(4Pic)	16 000	0,08
96	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	Pcp	12 000	0,098
97	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(4Acx)	6 400
98	D-Phe	D-Phe	D-Leu	D-Om	NH(Aeb)	24 000	0,014
99	D-Ala(2Thi)	D-3,4Cpa	D-Leu	D-Om	Mor	19 000	0,083
100	D-Ala(2Thi)	D-2Nal	D-Leu	D-Om	Mor	31 000	0,079
101	D-Ala(2Thi)	D-4Cpa	D-Leu	D-Om	Mor	38 000	0,112
102	D-AIa(2Thi)	D-4Cpa	D-Leu	D-Orn	NH(4Pic)	24 000	0,032
103	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Aao)	140 000	0,101
104	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Aoo)	6 300
105	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Hoh)	66 000	0,015
106	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Ahx)	10 000	0,055
107	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Ghx)	22 000	0,032
108	D-Phe	D-Phe	D-Nle	D-Arg	NH(Gao)	67 000	0,034

Peptidy 88 až 108 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.

Príklad 9

Vybrané peptidy, ktoré boli uvedené v tabuľkách A až G, sa ďalej podrobili špecifickému in vivo testovaniu na stanovenie trvania účinku ich opiátových vlastností a výsledky sú uvedené v tabuľke H. Čísla peptidov zodpovedajú číslam uvedeným v tabuľkách a hodnoty μ/κ pomeru sú uvedené z referenčných dôvodov. In vivo testovanie sa uskutočňovalo použitím myšieho zvíjacieho testu (WT), ktorý sa dobre hodí na stanovenie dĺžky trvania analgetického biologického účinku. Tento test je podrobne opísaný v článku G. A. Bentley a ďalší, Br.J. Pharmac., 73: 325 - 332, 1981, a používa samčeky ICR myší, ktoré sú pri vedomí, dodávané firmou Harlan, s hmotnosťou medzi 20 a 30 gramov. Myšiam nie je podávaná potrava 12 až 16 hodín pred začiatkom testu. Monitorované bolestivé správanie, tzn. zvíjanie sa, sa indukuje intraperitoneálnym (i. p.) podaním nariedenej kyseliny octovej. Na jeden kg telesnej hmotnosti je použitých 10 ml 0,6 % vodnej kyseliny octovej. Zvíjanie sa hodnotí počas 15 minút po podaní kyseliny octovej. Ako prvý krok sú zlúčeniny testované v 3 až 4 zvyšujúcich sa dávkach podávaných intravenóznym spôsobom a v jednom časovom bode pred ošetrením (5 minút pred podaním injekcie s kyselinou octovou). Tento krok je použitý na stanovenie účinnej (WT-ED₅₀), ako aj submaximálnej účinnej dávky (približne 80 až 90 % analgetický účinok). V druhom kroku sa táto submaximálna účinná dávka pre každý konkrétny peptid podáva v rôznych časoch pred ošetrením (tzn. -5 minút, -60 minút, -120 minút a -180 minút) pred podaním kyseliny octovej, aby sa stanovilo trvanie účinku. Počas testu sa používa kontrolná skupina myší, ktorým sa podáva len vehikulum, bez kandidátskeho peptidu. Počet zvíjaní sa počíta počas 15 minút so začiatkom od podania injekcie s kyselinou octovou, a biologický účinok, tzn. analgézia, je vyjadrená v percentách, a vypočíta sa nasledovne:

((počet zvíjaní sa v kontrolnej skupine) - (počet zvíjaní sa v testovanej skupine))

100 x ________________________________________________________________________________ počet zvíjaní sa v kontrolnej skupine

Pretože každá submaximálna dávka bude pravdepodobne kolísať, nie sú priamo porovnateľné, takže výsledky sa matematicky normalizujú, ako je známe v tejto oblasti, aby sa získali porovnateľné hodnoty, ktoré sú uvedené v tabuľke H. V tabuľke H je analgetický účinok pretrvávajúci po 1, 2 a 3 hodinách vyjadrený ako percento účinku zisteného v -5 minúte. Hodnoty vyššie ako 100 % indikujú väčší analgetický účinok ako účinok na začiatku experimentu. Opiátové peptidy, ktoré redukujú zvíjanie sa na najmenej približne 25 % po 1 hodine, sú považované za peptidy, ktoré majú dlhotrvajúci in vivo účinok.

Okrem toho, že sa tento test používa na stavovanie trvania analgetického účinku, používa sa aj na meranie in vivo biologického potenciálu peptidu. Táto hodnota je uvedené v tabuľke pod hlavičkou WT-ED₅₀ v míliSK 286135 B6 gramoch na kg telesnej hmotnosti. Hodnota je meradlom dávky nevyhnutnej na redukciu počtu zvíjaní sa testovanej myši na 50 % (v porovnaní s kontrolnou myšou) počas 15 minút.

Tabuľka H

Číslo peptidu	μ/κ pomer	WT-ED50 mg/kg	Analgetický účinok (%)
1 h	2h	3h
1	38 000	0,09	83,9	75,5	61,3
2	60 000	0,14	70,5	29,8
3	18 000	0,078	48,6	39,8
4	7 200	0,3	49,3
5	20 000	0,04	66,0	34,5
6	42 000	0,014	105,7	52,7
7	17 000	0,02	67,5	36,8
8	26 000	0,01	66,9	45,1
9	2 500	0,03	72,5	39,5
10	25 000	0,07	81,6	47,5
11	62 000	0,07	61,8	36,9
12	7 000	0,07	60,5	53,6
13	2 700	0,44	30,7
14	2 000	0,14	36,0
15	57 000	0,017	60,0
42	27 000	0,06	45,3	29,4
43	2 500	0,2
44	8 300	0,2
46	14 000	0,083
47	30 000	0,09
48	18 000	0,065	53,7
49	92 000	0,02	65,5	69,2	38,3
50	9 300	0,077	35,6
51	12 000	0,018	32,5
52	92 000	0,019	30,6
53	85 000	0,026	47,7	32,6
56	13 000	0,057	77,4	59,3
57	28 000	0,026	100	67,2	58,2
58	6 500	0,04	93,4	45,7
59	13 000	0,052	83,3	59,7
60	1 900	0,083	83,8	35,5
61	10 400	0,019	57,5	60,3
62	27 000	0,18	38
63	16 000	0,04	51,8	36,1
64	37 000	0,032	74,7
65	11 000	0,031	39,5
88	16 000	0,04	56,6	28,9
94	70 000	0,02	58,8
95	16 000	0,08	45,8
96	12 000	0,098	56,7
98	24 000	0,014	85,5	40,8
99	19 000	0,083	50,3	69,3
100	31 000	0,079	82,8	27,6
101	38 000	0,112	89,9	45,6
102	24 000	0,032	63,9
103	140 000	0,101	37,1
105	66 000	0,015	48,2
106	0 055	46,7
107	22 000	0,032	29,0
108	67 000	0,034	84,3	32,9

Opiátové peptidy sú užitočné ako analgetiká a na iné farmakologické aplikácie na ošetrovanie patologických stavov spojených s KOR systémom. Sú výhodné v porovnaní s μ agonistickými potláčateľmi bolesti, napr. morím, ktoré majú nežiaduce účinky, ako zápcha, respiračná depresia a svrbenie. Je veľmi želateľné, aby tieto opiátové peptidy významne neprekračovali krvno/mozgovú bariéru, aby sa zabránilo potenciálnym vedľajším účinkom, ktoré môžu vzniknúť. Bezpečnosť týchto zlúčenín z hľadiska vstupu do mozgu sa stanovuje porovnaním ich schopnosť vyvolať periférne účinky a ich schopnosť vyvolať centrálne účinky. Periférne účinky sa merajú použitím myšieho testu zvíjania sa (WT), ktorý bol opísaný. Centrálne účinky zapríčinené pôsobením na kapa receptory umiestnené v mozgu sa merajú použitím testu švihania chvostom (TF).

Test švihania chvostom je test akútnej somatickej bolesti, zostavený na stanovenie potenciálu a trvania účinku analgetík pôsobiacich centrálne. Bolesť vyvolaná ponorením chvosta do horúcej vody (52 °C) spôsobuje rýchle vybratie chvosta, tiež známe ako švihnutie chvostom. Očakáva sa, že centrálne účinkujúce analgetické zlúčeniny predlžujú od dávky závislým spôsobom čas do vytiahnutia chvosta. Test je opísaný vo Vanderah, T.W, a ďalší, J. Pharm. Exper. Therapeutics, 262: 190 - 197, 1992.

Bezpečnosť sa stanovuje použitím mozgového penetračného indexu (BPI), ktorý je definovaný ako

BPI = (TF-ED₅o)/(WT-ED_5o), kde EDso hodnoty sú hodnoty, ktoré zabezpečujú polovicu maximálneho účinku v myšom zvíjacom teste (WT-ED_5o) alebo v myšom teste švihania chvostom (TF-ED₅₀), keď je látka podávaná i.v. spôsobom. Vysoká BPI hodnota signalizuje nízku mozgovú penetráciu, a indikuje, že zlúčenina je pravdepodobne vo veľkom rozsahu bezpečná (nemá mozgové vedľajšie účinky), keď sa použije na účely opísané v tejto prihláške. Výhodné opiátové zlúčeniny majú BPI hodnoty rovnajúce sa alebo vyššie ako 100, pričom výhodnejšie sú opiátové peptidy, ktoré majú BPI vyššie ako 300. Systémové nepeptidové kapa agonisty (napr. Enadolín a U-69 593) majú BPI hodnoty nižšie ako 5, z čoho vyplýva významné prenikanie do mozgu, čo je zrejmé aj na základe vedľajších účinkov (diuréza, stav úzkosti a útlm), ktoré spôsobujú pri ich klinickom použití. BPI hodnoty pre niektoré reprezentatívne opiátové peptidy sú uvedené v tabuľke I, ktorá nasleduje:

Tabuľka I

Č. peptidu	WT-ED50 mg/kg	TF-ED50 Mg/kg	BPI
1	0,09	9,7	108
3	0,078	13,82	177
5	0,04	4,4	110
6	0,014	6,4	457
7	0,020	3,1	155
8	0,01	9,84	984
15	0,017	2,86	168
49	0,020	1,62	81
53	0,026	2,1	81
57	0,026	5,6	215
58	0,034	4,34	128
61	0,019	>10	>526
88	0,040	12	300
96	0,098	>10	>102
98	0,014	3,5	250
99	0,083	16	193
102	0,032	>10	>313
105	0,015	12,6	840

Pretože sa tieto peptidy viažu silno na KOR, sú užitočné aj v in vitro testoch na štúdium receptorov a na stanovenie toho, aké receptory môžu byť prítomné v konkrétnej tkanivovej vzorke. Takže sú v tomto smere užitočné na diagnostiku a potenciálne aj na in vivo diagnostiku.

Vo všeobecnosti je možné použiť tieto opiátové peptidy na dosiahnutie analgetického účinku na liečbu bolesti vnútornosti a aj na liečbu reumatoidnej artritídy. Užitočné sú najmä na liečbu abdominálnych postchirurgických symptómov, ako napríklad porúch trávenia a bolesti. Sú tiež považované za látky, ktoré sú účinné na liečbu IBS, nestálosti močového mechúra, inkontinencie a iných indikácií, kde lokálny zápal spôsobuje bolestivé stavy v črevách alebo v iných vnútornostiach, napr. zápalovú chorobu vnútorností (IBD) a bolestivú menštruáciu. Schopnosť opiátových peptidov znižovať imunitnú odpoveď môže byť výhodná na potláčanie IBD a iných indikácií, ako autoimunitných ochorení. Podávanie peptidov môže byť použité na vytvorenie lokálneho analgetického účinku pri akútnych, ako aj chronických zápalových stavoch. Môžu byť použité na liečbu digestívneho ileusu, so symptómami ako opuchy, nausea alebo na liečbu črevných nepriechodností, ktoré sú spojené s bolesťou, napr. črevná obštrukcia, ktorá môže byť spôsobená spastickými kontrakciami. Opiátové peptidy sú užitočné aj na vytvorenie periférnej analgézie a môžu byť nasmerované na odstránenie pooperačnej bolesti, ako aj chronickej bolesti, ako je napríklad bolesť spôsobená zápalom gastrointestinálnych a vnútomostných tkanív a môžu tiež priniesť úľavu počas odvykania od drogovej závislosti.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť podávané vo forme farmaceutický prijateľných, netoxických solí, ako napríklad kyslých adičných solí, ako je dobre známe v tejto oblasti. Príkladmi takýchto kyslých adičných solí sú hydrochlorid, hydrobromid, síran, fosfát, dusičnan, oxalát, tumarát, glukonát, tanát, pamoát, maleát, octan, citrát, benzoát, sukcinát, alginát, malát, askorbát, tartrát a podobne. Ak sa má účinná zložka podávať vo forme tabliet, môže tableta obsahovať farmaceutický prijateľné, netoxické riedidlo, ktoré zahŕňa spojovník, ako tragant, pšeničný škrob alebo želatínu. Môže sa uskutočniť aj intravenózne podanie v izotonickom fyziologickom roztoku, fosfátovom tlmivom roztoku, v roztokoch manitolu alebo glukózy.

Farmaceutické prostriedky budú zvyčajne obsahovať účinné množstvo peptidu spolu s bežným, farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Vo všeobecnosti bude prostriedok obsahovať analgetické množstvo, tzn. množstvo, ktoré spôsobí blokovanie bolesti. Zvyčajne bude dávka v rozmedzí od približne 1 pg do približne 10 mg peptidu na kg telesnej hmotnosti hostiteľa, keď sa bude podávať intravenózne. Prostriedky môžu byť podávané, ako je potrebné; napríklad môžu byť podávané opakovane v 3 až 6 hodinových intervaloch. Povaha týchto zlúčenín môže umožniť účinné orálne podanie; ale orálna dávka môže byť vyššia. Ak je to želateľné, môže byť použité podávanie opiátového peptidu počas predĺženej doby, napríklad počas jedného týždňa alebo dlhšie, pričom môže byť použitá forma jednotkového podania, pomalé uvoľňovanie, deponovacie alebo implantátové dávkové formy. Napríklad, vhodný pomaly uvoľňujúci deponovací prostriedok na injekčné podanie môže obsahovať peptid alebo jeho soľ dispergovanú v neantigénnom polyméri, akým je polymér tvorený kyselinou polymliečnou a kyselinou polyglykolovou, ako je opísané v US. patente č. 3 773 919. Je tiež známe, že podávanie pomalým uvoľňovaním sa môže uskutočňovať prostredníctvom silastického implantátu.

Tieto zlúčeniny môžu byť podávané cicavcom vrátane ľudí, intravenózne, subkutánne, íntramuskuláme, perkutánne, intranazálne, intrapulmonálne, orálne topicky, intrarektálne, intravaginálne alebo spinálnym dávkovaním, aby sa dosiahol analgetický účinok, akým je napríklad zvrátenie gastrointestinálnej nepriechodnosti indukovanej peritoneálnym podráždením. Môžu byť takto použité na zmiernenie pooperačnej bolesti. Účinné dávky budú kolísať v závislosti od formy podania a od konkrétneho druhu cicavca, ktorý sa lieči. Príkladom jednej typickej dávkovej formy je bakteriostatický vodný roztok s pH približne 3 až 8, napríklad približne 6, ktorý obsahuje peptid, a ktorý je podávaný kontinuálne parenterálne, aby poskytol dávku v rozsahu od približne 0,3 pg do 3 mg/kg telesnej hmotnosti za deň. Tieto zlúčeniny sa považujú za dobre tolerované in vivo, a za vhodné najmä na podávanie subkutánnou injekciou v roztoku bakteriostatickej vody alebo podobne.

Hoci bol tento vynález opísaný s ohľadom na jeho výhodné uskutočnenia, treba tomu rozumieť tak, že zmeny a modifikácie, ktoré sú zrejmé priemernému odborníkovi v tejto oblasti, neprekračujú rámec predloženého vynálezu, ktorý je uvedený v patentových nárokoch. V peptidoch podľa vynálezu môžu byť napríklad použité iné substitúcie známe v oblasti, ktoré významne neuberajú z účinnosti peptidov. V polohe 2 môžu byť použité iné substitúcie ako D-Phe zvyšky, ako napríklad (4Br)D-Phe alebo (2,4C1₂)D-Phe. Tak D-Lys(Bu), ako aj D-Lys(Et₂) môžu byť považované za ekvivalenty D-Ily a D-Arg(Et₂). A-koniec tetrapetidu môže byť, ak je to želateľné, permetylovaný, ako je známe v oblasti. Diamino zlúčeniny môžu byť použité ako spojovníky na vytvorenie dimérov 2 tetrapeptidových amidov. Spojovníky, ktoré môžu byť úspešne použité zahŕňajú 1,6-diaminohexán, l,5-diamino-3-oxapentán a l,8-diamino-3,6-dioxaoctan. Výsledné diméry sú považované za ekvivalenty príslušných monomérov.

Claims

1. Syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ, ktorý má afinitu proti kapa opiátovému receptoru najmenej 1000-krát vyššiu, ako je jeho afinita proti mu opiátovému receptoru, ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, a ktorý má vzorec:

H-Xaa'-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je (A)D-Phe, (C^aMe)D-Phe, D-Tyr, D-Tic - kyselina D-l,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylová alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, C1 alebo CH3; Xaa² je (A')D-Phe, D-lNal - D-alanín substituovaný naftylom na beta uhlíku s miestom pripojenia v polohe 1 naftylového kruhu, D-2Nal - D-alanín substituovaný naftylom na beta uhlíku s miestom pripojenia v polohe 2 naftylového kruhu, D-Tyr alebo D-Trp, kde A' je A alebo 3,4C12; Xaa³ je D-Nle - D-norleucín, (B)D-Leu, D-Hle - D-homoleucín, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C“Me; Xaa⁴ je D-Arg, D14

-Har - D-homoarginín, D-nArg - D-norarginín, D-Lys, D-Ily - izopropyl-D-lyzín, D-Arg(Et₂), D-Har(Et₂) -

- dietyl-D-homoarginín, D-Amf - D-(NH2CH₂)-fenylalanín, D-Gmf - D-(CH₂NHC(NH)NH₂)-fenylalanín, D-Dbu - kyselina alfa,gama-diaminobutyrová, D-Orn - D-omitín alebo D-Ior - izopropyl-D-omitín; a Q je NR'R², morfolinyl, tiomorfolinyl, (C)piperidinyl, piperazinyl, 4-mono- alebo 4,4-di-substituovaný piperazinyl, alebo ε-lyzyl, kde R¹ je substituovaný alebo nesubstituovaný priamy alebo rozvetvený Ci-Csalkyl a C3-C6cykloalkyl, pričom substituenty sa volia zo skupiny, ktorá obsahuje hydroxyl a amino; benzyl, substituovaný benzyl, pričom jeho substituenty sú vybrané zo skupiny, ktorá obsahuje amino, nitro, 2-amino-2-karboxyetyl, metyl, etyl, chlór, fluór, aminometyl, aminoetyl a amidino; aminocyklohexyl, 2-tiazolyl, 2-pikolyl, 3-pikolyl, 4-pikolyl, ®-(acylamino)-polymetylén alebo poly(oxyetylén)-ová skupina; a R² je H alebo priamy alebo rozvetvený Ci-C6alkyl a C₃-C₆cykloalkyl; a C je H, 4-hydroxyskupina alebo 4-oxoskupina.

2. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Xaa² je D-Phe, Xaa³ je D-Leu alebo D-Nle, Xaa⁴ je D-Arg alebo D-Orn, Q je NHR¹ a R¹ je etyl, propyl, butyl, cyklopropyl alebo cyklobutyl.

3. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Q je morfolinyl alebo tiomorfolinyl alebo NH(4-pikolyl).

4. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Q je N(Et)₂, NH(Aeb) - NH(4-amino-2-karboxyetyl)benzyl, Ppz - piperazinyl, Pcp - 4-fenylkarbamoylpiperazín-l-yl alebo NHR¹, kde R¹ je Aao - 8-(acetylamino)-3,6-dioxaokt-l-yl, Aoo - 8-amino-3,6-dioxokt-l-yl, Hoh - kyselina 6-(L-hydroorotylamino)-hex-l-ylová, Ghx -

- 6-(D-glukonylamino)-hexyl, alebo Gao - 6-(D-glukonylamino)-3,6-dioxaokt-l-yl.

5. Syntetický peptid podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, kde Xaa¹ je D-Phe, D-Ala(2-tienyl) alebo D-4Fpa - 4-fluór-D-fenylalanín.

6. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde buď Xaa² je D-4Cpa - 4-chlór-D-fenylalanín alebo D-3,4Cpa -

- 3,4-dichlór-D-fenylalanín, alebo Xaa⁴ je D-Gmf.

7. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má WT-ED₅₀ približne 0,5 mg/kg alebo nižší, ktorý má vzorec:

H-Xaa¹ -Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa’ je D-Phe (nesubstituovaný alebo substituovaný s C“Me, 2F, 4F alebo 40) alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl); Xaa² znamená (A')D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A' je H, 4F, 4C1, 4NO2 alebo 3,4C12; Xaa³ je D-Nle, D-Leu, D-CML - C“metyl-D-leucín, D-Met alebo D-Acp - D-Ala(cyklopentyl); Xaa⁴je D-Arg, D-Arg(Et2), D-Lys, D-Ily, D-Har, D-Har(Et₂), D-nArg, D-Om, D-Ior, D-Dbu, D-Amf, a D-Gmf; a Q je NR’R², Mor - morfolinyl, Tmo - tiomorfolinyl, Pip - piperidinyl, 4-HyP - 4-hydroxpiperidín-l-yl, OxP -

- 4-oxo-piperidín-l-yl, Pcp alebo Ppz, kde R¹ znamená Me, Et, Pr, Bu, hEt, Aeb, Cyp - cyklopropyl, Bzl -

- benzyl, Hoh alebo 4-pikolyl, a R² znamená H alebo Et.

8. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má ED₅₀ približne 0,5 mg/kg alebo nižší, a ktorý má vzorec:

H-Xaa¹-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe, D-4Fpa - 4-íluór-D-fenylalanín, D-2Fpa, D-Acp alebo D-Ala(2Thi) - 2-tienyl-D-alanín; Xaa² je (A)D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A je 4F alebo 4C1; Xaa³ je D-Nle, D-Met alebo D-Leu; Xaa⁴ je D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Om alebo D-Gmf; a Q je NHR¹, Mor, Tmo, Pip alebo Ppz, kde R¹je Et, Pr alebo 4Pic - 4-pikolyl.

9. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má ED₅o približne 0,5 mg/kg alebo nižší, a ktorý má vzorec:

H-Xaa’-Xaa²-Xaa³-Xaa⁴-Q, kde Xaa¹ je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa alebo D-Ala(2Thi); Xaa²je (A)D-Phe, D-lNal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A je 3,4C12 alebo 4C1; Xaa³ je D-Nle alebo D-Leu; Xaa⁴ je D-Arg, D-Om alebo D-Gmf; a Q je NHR¹, Mor, Tmo, Pcp, Ppz alebo N(Et)2, kde R¹ je Et, Pr, Cyp, 4Pic, Aeb alebo Hoh.

10. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má jeden z nasledujúcich vzorcov: H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHEt, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHPr, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-tiomorfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NEt₂, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NHMe, H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Om-morfolinyl, H-D-4Fpa-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl,

H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-cyklopropyl,

H-D-Ala(2Thi)-D-3,4Cpa-D-Leu-D-Arg-morfolinyl,

H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Gmf-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Om-NH(Aeb),

5 H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-piperazinyl, a H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH(Hoh).

11. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje analgeticky účinné množstvo syntetického peptidu podľa ktoréhokoľvek nárokov 1 až 10 a farmaceutický prijateľný kvapalný alebo 10 tuhý nosič.