TWI717664B - 一種苯基丙醯胺類衍生物的鹽及其製備方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種苯基丙醯胺類衍生物的鹽及其製備方法。具體地，本發明提供4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸的乙酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽及其製備方法。本發明式(I)化合物的鹽具備良好的穩定性、工藝簡單易於操作，可更好地用於臨床治療。

Description

一種苯基丙醯胺類衍生物的鹽及其製備方法
本發明涉及4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸的鹽及其製備方法，以及其作為κ鴉片樣物質受體（KOR受體）激動劑的用途和其在製備治療和/或預防疼痛和疼痛相關疾病的藥物中的用途。
本申請要求申請日為2017年12月6日的中國專利申請CN201711272474.1的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
鴉片受體是一類重要的G蛋白偶聯受體，是內源性鴉片肽及鴉片類藥物結合的靶點，鴉片受體激活後對神經系統免疫及內分泌系統具有調節作用，鴉片類藥物是目前最強且常用的中樞鎮痛藥。內源性鴉片肽是哺乳動物體內天然生成的鴉片樣活性物質，目前已知的內源性鴉片肽大致分為腦啡肽、內啡肽、強啡肽和新啡肽幾類，中樞神經系統中存在其相應的鴉片受體，即μ、δ、κ受體等。
κ鴉片受體（κ-opioid receptor, KOR）由380個胺基酸組成，強啡肽是其內源性配體。在感覺神經元、背根神經節細胞和初級傳入神經元末梢中均有表達，參與痛覺、神經內分泌、情感行為和認知等重要的生理活動。KOR還與內向整流鉀通道和N-型鈣離子通道偶聯。KOR激動劑能夠抑制（鈣離子依賴性）外周感覺神經末梢傷害前和炎症前P物質的釋放，這可能是其具有抗傷害感受和抗炎作用的原因。除了強啡肽，各種天然生物鹼和合成的配體也可與KOR結合。KOR提供了天然的成癮控制機制，因此，作為受體激動劑的藥物具有藥物成癮治療的潛力。
KOR激動劑藥物有阿西馬朵林(asimadoline)、U-50488、那若松(naloxone)，公開的KOR激動劑專利申請包括WO20071398、WO2008060552、WO09932510、WO2013184794、WO2014089019、WO2014184356和WO2015065867。
WO2017211272(申請號PCT/CN2017/087328，申請日2017.06.06)中公開了一種KOR激動劑化合物，該化合物對h-KOR受體具有明顯的激動作用、藥代性質良好、且能夠改善疼痛，具有更為突出的優勢，其化合物結構如式(I)所示：
Figure 02_image001
。
由於式(I)所示化合物的溶解度較低，為了進一步提高化合物的溶解度，我們對式(I)所示化合物進行了成鹽研究，考察的鹽包括乙酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽等；通過成鹽後產物的溶解度有了較大改善，並且考察鹽的穩定性等問題，在治疼痛方面具有重要的研究意義。
本發明要解決的技術問題是提供一種4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸的鹽，該鹽具備良好的穩定性，可更好地應用於臨床。
本發明的技術方案如下： 本發明提供一種式(I)所示化合物4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸的可藥用的鹽，
Figure 02_image001
， 所述可藥用的鹽選自無機鹽或有機鹽，優選乙酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽。
優選地，所述的可藥用的鹽中式(I)所示化合物與酸（根）的莫耳比選自1:1~1:5，優選1:1、1:2或1:3。
更優選地， 所述可藥用的鹽中式(I)所示化合物與氯化氫分子的莫耳比優選1:1、1:2或1:3，更優選1:3； 所述式(I)所示化合物與磷酸分子的莫耳比優選1:3； 所述式(I)所示化合物與檸檬酸分子的莫耳比優選1:1、1:2或1:3，更優選1:1； 所述式(I)所示化合物與苯甲酸分子的莫耳比優選1:2； 所述式(I)所示化合物與富馬酸分子的莫耳比優選1:2。
本發明還提供一種製備可藥用的鹽的方法，所述方法包括式(I)所示化合物與相應的酸成鹽反應的步驟。
上述方案中，所述成鹽反應在溶劑中進行，所述溶劑優選自醇類溶劑、鹵代烴類溶劑、醚類溶劑、腈類溶劑、醇類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑或鹵代烴類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑；所述醇類溶劑優選甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇，所述醚類溶劑優選乙醚、甲基三級丁基醚、異丙基醚或二氧六環，所述腈類溶劑優選自乙腈，所述鹵代烴類溶劑優選自二氯甲烷。
在可選實施方案中，所述醇類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑優選乙醇/異丙醚的混合溶劑或乙醇/異丙醇/異丙醚的混合溶劑。在另一可選實施方案中，所述鹵代烴類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑優選二氯甲烷/異丙醚的混合溶劑。
優選地，成鹽反應結束後還包括加入反溶劑、揮發溶劑或冷卻的步驟，所述反溶劑優選醚類溶劑，所述醚類溶劑優選乙醚、甲基三級丁基醚、異丙基醚或二氧六環。
本發明還提供一種製備可藥用的鹽的方法，所述鹽的製備方法採用轉鹽方法，優選將三氟乙酸鹽轉為乙酸鹽。在可選實施方案中，轉鹽方法包括將(I)所示化合物的三氟乙酸鹽通過高效液相色譜經含有乙酸的水作為洗脫劑進行洗脫後，濃縮、乾燥得到式(I)所示化合物乙酸鹽的步驟。
上述方案中，所述洗脫劑還可以包含乙酸銨、乙腈或乙酸銨/乙腈。
優選地，所述洗脫劑中乙酸的體積比為0.1%。
本發明還提供一種藥物組合物，其含有上述方案中所述的可藥用的鹽和任選的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本發明還提供上述方案中所述的鹽或藥物組合物在製備預防和/或治療κ鴉片樣物質受體激動劑介導的相關疾病的藥物中的用途；所述疾病選自疼痛、炎症、瘙癢、水腫、低鈉血症、低鉀血症、腸阻塞、咳嗽和青光眼，優選疼痛；所述疼痛優選自神經性疼痛、軀幹痛、內臟痛、皮膚痛、關節炎疼痛、腎結石疼痛、子宮痙攣、痛經、子宮內膜異位症、消化不良、外科手術後疼痛、醫療處理後疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆發性癌症疼痛和GI紊亂相關的疼痛。 發明詳述
在本申請的說明書和申請專利範圍中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。然而，為了更好地理解本發明，下面提供了部分相關術語的定義和解釋。另外，當本申請所提供的術語的定義和解釋與本領域技術人員所通常理解的含義不一致時，以本申請所提供的術語的定義和解釋為准。
本發明所述“鹵代”是指被“鹵素原子”取代，“鹵素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
本發明所述“C1-6 烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個碳原子的烷基，具體實例包括但不限於：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、異己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本發明所述的“醚類溶劑”是指含有醚鍵-O-且碳原子數為1至10個的鏈狀化合物或環狀化合物，具體實例包括但不限於：四氫呋喃、乙醚、異丙醚、丙二醇甲醚、甲基三級丁基醚或1,4-二氧六環。
本發明所述的“醇類溶劑”是指一個或多個“羥基（-OH）”取代“C1-6 烷基”上的一個或多個氫原子所衍生的基團，所述“羥基”和“C1-6 烷基”如前文所定義，具體實例包括但不限於：甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、異戊醇或三氟乙醇。
本發明所述的“腈類溶劑”是指一個或多個“氰基（-CN）”取代“C1-6 烷基”上的一個或多個氫原子所衍生的基團，所述“氰基”和“C1-6 烷基”如前文所定義，具體實例包括但不限於：乙腈或丙腈。
本發明所述的“鹵代烴類溶劑”是指一個或多個“鹵素原子”取代“C1-6 烷基”上的一個或多個氫原子所衍生的基團，所述“鹵素原子”和“C1-6 烷基”如前文所定義，具體實例包括但不限於：氯甲烷、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。
本發明所述的“混合溶劑”是指一種或多種不同種類的有機溶劑按照一定比例混合而成的溶劑，或有機溶劑與水按照一定比例混合而成的溶劑；所述混合溶劑優選為一種或多種醇類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑、鹵代烴類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑；所述醇類溶劑、醚類溶劑、鹵代烴類溶劑如前文所定義；所述一定比例為0.05:1~1:0.05，優選為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:8、1:10或1:20。
本發明還涉及，包括式(I)所示的化合物的鹽以及任選的一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物製劑。所述藥物製劑可以製成藥學上可接受的任一劑型。例如，本發明的鹽或藥物製劑可以配製為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、注射劑（包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液）、栓劑、吸入劑或噴霧劑。
此外，本發明的所述藥物製劑還可以以任何合適的給藥方式，例如口服、腸胃外、直腸、經肺或局部給藥等方式施用於需要這種治療的患者或受試者。當用於口服給藥時，所述藥物組合物可製成口服製劑，例如口服固體製劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；或，口服液體製劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。當製成口服製劑時，所述藥物製劑還可包含適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。當用於腸胃外給藥時，所述藥物製劑可製成注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。當製成注射劑時，所述藥物組合物可採用現有製藥領域中的常規方法來進行生產。當配製注射劑時，所述藥物製劑中可以不加入附加劑，也可根據藥物的性質加入適宜的附加劑。當用於直腸給藥時，所述藥物製劑可製成栓劑等。用於經肺給藥時，所述藥物製劑可製成吸入劑或噴霧劑等。在某些優選的實施方案中，本發明的鹽以治療和/或預防有效量存在於藥物製劑或藥物中。在某些優選的實施方案中，本發明的鹽以單位劑量的形式存在於藥物製劑或藥物中。 發明的有益效果
與現有技術相比，本發明的技術方案具有以下優點： 經研究表明，本發明製備的式(I)所示化合物的鹽的純度較高，在光照、高溫、高濕的條件下HPLC純度變化小、化學穩定性高；本發明技術方案得到的式(I)所示化合物的鹽能夠滿足生產運輸儲存的藥用要求，生產工藝穩定、可重複可控，能夠適應於工業化生產。
為讓本發明之上述和其他目的、特徵和優點能更明顯易懂，下文特舉實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下。
以下將結合實施例更詳細地解釋本發明，本發明的實施例僅用於說明本發明的技術方案，並非限定本發明的實質和範圍。
實驗所用儀器的測試條件： 化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(d)以10-6 (ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6 )、氘代氯仿(CDCl3 )、氘代甲醇(CD3 OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用FINNIGAN LCQAd (ESI)質譜儀(生產商：Thermo，型號：Finnigan LCQ advantage MAX)。
HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150×4.6mm色譜柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18 150×4.6mm色譜柱)。
離子色譜(HPIC)，儀器：美國DionexICS-5000+ 離子色譜儀；分離柱: IonPac AS11-HC，檢測方式：電導；淋洗液：NaOH 0.03M；流速：1.5mL/min。
實施例1、式(I)所示化合物的乙酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(71 mg，0.1 mmol)和異丙醇(0.25 mL)加入反應瓶中，升溫至50℃，攪拌溶解完全，50℃下滴加乙酸(6 mg，0.1 mmol)後再加入異丙醚(0.25 mL)，50℃繼續攪拌2小時，自然冷卻至室溫，攪拌16小時，反應液過濾，濾餅真空乾燥，得到標題產物(30 mg，產率39%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與乙酸的莫耳比為1:1。
1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD) d 7.37-7.11 (m, 10H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.86 (brs., 1H), 3.83-3.58 (m, 3H), 3.24-3.03 (m, 3H), 2.96-2.72 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.52 (dd, 1H), 2.19 (brs., 2H), 1.90 (s, 3H), 1.83-1.53 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H)。
實施例2、式(I)所示化合物的乙酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(300 mg，0.424 mmol)加入到二氯甲烷(3 mL)中，攪拌溶清，加入預製的溶於0.5 mL二氯甲烷的乙酸(26.7 mg，0.445 mmol)溶液，升溫至50℃微沸狀態下攪拌2小時，加入異丙醚(3 mL)，室溫下攪拌2小時，反應液過濾，濾餅用異丙醚(5 mL×2)淋洗，抽幹，真空乾燥，得到標題產物(300 mg，產率92%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與乙酸的莫耳比為1:1。
1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD) d 7.40-7.12 (m, 10H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.39 (dd, 1H), 3.97-3.69 (m, 4H), 3.23-3.06 (m, 3H), 2.98-2.73 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.53 (dd, 1H), 2.20 (d, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.87-1.74 (m, 2H), 1.74-1.51(m, 7H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H)。
實施例3、式(I)所示化合物的乙酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(500 mg，0.042 mmol)和二氯甲烷(5 mL)加入反應瓶中，攪拌溶解完全，滴加乙酸(44.4 mg，0.741 mmol)，反應液升溫至40℃，攪拌2小時，加入二異丙基醚(5 mL)，緩慢冷卻至室溫，攪拌1小時，反應液過濾，濾餅真空乾燥，得到標題產物(500 mg，產率：92%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與乙酸的莫耳比為1:1。
1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD) d 7.34-7.05 (m, 10H), 4.83 (dd, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.93-3.64 (m, 4H), 3.24-3.04 (m, 3H), 2.97-2.76 (m, 4 H), 2.68- 2.47 (m, 2H), 2.30-2.07 (m, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.84-1.55 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.19 (d, 3H), 1.06-0.79 (m, 6H)。
實施例4、式(I)所示化合物的乙酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(300 mg，0.42 mmol)和二氯甲烷(3 mL)加入反應瓶中，攪拌溶解完全，滴加預製的乙酸(76.3 mg，1.27 mmol)的二氯甲烷(0.5 mL)溶液，升溫至50℃，攪拌2小時，再加入異丙醚(3 mL)，緩慢降溫至室溫，室溫攪拌72小時，反應液過濾，濾餅用異丙醚(5 mL×2)洗，真空乾燥，得到標題產物(300 mg，產率92%)。
所得產物的的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與乙酸的莫耳比為1:2。
1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD) d 7.39-7.13 (m, 10H), 4.83 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.39 (dd, 1H), 3.94-3.65 (m, 4H), 3.27-3.12 (m, 3H), 2.95-2.79 (m, 4 H), 2.70-2.52 (m, 2H), 2.20 (dd, 2H), 1.93 (s, 6H), 1.84-1.55(m, 9H), 1.51-1.40 (d, 2H), 1.20 (d, 3H), 1.01-0.87 (m, 6H)。
實施例5、式(I)所示化合物的乙酸鹽的製備 將交聯葡聚糖凝膠(sephadex g25，10 g)用20%乙醇水溶液浸泡30分鐘，裝填柱子(直徑:高度=1:3，剩餘用海沙填滿)，將式(I)所示化合物(2 g，粗品)和水(2 mL)加入反應瓶中，滴加氨水至溶液pH為7左右，濕法上樣，用純水沖洗，收集214 nm和210 nm峰，收集到的溶液直接凍乾，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(色譜柱WATERS 2767 Xbridge 30Í150mm, 5μm；流動相(A：水(0.1%乙酸)、B：水(10 mmol/L 乙酸銨)、C：乙腈))得到標題產物(500 mg)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：乙酸根離子含量為13.52%，表明該鹽中主成分與乙酸的莫耳比為1:2。
實施例6、式(I)所示化合物的鹽酸鹽的製備 將粗品式(I)所示化合物(2 g，1.88 mmol)溶於鹽酸(16 mL，4M )中，攪拌反應2小時，減壓濃縮得到約2 g粗品，用高效液相色譜法純化所得粗品(色譜柱：Sharpsil-H 20Í250mm; 5μm; C18；流動相(A：水(0.05% HCl)、B：乙腈))，得到標題產物(80 mg，產率70%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：氯離子含量為9.73%，表明該鹽中主成分與鹽酸的莫耳比為1:2。
實施例7、式(I)所示化合物的鹽酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(100 mg，0.141 mmol)溶於乙醇(2 mL)中，滴加0.176 mL 4M 氯化氫的異丙醇溶液，室溫攪拌16小時，沒有固體析出，加入二異丙基醚(2 mL)，攪拌4小時，反應液過濾，濾餅用二異丙基醚(1 mL)洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(80 mg，產率70%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：氯離子含量為12.57%，表明該鹽中主成分與鹽酸的莫耳比為1:3。
實施例8、式(I)所示化合物的鹽酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(350 mg，0.494 mmol)溶於異丙醇(5 mL)中，攪拌全溶，滴加0.494 mL 4M 氯化氫的異丙醇溶液，有固體析出，攪拌5分鐘後又完全溶解，室溫攪拌16小時，沒有固體析出，加入二異丙基醚(2 mL)，室溫攪拌6小時，反應液過濾，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(250 mg，產率62%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：氯離子含量為12.38%，表明該鹽中主成分與鹽酸的莫耳比為1:3。
實施例9、式(I)所示化合物的鹽酸鹽的製備 將粗品式(I)所示化合物(4.08 g，粗品)於0℃下加入到鹽酸(40 mL，4M )中，室溫攪拌2小時，減壓濃縮，用製備色譜純化所得殘餘物，得到標題產物(710 mg，產率17%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：氯離子含量為12.38%，表明該鹽中主成分與鹽酸的莫耳比為1:3。
實施例10、式(I)所示化合物的檸檬酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(71 mg，0.1 mmol)溶於異丙醇(0.3 mL)中，升溫至60℃，加入一水合檸檬酸(22 mg，0.105 mmol)的異丙醇(0.8 mL)溶液，60℃攪拌2小時，冷卻至室溫攪拌16小時，反應液過濾，濾餅用異丙醇(0.6 mL)淋洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(60 mg，產率78%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與檸檬酸的莫耳比為1:1。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d 7.40-7.11 (m, 10H), 4.86-4.79 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.43-4.29 (m, 1H), 3.96-3.81 (m, 3H), 3.76 (d, 2H), 3.69- 3.51 (m, 2H), 3.22- 3.06 (m, 2H), 3.05-2.90 (m, 4H), 2.79 (dd, 2H), 2.70 (s, 2H), 2.33-2.03 (m, 2H), 1.92-1.65 (m, 7H), 1.65-1.49 (m, 2H), 1.42 (brs., 2H), 1.34-1.25 (m, 3H), 1.02-0.84 (m, 6H)。
實施例11、式(I)所示化合物的檸檬酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(500 mg，0.706 mmol)溶於異丙醇(10 mL)中，攪拌溶清，升溫至40℃，滴加入預製的一水合檸檬酸(156 mg，0.741 mmol)的異丙醇(10 mL)溶液，有白色渾濁，40℃攪拌2小時，冰浴冷卻攪拌0.5小時。反應液過濾，濾餅用異丙醇淋洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(600 mg，產率94%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與檸檬酸的莫耳比為1:1。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d7.48-7.29 (m, 2H), 7.29-7.04 (m, 8H), 4.87-4.81 (m, 1H), 4.56 (dd, 1H), 4.35 (dt, 1H), 3.98-3.75 (m, 4H), 3.75-3.57 (m, 2H), 3.57-3.50 (m, 2 H),3.21-3.14 (m, 1H),3.13-2.89 (m, 5H), 2.79 (dd, 2H), 2.69 (dd, 2H), 2.30-2.01 (m, 2H), 1.88-1.61 (m, 8H), 1.61-1.49 (m, 1H), 1.49-1.33 (m, 2H), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.06-0.76 (m, 6H)。
實施例12、式(I)所示化合物的檸檬酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(300 mg，0.424 mmol)溶於異丙醇(4 mL)中，80℃加入一水合檸檬酸(187 mg，0.89 mmol)的異丙醇溶液(4 mL)，80℃溶解，攪拌2小時後，室溫攪拌72小時，將固體過濾，用異丙醇(5 mL×3)洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(300 mg，產率77%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與檸檬酸的莫耳比為1:2。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d7.43-7.20 (m, 9H), 7.15 (t, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.58 (dd, 1H), 4.41-4.26 (m, 1 H), 3.92-3.78 (m, 4H), 3.70-3.55 (m, 3 H), 3.27-3.00 (m, 4H), 2.99-2.86 (m, 2H), 2.82(dd, 4H), 2.72 (dd, 4H), 2.32-2.08 (m, 2H), 1.88-1.62 (m, 8H), 1.62-1.48 (m, 2H), 1.48-1.37 (m, 2H), 1.33-1.25 (m, 3H), 1.02-0.88 (m, 6H)。
實施例13、式(I)所示化合物的檸檬酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(300 mg，0.423 mmol)溶於異丙醇(5 mL)中，加入一水合檸檬酸(356.2 mg，1.69 mmol)，升溫至60℃，攪拌2小時。反應液緩慢冷卻至室溫，過濾，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(260 mg，產率66%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示核磁數據表明該鹽中主成分與檸檬酸的莫耳比為1:3。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d 7.39-7.32 (m, 2H), 7.32-7.19 (m, 7H), 7.15 (t, 1H), 4.89-4.84 (m, 1H), 4.75-4.57 (m, 1H), 4.40-4.30 (m, 1H), 3.98-3.78 (m, 5H), 3.76-3.58 (m, 2H), 3.25-3.00 (m, 4H), 2.98-2.88 (m, 3H), 2.85 (dd, 5H), 2.77 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.32-2.06 (m, 2H), 1.87-1.65 (m, 7H), 1.65-1.47 (m, 2H), 1.43 (brs., 2H), 1.35-1.26 (m, 3H), 1.01-0.81 (m, 6H)。
實施例14、式(I)所示化合物的磷酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(308 mg，0.436 mmol)溶於異丙醇(5 mL)中，加入磷酸(200mg，1.73 mmol，純度85%)，升溫至60℃，攪拌反應2小時，緩慢降溫至室溫，攪拌16小時。反應液過濾，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(520 mg，產率51.9%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：磷酸根離子含量為31.43%，表明該鹽中主成分與磷酸的莫耳比為1:3。
實施例15、式(I)所示化合物的磷酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(500 mg，0.706 mmol)溶於異丙醇(40 mL)中，升溫至40℃，加入預製的磷酸(369 mg，3.2 mmol，純度85%)的異丙醇(10 mL)溶液，40℃攪拌2小時，0℃攪拌30分鐘。反應液過濾，濾餅用異丙醇(1 mL×3)淋洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(660 mg，產率90%)。
所得產物的離子色譜(HPIC)檢測結果：磷酸根離子含量為29.08%，表明該鹽中主成分與磷酸的莫耳比為1:3。
實施例16、式(I)所示化合物的苯甲酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(55 mg，0.077 mmol)溶於異丙醇(1 mL)中，加熱到50℃，攪拌至全溶，加入預製的苯甲酸(38 mg，0.31 mmol)的異丙醇(0.3 mL)溶液，50℃攪拌2小時，緩慢降溫至室溫，攪拌16小時，反應液過濾，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(35 mg，產率54%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與苯甲酸的莫耳比為1:2。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d8.21-7.96 (m, 10H), 7.44-7.21 (m, 10H), 4.84 (d, 1H), 4.69-4.57 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.00-3.83 (m, 3H), 3.77 (brs., 2H), 3.31-3.24 (m, 3 H), 3.20 (s, 1H),2.97-2.81 (m, 4H), 2.76-2.60 (m, 2H),1.83-1.53 (m, 9H), 1.43 (brs, 2H), 1.28-1.18 (m, 3H), 0.95 (d, 3H), 0.91 (d, 3H)。
實施例17、式(I)所示化合物的富馬酸鹽的製備 將式(I)所示化合物(50 mg，0.0706 mmol)溶於異丙醇(0.5 mL)中，加入富馬酸(33 mg，0.28 mmol)，升溫至60℃，攪拌2小時，冷卻至室溫，過濾，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物(26 mg，產率44.6%)。
所得產物的1 H-NMR如下所示，核磁數據表明該鹽中主成分與富馬酸的莫耳比為1:2。
1 H-NMR (400MHz, CD3 OD) d 7.41-7.31 (m, 2H), 7.31-7.20 (m, 7H), 7.20-7.10 (m, 1H), 6.69 (s, 4H), 4.84 (dd, 1H), 4.73-4.60 (m, 1H), 4.37 (dd , 1H), 3.96-3.78 (m, 3H), 3.78-3.63 (m, 2H), 3.60-3.51 (m, 1H), 3.26-3.15 (m, 1H), 3.13-2.96 (m, 3H), 2.96-2.79 (m, 3H), 2.31-2.08 (m, 2H), 1.83-1.54 (m, 8H), 1.49-1.38 (m, 2H), 1.33-1.26 (m, 3H), 1.00-0.82 (m, 6H)。
實施例18、本發明晶型影響因素實驗 將式(I)所示化合物和式(I)化合物的乙酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽的樣品分別敞口平攤放置，考察在室溫、加熱(40℃、60℃)、光照(4500Lux)、高濕(RH75%、RH90%)條件下樣品的穩定性。取樣考察期為20天。 實驗結果：
表1、式(I)化合物遊離態和鹽的影響因素實驗結果
Figure 107143729-A0304-0001
 備註：符號“/”表示未測定。 實驗結論：
影響因素實驗結果表明： 游離態在光照、高溫條件下放置20天均有較大降解，高溫對遊離態穩定性影響大。
乙酸鹽(1:1 或 1:2)在光照、40℃、60℃條件下均有不同程度的降解。乙酸鹽(1:2)在高溫條件下穩定性差。在20天實驗完成後，高溫條件下的樣品測試離子色譜結果顯示：乙酸根含量大大降低。
鹽酸鹽(1:2)在光照、高溫條件下有略有降解；鹽酸鹽(1:3)在光照條件下略有降解，在其他條件下穩定。
檸檬酸鹽(1:2或1:3)在高溫60℃條件下有較大降解。
磷酸鹽(1:3)在光照、高溫條件下較穩定或略有降解。
建議各鹽型樣品在陰涼處、密封條件下、避光保存。
實施例19、本發明式(I)化合物不同鹽型長期加速穩定性實驗 將式(I)所示化合物的乙酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽的樣品在避光、密封條件下(內包裝為藥用低密度聚乙烯複合膜，外用鋁箔包裝)，濕度(60%RH)、溫度(4℃、25℃)、有無氮氣保護條件進行6個月的長期加速穩定性考察。 實驗結果
表2、式(I)化合物的鹽長期加速穩定性實驗結果
Figure 107143729-A0304-0002
 實驗結論：
長期加速穩定性實驗結果顯示：式(I)所示化合物的乙酸鹽(1:1)、鹽酸鹽(1:3)、檸檬酸鹽(1:1)、磷酸鹽(1:3)的無定型樣品於4℃、25℃60%RH，氮氣保護和無氮氣保護條件下放置6個月穩定性良好。
實施例20、式(I)所示化合物的製備可參考WO2017211272(申請號PCT/CN2017/087328，申請日2017.06.06)中的方法 4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸式(I)
Figure 02_image003
Figure 02_image005
第一步　 4-苄基 1-三級丁基 4-(((苄氧基)羰基)胺基)哌啶-1,4-二羧酸1b 將4-(((苄氧基)羰基)胺基)-1-(三級丁氧羰基)哌啶-4-羧酸1a (1.2 g，0.0032 mol，採用公知的方法“Bioorganic Medicinal Chemistry Letters , 2007, 7(9), 2448-2451”製備而得)，苄溴(0.65 g，0.0038 mol)，碳酸銫(2.1 g，0.0064 mol)溶於20 mLN ,N -二甲基甲醯胺中，室溫攪拌反應12小時。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取(30 mL×3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮後用薄層色譜法(以正己烷和乙酸乙酯為展開劑)純化所得殘餘物，得到標題產物1b (800 mg，產率：53%)。
第二步　 4-(((苄氧基)羰基)胺基)哌啶-4-羧酸苄酯鹽酸鹽1c 將1b (800 mg，1.71 mmol)溶於2 mL二氯甲烷中，加入2 mL 4M 氯化氫的1,4-二氧六環溶液，室溫攪拌反應4小時。反應液減壓濃縮，得到粗品標題產物1c (800 mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第三步　 (R )-1-(2-((((9H -茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-6-((三級丁氧羰基)胺基)己醯基)-4-(((苄氧基)羰基)胺基)哌啶-4-羧酸苄酯 1e 將粗品1c (800 mg，1.97 mmol)和(R )-2-((((9H -茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-6-((三級丁氧羰基)胺基)己酸1d (926 mg，1.97 mmol，採用公知的方法“ChemMedChem , 2015, 10(7), 1232-1239”製備而得)溶於20 mLN ,N -二甲基甲醯胺中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸酯(1.12 g，3 .0 mmol)和N ,N -二異丙基乙胺(0.7 mL，3.94 mmol)，室溫攪拌反應12小時。反應液倒入2 N檸檬酸溶液中，用乙酸乙酯萃取(30 mL×3)，合併有機相，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1e (1.6 g)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第四步　 (R )-1-(2-胺基-6-((三級丁氧羰基)胺基)己醯基)-4-(((苄氧基)羰基)胺基)哌啶-4-羧酸苄酯1f 將粗品1e (1.6 g，0.002 mol)溶於10 mL二氯甲烷中，加入10 mL哌啶，室溫攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮後用薄層色譜法(以二氯甲烷和甲醇為展開劑)純化所得殘餘物，得到標題產物1f (900 mg，產率：77%)。
第五步 (R )-2-((R )-2-(2-氯乙醯胺基)-3-苯基丙醯胺基)-4-甲基戊酸苄酯 1i 將(R )-2-((R )-2-(2-胺基-3-苯基丙醯胺基)-4-甲基戊酸苄酯1g (500 mg，1.36 mmol，採用專利申請“US20110212882A1”公開的方法製備而得)和三乙胺(275 mg，2.72 mmol)溶於10 mL二氯甲烷中，滴加入氯乙醯氯(230 mg，2 mmol)，室溫攪拌反應12小時。反應液倒入水中，用飽和氯化銨溶液洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1i (500 mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第六步 (R )-4-甲基-2-((R )-3-苯基-2-(2-(((R )-2-苯基丙基)胺基)乙醯胺基)丙醯胺基)戊酸苄酯1k 將粗品化合物1i (500 mg，1.12 mmol)和(R )-2-苯基丙-1-胺1j (228 mg，1.68 mmol，採用公知的方法“Angewandte Chemie,International Edition , 2003, 42(39), 4793-4795”製備而得)溶於10 mLN ,N -二甲基甲醯胺中，加入碘化鉀(372 mg，2.24 mmol)和碳酸鉀(309 mg，2.24 mmol)，升溫至60℃攪拌反應12小時。反應液冷卻至室溫，加入水，用二氯甲烷萃取(30 mL×3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1k (600 mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第七步 (9R ,12R )-9-苄基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三氧代-5-((R )-2-苯基丙基)-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三-13-酸苄酯1l 將粗品化合物1k (600 mg，1.1 mmol)溶於20 mL二氯甲烷中，加入二碳酸二三級丁酯(361 mg，1.66 mmol)和三乙胺(222 mg，2.2 mmol)，室溫攪拌反應12小時。反應液減壓濃縮，用薄層色譜法(以二氯甲烷和甲醇為展開劑)純化所得殘餘物，得到標題產物1l (580 mg，產率：82%)。
第八步 (9R ,12R )-9-苄基-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10-三氧代-5-((R )-2-苯基丙基)-3-氧雜-5,8,11-三氮雜十三-13-甲酸1m 將化合物1l (580 mg，0.9 mmol)溶於10 mL甲醇中，加入鈀碳(60 mg，催化量)，加畢，氫氣置換三次，室溫攪拌反應12小時。反應液用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1m (500 mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第九步 1-((9R ,12R ,15R )-9-苄基-15-(4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四氧代-5-((R )-2-苯基丙基)-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-醯基)-4-(((苄氧基)羰基)胺基)哌啶-4-羧酸苄酯 1n 將粗品化合物1m (365 mg，0.66 mmol)，1f (393 mg，0.66 mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸酯(376 mg，0.99 mmol)和N,N -二異丙基乙胺(0.16 mL，0.99 mmol)溶於10 mLN ,N -二甲基甲醯胺中，室溫攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮，用薄層色譜法(以二氯甲烷和甲醇為展開劑)純化所得殘餘物，得到標題產物1n (170 mg，產率：23%)。
第十步 4-胺基-1-((9R ,12R ,15R )-9-苄基-15-(4-((三級丁氧羰基)胺基)丁基)-12-異丁基-2,2-二甲基-4,7,10,13-四氧代-5-((R )-2-苯基丙基)-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-醯基)哌啶-4-羧酸 1o
將化合物1n (80 mg，0.0706 mmol)溶於10 mL甲醇中，加入鈀碳(10 mg，催化量)，加畢，氫氣置換三次，室溫攪拌反應12小時。反應液用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1o (60 mg)，產品不經純化直接進行下一步反應
第十一步 4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸三氟醋酸鹽1p
將粗品化合物1o (60 mg，0.066 mmol)溶於2 mL二氯甲烷中，加入1 mL 4 M氯化氫的1,4-二氧六環溶液，室溫攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮後用高效液相色譜法純化所得殘餘物，得到標題產物1p (30 mg，產率：55.6%)。 MS m/z (ESI): 708.6[M+1]
第十二步 4-胺基-1-((2R ,5R ,8R ,14R )-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸式(I) 將化合物1p (1 g，0.95 mmol)溶於10 mL水中，冰浴冷卻下，滴加入氨水至pH為7-8，攪拌反應0.5小時後，減壓濃縮，用高效液相色譜法製備純化，得到標題產物(600 mg，產率：89%)。 MS m/z (ESI): 708.6[M+1]
1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD) d 7.32-7.18 (m, 10H), 4.86-4.84 (m, 1H), 4.61 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 3.86 (brs., 1H), 3.83-3.58 (m, 3H), 3.24-3.03 (m, 3H), 2.96-2.72 (m, 4 H), 2.61 (dd, 1H), 2.52 (dd, 1H), 2.19 (brs., 2H), 1.83-1.53 (m, 9H), 1.44 (d, 2H), 1.18 (d, 3H), 0.96-0.90 (m, 6H)。 測試例1
1、實驗目的 本實驗的目的是為了測試式（I）化合物對人源KOR（h-KOR）受體的激動作用，根據EC50 大小評價化合物的體外活性。
2、h-KOR活性的測試
2.1實驗目的 本發明的化合物可以激活h-KOR受體，從而降低細胞內cAMP的水平；第二信使cAMP進入細胞核與DNA的CRE相結合，可啟動下游螢光素酶（Luciferase）的表達，螢光素酶與其基質反應可發出螢光，通過測定螢光信號反映化合物的激動活性。
2.2實驗方法 式（I）化合物激動h-KOR影響下游cAMP水平變化的活性通過以下的方法進行測試。 2.2.1實驗材料及儀器 1）實驗儀器 1. 酶標儀（PE，Vector3） 2）實驗材料
Figure 107143729-A0304-0003
 2.2.2實驗步驟 1）HEK293 /KOR/CRE單克隆細胞株的獲得 將人源KOR/pcDNA3.1(+)和CRE/pGL4.29轉入HEK293細胞株，通過在培養基中加入G418和潮黴素(Hygromycin)，並在96孔細胞培養板中篩選出HEK293 /KOR/CRE單克隆細胞株。 2）式（I）化合物對h-KOR激動作用實驗 HEK293/h-KOR/CRE單克隆細胞株在DMEM/高葡萄糖培養基（10%FBS,1mg/ml G418，200µg/ml潮黴素，混勻）中培養，每3天傳代一次。實驗當天以新鮮細胞培養基制取細胞懸液，20,000細胞/孔鋪96孔板（BD，#356692），5%二氧化碳 37℃培養。第二天，先將式（I）化合物溶解在純DMSO中濃度為20mM，再用DMSO配製成首個濃度200 nM，並以3倍依次稀釋成8個濃度，設置成空白和對照的孔加入90μl DMSO；用含10μM Forskolin的DMEM/高葡萄糖 (SH30243.01B，Hyclone)培養基稀釋20倍。取出第一天接種的細胞培養板，每孔分別加入10μl稀釋後藥物或對照（0.5%DMSO），輕輕振盪混勻，放置37℃培養4小時。在96孔細胞培養板中，每孔加入100μl 螢光素酶檢測液（Promega，# E6110），室溫放置5分鐘，採用Victor3.0測化學發光值。用Graphpad Prism軟件根據化合物各濃度與相應的信號值計算化合物的EC50 值。
2.3 測試結果 式（I）化合物激動h-KOR受體影響cAMP水平的EC50 =1 pM，該化合物對h-KOR受體具有明顯的激動作用。 藥代動力學評價 測試例2、犬藥代動力學測試
1、摘要 以Beagle犬為受試動物，應用LC/MS/MS法測定了Beagle犬靜脈注射給予式（I）所示化合物後不同時刻血漿中的藥物濃度。研究本發明化合物在Beagle犬體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特徵。
2、試驗方案
2.1 試驗藥品 式（I）化合物
2.2 試驗動物 Beagle犬雄性3只為1組，美迪西普亞醫藥科技（上海）有限公司提供。
2.3 藥物配製 稱取適量樣品，加入100%生理鹽水溶解。
2.4 給藥 Beagle犬3只，雄性，為1組；禁食一夜後分別靜脈注射給藥，給藥體積2ml/kg。
3、操作 靜脈組於給藥前及給藥後5 min,15min, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0, 12.0, 24.0 h由頸靜脈採血1.0 ml，置於肝素化試管中，3500 rpm離心10 min分離血漿，於-80°C保存。 用LC/MS/MS法測定靜脈注射給藥後Beagle犬血漿中的待測化合物含量。
4、Beagle犬藥代動力學參數結果 式（I）化合物的Beagle犬藥代動力學參數如下：
Figure 107143729-A0304-0004
 結論：該化合物的Beagle犬藥代性質良好。 測試例3、KOR激動劑治療大鼠角叉菜膠誘導的炎性痛實驗報告
1. 實驗目的 建立大鼠角叉菜膠炎性痛模型，評估KOR激動劑對大鼠炎性痛的治療作用。
2．實驗方法和實驗材料
2.1．實驗動物和飼養條件 實驗用Wistar雄性大鼠，購自上海斯萊克實驗動物有限公司（中國上海，合格證編號2015000513408，許可證SCXK（滬）2012-0002，購入時150-180g，5只/籠飼養，12/12小時光/暗週期調節，溫度23±1℃恒溫，濕度50～60 %，自由進食進水。動物購進後，進行適應性飼養7天以上開始實驗。
2.2．實驗藥品 式（I）化合物； λ-角叉菜膠（λ-Carrageenan）：批號為BCBP8978V，sigma產品。 0.9% 氯化鈉溶液（500 ml：4.5 g） 1%λ-角叉菜膠用生理鹽水配置後攪拌過夜呈果凍狀混懸液。 藥物劑量均按鹼基計算。
2.3．實驗設計和實驗方法 2.3.1.動物分組： 大鼠適應性飼養後，分組如下：
Figure 107143729-A0304-0005
 註：NS:配製角叉菜膠溶液時用的生理鹽水；i.v.：靜脈注射；s.c.：皮下注射。 2.3.2. 實驗方法[1] ： 實驗方法按照文獻1中（Kazunari Nakao等）的方法進行改進。炎性痛實驗在實驗前將大鼠按照體重隨機分組如下：空白對照組，模型組，0.1mg/kg組，0.3mg/kg組。每組大鼠8只。炎性痛造模採用1%角叉菜膠（100µl）對Wistar大鼠足墊進行皮下注射。4h後對大鼠進行足底觸痛測試評估其機械痛閾值，檢測前30min分別給予單次尾靜脈給藥（1 ml/kg），對照組和模型組給予相應的溶劑。 注：參考文獻1，CJ-023,423, a Novel, Potent and Selective Prostaglandin KOR Receptor Antagonist with Anti-hyperalgesic Properties[J].The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007,322(2):686–694.
2.4. 實驗儀器 電子觸覺測量儀（電子Von Frey）：UGO BASILE，型號38450。
2.5. 數據表達和統計學處理 實驗數據表示為平均數（Mean）±標準差（S.D.）。採用excel軟件t檢驗進行統計比較。將模型組與空白對照組數據進行分析比較，是否存在顯著數理統計意義，*P＜0.05表示模型組與對照組比較具有顯著性差異, **P＜0.01表示模型組與對照組比較具有高度顯著性差異。#P＜0.05表示模型組與給藥組比較具有顯著性差異, ##P＜0.01表示模型組與給藥組比較具有高度顯著性差異。
3. 結果： 空白對照組大鼠觸痛閾值為20g左右，模型組觸痛閾值為7.6g，與空白對照組比較，模型組大鼠觸痛閾值明顯下降（P ＜0.01）；與模型組比較，所有藥物均能明顯增加炎性大鼠的觸痛閾值（P＜0.01），0.1mg/kg、0.3mg/kg觸痛閾值分別為13.7g、23.2g，依次增加幅度分別為79.5%和204.5%，具有明顯的劑量依賴性（圖1）。
4. 討論 λ-角叉菜膠(carrageenan)是由水生植物鹿角菜中提取的膠體物質，具有過敏刺激作用。角叉菜膠單獨實驗即可誘發炎症，引起疼痛。本實驗通過建立角叉菜膠炎性痛模型，觀察大鼠給予KOR激動劑後的觸痛閾值變化情況，評價藥物對亞急性炎性痛的鎮痛作用及其作用強度。實驗採用電子觸痛儀測量大鼠對觸痛的反應情況，電子觸覺測量儀（e-VF）採用Ugo Basile原創設計，用於評估大、小鼠過敏症和觸誘發痛。該設備可自動記錄動物的受刺激時間和刺激強度。獨特的三棱鏡設計，使得實驗時觀察受試動物足底區域變得非常容易。測試過程中，設備可自行感應受試動物縮回受測爪，也可通過腳踏開關人為判斷。定位更加集中，比較適用於局部疼痛和神經性疼痛測定。
5. 結論 受試藥能改善大鼠炎性疼痛，且具有劑量依賴性。
雖然本發明已以實施例揭露如上，然其并非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1：式（I）化合物對角叉菜膠誘導的大鼠角叉菜膠炎性痛的影響。

Claims (15)

  1. 一種式(I)所示化合物4-胺基-1-((2R,5R,8R,14R)-2-(4-胺基丁基)-8-苄基-5-異丁基-4,7,10-三氧代-14-苯基-3,6,9,12-四氮雜十五-1-醯基)哌啶-4-羧酸的可藥用的鹽，
    Figure 107143729-A0305-02-0033-1
     所述可藥用的鹽選自乙酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽或富馬酸鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的可藥用的鹽，其特徵在於，所述式(I)所示化合物與酸(根)的莫耳比選自1：1~1：5。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的可藥用的鹽，其特徵在於，所述式(I)所示化合物與酸(根)的莫耳比選自1：1、1：2或1：3。
  4. 如申請專利範圍第3項所述的可藥用的鹽，其特徵在於，所述式(I)所示化合物與氯化氫分子的莫耳比選自1：1、1：2或1：3；所述式(I)所示化合物與磷酸分子的莫耳比選自1：3；所述式(I)所示化合物與檸檬酸分子的莫耳比選自1：1、1：2或1：3；所述式(I)所示化合物與苯甲酸分子的莫耳比選自1：2；所述式(I)所示化合物與富馬酸分子的莫耳比選自1：2。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的可藥用的鹽，其特徵在於，所述式(I)所示化合物與氯化氫分子的莫耳比選自1：3；所述式(I)所示化合物與檸檬酸分子的莫耳比選自1：1。
  6. 一種製備如申請專利範圍第4項所述可藥用的鹽的方法，其特徵在於，所述方法包括式(I)所示化合物與酸成鹽反應的步驟。
  7. 如申請專利範圍第6項所述的方法，其特徵在於，所述成鹽反應在溶劑中進行，所述溶劑選自醇類溶劑、鹵代烴類溶劑、醚類溶劑、腈類溶劑、醇類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑或鹵代烴類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑；所述醇類溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇，所述醚類溶劑選自乙醚、甲基三級丁基醚、異丙基醚或二氧六環，所述腈類溶劑選自乙腈，所述鹵代烴類溶劑選自二氯甲烷，所述醇類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑選自乙醇/異丙醚的混合溶劑或乙醇/異丙醇/異丙醚的混合溶劑，所述鹵代烴類溶劑與醚類溶劑的混合溶劑選自二氯甲烷/異丙醚的混合溶劑。
  8. 如申請專利範圍第7項所述的方法，其特徵在於，成鹽反應結束後還包括加入反溶劑、揮發溶劑或冷卻的步驟，所述反溶劑選自醚類溶劑，所述醚類溶劑選自乙醚、甲基三級丁基醚、異丙基醚或二氧六環。
  9. 一種製備如申請專利範圍第1項所述可藥用的鹽的方法，其特徵在於，所述可藥用的鹽的製備方法採用轉鹽方法，將三氟乙酸鹽轉為乙酸鹽。
  10. 如申請專利範圍第9項所述的方法，其特徵在於，所述轉鹽方法包括將(I)所示化合物的三氟乙酸鹽通過高效液相色譜經含有乙酸的水作為洗脫劑進行洗脫後，濃縮、乾燥得到式(I)所示化合物乙酸鹽的步驟。
  11. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其特徵在於，所述洗脫劑還包含乙酸銨、乙腈或乙酸銨/乙腈。
  12. 如申請專利範圍第10-11項中任一項所述的方法，其特徵在於，所述洗脫劑中乙酸的體積比為0.1%。
  13. 一種藥物組合物，其含有申請專利範圍第1-4任一項所述的可藥用的鹽和任選的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
  14. 一種如申請專利範圍第1-4中任一項所述的可藥用的鹽或申請專利範圍第13項所述的藥物組合物在製備預防和/或治療κ鴉片樣物質受體激動劑介導的相關疾病的藥物中的用途；所述疾病選自疼痛、炎症、瘙癢、水腫、低鈉血症、低鉀血症、腸阻塞、咳嗽和青光眼。
  15. 如申請專利範圍第14項所述的用途，其特徵在於，所述疾病選自疼痛，所述疼痛選自神經性疼痛、軀幹痛、內臟痛、皮膚痛、關節炎疼痛、腎結石疼痛、子宮痙攣、痛經、子宮內膜異位症、消化不良、外科手術後疼痛、醫療處理後疼痛、眼部疼痛、耳炎疼痛、爆發性癌症疼痛和胃腸(GI)功能紊亂相關的疼痛。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023536221A (ja) 2020-06-25 2023-08-24 ヒューマンウェル ファーマシューティカル ユーエス 医学的障害の治療のためのペプチド
CN113624898B (zh) * 2021-08-23 2023-08-25 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014089019A1 (en) * 2012-12-03 2014-06-12 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Methods and compositions for treating vasomotor symptoms
CN104271552A (zh) * 2012-03-05 2015-01-07 雷迪博士实验室有限公司 作为kappa阿片样物质受体(kor)激动剂的取代的杂环乙酰胺
US20160250277A1 (en) * 2013-10-28 2016-09-01 Cara Therapeutics, Inc. Peripheral kappa opioid receptor agonists for preventing, inhibiting or treating nausea and vomiting
TW201742858A (zh) * 2016-06-07 2017-12-16 Jiangsu hengrui medicine co ltd 苯基丙醯胺類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5965701A (en) 1997-12-23 1999-10-12 Ferring Bv Kappa receptor opioid peptides
US8906859B2 (en) 2006-11-10 2014-12-09 Cera Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
PT2064228E (pt) * 2006-11-10 2012-12-10 Cara Therapeutics Inc Amidas peptídicas sintéticas
US7842662B2 (en) 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
EP2062909A1 (en) * 2007-11-21 2009-05-27 SOLVAY (Société Anonyme) Peptide production and purification process
US8809278B2 (en) * 2008-07-11 2014-08-19 University Of Kansas Cyclic tetrapeptides
TW201012829A (en) * 2008-09-22 2010-04-01 Ipsen Mfg Ireland Ltd Process for the synthesis of (Aib8,35)hGLP-1(7-36)-NH2
US20150150935A1 (en) * 2012-06-05 2015-06-04 Cara Therapeutics, Inc. Peripheral kappa receptor agonists for reducing pain and inflammation
WO2014184356A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Dr. August Wolff Gmbh & Co. Kg Arzneimittel Perhydroquinoxaline derivatives useful as analgesics
MX2016016479A (es) * 2014-06-26 2017-04-10 Maruishi Pharma Metodo para producir un pentapeptido sintetico.
JP7028746B2 (ja) 2018-10-05 2022-03-02 株式会社日立製作所 質問生成装置および質問生成方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104271552A (zh) * 2012-03-05 2015-01-07 雷迪博士实验室有限公司 作为kappa阿片样物质受体(kor)激动剂的取代的杂环乙酰胺
WO2014089019A1 (en) * 2012-12-03 2014-06-12 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Methods and compositions for treating vasomotor symptoms
US20160250277A1 (en) * 2013-10-28 2016-09-01 Cara Therapeutics, Inc. Peripheral kappa opioid receptor agonists for preventing, inhibiting or treating nausea and vomiting
TW201742858A (zh) * 2016-06-07 2017-12-16 Jiangsu hengrui medicine co ltd 苯基丙醯胺類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用

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