ES2354607T3 - Procedimiento y aparato para producir liposomas. - Google Patents

Procedimiento y aparato para producir liposomas. Download PDF

Info

Publication number
ES2354607T3
ES2354607T3 ES03737789T ES03737789T ES2354607T3 ES 2354607 T3 ES2354607 T3 ES 2354607T3 ES 03737789 T ES03737789 T ES 03737789T ES 03737789 T ES03737789 T ES 03737789T ES 2354607 T3 ES2354607 T3 ES 2354607T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
solution
lipid
organic
liposome
aqueous solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES03737789T
Other languages
English (en)
Inventor
Ian Maclachlan
Lloyd Jeffs
Cory Giesbrecht
Lorne R. Palmer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Protiva Biotherapeutics Inc
Original Assignee
Protiva Biotherapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=30000947&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2354607(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Protiva Biotherapeutics Inc filed Critical Protiva Biotherapeutics Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2354607T3 publication Critical patent/ES2354607T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Un procedimiento para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho procedimiento: proporcionar una solución acuosa en un primer depósito; proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica que encapsula el producto terapéutico; caracterizado porque la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.

Description

Procedimiento y aparato para producir liposomas.
Antecedentes de la invención
Se conocen ya muchos sistemas para administrar sustancias activas, tales como liposomas, nanopartículas, partículas poliméricas, inmunocomplejos y complejos de ligando y ciclodextrinas (véase, Drug Transport in antimicrobial and anticancer chemotherapy. G. Papadakou Ed., CRC Press, 1995). Los liposomas se preparan típicamente en el laboratorio mediante sonicación, diálisis con detergente, inyección de etanol o dilución, extrusión con prensa francesa, infusión de éter y evaporación de fase inversa. Los liposomas con múltiples bicapas se conocen como vesículas lipídicas multilamelares (MLV). Las MLV son candidatos para fármacos de liberación temporal debido a que los fluidos atrapados entre las capas solo se liberan a medida que se degrada cada membrana. Los liposomas con una bicapa única se conocen como vesículas lipídicas unilamelares (UV). Las UV pueden preparase pequeñas (SUV) o grandes
(LUV).
Algunos de los procedimientos anteriores para la producción de liposomas imponen condiciones severas o extremas que pueden dar como resultado la desnaturalización del material fosfolipídico sin tratar y fármacos encapsulados. Además, estos procedimientos no pueden escalarse fácilmente para una producción en masa de grandes volúmenes de liposomas. Además, la formación de vesículas lipídicas por dilución convencional con etanol, implica la inyección o adición en gotas de un lípido en un tampón acuoso. Las vesículas resultantes son típicamente heterogéneas en tamaño y contienen una mezcla de vesículas unilamelares y multilamelares.
Los liposomas convencionales se formulan para portar agentes terapéuticos contenidos dentro del espacio interior acuoso (fármacos solubles en agua) o repartidos en la capa o capas lipídicas (fármacos insolubles en agua). Los agentes activos que tienen semividas cortas en el torrente sanguíneo son particularmente adecuados para su suministro mediante liposomas. Se sabe que muchos agentes antineoplásicos, por ejemplo, tienen una semivida corta en el torrente sanguíneo de modo que su uso parenteral no es viable. Sin embargo, el uso de liposomas para suministro específico de sitio de agentes activos mediante el torrente sanguíneo está limitado gravemente por el rápido aclaramiento de liposomas de la sangre por células del sistema reticuloendotelial (SRE).
El documento EP-A-1 203 614 desvela técnicas para la preparación de vesículas lipídicas usando un aparato que tiene un primer conducto (fase lipídica) conectado a un segundo conducto (fase polar) de modo que las porciones exteriores de los conductos forman una superficie de contacto común (orificio). El orificio se dispone de modo que la fase lipídica pueda pasar de forma sustancialmente perpendicular a la dirección del flujo de la fase polar.
El documento WO 02/43699 desvela un procedimiento para preparar liposomas grandes (es decir, de 1 a 8 micrómetros de tamaño) que contienen una sustancia farmacéutica atrapada por infusión de una solución de alcohol que contiene lípidos directamente en una solución de polímero acuoso, tal como una solución de polietilenglicol (PEG).
El documento EP-A-1 013 268 desvela un procedimiento para producir liposomas o emulsiones mediante pulverización de una solución oleosa y una solución acuosa en una boquilla de mezcla, en la que los liposomas o emulsiones se forman en la bruma cuando las soluciones nebulizadas colisionan entre sí.
El documento WO 00/29103 desvela un procedimiento para preparar liposomas en el que las fases lipídica y acuosa se introducen en una cámara de premezcla con una alta velocidad a 90º entre sí, creando de este modo un flujo turbulento. De hecho, el premezclador se diseña para crear un vórtice turbulento mediante el cual una corriente de componente se inyecta por medio de alta presión en una segunda corriente de componente a 90º entre sí o ambas corrientes se inyectan por medio de alta presión a 90º entre sí. Véanse, por ejemplo, las Figuras 3 y 10 del documento WO 00/29103.
El documento WO 91/16039 desvela un procedimiento para producir liposomas mediante la adición de una solución acuosa directamente en una solución lipídica orgánica presente en un recipiente de reacción, seguido de la mezcla de los componentes con agitación fuerte. Véase, por ejemplo, página 6, líneas 1-7 y Ejemplo 1 del documento WO 91/16039.
El documento US-A-5 653 996 desvela un procedimiento para producir liposomas mediante la pulverización de una solución lipídica orgánica en o bajo la superficie de una solución de tampón acuosa. Véase, por ejemplo, col. 4, líneas 7-14, Figura 1 y la reivindicación 1 del documento US-A-5 653 996.
Isele U y col. en Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 83, nº. 11, Noviembre 1994, págs. 1608-1616 desvela un dispositivo de mezcla en el que las soluciones acuosa y orgánica se bombean en la cámara de mezcla desde el mismo lado. Véase, por ejemplo, la Figura 1 en la página 1069. Por lo tanto, las soluciones acuosa y orgánica no se introducen en el ambiente de mezcla en ningún ángulo particular.
El documento EP-A-0 055 576 desvela un procedimiento para preparar liposomas mediante la dispersión de una solución lipídica que contiene dos disolventes orgánicos diferentes en una solución acuosa. En particular, D9 enseña que el procedimiento preferido para la formación de la dispersión es mediante el pase de la solución lipídica a través de un filtro microporoso (es decir, membrana de policarbonato) antes de que entre en contacto con la solución acuosa presente en el dispersador. Véase, por ejemplo, página 10, líneas 19-26 y Ejemplos 1-IV del documento EP-A-0 055 576.
La patente de Estados Unidos nº 5.478.860, que se expidió a Wheeler y col., el 26 de Diciembre de 1995 y que se incorpora en el presente documento por referencia, desvela composiciones de microemulsión para el suministro de compuestos hidrófobos. Dichas composiciones tienen una diversidad de usos. En una realización, los compuestos hidrófobos son agentes terapéuticos que incluyen fármacos. La patente también desvela procedimientos para suministro in vitro e in vivo de compuestos hidrófobos a células.
La publicación de PCT WO01/05373 de Knopov, y col., que se incorpora por referencia en el presente documento, desvela técnicas para preparar vesículas lipídicas usando un procedimiento de tipo inyección de etanol con un mezclador estático que proporciona un ambiente turbulento (por ejemplo, números de Reynolds > 2000). A continuación pueden cargarse agentes terapéuticos después de la formación de las vesículas.
A pesar de los aparentes avances de la patente de Estados Unidos nº 5.478.860 y el documento WO01/05373, existe una necesidad de procedimientos y aparatos para formular y producir vesículas lipídicas y en particular vesículas lipídicas que encapsulan un agente terapéutico tal como un ácido nucleico. La presente invención satisface esta y otras necesidades.
Breve sumario de la invención
La presente invención proporciona procedimientos y aparato para preparar vesículas lipídicas que contienen opcionalmente un agente terapéutico. El agente terapéutico puede incluir, por ejemplo, una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, un fármaco o similares. La presente invención puede usarse para formar vesículas lipídicas que contienen ADN plasmídico encapsulado o fármacos de moléculas pequeñas. En un aspecto, las vesículas lipídicas se preparan rápidamente a baja presión y el enfoque es completamente escalable. En ciertas realizaciones preferidas, el procedimiento no implica un mezclador estático o equipamiento de extrusión especializado.
Como tal, en una realización, la presente invención proporciona un procedimiento para producir una vesícula lipídica, preferentemente un liposoma. El procedimiento comprende proporcionar una solución acuosa en un primer depósito; proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea un liposoma que encapsula el producto terapéutico. El procedimiento se caracteriza por que la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
En ciertos aspectos, la solución acuosa tal como un tampón, comprende un producto terapéutico, de modo que el producto terapéutico se encapsule en el liposoma.
Los productos terapéuticos adecuados incluyen, sin limitación, una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip (ARN de interferencia pequeño), ADN precondensado y un antígeno. En ciertos aspectos preferidos, el producto terapéutico es ácido nucleico.
En ciertos aspectos, el producto terapéutico es un ácido nucleico incluido en la solución acuosa. En ciertos aspectos, el producto terapéutico es lipófilo y está incluido en la solución lipídica orgánica. En ciertos aspectos, la eficacia de la encapsulación del producto terapéutico inicial es tan alta como aproximadamente el 90%.
En otra realización más, la presente invención proporciona un aparato para producir una vesícula lipídica, preferentemente un liposoma, que encapsula un producto terapéutico. El aparato comprende un primer depósito para contener una solución acuosa; un segundo depósito para contener una solución lipídica orgánica, en el que una de la solución acuosa y de la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico. El aparato también comprende un mecanismo de bomba configurado para bombear dichas soluciones acuosa y lipídica orgánica en una región de mezcla a caudales sustancialmente iguales. Durante el funcionamiento, la solución lipídica orgánica se mezcla con dicha solución acuosa en la región de mezcla para formar de forma sustancialmente instantánea un liposoma con producto terapéutico encapsulado. El aparato se caracteriza por que la región de mezcla incluye un conector T, introduciéndose dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
Estos y otros aspectos resultarán más evidentes cuando se lean con los dibujos adjuntos y las descripciones detalladas siguientes.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 proporciona un diagrama de flujo para un procedimiento de fabricación de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 2 proporciona un esquema de un procedimiento para preparar liposomas en una realización de la presente invención.
La Figura 3 proporciona un esquema de un aparato de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 4 proporciona un esquema de un aparato que tiene un sistema de ultrafiltración de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 5 muestra el efecto de variar la concentración de etanol de la solución lipídica inicial en el diámetro medio de SPLP y encapsulación de ADN. La eficacia de encapsulación de ADN y los tamaños de vesículas se determinaron después de la etapa de dilución.
La Figura 6 muestra el efecto de variar el pH de la solución plasmídica inicial en el diámetro medio de SPLP y encapsulación de ADN. La eficacia de encapsulación de ADN y los tamaños de vesículas se determinaron después de la etapa de dilución.
La Figura 7 muestra el efecto de variar el pH del tampón usado para la etapa de dilución en la eficacia de encapsulación de ADNp.
La Figura 8 muestra el efecto de variar la concentración salina del tampón usado para la etapa de dilución en la eficacia de encapsulación de ADNp.
La Figura 9A-B muestra un procedimiento esquemático de preparación de liposomas de la presente invención.
La Figura 10 muestra la encapsulación de safranina en ciertos liposomas de la presente invención.
La Figura 11 muestra un procedimiento esquemático de preparación de liposomas de la presente invención.
La Figura 12 ilustra una comparación entre una realización de la presente invención y un procedimiento de goteo de etanol para encapsular ADNp.
La Figura 13 muestra un conector T y la dinámica de flujo asociada de acuerdo con una realización.
La Figura 14 muestra diversos parámetros asociados con el flujo del conector T de la Figura 13.
Descripción detallada de la invención y realizaciones preferidas I. Definiciones
La expresión "ácido nucleico" se refiere a un polímero que contiene al menos dos nucleótidos. Los "nucleótidos" contienen un azúcar desoxiribosa (ADN) o ribosa (ARN), una base y un grupo fosfato. Los nucleótidos se enlazan entre sí a través de los grupos fosfato. Las "bases" incluyen purinas y pirimidinas, que incluyen adicionalmente los compuestos naturales adenina, timina, guanina, citosina, uracilo, inosina y análogos naturales y derivados sintéticos de purinas y pirimidinas, que incluyen, sin limitación, modificaciones que sitúan nuevos grupos reactivos tales como, sin limitación, aminas, alcoholes, tioles, carboxilatos y alquilaluros.
El ADN puede estar en forma de antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), cassetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico o derivados de estos grupos. El ARN puede estar en forma de ARN de oligonucleótido, ARNt (ARN de transferencia), ARNnp (ARN nuclear pequeño), ARNr (ARN ribosomal), ARNm (ARN mensajero), ARN antisentido, ARNip (ARN de interferencia pequeño), ribozimas, secuencias quiméricas o derivados de estos grupos.
"Antisentido" es un polinucleótido que interfiere con la función de ADN y/o ARN. Esto puede dar como resultado la supresión de la expresión. Los ácidos nucleicos naturales tienen una cadena principal de fosfato, los ácidos nucleicos artificiales pueden contener otros tipos de cadenas principales y bases. Estos incluyen APN (ácidos péptido nucleicos), fosfotionatos y otras variantes de la cadena principal de fosfato de ácidos nucleicos nativos. Además, el ADN y el ARN pueden ser monocatenarios, bicatenarios, tricatenarios o tetracatenarios.
El término "gen" se refiere a una secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, ADN) que comprende secuencias codificantes necesarias para la producción de un polipéptido o precursor (por ejemplo, virus del herpes simple). El polipéptido puede codificarse por una secuencia codificante de longitud completa o por cualquier parte de la secuencia codificante siempre que la actividad o propiedades funcionales deseadas (por ejemplo, actividad enzimática, unión a ligando, transducción de señales y similares) de la longitud completa o del fragmento se conserven.
Como se usa en el presente documento, la expresión "solución acuosa" se refiere a una composición que se comprende completamente, o en parte, de agua.
Como se usa en el presente documento, la expresión "solución lipídica orgánica" se refiere a una composición que se comprende completamente, o en parte, de un disolvente orgánico que tiene un lípido.
El término "lípido" se refiere a un grupo de compuestos orgánicos que son ésteres de ácidos grasos y se caracterizan por ser insolubles en agua pero solubles en muchos disolventes orgánicos. Habitualmente se dividen al menos en tres clases: (1) "lípidos simples" que incluyen grasas y aceites así como ceras, (2) "lípidos compuestos" que incluyen fosfolípidos y glucolípidos; (3) "lípidos derivados" tales como esteroides.
La expresión "lípido anfipático" se refiere, en parte, a cualquier material adecuado en el que la parte hidrófoba del material lipídico se orienta en una fase hidrófoba, mientras que una parte hidrófila se orienta hacia la fase acuosa. Los lípidos anfipáticos son habitualmente el componente principal de una vesícula lipídica. Las características hidrófilas derivan de la presencia de grupos polares o cargados tales como carbohidratos, grupos fosfato, carboxílico, sulfato, amino, sulfhidrilo, nitro, hidroxi y otros similares. Puede conferirse hidrofobicidad mediante la inclusión de grupos apolares que incluyen, sin limitación, grupos de hidrocarburos alifáticos de cadena larga saturados e insaturados y dichos grupos sustituidos por uno más grupos cicloalifáticos o heterocíclicos aromáticos. Los ejemplos de compuestos anfipáticos incluyen, sin limitación, fosfolípidos, aminolípidos y esfingolípidos. Los ejemplos representativos de fosfolípidos incluyen, sin limitación, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinotisol, ácido fosfatídico, palmitoiloleoil fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidilcolina, diolelilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina o dilinoleoilfosfatidilcolina. Otros compuestos que carecen de fósforo, tales como esfingolípidos, familias de glucoesfingolípidos, diacilgliceroles y \beta-aciloxiácidos, también están dentro del grupo designado como lípidos anfipáticos. Adicionalmente, el lípido anfipático descrito anteriormente puede mezclarse con otros lípidos incluyendo triglicéridos y esteroles.
La expresión "lípido aniónico" se refiere a cualquier lípido que está cargado negativamente a pH fisiológico. Estos lípidos incluyen, sin limitación, fosfatidilglicerol, cardiolipina, diacilfosfatidilserina, ácido diacilfosfatídico, N-dodecanoilfosfatidiletanolaminas, N-succinil fosfatidiletanolaminas, N-glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilgliceroles y otros grupos modificadores aniónicos unidos a lípidos neutros.
La expresión "lípido catiónico" se refiere a cualquiera de una variedad de especies lipídicas que portan una carga positiva neta a un pH selectivo, tal como pH fisiológico. Dichos lípidos incluyen, sin limitación, cloruro de N,N-dioelil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); cloruro de N-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio ("DDAB"); cloruro de N-(2,3-dioleoiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTAP"); 3-(N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil)colesterol ("DC-Col") y bromuro de N-(1,2-dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio ("DMRIE"). Adicionalmente, están disponibles varias preparaciones comerciales de lípidos catiónicos que pueden usarse en la presente invención. Estas incluyen, por ejemplo, LIPOFECTIN® (liposomas catiónicos disponibles en el mercado que comprenden DOTMA y 1,2-dioleoil-sn-3-fosfoetanolamina ("DOPE") de GIBCOBRL, Grand Island, Nueva York, Estados Unidos); LIPOFECTAMINE® (liposomas catiónicos disponibles en el mercado que comprenden N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N-(2-(espermincarboxamido)etil)-N,N-dimetilamonio trifluoroacetato ("DOSPA") y ("DOPE"), de GIBCO/BRL); y TRANSFECTAM® (lípidos catiónicos disponibles en el mercado que comprenden dioctadecilamidoglicil carboxiespermina ("DOGS") en etanol de Promega Corp., Madison, Wisconsin, Estados Unidos). Los siguientes lípidos son catiónicos y tienen una carga positiva a pH por debajo del fisiológico: DODAP, DODMA, DMDMA y similares.
"Vesícula lipídica" se refiere a cualquier composición lipídica que pueda usarse para suministrar un compuesto incluyendo, sin limitación, liposomas, en la que se encapsula un volumen acuoso mediante una bicapa lipídica anfipática; o en la que los lípidos revisten un interior que comprende un componente molecular grande, tal como un plásmido, con un interior acuoso reducido; o agregados lipídicos o micelas, en las que el componente encapsulado está contenido dentro de una mezcla lipídica relativamente desordenada.
Como se usa en el presente documento, "encapsulado lipídico" puede referirse a una formulación lipídica que proporciona un compuesto con encapsulación completa, encapsulación parcial o ambas.
Como se usa en el presente documento, el término "SPLP" se refiere a una partícula lipídica plasmídica estable. Una SPLP representa una vesícula de lípidos que revisten un interior que comprende un ácido nucleico tal como un plásmido con un interior acuoso reducido.
II. General
La presente invención proporciona procedimientos y aparato para preparar vesículas lipídicas. Los procedimientos pueden usarse para preparar vesículas lipídicas que poseen una amplia serie de componentes lipídicos que incluyen, sin limitación, lípidos catiónicos, lípidos aniónicos, lípidos neutros, lípidos de polietilenglicol (PEG), lípidos poliméricos hidrófilos, lípidos fusogénicos y esteroles. Pueden incorporarse principios activos hidrófobos en el disolvente orgánico (por ejemplo, etanol) con el lípido y pueden añadirse ácidos nucleicos y principios activos hidrófilos a un componente acuoso. En ciertos aspectos, los procedimientos de la presente invención pueden usarse en la preparación de microemulsiones cuando una monocapa lipídica rodea a un núcleo de base oleosa. En ciertos aspectos preferidos, los procedimientos y aparato se usan en la preparación de vesículas lipídicas o liposomas, encapsulándose un agente terapéutico dentro del liposoma coincidiendo con la formación del liposoma.
III. Procedimientos de Preparación
La Figura 1 es un ejemplo de un diagrama de flujo representativo 100 de un procedimiento de la presente invención. Este diagrama de flujo es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto habitual en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
En un aspecto, el presente procedimiento proporciona una solución lipídica 110 tal como un lípido de uso clínico sintetizado bajo la Buena Práctica de Fabricación (GMP), que se solubiliza posteriormente en una solución orgánica 120 (por ejemplo, etanol). De forma similar, un producto terapéutico, por ejemplo, un agente activo terapéutico tal como ácido nucleico 112 u otro agente, se prepara bajo GMP. A partir de entonces, una solución de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) 115 que contiene un tampón (por ejemplo, de citrato) se mezcla con una solución lipídica 120 solubilizada en un alcanol inferior para formar una formulación liposomal 130. En aspectos preferidos de la presente invención, el agente terapéutico se "atrapa de forma pasiva" en el liposoma coincidiendo sustancialmente con la formación del liposoma. Sin embargo, los expertos en la materia se darán cuenta de que los procedimientos y el aparato de la presente invención son igualmente aplicables al atrapamiento o carga activos de los liposomas después de la formación de la vesícula.
De acuerdo con los procedimientos y el aparato de la presente invención, la acción de introducir de forma continua soluciones lipídicas y de tampón en un ambiente de mezcla, tal como en una cámara de mezcla, provoca una dilución continua de la solución lipídica con la solución de tampón, produciendo de este modo un liposoma de forma sustancialmente instantánea tras la mezcla. Como se usa en el presente documento, la frase "diluir continuamente una solución lipídica con una solución de tampón" (y variaciones) significa generalmente que la solución lipídica se diluye de forma suficientemente rápida en un proceso de hidratación con suficiente fuerza para efectuar la generación de vesículas. Mediante la mezcla de la solución acuosa con la solución lipídica orgánica, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas en presencia de la solución de tampón (acuosa) para producir un liposoma.
En los procedimientos de la presente invención, la solución lipídica orgánica preferentemente incluye un disolvente orgánico, tal como un alcanol inferior. En un aspecto, los liposomas se diluyen después 140 con un tampón (por ejemplo, de citrato) para aumentar el atrapamiento de ácido nucleico (por ejemplo, plasmídico). Antes de la concentración de la muestra 160, se retira el agente terapéutico libre (por ejemplo, ácido nucleico) mediante el uso, por ejemplo, de un cartucho de intercambio aniónico 150. Además, mediante el uso de una etapa de ultrafiltración 170 para retirar el alcanol, la muestra se concentra (por ejemplo, a aproximadamente 0,9 mg/ml de ADN plasmídico), se retira el alcanol y se reemplaza el tampón con un tampón de sustitución (por ejemplo, con un tampón salino) 180. A partir de entonces, la muestra se filtra 190 y se introduce en viales 195. El procedimiento se discutirá ahora en más detalle en el presente documento a continuación usando las etapas como se exponen en la Figura 1.
1. Solubilización de lípidos y disolución del agente terapéutico
En una realización, las vesículas de liposoma de los presentes procedimientos son formulaciones de partícula lipídica plasmídica estable (es decir, SPLP). Los expertos en la materia apreciarán que la siguiente descripción solamente tiene fines ilustrativos. Los procedimientos de la presente invención son aplicables a una amplia serie de tipos y tamaños de vesículas lipídicas. Estas vesículas lipídicas incluyen, sin limitación, vesículas lipídicas bicapa sencillas conocidas como vesículas lipídicas unilamelares que pueden prepararse pequeñas (SUV) o grandes (LUV), así como vesículas lipídicas multilamelares (MLV). Las vesículas adicionales incluyen micelas, partículas lípido-ácido nucleico, virosomas y similares. Los expertos en la materia conocerán otras vesículas lipídicas para las que los procedimientos y el aparato de la presente invención serán adecuados.
El tamaño preferido para los liposomas preparados de acuerdo con los presentes procedimientos y aparato están entre aproximadamente 50 y 550 nm de diámetro. En ciertos aspectos preferidos, la preparación de liposomas tiene una distribución de tamaños en la que el tamaño medio (por ejemplo, el diámetro) es de aproximadamente 70 nm a aproximadamente 300 nm y más preferentemente el tamaño medio es menor de aproximadamente 200 nm, tal como aproximadamente 150 nm o menos (por ejemplo, aproximadamente 100 nm).
En ciertos aspectos, la formulación de liposomas (por ejemplo, formulación de SPLP) de la presente invención incluye cuatro componentes lipídicos: un fosfolípido; colesterol; un lípido de PEG; y un lípido catiónico. En un aspecto preferido el fosfolípido es DSPC, el lípido de PEG es PEG-DSG y el lípido catiónico es DODMA. En un aspecto preferido, la composición molar es aproximadamente 20:45:10:25 DSPC:Col:PEG-DSG:DODMA. En ciertas realizaciones, la concentración de disolvente orgánico en la que los lípidos se solubilizan es de aproximadamente 45% v/v a aproximadamente 90% v/v. En ciertos aspectos preferidos, el disolvente orgánico es un alcanol inferior. Los alcanoles inferiores adecuados incluyen, sin limitación, metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, sus isómeros y combinaciones de los mismos. En una realización, el disolvente es preferentemente etanol con un volumen de aproximadamente 50-90% v/v. Preferentemente, los lípidos ocupan un volumen de aproximadamente 1 ml/g a aproximadamente 5 ml/g.
Los lípidos se solubilizan 120 usando, por ejemplo, un agitador superior a una temperatura adecuada. En un aspecto, la concentración de lípidos total de la solución es de aproximadamente 15,1 mg/ml (20 mM). En ciertos aspectos preferidos, el agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) se incluye en una solución acuosa (por ejemplo, tampón) y se diluye hasta una concentración final. En un aspecto preferido, por ejemplo, la concentración final es de aproximadamente 0,9 mg/mg en tampón de citrato, con un pH de aproximadamente 4,0. En este caso, el volumen de la solución de plásmido es la misma que la solución de alcanol-lípido. En una realización, la preparación de la solución de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) se realiza en un recipiente de acero inoxidable con envoltura con un mezclador superior. La muestra no necesita calentarse para prepararse, aunque en ciertos casos está a la misma temperatura que la solución lipídica antes de la formación de vesículas lipídicas.
En una realización, el agente terapéutico se incluye en la solución lipídica. En ciertos aspectos preferidos, el agente terapéutico en la solución lipídica es lipófilo. Los agentes lipófilos adecuados incluyen taxol, derivados del taxol, incluyendo, por ejemplo, protax III y paclitaxol, benzoporfirinas lipófilas, verteporfina el profármaco lipídico de foscarnet, 1-O-octadecil-sn-glicerol-3-fosfonoformato (ODG-PFA), dioleoil[3H]yododesoxiuridina ([3H]IDU-O12), péptidos inhibidores de la proteasa de VIH derivatizados con lípidos tales como: iBOC-[L-Phe]-[D-beta-Nal]-Pip-[alfa-(OH)-Leu]-Val (7194) y otros fármacos o profármacos derivatizados con lípidos.
2. Formación de Liposomas
Después de que las soluciones, por ejemplo, solución lipídica 120 y solución de agente terapéutico acuosa (por ejemplo, ácido nucleico) 115, se han preparado, se mezclan entre sí 130 usando, por ejemplo, un mezclador de bomba peristáltica. En un aspecto, las soluciones se bombean a caudales sustancialmente iguales en un ambiente de mezcla. El ambiente de mezcla incluye un conector "T" o cámara de mezcla. En este caso, se prefiere que las líneas de fluido, y por lo tanto los flujos de fluido, se encuentren en una apertura estrecha dentro del conector "T" como flujos opuestos a aproximadamente 180º entre sí.
Tras el encuentro y mezcla de los flujos de solución en el ambiente de mezcla, se forman vesículas lipídicas de forma sustancialmente instantánea. Las vesículas lipídicas se forman cuando una solución orgánica que incluye un lípido disuelto y una solución acuosa (por ejemplo, tampón) se mezclan de forma simultánea y continua. De forma ventajosa, y sorprendentemente, mediante la mezcla de la solución acuosa con la solución lipídica orgánica, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas hasta producir de forma sustancialmente instantánea un liposoma. El mecanismo de bomba puede configurarse para proporcionar caudales equivalentes o diferentes de las soluciones lipídica y acuosa en el ambiente de mezcla que crea vesículas lipídicas en un ambiente de alto alcanol.
De forma ventajosa, y sorprendentemente, los procedimientos y aparato para mezclar la solución lipídica y la solución acuosa como se enseña en el presente documento posibilitan la encapsulación del agente terapéutico en el liposoma formado de forma sustancialmente coincidente con la formación del liposoma con una eficacia de encapsulación de hasta aproximadamente el 90%. Pueden usarse etapas de procesamiento adicionales como se analiza en el presente documento para refinar adicionalmente la eficacia de encapsulación y la concentración si se desea.
En un aspecto preferido, usando los procedimientos y aparato de la presente invención, es posible formar vesículas lipídicas de forma instantánea en un procedimiento continuo de dos etapas que es completamente escalable. En un aspecto, las vesículas lipídicas se forman con un diámetro medio de menos de aproximadamente 200 nm, lo que no requiere una reducción de tamaño adicional mediante procedimientos de alta energía tales como extrusión de membrana, sonicación o microfluidización.
En una realización, las vesículas lipídicas se forman cuando los lípidos disueltos en un disolvente orgánico (por ejemplo, etanol) se diluyen de una manera por etapas mediante su mezcla con una solución acuosa (por ejemplo, tampón). Esta dilución controlada por etapas se consigue mezclando las corrientes acuosa y lipídica entre sí en una apertura, tal como un conector T. Las concentraciones de lípidos, disolventes y soluto resultantes pueden mantenerse constantes a lo largo del procedimiento de formación de vesículas.
Una realización del proceso de la invención se muestra en la Figura 2. En un aspecto, usando los procedimientos de la presente invención, se prepara una vesícula mediante una dilución por etapas de dos fases sin gradientes. Por ejemplo, en la primera dilución por etapas, las vesículas se forman en un ambiente de alto alcanol (por ejemplo, etanol) (por ejemplo, de aproximadamente 30% a aproximadamente 50% v/v de etanol). Estas vesículas pueden estabilizarse después mediante la disminución de la concentración de alcanol (por ejemplo, etanol) hasta menos o igual a aproximadamente el 25% v/v, tal como de aproximadamente el 17% v/v a aproximadamente el 25% v/v, de una manera por etapas. En aspectos preferidos, con el agente terapéutico presente en la solución acuosa, o en a solución lipídica, el agente terapéutico se encapsula de forma coincidente con la formación del liposoma.
Como se muestra en la Figura 2, en una realización, los lípidos se disuelven inicialmente en un ambiente de alcanol de aproximadamente el 40% v/v a aproximadamente el 90% v/v, más preferentemente de aproximadamente el 65% v/v a aproximadamente el 90% v/v y más preferentemente de aproximadamente el 80% v/v a aproximadamente el 90% v/v (A). A continuación, la solución lipídica se diluye por etapas mediante su mezcla con una solución acuosa dando como resultado la formación de vesículas a una concentración de alcanol (por ejemplo, etanol) de entre aproximadamente 37,5 y 50% (B). Mediante la mezcla de la solución acuosa con solución lipídica orgánica la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas para producir un liposoma. Además, las vesículas lipídicas tales como SPLP (una partícula lipídica) pueden estabilizarse más mediante una dilución adicional por etapas de las vesículas a una concentración de alcanol de menos o igual a aproximadamente el 25%, preferentemente entre aproximadamente el 19 y el 25% (C).
En ciertos aspectos, para ambas diluciones por etapas (A\rightarrowB y B\rightarrowC), las concentraciones de etanol, lípido y soluto resultantes se mantienen a niveles constantes en el recipiente receptor. A estas concentraciones de etanol mayores después de la etapa de mezcla inicial, el reordenamiento de los monómeros lipídicos en bicapas transcurre de una manera más ordenada en comparación con vesículas que se forman por dilución a concentraciones de etanol menores. Sin quedar ligado a ninguna teoría particular, se cree que estas concentraciones de etanol mayores promueven la asociación de ácidos nucleicos con lípidos catiónicos en las bicapas. En un aspecto preferido, la encapsulación de ácido
nucleico se produce dentro de un intervalo de concentraciones de alcanol (por ejemplo etanol) por encima del 22%.
En ciertos aspectos, después de que se formen las vesículas lipídicas, estas se recogen en otro recipiente, por ejemplo, un recipiente de acero inoxidable. En un aspecto, las vesículas lipídicas se forman a una velocidad de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 ml/min. En un aspecto, después de la etapa de mezcla 130, la concentración de lípidos es de aproximadamente 1-10 mg/ml y la concentración de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) es de aproximadamente 0,1-3 mg/ml. En ciertos aspectos preferidos, la concentración de lípidos es de aproximadamente 7,0 mg/ml y la concentración de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) es de aproximadamente 0,4 mg/ml para proporcionar una relación ADN:lípido de aproximadamente 0,06 mg/mg. La concentración del tampón es de aproximadamente 1-3 mM y la concentración del alcanol es de aproximadamente el 45% v/v a aproximadamente el 90% v/v. En aspectos preferidos, la concentración de tampón es de aproximadamente 3 mM y la concentración de alcanol es de aproximadamente el 45% v/v a aproximadamente el 60% v/v.
3. Dilución de liposomas
Volviendo a la Figura 1, después de la etapa de mezclado 130, el grado de encapsulación de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) puede potenciarse si la suspensión de vesículas lipídicas se diluye opcionalmente 140 antes de la retirada del plásmido libre. Por ejemplo, antes de la etapa de dilución 140, si el atrapamiento del agente terapéutico es de aproximadamente 30-40%, puede aumentarse hasta aproximadamente 70-80% después de la incubación tras la etapa de dilución 140. En la etapa 140, la formulación de liposoma se diluye hasta de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 40%, preferentemente aproximadamente el 20% de alcanol, mediante la mezcla con una solución acuosa tal como un tampón (por ejemplo, 1:1 con tampón de citrato, NaCl 100 mM, pH 4,0). Dicha dilución adicional se consigue preferentemente con un tampón. En ciertos aspectos dicha dilución adicional de la solución de liposoma es una dilución continua por etapas. Después opcionalmente se permite que la muestra diluida se incube a temperatura ambiente.
4. Retirada del agente terapéutico libre
Después de la etapa opcional de dilución 140, aproximadamente el 70-80% o más del agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) está atrapado dentro de la vesícula lipídica (por ejemplo, SPLP) y el agente terapéutico libre puede retirarse de la formulación 150. En ciertos aspectos, se usa cromatografía de intercambio aniónico. Ventajosamente, el uso de una resina de intercambio aniónico da como resultado una capacidad de retirada de ácido nucleico dinámica alta, es capaz de un uso único, puede preesterilizarse y validarse y es completamente escalable. Además, el procedimiento preferentemente da como resultado la retirada de agente terapéutico libre (por ejemplo, ácido nucleico tal como aproximadamente el 25% del plásmido total). El volumen de muestra después de la cromatografía no cambia y las concentraciones de agente terapéutico (por ejemplo ácido nucleico) y de lípido son de aproximadamente 0,64 y 14,4 mg/ml, respectivamente. En este punto, la muestra puede ensayarse con respecto a agente terapéutico encapsulado y ajustarse a aproximadamente 0,55 mg/ml.
5. Concentración de la muestra
En ciertos casos, la solución de liposoma se concentra opcionalmente aproximadamente 2-6 veces, preferentemente aproximadamente 4 veces, usando por ejemplo, ultrafiltración 160 (por ejemplo, diálisis de flujo tangencial). En una realización, la muestra se transfiere a un depósito de suministro de un sistema de ultrafiltración y se retira el tampón. El tampón puede retirarse usando diversos procedimientos, tales como mediante ultrafiltración. En un aspecto, el tampón se retira usando cartuchos rellenos con fibras huecas de polisulfona, por ejemplo, que tienen diámetros internos de aproximadamente 0,5 mm y un punto de corte de peso molecular nominal (NMWC) de 30.000. Los liposomas se conservan dentro de las fibras huecas y se recirculan mientras que el disolvente y las moléculas pequeñas se retiran de la formulación mediante su paso a través de los poros de las fibras huecas. En este procedimiento, el filtrado se conoce como la solución de permeado. Tras la compleción de la etapa de concentración, las concentraciones de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) y lípido aumentan hasta aproximadamente 0,90 y 15,14 mg/ml respectivamente. En una realización, la concentración de alcanol permanece sin cambios, pero la relación alcanol:lípido disminuye aproximadamente cuatro veces.
6. Retirada del alcanol
En una realización, la formulación concentrada se diafiltra después frente a aproximadamente 5-15 volúmenes, preferentemente aproximadamente 10 volúmenes, de solución acuosa (por ejemplo, tampón) (por ejemplo, tampón de citrato pH 4,0 (citrato 25 mM, NaCl 100 mM) para retirar el alcanol 170. La concentración de alcanol al final de la etapa 170 es menor de aproximadamente el 1%. Preferentemente, las concentraciones de lípido y agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) permanecen sin cambios y el nivel de atrapamiento de agente terapéutico también permanece constante.
7. Reemplazamiento del tampón
Después de que se haya retirado el alcanol, la solución acuosa (por ejemplo, tampón) se reemplaza después por diafiltración frente a otro tampón 180 (por ejemplo, frente a 10 volúmenes de solución salina de NaCl 150 mM con Hepes 10 mM pH 7,4). Preferentemente, la relación de concentraciones de lípido y agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) permanecen sin cambios y el nivel de atrapamiento de ácido nucleico es aproximadamente constante. En ciertos casos, el rendimiento de la muestra puede mejorarse mediante el aclarado del cartucho con tampón a aproximadamente 10% del volumen de la muestra concentrada. En ciertos aspectos, este aclarado se añade después a la muestra concentrada.
8. Filtración estéril
En ciertas realizaciones preferidas, puede realizarse opcionalmente una filtración estéril 190 de la muestra a concentraciones de lípido de aproximadamente 12-14 mg/ml. En ciertos aspectos, la filtración se realiza a presiones por debajo de aproximadamente 275,79 kPa, usando un filtro de cápsula y un recipiente dispensador presurizado con una camisa de calefacción. Calentar la muestra ligeramente puede mejorar la facilidad de filtración.
9. Llenado estéril
La etapa de llenado estéril 195 se realiza usando procedimientos similares a los de las formulaciones liposomales convencionales. Los procedimientos de la presente invención dan como resultado aproximadamente 50-60% del agente terapéutico de entrada (por ejemplo, ácido nucleico) en el producto final. En ciertos aspectos preferidos, la relación de agente terapéutico y lípido del producto final es de aproximadamente 0,04 a 0,07.
IV. Agentes terapéuticos
Las formulaciones de fármaco basadas en lípidos y composiciones de la presente invención son útiles para el suministro sistémico o local de agentes terapéuticos o agentes bioactivos y también son útiles en los ensayos de diagnóstico. El siguiente análisis de refiere generalmente a liposomas; sin embargo, resultará inmediatamente evidente para los expertos en la materia que este mismo análisis es completamente aplicable a los otros sistemas de suministro de fármaco de la presente invención.
Como se describe anteriormente, el agente terapéutico se incorpora preferentemente a la vesícula lipídica durante la formación de la vesícula. En una realización, los principios activos hidrófobos pueden incorporarse al disolvente orgánico con el lípido, mientras que los principios activos de ácido nucleico e hidrófilos pueden añadirse al componente acuoso. En ciertos casos, el agente terapéutico incluye uno de una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, ribozimas, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado, un antígeno y combinaciones de los mismos. En aspectos preferidos, el agente terapéutico es ácido nucleico. El ácido nucleico puede codificar una proteína tal como, por ejemplo, un virus de herpes simple, timidina quinasa (HSV-TK), una citosina desaminasa, una xantina-guaninfosforribosiltransferasa, una p53, una purina nucleósido fosforilasa, una carboxilesterasa, una desoxicitidina quinasa, una nitrorreductasa, una timidina fosforilasa o citocromo P450 2B1.
En ciertos aspectos, se incorpora un agente terapéutico al componente lipídico orgánico. En ciertos casos el agente terapéutico es lipófilo. Los agentes lipófilos adecuados incluyen taxol, derivados del taxol, incluyendo, por ejemplo, protax III y Paclitaxol, benzoporfirinas lipófilas, verteporfina el profármaco lipídico de foscarnet, 1-O-octadecil-sn-glicerol-3-fosfonoformato (ODG-PFA), dioleoil[3H]yododesoxiuridina ([3H]IDU-O12), péptidos inhibidores de la proteasa de VIH derivatizados con lípidos tales como iBOC-[L-Phe]-[D-beta-Nal]-Pip-[alpha-(OH)-Leu]-Val (7194) y otros fármacos o profármacos derivatizados con lípidos.
En otra realización, las vesículas lipídicas de la presente invención pueden cargarse con uno o más agentes terapéuticos después de la formación de la vesícula. En ciertos aspectos, los agentes terapéuticos que se administran usando la presente invención puede ser cualquiera de una diversidad de fármacos que se seleccionan para ser un tratamiento apropiado para la enfermedad a tratar. Con frecuencia el fármaco es un agente antineoplásico tal como vincristina, doxorrubicina, mitoxantrona, camptotecina, cisplatino, bleomicina, ciclofosfamida, metotrexato, estreptozocina y similares. Los agentes antitumorales especialmente preferidos incluyen, por ejemplo, actinomicina D, vincristina, vinblastina, cistina arabinósido, antraciclinas, agentes alquilantes, compuestos de platino, antimetabolitos y análogos de nucleósidos, tales como metotrexato análogos de purina y pirimidina. También puede ser deseable suministrar agentes antiinfecciosos a tejidos específicos mediante los presentes procedimientos. Las composiciones de la presente invención también pueden usarse para el suministro selectivo de otros fármacos incluyendo, sin limitación, anestesia local, por ejemplo, dibucaína y clorpromacina; bloqueadores beta-adrenérgicos, por ejemplo, propanolol, timolol y labetolol; agentes antihipertensores, por ejemplo, clonidina e hidralacina; antidepresivos, por ejemplo, imipramina, amitriptilina, y doxepim: anticonvulsivos, por ejemplo, fenitoína; antihistamínicos, por ejemplo, difenhidramina, clorfenirimina y prometacina; agentes antibióticos/antibacterianos, por ejemplo, gentamicina, criprofloxacina y cefoxitina; agentes antifúngicos, por ejemplo, miconazol, treconazol, econazol, isoconazol, butaconazol, clotrimazol, itraconazol, nistatina, naftifina y anfotericina B, agentes antiparasitarios, hormonas, antagonistas de hormonas, inmunomoduladores, antagonistas de neurotransmisores, agentes antiglaucoma, vitaminas, narcóticos y agentes de formación de imágenes.
V. Aparato
En otra realización, la presente invención proporciona un aparato para llevar a cabo los procedimientos de la presente invención. La Figura 3 es un ejemplo de un esquema representativo de un aparato 300 de acuerdo con una realización de la presente invención. Este esquema es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto habitual en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
En una realización, el aparato de la presente invención incluye dos depósitos, un depósito de solución acuosa 310 y un depósito de solución orgánica 320, para contener solución acuosa y solución orgánica, respectivamente. En ciertos aspectos, las formulaciones de vesícula lipídica se preparan rápidamente, a baja presión (por ejemplo, < 68,95 kilopascales) y el aparato y los procedimientos de la presente invención son completamente escalables (por ejemplo 0,5 ml-5000 l). A una escala de 1 l, las vesículas lipídicas se forman a aproximadamente 0,4-0,8 l/min. En ciertos aspectos preferidos, el aparato no usa mezcladores estáticos ni equipamiento de extrusión especializado.
La cámara de mezcla 340 es, en una realización, un conector T, que tiene espigas de manguera opcionales, en las que las líneas de fluido 334 y 336 impactan entre sí a aproximadamente 180. En aspectos preferidos, se preparan vesículas lipídicas de diámetros medios bien definidos y reproducibles usando caudales sustancialmente iguales de las líneas de flujo. En otros aspectos, las vesículas lipídicas de diámetros medios bien definidos y reproducibles se preparan cambiando el caudal de las líneas de fluido, por ejemplo, para asegurar una mezcla suficiente en algunos casos. En aspectos preferidos, la varianza entre los caudales es menor del 50%, más preferentemente menor del aproximadamente 25% e incluso más preferentemente menor de aproximadamente el 5%.
La Figura 13 muestra un conector T y la dinámica de flujo asociada de acuerdo con una realización. Los ejemplos de caudales y tasas de cizallamiento y números de Reynolds (medida de la turbulencia) resultantes se muestran en la Figura 14 y se analizan en más detalle a continuación en el Ejemplo 8. Al comparar con sistemas anteriores, la presente invención proporciona un flujo no turbulento y tasas de cizallamiento aumentadas a caudales mucho menores (y sustancialmente equivalentes). Por ejemplo, la presente invención proporciona ventajosamente un flujo no turbulento (N_{re} < 2000) en el ambiente de mezcla con una tasa de cizallamiento entre aproximadamente 500/s y aproximadamente 3300/s a un caudal (ambas líneas de flujo) de entre aproximadamente 0,075 y aproximadamente 0,3 l/min.
La mezcla de los dos componentes fluidos puede accionarse usando, por ejemplo, una bomba peristáltica 330, una bomba de desplazamiento positivo o mediante la presurización de los recipientes de lípido-etanol y tampón 320, 310. En un aspecto, se usa una bomba Watson-Marlow 505Di/L equipada con un cabezal de bomba 505L; pueden usarse tubos de silicona (por ejemplo, endurecidos con platino con DI de 3,2 mm, grosor de pared de 2,4 mm; disponible de Watson Marlon como el nº de catálogo 913A032024) para líneas de flujo en un conector T de polipropileno o de acero inoxidable (por ejemplo, con un DI de 3,18 mm). Las vesículas lipídicas se forman típicamente a temperatura ambiente, pero las vesículas lipídicas pueden formarse a temperaturas elevadas de acuerdo con la presente invención. A diferencia de otros enfoques existentes, no existen requisitos generales para la composición de tampón. De hecho, los procedimientos y aparato de la presente invención pueden formular una vesícula lipídica mediante la mezcla de lípido en un alcanol con agua. En ciertos aspectos, los procedimientos y aparato de la presente invención forman vesículas lipídicas que tienen menos de 200 nm de diámetro.
Cuando se preparan vesículas lipídicas que contienen ADN plasmídico (tales como SPLP), la relación de plásmido y lípido catiónico y contraiones puede optimizarse. Para formulaciones purificadas, se prefiere una encapsulación de ADN plasmídico ("ADNp") del 70-95% después de la mezcla y etapas de retirada de etanol. El nivel de encapsulación de ADNp puede aumentarse mediante la dilución de esta formulación de SPLP inicial. De forma sorprendente, los procedimientos y aparato de la presente invención proporcionan una eficacia de encapsulación tras la mezcla de las soluciones (con agente terapéutico en uno de los componentes de la solución) en el ambiente de mezcla de hasta aproximadamente el 90%. Puede realizarse una purificación adicional, por ejemplo, dilución, como se analiza en el presente documento.
En ciertos aspectos, el aparato de producción de liposomas 300 de la presente invención incluye adicionalmente un mecanismo de control de la temperatura (no mostrado) para controlar la temperatura de los depósitos 310 y 320. Preferentemente, el fluido del primer depósito 310 y el segundo depósito 320 fluye a la cámara de mezcla 340 simultáneamente en aperturas separadas. El aparato 300 incluye adicionalmente un depósito de recogida 350 corriente abajo de la cámara de mezcla para la recogida de liposoma. Además, en ciertos aspectos, el aparato 300 incluye adicionalmente recipientes de almacenamiento corriente arriba de uno o ambos de los depósitos 310 y 320. Además, uno o ambos de los depósitos 310 y 320 son preferentemente recipientes de acero inoxidable con envoltura equipados con un mezclador superior.
En otra realización, la presente invención proporciona un aparato que tiene un sistema de ultrafiltración para llevar a cabo los procedimientos de la presente invención. La Figura 4 es un ejemplo de un esquema representativo de un aparato 400 de acuerdo con una realización de la presente invención. Este esquema es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
\newpage
En ciertos aspectos el aparato 400 incluye una pluralidad de depósitos y está equipado con un sistema de ultrafiltración. Un depósito de solución acuosa 440 y un depósito de solución orgánica 430 tienen cada uno vesículas de preparación corriente arriba 433 y 425 respectivamente. En un aspecto, el recipiente de preparación de lípido 425 está equipado opcionalmente con un recipiente de almacenamiento de alcanol 421 en comunicación fluida con el
mismo.
Como se muestra en la Figura 4, el sistema de ultrafiltración incluye un recipiente de incubación 450 en comunicación fluida con un recipiente de recogida 455, una columna de intercambio 460 y un cartucho de ultrafiltración de flujo tangencial 465. El sistema de ultrafiltración opcionalmente incluye un recipiente de permeado 470. En ciertos aspectos, la ultrafiltración se usa para concentrar muestras de SPLP y retirar después el etanol de la formulación mediante reemplazo de tampón.
En una realización de funcionamiento, las SPLP diluidas se transfieren al depósito de suministro del sistema de ultrafiltración. La concentración se realiza mediante la retirada de tampón y etanol usando, por ejemplo, cartuchos de flujo cruzado 465 rellenados con fibras huecas de polisulfona que poseen diámetros internos de aproximadamente 0,5 mm y un punto de corte de peso molecular (MWCO) de 100.000. Las SPLP se conservan dentro de las fibras huecas y se recirculan, mientras que el etanol y los componentes de tampón se retiran de la formulación mediante su paso a través de los poros de estas fibras huecas. Este filtrado se conoce como la solución de permeado y se descarta mediante el recipiente 470. Después de que se concentren las SPLP a la concentración de plásmido deseada, el tampón en el que se suspenden las SPLP se retira por ultrafiltración y se reemplaza con un volumen igual del tampón final. La ultrafiltración puede reemplazarse con otros procedimientos tales como diálisis convencional.
VI. Ejemplos Ejemplo 1
Este ejemplo ilustra diversas propiedades físicas y químicas de las SPLP preparadas de acuerdo con una realización de la presente invención.
Tabla I: la cantidad de etanol, ADNp y contenido de lípidos en las etapas del procedimiento de acuerdo con la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA I
1 
\newpage
La Tabla II expone la especificación plasmídica preparada de acuerdo con un aspecto de la presente invención.
TABLA II
3 
\vskip1.000000\baselineskip
La tabla III expone la especificación de SPLP preparada de acuerdo con un aspecto de la presente invención.
TABLA III
4
Ejemplo 2
Este ejemplo ilustra diversos parámetros de procedimiento en una realización de la presente invención.
En una realización de SPLP, la variación de la concentración inicial de etanol para la disolución de lípidos tuvo escaso impacto en el tamaño del vehículo o la encapsulación del ADN, siempre que la concentración de etanol fue lo suficientemente alta para asegurar que no precipitaban ninguno de los componentes lipídicos individuales (véase, Figura 5). Por debajo del 75% de etanol, los lípidos no eran solubles incluso calentando a 55ºC. Los lípidos que se disolvieron en etanol al 75% a 55ºC formaron SPLP con diámetros medios mayores y menor encapsulación de ADN (véase, Figura 5).
La relación inicial de ADN y lípido ha variado de 0,048 a 0,081 mg de ADN: mg de formulación lipídica y se formaron vesículas de tamaño similar con un 77-90% de encapsulación de ADN.
Se han preparado SPLP con un intervalo de pH de aproximadamente 3,5 a 6 para la etapa de mezcla inicial y todas las formulaciones poseían diámetros de partícula medios de menos de 150 nm y eficacias de encapsulación de ADN de más del 50% (véase, Figura 6). A pH mayor, las vesículas también se preparan con tamaños de vesículas similares, pero con eficacias de encapsulación de ADN menores.
En ciertos aspectos, los diámetros de vesícula medios de vesículas vacías preparadas usando un procedimiento de la presente invención dependen de la concentración salina del tampón de dilución (por ejemplo, vesículas de esfingomielina:colesterol, vesículas de EPC:EPG). La variación de las condiciones iónicas en el tampón influye en la tendencia de un lípido dado a disponerse en bicapas y vesículas.
Durante el desarrollo de una formulación de SPLP, se descubrió que tanto el pH como la concentración salina del tampón de dilución tenían un efecto significativo en la eficacia de encapsulación de ADN. De forma natural, los tampones de dilución con valores de pH menores que la pKa para el componente lipídico catiónico (DODMA) dio valores de encapsulación mayores (Figura 7). De forma interesante, una concentración salina final de 150 mM también era óptima para encapsulación de ADN (Figura 8).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para realizar vesículas de EPC y POPC.
Las vesículas de POPC son útiles como vesículas "sumidero" para ensayos de fusión de membrana. En particular, pueden usarse en exceso para retirar lípidos de PEG de otros liposomas, desestabilizando de este modo los otros liposomas y permitiéndoles fusionarse con la membrana deseada. Las vesículas de EPC son útiles para retirar colesterol de placas arteriales.
Las vesículas se prepararon con una concentración de etanol inicial del 80% y una concentración de lípidos de 10 mM. Después de mezclar y diluir, la concentración de etanol fue del 20% y la concentración de lípidos fue de 5 mM. La formulación de EPC se mezcló y diluyó con PBS y el POPC se mezcló y diluyó con HBS. Ambas preparaciones se concentraron y se retiró el etanol usando un cartucho de ultrafiltración, es decir, EPC contra PBS, y el POPC contra HBS. Ambas preparaciones se filtraron de forma estéril usando filtros de jeringa de 0,22 \mum.
TABLA IV Datos de vesículas de EPC y POPC
6
Ejemplo 4
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas de EPC/colesterol con un gradiente de pH.
Las vesículas lipídicas unilamelares (LUV) que comprenden EPC y colesterol se han preparado tradicionalmente mediante películas lipídicas hidratantes para formar vesículas lipídicas multilamelares (MLV) que se han sometido a reducción de tamaño de vesícula usando extrusión de alta presión. Se conoce bien que estas vesículas pueden prepararse con interiores acuosos ácidos y un gradiente pH a través de la bicapa lipídica. Se ha demostrado que las moléculas lipófilas débilmente básicas se acumulan en estas vesículas a concentraciones internas altas. Diversos liposomas cargados con fármaco que están actualmente en las últimas etapas de los ensayos clínicos utilizan este enfoque (por ejemplo, Myocet: vesículas cargadas con doxorrubicina).
En un aspecto, se usó safranina para determinar si dicho gradiente de pH estaba presente. La safranina es un colorante lipófilo básico que se ha usado para estudiar gradientes de membrana de pH.
Se prepararon vesículas de EPC/Col usando los presentes procedimientos y aparato a una concentración inicial de etanol del 80% y concentración de lípidos 10 mM (véase Figura 9A-B). Después de la mezcla y dilución, la concentración de etanol fue del 20% y la concentración de lípidos fue de 5 mM. Se prepararon tres formulaciones diferentes:
1. Mezclada y diluida con PBS (control).
2. Mezclada y diluida con citrato 150 mM (la concentración final de citrato es 94 mM).
3. Mezclada y diluida con citrato 300 mM (la concentración final de citrato es 188 mM).
Después de la mezcla y dilución, cada muestra se concentró y se retiró el etanol usando ultrafiltración. Después de la etapa de concentración, cada muestra se diafiltró frente a su tampón de dilución para asegurar que el tampón de citrato ácido presente dentro de las vesículas no se filtrara durante la retirada del etanol. Todas las muestras se formularon finalmente con un tampón externo de solución salina tamponada con fosfato a pH 7,4. Después de la filtración estéril, los diámetros de vesícula medios de estas formulaciones fueron muy similares (90-92 nm) y poseían una desviación típica y valores de Chi cuadrado aceptables (Tabla V).
Después de la diálisis, las vesículas se ensayaron con respecto a concentración de lípidos usando el ensayo de colesterol Infinity. Después se prepararon soluciones que contenían lípido 5 mM y safranina 0,2 mM obtenidos de una solución madre 10 mM filtrada. Las soluciones se incubaron a 37ºC durante 30 minutos. Después se pasó una alícuota de 500 \mul de cada solución incubada por una columna de filtración de gel de Sepharose CL4B de 2 ml. El colorante libre se separó de las vesículas y las fracciones que contenían lípidos se recogieron y analizaron. La concentración de safranina se determinó mediante la medida de la fluorescencia de las muestras a excitación a 516 nm y emisión a 585 nm.
Las vesículas con interiores ácidos acumularon safranina, mostrando las vesículas que contenían citrato 94 nM la mayor encapsulación. Por el contrario, las vesículas control con PBS encapsularon muy poca safranina. Las vesículas con citrato 188 mM también encapsularon algo de safranina, pero no tanta como las vesículas que contenían citrato 94 mM (véase Figura 10).
TABLA V Vesículas de EPC/Col cargadas con Safranina
7 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas de esfingomielina/colesterol.
Las vesículas de esfingomielina/colesterol son deseables debido a su durabilidad y fuerza. Estas vesículas también pueden usarse para encapsular fármacos usando un gradiente de pH. Sin embargo, estas LUV han necesitado tradicionalmente formarse a temperaturas mayores de 65ºC y usando extrusión de alta presión. Para formar estas vesículas con el lipomixer, deberían tomarse en cuenta varias variables, tales como concentración de etanol, concentración de lípidos y la concentración salina del tampón de mezcla y dilución.
Las vesículas se formularon en una relación de 55/45 SM/Col (mol:mol), mientras que la concentración inicial de etanol después de mezclar variaba de 50 a 25%. Los tampones de dilución ensayados incluyeron PBS, agua, citrato 10 mM, citrato 150 mM, y citrato 300 mM. Las concentraciones de lípido finales variaron de 0,5 a 2,5 mM. Las vesículas formuladas en presencia de sal (es decir, usando tampones) fueron de 200-500 nm, lo que indicaba una MLV. Se dializaron alícuotas de estas muestras frente a citrato 150 mM y agua en un intento de retirar el etanol y estabilizar las vesículas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 6
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas que encapsulan de forma pasiva moléculas pequeñas tales como calceína.
La calceína es un colorante fluorescente que se autoinactiva a concentraciones mayores de 10 mM. Pueden usarse vesículas que encapsulan calceína en ensayos de fusión para determinar si las vesículas se han fusionado entre sí. La fusión disminuye la concentración de calceína interna provocando que emita fluorescencia. Las vesículas se prepararon con DSPC:COL:PEG-DLG:DODMA (20:55:10:15) a una concentración de etanol del 19% y lípido 2 mM después de mezcla y dilución (véase la Figura 11). Los lípidos disueltos en etanol se mezclaron con una solución que contenía citrato 20 mM y calceína 75 mM y después se diluyeron las vesículas resultantes con NaCl 300 mM y calceína 37,5 mM. La calceína se obtuvo a partir de una solución madre 100 mM. La concentración de calceína final en las vesículas fue de 37,5 mM.
Después de mezcla y dilución las vesículas se dializaron durante una noche frente a HBS para retirar el colorante no encapsulado. Esto no tuvo éxito en la retirada de todo el colorante libre, de modo que las vesículas se pasaron a través de una columna de filtración en gel. La fracción de lípido se recogió y se analizó. Se descubrió que la calceína de hecho se inactivaba a la concentración dentro de las vesículas. Esto es una clara demostración de que los procedimientos y aparato de la presente invención pueden usarse para preparar vesículas que encapsulan de forma pasiva moléculas pequeñas.
TABLA VI Vesículas con Calceína encapsulada
8 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 7
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención frente a procedimientos de la técnica anterior.
En referencia a la Figura 12, los lípidos se disolvieron en etanol al 90% (A) y se diluyeron: por etapas usando el aparato de la presente invención hasta etanol al 45% (B) y 22,5% (C), representado por la línea continua ("LipoMixer"); o se añadieron en gotas en el tampón con agitación hasta una concentración de etanol final del 22,5% (C), representado por la línea punteada. Incluso aunque las concentraciones de etanol finales para ambas preparaciones era la misma, la SPLP formada de acuerdo con los procedimientos de la presente invención tenía una encapsulación de ADN del 85% mientras que las vesículas preparadas por goteo de etanol solo tenían una encapsulación de ADN del 5%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8
Este ejemplo ilustra diversas condiciones y propiedades para formar liposomas de acuerdo con la presente invención. Debería apreciarse que pueden usarse otras condiciones y parámetros y que los usados en el presente documento son meramente ejemplares.
En referencia a las Figuras 13 y 14, se modelan diversos caudales (sustancialmente equivalentes para flujos de solución lipídica y acuosa) y se analizan para mostrar diversos parámetros tales como tasa de cizallamiento y número de Reynolds (N_{re}) y tamaño de vesícula. Los parámetros y condiciones se determinaron en la salida del conector T corrigiendo con respecto a la densidad y viscosidad de la solución de etanol resultante. No se ha explicado la turbulencia adicional como resultado del encuentro de las dos corrientes entre sí en oposición, así como tampoco la turbulencia adicional como resultado de que las corrientes tengan que doblar una esquina de 90º.

Claims (44)

1. Un procedimiento para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho procedimiento:
proporcionar una solución acuosa en un primer depósito;
proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico;
mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica que encapsula el producto terapéutico; caracterizado porque
la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la vesícula lipídica es un liposoma.
3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene una concentración de aproximadamente el 20% v/v a aproximadamente el 50% v/v de disolvente orgánico.
4. El procedimiento de la reivindicación 3, que comprende adicionalmente diluir adicionalmente la solución de liposoma.
5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicha dilución adicional es con un tampón.
6. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicha dilución adicional de la solución de liposoma es una dilución continua por etapas.
7. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que la solución de liposoma tiene una concentración de menos de aproximadamente el 25% v/v de disolvente orgánico después de la dilución.
8. El procedimiento de la reivindicación 3, que comprende adicionalmente retirar dicho disolvente orgánico asociado con dicha solución de liposoma para formar una forma final.
9. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución lipídica orgánica comprende un disolvente orgánico.
10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que dicho disolvente orgánico es un alcohol inferior.
11. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que dicho disolvente orgánico comprende agua.
12. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende una solución orgánica.
13. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende un tampón.
14. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha vesícula lipídica es de menos de aproximadamente 200 nm de diámetro.
15. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha vesícula lipídica se forma a una velocidad de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 ml/min.
16. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende el producto terapéutico.
17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho producto terapéutico se selecciona del grupo que consiste en una proteína, un plásmido, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado y un antígeno.
18. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho producto terapéutico es un ácido nucleico.
19. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que el producto terapéutico es una especie cargada.
20. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución lipídica orgánica comprende el producto terapéutico.
21. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que el producto terapéutico es lipófilo.
22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el producto lipófilo se selecciona del grupo que consiste en protax III, Paclitaxol, taxol, derivados de taxol y profármacos derivatizados con lípidos.
23. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que se controla la temperatura de uno o ambos del primer y el segundo depósitos.
24. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que uno o ambos del primer y el segundo depósitos incluyen un recipiente de acero inoxidable con envoltura con un mezclador superior.
25. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que durante la mezcla la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas en presencia de la solución acuosa.
26. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene un pH de aproximadamente 3,5 a aproximadamente 8,0.
27. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho ácido nucleico codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste en una timidina quinasa del virus del herpes simple (HSV-TK), una citosina desaminasa, una xantina-guaninfosforribosil transferasa, una p53, una purina nucleósido fosforilasa, una carboxilesterasa, una desoxicitidina quinasa, una nitrorreductasa, una timidina fosforilasa, y un citocromo P450 2B1.
28. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene una eficacia de encapsulación de ácido nucleico de más de aproximadamente el 50%.
29. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene una eficacia de encapsulación de ácido nucleico de entre aproximadamente el 80% y aproximadamente el 90%.
30. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene un diámetro de aproximadamente 150 nm o menos.
31. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene una concentración salina de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 200 mM.
32. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, comprendiendo dicho procedimiento adicionalmente:
proporcionar dicha solución lipídica orgánica que tiene una concentración de aproximadamente el 70% v/v a aproximadamente el 100% v/v de disolvente orgánico en el segundo depósito.
\vskip1.000000\baselineskip
33. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que durante la mezcla la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas hasta una concentración de aproximadamente el 35% v/v a aproximadamente el 50% v/v de disolvente orgánico.
34. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que el producto terapéutico es uno de una especie aniónica y una especie catiónica.
35. Un aparato para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho aparato:
un primer depósito para contener una solución acuosa;
un segundo depósito para contener una solución lipídica orgánica, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; y
un mecanismo de bomba configurado para bombear dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en una región de mezcla a caudales sustancialmente iguales;
mezclándose la solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa en la región de mezcla para formar de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica con producto terapéutico encapsulado; caracterizado por que
la región de mezcla incluye un conector T, introduciéndose dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
\vskip1.000000\baselineskip
36. El aparato de la reivindicación 35, en el que la vesícula lipídica es un liposoma.
37. El aparato de la reivindicación 36, que incluye adicionalmente un recipiente receptor para recibir el liposoma con producto terapéutico encapsulado.
38. El aparato de la reivindicación 36, en el que el liposoma está en una solución que tiene una primera concentración, incluyendo adicionalmente el aparato un sistema de filtración acoplado al recipiente receptor, configurándose dicho sistema de filtración para aumentar la concentración de la solución de liposoma con producto terapéutico encapsulado hasta una segunda concentración.
39. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el producto terapéutico se selecciona del grupo que consiste una proteína, un plásmido, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado y un antígeno.
40. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el mecanismo de bomba incluye una bomba peristáltica.
41. El aparato de la reivindicación 36, en el que durante la mezcla, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continúa por etapas en presencia de la solución acuosa.
42. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que la solución lipídica orgánica incluye el producto terapéutico y en el que el producto terapéutico es lipófilo.
43. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que la solución acuosa incluye el producto terapéutico.
44. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el producto terapéutico es uno de una especie aniónica y una especie catiónica.
ES03737789T 2002-06-28 2003-06-30 Procedimiento y aparato para producir liposomas. Expired - Lifetime ES2354607T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39288702P 2002-06-28 2002-06-28
US392887P 2002-06-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2354607T3 true ES2354607T3 (es) 2011-03-16

Family

ID=30000947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES03737789T Expired - Lifetime ES2354607T3 (es) 2002-06-28 2003-06-30 Procedimiento y aparato para producir liposomas.

Country Status (10)

Country Link
US (10) US7901708B2 (es)
EP (3) EP2338478B1 (es)
JP (5) JP4722481B2 (es)
AT (1) ATE485031T1 (es)
AU (2) AU2003245160B2 (es)
CA (1) CA2491164C (es)
DE (1) DE60334618D1 (es)
DK (1) DK1519714T3 (es)
ES (1) ES2354607T3 (es)
WO (1) WO2004002453A1 (es)

Families Citing this family (368)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60334618D1 (de) 2002-06-28 2010-12-02 Protiva Biotherapeutics Inc Verfahren und vorrichtung zur herstellung von liposomen
US7718189B2 (en) 2002-10-29 2010-05-18 Transave, Inc. Sustained release of antiinfectives
SG190613A1 (en) * 2003-07-16 2013-06-28 Protiva Biotherapeutics Inc Lipid encapsulated interfering rna
US9198645B2 (en) * 2003-11-26 2015-12-01 The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce of The National Institute of Standards and Technology Controlled vesicle self-assembly in continuous two phase flow microfluidic channels
CN107811971B (zh) 2004-05-03 2021-10-29 益普生生物制药公司 用于药物输送的脂质体
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain
US8715591B2 (en) * 2004-07-21 2014-05-06 The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce, The National Institute of Standards and Technology Microfluidic apparatus to control liposome formation
DK1802277T3 (da) * 2004-10-18 2010-05-17 Polymun Scient Immunbio Forsch Liposomal sammensætning indeholdende en aktiv bestanddel til relaksation af glat muskulatur og terapeutisk anvendelse af sammensætningen
US9393315B2 (en) 2011-06-08 2016-07-19 Nitto Denko Corporation Compounds for targeting drug delivery and enhancing siRNA activity
WO2006113679A2 (en) * 2005-04-15 2006-10-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Delivery of sirna by neutral lipid compositions
JP2006248978A (ja) * 2005-03-10 2006-09-21 Mebiopharm Co Ltd 新規なリポソーム製剤
CA2616877C (en) 2005-07-27 2014-01-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
US8093369B2 (en) * 2005-10-11 2012-01-10 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Ltd. Compositions for silencing the expression of VDAC1 and uses thereof
AU2006308765B2 (en) 2005-11-02 2013-09-05 Arbutus Biopharma Corporation Modified siRNA molecules and uses thereof
PL1962805T3 (pl) 2005-12-08 2017-01-31 Insmed Incorporated Kompozycje środków przeciwzapalnych oparte na lipidach do leczenia infekcji płucnych
EP2012750B1 (en) * 2006-04-06 2018-02-21 Insmed Incorporated Methods for coacervation induced liposomal encapsulation and formulations thereof
KR101128639B1 (ko) * 2006-11-17 2012-03-26 현대중공업 주식회사 휠식 건설기계의 핸들 및 조이스틱 조향을 위한유압제어장치
US9273300B2 (en) * 2007-02-07 2016-03-01 Strike Bio, Inc Methods and compositions for modulating sialic acid production and treating hereditary inclusion body myopathy
US8067390B2 (en) 2007-03-02 2011-11-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Therapeutic targeting of interleukins using siRNA in neutral liposomes
WO2008137717A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Transave, Inc. Compositions of multicationic drugs for reducing interactions with polyanionic biomolecules and methods and uses thereof
US9119783B2 (en) 2007-05-07 2015-09-01 Insmed Incorporated Method of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9333214B2 (en) 2007-05-07 2016-05-10 Insmed Incorporated Method for treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9114081B2 (en) 2007-05-07 2015-08-25 Insmed Incorporated Methods of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US20100215582A1 (en) * 2007-05-14 2010-08-26 Konica Minolta Holdings, Inc. Liposome and method for producing liposome
CN101939027B (zh) * 2007-10-02 2014-07-30 玛瑞纳生物技术有限公司 用于递送核酸的脂肽
AU2008342535B2 (en) 2007-12-27 2015-02-05 Arbutus Biopharma Corporation Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
CA2721380A1 (en) 2008-04-15 2009-10-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of csn5 gene expression using interfering rna
WO2009149418A2 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Asuragen, Inc. Novel compositions for the in vivo delivery of rnai agents
AU2009303345B2 (en) 2008-10-09 2015-08-20 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
WO2010045512A2 (en) * 2008-10-16 2010-04-22 Mdrna , Inc. Processes and compositions for liposomal and efficient delivery of gene silencing therapeutics
CA2741373A1 (en) 2008-10-30 2010-06-03 Peixuan Guo Membrane-integrated viral dna-packaging motor protein connector biosensor for dna sequencing and other uses
JP5766188B2 (ja) 2009-07-01 2015-08-19 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 固形腫瘍に治療剤を送達するための脂質製剤
US8716464B2 (en) 2009-07-20 2014-05-06 Thomas W. Geisbert Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression
US9222086B2 (en) 2009-09-23 2015-12-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer
JP5823405B2 (ja) 2009-11-04 2015-11-25 ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 核酸含有脂質粒子および関連方法
WO2011065056A1 (ja) * 2009-11-30 2011-06-03 株式会社 資生堂 ポリマーソーム及び製造方法
PT3338765T (pt) 2009-12-01 2019-03-18 Translate Bio Inc Derivado de esteróide adequado para a administração de arnm em doenças genéticas humanas
CN102686729B (zh) 2009-12-18 2015-09-23 箭头研究公司 用于治疗hsf1相关疾病的有机组合物
IN2012DN06588A (es) 2010-02-10 2015-10-23 Novartis Ag
WO2011120023A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting survivin gene expression uses thereof
US20130037977A1 (en) * 2010-04-08 2013-02-14 Paul A. Burke Preparation of Lipid Nanoparticles
WO2011133584A2 (en) 2010-04-19 2011-10-27 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting hras gene expression and uses thereof
CN102985544A (zh) 2010-04-23 2013-03-20 诺瓦提斯公司 治疗β-ENaC-相关疾病的有机组合物
WO2011139843A2 (en) 2010-04-28 2011-11-10 Marina Biotech, Inc. Multi-sirna compositions for reducing gene expression
WO2011141704A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc Novel cyclic cationic lipids and methods of use
CA2799091A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
EP2575764B1 (en) 2010-06-03 2017-04-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
US9387152B2 (en) 2010-06-28 2016-07-12 The General Hospital Corporation Blood substitutes and uses thereof
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
MX2013000164A (es) 2010-07-06 2013-03-05 Novartis Ag Liposomas con lipidos que tienen valor de pka ventajoso para suministro de arn.
EP2590670B1 (en) 2010-07-06 2017-08-23 GlaxoSmithKline Biologicals SA Methods of raising an immune response by delivery of rna
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
JP5940064B2 (ja) 2010-07-06 2016-06-29 ノバルティス アーゲー 低用量のｒｎａを用いた大型哺乳動物の免疫化
WO2012006376A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Virion-like delivery particles for self-replicating rna molecules
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HRP20220695T1 (hr) 2010-08-31 2022-07-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilirani liposomi za isporuku rnk kodirane za imunogen
CA3162352A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Modernatx, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
KR102162111B1 (ko) 2010-10-11 2020-10-07 노파르티스 아게 항원 전달 플랫폼
WO2012075040A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA FOR USE IN TREATMENT OF HUMAN GENETIC DISEASES
EP2741784B1 (en) 2011-03-02 2017-05-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Tusc2 therapies
CN103370055B (zh) * 2011-03-25 2015-06-24 泰尔茂株式会社 缓释性脂质体组合物及其制造方法
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
BR112013031553A2 (pt) 2011-06-08 2020-11-10 Shire Human Genetic Therapies, Inc. composições, mrna que codifica para uma hgla e seu uso, uso de pelo menos uma molécula de mrna e um veículo de transferência e uso de um mrna que codifica para proteína exógena
US10196637B2 (en) 2011-06-08 2019-02-05 Nitto Denko Corporation Retinoid-lipid drug carrier
US9011903B2 (en) 2011-06-08 2015-04-21 Nitto Denko Corporation Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
ES2705498T3 (es) 2011-08-31 2019-03-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas pegilados para administración de ARN que codifica inmunógeno
CA2847283C (en) 2011-09-02 2023-03-14 Novartis Ag Organic compositions to treat hsf1-related diseases
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9428535B2 (en) 2011-10-03 2016-08-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
WO2013059922A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 The University Of British Columbia Limit size lipid nanoparticles and related methods
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
RU2647476C2 (ru) 2011-11-04 2018-03-15 Нитто Денко Корпорейшн Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства
US9463247B2 (en) 2011-12-07 2016-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents
US20140308304A1 (en) 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
CA2856742A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
US9035039B2 (en) 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
WO2013105022A2 (en) 2012-01-09 2013-07-18 Novartis Ag Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases
EP3988104A1 (en) 2012-02-24 2022-04-27 Arbutus Biopharma Corporation Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
AU2013243946A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of membrane proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
WO2013163628A2 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Duke University Genetic correction of mutated genes
KR20150004414A (ko) 2012-05-02 2015-01-12 노파르티스 아게 Kras-관련 질환을 치료하기 위한 유기 조성물
US9889208B2 (en) 2012-05-04 2018-02-13 The Johns Hopkins University Lipid-based drug carriers for rapid penetration through mucus linings
KR101493961B1 (ko) * 2012-05-16 2015-02-17 한국생명공학연구원 압출공정 없이 핵산 함유 나노 리포솜을 제조하는 방법
KR102277921B1 (ko) 2012-05-21 2021-07-14 인스메드 인코포레이티드 폐 감염을 치료하기 위한 시스템
EA201492055A1 (ru) 2012-06-08 2015-11-30 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. ИНГАЛЯЦИОННАЯ ДОСТАВКА мРНК В НЕЛЕГОЧНЫЕ КЛЕТКИ-МИШЕНИ
EP2859102A4 (en) 2012-06-08 2016-05-11 Shire Human Genetic Therapies NUCLEASE RESISTANT POLYNUCLEOTIDES AND USES THEREOF
AU2013292647B2 (en) 2012-07-18 2018-03-15 Onyx Therapeutics, Inc. Liposomal compositions of epoxyketone-based proteasome inhibitors
CN103565745A (zh) 2012-08-10 2014-02-12 德克萨斯州大学系统董事会 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
JPWO2014046191A1 (ja) 2012-09-21 2016-08-18 テルモ株式会社 局所麻酔薬持続徐放性リポソーム製剤
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
CA2891487A1 (en) 2012-11-29 2014-06-05 Insmed Incorporated Stabilized vancomycin formulations
SG10201707569YA (en) 2012-12-12 2017-10-30 Broad Inst Inc Delivery, Engineering and Optimization of Systems, Methods and Compositions for Sequence Manipulation and Therapeutic Applications
CA2902393C (en) 2013-02-28 2022-11-01 Arrowhead Research Corporation Organic compositions to treat epas1-related diseases
AU2014236250B2 (en) 2013-03-14 2019-01-03 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Process for formulating an anionic agent
US9957499B2 (en) 2013-03-14 2018-05-01 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP3932947A1 (en) 2013-03-14 2022-01-05 Translate Bio MA, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
IL305374A (en) 2013-03-14 2023-10-01 Ethris Gmbh CFTR mRNA Assemblies and Related Methods and Uses
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10130649B2 (en) 2013-03-15 2018-11-20 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
US10342760B2 (en) 2013-03-15 2019-07-09 The University Of British Columbia Lipid nanoparticles for transfection and related methods
US9693958B2 (en) * 2013-03-15 2017-07-04 Cureport, Inc. Methods and devices for preparation of lipid nanoparticles
BR112015031608A2 (pt) 2013-06-17 2017-08-22 Massachusetts Inst Technology Aplicação e uso dos sistemas crispr-cas, vetores e composições para direcionamento e terapia hepáticos
RU2716421C2 (ru) 2013-06-17 2020-03-11 Те Брод Инститьют Инк. Доставка, применение и применения в терапии систем crispr-cas и композиций для целенаправленного воздействия на нарушения и заболевания с использованием вирусных компонентов
EP3011032B1 (en) 2013-06-17 2019-10-16 The Broad Institute, Inc. Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for targeting and modeling diseases and disorders of post mitotic cells
US20160151284A1 (en) 2013-07-23 2016-06-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for delivering messenger rna
US10195291B2 (en) 2013-09-24 2019-02-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the manufacture of lipid nanoparticles
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
CA2926218A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051135A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag Organic compositions to treat hepcidin-related diseases
EP3574923A1 (en) 2013-10-22 2019-12-04 Translate Bio, Inc. Mrna therapy for phenylketonuria
WO2015061461A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cns delivery of mrna and uses thereof
CA2928188A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
KR102096796B1 (ko) 2013-10-22 2020-05-27 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 메신저 rna의 전달을 위한 지질 제형
US9636034B2 (en) 2013-10-23 2017-05-02 Verily Life Sciences Llc Non-invasive analyte detection system with modulation source
US10542918B2 (en) 2013-10-23 2020-01-28 Verily Life Sciences Llc Modulation of a response signal to distinguish between analyte and background signals
SG10201804974RA (en) 2013-12-12 2018-07-30 Broad Inst Inc Compositions and Methods of Use of Crispr-Cas Systems in Nucleotide Repeat Disorders
EP3080259B1 (en) 2013-12-12 2023-02-01 The Broad Institute, Inc. Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation
BR112016013201B1 (pt) 2013-12-12 2023-01-31 The Broad Institute, Inc. Uso de uma composição compreendendo um sistema crispr-cas no tratamento de uma doença genética ocular
EP3080271B1 (en) 2013-12-12 2020-02-12 The Broad Institute, Inc. Systems, methods and compositions for sequence manipulation with optimized functional crispr-cas systems
EP3079726B1 (en) 2013-12-12 2018-12-05 The Broad Institute, Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using particle delivery components
SG10201804975PA (en) 2013-12-12 2018-07-30 Broad Inst Inc Delivery, Use and Therapeutic Applications of the Crispr-Cas Systems and Compositions for HBV and Viral Diseases and Disorders
US10751283B2 (en) 2014-01-14 2020-08-25 Capability Building, Inc. Liposomal rehydration salt formulation and associated methods of use
AR094658A1 (es) * 2014-01-14 2015-08-19 Fast Rehydration Llc Formulación de sales de rehidratación liposomal
CA2936514C (en) 2014-01-21 2023-08-08 Joel DE BEER Hybridosomes, compositions comprising the same, processes for their production and uses thereof
EP3981437A1 (en) 2014-04-23 2022-04-13 ModernaTX, Inc. Nucleic acid vaccines
ES2750661T3 (es) 2014-04-25 2020-03-26 Translate Bio Inc Métodos para la purificación de ARN mensajero
PL3142643T3 (pl) 2014-05-15 2019-12-31 Insmed Incorporated Sposoby leczenia zakażeń płuc prątkami niegruźliczymi
EP3587409B8 (en) 2014-05-30 2022-07-13 Translate Bio, Inc. Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids
WO2015192020A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Children's Medical Center Corporation Products and methods to isolate mitochondria
CA2952824C (en) 2014-06-24 2023-02-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Stereochemically enriched compositions for delivery of nucleic acids
HUE060907T2 (hu) 2014-06-25 2023-04-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske formulációk nukleinsavak bevitelére
EP3164112A1 (en) * 2014-07-02 2017-05-10 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Encapsulation of messenger rna
WO2016011123A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Arrowhead Research Corporation Organic compositions to treat apoc3-related diseases
EP3686279B1 (en) 2014-08-17 2023-01-04 The Broad Institute, Inc. Genome editing using cas9 nickases
US9765333B2 (en) 2014-08-21 2017-09-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing marburg virus gene expression
US20180010132A1 (en) 2014-09-11 2018-01-11 Novartis Ag Inhibition of prmt5 to treat mtap-deficiency-related diseases
WO2016049163A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Use and production of chd8+/- transgenic animals with behavioral phenotypes characteristic of autism spectrum disorder
WO2016045732A1 (en) * 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
WO2016049258A2 (en) 2014-09-25 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Functional screening with optimized functional crispr-cas systems
AU2015328012A1 (en) 2014-10-02 2017-05-11 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for silencing Hepatitis B virus gene expression
US10479997B2 (en) 2014-12-01 2019-11-19 Novartis Ag Compositions and methods for diagnosis and treatment of prostate cancer
ES2861597T3 (es) 2014-12-05 2021-10-06 Translate Bio Inc Terapia de ARN mensajero para el tratamiento de enfermedad articular
WO2016094880A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs)
EP3985115A1 (en) 2014-12-12 2022-04-20 The Broad Institute, Inc. Protected guide rnas (pgrnas)
EP3230452A1 (en) 2014-12-12 2017-10-18 The Broad Institute Inc. Dead guides for crispr transcription factors
WO2016094874A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems
WO2016100974A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 The Broad Institute Inc. Unbiased identification of double-strand breaks and genomic rearrangement by genome-wide insert capture sequencing
WO2016106236A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 The Broad Institute Inc. Rna-targeting system
EP3702456A1 (en) 2014-12-24 2020-09-02 The Broad Institute, Inc. Crispr having or associated with destabilization domains
US9861710B1 (en) 2015-01-16 2018-01-09 Verily Life Sciences Llc Composite particles, methods, and in vivo diagnostic system
EP3270894B1 (en) 2015-03-19 2021-02-24 Translate Bio, Inc. Mrna therapy for pompe disease
EP3271057B1 (en) 2015-03-19 2019-09-04 The University of Connecticut Systems and methods for continuous manufacturing of liposomal drug formulations
US11298326B2 (en) 2015-03-24 2022-04-12 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid-containing lipid nanoparticles
US10653768B2 (en) 2015-04-13 2020-05-19 Curevac Real Estate Gmbh Method for producing RNA compositions
US11298318B2 (en) * 2015-04-13 2022-04-12 Fountain Technologies International, Llc One-step method for production of ultra-small lipid structures
US20180245074A1 (en) 2015-06-04 2018-08-30 Protiva Biotherapeutics, Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
EP3302525A2 (en) 2015-06-05 2018-04-11 Novartis AG Methods and compositions for diagnosing, treating, and monitoring treatment of shank3 deficiency associated disorders
WO2016205745A2 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Cell sorting
AU2016279077A1 (en) 2015-06-18 2019-03-28 Omar O. Abudayyeh Novel CRISPR enzymes and systems
CA2989830A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute, Inc. Crispr enzyme mutations reducing off-target effects
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
EP3436575A1 (en) 2015-06-18 2019-02-06 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
WO2017004143A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2017019891A2 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
WO2017031232A1 (en) 2015-08-17 2017-02-23 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
EP3337908A4 (en) 2015-08-18 2019-01-23 The Broad Institute, Inc. METHOD AND COMPOSITIONS FOR CHANGING THE FUNCTION AND STRUCTURE OF CHROMATIN GRINDING AND / OR DOMAINS
CA2995995A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof
EP3736261B1 (en) 2015-09-17 2023-10-11 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
US20190255107A1 (en) 2015-10-09 2019-08-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
EP4089175A1 (en) 2015-10-13 2022-11-16 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
EP3362555B1 (en) 2015-10-14 2021-01-13 Translate Bio, Inc. Modification of rna-related enzymes for enhanced production
RU2732567C2 (ru) 2015-10-16 2020-09-21 Ипсен Биофарм Лтд. Стабилизированные фармацевтические композиции камптотецина
EP3365441A1 (en) 2015-10-22 2018-08-29 The Broad Institute Inc. Type vi-b crispr enzymes and systems
EP3368687B1 (en) 2015-10-27 2021-09-29 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for targeting cancer-specific sequence variations
WO2017075478A2 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures
WO2018081480A1 (en) 2016-10-26 2018-05-03 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations
WO2017075465A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting gata3
CA3003055C (en) 2015-10-28 2023-08-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2017075451A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting pou2af1
WO2017095944A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Flagship Pioneering, Inc. Methods and compositions relating to chondrisomes from blood products
WO2017099823A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
US20190233814A1 (en) 2015-12-18 2019-08-01 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
CN108601765A (zh) 2015-12-18 2018-09-28 德克萨斯州大学系统董事会 用于早产管理的治疗剂
HUE057877T2 (hu) 2015-12-22 2022-06-28 Modernatx Inc Vegyületek és készítmények terápiás szerek intracelluláris bejuttatására
AU2017248189B2 (en) 2016-04-08 2021-04-29 Translate Bio, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
WO2017184786A1 (en) 2016-04-19 2017-10-26 The Broad Institute Inc. Cpf1 complexes with reduced indel activity
WO2017189308A1 (en) 2016-04-19 2017-11-02 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
CN110382692A (zh) 2016-04-19 2019-10-25 博德研究所 新型crispr酶以及系统
CN109312313A (zh) 2016-06-13 2019-02-05 川斯勒佰尔公司 用于治疗鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症的信使rna疗法
JP7267013B2 (ja) 2016-06-17 2023-05-01 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド Ｖｉ型ｃｒｉｓｐｒオルソログ及び系
US20210222164A1 (en) 2016-06-29 2021-07-22 The Broad Institute, Inc. Crispr-cas systems having destabilization domain
US11191849B2 (en) 2016-06-30 2021-12-07 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for delivering messenger RNA
CN106074402A (zh) * 2016-07-28 2016-11-09 浙江美保龙生物技术有限公司 一种猪细小病毒脂质体稀释液冻干制品及其制备方法
CN106074404A (zh) * 2016-08-17 2016-11-09 浙江美保龙生物技术有限公司 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒脂质体稀释液冻干制品及其制备方法
US11352647B2 (en) 2016-08-17 2022-06-07 The Broad Institute, Inc. Crispr enzymes and systems
CN110312799A (zh) 2016-08-17 2019-10-08 博德研究所 新型crispr酶和系统
WO2018049025A2 (en) 2016-09-07 2018-03-15 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses
WO2018047148A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 Novartis Ag Compounds for the inhibition of mirna
US20200016202A1 (en) 2016-10-07 2020-01-16 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
CN116672456A (zh) 2016-10-12 2023-09-01 得克萨斯州大学系统董事会 用于tusc2免疫治疗的方法和组合物
EP3535396A1 (en) 2016-11-01 2019-09-11 Novartis AG Methods and compositions for enhancing gene editing
WO2018089540A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
EP3538546A1 (en) 2016-11-14 2019-09-18 Novartis AG Compositions, methods, and therapeutic uses related to fusogenic protein minion
JP7317706B2 (ja) 2016-12-14 2023-07-31 リガンダル インコーポレイテッド 核酸およびタンパク質ペイロード送達のための方法および組成物
EP3585417B1 (en) 2017-02-27 2023-02-22 Translate Bio, Inc. Method of making a codon-optimized cftr mrna
ES2911186T3 (es) 2017-03-15 2022-05-18 Modernatx Inc Formas cristalinas de aminolípidos
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
ES2940259T3 (es) 2017-03-15 2023-05-04 Modernatx Inc Compuesto y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
WO2018170333A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 The Broad Institute, Inc. Novel cas13b orthologues crispr enzymes and systems
BR112019021359A2 (pt) 2017-04-11 2020-05-05 Arbutus Biopharma Corp moléculas, composições, compostos, métodos para administrar um sirna, para preparar um composto e para tratar uma infecção, composto ou sal, conjugado de galnac e uso de um composto
EP3610009A1 (en) 2017-04-12 2020-02-19 The Broad Institute, Inc. Novel type vi crispr orthologs and systems
WO2018191719A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid delivery of therapeutic agents to adipose tissue
WO2018191657A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
WO2018191750A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 The Broad Institute Inc. Novel delivery of large payloads
AU2018256877B2 (en) 2017-04-28 2022-06-02 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2018204777A2 (en) 2017-05-05 2018-11-08 The Broad Institute, Inc. Methods for identification and modification of lncrna associated with target genotypes and phenotypes
JP7395355B2 (ja) 2017-05-08 2023-12-11 フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ， インコーポレイテッド 膜融合を促進するための組成物およびその使用
IL270631B2 (en) 2017-05-16 2024-03-01 Translate Bio Inc Treatment of cystic fibrosis through the administration of mRNA with an optimal codon encoding ctfr
JP2020524993A (ja) 2017-06-13 2020-08-27 フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ， インコーポレイテッド クロンを含む組成物及びその使用
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
US11530413B2 (en) 2017-07-21 2022-12-20 Novartis Ag Compositions and methods to treat cancer
CA3071968A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid-containing lipid nanoparticle
JP7355731B2 (ja) 2017-08-16 2023-10-03 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
US11524932B2 (en) 2017-08-17 2022-12-13 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
US20200172472A1 (en) 2017-08-17 2020-06-04 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
IT201700099627A1 (it) * 2017-09-06 2019-03-06 Anna Angela Barba Produzione di vettori nano-liposomiali incapsulanti ferro altamente biodisponibile con tecnica in continuo.
WO2019051402A1 (en) 2017-09-11 2019-03-14 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNA INTERFERENCE AGENTS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE EXPRESSION OF APOLIPOPROTEIN C-III (APOC3)
CN111511388A (zh) 2017-09-21 2020-08-07 博德研究所 用于靶向核酸编辑的系统、方法和组合物
US20200255828A1 (en) 2017-10-04 2020-08-13 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for altering function and structure of chromatin loops and/or domains
WO2019089828A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Acuitas Therapeutics, Inc. Lamellar lipid nanoparticles
WO2019089803A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for studying cell evolution
CN111565833B (zh) * 2017-11-01 2023-04-07 国立大学法人大阪大学 用于制造具有期望的粒径的脂质颗粒的方法及装置的开发
US20210363260A1 (en) 2017-11-13 2021-11-25 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for treating cancer by targeting the clec2d-klrb1 pathway
CN109893664B (zh) * 2017-12-11 2022-03-11 四川大学 一种阳离子脂质纳米颗粒/dna复合物及其制备方法
TW201936201A (zh) 2017-12-14 2019-09-16 美商堅固生物科技公司 基因之非病毒生產及遞送
AU2018392716A1 (en) 2017-12-20 2020-06-18 Translate Bio, Inc. Improved composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
WO2019139997A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Trucode Gene Repair, Inc. Polymer-based nanoparticles, related formulation methods, and apparatus
WO2019150309A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Hammack Scott Modulators of gpr68 and uses thereof for treating and preventing diseases
WO2019191627A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Insmed Incorporated Methods for continuous manufacture of liposomal drug products
WO2019213276A1 (en) 2018-05-02 2019-11-07 Novartis Ag Regulators of human pluripotent stem cells and uses thereof
US11690921B2 (en) 2018-05-18 2023-07-04 Sangamo Therapeutics, Inc. Delivery of target specific nucleases
CA3106035A1 (en) 2018-08-07 2020-02-13 The Broad Institute, Inc. Cas12b enzymes and systems
KR20210042089A (ko) * 2018-08-10 2021-04-16 다케다 야쿠힝 고교 가부시키가이샤 양이온성 지질
WO2020032185A1 (ja) * 2018-08-10 2020-02-13 国立大学法人京都大学 カチオン性脂質を用いた心筋細胞へのトランスフェクション方法
WO2020041380A1 (en) 2018-08-20 2020-02-27 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for optochemical control of crispr-cas9
US11174500B2 (en) 2018-08-24 2021-11-16 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
WO2020061426A2 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Acuitas Therapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing lipid nanoparticles and liposomes
BR112021005815A2 (pt) 2018-09-28 2021-06-29 Nutcracker Therapeutics, Inc. formulações de nanoparticulas lipídicas compreendendo compostos peptídicos catiônicos lipidados para liberação de ácido nucleico
DK3860561T3 (da) 2018-10-01 2023-08-07 Alnylam Pharmaceuticals Inc Bionedbrydelige lipider til levering af aktive stoffer
PL3864163T3 (pl) 2018-10-09 2024-05-20 The University Of British Columbia Kompozycje i układy zawierające pęcherzyki zdolne do transfekcji wolne od rozpuszczalników organicznych i detergentów oraz związane z nimi sposoby postępowania
CA3116576A1 (en) 2018-10-18 2020-04-23 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
CA3121191A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Crispr Therapeutics Ag Optimized mrna encoding cas9 for use in lnps
US11166996B2 (en) 2018-12-12 2021-11-09 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Anellovirus compositions and methods of use
JP2022517783A (ja) 2019-01-11 2022-03-10 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 活性剤の脂質ナノ粒子送達のための脂質
WO2020191102A1 (en) 2019-03-18 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Type vii crispr proteins and systems
WO2020191103A1 (en) * 2019-03-19 2020-09-24 Arcturus Therapeutics, Inc. Method of making lipid-encapsulated rna nanoparticles
EP3711749A1 (en) 2019-03-19 2020-09-23 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Method of making lipid nanoparticles
WO2020206231A1 (en) 2019-04-05 2020-10-08 Precision Biosciences, Inc. Methods of preparing populations of genetically-modified immune cells
WO2020227534A1 (en) 2019-05-07 2020-11-12 Precision Biosciences, Inc. Optimization of engineered meganucleases for recognition sequences
WO2020236972A2 (en) 2019-05-20 2020-11-26 The Broad Institute, Inc. Non-class i multi-component nucleic acid targeting systems
US20220305107A1 (en) 2019-06-18 2022-09-29 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company COMBINATION OF HEPATITIS B VIRUS (HBV) VACCINES AND HBV-TARGETING RNAi
WO2021016608A1 (en) 2019-07-25 2021-01-28 Precision Biosciences, Inc. Compositions and methods for sequential stacking of nucleic acid sequences into a genomic locus
ES2918001A2 (es) 2019-08-14 2022-07-13 Acuitas Therapeutics Inc Nanoparticulas lipidicas mejoradas para el suministro de acidos nucleicos
CN114929205A (zh) 2019-09-06 2022-08-19 世代生物公司 包括末端封闭式dna和可切割脂质的脂质纳米颗粒组合物及其使用方法
JP2022548304A (ja) 2019-09-19 2022-11-17 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療薬の細胞内送達のための分岐状尾部脂質化合物及び組成物
CN114787127B (zh) 2019-11-22 2024-04-26 世代生物公司 可电离脂质及其纳米颗粒组合物
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
EP4114946A1 (en) 2020-03-04 2023-01-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for sensitization of tumor cells to immune therapy
IL296781A (en) 2020-03-30 2022-11-01 BioNTech SE RNA compositions targeting claudin-18.2
WO2021204179A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for coronavirus
WO2021216541A1 (en) 2020-04-20 2021-10-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Biologically active dry powder compositions and method of their manufacture and use
CN113521268A (zh) 2020-04-22 2021-10-22 生物技术Rna制药有限公司 冠状病毒疫苗
WO2021231259A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Precision Biosciences, Inc. Self-limiting viral vectors encoding nucleases
EP4150068A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 Precision BioSciences, Inc. Treatment of retinitis pigmentosa using improved engineered meganucleases
US20210355463A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Crispr Therapeutics Ag Messenger rna encoding cas9 for use in genome-editing systems
EP3915544A1 (en) * 2020-05-25 2021-12-01 Leon-Nanodrugs GmbH Method for producing a liposome dispersion
TW202208630A (zh) 2020-06-15 2022-03-01 美國全美兒童醫院之研究學會 針對肌肉營養不良症的腺相關病毒載體遞送
EP4182297A1 (en) 2020-07-16 2023-05-24 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
WO2022040435A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nanodrugs for targeted drug delivery and use thereof
CN112206726A (zh) * 2020-09-04 2021-01-12 仲恺农业工程学院 海藻酸钠/乳脂粉昆虫病毒微胶囊及其制备方法
CA3194951A1 (en) 2020-09-13 2022-03-17 Arcturus Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticles encapsulation of large rna
US20230365995A1 (en) 2020-10-07 2023-11-16 Precision Biosciences, Inc. Lipid nanoparticle compositions
US11771652B2 (en) 2020-11-06 2023-10-03 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mRNA vaccines
US11591544B2 (en) 2020-11-25 2023-02-28 Akagera Medicines, Inc. Ionizable cationic lipids
MX2023007574A (es) 2020-12-22 2023-09-29 CureVac SE "vacuna de arn contra variantes de sars-cov-2.
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
IL305353A (en) 2021-02-26 2023-10-01 Ethris Gmbh Spray formulations for the administration of acid bases
EP4059491A1 (de) 2021-03-17 2022-09-21 Evonik Operations GmbH Vorrichtung und verfahren zur herstellung von nanocarriern und/oder nanoformulierungen
WO2022215036A1 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Vaxthera Sas Coronavirus vaccine comprising a mosaic protein
JP2024514939A (ja) 2021-04-22 2024-04-03 プレシジョン バイオサイエンシズ，インク． ヒトミトコンドリアゲノムを標的化する遺伝子操作メガヌクレアーゼ
EP4326862A1 (en) 2021-04-22 2024-02-28 Precision Biosciences, Inc. Engineered meganucleases that target human mitochondrial genomes
EP4352215A1 (en) 2021-06-11 2024-04-17 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna polymerase iii promoters and methods of use
WO2022266032A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Generation Bio Co. Cationic lipids and compositions thereof
WO2023278811A1 (en) 2021-07-01 2023-01-05 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
CA3227103A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Matthew P. GEMBERLING Compositions and methods for modulating expression of frataxin (fxn)
WO2023010135A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2023023055A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Compositions and methods for optimizing tropism of delivery systems for rna
WO2023044343A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Acyclic lipids and methods of use thereof
CA3232386A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and methods of use thereof
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
TW202327646A (zh) 2021-10-15 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 Rna分子
WO2023077148A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Tome Biosciences, Inc. Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
CA3237482A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone Precise genome editing using retrons
WO2023091490A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Senda Biosciences, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
WO2023091787A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Senda Biosciences, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
WO2023114937A2 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Fluorinated cationic lipids for use in lipid nanoparticles
WO2023114944A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Fluorinated cationic lipids for use in lipid nanoparticles
US20230295075A1 (en) 2021-12-16 2023-09-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2023111907A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Pfizer Inc. Polynucleotide compositions and uses thereof
WO2023122764A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Tome Biosciences, Inc. Co-delivery of a gene editor construct and a donor template
WO2023122752A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023141602A2 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Renagade Therapeutics Management Inc. Engineered retrons and methods of use
WO2023147090A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
WO2023144798A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Genevant Sciences Gmbh Ionizable cationic lipids for lipid nanoparticles
WO2023144792A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Genevant Sciences Gmbh Poly(alkyloxazoline)-lipid conjugates and lipid particles containing same
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023178182A1 (en) 2022-03-16 2023-09-21 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for detection and treatment of coronavirus infection
WO2023183616A1 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Senda Biosciences, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
WO2023196818A1 (en) 2022-04-04 2023-10-12 The Regents Of The University Of California Genetic complementation compositions and methods
WO2023196931A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
US20230346977A1 (en) 2022-04-13 2023-11-02 Universitat Autònoma De Barcelona Treatment of neuromuscular diseases via gene therapy that expresses klotho protein
WO2023205744A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion compositions
WO2023215831A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Tome Biosciences, Inc. Guide rna compositions for programmable gene insertion
WO2023215481A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University INTERFERING RNA THERAPY FOR PLN-R14del CARDIOMYOPATHY
WO2023218431A1 (en) 2022-05-13 2023-11-16 BioNTech SE Rna compositions targeting hiv
WO2023225670A2 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Tome Biosciences, Inc. Ex vivo programmable gene insertion
WO2023230295A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 BioNTech SE Rna compositions for delivery of monkeypox antigens and related methods
WO2023232747A1 (en) 2022-05-30 2023-12-07 BioNTech SE Complexes for delivery of nucleic acids
GB202208022D0 (en) 2022-05-31 2022-07-13 Sisaf Ltd Therapeutic compounds and compositions
WO2023239756A1 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2023250511A2 (en) 2022-06-24 2023-12-28 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for reducing low-density lipoprotein through targeted gene repression
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024006863A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Precision NanoSystems ULC Lipid nanoparticle formulations for vaccines
WO2024007020A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. Combination of engineered natural killer (nk) cells and antibody therapy and related methods
WO2024015881A2 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for targeted transcriptional activation
GB202210794D0 (en) 2022-07-22 2022-09-07 Sisaf Ltd Lipid formulations
WO2024033901A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2024037578A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Composition of lipid nanoparticles
US20240067968A1 (en) 2022-08-19 2024-02-29 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for regulation of hepatitis b virus through targeted gene repression
EP4327829A1 (en) 2022-08-26 2024-02-28 Ethris GmbH Stabilization of lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
WO2024042236A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Ethris Gmbh Stable lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
WO2024049979A2 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Senda Biosciences, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
WO2024054843A2 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2024057237A1 (en) 2022-09-16 2024-03-21 Pfizer Inc. Lipid nanoparticles
WO2024064642A2 (en) 2022-09-19 2024-03-28 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for modulating t cell function
WO2024064934A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium csp antigens and related methods
WO2024064910A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Chroma Medicine, Inc. Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
WO2024063789A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024064931A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of liver stage antigens and related methods
WO2024063788A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
WO2024074376A1 (en) 2022-09-27 2024-04-11 Resolution Therapeutics Limited Therapeutic macrophages
WO2024074211A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 BioNTech SE Rna compositions targeting claudin-18.2
WO2024074634A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 BioNTech SE Rna compositions targeting claudin-18.2
WO2024089633A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Pfizer Inc. Rna molecules encoding rsv-f and vaccines containing them
WO2024089634A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against influenza and rsv
WO2024095179A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Pfizer Inc. Lipid compounds and uses thereof
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)

Family Cites Families (133)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4394448A (en) 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
DE3068743D1 (en) 1980-01-16 1984-08-30 Weder Hans G Process and dialysis-installation for the preparation of bilayer-vesicles and their use
US4598051A (en) 1980-03-12 1986-07-01 The Regents Of The University Of California Liposome conjugates and diagnostic methods therewith
GR77320B (es) * 1980-12-22 1984-09-11 Procter & Gamble
US4394372A (en) 1980-12-22 1983-07-19 The Procter & Gamble Company Process for making lipid membrane structures
US4602354A (en) 1983-01-10 1986-07-22 Ncr Corporation X-and-OR memory array
US4515736A (en) 1983-05-12 1985-05-07 The Regents Of The University Of California Method for encapsulating materials into liposomes
JPS607932A (ja) * 1983-06-29 1985-01-16 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd リポソーム懸濁液およびその製法
US5545412A (en) 1985-01-07 1996-08-13 Syntex (U.S.A.) Inc. N-[1, (1-1)-dialkyloxy]-and N-[1, (1-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-n,n,n-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5208036A (en) 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5320906A (en) 1986-12-15 1994-06-14 Vestar, Inc. Delivery vehicles with amphiphile-associated active ingredient
US4895452A (en) 1988-03-03 1990-01-23 Micro-Pak, Inc. Method and apparatus for producing lipid vesicles
EP0422124A4 (en) 1988-06-27 1991-10-16 Genex Corporation Thermal release of recombinant protein into culture media
JPH0720857B2 (ja) 1988-08-11 1995-03-08 テルモ株式会社 リポソームおよびその製法
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
JPH03126211A (ja) 1989-10-12 1991-05-29 Nippon Chemicon Corp 電解コンデンサ用電解液
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
JPH06171Y2 (ja) 1990-03-30 1994-01-05 日新製鋼株式会社 圧延機のパスライン切換装置
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
DE4013580A1 (de) * 1990-04-24 1991-10-31 Schering Ag Verfahren zur herstellung von wirkstoffhaltigen waessrigen liposomensuspensionen
JP2958076B2 (ja) * 1990-08-27 1999-10-06 株式会社ビタミン研究所 遺伝子導入用多重膜リポソーム及び遺伝子捕捉多重膜リポソーム製剤並びにその製法
JPH0665382B2 (ja) * 1991-03-20 1994-08-24 雪印乳業株式会社 リポソーム調製装置とその装置を使用するリポソーム調製方法
JP2774417B2 (ja) 1991-08-07 1998-07-09 株式会社ディ・ディ・エス研究所 ペプチド骨格を有する分枝鎖型糖複合体及び微粒子キャリヤー
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
US5298422A (en) 1991-11-06 1994-03-29 Baylor College Of Medicine Myogenic vector systems
US5858784A (en) 1991-12-17 1999-01-12 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery
AU3467193A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Regents Of The University Of California, The Gene therapy for cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activity (CFTR)
JP2731630B2 (ja) 1992-02-19 1998-03-25 ベイラー・カレッジ・オブ・メディスン 細胞増殖のオリゴヌクレオチドの変調
ATE194767T1 (de) * 1992-03-23 2000-08-15 Univ Georgetown In liposomen verkapseltes taxol und verwendungsverfahren
WO1993024640A2 (en) 1992-06-04 1993-12-09 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for in vivo gene therapy
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
JP2854203B2 (ja) 1992-09-03 1999-02-03 株式会社ディ・ディ・エス研究所 リポソームの製造法
JPH0680560U (ja) 1993-04-21 1994-11-15 株式会社長谷川製作所 パイプレンチ
US5478860A (en) 1993-06-04 1995-12-26 Inex Pharmaceuticals Corp. Stable microemulsions for hydrophobic compound delivery
EP0706374B1 (en) 1993-06-30 1997-12-10 Genentech, Inc. Method for preparing liposomes
ES2154680T3 (es) 1993-07-08 2001-04-16 Liposome Co Inc Metodo para controlar el tamaño de los liposomas.
WO1995002698A1 (en) 1993-07-12 1995-01-26 Life Technologies, Inc. Composition and methods for transfecting eukaryotic cells
US5674908A (en) 1993-12-20 1997-10-07 Life Technologies, Inc. Highly packed polycationic ammonium, sulfonium and phosphonium lipids
FR2714830B1 (fr) 1994-01-10 1996-03-22 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations.
US6989434B1 (en) 1994-02-11 2006-01-24 Invitrogen Corporation Reagents for intracellular delivery of macromolecules
US6075012A (en) 1994-02-11 2000-06-13 Life Technologies, Inc. Reagents for intracellular delivery of macromolecules
EP0807116A4 (en) 1994-06-22 1998-01-07 Megabios Corp CATIONIC AMPHIPHILE
FR2722506B1 (fr) 1994-07-13 1996-08-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations
US5885613A (en) * 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
US5627159A (en) 1994-10-27 1997-05-06 Life Technologies, Inc. Enhancement of lipid cationic transfections in the presence of serum
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US6251939B1 (en) 1995-06-07 2001-06-26 Promega Biosciences, Inc. Carbamate-based cationic lipids
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
JPH11507815A (ja) 1995-06-07 1999-07-13 ジンタ・インコーポレイテッド ホスホン酸基本カチオン性脂質
DE69634084T2 (de) 1995-06-07 2005-12-08 Inex Pharmaceuticals Corp. Herstellung von lipid-nukleinsäure partikeln duch ein hydrophobische lipid-nukleinsäuree komplexe zwischenprodukt und zur verwendung in der gentransfer
US5981501A (en) * 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US5811406A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Regents Of The University Of California Dry powder formulations of polynucleotide complexes
US6007838A (en) * 1995-06-07 1999-12-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Process for making liposome preparation
US20030069173A1 (en) 1998-03-16 2003-04-10 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced transfections
WO1996040961A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US6339173B1 (en) 1996-07-22 2002-01-15 Promega Biosciences, Inc. Amide-based cationic lipids
US6330349B1 (en) 1995-11-30 2001-12-11 Chromavision Medical Systems, Inc. Automated method for image analysis of residual protein
US5817856A (en) 1995-12-11 1998-10-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Radiation-protective phospholipid and method
DK0807431T3 (da) * 1996-05-14 2004-07-26 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåde til fremstilling af carotenoidpræparater
US6284267B1 (en) 1996-08-14 2001-09-04 Nutrimed Biotech Amphiphilic materials and liposome formulations thereof
US6210707B1 (en) 1996-11-12 2001-04-03 The Regents Of The University Of California Methods of forming protein-linked lipidic microparticles, and compositions thereof
US6034135A (en) 1997-03-06 2000-03-07 Promega Biosciences, Inc. Dimeric cationic lipids
US5877220A (en) 1997-03-06 1999-03-02 Genta, Incorporated Amide-based oligomeric cationic lipids
JP4656675B2 (ja) * 1997-05-14 2011-03-23 ユニバーシティー オブ ブリティッシュ コロンビア 脂質小胞への荷電した治療剤の高率封入
US6835395B1 (en) * 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
WO1998051285A2 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Genzyme Corporation Cationic amphiphile formulations
JP2002508765A (ja) * 1997-06-23 2002-03-19 アルザ コーポレイション リポソーム被包ポリヌクレオチド組成物および方法
US20030083272A1 (en) 1997-09-19 2003-05-01 Lahive & Cockfield, Llp Sense mrna therapy
DE69837274T2 (de) 1997-10-10 2007-11-08 Inex Pharmaceuticals Corp., Burnaby Verfahren zur verkapselung von nukleinsäuren in lipiddoppelschichten
US6734171B1 (en) 1997-10-10 2004-05-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6410328B1 (en) 1998-02-03 2002-06-25 Protiva Biotherapeutics Inc. Sensitizing cells to compounds using lipid-mediated gene and compound delivery
CA2271582A1 (en) 1998-05-14 1999-11-14 Sean C. Semple Method for administration of therapeutic agents, including antisense, with repeat dosing
US20030044454A1 (en) * 1998-06-30 2003-03-06 Masaru Fukui Compositions containing liposomes and/or emulsions and process for the preparation thereof
JP2002520038A (ja) 1998-07-20 2002-07-09 アイネックス ファーマシューティカルズ コーポレイション リポソームカプセル化核酸複合体
US6900049B2 (en) 1998-09-10 2005-05-31 Cell Genesys, Inc. Adenovirus vectors containing cell status-specific response elements and methods of use thereof
ATE383331T1 (de) 1998-11-12 2008-01-15 Invitrogen Corp Transportreagentien
JP2002529240A (ja) * 1998-11-13 2002-09-10 オプタイム セラピュウティクス， インコーポレイテッド リポソーム生成のための方法および装置
US6649780B1 (en) 1998-12-22 2003-11-18 Valentis, Inc. Cationic lipids
CA2370690A1 (en) 1999-04-20 2000-10-26 The University Of British Columbia Cationic peg-lipids and methods of use
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
US20010048940A1 (en) 1999-06-18 2001-12-06 Jennifer D. Tousignant Cationic amphiphile micellar complexes
CA2379060A1 (en) 1999-07-14 2001-01-25 Alza Corporation Neutral lipopolymer and liposomal compositions containing same
IL147089A0 (en) 1999-07-15 2002-08-14 Inex Pharmaceuticals Corp Methods of preparing lipid-encapsulated therapeutic agents
US6242188B1 (en) * 1999-07-30 2001-06-05 Applied Gene Technologies, Inc. Sample processing to release nucleic acids for direct detection
WO2001051003A2 (en) 2000-01-10 2001-07-19 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Use of lipid conjugates in the treatment of disease
WO2002081628A2 (en) 2001-04-05 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth, using nucleic acid based technologies
KR20080023768A (ko) 2000-03-30 2008-03-14 화이트헤드 인스티튜트 포 바이오메디칼 리서치 Ｒｎａ 간섭의 ｒｎａ 서열 특이적인 매개체
US20030072794A1 (en) 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
AU7542301A (en) 2000-06-09 2001-12-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes<sup>TM</sup>) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
WO2002034236A2 (en) 2000-10-25 2002-05-02 The University Of British Columbia Lipid formulations for target delivery
US20020086849A1 (en) 2000-10-27 2002-07-04 Gulilat Gebeyehu Method for introducing antisense oligonucleotides into eucaryotic cells
EP1203614A1 (de) * 2000-11-03 2002-05-08 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Lipidvesikeln
JP2004522717A (ja) * 2000-12-01 2004-07-29 バイオミラ，インコーポレイテッド Ｐｅｇへの注入による大型リポソームの作製
CZ302719B6 (cs) 2000-12-01 2011-09-21 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Izolovaná molekula dvouretezcové RNA, zpusob její výroby a její použití
WO2002085434A1 (de) 2001-04-21 2002-10-31 Curevac Gmbh Injektionsgerät für rna applikation
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
US20040142892A1 (en) 2001-04-30 2004-07-22 The University Of British Columbia Autogene nucleic acids encoding a secretable RNA polymerase
CA2830887C (en) 2001-06-05 2016-11-29 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition containing a stabilised mrna optimised for translation in its coding regions
US20040063654A1 (en) 2001-11-02 2004-04-01 Davis Mark E. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
AU2003205049B2 (en) * 2002-01-09 2009-05-28 Transave, Inc. Efficient nucleic acid encapsulation into medium sized liposomes
US20090191259A1 (en) * 2002-01-09 2009-07-30 Transave, Inc. Efficient liposomal encapsulation
WO2003059381A2 (en) 2002-01-18 2003-07-24 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
EP1509203B1 (en) 2002-05-15 2016-04-13 California Pacific Medical Center Delivery of nucleic acid-like compounds
DE60334618D1 (de) 2002-06-28 2010-12-02 Protiva Biotherapeutics Inc Verfahren und vorrichtung zur herstellung von liposomen
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
JP2007524349A (ja) 2003-01-16 2007-08-30 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア ＩＣＡＭ−１のｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法
US7803781B2 (en) 2003-02-28 2010-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression
US7067169B2 (en) 2003-06-04 2006-06-27 Chemat Technology Inc. Coated implants and methods of coating
JP4695075B2 (ja) 2003-06-18 2011-06-08 イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム トランスフェクションで使用するためのスフィンゴ脂質ポリアルキルアミン抱合体
SG190613A1 (en) 2003-07-16 2013-06-28 Protiva Biotherapeutics Inc Lipid encapsulated interfering rna
JP4842821B2 (ja) 2003-09-15 2011-12-21 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド ポリエチレングリコール修飾脂質化合物およびその使用
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
EP1766035B1 (en) 2004-06-07 2011-12-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid encapsulated interfering rna
EP1773857A4 (en) 2004-07-02 2009-05-13 Protiva Biotherapeutics Inc THE IMMUNE SYSTEM STIMULATING SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF
AU2006336384B2 (en) * 2005-02-14 2010-12-16 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
US20060228406A1 (en) 2005-03-17 2006-10-12 Invitrogen Corporation Transfection reagent for non-adherent suspension cells
CA2616877C (en) 2005-07-27 2014-01-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
CA2721380A1 (en) 2008-04-15 2009-10-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of csn5 gene expression using interfering rna
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
JP5766188B2 (ja) 2009-07-01 2015-08-19 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 固形腫瘍に治療剤を送達するための脂質製剤
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
ES2702428T3 (es) 2010-11-15 2019-02-28 Life Technologies Corp Reactivos de transfección que contienen amina y métodos para prepararlos y usarlos
US20160151284A1 (en) 2013-07-23 2016-06-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for delivering messenger rna

Also Published As

Publication number Publication date
EP2823809B1 (en) 2016-11-02
US8329070B2 (en) 2012-12-11
CA2491164A1 (en) 2004-01-08
US20210275455A1 (en) 2021-09-09
ATE485031T1 (de) 2010-11-15
US11298320B2 (en) 2022-04-12
US20040142025A1 (en) 2004-07-22
EP2823809A1 (en) 2015-01-14
AU2009212823A1 (en) 2009-09-17
AU2009212823B2 (en) 2011-09-01
CA2491164C (en) 2012-05-08
US7901708B2 (en) 2011-03-08
US20200268664A1 (en) 2020-08-27
JP2010184947A (ja) 2010-08-26
EP1519714B1 (en) 2010-10-20
US20190167586A1 (en) 2019-06-06
JP2016172778A (ja) 2016-09-29
US20140294937A1 (en) 2014-10-02
US9504651B2 (en) 2016-11-29
US20210267891A1 (en) 2021-09-02
JP2016199585A (ja) 2016-12-01
DK1519714T3 (da) 2011-01-31
US20170258719A1 (en) 2017-09-14
AU2003245160B2 (en) 2009-09-24
EP1519714A1 (en) 2005-04-06
JP2005538967A (ja) 2005-12-22
US20110216622A1 (en) 2011-09-08
EP2338478B1 (en) 2014-07-23
AU2003245160A1 (en) 2004-01-19
JP2013067657A (ja) 2013-04-18
US20210275454A1 (en) 2021-09-09
US11318098B2 (en) 2022-05-03
JP5192515B2 (ja) 2013-05-08
US9492386B2 (en) 2016-11-15
EP2338478A1 (en) 2011-06-29
WO2004002453A1 (en) 2004-01-08
DE60334618D1 (de) 2010-12-02
US20140044772A1 (en) 2014-02-13
JP4722481B2 (ja) 2011-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2354607T3 (es) Procedimiento y aparato para producir liposomas.
CA2616877C (en) Systems and methods for manufacturing liposomes
US20130037977A1 (en) Preparation of Lipid Nanoparticles