RU2647476C2 - Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства - Google Patents
Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства Download PDFInfo
- Publication number
- RU2647476C2 RU2647476C2 RU2014122432A RU2014122432A RU2647476C2 RU 2647476 C2 RU2647476 C2 RU 2647476C2 RU 2014122432 A RU2014122432 A RU 2014122432A RU 2014122432 A RU2014122432 A RU 2014122432A RU 2647476 C2 RU2647476 C2 RU 2647476C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lipid
- solution
- sirna
- ethanol
- lipids
- Prior art date
Links
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 226
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 140
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 title description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 171
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 85
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 53
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 claims description 47
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 22
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 12
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- SBCVJZHHHVYKNM-UHFFFAOYSA-M [2-[bis(2-tetradecanoyloxyethyl)amino]-2-oxoethyl]-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCN(C(=O)C[N+](C)(C)CCO)CCOC(=O)CCCCCCCCCCCCC SBCVJZHHHVYKNM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 8
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 5
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 5
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 claims description 5
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 5
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 5
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 5
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 5
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 3
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 126
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 71
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 71
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 71
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 68
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 56
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 42
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 32
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 29
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 29
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 26
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 24
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 24
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 24
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 24
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 19
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 13
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 12
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 9
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 8
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 8
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 6
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 6
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AKJHMTWEGVYYSE-AIRMAKDCSA-N 4-HPR Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1NC(=O)/C=C(\C)/C=C/C=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C AKJHMTWEGVYYSE-AIRMAKDCSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229940067605 phosphatidylethanolamines Drugs 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 3
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylethyl 2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DQHZWYHPADEDAI-UHFFFAOYSA-N 3,7-dimethyl-9-(2,2,6-trimethylcyclohexyl)nonanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(C)CCCC(C)CCC1C(C)CCCC1(C)C DQHZWYHPADEDAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UPHFJVMAJPDXRB-UHFFFAOYSA-N 3,7-dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)nonanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(C)CCCC(C)CCC1=C(C)CCCC1(C)C UPHFJVMAJPDXRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 description 2
- LMMRBBYYUIBMHI-UHFFFAOYSA-N 9-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)nonanoic acid Chemical compound CC1=C(CCCCCCCCC(O)=O)C(C)(C)CCC1 LMMRBBYYUIBMHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 2
- NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N [3-(dimethylamino)-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC NYDLOCKCVISJKK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- LZCDAPDGXCYOEH-UHFFFAOYSA-N adapalene Chemical compound C1=C(C(O)=O)C=CC2=CC(C3=CC=C(C(=C3)C34CC5CC(CC(C5)C3)C4)OC)=CC=C21 LZCDAPDGXCYOEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002916 adapalene Drugs 0.000 description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- VQBJUJRROIKNNI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[2-[2-(3-aminopropoxy)ethoxy]ethoxy]propyl]-3-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[2-[2-(3-aminopropoxy)ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-oxopropoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanamide Chemical compound NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)CCOCCOCCOCCOCCOCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCN VQBJUJRROIKNNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 2
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 2
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 2
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- IXPNELVVWRMWJI-UHFFFAOYSA-N 2,6-diamino-n-[3-[2-[2-[3-[3-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[2-[2-[3-(2,6-diaminohexanoylamino)propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-oxopropoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoylamino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propyl]hexanamide Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)CCOCCOCCOCCOCCOCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)C(N)CCCCN IXPNELVVWRMWJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVRREBJWEVLTEQ-WRBBJXAJSA-N 2-[3-(dimethylamino)propanoyl-[2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxyethyl]amino]ethyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCCN(C(=O)CCN(C)C)CCOC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SVRREBJWEVLTEQ-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- LYVCKXIOCZNKRV-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[2-(dimethylamino)ethylsulfanyl]acetyl]-(2-tetradecanoyloxyethyl)amino]ethyl tetradecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCN(C(=O)CSCCN(C)C)CCOC(=O)CCCCCCCCCCCCC LYVCKXIOCZNKRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- QIGJYVCQYDKYDW-UHFFFAOYSA-N 3-O-alpha-D-mannopyranosyl-D-mannopyranose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(CO)OC(O)C1O QIGJYVCQYDKYDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-DJHAAKORSA-N 6-O-alpha-D-glucopyranosyl-alpha-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-DJHAAKORSA-N 0.000 description 1
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N DOSPA trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCNC(=O)C(CCCNCCCN)NCCCN)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 229920002670 Fructan Polymers 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N Maltulose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)(CO)OCC1O NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N Metrizamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(=O)N[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)OC2O)O)=C1I BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920000362 Polyethylene-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HIWPGCMGAMJNRG-ACCAVRKYSA-N Sophorose Natural products O([C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HIWPGCMGAMJNRG-ACCAVRKYSA-N 0.000 description 1
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N Spermine Natural products NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DRQXUCVJDCRJDB-UHFFFAOYSA-N Turanose Natural products OC1C(CO)OC(O)(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 DRQXUCVJDCRJDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 1
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- HIWPGCMGAMJNRG-UHFFFAOYSA-N beta-sophorose Natural products OC1C(O)C(CO)OC(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HIWPGCMGAMJNRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- PUDIBYZCMYMCQI-ZETCQYMHSA-N carboxyspermidine Chemical compound NCCCNCCC[C@H](N)C(O)=O PUDIBYZCMYMCQI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940009025 chenodeoxycholate Drugs 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- 150000001838 cholestanes Chemical class 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M didecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UAKOZKUVZRMOFN-JDVCJPALSA-M dimethyl-bis[(z)-octadec-9-enyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC UAKOZKUVZRMOFN-JDVCJPALSA-M 0.000 description 1
- REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M dimethyldioctadecylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 210000000613 ear canal Anatomy 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 150000002190 fatty acyls Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 150000002313 glycerolipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 239000000819 hypertonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940021223 hypertonic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002977 intracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 1
- 238000003754 machining Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N maltulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960000554 metrizamide Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- GLGLUQVVDHRLQK-WRBBJXAJSA-N n,n-dimethyl-2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propan-1-amine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(CN(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC GLGLUQVVDHRLQK-WRBBJXAJSA-N 0.000 description 1
- QIGJYVCQYDKYDW-NSYYTRPSSA-N nigerose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1O QIGJYVCQYDKYDW-NSYYTRPSSA-N 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003617 peroxidasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N pregnane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](CC)[C@@]1(C)CC2 JWMFYGXQPXQEEM-WZBAXQLOSA-N 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003290 ribose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M sodium;[(2r)-2,3-di(octadecanoyloxy)propyl] 2-(2-methoxyethoxycarbonylamino)ethyl phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCCNC(=O)OCCOC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- PZDOWFGHCNHPQD-VNNZMYODSA-N sophorose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PZDOWFGHCNHPQD-VNNZMYODSA-N 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 238000002693 spinal anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 150000003440 styrenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 125000000647 trehalose group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4833—Encapsulating processes; Filling of capsules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
- B01J13/04—Making microcapsules or microballoons by physical processes, e.g. drying, spraying
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
- B01J13/06—Making microcapsules or microballoons by phase separation
- B01J13/12—Making microcapsules or microballoons by phase separation removing solvent from the wall-forming material solution
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Настоящая группа изобретений относится к области медицины, в частности фармакологии, и раскрывает способ получения липидной наночастицы, инкапсулирующей молекулу siPHK и фармацевтическую композицию, содержащую липидную наночастицу, инкапсулирующую молекулу siPHK. Группа изобретений обеспечивает получение липидных наночастиц, имеющих индекс полидисперсности (PDI) менее 0,2 и размер частицы от 50 до 150 нм, который может осуществляться в больших объемах и использоваться при крупномасштабном производстве. Настоящие липидные наночастицы могут быть использованы для обеспечения носителей для доставки терапевтических молекул, в частности, молекул siPHK. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 13 табл., 7 пр, 6 ил.
Description
ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США №61/556,124, поданной 4 ноября 2011, которая включена в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к способу получения частиц на основе липидов и нуклеиновых кислот простым и репродуцируемым образом. Способ обеспечивает получение частиц, которые являются монодисперсными со средним размером 50-150 нм.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Липиды являются потенциально полезными в качестве носителей для доставки терапевтических молекул, в частности для доставки нуклеиновых кислот. Липиды образуют липосомы, которые могут инкапсулировать, образовывать комплексы или захватывать молекулы нуклеиновых кислот, и таким образом улучшать доставку этого класса терапевтических молекул в клетки-мишени после введения, например, внутривенно для циркуляции. Их полезность в фармацевтических композициях ограничивается доступными методами для получения наночастиц липидов и нуклеиновых кислот воспроизводимым образом. Были разработаны различные методы для получения таких наночастиц.
Batzri et al., 1973, Biophys Biochem Acta 298:1015-19, и Kremer et al., 1977, Biochemistry 16:3932-35, описывают получение липидных везикул посредством растворения липидов в этаноле и впрыскивания этанольного раствора в водный раствор, в котором липиды самопроизвольно формируют липосомы. Hirota et al., 1999, BioTechniques 27:286-89, описывают получение липидных везикул, покрытых молекулами нуклеиновой кислоты, посредством растворения катионных липидов в этаноле и впрыскивания этанольного раствора в водный раствор, содержащий молекулы нуклеиновой кислоты. Этот способ не позволяет получить липосомы, которые инкапсулируют нуклеиновую кислоту.
Maurer et al. в US 7094423 описывают получение липосом, которые инкапсулируют нуклеиновые кислоты, посредством сначала получения предварительно сформированных одностеночных везикул в водном растворе. Предварительно сформированные везикулы получают посредством растворения липидов в этаноле и впрыскивания липидной смеси в водный буфер. Способ получения пустых предварительно сформированных везикул включает установление размера посредством экструзии. Этанол добавляется в пустые предварительно сформированные везикулы после установления размера для дестабилизации их, и нуклеиновые кислоты в 40% этаноле добавляются для дестабилизации липидных везикул. После инкубации смесь диафильтруется для удаления этанола. Изменения процентного содержания этанола, температуры, времени инкубации, липидной композиции, отношения лекарственное средство/липид и начальной концентрации нуклеиновой кислоты все влияют на эффективность инкапсулирования и выход этого способа. Например, Maurer et al. раскрывает, что захват увеличивается при увеличении отношения олигонуклеотид:липид, с достижением максимума при более чем 0.16 мг антисмыслового нуклеотида на мг липида, с достижением увеличения числа липосом большего размера и их полидисперности.
Semple et al. в US 6858225 получали липосомы, инкапсулирующие РНК, применяя ионизируемый катионный липид. Липид растворяется в этаноле и объединяется с нуклеиновыми кислотами в водном буфере при низком pH. Этанол удаляется, и pH доводится до нейтрального значения pH с образованием липосом. Получение липосом является гетерогенным и требует гомогенизации или экструзии с получением монодисперсных липидных везикул. Согласно Maurer et al., Semple et al. раскрывают, что захват увеличивается при увеличении отношения олигонуклеотид:липид, с достижением максимума при более чем 0.16 мг антисмыслового олигонуклеотида на мг липида, с достижением увеличения числа липосом большего размера и их полидисперности.
MacLachlan et al. в US 7901708 описывают получение липидных везикул, инкапсулирующих РНК посредством смешивания липидов, растворенных в этаноле, с РНК в водном растворе в смесительной камере (Т-трубка), в которой липиды и РНК растворяются постепенно, таким образом, по существу мгновенно образуя везикулы.
Wheeler et al. в US 20100041152 описывают получение липосом, инкапсулирующих РНК, посредством растворения катионных липидов в этаноле и смешивания с РНК в 65-85% этаноле с получением растворимого заряд-нейтрализованного комплекса, добавления некатионных липидов к этому комплексу с образованием смеси липид - нуклеиновая кислота, и удаления этанола. Липосому нуждаются в гомогенизации или экструзии с получением монодисперсных липидных везикул.
Остается потребность в способе получения инкапсулированных нуклеиновых кислот без необходимости стадий интенсивной механической обработки для получения предварительно сформированных липосом и без необходимости стадии обработки для уменьшения частиц липид-нуклеиновая кислота до монодисперсной популяции.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Одним объектом настоящего изобретения является способ получения липидной наночастицы, инкапсулирующей полианион, содержащий стадии добавления первого раствора, содержащего липиды, растворенные в смешивающемся с водой органическом растворителе, при постоянной скорости во второй раствор, содержащий полианион в водном буфере при перемешивании второго раствора с получением смеси, содержащей органический растворитель при 25-45% (об:об); и удаления органического растворителя из смеси посредством диафильтрации с применением водного буферизованного раствора при нейтральном pH. Добавление первого раствора ко второму раствору предпочтительно продолжается в течение 1-100 минут. Полианион может представлять собой нуклеиновую кислоту, например, молекулу РНК. Полианион предпочтительно присутствует при концентрации 0.08-0.8 мг/мл. Отношение липид: лекарственное средство (мас.:мас.) липидной наночастицы предпочтительно составляет от 0.06 до 0.16. Отношение зарядов липид: лекарственное средство липидной наночастицы предпочтительно составляет от 1:25:1 до 1:1.
Другим вариантом выполнения способа является применение полисахарида в водных растворах. Полисахарид предпочтительно выбирается из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, сорбита, ксилита, лактозы, мальтозы и инулина. Другой вариант выполнения способа дополнительно содержит стадию лиофилизации липидной наночастицы, инкапсулирующей полианион.
В другом варианте выполнения способа органическим раствором предпочтительно является этанол. Предпочтительно, при завершении получения смеси липида и полианиона, смесь содержит этанол при 35% (об.:об.).
В другом варианте выполнения способа липиды содержат катионный липид, вспомогательный липид, стерол и ПЭГ липид. Предпочтительно, катионный липид составляет от 40 до 60 мольных процентов липидов. Предпочтительно, катионный липид выбирается из группы, состоящей из HEDC, HEDODC и HE-Et-DODC, более предпочтительно состоящего из ионизируемого или неионизируемого положительного заряда. Предпочтительно, липиды дополнительно содержат нацеливающий липид.
В другом варианте выполнения способа этанол и водные растворы смешиваются при 25-55°C, и буферизуются при pH 3.5-6.5, предпочтительно с применением цитрата.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая липидную наночастицу, инкапсулирующую полианион, полученную посредством способа, содержащего стадии добавления первого раствора, содержащего липиды, растворенные в смешивающемся с водой органическом растворителе, при постоянной скорости во второй раствор, содержащий полианион в водном буфере при перемешивании второго раствора с поучением смеси, содержащей органический растворитель при 25-45% (об.:об.); и удаления органического растворителя из смеси посредством диафильтрации с применением водного буферизованного раствора при нейтральном pH.
Вариант выполнения настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, содержащую нуклеиновую кислоту, молекулу РНК или двухнитиевую молекулу siPHK. Предпочтительно, отношение липид: лекарственное средство липидной наночастицы составляет от 0.06 до 0.16 (мас.:мас.), и отношение зарядов липид: лекарственное средство липидной наночастицы составляет от 1:25:1 до 1:1.
В другом варианте выполнения фармацевтической композиции липиды содержат катионный липид, вспомогательный липид, стерол и ПЭГ липид. Предпочтительно, катионный липид составляет от 40 до 60 мольных процентов липидов. Катионный липид предпочтительно выбирается из группы, состоящей из HEDC, HEDODC и HE-Et-DODC. Катионный липид может состоять из ионизируемого или неионизируемого положительного заряда. Липиды могут дополнительно содержать нацеливающий липид.
Другой вариант выполнения фармацевтической композиции дополнительно содержит полисахарид, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, сорбита, ксилита, лактозы, мальтозы и инулина. Предпочтительно способ получения фармацевтической композиции дополнительно содержит лиофилизацию полианиона, инкапсулированного липосомой. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать цитрат. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать вспомогательные вещества, состоящие из полоксамеров, поверхностно-активных веществ, детергентов или полигидрокси или полигидроксиэтилен полимеров.
В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция состоит из липидных наночастиц, инкапсулирующих молекулы РНК, имеющих средний диаметр частицы 50-150 нм, более предпочтительно менее 100 нм, наиболее предпочтительно минимально поли дисперсных.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 схематически показывает способ, описанный в настоящей заявке для получения наночастиц на основе липидов и нуклеиновых кислот. Подробное описание каждой стадии способа описывается далее.
Фиг. 2 показывает средний размер частиц в нанометрах (нм) как функцию конечной концентрации РНК от 0.05 до 0.5 мг/мл. Подробное описание эксперимента приводится в Примере 1.
Фиг. 3 показывает средний размер частиц в нм как функцию pH буфера при смешивании липидов с РНК. Подробное описание эксперимента приводится в Примере 2.
Фиг. 4 показывает средний размер частиц, полученных с применением способа согласно Примеру 2 (NDT-0009) или способу Semple, как подробно описано в Примере 3. Столбики слева показывают измерение размера после смешивания. Столбики слева показывают измерение конечного продукта (для продукта по способу Semple, после экструзии и диафильтрации).
Фиг. 5 показывает эффективность инкапсуляции (ЕЕ) в процентах для частицы, полученной с применением способа согласно Примеру 2 (Способ по Примеру 2) или Примеру Semple, как описано в Примере 3. Столбики слева показывают измерение размера после смешивания. Столбики слева показывают измерение конечного продукта (для продукта по способу Semple, после экструзии и диафильтрации).
Фиг. 6 показывает восстановление siPHK в процентах для частицы, полученной с применением способа согласно Примеру 2 или Примеру Semple, как описано в Примере 3.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ВЫПОЛНЕНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Описание настоящего изобретения относится к способу получения липид-инкапсулированных терапевтических молекул, включающих отрицательно-заряженные терапевтические полимеры, например, нуклеиновые кислоты, белки и пептиды. Приведенное описание настоящего изобретения включает способ получения липид-инкапсулированных молекул нуклеиновых кислот. Способ, в частности, делает возможным крупномасштабное производство частиц, состоящих из инкапсулированных липосомами молекул лекарственного средства. Способ обеспечивает неожиданный и удивительный результат, состоящий в том, что полученные частицы имеют распределение по размеру от 50 до 150 нм при индексе полидисперсности (PDI) менее 0.2. Этот способ обеспечивает средства инкапсуляции посредством объединения липидов, солюбилизированных в смешивающемся с водой органическом растворителе, таком как этанол, с отрицательно-заряженными терапевтическими полимерами, солюбилизированными в водном растворителе, и удаления органического растворителя. Абсолютные и относительные концентрации липидов и отрицательно-заряженных терапевтических полимеров достаточны для получения маленьких частиц. Частицы, полученные способов согласно описанию настоящего изобретения, не нуждаются в механической обработке, такой как экструзия, для получения популяции частиц с PDI менее 0.2.
Способ согласно настоящему изобретению имеет преимущества по сравнению с ранее описанными способами благодаря легкости, с которой он может быть воспроизведен в больших объемах и надежности при осуществлении при широком диапазоне температур, растворителей, pH и продолжительности обработки.
Способ согласно настоящему изобретению имеет преимущества по сравнению с ранее описанными способами благодаря воспроизводимости получения частиц с PDI менее 0.2, предпочтительно менее 0.1, и без излишних стадий, необходимых для получения предварительно сформированных везикул.
Способ согласно настоящему изобретению имеет преимущества по сравнению с ранее описанными способами благодаря воспроизводимости получения равномерной популяции наночастиц без излишних стадий, необходимых для частиц, получаемых механически, при смешивании липидов и отрицательно заряженных терапевтических полимеров. Эти излишние стадии включают, например, обработку ультразвуком, гомогенизацию или экструзию, для уменьшения их размера и доведения равномерности до терапевтически приемлемого диапазона.
Способ согласно настоящему изобретению имеет преимущество достижения эффективности инкапсуляции нуклеиновой кислоты, равной эффективности ранее описанных способов или улучшенной по сравнению с ними, без излишних стадий обработки наночастиц.
Другие преимущества способа согласно настоящему изобретению очевидны из приведенного далее подробного описания настоящего изобретения, касающегося липидных компонентов и условий.
Липидная смесь, применяемая в способе согласно настоящему изобретению, содержит по меньшей мере положительно-заряженный липид (катионный липид) в комплексе с отрицательно-заряженными терапевтическими полимерами, и полиэтиленгликоль-содержащий липидный конъюгат (ПЭГ-липид) для предотвращения агрегации. Катионным липидом может быть перманентный катионный заряд для широкого диапазона условий pH, ионизируемый катионный липид, который заряжается при низком pH (менее чем pH 6) и без суммарного заряда при нейтральном pH (pH 6.5-8), или комбинация перманентного и ионизируемого катионных липидов. Липидная смесь также может содержать нацеливающий липид, полимер, стероид, фосфолипид, или член другой липидной группы, включающей жиры, воск, жирорастворимые витамины, моноглицериды или диглицериды, жирные ацилы, глицеролипиды, глицерофосфолипиды, сфинголипиды, сахаролипиды и поликетиды. Этот способ может также применяться для формирования липосом с только нейтральными или отрицательно заряженными компонентами.
Предпочтительно компоненты липидной смеси могут быть выбраны из следующих групп.
Катионный липид
Настоящее изобретение охватывает катионные липиды формулы I
в которой
Z=алкильный линкер, C2-C4 алкил
Y=алкильный линкер, C1-C6алкил
R1 и R2 каждый независимо представляет собой C10-C30алкил, C10-C30алкенил, или C10-C30алкинил, C10-C30алкил, C10-C20алкил, C12-C18алкил, C13-C17алкил, C13алкил, C10-C30алкенил, C10-C20алкенил. C12-C18алкенил, C13-C17алкенил, C17алкенил; R3 и R4 каждый независимо представляет собой водород, C1-С6алкил, или -CH2CH2ОН, C1-C6алкил, C1-C6алкил; n равно 1-6; и X представляет собой противоион, включая любой азотный противоион, причем этот термин легко понятен в данной области техники. Предпочтительные азотные противоионы включают галогены, причем хлорид и бромид являются особенно предпочтительными. Другим предпочтительным противоионом является мезилат (-SO3CH3).
Примерные соединения формулы I включают:
и
и
Другие катионные заряженные липиды при физиологическом pH включают, но без ограничения к этому, N,N-диолеил-N,N-диметиламмония хлорид ("DODAC"); N-(2,3-диолеилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмония хлорид ("DOTMA"); N,N-дистеарил-N,N-диметиламмония бромид ("DDAB"); N-(2,3-диолеилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмония хлорид ("DOTAP"); N-(1,2-димиристилоксипроп-3-ил)-N,N-диметил-N-гидроксиэтиламмония бромид ("DMRIE"), 3β-(N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил)холестерин ("DC-Chol"), диоктадециламидоглицил карбоксиспермидин ("DOGS"); и Н-(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-N-(2-(сперминкарбоксамидо)этил)-N,N-диметиламмония трифторацетат ("DOSPA").
Ионизируемые катионные липиды
Настоящее изобретение охватывает ионизируемые катионные липиды формулы II
в которой
Z=алкильный линкер, С2-С4алкил, -CH2SCH2CH2-
Y=алкильный линкер, C1-C6алкил
R1 и R2 каждый независимо представляет собой C10-C30алкил, C10-C30алкенил, или C10-C30алкинил, C10-C30алкил, C10-C20алкил, С12-С18алкил, С13-C17алкил, C13алкил, C10-C30алкенил, C10-C20алкенил. С12-С18алкенил, C13-C17алкенил, C17алкенил; R3 и R4 каждый независимо представляет собой водород, C1-C6алкил, или -CH2CH2ОН, C1-C6алкил, C1-C3алкил.
Некоторые положительно-заряженный липиды имеют рКа при или около физиологическом pH и являются катионными в мягких кислотных условиях и слабо катионными при физиологическом pH. Такие ионизируемые катионные липиды включают, но без ограничения к этому, ((2-((2-(диметиламино)этил)тио)ацетил)азандиил)бис(этан-2,1-диил) дитетрадеканоат ("S104"), (Z)-((3-(диметиламино)пропаноил)азандиил)бис(этан-2,1-диил)диолеат ("i-Et-DODC"), N-(2,3-диолеилокси)пропил)]N,N-диметиламмония хлорид ("DODMA") и 1,2-диолеил-3-диметиламмония-проан ("DODAP").
Обнаружено, что ионизируемые липиды могут облегчать связывание и/или высвобождение активного фармацевтического ингредиента (API), как показано ниже.
Природные липиды
Примеры природных липидов включают, но без ограничения к этому, фосфолипиды, аминолипиды и сфинголипиды. Природные липиды включают амфифатические липиды. Презентативные примеры фосфолипидов включают, но без ограничения к этому, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидиновую кислоту, пальмитоилолеоил фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин, лизофосфатидилэтаноламин, дипальмитоилфосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин ордилинолеоилфосфати-дилхолин. Другие соединения, не содержащие фосфор, такие как сфинголипид, семейства гликосфинголипидов, диацилглицерины и 3-ацилокси кислоты, также входят в группу, обозначенную как амфифатические липиды. Кроме того, амфифатический липид, описанный выше, может быть смешан с другими липидами, включая триглицериды и стиролы.
ПЭГ-липиды
Стабилизирующий бислой компонент представляет собой полиэтиленгликоль («ПЭГ»), конъюгированный с липидной головной группой, например, фосфатидилэтаноламин. Другой стабилизирующий бислой компонент представляет собой ПЭГ, конъюгированный с церамидом. ПЭГ может быть конъюгирован с фосфатидилэтаноламином или, альтернативно, с церамидом, применяя стандартные реакции связывания, известные специалистам в данной области техники и применяемые ими. Кроме того, предварительно сформированные ПЭГ-фосфатидилэтаноламин ("ПЭГ-РЕ") конъюгаты являются коммерчески доступными.
ПЭГ с различными молекулярными массами могут применяться для формирования стабилизирующих бислой компонентов согласно настоящему изобретению. ПЭГ с различными молекулярными коммерчески доступны для получения из ряда различных источников или, альтернативно, они могут быть синтезированы с применением стандартных методик полимеризации, хорошо известных специалистам в данной области техники. В представленном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу в интервале от 200 до 10000 Да, предпочтительно от 500 до 4000 Да, и наиболее предпочтительно от 1000 до 2000 Да. В общем, было обнаружено, что повышение молекулярной массы ПЭГ уменьшает концентрацию стабилизирующего бислой компонента, необходимой для достижения стабилизации.
Фосфатидилэтаноламин, имеющий многообразие с групп с ацильной цепью с различной длиной цепи и степенью насыщенности, может быть конъюгирован с ПЭГ с формированием стабилизирующего бислой компонента. Такие фосфатидилэтаноламины являются коммерчески доступными, или могут быть выделены или синтезированы с применением обычных методик, известных специалистам в данной области техники. Фосфатидилэтаноламины, содержащие насыщенные или ненасыщенные жирные кислоты с длиной углеводородной цепи в интервале от С10 до С20, являются предпочтительными. Фосфатидилэтаноламины с моно- или диненасыщенными жирными кислотами и смеси насыщенных и ненасыщенных жирных кислот также могут применяться. Подходящие фосфатидилэтаноламины включают, но без ограничения к этому, следующие: димиристоилфосфатидилэтаноламин (DMPE), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (DPPE), диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) и дистеароилфосфатидил-этаноламин (DSPE).
Вышеуказанные композиции также могут включать ПЭГ-конъюгированные липиды, которые по существу известны в данной области техники, включая ПЭГ-фосфолипиды и ПЭГ-церамиды, включая одну или более молекул, выбранных из следующих: ПЭГ2000-DSPE, ПЭГ2000-DРРЕ, ПЭГ2000-DМРЕ, ПЭГ2000-DОРЕ, ПЭГ1000-DSPE, ПЭГ1000-DPPE, ПЭГ1000-DMPE, ПЭГ1000-DOPE, ПЭГ550-DSРЕ, ПЭГ550-DРРЕ, ПЭГ-550DMРЕ, ПЭГ-1000DOPE, ПЭГ-холестерин, ПЭГ2000-церамид, ПЭГ 1000-церамид, ПЭГ750-церамид, и ПЭГ550-церамид.
Кроме того, композиции также могут включать монодисперсные (md) ПЭГ-липиды, с общей формулой md ПЭГ-линкер-липид, с примерами, включающими, но без ограничениями к этому, 83-гидрокси-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,7275,78,81-гептакозаоксатриоктаконтил (2,3-бис(тетра-децилокси)пропил)карбамат ("НО-ПЭГ1251-сВТР") и 134-гидрокси-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75, 78, 81,84,87,90,93,96,99,102,105,108,111,114,117,120,123,126,129,132-тетратетраконтаоксатетратриконтагектил (2,3-бис(тет-радецилокси)пропил)карбамат ("НО-ПЭГ2000-сВТР") в качестве примеров.
Стероиды
Стероиды включают холестаны (например, холестерин), холаны и желчные кислоты (например, хенодеоксихолат и холат), эргостерол, ланостерол, кортикостероиды (например, глюкокортикоид), прегнан (например, прогестерон), и фитостиролы. Они могут быть включены также в форме конъюгата с гидрофильной составляющей, например, полиэтиленгликол. Предпочтительный стероид представляет собой холестерин.
Нацеливающий липид
Пример нацеливающего липида представляет собой соединение формулы (А),
в которой
- липид (L) выбирается из группы, состоящей из DSPE, DOPE, и DC;
- линкер (X) выбирается из группы, состоящей из ничего, ПЭГ550, ПЭГ2000, ПЭГ-глутамат (-Glu), Glu, С6, глицин, и GluNH, N1,N19-бис(3-(2-(2-(3-аминопропокси)этокси)этокси)пропил)-4,7,10,13,16-пентаоксанонадекан-1,19-диамид; и
- ретиноид (R) выбирается из группы, состоящей из третиноин, адапален, ретинол, 4-гидрокси(фенил)ретинамид (4-HPR), ретиноевая кислота (витамин А), 9-(2,6,6-триметилциклогекс-1-ен-1-ил)нонановой кислоты, 3,7-диметил-9-(2,6,6-триметилциклогекс-1-ен-1-ил)нонановой кислоты, 3,7-диметил-9-(2,2,6-триметилциклогексил)нонановой кислоты, и любой частично или полностью насыщенный ретиноид или его производную.
Другой пример нацеливающего липида представляет собой соединение формулы (В),
в которой
- линкер (X) представляет собой N1,N19-бис(3-(2-(2-(3-аминопропокси)этокси)этокси)пропил)-4,7,10,13,16-пентаоксанонадекан-1,19-диамид ("бисамидо-ПЭГ") или N1,N19-бис(16,20-диамино-15-оксо-4,7,10-триокса-14-азаикозил)-4,7,10,13,16-пентаоксанонадекан-1,19-диамид ("лиз-бисамидо-ПЭГ-лиз"); и
- ретиноид (R) выбирается из группы, состоящей из третиноин, адапален, ретинол, 4-гидрокси(фенил)ретинамид (4-HPR), и ретиноевую кислоту (витамин А), 9-(2,6,6-триметилциклогекс-1-ен-1-ил)нонановую кислоту, 3,7-диметил-9-(2,6,6-триметилциклогекс-1-ен-1-ил)нонановую кислоту, 3,7-диметил-9-(2,2,6-триметилциклогексил)нонановую кислоту, и любой частично или полностью насыщенный ретиноид или его производную.
Другие нацеливающие молекулы могут быть включены в липидную смесь, например, фолиевая кислота, витамин Е, пептидные лиганды и/или моноклональные антитела.
Композиции и составы на основе частиц лекарственное средство-липид
Описание включает композиции, содержащие липидные частицы с активным агентом или без него, в которых активный агент, когда присутствует, связан с липидной частицей. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения, активным агентом является терапевтическое средство. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения, активным агентом является отрицательно заряженный терапевтический полимер, инкапсулированный внутри внутренней водной среды липидной частицы. В других вариантах выполнения настоящего изобретения, активный агент присутствует внутри одного или более липидных бислоев липидной частицы. В других вариантах выполнения настоящего изобретения активный агент связан с внешней частью или внутренней частью липидной поверхности липидной частицы.
В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения липидные частицы согласно настоящему изобретению связаны с нуклеиновой кислотой с образованием частиц нуклеиновая кислота-липид. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения нуклеиновая кислота полностью инкапсулирована в липидной частице. Как применяется в описании настоящего изобретения термин "нуклеиновая кислота», как означает, включает любой олигонуклеотид или полинуклеотид. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения олигонуклеотиды согласно настоящему изобретению составляют 15-50 нуклеотидов в длину.
Термины "полинуклеотид" (PNA) и "олигонуклеотид" согласно настоящему изобретению относятся к полимеру или олигомеру мономеров нуклеотида или нуклеозида, состоящих из оснований, сахаров и связей между сахарами (скелет) природного происхождения. Термины "полинуклеотид" и "олигонуклеотид" также включают полимеры или олигомеры, содержащие мономеры неприродного происхождения или их части, которые функционируют подобным образом. Такие модифицированные или замещенные олигонуклеотиды часто предпочтительны по сравнению с природными формами благодаря свойствам, таким как, например, повышенное клеточное поглощение и повышенная стабильность в присутствии нуклеаз.
Олигонуклеотидами могут быть как олигодеоксирибонуклеотиды или олигорибонуклеотиды. Олигодеоксирибонуклеотид состоит из деоксирибозы, соединенной ковалентно с фосфатом при 5' и 3' углеводородах этого сахара с формированием отрицательно заряженного чередующегося неразветвленного полимера. Олигорибонуклеотид состоит из подобной повторяющейся структуры, где каждый нуклеотид имеет рибозную сахарную группу. Модифицированные рибозные молекулы могут быть включены в олигорибонуклеотид.
Нуклеиновая кислота, которая присутствует в частице липид-нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению, включает любую форму нуклеиновой кислоты, которая известна. Нуклеиновые кислоты, применяемые в настоящей заявке, могут представлять собой однонитиевую ДНК или РНК, или двухнитиевую ДНК или РНК, или ДНК-РНК гибриды или РНК-РНК и/или ДНК-РНК гибриды или РНК дуплексы. Примеры двухнитиевой ДНК включают структурные гены, гены, включающие контролирующие и терминирующие области, и самореплицирующиеся системы, такие как вирусные или плазмидные ДНК. Примеры двухнитиевой РНК включают siPHK и другие реагенты РНК интерференции. Однонитиевые нуклеиновые кислоты включают, например, антисмысловые олигонуклеотиды, рибозимы, микроРНК, и триплекс-формирующие олигонуклеотиды.
Нуклеиновые кислоты могут иметь различную длину, как правило, в зависимости от конкретной формы нуклеиновой кислоты. Например, в конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения плазмиды или гены могут составлять от около 1,000 до 100,000 нуклеотидных остатков в длину. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения олигонуклеотиды могут иметь от около 10 до 100 нуклеотидов в длину. В различных родственных вариантах выполнения настоящего изобретения олигонуклеотиды, либо однонитиевые, либо двухнитиевые, либо трехнитиевые, могут иметь в длину от около 10 до около 50 нуклеотидов, от около 21 до около 50 нуклеотидов, от около 15 до около 30 нуклеотидов, от около 20 до около 30 нуклеотидов в длину. Полинуклеотиды из 50 нуклеотидов или менее в общем обозначаются "фрагменты".
В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения олигонуклеотид (или его нить) может быть специфически гибридизован или комплементарен с целевым полинуклеотидом. Термин «специфически гибридизованный" и «комплементарный" применяются для обозначения достаточной степени комплементарности, так что происходит стабильное и специфическое связывание между целевой ДНК или РНК и олигонуклеотидом. Понимается, что олигонуклеотид не должен быть на 100% комплементарен его целевой последовательности нуклеиновой кислоте, чтобы быть специфически гибридизуемым. Олигонуклеотид является специфически гибридизуемым, когда связывание олигонуклеотида с его целью нарушает нормальную функцию целевой молекулы, вызывая уменьшение или потерю ее функциональности или экспрессии, и имеется достаточная степень специфического спаривания оснований, чтобы избежать неспецифического связывания олигонуклеотида с нецелевыми последовательностями в условиях, при которых желательно специфическое связывание, т.е. при физиологических условиях в случае in vivo анализов или терапевтического лечения, или, в случае in vitro анализов, в условиях, при которых проводятся анализы. Таким образом, в других вариантах выполнения настоящего изобретения этот олигонуклеотид включает 1, 2 или 3 основных замещений по сравнению с областью гена или последовательности мРНК, которая является нацеливающей или с которой он специфически гибридизуется.
В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения частицы нуклеиновая кислота-липид могут быть связаны с молекулами интерферирующих РНК (PHKi). Способы интерференции РНК с применением PHKi молекул могут применяться для нарушения экспрессии гена или полинуклеотида, представляющих интерес. siPHK представляют собой РНК дуплексы длиной, как правило, 15-30 нуклеотидов, которые могут связываться с цитоплазматическим мульти-белковым комплексом, известным как PHKi-индуцированный комплекс сайлесинга (RISC). RISC, загруженный siPHK, опосредует разрушение гомологичных мРНК транскриптов; поэтому siPHK может обозначатся как подавляющий экспрессию белка с высокой специфичностью. В отличие от других антисмысловых методик, siPHK функция в ходе природного механизма развивается с контролем генной экспрессии по некодирующей РНК. Это в общем рассматривается как причина, почему ее активность является более высокой in vitro и in vivo, чем у антисмыслового олигонуклеотида, либо рибозимов. PHKi реагенты могут включать ДНК смысловые: РНК антисмысловые гибриды, РНК смысловые: ДНК антисмысловые гибриды, и ДНК:ДНК гибриды способны опосредовать PHKi. Таким образом, PHKi молекулы, содержащие любой из этих различных типов двухнитиевых молекул, могут применяться. Кроме того, понимается, что PHKi молекулы могут применяться и вводиться в клетки во множестве различных форм. Соответственно, как применяется в описании настоящего изобретения, PHKi молекулы охватывают любую и все молекулы, способные индуцировать PHKi ответ в клетках, включая, но без ограничения к этому, двухнитиевые полинуклеотиды, содержащие две различные нити, т.е. смысловую нить и антисмысловую нить, например, малую интерферирующую РНК (siPHK); полинуклеотиды, содержащие петлю шпильку комплементарных последовательностей, которая образует двухнитиевую область, например, shPHKi молекулы, и экспрессионные вектора, которые экспрессируют один или более полинуклеотидов, способных образовывать двухнитиевый полинуклеотид сам по себе или в комбинации с другим полинуклеотидом.
РНК интерференция (PHKi) может применяться для специфического ингибирования целевых полинуклеотидов. Опосредованное двухнитиевой РНК подавление экспрессии гена и нуклеиновой кислоты может сопровождаться, согласно настоящему изобретению, введением dsPHK, siPHK или shPHK в клетки или организмы. siPHK может представлять собой двухнитиевую РНК, или гибридную молекулу, содержащую как РНК, так и ДНК, например, одну РНК нить и одну ДНК нить, или sisiPHK.
Нацеливающие PHKi молекулы специфические полинуклеотиды могут быть легко получены в соответствии с методиками, известными в данной области техники. Соответственно, специалисту в данной области техники будет понятно, что широкое многообразие различных молекул siPHK может применяться для нацеливания специфического гена или транскрипта. В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения siPHK молекулы согласно настоящему изобретению представляют собой двухнитиевые и нуклеотиды длиной 16-30 или 18-25, включая каждое целое число между ними.
В общем, siPHK молекулы полностью комплементарны одной нити целевой молекуле ДНК. В других вариантах выполнения настоящего изобретения siPHK могут иметь модифицированный состав, такой как, например, 2'-деокси или 2-О-метил модификации. Однако, в предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения, не вся нить siPHK включает 2' деокси или 2'-O-модифицированные основания.
В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения изобретение относится к способам и композициям для получения частиц липид-инкапсулированной нуклеиновой кислоты, в которых нуклеиновые кислоты инкапсулированы внутри липидного слоя. Такие частицы нуклеиновая кислота-липид, включающие siPHK олигонуклеотиды, отличаются применением многообразия биофизических параметров, включая: (1) отношение нуклеиновой кислоты и липида; (2) эффективность инкапсуляции; и (3) размер частицы. Высокая эффективность инкапсуляции, хорошая нуклеазная устойчивость и сывороточная стабильность и контролируемый размер частиц, в общем менее 200 нм в диаметр, желательны. Кроме того, природа полимера нуклеиновой кислоты важна, так как модификация нуклеиновой кислоты для обеспечения нуклеазной устойчивости повышает стоимость терапевтического средства, тогда как во многих случаях обеспечивается лишь ограниченная устойчивость. Если иного не указано, эти критерии вычисляются согласно настоящему изобретению следующим образом:
Отношение липид: лекарственное средство представляет собой количество лекарственного средства в определенном объеме препарата, поделенное на количество липида в таком же объеме. Это может быть выражено как моль на моль основы или как масса на массу ocновы, или как масса на моль основы. Наконец, в случае готов для введения композиций, отношение липид: лекарственное средство вычисляется после диализа, хроматографии и/или ферментного (например, нуклеазного) расщепления, применяемых для удаления избыточного лекарственного средства.
Инкапсуляция
Для определения эффективности инкапсуляции (ЕЕ) siPHK, выражаемой в качестве процента инкапсулированной siPHK в частицах липид-нуклеиновая кислота, применяется анализ RiboGreen описанным далее образом. Эта методика может применяться для определения концентрации в растворе дуплекса и одноцепочечной РНК или ДНК.
Оборудование включает BioTek Instruments, Inc FLx800, пипетки с регулируемым объемом и вихревой смеситель. Реагенты включают воду, свободную от РНКазы (класс MilliQ или эквивалент), буфер 20хТЕ "RNase free" (Invitrogen, TI 1493, или эквивалент), Quant-iT RiboGreen реагент (Invitrogen, RI 1491) и 10% Тритон Х-100 в воде (Thermo Scientific, 28314, или эквивалент).
Получение IX ТЕ буфера включает перенос 38 мл воды, свободной от РНКазы, в центрифужную пробирку, объемом 50 мл, с помощью градуированного цилиндра, объемом 50 мл; и пипетирование 2 мл раствора 20Х ТЕ-буфере в пробирку для центрифугирования и смешивание с применением вортекса.
Получение 2% Тритон Х-100 и 1% Тритон Х-100 в IX ТЕ-буфере включает пипетирование 2 мл или 1 мл, соответственно, 10% Тритон Х-100 в коническую пробирку, объемом 15 мл, свободную от РНКазы, с добавлением 8 мл или 9 мл, соответственно, IX ТЕ-буфера, и перемешивание путем вращения для хорошего перемешивания.
Приготовление рабочего раствора RiboGreen включает извлечение замороженного сток-раствора RiboGreen реагента нагреванием до комнатной температуры и разбавлением в соотношении 1:200 с помощью ТЕ-буфера. Центрифужные пробирки заворачивали в алюминиевую фольгу, чтобы предотвратить избыточное освещение реакционного раствора.
Стандарт получают посредством получения раствора РНК в ТЕ-буфере и раскапывания в 96-луночный планшет. Образцы разводили до конечной концентрации около 80 мкг/мл siPHK и переносили в 96-луночный планшет, как показано на Фиг. 1. Рабочий раствор RiboGreen добавляли и смешивали с каждым образцом и стандартом. Образцы инкубировали в темноте в течение 1-2 минут перед анализом.
1% Тритон Х-100 в ТЕ-буфере затем добавляли для дублирования образцов, а затем добавляли рабочий раствор RiboGreen.
Эффективность инкапсуляции определяют на основе флуоресцентных измерений с применением среднего значения результатов флуоресценции для каждого образца с поправкой на измерения базовой линии среднего значения внешних образцов (флуоресценция RiboGreen реагента в отсутствие РНК), и после коррекции на 8% уменьшения интенсивности сигнала вследствие присутствия Тритон Х-100. Эффективность инкапсуляции затем рассчитывается по следующей формуле:
ЕЕ=(Тритоновый образец - образец липосом)/(Тритоновый образец)
Таким образом, эффективность инкапсуляции представляет собой разницу между значением общей РНК (измеренной после растворения липосом с детергентами) и значением интактных липосом, поделенную на значение общей РНК. Флуоресценция, полученная от интактного образца липосом, будет состоять из свободной РНК в растворе плюс РНК, абсорбированной на внешней поверхности липосомы.
Размер
Размер показывает размер (диаметр) полученных частиц. Распределение по размеру может быть определено с применением устройства динамического рассеяния света (DLS) Malvern Zetasizer Nano-ZS.
Эта методика применяется для измерения среднего диаметра по объему, Z-среднего диаметра и полидисперсности для образцов липосом в процессе. Полидисперсность представляет собой числовое значение для распределения частиц по размерам.
Измерения проводились при комнатной температуре. Образцы и реагенты должны быть доведены до комнатной температуры. Определяли средневзвешенный диаметр частиц и индекс полидисперсности.
Способ получения
Получение липосом
Липидную смесь можно солюбилизировать в смешивающемся с водой органическом растворителе, предпочтительно абсолютном этаноле. В большинстве вариантов выполнения настоящего изобретения органический растворитель применяют в том виде, в котором он является коммерчески доступным.
В одном примерном варианте выполнения настоящего изобретения смесь липидов представляет собой смесь катионных аминолипидов, нейтральных липидов (отличных от аминолипидов), стероидов (например, холестерина), а ПЭГ-модифицированные липиды (например, ПЭГ-S-DMG, ПЭГ-C-DOMG или ПЭГ DМА) представляют собой со-солюбилизаторы в органическом растворителе. В предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения липидная смесь по существу состоит из катионного аминолипида, нейтрального липида, холестерина и ПЭГ-модифицированного липида. В других предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения липидная смесь состоит из катионного липида, DOPE (или другого вспомогательного липида, либо ионизируемого, либо с перманентным катионным зарядом), холестерина и ПЭГ-конъюгированного липида при различных молярных соотношениях. Предпочтительные мольные диапазоны составляют от 40 до 60 мол. % катионного липида, от 10 до 30% нейтрального липида, от 20 до 40% холестерина и от 1 до 10% ПЭГ-модифицированного липида.
Нацеливающий липид может быть добавлен к липидной смеси, например, diVA-ПЭГ750-diVА (или другой VA-конъюгированный нацеливающий липид) в мольном соотношении от 0,1 до 5 (нацеливающий липид: общий липид).
Общая концентрация липидов составляет менее 25 мг/мл, предпочтительно менее 5 мг/мл. Липидную смесь фильтруют через мембранный фильтр, размером, например, 0,45 или 0,2 мкм.
Согласно настоящему изобретению липидную смесь объединяют с буферизированным водным раствором. Буферизированный водный раствор может представлять собой раствор, в котором буфер имеет pH меньше чем рКа протонированного липида в липидной смеси. Примеры подходящих буферов включают цитратный, фосфатный и ацетатный. Особенно предпочтительным буфером является цитратный буфер. Предпочтительными будут буфера с диапазоном концентрации 1-1000 мМ аниона, в зависимости от химического состава нуклеиновых кислот, которые будут инкапсулированы, и оптимизация концентрации буфера может быть важна для достижения высоких уровней загрузки. Для этого может быть удобным добавить криозащитное средство и/или неионное растворенное вещество, которые будут уравновешивать осмотический потенциал через мембрану частиц, например, когда частицы диализуют для удаления этанола, повышения pH, или фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Количество нуклеиновой кислоты в буфере составляет от около 0,08 до 0,8 мг/мл.
В процессе добавления этанола температура водного раствора составляет от 25 до 45°C, предпочтительно от 30 до 40°C. Раствор этанола добавляется к водному раствору либо посредством распыления на границу раздела фаз воздух-вода, в узком потоке, либо через границу раздела фаз жидкость-жидкость между этанолом, доставляемым через трубку, которая погружена, и водным раствором.
Органический раствор добавляется самотеком или с помощью насоса, доставляющего органический раствор к водному раствору с контролируемой скоростью, предпочтительно с постоянной скоростью. Доставка органического раствора может быть завершена в течение от 1 мин до 100 мин, предпочтительно от 1 до 25 минут. Органический раствор может добавляться через одно распыление или струю, через трубку или сопло, или через многосопельные устройства. Во время добавления органического раствора в водный раствор, получающийся раствор может перемешиваться посредством вихревого движения, встряхивания или рециркуляции. Дополнительная стадия приводит к конечной концентрации, которая предпочтительно составляет от 25 до 45% этанола, наиболее предпочтительно 35% этанола.
Конечный раствор обрабатывают с целью удаления органического растворителя, посредством диализа или фильтрации, предпочтительно посредством диафильтрации. По мере того как этанол удаляется, водный раствор преобразуется в раствор, буферизированный при нейтральном pH, от pH 6,8 до pH 7,5, предпочтительно, pH 7,2, например фосфатным или HEPES буфером. Получающийся водный раствор предпочтительно стерилизуют перед хранением или применением, например, посредством фильтрования через фильтр 0,22 мкм.
Липосомы, инкапсулирующие отрицательно заряженные терапевтические полимеры
Описанные в настоящей заявке способы могут применяться для получения частиц липидов с отрицательно заряженным терапевтическим полимером, например, молекулой РНК. В способах, описанных в настоящей заявке, смесь липидов объединяется с водным раствором полимера. Полимер эффективно инкапсулируется в полученных липидных частицах.
Наночастицы могут включать полианионное активное вещество или терапевтический агент, например РНК, и один, два или три биосовместимых полимеров. Типичные терапевтические агенты включают нуклеиновые кислоты, противоопухолевые агенты, такие как таксаны.
Суммарный заряд отрицательно заряженного полимера, который должен быть меньше или равен числу положительных зарядов в липидной смеси, в момент добавления составляет предпочтительно от 0,06 до 0,16 (по массе). Например, когда применяется РНК, инкапсулированные нуклеиновые кислоты присутствуют в конечном соотношении РНК: липид от 0,06 до 0,16, заряд: заряд (-/+), предпочтительно от 1:2,5 до 1:1.
Когда смесь липидов содержит катионный липид с зарядом, липидные везикулы могут образовываться в присутствии отрицательно заряженного полимера, чтобы инкапсулировать и захватить полимер. Полученные частицы могут быть нейтрализованы посредством повышения pH среды до физиологического pH или выше. Полученные таким образом везикулы обеспечивают композиции с одинаковым размером везикул с высоким содержанием нуклеиновых кислот.
В любом случае, везикулы, инкапсулирующие полимер (наночастицы), имеют размер в интервале от 50 до 150 нм.
В соответствии со способом, описанным в настоящей заявке, липидную смесь объединяют с буферизированным водным раствором, который может содержать отрицательно заряженный полимер. Буферизированный водный раствор может представлять собой раствор, в котором буфер имеет pH менее чем рКа протонированного липида в липидной смеси. Примеры подходящих буферов включают цитратный, фосфатный, ацетатный и MES. Особенно предпочтительным буфером является цитратный буфер. Предпочтительными будут буфера с диапазоном концентрации 1-1000 мМ аниона, в зависимости от химического состава полимера, который подлежит инкапсуляции, и оптимизация концентрации буфера может быть важна для достижения высоких уровней загрузки.
Может быть подходящим добавление криозащитного средства и/или неионного растворенного вещества, которое будет уравновешивать осмотический потенциал через мембрану частиц, когда частицы диализуют для удаления этанола, повышения pH, или при смешении с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем.
Для РНК схема описанного в настоящей заявке способа показана на Фиг. 1. Растворы получаются растворением лиофилизованного или твердого материала в воде, предпочтительно буферизированной при pH 3,5-4,5, например, с 50 мМ цитрата. Количество нуклеиновой кислоты в буфере составляет от 0,08 до 0,8 мг/мл. Во время добавления этанола температура водного раствора поддерживается от 25 до 45°C, предпочтительно от 30 до 40°C. При применении одноцепочечной нуклеиновой кислоты краткосрочное нагревание при повышенной температуре может быть благоприятно, например, 1-2 минут при 65°C.
Этанольный раствор добавляют к водному раствору либо посредством распыления на границу раздела фаз воздух-вода, в узком потоке, либо через границу раздела фаз жидкость-жидкость между этанолом, доставляемым через трубку, которая соединена с контейнером, и водным раствором.
Органический раствор добавляется посредством доставки органического раствора к водному раствору с контролируемой скоростью, предпочтительно с постоянной скоростью. Доставка органического раствора может быть завершена в течение от 1 мин до 100 мин, предпочтительно от 1 до 25 минут. Органический раствор может быть добавлен через одно распыление или струю, через трубку или сопло или через многосопельное устройство. Во время добавления органического раствора в водный раствор, полученный раствор может перемешиваться посредством вихревого движения, встряхивания или рециркуляции. Дополнительная стадия приводит к конечной концентрации достаточной, чтобы разрушить структуру липосомального бислоя, предпочтительно от 25 до 45% этанола, наиболее предпочтительно 35% этанола.
Для частиц липидов и нуклеиновых кислот конечная концентрация РНК составляет от 0,001 до 1 мг/мл, предпочтительно от 0,01 до 0,5 мг/мл, наиболее предпочтительно от 0,05 до 0,5 мг/мл. Окончательное соотношение лекарственное средство/липиды, составляет от 0,06 до 0,16 масса:масса (от 2,5:1 до 1:1, отношение заряд:заряд).
Полученный раствор обрабатывают для удаления органического растворителя, посредством диализа или фильтрации, предпочтительно посредством диафильтрации. В то время как этанол удаляется, водный раствор преобразуется в раствор, буферизированный при нейтральном pH, от pH 6,8 до pH 7,5, предпочтительно, pH 7,2, например фосфатный буфер. Полученный водный раствор предпочтительно стерилизуют перед хранением или применением, например, фильтрованием через фильтр размера 0,22 мкм.
Окончательная эффективность инкапсуляции получается более 85%. Окончательный средний диаметр частиц составляет от 50 до 150 нм. Индекс пол и дисперсности ПДИ получают менее 0,2, предпочтительно менее 0,1.
Лиофилизация
Настоящее изобретение в частности относится к лиофилизованной фармацевтической композиции, которая при восстановлении имеет минимальное количество крупных агрегатов. Такие большие агрегаты могут иметь размер более около 0,2 мкм, более около 0,5 мкм или более около 1 мкм, и могут быть нежелательными в восстановленном растворе. Размеры агрегатов могут быть измерены с применением различных методов, включая те, которые указаны в Фармакопее США 32 <788>, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки. Исследования могут включать подсчет количества частиц в режиме светотени, тест подсчета микроскопических частиц, лазерную дифракцию и оптическое зондирование одиночных частиц. В одном варианте выполнения настоящего изобретения размер частиц в данном образце измеряется с помощью лазерной дифракции и/или оптического зондирования одиночных частиц. Динамическое рассеяние света (DLS) может быть использовано для измерения размера частиц, но оно основано на броуновском движении, таким образом, методика не может обнаружить некоторые крупные частицы. Лазерная дифракция основана на различиях в показателе преломления между частицей и суспензионной средой. Методика способна обнаруживать частицы от субмикронного до миллиметрового диапазона. Относительно небольшие (например, около 1-5% по массе) количества более крупных частиц могут быть определены в суспензии наночастиц. Оптическое зондирование одиночных частиц (SPOS) включает исследование частиц методом затенения разбавленных суспензий для подсчета отдельных частиц около 0,5 мкм. Зная концентрацию частиц измеряемого образца, можно вычислить массовый процент агрегатов или концентрацию агрегатов (частицы/мл).
Образование агрегатов может происходить при замораживании и/или на стадии высушивания лиофилизации, например, в результате дегидратации поверхности частиц. Процесс замораживания оказывает концентрирующий эффект, который может уменьшать расстояние между частицами, так как образуется лед (Alison et al., Biochim Biophys Acta. 2000 Sep 29; 1468 (1-2): 127-38; Armstrong and Anchordoquy, J Pharm Sci. 2004 Nov; 93 (11): 2698-709). Это обезвоживание можно избежать с помощью лиопротекторов, таких как полисахариды, в суспензии перед лиофилизацией. Подходящие полисахариды включают сахарозу, лактулозу, лактозу, мальтозу, трегалозу или целлюлозу, койибиозу, нигерозу, изомальтозу, трегалозу, софорозу, ламинарибиозу, гентиобиозу, туранозу, мальтулозу, палатинозу, генциобиулозу, маннобиозу, мелибиозу, мелибиулозу, рутинозу, рутинулозу и ксилобиозу. В одном варианте выполнения настоящего изобретения композиция содержит полисахарид, который представляет собой сахарозу. В другом варианте выполнения композиция содержит полисахарид, который представляет собой трегалозу. Результаты заявителей показывают, что, если сравнивать с исходной суспензией, при восстановлении получаются эквивалентные распределения по размерам, определенные методом DLS..
Ранее полагали, что витрификация, процесс иммобилизации макромолекул в стеклообразном наполнителе, не является фактором, вносящем вклад в предотвращение агрегации липосом, и что необходимы гипертонические растворы сахара (Alison et al.). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что результаты стадий замораживания и высушивания лиофилизации зависят от определенного соотношения липид: полисахарид (масса:масса), которое обеспечивает средства для предотвращения этой агрегации липосом, нарушения липосомального диффузионного барьера и высвобождения инкапсулированных РНК с образованием липоплексов нуклеиновых кислот. В одном варианте выполнения настоящего изобретения композиция содержит от 12 до 15% (масса:масса) сахарозы и от 5 до 20 мг/мл липида, предпочтительно 12% сахарозы и 9 мг/мл липида. Более предпочтительно, чтобы композиция также содержала буфер, наиболее предпочтительно HEPES при нейтральном pH.
Стадии лиофилизации проводятся в подходящей стеклянной емкости, предпочтительно цилиндрическом стеклянном флаконе, объемом 10 мл. Стеклянный флакон должен выдерживать резкие изменения температуры от менее чем -40°C до выше комнатной температуры за короткие периоды времени и равномерно уменьшаться. Композиция, содержащая наполнитель и липосомы, инкапсулирующие нуклеиновую кислоту, добавляется во флакон, предпочтительно в объеме 3 мл, предпочтительно с 9 мг/мл липида.
Стадия лиофилизации может включать замораживание композиции при температуре более около -40°C, или, например, менее около -30°C, образуя замороженную композицию; и высушивание замороженной композиции с образованием лиофилизованной композиции. Стадия замораживания предпочтительно приводит к линейному уменьшению температуры до конечной в течение около 6 минут, предпочтительно при 1°C/мин от 20 до -40°C. Более предпочтительно может применяться сахароза при 12-15%, и стадия высушивания при около 50-150 мТорр, сначала при низкой температуре от около -15 до около -35°C, а затем при более высокой температуре от комнатной температуры до около 25°C, и завершается в течение от трех до семи дней. В другом варианте выполнения настоящего изобретения может применяться трегалоза и стадия высушивания при около 50-100 мТорр, сначала при низкой температуре от около 0 до около -15°C, а затем при более высокой температуре.
Другим объектом настоящего изобретения является способ предотвращения существенной агрегации частиц в фармацевтической композиции наночастиц, включающий добавление сахара и соли в лиофилизируемую композицию для предотвращения агрегации и высвобождения нуклеиновой кислоты из внутренней части липосомы.
Фармацевтические композиции
Липидные частицы, раскрытые в настоящей заявке, в частности при связывании с терапевтическим средством, могут быть получены в виде фармацевтической композиции, например, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый разбавитель, эксципиент или носитель, как например, физиологической соляной раствор или фосфатный буфер, выбранные в соответствии с путем введения и стандартной фармацевтической практикой. Как очевидно специалисту в данной области техники, носители могут быть выбраны на основе пути введения, как описано далее, расположения целевого высвобождения, лекарственного средства, которое подлежит доставке, периода доставки лекарственного средства и т.д.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут вводиться пациенту любыми средствами, известными в данной области техники, включая пероральный и парентеральный пути введения. Термин "пациент," как применяется в описании настоящего изобретения, относится к людям, а также к не принадлежащим к человеческому роду организмам, включая, например, млекопитающих, птиц, рептилий, амфибий и рыб. Например, не принадлежащими к человеческому роду организмами могут быть млекопитающие (например, грызун, мышь, крыса, кролик, обезьяна, собака, кошка, примат или свинья). В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения парентеральные пути введения являются желательными, так как они позволяют избежать контакта с пищеварительными ферментами, которые присутствуют в пищеварительном тракте. Согласно таким вариантам выполнения настоящего изобретения, композиции согласно настоящему изобретению могут вводиться посредством инъекции (например, внутривенно, подкожно или внутримышечно, посредством внутрибрюшинной инъекции), ректально, вагинально, местно (посредством порошков, кремов, мазей или капель), или посредством ингаляции (в виде спреев).
В конкретном варианте выполнения настоящего изобретения, наночастицы согласно настоящему изобретению вводятся субъекту, нуждающемуся в этом, системно, например, парентерально, или посредством внутривенного вливания или инъекции.
В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения фармацевтические композиции, содержащие частицы липид-нуклеиновая согласно настоящему изобретению получают в соответствии со стандартными методиками, и они дополнительно содержат фармацевтически приемлемый носитель. В общем, в качестве фармацевтически приемлемого носителя применяется соляной раствор. Другие подходящие носители включают, например, воду, буферизированную воду, 0.9% соляной раствор, 0.3% глицин, сахар или полисахарид, например, сахарозу, мальтозу, трегалозу, каррагенин, ксантановую камедь, маннит, фруктан (например, инулин), циклодекстрин, ксилит, сорбит или полиэтиленгликоль (ПЭГ), включая гликопротеины для усиления стабильности, такие как альбумин, липопротеин, глобулин. Объемообразующие агенты, криозащитные средства и/или лиопротекторы, а также захватывающие металлы вещества, например, EDTA, могут быть включены. В композициях, содержащих соляной раствор или другие носители, содержащие соли, носитель предпочтительно добавляется после образования липидной частицы. Таким образом, После формирования композиций липид-нуклеиновая кислота, композиции могут быть разбавлены фармацевтически приемлемыми носителями, такими как нормальный соляной раствор.
Полученные фармацевтические препараты могут быть стерилизованы посредством обычных хорошо известных методик стерилизации. Водные растворы могут затем быть упакованы для применения или отфильтрованы при асептических условиях и лиофилизиорваны, причем лиофилизированный препарат объединяется со стерильным водным раствором до введения. Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для условий, приближенных к физиологическим, как например агенты для установление pH и буферизующие агенты, агенты для установления тоничности, например, ацетат натрия, лактат натрия, хлорид натрия, хлорид калия или хлорид кальция. Кроме того, липидная суспензия может включать липид-защитные агенты, которые защищают липиды от свободнорадикальных и липидных перокислительных повреждений при хранении. Липофильные свободнорадикальные гасители, такие как а-токоферолд и водорастворимые специфичные к железу хелатирующие агенты, такие как ферриоксамин, являются подходящими.
Концентрация липидной частицы или частицы липид-нуклеиновая кислота в фармацевтических композициях может широко варьироваться, т.е., от менее около 0.01%, как правило при или по меньшей мере около 0.05-5%, до самое большее от 10 до 30 мас. %, и выбирается прежде всего на основе жидких объемов, вязкостей и т.д., в соответствии с конкретным выбранным путем введения. Например, концентрация может быть увеличена для более низкой загрузки жидкости согласно лечению. Это может быть особенно желательно в случае пациентов, имеющих связанную с атеросклерозом сердечную недостаточность с застойными явлениями или тяжелую гипертензию. Альтернативно, комплексы, состоящие из раздражающих липидов, могут быть разбавлены до низких концентраций для уменьшения воспаления в месте введения. В одной группе вариантов выполнения настоящего изобретения, нуклеиновая кислота будет иметь прикрепленную метку и будет применяться для диагностики (посредством указания присутствия комплементарной нуклеиновой кислоты). В этом случае количество вводимых комплексов будет зависеть от конкретной применяемой метки, тяжести заболевания, подлежащего диагностике, и решения клинициста, но в общем будет составлять от около 0.01 до около 50 мг на кг массы тела, предпочтительно от около 0.001 до около 5 мг на кг массы тела.
Способ применения
Липидные частицы, описанные в настоящей заявке, могут применяться для доставки отрицательно заряженного терапевтического полимера, такого как нуклеиновая кислота в клетку, in vitro или in vivo. Хотя последующее описание различных методов с применением липидных частиц и связанных с ними фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению иллюстрируются посредством описания частиц липидов и нуклеиновых кислот, следует понимать, что эти способы и композиции могут быть легко адаптированы для доставки любого терапевтического средства для лечения любого заболевания или расстройства, которая может быть благоприятной для такого лечения.
В некоторых вариантах выполнения настоящее изобретение обеспечивает способы введения нуклеиновой кислоты в клетку. Предпочтительными нуклеиновыми кислотами для введения в клетки являются siPHK, иммуностимулирующие олигонуклеотиды, плазмиды, антисмысловые и рибозимы. Эти способы могут осуществляться посредством контакта частиц или композиций согласно настоящему изобретению с клетками в течение периода времени, достаточного для того, чтобы произошла внутриклеточная доставка.
Композиции согласно настоящему изобретению могут адсорбироваться на почти любом типе клеток. Сразу после адсорбции частицы липид-нуклеиновая кислота могут быть либо эндоцитированы частью клеток, обменом липидов с клеточными мембранами, либо слиться с клетками. Перенос или включение нуклеиновой кислоты как части комплекса может происходить посредством любого из этих путей. Без намерения ограничения объема изобретения, можно полагать, что в случае частиц, поглощенных клеткой посредством эндоцитоза, частицы затем взаимодействуют с эндосомальной мембраной, что приводит к дестабилизации эндосомальной мембраны, возможно, посредством формирования небислойных фаз, что приводит к введению инкапсулированной нуклеиновой кислоты в клеточную цитоплазму. Аналогичным образом, в случае прямого слияния частиц с плазматической мембраной клетки, если имеет место слияние, липосомальная мембрана включается в клеточную мембрану, и содержимое липосомы смешивается с внутриклеточной жидкостью. Контакт между клетками и композициями липидов и нуклеиновых кислот, если осуществляется in vitro, будет происходить в биологически совместимой среде. Концентрация композиции может широко варьировать в зависимости от конкретного применения, но обычно составляет от 1 мкмоль до 10 ммоль. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения обработка клеток композициями липидов и нуклеиновых кислот обычно будет осуществляться при физиологических температурах (37°C) в течение периода от 1 до 24 часов, предпочтительно от 2 до 8 часов. В случае применения in vitro, доставка нуклеиновых кислот может быть осуществлена в любую клетку, выращенную в культуре, будь она растительного или животного происхождения, позвоночных и беспозвоночных, и из любой ткани или типа. В предпочтительных вариантах выполнения настоящего изобретения клетками будут животные клетки, более предпочтительно клетки млекопитающих и наиболее предпочтительно клетки человека.
В одной группе вариантов выполнения настоящего изобретения суспензия частиц липидов и нуклеиновой кислоты добавляется к клеткам с конфлюентностью 60-80%, имеющим плотность клеток от около 103 до около 105 клеток/мл, более предпочтительно около 2×104 клеток/мл. Концентрация суспензии, добавляемой к клеткам, предпочтительно составляет от около 0,01 до 20 мкг/мл, более предпочтительно около 1 мкг/мл.
Типичные области применения включают применение хорошо известных методик для обеспечения внутриклеточной доставки siPHK для нокдауна или сайленсинга конкретных клеточных мишеней. В качестве альтернативы, применения включают доставку последовательностей ДНК или мРНК, которые кодируют терапевтически полезные полипептиды.
Способы согласно настоящему изобретению могут быть осуществлены in vitro, ex vivo или in vivo. Например, композиции согласно настоящему изобретению могут также применяться для доставки нуклеиновых кислот в клетки в живом организме с применением способов, которые известны специалистам в данной области техники.
В случае in vivo введения фармацевтические композиции предпочтительно вводить парентерально, т.е. внутрисуставно, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно или внутримышечно. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения фармацевтические композиции вводятся внутривенно или внутрибрюшинно с помощью болюсной инъекции.
В других способах фармацевтические препараты можно вводить в контакт с тканью-мишенью посредством непосредственного нанесения препарата на ткань. Нанесение может осуществляться посредством местной, «открытой» или «закрытой» методики. Термин «местная» означает непосредственное нанесение фармацевтического препарата на ткань, подвергающуюся воздействию условий среды, такую, как кожа, ротовая часть глотки, наружный слуховой проход и тому подобное. «Открытые» методики представляют собой такими методики, которые включают надрезание кожи пациента и непосредственную визуализацию основной ткани, на которую наносятся фармацевтические препараты. Это обычно достигается посредством хирургического вмешательства, такого как торакотомии для доступа к легким, брюшная лапаротомии для доступа к брюшной полости или другого прямого хирургического подхода к ткани-мишени. «Закрытые» методики являются инвазивными методиками, в которых внутренние ткани-мишени не визуализируются непосредственно, но становятся доступными с помощью проникающих инструментов через небольшие раны на коже. Например, препараты могут быть введены в брюшину с помощью лаважной иглы. Кроме того, фармацевтические препараты могут быть введены к мозговым оболочкам или к спинному мозгу посредством инфузии во время люмбальной пункции с последующим соответствующим позиционированием пациента, как обычно практикуется при спинномозговой анестезии или метризамидной визуализации спинного мозга. Кроме того, препараты могут вводиться с помощью эндоскопических устройств.
Композиции липид-нуклеиновая кислота также могут быть введены в виде аэрозоля, вдыхаемого в легкие, или посредством прямой инъекции в месте заболевания.
Способы согласно настоящему изобретению могут быть осуществлены на различных субъектах или хозяевах. Предпочтительные субъекты или хозяева включают виды млекопитающих, таких как люди, нечеловекообразные приматы, собаки, кошки, крупный рогатый скот, лошади, овцы и тому подобное. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения субъектом является млекопитающее, такое как человек, нуждающийся в лечении или профилактике заболевания или расстройства, например, субъект с диагнозом или рассматриваемый как с повышенным риском заболевания или расстройства.
Дозы для частиц липидов и терапевтического агента согласно настоящему изобретению будут зависеть от соотношения терапевтического агента и липидов и от мнения лечащего врача, основанного на возрасте, массе и состояния пациента.
В одном варианте выполнения настоящее изобретение относится к способу модуляции экспрессии целевого полинуклеотида или полипептида. Эти методы обычно включают контакт клетки с липидной частицей согласно настоящему изобретению, которая связана с нуклеиновой кислотой, способной модулировать экспрессию целевого полинуклеотида или полипептида. Как применяется в описании настоящего изобретения, термин «модулировать» относится к изменению экспрессии целевого полинуклеотида или полипептида. В разных вариантах выполнения модулирование может означать увеличение или усиление, или может означать, уменьшение или ослабление. Способы измерения уровня экспрессии целевого полинуклеотида или полипептида известны и доступны в данной области техники и включают, например, способы на основе полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-PCR) и иммуногистохимических способов. В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения уровень экспрессии целевого полинуклеотида или полипептида увеличивается или уменьшается по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, или более чем на 50% по сравнению с соответствующей контрольной величиной.
Например, если желательно повысить экспрессию полипептида, нуклеиновая кислота может представлять собой экспрессионный вектор, который включает в себя полинуклеотид, который кодирует желаемый полипептид. С другой стороны, если желательно снизить экспрессию полинуклеотида или полипептида, тогда нуклеиновая кислота может представлять собой, например, антисмысловой олигонуклеотид, siPHK, или микроРНК, которые содержат полинуклеотидную последовательность, которая специфически гибридизуется с полинуклеотидом, который кодирует целевой полипептид, таким образом нарушая экспрессию целевого полинуклеотида или полипептида. Альтернативно, нуклеиновой кислотой может быть плазмида, которая экспрессирует такой антисмысловой олигонуклеотид, siPHK или микроРНК.
В конкретных вариантах выполнения настоящего изобретения активный агент нуклеиновая кислота или терапевтическое средство выбирается из siPHK, микроРНК, антисмыслового олигонуклеотида и плазмиды, способной экспрессировать siPHK, микроРНК или антисмысловой олигонуклеотид, и в которой siPHK, микроРНК или антисмысловая РНК содержит олигонуклеотид, который специфически связывается с полинуклеотидом, который кодирует полипептид или его комплемент, таким образом, что экспрессия полипептида уменьшается.
В других вариантах выполнения настоящего изобретения нуклеиновая кислота представляет собой плазмиду, которая кодирует полипептид или его функциональный вариант или фрагмент, таким образом, что экспрессия полипептида или функционального варианта или фрагмента увеличивается.
В родственных вариантах выполнения настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или расстройства, характеризующихся избыточной экспрессией полипептида у субъекта, включающему введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, в которой терапевтическое средство выбирается из siPHK, микроРНК, антисмыслового олигонуклеотида и плазмиды, способной экспрессировать siPHK, микроРНК или антисмысловой олигонуклеотид и в которой siPHK, микроРНК или антисмысловая РНК содержит олигонуклеотид, который специфически связывается с полинуклеотидом, который кодирует полипептид или его комплемент.
В другом родственном варианте выполнения настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или расстройства, характеризующиеся сверхэкспрессией полипептида у субъекта, включающему введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, в которой терапевтическое средство представляет собой плазмиду, кодирующую полипептид или его функциональный вариант или его фрагмент.
Анализ срока хранения
Термин "срок хранения", как применяется в настоящей заявке, относится к периоду времени, в течение которого наночастицы липид:РНК могут храниться (при определенныхи условиях, например, в буфере при 4°C.) до потери их биологической активности.. Биологическая активность, проанализированная для определения сролка хранения согласно настоящему изобретению, представляет собой способность наночастиц липид:РНК трарнсфектировать клетки млекопитающих in vivo после внутривенного введения.
В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения срок хранения определяется посредством хранения наночастиц липид:РНК в течение различных периодов времени, инъекции одному или более тестируемым животным и анализа взятых у животного тканей на трансфекцию (например, экспрессия репортерного гена), как описано выше и как показано в примерах.
Очевидно, что срок хранения может быть выражен в абсолютном выражении, то есть продолжительность времени, в течение которого композиция может храниться до потери активности. Альтернативно, срок хранения может быть выражен в относительном выражении посредством ссылки на другую композицию. Таким образом, например, когда наночастицы липид:РНК показывают трансфекционную активность после фексированного периода хранения, и эта активность больше активности другого комплекса, подобным образом хранящегося в течение такого же периода времени, рассматриваемый комплекс, как говорят, имеет увеличенный срок хранения по сравнению с отличным комплексом.
Наборы, содержащие полианионное терапевтическое средство, инкапсулированное в липосомах
Настоящее изобретение также обеспечивает наборы для получения наночастиц липид:РНК, описанных в настоящей заявке. Такие наборы могут быть получены из легко доступных веществ и реагентов, как описано выше. Например, такие наборы могут содержать любое одно или более из следующих веществ: липосомы, нуклеиновая кислота (РНК, ДНК, одно- или двухнитиевая), гидрофильные полимеры, гидрофильные полимеры с нацеливающими составляющими, такими как Fab' фрагменты, и инструкции. Широкое многообразие наборов и компонентов может быть получено согласно настоящему изобретению, в зависимости от предназначения набора и конкретных потребностей потребителя. Например, набор может содержать любую одну из ряда нацеливающих составляющих для нацеливающих для нацеливания комплекса на специфический тип клетки, как описано выше.
Набор при необходимости может содержать инструкции, включающие руководства (т.е. протоколы) по применению наночастиц липид:РНК для трансфекции клеток in vivo, ex vivo, или in vitro. Как правило, в инструкции описывается методика получения наночаситц липид:РНК из липосом и нуклеиновой кислоты, как описано выше. В инструкции также описывается как смешивать гидрофильный полимер с наночастицами липид:РНК. Кроме того, в инструкции может описываться методика трансфекции клеток наночастицами липид:РНК.
Примеры
Пример 1: Влияние концентрации на размер частиц РНК-липиды.
Этот пример показывает влияние концентрации siPHK и липидов на размер частиц.
Для получения наночастиц способом, описанным в настоящей заявке, катионный липид, DOPE, холестерин, PEG-BML и DIVA-PEG750-DIVA солюбилизировали в абсолютном этаноле при молярном соотношении 50:10:38:2:5, соответственно. siPHK солюбилизировали в 50 мМ цитратном буфере при pH 4,5.
Буфер, содержащий siPHK, довели до 35-40°C при непрерывном перемешивании в сосуде для смешивания. Смесь этанол/липид затем распыляли на поверхности буфера, содержащего siPHK, с применением коллектора/сопловой решетки для спонтанного образования липосом, загруженных siPHK. Концентрации липидов и РНК доводили до конечного диапазона концентраций siPHK от 0,05 до 0,5 мг/мл, до отношения лекарственное средство: липид 0,08 (масса:масса), а также концентрации этанола 35%. Соотношение липидов и siPHK поддерживали постоянным для всех исследуемых условий.
Липосомы, загруженные siPHK, разбавляли до ~10% этанола, чтобы стабилизировать частицы, и подвергали диафильтрации относительно 10-кратных объемов PBS (pH 7,2) для удаления этанола и замены буфера. Конечный продукт фильтровали через PES фильтр размера 0,22 мкм, стерилизующего класса, для снижения общего количества микробов. Объемный средний размер частиц и индекс полидисперсности (PDI) определяли с помощью динамического рассеяния света (DLS). Результаты показаны в Таблице 1 и на Фиг. 2.
Результаты показывают, что размер частиц возрастает с увеличением концентрации siPHK (в мг/мл). Снижение концентраций липидов и siPHK (при том же относительном показателе) уменьшает размер частиц, а при увеличении концентрации увеличивается размер частиц. Конечные концентрации siPHK от 0,05 до 0,5 мг/мл обеспечивают наночастицы со средним диаметром частиц от 96,7 до 141,9 нм, менее 150 нм, и с индексом полидисперсности менее 0,2 во всех случаях.
Частицы размера менее 150 нм с PDI менее 0,2 образуются с помощью способа, описанного в настоящей заявке, без получения предварительно сформированных пустых липидных везикул и/или без механической обработки.
Пример 2: Влияние параметров процесса на образование частиц РНК-липиды
Этот пример показывает влияние различных параметров процесса на образование частиц РНК-липиды. Некоторые параметры подвергались проверке во время этого эксперимента, в том числе температура, концентрация этанола, буфера, соотношения липид: siPHK, и тип сопла, применяемого для диспергирования липидного раствора.
HEDC, DOPE, холестерин, ПЭГ-BML, и diVA-n3T750-diVA растворяли в абсолютном этаноле при молярном соотношении 40:30:25:5:2. Буфер, содержащий siPHK, доводили до указанной температуры при непрерывном перемешивании в сосуде для смешивания. Смесь этанол/липид затем распыляли на поверхности буфера, содержащего siPHK, с применением сопла для спонтанного образования липосом, загруженных siPHK. Липиды объединяли с siPHK так, чтобы достичь конечной концентрации siPHK 0,1 мг/мл при указанном соотношении лекарственное средство/липиды и указанном конечном проценте этанола.
siPHK солюбилизировали в цитратном буфере, концентрация которого варьировалась от 25 до 100 мМ, и pH варьировался от 3,5 до pH 6,5. Температура смеси варьировалась от 25 до 45°C. Конечная концентрация этанола варьировалась от 25 до 45%. Соотношение лекарственное средство: липид (масса/масса) варьировалось от 0,07 до 0,11. Внутренний диаметр (ID) гидратационного сопла варьировался от 0,005 до 0,125 дюйма. Каждое условие принимали в виде измерения для сравнения влияния каждого параметра процесса. Если не указано иное, каждое условие осуществляли в 50 мМ цитратном буфере, pH 4,5, 35°C, 35% конечной концентрации этанола, при соотношение лекарственное средство: липиды 0,07 и при внутреннем диаметре сопла 0,005 дюйма.
Липосомы, загруженные siPHK, разбавляли до 10% этанола, чтобы стабилизировать частицы, и подвергали диафильтрации относительно 10-кратных объемов PBS (pH 7,2) для удаления этанола и замены буфера. Конечный продукт фильтровали через PES фильтр, размера 0,22 мкм, стерилизующего класса, для снижения общего количества микробов.
Таблица 2 и Фиг. 3 показывают влияние pH на средний диаметр и PDI наночастиц липидов и нуклеиновых кислот. Увеличение буфера pH приводило к увеличению размера частиц, который, однако, составлял менее 150 нм среднего размера частиц.
Таблица 3 показывает влияние концентрации буфера на различные параметры. Результаты показали, что увеличение концентрации буфера снижает восстановление siPHK. Средний диаметр частиц и PDI оказался неизмененным. Минимальный размер частиц наблюдался при pH 3,5, и максимум восстановления siPHK наблюдался для 25 мМ цитратного буфера.
Таблица 4 показывает, что увеличение температуры гидратации от 25 до 45°С, уменьшило размер частиц от 135,7 до 102,2 нм при одновременном повышении восстановления siPHK с 80% до 87%. Увеличение конечного процента этанола увеличило размер частиц при отсутствии влияния на восстановление siPHK, но снизило эффективность инкапсуляции до 88%.
Таблица 5 показывает, что при увеличении пониженного отношения лекарственное средство: липид, восстановление siPHK увеличилось 80 до 87%. Максимальное восстановление наблюдалось при соотношении лекарственное средство: липиды 0,07 (масса:масса). Все остальные измеряемые свойства не изменялись при изменении соотношения лекарственное средство: липиды. Этот результат является удивительным и неожиданным с точки зрения сведений, раскрытых в Maurer et al. и Semple et al., где описывается, что оптимальное восстановление составляет при отношении лекарственное средство: липиды (масса:масса) равным или более 0,16 (отношение липид: лекарственное средство (масса:масса) равно или менее 6,25). Полученные результаты подтверждают, что способ, описанный в настоящей заявке, приводит к противоположной тенденции.
Таблица 6 показывает, что увеличение внутреннего диаметра сопла в 25 раз не повлияло на размер частиц, эффективность инкапсуляции или восстановление siPHK. Существует значительная вариабельность в значении отверстии сопла, используемого для добавления этанола/липидов к поверхности буфера. Такая вариабельность может обеспечить большое преимущество при масштабировании.
Пример 3: Сравнение раскрытого способа с контрольными способами серийного получения липосом
Эти результаты сравнения способа, описанного в настоящей заявке для получения частиц липид/нуклеиновая кислота, со способом, описанным в патенте США 6,858,225. Semple, et al. (контрольный способ или контрольная композиция, применяемая в контрольном способе) получали с применением композиции, полученной в примере 2. или применяя контрольный способ.
Композицию, полученную в Примере 2, состоящую из катионного липида, DOPE, холестерина, ПЭГ-конъюгированного липида и нацеливающего липида, совместно солюбилизировали в молярном соотношении 40:30:25:5:2 (смотрите пример 2 выше).
Контрольную композицию, состоящую из DODAP, DSPC, холестерина и ПЭГ-ССВ-14, совместно солюбилизировали в молярном соотношении 25:20:45:10.
В способе согласно Примеру 2 липиды солюбилизировали при 4,32 мг/мл в абсолютном этаноле, тогда как siPHK солюбилизировали при 0,163 мг/мл в 50 мМ цитрата, pH 4,5. Раствор siPHK доводили до 35 до 40°C при непрерывном перемешивании в сосуде для смешения. Смесь этанол/липид затем распыляли на поверхность буфера, содержащего siPHK, с применением устройства коллектор/сопло. Конечная концентрация этанола составляла 35%, и конечное соотношение липид/siPHK составляло 14:1 (масса:масса). Полученные частицы затем разбавляли до 10% этанола, а затем подвергали диафильтрации относительно 10-кратного объема PBS (pH 7,2).
В контрольном способе липиды солюбилизировали при 25 мг/мл в абсолютном этаноле, a siPHK солюбилизировали при 4,17 мг/мл в 300 мМ цитрата, pH 4,0. Буфер, содержащий siPHK, выдерживали при комнатной температуре при непрерывном перемешивании в сосуде для смешения. Смесь этанол/липид затем распыляли на поверхность буфера, содержащего siPHK, с применением единственного сопла для спонтанного образования липосом, загруженных siPHK. Конечная концентрация этанола составила 40%, а конечное соотношение липид/siPHK составило 6:1 (масса:масса). После смешивания суспензию липид/siPHK переносили в экструдер на 10 мл, снабженный двумя 100 нм поликарбонатными мембранами, и предварительно инкубировали при 65°C. Суспензию подвергали экструзии с применением десяти проходов при 300 фунтов на кв. дюйм. Получающиеся частицы подвергали диафильтрации относительно 10-кратных объемов PBS, pH 7,2.
Частицы, полученные каждым способом, пропускали через фильтр размера 0,22 мкм. Средний размер частиц, PDI и ЕЕ измеряли, как описано в настоящей заявке.
Способ в соответствии с примером 2 обеспечивал более мелкие липидные наночастицы, чем контрольнйы способ без стадии экструзии (Фиг. 4). Размер частиц, полученных контрольным способом, измеряли перед экструзией. Частицы, полученные из композиции NDT-0009 с применением контрольного способа, имели средний размер частиц более 250 нм. После экструзии и диафильтрации средний размер частиц уменьшается до 128 нм. Способ в соответствии с примером 2 обеспечивал частицы со средним размером частиц менее 150 нм без экструзии. Аналогичная тенденция наблюдалась для контрольной композиции.
Способ в соответствии с примером 2 оказался более эффективным при инкапсуляции siPHK в липидные наночастицы, чем контрольный способ (Фиг. 5). Эффективность инкапсуляции (ЕЕ) частицами, полученными способом согласно примеру 2, выше, чем у частиц, образованных посредством контрольного способа (измеряли до диафильтрации в обоих продуктах). ЕЕ частиц, полученных способом в соответствии с примером 2, более чем на 95% выше, чем ЕЕ, определенная для частиц, образованных контрольным способом. В контрольном способе большая часть свободной siPHK удаляется после диафильтрации, что приводит к улучшению ЕЕ конечного продукта.
Способ в соответствии с примером 2 обеспечивает наночастицы с более высокой эффективностью инкапсуляции, чем контрольный способ (Фиг. 6). Окончательное восстановление siPHK способом в соответствии с примером 2 было более чем в два раза больше, по сравнению с восстановлением, которое получается согласно контрольному способу (72% против 33%), где измерения проводили диафильтрации для обоих продуктов. Эти данные отражают улучшение ЕЕ, а также отсутствие стадии экструзии в способе в соответствии с примером 2. Способ в соответствии с примером 2 обеспечивает лучшее восстановление siPHK, потому что дополнительная стадия экструзии в случае контрольного способа структурно изменяет липосомы, и при этом по-видимому siPHK диссоциирует из частиц. Эти результаты показывают, что способ, описанный в настоящей заявке, обеспечивает некоторые преимущества по сравнению с контрольным способом благодаря уменьшению количества стадий процесса при одновременном повышении эффективности инкапсуляции и выхода наночастиц со средним размером частиц менее 150 нм.
Пример 4: Сравнение вариабельности при масштабировании серийного производства липосом
Способ, который описан в примере 2, осуществляли с различными композициями липидов, которые включали комбинацию перманентно заряженного (HEDC) катионного липида и ионизируемого (S104) катионной липидной молекулы. HEDC, S104, DOPE, холестерин, ПЭГ - BML и DIVA - ПЭГ 750-DIVA растворяли в абсолютном этаноле при молярном соотношении 20:20:30:25:5:2. При масштабировании оценивали различные молекулы siPHK, различные объемы партий и различные соотношения siPHK (лекарственное средство)/липиды. Таблица 7 обобщает результаты, характеризующие наночастицы, полученные при ряде условий.
Таблица 7
Полученные результаты показывают, что способ, описанный в настоящей заявке, является достаточно надежным. Похожие размер частиц и PDI были получены при масштабировании, охватывающем до 50-кратный диапазон. Размер частиц систематически был менее 100 нм, с выходами продукта >90%. Значения индекса полидисперсности находились в очень низком диапазоне, что свидетельствует о почти монодисперсной популяции везикул.
Пример 5: Сравнение вариабельности при масштабировании серийного производства липосом для композиций, содержащих сахарозу
Способ, который описан в примере 2, осуществляли с HEDC, S104, DOPE, холестерином, ПЭГ -BML и DIVA- ПЭГ 750-DIVA, растворенными в этаноле при молярном соотношении 20:20:30:25:5:2. Сахарозу включали в препарат везикул, как описано в настоящей заявке. Партии различных объемов оценивали и подвергали замораживанию-оттаиванию. В Таблице 8 приведены результаты, характеризующие образованные наночастицы при ряде условий.
Приведенные результаты показывают, что замораживание-оттаивание не изменяет свойства липидных наночастиц. Результаты также показали, что вариабельность между партиями является довольно низкой, и что способ воспроизводимо обеспечивает однородные наночастицы.
Условия были установлены для стабилизации частиц лекарственное средство: липид посредством лиофилизации. Частицы лекарственное средство: липид, полученные в соответствии с примером 2, могут быть лиофилизированы без потери активности. Конечная концентрация сахарозы, при которой были сформированы частицы лекарственное средство: липид, составила 8% (масса/объем). Лиофилизированные препараты восстанавливали посредством добавления дистиллированной воды и измеряли их трансфекционную активность в легких мышей после внутривенной инъекции. Замораживание и оттаивание восстановленного препарат не влияло на активность. Результаты, приведенные в Таблице 9, демонстрируют, что частицы, полученные при использовании настоящего способа, описанные в настоящей заявке, сохраняют свои свойства во время лиофилизации и, следовательно, являются стабильными. В частности, размер частиц является стабильным и сохраняется до, в ходе и после лиофилизации.
Стабильность частиц является функцией липидной композиции, значений липид: РНК (масса:масса) и выбора полисахарида, применяемого в композиции. Методический подход, описанный в настоящей заявке для получения стабильных композиций комплексов липид: РНК, обладающих высокой биологической активностью in vivo, обеспечивает преимущества получения фармацевтически приемлемых препаратов, и, таким образом, облегчает доставку РНК на основе липосом.
Пример 6: Погруженное впрыскивание липидов
Способ, как описано в примере 2, был проведен модифицированным образом посредством получения везикул с применением погруженного впрыскивания. HEDC, S104, DOPE, холестерин, ПЭГ - BML и DIVA - ПЭГ750-DIVA растворяли в этаноле при молярном соотношении 20:20:30:25:5:2. В Таблице 10 приводятся результаты, характеризующие наночастицы, полученные в результате способа погруженного впрыскивания, по сравнению со способом добавления на поверхность. Полученные результаты показывают удивительный и неожиданный результат: средний размер частиц существенно уменьшается, когда липиды добавляются к водной фазе посредством погруженного впрыскивания.
Замороженные (содержащие сахарозу) композиции, полученные с применением полуодноразовой последовательности производства
Такой же способ применяли для полученных липосом, содержащих сахарозу в буфере. В Таблице 11 приводятся результаты, характеризующие наночастицы, полученные при различном времени добавления, а в Таблице 12 приводятся результаты, характеризующих наночастицы, полученные с применением поверхностного добавления, по сравнению с погруженной инжекцией.
Приведенные результаты показывают удивительный и неожиданный результат: средний размер частиц существенно уменьшался, когда липиды добавлялись к водной фазе посредством погруженного впрыскивания с временем добавления менее 2 минут. Приведенные результаты также показывают удивительные результаты: средний размер частиц существенно уменьшался, когда липиды добавляли к водной фазе посредством погруженного впрыскивания.
Claims (34)
1. Способ получения липидной наночастицы, инкапсулирующей молекулу siPHK, включающий стадии:
получение первого раствора, содержащего катионный липид, нейтральный липид, стерол и ПЭГ липид, растворенные в этаноле;
получение второго раствора, содержащего молекулу siPHK в концентрации от 0.08 до 0.8 мг/мл и водный буфер при рН 3,5-6,5;
впрыскивание первого раствора во второй раствор при постоянной скорости в течение 1-100 минут, до тех пор, пока смесь, содержащая 25-45% (об.:об.) этанола, не будет получена, с получением липидной наночастицы, имеющей отношение siPHK: общее количество всех липидов от 0.06 до 0.16 (мас.:мас.) и отношение зарядов siPHK: катионного липида от 1:2,5 до 1:1; и
удаление этанола из смеси посредством диафильтрации относительно водного раствора, буферизированного при рН 6-8.
2. Способ по п. 1, где водный раствор дополнительно содержит полисахарид.
3. Способ по п. 2, где полисахарид выбирается из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, сорбита, ксилита, лактозы, мальтозы и инулина.
4. Способ по п. 1, дополнительно содержащий стадию лиофилизации липидной наночастицы, инкапсулирующей молекулу siPHK.
5. Способ по п. 1, где катионный липид составляет от 40 до 60 мольных процентов от липидов.
6. Способ по п. 1, где катионный липид выбирается из группы, состоящей из HEDC, HEDODC и HE-Et-DODC:
и
7. Способ по п. 1, где катионный липид имеет ионизируемый или перманентный положительный заряд.
8. Способ по п. 1, где первый раствор дополнительно содержит соединение, содержащее молекулу ретиноида, фолиевую кислоту, витамин Е, пептидный лиганд и/или моноклональное антитело.
9. Способ по п. 1, где второй раствор и первый раствор находятся при 25-55°С.
10. Способ по п. 1, где второй раствор содержит цитрат.
11. Способ по п. 1, где первый раствор добавляется ко второму раствору посредством впрыскивания через многосопловое устройство на границу раздела фаз воздух-вода.
12. Способ по п. 1, где первый раствор добавляется ко второму раствору посредством погруженного впрыскивания.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную наночастицу, инкапсулирующую молекулу siPHK, полученную способом по любому из пп. 1-12, где липидная наночастица, инкапсулирующая молекулу siPHK, имеет индекс полидисперсности, равный менее 0,2.
14. Фармацевтическая композиция по п. 13, где способ дополнительно содержит лиофилизацию липидной наночастицы, инкапсулирующей молекулу siPHK.
15. Фармацевтическая композиция по п. 13, дополнительно содержащая полисахарид.
16. Фармацевтическая композиция по п. 15, где полисахарид выбирается из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, сорбита, ксилита, лактозы, мальтозы и инулина.
17. Фармацевтическая композиция по п. 13, где средневзвешанный диаметр липидной наночастицы, инкапсулирующей молекулу siPHK, составляет 50-100 нм.
18. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14-17, где катионный липид имеет структурную формулу I:
в которой
Z представляет собой алкильный линкер, С2-С4алкил
Y представляет собой алкильный линкер, C1-С6алкил
R1 и R2 каждый независимо представляет собой С12-С30алкил или С12-С30алкенил;
R3 и R4 каждый независимо представляет собой водород, С1-С6алкил или -СН2СН2ОН;
n равно 1-6; и
X представляет собой противоион.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161556124P | 2011-11-04 | 2011-11-04 | |
US61/556,124 | 2011-11-04 | ||
PCT/IB2012/003109 WO2013093648A2 (en) | 2011-11-04 | 2012-11-02 | Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014122432A RU2014122432A (ru) | 2015-12-10 |
RU2647476C2 true RU2647476C2 (ru) | 2018-03-15 |
Family
ID=47178988
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014122433A RU2642640C2 (ru) | 2011-11-04 | 2012-11-02 | Одноразовая система для стерильного получения частиц из липидов и нуклеиновых кислот |
RU2014122432A RU2647476C2 (ru) | 2011-11-04 | 2012-11-02 | Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014122433A RU2642640C2 (ru) | 2011-11-04 | 2012-11-02 | Одноразовая система для стерильного получения частиц из липидов и нуклеиновых кислот |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8956572B2 (ru) |
EP (4) | EP3673898A1 (ru) |
JP (3) | JP6133883B2 (ru) |
KR (2) | KR102056702B1 (ru) |
CN (2) | CN103906503B (ru) |
AU (2) | AU2012356239B2 (ru) |
CA (2) | CA2853689C (ru) |
CY (1) | CY1121495T1 (ru) |
DK (1) | DK2773326T3 (ru) |
ES (1) | ES2721325T3 (ru) |
HR (1) | HRP20190481T1 (ru) |
HU (1) | HUE043809T2 (ru) |
LT (1) | LT2773326T (ru) |
PL (1) | PL2773326T3 (ru) |
PT (1) | PT2773326T (ru) |
RS (1) | RS58562B1 (ru) |
RU (2) | RU2642640C2 (ru) |
SI (1) | SI2773326T1 (ru) |
TR (1) | TR201904389T4 (ru) |
TW (3) | TWI618548B (ru) |
WO (2) | WO2013064911A2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20190321295A1 (en) * | 2014-07-16 | 2019-10-24 | Novartis Ag | Method of Encapsulating a Nucleic Acid in a Lipid Nanoparticle Host |
Families Citing this family (109)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2807552A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-02-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
CN104531812A (zh) | 2010-10-01 | 2015-04-22 | 现代治疗公司 | 设计核酸及其使用方法 |
WO2012135805A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | modeRNA Therapeutics | Delivery and formulation of engineered nucleic acids |
US9464124B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-10-11 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
RU2707251C2 (ru) | 2011-10-03 | 2019-11-25 | Модерна Терапьютикс, Инк. | Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты и их применение |
US9579338B2 (en) | 2011-11-04 | 2017-02-28 | Nitto Denko Corporation | Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery |
KR20140102759A (ko) | 2011-12-16 | 2014-08-22 | 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 | 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물 |
US9320297B2 (en) * | 2012-03-22 | 2016-04-26 | Lemniscate Innovations Llc | Spherification/reverse spherification automated and integrated system and method |
EP2833892A4 (en) | 2012-04-02 | 2016-07-20 | Moderna Therapeutics Inc | MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS AND PEPTIDES ASSOCIATED WITH ONCOLOGY |
US9878056B2 (en) | 2012-04-02 | 2018-01-30 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides |
US9283287B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins |
US9572897B2 (en) | 2012-04-02 | 2017-02-21 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins |
HUE056014T2 (hu) | 2012-06-08 | 2022-01-28 | Nitto Denko Corp | Lipidek gyógyszerszállító készítményekhez |
JP6144355B2 (ja) | 2012-11-26 | 2017-06-07 | モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX,Inc. | 化学修飾mRNA |
SG11201506116XA (en) | 2013-02-05 | 2015-09-29 | 1Globe Health Inst Llc | Biodegradable and clinically-compatible nanop articles as drug delivery carriers |
WO2014152211A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Moderna Therapeutics, Inc. | Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions |
US8980864B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-03-17 | Moderna Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of altering cholesterol levels |
US11377470B2 (en) | 2013-03-15 | 2022-07-05 | Modernatx, Inc. | Ribonucleic acid purification |
EP3971287A1 (en) * | 2013-07-11 | 2022-03-23 | ModernaTX, Inc. | Compositions comprising synthetic polynucleotides encoding crispr related proteins and synthetic sgrnas and methods of use |
AU2014315287A1 (en) | 2013-09-03 | 2015-03-12 | Moderna Therapeutics, Inc. | Chimeric polynucleotides |
US20160194368A1 (en) | 2013-09-03 | 2016-07-07 | Moderna Therapeutics, Inc. | Circular polynucleotides |
WO2015048020A2 (en) * | 2013-09-24 | 2015-04-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the manufacture of lipid nanoparticles |
WO2015048744A2 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-02 | Moderna Therapeutics, Inc. | Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides |
US10323076B2 (en) | 2013-10-03 | 2019-06-18 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor |
CN103599549A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-02-26 | 大连民族学院 | 一种siRNA/抗癌药物联合转运复合载体及其制备方法和应用 |
BR112016024644A2 (pt) | 2014-04-23 | 2017-10-10 | Modernatx Inc | vacinas de ácido nucleico |
JP6782171B2 (ja) * | 2014-07-02 | 2020-11-11 | シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド | メッセンジャーrnaのカプセル化 |
CA2955250A1 (en) | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Moderna Therapeutics, Inc. | Chimeric polynucleotides |
US20170210788A1 (en) | 2014-07-23 | 2017-07-27 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of intrabodies |
WO2016045732A1 (en) * | 2014-09-25 | 2016-03-31 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Stable formulations of lipids and liposomes |
RU2723032C2 (ru) * | 2014-12-29 | 2020-06-08 | Бонак Корпорейшн | Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты |
AU2016222746A1 (en) | 2015-02-24 | 2017-09-07 | The University Of British Columbia | Continuous flow microfluidic system |
JP2018525209A (ja) | 2015-04-28 | 2018-09-06 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | 使い捨てマイクロ流体カートリッジ |
IL288342B2 (en) * | 2015-07-22 | 2024-02-01 | Nitto Denko Corp | Formulations and methods for lyophilic nanoparticulate forms |
US11564893B2 (en) | 2015-08-17 | 2023-01-31 | Modernatx, Inc. | Methods for preparing particles and related compositions |
US9938572B1 (en) * | 2015-09-08 | 2018-04-10 | Raindance Technologies, Inc. | System and method for forming an emulsion |
HRP20220156T1 (hr) | 2015-09-17 | 2022-04-15 | Modernatx, Inc. | Spojevi i pripravci za unutarstaničnu isporuku terapeutskih sredstava |
JP6921833B2 (ja) | 2015-10-22 | 2021-08-18 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | ヒトサイトメガロウイルスワクチン |
JP7080172B2 (ja) | 2015-12-10 | 2022-06-03 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | 治療薬の送達のための組成物及び方法 |
DK3394030T3 (da) | 2015-12-22 | 2022-03-28 | Modernatx Inc | Forbindelser og sammensætninger til intracellulær afgivelse af midler |
ES2919552T3 (es) | 2015-12-23 | 2022-07-27 | Modernatx Inc | Procedimientos de utilización de polinucleotidos codificadores de ligando ox40 |
CN108778477B (zh) | 2016-01-06 | 2022-02-25 | 不列颠哥伦比亚大学 | 分叉混合器及其使用和制造方法 |
EP3400023A1 (en) | 2016-01-10 | 2018-11-14 | ModernaTX, Inc. | Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies |
US10689873B2 (en) | 2016-03-10 | 2020-06-23 | Lonza Ltd | Customizable facility |
AU2017230823A1 (en) | 2016-03-10 | 2018-09-27 | Lonza Ltd | Customizable facility |
WO2017223135A1 (en) * | 2016-06-24 | 2017-12-28 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticles |
MX2018016389A (es) * | 2016-06-30 | 2019-08-16 | Arbutus Biopharma Corp | Composiciones y metodos para suministro de arn mensajero. |
EP3478821A1 (en) | 2016-08-02 | 2019-05-08 | Lonza Ltd | Customizable facility |
WO2018035388A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US20200283743A1 (en) | 2016-08-17 | 2020-09-10 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
IL264842B (en) * | 2016-08-18 | 2022-08-01 | Troy Bremer | Delivery of urea to macular and retinal cells using liposome constructs |
EP3315125A1 (en) * | 2016-10-31 | 2018-05-02 | Silence Therapeutics (London) Ltd | Lipid nanoparticle formulation |
US11583504B2 (en) | 2016-11-08 | 2023-02-21 | Modernatx, Inc. | Stabilized formulations of lipid nanoparticles |
AU2018234828A1 (en) | 2017-03-15 | 2019-09-19 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticle formulation |
KR20190132405A (ko) | 2017-03-15 | 2019-11-27 | 모더나티엑스, 인크. | 치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물 |
AU2018234814B2 (en) | 2017-03-15 | 2022-06-30 | Modernatx, Inc. | Crystal forms of amino lipids |
WO2018191750A2 (en) | 2017-04-14 | 2018-10-18 | The Broad Institute Inc. | Novel delivery of large payloads |
MA49421A (fr) | 2017-06-15 | 2020-04-22 | Modernatx Inc | Formulations d'arn |
EP3651733A4 (en) * | 2017-07-10 | 2021-04-07 | ImmunoVaccine Technologies Inc. | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS, METHOD OF MANUFACTURING USING LIPID VESICLE PARTICLES OF DEFINED SIZE, AND USES THEREOF |
WO2019027055A1 (ja) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | 協和発酵キリン株式会社 | 核酸含有脂質ナノ粒子 |
JP2019043216A (ja) | 2017-08-30 | 2019-03-22 | いすゞ自動車株式会社 | ステアリング装置 |
WO2019046809A1 (en) | 2017-08-31 | 2019-03-07 | Modernatx, Inc. | METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES |
SG11202002579SA (en) | 2017-10-20 | 2020-05-28 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Preparation and storage of liposomal rna formulations suitable for therapy |
EP3705179B1 (en) * | 2017-11-01 | 2024-05-22 | Osaka University | Method and system for producing lipid particles having desired particle diameter |
JP7103726B2 (ja) * | 2017-11-09 | 2022-07-20 | イミューノヴァクシーン テクノロジーズ インコーポレイテッド | 医薬組成物、脂質ベシクル粒子の分粒を含む調製のための方法、及びそれらの使用 |
EP3710039A4 (en) | 2017-11-13 | 2021-08-04 | The Broad Institute, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR CANCER TREATMENT BY TARGETING THE CLEC2D-KLRB1 PATH |
US10968257B2 (en) | 2018-04-03 | 2021-04-06 | The Broad Institute, Inc. | Target recognition motifs and uses thereof |
WO2019204451A1 (en) * | 2018-04-17 | 2019-10-24 | Carnegie Mellon University | Enhanced lipid nanoparticle drug delivery using a negatively charged polymer |
WO2020047061A1 (en) * | 2018-08-29 | 2020-03-05 | Translate Bio, Inc. | Improved process of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles |
MA53650A (fr) | 2018-09-19 | 2021-07-28 | Modernatx Inc | Lipides peg et leurs utilisations |
MA53652A (fr) | 2018-09-19 | 2021-07-28 | Modernatx Inc | Lipides peg de haute pureté et leurs utilisations |
WO2020061457A1 (en) * | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Modernatx, Inc. | Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof |
CA3113449A1 (en) * | 2018-09-21 | 2020-03-26 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Systems and methods for manufacturing lipid nanoparticles and liposomes |
JP2022512578A (ja) | 2018-10-09 | 2022-02-07 | ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | 有機溶媒不含かつ劣化剤不含のトランスフェクション・コンピテント・ベシクルを含む組成物及びシステム並びにそれらに関連する方法 |
CA3112837A1 (en) * | 2018-10-19 | 2020-04-23 | Translate Bio, Inc. | Pumpless encapsulation of messenger rna |
AU2020214843A1 (en) * | 2019-01-31 | 2021-08-19 | Modernatx, Inc. | Methods of preparing lipid nanoparticles |
WO2020191102A1 (en) | 2019-03-18 | 2020-09-24 | The Broad Institute, Inc. | Type vii crispr proteins and systems |
WO2020191103A1 (en) * | 2019-03-19 | 2020-09-24 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Method of making lipid-encapsulated rna nanoparticles |
EP3965738A1 (en) | 2019-05-07 | 2022-03-16 | Universidade do Minho | Method for production of liposomes |
US20220220469A1 (en) | 2019-05-20 | 2022-07-14 | The Broad Institute, Inc. | Non-class i multi-component nucleic acid targeting systems |
US20230097090A1 (en) | 2019-08-14 | 2023-03-30 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Improved lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids |
CN114929205A (zh) | 2019-09-06 | 2022-08-19 | 世代生物公司 | 包括末端封闭式dna和可切割脂质的脂质纳米颗粒组合物及其使用方法 |
JP7271374B2 (ja) * | 2019-09-10 | 2023-05-11 | 株式会社東芝 | 分析方法、分析基体、分析キット及び分析装置。 |
EP4031524A1 (en) | 2019-09-19 | 2022-07-27 | ModernaTX, Inc. | Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents |
MX2022006033A (es) | 2019-11-22 | 2022-06-22 | Generation Bio Co | Lipidos ionizables y composiciones de nanoparticulas de estos. |
KR102409145B1 (ko) * | 2020-03-23 | 2022-06-15 | 프레스티지바이오로직스 주식회사 | 항체 의약품 제조 공정을 위한 버퍼 조제 및 이송 시스템 |
CN111467321A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-07-31 | 深圳市新合生物医疗科技有限公司 | 一种mRNA核酸类药物胞内递送系统、制备方法和应用 |
MX2023002928A (es) | 2020-09-13 | 2023-06-12 | Arcturus Therapeutics Inc | Encapsulacion de arn grande en nanoparticulas lipidicas. |
CN112843019A (zh) * | 2021-01-27 | 2021-05-28 | 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 | 一种核酸脂质纳米粒组合物,包含其的药物制剂,及其制备方法和应用 |
EP4294450A1 (en) * | 2021-02-16 | 2023-12-27 | The Johns Hopkins University | Methods for preparation of plasmid dna/lipid particles with defined size for in vitro and in vivo transfection |
WO2022175366A1 (en) | 2021-02-17 | 2022-08-25 | Secoya Technologies | Method for producing lipid nanoparticles and lipid nanoparticles resulting therefrom |
US11524023B2 (en) | 2021-02-19 | 2022-12-13 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same |
JP2024515080A (ja) * | 2021-04-22 | 2024-04-04 | インベンテージ ラボ インコーポレイテッド | 脂質ナノ粒子の製造方法およびその製造装置 |
KR20240023420A (ko) | 2021-06-14 | 2024-02-21 | 제너레이션 바이오 컴퍼니 | 양이온성 지질 및 이의 조성물 |
WO2023057596A1 (en) * | 2021-10-06 | 2023-04-13 | Leon-Nanodrugs Gmbh | Method for preparing lipid nanoparticles |
TW202334080A (zh) | 2021-11-08 | 2023-09-01 | 美商歐納醫療公司 | 用於遞送環狀聚核苷酸之脂質奈米粒子組合物 |
CN116549626A (zh) * | 2022-01-27 | 2023-08-08 | 深圳瑞吉生物科技有限公司 | 一种载核酸脂质纳米颗粒冻干制剂及其制备方法与应用 |
WO2023161350A1 (en) | 2022-02-24 | 2023-08-31 | Io Biotech Aps | Nucleotide delivery of cancer therapy |
WO2023196818A1 (en) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | The Regents Of The University Of California | Genetic complementation compositions and methods |
KR102475540B1 (ko) * | 2022-04-26 | 2022-12-08 | 주식회사 무진메디 | 약물이 담지된 지질 나노입자 제조 방법 및 제조 장치 |
WO2023239756A1 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Generation Bio Co. | Lipid nanoparticle compositions and uses thereof |
WO2024102730A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Orna Therapeutics, Inc. | Lipids and nanoparticle compositions for delivering polynucleotides |
WO2024102762A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Orna Therapeutics, Inc. | Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides |
WO2024102677A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Orna Therapeutics, Inc. | Circular rna compositions |
WO2024119039A2 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Stealth lipid nanoparticles and uses thereof |
WO2024119103A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers |
WO2024119074A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Stealth lipid nanoparticle compositions for cell targeting |
WO2024119051A1 (en) | 2022-12-01 | 2024-06-06 | Generation Bio Co. | Novel polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same |
WO2024129982A2 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-20 | Orna Therapeutics, Inc. | Circular rna compositions and methods |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007051303A1 (en) * | 2005-11-02 | 2007-05-10 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF |
WO2010021865A1 (en) * | 2008-08-18 | 2010-02-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids |
RU2573409C2 (ru) * | 2009-11-04 | 2016-01-20 | Дзе Юниверсити Оф Бритиш Коламбиа | Содержащие нуклеиновые кислоты липидные частицы и относящиеся к ним способы |
Family Cites Families (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4781871A (en) * | 1986-09-18 | 1988-11-01 | Liposome Technology, Inc. | High-concentration liposome processing method |
JPH01501228A (ja) * | 1986-09-18 | 1989-04-27 | リポソーム テクノロジー,インコーポレイテッド | 高濃度リポソーム処理方法 |
US4895452A (en) | 1988-03-03 | 1990-01-23 | Micro-Pak, Inc. | Method and apparatus for producing lipid vesicles |
JPH08512056A (ja) * | 1993-06-30 | 1996-12-17 | ジェネンテク・インコーポレイテッド | リポソームの製造法 |
ATE285477T1 (de) | 1995-06-07 | 2005-01-15 | Inex Pharmaceutical Corp | Herstellung von lipid-nukleinsäure partikeln duch ein hydrophobische lipid-nukleinsäuree komplexe zwischenprodukt und zur verwendung in der gentransfer |
US5981501A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
US6395302B1 (en) | 1996-11-19 | 2002-05-28 | Octoplus B.V. | Method for the preparation of microspheres which contain colloidal systems |
US6287591B1 (en) * | 1997-05-14 | 2001-09-11 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Charged therapeutic agents encapsulated in lipid particles containing four lipid components |
AU756196B2 (en) | 1998-11-13 | 2003-01-09 | Optime Therapeutics, Inc. | Method and apparatus for liposome production |
US6855296B1 (en) | 1998-11-13 | 2005-02-15 | Optime Therapeutics, Inc. | Method and apparatus for liposome production |
IL147089A0 (en) | 1999-07-15 | 2002-08-14 | Inex Pharmaceuticals Corp | Methods of preparing lipid-encapsulated therapeutic agents |
US7094423B1 (en) | 1999-07-15 | 2006-08-22 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for preparation of lipid-encapsulated therapeutic agents |
EP1203614A1 (de) | 2000-11-03 | 2002-05-08 | Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH | Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Lipidvesikeln |
DE60132094T3 (de) * | 2001-10-26 | 2012-02-02 | Octoplus Polyactive Sciences B.V. | Verfahren zur Herstellung von gereinigten Partikeln |
US7223887B2 (en) | 2001-12-18 | 2007-05-29 | The University Of British Columbia | Multivalent cationic lipids and methods of using same in the production of lipid particles |
US20090191259A1 (en) | 2002-01-09 | 2009-07-30 | Transave, Inc. | Efficient liposomal encapsulation |
US6712963B2 (en) | 2002-06-14 | 2004-03-30 | Scilog, Llc | Single-use manifold for automated, aseptic transfer of solutions in bioprocessing applications |
WO2004002453A1 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Protiva Biotherapeutics Ltd. | Method and apparatus for producing liposomes |
FR2856940B1 (fr) * | 2003-07-04 | 2007-02-09 | Stedim Sa | Systeme clos a usage unique de melange, de stockage et d'homogeneisation de liquides en conditions propres ou steriles |
WO2005090403A2 (en) * | 2004-03-12 | 2005-09-29 | Biovest International, Inc. | Method and apparatus for antibody purification |
EP1773976B2 (en) | 2004-06-04 | 2020-01-01 | Global Life Sciences Solutions USA LLC | Disposable bioreactor systems and methods |
US7410587B2 (en) | 2004-08-03 | 2008-08-12 | Scilog, Inc. | Liquid handling for filtration and preparative chromatography |
US7404969B2 (en) * | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
AU2006274413B2 (en) | 2005-07-27 | 2013-01-10 | Arbutus Biopharma Corporation | Systems and methods for manufacturing liposomes |
WO2007117023A1 (ja) | 2006-04-11 | 2007-10-18 | Wingturf Co., Ltd. | リポソーム分散液の製造方法ならびに製造装置 |
EP1920765A1 (en) | 2006-11-07 | 2008-05-14 | Medigene AG | Liposome preparation by single-pass process |
WO2009086558A1 (en) | 2008-01-02 | 2009-07-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
JP5322476B2 (ja) | 2008-03-31 | 2013-10-23 | テルモ株式会社 | リポソームの製造装置およびリポソームの製造方法 |
US8231787B2 (en) | 2008-05-06 | 2012-07-31 | Spf Innovations, Llc | Tangential flow filtration system |
EP2902013A1 (en) | 2008-10-16 | 2015-08-05 | Marina Biotech, Inc. | Processes and Compositions for Liposomal and Efficient Delivery of Gene Silencing Therapeutics |
TW201021853A (en) * | 2008-11-17 | 2010-06-16 | Enzon Pharmaceuticals Inc | Releasable cationic lipids for nucleic acids delivery systems |
WO2010080724A1 (en) * | 2009-01-12 | 2010-07-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids |
ES2443147T3 (es) * | 2009-01-20 | 2014-02-18 | Med Coat Ab | Composición de recubrimiento y su empleo |
FR2943560B1 (fr) * | 2009-03-24 | 2011-05-27 | Jean Pascal Zambaux | Bioreacteur jetable et systeme d'agitation a usage unique |
NZ600616A (en) * | 2009-12-01 | 2014-11-28 | Shire Human Genetic Therapies | Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases |
US20130116419A1 (en) * | 2010-01-22 | 2013-05-09 | Daniel Zewge | Post-synthetic chemical modification of rna at the 2'-position of the ribose ring via "click" chemistry |
EP3391877A1 (en) | 2010-04-08 | 2018-10-24 | The Trustees of Princeton University | Preparation of lipid nanoparticles |
RU2769872C2 (ru) * | 2011-06-08 | 2022-04-07 | Нитто Денко Корпорейшн | СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ НАЦЕЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА И УСИЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ siPHK |
-
2012
- 2012-11-02 AU AU2012356239A patent/AU2012356239B2/en active Active
- 2012-11-02 WO PCT/IB2012/002916 patent/WO2013064911A2/en active Application Filing
- 2012-11-02 EP EP19205352.8A patent/EP3673898A1/en not_active Ceased
- 2012-11-02 ES ES12829180T patent/ES2721325T3/es active Active
- 2012-11-02 EP EP12848760.0A patent/EP2773328A2/en not_active Withdrawn
- 2012-11-02 PT PT12829180T patent/PT2773326T/pt unknown
- 2012-11-02 HU HUE12829180A patent/HUE043809T2/hu unknown
- 2012-11-02 WO PCT/IB2012/003109 patent/WO2013093648A2/en active Application Filing
- 2012-11-02 KR KR1020147014826A patent/KR102056702B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-02 RS RS20190426A patent/RS58562B1/sr unknown
- 2012-11-02 CA CA2853689A patent/CA2853689C/en active Active
- 2012-11-02 KR KR1020147014822A patent/KR102046968B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-02 RU RU2014122433A patent/RU2642640C2/ru active
- 2012-11-02 EP EP18209774.1A patent/EP3485875A1/en active Pending
- 2012-11-02 PL PL12829180T patent/PL2773326T3/pl unknown
- 2012-11-02 LT LTEP12829180.4T patent/LT2773326T/lt unknown
- 2012-11-02 CN CN201280054023.XA patent/CN103906503B/zh active Active
- 2012-11-02 SI SI201231557T patent/SI2773326T1/sl unknown
- 2012-11-02 AU AU2012330819A patent/AU2012330819B2/en active Active
- 2012-11-02 TR TR2019/04389T patent/TR201904389T4/tr unknown
- 2012-11-02 RU RU2014122432A patent/RU2647476C2/ru active
- 2012-11-02 JP JP2014540573A patent/JP6133883B2/ja active Active
- 2012-11-02 CA CA2853685A patent/CA2853685C/en active Active
- 2012-11-02 CN CN201280054027.8A patent/CN103906504B/zh active Active
- 2012-11-02 EP EP12829180.4A patent/EP2773326B1/en active Active
- 2012-11-02 JP JP2014540571A patent/JP6149041B2/ja active Active
- 2012-11-02 DK DK12829180.4T patent/DK2773326T3/en active
- 2012-11-05 TW TW101141082A patent/TWI618548B/zh active
- 2012-11-05 TW TW106116691A patent/TWI626952B/zh active
- 2012-11-05 TW TW101141084A patent/TWI615156B/zh active
- 2012-11-05 US US13/669,217 patent/US8956572B2/en active Active
-
2017
- 2017-04-20 JP JP2017083327A patent/JP6442551B2/ja active Active
-
2019
- 2019-03-11 HR HRP20190481TT patent/HRP20190481T1/hr unknown
- 2019-03-28 CY CY20191100358T patent/CY1121495T1/el unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007051303A1 (en) * | 2005-11-02 | 2007-05-10 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF |
WO2010021865A1 (en) * | 2008-08-18 | 2010-02-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids |
RU2573409C2 (ru) * | 2009-11-04 | 2016-01-20 | Дзе Юниверсити Оф Бритиш Коламбиа | Содержащие нуклеиновые кислоты липидные частицы и относящиеся к ним способы |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
Walter E. Kowtoniuk et.al. A chemical screen for biological small molecule-RNA conjugates reveals CoA-linked RNA. Proc Natl Acad Sci USA. 2009 May 12; 106(19): 7768-7773. Published online, 2009, Apr. 28. * |
Yavada Preeti et.al., Effect of lyophilization and freeze-thawing on the stability of siRNA-liposome complexes, Aaps Pharmscitech, Springer New York LLC, US, vol. 9, no. 2, pages 335 - 341. * |
В.А.Рабинович, З.Я. Хавин. Краткий химический справочник. Химия, 1991, см. с. 283. * |
В.А.Рабинович, З.Я. Хавин. Краткий химический справочник. Химия, 1991, см. с. 283. Покровский В.И. Энциклопедический словарь медицинских терминов. 2005, 1591 с., см. с. 653. * |
Покровский В.И. Энциклопедический словарь медицинских терминов. 2005, 1591 с., см. с. 653. * |
Тазина Е.В. Особенности инкапсулирования лекарственных препаратов в липосомы (Обзор). Химико-фармацевтический журнал, Том 45, N8, август 2011;. * |
Тазина Е.В. Особенности инкапсулирования лекарственных препаратов в липосомы (Обзор). Химико-фармацевтический журнал, Том 45, N8, август 2011;. Yavada Preeti et.al., Effect of lyophilization and freeze-thawing on the stability of siRNA-liposome complexes, Aaps Pharmscitech, Springer New York LLC, US, vol. 9, no. 2, pages 335 - 341. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20190321295A1 (en) * | 2014-07-16 | 2019-10-24 | Novartis Ag | Method of Encapsulating a Nucleic Acid in a Lipid Nanoparticle Host |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2647476C2 (ru) | Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства | |
US10155945B2 (en) | Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery | |
US10624852B2 (en) | Liposomes comprising a calcium phosphate-containing precipitate | |
ES2386549T3 (es) | Composición para inhibir la expresión de un gen diana |