CN108601765A - 用于早产管理的治疗剂 - Google Patents

用于早产管理的治疗剂 Download PDF

Info

Publication number
CN108601765A
CN108601765A CN201680080198.6A CN201680080198A CN108601765A CN 108601765 A CN108601765 A CN 108601765A CN 201680080198 A CN201680080198 A CN 201680080198A CN 108601765 A CN108601765 A CN 108601765A
Authority
CN
China
Prior art keywords
liposome
pharmaceutical composition
ind
targeting moiety
ora
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680080198.6A
Other languages
English (en)
Inventor
J·S·瑞福尔佐
B·戈丁
M·朗高
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Texas System
Methodist Hospital
Original Assignee
University of Texas System
Methodist Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Texas System, Methodist Hospital filed Critical University of Texas System
Publication of CN108601765A publication Critical patent/CN108601765A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/095—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了使用脂质体包封的保胎药剂如吲哚美辛治疗和预防早产的方法和组合物。在某些方面，提供了靶向脂质体，所述靶向脂质体允许将保胎药剂直接递送至子宫，如通过靶向催产素受体。

Description

用于早产管理的治疗剂
本申请要求2015年12月18日提交的美国临时申请号62/269,651的优先权权益，所述临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。
本发明是根据由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的批准号：R21HD082947在政府支持下进行的。政府享有本发明的某些权利。
发明背景
1.发明领域
本发明总体上涉及生物学和医学领域。更具体地说，本发明涉及用于早产管理的组合物和方法。
2.相关技术描述
早产是影响美国(US)大约400万次分娩的12％的围产期发病率和死亡率的主要原因。虽然早产的病因学在很大程度上是未知的，但它被定义为子宫的有规律的收缩，从而导致在妊娠37周之前子宫颈的变化。早产新生儿处于急性和慢性健康问题和发育缺陷的增加的风险。由于孕产妇医学病状或妊娠并发症，药物对于需要持续或阵发性治疗的孕妇和胎儿的健康常常是必不可少的。当游离未结合的药物穿过胎盘时，最常发生胎儿暴露于药物(van der Aa等人,1998；Garland,1998；Syme等人,2004)。使治疗剂靶向受影响的组织并使胎盘通过的循环游离药物部分最小化可为产科学领域开创新的机会。
保胎药仍然是针对早产的主要治疗以延迟分娩。保胎药治疗的基本问题是其对胎儿的微弱功效和潜在的不良作用。不幸的是，虽然需求量很大，但过去三十年以来，保胎药疗法一直没有显著改善，这可归因于针对早产的药物治疗领域的创新不足。
吲哚美辛(IND)是美国临床上可用的最有效的保胎药物。IND属于非类固醇抗炎药(NSAID)家族，其通过降低母体子宫中的前列腺素产生来起作用。IND自由地穿过胎盘，并且其施用与胎儿不良作用相关，包括人和动物模型中动脉导管的产前闭合、羊水过少、坏死性肠结肠炎(Major等人,1994)以及脑室内出血(Suarez等人,2001)。因此，需要靶向保胎药疗法来通过使母亲和婴儿的治疗功能更佳且更安全而解决这些妊娠所特有的基本问题。
发明概述
在第一个实施方案中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含包封在脂质体中的保胎药剂。在一些方面，所述保胎药剂是穿过胎盘(当以包封形式提供时)的药剂。
在某些方面，所述保胎药剂包括β2-肾上腺素能激动剂、钙通道阻滞剂、催产素受体拮抗剂(ORA)、前列腺素F2α受体抑制剂、一氧化氮供体或非类固醇抗炎药(NSAID)。在其他方面，所述β2-肾上腺素能激动剂包括特布他林、利托君、非诺特罗、沙丁胺醇、硫酸贝多拉君、MN-221、异克舒令、海索那林或布酚宁。在具体方面，所述钙通道阻滞剂包括硝苯地平或尼卡地平。在一些特定方面，所述ORA包括阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。在某些方面，所述前列腺素F2α受体抑制剂包括OBE-001、OBE-002或PDC-31。在其他方面，所述NSAID包括吲哚美辛(IND)、舒林酸、酮咯酸、塞来昔布、罗非昔布或尼美舒利。在其他具体的方面，所述脂质体包含吲哚美辛。在特定方面，所述一氧化氮供体包括西地那非、一氧化氮或硝酸甘油。
在一些方面，所述保胎药剂包括硫酸镁、黄体酮或乙醇。在其他方面，所述脂质体包含结合至催产素受体的靶向部分。在某些方面，所述靶向部分包括催产素受体激动剂或拮抗剂。在一些方面，所述催产素受体激动剂是催产素、卡贝缩宫素、TC OT 39、WAY 267464二盐酸盐、[Thr4]-催产素肽、[HO1][Thr4]-催产素肽、[Thr4,Gly7]-催产素肽或[HO1][Thr4,Gly7]-催产素肽。在一个具体方面，所述催产素受体激动剂是催产素。在其他特定方面，所述催产素受体拮抗剂是阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。在另一具体方面，所述催产素受体拮抗剂是阿托西班。
在仍然其他方面，所述实施方案的脂质体包括靶向部分，如使所述脂质体靶向子宫的靶向部分。例如，所述靶向部分可包括蛋白质、抗体、肽、适体或硫代适体。在某些方面，所述靶向部分缀合至所述脂质体的表面。在一些方面，所述靶向部分缀合至所述脂质体中的磷脂。在其他方面，所述靶向部分缀合至聚乙二醇化脂质。在具体方面，所述靶向部分缀合至聚乙二醇化磷脂。在其他特定方面，所述聚乙二醇化磷脂包括1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。在某些方面，所述聚乙二醇化磷脂包括DSPE-PEG(2000)羧酸。在一些方面，所述靶向部分包括DSPE-PEG(2000)-阿托西班(参见例如，图5B)。在其他方面，所述靶向部分通过碳二亚胺交联剂缀合。在一个具体方面，所述靶向部分通过1-乙基-3-(-3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)交联剂缀合。
在一些方面，所述脂质体包括至少一种磷脂。在某些方面，所述脂质体至少包括聚乙二醇化脂质。在特定方面，所述脂质体包括至少一种阳离子、阴离子或两性离子脂质。在具体方面，所述脂质体包括胆固醇。
在另外的方面，所述组合物包含多种平均直径为约50至500nm的脂质体。在某些方面，所述脂质体具有约100至400nm、100至300nm或100至200nm的平均直径。在一些方面，所述保胎药剂包括吲哚美辛，并且所述靶向部分包括缀合至所述脂质体的催产素受体拮抗剂。
作为另一个实施方案，提供了一种用于治疗患者的根据本文所述的任何实施方案和方面的组合物。在一些方面，所述患者怀孕并且正在进入早产或处于进入早产的风险。
在又一实施方案中，提供了一种治疗怀孕患者以减缓或预防早产的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的包封在脂质体中的保胎药剂，如本文提供的药物组合物。在一些实施方案中，所述患者是人患者。在其他方面，所述患者是家养或家畜动物。在一些方面，所述脂质体包含使所述脂质体靶向子宫的靶向部分。在特定方面，所述脂质体包含结合至催产素受体的靶向部分。在具体方面，所述保胎药剂是穿过胎盘的药剂。在某些方面，局部施用所述实施方案的组合物。在其他方面，全身施用所述组合物。
如本文所用，就指定组分而言“基本上不含”在本文中用于表示指定组分未被有目的地配制到组合物中和/或仅以污染物或痕量存在。因此，由组合物的任何意外污染产生的指定组分的总量远低于0.01％。最优选的是用标准分析方法检测不到指定组分量的组合物。
如本文在说明书中所用，“一个/种(a/an)”可指一个(种)或多个(种)。如本文在权利要求中所用，当与词语“包括/包含(comprising)”结合使用时，词语“一个/种”可指一个(种)或多于一个(种)。
除非明确指明仅仅指代替代物，或替代物相互排斥，否则权利要求书中所用的术语“或”用于指“和/或”，尽管本公开支持仅仅指代替代物和“和/或”的定义。如本文所用，“另一”可指至少第二个(种)或更多个(种)。
在整个本申请中，术语“约”用于指示值包括装置、用以测定所述值的方法的误差的固有变化，或研究受试者中存在的变化。
通过以下详细描述，本发明的其他目的、特征和优点将变得显而易见。然而，应理解的是，尽管指示本发明的优选实施方案，但是详细描述和特定实施例仅通过说明的方式给出，因为从此详细描述中，本发明的精神和范围内的各种改变和修改对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
附图简述
以下附图形成本说明书的一部分，并且被包括以进一步说明本发明的某些方面。本发明可通过参考与本文提出的特定实施方案的详细描述结合的这些附图中的一个或多个来更好地理解。
图1A-1C：使用DLS，(A)脂质体(LIP)和(B)脂质体-吲哚美辛(LIP-IND)的大小分布的代表图，以及(C)LIP-IND的扫描电子显微照片(SEM)。
图2：如通过荧光显微镜检术检测的子宫、胎盘和胎儿中的LIP-IND定位。在子宫中观察到高LIP-IND定位，在胎盘中定位水平低，并且通过荧光显微镜检术未检测到胎儿中的定位。
图3：吲哚美辛(IND)和脂质体-吲哚美辛(LIP-IND)施用4小时后子宫和胎儿内的吲哚美辛水平。
图4：在施用吲哚美辛(IND)和脂质体-吲哚美辛(LIP-IND)4小时后子宫组织内的前列腺素E2(PGE2)水平。
图5A-5C：具有吲哚美辛和催产素受体拮抗剂阿托西班(LIP-IND-ORA)设计的脂质体的示意性表示。(A)LIP-IND-ORA结构的说明和(B)ORA缀合至LIP膜的示意图。(C)LIP-IND-ORA作用机制的示意图：(1-2)与妊娠子宫上表达的催产素受体结合并将IND(小的白色圆圈)特异性引导至子宫(3)，由此改善吲哚美辛的保胎药功效，同时减少其胎盘通道。
图6A-6E：催产素受体(OR)表达和相关的脂质体靶向效率的体外表征。体外实验在从妊娠小鼠分离的原代平滑肌细胞SMC1和SMC2中(A-C)和人平滑肌细胞系SMC-A和SMC-B(D-E)中进行。通过用OR抗体(OR-Ab)进行免疫荧光染色来验证OR表达，并经由共聚焦显微镜(A，D)进行分析，使用IgG染色作为阴性对照。经由共聚焦显微镜(B、E)以及经由流式细胞术(C)对脂质体靶向特异性进行分析。使用NIS-elements对所有图像进行分析和量化。平均值±SEM，n＝9。比例尺＝50μm。与IgG对照(A、D)或非靶向脂质体(B、E)相比，*p值<0.05，**p值<0.01。
图7A-7D：LIP-IND-ORA组分在妊娠小鼠体内的生物分布。(A)母体子宫和肝脏以及妊娠小鼠的胎儿中LIP-IND-ORA组织分布的定性分析。在中下图(子宫中的LIP-IND-ORA)中观察到LIP-IND-ORA抗体染色。(B)注射LIP-IND-ORA对比SAL的小鼠的胎儿的另外图像。用丽丝胺罗丹明荧光标记LIP-IND-ORA，并将样品用DAPI复染色。在所有板中不存在丽丝胺罗丹明荧光证明脂质体未渗透至胎儿。(C)使用NIS elements标准化至组织自体荧光的组织中的LIP-IND-ORA荧光信号的定量。从每个器官的每只小鼠至少9个随机选择的场获得脂质体的定量生物分布。(D)通过LC-MS/MS分析测定母体子宫和胎儿中的IND浓度。平均值±SEM，n＝6。当施用游离药物时，与胎儿(C)或IND的水平(D)相比，*p值<0.05，**p值<0.01。
图8A-8D：离体子宫收缩性的抑制。证明了LIP-IND-ORA抑制从妊娠小鼠分离的子宫的收缩性的功效。(A)在催产素不存在下测定LIP-IND-ORA与LIP-ORA、LIP-IND、IND、LIP和未处理的对照(盐水，SAL)相比之间的子宫收缩的抑制(％)(B)在各种剂量的催产素(子宫收缩性诱导剂)存在下催产素诱导子宫收缩(％)。(C)如通过ELISA测定的前列腺素E2(PGE2)浓度。(D)来自离体收缩实验的代表性肌动描记图。平均值±SEM。n＝6。与未处理的对照相比，*p值<0.05，**p值<0.01。
图9：在预防早产中的体内治疗功效。在LPS诱导的早产妊娠小鼠模型中测试了LIP-IND-ORA预防早产的功效。比较在LIP-IND-ORA(n＝13)、吲哚美辛(IND，n＝11)和盐水(n＝8)之间的早产率。与盐水对照相比，*p值＝0.029。
图10：离体人子宫肌层收缩性研究。在器官浴槽室中，与所有其他组相比，LIP-IND-ORA-A在抑制人子宫组织模型中的子宫收缩性方面表现出等效或优异的活性，并抑制小鼠中催产素诱导的子宫收缩。*p<0.05。
图11A-11B：使用NanoAssembler配制的LIP-IND-ORA的表征。靶向LIP的大小非常均匀且具有窄的大小分布(A)和ζ电位(B)。NanoAssembler也允许生产可重现的大量LIP。
说明性实施方案的描述
由子宫收缩引起的早产是新生儿发病率和死亡率的主要促成因素。旨在减少子宫收缩的治疗包括保胎药剂，如吲哚美辛。遗憾地是，临床上使用的保胎药往往效率低下并穿过胎盘，从而引起胎儿副作用。本发明的实施方案通过提供用于控制递送保胎药剂的方法和组合物来克服与现有技术相关的挑战。例如，已经证明通过提供包封在脂质体中的保胎药剂，胎儿暴露于药物可显著降低。此外，针对妊娠子宫并负载有保胎药剂的靶向脂质体纳米颗粒展示进一步改善的功效并同样减少药物胎盘通过。在示例性方法中，纳米脂质体包封吲哚美辛并用临床使用的催产素受体拮抗剂ORA修饰，对这些颗粒(称为LIP-IND-ORA)进行了设计并在体外、离体和体内进行了评估。本文研究表明，所述颗粒通过增加可用于其预期作用部位的药物的分数、同时降低胎儿暴露于药物而改善药物功效。LIP-IND-ORA可特异性地引导IND递送至妊娠子宫，抑制子宫收缩并降低早产。这种有希望的方法可为产科学的药物开发开辟新的视野，这可能对早产产生重大影响，目前尚无成功的治疗方法。
I.纳米颗粒
如本文所用，术语“纳米颗粒”是指尺寸在1至1,000nm范围内的任何材料。在一些实施方案中，纳米颗粒具有在50至500nm范围内的尺寸。在特定方面，纳米颗粒是基于脂质的纳米颗粒，包括脂质体、脂质制剂和基于脂质的囊泡。基于脂质的纳米颗粒可以是带正电的、带负电的或中性的。在某些实施方案中，基于脂质的纳米颗粒是带中性电荷的。
“脂质体”是通用术语，其涵盖各种单层和多层脂质媒介物，所述脂质媒介物通过生成封闭的脂质双层或聚集体而形成。脂质体可被表征为囊泡结构，所述囊泡结构具有通常包含磷脂的双层膜和通常包含水性组合物的内部介质。本文提供的脂质体包括单层脂质体、多层脂质体和多囊脂质体。本文提供的脂质体可带正电、带负电或带中性电荷。在某些实施方案中，所述脂质体是电荷中性的。
多层脂质体具有通过水性介质分隔的多个脂质层。它们在包含磷脂的脂质悬浮于过量水溶液中时自发形成。脂质组分在形成封闭结构之前进行自我重排，并将水和溶解的溶质包埋在脂质双层之间或包埋在核心内(Ghosh和Bachhawat，1991)。亲脂性分子或具有亲脂性区域的分子也可溶解于脂质双分子层中或与脂质双层缔合。
在具体方面，将保胎药剂例如IND包封在脂质体的水性内部中，散布在脂质体的脂质双层内，经由与脂质体和所述药剂两者缔合的连接分子连接至脂质体，包埋在脂质体中，与脂质体复合等。在其他方面，所述脂质体包含与脂质体的外部结合或缀合的靶向剂。
如本领域普通技术人员已知的，根据本发明实施方案使用的脂质体可通过不同的方法来制备。例如，将磷脂(Avanti Polar Lipids,Alabaster,AL)，例如像中性磷脂二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)溶解于叔丁醇中。然后将脂质与治疗剂和/或靶向部分混合。将Tween 20添加至脂质混合物以使得Tween 20是组合物重量的约5％。向此混合物中添加过量的叔丁醇，以使得叔丁醇的体积是至少95％。将混合物涡旋，在干冰/丙酮浴中冷冻并冻干过夜。将冻干制剂储存在-20℃，并且可使用达三个月。当需要时，将冻干的脂质体在0.9％盐水或灭菌注射用水中重构。
或者，可通过将脂质混合在容器例如玻璃梨形烧瓶中的溶剂中来制备脂质体。所述容器应具有比预期脂质体悬浮液的体积大十倍的体积。使用旋转蒸发器，在大约40℃在负压下除去溶剂。□通常在约5分钟至2小时内除去溶剂，这取决于脂质体的所需体积。所述组合物可在真空下在干燥器中进一步干燥。干燥的脂质通常由于随时间劣化的趋势而在约1周后被丢弃。
干燥的脂质可在无菌、无热原水盐水或缓冲液中通过振荡在大约25至50mM磷脂中水合，直到所有脂质膜重新悬浮。然后可将水性脂质体分成等分部分，将每个等分部分置于小瓶中，冻干并在真空下密封。
如上所述制备的干燥的脂质或冻干的脂质体可脱水并在蛋白质或肽的溶液中重构，并用合适的溶剂例如DPBS稀释至合适的浓度。然后将混合物在涡旋混合器中剧烈振荡。通过在29,000×g下离心除去未包封的另外材料，如包括但不限于激素、药物、核酸构建体、靶向部分等的药剂，并洗涤脂质体团块。将洗涤的脂质体以合适的总磷脂浓度，例如约50至200mM重新悬浮。可根据标准方法测定包封的另外材料或活性剂的量。在测定包封在脂质体制剂中的另外材料或活性剂的量后，可将脂质体稀释至适当的浓度并储存在4℃直到使用。□包含脂质体的药物组合物通常将包含无菌的药学上可接受的载体或稀释剂，如水或盐水溶液。
可用于本公开中的用于脂质体制备的另外的方法包括机械方法(例如涡旋、在低/中压下通过聚碳酸酯过滤器挤出、微流化器、高压均质化、超声刺激、微流体技术和气体鼓泡)、基于通过水性介质置换有机溶剂的方法(例如除去有机溶剂、使用与水不混溶的溶剂(包括醚和石油)、乙醇或叔丁醇注入法、溶剂蒸发和反相蒸发)、基于洗涤剂除去、凝胶排阻色谱法、透析和快速稀释的方法。
在其他替代方法中，脂质体可根据其他已知的实验室程序来制备(例如，参见Bangham等人,1965；Gregoriadis,1979；Deamer和Uster,1983；Szoka和Papahadjopoulos,1978，其各自以引用的方式在相关部分中并入本文)。可用于本发明实施方案的另外的脂质体包括阳离子脂质体，例如，如WO02/100435A1、美国专利5,962,016、美国申请2004/0208921、WO03/015757A1、WO04029213A2、美国专利5,030,453和美国专利6,680,068中所描述，所述专利全部以引用的方式整体并入本文而无免责声明。在WO04/002453A1中也描述了制备脂质体的方法。中性脂质可掺入阳离子脂质体中(例如，Farhood等人，1995)。可在某些实施方案中使用的各种中性脂质体公开于美国专利5,855,911中，其以引用的方式并入本文。这些方法在其各自包埋水性材料的能力及其各自的水性空间与脂质比率方面不同。
在一个实施方案中，使用微流体技术如NanoAssemblrTM(Precision NanoSystems,Inc)来制备脂质体(在Kastner等人,2014中进行了描述；其以引用的方式并入本文)。NanoassemblrTM能够使用微流体混合筒快速、可重现和可扩展地制造均匀的下一代纳米颗粒和脂质体(Belliveau等人,2012；Zhigaltsev等人,2012)，其中含脂质溶剂被泵入一个入口中并且缓冲水溶液被泵入另一个入口中。脂质体形成发生在溶剂和水流的界面处，并且是基于沿腔室的极性改变。通过通道和通道底部槽的设计促进了混合，其增强受控湍流流动，从而增加了流体界面的表面积。脂质体形成的特征可经由分开的流的流速改变以及水流与溶剂流的比率来控制(Zhigaltsev等人,2012；Balley等人,2012)。此外，所述系统可通过使用并行化混合筒来扩大规模，从而允许其用作高通量方法(Belliveau等人,2012)。
脂质体的大小取决于合成方法而变化。本发明实施方案中的脂质体可以是各种大小。在某些实施方案中，所述脂质体是小的，例如外径小于约500nm、200nm、约90nm、约80nm、约70nm、约60nm或小于约50nm。例如，一般来说，在掺入药物或靶向部分后，根据本发明实施方案使用的脂质体包含约50至500nm的大小。此类脂质体制剂也可通过颗粒电荷(ζ电位)和/或光密度(OD)来定义。在制备此类脂质体时，可使用本文所描述或本领域普通技术人员已知的任何方案。制备脂质体的另外非限制性实例描述于美国专利4,728,578、4,728,575、4,737,323、4,533,254、4,162,282、4,310,505以及4,921,706中；国际申请PCT/US85/01161和PCT/US89/05040；英国专利申请GB 2193095 A；Mayer等人,1986；Hope等人,1985；Mayhew等人1987；Mayhew等人,1984；Cheng等人,1987；以及Liposome Technology,1984，其各自以引用的方式并入本文)。
在某些实施方案中，基于脂质的纳米颗粒是中性脂质体(例如DOPC脂质体)。如本文使用的“中性脂质体”或“不带电的脂质体”被定义为具有一种或多种产生基本上中性净电荷(基本上不带电)的一种或多种脂质组分的脂质体。“基本上中性的”或“基本上不带电的”是指在给定群体(例如脂质体群体)内很少(如果有的话)脂质组分包含未被另一种组分的相反电荷抵消的电荷(例如，少于10％的组分包含未抵消的电荷，更优选少于5％且最优选少于1％)。在某些实施方案中，中性脂质体可主要包括在生理条件(即约pH 7)下本身是中性的脂质和/或磷脂。
本发明实施方案的脂质体和/或基于脂质的纳米颗粒可包含磷脂。在某些实施方案中，单一种类的磷脂可用于产生脂质体(例如，中性磷脂如DOPC可用于产生中性脂质体)。在其他实施方案中，可使用多于一种磷脂来产生脂质体。
磷脂包括例如磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺；因为磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱在生理条件下(即在约pH 7下)不带电，所以这些化合物对于产生中性脂质体可能特别有用。在某些实施方案中，磷脂DOPC用于产生不带电的脂质体。在某些实施方案中，可使用不是磷脂(例如胆固醇)的脂质。
磷脂包括可用于实施方案的脂质体中的磷脂，包括但不限于甘油磷脂和某些鞘脂。磷脂包括但不限于二油酰磷脂酰胆碱(“DOPC”)、卵磷脂酰胆碱(“EPC”)、二月桂酰磷脂酰胆碱(“DLPC”)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)、二棕榈酰磷脂酰胆碱("DPPC")、二硬脂酰磷脂酰胆碱("DSPC")、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(“MPPC”)、1-棕榈酰基-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“PMPC”)、1-棕榈酰基-2-硬脂酰磷脂酰胆碱(“PSPC”)、1-硬脂酰基-2-棕榈酰磷脂酰胆碱(“SPPC”)、二月桂酰磷脂酰甘油(“DLPG”)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)、二棕榈酰磷脂酰甘油(“DPPG”)、二硬脂酰磷脂酰甘油(“DSPG”)、二硬脂酰鞘磷脂(“DSSP”)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(“DSPE”)、二油酰磷脂酰甘油(“DOPG”)、二肉豆蔻酰磷脂酸(“DMPA”)、二棕榈酰磷脂酸(“DPPA”)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(“DMPE”)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(“DPPE”)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(“DMPS”)、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(“DPPS”)、脑磷脂酰丝氨酸(“BPS”)、脑鞘磷脂(“BSP”)、二棕榈酰鞘磷脂(“DPSP”)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(“DAPC”)、1,2-二花生酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(“DBPC”)、1,2-双二十碳烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(“DEPC”)、二油酰磷脂酰乙醇胺(“DOPE”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(“POPC”)、棕榈酰油酰基棕榈油酰基磷脂酰乙醇胺(“POPE”)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺以及二亚油酰磷脂酰胆碱。
磷脂可来自天然或合成来源。然而，来自天然来源的磷脂，如卵或大豆磷脂酰胆碱、脑磷脂酸、脑或植物磷脂酰肌醇、心磷脂以及植物或细菌磷脂酰乙醇胺在某些实施方案中不被用作主要磷脂(即，构成总磷脂组合物的50％或更多)，因为这可导致所得脂质体的不稳定性和泄漏。在某些方面，磷脂不是来自天然来源的磷脂。例如，在一些方面，磷脂不是来自大豆提取物。
实施例
包括以下实施例以展示本发明的优选实施方案。本领域的普通技术人员应理解的是，在以下实施例中公开的技术代表由本发明人发现的在本发明的实践中起良好作用的技术，并且因此可被认为构成本发明实践的优选模式。然而，根据本公开，本领域的技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可在已公开并仍获得类似或相似结果的特定实施方案中做出许多改变。
实施例1–脂质体(LIP)防止吲哚美辛穿过胎盘转移至胎儿
为了确定脂质体(LIP)是否能够防止吲哚美辛(IND)穿过胎盘转移至胎儿同时保留其药理学活性，设计了具有150至200nm大小的多层LIP，进行荧光标记并负载IND(LIP-IND)。通过DLS和SEM对脂质体的表征表明，纳米颗粒表现为约150至170直径的均匀球形囊泡(图1)。当评估五个单独制备的IND和LIP-IND批次的大小分布时，LIP的平均值是159.8±1.1nm(多分散性指数，PDI<0.083)，并且LIP-IND的平均值是164.4±4.7(PDI：0.069)。低PDI(<0.1)值指向形成的磷脂纳米囊泡的均匀性。药物的定量分析揭示在脂质体中IND包封效率是93％。为了实现组织分析中的生物分布，将LIP和IND-LIP用红色荧光染料标记。
表1.子宫、胎盘和胎儿中根据重量标准化的吲哚美辛水平。
子宫NS 胎盘NS 胎儿*
IND 236.7±21.6 649.7±78.4 81.3±24.7
LIP-IND 318.7±54.2 937.8±513.0 10.7±17.1
IND：吲哚美辛，LIP-IND：脂质体-吲哚美辛。吲哚美辛水平是以平均值±sem表示的ng/g。NS-非显着(IND对LIP-IND)。*p＝0.041(IND对比LIP-IND)。
LIP-IND分布的定性评估揭示所述系统主要限制在子宫内，在胎盘内最低限度检测到并且在胎儿中不存在，如图2中所示。定量地，LIP-IND亮度值在给予LIP的动物的子宫中相较于胎盘和胎儿显著更高(子宫：15.3±5.4对比胎盘：3.0±3.5对比胎儿：4.4±2.5，p＝0.009)。如表1中所述并在图3中所描绘，LIP-IND系统相较于单独IND导致胎儿中IND水平显著更低(LIP-IND：10.7±17.1ng/g对比IND：81.3±24.7ng/g，p＝0.041)。
为了评价从LIP-IND施用的IND的药理学作用，在子宫中检测PGE2的水平。相较于LIP和SAL，PGE2水平在给与LIP-IND和IND的动物的子宫中显著降低(LIP-IND：457.5±64.0pg/mL对比IND：493.3±89.0pg/mL对比LIP：1066.0±171.0pg/mL对比SAL：1142.0±52.0pg/mL，p＝0.0001)，如图4中所描述。
在妊娠小鼠模型中，LIP位于子宫内并且不会穿过胎盘至胎儿。胎儿内IND的百分比降低7.6倍，同时封装在LIP内并保持吲哚美辛的PG产生抑制作用。
总之，在妊娠小鼠模型中，LIP-IND在胎儿内未检测到并且位于子宫内。LIP-IND系统使胎儿内的药物水平降低7.6倍，但仍保持其药理学作用，如通过子宫中显著降低的PGE2水平所证明。因此，LIP提供一种新颖的治疗方法以通过降低胎盘通过至胎儿来纠正吲哚美辛的主要临床限制。
实施例2–LIP-IND靶向递送至妊娠子宫
脂质体设计和制造。为了实现LIP-IND系统主动靶向子宫，开发了一种新方法，该方法将临床使用的ORA缀合至脂质体的表面。如图5中示意性地示出，将负载有IND并在其表面上用临床上可用的催产素受体拮抗剂(Flenady等人,2014)(ORA)修饰的脂质体被制成LIP-IND-ORA。催产素受体在妊娠子宫上特异性地表达。因此，对LIP-IND-ORA进行了评估以确定其将IND特异性地引导递送至妊娠子宫、抑制子宫收缩并减少早产的能力。
为此目的，将脂质体工程化以包括具有间隔基和羧基的磷脂(PEG-DSPE)，其可使用插入后技术与ORA的氨基反应。对各种浓度的成分进行了测试。在所评估的系统中，发现3％PEG-DSPE在ORA缀合中最有效(如标准化至PEG-DSPE的摩尔浓度的缀合效率为51.8％)。所得LIP-IND-ORA纳米脂质体的大小是124.2±0.7nm，具有-21.2±0.4mV的负ζ电位和93％IND负载效率。向LIP-IND中添加ORA不会改变纳米颗粒的药物包封和荧光性质。
体外靶向效率。在从两只妊娠小鼠分离的平滑肌细胞(SMC)(因此称为SMC1和SMC2)中使用免疫荧光确定催产素受体(OR)的表达水平(图6A)。在两种情况下，使用同种型IgG抗体测试非特异性结合。两种细胞均表达OR，而与SMC1相比，SMC2具有高4倍的表达水平。当将细胞与荧光标记的靶向LIP-IND-ORA对比非靶向脂质体一起孵育时，观察到相同的趋势(图6B)。与非靶向脂质体相比时，在两种原代平滑肌细胞中，LIP-IND-ORA均能更好地附着和保留。就靶向效率而言，与SMC1相比，LIP-IND-ORA 8倍更有效地附着至SMC2细胞，这与OR表达水平一致。所述结果也经由流式细胞术证实(图2C)，其中与非靶向脂质体相比，观察到与LIP-IND-ORA相关的细胞的显著增加。
进一步分析测试了LIP-IND-ORA对比非靶向脂质体与两种人子宫SMC样品(SMC-A和SMC-B)的缔合。结果显示，对于SMC-A和SMC-B，当ORA靶向分别在位5倍和23倍时，脂质体累积的显著增加(图6D和6E)。这些发现证实OR可成功地用这种系统靶向鼠和人子宫SMC。
体内生物分布研究。为了证明靶向LIP-IND-ORA系统将使胎盘通道最小化并将IND递送至妊娠子宫，对于标记的LIP-IND-ORA使用母体和胎儿组织的荧光显微镜检术来评估靶向LIP-IND-ORA系统在体内的生物分布并通过HPLC-MS/MS对IND进行分析。使用荧光显微镜检术来评估子宫和胎儿组织的脂质体定位。已知纳米颗粒倾向于累积在肝脏(网状内皮系统的主要器官)中，还测量了LIP-IND-ORA系统和IND在肝脏中的累积。基于组织的荧光显微镜检术评估，所述系统的最强信号在妊娠小鼠的子宫中。LIP-IND-ORA主要限于子宫内，在肝脏和胎盘内最低限度检测到，并且在胎儿中不存在，如图7A和7B中所示。定量地，与肝、胎盘或胎儿中相比，与LIP-IND-ORA相关的荧光信号的二进制面积在给予LIP-IND-ORA的动物的子宫中高三倍以上(子宫：21,243±3,502；肝：6,768±2,919；胎儿：168±934μm2，p<0.05)[n＝6/组，平均值±SEM]。
为了评估在使用LIP-IND-ORA系统递送时药物的胎盘通过的减少，通过液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)在子宫和胎儿组织中测量IND的浓度。与单独接受IND的那些妊娠小鼠相比，子宫组织中IND的浓度在接受LIP-IND-ORA的妊娠小鼠中加倍(LIP-IND-ORA：1862.7±503.3ng/g对比IND：965.1±311.7ng/g，p＝0.006)，如图7D中所示。此外，与单独接受IND的动物相比，给予LIP-IND-ORA的动物胎儿内IND的水平降低了2倍(LIP-IND-ORA：121.3±16.8ng/g对比IND：245.3±61.7ng/g，p＝0.002)。总体而言，对比IND，对于LIP-IND-ORA子宫与胎儿IND浓度比率高4倍。这些发现证实了将LIP-IND-ORA靶向至与IND的胎盘通过减少相关的妊娠子宫组织。
离体子宫收缩性。离体检查了LIP-IND-ORA系统抑制妊娠子宫收缩性的功效。与治疗对照(盐水，SAL)相比，LIP-IND-ORA显著增加了子宫收缩的抑制百分比(LIP-IND-ORA：56.0±6.4％对比SAL：-12.8±18.4％，p＝0.003)[n＝6/组，平均值±SEM]，如图8A中所示。此外，与LIP相比，LIP-IND-ORA显著增加了子宫收缩的抑制百分比(LIP-IND-ORA，56.0±6.4，对比LIP-6.0±11.8p＝0.001)。令人感兴趣地，LIP-IND与单独的IND类似地抑制子宫收缩(分别为36.8±5.9％对比34.3±6.6％)，从而表明在包封于LIP中时药物的保胎功效。最后，与所有其他组相比，LIP-ORA在子宫收缩力方面未显示显著差异(18.2±20.4)。在图8D中给出了每种药物的肌动描记图实验的表示及其对子宫收缩性的作用。由于生理盐水作为没有保胎药剂的对照，其暴露导致子宫收缩增加，如由其负值所指定的。与单独IND相比，使用LIP-IND-ORA对子宫活动的抑制作用似乎更有效(IND：34.3±5.9)。此外，为了模拟子宫中催产素诱导的收缩，还进行了催产素(OXY)的剂量反应曲线。在这种设置中，与IND和SAL两者相比，在所有催产素剂量下LIP-IND-ORA都显示OXY诱导的收缩曲线下降(图8B)。
体外人收缩性研究：将来自在非分娩期、健康女性的剖宫产术获得的子宫活组织检查的条暴露于递增剂量(10-9至10-6mM)的IND和LIP-IND-ORA；使用盐水作为对照。在10-6最高浓度下，子宫收缩百分比在IND与LIP-IND-ORA-A之间相似，并且与SAL相比显著降低(IND：67.2％±8.4％对比LIP-IND-ORA：69.9％±8.4％对比SAL：107.2％±12.6％，p<0.05)，如图10中所示。
为了评估包封在LIP-IND-ORA系统中的IND的药理学活性，在子宫中测定了前列腺素E2(PGE2)的水平。与SAL相比，PGE2水平在暴露于LIP-IND-ORA和IND的子宫中显著降低(分别4,127.9±1,178.6、2,587.4±676.5和40,188.7±15,555.6pg/mL，p＝0.019)[n＝6/组，平均值±SEM]，如图8C中所描述。这说明IND包封在靶向LIP内，即即LIP-IND-ORA不会改变IND的药理学活性。
体内早产。与SAL相比，LIP-IND-ORA显著降低了LPS诱导的早产比率(LIP-IND-ORA：46.2％对比SAL：87.5％，p＝0.029)，如图9中所示。尽管与单独IND相比，使用LIP-IND-ORA早产率降低15％(IND：54.5％)，但这无显著统计学意义。此外，尽管与IND和SAL相比，用LIP-IND-ORA处理的小鼠的妊娠长度(小时)延长31％(LIP-IND-ORA：44.0±4.5小时对比IND：30.0±4.9小时对比SAL：17.5±3.2小时，p＝0.076)。
因此，使用定制的脂质体在体外、体内和离体三种途径中一致地证明吲哚美辛直接成功递送至妊娠子宫。另外，吲哚美辛的保胎功效显著增强，同时胎儿中检测到的药物水平降低。靶向脂质体显著降低子宫中的前列腺素水平，从而抑制子宫收缩。与游离药物相比，这使妊娠延长31％，并使早产率降低15％。为了能够更快地临床转化所提出的方法，临床使用的33催产素受体拮抗剂(ORA或阿托西班)被用作靶向元件。在治疗浓度下，ORA显示出诱导最小的不良作用。在目前的研究中，ORA的总施用剂量比最小治疗剂量低数倍，且因此，通过LC-MS/MS在母体器官中不可检测到ORA水平。因此，使用ORA作为孕妇安全靶向部分的目标是成功地将吲哚美辛直接递送至子宫。纳米医学的原理已被应用于优化用于治疗早产的保胎药，并且新颖的药物递送系统可为新的范式转变方向提供途径以推动产科学领域。
实施例3–材料和方法
脂质体设计和制造。LIP、LIP-IND、LIP-ORA和LIP-IND-ORA通过脂质水合-挤出法制备。首先，将脂质以下列浓度溶解在3mL乙醇中：9.6至12.2mg大豆磷脂酰胆碱(LipoidS100，Lipoid，德国)、0至0.77mg胆固醇(Sigma)和1至3mg DSPE-PEG(2000)羧酸(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[羧基(聚乙二醇)-2000](铵盐))(Avanti，Alabama，USA)。为了荧光标记LIP，将总脂质的2％的荧光磷脂丽丝胺罗丹明B 1,2-二十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、三乙基铵盐(罗丹明-DHPE，Invitrogen)掺入到所有脂质体制剂中。向LIP-IND和LIP-IND-ORA制剂的以上乙醇混合物中添加0.45mg的IND(Sigma)。通过使用旋转蒸发器(Rotavapor，Buchi，瑞士)以150rpm在41℃下蒸发溶剂30分钟(min)来形成薄膜。将所述膜用1mLPBS(pH 7.2)再水合。使用Lipex生物膜挤出机使用以下800-、400-和200-nmNuclepore Track-Etch Membrane(Whatman)过滤器中的每一个将脂质体挤出10次。使用Solvall WX超系列超速离心机(Thermo Scientific)将所得脂质体超速离心(60,000xg，2小时[h])。除去上清液并将LIP和LIP-IND用1mL PBS重新悬浮。
通过将1.9mg EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺)(Lifetechnologies)和2.9mg NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)添加至MES缓冲液中的每mg ORA中来制备ORA-NHS以用于与脂质体缀合并在室温(RT)下在旋转器中孵育至少15分钟。对于LIP-ORA和LIP-IND-ORA制剂，将所述系统用1mL含有等效于0.35mg ORA重量的ORA-NHS的MES(2-[吗啉代]乙磺酸)缓冲液重新悬浮。在室温下进行缀合过夜，并通过超速离心(60,000xg，2小时)从脂质体中洗去未结合的ORA。
使用Zetasizer(Malvern，Worcestershire，UK)通过动态光散射来评估脂质体的大小和ζ电位。每种制剂的五个分开制备的批次每种一式三份进行分析。如先前所描述，通过扫描电子显微镜检术观察LIP的形态和结构(Refuerzo等人,2015)。
使用高效液相色谱法(HPLC)评估LIP中IND的水平。使用来自缀合后超速离心的上清液来测量未结合的ORA浓度以间接确定ORA缀合效率。将LIP-ORA和LIP-IND-ORA的等分部分溶解于乙醇中并用于直接测量缀合的ORA。
在所述制剂中用于吲哚美辛检测的HPLC方法：使用UV二极管阵列HPLC系统ColumnHitachi Elite LaChrom、柱烘箱L-2300、自动进样器L-2200、二极管阵列检测器L-2455、泵L-2130Hitachi D-2000Elite v3.0软件通过等度检测来对IND进行分析。使用Kinetex2.6μXB-C18(100x4.6mm，Phenomenex)柱在237nm处分离。使用等度洗脱进行色谱分离，其中流动相由0.2％于乙腈中的磷酸组成，流速为0.6ml/分钟，平均保留时间为7.2分钟。
使用微流体装置NanoAssemblerTM(Precision NanoSystems,Inc)(Ramishetti等人,2015)制备LIP-IND-ORA，其已被证明能够提高脂质体产量、提高再现性和可扩缩性(Belliveau等人,2012；Zhigaltsev等人,2012；Kastner等人,2014)并且根据GLP以及GMP实践。简言之，通过将1体积的含有30μM S100大豆磷脂酰胆碱(Lipoid，Ludwigshafen，德国)、6μM胆固醇(Sigma，St.Louis，MO)、3.8μM吲哚美辛(Sigma，St.Louis，MO)和1.1μM DSPE-PEG(2000)羧酸(Avanti Polar Lipids,Alabaster,AL)的溶剂与两体积的使用双注射泵(S200型号，kD Scientific，Holliston，MA)的蒸馏水混合以驱动溶液通过组合流速为9mL/分钟的微混合器来制备脂质体。将产生的脂质体用磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH 7.4)透析16小时以除去乙醇。如通过动态光散射(Malvern Zetasizer，Malvern Instruments，Malvern，UK)所测量，所得脂质体具有约167nm的流体动力学直径，0.14的PdI和-5.36mV的ζ-电位。在脂质体产生后在作为催化剂的MES缓冲液(PolyLink蛋白质偶联试剂盒，Polysciences，Warrington，PA)中使用3μM EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺)(Lifetechnologies，Carlsbad，CA)和8.3μM NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)(Life technologies，Carlsbad，CA)进行脂质体与ORA/阿托西班的缀合。将0.3μM ORA溶解在催化剂混合物中，并将脂质体添加至溶液中，并在室温(RT)下在旋转器中反应至少15分钟。缀合效率被确定为51.8％。向LIP-IND中添加ORA不会改变纳米颗粒的药物包封和荧光性质(图11A至11B)。
动物：从Charles River购买妊娠雌性(品系CD1，储备N 022)小鼠。为了靶向效率和生物分布研究，在妊娠期、妊娠第18天(GD18)使用小鼠。对于离体子宫收缩性研究，在妊娠第19天(GD19)使用妊娠小鼠，就在小鼠即将分娩并且子宫收缩性最大之前。对于早产研究，在妊娠中期获得小鼠(GD 14)。将小鼠分开圈养于温度和湿度控制的宿舍中，具有恒定12:12小时光暗循环。
另外，人活组织检查是从接受剖宫产术的两名妇女获得的，以产生子宫细胞的细胞培养物。两者均从单胎、在妊娠39周时的非生产孕妇获得(人A是西班牙裔，BMI 29kg/m2，人B是高加索人，BMI为33kg/m2)。
体外靶向效率。为了证实催产素受体在子宫细胞上的定位，在妊娠第19天(GD)从两个定时妊娠的CD1妊娠小鼠(Charles River)产生妊娠小鼠子宫细胞系。将小鼠分别圈养于环境控制的动物饲养所中在12小时光照和黑暗循环下。在整个实验过程中动物随意喂食。在CO2吸入安乐死后，进行剖腹手术，并且取回妊娠子宫并置于Hank平衡盐溶液中。用剃刀将子宫组织切成1至2mm的片段，然后在振荡孵育箱中在37℃在0.1％胰蛋白酶(Sigma，USA)和0.1％脱氧核糖核酸酶(Sigma，USA)中消化30分钟，随后用0.1％胶原酶(Sigma，USA)消化另外30分钟。在通过纱布过滤组织后，将细胞洗涤，然后接种在含RPMI 1640培养基(Sigma，USA)、10％胎牛血清(FBS，Sigma，USA)和Pen-Strep(Sigma,USA)的胶原I涂覆的75mm烧瓶(BD Biosciences，USA)上。每天更换培养基，直到第4天。
一式三份地进行脂质体附着的研究，其中将细胞以2x105个细胞/mL和0.5mL/孔的密度接种在8孔腔式载玻片中。将细胞在37℃孵育过夜以用于细胞附着。将10μL用丽丝胺罗丹明标记的靶向或非靶向脂质体添加至每个孔中并轻轻振荡以在孔中均匀分布。将载玻片在37℃孵育4小时以允许细胞与脂质体之间的相互作用。在孵育后，丢弃含有脂质体的培养基，并用PBS洗涤细胞两次。然后用4％于PBS中的多聚甲醛将细胞固定30分钟。用所提供的载玻片分离器移除载玻片室，并使用Prolong Gold Antifade试剂(Life Technologies)将载玻片安装并用Cytoseal XYL(Thermo Scientific)密封。使用Nikon Eclipse Ti荧光显微镜检测来自脂质体的荧光信号，并使用NIS Elements软件进行分析。
对于流式细胞术分析，通过使用细胞解离缓冲液(Life Technologies)来将细胞从烧瓶中脱离。从烧瓶中除去培养基，并用不含钙/镁的PBS洗涤细胞层。在除去PBS后，将2mL细胞解离缓冲液添加至细胞中并将所述烧瓶在37℃下孵育10分钟。通过牢固地敲打烧瓶来使在所述时间后仍然附着的细胞脱离。通过添加培养基收集细胞并计数。将至少2x105个细胞与靶向和非靶向脂质体一起在37℃下孵育4小时。在孵育时间后，通过以400xg离心5分钟除去含脂质体的培养基。使用未处理的细胞作为对照，使用在PerCP通道中检测到的BDFACS Fortessa(Becton Dickinson，San Jose，CA)对细胞进行分析。使用FCS ExpressFlow 5软件对数据进行后处理。
体内生物分布研究。使用建立的体内妊娠小鼠模型将从LIP-IND-ORA递送至妊娠子宫的IND的浓度与游离IND进行比较。在GD 18，将定时妊娠的CD1小鼠(N＝6只/组)随机分配以经由尾静脉注射以0.1mL体积接受LIP-IND-ORA、IND或盐水(SAL)。当使用药物(LIP-IND-ORA或IND)时，IND的剂量是1mg/kg(基于母体重量，每只动物50至60mg范围)。在研究中维持体内剂量。在4小时后，通过CO2吸入杀死妊娠小鼠，随后进行剖腹术以取回母体肝脏、子宫、胎盘和胎儿。当静脉内施用时，LIP-IND-ORA的作用开始是未知的。然而，吲哚美辛的作用发生在口服给与至人和啮齿动物时是2至3小时，并且当用脂质体包封并经由腹膜内注射施用时是4至5小时。初步调查显示，在施用后4小时，当包封在LIP内时，子宫中IND增加并且胎儿中减少39。基于这些先前的研究，选择4小时作为暴露时间。
如先前所述通过免疫荧光测定脂质体分布(Refuerzo等人，2015)。简言之，使用荧光显微镜检术定性地评估LIP的组织定位，所述荧光显微镜检术鉴定肝脏、子宫、胎盘和胎儿内LIP(如先前所述用荧光染料标记)的存在或不存在。对于此分析，将切下的组织置于低温模具中，包埋在低温保存培养基(OCT)中并立即使用液氮冷冻。将块储存在-80℃直到使用低温切片机切片。在安装于载玻片上期间，用DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色对组织切片进行染色以鉴定细胞的核结构。使用BX51荧光显微镜(Nikon，USA)在100倍放大率下使用用于DAPI和Cy3的滤光片拍摄图像。此研究中使用每组6只动物，并将它们的器官切片并进行分析。在每个动物至少9个区域的随机选择的区域中进行定量以确保客观性，同时选择图像来表示荧光信号。使用NIS elements图像处理软件(Nikon，USA)测定脂质体的定量生物分布。荧光信号的二进制面积以μm2报告为平均值±sem。
吲哚美辛在IND和LIP-IND-ORA样品中的浓度通过使用以非那西丁-乙氧基-D5(Sigma，USA)作为内标物的多重反应监测测定的LC-MS/MS来测定。将子宫和胎儿组织在1mL冰冷的甲醇/水(7:3v/v)中均质化。向每个样品中添加非那西丁(最终浓度20ng/mL)，然后以15,000rpm离心10分钟。将上清液在氮气下干燥并在0.1％甲酸水溶液中重构，然后用乙腈(1:2)进行蛋白质沉淀。再次离心样品，将上清液转移至小瓶中，并将10μL注入连接至LC系统的Shimadzu triple quad 8040MS中。吲哚美辛浓度以ng/mL相对于校准物测定。校准曲线通过在对照组织(无吲哚美辛)中以校准物水平(15.6；31.2；62.4；125；250和500ng/mL)掺入，随后与样品制备相同的提取程序来制备。方法参数是：LOD＝3.9ng/mL(精确度76％，S/N>3)；LOQ＝15.6ng/mL(精确度85％；CV<10％；S/N>10)，用于线性回归的相关系数R2＝0.992。吲哚美辛浓度按照组织重量(ng/g)进一步标准化并报道为平均值±SEM。
离体子宫收缩性。使用建立的离体妊娠小鼠或人子宫收缩模型来测量LIP-IND-ORA抑制子宫收缩的能力。对于小鼠，在GD19，定时妊娠动物(N＝6)经受CO2吸入安乐死，切下母体子宫并置于Krebs生理溶液中。在人组织的情况下，使用来自非分娩期、健康女性的剖宫产术获得的子宫活组织检查的条。切割4mm宽的子宫环形段，并轻轻移除胎儿和胎盘。将子宫环定位在钨丝(直径250μm)箍筋之间并置于含有10mL Krebs缓冲液的器官室中，用保持在恒定温度和pH(37℃，pH 7.4)下的95％氧气中的5％二氧化碳鼓泡。在60分钟的平衡期间，逐渐施加被动张力至1g的最佳水平。一旦子宫组织自发收缩，然后就将子宫环与以下中的任一种一起孵育40分钟：LIP-IND-ORA(10-5mol/L)、LIP-ORA、LIP-IND(10-5mol/L)、IND(10-5mol/L)、LIP以及盐水(SAL)作为对照。在研究药物孵育后，获得了催产素(OXY)的剂量反应曲线(10-9mol/L至10-6mol/L；OXY剂量之间20分钟)以产生增加的稳定子宫收缩。施加到器官室中的IND的最终浓度等于LIP-IND和LIP-IND-ORA中IND的浓度(1mg/kg)。为了确认组织活力，在实验结束时在每个室中加入氯化钾(KCL 60mmol/L)。将OXY和IND(Sigma，USA)分别溶解于水和乙醇中。器官室溶液中乙醇的最终浓度(1.3×10-4mol/L)比血浆浓度低130倍，这可能解释了保胎作用。
利用数据采集软件(WINDAQ-200；DATAQ)使用连接并存储到在线计算机上的等长张力传感器(Harvard Apparatus，South Natik，MA)记录等长张力的变化。使用Windaq数据采集系统(Dataq Instruments Inc，Akron，OH)采集和分析数据。在施加每种研究药物之前(基础活动)和之后，作为40分钟内的积分活动对每个子宫环的自发收缩活动进行分析。基线活动被定义为在子宫收缩稳定后40分钟内的积分活动。单独IND和LIP-IND-ORA的作用通过计算积分活动来确定，积分活动表示为相对于基线积分活动的百分比变化。OXY诱导的收缩反应表示为每个OXY剂量和基线子宫收缩性在20分钟内的积分活动54、55、56。使用软件(Sigma Plot and GraphPad Prism，版本3.00用于Windows；GraphPad Software，SanDiego，CA)计算子宫收缩的抑制百分比和催产素的剂量反应曲线。数据表示为平均值±SEM。
由于IND的药理学作用涉及环氧合酶对前列腺素产生的抑制，所以使用ELISA(ADI-901-001，Enzo Life Science，New York，USA)在子宫组织中测量前列腺素E2(PGE2)水平。使用GD 19(n＝5)的另一组妊娠CD1小鼠来评估子宫PGE2水平。如先前所述获得来自妊娠小鼠的子宫并与LIP-IND-ORA、IND或作为对照的盐水一起孵育40分钟。选择40分钟的暴露时间是因为这是子宫组织在子宫收缩性实验中暴露于LIP-IND-ORA或IND的相同时间长度。然后基于ELISA试剂盒(ADI-901-001，Enzo Life Science，New York，USA)中的说明书测定每种样品中的PGE2水平。PGE2的浓度表示为pg/mL并报道为平均值±SEM。
体内早产。使用建立的体内早产妊娠小鼠模型来测试LIP-IND-ORA预防早产的能力。LPS是在鼠模型中诱导分娩的常用模型。在GD 16，经由腹膜内注射向定时妊娠的CD1小鼠施用脂多糖(LPS，Sigma，USA)(25μg/kg)。将动物随机分成3组，并根据组随机化经由尾静脉注射给与每日治疗：IND(N＝11)、LIP-IND-ORA(N＝13)以及SAL(N＝8)。基于先前研究，IND浓度再次是1mg/kg。由于LIP-IND-ORA溶液颜色明显呈粉红色，并且由于创建安慰剂的资源有限，所以随机化不是盲的。在LPS施用后每天，早产率被确定为在GD18之前自发分娩的妊娠小鼠的数目。将动物圈养在单笼中，并通过直接观察或通过视频照相机监测治疗期的持续时间以确认分娩的时机。早产率被表示为百分比，并且在LPS施用后的妊娠长度以小时表示。结果报道为中值±sem。
基于涉及IND在预防妊娠啮齿动物的早产中的先前实验进行样本大小计算。用IND处理的小鼠具有30％的早产率，相比之下对照组为90％。基于α为0.05(双尾)且β为0.80的33％的作用，确定每组中需要7只母鼠。
统计分析。使用单向方差分析与Tukey事后检验对所述组之间肌层的等长张力、子宫和胎儿中的IND浓度、子宫中的PGE2浓度、早产率和妊娠长度的差异进行分析。使用STATA软件(版本12.1)并且P值<0.05被认为是显著的。
与人剂量相比，LIP-IND-ORA中的ORA浓度的计算。ORA的剂量是35.8μg/小鼠(约50g)或大约7mg/kg，其基于公认的NIH换算因子(基于(Freireich等人，1966)的ACUC指导)等效于0.58mg/kg的人剂量。
在人中，ORA以三步作为输注递送：初始负载剂量6.75mg，接着300μg/分钟持续3小时(54mg)，并且随后以100μg/分钟静脉内输注达45小时。因此总剂量在70至330mg/人或者(考虑到60kg的平均重量)1.2至5.5mg/kg的范围内。因此，ORA的给定剂量低于药物的生理相关浓度。
***
根据本公开，本文公开的并且要求保护的所有方法可在无需过度实验的情况下进行和实施。尽管本发明的组合物和方法已经根据优选实施方案进行了描述，但对本领域技术人员显而易见的是可使本文所述的方法和本文所述方法的步骤或步骤的顺序发生变化，而不偏离本发明的概念、精神和范围。更具体地说，显而易见的是在化学上和生理学上相关的某些试剂可取代本文所述的试剂，同时达到相同或相似结果。对本领域技术人员来说显而易见的是所有此类相似的替代和修改被认为在如由随附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
参考文献
以下参考文献以引用方式特别并入本文，在某种程度上，它们提供示例性程序或对本文所阐述的那些进行补充的其他细节。
美国专利4,162,282
美国专利4,310,505
美国专利4,533,254
美国专利4,728,575
美国专利4,728,578
美国专利4,737,323
美国专利4,921,706
美国专利5,030,453
美国专利5,855,911
美国专利5,962,016
美国专利6,680,068
美国专利申请2004/0208921
WO02/100435A1
WO03/015757A1
WO04/002453A1
WO04029213A2
英国专利申请GB 2193095 A
国际申请PCT/US85/01161
国际申请PCT/US89/05040
Balley等人,2012.
Bangham等人,1965.
Belliveau等人,2012.
Cheng等人,1987.
Deamer和Uster,1983.
Farhood等人,1995.
Flenady等人,Oxytocin receptor antagonists for inhibiting pretermlabour.The Cochrane database of systematic reviews；6:CD004452,2014.
Freireich,EJ,等人Quantitative comparison of toxicity of anticanceragents in mouse,rat,dog,monkey and man.Cancer Chemother Rep.；50(4):219-244,1966.
Garland M.Pharmacology of drug transfer across the placenta/.Obstetgynecol Clin North Am；25:21-42,1998.
Ghosh和Bachhawat,1991.
Gregoriadis,1979.
Hope等人,1985.
Kastner等人,2014.
Liposome Technology,1984.
Major等人,Tocolysis with indomethacin increases the incidence ofnecrotizing enterocolitis in the low-birth-weight neonate.Am J ObstetGynecol；170(1Pt 1):102-106,Jan 1994.
Mayer等人,1986.
Mayhew等人1987.
Mayhew等人,1984
Ramishetti等人,2015.
Refuerzo等人,Liposomes:a nanoscale drug carrying system to preventindomethacin passage to the fetus in a pregnant mouse model.Am J ObstetGynecol.；212(4):508e501-507,Apr 2015.
Suarez等人,Indomethacin tocolysis and intraventricularhemorrhage.Obstet Gynecol；97(6):921-925,2001年6月.
Syme等人,Drug transfer and metabolism by the human placenta.ClinPharmacokinet；43(8):487-514,2004.
Szoka和Papahadjopoulos,1978.
van der Aa等人,Mechanisms of drug transfer across the humanplacenta.Pharmacy world&science:PWS.；20(4):139-148,1998年8月.
Zhigaltsev等人,2012.

Claims (73)

1.一种药物组合物，其包含包封在脂质体中的保胎药剂，其中所述脂质体包含结合至催产素受体的靶向部分。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述保胎药剂是穿过胎盘的药剂。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述保胎药剂包括β2-肾上腺素能激动剂、钙通道阻滞剂、催产素受体拮抗剂(ORA)、前列腺素F2α受体抑制剂、一氧化氮供体或非类固醇抗炎药(NSAID)。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述β2-肾上腺素能激动剂包括特布他林、利托君、非诺特罗、沙丁胺醇、硫酸贝多拉君、MN-221、异克舒令、海索那林、布酚宁沙丁胺醇或非诺特罗。
5.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述钙通道阻滞剂包括硝苯地平或尼卡地平。
6.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述ORA包括阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。
7.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述ORA包括卡贝缩宫素、TC OT 39、WAY267464二盐酸盐、[Thr4]OT、[HO1][Thr4]OT、[Thr4,Gly7]OT以及[HO1][Thr4,Gly7]OT。
8.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述前列腺素F2α受体抑制剂包括OBE-001、OBE-002或PDC-31。
9.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述NSAID包括吲哚美辛、舒林酸、酮咯酸、塞来昔布、罗非昔布或尼美舒利。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述组合物包含吲哚美辛。
11.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述一氧化氮供体包括西地那非、一氧化氮或硝酸甘油。
12.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述保胎药剂包括硫酸镁、黄体酮或乙醇。
13.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述靶向部分包括催产素受体激动剂或拮抗剂。
14.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述催产素受体激动剂是催产素、卡贝缩宫素、TC OT 39、WAY 267464二盐酸盐、[Thr4]-催产素肽、[HO1][Thr4]-催产素肽、[Thr4,Gly7]-催产素肽或[HO1][Thr4,Gly7]-催产素肽。
15.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述催产素受体激动剂是催产素。
16.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述催产素受体拮抗剂是阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。
17.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述催产素受体拮抗剂是阿托西班。
18.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述靶向部分包括蛋白质、抗体、肽、适体或硫代适体。
19.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述靶向部分缀合至所述脂质体的表面。
20.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述靶向部分缀合至所述脂质体中的磷脂。
21.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述靶向部分缀合至聚乙二醇化脂质。
22.如权利要求21所述的药物组合物，其中所述靶向部分缀合至聚乙二醇化磷脂。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述聚乙二醇化磷脂包括1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。
24.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述聚乙二醇化磷脂包括DSPE-PEG(2000)羧酸。
25.如权利要求24所述的药物组合物，其中所述靶向部分包括DSPE-PEG(2000)-阿托西班(图5B)。
26.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述靶向部分通过碳二亚胺交联剂缀合。
27.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述靶向部分通过1-乙基-3-(-3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)交联剂缀合。
28.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述脂质体至少包括第一磷脂。
29.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述脂质体至少包括聚乙二醇化脂质。
30.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述脂质体至少包括第一阳离子、阴离子或两性离子脂质。
31.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述脂质体包括胆固醇。
32.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物包含多种平均直径为约50至500nm的脂质体。
33.如权利要求32所述的药物组合物，其中所述脂质体具有约100至200nm的平均直径。
34.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述保胎药剂包括吲哚美辛，并且所述靶向部分包括缀合至所述脂质体的催产素受体拮抗剂。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的组合物，其用于治疗患者。
36.如权利要求35所述的组合物，其中所述患者怀孕并且正在进入早产或处于进入早产的风险。
37.一种治疗怀孕患者以减缓或预防早产的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的包封在脂质体中的保胎药剂。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述患者是人患者。
39.如权利要求37所述的方法，其中所述患者是家养或家畜动物。
40.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体包含使所述脂质体靶向子宫的靶向部分。
41.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体包含结合至催产素受体的靶向部分。
42.如权利要求37所述的方法，其中所述保胎药剂是穿过胎盘的药剂。
43.如权利要求37所述的方法，其中所述保胎药剂包括β2-肾上腺素能激动剂、钙通道阻滞剂、催产素受体拮抗剂(ORA)、前列腺素F2α受体抑制剂、一氧化氮供体或非类固醇抗炎药(NSAID)。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述β2-肾上腺素能激动剂包括特布他林、利托君、非诺特罗、沙丁胺醇、硫酸贝多拉君、MN-221、异克舒令、海索那林、布酚宁沙丁胺醇或非诺特罗。
45.如权利要求37所述的方法，其中所述钙通道阻滞剂包括硝苯地平或尼卡地平。
46.如权利要求43所述的方法，其中所述ORA包括阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。
47.如权利要求43所述的方法，其中所述ORA包括卡贝缩宫素、TC OT 39、WAY 267464二盐酸盐、[Thr4]OT、[HO1][Thr4]OT、[Thr4,Gly7]OT以及[HO1][Thr4,Gly7]OT。
48.如权利要求43所述的方法，其中所述前列腺素F2α受体抑制剂包括OBE-001、OBE-002或PDC-31。
49.如权利要求43所述的方法，其中所述NSAID包括吲哚美辛、舒林酸、酮咯酸、塞来昔布、罗非昔布或尼美舒利。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述组合物包含吲哚美辛。
51.如权利要求43所述的方法，其中所述一氧化氮供体包括西地那非、一氧化氮或硝酸甘油。
52.如权利要求37所述的方法，其中所述保胎药剂包括硫酸镁、黄体酮或乙醇。
53.如权利要求37所述的方法，其中所述靶向部分包括催产素受体激动剂或拮抗剂。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述催产素受体激动剂是催产素。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述催产素受体拮抗剂是阿托西班、瑞替西班、巴芦西班或亚泊西班。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述催产素受体拮抗剂是阿托西班。
57.如权利要求41所述的方法，其中所述靶向部分包括抗体或适体。
58.如权利要求40所述的方法，其中所述靶向部分缀合至所述脂质体的表面。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述靶向部分缀合至所述脂质体中的磷脂。
60.如权利要求58所述的方法，其中所述靶向部分缀合至聚乙二醇化脂质。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述靶向部分缀合至聚乙二醇化磷脂。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述聚乙二醇化磷脂包括1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述聚乙二醇化磷脂包括DSPE-PEG(2000)羧酸。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述靶向部分包括DSPE-PEG(2000)-阿托西班(图5B)。
65.如权利要求58所述的方法，其中所述靶向部分通过碳二亚胺交联剂缀合。
66.如权利要求58所述的方法，其中所述靶向部分通过1-乙基-3-(-3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)交联剂缀合。
67.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体至少包括第一磷脂。
68.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体至少包括聚乙二醇化脂质。
69.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体至少包括第一阳离子、阴离子或两性离子脂质。
70.如权利要求37所述的方法，其中所述脂质体包括胆固醇。
71.如权利要求37所述的方法，其中所述组合物包含多种平均直径为约50至500nm的脂质体。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述脂质体具有约100至200nm的平均直径。
73.如权利要求41所述的方法，其中所述保胎药剂包括吲哚美辛，并且所述靶向部分包括缀合至所述脂质体的催产素受体拮抗剂。
CN201680080198.6A 2015-12-18 2016-12-19 用于早产管理的治疗剂 Pending CN108601765A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562269651P 2015-12-18 2015-12-18
US62/269,651 2015-12-18
PCT/US2016/067449 WO2017106814A1 (en) 2015-12-18 2016-12-19 Therapeutics for preterm labor management

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108601765A true CN108601765A (zh) 2018-09-28

Family

ID=59057721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680080198.6A Pending CN108601765A (zh) 2015-12-18 2016-12-19 用于早产管理的治疗剂

Country Status (4)

Country Link
US (2) US10736880B2 (zh)
EP (1) EP3389650B1 (zh)
CN (1) CN108601765A (zh)
WO (1) WO2017106814A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023550555A (ja) * 2020-11-16 2023-12-01 ゾーマ（ユーエス） エルエルシー 早期分娩の治療または予防のための組成物及び方法
CN114366819B (zh) * 2021-12-29 2023-01-31 中山大学附属第一医院 一种胎盘病灶特异性药物分布递送系统及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1501934A (zh) * 2001-04-12 2004-06-02 惠氏公司 新型的3-c(o)r取代的10-环己基苯甲酰基吡咯并苯并二氮杂�;保胎催产素受体拮抗剂
WO2014186843A1 (en) * 2013-05-23 2014-11-27 Newcastle Innovation Limited Targeted delivery of drugs to the myometrium

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4162282A (en) 1976-04-22 1979-07-24 Coulter Electronics, Inc. Method for producing uniform particles
US4310505A (en) 1979-11-08 1982-01-12 California Institute Of Technology Lipid vesicles bearing carbohydrate surfaces as lymphatic directed vehicles for therapeutic and diagnostic substances
US4533254A (en) 1981-04-17 1985-08-06 Biotechnology Development Corporation Apparatus for forming emulsions
US5030453A (en) 1983-03-24 1991-07-09 The Liposome Company, Inc. Stable plurilamellar vesicles
US4728575A (en) 1984-04-27 1988-03-01 Vestar, Inc. Contrast agents for NMR imaging
US4921706A (en) 1984-11-20 1990-05-01 Massachusetts Institute Of Technology Unilamellar lipid vesicles and method for their formation
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
EP0249561B1 (en) 1986-06-12 1992-05-13 The Liposome Company, Inc. Compositions using liposome-encapsulated non-steroidal anti-inflammatory drugs
IL79559A0 (en) 1986-07-29 1986-10-31 Univ Ramot Contrast agents for nmr medical imaging
US4728578A (en) 1986-08-13 1988-03-01 The Lubrizol Corporation Compositions containing basic metal salts and/or non-Newtonian colloidal disperse systems and vinyl aromatic containing polymers
EP0582450A3 (en) 1992-08-03 1994-11-23 Rohto Pharma Antibodies against oxytocin receptor and their production.
US5508045A (en) 1992-10-09 1996-04-16 The Regents Of The University Of California Method and agents for control and management of labor during pregnancy
US5855911A (en) 1995-08-29 1999-01-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal phosphodiester, phosphorothioate, and P-ethoxy oligonucleotides
US5891467A (en) 1997-01-31 1999-04-06 Depotech Corporation Method for utilizing neutral lipids to modify in vivo release from multivesicular liposomes
US20070032410A1 (en) * 2000-01-11 2007-02-08 Atossa Healthcare, Inc. Compositions and methods for the treatment of psychiatric disorders
US6680068B2 (en) 2000-07-06 2004-01-20 The General Hospital Corporation Drug delivery formulations and targeting
EP1399189A1 (en) 2001-06-11 2004-03-24 Universite De Montreal Compositions and methods for enhancing nucleic acid transfer into cells
AU2002324723B2 (en) 2001-08-16 2007-10-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Synthesis and use of reagents for improved DNA lipofection and/or slow release pro-drug and drug therapies
CA2491164C (en) 2002-06-28 2012-05-08 Cory Giesbrecht Method and apparatus for producing liposomes
AU2003279010A1 (en) 2002-09-28 2004-04-19 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for delivery of short interfering rna and short hairpin rna
AU2003284149A1 (en) 2002-10-15 2004-05-04 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Compositions and methods for inhibiting group b streptococcus-induced pulmonary hypertension in neonates
WO2004064731A2 (en) 2003-01-14 2004-08-05 University Of Washington Lipid-drug formulations and methods for targeted delivery of lipid-drug complexes to lymlplhoid tissues
WO2004062563A2 (en) * 2003-01-16 2004-07-29 Université de Lausanne Methods for screening for therapeutic agents that are useful in the treatment of oxytocin and vasopressin-related disorders
WO2005000266A2 (en) 2003-05-22 2005-01-06 Neopharm, Inc. Liposomal formulations comprising a combination of two or more active agents
GB0327975D0 (en) 2003-12-02 2004-01-07 Imp College Innovations Ltd Methods of treatment
AU2005313989A1 (en) 2004-12-09 2006-06-15 Centocor, Inc. Oxytocin receptor antagonists and their use for the treatment of pulmonary related diseases
WO2007078262A1 (en) 2006-01-06 2007-07-12 National University Of Singapore Method of preparing nano-structured material(s) and uses thereof
CN101437485A (zh) 2006-05-09 2009-05-20 高露洁-棕榄公司 口腔护理方案
WO2011038451A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 The University Of Sydney Therapy and prevention of problem drinking
CA2799733A1 (en) 2010-05-18 2011-11-24 Universite De Geneve New uses of oxytocin-like molecules and related methods
WO2013075176A1 (en) * 2011-11-24 2013-05-30 Newcastle Innovation Limited Compositions and methods for modulating uterine contractions
US20130247924A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Mark Scatterday Electronic cigarette having a flexible and soft configuration
EP2873418A1 (en) 2013-11-19 2015-05-20 Laboratorio Reig Jofre S.A. A combination of dosage units for use in the treatment of preterm labour condition

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1501934A (zh) * 2001-04-12 2004-06-02 惠氏公司 新型的3-c(o)r取代的10-环己基苯甲酰基吡咯并苯并二氮杂�;保胎催产素受体拮抗剂
WO2014186843A1 (en) * 2013-05-23 2014-11-27 Newcastle Innovation Limited Targeted delivery of drugs to the myometrium

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JERRIE S. REFUERZO, ET AL: "Liposomes: a nanoscale drug carrying system to prevent indomethacin passage to the fetus in a pregnant mouse model", 《AMERICAN JOURNAL OF OBSTETRICS & GYNECOLOGY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3389650A1 (en) 2018-10-24
US20180360806A1 (en) 2018-12-20
US20200330432A1 (en) 2020-10-22
EP3389650A4 (en) 2019-08-07
WO2017106814A1 (en) 2017-06-22
US10736880B2 (en) 2020-08-11
EP3389650B1 (en) 2022-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Refai et al. Development and characterization of polymer-coated liposomes for vaginal delivery of sildenafil citrate
Li et al. Dual-function nanostructured lipid carriers to deliver IR780 for breast cancer treatment: Anti-metastatic and photothermal anti-tumor therapy
Paul et al. Drug delivery to the human and mouse uterus using immunoliposomes targeted to the oxytocin receptor
CN104755075B (zh) 非那雄胺和米诺地尔聚合物纳米粒子、其制备方法、药物组合物及其用途
JP6623479B2 (ja) 脂質ナノ粒子及びその使用
Needham et al. The development and testing of a new temperature-sensitive drug delivery system for the treatment of solid tumors
Fekri et al. Ultrasound microbubble treatment enhances clathrin-mediated endocytosis and fluid-phase uptake through distinct mechanisms
Refuerzo et al. Liposomes: a nanoscale drug carrying system to prevent indomethacin passage to the fetus in a pregnant mouse model
Hsu et al. An overview of nanoparticles in drug delivery: properties and applications
CN104427976B (zh) 疏水的活性成分的储库制剂及其制备方法
Trauer et al. Influence of massage and occlusion on the ex vivo skin penetration of rigid liposomes and invasomes
CN109789212A (zh) 聚谷氨酸化抗叶酸剂及其用途
Martina et al. The effect of magnetic targeting on the uptake of magnetic-fluid-loaded liposomes by human prostatic adenocarcinoma cells
AU2021200146A1 (en) Methods for better delivery of active agents to tumors
CN106794164A (zh) 脂质体包封的亲和性药物
CN107028802A (zh) 用于药物的经皮递送和全身性递送的纳米粒子
Priyanka et al. A review on skin targeted delivery of bioactives as ultradeformable vesicles: Overcoming the penetration problem
Jain et al. Transfersomes: Ultradeformable vesicles for transdermal drug delivery
CN108136217A (zh) 用于治疗膀胱癌的制剂
Kristl et al. Current view on nanosized solid lipid carriers for drug delivery to the skin
US20200323811A1 (en) Intranasal pharmaceutical composition comprising anticancer drugcontaining nanoparticles for treating brain diseases
CN110464709A (zh) 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
Adnan et al. Transethosomes: a promising challenge for topical delivery short title: transethosomes for topical delivery
Li et al. PEGylated liposomes accumulate in the areas relevant to skin toxicities via passive extravasation across “leaky” endothelium
CN108601765A (zh) 用于早产管理的治疗剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination