ES2287387T3 - Inhibidores de la proteasa de vih. - Google Patents

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ES2287387T3 ES03011749T ES03011749T ES2287387T3 ES 2287387 T3 ES2287387 T3 ES 2287387T3 ES 03011749 T ES03011749 T ES 03011749T ES 03011749 T ES03011749 T ES 03011749T ES 2287387 T3 ES2287387 T3 ES 2287387T3
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James E. Fritz
Marlys Hammond
William J. Hornback
Stephen W. Kaldor
Vincent J. Kalish
John E. Munroe
Siegfried Heinz Reich
John H. Tatlock
Timothy A. Shepherd
Michael J. Rodriguez
Louis N. Jungheim
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Abstract

Un compuesto de fórmula 1 Q1 y Q2 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo y arilo sustituidos y no sustituidos, y Q1 y Q2 pueden formar un anillo con G; Q3 se selecciona entre mercapto y alcoxilo, ariloxilo, tioéter, amino, alquilo, cicloalquilo, heterociclo saturado y parcialmente saturado, y arilo sustituidos y no sustituidos; Q4-Q8 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, OPO(OH)2, hidroxilo, alquilo, amino y nitro. Y y G son cada uno oxígeno o -N-H; D es nitrógeno; E es carbono o nitrógeno; Q9 es hidrógeno; A es un carbociclo o heterociclo, que está opcionalmente sustituido adicionalmente; y B es decahidroisoquinolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde alquilo hace referencia a grupos lineales o ramificados que tienen de 1 a 8 átomos de carbono; cicloalquilo representa un anillo mono- o policarbocíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene de 5 a 14 átomos de carbono; alcoxi representa -O-alquilo; arilo hace referencia a un anillo monocíclico o policíclico carbocíclico o heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros; ariloxi representa -O-arilo; carbociclo representa un anillo monocíclico o policíclico aromático o saturado o parcialmente insaturado de 5 a 14 miembros; heterociclo representa un anillo monocíclico o policíclico aromático o saturado o parcialmente saturado de 5 a 14 miembros que tiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre; tioéter representa -S-arilo, -S-heterociclo, -S-cicloalquilo C5-C7 y -S-alquilo; amino representa -NL1L2 donde L1 y L2 se seleccionan independientemente entre oxígeno, carbociclo, heterociclo, alquilo, sulfonilo, e hidrógeno, o NC(O)L3 donde L3 es alquilo, alcoxilo, hidrógeno; o -NL1L2; sulfonilo representa -SO2L5 donde L5 es alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclo o amino; donde los sustituyentes para alquilo y arilo se seleccionan entre mercapto, tioéter, nitro, amino, ariloxilo, halógeno, hidroxilo, acilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclo saturado y parcialmente insaturado; y donde los sustituyentes para heterociclo y cicloalquilo se seleccionan entre los mencionados antes para alquilo y arilo más arilo y alquilo.

Description

Inhibidores de la proteasa de VIH.
Antecedentes de la invención
Esta invención se refiere a una serie novedosa de compuestos químicos útiles como inhibidores de la proteasa de VIH y al uso de tales compuestos como agentes antivirales.
El Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) es una enfermedad o condición relativamente recién reconocida. M El SIDA ocasiona un colapso gradual del sistema inmunitario corporal así como el deterioro progresivo de los sistemas nerviosos central y periférico. Desde su reconocimiento inicial a principios de los 80, el SIDA se ha propagado rápidamente y ha alcanzado ahora proporciones epidémicas en un segmento relativamente limitado de la población. La investigación intensiva ha conducido al descubrimiento del agente responsable, el retrovirus linfotrópico T III humano (HTLV-III), más comúnmente referido ahora como virus de la inmunodeficiencia humana o
VIH.
El VIH es un miembro de una clase de virus conocida como retrovirus. El genoma retroviral está compuesto de ARN que es convertido en ADN mediante transcripción inversa. Este ADN retroviral es integrado después establemente en el cromosoma de las células del anfitrión, y empleando los procesos replicativos de las células anfitrionas, produce nuevas partículas retrovirales y promueve la infección en otras células. Parece que el VIH tiene una afinidad concreta por la célula linfocítica T4 humana que juega un papel vital en el sistema inmunitario corporal. La infección por VIH de estos glóbulos blancos agota esta población de glóbulos blancos. Finalmente, el sistema inmunitario se vuelve no operativo e ineficaz contra diferentes enfermedades oportunistas tales como, entre otras, la neumonía por pneumocystis carinii, el sarcoma de Kaposi, y el cáncer del sistema linfático.
Si bien no se sabe el mecanismo exacto de la formación y del funcionamiento del virus VIH, la identificación del virus ha conducido a algún progreso en el control de la enfermedad. Por ejemplo, se ha encontrado que el fármaco azidotimidina (AZT) es eficaz para inhibir la transcripción inversa del genoma retroviral del virus VIH, produciendo así una medida de control, aunque no una cura, para pacientes afectados de SIDA. Continúa la búsqueda de fármacos que puedan curar o al menos proporcionar una medida de control mejorada del virus VIH mortal.
La replicación retroviral caracteriza rutinariamente la maduración post-traduccional de las poliproteínas. Esta maduración es completada por una enzima proteasa de VIH codificada viralmente. Esta produce polipéptidos maduros que con posterioridad ayudarán a la formación y al funcionamiento de los virus infecciosos. Si se suprime esta maduración molecular, termina la producción normal de VIH. Por consiguiente, los inhibidores de la proteasa de VIH pueden funcionar como agentes anti-virus VIH.
La proteasa de VIH es uno de los productos traducidos del gen pol de la proteína estructural del VIH. Esta proteasa retroviral escinde específicamente otros polipéptidos estructurales en sitios discretos para liberar estas proteínas estructurales y enzimas activadas nuevamente, restituyendo la replicación competente del virión. Como tal, la inhibición de la proteasa de VIH por compuestos potentes puede evitar la integración proviral de los linfocitos T infectados durante la fase temprana del ciclo vital del VIH-I, así como inhibir la maduración proteolítica viral durante su última fase. Adicionalmente, los inhibidores de proteasa pueden tener las ventajas de estar más fácilmente disponibles, tener una vida más larga en el virus, y ser menos tóxicos que los fármacos disponibles en la actualidad, posiblemente debido a su especificidad para la proteasa retroviral.
Según esta invención, se proporciona una clase novedosa de compuestos químicos que pueden inhibir y/o bloquear la actividad de la proteasa de VIH, que detienen la proliferación de virus VIH, las composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, y el uso de los compuestos como inhibidores de la proteasa de HIV.
Por consiguiente la presente invención proporciona los compuestos definidos en las reivindicaciones 1 a 8.
Compendio de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que se corresponden con la fórmula (1) de más abajo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, que inhiben la proteasa codificada por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) de tipo 1 (VIH-1) o de tipo 2 (VIH-2). Estos compuestos son útiles en el tratamiento de la infección por VIH y el tratamiento del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Los compuestos, sus sales farmacéuticamente aceptables, y las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden utilizar solos o combinados con otros antivirales, inmunomoduladores, antibióticos o vacunas. Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar también como profármacos. Se describen los métodos para tratar el SIDA, los métodos para tratar la infección por VIH y los métodos para inhibir la proteasa de VIH.
\newpage
Los compuestos de la presente invención tienen la fórmula (1):
1
donde los diferentes restos se definen como en la reivindicación 1.
La invención se refiere más concretamente a los compuestos de fórmula (1) preferidos donde:
al menos uno de Q_{1} y Q_{2} es alquilo sustituido o no sustituido y el otro se define como antes,
Q_{3} se selecciona entre tioéter y arilo,
Q_{4}-Q_{8} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo,
Y y G son cada uno oxígeno,
D es nitrógeno, y donde D se une mediante enlace sencillo a cada uno de los átomos anulares adyacentes,
E es carbono o nitrógeno,
Q_{9} es hidrógeno,
A es un carbociclo o heterociclo que es un mono-anillo de 5-7 miembros aromático o parcialmente saturado, que está opcionalmente sustituido adicionalmente,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se refiere incluso más concretamente a compuestos de fórmula (1) donde:
uno de Q_{1} y Q_{2} es alquilo sustituido o no sustituido, preferiblemente t-butilo, y el otro es hidrógeno,
Q_{4} es alquilo, preferiblemente metilo,
Q_{5} es hidroxilo,
Q_{6}-Q_{8} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo,
Y y G son cada uno oxígeno,
D es nitrógeno, y donde D se une mediante enlace sencillo a cada uno de los átomos anulares adyacentes,
E es carbono,
Q_{9} es hidrógeno,
A es un carbociclo que es un anillo monocíclico de 5-6 miembros, aromático, preferiblemente fenilo, que está opcionalmente sustituido adicionalmente,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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Los compuestos preferidos de fórmula (1) incluyen aquellos donde:
uno de Q_{1} y Q_{2} es alquilo terciario, preferiblemente t-butilo, y el otro es hidrógeno,
Q_{4} es metilo,
Q_{5} es hidroxilo, amino,
Q_{6}-Q_{8} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxilo,
Y y G son cada uno oxígeno,
D es nitrógeno, y donde D se une mediante enlace sencillo a cada uno de los átomos anulares adyacentes,
E es carbono,
Q_{9} es hidrógeno,
A es fenilo, que está sustituido opcionalmente adicionalmente,
y B es decahidroisoquinolinilo,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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Según la presente invención se proporciona un compuesto de fórmula 1(A):
2
como se define en la reivindicación 2.
La presente invención proporciona adicionalmente formulaciones farmacéuticas que comprenden una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, combinado con un portador farmacéuticamente aceptable, tal como un diluyente o excipiente.
La presente invención tiene que ver adicionalmente con un método para tratar el SIDA que comprende administrar a un anfitrión o paciente, tal como un primate, una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención.
La presente invención tiene que ver adicionalmente con un método para inhibir la replicación del VIH que comprende administrar a una célula infectada con VIH, una célula susceptible a la infección por VIH o un anfitrión o paciente, tal como un primate, una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona nuevos compuestos que se corresponden con la fórmula (1), como se ha descrito antes, que son útiles para tratar la infección por VIH y/o el SIDA.
Los compuestos de fórmula (1) pueden ser profármacos.
Todas las temperaturas indicadas en la presente memoria están en grados Celsius (ºC). Todas las unidades de medida empleadas en la presente memoria están en unidades en peso excepto para los líquidos que están en unidades en volumen.
El término "alquilo" según se utiliza en la presente memoria hace referencia a grupos de cadena lineal o ramificada, preferiblemente, que tienen de uno a ocho, más preferiblemente que tienen de uno a seis, y muy preferiblemente que tienen de uno a cuatro átomos de carbono. El término "alquilo C_{1}-C_{6}" representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a seis átomos de carbono. Los grupos alquilo C_{1}-C_{6} ilustrativos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo, neo-pentilo, hexilo, isohexilo, y similares. El término "alquilo C_{1}-C_{6}" incluye en su definición el término "alquilo C_{1}-C_{4}".
El término "cicloalquilo" representa un anillo mono- o poli-carbocíclico, saturado o parcialmente saturado, que tiene preferiblemente 5-14 átomos de carbono anulares. Los grupos cicloalquilo ilustrativos incluyen anillos monocíclicos que tienen 3-7, preferiblemente 3-6, átomos de carbono, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Un grupo cicloalquilo ilustrativo es cicloalquilo C_{5}-C_{7}, que es una estructura anular hidrocarbonada saturada que contiene de cinco a siete átomos de carbono.
El término "alcoxilo" representa -O-alquilo. Un ejemplo de alcoxilo es alcoxilo C_{1}-C_{6}, que representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a seis átomos de carbono anclada a un átomo de oxígeno. Los grupos alcoxilo C_{1}-C_{6} ilustrativos incluyen metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, sec-butoxilo, t-butoxilo, pentoxilo, hexoxilo, y similares. Alcoxilo C_{1}-C_{6} incluye en su definición alcoxilo C_{1}-C_{4}.
El término "arilo" según se utiliza en la presente memoria hace referencia a un anillo monocíclico o policíclico de 5-14 miembros, aromático, carbocíclico o heterocíclico. Los grupos arilo ilustrativos incluyen fenilo, naftilo, antrilo, fenantrilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, furilo, isotiazolilo, furazanilo, isoxazolilo, tiazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b]tiantrenilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatienilo, indolizinilo, isoindolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinzolinilo, benzotiazolilo, benzimidazolilo, tetrahidroquinolinilo, cinolinilo, pteridinilo, carbazolilo, beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, y fenoxazinilo.
El término "ariloxilo" representa -O-arilo.
El término "grupo hidrolizable" es un grupo, que cuando se une a un oxígeno, forma un éster, que puede ser hidrolizado en vivo a un grupo hidroxilo. Los grupos hidrolizables ilustrativos, que están sustituidos opcionalmente, incluyen la funcionalidad acilo, la funcionalidad sulfonato y la funcionalidad fosfato. Por ejemplo, tales grupos hidrolizables incluyen restos aminoácidos bloqueados o no bloqueados, un resto hemisuccinato, y un resto nicotinato.
El término "halógeno" representa cloro, flúor, bromo o yodo. El término "halo" representa cloro, flúor, bromo o yodo.
El término "carbociclo" representa un anillo monocíclico o policíclico de 5-14 miembros aromático o saturado o parcialmente saturado, tal como un anillo monocíclico de 5 a 7 miembros o bicíclico de 7 a 10 miembros, donde todos los miembros anulares son átomos de carbono.
El término "heterociclo" representa un anillo monocíclico o policíclico, de 5-14 miembros, aromático o saturado o parcialmente saturado, tal como un anillo monocíclico de 5 a 7 o bicíclico 7 a 10 miembros, que tienen de uno a tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y donde cualquier heteroátomo de nitrógeno y azufre puede estar opcionalmente oxidado, y cualquier heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternarizado. El anillo heterocíclico puede estar anclado a cualquier heteroátomo o átomo de carbono adecuado. Los ejemplos de tales heterociclos incluyen decahidroisoquinolinilo, octahidro-tieno[3,2-c]piridinilo, piperidinilo, piperazinilo, azepinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolidinilo, imidazolilo, isobenzofuranilo, furazanilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, tiantrenilo, triazinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, quinuclidinilo, isotiazolidinilo, indolilo, quinolinilo, cromenilo, xantenilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, tiadiazolilo, benzopiranilo, benzotiazolilo, benzoazolilo, furilo, tetrahidrofurilo, tetrahidropiranilo, tienilo, benzotienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b]tienilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilsulfóxido, tiamorfolinil-sulfona, oxadiazolilo, triazolilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidrisoquinolinilo, fenoxatienilo, indolizinilo, isoindolilo, indazolilo, purinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxialinilo, quinzolinilo, tetrahidroquinolinilo, cinolinilo, pteridinilo, carbazolilo, beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, y fenoxazinilo.
El término "tioéter" incluye S-arilo, tales como feniltio y naftiltio; S-heterociclo donde el heterociclo es saturado o parcialmente saturado; S-cicloalquilo (C_{5}-C_{7}; y S-alquilo, tales como alquil(C_{1}-C_{6})tio. En el tioéter, el -arilo, el -heterociclo, el -cicloalquilo y el -alquilo pueden estar sustituidos opcionalmente. Un ejemplo de un tioéter es "alquil(C_{1}-C_{6})tio", que representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a seis átomos de carbono anclada a un átomo de azufre. Los grupos alquil(C_{1}-C_{6})tio ilustrativos incluyen metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio, sec-butiltio, t-butiltio, pentiltio, hexiltio, y similares.
El término "mercapto" representa -SH.
El término "amino" representa -NL_{1}L_{2}, donde L_{1} y L_{2} son preferiblemente seleccionados independientemente entre oxígeno, carbociclo, heterociclo, alquilo, sulfonilo e hidrógeno; o NC(O)L_{3}, donde L_{3} es preferiblemente alquilo, alcoxilo, hidrógeno o -NL_{1}L_{2}. Los grupos arilo, alquilo y alcoxilo pueden estar sustituidos opcionalmente. Un ejemplo de un amino es alquil(C_{1}-C_{4})amino, que representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono anclada a un grupo amino. Los grupos alquil(C_{1}-C_{4})amino ilustrativos incluyen metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, butilamino, sec-butilamino, y similares. Otro ejemplo de amino es dialquil(C_{1}-C_{4})amino, que representa dos cadenas alquílicas lineales o ramificadas, que tienen cada una de uno a cuatro átomos de carbono anclado a un grupo amino común. Los grupos dialquil(C_{1}-C_{4})amino ilustrativos incluyen dimetilamino, etilmetilamino, metilpropilamino, etilisopropilamino, butilmetilamino, sec-butiletilamino, y similares. Un ejemplo de amino es alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilamino, que tiene una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono anclada a un radical sulfonilamino. Los grupos alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilamino ilustrativos incluyen metilsulfonilamino, etilsulfonil-amino, propilsulfonilamino, isopropilsulfonilamino, butilsulfonilamino, sec-butilsulfonilamino, t-butilsulfonilamino, y similares.
El término "acilo" representa L_{6}C(O)L_{4}, donde L_{6} es un enlace sencillo, -O o -N, y adicionalmente donde L_{4} es preferiblemente alquilo, amino, hidroxilo, alcoxilo o hidrógeno. Los grupos alquilo y alcoxilo pueden estar sustituidos opcionalmente. Un acilo ilustrativo es alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, que es una cadena alcoxilada lineal o ramificada tiene de uno a cuatro átomos de carbono anclada a un radical carbonilo. Los grupos alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo ilustrativos incluyen metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, y similares. Otro acilo ilustrativo es un carboxi donde L_{6} es un enlace sencillo y L_{4} es alcoxilo, hidrógeno, o hidroxilo. A acilo adicionalmente ilustrativo es N-(C_{1}-C_{4})alquilcarbamoilo (L_{6} es un enlace sencillo y L_{4} es un amino), que es una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono anclada al átomo de nitrógeno un radical carbamoilo. Los grupos N-alquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo ilustrativos incluyen N-metilcarbamoilo, N-etilcarbamoilo, N-propilcarbamoilo, N-isopropilcarbamoilo, N-butilcarbamoilo, y N-t-butilcarbamoilo, y similares. Otro acilo ilustrativo es N,N-dialquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, que tiene dos cadenas alquílicas lineales o ramificadas, que tienen cada una de uno a cuatro átomos de carbono ancladas al átomo de nitrógeno de un radical carbamoilo. Los grupos N,N-dialquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo ilustrativos incluyen N,N-dimetilcarbamoilo, N,N-etilmetilcarbamoilo, N,N-metilpropilcarbamoilo, N,N-etilisopropilcarbamoilo, N,N-butilmetilcarbamoilo, N,N-sec-butiletilcarbamoilo, y similares.
El término "sulfinilo" representa -SO-L_{5}, donde L_{5} es preferiblemente alquilo, amino, arilo, cicloalquilo o heterociclo. Alquilo, arilo, cicloalquilo y heterociclo pueden estar todos sustituidos opcionalmente.
El término "sulfonilo" representa -SO_{2}-L_{5}, donde L_{5} es preferiblemente alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclo o amino. Alquilo, arilo, cicloalquilo y heterociclo pueden estar todos sustituido opcionalmente. Un ejemplo de sulfonilo es alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilo, que es una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono anclada a un radical sulfonilo. Los grupos alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilo ilustrativos incluyen metilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, isopropilsulfonilo, butilsulfonilo, sec-butilsulfonilo, t-butilsulfonilo y similares.
Como se ha indicado antes, muchos de los grupos están sustituidos opcionalmente. Para todas las fórmulas en la presente memoria, todos los grupos químicos pueden estar sustituidos o no sustituidos con tal que las valencias de tales grupos permitan tales sustituciones, incluso si las definiciones de los grupos químicos no establecen explícitamente que los grupos están sustituidos o no sustituidos. Por ejemplo, si un grupo es definido simplemente como alquilo, éste puede ser alquilo sustituido o no sustituido. Los ejemplos de los sustituyentes para alquilo y arilo incluyen mercapto, tioéter, nitro (NO_{2}), amino, ariloxilo, halógeno, hidroxilo, alcoxilo, y acilo, así como arilo, cicloalquilo y saturado y parcialmente saturado heterociclos. Los ejemplos de los sustituyentes para heterociclo y cicloalquilo incluyen aquellos enumerados antes para alquilo y arilo, así como arilo y alquilo.
Los grupos arilo sustituidos ilustrativos incluyen un anillo fenilo o naftilo sustituido con uno o más sustituyentes, preferiblemente de uno a tres sustituyentes, seleccionados independientemente entre halo, hidroxi, morfolino alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, piridilalcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, haloalquilo (C_{1}-C_{4}), alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, carbamoilo, N-alquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, amino, alquil(C_{1}-C_{4})amino, dialquil(C_{1}-C_{4})amino o un grupo de fórmula -(CH_{2})_{a}-R^{7} donde a es 1, 2, 3 o 4; y R^{7} es hidroxi, C_{1}-C_{4} alcoxi, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, amino, carbamoilo, alquil(C_{1}-C_{4})amino o dialquil(C_{1}-C_{4})amino.
Otro alquilo sustituido es halo(C_{1}-C_{4})alquilo, que representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono con 1-3 átomos de halógeno anclados a ella. Los grupos haloalquilo C_{1}-C_{4} ilustrativos incluyen clorometilo, 2-bromoetilo, 1-cloroisopropilo, 3-fluoropropilo, 2,3-dibromobutilo, 3-cloroisobutilo, yodo-t-butilo, trifluorometilo y similares.
Otro alquilo sustituido es hidroxialquilo C_{1}-C_{4}, que representa una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono con un grupo hidroxi anclado a ella. Los grupos hidroxialquilo C_{1}-C_{4} ilustrativos incluyen hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2-hidroxiisopropilo, 4-hidroxibutilo y similares.
Otro alquilo sustituido es alquil(C_{1}-C_{4})tioalquilo (C_{1}-C_{4}), que es un grupo alquilo C_{1}-C_{4} lineal o ramificado con un grupo alquil(C_{1}-C_{4})tio anclado a él. Los grupos alquil(C_{1}-C_{4})tioalquilo C_{1}-C_{4} ilustrativos incluyen metiltiometilo, etiltiometilo, propiltiopropilo, sec-butiltiometilo, y similares.
Otro alquilo sustituido ilustrativo es heterociclo(C_{1}-C_{4})alquilo, que es una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono con un heterociclo anclado a él. Los grupos heterocicloalquilo C_{1}-C_{4} ilustrativos incluyen pirrolilmetilo, quinolinilmetilo, 1-indoliletilo, 2-furiletilo, 3-tien-2-ilpropilo, 1-imidazolilisopropilo, 4-tiazolilbutilo y similares.
Otro alquilo sustituido es arilalquilo C_{1}-C_{4}, que es una cadena alquílica lineal o ramificada que tiene de uno a cuatro átomos de carbono con un grupo arilo anclado a él. Los grupos arilalquilo C_{1}-C_{4} ilustrativos incluyen fenilmetilo, 2-feniletilo, 3-naftil-propilo, 1-naftilisopropilo, 4-fenilbutilo y similares.
El heterociclo puede, por ejemplo, estar sustituido con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, haloalquilo C_{1}-C_{4}, alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, carbamoilo, N-alquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, amino, alquil(C_{1}-C_{4})amino, dialquil(C_{1}-C_{4})amino o un grupo que tiene la estructura -(CH_{2})_{a}-R^{7} donde a es 1, 2, 3 o 4 y R^{7} es hidroxi, alcoxi C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, amino, carbamoilo, alquil(C_{1}-C_{4})amino o dialquil(C_{1}-C_{4})amino.
Los ejemplos de los heterociclos sustituidos incluyen 3-N-t-butilcarboxamidodecahidroisoquinolinilo, 6-N-t-butilcarboxamidooctahidro-tieno[3,2-c]piridinilo, 3-metilimidazolilo, 3-metoxipiridilo, 4-cloroquinolinilo, 4-aminotiazolilo, 8-metilquinolinilo, 6-cloro-quinoxalinilo, 3-etilpiridilo, 6-metoxibenzimidazolilo, 4-hidroxifurilo, 4-metilisoquinolinilo, 6,8-dibromo-quinolinilo, 4,8-dimetilnaftilo, 2-metil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolinilo, N-metil-quinolin-2-ilo, 2-t-butoxicarbonil-1,2,3,4-isoquinolin-7-ilo y similares.
Los sistemas anulares heterocíclicos ilustrativos representados por A o B incluyen (1) grupos anulares monocíclicos de 5 miembros tales como tienilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, furilo, isotiazolilo, furazanilo, isoxazolilo, tiazolilo y similares; (2) grupos monocíclicos de 6 miembros tales como piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo y similares; y (3) grupos anulares heterocíclicos policíclicos, tales como decahidroisoquinolinilo, octahidro-tieno [3,2-c]piridinilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b]tiantrenilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, y análogos de los mismos totalmente o parcialmente saturados.
Un cicloalquilo puede estar sustituido opcionalmente con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre halo, haloalquilo C_{1}-C_{4}, alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, carbamoilo, N-alquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, amino, alquil(C_{1}-C_{4})amino, dialquil(C_{1}-C_{4})amino o un grupo que tiene la estructura -(CH2)_{a}-R^{7} donde a es 1, 2, 3 o 4 y R^{7} es hidroxi, alcoxi C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, amino, carbamoilo, alquil(C_{1}-C_{4})amino o dialquil(C_{1}-C_{4})amino. Los grupos cicloalquilo sustituidos ilustrativos incluyen 3-metilciclopentilo, 4-etoxiciclohexilo, 5-carboxicicloheptilo, 6-cloro-ciclohexilo y similares.
Los grupos hidrolizables sustituidos ilustrativos incluyen N-bencilglicilo, N-Cbz-L-valilo, y N-metilnicotinato.
Los compuestos de la presente invención tienen al menos dos centros asimétricos indicados por un asterisco en la fórmula (1) de más abajo:
3
Como consecuencia de estos centros asimétricos, los compuestos de la presente invención pueden aparecer en cualquiera de las formas estereoisoméricas posibles, y se pueden utilizar en mezclas de estereoisómeros, que pueden ser ópticamente activas o racémicas, o se pueden utilizar solas como estereoisómeros esencialmente puros, esto es, puros en al menos 95%. Todas las formas asimétricas, los isómeros individuales y las combinaciones de los mismos, están dentro del alcance de la presente invención.
Los estereoisómeros individuales se pueden preparar a partir de sus precursores respectivos mediante los procedimientos descritos antes, resolviendo las mezclas racémicas, o separando los diastereómeros. La resolución se puede llevar a cabo en presencia de un agente de resolución, mediante cromatografía o mediante cristalizaciones repetidas o mediante alguna combinación de estos mecanismos que son conocidos en la técnica. Se pueden encontrar detalles adicionales relativos a las resoluciones en Enantiomers, Racemates, y Resolutions, John Wiley & Sons 1981 de Jacques et al.
Preferiblemente, los compuestos de la presente invención son sustancialmente puros, esto es, puros en más de 50%. Más preferiblemente, los compuestos son puros en al menos 75%. Incluso más preferiblemente, los compuestos son puros en más de 90%. Incluso más preferiblemente, los compuestos son puros en al menos 95%, más preferiblemente, puros en al menos 97%, y muy preferiblemente puros en al menos 99%.
Como se ha mencionado antes, la invención incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos definidos por la fórmula (1). Un compuesto de esta invención puede poseer grupos funcionales suficientemente ácidos, suficientemente alcalinos, o ambos, y por consiguiente reaccionar con cualquiera de numerosas bases inorgánicas u orgánicas, y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable.
El término "sal farmacéuticamente aceptable", según se utiliza en la presente memoria, hace referencia a las sales de los compuestos de la fórmula anterior que son sustancialmente no tóxicas para los organismos vivos. Las sales farmacéuticamente aceptables ilustrativas incluyen aquellas sales preparadas mediante reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico o una base inorgánica. Los reaccionantes se combinan generalmente en un disolvente mutuo tal como éter dietílico o benceno, para las sales de adición de ácido, o agua o alcoholes para las sales de adición de bases. Las sales precipitan normalmente de la en aproximadamente una hora a aproximadamente diez días y se pueden aislar mediante filtración u otros métodos convencionales. Tales sales son conocidas como sales de adición de ácido y sales de adición de bases.
Los ácidos que se pueden emplear para formar las sales de adición de ácido son ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido azufreico, ácido fosfórico, y similares, y ácidos orgánicos tales como p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y similares.
Los ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables son el sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butino-1,4-dioato, hexino-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, g-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metano-sulfonato, propanosulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato y similares.
Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables preferidas son aquellas formadas con ácidos minerales tales como ácido clorhídrico y ácido bromhídrico, y las formadas con ácidos orgánicos tales como ácido maleico y ácido metanosulfónico.
Las sales de adición de bases incluyen aquellas derivadas de bases inorgánicas y orgánicas, tales como los hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos de amonio o de metales alcalinos o alcalinotérreos, y similares. Estas bases útiles para preparar las sales de esta invención incluyen en ese caso hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de amonio, carbonato de potasio, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, bicarbonato de potasio, hidróxido de calcio, carbonato de calcio y similares. Son particularmente preferidas las formas de las sales de potasio y de sodio.
Se debe advertir que el contraión concreto que forma parte de cualquier sal de esta invención no tiene una naturaleza crítica, con tal que la sal en su conjunto sea farmacológicamente aceptable y con tal que el contraión no aporte cualidades no deseadas a la sal en su conjunto.
Algunos compuestos son los compuestos de fórmula 1(A) anteriores donde:
Z es un grupo que tiene la estructura:
4 
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5
R^{2} es hidrógeno, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, halo, amino, nitro, o trifluorometilo;
a es 1, 2, o 3;
c es 1; y
R^{3} es -C(O)NR^{4}R^{4};
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
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De estos compuestos, son más preferidos los compuestos donde:
Z es
6
R^{2} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, cloro, flúor, hidroxi, o amino;
X es
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7 
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R es -CH_{2}-piridilo;
R^{1} es fenilo o -S-fenilo; y
R^{3} es -C(O)NH(R^{4});
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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De estos compuestos, son especialmente preferidos los compuestos donde:
Z es
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8 
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X es
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9 
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R^{2a} es metilo, etilo, o propilo;
R^{2b} es hidrógeno, hidroxi, o amino;
R^{2c} es hidrógeno, hidroxi, o amino;
R^{3} es -C(O)NH(t-butil);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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Los compuestos de fórmula 1 se pueden preparar según la siguiente Reacción I.
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Reacción I
\vskip1.000000\baselineskip
10 
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donde las variables se definen como para la fórmula 1 anterior.
La Reacción I es una reacción de acoplamiento normalizada empleada comúnmente en la síntesis de amidas o péptidos que se lleva a cabo haciendo reaccionar una amina apropiadamente sustituida de fórmula IA, con un ácido carboxílico reaccionante apropiadamente sustituido de fórmula IB, en un disolvente aprótico o mezcla de disolventes. La reacción se lleva a cabo típicamente en presencia o ausencia de un agente promotor, preferiblemente en presencia de un agente promotor, y en presencia de un reactivo de acoplamiento. Los disolventes apróticos típicos para esta reacción son tetrahidrofurano y dimetilformamida, o una mezcla de tales disolventes. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente -30ºC a aproximadamente 25ºC. La amina reaccionante se emplea generalmente en proporciones equimolares con respecto al ácido carboxílico reaccionante, en presencia de una cantidad equimolar a un ligero exceso del reactivo de acoplamiento. Entre los reactivos de acoplamiento típicos se incluyen carbodiimidas tales como diciclohexilcarbodiimida (DCC) y N,N'-dietilcarbodiimida; imidazoles tales como carbonildiimidazol; así como reactivos tales como cloruro bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico (BOP-Cl) o N-etoxicarbonil-2-etoxi-1,2-dihidroquinolina (EEDQ). Un agente de acoplamiento preferido para esta reacción es DCC. Para esta reacción se incluye preferiblemente un agente promotor; un agente promotor preferido es hidrato de hidroxibenzotriazol
(HOBT\cdotH_{2}O).
Una vez completada la reacción, el compuesto se puede aislar, si se desea, mediante procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, el compuesto se puede cristalizar y después recoger mediante filtración, o el disolvente de reacción se puede separar mediante extracción, evaporación o decantación. El compuesto se puede purificar adicionalmente, si se desea, mediante técnica comunes tales como cristalización o cromatografía sobre soportes sólidos tales como gel de sílice o alúmina.
Los compuestos de partida de fórmula IA se pueden preparar según los procedimientos mostrados en el Esquema de Reacción A.
11
donde:
V^{A} es un grupo protector de amino;
B, D, G, Q_{1}, Q_{2}, Q_{3} y Q_{9} se definen como antes para la fórmula (1); y
ZZ es halo.
El Esquema de Reacción A, anterior, se completa llevando a cabo las reacciones 1-7 en orden sucesivo. Una vez completada la reacción, el compuesto intermedio se puede aislar, si se desea, mediante procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, el compuesto se puede cristalizar y después recoger mediante filtración, o el disolvente de reacción se puede separar mediante extracción, evaporación o decantación. El compuesto intermedio se puede purificar adicionalmente, si se desea, mediante técnica comunes tales como cristalización o cromatografía sobre soportes sólidos tales como gel de sílice o alúmina, antes de llevar a cabo la siguiente etapa del esquema de reacción.
La Reacción A.1 se lleva a cabo convirtiendo un ácido carboxílico reaccionante protegido con amino que tiene la estructura:
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en el anhídrido mixto correspondiente en condiciones conocidas en la técnica. Por ejemplo, el ácido carboxílico reaccionante protegido con amino se puede hacer reaccionar con un cloroformiato de alquilo C_{1}-C_{6}, tal como cloroformiato de isobutilo preferiblemente en presencia de un captador de ácido. Los captadores de ácido preferidos son las trialquilaminas, preferiblemente trietilamina. La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico tal como acetato de etilo. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. El anhídrido mixto reaccionante resultante se utiliza preferiblemente en la Reacción A.2 sin aislamiento o purificación adicional.
La Reacción A.2 se completa en dos etapas. Primero, una solución de hidróxido de sodio, se cubrió con una capa de un disolvente etérico, preferiblemente éter dietílico, se hace reaccionar con un gran exceso de N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina para formar un diazometano reaccionante. El hidróxido de sodio se utiliza preferiblemente en forma de una solución acuosa que tiene aproximadamente de cuatro a seis moles/litro de hidróxido de sodio. Una vez que esta reacción se completa sustancialmente, la capa orgánica se seca sobre un desecante tal como hidróxido de potasio. Esta solución se hace reaccionar después con el anhídrido mixto de la Reacción A.1, anterior, para formar el compuesto alfa-diazocarbonílico correspondiente. El diazometano reaccionante se utiliza preferiblemente en esta reacción sin aislamiento o purificación. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente -50ºC a aproximadamente -10ºC, preferiblemente de aproximadamente -20ºC.
En la Reacción A.3, el compuesto alfa-diazocarbonílico preparado en la Reacción A.2 se hace reaccionar con un ácido de fórmula H-ZZ donde ZZ es halo, típicamente en un disolvente aprótico tal como éter dietílico para formar un compuesto alfa-halocarbonílico. Un ácido reaccionante preferido es el ácido clorhídrico que proporciona el compuesto alfa-clorocarbonílico correspondiente. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente -30ºC a aproximadamente 0ºC. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. El ácido reaccionante se añade típicamente en forma de un gas anhidro en pequeños incrementos hasta que la reacción parece sustancialmente completa. La reacción se puede verificar mediante cromatografía en capa fina.
En la Reacción A.4, el radical carbonilo del compuesto preparado en la Reacción A.3 se reduce utilizando condiciones normalizadas conocidas en la técnica para formar el compuesto alfa-clorohidroxilado correspondiente. Por ejemplo, el compuesto preparado en la Reacción A.3 se combina con un agente reductor en una mezcla de disolventes. Los agentes reductores típicos incluyen borohidruro de sodio, borohidruro de litio, borohidruro de cinc, hidruro de diisobutilaluminio, e hidruro de sodio y bis(2-metoxi-etoxi)aluminio. Un agente reductor preferido es borohidruro de sodio. Entre las mezclas disolventes típicas se incluyen una mezcla prótica y aprótica tal como tetrahidrofurano/agua. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente -10ºC, preferiblemente de aproximadamente 0ºC.
En la Reacción A.5, el compuesto alfa-clorohidroxilado preparado en la Reacción A.4 se trata con una base fuerte para formar el epóxido correspondiente en condiciones normalizadas conocidas en la técnica. Por ejemplo, el compuesto alfa-clorohidroxilado se puede hacer reaccionar con una mezcla de hidróxido de potasio/etanol en un disolvente alcohólico tal como etanol. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura de reflujo del disolvente. Preferiblemente la reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente.
En la Reacción A.6, el epóxido preparado en la Reacción A.5 se hace reaccionar con un reaccionante heterocíclico:
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típicamente en un disolvente alcohólico a una temperatura que oscila típicamente de aproximadamente 20ºC a 100ºC. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen los alcoholes, preferiblemente isopropanol o etanol. La reacción se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 80ºC.
La Reacción A.7 es una reacción de desprotección de amino normalizada utilizando procedimientos y métodos conocidos en la técnica para proporcionar la amina correspondiente que se utiliza en la Reacción I, anterior. Esta amina se puede hacer reaccionar sin purificación, pero se purifica primero preferiblemente.
Los compuestos de fórmula IA, donde Q^{3} es -S-arilo, se preparan típicamente haciendo reaccionar primero serina con el grupo amino protegido con trifenilfosfina y azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente -80ºC a 0ºC para formar la beta-lactona correspondiente. La reacción se lleva a cabo típicamente en un éter, tal como tetrahidrofurano a una temperatura de aproximadamente -80ºC a -50ºC. A continuación, el anillo de lactona se abre para proporcionar un compuesto que tiene la estructura:
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haciendo reaccionar típicamente la lactona con un tioanión apropiadamente sustituido que tiene la estructura, -S-arilo. El compuesto tioaniónico se forma preferiblemente haciendo reaccionar el tiol correspondiente con una base fuerte, tal como hidruro de sodio o hidruro de potasio. Esta reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 40ºC y en una atmósfera inerte, por ejemplo de nitrógeno. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen éteres, preferiblemente tetrahidrofurano.
Alternativamente, los compuestos de fórmula IA, donde Q^{3} es -s-arilo, se pueden preparar utilizando los procedimientos detallados por Photaki, en JACS, 85, 1123 (1963), y Sasaki, N.A. et al, en Tetrahedron Letters, 28, 6069 (1987). Por ejemplo, los compuestos se pueden preparar haciendo reaccionar serina doblemente protegida (protegida en carboxi y protegida en amino) con cloruro de toluenosulfonilo en presencia de dimetilaminopiridina (DMAP) y un captador de ácido tales como piridina en un disolvente aprótico tal como cloruro de metileno para formar el toluenosulfonato correspondiente que se puede hacer reaccionar después con un tioanión apropiadamente sustituido que tiene la estructura, -S-arilo. El compuesto tioaniónico se forma preferiblemente haciendo reaccionar el tiol correspondiente con una base fuerte como se ha descrito antes. El grupo protector de carboxi se puede separar de la ariltioalanina doblemente protegida resultante utilizando condiciones conocidas en la técnica.
Los reaccionantes heterocíclicos de fórmula
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utilizados en la Reacción A.6, se pueden preparar utilizando procedimientos y métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los reaccionantes heterocíclicos se prepararon típicamente a partir de los aminoácidos con el grupo amino protegido correspondientes mediante activación del ácido seguido de tratamiento con una alquilamina. Esta reacción se lleva a cabo típicamente en presencia de un captador de ácido, tal como N-metilmorfolina. La separación del grupo protector de amino utilizando técnicas normalizadas de desprotección química normalizadas proporciona después los reaccionantes heterocíclicos deseados. Específicamente, el [3S-(3R*,4aR*,8aR*)]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida se preparó utilizando ácido 2S-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolinocarboxílico mediante el siguiente procedimiento:
1.
1) protección de amino (t-Boc);
2.
2) activación de ácido/reacción con t-butilamina;
3.
3) hidrogenación catalítica;
4.
4) desprotección de amino.
Las piperazinas reaccionantes se pueden preparar convirtiendo un compuesto de pirazina apropiadamente sustituido en el compuesto de piperazina correspondiente utilizando procedimientos conocidos en la técnica, preferiblemente utilizando hidrogenación catalítica. Por ejemplo, la hidrogenación se puede completar combinando la pirazina reaccionante con un catalizador en una atmósfera de hidrógeno en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 60ºC. Los catalizadores adecuados incluyen paladio sobre carbono, metal de platino, óxido de platino y similares. Un catalizador preferido es el óxido de platino. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen tetrahidrofurano, dimetilformamida o una mezcla de tetrahidrofurano y dimetilformamida.
El átomo de nitrógeno de la piperazina reaccionante resultante se puede alquilar utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la piperazina reaccionante se puede hacer reaccionar con un haloalquilo C_{1}-C_{4}, o una halometilpiridina, tales como yoduro de metilo o clorometilpiridina. Los halógenos sustituyentes preferidos incluyen cloro, bromo y yodo. La reacción se lleva a cabo a temperaturas de aproximadamente 0ºC a 60ºC en un disolvente mutuamente inerte y en presencia de un captador de ácido. Un captador de ácido preferido es carbonato de potasio. Los disolventes típicos incluyen una mezcla de disolventes próticos y apróticos tal como acetonitrilo y agua. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada.
Alternativamente, el reaccionante alquilado de piperazina se puede preparar utilizando aminación reductiva. Por ejemplo, la piperazina reaccionante preparada antes se puede hacer reaccionar con un aldehído (por ejemplo, aldehído 3-piridinocarboxílico, etanal, propanal) o una cetona en presencia de un agente reductor y un ácido. La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente alcohólico tal como metanol, etanol o isopropanol. Los agentes reductores típicos incluyen borohidruro de sodio, cianoborohidruro de litio, cianoborohidruro de sodio, y similares. Un agente reductor preferido es cianoborohidruro de sodio. Los ácidos típicos incluyen cualquier ácido prótico tal como ácido clorhídrico, ácido azufreico, ácido metanosulfónico, o ácido acético. Un ácido preferido es el ácido acético.
También se puede preparar el reaccionante intermedio
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que tiene la fórmula 2:
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donde:
V^{0} y V^{1} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, o hidroxialquilo C_{1}-C_{6};
V^{2} es hidrógeno, un grupo protector de amino, o un grupo de fórmula:
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v^{3} es -(CH_{2})_{t}-V^{3'};
t es 0, 1, 2, 3, o 4;
V^{3'} es arilo, -O-arilo, o -S-arilo;
V^{4} es hidrógeno o un grupo protector de amino; f, h y j son cada uno independientemente 0, 1 o 2; g e i son cada uno independientemente 0 o 1;
V^{5} es -CH_{2}-, -CHV^{5'}-, o -CV^{5'}V^{5'}-;
V^{6} es -CH_{2}-, -CHV^{6'}, -CV^{6'}V^{6'}-;
V^{7} es -CH_{2}-, -CHV^{7'}, o -CV^{7'}V^{7'}-;
cada uno de V^{5'}, V^{6'}, y V^{7'} se seleccionan independientemente entre halo, hidroxi, alquil C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, hidroxialquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil(C_{1}-C_{6})tio, amino, o ciano;
T y W son independientemente -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, O-, -NH-, o -(V^{9})-; y
V^{9} es alquilo C_{1}-C_{6}, arilalquilo C_{1}-C_{6}, arilo, o acilo; con las condiciones de que:
g e i no pueden ser ambos 0;
la suma de f, g, h, i y j debe ser 2, 3, 4, o 5;
si V^{5} es -CV^{5'}V^{5'}-, V^{6} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{6'}-; y V^{7} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{7'}-;
si V^{6} es -CV^{6'}V^{6'}-, V^{5} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{5'}-; y V^{7} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{7'}-:
si V^{7} es -CV^{7'}V^{7'}-, V^{5} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{5'}-; y V^{6} debe ser -CH_{2}- o -CHV^{6'}-;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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Los compuestos de fórmula 3 se pueden preparar según el siguiente Esquema de Reacción II:
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Esquema de Reacción II
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20
donde
V^{4}, V^{3}, V^{0}, V^{1}, V^{5}, T, V^{6}, W, V^{7}, f, g, h, i, j, se definen como antes para la fórmula 2, incluyendo sus definiciones de V^{3}, t, V^{5'}, V^{6'}, V^{7'}, y V^{9'},
V^{A} es un grupo protector de amino; y
U en la reacción 1-3 anterior representa la presencia de enlaces dobles entre, por ejemplo, V^{5} y V^{6}, V^{5} y V^{5}, o V^{7} y V^{6} y similares, donde g es 0, h es 0 y f es 2, o i es 0, respectivamente.
El Esquema de Reacción II, anterior, se completa llevando a cabo las reacciones 1-3 (o 1-5) en orden sucesivo. Una vez completada la reacción, el compuesto intermedio se puede aislar, si se desea, mediante procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, el compuesto se puede cristalizar y después recoger mediante filtración, o el disolvente de reacción se puede separar mediante extracción, evaporación o decantación. El compuesto intermedio se puede purificar adicionalmente, si se desea, mediante técnicas comunes tales como cristalización o cromatografía sobre soportes sólidos tales como gel de sílice o alúmina, antes de llevar a cabo la siguiente etapa del esquema de reacción.
Reacción II.1 se lleva a cabo típicamente activando el radical ácido carboxílico utilizando, por ejemplo, DCC o un anhídrido mixto tal como isobutilo, seguido de reacción con una amina primaria o secundaria que tiene la fórmula NV^{0}V^{1} donde V^{0} y V^{1} se definen como antes para la fórmula (2). La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico no polar o en una mezcla de disolventes en presencia o ausencia de un captador de ácido a una temperatura de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 25ºC para proporcionar la amida correspondiente. Los disolventes adecuados para esta reacción incluyen éteres e hidrocarburos y clorados, preferiblemente éter dietílico, cloroformo, o cloruro de metileno. Preferiblemente, esta reacción se lleva a cabo en presencia de un captador de ácido tal como una amina terciaria, preferiblemente trietilamina. La amida proporcionada mediante esta reacción se puede aislar o hacer reaccionar adicionalmente como se ha mostrado en la Reacción II.2.
La Reacción II.2 se lleva a cabo típicamente haciendo reaccionar el compuesto obtenido de la Reacción II.1 utilizando los procedimientos detallados en Comprehensive Organic Synthesis, "Heteroatom Manipulation", Barry M. Trost, ed., volumen 6, páginas 736-746, (1991). En general, un anillo monocíclico apropiadamente sustituido se hace reaccionar con un aldehído, tal como formaldehído o tricloroacetaldehído, en presencia de un ácido. El ácido se puede utilizar en forma de disolvente. Los ácidos típicos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido azufreico, ácido acético, ácido trifluoroacético, y similares. Se puede añadir opcionalmente un co-disolvente a la mezcla de reacción. La elección del co-disolvente no es crítica con tal que el co-disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen disolventes halogenados tales como cloruro de metileno, tricloroetano, tetracloruro de carbono, y similares. Alternativamente, el aldehído se puede producir en situ utilizando por ejemplo, dimetoximetano y un ácido adecuado.
En la reacción II.3, el compuesto aislado de la reacción II.2 se reduce para proporcionar un compuesto heterocíclico saturado como se ha descrito antes. La hidrogenación catalítica es un método preferido de reducción. Los catalizadores típicos incluyen catalizadores de paladio, catalizadores de rodio (por ejemplo rodio sobre aluminio) y catalizadores de renio. Los catalizadores preferidos incluyen paladio sobre carbono. Los disolventes adecuados para esta reacción incluyen los alcoholes C_{1}-C_{4}, tetrahidrofurano, ácido acético en alcohol, acetato de etilo y similares. Un disolvente preferido es el etanol. La reacción se lleva a cabo típicamente en una atmósfera de hidrógeno de aproximadamente 70,32 kg/cm^{2} a aproximadamente 281,29 kg/cm^{2} a una temperatura de aproximadamente 25ºC a aproximadamente 150ºC. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo en una atmósfera de hidrógeno de aproximadamente 140,6 kg/cm^{2} aproximadamente 210,9 kg/cm^{2} a una temperatura de aproximadamente 50ºC a 100ºC. El catalizador se emplea generalmente en una cantidad que oscila aproximadamente de proporciones equimolares a aproximadamente un exceso de doce veces (en peso) del reaccionante, preferiblemente en un exceso de aproximadamente seis a diez veces (en peso) del catalizador con respecto al sustrato.
Las Reacciones II.4 y II.5 se puede utilizar para preparar compuestos de fórmula (3) que corresponden a los compuestos de fórmula (2) donde
v^{2} es
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y
V^{3} y V^{4} se definen como antes para la fórmula (2), incluyendo sus definiciones de V^{3'} y t.
La Reacción II.4 es una reacción de desprotección de amino normalizada en la que se utilizan procedimientos y métodos conocidos en la técnica para proporcionar la amina correspondiente que se utiliza después en la Reacción II.5. Se prefieren los procedimientos de desprotección química. Por ejemplo, el compuesto aislado de II.3 se puede desproteger utilizando yoduro de trimetilsililo (TMSI) en un disolvente aprótico o mezcla de disolventes a una temperatura de aproximadamente 10ºC a 60ºC, preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 20ºC a 40ºC. Los disolventes típicos incluyen cloruro de metileno, acetonitrilo, tricloroetano, y similares.
En la Reacción 11,5, el epóxido preparado en la Reacción A.5, anterior, en la que Q_{3} de la Reacción A.5 es reemplazado por V^{3}, se hace reaccionar con el compuesto aislado de la Reacción II.4 en un disolvente alcohólico a una temperatura de aproximadamente 20ºC a 100ºC. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen los alcoholes, preferiblemente isopropanol o etanol. La reacción se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de aproximadamente 80ºC.
El compuesto aislado de reacción II.5 puede se puede desproteger opcionalmente para proporcionar un compuesto de fórmula (3) donde V^{A} es hidrógeno.
El epóxido utilizado en la Reacción II.5 se puede sintetizar utilizando el Esquema de Reacción A anterior en el que Q_{3} del Esquema A es reemplazado por V^{3}.
El ácido carboxílico reaccionante de fórmula (IB)
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utilizado en el Esquema de Reacción I, en la medida que no está disponible en el mercado, se puede preparar utilizando procedimientos conocidos. Más concretamente, este reaccionante se puede preparar mediante sustitución, oxidación o ambas adicionales de un compuesto carbocíclico o heterocíclico disponible en el mercado. Por ejemplo, los compuestos carbocíclicos o heterocíclicos de fórmula
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se pueden oxidar utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Específicamente, el compuesto de fórmula
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se puede hacer reaccionar con un agente oxidante tal como dióxido de selenio o permanganato de potasio a temperaturas de aproximadamente 0ºC a 200ºC en un disolvente mutuamente inerte, tal como agua o éter difenílico.
Un segundo método para preparar compuestos de fórmula (IB) implica proteger un grupo carbocíclico o heterocíclico apropiadamente sustituido con un grupo protector de carboxi, y después sustituir adicionalmente el grupo carbocíclico o heterocíclico utilizando procedimientos conocidos en la técnica. El grupo protector de carboxi se puede separar después utilizando procedimientos conocidos en la técnica para proporcionar el ácido carboxílico reaccionante de fórmula (IB).
El término "grupo protector de carboxi" según se utiliza en la memoria hace referencia a sustituyentes del grupo carboxi empleados comúnmente para bloquear o proteger la funcionalidad carboxi mientras reaccionan otros grupos funcionales del compuesto. Los ejemplos de tales grupos protectores de carboxi incluyen metilo, p-nitrobencilo, p-metilbencilo, p-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2,4,6-trimetoxibencilo, 2,4,6-trimetilbencilo, pentametil-bencilo, 3,4-metilendioxibencilo, benzhidrilo, 4,4'-dimetoxibenzhidrilo, 2,2',4,4'-tetrametoxibenzhidrilo, t-butilo, t-amilo, tritilo, 4-metoxitritilo, 4,4'-dimetoxi-tritilo, 4,4',4''-trimetoxitritilo, 2-fenilprop-2-ilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2,2,2-tricloroetilo, b-(di(n-butil)metilsilil)etilo, p-toluenosulfoniletilo, 4-nitrobencilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, 1-(trimetilsililmetil)prop-1-en-3-il y radicales similares. Un método preferido para proteger el grupo carboxi implica convertir el radical carboxi en un radical amida y después volver a hidrolizar la amida para proporcionar el sustituyente carboxi deseado. Se encuentran ejemplos adicionales de estos grupos en "Protective Groups en Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Capítulo 5 de E. Haslam, y "Protective Groups en Organic Synthesis", John Wiley y Sons, New York, N.Y., 1981, Capítulo 5 de T.W. Greene.
Un procedimiento preferido para proteger el radical carboxi implica la activación del ácido del radical carboxi, seguido de la formación de una amida. Por ejemplo, el radical carboxi se puede convertir en un haluro de acilo, anhidruro de acilo, acilimidazol y similares, preferiblemente en presencia de un captador de ácido para formar un radical carboxi activado. Se emplea típicamente un cloruro de ácido disponible en el mercado, obviando la necesidad de una nueva activación del ácido. Los captadores de ácido preferidos son las trialquilaminas, preferiblemente trietilamina. La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico tal como éter dietílico, cloruro de metileno o similares. Un disolvente preferido es el cloruro de metileno. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso, y los reaccionantes estén suficientemente solubilizados para efectuar la reacción deseada. El radical carboxi activado se hace reaccionar después con una amina, R^{11}-NH_{2}, por ejemplo anilina, en un disolvente aprótico para proporcionar una amida reaccionante
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que se puede sustituir después adicionalmente según procedimientos conocidos.
La amida reaccionante
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se puede sustituir adicionalmente mediante desprotonación en orto del grupo
27
para proporcionar el anión correspondiente seguido de reacción con una variedad de reactivos tales como haluros de alquilo, o agentes halogenantes tales como bromo. La amida reaccionante se desprotona generalmente dos veces utilizando dos equivalentes de una base fuerte tal como n-butil litio o sec-butil litio con respecto a la amida reaccionante, opcionalmente en presencia de un agente de coordinación de metales tal como tetrametiletilendiamina (TMEDA). La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico, preferiblemente un éter tal como éter dietílico, tetrahidrofurano o similares a una temperatura de aproximadamente -78ºC a aproximadamente 25ºC.
El compuesto resultante se puede hidrolizar después utilizando procedimientos conocidos en la técnica para proporcionar el ácido carboxílico reaccionante sustituido deseado de fórmula (IB). Por ejemplo, una hidrólisis adecuada implica exponer la amida reaccionante a un ácido mineral, ácido orgánico, o mezcla de ácido mineral/orgánico fuerte a una temperatura de aproximadamente 100ºC a aproximadamente 160ºC. Los ácido típicos que se pueden utilizar en esta reacción incluyen ácido bromhídrico, ácido acético, ácido clorhídrico y similares. Se puede emplear opcionalmente un tubo sellado para acelerar la velocidad de reacción.
Un tercer método para preparar ácido carboxílico reaccionante sustituido de fórmula (IB) implica la diazotacion de una anilina, seguido de la extinción de la sal de diazonio resultante. Específicamente, el radical amino de la anilina reaccionante se convierte en una sal de diazonio mediante reacción con ácido nitroso. El ácido nitroso se puede producir en situ tratando el nitrito de sodio con una solución acuosa de un ácido fuerte tal como ácido clorhídrico, o ácido azufreico. Esta reacción se lleva a cabo típicamente a 5ºC o menos. La sal de diazonio se extingue después mediante reacción con un reactivo adecuado para proporcionar el sistema aromático sustituido deseado. Los reactivos de extinción representativos incluyen agua, cianuro, haluro, ácido azufreico acuoso, y similares. Típicamente, la reacción se calentará para facilitar la reacción deseada.
Existen una variedad de reacciones que son conocidas en la técnica que se pueden utilizar para producir las sustituciones deseadas en los anillos carbocíclicos o heterocíclicos. Por ejemplo, existen una variedad de reacciones de sustitución electrofílica y nucleofílica aromáticas reseñadas en los capítulos 11 y 13 de "Advanced Organic Chemistry" 3ª edición, Wiley, 1985, de March. J.
Además, los compuestos de fórmula (IB) se pueden preparar carboxilando un compuesto carbocíclico o heterocíclico apropiadamente sustituido. La carboxilación se puede completar utilizando varios reactivos diferentes. Por ejemplo, el reactivo carbocíclico o heterocíclico se puede hacer reaccionar con fosgeno, cloruro de oxalilo, hidrocloruro de urea, o cloruro de N,N-dietilcarbamoilo en presencia de catalizadores de Friedel-Crafts. A variación de este método implica hacer reaccionar el reactivo carbocíclico o heterocíclico con un tiolcloroformiato de alquilo (RSCOCl), o un cloruro de carbamoilo (H_{2}NCOCl) para proporcionar una amida y un éster de tiol, respectivamente. La amida y el éster de tiol se pueden hidrolizar después para proporcionar el grupo carboxi deseado. March, en 491.
Los ejemplos de los catalizadores de Friedel-Crafts incluyen los ácidos de Lewis, tales como bromuro de aluminio (AlBr_{3}), cloruro de aluminio (AlCl_{3}), cloruro de hierro (III) (FeCl_{3}), tricloruro de boro (BCl_{3}), trifluoruro de boro (BF_{3}), y similares. Véanse también, "Advanced organic Chemistry", 3rd edition, Wiley, 1985 de March, J.; "Friedel-Crafts y Related Reactions", Interscience, New York, 1963-1965 de Olah; y "Friedel-Crafts Chemistry", Wiley, New York, 1973 de Olah.
Adicionalmente, los ácidos quinolinocarboxílicos reaccionantes se pueden preparar haciendo reaccionar una anilina apropiadamente sustituida con glicerol utilizando la reacción de Skraup descrita por Bradford, L. et al., en J. Chem. Soc., 1947, pág. 437. Por ejemplo, el ácido 3-aminobenzoico se puede hacer reaccionar con glicerol en presencia de un agente oxidante tal como ácido m-nitrobencenosulfónico o m-nitrobencenosulfonato de sodio en una solución acuosa al 60-75% de ácido azufreico para proporcionar la quinolina sustituida con carboxi deseada. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente 35ºC a la temperatura de reflujo durante una a seis horas, preferiblemente de aproximadamente 50ºC a la temperatura de reflujo durante dos a cuatro horas.
Los reaccionantes resultantes se pueden reducir o hidrogenar después utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Véase p. ej., March, en 700. Un procedimiento preferido implica la hidrogenación catalítica, por ejemplo combinando el ácido quinolinocarboxílico reaccionante con gas hidrógeno en presencia de un catalizador. Un catalizador preferido es paladio sobre carbono. Los disolventes típicos adecuados para su uso en esta reacción incluyen disolventes orgánicos cualesquiera como acetato de etilo. La elección del disolvente no es crítica con tal que el disolvente empleado sea inerte para la reacción en curso. Generalmente la reacción se completa sustancialmente al cabo de aproximadamente 1 a 24 horas cuando se lleva a cabo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 25ºC a aproximadamente 100ºC.
Según otras realizaciones, los compuestos de fórmula IA, en los que Q_{3} es reemplazado por R^{1}, se pueden preparar según el siguiente Esquema de Reacción B.
28
donde:
R^{b} es un grupo protector de amino; y
R^{1}, R^{3}, y T^{2} se definen como antes para la fórmula 1(B), incluyendo la definición de R^{4}, R^{5}, R^{6}, y p.
El Esquema de Reacción B, anterior, se completa llevando a cabo las reacciones 1-6 en orden sucesivo. Una vez completada la reacción, el compuesto intermedio se puede aislar, si se desea mediante procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, el compuesto se puede cristalizar y después recoger mediante filtración, o el disolvente de reacción se puede separar mediante extracción, evaporación o decantación. El compuesto intermedio se puede purificar adicionalmente, si se desea, mediante técnicas comunes tales como cristalización o cromatografía sobre soportes sólidos tales como gel de sílice o alúmina, antes de llevar a cabo la siguiente etapa del esquema de reacción.
En la Reacción B.1, la reacción se lleva a cabo típicamente mediante activación, esto es, convirtiendo un:
29 adecuadamente sustituido en el cloruro de acilo o bromuro de acilo correspondiente mediante reacción con cloruro de tionilo, bromuro de tionilo, tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo, pentabromuro de fósforo o pentacloruro de fósforo según procedimientos y en condiciones conocidas en la técnica. Los compuestos adecuados:
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están disponibles en el mercado o se preparan mediante procedimientos normalizados conocidos en la técnica.
En la Reacción B.2, el cloruro de acilo o bromuro de acilo, preparado en la Reacción B.1, típicamente se hace reaccionar con amoniaco o una amina primaria o secundaria que tiene la fórmula
H-NR^{4}R^{4},
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donde R^{4}, R^{5}, R^{6} y p se definen como antes para la fórmula 1(B), en un disolvente aprótico no polar o mezcla de disolventes en presencia o ausencia de un captador de ácido para proporcionar la amida correspondiente. La reacción se lleva a cabo típicamente a una temperatura de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 25ºC. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen éteres e hidrocarburos clorados, preferiblemente éter dietílico, cloroformo o cloruro de metileno. Preferiblemente, esta reacción se lleva a cabo en presencia de un captador de ácido tal como una amina terciaria, preferiblemente trietilamina.
En la Reacción B.3, la amida preparada en la Reacción B.2, se hace reaccionar con una base fuerte en presencia de un agente solubilizante para proporcionar el anión correspondiente que después se hace reaccionar en la Reacción B.4 con una amida de Weinreb para proporcionar una cetona. Reacción B.3 se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente -78ºC a aproximadamente 0ºC. Las bases típicas que se utilizan en la Reacción B.3 incluyen bases de amiduro de litio y bases de alquil litio, preferiblemente bases de alquil(C_{1}-C_{4})litio bases y bases de dialquil(C_{1}-C_{4})amiduro de litio. Los agentes solubilizantes típicos para la Reacción 3 son tetrametilalquilen(C_{1}-C_{4})diaminas, preferiblemente tetrametiletilendiamina. La Reacción B.4 se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente -80ºC a aproximadamente -40ºC. Los disolventes típicos para las Reacciones B.3 y B.4 incluyen éteres, preferiblemente tetrahidrofurano. En la Reacción B.4, el anión se emplea generalmente en una cantidad que oscila de aproximadamente proporciones equimolares a aproximadamente un exceso tres veces molar del anión, preferiblemente de aproximadamente un exceso dos veces molar del anión con respecto a la amida de Weinreb reaccionante.
En la Reacción B.5, la cetona preparada en la Reacción B.3, se reduce al alcohol correspondiente utilizando un agente reductor adecuado. La reacción se lleva a cabo en un disolvente prótico a una temperatura de aproximadamente -25ºC a aproximadamente 25ºC. Los agentes reductores típicos para esta reacción incluyen borohidruro de sodio, borohidruro de litio, hidruro de diisobutilaluminio, e hidruro de sodio y bis(2-metoxietoxi)aluminio. Un agente reductor preferido es borohidruro de sodio. Los disolventes próticos típicos T para esta reacción incluyen alcoholes, preferiblemente etanol.
La Reacción B.6 es una reacción de desprotección de amino normalizada en la que se utilizan procedimientos y métodos conocidos en la técnica para proporcionar la amina correspondiente que se utiliza en la Reacción I anterior. Esta amina se puede hacer reaccionar sin purificación, pero se purifica primero preferiblemente.
La amida de Weinreb utilizada como reaccionante en la Reacción B.4 se prepara típicamente haciendo reaccionar un aminoácido con el grupo amino protegido con N-metoxi-N-metil-amina en presencia de un agente promotor, un captador de ácido, y un agente de acoplamiento. La reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico o mezcla de disolventes a una temperatura de aproximadamente -25ºC a 25ºC. Un agente promotor preferido para esta reacción es HOBT\cdotH_{2}O. Los captadores de ácido preferidos son las alquilaminas terciarias, preferiblemente trietilamina o N-metil-morfolina. Un reactivo de acoplamiento preferido es hidrocloruro de etil-dimetilaminopropilcarbodiimida. La amida de Weinreb proporcionada mediante esta reacción se aísla preferiblemente antes de su uso en la Reacción B.4.
Los compuestos de fórmula IA, donde R^{1} reemplaza Q_{3} y donde R^{1} es -S-arilo, se preparan en el Esquema B haciendo reaccionar primero la serina con el grupo amino protegido con trifenilfosfina y azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente -80ºC a 0ºC para formar la beta-lactona correspondiente. La reacción se lleva a cabo típicamente en un éter, tal como tetrahidrofurano a una temperatura de aproximadamente -80ºC a -50ºC. A continuación, el anillo de lactona se abre para proporcionar un compuesto que tiene la estructura:
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haciendo reaccionar la lactona con un tioanión apropiadamente sustituido que tiene la estructura, -S-arilo. El compuesto tioaniónico se forma preferiblemente haciendo reaccionar el tiol correspondiente con una base fuerte, tal como hidruro de sodio o hidruro de potasio. Esta reacción se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 40ºC y en una atmósfera inerte, por ejemplo de nitrógeno. Los disolventes típicos para esta reacción incluyen éteres, preferiblemente tetrahidrofurano. La amida reaccionante deseada se forma después haciendo reaccionar el ácido carboxílico reaccionante resultante con N-metoxi-N-metil-amina en presencia de un agente promotor, un captador de ácido y un agente de acoplamiento sustancialmente como se ha descrito antes.
Alternativamente, los compuestos de fórmula (IA), donde R^{1} reemplaza Q_{3} y donde R^{1} es -S-arilo, se pueden preparar en el Esquema B utilizando los procedimientos detallados en Photaki, JACS, 85, 1123 (1963), y Sasaki, N.A. et al., Tetrahedron Letters, 28, 6069 (1987). Por ejemplo, los compuestos se pueden preparar haciendo reaccionar la serina doblemente protegida (protegida en carboxi y protegida en amino) con cloruro de toluenosulfonilo en presencia de dimetilaminopiridina (DMAP) y un captador de ácido tales como piridina en un disolvente aprótico tal como cloruro de metileno para formar el compuesto toluenosulfonato correspondiente que se pueden hacer reaccionar después con un tioanión apropiadamente sustituido que tiene la estructura. -S-arilo. El compuesto tioaniónico se forma preferiblemente haciendo reaccionar el tiol correspondiente con una base fuerte como se ha descrito antes. El grupo protector de carboxi se puede separar después de la ariltioanilina doblemente protegida resultante utilizando condiciones conocidas en la técnica.
Según ciertas realizaciones, se prepara un intermedio para elaborar compuestos de la presente invención como sigue. El intermedio tiene la fórmula 4:
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donde:
R^{1} es arilo, o -S-arilo;
R^{10} es hidrógeno o un grupo protector de amino;
R^{0} es alquilo C_{1}-C_{4} o -CH_{2}-piridilo;
R^{3} es un grupo que tiene la estructura:
1) -C(O)-N^{R}4R^{4},
2)
\vskip1.000000\baselineskip
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o
3)
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500
p es 4 o 5;
R^{4} en cada aparición es independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o hidroxialquilo C_{1}-C_{4}; y
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, o hidroxialquilo C_{1}-C_{4};
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El intermedio que tiene la fórmula 4 se elabora típicamente mediante el procedimiento que comprende:
(a) reducir un compuesto de fórmula
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para proporcionar un compuesto de piperazina;
(b) alquilar el compuesto de piperazina para proporcionar un compuesto de fórmula
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y después
(c) hacer reaccionar el compuesto de piperazina de la etapa (b) con un epóxido de fórmula
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donde R^{b} es un grupo protector de amino;
en un disolvente alcohólico a una temperatura de aproximadamente 20ºC a 100ºC para formar un compuesto de fórmula 4 donde R^{10} es un grupo protector de amino; y
d) separar opcionalmente el grupo protector de amino para formar un compuesto de fórmula 4 donde R^{10} es hidrógeno.
Las siguientes Preparaciones y Ejemplos ilustran aspectos de la invención. Estos ejemplos están con fines ilustrativos y no se pretende que limiten en alcance de la invención.
Las abreviaturas para los términos punto de fusión, espectros de resonancia magnética nuclear, espectros de masas por impacto de electrones, espectros de masas de desorción por campo, espectros de masas por bombardeo de átomos rápidos, espectros infrarrojos, espectros ultravioleta, análisis elemental, cromatografía líquida de alta resolución, y cromatografía en capa fina son, respectivamente, p.f., RMN, EIMS, MS(FD), MS(FAB), IR, UV, Análisis, HPLC, y TLC. Además, las absorciones máximas enumeradas para los espectros IR son las de interés, no todos los máximos observados.
Junto con los espectros de RMN, se utilizan las siguientes abreviaturas: singlete (s), doblete (d), doblete de dobletes (dd), triplete (t), cuartete (q), multiplete (m), doblete de multipletes (dm), singlete ancho (s ancho), doblete ancho (d ancho), triplete ancho (t ancho), y multiplete ancho (m ancho). J indica la constante de acoplamiento en Hertzios (Hz). A no ser que se indique de otro modo, los datos de RMN hacen referencia a la base libre del compuesto sujeto.
Los espectros de RMN se obtuvieron en un aparato Bruker Corp. 270 MHz o en un aparato General Electric QE-300 300 MHz. Los desplazamientos químicos se expresan en valores delta (ppm campo bajo del tetrametilsilano) MS(FD). Los espectros se recogieron en un Espectrómetro Varian-MAT 731 utilizando emisores dendríticos de carbono. Los espectros EIMS se obtuvieron en un aparato CEC 21-110 de Consolidated Electrodynamics Corporation. Los espectros MS(FAB) se obtuvieron en un Espectrómetro VG ZAB-3. Los espectros IR se obtuvieron en un aparato Perkin-Elmer 281. Los espectros UV se obtuvieron en un aparato Cary 118. La TLC se llevó a cabo en placas de gel de sílice E. Merck. Los puntos de fusión están sin corregir.
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Preparación 1
A. [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2- [3'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
Una solución de [1'S-(1'R*,1R*)]1-1-[1'-N-(benciloxicarbonil)amino-2'-(fenil)etil]oxirano y [3S-(3R*,4aR*,8aR*)]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida en etanol absoluto se calentó a 80ºC durante la noche. La mezcla de reacción se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo en cloruro de metileno al 10-50%) para proporcionar 6,47 g de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 75%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,29 (s, 9H), 1,25-2,05 (m, 2H), 2,20-2,35 (m, 2H), 2,55-2,70 (m, 11H), 2,85-3,10 (m, 3H), 3,24 (s ancho, 1H), 3,82 (s ancho, 1H), 3,98 (s ancho, 1H), 4,99 (s ancho, 2H), 5,16-5,18 (m, 1H), 5,80 (s ancho, 1H), 7,05-7,38 (m, 10H).
IR (CHCl_{3}): 3600-3100 (ancho), 3031, 2929, 1714, 1673, 1512, 1455, 1368, 1232, 1199, 1047 cm^{-1}. MS(FD): m/e 536 (M^{+}).
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B. [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarbo-xamida
Una suspensión agitada rápidamente de 6,37 g (11,91 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1A y 1,2 g de paladio sobre carbono al 10% en 200 mL de etanol absoluto se colocó en una atmósfera de hidrógeno. Después de aproximadamente 48 horas, la mezcla de reacción se filtró a través de celite y se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 5,09 g del compuesto del subtítulo deseado. Este compuesto se utilizó sin purificación adicional.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), -1,40-1,95 (m, 10H), 2,25-2,48 (m, 2H), 2,59-2,75 (m, 3H), 2,80-3,40 (m, 7H), 3,75-3,90 (m, 1H), 6,19 (s ancho, 1H), 7,18-7,35 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3600-3100 (ancho), 2929, 2865, 1671, 1515, 1455, 1367, 1245, 1047 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 402 (M^{+}, 100).
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Preparación 2
A. Ácido 2R-N(Benciloxicarbonil)amino-3-naft-2-iltiopropanoico
A una solución de 1,28 g (8,00 mmoles) de naftaleno-2-tiol en 30 mL de tetrahidrofurano, se le añadieron lentamente 1,77 g (8,16 g) de hidruro de sodio al 60%, en nitrógeno. Después de agitar durante aproximadamente 15 minutos, se añadió lentamente una solución de N(benciloxicarbonil)serino-\beta-lactona en 20 mL de tetrahidrofurano. La mezcla de reacción se dejó reaccionando a temperatura ambiente durante aproximadamente una hora, y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó sucesivamente con bisulfato de sodio 0,5N y una solución saturada de salmuera. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea para proporcionar 2,08 g de un sólido de color amarillo pálido.
Rendimiento: 68%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 3,42-3,61 (m ancho, 2H), 5,53-5,76 (s ancho, 1H), 4,85-5,08 (m ancho, 2H), 5,54-5,76 (s ancho, 1H). 7,06-7,97 (m, 12H).
[\alpha]_{D} -55,72º (c 1,0, MeOH).
IR (KBr): 3348, 3048, 1746, 1715, 1674, 1560, 1550, 1269, 1200, 1060 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 381 (M^{+}), 381 (100).
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B. 3R-1-Diazo-2-oxo-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-(naft-2-iltio)butano
A una solución fría (-30ºC) de 15,38 g (40,3 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2A en 230 mL de acetato de etilo, se le añadieron lentamente 5,62 mL (40,3 mmoles) de trietilamina, en nitrógeno a través de una jeringa. A la solución resultante se le añadieron después 7,84 mL (60,5 mmoles) de cloroformiato de isobutilo, a través de una jeringa. En un matraz separado, se añadieron cuidadosamente 10 g de N(metil)-N(nitro)-N(nitroso)-guanidina a una mezcla bicapa de 170 mL de éter dietílico y 170 mL de una solución 5N de hidróxido de sodio, dando como resultado un gran desprendimiento de gas. Cuando esta reacción estuvo sustancialmente completa, la capa orgánica se decantó de la capa acuosa sobre hidróxido de potasio y se secó. Esta formación y adición de diazometano se repitió utilizando cantidades idénticas de éter dietílico e hidróxido de sodio y 30 g de N(metil)-N(nitro)-N(nitroso)-guanidina. El diazometano reaccionante resultante se añadió después a la solución de anhídrido mixto preparada antes y la mezcla de reacción se dejó reaccionando fría (-30ºC) durante aproximadamente 20 minutos. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, se hizo burbujear nitrógeno a través de la solución utilizando a una pipeta Pasteur pulida al fuego para eliminar cualquier diazometano en exceso y después la solución se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo en cloruro de metileno al 10%) para proporcionar 13,62 g de un aceite de color amarillo.
Rendimiento: 83%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 3,32-3,46 (m, 2H), 4,40-4,67 (m, 1H), 5,00-5,09 (m, 2H), 5,44 (s, 1H), 5,76 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25-7,86 (m, 12H).
C. 3R-1-Cloro-2-oxo-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-(naft-2-iltio)butano
Una corta descarga (de aproximadamente 2 segundos) de ácido clorhídrico anhidro (gas) se hizo pasar a través de una solución fría (-20ºC) de 13,62 g (33,59 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2B en 230 mL de éter dietílico, dando como resultado el desprendimiento de un gas. Este procedimiento se repitió teniendo cuidado de no añadir ácido clorhídrico en exceso. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la solución se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo en cloruro de metileno al 10%) para proporcionar 12,05 g de un sólido de color tostado pálido.
Rendimiento: 87%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 3,41 (dd, J-12, 6 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 12,6 Hz, 1H), 4,18 (AB q, J = 41,9 Hz, J = 15,9 Hz, 2H), 4,77 (dd, J = 9, 3 Hz, 1H), 5,04 (AB q, J = 12 Hz, J = 10,4 Hz, 2H), 5,59 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,24-7,85 (m, 12H).
[\alpha]_{D} -80,00º (c 1,0, MeOH).
IR (CHCl_{3}): 3426, 3031, 3012, 1717, 1502, 1340, 1230, 1228, 1045 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 413 (M^{+}), 413 (100).
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D. [3R-(3R*,4S*)]-1-Cloro-2-hidroxi-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-(naft-2-iltio)butano
A una solución fría (0ºC) de 530 mg (1,28 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2C, en 10 mL de tetrahidrofurano y 1 mL de agua, se le añadieron 73 mg (1,92 mmoles) de borohidruro de sodio. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa según se indicó mediante TLC, la solución se ajustó a pH 3 utilizando 10 mL de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y 500 \muL de una solución 5N de ácido clorhídrico. La solución resultante se extrajo dos veces con cloruro de metileno y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y después se concentraron a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (eluyente de cloruro de metileno) para proporcionar 212 mg de un sólido de color tostado.
Rendimiento: 40%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 3,40 (s, 2H), 3,61-3,71 (m, 2H), 3,97-3,99 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 5,16 (s ancho, 1H), 7,21-7,83 (complejo, 12H).
MS(FD): m/e 415 (M^{+}), 415 (100).
[\alpha]_{D} -47,67º (c 0,86, MeOH).
IR (CHCl_{3}): 3630, 3412, 3011, 1720, 1502, 1236, 1044 cm^{-1}.
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E. [1'R-(1'R*,1S*)1-1-[(1'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-(naft-2-iltio)etil]oxirano
Una solución de 31 mg (0,55 mmoles) de hidróxido de potasio en 1 mL de etanol se añadió a una solución de 190 mg (0,46 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2D, en 6 mL de una solución de etanol/acetato de etilo 1:2. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se vertió en una mezcla de agua/cloruro de metileno. Las capas resultantes se separaron, y la capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (eluyente de acetato de etilo en cloruro de metileno al 10%) para proporcionar 172 mg de un sólido de color tostado claro.
Rendimiento: 99%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 2,76 (s ancho, 2H) 3,01 (s ancho, 1H), 3,31 (d, J = 5 Hz, 2H), 3,77 (s ancho, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,22 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,25-7,85 (complejo, 12H).
[\alpha]_{D} -125,42º (c 0,59, MeOH).
MS (FD): m/e 379 (M^{+}), 379 (100).
IR (CHCl_{3}): 3640, 3022, 2976, 1720, 1502, 1235, 1045 cm^{-1}.
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F. [2S-(2R*,2'R*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-(N-benciloxicarbonil)amino-4'-(naft-2-iltio)-butil]piperidino-2-N-(t-butil)carboxamida
Una solución de 0,51 g (1,34 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2E y 0,26 g (1,41 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4C en 25 mL de isopropanol se calentó a 55ºC durante aproximadamente cuarenta y ocho horas. La mezcla de reacción resultante se enfrió y después se concentró a presión reducida para proporcionar una sustancia bruta. Esta sustancia se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 4 mm; eluyente de acetona al 10% en cloruro de metileno) para proporcionar 104 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 14%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,29 (s, 9H), 1,44-1,82 (m, 6H), 2,19 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 3,09 (m, 1H), 3,46 (m, 2H), 4,00 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 5,73 (d, 1H), 6,01 (s ancho, 1H), 7,23-7,34 (m, 5H), 7,45 (m, 3H), 7,72-7,83 (m, 4H).
MS(FD): m/e 563 (M^{+}, 100).
G. [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-amino-4'-(naft-2-iltio)butil]piperidino-2-N-(t-butil)carboxamida
Una solución que contenía 1,05 g (0,18 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2F en 10 mL de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético se hizo reaccionar durante aproximadamente una hora. La mezcla de reacción resultante se concentró, se formó el azeotropo tres veces con tolueno, se volvió a disolver en metanol que contenía 4,5 mL de cada uno de dietilamina e hidróxido de amonio y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno que contenía ácido acético al 1%) para proporcionar 64 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 8,0%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,29 (s, 9H), 1,52-1,73 (m, 6H), 1,84 (m, 1H), 2,31-2,43 (m, 2H), 2,75-3,04 (m, 5H), 3,17 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 6,22 (s ancho, 1H), 7,47 (m, 3H), 7,73-7,82 (m, 4H). MS(FD): m/e 430 (M^{+}, 100).
Preparación 3
A. 2S-N-(Benciloxicarbonil)-2-pirrolidinocarboxilato, éster pentafluorofenílico
A una solución fría (0ºC) de 30 g (0,12 moles) de ácido 2S-N(benciloxicarbonil)-2-pirrolidinocarboxílico y 25,8 g (0,14 moles) de pentafluorofenol en 450 mL de tetrahidrofurano, se le añadieron 27,7 g (0,14 moles) de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) en una porción, seguido de 150 mL de cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se templó a la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante aproximadamente cuatro horas. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se disolvió en 500 mL de acetato de etilo y se lavó sucesivamente con agua, carbonato de potasio, 1N ácido clorhídrico y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar un sólido. Este sólido se volvió a disolver en hexano y se lavó con carbonato de potasio, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 45,95 g del compuesto del subtítulo deseado.
Rendimiento: 92%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,95-2,15 (m, 2H), 2,20-2,35 (m, 1H), 2,35-2,50 (m, 1H), 3,50-3,75 (m, 2H), 4,65-4,75 (m, 1H), 5,02-5,30 (m, 2H), 7,20-7,45 (m, 5H).
B. 2S-N-(Benciloxicarbonil)pirrolidino-2-N(t-butil)carboxamida
A una solución fría (0ºC) solución de 45,90 g (0,111 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 3A en 100 mL de cloruro de metileno anhidro, se le añadieron lentamente 100 mL (0,952 mmoles) de t-butilamina. La mezcla de reacción se templó a la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante aproximadamente una hora y después se diluyó con 1000 mL de cloruro de metileno y después se lavó sucesivamente con carbonato de potasio 1N, ácido clorhídrico 1N, carbonato de potasio 1N, y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, y después se filtró en un tapón utilizando acetato de etilo al 50% en hexano para proporcionar 37,74 g del compuesto deseado que se utilizó sin purificación adicional.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,95-1,50 (m, 9H), 1,70-2,40 (m, 4H), 3,30-3,60 (m, 2H), 4,10-4,30 (m, 1H), 4,95-5,35 (m, 2H), 5,65 (s ancho, 0,5H), 6,55 (s ancho, 1H), 7,20-7,50 (m, 5,5H).
C. 2S-Pirrolidino-2-N-(t-Butil)carboxamida
El compuesto del subtítulo de la Preparación 3B (2,71 g, 8,9 mmoles) se desprotegió sustancialmente como se ha detallado en la Preparación 1B, utilizando 500 mg de paladio sobre carbono al 10% y gas hidrógeno (1 atmósfera) en 200 mL de etanol.
Rendimiento: 1,53 g (100%).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,35 (s, 9H), 1,60-1,75 (m, 2H), 1,76-1,90 (m, 1H), 2,00-2,15 (m, 1H), 2,58 (s ancho, 1H), 2,80-3,05 (m, 2H), 3,55-3,65 (m, 1H), 7,45 (s ancho, 1H).
D. [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[3'-N(Benciloxicarbonil)-amino-2'-hidroxi-4'-fenilbutil]pirrolidino-2-N-(t-butil)carboxamida
Una solución que contenía 122 mg (0,72 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 3C y 200 mg (0,68 mmoles) de [1S-(1R*,1'R*)]-1-[(1'-N-(benciloxicarbonil)amino-2'-fenil)etil]oxirano en 10 mL de metanol se agitó durante la noche. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El compuesto deseado se purificó utilizando cromatografía en columna (eluyente en gradiente de metanol al 2-4% en cloruro de metileno) para proporcionar 232,2 mg de un sólido amorfo claro.
Rendimiento: 55%.
[\alpha]_{D} -56,97º (C=0,27, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), 1,55-1,95 (m, 4H), 2,05-2,25 (m, 1H), 2,40-2,55 (m, 1H), 2,65-2,75 (m, 2H), 2,80-3,00 (m, 3H), 3,15-3,30 (m, 1H). 3,65-3,75 (m, 1H), 3,85-3,95 (m, 1H), 4,86 (d ancho, J = 1,1 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H), 6,95 (m, 1H), 7,15-7,40 (m, 10H).
IR (CHCl_{3}): 3700-3100 (ancho), 3434, 3031, 2976, 1720, 1664, 1604, 1512, 1455, 1394, 1367, 1343, 1233, 1156, 1107, 1063, 1028, 911 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 468 (M^{+}, 100)
E. [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenilbutil]pirrolidino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del subtítulo de la Preparación 3D (222 mg, 0,47 mmoles) se desprotegió sustancialmente como se ha detallado en la Preparación 1B, utilizando 67 mg de paladio sobre carbono al 10% y gas hidrógeno (1 atmósfera) en 15 mL de etanol. El compuesto deseado se purificó utilizando cromatografía en columna (eluyente de isopropanol al 10% en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 0,75%) para proporcionar 80 mg de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 51%.
[\alpha]_{D} -55,26º (c=0,23, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,80-3,70 (m, 25H), 6,90-7,40 (m, 6H).
IR (CHCl_{3}):- 3692, 3600-3200 (ancho), 2975, 1657, 1603, 1522, 1497, 1479, 1455, 1393, 1366, 1232, 1198, 1137, 1049, 882 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 334 (M^{+}, 100).
\newpage
Preparación 4
A. Ácido 2S-N-(t-butoxicarbonil) piperidino-2-carboxílico
Una solución de 1,64 g de carbonato de sodio en 15 ml de agua se añadió a una solución fría (0ºC) de 2,0 g (15,5 moles) de ácido 2S-piperidinocarboxílico en 50 mL de dioxano. Después de aproximadamente diez minutos, se añadieron a la mezcla 3,7 g (17,0 moles) de dicarbonato de di-t-butilo. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente seis horas, se concentró hasta un cuarto de su volumen original y después se aciduló a pH 2 utilizando hidrogenosulfato de sodio 1M y acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron, y las capas orgánicas se lavaron con una solución saturada de salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y después se redujeron hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 2,67 g de un sólido cristalino de color blanco.
Rendimiento: 75%.
[\alpha]_{D} -55,26º (c=0,23, MeOH)
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,20-1,80 (m, 15H), 2,15-2,30 (m, 1H), 2,85-3,10 (m, 1H), 3,90-4,10 (m, 2H), 4,70-5,00 (m, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3700-1800 (ancho), 3025, 3018, 3011, 2980, 2947, 2865, 1716, 1685, 1449, 1394, 1368, 1280, 1252, 1162, 1147, 1129 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 229 (M^{+}, 100).
42
B. 2S-N-(t-Butoxicarbonil)piperidino-2-carboxilato, éster pentafluorofenílico
A una solución fría (0ºC) de 2,53 g (11,03 moles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4A y 2,34 g (12,7 moles) de ácido pentafluorobenzoico en 50 mL de tetrahidrofurano, se le añadieron 2,42 g (12,7 moles) de EDC. La mezcla de reacción resultante se templó a la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante aproximadamente dos horas. La mezcla se concentró después a presión reducida para proporcionar un sólido. Este sólido se volvió a disolver en cloruro de metileno y se lavó sucesivamente con carbonato de potasio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 3,85 g de un aceite claro que se solidificó al reposar.
Rendimiento: 88%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,20-1,90 (m, 15H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,90-3,15 (m, 1H), 3,90-4,15 (m, 1H), 5,05-5,35 (m, 1H).
C. 2S-N-(t-Butoxicarbonil)piperidino-2-N-t-butilcarboxamida
A una solución fría (0ºC) de 3,8 g (9,6 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4B en 200 mL de cloruro de metileno, se le añadieron lentamente 2,53 mL (24,0 mmoles) de t-butilamina. La mezcla de reacción se hizo reaccionar durante aproximadamente cuatro horas y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver en cloruro de metileno y después se lavó sucesivamente con carbonato de potasio 1M y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se purificó utilizando cromatografía en columna (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 10-20% en hexano) para proporcionar 2,52 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 92%.
[\alpha]_{D} -41,47º (c=0,506, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,10-1,70 (m, 15H), 2,20-2,35 (m, 1H), 2,65-2,82 (m, 1H), 3,90-4,10 (m, 1H), 4,62 (s ancho, 1H).
\newpage
IR (CHCl_{3}): 3600-3300 (ancho), 2978, 2945, 2869, 1677, 1512, 1455, 1413, 1394, 1367, 1317, 1280, 1255, 1162, 1144, 1127, 1078, 1042, 868 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 284 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
43 
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D. 2S-Piperidino-2-N-t-butilcarboxamida
Una solución que contenía 1,0 g (3,5 moles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4C y 3,5 mL de ácido trifluoroacético en 25 mL de cloruro de metileno se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente dos horas. La mezcla de reacción se concentró y se formó el azeotropo una vez con tolueno. La mezcla de reacción resultante se repartió después entre cloruro de metileno y bicarbonato de sodio. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 641 mg del compuesto del subtítulo.
Rendimiento: 99%.
[\alpha]_{D} -22,45º (c=0,95, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,20-1,50 (m, 12H), 1,51-1,62 (m, 1H), 1,64 (s, 1H), 1,75-1,88 (m, 1H), 1,90-2,00 (m, 1H), 2,60-2,72 (m, 1H), 2,98-3,10 (m, 2H), 6,63 (s ancho, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3363, 3002, 2969, 2940, 2860, 1738, 1660, 1522, 1480, 1455, 1398, 1367, 1324, 1295, 1230, 1129, 1110, 852 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 184. (M^{+}, 100).
E. [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-N-[3'-(N-Benciloxicarbonil)amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butilpiperidino-2-N-t-butilcarboxamida
Una solución que contenía 195 mg (1,06 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4D y 300 mg (1,01 mmoles) de [1S-(1R*,1'R*)]-1-[(1'-N(benciloxicarbonil)amino-2'-fenil)etil]oxirano en 10 mL de isopropanol se agitó a 55ºC durante aproximadamente cuarenta y ocho horas. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El compuesto deseado se purificó utilizando cromatografía en columna (eluyente en gradiente de isopropanol al 1-5% en cloruro de metileno).
Rendimiento: 395 mg (81%).
[\alpha]_{D} -55,64º (c=0,22, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,32 (s, 9H), 1,45-1,90 (m, 6H), 2,25-2,50 (m, 2H), 2,70-3,20 (m, 5H), 3,30-3,40 (m, 1H), 3,75-4,05 (m, 2H), 4,95-5,10 (m, 3H), 6,15 (s ancho, 1H), 7,18-7,40 (m, 10H).
IR (CHCl_{3}): 3700-3100 (ancho), 3623, 3021, 2976, 1668, 1603, 1511. 1456, 1313, 1047, 878 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 482 (M^{+}, 100).
F. [2S-(2R*-,2'S*,3'R*)]-N-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butilpiperidino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del subtítulo de la Preparación 4E (371 mg, 0,77 mmoles) se desprotegió sustancialmente como se ha detallado en la Preparación 1B, utilizando 110 mg de paladio sobre carbono al 10% y gas hidrógeno en 20 mL de etanol para proporcionar 260 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 97%.
[\alpha]_{D} -64,92º (C=0,39, MeOH).
\newpage
RMN H1 (COCl_{3}): \delta 1,35 (s, 9H), 1,45-1,90 (m, 6H), 2,25-2,35 (m, 1H). 2,50-2,90 (m, 5H), 3,00-3,40 (m, 3H), 3,85-3,98 (m, 1H), 6,29 (s, 1H), 7,15-7,38 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3693, 3650-3100 (ancho), 2943, 2862, 1671, 1603, 1517, 1497, 1455, 1394, 1367, 1233, 1185, 1049, 887 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 348 (M^{+}, 100).
Preparación 5
A. Pirazino-2-N-(t-butil)carboxamida
A una suspensión de 50 g (0,403 moles) de ácido pirazino-2-carboxílico en 600 mL de tetrahidrofurano y 100 mL de dimetilformamida, se le añadieron 65,9 g (0,407 moles) de carbonildiimidazol. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar a 50ºC hasta que cesó el desprendimiento de gas. Después de enfriar la mezcla de reacción, se añadieron lentamente 73,5 g (1,00 moles) de t-butilamina. La mezcla de reacción se hizo reaccionar durante aproximadamente treinta minutos, se concentró a presión reducida, se volvió a disolver en 500 mL de cloruro de metileno y después se lavó sucesivamente con agua, ácido clorhídrico (pH 2), bicarbonato de sodio saturado, agua, hidróxido de potasio 1M, y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró para proporcionar 68,5 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 95%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,51 (s, 9H), 7,73 (s ancho, 1H), 8,49 (m, 1H), 8,72 (m, 1H), 9,38 (s, 1H),
B. (+/-)-Piperazino-2-N-(t-butil)carboxamida
Una mezcla de 68,5 g (0,382 moles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5A, 70 g (0,308 moles) de óxido de platino en 186 mL de etanol se calentó durante la noche a 40ºC en una atmósfera de hidrógeno (4,22 kg/cm^{2}). La sustancia bruta resultante se filtró y el producto filtrado se concentró para proporcionar 65 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 95%.
MS (FD): m/e 185 (M^{+}, 100).
C. (+/-)-4-(Pirid-3'-ilmetil)piperazino-2-N-(t-butil)carboxamida
A una solución de 5,0 g (0,027 moles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5B en 160 mL de una mezcla 1:1 de agua y acetonitrilo, se le añadieron 18,65 g (0,135 moles) de carbonato de potasio. La mezcla resultante se agitó vigorosamente durante la adición de 4,43 g (0,027 moles) de hidrocloruro de 3-clorometilpiridina y después se dejó reaccionando durante la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida, se suspendió en una solución de isopropanol al 20% en cloroformo y se lavó sucesivamente con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de 5% metanol en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 1%) para proporcionar 1,34 g de un aceite de color amarillo claro.
Rendimiento: 18%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,10 (s, 9H), 1,89-2,01 (m, 2H), 2,35 (m, 1H), 2,57-2,74 (m, 4H), 3,09 (m, 1H), 3,27 (s, 2H), 6,71 (s ancho, 1H), 7,03 (m, 1H), 7,44 (m, 1H) 8,26 (m, 2H).
IR (KBr): 3691, 3611, 3366, 2974, 1666, 1602, 1521, 1479, 1456, 1427, 1393, 1366, 1324, 1139, 1047, 839 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 276 (M^{+}, 100).
D. [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-(N-benciloxicarbonil)amino-4'-fenilbutil]-4-(pirid-3''-ilmetil) piperazino-2-N-(t-butil)carboxamida
Una solución que contenía 0,377 g (1,27 mmoles) de (1S-(1R*,1'R*)]-1-[(1'-N-Benciloxicarbonil)amino-2'-fenil)etil]oxirano y 0,350 g (1,27 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5C en 12 mL de isopropanol se hizo reaccionar a 45ºC durante aproximadamente cuarenta y ocho horas. La mezcla de reacción se enfrió y después se concentró a presión reducida para proporcionar una sustancia bruta. Esta sustancia se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 6 mm; eluyente en gradiente de 5-isopropanol al 10% en cloruro de metileno) para proporcionar 120 mg del isómero A y 68 mg del isómero B.
Rendimiento: 26% global.
Isómero A:
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), 2,26-2,89 (m, 13H), 3,29 (m, 1H), 3,45 (s, 2H), 3,79-3,95 (m, 3H), 4,73 (s ancho, 1H), 4,97 (s ancho, 2H), 5,20 (m, 1H), 7,14-7,29 (m, 6H) 7,57 (m, 1H), 7,82 (s ancho, 1H), 8,53 (m, 2H).
IR (KBr): 3692, 3434, 2970, 2829, 1714, 1661, 1604, 1579, 1512, 1455, 1427, 1393, 1365, 1231, 1149, 1029, 909 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 573 (M^{+}, 100).
E. [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-amino-4'-fenil]butil-4-(pirid-3''-ilmetil)piperazino-2-N-(t-butil)carboxa-mida
Una solución que contenía 0,062 g (0,11 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5D (isómero A) se agitó durante aproximadamente noventa minutos en 1,5 mL de una solución de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético. La mezcla resultante se concentró, se formó el azeotropo tres veces con tolueno, se volvió a disolver en metanol que contenía 1 mL de cada uno de dietilamina e hidróxido de amonio y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 15-25% en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 1%) para proporcionar 13 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 28%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), 2,36-3,21 (m, 15H), 3,47 (d, 2H), 3,75 (m, 1H), 7,19-7,30 (m, 6H) 7,57 (m, 2H), 8,52 (m, 2H).
MS (FD): m/e 440 (M^{+}, 100)
Preparación 6
A. [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[3'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-hidroxi-4'-feniltiobutil]-4-[pirid-3''-ilmetil]piperazi-no-2-N-t-butilcarboxamida [isómero B]
Una solución de 596 mg (1,81 mmoles) de [1S-(1R*,1'S*)]-1-[1'-N-(benciloxicarbonil)amino-2'-(feniltio)etil]oxirano y 500 mg (1,81 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5C en 15 mL de isopropanol se calentaron a 43ºC durante aproximadamente cuarenta y ocho horas. La reacción se verificó utilizando TLC (isopropanol al 10% en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 1%; Isómero A R_{f} = 0,7; Isómero B R_{f} = 0,6). Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 6 mm; eluyente en gradiente de isopropanol al 5-15% en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 1%) para proporcionar 200 mg del isómero
A en forma de una espuma de color tostado claro y 119 mg de una espuma de color blanquecino (isómero B).
Isómero A:
Rendimiento: 18%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,31 (s, 9H), 2,25-2,62 (m, 7H), 2,78-2,95 (m, 2H), 2,98-3,08 (m, 1H), 3,10-3,25 (m, 2H), 3,40-3,55 (m, 2H), 3,72-3,85 .(m, 1H), 3,90-4,00 (m, 1H), 5,05 (s, 2H), 7,01 (s ancho, 1H), 7,10-7,40 (m, 11H), 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,49 (s, 2H).
MS (FD): m/e 606 (M^{+}, 100).
Análisis para C_{33}M_{43}N_{5}O_{4}S:
Calcd: C, 65,42; H, 7,15; N, 11,56;
Encontrado: C, 65,38; H, 7,27; N, 11,36.
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Isómero B:
Rendimiento: 11%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), 2,25-2,85 (m, 8H), 3,20-3,32 (m, 3H), 3,47 (s, 2H), 3,78-3,95 (m, 2H), 5,06 (s, 2H), 5,30-5,38 (m, 1H), 7,10-7,42 (m, 12H), 7,55-7,85 (m, 2H), 8,50-8,60 (m, 2H).
MS (FD): m/e 606 (M), 497 (100).
44
B. [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-amino-4'-feniltiobutil]-4-[pirid-3''-ilmetil]piperazino-2-N-t-butilcarboxa-mida
Una solución de 110 mg (0,18 mmoles) del isómero B de la Preparación 6A en 5 mL de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver en 4 mL de hidróxido de amonio. La solución resultante se extrajo cuatro veces con porciones de 10 mL de una solución de isopropanol al 10% en cloroformo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 10-30% en cloruro de metileno que contenía hidróxido de amonio al 1%) para proporcionar 65 mg de una espuma de color amarillo claro.
Rendimiento: 72%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,25 (s, 9H), 2,25-2,78 (m, 7H), 3,00-3,32 (m, 4H), 3,47 (s, 2H), 3,60-3,75 (m, 1H), 4,18-4,35 (m, 1H), 6,90-7,65 (m, 9H), 8,40-8,60 (m, 2H).
MS(FD): m/e 473 (M^{+}, 100).
Preparación 7
A. [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[3'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-hidroxi-4'-(naft-2-iltio)]butildecahidroiso-quinolino-3-N-(t-butil)carboxamida
Se preparó una solución que contenía 165 mg (0,40 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 2E y 94 mg (0,43 mmoles) de 3-(1-N(t-butil)amino-1-oxometil) octahidro-(2H)-isoquinolina en 5 mL de etanol. La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando a 80ºC durante aproximadamente 19 horas. La solución se enfrió después a la temperatura ambiente y se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía radial (eluyente de acetato de etilo en cloruro de metileno al 10%) para proporcionar 103 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 42%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,10-1,73 (m, 20H), 2,13-2,31 (m, 2H), 2,44-2,53 (m, 1H), 2,56-2,68 (m, 1H), 2,86-2,97 (m, 1H), 3,52 (s ancho, 2H), 4,02 (s ancho, 2H), 4,98 (s, 2H), 5,65 (s, 1H), S.94, (s, 1H), 7,25-7,83 (complejo, 13H).
MS (FD): m/e 629 (M^{+}), 138 (100).
[\alpha]_{D} -92,45º (c 1,06, MeOH).
IR (CHCl_{3}): 3429, 3010, 2929, 1713, 1670, 1514, 1455, 1047 cm^{-1}.
45
B. (3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[3'-amino-2'-hidroxi-4'-(naft-2-iltio)]butildecahidro isoquinolino-3-N-(butil)carboxamida
Se preparó una solución que contenía 50 mg (0,081 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 7A y 1 mL de una solución acuosa de ácido bromhídrico al 38% en ácido acético. La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se suspendió con tolueno y después se concentró a presión reducida para proporcionar 61 mg del intermedio del subtítulo deseado. Este compuesto se utilizó bruto sin purificación en el Ejemplo 9.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,14 (s, 1H), 1,17-2,07 (complejo, 15H), 2,66-2,87 (m, 2H), 3,21-3,25 (m, 2H), 3,75 (d, J = 12 Hz, 1H), 3,85 (d, J = 6 Hz, 1H), 4,36-4,47 (m, 1H), 6,73 (s, 1H), 7,39-7,90 (complejo, 7H).
MS (FD): 483 (M^{+}), 483 (100).
Preparación 8
A. Ácido 2R-2-N(benciloxicarbonil)amino-3-feniltiopropanoico
El intermedio del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2A, utilizando 13,1 mL (127 mmoles) de tiofenol, 4,6 g (117 mmoles) de una solución de hidruro de sodio al 60% y 25,6 g (116 mmoles) de \beta-lactona de L-N(benciloxicarbonil)-serina en 450 mL de tetrahidrofurano para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de ácido acético al 0-2% en una mezcla 4:1 de cloruro de metileno/acetato de etilo) para proporcionar 27,9 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 72%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,55-7,18 (m, 10H), 5,55 (d, J = 7 Hz, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,73-4,60 (m, 1H), 3,55-3,30 (m, 2H).
IR (KBr): 3304, 3035, 1687, 1532, 736 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 332, 288, 271, 181.
46
B. 3S-1-Diazo-2-oxo-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-feniltiobutano
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2B, utilizando 12,1 g (37 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8A, 5,09 mL (37 mmoles) de trietilamina, 7,13 mL (55 mmoles) cloroformiato de isobutilo, 146 mmol de una solución de diazometano para proporcionar un residuo. La solución de diazometano se preparó utilizando 100 mL de éter dietílico, 150 mL de una solución 5N de hidróxido de sodio y 21 g (146 mmoles) de N(metil)-N(nitro)-N(nitroso)-guanidina como se describe en la Preparación 28. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 0-5% en cloruro de metileno) para proporcionar un aceite de color amarillo.
Rendimiento: 73%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,50-7,19 (m, 10H), 5,62 (d, J = 7 Hz, 1H), 5,47 (s ancho, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,50-4,32 (m, 1H), 3,33 (d, J = 6 Hz, 1H).
IR (KBr): 3012, 2115, 1720, 1501, 1367, 1228 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 356, 328, 242.
C. 3R-1-Cloro-2-oxo-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-feniltio butano
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2C, utilizando 22,3 g (63 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8B y pequeñas cantidades de ácido clorhídrico (gas) en 400 mL de éter dietílico para proporcionar 21 g de un sólido de color blanco. Este sólido se utilizó sin purificación adicional.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,50-7,15 (m, 10H), 5,56 (dd, J = 2, 6,7 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,78.-4,67 (m, 1H), 4,20 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 4,12 (d, J-15,9 Hz, 1H), 3,48-3,23 (m, 2H).
IR (KBr): 3349, 1732, 1684, 1515, 1266 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 363 (M^{+}).
47
D. (2S-(2R*,3S*))-1-Cloro-2-hidroxi-3-N-(benciloxicarbonil)amino-4-feniltiobutano
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2D, utilizando 21 g (58 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8C, y 2,4 g (63 mmoles) de borohidruro de sodio en 300 mL de tetrahidrofurano para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de metanol al 0-2% en cloruro de metileno) seguido de cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 0-2% en cloroformo) y después se recristalizó en cloruro de metileno a -78ºC para proporcionar 8,3 g del compuesto del subtítulo.
Rendimiento: 39%.
RMN H1 (CDCl_{3}): d 7,47-7,19 (m, 10H), 5,22-5,03 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,01-3,89 (m, 2H), 3,75-3,58 (m, 2H), 3,32 (d, J = 4 Hz, 2H).
IR (KBr): 3321, 2951, 1688, 1542, 1246, 738 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 366 (M^{+}), 119.
48
E. [1'R-(1'R*,1S*)]-1-[(1'-N-(benciloxicarbonil)amino-2'-feniltio)etiloxirano
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2E, utilizando 8,3 g (23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8D, 1,4 g (25 mmoles) de hidróxido de potasio en 400 mL de etanol para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 0-2% en cloruro de metileno) para proporcionar 6,4 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 85%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,45-7,15 (m, 10 H), 5,12 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 3,77-3,62 (m, 1H), 3,21 (d, J = 6 Hz, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,77 (m, 2H).
IR (KBr): 3303, 3067, 1694, 1538, 1257, 741 cm^{-1}.
MS (FD) m/e 329.
49
F. [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-(3'-N-(benciloxicarbonil)amino-2'-hidroxi-4'-(fenil)tio)butilodecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2F, utilizando 6,3 g (19 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8E, 5 g (21 mmoles) de [3S-(3R*,4aR*,8aR*)]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida en 300 mL de etanol para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 0-20% en cloruro de metileno) para proporcionar 4,3 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 40%.
RMN H1 (COCl_{3}): \delta 7,41-7,11 (m, 10H), 5,90 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,05 (d, J = 4 Hz, 2H), 4,08-3,90 (m, 2H), 3,40 (d, J = 6, 2H), 3,05 (s, 1H), 2,95-2,85 (m, 1H), 2,62-2,45 (m, 2H), 2,28-2,15 (m, 2H), 2,05-1,88 (m, 2H), 1,78-1,10 (m, 7H), 1,29 (s, 9H).
IR(KBr): 3330, 2925, 2862, 1706, 1661, 1520, 1454, 1246, 738, 694 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 568 (M^{+}), 467:
50
G. [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3,S*)]-2-[3'-amino-2'-hidroxi-4'-(fenil)tio]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcar-boxamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Procedimiento 2G utilizando 1 g (1,8 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8F y 40 mL de una solución de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético, con la excepción de que la sustancia bruta se disolvió en 30 mL de metanol. A la solución resultante, se le añadieron 2 mL de dietilamina y 2 mL de hidróxido de amonio concentrado y después la mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver en agua y acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con una solución acuosa de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de metanol al 0-10% en cloroformo (que contenía 3 gotas de hidróxido de amonio por 1000 mL de cloroformo) para proporcionar 0,54 g de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 71%. separado
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,41-7,16 (m, 5H), 6,07 (s, 1H), 3,78-3,70 (m, 1H), 3,45-3,38 (m, 1H), 3,03-2,84 (m, 3H), 2,38-2,20 (m, 3H), 2,00-1,05 (m, 12H), 1,33 (s, 9H).
IR (KBr): 2924, 2862, 1660, 1517, 1454, 1439, 737, 691 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 434 (M^{+}), 293.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación 9
A. 3-Metoxi-N-fenilbenzamida
Una solución de 13,4 mL (147 mmoles) de anilina en 30,7 mL de trietilamina se añadió lentamente a una solución que contenía 25,1 g (147 mmoles) de cloruro de 3-metoxibenzoilo en cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente treinta minutos y después se diluyó con bicarbonato de sodio 1N. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, hidróxido de sodio 1M y después salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 31,6 g de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 95%.
B. 3-Metoxi-2-metil-N-fenilbenzamida
A una solución fría (-70ºC) de 4,54 g (20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9A y 5,11 g (44 mmoles) de TMEDA en 70 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron 26,9 mL de una solución 1,56M de n-butil litio en hexano. La mezcla de reacción resultante se templó a -15ºC y se agitó durante aproximadamente 45 minutos para proporcionar una suspensión de color amarillo. La suspensión se volvió a enfriar después a -70ºC y se añadieron 2,89 g (20 mmoles) de yoduro de metilo, dando como resultado la formación de un precipitado de color blanco. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se sofocó con cloruro de amonio saturado y se diluyó con éter dietílico. Las capas resultantes se separaron y la fase orgánica se lavó sucesivamente con soluciones de cloruro de amonio saturado, agua, bicarbonato de sodio saturado y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron después sobre sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar un sólido de color blanco que se purificó mediante recristalización en una solución 2:1 de acetato de etilo/hexano para proporcionar 4,00 g de agujas.
Rendimiento: 99%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 2,36 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,89 (s, 1H), 6,90-7,70 (m, 8H).
IR (CHCl_{3}): 3424, 3013, 2963, 2943, 2840, 1678, 1597, 1585, 1519, 1463, 1438, 1383, 1321, 1264, 1240, 1178, 1083, 1069 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 241 (M^{+}, 100).
51
C. Ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico
Una mezcla de 1,21 g (5,00 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9B, 35 mL de 5N ácido clorhídrico y 20 mL de una solución de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético se calentaron a reflujo durante 24 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con 100 mL de acetato de etilo y 100 mL de agua. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó una vez con agua y después se alcalinizó a pH 11 utilizando hidróxido de sodio 0,5N. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se reaciduló a pH 1 utilizando ácido clorhídrico 5N. El compuesto deseado se extrajo después de esta capa acuosa utilizando acetato de etilo. Los extractos en acetato de etilo se lavaron después con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y después se concentraron para proporcionar un residuo que después de dos concentraciones en hexano produjo 750 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 98%.
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 2,26 (s, 3H), 6,98 (d, J = 8,03 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 7,69 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,37 Hz, 1H), 9,55 (s ancho, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3600-2100 (ancho), 3602, 2983, 1696, 1588, 1462, 1406, 1338, 1279, 1174, 1154, 1075, 1038, 920, 892, 854, 816 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 152 (M^{+}, 100)
52
Alternativamente, el compuesto del subtítulo deseado se preparó añadiendo 22,6 g (0,33 moles) de nitrito de sodio en pequeñas porciones a una solución refrigerada (-10ºC) de 45 g (0,30 moles) de ácido 3-amino-2-metilbenzoico y 106 g (58 mL; 1,08 moles) de ácido azufreico concentrado en 400 mL de agua, mientras se mantenía la temperatura por debajo de 7ºC. La mezcla de reacción resultante se agitó durante aproximadamente 30 minutos a -10ºC, se vertió en una solución de 240 mL de ácido azufreico concentrado en 1,2 L agua, y después se calentó lentamente a 80ºC (se produce un fuerte desprendimiento de gas entre las temperaturas de 40-60ºC). Cuando se detuvo el desprendimiento de gas, la mezcla de reacción se enfrió a la temperatura ambiente y el compuesto del subtítulo se extrajo cinco veces con acetato de etilo (600 mL). Las fases orgánicas combinadas se combinaron con 500 mL de una solución acuosa saturada de carbonato de sodio. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se aciduló a pH 2 con ácido clorhídrico concentrado. El compuesto del título se extrajo después utilizando acetato de etilo (500 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y después se concentraron a presión reducida para proporcionar una sustancia bruta. Esta sustancia se purificó utilizando dos recristalizaciones en una mezcla de acetato de etilo/cloroformo para proporcionar 23,2 g de un polvo de color naranja claro.
Rendimiento: 52%.
Preparación 10
A. 2-Etil-3-metoxi-N-fenilbenzamida
El compuesto del subtítulo se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 9B, utilizando 13,5 mL (21 mmoles) de n-butil litio 1,56 M, 2,27 g (10,0 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9A, 2,56 g (22,0 mmoles) de TMEDA y 1,56 g (10,0 mmoles) de yoduro de etilo en 50 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia bruta resultante se purificó mediante recristalización en una solución 3:1 de acetato de etilo/hexano para proporcionar 1,57 g de agujas.
Rendimiento: 62%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,22 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 2,81 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 3,88 (s, 3H), 6,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,10-7,45 (m, 4H), 7,50 (s, 1H), 7,62 (d, J = 7,95 Hz, 1H).
MS(FD): m/e 255 (M+, 100).
53
B. Ácido 2-etil-3-hidroxibenzoico
Una solución que contenía 180 mg (0,71 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 10A, 3 mL de 5N ácido clorhídrico y 3 mL de una solución al 30% de ácido bromhídrico/ácido acético se calentaron durante 20 horas en un tubo sellado a 155ºC. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se extrajo una vez con agua y después se alcalinizó a pH 11 utilizando hidróxido de sodio 0,5N. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se reaciduló a pH 1 utilizando ácido clorhídrico 5N. El compuesto deseado se extrajo después de esta capa acuosa utilizando acetato de etilo. Los extractos en acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y después se concentraron para proporcionar 103 mg de un sólido de color rojo pálido.
Rendimiento: 86%.
RMN H1 (acetona-d_{6}): \delta 1,16 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 2,98 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 7,00-7,15 (m, 2H), 7,32-7,36 (m, 1H), 8,48 (s ancho, 1H).
MS(FD): m/e 166 (M^{+}, 100).
Preparación 11
A. 2-Fluoro-3-metoxi-N-fenilbenzamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 9B, añadiendo una solución de 3,15 g (10,0 mmoles) de N-fluorobencenosulfonimida en 5 mL de tetrahidrofurano a una solución que contenía 13,5 mL (21,0 mmoles) de n-butil litio 1,56 M, 2,27 g (10,0 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9A y 2,56 g (22,0 mmoles) de TMEDA en 50 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia bruta resultante se recristalizó dos veces en una solución 2:1 de acetato de etilo/hexano y después se purificó adicionalmente utilizando cromatografía radial (6 mm, acetato de etilo al 0,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 540 mg de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 22%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 3,94 (s, 3H), 7,05-7,80 (m, 8H), 8,35-8,50 (m, 1H).
MS(FD): m/e 245 (M^{+}, 100).
B. Ácido 2-fluoro-3-hidroxibenzoico
El compuesto del subtítulo se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 9C, utilizando una solución de 255 mg (1,02 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 11A, 3 mL de ácido clorhídrico 5N y 5 mL de una solución al 30% de ácido bromhídrico en ácido acético para proporcionar 134 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 86%.
RMN H1 (acetona-d_{6}): \delta 7,05-7,50 (m, 5H).
MS (FD): m/e 156 (M^{+}, 100).
Preparación 12
A. 4-N-(Fenil)-carbamoilpiridina
Una solución de 22,8 mL (250 mmoles) de anilina en 104,5 mL (750 mmoles) de trietilamina se añadió lentamente a una solución de 44,5 g (250 mmoles) de hidrocloruro de 4-cloroformilpiridinio en 500 mL de cloroformo. La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche y después se sometió a reflujo durante 2 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con 600 mL de agua que dio como resultado la formación de un producto precipitado. Después de añadir 200 mL de isopropanol a la mezcla, las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con hidróxido de sodio 0,1N, agua y después salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida a 70ºC para proporcionar un sólido de color blanco con un matiz pardo. Este sólido se lavó con 200 mL de acetato de etilo para proporcionar 38,9 g del compuesto del subtítulo deseado.
Rendimiento: 78%.
B. N-Oxido de 4-N-(Fenil)carbamoilo piridina
A una solución caliente (85-90ºC) de 19,8 g (100 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12A en 60 mL de ácido acético glacial, se le añadieron lentamente 51 mL de peróxido de hidrógeno detrás de una pantalla de aire. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente cuatro horas a 90ºC, se enfrió a la temperatura ambiente, se diluyó en aproximadamente 60 mL de una mezcla de isopropanol y cloroformo y después se alcalinizó a pH 12. Las capas resultantes se separaron y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar un sólido de color amarillo pálido. Este sólido se trituró con 250 mL de cloruro de metileno y se redujo hasta sequedad para proporcionar 15,95 g de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 75%.
C. 2-Cloro-4-N-(fenil)carbamoilo piridina
A una solución de 20,2 g (97,0 mmoles) de pentacloruro de fósforo en 27 mL (289 mmoles) de oxicloruro fosforoso, se le añadieron 14,4 g (67,2 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12B. La mezcla de reacción resultante se calentó lentamente a 130ºC y se hizo reaccionar durante aproximadamente 40 minutos. La mezcla de reacción se enfrió a la temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver en 80 mL de agua y después se diluyó con 80 mL de acuoso carbonato de potasio dando como resultado la formación de un precipitado de color amarillo. El precipitado se aisló mediante filtración, se disolvió en 250 mL de etanol caliente y después se filtró en caliente para proporcionar una solución de color amarillo claro. Esta solución se concentró a presión reducida hasta aproximadamente 160 mL y después se filtró en caliente de nuevo antes de la adición de aproximadamente 50-60 mL de agua. La solución resultante se enfrió y el compuesto deseado se aisló mediante recristalización para proporcionar 8,0 g de color amarillo pálido y blanco agujas.
Rendimiento: 51%.
D. 2-Metoxi-4-N-(fenil)carbamoilpiridina
A una suspensión de 4,09 g (18,0 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12C en 30 mL de metanol, se le añadieron 2,92 g (42,0 mmoles) de metóxido de sodio. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo durante aproximadamente dieciocho horas, se enfrió y se concentró a presión reducida para proporcionar un sólido. Este sólido se lavó con agua y se trituró con benceno frío para proporcionar 1,8 g de un sólido. El análisis de este sólido indicó que la reacción no se había completado, de manera que se añadieron 10,01 g (144 mmoles) adicionales de metóxido de sodio al sólido en metanol. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo en metanol durante quince horas y trabajó idénticamente para proporcionar 300 mg de un sólido. Este sólido se purificó utilizando cromatografía en columna (placa de 2 mm; eluyente de 40% acetato de etilo en hexano) seguido de recristalización en hexano caliente para proporcionar 140 mg del compuesto deseado.
Rendimiento: 3%.
E. 2-Metoxi-3-metil-4-N-(fenil)carbamoilo piridina
El compuesto del subtítulo se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 98, utilizando 260 mg (1,17 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12D, 404 mL (2,68 mmoles) de TMEDA, 1,78 mL (2,68 mmoles) de n-butil litio, y 329 mL (5,61 mmoles) de yoduro de metilo en 2 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente de 40% acetato de etilo en hexano) seguido de recristalización en hexano caliente para proporcionar 140 mg del compuesto del subtítulo deseado.
F. Ácido 3-metil-2-piridono-4-carboxílico
Una suspensión de 150 mg (0,598 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12E en 4 mL de ácido 5N clorhídrico (acuoso) se sometió a reflujo durante aproximadamente cinco horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite de color amarillo. Este aceite se disolvió en 15 mL de agua y la solución resultante se ajustó a pH 8 utilizando hidróxido de potasio y después se diluyó con 10 mL de tolueno. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se aciduló a pH 3,5 utilizando a 5N solución de ácido clorhídrico y después se concentró a presión reducida para proporcionar un sólido de color amarillo. Este sólido se suspendió en 2 mL de etanol caliente y se filtró a través de un tapón de algodón. El producto filtrado se redujo después hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 130 mg de un sólido. Este sólido se lavó con 5 mL de ácido acético caliente al 10% en acetato de etilo para proporcionar 17 mg de un sólido que se cristalizó después en etanol para proporcionar 6,8 mg del compuesto del subtítulo deseado.
Rendimiento: 6%.
Preparación 13
Ácido 2,6-dicloro-3-hidroxibenzoico
Se hizo burbujear lentamente gas cloro (20 g; 282 mmoles) a través una solución fría (-70ºC) de 20 g (145 mmoles) de ácido 3-hidroxibenzoico en 100 mL de metanol, en nitrógeno, dando como resultado un incremento de temperatura de aproximadamente -5ºC. La mezcla de reacción se volvió a enfriar y después de aproximadamente treinta minutos, el gas cloro se purgó con nitrógeno. La mezcla de reacción se templó después a la temperatura ambiente y se diluyó con 100 mL de agua. El compuesto del título deseado se aisló mediante recristalización para proporcionar un sólido de color blanco. Este sólido se purificó mediante recristalización en 90 mL de agua seguido de recristalización en 250 mL de benceno que contenía 10 mL de acetona para proporcionar 4,8 g del compuesto del título deseado.
Rendimiento: 16%.
Preparación 14
Ácido 2-cloro-3-hidroxibenzoico
Se hizo burbujear lentamente gas cloro (10,3 g; 147 mmoles) a través una solución fría de 20 g (145 mmoles) de ácido 3-hidroxibenzoico en 100 mL de metanol, en nitrógeno, mientras se mantenía la temperatura por debajo de -60ºC. Después de aproximadamente treinta minutos, el gas cloro se purgó con nitrógeno y la mezcla de reacción se dejó templando a la temperatura ambiente y se diluyó con 100 mL de agua. El compuesto del título deseado se aisló mediante recristalización para proporcionar un sólido de color blanco. Este sólido se purificó mediante recristalización en 50 mL de agua seguido de recristalización en 130 mL de benceno que contenía 10 mL de acetona para proporcionar el compuesto del título deseado.
Preparación 15
A. Ester 2-metil-3-metoxibenzoato de metilo
Una suspensión de 306 mg (2,00 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9C, 1,06 mL (20,0 mmoles) de yoduro de metilo y 1,38 g (10,0 mmoles) de carbonato de potasio en 8 mL de acetona se sometió a reflujo durante aproximadamente 3 horas. Puesto que la reacción no se completó, se añadieron 2 mL (37,7 mmoles) de yoduro de metilo, 2 g (14,5 mmoles) de carbonato de potasio y 10 mL de acetona adicionales a la mezcla de reacción. Después de someter a reflujo la mezcla durante aproximadamente dieciséis horas, la mezcla se filtró. El producto filtrado se concentró después a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con agua y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 188 mg de sustancia que era producto deseado en 88%.
B. Ácido 2-Metil-3-metoxibenzoico
Una solución de 116 mg (4,86 mmoles) de hidróxido de litio en 1 mL de agua se añadió a una solución de 175 mg (0,97 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 15A en 3 mL de tetrahidrofurano. La mezcla de reacción resultante se agitó rápidamente. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver con 10 mL de hexano, 25 mL de agua y 3 mL de hidróxido de sodio 1N. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se diluyó con acetato de etilo y después se aciduló a pH 1 utilizando ácido clorhídrico 1M. Las capas resultantes se separaron y la capa de acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 73 mg del compuesto del subtítulo deseado.
Preparación 16
A. 2-Butil-3-metoxi-N-fenilbenzamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 98, utilizando 11,95 mL de de n-butil litio 1,51M en hexanos (18,04 mmoles), 1,95 g (8,95 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9A, 2,19 g (18,89 mmoles) de TMEDA y 1,60 g (9,45 mmoles) de yoduro de butilo en 30 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 4 mm; eluyente de acetato de etilo al 15% en hexano) para proporcionar 83 mg de un aceite incoloro, claro.
Rendimiento: 3,5%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,89 (t, J = 7,27 Hz, 3H), 1,36 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 6,92 (d, J = 7,98 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 7,36 Hz, 1H), 7,11-7,22 (m, 2H), 7,35 (t, 2H), 7,59 (m, 2H).
IR (CHCl_{3}): 3691, 3619, 3424, 3024, 3010, 2963, 2874, 1679, 1602, 1580, 1517, 1459, 1437, 1315, 1265, 1177, 1055, 877 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 283 (M^{+}, 100).
B. Ácido 2-butil-3-hidroxibenzoico
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 10B, utilizando 80 mg (0,28 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 16A en 2 mL de ácido clorhídrico 5N, y 2 mL de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético para proporcionar 44 mg de sustancia bruta que se utilizó sin purificación adicional.
Rendimiento: 60% (mediante RMN H1).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,96 (t, J = 8,09 Hz, 3H), 1,44 (m, 2H), 1,59 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 6,99 (d, J = 8,03 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 7,77 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 6,85 Hz, 1H).
Preparación 17
A. 3-Metoxi-2-propil-N-fenilbenzamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 9B, utilizando 2,5 g (11,0 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9A, 2,81 g (24,2 mmoles) de TMEDA, 15,23 mL (23,13 mmoles) de n-butil litio y 1,33 g (11,0 mmoles) de bromuro de alilo en 30 mL de tetrahidrofurano para proporcionar 2,5 g de sustancia bruta. Esta sustancia se disolvió en 30 mL de etanol absoluto en presencia de 0,5 g de paladio sobre carbono al 10% y la mezcla resultante se hizo reaccionar en una atmósfera de hidrógeno durante aproximadamente doce horas. La mezcla se filtró después sobre celite y el producto filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite de color naranja. Este aceite se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 6 mm; eluyente de acetato de etilo al 10% en hexano) para proporcionar 438 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 15%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,94 (t, J = 7,35 Hz, 3H), 1,62 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 6,92 (d, J = 8,06 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 7,39 Hz, 1H), 7,16 (m, 2H), 7,34 (t, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,69. (s ancho, 1H).
B. Ácido 3-hidroxi-2-propilbenzoico
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 10B, utilizando 438 mg (1,62 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 17A en 7 mL de ácido clorhídrico 5N y 7 mL de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético para proporcionar un sólido de color tostado. Este sólido se purificó mediante recristalización en tolueno caliente para proporcionar 84 mg de un sólido de color tostado.
Rendimiento: 29%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,01 (t, J = 7,33 Hz, 3H), 1,63 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 6,98 (d, J = 7,97 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 7,86 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 7,28 Hz, 1H).
IR (KBr): 3383, 3047, 2962, 2872, 2641, 1698, 1458, 1412, 1341, 1296, 1278, 1223, 1174, 1086, 929, 815, 752 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 180 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación 18
A. 2-Isopropil-3-metoxibenzonitrilo
A una mezcla de 2,76 g (0,115 moles) de magnesio en 75 mL de éter dietílico, se le añadieron lentamente 24,31 g (0,143 moles) yoduro de isopropilo. La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando hasta que se consumió todo el magnesio. Después, se añadió una solución de 15,0 g (0,92 moles) de 2,3-dimetoxi benzonitrilo en 75 mL de éter dietílico a lo largo de noventa minutos. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante la noche a temperatura ambiente y después se sometió a reflujo durante cuatro horas. La mezcla de reacción resultante se enfrió después a 0ºC, y la capa superior se decantó en cloruro de amonio saturado y hielo. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con una solución diluida de hidróxido de sodio, agua, y una solución diluida de ácido clorhídrico, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró para proporcionar un aceite de color naranja. Este aceite se destiló a presión reducida (columna Vigreux de 12,7 cm (5 pulgadas); 0,2 mm Hg) para proporcionar 6,25 g de un aceite de color naranja.
Rendimiento: 39%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,37 (d, J = 6,47 Hz, 6H), 3,55 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 7,04 (d, J = 7,79 Hz, 1H), 7,18 (m, 2H).
IR (CHCl_{3}): 3690, 3617, 3019, 2968, 2939, 2841, 2228, 1577, 1470, 1457, 1440, 1387, 1363, 1265, 1100, 1070, 1045, 878 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 175 (M^{+}, 100).
B. Ácido 3-hidroxi-2-isopropilbenzoico
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 10B, utilizando 330 mg (1,88 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 18A en 2 mL de ácido clorhídrico 5N y ácido bromhídrico al 30% en ácido acético. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno que contenía ácido acético al 1%) para proporcionar 125 mg de un sólido de color rosa.
Rendimiento: 37%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,40 (d, J = 6,92 Hz, 6H), 3,62 (m, 1H), 6,83 (d, J = 7,86 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 7,89 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,55 Hz, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3599, 3025, 2965, 2876, 1695, 1603, 1584, 1466, 1454, 1404, 1360, 1275, 1234, 1166, 1148, 1086, 1057, 926 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 180 (M^{+}, 100).
54
Preparación 19
Ácido 3-metilisonicotínico
A una solución caliente (155ºC) de 10,7 g (0,1 moles) de 3,4-lutidina en 100 mL de éter difenílico, se le añadieron 18 g (0,16 moles) de dióxido de selenio en porciones. Después de aproximadamente 20 minutos, la reacción se calentó a 185ºC y se dejó reaccionando durante aproximadamente treinta minutos. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se filtró. El producto filtrado se extrajo con cloroformo y los extractos en cloroformo se concentraron después a presión reducida para proporcionar 6,0 g de un sólido de color pardo claro.
Rendimiento: 44%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 2,43 (s, 3H), 7,61 (d, J = 4,98 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 4,99 Hz, 1H), 8,53 (s, 1H).
^{13}C NMR (CDCl_{3}): \delta 17,91, 123,21, 132,81, 138,15, 148,12, 152,71, 167,89 ppm.
IR (KBr): 3425, 2418, 1724, 1606, 1445, 1387, 1303, 1278, 1235, 1100, 1072, 850 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 138 (M^{+}, 100).
Preparación 20
Ácido 5-quinolinocarboxílico
A una solución que contenía 15 g (0,1 moles) de ácido m-aminobenzoico, 27 g (0,13 moles) de m-nitrobencenosulfonato y 25 g (0,4 moles) de glicerol, se le añadieron 125 g de ácido azufreico al 70%. La mezcla de reacción resultante se sometió a reflujo durante aproximadamente 2,5 horas, se diluyó con 125 mL de agua, se alcalinizó a pH 9 utilizando hidróxido de amonio, se agitó durante la noche con 5 g de carbón, y después se filtró. El producto filtrado se hirvió después con 5 g carbón, se filtró, y después se enfrió a 50ºC, se aciduló a pH 5 con ácido acético glacial (15 mL), y se filtró para proporcionar un sólido de color pardo. Este sólido se hirvió en 300 mL de agua que contenía 10 mL de ácido acético y se filtró en caliente para proporcionar sustancia bruta. Esta sustancia se purificó utilizando recristalización en ácido acético en ebullición para proporcionar 6,1 g de un sólido de color pardo claro.
Rendimiento: 32%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,62 (m, 1H), 7,81 (t, J = 7,82 Hz, 1H), 8,20 (m, 2H), 8,93 (d, J-3,79 Hz, 1H), 9,24 (d, J = 8,58 Hz, 1H).
IR (KBr): 2772, 2431, 1906, 1708, 1610, 1589, 1507, 1363, 1323, 1269, 1235, 1211, 1141, 1076, 1034, 999, 866, 807 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 173 (M^{+}, 100).
Preparación 21
Ácido 1,2,3,4-tetrahidro-5-quinolinocarboxílico
Una solución que contenía 1,03 g (5,95 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 20, 1,87 g (29,77 mmoles) de formiato de amonio en 100 mL de etanol se purgó con nitrógeno durante 10 minutos. A esta solución se le añadieron 0,5 g de negro de paladio y la mezcla de reacción resultante se calentó a 65ºC. Después de aproximadamente tres horas, la mezcla de reacción se filtró; el producto filtrado resultante se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se repartió entre agua (pH 4) y una solución de isopropanol al 10% en cloroformo. Las capas resultantes se separaron, y la capa orgánica se lavó con agua (pH=4), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se concentró para proporcionar una sustancia bruta. Esta sustancia se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 5-10% en cloruro de metileno que contenía ácido acético al 1%) para proporcionar 87 mg de un sólido de color tostado.
Rendimiento: 8%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,04 (m, 2H), 2,16 (t, 2H), 2,40 (m, 2H), 5,81 (d, J = 8,05 Hz, 1H), 6,09 (t, J = 7,78 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 7,96 Hz, 1H).
IR(KBr): 3296, 2965, 2929, 1691, 1597, 1474, 1461, 1443, 1350, 1305, 1279, 1236, 1184, 1159, 1106, 1073, 1022, 827 cm-^{1}.
MS(FD): m/e 177 (M^{+},100).
55 
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Preparación 22
A. Ester 3-amino-2-metilbenzoato de metilo
Una solución de 10 g (66,2 mmoles) de ácido 3-amino-2-metilbenzoico y 20 g de monohidrato de ácido p-toluenosulfónico en 400 mL de metanol se sometió a reflujo durante la noche y después se diluyó con una mezcla de acetato de etilo y carbonato de potasio 1M. Las capas resultantes se enfriaron y después se separaron. La capa orgánica se lavó después sucesivamente con carbonato de potasio 1M, y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró para proporcionar 9,23 g de un aceite de color naranja.
Rendimiento: 85%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 2,34 (s, 3H), 3,73 (s ancho, 2H), 3,88 (s, 3H), 6,81 (d, J = 7,96 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,78 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3406, 3027, 3012, 2978, 2953, 1718, 1621, 1467, 1435, 1315, 1301, 1265, 1196, 1159, 1108, 1066, 1045, 810 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 165 (M^{+}, 100).
B. Ester 3-N-(metilsulfonil)amino-2-metilbenzoato de metilo
A una solución fría (0ºC) de 1,07 g (6,48 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 22A en 50 mL de cloruro de metileno anhidro, se le añadieron 1,18 g (6,80 mmoles) de anhídrido metilsulfónico. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante la noche a temperatura ambiente y después se diluyó con 100 mL de cloruro de metileno, se lavó dos veces con una solución de bicarbonato de sodio, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró, se volvió a disolver en hexano y después se concentró de nuevo para proporcionar un residuo. Este residuo se trituró después tres veces en hexano y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 1,46 g de un sólido de color rosa. Este sólido se recristalizó después utilizando 20 mL de una mezcla de hexano al 30%/acetato de etilo al 50%/metanol al 20%.
Rendimiento: 57%.
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 2,25-2,45 (m, 4,5H), 2,97 (s, 1,5H), 3,80 (s, 3H), 7,23-7,63 (m, 3H), 9,24 (s, 1H).
IR (KBr): 3900-2400 (ancho), 3298, 1713, 1466, 1320, 1290, 1265, 1248, 1210, 1183, 1156, 1047, 971, 964, 752, 563, 519 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 243 (M^{+}, 100).
56
C. Ácido 3-N-(metilsulfonil)amino-2-metilbenzoico
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 15B, utilizando 400 mg (1,64 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 22B, y 118 mg (4,93 mmoles) de hidróxido de litio en 20 mL de tetrahidrofurano y 8 mL de agua para proporcionar 206 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 55%.
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 2,43 (s, 3H), 2,97 (s, 3H), 7,26 (t, J = 7,87 Hz, 1H). 7,43 (d, J = 7,79 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 7,17 Hz, 1H).
IR (KBr): 3800-2200 (ancho), 3252, 1685, 1404, 1334, 1309, 1277, 1149, 982, 96S, 914, 780, 763, 748, 632, 518, 498 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 243 (M^{+}, 100).
Preparación 23
A. 3-metoxi-N-fenilbenzamida
Una solución de 13,4 mL (147 mmoles) de anilina en 30,7 mL de trietilamina se añadió lentamente a una solución que contenía 25,1 g (147 mmoles) de cloruro de 3-metoxibenzoilo en cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente treinta minutos y después se diluyó con bicarbonato de sodio 1N. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, hidróxido de sodio 1M y después salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 31,6 g de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 95%.
B. 3-Metoxi-2-metil-N-fenilbenzamida
A una solución fría (-70ºC) de 4,54 g (20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 23A y 5,11 g (44 mmoles) de TMEDA en 70 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron 26,9 mL de una solución 1,56M de n-butil litio en hexano. La mezcla de reacción resultante se templó a -15ºC y se agitó durante aproximadamente 45 minutos para proporcionar una suspensión de color amarillo. La suspensión se volvió a enfriar después a -70ºC y se añadieron 2,89 g (20 mmoles) de yoduro de metilo, dando como resultado la formación de un precipitado de color blanco. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se sofocó con cloruro de amonio saturado y se diluyó con éter dietílico. Las capas resultantes se separaron y la fase orgánica se lavó sucesivamente con soluciones de cloruro de amonio saturado, agua, bicarbonato de sodio saturado y salmuera. Los extractos orgánicos se secaron después sobre sulfato de sodio y se concentraron para proporcionar un sólido de color blanco que se purificó mediante recristalización en una solución 2:1 de acetato de etilo/hexano para proporcionar 4,00 g de agujas.
Rendimiento: 99%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 2,36 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,89 (s, 1H), 6,90-7,70 (m, 8H).
IR (CHCl_{3}): 3424, 3013, 2963, 2943, 2840, 1678, 1597, 1585, 1519, 1463, 1438, 1383, 1321, 1264, 1240, 1178, 1083, 1069 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 241 (M^{+}, 100).
57
C. Ácido 2-metil-3-hidroxibenzoico
Una mezcla de 1,21 g (5,00 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 238, 35 mL de ácido clorhídrico 5N y 20 mL de una solución de ácido bromhídrico al 30% en ácido acético se calentaron a reflujo durante 24 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con 100 mL de acetato de etilo y 100 mL de agua. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó una vez con agua y después se alcalinizó a pH 11 utilizando hidróxido de sodio 0,5N. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se reaciduló a pH 1 utilizando ácido clorhídrico 5N. El compuesto deseado se extrajo después de esta capa acuosa utilizando acetato de etilo. Los extractos en acetato de etilo se lavaron después con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y después se concentraron para proporcionar un residuo que después de dos concentraciones en hexano produjo 750 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 98%.
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 2,26 (s, 3H), 6,98 (d, J = 8,03 Hz, 1H) 7,02 (t, J = 7,69 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,37 Hz, 1H), 9,55 (s ancho, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3600-2100 (ancho), 3602, 2983, 1696, 1588, 1462, 1406, 1338, 1279, 1174, 1154, 1075, 1038, 920, 892, 854, 816 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 152 (M^{+}, 100).
58
Preparación Alternativa para Ácido 2-metil-3-hidroxibenzoico
A una suspensión fría (0ºC) de 0,54 g (3,3 mmoles) de ácido 2-metil-3-aminobenzoico en 5 mL de agua que contenía 0,65 mL de ácido azufreico concentrado, se le añadieron 0,25 g (3,6 mmoles) de nitrito de sodio sólido. Después de aproximadamente 15 minutos la mezcla de reacción se vertió en 20 mL de agua templada que contenía 4 mL de ácido azufreico concentrado. La mezcla de reacción resultante se calentó lentamente a 90ºC, dando como resultado el desprendimiento de gas. Después de cesar el desprendimiento de gas, la solución se enfrió a la temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico 0,5N, se secaron y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante filtración rápida a través gel de sílice (eluyente de metanol al 5% en cloruro de metileno) para producir 350 mg de un sólido de color blanco (p.f. 137-138ºC).
Rendimiento: 69%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 8,18 (s ancho, 1H), 7,42 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,13 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 2,46 (s, 3H).
59
Preparación 24
A. N-(t-Butil)-2-metilbenzamida
A una solución fría (0ºC) de 139,2 g (0,9 moles) de cloruro de o-toluoilo en 1200 mL de cloruro de metileno a 25ºC, en nitrógeno, se le añadieron lentamente 180,0 g (1,8 moles) de trietilamina seguido de la adición gota a gota de una solución que contenía 73,14 g (1,0 moles) de t-butilamina en 200 mL de cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se templó a la temperatura ambiente y se dejó reaccionando durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó después con 1800 mL de agua. Las capas acuosa y orgánica resultantes se separaron, y la capa orgánica se lavó sucesivamente con hidróxido de sodio 2N, ácido clorhídrico 1,0N y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 167,6 g del compuesto del subtítulo deseado en forma de un sólido de color blanquecino (pf 77-78ºC).
Rendimiento: 97%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,41 (s, 9H), 2,41 (s, 3H), 5,54 (s ancho, 1H), 7,13-7,30 (m, 4H).
IR (CHCl_{3}): 3430, 3011, 2971, 2932, 1661, 1510, 1484, 1452, 1393, 1366, 1304, 1216, 876 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 191 (M^{+}), 191 (100).
60
B. S-N-t-Butil-2-(3-(N-benciloxicarbonil)amino-2-oxo-4-fenilbutil)benzamida
A una solución de 7,0 g (36,5 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24A en 200 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron 12,1 mL (80,3 mmoles) de N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina (TMEDA) a través de una jeringa. La solución resultante se enfrió a -78ºC y después se añadieron 55,9 mL de sec-butil litio gota a gota a través de una jeringa mientras se mantenía la temperatura de la reacción por debajo de -60ºC. La solución de reacción resultante se dejó después agitando durante aproximadamente 1 hora a -78ºC antes de la adición de una solución que contenía 5,00 g (14,6 mmoles) de S-N-metoxi-N-metil-2-(N-benciloxicarbonil)amino-3-fenilpropanamida en 50 mL de tetrahidrofurano anhidro a través de una cánula mientras se mantenía la reacción temperatura por debajo de -65ºC. La mezcla de reacción resultante se templó a -20ºC, se sofocó utilizando 20 mL de cloruro de amonio saturado y después se diluyó con 200 mL de éter dietílico. Las capas orgánica y acuosa se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, hidrogenosulfato de sodio 0,2N y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar un aceite incoloro. Este aceite se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo al 25% en cloruro de metileno) para proporcionar 6,08 g de una espuma incolora.
Rendimiento: 88%.
[\alpha]_{D} -289,26º (c 0,12, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,99 (dd, J = 15; 6 Hz, 1H), 3,24 (dd, J = 15; 6 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 18 Hz, 1H), 4,16 (d. J = 18 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 15, 6 Hz, 1H), 5,00-5,09 (m, 2H), 5,56 (d, J = 6 Hz, 1H), 5,93 (s ancho, 1H), 7,03-7,40 (m, 14H).
IR (CHCl_{3}): 3431, 3027, 3012, 2973, 1713, 1658. 1511, 1454, 1383, 1366, 1307, 1231, 1046 cm^{-1}.
MS(FD) m/e 472 (M^{+}), 218 (100).
61
C. [2R-(2R*,3S*)]-N-t-Butil-2-(3-(N-benciloxicarbonil)amino-2-hidroxi-4-fenilbutil)benzamida
A una solución de 6,96 g (14,7 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24B en 200 mL de etanol absoluto, en nitrógeno, se le añadieron 2,78 g (73,5 mmoles) de borohidruro de sodio. Cuando la reacción estuvo sustancialmente completa, según se indicó mediante cromatografía en capa fina (TLC), la mezcla de reacción se diluyó con 200 mL de acetato de etilo y se sofocó mediante la adición gota a gota de 20 mL de cloruro de amonio saturado. Las capas orgánica y acuosa se separaron después y la capa orgánica se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico 1N, una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 6,4 g de un aceite incoloro. Este aceite se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de cloruro de metileno al 2-10% en acetato de etilo) para proporcionar 5,12 g del compuesto del subtítulo.
Rendimiento: 74%.
[\alpha]_{D} +10,38º (c 0,10, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,40 (s, 9H), 2,79 (dd, J = 12; 3 Hz, 1H), 2,90-2,98 (m, 2H), 3,04 (44, J = 12, 3 Hz, 1H), 3,70-3,81 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,96-5,08 (m, 2H), 5,10 (d, J-9 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 6 Hz, 1H), 5,93 (s, 1H), 7,13-7,42 (m, 14H).
IR (CHCl_{3}): 3431, 3028, 3012, 2971, 1773, 1643, 1515, 1454, 1367, 1229, 1028 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 475 (M^{+}), 475 (100).
62
D. [2R-(2R*,3S*)]-N-t-Butil-2-(3-amino-2-hidroxi-4- fenilbutil)benzamida
Se preparó una suspensión se preparó que contenía 41,0 g (120 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24C y 500 mg de paladio sobre carbono al 10% en 150 mL de etanol absoluto. Esta suspensión se sacudió a 4,22 kg/cm^{2} de hidrógeno en un aparato de sacudimiento Parr. El catalizador de paladio sobre carbono al 10% se separó después mediante filtración. El producto filtrado resultante se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 31,1 g de una espuma de color amarillo claro. Este compuesto se utilizó sin purificación adicional.
Rendimiento: 96%.
[\alpha]_{D} +34,68º (c 1,0, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,46 (s, 9H), 2,71 (dd, J = 13,7; 9,5 Hz, 1H), 2,84 (dd, J = 13,3; 2,51 Hz, 1H), 2,95-3,06 (m, 2H), 3,23-3,29 (m, 1H), 3,84-3,90 (m, 1H), 6,23 (s, 1H), 7,19-7,37 (m, 12H).
IR (CHCl_{3}): 3440, 3382, 3007, 2970, 2934, 1643, 1516, 1454, 1367, 1213 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 341 (M^{+}), 341 (100).
Preparación 25
A. Ácido 2R-2-N(t-butoxicarbonil)amino-3-naft-2-iltiopropanoico
A una solución de 2,14 g (13,4 mmoles) de 2-naftalenotiol en 40 mL de tetrahidrofurano anhidro a temperatura ambiente, se le añadieron una suspensión de 0,54 g (13,5 mmoles) de hidruro de sodio en aceite mineral. Después de aproximadamente 15 minutos, se añadió una solución de 2,5 g (13,4 mmoles) de S-N(t-butoxicarbonil)-serino-b-lactona en 30 mL de tetrahidrofurano gota a gota. La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando durante aproximadamente una hora y después se concentró a presión reducida para proporcionar un sólido gomoso. Este sólido se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en acetato de etilo) para proporcionar 4,35 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 94%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 10,25 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,78 (m, 3H), 7,46 (m, 3H), 5,39 (d, 1H), 4,61 (m, 1H), 3,49 (m, 2H), 1,37 (s, 9H).
B. 2R-N(Metoxi)-N(metil)[2-N(t-butoxicarbonil)amino-3-naft-2-iltio]propanamida
A una solución fría (0ºC) que contenía 4,3 g (12,4 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 25A, 1,58 g (16,15 mmoles) de hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina, 2,18 g (16,15 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT\cdotH_{2}O), 2,24 mL (16,15 mmoles) de trietilamina y 2,73 mL (24,86 mmoles) N-metilmorfolina en 100 mL de cloruro de metileno, se le añadieron 2,62 g (13,67 mmoles) de hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC). La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con 100 mL de hexano, se lavó sucesivamente con 200 mL de una solución saturada de bicarbonato de sodio y 200 mL de salmuera. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite de color amarillo claro.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (s, 1H), 7,80 (m, 3H), 7,49 (m, 3H), 5,41 (d, 1H), 4,92 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,18-3,46 (m, 2H), 3,05 (s, 3H), 1,42 (s, 9H).
MS (FD): m/e 391 (M^{+}), 390 (100).
C. 3R-N(t-Butil)-2-[2'-oxo-3'-N(t-butoxicarbonil)amino-4'-naft-2-iltio]butilbenzamida
A una solución fría (-78ºC) que contenía 8,60 g (45 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24A, y 14,2 mL (95 mmoles) de TMEDA en 100 mL de tetrahidrofurano anhidro y en una atmósfera inerte, se le añadieron lentamente 111 mL (95 mmoles) de una solución 0,85M de sec-butil litio en hexanos, a través de una jeringa. La temperatura interna de la vasija de reacción se vigiló durante la adición del sec-butil litio para asegurarse de que la temperatura no excediera de -57ºC. Después de dejar reaccionar la mezcla de reacción resultante durante aproximadamente una hora a -78ºC, se añadió gota a gota una solución de 7,90 g (20 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 2B en 80 mL de tetrahidrofurano. Cuando se completó la adición, la reacción se templó a -20ºC y después se sofocó mediante la adición de una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla resultante se diluyó después con 600 mL de éter dietílico. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con una solución 1M de bisulfato de sodio y una solución de salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite de color amarillo. Este aceite se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 10-50% en hexano) para proporcionar 8,5 g del intermedio del subtítulo deseado.
Rendimiento: (82%).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (s, 1H), 7,79 (t, 3H), 7,48 (m, 3H), 7,40 (d, 1H), 7,29 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 5,94 (s ancho, 1H), 5,65 (m, 1H), 4,65 (d, 1H), 4,24 (d, J = 17 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 17 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,39 (s, 9H).
MS (FD): m/e 521(M^{+}), 521(100).
D. [(2R-(2R*,3R*)]-N(t-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-N(t-butoxicarbonil)amino-4'-naft-2-iltio]butilbenzamida
A una solución de 3,49 g (6,7 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 25C en 150 mL de etanol absoluto, se le añadieron 0,51 g (13 mmoles) de borohidruro de sodio y la mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se enfrió después a 0ºC, se sofocó con una solución saturada de cloruro de amonio y se diluyó con 550 mL de cloruro de metileno. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico 1N, hidróxido de sodio 2N y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida para proporcionar una espuma incolora. Esta espuma se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de hexano al 10-25% en acetato de etilo) para proporcionar 2,78 g del intermedio del subtítulo deseado.
Rendimiento: 78%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,84 (s, 1H), 7,73 (m, 3H), 7,41 (m, 3H), 7,29 (t, 2H), 7,16 (t, 2H), 6,53 (s, 1H), 5,32 (d, 1H), 3,86 (m, 2H). 3,33 (m, 2H), 2,83 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).
MS (FD): m/e 523 (M^{+}), 522 (100).
63
E. [(2R-(2R*,3R*)]-N(t-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-amino-4'-naft-2-iltio]butilbenzamida
A una solución fría (0ºC) de 2,89 g (5,53 mmoles) del intermedio del subtítulo de la Preparación 25D en 100 mL de cloruro de metileno, se le añadieron 18 mL de ácido trifluoroacético. La mezcla de reacción resultante se dejó reaccionando durante aproximadamente una hora. La mezcla de reacción se concentró después a presión reducida para proporcionar una espuma. Esta espuma se suspendió en tolueno y después se concentró a presión reducida para proporcionar una espuma que se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 5% en cloruro de metileno) para proporcionar 1,71 g de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 74%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,75-7,85 (m, 4H), 7,24-7,51 (m, 7H), 6,06 (s, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
MS(FD): m/e 423 (M^{+}), 422 (100).
Preparación 26
A. N-t-Butil-2-metil-1-naftilamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 24A. La sustancia bruta se purificó mediante recristalización en una mezcla de hexano/acetato de etilo para proporcionar 20,99 g de agujas incoloras (pf 124-126ºC).
Rendimiento: 68%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,54 (s, 9H), 2,50 (s, 3H), 5,50-5,65 (s ancho, 1H), 7,23-7,54 (m, 3H), 7,74 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 10 Hz, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3424, 3010, 2969, 1660, 1512, 1503, 1454, 1366, 1291, 1263, 1221 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 241 (M^{+}), 241(100).
64
B. S-N-t-Butil-2-(3-(N-benciloxicarbonil)amino-4-fenil-2-oxobutil)-1-naftilamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 24A. El residuo resultante se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 10-30% en hexano) para proporcionar 7,43 g de una espuma incolora.
Rendimiento: 86%.
[\alpha]_{D} -6,86º, (c 0,10, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,45 (s, 9H), 3,03 (dd, J = 15, 8 Hz, 1H), 3,18 (dd, J = 15, Hz, 1H), 3,91 (d, J-16 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,70-4,80 (m, 1H), 4,94-5,06 (m, 2H), 5,41 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,12-6,20 (s ancho, 1H), 7,10-7,38 (m, 11H), 7,42-7,58 (m, 2H), 7,76-7,85 (m, 2H), 7,93 (s, J = 9 Hz, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3420, 3029, 3012, 2970, 1713, 1658, 1505, 1455, 1367, 1232, 1045 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 522 (M^{+}), 522 (100).
65
C. [2R-(2R*,3S*)]-N-t-Butil-2-(3-(N-benciloxicarbonil)amino-3-fenilmetil-2-hidroxipropil)-1-naftilamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 24C. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 2-10% en cloruro de metileno) para proporcionar 5,50 g de una espuma incolora.
Rendimiento: 74%.
[\alpha]_{D} +11,85º (c 0,20, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,54 (s, 9H), 2,85-3,15 (m, 4H), 3,85-3,95 (m, 1H), 4,00-4,13 (m, 2H), 4,90-5,34 (m, 3H), 5,85-5,95 (m, 1H), 7,05-7,60 (m, 15H), 7,81 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,91 (d, 9 Hz, 2H).
IR (CHCl_{3}): 3420, 3012, 2970, 1713, 1643, 1515, 1454, 1367, 1219, 1209, 1028 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 524 (M^{+}), 524 (100).
66
D. [2R-(2R*,3S*)]-N-t-Butil-2-(3-amino-2-hidroxipropil)-1-naftilamida
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 24D. El producto filtrado bruto se concentró para proporcionar 1,30 g de una espuma incolora que se utilizó sin ninguna purificación adicional.
Rendimiento: 92%.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación 27
A. 2-Yodo-4-hidroximetiltolueno
A una solución de 5,0 g (19,1 mmoles) de ácido 2-yodo-3-metilbenzoico en 50 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron lentamente 22 mL de una solución 1M de borano en tetrahidrofurano. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente noventa minutos y después se sofocó con etanol dando como resultado el desprendimiento de gas hidrógeno. La mezcla se diluyó con acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se cristalizó en una mezcla de hexano/acetato de etilo para proporcionar 120 mg del compuesto del subtítulo deseado.
B. Ácido 2-metil-5-hidroximetilbenzoico
Una mezcla de 142 mg (5,92 mmoles) de hidróxido de litio y 249 mg (1,48 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 27A en una mezcla 3:1 de tetrahidrofurano/agua se hicieron reaccionar durante aproximadamente veinticuatro horas. Cuando la reacción se completó, según se indicó mediante TLC, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se aciduló mediante la adición de ácido clorhídrico 1N. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y las capas resultantes se separaron. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se redujo hasta sequedad para proporcionar 70 mg del compuesto del subtítulo deseado.
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Preparación 28
Ácido 2-metil-3-metilaminobenzoico
A una solución de 500 mg (2,5 mmoles) de éster 2-metil-3-aminobenzoato de metilo en 5 mL de dimetilformamida, se le añadieron 387 mg (2,7 mmoles) de yoduro de metilo y 700 mg (5,4 mmoles) de diisopropiletilamina. La mezcla de reacción resultante se calentó a 70ºC durante aproximadamente dos horas y después se vertió en 10 mL de hidróxido de potasio 1N. Después de aproximadamente dieciséis horas, la mezcla se aciduló a pH 6 mediante la adición de ácido clorhídrico 2N. El compuesto del título deseado se extrajo en acetato de etilo, se secó y se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 343 mg de un sólido de color blanco (p.f. 165-167ºC).
Rendimiento: 84%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 12,52 (s ancho, 1H), 7,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,21 (s, 3H).
67
Preparación 29
A. Ácido 2-metil-5-aminobenzoico
El compuesto del título deseado se preparó reduciendo ácido 2-metil-5-nitrobenzoico utilizando una mezcla de estaño/ácido clorhídrico (p.f. 142-144ºC).
Rendimiento: 75%
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 12,67 (s ancho, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,04 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,25 (s, 2H), 2,40 (s, 3H).
68
B. Ácido 2-Metil-5-hidroxibenzoico
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación Alternativa 23C, utilizando el compuesto del subtítulo de la Preparación 29A.
Rendimiento: 65% (p.f. 136-139ºC).
RMN H1 (DMSO): \delta 12,77 (s ancho, 1H), 9,46 (ancho s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,41 (s, 3H).
69
Preparación 30
A. 5-Cianoisoquinolina
A una solución fría (0ºC) de 10,0 g (61,4 mmoles) de 5-aminoisoquinolina en 288 mL de ácido clorhídrico 1,5N, se le añadieron 15 mL de nitrito de sodio 5,2M en agua. Después de aproximadamente 5 minutos, se añadió una solución saturada fría de bicarbonato de sodio a la mezcla de reacción hasta que la solución de reacción dio negativo utilizando la prueba del papel de almidón y yoduro. La solución resultante se vertió en una mezcla bifásica fría (0-5ºC) que contenía 300 ml de tolueno y 150 mL de una solución acuosa que contenía 8,4 g (177 mmoles) de cianuro de sodio y 7,6 g (85 mmoles) de cianuro de cobre. La mezcla de reacción resultante se templó a la temperatura ambiente, se hizo reaccionar durante aproximadamente 1 hora, y después se diluyó con una mezcla de acetato de etilo y agua. Las capas resultantes se separaron, y la fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 5,9 g de un sólido de color amarillo.
Rendimiento: 56%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 9,38 (s, 1H), 8,76 (d, J = 5,89 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 8,29 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,30 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,59 Hz, 1H), 7,71 (t, J = 7,78 Hz, 1H);
IR (KBr): 3433, 3090, 3026, 2924, 2226, 1618, 1574, 1495, 1433, 1373, 1277, 1225, 1034, 829, 766, 714.
B. 5-Carboxiisoquinolina
Una solución de 6,5 g (42 mmoles) del compuesto del subtítulo de la preparación 30A en 55 mL de ácido clorhídrico concentrado se calentó a 155ºC en un tubo sellado durante 5,5 horas y después se enfrió a la temperatura ambiente, y después se redujo hasta sequedad para proporcionar un sólido. Este sólido se volvió a disolver en 300 mL de agua, y la solución resultante se ajustó a pH 6 utilizando una solución diluida de hidróxido de amonio, dando como resultado la precipitación de un sólido de color pardo. Este sólido se aisló utilizando filtración, se formó el azeotropo con benceno, y después se secó a 130ºC a presión reducida durante aproximadamente 3 horas para proporcionar 5,7 g de un polvo fino de color tostado oscuro (p.f. 270-272ºC).
Rendimiento: 78%.
RMN H1 (DMSO): \delta 13,4 (s ancho. 1H), 8,69 (d, 1H, J = 6,00 Hz), 8,58 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 8,40 (d, 1H. J = 7,37 Hz), 8,36 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,74 (t, 1H, J = 7,76);
IR (KBr): 3460, 3014, 2930, 2851, 2777, 2405, 1912, 1711, 1622, 1574, 1493, 1427, 1375, 1264, 1211, 1152, 1044.
C. Ester pentafluorofenílico de 5-carboxiisoquinolina
A una solución fría (0ºC) de 1,53 g (7,39.mmoles) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC) en 60 mL de acetato de etilo, se le añadieron 1,28 g (7,39 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 30B, y 4,08 g (22,17 mmoles) de pentafluorofenol en 30 mL de acetato de etilo. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente 6 horas a 0ºC y después se filtró a través de celite. El producto filtrado resultante se lavó sucesivamente con hidróxido de sodio 1N, agua, y salmuera, y después se concentró a presión reducida para proporcionar un sólido de color blanco. Este sólido se purificó utilizando cromatografía en columna (sílice; eluyente de acetato de etilo al 33% en hexanos) para proporcionar 1,80 g del compuesto del subtítulo deseado. (p.f. 142-144ºC).
Rendimiento 72%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 9,38 (s, 1H), 8,74 (m, 3H), 8,34 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,78 (t, J = 7,7 Hz, 1H);
IR (KBr): 3422, 3021, 2089, 1752, 1622, 1522, 1215, 758.
70 
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Preparación 31
Ester pentafluorofenílico de 5-carboxiquinolina
El compuesto del subtítulo deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en la Preparación 30C, utilizando 0,236 g (1,36 mmoles) de 5-carboxiquinolina, 0,746 g (4,05 mmoles) de pentafluorofenol, y 0,571 g (2,76 mmoles) de DCC en 25 mL de acetato de etilo, con la excepción de que la mezcla de reacción se dejó reaccionando durante 48 horas. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía en columna para proporcionar 0,40 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento 87%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 9,33 (d, J = 8,54 Hz, 1H), 9,03 (dd. J = 4,16, 1,28 Hz, 1H), 8,63 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 8,53 Hz, 1H); 7,87 (t, J = 7,96 Hz, 1H), 7,61 (dd, J-8,76, 4,18 Hz, 1H);
IR (KBr): 3472, 2667, 2461, 1749, 1520, 1319, 1259, 1182, 1145, 1105, 1005, 947, 812.
\newpage
Preparación 32
Ácido 1H-indolino-4-carboxílico
A una solución fría (10ºC) que contenía 100 mg (0,62 mmoles) de ácido indolo-4-carboxílico en 5 mL de ácido acético, se le añadieron 390 mg (6,2 mmoles) de cianoborohidruro de sodio sólido. La mezcla resultante se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas y después se diluyó con agua. El compuesto deseado se extrajo de esta solución utilizando cloruro de metileno y los extractos orgánicos se secaron después sobre sulfato de sodio y se filtraron. La sustancia bruta se purificó utilizando cromatografía en columna (sílice; eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 12 mg del compuesto del título. (p.f. 97-98ºC).
Rendimiento: 12%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,59 (m, 4H).
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71 
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Preparación 33
A. 2,3-Dimetoxi-6-clorotolueno
A una mezcla de 25 g (0,16 mmoles) de 1-metil-2,3-dimetoxibenceno en 25 mL de ácido acético, se le añadieron lentamente 26,4 g (0,33 mmoles) de 1-clorometilmetiléter. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante la noche a 30ºC y después se diluyó con agua fría, dando como resultado la formación de un producto precipitado. Este producto precipitado se purificó mediante recristalización en hexanos calientes y después se redujo hasta sequedad a presión reducida para proporcionar 20,3 g de un sólido de color blanco (p.f. 69-70ºC).
Rendimiento: 62%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,01 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 6,75 (d, 4,62 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 2,37 (s, 3H).
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72 
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B. Ácido 2-metil-3,4-dimetoxibenzoico
A una mezcla de 3,0 g (15 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 33A en 150 mL de agua, se le añadieron 3,2 g (20 mmoles) de permanganato de potasio sólido y 3,0 g (36 mmoles) de carbonato de sodio. La mezcla de reacción resultante se calentó después a 80ºC y se dejó reaccionando durante aproximadamente 24 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se filtró y se diluyó con acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron después y la capa acuosa se aciduló utilizando ácido clorhídrico 2N que dio como resultado la formación de un producto precipitado. Este producto precipitado se aisló utilizando filtración y se lavó con hexano frío para proporcionar 1,7 g de un sólido de color blanco (p.f. 179-180ºC).
Rendimiento: 58%.
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 12,49 (s ancho, 1H), 7,71 (s ancho, 1H), 6,99 (s ancho, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 2,45 (s, 3H).
73
C. Ácido 2-metil-3,4-dihidroxibenzoico
A una mezcla fría (0ºC) de 250 mL (1,3 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 339 en 5 mL de cloruro de metileno, se le añadieron 6,4 mL de una solución de 6,4 mmoles/1,0 m de tribromuro de boro en cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente 90 minutos y después se diluyó con 25 mL de ácido clorhídrico 2N. El compuesto deseado se extrajo utilizando acetato de etilo, y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 197 mg de un sólido de color tostado (p.f. 200-201ºC).
Rendimiento: 92%.
RMN H1 (DMSO): \delta 12,14 (s ancho, 1H), 9,96 (s ancho, 1H,), 8,34 (s ancho, 1H), 7,27 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,37 (s, 3H).
74
Ejemplo 1 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-fluoro-3''-hidroxifenil)pentil]de-cahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
A una solución fría (-10ºC) que contenía 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 31 mg (0,20 mmoles) de la Preparación 11B y 27 mg (0,20 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT\cdotH_{2}O) en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron 41 mg (0,20 mmoles) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida (DCC). La mezcla de reacción se agitó durante 36 horas a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida. El residuo resultante se volvió a disolver en acetato de etilo, se filtró a través de celite, se lavó sucesivamente con bicarbonato de sodio saturado y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 79 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 73%.
[\alpha]_{D} -90,80º (c=0,333, MeOH).
RMN H1- (CDCl_{3}): \delta 1,24 (s, 9H), 1,16-2,05 (m, 14H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,55-2,70 (m, 2H), 2,90-3,04 (m, 2H), 3,10-3,25 (m, 1H), 4,03 (s ancho, 1H), 4,51 (s ancho, 1H), 6,01 (s, 1H), 6,90-7,35 (m, 9H).
IR (CHCl_{3}): 3580, 3550-3100 (ancho), 2929, 2865, 1662, 1596, 1521, 1472, 1455, 1394, 1368, 1293, 1157, 1047, 879, 839 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 540 (M^{+}, 100).
75
Ejemplo 2 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-pirid-3''-il)pentil]decahi-droisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 31 mg (0,20 mmoles) de ácido 2-cloronicotínico, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 0-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 58 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 54%.
[\alpha]_{D} -70,64º (c = 0,224, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,16 (s, 9H), 1,17-2,10-(m, 12H), 2,25-2,37 (m, 2H), 2,52-2,70 (m, 2H), 2,97-3,06 (m, 2H), 3,44-3,53 (m, 2H), 4,05 (s ancho, 1H), 4,60-4,70 (m, 1H), 5,64 (s, 1H), 7,18-7,38 (m, 7H), 7,60-7,63 (m, 1H), 8,38-8,40 (m, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3618, 3428, 3650-3100 (ancho), 2929, 1667, 1583, 1515, 1455, 1401, 1368, 1247, 1071, 1046, 877 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 541 (M^{+}), 440 (100).
76
Ejemplo 3 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-etil-3''-hidroxifenil)pentil]deca-hidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 35 mg (0,21 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 10B, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 3-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 71 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 65%.
[\alpha]_{D}: -76,29º (c=0,291, MeOH).
^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta 1,03 (t, J = 7,42 Hz, 3H), 1,21 (s, 9H), 1,22-2,10 (m, 11H), 2,24-2,35 (m, 2H), 2,44-2,70 (m, 4H), 2,96-3,05 (m, 2H), 3,26-3,40 (m, 1H). 3,96-4,23 (m, 2H), 4,53 (s ancho, 1H), 5,80 (s, 1H), 6,30-6,56 (m, 3H), 6,77 (d, J = 7,77 Hz, 1H), 6,88 (t, J = 7,75 Hz, 1H), 7,19-7,39 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3700-3100 (ancho), 3429, 3327, 3011, 2971, 2930, 2867, 1662, 1604, 1585, 1514, 1455, 1394, 1368, 1278, 1155, 1087, 1046, 910 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 550 (M^{+}, 100).
77
Ejemplo 4 [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]pirrolidino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 55 mg (0,16 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 3E, 25 mg (0,16 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 98, 33 mg (0,16 mmoles) de DCC y 22 mg (0,16 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 4-8% en cloruro de metileno) para proporcionar 52 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 69%.
[\alpha]_{D}: -72,15º (c=0,211, MeOH).
RMN H1 (CD_{3}OD): \delta 1,33 (s, 9H), 1,70-1,90 (m, 4H), 2,06-2,20 (m, 1H), 2,45-3,30 (m, 8H), 3,60-3,70 (m, 1H), 4,25-4,38 (m, 1H), 6,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,93 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,15-7,32 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3600-2700 (ancho), 3450, 3255, 2968, 2928, 1653, 1632, 1588, 1513, 1454, 1364, 1291, 1233, 1064. 884, 836 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 468 (M^{+}, 100).
78
Ejemplo 5 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(pirid-3''-il-N-oxidil)pentil]decahi-droisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 28 mg (0,20 mmoles) de N-óxido de ácido nicotínico, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 5-10% en cloruro de metileno) para proporcionar 81 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 76%.
[\alpha]_{D}: -104,39º (c=0,213, MeOH).
RMN H1 (DMSO-d_{6}): \delta 1,19 (s, 9H), 1,19-.2,10 (m, 14H), 2,50-2,60 (m, 1H), 2,65-2,79 (m, 1H), 2,95-3,10 (m, 2H), 3,83 (s ancho, 1H), 4,22-4,32 (m, 1H), 4,87 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,06-7,11 (m, 1H), 7,17-7,22 (m, 2H), 7,33-7,44 (m, 3H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,44-8,48 (m, 2H).
IR (CHCl_{3}): 3600-3100 (ancho), 3428, 2930, 2864, 1669, 1603, 1515, 1479, 1455, 1432, 1394, 1368, 1300,1279, 1245, 1135, 1083, 1046, 1017 cm^{-1}.
MS(FD): m/e S22 (M^{+} 100).
Ejemplo 6 [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-(2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)-pentil]piperidino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 100 mg (0,29 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 4F, 44 mg (0,29 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 98, 59 mg (0,29 mmoles) de DCC y 39 mg (0,29 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 5 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 1,5-7% en cloruro de metileno) para proporcionar 57 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 41%.
[\alpha]_{D}: -58,90º (c=0,163, MeOH).
RMN H1 (CD_{3}OD): \delta 1,29 (s, 9H), 1,50-2,20 (m, 10H), 2,60-2,75 (m, 4H), 3,10-3,35 (m, 4H), 3,85-4,02 (m, 2H), 4,10-4,35 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 3,85-4,02 (m, 2H), 4,10-4,35 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 6,55 (d, J = 7,29 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 6,90-6,96 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 5H).
IR (CDCl_{3}): 3601, 3600-3100 (ancho), 3428, 3340, 3008, 2941, 2861, 1661, 1601, 1587, 1514, 1455, 1394, 1367, 1284, 1156, 1086, 1047, 832 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 482 (M^{+}, 100).
79
Ejemplo 7 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-fluorofenil)pentil]deca-hidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 18, 31 mg (0,20 mmoles) de ácido 3-fluoro-2-metilbenzoico, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 1,5-3% en cloruro de metileno) para proporcionar 40 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 37%.
[\alpha]_{D}: -80,10º (c=0,132, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,13 (s, 9H), 1,13-2,10 (m, 16H), 2,20-2,35 (m, 2H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,95-3,05 (m, 2H), 3,53-3,58 (m, 1H), 3,98 (s, 1H), 4,03-4,10 (m, 1H), 5,68 (s, 1H), 6,83-7,07 (m, 3H), 7,10-7,40 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3650-3150 (ancho), 3429, 3030, 3008, 2930, 2863, 1672, 1608, 1514, 1455, 1394, 1368, 1277, 1046, 910, 830 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 538 (M^{+}, 100).
HR MS(FAB): m/e para C_{32}H_{45}N_{3}O_{3}F:
Calcd: 538,3445;
Encontrado: 538,3469.
Ejemplo 8 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-3'',5''-dihidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 100 mg (0,25 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 18, 47 mg (0,25 mmoles) de ácido 2-cloro-3,5-dihidroxibenzoico, 51 mg (0,25 mmoles) de DCC y 34 mg (0,25 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-10% en cloruro de metileno) para proporcionar 47 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 33%.
[\alpha]_{D}: -53,79º (c=0,097, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,5-3,10 (m, 32H), 3,70-4,60 (m, 2H), 6,00-7,50 (m, 8H).
IR (CHCl_{3}): 3700-3100 (ancho), 2930, 2865, 1658, 1604, 1521, 1455, 1368, 1246, 1156, 1047, 1014, 856 cm^{-1}.
MS(FD): 572 (M^{+}, 100).
80 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3'',5''-diaminofenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 100 mg (0,25 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 41 mg (0,25 mmoles) de ácido 3,5-diamino-2-metilbenzoico, 51 mg (0,25 mmoles) de DCC y 34 mg (0,25 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro y 0,5 mL de dimetilformamida. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 1-10% en cloruro de metileno) para proporcionar 30 mg de una espuma de color naranja claro.
Rendimiento: 22%
[\alpha]_{D} -99,27º (c=0,137, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,21 (s, 9H), 1,30-2,02 (m, 16H), 2,19-2,35 (m, 2H), 2,48-2,70 (m, 2H), 2,90-3,07 (m, 2H), 3,10-3,23 (m, 1H), 3,50 (s ancho, 4H), 3,94 (s ancho, 1H), 4,40-4,50 (m, 1H), 5,70 (s, 1H). 5,89-5,95 (m, 2H), 6,30 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,15-7,33 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3600-3100 (ancho), 3029, 3005, 2928, 2865, 1664, 1621, 1513. 1455, 1392, 1367, 1276, 1244, 1171, 1047, 841 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 550 (M^{+}, 100).
81 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3'',5''-dinitrofenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 100 mg (0,25 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 56 mg (0,25 mmoles) de ácido 3,5-dinitro-2-metilbenzoico, 51 mg (0,25 mmoles) de DCC y 34 mg (0,25 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 0-3% en cloruro de metileno) para proporcionar 61 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 41%.
[\alpha]_{D} -105,96º (c=0,302, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,02 (s, 9H), 1,02-2,60 (m, 20H), 2,90-3,06 (m, 2H), 3,21 (s ancho, 1H), 3,60-3,75 (m, 1H), 4,05-4,20 (m, 1H), 4,65-4,80 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 7,20-7,50 (m, 5H), 8,00-8,20 (m, 2H), 8,56 (s, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3621, 3500-3100 (ancho), 3428, 3024, 2977, 2931, 1665, 1615, 1539, 1455, 1347, 1278, 1245, 1047, 878 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 610 (M^{+}, 100).
82 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 11 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-3''-hidroxifenil)pentil]de-cahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 116 mg (0,29 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 50 mg (0,29 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 14, 60 mg (0,29 mmoles) de DCC y 39 mg (0,29 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 4 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 83 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 51%.
[\alpha]_{D} 74,29º (C=0,140, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,19 (s, 9H), 1,19-2,80 (m, 16H), 2,90-3,15 (m, 2H), 3,35 (s ancho, 1H), 4,06 (s ancho, 1H), 4,56 (s ancho, 1H), 5,85 (s ancho, 1H), 6,60-6,70 (m, 1H), 6,90-7,35 (m, 8H).
IR (CHCl_{3}): 3621, 3600-3100 (ancho), 3429, 2977, 2929, 1671, 1584, 1515, 1445, 1394, 1368, 1292, 1182, 1046, 878, 823 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 556 (M^{+}, 100).
83 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 12 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 261 mg (0,65 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 100 mg (0,65 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9B, 134 mg (0,65 mmoles) de DCC y 88 mg (0,65 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 6 mL de tetrahidrofurano anhidro y 0,2 mL de dimetilformamida anhidra. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 1-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 304 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 87%.
[\alpha]_{D} -75,00º (c=0,200, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,18 (s, 9H), 1,19-2,05 (m, 18H), 2,20-2,35 (m, 2H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,90-3,05 (m, 2H), 3,22-3,35 (m, 1H), 3,96-4,05 (m, 1H), 4,45-4,55 (m, 1H), 5,77 (s, 1H), 6,53 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 6,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,85-6,90 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 6H).
IR (CHCl_{3}): 3606, 3600-3100 (ancho), 3429, 3011, 2929, 2865, 1663, 1604, 1587, 1514, 1455, 1367, 1277, 1200, 1156, 1046, 910 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 537 (M^{+}, 100).
84
Ejemplo 13 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-metoxifenil)pentil]decahidroisoquinolin-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 33 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 15B, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente de metanol al 2,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 93 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 84%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,17 (s, 9H), 1,17-2,05 (m, 12H), 2,05 (s, 3H), 2,25-2,38 (m, 2H), 2,50-2,75 (m, 2H), 2,95-3,10 (m, 2H), 3,35-3,50 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,98-4,15 (m, 2H), 4,59-4,65 (m, 1H), 5,72 (s, 1H). 6,47 (d ancho, J-8,21 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,15-7,45 (m, 5H).
\vskip1.000000\baselineskip
85
Ejemplo 14 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2'',3''-diclorofenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 38 mg (0,20. mmoles) de ácido 2,3-diclorobenzoico, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 95 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 84%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,16 (s, 9H), 1,17-2 05. (m, 12H), 2,20-2,38 (m, 2H), 2,50-2,75 (m, 2H), 2,95-3,10 (m, 2H), 3,40-3,55 (m, 1H), 3,69 (s, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 4,58-4,72 (m, 1H), 5,77 (s, 1H), 6,98-7,47 (m, 9H).
MS(FD): m/e 574(M^{+}), 473 (100).
Ejemplo 15 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-trifluorometilfenil)pentil]decahi-droisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 80 mg (0,20 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 38 mg (0,20 mmoles) de ácido 2-trifluorometilbenzoico, 41 mg (0,20 mmoles) de DCC y 27 mg (0,20 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 72 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 63%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,10 (s, 9H), 1,16-2,05 (m, 14H), 2,15-2,35 (m, 2H), 2,45-2,70 (m, 2H), 2,92-3,05 (m, 2H), 3,38-3,55 (m, 1H), 3,70. (s ancho, 1H), 3,98-4,10 (m, 1H), 4,58-4,70 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 7,00-7,65 (m, 10H).
MS (FD) m/e 573 (M^{+}, 100).
86
Ejemplo 16 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-oxo-3''-metil-pirid-4''-il)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 14,7 mg (0,037 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 5,6 mg (0,037 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 12F, 7,6 mg (0,037 mmoles) de DCC y 4,9 mg (0,037 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 1,3 mL de dimetilformamida anhidra. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 10% en cloruro de metileno) para proporcionar 6,5 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 34%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,00-3,40 (m, 32H), 4,00-4,70 (m, 3H), 5,90-6,10 (m, 1H), 6,90-7,40 (m, 8H).
MS(FD): m/e 537 (M^{+}, 100).
Ejemplo 17 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2'',6''-dicloro-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 48 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 13, 25 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 13, 2,5 mg (0,12 mmoles) de DCC y 16 mg (0,12 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 14 mg del compuesto del título deseado.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,9-2,15 (m, 23H), 2,22-2,85 (m, 4H), 2,95-3,10 (m, 2H), 3,30-3,58 (m, 1H), 3,98-4,12 (m, 1H), 4,56-4,75 (m, 1H), 5,60-5,82 (m, 1H), 6,60-6,79 (m, 1H), 6,90-7,40 (m, 6H).
IR (CHCl_{3}): 3010, 2937, 1644, 1606, 1605, 1497, 1474, 1454, 1433, 1417, 1341, 1313, 1274, 1252, 1161, 1093, 1074, 1027, 991 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 590 (M^{+}, 100).
Ejemplo 18 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)1-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-aminofenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 100 mg (0,25 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 18, 38 mg (0,25 mmoles) de ácido 3-amino-2-metilbenzoico, 34 mg (0,25 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O, 52 mg (0,25 mmoles) de DCC en 3 mL de tetrahidrofurano anhidro, con la excepción de que la reacción se llevó a cabo en presencia de 76 mg (0,75 mmoles) de trietilamina. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 78 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 58%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,19 (s, 9H), 1,20-2,08 (m, 15H), 2,20-2,35. (m, 2H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,92-3,05 (m, 2H), 3,28-3,38 (m, 1H), 3,61 (s ancho, 1H), 3,93-4,20 (m, 2H), 4,45-4,58 (m, 1H), 5,80 (s, 1H), 6,44 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 6,63 (d, J-7,9 Hz, 1H), 6,90 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,17-7,36 (m, 6H).
MS(FD): m/e 535 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 19 [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-hidroxi-2''-metilfenil)pentil]-4-pirid-3''-ilmetilpiperazino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 50 mg (0,11 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 6B, 16 mg (0,11 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9C, 14 mg (0,11 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O y 22 mg (0,11 mmoles) de DCC en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 5-10% en cloruro de metileno) para proporcionar 35 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 55%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,29 (s, 9H), 2,18 (s, 3H), 2,23-2,33 (m, 1H), 2,45-2,85 (m, 7H), 3,20-3,35 (m, 3H), 3,45 (s, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 4,25-4,35 (m, 1H), 5,00-5,40 (s ancho, 1H), 6,61 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,76-6,80 (m, 2H), 6,92 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,12-7,43 (m, 7H), 7,57-7,62 (m, 1H), 7,78 (s ancho, 1H), 8,48-8,58 (m, 2H).
MS (FD): m/e 606 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 20 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-isopropil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 55 mg (0,137 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 24,7 mg (0,137 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 189, 28,25 mg (0,137 mmoles) de DCC, y 18,5 mg (0,137 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 8 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 46 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 60%.
[\alpha]_{D} -84,61 (c=2,60, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta1,19 (d, J = 3,7 Hz, 3H), 1,21 (d, J = 3,75 Hz, 3H), 1,23 (s, 9H), 1,27-1,51 (m, 7H), 1,61-2,00 (m, 6H), 2,26-2,35 (m; 2H), 2,56-2,65 (m, 2H), 2,91-3,03 (m, 3H), 3,19-3,27 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 4,51 (m, 1H), 5,82 (s ancho, 1H), 5,93 (s ancho, 1H), 6,23 (d, J = 8,53 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 7,15 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 7,17 Hz, 1H), 6,86 (t, J = 7,74 Hz, 1H), 7,21-7,31 (m, 5H).
IR (CDCl_{3}): 3427, 3322, 3028, 3008, 2930, 2868, 1660, 1603, 1582, 1513, 1455, 1393, 1366, 1304, 1278, 1245, 1088, 1059 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 564 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
87 
\newpage
Ejemplo 21 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-butil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 91 mg (0,227 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 44 mg (0,227 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 16B, 46,7 mg (0,227 mmoles) DCC, y 30,6 mg (0,227 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 10 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 4-7% en cloruro de metileno) para proporcionar 72 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 55%.
[\alpha]_{D} -77,36 (c=0,36, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 9H), 1,29-2,00 (m, 18H), 2,27 (m, 2H), 2,48-2,69 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,29 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 6,45 (m, 2H), 6,75 (d, J = 7,19 Hz, 1H), 6,86 (t, J = 7,67 Hz, 1H), 7,21-7,31 (m, 5H).
IR (KBr): 3303 (ancho), 3087, 3029, 2927, 2862, 1647, 1583, 1520, 1455, 1366, 1281, 1209, 1109, 735, 698 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 578 (M^{+}, 100).
88
Ejemplo 22 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-propil-3''-hidroxifenil)pentil]de-cahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 67 mg (0,167 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 30 mg (0,167 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 17B, 34 mg (0,167 mmoles) de DCC, y 23 mg (0,167 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 4 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 75 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 80%.
[\alpha]_{D} -43,75 (c=0,160, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,87 (t, 3H), 1,18 (s, 9H), 1,21-2,04 (m, 15H), 2,24-2,33 (m, 2H), 2,49-2,58 (m, 3H), 2,66 (m, 1H), 2,98 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,70 (s, 1H), 6,43 (d, J = 8,32 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 7,12 Hz, 1H), 6,95 (t, J = 7,78 Hz, 1H), 7,20-7,33 (m, 5H).
IR (KBr): 3,287 (ancho), 3086, 2932, 2868, 1681, 1558, 1456, 1368, 1334, 1291, 1261, 1218, 1169, 1101, 1042, 776, 734, 552 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 564 (M^{+}, 100).
89 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 23 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 70 mg (0,16 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 24,6 mg (0,16 mmoles) del compuesto del subtítulo de preparación 9C, 33 mg (0,16 mmoles) de DCC, y 22 mg (0,16 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 4 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 54 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 60%.
[\alpha]_{D} -119,23 (c=0,26, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,09 (s, 9H), 1,12-1,79 (m, 12H), 1,93-2,02 (m, 2H), 2,17-2,30 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,43-2,61 (m, 2H), 2,91 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,51 (s ancho, 1H), 6,84 (m, 1H), 7,06 (m, 2H), 7,17-7,32 (m, 4H), 7,45 (m, 2H).
IR (KBr): 3297, 2925, 2862, 1627, 1586, 1530, 1482, 1466, 1439, 1366, 1287, 1221, 1156, 1119, 1026, 801, 735, 689 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 568 (M^{+}, 100).
90
Ejemplo 24 [3S-(3R*,4aR*,8ar*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-(naft-2-iltiometil)-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 70 mg (0,145 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 7B, 22 mg (0,145 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9C, 29 mg (0,145 mmoles) de DCC, y 19 mg (0,145 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 4 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetona al 5-15% en cloruro de metileno) para proporcionar 65 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 73%.
[\alpha]_{D} -112,00 (c=0,25. MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,10 (s, 9H), 1,15-1,80 (m, 12H), 1,93- 2,06 (m, 1H), 2,17-2,28 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,42-2,61 (m, 2H), 2,94 (d, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,83-3,92 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 5,36 (s ancho, 1H), 5,53 (s ancho, 1H), 6,79 (m, 1H), 6,93 (m, 2H), 7,21 (d, J = 8,83 Hz, 1H), 7,40-7,53 (m, 3H), 7,73 (m, 3H), 7,90 (s, 1H).
IR (KBr): 3427, 3311 (ancho), 2929, 2864, 1703, 1661, 1587, 1514, 1456, 1393, 1366, 1276, 1200, 1177, 1146, 1119, 1070, 1042 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 618 (M^{+}, 100).
91 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 25 [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-(naft-2-iltiometil)-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]piperidino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 28 mg (0,065 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 2G, 10 mg (0,065 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9C, 13,5 mg (0,065 mmoles) de DCC, y 9 mg (0,065 mmoles) HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 23 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 63%.
[\alpha]_{D} -233,33 (c=0,09, MeOH).
RMN H1 (COCl_{3}): \delta 1,17 (s, 9H), 1,26 (m, 1H), 1,56-1,73 (m, 6H), 2,19-2,23 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,42 (m, 1H), 2,62-2,73 (m, 2H), 3,11-3,19 (m, 1H), 3,50-3,72 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 5,89 (s, 1H), 6,77-6,87 (m, 3H), 7,00 (d, J = 8,65 Hz, 1H), 7,43-7,51 (m, 3H), 7,72-7,80 (m, 3H), 7,88 (s, 1H).
IR (KBr): 3329, 2934, 2857, 1646, 1586, 1522, 1457, 1364, 1284, 1223, 1133, 1072, 944, 835, 811, 744, 474 cm^{-1}.
MS(FD): m/e 564 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
92 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 26 [2S-(2R*,2'S*,3'R*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-4-(pirid-3'''-il-metil)piperazino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 65 mg (0,148 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 5E, 22,5 mg (0,148 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 9C, 30,5 mg (0,148 mmoles) de DCC, y 20 mg (0,148 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 5 mL de tetrahidrofurano. La sustancia bruta resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 64 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 75%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,33 (s, 9H), 1,86 (s, 3H), 2,30 (m, 1H), 2,49-2,98 (m, 11H), 3,33 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 6,29 (d, J = 9,16 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 7,23 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 7,79 Hz, 1H), 6,83 (t, J-7,84 Hz, 1H), 7,17-7,31 (m, 7H), 7,60 (m, 1H), 7,95 (s ancho, 1H), 8,50-8,55 (m, 2H).
MS(FD): m/e 574 (M^{+}, 100).
\vskip1.000000\baselineskip
93 
\newpage
Ejemplo 27 Sal monomesilato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)1-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-etil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
A una solución fría (0ºC) solución de 35,1 mg (0,064 mmoles) del compuesto del título de Ejemplo 3 en 2 \muL de cloruro de metileno anhidro, se le añadieron gota a gota 134 mL (0,067 mmoles) de una solución 0,5M de ácido metanosulfónico en cloruro de metileno. La reacción resultante se redujo hasta sequedad a presión reducida (26,66-13,33 Pa) para proporcionar 38 mg (bruto) de una espuma de color amarillo claro.
Rendimiento: 90%.
RMN H1 (CD_{3}OD): \delta 0,91 (t, J = 7,39, 3H), 1,29 (s, 9H), 1,30-3,20 (m, 21H), 4,00-4,40 (m, 2H), 6,47 (d, J = 7,30 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 7,78 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 7,78 Hz, 1H), 7,15-7,32 (m, 5H).
Ejemplo 28 Sal monomesilato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)-2-(2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 27, utilizando 125 mg (0,23 mmoles) del compuesto del título de Ejemplo 13 en 5 mL de cloruro de metileno anhidro, y 240 \muL (0,24 mmoles) de una solución 1,0M de ácido metanosulfónico en cloruro de metileno para proporcionar 136 mg (bruto) de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 95%.
RMN H1 (CD_{3}OD): \delta 1,12 (s, 9H), 1,10-2,20 (m, 16H), 2,60-2,75 (m, 4H), 3,10-3,50 (m, 6H), 3,60-3,70 (m, 1H), 3,90-4,30 (m, 3H), 6,53 (d, J = 7,35 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 7,87 Hz, 1H), 6,89 (t, J = 7,82 Hz, 1H).
Ejemplo 29 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3,S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metilfenil)pentil]decahidroiso-quinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 15 mg (0,034 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 4,7 mg (0,034 mmoles) de ácido o-toluico, 7,13 mg (0,034 mmoles) de DCC, y 4,7 mg (0,034 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2,5 mL de tetrahidrofurano. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente acetona al 10% en cloruro de metileno) para proporcionar 16 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 84%.
[\alpha]_{D} -80,00 (c=0,15).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,04 (s, 9H), 1,08-1,90 (m. 11H), 1,93 (m, 3H), 2,22 (m, 4H), 2,44 (m, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,58 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 5,45 (s ancho, 1H), 7,12-7,32 (m, 7H), 7,45 (m, 2H), 7,51 (d, J = 7,51 Hz, 1H).
IR (KBr): 3327, 2928, 2852, 1627, 1574, 1535, 1481, 1364, 1311, 1275, 1225, 1088, 737 cm^{-1}.
501
Ejemplo 30 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[3'-metil-pirid-4''-il)]pentil]deca-hidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 15 mg (0,034 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 6,69 mg (0,048 mmoles), del compuesto del título de la Preparación 19, 7,13 mg (0,034 mmoles) de DCC, y 4,7 mg (0,034 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 1,5 mL de tetrahidrofurano y 1 mL de dimetilformamida. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 3-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 10 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 52%.
[\alpha]_{D} -95,65 (c=0,115).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,00 (s, 9H), 1,20-1,77 (m, 12H), 1,99 (m, 1H), 2,17 (m, 2H), 2,44 (m, 5H), 2,92 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 7,20-7,46 (m, 6H), 7,75 (d, J = 8,94 Hz, 1H), 8,46 (m, 2H).
IR (KBr): 3307, 2925, 2860, 1653, 1542, 1481, 1439, 1391, 1365, 1281, 1224, 1058, 1041, 738, 691, 669 cm^{-1}.
94
Ejemplo 31 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(quinolin-5''-il)pentil]decahidro-isoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 15 mg (0,034 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 6,0 mg (0,034 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 20, 7,13 mg (0,034 mmoles) de DCC, y 4,7 mg (0,034 mmoles) HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 3-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 15 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 74%.
[\alpha]_{D} -99,50 (c=0,201).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 0,74 (s, 9H), 1,15-1,79 (m, 12H), 1,97 (m, 1H), 2,17 (m, 2H), 2,36 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 5,29 (s, 1H), 7,18-7,32 (m, 3H), 7,40-7,50 (m, 3H), 7,70 (m, 1H), 7,89 (m, 2H), 8,17 (m, 1H), 8,91 (m, 2H).
IR (KBr): 3299, 2923, 2862, 1644, 1546, 1481, 1439, 1390, 1327, 1279, 1222, 1207, 1037, 810, 735, 689 cm^{-1}.
95
Ejemplo 32 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(1'',2'',3'',4''-tetrahidroquinolin-5''-il)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 18 mg (0,04 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 7,38 mg (0,04 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 21, 8,56 mg (0,04 mmoles) de DCC, y 5,61 mg (0,04 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 3-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 12 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 50%.
[\alpha]_{D} -98,59 (c=0,142).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,13 (s, 9H), 1,14-2,04 (m, 15H), 2,19 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,90-3,09 (m, 2H), 3,26 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,75 (m, 1H), 4,01-4,14 (m, 2H), 4,42 (m, 1H), 5,56 (s, 1H), 6,49 (d, J = 7,96 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 7,40 Hz, 1H), 6,93 (t, J = 7,72 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,39 Hz, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,42 (d, 2H).
IR (KBr): 3327, 2928, 2852, 1629, 1590, 1519, 1481, 1449, 1364, 1310, 1275, 1229, 1087, 738, 690 cm^{-1}.
96
Ejemplo 33 [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-(2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(1'',2'',3'',4''-tetrahidroquinolin-5''-il)pentil]-4-(pirid-3'''-ilmetil)piperazino-2-N-t-butilcarboxamida
A una solución refrigerada (-10ºC) que contenía 45 mg (0,10 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 6B, 18 mg (0,10 mmoles) de ácido 1,2,3,4-tetrahidroquinolino-5-carboxílico, 30 mg (0,30 mmoles) de trietilamina, y 14 mg (0,10 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro, se le añadieron 22 mg (0,11 mmoles) de DCC. La mezcla de reacción resultante se agitó durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se volvió a disolver en acetato de etilo, y se filtró a través de celite. El producto filtrado se extrajo después sucesivamente con bicarbonato de sodio saturado (dos veces), salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida. La sustancia bruta se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 33 mg de una espuma de color blanquecino.
Rendimiento: 62%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,29 (s, 9H), 1,79-1,97 (m, 2H), 2,26-3,00 (m, 11H), 3,20-3,50 (m, 9H), 3,95-4,05 (m, 1H), 4,23-4,35 (m, 1H), 6,43-6,62 (m, 2H), 6,89 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,12-7,35 (m, 6H), 7,41 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,57-7,70 (m, 2H), 8,50-8,58 (m, 2H).
MS (FD): m/e 631 (M^{+}, 100).
Ejemplo 34 [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(quinolin-5''-il)pentil]-4-(pirid-3'''-ilmetil)pi-perazino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título fue aislado de Ejemplo 33. Rendimiento: 13 mg de una espuma de color blanquecino.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,18 (s, 9H), 2,27-2,90 (m, 9H), 3,17-3,60 (m, 5H), 4,07-4,19 (m, 1H), 4,40-4,55 (m, 1H), 4,75-4,95 (m, 1H), 6,90-7,68 (m, 11H), 8,16 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,48-8,60 (m, 2H), 8,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,89-8,97 (m, 1H).
MS(FD): m/e 527 (M^{+}, 100).
Ejemplo 35 2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-1-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[3''-metil-pirid-4''-il)]pentil]-4-(pirid-3'''-ilmetil)piperazino-2-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 20,3 mg (0,148 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 19, 70 mg (0,148 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 19, 31 mg (0,148 mmoles) de DCC, y 20 mg (0,148. mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en tetrahidrofurano que contenía 62 mL de trietilamina. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-15% en cloruro de metileno) para proporcionar 48 mg de una espuma de color blanco.
Rendimiento: 55%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,23 (s, 9H), 2,30-2,90 (m, 12H), 3,16-3,50 (m, 5H), 4,02-4,10 (m, 1H), 4,30-4,42,41 (m, 1H), 4,85 (s ancho, 1H), 6,90-7,60 (m, 10H), 8,38-8,57 (m, 3H).
MS(FAB): m/e 591,4 (M^{+}, 100).
Ejemplo 36 (3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-[2''-metil-3''-N-(metilsulfonil)amino-fenil)]pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 70 mg (0,17 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 40 mg (0,17 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 22, 35 mg (0,17 mmoles) de DCC, y 23 mg (0,17 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 1-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 72 mg de un sólido de color blanquecino.
Rendimiento: 69%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,14 (s, 9H), 1,19-2,38 (m, 19H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,92-3,06 (m, 4H), 3,43-3,55 5 (m, 1H), 4,01-4,10 (m, 1H), 4,58-4,70 (m, 1H), 5,66 (s, 1H), 6,37 (s ancho, 1H), 6,82-6,93 (m, 2H), 7,10-7,39 (m, 6H), 7,48 (d, J = 8,16 Hz, 1H).
IR (KBr): 3691, 3600-3300 (ancho), 2929, 2866, 1672, 1603, 1513, 1455, 1393, 1368, 1327, 1277, 1154, 1047, 972, 909. 877 cm^{-1}.
MS(FD): m/e (M^{+}, 100).
Ejemplo 37 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3''S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-[(1'',2'',3'',4''-tetrahidroquinolin-5''-il)]pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 18,5 mg (0,046 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 1B, 8,14 mg (0,046 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 20, 9,48 mg (0,046 mmoles) de DCC, y 6,21 mg (0,046 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano anhidro. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 11 mg de una espuma.
Rendimiento: 43%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,20 (s, 9H), 1,25-2,02 (m, 15H), 2,28 (m, 2H), 2,46-2,70 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,21 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 5,75 (s ancho, 1H), 6,38 (m, 3H), 6,83 (t, 1H), 7,21-7,33 (m, 5H).
Ejemplo 38 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[6''-metil-(1'',2'',3'',4''-tetrahidro-quinolin-5''-il)]pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 15 mg (0,035 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 6,5 mg (0,035 mmoles) de ácido 6-metil-1,2,3,4-tetrahidro-5-quinolinocarboxílico, 7,15 mg (0,035 mmoles) de DCC, y 4,7 mg (0,035 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano y 1 mL de dimetilformamida. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 3-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 12,5 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 60%.
97
Ejemplo 39 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[2'',6''-dimetil-3''-hidroxifenil]pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 1, utilizando 20 mg (0,046 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 8G, 11,53 mg (0,0694 mmoles) de ácido 2,6-dimetil-3-hidroxibenzoico, 9,54 mg (0,046 mmoles) de DCC, y 6,25 mg (0,046 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 3 mL de tetrahidrofurano. La sustancia resultante se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente de metanol al 4% en cloruro de metileno) para proporcionar 14 mg de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 52%.
98
Ejemplo 40 [2R'-(2R'*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 40, utilizando 100 mg (0,29 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24D, 44 mg (0,29 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 23C, 60 mg (0,29 mmoles) de DCC y 39 mg (0,29 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT\cdotH_{2}O) en 4 mL de tetrahidrofurano anhidro. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2-5% en cloruro de metileno) para proporcionar 58 mg de un polvo de color blanco.
Rendimiento: 42%.
[\alpha]_{D} 2,34º (c=3,4, MeOH).
RMN H1 (CD_{3}OD): \delta 1,47 (s, 9H), 1,88 (s, 3H), 2,70-2,80 (m, 1H), 2,95-3,10 (m, 3H), 3,25-3,30 (m, 1H), 3,85-3,95 (m, 1H). 4,35-4,45 (m, 1H), 4,84 (s, 1H), 6,55-6,58 (m, 1H), 6,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,15-7,45 (m, 11H).
IR (CHCl_{3}): 3580, 3550-3100 (ancho), 2929, 2865, 1662, 1596, 1521, 1472, 1455, 1394, 1368, 1293, 1157, 1047, 879. 839 cm^{-1}.
MS(FD): 475 (M*, 100).
99
Ejemplo 41 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-5''-hidroximetilfenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 40, utilizando 95 mg (0,28 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 24D, 65 mg (0,28 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 27B, 58 mg (0,28 mmoles) de DCC y 38 mg (0,28 mmoles) de HOBT\cdotH_{2}O en 2 mL de tetrahidrofurano que contenía 0,2 mL de dimetilformamida. El producto bruto se purificó utilizando cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente de metanol al 4% en cloruro de metileno) para proporcionar 64,6 mg del compuesto del título deseado.
Rendimiento: 47%.
[\alpha]_{D} -0,003 (c=1,02, MeOH).
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 1,44 (s, 9H), 1,98 (s, 3H), 2,70-2,85 (m, 1H), 3,00-3,12 (m, 2H), 3,25-3,35 (m, 1H), 3,85-3,97 (m, 1H), 4,00-4,10 (m, 2H), 4,35-4,46 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 6,98-7,43 (m, 11H), 8,06-8,18 (m, 1H).
MS(FD): m/e (M^{+} +1, 490).
100
Ejemplo 42 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-aminofenil)pentil]ben-zamida
A una solución fría (0ºC) de 50 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, se le añadieron 22 mg (0,14 mmoles) de ácido 2-metil-3-aminobenzoico, 16 mg (0,12 mmoles) de HOBT, 22 mg (0,12 mmoles) de EDC y 0,081 mL (0,58 mmoles) de trietilamina. La mezcla de reacción resultante se agitó a 0ºC durante aproximadamente una hora y después dieciséis horas a temperatura ambiente. La mezcla se sofocó después con agua y se extrajo con acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se secó, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo bruto. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 52 mg de un sólido de color blanco (pf 105-106ºC).
Rendimiento: 80%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,40 (m, 7H), 6,86 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,68 (s ancho, 2H), 3,51 (m, 3H), 3,12 (s, 2H), 3,04 (dd, J = 13,4, 10,1 Hz, 1H), 2,92 (dd, J = 13,4, 3,3 Hz, 1H), 2,23 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).
IR (KBr): 3304, 3068, 1633, 1516, 1321, 1221, 1076, 746 cm^{-1}.
101
Ejemplo 43 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-N(metil)aminofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 42 mg (0,26 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 28, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 102 mg de un sólido de color blanco (pf 111-113ºC).
Rendimiento: 76%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,75 (m, 2H). 7,52-7,21 (m, 9H), 7,00 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,62 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,69 (s, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,45 (s, 9H).
102 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 44 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-3''-aminofenil)pentil]ben-zamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 48 mg (0,28 mmoles) de ácido 2-cloro-3-aminobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 97 mg de un sólido de color blanco (pf 107-108ºC).
Rendimiento: 72%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,61-7,23 (m, 9H), 6,95 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,78 (m, 1H). 6,52 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,21 (s, 2H), 4,16 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 1,49 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
103 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 45 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-bromo-3''-aminofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 61 mg (0,28 mmoles) de ácido 2-bromo-3-aminobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 102 mg de un sólido de color blanco (pf 110-112ºC).
Rendimiento: 71%.
^{1}H MMR (CDCl_{3}): \delta 7,88 (s, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,60-7,25 (m, 9H), 6,95 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,52 (d, J = 7,9 HZ, 1H), 6,1 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,21 (s, 2H), 4,15 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,00 (m, 3H), 1,49 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
104
Ejemplo 46 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-(2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 75 mg (0,18 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 32 mg (0,21 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 23C, 24 mg (0,18 mmoles) de HOBT, 34 mg (0,18 mmoles) de EDC y 0,12 mL (0,88 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 52 mg de un sólido de color blanco (pf 119-120ºC).
Rendimiento: 53%.
IR (KBr): 3297, 1636, 1518, 1284, 1221, 1073, 746 cm^{-1}.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (s, 1H), 7,76 (m, 3H), 7,48 (m, 6H), 6,79 (m, 4H), 6,52 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,23 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,49 (m, 3H), 3,03 (dd, J = 13,4, 10,2 Hz, 1H), 2,97 (dd, J-13,4, 3,4 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,49 (s, 9H).
105
Ejemplo 47 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-5''-aminofenil)pentil]ben-zamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 44 mg (0,28 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 29, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente
de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 101 mg de un sólido de color blanco (pf 106-107ºC).
Rendimiento: 79%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H). 7,76 (m, 3H), 7,40-7,25 (m, 7H), 6,85 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,43 (d, J = .9,0 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,39 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,70 (ancho, s, 2H), 3,50 (m, 3H), 3,04 (dd, J-13,3, 10,1 Hz, 1H), 2,92 (dd, J-13,3, 3,2 Hz, 1H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).
106
Ejemplo 48 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-1-naftilamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,21 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 26D en 2,0 mL de dimetilformamida, 35 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 23C, 29 mg (0,21 mmoles) de HOBT, 40 mg (0,21 mmoles) de EDC y 0,15 mL (1,10 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de 1,5% metanol en cloruro de metileno) para proporcionar 106 mg de un sólido de color blanco (pf 115-117ºC).
Rendimiento: 82%.
RMN H1 (CDCl_{3} \delta 7,90 (s, 1H), 7,76 (m, 2H), 7,53-7,24 (m, 11H), 6,85 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,73 (m, 1H), 6,63 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,10 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,48 (m, 2H), 3,10 (dd, J = 12,9, 9,7 Hz, 1H), 2,88 (dd, J = 12,9, 3,2 Hz, 1H), 2,13 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
107
Ejemplo 49 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-3''-aminofenil)pentil]-1-naftilamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,21 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 26D en 2,0 mL de dimetilformamida, 39 mg (0,23 mmoles) de ácido 2-cloro-3-aminobenzoico, (29 mg (0,21 mmoles) de HOBT, 40 mg (0,21 mmoles) de EDC, y 0,15 mL (1,10 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 97 mg de un sólido de color blanco (pf 110-112ºC).
Rendimiento: 74%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (s, 1H), 7,81 (m, 4H), 7,75-7,21 (m, 9H), 6,95 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,75 (m, 1H), 6,51 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,21 (s. 2H), 4,15 (m, 1H). 3,51 (m, 2H), 3,00 (m, 3H), 1,49 (s, 9H).
108
Ejemplo 50 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-aminofenil)pentil]-benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 38 mg (0,28 mmoles) de ácido 3-aminobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 90 mg de un sólido de color blanco (pf 101-102ºC).
Rendimiento: 72%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,87 (s, 1H), 7,78 (m. 2H), 7,61-7,22 (m, 10H), 6,96 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,76 (m, 1H), 6,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,04 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 4,5 (m, 1H), 4,20 (s, 2H), 4,15 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 1,49 (s, 9H).
109
Ejemplo 51 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 50 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 20 mg (0,14 mmoles) de ácido 3-hidroxibenzoico, 16 mg (0,12 mmoles) de HOBT, 22 mg (0,12 mmoles) de EDC, y 0,081 mL (0,58 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo al 50% en hexano) para proporcionar 36 mg de un sólido de color blanco (pf 125-128ºC).
Rendimiento: 57%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,87 (s, 1H), 7,73 (m, 3H), 7,20-7,50 (m, 7H), 6,95-7,15 (m, 4H), 6,80 (m, 1H), 6,80 (m, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,30 (m, 1H), .5,9S (s, 1H), 4.S3. (m, 1H), . 4,10 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,03 (dd, J = 13,4, 10,5 Hz, 1H), 2,90 (dd, J-13,4, 3,5 Hz, 1H), 1,46 (s, 9H).
110
Ejemplo 52 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metilfenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 50 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 19 mg (0,14 mmoles) de ácido 2-metilbenzoico, 16 mg (0,12 mmoles) de HOBT, 22 mg (0,12 mmoles) de EDC, y 0,081 mL (0,58 mmoles) de trietilamina. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo al 40% en hexano) para proporcionar 33 mg de un sólido de color blanco (p.f. 85-87ºC).
Rendimiento: 52%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,76 (m, 3H), 7,15-7,52 (m, 11H), 7,02 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,48 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 3,00 (dd, J = 13,4, 10,2 Hz, 1H), 2,92 (dd, J = 13,4, 3,6 Hz, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,45 (s, 9H).
111
Ejemplo 53 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3'',5''-diaminofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 50 mg (0,12 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, 23 mg (0,14 mmoles) de ácido 2-metil-3,5-diaminobenzoico, 16 mg (0,12 mmoles) de HOBT, 22 mg (0,12 mmoles) de EDC, y 0,081 mL (0,58 mmoles) de trietilamina. El aceite bruto se purificó mediante cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 5% en cloruro de metileno) para proporcionar 28 mg de un polvo de color blanquecino (p.f. 125-128ºC).
Rendimiento: 42%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,77 (m, 3H), 7,20-7,53 (m, 10H), 6,35 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,15 (m ancho, 1H), 6,01 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,83 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H). 3,96 (m, 1H), 3,50 (m, 4H), 3,03 (dd, J = 13,4, 10,2 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 13,4, 3,5 Hz, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
112
Ejemplo 54 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2'',2''-diclorofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 75 mg (0,18 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 1,0 mL de dimetilformamida, 40 mg (0,21 mmoles) de ácido 2,3-diclorobenzoico, 24 mg (0,18 mmoles) de HOBT, 34 mg (0,18 mmoles) de EDC, y 0,12 mL (0,88 mmoles) de trietilamina. El aceite bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 25-50% en hexano) para proporcionar 75 mg de un sólido de color blanco (p.f. 116-119ºC).
Rendimiento: 74%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,20-7,52 (m, 9H), 7,13 (dd, J = 7,9, 1,2 Hz, 1H), 7,00 (t, J = 7-Hz, 1H), 6,64 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,8,8 (s ancho, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,50 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,00 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
113
Ejemplo 55 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-5'-aminofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 75 mg (0,18 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 1,0 mL de dimetilformamida, 36 mg (0,21 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 29, 24 mg (0,18 mmoles) de HOBT, 34 mg (0,18 mmoles) de EDC y 0,12 mL (0,88 mmoles) de trietilamina. El aceite bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de acetato de etilo al 50% en hexano) para proporcionar 90 mg de un sólido de color blanco (p.f. 109-110ºC).
Rendimiento: 90%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,21-7,52 (m, 10H), 7,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,73 (m, 1H), 6,55 (m, 2H), 5,92 (s ancho, 1H), 4,50 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,52 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,02 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).
114
Ejemplo 56 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-cloro-3''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 42, utilizando 75 mg (0,18 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 1,0 mL de dimetilformamida, 36 mg (0,21 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 14, 24 mg (0,18 mmoles) de HOBT, 34 mg (0,18 mmoles) de EDC, y 0,12 mL (0,88 mmoles) de trietilamina. El aceite bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo al 25-50% en hexano) para proporcionar 71 mg de un sólido de color blanco (p.f. 104-105ºC).
Rendimiento: 71%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,90 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,7 (m, 3H), 7,19-7,52 (m, 8H), 7,00 (m, 2H), 6,87 (m, 1H), 6,64 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,50 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 3,05 (dd, J = 13,4, 10,2 Hz, 2H), 2,94 (dd, J = 13,4, 3,6 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).
115
Ejemplo 57 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(isoquinolin-5''-il)pentil]benzamida
A una solución de 0,40 g (0,95 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E y 134 \muL (1,22 mmoles) de N-metilmorfolina en 15 mL de tetrahidrofurano, se le añadieron 0,45 g (1,33 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 30C. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente 8 horas y después se diluyó con acetato de etilo. Las capas resultantes se separaron y la capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, y salmuera, y después se concentró para proporcionar una sustancia bruta. Esta sustancia bruta se purificó utilizando cromatografía instantánea (sílice; eluyente de 4% metanol en cloruro de metileno) para proporcionar 0,53 g de un sólido de color blanco (p.f. 109-112ºC).
Rendimiento: 97%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 9,19 (s, 1H), 8,50 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,76 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,43 (m, 3H), 7,3,2 (m, 2H), 7,24 (m, 1H) 6,88 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,12 (m, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,51 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 3,01 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).
IR (película neta): 3428, 3019, 2978, 1647, 1514, 1215, 758 cm^{-1}.
116
Ejemplo 58 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5-oxo-5'-(1'',2'',3'',4''-tetrahidroisoquinolin-5''-il)pentil]benzamida
A una solución de 0,15 g (0,26 mmoles) del compuesto del título de Ejemplo 57 en 6 mL de ácido acético, se le añadieron 0,08 g (1,27 mmoles) de cianoborohidruro de sodio. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente 1 hora, y después se sofocó mediante la adición de una solución saturada de bicarbonato de sodio. El compuesto deseado se extrajo después utilizando acetato de etilo y los extractos orgánicos se lavaron sucesivamente con agua, y salmuera, y después se concentraron a presión reducida para proporcionar una espuma. Esta espuma se purificó utilizando cromatografía instantánea (sílice; eluyente de metanol al 4% en cloruro de metileno) para proporcionar 0,10 g de un sólido amorfo de color blanco (p.f. 197-199ºC).
Rendimiento: 66%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,85 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,50-7,20 (m, 7H), 7,06 (m, 1H), 6,95 (m, 2H), 6,59 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,02 (s, 1H), 4,48 (s ancho, 1H), 4,00 (s ancho, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,01 (s, 1H), 2,98 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 2,89 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), OH no observado.
IR (película neta): 3418, 3281, 3019, 1632, 1516, 1215, 756;
117
Ejemplo 59 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[2-N(metil)-1'',2'',3'',4''-tetrahidroisoquinolin-5''-il)pentil]benzamida
A una solución caliente (60ºC) de 0,11 g (0,19 mmoles) del compuesto del título de Ejemplo 57 en 3 mL de tetrahidrofurano, se le añadieron 53 mg (1,40 mmoles) de borohidruro de sodio y 75 \muL de ácido fórmico. Después de aproximadamente 1 hora, la mezcla de reacción se sofocó mediante la adición de una solución saturada de bicarbonato de sodio. El compuesto deseado se extrajo después utilizando acetato de etilo y los extractos orgánicos se lavaron sucesivamente con agua y salmuera, y después se concentró para proporcionar una espuma. Esta espuma se purificó utilizando cromatografía instantánea (sílice; eluyente de metanol al 5% en cloruro de metileno) para proporcionar 0,05 g de un sólido amorfo de color blanco (p.f. 110-113ºC).
Rendimiento: 44%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,86 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,50-7,20 (m, 7H), 7,00 (m, 3H), 6,46 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,96 (s, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 3,54 (s, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,20-2,90 (m, 4H), 2,60 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,44 (s, 9H).
IR (película neta): 3432, 3019, 2976, 1645, 1516, 1215, 756 cm^{-1}.
118
Ejemplo 60 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(1'',2'',3'',4''-tetrahidroisoquinolin-5''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 58.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,42 (m, 10H), 7,00 (m, 3H), 6,28 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 3,95 (s ancho, 3H), 2,80-3,20 (m, 7H), 2,62 (m, 1H), 1,47 (s, 9H).
119
Ejemplo 61 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(naft-1''-il)pentil]benzamida
A una solución fría (0ºC) de 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E en 2,0 mL de dimetilformamida, se le añadieron 45 mg (0,26 mmoles) de ácido naftaleno-1-carboxílico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina. La mezcla de reacción resultante se hizo reaccionar durante aproximadamente 1 hora a 0ºC y 16 horas a temperatura ambiente, después se diluyó con 10 mL de acetato de etilo. La mezcla resultante se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y después se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo. Este residuo se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 82 mg de un sólido de color blanco (p.f. 92-95ºC).
Rendimiento: 63%.
RMN H1 (CDCl_{3}) \delta 8,35 (s ancho, 1H), 7,95-7,68 (m, 7H), 7,62-7,30 (m, 10H), 6,71 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,10 (d, 6,2 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 3,51 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,0 (m, 2H), 1,51 (s, 9H).
120
Ejemplo 62 [2'R-(2'R*,3',S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(indol-4''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó y sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 42 mg (0,26 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 32, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 43 mg de un sólido de color blanco (p.f. 109-110ºC).
Rendimiento: 35%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 8,45 (s ancho, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,76 (m, 3H), 7,57-7,23 (m, 10H), 7,19-6,89 (m, 3H), 6,24 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 1,49 (s, 9H),
121
Ejemplo 63 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(quinolin-5''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente, según el procedimiento detallado en el Ejemplo 57, utilizando 0,060 g (0,15 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 42 \muL(0,38 mmoles) de N-metilmorfolina, y 0,074 g (0,38 mmoles) del compuesto del título de la Preparación 31 en 2 mL de tetrahidrofurano para proporcionar 0,045 g de un sólido de color blanco.
Rendimiento: 54%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 8,85 (m, 1H), 8,75 (m, 1H), 8,75 (d, J = 8,21 Hz, 1H), 8,07 (m, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,76 (m, 3H), 7,64 (m, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,25 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,45 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,69 (dd, J = 14, 3,09 Hz, 1H) 3,23 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 1,32 (s, 9H).
IR (KBr): 3485, 3429, 3279, 3061, 2964, 1638, 1543, 1454, 1364, 1319, 1219, 1072, 806, 746 cm^{-1}.
122
Ejemplo 64 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(1'',2'',3'',4''-tetrahidroquinolin-5''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 58, utilizando 0,023 g (0,36 mmoles) de cianoborohidruro de sodio, 0,041 g (0,07 mmoles) del compuesto del título de Ejemplo 63, y 2 mL de ácido acético para proporcionar 0,024 g de un sólido amorfo de color blanco.
Rendimiento: 60%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,88 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,42 (m, 6H), 6,79 (t, J = 7,73 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 7,2,8 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 8,15 Hz, 2H), 6,10 (ancho 1H), 5,91 (s ancho, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,48 (m, 2H), 3,24 (t, J = 5,50 Hz, 2H), 2,89 (m. 4H) 1,85 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).
IR (KBr): 3450, 2972, 1638, 1618, 1591, 1512, 1454, 1309, 1119, 1134, 1086, 814, 698, 621 cm^{-1}.
124
Ejemplo 65 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(indolin-4''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 42 mg (0,26-mmoles) del compuesto del título de la Preparación 32, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23, mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 12 mg de un sólido de color blanco (p.f. 83-84ºC).
Rendimiento: 9%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,99 (s, 1H), 7,76 (m, 3H), 7,69-7,23 (m, 10H), 7,10 (d, J-8,8 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,99 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,44 (m, 6H), 3,01 (m, 2H), 1,49 (s, 9H).
125
Ejemplo 66 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(quinolin-4''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 45 mg (0,26 mmoles) de ácido quinolino-4-carboxílico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 42 mg de un sólido de color blanco (p.f. 89-92ºC).
Rendimiento: 32%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 8,59 (s, 1H), 8,33 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,80-7,71 (m, 4H), 7,69-7,25 (m, 8H), 7,15 (s, 1H), 6,88 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,51 (d, 6,2 Hz, 2H), 3,02 (m, 2H), 1,39 (s, 9H).
126
Ejemplo 67 [2'R-(2'R*,3'S*)-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-hiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-nitrofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 47 mg (0,26 mmoles) de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 100 mg de un sólido de color blanco (p.f. 80-81ºC).
Rendimiento: 74%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,65-7,25 (m, 9H), 7,10 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,97 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,44 (m, J = 6,3 Hz, 2H), 3,03 (dd, J = 13,3, 10,2 Hz, 1H), 2,28 (dd, J = 13,5, 2,8 Hz, 1H), 2,53 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
127 
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Ejemplo 68 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-nitro-6''-metilfenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 47 mg (0,26 mmoles) de ácido 2-metil-5-nitrobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 102 mg de un sólido de color blanco (p.f. 85-88ºC).
Rendimiento: 75%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 8,17 (s, 1H), 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,59-7,22 (m, 10H), 6,71 (d, J-8,9 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,9 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,45 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 3,03 (dd, J = 13,3, 9,61 Hz, 1H), 2,9 (dd, J = 13,3, 3,72 Hz, 1H), 2,55 (s, 3H), 1,43 (s, 9H).
128 
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Ejemplo 69 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(1''-N(metil)indol-4''-il)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 46 mg (0,26 mmoles) de ácido 1-N-metil-4-indolinocarboxílico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 1% en cloruro de metileno) para proporcionar 42 mg de un sólido de color blanco (p.f. 86-89ºC).
Rendimiento: 31%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,88 (s, 1H), 7,79-7,65 (m, 3H), 7,53-6,95 (m, 13H), 6,22 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,99 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,51 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 1,49 (s, 9H).
129
Ejemplo 70 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3'',4''-dihidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 44 mg (0,26 mmoles) del compuesto del subtítulo de preparación 33C, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16.mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2,5% en cloruro de metileno) para proporcionar 76 mg de un sólido de color blanco (p.f. 121-123ºC).
Rendimiento: 58%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,89 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,55-7,22 (m, 10H), 6,85 (t, J = .7,9 Hz, 1H), 6,72 (m, 2H), 6,61 (d, J = .5,7 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 3,12 (dd, J = 13. 1, 10 Hz, 1H), 2,87 (dd, J = 13,1, 3,1 Hz. 1H), 2,13 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
130
Ejemplo 71 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-[3''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 45 mg (0,26 mmoles) de ácido 2-cloro-4-aminobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 2% en cloruro de metileno) para proporcionar 92 mg de un sólido de color blanco (p.f. 102-104ºC).
Rendimiento: 69%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,88 (s, 1H), 7,77 (m, 2H), 7,61-7,23 (m, 9H), 6,95 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,75 (m, 1H), 6,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 6,1 Hz, 1H). 5,90 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,20 (s, 2H), 4,12 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 1,48 (s, 9H).
131
Ejemplo 72 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-(2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-5''-hidroxifenil)pentil]benzamida
El compuesto del título deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 47 mg (0,26 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 29B, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 40 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 86 mg de un sólido de color blanco (p.f. 104-106ºC).
Rendimiento: 67%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,85 (s, 1H), 7,72 (m, 3H), 7,60-7,22 (m, 9H), 6,92 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,72 (m, 1H), 6,50 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,96 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,15 (m, 1H). 4,02 (m, 1H), 2,51 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 2,36 (s, 3H), 1,45 (s, 9H).
132 
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Ejemplo 73 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-t-Butil-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-iltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-hidroxi-4''-aminofenil)pentil]benzamida
El compuesto del título deseado se preparó sustancialmente según el procedimiento detallado en el Ejemplo 61, utilizando 100 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de la Preparación 25E, 40 mg (0,26 mmoles) de ácido 3-hidroxi-4-aminobenzoico, 32 mg (0,23 mmoles) de HOBT, 45 mg (0,23 mmoles) de EDC, y 0,16 mL (1,20 mmoles) de trietilamina en 2,0 mL de dimetilformamida. El residuo bruto se purificó utilizando cromatografía instantánea (eluyente de metanol al 3% en cloruro de metileno) para proporcionar 43 mg de un sólido de color blanco (p.f. 119-122ºC).
Rendimiento: 34%.
RMN H1 (CDCl_{3}): \delta 7,91 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,60-7,20 (m,10H), 6,96 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,75 (m, 1H), 6,55 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,23 (s, 2H), 4,12 (m, 1H), 3,52 (m, 2H), 3,00 (m, 3H), 1,48 (s, 9H).
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El Esquema de Reacción III muestra las estructuras de los compuestos de los Ejemplos 74 A a L más abajo.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Ejemplo 74 Ejemplo A N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-D,L-alanina
En un matraz de 500 ml se colocaron 3,0 g de 3-(2-Tienil)-D,L-alanina (la sustancia ópticamente activa en forma L está disponible en Aldrich o SIGMA y se podría utilizar para obtener un producto ópticamente activo) en 75 ml de H_{2}O/60 ml de dioxano, y se añadieron 5,6 g de K_{2}CO_{3}, seguido de 2,85 ml de cloruro de benciloxicarbonilo. La mezcla se agitó rápidamente durante 1 hora. La TLC (EtOAc/AcOH/CH_{3}CN/H_{2}O, 21/7/7/9) mostró que la sustancia de partida había desaparecido. Se observó un nuevo producto de mayor Rf. El dioxano se eliminó mediante concentración y la capa acuosa se lavó con Et_{2}O (75 ml). La capa acuosa se mezcló con CH_{2}Cl_{2} (150 ml) y se aciduló a pH = 2,0 con HCl 5 N. La N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-D,L-alanina deseada se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se separó y se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró, y se concentró para dar 5,05 g de la N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-D,L-alanina deseada (Rendimiento, 98%).
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,37 (m, 5H); 7,18 (d, J = 4Hz, 1H); 6,95 (m, 1H); 6,83 (m, 1H); 5,35 (d, J = 8Hz, 1M); 5,15 (s, 2H); 4,7 (m, 1H); y 3,4 (m, 2H).
Ejemplo B N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-L-alanin-terc-butilamida
En un matraz de 500 ml se colocaron 8,06 g del compuesto del subtítulo de Ejemplo A, N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-L-alanina, en 130 ml de THF. El compuesto se enfrió a 0ºC. Se añadió N-metilmorfolina (4,23 ml), seguido de cloroformiato de isobutilo (4,04 ml) a lo largo de dos minutos. La mezcla se agitó durante 15-20 minutos, y se añadieron 3,74 ml de t-butilamina. El baño se retiró, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante dos horas. La mezcla se concentró en un rotavapor, y el residuo se recogió en acetato de etilo. El residuo se lavó sucesivamente con H_{2}O, HCl, y una solución saturada de NaHCO_{3}. Las sustancias orgánicas se separaron y se secaron con Na_{2}SO_{4,} se filtraron, y se concentraron hasta un aceite. El aceite se disolvió en 100 ml hexano caliente y se enfrió en un refrigerador durante la noche para dar un sólido. El hexano se decantó, seguido de secado para producir un sólido de 9,25 g N-(carbobenciloxi)-3-(2-tienil)-L-alanin-terc-butilamida (Rendimiento, 97%).
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,37 (s, 5H); 7,2 (d, J-4Hz, 1H); 6,95 (dd, J = 4Hz, 8Hz, 1H); 6,87 (d, J = 4Hz, 1H); 5,52 (m, 2H); 5,12 (s, 2H); 4,27 (m, 1H); 3,27 (m, 2H), y 1,23 (s, 9H).
Ejemplo C N-t-Butil-5-benciloxicarbonil-(4,5,6,7)-tetrahidrotieno[3,2-c]piridino-6S-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 50 ml se colocaron 500 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo B, N-(Benciloxicarbonil)-3-(2-tienil)-L-alanin-terc-butilamida, en 12 ml de 1,1,2-tricloroetano. Se añadieron 2 ml de TFA, seguido de 2 ml dimetoximetano. La mezcla se calentó a reflujo, seguido de TLC cada cinco minutos. Al cabo de 15 minutos, la TLC mostró que la sustancia de partida había desaparecido. Se obtuvo principalmente el producto deseado, se retiró del calor, y se vertió en 30 ml de H_{2}O que contenía 3,5 g de K_{2}CO_{3} y 40 ml de CH_{2}Cl_{2}. El producto deseado se transfirió a un embudo separador, y las sustancias orgánicas se separaron y se secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron, y se concentraron hasta un aceite. El producto se purificó mediante cromatografía instantánea a través de 25 g (SiO_{2}) con EtOAc al 3%/CH_{2}Cl_{2}. Se obtuvieron 357 mg de N-t-butil-5-benciloxicarbonil-(4,5,6,7)-tetrahidrotieno[3,2-c]piridino-6S-N-t-butilcarboxamida (rendimiento, 69%).
Son muy importantes un período de quince minutos desde el momento del reflujo para la retirada de la fuente de calor y la elaboración inmediata para evitar las reacciones secundarias.
RMN H1 (300 MHz, d_{6} DMSO): \delta 7,35 (m, 7H); 6,83 (m, 1H); 5,15 (m, 2H); 4,98 (m, 1H); 4,35 (m, 2H); 3,10 (m, 2H); y 1,10 (s, 9H).
MS: m/e 372 (M+)
Ejemplo D [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-N-(Benciloxicarbonil)-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En una vasija de hidrogenación de alta presión se colocó el compuesto del subtítulo de Ejemplo C, N-t-butil-5-benciloxicarbonil-(4,5,6,7)-tetrahidro-tieno(3,2-c)-piridino-6S-N-t-butilcarboxamida, (10,5 g) y 105 g de Pd al 5% sobre carbono en 1,100 ml de THF y 525 ml de ETOH. La mezcla se colocó en H_{2} (210,97 Kg/cm^{2}) a 80ºC durante 24 horas. La mezcla de reacción se enfrió y el catalizador se filtró y se lavó con MeOH al 20%/CHCl_{3}. El producto filtrado orgánico se combinó y se concentró hasta un aceite bruto. El aceite se recogió en CH_{2}Cl_{2} y se sometió a cromatografía instantánea en 250 g de (SiO_{2}) eluyendo con MeOH al 2%/CH_{2}Cl_{2}. El isómero cis (principal) deseado se recuperó contaminado con una pequeña cantidad de un isómero minoritario. Esta mezcla se recristalizó mediante disolución en 1,5 ml de MeOH, adición de 20 ml de Et_{2}O, seguido de adición de 120 ml de hexano, y la mezcla se colocó en un refrigerador durante la noche. Los cristales obtenidos se filtraron, se lavaron con hexano frío y se secaron a vacío para dar 2,54 g del isómero cis (6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-N-(benciloxicarbonil)octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (Rendimiento, 24%).
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,37 (s, 5H); 6,0 y 5,5 (s ancho, 1H); 5,18 (s ancho, 2H); 4,22 (m, 2H); 3,40 (m, 1H); 2,87 (m, 3H); 2,48 (m, 1H); 2,15 (m, 2H); 1,70 (m, 1H); y 1,15 (s ancho, 9H).
MS: m/e 377 (M^{+}+1).
Ejemplo E [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-Octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 100 ml se colocaron 2,41 g del compuesto del subtítulo de Ejemplo D, [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-N-(Benciloxicarbonil)-octahidrotieno [3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, en 12 ml de CH_{3}CN/CH_{2}Cl_{2} 1:1. Se añadió la primera porción de yoduro de trimetilsililo (TMSI) (1,9 ml) y se agitó durante 10 minutos. Se añadió una segunda porción de TMSI (0,94 ml) y se agitó durante 10 minutos. Se añadió una tercera porción de TMSI (0,48 ml) y se agitó durante 30 minutos. La TLC (EtOAc al 5%/CH_{2}Cl_{2}) mostró que la sustancia de partida había desaparecido. La mezcla de reacción se diluyó con 30 ml de éter dietílico y 40 ml de H_{2}O y 6 ml de HCl 1 N. La capa de éter se separó y se lavó con 15 ml de HCl 0,1 N. Las capas etéricas combinadas se descartaron, y los lavados acuosos se combinaron. Se añadió NaHCO_{3} saturado para ajustar el pH de la capa acuosa a 8. La capa acuosa se extrajo dos veces con 200 ml de CH_{2}Cl_{2}, y las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La solución se filtró y se concentró para dar 1,3 g
(rendimiento, 84%) de la [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida deseada.
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6,43 (s, 1H); 3,22 (m, 2H); 2,95 (m, 4H); 2,17 (m, 3H); 2,0 (m, 1H); 1,55 (m, 2H); y 1,32 (s, 9H).
[\alpha]_{D} (EtOH) = -179,1º (at 25ºC).
Ejemplo F [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piri-dino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 100 ml se colocaron 1,45 g de [1'R-(1'R*,1S*)]-1-[(1'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-(feniltio)etil]oxirano (obtenido siguiendo la Preparación 8E. El ([1'R-(1'R*,1S*)]-1-[(1'-N-(Benciloxicarbonil)-amino-2'-
(feniltio)etil]oxirano se puede obtener también como se muestra en el Ejemplo M más abajo)) y 1,07 g del compuesto del subtítulo de Ejemplo 75, [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-Octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, en 30 ml de EtOH, y la mezcla se calentó a 65ºC durante 60 horas. La mezcla de reacción se concentró hasta una espuma y se purificó en un cromatotron (placa de 4000 micras), se eluyó con MeOH al 1%/CH_{2}Cl_{2}. Las fracciones deseadas se concentraron para dar 1,8 g de la [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida deseada. Algunas fracciones mixtas se combinaron al principio para dar 326 mg de una mezcla, que se sometió de nuevo a las mismas condiciones cromatográficas en una placa de 2000 micras. Se obtuvieron 228 mg adicionales de la [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida deseada. El rendimiento total de la [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida obtenida fue (rendimiento del 80,5%).
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,30 (m, 10H); 5,80 (m, 2H); 5,08 (AB, 2H); 3,95 (m, 2H); 3,42 (m, 2H); 3,17 (m, 3H); 2,90 (m, 2H); 2,67 (m, 1H); 2,58 (m, 1H); 2,48 (m, 1H); 2,35 (m, 2H); 1,98 (m, 4H); y 1,30 (s, 9H).
Ejemplo G [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 100 ml se colocaron 1,8 g del compuesto del subtítulo de Ejemplo F, [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-(2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxa-
mida, en 10 ml de cada uno de CH_{2}Cl_{2} y CH_{3}CN. Se añadió una primera porción de TMSI (1,14 ml) y se agitó durante 10 minutos. Se añadió una segunda porción de TMSI (0,72 ml) y se agitó durante 10 minutos. Se añadió una tercera porción de TMSI (0,24 ml) y se agitó durante 15 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con 40 ml de Et_{2}O y se vertió en 30 ml de HCl 0,1 N y 60 ml de Et_{2}O. La capa de Et_{2}O se separó y las sustancias orgánicas se descartaron. La capa acuosa se alcalinizó con una solución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos se separaron, se secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron, y se concentraron para proporcionar 1,18 g de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-(2-Hidroxi-4-feniltio-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (rendimiento, 86%) en forma de un sólido de color blanco.
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,38 (m, 2H); 7,28 (m, 2H); 7,20 (m, 1H); 6,23 (s, 2H); 3,65 (s, 1H); 3,28 (m, 3H); 2,90 (m, 4H); 2,70 (m, 2H); 2,58 (m, 1H); 2,43 (m, 1H); 2,34 (m, 1H); 2,05 (m, 4H); 1,80 (m, 3H); y 1,32 (s, 9H).
IR (CHCl_{3}): 3430; 3005; 2973; 1670; 1514; 1456; 1366; y 1090 cm^{-1}.
MS: m/e 437 (M^{+}).
Ejemplo H [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 25 ml se colocaron 40 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo G, [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3,S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, 14 mg de ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico, y 12,6 mg de HOBT en 2 ml de THF, y la mezcla de reacción se enfrió a -10ºC. Se añadió DCC (18,7 mg), y la mezcla se templó a la temperatura ambiente y se agitó durante 85 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 2 ml de Et_{2}O y se filtró a través de un tapón de algodón, el producto filtrado se concentró, y el residuo se hizo eluir en un cromatotrón (placa de 2000 micras) con MeOH al 3%/CHCl_{3}. Las fracciones deseadas se concentraron para dar 44 mg de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (rendimiento, 85%).
Ejemplo I Sal de ácido metanosulfónico de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 50 ml se colocaron 330 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo H, [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridi-
no-6-N-t-butilcarboxamida, en CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}CN (4 ml/2 ml), y se añadieron 37,5 ml de MeSO_{3}H a través de una jeringa de microlitros. La mezcla se enturbió. La mezcla de reacción se diluyó con 1 ml de CH_{2}Cl_{2}, y se añadieron Et_{2}O y hexano y se concentró. El residuo se sometió a sonicación con hexano y se concentró dos veces para obtener 385 mg de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-la sal de ácido metanosulfónico de ácido feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida deseada (Rendimiento, 100%).
Ejemplo J [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridi-no-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 50 ml se colocaron 145 mg de [1'S-(1'R*,1R*)]-1-[(1'-N-(Benciloxicarbonil)amino-2'-(fenil)etil]oxirano (obtenible como en el Esquema de Reacción A (etapas 1 a 5) más abajo, y 118 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo E, [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-Octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, en forma de una mezcla de enantiómeros en 3 ml de EtOH. La mezcla se calentó a 65ºC y se mantuvo a esta temperatura durante 20 horas. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo bruto se purificó mediante un cromatotron en una placa de 2000 micras, se hizo eluir con MeOH al 1%/CHCl_{3} para proporcionar 98 mg de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (Rendimiento, 37%) y 109 mg de un diastereómero de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida.
Si se utiliza [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-Octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida sustancialmente enantioméricamente pura en lugar de [6S-(6R*,3aS*,7aR*)]-Octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida en forma de una mezcla de enantiómeros, se debe producir un rendimiento superior de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida. (Véase, p. ej., el Ejemplo F anterior.)
Ejemplo K [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 25 ml se colocaron 85 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo J, [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-(benzoxi-carbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, en CH_{3}CN/CH_{2}Cl_{2}. Se añadió TMSI en porciones de 56 microlitros, 34 microlitros y 11 microlitros, respectivamente, cada diez minutos y se agitó durante 1 hora y media. La mezcla se diluyó con Et_{2}O (5 ml) y se vertió en 15 ml de HCl 1 N y Et_{2}O (20 ml). Las sustancias orgánicas se separaron y se descartaron. La capa acuosa se trató con 30 ml de una solución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos se secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron, y se concentraron hasta un aceite que se cristalizó para dar 64 mg [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3-R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (Rendimiento, 100%).
RMN H1 (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,28 (m, 5H); 6,38 (s, 1H); 3,75 (m, 1H); 3,32 (m, 2H); 3,12 (m, 1H); 2,93 (m, 2H); 2,78 (m, 2H); 2,58 (m, 3H); 2,38 (m, 1H); 2,12 (m, 5H); 1,83 (m, 2H); y 1,35 (s, 9H).
Ejemplo L [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida
En un matraz de 25 ml se colocaron 64 mg del compuesto del subtítulo de Ejemplo K, [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-5-[2-Hidroxi-4-fenil-3-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, 24 mg de ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico (obtenido mediante el método descrito en la Preparación 23C), y 22 mg de HOBT\cdotH_{2}O en 2 ml de THF, y la mezcla se enfrió a -10ºC. Se añadió DCC (32 mg), y la mezcla se templó a la temperatura ambiente y se agitó durante 60 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 2 ml de Et_{2}O, se filtró a través de un tapón de algodón, y el producto filtrado se concentró, y el residuo se hizo eluir en un cromatotrón (placa de 2000 micras) con un gradiente de MeOH al 1,5%/CHCl_{3} a MeOH al 4%/CHCl_{3}. Las fracciones deseadas se concentraron para dar 72 mg de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (Rendimiento, 85%).
Ejemplo 75 Sal de ácido metanosulfónico de ácido [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''- hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
Este compuesto se preparó como en el Ejemplo 23, con la excepción de que las Etapas de Preparación 8A y 8D se cambiaron como se muestra en la etapa (1) más abajo, y se añadió la etapa (2) de formación de la sal de más abajo.
(1)
A un matraz de 2 L se le añadieron Ph_{3}P (109,6 g) en 500 ml de CH_{2}Cl_{2}, y la mezcla se enfrió a -70ºC. A la mezcla se le añadió una solución de azidodicarboxilato de dietilo (66 ml) en 60 ml de THF gota a gota a lo largo de 25 minutos. Al cabo de 25 minutos, se añadió una solución de N-carbobenciloxi-L-serina (100 g) en 400 ml de THF gota a gota a lo largo de 45 minutos y se dejó templar a la temperatura ambiente en un baño de agua a lo largo de dos horas. Se añadieron 150 ml de THF a la mezcla. En otro matraz, una solución de tiofenol (46 g) en 1 L de THF se enfrió en un baño de hielo a 0ºC y se trató en porciones con una dispersión de NaH (10 g) para dar una solución espesa. Al cabo de una hora, la solución de lactona bruta se añadió a la solución de tiolato gota a gota a través de un embudo de adición a lo largo de 30 minutos. Al cabo de 12 horas, un precipitado de color blanco se separó mediante filtración, y la torta del filtro se lavó con THF. El sólido se recogió en NaHSO_{4} 0,4 N y EtOAc, se separó, y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó, y se evaporó para proporcionar 85 g de ácido 2R-2-N-(benciloxicarbonil)amino-3-feniltio-propanoico en forma de un aceite viscoso.
Se cree que el sólido original es la sal de sodio del producto deseado. En ese caso, el rendimiento y la facilidad de aislamiento se pueden mejorar mediante aislamiento de la sal de sodio directamente.
La clorocetona 3R-1-Cloro-2-oxo-3-N-(benciloxi-carbonil)amino-4-feniltiobutano bruta (16,87 g, 46,4 mmoles) se añadió a 1 L de EtOH absoluto y 200 mL THF, y la solución se enfrió en un baño de CO_{2}-acetona (T_{int}-78º), y se añadió gota a gota NaBH_{4} (2,63 g, 69,5 mmoles) en 200 ml EtOH absoluto a lo largo de 1 h (T_{int} < -75ºC). El análisis TLC tras la adición mostró que se había completado la reacción. La reacción se diluyó con 300 mL de éter y se sofocó mediante la adición lenta de NaHSO_{3} 0,4 N agitando, que produjo el desprendimiento de gas. Esta mezcla se concentró a presión reducida para eliminar la mayoría del EtOH y se añadió agua adicional. La mezcla se extrajo con éter, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron para proporcionar 15,7 g de un sólido de color blanquecino. Esta sustancia se trituró con hexano hirviendo (300 mL), y el hexano se decantó cuidadosamente mientras estuvo caliente. Esto se repitió 10 veces (300 mL cada uno) para proporcionar 10,35 g de un sólido de color blanquecino (un isómero puro mediante TLC). El producto filtrado en hexano se concentró para dar 6 g de un sólido de color blanco que dejó aparte. El sólido triturado se calentó con 50 mL de CH_{2}Cl_{2} y aproximadamente 6 mL de hexano y se filtró en caliente. La solución transparente se dejó enfriando a 25ºC y después se colocó en un congelador. El sólido resultante se filtró y se lavó con hexanos para dar 7,157 g de un sólido de color blanco. El producto filtrado se combinó con el producto filtrado en hexano de antes y con el producto de reacción bruto de dos experimentos a pequeña escala (partiendo de 500 mg de cetona cada uno), y la sustancia combinada se sometió a cromatografía sobre SiO_{2} (hexanos-éter 2:1 - - -> hexanos-éter 1:1, cargada con CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 2,62 g de producto adicional. Se obtuvieron un total de 10,31 g de isómero puro de [2S-(2R*,3S*)]-1-Cloro-2-hidroxi-3-N-(benciloxicarbonil)-amino-4-feniltiobutano (rendimiento 50% a partir del ácido).
alfa_{D} = -63,6º (c=1, MeOH).
(2)
Formación de la Sal
Se disolvió [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)1-2-[2'Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida (3,34 g) en 30 ml de MeOH y 30 ml de CH_{2}Cl_{2}, y se añadió una solución de ácido metanosulfónico (596 mg) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} gota a gota. Al cabo de 10 minutos, la mezcla de reacción se concentró hasta espuma. La sal bruta se recogió en 5 ml de THF y se añadió lentamente a una mezcla de 175 ml de éter etílico y 25 ml de hexanos agitando hasta que se obtuvo una suspensión fina. Esta se enfrió en un congelador, se filtró en frío y se lavó varias veces con éter etílico, seguido de secado en un horno de vacío para proporcionar 3,75 g (96%) de sal de ácido metanosulfónico de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida en forma de un polvo de color blanco.
Ejemplo 76 Ácido 3-(bisbenzoxifosfinil)oxi-2-metilbenzoico
136
A una solución refrigerada (0ºC), agitada de 706 mg (4,67 mmoles) de ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico en 30 mL de piridina se le añadieron gota a gota 10,3 mL (10,21 mmoles) de una solución 1,0 M de hexametildisilazida de litio a lo largo de 5 minutos. Después de agitar durante 5 minutos, se añadieron 3,0 g (5,57 mmoles) de pirofosfato de tetrabencilo en una porción, y la mezcla de reacción se templó a la temperatura ambiente a lo largo de 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se repartió entre HCl 2,5 N (200 mL) y una mezcla 50/50 de acetato de etilo/hexano (200 mL). Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo dos veces con una solución 50/50 de acetato de etilo/hexano. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. La purificación del producto bruto mediante cromatografía instantánea (eluyente en gradiente de acetato de etilo 50-70%/ hexano/ácido acético 2%) produjo 910 mg de un aceite de color amarillo claro, que es ácido 3-(bisbenzoxifosfinil)oxi-2-metilbenzoico.
Rendimiento: 47%
RMN H1 (CDCl_{3}): d 2,49 (s, 3H), 5,14 (d, J = 8,60 Hz, 4H), 7,10-7,40 (m, 11H), 7,48 (d, J = 8,09 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 7,80 Hz, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3700-2350 (ancho), 1700, 1457, 1382, 1273, 1240, 1179, 1082, 1034, 1023, 1001, 966, 881, 851 cm^{-1}. MS (FD): m/e 413 (M^{+}, 100).
Ejemplo 77 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxa-5'-(2''-metil-3''-(bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
137
A una solución refrigerada (-10ºC) de 95 mg (0,23 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 76, ácido 3-(Bisbenzoxifosfinil)oxi-2-metilbenzoico, 92 mg (0,23 mmoles) de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida (véase por ejemplo Preparación 1B), y 31 mg (0,23 mmoles) de HOBt en 5 mL de THF anhidro, se le añadieron 48 mg (0,23 mmoles) de DCC en una porción. Después de agitar durante 3 días a la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través un tapón de algodón. El producto filtrado resultante se extrajo dos veces con carbonato de sodio saturado, se lavó con salmuera, y se secó sobre sulfato de sodio. La purificación del producto bruto mediante cromatografía radial (placa de 2 mm; eluyente en gradiente de metanol al 2,5-5%/cloruro de metileno) produjo 100 mg de una espuma de color blanco, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(Bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 52%
RMN H1 (CDCl_{3}): d 1,13 (s, 9H), 1,14-2,10 (m, 15H), 2,23-2,36 (m, 2H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,92-3,05 (m, 2H), 3,39-3,50 (m, 1H), 3,80-4,10 (m, 2H), 4,52-4,62 (m, 1H), 5,03-5,13 (m, 4H). 5,65 (s, 1H), 6,62 (d, J = 8,51 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 7,60 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 8,10 Hz, 1H).
IR (CHCl_{3}): 3690, 3600-3100 (ancho), 3009, 2929, 2866, 1672, 1603, 1513, 1456, 1368, 1277, 1239, 1182,1037, 1023, 1001, 967, 880 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 796 (M^{+}, 100).
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138 
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Ejemplo 78 3''-Dihidrogenofosfato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxa-5'-(2''-metil-3''-Hidroxifenil)pentil]decahidro-isoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida 
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139 
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Una mezcla de 86 mg (0,108 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 77, [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]-decahidroiso-
quinolino-3-N-t-butilcarboxamida, y 23 mg de Paladio sobre carbono al 10% en 16 mL de metanol se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y se concentró para dar 61 mg de un sólido de color blanco, que es 3''-dihidrogenofosfato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3'-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 96%
RMN H1 (Metanol-d_{4}): d 1,32 (s, 9H), 1,33-2,21 (m, 14H), 2,60-2,75 (m, 1H), 3,18-3,49 (m, 5H), 3,56-3,70 (m, 1H), 3,95-4,35 (m, 3H), 5,47 (s, 1H), 6,71 (d, J = 7,26 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 8,24 Hz, 1H), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,40 (d, J = 8,18 Hz, 1H).
IR (KBr): 3800-2400 (ancho), 1673, 1545, 1456, 1395, 1368, 1222, 1185, 1077, 942, 857, 792 cm^{-1}.
MS (FAB): m/e 616,3 (M^{+} 100).
Ejemplo 79 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxa-5'-(2''-metil-3''-(bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-N-t-butilcarboxamida
140
A una solución refrigerada (0ºC), agitada de 478 mg (1,16 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 76, ácido 3-(bisbenzoxifosfinil)oxi-2-metilbenzoico, 500 mg (1,16 mmoles) de (3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[3'-amino-2'-hidroxi-4'(fenil)tio]butildecahidro-isoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida (véase, por ejemplo, la Preparación 8G o la Preparación 8G con las modificaciones de las Preparaciones 8A y 8D como en el Ejemplo 75), 352 mg (3,48 mmoles) de trietilamina, y 166 mg (1,23 mmoles) de HOBt en 8 mL de THF anhidro se le añadieron 254 mg (1,23 mmoles) de DCC en una porción. Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró, el residuo se recogió en acetato de etilo y se filtró a través un tapón de algodón. El producto filtrado resultante se extrajo dos veces con carbonato de sodio saturado, se lavó con salmuera, y se secó sobre sulfato de sodio. La purificación del producto bruto mediante cromatografía radial (placa de 6 mm; eluyente en gradiente de acetato de etilo al 30%/ hexano) produjo 644 mg de una espuma de color blanco, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(Bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 67%
RMN H1 (CDCl_{3}): d 1,04 (s, 9H), 1,15-2,61 (m, 19H), 2,89-3,00 (m, 1H), 3,39-3,50 (m, 1H), 3,67 (s, 1H), 3,75-3,85 (m, 1H), 4,03-4,15 (m, 1H), 4,43-4,58 (m, 1H), 5,00-5,20 (m, 4H), 5,47 (s, 1H), 7,10-7,55 (m, 19H).
IR (CHCl_{3}): 3600-3150 (ancho), 3010, 2975, 2929, 2867, 1670, 1517, 1457, 1440, 1366, 1277, 1239, 1082, 1035, 1025, 1001, 968, 879 cm^{-1}.
MS (FAB): 828,4 (M^{+}, 100).
141
Ejemplo 80 Hidrocloruro de 3''-Dihidrogenofosfato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltio-metil-4'-aza-5'-oxa-5'-2''-metil-3''-Hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
142
Una mezcla de 505 mg (0,61 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 79, [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(Bisbenzoxifosfinil)oxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida, y 500 mg de Paladio sobre carbono al 10% en 20 mL de metanol se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 24 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y se concentró para dar 380 mg de producto bruto que se purificó mediante HPLC (Waters Nova Pack C_{1}8 RCM Columna (40x10 cm); velocidad de flujo de 40 mL/minuto; Eluyente de agua 45% (HCl 1%), acetonitrilo 15%, metanol 40%), para dar 230 mg de una espuma de color blanco, que es 3''-dihidrogenofosfato de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 58%
RMN H1 (Metanol-d_{4}): d 1,10-2,30 (m, 25H), 2,39 (s, 3H), 2,95-3,65 (m, 4H), 3,90-4,25 (m, 3H), 7,15-7,50 (m, 8H), 7,99 (s, 1H).
IR (KBr): 3700-2100 (ancho), 1674, 1547, 1458, 1440, 1395, 1368, 1241, 1182, 1074, 1025, 966, 867 cm^{-1}.
MS (FAB): m/e 648,3 (M^{+}+1, 100).
143
Ejemplo 81 Ácido 3-(Acetil)hidroxi-2-metilbenzoico
144
A una solución heterogénea de 3,06 g (30 mmoles) de anhídrido acético y 1,53 g.(10 mmoles) de ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico se le añadió una gota de ácido azufreico concentrado. La mezcla se calentó con una pistola térmica durante 2 min. y después se vertió en 14 mL de agua fría. El precipitado resultante se recogió mediante filtración a vacío, se lavó dos veces con agua y se secó durante la noche en un horno de vacío. Recristalización en acetato de etilo al 20%/ hexano (7 mL) produjo 595 mg de un sólido de color blanco, que es ácido 3-(acetil)hidroxi-2-metilbenzoico.
Rendimiento: 31%
IR (CHCl_{3}): 3700-2300 (ancho), 1765, 1698, 1460, 1404, 1372, 1299, 1273, 1172, 1081, 1041; 1012, 933, 913, 865, 823 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 194 (M^{+}, 100).
Ejemplo 82 [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxa-5'-(2''-metil-3''-(acetil)hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida
145
A una solución refrigerada (-10ºC) agitada de 34 mg (0,174 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 81, ácido 3-(acetil)hidroxi-2-metilbenzoico, 70 mg (0,174 mmoles) de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida y 24 mg (0,174 mmoles) de HOBt en 3 mL de THF anhidro se le añadieron 36 mg (0,174 mmoles) de DCC en una porción. Después de agitar durante 2 días a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través de un tapón de algodón. El producto filtrado resultante se extrajo una vez con carbonato de sodio saturado, una vez con salmuera, y se secó sobre sulfato de sodio. La purificación del producto bruto mediante cromatografía radial (placa de 1 mm; eluyente en gradiente de metanol al 0-5%/cloruro de metileno) produjo 65 mg de una espuma de color blanco, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(acetil)hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 65%
RMN H1 (CDCl_{3}): d 1,15 (s, 9H). 1,16-2,37 (m, 21H), 2,50-2,70 (m, 2H), 2,93-3,05 (m, 2H), 3,39-3,50 (m, 1H), 3,99-4,10 (m, 1H), 4,53-4,64 (m, 1H), 3,99-4,10 (m, 1H), 4,53-4,64 (m, 1H), 5,69 (s, 1H), 6,64 (d, J = 8,45 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 7,47 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 7,57 Hz, 1H), 7,11 (t, J = 7,75 Hz, 1H), 7,19-7,40 (m, 5H).
IR (CHCl_{3}): 3700-3100 (ancho), 3008, 2929, 2865, 1762, 1671, 1604, 1514, 1455, 1394, 1368, 1303, 1277, 1175, 1121, 1082, 1047, 910 cm^{-1}.
MS (FD): m/e 578 (M^{+}, 100).
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Ejemplo 83
146
A una solución fría (0ºC) de 35 mg (0,061 mmoles) del compuesto del subtítulo de Ejemplo 82, [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(acetil)hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida en 2 mL de cloruro de metileno anhidro, se le añadieron gota a gota 128 microlitros (0,064 mmoles) de una solución 0,5 M de ácido metanosulfónico en cloruro de metileno. La reacción resultante se redujo hasta sequedad a presión reducida (26,66-13,33 Pa) para proporcionar 40,5 mg (bruto) de una espuma de color amarillo claro, que es la sal de ácido metanosulfónico de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-(acetil)hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
Rendimiento: 98%
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Ejemplo 84
147
Se disolvió N-Boc-4-tio-L-prolina (asequible de Sigma) (1,5 g) en 3 ml de metanol y se enfrió a 0ºC en un baño de hielo. En un matraz separado, se disolvieron 5,8 g de "OXONE" en 5 ml de H_{2}O y se añadieron gota a gota a la mezcla de reacción. Al cabo de 30 minutos, la mezcla de reacción se dejó templando a la temperatura ambiente y se agitó durante la noche, seguido de dilución con CHCl_{3}/H_{2}O, separación, y extracción con CHCl_{3} (3 x 100 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto de la fórmula mostrada antes (700 mg, rendimiento 41%) en forma de un sólido de color blanco.
Ejemplo 85
148
El compuesto de la fórmula mostrada en el Ejemplo 84 y (3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[3'-amino-2'-hidroxi-4'(fenil)tio]butildecahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida se acoplaron entre sí mediante un procedimiento similar al mostrado en el Ejemplo 79 anterior. La sustancia bruta se purificó mediante cromatografía instantánea (MeOH al 3%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 40 mg (rendimiento 51%) de un compuesto de la fórmula mostrada antes.
Ejemplo 86
149
El compuesto de la fórmula mostrada en el Ejemplo 85 (20 mg) se disolvió en 1 ml de CH_{2}Cl_{2} y se trató con 1 ml de ácido trifluoroacético. Al cabo de 30 minutos a temperatura ambiente, el producto de reacción se concentró a vacío para dar el compuesto de fórmula mostrada antes, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*,4''S)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(tiazolino-4''-il-1'',1''-dióxido)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
CI_{50} Pandex 244 ng/ml
Ejemplo 87
150
Se acoplaron entre sí ácido 3-tiofenocarboxílico (asequible de Aldrich) y [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butildecahidro-isoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida mediante un procedimiento similar al Ejemplo 77 anterior. La sustancia bruta se purificó mediante cromatografía instantánea (MeOH 2%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 70 mg (rendimiento 63%) del compuesto de fórmula mostrada antes, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(tieno-3''-il)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
CI_{50} Pandex = 25% a 1,000 ng/ml
Ejemplo 88
151
Se acoplaron entre sí ácido 3-tetrahidrotiofenocarboxílico-1,1-dióxido y [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[3'-Amino-2'-hidroxi-4'-fenil]butil-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida mediante un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 77 anterior. La sustancia bruta se purificó mediante cromatografía instantánea (MeOH al 3%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 50 mg (rendimiento 42%) del compuesto de la fórmula mostrada antes, [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(tetrahidrotieno-3''-il-1'',1''-dióxido)pentil]-decahi-
droisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida, en forma de una mezcla de diastereoisómeros.
CI_{50} Pandex = 28% a 20 ng/ml.
Ejemplo 89
152
Se acoplaron entre sí ácido 3-tetrahidratiofenocarboxílico-1,1-dióxido y [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-5-[2-Hidroxi-4-feniltio-3-(benzoxicarbonil)-aminobutil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida mediante un procedimiento similar al de los Ejemplos 74 G y H anteriores. La sustancia bruta se purificó mediante cromatografía instantánea (MeOH al 3-4%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 30 mg (rendimiento 57%) de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(tetrahidrotieno-3''-il-1'',1''-dióxido)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida, en forma de una mezcla de diastereoisómeros.
CI_{95} CEM = 98 nM
CI_{50} Pandex = 0,5 ng/ml (0,9)
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Ejemplo 90
153
Se acoplaron entre sí ácido 3-metil-2-tiofenocarboxílico y (3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-(3'-amino-2'-hidroxi-4'(fenil)tio]butildecahidro-isoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida mediante un procedimiento similar al del Ejemplo 79 anterior, lo que proporcionó 39 mg (rendimiento 76%) de un compuesto de la fórmula anterior, que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(3''-metil-tieno-2''-il)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida.
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Ejemplo 91
154
La [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]'-2-[2'-Hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-6-N-t-butilcarboxamida (véase por ejemplo el Ejemplo 74 L) (30,5 mg) se disolvió en 2 ml de MeOH. En otro matraz, se disolvió "OXONE" (51 mg) en 1 ml de agua y se añadió al primer matraz. Después de agitar durante 6 horas, se añadió otra porción de "OXONE" (17 mg), y la mezcla de reacción se agitó durante 42 horas. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con agua. La capa orgánica se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía radial (placa de 1,000 micras; MeOH al 3-9%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 5 mg de [6S-(6R*,3aS*,7aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-octahidrotieno[3,2-c]piridino-1,1-dióxido-6-N-t-butilcarboxamida.
Ejemplo 92
155
El compuesto mostrado antes, [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-Hidroxi-3'-(4'''-fluoro)feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida se preparó utilizando procedimientos análogos a los mostrados en el Ejemplo 23, con la excepción de que el tiofenol fue reemplazado por 4-fluorotiofenol en la Preparación 8A.
El producto resultante se utiliza de una manera análoga a la del producto de la Preparación 8A en el protocolo de preparación subsiguiente del Ejemplo 23.
Ejemplo 93
156
El compuesto mostrado antes, sal de ácido metanosulfónico de [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-(2'-Hidroxi-3'-(4'''-fluoro)feniltiometil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarbo-
xamida se preparó mediante un método análogo al del Ejemplo 75 (etapa 2) anterior.
Como se ha observado antes, los compuestos de la presente invención son útiles para inhibir la proteasa de VIH, que es una enzima asociada con la producción y el ensamblaje del componente viral. Una realización de la presente invención es un método para tratar la infección por VIH que comprende administrar a un anfitrión o paciente, tal como un primate, una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otra realización de la presente invención es un método para tratar el SIDA que comprende administrar a un anfitrión o paciente una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Una realización adicional de la presente invención es un método para inhibir la proteasa de VIH que comprende administrar a una célula o un anfitrión o paciente infectados con VIH, tal como un primate, infectado con VIH, una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El término "cantidad efectiva" significa una cantidad de un compuesto de fórmula (1) o su sal farmacéuticamente aceptable que es eficaz para inhibir la producción y el ensamblaje del componente viral mediado por la proteasa de VIH. La dosis específica del compuesto administrado según esta invención para obtener efectos terapéuticos o inhibidores se determinarán, por supuesto, por las circunstancias concretas que rodeen al caso, incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la ruta de administración, la condición que esté siendo tratada y el anfitrión o paciente individual que esté siendo tratado. Una dosis diaria ilustrativa (administrada en dosis únicas o divididas) contiene un nivel de dosificación de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal de un compuesto de esta invención. Las dosis diarias preferidas generalmente son de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg y, más preferiblemente, de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg.
Los compuestos de la invención se pueden administrar mediante una variedad de rutas, incluyendo las rutas oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Los compuestos de la presente invención son formulados preferiblemente antes de la administración. Por consiguiente, otra realización de la presente invención es una composición o formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable, tal como un diluyente o excipiente para ello.
El ingrediente activo comprende preferiblemente del 0,1% al 99,9% en peso de la formulación. Mediante "farmacéuticamente aceptable" se significa que el portador, tal como el diluyente o el excipiente, es compatible con los otros ingredientes de la formulación y no son nocivos para el anfitrión o el paciente.
Las formulaciones farmacéuticas se pueden preparar a partir de los compuestos de la invención mediante procedimientos conocidos utilizando ingredientes conocidos y fácilmente asequibles. Al elaborar las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo se administrará usualmente con un portador, o se diluirá mediante un portador, o se incluirá en un portador, que puede estar en forma de una cápsula, saquito, papel u otro recipiente adecuado. Cuando el portador sirve como diluyente, éste puede ser un una sustancia sólida, semi-sólida o liquida que actúa como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Así, las composiciones pueden estar en forma de tabletas, píldoras, polvos, grageas, saquitos, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles (en forma de un sólido o en un medio líquido), pomadas (que contienen, por ejemplo, hasta el 10% en peso del compuesto activo), cápsulas de gelatina blanda y dura, supositorios, soluciones inyectables estériles, polvos envasados estériles y similares.
Los siguientes ejemplos de formulación son meramente ilustrativos y no se pretende que limiten en alcance de la invención. El término "ingrediente activo" representa un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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Formulación 1
Se preparan cápsulas de gelatina dura utilizando los siguientes ingredientes:
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157 
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Formulación 2
Se prepara un comprimido utilizando los ingredientes de más abajo:
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158 
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Los componentes se combinan y comprimen para formar comprimidos con un peso individual de 665 mg.
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Formulación 3
Se prepara una solución en aerosol que contiene los siguientes componentes:
159
El compuesto activo se mezcla con etanol y la mezcla se añade a una porción del propelente 22, se enfría a -30ºC y se transfiere a un dispositivo de relleno. La cantidad requerida se introduce en un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el resto del propelente. Después se ajustan las unidades de válvula al recipiente.
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Formulación 4
Los comprimidos, que contienen cada uno 60 mg de ingredientes activos, se elaboran como sigue:
160
El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se hacen pasar a través de una malla tamiz U.S. del Núm. 45 U.S. y se mezclan cuidadosamente. La solución acuosa que contenía polivinilpirrolidona se mezcla con el polvo resultante, y la mezcla se hace pasar después través de un tamiz U.S. con malla del Núm. 14. Los gránulos producidos de este modo se secan a 50ºC y se hacen pasar a través un tamiz U.S. con malla del Núm. 18. El carboximetilalmidón sódico, el estearato de magnesio y el talco, que se habían pasado previamente a través de un tamiz U.S. con malla del Núm. 60, se añaden después a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen en una máquina para comprimidos para producir comprimidos con un peso individual de 150 mg.
\newpage
Formulación 5
Las cápsulas, cada que contienen cada una 80 mg de ingrediente activo, se elaboran como sigue:
161
El ingrediente activo, la celulosa, el almidón y el estearato de magnesio se combinan, se hacen pasar a través de un tamiz U.S. con malla del Núm. 45, y se cargaron en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 200 mg.
\vskip1.000000\baselineskip
Formulación 6
Los supositorios, que contienen cada uno 225 mg de ingrediente activo, se elaboran como sigue:
162
El ingrediente activo se hace pasar a través de un tamiz U.S. con malla del Núm. 60 y se suspende en los glicéricos de ácidos grasos saturados fundidos previamente utilizando el mínimo calor necesario. La mezcla se vierte después en un molde para supositorios con una capacidad nominal de 2 g y se deja enfriar.
\vskip1.000000\baselineskip
Formulación 7
Las suspensiones, que contienen cada una 50 mg de ingrediente activo por dosis de 5 ml, se elaboran como sigue:
163
El ingrediente activo se hace pasar a través de un tamiz U.S. con malla del Núm. 45 y se mezcla con la carboximetilcelulosa sódica y el jarabe para formar una pasta uniforme. La solución de ácido benzoico, el aroma y el colorante se diluyen con una porción del agua y se añaden, agitando. Después se añade agua suficiente para producir el volumen requerido.
\vskip1.000000\baselineskip
Formulación 8
Se prepara una formulación intravenosa como sigue:
164
La solución de los ingredientes anteriores se administra intravenosamente a un sujeto a una velocidad de 1 ml por minuto.
Escrutinio de la actividad
Se utilizaron varios ensayos para probar la actividad biológica de los compuestos inhibidores de la proteasa del VIH. Por ejemplo, los ensayos se utilizaron para analizar las velocidades de inhibición proteolítica y los efectos antivirales sobre las líneas celulares infectadas con VIH. Los procedimientos para estos experimentos se describen más abajo. Los resultados de estos análisis se resumen en la Tabla 1 de más abajo o se resumen en los ejemplos anteriores.
I. Escrutinio de Fármacos Primario de compuestos Anti-VIH en el Southern Research Institute (SRI) (Los Resultados registrados en la Tabla 1 se designan "SRI CEM (ng/ml)" o "SRI MT2 (ng/ml)") A. Principio de la Prueba MTT
El SRI tiene un programa establecido para el análisis antiviral primario de compuestos en pruebas de microtitulación que miden la capacidad de un compuesto seleccionado para inhibir la destrucción celular inducida por VIH. Esta prueba implica la conversión del colorante de tetrazolio MTT en un producto de formazano coloreado mediante las enzimas mitocondriales en células metabólicamente activas. Este sistema de pruebas se utiliza en el SRI para escrutar más de 30,000 compuestos al año. Brevemente, la prueba implica la infección de células CEM o MT2 en placas de 96 pocillos de fondo redondo. El compuesto de interés se añade inmediatamente antes de la infección. Después de 6 días de incubación a 37ºC las placas se tiñen con MTT. Los resultados de la prueba se cuantifican espectrofotométricamente en un lector de placa Vmax de Molecular Devices. Los datos se analizan mediante regresión lineal utilizando un programa de soporte lógico de la empresa para calcular la actividad antiviral (CI_{25}, CI_{50}, CI_{95}) y la toxicidad (CT_{25}, CT_{50}, CT_{95}) así como otros valores.
Las pruebas antivirales primarias se realizan rutinariamente en células CEM o MT-2. En el SRI se ha encontrado que todos los compuestos activos han sido identificados en células CEM, mientras que en los experimentos realizados en la línea celular MT-2 célula se ha perdido una pequeña proporción de los compuestos activos.
\vskip1.000000\baselineskip
B. Pruebas de Escrutinio Normalizadas en Células CEM y MT-2 1. Dilución del compuesto y reparto en las placas
Los fármacos se solubilizan en el vehículo apropiado tal como agua destilada o DMSO si fuera necesario. Durante todas las fases del procedimiento de manipulación se utilizan guantes de látex, batas de laboratorio y máscaras para evitar la exposición a agentes potencialmente nocivos. El fármaco se prepara a la concentración apropiada y se almacena a -20ºC hasta que es utilizado por el laboratorio del escrutinio. La primera dilución de cada compuesto se realiza en un tubo de dilución con medio para producir una concentración 1:2 de la máxima concentración de ensayo. Los tubos de titulación estériles se utilizan después para elaborar diluciones semilogarítmicas seriadas de cada compuesto. Siguiente a la dilución del fármaco, el compuesto diluido se añade al pocillo apropiado de una placa de microtitulación de 96 pocillos. Se pueden probar convenientemente hasta 12 diluciones por triplicado en una sola placa con los todos los controles apropiados incluyendo el control celular, el control del virus, el control de la toxicidad, el control del color del fármaco, el control del medio y el control del plástico (fondo). Cuando en ensayo incluye sólo seis diluciones, se pueden probar dos fármacos en una sola placa de microtitulación. Los fármacos se añaden a la placa en un volumen final de 100 microlitros.
2. Células y virus
Durante el tiempo que se preparan las diluciones, las células se lavan y se cuentan. La viabilidad se vigila mediante exclusión con colorante azul de tripán y las pruebas no se realizan si la viabilidad cae por debajo del 90%. Las células se mantienen en una fase de crecimiento exponencial y se dividen 1:2 el día antes de la prueba para asegurar la tasa de crecimiento exponencial.
Para el escrutinio primario, las líneas celulares utilizadas con CEM y MT-2. A no ser que se indique de otro modo, el medio utilizado es RPMI 1640 con 10% de suero fetal de ternera (FBS) inactivado con calor, glutamina y antibióticos.
Las células se propagan a 37ºC en una atmósfera con 5% de CO_{2} en aire. El virus empleado para este trabajo son productos aislados IIIB y/o RF de VIH-1, que se preparan mediante un procedimiento de infección aguda.
Brevemente, las células infectadas con virus se sedimentan en una base diaria comenzando tres días post-infección hasta que el virus ha destruido todas las células del cultivo. La actividad transcriptasa inversa y el ELISA p24 se utilizan para identificar agrupamientos con la mayor cantidad de virus.
Estos cultivos de 24 horas se reúnen, se filtran y se congelan a -90ºC. Antes de su uso en la prueba, se titula la agrupación de virus infeccioso en todas las líneas celulares disponibles con el fin de determinar la cantidad de virus requerida en el análisis antiviral.
En general, las agrupaciones producidas por el método de infección aguda requieren la adición de un microlitro de virus infeccioso por pocillo dando como resultado el escrutinio de fármacos a una multiplicidad de infección de 0,01. De esta manera, se prepara suficiente virus y se congela para completar hasta dos mil compuestos de una sola provisión de virus infeccioso. El uso de una sola provisión de virus durante un largo período de ensayo tiene efectos muy favorables sobre la reproducibilidad de los sistemas de prueba.
La infección con virus de las células CEM y MT-2 para la prueba antiviral se lleva a cabo en un procedimiento masivo de infección. El número apropiado de células requerido para completar la prueba se mezcla con virus infeccioso en un tubo de centrífuga cónico en un pequeño volumen final de 1-2 microlitros.
Después de 4 horas de incubación las células infectadas se llevan a la concentración final apropiada de 5 x 10^{4} células por microlitro con medio de cultivo de tejido de nueva aportación y se añaden 100 microlitros a los pocillos experimentales y de control del virus apropiados. Las células no infectadas a la misma concentración se cultivan en placa para los controles de la toxicidad y para los controles celulares. Las pruebas se pueden realizar también utilizando un método de infección en pocillo. En este caso, el fármaco, las células y el virus se añaden al pocillo individualmente. En cada caso la MOI se ajusta para producir una destrucción celular completa en los pocillos para el control del virus el Día 6.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Evaluación de la inhibición del CPE
Después de la adición de las células y los fármacos a la placa de microtitulación, la place se incuba durante 6 días a 37ºC. La experiencia ha determinado que la incubación durante períodos de tiempo más largos (7-8 días) o el uso de un mayor número de células introducidas (1 x 10^{4}) da como resultando una disminución significativa de la viabilidad del control celular y un estrechamiento de la diferencia de densidad óptica entre los controles celulares y de virus tras la tinción con MTT.
El método para evaluar la prueba antiviral implica la adición de 20 microlitros de la sal de tetrazolio de MTT a 5 mg/ml a cada pocillo de la placa durante 4-8 horas. Después de este período de incubación, las células se rompen mediante la adición de 50 microlitros de SDS al 20% en HCl 0,01 N.
La actividad metabólica de las células viables en el cultivo dan como resultado un producto de reacción coloreado que se mide espectrofotométricamente en un lector de placa Vmax de Molecular Devices a 570 nm. El valor de densidad óptica (D.O.) es una función de la cantidad de producto de formazano que es proporcional al número de células viables.
El lector de microplaca está en línea con una microcomputadora del laboratorio del escrutinio que evalúa los datos de la placa y calcula los datos de la placa. El informe de la placa proporciona una restricción de toda la información pertinente incluyendo los valores de D.O. de partida, las D.O. medias calculadas y la reducción del porcentaje del CPE viral así como los cálculos que incluyen CT_{50}, CI_{50} y los índices antiviral y de especificidad. Finalmente, los resultados incluyen un gráfico que representa visualmente el efecto del compuesto sobre las células no infectadas (toxicidad) y el efecto protector o no protector del compuesto sobre las células infectadas.
II. Escrutinio en Células Completas de los Compuestos Anti-VIH de Eli Lilly (Los Resultados Registrados en la Tabla 1 Son Designados "CI_{50} nM de Células Completas" o "CI_{90} nM de Células Completas" A. Propósito y Materiales
Propósito: Determinar la CI_{50} y la CC_{50} para los compuestos:
\vskip1.000000\baselineskip
Reactivos y Materiales Medio A
\quad
Medio A [DMSO 1%] (100 microlitros DMSO + 9,9 ml medio A)
\quad
Se utilizó SN 123 para infectar células (15 ml para 6 placas) (10 ml para 4 placas)
\quad
Células CEM @ [1 x 10^{4}] células/ml (placa 4=40 ml) (placa 6=60 ml) DMSO (se necesitan 5 ml)
\quad
35B a (10 mM) (se necesitan 70 microlitros de cada uno)
\quad
A-D a [10 mM] en DMSO al 100%
\quad
4 o 6 placas de 96 pocillos con fondo en forma de u
\quad
4 placas de 96 pocillos con fondo plano para las diluciones
\quad
8-10 cajas de puntas Costar estériles
\quad
Aproximadamente 10 bandejas de reactivos
\quad
Costar 12-pette
\vskip1.000000\baselineskip
Información Relevante
\quad
1000 células/pocillo = 1 x 10^{4} células/ml = 1000 células/100 microlitros
\quad
200 microlitros = volumen total en un pocillo
\quad
Concentración final de DMSO = 0,25%
\quad
Dilución final de Sn123 = 1:64
\quad
Compuestos diluidos seriadamente 35B, A-D, 1:3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
\newpage
B. Procedimiento 1. Preparación y Colocación de las Células, Medio A y Medio A (DMSO 1%)
a.
Numerar una placa para el cultivo de tejido de 96 pocillos para cada compuesto sometido a ensayo, uno para una placa de control, y uno para el compuesto de control.
165
b.
Contar las células en un hemacitómetro y resuspenderlas en 40 ml o 80 ml de Medio A a una concentración de [1 x 10^{4}] células/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
Recuento de Células en un Hemacitómetro
\quad
Etiquetar dos tubos nunc 1 y 2 de 1,8 ml.
\quad
Colocar 0,5 ml de células CEM bien mezcladas (en la fase de crecimiento) en el tubo 1.
\quad
Colocar 50 microlitros de PBS y 40 microlitros de azul de tripán en el tubo 2.
\quad
Mezclar las células en el tubo 1 después retirar 10 microlitros de células y colocarlas en el tubo 2.
\quad
Mezclar bien en el tubo 2, después retirar 10 microlitros de las células teñidas y colocarlas en el hemacitómetro.
\quad
Contar el número de células en el cuadrado central del hemacitómetro con el microscopio ajustado a 10X.
\vskip1.000000\baselineskip
La concentración de las CEM de la provisión en células/ml es la siguiente:
Células contadas x 1 x 10^{5} = Concentración de las CEM en [células/ml].
c.
Añadir 200 microlitros de Medio A a:
\quad
A1 de las placas 2-6.
\quad
Estos son Blancos.
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
A4-H4 de la placa 1.
\quad
Estos son Blancos.
\vskip1.000000\baselineskip
d.
Añadir 5 microlitros de Medio A a todos los pocillos de las Filas A-D de las placas 2-6 excepto A1 (la mitad superior de cada una de las placas).
e.
Añadir 50 microlitros de Medio A a los pocillos A1-D3 de la Placa 1 (la mitad superior de la placa).
f.
Añadir 50 microlitros de Medio A [DMSO 1%] a todos los pocillos de las Columnas 1-3 de placa 1.
\newpage
g.
Añadir 100 microlitros de [1 x 10^{4}] células/ml a todos los pocillos de las Columnas 1-3 de la placa 1 y a todos los pocillos (excepto A1 que es el blanco) del las otras placas. Esto sitúa 1000 células/pocillo.
h.
Colocar las placas en una incubadora mientras se realizan las diluciones del fármaco.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Control de la Preparación y Fármacos de Ensayo
(a) Preparación de (35B, A-D) diluciones seriadas 1:3 en placa con DMSO al 100%.
(1)
Colocar 60 microlitros de DMSO en todos los pocillos de las Columnas 2-12, Filas A-E.
(2)
Colocar 70 microlitros de 35B [10 mM] en DMSO al 100% en el pocillo A1.
(3)
Colocar 70 microlitros de A [10 mM] en DMSO al 100% en el pocillo B1.
(4)
Colocar 70 microlitros de B [10 mM] en DMSO al 100% en el pocillo C_{1}.
(5)
Colocar 70 microlitros de C [10 mM] en DMSO al 100% en el pocillo D1.
(6)
Colocar 70 microlitros de D [10 mM] en DMSO al 100% en el pocillo E1.
(7)
Diluir seriadamente (35B, A-D) 1:3 hasta la Columna 12 transfiriendo 30 microlitros de la Columna 1 a la Columna 2, después de la Columna 2 a la Columna 3, etc., hasta la Columna 12. Cambiar las puntas antes de cada dilución.
\vskip1.000000\baselineskip
(b) Preparación de una placa de dilución 1:10 en Medio A:
(1)
En las filas A-E de otra placa hacer una fila para la primera dilución 1:10 que corresponda a cada uno de los compuestos de la fila con DMSO al 100% DMSO.
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
35B en la Fila A para la primera dilución 1:10.
\quad
A en la Fila B para la primera dilución 1:10.
\quad
B en la Fila C para la primera dilución 1:10.
\quad
C en la Fila D para la primera dilución 1:10.
\quad
D en la Fila E para la primera dilución 1:10.
(2)
Colocar 180 microlitros de medio A en todos los pocillos de las filas A-E correspondientes a las filas con DMSO al 100%. Se necesitan 2,5 ml por fila.
(3)
Retirar 20 microlitros de todos los pocillos de cada fila de las filas con DMSO al 100% y transferirlos a la fila 1:10 correspondiente.
\vskip1.000000\baselineskip
(c). Preparación de la placa de Dilución 1:100 en Medio A:
(1)
Elaborar una placa para cada 3 compuestos que se vayan a someter a ensayo.
(2)
Colocar 225 microlitros de medio A en todos los pocillos de las filas A, B, D, E, G, y H, dejando vacías las filas C y F. Utilizar 20 ml de medio A por placa.
(3)
Transferir 25 microlitros de cada compuesto de la fila en la dilución 1:10 hacia las dos filas correspondientes de la placa de dilución 1:100 cambiando las puntas antes de cada transferencia.
166
3. Adición de SN123 Viral a las Placas
a.
Descongelar Sn123 en un baño de agua a 37ºC durante aproximadamente 10 minutos.
b.
Diluir Sn123 1:16 añadiendo 1 ml de Sn123 a 15 ml de medio A.
c.
Añadir 50 microlitros de Sn123 [1:16] a los pocillos E1-H12 de las placas 2-6 y a los pocillos E1-H3 de la placa 1.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Adición de los Fármacos a las Placas
a.
Añadir 50 microlitros de los fármacos de control y de ensayo de las filas de las placas de dilución 1:100 a las filas apropiadas de las placas finales (cambiando las puntas antes de cada transferencia). Una fila en la placa 1:100 serán 4 filas en la placa final. Dejar A1 como blanco.
b.
Incubar todas las placas 7 días a 37ºC con 5% CO_{2}.
c.
Realizar el protocolo Xtt el día 7 como sigue:
d.
Preparación de la Solución Xtt/PMS:
\quad
(placa 4 = 20 ml)
\quad
(placa 6 = 30 ml)
(1)
Receta para PMS 2 mM:
\quad
15,3 mg PMS + 0,5 ml PBS = PMS a [100 mM] 100 microlitros [100 mM] PMS + 4,9 ml PBS = PMS a [2 mM]
(2)
Calentar 500 ml de H_{2}O en un microondas durante 5 minutos al máximo.
(3)
Colocar 20 o 30 ml de RPMI con rojo fenol en un tubo de centrífuga de 50 ml.
(4)
Colocar el RPMI en vaso de precipitados del agua caliente.
(5)
Añadir 20 o 30 mg de XTT al RPMI calentado.
\quad
Concentración final de XTT = [1 mg/ml].
(6)
Esperar para disolver XTT, después añadir 200 microlitros de PMS [2 mM] por 10 ml de solución de XTT.
e.
Adición de Xtt/PMS a la Placa:
(1)
Añadir 50 microlitros de solución de XTT/PMS a todos los pocillos de todas las placas.
(2)
Cubrir las placas e incubar 4 horas a 37ºC con 5% CO_{2}.
(3)
Retirar las placas de la incubadora y reemplazar los cubres por selladores de placas de plástico.
(4)
Mezclar los contenidos de las placas.
(5)
Leer las placas a una longitud de onda de ensayo de 450 nM y una longitud de onda de referencia de 650 nM.
\vskip1.000000\baselineskip
III. Análisis de Fluorescencia de Inhibición de la Proteasa de VIH-1 Para el Escrutinio de la Inhibición de la Proteasa de VIH (Los Resultados Registrados en la Tabla 1 Son Denominados "Pandex (ng/ml)")
Según se utilizan en la presente memoria, las abreviaturas se definen como sigue:
BSA - seralbúmina bovina
BOC - t-butoxicarbonilo
BrZ - 2-bromobenciloxicarbonilo
2-C_{1}Z- 2-clorobenciloxicarbonilo
DCC - diciclohexilcarbodiimida
DIEA - diisopropiletilamina
DTT - ditiotreitol
EDTA - ácido etilendiaminotetraacético
FITC - isotiocarbamil fluoresceína
HEPES - ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinotanosulfónico
MES - ácido 4-morfolinoetanosulfónico
PAM - fenilacetimidometilo
TAPS - ácido 3-[tris(hidroximetil)metil]amino-1-sulfónico
TRIS - tris(hidroximetil)aminometano
TOS - p-toluenosulfonilo (tosilo)
A. Preparación de las Fracciones de Proteasa y Gag 1. Cultivo de E. coli K12 L507/pHP10D
Se obtuvieron liófilos de E. coli K12 L507/pHP10D del Northern Regional Research Laboratory, Peoria, Illinois 61604, bajo el número de acceso NRRL B-18560 (consignada el 14 de Noviembre, 1989). Los liófilos se decantaron en tubos que contenían 10 ml de medio LB (10 g de Bacto-triptona, 5 g de Bacto-extracto de levadura, y 10 g de cloruro de sodio acuoso por litro; el pH se ajustó a 7,5 y se incubó a 32ºC durante la noche).
Una pequeña porción del cultivo durante la noche se colocó en placas de agar LB (medio LB con 15 g/L de Bacto-agar) que contenían 12,5 microgramos/ml de tetraciclina de manera que se obtuvo una sola colonia aislada de E. coli K12 L507/pHP10D. La única colonia aislada se inoculó en 10 ml de medio LB que contenía 12,5 microgramos/ml de tetraciclina y se incubó durante la noche a 32ºC con sacudimiento vigoroso. Los 10 ml del cultivo durante la noche se inocularon en medio LB que contenía 12,5 microgramos/ml de tetraciclina y se incubó a 32ºC con sacudimiento vigoroso hasta que el cultivo alcanzó la fase semilogarítmica.
2. Cultivo de E. coli K12 L507/pHGAG
Se obtuvieron liófilos de E. coli K12 L507/pHGAG del NRRL bajo el número de acceso NRRL B-18561 (consignada el 14 de Noviembre, 1989). Se aisló una colonia purificada de E. coli K 12 L507/pHGAG, y se utilizó como inóculo para un cultivo que se desarrolló hasta la fase semilogarítmica sustancialmente según la ilustración de la Etapa A, anterior, para E. Coli K12 L507/pHP10D.
3. Preparación de la Fracción de Proteasa
Un cultivo de E. coli K12 L507/pHP10D se desarrolló hasta la fase semilogarítmica a 32ºC en medio LB que contenía 12,5 microgramos/ml de tetraciclina. La temperatura de cultivo se elevó rápidamente a 40ºC para inducir la expresión génica, y se dejó que las células crecieran durante 2,5 horas a esta temperatura antes de enfriar el cultivo rápidamente sobre hielo. Las células se centrifugaron y el sedimento celular se resuspendió en 20 ml de tampón MES 50 mmolar (pH 6,0) que contenía 1 mmol de EDTA, 1 mmol de DTT, 1 mmol de PMSF y 10% glicerol ("Tampón A"). Las células se lisaron mediante sonicación utilizando un Fischer Model 300 Dismembrator y una sonda para micropunta. Después de la centrifugación a 27.000xg, el sobrenadante se diluyó hasta un volumen total de 60 ml con Tampón A y se cargó en una columna de 2,0x19 cm QAE-Sepharose (1 ml/min, 4ºC), que había sido equilibrada en Tampón A. La columna se lavó isocráticamente durante 180 min y después se hizo eluir con un eluyente en gradiente de cloruro de sodio acuoso 0-1,0M en Tampón A a lo largo de 120 min. La actividad enzimática se midió mediante HPLC utilizando el péptido sintético Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val como describe Margolin et al., en Biochem. Biophys. Res, Commun., 167, 554-560 (1990); se midió la producción del péptido p1 (Ser-Gln-Asn-Tyr).
Las fracciones activas se combinaron, se ajustaron a pH 1,2M en sulfato de amonio, y se aplicaron a una columna de 2,0x18 cm de hexil agarosa que había sido equilibrada en Tampón A que contenía sulfato de amonio 1,2M. La muestra se cargó a una velocidad de flujo de 1 ml/min a 4ºC, se lavó con el tampón de equilibrado durante 240 min (1 ml/min) y después se hizo eluir utilizando un gradiente lineal inverso de sulfato de amonio 1,2-0M en Tampón A durante 120 min a la misma velocidad de flujo. La columna se lavó después isocráticamente en Tampón A durante 120 min.
Las fracciones activas se combinaron, se concentraron hasta 10 ml utilizando una célula agitada Amicon con una membrana YM-10 y después se aplicaron a una columna de intercambio catiónico MonoS (1,0x10 cm) que había sido equilibrada en Tampón A. La muestra se cargó a una velocidad de flujo de 1 ml/min a 25ºC. después de lavar isocráticamente durante 30 min, la proteasa se hizo eluir utilizando un gradiente lineal de cloruro de sodio acuoso 0-0,45M en Tampón A a lo largo de 40 min. La columna se lavó isocráticamente en Tampón A que contenía 0,45M cloruro de sodio acuoso durante 30 minutos.
Las fracciones activas se combinaron y se concentraron hasta 200 microlitros utilizando una célula agitada Amicon y una membrana YM-10 y después la proteasa se aplicó a una columna de exclusión por tamaños Superose de talla 6 equilibrada en Tampón A que contenía cloruro de sodio acuoso 0,1M. La columna se lavó isocráticamente en este tampón a una velocidad de flujo de 0,5 ml/min, después de lo cual la proteasa de VIH se hizo eluir como un solo pico.
QAE-Sepharose y hexil agarosa fueron adquiridas de Sigma Chemical Company. Superose 6 y MonoS fueron adquiridas de Pharmacia. Los tampones y los reactivos fueron obtenidos de Sigma.
4. Preparación de la Fracción Gag
De una manera análoga, se desarrolló un cultivo de E. coli K12 507/pHGAG hasta la fase semilogarítmica a 32ºC después se desplazó a 40ºC durante aproximadamente 4 a 5 horas. El cultivo se enfrió sobre hielo y se centrifugó, después el sedimento se resuspendió en 8 ml de tampón de lisis que contenía 5 mg/ml de lisozima. El tampón de lisis estaba formado por Tris-HCl 50 mM (pH 7,8), EDTA 5 mM, DTT 1 mM, NaCl 100 mM, 1 microgramo/ml de E64 y 2 microgramos/ml de aprotinina. El cultivo se incubó aproximadamente 30 a 60 minutos a 4ºC, después se sometió brevemente a sonicación en un Disrruptor Celular Branson® a una potencia del 60% para tres series de 20 segundos enfriando entre cada serie. El cultivo se centrifugó después a 15,000 x g. El sobrenadante, que contiene una proteína gag no procesada, se purificó parcialmente mediante cromatografía de exclusión por tamaños en una columna Sephadex G-50 y se almacenó a -20ºC en glicerol al 50% y tampón de lisis.
B. Preparación de Substrato: N^{a}-Biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-pro-Ile-Val-Gly-Lys(N^{e}-FITC)-OH (a = Alfa, e = Epsilon) 1. Preparación del péptido biotinilado en el extremo amino
El péptido protegido-resina N^{a}-Boc-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr(BrZ)-Pro-Ile-Val-Gly-Lys(2-ClZ)-OCH_{2}-PAM-resina se sintetizó en un sintetizador peptídico Advanced Chemtech Model 200 a una escala 1,5 mmol utilizando el protocolo de doble acoplamiento normalizado. El grupo t-Boc amino terminal se separó con ácido trifluoroacético al 50% en cloruro de metileno y la resina resultante se neutralizó con diisopropiletilamina (DIEA) al 5% en cloruro de metileno. Después, se añadieron 1,1 g (4,5 mmoles) de biotina en 20 ml de dimetilsulfóxido a la resina peptídica, seguido de 4,5 mmoles de diciclohexilcarbodiimida (DCC) en 9 ml de cloruro de metileno. La mezcla de reacción resultante se diluyó hasta un volumen total de 40 ml utilizando 11 ml de cloruro de metileno, y después se dejó reaccionando durante aproximadamente 5 horas. La solución de reacción se concentró, la resina se lavó sucesivamente con dimetilsulfóxido, dimetilformamida y cloruro de metileno y después se neutralizó con DIEA al 5% en cloruro de metileno. Esta reacción se repitió dos veces, prolongando el tiempo de reacción a 12 horas por reacción. El análisis con ninhidrina indicó la completa reacción de la biotina con el grupo amino de la glicina. La resina peptídica final se lavó extensamente con dimetilformamida y cloruro de metileno y se secó para proporcionar 4,3 g, rendimiento (98%).
2. Desprotección
El péptido se desprotegió y se escindió de la resina utilizando 50 ml de una solución de ácido fluorhídrico/m-cresol, 0ºC, 1 hora. Después de la eliminación del ácido fluorhídrico mediante destilación a vacío, el m-cresol se extrajo de la mezcla de reacción utilizando 100 ml de éter dietílico. El péptido se solubilizó después en ácido acético acuoso al 50%, se congeló y se liofilizó para proporcionar 2,14 g.
3. Purificación
El péptido bruto, biotinilado en el extremo amino, se disolvió en 200 ml de una solución de acetonitrilo al 5% en agua que contenía el 0,1% de ácido trifluoroacético y después se filtró a través un filtro de 0,22 micras. La solución resultante se aplicó a una columna en fase reversa de 2,2x25 cm de octadecil-sílice (Vydac C-18) que había sido equilibrada con el mismo tampón. El péptido se hizo eluir utilizando un gradiente lineal de 855 minuto de acetonitrilo al 7,5-25%, a 2 ml/minuto, con recogida de fracciones. Estas fracciones se analizaron utilizando HPLC Analítica que fue realizada en una columna Vydac C-18 de 4,6x250 mm utilizando condiciones de tampón similares. Las fracciones que contenían la sustancia deseada se combinaron, se congelaron y se liofilizaron para proporcionar 1,206 g (rendimiento 62%).
El análisis de aminoácidos del péptido biotinilado aislado produjo las siguientes proporciones concordantes con las teóricas: Asn 1,1; Ser 0,96; Gln 1,1; Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,80; Ile 0,78; Tyr 1,1; Lys 1,1. La espectrometría de masas por bombardeo de Atomos rápidos produjo un pico de masas del ión molecular de 1288, en concordante con el teórico.
4. Marcaje
El péptido purificado biotinilado se marcó después con un marcador fluorescente en el extremo C-terminal para su uso en el análisis Pandex. Primero, el péptido biotinilado (1,206 g, 0,936 mmoles) se disolvió en 100 ml de borato de sodio 0,1M, pH 9,5. Después, se añadió una solución de 3 g (7,7 mmoles) de isotiocianato de fluoresceína en 15 ml de dimetilsulfóxido a la mezcla de reacción en 10 porciones iguales a lo largo de dos horas. La mezcla resultante se dejó reaccionando durante una hora después de la adición final. La solución se ajustó a pH 3 utilizando ácido clorhídrico 5N, dando como resultado la formación de un producto precipitado que se eliminó mediante centrifugación.
La solución peptídica se ajustó después a pH 7,8 utilizando hidróxido de sodio 5N y después se diluyó hasta 200 ml mediante la adición de acetato de amonio 0,1M, pH 7,5. La solución resultante se filtró después a través de un filtro de 0,22 micras y se cargó sobre una columna Vydac C-18 de 2,2x25 cm que había sido equilibrada con acetonitrilo al 5% en acetato de amonio 0,1M (pH 7,5). El péptido se hizo eluir de la columna utilizando un gradiente lineal de 855 minutos de acetonitrilo al 5-25%, a 2 ml/minuto, con recogida de las fracciones. La HPLC analítica se utilizó para analizar las fracciones. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron después, se congelaron y se liofilizaron para proporcionar 190,2 mg (12%).
El análisis de aminoácidos del péptido purificado produjo lo siguiente en concordancia con la teoría: Asn 1,1; Ser 1,0; Gln 1,1: Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,8; Ile 0,8; Tyr 1,1; Lys 1,0. La espectrometría de masas por bombardeo de átomos rápidos produjo un pico de masas del ión molecular de 1678, en concordancia con la teoría.
\newpage
5. Análisis de Fluorescencia de Inhibición de la Proteasa de VIH-1
Se utilizan los siguientes tampones y soluciones en el Análisis de Florescencia de Inhibición de la Proteasa de VIH-1:
167
A cada uno de los pocillos de una placa de 96 pocillos de fondo redondo se le añaden 20 microlitros la Solución de Enzima seguido de 10 microlitros del compuesto que se va a evaluar en una solución acuosa de dimetilsulfóxido al 20%. Se obtuvo la proteasa de VIH-1 purificada como se ha descrito antes. La solución resultante se incuba durante una hora a temperatura ambiente y después se añaden a cada uno de los pocillos 20 microlitros de una solución que contenía el sustrato, preparada antes, en tampón MES-ALB (1,5 microlitros/ml). Las soluciones se incuban después durante 16 horas a temperatura ambiente y después cada uno de los pocillos se diluye con 150 microlitros de tampón MES-ALB.
A cada uno de los pocillos de una segunda placa Pandex de 96 pocillos de fondo redondo se le añaden 25 microlitros de la Solución de Cuentas Recubiertas con Avidina. Después, a cada uno de los pocillos se le añaden 25 microlitros de las soluciones de incubación diluidas, preparadas antes. Las soluciones se mezclan cuidadosamente y las placas se cargan en una máquina Pandex®, se lavan, se evacuan y se leen. La detección de la muestra se realizó mediante excitación a 485 nm, leyendo la epifluorescencia resultante a 535 nm.
Los resultados de CI_{50} obtenidos en el Análisis de Fluorescencia para los compuestos de la presente invención se muestran más abajo en la Tablas 1, 2, y 3. Todos los valores han sido normalizados a un control positivo que es [1S-(1R*,4R*,5S*)]-N-(1-(2-amino-2-oxoetil)-2-oxo-3-aza-4-fenilmetil-5-hidroxi-6-(2-(1-t-butilamino-1-oxometil)fenil)hexil)-2-quinolinilcarboxamida.
Los datos de actividad para los compuestos ilustrativos abarcados por la presente invención se proporcionan en las Tablas 1, 2, y 3 más abajo y en los Ejemplos precedentes. Los resultados entre Paréntesis son para el Ejemplo 1 de la Solicitud de Patente Europea Núm. 0 526 009 A1 = 35B en la misma prueba.
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TABLA 1
169
170
171
172
173
174 
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175
176
177 
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TABLA 2
178
TABLA 3
179
180
181
182

Claims (8)

1. Un compuesto de fórmula 1
183
Q_{1} y Q_{2} se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo y arilo sustituidos y no sustituidos, y Q_{1} y Q_{2} pueden formar un anillo con G;
Q_{3} se selecciona entre mercapto y alcoxilo, ariloxilo, tioéter, amino, alquilo, cicloalquilo, heterociclo saturado y parcialmente saturado, y arilo sustituidos y no sustituidos;
Q_{4}-Q_{8} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, OPO(OH)_{2}, hidroxilo, alquilo, amino y nitro.
Y y G son cada uno oxígeno o -N-H;
D es nitrógeno;
E es carbono o nitrógeno;
Q_{9} es hidrógeno;
A es un carbociclo o heterociclo, que está opcionalmente sustituido adicionalmente; y
B es decahidroisoquinolina;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde alquilo hace referencia a grupos lineales o ramificados que tienen de 1 a 8 átomos de carbono;
cicloalquilo representa un anillo mono- o policarbocíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene de 5 a 14 átomos de carbono;
alcoxi representa -O-alquilo;
arilo hace referencia a un anillo monocíclico o policíclico carbocíclico o heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros;
ariloxi representa -O-arilo;
carbociclo representa un anillo monocíclico o policíclico aromático o saturado o parcialmente insaturado de 5 a 14 miembros; heterociclo representa un anillo monocíclico o policíclico aromático o saturado o parcialmente saturado de 5 a 14 miembros que tiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre;
tioéter representa -S-arilo, -S-heterociclo, -S-cicloalquilo C_{5}-C_{7} y -S-alquilo;
amino representa -NL_{1}L_{2} donde L_{1} y L_{2} se seleccionan independientemente entre oxígeno, carbociclo, heterociclo, alquilo, sulfonilo, e hidrógeno, o NC(O)L_{3} donde L_{3} es alquilo, alcoxilo, hidrógeno; o -NL_{1}L_{2};
sulfonilo representa -SO_{2}L_{5} donde L_{5} es alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclo o amino;
donde los sustituyentes para alquilo y arilo se seleccionan entre mercapto, tioéter, nitro, amino, ariloxilo, halógeno, hidroxilo, acilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclo saturado y parcialmente insaturado; y donde los sustituyentes para heterociclo y cicloalquilo se seleccionan entre los mencionados antes para alquilo y arilo más arilo y alquilo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1 de fórmula 1(A)
184
donde:
Z es un grupo que tiene la estructura:
185 
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186 
\vskip1.000000\baselineskip
187 
\vskip1.000000\baselineskip
188
donde:
a es 1, 2, 3, 4, o 5;
b es 1, o 2;
c es 1, o 2;
d es 1, 2, 3, 4;
cada uno de R^{2} es independientemente hidrógeno, hidroxi, tiol, halo, amino, alquil(C_{1}-C_{4})amino, dialquil(C_{1}-C_{4})amino, nitro, carboxi, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, alquil(C_{1}-C_{8})tio, haloalquilo C_{1}-C_{4}, hidroxialquilo C_{1}-C_{4}, alquil(C_{1}-C_{6})tioalquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilo, carbamoilo, N-alquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilo, N,N-dialquil(C_{1}-C_{4})carbamoilo, o alquil(C_{1}-C_{4})sulfonilamino;
A^{1} y A^{2} son independientemente -CH_{2}- o -N(R^{8})-;
A^{3} y A^{4} son independientemente -CH- o -N-;
A^{5} y A^{6} son independientemente -CH_{2}- o -N(R^{9})-;
A^{7} y A^{8} son independientemente -CH- o -N-;
R^{8} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};
R^{9} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};
R^{1} es arilo, o -S-arilo;
X es un grupo que tiene la estructura:
189
donde:
R^{3} es un grupo que tiene la estructura:
1) -C(O)-NR^{4}R^{4},
2)
190
o
3)
191
p es 4 o 5;
R^{4} en cada aparición es independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o hidroxialquilo C_{1}-C_{4}; y
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{6}, o hidroxialquilo C_{1}-C_{4}; con las condiciones de que:
(1) uno de A^{1} y A^{2} debe ser -N(R^{8})-;
(2) A^{1} y A^{2} no pueden ser ambos -N(R^{8})-;
(3) A^{3} y A^{4} no pueden ser ambos -N-;
(4) uno de A^{5} y A^{6} debe ser -N(R^{9})
(5) A^{5} y A^{6} no pueden ser ambos -N(R^{9})-;
(6) A^{7} y A^{8} no pueden ser ambos -N-;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde arilo hace referencia a un anillo monocíclico o policíclico carbocíclico o heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros.
3. El compuesto según la reivindicación 2 donde:
Z es un grupo que tiene la estructura:
192 
\vskip1.000000\baselineskip
193
R^{2} es hidrógeno, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, halo, amino, nitro, o trifluorometilo;
a es 1, 2, o 3;
c es 1; y
R^{3} es -C(O)NR^{4}R^{4},
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. El compuesto según la reivindicación 3 donde:
Z es
194
R^{2} es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, cloro, flúor, hidroxi, o amino;
X es
195
R^{1} es fenilo o -S-fenilo; y
R^{3} es -C(O)NH(R^{4});
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. El compuesto según la reivindicación 4 donde:
Z es
196
R^{2a} es metilo, etilo, o propilo;
R^{2b} es hidrógeno, hidroxi, o amino;
R^{2c} es hidrógeno, hidroxi, o amino;
R^{3} es -C(O)NH(t-butilo);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. El compuesto según la reivindicación 4 que es [3S-(3R*,4aR*,3aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-propil-3''-hidroxifenil)pentil]decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. Un compuesto según reivindicación 5 que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'(2-metil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. Un compuesto según reivindicación 5 que es [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2'S*,3'R*)]-2-[2'-hidroxi-3'-fenilmetil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-etil-3''-hidroxifenil)pentil]-decahidroisoquinolino-3-N-t-butilcarboxamida; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
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