HU226814B1 - Hiv protease inhibitors based on decahydroisoquinoline-carboxamide derivatives and use thereof - Google Patents

Hiv protease inhibitors based on decahydroisoquinoline-carboxamide derivatives and use thereof Download PDF

Info

Publication number
HU226814B1
HU226814B1 HU9600908A HU9600908A HU226814B1 HU 226814 B1 HU226814 B1 HU 226814B1 HU 9600908 A HU9600908 A HU 9600908A HU 9600908 A HU9600908 A HU 9600908A HU 226814 B1 HU226814 B1 HU 226814B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
reaction
acid
mmol
solution
Prior art date
Application number
HU9600908A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9600908D0 (en
HUT75652A (en
Inventor
Marlys Hammond
Bruce A Dressman
James E Fritz
William J Hornback
Stephen W Kaldor
Vincent J Kalish
John E Munroe
Siegfried Heinz Reich
John H Tatlock
Timothy A Shepherd
Michael J Rodriguez
Louis N Jungheim
Original Assignee
Agouron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agouron Pharma filed Critical Agouron Pharma
Publication of HU9600908D0 publication Critical patent/HU9600908D0/hu
Publication of HUT75652A publication Critical patent/HUT75652A/hu
Publication of HU226814B1 publication Critical patent/HU226814B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/28—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C237/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/36—Radicals substituted by singly-bound nitrogen atoms
    • C07D213/40—Acylated substituent nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/50—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C07D217/06—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines with the ring nitrogen atom acylated by carboxylic or carbonic acids, or with sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/576—Six-membered rings
    • C07F9/62—Isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems

Description

A találmány új kémiai vegyületekre vonatkozik, amelyek hasznosak HIV-proteáz gátlása tekintetében. A találmány továbbá ilyen vegyületek vírusellenes szerként való alkalmazására is vonatkozik.
A szerzett immunhiányos állapot (AIDS) viszonylag nem túl régen felismert betegség vagy állapot. Az AIDS a szervezet immunrendszerének fokozatos leromlását, valamint a központi és perifériás idegrendszer fokozódó károsodását okozza. Az 1980-as évek kezdetén történt felismerése óta az AIDS gyorsan terjedt, és mára a népesség viszonylag korlátozott részében járványos arányokat ért el. Széles körű kutatások eredményeként felismerték, hogy a betegségért a humán T-limfotrop retrovírus III (HTLV-III) a felelős, amit újabban a humán immunhiányt előidéző vírusként vagy HIV-ként jelöltek.
A HÍV a retrovírusokként ismert vírusok osztályába tartozik. A retrovírus genomját olyan RNS alkotja, amely reverz átírás útján DNS-sé konvertálódik. A retrovírusnak ez a DNS-e stabilan beépül a gazdasejtek kromoszómájába, és - a gazdasejtek replikációs folyamatai révén - új retrovírusrészecskéket termel, és a fertőzést más sejtekre is átviszi. A HÍV különös affinitást mutat a humán T-4 limfocitasejthez, amely életfontosságú szerepet játszik a test immunrendszerében. E fehér vértestsejtek HIV-fertőzése csökkenti ezt a sejtpopulációt. Esetenként az immunrendszer működésképtelenné és különböző betegségekkel, így többek között a Kaposi-szarkómával és a nyirokrendszeri rákkal szemben hatástalanná válik.
Bár a HÍV képződésének és hatásának pontos mechanizmusa még nem ismert, a vírus azonosítása bizonyos előrehaladáshoz vezetett e betegség szabályozásában. így az azidotimidin (AZT) hatóanyagot hatásosnak találták a HÍV retrovírusos genomja reverz átírásának gátlása szempontjából, ami az AIDS-fertőzötteknek - ha gyógyulást nem is - befolyásolási lehetőséget nyújt. A kutatás olyan hatóanyagok irányában folyik, amelyek képesek gyógyítani vagy legalább javított mértékben szabályozni a halálos HÍV vírust.
A retrovírusos replikációt általában poliproteinek poszttranszlációs képzése jellemzi. Ez vírusok által kódolt HIV-proteázenzim útján megy végbe. Ennek során érett polipeptidek keletkeznek, amelyek ezt követően részt vesznek a fertőző vírus képződésében és funkcionálásában. Ha ez a molekuláris folyamat gátlást szenved, a HÍV normál termelődése megáll. A HlV-proteázt gátló anyagok ezért HIV-ellenes szerként hathatnak.
A HIV-proteáz a HÍV struktúrprotein pol gén eredetű transzlációs termékek egyike. Ez a retrovírus-proteáz más struktúrpolipeptideket diszkrét helyeken sajátosan hasítva frissen aktivált struktúrproteineket szabadít fel és tesz alkalmassá a virion replikációjához. A HIV-proteáz alkalmas vegyületek útján történő gátlása így megakadályozhatja fertőzött T-limfociták provírusos integrációját a HIV-1 életciklusának korai szakaszában, valamint gátolhatja a késői szakaszban a vírus proteolitikus folyamatait. Ezenkívül a proteázinhibitorok előnye lehet a jelenleg elérhető hatóanyagokhoz képest könnyebb előállíthatóság, a vírusban hosszabb élettartam és kisebb toxikusság, amire a retrovírus-proteázhoz mutatott sajátosságok következtében nyílhat mód.
Az EP-A-0 560 368 számú bejelentés szubsztituált pipekolinsavszármazékokra mint HIV-proteáz inhibitorokra vonatkozik. A vegyületekről azt írják, hogy gátolják a HÍV által indukált citopatogén hatásokat humán sejtekben.
Az EP-A-0 539 192 számú bejelentés HlV-proteáz-inhibitor tulajdonságokkal rendelkező oligopeptid analógokra vonatkozik. Ismertetik ezek gyógyászatilag elfogadható sóit és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítményeket is.
Az EP-A-0 346 847 számú bejelentés vírusos eredetű proteázokat gátló aktivitással rendelkező aminosavszármazékokra vonatkozik. Ismertetik ezek gyógyászatilag elfogadható sóit és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítményeket is.
A találmány ennek megfelelően kémiai anyagok olyan új osztályát biztosítja, amelyek gátolhatják és/vagy blokkolhatják a HIV-proteáz aktivitását, megállíthatják a HÍV vírus burjánzását. A találmány továbbá e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmény, valamint e vegyületek alkalmazása HIV-proteázt gátló anyagként.
A találmány az (1/1) képletű vegyületre és gyógyászatilag elfogadható sóira vonatkozik, amelyek gátolják a humán immunhiányos vírus (HÍV) 1. típusa (HIV-1) vagy 2. típusa (HIV-2) által kódolt proteázt. Ezek a vegyületek hasznosak HIV-fertőzés kezelésében és a szerzett immunhiányos állapot (AIDS) kezelésében. A találmány szerinti vegyületek, gyógyászatilag elfogadható sóik és a gyógyászati készítmények használhatók egyedül vagy egyéb vírusellenes, immunmoduláló anyagokkal, antibiotikumokkal vagy vakcinákkal együtt.
A találmány (1/1) képletű vegyületre és gyógyászatilag elfogadható sóira vonatkozik.
Egy előnyös megvalósítási mód a fenti vegyület (1/11) képletű sztereoizomerére és gyógyászatilag elfogadható sóira vonatkozik.
Egy különösen előnyös megvalósítási módban a sztereoizomer sója lényegében tiszta.
Egy további előnyös megvalósítási módban a sztereoizomer lényegében tiszta.
Egy másik megvalósítási mód szerint a találmány (1/111) képletű vegyületre vonatkozik.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja (1 /IV) képletű sztereoizomerre vonatkozik.
Egy különösen előnyös megvalósítási módban a sztereoizomer lényegében tiszta.
A találmány egy további megvalósítási módja gyógyászati készítményre vonatkozik, amely a találmány szerinti vegyületet és gyógyászatilag elfogadható vivőanyagot tartalmaz.
A találmány egy másik megvalósítási módja a fenti vegyületek bármelyikének alkalmazására vonatkozik HIV-proteáz gátlására szolgáló gyógyszer előállítására.
HU 226 814 Β1
A találmány új, a fentiekben definiált képletű vegyületeket biztosít, amelyek hasznosak HIV-fertőzés és/vagy AIDS kezelésében.
A leírásban a hőmérsékletre vonatkozó adatok °C egységben értendők. A használt anyagokra vonatkozó mérési adatok tömegegységben vannak adva a folyadékok kivételével, amelyek térfogategységben vannak meghatározva.
A találmány szerinti vegyületekben legalább két aszimmetriacentrum van, amelyeket az (1/1) általános képletben csillag jelöl.
Ezen aszimmetriacentrumok következtében a találmány szerinti vegyületek előfordulhatnak a lehetséges sztereoizomer alakok bármelyikében, és használhatók a sztereoizomerek elegyeiként, amelyek lehetnek optikailag aktív vagy racém elegyek, vagy használhatók lényegileg tiszta sztereoizomerek alakjában, így legalább 95%-os tisztaságban. Valamennyi aszimmetrikus forma, egyedi sztereoizomer és azok kombinációi is a találmány körébe tartoznak.
Az egyes sztereoizomereket előállíthatjuk a fenti eljárásokkal megfelelő prekurzoraikból, a racém elegyek rezolválásával vagy a diasztereomerek elválasztása útján. A rezolválást lefolytathatjuk rezolválószer jelenlétében, kromatográfiás eljárás vagy ismételt kristályosítás vagy ezen eljárásoknak a technika állásából ismert kombinációja útján. A rezolválás részleteit a szakirodalom tárgyalja [Jacques és munkatársai: Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons, 1981],
A találmány szerinti vegyületek előnyösen lényegében tiszták, azaz 50%-ot meghaladó tisztaságúak. A vegyületek előnyösebben legalább 75%-os, még előnyösebben legalább 90%-os, még előnyösebben legalább 95%-os, különösen előnyösen legalább 97%-os és legelőnyösebben legalább 99%-os tisztaságúak.
A fentiek értelmében a találmány az (1/1) képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóit is magában foglalja. A találmány szerinti vegyületek tartalmazhatnak kellően savas, kellően bázikus vagy mindkét funkciós csoportot, és ennek megfelelően reagálhatnak számos szervetlen vagy szerves bázissal, valamint szervetlen vagy szerves savval gyógyászatilag elfogadható só képződése közben.
A gyógyászatilag elfogadható só kifejezésen az (1/1) képletű vegyületek olyan sóit értjük, amelyek élő szervezetek számára lényegileg nem toxikusak. Gyógyászatilag elfogadható sókra példák a találmány szerinti vegyületek ásványi vagy szerves savakkal vagy szervetlen bázisokkal lejátszódó reakciója során képződő sók. A reagenseket savaddíciós sók esetén általában mindkét anyagra nézve megfelelő oldószerben, így dietil-éterben vagy benzolban egyesítjük, míg bázisokkal képzett addíciós sók esetén vizet vagy alkoholokat használunk. A sók 1 óra és 10 nap közötti időtartam alatt általában kicsapódnak az oldatból, és szűrés vagy egyéb szokásos eljárás útján izolálhatok. Az ilyen sók savaddíciós és bázisokkal képzett addíciós sóként ismertek.
Savaddíciós sók képzésére alkalmazható savak lehetnek szervetlen savak, így hidrogén-klorid, hidrogénbromid, hidrogén-jodid, kénsav, foszforsav és hasonlók, továbbá szerves savak, így para-toluolszulfonsav, metánszulfonsav, oxálsav, para-bróm-fenil-szulfonsav, szénsav, borostyánkősav, citromsav, benzoesav, ecetsav és hasonlók.
Gyógyászatilag elfogadható sókra példák a szulfát, piroszulfát, hidrogén-szulfát, szulfit, hidrogén-szulfit, foszfát, monohidrogén-foszfát, dihidrogén-foszfát, metafoszfát, pirofoszfát, klorid, bromid, jodid, acetát, propionát, dekanoát, kaprilát, akrilát, formiát, izobutirát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát, szukcinát, szuberát, szebacát, fumarát, maleát, butin-1,4dioát, hexin-1,6-dioát, benzoát, klór-benzoát, metilbenzoát, dinitro-benzoát, hidroxi-benzoát, metoxi-benzoát, italát, szulfonát, xilolszulfonát, fenil-acetát, fenilpropionát, fenil-butirát, citrát, laktát, g-hidroxi-butirát, glikolát, tartarát, metánszulfonát, propánszulfonát, naftalin-1-szulfonát, naftalin-2-szulfonát, fenil-glikolát és hasonlók.
A gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sók közül előnyösek az ásványi savakkal, így a hidrogén-kloriddal és hidrogén-bromiddal képzett, valamint szerves savakkal, így maleinsavval és metánszulfonsawal képzett sók.
Bázisokkal képzett addíciós sók magukban foglalják a szervetlen és szerves bázisokból, így az ammónium- vagy alkálifém- vagy alkáliföldfém-hidroxidokból, karbonátokból, hidrogén-karbonátokból és hasonlókból származtatott sókat. A találmány szerinti sók előállítása során hasznos bázisok, így többek között a nátriumhidroxid, kálium-hidroxid, ammónium-hidroxid, káliumkarbonát, nátrium-karbonát, nátrium-hidrogén-karbonát, kálium-hidrogén-karbonát, kalcium-hidroxid és kalcium-karbonát. Különösen előnyösek a kálium- és nátriumsók alakjában lévő vegyületek.
Megjegyezzük, hogy a találmány szerinti sók részét képező ellenionok anyagi természete nem kritikus mindaddig, amíg a só egésze gyógyászatilag elfogadható, és az ellenion a só egészének minőségét nem befolyásolja hátrányosan.
A találmány szerinti vegyületek a következők: az (1/1) képletű 2-[2’-hidroxi-3’-(fenil-tio-metil)-4’aza-5’-oxo-5’-(2”-metil-3”-hidroxi-fenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-terc-butil-karboxamid, az (1/111) képletű 2-[2'-hidroxi-3'-(fenil-tio-metil)-4'aza-5’-oxo-5’-(2”-meti I-3 ”-h id roxi -fen i I )-pe n ti I ]dekahidroizokinolin-3-N-terc-butil-karboxamidmetánszulfonsav-só.
A fenti képletekkel leírt vegyületek mindegyikében öt aszimmetriacentrum van, így azok 32 egyedi sztereoizomer csoportjából választható vegyületeket és két vagy több sztereoizomerből képzett tetszőleges elegyet határoznak meg.
E vegyületek előnyös sztereoizomerei a következők: a (1/11) képletű [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3'S*)]-2[2’-hidroxi-3’-(fenil-tio-metil)-4’-aza-5’-oxo-5’-(2”-metil3”-hidroxi-fenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-tercbutil-karboxamid, a (1/IV) képletű [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3’S*)]-2[2’-hidroxi-3’-(fenil-tio-metil)-4’-aza-5’-oxo-5’-(2”-metil3
HU 226 814 Β1
3”-hidroxi-fenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-tercbutil-karboxamid-metánszulfonsav-só, vagy a fentiekben felsorolt legelőnyösebb vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói.
A találmány szerinti általános képletű vegyületeket előállíthatjuk az A általános reakcióvázlatnak megfelelően, ahol
D jelentése nitrogénatom,
G jelentése oxigénatom,
Q1 jelentése t-butil-csoport,
Q2 jelentése hidrogénatom,
B jelentése dekahidroizokinolin-gyűrű,
Q3 jelentése fenil-tio-csoport,
Qg jelentése hidrogénatom,
E jelentése szénatom,
Q4 jelentése metilcsoport,
Q5 jelentése hidroxilcsoport,
A jelentése benzolgyűrű.
Az A reakcióvázlaton feltüntetett reakció szokásos kapcsolási reakció, amelyet általánosan alkalmaznak amidok vagy peptidek szintézise során. A reakciót úgy folytatjuk le, hogy megfelelően helyettesített (II) általános képletű amint aprotikus oldószerben vagy oldószerek elegyében megfelelően helyettesített (III) általános képletű karbonsavval reagáltatjuk. A reakciót rendszerint aktivátor jelenlétében vagy aktivátor nélkül, előnyösen aktivátor jelenlétében folytatjuk le, ennek során kapcsolószer is jelen van. E reakció számára jellegzetes aprotikus oldószerek a tetrahidrofurán és a dimetilformamid vagy ilyen oldószerek elegyei. A reakció-hőmérséklet általában -30 °C és 25 °C között van. Az aminreagenst a karbonsavhoz viszonyítva általában ekvimoláris mennyiségben használjuk, ahol a kapcsolószer is ekvimoláris mennyiségben vagy csekély feleslegben van jelen. Jellegzetes kapcsolószerek többek között a karbodiimidek, így a diciklohexil-karbodiimid (DCC) és az Ν,Ν’-dietil-karbodiimid; az imidazolok, így karbonil-diimidazol; továbbá bisz(2-oxo-3-oxazolidinil)foszfinil-klorid (BOP-C1) vagy N-(etoxi-karbonil)-2-etoxi-1,2-dihidrokinolin (EEDQ). E reakcióhoz az előnyös kapcsolószer a DCC. Ezt a reakciót előnyösen aktivátorral folytatjuk le; előnyös aktivátor a hidroxi-benzotriazol-hidrát (HOBTH2O).
A reakció befejeződése után - kívánt esetben - a vegyületet elválaszthatjuk a technika állása szerint ismert eljárásokkal, így a vegyületet kikristályosíthatjuk és szűréssel összegyűjthetjük, vagy a reakcióelegyben lévő oldószert eltávolíthatjuk extrakció, bepáriás vagy dekantálás útján. Kívánt esetben a vegyületet tovább tisztíthatjuk szokásos eljárásokkal, így kristályosítás útján vagy szilárd hordozón, így szilikagélen vagy timföldön lefolytatott kromatográfiás eljárással.
A (II) általános képletű kiindulási vegyületeket a B általános reakcióvázlaton feltüntetett eljárásokkal állíthatjuk elő. A B reakcióvázlatban szereplő általános képletekben
VA jelentése amino-védőcsoport;
B, D, G, Qh Q2, Q3 és Qg jelentése megegyezik az (I) általános képletnél megadott jelentésekkel; és
ZZ jelentése halogénatom.
A B reakcióvázlat szerinti eljárást úgy valósítjuk meg, hogy az 1-7. reakciókat a megadott sorrendben kivitelezzük. A reakció befejeződése után a köztiterméket - kívánt esetben - ismert eljárásokkal izolálhatjuk, így a vegyületet kristályosíthatjuk és szűréssel összegyűjthetjük, vagy a reakcióelegyben lévő oldószert extrakció, bepáriás vagy dekantálás útján eltávolíthatjuk. Kívánt esetben a köztiterméket tovább tisztíthatjuk szokásos eljárásokkal, így kristályosítás útján vagy szilárd hordozón, így szilikagélen vagy timföldön lefolytatott kromatográfiás eljárással, mielőtt a reakcióvázlat következő lépését lefolytatjuk.
A B. 1 reakciót úgy folytatjuk le, hogy egy védett aminocsoportot tartalmazó, (IV) általános képletű reagenst szokásos körülmények között a megfelelő vegyes anhidriddé alakítunk. Többek között védett aminocsoportot tartalmazó karbonsavat reagáltathatunk 1-6 szénatomos alkil-klór-hangyasav-észterrel, így izobutil-klór-hangyasav-észterrel, előnyösen savmegkötő anyag jelenlétében. Előnyös savmegkötő anyagok a trialkil-aminok, még előnyösebben trietil-amint használunk. A reakciót általában aprotikus oldószerben, így etil-acetátban folytatjuk le. Az oldószer megválasztása nem kritikus mindaddig, amíg az alkalmazott oldószer a lefolytatott reakció szempontjából inért, és a reagensek a kívánt reakció lejátszódásához kellően szolubilizált állapotban vannak. A kapott vegyes anhidridet előnyösen további izolálás vagy tisztítás nélkül használjuk fel a B.2 reakcióban.
A B.2 reakciót két lépésben folytatjuk le. Először diazo-metán előállítására éter típusú oldószer, előnyösen dietil-éter rétegével borított nátrium-hidroxid-oldatot reagáltatunk N-metil-N-nitro-N-nitrozo-guanidin nagy feleslegével. A nátrium-hidroxidot előnyösen vizes oldat alakjában használjuk, amelynek koncentrációja 4-6 mol/l. A reakció befejeződését követően a szerves fázist szárítószer, így vízmentes kálium-hidroxid felett szárítjuk. A megfelelő α-diazo-karbonil előállítására ezt az oldatot a fenti B. 1 reakcióban kapott vegyes anhidriddel reagáltatjuk. A diazo-metán-reagenst ebben a reakcióban előnyösen izolálás vagy tisztítás nélkül használjuk. A reakciót általában -50 °C és -10 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen -20 °C-os névleges hőmérsékleten folytatjuk le.
A B.3 reakcióban α-halogén-karbonil előállítására a B.2 reakcióban előállított α-diazo-karbonilt H-ZZ általános képletű savval - amely képletben ZZ jelentése halogénatom - reagáltatjuk általában aprotikus oldószerben, így dietil-éterben. A megfelelő a-klór-karbonil előállítására használt előnyös sav a hidrogén-klorid. A reakciót általában -30 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten folytatjuk le. Az oldószer megválasztása nem kritikus mindaddig, amíg az alkalmazott oldószer a lejátszódó reakcióra nézve inért és a kívánt reakció lejátszódásához a reagensek kellően szolubilizált állapotban vannak. A reagensként használt savat általában vízmentes gáz alakjában kis részletekben adagoljuk a reakció befejeződéséig. A reakció lejátszódását vékonyréteg-kromatográfiás eljárással követhetjük.
HU 226 814 Β1
A B.4 reakcióban a megfelelő a-klór-hidroxi-vegyület előállítására a B.3 reakcióban előállított vegyület karbonilcsoportját a technika állásából ismert szokásos eljárásokkal redukáljuk. A B.3 reakcióban előállított vegyületet többek között oldószerek elegyében redukálószerrel egyesíthetjük. Jellemző redukálószerek többek között a nátrium-[tetrahidrido-borát](1—), lítium-[tetrahidrido-borát](1 —), cink-[tetrahidrido-borát](1—), diizobutil-alumínium-hidrid és nátrium-bisz(2-metoxi-etoxi)alumínium-hidrid. Előnyös redukálószer a nátrium-[tetrahidrido-borát](1 —). Jellegzetes oldószerelegyek többek között protikus és aprotikus elegyek, így tetrahidrofurán és víz elegye. Az oldószer megválasztása nem kritikus mindaddig, amíg az alkalmazott oldószer a lejátszódó reakcióra nézve inért és a kívánt reakció lejátszódásához a reagensek kellően szolubilizált állapotban vannak. A reakciót általában -10 °C-ot meghaladó hőmérsékleten, előnyösen 0 °C névleges hőmérsékleten folytatjuk le.
A B.5 reakcióban a megfelelő epoxid előállítására a B.4 reakcióban előállított α-klór-hidroxi-vegyületet erős bázissal kezeljük a technika állásából ismert szokásos körülmények között. Az α-klór-hidroxi-vegyületet többek között reagáltathatjuk alkohol típusú oldószerben, így etanolban nátrium-hidroxid/etanol eleggyel. A reakciót jellemzően 0 °C-tól az oldószer forráspontjáig terjedő hőmérsékleten folytatjuk le. A reakció előnyös hőmérséklete a szobahőmérséklet.
A B.6 reakcióban a B.5 reakció szerint előállított epoxidot (V) általános képletű heterociklusos reagenssel reagáltatjuk jellemzően alkohol típusú oldószerben 20 °C és 100 °C közötti hőmérsékleten. Az oldószer megválasztása nem kritikus mindaddig, amíg az alkalmazott oldószer a lejátszódó reakcióra nézve inért és a kívánt reakció lejátszódásához a reagensek kellően szolubilizált állapotban vannak. E reakcióhoz használt jellemző oldószerek alkoholok, előnyösen izopropanol vagy etanol. A reakciót előnyösen 80 °C névleges hőmérsékleten folytatjuk le.
A B.7 reakció amino-védőcsoport szokásos lehasítási reakciója a technika állásából ismert eljárásokat és módszereket használva a fenti A reakcióvázlatban használt megfelelő amin előállítására. A kapott amint reagáltathatjuk tisztítás nélkül, azonban előnyösen előzőleg tisztítjuk.
A B.6 reakciólépés kiindulási anyagaként használt (V) általános képletű vegyületeket ismert eljárásokkal és módszerekkel állíthatjuk elő. A heterociklusos reagenseket jellemző módon a megfelelő, védett aminocsoportot tartalmazó aminosavakból állítottuk elő savas aktiválást követően alkil-aminnal lefolytatott kezelés útján. Ezt a reakciót általában savmegkötő anyag, így N-metil-morfolin jelenlétében folytatjuk le. Az amino-védőcsoportnak a kémiai gyakorlatban szokásos amino-védőcsoport lehasítás útján történő eltávolítása a kívánt heterociklusos reagenseket eredményezi.
Az A reakcióvázlatban használt (III) általános képletű karbonsavat - amennyiben kereskedelmi forgalomban nem szerezhető be - ismert eljárásokkal előállíthatjuk. Közelebbről ezt a reagenst előállíthatjuk kereskedelmi forgalomban kapható karbociklusos vagy heterociklusos vegyületek további helyettesítése és/vagy oxidálása útján. így a (VII) általános képletű karbociklusos vagy heterociklusos vegyületeket ismert eljárásokkal oxidálhatjuk. A (VII) általános képletű vegyületet sajátos esetekben reagáltathatjuk oxidálószerrel, így szelén-dioxiddal vagy kálium-permanganáttal 0 °C és 200 °C közötti hőmérsékleten a reagensekre nézve egyaránt inért oldószerben, így vízben vagy difenil-éterben.
A (III) általános képletű vegyületek további előállítási eljárása során megfelelően helyettesített karboxilezett karbociklusos vagy heterociklusos csoportot karboxi-védőcsoporttal védünk, majd a karbociklusos vagy heterociklusos csoportot ismert eljárásokkal tovább helyettesítjük. A karboxi-védőcsoportot ezután ismert eljárásokkal eltávolítva a kívánt (III) általános képletű karbonsavreagenst kapjuk.
A karboxi-védőcsoport kifejezésen a leírásban a karboxiesoport olyan helyettesítőit értjük, amelyeket általában a karboxiesoport blokkolására vagy védelmére használnak, miközben a vegyületen lévő egyéb funkciós csoportokat reagáltatnak. Ilyen karboxi-védőcsoportokra példa többek között a metil-, p-nitro-benzil-, p-metil-benzil-, ρ-metoxi-benzil-, 3,4-dimetoxi-benzil-, 2,4-dimetoxi-benzil-, 2,4,6-trimetoxi-benzil-, 2,4,6trimetil-benzil-, pentametil-benzil-, 3,4-metilén-dioxibenzil-, benzhidril-, 4,4’-dimetoxi-benzhidril-, 2,2’,4,4’tetrametoxi-benzhidril-, terc-butil-, terc-amil-, tritil-, 4-metoxi-tritil-, 4,4’-dimetoxi-tritil-, 4,4’,4”-trimetoxi-tritil-, 2-fenil-prop-2-il-, trimetil-szilil-, terc-butil-dimetilszilil-, fenacil-, 2,2,2-triklór-etil-, b-[di(n-butil)-metilszililj-etil-, ρ-toluolszulfonil-etil-, 4-nitro-benzil-szulfoniletil-, allil-, cinnamil- és 1 -(trimetil-szilil-metil)-prop-l -en3-il-csoport. A karboxiesoport védelmére előnyösen úgy járunk el, hogy azt amidcsoporttá alakítjuk, majd a kívánt karboxiesoport biztosítására az amidcsoportot hidrolízis útján visszaállítjuk. Ilyen csoportokra további példák találhatók a szakirodalomban [E. Hasiam: Protective Groups in Organic Chemistry, 5. fejezet (szerkesztő: J. G. W. McOmie, Plenum Press, New York, N. Y., 1973 és T. W. Greene: Protective Groups in Organic Synthesis, 5. fejezet, John Wiley and Sons, New York, N. Y., 1981],
A karboxiesoport védelmére szolgáló előnyös eljárás szerint a karboxiesoportot savval aktiváljuk, majd amidot képezünk. A karboxiesoportot aktivált karboxicsoporttá alakítására többek között savhalogeniddé, acil-anhidriddé vagy acil-imidazollá alakíthatjuk előnyösen savmegkötő anyag jelenlétében. Szokásosan kereskedelmi forgalomban beszerezhető savkloridot használunk, ezáltal elkerülhetővé válik további savas aktiválás szükségessége. Előnyös savmegkötő anyagok a trialkil-aminok, még előnyösebben trietil-amint használunk. A reakciót szokásosan aprotikus oldószerben, így többek között dietil-éterben vagy metilénkloridban folytatjuk le. Az előnyös oldószer a metilénklorid. Az oldószer megválasztása nem kritikus mindaddig, amíg az alkalmazott oldószer a lejátszódó reakcióra nézve inért és a kívánt reakció lejátszódásához a
HU 226 814 Β1 reagensek kellően szolubilizált állapotban vannak. Az aktivált karboxicsoportot ezután R11-NH2 általános képletű aminnal, így anilinnal reagáltatjuk aprotikus oldószerben, ennek során (Vili) általános képletű amidot kapunk, amelyet ismert eljárásokkal tovább helyettesíthetünk.
A (Vili) általános képletű amidreagenst tovább helyettesíthetjük a (b) általános képletű csoport orto-helyzetű deprotonálása útján, ezáltal a megfelelő aniont kapjuk, ezt követően számos reagenssel, így alkilhalogenidekkel vagy halogénezőszerekkel, így brómmal lefolytatott reakció következhet. Az amidreagenst általában kétszeresen deprotonáljuk, ehhez az amidreagenshez viszonyítva 2 ekvivalens mennyiségű erős bázist, így n-butil-lítiumot vagy szek-butil-lítiumot használunk adott esetben fémekkel koordinációs vegyületet képező szer, így tetrametil-etilén-diamin (TMEDA) jelenlétében. A reakciót általában aprotikus oldószerben, előnyösen éterben, így többek között dietil-éterben vagy tetrahidrofuránban folytatjuk le -78 °C és 25 °C közötti hőmérsékleten.
A kívánt, (III) általános képletű helyettesített karbonsavreagens előállítására a kapott vegyületet ezután ismert eljárásokkal hidrolizálhatjuk. A hidrolízist többek között lefolytathatjuk oly módon, hogy az amidreagenst erős ásványi savval, szerves savval vagy ásványi sav és szerves sav elegyével kezeljük 100 °C és 160 °C közötti hőmérsékleten. Az ebben a reakcióban általánosan használható savak többek között a hidrogén-bromid, ecetsav és hidrogén-klorid. A reakció meggyorsítására adott esetben használhatunk lezárt csövet.
A (III) általános képletű helyettesített karbonsavreagens előállításának harmadik módszere szerint anilint diazotálunk, majd a kapott diazóniumsót befagyasztjuk. Az anilinreagens aminocsoportját sajátosan salétromossavval lefolytatott reakció útján alakítjuk diazóniumsóvá. Salétromossavat előállíthatunk in situ oly módon, hogy nátrium-nitritet erős sav, így sósav vagy kénsav vizes oldatával kezelünk. Ezt a reakciót általában 5 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten folytatjuk le. A kívánt helyettesített aromás rendszer előállítására a diazóniumsót ezután alkalmas reagenssel kezeljük. Erre a kezelésre alkalmas reagensek többek között a víz, cianidok, halogenidek és a kénsav vizes oldata. A kívánt reakció kedvező befolyásolása érdekében a reakcióelegyet általában melegítjük.
A technika állásából számos reakció ismert, amelyek a karbociklusos vagy heterociklusos gyűrűkön lefolytatandó kívánt helyettesítésekhez felhasználhatók. A szakirodalom számos aromás elektrofil és nukleofil helyettesítő reakciót ismertet [March J.: Advanced Organic Chemistry, 3. kiadás, 11. és 13. fejezet, Wiley, 1985],
A (III) általános képletű vegyületeket ezenkívül előállíthatjuk megfelelően helyettesített karbociklusos vagy heterociklusos vegyületek karboxilezésével is. A karboxilezést számos reagenssel lefolytathatjuk. A karbociklusos vagy heterociklusos reagenst többek között reagáltathatjuk foszgénnel, oxalil-kloriddal, karbamid-hidrokloriddal vagy N,N-dietil-karbamoil-kloriddal Friedel-Crafts-katalizátorok jelenlétében. E reakció változatai közé tartozik karbociklusos vagy heterociklusos reagens reagáltatása alkil-tiol-klór-hangyasav-észterrel (RSCOCI) vagy karbamoil-kloriddal (H2NCOCI) amid, illetve tiol-észter előállítására. Az amidot vagy tiol-észtert a kívánt karboxicsoport előállítására ezután hidrolizálhatjuk (lásd a fenti irodalmi hivatkozás 491. oldalán).
A Friedel-Crafts-katalizátorokra példák többek között a Lewis-savak, így az alumínium-bromid (AIBr3), alumínium-klorid (AICI3), vas(lll)-klorid (FeCI3), bór-triklorid (BCI3) és bór-trifluorid (BF3), továbbá a szakirodalom is számos alkalmas katalizátort ismertet [March J.: Advanced Organic Chemistry, 3. kiadás, Wiley, 1985; Oláh: Friedel-Crafts and Related Reactions, Interscience, New York, 1963-1965; és Oláh: Friedel-Crafts Chemistry, Wiley, New York, 1973],
A következőkben a találmányt előállítási példákkal és példákkal szemléltetjük. Ezek a példák csupán a szemléltetés célját szolgálják, ezért nem korlátozó jellegűek.
A magmágneses rezonanciaspektrum, elektronütközéses tömegspektrum, térdeszorpciós tömegspektrum, gyors atomokkal végzett bombázás útján mért tömegspektrum, infravörös spektrum, ultraibolya spektrum, nagynyomású folyadékkromatográfia és vékonyréteg-kromatográfia rövidítései a következők: NMR, EIMS, MS(FD), MS(FAB), IR, UV, HPLC és TLC. Megjegyezzük, hogy az IR-spektrumra vonatkozóan felsorolt abszorpciós maximumok nem tartalmazzák az összes maximumot, hanem csak a jellegzetesebb értékeket.
Az NMR-spektrumokkal kapcsolatban a következő rövidítéseket használjuk: szingulett (s), duplett (d), kettős duplett (dd), triplett (t), kvartett (q), multiplett (m), kettős multiplett (dm), széles szingulett (br.s), széles duplett (br.d), széles triplett (br.t), széles multiplett (br.m). J a herz (Hz) egységben megadott kapcsolási együtthatót jelzi. Egyéb utalás hiányában az NMR adatok szabad bázis alakjában lévő találmány szerinti vegyületre vonatkoznak.
Az NMR-spektrum adatait Bruker Corp. 270 MHz típusú berendezésen vagy General Electric QE-300 300 MHz típusú berendezésen mértük. A kémiai eltolódás adatait δ értékekben fejeztük ki (a tetrametil-szilántól számítva ppm egységben). Az MS(FD) spektrumot Varian-MAT 731 Spektrometer típusú berendezéssel vettük fel karbon dendrit emittert használva. Az EIMS spektrumot CEC 21-110 típusú berendezéssel mértük (gyártó cég: Consolidated Electrodynamic Corporation). Az MS(FAB) spektrum meghatározására VG ZAB-3 Spektrometer típusú berendezést használtunk. Az IR-spektrumot Perkin-Elmer 281 típusú berendezéssel mértük. Az UV spektrumot Cary 118 típusú berendezéssel határoztuk meg. TLC lefolytatására E. Merck gyártmányú szilikagéllemezeket használtunk. Az olvadáspontra megadott értékek korrekciót nem tartalmaznak.
HU 226 814 Β1
Referencia előállítási példa
A) 2R-N-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-3-naft-2-il-tiopropánsav
1,28 g (8,00 mmol) naftalin-2-tiol 30 ml tetrahidrofuránban lévő oldatához nitrogénatmoszféra alatt lassan 1,77 g 60 tömeg%-os nátrium-hidridet adtunk. 15 perc időtartamú keverés után 20 ml tetrahidrofuránban lévő N-(benzil-oxi-karbonil)-szerin-p-lakton oldatát adtuk lassan az elegyhez. A reakcióelegyet 1 óra alatt hagytuk szobahőmérsékletre lehűlni, majd csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot etil-acetátban oldottuk és egymást követően 0,5 mol/l koncentrációjú nátrium-hidrogén-szulfát-oldattal és telített sóoldattal mostuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, és a szerves fázist vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 2,08 g halványsárga színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 68%). 1H-NMR (CDCI3): δ 3,42-3,61 (br.m, 2H), 5,53-5,76 (br.s, 1H), 4,85-5,08 (br.m, 2H), 5,54-5,76 (br.s,
1H), 7,06-7,97 (m, 12H).
[a]D -55,72° (c 1,0, MeOH).
IR (KBr): 3348, 3048, 1746, 1715, 1674, 1560, 1550,
1269,1200,1060 cm-1.
MS(FD): m/e 381 (M+), 381 (100).
A C20H19NO4S összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 66,12 5,02 3,67
Mért: 66,22 5,04 3,86
B) 3R-1-Diazo-2-oxo-3-N-(benzil-oxi-karbonil)amino-4-(naft-2-il-tio)-bután
A referencia előállítási példa A) lépése 15,38 g (40,3 mmol) cím szerinti vegyületének 230 ml etil-acetátban lévő (-30 °C-ra hűtött) hideg oldatához nitrogénatmoszféra alatt fecskendő segítségével 5,62 ml (40,3 mmol) trietil-amint adtunk lassan. A kapott oldathoz fecskendővel 7,84 ml (60,5 mmol) izobutil-klórszénsav-észtert adtunk. Egy külön reakcióedényben 170 ml dietil-éter és 170 ml 5 mol/l koncentrációjú nátrium-hidroxid-oldat kétfázisú elegyéhez óvatosan 10 g N-(metil)-N-(nitro)-N-(nitrozo)-guanidint adtunk óvatosan intenzív gázfejlődés közben. A reakció befejeződése után a szerves fázist a vizes fázisról nátrium-hidroxidra dekantáltuk és megszárítottuk. A fenti diazo-metán előállítást és addíciót azonos mennyiségű dietil-éter és nátrium-hidroxid, valamint 30 g N-(metil)-N-(nitro)-N(nitrozo)-guanidin alkalmazásával megismételtük. A kapott diazo-metán-reagenst a fentiek szerint előállított vegyes anhidridoldathoz adtuk, és a reakcióelegyet hagytuk hidegen (-30 °C hőmérsékleten) 20 percig reagálni. Amint a reakció - vékonyréteg-kromatográfiás eljárás (TLC) szerint - befejeződött, a diazo-metán feleslegének eltávolítására tűzi polírozású Pasteur-pipettán keresztül nitrogént buborékoltattunk az oldaton át, majd az oldatot csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (metilén-kloridban lévő 10 térfogat% etil-acetát eluenssel lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 13,62 g sárga olajat kaptunk (kitermelés: 83%).
1H-NMR (CDCI3): δ 3,32-3,46 (m, 2H), 4,40-4,67 (m,
1H), 5,00-5,09 (m, 2H), 5,44 (s, 1H), 5,76 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,25-7,86 (m, 12H).
C) 3R-1-Klór-2-oxo-3-N-(benzil-oxi-karbonil)amino-4-(naft-2-il-tio)-bután
A referencia előállítási példa B) lépése 13,62 g (33,59 mmol) termékének 230 ml dietil-éterben készített hideg (-20 °C hőmérsékletű) oldatán rövid (2 másodperc) ideig vízmentes sósavgázt fúvattunk keresztül, ami gázfejlödést eredményezett. Ezt az eljárást megismételtük ügyelve arra, hogy feleslegben ne vigyünk be sósavat. A reakció teljes lejátszódása után amit TLC útján követtünk - az oldatot csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (metilén-kloridban lévő 10 térfogat% etil-acetát eluenssel lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 12,05 g halvány cserszínű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 87%).
1H-NMR (CDCI3): δ 3,41 (dd, J=12,6 Hz, 1H), 3,53 (dd, J=12,6 Hz, 1H), 4,18 (AB q, J=41,9 Hz, J=15,9 Hz, 2H), 4,77 (dd, J=9, 3 Hz, 1H), 5,04 (AB q, J=12 Hz, J=10,4 Hz, 2H), 5,59 (d, J=7 Hz, 1H), 7,24-7,85 (m, 12H).
[a]D-80,00° (C 1,0, MeOH).
IR (CHCI3): 3426, 3031,3012,1717,1502,1340,1230, 1228, 1045 cm-1.
MS(FD): m/e 413 (M+), 413 (100).
A C22H20NO3SCI összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 63,84 4,87 3,38
Mért: 64,12 4,95 3,54
D) [3R-(3R*,4S*)]-1-Klór-2-hidroxi-3-N-(benzil-oxikarbonil)-amino-4-(naft-2-il-tio)-bután A referencia előállítási példa C) lépése 530 mg (1,28 mmol) termékének 10 ml tetrahidrofuránban és 1 ml vízben készített hideg (0 °C hőmérsékletű) oldatához 73 mg (1,92 mmol) nátrium-[tetrahidrido-borát]( 1 —)-ot adtunk. Amikor TLC a reakció befejeződését jelezte, 10 ml vizes telített ammónium-klorid-oldat és 500 μΙ 5 mol/l koncentrációjú sósavoldat útján az oldat pH-ját 3-ra állítottuk be. A kapott oldatot metilénkloriddal kétszer extraháltuk, az egyesített szerves fázisokat vízzel mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (metilén-klorid eluálószerrel lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 212 mg cserszínű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés 40%).
1H-NMR (CDCI3): δ 3,40 (s, 2H), 3,61-3,71 (m, 2H), 3,97-3,99 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 5,16 (br.s, 1H), 7,21-7,83 (komplex, 12H).
MS(FD): m/e 415 (M+), 415 (100).
[</.]D-47,67° (c0,86; MeOH).
IR (CHCI3): 3630, 3412, 3011, 1720, 1502, 1236, 1044 cm-1.
HU 226 814 Β1
A C22H22NO3CIS összegképletre vonatkozó elemana-
lízis: C% H% N%
Számított: 63,53 5,33 3,37
Mért: 63,72 5,60 3,64
E) [1 ’R-(1 ’R*,1S*)]-1-[(1 ’-N-(Benzil-oxi-karbonil)amino-2’-(naft-2-il-tio)-etil]-oxirán
A referencia előállítási példa D) lépése 190 mg (0,46 mmol) termékének 6 ml 1:2 térfogatarányú etanol/etil-acetát elegyben lévő oldatához 31 mg (0,55 mmol) kálium-hidroxid 1 ml etanolban lévő oldatát adtuk. Amikor TLC a reakció befejeződését jelezte, a reakcióelegyet víz és metilén-klorid elegyébe öntöttük. A kapott fázisokat elválasztottuk, a szerves fázist vízzel mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (metilénkloridban lévő 10 térfogat% etil-acetát eluálószerrel lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 172 mg halvány cserszínű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 99%).
1H-NMR (CDCI3): δ 2,76 (br.s, 2H), 3,01 (br.s, 1H), 3,31 (d, J=5 Hz, 2H), 3,77 (br.s, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,22 (d, J=6 Hz, 1H), 7,25-7,85 (komplex, 12H).
[a]D -125,42° (c0,59; MeOH).
MS (FD): m/e 379 (M+), 379 (100).
ÍR (CHCI3): 3640, 3022, 2976, 1720, 1502, 1235, 1045 cm-1.
A C22H21NO3S összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 69,63 5,58 3,69
Mért: 69,41 5,53 3,64
F) [2S-(2R*,2’R*,3,St)]-1-[2,-Hidroxi-3’-(N-benziloxi-karbonil)-amino-4'-(naft-2-il-tio)-butil]-piperidin2-N-(terc-butil]-karboxamid
A referencia előállítási példa E) lépése 0,51 g (1,34 mmol) termékének és a 4C) előállítási példa 0,26 g (1,41 mmol) termékének 25 ml izopropanolban lévő oldatát 8 órán át 55 °C hőmérsékletre hevítettük. A kapott reakcióelegyet lehűtöttük, majd csökkentett nyomáson betöményítve a nyers reakcióterméket kaptuk. Ezt az anyagot (4 mm-es lemezen metilénkloridban lévő 10 térfogat% aceton eluálószerrel lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 104 mg fehér színű habot kaptunk (kitermelés: 14%). 1H-NMR (CDCI3): δ 1,29 (s, 9H), 1,44-1,82 (m, 6H),
2,19 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 3,09 (m, 1H), 3,46 (m, 2H), 4,00 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 5,73 (d, 1H), 6,01 (br.s, 1H), 7,23-7,34 (m, 5H), 7,45 (m, 3H), 7,72-7,83 (m,4H).
MS(FD): m/e 563 (M+, 100).
G) [2S-(2R*,2’S*,3’S*)]-1-[2’-Hidroxi-3’-amino-4’(naft-2-il-tio)-butil]-piperidin-2-N-(terc-butil]karboxamid
A referencia előállítási példa F) lépése 1,05 g (0,18 mmol) cím szerinti termékét 1 órán át 10 ml 30 tömeg%-os hidrogén-bromidot tartalmazó ecetsavoldatban reagáltattuk. A kapott reakcióelegyet betöményítettük, toluollal három alkalommal azeotrópos desztillációt folytattunk le, amit egyenként 4,5 ml dietil-amint és ammónium-hidroxidot tartalmazó metanolban végzett oldás és csökkentett nyomáson történő betöményítés követett, amelynek során maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (1 mm-es lemezen 1 tömeg% ecetsavat tartalmazó metilén-kloridban lévő 3 térfogat% metanol eluálószerrel lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 64 mg fehér színű habot kaptunk (kitermelés: 80%).
1H-NMR (CDCI3): δ 1,29 (s, 9H), 1,52-1,73 (m, 6H),
1,84 (m, 1H), 2,31-2,43 (m, 2H), 2,75-3,04 (m,
5H), 3,17 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 6,22 (br.s, 1H), 7,47 (m, 3H), 7,73-7,82 (m, 4H). MS(FD): m/e 430 (M+, 100).
1. előállítási példa
A) 2R-2-N-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-3-(fenil-tio)propánsav
A kívánt cím szerinti intermediert a referencia előállítási példa A) lépésben leírt eljárással állítottuk elő, ennek során a bepárlási maradék előállításához 13,1 ml (127 mmol) tiofenolt, 4,6 g (117 mmol) 60 tömeg%-os nátrium-hidrid-oldatot és 25,6 g (116 mmol) L-N-(benzil-oxi-karbonil)-szeriη-β-laktont használtunk 450 ml tetrahidrofuránban. Ezt a maradékot (4:1 térfogatarányú metilén-klorid/etil-acetát elegyben lévő 0-2 térfogat% ecetsav eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 27,9 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 72%). 1H-NMR (CDCI3): δ 7,55-7,18 (m, 10H), 5,55 (d,
J=7 Hz, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,73-4,60 (m, 1H),
3,55-3,30 (m, 2H).
ÍR (KBr): 3304, 3035, 1687, 1532, 736 cm-1.
MS(FD): m/e 332, 288, 271, 181.
A C17H17NO4S összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 61,61 5,17 4,23
Mért: 61,69 5,22 4,47
B) 3S-1-Diazo-2-oxo-3-N-(benzil-oxi-karbonil)amino-4-(fenil-tio)-bután
A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa B) lépésében leírt eljárás szerint állítottuk elő, ennek során a bepárlási maradék előállításához 12,1 g (37 mmol) 1 A) előállítási példa szerinti terméket, 5,09 ml (37 mmol) trietil-amint, 7,13 ml (55 mmol) izobutil-klór-szénsav-észtert és 146 mmol diazo-metán-oldatot használtunk. A diazo-metánban lévő oldatot a referencia előállítási példa B) lépésben ismertetett módon készítettük 100 ml dietil-étert, 150 ml 5 mol/l koncentrációjú nátrium-hidroxid-oldatot és 21 g (146 mmol) N-(metil)-N-(nitro)-N-(nitrozo)-guanidint használva. Ezt a maradékot (metilén-kloridban lévő 0-5 térfogat% etilacetát eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva sárga színű olajat kaptunk (kitermelés: 73%).
HU 226 814 Β1 1H-NMR (CDCI3): δ 7,50-7,19 (m, 10H), 5,62 (d,
J=7 Hz, 1H), 5,47 (br.s, 1H), 5,11 (s, 2H),
4,50H,32 (m, 1H), 3,33 (d, J=6 Hz, 1H).
IR (KBr): 3012, 2115,1720, 1501, 1367, 1228 cm-1. MS (FD): m/e 356, 328, 242.
C) 3R-1-Klór-2-oxo-3-N-(benzil-oxi-karbonil)amino-4-(fenil-tio)-bután
A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa C) lépésében ismertetett eljárással állítottuk elő, ennek során 21 g fehér színű szilárd anyag előállításához az 1B) előállítási példa 22,3 g (63 mmol) cím szerinti termékét és (gáznemű) hidrogén-klorid kis mennyiségét használtuk 400 ml dietil-éterben. A kapott szilárd anyagot további tisztítás nélkül használtuk fel.
1H-NMR (CDCI3): δ 7,50-7,15 (m, 10H), 5,56 (dd, J=2;
6,7 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,78H,67 (m, 1H), 4,20 (d, J=15,9 Hz, 1H), 4,12 (d, J=15,9 Hz, 1H),
3,48-3,23 (m, 2H).
IR (KBr): 3349, 1732,1684, 1515, 1266 cm1.
MS (FD): m/e 363 (M+).
A C18H18NO3SCI összegképletre vonatkozó elemana-
lízis: C% H% N%
Számított: 59,42 4,99 3,85
Mért: 59,57 5,09 4,13
D) [2S-(2R*,3S*)]-1-Klór-2-hidroxi-3-N-(benzil-oxikarbonil)-amino-4-(fenil-tio)-bután
A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa D) lépésében ismertetett eljárás szerint állítottuk elő, ennek során a bepárlási maradék készítéséhez az 1C) előállítási példa 21 g (58 mmol) cím szerinti termékét és 2,4 g (63 mmol) nátrium-[tetrahidrido-borát](1—)-ot használtunk 300 ml tetrahidrofuránban. Ezt a maradékot (metilén-kloridban lévő 0-2 térfogat% metanol eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással, majd azt követően (kloroformban lévő 0-2 térfogat% etil-acetát eluálószergradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással és metilén-kloridból -78 °C hőmérsékleten végzett átkristályosítással tisztítva 8,3 g cím szerinti vegyületet kaptunk (kitermelés: 39%).
1H-NMR (CDCI3): δ 7,47-7,19 (m, 10H), 5,22-5,03 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,01-3,89 (m, 2H), 3,75-3,58 (m, 2H), 3,32 (d, J=4 Hz, 2H).
IR (KBr): 3321, 2951,1688, 1542, 1246, 738 cm-1. MS(FD): m/e 366 (M+), 119.
A C18H20NO3SCI összegképletre vonatkozó elemana-
lízis: C% H% N%
Számított: 59,09 5,51 3,83
Mért: 59,03 5,50 3,96
E) [1 R-(1 ’R*,1S*)]-1-[(1 ’-N-(Benzil-oxi-karbonil)amino-2’-(naft-2-il-tio)-etil-oxirán
A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa E) lépésében ismertetett eljárás szerint állítottuk elő, ennek során az 1D) előállítási példa 8,3 g (23 mmol) cím szerinti termékét és 1,4 g (25 mmol) kálium-hidroxidot használtunk a bepárlási maradék előállítására. Ezt a maradékot (metilén-kloridban lévő 0-2 térfogat% etil-acetát eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 6,4 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 85%).
1H-NMR (CDCI3): δ 7,45-7,15 (m, 10H), 5,12 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 3,77-3,62 (m, 1H), 3,21 (d, J=6 Hz, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,77 (m, 2H).
IR (KBr): 3303, 3067, 1694, 1538,1257, 741 cm-1.
MS (FD): m/e 329.
A C32H45N3O4S összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 65,63 5,81 4,25
Mért: 65,48 5,82 4,29
F)[3S-(3R\4aR\8aR\2'S\3'S^)]-2-[3'-N-(benziloxi-karbonil)-amino-2’-hidroxi-4’-(fenil)-tio]-butildekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)-karboxamid A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa F) lépésében ismertetett eljárás szerint állítottuk elő, ennek során az 1E) előállítási példa 6,3 g (19 mmol) cím szerinti termékét és 5 g (21 mmol) [3S(3R*,4aR*,8aR*)]-dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)karboxamidot használtunk 300 ml etanolban a bepárlási maradék készítéséhez. Ezt a maradékot (metilénkloridban lévő 0-20 térfogat% etil-acetát eluálószergradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 4,3 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 40%).
1H-NMR (CDCI3): δ 7,41-7,11 (m, 10H), 5,90 (d, J=5 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,05 (d, J=4 Hz, 2H), 4,08-3,90 (m, 2H), 3,40 (d, J=6,2H), 3,05 (s, 1H), 2,95-2,85 (m, 1H), 2,62-2,45 (m, 2H), 2,28-2,15 (m, 2H), 2,05-1,88 (m, 2H), 1,78-1,10 (m, 7H), 1,29 (s, 9H).
IR (KBr): 3330, 2925, 2862, 1706, 1661, 1520, 1454, 1246, 738, 694 cm-1.
MS (FD): m/e 568 (M+), 467.
A C32H45N 3O4S összegképletre vonatkozó elemanalí-
zis: C% H% N%
Számított: 67,69 7,99 7,40
Mért: 67,64 8,20 7,45
G) [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2S\35S*)]-2-[3'-amino-2'hidroxi-4’-(fenil)-tio]-butil-dekahidroizokinolin-3-N(terc-butil)-karboxamid
A cím szerinti vegyületet a referencia előállítási példa G) lépésében ismertetett eljárás szerint állítottuk elő az 1F) előállítási példa 1 g (1,8 mmol) cím szerinti termékét és 40 ml 30 tömeg% hidrogén-bromidot tartalmazó ecetsavoldat alkalmazásával azzal az eltéréssel, hogy a nyersterméket 30 ml metanolban oldottuk. A kapott oldathoz 2 ml dietil-amint és 2 ml tömény ammónium-hidroxid-oldatot adtunk, majd az elegyet csökkentett nyomáson betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot víz és etil-acetát elegyében ismét feloldottuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, a szerves fázist
HU 226 814 Β1 sorrendben vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és sóoldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson száraz állapot eléréséig betöményítve maradékot kaptunk. Ezt a maradékot (1000 ml kloroformra számítva 3 csepp ammónium-hidroxid-oldatot tartalmazó kloroformban lévő 0-10 térfogat% metanol eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) elárasztásos kromatográfiás eljárással tisztítva 0,54 g fehér színű habot kaptunk (kitermelés: 71%).
1H-NMR (CDCI3): δ 7,41-7,16 (m, 5H), 6,07 (s, 1H),
3,78-3,70 (m, 1H), 3,45-3,38 (m, 1H), 3,03-2,84 (m, 3H), 2,38-2,20 (m, 3H), 2,00-1,05 (m, 12H),
1,33 (s, 9H).
IR (KBr): 2924, 2862, 1660, 1517, 1454, 1439, 737,
691 cm-1.
MS(FD): m/e434 (M+), 293.
2. előállítási példa
A) 3-Metoxi-N-fenil-benzamid
13,4 ml (147 mmol) anilin 30,7 ml trietil-aminban lévő oldatát lassan metilén-kloridban lévő 25,1 g (147 mmol) 3-metoxi-benzoil-klorid-oldatához adtuk. A kapott reakcióelegyet 30 percen át reagáltattuk, majd 1 mol/l koncentrációjú nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal hígítottuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, a szerves fázist sorrendben vízzel, 1 mol/l koncentrációjú nátrium-hidroxid-oldattal és sóoldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson betöményítve 31,6 g piszkosfehér színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 95%).
B) 3-Metoxi-2-metil-N-fenil-benzamid
A 2A) előállítási példa 4,54 g (20 mmol) cím szerinti termékét és 5,11 g (44 mmol) TMEDA-t 70 ml vízmentes tetrahidrofuránban tartalmazó hideg (-70 °C hőmérsékletű) oldatához n-butil-lítium 26,9 ml 1,56 mol/l koncentrációjú hexános oldatát adtuk. A kapott reakcióelegyet -15 °C hőmérsékletre melegítettük, majd 45 percen át keverve sárga színű zagyot kaptunk. A zagyot ismét -70 °C hőmérsékletre hűtöttük, és 2,89 g (20 mmol) metil-jodidot hozzáadva fehér színű csapadékot kaptunk. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten kevertük, a reakciót telített ammónium-klorid-oldattal befagyasztottuk, és a reakcióelegyet dietil-éterrel hígítottuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, a szerves fázist sorrendben telített ammóniumklorid-oldattal, vízzel, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és sóoldattal mostuk. A szerves extraktumokat ezután vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, és betöményítve fehér színű szilárd anyagot kaptunk. A szilárd anyagot etil-acetát/hexán 2:1 térfogatarányú elegyéből átkristályosítva 4,00 g tű alakú kristályokat kaptunk (kitermelés: 99%).
1H-NMR (CDCI3): δ 2,36 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,89 (s,
1H), 6,90-7,70 (m,8H).
IR (CHCI3): 3424, 3013, 2963, 2943, 2840,1678,1597,
1585, 1519, 1463, 1438, 1383, 1321, 1264, 1240,
1178,1083,1069 crrr1.
MS(FD): m/e 241 (M+, 100).
A C15H15NO2 összegképletre vonatkozó elemanalízis:
C% H% N%
Számított: 74,67 6,27 5,80
Mért: 74,65 6,29 5,82
C) 3-Hidroxi-2-metil-benzoesav A 2B) előállítási példa 1,21 g (5,00 mmol) cím szerinti termékét, 35 ml 5 mol/l koncentrációjú sósavoldatot és 20 ml 30 tömeg% hidrogén-bromid-tartalmú ecetsavoldatot tartalmazó elegyet 24 órán át visszacsepegő hűtő alatt forraltunk. Lehűtés után a reakcióelegyet 100 ml etil-acetáttal és 100 ml vízzel hígítottuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, és a szerves fázist vízzel egy alkalommal mostuk, majd 0,5 mol/l koncentrációjú nátrium-hidroxid-oldattal pH=11 érték eléréséig meglúgosítottuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, és a vizes fázist 5 mol/l koncentrációjú sósavoldattal pH=1 érték eléréséig ismét megsavanyítottuk. A kívánt vegyületet ezután ebből a vizes fázisból extraháltuk etil-acetáttal. Az etil-acetátos extraktumot sóoldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd betöményítve maradékot kaptunk, amelyet hexánból két alkalommal betöményítve 750 mg fehér színű szilárd anyagot kaptunk (kitermelés: 98%).
1H-NMR (DMSO-dg): δ 2,26 (s, 3H), 6,98 (d, J=8,03 Hz, 1H), 7,02 (t, J=7,69 Hz, 1H), 7,15 (d, J=7,37 Hz, 1H), 9,55 (br.s, 1H).
IR (CHCI3): 3600-2100 (br.), 3602, 2983, 1696, 1588, 1462, 1406, 1338, 1279, 1174, 1154, 1075, 1038, 920, 892,854, 816 cm-1.
MS(FD): m/e 152 (M+, 100).
A C8H8O3 összegképletre vonatkozó elemanalízis:
C% H%
Számított: 63,15 5,30
Mért: 63,18 5,21
A cím szerinti vegyületnek egy további eljárással történő előállításához 22,6 g (0,33 mól) nátrium-nitritet kis részletekben 45 g (0,30 mól) 3-amino-2-metilbenzoesav és 106 g (58 ml; 1,08 mól) tömény kénsav 400 ml vízben lévő (-10 °C hőmérsékletre) hűtött oldatához adtunk, miközben a hőmérsékletet 7 °C alatt tartottuk. A kapott reakcióelegyet 30 percen át -10 °C hőmérsékleten kevertük, 240 ml tömény kénsav 1,2 I vízben lévő oldatához öntöttük, majd lassan 80 °C hőmérsékletre melegítettük (ennek során a 40-60 °C hőmérséklet-tartományban intenzív gázfejlődés következett be). A gázfejlődés megszűnése után a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtöttük, és a cím szerinti vegyületet öt alkalommal (600 ml) etil-acetáttal extraháltuk. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-karbonát 500 ml telített vizes oldatához adtuk. A kapott fázisokat elválasztottuk, és a vizes fázist tömény sósavval pH=2 értékig megsavanyítottuk. A cím szerinti vegyületet ezután (500 ml) etil-acetáttal extraháltuk, és az egyesített szerves fázisokat sóoldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük, majd csökkentett nyomáson betöményítve a nyersterméket kaptuk. A nyersterméket etil-acetát/kloroform elegyből két alkalommal átkristályosítva 23,2 g világos narancsszínű port kaptunk (kitermelés: 52%).
HU 226 814 Β1
Referenciapélda [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3O-2-[2’-H/'círox/'-3’fenil-metil-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-fluor-3-hidroxifenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)karboxamid előállítása
Az 1B) előállítási példa 80 mg (0,20 mmol) cím szerinti termékét, a 11B) előállítási példa 31 mg (0,20 mmol) cím szerinti termékét és 27 mg (0,20 mmol) 1-hidroxi-benztriazol-hidrátot (HOBTH2O) 3 ml vízmentes tetrahidrofuránt tartalmazó hideg (-10 °C hőmérsékletű) oldathoz 41 mg (0,20 mmol) 1,3-diciklohexil-karbodiimidet (DCC) adtunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 36 órán át kevertük, majd csökkentett nyomáson betöményítettük. A kapott maradékot etil-acetátban újra feloldottuk, celiten keresztül szűrtük, sorrendben telített nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és sóoldattal mostuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítottuk, szűrtük és betöményítettük. A nyersterméket (1 mm-es lemezen metilénkloridban lévő 2-5 térfogat0! metanol eluálószer-gradiens mellett lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 79 mg fehér színű habot kaptunk (kitermelés: 73%).
[a]D -90,80° (c=0,333, MeOH).
1H-NMR (CDCI3): δ 1,24 (s, 9H), 1,16-2,05 (m, 14H),
2,20-2,40 (m, 2H), 2,55-2,70 (m, 2H), 2,90-3,04 (m, 2H), 3,10-3,25 (m, 1H), 4,03 (br.s, 1H), 4,51 (br.s, 1H), 6,01, (s, 1H), 6,90-7,35 (m, 9H).
IR (CHCI3): 3580, 3550-3100 (br.), 2929, 2865, 1662,
1596, 1521, 1472, 1455, 1394, 1368, 1293, 1157,
1047,879,839 cm-1.
MS(FD): m/e 540 (M+, 100).
HR MS (FAB): m/e a C31H43N3O4F összegképletre vonatkozóan:
Számított: 540,3238
Mért: 540,3228
1. példa [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3’S*)]-2-[2’-Hidroxi-3’(fenil-tio-metil)-4’-aza-5'-oxo-5'-(2-metil-3-hidroxifenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)karboxamid előállítása
A cím szerinti vegyületet a referenciapéldában ismertetett eljárás szerint állítottuk elő az 1G) előállítási példa 70 mg (0,16 mmol) cím szerinti termékét, a 2C) előállítási példa 24,6 mg (0,16 mmol) cím szerinti termékét, 33 mg (0,16 mmol) DCC-et és 22 mg (0,16 mmol) HOBTH2O-t 4 ml tetrahidrofuránban használva. A nyersterméket (1 mm-es lemezen metilén-kloridban lévő 3 térfogat0! metanol eluálószergradiens mellett lefolytatott) radiális kromatográfiás eljárással tisztítva 54 mg fehér színű habot kaptunk (kitermelés: 60%).
[a]D -119,23° (c=0,26, MeOH).
1H-NMR (CDCI3): δ 1,09 (s, 9H), 1,12-1,79 (m, 12H),
1,93-2,02 (m, 2H), 2,17-2,30 (m, 2H), 2,31 (s, 3H),
2,43-2,61 (m, 2H), 2,91 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,37 (m, 1H),
5,51 (br.s, 1H), 6,84 (m, 1H), 7,06 (m, 2H),
7,17-7,32 (m,4H), 7,45 (m, 2H).
IR (KBr): 3297, 2925, 2862, 1627, 1586, 1530, 1482,
1466, 1439, 1366, 1287, 1221, 1156, 1119, 1026,
801,735, 689 cm-1.
MS(FD): m/e 568 (M+, 100).
HR MS (FAB): m/e a C32H46N3O4S összegképletre vonatkozóan:
Számított: 568,3209
Mért: 568,3182
2. példa [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3’S*)]-2-[2’-Hidroxi-3’(fenil-tio-metil)-4’-aza-5’-oxo-5’-(2-metil-3-hidroxifenil)-pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)karboxamid-metánszulfonsav-só
Ezt a vegyületet az 1. példában ismertetett eljárás szerint állítottuk elő azzal az eltéréssel, hogy az 1A és 1D előállítási példák lépéseit az alábbi (1) lépésben ismertetett módon megváltoztattuk, és az eljárást kiegészítettük az alábbi (2) sóképzési lépéssel.
(1) Egy 2 I térfogatú lombikba 500 ml CH2CI2-ban lévő 109,6 g Ph3P-t vittünk be, és az elegyet -70 °C hőmérsékletre hűtöttük. Az elegyhez 25 percen keresztül cseppenként (66 ml) dietil-azido-dikarboxilát 60 ml THF-ban készített oldatát adtuk. 25 perc múlva 45 perc alatt cseppenként (100 g) N-karbobenzil-oxi-L-szerin 400 ml THF-ban lévő oldatát adtuk az elegyhez, majd 2 óra alatt vízfürdőn hagytuk szobahőmérsékletre melegedni. Az elegyhez 150 ml THF-t adtunk. Egy másik lombikban (46 g) tiofenol 1 I THF-ban készített oldatát jeges fürdőn 0 °C hőmérsékletre hűtöttük, és részletekben hozzáadott (10 g) NaH-diszperzióval kezelve viszkózus oldatot kaptunk. 1 óra múlva a nyers laktonoldatot 30 perc alatt adagolótölcsérből cseppenként a tiolátoldathoz adtuk. 12 óra múlva szűréssel fehér csapadékot különítettünk el, és a szűrőlepényt THF-nal mostuk. A szilárd anyagot 4 mol/l koncentrációjú NaHSO4 és EtOAc elegyében felvettük, elválasztottuk, és a szerves fázist sóoldattal mostuk, szárítottuk, majd betöményítve viszkózus olajként 85 g 2R-2-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-3-fenil-tio-propánsavat kaptunk.
Az eredeti szilárd anyagot a kívánt termék nátriumsójának tartjuk. Ezért a kitermelés és az elválasztás lefolytatása javítható azáltal, ha közvetlenül a nátriumsót izoláljuk.
A (16,87 g, 46,4 mmol) 3R-1-klór-2-oxo-3-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-4-(fenil-tio)-bután nyers klór-ketont 1 I abszolút EtOH és 200 ml THF elegyéhez adtuk, és az oldatot (-78 °C hőmérsékletű) CO2/aceton fürdőben lehűtöttük, majd 200 ml abszolút etanolban (2,63 g, 69,5 mmol) NaBH4-ot adtunk hozzá 1 órán át cseppenként (ennek során a belső hőmérsékletet -75 °C-nál alacsonyabb értéken tartottuk. Az adagolást követően elvégzett TLC elemzés azt mutatta, hogy a reakció lejátszódott. A reakcióelegyet 300 ml dietiléterrel hígítottuk, majd a reakciót keverés közben 0,4 mol/l koncentrációjú NaHSO3-oldat lassú adagolása útján befagyasztottuk, amelynek során gáz fejlődött. Ezt az elegyet csökkentett nyomáson az etanol nagy részének eltávolítása útján betöményítettük, majd vizet adtunk hozzá. A kapott elegyet dietil-éterrel extrahál11
HU 226 814 Β1 tűk, és az egyesített szerves fázisokat NaHCO3 telített vizes oldatával és sóoldattal mostuk, (vízmentes Na2SO4 fölött) szárítottuk, majd betöményítve 15,7 g piszkosfehér színű szilárd anyagot kaptunk. Ezt az anyagot (300 ml) forrásban lévő hexánban eldörzsöltük, majd a hexánt óvatosan még forró állapotban dekantáltuk. Ezt a műveletet 10 alkalommal (esetenként 300 ml oldószerrel) megismételve 10,35 g piszkosfehér színű szilárd anyagot kaptunk (amely TLC szerint egyetlen tiszta izomer). A hexános szűrletet betöményítve 6 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk, amelyet félretettünk. Az eldörzsölt szilárd anyagot 50 ml CH2CI2 és 6 ml hexán elegyével hevítettük és forrón szűrtük. A tiszta oldatot hagytuk 25 °C hőmérsékletre lehűlni, majd fagyasztószekrénybe tettük. A kapott szilárd anyagot szűrtük, ezután hexánnal mosva 7,157 g fehér színű szilárd anyagot kaptunk. A szűrletet egyesítettük a korábbi hexános szűrlettel és két kis léptékű kísérlet (egyenként 500 mg kiindulási keton) nyers reakciótermékével, és az egyesített anyagot SiO2 fázison (CH2CI2 tartalmú, 2:1 ->1:1 térfogatarányú hexán/dietiléter eluálószerrel) kromatográfiás eljárással kezelve 2,62 g további terméket kaptunk. A [2S-(2R*,3S*)]-1klór-2-hidroxi-3-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-4-(feniltio)-butánnak összesen 10,31 g tiszta izomerét kaptuk (a savra vonatkoztatott kitermelés: 50%). a.D=-63,6° (c=1, MeOH).
(2) Sóképzés ml metanol és 30 ml CH2CI2 elegyében (3,34 g) [3S-(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3’S*)]-2-[2’-hidroxi-3’-(feniltio-metil)-4’-aza-5’-oxo-5’-(2”-metil-3”-hidroxi-fenil)pentil]-dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)-karboxamidot oldottunk, és cseppenként 10 ml CH2CI2-ban oldott (596 mg) metánszulfonsavat adtunk hozzá. 10 perc múlva a reakcióelegyet habbá töményítettük be. A nyers sót 5 ml THF-ban felvettük, és keverés közben 175 ml etil-éter és 25 ml hexán elegyéhez adtuk, ennek során finom szuszpenzió képződött. Ezt a szuszpenziót fagyasztószekrényben lehűtöttük, hidegen szűrtük, dietil-éterrel több alkalommal mostuk, majd vákuumkemencében szárítva fehér színű porként 3,75 g [3S(3R*,4aR*,8aR*,2’S*,3’S*)]-2-[2’-hidroxi-3’-(fenil-tiometil)-4’-aza-5’-oxo-5’-(2”-metil-3”-hidroxi-fenil)-pentil]dekahidroizokinolin-3-N-(terc-butil)-karboxamid-metánszulfonsav-sót kaptunk.
A fentiek értelmében a találmány szerinti vegyületek hasznosak HIV-proteáz gátlásában, amely vírusos komponens termelésével és beépülésével kapcsolatos enzim.
A leírásban a „hatásos mennyiség’’ kifejezésen az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója olyan mennyiségét értjük, amely hatásos a HIV-proteáz által közvetített vírusos komponens termelésének és beépülésének gátlása tekintetében. A találmány értelmében terápiás vagy gátló hatás elérésére beadott vegyület dózisát természetesen a konkrét körülmények alapján határozzuk meg, amelyek többek között a beadott vegyület, a beadás módja, a kezelt betegség és a beteg állapota. A napi (egyetlen adagban vagy több alkalommal beadott) dózis 1 kg testtömegre vonatkoztatva 0,01-50 mg találmány szerinti vegyület. Előnyös napi dózisok általában 0,05 mg/kg-20 mg/kg, még előnyösebben 0,1 mg/kg-10 mg/kg.
A találmány szerinti vegyületek különböző módon adhatók be, beleértve az orális, rektális, transzdermális, szubkután, intravénás, intramuszkuláris és intranazális beadást. A találmány szerinti vegyületeket a beadást megelőzően előnyösen formuláljuk. A találmány egyik kiviteli alakja ezért gyógyászati készítmény, amely (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója hatásos mennyiségét tartalmazza gyógyászatilag elfogadható hordozó, így hígító vagy kötőanyag mellett.
A hatóanyag a formulálás össztömegére vonatkoztatva előnyösen 0,1-99,9%. A „gyógyászatilag elfogadható” kifejezésen azt értjük, hogy a hordozó - a hígító vagy kötőanyag - a formulálás egyéb alkotórészeivel összeférhető, továbbá nem káros a betegre nézve.
A találmány szerinti vegyületekből gyógyászati készítményeket előállíthatunk ismert eljárásokkal szokásos és könnyen hozzáférhető alkotórészeket használva. A találmány szerinti készítmények előállítása során a hatóanyagot általában hordozóval keverjük vagy hígítjuk vagy hordozóba burkoljuk, amely lehet kapszula, tasak, papír vagy egyéb alkalmas tartó. Ha a hordozó egyúttal hígítószer, az lehet szilárd, félszilárd vagy folyékony anyag, amely a hatóanyag számára hordozóvagy kötőanyagként vagy vivőközegként szolgál. így a készítmények többek között lehetnek tabletta, pirula, por, ostya, elixír, szuszpenzió, emulzió, oldat, szirup, aeroszol (szilárd anyagként vagy folyékony közegben), (10 tömeg%-ig terjedő mennyiségű hatóanyagot tartalmazó) kenőcs, lágy- és keményzselatin-kapszula, kúp, injektálható steril oldat vagy steril csomagolású por.
A következő formulálási példák csupán szemléltetésül szolgálnak és nem korlátozzák a találmány oltalmi körét. A „hatóanyag” kifejezés (I) általános képletű vegyületet vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját jelenti.
1. formulálás
Keményzselatin-kapszulákat állítunk elő a következő alkotórészekből:
Mennyiség (mg/kapszula)
Hatóanyag 250
Keményítő, szárított 200
Magnézium-sztearát 10
Összesen: 460
2. formulálás
Tablettákat állítunk elő az alábbi alkotórészekből:
Mennyiség (mg/tabletta)
Hatóanyag 250
Cellulóz, mikrokristályos 400
Szilícium-dioxid (habosított) 10
Sztearinsav 5
Összesen: 665
A komponenseket összekeverjük és egyenként 665 mg tömegű tablettákká sajtoljuk.
HU 226 814 Β1
3. formulálás
A következő komponenseket tartalmazó aeroszol-
oldatot állítjuk elő: Tömegrész
Hatóanyag 0,25
Metanol 25,75
22 típusú vivőanyag
(klór-difluor-metán) 74,00
Összesen: 100,00
A hatóanyagot etanollal elkeverjük, és a kapott elegyet a 22 típusú vivőanyag egy részéhez adjuk, -30 °C hőmérsékletre hűtjük és átvisszük a töltőberendezésbe. Ezután a kívánt mennyiségű elegyet rozsdamentes acél anyagú tartályba töltjük, és a vivőanyag maradék részével hígítjuk. Ezután a tartályra felszereljük az adagolószelepet.
4. formulálás
Egyenként 60 mg hatóanyagot tartalmazó tablettákat állítunk elő a következő módon:
Mennyiség (mg/tabletta)
Hatóanyag 60
Keményítő 45
Mikrokristályos cellulóz 35
Poli(vinil-pirrolidon) (10 tömeg%-os vizes oldat) 4
Nátrium-karboxi-metil-keményítő 4,5
Magnézium-sztearát 0,5
Talkum 1_
Összesen: 150
A hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt 354 pm lyukbőségű szitán átszitáljuk és alaposan összekeverjük. A poli(vinil-pirrolidon)-t tartalmazó vizes oldatot a kapott porral elkeverjük, és a keveréket 1,41 mm lyukbőségű szitán átbocsátjuk. Az így előállított granulátumot 50 °C hőmérsékleten szárítjuk és 1,00 mm lyukbőségű szitán keresztül szitáljuk. Az előzőleg 250 pm lyukbőségű szitán átjutott nátrium-karboxi-metilkeményítőt, magnézium-sztearátot és talkumot ezután a granulátumhoz adjuk, amelyet keverés után tablettázógépen egyenként 150 mg tömegű tablettákká sajtolunk.
5. formulálás
Egyenként 80 mg hatóanyagot tartalmazó kapszulákat állítunk elő a következő módon:
Mennyiség (mg/kapszula)
Hatóanyag 80
Keményítő 59
Mikrokristályos cellulóz 59
Magnézium-sztearát 2
Összesen: 200
A hatóanyagot, a cellulózt, keményítőt és magnézium-sztearátot összekeverjük, 354 pm lyukbőségű szitán átbocsátjuk, majd 200 mg adagokban keményzselatin-kapszulákba töltjük.
6. formulálás
Egyenként 225 mg hatóanyagot tartalmazó kúpokat állítunk elő a következő módon:
Mennyiség (mg/kúp)
Hatóanyag 225
Telített zsírsav-gliceridek 2000
Összesen: 2225
A hatóanyagot 250 pm lyukbőségű szitán átbocsátjuk, és az előzetesen a minimálisan szükséges hő alkalmazásával megolvasztott telített zsírsav-gliceridekben szuszpendáltatjuk. Az elegyet ezután 2 g névleges tömegű kúp öntőformájába öntjük és hagyjuk lehűlni.
7. formulálás ml dózisonként 50 mg hatóanyagot tartalmazó szuszpenziót állítunk elő a következő módon:
Mennyiség/dózis
Hatóanyag
Nátrium-karboxi-metil-cellulóz Szirup
Benzoesavoldat
Aroma Színezék Tisztított víz mg 50 mg 1,25 ml 0,10 ml kívánság szerint kívánság szerint 5 ml-re kiegészítve
A hatóanyagot 354 pm lyukbőségű szitán átbocsátjuk, majd a nátrium-karboxi-metil-cellulózzal és a sziruppal híg pasztát képezünk. A benzoesavas oldatot, aromát és színezéket a víz egy részével hígítjuk, majd keverés közben a pasztához adjuk. Ezt követően a kívánt térfogathoz szükséges mennyiségű vizet adjuk az elegyhez.
8. formulálás
Intravénás formulálást állítunk elő a következő módon:
Hatóanyag 100 mg
Izotóniás sóoldat 1000 ml
A fenti alkotórészek oldatát általában 1 ml/perc sebességgel intravénásán adjuk be a betegnek.
Hatásosság osztályozó vizsgálata
Számos vizsgálatot használtak a HIV-proteázt gátló vegyületek biológiai aktivitásának tanulmányozására. Többek között vizsgálták HIV-fertőzött sejtvonalakon a proteolitikus gátlási sebességet és a vírusellenes hatást. Az ilyen vizsgálatokhoz alkalmazott eljárásokat az alábbiakban ismertetjük. A vizsgálatok eredményeit az alábbi I. táblázatban közöljük vagy a példákban foglaljuk össze.
I. A HIV-ellenes vegyületek első hatástani vizsgálata a Southern Kutató Intézetben (Southern Research lnstitute=SRI) (Az eredményeket az I. táblázatban adjuk meg „SRI CEM (ng/ml)” vagy „SRI MT2 (ng/ml)” jelöléssel)
A) Az MTT vizsgálat elve
Az SRI kifejlesztett egy programot a vegyületek első antivirális analízisére mikrotiterpróbában, amely a kiválasztott vegyület azon képességét méri, hogy hogyan gátolja a HIV-indukált sejtpusztulást. Ezen vizsgálat során az MTT tetrazólium festék a metabolikusan aktív sejtekben a mitokondriális enzimek révén egy szí13
HU 226 814 Β1 nes formazán termékké alakul át. Az SRI ezt a vizsgálati rendszert évente több mint 30 000 vegyület osztályozására alkalmazza. Közelebbről, ez a vizsgálat magában foglalja a CEM vagy az MT-2 sejtek megfertőzését 96 legömbölyített aljú mélyedéssel rendelkező lemezen. A vizsgált vegyületet közvetlenül a fertőzés előtt helyezzük a mélyedésbe. A lemezeket 6 napig 37 °C-on inkubáljuk, majd ezt követően megfestjük MTT-vel. A vizsgálati eredményeket spektrofotometriásán mérjük egy Molecular Devices Vmax lemezleolvasón. A kapott adatokat lineáris regresszióval saját fejlesztésű program felhasználásával elemezzük és számítjuk ki az antivirális aktivitást (IC25, IC50, IC95,) és toxicitást (TC25, TC50, TC95,), valamint az egyéb értékeket.
Az első antivirális vizsgálatokat rutinszerűen végezzük CEM vagy MT-2 sejteken. Az SRI azt találta, hogy az összes aktív vegyület azonosítható CEM sejteken, míg az MT-2 sejtvonalon végzett vizsgálatokban az aktív vegyületeknek egy kis része elvész.
B) Standard osztályozó vizsgálatok CEM és
MT-2 sejteken
1. A vegyület hígítása és elosztása a lemezeken
Az anyagokat egy megfelelő hordozóban, így desztillált vízben vagy - ha szükséges -DMSO-ban feloldjuk. Latexkesztyűt, laborköpenyt és maszkokat használunk a kezelési eljárás minden egyes fázisában, hogy megelőzzük a potenciálisan ártalmas szerek károsító hatásait. Az anyagot megfelelő koncentrációra hígítjuk és -20 °C-on tároljuk az osztályozó laboratóriumban történő felhasználásig. Minden egyes vegyület első hígítását egy hígítócsőben végezzük annyi közeggel, hogy a legnagyobb vizsgálati koncentráció kétszeresét kapjuk. Ezután steril hígítócsöveket használunk ahhoz, hogy minden vegyületből egy féllogaritmikus hígítás! sorozatot készítsünk. Az anyag hígítását követően, a hígított vegyületet hozzáadjuk a 96 mélyedéses mikrotiterlemez megfelelő mélyedéséhez. Egyetlen lemezen 12 hígítást lehet vizsgálni kényelmesen három párhuzamos mintán az összes alkalmas kontrollal együtt, beleértve a sejtkontrollt, víruskontrollt, toxicitási kontrollt, anyagszínkontrollt, közegkontrollt és a műanyag (háttér) kontrollt. Abban az esetben, ha a mintát csak 6 hígításban vizsgáljuk, két anyag vizsgálható egyidejűleg egyetlen mikrotiterlemezen. Az anyagokat 100 μΙ végtérfogatban adjuk a lemezhez.
2. Sejtek és vírusok
Azon idő alatt, amíg az anyag hígításait elkészítjük, a sejteket mossuk és megszámláljuk. Az életképességet tripánkék festék kizárásával követjük nyomon, és a vizsgálatokat nem végezzük el, ha az életképesség 90% alá csökken. A sejteket exponenciálisan növekvő fázisban tartjuk fenn és a vizsgálat előtti napon 1:2 arányban megosztjuk, hogy az exponenciális növekedési sebességet biztosítsuk.
Az első osztályozáshoz használt sejtvonalak CEM vagy MT-2 sejtvonalak. Hacsak másképp nem jelöljük, az alkalmazott közeg RPMI-1640 tápközeg, kiegészítve 10% hővel inaktivált magzati borjúszérummal (FBS), glutaminnal és antibiotikumokkal.
A sejteket 37 °C-on szaporítjuk 5% CO2-ot tartalmazó atmoszférában. Az ehhez a munkához alkalmazott vírus a HIV-1 IIIB és/vagy RF izolátum, amelyet akut fertőzési folyamattal készítünk.
Röviden, a vírussal fertőzött sejteket naponta összegyűjtjük a háromnapos utófertőzés kezdetétől egészen addig, amíg a vírus a tenyészetben lévő összes sejtet elöli. Reverz transzkriptáz aktivitást és p24 ELISA-t használunk annak azonosítására, hogy melyek azok a keverékminták, melyek a legnagyobb mennyiségű vírust tartalmazzák.
Ezeket a 24 órás tenyészeteket összekeverjük, szűrjük és -90 °C-on lefagyasztjuk. A vizsgálatban való használat előtt meghatározzuk a fertőző vírus-keverékminta titerét az összes alkalmas sejtvonalon abból a célból, hogy meghatározzuk a kívánt vírus mennyiségét az antivirális próbában.
Általában az akut fertőzési módszerrel termelt keverékminták esetében mélyedésenként 1 μΙ fertőző vírus hozzáadása szükséges az anyagok osztályozásában, ha a fertőzés mértéke 0,01. Ezen a módon elegendő vírust készítünk és fagyasztunk ezer mikrotiterlemez befedéséhez, ezzel lehetővé téve akár kétezer vegyület tesztelését a fertőző vírus egyetlen állományából. Egyetlen vírusállomány használata a tesztelésben hosszú időn keresztül igen kedvező hatású a vizsgálati rendszerek megismételhetősége szempontjából.
A CEM és az MT-2 sejtek vírussal történő megfertőzését az antivirális vizsgálathoz nagy tömegben való fertőzési eljárással kivitelezzük. Megfelelő számú sejtet, amely szükséges a vizsgálat teljessé tételéhez, egy kúpos centrifugacsőben 1-2 ml össztérfogatban a fertőző vírussal összekeverünk.
Négyórás inkubálást követően a fertőzött sejteket friss szövettenyésztő tápközeggel megfelelő végkoncentrációra (5x104 sejt/ml) hígítjuk, és 100 μΙ-t adunk a megfelelő kísérleti és víruskontroll-mélyedésekhez. A nem fertőzött sejteket ugyanilyen koncentrációban adjuk a toxicitási kontrollokhoz és a sejtkontrollokhoz. Ebben az esetben a vizsgálandó anyagot, a sejteket és a vírusokat egyenként adjuk a mélyedésekbe. Minden esetben a MOl-t úgy állítjuk be, hogy a 6. napig teljes sejtpusztítást kapjunk a víruskontroll-mélyedésekben.
3. A CPE-gátlás kiértékelése
Miután a sejteket és a mintákat hozzáadtuk a mikrotiterlemezhez, a lemezt 6 napon keresztül 37 °C-on inkubáljuk. A tapasztalat dönti el, hogy egy hosszabb ideig tartó inkubáció (7-8 nap) vagy egy magasabb bevitt sejtszám (1x104) alkalmazása eredményez-e szignifikáns csökkenést a sejtkontroll-életképességben és kisebb különbségeket az optikai sűrűségben a sejt- és a víruskontrollok között a MTT-s festést követően.
Az antivirális vizsgálat kiértékelésének módszere abban áll, hogy 20 μΙ MTT-tetrazólium-sót (5 mg/ml) adunk a lemez minden egyes mélyedéséhez 4-8 óráig. Ezen inkubálási periódus után a sejteket elroncsoljuk
HU 226 814 Β1 μΙ 20% SDS-t tartalmazó 0,01 mol/l HCI hozzáadásával.
A tenyészetben az életképes sejtek metabolikus aktivitása színes reakcióterméket eredményez, amelyet spektrofotometriásán Molecular Devices Vmax lemezleolvasóval 570 nm-en mérünk. Az optikai sűrűség (O. D.) érték a keletkezett formazán mennyiségének függvénye, amely az életképes sejtek számával arányos.
A lemezleolvasó online összeköttetésben áll az osztályozó laboratórium mikroszámítógépével, amely méri és kiszámítja a lemez adatait. A lemez jegyzőkönyve az összes lényeges információ lefutását megadja, beleértve a nyers O. D. értékeket, a számított átlagos O. D. értékeket és a virális CPE százalékos csökkenését, valamint a számításokat, beleértve TC50-t, IC50-t, és az antivirális és a specifikus indexeket. Végül az eredmények egy görbét adnak, amely ábrázolja a vegyület hatását a nem fertőzött sejteken (toxicitás) és a vegyület védő vagy nem védő hatását a fertőzött sejteken.
II. A HIV-ellenes vegyületek teljes sejtvizsgálata az
Eli Lilly cégnél (az eredményeket az I. táblázatban közöljük „Teljes sejt IC50 nM” vagy „Teljes sejt IC90 nM” jelöléssel)
A) Célok és eszközök
Cél: a vegyületek IC50 és CC50 adatainak meghatározása
Reagensek és anyagok
A tápközeg
A [1% DMSO] tápközeg (100 μΙ DMSO+9,9 ml A tápközeg)
SN 123-at használunk a sejtek megfertőzéséhez (15 ml 6 lemezhez) (10 ml 4 lemezhez)
CEM sejtek [1x104] sejt/ml (4 lemez=40 ml) (6 lemez=60 ml)
DMSO (5 ml szükséges)
35B [10 mmol/l koncentrációban] (szükséglet 70 μΙ)
A-D [10 mmol/l koncentrációban] 100% DMSO-ban vagy 6 db U aljú 96 mélyedéses lemez db lapos aljú 96 mélyedéses lemez a hígításokhoz
8-10 doboz steril costar típusú pipettacsúcs reagenstálca utas costar pipetta
Fontos információk
1000 sejt/mélyedés=1x104 sejt/ml=1000 sejt/100 μΙ
200 μ^οββζΙέιΗχζ^θΙ a mélyedésben
A DMSO végkoncentrációja=0,25%
Az Sn123 végső hígítása=1:64
Sorozatban hígított vegyületek 35B, A-D, 1:3
6) Eljárás
1. Sejtek előállítása és lemezre vitele, A tápközeg és A [1 % DMSO] tápközeg
a) Egy 96 mélyedéses szövettenyésztő lemezt veszünk minden egyes vizsgálandó vegyülethez, egyet kontroli-lemezként és egyet a kontrollvegyülethez.
Lemez száma Vegyület elnevezése
1. negatív és pozitív kontroll
2. 35B
3. A
4. B
5. C
6. D
b) A sejteket hemacitométerben megszámláljuk és 40 ml vagy 80 ml A tápközegben 1x104 sejt/ml koncentrációban reszuszpendáljuk.
Sejtszámlálás hemacitométerben
Két 1,8 ml-es nunc csövet 1 és 2 jelzéssel megjelölünk.
Az 1-es csőbe 0,5 ml alaposan összekevert (növekvő fázisban lévő) CEM sejtet viszünk be.
A 2-es csőbe 50 μΙ PBS-t és 40 μΙ tripánkék festéket viszünk be.
Az 1-es csőben a sejteket felkeverjük, majd 10 μΙ-t kiveszünk belőle és átvisszük a 2-es csőbe.
A 2-es cső tartalmát jól összekeverjük, a megfestődött sejtekből 10 μΙ-t kiveszünk és behelyezzük a hemacitométerbe.
A sejteket a hemacitométer középterében 10-szeres nagyítású mikroszkóppal megszámláljuk.
A CEM sejtállomány koncentrációja sejt/ml-ben a következő: megszámlált sejtekx1x105=CEM-sejt koncentráció (sejt/ml)
c) 200 μΙ A tápközeget adunk:
a 2-6 lemez A1 sorához (ezek vakpróbák) az 1-es lemez A4-H4 sorához (ezek vakpróbák).
d) 5 μΙ A tápközeget adunk a 2-6-os lemez A-D sorának minden egyes mélyedéséhez kivéve az A1-et (a lemezek felső fele).
e) 50 μΙ A tápközeget adunk az 1-es lemez A1-D3 mélyedéseihez (a lemez felső fele).
f) 50 μΙ A [1% DMSO] tápközeget adunk az 1-es lemez 1-3 oszlopának összes mélyedéséhez.
g) 100 μΙ 1x104 sejt/ml koncentrációjú sejtet adunk az 1-es lemez 1-3 oszlopának minden egyes mélyedéséhez és a többi lemez összes mélyedéséhez (kivéve A1-et, ami vakpróba). Ez mélyedésenként 1000 sejtet jelent.
h) A lemezeket behelyezzük az inkubátorba, amíg a vizsgálandó anyag hígításait elkészítjük.
2. Kontrollminták és a vizsgálati minták elkészítése (a) Lemezeken elkészítjük a 35B és az A-D vegyületek 1:3 hígítási sorozatát 100%-os DMSO-val.
(1) 60 μΙ DMSO-t adunk a 2-12 oszlopok A-E sorának összes mélyedésébe.
(2) 70 μΙ 35B-t (10 mmol/l) adunk 100% DMSO-ban azA1 mélyedésbe.
(3) 70 μΙ A-t (10 mmol/l) adunk 100% DMSO-ban a B1 mélyedésbe.
(4) 70 μΙ B-t (10 mmol/l) adunk 100% DMSO-ban a C1 mélyedésbe.
(5) 70 μΙ C-t (10 mmol/l) adunk 100% DMSO-ban a D1 mélyedésbe.
HU 226 814 Β1 (6) 70 μΙ D-t (10 mmol/l) adunk 100% DMSO-ban az E1 mélyedésbe.
(7) Sorozathígítást végzünk (35B, A-D) 1:3 arányban 12 oszlopon keresztül lefelé úgy, hogy az 1. oszlopból 30 μΙ oldatot átviszünk a 2. oszlopba, majd a 2. oszlopból a 3.-ba és így tovább. Minden hígítás előtt a csúcsot kicseréljük.
(b) 1:10 hígítású lemez elkészítése A tápközegben (1) Egy másik lemez A-E soraiban készítünk egy sort az első 1:10 arányú hígításhoz, amely minden egyes vegyület 100%-os DMSO sorának felel meg a következők szerint:
a 35B vegyület az A sorba az első 1:10 hígításhoz,
A vegyület a B sorba az első 1:10 hígításhoz,
B vegyület a C sorba az első 1:10 hígításhoz,
C vegyület a D sorba az első 1:10 hígításhoz,
D vegyület az E sorba az első 1:10 hígításhoz.
(2) 180 μΙ A tápközeget adunk az A-E sorok minden mélyedésébe a 100% DMSO sornak megfelelően. 2,5 ml szükséges soronként.
(3) Eltávolítunk 20 μΙ-t a 100%-os DMSO sorok minden sorának mindegyik mélyedéséből és átvisszük azt a megfelelő 1:10 sorba.
(c) Az 1:100 hígítású lemez elkészítése A tápközegben:
(1) 3 vizsgálandó vegyületenként készítünk egy lemezt.
(2) 225 μΙ A tápközeget teszünk az A, B, D, E, G és H sor összes mélyedésébe, üresen hagyva a C és F sorokat. Ehhez 20 ml A tápközeget használunk lemezenként.
(3) Az egyes vegyületek 1:10 arányú hígítású sorából átviszünk 25 μΙ-t az 1:100-as hígítású lemez megfelelő két sorába, a csúcsokat az egyes transzformációk előtt kicserélve.
Oszlopszám Hatóanyag- koncentráció (nmol/l) Hatóanyagoldat (μΙ)
1. 25 000 25,00 000
2. 8 333 8,33333
3. 2 778 2,77778
4. 926 0,92593
5. 309 0,30864
6. 103 0,10288
7. 34 0,03429
8. 11 0,01143
Oszlopszám Hatóanyag- koncentráció (nmol/l) Hatóanyagoldat (μΙ)
9. 3,81 0,00381
10. 1,27 0,00127
11. 0,42 0,00042
12. 0,14 0,00014
3. SN123 vírus hozzáadása a lemezekhez
a) Az Sn123-at 37 °C-os vízfürdőn 10 perc alatt felengedjük.
b) Az Sn123-at 1:16 térfogatarányban hígítjuk, ehhez 1 ml Sn123-at hozzáadunk 15 ml A tápközeghez.
c) 50 μΙ Sn123-at (1:16) adunk a 2-6-os lemez E1-H12 mélyedéseihez és az 1-es lemez E1-H3 mélyedéseihez.
4. A vizsgálandó vegyületek hozzáadása a lemezekhez
a) 50 μΙ kontroll- és tesztvegyületet adunk az 1:100 hígítású lemezek soraiból a végső lemezek megfelelő soraihoz (a csúcsokat minden egyes átvitel előtt cserélve). Az 1:100-as lemez egy sora 4 sort fog képezni az utolsó lemezen. A1-et vakpróbának hagyjuk.
b) Az összes lemezt 7 napig 37 °C-on 5% CO2-tartalmú atmoszférában inkubáljuk.
c) A 7. napon elkészítjük az Xtt jegyzőkönyvet az alábbiak szerint:
d) Xtt/PMS-oldatot készítünk: (4 lemez=20 ml) (6 lemez=30 ml) (1) 2 mmol/l koncentrációjú PMS elkészítése:
15,3 mg PMS+0,5 ml PBS=100 mmol/l PMS 100 μΙ (100 mmol/l) PMS+4,9 ml PBS=2 mmol/l PMS (2) 500 ml vizet mikrohullámú berendezésben magas fokozaton 5 percig melegítünk.
(3) 20 vagy 30 ml fenolvörös RPMI-t teszünk egy 50 ml-es centrifugacsőbe.
(4) Az RPMI-t a forró vizes főzőpohárba tesszük.
(5) 20 vagy 30 mg XTT-t adunk a felmelegített RPMI-hez. XTT végső koncentrációja: 1 mg/ml.
(6) Megvárjuk, amíg az XTT feloldódik, majd 200 μΙ 2 mmol/l PMS-t adunk 10 ml XTT-oldatra számítva.
(e) Az XTT/PMS hozzáadása a lemezekhez:
(1) 50 μΙ XTT/PMS oldatot adunk az összes lemez minden mélyedéséhez.
(2) A lemezeket lefedjük és 4 órán keresztül inkubáljuk 37 °C-on 5% CO2-tartalom mellett.
(3) A lemezeket kivesszük az inkubátorból és a fedeleket műanyag lemez lezáróval kicseréljük.
(4) Összekeverjük a lemezek tartalmát.
(5) Leolvassuk a lemezeket a 450 nm vizsgálati és a 650 nm referencia-hullámhosszon.
III. Fluoreszcens HIV-1 proteáz inhibitor próba a HIV-proteáz gátlásának vizsgálatára [az eredményeket az I. táblázatban adjuk meg „Pandex (ng/ml)’’ jelöléssel]
A leírásban az alábbi rövidítéseket használjuk:
BSA borjú-szérumalbumin
BOC terc-butil-oxi-karbonil-csoport
BrZ 2-bróm-benzil-oxi-karbonil-csoport
2-CIZ 2-klór-benzil-oxi-karbonil-csoport
DCC diciklohexil-karbodiimid
DIEA diizopropil-etil-amin
DTT ditiotreitol
EDTA etilén-diamin-tetraecetsav
HU 226 814 Β1
FITC fluoreszcein-izotio-karbamil-csoport
HEPES 4-(2-hidroxi-etiI)-1 -piperazin-etánszulfonsav MES 4-morfolin-etánszulfonsav
PAM fenil-acetimido-metil-csoport
TAPS 3-[trisz(hidroxi-metil)-metil]-amino-1 szulfonsav
TRIS trisz(hidroxi-metil)-amino-metán
TOS p-toluolszulfonil-csoport (tozilcsoport)
A) Proteáz és Gag-frakciók előállítása
1. Az E. coli K12 L507/pHP10D törzs tenyészete
A fagyasztva szárított E. coli K12 L507/pHP10D törzset a Northern Régiónál Research Laboratory-tól (Peoria, Illinois 61604, USA) szereztük be NRRL B-18560 letéti számon (letétbe helyezve 1989. november 14-én). A liofilizátumokat 10 ml LB tápközeget (literenként 10 g Bacto-tryptone, 5 g Bacto-élesztő kivonat és 10 g vizes nátrium-klorid) tartalmazó csövekbe töltjük, a pH-t 7,5-re beállítjuk és egy éjszakán át 32 °C-on inkubáljuk.
Az így kapott tenyészet egy kis részét LB-agar (LB tápközegben literenként 15 g Bacto-agar) lemezekre helyezzük, amelyek milliliterenként 12,5 pg tetraciklint tartalmaznak, oly módon, hogy az E. coli K12 L507/pHP10D egy egyedülálló telep izolátumát kapjuk. Az így kapott egyedülálló teleppel 10 ml, 12,5 pg/ml tetraciklint tartalmazó LB tápközeget oltunk be és egy éjszakán át erőteljes rázatással 32 °C-on inkubáljuk. Ezzel a 10 ml tenyészettel oltjuk be az ugyancsak 12,5 pg/ml tetraciklint tartalmazó LB tápközeget, és erőteljes rázatás mellett 32 °C-on inkubáljuk, amíg a tenyészet a logaritmikus fázis középső tartományát el nem éri.
2. Az E. coli K12 L507/pHGAG törzs tenyészete
A fagyasztva szárított E. coli K12 L507/pHGAG törzset az NRRL-től szereztük be NRRL B—18561 letéti számon (letétbe helyezve 1989. november 14-én). Izoláljuk az E. coli K12 L507/pHGAG egy tisztított telepét, és ezt használjuk inokulumként a tenyészethez, amelyet lényegében a fenti 1. pontban, az E. coli K12 L507/pHP10D törzsnél leírtak szerint a logaritmikus fázis középső tartományáig növesztünk.
3. A proteáz-frakció izolálása
Az E. coli K12 L507/pHP10D törzs tenyészetét a logaritmikus fázis középső tartományáig növesztjük 32 °C-on 12,5 pg/ml tetraciklint tartalmazó LB tápközegben. A tenyészet hőmérsékletét gyorsan 40 °C-ra emeljük, hogy megindítsuk a génexpressziót, és a sejteket 2,5 órán át ezen a hőmérsékleten növesztjük, majd a tenyészetet jéggel gyorsan lehűtjük. A sejteket centrifugáljuk, és a sejtüledéket 20 ml 50 mmol MES pufferben (pH=6,0) - amely 1 mmol EDTA-t, 1 mmol DTT-t, 1 mmol PMSF-t és 10% glicerint tartalmaz („A” puffer) - reszuszpendáljuk. A sejteket ultrahangos kezeléssel feltárjuk, ehhez Fischer Model 300 Dismembrator készüléket és mikrocsúcsot használva. A szuszpenziót 27 000xg-vel centrifugáljuk, a felülúszót az „A” pufferrel 60 ml-re kiegészítjük, és 2,0^19 cm QAESepharose oszlopra visszük (1 ml/perc átfolyási sebesség mellett 4 °C hőmérsékleten), amelyet előzőleg „A” pufferrel kiegyensúlyoztunk. Az oszlopot 180 percen át izokratikusan mossuk, majd 120 percen átgradienselúciónak vetjük alá, amihez „A” puffért használunk, melyben a nátrium-klorid-koncentráció 0-ról 1,0 mol/l-re változik. Az enzimatikus aktivitást HPLC-vel mérjük SerGln-Asn-Tyr-Pro-lle-Val szintetikus peptidet használva, ahogyan azt Margolin és munkatársai leírták [Biochem. Biophys. Rés. Commun. 167, 554-560 (1990)]. A p1 peptid (Ser-GIn-Asn-Tyr) termelődését mérjük.
Az aktív frakciókat egyesítjük, 1,2 mol/l ammóniumszulfáttal a pH-t beállítjuk, és 2,0x18 cm-es hexil-agaróz oszlopot alkalmazunk, amelyet előzőleg 1,2 mol/l ammónium-szulfátot tartalmazó „A” pufferrel kiegyenlítünk. A mintát 1 ml/perc átfolyási sebességgel 4 °C hőmérsékleten visszük az oszlopra, ugyanezen sebességgel mossuk 240 percen át az oszlopot „A” pufferral, majd fordított lineáris gradienssel eluáljuk 120 percen át, melyhez ugyanilyen átfolyási sebesség mellett „A puffért használunk, amelyben az ammónium-szulfát koncentrációja 1,2 mol/l-ről nullára csökken. Az oszlopot ezután izokratikusan mossuk az „A” pufferrel 120 percen át.
Az aktív frakciókat egyesítjük, Amicon kevertetett cellában YM-10 membrán alkalmazásával 10 ml térfogatra betöményítjük, és ezután 1,0x10 cm-es MonoS kationcserélő oszlopra visszük, amit előzőleg „A” pufferrel kiegyenlítettünk. A minta rávitele 1 ml/perc átfolyási sebességgel 25 °C-on történik. Miután 30 percig izokratikusan mostuk az oszlopot, a proteázt lineáris gradienssel eluáljuk 40 percen át „A” pufferrel, amelyben a vizes nátrium-klorid koncentrációja nulláról 0,45 mol/l-re emelkedik. Ezután 40 percen át mossuk az oszlopot 0,45 mol/l vizes nátrium-kloridot tartalmazó „A” pufferrel.
Az aktív frakciókat egyesítjük, 200 μΙ-re betöményítjük egy Amicon kevertetett cellában YM-10 membrán alkalmazásával. A proteázoldatot egy Superose 6 méretkizárásos oszlopra visszük, amit előzőleg 0,1 mol/l vizes nátrium-klorid tartalmú „A” pufferrel egyenlítettünk ki. Az oszlopot izokratikusan 0,5 ml/perc átfolyási sebességnél ezzel a pufferrel mossuk, amelyet követően a HIV-proteáz egyetlen csúcsban eluálódik az oszlopról.
A QAE-Sepharose és a hexil-agaróz gyártója a Sigma Chemical Company, a Superose 6 és MonoS gyantákat a Pharmaciától szereztük be. A pufferek és a reagensek a Sigma cégtől származnak.
4. A Gag-frakció előállítása
Az előbbiekhez hasonló módon az E. coli K12 507/pHGAG törzs tenyészetét 32 °C-on a logaritmikus középső tartományáig növesztjük, majd 4-5 órára a hőmérsékletet 40 °C-ra emeljük. A tenyészetet jégen lehűtjük, centrifugáljuk, majd a sejtüledéket 8 ml 5 mg/ml lizozimot tartalmazó lizálópufferben szuszpendáltatjuk. A lizálópuffer összetétele: 50 mmol/l TriszHCI (pH=7,8), 5 mmol/l EDTA, 1 mmol/l DTT, 100 mmol/l NaCI, 1 pg/ml E64 és 2 pg/ml aprotinin.
HU 226 814 Β1
A szuszpenziót 30-60 percen át inkubáljuk 4 °C-on, majd Branson® Cell Disrupter készülékben 60%-os teljesítmény mellett háromszor 20 másodpercig ultrahangos feltárásnak tesszük ki, az egyes kezelések között hűtést alkalmazva. A szuszpenziót 15 000xg-vel lecentrifugáljuk, majd a felülúszót, mely a kifejletlen gag proteint tartalmazza, Sephadex G-50 méretkizárásos oszlopon részlegesen tisztítjuk, és 50% glicerint tartalmazó lizálópufferben tároljuk-20 °C hőmérsékleten.
B) Az Na-biotin-Gly-Ser-GIn-Asn-Tyr-Pro-lle-ValGly-Lys (Nc-FITC)-OH képletű szubsztrát előállítása
1. Az amino-terminálison biotinilezett peptid előállítása
Az Na-Boc-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr(BrZ)-Pro-lle-ValGly-Lys(2-.CIZ)-OCH2-PAM-gyanta képletű védett peptid/gyanta komplexet az Advanced Chemtech Model 200 peptidszintetizátoron állítjuk elő 1,5 mmol fokozatnál, a szokásos dupla páros eljárást alkalmazva. Az amino-terminális terc-Boc-csoportot 50%-os trifluor-ecetsavval metilén-kloridban eltávolítjuk, és a gyantát metilén-kloridban lévő 5%-os diizopropil-etilaminnal (DIEA) semlegesítjük. A peptid/gyanta komplexhez 20 ml dimetil-szulfoxidban 1,1 g (4,5 mmol) biotint, majd 9 ml metilén-kloridban 4,5 mmol diciklohexil-karbodiimidet (DCC) adunk. A kapott reakcióelegyet 11 ml metilén-kloriddal 40 ml össztérfogatra hígítjuk, és hagyjuk reagálni 5 órán át. A kapott oldatot betöményítjük, a gyantát dimetil-szulfoxiddal, dimetilformamiddal és metilén-kloriddal mossuk, majd metilén-kloridban lévő 5%-os DlEA-val semlegesítjük. Ezt a reakciót kétszer megismételjük, 12 órát hagyva az egyes reakciókra. A gyanta ninhidrines analízise azt mutatja, hogy a biotin és a glicin aminocsoportja között a reakció teljes. A végső peptid/gyanta komplexet dimetil-formamiddal és metilén-kloriddal alaposan kimosva és megszárítva 4,3 g (98%) terméket kapunk.
2. A védőcsoport eltávolítása ml hidrogén-fluorid/m-krezol oldatban 0 °C-on történő egyórás kezeléssel eltávolítjuk a peptid védőcsoportját, és a peptidet lehasítjuk a gyantáról. Vákuumdesztillációval eltávolítjuk a hidrogén-fluoridot, és az m-krezolt 100 ml dietil-éterrel extraháljuk a reakcióelegyből. A peptidet ezután 50%-os vizes ecetsavban oldjuk, fagyasztjuk és liofilizáljuk. Ennek során 2,14 g terméket kapunk.
3. Tisztítás
A biotinilezett amino-terminálisú, nyers peptidet feloldjuk acetonitril 0,1% trifluor-ecetsavat tartalmazó 5%-os 200 ml térfogatú vizes oldatában és 0,22 μ-os szűrőn átszűrjük. A szűrletet rávisszük egy 2,2x25 cm méretű fordított fázisú oktadecil-szilikagél oszlopra (Vydac C—18), melyet előzőleg ugyanezzel a pufferral kiegyenlítettünk. A peptidet 855 perces lineáris gradienselúcióval, 2 ml/perc átfolyási sebességnél oldjuk le az oszlopról, ahol az acetonitril koncentrációját
7,5%-ról 25%-ra növeljük. Az egyes frakciókat 4,6x250 mm méretű Vydac C-18 oszlopon HPLC-vel analizáljuk azonos pufferkörülmények alkalmazásával. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd fagyasztva és szárítva 1,206 g terméket kapunk (kitermelés: 62%).
Az izolált biotinilezett peptid aminosav-analízisének eredményei: Asn 1,1; Ser 0,96; Gin 1,1; Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,80; Ile 0,78; Tyr 1,1; Lys 1,1 - az elméletileg várt eredménynek megfelelően. Gyors atomokkal végzett bombázás útján mérve a molekulaion tömege az elméleti értéknek megfelelően 1288.
4. Jelölés
A tisztított biotinilezett peptidet a C-terminálison a Pandex-vizsgálatnál használt fluoreszcens markerrel jelöljük. Először 1,206 g (0,936 mmol) biotinilezett peptidet feloldunk 100 ml 0,1 mol/l nátrium-borát pufferben (pH=9,5). Az oldathoz 2 óra alatt 10 egyenlő adagban elosztva hozzáadjuk 3 g (7,7 mmol) fluoreszcein-izotiocianát 15 ml dimetil-szulfoxidban készült oldatát. Az utolsó adagolás után egy órán át hagyjuk lejászódni a reakciót. Az oldat kémhatását 5 mol/l sósavval pH=3 értékre beállítjuk, és a keletkezett csapadékot centrifugálással eltávolítjuk.
A peptidoldat kémhatását 5 mol/l nátrium-hidroxiddal pH=7,8 értékre állítjuk be, majd 0,1 mol/l ammónium-acetát-oldat (pH=7,5) hozzáadásával 200 ml-re hígítjuk. Az így kapott oldatot 0,22 μΐτι-es szűrőn átszűrjük, és 2,2x25 cm méretű Vydac C-18 oszlopra visszük, melyet előzőleg 0,1 mol/l ammónium-acetátban (pH=7,5) készült 5%-os acetonitrillel kiegyensúlyoztunk. A peptidet 855 perc alatt lineáris gradienssel eluáljuk az oszlopról 2 ml/perc átfolyási sebességnél, mialatt az acetonitril koncentrációját 5%-ról 25%-ra emeljük. Az egyes frakciókat analitikai HPLC-vel elemezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, fagyasztjuk és liofilizáljuk, így 190,2 mg terméket kapunk (kitermelés: 12%).
A tisztított peptid aminosav-analízisének eredménye: Asn 1,1; Ser 1,0; Gin 1,1; Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,8; Ile 0,8; Tyr 1,1; Lys 1,0 - az elméletileg várt eredményeknek megfelelően. Gyors atomokkal végzett bombázás útján mérve a molekulaion tömege az elméletileg várt értéknek megfelelően 1678.
5. Fluoreszcens HIV-1 proteáz gátlást vizsgálat
Az alábbi összetételű puffereket és oldatokat használjuk a fluoreszcens HIV-1 proteáz gátlási vizsgálatban:
MES-ALB puffer: 0,05 mol/l 4-morfolin-etánszulfonsav, pH=5,5
0,02 mol/l NaCI 0,002 mol/l EDTA 0,001 mol/l DTT
TBSA puffer:
11,0 mg/ml BSA
0,02 mol/l Trisz
0,15 mol/l NaCI
1,0 mg/ml BSA
HU 226 814 Β1
Avidinnel bevont gyöngyök oldata: 0,1 %-os Fluorion Avidin Assay Particles-t tartalmazó oldat (0,6-0,8 pm átmérőjű polisztirolgyöngyökhöz konjugált avidin, TBSA pufferben)
Enzimoldat: 27 lU/ml koncentrációjú tisztított HIV-1 proteáz-oldat MES-ALB pufferben (1 IU megfelel annak az enzimmennyiségnek, amely 37 °C-on percenként 1 pmol szubsztrátot hidrolizál el).
Egy legömbölyített aljú, 96 mélyedéses lemez minden egyes mélyedésébe bemérünk 20 pl fenti enzimoldatot, majd hozzáadunk a vizsgálandó vegyület 20 tömeg%-os vizes dimetil-szulfoxidos oldatából 10 pl-t. A tisztított HIV-1 proteázt a fentiekben leírtak szerint kapjuk meg. A reakcióelegyet egy órán át inkubáljuk szobahőmérsékleten, majd a fentiek szerint előállított szubsztrát MES-ALB pufferben készült oldatának (1,5 μΙ/ml) 20 μΙ-ét adjuk hozzá minden egyes mélyedéshez. Az oldatokat ezután 16 órán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd az egyes mélyedések tartalmát 150 pl MES-ALB pufferrel hígítjuk.
Egy másik legömbölyített aljú, 96 mélyedéses Pandex lemez minden egyes mélyedésébe bemérünk 25 pl avidinnel borított gyöngyszuszpenziót, majd 25 pl hígított, fenti inkubáló oldatot adunk hozzá. Az elegyet alaposan 5 összekeverjük, és a lemezeket Pandex® készülékbe helyezzük, mossuk, kiürítjük és mérjük. A minta kiértékelésénél a gerjesztéshez 485 nm hullámhosszú fényt használunk, az epifluoreszcencia mérése 535 nm-en történik.
A fluoreszcens vizsgálatban a találmány szerinti vegyületekre kapott IC50-értékeket az I., II. és III. táblázatban foglaljuk össze. Valamennyi értéket az [1S(1 R*,4R*,5S*)]-N-{1-(2-amino-2-oxo-etil)-2-oxo-3-aza4-fenil-metil-5-hidroxi-6-[2-( 1 -terc-butil-amino-1 -oxometil)-fenil]-hexil}-2-kinolinil-karboxamid pozitív kontrolihoz viszonyítottuk.
A találmány szerinti vegyületekre kapott aktivitásadatokat az I., II. és III. táblázatban és az ezeket megelőző példákban mutatjuk be. A zárójelbe tett eredmények a 0 526 009 számú európai közrebocsátási irat 1. példája szerinti vegyületre (=35B) vonatkoznak ugyanilyen vizsgálatban.
I. táblázat
A zárójelben lévő eredmények a 0 526 009 számú európai közrebocsátási irat 1. példája szerinti vegyületre (=35B) vonatkoznak azonos vizsgálatban
Példa —I o j£. ° IB H co 2 JP. H O Ji8 IB H co 2 JP. SRI CEM (ng/ml) SRI MT2 (ng/ml) Pandex (ng/ml)
1. 2,39 (9,93) 19,0 (53,5) 8,62 6,27 0,2c (0,16)d
c) 35B 9,3 ng/ml; d) 35B 0,63 ng/ml
Példa Teljes sejt IC50 nM Teljes sejt ICgo nM SRI CEM (ng/ml) SRI MT2 (ng/ml) Pandex (ng/ml)
1. 2,39 (9,93) 19,0 (53,5) 8,62 6,27 0,2^ (0,16)d
b) 35B 2,7 ng/ml; d) 35B 0,63 ng/ml
Példa —I O ,2. 8 SB H co 2 JP. Teljes sejt ICgo nM SRI CEM (ng/ml) SRI MT2 (ng/ml) Pandex (ng/ml)
Referencia 1000 1380 1310 1500 462d
d) 35B 0,48 ng/ml //. táblázat
2. példa szerinti vegyület IC50=14,5 nM (teljes sejt) ICs0=56,1 nM (teljes sejt) ///. táblázat Gátló aktivitás
Példa száma Fluoreszcenciavizsgálat, IC50 (pg/ml)
Kontroll 1,0
1. 0,25
Referencia 962
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (15)

1. (1/1) képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfo50 gadható sója.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyület (1/11) képletű sztereoizomerje vagy gyógyászatilag elfogadható sója.
3. A 2. igénypont szerinti vegyület lényegében tisz55 ta sója.
4. A 2. igénypont szerinti vegyület lényegében tiszta sztereoizomerje.
5. (1/111) képletű vegyület.
6. Az 5. igénypont szerinti vegyület (1/IV) képletű 60 sztereoizomerje.
HU 226 814 Β1
7. A 6. igénypont szerinti vegyület lényegében tiszta sztereoizomerje.
8. Gyógyászati készítmény, amely (a) gyógyászatilag hatékony mennyiségű 1. igénypont szerinti (1/1) képletű vegyületet vagy gyógyászatilag elfogadható sóját és (b) gyógyászatilag elfogadható vivőanyagot tartalmaz.
9. A 8. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, ahol az (a) pontban említett vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója a 2. igénypont szerinti (1/11) képletű sztereoizomer, vagy az említett sztereoizomer gyógyászatilag elfogadható sója.
10. A 9. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, ahol az (a) pontban említett vegyület a 2. igénypont szerinti (1/11) képletű sztereoizomer.
11. A 9. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, ahol az (a) pont szerinti vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója a 6. igénypont szerinti (1/IV) képletű gyógyászatilag elfogadható só.
12. Az 1. igénypont szerinti (1/1) képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója alkalmazása HIV5 proteáz gátlására szolgáló gyógyszer előállítására.
13. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója a 2. igénypont szerinti (1/11) képletű sztereoizomer vagy az említett sztereoizomer gyógyá10 szatilag elfogadható sója.
14. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója a 2. igénypont szerinti (1/11) képletű sztereoizomer.
15 15. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója a 6. igénypont szerinti (1/IV) képletű gyógyászatilag elfogadható só.
HU9600908A 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitors based on decahydroisoquinoline-carboxamide derivatives and use thereof HU226814B1 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13354393A 1993-10-07 1993-10-07
US13369693A 1993-10-07 1993-10-07
US08/190,764 US5484926A (en) 1993-10-07 1994-02-02 HIV protease inhibitors
PCT/US1994/011307 WO1995009843A1 (en) 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitors

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9600908D0 HU9600908D0 (en) 1996-05-28
HUT75652A HUT75652A (en) 1997-05-28
HU226814B1 true HU226814B1 (en) 2009-11-30

Family

ID=27384442

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9600908A HU226814B1 (en) 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitors based on decahydroisoquinoline-carboxamide derivatives and use thereof
HU0900219A HU227885B1 (en) 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitor carboxamide-derivatives with hiv protease inhibitor effect

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0900219A HU227885B1 (en) 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitor carboxamide-derivatives with hiv protease inhibitor effect

Country Status (36)

Country Link
US (14) US5484926A (hu)
EP (3) EP1340744B1 (hu)
JP (2) JP2951724B2 (hu)
KR (1) KR100190517B1 (hu)
CN (2) CN1046269C (hu)
AP (1) AP600A (hu)
AT (3) ATE286025T1 (hu)
AU (1) AU694746B2 (hu)
BG (1) BG62567B1 (hu)
BR (1) BR9407782A (hu)
CA (2) CA2268709C (hu)
CZ (1) CZ290417B6 (hu)
DE (3) DE69431193T2 (hu)
DK (2) DK0889036T3 (hu)
EE (1) EE05399B1 (hu)
ES (3) ES2287387T3 (hu)
FI (1) FI114794B (hu)
GE (2) GEP20002209B (hu)
HK (3) HK1013650A1 (hu)
HU (2) HU226814B1 (hu)
MD (1) MD1507G2 (hu)
MY (1) MY138860A (hu)
NO (1) NO307050B1 (hu)
NZ (2) NZ329626A (hu)
OA (1) OA10718A (hu)
PL (1) PL185647B1 (hu)
PT (2) PT722439E (hu)
RO (1) RO119363B1 (hu)
RU (1) RU2139280C1 (hu)
SI (2) SI0722439T1 (hu)
SK (2) SK284115B6 (hu)
TJ (1) TJ339B (hu)
TW (1) TW432049B (hu)
UA (1) UA56984C2 (hu)
UY (1) UY23840A1 (hu)
WO (1) WO1995009843A1 (hu)

Families Citing this family (146)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040122000A1 (en) 1981-01-07 2004-06-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated. Inhibitors of aspartyl protease
US6878728B1 (en) 1999-06-11 2005-04-12 Vertex Pharmaceutical Incorporated Inhibitors of aspartyl protease
USH1649H (en) * 1987-07-31 1997-05-06 Barrish; Joel C. HIV protease inhibitor combinations
US7141609B2 (en) 1992-08-25 2006-11-28 G.D. Searle & Co. α- and β-amino acid hydroxyethylamino sulfonamides useful as retroviral protease inhibitors
KR100336699B1 (ko) 1992-08-25 2002-05-13 윌리암스 로저 에이 레트로바이러스 프로테아제 저해제로서 유용한히드록시에틸아미노 술폰아미드
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US5514801A (en) * 1992-12-29 1996-05-07 Monsanto Company Cyclic sulfone containing retroviral protease inhibitors
IL110255A (en) * 1993-07-16 1998-12-06 Merck & Co Inc Creation and resolution of 2 tert-butylcarboxamidopiprazine
HUT74685A (en) * 1994-02-02 1997-01-28 Lilly Co Eli Hiv protease inhibitors and intermediates piperidine derivatives condensed with heterocycles as intermediates for hiv protease inhibitors
US5461154A (en) * 1994-02-02 1995-10-24 Eli Lilly And Company Intermediate and process for making
US5480887A (en) * 1994-02-02 1996-01-02 Eli Lilly And Company Protease inhibitors
US20030207813A1 (en) * 1996-12-09 2003-11-06 G.D. Searle Retroviral protease inhibitor combinations
UA49803C2 (uk) * 1994-06-03 2002-10-15 Дж.Д. Сьорль Енд Ко Спосіб лікування ретровірусних інфекцій
US5831117A (en) * 1995-01-20 1998-11-03 G. D. Searle & Co. Method of preparing retroviral protease inhibitor intermediates
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
EP0984000B1 (en) * 1995-09-26 2008-12-03 Japan Tabacco Inc. Process for producing amide derivatives and intermediate compounds
US6133461A (en) * 1995-09-26 2000-10-17 Japan Tobacco Inc. Process for producing amide derivatives and intermediates therefor
US5914332A (en) 1995-12-13 1999-06-22 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
MY126358A (en) * 1996-03-22 2006-09-29 Glaxo Group Ltd Compositions comprising vx478 and a water soluble tocopherol derivative such as vitamin e-tpgs
KR100524327B1 (ko) * 1996-06-05 2005-10-28 가부시키가이샤 세가 화상 처리 장치, 화상 처리 방법, 게임 장치 및 기록 매체
US5925759A (en) * 1996-09-05 1999-07-20 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making HIV-protease inhibitors and intermediates for making HIV-protease inhibitors
US5705647A (en) * 1996-09-05 1998-01-06 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
UA67727C2 (uk) * 1996-09-05 2004-07-15 Агурон Фармасевтікелс, Інк. Проміжні сполуки для одержання інгібіторів віл-протеази і способи одержання інгібіторів віл-протеази
US5962725A (en) 1996-09-05 1999-10-05 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediate compounds useful for making HIV protease inhibitors such as nelfinavir
US6232333B1 (en) 1996-11-21 2001-05-15 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
DE19704885C1 (de) * 1997-02-11 1998-06-10 Clariant Gmbh Verfahren zur Herstellung von 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure und 3-Acetoxy-2-methylbenzoesäure
US6001851A (en) * 1997-03-13 1999-12-14 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
HRP980112A2 (en) * 1997-03-13 1998-12-31 Agouron Pharma Hiv protease inhibitors
US6130348A (en) 1997-04-10 2000-10-10 Hoffmann-La Roche Inc. Process for a phenylthiobutyl-isoquinoline and intermediates therefor
WO1998045271A1 (en) * 1997-04-10 1998-10-15 F. Hoffman-La Roche Ag Process for making a butylthio-isoquinoline and intermediates therefor
US6123694A (en) * 1997-05-09 2000-09-26 Paragon Trade Brands Disposable absorbent article with unitary leg gathers
DE19730602A1 (de) * 1997-07-17 1999-01-21 Clariant Gmbh 3-Acetoxy-2-methylbenzoesäurechlorid und ein Verfahren zu seiner Herstellung
US6084107A (en) * 1997-09-05 2000-07-04 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
US6436989B1 (en) 1997-12-24 2002-08-20 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Prodrugs of aspartyl protease inhibitors
IN188157B (hu) 1998-01-16 2002-08-24 Japan Tobacco Inc
US6124500A (en) * 1998-03-09 2000-09-26 Rohm And Haas Company Process for synthesizing benzoic acids
FR2776292B1 (fr) 1998-03-20 2004-09-10 Oncopharm Cephalotaxanes porteurs de chaine laterale et leur procede de synthese
AU6852998A (en) * 1998-04-16 1999-11-08 Nagase & Company, Ltd. Process for preparing chloro alcohol derivatives and intermediates
AU767728B2 (en) 1998-06-19 2003-11-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Sulfonamide inhibitors of aspartyl protease
AU4862799A (en) 1998-07-08 2000-02-01 G.D. Searle & Co. Retroviral protease inhibitors
US6107511A (en) * 1998-07-29 2000-08-22 Kaneka Corporation Process for the purification or isolation of (2S,3R)-1-halo-2-hydroxy-3-(protected amino)4-phenylthiobutanes or optical antipodes thereof
US7635690B2 (en) * 1999-01-22 2009-12-22 Emory University HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
US7115584B2 (en) * 1999-01-22 2006-10-03 Emory University HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
TWI260322B (en) 1999-02-12 2006-08-21 Vertex Pharma Inhibitors of aspartyl protease
US6566560B2 (en) 1999-03-22 2003-05-20 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Resorcinolic compounds
BR0009200A (pt) 1999-03-22 2001-12-26 Immugen Pharmaceuticals Inc Compostos e composições para o tratamento dedoenças associada com disfunção imune
WO2001005230A1 (en) * 1999-07-20 2001-01-25 Merck & Co., Inc. Alpha-hydroxy-gamma-[[(carbocyclic-or heterocyclic-substituted)amino]carbonyl]alkanamide derivatives and uses thereof
US6589962B1 (en) 1999-07-20 2003-07-08 Merck & Co., Inc. Alpha-hydroxy-gamma-[[(carbocyclic-or heterocyclic-substituted)amino]carbonyl]alkanamide derivatives and uses thereof
KR100339831B1 (ko) 1999-08-18 2002-06-07 김태성 신규의 에틸 아지리딘 유도체 및 그 제조방법
US6403799B1 (en) 1999-10-21 2002-06-11 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of intermediates in the synthesis of HIV-protease inhibitors
WO2001038332A1 (en) 1999-11-24 2001-05-31 Merck & Co., Inc. Gamma-hydroxy-2-(fluoroalkylaminocarbonyl)-1-piperazinepentanamides as hiv protease inhibitors
DK2269591T3 (en) 2000-01-19 2018-07-16 Abbvie Inc IMPROVED PHARMACEUTICAL FORMULATIONS
US7119085B2 (en) * 2000-03-23 2006-10-10 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods to treat alzheimer's disease
US6992081B2 (en) 2000-03-23 2006-01-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
AU2001259817A1 (en) 2000-05-04 2001-11-12 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The National Institutes Of Health Methods of and compounds for inhibiting calpains
US20020198207A1 (en) * 2000-05-18 2002-12-26 Kath John Charles Novel Hexanoic acid derivatives
US20030096864A1 (en) * 2000-06-30 2003-05-22 Fang Lawrence Y. Compounds to treat alzheimer's disease
EP1666452A2 (en) 2000-06-30 2006-06-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
US6846813B2 (en) * 2000-06-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Compounds to treat alzheimer's disease
PE20020276A1 (es) 2000-06-30 2002-04-06 Elan Pharm Inc COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER
DE60116313T2 (de) 2000-06-30 2006-08-31 Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco Verbindungen zur behandlung der alzheimerischen krankheit
US7425537B2 (en) * 2000-08-22 2008-09-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services SH2 domain binding inhibitors
AU2001296402A1 (en) * 2000-09-28 2002-04-08 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Methods and compounds for inhibiting eicosanoid metabolism and platelet aggregation
US6541510B2 (en) * 2000-09-28 2003-04-01 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Antiviral methods and compounds
IT1318986B1 (it) * 2000-10-09 2003-09-19 Archimica S P A Ora Clariant L Procedimento per la preparazione di (s)-n-terbutil-1,2,3,4-tetraidroisochinolin-3-carbossiammide.
JP4259869B2 (ja) * 2000-10-19 2009-04-30 ターゲット ディスカヴァリー インコーポレイテッド タンパク質及びペプチド末端配列の決定方法
JPWO2002064553A1 (ja) * 2001-02-14 2004-06-10 呉羽化学工業株式会社 ハロゲノアルコール誘導体の製造方法
HN2002000136A (es) 2001-06-11 2003-07-31 Basf Ag Inhibidores de la proteasa del virus hiv, compuestos que contienen a los mismos, sus usos farmaceuticos y los materiales para su sintesis
US6982264B2 (en) 2001-06-27 2006-01-03 Elan Pharmaceuticals, Inc. Substituted alcohols useful in treatment of Alzheimer's disease
US20070213407A1 (en) * 2001-06-29 2007-09-13 Elan Pharmaceuticals And Pharmacia & Upjohn Company Llc Compounds to treat Alzheimer's disease
US20030191121A1 (en) * 2001-08-09 2003-10-09 Miller Ross A. Piperazine carboxamide intermediates of HIV protease inhibitors and processes for their preparation
US20030068655A1 (en) * 2001-09-12 2003-04-10 Protiveris, Inc. Microcantilever apparatus and methods for detection of enzymes
US6696494B2 (en) 2001-10-22 2004-02-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. α-hydroxyarylbutanamine inhibitors of aspartyl protease
JP4625637B2 (ja) 2002-02-22 2011-02-02 シャイア エルエルシー 活性物質送達系及び活性物質を保護し投与する方法
US20040067216A1 (en) * 2002-02-22 2004-04-08 Karki Shyam B. Hiv protease inhibitors supported on cation exchange resins for oral administration
US7157489B2 (en) * 2002-03-12 2007-01-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois HIV protease inhibitors
WO2003080043A1 (en) * 2002-03-18 2003-10-02 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Topical formulations of resorcinols and cannibinoids and methods of use
DE10212885A1 (de) * 2002-03-22 2003-10-02 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure
DE10226219A1 (de) * 2002-06-13 2004-01-08 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von 3-Acyloxy-2-methylbenzoesäuren
EP1371626A3 (de) * 2002-06-13 2004-07-21 Bayer Chemicals AG Verfahren zur Herstellung von 3-Alkoxy-2-methylbenzoesäuren
CA2393720C (en) 2002-07-12 2010-09-14 Eli Lilly And Company Crystalline 2,5-dione-3-(1-methyl-1h-indol-3-yl)-4-[1-(pyridin-2-ylmethyl)piperidin-4-yl]-1h-indol-3-yl]-1h-pyrrole mono-hydrochloride
ES2259400T3 (es) * 2002-08-21 2006-10-01 Lanxess Deutschland Gmbh Compuestos quirales de difosforo y sus complejos con metales de transicion.
US7615575B2 (en) 2003-02-13 2009-11-10 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
CN1819993A (zh) * 2003-05-08 2006-08-16 美国辉瑞有限公司 用于合成hiv－蛋白酶抑制剂的中间体及其制备方法
JP4731320B2 (ja) * 2003-07-15 2011-07-20 アリジェン製薬株式会社 抗コロナウイルス剤
US7211588B2 (en) * 2003-07-25 2007-05-01 Zentaris Gmbh N-substituted indolyl-3-glyoxylamides, their use as medicaments and process for their preparation
US8025899B2 (en) * 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) * 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
SI2258376T1 (sl) 2004-07-27 2019-04-30 Gilead Sciences, Inc. Analogi fosfonata spojin inhibitorjev HIV
DK1814858T3 (en) * 2004-08-23 2015-05-26 Mylan Lab Ltd NOVEL crystalline forms of nelfinavir mesylate
US8022249B2 (en) 2005-04-01 2011-09-20 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
US8076514B2 (en) 2005-07-20 2011-12-13 Eli Lilly And Company Phenyl compounds and their use in the treatment of Type II diabetes
WO2007015805A1 (en) 2005-07-20 2007-02-08 Eli Lilly And Company 1-amino linked compounds
CA2637373A1 (en) 2006-01-25 2007-08-02 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
CA2637375A1 (en) 2006-01-25 2007-08-02 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
KR20080097418A (ko) 2006-02-02 2008-11-05 웰스태트 테러퓨틱스 코포레이션 물질대사 장애의 치료용 화합물
JP4831410B2 (ja) * 2006-02-28 2011-12-07 東亞合成株式会社 抗ウイルス性ペプチドおよび抗ウイルス剤
JP4788958B2 (ja) * 2006-02-28 2011-10-05 東亞合成株式会社 抗ウイルス性ペプチドおよびその利用
WO2007109160A2 (en) * 2006-03-16 2007-09-27 Renovis, Inc. Bicycloheteroaryl compounds as p2x7 modulators and uses thereof
US20080161324A1 (en) * 2006-09-14 2008-07-03 Johansen Lisa M Compositions and methods for treatment of viral diseases
WO2008041087A1 (en) * 2006-10-06 2008-04-10 Aurobindo Pharma Limited An improved process for preparation of amorphous nelfinavir mesylate
EP2131865B1 (en) 2007-03-12 2014-12-17 Nektar Therapeutics Oligomer-protease inhibitor conjugates
CN103356622A (zh) * 2007-06-29 2013-10-23 吉里德科学公司 治疗用组合物及其用途
JP5547066B2 (ja) * 2007-06-29 2014-07-09 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 治療用組成物およびその使用
WO2009036341A2 (en) * 2007-09-14 2009-03-19 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to hiv protease inhibition
WO2009042093A1 (en) * 2007-09-25 2009-04-02 Merck & Co., Inc. Hiv protease inhibitors
WO2009114151A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid and olgomer-atazanavir conjugates
UA103894C2 (ru) 2008-03-13 2013-12-10 Уеллстат Терепьютикс Корпорейшн Соединения и способ для снижения уровня мочевой кислоты
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
JP5600116B2 (ja) 2008-12-09 2014-10-01 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｔｏｌｌ様受容体のモジュレーター
SG171308A1 (en) * 2008-12-11 2011-07-28 Shionogi & Co Synthesis of carbamoylpyridone hiv integrase inhibitors and intermediates
US8551973B2 (en) * 2008-12-23 2013-10-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
WO2010075549A2 (en) * 2008-12-23 2010-07-01 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidates
SG194404A1 (en) 2008-12-23 2013-11-29 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
EP2435037B1 (en) 2009-05-27 2014-11-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
EP2440249A2 (en) 2009-06-12 2012-04-18 Nektar Therapeutics Covalent conjugates comprising a protease inhibitor, a water-soluble, non-peptidic oligomer and a lipophilic moiety
EP2509590B1 (en) * 2009-12-10 2019-10-30 The Trustees of Columbia University in the City of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
US10640457B2 (en) 2009-12-10 2020-05-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
DE102010004957A1 (de) 2010-01-14 2011-07-21 Universitätsklinikum Jena, 07743 Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung
US20110223131A1 (en) 2010-02-24 2011-09-15 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
US8247436B2 (en) 2010-03-19 2012-08-21 Novartis Ag Pyridine and pyrazine derivative for the treatment of CF
BR112012024884A2 (pt) 2010-03-31 2016-10-18 Gilead Pharmasset Llc síntese estereosseletiva de ativos contendo fósforo
TWI577377B (zh) 2010-09-16 2017-04-11 Ｖｉｉｖ醫療保健公司 醫藥組合物
US9079834B2 (en) 2010-10-28 2015-07-14 Merck Canada Inc. HIV protease inhibitors
EP2771332B1 (en) 2011-10-26 2016-06-29 Merck Canada Inc. Thiophen and thiazol sulfonamid derivatives as HIV protease inhibitors for the treatment of AIDS
AR092489A1 (es) 2012-09-11 2015-04-22 Merck Sharp & Dohme Inhibidores de proteasa del vih
US9227990B2 (en) 2012-10-29 2016-01-05 Cipla Limited Antiviral phosphonate analogues and process for preparation thereof
RU2505286C1 (ru) * 2012-12-29 2014-01-27 Открытое Акционерное Общество "Фармасинтез" Фармацевтическая композиция для лечения вич-инфекции, способ ее получения и способ лечения
WO2015013835A1 (en) 2013-07-31 2015-02-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Piperazine derivatives as hiv protease inhibitors
RU2543322C1 (ru) * 2013-09-19 2015-02-27 Открытое Акционерное Общество "Фармасинтез" Фармацевтическая композиция для лечения вич-инфекции, способ ее получения и способ лечения
EP3082822B1 (en) 2013-12-19 2020-01-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
EP3083609B1 (en) 2013-12-19 2018-08-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
WO2015134366A1 (en) 2014-03-06 2015-09-11 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
US10138255B2 (en) 2014-03-10 2018-11-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Piperazine derivatives as HIV protease inhibitors
WO2016001907A1 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Prendergast Patrick T Mogroside iv and mogroside v as agonist/stimulator/un-blocking agent for toll-like receptor 4 and adjuvant for use in human/animal vaccine and to stimulate immunity against disease agents.
CN113577081A (zh) 2014-07-11 2021-11-02 吉利德科学公司 用于治疗hiv的toll样受体调节剂
EP3212196A4 (en) 2014-10-29 2018-07-11 Wisconsin Alumni Research Foundation Boronic acid inhibitors of hiv protease
CA2997955A1 (en) 2015-09-15 2017-03-23 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptors for the treatment of hiv
US10539397B2 (en) 2017-04-12 2020-01-21 Wilcox Industries Corp. Modular underwater torpedo system
RU2764243C2 (ru) 2017-09-22 2022-01-14 ДЖУБИЛАНТ ЭПИПЭД ЭлЭлСи Гетероциклические соединения в качестве ингибиторов PAD
CA3076476A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Jubilant Epipad LLC Imidazo-pyridine compounds as pad inhibitors
CA3080677A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Jubilant Prodel LLC Pyrimidine derivatives as inhibitors of pd1/pd-l1 activation
EP3704120B1 (en) 2017-11-24 2024-03-06 Jubilant Episcribe LLC Heterocyclic compounds as prmt5 inhibitors
CN112105610B (zh) 2018-03-13 2024-01-26 朱比连特普罗德尔有限责任公司 作为pd1/pd-l1相互作用/活化的抑制剂的双环化合物
JP2021138694A (ja) 2020-03-06 2021-09-16 ファイザー・インク ＳＡＲＳ−ＣｏＶ−２複製を阻害し、コロナウイルス疾患２０１９を処置する方法
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2448392A1 (fr) * 1979-02-12 1980-09-05 Vilbiss Toussaint De Dispositif automatique pour la projection de produits de revetement
US5142056A (en) * 1989-05-23 1992-08-25 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
IL89900A0 (en) * 1988-04-12 1989-12-15 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids and pharmaceutical compositions containing them
CA1340588C (en) * 1988-06-13 1999-06-08 Balraj Krishan Handa Amino acid derivatives
IL91307A0 (en) * 1988-08-24 1990-03-19 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors and pharmaceutical compositions for the treatment of aids containing them
EP0361341A3 (en) * 1988-09-28 1991-07-03 Miles Inc. Therapeutics for aids based on inhibitors of hiv protease
US5063208A (en) * 1989-07-26 1991-11-05 Abbott Laboratories Peptidyl aminodiol renin inhibitors
WO1991008221A1 (en) * 1989-12-04 1991-06-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Peptide inhibitors of hiv protease
GB8927913D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
GB8927915D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Novel alcohols
CA2032259A1 (en) * 1989-12-18 1991-06-19 Wayne J. Thompson Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids
CA2056911C (en) * 1990-12-11 1998-09-22 Yuuichi Nagano Hiv protease inhibitors
RU2120447C1 (ru) * 1991-02-08 1998-10-20 Санкио Компани Лимитед ПРОИЗВОДНЫЕ β АМИНО α ГИДРОКСИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ ИЛИ ЭФИРОВ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
US5235039A (en) * 1991-06-10 1993-08-10 Eli Lilly And Company Substrates for hiv protease
US5508407A (en) * 1991-07-10 1996-04-16 Eli Lilly And Company Retroviral protease inhibitors
CN1071930A (zh) 1991-07-10 1993-05-12 伊莱利利公司 用作治疗艾滋病的人免疫缺陷病毒蛋白酶的抑制剂
US5220796A (en) 1991-07-15 1993-06-22 The Boc Group, Inc. Adsorption condensation solvent recovery system
DE4126482A1 (de) * 1991-08-10 1993-02-11 Bayer Ag (alpha)-trifluormethyl-substituierte, gesaettigt-bicyclische amine und verfahren zu deren herstellung
US5516784A (en) * 1991-08-13 1996-05-14 Schering Corporation Anti-HIV (AIDS) agents
EP0534511A1 (en) * 1991-08-16 1993-03-31 Merck & Co. Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of aids
US5256783A (en) 1991-09-18 1993-10-26 Hoffmann-La Roche Inc. Method for producing 2-isoquinoline compounds
WO1993008184A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 Merck & Co., Inc. Hiv protease inhibitors
WO1993013066A1 (en) * 1991-12-20 1993-07-08 Syntex (U.S.A.) Inc. Cyclic amides of 3-amino-2-hydroxy-carboxylic acids as hiv-protease inhibitors
DK0560268T3 (da) * 1992-03-13 1995-06-12 Bio Mega Boehringer Ingelheim Substituerede pipecolinsyrederivater som HIV-proteasehæmmere
WO1993023379A1 (en) * 1992-05-21 1993-11-25 Monsanto Company Retroviral protease inhibitors
KR100336699B1 (ko) * 1992-08-25 2002-05-13 윌리암스 로저 에이 레트로바이러스 프로테아제 저해제로서 유용한히드록시에틸아미노 술폰아미드
IS2334B (is) * 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US5491166A (en) * 1992-12-22 1996-02-13 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
US5846993A (en) * 1992-12-22 1998-12-08 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US5733906A (en) * 1993-10-12 1998-03-31 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV Protease useful for the treatment of Aids
US5434265A (en) * 1992-12-22 1995-07-18 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease
US5475136A (en) * 1992-12-22 1995-12-12 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
ES2150933T3 (es) 1992-12-22 2000-12-16 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa vih utiles para el tratamiento del sida.
US5554653A (en) * 1992-12-22 1996-09-10 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
MX9308025A (es) * 1992-12-22 1994-08-31 Lilly Co Eli Compuestos inhibidores de la proteasa del virus dela inmunodeficiencia humana, procedimiento para supreparacion y formulacion farmaceutica que los contiene.
MX9308016A (es) 1992-12-22 1994-08-31 Lilly Co Eli Compuestos inhibidores de la proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, procedimiento para su preparacion y formulacion farmaceutica que los contiene.
US5480887A (en) * 1994-02-02 1996-01-02 Eli Lilly And Company Protease inhibitors
US5527829A (en) * 1994-05-23 1996-06-18 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
NO961382L (no) 1996-04-09
ES2236849T3 (es) 2005-07-16
AP600A (en) 1997-07-23
UY23840A1 (es) 1994-10-21
SI0889036T1 (en) 2005-04-30
DE69434977T2 (de) 2008-03-13
EP1340744B1 (en) 2007-05-23
JP2951724B2 (ja) 1999-09-20
PL313871A1 (en) 1996-07-22
AU694746B2 (en) 1998-07-30
BG62567B1 (bg) 2000-02-29
HU9600908D0 (en) 1996-05-28
US5484926A (en) 1996-01-16
ES2181725T3 (es) 2003-03-01
HU227885B1 (en) 2012-05-29
SK284115B6 (sk) 2004-09-08
FI114794B (fi) 2004-12-31
US6693199B2 (en) 2004-02-17
MY138860A (en) 2009-08-28
EE9600091A (et) 1996-12-16
MD1507G2 (ro) 2001-04-30
US5827891A (en) 1998-10-27
DE69434977D1 (de) 2007-07-05
US20020077338A1 (en) 2002-06-20
CZ290417B6 (cs) 2002-07-17
US5952343A (en) 1999-09-14
FI961449A (fi) 1996-05-29
CA2173328A1 (en) 1995-04-13
US5827858A (en) 1998-10-27
GEP20084497B (en) 2008-09-25
DK0722439T3 (da) 2002-12-16
DK0889036T3 (da) 2005-02-28
EP0722439B1 (en) 2002-08-14
OA10718A (en) 2001-11-02
ES2287387T3 (es) 2007-12-16
RU2139280C1 (ru) 1999-10-10
GEP20002209B (en) 2000-08-25
NO307050B1 (no) 2000-01-31
FI961449A0 (fi) 1996-03-29
US5827859A (en) 1998-10-27
DE69434214D1 (de) 2005-02-03
CA2268709A1 (en) 1995-04-13
BR9407782A (pt) 1997-03-18
DE69431193T2 (de) 2002-12-12
TW432049B (en) 2001-05-01
EP0889036A1 (en) 1999-01-07
US5824688A (en) 1998-10-20
SK43996A3 (en) 1997-01-08
ATE286025T1 (de) 2005-01-15
WO1995009843A1 (en) 1995-04-13
DE69434214T2 (de) 2005-06-02
CN1131942A (zh) 1996-09-25
EP0889036B1 (en) 2004-12-29
US20030216569A1 (en) 2003-11-20
CN1262272A (zh) 2000-08-09
JPH09501443A (ja) 1997-02-10
HK1014950A1 (en) 1999-10-08
SK284116B6 (sk) 2004-09-08
HK1056172A1 (en) 2004-02-06
MD1507F2 (en) 2000-07-31
CA2173328C (en) 1999-08-31
PT889036E (pt) 2005-05-31
NZ275633A (en) 1998-03-25
PT722439E (pt) 2002-12-31
US5834467A (en) 1998-11-10
US5859002A (en) 1999-01-12
BG100455A (en) 1997-09-30
CA2268709C (en) 2008-03-25
HU0900219D0 (en) 2009-06-29
TJ339B (en) 2002-07-01
EP0722439A1 (en) 1996-07-24
CN1046269C (zh) 1999-11-10
KR100190517B1 (en) 1999-06-01
US5852043A (en) 1998-12-22
JP3703647B2 (ja) 2005-10-05
EE05399B1 (et) 2011-04-15
CZ100496A3 (en) 1996-09-11
AU7967494A (en) 1995-05-01
US6162812A (en) 2000-12-19
HUT75652A (en) 1997-05-28
DE69431193D1 (en) 2002-09-19
UA56984C2 (uk) 2003-06-16
NO961382D0 (no) 1996-04-03
PL185647B1 (pl) 2003-06-30
SI0722439T1 (en) 2002-10-31
US5837710A (en) 1998-11-17
EP1340744A3 (en) 2003-12-03
EP1340744A2 (en) 2003-09-03
ATE362918T1 (de) 2007-06-15
ATE222240T1 (de) 2002-08-15
CN1195737C (zh) 2005-04-06
US6271235B1 (en) 2001-08-07
AP9600844A0 (en) 1996-07-31
JPH11310573A (ja) 1999-11-09
NZ329626A (en) 1999-08-30
US6525215B2 (en) 2003-02-25
RO119363B1 (ro) 2004-08-30
HK1013650A1 (en) 1999-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU226814B1 (en) Hiv protease inhibitors based on decahydroisoquinoline-carboxamide derivatives and use thereof
EP0604182B1 (en) Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of Aids
AU700417B2 (en) Protease inhibitors
US5719287A (en) Intermediates for inhibitors of HIV protease and method of preparation thereof
EP0604183B1 (en) Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of aids
EP0604184B1 (en) Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of aids
US5578608A (en) Symmetrical diaryl and diheteroanyl cis epoxy alkanes antiviral compounds
US5508407A (en) Retroviral protease inhibitors
CZ281393A3 (en) Hiv protease inhibitor, suitable for aids treatment, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which it is comprised
US5461154A (en) Intermediate and process for making
EP0604186B1 (en) Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of aids
SA95160061B1 (ar) مثبطات بروتياز hiv (protease inhibitors)