UA49803C2 - Спосіб лікування ретровірусних інфекцій - Google Patents

Спосіб лікування ретровірусних інфекцій Download PDF

Info

Publication number
UA49803C2
UA49803C2 UA96124971A UA96124971A UA49803C2 UA 49803 C2 UA49803 C2 UA 49803C2 UA 96124971 A UA96124971 A UA 96124971A UA 96124971 A UA96124971 A UA 96124971A UA 49803 C2 UA49803 C2 UA 49803C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
amino
hydroxy
phenylmethyl
methylpropyl
propyl
Prior art date
Application number
UA96124971A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Мартін Л. Брайент
Керен Е. Поттс
Мері Смідт
Саймен П. Таккер
Original Assignee
Дж.Д. Сьорль Енд Ко
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дж.Д. Сьорль Енд Ко filed Critical Дж.Д. Сьорль Енд Ко
Publication of UA49803C2 publication Critical patent/UA49803C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/63—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Abstract

Винахід спрямовано на розробку способу лікування захворювань ссавців, викликаних ретровірусними інфекціями, зокрема ВІЛ-інфекціями. Винахід передбачає застосування комбінацій інгібіторів ретровірусних протеаз, які можуть ефективно запобігати реплікації ретровірусів in vitro або in vivo. Винахід стосується застосування інгібіторів ретровірусних протеаз в комплексі з іншими інгібіторами протеаз. Описано також комбіновану терапію із застосуванням інгібіторів ретровірусних протеаз разом з іншими противірусними агентами.

Description

Опис винаходу
Настоящее изобретение относится к способам лечения заболеваний млекопитающих, вьізванньїх 2 ретровирусньми инфекциями, например, вирусного иммунодефицита человека (ВИЧ), характеризующихся использованием комбинаций ингибиторов ретровирусной протеазь,, которье обладают зффективной способностью предотвращать репликации ретровирусов млекопитающего, подобньіїх ВИЧ, іп мімо и іп міго. В частности, настоящее изобретение относится к соединениям ингибиторов протеазьї, применяемьм в комбинированной терапийи вместе с другими соединениями ингибиторов протеазь.
В течение репликационного цикла ретровирусов продуктьі транскрипции гена глюкозаминглюкана и глюкозаминглюкана - полимера (дад апа дад - роІдепе ігапзсгіріоп ргодисів) реализуются в виде протеинов.
Протеиньі последовательно обрабатьваются протеазой (или протеиназой), кодированной посредством вируса, с целью получения вирусньїх ферментов и структурньїх протеинов сердцевинь! вируса. В большинстве случаев, протеиньі предшественников глюкозаминглюкана преобразуются в протейинь! сердцевинь! (белок сердцевинь)), а 12 протеийньіь предшественника полимера преобразуются в вирусньє ферменть, например в обратную транскриптазу и ретровирусную протеазу. Бьіло показано, что корректная ообработка протеинов предшественника с помощью ретровирусной протеиназь! необходима для получения упорядоченной структурь (сборки) инфекционньїх вирусов. Так, бьло показано, что мутации со сдвигом рамки в зоне протеазь полимерного (гена вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) предотвращают образование протеина предшественника глюкозаминоглюкана. Посредством сай - направленного мутагенеза остатка аспаргиновой кислоті в активном сайте ВИЧ протеазьй бьл также продемонстрировано предотвращение процессинга предшественника глюкозаминоглюкай
Таким образом, бьіли сделань! попьітки ингибировать вирусную репликацию путем снижения активности ретровирусньїх протеаз. с 29 Обьчно ингибирование ретровирусной протеазьь вовлекает в паталогический процесс транзицию - (3 состояние, при котором иммитируется процесс, характеризующийся открьїтостью ретровирусной протеазь воздействию миметического соединения, которое связьвает ее (обьічно обратимьм способом ) до состояния фермента, в конкуренции с протеинами глюкозаминоклюкана и глюкозаминоглюкана - полимера, с целью подавления специфического процессинга структурньїх протеинов и вьіделения ретровирусной протеазь! как о 30 таковой. МИспользуя описанньй механизм, можно успешно ингибировать репликационнье ретровируснье Га») протеазь.
Бьіло предложено несколько классов миметических соединений, в частности, для ингибирования протеаз, со например, для ингибирования ВИЧ протеазь. Такие миметические соединения включают изостерь Ф оксизтиламина, восстановленнье изостерьі амида и непептидньюе изостерь Примерами могут служить: ЕР 0 3о 346 847; ЕР 0 342 541; Корепз и др. " Каїопа! ЮОевзідп ої Реріде - Вазей Ргоївіпазе Іппірйоге в (Усовершенствованнье схемь!ї ингибиторов протеиназь! на основе пептидов )", Зсіепсе (Наука), 248, 358 (1990);
Егісвоп и др. "Оеєвідп Асіїміу, апа 2.8 А Стувіа! Бігисішге ої а Со Зуттейіс Іппіріюг Сотріехей ю НІМ -1 Ргоігеазе (Схематическая активность и 2.8 А кристаллическая структура С о преобразованная с помощью « симметрического ингибитора в ВИЧ - 1 протеазу)"» Зсіепсе (Наука), 249, 527, (1990); и 5.ТНаївгімопозв, З 40 "Віусішге - Вазей Оезідп ої Моп - Реріїде НІМ Ргоїеазе Іппіріюг: (Структурная схема ингибитора непептидной с ВИЧ протеазь)у", З5Іпй Аппиа! Вийаіюо Меадісіпаї Спетівігу Мееїйіпо, Зіаїе Опімегейу ої Мем/ - Хогк аї Вийаїйо,
Із» МУ, Мау 22-25, 1994 (35 - е Годовое совещание по химико -медицинским проблемам, Государственньй
Университет, Буффало, штат Нью - Йорк, 22-25 мая 1994Гг.).
Проблемой для ингибиторов ретровирусной протеиназьі, например ингибиторов ВИЧ протеиназь, является 45 образованиє штаммов вируса, устойчивьх к воздействию ингибитора. Например, в соответствии с Мегск апа шк Сов, ингибитор Г. - 735,524 ВИЧ протеазьї оказьівает зффективное воздействие на ВИЧ инфекции в организме (се) человека, в то время как ВИЧ устойчивье штаммь! ЇЇ - 735, 524 продолжают прогрессировать в организме больньх. (Уу/аїдпоіІ2, Те Умаї! Зігееї доцигпаІ, 25 февраля 1994г., стр. ВЗ; Сопага и др., Майшге, 374:569-571 бо (1995)). Другие примерь! могут бьіть обнаружень! в работах Масса и др., Ргос. Майї). Асад.Зсі. ОБА 91:4096-4100 ав! 20 (1994); Но и др., у. Мігої. 68:2016-2020 (1994);и Загаапа и др., Віоспет. 33:2004-2010 (1994).
Настоящее изобретение направлено на создание способа лечения заболеваний, вьізьіваемьх с» ретровирусньми инфекциями млекопитающих, например вирусом иммунодифицита человека (ВИЧ), путем использования комбинаций ингибиторов ретровирусной протеазьі, которне характеризуются способностью предотвращать репликацию іп мімо или іп міго Данное изобретение, в частности, относится к соединениям ингибиторов протеазьі, применяємьм в комбинированной терапий вместе с другими соединениями ингибиторов
ГФ) протеазьь Кроме того, данная комбинация может бьть также использована в сочетаниий с другими антивирусньіми агентами о Ретровирусная протеаза представляет собой фермент, имеющий решающее значение для ретровирусного репликационного процесса Размножение ретровирусов, подобньїх ВИЧ, может блокироваться, благодаря 60 появлению возможности воздействия на вирус со стороньії ингибитора ретровирусной протеазь! Однако, при длительной открьїтости ретровирусов воздействию ингибитора протеазьь процесс отбора вариантньх ретровирусов может получить такое развитие, которое приведет к появлению нового доминирующего штамма ретровируса, устойчивого к ингибитору протеазьь Новьій доминирующий штамм ретровируса может создать такую протеазу, которая больше не сможет бьіть ингибирована, или, что встречается чаще, в недостаточной бо степени сможет вьіть ингибирована ингибитором протеазьї Она получит возможность свободного размножения даже в присутствийи ингибитора протеазь до тех пор, пока концентрация ингибитора в значительной степени не возрастет Настоящее изобретение предлагает способ предотвращения возникновения ретровирусньх штаммов, обладающих устойчивостью к воздействию ингибитора ретровирусной протеазь
Данньїйй способ предназначен для лечения млекопитающих, например человека, обезьяньі, кошачьих и т п путем назначения зффективного количества, по меньшей мере, двух ингибиторов ретровирусной протеазь
Лечение может бьть осуществлено совместньм воздействием, по крайней мере, двух ингибиторов ретровирусной протеазь, то есть таким назначением двух или более ингибиторов ретровирусной протеазь, при котором зффективное количество, по крайней мере, двух ингибиторов поступает в организм млекопитающего за 7/0 один прием В качестве альтернативного варианта, лечение может бьть совершено непрерьівньм или попеременньм воздействием, по крайней мере, двух ингибиторов ретровирусной протеазьі, то есть, таким назначением двух или более ингибиторов ретровирусной протеазь,, при котором зффективное количество только одного ингибитора поступает в организм млекопитающего за один прием. При надлежащем отборе ингибиторов ретровирусной протеазь! данньй способ может обеспечить зффективньй контроль размножения /5 ретровирусов даже в присутствий штаммов, устойчивьїх к воздействию любого из данньїх ингибиторов.
Ингибиторь! ретровирусной протеазьі отбираются, в зависимости от профиля (характеристик) устойчивьмх штаммов ретровирусов, которьй проявляется іп мімо или іп мійго под воздействием ингибитора на размножающуюся культуру ретровирусов. Ингибиторь! ретровирусной протеазьії отбираются на отсутствие перекрестной устойчивости, по меньшей мере, одним ретровирусньмм устойчивьім штаммом. Ретровирусньй го штамм считается перекрестно-устойчивьім воздействию двух ингибиторов протеиназьі в том случає, если ретровирусньій штамм устойчив воздействию обоих ингибиторов. В том случає, когда перекрестная устойчивость может допускаться лишь с оговорками, есть основания для утверждения, что никакой перекрестной устойчивости не существует между отобранньми ингибиторами ретровирусной протеазь,, если они рассматриваются как одна группа. Таким образом, вариант (или штамм-мутант) ретровируса, которьй с об Возникает в результате воздействия первичного ингибитора ретровирусной протеазь, может все еще ингибироваться (подавляться) вторичньім ингибитором ретровирусноц протеазьі, а также вариант, которьй і) возникаєт в результате воздействия как первичного, так и вторичного ингибиторов ретровирусной протеазь, может все еще ингибироваться третичньм ингибитором ретровирусной протеазьь или четвертичньі!м ингибитором ретровирусной протеазь и так далее. со зо Проводится сравнение профилей (характеристик) перекрестной устойчивости различньїх ингибиторов протеаз и отбираются соединения для комбинированной терапии, которье, предпочтительно, характеризуются о незначительной перекрестной устойчивостью или лишень ее вообще. Фенотип устойчивости к воздействию /ду лекарственного средства может бьіть подразделен на следующие уровни: отсутствие какой бьі-то ни бьло устойчивости, низкий уровень устойчивости (менее 10 сдвигов складок в ЕСво или ЕСод), средний уровень ме) устойчивости (примерно от 10 до 100 сдвигов складок в ЕСво или ЕСор) или вьісокий уровень устойчивости «Е (более 100 сдвигов складок в ЕСво или ЕСорд). Существует предположение, что устойчивость к лекарственньім средствам должна бьть связана со снижением степени воздействия на вирусньй груз пациента, когда достигаемая іп мімо концентрация ингибитора имеет пониженную способность подавления протеазь, то есть когда речь идет об устойчивом вирусе. Таким образом, найболее предпочтительньми комбинациями « Мнгибиторов протеазьі могут считаться такие, которье проявляют минимум профилей (характеристик) в с перекрестной устойчивости (то есть, предпочтительно, не более, чем для среднего уровня устойчивости; более предпочтительно - не более, чем для низкого уровня устойчивости; и найболее предпочтительньм вариантом ;» является полное отсутствие устойчивости), и максимум присущей им способности воздействовать на вирусь "дикого типа" и/или вирусь, отобраннье в качестве устойчивьх Кк другим ингибиторам. Например, предпочтительнье соединения, вьібраннье для использования в сочетаний с первичньім соединением должнь ї5» бьіть предпочтительньїми с точки зрения их зффективного воздействия на штаммь! вируса, которне занимают промежуточньй уровень, более предпочтительньми - вьісокий уровень устойчивости к первичному соединению. і, Фармакологические и токсикологические характеристики каждого ингибитора и каждой комбинации также о являются факторами, принимаемьми во внимание при отборе ингибиторов для комбинированной терапии.
Более предпочтительньмм вариантом вьібора ингибиторов ретровирусной протеазьі является ситуация, о когда, по крайней мере, один вирусньій штамм, устойчивьїй к первичному ингибитору ретровирусной протеазь, сю и, по крайней мере, один вирусньій штамм, устойчивьій ко вторичному ингибитору ретровирусной протеазь, имеют различнье аминокислотнье замещения в пептидной последовательности протеазь), которье воздействуют на одну и ту же зону сайта связьівания субстрата протеазьі и способствуют устойчивости к
Б Мнгибитору. Таким образом, число возможньїх замещений аминокислот, которне могут произойти в одном и том же сайте в протеазе, ограничено. В зтой связи следует подчеркнуть, что сайт имеет решающее значение для (Ф, определения активности, зффективности и/или стабильности фермента. ка Зтот момент бьіл исследован в отношений ингибиторов ВИЧ протеазьі примеров 1 и 2. Ретровирусная устойчивость комбинации по примеру 1 является результатом сайт - мутации в аминокислоте 88 ВИЧ протеазь бо (замещение аспаргина 88 с помощью аспаргиновой кислоть! 88). Ретровирусная устойчивость к соединению по примеру 2 также является результатом сайт - мутации аминокислоть! 88 ВИЧ протеазь! (замещение аспаргина 88 с помощью серина 88). Как известно, некоторне замещения в аминокислоте 88 вьізьівают потерю активности фермента (І оеб и др. Каидге(Природа)340:387-400 (1989)). Таким образом, назначение обоих ингибиторов ВИЧ протеазь! по примерам 1 и 2 значительно снижает правдоподобие продолжающегося возникновения устойчивьх в5 шШтаммов вирусов с перекрестной устойчивостью к воздействию обоих ингибиторов. Через б недель после начала лечения устойчивости к обоим ингибиторам, использованньм в комбинации, не бьіло обнаружено, по сравнению с фактом возникновения фенотипа, устойчивого к одиночному ингибитору, в рамках того же самого временного периода. В дополнение к сайт - мутациям, которне оказьвают влияние на активность фермента, в том же самом варианте могут появляться другие сайт - мутации, которье не оказьівают существенного влияния на активность и/или устойчивость фермента.
В качестве альтернативного, более предпочтительного, примера осуществления может служить следующее: ингибиторь! ретровирусной протеазьі отбираются в том случаеє, когда, по крайней мере, один вирусньій штамм, устойчивьїй к первичному ингибитору ретровирусной протеазьї, имеет возросшую чувствительность к так назьіваемому вторичному ингибитору протеазь, или 7/0 Когда, по крайней мере, один вирусньій штамм, устойчивьй к вторичному ингибитору ретровирусной протеазь, имеет возросшую чувствительность к так назьіваемому первичному ингибитору протеазь.
Перечень характерньїх ингибиторов ретровирусной протеазьі, которье пригодньі для использования при осуществлении настоящего изобретения, включаєет, но не ограничиваєется представленньми рамками, следующие ингибиторь! протеазьі, раскрьтье и описаннье в патентньїх заявках, находящихся в процессе 7/5 одновременного рассмотрения, и совладельцами которьїх являются США:
МІМ.08/152,934(подана 15 ноября 1993Г.), 08/253,53Цподана З июня 1994Гг.), 08/109,787 (подана 20 августа 1993Г.), 08/110,911 (подана 24 августа 1993Г.), 08/110,913 (подана 24 августа 1993Г.), 08/110,912 (подана 24 августа 1993Г.), 08/204,827 (подана 2 марта 1994Гг.), 07/886,556 (подана 20 мая 1992Гг.), 07/886,663 (подана 20 мая 1992г.), сч 07/886,531 (подана 20 мая 1992Гг.), 08/148,817 (подана 8 ноября 1993Г.), (8) 08/886,700 (подана 21 мая 1992г.) и 07/998,187 (подана 29 декабря 1992г.), а также патентнье заявки РСТ ММ. РСТ/О5З93/10552 (подана 29 октября 1993г.), РСТ/І5З93/10460 (подана 29 октября 1993г.), РСТ/О593/10461 (подана 29 октября 1993Г.). с зо Каждьй из них включен в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. Перечень дополнительньїх ингибиторов ретровирусной протеазьі, пригодньїх для использования при о осуществлении настоящего способа, включает, но не ограничивается представленньіми рамками, следующие со ингибиторь! протеазьі, раскрьітье и описаннье в патенте 5 5,157,041; в европейском патенте ЕР 346,847; патентной заявке ОЗ Мо.07/883,825 (подана 15 мая 1992 г.); УМО 93/09096; Теї. І ей. 35:673-676 (1994); Ргос. (22)
Май. Асад. Зеї. ОБА, 91:4096-4100 (1994); М.М. ММопад и др., Віорпапт апа Огид Оізров. 15:535-544 (1994); М.І. «Е
МУеві апа О.Р. Раїпієе, Тгтепдвз РНагптасої. Зеї. 1667-75 (1995); 5. Тгаівгімопдз, " НІМ.Ргоїеазе Іппіріоге (Ингибиторьї ВИЧ протеазь)", Апп. Керогіз Мед.Спет., том 29, статья 14, стр. 133-144 (1994) (Асадетіс Ргезз,
У. ВгівіоІ,Е4.). Каждьй из них включен в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. «
Не прибегая к дальнейшему подробному описанию, вьіражаєм уверенность в том, что любой специалист, па) с обладающий достаточной квалификацией и уровнем знаний в рассматриваемой области, сможет, используя приведенное вьіше описание, применить настоящее изобретение в полном его обьеме. Предлагая следующие ;» предпочтительнье специфические примерь! осуществления, авторьі не намереваются дать исчерпьівающее описание всех возможньх комбинаций соединений, а только лишь показьвают примерь комбинаций лекарственньїх средств, которье они имеют полное основание считать зффективньми. Подобнье испьтания ї5» зтих и других ингибиторов протеазьь с использованием устойчивьїх вирусньїх изолятов, число которьїх не ограничиваєется приведенньім ниже перечнем, может помочь идентифицировать соответствующие комбинации і, лекарственньїх средств. Позтому приведеннье ниже предпочтительнье специфические примерь о осуществления должнь! восприниматься как найболее вніразительнье и иллюстративньсе, но ни в коей мере не о 50 ограничивающие и не замькающие на себе смьсл настоящего изобретения. сю
Ф) іме) бо б5
ПРИМЕР 1 то ОЇ о ї Ї
Е МН "В о Е - он Н ва- (6) 5-ПКчКУ, 2571-М1-І3-((1,1-диметилотил)амино|карбонилі)2-метилпропил)амино)|-2-гидрокси-1--(фенилметил)пропиліц-2-((2- кинолинилкарбонил)амино|-бутанедиамид может бьіть приготовлен в соответствии со способами, раскрьітьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, совладельцем которьїх является
США ММ.08/152,934 (подана 15 ноября 1993г.) и 08/156,498 (подана 23 ноября 1993г.) Обе заявки США с включень в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. о
ПРИМЕР 2 со о с : Її Ф си, МС
Н «
Н Е Н Н о м он ші с ; з» (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -терт-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(терт-бутилкарбамоил))амино- 4-фенил-2-бутанол может бьть приготовлен в соответствии со способами, раскрьтьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, совладельцем которьїх является США 1» 75 ММ.08/109,787 (подана 20 августа 1993г.), дело патентного поверенного М 2766/1 - заявка подана совместно с настоящей заявкой-, а также заявка М 08/156,498 (подана 23 ноября 1993г.).Все три заявки включень в описание (Се) изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. (ее) ПРИМЕР 3 о 50 сю» (в; » Х р; ях іме) 60 - Н он . ОСН (2К-гидрокси-3-|(4-метоксифенил)сульфонилі)|(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропилі бо карбаминовой кислотьї 5Х-пиримидилметиловьй зфир может бьть приготовлен в соответствии со способами,
раскрьтьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, совладельцем которьїх является США ММ.08/110,911 (подана 24 августа 1993г.) и 08/156,498 (подана 23 ноября 1993г.).Обе заявки США включень в описание изобретения путем ссьІлки на соответствующий источник во всей его Полноте.
ПРИМЕР 4 4, - , к
І
1
О О0 і
В К ОК
5 Осн
ЬІ-пехе,25711-(2-гидрокси-3-М 1-(2-метилпропил)-М -(4-метоксифенилсульфонил)амино)|-1--фенилметил)пропил|-2-метил-3--«метилсульфонил)пропанамид может сч бьїть приготовлен в соответствии со способамим, раскрьтьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, совладельцем которьїх является США ММ.08/110,913 (подана24 августа (о) 1993г.) и 08/156,498 (подана 23 ноября 1993г.).Обе заявки США включень в описание изобретения путем ссьІлки на соответствующий источник во всей его полноте.
ПРИМЕР 5 о о с (22) лай
Де Н «І че С.
В МН о ов Га; - с ;» ве М-(2(К)-Гидрокси-1(5)-инданил)-24(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4-(3-пиридилметил)-2(5)-М'-(Ї-бутилкарб (Се) оксамидо)-пиперазинил))-пентанеамид (1-735,524) может бьть приготовлен в соответствии со способами, раскрьітьми в патентной заявке США М.07/883,825 (подана 15 мая 1992г.), МО 93/09096,ТейІ ен.35:673-676 со (1994) и Ргос.Май. Асайд.5сі. США, 91:4096-4100 (1994). Включеньі в описание изобретения путем ссьілки на ав! 250 соответствующий источник во всей его полноте. сю»
Ф) іме) 60 б5
ПРИМЕР 5
Н и М
ОЇ ж хх мн АК і х МН
В х Н 4 он
Н - : Н (8;
М-терт-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-фенил-3(5)-Ї(Н-(2-квинолилкарбонил)-І -аспарагинил|Іамино|бутилі|- (4ак,ваз)-изоквинолин-3(5)-карбоксамид (Ко 31-8959) может бьіть приготовлен в соответствии со способами, раскрьітьмми в патенте США 5,157,041, включенньім в описание путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. с
ПРИМЕР 7 (о) со о с (22) » ОО у ч
М
МН ві в) ї : ОН Н « дхкі « - с 9) . "» 5-1 2571)-М1-І3-(ЦД1,1-диметилотил)амино|карбонил)(З-метилбутил)амино|-2-гидрокси-1-(фенилметил )пропил)|-2-(2-квинолинилкарбонил)амино|-бутанедиамид может бьть приготовлен в соответствии со способами, раскрьтьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, т» совладельцем которьїх является США ММ.08/152,934(подана 15 ноября 1993г.) и 08/156,498 (подана 23 ноября со 1993г.).Обе заявки США включень в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. (ее) о 50 сю»
Ф) іме) 60 б5
ПРИМЕР 8 і)
М Бк 18 М о: Н
Ов он
Ни- о)
М-І3-(М2-(М1-(1,1-диметилотил)аминосульфонилі|-М2 -(-2-метилпропил)амино)|-2К-гидрокси-15-(фенилметил)пропилІ-25-(2-квинолинилкарбонил)амино|бутанедиамид может бьть приготовлен в соответствии со способамим, раскрьтьми в находящихся в процессе одновременного рассмотрения патентньїх заявках, совладельцем которьїх является США,: в патентной заявке с
РСТ/ЮБО3/10552 (подана 29 октября 1993г.) и в патентной заявке США 08/156,498 (подана 23 ноября о 1993г.).Обе заявки включень! в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте.
ПРИМЕР 9 со о с (22) « о он й о сн ЖО ве
І! М М М с вришшаагаванва і
СВ о) 7 Он о 2 с ;» (25,3К,45,55)-2,5-Бис-|(М-ІМ-(М-метил-М-(2-пиридинилметил)амино|карбонил|валинилІамино-3,4-дигидрокси-1 - «б-дифенилгексан (А-77003) может бьть приготовлен в соответствии с методами, раскрьтьми в научном о журнале уУ.Мей4.Спет. 36:320-330 (1993).Включен в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источникво всей его полноте. у ПРИМЕР 10 («в) сю»
Ф) о Ї аа » АХ ки
М ь «кх
М св о 7 он | у; (ві б5
(25535,55)-5-(М-(М-(М-метил-М-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІамино)карбонил|валинилІамино1|-2-ІМ-(5-тиаз олил)мегоксикарбонил|амино)|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексан(А-84538,АВТ-538) может бьть оприготовлен в соответствии с методами, раскрьтьми в патентной заявке РСТ М. УУО 94/14436 (подана 16 декабря 1993г.).Включено в описание путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте.
ПРИМЕР 11 о о о ве: " - то М
Н он
МН; (2К-гидрокси-3-І(4-аминофенил)сульфонил)(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропил| карбаминовой кислоть! З5-тетрагидрофураниловьй зфир (МХ-478) может бьть приготовлен в соответствии со способами, раскрьітьми в патентной заявке РСТ М. УМО 94/05639 (подана 7 сентября 1993г.). Включено в описание изобретения путем ссьілки на соответствующий источник во всей его полноте. сч
ПРИМЕР 12 о со о с 5 Н б бу й о х « но Н
М
Н ВІ Н «
ОН - - Н и?
М-терт-Бутилдекагидро-2-(2(К)-гидрокси-4-(фенилтио)-3(5)-Ц(М-(2-метил-З-гидроксифенил)карбонил|амино|бу їх тиліІ- (4аК,ваз)-изоквинолин-3(5)-карбоксамид (АС 1343, А0-1450) может бьіть приготовлен в соответствии со способами, раскрьітьми в Віоодг.я: МеЯа.Спет.І еї.5: 715-720, 5:721-726 5 5:727-732 (1995),каждьй из которьйх і, включен в описание путем ссьіІлки на соответствующий источник во всей его полноте. В частности, НОВТ
Го! активньій зфир З-гидрокси-2-метилбензойной кислоть! (Віоодг. 5 Меа. Сет. ей 5:727-732 (1995)) может 5ор сопрягаться с М-терт-Бутил о декагидро-2-(2(К)-гидрокси-4-(фенилтио)-3(5)-аминобутил)-(4ак,ваз)-изоквинолин-3(5)-карбоксамидом (Віоодг.8 сю Меда.Спет.! еї.5:715-720 (1995)).
Ф) іме) 60 б5
ПРИМЕР 13 но, (в) гі
Ши. р 6)
НМ МН
І4К-(4о,5оо6р, р 31-1,3-бис((З-аминофенил)метилігексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-одиночньй (ОМР-450,ХМ-412) может бьїть приготовлен в соответствий с методами, раскрьітьми в патентной заявке РСТ М.
МО 93/07128. Включено в описание путем ссьіІлки на соответствующий источник во всей его полноте. В частности, З-нитрофенилметиловьій галид, например, З-нитрофенилметилхлорид или бромид вступает в реакцию с окси-защищенньм производньм
І4К-(40,5оо6р, 7 В)|-гексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-одиночньмМ с Га последующим снятием защить! оксигрупп (см. МУО 93/07128) и восстановлением нитрогрупп до аминогрупп. о
Такое восстановление может бьіть осуществлено с помощью действий, хорошо известньїх специалистам в зтой области.
ПРИМЕР 14 со «в) с
Н о о, Ф
І Ми
М «Ж е стттеео
ЕЕ у; - с Приготовление ; » М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропиліІ-25-|(пир ролидин-1-ил)іацетилламинол-3,3-диметилбутанамида.
Часть А: Приготовление 1,3-бензодиоксол-5-сульфонил хлорида. о їз К раствору 4,25г безводного М,М-диметилформамида при температуре 0"С в атмосфере азота бьло добавлено 7,84г хлористого сульфурила, на оснований чего формировали твердье частиць! продукта. После 15 (се) - минутного перемешивания бьіло добавлено 6,45г 1,3-бензодиоксола и смесь нагревали при 100"С в течение 2 со часов. Реакцию проводили при охлаждениий ледяной водой, зкстракцию вьіполняли с помощью хлористого метилена, осушали посредством сульфата магния, фильтровали и доводили до определенной концентрации, (ав) 50 отобь получить 7,32г сірого материала в виде смазочного мазута. Последний подвергали хроматографической с» обработке на силикагеле с использованием 2095 хлористого метилена/гексана для получения 1,9г (1,3-бензодиоксол-5-ил) сульфонил хлорида (хлористого сульфонила).
Существует альтернативньй способ, при котором в бутьіль с кругльм дном обьемом 22л, снабженную механической мешалкой, охлаждающим конденсатором, нагревательньм устройством и вьравнивающей 59 давление капельной воронкой, вливали сложную смесь (ОМЕ) триокисида серні (серного ангидрида) (2778Г; 18,1
ГФ) молей). Затем добавляли дихлорзтан (4л) и начинали перемешивание. 1,3 - Бензодиоксол (1905г; 15,6 молей) т вводили в течение пяти минут через капельную воронку. Температуру поднимали до 757"С и поддерживали на таком уровне в течение 22 часов (Измерительное устройство (ММК - ядерньій магнитньїй резонанс) показало, что реакция завершилась через 9 часов). Продукть! реакции охлаждали до 26"С, и бьіл добавлен оксалилхлорид бо (2290г; 18,1 моля) с такой интенсивностью, чтобьі поддержать температуру ниже 40"С (в течение 1,5 часа).
Смесь подогревали до 67"С в течение 5 часов с последующим охлаждение до 16"С на ледяной бане. Реакция бьла приостановлена с помощью водьі (5л) с интенсивностью, обеспечивающей поддержание температурь ниже 20"С. После того, как добавление водь! било прекращено, смесь перемешивали в течение 10 минут. Слойи бьіли разделеньі, и органический слой снова дваждьі промьіли водой (5л). Органический слой вьісушивали с бо помощью сульфата магния (500г) и отфильтровьівали, с целью отделения осушающего агента. Растворитель бьіл удален под вакуумом при 50"С. Полученной теплой жидкости дали возможность остьіть, и в зтот период началось формирование твердьх частиц. По истечениий часа, твердье частиць! бьли промьїть! гексаном (400мл), отфильтрованьй и вьісушень, с целью получения требуемого хлористого сульфонила (2823Г).
Промьвочную гексановую жидкость концентрировали, и полученнье твердье частиць промьли гексаном (400мл) для получения дополнительного количества хлористого сульфонила (464г). Общее количество полученного продукта составило 3287г. (95,5905 - на основе 1,3-бензодиоксола).
Часть Б. Приготовление 25-|ІБис(фенилметил)амино|-З-фенилпропанола.
Метод 1: 25-І(Бис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанол из рІВАГ. восстановления 70 М,М-бис(фениметил)-І -Фенилаланин фенилметилового зфира.
Зтап 1: Раствор І -фенилаламина (50,0г; 0,302мол.), гидроокись натрия (24,2г; 0,605мол.) и карбонат калия (83,6г; 0,6О05мол.) в воде (500мл) нагревали до 977С. Затем медленно добавляли бромистьй бензил (108,5мл; 0,бо5мол.), (период времени,в течение которого добавлялся бромистьй бензил - 25мин.).Смесь перемешивали при 977"С в атмосфере азота в течение 30 минут. Раствор охлаждали до комнатной температурь и 7/5 Зкстрагировали с помощью толуола (2х250мл). Комбинированнье органические слой промьмшвали водой или рассолом, вьісушивали посредством сульфата магния, фильтровали и концентрировали до состояния нефти (мазута).. М,М-бис(фениметил)-І -Фенилаланин фенилметиловьй зфир может очищаться методом колоночной хроматографии (силикагель, 1595 зтилацетат/гексан).Обьчно продукт получается достаточно чисть!м,чтобь бьїть использованньім на следующем зтапе без дополнительной очистки. ЕІМ5: пт/ 434 (М-1).
Зтап 2. Бензилированньй фенилаланин фенилметиловьй зфир (0,302мМол.), полученньій в результате реакции первого зтапа, бьіл растворен в толуоле (750мл) и охлажден до -557С. 1,5 М-раствор ОІВАГа в толуоле (443,9 мл;0,666 мол.) добавляли с такой интенсивностью, чтобьї поддержать диапазон температурь! в пределах от -557 до -50"С (период времени, израсходованньій на процесс добавления - 1 час). Смесь перемешивали в течение 20 минут в атмосфере азота, а затем гасили реакцию при -55"С путем медленного добавления сч об Метанола (З7мл). Холодньй раствор затем бьіл влит в холодньй (57С) раствор 1,5 М НС (1,вл). Вьіпавшие в осадок твердье частицьї (приблизительно 138г) бьіли отфильтрованьі и промьїтьї толуолом. Твердьій продукт і) бьіл взвешен в смеси толуола (400мл) и водь! (100мл). Смесь охлаждали до 57С и обрабатьвали 2,5 М Маон (186бмл), а затем перемешивали при комнатной температуре до растворения твердьїх частиц. Слой толуола бьл отделен от водной фазь и промьт водой или расолом, вьісушен посредством сульфата магния, отфильтровани (се зо Концентрирован до обьема 75мл (89г). Зтилацетат (25мл) и гексан (25мл) бьіли добавлень к остатку, после чего начал кристаллизоваться требуемь!й спиртопродукт. По истечениий 30 минут бьіли добавленьї дополнительнье о 5Омл гексана, с целью активизации поойесса дальнейшей кристализации. со
Полученнье твердье частиць!ї бьіли отфильтрованьі и промьїть! 5О0мл гексана для получения 34,9г первой порции продукта. Вторая порция продукта (5,бг) бьіила вьіделена путем повторной фильтрации маточного Ме зв раствора. Обе порции бьіли обьєединень! и рекристаллизованьї из зтилацетата (2Омл) и гексана (ЗОмл), чтобь «Е получить 40г 25-ІБис(фенил-метил)амино|-3-фенилпропанола, 4095 получено из І -фенилаланина. Аналогичньй расчет вбіполнен для С2ЗН25БОМ: С, 83,34; Н, 7,60; М, 4,23 Получено: С, 83,43; Н, 7,59; М, 4,22.
Метод 2: Приготовление рЗ-2-(Бис(фенилметил)амино|бензин-пропанола из / М,.М-Дибензиляции
Ї-Фенилаланинола. І-фенилаланинол (176,6бг; 1,168мол.) добавляли к перемешиваемому раствору карбоната « 470 Ккалия (484,6бг; З,50бмол.) в 71Омл водьї. Смесь нагревали до 6573 в атмосфере азота. Раствор бромистого шщ с бензила (400г; 2,33бмол.) в ЗА зтаноле (З0бмл) добавляли с интенсивностью, которая обеспечивала й поддержание температурь! в пределах 60-68"С. Двухфазньйй раствор перемешивали при 65"С в течение 55мин., "» а затем давали ему возможность остьіть до 10"С при интенсивном перемешиваний. Маслянистьій продукт отверждался в виде мелких гранул. Продукт разбавляли 2,0л водопроводной водь! и перемешивали в течение 5 Минут для растворения неорганики с помощью продукта. Продукт вьіделяли путем фильтрации при пониженном ї» давлении и промьшвали водой до тех пор, пока рН не достигал 7. Полученньй сьірой продукт подвергали рекристаллизации из 1,1л зтилацетатаУ/гептана (1:10). Продукт вьіделяли путем фильтрации ( при -87С), о промьівали 1,бл охлажденного (-107"С) зтилацетата/гептана (1:10) и вьісушивали воздухом, с целью получения о З39г (8895 вьіхода) 25-І(Бис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанола, точка плавления Мр-71,5-73,0760.
Часть С: Приготовление 25-|ІБис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанальдегида. о Метод 1: 25-І(Бис(фенилметил)амино)|-3-фенилпропанол (200г; О0,604мол.)растворяли в тризтиламине (З0Омл; се» 2,15мол.). Смесь охлаждали до 12"С и добавляли трехокись серь/пиридиновая смесь (380г; 2,39мол.) в диметилсульфоксиде (ОМ5О) (1,бл) с интенсивностью, обеспечивающей поддержание температурь! в пределах 8-17"С. Раствор перемешивали при температуре окружающей средь в атмосфере азота в течение 1,5 часа. Реактивную смесь охлаждали ледяной водой и гасили реакцию 1,бл холодной водь (10-157С) более 45 минут.
Полученньй раствор зкстрагировали с помощью зтилацетата (2,0л), промьівали 595 лимонной кислотой (2,0л) и іФ) рассолом (2,2л), внісушивали посредством МазО) (280г) и отфильтровьівали. Растворитель удаляли іп масцо и ко вьсушивали в вакууме с получением 198,8г 25-І|(Бис(фенилметил)амино|-З-фенилпропанальдегида в виде бледно-желтой маслянистой жидкости (99,995). Полученньй сьрой продукт бьл достаточно чистьм для бо использования в следующем зтапе без дополнительной очистки.
Метод 2: Раствор оксалилхлорида (8,4мл; 0,09бмол.) в дихлорометане (240мл) охлаждали до -747С. Затем медленно добавляли раствор диметилсульфоксида (12,Омл; 0,155мол.) в дихлорометане (50мл). Интенсивность процесса добавления вьібирали таким образом, чтобь! поддержать температуру - 74"С (время добавления - 125 часа) Смесь оперемешивали в течение 5 минут с последующим добавлением раствора ве 23-ІБис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанола (0,74мол.) в 100мл дихлорометана (время добавления - 20 минут, температура - от -757С до -68"С). Раствор перемешивали при -78"С в течение 35 минут в атмосфере азота. Затем в течение более 10 минут добавляли тризтиламин (41,2мл; 0,295мол.) (при температуре от -787С до -68"С), при зтом вьіпадала в осадок соль аммония. Холодную смесь перемешивали в течение 30 минут, а затем добавляли воду (255мл.). Слой дихлорометана вьіделяли из водной фазьї и промьівали водой, рассолом, Вьісушивали в сульфате магния, фильтровали и концентрировали. Осадок разбавляли зтилацетатом и гексаном, а затем фильтровали, с целью дальнейшего извлечения соли аммония. Фильтрат концентрировали для получения 25-ІБис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанальдегида. Альдегид передавали на следующий зтап обработки без дополнительной очистки.
Метод 3. К смеси из 1,0г (З, Оммол.) 25-І(Бис(фенилметил)амино|-3З-фенилпропанол, 0,531г (4,5З3ммол.) 7/0 М-метилморфолина, 2,27г молекулярньх сит (4А) и 9,1мл ацетонитрила добавляли 5Змг (0,15ммол.) перутената тетрапропиламмония (ТКАР).Смесь перемешивали в течение 40 минут при комнатной температуре и концентрировали при пониженном давлении. Осадок взвешивали в 15мл зтилацетата, фильтровали Через фильтровальньй злемент силикагеля. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, с целью получения продукта, содержащего, приблизительно, 5095 25-ІБис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанальдегида /5 В виде бледно-желтого маслянистого вещества.
Метод 4. К раствору 1,0г (3,02ммол.) 25-І(Бис(фенилметил)амино|-З-фенилпропанола в 9Омл толуола добавили 4,6бО9мг (0,0Зммол.)2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси, свободного радикала (ТЕМРО), 0,32г (3,11мол.) бромистого натрия, 9,Омл зтилацетата и 1,5мл водьі. Смесь охлаждали до 0"С и в течение 25 минут с лишним медленно добавляли 2,87мл водного раствора 595 хозяйственной хлорной извести, содержащей 0,735г (8В,7оммол.) бикарбоната натрия и 8,53мл водьі. Смесь перемешивали при 0"С в течение 60 минут. Вьіполняли еще два дополнительньїх добавления хлорной извести (каждое по 1,44мл) с последующим перемешиванием в течение 1Омин. Водньій слой бьіл дваждь! зкстрагирован 20мл зтилацетата. Комбинированньій органический слой бьіл промьт 4,О0мл раствора, содержащего 25мг йодистого калия и водьі (4,О0мл), 2о0мл 1095 водного раствора тиосульфата натрия, а затем раствором рассола. Органический раствор бьл вьсушен посредством с 2г5 бульфата магния, отфильтрован и концентрирован при пониженном давлении, с целью получения 1,34г сірого маслянистого продукта, содержащего небольшое количество требуемого альдегида продукта - і) 25-І(Бис(фенилметил)амино!|-3- фенилпропанальдегида.
Часть 02: Приготовление М,М-дибензил-3(5)-амино-1,2-(5)-зпокси-4-фенилбутана.
Метод 1: Раствор 25-ІБис(фенилметил)амино|-3-фенилпропанальдегида (191,7г; 0,58мол.) и є
Зо Хлоройодометана (56,4мл; 0,77мол.) в тетрагидрофуране (1,8л) бьіл охлажден до температурь! от -30"С до -
З35"С в реакторе из нержавеющей стали в атмосфере азота. Затем бьіл добавлен раствор п-бутиллития в о гексане (1,6М, Збб5мл, 0,58мол.) с интенсивностью, обеспечивающей поддержание температурьі ниже -2576. со
После зтой процедурьі смесь перемешивали при температуре от -35"С до -35"С в течение 10 минут.
Дальнейшие добавления реагентов осуществляли следующим образом: Ме (17 Осуществляли дополнительную добавку хлоройодометана (17мл) с последующей добавкой «Е п-бутиллитиума (110мл) при температуре ниже -257"С. После добавок раствор перемешивали при температуре от -307С до -35"С в течение 10 минут. Зто повторяли еще раз. (2) Осуществляли дополнительную добавку хлоройодометана (8,5мл;0,11мол.) с последующей добавкой п-бутиллитиума (55мл; 0,088мол.) при температуре ниже -25"С. После добавок раствор перемешивали при « температуре от -307С до -35"С в течение 10 минут. 9то повторяли 5 раз. з с (3) Осуществляли дополнительную добавку хлоройодометана (8,5мл; 0,11мол.) с последующей добавкой п-бутиллитиума (З37мл; 0,059мол.) при температуре ниже -25"С. После добавок раствор перемешивали при ;» температуре от -30"С до -35С в течение 10 минут. Зто повторяли еще раз. Наружное охлаждение приостанавливали и смесь нагревали до комнатной температурьі в течение промежутка времени от 4 до 16 часов, до тех пор, пока ТІ-С (результать токослойной хроматографии) (силикагель, 2095 зтилацетата/гексана) не їх показьівали завершение реакции. Реактивная смесь бьіла охлаждена до 107С и погашена 1452г 1695 раствора хлористого аммония при поддержании температурьі ниже 23"С. Смесь перемешивали в течение 10 минут и ік органический слой отделяли от водного. Водная фаза бьіла зкстрагирована зтилацетатом (2х500мл) Слой о зтилацетата бьіл обьединен со слоем тетрагидрофурана. Комбинированньй раствор бьіл вьісушен с помощью 5р бульфата магния (220г), отфильтрован и концентрирован іп масио. Коричневьй маслянистьй осадок бьл о вьісушен при 70"С іп масо ( 0,8бар.) в течение 1 часа, в результате чего бьіло получено 222,8г сьірого сю продукта. Зтот сьірой продукт использовали непосредственно для проведения следующего зтапа процесса без дополнительной очистки.
Метод 2: Раствор сьірого альдегида (0,074мол.) и хлоройодометана (7,Омл; 0,09бмол.) в тетрагидрофуране дво (285мл) охлаждали до -78"С ватмосфере азота. 1,6М раствор п-бутиллитиума в гексане (25мл; 0,04Омол.) бьіл добавлен с интенсивностью, обеспечивающей поддержание температурь! в районе 757"С. После осуществления (Ф) первой добавки снова бьіло добавлено дополнительное количество хлоройодометана (1,бмл; 0,022мол.) с ка последующим добавлением п-бутиллитиума (2З3мл; 0,037мол.) при поддержании температурь! -757С. Смесь перемешивали в течение 15 минут. Каждьй из реагентов, хлоройодометан (0,7Омл; 0,01Омол.) и п-бутиллитиум бо (Змл; 0,008мол.) добавляли еще 4 раза в течение 45мин. при -75"С. Холодную баню затем удаляли, а раствор подогревали до 22"С в течение 1,5 часа. Раствор вливали в ЗООмл насьіщщенного водного раствора хлористого аммония. Слой тетрагидрофурана отделяли. Водную фазу зкстрагировали зтилацетатом (1хЗООмл).
Комбинированнье органические слой промьвали рассолом, вьісушивали в присутствий сульфата магния, отфильтровьівали и концентрировали, в результате чего бьіл получен коричневьій маслянистьй продукт (27 ,4г). 65 Полученньй продукт мог бьіть использован в следующем зтапе без дополнительной очистки.
Метод 3: Раствор 25-І(Бис(фенилметил)амино|-З-фенилпропанальдегида (178,84г; 0О,54мМол.) и бромохлорометана (4бмл; 0,71мол.) в тетрагидрофуране (1,вл) бал охлажден до температурь от -307С до - 35"С в реакторе из нержавеющей стали в атмосфере азота. Затем бьіл добавлен раствор п-бутиллития в гексане (1,6М, 34Омл, 0,54мол.) с интенсивностью, обеспечивающей поддержание температурь! ниже -257С. После зтой процедурьі смесь перемешивали при температуре от -30"С до - 35"С в течение 10 минут. Дальнейшие добавления реагентов осуществляли следующим образом: (1) Осуществляли дополнительную добавку бромохлорометана (14мл) с последующей добавкой п-бутиллитиума (102мл) при температуре ниже -257"С. После добавок раствор перемешивали при температуре от -307С до -35"С в течение 10 минут. Зто повторяли еще раз. 70 (2) Осуществляли дополнительную добавку бромхлорометана (7мл; 0,11мол.) с последующей добавкой п-бутиллитиума (5імл; 0,082мол.) при температуре ниже -25"С. После добавок раствор перемешивали при температуре от -307С до -357С в течение 10 минут. Зто повторяли 5 раз. (3) Осуществляли дополнительную добавку бромохлорометана (7мл; 0,11мол.) с последующей добавкой п-бутиллитиума (5імл; 0,082мол.) при температуре ниже -25"С. После добавок раствор перемешивали при /5 температуре от -30'С до -35'С в течение 10 минут. Зто повторяли еще раз. Наружное охлаждение приостанавливали и смесь нагревали до температурьї окружающей средь! в течение промежутка времени от 4 до 16 часов, до тех пор, пока ТС (результатьь токослойной хроматографии) (силикагель, 2090 зтилацетата//гексана) не показьвали завершение реакции. Реактивная смесь бьла охлаждена до 10"С и погашена 145г 1695 раствора хлористого аммония при поддержании температурь ниже 23"С. Смесь го перемешивали в течение 10 минут и органический слой бьл отделен от водного. Водная фаза бьла зкстрагирована зтилацетатом (2х500мл). Слой зтилацетата бьл обьединен со слоем тетрагидрофурана.
Комбинированньй раствор бьіл вьісушен с помощью сульфата магния (220г), отфильтрован и концентрирован на ротационном вьіпарном устройстве при температуре 65"С. Коричневьй маслянистьй осадок бьіл вьісушен при 70"С іп масцо (0,8бар.) в течение 1 часа, в результате чего бьіло получено 222,8г сьірого продукта. сч
Часть Е: Приготовление М-(3(5)-ІМ,М-бис(фенилметил)амино|-2(К)-гидрокси-4-фенилбутил|-М-изобутиламина соли щавелевой кислоть. і)
Зтап 1: К раствору сього М,М-дибензил-3(5)-амино-1,2(5)-зпокси-4-фенилбутана (388,5г; 1,1З3мол.) в изопропаноле (2,7л) (или зтилацетате) добавляли изобутиламин (1,7кгм; 23,1мол.) в течение 2 минут.
Температура поднималась от 25"С до З30"С. Раствор подогревали до 82"С и перемешивали при зтой с зо температуре в течение 1,5 часа. Тепльїй раствор концентрировали іп масо. Коричневьй маслянистьй осадок внісушивали іп масцо (0,8мм На) в течение 10 часов, в результате чего бьіл получен сьірой маслянистьїй продукт о в количестве 450 г. со
Зтап 2: К раствору щавелевой кислоть! (8,08г; 89,72ммол.) в метаноле (7/бмл) добавляли раствор сьірого
ІЗ(5)-ІМ,М-бис(фенилметил)амино)|--1--2-метилпропил)амино-4-фенилбутан-2(К)-ола в зтилацетате (9Омл) в ме) з5 Течение 15 минут. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение около 2 часов. Твердьй продукт «г бьіл вьіделен путем фильтрации, промьт зтилацетатом (2х20мл) и вьісушен іп масо в течение около часа, в результате чего бьіло получено 21,86г 97 95 диастереометрически чистой соли. Точка плавления Мр-174,992С;
Микроанализь!: Подсчитано: С 71,0590; Н 7,50905; М 5,5390; Получено: С 71,71905; Н 7,7590; М 5,3990.
При альтернативном варианте сьрой « 3(5)-ІМ,М-бис(фенилметил)амино)|-1-(2-зтилпропил)амино-4-фенилбутан-2(К)-ол (5г) растворяли в з с метил-терт-бутилетеое (зфире) (МТВЕ) (1О0мл) и добавляли щавелевую кислоту (1г) в метаноле (4мл). Смесь перемешивали в течение 2 часов. Полученньій твердьій продукт отфильтровьівали промьівали холодньім МТВЕ ;» и внісушивали, в результате чего получали около 98,995 диастереометрически чистого продукта (основьіваясь на пиковьїх зонах жидкостной хроматографии вьісокого разрешения (НРІ С)).
Часть Е. Приготовление їх 1-ІМ-(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|-М-(2-метилпропил)амино1-3(5)-|М,М-бис(фенилметші)амино1|-4-фенил-2(
КО- бутанола. ік КО М-І3(5)-ІМ,М-бис(фенилметил)амино!|-2(К)-гидрокси-4-фенилбутил|-М-изобутиламин. соли щавелевой
Го! кислоть! (354,7г; О0,7мол.) в 1,4-диоксина (2000мл) добавляли раствор карбоната калия (241,9г; 1,75мол.) в воде 5р (25Омл). Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим добавлением в о течение более 15 минут 1,3-бензодиоксол-б5--сульфонил хлорида (162,2г; 0,73БбБмол.) в 1,4-диоксоле 4) (250мл).Реактивную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем добавляли зтилацетат (1000мл) и воду (500мл) с непрерьівньім перемешиванием в течение еще одного часа. Водньй слой отделяли, а затем зкстрагировали с помощью озтилацетата (200мл). Обьединеннье слои зтилацетата ов промьвали 2595 раствором рассола (500мл) и вьісушивали с помощью безводного сульфата магния. После фильтрации и промьівки сульфата магния зтилацетатом (200мл) растворитель удаляли іп масцио, в результате
Ф) чего получали требуемьй сульфонамид в виде желтого пенистого маслянистого продукта (440,2г; 105905 вьіход). ка Жидкостная хроматография вьісокого разрешения /МС РІ С/М5) (злектроразбрьізгивание) т/2 601 |МАНІЮ).
Существует альтернативньй способ, при котором во ІМ-І3(5)-(М,М-бис(фенилметил)амино!|-2(К)-гидрокси-4-фенилбутил|-М-изобутиламин соль щавелевой кислоть (2800г; 5,5З3мол.) и ТНЕ (4л) вливали в 22-литровую бутьіль с кругльм дном, оснащенную механической мешалкой. Карбонат калия (1921г; 13,9мол.) растворяли в воде (2,8л) и добавляли к суспензиий ТНЕ. Затем смесь перемешивали в течение часа. 1,3-бензодиоксол-5-сульфонилхлорид (1281г; 5,8мол.) растворяли в ТНЕ (14л) и добавляли к реактивной смеси в течение более 25 минут. Дополнительнье 200мл ТНЕ бьли 65 Мспользованьі для прополаскивания воронки через которую призволились добавки. Реактивной смеси дали возможность находиться в состояниий перемешивания в течение 14 часов, а затем добавили воду (4л). Смесь перемешивали в течение 30 минут и затем обеспечивали возможность расслоения. Слои отделили, а водньй слой дваждьі промьіли с помощью ТНЕ (500мл). Комбинированнье слой ТНЕ вьісушивали сульфатом магния (500г) в течение одного часа. Затем раствор бьіл отфильтрован, с целью удаления осушающего агента и Мспользования его для проведения последующих реакций.
Часть б. Приготовление 1-ІМ-(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|-М-(2-метилпропил)амино|-3(5)-амино-4-фенил-2(К)-бутанол.. Соли метансульфокислоть.
Строй 70 1-ІМ-(1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонилд|-М-(2-метилпропил)амино!|-3(5)-бис(фенилметил)амино)|-4-фенил-2(К)-б утанол (6,2г; 0,01Омол.) растворяли в метаноле (40мл). Метансульфокислоту (0,969г; 0,01Омол.) и воду (5мл) добавляли к зтому раствору. Смесь бьіла помещали в емкость на 500мл для Раїт гидрирования, содержащую 2095 РЯ(ОН)» на углероде (255мг, 5095 содержание водьї). Емкость помещали в гидрогенератор и продували 5 раз азотом и 5 раз водородом. Реакцию проводили при температуре 35"С, водород подавали под давлением 63 у75 РІ (абсолютное давление в фунтах на квадратньйй дюйм) в течение 18 часов. Затем добавляли дополнительньй катализатор (125мг), продували и процесс гидрирования продолжался с учетом дополнительньїх 20 часов. Смесь фильтровали через целит, которьій промьшвали метанолом (2х1Омл).
Приблизительно одну треть метанола удаляли при пониженньмм давлении. Оставшийся метанол отделяли посредством азиотропной дистилляции в присутствийи толуола при 80 іт. Толуол добавляли порциями 15,10,10
М 1Омл. Продукт вьікристаллизовьівался из смеси, отфильтровьвался и дваждь! промьівался 1О0мл -порциями толуола. Твердьйй продукт вьісушивали при комнатной температуре при 1 Ю/гт в течение 6 часов для того, чтобь получить аминовую соль (4,5г; 84905):т/2 421 |М.АНІК.
Существует альтернативньй способ, при котором К ТНЕ раствору сьірого 1-ІМ-(1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонилд|-М-(2-метилпропил)амино!|-3(5)-бис(фенилметил)амино)|-4-фенил-2(К)-б сч об утанола добавляли воду (500мл), а затем метансульфокислоту (531г; 5,5мол.). Раствор перемешивали до тех пор, пока не убеждались в том, что произошло полное смешение. Смесь бьіла помещена в автоклав на 5 і) галлонов. Катализатор Реагітап (200г 2095 РЯ(ОН)» на С/5095 водьї) добавляли в автоклав посредством ТНЕ (500мл). Реактор продували 4 раза азотом и 4 раза водородом. Реактор заполняли водородом под давлением 60 рзід (избьіточное давление в фунтах на квадратньйй дюйм) и осуществляли перемешивание со стартовой со
Зо бкоростью 450об/мин. По истеченим 16 часов, анализ НРІС указал на присутствие небольшого количества промежуточного монобензила. Затем добавляли дополнительньй катализатор (50г) и обеспечивали (бьістрое; в о течение ночи) протекание реакции. Смесь фильтровали через целит (500г), чтобь! отделить катализатор, и со затем концентрировали в вакууме в виде пяти порций. К каждой порции добавляли толуол (500 мл) и удаляли под вакуумом в азеотропньм способом вьіделенную остаточную воду. Полученньй твердьй продукт Ме з5 подразделяли на три порции и каждую из них промьшвали метил (бутиловьім зфиром (2л), а затем «г отфильтровьівали. Оставшийся растворитель вьіделяли при комнатной температуре в вакуумной печи при мене,чем 1 іоїт, с целью получения 2714г требуемой соли.
Часть Н. Приготовление
М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропиліІ-25-Кфен « илметоксикарбонил) амино!|-3,3-диметилбутанамида. з с К раствору 118,6вг (0,77бмол.) М-гидроксибензотриазола и 137 г (0,52мол)
М-карбобензилоксикарбонил-і -терт-лейцина в 750мл безводного ОМЕ при температуре 0"С в атмосфере азота ;» бьіло добавлено 109,1г (0,57мол) ЕОС. После перемешивания при 0"С в течение 2 часов добавляли раствор 273Зг (0,53Змол.) 2-гидрокси-3-|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропиламинметанес їх ульфоната в 250мл безводного ОМЕ, предварительно нейтрализованньй 228мл (210г; 2,08мол) 4-метилморфолина. После перемешивания при 0"С в течение 30 минут смесь перемешивали при комнатной ік температуре в течение 18 часов. Растворители удаляли при пониженном давлениий и при температуре 457С,
Го! добавляли 1,5л зтилацетата, вьіполняли промьівку 5906 лимонной кислотой, насьіщенньім бикарбонатом натрия, рассолом, вьісушивали посредством безводного сульфата магния, отфильтровьвали и концентрировали до о получения 400г сьірого материала. Полученньій продукт подвергли хроматографическому анализу, разделив на 4) З группьі, приготовив 2000 хроматограмм на силикагеле с использованием 2090-5095 зтилацетата/ /гексана в качестве злюента для вьіделения 320г очищенного продукта, т/е-674(М'-і і), 9890 посредством НРІ С.
Часть І: Приготовление
ІМ-(2К-гидрокси-3-|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил|-25-амин о-3,3-диметилбутанамида.
Ф) Раствор 312г ка М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропиліІ-25-Кфен илметоксикарбонил)амино|-3,3-диметилбутанамида в їл тетрагидрофурана подвергался гидрированию бо водородом при избьточньм давлением 60 рзід в течение 6 часов при комнатной температуре в присутствий 100г катализатора, в качестве которого вьібран 4956 палладий - на- углероде. Катализатор удаляли путем фильтрации, а растворители отделяли при пониженном давлении, с целью получения 240г требуемого соединения.
Часть у: Приготовление 65 М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-|(хло роацетил)амино!|-3,3-диметилбутанамида.
К раствору 234, 3г (0,43У9мол.)
ІМ-(2К-гидрокси-3-|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил|-25-амин о-3,3-диметилбутанамида в 1л метиленхлорида бьіло добавлено 8Омл (59,5г; 0,4бмол) дизопропилетиламина с последующим медленньм добавлением при комнатной температуре 78,8г (0,4бмол.) ангидрида хлороуксусной кислотьі при поддержаний температурьі ниже 36"С. После перемешивания в течение дополнительного часа хроматографические анализьі НРІ С указали на присутствие небольшого количества исходного материала и после зтого еще добавляли 1,5г ангидрида хлороуксусной кислоть!ї. По истечение 10 минут, растворители бьіли удаленьії при пониженном давлений, добавлен 1л зтилацетата, вьіполнена промьввка 595 лимонной кислотой, /о насьшщеннькм бикарбонатом натрия, рассолом, вьсушень посредством безводного сульфата магния, отфильтрованьі и концентрированьі до получения 314г сьірого материала. Полученньй продукт подвергали хроматографическому анализу, разделив на З группь),, приготовив 2000 хроматограмм на силикагеле с использованием 2095-5095 зтилацетата/гексана для получения 165г требуемого продукта, т/е-616(Мчі їі), 9895 посредством НРІ С.
Часть К. Приготовление
ІМ-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропилі|-25-((пир ролидин-1-ил)іацетиліамино!|-3,3-диметилбутанамида.
К 164,2г (0,27мол.)
М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-|Цхло рацетил)амино!Ї-3,3-диметилбутанамида бьіло добавлено 500мл тетрагидрофурана. Растворитель удаляли при пониженном давлениий, с целью полного извлечения зтилацетатаї: затем бьло добавлено ЗБОмл тетрагидрофурана. К зтому раствору при температуре 10"С бьіло добавлено 1ЗОмл (1,5бмол.) пирролидина. По истечениий 1 часа, растворители бьли удаленьй при пониженном давлении, добавлен їл зтилацетата, вьіполнена промьіївка насьіщенньім бикарбонатом натрия, рассолом, осушка посредством безводного сульфата с об магния, фильтрация и концентрация до получения 185 г сьрого продукта,которьй подвергали хроматографическому анализу НРІ С, с целью получения 98,895 чистотьі. Полученньїй продукт бьіл разделен на і)
З группьі и подвергнут хроматографическому анализу, с приготовлением 2000 хроматограмм,с использованием первой порции 5095 зтилацетата/гексана и последующей обработкой 595 метанол/зтилацетатом для получения 160г чистого продукта (9996 методом НРІ-С). Затем зтот продукт подвергли рекристаллизации из 460мл. (9 зо дизтилового зфира и 7Омл. гексана, с целью получения 121 г требуемого родукта (более 9995 методом НРІ С), т/е-651(Мч і), тр-112-11476. о
ПРИМЕР 15 со (22) « о о ч ст АЗЯД МИ - с 3 зв - М М -5 о
І» аа у; оо сн он 0 ши .- Й й «» .
Приготовление ік М-(2К-гидрокси-3-((2-метилпропил)|1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|амино|-15-(фенилметил)пропил|-25-метил
Го! -3-"(метилсульфанол)пропанамида.
Часть А: Приготовление 2(5)-метил-3-"метилсульфонил) пропионовой кислоть. о Зтап 1: К раствору 200г (1,2Змол.) 0-(-)-3-ацетил-б-меркаптоизомасляной кислотьі в 1,0л метанола 4) добавляли 161,0г (2,47мол.) гидроокиси калия, раствореннье в 500мл метанола при поддержаний температурь! ниже 107", благодаря охлаждению на ледяной бане. После перемешивания, в течение дополнительньїх 20 минут, добавляли 117мл. (156г; 1,2З3мол) диметилсульфата при поддержаний температурь! ниже 207С. Ледяную баню удаляли, а смесь перемешивали в течение дополнительньїх 60 минут. Соли удаляли путем фильтрации, растворители вьіделяли при пониженном давлений и добавляли зтилацетат. После отделения водного слоя он (Ф, бьл подкислен концентрированной хлористоводородной кислотой, зкстрагирован зтилацетатом, вьсушен ка безводньім сульфатом магния, отфильтрован и концентрирован до получения 164г (9995) требуемого продукта - 2(5)-метил-3-(метилтио)пропионовой кислоть!, т/е-133(М-Н). во Зтап 2: К раствору 10,0г (74,б6ммол.) 2(5)-метил-3-(метилтио) пропионовой кислоть! в 150мл ацетона и ЗОмл водьі, охлажденному до 18"С на ледяной бане, бьіло добавлено 161,8г (26З3ммол.) оксона. После того, как бьіла добавлена почти половина материала, температура поднималась до 24"С. В зтот момент процесс добавления прекращали, температуру снижали до 18"С, а затем процесс добавления снова возобновляли. После перемешивания в течение 15 минут при температуре 15-20"С баню удаляли и перемешивание реактивной б5 смеси продолжали при комнатной температуре в течение часа. Твердьй продукт отфильтровьвали и промьіївали ацетоном, фильтрат концентрировали, приблизительно, до обьема 40мл, а осадок растворяли в
200мл зтилацетата. Слой зтилацетата вьісушивали безводньм сульфатом магния, отфильтровьшвали и концентрировали, с целью получения 11,4г маслянистого продукта. Он бьл растворен в минимальном количестве зтилацетата, бьл добавлен гексан, чтобь! вьізвать формирование осадка. Последний бьл собран, с целью получения 6,95г требуемого продукта, т/е-167(М-Н).
Часть В: Приготовление
М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил)|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|амино!|-15-(фенилметил)пропил|-25-мети л-З-«метилсульфонил)пропанамида.
К раствору 5,0г (ЗОммол.) 2(5)-метил-3--"метилсульфонил)упропионовой кислотьі и 6,90г (45ммол.) 70 М-гидроксибензотриазола в ЗОмл безводного ОМЕ при 0"С в атмосфере азота бьіло добавлено 6, З4г (ЗЗммол.)
ЕС. По истечении приблизительно 10 минут, ЕОС весь расворялся. По истечении 60 минут, при 0"С бьл добавлен раствор 15,5г (ЗОммол.) 2-гидрокси-3-|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропиламинметанес ульфоната в ЗОмл безводного МЕ после предварительной нейтрализации З4мл (31,бммол.) 7/5 4-метилморфолина. По истеченийи З часов при 0"С, смесь интенсивно перемешивали в течение 17 часов. ОМЕ удаляли при пониженном давленийи, добавляли зтилацетат, промьівали 596 лимонной кислотой, насьлщщенньм бикарбонатом натрия, водой, рассолом, вьісушивали безводньм сульфатом магния, отфильтровьвали и концентрировали для получения 16бг сьірого продукта, которьій методом хроматографии (НРІ С) очищали до достижения 889о степени чистотьі. Затем продукт подвергали хроматографии на силикагеле с использованием 2о 2090-8095 зтилацетата/гексана для получения чистого продукта, которьій получали методом рекристаллизации из зтилацетата/гексана, сцелью получения 8,84г чистого продукта, мр 131,8-133,87С (точка плавления).
Существует альтернативньй способ, при котором Кк раствору З35,0г (211ммол.) 2(5)-метил-3--(«метилсульфонил) пропионовой кислотьі и 48,3г (З15ммол.) М-гидроксибензотриазола в 21Омл безводного ОМЕ при 0"С в атмосфере азота бьло добавлено 44,4г (231ммол.) ЕЮОС. По истечений сч приблизительно 30 минут, ЕОС весь расворялся. По истечений дополнительньїх 60 минут, при 0"С бьл добавлен раствор 108,в8г (211ммол.) і) 2-гидрокси-3-|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропиламинметанес ульфоната в ЗбОмл безводного ОМЕ, после предварительной нейтрализации 24мл (22,3г) 4-метилморфолина.
По истечений 2 часов при 0"С интенсивно перемешивали в течение 18 часов. ОМЕ удаляли при пониженном с зо давлений, добавляли 1л зтилацетата, промьівали 575 лимонной кислотой, насьіщенньм бикарбонатом натрия, водой, рассолом, вьісушивали безводньім сульфатом магния, отфильтровьівали и концентрировали, с целью о получения 120,4г сьірого продукта, которьій методом хроматографии (НРІ С) очищали до достижения 9090 со степени чистотьі. Полученньій продукт дваждь! подвергали кристаллизации из 750-1000мл абсолютного зтанола для получения 82,6г требуемого продукта . ме)
Зо ПРИМЕР 16 З « - с - ;»
Н о 0 їх сок МИ см І в є
Ф й ЕХ г й со но АЖ но он ); о -Т» о сю»
Приготовление 25-Ї(М-метиламино)ацетилІамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)амино) 29 -15-(фенилметил)пропил/|-3,3- диметилбутанамида.
ГФ) К 6,55г (10,7ммол.)
М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-|(хло де роацетил)амино!|-3,3-диметилбутанамида добавляли 25мл тетрагидрофурана. Растворитель удаляли при пониженном давленийи,с целью полного извлечения зтилацетата, затем добавляли 25мл тетрагидрофурана, К 60 зтому раствору бьіло добавлено 19мл (214ммол.) 4095 водного раствора метиламина при температуре 102С. По истечений 2 часов, растворители удаляли при пониженном давлении, добавляли 1л зтилацетата, производили промьівку насьіщенньім бикарбонатом натрия, рассолом, сушку безводньім сульфатом магния, фильтрацию и концентрацию, для получения 6,0г продукта (с 9895 чистотой).
Пример 17 б5 Соединения ингибиторов ретровирусной протеазь! по настоящему изобретению являются зффективньми ингибиторами ВИЧ протеазьї. Ферментнье испьітания, описаннье ниже, могут бьіть применень! с целью отбора ингибиторов ретровирусной протеазьь для использования в комбинированной терапии. С использованием данного способа для таких соединений может бьіть рассчитана величина значения ІС5БО (концентрации, при которой соединение ингибитора снижает активность на 5090).
Ферментньй способ представляет собой следующее. В качестве субстрата вьбирают 2-аминобензоил-ІПе-Міе-Рпе(р-МО2)-СІп-АгаМН2г. Позитивньй контроль оосуществляется с помощью операционной системь! ММТ-101 (системьї мультипрограммирования с переменньім числом задач) (МіШег и др.,
Зсіепсе (Наука), 246,1149 (1989)). В качестве буфера при испьітаниях используют 20ММ сульфата натрия, рН 7/0 8,4; 2095 глицерола, 1мМ ЕОТА (зтилендиаминтатра уксусная кислота (ЗДТК)), 1мМ ОТ (дитиотреитол) и 0,190
СНАРБ5. Затем субстрат растворяют в ОМ5О (диметилсульфоксиде), разбавляют 10 складок в буфере, использованном в испьітаниях. Окончательную концентрацию субстрата, участвующего в исследованиях, доводят, приблизительно, до 80 уМ.ВИЧ протеазу растворяют буфере, использованном при проведений исследований, с целью получения окончательной концентрации ферментов, равной, приблизительно, 12,3 7/5 наномоляра (папотоїаг) на оснований молекулярного веса 10,870.
Окончательная концентрация ЮОМ5О составляет около 1495, а окончательная концентрация глицерола составляет около 1895. Участвующее в исследований соединение растворяют в ОМ5О и разбавляют в ОМ5О до десятикратной (10х) тестовой концентрации, 10 дл субстрата. Усиление флуоресценции отмечают в 4 временньїх точках (0,8,16,24мин.) при температуре окружающей средь. Каждое исследование проводят в Уудвоенньх (сдвоенньмх) лунках.
Пример 18
Зффективность вьібранньїх соединений ингибиторов ВИЧ протеазьі по настоящему изобретению может бьть определена путем использования описанного вьіше ферментного исследования с последующим тестированием СО4-- клеточной линии. Антивируснье активнье состояния ингибиторов протеазь! проявляются Га при значениях зффективной концентрации 50 (ЕС 50) и/или зффективной концентрации 90 (ЕСорд). Названнье вьіше концентрации представляют собой такие концентрации ингибиторов, которьіе бьіли необходимь! для о ингибирования вирусной репликации до 5095 или 9095, соответственно.
Способ исследования процесса ВИЧ ингибирования, проведенньїх на реально инициированньїх клетках, представляет собой автоматизированньй тетразолиум ((еігагоїйт) на основе только колорометрического со анализа, представленного в работе Рашцмеї5 и др., у). МігоЇ.Меїноаз 20,309-321 (1988). Испьітания проводились на 96 - луночньїх планшетах для культурь! ткани. Клеточная линия СО4ж,например СЕМ, МТ-2, МТ-4 или другая о подобная клеточная линия, виіращивается в КРМІ -1640 среде (Сірсо), к которой добавлена 1095 фетальная о телячья сьмворотка, а затем обрабатьваєтся полибреном (роїубгепе) (2 мг/мл). 8Оццл обьема среднь, содержащей 1 х 104 клеток, распределяли в каждую из лунок планшета для культурь! ткани. В каждую лунку Ф добавляли 100 ул обьема исследуємого соединения, растворенного в среде культурьі ткани (или среде без «І исследуемого соединения, взятой в качестве контрольной), чтобь!ї получить окончательную концентрацию и создать условия для инкубации клеток при 37"С в течение 1 часа. Замороженную ВИЧ культуру разбавляют средой культурь до концентрации 5х107 ТСІОво на мл (ТСІОво - дозе вируса, которая инфицирует 5096 клеток в « культуре ткани) и 20ул обьема вирусной пробьі (содержащей 1000 ТСІЮОво вируса) добавляют в лунки, содержащиеє исследуемоє соединение, и в лунки, содержащиеє только среду (инфицированнье контрольнье З с клетки). Некоторье лунки содержат культурную среду без вируса (неинфицированньюе контрольнье клетки). "» Подобньім образом, с помощью добавления средьі), не содержащей вирус, в несколько лунок с исследуемьм " соединением, определяется присущая зтому соединению токсичность. В общем, планшеть! культурой ткани содержат следующие зкспериментальньсе данньє: т» Клетки Лекарственнье средства Вирусь с 1. Ж - - 2. ни ни - (ее) З. жк - жк ав | 20 4. що к к сю В результате зкспериментов 2 и 4 получали следующие значения окончательной концентрации исследуемьсмх соединений: 1,10,100, и 500цг/мл. Азидотимидин (АТ) и дидеоксиинозин (аа) включают в качестве позитивного контрольного злемента для управления воздействием лекарственного средства.Исследуемье соединения растворяют в ОМ5О и разбавляют в среде культурь! ткани таким образом,чтобьі! окончательная концентрация
Ге! ОМ5БО не превьшала в каждом из случаеєв 1,595. Во все контрольнье лунки добавляют ОМ5О в соответствующей концентрации. де После добавления вируса клетки вьращивают в инкубационньїх условиях при 37"С в увлажненной атмосфере 595 СО» в течение 7 дней. Исследуемье соединения могут добавляться в 0,2 или 5-й день, если 60 потребуется. На 7-й день после инфицирования клетки в каждой из лунок ресуспендируют и 100 дл пробь каждой клеточной суспензий извлекают для проведения исследований. 20 дл обьема раствора 5мг/мл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромида (МТТ) добавляют к каждому дл клеточной суспензиий и клетки помещают на 4 часа в инкубационную 5956 СО» среду с температурой 37"С. В процессе вьращивания в инкубационньїх условиях состав МТТ метаболически снижаєтся за счет живьїх клеток, в бо результате чего в клетке образуется окрашенньій Тгпталап продукт. К каждой пробе добавляют 100 ді 1090 додицилсульфата натрия в 0,01 М НС, с целью лизирования (растворения), а сами пробьї сразу же помещают в инкубационнье условия. Использование считьшающего устройства для анализа микропланшетов при молекулярньїх исследованиях позволяет обнаружить поглощение на 590 нанометрах (пт) для каждой пробь.
Цитотоксичность и антивирусная зффективность исследуемого соединения определяется при сравнений значений степени поглощения, полученньїх для лунок, содержащих инфицированнье или неинфицированнье клетки, вьуращеннье в инкубационньх условиях вместе с соединениями, и для неинфицированньх, необработанньїх контрольньїх лунок.
Методика вьіращивания культурьї ВИЧ. Стимулирование лимфоцитов доноров. 70 Светлье слой кровяного сгустка бьіли полученьії от Американского Красного Креста или из Банка крови медицинского отделения Вашингтонгского университета. Зти препарать! пьіли предварительно отобрань! для антител вируса иммунодефицита человека (НІМХВИЧ) и вируса мозаийки цветной капустьі (СММ), а также антигена поверхности вируса гепатита В(ІНВУ) (НВзАд) и АЇ Т (активности аланиновой трансферазьї) в качестве маркера для негепатита - А и негепатита В. Обогащенную лейкоцитами кровь (ЗОмл) удаляют из пластмассового 7/5 Контейнера и 15мл распределяют по двум 50мл центробежньм пробиркам с завичивающейся крьішкой. Каждьй образец разводят в равном обьеме стерильного физиологического раствора с фосфатньім буфером (РВ5) и смешивают методом пипетирования. РісоП-Радце (набор фикола) или ЗМ (вещество, стимулирующее размножение лимфоцитов ) размещают под разведенньіми образцами крови, используя пипетку Пастера и дают возможность раствору стечь на дно пробирки. Затем каждую пробирку подвергают центрифугированию со 2о бкоростью 1300об/мин. (400х9) в течение 45 минут при температуре 20"С. После центрифугирования зону лимфоцитов поверхности раздела вьіделяют и переносят в 5О0мл пробирку. Добавляют стерильньій РВ5 для разбавления вьіделенньїх лимфоцитов, а затем центрифугируют со скоростью 1300об/мин, в течение 8 минут.
Клеточньй осадок в пробирке после центрифугирования дваждь! промьівают путем ресуспендирования в РВ5 и повторного центрифугирования. Окончательньй клеточньій осадок ресуспендируют в 20мл РВ5 путем сч об пипетирования и общее количество жизнеспособньх клеток определяют путем исключения Тгурап Віце (трипановой голубизньї). і) исследования острой инфекционной способности путем использования клинических изолятов.
Приблизительно Зч 107 клеток в течение 48 часов подвергают воздействию, примерно, З-5дг/мл фитогемоагллютилина (РНА) в КРМІ, содержащем 1095 фетальную бьчью сьворотку и 1-2 «95 (100/тіІ).Определенное количество маточного раствора вируса добавляют к суспензий лимфоцитов при множественности инфицирования около 0,001-0,01. Клеточно-вирусную суспензию инкубируют в течение 2 о часов при температуре 37"С, с целью обеспечения вирусной абсорбции. Осадочньй вирусньй инокулят Ге в удаляют методом центрифугирования, а клетки ресуспендируют в КРМІ, содержащем 1095 ЕВС и 10Ш/ті 1Ї -2.
Зти инфицированнье клетки добавляют к исследуемому обьекту, разбавленному завершенной (готовой) Ф средой культурьі ткани из запаса маточного раствора (1Омг/мл) в ЮОМ5БО на 96 луночном тетрационном «Ж микропланшете, с целью получения около 5Хх10 ? клеток на лунку, содержащую 200цл. Инфицированнье необработанньюе клетки и клетки, обработаннье только ОМ5О(0,195), АТ или ОО, бьіли использовань! в качестве контрольньїх.Культурь! бьіли исследованьй на образование синцития на 7 и 11 день после « инфицирования или надосадочньх жидкостей, которье бьли тестированьй на активность обратной транскриптазь или антигена р24. т с исследования хронической инфекционной способности. "» Клетки СЕМ, хронически инфицированнье НХВ2 (лабораторньй штамм НІМ-1 (ВИЧ-1)) добавляют в шесть " лунок 12 луночного тетрационного микропланшета, с целью распределения 5х107 клеток на каждую лунку.
Половина лунок обрабатьввается исследуемь!м соединением в различньїх концентрациях, а такое же количество нейнфицированньх клеток СЕМ остаеєется без добавления исследуемого соединения. Свежая среда, т- содержащая или не содержащая исследуемое соединение, добавляется каждьй день в течение последующих
Ге) трех дней. После зтого культурь инкубируют в течение 48 часов без изменения средьі. Клетки собирают методом центрифугирования, промьівают (дваждь)) 2х в РВ5 и ресуспендируют в 50цл (дваждь!)) 2х в буфере бо Ї аеттії, содержащем 0,125М Триз (Ттів) рНб,8; 496 додецилсульфита натрия (505), 2095 глицерола, 1095 бета ав | 20 меркаптозтанола и 0,0296 бромофенола голубого. Надосадочнье культурьі пропускают через 0,22ум фильтр для удаления остатков органических веществ (дебриса) и центрифугируют со скоростью 50000об./мин. в с» течение 90 минут для концентрации вирусньїх частиц. Вирусньій осадок ресуспендируют в 50 дл 2х буфера
Ї аеттії. Клетки вирусной суспензии кипятятся в течение 5 минут, а затем подвергаются злектрофоретической сепарации в 10-20965 5О5 - геля градиента полиакриламида. Компонентьі, входящие в состав геля, затем переносятся в нитроцеллюлозу методом злектроблоттинга. ВИЧ специфифические протеиньі обнаруживают,
ГФ) используя моноклональнье антитела, присоединеннье к рі и р17, после чего следует доаї-апіі--птоийвзе Ідс, 7 присоединенньій к биотину, и авидин, присоединенньій к пироксидазе хрена (НКР). Ферментная конверсия 4-хлоро-1-нафтола бьла использована для обеспечения визуального наблюдения над специфическими протеинами, распознанньми моноклональньми антителами. В дополнение, бьла проанализирована бо инфицирующая способность вируса, приобретенная благодаря хроническому инфицированию клеток СЕМ в присутствий или в оотсутствий исследуемьх соединений. Отфильтрованнье надосадочнье жидкости разбавляются и используют для инфицирования неинфицированньх клеток СЕМ (около ї1х10 "/лунка).
Культурь! бьіли исследованьь на формирование синцития на 7 или 11 день после инфицирования или бе / надосадочньйх жидкостей, тестированньїх на активность обратной транскриптазь, или антигена рага4.
Микротесть! обратной транскриптазь (КТ).
Микротест КТ представляет собой адаптацию нескольких стандартньїх тестов КТ. Бьіла разработана методика, позволяющая проводить, с помощью количественньїх измерений мальх обьемов, исследования активности КТ ВИЧ и облегчить обработку многочисленньїх образцов (проб). 9 Материаль! Маточньй рабочий раствор (на мл)
Триз (Ттів) (РН7,8) 1оМ БОЦІ ксі зом 25БцІ
ОТ (Дитиотрейитол) (хранение при -20С ) б1М 2Оді
Мас ом5М ЗЗці роу(гА)р(ато12-18) 25012,5тІ 25БцІ
Рпагтасіа (фармация) 27-7878 (0,59)
МР-АО 296 25БДЦІ
ЗН-ТТВ (МЕТ 221 А, 80 Сі/ттоЇї) 2,5Сті тоді о) ТТ
Способ:
Добавить по 50, 1 КТ - смеси на лунку в 96 луночньїй тетрационньійй микропланшет с О-образньім дном. 2. Добавить по 10-20) на лунку раствора надосадочной жидкости, свободной от присутствия клеток. 3. Перемешать содержимое лунки механическим перемешивающим устройством. 4. Инкубировать при 37"С в течение 2 часов. 5. Отсосать на фильтровальную бумагу ОЕ81 или зквивалентньїй материал, используя ТОМТЕС. 6. Прополоскать четьіре раза, используя 2Х 55С (раствор хлорида и цитрата натрия). с 29 7. Прополоскать один раз, используя 95905 зтанол. Го) 8. Осушить фильтр. 9. Приготовить для под счета, используя бета-планшетньй счетчик (Фармация).
ПРИМЕР 19 о
СВЕЖАЯ СРЕДА НЕИЙФИЦИРОВАННЬЕ о
С СОЕДИНЕНИЯМИ КЛЕТКИ Ге в
ИЛИ БЕЗ НИХ (22) «
ИССЛЕДУЕМАЯ « дю НАДОСАДОЧНАЯ ЖИДКОСТЬ шщ с вич ДЛЯ ЕС хз РАСЩЕПЛЕННАЯ я ИНФИЦИРОВАННЬТЕ КУЛЬТУРА 15 КЛЕТКИ їх СОХРАНЕННЬКЕ со . ДЛЯ РСЕ. со СЕМЬ КЛЕТКИ й («в) сю»
МНОЖЕСТВЕННЬЕ ЦИКЛЬІЇ ПРИГОТАВЛИВАЮТСЯ С УВЕЛИЧЕНИЕМ КОНЦЕНТРАЦИИ зв СОЕДИНЕНИЯ ДО ТЕХ ПОР, ПОКА НЕ БУДЕТ НАБЛЮДАТЬСЯ СДВИГ ЕС» (Ф. Следующим является метод культурьі, использованньй для отбора мутантов, устойчивьїх к ингибиторам ко ВИЧ протеазь. МИнфицированнье клетки вьращивали непрерьшвно в присутствий ингибитора протеазь.
Некоторье культурьї подвергали чередующемуся понедельному воздействию вьісоких и низких концентраций во ингибитора. Остальнье культурьі подвергали воздействию постоянной концентрации. Концентрация лекарственного средства возрастала периодически до тех пор, пока в ЕСсо не наблюдался стойкий сдвиг. Сдвиг в графике реакции на дозу бьіл, в основном определен при концентрации лекарственного средства от 0,5 до
Ту/мл или более (5-10х ЕСоерд) и зависел от подвергающегося обработке вирусного изолята. БвілиИ использовань оба варианта изолятов ВИЧ, как лабораторньй, так и клинический. Те же самье вируснье изолять 65 Мспользовались тем же самьм способом при отсутствий лекарственньхх средств, что позволило непосредственно сравнить нуклеозидную последовательность для обработанньїх и необработанньїх изолятов.
В основном, вариантьї ВИЧ-1, устойчивье ингибиторам протеазьі, бьіли вьібраньї методом установленного процесса вьсевания (вьіращивания) в присутствий нескольких значений ингибиторньїх концентраций ингибиторов протеазь, обозначенньх в работе (см. Магком/ї: и др., доигпаї ої Мігоїоду 69:701-706 (1995)).
Вариантьї ВИЧ-1 перечисленньсе ниже, указьівают на мутации, которне присутствуют в вьібранньїх вирусньїх изолятах и не присутствуют в контрольньїх, необработанньїх изолятах. КЕ представляет собой ВИЧ -ІКЕ, которьій является штаммом ВИЧ-1, а КЕК представляет собой смесь штаммов, полученньх в результате отбора
КЕ, устойчивьїх к воздействию соединения, представленного в примере | "КЕК представляеєет собой смесь вирусньїх штаммов, имеющих генотипь! протеазь! 548М (клоньі 14/40); 548М, М82А (клоньі 18/40); 548М, І 905 7/0 (клонь 2/40); 548М, І54Т, М82А (клонь 1/40 ); 548М (клонь 1/40); 548М, О61Н (клонь! 1/40); М13І, 548М (клонь 1/40 ); 0548М, Е53ІЇ, М82А (клоньі 1/40); 548М, М82А,С95У (клоньі 1/40). КЕК2 представляет собой смесь устойчивьїх штаммов, полученньїх путем клонирования КЕК тремя циклами роста при ограниченном разбавлении. КЕК2 представляет собой смесь вирусньїх штаммов, имеющих генотипь! протеазь!: 348М, М82А (клоньі 13/15); 517Е, 548М, М82А (клонь 1/15); 648М, М82А, М370, М880 (клонь 11/15). КЕКК представляеєет собой /5 смесь штаммов, полученньх путем отбора КЕ, устойчивьїх к соединениям примеров 1 и 2, а затем клонированньїх тремя циклами роста при лимитированном разбавлений. КЕКК включает смесь вирусньх штаммов, имеющих следующие генотипь! протеазь! 548, І5АТ, І 6З3Р, М82А (клонь 7/9); 548, І54Т, І 6ЗР, М82А,
М885 (клонь 1/9); 548М, І5АТ, І 63Р, 57ЗМ, М82А (клонь 1/9). ЗЕ162 представляет собой обьект ЗЕ-162, которьй является штаммом ВИЧ-1, а 5Е162К представляеєет собой смесь штаммов, полученньїх в результате отбора 8Р162,устойчивьїх к воздействию соединения, представленного в примере 1. 5Е162К включает смесь вирусньх штаммов, имеющих генотипьі протеазьі МА46бІ, 53, І163Р, А71 М, М880 (клоньі 2/3); МАбІ,Е53І І 63Р,А71
М,М880,092К (клонь! 1/3). 89-959 представляет собой обьект 89-959, которьій является штаммом ВИЧ-1, а 89-959К представляет собой смесь штаммов, полученньїх в результате отбора 89-959, устойчивьмх к воздействию соединения, представленного в примере 2. 89-959К включает смесь вирусньїх штаммов, имеющих сч об Генотипь! протеазь М885 (клоньй 4/53 и 025М,126А,030М,037М,К41К,5730,К87К,М885(КЛонь 1/4). МІ 4 представляет собой обьект НІМ-1 (ВИЧ-1) 4, Которьій является штаммом ВИЧ-1. МІ 4А(548М) представляет і) собой штамм, имеющий синтетически генерированную сайт-направленную мутацию в протеазе от глицина до валина в позициий аминокислоть! номер 48. МІ 4(І84М) представляет собой штамм, имеющий синтетически генерированную сайт-направленную мутацию в протеазе от изолейцина до валина в позициий аминокислоть! (є зо номер 84. МІ 4(К8О,Ма46І) представляет собой штамм, имеющий синтетически генерированнье сайт-направленнье мутации в протеазе от аргинина до глютамина в позициий аминокислоть! номер 8 и от о метионина до изолейцина в позиции аминокислотьі номер 46. МІ 4(Р22-538) представляет собой смесь со штаммов, полученньїх при отборе ВИЧ-1мр43, устойчивьй к соединению ГЕ образца после 22 пересевов, включающий следующие генотипь! протеазь!: М46Ї, І 63Р, АТМ, М82Е, ІВАМ (4/10 ); МА61ІІ 63Р,М82Р,ІВ4М (310); (22)
М46ІД71 М.М82Б,ІваМ (3/10). МІ 4(Р37-538) представляет собой штаммьї, полученньюе при отборе ВИЧ-1 МІ 4-3, «Е устойчивье к соединению примера 10 после 37 пересевов, включающие следующий генотип протеазь: 461 6З3Р, А71 МіІВ4А. МІ4 (538/524) представляет собой штаммьі, полученнье при отборе МІ 4 (Р22-538), устойчивье к соединению примера 5 после 24 пересевов, включающие следующий генотип протеазь!: МАбІ,
Їб6ЗР, А71МО)84А. МІ4(538/27-АС) представляет собой смесь штаммов, полученньх при отборе Мі4 « (Р22-538)устойчивую к соединению примера 12 после 7 пересевов, включающую следующиє генотипь опт) с протеазь!: М46Ї, І 6З3Р, А71 М, ІЗВ4А; М321І,М821І. МІ 4 (538/Р24-АсС) представляет собой штаммь!, полученнье при . отборе МІ 4 (Р22-538),устойчивье к соединению примера 12 после 24 пересевов, включающие следующий и?» генотип протеазь!: 461, 63Р,А71МІВ4А. МІ 4(Р 119-003) представляет собой штаммь!і, полученнье при отборе вВИЧ-Тмр43, устойчивье Кк соединению примера 9 после 19 пересевов, включающие следующий генотип прОТеазрік8кК, Мабі. МІ4(РЗ4-003) представляет собой штаммь), полученнье при отборе ВИЧ-1 ум|4-3, ї5» устойчивье к соединению примера 9 после 34 пересевов, включающие следующий генотип протеазь:
КВК,МА61,І 6З3Р, А71М,І 90М. Результать! устойчивости вирусньїх изолятов представлень в таблицах 1-11. ік Пример 20 о Результатьі устойчивости вирусньїх изолятов, представленнье в таблицах 1-3, бьіли получень! в соответствии со следующим алгоритмом исследований или дополнительньми его о модификациями. Приблизительно 3х10 ' клеток в течениє 48 часов активизируют З-5дг/мл РНА в КРМІ, сю» содержащем 1095 фетальной бьічьей сьіворотки и 1-2 (100/ті). Определеннье количества маточньїх растворов добавляют к активизированной суспензий лимфоцитов при множественности инфицирования около 0,001-0,01.
Суспензию клеточного вируса инкубируют при температуре 37"С в течение 2 часов для обеспечения процесса вирусной абсорбции. Осадочньйй вирусньій инокулят удаляют центрифугированием, а клетки ресуспендируют в
КРМІ, содержащем 1095 ЕВ5 и 10Ш/ті 1/-2.3ти инфицированнье клетки добавляют к исследуемому обьекту,
ІФ) разбавленному готовой средой культурь! ткани из запаса маточного раствора (1Омг/мл) в ОМ5О на 96 луночном ко тетрационном микропланшете, с целью получения около 5хХ10 ? клеток на лунку, содержащую 200рл.
Инфицированнье необработанньсе клетки и клетки, обработаннье только ОМ5О (0,195) или АТ, или ОО, бьіли 60 использованьі в качестве контрольньїх. Культурь! бьіли исследованьі! на образование синцития на 7 и 11 день после инфицирования или надосадочньїх жидкостей, которье бьли тестированьй на активность обратной транскриптазь, или антигена рага4.
Таблица 1 6БЕ Пример Изолят вируса (ЕС 50 нано г/мл)
М. 8Е162 вЕ1628
1 31 443 2 2 6 4 4 5 6 2 11
Таблица 2
Пример Изолят вируса (ЕС 50 нано г/мл)
М. 5Е162 5Е1628 то 1 2 111 7 1 108 8 1 98
Таблица З
Пример Изолят вируса (ЕС 50 нано г/мл)
М. 89-959 89-95085 89-05ОК 1 96" 5 37 2 1007 395" 872 5 зве в' зве 6 4 ве 7 138 128 8 125 118 сч 1 хухх,5 Указьівают на значения величин, полученньїх при проведений одного и того же зксперимента. (о)
Пример 21
Результатьіь устойчивости вирусньїх изолятов, представленнье в таблицах 4-6, бьіли получень! в соответствии со следующим алгоритмом исследований или дополнительньми его модификациями. с
Исследования проводят на 96 луночньїх планшетах для культурь! ткани. Клетки СЕМ-Т4 суспендируют в 9690 среде ЕРМІ (Сібго ВЕК Ме Текппоіодіев,Іпс., Заййзригд МО) 1095 подогретой фетальной бьчьей сьіворотки (2 (Сірго ВЕ Ійе Текппоіодієв,Іпс.Заййвриго МО) до получения окончательной концентрации 5Бх10 9 со жизнеспособньх клеток на мл. Замороженная аликвотная проба ВИЧ культурь (штамм ВИЧ-1 уд) бьстро оттаиваєтся (на 37"С водяной бане) и добавляется к СЕМ Т4 клеткам, с целью достижения окончательной Ге) концентрации около 0,001-0,01 инфекционньх единиц на клетку. Клеточно-вирусную суспензию бьстро - смешивают путем создания завихрений и 100 ул немедленно добавляют к 100 ул каждого из исследуемьмх соединений (приготовленньїх в виде 2х концентратов в 9095 КРМІ, 1095 ЕВ5), разбавленньїх для каждой лунки 96 луночного планшета для вьіращивания культурь! ткани. Каждьій планшет включает контрольнье лунки, содержащие клетки и вирусьі, но не исследуемье соединения. 3-Азидо-3-деокситимидин (АТ) включают в « 0 Качестве позитивного регулятора во все исследования. Планшеть с культурой ткани инкубируют при - с температуре 37"С во влажной атмосфере 595 СО» в течение 7 дней. Затем определяют уровень вирусной репликации путем измерения активности обратной транскриптазьі в надосадочньїх жидкостях, используя :з» стандартнье методь (как бьіло описано в уроне техники, например, Тесппідце іп НІМ Кезеагсп (АлгоритмвВИчЧ исследований), АїІдоміпі 8. УУаїКег,едз., 1990,51осКіоп Ргезв, МУ). 395 Таблица 4 г»
Пример Изолят вируса (ЕСво нано г/мл) іс) М. ВЕ ВЕВ со 1 зо 2237 о 50 2 40 8
З 5 2" сю» 4 10 Ох 5 де т 6 1222 157 ж жк о , Указьівают на значения величин, полученньїх при проведений одного и того же зксперимента.
Ге Таблица 5
Пример Изолят вируса (ЕСво нано г/мл) во М. ВЕ ВЕВ 1 24 394 7 2 78 8 2 1 бо Таблица 6
Пример Изолят вируса (ЕСво нано г/мл)
М. ВЕ ВЕ ВЕВК 1 19 880 5бО9 2 35 367 1111 5 6 57 982 6 6 31 962 14 1 6 39 15 5 9 21 16 З 1 9
Пример 22
Результатьіь устойчивости вирусньх изолятов, представленнье в таблицах 7-11,бьіли получень! в соответствии с алгоритмом исследований, описанньїх в работе Магком/й» и др., доцгпа! ої Мігоіоду, мої. 75 59,701-706 (1995), которне включень! в описание настоящего изобретения методом ссьілки на приведенньй
Источник во всей его полноте, или дополнительньіми его модификациями.
Таблица 7
Пример Изолят вируса (ЕСод наном)
М. МА МІА(СА8У). МІ А(ІВАМ)
Б 80 160 640 6 зо 150 90 10 во 160 8оо 12. 25 125 125 с 13 250 1000 6250 148 8 72 о 15. 80 во во 16.8 8 8 (зе) то Таблица 8 о
Пример Изолят вируса (ЕСво наном) с
М. МА МІ А(КВО,МАвІ) 5 во 240 о 6 о) о) чІ 10 во 240 12 25 125 13 250 750 « 16 8 8 - с Таблица 9 ; т Пример Изолят вируса (ЕС5Бо наном)
М. МА МІ А(Р22-538). МІ А(Р37-538)
Б 80 8оо 6400 «г» в зо 150 2400 10 во 1600 6400 шо 12. 25 БОО »3125 (ее) 13 250 БООО »31250 о 50 14. 60 во 1000 15. 8 400 1000 сю 16. 8 8 40
Таблица 10
Пример Изолят вируса (ЕСво наном) іФ) М. МА МІА(53 8/524) МІ 4(538/Р7-АС) ко МІ А(538/Р2ААС) 5 во 6400 6400 6400 во 6 зо 2400 2400 2400 10 во 6400 6400 6400 12 25 »3125 »3125 23125 13 250 »31250 »31250 »31250 16 8 40 40 40 б5
Таблица 11
Пример Изолят вируса (ЕСво наном)
М. МІ4 МІА(Р19-003) МІА(Р34-003)
Б 80 240 400 6 зо Кв) зо 10. во 400 400 12. 25 150 375 13 250 1250 1250 70 в в 8 8
Пример 23
Ингибиторь! протеазьі по примерам 1 и 2, которне содержат уникальную изостеру гидроксизтилуриа, бьіли использованьії для вьібора іп мійго вариантов ВИЧ-1, устойчивьїх к воздействию лекарственньїх средств. 75 Клинические и лабораторнье штаммь! ВИЧ-1 бьіли засеянь! в Т-клеточнье линии или в мононуклеарнье клетки периферийной кровеносной системьї (РВМСОз5)в присутствий увеличивающихся концентраций лекарственньх средств. Устойчивьіе вариантьі стабильно демонстрировали значения ЕС 5), по меньшей мере, десятью фолдами вьше, чем контрольнье вирусь!, вьісеяннье на идентичньй период времени, но без ингибитора.
Вирусная ДНК бьіла усилена с помощью РСК (камерьї для обслуживания и заменьі полезной нагрузки), а нуклеотидная последовательностью гена, кодирующего протеазу, бьіла определена с использованием стандартньїх методов. Для вирусов, устойчивьх к воздействию ингибиторов протеазьь по примерам 2 и соответственно, во многих отобранньїх вариантах наблюдалась характерная замена аминокислоть! в позиции 88. Аспаргиновьій остаток в позиции 88 располагаєтся внутри законсервированной улиткообразной зонь, присутствующей как в мономерной, так и в бимерной аспаргиновой протеиназе. Последовательность су соответствующих конечньїх карбоксильньїх групп СІу-Рга-Азр/Азп (остатки 86-88) являєтся уникальной для ретровирусньїх аспаргиновьїх протеиназ. В то время, как любье обьяснения подобньїх результатов могут і9) восприниматься как простье рассуждения, создание моделей на основе изучения матриц, полученньїх из вьісокорастворимьїх радисактивньїх структур прототипньїх ингибиторов гидроксизтилугеа, присоединенньїх к рекомбинанту ВИЧ-1 протеазь, дает все основания предположить, что мутации аспаргина (Апз88) могут явиться со зо подтверждением сдвига протеазь..
Соединения ингибитора ретровирусной протеазьь по настоящему изобретению представляют собой о зффективнье антивируснье соединения, в частности, являются зффективньми ингибиторами ретровирусов, с например лентивирусов, как бьіло показано вьіше. Таким образом, рассматриваемье соединения являются зффективньми ингибиторами ВИЧ. Можно предположить, что рассматриваемье соединения смогут оказьівать о угнетающее воздействиє таюке и на другие штаммь! ВИЧ, например на ВИЧ-2, а также на другие вирусь, «ф например на вирус МІЗМА, вирус иммунодефицита обезьянь, (5ІМ), НТІ М-1, НТ М-2.
Настоящее изобретение также относится к растворам или гидратам соединений ингибиторов ретровирусной протеазьі, которне в заданньїх условиях приготовляют или вьіделяют способами, известньми из уровня техники. «
Соединения ингибиторов ретровирусной протеазь! могут бьіть использованьі в виде солей, полученньїх из Ше) с органических или неорганических кислот. Перечень зтих солей включает, но не й ограничиваєется следующим: ацетат, адипат, альгинат, цитрат, соль аспаргиновой кислотьі, соль бензойной "» кислотьі, бензолсульфонат, бисульфат, соль масляной кислотьі, соль камфорной кислотьі, камфорсульфонат, диглюконат, циклопентанепропионат, додециклсульфат, зтанесульфонат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептпноат, гексаноат, фумарат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, «» 2-гидрокси-зтанесульфонат, лактат, малеат, метанесульфонат, никотинат, 2-нафталенесульфонат, оксалат, палмоат, ректинат, персульфат, З-фенилпропионат, соль пикриновой кислоть, пивалат (соль триметилуксусной іш кислоть), пропионат (соль пропионовой кислотьї), соль янтарной кислоть, тартрат, тиоцианат, тозилат, мезилат о и соль ундекановой кислоть.
Примерами кислот, которьіе могут бьіть использованьї для формирования фармацевтически допустимьсх о кисльїх добавочньїх солей, могут служить такие неорганические кислоть!: хлористоводородная кислота, серная с» кислота и фосфорная кислота, а также органические кислотьі: щавелевая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота и лимонная кислота. Предпочтительньімм вариантом может служить хлористоводородная соль.
Другие примерь! включают соли со щелочньми или щелочно-земельньми металлами, например натрием,
Ккалием, кальцием или магнием или с органическим основанием. Общая дневная доза, назначаємая хозяину одноразово или в виде нескольких доз, может составить, например, от 0,01 до 5Омг/кг веса тела, а чаще от 0,1
Ф, до ЗОмг. Композиция единицьі дозировки может содержать такие количества их подмножеств, которье могут ко формировать дневную зону.
Количество активньїх ингредиентов, которье могут бьїть обьединеньі с материалами-носителями для бо создания единой формь дозировки, должньі меняться в зависимости от обрабатьвшваємого хозяина и особенностей метода лечения.
Схема приема лекарственного средства для лечения болезни с помощью соединений или композиций ингибитора ретровирусной протеазь! вьібирается в соответствии с цельім набором факторов, включающим тип, возраст, вес, пол, режим питания и медицинские показания пациента, а именно, тяжесть заболевания, способ 65 применения лекарственного вещества, фармакологические признаки, например активность, зффективность, фармакокинетические и токсикологические особенности используемого соединения, то есть, принимается во внимание информация о том, используется ли отдельная система прохождения лекарственного вещества и назначается ли соединение как часть комбинации лекарственньх средств. Мтак, режим дозировки действительно применяемого способа лечения может широко видоизменяться и позтому может отличаться от предпочтительного варианта режима дозировки, установленного вьіше.
Соединения по настоящему изобретению могут приниматься орально, парентерально, в виде ингаляций, через прямую кишку, локально, в виде дозированньїх, приготовленньїх по специальной технологии единиц, содержащих традиционнье нетоксичнье фармацевтически допустимье носители, адьюванть! и наполнители,по вьібору. В качестве типичньїх назначений могут бьіть также использовань! трансдермальнье назначения в виде /о трансдермальньїх бляшек или лекарственного злектрофореза. Термин парентеральньй в контексте настоящего описания включает подкожнье иньекции, внутривенньюе, внутримьішечнье, иньекции в крудную клетку и различнье методь! вливаний.
В качестве составов, пригодньїх для иньекций, например стерильнье воднье растворь! или маслянистье суспензии могут приготавливаться в соответствий с известньіми из уровня техники методиками, использующими 7/5 Соответствующие дисперснье или влажнье субсидированньрюе агентьі. Стерильнье, пригоднье для иньекций препарать! могут бьіть также представлень в виде стерильньх растворов или суспензий в нетоксичньх, пригодньїх для парентеральньх назначений растворителях, например в виде раствора в 1,3-бутанедиола.
Среди допустимьїх наполнителей и растворов, которне могут применяться в зтих случаях - вода, раствор
Рингера, и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильнье фиксированнье масла могут бьть Мспользовань! в качестве растворителя или суспендирующей средь!. Для зтой цели могут применяться легкие фиксированнье масла, включая синтетические моно- или диглицеридь. Кроме того, в приготовлений препаратов для иньекций находят применение жирньсе кислотьї, например олеиновая кислота.
Суппозиторий для ректального назначения лекарственного вещества могут бьть приготовлень! путем смешения лекарственного вещества с подходящим не раздражающим инертньм наполнителем, например, с о маслом какао и полизтиленгликолями, которне имеют твердую консистенцию при обьічной температуре, но о превращаются в жидкость при ректальной температуре и позтому растворяются в прямой кишке и вьісвобождают лекарственное средство.
Видь! твердьх дозировок для орального назначения могут включать капсульі, таблетки, пилюли, порошки, гранульі. В таких видах твердьїх дозировок активньій компонент может бьіть добавлен в качестве примеси, по (У зо крайней мере, к одному из таких инертньїх разбавителей, как сахароза, лактоза или крахмал. Такие видь дозировки могут также включать, в практическом применениий, дополнительнье вещества, отличнье от о инертньїх разбавителей, например, смазьвающие агентьї, а именно магниевая соль стеариновой кислоть!. В со случаях с капсулами, таблетками и пилюлями дозировки могут также содержать буффернье злементь..
Таблетки и пилюли могут бьіть приготовленьї в знтеросолюбильньх покрьїтиях. Ме
Видь! жидких дозировок для орального назначения могут включать фармацевтически допустимье змульсии, «г растворьі, суспензии, сиропь! и зликсирьії, содержащие инертнье разбавители, обчно встречающиеся в уровне техники, например воду. Такие композиции могут также содержать адьювантьі, например, увлажняющие вещества, змульгирующие и суспендирующие злементьії, подслацдивающие, коррегирующие и отдушивающие агенть. «
В том случае, когда соединения ингибиторов ретровирусной протеазь,, по настоящему изобретению, в с назначаются в качестве единственньїх активно действующих фармацевтических средств, они могут применяться в сочетанийи с другими антивирусньіми агентами, которне способньі активно противодействовать ;» таким ретровирусам как ВИЧ-1. Такие соединения включают, но не ограничиваются ими, другие ингибиторь
ВИЧ-1 протеазьі, различнье нуклеозидньюе аналоги, ингибиторьї ненуклеозидной обратной транскриптазь, татантагонисть и ингибиторь! глюкозидазь!. їх Примерьї ингибиторов ВИЧ-1 протеазьі! включают, но не ограничиваются следующим: Ко 31-859 (Кобегів, М.
А. и др. Зсіепсе 1990, 248, 258-261 апа Огодв ої (Ше Ешіиге (Наука 1990, 248, 258-261 и лекарственнье ік средства будущего)1991, 16(3), 210-212 КМІ-272, (Кадауата,З., и др. Апіїтісгорбіаї Адепіз апа СпетоїПпегару
Го! (Противомикробньсе агенть! и гемотерапия) 1993, 810-817), цикличнье серии мочевинь! (І ат, Р.,и др. "Ое Момо 5о Безідп апа Оізсомегу ої Роїепі, Мопреріда! НІМ-1 Ргоіеаве Іппіріог5, рарег 96 аг Ше 205 Атегісаї о Спетіса! Зосіеїу Майопа! Меейто, Меадіса! Спетівігу Оімівіоп, ЮОепмег,Со, Магсй 28-АргіЇ 2,1993) ("Новье сю методьї конструирования и открьтие сильнодействующих ингибиторов непептидной ВИЧ-1 протеазь ", документ 96 205 национального заседания Американского химического общества, Отделение химической медицинь, 28 марта-2 апреля 1993г.), І -735,524 (ОРогвеу, В.О. и др., "/-735,524:Тпйе Каїйопа! Оезідп ої а Роїепі апа Огаїїу ов Віоамайаріє НІМ Ргоївеазе Іппірігог" рарег б аї Ше 2060 Атегісаї СПетіса! Зосіеє(у Майопа! Меенйпа,
Медісаі Спетівігу Оімівіоп, Спісадо,Ї, А!цдиві 22-27,1993) ("/-735,524: Рациональная структура
Ф) сильнодействующего орально назначаемого ингибитора ВИЧ протеазь", документ б 206 национального ка заседания Американского химического общества, Отделение химической медицинь!, Чикаго, І, 22-27 августа 1993 г.), и аналогичньєе. во Перечень примеров нуклеозидньїх аналогов включают, но не ограничиваєется, азидотимидин (АТ), дидеоксиинозин (001), БОС, ЗО, 04Т, РМЕА. Перечень примеров ингибиторов ненуклеозидной обратной транскриптазь! включаєт, но не ограничивается, класс пиридинов (УУеїд).5. и др. У.Мед Спет. 1993,36,249-255;
Ноїтап, .М. и др. У.Мей Спет. 1992,35,3784-3791; 5аагі и др. У.Мей Спет. 1992,35,3792-3802; Югидв ої (пе
Ешшге (Лекарственнье средства будущего. 1992, 17 (4), 283-285 и их аналоги);бис-(гетероарил)класса 65 пиперазинов (Котего О.І. и др. У.Мей Спет. 1993,36,1505-1508; Котего ОЇ. и др. Ргос. Май). Асад. Зеі.О5БА 1991,34,746-751 и 3187-3198; и их аналогов) и трициклик пиридобензо - и депиридодиазепинов (Нагогаме, К.О.,
У.Мей Спет. 1991,34, 2231-2241; Мегіцагі, М.). Зсіепсе (Наука) 1990, 250,1411-14413; и их аналоги) и 5-хлоро-3--фенилсульфонил)индоле-2-карбоксамид и его аналоги (УМПШатве,".М.и др. У.Мей Спет. 1993, 36, 1291-1294). Примерь! тат антагонистов включают, но не ограничиваются, Ко 5-3335 и Ко 24-7429 (Нзи М.С.и др.
Ргос.МакнН.Асай. Зсі БА 1993,909,5395-6399; Тат,5З и др. "Таї Іппірйоге: а Мем Сіазв ої Апіі-НІМ Адепів" рарег 372, аї (Ше 2040 Атегісаї! Спетіса! Босієїу Маїйопа! Меейпд, Огдапіс Спетівігу Оімівіоп, УУазпіпдіоп,
ОС, А!цдиві 23-28,1992) ("Тат ингибиторьсновьій класс анти-ВИЧ агентов ", документ 372 204 национального заседания Американского химического общества, Отделение органической химии, Вашингтон, ОС, 23-28 августа 1992г.), и их аналоги. Примерь ингибиторов гликозидазьі включают, но не ограничивают их круг, /о кастаноспермин, кастаноспермин 6 бутриловьй зфир, М-бутил-1-деоксиножиримицин,
М-бутил-1-деоксиножиримицин пер-бутриловьй зфир и их аналоги, а также их пролекарственнье средства.
Терапевтические средства могут бьіть представлень! как отдельнье композиции,которье назначаются, фактически в одно и то же время, или терапевтические средства, которье назначаются в виде одного единственного соединения, в результате чего все зффективно действующие агенть! оказьіваются в организме /5 Носителя инфекции в терапевтически достаточном количество. Кроме того, терапевтические агенть! могут назначаться в различное время, но таким образом, чтобь! только один или два активньїх агента за один раз оказьівались в организме в терапевтически зффективном количестве.
Соединения и способьії по настоящему изобретению являются зффективньми антивирусньми соединениями и, в частности, зффективньми ретровирусньми ингибиторами, как бьіло показано вьіше. Таким образом, 2о рассматриваємье соединения являются зффективньми ингибиторами ВИЧ протеазьі. Бьіло сделано предположение, что рассматриваемье соединения должнь! угнетающе действовать на другие ретровирусь, например на лентивирусьї, вчастности на другие штаммь! ВИЧ, например ВИЧ-2, на вирус Т-клеточной лейкемии, саркомь! Рауса, вирус иммунодефицита обезьяньі, лейкемии кошек, иммунодефицита кошек и т.п.
Таким образом, рассматриваемье соединения являются зффективньми при лечении и / или профилактике с 2г5 ретровирусньїх заболеваний.
Рассматриваемьсе соединения и способьії также являются зффективньми при предупреждений роста і) ретровиросной инфекции в растворе. Клеточная культура как человека, так и животного, например, культурь!
Т-лимфоцитов, используются для различньїх целей, например, для исследования и диагностики , включая отладку и контроль. Перед и в течение вьіращивания и хранения клеточной культурь! рассматриваемье со зо соединения могут добавляться к среде клеточной культурь! в концентрации, зффективной для предотвращения неожиданной или нежелательной репликации ретровируса, которьій может скрьїто присутствовать в клеточной о культуре. Вирус может изначально присутствовать в клеточной культуре, например известно, что ВИЧ должен оду присутствовать в Т-лимфоцитах человека задолго до того, как его обнаружат в крови или через воздействие на него вирусом. Мспользование рассматриваемьх соединений и методов ообеспечиваєт вьявление Ме
Зз5 Моследователями и врачами-клиницистами скрьітой предрасположенности к потенциально летальньм «г ретровирусам.
В формуле изобретения представлень существеннье его признаки, однако обьем защить не ограничиваеєтся представленньми в примерах осуществления соединениями. Тем не менее, варианть! и изменения, которне могут стать очевидньіми для специалистов в данном уровне техники, должнь! находиться в « 0 пределах обьема защить, представленного в приложенной формуле изобретения. в с Специалист в данной области может легко обнаружить основнье характернье особенности настоящего
Й изобретения и в пределах формуль! изобретения успешно произвести их зквивалентную замену, чтобь а приспособить изобретение к использованию в заданньх условиях.

Claims (1)

  1. Формула винаходу щ» со 1. Способ лечения ретровирусньїх инфекций у млекопитающих, содержащий введение зтому оо млекопитающему а) зффективного количества первого ингибитора ретровирусной протеазь!; и 5) зффективного 5р Количества второго ингибитора ретровирусной протеазь!, где зтот второй ингибитор ретровирусной протеазь о зффективен против по меньшей мере одного ретровирусного штамма, устойчивого к зтому первому ингибитору «Фо» ретровирусной протеазь.
    2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первьій и второй ингибиторь! вводят так, чтобьї зффективное количество обоих ингибиторов присутствовало в зтом млекопитающем.
    3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что введение первого и второго ингибиторов чередуют так, чтобь в зтом млекопитающем в период времени присутствовало зффективное количество одного ингибитора. (Ф) 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первьій ингибитор ретровирусной протеазь! является: ГІ М-(2(К)-Гидрокси-1(5)-инданил)-2(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4- (З-пиридилметил)-2(5)-М'-(1-бутилкарбоксамидо)-пиперазинил))-пентанамидом; во М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-фенил-3(5)-Ї(М-(2-хинолилкарбонил)-І -аспарагинилІамино|бутилі-( 4ак,ваб)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; (2553К,45,55)-2,5-бис-ІМ-(М-(М-метил-М-(2-пиридинилметил)амино|карбонил|валинилІамино)|-3,4-дигидрокси-1 «б-дифенилгексаном; (25535,55)-5-(М-І(М-(М-метил-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІіамино|карбонил|валинилІамино1-2-ІМ-(5-тиазол 65 ил)метоксикарбонил|амино|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексаном; З5-тетрагидрофураниловьм зфиром
    (2К-гидрокси-3-І(4-аминофенил)сульфонил)(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропил| карбаминовой кКИСлОТЬ; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-«(фенилтио)-3(5)-І((М-(2-метил-3-гидроксифенил)карбонил|амино|бу тиліІ-(4акК,ваз)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; ВА Бе 68 ще 31-1,3-бис((З-аминофенил)метилігексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-оном; М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил/і-25-|ЇХ пирролидин-1-ил)ацетиліамино!Ї-3,3-диметилбутанамидом; М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил)|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-м етил-3-(метилсульфонил)пропанамидом; 15-11КкК,2571-М-(2-гидрокси-3-(М'Є(2-метилпропил)-М'-(4-метоксифенилсульфонил)амино|-1--фенилметил) пропил)|-2-метил-3--(метилсульфонил)пропанамидом; 25-Ї(М-метиламино)ацетилІіамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)ам
    15. ино|-15-(фенилметил)пропил|-3,3-диметилбутанамидом; или (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино-4-ф енил-2-бутанолом;
    5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что второй ингибитор ретровирусной протеазьї является: М-(2(К)-гидрокси-1(5)-инданил)-2(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4--З3-пиридилметил)-2(5)-М'-(трет-бутилк арбоксамидо)-пиперазинил))-пентанамидом; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-фенил-3(5)-Ї(М-(2-хинолилкарбонил)-І -аспарагинилІамино|бутилі-( 4ак,ваб)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; (2553К,45,55)-2,5-бис-ІМ-(М-(М-метил-М-(2-пиридинилметил)амино|карбонил|валиниліамино!|-3,4-дигидрокси- с 1,6-дифенилгексаном; о (25535,55)-5-(М-(М-(М-метил-М-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІамино)карбонил|валинилІамино1|-2-ІМ-(5-тиаз олил)метоксикарбонил|амино)|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексаном; З5-тетрагидрофураниловьм зфиром (2К-гидрокси-3-І(4-аминофенил)сульфонил)(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропил| карбаминовой со кислотьї; о М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-«(фенилтио)-3(5)-І((М-(2-метил-3-гидроксифенил)карбонил|амино|бу тиліІ-(4акК,ваз)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; (ее) Ідк-42 ва бе в Фу 31-1,3-бис((З-аминофенил)метилігексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-оном; М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил/і-25-|ЇХ З пирролидин-1-ил)ацетилі амино!|-3,3-диметилбутанамидом; М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил)|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-м етил-3-(метилсульфонил)пропанамидом; « дю 15-11КкК,2571-М-(2-гидрокси-3-(М'Є(2-метилпропил)-М'-(4-метоксифенилсульфонил)амино|-1--фенилметил) з пропил)|-2-метил-3--(метилсульфонил)пропанамидом; с 25-Ї(М-метиламино)ацетилІіамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)ам ; з» ино|-15-(фенилметил)пропил|-3,3-диметилбутанамидом или (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино-4-ф їз 15 енил-2-бутанолом.
    6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первьій ингибитор ретровирусной протеазь! является: (Се) М-(2(К)-гидрокси-1(5)-инданил)-2(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4--З3-пиридилметил)-2(5)-М'-«(трет-бутилк бо арбоксамидо)-пиперазинил))-пентанамидом; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-фенил-3(5)-Ї(М-(2-хинолилкарбонил)-І -аспарагинилІамино|бутилі-( (ав) 50 д4ак,ваз)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; с» (2553К,45,55)-2,5-бис-ІМ-(М-(М-метил-М-(2-пиридинилметил)амино|карбонил|валинилІамино)|-3,4-дигидрокси-1 «б-дифенилгексаном; (25535,55)-5-(М-(М-(М-метил-М-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІамино)карбонил|валинилІамино1|-2-ІМ-(5-тиаз олил)метоксикарбонил|амино)|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексаном; З5-тетрагидрофураниловьм зфиром ГФ) (2К-гидрокси-3-І(4-аминофенил)сульфонил)(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропил| карбаминовой 7 кКИСлОТЬ; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-(фенилтио)-3(5)-ІМ-(2-метил-З-гидроксифенил)карбонил|амино|бу тиліІ-(4акК,ваз)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; 60 відо ве 68 в 31-1,3-бис((З-аминофенил)метилігексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-оном; М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил/і-25-|ЇХ пирролидин-1-ил)ацетиліамино!Ї-3,3-диметилбутанамидом; 65 М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил) І1,З -бензодиоксол-5 -ил)сульфонилі амино|-15-(фенилметил)пропил|-25-метил-3--«метилсульфонил)пропанамидом;
    15-11КкК,2571-М-(2-гидрокси-3-(М'Є(2-метилпропил)-М'-(4-метоксифенилсульфонил)амино|-1--фенилметил) пропил)|-2-метил-3--«метилсульфонил)пропанамидом или (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино- 4-фенил-2-бутанолом, и второй ингибитор ретровирусной протеазьї является 25-Ї(М-метиламино)ацетилІіамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)ам ино|-15-(фенилметил)пропил|-3,3-диметилбутанамидом.
    7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первьій ингибитор ретровирусной протеазь! является: 70 М-(2(К)-гидрокси-1(5)-инданил)-2(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4--З3-пиридилметил)-2(5)-М'-(трет-бутилк арбоксамидо)-пиперазинил))-пентанеамидом, а второй ингибитор ретровирусной протеиназь! является (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино- 4-фенил-2-бутанолом; М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил)|(І,З-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі|амино|-ІЗ-«фенилметил)пропил)|-25-мет ил-3-"(«метилсульфонил)пропанамидом; 15-11КкК,2571-М-(2-гидрокси-3-(М'Є(2-метилпропил)-М'-(4-метоксифенилсульфонил)амино|-1--фенилметил) пропил)|-2-метил-3--«метилсульфонил)пропанамидом или 25-Ї(М-метиламино)ацетилІіамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)ам ино|-15-(фенилметил)пропил|-3,3-диметилбутанамидом.
    8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первьій ингибитор ретровирусной протеазь! является: (25535,55)-5-(М-(М-(М-метил-М-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІамино)карбонил|валинилІамино1|-2-ІМ-(5-тиаз олил)метоксикарбонил|амино)|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексаном, а второй ингибитор ретровирусной протеиназь! является с (2кК,35)-3-(М-метиламиноацетил-і -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино- 4-фенил-2-бутанолом; і) М-(2К-гидрокси-3-Ї(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|(2-метилпропил)амино|-15-(фенилметил)пропил/|-25-|ЇК пирролидин-1-ил)ацетиліамино)|-3,3-диметилбутанамидом или со зо 25-Ї(М-метиламино)ацетилІамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)амино) -18-(фенилметил)пропил/|-3,3-диметилбутанамидом. о
    9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пациенту вводят третий ингибитор ретровирусной протеазь, со которьій зффективен против по меньшей мере одного вирусного штамма, которьій устойчив как к первому так и ко второму ингибиторам ретровирусной протеазь. Ме
    10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что третий ингибитор ретровирусной протеазь! является: «г М-(2(К)-гидрокси-1(5)-инданил)-2(К)-фенилметил-4(5)-гидрокси-5-(1-(4--З3-пиридилметил)-2(5)-М'-(трет-бутилк арбоксамидо)-пиперазинил))-пентанамидом; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-фенил-3(5)-ІМ-(2-хинолилкарбонил)-І -аспарагинилІіамино|бутилі-(4 ак,ваб5)-изохинолин-3(5)-карбоксамидом; « (2553К,45,55)-2,5-бис-ІМ-(М-(М-метил-М-(2-пиридинилметил)амино|карбонил|валиниліамино!|-3,4-дигидрокси- з с 1,6-дифенилгексаном; . (25535,55)-5-(М-(М-(М-метил-М-(2-изопропил-4-тиазолил)метилІамино)карбонил|валинилІамино1|-2-ІМ-(5-тиаз и?» олил)метоксикарбонил|амино)|-3-гидрокси-1,6-дифенилгексаном; З5-тетрагидрофураниловьм зфиром
    45. (2К-тидрокси-3-((4-аминофенил)сульфонилі|(2-метилпропил)амино)|-15-(фенилметил)пропил) карбаминовой ї5» кКИСлОТЬ; М-трет-бутилдекагидро-2-І2(К)-гидрокси-4-«(фенилтио)-3(5)-І((М-(2-метил-3-гидроксифенил)карбонил|амино|бу ік тиліІ-(4акК,ваз)-изохинолин-3 (5)-карбоксамидом; со Ідв-(4 Ба ба ще о 50 3-1,3-бис((З-аминофенил)метил|ігексагидро-5,6-дигидрокси-4,7-бис(фенилметил)-2Н-1,3-диазепин-2-оном; М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонилі(2-метилпропил)амино!|-15-(фенилметил)пропил/і-25-|ЇХ с» пирролидин-1-ил)ацетиліамино!Ї-3,3-диметилбутанамидом; М-(2К-гидрокси-3-(2-метилпропил)|(1,3-бензодиоксол-5-ил)сульфонил|амино!|-15-(фенилметил)пропилі|-25-м етил-3-(метилсульфонил)пропанамидом; 22 15-11КкК,2571-М-(2-гидрокси-3-(М'Є(2-метилпропил)-М'-(4-метоксифенилсульфонил)амино|-1--фенилметил) Ге! пропил)|-2-метил-3--(метилсульфонил)пропанамидом; 25-Ї(М-метиламино)ацетилІіамино|-М-(2К-гидрокси-3-((1,3-бензодиоксол-5-ил)усульфонил)(2-метилпропил)ам де ино|-15-(фенилметил)пропил|-3,3-диметилбутанамидом или 60 (2к,35)-3-(М-метиламиноацетил-їі -трет-бутилглицинил)амино-1-(М-изоамил-М-(трет-бутилкарбамоил))амино-4-ф енил-2-бутанолом.
    11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что по крайней мере один вирусньій штамм устойчив к зтому первому ингибитору ретровирусной протеазьї, и по меньшей мере один вирусньй штамм устойчив к зтому второму ингибитору ретровирусной протеазьі, каждьій из которьїх продуцирует ретровируснье протеазьї, имеющие по б5 меньшей мере одно аминокислотное замещение в пептидной последовательности протеазь, где зто замещение влияет на ту же самую область сайта связьшания субстрата протеазьь и содействует наблюдаемой устойчивости к ингибитору.
    12. Способ по п. 17, отличающийся тем, что включаєт также введение по меньшей мере одного противовирусного средства, отличного от ингибитора протеазь..
    13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что противовирусное средство является аналогом нуклеозида, ненуклеозидньім ингибитором обратной транскриптазьі), антагонистом іа! (тирозинаминотрансферазь!) или ингибитором гликозидазь.
    14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что аналог нуклеозида вьібирают А7У, Ю0І, РОС, ЗТС, 04Т или РМЕА и зтот ингибитор гликозидазьї является кастаноспермином или М-бутил-1-деоксиножирмицином. 70 15. Способ по п. 1, отличающийся тем, что млекопитающее является человеком, обезьяной или кошкой.
    16. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ретровирус является ВИЧ или НТІМ.
    17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что ретровирус является ВИЧ-1 или ВИЧ-2.
    18. Способ лечения ретровирусньїх инфекций у млекопитающего, содержащий а) вьібор двух ингибиторов ретровирусной протеазь), где второй вьібранньій ингибитор ретровирусной /5 протеазьь зффективен против по меньшей мере одного ретровирусного штамма, устойчивого к первому ингибитору ретровирусной протеазь и Б) введение зтому пациенту зффективного количества первого и второго вьібранньїх ингибиторов.
    19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что первьїй и второй ингибиторь! вводят так, чтобь! в зтом пациенте присутствовало зффективное количество обоих ингибиторов.
    20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что введение первого и второго ингибиторов чередуют так, чтобь в организме пациента в период времени присутствовало зффективное количество одного ингибитора. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 10, 15.10.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і сч ов науки України. о (зе) «в) (ее) (о) «
    - . и? щ» се) (ее) («в) сю» іме) 60 б5
UA96124971A 1994-06-03 1995-02-06 Спосіб лікування ретровірусних інфекцій UA49803C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US25363894A 1994-06-03 1994-06-03
PCT/US1995/006673 WO1995033464A2 (en) 1994-06-03 1995-06-02 Retroviral protease inhibitor combinations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA49803C2 true UA49803C2 (uk) 2002-10-15

Family

ID=22961095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA96124971A UA49803C2 (uk) 1994-06-03 1995-02-06 Спосіб лікування ретровірусних інфекцій

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6100277A (uk)
EP (2) EP0762880B1 (uk)
JP (2) JP3896159B2 (uk)
KR (1) KR100386754B1 (uk)
CN (1) CN1290500C (uk)
AT (1) ATE307581T1 (uk)
AU (1) AU696299B2 (uk)
BR (1) BR9507912A (uk)
CA (1) CA2191948A1 (uk)
CZ (1) CZ296149B6 (uk)
DE (1) DE69534549T2 (uk)
DK (1) DK0762880T3 (uk)
ES (1) ES2252742T3 (uk)
FI (2) FI118986B (uk)
HU (1) HUT76979A (uk)
MX (1) MX9700237A (uk)
NO (1) NO322963B1 (uk)
NZ (1) NZ287702A (uk)
PL (1) PL180070B1 (uk)
RU (1) RU2166317C2 (uk)
UA (1) UA49803C2 (uk)
WO (1) WO1995033464A2 (uk)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5610294A (en) * 1991-10-11 1997-03-11 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Substituted cyclic carbonyls and derivatives thereof useful as retroviral protease inhibitors
DE69321845T2 (de) 1992-08-25 1999-04-29 Searle & Co Hydroxyethylaminosulfonamide verwendbar als inhibitoren retroviraler proteasen
US7141609B2 (en) 1992-08-25 2006-11-28 G.D. Searle & Co. α- and β-amino acid hydroxyethylamino sulfonamides useful as retroviral protease inhibitors
US5723490A (en) * 1992-09-08 1998-03-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated THF-containing sulfonamide inhibitors of aspartyl protease
WO1994015608A1 (en) * 1993-01-15 1994-07-21 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Hiv protease inhibitors
US20030207813A1 (en) * 1996-12-09 2003-11-06 G.D. Searle Retroviral protease inhibitor combinations
US5756533A (en) * 1995-03-10 1998-05-26 G.D. Searle & Co. Amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
GB9503850D0 (en) * 1995-02-25 1995-04-19 Glaxo Group Ltd Medicaments
US6667307B2 (en) 1997-12-19 2003-12-23 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
EP1188766A1 (en) 1995-03-10 2002-03-20 G.D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5705500A (en) * 1995-03-10 1998-01-06 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
ATE229033T1 (de) * 1995-03-10 2002-12-15 Searle & Co Heterocyclocarbonyl-aminosäure-hydroxyethylamin - sulfonamid inhibitoren retroviraler proteasen
US6861539B1 (en) 1995-03-10 2005-03-01 G. D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6143788A (en) * 1995-03-10 2000-11-07 G.D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethlamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6150556A (en) * 1995-03-10 2000-11-21 G. D. Dearle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5776971A (en) * 1995-03-10 1998-07-07 G.D. Searle & Co. Heterocyclecarbonyl amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US7339078B2 (en) 1995-03-10 2008-03-04 G.D. Searle Llc Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5985870A (en) * 1995-03-10 1999-11-16 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6407134B1 (en) 1995-03-10 2002-06-18 G. D. Searle & Co. Heterocyclecarbonyl amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6169085B1 (en) 1995-03-10 2001-01-02 G. D. Searle & Company Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5691372A (en) * 1995-04-19 1997-11-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Oxygenated-Heterocycle containing sulfonamide inhibitors of aspartyl protease
US6037157A (en) * 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
AU759386B2 (en) * 1995-06-29 2003-04-10 Abbvie Inc. Use of Ritonavir (ABT-538) for improving the pharmacokinetics of drugs metabolized by cytochrome P450 in a method of treating AIDS
EP0861249A1 (en) * 1995-11-15 1998-09-02 G.D. Searle & Co. Substituted sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
CN1228026A (zh) * 1996-06-25 1999-09-08 葛兰素集团有限公司 用于治疗hiv感染的含有vx478、叠氮胸苷、ftc和/或3tc的复方制剂
DE69718168T2 (de) * 1996-06-25 2003-10-23 Glaxo Group Ltd Zusammensetzungen enthaltend vx478, zidovudine und 159u89 für die verwendung in der behandlung von hiv
US6113920A (en) * 1996-10-31 2000-09-05 Glaxo Wellcome Inc. Pharmaceutical compositions
CA2270546A1 (en) * 1996-11-08 1998-05-22 Japan Energy Corporation Aids remedy
US6045829A (en) * 1997-02-13 2000-04-04 Elan Pharma International Limited Nanocrystalline formulations of human immunodeficiency virus (HIV) protease inhibitors using cellulosic surface stabilizers
US6180634B1 (en) 1997-11-13 2001-01-30 Merck & Co., Inc. Combination therapy for the treatment of AIDS
ES2604662T3 (es) 1998-06-23 2017-03-08 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ensayo de acondicionamiento físico y métodos para reducir la resistencia del VIH a la terapia
AU4862799A (en) * 1998-07-08 2000-02-01 G.D. Searle & Co. Retroviral protease inhibitors
GB9815567D0 (en) * 1998-07-18 1998-09-16 Glaxo Group Ltd Antiviral compound
US20010042866A1 (en) * 1999-02-05 2001-11-22 Carrie Carter Coman Inxalygazn optical emitters fabricated via substrate removal
RU2247123C2 (ru) * 1999-10-06 2005-02-27 Тиботек Фармасьютикалз Лтд. Гексагидрофуро [2,3-b] фуран-3-ил-n-{3-[(1,3-бензодиоксол-5- илсульфонил)(изобутил)амино]-1-бензил -2-гидроксипропил}карбамат, фармацевтическая композиция на их основе, способы ингибирования и способ лечения
US6617310B2 (en) 2000-07-19 2003-09-09 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Phosphate esters of bis-amino acid sulfonamides containing substituted benzyl amines
AU2001281250A1 (en) 2000-08-11 2002-02-25 The Brigham And Women's Hospital, Inc. (hydroxyethyl)ureas as inhibitors of alzheimer's beta-amyloid production
US7157489B2 (en) * 2002-03-12 2007-01-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois HIV protease inhibitors
US20040197321A1 (en) * 2002-03-19 2004-10-07 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
US20030180279A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
US20050131042A1 (en) * 2003-12-11 2005-06-16 Flentge Charles A. HIV protease inhibiting compounds
US8193227B2 (en) 2003-12-11 2012-06-05 Abbott Laboratories HIV protease inhibiting compounds
US20050148523A1 (en) * 2003-12-15 2005-07-07 Colonno Richard J. Method of treating HIV infection in atazanavir-resistant patients using a combination of atazanavir and another protease inhibitor
US8173144B2 (en) * 2004-11-04 2012-05-08 L'oreal Administration of urea compounds for combating signs of cutaneous aging
CA2653374A1 (en) * 2006-07-07 2008-01-24 Manoj C. Desai Modulators of pharmacokinetic properties of therapeutics
PT2178513E (pt) * 2007-06-22 2011-05-31 Bristol Myers Squibb Co Composi??es em comprimido que cont?m atazanavir
KR20100033379A (ko) * 2007-06-22 2010-03-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 아타자나비르를 함유하는 정제 조성물
CN101778624A (zh) * 2007-06-22 2010-07-14 百时美施贵宝公司 含有阿扎那韦的压片组合物
ATE499927T1 (de) * 2007-06-22 2011-03-15 Bristol Myers Squibb Co Tablettierte atazanavirhaltige zusammensetzungen
US20100021505A1 (en) * 2008-07-28 2010-01-28 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
EP2151450A1 (de) * 2008-07-29 2010-02-10 Sandoz AG Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden
CA2967453C (en) 2010-01-27 2018-07-17 Viiv Healthcare Company Combinations for use in the inhibition of hiv-1
US10889411B2 (en) 2017-02-03 2021-01-12 Berry Plastics Corporation Container with lid and detachable lid collar

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5142056A (en) * 1989-05-23 1992-08-25 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
US4652552A (en) * 1984-09-10 1987-03-24 E. I. Du Pont De Nemours And Company Tetrapeptide methyl ketone inhibitors of viral proteases
US4644055A (en) * 1984-12-17 1987-02-17 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for preparing specific inhibitors of virus-specified proteases
US4857511A (en) * 1985-09-17 1989-08-15 Burroughs Wellcome Co. Treatment of human viral infections
US5458889A (en) * 1986-05-22 1995-10-17 Atlantic Pharmaceutical Products Limited Methods and compositions for inhibiting or destroying viruses or retroviruses
USH1649H (en) * 1987-07-31 1997-05-06 Barrish; Joel C. HIV protease inhibitor combinations
DE3830825A1 (de) * 1987-09-15 1989-03-23 Sandoz Ag Hydrophile reninhemmer, ihre herstellung und verwendung
IL89900A0 (en) * 1988-04-12 1989-12-15 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids and pharmaceutical compositions containing them
IL90218A0 (en) * 1988-05-13 1989-12-15 Abbott Lab Retroviral protease inhibitors
US5122517A (en) * 1988-06-10 1992-06-16 Regents Of The University Of Minnesota Antiviral combination comprising nucleoside analogs
CA1340588C (en) * 1988-06-13 1999-06-08 Balraj Krishan Handa Amino acid derivatives
DE3912829A1 (de) * 1989-04-19 1990-10-25 Bayer Ag Verwendung von renininhibitorischen peptiden als mittel gegen retroviren
EP0815856B1 (en) * 1990-11-19 2005-06-01 Monsanto Company Retroviral protease inhibitors
US5413999A (en) * 1991-11-08 1995-05-09 Merck & Co., Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
NZ244986A (en) * 1991-11-08 1995-10-26 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitor and pharmaceutical compositions
WO1993017003A1 (en) * 1992-02-26 1993-09-02 Smithkline Beecham Corporation Retroviral protease inhibitors
US5559256A (en) * 1992-07-20 1996-09-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Aminediol protease inhibitors
US5521219A (en) * 1992-08-25 1996-05-28 G. D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamides useful as retroviral protease inhibitors
IS2334B (is) * 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
PL310895A1 (en) * 1993-03-31 1996-01-08 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors in aids treating pharmaceutic compositions
US5504104A (en) * 1993-11-19 1996-04-02 Warner-Lambert Company Tricyclic pyrone derivatives as protease inhibitors and antiviral agents
US5476874A (en) * 1994-06-22 1995-12-19 Merck & Co., Inc. New HIV protease inhibitors
IL114808A (en) * 1994-08-11 1999-10-28 Merck & Co Inc Combinations of protease inhibitors for the treatment of hiv infection and aids
US6037157A (en) * 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics

Also Published As

Publication number Publication date
AU2651095A (en) 1996-01-04
NO322963B1 (no) 2006-12-18
PL317425A1 (en) 1997-04-14
PL180070B1 (pl) 2000-12-29
FI118986B (fi) 2008-06-13
FI964835A (fi) 1997-01-29
KR100386754B1 (ko) 2003-08-21
CA2191948A1 (en) 1995-12-14
CZ296149B6 (cs) 2006-01-11
JP2007020576A (ja) 2007-02-01
NO965136D0 (no) 1996-12-02
EP0762880B1 (en) 2005-10-26
WO1995033464A2 (en) 1995-12-14
JPH10505324A (ja) 1998-05-26
ATE307581T1 (de) 2005-11-15
MX9700237A (es) 1997-04-30
FI964835A0 (fi) 1996-12-03
FI20085256A (fi) 2008-03-28
CN1166786A (zh) 1997-12-03
AU696299B2 (en) 1998-09-03
EP0762880A1 (en) 1997-03-19
HUT76979A (hu) 1998-01-28
CN1290500C (zh) 2006-12-20
DK0762880T3 (da) 2006-03-06
BR9507912A (pt) 1997-08-12
CZ352596A3 (en) 1997-10-15
EP1649871A1 (en) 2006-04-26
ES2252742T3 (es) 2006-05-16
RU2166317C2 (ru) 2001-05-10
WO1995033464A3 (en) 1996-01-04
JP3896159B2 (ja) 2007-03-22
NO965136L (no) 1997-01-20
NZ287702A (en) 2000-06-23
DE69534549D1 (de) 2005-12-01
HU9603328D0 (en) 1997-01-28
US6100277A (en) 2000-08-08
DE69534549T2 (de) 2006-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA49803C2 (uk) Спосіб лікування ретровірусних інфекцій
Qian et al. HIV entry inhibitors and their potential in HIV therapy
Lazdins et al. In Vitro Effect of α1-Acid Glycoprotein on the Anti—Human Immunodeficiency Virus (HIV) Activity of the Protease Inhibitor CGP 61755: A Comparative Study with Other Relevant HIV Protease Inhibitors
US6593362B2 (en) Non-peptidic cyclophilin binding compounds and their use
JPH05506031A (ja) 免疫不全ウイルス感染に伴う疾病の抑制
WO1993001820A2 (en) Inhibition of non-cd4 mediated hiv infection
CA2211973A1 (en) Combination therapy for hiv infection using the hiv protease inhibitor indinavir and the reverse transcriptase inhibitor 3tc, optionally together with azt, ddi or ddc
US20050059745A1 (en) Antiviral therapy
EP1194141B1 (en) Antiviral therapy
US6387959B1 (en) Antiviral therapy
EP1263429B1 (en) Antiviral therapy
EP1064940A1 (en) Antiviral therapy
WO2012100835A1 (en) Methods and compositions for the treatment of aids
Maeda et al. In vitro and in vivo resistance to human immunodeficiency virus type 1 entry inhibitors.
US6964763B1 (en) Methods and compositions for inhibiting HIV infectivity and blocking chemokine activity
US20030207813A1 (en) Retroviral protease inhibitor combinations
Agadjanyan et al. Monoclonal antibodies define a cellular antigen involved in HTLV-I infection
Ambrosioni et al. Enfuvirtide
WO1999026649A1 (en) Methods and compositions for inhibiting hiv infectivity and blocking chemokine activity
OA17892A (en) Compounds for the treatment and prevention of retroviral Infections