JPH10505324A - レトロウイルスプロテアーゼインヒビターの組合せ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、レトロウイルスの複製を容器内あるいは生体内で防止するのに有効なレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤のコンビネーションを使用することにより、哺乳動物のレトロウイルス感染症（例えばＨＩＶ）を治療する方法を指向するものである。特に、本発明はプロテアーゼ阻害剤化合物を他のプロテアーゼ阻害剤化合物とのコンビネーション療法で使用する方法に関する。本発明はまたプロテアーゼ阻害剤とプロテアーゼ阻害剤の外の抗ウイルス剤とのコンビネーションを用いるコンビネーション療法に関するものである。

Description

【発明の詳細な説明】 レトロウイルスプロテアーゼインヒビターの組合せ発明の背景 １．発明の分野 本発明は、哺乳動物レトロウイルス（例えば、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩ Ｖ））のインビトロおよびインビボでの複製の防止に有効なレトロウイルスプロ テアーゼインヒビターの組合せを用いる、哺乳動物レトロウイルス（例えば、ヒ ト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ））感染の治療法に関する。特に本発明は、他の プロテアーゼインヒビター化合物との併用療法で使用されるプロテアーゼインヒ ビター化合物に関する。２．関連技術 レトロウイルスの複製サイクルの間、ｇａｇおよびｇａｐ−ｐｏｌ遺伝子転写 産物はタンパク質として翻訳される。このタンパク質は次に、ウイルスにコード されるプロテアーゼ（またはプロテイナーゼ）により処理されて、ウイルス酵素 およびウイルスコアの構造タンパク質を生成する。一般的には、ｇａｇ前駆体タ ンパク質は処理されてコアタンパク質になり、ｐｏｌ前駆体タンパク質は処理さ れてウイルス酵素（例えば、逆転写酵素やレトロウイルスプロテアーゼ）になる 。感染性ウイルス粒子を組み立てるには、レトロウイルスプロテアーゼによる前 駆体タンパク質の正しい処理が必要であることは、証明されている。例えば、Ｈ ＩＶのｐｏｌ遺伝子のプロテアーゼ領域のフレームシフト突然変異は、ｇａｇ前 駆体タンパク質の処理を妨害することは証明されている。またｇａｇ前駆体タン パク質が防害されることは、ＨＩＶプロテアーゼ活性部位中のアスパラギン酸残 基の部位特異的突然変異誘発によっても証明されている。すなわち、レトロウイ ルスプロテアーゼの作用を阻害することによりウイルス複製を阻害するという試 みがなされている。 レトロウイルスプロテアーゼ阻害は、典型的には遷移状態の模倣が関与し、こ うしてレトロウイルスプロテアーゼは、ｇａｇおよびｇａｐ−ｐｏｌタンパク質 と競合して酵素に結合（典型的には可逆的に）し、こうして構造タンパク質の特 異的処理とレトロウイルスプロテアーゼ自身の放出を阻害する模倣化合物に接触 される。この方法で、レトロウイルス複製プロテアーゼは有効に阻害される。 特にプロテアーゼの阻害（例えば、ＨＩＶプロテアーゼの阻害）のためにいく つかのクラスの模倣化合物が提唱されている。そのような模倣化合物には、ヒド ロキシエチルアミン同配体(isosteres)、還元アミド同配体および非ペプチド同 配体がある。例えば、ＥＰ０３４６８４７；ＥＰ０３４２５４１；ロバーツ(Rob erts)ら、「ペプチドベースのプロテアーゼインヒビターの合理的設計」、Scine ce,２４８，３５８（１９９０）；エリックソン（Erickson）ら、「ＨＩＶ−１ プロテアーゼと複合体を形成したＣ₂対称インヒビターの設計活性および２．８ Å結晶構造」、Scinece,２４９，５２７（１９９０）；およびエス・タイスリボ ングス(S．Thaisrivongs)、「非ペプチドＨＩＶプロテアーゼインヒビターの構 造ベースの設計」、第３５回バッファロー医化学ミーティング（３５th Annual Buffalo Medicinal Chemistry Meeting）、ニューヨーク州立大学バッファロー 校、バッファロー、ニューヨーク、１９９４年５月２２〜２５日を参照。 ＨＩＶプロテアーゼインヒビターのようなレトロウイルスプロテアーゼインヒ ビターについての問題は、インヒビターに耐性のウイルス株の出現である。例え ば、メルク社(Merck & Co.)のＨＩＶプロテアーゼインヒビターであるＬ−７３ ５，５２４は、ヒトのＨＩＶ感染に有効であるが、後にＬ−７３５，５２４耐性 のＨＩＶ株が患者に出現する（ワルドホルツ（Waldholz）、The Wall Street Jo urnal，February ２５，１９９４，page B3；およびコンドラ（Condra）ら、Nat ure ３７４：５６９−５７１（１９９５））。他の例は、バッカ(Vacca)ら、Pr oc．Natl．Acad．Sci．USA ９１：４０９６−４１００（１９９４）；ホー（Ho ）ら、J．Virol．６８：２０１６−２０２０（１９９４）；およびサルダナ(Sar dana)ら、Biochem．３３：２００４−２０１０（１９９４）に見いだされる。発明の簡単な説明 本発明は、哺乳動物レトロウイルス（例えば、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩ Ｖ））のインビトロおよびインビボでの複製の防止に有効なレトロウイルスプロ テアーゼインヒビターの組合せを用いる、哺乳動物レトロウイルス（例えば、ヒ ト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ））感染の治療法に関する。特に本発明は、他の プロテアーゼインヒビター化合物との併用療法で使用されるプロテアーゼインヒ ビター化合物に関する。さらに、この組合せはまた、他の抗ウイルス剤と組合せ て使用することもできる。発明の詳細な説明 レトロウイルスプロテアーゼは、レトロウイルス複製過程において決定的に重 要な酵素である。レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）の増殖は、ウイルスをレト ロウイルスプロテアーゼインヒビターに曝すことにより妨害できる。しかしレト ロウイルスをプロテアーゼインヒビターに長期間曝すと、変種レトロウイルスが 選択されて、プロテアーゼインヒビターに耐性の新しい主要なレトロウイルス株 が出現する。この新しい主要なレトロウイルス株は、プロテアーゼインヒビター に阻害されないか、またはより頻繁にはプロテアーゼインヒビターによる阻害が 不十分であるプロテアーゼを産生し、インヒビターの濃度を実質的に増加させな い限りプロテアーゼインヒビターの存在下でも自由に増殖する。本発明は、レト ロウイルスプロテアーゼインヒビターに耐性のレトロウイルス株の出現を克服す る方法を提供する。 本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト、サル、ネコなど）への、少なくとも２つ の有効量のレトロウイルスプロテアーゼインヒビターの投与を提供する。投与は 、少なくとも２つのレトロウイルスプロテアーゼインヒビターの同時投与により 行われれ、すなわち哺乳動物中である時点に少なくとも２つのインヒビターの有 効量が存在するように２つまたはそれ以上のレトロウイルスプロテアーゼインヒ ビターが投与される。あるいは、投与は、少なくとも２つのレトロウイルスプロ テアーゼインヒビターの連続的または交互の投与により行われ、すなわち哺乳動 物中である時点に１つのインヒビターのみの有効量が存在するように２つまたは それ以上のレトロウイルスプロテアーゼインヒビターが投与される。レトロウイ ルスプロテアーゼインヒビターを正しく選択することにより、この方法は、任意 の１つのインヒビターに対して耐性の株の存在下でもレトロウイルスの増殖を有 効に防止することができる。 レトロウイルスプロテアーゼインヒビターは、レトロウイルスの増殖培養物に インヒビターを曝すことによりインビボまたはインビトロで出現するルトロウイ ルスの耐性株のプロフィールに基づき選択される。レトロウイルスプロテアーゼ インヒビターは、少なくとも１つのレトロウイルス耐性株による交差耐性の欠如 について選択される。レトロウイルス株が両方のインヒビターに対して耐性であ る時、レトロウイルス株は２つのプロテアーゼインヒビターに対して交差耐性で あると見なされる。ある程度の交差耐性は許容されるが、群として考えた時選択 されたレトロウイルスプロテアーゼの間に交差耐性がないことが好ましい。すな わち、第１のレトロウイルスプロテアーゼインヒビターに曝した後に出現するレ トロウイルスの変種（突然変異株）は、第２のレトロウイルスプロテアーゼイン ヒビターにより阻害されるか、または第１と第２のレトロウイルスプロテアーゼ インヒビターに曝した後に出現する変種は、第３のまたは第４のレトロウイルス プロテアーゼインヒビターにより阻害されるなど。 種々のプロテアーゼインヒビターの間の交差耐性プロフィールの比較を行い、 好ましくはほとんどまたは全く交差耐性を示さない併用療法のための化合物が選 択される。薬剤耐性の表現型は、耐性無し、低レベルの耐性（ＥＣ₅₀またはＥＣ₉₀ で約１０倍未満のシフト）、中レベルの耐性（ＥＣ₅₀またはＥＣ₉₀で約１０〜 約１００倍のシフト）、高レベルの耐性（ＥＣ₅₀またはＥＣ₉₀で約１００倍以上 のシフト）に分類される。達成できるインビボインヒビター濃度が、耐性ウイル スに対して阻害効果が低下している時、薬剤耐性は患者のウイルス負荷への作用 の低下と相関することが予測される。すなわち、プロテアーゼインヒビターのよ り好適な組合せは、最小の交差耐性プロフィール（すなわち、好ましくは中レベ ルの耐性以下であり、より好ましくは低レベル以下の耐性であり、そして最も好 ましくは耐性無し）を示し、野性型および／または別のインヒビターに対して選 択された耐性ウイルスに対して最大の本質的力価を示すものである。例えば、第 １の化合物と組合せて使用するのに好適な化合物は、中レベル、より好ましくは 高レベルで第１の化合物に耐性のウイルス株に対して有効であることが好ましい 。各インヒビターおよび組合せの薬理および毒性は、併用療法のインヒビターの 選択の因子でもある。 より好ましくは、第１のレトロウイルスプロテアーゼインヒビターに対して耐 性の少なくとも１つのウイルス株と、第２のレトロウイルスプロテアーゼインヒ ビターに対して耐性の少なくとも１つのウイルス株が、プロテアーゼの同じ基質 結合部位領域に影響し観察されたインヒビター耐性に寄与するプロテアーゼペプ チド配列中の異なるアミノ酸置換を有する時、レトロウイルスプロテアーゼイン ヒビターが選択される。すなわち、プロテアーゼ中の同じ部位で起きる可能なア ミノ酸置換の数は限定される。これは、この部位が酵素の活性、有効性および／ または安定性に決定的に重要である時、特に真実である。 これは、本発明の例１および例２のＨＩＶプロテアーゼインヒビターに関して 観察された。例１の化合物に対するレトロウイルス耐性は、ＨＩＶプロテアーゼ のアミノ酸８８の部位突然変異（アスパラギン８８のアスパラギン酸８８による 置換）により得られた。例２の化合物に対するレトロウイルス耐性も、ＨＩＶプ ロテアーゼのアミノ酸８８の部位突然変異（アスパラギン８８のセリン８８によ る置換）により得られた。アミノ酸８８のいくつかの置換は、酵素活性の喪失を 引き起こすことが知られている（ロエブ（Loeb）ら、Nature ３４０：３８７− ４００（１９８９））。すなわち、例１と２のＨＩＶプロテアーゼインヒビター の両方の投与は、両方のインヒビターに対して交差耐性のウイルスの耐性株のさ らなる産生の可能性を実質的に低下させる。両方のインヒビターを組合せて６週 間治療した場合、同期間の１つのインヒビターに対して耐性の表現型の出現と比 較して、組合せて使用した両方のインヒビターに対する耐性は検出されていない 。酵素活性に影響する部位突然変異以外に、酵素活性および／または耐性に実質 的に影響しない同じ変種の他の部位突然変異も発生し得る。 あるいは、より好ましくは、第１のレトロウイルスプロテアーゼインヒビター に対して少なくとも１つのウイルス耐性株が、第２のプロテアーゼインヒビター に対して感受性が上昇している時、または第２のレトロウイルスプロテアーゼイ ンヒビターに対して少なくとも１つのウイルス耐性株が、第１のプロテアーゼイ ンヒビターに対して感受性が上昇している時、レトロウイルスプロテアーゼイン ヒビターが選択される。 本発明の方法での使用に適した代表的なレトロウイルスプロテアーゼインヒビ ターには、共有の同時係属米国特許出願第０８／１５２，９３４号（１９９３年 １１月１５日出願）、第０８／２５３，５３１号（１９９４年６月３日出願）、 第０８／１０９、７８７号（１９９３年８月２０日出願）、第０８／１１０，９ １１号（１９９３年８月２４日出願）、第０８／１１０，９１３号（１９９３年 ８月２４日出願）、第０８／１１０，９１２号（１９９３年８月２４日出願）、 第０８／２０４，８２７号（１９９４年３月２日出願）、第０７／８８６，５５ ６号（１９９２年５月２０日出願）、第０７／８８６，６６３号（１９９２年５ 月２０日出願）、第０７／８８６，５３１号（１９９２年５月２０日出願）、第 ０８／１４８，８１７号（１９９３年１１月８日出願）、第０８／８８６，７０ ０号（１９９２年５月２１日出願）、および第０７／９９８，１８７号（１９９ ２年１２月２９日出願）、およびＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／１０５５２ 号（１９９３年１０月２９日出願）、ＰＣＴ／ＵＳ９３／１０４６０号（１９９ ３年１０月２９日出願）、ＰＣＴ／ＵＳ９３／１０４６１号（１９９３年１０月 ２９日出願）に開示および記載されているプロテアーゼがあるが、これらに限定 されない（これらはそれぞれ、参考のため本明細書に引用される）。本発明の方 法での使用に適したさらなるレトロウイルスプロテアーゼインヒビターには、米 国特許第５，１５７，０４１号；ＥＰ３４６，８４７号；米国特許出願第０７／ ８８３，８２５号（１９９２年５月１５日出願）；ＷＯ９３／０９０９６号；Te t．Lett.３５：６７３−６７６（１９９４）；Proc．Natl．Acad．Sci．USA，９ １：４０９６−４１００（１９９４）；ワイ・エヌ・ウォング（Y．N．Wong）ら 、Biopharm．& Drug Dispos.１５：５３５−５４４（１９９４）；エム・エル・ ウェストとディー・ピー・フェアリー（M．L．West and D．P．Fairlie）、Tren ds Pharmacol．Sci．１６：６７−７５（１９９５）；およびエス・タイスリボ ングス(S．Thaisrivongs)、「ＨＩＶプロテアーゼインヒビター」、Ann．Report s Med．Chem.，Vol.２９，Chap．１４，pp１３３−１４４（１９９４）（アカデ ミックプレス（Academic Press）、ジェイ・ブリストル（J．Bristol）編）に開 示および記載されているプロテアーゼがあるが、これらに限定されない（これら はそれぞれ、参考のため本明細書に引用される）。 さらに説明しなくても、当業者は前記の記載を用いて、本発明を最大に利用で きると考えられる。以下の好適な実施態様は、すべての可能な化合物の組合せを 網羅するものではなく、有効であることが記載される薬剤組合せの例を提供する のみである。耐性ウイルス単離物（以下に記載するものに限定されない）を用い るこれらおよび他のプロテアーゼインヒビターの同様の試験は、適当な薬剤組合 せを同定するのに有効であろう。従って以下の好適な実施態様は、単に例示のた めであり、決して本発明を限定するものではない。例１ ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ¹−［３−［［［１，１−ジメチルエ チル）アミノ］カルボニル］）２−メチルプロピル）アミノ］−２−ヒドロキシ −１−（フェニルメチル）プロピル］−２−［（２−キノリニルカルボニル）ア ミノ］−ブタンジアミドは、共有の同時係属米国特許出願第０８／１５２，９３ ４号（１９９３号１１月１５日出願）および第０８／１５６，４９８号（１９９ ３号１１月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用され る）に従って調製することができる。例２ （２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグ リシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイ ル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノールは、共有の同時係属米国特許出願 第０８／１０９，７８７号（１９９３号８月２０日出願）、本出願と同時出願さ れた代理人事件整理番号２７６６／１号、および第０８／１５６，４９８号（１ ９９３号１１月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用 される）に従って調製することができる。例３ ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−メトキシフェニル）スルホニル］（２− メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸 ５−ピリミジルメチルエステルは、共有の同時係属米国特許出願第０８／１１０ ，９１１号（１９９３号８月２４日出願）および第０８／１５６，４９８号（１ ９９３号１１月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用 される）に従って調製することができる。例４ ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミ ノ］−１−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニ ル）プロパンアミドは、共有の同時係属米国特許出願第０８／１１０，９１３号 （１９９３号８月２４日出願）および第０８／１５６，４９８号（１９９３号１ １月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用される）に 従って調製することができる。例５ Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド（Ｌ−７３５，５２４）は、米国特許出願第０７／８８３，８２５号（１９ ９２号５月１５日出願）、ＷＯ９３／０９０９６号、Tet．Lett.３５：６７３− ６７６（１９９４）およびProc．Natl．Acad．Sci．USA，９１：４０９６−４１ ００（１９９４）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用される）に 従って調製することができる。例６ Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニ ル−３（Ｓ）−［［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラジニル］ア ミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）−カルボキサミ ド（Ｒｏ３１−８９５９）は、米国特許第５，１５７，０４１号に開示の方法（ 参考のため本明細書に引用される）に従って調製することができる。例７ ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ¹−［３−［［［（１−ジメチルエチ ル）アミノ］カルボニル］（３−メチルブチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−１ −（フェニルメチル）プロピル］−２−［（２−キノリルカルボニル）アミノ］ −ブタンジアミドは、共有の同時係属米国特許出願第０８／１５２，９３４号（ １９９３号１１月１５日出願）および第０８／１５６，４９８号（１９９３号１ １月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用される）に 従って調製することができる。例８ Ｎ−［３−［Ｎ²−［Ｎ¹−（１，１−ジメチルエチル）アミノスルホニル］ −Ｎ²−（２−メチルプロピル）アミノ］−２Ｒ−ヒドロキシ−１Ｓ−（フェニ ルメチル）プロピル］−２Ｓ−［（２−キノリニルカルボニル）アミノ］ブタン ジアミドは、共有の同時係属ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／１０５５２号（ １９９３号１０月２９日出願）および第０８／１５６，４９８号（１９９３号１ １月２３日出願）に開示の方法（いずれも参考のため本明細書に引用される）に 従って調製することができる。例９ （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２，５−ビス−［Ｎ−［Ｎ−［［Ｎ−メチル− Ｎ−（２−ピリジニルメチル）アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−３， ４−ジヒドロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン（Ａ−７７００３）は、J．Med ．Chem．３６：３２０−３３０（１９９３）に開示の方法（参考のため本明細書 に引用される）に従って調製することができる。例１０ （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）５−（Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプロ ピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−２ −［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒドロキシ −１，６−ジフェニルヘキサン（Ａ−８４５３８、ＡＢＴ−５３８）は、ＰＣＴ 特許出願ＷＯ９４／１４４３６号（１９９３号１２月１６日出願）に開示の方法 （参考のため本明細書に引用される）に従って調製することができる。例１１ ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−アミノフェニル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸３ Ｓ−テトラヒドロフラニルエステル（ＶＸ−４７８）は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９ ４／０５６３９号（１９９３号９月７日出願）に開示の方法（参考のため本明細 書に引用される）に従って調製することができる。例１２ Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェ ニルチオ）−３（Ｓ）−［［Ｎ−［（２−メチル−３−ヒドロキシフェニル）カ ルボニル］アミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）− カルボキサミド（ＡＧ−１３４３、ＡＧ−１３５０）は、Bioorg．& Med．Chem ． Let．５：７１５−７２０，５：７２１−７２６および５：７２７−７３２（１ ９９５）に開示の方法（参考のため本明細書に引用される）に従って調製するこ とができる。特に、３−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸（Bioorg．& Med．Che m．Let.５：７２７−７３２（１９９５））のＨＯＢＴ活性エステルは、Ｎ−ｔ ｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェニルチオ ）−３（Ｓ）−アミノブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ） −カルボキサミド（Bioorg．& Med．Chem．Let．５：７１５−７２０（１９９５ ））に結合することができる。例１３ ［４Ｒ−（４α，５α，６β，７β）］−１，３−ビス［（３−アミノフェニ ル）メチル］ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロキシ−４，７−ビス（フェニルメ チル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン（ＤＭＰ−４５０、ＸＭ−４１２ ）は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９３／０７１２８号に開示の方法（参考のため本明細 書に引用される）に従って調製することができる。特に３−ニトロフェニルメチ ルハロゲン化物（例えば、３−ニトリルフェニルメチルクロリドまたはブロミド ）は、［４Ｒ−（４α５α，６β，７β）］−ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロ キシ−４，７−ビス（フェニルメチル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン のヒドロキシ保護誘導体と反応させて、次にヒドロキシ基を脱保護（ＷＯ９３／ ０７１２８号参照）して、ニトロ基をアミノ基に還元する。そのような還元は、 当業者に公知の標準的方法を用いて行われる。例１４ Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル） スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロ ピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］−３，３−ジ メチルブタンアミドの調製 パートＡ：１，３−ベンゾキオキソール−５−スルホニルクロリドの調製 ０℃の４．２５ｇの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの溶液に、窒素下で７ ．８４ｇの塩化スルフリルを加えると、固体が生成した。１５分間攪拌後、６． ４５ｇの１，３−ベンゾジオキソールを加え、混合物を１００℃で２時間加熱し た。反応物を冷却し、氷水中に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、硫酸マグネシウム で乾燥し、ろ過し、濃縮して７．３２ｇの粗物質を黒い油状物として得た。これ を２０％塩化メチレン／ヘキサンを用いてシリカゲルでクロマトグラフィーをし て、１．９ｇの（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニルクロリド を得た。 あるいは、機械攪拌器、冷却器、加熱用マントル、および圧力平衡化滴下ロー トを取り付けた２２リットルの丸底フラスコに、三酸化イオウＤＭＦ複合体（２ ７７８ｇ，１８．１モル）を加えた。次にジクロロメタン（４リットル）を加え 、攪拌を始めた。次に１，３−ベンゾジオキソール（１９０５ｇ，１５．６モル ）を、滴下ロートで５分間かけて加えた。次に温度を７５℃に上げ、２２時間維 持した（ＮＭＲは、９時間後に反応が完了したことを示した）。反応物を２６℃ に冷却し塩化オキサリル（２２９０ｇ，１８．１モル）を、温度を４０℃以下に 維持するような速度で加えた（１．５時間）。混合物を６７℃に５時間加熱し、 次に氷浴で１６℃に冷却した。反応を、温度を２０℃以下に維持する速度で水（ ５ リットル）で停止させた。水の添加終了後、混合物を１０分間攪拌した。層を分 離し、有機層を再度水（５リットル）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム（ ５００ｇ）で乾燥し、ろ過して、乾燥物質を除去した。溶媒を減圧下で５０℃で 除去した。得られた暖かい液体を冷却させると、固体が生成し始めた。１時間後 固体をヘキサン（４００ml）で洗浄し、ろ過し、乾燥して、目的の塩化スルホニ ル（２８２３ｇ）を得た。ヘキサン洗浄物を濃縮して、得られた固体を４００ml のヘキサンで洗浄して、さらに塩化スルホニル（４６４ｇ）を得た。総収率は３ ２８７ｇであった（１，３−ベンゾジオキソールに基づき９５．５％）。 パートＢ：２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパノー ルの調製 方法１：Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチル）−Ｌ−フェニルアラニンフェニルメチ ルエステルのＤＩＢＡＬ還元からの２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］− ３−フェニルプロパノール 工程１：水（５００ml）中のＬ−フェニルアラニン（５０．０ｇ，０．３０２モ ル）、水酸化ナトリウム（２４．２ｇ，０．６０５モル）および炭酸カリウム（ ８３．６ｇ，０．６０５モル）の溶液を、９７℃に加熱した。次に臭化ベンジル （１０８．５ml，０．６０５モル）を静かに加えた（添加時間−２５分）。混合 物を９７℃で３０分間窒素下でで攪拌した。溶液を室温に冷却し、トルエン（２ ×２５０ml）で抽出した。合わせた有機層を水と食塩水で洗浄し、硫酸マグネシ ウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、油状物を得た。Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチ ル）−Ｌ−フェニルアラニンフェニルメチルエステルは、カラムクロマトグラフ ィー（シリカゲル、１５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製できる。通常この生成 物は、直接使用するのに充分純粋であり、さらに精製することなく次の工程に使 用できた。ＥＩＭＳ：ｍ／ｚ ４３４（Ｍ−１）。 工程２：前記の反応からのベンジル化フェニルアラニンフェニルメチルエステル （０．３０２モル）をトルエン（７５０ml）に溶解し、−５５℃に冷却した。ト ルエン中の１．５ＭのＤＩＢＡＬの溶液（４４３．９ml，０．６６６モル）を、 温度を−５５〜−５０℃に維持する速度で加えた（添加時間−１時間）。混合物 を窒素下で２０分間攪拌し、次にメタノール（３７ml）を静かに加えて−５５℃ で反応を停止させた。冷却溶液を次に、冷却した（５℃）１．５ＮのＨＣｌ溶液 （１．８リットル）に注いだ。沈殿した固体（約１３８ｇ）をろ過して、トルエ ンで洗浄した。固体物質を、トルエン（４００ml）と水（１００ml）の混合液に 懸濁した。混合液を５℃に冷却し、２．５ＮのＮａＯＨ（１８６ml）で処理し、 固体が溶解するまで室温で攪拌した。トルエン層を水層から分離し、水と食塩水 で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、７５ml（８９ｇ）の容量に濃縮 した。残渣に酢酸エチル（２５ml）とヘキサン（２５ml）を加えると、目的のア ルコール産物が結晶化し始めた。３０分後、さらに５０mlのヘキサンを加えて、 結晶化を促進させた。固体をろ過し、５０mlのヘキサンで洗浄して、最初の産物 ３４．９ｇを得た。母液を再度ろ過して第２の産物（５．６ｇ）を単離した。２ つの産物を合わせて、酢酸エチル（２０ml）とヘキサン（３０ml）から結晶化し て、４０ｇの２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパノ ールを得た（Ｌ−フェニルアラニンからの収率は４０％）。Ｃ₂₃Ｈ₂₅ＯＮの元素 分析、理論値：Ｃ，８３．３４；Ｈ，７．６０；Ｎ，４．２３。実測値：Ｃ，８ ３．４３，；Ｈ，７．５９；Ｎ，４．２２。 方法２：Ｌ−フェニルアラニノールのＮ，Ｎ−ジベンジル化からのβＳ−２−［ ビス（フェニルメチル）アミノ］ベンゼン−プロパノールの調製 Ｌ−フェニルアラニノール（１７６．６ｇ，１．１６８モル）を、７１０mlの 水中の炭酸カリウム（４８４．６ｇ，３．５０６モル）の攪拌溶液に加えた。混 合物を窒素下で６５℃に加熱した。３Ａエタノール（３０５ml）中の臭化ベンジ ル（４００ｇ，２．３３９モル）の溶液を、６０〜６８℃の温度を維持する速度 で加えた。２相系の溶液を６５℃で５５分間攪拌し、次に激しく攪拌しながら１ ０℃に冷却した。油状生成物を固化させて小さい顆粒にした。生成物を２．０リ ットルの水道水で希釈し、５分間攪拌して生成物の無機物質を溶解させた。減圧 下でろ過して生成物を単離し、pHが７になるまで水で洗浄した。得られた粗生成 物を、１．１リットルの酢酸エチル／ヘプタン（１：１０）から再結晶した。生 成物をろ過して（−８℃で）単離し、１．６リットルの冷（−１０℃）酢酸エチ ル／ヘプタン（１：１０）で洗浄して、空気乾燥して、３３９ｇ（収率８８％） の２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパノール（融点 ＝７１．５〜７３．０℃）を得た。 パートＣ：２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパンア ルデヒドの調製 方法１：２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパノール （２００ｇ，０．６０４モル）を、トリエチルアミン（３００ml，２．１５モル ）に溶解した。混合物を１２℃に冷却し、ＤＭＳＯ（１．６リットル）中の３酸 化イオウ／ピリジン複合体（３８０ｇ，２．６９モル）の溶液を、８〜１７℃の 温度を維持するような速度で加えた。溶液を窒素下で周囲温度で１．５時間攪拌 した。反応混合物を氷水で冷却し、１．６リットルの冷水（１０〜１５℃）で４ ５分間かけて反応を停止させた。得られた溶液を酢酸エチル（２．０リットル） で抽出し、５％クエン酸（２．０リットル）と食塩水（２．２リットル）で洗浄 し、硫酸マグネシウム（２８０ｇ）で乾燥し、ろ過した。溶媒を真空下で除去し 、次に真空下で乾燥して１９８．８ｇの２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ ］−３−フェニルプロパンアルデヒドを淡黄色の油状物として得た（９９．９％ ）。得られた粗生成物は、直接使用するのに充分純粋であり、さらに精製するこ となく次の工程に使用できた。 方法２：ジクロロメタン（２４０ml）中の塩化オキサリル（８．４ml．０．０９ ６モル）の溶液を−７４℃に冷却した。次にジクロロメタン（５０ml）中のＤＭ ＳＯ（１２．０ml，０．１５５モル）の溶液を、温度を−７４℃に維持するよう な速度で静かに加えた（添加時間、約１．２５時間）。混合物を５分間攪拌して 、次に１００mlのジクロロメタン中の２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］ −３−フェニルプロパノール（０．０７４モル）の溶液を加えた（添加時間−２ ０分、温度−７５℃〜−６８℃）。溶液を−７８℃で窒素下で３５分間攪拌した 。次にトリエチルアミン（４１．２ml，０．２９５モル）を１０分間かけて加え る（温度−７８℃〜−６８℃）と、アンモニウム塩が沈殿した。冷混合物を３０ 分間攪拌して、次に水（２２５ml）を加えた。ジクロロメタン層を水層から分離 して、水、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残 渣を酢酸エチルとヘキサンで希釈し、次にろ過してアンモニウム塩をさらに除去 した。濾液を濃縮して、２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニ ル プロパンアルデヒドを得た。このアルデヒドを精製することなく次の工程に使用 した。 方法３：１．０ｇ（３．０ミリモル）の２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ ］−３−フェニルプロパノール、０．５３１ｇ（４．５３ミリモル）のＮ−メチ ルモルホリン、２．２７ｇのモレキュラーシーブ（４Å）そして９．１mlのアセ トニトリルの混合物に、５３mg（０．１５ミリモル）のテトラプロピルアンモニ ウム過ルテニウム酸（ＴＲＡＰ）を加えた。混合物を室温で４０分間攪拌して、 減圧下で濃縮した。残渣を１５mlの酢酸エチルに懸濁して、シリカゲルのパッド でろ過した。濾液を減圧下で濃縮して、約５０％の２Ｓ−［ビス（フェニルメチ ル）アミノ］−３−フェニルプロパンアルデヒドを含有する生成物を淡黄色の油 状物として得た。 方法４：９．０mlのトルエン中の１．０ｇ（３．０２ミリモル）の２Ｓ−［ビス （フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパノールの溶液に、４．６９mg （０．０３ミリモル）の２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキ シ、遊離ラジカル（ＴＥＭＰＯ）、０．３２ｇ（３．１１ミリモル）の臭化ナト リウム、９．０mlの酢酸エチルおよび１．５mlの水を加えた。混合物を０℃に冷 却し、０．７３５ｇ（８．７５ミリモル）の重炭酸ナトリウムを含有する５％家 庭用漂白剤２．８７mlと水８．５３mlを、２５分間かけて静かに加えた。混合物 を０℃で６０分間攪拌した。さらに２回（各回１．４４ml）漂白剤を加え、次に １０分間撹拌した。水層を、２０mlの酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機 層を、２５mgのヨウ化カリウムと水（４．０ml）を含有する溶液４．０ml、２０ mlの１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液および次に食塩水溶液で洗浄した。有機溶 液を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、少量の目的のアル デヒド、２Ｓ−［ビス（フェニルメチル）アミノ］−３−フェニルプロパンアル デヒドを含有する粗油状物１．３４ｇを得た。 パートＤ：Ｎ，Ｎ−ジベンジル−３（Ｓ）−アミノ−１，２−（Ｓ）−エポキシ −４−フェニルブタンの調製 方法１：テトラヒドロフラン（１．８リットル）中の２Ｓ−［ビス（フェニルメ チル）アミノ］−３−フェニルプロパンアルデヒド（１９１．７ｇ，０．５８モ ル）とクロロヨードメタン（５６．４ml，０．７７モル）の溶液を、ステンレス の反応槽中で窒素下で−３０〜−３５℃に冷却した。次にヘキサン中のｎ−ブチ ルリチウムの溶液（１．６Ｍ，３６５ml，０．５８モル）を、−２５℃以下の温 度を維持するような速度で加えた。添加後混合物を−３０〜−３５℃で１０分間 攪拌した。以下の方法でさらに試薬を加えた：（１）追加のクロロヨードメタン （１７ml）を加え、次に−２５℃以下でｎ−ブチルリチウム（１１０ml）を加え た。添加後混合物を−３０〜−３５℃で１０分間攪拌した。これを１回繰り返し た。（２）追加のクロロヨードメタン（８．５ml，０．１１モル）を加え、次に −２５℃以下でｎ−ブチルリチウム（５５ml，０．０８８モル）を加えた。添加 後混合物を−３０〜−３５℃で１０分間攪拌した。これを５回繰り返した。（３ ）追加のクロロヨードメタン（８．５ml，０．１１モル）を加え、次に−２５℃ 以下でｎ−ブチルリチウム（３７ml，０．０５９モル）を加えた。添加後混合物 を−３０〜−３５℃で１０分間攪拌した。これを１回繰り返した。外部冷却器を 停止させ、混合物を４〜１６時間かけて周囲温度まで暖めると、ＴＬＣ（シリカ ゲル、２０％酢酸エチル／ヘキサン）は、反応が完了したことを示していた。反 応混合物を１０℃に冷却し、２３℃以下の温度を維持しながら、１４５２ｇの１ ６％塩化アンモニウム溶液で反応を停止させた。この混合物を１０分間攪拌し、 有機層と水層を分離した。水層を酢酸エチル（２×５００ml）で抽出した。酢酸 エチル層を、テトラヒドロフラン層と合わせた。合わせた溶液を硫酸マグネシウ ム（２２０ｇ）で乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。褐色の油状残渣を真空下 （０．８バール）で７０℃で１時間乾燥して、２２２．８ｇの粗物質を得た。粗 生成物は、精製することなく直接次の工程に使用される。 方法２：テトラヒドロフラン（２８５ml）中の粗アルデヒド０．０７４モルとク ロロヨードメタン（７．０ml，０．０９６モル）の溶液を、窒素下で−７８℃に 冷却した。次にヘキサン中１．６Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液（２５ml，０．０ ４０モル）を、−７５℃の温度を維持するような速度で加えた。最初の添加後、 クロロヨードメタン（１．６ml，０．０２２モル）を再度加え、温度を−７５℃ に維持して次にｎ−ブチルリチウム（２３ml，０．０３７モル）を加えた。混合 物を１５分間攪拌した。クロロヨードメタン（０．７０ml，０．０１０モル）と ｎ−ブチルリチウム（５ml，０．００８モル）の各試薬を、４５分間かけて−７ ５℃でさらに４回加えた。次に冷却浴を除き、溶液を１．５時間かけて２２℃に 暖めた。混合物を３００mlの飽和塩化アンモニウム溶液中に注いだ。テトラヒド ロフラン層を分離した。水層を酢酸エチル（１×３００ml）で抽出した。合わせ た有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、褐 色の油状物を得た（２７．４ｇ）。生成物を精製することなく次の工程に使用し た。 方法３：テトラヒドロフラン（１．８リットル）中の２Ｓ−［ビス（フェニルメ チル）アミノ］−３−フェニルプロパンアルデヒド（１７８．８４ｇ，０．５４ モル）とブロモクロロメタン（４６ml，０．７１モル）の溶液を、ステンレスの 反応槽中で窒素下で−３０〜−３５℃に冷却した。次にヘキサン中のｎ−ブチル リチウムの溶液（１．６Ｍ，３４０ml，０．５４モル）を、−２５℃以下の温度 を維持するような速度で加えた。添加後混合物を−３０〜−３５℃で１０分間攪 拌した。以下の方法でさらに試薬を加えた：（１）追加のブロモクロロメタン（ １４ml）を加え、次に−２５℃以下でｎ−ブチルリチウム（１０２ml）を加えた 。添加後混合物を−３０〜−３５℃で１０分間攪拌した。これを１回繰り返した 。（２）追加のブロモクロロメタン（７ml，０．１１モル）を加え、次に−２５ ℃以下でｎ−ブチルリチウム（５１ml，０．０８２モル）を加えた。添加後混合 物を−３０〜−３５℃で１０分間攪拌した。これを５回繰り返した。（３）追加 のブロモクロロメタン（７ml，０．１１モル）を加え、次に−２５℃以下でｎ− ブチルリチウム（５１ml，０．０８２モル）を加えた。添加後混合物を−３０〜 −３５℃で１０分間攪拌した。これを１回繰り返した。外部冷却器を停止させ、 混合物を４〜１６時間かけて周囲温度まで暖めると、ＴＬＣ（シリカゲル、２０ ％酢酸エチル／ヘキサン）は、反応が完了したことを示していた。反応混合物を １０℃に冷却し、２３℃以下の温度を維持しながら、１４５２ｇの１６％塩化ア ンモニウム溶液で反応を停止させた。混合物を１０分間攪拌し、有機層と水層を 分離した。水層を酢酸エチル（２×５００ml）で抽出した。酢酸エチル層を、テ トラヒドロフラン層と合わせた。合わせた溶液を硫酸マグネシウム（２２０ｇ） で乾燥し、ろ過し、６５℃でロータリーエバポレーターで濃縮した。褐色の油状 残渣を真空下（０．８バール）で７０℃で１時間乾燥して、２２２．８ｇの粗物 質を得た。 パートＥ：Ｎ−［３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチル）アミノ］−２（ Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル］−Ｎ−イソブチルアミン・シュウ酸塩 の調製 工程１：イソプロパノール（２．７リットル）（または酢酸エチル）中の粗Ｎ， Ｎ−ジベンジル−３（Ｓ）−アミノ−１，２（Ｓ）−エポキシ−４−フェニルブ タンの溶液（３８８．５ｇ，１．１３モル）の溶液に、２分間かけでイソブチル アミン（１．７kg，２３．１モル）を加えた。温度は２５℃から３０℃に上昇し た。溶液を８２℃に加熱して、この温度で１．５時間攪拌した。暖かい溶液を真 空下で濃縮した。褐色の油状残渣を１６時間真空下で乾燥（０．８mmHg）して、 ４５０ｇの生成物を粗油状物として得た。 工程２：メタノール（７６ml）中のシュウ酸の溶液（８．０８ｇ，８９．７２モ ル）に、酢酸エチル（９０ml）中の粗３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチ ル）アミノ］−１−（２−メチルプロピル）アミノ−４−フェニルブタン−２（ Ｒ）−オールを１５分間かけて加えた。混合物を室温で約２時間攪拌した。固体 をろ過して単離し、酢酸エチル（２×２０ml）で洗浄し、真空下で約１時間乾燥 して、２１．８６ｇの９７％ジアステレオ異性体的に純粋な塩を得た。融点＝１ ７４．９９℃；微量元素分析：理論値：Ｃ，７１．０５％；Ｈ，７．５０％；Ｎ ，５．５３％。実測値：Ｃ，７１．７１％；Ｈ，７．７５％；Ｎ，５．３９％。 あるいは、粗３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチル）アミノ］−１−（ ２−メチルプロピル）アミノ−４−フェニルブタン−２（Ｒ）−オール（５ｇ） を、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１０ml）中に溶解し、メ タノール（４ml）中のシュウ酸（１ｇ）を加えた。混合物を約２時間攪拌した。 得られた固体をろ過し、冷ＭＴＢＥで洗浄し、乾燥して、約９８．９％のジアス テレオ異性体的に純粋な（ＨＰＬＣピーク面積に基づく）２．１ｇの白色固体を 得た。 パートＦ：１−［Ｎ−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル ］−Ｎ−（２−メチルプロピル）アミノ］−３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フェ ニルメチル）アミノ］−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノールの調製 １，４−ジオキサン（２０００ml）中のＮ−［３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フ ェニルメチル）アミノ］−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル］−Ｎ− イソブチルアミン・シュウ酸塩（３５４．７ｇ，０．７モル）に、水（２５０ml ）中の炭酸カリウム（２４１．９ｇ，１．７５モル）の溶液を加えた。混合物を 室温で２時間攪拌し、次に１，４−ジオキサン（２５０ml）中の１，３−ベンゾ ジオキソール−５−スルホニルクロリド（１６２．２ｇ，０．７３５モル）を１ ５分間かけて加えた。反応混合物を室温で１８時間攪拌した。酢酸エチル（１０ ００ml）と水（５００ml）を加え、さらに１時間攪拌を続けた。水層を分離し、 さらに酢酸エチル（２００ml）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を、２５％食 塩水（５００ml）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、硫酸マ グネシウムを酢酸エチル（２００ml）で洗浄後、溶媒を真空下で除去して、目的 のスルホンアミドを粘性の黄色の発泡性の油状物として得た（４４０．２ｇ，収 率１０５％）。ＨＰＬＣ／ＭＳ（電気スプレー）（ｍ／ｚ ６０１［Ｍ＋Ｈ］⁺ ）。 あるいは、Ｎ−［３（Ｓ）−［Ｎ，Ｎ−ビス（フェニルメチル）アミノ］−２ （Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル］−Ｎ−イソブチルアミン・シュウ酸 塩（２８００ｇ，５．５３モル）とＴＨＦ（４リットル）を、機械攪拌器を取り 付けた２２リットルの丸底フラスコに加えた。炭酸カリウム（１９２１ｇ，１３ ．９モル）を水（２．８リットル）に溶解し、ＴＨＦスラリーに加えた。次に混 合物を１時間攪拌した。１，３−ベンゾジオキソール−５−スルホニルクロリド （１２８１ｇ，５．８モル）をＴＨＦ（１．４リットル）に溶解し、２５分間か けて反応混合物に加えた。さらに２００mlのＴＨＦを使用して、滴下ロートをす すいだ。反応物を１４時間攪拌し、次に水（４リットル）を加えた。この混合物 を３０分間攪拌し、層を分離させた。層を除去し、水層をＴＨＦ（５００ml）で ２回洗浄した。合わせたＴＨＦ層を硫酸マグネシウム（５００ｇ）で１時間乾燥 した。次に溶液をろ過して、乾燥物質を除去し、次の反応に使用した。 パートＧ：１−［Ｎ−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル ］−Ｎ−（２−メチルプロピル）アミノ］−３（Ｓ）−アミノ−４−フェニル −２（Ｒ）−ブタノール・メタンスルホン酸塩の調製 粗１−［Ｎ−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］−Ｎ −（２−メチルプロピル）アミノ］−３（Ｓ）−［ビス（フェニルメチル）アミ ノ］−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノール（６．２ｇ，０．０１０モル）を、 メタノール（４０ml）に溶解した。次にメタンスルホン酸（０．９６９ｇ，０． ０１０モル）と水（５ml）をこの溶液に加えた。混合物を、２０％Ｐｄ（ＯＨ）₂ 担持活性炭（２５５mg，５０％水分含量）を含有する５００mlのパール水素添 加瓶中に入れた。瓶を水素添加装置に入れ、窒素を５回パージし、水素を５回パ ージした。反応を３５℃で６３ＰＳＩ水素圧で１８時間進ませた。さらに触媒（ １２５mg）を加えて、パージ後、さらに２０時間水素添加を続けた。混合物を、 メタノール（２×１０ml）で洗浄したセライトでろ過した。メタノールの約３分 の１を減圧下で除去した。残りのメタノールを、８０torrでトルエンと共沸蒸留 させて除去した。トルエンを、１５、１０、１０および１０mlで加えた。生成物 を混合物から結晶化し、ろ過し、１０mlのトルエンで２回洗浄した。固体を室温 で１torrで６時間乾燥して、アミン塩（４．５ｇ，８４％）を得た：ｍ／ｚ ４ ２１［Ｍ＋Ｈ］⁺。 あるいは、粗１−［Ｎ−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホ ニル］−Ｎ−（２−メチルプロピル）アミノ］−３（Ｓ）−［ビス（フェニルメ チル）アミノ］−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノールに、水（５００ml）を加 え、次にメタンスルホン酸（５３１ｇ，５．５モル）を加えた。この溶液を完全 に混合するように撹拌し、５ガロンのオートクレーブに入れた。パールマン（Pe ralman）触媒（２００ｇの２０％Ｐｄ（ＯＨ）₂担持活性炭／５０％水）を、Ｔ ＨＦ（５００ml）とともにオートクレーブに加えた。反応槽に窒素を４回パージ し、水素を４回パージした。反応槽に、６０psigの水素を充填し、４５０rpmで 攪拌を開始した。１６時間後、ＨＰＬＣ解析は、少量のモノ−ベンジル中間体が まだ残存していることを示していた。追加の触媒（５０ｇ）を加え、反応を一晩 続けた。次に溶液をセライト（５００ｇ）でろ過して触媒を除去し、５つの画分 に分けて真空下で濃縮した。各画分にトルエン（５００ml）を加え、残存水を共 沸させて除去するために真空下で除去した。得られた溶液を３つの画分に分割 し、各画分をメチルｔ−ブチルエーテル（２リットル）で洗浄しろ過した。残存 溶媒を室温で真空オーブン中で１torr以下で除去して、２７１４ｇの目的の塩を 得た。 パートＨ：Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール− ５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメ チル）プロピル］−２Ｓ−［（フェニルメトキシカルボニル）アミノ］−３，３ −ジメチルブタンアミドの調製 ７５０mlの無水ＤＭＦ中の１１８．８ｇ（０．７７６モル）のＮ−ヒドロキシ ベンゾトリアゾールと１３７．１ｇ（０．５２モル）のＮ−カルボベンジルオキ シカルボニル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシンを、０℃で窒素下で１０９．１ｇ（０． ５７モル）のＥＤＣに加えた。０℃で２時間攪拌後、あらかじめ２２８ml（２１ ０ｇ，２．０８モル）の４−メチルモルホリンで中和した、２５０mlの無水ＤＭ Ｆ中の２７３ｇ（０．５３モル）の２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベン ゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１ Ｓ−（フェニルメチル）プロピルアミンメタンスルホン酸塩を加えた。０℃で３ ０分間攪拌後、混合物を室温で１８時間攪拌した。溶媒を減圧下でで４５℃で除 去し、１．５リットルの酢酸エチルを加え、５％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウ ム、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、４０ ０ｇの粗物質を得た。これを、シリカゲルのＰｒｅｐ２０００クロマトグラムで ２０％−５０％酢酸エチル／ヘキサンを溶出液として用いて、３回のバッチでク ロマトグラフィーをして、３２０ｇの精製物質を得た。ｍ／ｅ＝６７４（Ｍ＋Ｌ ｉ）、ＨＰＬＣで９８％。 パートＩ：Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール− ５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメ チル）プロピル］−２Ｓ−アミノ−３，３−ジメチルブタンアミドの調製 １リットルのテトラヒドロフラン中の３１２ｇのＮ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３ −［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチルプ ロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−２Ｓ−［（フェニル メトキシカルボニル）アミノ］−３，３−ジメチルブタンアミドの溶液を、１０ ０ｇの４％白金担持活性炭触媒の存在下で６０psigの水素下で室温で６時間水素 添加した。触媒をろ過して除去して、溶媒を減圧下で除去して、２４０ｇの目的 の化合物を得た。 パートＪ：Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール− ５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメ チル）プロピル］−２Ｓ−［（クロロアセチル）アミノ］−３，３−ジメチルブ タンアミドの調製 １リットルの塩化メチレン中の２３４．３ｇ（０．４３９モル）のＮ−［２Ｒ −ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル ］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）ブロピル］−２ Ｓ−アミノ−３，３−ジメチルブタンアミドに、８０ml（５９．５ｇ，０．４６ モル）のジイソプロピルエチルアミンを加え、次に温度を３５℃以下に維持しな がら室温の７８．８ｇ（０．４６モル）の無水クロロ酢酸を加えた。さらに１時 間攪拌後、ＨＰＬＣで解析すると、少量の出発物質が残存しており、１．５ｇの 無水クロロ酢酸を加えた。１０分後、減圧下で溶媒を除去し、１リットルの酢酸 エチルを加え、５％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、無水硫 酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、３１４ｇの粗物質を得た。これを シリカゲルのＰｒｅｐ２０００クロマトグラムで２０％−５０％酢酸エチル／ヘ キサンを用いて、３回のバッチでクロマトグラフィーをして、１６５ｇの目的の 化合物を得た。ｍ／ｅ＝６１６（Ｍ＋Ｌｉ）、ＨＰＬＣで９８％。 パートＫ：Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール− ５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメ チル）プロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］− ３，３−ジメチルブタンアミドの調製 １６４．２ｇ（０．２７モル）のＮ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３ −ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチルプロビル）アミノ ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−２Ｓ−［（クロロアセチル）アミノ ］−３，３−ジメチルブタンアミドに、５００mlのテトラヒドロフランを加え、 次に減圧下で溶媒を除去して酢酸エチルを除去し、次に３５０mlのテトラヒドロ フランを加えた。この溶液に１０℃で１３０ml（１．５６モル）のビロリジンを 加えた。１時間後、溶媒を減圧下で除去し、１リットルの酢酸エチルを加え、飽 和重炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し 、濃縮して、１８５ｇの粗物質を得て、これをＨＰＬＣで測定すると純度は９８ ．９％であった。これを３つに分けて、Ｐｒｅｐ２０００クロマトグラムで最初 は５０％酢酸エチル／ヘキサンを用いて、次に５％メタノール／酢酸エチルで３ 回のバッチでクロマトグラフィーをして、１６０ｇの精製物質を得た（ＨＰＬＣ で９９％）。これを次に、４６０mlのジエチルエーテルと７０mlのヘキサンから 再結晶して、１２１ｇの目的の生成物を得た（ＨＰＬＣで＞９９％）、ｍ／ｅ＝ ６５１（Ｍ＋Ｌｉ）、融点＝１１２〜１１４℃。例１５ Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾジ オキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロ ピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミドの調製 パートＡ：２（Ｓ）−メチル−３−（メチルスルホニル）プロピオン酸の調製 工程１：１．０リットルのメタノール中の２００ｇ（１．２３モル）のＤ−（− ）−３−アセチル−ｂ−メルカプトイソ酪酸に、氷欲で冷却しで温度を１０℃以 下に維持しながら、５００mlのメタノールに溶解した１６１．０ｇ（２．４７モ ル）の水酸化カリウムを加えた。さらに２０分間攪拌後、温度を２０℃以下に維 持しながら１１７ml（１５６ｇ，１．２３モル）の硫酸ジメチルを加えた。氷浴 を除去し、混合物をさらに６０分間攪拌した。塩をろ過して除去し、溶媒を減圧 下で除去し、酢酸エチルを加えた。水層を分離後、濃塩酸で酸性にし、酢酸エチ ルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、１６４ｇ （９９％）の目的の２Ｓ−メチル−３−（メチルチオ）プロピオン酸を得た、ｍ ／ｅ＝１３３（Ｍ−Ｈ）。 工程２：氷浴で１８℃に冷却した１５０mlのアセトン中の１０．０ｇ（７４．６ ミリモル）の２Ｓ−メチル−３−（メチルチオ）プロピオン酸と３０mlの水に、 １６１．８ｇ（２６３ミリモル）のオキソン(Oxone)を加えた。約半分の物質を 加えた後、温度が２４℃に上昇し、添加を停止し、温度を１８℃に下げ、浴を除 去して、反応物を室温で１時間攪拌した。固体をろ過し、アセトンで洗浄し、濾 液を約４０mlに濃縮して、残渣を２００mlの酢酸エチルに溶解した。酢酸エチル 層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、１１．４ｇの油状物を 得た。これを最小量の酢酸エチルに溶解し、ヘキサンを加えて沈殿物を形成させ た。これを集めて６．９５ｇの目的の生成物を得た、ｍ／ｅ＝１６７（Ｍ＋Ｈ） 。 パートＢ：Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３ −ベンゾジオキソール-５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメ チル）プロピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミドの 調製 ３０mlの無水ＤＭＦ中の５．０ｇ（３０ミリモル）の２Ｓ−メチル−３−（メ チルスルホニル）プロピオン酸と６．９０ｇ（４５ミリモル）のＮ−ヒドロキシ ベンゾトリアゾールに、０℃で窒素下で６．３４ｇ（３３ミリモル）のＥＤＣを 加えた。約１０分後、ＥＤＣはすべて溶解した。０℃で６０分後、３．４ml（３ １．６ミリモル）の４−メチルモルホリンであらかじめ中和した、３０mlの無水 ＤＭＦ中の１５．５ｇ（３０ミリモル）の２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３ −ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピルアミンメタンスルホン酸塩を加えた。０ ℃で３時間後、混合物を１７時間一晩攪拌した。減圧下でＤＭＦを除去し、酢酸 エチルを加え、５％クエン酸、飽和重炭酸ナトリウム、水、食塩水で洗浄し、無 水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して１６ｇの粗物質を得て、これは ＨＰＬＣで純度８８％であった。生成物を２０％−８０％酢酸エチル／ヘキサン を用いてシリカゲルでクロマトグラフィーをして、純粋な生成物を得て、これを 酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して、８．８４ｇの純粋な生成物を得た、融 点１３１．８〜１３３．８℃。 あるいは、２１０mlの無水ＤＭＦ中の３５．０ｇ（２１１ミリモル）の２Ｓ− メチル−３−（メチルスルホニル）プロピオン酸と４８．３ｇ（３１５ミリモル ）のＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールに、０℃で窒素下で４４．４ｇ（２３１ ミリモル）のＥＤＣを加えた。約３０分後、ＥＤＣはすべて溶解した。０℃で６ ０分後、２４ml（２２．３ｇ）の４−メチルモルホリンであらかじめ中和した、 ３５０mlの無水ＤＭＦ中の１０８．８ｇ（２１１ミリモル）の２Ｒ−ヒドロキシ −３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチ ルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピルアミンメタンスルホ ン酸塩を加えた。０℃で２時間後、混合物を１８時間一晩攪拌した。減圧下でＤ ＭＦを除去し、１リットルの酢酸エチルを加え、５％クエン酸、飽和重炭酸ナト リウム、水、食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し て１２０．４ｇの粗物質を得て、これはＨＰＬＣで純度９０％であった。生成物 を７５０〜１０００mlの無水エタノールから再結晶して、８２．６ｇの純粋な生 成物を得た。例１６ ２Ｓ−［［Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ− ３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メチル プロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメチル ブタンアミドの調製 Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−クロロアセチル）アミノ］−３，３−ジメチルブタンアミド に、２５mlのテトラヒドロフランを加え、溶媒を減圧下で除去して酢酸エチルを 除去し、次に２５mlのテトラヒドロフランを加えた。１０℃のこの溶液に１９ml （２１４ミリモル）の４０％メチルアミン水溶液を加えた。２時間後、溶媒を減 圧下で除去し、１リットルの酢酸エチルを加え、飽和重炭酸ナトリウム、食塩水 で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、６．０ｇの生成 物（純度９８％）を得た。例１７ 本発明のレトロウイルスプロテアーゼインヒビター化合物は、有効なＨＩＶプ ロテアーゼインヒビターである。以下に記載する酵素測定法は、併用療法で使用 するためのレトロウイルスプロテアーゼインヒビターの選択に使用することがで きる。このような化合物のＩＣ５０（インヒビター化合物が酵素活性を５０％低 下させる濃度）は、この方法を用いて計算できる。 酵素法は以下の通りである。基質は、２−アミノベンゾイル−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ −Ｐｈｅ（ｐ−ＮＯ２）−Ｇｌｎ−ＡｒｇＮＨ２である。陽性対照はＭＶＴ−１ ０１（エム・ミラー（Miller，M.）ら、Science ２４６，１１４９（１９８９） ）である。測定緩衝液は、２０mMリン酸ナトリウム、pH６．４、２０％グリセロ ール、１mM ＥＤＴＡ、１mM ＤＴＴおよび０．１％ＣＨＡＰＳである。基質は ＤＭＳＯに溶解し、次に測定緩衝液で１０倍に希釈する。測定液中の最終基質濃 度は、約８０μＭである。ＨＩＶプロテアーゼは、分子量１０，７８０に基づい て最終濃度が約１２．３ナノモルになるように、測定緩衝液で希釈する。 ＤＭＳＯの最終濃度は約１４％であり、、グリセロールの最終濃度は約１８％ である。試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、ＤＭＳＯで試験濃度の約１０倍（１０ ×）に希釈する。次に１０μl の基質を加える。蛍光の増加を、周囲温度で４点 （０、８、１６、および２４分）で追跡する。各測定は、２重測定のウェルで行 う。例１８ 本発明の選択したＨＩＶプロテアーゼインヒビター化合物の有効性は、上記の 酵素測定法と以下のＣＤ４＋細胞株測定法で測定した。プロテアーゼインヒビタ ーの抗ウイルス活性は、有効濃度５０（ＥＣ５０）および／または有効濃度９０ （ＥＣ９０）値として表す。これらは、ウイルス複製をそれぞれ５０％または９ ０％阻害するのに必要なインヒビターの濃度である。 急性感染細胞のＨＩＶ阻害測定法は、基本的にはパウウェルズ(Pauwels)らが 報告した（J．Virol．Methods ２０，３０９−３２１（１９８８））テトラゾリ ウムに基づく自動比色法である。測定は、９６ウェル組織培養プレート中で行う 。ＣＤ４＋細胞株（例えば、ＣＥＭ、ＭＴ−２、ＭＴ−４および類似の細胞株） を、１０％胎児牛血清を補足したＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ(Gibco)）中 で増殖させ、次にポリブレン（２μg/ml）で処理する。１×１０⁴細胞を含有す る８０μl 量の培地を、組織培養プレートの各ウェルに分注する。各ウェルに、 組織培養培地に溶解した試験化合物（または、対照として試験化合物のない培地 ）１００μl を添加して、目的の最終濃度として、３７℃で１時間インキュベー トする。ＨＩＶ−１の凍結培養物を培地で、５×１０⁴ＴＣＩＤ₅₀／ml（ＴＣＩ Ｄ₅₀＝組織培養中の５０％の細胞に感染するウイルス量）の濃度に希釈し、２０ μl のウイルス試料（１０００ＴＣＩＤ₅₀のウイルスを含有する）を、試験化合 物を含有するウェルおよび培地のみを含有するウェル（感染対照細胞）に添加す る。数個のウェルに、ウイルスのない培地（非感染対照細胞）を入れる。同様に 、試験化合物の本質的毒性は、試験化合物を含有する数個のウェルにウイルスの ない培地を加えて測定する。要約すると、組織培養プレートは以下の実験系を含 有する： 実験系２と４では、試験化合物の最終濃度は１、１０、１００および５００μ g/mlである。アジドチミジン（ＡＺＴ）またはジデオキシイノシン（ｄｄＩ） は、陽性薬剤対照として含める。試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、組織培養培地 に希釈して、いずれの場合も最終ＤＭＳＯ濃度が１．５％を越えないようにする 。ＤＭＳＯを、適当な濃度ですべての対照ウェルに加える。 ウイルスの添加後、細胞を３７℃で加湿した５％ＣＯ₂雰囲気中で７日間イン キュベートする。試験化合物を、必要であれば０、２、および５日目に加えるこ とができる。感染後７日目に、各ウェルの細胞を再懸濁して、測定のために各細 胞懸濁液１００μl の試料を取る。５mg/ml の３−（４，５−ジメチルチアゾー ル−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）溶液２ ０μl を、各１μl の細胞懸濁液に加え、細胞を３７℃で加湿した５％ＣＯ₂雰 囲気中で４時間インキュベートする。このインキュベートの間、ＭＴＴは生きて いる細胞により代謝されて減少し、細胞中に着色したホルマザン生成物が産生さ れる。各試料に、０．０１ＮのＨＣｌ中の１０％ドデシル硫酸ナトリウム１００ μl を加えて細胞を溶解し、試料を一晩インキュベートする。モレキュラーデバ イシーズ(Molecular Devices)マイクロプレートリーダーを用いて、各試料につ いて５９０nmの吸光度を測定する。試験化合物の細胞毒性と抗ウイルス活性は、 化合物とともにインキュベートした感染または非感染細胞を含有するウェル中で 得られた吸光度を、非感染、未処理対照ウェルと比較して求める。 ＨＩＶ培養法 ドナーリンパ球の刺激 アメリカ赤十字（American Red Cross）またはワシントン大学医学部の血液銀 行から、バッフィーコートを得た。これらの調製物を、ＨＩＶ抗体とＣＭＶ抗体 、およびＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、および非Ａ非Ｂ肝炎のマーカーとして のＡＬＴ（アラニントランスフェラーゼ活性）について、プレスクリーニングし た。白血球を濃縮した血液（３０ml）をプラスチック容器から採取し、１５mlを ５０mlのネジふた遠心分離管に分注した。各試料を等量の無菌ＰＢＳで希釈して 、ピペットで混合した。フィコール−ペーク（Ficoll-Paque）（１５ml）または ＬＳＭを、パスツールピペットを用いて、希釈した血液試料の下に入れ、溶液を 管の底から排出させる。次に各管を、２０℃で１３００rpm（４００×ｇ）で４ ５分間遠心分離する。遠心分離後、界面のリンパ球バンドを取り、５０mlの管に 移す。 無菌ＰＢＳを加えて、分離したリンパ球を希釈し、次に１３００rpm で８分間遠 心分離した。細胞ペレットを、ＰＢＳに再懸濁し再遠心分離して２回洗浄する。 最終細胞ペレットをピペットで２０mlのＰＢＳに再懸濁し、生存細胞の総数をト リパンブルー排除により測定する。 臨床単離株を用いる急性感染性測定 約３×１０⁷個の細胞を、１０％胎児牛血清とＩＬ−２（１０U/ml）を含有す るＲＰＭＩ中の約３〜５μg/mlのＰＨＡで４８時間活性化する。定量したウイル ス株を、感染多重度約０．００１〜０．０１で、活性化リンパ球懸濁液に加える 。細胞−ウイルス懸濁液を３７℃で２時間インキュベートして、ウイルスを吸収 させる。遠心分離して残存ウイルス接種株を除去し、細胞を１０％ＦＢＳと１０ U/ml ＩＬ−２含有ＲＰＭＩ中に再懸濁する。これらの感染細胞を、９６ウェル マイクロタイタープレート中のＤＭＳＯ内のストック液（１０mg/ml）からの完 全組織培養培地で希釈した試験物質に加えて、２００μl 当たり約５×１０⁵細 胞を得る。感染した未処理細胞、およびＤＭＳＯのみ（０．１％）またはＡＺＴ もしＤＤＩで処理した細胞を、対照として用いた。培養物を融合細胞（syncytia ）形成について、感染後７日目および１１日目に観察するか、またはｐ２４抗原 の逆転写酵素活性について上澄液を試験する。 慢性感染測定 ＨＸＢ２（ＨＩＶ−１の実験室株）で慢性に感染させたＣＥＭ細胞を、１２ウ ェルマイクロタイタープレートの６ウェルに加えて、約５×１０⁴細胞／ウェル を得る。ウェルの半分は種々の濃度の試験化合物で処理し、同じ数の非感染ＣＥ Ｍ細胞を化合物を添加せずに維持する。試験化合物を含有するまたは含有しない 新鮮な培地を、３日間連続して毎日加える。次に培養物を４８時間、培地を交換 することなくインキュベートする。細胞を遠心分離して採取し、ＰＢＳで２回洗 浄し、０．１２５ＭトリスpH６．８、４％ＳＤＳ、２０％グリセロール、１０％ ベータメルカプトエタノールおよび０．０２％ブロモフェノールブルーを含有す る２×リームリ(Laemmli)緩衝液５０μl に再懸濁する。培養上澄液を０．２２ μのフィルターに通し、細胞破片を除去し、５０，０００rpm で９０分間遠心分 離してウイルス粒子を濃縮する。ウイルスペレットを５０μl の２×リームリ緩 衝液に再懸濁する。細胞またはウイルス懸濁液を５分間沸騰させ、次に１０〜２ ０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド勾配ゲル中で電気分離を行う。次にゲルの内容 物を電気ブロッティングによりニトロセルロースに移す。ｐ２４およびｐ１７に 対するモノクローナル抗体を用い、次にビオチンに結合したヤギ−抗マウスＩｇ ＧおよびＨＲＰに結合したアビジンを用いてＨＩＶ特異的タンパク質を検出する 。４−クロロ−１−ナフトールの酵素的変換を用いて、これらのモノクローナル 抗体に認識される特異的タンパク質を可視化する。さらに、試験化合物の存在下 でまたは非存在下で慢性に感染したＣＥＭ細胞により産生されるウイルスの感染 性を調べる。ろ過した上澄液を連続希釈を行い、非感染ＣＥＭ細胞（約１×１０⁴ 細胞／ウェル）を感染させるのに使用する。感染後７日目または１１日目に融 合細胞の形成について培養物を試験するか、または上澄液を逆転写酵素活性もし くはｐ２４抗原について試験する。 微量逆転写酵素（ＲＴ）測定 微量ＲＴ測定法は、いくつかの標準的ＲＴ測定法の１つの応用である。これは 、少量の試料のＨＩＶ ＲＴ活性を測定するためおよび多くの試料の処理を促進 するために開発された。 方法： １．ウェル当たり５０μl のＲＴカクテルを９６ウェルＵ底マイクロタイタープ レートに加える。 ２．ウェル当たり１０〜２０μl の細胞を含まない上澄液を加える。 ３．機械回転器を用いて充分混合する。 ４．３７℃で２時間インキュベートする。 ５．ＴＯＭＴＥＫを用いて吸引してＤＥ８１濾紙または同等物にのせる。 ６．２×ＳＳＣを用いて４回すすぐ。 ７．９５％エタノールを用いて１回すすぐ。 ８．濾紙を乾燥させる。 ９．ベータープレートカウンター（ファルマシア(Pharmacia)）を用いて計測す る準備をする。例１９ ＥＣ₅₀のシフトが観察されるまで、化合物の濃度を増加させて複数回サイクルを 繰り返す。 以下は、ＨＩＶプロテアーゼインヒビター耐性突然変異体の選択のために使用 した培養法である。感染した細胞を、プロテアーゼインヒビターの存在下で連続 的に増殖させる。いくつかの培養物を週毎に交互に高濃度または低濃度のインヒ ビターに接触させる。他のものは一定の濃度で継代する。ＥＣ₅₀のシフトが観察 されるまで、薬剤濃度を定期的に増加させる。用量応答曲線のシフトは、一般的 に薬剤濃度０．５〜１μg/ml以上（ＥＣ₉₀の５〜１０倍）で検出され、処理され るウイルス単離物に依存する。ＨＩＶの実験室で適応させた単離物または初代臨 床単離物を使用した。処理単離物および未処理単離物の間で直接ヌクレオシド配 列が比較できるように、同じウイルス単離物を同じ方法で薬剤の非存在下で継代 する。一般的にプロテアーゼインヒビターに耐性のＨＩＶ−１変種は、特定のプ ロテアーゼインヒビターのいくつかの阻害濃度の存在下で連続的に継代（増殖） させて選択される（マルコウィッツ(Markowitz)ら、Journal of Virology ６９ ：７０１−７０６（１９９５）を参照）。下記のＨＩＶ−１変種は、選択された ウイルス単離物中に存在するが、対照、未処理ウイルス単離物には存在しない突 然変異を示す。 ＲＦはＨＩＶ−１株ＨＩＶ−１_RFを示し、ＲＦＲは例１の化合物に対してＲＦ の選択により得られた耐性株の混合物を示す。ＲＦＲは、プロテアーゼ遺伝子型 Ｇ４８Ｖ（１４／４０クローン）；Ｇ４８Ｖ、Ｖ８２Ａ（１８／４０クローン） ；Ｇ４８Ｖ、Ｌ９０Ｓ（２／４０クローン）；Ｇ４８Ｖ、Ｉ５４Ｔ、Ｖ８２Ａ（ １／４０クローン）；Ｇ４８Ｍ（１／４０クローン）；Ｇ４８Ｖ、Ｑ６１Ｈ（１ ／４０クローン）；Ｖ１３Ｉ、Ｇ４８Ｖ（１／４０クローン）；Ｇ４８Ｖ、Ｆ５ ３Ｌ、Ｖ８２Ａ（１／４０クローン）；およびＧ４８Ｖ、Ｖ８２Ａ、Ｃ９５Ｙ（ １／４０クローン）を有するウイルス株の混合物である。ＲＦＲ２は、限界希釈 の３回の増殖によりＲＦＲをクローニングして得られた耐性株の混合物である。 ＲＦＲ２は、プロテアーゼ遺伝子型Ｇ４８Ｖ、Ｖ８２Ａ（１３／１５クローン） ；Ｇ１７Ｅ、Ｇ４８Ｖ、Ｖ８２Ａ（１／１５クローン）；およびＧ４８Ｖ、Ｖ８ ２Ａ、Ｎ３７Ｄ、Ｎ８８Ｄ（１／１５クローン）を有するウイルス株の混合物よ りなる。ＲＦＲＲは、例１と２の化合物に対してＲＦの選択と次に限界希釈の３ 回の増殖によりクローニングして得られた耐性株の混合物である。ＲＦＲＲは、 プロテアーゼ遺伝子型Ｇ４８Ｖ、Ｉ５４Ｔ、Ｌ６３Ｐ、Ｖ８２Ａ（７／９クロー ン）；Ｇ４８Ｖ、Ｉ５４Ｔ、Ｌ６３Ｐ、Ｖ８２Ａ、Ｎ８８Ｓ（１／９クローン） ；およびＧ４８Ｖ、Ｉ５４Ｔ、Ｌ６３Ｐ、Ｇ７３Ｍ、Ｖ８２Ａ（１／９クロ ーン）を有するウイルス株の混合物よりなる。ＳＦ１６２は、ＨＩＶ−１株ＳＦ −１６２であり、ＳＦ１６２Ｒは、例１の化合物に対してＳＲ１６２の選択によ り得られた耐性株の混合物である。ＳＦ１６２Ｒは、プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４ ６Ｉ、Ｆ５３Ｌ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｎ８８Ｄ（２／３クローン）；およびＭ ４６Ｉ、Ｆ５３Ｌ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｎ８８Ｄ、Ｑ９２Ｒ（１／３クローン ）を有するウイルス株の混合物よりなる。８９−９５９はＨＩＶ−１株８９−９ ５９であり、８９−９５９Ｒは、例２の化合物に対して８９−９５９の選択によ り得られた耐性株の混合物である。８９−９５９Ｒは、プロテアーゼ遺伝子型Ｎ ８８Ｓ（４／５クローン）；およびＤ２５Ｎ、Ｔ２６Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ３７Ｎ、 Ｒ４１Ｋ、Ｇ７３Ｄ、Ｒ８７Ｋ、Ｎ８８Ｓ（１／４クローン）を有するウイルス 株の混合物よりなる。ＮＬ４はＨＩＶ−１株ＨＩＶ−１_NL4-3である。ＮＬ４（ Ｇ４８Ｖ）は、プロテアーゼ中でアミノ酸４８位でグリシンからバリンへの合成 法で作成した部位特異的突然変異を有する株である。ＮＬ４（Ｉ８４Ｖ）は、プ ロテアーゼ中でアミノ酸８４位でイソロイシンからバリンへの合成法で作成した 部位特異的突然変異を有する株である。ＮＬ４（Ｒ８Ｑ、Ｍ４６Ｉ）は、プロテ アーゼ中でアミノ酸８位でアルギニンからグルタミンへの合成法で作成した部位 特異的突然変異とアミノ酸４６位でメチオニンからイソロイシンへの合成法で作 成した部位特異的突然変異を有する株である。ＮＬ４（Ｐ２２−５３８）は、２ ２回の継代後に例１０の化合物に対してＨＩＶ−１_NL4-3の選択により得られた 耐性株の混合物であり、プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、 Ｖ８２Ｆ、Ｉ８４Ｖ（４／１０）；Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ｖ８２Ｆ、Ｉ８４Ｖ（ ３／１０）；Ｍ４６Ｉ、Ａ７１Ｖ、Ｖ８２Ｆ、Ｉ８４Ｖ（３／１０）よりなる。 ＮＬ４（Ｐ３７−５３８）は、３７回の継代後に例１０の化合物に対してＨＩＶ −１_NL4-3の選択により得られた耐性株であり、プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４６Ｉ 、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｉ８４Ａよりなる。ＮＬ４（５３８／５２４）は、２４ 回の継代後に例５の化合物に対してＮＬ４（Ｐ２２−５３８）の選択により得ら れた耐性株であり、プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｉ８ ４Ａよりなる。ＮＬ４（５３８／Ｐ７−ＡＧ）は、７回の継代後に例１２の化合 物に対してＮＬ４（Ｐ２２−５３８）の選択により得られた耐性株の混合物であ り、 プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｉ８４Ａ；およびＶ３２ Ｉ、Ｖ８２Ｉよりなる。ＮＬ４（５３８／Ｐ２４−ＡＧ）は、２４回の継代後に 例１２の化合物に対してＮＬ４（Ｐ２２−５３８）の選択により得られた耐性株 であり、プロテアーゼ遺伝子型Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｉ８４Ａよりな る。ＮＬＡ（Ｐ１９−００３）は、１９回の継代後に例９の化合物に対してＨＩ Ｖ−１_NL4-3の選択により得られた耐性株であり、プロテアーゼ遺伝子型Ｒ８Ｋ 、Ｍ４６Ｉよりなる。ＮＬ４（Ｐ３４−００３）は、３４回の継代後に例９の化 合物に対してＨＩＶ−１_NL4-3の選択により得られた耐性株であり、プロテアー ゼ遺伝子型Ｒ８Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｌ６３Ｐ、Ａ７１Ｖ、Ｌ９０Ｍよりなる。ウイル ス単離物の耐性は、表１〜１１に要約する。例２０ 表１から表３に要約されたウイルス分離株耐性の結果は、下記の検定法あるい はそれを少し修飾した方法に従って得た。１０％ウシ胎児血清およびＩＬ−２（ １０単位／ml）を含むＲＰＭＩ中約３×１０⁷個の細胞を約３〜５μg ／mlのＰ ＨＡで４８時間活性化した。定量したウイルス原液をこの活性化されたリンパ球 浮遊液へ約０．００１〜０．０１の感染多重度で加えた。細胞−ウイルス浮遊液 を３７℃で２時間インキュベーションしてウイルスを吸収させた。残留ウイルス 接種材を遠心により除き、１０％ＦＢＳおよび１０単位／mlのＩＬ−２を含むＲ ＰＭＩ中に細胞を再浮遊させた。９６穴（ウェル）マイクロタイタープレート中 で、これら感染細胞をＤＭＳＯ中の原液（１０mg／ml）から得た試験化合物（完 全組織培地で希釈）へ加え、細胞約５×１０⁵個／ウェル／２００μl とした。 感染した未処理細胞およびＤＭＳＯだけ（０．１％）で処理した細胞あるいはＡ ＺＴまたはＤＤＩいずれかで処理した細胞を対照として使用した。培養を感染後 ７日目と１１日目にシンシチウム形成について調べるか、あるいは上澄を逆転写 酵素活性またはｐ２４抗原について試験した。 例２１ 表４〜表６に要約されたウイルス分離株耐性の結果は、下記の検定法あるいは それを少し修飾した方法に従って得た。検定は９６穴組織培養プレートで行なっ た。ＣＥＭ−Ｔ４細胞を９０％ＲＰＭＩ培地（Gibco BRL Life Technologies，I nc.，Gaithsburg，マリーランド州）１０％熱処理ウシ胎児血清（Gibco BRL Lif e Technologies，Inc.，Gaithsburg,マリーランド州）中に浮遊させ、最終濃度 を生活力のある細胞５×１０⁵個／mlとした。冷凍したＨＩＶ培養（ＨＩＶ−１_{R F} 株）の一部を迅速に融かし（３７℃の水浴中で）、ＣＥＭ−Ｔ４細胞へ加えて 約０．００１〜０．０１感染単位／細胞の最終濃度とした。ウイルス−細胞浮遊 液を回して迅速に混合し、直ちに１００μl を９６穴組織培養プレートの各ウェ ル中各試験化合物（９０％ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ中２×濃縮液として調製）希 釈液１００μl に加えた。各プレートは細胞とウイルスからなり試験化合物は含 まない対照ウェルを含んだ。すべての検定で３’−アジド−３’−デオキシチミ ジン（ＡＺＴ）を正の対照として含めた。 これら組織培養プレートを加湿した５％ＣＯ₂雰囲気中３７℃で７日間インキ ュベーションした。次にウイルスの複製レベルを標準法（前述した通り、例えば ＨＩＶ Research，Aldovini & Walker,編、１９９０年、Stockton Press，ニュ ーヨーク州、中の技術参照）を用いて、上澄中の逆転写酵素活性の測定により決 定した。 例２２ 表７〜表１１に要約されたウイルス分離株耐性の結果は、Markowitz 等、Jour nal of Virology,６９巻、７０１−７０６（１９９５）（これは参考文献として そのまま本明細書中に取り入れている）により記述された検定法あるいはそれを 少し修飾した方法に従って得た。 例２３ 独特のヒドロキシエチル尿素等配電子体を含む例１および例２のプロテアーゼ 阻害剤を用いて、薬物耐性ＨＩＶ−１変異株を容器内で選択した。臨床および研 究室のＨＩＶ−１株を、Ｔ細胞系であるいは末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ_S）で、 存在する薬物の濃度を高めながら継代した。耐性変異株は、同一期間阻害剤欠如 下で継代した対照ウイルスよりも、一貫して少なくとも１０倍高いＥＣ₅₀値を示 した。ウイルスＤＮＡをＰＣＲにより増幅し、プロテアーゼをコード化する遺伝 子のヌクレオチド配列を標準法を用いて測定した。それぞれ例２および例１のプ ロテアーゼ阻害剤に対して耐性のあるウイルスにおいては、選ばれた変異株の多 くで８８位のアミノ酸の変化が一貫して観察された。８８のＡｓｎ残基は、構造 的に保存されたらせん領域内にあり、単量体および二量体両方のアスパラギン酸 プロティナーゼ中に存在する。対応するカルボキシ末端配列Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａ ｓｐ／Ａｓｎ（残基８６−８８）は、レトロウイルスアスパラギン酸プロティナ ーゼに独特である。これらの結果に対するどんな説明も推測に過ぎないが、組換 えＨＩＶ−１プロテアーゼに結合した基本型のヒドロキシエチル尿素阻害剤の高 分解能Ｘ線構造から誘導された鋳型に基づくモデル化の研究は、Ａｓｎ８８突然 変異がプロテアーゼの立体配座を変えるかもしれないことを示唆するようである 。 本発明に係るレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤化合物は、有利に効果のある 抗ウイルス化合物であり、そしてとりわけレトロウイルス、特に上に示したレン チウイルス、の有効な阻害剤である。従って、この主題化合物はＨＩＶの有効な 抑制物質である。本発明化合物はまたＨＩＶの他の株、例えばＨＩＶ−２および 他のウイルス類、例えばＶＩＳＮＡウイルスおよびサル免疫不全ウイルス（ＳＩ Ｖ）、ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２も抑制するであろうことも企図されてい る。従って、本発明化合物はレトロウイルス感染症の治療および（または）予防 に有効である。 本発明はレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤化合物の溶媒和物あるいは水和物 を包含することも意味し、可能ならばこの分野で公知の方法により調製あるいは 単離される。 本レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤化合物は、無機酸または有機酸から誘導 される塩の形で使用できる。これらの塩は次のものを包含するが、これらに限定 しない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩 、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、シ ョウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデ シル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘ ミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、 ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩 、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸 塩、パルモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピ クリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシア ン酸塩、トシレート、メシレートおよびウンデカン酸塩。 製薬上容認しうる酸付加塩をつくるために使用しうる酸の例として、無機酸、 例えば塩酸、硫酸およびリン酸ならびに有機酸、例えばシュウ酸、マレイン酸、 コハク酸およびクエン酸が挙げられるが、なるべくは塩酸塩が好ましい。他の例 には、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、例えばナトリウム、カリウム、カ ルシウムまたはマグネシウムとの塩あるいは有機塩基との塩が含まれる。 患者に対して一回分量または分割した用量で投与される全１日量は、例えば体 重１kg当り０．０１から５０mg／日、より一般的には０．１から３０mgの量でよ い。投薬単位組成物は、このような量を分割してそれらを合わせて１日分量とす る約量を含むことができる。 担体材料と合わせて単一剤形をつくることのできる活性成分の量は、処置を受 ける患者および特定の投与様式によって変化する。 レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤化合物および（または）組成物を用いて病 状を処置する用法・用量は、種々な因子、例えば患者のタイプ、年齢、体重、性 別、食餌、および医学的症状、病気の重篤さ、投与経路、薬理学的な考慮すべき 事柄、例えば使用した特定化合物の活性、効力、薬動学的および毒物学的プロフ ィル、薬物供給系を利用するかどうかまた化合物を薬剤コンビネーションの一部 として投与するのかどうか、に従って選ばれる。従って、実際に用いられる用法 ・用量は広く変化することがあるので、前記の特に適当な用法・用量からそれる ことがある。 本発明化合物は、必要に応じ、通常の無毒性製薬上容認しうる担体、補助剤、 およびビヒクルを含有する投薬単位製剤として、経口的、非経口的に、吸入スプ レーにより、直腸に、あるいは局所的に投与することができる。局所投与はまた 経皮投与、例えば経皮パッチあるいはイオン導入装置の使用も含みうる。本明細 書で用いた非経口的という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射、あ るいは点滴技術を包含する。 注射用製剤、例えば無菌の注射用水性または油性懸濁系は、公知の技術に従い 適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて処方できる。無菌注射用製剤は また非経口的に容認しうる無毒性希釈剤あるいは溶剤中の無菌注射用溶液または 懸濁系、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液、のこともある。使用可能な容 認することのできるビヒクルおよび溶媒は水、リンゲル液、および等張塩化ナト リウム溶液である。更にまた、無菌固定油も溶媒としてあるいは懸濁媒質として 従来から使用されている。この目的に対して、合成モノグリセリドまたはジグリ セリドを含めて刺激の少ない固定油はいずれも使用できる。更にまた、脂肪酸、 例えばオレイン酸、を注射用製剤の製造に使用できる。 薬剤の直腸投与に供される座剤は、薬剤を適当な無刺激性付形剤、例えばカカ オ脂およびポリエチレングリコールと混合することにより製造できる。これら付 形剤は常温では固体であるが、直腸温度では液体であるため直腸内で融解し、薬 物を放出する。 経口投与に供される固体剤形はカプセル、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を 包含しうる。このような固体剤形においては、活性化合物を少なくとも１種の不 活性希釈剤、例えばショ糖、乳糖またはデンプンと混合できる。このような剤形 はまた普通の習慣にならって、不活性希釈剤の外の追加物質、例えば滑沢剤、例 えばステアリン酸マグネシウム、を含有しうる。カプセル、錠剤、および丸剤の 場合、これら剤形は緩衝剤も含むことができる。錠剤および丸剤は更に腸溶性被 覆を施して製造できる。 経口投与用液体剤形は、この分野で常用される不活性希釈剤、例えば水を含む 製薬上容認できる乳濁系、溶液、懸濁系、シロップ、およびエリキシルを包含し うる。このような組成物はまた補助剤、例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、な らびに甘味剤、フレーバ付与剤、および香料も含有しうる。 本発明に係るレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤化合物は唯一の活性医薬剤と して投与することができるが、これらはまたＨＩＶ−１のようなレトロウイルス に対して有効な他の抗ウイルス剤とのコンビネーションとしても使用できる。こ のような化合物として、他のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤、種々なヌクレオシ ド類縁物質、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、タット拮抗物質およびグリコシ ダーゼ阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。 ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤の例には、Ｒｏ ３１−８５９（Roberts，N． A.等、Science １９９０，２４８，２５８−２６１および Drugs of the Future １９９１，１６（３），２１０−２１２，ＫＮＩ−２７２，（Kagayama，S.等 、Antimicrobial Agents and Chemotherapy １９９３，８１０−８１７）、環状 尿素シリーズ（Lam，P．等、“De Novo Design and Discovery of Potent，Nonp eptidal ＨＩＶ−１ Protease Inhibitors,”第２０５回アメリカ化学会国際学 会、薬用化学部門における論文９６、デンバー、コロラド州、３月２８日〜４月 ２日、１９９３）Ｌ−７３５，５２４（Dorsey，B．D．等、“Ｌ−７３５，５２ ４：The Rational Design of a Potent and Orally Bioavailable HIV Protease Inhibitor,"第２０６回アメリカ化学会国際学会、医用化学部門における論文６ 、シカゴ市、イリノイ州、８月２２日−２７日、１９９３）およびその類縁体が 含まれるがこれらに限定されない。 競合型ヌクレオシド類縁体の例には、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ジデオキシ イノシン（ＤＤＩ）、ＤＤＣ、３ＴＣ、Ｄ４ＴおよびＰＭＥＡが含まれるがこれ らに限定されない。非ヌクレオシド、非競合型逆転写酵素阻害剤の例には、ピリ ドン類（Wei，J．S.等、J．Med．Chem．１９９３，３６，２４９−２５５；Hoff man，J．M.等、J．Med．Chem．１９９２，３５，３７８４−３７９１;Saari等、 J．Med．Chem．１９９２，３５，３７９２−３８０２;Drugs of the Future １ ９９２，１７（４），２８３−２８５、およびその類縁物質）；ビス（ヘテロア リール）ピペラジン類（Romero，D．L．等、J．Med．Chem．１９９３，３６， １５０５−１５０８；Romero，D．L．等、Proc．Natl．Acad．Sci．USA １９９ １，３４，７４６〜７５１および３１８７〜３１９８；およびその類縁物質）お よび三環式ピリドベンゾ−およびデピリドジアゼピノン類（Hargrave，K．D.，J ．Med．Chem.１９９１，３４，２２３１〜２２４１；Merluzzi，M．J．Science １９９０，２５０，１４１１〜１４１３；およびその類縁物質）および５−クロ ロ−３−（フェニルスルホニル）インドール−２−カルボキサミドおよびその類 縁物質（Williams，T．M．等、J．Med．Chem．１９９３，３６，１２９１〜１２ ９４）が含まれるが、これらに限定されない。タット拮抗物質の例には、Ｒｏ ５−３３３５およびＲｏ ２４−７４２９（Hsu，M．C.等、Proc．Natl．Acad． Sci．USA １９９３，９０９，６３９５〜６３９９；Tam，S．等、“TAT INHIBI TORS：A NEW CLASS OF ANTI-HIV AGENTS,"論文３７２，第２０４回アメリカ化学 会国際学会、有機化学部門、ワシントン、コロンビア地区、８月２３日〜２８日 、１９９２）およびその類縁物質が含まれるがこれらに限定されない。グリコシ ダーゼ阻害剤の例には、カスタノスペルミン、カスタノスペルミン６−ブトリル エステル、Ｎ−ブチル−１−デオキシノジリマイシン、Ｎ−ブチル−１−デオキ シノジリマイシンペル−ブトリルエステルおよびその類縁物質とプロドラッグが 含まれるがこれらに限定されない。 本治療剤は実質的に同時に投与される別個の組成物として処方することができ 、あるいは本治療剤を活性剤のすべてが患者に治療上有効な量で与えられるよう に単一組成物として投与することもできる。別法として、本治療剤は、活性剤の 一方のみ、あるいは二つがいつでも治療上有効な量で患者の中にあるように異な る時間に患者に投与することもできる。 本発明化合物および方法は効果的な抗ウイルス性化合物であり、とりわけ前に 示したように効果的なレトロウイルス抑制剤である。従って、本発明化合物は有 効なＨＩＶプロテアーゼ阻害剤である。本主題の化合物は他のレトロウイルス、 例えば他のレンチウイルス、とりわけＨＩＶの他の株、例えばＨＩＶ−２、ヒト Ｔ−細胞白血病ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、サル免疫不全ウイルスなど、も 抑制するであろうということが企図されている。従って、本発明化合物はレトロ ウイルス感染症の治療および（または）予防に有効である。 本発明化合物および方法は溶液中でレトロウイルスの増殖を防止する際にも有 効である。キャリブレーターおよび対照を含めて研究および診断手順といった種 種な公知の目的に対し、ヒトおよび動物の細胞培養、例えばＴ−リンパ球培養が 利用される。細胞培養の増殖および貯蔵の前、およびその途中において、細胞培 養の中に不注意にあるいは気付かずに存在するかもしれないレトロウイルスの予 期しない複製あるいは望まない複製を防止するために、本発明化合物を細胞の培 地へ有効な濃度で添加することができる。ウイルスは最初から細胞培養の中に存 在するかもしれず、例えばＨＩＶはヒトＴ−リンパ球の中に、それが血液中に検 出されるずっと以前から、あるいはウイルスへの曝露によって存在することが知 られている。本発明化合物および方法のこの使用法は、研究者あるいは臨床医に 対して潜在的に致命的となるレトロウイルスへの気付かない曝露あるいは不注意 による曝露を防止するものである。 上記の説明は本発明の単なる例示に過ぎないのであって、ここに開示された化 合物に本発明を限定することは意図しない。当業者にとって明白な変化および変 更は、請求の範囲に定義された本発明の範囲および本質内にあるものとする。 上記の説明から、当業者は本発明の本質的な特徴を容易に確かめることができ 、そして本発明の主旨と範囲から離れることなく本発明を種々な用法および条件 に適合させるように本発明に種々な変化および修飾を施すことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/425 Ａ６１Ｋ 31/425 31/44 31/44 31/47 ＡＧＡ 31/47 ＡＧＡ 31/495 ＡＤＹ 31/495 ＡＤＹ 31/55 31/55 31/70 31/70 38/55 Ｃ０７Ｄ 217/26 Ｃ０７Ｄ 217/26 243/04 243/04 277/28 277/28 317/62 317/62 401/12 ２１５ 401/12 ２１５ Ａ６１Ｋ 37/64 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 スミット，メアリー アメリカ合衆国 63011 ミズーリ州ボー ルウィン，ウイロウイック 325 (72)発明者 タッカー，サイモン，ピー アメリカ合衆国 63011 ミズーリ州エリ スビル，サニ グレン コート ６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．哺乳動物におけるレトロウイルス感染症の治療法において、前記哺乳動物 へ、 （ａ）有効量の第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤、および、 （ｂ）有効量の第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤を投与することから なり、そして前記第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、前記第一レトロ ウイルスプロテアーゼ阻害剤に耐性をもつ少なくとも１種のレトロウイルス株に 対して有効である上記方法。 ２．第一および第二の阻害剤は、両阻害剤の有効量が哺乳動物中に存在するよ うに投与する、請求項１記載の方法。 ３．第一および第二の各阻害剤の投与は、一阻害剤の有効量がいつでも哺乳動 物中に存在するように交互に行なう、請求項１記載の方法。 ４．第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニ ル-３（Ｓ）−［［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］ア ミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）−カルボキサミ ド； （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２，５−ビス［Ｎ−［Ｎ−［［Ｎ−メチル−Ｎ −（２−ピリジニルメチル）アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−３，４ −ジヒドロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン； （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−５−［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプ ロピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］− ２−［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒドロキ シ−１，６−ジフェニルヘキサン； ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−アミノフェニル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸３ Ｓ−テトラヒドロフラニルエステル； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェ ニルチオ）−３（Ｓ）−［［Ｎ−［（２−メチル−３−ヒドロキシフェニル）カ ルボニル］アミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）− カルボキサミド； ［４Ｒ−（４α，５α，６β，７β）］−１，３−ビス［（３−アミノフェニ ル）メチル］ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロキシ−４，７−ビス（フェニルメ チル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］−３，３− ジメチルブタンアミド； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾ ジオキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミド； ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミノ］− １−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニル）プ ロパンアミド； ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミド；または（２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル− Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグリシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅ ｒｔ−ブチルカルバモイル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール である、請求項１記載の方法。 ５．第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニ ル−３（Ｓ）−［［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］ア ミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）−カルボキサミ ド； （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２，５−ビス−［Ｎ−［Ｎ−［［Ｎ−メチル− Ｎ−（２−ピリジニルメチル）アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−３， ４−ジヒドロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン； （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−５−［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプ ロピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］− ２−［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒドロキ シ−１，６−ジフェニルヘキサン； ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−アミノフェニル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸３ Ｓ−テトラヒドロフラニルエステル； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェ ニルチオ）−３（Ｓ）−［［Ｎ−［（２−メチル−３−ヒドロキシフェニル）カ ルボニル］アミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）− カルボキサミド； ［４Ｒ−（４α，５α，６β，７β）］−１，３−ビス［（３−アミノフェニ ル）メチル］ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロキシ−４，７−ビス（フェニルメ チル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］− ３，３−ジメチルブタンアミド； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾジ オキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロ ピル］−２Ｓ−メチル-３−（メチルスルホニル）プロパンアミド； ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミノ］− １−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニル）プ ロパンアミド； ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミド；または（２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル− Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグリシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅ ｒｔ−ブチルカルバモイル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール である、請求項１記載の方法。 ６．第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニ ル−３（Ｓ）−［［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］ア ミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）−カルボキサミ ド； （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２，５−ビス−［Ｎ−［Ｎ−［［Ｎ−メチル− Ｎ−（２−ピリジニルメチル）アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−３， ４−ジヒドロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン； （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−５−［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプ ロピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］− ２−［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒドロキ シ−１，６−ジフェニルヘキサン； ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−アミノフェニル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸３ Ｓ−テトラヒドロフラニルエステル； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェ ニルチオ）−３（Ｓ）−［［Ｎ−［（２−メチル−３−ヒドロキジフェニル）カ ルボニル］アミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）− カルボキサミド； ［４Ｒ−（４α，５α，６β，７β）］−１，３−ビス［（３−アミノフェニ ル）メチル］ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロキシ−４，７−ビス（フェニルメ チル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］−（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル） プロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］−３，３ −ジメチルブタンアミド； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾ ジオキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミド； ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミノ］− １−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニル）プ ロパンアミド；または （２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグ リシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイ ル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール であり、そして第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミドである、 請求項１記載の方法。 ７．第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド であり、そして第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 （２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグ リシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイ ル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾ ジオキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミド； ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミノ］− １−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニル）プ ロパンアミド；または ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミド である、請求項１記載の方法。 ８．第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−５−［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプ ロピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］− ２−［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒド ロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン であり、第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は （２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブチルグ リシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイ ル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］−３，３− ジメチルブタンアミド；または ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミド である、請求項１記載の方法。 ９．第一および第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤の両方に対して耐性 をもつ少なくも１種のウイルス株に対して有効な第三のレトロウイルスプロテア ーゼ阻害剤を患者に投与する、請求項１記載の方法。 10．第三のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤は、 Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−２（Ｒ）−フェニル メチル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（１−（４−（３−ピリジルメチル）−２ （Ｓ）−Ｎ’−（ｔ−ブチルカルボキサミド）−ピペラジニル））−ペンタンア ミド； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニ ル−３（Ｓ）−［［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］ア ミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）−カルボキサミ ド； （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２，５−ビス−［Ｎ−［Ｎ−［［Ｎ−メチル− Ｎ−（２−ピリジニルメチル）アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］−３， ４−ジヒドロキシ−１，６−ジフェニルヘキサン； （２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−５−［Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−メチル−Ｎ−［（２−イソプ ロピル−４−チアゾリル）メチル］アミノ］カルボニル］バリニル］アミノ］− ２−［Ｎ−［（５−チアゾリル）メトキシカルボニル］アミノ］−３−ヒドロキ シ−１，６−ジフェニルヘキサン； ［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（４−アミノフェニル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］カルバミン酸３ Ｓ−テトラヒドロフラニルエステル； Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルデカヒドロ−２−［２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（フェ ニルチオ）−３（Ｓ）−［［Ｎ−［（２−メチル−３−ヒドロキジフェニル）カ ルボニル］アミノ］ブチル］−（４ａＲ，８ａＳ）−イソキノリン−３（Ｓ）− カルボキサミド； ［４Ｒ−（４α，５α，６β，７β）］−１，３−ビス［（３−アミノフェニ ル）メチル］ヘキサヒドロ−５，６−ジヒドロキシ−４，７−ビス（フェニルメ チル）−２Ｈ−１，３−ジアゼピン−２−オン； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル ）スルホニル］（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−［［（ピロリジン−１−イル）アセチル］アミノ］−３，３− ジメチルブタンアミド； Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキシ−３−［（２−メチルプロピル）［（１，３−ベンゾ ジオキソール−５−イル）スルホニル］アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プ ロピル］−２Ｓ−メチル−３−（メチルスルホニル）プロパンアミド； ［１Ｓ−［１Ｒ^*（Ｒ^*），２Ｓ^*］］−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−［Ｎ¹−（ ２−メチルプロピル）−Ｎ¹−（４−メトキシフェニルスルホニル）アミノ］− １−（フェニルメチル）プロピル］−２−メチル−３−（メチルスルホニル）プ ロパンアミド； ２Ｓ−［［（Ｎ−メチルアミノ）アセチル］アミノ］−Ｎ−［２Ｒ−ヒドロキ シ−３−［［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルホニル］（２−メ チルプロピル）アミノ］−１Ｓ−（フェニルメチル）プロピル］−３，３−ジメ チルブタンアミド； または、（２Ｒ，３Ｓ）−３−（Ｎ−メチルアミノアセチル−Ｌ−ｔｅｒｔ−ブ チルグリシニル）アミノ−１−（Ｎ−イソアミル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルカル バモイル））アミノ−４−フェニル−２−ブタノール である、請求項９記載の方法。 11．第一のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤に対する少なくとも１種のウイ ルス耐性株と第二のレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤に対する少なくとも１種 のウイルス耐性株との各々が、プロテアーゼペプチド配列中に少なくとも１個の アミノ酸置換を有するレトロウイルスプロテアーゼをつくり出し、そしてこの置 換がプロテアーゼの同じ基質結合部位領域に影響を及ぼし、観察された抑制剤耐 性に寄与する、 請求項１記載の方法。 12．プロテアーゼ阻害剤の外の少なくとも１種の抗ウイルス剤の投与を更に含 む、請求項１記載の方法。 13．抗ウイルス剤は、ヌクレオシド類縁体、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤 、タット拮抗物質あるいはグリコシダーゼ阻害剤である、請求項１２記載の方法 。 14．ヌクレオシド類縁体はＡＺＴ，ＤＤＩ，ＤＤＣ，３ＴＣ，Ｄ４ＴまたはＰ ＭＥＡであり、グリコシダーゼ阻害剤はカスタノスペルミンまたはＮ−ブチル− １−デオキシノジリマイシンである、請求項１３記載の方法。 15．哺乳動物はヒト、サルまたはネコである、請求項１記載の方法。 16．レトロウイルスはＨＩＶまたはＨＴＬＶである、請求項１記載の方法。 17．レトロウイルスはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２である、請求項１６記載の 方法。 18．患者のレトロウイルス感染症の治療法において、 （ａ）第二の選ばれたレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤が、第一の選ばれた レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤に対して耐性をもつ少なくとも１種のレトロ ウイルス株に対して有効である二つのレトロウイルスプロテアーゼ阻害剤を選び 、そして （ｂ）前記患者へ前記の第一および第二の選ばれた各阻害剤の有効量を投与す る ことからなる上記方法。 19．第一および第二の阻害剤を、両方の阻害剤の有効量が患者に存在するよう に投与する、請求項１８記載の方法。 20．第一および第二の阻害剤の投与を、一つの阻害剤の有効量がいつでも患者 に存在するように交互に行なう、請求項１８記載の方法。