KR100386754B1 - 레트로바이러스프로테아제저해제조합 - Google Patents

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엘. 브라이언트 마틴
이. 포츠 카렌
스미트 메어리
피. 터커 사이몬
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지.디. 썰 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 생체내 또는 시험관내에서 레트로바이러스의 복제를 방지하는데 효과적인 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 조합을 이용하는 HIV와 같은 포유류 레트로바이러스 감염의 치료방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 다른 프로테아제 저해제 화합물과의 병용요법에 사용되는 프로테아제 저해제에 관한 것이다. 또한 본 발명은 프로테아제 저해제 이외의 프로테아제 저해제 및 항바이러스제 조합의 병용요법에 관한 것이다.

Description

레트로바이러스 프로테아제 저해제 조합
발명의 배경
1. 발명의 분야
본 발명은 시험관내 및 생체내에서 사람 면역결핍 바이러스(HIV)와 같은 포유류 레트로바이러스의 복제를 방지하는데 효과적인 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 조합을 사용하는, HIV와 같은 포유류 레트로바이러스 감염의 치료방법에 관한 것이다. 특히 본 발명은 다른 프로테아제 저해제 화합물과의 병용요법에 사용되는 프로테아제 저해제 화합물에 관한 것이다.
2. 관련분야
레트로바이러스의 복제 사이클 동안에 gag 및 gag-pol 유전자 전사 산물은 단백질로 번역된다. 단백질은 바이러스에 의해 암호화된 프로테아제(또는 프로테이나제)에 의해 연속적으로 프로세싱되어 바이러스 효소와 바이러스 코어의 구조 단백질이 얻어진다. 가장 일반적으로, gag 전구체 단백질은 코어 단백질로 프로세싱되고 pol 전구체 단백질은 바이러스 효소, 예를들면, 역전사효소 및 레트로바이러스 프로테아제로 프로세싱된다. 레트로바이러스 프로테아제에 의한 전구체 단백질의 올바른 프로세싱이 감염 비리온의 집합에 필요하다는 것이 밝혀졌다. 예를들면, HIV의 pol 유전자의 프로테아제 영역내 프레임 시프트 돌연변이가 gag 전구체 단백질의 프로세싱을 방지한다는 것이 밝혀졌다. 또한, HIV 프로테아제 활성부위내 아스파르트산 잔기의 부위-지정 돌연변이 유발을 통하여 gag 전구체 단백질의 프로세싱이 방지된다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 레트로바이러스 프로테아제의 작용을 저해함으로써 바이러스 복제를 저해하려는 시도가 이루어졌다.
전형적으로, 레트로바이러스 프로테아제 저해는 전이상태 의태를 수반하여 이에 의하여 레트로바이러스 프로테아제는 gag 및 gag-pol 단백질과 경쟁적으로 효소에 (통상 가역적인 방식으로) 결합하는 의태 화합물에 노출됨으로써 구조 단백질의 특이적인 프로세싱과 레트로바이러스 프로테아제 자체의 방출을 저해한다. 이 방식으로, 레트로바이러스 복제 프로테아제는 효과적으로 저해될 수 있다.
의태 화합물의 몇가지 부류, 특히 HIV 프로테아제의 저해와 같은 프로테아제의 저해에 대하여 제안되었다. 그러한 의태물은 히드록시에틸아민 동배체, 환원된 아미드 동배체 및 비펩티드 동배체를 포함한다. 예를들면 EP 0 346 847; EP 0 342 541; Roberts et al, "Rational Design of Peptide-Based Proteinase Inhibitors," Science, 248, 358 (1990); Erickson et al, "Design Activity, and 2.8Å Crystal Structure of a C2Symmetric Inhibitor Complexed to HIV-1 Protease, "Science 249, 527 (1990); and S. Thaisrivongs, "Structure-Based Design of Non-Peptide HIV Protease Inhibitors," 35th Annual Buffalo Medicinal Chemistry Meeting, State University of New York at Buffalo, NY, May 22-25, 1994 참조.
HIV 프로테아제 저해제와 같은 레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 문제점은 저해제에 대해 내성인 바이러스 변종의 발생이다. 예를들면, Merck & Co.의 HIV 프로테아제 저해제 L-735, 524는 사람에게서 HIV 감염에 대해 효과적이지만, 후에 HIV의 L-735,524 내성 변종이 모체에서 발생한다 (Waldholz, The Wall Street Jaurnal February 25, 1994, page B3; 및 Condra et al., Nature 374:569-571 (1995)). 다른 예로는 Vacca et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:4096-4100 (1994); Ho et al., J. Virol. 68:2016-2020 (1994); 및 Sardana et al., Biochem. 33:2004-2010 (1994)에서 찾을 수 있다.
발명의 개요
본 발명은 시험관내 및 생체내에서 포유류 레트로바이러스의 복제를 방지하는데 효과적인 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 조합을 사용하는 사람 면역 결핍 바이러스(HIV)와 같은 포유류 레트로바이러스 감염의 치료방법에 관한 것이다. 특히 본 발명은 다른 프로테아제 저해제 화합물과의 병용요법에 사용되는 프로테아제 저해제 화합물에 관한 것이다. 또한, 이 조합은 다른 항-바이러스제와 조합하여 사용될 수도 있다.
발명의 상세한 설명
레트로바이러스 프로테아제는 레트로바이러스 복제 과정에서 중요한 효소이다. HIV와 같은 레트로바이러스의 번식은 바이러스를 레트로바이러스 프로테아제 저해제에 노출됨으로써 방해받을 수 있다. 그러나, 레트로바이러스의 프로테아제 저해제에 대한 장기간 노출로 변이체 레트로바이러스는 프로테아제 저해체에 대해 내성인 레트로바이러스의 새로운 우세한 변종이 나타나도록 선택될 수 있다. 레트로바이러스의 새로운 우세한 변종은 더 이상 저해될 수 없거나 보다 빈번하게는 프로테아제 저해제에 의해서 불충분하게 저해되는 프로테아제를 생산할 수 있으며 저해제의 농도가 실질적으로 증가되지 않는다면 프로테아제 저해제의 존재하에서도 자유롭게 번식할 수 있다. 본 발명은 레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대해 내성인 레트로바이러스 변종의 발생을 극복하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명은 사람, 원숭이, 고양이등과 같은 포유류에게 적어도 두개의 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 효과량을 투여하는 것을 제공한다. 투여는 적어도 두개의 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 투여에 의하여, 즉 적어도 두개의 저해제의 효과량이 항상 상기 포유류내에 존재하도록 둘이상의 레트로바이러스 프로테아제 저해제를 투여함으로써 달성될 수 있다. 대안으로, 투여는 적어도 두개의 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 연속 또는 교대 투여에 의하여, 즉 단지 하나의 저해제의 효과량이 항상 상기 포유류내에 존재하도록 둘이상의 레트로바이러스 프로테아제를 투여함으로써 달성될 수 있다. 레트로바이러스 프로테아제 저해제의 적당한 선택으로, 이 방법은 어느 하나의 저해제에 대한 내성변종의 존재하에서도 레트로바이러스의 번식을 효과적으로 조절할 수 있다.
레트로바이러스 프로테아제 저해제는 저해제의 레트로바이러스 번식 배양물에 노출시 생체내 또는 시험관내에서 발생하는 레트로바이러스의 내성변종의 프로파일에 기초하여 선택된다. 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 적어도 하나의 레트로바이러스 내성변종에 의한 교차내성(cross-resistance)이 없는 것으로 선택된다. 레트로바이러스 변종은 레트로바이러스가 양쪽 저해제에 대해 내성일 때 두개의 프로테아제 저해제에 대해 교차내성인 것으로 간주된다. 바람직하게는 어떤 교차내성을 견딜 수 있다면 1군으로 취해졌을 때 선택된 레트로바이러스 프로테아제 저해제간에 교차내성은 존재하지 않는다. 그러므로 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 노출의 결과로서 발생할 수 있는 레트로바이러스의 변이체(또는 돌연변이 변종)는 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제에 의해서도 여전히 저해될 것이며, 또는 양쪽 제1 및 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 노출의 결과로서 발생할 수 있는 것은 제3레트로바이러스 프로테아제 저해제 또는 제4레트로바이러스 프로테아제 저해제 등에 의해서도 여전히 저해될 것이다.
여러 가지 프로테아제 저해제 간의 교차내성 프로파일 비교를 하였으며 바람직하게는 교차내성이 거의 또는 전혀 없는 화합물이 병용요법에 선택된다. 약제내성 표현형은 비내성, 저레벨 내성(EC50또는 EC90에서 10배 미만 이동), 중간레벨내성(EC50또는 EC90에서 약 10 내지 약 100배 이동) 또는 고레벨내성(EC50또는 EC90에서 약 100배이상 이동)으로 나뉠 수 있다. 약제내성은 생체내에서 달성될 수 있는 저해제 농도가 내성 바이러스에 대해 감소된 프로테아제 저해 효과를 가질 때 환자 바이러스 하중에 대한 감소된 효과와 상호 관련 있는 것으로 예상된다. 그러므로 프로테아제 저해제의 더 바람직한 조합은 최소 교차내성 프로파일(즉, 바람직하게는 중간레벨 이하의 내성; 보다 바람직하게는 저레벨 이하의 내성; 및 가장 바람직하게는 비내성)과 다른 저해제에 대하여 선택된 야생형 및/또는 내성 바이러스를 위한 최대 내성적 효능을 나타내는 것이다. 예를들면, 제1화합물과 조합하여 사용되는 바람직한 화합물은 제1화합물에 대해 중간레벨, 보다 바람직하게는 고레벨 내성이 있는 바이러스의 변종에 대해 효과적인 것이 바람직하다. 각각의 저해제 및 조합물의 약리학 및 독물학도 병용요법를 위한 저해제 선택의 인자이다.
보다 바람직하게는 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성변종과 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성변종이 프로테아제의 동일 기질 결합부위에 영향을 주고 관찰되는 저해제 내성에 기여하는 프로테아제 펩티드 서열내 상이한 아미노산 치환을 가질 때 선택된다. 그러므로 프로테아제내 동일부위에서 일어날 수 있는 가능한 아미노산 치환의 수는 한정된다. 특히 이것은 그 부위가 효소의 활성, 효율 및/또는 안정성에 중요할 때 정확하다.
이 경우는 본 실시예 1 및 2의 HIV 프로테아제 저해제에 관하여 관찰하였다. 실시예 1의 화합물에 대한 레트로바이러스 내성은 HIV 프로테아제의 아미노산 88에서의 부위돌연변이(아스파라긴 88이 아스파르트산 88으로 치환)로부터 결과하였다. 또한 실시예 2의 화합물에 대한 레트로바이러스 내성은 HIV 프로테아제의 아미노산 88에서 부위 돌연변이(아스파라긴 88이 세린 88으로 치환)로부터 경과하였다. 아미노산 88에서의 어떤 치환은 효소활성의 손실을 유발하는 것으로 알려졌다 (Loeb et al., Nature 340:387-400 (1989)). 그러므로 실시예 1 및 2의 양쪽 HIV 프로테아제 저해제의 투여는 양쪽 저해제에 대한 바이러스 교차내성의 내성변종의 더 성공적인 생산 가능성을 실질적으로 감소시킨다. 조합하여 사용된 양쪽 저해제에 대한 내성은 동시적인 프레임에서 단일 저해제에 대한 내성 표현형의 출현과 비교하였을 때치료 6주 동안 검출되지 않았다. 효소활성에 영향을 주는 부위 돌연변이 외에, 동일 변이체내 다른 부위 돌연변이도 일어날 수 있으며 효소활성 및/또는 내성에 실질적으로 영향을 주지 않는다.
대안으로, 보다 상세하게는 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성변종이 상기 제2프로테아제 저해제에 대한 증가된 감도를 가질 때, 또는 제2레트로바이러스 프로테아제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성변종이 상기 제1프로테아제 저해제에 대한 증가된 감도를 가질 때 선택된다.
본 발명에서 사용하기에 적당한 대표적인 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 한정하는 것은 아니지만 공동소유의 계류중인 미국특허 출원번호 08/152,934 (1993년 11월 15일 출원), 08/253,531 (1994년 6월 3일 출원), 08/109,787 (1993년 8월 20일 출원), 08/110,911 (1993년 8월 24일 출원), 08/110,913 (1993년 8월 24일 출원), 08/110,912 (1993년 8월 24일 출원), 08/204,827 (1994년 3월 2일 출원), 07/886,556 (1992년 5월 20일 출원), 07/886,663 (1992년 5월 20일 출원), 07/886,531 (1992년 5월 20일 출원), 08/148,817 (1993년 11월 8일 출원), 08/886,700 (1992년 5월 21일 출원) 및 07/998,187 (1992년 12월 29일 출원)과 PCT 특허출원번호 PCT/US93/10552 (1993년 10월 29일 출원), PCT 특허출원번호 PCT/US93/10460 (1993년 10월 29일 출원) 및 PCT/US93/10461 (1993년 10월 29일 출원)에 개시되고 기재된 프로테아제 저해제를 포함하며, 그 각각은 여기서 그 전체가 참고로 포함된다. 본 발명에서 사용하기에 적당한 추가의 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 한정하는 것은 아니지만, 미국특허 5,157,041; EP 346,847; 미국특허 출원번호 No. 07/883,825 (1992년 5월 15일 출원); WO 93/09096; Tet. Lett. 35:673-676 (1994); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 4096-4100 (1994); Y. N. Wong et al., Biopharm. & Drug Dispos. 15:535-544 (1994); M.L. West and D. P. Fairlie, Trends Pharmacol. Sci. 16:67-75 (1995); and S. Thaisrivongs, "HIV Protease Inhibitors", Ann. Reports Med. Chem., Vol. 29, Chap. 14, pp. 133-144 (1994) (Academic Press, J. Bristol. Ed.)에 개시되고 기재된 프로테아제 저해제를 포함하며, 그 각각은 여기서 그 전체가 참고로 포함한다.
더 이상의 노력없이도 이 분야의 전문가라면 상기 설명을 이용하여 본 발명을 완전히 이용할 수 있다고 믿어진다. 다음 바람직한 특이적인 구체예는 모든 가능한 화합물 조합의 총망라한 설명을 제공하려는 것은 아니며 단순히 효과적인 것으로 예상되는 약제조합의 예를 제공하려는 것이다. 내성 바이러스 분리물을 사용하는 이들 및 다른 프로테아제 저해제의 유사한 시험은 적당한 약제조합을 동정하는 것을 도울 수 있다. 그러므로, 다음 바람직한 구체예는 단지 예시적이며 어떠한 방식으로도 나머지 명세를 한정하려는 것은 아니다.
실시예 1
[1S-[1R*(R*), 2S*]]-N1-[3-[[[(1, 1-디메틸에틸)아미노]카르보닐])2-메틸프로필)아미노]-2-히드록시-1-(페닐메틸)프로필]-2-[(2-퀴놀린일카르보닐)아미노]-부탄디아미드를 공동소유의 계류중인 미국특허출원 일련번호 08/152,934 (1993년 11월 15일 출원) 및 08/156,498(1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이 둘은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 2
(2R, 3R)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올을 공동소유의 계류중인 미국특허출원 일련번호 08/109,787 (1993년 8월 20일 출원), 본 출원으로 공동 출원한 대리인 일람번호 2766/1, 그리고 08/156,498 (1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이것들은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 3
[2R-히드록시-3-[[(4-메톡시페닐)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 5-피리미딜메틸 에스테르를 공동소유의 계류중인 미국특허출원 일련번호 08/110,911 (1993년 8월 24일 출원) 및 08/156,498 (1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이 둘은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 4
[1S-[1R*(R*), 2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드를 공동소유의 계류중인 미국특허출원 일련번호 08/110,913 (1993년 8월 24일 출원) 및 08/156,498 (1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이 둘은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 5
N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드(L-735,524)를 미국특허출원 일련번호 07/883,825 (1992년 5월 15일 출원), WO 93/09096, Tet. Lett. 35:673-676(1994) 및 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:4096-4100 (1994)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이것의 각각은 그 전체로서 참고로 본문에 포함한다.
실시예 6
N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-페닐-3(S)-[[N-(2-퀴놀일카르보닐)-L-아스파라긴일]아미노]부틸]-(4aR, 8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드(Ro 31-8959)를 미국특허 5,157,041에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 7
[1S-[1R*(R*), 2S*]]-N1-[3-[[[(1, 1)-디메틸에틸)아미노]카르보닐](3-메틸부틸)아미노]-2-히드록시-1-(페닐메틸)프로필]-2-[(2-퀴놀린일카르보닐)아미노]-부탄디아미드를 공동소유의 계류중인 미국특허출원 일련번호 08/152,934 (1993년 11월 15일 출원) 및 08/156,498 (1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이 둘은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 8
N-[3-[N2-[N1-(1, 1-디메틸에틸)아미노술포닐]-N2-(2-메틸프로필)아미노]-2R-히드록시-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(2-퀴놀린일카르보닐)아미노]부탄디아미드를 공동소유의 계류중인 PCT 특허출원 번호 PCT/US 93/10552 (1993년 10월 29일 출원) 및 US 특허출원 일련번호 08/ 156,498 (1993년 11월 23일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이들은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 9
(2S, 3R 4S, 5S)-2, 5-비스-[N-[N-[[N-메틸-N-(2-피리딘일메틸)아미노]카르보닐]발린일]아미노]-3,4-디히드록시-1, 6-디페닐헥산(A-77003)을 J. Med. Chem. 36:320-330 (1993)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이것을 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 10
(2S, 3S, 5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1, 6-디페닐헥산(A-84538, ABT-538)을 PCT 특허출원 일련번호 WO 94/14436 (1993년 12월 16일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 이것은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 11
[2R-히드록시-3-[[(4-아미노페닐)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 3S-테트라히드로푸란일에스테르(VX-478)를 PCT 특허출원 일련번호 WO 94/05639(1993년 9월 7일 출원)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다.
실시예 12
N-tert-부틸데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-[[N-[(2-메틸-3-히드록시페닐)카르보닐]아미노]부틸]-(4aR, 8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드(AG-1343, AG-1350)를 Bioorg. & Med. Chem. Let. 5:715-720, 5:721-726 및 5:727-732 (1995)에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 각각은 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다. 보다 구체적으로, 3-히드록시-2-메틸벤조산 HOBT 활성에스테르(Bioorg. & Med. Chem. Let. 5:727-732(1995))를 N-tert-부틸데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-아미노부틸]-(4aR, 8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드(Bioorg. & Med. Chem. Let. 5:715-720.(1995))에 결합시킬 수 있다.
실시예 13
[4R-(4α, 5α, 6β, 7β)]-1, 3-비스[(3-아미노페닐)메틸]헥사히드로-5, 6-디히드록시-4, 7-비스(페닐메틸)-2H-1, 3-디아제핀-2-온(DMP-450, XM-412)을 PCT 특허출원 WO 93/07128에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있으며, 그 전체로서 참고로 본문에 포함된다. 보다 구체적으로, 염화 또는 브롬화 3-니트로페닐메틸 같은 3-니트로페닐메틸 할로겐화물을 [4R-(4α, 5α, 6β, 7β)]-헥사히드로-5, 6-디히드록시-4, 7-비스(페닐메틸)-2H-1, 3-디아제핀-2-온의 히드록시 보호된 유도체와반응시킨 다음에 히드록시기를 탈보호하고 (WO 93/07128 참조) 니트로기를 아미노기로 환원시킨다. 그러한 환원은 이 분야의 숙련자들에게 잘 알려진 표준방법을 사용하여 이루어질 수 있다.
실시예 14
N-[2R-히드록시-3-[[1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드의 제조
A: 염화 1, 3-벤조디옥솔-5-술포닐의 제조.
질소하 0℃에서 무수 N, N-디메틸포름아미드 4.25g의 용액에 염화술푸릴 7.84g을 가한 다음에 고체가 형성되었다. 15분 동안 교반한 다음에 1, 3-벤조디옥솔 6.45g을 가하고 혼합물을 2시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 빙수에 붓고, 염화메틸렌으로 추출하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 미정제 물질 7.32g을 흑색 오일로서 얻었다. 이것은 20% 염화메틸렌/헥산을 사용하는 실리카겔에서 크로마토그래피하여 염화(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐 1.9g을 얻었다.
대안으로, 기계식 교반기, 냉각콘덴서, 가열맨틀 및 등압 적하깔때기가 장착된 22ℓ 둥근바닥 플라스크에 삼산화황 DMF 착체(2778g, 18.1mol)를 가하였다. 다음에 디클로로에탄(4ℓ)을 가하고 교반을 시작하였다. 1, 3-벤조디옥솔(1905g, 15.6mol)을 5분에 걸쳐 적하깔때기를 통하여 가하였다. 온도를 75℃로 상승시키고 22시간 동안 방치하였다 (NMR은 반응이 9시간 후에 끝났음을 나타내었다). 반응물을 26℃로 냉각시키고 염화옥살일(2290g, 18.1mol)을 40℃ 이하의 온도(1.5시간)을 유지하기 위한 속도로 가하였다. 혼합물을 5시간 동안 67℃로 가열한 다음에 얼음욕으로 16℃로 냉각시켰다. 반응물을 20℃ 이하의 온도를 유지시킨 속도에서 물(5ℓ)로칭시켰다. 물의 첨가로 완결시킨 후에, 혼합물을 10분동안 교반시켰다. 상들을 분리하고 유기상을 물(5ℓ)로 2회 다시 세척하였다. 유기상을 황산마그네슘(500g)으로 건조시키고 여과하여 건조제를 제거시켰다. 용매를 50℃에서 진공하에서 제거하였다. 얻어진 따뜻한 액체를 냉각시키자 고체가 형성되기 시작하였다. 1시간 후에 고체를 헥산(400㎖)으로 세척하고, 여과하여 건조시켜 원하는 염화술포닐(2823g)을 얻었다. 헥산 세척물을 농축하고 얻어진 고체를 헥산 400㎖로 세척하여 추가의 염화술포닐(464g)을 얻었다. 전체 수득량은 3287g (1, 3-벤조디옥솔에 기초하여 95.5%) 이었다.
B: 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올의 제조.
방법 1: N, N-비스(페닐메틸)-L-페닐알라닌페닐메틸에스테르의 DIBAL 환원으로부터의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올.
단계 1: 물(500㎖)중의 L-페닐알라닌(50.0g, 0.302mol), 수산화나트륨(24.2g, 0.605mol) 및 탄산칼륨(83.6g, 0.605mol)의 용액을 97℃로 가열하였다. 다음에 브롬화벤질(108.5㎖, 0.605mol)을 서서히 가하였다 (첨가시간 -25분). 혼합물을 질소분위기 하에서 30분동안 97℃에서 교반시켰다. 용액을 실온으로 냉각시키고 톨루엔(2×250㎖)으로 추출하였다. 조합한 유기상을 물 및 염수로 세척하고 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 오일로 농축시켰다. N, N-비스(페닐메틸)-L-페닐알라닌 페닐메틸에스테르를 컬럼 크로마토그래피(실리카켈, 15% 에틸아세테이트/헥산)로 정제하였다. 통상 생성물은 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 바로 사용할 정도로 순수하다. EIMS: m/z 434 (M-1).
단계 2: 상기 반응에서 벤질화된 페닐알라닌 페닐메틸에스테르(0.302mol)를 톨루엔(750㎖)에 용해시키고 -55℃로 냉각시켰다. 톨루엔 중의 DIBAL의 1.5M 용액(443.9㎖, 0.666mol)을 -55 내지 -50℃ 사이의 온도를 유지하기 위한 속도에서 가하였다 (첨가시간 -1시간). 혼합물을 질소분위기하에서 20분동안 교반한 다음에 메탄올(37㎖)를 서서히 가하여 -55℃에서칭시켰다. 차가운 용액을 차가운(5℃) 1.5N HCl 용액(1.8ℓ)에 부었다. 침전고체(약 138g)를 여과하고 톨루엔으로 세척하였다. 고체물질을 톨루엔(400㎖) 및 물(100㎖)의 혼합물에 현탁하였다. 혼합물을 5℃로 냉각하고 2.5N NaOH (186㎖)로 처리하고 다음에 고체가 용해될 때까지 실온에서 교반시켰다. 톨루엔상을 수상으로부터 분리하고 물 및 염수로 세척하고 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 75㎖(89g)의 부피로 농축시켰다. 에틸아세테이트(25㎖) 및 헥산(25㎖)을 잔류물에 가하자 원하는 알코올 생성물이 결정화되기 시작하였다. 30분 후에, 추가의 50㎖ 헥산을 가하여 결정화를 더 촉진시켰다. 고체를 여과하고 헥산 50㎖로 세척하여 제1수거 생성물 34.9g을 얻었다. 제2수거생성물(5.6g)을 모액을 재여과시킴으로써 분리하였다. 2가지의 수거물을 조합하고 에틸아세테이트(20㎖) 및 헥산(30㎖)으로부터 재결정화하여 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판을 40g을 얻었고 L-페닐알라닌으로부터 수율은 40%이었다. C23H25ON에 대한 분석계산치: C, 83.34; H, 7.60; N, 4.23. 실측치: C, 83.43; H, 7.59; N, 4.22.
방법 2: L-페닐알라닌올의 N, N-디벤질화로부터 βS-2-[비스(페닐메틸)아미노]벤질-프로판올의 제조.
L-페닐알라닌올(176.6g, 1.168mol)을 물 710㎖중의 탄산칼륨(484.6g, 3.506mol)의 교반용액에 가하였다. 혼합물을 질소분위기하에 65℃로 가열하였다. 3A 에탄올(305㎖)중의 브롬화벤질(400g, 2.339mol)의 용액을 온도를 60 내지 68℃로 유지하는 속도로 가하였다. 이 2상 용액을 65℃에서 55분 동안 교반한 다음 격렬하게 교반하면서 10℃로 냉각시켰다. 오일상 생성물을 작은 과립으로 고화시켰다. 생성물을 수도물 2.0ℓ로 희석하고 5분동안 교반하여 무기부산물을 용해시켰다. 생성물을 감압하에 여과에 의해 분리하고 pH가 7일 때까지 물로 세척하였다. 얻어진 미정제 생성물을 에틸아세테이트/헵탄(1:10) 1.1ℓ로부터 재결정하였다. 생성물을 여과(-8℃에서)에 의해 분리하고 차가운(-10℃) 에틸아세테이트/헵탄(1:10) 1.6ℓ로 세척하고 공기건조시켜 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올 339g (수율 88%)을 얻었다. 융점: 71.5-73.0℃.
C: 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드의 제조.
방법 1: 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올(200g, 0.604mol)을 트리에틸아민(300㎖, 2.15mol)에 용해시켰다. 혼합물을 12℃로 냉각시키고 DMSO (1.6ℓ)중의 삼산화황/피리딘 착체(380g, 2.39mol)의 용액을 온도를 8 내지 17℃로 유지하는 속도로 가하였다. 용액을 1.5시간 동안 질소분위기하에 주위온도에서 교반하였다. 반응혼합물을 빙수로 냉각시키고 45분에 걸쳐 냉수(10-15℃) 1.6ℓ0로칭하였다. 얻어진 용액을 에틸아세테이트(2.0ℓ)로 추출하여 5% 시트르산(2.0ℓ) 및 염수(2.2ℓ)로 세척하고 MgSO4(280g)상에서 건조시키고 여과하였다. 용매를 진공에서 제거한 다음 진공하에 건조시켜 2S-[비스-(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드 198.8g을 담황색 오일로서 얻었다 (99.9%). 얻어진 미정제 생성물은 정제하지 않고 다음 단계에서 바로 사용할 정도로 순수하였다.
방법 2: 디클로로메탄(240㎖)중의 염화옥살일(8.4㎖, 0.096mol)의 용액을 -74℃로 냉각시켰다. 그 다음 디클로로메탄(50㎖)중의 DMSO (12.0㎖, 0.155mol)의 용액을 온도를 -74℃로 유지하는 속도로 천천히 가하였다 (첨가시간 ∼1.25시간). 혼합물을 5분 동안 교반하고 이어서 디클로로메탄 100㎖중의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올(0.074mol)의 용액을 가하였다 (첨가시간 ∼20분, 온도 -75℃ 내지 -68℃). 용액을 -78℃에서 35분동안 질소분위기하에 교반하였다. 그 다음 트리에틸아민(41.2㎖, 0.295mol)을 10분에 걸쳐 가하였는데 (온도 -78℃ 내지 -68℃) 이때 암모늄염이 침전되었다. 이 차가운 혼합물을 30분 동안 교반한 다음 물(225㎖)을 가하였다. 디클로로메탄층을 수상으로부터 분리하여 물, 염수로 세척하고 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하여 농축하였다. 잔류물을 에틸아세테이트 및 헥산으로 회석한 다음 여과하여 암모늄염을 더 제거하였다. 여액을 농축하여 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드를 얻었다. 이 알데히드를 정제하지 않고 다음 단계로 속행하였다.
방법 3: 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올 1.0g (3.0mmol), N-메틸포르폴린 0.531g(4.53mmol), 분자체(4A) 2.27g 및 아세토니트릴 9.1㎖를 테트라프로필암모늄 퍼루테네이트(TPAP) 53mg (0.15mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 에틸아세테이트 15㎖에 현탁하고 실리카겔 패드를 통해 여과하였다. 여액을 감압하에 농축하여 약 50%의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드를 함유하는 생성물을 담황색 오일로서 얻었다.
방법 4: 톨루엔 9.0㎖중의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판올 1.0g (3.02mmol)의 용액에 자유라디칼 2, 2, 6, 6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시(TEMPO) 4.69mg (0.03mmol), 브롬화나트륨 0.32g (3.11mmol), 에틸아세테이트 9.0㎖ 및 물 1.5㎖를 가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 물 8.53㎖ 및 중탄산나트륨 0.735g (8.75mmol)을 함유하는 5% 가정용 표백제 2.87㎖의 수용액을 25분에 걸쳐 천천히 가하였다. 혼합물을 0℃에서 60분 동안 교반하였다. 2개의 추가의 표백제 첨가물 (각각 1.44㎖)을 가하고 이어서 10분 동안 교반하였다. 수층을 에틸아세테이트 20㎖로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 요오드화칼륨 25mg과 물(4.0㎖)을 함유하는 용액 4.0㎖, 10% 티오황산나트륨수용액 20㎖, 그 다음 염수용액으로 세척하였다. 유기용액을 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 감압하에 농축하여 원하는 알데히드생성물인 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐 프로판알데히드를 소량 함유하는 미정제 오일 1.34g을 얻었다.
D: N, N-디벤질-3(S)-아미노-1, 2-(S)-에폭시-4-페닐부탄의 제조
방법 1: 테트라히드로푸란(1.8ℓ)중의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드(191.7g, 0.58mol) 및 클로로요오도메탄(56.4㎖, 0.77mol)의 용액을 질소분위기하에 스테인레스강 반응기에서 -30 내지 -35℃로 냉각시켰다. 그 다음 헥산(1.6M, 365㎖, 0.58mol)중의 n-부틸리튬의 용액을 온도를 -25℃ 이하로 유지하는 속도로 가하였다. 첨가 후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 더 이상의 시약 첨가는 다음 방법으로 실행하였다: (1) 추가의 클로로요오도메탄(17㎖)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(110㎖)을 가하였다. 첨가후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 1회 반복하였다. (2) 추가의 클로로요오도메탄(8.5㎖, 0.11mol)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(55㎖, 0.088mol)을 가하였다. 첨가후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 5회 반복하였다. (3) 추가의 클로로요오도메탄(8.5㎖, 0.11mol)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(37㎖, 0.059mol)을 가하였다. 첨가후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 1회 반복하였다. TLC (실리카겔, 20% 에틸아세테이트/헥산)가 반응이 종료되었음을 나타내었을 때 외부냉각을 중지하고 혼합물을 4 내지 16시간에 걸쳐 주위온도로 가온하였다. 반응혼합물을 10℃로 냉각시키고 온도를 23℃ 이하로 유지하면서 16% 염화암모늄용액 1452g으로칭하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 유기층과 수층을 분리하였다. 수상을 에틸아세테이트(2×500㎖)로 추출하였다. 에틸아세테이트층을 테트라히드로푸란층과 합하였다. 합한 용액을 황산마그네슘(220g)상에서 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 갈색오일 잔류물을 70℃에서 진공(0.8bar)에서 1시간 동안 건조시켜 미정제 물질 222.8g을 얻었다. 보통 이 미정제 생성물은 정제하지 않고 다음 단계에서 바로 사용한다.
방법 2: 테트라히드로푸란(285㎖)중의 미정제 알데히드(0.074mol) 및 클로로요오도메탄(7.0㎖, 0.096mol)의 용액을 질소분위기하에 -78℃로 냉각시켰다. 그 다음 헥산(25㎖, 0.040mol)중의 n-부틸리튬의 1.6M 용액을 온도를 -75℃로 유지하는 속도로 가하였다. 이 최초의 첨가후 추가의 클로로요오도메탄(1.6㎖, 0.022mol)을 다시 가하고 이어서 온도를 -75℃로 유지하면서 n-부틸리튬(23㎖, 0.037mol)을 가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 시약 클로로요오도메탄(0.70㎖, 0.010mol)과 n-부틸리튬(5㎖, 0.008mol) 각각을 -75℃에서 45분에 걸쳐 4회 더 가하였다. 그 다음 냉각 욕을 제거하고 용액을 1.5시간에 걸쳐 22℃로 가온하였다. 혼합물을 포화염화암모늄수용액 300㎖에 주입하였다. 테트라히드로푸란층을 분리하였다. 수상을 에틸아세테이트(1×300㎖)로 추출하였다. 합한유기층을 염수로 세척하여 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 농축하여 갈색오일(27.4g)을 얻었다. 이 생성물은 정제하지 않고 다음 단계에서 사용할 수 있다.
방법 3: 테트라히드로푸란(1.8ℓ)중의 2S-[비스(페닐메틸)아미노]-3-페닐프로판알데히드(178.84g, 0.54mol) 및 브로모클로로메탄(46㎖, 0.71mol)의 용액을 질소분위기하에 스테인레스강 반응기에서 -30 내지 -35℃로 냉각시켰다. 그 다음 헥산(1.6M 340㎖, 0.54mol)중의 n-부틸리튬의 용액을 온도를 -25℃ 이하로 유지하는 속도로 가하였다. 첨가 후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 더 이상의 시약첨가는 다음 방법으로 실행하였다: (1) 추가의 브로모클로로메탄(14㎖)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(102㎖)을 가하였다. 첨가 후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 1회 반복하였다. (2) 추가의 브로모클로로메탄(7㎖, 0.11mol)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(51㎖, 0.082mol)을 가하였다. 첨가후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 5회 반복하였다. (3) 추가의 브로모클로로메탄(7㎖, 0.11mol)을 가하고 이어서 -25℃ 미만에서 n-부틸리튬(51㎖, 0.082mol)을 가하였다. 첨가후 혼합물을 -30 내지 -35℃에서 10분 동안 교반하였다. 이것을 1회 반복하였다. TLC (실리카겔, 20% 에틸아세테이트/헥산)가 반응이 종료되었음을 나타내었을 때 외부냉각을 중지하고 혼합물을 4 내지 16시간에 걸쳐 주위온도로 가온하였다. 반응혼합물을 10℃로 냉각시키고 온도를 23℃ 이하로 유지하면서 16% 염화암모늄용액 1452g으로칭하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 유기층과 수층을 분리하였다. 수상을 에틸아세테이트(2×500㎖)로 추출하였다. 에틸아세테이트층을 테트라히드로푸란층과 합하였다. 합한 용액을 황산마그네슘(220g)상에서 건조시켜 여과하고 65℃에서 회전증발기상에서 농축하였다. 갈색오일 잔류물을 70℃에서 진공(0.8bar)에서 1시간 동안 건조시켜 미정제 물질 222.8g을 얻었다.
E: N-[3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-2(R)-히드록시-4-페닐부틸]-N-이소부틸아민·옥살산 염의 제조
단계 1: 이소프로판올(2.7ℓ)(또는 에틸아세테이트)중의 미정제 N, N-디벤질-3(S)-아미노-1, 2(S)-에폭시-4-페닐부탄(388.5g, 1.13mol)의 용액에 2분에 걸쳐 이소부틸아민(1.7kgm, 23.1mol)을 가하였다. 온도를 25℃에서 30℃로 상승시켰다. 용액을 82℃로 가열하고 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이 따뜻한 용액을 진공에서 농축하였다. 갈색오일 잔류물을 진공(0.8mmHg)에서 16시간 동안 건조시켜 생성물 450g을 미정제 오일로서 얻었다.
단계 2: 메탄올(76㎖)중의 옥살산(8.08g, 89.72mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 에틸아세테이트(90㎖)중의 미정제 3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-1-(2-메틸프로필)아미노-4-페닐부탄-2(R)-올의 용액을 가하였다. 혼합물을 실온에서 약2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 분리하여 에틸아세테이트(2×20㎖)로 세척하고 진공에서 약 1시간 동안 건조시켜 부분입체이성질체 순도 97%의 염 21.86g을 얻었다. 융점 = 174.99℃; 미량분석: 계산치: C 71.05%, H 7.50%, N 5.53%; 실측치: C 71.71%, H 7.75%, N 5.39%.
대안으로 미정제 3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-1-(2-메틸프로필)아미노-4-페닐부탄-2(R)-올(5g)을 메틸-tert-부틸에테르(MTBE)(10㎖)에 용해시키고 메탄올(4㎖)중의 옥살산(1g)을 가하였다. 혼합물을 약 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 고체를 여과하고 차가운 MTBE로 세척하고 건조시켜 부분입체이성질체 순도 약 98.9% (HPLC 피크면적에 의거)의 백색 고체 2.1g을 얻었다.
F: 1-[N-[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]-N-(2-메틸프로필)아미노]-3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-4-페닐-2(R)-부탄올의 제조
1, 4-디옥산(2000㎖)중의 N-[3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-2(R)-히드록시-4-페닐부틸]-N-이소부틸아민·옥살산 염(354.7g, 0.7mole)에 물(250㎖)중의 탄산칼륨(241.9g, 1.75mol)의 용액을 가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 이어서 15분에 걸쳐 1, 4-디옥산(250㎖)중의 1, 3-벤조디옥솔-5-술포닐 클로라이드(162.2g, 0.735mol)를 가하였다. 반응혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 에틸아세테이트(1000㎖) 및 물(500㎖)을 가하여 1시간 더 교반을 계속하였다. 수층을 분리하여 에틸아세테이트(200㎖)로 더 추출하였다. 합한 에틸아세테이트층을 25% 염수용액(500㎖)으로 세척하고 무수황산마그네슘상에서 건조시켰다. 여과하고 황산마그네슘을 에틸아세테이트(200㎖)로 세척한 후 용매를 진공에서 제거하여 원하는 술폰아미드를 점성의 황색 거품상 오일로서 얻었다(440.2g, 수율 105%), HPLC/MS (일렉트로스프레이) (m/z 601 [M+H]+).
대안으로 N-[3(S)-[N, N-비스(페닐메틸)아미노]-2(R)-히드록시-4-페닐부틸]-N-이소부틸아민·옥살산 염(2800g, 5.53mol) 및 THF (4ℓ)를 기계식 교반기가 설치된 22ℓ둥근바닥 플라스크에 가하였다. 탄산칼륨(1921g, 13.9mol)을 물(2.8ℓ)에 용해시켜 이 THF 슬러리에 가하였다. 그 다음 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 1, 3-벤조디옥솔-5-술포닐 클로라이드(1281g, 5.8mol)를 THF (1.4ℓ)에 용해시켜 25분에 걸쳐 반응혼합물에 가하였다. 추가의 THF 200㎖를 사용하여 첨가 깔때기를 세정하였다. 반응물을 14시간 동안 교반한 다음 물(4ℓ)을 가하였다. 이 혼합물을 30분 동안 교반하고 층을 분리시켰다. 층을 제거하고 수층을 THF (500㎖)로 2회 세척하였다. 합한 THF층을 황산마그네슘(500g)으로 1시간 동안 건조시켰다. 그 다음 이 용액을 여과하여 건조제를 제거하고 후속 반응에서 사용하였다.
G: 1-[N-[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]-N-(2-메틸프로필)아미노]-3(S)-아미노-3(S)-아미노-4-페닐-2(R)-부탄올·메탄술폰산 염의 제조
미정제 1-[N-(1, 3-밴조디옥솔-5-일)술포닐]-N-(2-메틸프로필)아미노]-3-(S)-[비스(페닐메틸)아미노]-4-페닐-2(R)-부탄올(62g, 0.010mol)을 메탄올(40㎖)에 용해시켰다. 그 다음 이 용액에 메탄술폰산(0.969g, 0.010mol) 및 물(5㎖)을 가하였다. 혼합물을 20% Pd(OH)2/C (255mg, 함수율 50%)가 들어 있는 500㎖ 파르 수소화 병에 넣었다. 이 병을 수소화반응기에 넣고 질소로 5회, 수소로 5회 퍼지하였다. 반응을 35℃에서 63PSI의 수소압력으로 18시간 동안 진행시켰다. 추가의 촉매(125mg)를 가하고 퍼지후 수소화를 20시간 더 계속하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 이것을 메탄올(2×10㎖)로 세척하였다. 메탄올의 약 1/3을 감압하에 제거하였다. 남은 메탄올을 80토르에서 톨루엔과의 공비 증류로 제거하였다. 톨루엔을 15, 10, 10 및 10㎖씩 가하였다. 생성물을 혼합물로부터 결정하고 여과하여 톨루엔 10㎖씩으로 2회 세척하였다. 고체를 실온, 1토르에서 6시간 동안 건조시켜 아민염(4.5g, 84%)을 얻었다: m/z 421 [M+H]+.
대안으로 미정제 1-[N-[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]-N-(2-메틸프로필)아미노]-3(S)-[비스(페닐메틸)아미노]-4-페닐-2(R)-부탄올의 THF 용액에 물(500㎖)을 가하고 이어서 메탄술폰산(531g, 5.5mol)을 가하였다. 이 용액을 완전한 혼합을 보장하기 위해 교반하여 5갈론 오토클레이브에 가하였다. Pearlman 촉매(20% Pd (OH)2/C/50% 물 200g)를 THF (500㎖)의 도움으로 오토클레이브에 가하였다. 반응기를 질소로 4회, 수소로 4회 퍼지하였다. 반응기에 60psig의 수소를 충전하고 450rpm으로 교반을 시작하였다. 16시간 후 HPLC 분석으로 소량의 모노-벤질 중간체가 여전히 존재함을 알았다. 추가의 촉매(50g)를 가하여 반응을 하룻밤 실행시켰다. 그 다음 용액을 셀라이트(500g)를 통해 여과하여 촉매를 제거하고 5부분으로 나누어 진공에서 농축하였다. 각 부분에 톨루엔(500㎖)을 가하여 진공하에 제거하고 잔여의 물을 공비제거하였다. 얻어진 고체를 3부분으로 나누어 각각을 메틸 t-부틸에테르(2ℓ)로 세척하고 여과하였다. 잔류용매를 1토르 미만의 진공오븐으로 실온에서 제거하여 기대한 염 2714g을 얻었다.
H: N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(페닐메톡시카르보닐)아미노]-3, 3-디메틸부탄아미드의 제조.
질소분위기하 0℃의 무수 DMF 750㎖중의 N-히드록시벤조트리아졸 118.8g (0.776mol) 및 N-카르보벤질옥시카르보닐-L-tert-루신 137.1g (0.52mol)의 용액에 EDC 109.1g (0.57mol)을 가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반후 무수 DMF 250㎖중의 4-메틸모르폴린 228㎖(210g, 2.08mol)로 미리 중화시킨 2R-히드록시-3[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필아민 메탄술포네이트 273g (0.53mol)의 용액을 가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반 후 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 용매를 45℃에서 감압하에 제거하고 에틸아세테이트 1.5ℓ를 가하고 5% 시트르산, 포화 중탄산나트륨, 염수로 세척하고 무수황산마그네슘상에서 건조시켜 여과하고 농축하여 미정제 물질 400g을 얻었다. 이것을 용출액으로서 20%-50% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 실리카겔상의 Prep 2000 크로마토그램상에서 3뱃치로 크로마토그래피하였다. m/e = 674 (M+Li), HPLC로 98%.
I: N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메릴)프로필]-2S-아미노-3, 3-디메틸부탄아미드의 제조
테트라히드로푸란 1ℓ중의 N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐] (2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(페닐메톡시카르보닐)아미노]-3, 3-디메틸부탄아미드 312g의 용액을 실온에서 6시간 동안 60psig의 수소하에서 4% 팔라듐/탄소촉매 100g의 존재하에서 수소화하였다. 촉매를 여과에 의해 제거하고 용매를 감압하에 제거하여 원하는 화합물 240g을 얻었다.
J: N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(클로로아세틸)아미노]-3, 3-디메틸부탄아미드의 제조
염화메틸렌 1ℓ중의 N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-아미노-3, 3-디메틸부탄아미드 234.3g (0.439mol)의 용액에 디이소프로필에틸아민 80㎖ (59.5g, 0.46mol)를 가하고 이어서 온도를 35℃ 이하로 유지하면서 클로로아세트산무수물 78.8g (0.46mol)을 실온에서 천천히 가하였다. 1시간 더 교반한 후 HPLC에 의한 분석으로 소량의 출발물질이 여전히 존재함을 알수 있었는 바 클로로아세트산 무수물 1.5g을 가하였다. 10분 후 용매를 감압하에 제거하고 에틸아세테이트 1ℓ를 가하고 5% 시트르산, 포화중탄산나트륨, 염수로 세척하고 무수황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 농축하여 미정제 물질 314g을 얻었다. 이것을 20-50% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 실리카겔상의 Prep 2000 크로마토그램상에서 3부분으로 나누어 크로마토그래피하여 원하는 화합물 165g을 얻었다. m/e = 616 (M+Li), HPLC로 98%.
K: N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3, 3-디메틸부탄아미드의 제조
N-[2R-히드록시-3-[[(1, 3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(클로로아세틸)아미노]-3, 3-디메틸부탄아미드 164.2g (0.27mol)에 테트라히드로푸란 500㎖를 가하고 용매를 감압하에 제거하여 모든 에틸아세테이트를 제거한 다음 테트라히드로푸란 350㎖를 가하였다. 10℃의 이 용액에 피롤리딘 130㎖ (1.56mol)를 가하였다. 1시간 후 용매를 감압하에 제거하고 에틸아세테이트 1ℓ를 가하고 포화중탄산나트륨, 염수로 세척하고 황산마그네슘상에서 건조시키고 농축하여 미정제 물질 185g을 얻었는데, 이것은 HPLC로 순도가 98.9%인 것으로 분석되었다. 이것을 3부분으로 나누어 먼저 50% 에틸아세테이트/헥산을, 다음에 5% 메탄올/에틸아세테이트를 사용하여 Prep 2000 크로마토그램상에서크로마토그래피하여 정제된 물질 160g을 얻었다 (HPLC로 99%). 그 다음 이것을 디에틸에테르 460㎖와 헥산 70㎖로부터 재결정하여 원하는 생성물 121g을 얻었다 (HPLC로 > 99%), m/e = 651 (M+Li), 융점 = 112-114℃.
실시예 15
N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드의 제조
A: 2(S)-메틸-3-(메틸술포닐)프로피온산의 제조
단계 1: 1.0ℓ의 메탄올 중의 200g(1.23moℓ)의 D-(-)-3-아세틸-b-메르캅토이소부티르산의 용액에, 빙욕으로 냉각하면서 10℃ 이하의 온도를 유지하면서 500㎖의 메탄올에 용해된 161.0g(2.47moℓ)의 수산화칼륨을 가하였다. 추가 20분 교반한 후, 20℃ 이하의 온도를 유지하면서 117㎖(156g, 1.23moℓ)의 황산디메틸을 첨가하였다. 빙욕을 제거하고 혼합물을 추가 60분간 교반하였다. 여과에 의해 염을 제거하고 감압하에 용매를 제거하고 에틸아세테이트를 가하였다. 수층을 분리한 후, 진한 염산으로 산성화하고 에틸아세테이트로 추출하고 무수황산마그네슘에서 건조시키고 여과 및 농축하여 164g(99%)의 원하는 2S-메틸-3-(메틸티오)프로피온산, m/e=133(M+H)을 얻었다.
단계 2: 150㎖의 아세톤과 30㎖의 물중의 10.0g(74.6mmoℓ)의 2S-메틸-3-(메틸티오)프로피온산의 용액에 161.8g(263mmoℓ)의 옥손을 가하였다. 물질의 대략 절반을 첨가하고 온도를 24℃로 올리고 첨가를 중지하고 온도를 18℃로 낮춘다음 첨가를 계속하였다. 15-20℃에서 15분간 교반한 후, 욕을 제거하고 반응액을 실온에서 1시간동안 교반하였다. 고형물을 여과하고 아세톤으로 세척하고 여액을 대략 40㎖로 농축하고 잔류물을 200㎖의 에틸아세테이트에 용해시켰다. 에틸아세테이트층을 무수황산마그네슘으로 건조시키고 여과 및 농축하여 11.4g의 오일을 얻었다. 이것을 최소량의 에틸아세테이트에 용해시키고 헥산을 가하여 침전이 형성되도록 하였다. 이것을 수집하여 6.95g의 원하는 생성물, m/e=167(M+H)을 얻었다.
B: N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드의 제조
질소하에 0℃에서 30㎖의 무수 DMF 중의 5.0g(30mmoℓ)의 2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로피온산과 6.90g(45mmoℓ) N-히드록시벤조트리아졸의 용액에 6.34g(33mmoℓ)의 EDC를 가하였다. 대략 10분후, EDC는 모두 용해되었다. 0℃에서 60분후, 사전에 3.4㎖(31.6mmoℓ)의 4-메틸모르폴린으로 중화시킨 30㎖의 무수 DMF 중의 15.5g(30mmoℓ)의 2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필아민 메탄술포네이트의 용액을 가하였다. 0℃에서 3시간후, 혼합물을 밤새 17시간동안 교반하였다. 감압하에 DMF를 제거하고 에틸아세테이트를 가하고 5% 시트르산, 포화중탄산나트륨, 물, 염수로 세척하고 무수황산마그네슘상에서 건조시키고 여과 및 농축하여 16g의 미정제 물질을 얻었는데 이것은 HPLC로 88% 순수하였다. 생성물을 20%-80% 에틸아세테이트/헥산을 사용하여 실리칼겔상에서 크로마토그라피하여 순수한 생성물을 얻었는데 이것을 에틸아세테이트/헥산으로부터 재결정하여 8.84g의 순수한 생성물, mp 131.8-133.8℃을 얻었다.
또다르게는 질소하에 0℃에서 210㎖의 무수 DMF 중의 35.0g(211mmoℓ)의 2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로피온산과 48.3g(315mmoℓ) N-히드록시벤조트리아졸의 용액에 44.4g(231mmoℓ)의 EDC를 첨가하였다. 대략 30분후, EDC는 모두 용해되었다. 0℃에서 추가 60분후, 사전에 24㎖(22.3g)의 4-메틸모르폴린으로 중화시킨 350㎖의 무수 DMF 중의 108.8g(211mmoℓ)의 2R-히드록시-3[[(1,3-벤조디옥솔-5일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필아민 메탄술포네이트의 용액을 가하였다. 0℃에서 2시간후, 혼합물을 밤새 18시간동안 교반하였다. DMF를 감압하에 제거하고 1ℓ의 에틸아세테이트를 가하고, 5% 시트르산, 포화중탄산나트륨, 물, 염수로 세척하고 무수황산마그네슘에서 건조시키고 여과 및 농축하여 120.4g의 미정제 물질을 얻었는데, 이것은 HPLC로 90% 순수하였다. 생성물을 750-1000㎖의 무수에탄올에서 2회 재결정하여 82.6g의 원하는 생성물을 얻었다.
실시예 16
2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드의 제조
6.55g(10.7mmo ℓ)의 N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[(클로로아세틸)아미노]-3,3-디메틸부탄아미드에 25㎖의 테트라히드로푸란을 가하고, 용매를 감압하에 제거하여 에틸아세테이트를 제거한 다음 25㎖의 테트라히드로푸란을 가하였다. 10℃에서 이 용액에 19㎖(214mmoℓ)의 40% 수성 메틸아민을 가하였다. 2시간후, 용매를 감압하에 제거하고 1ℓ 에틸아세테이트를 가하고 포화중탄산나트륨, 염수로 세척하고 무수황산마그네슘에서 건조시키고 여과 및 농축하여 6.0g의 생성물(98% 순도)을 얻었다.
실시예 17
본 발명의 레트로바이러스 프로테아제 저해제는 효과적인 HIV 프로테아제 저해제이다. 하기한 효소측정법을 병용요법에 사용하기 위한 레트로 바이러스 프로테아제 저해제의 선택에 사용될 수 있다. 이러한 화합물에 대한 IC50(저해제 화합물이 효소활성을 50% 감소시키는 농도)은 이 방법을 사용하여 계산될 수 있다.
효소방법은 다음과 같다. 기질은 2-아미노벤조일-Ile-Nle-Phe(p-NO2)-Gln-ArgNH2이다. 포지티브 콘트롤은 MVT-101(Miller, M. et al., Science 246, 1149 (1989))이다. 측정 완충액은 20mM 인산나트륨, pH 6.4, 20% 글리세롤, 1mM EDTA, 1mM DTT 및 0.1% CHAPS이다. 기질은 DMSO에 용해시킨다음 측정 완충액에 10배 희석한다. 측정에서 최종 기질농도는 약 80μM이다. HIV 프로테아제는 10,780의 분자량을 기준으로 약 12.3 나노몰의 최종 효소농도로 측정 완충액에 희석시킨다.
DMSO의 최종농도는 약 14%이고 글리세롤의 최종농도는 약 18%이다. 시험화합물을 DMSO에 용해시키고 시험농도에 약 10배로 DMSO에 회석한 다음, 10㎕의 기질을 가한다. 주위온도에서 4개 시점(0, 8, 16 및 24분)에서 형광의 증가를 모니터한다. 각 측정은 2벌의 웰로 수행한다.
실시예 18
본 발명의 선택된 HIV 프로테아제 저해제의 효과는 상기한 효소측정법과 다음의 CD4+ 세포주 측정법을 사용하여 구해질 수 있다. 프로테아제 저해제의 항 바이러스활성은 유효농도 50 (EC50) 및/또는 유효농도 90 (EC90) 값으로 표시된다. 이것들은 바이러스 복제를 각각 50% 또는 90% 저해하기 위해 요구된 저해제의 농도이다.
급성 감염된 세포의 HIV 저해율 측정방법은 Pauwels et al., J. Virol. Methods 20, 309-321 (1988)에 의해 보고된 본질적으로 자동화된 테트라졸리움 기제 비색측정법이다. 측정은 96-웰 조직 배양판에서 수행된다. CEM, MT-2, MT-4 및유사 세포주와 같은 CD4+ 세포주를 10% 우태아 혈청을 보충한 PRMI-1640 배지(Gibco)에서 성장시킨다음 폴리브렌(2㎍/㎖)으로 처리한다. 1 ×104세포를 함유하는 배지 80㎕ 부피를 조직배양판의 각웰에 분배한다. 각 웰에 조직배지(또는 콘트롤로서 시험화합물이 없는 배지)에 용해된 100㎕ 부피의 시험화합물을 가하여 원하는 최종농도를 달성하고 세포를 37℃에서 1시간동안 배양한다. HIV-1의 동결된 배양물을 ㎖당 5×104TCID50(TCID50= 배지에서 세포의 50%를 감염시키는 바이러스의 투여량)의 농도로 배지에 회석시키고 20㎕ 부피의 바이러스 샘플(1000 TCID50의 바이러스 함유)을 시험화합물을 함유하는 웰과 단지 배지(감염된 콘트롤 세포)만 함유하는 웰에 첨가한다. 몇개의 웰은 바이러스없는 배지(비감염 콘트롤 세포)를 수용한다.
마찬가지로, 시험화합물의 고유 독성을 시험화합물을 함유하는 몇개의 웰에 바이러스 없는 배지를 가함으로써 구한다. 요약하면, 조직배양판은 다음 실험을 포함한다.
실험 2 및 4에서 시험화합물의 최종농도는 1, 10, 100 및 500㎍/㎖이다. 아지도티미딘(AZT)이나 아니면 디데옥시이노신(ddI)이 포지티브 약제 콘트롤로서 포함된다. 시험화합물은 DMSO에 용해시키고 조직 배지에 회색시켜 어느 경우에도 최종 DMSO 농도를 1.5%를 초과하지 않도록 한다. DMSO를 적당한 농도로 모든 콘트롤 웰에 첨가한다.
바이러스의 첨가에 이어서, 가습된 5% CO2분위기에서 37℃에서 7일간 배양한다. 시험화합물은 원한다면, 0일, 제 2일 및 제 5일에 첨가할 수 있다. 감염후 제 7일에, 각웰의 세포를 재현탁시키고 각웰 현탁액의 100㎕ 샘플을 측정을 위해 옮긴다. 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드(MTT)의 5mg/㎖ 용액 20㎕ 부피를 각 μL 세포현탁액에 첨가하고 세포를 5% CO2환경에서 37℃에서 4시간 동안 배양한다. 이 배양의 동안에 MTT는 살아있는 세포에 의해 대사에 의해 환원되어 착색된 포르마잔(formazan) 생성물의 세포내 생성을 가져온다. 각 샘플에 0.01N HC ℓ중의 10% 도데실황산나트륨 100㎕를 가하여 세포를 용해하고 샘플을 밤새 배양한다. 590nm에서의 흡광도를 분자장치(Molecular Devices) 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 각 샘플에 대해 구한다. 시험화합물의 세포독성 및 항세포 효율은 화합물과 함께 배양된 감염 또는 비감염세포를 함유하는 웰과, 비감염된 미처리 콘트롤 웰에서 얻은 흡광도 값의 비교에 의해 구해진다.
HIV 배양과정
공여 림프구의 자극
연막(Buffy coats)을 어메리칸 레드크로스 또는 워싱톤 유니버시티 스쿨 오브 메디신의 블러드 뱅크로부터 얻었다. 이 제제를 HIV 및 CMV 항체와 비 A, 비-B형 간염에 대한 마커로서 HBV 표면 항원(HBsAg) 및 ALT(알라닌 트랜스퍼라제 활성)에 대해 예비스크리닝한다. 백혈구 풍부화된 혈액(30㎖)을 플라스틱 용기로부터 옮기고 15㎖를 두개의 50㎖ 나사마개 원심분리관에 분배한다. 각 샘플을 같은 부피의 멸균 PBS로 회석하고 피페팅에 의해 혼합한다. 피콜-파크(Ficoll-Paque)(15㎖) 또는 LSM을 파스퇴르 피펫을 사용하여 용액이 관의 바닥으로 흘러들게 하면서 희석된 혈액샘플아래 놓는다. 그다음 각 관을 20℃에서 1300 rpm에서 (400 x g) 45분간 원심분리한다. 원심분리에 이어서, 계면에서의 림프구 띠를 제거하여 50㎖ 관에 옮긴다. 멸균 PBS를 가하여 분리된 림프구를 희석한 다음 1300rpm에서 8분간 원심분리한다. 세포 펠릿을 PBS에 재현탁하고 재원심분리함으로써 2회 세척한다. 최종 세포 펠릿을 피페팅에 의해 20㎖ PBS에 재현탁시키고 생존세포의 총수를 트리판 블루 추출에 의해 구한다.
임상분리물을 사용하는 급성 감염성 측정
대략 3 ×107세포를 RPMI 중의 약 3-5㎍/㎖ PHA와 계속해서 10% 우태아혈청 및 IL-2(10U/㎖)로 48시간동안 활성화시킨다. 정량화된 바이러스 스톡을 약 0.001-0.01의 다수의 감염에서의 활성화된 림프구 현탁액에 첨가한다. 세포-바이러스 현탁액을 바이러스 흡수를 허용하기 위해 37℃에서 2시간동안 배양한다. 잔류 바이러스 접종물을 원심분리에 의해 옮겨 세포를 10% FBS와 10U/㎖ IL-2를 함유하는 RPMI에 재현탁시킨다. 이들 감염된 세포를 96웰 마이크로타이터 플레이트에 DMSO 중의 스톡(10mg/㎖)으로부터 완전조직배지에 희석된 시험물품에 첨가하여 200㎕ 당 웰당약 5 x 105세포를 제공한다. 감염된, 미처리된 세포 및 DMSO 단독(0.1%)으로 또는 AZT나 아니면 DDI로 처리된 세포를 콘트롤로서 사용하였다. 배양물을 감염후 제 7일 및 제11일에 합포체 형성에 대해 조사하거나 또는 상징액을 역전사효소활성 또는 p24 항원에 대해 시험하였다.
만성 감염성 측정
HXB2(HIV-1의 실험용 변종)로 만성감염된 CEM 세포를 12웰 마이크로타이터플레이트의 6개의 웰에 가하여 웰당 약 5 ×104세포를 제공한다. 웰의 절반을 여러 농도의 시험화합물로 처리하고 같은 수의 비감염 CEM 세포를 첨가된 화합물없이 유지한다. 시험화합물이 있거나 없는 신선한 배지를 연속 3일동안 매일 첨가한다. 그다음 배양물을 배지에 변화없이 48시간동안 배양한다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고 PBS에서 2회 세척하고 0.125M Tris pH 6.8, 4% SDS, 20% 글리세롤, 10% 베타메르캅토에탄올 및 0.02% 브로모페놀 블루를 함유하는 50㎕ 2 x Laemmli 완충액에 재현탁시킨다. 배양상징액을 0.22㎛ 필터를 통과시켜 세포 부스러기를 제거하고 50,000rpm에서 90분간 원심분리하여 바이러스 입자를 농축시킨다. 바이러스 펠릿을 50㎕ 2 x Lammli 완충액에 재현탁시킨다. 세포 또는 바이러스 현탁액을 5분간 끓인 다음 10-20% SDS-폴리아크릴아미드 구배 겔에서 전기영동분리를 시킨다. 그다음 겔의 내용물을 전기블로팅에 의해 니트로 셀룰로스에 이동시킨다. HIV 특이적 단백질을 p24 및 p17에 대한 모노클로날 항체와, 비오틴에 연결된 염소- 항마우스 IgG, 그리고 HRP에 연결된 아비딘을 사용하여 검출한다. 4-클로로-1-나프톨의 효소학적변환을 사용하여 모노클로날 항체에 의해 인식된 특이적 단백질을 시각화하였다. 게다가, 시험화합물의 존재 또는 부재하에 만성감염된 CEM 세포에 의해 생성된 바이러스의 감염성을 조사하였다. 여과된 상징액을 연속적으로 희석하여 비감염 CEM 세포(약 1 x 104/웰)를 감염시키기 위해 사용한다. 배양물을 감염후 제 7일 및 제11일에 합포체 형성에 대해 조사하거나 또는 상징액을 역전사효소활성 또는 상징액을 역전사효소활성 또는 p24 항원에 대해 시험하였다.
마이크로 역전사효소(RT) 측정
마이크로 RT 측정은 몇가지 표준 RT 측정의 개작이다. 그것은 HIV RT 활성의 소부피 정량 측정을 허용하고 수많은 샘플의 처리를 용이하게 하기 위해 개발되었다.
방법:
1. 웰당 50㎕ RT 칵테일을 96-웰 U-바닥 마이크로타이터 플레이트에 가한다.
2. 웰당 10-20㎕의 세포없는 상청 용액을 가한다.
3. 기계 회전장치를 사용하여 잘 혼합한다.
4. 37℃에서 2시간동안 배양한다.
5. TOMTEK를 사용하여 DE81 여과지, 또는 등가물상에서 흡출한다.
6. 2 x SSC를 사용하여 4회 세정한다.
7. 95% 에탄올을 사용하여 1회 세정한다.
8. 필터를 건조시킨다.
9. 베타-플레이트 카운터(Pharmacia)를 사용하여 계수를 준비한다.
실시예 19
EC50에서 이동이 관찰될 때까지 화합물의 농도를 증가시키면서 다수회의 사이클은 반복하였다.
다음은 HIV 프로테아제 저해제 내성 돌연변이체의 선택을 위해 사용되는 배양방법이다. 감염세포를 프로테아제 저해제의 존재하에 연속적으로 성장시켰다. 약간의 배양물을 주교대로 높고 낮은 저해제 농도에 처리하였다. 다른 것들은 일정한 농도로 보냈다. 약제 농도는 EC50에서 일정한 이동이 관찰될 때까지 주기적으로 증가되었다. 투여량 반응 곡선에서의 이동은 일반적으로 0.5 내지 1㎍/㎖ 또는 그이상의 약제 농도(5-10 x EC90)에서 검출되었고, 처리되는 바이러스 분리물에 의존하였다. HIV의 실험실 적응된 분리물과 1차 임상적 분리물 둘다를 사용했다. 동일 바이러스 분리물을 약제의 존재하에 동일한 방식으로 통과시켜, 직접 뉴클레오시드 서열 비교가 처리 및 비처리 분리물 사이에 가능하게 되었다. 일반적으로 프로테아제 저해제에 내성인 HIV-1 변이체는 명시된 프로테아제 저해제의 여러 저해 농도하에 일련의 통과(성장)에 의해 선택되었다(Markowitz et al., Journal of Virology 69: 701-706 (1995)). 하기된 HIV-1변이체는 선택된 바이러스 분리물애 존재하고 비처리된 바이러스 분리물인 대조군에는 존재하지 않는 돌연변이를 가리킨다.
RF는 HIV-1 변종 HIV-1RF를 나타내며, RFR은 실시예 1의 화합물에 대한 RF의 선택에 의해 얻어진 내성 변종의 혼합물을 나타낸다. RFR은 G48V(14/40 클론); G48V, V82A(18/40 클론); G48V, L90S(2/40 클론); G48V, I54T, V82A(1/40 클론); G48M(1/40 클론); G48V, Q61H (1/40 클론); V13I, G48V(1/40 클론); G48V, F53L, V82A(1/40 클론); 및 G48V, V82A, C95Y(1/40 클론)의 프로테아제 유전자형을 가지는 바이러스 변종의 혼합물로 이루어진다. RFR2는 제한 희석에서의 3회 성장에 의해 RFR을 클로닝함으로써 얻어진 내성 변종의 혼합물을 나타낸다. RFR2는 G48V, V82A(13/15 클론); G17E, G48V, V82A(1/15클론; 및 G48V, V82A, N37D, N88D(1/15 클론)의 프로테아제 유전자형을 가지는 바이러스 변종의 혼합물로 이루어진다. RFRR은 실시예 1 및 2의 화합물에 대한 RF의 선택과 그다음 제한 희석에서의 3회 성장으로 클로닝에 의해 얻어진 내성 변종의 혼합물을 나타낸다. RFRR은 G48V, I54T, L63P, V82A(7/9 클론); G48V, I54T, L63P, V82A, N88S(1/9 클론); 및 G48V, I54T, L63P, G73M, V82A(1/9 클론)의 프로테아제 유전자형을 가지는 바이러스 변종의 혼합물로 이루어진다. SF162는 HIV-1 변종 SF-162를 나타내고, SF162R은 실시예 1의 화합물에 대한 SF162의 선택에 의해 얻어진 내성 변종의 혼합물을 나타낸다. SF162R은 M46I, F53L, L63P, A71V, N88D(2/3 클론); 및 M46I, F53L, L63P, A71V, N88D, Q92R(1/3 클론)의 프로테아제 유전자형을 가지는 바이러스 변종의 혼합물로 이루어진다. 89-959는 HIV-1 변종 89-959를 나타내고, 89-959R은 실시예 2의 화합물에 대한 89-959의 선택에 의해 얻어진 내성 변종의 혼합물을 나타낸다. 89-959R은 N88S(4/5 클론); 및 D25N, T26A, D30N, R41K, G73D, R87K, N88S(1/4 클론)의 프로테아제 유전자형을 가지는 바이러스 변종의 혼합물로 이루어진다. NL4는 HIV-1 변종 HIV-1NL4-3을 나타낸다. NL4(G48V)는 아미노산 위치번호 48에서 글리신에서 발린으로의 합성적으로 발생되는 프로테아제내 부위-지정 돌연변이를 가지는 변종을 나타낸다. NL4(I84V)는 아미노산 위치번호 84에서 이소루신에서 발린으로의 합성적으로 발생되는 프로테아제내 부위-지정 돌연변이를 가지는 변종을 나타낸다.NL4(R8Q, M46I)는 아미노산 위치번호 8에서 아르기닌에서 글루타민으로의, 아미노산 위치번호 48에서 메티오닌에서 이소루신으로의 합성적으로 발생되는 프로테아제내 부위-지정 돌연변이를 가지는 변종을 나타낸다. NL4(P22-538)는 22통과후 실시예 10의 화합물에 대한 HIV-1NL4-3의 선택에 의해 얻어진 내성변종의 혼합물을 나타내며, M46I, L63P, A71V, V83F, I84V(4/10); M46I, L63P, V82F, I84V(3/10); 및 M46I, A71V, V82F, I84V(3/10)의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NL4(P37-538)는 37통과후 실시예 10의 화합물에 대한 HIV-1NL4-3의 선택에 의해 얻어진 내성변종을 나타내며, M46I, L63P, A71V, I84A의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NL4(538/524)는 24통과후 실시예 5의 화합물에 대한 NL4(P22-538)의 선택에 의해 얻어진 내성변종을 나타내며, M46I, L63P, A71V, I84A의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NL4(538/P7-AG)는 7통과후 실시예 12의 화합물에 대한 NL4(P22-538)의 선택에 의해 얻어진 내성변종의 혼합물을 나타내며, M46I, L63P, A71V, I84A; 및 V32I, V82I의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NL4(538/P24-AG)는 24통과후 실시예12의 화합물에 대한 NL4(P22-538)의 선택에 의해 얻어진 내성변종을 나타내며, M46I, L63P, A71V, I84A의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NLA(P19-003)는 19통과후 실시예 9의 화합물에 대한 HIV-1NL4-3의 선택에 의해 얻어진 내성변종을 나타내며, R8K, M46I의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. NL4(P34-003)는 34통과후 실시예 9의 화합물에 대한 HIV-1NL4-3의 선택에 의해 얻어진 내성 변종을 나타내며, R8K, M46I, L63P, A71V, L90M의 프로테아제 유전자형으로 이루어진다. 바이러스 분리물 내성 결과는 표 1-11에 요약된다.
실시예 20
표 1-3에 요약된 바이러스 분리물 내성 결과는 다음 측정법 또는 그것의 작은 변형에 따라 얻어졌다. 약 3 x 107세포를 10% 우태아 혈청 및 IL-2(10U/㎖)를 함유하는 RPMI 중 약 3-5㎍/㎖ PHA로 48시간동안 활성화시킨다. 정량 바이러스 스톡을 약 0.001-0.01의 감염 다중성으로 활성화된 림프구 현탁액에 첨가한다.
세포-바이러스 현탁액을 2시간동안 37℃에서 배양하여 세포-바이러스 흡수를 허용한다. 잔류 바이러스 접종물을 원심분리에 의해 제거하고, 세포를 10% FBS 및 10U/㎖ IL-2를 함유하는 RPMI에 재현탁한다. 이들 감염세포를 96웰 마이크로타이터 플레이트에서 DMSO중 스톡(10mg/㎖)으로부터 완전 조직 배양 배지에 희석된 시험-화합물에 첨가하여 200㎕당 웰당 약 5 x 105세포를 얻었다. 감염되고 비처리된 세포와 DMSO 단독(0.1%), 또는 AZT 또는 DDI로 처리된 세포를 대조군으로 사용했다. 배양물을 감염후 7 및 10일째에 합포체 형성에 대해 시험하거나, 상청액을 역전사 효소 활성 또는 p24 항원에 대해 시험했다.
표 1
표 2
표 3
†, ‡, § 은 동일 실험에서 얻어진 값을 가리킨다
실시예 21
표 4-6에 요약된 바이러스 분리물 내성 결과는 다음 측정방법 또는 그것의 사소한 변형에 따라 얻어졌다. 측정은 96-웰 조직 배양 플레이트에서 수행한다. CEM-T4 세포를 90% RPMI 배지(Gibco BRL Life Technologies, Inc., Gaithsburg, MD) 10% 열처리된 우태아 혈청(Gibco BRL Life Technologies, Inc., Gaithsburg, MD)에 현탁하여 ㎖당 5 x 105생존 세포의 최종 농도를 만든다. HIV 배양물(변종 HIV-1RF)의 냉동분액을 급속히(37℃ 수욕에서) 해동시키고, CEM-T4 세포에 의해 첨가하여 세포당 약 0.001-0.01 감염단위의 최종 농도를 만든다. 바이러스-세포 현탁액을 와동에 의해 급속히 혼합하고, 100μL를 96-웰 조직배양 플레이트의 각 웰에 100μL의 각 시험-화합물(90% RPMI, 10% FBS 중 2 x 농축물로서 제조된) 희석액에 즉시 첨가한다. 각 플레이트는 세포 및 바이러스를 포함하나 시험-화합물은 포함하지 않는 대조 웰을 함유한다. 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT)은 모든 측정에서 양성 대조군으로서 포함된다.
조직배양 플레이트를 7일간 가습된 5% CO2분위기에서 37℃로 배양한다. 그다음 바이러스 복제의 레벨을 표준방법을 이용한 상청액중 역전사 효소 활성의 측정에 의해 결정한다(상기와 같음, 예컨대 Techniques in HIV Research, Aldovini & Walker, eds., 1990, Stockton Press, NY 참조).
표 4
표 5
표 6
실시예 22
표 7-11에 요약된 바이러스 분리물 내성 결과는 여기에 그 전체가 참고문헌으로 포함된 Markowitz et al., Journal of Virology, vol. 69, 701-706 (1995)에 기술된 측정방법 또는 그것의 사소한 변형에 따라 생성되었다.
표 7
표 8
표 9
표 10
표 11
실시예 23
단일 히드록시에틸우레아 동배체를 함유하는 실시예 1 및 2의 프로테아제 저해를 사용하여 시험관내에서 약제 내성 HIV-1 변이체를 선택했다. 임상적 및 실험적 HIV-1 변종을 증가하는 약제 농도의 존재하에 T 세포주 또는 말초혈 단핵세포(PBMC)에서 통과시켰다. 내성 변이체를 동일 기간동안 그러나 저해제의 부재하에 통과된 대조바이러스 보다 적어도 10배 더 높은 EC50값을 일정하게 나타냈다. 바이러스 DNA를 PCR에 의해 증폭하고, 프로테아제 암호화 유전자의 뉴클레오티드 서열을 표준방법을 이용하여 결정했다. 각각 실시예 2 및 1의 프로테아제 저해제에 내성인 바이러스에서, 위치 88에서의 아미노산 변화가 다수의 선택 변이체에서 일관되게 관찰되었다. 88에서의 Asn 잔기는 모노머 및 다이머 둘다의 아스파르트산 프로테이나제에 존재하는 구조적 보존 나선형 도메인내에 위치한다. 해당 카르복시 말단 서열 Gly-Arg-Asp/Asn(잔기 86-88)은 레트로바이러스 아스파르트산 프로테이나제에 유일하다. 이들 결과에 대한 어떤 설명도 단지 추측에 불과하지만,재조합 HIV-1 프로테아제에 결합된 원형 히드록시에틸우레아 저해제의 고해상 X-ray 구조에서 유래된 주형에 기초한 모델링 연구는 Asn88 돌연변이가 프로테아제의 구성을 변화시킬 수 있다는 것을 제시한다.
본 발명의 레트로바이러스 프로테아제 저해제 화합물은 유리하게 효과적인 항바이러스 화합물이고, 특히 상기와 같은 레트로바이러스, 특히 렌티바이러스의 효과적인 저해제이다. 따라서 주제 화합물은 또한 HIV의 효과적 저해제이다. 주제 화합물은 또한 HIV-2와 다른 바이러스, 애컨대 VISNA 바이러스 및 원숭이 면역 결핍 바이러스(SIV), HTLV-1, 및 HTLV-2와 같은 HIV의 다른 변종들을 저해할 것이라고 생각된다. 따라서 주제 화합물은 레트로바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 효과적이다.
본 발명은 또한 가능한 때 레트로바이러스 프로테아제 저해제 화합물의 용매화물 또는 수화물을 포함한다고 의도되며, 당업계에 공지된 방법에 의해 제조 또는 분리한다.
레트로바이러스 프로테아제 저해제 화합물은 무기 또는 유기산에서 유도된 염의 형태로 사용될 수 있다. 이들 염은 다음을 포함하나 이에 한정되지는 않는다: 아세트산염, 아디프산염, 알긴산염, 시트르산염, 아스파르트산염, 벤조산염 벤젠술폰산염, 중황산염, 부티르산염, 캄포르산염, 캄포르술폰산염, 디글루콘산염, 시클로펜탄트로피온산염, 도데실황산염, 에탄술폰산염, 글루코헵탄산염, 글리세로인산염, 혜미황산염, 헵탄산염, 헥산산염, 푸마르산염, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 2-히드록시-에탄술폰산염, 락트산염, 말레산염, 메탄술폰산염, 니코틴산염, 2-나프탈렌술폰산염, 옥살산염, 팜산염, 펙틴산염, 과황산염, 3-페닐프로피로피온산염, 피크르산염, 피발산염, 프로피온산염, 숙신산염, 타르타르산염, 티오시안산염, 토실산염, 메실산염 및 운데칸산염, 약학적으로 허용되는 산부가염을 형성하는데 사용될 수 있는 산의 예는 염산, 황산 및 인산과 같은 무기산과 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산과 같은 유기산을 포함하며, 염화수소산염이 바람직하다. 다른 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘과 같은 알칼리금속 또는 알칼리토금속을 갖는 또는 유기염기를 갖는 염을 포함한다.
숙주에 한번에 또는 분할된 투여로 투여되는 총 일일 투여량은 예컨대 일당 0.01 내지 50mg/kg 체중, 더 일반적으로는 0.1 내지 30mg/kg 체중의 양일 수 있다. 투여 단위 조성물은 일일 투여량을 보충할 수 있는 그것의 약수의 양을 함유할 수 있다.
담체물질과 조합되어 단일 투약 형태를 생성할 수 있는 활성성분의 양은 시험되는 숙주와 투여의 특정방식에 매우 의존한다.
레트로바이러스 프로테아제 화합물 및/또는 조성물로 질환상태를 치료하기 위한 투약양생법은 환자의 체형, 연령, 체중, 성별, 식이요법 및 의학적상태, 질환의 중증도, 투여경로, 약제 전달 시스템이 사용되건 화합물이 약제조합의 일부로서 투여되건 간에 사용된 특정화합물의 활성, 효능, 약물동력학 및 독물학적 프로파일과 같은 약리학적 고찰을 포함하여 여러 가지 인자에 따라 선택된다. 그러므로, 실제로 사용되는 투약 양생법은 광범위하게 변할 수 있으며 따라서 상술된 바람직한 투약 처방으로부터 벗어날 수 있다.
본 발명의 화합물은 종래의 비독성의 약학적으로 허용되는 담체, 보조제 및 원한다면 부형제를 함유하는 투약 유니트 제제로 경구, 비경구, 흡입 스프레이, 장내 또는 국소투여될 수 있다. 또한, 국소투여는 경피 패치 또는 전이요법 장치와 같은 경피투여의 사용을 수반한다. 여기서 사용되는 용어 비경구는 피하주사, 정맥내, 근육내, 흉부내 주사, 또는 주입 기술을 포함한다.
주사가능한 제제는 예를들면, 살균 주사용의 수성 또는 유성 현탁액은 적당한 분산 또는 습윤제와 현탁화제를 사용하여 공지된 기술에 따라서 조제될 수 있다. 또한 살균 주사용 제제는 예를들면 1, 3-부탄디올내 용액으로서 비독성의 비경구적으로 허용되는 희석액 또는 용매내 살균 주사용 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 부형제 및 용매는 물, 링거액 및 염화나트륨 등장액이다. 또한, 통상적으로 살균 정유도 용매 또는 현탁화 매질로서 사용된다. 이 목적을 위하여 어떤 혼합 정유도 합성모노-또는 디글리세라이드를 포함하여 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산의 주사용 제제로서의 용도도 밝혀졌다.
약제의 장내투여를 위한 좌약은 통상의 온도에서는 고체이지만 장내온도에서는 액체이고 따라서 장내에서 용해되어 약을 방출하는 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적당한 무자극 부형제와 약제를 혼합함으로써 제조될 수 있다.
경구투여용 고체투약 형태는 캡슐, 정제, 알약, 분말 및 과립을 포함할 수 있다. 그러한 고체투약 형태에서 활성화합물은 수크로스, 락토스 또는 전분과 같은 불활성 희석제와 혼합될 수 있다. 또한, 그러한 투약형태는 통상의 실시에서 불활성 희석제 이외의 다른 추가의 물질, 예를들면, 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제로 이루어질 수 있다. 캡슐, 정제 및 알약의 경우에서, 정제 및 알약은 또한 장코팅으로 제조될 수 있다.
경구투여용 액체투약 형태는 물과 같은, 이 분야에 통상 사용되는 불활성 희석제를 함유하는 약학적으로 허용되는 에멀션, 용액, 현탁액, 시럽 및 부형제를 포함할 수 있다. 또한 그러한 조성물은 습윤제, 에멀션화 및 현탁화제, 감미제, 조미제 및 향신료와 같은 보조제로 이루어질 수 있다.
본 발명의 레트로바이러스 프로테아제 저해제 화합물이 단독활성 약제로 투여될 수 있다면, 그것은 HIV-1과 같은 레트로바이러스에 대해 효과적인 다른 항바이러스제와 조합하여 사용될 수 있다. 그러한 화합물은 한정하는 것은 아니지만, 다른 HIV-1 프로테아제 저해제, 여러 가지 뉴클레오시드 유사체, 비뉴클레오시드 역전사효소 저해제, tat 안타고니스트 및 글리코시다제 저해제를 포함한다.
HIV-1 프로테아제 저해제의 예는 한정하는 것은 아니지만, Ro 31-859 (Roberts, N.A. et al. Science 1990, 248, 258-261 및 Drugs of the Future 1991, 16(3), 210-212), KNl-272 (Kagayama, S., et al. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1993, 810-817), 고리우레아계(Lam, P., et al., "De Novo Design and Discovery of Potent Nonpeptidal HIV-1 Protease Inhibitors, "paper 96 at the 205th Chemical Society National Meeting, Medicinal Chemistry Division, Denver, CO, March 28-April 2, 1993), L-735, 524 (Dorsey B. D., et al., "L-735, 524: The Rational Design of a Potent and Orally Bioavailable HIV Protease Inhibitor, "page 6 at the 206th American Chemical Society NationalMeeting, Medicinal Chemistry Division, Chicago, IL, August 22-27, 1993) 및 그것들의 유사체를 포함한다.
경쟁적 뉴클레오시드 유사체의 예는 한정하는 것은 아니지만, 아지도티미딘(AZT), 디데옥시이노신(DDI), DDC, 3TC, D4T 및 PMEA를 포함한다. 비뉴클레오시드, 비경쟁적 역전사효소 저해제의 예는 한정하는 것은 아니지만, 피리돈 계열(Wei, J. S., et al. J. Med. Chem. 1993, 36, 249-255; Hoffman, J. M., et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3784-3791; Saari et al. J. Med. Chem. 1992, 35 3792-3802; Drugs of the Future 1992, 17(4), 283-285) 및 그것의 유사체; 비스-(헤테로아릴) 피페라진 계열(Romero, D. L., et al. J. Med. Chem. 1993, 36, 1505-1508; Romero. D. L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991, 34, 746-751 및 3187-3198) 및 그것의 유사체; 삼고리 피리도벤조- 및 데피리도디아제핀온(Hargrave, K. D., J. Med. Chem, 1991, 34, 2231-2241; Merluzzi, M. J. Science 1990, 250, 1411-1413) 및 그것의 유사체; 및 5-클로로-3-(페닐술포닐)인돌-2-카르복시아미드 및 그것의 유사체(Williams, T. M. et al., J. Med. Chem. 1993, 36, 1291-1294)를 포함한다. tat 안타고니스트의 예는 한정하는 것은 아니지만, Ro 5-3335 및 Ro 24-7429 (Hsu, M. C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 909, 6395-6399; Tam, S. et al., "TAT INHIBITORS: A NEW CLASS OF ANTI-HIV AGENTS, "paper 372, at the 204th American Chemical Society National Meeting, Organic Chemistry Division, Washington, DC. August 23-28, 1992) 및 그것의 유사체를 포함한다. 글리코시다제 저해제의 예는 한정하는 것은아니지만, 카스타노스페르민, 카스타노스페르민 6-부티릴 에스테르, N-부틸-1-데옥시노지리마이신, N-부틸-1-데옥시노지리마이신 퍼-부티릴 에스테르 및 그것의 유사체와 프로드러그를 포함한다.
치료제는 실질적으로 동시에 주어지는 별개의 조성물로 제조될 수 있으며, 또는 치료제는 모든 활성성분이 숙주내에서 치료학적으로 효과적인 양이 되도록 단일 조성물로 제공될 수 있다. 대안으로, 치료제는 한 번에 단지 하나 또는 두 개의 활성제가 숙주내에서 치료적으로 효과적인 양이 되도록 상이한 시간내에서 숙주에 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 방법은 효과적인 항바이러스 화합물이고 특히, 상술된 바와 같은 효과적인 레트로바이러스 저해제이다. 따라서, 본 화합물은 효과적인 HIV 프로테아제 저해제이다. 또한 본 화합물은 다른 렌티바이러스, 특히 HIV의 다른 변종, 예를들면 HIV-2, 사람 T-세포 백혈병 바이러스, 라우스 육종 바이러스, 원숭이 면역결핍 바이러스, 고양이 백혈병 바이러스, 고양이 면역결핍 바이러스 등과 같은 다른 레트로바이러스도 저해한다고 생각된다. 따라서, 본 화합물은 레트로바이러스의 치료 및/또는 예방에 효과적이다.
본 화합물과 방법은 용액내 레트로바이러스의 성장을 방지하는 데에도 효과적이다. T-림프구 배양물과 같은 사람과 동물 세포 배양물은 검량 및 컨트롤을 포함하는 조사 및 진단 과정과 같은 여러 가지 널리 알려진 목적에 이용된다. 세포 배양물의 성장 및 저장전과 동안에, 본 화합물은 효과적인 농도로 세포 배양 배지에 첨가되어 세포 배양물에 우연히 또는 모르게 존재할 수 있는 레트로바이러스의예기치 않거나 원치않는 복제를 방지할 수 있다. 바이러스는 세포 배양물내에 원래 존재할 수 있으며, 예를들면 HIV는 혈액에서 검출되기 오래전에, 또는 바이러스에의 노출을 통하여 사람 T-림프구내에 존재하는 것으로 알려졌다. 본 화합물 및 방법의 이 용도는 연구자 또는 아이들이 잠재적으로 치명적인 레트로바이러스에 모르게 또는 우연히 노출되는 것을 방지한다.
상기는 단지 본 발명의 예시이며 개시된 화합물로 본 발명을 한정하려는 것은 아니다. 이 분야의 전문가에게 명백한 변형 및 변경은 첨부된 청구범위로 한정된 발명의 범주와 성질내에 있는 것으로 의도한다.
상기 설명으로부터 이 분야의 전문가라면 본 발명의 필수 특징을 용이하게 알수 있으며 본 발명의 사상과 범주를 이탈하지 않고 여러 가지 용도와 상태에 적합하게 여러가지 변경과 변형이 이루어질 수 있다.

Claims (12)

  1. (a) 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제; 및
    (b) 상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제에 내성인 적어도 하나의 레트로바이러스 변종에 대하여 효과적인 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제
    를 포함하는 포유동물의 레트로바이러스 감염을 치료하기 위한 레트로바이러스 프로테아제 저해제 조합물로서,
    상기 제1 및 제2 저해제는 두 저해제의 효과량이 상기 포유류내에 존재하도록 하는 양으로 제공되고,
    상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-페닐-3(S)-[[N-(2-퀴놀일카르보닐)-L-아스파라긴일]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복사미드;
    (2S,3R,4S,5S)-2,5-비스-[N-[N-[[N-메틸-N-(2-피리딘일메틸)아미노]카르보닐]발린일]아미노]-3,4-디히드록시-1,6-디페닐헥산;
    (2S,3S,5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1,6-디페닐헥산;
    [2R-히드록시-3-[[(4-아미노페닐)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 3S-테트라히드로푸란일 에스테르;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-[[N-[(2-메틸-3-히드록시페닐)카르보닐]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    [4R-(4α,5α,6β,7β)]-1,3-비스[(3-아미노페닐)메틸]헥사히드로-5,6-디히드록시-4,7-비스(페닐메틸)-2H-1,3-디아제핀-2-온;
    N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드;
    N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    [1S-[1R*(R*),2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드; 또는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올이고, 그리고,
    상기 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-페닐-3(S)-[[N-(2-퀴놀일카르보닐)-L-아스파라긴일]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    (2S,3R,4S,5S)-2,5-비스-[N-[N-[[N-메틸-N-(2-피리딘일메틸)아미노]카르보닐]발린일]아미노]-3,4-디히드록시-1,6-디페닐헥산;
    (2S,3S,5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1,6-디페닐헥산;
    [2R-히드록시-3-[[(4-아미노페닐)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 3S-테트라히드로푸란일 에스테르;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-[[N-[(2-메틸-3-히드록시페닐)카르보닐]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    [4R-(4α,5α,6β,7β)]-1,3-비스[(3-아미노페닐)메틸]헥사히드로-5,6-디히드록시-4,7-비스(페닐메틸)-2H-1,3-디아제핀-2-온;
    N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드;
    N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    [1S-[1R*(R*),2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드; 또는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올
    인 레트로바이러스 프로테아제 저해제 조합물
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-페닐-3(S)-[[N-(2-퀴놀일카르보닐)-L-아스파라긴일]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    (2S,3R,4S,5S)-2,5-비스-[N-[N-[[N-메틸-N-(2-피리딘일메틸)아미노]카르보닐]발린일]아미노]-3,4-디히드록시-1,6-디페닐헥산;
    (2S,3S,5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1,6-디페닐헥산;
    [2R-히드록시-3-[[(4-아미노페닐)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 3S-테트라히드로푸란일 에스테르;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-[[N-[(2-메틸-3-히드록시페닐)카르보닐]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    [4R-(4α,5α,6β,7β)]-1,3-비스[(3-아미노페닐)메틸]헥사히드로-5,6-디히드록시-4,7-비스(페닐메틸)-2H-1,3-디아제핀-2-온;
    N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드;
    N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    [1S-[1R*(R*),2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드; 또는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올이고,
    상기 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드
    인 것을 특징으로 하는 조합물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드이고,
    상기 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올;
    N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    [1S-[1R*(R*),2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드; 또는
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드
    인 것을 특징으로 하는 조합물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    (2S,3S,5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1,6-디페닐헥산이고,
    상기 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올;
    N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드; 또는
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드
    인 것을 특징으로 하는 조합물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제에 내성이 있는 적어도 하나의 바이러스 변종에 효과적인 제3레트로바이러스 프로테아제 저해제를 더 포함하고,
    상기 제3레트로바이러스 프로테아제 저해제는
    N-(2(R)-히드록시-1(S)-인단일)-2(R)-페닐메틸-4(S)-히드록시-5-(1-(4-(3-피리딜메틸)-2(S)-N'-(t-부틸카르복시아미도)-피페라진일))-펜탄아미드;
    N-tert-부틸데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-페닐-3(S)-[[N-(2-퀴놀일카르보닐)-L-아스파라긴일]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    (2S,3R,4S,5S)-2,5-비스-[N-[N-[[N-메틸-N-(2-피리딘일메틸)아미노]카르보닐]발린일]아미노]-3,4-디히드록시-1,6-디페닐헥산;
    (2S,3S,5S)-5-[N-[N-[N-메틸-N-[(2-이소프로필-4-티아졸일)메틸]아미노]카르보닐]발린일]아미노]-2-[N-[(5-티아졸일)메톡시카르보닐]아미노]-3-히드록시-1,6-디페닐헥산;
    [2R-히드록시-3-[[(4-아미노페닐)술포닐](2-메톡시프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]카르밤산 3S-테트라히드로푸란일 에스테르;
    N-tert-부틸 데카히드로-2-[2(R)-히드록시-4-(페닐티오)-3(S)-[[N-[(2-메틸-3-히드록시페닐)카르보닐]아미노]부틸]-(4aR,8aS)-이소퀴놀린-3(S)-카르복시아미드;
    [4R-(4α,5α,6β,7β)]-1,3-비스[(3-아미노페닐)메틸]헥사히드로-5,6-디히드록시-4,7-비스(페닐메틸)-2H-1,3-디아제핀-2-온;
    N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-[[(피롤리딘-1-일)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부탄아미드;
    N-[2R-히드록시-3-[(2-메틸프로필)[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐]아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-2S-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    [1S-[1R*(R*),2S*]]-N-[2-히드록시-3-[N1-(2-메틸프로필)-N1-(4-메톡시페닐술포닐)아미노]-1-(페닐메틸)프로필]-2-메틸-3-(메틸술포닐)프로판아미드;
    2S-[[(N-메틸아미노)아세틸]아미노]-N-[2R-히드록시-3-[[(1,3-벤조디옥솔-5-일)술포닐](2-메틸프로필)아미노]-1S-(페닐메틸)프로필]-3,3-디메틸부탄아미드; 또는
    (2R,3S)-3-(N-메틸아미노아세틸-L-tert-부틸글리신일)아미노-1-(N-이소아밀-N-(tert-부틸카르바모일))아미노-4-페닐-2-부탄올
    인 것을 특징으로 하는 조합물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 제1레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성 변종과 상기 제2레트로바이러스 프로테아제 저해제에 대한 적어도 하나의 바이러스 내성 변종은 각기 프로테아제 펩티드 서열내 적어도 하나의 아미노산 치환을 가진 레트로바이러스 프로테아제를 생성하며 이 치환은 프로테아제의 동일 기질 결합 부위 영역에 영향을 주고 관찰된 저해제 내성에 기여하는 것을 특징으로 하는 조합물.
  7. 제1항에 있어서, 프로테아제 저해제 이외의 적어도 하나의 항바이러스제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조합물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 항바이러스제는 뉴클레오시드 유사체, 비뉴클레오시드 역전사효소 저해제, tat 안타고니스트 또는 글리코시다제 저해제인 것을 특징으로 하는 조합물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 유사체는 AZT, DDI, DDC, 3TC, D4T 또는 PMEA이고 상기 글리코시다제 저해제는 카스타노스페르민 또는 N-부틸-1-데옥시노지르마이신인 것을 특징으로 하는 조합물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 사람, 원숭이 또는 고양이인 것을 특징으로 하는 조합물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 레트로바이러스는 HIV 또는 HTLV인 것을 특징으로 하는 조합물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 레트로바이러스는 HIV-1 또는 HIV-2인 것을 특징으로 하는 조합물.
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Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5610294A (en) * 1991-10-11 1997-03-11 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Substituted cyclic carbonyls and derivatives thereof useful as retroviral protease inhibitors
PT810209E (pt) 1992-08-25 2002-09-30 Searle & Co Hidroxietilamino-sulfonamidas de alfa- e beta-aminoacidos uteis como inibidores de protease retroviral
US7141609B2 (en) 1992-08-25 2006-11-28 G.D. Searle & Co. α- and β-amino acid hydroxyethylamino sulfonamides useful as retroviral protease inhibitors
US5723490A (en) * 1992-09-08 1998-03-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated THF-containing sulfonamide inhibitors of aspartyl protease
CA2153777A1 (en) * 1993-01-15 1994-07-21 Siegfried H. Reich Hiv protease inhibitors
US20030207813A1 (en) * 1996-12-09 2003-11-06 G.D. Searle Retroviral protease inhibitor combinations
US5756533A (en) * 1995-03-10 1998-05-26 G.D. Searle & Co. Amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
GB9503850D0 (en) * 1995-02-25 1995-04-19 Glaxo Group Ltd Medicaments
EP1188766A1 (en) 1995-03-10 2002-03-20 G.D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6143788A (en) * 1995-03-10 2000-11-07 G.D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethlamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6861539B1 (en) 1995-03-10 2005-03-01 G. D. Searle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5705500A (en) * 1995-03-10 1998-01-06 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6150556A (en) * 1995-03-10 2000-11-21 G. D. Dearle & Co. Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
ATE229033T1 (de) 1995-03-10 2002-12-15 Searle & Co Heterocyclocarbonyl-aminosäure-hydroxyethylamin - sulfonamid inhibitoren retroviraler proteasen
US6169085B1 (en) 1995-03-10 2001-01-02 G. D. Searle & Company Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6407134B1 (en) 1995-03-10 2002-06-18 G. D. Searle & Co. Heterocyclecarbonyl amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US6667307B2 (en) 1997-12-19 2003-12-23 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5985870A (en) * 1995-03-10 1999-11-16 G.D. Searle & Co. Sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US7339078B2 (en) 1995-03-10 2008-03-04 G.D. Searle Llc Bis-amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5776971A (en) * 1995-03-10 1998-07-07 G.D. Searle & Co. Heterocyclecarbonyl amino acid hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
US5691372A (en) * 1995-04-19 1997-11-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Oxygenated-Heterocycle containing sulfonamide inhibitors of aspartyl protease
US6037157A (en) * 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
AU759386B2 (en) * 1995-06-29 2003-04-10 Abbvie Inc. Use of Ritonavir (ABT-538) for improving the pharmacokinetics of drugs metabolized by cytochrome P450 in a method of treating AIDS
US5753660A (en) * 1995-11-15 1998-05-19 G. D. Searle & Co. Substituted sulfonylalkanoylamino hydroxyethylamino sulfonamide retroviral protease inhibitors
NZ333099A (en) * 1996-06-25 2000-06-23 Glaxo Group Ltd synergistic combinations comprising 141W94, zidovudine and 3TC for use in the treatment of HIV
KR20000022225A (ko) 1996-06-25 2000-04-25 그레이엄 브레레톤;레슬리 에드워즈 Hiv 치료에 사용하기 위한 vx478, 지도부딘 및(또는)1592u89를 포함하는 배합물
US6113920A (en) * 1996-10-31 2000-09-05 Glaxo Wellcome Inc. Pharmaceutical compositions
EP0955054A4 (en) * 1996-11-08 2003-01-29 Japan Energy Corp AIDS CURE
US6045829A (en) * 1997-02-13 2000-04-04 Elan Pharma International Limited Nanocrystalline formulations of human immunodeficiency virus (HIV) protease inhibitors using cellulosic surface stabilizers
US6180634B1 (en) 1997-11-13 2001-01-30 Merck & Co., Inc. Combination therapy for the treatment of AIDS
CA2336160C (en) 1998-06-23 2015-02-17 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of compounds for treating hiv
US6538006B1 (en) * 1998-07-08 2003-03-25 Pharmacia Corporation Retroviral protease inhibitors
GB9815567D0 (en) * 1998-07-18 1998-09-16 Glaxo Group Ltd Antiviral compound
US20010042866A1 (en) * 1999-02-05 2001-11-22 Carrie Carter Coman Inxalygazn optical emitters fabricated via substrate removal
CZ300031B6 (cs) * 1999-10-06 2009-01-14 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hexahydrofuro[2,3-b]furan-3-yl-N-{3-[(1,3-benzodioxol-5-ylsulfonyl) (isobutyl)amino]-1-benzyl-2-hydroxypropyl}karbamát a farmaceutický prípravek s jeho obsahem
US6617310B2 (en) 2000-07-19 2003-09-09 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Phosphate esters of bis-amino acid sulfonamides containing substituted benzyl amines
WO2002014264A2 (en) 2000-08-11 2002-02-21 The Brigham And Women's Hospital, Inc. (hydroxyethyl)ureas as inhibitors of alzheimer's beta-amyloid production
US7157489B2 (en) 2002-03-12 2007-01-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois HIV protease inhibitors
US20040197321A1 (en) * 2002-03-19 2004-10-07 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
US20030180279A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
US20050131042A1 (en) * 2003-12-11 2005-06-16 Flentge Charles A. HIV protease inhibiting compounds
US8193227B2 (en) 2003-12-11 2012-06-05 Abbott Laboratories HIV protease inhibiting compounds
US20050148523A1 (en) * 2003-12-15 2005-07-07 Colonno Richard J. Method of treating HIV infection in atazanavir-resistant patients using a combination of atazanavir and another protease inhibitor
US8173144B2 (en) * 2004-11-04 2012-05-08 L'oreal Administration of urea compounds for combating signs of cutaneous aging
PT2487165T (pt) * 2006-07-07 2016-11-18 Gilead Sciences Inc Moduladores de propriedades farmacocinéticas de agentes terapêuticos
ES2449074T3 (es) * 2007-06-22 2014-03-18 Bristol-Myers Squibb Holdings Ireland Composiciones en forma de comprimidos que contienen atazanavir
AU2008268537B2 (en) * 2007-06-22 2012-11-01 Bristol-Myers Squibb Holdings Ireland Tableted compositions containing atazanavir
JP2010530890A (ja) * 2007-06-22 2010-09-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー アタザナビルを含む錠剤組成物
EP2178511B1 (en) * 2007-06-22 2011-03-02 Bristol-Myers Squibb Company Tableted compositions containing atazanavir
US20100021505A1 (en) * 2008-07-28 2010-01-28 Tibor Sipos Composition and method to prevent or reduce diarrhea and steatorrhea in HIV patients
EP2151450A1 (de) * 2008-07-29 2010-02-10 Sandoz AG Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden
US20120295898A1 (en) 2010-01-27 2012-11-22 Mark Richard Underwood Antiviral Therapy
US10889411B2 (en) 2017-02-03 2021-01-12 Berry Plastics Corporation Container with lid and detachable lid collar

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0580402A2 (en) * 1992-07-20 1994-01-26 E.R. Squibb & Sons, Inc. Aminediol protease inhibitors

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5142056A (en) * 1989-05-23 1992-08-25 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
US4652552A (en) * 1984-09-10 1987-03-24 E. I. Du Pont De Nemours And Company Tetrapeptide methyl ketone inhibitors of viral proteases
US4644055A (en) * 1984-12-17 1987-02-17 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for preparing specific inhibitors of virus-specified proteases
US4857511A (en) * 1985-09-17 1989-08-15 Burroughs Wellcome Co. Treatment of human viral infections
US5458889A (en) * 1986-05-22 1995-10-17 Atlantic Pharmaceutical Products Limited Methods and compositions for inhibiting or destroying viruses or retroviruses
USH1649H (en) * 1987-07-31 1997-05-06 Barrish; Joel C. HIV protease inhibitor combinations
DE3830825A1 (de) * 1987-09-15 1989-03-23 Sandoz Ag Hydrophile reninhemmer, ihre herstellung und verwendung
IL89900A0 (en) * 1988-04-12 1989-12-15 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids and pharmaceutical compositions containing them
IL90218A0 (en) * 1988-05-13 1989-12-15 Abbott Lab Retroviral protease inhibitors
US5122517A (en) * 1988-06-10 1992-06-16 Regents Of The University Of Minnesota Antiviral combination comprising nucleoside analogs
CA1340588C (en) * 1988-06-13 1999-06-08 Balraj Krishan Handa Amino acid derivatives
DE3912829A1 (de) * 1989-04-19 1990-10-25 Bayer Ag Verwendung von renininhibitorischen peptiden als mittel gegen retroviren
ES2059293T3 (es) * 1990-11-19 1998-12-16 Monsanto Co Inhibidores de proteasas retrovirales.
US5413999A (en) * 1991-11-08 1995-05-09 Merck & Co., Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
ATE163926T1 (de) * 1991-11-08 1998-03-15 Merck & Co Inc Hiv-protease-inhibitoren verwendbar in der aids- behandlung
WO1993017003A1 (en) * 1992-02-26 1993-09-02 Smithkline Beecham Corporation Retroviral protease inhibitors
JP4091654B2 (ja) * 1992-08-25 2008-05-28 ジー．ディー．サール、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤として有用なスルホニルアルカノイルアミノヒドロキシエチルアミノスルホンアミド
IS2334B (is) * 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
CZ286412B6 (en) * 1993-03-31 2000-04-12 Merck & Co Inc Synergetic combination of compounds for treating AIDS, pharmaceutical preparation containing such synergetic combination and use of this synergetic combination for preparing pharmaceutical preparation
US5504104A (en) * 1993-11-19 1996-04-02 Warner-Lambert Company Tricyclic pyrone derivatives as protease inhibitors and antiviral agents
US5476874A (en) * 1994-06-22 1995-12-19 Merck & Co., Inc. New HIV protease inhibitors
IL114808A (en) * 1994-08-11 1999-10-28 Merck & Co Inc Combinations of protease inhibitors for the treatment of hiv infection and aids
US6037157A (en) * 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0580402A2 (en) * 1992-07-20 1994-01-26 E.R. Squibb & Sons, Inc. Aminediol protease inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
FI964835A0 (fi) 1996-12-03
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