KR0161140B1

KR0161140B1 - 항 에이즈 효과를 갖는 비가역적 hiv 프로테아제 억제제, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물

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Publication number: KR0161140B1
Application number: KR1019950013367A
Authority: KR
Inventors: 윤흥식; 최호일; 정원희; 손영찬; 박지효; 문광률; 최낙현; 김성천; 김충렬; 이태규; 권영도
Original assignee: 성재갑; 주식회사엘지화학
Priority date: 1995-05-26
Filing date: 1995-05-26
Publication date: 1998-12-01
Also published as: KR960041173A

Abstract

본 발명은 HIV 프로테아제의 억제제로서 유용한 신규 화합물 및 그의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 하기의 일반식(Ⅰ)의 시스-에폭사이드 구조를 갖는 화합물 및 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물은, HIV 프로테아제의 비가역적 억제제로서 억제 효과는 높은 반면 그 세포독성은 낮기 때문에, 에이즈 또는 HIV 감염의 치료 또는 예방용 제제로서 유용하게 사용될 수 있다.

상기식에서, R¹, R²및 R³는 명세서중에서 정의한 바와 같다.

Description

항 에이즈(AIDS)효과를 갖는 비가역적 HIV 프로테아제 억제제, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물

본 발명은 인간 면역결핍 바이러스(HIV)프로테아제 억제 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 HIV 프로테아제를 비가역적으로 억제하는 신규의 시스-에폭시 화합물과 이의 제조방법, 그리고 이 화합물을 유효성분으로 포함하여 HIV 감염으로 발생되는 후천성 면역 결핍증(AIDS, 이하 에이즈로 칭한다)의 치료 및 예방을 위한 조성물에 관한 것이다.

HIV는 에이즈 및 에이즈 증후군을 일으키는 레트로 바이러스이다. 레트로 바이러스는 유전정보 물질로 RNA를 갖는데, 숙주를 감염시킨 후 역전사효소(reverse transcriptase)에 의해 바이러스 RNA로 부터 이중 나선의 DNA를 만들게 된다. 이렇게 만들어진 이중나선 DNA는 인테그라제(integrase)에 의해 숙주의 염색체에 접목되어, 감염된 새로운 바이러스 RNA 뿐 아니라, 숙주의 효소적 기작을 이용하여 바이러스의 단백질도 만들 수 있다. 생성된 다단백질(polyprotein)은 새로운 바이러스를 형성하기 위하여 변형되어야 하는데, 이러한 변형은 숙주의 효소 또는 바이러스가 갖고 있는 효소에 의해서 이루어진다. 이들 효소중에서 가장 중요한 것은 하나의 프로테아제(protease)로서 이 효소는 다단백질을 바이러스 형성에 필요한 구조단백질 및 효소로 분해시키는 효소이다.

레트로 바이러스의 프로테아제 중에서는 HIV 프로테아제가 가장 집중적인 연구 대상이 되어 왔다. HIV는 껍질 단백질 및 필요한 효소를 만들 때 이들을 mRNA로 부터 각각 합성해 내는 것이 아니라, 일단 껍질 단백질과 효소 등이 다 함께 결합되어 있는 긴 형태의 다단백질 gag-단백질(p55) 또는 gag-pol 단백질(p165)을 먼저 만든 다음이 다단백질이 자신의 내부에 있는 프로테아제에 의하여 껍질 단백질과 역전사효소, 인테그라제 등 바이러스 형성에 필요한 효소들로 분해되게 된다. 이러한 분해 과정을 담당하는 프로테아제를 억제하면 바이러스의 복제가 중단되는데, 이러한 원리에 기초한 것이 프로테아제 억제제이다.

돌연변이 실험을 통하여 프로테아제 기능이 없는 바이러스는 감염성이 없는 것으로 보고되었다[Kohl et al., Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 85, 4686-4960 (1988); and Peng et al., I Virol., 63, 2550(1989)]. 따라서, HIV 프로테아제의 기능을 저해하는 억제제는 HIV 감염에 의해 발생되는 질환의 치료제로서의 가능성이 제시되어 오고 있다.

HIV 프로테아제는 99개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 그의 구조는 X-선 구조 결정에 의해 결정되었다[Navia, et al., Nature 337, 615-620(1989); Wlodawer, et al., Science, 245, 616-621(1989); and MIller, et al., Science, 246, 1149-1152(1989)]. HIV 프로테아제는 두개의 동일한 단위체가 이량체로 존재하고 있는데, 각 단위체의 분자량은 10793이다. 이러한 HIV 프로테아제는 반응 부위에 아스파르테이트-트레오닌-글리신의 배열을 갖는 전형적인 아스파르틱 프로테아제이다.

HIV 프로테아제 억제제의 개발은 다른 종류의 아스파르틱 프로테아제(특히 레닌)의 억제제 개발 동향에 따르고 있다. 그 기본적인 접근 방식은 효소의 전이상태(transition stat)와 유사한 화합물(transition state analogue, TSA)을 개발하여 효소의 친화도를 높임으로써 효소에 대한 결합력을 높이는데 있다. 이러한 방식으로 개발한 HIV 프로테아제 억제제는 여러 문헌에 개시되어 있다(Roberts, et al., Science, 248, 358(1990); 유럽 특허 공개 제 0337714 호; 제 0346847 호; 제 356223 호; 제 352000 호; 제 357332 호; 제 362002 호; 및 제 361341 호; Bone et al., IACS, 113, 9382(1991)). 그러나, 상기와 같은 공지의 HIV 프로테아제 억제제들은 모두 효소의 친화도를 높인 가역적 억제제들로서, 실제 치료제를 사용하기에는 부족함이 있었다.

이에, 본 발명자들은 전술한 바와 같이 전이상태를 모방한 가역적인 억제제보다 강력한 억제효과를 얻기 위하여, 전이상태와는 다른 시스-에폭사이드 구조를 도입한 비가역적인 억제제를 개발하여 출원 한 바 있으며(1993년 6월 14일자 대한민국 특허출원 제 93-10811호 참조), 본 발명에 이르러서는 시스-에폭사이드 구조에 L-아미노산이 아닌 알킬아민을 C-말단에 도입하고, N-말단에는 페니실아민으로부터 제조된 β-메탄설포닐-L-발리닐 카바메이트 유도체를 도입함으로써 보다 강력한 비가역적 HIV 바이러스 증식 억제 효과를 갖는 신규한 (4R, 3S)-시스 에폭사이드 화합물을 개발하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 보다 향상된 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 억제 활성을 갖는 신규 화합물 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 상기 화합물을 유효 성분으로 포함하는, 후천성 면역결핍증 또는 HIV감염의 예방 또는 치료에 유용한 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는 하기 일반식(I)의 시스-에폭사이드 구조를 갖는 화합물 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물을 제공한다;

상기식에서, R¹은 탄소수 1 내지 8의 사이클릭 알킬 라디칼 또는 헤테로 사이클이고, R²및 R³는 서로 독립적으로 저급알킬, 방향족 라디칼로 치환된 저급 알킬, 탄소수 3 내지 8의 사이클릭 알킬, 사이클릭 알킬 라디칼로 치환된 저급 알킬 또는 방향족 라디칼이다.

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 명세서에서 사용된 용어중 저급알킬은 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 측쇄 알킬을 의미한다.

또한 헤테로사이클은 산소, 질소 및 황원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 3각 내지 6각형 화합물을 의미하며, 상기 질소 또는 황원자는 산화된 형태일 수도 있다. 본 발명의 헤테로사이클에는 상기 언급한 헤테로사이클이 벤젠, 사이클로헥산 또는 다른 헤테로사이클과 결합된 비사이클도 포함된다. 대표적인 헤테로사이클에는 피롤, 피롤리닐, 피롤리디닐, 피라조일, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸린, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피리딜, 피페리디닐, 피라지닐, 피페라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 옥사조일, 옥사졸리닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸릴, 이속사졸리닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티아졸릴, 티아졸리디닐, 이소티아졸릴, 이소티아졸리디닐, 인들릴, 퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다조일릴, 벤조티아조일릴, 벤즈옥사조일, 벤조퍼푸라닐, 푸릴, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로푸라닐, 디옥사닐, 디옥솔리닐, 티에닐, 벤조티아닐 및 벤조티라닐 등이 포함된다.

본 명세서에서 사용된 아미노산에 관한 약어들은 아미노산 및 펩타이드에 대한 생화학적 명명법에 관한 IUPAC-IUB 합동회의에 따른 것이다[Eur. J. Biochem. 158, 9-31(1984)].

본 발명에 따른 화합물은 또한 비대칭 탄소 중심을 가질 수 있으며, 라세미체, 라세미 화합물, 부분입체이성체 혼합물 및 개개인의 부분입체이성체로서 존재할 수 있으며, 이들 모든 형태의 이성체도 본 발명에 포함된다.

본 발명의 바람직한 화합물은 R₁ 이 2-티오펜, 2-푸라닐 또는 4-옥소-2,3-디하이드로-6,6-디메틸피란이고, R₂가 이소프로필이며, R₃가 벤질인 일반식(I)의 화합물이다.

본 발명의 대표적인 화합물의 구체적인 예를 들어 다음과 같다:

화합물 1: [(5S)-[[[N-2-티오펜카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드

화합물 2: [(5S)-[[(N,-2-푸란카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드

화합물 3: [(5S)-[[(N-2-피리딘카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드

화합물 4: [(5S)-[[(N-3-피리딘카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드

화합물 5: [(5S)-[[(N-2-(4-옥소-2, 3-디하이드로-6,6-디메틸피란)]카보닐]-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드

본 발명에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물은 하기 반응도식 1에 도시된 바와 같이 제조할 수 있다.

여기서에서, R¹, R²및 R³는 상기에서 정의한 바와 같다.

상기 반응도식 1에 따르면, 먼저 일반식(Ⅱ)의 화합물을 일반식(Ⅲ)의 화합물과 커플링 반응시킨 후 mCPBA(메타클로로퍼옥시벤조산)으로 산화반응시켜 일반식(Ⅳ)의 화합물을 얻는다. 이로부터 벤질옥시카보닐 보호그룹을 제거하고 일반식(V)의 화합물을 커플링시킨 후 상기와 같이 산화반응을 수행하여 일반식(VI)의 화합물을 얻는다. 이로부터 벤질옥시카보닐 보호그룹을 제거하고 R¹-COOH를 커플링시켜 목적하는 일반식(Ⅰ)의 화합물을 얻는다.

상기 커플링 반응에는 커플링 시약으로서 예를 들면, 디사이클로헥실 카보디이미드(DCC), 3-에틸-3'-(디메틸아미노)-프로필카보디이미드(EDC), 비스-(2-옥소-3-옥사졸리디닐)-포스핀산 클로라이드(BOP-CI), 디페닐포스포릴아지드(DPPA)등을 사용할 수 있는데, 이들로서만 한정되는 것은 아니다. 상기 공정에 사용된 카볼실산은 산 할라이드 또는 기타 활성 에스테르 유도체로 전환시킨 후 커플링 반응시킬 수도 있다. 상기 산 할라이드 유도체로는 산 클로라이드가 포함되며, 활성 에스테르 유도체는 아민과의 커플링 반응에 의해 아미드 결합을 형성하게 하거나 알콜과의 컬플링 반응에 의해 에스테르 결합을 형성하도록 하기 위해 카복실산 그룹을 활성화시키는데 통상적으로 사용되는 것들로서, 예를 들면, 메록시카보닐 클로라이드, 이소부톡시카보닐 클로라이드 등과 같은 알콕시카보닐 할라이드와, 커플링 시약으로부터 유도된 카복실산 무수물, N-하이드록시벤조트리아졸 유도된 에스테르, N-하이드록시 프탈이미드 유도된 에스테르, N-하이드록시숙신이미드 유도된 에스테르, N-하이드록시-5-노르보넨-2',3'-디카복스아미드 유도된 에스테르, 2,4,5-트리클로로페놀 유도된 에스테르 등이 포함되나, 이들로서만 한정되는 것은 아니다.

탈보호 반응, 예를 들어 벤질옥시카보닐기는 통상의 방법에 의하여, 예를 들면 Pd/C 촉매 존재하에서 수조가압하에 반응시켜 제거할 수 있다.

상기 반응도식 1에서 일반식(Ⅱ)의 화합물은 하기 반응도식 2에 도시된 바와 같이 제조될 수 있다.

여기에서, X는 할로겐원자, 예를 들면 Br 또는 I이고,는 아미노기 보호그룹이다.

상기 반응도식 2는 문헌[Keinan et al., Tetrahedron, 47, 4631-4638(1991); and Corey Shimaji, J.Am. Chem. Soc., 105, 1662-1664(1983)]에 기술되어 있는 방법에 의거한 시스-β, γ-올레핀 산의 제조공정을 나타내는 것이다. 일반식(Ⅶ)의 화합물을 비티그 반응시켜 일반식(Ⅷ)의 화합물을 수득한 다음, 이를 산 촉매 존재하에 t-부탄올중에서 용매의 환류온도로 가열 교반함으로써 목적하는 일반식(Ⅱ)의 화합물을 제조할 수 있다. 여기에서, 상기 논문에 기재된 방법에 따라 일반식(Ⅷ)의 오르토에스테르를 산처리하여 일반식(Ⅸ)의 화합물을 만든 후 염기 처리하여 보호 그룹을 제거하는 경우에는 β, γ-올레핀 산에서 α, β-올레핀 산으로 50%이상 전환되어 목적 화합물의 수율이 매우 낮아질 뿐 아니라 이의분리에도 어려움이 따르기 때문에, 본 발명에서는 일반식(Ⅷ)의 오르토에스테르를 산촉매의 존재하에 t-부탄올을 용매로 하여 용매의 환류온도로 가열 교반함으로써 α, β-올레핀 산으로 전환되지 않은 β, γ-올레핀 산 화합물(Ⅱ)를 80 내지 90%수율로 얻을 수 있었다.

상기 반응도식 1에서 일반식(Ⅲ)의 그룹을 제공하는 작용화된 아민은 하기 반응도식 3에서 도시된 바와 같이, 문헌[Weinreb et al., Tetrahedron Lett., 22, 3815(1981)]에 기술된 방법으로 제조한 N, O-디메틸아미드를 그리나드 반응시킨 후, 비티그 반응 및 수소화 반응을 통해 제조할 수 있다.

또한, 반응도식 1에서 사용된 일반식(Ⅴ)의 화합물은 하기 반응도식 4에 도시된 바와 같이, L-페니실아민으로부터 염기의 존재하에서 티올기를 메틸화한 후 벤질옥시카보닐기로 아민을 보호하는 것에 의해 제조할 수 있다.

본 발명의 일반식(Ⅰ)의 화합물은 HIV 프로테아제 억제 활성을 가지므로 에이즈 또는 HIV 감염의 치료 또는 예방을 위한 제제로서 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 1일 체중 1㎏당 5 내지 30㎎의 양을 한번에 또는 수회에 걸쳐 숙주에 투여할 수 있으며, 특정 환자에 대한 투여 수준은 사용될 특정 화합물, 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변환될 수 있다.

또한 본 발명의 화합물은 목적하는 바에 따라 경구 또는 비경구 투여할 수 있다. 경구투여용 제형으로는 캅셀제, 정제, 환제, 산제 및 과립제가 가능한데, 화합물 특성을 고려한다면 캅셀제가 특히 바람직하고, 정제로 할 경우에는 장용성 제제로 하는 것이 바람직하다. 경구 투여형 제형으로 제조할 때에는 본 발명의 활성화합물을 수크로오즈, 락토오즈 또는 전분과 같은 적어도 하나의 불활성 희석제, 그리고 스테아린산 마그네슘과 같은 적어도 하나의 활제를 포함할 수 있다. 주사용 제제로 제조할 경우에는 공지된 기술에 따라, 예를 들면 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액과 적절한 분산제, 수화제 또는 현탁화제와 함께 사용하여 제조할 수 있는데, 허용 가능한 용매로서는 예를 들어 폴리에틸렌글리클, 에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 에탄올 등이 있다.

한편, 본 발명의 일반식(Ⅰ)의 화합물은 하나이상의 다른 에이즈치료제, 면역조절제 등과 병행하여 투여될 수 있으며, HIV 감염의 치료 및 예방에 유용한 제제라면, 상기에 언급한 제제 이외에도 어떠한 것이라도 사용될 수 있다.

이하 본 발명을 다음의 제조예 및 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 단 하기의 실시예는 본 발명에 따른 신규한 화합물의 제조 방법에 대한 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이로서 제한되는 것은 아니다.

[제조예 1]

[(S)-2-아미노-3-메틸-1-페닐 부탄의 제조]

[(1-1) L-N-벤질옥시카보닐-N'-메톡시-N'-메틸-페닐알라닌 아미드의 제조]

25g(0.084 몰)의 N-벤질옥시카보닐-L-페닐알라닌과 18.4㎖(0.167 몰)의 N-메틸모르폴린을 500㎖의 디클로로메탄에 용해시킨 후 -15℃에서 10.8㎖ (83.6 밀리몰)의 이소부틸 클로로포르메이트를 가하였다. 15분후에 1.2당량의 N, O-디메틸하이드록실아민을 -15℃에서 가하고 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 다음 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 500㎖의 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고 유기층을 무수 MgSO₄로건조시킨 다음 셀라이트에 통과시켜 유기용매를 제거하여 표제화합물 26.7g(수율 93%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 2.87(m, 1H), 3.05(m, 1H), 3.17(s, 3H), 3.66(s, 3H), 4.96(m, 1H), 5.07(s, 2H), 5.23(d, 1H), 7.12-7.34(m, 10H)

[(1-2) (S)-3-[(N-벤질옥시카보닐)아미노]-1-메틸-4-페닐-2-부탄온의 제조]

상기(1-1)에서 제조한 화합물 6.84g(0.02 몰)을 60㎖의 THF 에 용해시키고 3M 메틸 마그네슘 브로마이드 에테르용액 30㎖(0.09 몰)을 0 ℃에서 가한 후 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 0 ℃에서 물을 가하여 반응을 종결시키고 용매를 감압 증류하여 제거한 다음 300㎖의 에테르를 가하여 희석하고 200㎖의 염화 암모늄 용액으로 3회 세척하였다. 이어서, 무수 MgSO₄로 건조시키고 감압 증류한 다음 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸아세테이트=8:2)를 실시하여 표제 화합물 5.11g(수율 86%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 2.13(s, 3H), 3.04(m, 2H), 4.57(m ,1H), 5.08(s, 2H), 5.17(d, 1H), 7.12-7.34(m, 10H)

[(1-3) (S)-3-[(N-벤질옥시카보닐)아미노]-2-메틸-4-페닐-1-부텐의 제조]

8.57g(0.024 몰)의 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드를 60㎖의 무수 롤루엔에 용해시키고 44㎖(0.022 몰)의 0.5M 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 롤루엔 용액을 -20℃에서 가한 후 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 용액에 상기 (1-2)에서 제조한 화합물 5.94g(0.02 몰)을 50㎖의 무수 톨루엔에 용해시킨 용액을 -20℃에서 10분간 가한 다음 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 가하여 반응을 종결시키고 용매를 감압 증류하여 제거한 다음 200㎖의 디클로로메탄을 가하여 희석하고 1N 염산으로 세척하였다. 무수 MgSO₄로 건조시키고 감압 증류하여 유기 용매를 제거한 다음 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸아세테이트=9:1)를 실시하여 표제 화합물 5.25g(수율 89%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 1.79(s, 3H), 2.84(m, 2H), 4.31(m, 1H), 4.52(bs, 1H), 4.81(d, 2H), 5.07(s, 2H), 7.13-7.35(m, 10H)

[(1-4)(S)-2-아미노-3-메틸-1-페닐 부탄의 제조]

상기 (1-3)에서 제조한 화합물 2.95g(0.01 몰)을 30㎖의 메탄올에 용해시키고 200㎎의 10% Pd/C를 가한 후 1기압의 수소 조건하에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서 셀라이트를 통과시켜 무기물을 제거한 다음 유기용매를 감압 증류하여 표제 화합물 1.63g을 정량적으로 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 0.94(m, 6H), 1.11(bs, 2H), 1.65(m, 1H), 2.39(m, 1H), 2.82(m, 2H), 7.13-7.32(m, 5H)

[α]_D=-3.74(C=0.12, 디클로로메탄)

e. e. =-3.74/-38.1=98%

[제조예 2]

[N-벤질옥시카보닐-S-메틸-페니실아민의 제조]

8.9g(0.06 몰)의 L-페니실아민을 디옥산 120㎖와 물 40㎖에 가하여 0℃로 냉각시킨 다음 20㎖의 6N 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 용해시켰다. 생성된 용액에 9.24g(0.066 몰)의 요오드화메탄을 가하고 플라스크 마개를 막은 다음 0℃에서 3시간, 이어서 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응물을 0℃로 냉각시키고 6 N 수산화나트륨 15㎖ 와 벤질클로로포르메이트 10.20 g (0.09 몰)을 가한 다음, 0℃에서 1시간, 이어서 상온에서 2시간 동안 교반하여 반응을 종결시켰다. 용매를 감압 증류하여 제거한 후, 미반응 벤질클로로포르메이트를 제거하기 위해 물과 에테르 20㎖를 가한 다음 유기층을 제거하였다. 수용액층에 300㎖의 에틸 아세테이트를 가하고 6N 염산으로 pH를 3이하로 조정하였다. 유기층을 분리한 후 무수 MgSO₄로 건조시키고 용매를 감압 증류하여 표제 화합물 14.25g(수율 80%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 1.2(s, 6H), 2.1(s, 3H), 4.3(d, 1H), 5.1(s, 2H), 7.1(m, 5H)

[제조예 3]

[(S)-5-[(N-벤질옥시카보닐)아미노]-6-페닐-헥스-3-(시스)-엔-1-카보닐산의 제조 ]

[(3-1) 5-L-(N-벤질옥시카보닐)아미노-6-페닐-헥스-3-(시스)-엔일-4'-메틸-2',6',7'-트리옥사-비사이클로-[2',2',2']-옥세탄의 제조]

문헌[Keinan et al., Tetrahedron, 26, 4631-4638(1991)에 기술된 방법에 따라 합성된 1-(2-트리페닐포스포늄-메틸)-4'-메틸-2', 6', 7'-트리옥사-비사이클로-[2', 2', 2']-옥세탄 브로마이드 60.89 g(0.12 몰)을 400㎖의 테트라하이드로푸란에 용해시키고 -78℃에서 교반하였다. 이어서 220㎖(0.11 몰)의 0.5M 칼륨헥사메틸 디실라잔 용액을 -78℃에서 1시간 동안 냉각시킨 다음 상기 용액에 20분 동안 서서히 가하고 -78℃에서 1시간, 이어서 상온에서 1시간 동안 교반한 뒤 물을 가하여 반응을 종결시켰다. 용매를 제거한 후 에틸아세테이트에 용해시키고 NaHCO₃포화용액 및 물로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 감압 증류한 다음 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸아세테이트:트리에틸아민=70:30:5)를 실시하여 표제 화합물 36.5(수율 84%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 0.8(s, 3H), 2.2-3.0(m, 4H), 3.9(s, 6H), 4.6(m, 1H), 4.8(br, 1H), 5.05(s, 2H), 5.4-5.6(m, 2H), 7.1-7.5[m, 10H)

[(3-2) (S)-[(N-벤질옥시카보닐)아미노산]-6-페닐-헥스-3-(시스)-엔-1-카보닐산의 제조]

상기 (3-1)에서 제조한 화합물 2.5g(6 밀리몰)을 1% 미만의 진한 염산이 포함된 t-부탄올과 물의 혼합용액에 용해시켜 반응용매의 환류온도로 약 20시간 동안 교반한 뒤, 반응용매를 증류감압하여 제거하고 K₃CO₃용액을 가하여 pH를 9이상으로 조정한 다음 에틸아세테이트로 세척하였다. HC1로 수용액층의 pH를 2로 맞추고 에틸아세테이트로 추출한 다음 MgSO₄로 건조시키고 유기용매를 제거하여 1.62g(수율 80%)의 표제 화합물을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 2.7-3.3(m, 4H), 4.6(m, 1H), 4.8(br, 1H), 5.05(s, 2H), 5.4(t, 1H), 5.6(m, 1H), 7.1-7.5[m, 10H)

MS(FAB, m/e) 340(M+1), [α]_D=+25.2(C=0.50, 메탄올)

[실시예 1]

[[5S)-[[(N-2-티오펜카보닐]-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드(화합물 1)의 제조]

[(1-1)[(5S)-(N-벤질옥시카보닐)아미노]-3-(시스)-엔-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드의 제조]

상기 제조예 3에서 제조한 화합물 0.339g(1 밀리몰)을 각각 1.5 당량의 EDC, HOBT) 및 트리에틸아민과 혼합하여 20㎖의 디메틸포름아미드에 용해시킨 다음 제조예 1의 생성물 0.179g(1 밀리몰)을 0℃에서 가하고 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 증류에서 제거한 후 에틸아세테이트에 용해시키고 1N 염산과 NaHCO₃포화용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 감압증류하여 용매를 제거한 후 컬럼 크로마토그래피(에틸아세테이트:헥산=1:1)를 실시하여 표제 화합물 0.44g(수율 87.5%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 1.01(m, 6H), 1.78(m, 1H), 2.42-3.25(m, 6H), 4.05(m, 1H), 4.58(m, 1H), 4.95(bs, 1H), 5.08(s, 2H), 5.35(m, 1H), 5.58(m, 1H), 7.09-7.41[m, 16H)

[(1-2) [(5S)-[(N-벤질옥시카보닐)아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드의 제조]

상기 (1-1)에서 제조한 화합물 339㎎(0.7 밀리몰)을 20㎖의 디클로로메탄에 용해시키고 3 당량의 메타클로로퍼옥시벤조산을 가한 다음 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 30㎖의 10% Na₂S₂O₃용액을 가하고 30분간 교반한 후 유기층을 NaHCO₃포화용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 유기용매를 제거하여 표제화합물 287㎎(수율 82%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 0.83-0.99(m, 6H), 1.77(m, 1H), 2.61-3.24(m, 8H), 3.74(m, 1H), 4.11(m, 1H), 4.95(d, 1H), 5.10(s, 2H), 7.21-7.50[m, 15H)

[(1-3) [(5S)-[[(N-벤질옥시카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드의 제조]

상기 (1-2)에서 제조한 화합물 2.50 g (5 밀리몰)을 50㎖의 메탄올에 용해시킨 후 10 중량 %의 10% Pd/C와 혼합하여 수소풍선 조건에서 3시간동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트에 통과시켜 무기 촉매를 제거한 다음 반응 용매를 감압 증류하여 제거하였다. 상기 제조예 2의 생성물을 1.49 g(5 밀리몰)과 각각 1.5 당량의 EDC, HOBT 및 트리에틸아민을 50㎖ 디메틸포롬아미드에 용해시킨 다음 상기에서 얻은 아민을 0℃에서 가하고 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 증류하여 제거하고 에틸아세테이트에 용해시킨 후 NaHCO₃포화용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 감압 증류하여 용매를 제거한 후 20㎖의 디클로로메탄과 5 당량의 메타클로로퍼옥시벤조산을 가하고 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 200㎖의 10% Na₂S₂O₃용액을 가하고 30분간 교반한 후 유기층을 NaHCO₃포화용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 유기 용매를 제거한 후 컬럼 크로마토그래피(헥산:에틸아세테이트=3:7)를 실시하여 표제 화합물 1.80 g(수율 52%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 0.86-0.95(m, 6H), 1.54-2.21(m, 9H), 2.69-3.42(m, 7H), 4.05-4.17(m, 2H), 4.52(d, 1H), 5.11(s, 2H), 7.18-7.55[m, 15H)

FAB MS: 678(M+1)

[(1-4) [(5S)-[[(N-2-티오펜카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드의 제조]

상기 (1-3)에서 제조한 화합물 339㎎ (0.5 밀리몰)을 20㎖의 메탄올에 용해시킨 후 10 중량 %의 10% Pd/C와 혼합하여 수소풍선 조건에서 3시간동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트에 통과시켜 무기 촉매를 제거한 다음 반응 용매를 감압 증류하여 제거하였다. 2-티오펜산 64.1㎎(0.5 밀리몰)과 각각 1.5 당량의 EDC, HOBT 및 트리에틸아민을 10㎖ 디메틸포롬아미드에 용해시킨 다음 상기에서 얻은 아민을 0℃에서 가하고 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 증류하여 제거하고 에틸아세테이트에 용해시킨 후 NaHCO₃포화용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고 유기 용매를 감압 증류하여 용매를 제거한 후 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올=20:1)를 실시하여 표제 화합물 236㎎(수율 72%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) δ 0.89(m, 6H), 1.49-2.05(m, 9H), 2.62(m, 1H), 2.76-3.01(m, 8H), 4.03(m, 2H), 4.98(d, 1H), 5.73[d, 1H), 7.09-7.56(m, 15H) FAB MS: 654(M+1)

[실시예 2]

실시예 1에서 2-티오펜산 대신2-푸란산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 하기 표1에 열거한 화합물 2을 수득하였다.

[실시예 3]

실시예 1에서 2-티오펜산 대신 2-피리딘산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 하기 표1에 열거한 화합물 3로 수득하였다.

[실시예 4]

실시예 1에서 2-티오펜산 대신 3-피리딘산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 하기 표1에 열거한 화합물 4을 수득하였다.

[실시예 5]

실시예 1에서 2-티오펜산 대신 2-(4-옥소-2,3-디하이드로-6,6-디메틸피란산)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 하기 표1에 열거한 화합물 5을 수득하였다.

[HIV 프로테아제의 억제 효능 분석]

본 발명의 화합물들의 HIV 프로테아제에 대한 억제 효능을 다음의 방법을 사용하여 확인하였다.

먼저 반응기질이 없는 상태에서 HIV 프로테아제 효소와 본 발명의 화합물을 혼합한 다음(배양전 용액), 반응용액의 일부를 취하여 과량의 반응기질이 있는 용액(분석 용액)에 가하여 효소 활성의 감소정도를 남아있는 활성의 정도로서 측정하였다. 배양전 용액은 50mM 아세트산 나트륨, pH 5.5, 1mM 디티오트레이를(DTT), 1mM 에틸렌 디아민테트라아세테이트(EDTA), 0.75M 황산암모늄, 0.1% NP 40(Noniget 40, Sigma Chemical Co.)과, 본 발명의 화합물이 여러 농도로 포함되어 있다. 억제 반응은 2.6 nM 의 HIV-1 프로테아제를 가함으로써 개시하였다. 일정시간마다 10㎕씩 취하여, 상기와 동일한 완충용액에 100μM의 반응기질이 포함되어 있는 80㎕의 용액에 가하여 남아있는 효소 활성을 검정하였다. 이때, 반응기질로는 H-His-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-(p-니트로)-Phe -Glu-Ala-Ile-Ser-NH의 11개 아미노산으로 이루어진 올리고펩티드를 사용하였는데, 이 기질은 HIV 프로테아제에 의해 (p-니트로)-Phe 과 Leu 사이의 아미드 결합이 끊어지게 된다. 반응속도는 (p-니트로)-Phe 의 280nm에서의 강한 흡광도를 이용하여, 반응전의 기질과 반응후의 생성물을 HPLC)로 분리하여 생성물의 상대적 양을 측정함으로써 결정하였다. 시간에 따른 효소 활성의 감소량을 구하고 감소량의 자연로그값(1n)을 시간에 대하여 그래프로 나타낸 직선의 기울기로부터 k를 구하였다. 억제 상수는 하기식에 의해 구하였다.

여기에서, k_obs는 일정한 농도의 제제 존재하에서 시간에 따라 효소활성이 감소되는 정도를 나타내는 속도상수이고, k_ina는 억제제와 효소간의 Michaelis-Menten 결합체로부터 공유결합이 형성되는 화학반응이 일어나는 속도상수이고, K₁는 억제제와 효소간의 Michaelis-Menten 결합체의 해리상수(Inhibition Constant)이고, [I]는 억제제의 농도이다.

상기식은 억제제 농도가 효소의 농도보다 월등히 높을 경우(정상 상태 조건)에 적용이 가능하다. 그러나, 억제제 농도가 고활성이이서 억제제의 농도와 효소의 농도가 비슷한 조건에서 실험을 행하여야 경우에는 상기식보다(E: 유리 효소, I; 유리 억제제, EI: Michaelis-Menten 결합체 농도, EI': 효소와 억제제의 공유 결합물)농도의 식을 사용하여 정상상태 가정을 하지 않은 각 시간마다 살아있는 효소의 상대적 농도 E/(E+EI+EI')의 값을 KINSIM/FITSIM 프로그램(Willams and Morrison; Zimmerle and Frieden)에 입력하여 계산함으로써 억제상수 k_i와 k_ina및 2차 억제상수(second order rate constant)인 k_ina/K_I를 구하여 하기 표2에 나타내었다. 본 발명의 화합물의 경우, 어느 것이나 이차억제상수 k_{ina /}K_I의 값이 충분히 크므로, 효소와 억제제 간에 비가역적인 반응이 일어났음을 알 수 있다.

[항 HIV-1 바이러스 활성 및 세포독성 측정]

항 바이러스 효과는 신키티움 형성 조사와 역전사 효소 검정 조사를 하여 바이러스 복제를 50%로 저지하는 농도(IC₅₀)를 결정하여 평가하였다.

HIV-1 바이러스는 다음과 같이 배양하였다. 먼저, COS 세포[Simian 바이러스 40으로 형질전환된 아프리카 녹색 원숭이의 신장 세포)를 DME 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 배양한 후 배양액 1 ㎖(10⁷세포)를 일렉트로포레이션(electroporation) 용기에 넣고 20㎕의 HIV-1 유전자를 함유한 플라스미드(pNL 4-3)와 섞어준 다음, 20% FBS(태아 소 혈청)을 함유한 RPMI 배지중에서 800 μF, 250V로 Cell-Porator(BRL)을 이용하여 electroporation 시켰다. 이어서, 얼음중에서 10분간 방치한 후 15㎖의 DME 배지(10% FBS 함유)를 들어있는 T75 플라스크에 옮겨 CO₂배양기에서 배양하였다. 24시간 후에 10㎖의 동일한 새 배지로 바꾸어 주고, 제 2일째에 배양액을 모아서 원심 분리한 다음 0.22mm 필터에 통과시키고 분배하여 -70℃에서 보관하였다. 그런다음, MT-2 세포주 HIV-1을 감염시켜 바이러스 양을 증폭시켰다. 즉, 4 x 10⁶세포의 MT-2 세포주를 1500 TCID₅₀(50 % 세포감염농도, tissue culture infectious dose)의 NL43 바이러스로 감염시킨 뒤 신키티움이 많이 형성되는 7일경에 5배의 감염되지 않은 MT-2 세포를 넣고 이틀 후부터 3일동안 매일 바이러스 배양액을 취하였다. 배양액을 원심분리하고 0.22 mm 필터를 통과시킨 다음 분배시켜 -70℃에서 보관하였다. 그 결과 p24의 양이 131 ng/㎖이고, TCID₅₀값이 4 x 10⁴TCID₅₀/㎖ 이며, 역전사효소 활성이 3.8 x 10⁵cpm/㎖ 인 바이러스를 얻었다.

본 발명의 화합물의 HIV-1 증식 억제 효과를 알아보기 위해 다음과 같은 실험을 행하였다. 대전 혈액원으로부터 입수한 혈액에서 PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells)를 파이콜-하이팩(Ficoll-Hypaque, Pharmacia)으로 분리한 다음, 5㎕/㎖ 의 PHA-P(Sigma)를 가하여 배양하였다. 상기 배양은 20% FBS, IL-20(20 Units/㎖), 페니실린(100 Units/㎖), 스트렙토마이신(100 ㎕/㎖) 및 암포테리신 B(0.25 ㎕/㎖)를 함유하는 RPMI 1640 배지를 사용하여 수행하였다. 3일 후에 RPMI 배지로 세포를 세척한 후 37℃에서 1.2 x 10⁷세포를 12,000 TCID₅₀의 바이러스와 2시간 동안 섞어주면서 감염시켰다. 원심분리 후 얻은 세포를 RPMI 배지로 2회 세척한 후 세포수를 2 x 10⁶세포/㎖ 로 조정하였다. 측정하고자 하는 HIV-1 억제 화합물을 DMSO로 희석시켜 200, 63.2, 20, 6.32, 3.56, 2, 0.632, 0.2, 0.0632 및 0 μM의 용액(각각 200㎕)을 준비하였다. 상기에서 사용한 RPMI 1640 배지 495 ㎕를 24웰 배양 평판에 가하고, 여기에 5 ㎕의 HIV-1 억제 화합물을 첨가한 다음 500 ㎕의 HIV-1 바이러스에 감염된 세포(1 x 10⁶세포)를 가하였다. 따라서 화합물의 최종 농도는 1000, 316, 100, 31.6, 17.78, 10, 3.16, 1, 0.316 및 0 nM 이다. 4일후에 750㎕의 배지를 따라 버리고 화합물을 함유한 동일 배지 1㎖를 새로 첨가하고 7일 후에 P24 양 또는 역전사효소 활성을 측정하여, 바이러스의 양을 50%로, 억제하는 화합물의 농도인 IC₅₀을 측정하였다.

단백질 p24 양은 듀퐁(Du Pont)사의 HIV-1 p24 Core Profile ELISA(NEN Cat # NEK-060) 또는 셀룰라 프로덕츠 인코포레이티드(Cellular Products Inc.)사의 Retro-tekTM HIV-1 p24 antigen ELISA(CPI Cat # 0801111)을 이용하여 측정하였다. 역전사효소 활성은 다음과 같이 측정하였다. 먼저 세포를 HIV-1으로 감염시키고 7일 후에 800㎕의 배양액을 400 ㎕의 PEG(폴리에틸렌글리콜) 용액(30% PEG 8000, 0.4 M NaC1)과 혼합한 다음 4 ℃에서 보관하였다. 다음날 에펜도르프 원섬분리기로 15,000 rpm에서 20분간 원심분리시켜 얻은 바이러스를 40㎕의 용액 1(25 mM 트리스-HCl, pH 7.8, 0.25mM EDTA, 0.025 % 트리톤 X-100, 50 % 글리세롤, 10 mM DTT 및 100 mM KC1)과 20㎕의 용액 2(0.9 % 트리톤 X-100, 43.7 mM KC1)에 용해시킨 다음, 이중 10㎕를 취하여 90㎕의 역전사효소 활성 측정액[46.5 mM 트리스-HC1, pH 7.8, 8.89 mM DTT, 11.1 mM MgC1₂, 3.75 mM NaC1, 2.5 μCi 3H-TTP(NEN-Du Pont, 10-25 Ci/밀리몰), 0.556 μ/㎖ 폴리(rA):올리고(dT)(파마시아(Pharmacia))]과 혼합하고 37℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응후 9 ㎕의 0.25 M EDTA를 첨가하여 반응을 중단시킨 다음, 이 용액을 DEAE 필터((DE 81, Whatmann Cat # 3658N323)에 옮겨 건조시키고 2 x SSC 완충용액으로 세척하였다. 필터를 건조시킨 다음 5㎖의 액체섬광 용액을 첨가하고 액체섬광계수기를 이용하여 정량하였다.

항에이즈제의 최대 허용치를 결정하기 위한 세포 독성을 검사하기 위하여, PHA-P로 자극시킨 1 x 10⁶PBMC 세포를 24 웰 배양 평판에 가하고 0.1 내지 100 μM 범위의 본 발명의 화합물을 첨가한 다음 RPMI 1640 배지에서 37℃로 배양하고 4일간격으로 배지를 바꾸어 주면서 세포의 증식 정도를 트리판 블루다이 익스크루전 방법(Trypanblue dye exclusion technique)으로 혈구 계산판에서 2주간 관찰하여 세포독성 CT₅₀(세포의 50%가 죽는 값)을 결정하였다. 측정된 항바이러스 활성 및 세포 독성의 결과를 하기 표2에서 나타내었다. 하기 표2에서 보듯이, 본 발명의 화합물들은 모두 HIV 프로테아제 억제 효과가 높으면서도 세포독성은 낮다는 것을 알 수 있다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 일반식(Ⅰ)의 혼합물은 HIV 프로테아제의 비가역적 억제제로서 억제효과는 높은 반면 세포독성은 낮기 때문에, 에이즈 또는 HIV 감염의 치료 또는 예방을 위한 약학적 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

하기 일반식(Ⅰ)의 시스-에폭사이드 구조를 갖는 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물:

상기식에서, R¹은 탄소수 5 내지 8의 사이클릭 알킬 라디칼 또는 산소, 질소 및 황원자를 포함하는 헤테로사이클(상기 질소 또는 황원자는 산화된 형태일 수 있다)이고, R²및 R³는 서로 독립적으로 C_1-4알킬 또는 벤질이다.
제1항에 있어서, R₁ 이 2-티오펜, 2-푸라닐 또는 4-옥소-2,3-디하이드로-6,6-디페닐피란이고, R₂가 이소프로필이며, R₃ 가 벤질인 화합물.
제1항에 있어서, [(5S)-[[(N-2-티오펜카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드; [(5S)-[[(N-2-푸란카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드; [(5S)-[[(N-2-피리딘카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드; [(5S)-[[(N-2-피리딘카보닐)-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드; [(5S)-[[(N-2-(4-옥소-2,3-디하이드로-6,6-디메틸피란)카보닐]-β-메탄설포닐-L-발리닐]아미노]-(4R,3S)-에폭시-6-페닐-1-헥사노일]-[(2S)-[1-페닐-3-메틸]부틸]아미드 및 이들의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 및 용매화물 중에서 선택된 화합물.
일반식(Ⅱ)의 화합물을 일반식(Ⅲ)의 화합물과 커플링 반응시킨 후 산화시켜 일반식(Ⅳ)의 화합물을 얻고; 일반식(Ⅳ)의 화합물을 탈보호시킨 후 일반식(Ⅴ)의 화합물을 커플링시켜 일반식(Ⅵ)의 화합물을 얻고; 일반식(Ⅴ)의 화합물을 탈보호시킨 후 R¹-COOH를 커플링시키는 것을 특징으로 하는, 일반식(I)의 화합물의 제조방법

상기에서, R¹, R², R³는 제1항에서 정의한 바와 같고,는 아미노기 보호그룹이다.
제4항에 있어서, 일반식(Ⅶ)의 화합물을 비티그 반응시켜 일반식(Ⅷ)의 화합물을 수득한 다음, 이를 산 촉매 존재하에 t-부탄올중에서 용매의 환류온도로 가열하는 것에 의해 상기 일반식(Ⅱ)의 화합물을 제조하는 단계를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

상기에서, X는 할로겐 원자이고,는 아미노기 보호그룹이다.
하기 일반식(Ⅰ)의 시스-에폭사이드 구조를 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 후천성 면역결핍증 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염의 예방 또는 치료에 유용한 조성물.

상기식에서, R¹은 탄소수 5 내지 8의 사이클릭 알킬 라디칼 또는 산소, 질소 및 황원자를 포함하는 헤테로사이클(상기 질소 또는 황원자는 산화된 형태일 수 있다)이고, R²및 R³는 서로 독립적으로 C_1-4알킬 또는 벤질이다.