JPH05506031A - 免疫不全ウイルス感染に伴う疾病の抑制 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫不全ウィルス感染に伴う疾病の抑制発明の分野 本発明は薬剤、医薬および免疫不全ウィルス感染に伴う異常の作用を予防または 治療する方法に関する。

発明の背景 インテグリン細胞接着受容体と相互作用するタンパク質は、しばしば、そのイン テグリン結合部位内にアミノ酸トリペプチドＲＧＤ配列を含んでいる。ＲＧＤ配 列はフィブロネクチン、ビトロネクチンおよびコラーゲンに見られ、発達および 分化の間のインテグリン介在細胞接着に利用される細胞外マトリックス結合部位 を同定する。白血球上のインテグリン受容体は凝析タンパク質（フォンビルブラ ンド因子（ｖｏｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　ｆａｃｔｏｒ）　、フィブリノーゲ ン、トロンポスポンジン）および補体成分（Ｃ３ｂ）に結合し、細胞−細胞間の 接着（ＬＦＡ−１とＩ−ＣＡＭ）に関与する。これらの相互作用は、ホメオスタ ティック調整、食作用、細胞移動、細胞信号、細胞取引およびリンパ球認識を包 含する。加えて、細菌、寄生体およびウィルスのタンパク質は、インテグリン受 容体を認識し、病原の起因するかもしれないＲＧＤ配列を含有しつる。

後天性免疫不全歴候群（ＡＩＤｓ）の病因であるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ ）はレトロウィルス科のウィルスである。ヒトＴ−リンパ球性ウィルスタイプ− Ｉ　Ｉ　Ｉ　（ＨＬＴＶ−Ｉ　Ｉ　Ｉ）　、タイプ１に分類されるリンパ節疾患 ウィルス（ＬＡＶ）およびＡＩＤＳ関連レトロウィルス（ＡＲＶ）を包含するＨ ＩＶの数種の単離体が存在する。関連免疫不全ウィルスはＨＩＶタイプ２を包含 し、最近、それが西アフリカにおけるＡＩＤＳと関連することが明らかにされた （グヤダー（Ｇ　ｕｙａｄｅｒ）ら、ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３２旦： ６６２　（１９８７）参照）。他の免疫不全ウィルスはＳＩＶ、、、−ＢＫ２８ 　（ヒルシｓ　（Ｈｉｒｓｈ）ら、セル（Ｃｅｌｌ）４９　：　３０７　（１９ ８７）：ケストラー（Ｋｅｓｔｌｅｒ）ら、ネイチャ−３３１：６１９　（１９ ８８）参照）のようなＳＩＶウィルス：ネコ免疫不全ウィルス（ＦＩＶ）；およ びウシ免疫不全ウィルス（ＢＩＶ）を包含する。

ＨＩＶゲノムの分子特性表示は、該ウィルスが他のレトロウィルスと同一の全ｇ ａｇ　ｐｏｌ−ｅｎｖ構成を示すことを証明した。ラトナー（Ｒａｔｎｅｒ）ら 、ルスには見られない少なくとも５種の遺伝子：ｖｉｆＳ　ｔａｔ、ｒｅｖ％ｎ ｅｆおよびｖｐｒを有する。ｇａｇ領域は、５５キロダルトンのｇａｇ先駆体タ ンパク質をＨＩＶプロテアーゼで開裂することで製造される、４種のコアタンパ ク質、ｐ１７、ｐ２４、ｐ７およびｐ６をコードする。該プロテアーゼはｐｏｌ 領域によってコードされる。

免疫不全ウィルスはまた、ｔａｔと称される、ＲＧＤ配列を含有するトランス作 用（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）タンパク質用の遺伝子を有している。Ｈ ＩＶ−１ｔａｔは、ウィルス遺伝子発現および複製を大きく増加させる、８６個 のアミノ酸長のタンパク質である。ｔａｔ中のトリペプチドＲＧＤ配列は、該タ ンノ々り質のカルボキシ末端部に位置し、ＨＩＶ−１単離体の間でよ（保存され る。該ｔａｔタンパク質に対するモノクローナル抗体の生成は、ブレイク（Ｂ　 ｒａｋｅ）ら、ジャーナル・オン・パイロｏジー（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、６４． ９６２　（１９９０）によって開示されている。

免疫不全ウィルス感染に伴う疾病の病原に関し、常に増加の一途にある知識にも かかわらず、免疫不全ウィルス感染およびＨＩＶ誘発のシンシチウム形成および 、例えば、カボシ肉腫（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ　Ｓａｒｃｏｍａ）を包含する免疫不 全ウィルス感染に伴う他の異常を抑制する医薬についての切迫した要求がある。

発明の要約 本発明は、免疫不全ウィルスのｔａｔタンパク質が、このようなウィルスの感染 に伴う疾病の進行において役割を果たしており、かかる疾病の進行がｔａｔタン パク質の細胞接着機能を妨げることによって抑制できるという知見にある。

さらに詳しくは、本発明は、１つの具体例において、免疫不全ウィルスｔａｔタ ンパク質中のＲＧＤ細胞接着機能の抑制剤を動物に投与することからなる、免疫 不全ウィルスによる動物の感染に伴う疾病の進行を抑制する方法にある。

もう一つの態様において、本発明は、免疫不全ウィルスによる感染の治療用医薬 の製造における、免疫不全ウィルスｔａｔタンパク質中のＲＧＤ細胞接着機能の 抑制剤の使用にある。

関連する具体例において、本発明は、免疫不全ウィルスｔａｔタンパク質のＲＧ Ｄ細胞接着機能の抑制剤と、医薬上許容される担体とからなる医薬組成物にある 。

発明の詳説 今回、免疫不全ウィルスのｔａｔタンパク質が細胞外ｔａｔタンパク質の細胞接 着にて機能し、このような細胞接着機能を抑制することにより、ｔａｔタンパク 質による転写活性を抑制しうろことが判明した。さらに、このようなｔａｔ介在 転写活性の抑制が、異常遺伝子発現から生じる疾病の、開始を包含する、進行を 抑制し、すなわち、予防しまたは遅延させることが判明した。このような疾病は 、免疫不全にてもたらされる免疫機能障害ならびにカボシ肉腫のような免疫不全 ウィルス感染に伴う他の疾病を包含する。例えば、ホゲル（Ｖｏｇｅｌ）ら、ネ イチャー　３３５　：　６０６　（１９８８）参照。

本発明の方法に従って、ｔａｔ細胞接着を妨げるのに用いることができる薬剤は 、ｔａｔＲＧＤ配列のペプチド疑似体またはｔ　ａ　ｔ　ＲＧＤ結合剤を包含す る。

ｔ　ａ　ｔ　ＲＣＪＤ疑似体のペプチド疑似体は、ＲＧＤ細胞接着受容体に結合 するか、そうでないとｔｘｔが細胞に結合することを抑制する化合物、ペプチド またはタンパク質であってもよい。このような疑似体は、ｔａｔ受容体に結合し 、および／またはｔａｔ中のＲＧＤ配列の構造に機能的に近い化合物であっても よい。このような疑似体はまたペプチドまたはオリゴペプチドであってもよい。

かかる疑似体は、その構造にて部分配列−ＲＧＤ−を含有していてもよい。この ようなペプチド疑似体は、ｔａｔ変異体、すなわち、１個以上のアミノ酸が加え られ、欠失し、置換されまたは再配列したｔａｔタンノくり質誘導体、ならびに 細胞接着を減少させるように、化学的に修飾されたｔａｔタンノくり質を包含す る。

本発明の方法にて有用なペプチド疑似体はまた、オリゴペプチド、すなわち、２ 〜約２０個までのアミノ酸を有するペプチドを包含し、そのオリゴペプチドカく 、ｔ　ａ　ｔ　ＲＧＤ配列が結合する受容体への結合でＲＧＤ配列と競合する。

多くのＲＧＤペプチド疑似体が、例えば、創傷治癒、組織修復および血栓症；こ おける、細胞接着の役割に関する研究から知られている。このように以前（二層 も１だされたＲＧＤ介在細胞接着の疑似体を、本発明の方法において用いること ができる。例えば、たとえ十分に記載されているとしても、参考のためにここ１ こ挙げる、米国特許第４．６８３．２９１号：第４，６６１．１１１号；　４． ６１４，５１７号：４．５８９．８８１号：４．５７８，０７９号；　４．５１ ７．６８６号：４，５４４．５００号；４．３９７．８４２号＋４．８５７．５ ０８号：４．８７９．３１３号；および米国特許出願０７／６５０．５２７号、 ０７／６３０，１２４号および０７／４３３．９３３号：　ならびｌ：ＰＣＴ　 ＷＯ３９１０５１５０（ＵＳ　８８１０４４０３）　、ＥＰ−Ａ　Ｏ３４１９１ ５、ＥＰ−Ａ　０２７５７４８、ＥＰ−Ａ　Ｏ３７２４８６、ＥＰ−Ａ　Ｏ３８ １０３３、ＥＰ−Ａ　Ｏ４１０５３７、ＥＰ−Ａ　Ｏ４１０５３９、ＥＰ　−Ａ 　Ｏ４１０５４０，ＥＰ−Ａ　Ｏ４１０５４１、ＥＰ−Ａ　Ｏ４１０７６７およ びＥＰ−Ａ　Ｏ４１１８３３参照。

本発明において有用なｔａｔタンパク質によるＲＧＤ−介在細胞接着の抑制剤の 別の具体例は、細胞表面受容体に対するＲＧＤ配列の親和力を妨げまた（ま減少 させるように免疫不全ウィルスのｔａｔタンｌくり質に結合する医薬上許容され るｔａｔＲＧＤ結合剤である。このようなＲＧＤ結合剤の一つの例は、ｔａｔタ ンパク質に対する抗体、好ましくはＲＧＤ配列に特異的な抗体である。このよう な抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を製造する標準技法により 製造することができる。例えば、たとえ十分に記載されてし＼るとしても、参考 のためここに挙げる、ブレイク（Ｂｒａｋｅ）ら、ジャーナル・オン・ノくイロ ロジー、６４　：　９６２　（１９９０）参照。別法として、今回、組換え型Ｄ ＮＡ技法によりキメラ抗体を製造することが可能である。この具体例のさらなる 変形はこのような抗体のフラグメントまたは誘導体の使用にある。かかるＲＧＤ 結合剤のもう一つ別の例は、ＲＧＤ配列配列線胞表面受容体の可溶性誘導体であ る。このような受容体は標準技法により単離することができ、該受容体の膜内外 かつ細胞質ドメインを欠失することにより可溶形に変えることができる。例えば 、ＥＰ−Ａ　Ｏ２４０９７５、ＷＯ８７１０５９１２、Ｗｏ８７１０７３０２、 ＥＰ−Ａ　Ｏ２５７１１４、ＷＯ８７１０６９３８およびＷｏ　８８１０１３０ ４参照。

ｔａｔ変異体を製造する変異誘発用のｔａｔタンノくり質遺伝子コード配７ｊｌ ｌｆｔ、免疫不全ウィルスまたは公然と入手可能な多くの免疫不全ウィルスゲノ ムライブラリーのいずれかから製造することができる。好ましくは、１以上のＲ ＧＤ残基を置換した変異誘発体は、標準技法により製造することができる。

ＲＧＤ接着を干渉する代表的化合物は・Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−８ｅｒ −ＮＨ２：Ａｃ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ａｓｐ−８ｅｒ−ＮＨ２；Ａｃ−Ｇｌｙ −Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｌｙｓ −Ｐｒｏ−Ｉ　１ｅ−５ｅｒ−１１ｅ−Ａｓｎ−Ｔｙｙｒ−ＡｒｇＮ　Ｈ２； Ｎ−α−アセチルーンクロ（Ｓ、　Ｓ）−システイニルアルギニルグリシルアス ノくルチルセリルアルギニルグリシルアスパルチルセリルシスティンアミド：Ｎ −α−アセチル−シクロ（Ｓ、　Ｓ）−システイニル−Ｎ−α−メチルアルギニ ルグリ シクロ（１．５）−Ｄ−アラニルアルギニルグリシルアスノくルチルセリン；Ａ ｃ−Ｈｉｓ−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａ ｌａ−Ｇｌｙ−、Ａｓｐ−Ｖａｌ−ＯＨ：３Ｓ．６Ｓ−３−カルボキンメチル− ６−（３−グアニジノプロピル）−２．５−ピペラジンジオン。

３５．６Ｒ−３−カルボキンメチル−６−（５−グアニジノプロピル）−２，５ −ピペラジンジオン。

シクロ（１，１０）−プロリルアルギニルグリシルアスパルチル−Ｄ−フェニル アラニルプロリルアルギニルグリシルアスパラチル−Ｄ−フェニルアラニル。

シクロ（１，５）−アラニルアルギニルグリシルアスパルチル−Ｄ−セリン：シ クロ（１，６）−グリンルアルギニルグリシルアスバルチルセリルブロリン：シ クロ（１，６）−グリシルプロリニルアルギニルグリシルアスパルチル−Ｄ−ブ ロリン： シクロ（１，６）−プロリニルグリシニルアルギニルグリシニルアスパルチル− Ｄ−プロリン： Ｎ−α−アセチル−シクロ（ｓ、５）−Ｌ−ンステイニルーＬ−アルギニルーグ リンルーし一アスパルチルーし一トリプトフィルーＬ−ペニンラミンアミド；シ クロ（１，８）−メチルアルギニルグリシルアスバルチルフェニルアラニルアル ギニルグリンルアスバルチルフェニルアラニン：Ｔｈ　ｒ−Ａｒ　ｇ−Ｔｙ　ｒ −、Ａｒ　ｇ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａｓ　ｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓ　ｐ　−、Ａ　１　ａ　 −Ｔｈ　ｒ−Ｍｅ　ｔ−３ｅ　ｒ−○Ｈ：／クロ（１（α）、６（δ））−グリ シル−Ｎ（α）メチルアルギニルグリシルアスパルチルセリルグルタミン酸アミ ド。

Ｎ−α−ベンゾイル−Ｎ（α）−メチルアルギニルグリシニルアスパルチルアニ リド： Ｎ−α−アセチル−シクロ（Ｓ、　Ｓ）システイニル（Ｎ−α−メチル）アルギ ニルグリシルアスパルチル−（２Ｒ，３Ｒ）−３−フェニルシスティンアミド。

シクロ（１，６）−プロリニルアルギニルグリシニルアスパルチルグリシニルー Ｄ−プロリン； および シクロ（１，６）−プロリニルアルギニルグリシニルアスパルチルグリシニル− Ｄ−フェニルアラニンである。

ペプチドおよび化学分野にて通常用いられる略語および符号を、本発明の化合物 を記載するのに用いる。一般に、アミノ酸の省略形は、ヨーロピアン・ジャーナ ル・オン・バイオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　１５８ ．９　（１９８４）に記載されているところの、Ｉ　ＵＰＡＣ−Ｉ　ＵＢ　Ｊｏ ｉｎｔ　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏ＋ｍｅｎ ｃｌａｔｕｒｅに従う。

アミノ酸　３文字コード　１文字コードアスパラギン　Ａｓｎ　Ｎ アスパラギン酸　、へｓｐ　Ｄ グルタミン酸　Ｇｌｕ　Ｅ グリシン　ｃｒｙ　Ｇ ヒスチジン　Ｈｉｓ　Ｈ メチオニン　Ｍｅｔ　Ｍ フェニルアラニン　Ｐｈｅ　Ｆ プロリン　Ｐｒｏ　Ｐ セリン　Ｓｅｒ　Ｓ スレオニン　Ｔｈｒ　Ｔ トリプトファン　Ｔｒｐ　Ｗ アスパラギン　Ａｓｘ　Ｂ またはアスパラギン酸 グルタミン　Ｇｌｘ　Ｚ またはグルタミン酸 本発明の方法において有用な薬剤は容易に製造され、そのｔａｔ細胞接着抑制能 に基づいて選択される。細胞接着検定は、例えば、以下の実施例において開示さ れている検定法を包含する、その分野において知られている標準技法により実施 することができる。例えば、たとえ、十分に記載されているとしても、参考のた めにここに挙げられる、フランケル（Ｆ　ｒ３ｎｋｅｌ）ら、セル（Ｃｅｌｌ） 　５５・１１８９　（１９８８）参照。

本発明の方法において、ｔａｔ細胞接着の抑制剤は、内服、例えば、静脈内、皮 下または筋肉的注射または注入のような非経口、経口、直腸、口内、経皮または 吸入により、動物、特に免疫不全ウィルスによる感染に感受性であるヒトに投与 される。化合物は、典型的には、投与経路に基づいて選択される医薬上許容され る担体または希釈剤中にて投与される。ビル、粉末、錠剤、カプセルまたはカブ レット（ｃａｐｌｅｔ）のような固体処方の場合、有用な担体は、なかんずく、 ラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカ シア、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸を包含する。さらに、該担 体は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル単独または ワックスと一緒にしたような徐放性物質を包含してもよい。

経口、鼻腔内または非経口投与用の液体担体は、なかんずく、所望により、有機 または無機塩、例えば、アンモニウム、カリウムまたはナトリウムのアセテート 、アジペート、スクシネートまたはントレートで緩衝処理されていてもよい、グ リセリン、シロップ、ビーナツツ油、オリーブ油、食塩水、デキストロースおよ び水を包含する。付加賦形剤を、緊張性を調節するのに加えてもよく、または特 に凍結乾燥すべき処方の場合、例えば、ゼラチン、ポリビニルピロリジン、セル ロース、アカシア、ポリエチレングリコール、ピロリドンまたはマンニトールの ような安定化剤を添加してもよい。

直腸または膣投与の場合、該化合物を、粉末形にて、カカオ脂、グリセリン、ゼ ラチンまたはポリエチレングリコールのような賦形剤と合して全開に成形するこ とができる。経皮デリバリ−の場合、該化合物を油状調製物、ゲル、クリームま たはエマルジョンと合し、経皮パッチを介して投与することができる。

本発明の方法においては、ＲＧＤ−介在ｔａｔ細胞接着を抑制する薬剤の医薬上 許容される組成物を、動物、特に免疫不全ウィルス、とりわけＨＩＶに感染した と思われるまたは思われているヒトに、免疾機能障害の進行を抑制するに、好ま しくは免疫機能障害または他の疾病を安定化または改善するに有効な量にて投与 する。

投与量は、免疫機能障害の進行段階および治療すべき動物の年令、体重および健 康状態を包含する種々の要素に依存して変化する。免疫不全ウィルスによる感染 に伴う免疫障害に対する本発明の方法の効果を、Ｔ４およびＴ８の細胞数および Ｔ４／Ｔ８比をめることでモニター観察し、それに応じて投与割合および投与量 を修飾することができる。また、動物の体液中のウィルスの存在は、ウィルス抗 原、ウィルス抗原に対する抗体の存在を評価することにより、または、例えば、 血清にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いるウィルス性核酸を測定するこ とによりモニター観察することができる。または、肉腫の進行をモニター観察し 、カポン肉腫を治療する場合、それに応じて投与量を調整することができる。

本発明の方法は、長期間、例えば、数週間または数カ月を通して、または感染動 物内に潜在的に残存する免疫不全ウィルスの能力のため、周期的に繰り返しなさ れる治療にて実施されると考えられる。

ＲＧＤ−介在ｔａｔ細胞接着の抑制剤と、他の医薬上活性な薬剤、例えば、ウィ ルス複製および合胞体形成を抑制するのに効果的な他の薬剤、例えば、ＡＺＴお よびｄｄｅのような他のヌクレオシド類似体、ＨＩＶプロテアーゼ抑制剤および ５ＣＤ４およびその切形体の共同投与または同時投与は、本発明の範囲内に含ま れる。

以下の実施例は、本発明の例示およびその好ましい具体例であり、何ら本発明を 制限するものではない。

全長（ｆｕｌｌ−１ｅｎｇｔｈ）　ｔ　ａ　ｔ　（ＨＴＬＶ−Ｉ　Ｉ　Ｉ　Ｂ単 離体）細菌発現プラスミド、ｐＯＴｓ−ＴＡＴＩ　Ｉ　Ｉの構築は、以前にアル ドビニ（Ａｌｄｏｖｉｎｉ）らのプロシーディング・オン・ナショナル・アカデ ミ−・オン・サイエンス・オン・ザ・ユナイティッド・ステイト・オン・アメリ カ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ’ｌ　Ａｃａｄ、Ｓｅｉ、。

ＵＳＡ）８３　：　６６７２〜６６７６　（１９８６）に記載された。ＲＧＥ　 ｔ　ａ　ｔ（変異体１）発現ベクターを以下のように構築した。ｐＯＴｓ−ＴＡ ＴＩ　Ｉ　ｒからＮｄｅＩ−ＸｂａＩの５８２塩基対フラグメントをゲル精製し 、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いてプラスミドｐＵｃ１９のポリリンカー領域中にサ ブクローニングした。得られたプラスミド、ｐＵｃ１９ＴＡＴ、ＷＴをＡｖａＩ およびＸｂａＩで消化し、ついで３５塩基対のＡｖａＩ−ＸｂａＩ合成オリゴヌ クレオチドに連結し、ｐＵＣ１９ＴＡＴ、ＲＧＥを生成した。この合成オリゴヌ クレオチドは、ＡＳｐａｏをＧｌｕに変える単一の塩基置換でｔａｔ遺伝子の３ ′末端を再構築する。全長の変異したｔａｔ遺伝子を含むＢａｍＨＩ−Ｘｂａｌ の２５３塩基対フラグメントをｐＵｃ１９ＴＡＴ、ＲＧＥがらｆｆ製し、ついで ｐＯＴｓ−Ｔ−ＡＴＩ　Ｉ　Ｉ＋７）ＢａｍＨＩ−Ｘｂａ　Ｉ部位に連結した。

ＫＧＥｔａｔ（変異体２）発現ベクターは、倍の塩基置換（、Ａｒｇ７ｓのＬｙ ｓおよび”Ｓｌ）ｇｏのＧｌｕへの変化）を含む３５塩基対のＡｖａｌ−Ｘｂａ １合成オリゴヌクレオチドを用いる以外、同様にして構築した。これらの変異は 、適当な配列プライマーを用いる、ンデオキシ・シーケンシング（サンが−（Ｓ 　ａｎｇｅｒ）ら、プロシーデング・オン・ナショナル・アカデミ−・オン・サ イエンス・オン・ザ・ユナイティッド・ステイト・各ｐｏ”ｒｓ発現ベクターを 有するイー−）す（Ｅ、ｃｏｌｉ）　（、へＲ１２０株）細菌細胞を、５０Ｍｇ ／ｍｌでアンピンリン含有のＬＢダグロス中３７℃にて０゜４の光学濃度まで増 殖させ、アルドビニらによって、プロシーデング・オン・ナショナル・アカデミ −・オン・サイエンス・オン・ザ・ユナイティッド・ステイト・オン・アメリカ ８３：６６７２〜６６７６　（１９８６）に記載されているように、ナリジキシ ン酸を６０Ｍｇ／ｍ１まで添加することにより誘発した。誘発の５時間後、超音 波処理した細胞溶解物を遠心分離（１５，０００ｘｇ）に付し、ＬＭ　ＨＣＩを ゆっくり加えることによって、上澄液をｐＨ３，０に酸性化して核酸を沈澱させ た。

遠心分離および１．５Ｍ　トリス塩基（ｐＨ８，５）を用いてｐＨ７，５に中和 した後、試料を、５０ｍＭ　ＮａＭＥＳ、ｐＨ６，５にて平衡にした、セファデ ックス（Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　−２５Ｆカラム（ファーマンア（Ｐ　ｈａ ｒｍａｃｉａ）　、ビス力タウェイ、ニューシャーシー州）（ＩＸ４０ｃｍ）に 加えた。タンパク質ピーク分をプールし、アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）　ＹＭ−５ 膜（アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）　、ダンバース、マサチューセッツ州）を用いて １０倍に濃縮した。

ついで、試料を、リン酸塩−緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７，４）にて平衡にした 個々の抗−ｔａｔイムノアフィニティーカラム（３ｍｌのベッド容量）に加えた 。

カラムは、精製した抗−ｔａｔモノクローナル抗体（以下、参照）を創造主の推 奨する条件に従ってＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファーマシア）にカッ プリングすることにより製造した。該カラムをＰＢＳで洗浄し、溶出前に流出物 質（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍａｔｅｒｉａｌ）を２回加えた。結合試料を 溶出しく１００ｍＭクエン酸ナトリウム１０．５ＭＮａＣ１、ｐＨ３，０）、タ ンパク質ピーク分をプールし、固形トリス塩基を用いて直ちにｐＨ７，５に中和 した。以前、アルドビニらによりプロシーディング・オン・ナショナル・アカデ ミ−・オン・サイエンス・オン・ザ・ユナイティッド・ステイト・オン・アメリ カ８３　：　６６７２〜６６７６　（１９８６）に記載されているように、クー マシープル−（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ　ｂｌｕｅ）染色を用いるＳ　Ｄ　Ｓ　−Ｐ 　Ａ　Ｇ　Ｅおよびウェスタンプロット検定により、イムノアフィニティー精製 をモニター観察した。試料を濃縮し、タンパク質濃度をブラッドフォード（Ｂ　 ｒａｄｆｏｒｄ）の方法、アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、）７２．２４８〜２５４　（１９７６）により測定し、ついで 試料を用いるまで４℃にて貯蔵した。

Ｃ９細胞培養 ヒ１−Ｔ−リンパ球ＨＵＴ−７８およびＭＯＬＴ−４懸濁細胞株、ヒト骨髄単球 ＴＨＰ−１懸濁細胞株およびラット骨格筋肉−誘導Ｌ８８膜性筋芽細胞をアメリ カン・タイプ・カルチャー・コレクション（ロックビル、メリーランド州）から 入手した。さらに、強固に融合したＨＩＶ−Ｉ　ＬＴＲ−ＣＡＴ転写単位を含有 するＧ４１８−耐性Ａ３ＨｅＬａ細胞株を用いた。Ａ５を除（、すべての細胞株 を増殖させ、通常、１０％胎児ウン血清（ギブコ・ラボラドリース（Ｇ　ｉｂｃ 。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　、グランド・アイランド、ニューヨーク州）、２ ｍＭＬ−グルタミン、ＩＯＵ／ｍ！ペニシリンＧおよび１０Ｍｇ／ｍｌストレプ トマイシン（ＤＭＥＭ）補足のダルベツコ修飾イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ ’ｓ　ＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ）　（ＤＭＥＭ）中にて継代（ ｓｕｂｐａｓｓａｇｅ）　シた。Ａ５５細胞は、通常、領４ｍｇ／ｍ１Ｇ４１８ 　（ギブ：ｌ　（Ｇｉｂｃｏ）　）補足のＤ　Ｍ−Ｅ　Ｍにて培養した。

Ｄ、ペプチド合成 ペプチドＧＲＧＤＳＰＫおよびＧＲＡＤＳＰＫを、ＦＭＯＣ化合物を用い、Ｒａ ＭＰＳ系（デュポン・コーポレイション（Ｄｕ　Ｐａｎｔ　Ｃａｒｐ、）　、ウ ィルミントン、プラウエア州）でカルボキシル末端アミドとして合成した。アミ ノ酸および他の試薬はデュポン社から入手し；すべでの溶媒は入手しつる最高品 質のものであった。合成は、創造主の指示に従い、ピペリジン／ＤＭＦでＲａｐ ｉｄＡｍｉｄｅ樹脂を脱ブロックし；ＤＭＦおよびメタノールで交互に洗浄し： ＦＭＯＣ−アミノ酸を加え、２時間ロックし：ＤＭＦおよびメタノールで洗浄し 、ついでニンヒドリン反応により試験し；各アミノ酸についてこれらの工程を繰 り返すことにより行った。ペプチドを樹脂から切断し、遮断基をトリフルオロ酢 酸：１，２−エタンジチオール：フェノールで除去した。溶出したペプチドをジ エチルエーテルで沈澱させ、エーテルで、ついでエーテル：酢酸エチル１：１で 洗浄した。ペプチドをＥＰＬＣＭｏｎｏ　Ｓ　カラム（ファーマ／ア・エル・ケ イ・ビー・バイオテクノロジー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ）　、ビス力タウエイ、ニュージャージ州）にて精製した。該試料 をＤＯｍＭ　ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ３，０，３０％アセトニトリルに加え、０． ３５Ｍまで線状グランエンドのＮａＣ１で溶出した。該カラム溶出液を０Ｄ２１ ４でモニター観察した。単一ピークとしてペプチドが溶出し、組成分析によれば 、各々が、適当なモル比のアミノ酸を含有した（プロティン・ストラフチャー・ ラボラトリ−（Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ） 　、ウィスター・インスティテユート、フィル、ペンシルベニア州）。

Ｅ、細胞接着検定 実質的に、ルオスラチ（ＲｕａｓＬａｈｔｉ）らのメソッズ・エンザイモロール （Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、）　８２　：　８０３〜８３１　（１９８ ２）に記載されている接着検定では、ポリスチレンプレート（リンプロ（Ｌｉｎ ｂｒｏ）　７６−２０３　；非組織培養処理、フロー・ラボラドリース（Ｆｌｏ ｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　、マツククリーン、ヴアージニア州）を、野 生型および変異ｔａｔタンパク質、およびマトリックスタンパク質のビトロネク チンで、３７℃にて一夜コートした。ビトロネクチで、ＤＭＥＭで洗浄し、つい でＤＭＥＭｏ、１ｍｌを各ウェルに加えた。付着性Ｌ８筋芽細胞をトリプシン処 理により懸濁させ、トリプシン−抑制剤（０，５ｍｇ／ｍｌ　滅菌ＰＢＳ）で３ 回洗浄し；ＨＵＴ−７８、ＭＯＬＴ−４、およびＴＨＰ−１細胞をＰＢＳにて３ 回洗浄し：各細胞懸濁液１００μｌをクアドリブリケート（ｑｕａｄｒｉｐｌｉ ｃａｔｅ）にてウェルに加えた（Ｉ　Ｘ　１０’細胞／ｍｌ　ＤＭＥＭ）。

Ｔ−リンパ球および単球／マクロファージ細胞に対する公知のＨＩＶ−１親和性 のため、ＨＩＶ−１複製に有能なヒトＴ−リンパ球細胞株のＨＵＴ−７８および ＭＯＬＴ−４、およびヒト骨髄単球細胞株ＴＨＰ−１を選んだ。（例えば、キク カワ（Ｋ　１ｋｕｋａｖａ）ら、ジャーナル・オン・パイロロジー（Ｊ、Ｖｉｒ ｏｌ、）　５７゜１１５９　（１９８６）；レビー（Ｌ　ｅｖｙ）ら、サイエン ス（Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ）　（’７シントン・ディー−ノー　（Ｗａｓｈ、ＤＣ） ）、２３５．８４０　（１９８４）：ツチャ（Ｔｓｕｃｈｉｙａ）ら、インター ナショナル・ジャーナル・オン・カンサー（Ｉ　ｎｔ、　ＪＣａｎｃｅｒ）２６ ．１７１　（１９８０）参照）。その識別可能な接着特性のため、Ｌ８８細胞、 ラットの骨格筋肉細胞株を用いた。細胞をコートしたウェル中にて１時間インキ ュベートし、４％ホルマリンで固定し、１％トルイノンブルーで染色した。細胞 接着性を、５７０ｎＭにセットしたマイクロタイター・プレート・リーダー（ダ イナチック・ラボラドリース（Ｄｙｎａｔｅｅｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ） 　、シャンティイ、バージニア州）を用いて測定した。他の実験においては、該 細胞を、サイトカラシンＢおよびコルヒチンと別々にまたは組み合わせて、各々 １０μｇ／ｍｌで３０分間、４℃にてインキュベートし、ついでタンパク質−コ ートのウェルに加えた。

ｔａｔは試験した４種のすべての細胞株の細胞接着性を介在するにおいて非常に 効果的であった。該ｔａｔ−介在接着は用量依存性であり、半一最大細胞接着を 付与するｔａｔの被覆濃度は１と５μｇ／ｍｌの間にあった。各細胞株での、ｔ ａｔ−コートウェルへの接着性レベルは、対照マトリックスタンパク質で得られ る結合の最高レベルと同等であった。

ｔａｔに導入された単一のアミノ酸り、。−Ｅ置換（グルタミン酸により置換さ れたアスパラギン酸）は、ｔａｔ−介在細胞結合を有意に減少させるか、または 完全に排除した。ｔａｔのネットチャージ全体が影響を受けず、ＲＧＤ−ＲＧＥ 置換がフィブロネクチンへの細胞結合を排除することが示されているため（オバ ラ（Ｏｂａｒａ）ら、セル、５３　：　６４９〜６５７　（１９８８））　、Ｄ −Ｅ変化を選択した。該ｔａｔＤ−Ｅ変異は、Ｌ８細胞の接着性を完全に排除し 、ＨＵＴ−７８、ＭＯＬＴ−４およびＴＨＰ−１細胞の結合（４０〜９０％）を 減少させた。

該Ｌ８筋芽細胞は、ウェルを１２０μｇ／ｍｌまでの濃度でコートした時でさえ 、変異ＲＧＥ　ｔ　ａ　ｔタンパク質に接着しなかったのに対して、１μｇ／ｍ ｌまたはそれ以上でコートした野生型ＲＧＤ　ｔ　ａ　ｔタンパク質は効率よ（ 細胞接着を媒介した。

ＫＧＥ変異ｔａｔタンパク質もまた、Ｌ８細胞で細胞接着を完全に欠いた。加え て、他の細胞株のＫＧＥ　ｔ　ａ　を変異体への接着は、バンクグラウンドより もわずかに大きいだけであった。完全な用量応答を行うに十分な量のＫＧＥ変異 体を入手できなかったため、その接着は単一のタンパク質濃度（５μｇ／ｍｌ） で実施した。同様の量の抗−ｔａｔＭＡｂは、ＥＬＩＳＡ法により判断されるよ うに、野生型ｔａｊ、変異ＲＧＥまたは変異ＫＧＥ　ｔ　ａ　ｔタンパク質のい ずれがでコートしたウェルに結合するため、ＲＧＥおよびＫＧＥ変異ｔａｔタン パク質に対する細胞接着の欠乏は、ウェルに結合した変異ｔａｔの低レベルによ るものではないとすることができる。

ｔａｔ細胞接着におけるＲＧＤ部位での変異の影響は、細胞結合がインテグリン の関係を包含しうろことを示唆している。この可能性をさらに研究するために、 ＥＤＴＡ、細胞骨格遮断剤およびＲＧＤ−含有ペプチドの細胞接着に対する効果 を研究した。これらの研究で、骨格筋肉誘導のＬ８８細胞がインテグリン発現を 特徴付け、主にビトロネクチンに接着することが判明したため、例えば、ビーズ セカ−（Ｂ　１ｅｓｃｅｋｅｒ）　、ジャーナル・オン・イムノロジー（Ｊ、　 Ｉ＋ｍｍｕｎｏ１．）　、１４５．２０９　（１９９０）　、この細胞株を用い た。Ｌ８細胞の制限されたインテグリン分配は、該結果のさらに直接的な説明を も可能とする。

ｔａｔとＬ８細胞の間の相互作用は二価のカチオンに依存した。ＥＤＴＡの付加 は細胞接着を排除したが、Ｃａ”またはＭ　ｇ　２　”″のいずれかの付加によ り接着性は保たれた。加えて、細胞結合はサイトカラシンＢに加えてコルヒチン の存在下で排除されるため、細胞接着は無傷の細胞骨格を必要とした。これらの 結果はインテグリンー介在細胞接着と一致している（ルオスラチ（Ｒｕｏｓｌａ ｈｔｉ）ら、メソッズ・エンサイモール（Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、） 　８２　：　８０３〜８３１　（１９８２）およびルオスラチら、サイエン７、 　（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　（Ｗａｓｈ、ＤＣ）、２３旦＝４９１〜４９７　（１９ ８７）。

ｔａｔへのし、細胞接着もまた、合成ペプチドＧＲＧＤＳＰＫの付加により排除 される。ＲＧＤトリペプチドを有するこのペプチドは、１００μｇ／ｍｌよりも 高い濃度で存在する場合に、細胞接着をバックグラウンドレベルに減少させる。

対照マトリックスタンパク質ヒドロネクチンへのり、細胞接着は、ペプチドの同 様のレベルで抑制された。対照的に、ＲＡＤ配列を含有する、対照の合成ペプチ ドは５ｍｇ／ｍｌまでの濃度で細胞接着を遮断しなかった。これらの結果もまた 、インテグリンー介在細胞接着と一致している。ルオスラチら、メソッズ・エン サイモール、８２：８０３〜８３１　（１９８２）およびルオスラチ・イー（Ｒ ｕｏｓｌａｈｔｉ、　Ｅ、　）ら、サイエンス（Ｗａｓｈ、ＤＣ）、２３８　： 　４９１〜４９７　（１９８７）。

ｔａｔ−介在細胞接着性の興味のある観察は、Ｌ、筋芽細胞が接着後に円形を保 持しており、それに対してビトロネクチンに結合した場合、該Ｌ８細胞は拡散し 、平滑となり、多数の突起を有した。細胞拡散はまた、細胞培養処理の合成（ｐ ｌａｓｔｉｃ）またはポリ−リジンに非特異的に結合したし、細胞でも見られた 。

ｔａｔでの細胞拡散の不在はまた、Ｔ−リンパ球および骨髄単球細胞株でも示さ れた。ｔａｔに結合したＬ８細胞の明瞭な形態は、細胞骨格再構成に至る後−結 合事象が、ビトロネクチンのような細胞外マトリックスタンパク質に結合した細 胞と比較した、ｔａｔに結合した細胞では異なることを示唆している。

Ｆ、細胞摂取およびＣＡ　Ｔ検定 精製した野生型、ＲＧＥまたはＫＧＥ変異ｔａｔタンパクＷ　（２ｔｔｇ、４． ＩＸ　１０−”Ｍ）を、１０６個のＡ５細胞を含有するベトリ皿の培地（ＤＭＥ Ｍ／１００μＭクロロキン（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）　）に直接加えた。２４ 時間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで洗浄し、新たな培地を補給し、２４ 時間後に収穫した。細胞をＰＢＳにて２回洗浄し、溶解緩衝液（１ｍＭ　ＤＴＴ 、０．１％トリトンＸ−１００，１０％グリセロール、１０ｍＭ　トリス、ｐＨ ８，０）中に再懸濁させた。

凍結−解凍のサイクルを３回行った後、試料を遠心分離に付し、上澄液を除去し 、タンパク質含量をブラッドフォード（Ｂ　ｒａｄｆｏｒｄ）らのアナリティカ ル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　７２．　２４８　 （１９７６）による記載に従って測定した。

等濃度のＡ５試料を、以府に記載されているように（バレリー（Ｖａｌｅｒｉｅ ）ら、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　（Ｌｏｎｄ、）旦旦旦：　７８〜８１　 （１９８８））、タロラムフニニ＝−ル・アセチル・トランスフェラーゼ（ＣＡ Ｔ）活性について検定した。薄層クロマトグラフィーにより分離した非アセチル 化１４（−クロラムフェニコールおよびアセチル化形をフィルムに一夜照射した 後に削り取り、放射能の量を液体シンチレーションカウンター（ベックマン・イ ンストラメント（Ｅ　ｅｃｋｍａｎＩ　ｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）　、アーヴイン、 カリフォルニア州）にて測定した。相対的ＣＡＴ活性（＋／−標準偏差）を、少 なくとも３回の独立した検定からの野生型ｔａｔの変換％で割った変異ｔａｔの 変換％の割合より算定した。

精製した野生型ｔａｔタンパク質のこれら細胞への付加は、ＣＡＴ活性の著しい 増加をもたらした。この検定におけるＲＧＥ変異体のトランス作用活性（ｔｒａ ｎｓａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ａｖｔｉｖｉｔｙ）は、有意ではあるが、再生的に 野生型ｔａｔタンパク質を用いて得られるレベルの半分であった。この５０％減 少は、広範な投与範囲にわたって一貫して観察され、またＨＩＶ−Ｉ　ＬＴＲ− ＣＡＴ含有のプラスミドで一時的にトランスフェクションしたＬ８細胞でも観察 された。さらにまた、ＫＧＢ配列を有する倍の変異体は野生型ｔａｔのわずか１ ０分の１のトランス作用活性を有するだけであった。これらの結果は、ＲＧＤ− 介在ｔａｔ細胞接着が外生ｔａｔ−誘発のトランス作用を必要とすることを示し ている。

Ｇ、付加ＲＧＤオリゴペプチド疑似疑 似様同様験にて、３種のＲＧＤペプチド疑似体を、そのｔａｔタンパク質への細 胞接着抑制能について試験した。典型的なプロトコルは以下のとおりである：１ 、検定の２日前に、細胞を裂き、高生存力および定型的形態を保証した。１つの マイクロタイタープレートはｌＸｌ０’個の細胞を必要とする。

２、検定の１日前に、平坦な非組織培養処理のマイクロタイターＥＬＩＳＡプレ ートをｔａｔタンパク質でコートする。典型的には、興味のあるＲＧＤ＝含有タ ンパク質またはペプチドを、最終濃度５μｇ／ｍｌに希釈しくＰ　Ｂ　Ｓ１０． ００５％ＮａＮ５）　、１００μｍを各ウェルに加える。この操作には、マルチ チャンネルのマイクロピペッタ−が望ましく、各ウェルにおけるタコ／バク質濃 度の再現性を保証する。より高または低濃度のタンパク質（経験的に測定）は、 適切な結合を得るに必要であるかもしれないことに留意すべきである。加えて、 少なくとも３つのウェルにはＰ　Ｂ　Ｓ　／　Ｎａ　！’；　Ｓを単独で加え、 陰性の対照に供するべきである。さらに、陽性対照のウェルも望まれる。プレー トを３７℃にて一夜インキユベートする。

３、簡単に暴露した（すなわち、３０秒間）後、細胞を注意してフラスコから１ 、Ｑｍｌの０．４％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液に移す。０．５ｍｇ／ｍ１　）リ プシン抑制剤１０ｍ１を速やかに加え、細胞を臨床用マイクロピペッタにて３０ ０Ｑｒｐｍで回転させる。細胞ペレットをトリプシン−抑制剤（１０ｍｌ／洗浄 ）にて２回以上洗浄する。細胞を適当容量の滅菌ＰＢＳ中に再懸濁させ、生細胞 の総数を測定する。撹拌後、細胞濃度を、血清不含ＤＭＥＭ中、１０６細胞／ｍ ｌに調整する。

４、マイクロタイタープレートをＰＢＳにて３回洗浄し、いずれの非結合物質も 除去する。これらの洗浄は自動プレートＥＬＩＳＡプレート洗浄器を用いて実施 することができ、または別法としてウェルを手に持つ噴出ボトル（ｈａｎｄ−ｈ ｅｌｄｓｑｕｉｒｔ　ｂｏｔｔｌｅ）を用いてリンスすることができる。ついで 、血清不含Ｄ　Ｍ　Ｅ　Ｍ１００μｌを各タンパク質−コートのウェルに加える 。ペプチドを８２０１０．１Ｍ酢酸または血清不含ＤＭＥＭ中に希釈する。ペプ チドを細胞と共に４℃にて３０〜６０分間回転装置上でブレインキュベートする 。

５　ついで、細胞懸濁液１００μｍを所望のウェルに加え、プレートを組織培養 インキュベーター（５％Ｃ○２．３７℃）中に１時間入れる。インキュベートを ２時間の長い間続行することができる。

６、プレートを速やかに逆にし、固定して２回振盪し、ウェルを静かにＰＢＳで ２回リンスする。定着剤（４％フォルマリン／ＰＢＳ）１００μｌを各ウェルに 速やかに加え、室温にて１５分間インキュベートする。

７、プレートを速やかに逆にし、固定して２回振盪し、ウェルを静かにＰＢＳで ２回リンスする。染色溶液（１％トルイジンブルー／４％定着剤）１００μｍを 各ウェルに加え、室温にて２０分間インキュベートする。

８　プレートを速やかに逆にし、固定して２回振盪し、過剰の染色剤がすべて除 去されるまで、ウェルをｄＨ２０で３〜５回リンスする。プレートを傾けて風乾 させる。

９、接着性を、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用い、５７０ｎｍにセットした光 学濃度で測定する。

１　０．０５　０．０９　０．０５　０．１１２　０．０７　０．０９　０．０ ７　０．１１３　０．０９　０．０７　０．０６　０．０６１、シクロ（１，６ ）グリシルプロリニルアルギニルグリシルアスパルチル−Ｄ−プロリン： ２、シクロ（１，６）プロリニルグリンニルアルギニルグリシニルアスバルチル ーＤ−プロリン： ３、シクロ（１，５）Ｄ−アラニルアルギニルグリシニルアスパルチルセリン対 照ウェル（すなわち、ペプチド不含）からのＯＤ読みは、Ｌ８細胞の場合で０． １１であり、ＭＯＬＴ−４１１胞の場合テ０．１８Ｔあった。

前記操作と同様のＣＡＴ検定にて、ＲＧＤペプチド疑似体を細胞と、ｔａｔと共 に、洗浄前に、少なくとも６時間、好ましくは一夜インキユベートし、ペプチド Ｎｏ、ｌは外生トランス作用を有意に抑制することがわかった。他のペプチドで は部分抑制が観察された。ペプチドＧＲＧＤＳＰＫを包含するある種の他のペプ チドでは、抑制は観察されなかった。

前記の実施例は、ＲＧＤ−介在ｔａｔ細胞接着の抑制が、ｔａｔ−誘発のトラン ス作用を抑制し、そのため免疫不全ウィルス感染に伴う疾病の進行を抑制するた めの有効な方法であることを示す。

前記の記載および実施例は、本発明の実施および使用の方法、その好ましい具体 例を開示するものであり、何ら本発明を制限するものではなく、本発明は以下の 請求の範囲内に含まれるすべての変形および修飾をも包含する。

要約書 ｔａｔタンパク質ＲＧＤ−介在細胞接着を抑制する薬剤からなる医薬組成物は、 動物免疫不全ウィルスにおける感染に伴う疾病の進行を抑制するのに有用である 。

国際調査報告

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．免疫不全ウイルスｔａｔタンパク質中のＲＧＤ細胞接着機能の抑制剤を動物 に投与することからなる、免疫不全ウイルスによる動物の感染に伴う疾病進行の 阻害方法。
2. ２．抑制剤がＲＧＤ−介在ｔａｔ細胞接着を抑制する請求項１記載の方法。
3. ３．抑制剤がｔａｔＲＧＤ配列のＲＧＤ含有ペプチド擬似体またはｔａｔ−ＲＧ Ｄ結合剤である請求項２記載の方法。
4. ４．抑制剤が部分配列−ＲＧＤ−を有する請求項３記載の方法。
5. ５．抑制剤がｔａｔＲＧＤ結合部位に対する抗体である請求項３記載の方法。
6. ６．免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求項１記載の方法。
7. ７．疾病がカポシ肉腫である請求項５記載の方法。
8. ８．医薬上許容される担体中、免疫不全ウイルスｔａｔタンパク質中のＲＧＤ細 胞接着機能の抑制剤からなる医薬組成物。
9. ９．免疫不全ウイルスによる感染症の治療用医薬の製造における、免疫不全ウイ ルスｔａｔタンパク質のＲＧＤ細胞接着機能の抑制剤の使用。
10. １０．抑制剤がＲＧＤ配列のＲＧＤ−含有ペプチド疑似体またはｔａｔＲＧＤ結 合剤である請求項９記載の使用。
11. １１．抑制剤が部分的配列−ＲＧＤ−を有する請求項１０記載の使用。
12. １２．抑制剤がｔａｔ結合部位に対する抗体である請求項１０記載の使用。
13. １３．免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求項９記載の使用。