SK284116B6 - Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ich obsahuje, a ich použitie - Google Patents

Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ich obsahuje, a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK284116B6
SK284116B6 SK493-2002A SK4932002A SK284116B6 SK 284116 B6 SK284116 B6 SK 284116B6 SK 4932002 A SK4932002 A SK 4932002A SK 284116 B6 SK284116 B6 SK 284116B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
mmol
title compound
preparation
solution
acid
Prior art date
Application number
SK493-2002A
Other languages
English (en)
Inventor
Bruce A. Dressman
James E. Fritz
Marlys Hammond
William J. Hornback
Stephen W. Kaldor
Vincent J. Kalish
John E. Munroe
Siegfried Heinz Reich
John H. Tatlock
Timothy A. Shepherd
Michael J. Rodriguez
Louis N. Jungheim
Original Assignee
Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agouron Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Publication of SK284116B6 publication Critical patent/SK284116B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/28—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C237/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/36—Radicals substituted by singly-bound nitrogen atoms
    • C07D213/40—Acylated substituent nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/50—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C07D217/06—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines with the ring nitrogen atom acylated by carboxylic or carbonic acids, or with sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07F9/576—Six-membered rings
    • C07F9/62—Isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Optical Couplings Of Light Guides (AREA)

Abstract

Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ako účinnú látku obsahuje aspoň jednu zlúčeninu podľa vynálezu v spojení s farmaceuticky prijateľným nosičom; použitie karboxamidových zlúčenín podľa vynálezu na výrobu farmaceutického prostriedku na inhibíciu HIV-proteázy.ŕ

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka karboxamidových zlúčenín, farmaceutického prostriedku, ktorý ich obsahuje, a ich použitia. Ide tu o nový rad chemických zlúčenín použiteľných ako inhibítory HlV-proteázy a ako antivírusové prostriedky.
Doterajší stav techniky
Syndróm získanej imunonedostatočností („acquired immune deficiency syndróme“) (AIDS) je pomerne nedávno známou chorobou alebo stavom zdravia. AIDS spôsobuje postupný rozpad imunitného systému tela a taktiež progresívne narušenie centrálneho a periférneho nervového systému. Od svojho počiatočného rozpoznania na začiatku roku 1980 sa AIDS rýchlo rozšíril a teraz dosiahol epidemiologických rozmerov v pomerne ohraničenej časti populácie. Intenzívny výskum viedol k objavu zodpovedného činiteľa - ľudského T. lymfotropného retrovírusu III („human T-lymphotropic retrovirus III“) (HTLV III), teraz bežne označovaného ako vírus ľudskej imunonedostatočností („hutnan immunodeficiency vírus“) či HIV.
HIV je členom triedy vírusov známych ako retrovírusy. Genóm retrovírusu je zložený z RNA, ktorá je prepísaná do DNA rezervnou transkripciou. Táto retrovírusová DNA sa potom stabilne integruje do bunkových chromozómov hostiteľa a s využitím replikačných pochodov hostiteľských buniek produkuje nové častice retrovírusu a infekcia pokračuje do ďalších buniek. Zdá sa, že HIV má zvláštnu afinitu k bunkám ľudských T-4 lymfocytov, ktoré majú životnú úlohu v imunitnom systéme tela. Infekcia týchto buniek bielych krviniek HIV vyčerpáva populáciu týchto bielych krviniek. Prípadne sa imunitný systém stáva neoperatívnym a neúčinným proti rôznym prípadným chorobám, akými sú okrem iných pneumocystická karinálna pneumónia, Karposiho sarkóm a karcinóm lymfatického systému.
Napriek tomu, že presný mechanizmus vzniku a pôsobenia vírusu HIV doteraz nie je známy, identifikácia vírusu viedla k určitému pokroku v kontrole choroby. Napríklad liek azidotymidín (AZT) sa ukázal byť účinným v inhibicii reverznej transkripcie retrovirusového genómu vírusu HIV, čo umožňuje kontrolu, ale v žiadnom prípade nie vyliečenie pacientov postihnutých AIDS. Pokračuje hľadanie liekov, ktoré vyliečia alebo aspoň poskytnú zvýšený stupeň kontroly nad smrtiacim vírusom HIV.
Replikácia retrovírusu bežne obsahuje posttranslačnú premenu polypeptidov. Túto premenu zabezpečuje vírusom kódovaný enzým HlV-proteáza. Takto poskytnuté zrelé polypeptidy potom následne pôsobia pri tvorbe a činnosti infekčných vírusov. Ak je táto molekulárna premena potlačená, je normálna produkcia HIV ukončená. Inhibítory HlV-proteázy môžu teda pôsobiť ako antivírusové prostriedky proti HIV.
HlV-proteáza je jedným z produktov translácie štruktúrnych proteínov HIV génu pol. Táto retrovírusová proteáza špecificky štiepi iné štrukturálne polypeptidy na určených miestach za vzniku nových aktivovaných štrukturálnych proteínov a enzýmov, a tak vykonáva kompetitivnu replikáciu viriónu. Samotná inhibícia HlV-proteázy potenciálnou zlúčeninou môže predchádzať provírusovej integrácii infikovaných T-lymfocytov v priebehu skorej fázy životného cyklu HfV-1 a tiež aj inhibovať proteolytické premeny vírusu v jeho neskoršom stupni. Navyše inhibítory proteázy môžu mať výhody v ľahšej dostupnosti i dlhšej životnosti vo víruse a nižšej toxicite proti v súčasnosti do stupným liekom možné vďaka ich špecifite k retrovírusovej proteáze.
V súlade s týmto vynálezom sa tu poskytuje nová trieda chemických zlúčenín, ktoré môžu inhibovať a/alebo blokovať aktivitu HlV-proteázy, čo zastavuje bujnenie vírusu HIV, farmaceutické prípravky obsahujúce tieto zlúčeniny a použitie zlúčenín ako inhibítorov HlV-proteázy.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu sú konkrétne ďalej (na str. 7 a 8) vymenované zlúčeniny, ktoré sa môžu priradiť ku karboxamidovým zlúčeninám všeobecného vzorca (IB)
(IB), v ktorom
R1 je aryl alebo S-aryl, kde aryl znamená 5 až 14-článkový karbocyklický alebo heterocyklický, monocyklický alebo polycyklický aromatický kruh, v ktorom heteroatómy sa vyberú z atómu dusíka, kyslíka a síry,
X1 je skupina všeobecného vzorca,
kde
T2 je vodík, halogén alebo C, -C4 alkyl,
R3 je skupina,
alebo kde p je 4 alebo 5,
R4 je nezávisle vodík, Ci-C6 alkyl alebo hydroxy(C|-C4) alkyl, v ktorých alkyl sa prípadne substituuje skupinou, ktorá sa vyberie zo súboru zahrnujúceho a) merkaptoskupinu -SH, b) tioéterovú skupinu, ktorá sa vyberie zo súboru zahrnujúceho (i) C5-C14 S-aryl, kde aryl znamená ako pri R1, ii) fenyltioskupinu, iii) naftyltioskupinu, iv) S-heterocyklus, kde heterocyklus je 5 až 14-článkový, aromatický alebo čiastočne alebo úplne nasýtený, monocyklický alebo polycyklický kruh, ktorý má 1 až 3 heteroatómy, ktoré sa vyberú zo skupiny zahrnujúcej dusík, kyslík a síru, v) C5-C7 S-cykloalkyl, ktorý je čiastočne alebo úplne nasýtený, a vi) CrC8 S-alkyl, pričom aryl, heterocyklus, cykloalkyl a alkyl sa prípadne substitujú, c) nitroskupinu -NO2, d) aminoskupinu všeobecného vzorca -NL1!?, v kto2 rom L1 a L2 sa nezávisle vyberú zo skupiny zahrnujúcej (di) kyslík, (dii) C5-Cl4 karbocyklus, (diii) heterocyklus, ktorý je ako hore pod ad iv), (div) CrC8 alkyl, (dv) sulfonyl všeobecného vzorca -SO2-L3, v ktorom L3 je C5-C14 aryl, C -C8 alkyl, C5-C14cykloalkyl, ktorýje čiastočne alebo úplne nasýtený a mono- alebo polycyklický, C8-C14 heterocyklus alebo aminoskupina, ako sa definujú skôr, pričom aryl, alkyl, cykloalkyl a heterocyklus sa prípadne substituujú, (dvi) vodík a (dvii) skupinu všeobecného vzorca NC(O)L3, v ktorom L3 je CrC8 alkyl, C|-C8 alkoxyl, vodík alebo definovaná skupina -NĽL2, pričom alkyl a alkoxyl sa prípadne substituujú, e) C5-C|4 aryloxyl, f) halogén, g) hydroxyl, h) CrC8 alkoxyl, j) acyl, ktorým je skupina všeobecného vzorca L6C(O)L4, v ktorom L6 je jednoduchá väzba, -O alebo -N a L4 je CrC8 alkyl, aminoskupina, ktorá znamená ako sa uvádza v ad d), CrC8 alkoxyl alebo vodík, kde alkyl a alkoxyl sa prípadne substituujú, k) CrC8 alkyl, I) C5-Cl4 aryl, ktorý znamená, ako sa uvádza pri R1, m) C5-C14 cykloalkyl a n) čiastočne alebo úplne nasýtený C5-C|4 heterocyklus, ktorý znamená ako pod ad iv), pričom všetky skupiny zo substituentov a) až n) sa prípadne ešte substituujú substituentmi ad a) až n), a v prípade, že sa uvádza, že skupina sa môže prípadne substituovať, znamená to, že sa môže substituovať ktorýmkoľvek zo substituentov ad a) až n),
R5 a R6 sa nezávisle vyberú zo súboru vodík, hydroxyl, C|-C6 alkyl, Ci-C6 alkoxyl a hydroxy(C|-C4)alkyl, v ktorých alkyl sa prípadne substituuje uvedenými substituentmi ad a) až ad n),
Z1 je skupina všeobecných vzorcov
kde aje 1, 2, 3, 4 alebo 5, b je 1 alebo 2, c je 1 alebo 2, d je 1, 2, 3 alebo 4, každá zo skupín R7 je nezávisle vodík, hydroxyl, merkaptoskupina, halogén, aminoskupina, (C1-C4)alkylaminoskupina, di(ClL-C4)alkylaminoskupina, kde aminoskupina znamená ako v ad d), nitroskupina, karboxyl, C|-C6 alkyl, C,-Q alkoxyl, C -C4 alkyltioskupina, halogén(CrC4)alkyl, hydroxy(C]-C4)alkyl, CrC4 alkyltio(C|-C4)-alkyl, CrC4 alkoxykarbonyl, karbamoyl, N-(C1-C4)alkylkarbamoyl, C|-C4 alkylsulfonyl, kde sulfonyl znamená ako v (dv), N,N-di(Cr -C4)alkylkarbamoyl alebo Ci-C4 alkyl-sulfonylaminoskupina, kde sulfonyl znamená ako v (dv) a aminoskupina znamená ako v ad d), v ktorých alkyl a alkoxyl sa prípadne substituujú substituentmi uvedenými pod ad a) až ad n),
A1 a A2 sú nezávisle -CH2- alebo -N(R8)-,
A3 a A4 sú nezívisle -CH- alebo -N-,
A5 a A6 sú nezávisle - CH2- alebo -N(R9)-,
A7 a A8 sú nezávisle -CH- alebo -N-,
R8 je vodík alebo C,-C4 alkyl,
R9 je vodík alebo C,-C4 alkyl a
T2 je vodík alebo C[-C4 alkyl, pričom alkyl v R8, R9 a T2 sa prípadne substituuje substituentmi uvedenými pod ad a) až ad n), s výhradou, že (1) jedna zo skupín A1 a A2 musí byť -N(R8)-, (2) obidve skupiny A1 a A2 nemôžu byť -N(R8), (3) obidve skupiny A3 a A4 nemôžu byť -N-, (4) jedna zo skupín A5 a A6 musí byť -N(R)9-, (5) obidve skupiny A5 a A6 nemôžu byť -N(R9)- a (6) obidve skupiny A7 a A8 nemôžu byť -N-, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
Jednu výhodnú skupinu zlúčenín podľa predloženého vynálezu tvoria zlúčeniny všeobecného vzorca (IB), v ktorom
T2 je vodík alebo metyl a R3 je ako v nároku 1,
Z1 je skupina všeobecných vzorcov
v ktorých K je vodík, Cj-C4 alkyl, prípadne substituovaný substituentmi uvedenými v nároku 1 pod ad a) až ad n), halogén, nitroskupina, aminoskupina, ktorá je ako v nároku 1, alebo hydroxyl, aje 1,2 alebo 3, c je 1, a
R1 je ako v nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
Druhú výhodnú skupinu zlúčenín podľa predloženého vynálezu tvoria zlúčeniny všeobecného vzorca (IB), v ktorom
R7 je vodík, metyl, etyl, hydroxyl, aminoskupina, ktorá je ako v nároku 1, alebo chlór,
R1 je -S-fenyl alebo -S-naft-2-yl,
R3 je -C(O)NR4R4, kde R4 je ako v nároku 1, a
X1 je ako v nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
SK 284116 Β6
Tretiu výhodnú skupinu zlúčenín podľa predloženého vynálezu predstavujú zlúčeniny všeobecného vzorca (IB), v ktorom
R7a je vodík, metyl, etyl, chlór, bróm alebo fluór,
R7b je vodík, hydroxyl, chlór alebo aminoskupina, ktorá je ako v nároku 1,
R7cje vodík, hydroxyl alebo aminoskupina, ktorá je ako v nároku 1,
R3 je - C(O)NH(terc-butyl) a
R1 a X sú ako v nároku 1, alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
Podstatou vynálezu sú nasledujúce konkrétne zlúčeniny:
[2'R-(2'Ä*,3'S*)]-N-terc-butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(l,2,3,4-tetrahydrochinolin-5-yl)pentyl]benzamid, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyl)pentyljbenzamid, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, [2'R-(2 ’R*,3'S*)]-N-terc-butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naň-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3,5-diaminofenyl)pentyljbenzamid, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyl)pentyl]-l-naftylamid, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ a [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-chlór-3-aminofenyl)pentyl]-l-naftylamid, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
Predmetom vynálezu sú tiež uvedené konkrétne zlúčeniny na použitie ako farmaceutický prostriedok.
Ešte ďalším predmetom vynálezu je farmaceutický prostriedok, ktorý ako účinnú látku obsahuje v účinnom množstve aspoň jednu uvedenú konkrétnu karboxamidovú zlúčeninu v spojení s farmaceutický prijateľným nosičom.
Ešte ďalším predmetom vynálezu je použitie uvedených konkrétnych karboxamidových zlúčenín na výrobu farmaceutického prostriedku inhibujúceho HlV-proteázy.
Predložený vynález poskytuje nové zlúčeniny zodpovedajúce všeobecnému vzorcu (IB) uvedenému skôr, ktoré sú užitočné na liečenie infekcie HIV a/alebo AIDS.
Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť proliečivá, ktoré môžu slúžiť na zlepšenie farmaceutických vlastností zlúčenín, ako sú farmakokinetické vlastnosti, napr. zlepšená biologická dostupnosť alebo rozpustnosť. Príprava proliečiv sa môže uskutočniť reakciou zlúčeniny vzorca (IB), v ktorej aspoň jedna zo skupín Q4-Q8 je -O-H, s napr. aktivovanými aminoacylovými, fosfátovými alebo hemisukcinylovými derivátmi.
Všetky teplotné údaje tu uvedené sú v stupňoch Celsia (°C). Všetky koncentračné jednotky tu použité sú jednotky hmotnostné (hmotnostný zlomok) okrem kvapalín, kde sú jednotky objemové (objemový zlomok).
Termín „alkyl“, ako je tu používaný, sa vzťahuje na lineárne alebo rozvetvené uhlíkaté reťazce, výhodne tie, ktoré majú 1 - 8, výhodnejšie 1 - 6, najvýhodnejšie 1 - 4 atómy uhlíka. Termín „C|-C6 alkyl“ predstavuje lineárne alebo rozvetvené 1 - 6 -uhlíkaté reťazce, napr. metyl, etyl, n-pro pyl, izopropyl, butyl, izobutyl, sek-butyl, terc-butyl, pentyl, neopentyl, hexyl, izohexyl a podobne. Termín „Cr -C6 alkyl“ obsahuje vo svojom definičnom odbore termín „C,-C4 alkyl“
Termín „cykloalkyl“ predstavuje nasýtené alebo čiastočne nasýtené, monocyklické alebo polycyklické uhľovodíkové systémy, ktoré majú výhodne 5-14 atómov uhlíka v cykle. Napríklad termín „cykloalkyl“ predstavuje monocyklické systémy, ktoré majú 3 - 7, výhodnejšie 3-6 atómov uhlíka, akými sú cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl a pod. Príkladom cykloalkylovej skupiny je C5-C7 cykloalkyl, ktorý má nasýtený uhľovodíkový cyklický skelet obsahujúci 5-7 atómov uhlíka.
Termín „alkoxyl“ predstavuje -O-alkyl. Príkladom alkoxylovej skupiny je CrC6 alkoxyl, ktorý predstavuje lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až šiestimi atómami uhlíka naviazaný na atóm kyslíka. Napríklad Cj-C(, alkoxylovej skupiny obsahujú metoxyl, etoxyl, propoxyl, izopropoxyl, butoxyl, sek-butoxyl, terc-butoxyl, pentoxyl, hexoxyl a podobne. CrCe alkoxyl obsahuje vo svojom definičnom odbore CrC4 alkoxyl.
Termín „aryl“, ako je tu používaný, sa vzťahuje na karbocyklické alebo hetero-cyklické aromatické, 5-14 -členné monocyklické alebo polycyklické systémy. Napríklad arylové skupiny predstavujú fenyl, naftyl, antryl, fenantryl, tienyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, furyl, izotiazolyl, furazanyl, izoxazolyl, tiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, triazinyl, benzo[ŕ>]tienyl, nafto[2,3-b]tiantrenyl, izobenzofuryl, chromenyl, xantenyl, fenoxatienyl, indolizinyl, izoindolyl, indolyl, indazolyl, purinyl, izochinolyl, cinnolyl, ftalazinyl, naftyridinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, benzotiazolyl, benzimidazolyl, tetrahydrochinolyl, chinolinyl, pteridínyl, karbazolyl, b-karbolinyl, fenantridinyl, akrydinyl, pterimidinyl, fenantrolinyl, fenazinyl, fenotiazinyl, pyridazinyl a fenoxazinyl.
Termín „aryloxyl“ predstavuje skupinu -O-aryl.
Termín „hydrolyzovateľná skupina“ je skupina, ktorá, ak je naviazaná na kyslík, tvorí ester, ktorý môže byť in vivo hydrolyzovaný na hydroxylovú skupinu. Príklady hydrolyzovateľných skupín, ktoré môžu byť prípadne substituované, zastupujú acylové, sulfonátové a fosfátové funkčné skupiny. Napríklad tieto hydrolyzovateľné skupiny obsahujú blokovaný alebo neblokovaný zvyšok aminokyseliny, hemisukcinátový alebo nikotinátový zvyšok.
Termín „halogén“ predstavuje chlór, fluór, bróm alebo jód.
Termín „karbocyklus“ predstavuje aromatický, nasýtený alebo čiastočne nenasýtený, 5-14 -členný monocyklický alebo polycyklický systém, ako je 5 - 7 -členný monocyklický alebo 7-10 -členný bicyklický systém, v ktorom všetky atómy viazané v cykle sú atómy uhlíka.
Termín „heterocyklus“ predstavuje aromatický, nasýtený alebo čiastočne nasýtený, 5 - 14-členný, monocyklický alebo polycyklický systém, akým je 5 - 7 -členný monocyklický alebo 7-10 -členný bicyklický systém, ktorý má 1 - 3 heteroatómy vybrané zo súboru: dusík, kyslík a síra, a v ktorom ktorýkoľvek heteroatóm dusíka alebo síry môže byť prípadne oxidovaný a ktorýkoľvek heteroatóm dusíka môže byť prípadne kvartemizovaný. Heterocyklický systém môže byť pripojený na ktoromkoľvek vhodnom heteroatóme alebo atóme uhlíka. Príklady takých heterocyklov predstavujú dekahydroizochinolyl, oktahydrotieno[3,2-cjpyridyl, piperidyl, piperazinyl, azepinyl, pyrolyl, pyrolidinyl, pyrazolyl, pyrazolidinyl, imidazolyl, izobenzofuryl, furazanyl, imidazolyl, imidazolidinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, oxazolyl, oxazolidinyl, izoxazolyl, tiantrenyl, triazinyl, izoxazolidinyl, morfolinyl, tiazolyl,
SK 284116 Β6 tiazolidinyl, izotiazolyl, chinuklidinyl, izotiazolidinyl, indolyl, chinolyl, chromenyl, xantenyl, izochinolyl, benzimidazolyl, tiadiazolyl, benzopyranyl, benzotiazolyl, benzazolyl, furyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tienyl, benzotienyl, benzo[Z>]tienyl, nafto[2,3-Z>] tienyl, tiomorfolinyl, tiomorfolinylsulfoxid, tiomorfolinylsulfón, oxadiazolyl, triazolyl, tetrahydrochinolyl, tetrahydroizochinolyl, fenoxatienyl, indolizinyl, izoindolyl, indazolyl, purinyl, chinolyl, ftalazinyl, naftyridinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, cinnolinyl, pteridinyl, karbazolyl, b-karbolinyl, fenantridinyl, akridinyl, pterimidinyl, fenantrolinyl, fenazinyl, izotiazolyl, fenotiazinyl, fenoxazinyl.
Termín „tioéter“ predstavuje S-arylové skupiny, ako je fenyltio a naftyltio, S-heterocyklus, ktorý je nasýtený alebo čiastočne nasýtený, S-(C5-C7) cykloalkyl a S-alkyl, ako je CrC6 alkyltioskupina. V tioéteri môže byť arylová, heterocyklická, cykloalkylová alebo alkylová skupina pripadne substituovaná. Príkladom tioéteru je „C;-Cs alkyltioskupina“, ktorá predstavuje lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až šiestimi atómami uhlíka naviazaný na atóm síry. Príklady C|-C6 alkyltioskupín predstavujú metyltio-, etyltio-, propyltio-, izopropyltio-, butyltio-, sekbutyltio-, terc-butyltio-, pentyltio-, hexyltioskupinu a podobne.
Termín „merkaptoskupina“ predstavuje -SH.
Termín aminoskupina predstavuje -ΝΙ^Ε;, kde Lj a L2 sú výhodne nezávisle vybrané zo súboru: kyslík, karbocyklus, heterocyklus, alkyl, sulfonyl a vodík, alebo NC(O)L3, kde L3 je výhodne alkyl, alkoxyl, vodík alebo -NL1L2. Arylové, alkylové alebo alkoxylové skupiny môžu byť prípadne substituované. Príkladom aminoskupiny je C|-C4 alkylaminoskupina, ktorá predstavuje lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi uhlíkovými atómami naviazanými na aminoskupinu. Napríklad CrC4 alkylaminoskupiny predstavujú metylamino- etylamino-, propylamino-, izopropylamino- butylamino- sek-butylaminoskupinu a pod. Iným príkladom aminoskupiny je di(CrC4) alkylaminoskupina, ktorá obsahuje dva lineárne alebo rozvetvené alkylové reťazce, z ktorých každý má 1 - 4 atómy uhlíka, naviazané na bežnú aminoskupinu. Napríklad di(C]-C4) alkylaminoskupiny predstavujú dimetylamino-, etylmetylamino-metylpropylamino-, etylizopropylamino- butylmetylamino-, sek-butylmetylaminoskupinu a podobne. Príkladom aminoskupiny je CrC4 alkylsulfonylaminoskupina, ktorá má lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec, ktorý tvoria 1 - 4 atómy uhlíka, ktorý je pripojený na sulfonylamínový zvyšok. Napr. CrC4 alkylsulfonylaminoskupiny predstavujú metylsulfonylamino-, etylsulfonylamino-, propylsulfonylamino-, izopropylsulfonylamino-, butylsulfonylamino-, sek-butylsulfonylamino a terc-butylsulfonylaminoskupinu a pod.
Termín „acyl“ predstavuje L6C(O)L4, kde L6 je jednoduchá väzba, -O alebo -N, a kde L4 je výhodne alkyl, aminoskupina, hydroxyl, alkoxyl alebo vodík. Alkylové a alkoxylové skupiny môžu byť prípadne substituované. Napríklad acylovou skupinou je CrC4 alkoxykarbonyl, v ktorom lineárny alebo rozvetvený alkoxylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka je pripojený na karbonylový zvyšok. Napríklad CrC4 alkoxykarbonylová skupina predstavuje metoxykarbonyl, etoxykarbonyl, propoxykarbo-nyl, izopropoxykarbonyl, butoxykarbonyl a podobne. Iným príkladom acylovej skupiny je karboxyl, v ktorom L6 je jednoduchá väzba a L4je alkoxyl, vodík alebo hydroxyl. Ďalším príkladom acylovej skupiny je N-(C!-C4) alkoxykarbamoyl (L6 je jednoduchá väzba a L4 je aminoskupina), v ktorom je lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s 1 - 4 atómami uhlíka naviazaný na dusíkový atóm karba moylového zvyšku. Napríklad N-(CrC4) alkylkarbamoylová skupina predstavuje N-metylkarbamoyl, N-etylkarbamoyl, N-propylkarbamoyl, N-izopropylkarbamoyl, N-butylkarbamoyl, N-terc-butylkarbamoyl a podobne. Ešte iným príkladom acylovej skupiny je N,N-di(CrC4) alkylkarbamoyl, ktorý má dva lineárne alebo rozvetvené alkylové reťazce, z ktorých každý má 1 - 4 atómy uhlíka, naviazané na dusíkový atóm karbamoylového zvyšku. Napr. N,N-di(C|-C4) alkylkarbamoylová skupina obsahuje N,N-dimetylkarbamoyl, Ν,Ν-etylmetylkarbamoyl, N,N-metylpropylkarbamoyl, N,N-etylizopropylkarbamoyl, Ν,Ν-butylmetylkarbamoyl, Ν,Ν-sek-butyletylkarbamoyl a podobne.
Termín „sulfmyl“ predstavuje -SO-L5, v ktorom L5je výhodne alkyl, aminoskupina, aryl, cykloalkyl alebo heterocyklus. Alkyl, aryl, cykloalkyl a heterocyklus môžu byť prípadne substituované.
Termín „sulfonyl“ predstavuje -SO2-L5, v ktorom L5je výhodne alkyl, aryl, cykloalkyl, heterocyklus alebo aminoskupina. Alkyl, aryl, cykloalkyl a heterocyklus môžu byť prípadne substituované. Príkladom sulfonylovej skupiny je CrC4 alkylsulfonyl, v ktorom je lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka naviazaný na sulfonylový zvyšok. Napríklad CrC4 alkyl sulfonylová skupina predstavuje metylsulfonyl, etylsulfonyl, propylsulfonyl, izopropylsulfonyl, butylsulfonyl, sek-butylsulfonyl, terc-butylsulfonyl a podobne.
Ako je naznačené skôr, celý rad skupín môže byť prípadne substituovaných. Pre všetky vzorce tu uvedené môžu byť všetky chemické skupiny substituované alebo nesubstituované, pokiaľ väzbové pomery v týchto skupinách dovoľujú takéto substitúcie, dokonca aj keď definície chemických skupín explicitne neudávajú, že skupina je substituovaná alebo nesubstituovaná. Napríklad, ak je jednoducho určená ako alkylová, môže ísť o substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl. Príklady substituentov alkylových alebo arylových skupín predstavujú merkaptoskupina, tioéter, nitroskupina (NO2) či aminoskupina, aryloxyl, halogén, hydroxyl, alkoxyl a acyl, ako aj aryl, cykloalkyl a nasýtené alebo čiastočne nasýtené heterocykly. Príklady substituentov heterocyklu alebo cykloalkylu predstavujú substituenty uvedené pre alkyl alebo aryl, ako aj v prípade arylu alebo alkylu.
Príklady substituovaných arylov obsahujú fenyl alebo naftyl substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi, výhodne jedným až troma substituentmi, nezávisle vybranými zo súboru: halogén, hydroxyl, morfolinvl(C|-C4) alkoxykarbonyl, pyridyl(CrC4) alkoxykarbonyl, halogénfCj-C4) alkyl, CrC4 alkyl, C -C4 alkoxyl, karboxyl, CrC4 alkoxykarbonyl, karbamoyl, N-(C|-C4) alkylkarbamoyl, aminoskupina, (Cj-Cjalkylaminoskupina, di(CrC4) alkylaminoskupina alebo skupina so vzorcom -(CH2)a-R7, kde a je 1, 2, 3 alebo 4 a R7 je hydroxyl, C|-C4 alkoxyl, karboxyl, Cr -C4 alkoxykarbonyl, aminoskupina, karbamoyl, (C]-C4) alkylaminoskupina alebo di(C] -C4) alkylaminoskupina.
Iným substituovaným alkylom je halogén(Ci-C4) alkyl, ktorý predstavuje lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka s naviazanými 1 - 3 atómami halogénu. Napríklad halogén(CrC4) alkylové skupiny predstavujú chlórmetyl, 2-brómetyl, 1-chlórizopropyl, 3-fluórpropyl, 2,3-dibrómbutyl, 3-chlórizo-butyl, jódterc-butyl, trifluormetyl a podobne.
Iným substituovaným alkylom je hydroxy(Ci-C4) alkyl, ktorý predstavuje lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka s naviazanou hydroxylovou skupinou. Príkladmi hvdroxyfC·-C4) alkylových skupín sú hydroxymetyl, 2-hydroxyetyl, 3-hydroxypropyl, 2-hydroxyizopropyl, 4-hydroxybutyl a podobne.
SK 284116 Β6
Ešte iným substituovaným alkylom je CrC4 alkyltio(CrC4) alkyl, ktorý obsahuje lineárny alebo rozvetvený 1 - 4 uhlíkatý reťazec s naviazanou Ci-C4 alkyltioskupinou. Príklady CrC4 alkyltio(Ci-C4) alkylových skupín predstavujú metyltiometyl, etyltiometyl, propyltiopropyl, sck-butyltiometyl a podobne.
Iným príkladom substituovaného alkylu je heterocyklus(C|-C4) alkyl, čo je lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka s naviazaným heterocyklom. Príklady heterocyklus(Ci-C4) alkylov predstavujú pyrolylmetyl, chinolylmetyl, 1-indolyletyl, 2-furyletyl, 3-tien-2-ylpropyl, 1 -imidazolylizopropyl, 4-tiazolylbutyl a pod.
Ešte iným substituovaným alkylom je aryl(CrC4) alkyl, čo je lineárny alebo rozvetvený alkylový reťazec s jedným až štyrmi atómami uhlíka s naviazanou arylovou skupinou. Príklady aryl(CrC4) alkylových skupín predstavujú fenylmetyl, 2-fenyletyl, 3-naftylpropyl, 1-naftylizopropyl, 4-fenylbutyl a podobne.
Heterocyklus môže byť napríklad substituovaný 1, 2 alebo 3 substituentmi nezávisle vybranými zo súboru: halogén, halogén(C|-C4) alkyl, CrC4 alkyl, CrC4 alkoxyl, karboxyl, C|-C4 alkoxykarbonyl, karbamoyl, N-(CrC4) alkylkarbamoyl, aminoskupina, (CrC4) alkylaminoskupina, di(Ci-C4)alkylaminoskupina alebo skupinu so štruktúrou -(CH2)a-R7, kde aje 1, 2, 3 alebo 4 a R7 je hydroxyl, Ci-C4 alkoxyl, karboxyl, CrC4 alkoxykarbonyl, aminoskupina, karbamoyl, (C,-C4) alkylaminoskupina alebo di(CrC4) alkylaminoskupina.
Príklady substituovaných heterocyklov obsahujú 3-N-terc-butylkarboxamiddekahydroizochinolyl, 6-N-terc-butylkarboxamidoktahydrotieno[3,2-c]pyridyl, 3-mctylimidazolyl, 3-metoxypyridyl, 4-chlórchinolyl, 4-aminotiazolyl, 4-hydroxyfuryl, 6-chlór-chinoxalinyl, 3-etylpyridyl, 6-metoxybenzimidazolyl, 8-metylchinolyl, 4-metylizochinolyl, 6,8-dibrómchinolyl, 4,8-dimctylnaftyl, 2-metyl-l,2,3,4-tetrahydroizochinolyl, N-metylchinol-2-yl, 2-terc-butoxykarbonyl-l,2,3,4-izochinol-7-yl a podobne.
Cykloalkyl môže byť prípadne substituovaný 1, 2 alebo 3 substituentmi nezávisle vybranými zo súboru: halogén, halogén(C,-C4) alkyl, CrC4 alkyl, CrC4 alkoxyl, karboxyl, CrC4 alkoxykarbonyl, karbamoyl, N-(CrC4) karbamoyl, aminoskupina, (CrC4) alkylaminoskupina, di(CrC4) alkylaminoskupina alebo skupina so štruktúrou -(CH2)a-R7, kde aje 1, 2, 3 alebo 4 a R7 je hydroxyl, CrC4 alkoxyl, karboxyl, CrC4 alkoxykarbonyl, aminoskupina, karbamoyl, (Ci-C4) alkylaminoskupina alebo di(CrC4) alkylaminoskupina. Príklady substituovaných cykloalkylových skupín obsahujú 3-metylcyklopentyl, 4-etoxycyklohexyl, 5-karboxycykloheptyl, 6-chlórcyklohexyl a podobne.
Príklady substituovaných hydrolyzovateľných skupín predstavujú N-benzylglycyl, N-Cbz-L-valyl a N-metylnikotinát.
Zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, majú najmenej dve asymetrické centrá, označené hviezdičkou vo vzorci (IB) nižšie :
V dôsledku prítomnosti týchto asymetrických centier zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, sa môžu vyskytovať v akejkoľvek stereoizomémej forme a môžu byť použité ako zmesi stereoizomérov, ktoré môžu byť opticky aktívne alebo racemické alebo môžu byť použité samotné ako v podstate čisté stereoizoméry, t. j. najmenej 95 % čisté. Všetky asymetrické formy, samostatné stereoizoméry a ich kombinácie sú v rozsahu predloženého vynálezu.
Samostatné stereoizoméry môžu byť pripravené z im zodpovedajúcich prekurzorov postupmi ďalej opísanými, rozlíšením racemických zmesí alebo separáciou diastereoizomérov. Rozlíšenie môže byť uskutočnené v prítomnosti činidiel, chromatografiou alebo opakovanou kryštalizáciou, prípadne nejakou kombináciou týchto techník ako je známe zo súčasného stavu techniky. Ďalšie podrobnosti ohľadom rozlíšenia sa nájdu v Jacques a spol.: Enantiomers, Racemates and Resolutions; John Wiley & Sons, 1981.
Výhodné zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, sú v podstate čisté, t. j. viac než 50 % čisté. Výhodnejšie sú zlúčeniny najmenej 75 % čisté. Ešte výhodnejšie sú zlúčeniny viac než 90 % čisté. Ešte výhodnejšie sú zlúčeniny najmenej 97 % čisté a najvýhodnejšie najmenej 99 % čisté.
Ako je uvedené skôr, vynález obsahuje farmaceutický prijateľné soli zlúčenín definovaných vzorcom (I). Zlúčeniny, ktoré sú predmetom tohto vynálezu, môžu poskytovať dostatočne kyslé, dostatočne zásadité alebo obe tieto funkčné skupiny a zodpovedajúcim spôsobom reagovať s každou z mnohých anorganických alebo organických zásad, anorganických a organických kyselín za tvorby farmaceutický prijateľných solí.
Termín „farmaceutický prijateľná soľ“, ako je tu používaný sa vzťahuje na soli zlúčenín uvedeného vzorca, ktoré sú v podstate netoxické pre živé organizmy. Príklady farmaceutický prijateľných solí predstavujú tie soli, ktoré boli pripravené reakciou zlúčenín, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, s minerálnymi alebo organickými kyselinami alebo anorganickými zásadami. Reaktanty sú všeobecne kombinované vo vzájomných rozpúšťadlách, akými sú dietyléter alebo benzén pre adičné soli s kyselinami alebo voda či alkohol pre adičné soli so zásadami. Soli sa normálne vyzrážajú z roztoku v priebehu jednej hodiny až desiatich dní a môžu byť izolované filtráciou či iným bežným spôsobom. Tieto soli sú známe ako adičné soli kyselín alebo adičné soli zásad.
Kyseliny, ktoré môžu byť použité na tvorbu adičných solí s kyselinami, sú anorganické kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jódovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a podobne a organické kyseliny, ako je kyselina p-toluénsulfónová, kyselina metánsulfónová, kyselina šťaveľová, kyselina p-brómbenzénsulfónová, kyselina uhličitá, kyselina jantárová, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina octová a podobne.
Príkladom farmaceutický prijateľných solí je síran, disíran, hydrogensíran, siričitan, hydrogensiričitan, fosforečnan, monohydrogenfosforečnan, dihydrogenfosforečnan, metafosforečnan, difosforečnan, chlorid, bromid, jodid, octan, propionät, dekanoát, kaprylát, akrylát, formiát, izobutyrát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát, sukcinát, suberát, sebakát, fumarát, maleinát, butín-1,4-dioát, hexín-l,4-dioát, benzoát, chlórbenzoát, metylbenzoát, dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, metoxybenzoát, ftalát, sulfonát, xylénsulfonát, fenylacetát, fenylpropionát, fenylbutyrát, citrát, laktát, γ-hydroxybutyrát, glykolát, tartarát, metánsulfonát, propánsulfonát, naflalén-l-sulfonát, naňalén-2-sulfonát, mandľan a podobne.
SK 284116 Β6
Výhodné farmaceutický prijateľné adičné soli s kyselinami sú tvorené s minerálnymi kyselinami, ako je kyselina chlorovodíková a s organickými kyselinami, ako je kyselina maleinová a kyselina metánsulfónová.
Adičné soli so zásadami obsahujú soli odvodené od anorganických i organických zásad, ako sú hydroxid amónny, hydroxidy alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, uhličitany, hydrogenuhličitany a podobne. Zásady použiteľné na prípravu solí obsiahnutých v tomto vynáleze teda predstavujú hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid amónny, uhličitan draselný, uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, hydroxid vápenatý, uhličitan vápenatý a podobne. Forma draselných a sodných solí je zvlášť výhodná.
Je treba poznamenať, že sprievodný ión, ktorý tvorí časť akejkoľvek soli, ktorá je predmetom tohto vynálezu, nie je kritickou vlastnosťou, pokiaľ soľ ako celok je farmaceutický prijateľná a pokiaľ sprievodný ión neprináša nežiaduce kvality soli ako celku.
Určité zlúčeniny sú tie zlúčeniny uvedeného vzorca (IB), v ktorých:
X1 je
T2 je vodík alebo metyl,
Z1 je skupina, ktorá má štruktúru:
R7je vodík, CrC4 alkyl, halogén, nitroskupina, aminoskupina, hydroxyl a je 1,2 alebo 3 c je 1 alebo ich farmaceutický prijateľná soľ.
Z týchto zlúčenín sú ešte výhodnejšie zlúčeniny, v ktorých:
Z1je
I
,kde:
R7je vodík, metyl, etyl, hydroxyl, aminoskupina, chlór
R1 je -S-fenyl alebo -S-naft-2-yl
R3 je -C(O)NR4R4 alebo ich farmaceutický prijateľná soľ.
Z týchto zlúčenín sú zvlášť výhodnejšie tie zlúčeniny, v ktorých:
Z1 je
R7aje vodík, metyl, etyl, chlór, bróm alebo fluór
R7b je vodík, hydroxyl, chlór alebo aminoskupina
R7cje vodík, hydroxyl alebo aminoskupina
R’je-C(O)NH(terc-butyl) alebo ich farmaceutický prijateľná soľ.
Zlúčeniny vzorca (IB) môžu byť pripravené v súlade s nasledujúcou reakciou I.
Reakcia I
kde premenné sú, ako boli definované pre vzorec (IB) skôr uvedený.
Reakcia I je štandardná spájacia reakcia bežne používaná v syntéze amidov alebo peptidov, ktorá sa uskutočňuje reakciou vhodne substituovaného amínu vzorca (IA) s reaktantom, vhodne substituovanou karboxylovou kyselinou vzorca (IB), v aprotickom rozpúšťadle alebo zmesi rozpúšťadiel. Reakcia sa obvykle uskutočňuje v prítomnosti alebo neprítomnosti aktivačného činidla, výhodne v prítomnosti aktivačného činidla a v prítomnosti spájacieho („coupling“) činidla. Typické aprotické rozpúšťadlá na túto reakciu sú tetrahydrofurán a dimetylformamid alebo zmes týchto rozpúšťadiel. Reakcie sa obvykle uskutočňujú pri teplote od zhruba -30 °C do asi 25 °C. Amínový reaktant sa všeobecne používa v ekvimolámom pomere vzhľadom na druhý reaktant, karboxylovú kyselinu, v prítomnosti ekvimolámeho množstva až mierneho nadbytku spájacieho činidla. Obvyklými spájacími činidlami sú karbodiimidy ako dicyklohexylkarbodiimid (DCC) a N,N'-dietylkarbodiimid, imidazoly, ako je karbonyldiimidazol, ale aj činidlá, ako je chlorid kyseliny bis(2-oxo-3-oxazolidinyljfosfónovej („bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphinic chloride“) (ΒΟΡ-Cl) alebo N-etoxykarbonyl-2-etoxy-l,2-dihydrochinolín (EEDO). Výhodným spájacím činidlom pre túto reakciu je DCC. Aktivačné činidlo sa výhodne zúčastňuje na tejto reakcii; výhodným aktivačným činidlom je hydroxybenyotriazolhydrát (HOBT.H2O).
Akonáhle je reakcia ukončená, zlúčenina môže byť izolovaná, ak sa to vyžaduje, spôsobmi známymi zo stavu techniky, napríklad zlúčenina môže byť kryštalizovaná alebo zhromaždená filtráciou, reakčné rozpúšťadlo môže byť odstránené extrakciou, odparením, alebo dekantáciou. Zlúčenina môže byť ďalej čistená, ak sa to vyžaduje, bežnými technikami, ako je kryštalizácia alebo chromatografia na pevných nosičoch, akými sú silikagél alebo oxid hlinitý.
Východiskové zlúčeniny vzorca (IA) môžu byť pripravené v súlade so spôsobmi uvedenými v reakčnej schéme
B.
SK 284116 Β6
Reakčná schéma B
1. aktivácia kyseliny
2. tvorba amidu
R1 na zodpovedajúci acylchíorid alebo acylbromid reakciou s tionylchloridom, tionylbromidom, chloridom fosforitým, bromidom fosforitým, bromidom fosforečným alebo chloridom fosforečným podľa postupu a pri podmienkach známych zo súčasného stavu techniky.
Vhodné zlúčeniny
3. silná zásada, katalyzátor
(Weinrebov amid) sú komerčne dostupné alebo pripravené štandardnými postupmi známymi zo súčasného stavu techniky.
V reakcii B.2 acylchlorid alebo acylbromid pripravený v reakcii B.l obvykle reaguje s amoniakom alebo primárnym či sekundárnym aminom, ktorý má vzorec: H-NR4R4,
5. redukcia
6. odstránenie chránenia
RJ
Rbje chrániaca skupina aminoskupiny
R1, R3 a T2 sú definované skôr pre vzorec (IB) vrátane definícií R4, R5, R6 a pod.
Reakčná schéma B uvedená skôr je ukončená vykonaním reakcií 1 - 6 v uvedenom poradí. Akonáhle je reakcia ukončená, intermediáma zlúčenina môže byť izolovaná, ak je to žiadané, postupmi známymi zo súčasného stavu techniky, napr. zlúčenina môže byť kryštalizovaná a potom zhromaždená filtráciou alebo reakčné rozpúšťadlo môže byť odstránené extrakciou, odparením alebo dekantáciou. Intermediáma zlúčenina môže byť ďalej čistená, ak je to žiadané, bežnými technikami, ako je kryštalizácia alebo chromatografia na pevnom nosiči, ako je silikagél alebo oxid hlinitý pred uskutočnením ďalšieho kroku v reakčnej schéme.
V reakcii B.l je reakcia obvykle uskutočnená aktiváciou, ktorá je konverziou vhodne substituovanej zlúčeniny alebo kde R4, R5, R6 a p sú, ako boli definované skôr pre vzorec (IB), v nepolámom aprotickom rozpúšťadle alebo zmesi rozpúšťadiel v prítomnosti či neprítomnosti akceptora kyseliny a poskytujú zodpovedajúci amid. Reakcia sa obvykle uskutočňuje pri teplote od zhruba -20 °C do zhruba 25 °C. Typické rozpúšťadlá pre túto reakciu sú étery a chlórované uhľovodíky, výhodne dietyléter, chloroform alebo dichlórmetán. Výhodne je táto reakcia uskutočnená v prítomnosti akceptora kyseliny, ako je terciámy amín, výhodne trietylamín.
V reakcii B.3 amid pripravený v reakcii B.2 so silnou zásadou v prítomnosti solubilizačného činidla a poskytuje zodpovedajúci anión, ktorý potom reaguje v reakcii B.4 s Weinrebovým amidom a poskytuje ketón. Reakcia B.3 sa obvykle uskutočňuje v aprotickom rozpúšťadle pri teplote od zhruba -78 °C do zhruba 0 °C. Obvyklé zásady používané v reakcii B.3 sú lítiumamidové bázy a alkyllitne bázy, výhodne Ci-C4 alkyllitne bázy a lítne di(C]-C4) alkylamidové bázy. Obvyklými solubilizačnými činidlami pre reakciu B.3 sú tetrametyl(CrC4) alkyléndiaminy, výhodne tetrametyletyléndiamín. Reakcia B.4 sa obvykle uskutočňuje v aprotickom rozpúšťadle pri teplote od zhruba -80 °C do asi -40 °C. Obvyklé rozpúšťadlá pre reakcie B.3 a B.4 sú étery, výhodne tetrahydrofúrán. V reakcii B.4 je anión všeobecne používaný v množstve zhruba ekvimolámom až do zhruba trojnásobného nadbytku (moláme), výhodne v asi dvojmolámom nadbytku aniónu vzhľadom na reaktant - Weinrebov amid.
V reakcii B.5 je ketón pripravený v reakcii B.4 redukovaný vhodným redukčným činidlom na zodpovedajúci alkohol. Reakcia sa uskutočňuje v protickom rozpúšťadle pri teplote od zhruba -25 °C do zhruba 25 °C. Typické redukč
SK 284116 Β6 né činidlá pre túto reakciu sú tetrahydridoboritan sodný, tetrahydridoboritan lítny, diizobutylalán a bis(2-metoxyetoxy)dihydridohlinitan sodný. Výhodným redukčným činidlom je tetrahydridoboritan sodný. Obvyklé protické rozpúšťadlá pre túto reakciu sú alkoholy, výhodne etanol.
Reakcia B.6 je štandardná reakcia odstránenia chránenia aminoskupiny použitím postupov a metód známych zo súčasného stavu techniky a poskytuje amín, ktorý sa používa v uvedenej reakcii 1. Tento amín môže byť použitý na reakciu bez čistenia, aleje výhodné ho vopred čistiť.
Weinrebov amid použitý ako reaktant v reakcii B.4 je obvykle pripravovaný reakciou aminokyseliny s chránenou aminoskupinou s N-metoxy-N-metylamínom v prítomnosti aktivačného činidla, akceptora kyseliny a kondenzačného činidla. Reakcia sa obvykle uskutočňuje v aprotickom rozpúšťadle alebo zmesi rozpúšťadiel pri teplote od zhruba -25 °C do 25 °C. Výhodným aktivačným činidlom pre túto reakciu je HOBT.H2O. Výhodným akccptormi kyseliny sú terciáme amíny, výhodne trietylamín alebo N-metylmorfolin. Výhodným kondenzačným činidlom je l-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimidhydrogenchlorid. Weinrebov amid poskytnutý touto reakciou je výhodne izolovaný pred jeho použitím v reakcii B.4.
Zlúčeniny vzorca (IA), kde R1 je -S-aryl, sú pripravované v reakčnej schéme B najprv reakciou serínu s chránenou aminoskupinou s trifenylfosfínom a dietylazodikarboxylátom (DEAD) v aprotickom rozpúšťadle pri teplote od zhruba -80 °C do zhruba 0 °C za tvorby b-laktónu. Reakcia sa obvykle uskutočňuje v éteri, ako je tetrahydrofurán pri teplote od -80 °C do -50 °C. Ďalej je laktónový kruh otváraný reakciou laktónu s patrične substituovaným tioaniónom obsahujúcim štruktúru -S-aryl a poskytuje zlúčeninu,
Tioanión je výhodne tvorený reakciou zodpovedajúceho tiolu so silnou zásadou, ako je hydrid sodný alebo hydrid draselný. Táto reakcia sa obvykle uskutočňuje v aprotickom rozpúšťadle pri teplote od zhruba 0 °C do zhruba 40 °C v inertnej atmosfére, akou je dusík. Obvyklými rozpúšťadlami pre túto reakciu sú étery, výhodne tetrahydrofurán. Žiadaný amidický reaktant vzniká reakciou pripraveného reaktantu karboxylovej kyseliny s N-metoxy-N-metylamínom v prítomnosti aktivačného činidla, akceptora kyseliny a kondenzačného činidla, ako bolo v podstate opísané skôr.
Alternatívne môžu byť zlúčeniny vzorca (IA), kde R1 je -S-aryl, pripravené v reakčnej schéme B použitím postupu uvedeného v: Photaki, JACS 85, 1123 (1963) a Sasaki N.
A. a spol. : Tetrahedron Letters 28, 6069 (1987). Napr. zlúčeniny môžu byť pripravené reakciou dvojnásobne chráneného serínu (chránená karboxylová skupina i aminoskupina) s toluénsulfonylchloridom v prítomnosti dimetylaminopyridínu (DMAP) a akceptora kyseliny, ako je pyridín v aprotickom rozpúšťadle ako je dichlórmetán za vzniku zodpovedajúcej toluénsulfonovej zlúčeniny, ktorá potom môže reagovať s patrične substituovaným tioaniónom, ktorý obsahuje štruktúru -S-aryl. Tioanión je výhodne tvorený reakciou zodpovedajúceho tiolu so silnou zásadou, ako bolo uvedené skôr. Chránenie karboxylovej skupiny môže byť potom odstránené zo vznik novšieho dvojnásobne chráne ného aryltioalanínu za podmienok známych zo súčasného stavu techniky.
Podľa určitých označení sa medziprodukt na prípravu zlúčenín, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, pripraví nasledovne. Medziprodukt má vzorec (IV)
(IV), v ktorom:
R1 je aryl alebo-S-aryl
R10 je vodík alebo chrániaca skupina aminoskupiny
X'je jak uvedeno shora,
R3 je skupina, ktorá má štruktúru:
1)-C(O)-NR4R4
alebo
P je 4 alebo 5
R4 je v každom výskyte nezávisle vodík, CrC6 alkyl alebo hydroxy(C|-C4) alkyl
R5 a R6 sú nezávisle vybrané zo súboru, ktorý obsahuje: vodík, hydroxyl, C[-C6 alkyl, CrC6 alkoxyl alebo hydroxy(CrC6) alkyl alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ. Reaktant-karboxylová kyselina -vzorca (IB)
Z’-COOH (IB), použitý v reakčnej schéme I, v meradle obchodne neprístupnom, môže byť pripravený známymi postupmi. Najmä tento reaktant môže byť pripravený ďalšou substitúciou a/alebo oxidáciou komerčne dostupnej karbocyklickej alebo heterocyklickej zlúčeniny. Napr. karbocyklická alebo heterocyklická zlúčenina vzorca
Z’-CHj môže byť oxidovaná postupom známym v súčasnom stave techniky. Špecificky zlúčenina vzorca
Z'-CH3 môže reagovať s oxidačným činidlom, ako je oxid seleničitý alebo manganistan draselný pri teplotách od zhruba 0 °C do 200 °C vo vzájomne inertnom činidle, ako je voda alebo difenyléter.
Druhá metóda prípravy zlúčenín vzorca (IB) obsahuje chránenie vhodne substituovaných karboxylovaných karbocyklických alebo heterocyklických skupín skupinou, ktorá chráni karboxylovú skupinu a potom substitúciu karbocyklických alebo heterocyklických skupín postupmi známymi zo súčasného stavu techniky. Chrániaca skupina karboxylovej skupiny potom môže byť odstránená postupmi zná
SK 284116 Β6 mymi zo súčasného stavu techniky. Tým poskytne žiadaný reaktant karboxylovú kyselinu vzorca (IB).
Termín „skupina chrániaca karboxyl“, ako je používaný v špecifikácii, sa vzťahuje na substituenty karboxylovej skupiny bežne používané na blokovanie alebo chránenie karboxylovej skupiny v priebehu reakcií iných funkčných skupín zlúčeniny. Príklady skupín chrániacich karboxyl predstavujú metyl, p-nitrobenzyl, p-metylbenzyl, p-metoxybcnzyl, 3,4-dimetoxybenzyl, 2,4-dimetoxybenzyl, 2,4,6-trimetoxybenzyl, 2,4,6-tri-metylbenzyl, pentametylbenzyl, 3,4-metyléndioxybenzyl, benzhydryl, 4,4'-dimetoxybenzhydryl, 2,2’,4,4'-tetrametoxybenzhydryl, terc-butyl, terc-amyl, trityl, 4-metoxytrityl, 4,4-dimetoxytrityl, 4,4',4''-trimetoxytrityl, 2-fenylprop-2-yl, trimetylsilyl, terc-butyldimetylsilyl, fenacyl, 2,2,2-trichlóretyl, 2-(di(n-butyl)metylsilyl)etyl, p-toluén-sulfonyletyl, 4-nitrobenzylsuifonyIetyl, allyl, cinnamyl, 1-(trimetylsilylmetyl)-prop-l-en-3-yl a podobné zvyšky. Výhodný spôsob ochrany karboxylovej skupiny predstavuje premena karboxylového zvyšku na amidický zvyšok a potom hydrolýza amidu spätne poskytne žiadaný karboxylový substituent. Ďalšie príklady týchto skupín sa nájdu v E. Haslam: „Protective Groups in Organic Chemistry“, editor J. G. W. McOmie, Plénum Press, New York, N. Y., 1973, kapitola 5 a v T. W. Greeme: „Protective Groups in Organic Synthesis“, John Wiley & Sons, New York, N. Y., 1981, kapitola 5.
Výhodný postup chránenia karboxylovej skupiny predstavuje aktivácia karboxylovej skupiny nasledovaná tvorbou amidu. Napr. karboxylová skupina môže byť premenená na acylhalogenid, acylanhydrid, acylimidazol a pod., výhodne v prítomnosti akceptora kyseliny za tvorby aktivovanej karboxylovej skupiny. Obvykle sa používajú komerčne dostupné chloridy kyselín, čím sa vyhne potrebe ďalšej aktivácie kyseliny. Výhodnými akceptormi sú trialkylamíny, výhodne trietylamín. Reakcia sa obvykle uskutočňuje v aprotickom rozpúšťadle, ako je dietyléter, dichlórmetán a pod. Výhodným rozpúšťadlom je dichlórmetán. Výber rozpúšťadla nie je kritický, pokiaľ použité rozpúšťadlo je inertné v priebehu reakcie a reaktanty sú dostatočne rozpustené na dosiahnutie žiadanej reakcie. Aktivovaná karboxylová skupina potom môže reagovať s amínom R-NH2, napr. anilínom v aprotickom rozpúšťadle a poskytne amidický reaktant
Z'-C(O)HN-R’, ktorý môže byť ďalej substituovaný podľa známych postupov.
Amidický reaktant
Z'-C(O)HN-R' môže byť ďalej substituovaný dcprotonizáciou orto-skupiny
Z'za poskytnutia zodpovedajúceho aniónu nasledovanou reakciou s mnohými činidlami, ako sú alkylhalogenidy alebo halogenačné činidlá, ako je bróm. Amidický reaktant je všeobecne deprotonizovaný dvakrát s použitím dvoch ekvivalentov silnej zásady, ako je n-terc-butyllítium alebo sek-betyllítium vzhľadom na amidický reaktant, prípadne v prítomnosti činidla koordinujúceho kov, ako je tetrametyletyléndiamín (TMEDA). Reakcia sa obvykle uskutočňuje v aprotickom prostredí, výhodne v éteri, ako je dietyléter, tet rahydrofurán a pod., pri teplote zhruba od -78 °C do 25 °C.
Vzniknutá zlúčenina potom môže byť hydrolyzovaná postupmi známymi zo súčasného stavu techniky, aby poskytla žiadaný reaktant substituovanú karboxylovú kyselinu vzorca (IB). Napr. vhodná hydrolýza obsahuje vystavenie amidického reaktantu silnej minerálnej kyseline, organickej kyseline alebo zmesi minerálnej a organickej kyseliny pri teplote od zhruba 100 °C do zhruba 160 °C. Obvyklé kyseliny, ktoré môžu byť použité na túto reakciu, sú kyselina bromovodiková, kyselina octová, kyselina chlorovodíková a pod. Prípadne môže byť použitá zatavená trubica na zvýšenie rýchlosti reakcie.
Tretia metóda prípravy reaktantov substituovaných karboxylových kyselín vzorca (IB) obsahuje diazotáciu anilínu nasledovanú premenou vzniknutej diazóniovej soli. Špecificky je aminoskupina anilínu premenená na diazóniovú soľ reakciou s kyselinou dusitou. Kyselina dusitá môže byť produkovaná in situ reakciou dusitanu sodného s vodným roztokom silnej kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková alebo kyselina sírová. Reakcia sa obvykle uskutočňuje pri 5 °C alebo nižšej teplote. Diazóniová soľ je potom premenená reakciou s vhodným činidlom za poskytnutia žiadaného substituovaného aromatického systému. Zvolenými výmennými činidlami je voda, kyanid, halogenid, vodná kyselina sírová a pod. Obvykle sa žiadaná reakcia uľahčuje zahrievaním.
Zo súčasného stavu techniky je známych mnoho reakcií, ktoré môžu byť použité na vykonanie žiadaných substitúcií na karbocyklických alebo heterocyklických systémoch. Napr. mnoho aromatických elektrofilných a nukleofílných reakcií je naznačených v kapitolách 11 a 13 v March J.: „Advanced Organic Chemistry“, 3. vydanie, Wiley, 1985.
Navyše zlúčeniny vzorca (IB) môžu byť pripravené karboxyláciou vhodne substituovanej karbocyklickej alebo heterocyklickej zlúčeniny. Karboxylácia môže byť uskutočnená rozličnými činidlami. Napr. karbocyklické alebo hetrocyklické reaktanty môžu reagovať s fosgénom, oxalylchloridom, hydrogénchloridom močoviny alebo N,N-dietylkarbamoylchloridom v prítomnosti Friedelových-Craftsových katalyzátorov. Úprava tejto metódy predstavuje reakciu karbocyklického alebo heterocyklického reaktantu s alkyltiochlórformiátom (RSCOC1) alebo karbamoylchloridom (H2NCOC1), ktorá poskytuje amid, príp. tioester. Amid alebo tioester potom môže byť hydrolyzovaný a poskytnúť žiadanú karboxylovú skupinu -March na str. 491.
Príklady Friedelových-Craftsových katalyzátorov predstavujú Lewisove kyseliny, ako je bromid hlinitý (AlBr3), chlorid hlinitý (A1C13), chlorid železitý (FeCl3), chlorid boritý (BC13), fluorid boritý (BF3) a iné. Pozri aj March J.: „Advanced Organic Chemistry“, 3. vydanie, Wiley, 1985 a tiež Olah: „Friedel-Crafts and Related Reactions“, Interscience, New York, 1963 - 1965 a Olah: „Friedel-Crafts Chemistry“, Wiley, New York, 1973.
Navyše reaktanty -chinolinkarboxylové kyseliny -môžu byť pripravené reakciou vhodne substituovaného anilínu s glycerolom použitím Skraupovej reakcie opísanej v Bradford L. a spol.: J. Chem. Soc, 1947, str. 437. Napr. 3-aminobenzoová kyselina môže reagovať s glycerolom v prítomnosti oxidačného činidla, ako je m-nitro-benzénsulfónová kyselina alebo m-nitrobenzénsulfónan sodný v 60 - 75 % vodnom roztoku kyseliny sírovej a poskytnúť žiadaný karboxylom substituovaný chinolín. Reakcia sa obvykle uskutočňuje pri teplote od asi 35 °C do teploty refluxu 1 - 6 hodín, výhodne pri 50 °C až teplote refluxu 2 - 4 hodiny.
SK 284116 Β6
Výsledné reaktanty môžu byť redukované alebo hydrogenované použitím postupov známych zo súčasného stavu techniky. Pozri napr. March, str. 700. Výhodný postup predstavuje katalytická hydrogenácia, napr. zmiešaním reaktantu - chinolín-karboxylovej kyseliny - s vodíkom v prítomnosti katalyzátora. Výhodným katalyzátorom je paládium na uhlí. Obvyklé rozpúšťadlá vhodné na použitie v tejto reakcii sú všetky organické rozpúšťadlá, ako je etylacetát. Výber rozpúšťadla nie je kritický, pokiaľ použité rozpúšťadlo je inertné v priebehu reakcie. Reakcia je všeobecne v podstate ukončená po približne 1 - 24 hodinách, ak prebieha pri teplote v rozmedzí od zhruba 25 °C do zhruba 100 °C.
Nasledujúce „prípravy“ a „príklady“ ilustrujú aspekty tohto vynálezu. Tieto príklady sú len na ilustráciu a nie sú určené na vymedzenie rozsahu tohto vynálezu.
Skratky pre termíny teplota topenia („melting-point“), spektrá nukleárnej magnetickej rezonancie („nuclear magnetic resonance spectra“), hmotnostné spektrá s ionizáciou nárazom elektrónov („electron impact mass spectra“), hmotnostné spektrá s ionizáciou desorpciou poľom („field desorption mass spectra“), hmotnostné spektrá s ionizáciou nárazom rýchlych atómov („fast atóm bombardment mass spectra“), infračervené spektrá („infrared spectra“), ultrafialové spektrá („ultraviolet spectra“), elementárne analýzy, vysokoúčinná kvapalinová chromatografia („high performance liquid chromatography“), a chromatografia na tenkej vrstve („thin layer chromatography“) sú v danom poradí t. t., NMR, EIMS, MS(FD), MS(FAB), ÍR, UV, Analýza, HPLC a TLC. Navyše absorpčné maximá pre IR spektrá sú vybrané, nie sú uvedené všetky pozorované maximá.
V spojení so spektrami NMR sú používané nasledovné skratky: singlet (s), dublet (d), dublet dubletov (dd), triplet (t), kvartet (q), multiplet (m), dublet multipletov (dm), široký singlet (br.s), široký dublet (br.d), široký triplet (br.t) a široký multiplet (br.m). J udáva interakčné konštanty v Hertzoch (Hz). Pokiaľ nie je uvedené inak, údaje NMR sa vzťahujú na voľnú bázu skúmanej zlúčeniny.
Spektrá NMR boli získané na prístroji Bruker Corp. 270 MHz alebo na Generál Electric QE-300 300 MHz. Chemické posuny sú vyjadrené v 8-hodnotách (posun ppm k nižším hodnotám poľa vzhľadom na signál tetrametylsilánu). MS(FD) boli namerané na spektrometri Varian MAT 731 s emitormi na báze uhlíkatých dendritov. Spektrá EIMS boli získané na prístroji CEC 21-110 výrobcu Consolidated Electrodynamics Corporation. Spektrá MS(FAB) boli získané na spektrometri VG ZAB-3. Spektrá IR boli namerané na prístroji Perkin-Elmer 281. Spektrá UV boli merané na prístroji Čary 118. TLC prebiehali na silikagélových doskách firmy Merck. Teploty topenia nie sú korigované.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príprava 1
A. 2R-N-(Benzyloxykarbonyl)amino-3-naft-2-yltiopropánová kyselina
K roztoku 1,28 g (8,00 mmol) 2-tionaftolu v 30 ml tetrahydrofuránu bolo postupne pod dusíkom pridané 1,77 g (8,16 g) 60 % hydridu sodného. Po zhruba 15 minútach miešania bol postupne pridaný roztok N-bcnzyloxykarbonylserín-b-laktónu v 20 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes bola ponechaná stáť pri laboratórnej teplote asi jednu hodinu a potom bol odparením pri zníženom tlaku získaný zvyšok. Tento zvyšok bol rozpustený etylacetáte a premytý najprv 0,5 mol/1 roztokom hydrogensiričitanu sodného a potom nasýteným roztokom chloridu sodného. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola sušená síranom sodným, filtrovaná a koncentrovaná pri zníženom tlaku za vzniku zvyšku. Tento zvyšok bol čistený rýchlou chromatografiou a poskytol 2,08 g bledožltej pevnej látky. Výťažok: 68 % 'H NMR (CDClj): δ 3,42-3,61 (br.m, 2H); 5,53-5,76 (br.s, IH); 4,85-5,08 (br.m, 2H); 5,54-5,76 (br.s, IH); 7,06-7,97 (m, 12H) [a]D-55,72°(cl,0;MetOH)
IR (KBr): 3348; 3048; 1746; 1715; 1674; 1560; 1550; 1269; 1200; 1060 cm1
MS (FD): m/e 381 (M+), 381 (100) Analýza pre C20H19NO4S vypočítané: C 66,12; H 5,02; N 3,67 nájdené: C 66,22; H 5,04; N 3,86
B. 3R-l-Diazo-2-oxo-3-N-(benzyIoxykarbonyl)amino-4-(naft-2-yltio)bután
Ku chladnému (-30 °C) roztoku 15,38 g (40,3 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 2A v 230 ml etylacetátu bolo postupne injekčnou striekačkou pridané 5,62 ml (40,3 mmol) trietylamínu. K vzniknutému roztoku bolo potom injekčnou striekačkou pridaných 7,84 (60,5 mmol) izopropylchlórformiátu. V ďalšej banke sme opatrne pridali 10 g N-metyl-N-nitro-N-nitrózoguanidínu k dvojvrstvovej zmesi 170 ml dietyléteru a 170 ml 5 mol/1 hydroxidu sodného, čo viedlo k silnému vývinu plynu. Keď bola táto reakcia v podstate úplná, bola organická vrstva dekantovaná od vodnej vrstvy na hydroxid sodný a sušená. Táto príprava diazometánu a pridanie bolo opakované s identickými množstvami dietyléteru a hydroxidu sodného a 30 g N-metyl-N-nitro-N-nitrózoguanidínu. Vzniknutý diazometánový reaktant bol potom pridaný k pripravenému zmiešanému anhydridu a zmes reagovala zhruba 20 minút za chladu (-30 °C). Keď reakcia v podstate skončila, čo bolo dokázané TLC, bola reakčná zmes prebublávaná dusíkom zavádzaným vyžíhanou Pasteurovou pipetou na odstránenie nadbytku diazometánu a potom bol roztok koncentrovaný pri zníženom tlaku na zvyšok. Tento zvyšok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 10 % etylacetátu v dichlórmetáne) a bolo získaných 13,62 g žltého oleja.
Výťažok: 83 % 'H NMR (CDClj): δ 3,32-3,46 (m, 2H); 4,40-4,67 (m, IH); 5,00-5,09 (m, 2H); 5,44 (s, 2H); 5,76 (d J=7,8 Hz, 1 H); 7,25-7,86 (m, 12H)
C. 3R-1 -Chlór-2-oxo-3-N-(benzyloxykarbonyl)amino-4-(naft-2-yltio)bután
Krátky pulz (zhruba 2 sekundy) bezvodého plynného chlorovodíka bol zavedený do chladného (-20 °C) roztoku 13,62 g (33,59 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve Prípravy 2B v 230 ml dietyléteru, čo viedlo k vývinu plynu. Tento postup bol opatrne opakovaný tak, aby nebol pridaný nadbytok chlorovodíka. Keď bola reakcia v podstate ukončená, ako bolo indikované TLC, bol roztok koncentrovaný pri zníženom tlaku na zvyšok. Zvyšok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 10 % etylacetátu v dichlórmetáne) a bolo získaných 12,05 g bledohnedastej látky.
Výťažok: 87 % ‘H NMR (CDClj): δ 3,41 (dd, J=12,6 Hz, IH); 3,53 (dd J=12,6 Hz, IH); 4,18 (AB q, J=41,9 Hz, J=15,9 Hz, 2H); 4,77 (dd, J=9,3 Hz, IH); 5,04 (AB q, J=12 Hz, J=10,4 Hz, 2H); 5,59 (d, J=7 Hz, 1 H); 7,24-7,85 (m, 12H) [a]D-80,00°(cl,0; MetOH)
SK 284116 Β6
IR (CHClj): 3426; 3031; 3012; 1717; 1502; 1340; 1230; 1228; 1045 cm1
MS (FD): m/e 413 (M+), 413 (100)
Analýza pre CzjH^NCýSCI:
vypočítané: C 63,84; H 4,87; N 3,38 namerané: C 64,12; H 4,95; N 3,54
D. [3R-(3R*,4S*)]-l-Chlór-2-hydroxy-3-N-(benzyloxykarbonyl)amíno-4-(naff-2-yItio)bután
K chladnému (0 °C) roztoku 530 mg (1,28 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve Prípravy 2C v 10 ml tetrahydrofuránu 1 ml vody bolo pridaných 73 mg (1,92 mmol) tetrahydridoboritanu sodného. Keď bola reakcia v podstate ukončená, čo bolo zistené TLC, bolo pH roztoku upravené na pH = 3. 10 ml vodného nasýtenéno roztoku chloridu amónneho a 500 μΐ 5 mol/1 roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Vzniknutý roztok bol dvakrát extrahovaný dichlórmetánom a spojené organické vrstvy boli premyté vodou, vysušené síranom sodným, filtrované a koncentrované pri zníženom tlaku na odparok. Odparok bol čistený radiálnou chromatografiou (eluent dichlórmetán) a bolo získaných 212 mg hnedastej pevnej látky.
Výťažok: 40 % 'H NMR (CDClj): δ 3,40 (s, 2H); 3,61-3,71 (m, 2H); 3,973,99 (m, 2H); 4,99 (s, 2H); 5,16 (br.s, IH); 7,21-7,83 (komplex, 12H)
MS (FD): m/e 415 (M+),415 (100) [a]D-47,67 ° (c 0,86; MetOH)
IR (CHClj): 3630; 3412; 3011; 1720; 1502; 1236; 1044 cm1 Analýza pre C22H22NO3CIS:
vypočítané: C 63,53; H 5,33; N 3,37 namerané : C 63,72; H 5,60; N 3,64
E. [ 1 ’R-(TR*, 1S *)]-l -[1 '-N-(Benzyloxykarbonyl)amino-2'-(naft-2-yltio)etyl]oxirán
Roztok 31 mg (0,55 mmol) hydroxidu draselného v 1 ml etanolu bol pridaný k roztoku 190 mg (0,46 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 2D v 6 ml roztoku etanol/etylacetát (1 : 2). Keď bola reakcia podľa TLC v podstate ukončená, bola reakčná zmes vliata do zmesi dichlórmetánu s vodou. Vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola premytá vodou, vysušená síranom sodným a koncentrovaná pri zníženom tlaku na odparok. Odparok bol čistený radiálnou chromatografiou (eluent 10 % etylacetátu v dichlórmetáne) a bolo získaných 172 mg bledohnedastej pevnej látky.
Výťažok: 99 % 'H NMR (CDClj): δ 2,76 (br.s, 2H); 3,01 (br.s, IH); 3,31 (d, J=5 Hz, 2H); 3,77 (br.s, 1 H); 5,05 (s, 2H); 5,22 (d, J=6 Hz, 1 H); 7,25-7,85 (komplex, 12H) [a]D-125,42° (C 0,59; MetOH) MS (FD): m/e 379 (M+), 379 (100) IR (CHClj). 3640,3022,2976,1720,1502,1235, 1045 cm·' Analýza pre C22H21NO3S vypočítané: C 69,63; H 5,58; N 3,69 namerané: C 69,41; H 5,53; N 3,64
F. [2S-(2R*,2'R*,3’S*)]-l-[2'-Hydroxy-3'-(N-benzyloxykarbonyl)amino-4'-(naft-2-yltio)butyl]piperidín-2-N-(terc-butyl)karboxamid
Roztok 0,51 g (1,34 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 2E a 0,26 g (1,41 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 4C v 25 ml izopropanolu bol zahrievaný na 55 °C asi 48 hodín. Vzniknutá reakčná zmes bola ochladená a potom odparená pri zníženom tlaku na surový produkt. Tento produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (4 mm doska, eluent 10 % acetónu v dichlórmetáne) a bolo získaných 104 mg bielej peny.
Výťažok: 14% 'H NMR (CDClj): δ 1,29 (s, 2H); 1,44-1,82 (m,6H); 2,19 (m, IH); 2,40 (m, IH); 2,68 (m, 2H); 3,09 (m, IH); 3,46 (m, 2H); 4,00 (m, 2H); 5,01 (s, 2H); 5,73 (d, IH); 6,01 (br.s, IH); 7,23-7,34 (m, 5H); 7,45 (m, 3H); 7,72-7,83 (m, 4H)
MS (FD): m/e 563 (M+, 100)
G. [2S-(2R*,2'S*,3'S*)]-l-[2'-Hydroxy-3'-amino-4'-(naft-2-yltio)butyl]piperidín-2-N-(terc-butyl)karboxamid
Roztok 1,05 g (0,18 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 2F v 10 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej reagoval zhruba 1 hodinu. Vzniknutá reakčná zmes bola odparená, trikrát azeotropicky odparená s toluénom, rozpustená v metanole obsahujúcom po 4,5 ml dietylamínu a hydroxidu amónneho a potom odparená pri zníženom tlaku na odparok. Tento odparok bol čistený radiálnou chromatografiou (1 mm doska, eluent 3 % metanol v dichlórmetáne obsahujúcom 1 % kyseliny octovej) a bolo získaných 64 mg bielej peny.
Výťažok: 80 % ‘H NMR (CDClj): δ 1,29 (s, 9H); 1,52-1,73 (m, 6H); 1,84 (m, IH); 2,31-2,43 (m, 2H); 2,75-3,04 (m, 5H); 3,17 (m, IH); 3,41 (m, IH); 3,71 (m, IH); 6,22 (br.s, IH); 7,47 (m, 3H); 7,37-7,82 (m, 4H)
MS(FD):m/c430 (M+, 100)
Príprava 2
A. 3-Metoxy-N-fenylbenzamid
Roztok 13,4 ml (147 mmol) anilínu v 30,7 ml trietylamínu bol postupne pridaný do roztoku obsahujúceho 25,1 g (147 mmol) 3-metoxybenzoylchloridu v dichlórmetáne. Reakčná zmes reagovala zhruba 30 minút a potom bola zriedená 1 mol/1 roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne vodou, 1 mol/1 hydroxidom sodným a potom roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, sfiltrovaná a odparená dosucha pri zníženom tlaku. Bolo získaných 31,6 g bielistej pevnej látky.
Výťažok: 95 %
B. 3-Metoxy-2-metyl-N-fenylbenzamid
K chladnému (-70 °C) roztoku 4,54 g (20 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 9A a 5,11 g (44 mmol) TMEDA v 70 ml bezvodého tetrahydrofuránu bolo pridaných 26,9 ml 1,56 mol/1 roztoku n-butyllitia v hexáne. Vzniknutá reakčná zmes bola zahriata na -15 °C a miešaná zhruba 45 minút za vzniku žltej suspenzie. Suspenzia bola ochladená na -70 °C a bolo k nej pridaných 2,89 g (20 mmol) metyljodidu, pričom vznikla biela zrazenina. Reakčná zmes bola miešaná cez noc pri laboratórnej teplote, zmiešaná s nasýteným roztokom chloridu amónneho a zriedená dietyléterom. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická fáza bola postupne premytá nasýteným roztokom chloridu amónneho, vodou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného. Organické extrakty potom boli vysušené síranom sodným, odparené a získaná biela pevná látka bola rekryštalizovaná z roztoku etylacetát/hexán (2 : 1), čím sa získalo 4,00 g ihlíc. Výťažok: 99 % ‘H NMR (CDClj): δ 2,36 (s, 3H); 3,88 (s, 3H); 3,89 (s, 1 H); 6,90-7,70 (m, 8H) IR (CHClj) : 3424, 3013; 2963; 2943 ; 2840; 1678; 1597; 1585; 1519; 1463; 1438; 1383; 1321; 1264; 1240; 1178; 1083; 1069 cm’1
MS (FD): m/e 241 (M+, 100) Analýza pre C15H|5NO2 vypočítané : C 74,67; H 6,27; N 5,80 namerané : C 74,65; H 6,29; N 5,82
C. Kyselina 3-hydroxy-2-metylbenzoová
Zmes 1,21 g (5,00 mmol) zlúčeniny uvedenej v názve prípravy 9B, 35 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 20 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej bolo refluxovaných 24 hodín. Po ochladení bola reakčná zmes zriedená 100 ml etylacetátu a 100 ml vody. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola raz premytá vodou a potom jej pH bolo upravené na pH = 11 0,5 mol/1 hydroxidom sodným. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a vodná vrstva bola okyslená na pH = 1 5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou. Žiadaná zlúčenina potom bola extrahovaná z tejto vodnej vrstvy etylacetátom. Etylacetátová extrakty boli premyté roztokom chloridu sodného, vysušené síranom sodným, sfiltrované a zahustené na odparok, ktorý po dvoch koncentrovaniach z hexánu poskytol 750 mg bielej pevnej látky.
Výťažok: 98 % ’H NMR (DMSO-d6): δ 2,26 (s, 3H); 6,98 (d, J=8,03 Hz, IH); 7,02 (t, J=7,69 Hz, IH); 7,15 (d, J=7,37 Hz, 1 H); 9,55 (br.s, 1 H)
IR (CHClj): 3600-2100 (br.); 3602; 2983; 1696; 1588; 1462; 1406; 1338; 1279; 1174; 1154; 1075; 1038; 920; 892; 854; 816 cm'1
MS(FD):m/el52(M+, 100) Analýza pre C8H8O3 vypočítané: C63,15; H 5,30 namerané: C 63,18; H 5,21
Alternatívne môže byť žiadaná titulná zlúčenina pripravená pridaním 22,6 g (0,33 mol) dusitanu sodného v malých dávkach k chladnému (-10 °C) roztoku 45 g (0,30 mol) kyseliny 3-amino-2-metylbenzoovej a 106 g (58 ml; 1,08 mol) koncentrovanej kyseliny sírovej v 400 ml vody, pričom sa teplota udržuje pod 7 °C. Vzniknutá reakčná zmes bola miešaná zhruba 30 minút pri -10 °C, vliata do roztoku 240 ml koncentrovanej kyseliny sírovej v 1,2 1 vody a potom postupne zahriata na 80 °C (medzi 40 - 60 °C dochádza k silnému vývinu plynu). Po ukončení vývinu plynu bola reakčná zmes ochladená na laboratórnu teplotu a titulná zlúčenina bola päťkrát extrahovaná etylacetátom (600 ml). Spojené organické fázy boli zmiešané s 500 ml nasýteného vodného roztoku uhličitanu sodného. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a vodná vrstva bola okyslená na pH = 2 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Titulná zlúčenina potom bola extrahovaná etylacetátom (500 ml) a spojené organické fázy boli premyté roztokom chloridu sodného, vysušené síranom sodným, filtrované a zahustené pri zníženom tlaku na surový produkt. Tento produkt bol prečistený dvoma kryštalizáciami zo zmesi etylacetát/chloroform a bolo získaných 23,2 g bledooranžového práškovitého produktu.
Výťažok: 52 %
Príprava 3
A. 2-Ety 1-3 -metoxy-N-fenylbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9B použitím 13,5 ml (21 mmol) 1,56 mol/1 n-butyllítia, 2,27 g (10,0 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 9A, 2,56 g (22,0 mmol) TMEDA a 1,56 g (10,0 mmol) etyljodidu v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Vzniknutý surový materiál bol čistený rekryštali záciou z roztoku etylacetát/hexán (3 : 1) a bolo získaných 1,57 g ihlíc
Výťažok: 62 % 'H NMR (CDClj): δ 1,22 (t, J=7,4 Hz, 3H); 2,81 (q, J = 7,4 Hz, 2H); 3,88 (s, 3H); 6,96 (d, J-8,2 Hz, 4H); 7,05 (d, J=7,6 Hz, IH); 7,10-7,45 (m, 4H); 7,50 (s, IH); 7,62 (d, J=7,95 Hz, IH)
MS(FD):m/e 255 (M+,100) Analýza pre c16h17no2 vypočítané: C 75,27; H 6,71; N 5,49 namerané: C 75,39; H 6,72; N 5,43
B. Kyselina 2-etyl-3-hydroxybenzoová
Roztok obsahujúci 180 mg (0,71 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 10A, 3 ml kyseliny chlorovodíkovej a 3 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej bol zahrievaný 20 hodín v zatavenej trubici na 155 °C. Po ochladení bola reakčná zmes zriedená etylacetátom a vodou. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická fáza raz extrahovaná vodou a potom bolo pH upravené na pH = 11 0,5 mol/1 hydroxidom sodným. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a vodná vrstva okyslená na pH=l 5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou. Žiadaná zlúčenina potom bola extrahovaná z tejto vodnej vrstvy etylacetátom. Etylacetátové extrakty boli premyté roztokom chloridu sodného, vysušené síranom sodným a zahustené na 103 mg bledočervenej pevnej látky. Výťažok: 88 % ’H NMR (acetón-d6): δ 1,16 (t, J=7,4 Hz, 3H); 2,98 (q, J=7,4 Hz, 2H); 7,00-7,15 (m, 2H); 7,32-7,36 (m, 1 H); 8,48 (br.s, 1 H) MS(FD):m/e 166(M+,100)
Príprava 4
A. 2-Fluór-3-metoxy-N-fenylbenzamid
Požadovaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9B pridaním roztoku 3,15 g (10,0 mmol) N-fluórbenzénsulfónimidu v 5 ml tetrahydrofuránu k roztoku obsahujúcom 13,5 ml (21,0 mmol) 1,56 mol/1 n-butyllítia , 2,27 g (10,0 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 9A a 2,56 g (22,0 mmol) TMEDA v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Vzniknutý surový materiál bol dvakrát «kryštalizovaný zo zmesi etylacetát/hexán a ďalej čistený radiálnou chromatografiou (6 mm doska, 0,5 % etylacetátu v dichlórmetáne) a bolo získaných 540 mg bielistej pevnej látky.
Výťažok: 22 % ’H NMR (CDClj): δ 3,94 (s, 3H); 7,05-7,80 (m, 8H); 8,35-8,50 (m, 1 H);
MS (FD): m/e 245 (M+, 100)
B. Kyselina 2-fluór-3-hydroxybenzoová
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9C použitím roztoku 255 mg (1,02 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 11A, 3 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 5 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej a bol získaných 134 mg bielej pevnej látky.
Výťažok: 86 % ’H NMR (acetón-d6): δ 7,05-7,50 (m, 5H) MS(FD):m/el56(M+, 100)
Príprava 5
A. 4-N-(Fenyl)karbamoylpyridin
Roztok 22,8 ml (250 mmol) anilínu v 104,5 ml (750 mmol) trietylamínu bol postupne pridaný k roztoku 44,5 g (250 mmol) 4-chlórformylpyridíniumhydrogénchlo
SK 284116 Β6 ridu v 500 ml chloroformu. Vzniknutá reakčná zmes bola miešaná cez noc a potom 2 hodiny refluxovaná. Po ochladení bola reakčná zmes zriedená 600 ml vody, čo viedlo k tvorbe zrazeniny. Po pridaní 200 ml izopropanolu k zmesi boli oddelené vzniknuté vrstvy, organická vrstva bola premytá postupne 0,1 mol/1 hydroxidom sodným, vodou, roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a potom zahustená pri zníženom tlaku pri 70 °C na bielu pevnú látku s bronzovým nádychom. Táto pevná látka bola premytá 200 ml etylacetátu a bolo získaných 38,9 g žiadanej titulnej zlúčeniny.
Výťažok: 78 %
B. 4-N-(Fenyl)karbamoylpyridín-N-oxid
K horúcemu (85 - 90 °C) roztoku 19,8 g (100 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 12A v 60 ml ľadovej kyseliny octovej bolo postupne pridaných 51 ml peroxidu vodíka za ochranným štítom. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 4 hodiny pri 90 °C, potom bola ochladená na laboratórnu teplotu, zriedená zhruba 60 ml zmesi izopropanol/chloroform a potom bolo pH upravené na pH = 12. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a spojené organické extrakty boli sušené síranom sodným, filtrované a zahustené pri zníženom tlaku za vzniku bledožltej pevnej látky. Tento produkt bol rozotrený v 250 ml dichlórmetánu a odparený dosucha. Získalo sa 15,95 g bielistej pevnej látky. Výťažok: 75 %
C. 2-Chlór-4-N-(fenyl)karbamoylpyridín
K roztoku 20,2 g (97,0 mmol) chloridu fosforečného v 27 ml (289 mmol) chlorid-oxidu fosforečného bolo pridaných 14,4 g (67,2 mmol)titulnej zlúčeniny prípravy 12B. Vzniknutá reakčná zmes bola postupne zahriata na 130 °C a ponechaná reagovať zhruba 40 minút. Reakčná zmes bola ochladená na laboratórnu teplotu a odparená pri zníženom tlaku na odparok. Odparok bol rozpustený v 80 ml vody a potom zriedený 80 ml vodného roztoku uhličitanu draselného za vzniku žltej zrazeniny. Zrazenina bola izolovaná filtráciou, rozpustená v 250 ml horúceho etanolu, za horúca sfiltrovaná za vzniku tmavožltého roztoku. Tento roztok bol zahustený pri zníženom tlaku na objem zhruba 160 ml a filtrovaný za horúca pred pridaním zhruba 50 - 60 ml vody. Vzniknutý roztok bol ochladený a žiadaná zlúčenina bola izolovaná rekryštalizáciou. Získaných bolo 8,0 g bledožltých a bielych ihlíc. Výťažok: 51 %
D. 2-Metoxy-4-N-(fenyl)karbamoylpyridín
K suspenzii 4,09 g (18,0 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 12C v 30 ml metanolu bolo pridaných 2,92 g (42,0 mmol) metanolátu sodného. Vzniknutá reakčná zmes bola refluxovaná zhruba 18 hodín, ochladená a zahustená pri zníženom tlaku na pevný odparok. Tento odparok bol premytý vodou a rozotrený v chladnom benzéne, čím sa získalo 1,8 g pevnej látky. Analýza tejto pevnej látky ukázala, že reakcia nie je úplná, a preto bolo k tejto látke v metanole pridaných dodatočných 10,01 g (144 mmol) metanolátu sodného. Vzniknutá reakčná zmes bola refluxovaná v metanole 15 hodín a spracovaná identicky. Bolo získaných 300 mg pevnej látky. Táto pevná látka bola čistená kolónovou chromatografíou (2 mm doska, eluent 40 % etylacetátu v hexáne) nasledovanou rekryštalizáciou z horúceho hexánu. Bolo získaných 140 mg žiadanej látky. Výťažok: 3 %
E. 2-Metoxy-3-metyl-4-N-(fenyl)karbamoylpyridín
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9B použitím roztoku
260 mg (1,17 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 12D, 404 ml (2,68 mmol) TMEDA, 1,78 ml (2,68 mmol) n-tercbutyllítia, 329 ml (5,61 mmol) metyljodidu v 2 ml tetrahydrofuránu. Surový materiál bol čistený radiálnou chromatografiou (2 mm doska, eluent 40 % etylacetátu v hexáne) nasledovanou rekryštalizáciou z horúceho hexánu. Získalo sa 140 mg žiadanej titulnej zlúčeniny.
F. Kyselina 3-metyl-2-pyridón-4-karboxylová
Suspenzia 150 mg (0,598 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 12E v 4 ml vodnej kyseliny chlorovodíkovej bola refluxovaná zhruba 5 hodín. Po ochladení bola reakčná zmes zahustená pri zníženom tlaku na žltý olej. Tento olej bol rozpustený v 15 ml vody a pH vzniknutého roztoku bolo upravené na pH = 8 hydroxidom draselným a potom bol roztok zriedený 10 ml toluénu. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, vodná vrstva bola okyslená na pH = 3,5 5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou a odparením pri zníženom tlaku poskytla žltú pevnú látku. Táto pevná látka bola resuspendovaná v 2 ml horúceho etanolu a filtrovaná cez chumáč vaty. Filtrát bol odparený dosucha pri zníženom tlaku. Získalo sa 130 mg pevnej látky. Táto pevná látka bola premytá 5 ml horúceho 10 % roztoku kyseliny octovej v etylacetáte. Získaných 17 mg pevnej látky bolo kryštalizovaných z etanolu a získalo sa 6,8 mg žiadanej titulnej zlúčeniny. Výťažok: 6 %
Príprava 6 Kyselina 2,6-dichlór-3-hydroxybenzoová g (282 mmol) plynného chlóru bolo postupne zavádzaného do chladného (-70 °C) roztoku 20 g (145 mmol) kyseliny 3-hydroxybenzoovej v 100 ml metanolu pod dusíkom, čo viedlo k zvýšeniu teploty na zhruba -5 °C. Reakčná zmes bola znovu ochladená a po zhruba 30 minútach bol plynný chlór vyfúkaný dusíkom. Reakčná zmes bola potom zahriata na laboratórnu teplotu a zriedená 100 ml vody. Žiadaná titulná zlúčenina bola izokovaná rekryštalizáciou, ktorá poskytla bielu pevnú látku. Táto pevná látka bola rekryštalizáciou z 250 ml benzénu obsahujúceho 10 ml acetónu. Bolo získaných 4,8 g žiadanej titulnej zlúčeniny. Výťažok: 16 %
Príprava 7 Kyselina 2-ch lór-3 -hydroxybenzoová
10,3 g (147 mmol) plynného chlóru bolo postupne zavádzaného do chladného roztoku 20 g (145 mmol) 3-hydroxybenzoovej kyseliny pod dusíkom pri udržiavaní teploty pod -60 °C. Po zhruba 30 minútach bol plynný chlór vyfúkaný dusíkom a reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a potom zriedená 100 ml vody. Žiadaná titulná zlúčenina bola izolovaná rekryštalizáciou ako biela pevná látka. Táto pevná látka bola čistená rekryštalizáciou z 50 ml vody nasledovanou kryštalizáciou zo 130 ml benzénu obsahujúceho 10 ml acetónu, čo poskytlo žiadanú titulnú zlúčeninu.
Príprava 8
A. metylester kyseliny 2-metyl-3-metoxybenzoovej
Suspenzia 306 mg (2,00 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 9C, 1,06 ml (20,0 mmol) metyljodidu a 1,38 g (10,0 mmol) uhličitanu draselného v 8 ml acetónu bola refluxovaná zhruba 3 hodiny. Pretože reakcia nebola ukončená, bolo k reakčnej zmesi pridaných navyše 2 ml (37,7 mmol) metyljodidu, 2 g (14,5 mmol) uhličitanu draselného a 10 ml acetónu. Reakčná zmes bola refluxovaná zhruba 16 hodín a potom sfiltrovaná. Filtrát bol zahustený pri zníženom tlaku na odparok. Tento odparok bol rozpustený v etylacetáte, premytý vodou a odparený dosucha. Bolo získaných 188 mg produktu, čo bolo zhruba 88 % žiadaného produktu.
B. Kyselina 2-metyl-3-metoxybenzoová
Roztok 116 mg (4,86 mmol) hydroxidu lítneho v 1 ml vody bol pridaný k roztoku 175 mg (0,97 mmol) titulnej zlúčeniny Prípravy 15A v 3 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutá reakčná zmes bola intenzívne miešaná. Akonáhle bola reakcia podľa TLC v podstate skončená, bola reakčná zmes zahustená pri zníženom tlaku na odparok. Tento odparok bol rozpustený v 10 ml hexánu, 25 ml vody a 3 ml 1 mol/1 hydroxidu sodného. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, vodná vrstva bola zriedená etylacetátom a potom okyslená na pH = 1 1 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, etylacetátová vrstva bola premytá roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a odparená dosucha pri zníženom tlaku. Získalo sa 73 mg žiadanej titulnej zlúčeniny.
Príprava 9
A. 2-Butyl-3-metoxy-N-fenylbenzamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9B použitím
11.95 ml (18,04 mmol) 1,51 mol/1 n-butyllítia v hexáne,
1.95 g (8,95 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 9A, 2,19 g (18,89 mmol) TMEDA a 1,60 g (9,45 mmol) butyljodidu v 30 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Vzniknutý surový produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (4 mm doska, eluent 15 % etylacetátu v hexáne). Bolo získaných 83 mg číreho bezfarebného oleja. Výťažok: 3,5 %
Ή NMR (CDClj): δ 0,89 (t, J=7,27 Hz, 3H); 1,36 (m, 2H); 1,56 (m, 2H); 2,78 (m, 2H); 3,84 (s, 3H); 6,92 (d, J=7,98 Hz, IH); 7,00 (d, J=7,36 Hz, IH); 7,11-7,22 (m, 2H); 7,35 (t, 2H); 7,59 (m, 2H)
IR (CHCI,) : 3691; 3619; 3424; 3024; 3010; 2963; 2874; 1679; 1602; 1580; 1517; 1459; 1437; 1315; 1265; 1177; 1055; 877 cm'1
MS (FD): m/e 283 (M’, 100)
B. Kyselina 2-butyl-3-hydroxybenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 10B použitím 80 mg (0,28 mmol) titulnej zlúčeniny Prípravy 16A v 2 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 2 ml 30 % brómovodíka v kyseline octovej. Bolo získaných 44 mg surového produktu, ktorý bol použitý bez ďalšieho čistenia. Výťažok: 60 % (z 'H NMR) 'H NMR (CDClj): δ 0,96 (t, J=8,09 Hz, 3H); 1,44 (m, 2H); 1,59 (m, 2H); 3,03 (m, 2H); 6,99 (d, J=8,03 Hz, IH); 7,15 (t, J=7,77 Hz, IH); 7,59 (d, J=6,85 Hz, IH)
Príprava 10
A. 3-Metoxy-2-propyl-N-fenylbenzamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 9B použitím 2,5 g (11,0 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 9A, 2,81 g (24,2 mmol) TMEDA, 15,23 ml (23,13 mmol) n-butyllítia a 1,33 g (11,0 mmol) allylbromidu v 30 ml tetrahydrofuránu, čo poskytlo 2,5 g surového produktu. Tento produkt bol rozpustený v 30 ml bezvodého etanolu v prítomnosti 0,5 g 10 % paládia na uhlí a vzniknutá zmes reagovala zhruba 12 hodín vo vodíkovej atmosfére. Zmes bola potom filtrovaná na celíte, filtrát bol zahustený pri zníženom tlaku na oran žový olej. Tento olej bol čistený radiálnou chromatografiou (6 mm doska, eluent 10 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 438 mg bielej peny. Výťažok: 15 % ‘H NMR (CDClj): δ 0,94 (t, >7,35 Hz, 3H); 1,62 (m, 2H); 2,75 (m, 2H); 3,84 (s, 3H); 6,92 (d, J=8,06 Hz, IH); 7,00 (d, J=7,39 Hz, IH); 7,16 (m, 2H); 7,34 (t, 2H); 7,59 (d, 2H);7,69(br.s, IH)
B. Kyselina 3-hydroxy-2-propylbenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 10B použitím 438 mg (1,62 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 17A v 7 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 7 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej. Bola získaná hnedastá pevná látka. Táto látka bola čistená rekryštalizáciou z horúceho toluénu. Bolo získaných 84 mg hnedastej pevnej látky. Výťažok: 29 % 'H NMR (CDClj): δ 1,01 (t, J=7,33 Hz, 3H); 1,63 (m, 2H); 2,98 (m, 2H); 6,98 (d, J=7,97 Hz, IH); 7,14 (t, J=7,86 Hz, IH); 7,57 (d, J=7,28 Hz, IH) I
R (KBr): 3383; 3047; 2962; 2872; 2641; 1698; 1458; 1412; 1341; 1296; 1278; 1223; 1174; 1086; 926; 815; 752 cm'1 MS(FD):m/el80(M+, 100)
Príprava 11
A. 2-Izopropyl-3-metoxybenzonitril
K zmesi 2,76 g (0,115 mol) horčíka v 75 ml dietyléteru bolo postupne pridaných 24,31 g (0,143 mol) izopropyljodidu. Vzniknutá reakčná zmes reagovala až do rozpustenia všetkého horčíka. Potom bol počas 90 minút pridaný roztok 15,0 g (0,92 mol) 2,3-dimetoxybenzonitrilu v 75 ml dietyléteru. Vzniknutá reakčná zmes reagovala cez noc pri laboratórnej teplote a potom bola refluxovaná 4 hodiny. Vzniknutá reakčná zmes bola ochladená na 0 °C a horná vrstva bola dekantovaná do nasýteného roztoku chloridu amónneho a ľadu. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola postupne premytá zriedeným roztokom hydroxidu sodného, zriedeným roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vysušená síranom sodným, filtrovaná a potom zahustená na oranžový olej. Tento olej bol destilovaný pri zníženom tlaku (12,7 cm Vigreuxova kolóna, 26,7 Pa) a bolo získaných 6,25 g oranžového oleja.
Výťažok: 39 % 'H NMR (CDClj): δ 1,37 (d, J=6,47 Hz, 6H); 3,55 (m, IH);
3.83 (s, 3H); 7,04 (d, J=7,79 Hz, 1H);7,18 (m, 2H)
IR (CHCI,): 3690; 3617; 3019; 2968; 2939; 2841; 2228; 1577; 1470; 1457; 1440; 1387; 1363; 1265; 1100; 1070; 1045; 878 cm’1
MS(FD):m/e 175(M*,100)
B. Kyselina 3-hydroxy-2-izopropylbenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 10B použitím 330 mg (1,88 mmol) titulnej zlúčeniny Prípravy 18A v 2 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej. Surový produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (2 mm doska, eluent 3 % metanolu v dichlórmetáne obsahujúcom 1 % kyseliny octovej). Bolo získaných 125 mg ružovo sfarbenej pevnej látky. Výťažok: 37 % 'H NMR (CDClj): δ 1,40 (d, J=6,92 Hz, 6H); 3,62 (m, IH);
6.83 (d, J=7,86 Hz, IH); 7,06 (t, J=7,89 Hz, 1 H); 7,24 (d, J=7,55 Hz, 1 H)
IR (CHClj): 3599; 3025; 2965; 2876; 1695; 1603; 1584; 1466; 1454; 1404; 1360; 1275; 1234; 1166; 1148; 1086; 1057; 926 cm'1
SK 284116 Β6
MS(FD): m/e 180(M+, 100)
Analýza pre C10H,2O3 vypočítané: C 66,65; H 6,71 namerané: C 66,53; H 6,84
Príprava 12
Kyselina 3-metylizonikotínová
K horúcemu (135 °C) roztoku 10,7 g (0,1 mol) 3,4-lutidínu v 100 ml difenyléteru bolo po dávkach pridaných 18 g (0,16 mol) oxidu seleničitého. Po zhruba 20 minútach bola reakčná zmes zahriata na 185 °C a ponechaná reagovať 30 minút. Po ochladení bola reakčná zmes zriedená vodou a filtrovaná. Filtrát bol extrahovaný chloroformom a chloroformové extrakty boli zahustené pri zníženom tlaku na 6,0 g bledohnedej pevnej látky.
Výťažok: 44 % 'H NMR (CDClj): δ 2,43 (s, 3H); 7,61 (d, J=4,98 Hz, IH); 8,49 (d, J=4,99 Hz, IH); 8,53 (s, IH) 13C NMR (CDClj): δ 17,91; 123,21; 132,81; 138,15; 148,12; 152,71; 167,89 ppm
IR (KBr): 3425; 2418; 1724; 1606; 1445; 1387; 1303; 1278; 1235; 1100; 1072; 850 cm’1
MS(FD): m/e 138 (M+, 100)
Príprava 13
Kyselina 5-chinolínkarboxylová
K roztoku obsahujúcemu 15 g (0,1 mol) kyseliny m-aminobenzoovej, 27 g (0,13 mol) m-nitrobenzénsulfónanu a 25 g (0,4 mol) glycerolu bolo pridaných 125 g 70 % kyseliny sírovej. Vzniknutá reakčná zmes bola refluxovaná zhruba 2,5 hodiny a zriedená 125 ml vody. Po upravení pH na pH = 9 hydroxidom amónnym bola miešaná cez noc s 5 g aktívneho uhlia a filtrovaná. Filtrát bol povarený s 5 g aktívneho uhlia, ochladený na 50 °C, okyslený na pH = 5 ľadovou kyselinou octovou (15 ml), filtrovaný a poskytol hnedú pevnú látku. Táto látka bola povarená v 300 ml vody obsahujúcej 10 ml kyseliny octovej, za horúca sfiltrovaná a poskytla surový produkt. Tento produkt bol čistený rekryštalizáciou z vriacej kyseliny octovej. Získalo sa 6,1 g bledohnedej pevnej látky. Výťažok: 32 % 'H NMR (CDClj); δ 7,62 (m, IH); 7,81 (t, J=7,82 Hz, IH); 8,20 (m, 2H); 8,93 (d, J=3,79 Hz, IH); 9,24 (d, J=8,58 Hz, IH)
IR (KBr): 2772; 2431; 1906; 1708; 1610; 1589; 1507; 1363; 1323; 1269; 1235; 1211; 1141; 1076; 1034; 999; 866; 807 cm’1
MS(FD): m/e 173(M+, 100)
Príprava 14
Kyselina 1,2,3,4-tetrahydro-5-chinolínkarboxylová
Roztok obsahujúci 1,03 g (5,95 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 20, 1,87 g (29,77 mmol) mravčanu amónneho v 100 ml metanolu bol prebublávaný 10 minút dusíkom. K tomuto roztoku bolo pridaných 0,5 g paládiovej černe a vzniknutá reakčná zmes bola zahrievaná pri 65 °C. Po zhruba 3 hodinách bola reakčná zmes sfiltrovaná, a filtrát bol zahustený pri zníženom tlaku na odparok. Tento odparok bol roztrepaný medzi vodu (pH = 4) a roztok 10 % izopropanolu v chloroforme. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola premytá vodou (pH = 4), vysušená síranom sodným a zahustená na surový produkt. Tento produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (2 mm doska, gradient eluentu 5 - 10 % metanolu v dichlórmetáne obsahujúcom 1 % kyseliny octovej). Získalo sa 87 mg hnedastej pevnej látky.
Výťažok: 8 % ‘H NMR (CDClj): δ 1,04 (m, 2H); 2,16 (t, 2H); 2,40 (m, 2H); 5,81 (d, J=8,05 Hz, IH); 6,09 (t, >7,78 Hz, 1 H); 6,23 (d, J=7,96 Hz, 1 H)
IR (KBr): 3296; 2965; 2929; 1691; 1597; 1474; 1461; 1443; 1350; 1305; 1279; 1236; 1184; 1159; 1106; 1073; 1022; 827 cm’1
MS(FD): m/e 177(M+, 100) Analýza pre C10HhNO2 vypočítané: C 67,78; H 6,26; N 7,90 namerané: C 67,96; H 6,10; N 7,88
Príprava 15
A. Metylester kyseliny 3-amino-2-metyIbenzoovej
Roztok 10 g (66,2 mmol) kyseliny 3-amino-2-metylbenzoovej a 20 g monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej v 400 ml metanolu bol refluxovaný cez noc a potom zriedený zmesou etylacetátu s 1 mol/1 uhličitanom draselným. Vzniknuté vrstvy boli ochladené a potom oddelené. Organická vrstva bola potom premytá postupne 1 mol/1 uhličitanom draselným a roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a zahustená na 9,23 g oranžového oleja.
Výťažok: 85 % ’H NMR (CDClj): δ 2,34 (s, 3H); 3,73 (br.s, 2H); 3,88 (s, 3H); 6,81 (d, J=7,96 Hz, IH); 7,05 (t, J=7,78 Hz, IH); 7,19-7,30 (m, IH)
IR (CHC13): 3406; 3027; 3012; 2978; 2935; 1718; 1621; 1467; 1435; 1315; 1301; 1196; 1159; 1108; 1066; 1045; 810 cm-1
MS(FD): m/e 165(M+, 100)
B. metylester kyseliny 3-N-(metylsulfonyl)amino-2-metylbenzoovej
Do chladného (0 °C) roztoku 1,07 g (6,48 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 22A v 50 ml bezvodého dichlórmetánu bolo pridaných 1,18 g (6,80 mmol) anhydridu kyseliny metánsulfónovej. Vzniknutá reakčná zmes reagovala cez noc pri laboratórnej teplote a potom bola zriedená 100 ml dichlórmetánu, dvakrát premytá roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná, zahustená, rozpustená v hexáne a opäť zahustená na odparok. Tento odparok bol trikrát rozotrený v hexáne a potom odparený dosucha pri zníženom tlaku. Získalo sa 1,46 g ružovej pevnej látky, ktorá bola rekryštalizovaná zo zmesi hexán/etylacetát/metanol (3:5: 2).
Výťažok: 57 % 'H NMR (DMSO-dé). δ 2,25-2,45 (m, 4,5H); 2,97 (s, 1,5H); 3,80 (s, 3H); 7,23-7,63 (m, 3H);9,24(s, IH) IR(KBr): 3900-2400 (br.); 3298; 1713; 1466; 1320; 1290; 1265; 1248; 1210; 1183; 1156; 1047; 971; 964; 752; 563; 519 cm'1
MS(FD): m/e 243(M+, 100) Analýza pre CnoH^NOjS vypočítané: C 49,37; H 5,39; N 5,76 namerané: C 49,45; H 5,54; N 5,80
C. Kyselina 3-N-(metylsulfonyl)amino-2-metylbenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 15B použitím 400 mg (1,64 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 22B a 118 mg (4,93 mmol) hydroxidu lítneho v 20 ml tetrahydrofuránu a 8 ml vody. Bolo získaných 206 mg bielej pevnej látky.
Výťažok: 55 %
SK 284116 Β6 ’H NMR (DMSO-d6): δ 2,43 (s, 3H); 2,97 (s, 3H); 7,26 (t, J=7,87 Hz, IH); 7,43 (d, J=7,79 Hz, IH); 7,60 (d, J=7,17 Hz, IH)
IR(KBr): 3800-2200 (br); 3252; 1685; 1404; 1334; 1309; 1277; 1149; 982; 965; 914; 780; 748; 632; 518; 498 cm’1 MS(FD): m/e 243(M+, 100)
Príprava 16
A. 3-Metoxy-N-fenyľbenzamid
Roztok 13,4 ml (147 mmol) anilínu v 30,7 ml trietylamínu bol postupne pridaný do roztoku obsahujúceho 25,1 g (147 mmol) 3-metoxybenzoylchloridu v dichlórmetáne. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 30 minút a potom bola zriedená 1 mol/1 hydrogenuhličitanom sodným. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne vodou, 1 mol/1 hydroxidom sodným, roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným a odparená dosucha pri zníženom tlaku. Bolo získaných 31,6 g bielistej pevnej látky.
Výťažok: 95 %
B. 3-Metoxy-2-metyl-N-fenylbenzamid
Do chladného (-70 °C) roztoku 4,54 g (20 mmol) titulnej zlúčeniny Prípravy 23A a 5,11 g (44 mmol) TMEDA v 70 ml bezvodého tetrahydrofuránu bolo pridaných 26,9 ml 1,56 mol/1 roztoku n-butyllítia v hexáne. Vzniknutá reakčná zmes bola zahriata na -15 °C a miešaná zhruba 45 minút za vzniku žltej zrazeniny. Suspenzia potom bola znovu ochladená na -70 °C a bolo pridaných 2,89 g (20 mmol) metyljodidu za vzniku bielej zrazeniny. Reakčná zmes bola miešaná cez noc pri laboratórnej teplote. Potom bol pridaný nasýtený roztok chloridu amónnneho a dietyléter. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická fáza bola premytá postupne nasýteným roztokom chloridu amónneho, vodou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného. Potom boli organické extrakty vysušené síranom sodným a odparené na bielu pevnú látku, ktorá bola čistená kryštalizáciou z roztoku etylacetát/hexán (2 : : 1). Bolo získaných 4,00 g ihlíc.
Výťažok: 99 % 'H NMR (CDClj): δ 2,36 (s, 3H); 3,88 (s, 3H); 3,89 (s, IH); 6,90-7,70 (m, 8H)
IR (CHClj) : 3424; 3013; 2963; 2943; 2840; 1678; 1597; 1585; 1519; 1463; 1438; 1383; 1321; 1264; 1240; 1178; 1083; 1069 om·1
MS (FD): m/e 241 (M+, 100) Analýza pre C15H15NC>2 vypočítané: C 74,67; H 6,27; N 5,80 namerané : C 74,65; H 6,29; N 5,82
C. Kyselina 2-metyl-3-hydroxybenzoová
Zmes 1,21 g (5,00 mmol) zlúčeniny prípravy 23B, 35 ml 5 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej a 20 ml 30 % roztoku brómovodíka v kyseline octovej bola refluxovaná 24 hodín. Po ochladení bola reakčná zmes zriedená 100 ml etylacetátu a 100 ml vody. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva premytá raz vodou a potom bolo jej pH upravené na pH = 11 0,5 mol/1 hydroxidom sodným. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a vodná vrstva bola opäť okyslená na pH = 1 5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou. Žiadaná zlúčenina potom bola extrahovaná z tejto vodnej vrstvy etylacetátom. Etylacetátové extrakty potom boli premyté roztokom chloridu sodného, vysušené síranom sodným, filtrované a odparené pri zníženom tlaku na odparok, ktorý po dvoch odpareniach z hexánu poskytol 750 mg pevnej látky.
Výťažok: 98 % 'H NMR (DMSO-d6): δ 2,26 (s, 3H); 6,98 (d, J=8,O3 Hz, IH); 7,02 (t, J=7,69 Hz, IH); 7,15 (d, J=7,37 Hz, 1 H); 9,55 (br.s, IH)
IR (CHClj): 3600-2100 (br.); 3602; 2983; 1696; 1588; 1462; 1406; 1338; 1279; 1174; 1154; 1075; 1038; 920; 892; 854; 816 cm'1
MS(FD): m/e 152(M+, 100) Analýza pre C8H8O3 vypočítané: C 63,15; H 5,30 namerané : C 63,18; H 5,21
Alternatívna príprava kyseliny 2-metyl-3-hydroxybenzoovej
K chladnej (0 °C) suspenzii 0,54 g (3,3 mmol) kyseliny 2-metyl-3-aminobenzoovej v 5 ml vody obsahujúcej 0,65 ml koncentrovanej kyseliny sírovej bolo pridaných 0,25 g (3,6 mmol) pevného dusitanu sodného. Po zhruba 15 minútach bola reakčná zmes vliata do 20 ml teplej vody obsahujúcej 4 ml koncentrovanej kyseliny sírovej. Vzniknutá reakčná zmes bola postupne zahrievaná na 90 °C, čo viedlo k vývinu plynu. Akonáhle vývin plynu ustal, bol roztok ochladený na laboratórnu teplotu a bol extrahovaný etylacetátom. Organické vrstvy boli spojené, premyté 0,5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, vysušené a zahustené pri zníženom tlaku. Surový produkt bol čistený rýchlou chromatografiou na silikagéli (eluent 5 % metanolu v dichlórmetáne), čo poskytlo 350 mg bielej pevnej látky (t. t. 137 -138 °C).
Výťažok: 69 %
Ή NMR (CDClj): δ 8,18 (br.s, IH); 7,42 (d, J=7,7 Hz, IH); 7,13 (t, J=7,9 Hz, IH); 6,93 (d, J=7,9 Hz, IH); 2,46 (s, 3H)
Analýza pre C8H8O3 vypočítané: C 63,15; H 5,29 namerané: C 63,32; H 5,36
Príprava 17
A. N-(terc-Butyl)-2-metylbenzamid
K chladnému (0 °C) roztoku 139,2 g (0,9 mol) o-toluoylchloridu v 1200 ml dichlórmetánu pri 25 °C pod dusíkom bolo postupne pridaných 180,0 g (1,8 mol) trietylamínu nasledovaného prikvapkávaním roztoku 73,14 g (1,0 mol) terc,butylamínu v 200 ml dichlórmetánu. Vzniknutá znes bola zahriata na laboratórnu teplotu a reagovala 2,5 hodiny. Reakčná zmes bola potom zriedená 1800 ml vody. Vzniknutá organická a vodná vrstva boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne 2 mol/1 hydroxidom sodným, 1 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou a roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a nato odparená dosucha pri zníženom tlaku na 167,6 g žiadanej titulnej zlúčeniny ako bielistej pevnej látky (t. t. TI - 78 °C).
Výťažok: 97 % ’H NMR (CDClj): δ 1,41 (s, 9H); 2,41 (s, 3H); 5,54 (br.s, IH); 7,13-7,30 (m, 4H)
IR (CHClj) : 3430; 3011; 2971; 2932; 1661; 1510; 1484; 1452; 1393; 1366; 1304; 1216; 876 cm'1 MS (FD): m/e 191 (M+); 191 (100)
Analýza pre C12H17NO vypočítané: C 75,35; H 8,76; N 7,32 namerané: C 75,10; H 9,11; N 7,20
B. S-N-terc-Butyl-2-[3-(N-benzyloxykarbonyl)amino-4-fenyl-2-oxobutyl]benzamid
K roztoku 7,0 g (36,5 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24A v 200 ml tetrahydrofuránu bolo pridaných 12,1 ml (80,3 mmol) Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametyletyléndiamínu (TMEDA) injekčnou striekačkou. Vzniknutý roztok bol ochladený na -78 °C a potom bolo k nemu prikvapkaných 55,9 ml sek-butyllítia injekčnou striekačkou, pričom bola reakčná teplota udržiavaná pod -60 °C. Vzniknutý reakčný roztok bol miešaný ďalej 1 hodinu pri -78 °C pred pridaním roztoku obsahujúceho 5,00 g (14,6 mmol) S-N-metoxy-N-metyl-2-(N-benzyloxykarbonyl)amino-3-fenylpropánamidu v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu, ktorý bol potom pridaný kanylou pri reakčnej teplote udržiavanej pod -65 °C. Vzniknutá reakčná zmes bola zahriata na -20 °C a po pridaní 20 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho bola potom zriedená 200 ml dietyléteru. Organická a vodná vrstva boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne vodou, 0,2 mol/1 hydrogensíranom sodným, roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a potom odparená dosucha pri zníženom tlaku na bezfarebný olej. Tento olej bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 25 % etylacetátu v dichlórmetáne). Získalo sa 6,08 g bezfarebnej peny.
Výťažok: 88 % [a]D-289,26 ° (c 0,12, MetOH) 'H NMR (CDClj): δ 1,38 (s, 9H); 2,90 (dd, J=I5,6 Hz, IH); 3,24 (dd, J=15,6 Hz, IH); 3,89 (d, J=18 Hz, IH); 4,16 (d, J=18 Hz, IH); 4,72 (dd, J=15,6 Hz, IH); 5,00-5,09 (m, 2H); 5,56 (d, J=6 Hz, IH); 5,93 (br.s, IH); 7,03-7,40 (m, 14H)
IR (CHClj): 3431; 3027; 3012; 2973; 1713; 1658; 1511; 1454; 1383; 1366; 1307; 1231; 1046 cm’’
MS (FD): m/e 472 (M+); 218 (100)
Analýza pre C29HJ2N2O4 vypočítané: C 73,70; H 6,82; N 5,93 namerané: C 73,41; H 6,98; N 5,83
C. [2R-(2R*,3S*)]-N-terc-Butyl-2-[3-(N-benzyloxykarbonyl)amino-4-fenyl-2-hydroxybutyl]benzamid
K roztoku 6,96 g (14,7 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24B v 200 ml bezvodého etanolu bolo pod dusíkom pridaných 2,78 g (73,5 mmol) tetrahydridoboritanu sodného. Keď bola reakcia v podstate skončená, ako bolo zistené chromatografiou na tenkej vrstve (TLC), bola reakčná zmes zriedená 200 ml etylacetátu a reakcia ukončená prikvapkávanim 20 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Organická a vodná vrstva boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne 1 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a potom odparená dosucha pri zníženom tlaku, čo poskytlo 6,4 g bezfarebného oleja. Tento olej bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 2 - 10 % dichlórmetánu v etylacetáte). Bolo získaných 5,12 g titulnej zlúčeniny. Výťažok: 74 % [ct]D+10,38 0 (c 0,10, MetOH) 'H NMR (CDClj): 6 1,40 (s, 9H); 2,79 (dd, J=12,3 Hz, IH); 2,90-2,98 (m, 2H); 3,04 (dd, J=12,3 Hz, IH); 3,703,81 (m, IH); 3,97 (m IH); 4,96-5,08 (m, 2H); 5,10 (d, J=9 Hz, 1 H); 5,88 (d, J=6 Hz, 1 H); 5,93 (s, 1 H); 7,13-7,42 (m, 14H)
ÍR (CHClj): 3431; 3028; 3012; 2971; 1773; 1643; 1515; 1454; 1367; 1229; 1028; cm’1
MS (FD): m/e 475 (M+); 475 (100)
Analýza pre C29HJ4N2O4 vypočítané: C 73,39; H 7,22; N 5,99 namerané: C 73,12; H 7,48; N 5,62
D. [2R-(2R*,3S*)]-N-terc-Butyl-2-(3-amino-4-fenyl-2-hydroxybutyl)benzamid
Bola pripravená suspenzia obsahujúca 41,0 g (120 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24C a 500 mg 10 % paládia na uhli v 150 ml bezvodého etanolu. Táto suspenzia bola trepaná pod tlakom vodíka 414 kPa v Pátrovej trepačke. Katalyzátor 10 % paládia na uhlí bol potom odstránený filtráciou. Vzniknutý filtrát bol odparený dosucha pri zníženom tlaku, čo poskytlo 31,1 g bledožltej peny. Táto zlúčenina bola použitá bez ďalšieho čistenia.
Výťažok: 96 % [a]D+34,68 0 (c 1,0, MetOH) 'H NMR (CDClj): δ 1,46 (s, 9H); 2,71 (dd, J=13,7; 9,5 Hz, IH); 2,84 (dd, J=13,3; 2,51 Hz, IH); 2,95-3,06 (m, 2H); 3,23-3,29 (m, IH); 3,84-3,90 (m, IH); 6,23 (s, IH); 7,197,37 (m, 12H)
IR (CHClj): 3440; 3382; 3007; 2970; 2934; 1643; 1516; 1454; 1367; 1213 cm’1 MS (FD): m/e 341 (M+); 341 (100)
Príprava 18
A. Kyselina 2R-2-N-(terc-butoxykarbonyl)amino-3-naft-2-yltiopropánová
K roztoku 2,14 g (13,4 mmol) 2-tionaftolu v 40 ml bezvodého tetrahydrofuránu bola pri laboratórnej teplote pridaná suspenzia 0,54 g (13,5 mmol) hydridu sodného v minerálnom oleji. Po zhruba 15 minútach bol prikvapkávaný roztok 2,5 g (13,4 mmol) S-N-(terc-butoxykarbonyl)serín-b-laktónu v 30 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 1 hodinu a potom bola odparená pri zníženom tlaku na gumovitý odparok. Odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 1 % metanolu v etylacetáte). Získalo sa 4,35 e bielej pevnej látky.
Výťažok: 94 % ’H NMR (CDClj): δ 10,25 (s, IH); 7,89 (s, IH); 7,78 (m, 3H); 7,46 (m, 3H); 5,39 (d, 1 H); 4,61 (m, 1 H); 3,49 (m, 2H); 1,37 (s, 9H)
B. 2R-N-Metoxy-N-metyl-2-N-(terc-butoxykarbonyl)amino-3-naft-2-yltiopropánamid
K chladnému (0 °C) roztoku obsahujúcemu 4,3 g (12,4 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25A, 1,58 g (16,15 mmol) Ν,Ο-dimetylhydroxylamínhydrogénchloridu, 2,18 g (16,15 mmol) 1-hydroxybenztriazolhydrátu (HOBT.HjO), 2,24 ml (16,15 mmol) trietylamínu a 2,73 ml (24,86 mmol) N-metylmorfolinu v 100 ml dichlórmetánu bolo pridaných 2,62 g (13,67 mmol) l-(3-dimctylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrogenchloridu (EDC). Vzniknutá reakčná zmes reagovala pri laboratórnej teplote cez noc. Reakčná zmes bola zriedená 100 ml hexánu, premytá postupne 200 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 200 ml roztoku chloridu sodného. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola sušená síranom sodným, filtrovaná a odparená pri zníženom tlaku na číry žltý olej.
'H NMR (CDClj): δ 7,90 (s, IH); 7,80 (m 3H); 7,49 (m 3H); 5,41 (d, IH); 4,92 (d, IH); 4,92 (m, 1 H); 3,59 (s, 3H); 3,18-3,46 (m, 2H); 3,05 (s, 3H); 1,42 (s, 9H) MS (FD): m/e 391 (M4); 390 (100)
C. 3R-N-(terc-Butyl)-2-[2'-oxo-3'-N-(terc-butoxykarbonyl)-amino-4'-naft-2-yltio]butylbenzamid
K chladnému (-78 °Č) roztoku obsahujúcemu 8,60 g (45 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24A a 14,2 ml (95 mmol) TMEDA v 100 ml bezvodého tetrahydrofuránu v inertnej atmosfére bolo postupne pridaných 111 ml (95 mmol) 0,85 mol/1 roztoku sek-butyllítia v hexáne injekčnou striekačkou. Teplota vnútri reakčnej nádoby bola sledovaná počas pridávania sek-butyllítia, aby sa zistilo, že neprekročí -57 °C. Reakčná zmes ďalej reagovala zhruba 1 hodinu pri -78 °C a potom bol prikvapkaný roztok 7,910 g (20 mmol) titulného medziproduktu prípravy 2B v 80 ml tetrahydrofuránu. Keď pridávanie skončilo, bola reakčná zmes zahriata na -20 °C a potom bola reakcia ukončená prídavkom nasýteného roztoku chloridu amónneho. Vzniknutá zmes potom bola zriedená 600 ml dietyléteru. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne 1 hydrogensíranu sodného a roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a odparená pri zníženom tlaku na žltý olej. Tento olej bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 10 - 50 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 8,5 g žiadaného titulného medziproduktu.
Výťažok: (82 %) 'H NMR (CDClj): δ 7,90 (s, IH); 7,79 (t, 3H); 7,48 (m, 3H); 7,40 (d, IH); 7,29 (m, 2H); 7,05 (d, IH); 5,94 (br.s, IH); 5,65 (m, IH); 4,65 (d, IH); 4,24 (d,J=17 Hz, IH); 3,86 (d, J=17 Hz, 1 H); 3,66 (m, 1 H); 3,40 (m, 1 H); 1,42 (s, 9H); 1,39 (s, 8H)
MS (FD): m/e 521 (M+); 521 (100)
D. [2R-(2R*,3R*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-N-(terc-butoxykarbonyl)amino-4'-naft-2-yltio]butylbenzamid
K roztoku 3,49 g (6,7 mmol) titulného produktu prípravy 25C v 150 ml bezvodého etanolu bolo pridaných 0,51 g (13 mmol) tetrahydridoboritanu sodného a vzniknutá reakčná zmes reagovala cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes potom bola ochladená na 0 °C a reakcia bola ukončená nasýteným roztokom chloridu amónneho a zriedením 550 ml dighlórmetánu. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická vrstva bola premytá postupne 1 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, 2 mol/1 hydroxidom sodným, roztokom chloridu sodného, sušená síranom sodným, filtrovaná a potom odparená pri zníženom tlaku na bezfarebnú penu. Táto pena bola čistená rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 10-25 % hexánu v etylacetáte). Získalo sa 2,78 g žiadaného titulného produktu.
Výťažok: 78 % ‘H NMR (CDClj): ô 7,84 (s, IH); 7,73 (m, 3H); 7,41 (m, 3H); 7,29 (t, 2H); 7,16 (t, 2H); 6,53 (s, IH); 5,32 (d, IH); 3,86 (m, 2H); 3,33 (m, 2H); 2,83 (m, 2H); 1,40 (s, 9H) MS (FD): m/e 523 (M+); 522 (100)
Analýza pre C3oH38N204S vypočítané: C 68,94; H 7,33; N 5,36 namerané: C 68,65; H 7,34; N 5,15
E. [2R-(2R*,3R*)]-N-(terc-Butyl)-2-(2'-hydroxy-3'-amino-4'-naft-2-yltio)butylbenzamid
K chladnému (0 °C) roztoku 2,89 g (5,53 mmol) titulného produktu prípravy 25D v 100 ml dichlórmetánu bolo pridaných 18 ml kyseliny trifluóroctovej. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 1 hodinu. Potom bola reakčná zmes odparená pri zníženom tlaku na penu. Táto pena bola resuspendovaná v toluéne a odparená pri zníženom tlaku, čo poskytlo penu, ktorá bola čistená rýchlou chromatografiou (eluent 5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 1,71 g bielej peny.
Výťažok: 74 % ‘H NMR (CDClj): δ 7,75-7,85 (m, 4H); 7,24-7,51 (m, 7H); 6,06 (s, IH); 3,75 (m, IH); 3,61 (m, 1 H); 3,07 (m, 2H);
2,95 (m, 2H); 1,47 (s, 9H)
MS (FD): m/e 423 (M’); 422 (100)
Príprava 19
A. N-terc-Butyl-2-metyl-1 -naftylamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 24A. Surový produkt bol čistený rekryštalizáciou zo zmesi hexán/etylacetát a bolo získaných 20,99 g bezfarebných ihlíc (t. t. 124 -126 °C).
Výťažok: 68 % 'H NMR (CDClj): δ 1,54 (s, 9H); 2,50 (s, 3H); 5,50-5,65 (br.s, IH); 7,23-7,54 (m, 3H); 7,74 (d, J=10 Hz, 1 H); 7,78 (d, J=10 Hz, 1 H); 7,87 (d, J=10 Hz, IH) IR (CHCI,): 3424; 3010; 2969; 1660; 1512; 1503; 1454; 1366; 1291; 1263; 1221 cm1
MS (FD): m/e 241 (M+); 241 (100)
Analýza pre Ci6Hi9NO vypočítané: C 79,63; H 7,94; N 5,80 namerané: C 79,90; H 8,11; N 5,76
B. S-N-terc-Butyl-2-[3-(N-benzyloxykarbonyl)amino-4-fenyl-2-oxobutyl]-1 -naftylamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 24A. Získaný odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 10-30 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 7,43 g bezfarebnej peny.
Výťažok: 86 % [a]D-6,86°(c 0,10, MetOH) 'H NMR (CDClj): δ 1,45 (s, 9H); 3,03 (dd, J=15,8 Hz, IH); 3,18 (dd, J=15,5 Hz, IH); 3,91 (d, J=16 Hz, IH); 4,04 (d, J=16 Hz, IH); 4,70-4,80 (m, IH); 4,94-5,06 (m, 2H);
5,41 (d, J=8 Hz, IH); 6,12-6,20 (br.s, IH); 7,10-7,38 (m, 11 H); 7,42-7,58 (m, 2H); 7,76-7,85 (m, 2H); 7,93 (s, J=9 Hz, 1 H)
IR (CHClj): 3420; 3029; 3012; 2970; 1713; 1658; 1505; 1455; 1367; 1232; 1045 cm'1
MS (FD): m/e 522 (M*); 522 (100)
Analýza pre CjjHj4N2O4 vypočítané: C 75,84; H 6,56; N 5,36 namerané: C 75,56; H 6,74; N 5,17
C. [2R-(2R*,3S*)]-N-terc-Butyl-2-[3-(N-benzyloxykarbonyl)amino-3 -fenylmetyl-2-hydroxypropyl] -1 -naftylamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 24C. Výsledný produkt bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 2 - 10 % etylacetátu v dichlórmetáne). Získalo sa 5,50 g bezfarebnej peny.
Výťažok:74 % [a]D+l l,85°(c 0,20, MetOH) ‘H NMR (CDClj): δ 1,54 (s, 9H); 2,85-3,15 (m, 4H); 3,85-3,95 (m, IH); 4,00-4,13 (m, 2H); 4,90-5,04 (m, 3H); 5,85-5,95 (m, IH); 7,05-7,60 (m, 15H); 7,81 (d, J=9 Hz, 2H); 7,91 (d, J=9 Hz, 2H) IR (CHClj): 3420; 3012; 2970; 1713; 1643; 1515; 1454; 1367; 1219; 1209; 1028 cm'1
MS (FD): m/e 524 (M+); 524 (100)
Analýza pre CjjHj6N2O4 vypočítané: C 75,55; H 6,92; N 5,14 namerané: C 75,41; H 7,16; N 5,14
D. [2R-(2R*,3S*)]-N-terc-Butyl-2-[3-amino-2-hydroxypropyl]-l-naftylamid
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 24D. Surový filtrát bol zahustený a získalo sa 1,30 g bezfarebnej peny, ktorá bola použitá bez ďalšieho čistenia.
Výťažok: 92 %
SK 284116 Β6
Príprava 20
A. 2-Jód-4-hydroxymetyltoluén
K roztoku 5,0 g (19,1 mmol) kyseliny 2-jód-3-metylbcnzoovej v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu bolo postupne pridaných 22 ml 1 mol/l roztoku boránu v tetrahydrofuráne. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 90 minút a potom bola reakcia ukončená etanolom, čo viedlo k vývinu plynného vodíka. Zmes bola zriedená etylacetátom. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola postupne premytá hydrogenuhličitanom sodným, roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a kryštalizáciou zo zmesi hexán/etylacetát sa získalo 120 mg žiadanej titulnej zlúčeniny.
B. Kyselina 2-metyl-5-hydroxymetylbenzoová
Zmes 142 mg (5,92 mmol) hydroxidu lítneho a 249 mg (1,48 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 27A v zmesi tetrahydrofurán/voda (2:1) reagovala zhruba 24 hodín. Keď bola reakcia ukončená, ako bolo zistené TLC, reakčná zmes bola zahustená pri zníženom tlaku a okyslená prídavkom 1 mol/l kyseliny chlorovodíkovej. Zmes bola zriedená etylacetátom a vzniknuté vrstvy boli oddelené. Organická vrstva bola premytá roztokom chloridu sodného, vysušená síranom sodným, filtrovaná a odparením pri zníženom tlaku sa získalo 70 mg žiadaného titulného produktu.
Príprava 21
Kyselina 2-metyl-3-metylaminobenzoová
K roztoku 500 mg (2,5 mmol) metylesteru kyseliny 2-metyl-3-aminobenzoovej v 5 ml dimetylformamidu bolo pridaných 387 mg (2,7 mmol) metyljodidu a 700 mg (5,4 mmol) diizopropyletylaminu. Vzniknutá reakčná zmes bola zahrievaná na 70 °C zhruba 2 hodiny a potom vliata do 10 ml 1 mol/l hydroxidu sodného. Po 16 hodinách bola zmes okyslená na pH = 6 prídavkom 2 mol/l kyseliny chlorovodíkovej. Žiadaná titulná zlúčenina bola extrahovaná do etylacetátu, vysušená a odparená dosucha pri zníženom tlaku. Získalo sa 343 mg bielej pevnej látky (t. 1.165 - 167 °C). Výťažok: 84 % 'H NMR (CDClj): δ 12,52 (br.s, IH); 7,30 (d, J=7,8 Hz, IH); 7,25 (t, J=7,9 Hz, IH); 6,93 (d, J=7,8 Hz, 1 H); 2,92 (s, 3H); 2,21 (s, 3H).
Analýza pre C9HhNO2 vypočítané: C 65,44; H 6,71; N 8,48 namerané: C 65,62; H 6,84; N 8,26
Príprava 22
A. Kyselina 2-metyl-5-aminobenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená redukciou kyseliny 2-metyl-5-nitrobenzoovej zmesou cínu a kyseliny chlorovodíkovej (t. t. 142 - 144 °C).
Výťažok: 75 % 'H NMR (DMSO-d6): δ 12,67 (br.s, IH); 7,23 (s, IH); 7,04 (d, J=8,2 Hz, IH); 6,82 (d, J=7,9 Hz, 1 H); 3,25 (s, 2H); 2,40 (s, 3H)
Analýza pre CgH9NO2 vypočítané: C 63,57; H 6,00; N 9,27 namerané: C 63,81; H 6,24; N 9,06
B. Kyselina 2-metyl-5-hydroxybenzoová
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v Alternatívnej príprave 23 C použitím titulnej zlúčeniny prípravy 29A.
Výťažok: 65 % (t. t. 136 - 139 °C) ’H NMR (DMSO): δ 12,77 (br.s, IH); 9,46 (br.s, IH); 7,26 (s, IH); 7,12 (d, J=8,3 Hz, 1 H); 6,85 (d, J-8,1 Hz, 1 H);
2,41 (s,3H)
Analýza pre C8H8O3 vypočítané: C 63,15; H 5,29 namerané: C 63,27; H 5,22
Príprava 23
A. 5-Kyanoizochinolín
K chladnému (0 °C) roztoku 10,0 g (61,4 mmol) 5-aminoizochinolínu v 288 ml 1,5 mol/l kyseliny chlorovodíkovej bolo pridaných 15 ml 5,2 mol/l dusitanu sodného vo vode. Zhruba po 5 minútach bol pridaný chladný nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného k reakčnej zmesi, až reakčný roztok poskytol negatívny výsledok na test jódškrobovým papierikom. Vzniknutý roztok bol vliaty do chladnej (0-5 °C) dvojfázovej zmesi obsahujúcej 300 ml toluénu a 150 ml vodného roztoku obsahujúceho 8,4 g (177 mmol) kyanidu sodného a 7,6 g (85 mmol) kyanidu med’ného. Vzniknutá reakčná zmes bola zahriata na laboratórnu teplotu, ponedhaná reagovať zhruba 1 hodinu a potom zriedená zmesou etylacetátu a vody. Vzniknuté vrstvy boli oddelené, organická fáza bola vysušená síranom sodným a odparená dosucha pri zníženom tlaku. Získalo sa 5,9 g žltej pevnej látky.
Výťažok: 56 % ’H NMR (CDClj): δ 9,38 (s, IH); 8,76 (d, J=5,89 Hz, IH);
8,25 (d, J=8,29 Hz, IH); 8,13 (d, J=8,3O Hz, IH); 8,03 (d, J=8,59 Hz, IH); 7,71 (t, J=7,78 Hz, IH) IR (KBr): 3433; 3090; 3026; 2924; 2226; 1618; 1574; 1495; 1433; 1373; 1277; 1225; 1034; 829; 766; 714 cm·'
B. 5-Karboxyizochinolín
Roztok 6,5 g (42 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 30A v 55 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej bol zahrievaný na 155 °C v zatavenej trubici 5,5 hodiny. Potom bol ochladený na laboratórnu teplotu a ďalej odparený dosucha na pevnú látku. Táto látka bola rozpustená v 300 ml vody a pH vzniknutého roztoku bolo upravené na pH = 6 zriedeným roztokom hydroxidu amónneho, čo viedlo k vyzrážaniu hnedej pevnej látky, ktorá bola izolovaná filtráciou, ďalej vysušená azeotropicky s benzénom a potom vysušená pri 130 °C pri zníženom tlaku počas zhruba 3 hodín. Získalo sa 5,7 g jemného tmavočerveno-hnedého prášku (t. t. 270 - 272 °C).
Výťažok: 78 % ’H NMR (DMSO): δ 13,4 (br.s, IH); 8.69 (d, J=6,00 Hz, IH); 8,58 (d, J=4,6 Hz, IH); 8,40 (d, J=7,37 Hz, IH); 8,36 (d, >8,12 Hz, IH); 7,74 (t, 1=7,76 Hz, IH). IR (KBr): 3460; 3014; 2930; 2851; 2777; 2405; 1912; 1711; 1622; 1574; 1493; 1427; 1375; 1264; 1211; 1152; 1044 cm '
C. Pentafluórfenylester 5-karboxyizochinolínu
K chladnému (0 °C) roztoku 1,53 g (7,39 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) v 60 ml etylacetátu bolo pridaných 1,28 g (7,39 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 30B a 4,08 g (22,17 mmol) pentafluórfenolu v 30 ml etylacetátu. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 6 hodín pri 0 °C a potom bola sfiltrovaná cez celit. Vzniknutý filtrát bol premytý postupne 1 mol/l hydroxidom sodným, vodou, roztokom chloridu sodného a potom odparený pri zníženom tlaku na bielu pevnú látku. Táto látka bola čistená kolónovou chromatografiou (silikagél, eluent 33 % etylacetátu v hexáne). Bolo získaných 1,80 g žiadanej titulnej zlúčeniny (t. t. 142-144 °C).
Výťažok: 72 %
SK 284116 Β6 ‘H NMR (CDClj): δ 9,38 (s, IH); 8,74 (m, 3H); 8,34 (d, J=8,l Hz, IH); 7,78 (t, 1=7,7 Hz, 1 H); IR (KBr): 3422; 3021; 2089; 1752; 1622; 1522; 1215; 758; cnť1 Analýza pre C16H6NO2F5.0,3 CH2CI2 vypočítané: C 57,30; H 2,17; N 4,03 namerané: C 57,40; H 2,10; N 4,33
Príprava 24 Pentafluórfenylester 5-karboxychinolínu
Žiadaná titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príprave 30C použitím 0,236 g (1,36 mmol) 5-karboxychinolínu, 0,746 g (4,05 mmol) pentafluórfenolu a 0,571 g (2,76 mmol) DCC v 25 ml etylacetátu okrem toho, že reakčná zmes reagovala 48 hodín. Vzniknutý surový produkt bol čistený kolónovou chromatografiou a bolo získaných 0,40 g bielej pevnej látky. Výťažok: 87 % 'H NMR (CDClj): δ 9,33 (d, J=8,54 Hz, IH); 9,03 (dd, J=4,16, 1,28 Hz, IH); 8,63 (d, J=7,25 Hz, IH); 8,63 (d, J=7,25 Hz, IH); 4,50-4,32 (m, IH); 8,47 (d, >8,53 Hz, IH); 7,87 (t, >7,96 Hz, IH); 7,61 (dd, >8,76, 4,18 Hz, IH)
IR (KBr): 3472; 2667; 2461; 1749; 1520; 1319; 1259; 1182; 1145; 1105; 1005; 947; 812 cm’1
Príprava 25
Kyselina 1 H-indolín-4-karboxylová
K chladnému (10 °C) roztoku obsahujúceho 100 mg (0,62 mmol) indol-4-karboxylovej kyseliny v 5 ml kyseliny octovej sme pridali 390 mg (6,2 mmol) pevného trihydridokyanoboritanu sodného. Vzniknutá zmes reagovala pri laboratórnej teplote zhruba 16 hodín a potom bola zriedená vodou. Žiadaná zlúčenina bola extrahovaná z tohto roztoku dichlórmetánom a organické extrakty boli potom sušené síranom sodným a filtrované. Surový produkt bol čistený kolónovou chromatografiou (silikagél, eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 12 mg titulnej zlúčeniny (t. t. 97 - 98 °C).
Výťažok: 12% 'H NMR (CDClj): δ 7,48 (d, >8,8 Hz, IH); 7,34 (t, >8,6 Hz, IH); 6,88 (d, >8,8 Hz, lH);3,59(m, 4H).
Analýza pre C9H9NO2 vypočítané: C 66,25; H 5,56; N 8,58 namerané: C 66,36; H 5,82; N 8,42
Príprava 26
A. 2,3-Dimetoxy-6-chlórtoluén
K zmesi 25 g (0,16 mmol) 2,3-dimetoxytoluénu v 25 ml kyseliny octovej bolo postupne pridaných 26,4 g (0,33 mmol) 1-chlórmetylmetyléteru. Vzniknutá reakčná zmes reagovala cez noc pri 30 °C a potom bola zriedená chladnou vodou, čo viedlo k tvorbe zrazeniny. Táto zrazenina bola čistená rekryštalizáciou z horúceho hexánu a potom odparená dosucha. Získalo sa 20,3 g bielej pevnej látky (t. t. 69 - 70 °C).
Výťažok: 62 % ’H NMR (CDClj): δ 1,01 (d, J=6,l Hz, IH); 6,75 (d, 4,62 (s, 3H); 3,85 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 2,37 (s, 3H). Analýza pre Ci0H|3O2CI vypočítané: C 59,93; H 6,54 namerané: C 59,87; H 6,43
B. Kyselina 2-metyl-3,4-dimetoxybenzoová
K zmesi 3,0 g (15 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 33A v 150 ml vody bolo pridaných 3,2 g (20 mmol) pevného manganistanu draselného a 3,0 g (36 mmol) uhličitanu sodného. Vzniknutá reakčná zmes bola potom zahrievaná na 80 °C a reagovala zhruba 24 hodín. Po ochladení bola reakčná zmes filtrovaná a zriedená etylacetátom. Vzniknuté vrstvy boli potom oddelené, vodná vrstva bola okyslená 2 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, čo viedlo k tvorbe zrazeniny. Táto zrazenina bola izolovaná filtráciou a premytá chladným hexánom. Získalo sa 1,7 g bielej pevnej látky (t. t. 179- 180 °C).
Výťažok: 58 % 'H NMR (DMSO-d6): δ 12,49 (br.s, IH); 7,71 (br.s, IH); 6,99 (br.s, IH); 3,89 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 2,45 (s, 3H). Analýza pre C](HI2O4 vypočítané: C 61,28; H 6,17 namerané: C 61,36; H 6,24
C. Kyselina 2-metyl-3,4-dihydroxybenzoová
K chladnej (0 °C) zmesi 250 ml (1,3 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 33B v 5 ml dichlórmetánu bolo pridaných 6,4 ml z 6,4 mmol/1 roztoku bromidu boritého v dichlórmetáne. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 90 minút a potom bola zriedená 25 ml 2 mol/1 kyseliny chlorovodíkovej. Žiadaná zlúčenina bola extrahovaná etylacetátom a organické extrakty sušené síranom sodným, filtrované a odparením poskytli 197 mg červeno-hnedej pevnej látky (t. t. 200-201 °C).
Výťažok: 92 % 'H NMR (DMSO): δ 12,14 (br.s, IH); 9,96 (br.s, IH); 8,34 (br.s, IH); 7,27 (d, J=7,0 Hz, IH); 6,67 (d, >6,7 Hz, IH); 2,37 (s, 3H).
Analýza pre C8H8O4 vypočítané: C 57,14; H 4,80 namerané: C 57,34; H 4,76
Príklad 1 2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-fenylmetyl-4‘-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyl)pentyl]benzamíd
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 40 použitím 100 mg (0,29 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24D, 44 mg (0,29 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 23C, 60 mg (0,29 mmol) DCC a 39 mg (0,29 mmol) HOBT.H2O v 4 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Surový produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (2 mm doska, gradient eluentu 2 - 5 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 58 mg bieleho prášku. Výťažok: 42 % [α]ο2,34° (c=3,4; MetOH) 'H NMR (CDjOD): δ 1,47 (s, 9H); 1,88 (s, 3H); 2,70-2,80 (m, IH); 2,95-3,10 (m, 3H); 3,25-3,40 (m, IH); 3,85-3,95 (m, IH); 4,35-4,45 (m, IH); 4,84 (s, IH); 6,55-6,58 (m, IH); 6,74 (d, J=8,0 Hz, IH); 6,94 (t, >7,8 Hz, IH); 7,15-7,45 (m, 11H) IR (CHCI,): 3580; 3550-3100 (br); 2929; 2865; 1662; 1596; 1521; 1472; 1455; 1394; 1368; 1293; 1157; 1047; 879; 839 cm'1 MS(FD): m/e 475 (M+, 100)
HR MS (FAB) m/e pre C29H33N2O4 vypočítané: 475,2597 namerané: 475,2610
Príklad 2 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-fenylmetyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-5-hydroxymetylfenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 40 použitím 95 mg (0,28 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 24D, 65 mg (0,28 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 27B, 58 mg (0,28 mmol) DCC a 38 mg
SK 284116 Β6 (0,28 mmol) HOBT.H2O v 2 ml bezvodého tetrahydrofuránu obsahujúceho 0,2 ml dimetylformamidu. Surový produkt bol čistený radiálnou chromatografiou (2 mm doska, eluent 4 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 64,6 mg žiadanej titulnej zlúčeniny.
Výťažok: 47 % [a]D-0,003°(c=l,02; MetOH) 'H NMR (CDClj): δ 1,44 (s, 9H); 1,98 (s, 3H); 2,70-2,85 (m, IH); 3,00-3,12 (m, 2H); 3,25-3,35 (m, IH); 3,85-3,97 (m, IH); 4,00-4,10 (m, 2H); 4,35-4,46 (m, IH); 4,50 (s, 2H); 6,98-7,43 (m, 11 H); 8,06-8,18 (m, IH) MS (FD): m/e (M*+l, 490)
Analýza pre C30H36N2O4 vypočítané: C 73,74; H 7,43; N 5,52 namerané: C 74,00; H 7,49; N 5,68
Príklad 3 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-nafl-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-aminofenyl)pentyljbenzamid
K chladnému (0 °C) roztoku 50 mg (0,12 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2,0 ml dimetylformamidu bolo pridaných 22 mg (0,14 mmol) kyseliny 2-metyl-3-aminobenzoovej, 16 mg (0,12 mmol) HOBT, 22 mg (0,12 mmol) EDC a 0,081 ml (0,58 mmol) trietylamínu. Vzniknutá reakčná zmes bola miešaná pri 0 °C zhruba 1 hodinu a potom 16 hodín pri laboratórnej teplote. Do reakčnej zmesi bola potom pridaná voda a zmes bola extrahovaná etylacetátom. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola sušená, filtrovaná a zahustená pri zníženom tlaku na surový odparok. Tento odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 3 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 52 mg bielej pevnej látky (t. t. 105 -106 °C).
Výťažok: 80 % 'H NMR (CDClj): δ 7,89 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,40 (m, 7H); 6,86 (t, J=9,0 Hz, IH); 6,12 (s, IH); 5,93 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,02 (m, IH); 3,68 (br.s, 2H); 3,51 (m, 3H); 3,12 (s, 2H); 3,04 (dd, >13,4, 10,1 Hz, IH); 2,92 (dd, >13,4, 3,3 Hz, IH); 2,23 (s, 3H);1,50(s, 9H)
IR (KBr): 3304; 3068; 1633; 1516; 1321; 1221; 1076; 746 cm1
Analýza pre C33H37N3O3S vypočítané: C 71,32; H 6,71; N 7,56 namerané: C 71,54; H 6,83; N 7,32
Príklad 4 [2'R-(2'R*,3lS*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-N-(mctyl)aminofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 42 mg (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 28, 32 mg (0,23 mmol) HOBT , 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Surový produkt bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne).
Bolo získaných 102 mg bielej pevnej látky (t. t. 111 - 113°C).
Výťažok: 76 % ‘H NMR (CDClj): δ 7,89 (s, IH); 7,75 (m, 2H); 7,52-7,21 (m, 9H); 7,00 (t, J=7,9 Hz, IH); 6,62 (t, >7,4 Hz, IH);
6,41 (d, >9,1 Hz, IH); 6,09 (d, >5,8 Hz, IH); 5,91 (s, IH); 4,48 (m, IH); 4,01 (m, IH); 3,69 (s, IH); 3,50 (m, 2H); 3,01 (m, 2H); 2,85 (s, 3H); 2,12 (s,3H); 1,45 (s,9H) Analýza pre C34Hj9N3O3S vypočítané: C 71,67; H 6,89; N 7,37 namerané: C 71,92; H 6,74; N 7,42
Príklad 5 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-chlór-3-aminofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 48 mg (0,28 mmol) kyseliny 2-chlór-3-aminobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 97 mg bielej pevnej látky (t. t, 107- 108 °C).
Výťažok: 72 % 'H NMR (CDC13): δ 7,89 (s, IH); 7,78 (m, 2H); 7,61-7,23 (m, 9H); 6,95 (t, >7,8 Hz, IH); 6,78 (m, IH); 6,52 (d, >7,9 Hz, IH); 6,05 (d, >6,0 Hz, IH); 5,92 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,21 (s, 2H); 4,16 (m, IH); 3,51 (m, 2H); 3,01 (m, 3H); 1,49 (s, 9H)
Analýza pre C32Hj4N3O3SCI vypočítané: C 66,71; H 5,95; N 7,29 namerané: C 66,85; H 6,06; N 7,42
Príklad 6 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-bróm-3-aminofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 61 mg (0,28 mmol) kyseliny 2-bróm-3-aminobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 102 mg bielej pevnej látky (t. 1.110 -112 °C).
Výťažok: 71 % 'H NMR (CDClj): δ 7,88 (s, IH); 7,78 (m, 2H); 7,60-7,25 (m, 9H); 6,95 (t, >7,8 Hz, IH); 6,78 (m, IH); 6,52 (d, >7,9 Hz, IH); 6,10 (d, >6,1 Hz, IH); 4,52 (m, IH); 4,21 (s, 2H); 4,15 (m, IH); 3,50 (m, 2H); 3,00 (m, 3H); 1,49 (s, 9H)
Analýza pre C32H34N3O3SBr vypočítané: C 61,93; H 5,52; N 6,77 namerané: C 61,82; H 5,83; N 6,63
Príklad 7 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metyl-3-hydroxyfenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 75 mg (0,18 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 32 mg (0,21 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 23C, 24 mg (0,18 mmol) HOBT, 34 mg (0,18 mmol) EDC a 0,12 ml (0,88 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 52 mg bielej pevnej látky (t. t.l 19 - 120 °C).
Výťažok: 53 % ’H NMR (CDClj): δ 7,90 (s, IH); 7,76 (m, 3H); 7,48 (m, 6H); 6,79 (m, 4H); 6,52 (d, >9,2 Hz, IH); 6,23 (s, IH); 5,92 (s, IH); 4,50 (s, IH); 4,02 (m, IH); 3,49 (m, 3H); 3,03 (dd, >13,4, 10,2 Hz, IH); 2,97 (dd, >13,4, 3,4 Hz, IH);
2,25 (s, 3H); 1,49 (s, 9H) IR (KBr): 3297; 1636; 1518; 1284; 1221; 1073; 746 cm’1
Analýza pre C33H36N2O4S vypočítané: C 71,19; H 6,52; N 5,03 namerané: C 70,95; H 6,59; N 4,87
Príklad 8 [2'R-(2'R*3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2yltio-metyl-4'-aza-5’-oxo-5'-(2-metyl-5''aminofenyljpentylj-benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 44 mg (0,28 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 29, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 101 mg bielej pevnej látky (t. t. 106-107 °C).
Výťažok: 79 % 'H NMR (CDClj): δ 7,89 (s, IH); 7,76 (m, 3H); 7,40-7,25 (m, 7H); 6,85 (t, J=9,0 Hz, IH); 6,62 (d, J=7,7 Hz, IH); 6,43 (d, J=9,0 Hz, IH); 6,08 (d, J=5,8 Hz, IH); 5,89 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,02 (m, IH); 3,70 (br.s, 2H); 3,50 (m, 3H); 3,04 (dd, J=13,3, 10,1 Hz, IH); 2,92 (dd, >13,3, 3,2 Hz, IH); 2,21 (s, 3H); 1,50 (s, 9H)
Analýza pre Cj3Hj7NjOjS vypočítané: C 71,32; H 6,71; N 7,56 namerané: C 71,64; H 6,93; N 7,45
Príklad 9 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2,-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyl)pentyl]-l-naftylamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,21 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 26D v 2 ml dimetylformamidu, 35 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 23C, 29 mg (0,21 mmol) HOBT, 40 mg (0,21 mmol) EDC a 0,15 ml (1,10 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 1,5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 106 mg bielej pevnej látky (t. t. 115-117 °C).
Výťažok: 82 % 'H NMR (CDClj): δ 7,90 (s, 1 H); 7,76 (m, 2H); 7,53-7,24 (m, 11 H); 6,85 (t, J=7,6 Hz, IH); 6,73 (m, 2H); 6,63 (d, J=5,7 Hz, IH); 6,51 (d, J=9,2 Hz, IH); 6,10 (s, IH); 5,90 (s, IH); 4,50 (m, IH); 4,09 (m, IH); 3,48 (m, 2H); 3,10 (dd, J=12,9, 9,7 Hz, IH); 2,88 (dd, J=12,9, 3,2 Hz, IH); 2,13 (s, 3 H); 1,46 (s, 9H)
Analýza pre C37H38N2O4S vypočítané: C 73,24; H 6,31; N 4,62 namerané: C 73,46; H 6,70; N 4,35
Príklad 10 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5 '-oxo-5 '-(2-chlór-3 -aminofenyljpentyl]-1-naftylamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,21 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 26D v 2 ml dimetylformamidu, 39 mg (0,23 mmol) kyseliny 2-chlór-3-aminobenzoovej, 29 mg (0,21 mmol) HOBT, 40 mg (0,21 mmol) EDC a 0,15 ml (1,10 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent
1,5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 97 mg bielej pevnej látky (t. t. 110 - 112 °C).
Výťažok: 74 % 'H NMR (CDClj): δ 7,90 (s, IH); 7,81 (m, 4H); 7,75-7,21 (m, 9H); 6,95 (t, J=7,8 Hz, IH); 6,75 (m, IH); 6,51 (d, J=8,2 Hz, IH); 6,12 (d, >5,9 Hz, IH); 5,95 (s, IH); 4,50 (m, IH); 4,21 (s, 2H);.4,15 (m, IH); 3,51 (m, 2H); 3,00 (m, 3H); 1,49 (s, 9H)
Analýza pre Cj6H36N3O3SCl vypočítané: C 69,05; H 5,79; N 6,71 namerané: C 69,21; H 5,85; N 6,54
Príklad 11 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(3-aminofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 38 mg (0,28 mmol) kyseliny 3-aminobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 90 mg bielej pevnej látky (t. t. 101-102 °C).
Výťažok: 72 % ‘H NMR (CDClj): δ 7,87 (s, IH); 7,78 (m, 2H); 7,61-7,22 (m, 10H); 6,96 (t, >7,7 Hz, IH); 6,76 (m, IH); 6,52 (d, >7,8 Hz, IH); 6,04 (d, >6,1 Hz, IH); 5,91 (s, IH); 4,50 (m, IH); 4,20 (s, 2H); 4,15 (m, IH); 3,50 (m, 2H); 3,01 (m, 3H); 1,49 (s, 9H)
Analýza pre Cj,H1sNjOjS vypočítané: C 70,95; H 6,51; N 7,76 namerané: C 71,21; H 6,72; N 7,72
Príklad 12 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2’-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(3-hydroxyfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 50 mg (0,12 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 20 mg (0,14 mmol) kyseliny 3-hydroxybenzoovej, 16 mg (0,12 mmol) HOBT, 22 mg (0,12 mmol) EDC a 0,081 ml (0,58 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 50 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 36 mg bielej pevnej látky (t. t. 125 - 128 °C).
Výťažok: 57 % 'H NMR (CDClj): δ 7,87 (s, IH); 7,73 (m, 3H); 7,50-7,20 (m, 7H); 7,15-6,95 (m, 4H); 6,80 (m, IH); 6,50 (s, IH); 6,30 (m, IH); 5,95 (s, IH); 4,53 (m, IH); 4,10 (m, 2H); 3,45 (m, 2H); 3,03 (dd, 3=13,4, 10,5 Hz, 1 H); 2,90 (dd, >13,4,3,5 Hz, 1 H); 1,46 (s, 9H) HR
MS (FAB) m/e pre C32H34N2O4S vypočítané: 675,1294 namerané: 675,1311
Príklad 13 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metylfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 50 mg (0,12 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 19 mg (0,14 mmol) kyseliny 2-metylbenzoovej, 16 mg (0,12 mmol) HOBT, 22 mg (0,12 mmol) EDC a 0,081 ml (0,58 mmol) trietylamínu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 40 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 33 mg bielej pevnej látky (t. t. 85 - 87 °C).
SK 284116 Β6
Výťažok: 52 % 'H NMR (CDCIj): δ 7,89 (d, J=l,0 Hz, IH); 7,76 (m, 3H);
7.52- 7,15 (m, 1 IH); 7,02 (t, J=7,4 Hz, IH); 6,48 (d, J=9,0 Hz, IH); 6,08 (d, J=6,l Hz, IH); 5,89 (s, IH); 4,53 (m, IH); 4,02 (m, IH); 3,48 (d, J=6,8 Hz, 2H); 3,00 (dd, J=13,4, 10,2 Hz, IH); 2,92 (dd, J=13,4, 3,6 Hz, IH); 2,46 (s,3H); 1,45 (s, 9H)
HR MS (FAB) m/e pre CjjH36N2O3S vypočítané: 673,1501 namerané: 673,1504
Príklad 14 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5l-(2-metyl-3,5-diaminofenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 50 mg (0,12 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2 ml dimetylformamidu, 23 mg (0,14 mmol) kyseliny 2-metyl-3,5-diaminobenzoovej, 16 mg (0,12 mmol) HOBT, 22 mg (0,12 mmol) EDC a 0,081 ml (0,58 mmol) trietylamínu. Surový olejovitý odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 28 mg temer bieleho prášku (t. t. 125 - 128 °C).
Výťažok: 42 % 'H NMR (CDCIj): δ 7,90 (d, J=1,2 Hz, IH); 7,70 (m, 3H);
7.53- 7,20 (m, 10H); 6,35 (d, J=9,3 Hz, IH); 6,15 (br.m, IH); 6,01 (d, J=2,l Hz, IH); 5,92 (s, IH); 5,83 (d, J=2,l Hz, IH); 4,50 (m, IH); 3,96 (m, IH); 3,50 (m, 4H); 3,03 (dd, J=13,4, 10,2 Hz, IH); 2,91 (dd, J=13,4, 3,5 Hz, 1 H); 2,10 (s, 3H); 1,47 (s, 9H)
HR MS (FAB) m/e pre CjjHjgNAS vypočítané: 703,1719 namerané: 703,1733
Príklad 15 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2,3-di-chlórfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 75 mg (0,18 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 1 ml dimetylformamidu, 40 mg (0,21 mmol) kyseliny 2,3-dichlórbenzoovej, 24 mg (0,18 mmol) HOBT, 34 mg (0,18 mmol) EDC a 0,12 ml (0,88 mmol) trietylamínu. Surový olejovitý odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 25 - 50 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 75 mg bielej pevnej látky (t. t. 116 - 119 °C).
Výťažok: 74 % ’H NMR (CDCIj): δ 7,90 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,52-7,20 (m, 9H); 7,13 (dd, J=7,9, 1,2 Hz, IH); 7,00 (t, J=7,8 Hz, IH); 6,64 (d, J=9,9 Hz, IH); 5,88 (br.s, IH); 4,52 (m, IH); 4,03 (m, 1 H); 3,50 (d, >6,0 Hz, 2H); 3,00 (m, 2H); 1,44 (s, 9H)
Analýza pre Cj2H32N2O3SCl2 vypočítané: C 64,53; H 5,42; N 4,70 namerané: C 64,54; H 5,50; N 4,73
Príklad 16 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-a7.a-5’-oxo-5'-(2-chlór-5-aminofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 75 mg (0,18 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 1 ml dimetylformamidu, 36 mg (0,21 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 29, 24 mg (0,18 mmol) HOBT, 34 mg (0,18 mmol)
EDC a 0,12 ml (0,88 mmol) trietylamínu. Surový olejovitý odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 50 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 90 mg bielej pevnej látky (t. 1.109-110 °C).
Výťažok: 90 % 'H NMR (CDCIj): δ 7,89 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,52-7,21 (m, 10H); 7,04 (d, J=8,3 Hz, IH); 6,73 (m, IH); 6,55 (m, 2H); 5,92 (br.s, IH); 4,50 (m, IH); 3,99 (m, 2H); 3,52 (d, J=5,6 Hz, 2H); 3,02 (m, 2H); 1,45 (s, 9H) Analýza pre C32H34N3O3SC1 vypočítané: C 66,71; H 5,95; N 7,29 namerané: C 66,94; H 6,34; N 6,92
Príklad 17 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4’-aza-5’-oxo-5’-(2’’-chlór-3’’-hydroxyfenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 42 použitím 75 mg (0,18 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 1 ml dimetylformamidu, 36 mg (0,21 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 14, 24 mg (0,18 mmol) HOBT, 34 mg (0,18 mmol) EDC a 0,12 ml (0,88 mmol) trietylamínu. Surový olejovitý odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 25 - 50 % etylacetátu v hexáne). Získalo sa 71 mg bielej pevnej látky (t. t. 104- 105 °C).
Výťažok: 71 % 'H NMR (CDCIj): 8 7,90 (d, J=1,0 Hz, IH); 7,70 (m, 3H); 7,52-7,19 (m, 8H); 7,00 (m, 2H); 6,87 (m, IH); 6,64 (d, J=9,l Hz, IH); 5,89 (s, IH); 4,52 (s, IH); 4,04 (m, IH); 3,50 (d, J=6,l Hz, 2H); 3,05 (dd, J=13,4, 10,2 Hz, 2H); 2,94 (dd, J=13,4, 3,6 Hz, IH); 1,45 (s,9H) Analýza pre CjiHjjN/OjSCI vypočítané: C 66,59; H 5,76; N 4,85 namerané: C 66,64; H 5,90; N 4,93
Príklad 18 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(izochinol-5-yl)pentyl]benzamid
K roztoku 0,40 g (0,95 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E a 134 μΐ (1,22 mmol) N-metylmorfolínu v 15 ml tetrahydrofuránu bolo pridaných 0,45 g (1,33 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 30C. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 8 hodín a potom bola zriedená etylacetátom. Vzniknuté vrstvy boli oddelené a organická vrstva bola postupne premytá vodou a roztokom chloridu sodného a zahustená na surový produkt. Surový produkt bol čistený rýchlou chromatografiou (silikagél, 4 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 0,53 g bielej pevnej látky (t. t. 109-112 °C).
Výťažok: 97 % 'H NMR (CDCIj): ô 9,19 (s, IH); 8,50 (d, J=4,6 Hz, IH); 8,23 (d, J=5,9 Hz, IH); 7,92 (m, 2H); 7,76 (m, 3H); 7,56 (m, 3H); 7,43 (m, 3H); 7,32 (m, 2H); 7,24 (m, IH); 6,88 (d, J=9,0 Hz, IH); 6,05 (br.s, IH); 5,93 (s, IH); 4,64 (m, IH); 4,12 (m, IH); 3,51 (d, J=6,3 Hz, 2H);3,01 (m, 2H); 1,40 (s, 9H) IR (film): 3428; 3019; 2978; 1647; 1514; 1215; 750 cm’1
HR MS pre Cj5H36N3O3S (MH+) vypočítané: 578,2477 namerané: 578,2468
Analýza pre CjsHjsNjOjS.O.I? CH2C12 vypočítané : C 71,33; H 6,02; N 7,10; S 5,41 namerané: C 71,35; H 6,00; N 7,09; S 5,44
Príklad 19 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-( 1 ,2,3,4-tetrahydroizochinol-5-yl)pentyl]benzamid
K roztoku 0,15 g (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny príkladu 57 v 6 ml kyseliny octovej bolo pridaných 0,08 g (1,27 mmol) trihydridokyanoboritanu sodného. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 3 hodiny a potom bola reakcia ukončená pridaním nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Žiadaná zlúčenina potom bola extrahovaná etylacetátom. Organické extrakty boli premyté postupne vodou, roztokom chloridu sodného a zahustené pri zníženom tlaku na penu. Táto pena bola čistená rýchlou chromatografiou (silikagél, eluent 4 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 0,10 g bielej amorfnej látky (t. t. 197 - 199 °C).
Výťažok: 66 % 'H NMR (CDClj): δ 7,85 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,50-7,20 (m, 7H); 7,06 (m, IH); 6,95 (m, 2H); 6,59 (d, J=9,l Hz, IH); 6,02 (s, IH); 4,48 (br.s, IH); 4,00 (br.s, IH); 3,98 (s, 2H); 3,45 (m, 2H); 3,01 (s, IH); 2,98 (d, 3=6,0 Hz, 3H); 2,89 (m, 3H); 1,44 (s, 9H); OH nepozorovaný IR (film): 3418; 3281; 3019; 1632; 1516; 1215; 756 cm'1 HR MS pre CjjH^NjOjS vypočítané: 582,2790 namerané: 582,2792
Analýza pre C35H33N3O3S.0,17 CH2C12 vypočítané: C 70,85; H 6,65; N 7,05; S 5,38 namerané: C 70,85; H 6,74; N 7,16; S 5,42
Príklad 20 [2'R-(2'R*,3lS*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-N-(metyl)-l,2,3,4-tetrahydroizochinol-5-yl)pentyl]benzamid
K horúcemu (60 °C) roztoku 0,11 g (0,19 mmol) titulnej zlúčeniny príkladu 57 v 3 ml tetrahydrofuránu bolo pridaných 53 mg (1,40 mmol) tetrahydridoboritanu sodného a 75 μΐ kyseliny mravčej. Po zhruba 1 hodine bola reakcia zastavená pridaním nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Žiadaná zlúčenina potom bola extrahovaná etylacetátom a organické extrakty boli postupne premyté vodou a roztokom chloridu sodného a potom zahustené na penu. Táto pena bola čistená rýchlou chromatografíou (silikagél, eluent 5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 0,05 g bielej amorfnej pevnej látky (t. t. 110-113 °C). Výťažok: 44 %
Ή NMR (CDClj): δ 7,86 (s, 1 H); 7,75 (m, 3H); 7,50-7,20 (m, 7H); 7,00 (m, 3H); 6,46 (d, J=9,0 Hz, IH); 6,13 (d, J=5,0 Hz, IH); 5,96 (s, IH); 4,45 (m, IH); 3,97 (m, IH); 3,54 (s, 2H); 3,46 (m, 2H); 3,20-2,90 (m, 4H); 2,60 (t, J=5,9 Hz, 2H); 2,40 (s, 3H); 1,44 (s, 9H)
IR (film): 3432; 3019; 2976; 1645; 1516; 1215; 756 cmHR MS pre Cj6H42N3O3S (MH+) vypočítané: 596,2947 namerané: 596,2939
Analýza pre C36H4iN3O3S.0,32 CH2C12 vypočítané: C 70,02; H 6,74; N 6,75; S 5,15 namerané: C 70,03; H 6,74; N 6,81; S 5,24
Príklad 21 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-fenyl-metyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(l,2,3,4-tetrahydroizochinol-5-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 58.
‘H NMR (CDClj): δ 7,42 (m, 10H); 7,00 (m, 3H); 6,28 (d, J=9,4 Hz, IH); 5,95 (s, IH); 4,60 (m, 1 H); 3,95 (br.s, 3H); 3,20-2,80 (m, 7H); 2,62 (m, 1 H); 1,47 (s, 9H) Analýza pre C31H37N3O3.MetOH vypočítané: C 72,29; H 7,77; N 7,90 namerané: C 72,61; H 7,58; N 7,61
Príklad 22 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3’-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(naft-1 -yl)pentyl]benzamid
K chladnému (0 °C) roztoku 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E v 2,0 ml dimetylformamidu bolo pridaných 45 mg (0,26 mmol) kyseliny 1-naftoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu. Vzniknutá reakčná zmes reagovala zhruba 1 hodinu pri 0 °C, 16 hodín pri laboratórnej teplote a potom bola zriedená 10 ml etylacetátu. Vzniknutá zmes bola premytá vodou, sušená síranom sodným, filtrovaná a potom zahustená pri zníženom tlaku na odparok. Tento odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 5 % metanolu v dichlórmetáne). Bolo získaných 82 mg bielej pevnej látky (t. t. 92 - 95 °C).
Výťažok: 63 % 'H NMR (CDClj): δ 8,35 (br.s, IH); 7,95-7,68 (m, 73H); 7,62-7,30 (m, 10H); 6,71 (d, J=8,9 Hz, IH); 6,10 (d, J=6,2 Hz, IH); 5,89 (s, IH); 4,61 (m, IH); 4,26 (m, IH); 3,51 (m, J=8,9 Hz, 21 H); 3,0 (m, 2H); 1,51 (s, 9H)
Analýza pre C36H36N2O3S vypočítané: C 74,97; H 6,29; N 4,86 namerané : C 75,13; H 6,45; N 4,49
Príklad 23 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5l-oxo-5'-(indol-4-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 42 mg (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 32, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 43 mg bielej pevnej látky (t. 1.109 -110 °C). Výťažok: 35 % ‘H NMR (CDClj): δ 8,45 (br.s, IH); 7,90 (s, IH); 7,76 (m, 3H); 7,57-7,23 (m, 10H); 7,19-6,98 (m, 3H); 6,24 (d, J=6,2 Hz, IH); 5,97 (s, IH); 4,63 (m, IH); 4,13 (m, IH); 3,51 (m, 2H); 3,01 (m, 2H); 1,49 (s, 9H)
Analýza pre C34Hj6N30jS vypočítané : C 72,18; H 6,24; N 7,43 namerané: C 72,31; H 6,37; N 7,22
Príklad 24 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-tcrc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(chinol-5-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 57 použitím 60 mg (0,15 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 42 μΐ (0,38 mmol) N-metylmorfolínu a 74 mg (0,38 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 31 v 2 ml tetrahydrofuránu. Získalo sa 45 mg bielej pevnej látky.
Výťažok: 54 % ‘H NMR (CDClj): δ 8,85 (m, 1 H); 8,75 (m, 1 H); 8,75 (d, J=8,21 Hz, 1 H); 8,07 (m, 2H); 7,95 (s, 1 H); 7,76 (m, 3H); 7,64 (m, 2H); 7,54 (m, 2H); 7,44 (m, 2H); 7,38 (m, 3H);
7,25 (m, IH); 4,88 (s, 2H); 4,45 (m, 2H); 4,05 (m, IH); 3,69 (dd, J=14,0, 2,9 Hz, IH); 3,23 (m, 1 H); 3,05 (m, 2H); 1,32 (s, 9H)
IR (KBr): 3485; 3429; 3279; 3061; 2964; 1638; 1543; 1454; 1364; 1319; 1219; 1072; 806; 746 cm'1 HR MS pre C35H36N3O3S (MH+) vypočítané: 578,2477 namerané: 578,2491
Analýza pre Ο35Η35Ν3Ο38.0,6 H2O vypočítané: C 71,42; H 6,20; N 7,14; S 5,45 namerané: C 71,44; H 6,16; N 7,19; S 5,41
Príklad 25 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(ľ',2,3,4-tetrahydrochinol-5-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 58 použitím 23 mg (0,36 mmol) trihydridokyanoboritanu sodného, 41 mg (0,07 mmol) titulnej zlúčeniny príkladu 63 a 2 ml kyseliny octovej. Získalo sa 24 mg bielej amorfnej pevnej látky. Výťažok: 60 % 'H NMR (CDClj): δ 7,88 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,42 (m, 6H); 6,79 (t, J=7,73 Hz, IH); 6,54 (d, 3=7,28 Hz, IH); 6,44 (d, 3=8,15 Hz, 2H); 6,10 (br.s, IH); 5,91 (br.s, IH); 4,45 (m, IH); 4,05 (m, IH); 3,48 (m, 2H); 3,24 (t, 3=5,50 Hz, 2H); 2,89 (m, 4H); 1,85 (m, 2H);l,46(s,9H)
IR (KBr): 3450; 2972; 1638; 1618; 1591; 1512; 1454; 1309; 1119; 1134; 1086; 814; 698; 621 cm'1 HR MS pre C35H40N3O3S (MH+) vypočítané: 582,2790 namerané: 582,2792
Príklad 26 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(indolin-4-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25 E, 42 mg (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 32, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent
1,5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 12 mg bielej pevnej látky (t. t. 83 - 84 °C).
Výťažok: 9 % 'H NMR (CDClj): δ 7,99 (s, IH); 7,76 (m, 3H); 7,69-7,23 (m, 10H); 7,10 (d, 3=8,8 Hz, IH); 6,60 (d, 3=8,9 Hz, IH); 5,99 (d, J=6,2 Hz, IH); 5,89 (s, IH); 4,53 (m, IH); 4,11 (m, 1 H); 3,44 (m, 6H); 3,01 (m, 2H); 1,49 (s, 9H) Analýza pre C34H37N3O3S vypočítané: C 71,92; H 6,57; N 7,40 namerané : C 72,21; H 6,72; N 7,26
Príklad 27 [2'R-(2'R*,3‘S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naň-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(chinol-4yl)-pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 45 mg (0,26 mmol) kyseliny chinolín-4-karboxylovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent
1,5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 42 mg bielej pevnej látky (t. t. 89 - 92 °C).
Výťažok: 32 % ‘H NMR (CDClj): δ 8,59 (s, IH); 8,33 (d, J=7,9 Hz, IH); 8,09 (d, 3=8,4 Hz, IH); 7,93 (s, IH); 7,80-7,71 (m, 4H); 7,69-7,25 (m, 8H); 7,15 (s, IH); 6,88 (d, J=8,4 Hz, IH);
5,799 (s, IH); 5,85 (s, IH); 4,63 (m, IH); 4,21 (m, IH); 3,51 (d, j=6,2 Hz, 2H); 3,02 (m, 2H); 1,39 (s, 9H) Analýza pre Cj5Hj5N30jS vypočítané: C 72,76; H 6,11; N 7,27 namerané: C 72,91; H 6,33; N 7,36
Príklad 28 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-tiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2''-metyl-3-nitrofenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25 E, 47 mg (0,26 mmol) kyseliny 2-metyl-3-nitrobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2,0 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne).
Získalo sa 100 mg bielej pevnej látky (t. t. 80 - 81 °C). Výťažok: 74 % 'H NMR (CDClj): δ 7,89 (s, IH); 7,75 (m, 3H); 7,65-7,25 (m, 2H); 7,10 (d, 3=7,9 Hz, IH); 6,63 (d, 3=8,9 Hz, IH); 5,97 (d, 3=6,0 Hz, IH); 5,87 (s, IH); 4,53 (m, IH); 4,11 (m, IH); 3,44 (m, 3=6,3 Hz, 2H); 3,03 (dd, 3=13,3, 10,2 Hz, IH); 2,28 (dd, 3=13,5 Hz, lH);2,53(s,3H);l,47(s,9H) Analýza pre C33H35N3O5S vypočítané: C 67,67; H 6,02; N 7,17 namerané : C 67,83; H 5,93; N 7,05
Príklad 29 [2'R-(2'R,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2’-hydroxy-3’-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(3-nitro-6-metylfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25 E, 47 mg (0,26 mmol) kyseliny 2-metyl-5-nitrobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2,0 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 102 mg bielej pevnej látky (t. t 85 - 88 °C).
Výťažok: 75 % ’H NMR (CDClj): δ 8,17 (s, IH); 8,07 (d, 3=8,4 Hz, IH); 7,78 (m, 2H); 7,59-7,22 (m, 10H); 6,71 (d, 3=8,9 Hz, IH); 6,03 (d, 3=6,1 Hz, IH); 5,90 (s, IH); 4,52 (m, IH); 4,13 (m, IH); 3,45 (d, 3=6,2 Hz, 2H); 3,03 (dd, 3=13,3, 9,61 Hz, IH); 2,90 (dd, 3=13,3, 3,72 Hz, lH);2,55(s,3H); 1,43(s,9H) Analýza pre C33H35N3O5S vypočítané: C 67,67; H 6,02; N 7,17 namerané: C 67,92; H 6,22; N 7,02
Príklad 30 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(l-N-(mctyl)indol-4-yl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 46 mg (0,26 mmol) kyseliny l-N-metylindol-4-karboxylovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 1 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 42 mg bielej pevnej látky (t. t. 86 - 89 °C).
Výťažok: 31 % 'H NMR (CDClj): δ 7,88 (s, IH); 7,79-7,65 (m, 3H); 7,53-6,95 (m, 13H); 6,22 (d, >6,3 Hz, IH); 5,99 (s, IH); 4,67 (m, 1 H); 4,13 (m, IH); 3,75 (s, 3H); 3,51 (m, 2H); 3,03 (m, 2H);1,49 (s,9H)
Analýza pre CjjHjjNjOjS vypočítané: C 72,51; H 6,43; N 7,25 namerané: C 72,83; H 6,51; N 7,15
Príklad 31 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl)-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3,4-dihydroxyfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 44 mg (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 33C, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2,0 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent
2,5 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 76 mg bielej pevnej látky (t. t. 121 -123 °C).
Výťažok: 58 % ‘H NMR (CDClj): δ 7,89 (s, IH); 7,75 (m, 2H); 7,55-7,22 (m, 10H); 6,85 (t, >7,9 Hz, 1 H); 6,72 (m, 2H); 6,61 (d, >5,7 Hz, 1 H); 6,50 (d, >9,4 Hz, 1 H); 6,13 (s, 1 H); 5,92 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,09 (m, IH); 3,51 (m, 2H); 3,12 (dd, >13,1, 10Hz, IH); 2,87 (dd, J=13,l, 3,1 Hz, 1 H); 2,13 (s, 3H); 1,46 (s, 9H)
Analýza pre C3jHj6N2O5S vypočítané: C 69,21; H 6,34; N 4,89 namerané: C 69,43; H 6,72; N 4,72
Príklad 32 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(3-hydroxyfenyl)pentyl]benzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 45 mg (0,26 mmol) kyseliny 2-chlór-4-aminobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2,0 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografíou (eluent 2 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 92 mg bielej pevnej látky (t. t. 102 - 104 °C).
Výťažok: 69 % 'H NMR (CDClj): δ 7,88 (s, IH); 7,77 (m, 2H); 7,61-7,23 (m, 9H); 6,95 (t, J=7,70 Hz, IH); 6,75 (m, IH); 6,51 (d, >7,8 Hz, IH); 6,06 (d, J=6,l Hz, IH); 5,90 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,20 (s, 2H); 4,12 (m, IH); 3,50 (m, 2H); 3,01 (m, 3H); 1,48 (s, 9H)
Analýza pre C32H54N3O3SC1 vypočítané: C 66,71; H 5,95; N 7,29 namerané: C 66,92; H 5,97; N 7,16
Príklad 33 [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-5-hydroxyfenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25 E, 47 mg (0,26 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 29B, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 40 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2,0 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 86 mg bielej pevnej látky (t. t. 104 - 106 °C).
Výťažok: 67 % 'H NMR (CDClj): δ 7,85 (s, IH); 7,72 (m, IH); 7,60-7,22 (m, 9H); 6,92 (t, >7,50 Hz, IH); 6,72 (m, IH); 6,50 (d, >7,6 Hz, IH); 5,96 (s, IH); 5,90 (s, IH); 4,50 (m, IH); 4,02 (m, 1 H); 3,51 (m, 2H); 3,01 (m, 3H); 2,36 (s, 3H); 1,45 (s, 9H)
Analýza pre C3jH37NjOjS vypočítané: C 71,32; H 6,71; N 7,56 namerané: C 71,56; H 6,76; N 7,52
Príklad 34 [2lR-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5 '-oxo-5 '-(3 -hydroxy-4-aminofenyl)pentyljbenzamid
Titulná zlúčenina bola pripravená v podstate v súlade s postupom opísaným v príklade 61 použitím 100 mg (0,23 mmol) titulnej zlúčeniny prípravy 25E, 40 mg (0,26 mmol) kyseliny 3-hydroxy-4-aminobenzoovej, 32 mg (0,23 mmol) HOBT, 45 mg (0,23 mmol) EDC a 0,16 ml (1,20 mmol) trietylamínu v 2 ml dimetylformamidu. Surový odparok bol čistený rýchlou chromatografiou (eluent 3 % metanolu v dichlórmetáne). Získalo sa 43 mg bielej pevnej látky (t. t. 119-122 °C).
Výťažok: 34 % 'H NMR (CDClj): δ 7,91 (s, IH); 7,75 (m, 2H); 7,60-7,20 (m, 10H); 6,96 (t, J=7,9 Hz, IH); 6,75 (m, IH); 6,55 (d, >7,8 Hz, IH); 6,10 (s, IH); 5,95 (s, IH); 4,51 (m, IH); 4,23 (s, 2H); 4,12 (m, 1 H); 3,52 (m, 2H); 3,00 (m, 3H); 1,48 (s, 9H)
Analýza pre Cj2Hj5N3O4S vypočítané; C 68,92; H 6,33; N 7,53 namerané: C 69,12; H 6,57; N 7,32
Príklad 35
Kyselina 3 -(bisbenzyloxyfosfinyl)oxy-2-metylbenzoová
OPO(OBn)2 o
K chladnému (0 °C) miešanému roztoku 706 mg (4,67 mmol) kyseliny 3-hydroxy-2-metylbenzoovej v 30 ml pyridínu bolo prikvapkaných počas 5 minút 10,3 ml (10,21 mmol) 1 mol/1 roztoku lítiumhexametyldisilylazidu. Po päťhodinovom miešaní boli v jednej dávke pridané 3,0 g (5,57 mmol) tetrabenzyldifosfátu a reakčná zmes bola počas 30 minút zahriata na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes bola odparená a odparok roztrepaný medzi 2,5 mol/1 HC1 (200 ml) a zmes etylacetát/hexán (1:1) 1200 ml). Vrstvy boli oddelené, vodná vrstva dvakrát extrahovaná roztokom EtOAc/hexán (1 : 1). Organické vrstvy boli spojené, premyté roztokom NaCl a sušené Na2SO4. Čistenie surového produktu rýchlou chromatografiou (gradient eluentu 50 - 70 % EtoAc/hexán/2 % HAc) poskytlo 910 mg bledožltého oleja, ktorým je kyselina 3-(bisbenzyloxyfosfinyl)oxy-2-metylbenzoová.
Výťažok: 47 % 'H NMR (CDC13): δ 2,49 (s, 3H); 5,14 (d, >8,60 Hz, 4H); 7,10-7,40 (m, 11H); 7,48 (d, >8,09 Hz, IH); 7,81 (d, >7,80 Hz, IH); IR(CHC13): 3700-2350 (br); 1700; 1457; 1382; 1273; 1240; 1179; 1082; 1034; 1023; 1001; 966; 681; 851 cm’1
SK 284116 Β6
MS(FD): m/e 413 (M+, 100)
Príklad 36
Kyselina 3-(acetyl)hydroxy-2-metylbenzoová
K heterogénnemu roztoku 3,06 g (30 mmol) acetanhydridu a 1,53 g (10 mmol) kyseliny 3-hydroxy-2-metylbenzoovej bola pridaná jedna kvapka koncentrovanej kyseliny sírovej. Zmes bola zahrievaná pištoľou na horúci vzduch 2 minúty a potom vliata do 14 ml chladnej vody. Vzniknutá zrazenina bola odsatá, premytá dvakrát vodou a sušená cez noc vo vákuovej sušiarni. Rekryštalizáciou z 20 % etylacetátu v hexáne (7 ml) sa získalo 595 mg bielej pevnej látky, ktorou je kyselina 3-(acetyl)hydroxy-2-metylbenzoová. Výťažok: 31 %
IR (CHClj): 3700-2300 (br.); 1765; 1698; 1460; 1404; 1372; 1299; 1273; 1172; 1081; 1041; 1012; 933; 913; 865; 823 cm'1.
MS (FD):m/e 194(M+, 100)
Príklad 37
N-Boc-4-tio-L-prolín (dodáva Sigma) (1,5 g) bol rozpustený v 3 ml metanolu a ochladený na 0 °C v ľadovom kúpeli. V inej banke bolo 5,8 g „OXONE“ rozpusteného v 5 ml vody pokvapkaného do reakčnej zmesi. Po 30 minútach bola reakčná zmes ponechaná, aby dosiahla laboratórnu teplotu a miešaná cez noc. Potom bola zriedená CHClýH2O, separovaná a extrahovaná CHC13 (trikrát po 100 ml). Organické vrstvy boli spojené, sušené Na2SO3 a odparené pri zníženom tlaku. Získala sa zlúčenina zodpovedajúca uvedenému vzorcu (700 mg) ako biela pevná látka. Výťažok: 41 %
Ako bolo uvedené skôr, zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, sú použiteľné na inhibíciu HIV-proteázy, ktorá je enzýmom spojeným s produkciou a usporiadaním zložiek vírusu. Predložený vynález obsahuje spôsob liečenia infekcie HIV obsahujúci podávanie účinného množstva zlúčeniny vzorca (IB) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli hostiteľovi alebo pacientovi, akým je primát. Predložený vynález ďalej obsahuje spôsob liečenia AIDS obsahujúci podávanie účinného množstva zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli hostiteľovi alebo pacientovi. Ďalej predložený vynález obsahuje spôsob inhibície HlV-proteázy predstavujúci podávanie účinného množstva zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli bunke infikovanej HIV alebo hostiteľovi alebo pacientovi, akým je primát.
Termín „účinné množstvo“ znamená množstvo látky vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, ktoré je účinné na inhibíciu HlV-proteázou sprostredkovanou produkcie alebo usporiadania zložiek vírusu. Špecifická dávka zlúčeniny podávanej podľa tohto vynálezu na dosiahnutie terapeutických alebo inhibičných účinkov bude ale určovaná zvláštnymi okolnosťami vzťahujúcimi sa na prípad vrá tane napr. podávanej zlúčeniny, spôsobu podávania, stavu liečby a liečeného hostiteľa alebo pacienta. Príkladne denné dávky (podávané ako jedna alebo rozdelené dávky) dosahujú úrovne dávkovania od zhruba 0,01 mg/kg do zhruba 50 mg/kg zlúčeniny tohto vynálezu na telesnú váhu. Výhodné denné dávky sú všeobecne od zhruba 0,05 mg/kg do zhruba 20 mg/kg a výhodnejšie od zhruba 0,1 mg/kg do zhruba 10 mg/kg.
Zlúčeniny, ktoré sú predmetom tohto vynálezu, môžu byť podávané mnohými spôsobmi vrátane orálnych, rektálnych, transdermálnych, subkutánnych, intravenóznych, intramuskulámych a intranazálnych. Zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, sú výhodne pripravené pred podávaním. Preto ďalej predložený vynález obsahuje farmaceutické kompozície alebo prípravky obsahujúce účinné množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli a farmaceutický prijateľný nosič, akým je riedidlo alebo vehikulum.
Aktívne prísady výhodne predstavujú od 0,1 - 99,9 % hmotnosti prípravku. „Farmaceutický prijateľným“ sa rozumie nosič, akým je riedidlo alebo vehikulum, kompatibilný s inými zložkami a nie je škodlivý pre hostiteľa alebo pacienta.
Farmaceutické prípravky môžu byť pripravené zo zlúčenín tohto vynálezu známymi spôsobmi používajúcimi známe a ľahko dostupné prísady. Pri príprave kompozícií, ktoré sú predmetom tohto vynálezu, je aktívna zložka obvykle zmiešaná s nosičom, zriedená nosičom alebo uzavretá do nosiča, ktorý môže byť vo forme kapsuly, taštičky, papiera alebo iného vhodného obalu. Pokiaľ nosič slúži ako riedidlo, môže ním byť pevný, polopevný alebo kvapalný materiál, ktorý pôsobí ako vehikulum, masťový základ alebo prostredie pre aktívnu prísadu. Kompozícia môže byť teda vo forme tabliet, piluliek, prášku, pastiliek, taštičiek, elixíru, suspenzií, emulzii, roztokov, sirupov, aerosólov (ako pevné alebo kvapalné prostriedky), masti (obsahujúcej napr. do 10 % (hmotnostných) aktívnej zlúčeniny), mäkkých alebo pevných želatínových kapsúl, čapikov, sterilných injekčných roztokov, sterilné balených práškov a pod.
Nasledujúce príklady prípravkov sú len ilustratívne a nie sú zamerané na obmedzovanie rozsahu vynálezu. Termín „aktivitazložka“ predstavuje zlúčenina vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ.
Prípravok 1
Pevné želatínové kapsuly sa pripravia použitím nasledujúcich prísad:
zložka množstvo (rng/kaosula)
aktívna zložka 250
škrob sušený 200
stearan horečnatý 10
celkom 460 mg
Prípravok 2
Na prípravu tabliet sa použijú uvedené zložky:
zložka množstvo (fns/kaDsula)
aktívna zložka 250
celulóza mikrokryštalická 400
oxid kremičitý, aerogél 10
kyselina stearová 5
celkom 665 mg
Zložky sú zmiešané a lisované do tabliet, z ktorých každá má hmotnosť 665 mg.
SK 284116 Β6
Prípravok 3
Na prípravu aerosólového roztoku obsahujúceho nasledovné zložky:
zložka hmotnosť í g)
aktívna zložka 0,25
etanol 25,75
propelant 22 (chlórdifluórmetán) 74.00
celkom 100,00
Aktívna zložka sa preoseje na site s okami 0,250 mm a resuspenduje sa v glyceridoch nasýtených mastných kyselín vopred roztavených použitím minimálneho potrebného tepla. Zmes sa potom vleje do čapíkovej formy s nominálnou kapacitou 2 g a nechá sa vychladnúť.
Prípravok 7
Suspenzia obsahujúca 50 mg aktívnej zložky v 5 ml dávky sa pripraví takto:
Aktívna zložka sa zmieša s etanolom a zmes sa pridá k časti propelantu 22 ochladenej na -30 °C a prevedie do plniaceho zariadenia. Požadované množstvo sa prevedie do nádoby z nehrdzavejúcej ocele a zriedi sa zvyškom propelantu. Nádoba sa potom obstará ventilovou jednotkou.
Prípravok 4
Tablety, z ktorých každá obsahuje 60 mg aktívnej zložky, sa pripravia takto:
zložka množstvo (mg/tableta)
aktívna zložka 60
škrob 45
celulóza mikrokryštalická 35
polyvinylpyrolidón 4
(ako 10 % roztok vo vode)
karboxymetylovaný škrob, sodná soľ 4,5
stearan horečnatý 0,5
talok 1
celkom 150
Aktívna zložka, škrob a celulóza sa preosejú na site s okami 0,354 mm a dôkladne sa premiešajú. So vzniknutýn práškom sa zmieša vodný roztok obsahujúci polyvinylyrolidón a zmes sa preoseje na site s okami 1,41 mm. Vzniknuté granuly sa sušia pri 50 °C a preosejú sa na site s okami 1,00 mm. Sodná soľ karboxymetylovaného škrobu, stearan horečnatý a talok, vopred preosiate na site s okami 0,250 mm, sa potom pridajú ku granulám, ktoré sa lisujú na tabletovacom stroji na tablety, z ktorých každá má hmotnosť 150 mg.
Prípravok 5
Kapsuly, z ktorých každá obsahuje 80 mg aktívnej zložky, sa pripravujú takto:
zložka množstvo (mg/kapsula)
aktívna zložka 80
škrob 59
celulóza mikrokryštalická 59
stearan horečnatý 2
celkom 200
Aktívna zložka, celulóza, škrob a stearan horečnatý sa zmiešajú, preosejú na site s okami 0,354 mm a plnia do tvrdých želatínových kapsúl v množstve 200 mg.
Prípravok 6
Capíky, z ktorých každý obsahuje 225 mg aktívnej zložky, sa pripravia takto:
zložka hmotnosť (mg)
aktívna zložka 225
glyceridy nasýtených 2000
mastných kyselín
celkom 2225
zložka množstvo
aktívna zložka 50 mg
karboxymetylcelulóza, sodná soľ 50 mg
sirup 1,25 ml
roztok kyseliny benzoovej 0,10 ml
vonné látky q. v.
farbidlá a. v.
čistá voda do celkového objemu 5,00 ml
Aktívna zložka sa preoseje na site s okami 0,354 mm a premieša sa so sodnou soľou karboxymetylcelulózy a sirupom na jemnú pastu. Roztok kyseliny benzoovej, vonné látky a farbivá sa zriedia časťou vody a pridajú sa za miešania. Potom sa pridá potrebné množstvo vody do požadovaného objemu.
Prípravok 8
Intravenózny prípravok sa pripraví takto:
zložka_____________________________množstvo aktívna zložka 100 mg izotonický fyziologický roztok 1000 ml
Roztok uvedených zložiek je všeobecne podávaný intravenózne rýchlosťou 1 ml/min.
Vyšetrenie aktivity
Na testovanie biologickej aktivity zlúčenín inhibujúcich HlV-proteázu boli použité mnohé testy. Napríklad testy boli použité na analýzu proteolytických inhibičných rýchlostí a antivírusových účinkov bunkových línií infikovaných HIV. Postupy týchto pokusov sú opísané ďalej. Výsledky týchto skúšok sú zhrnuté v tabuľke 1 uvedenej neskôr alebo sú zhrnuté v príkladoch uvedených skôr.
I. Primáme liekové vyšetrenie anti-HIV zlúčenín v Southem Research Inštitúte (SRI) (Výsledky zaznamenané v tabuľke 1 sú označené „SRI CEM (ng/ml)“ alebo „SRI MT2 (ng/ml)“)
A. Princíp stanovenia MTT
SRI vyvinul program na primárnu antivírusovú analýzu zlúčenín v mikrotitračnom stanovení, ktoré meria schopnosť vybranej zlúčeniny inhibovať ničenie buniek indukované HIV. Táto skúška predstavuje premenu tetrazóliového farbiva MTT na farebný formazánový produkt mitochondriálnymi enzýmami metabolický aktívnych buniek. Tento systém stanovenia je používaný v SRI na vyšetrenie viac ako 30 000 zlúčenín za rok. Stanovenie obsahuje infekciu buniek CEM alebo MT2 na doskách s 96 jamkami s guľatým dnom. Testovaná zlúčenina sa pridá tesne pred infekciou. Po 6 hodinách inkubácie sú dosky ofarbené MTT. Výsledky stanovenia sú kvantifikovanc spcktrofotometricky na čítačke dosiek „Molecular Devices Vmax“. Údaje sú analyzované lineárnou regresiou použitím vlastného softwarového programu na výpočet antivírusovej aktivity
SK 284116 Β6 (IC25, IC50, IC95), toxicity (TC25, TC50, TC95) a tiež iných hodnôt.
Primáme antivírusové skúšky sú rutinne uskutočňované na bunkách CEM alebo NT2. SRI zistil, že všetky aktívne zlúčeniny boli identifikované bunkami CEM, zatiaľ čo pokusy uskutočnené s líniou buniek MT2 pozabudli na malý podiel aktívnych zlúčenín.
B. Štandardné vyšetrovacie stanovenie na bunkách CEM a MT2
1. Riedenie zlúčenín a nanášanie na dosky.
Lieky sú rozpustené v zodpovedajúcom vehikule, akým je destilovaná voda alebo DMSO, ak je to nevyhnutné. Latexové rukavice, laboratórne plášte a masky sú používané vo všetkých fázach pracovného postupu, aby sa zabránilo expozícii potenciálne škodlivými činidlami. Liek je pripravený v zodpovedajúcej koncentrácii a je skladovaný pri -20 °C, dokedy sa nepoužije v skúšobnom laboratóriu. Prvé zriedenie každej zlúčeniny sa vykoná médiom v zricďovacej skúmavke a dosiahne sa dvojnásobná koncentrácia vzhľadom na najvyššiu testovanú koncentráciu. Potom sa použijú sterilné titračné skúmavky na prípravu sériových polovičných („one half log“) zriedení každej zlúčeniny. Podľa zriedenia lieku je zriedená zlúčenina pridaná do zodpovedajúcej jamky 96-jamkovej mikrotitračnej dosky. Až 12 zriedení môže byť stanovených triplicitne na jednej doske so všetkými príslušnými kontrolami vrátane kontroly buniek, kontroly vírusu, kontroly toxicity, kontroly farby lieku, kontroly média a kontroly plastu (pozadia). Pokiaľ testy obsahujú iba šesť zriedení, môžu byť testované dva lieky na jednej mikrotitračnej doske. Lieky sa pridávajú na dosku v konečnom objeme 100 pl.
2. Bunky a vírus
Počas riedenia liekov sú premývané a počítané bunky. Životaschopnosť sa monitoruje vylúčením farbiva trypanovej modrej a stanovenia sa neuskutočňujú, ak životaschopnosť klesne pod 90 %. Bunky sú udržiavané v exponenciálnej rastovej fáze a sú rozdelené na polovice jeden deň pred skúškou, aby sa zistila exponenciálna rastová rýchlosť.
Na primárne vyšetrenie sú používané línie buniek CEM a MT2. Pokiaľ nie je inak uvedené, použitým médiom je RPMI 1640 s 10 % tepelne inaktivovaného fetálneho teľacieho séra (FBS), glutamínu a antibiotík.
Bunky sú propagované pri 37 °C v atmosfére 5 % CO2 vo vzduchu. V tejto práci je používaný vírus HIV-1, izoláty IIIB a/alebo RF, ktoré boli pripravené akútnym infekčným procesom.
Vírusom infikované bunky sú peletované na dennej báze počínajúc tri dni po infekcii, dokiaľ vírus nezničí všetky bunky v kultúre. Na identifikáciu súborov s najväčším množstvom vírusu sa používa aktivita reverznej transkriptázy a p24 ELISA.
Tieto 24-hodinové zbery sú zhromažďované, filtrované a mrazené pri -90 °C. Pred použitím v skúškach je infekčný súbor vírusu titrovaný na všetkých dostupných líniách buniek, aby sa stanovilo množstvo vírusu potrebné na antivírusové skúšky.
Všeobecne súbory produkované metódou akútnej infekcie vyžadujú pridanie 1 pl infekčného vírusu do jamky, čo vedie pri vyšetrení liekov k multiplicite infekcie 0,01. Týmto spôsobom sa pripraví dostatok vírusu a zamrazí, čo vystačí na viac ako 100 mikrotitračných dosiek a umožní testovať až 200 zlúčenín z jednej dávky infekčného vírusu. Použitie jednej dávky vírusu v priebehu dlhého obdobia má priaznivý účinok na opakovateľnosť skúškových stanovení.
Vírusová infekcia buniek CEM a MT2 pre antivírusové stanovenia sa vykonáva hromadným infekčným procesom. Zodpovedajúci počet buniek požadovaný na uskutočnenie stanovenia je zmiešaný s aktívnym vírusom v kónickej centrifugačnej skúmavke v malom celkovom objeme 1 - 2 pl.
Po 4-hodinovej inkubácii sú infikované bunky použité na upravenie konečnej koncentrácie buniek 5 x 104 na ml čerstvým médiom pre tkanivové kultúry a 100 pl sa pridá do zodpovedajúcich jamiek na pokus a kontrolu vírusu. Neinfikované bunky rovnakej koncentrácie sú nanesené na kontrolu toxicity a kontrolu buniek. Stanovenia môžu byť tiež uskutočnené metódou infekcie v jamke. V tomto prípade sú liek, bunky a vírus pridané do jamky individuálne. V každom prípade sa MOI nastavuje tak, aby poskytlo úplné zničenie buniek v kontrolných jamkách vírusu po 6 dňoch.
3. Vyhodnotenie inhibície CPE
Po pridaní buniek a liekov na mikrotitračnú dosku je doska inkubovaná 6 dní pri 37 °C. Skúsenosť určila, že dlhšia inkubácia (7 - 8 dní) alebo použitie väčšieho počiatočného počtu buniek (1 x 104) vedie k významnému poklesu životaschopnosti kontrolných buniek a k zmenšeniu rozdielu optickej hustoty medzi kontrolami buniek a vírusu po vyfarbení MTT.
Metóda vyhodnotenia antivirusovej skúšky predstavuje pridanie 20 ml tetrazóliovej soli MTT v koncentrácii 5 mg/ml do každej jamky dosky na 4 - 8 hodín. Po tejto inkubačnej dobe sú bunky otvorené prídavkom 50 pl 20 % SDS v 0,01 mol/1 HCI.
Metabolická aktivita životaschopných buniek v kultivácii vedie k farebnému reakčnému produktu, ktorý sa stanovuje spektrofotometricky na snímači dosiek Molecular Device Vm, pri 570 nm. Optická hustota („optical density“) (OD) je funkciou množstva formazánového produktu, ktoré je úmerné počtu životaschopných buniek.
Snímač dosiek je „on-line“ zapojený na vyhodnocovací laboratórny mikropočítač, ktorý vyhodnocuje údaje z dosiek a počíta údaje pre dosky. Správa o doske poskytuje prehľad všetkých súvisiacich informácií obsahujúcich hrubé hodnoty OD, vypočítané priemerné hodnoty OD a percentuálne zníženie vo vírusových CPE, ako aj výpočty obsahujúce TC50, IC5() a antivírusové a špecifické indexy. Napokon je vo výsledkoch uvedený graf, ktorý vizuálne zobrazuje účinok zlúčeniny na neinfikované bunky (toxicita) a ochranný účinok, resp. neúčinnosť zlúčeniny na infikované bunky.
II. Vyšetrenie anti-HIV zlúčeniny na celých bunkách v Eli Lilly (výsledky označené v tabuľke 1 sú označené „Celé bunky IC50 nmol/1“' alebo „Celé bunky 1C9O nmol/ľ“)
A. Účel a materiál Účel: stanoviť IC50 a CG50 pre zlúčeniny
Činidlá a materiál:
médium A médium A s 1 % DMSO (0,1 ml DMSO a 9,9 ml média A) SN 123 použitá na infekciu buniek (15 ml na 6 dosiek, 10 ml na 4 dosky) bunky CEM, 1 x 104 bunick/ml (40 ml na 4 dosky, 60 ml na 6 dosiek)
DMSO (spotreba 5 ml)
35B pri 10 mmol/1 (spotreba 70 ml vždy) A až D pri 10mmol/l v 100 % DMSO 4 alebo 6 96-jamkových dosiek s dnom v tvare U 4 96-jamkové dosky s plochým dnom na riedenie
8-10 škatúľ sterilných špičiek „Costar“ zhruba 10 podnosov na činidlá pipeta „Costar 12-pette“
Dôležité údaje:
1000 buniek/jamka znamená 1 x 104 buniek/ml, a teda 1000 buniek/(100 μΙ)
200 μΐ = celkový objem jamky konečná koncentrácia DMSO = 0,25 % konečné zriedenie SN 123 = 1 : 64 sériovo riedené zlúčeniny 35B, A až D = 1 : 3
B. Postup
1. Príprava buniek a nanášanie buniek, príprava média A a média A s 1 % DMSO
a. očíslovanie 96-jamkových dosiek na kultiváciu tkanív pre každú testovanú zlúčeninu, jednej pre kontrolnú dosku, jednej pre kontrolnú zlúčeninu doska číslo ____________opis_______________ negatívna a pozitívna kontrola 35B
A
B
C
D
b. spočítanie buniek na hemacytometri a ich resuspendovanie v 40 alebo 80 ml média A pri koncentrácii 1 x x 104 buniek/ml
Spočítanie buniek na hemacytometri:
označenie dvoch 1,8 ml skúmaviek 1 a 2 („nunc tubes“), pridanie 0,5 ml dobre premiešaných buniek CEM (vo fáze ras tu) do skúmavky 1, pridanie 50 μΐ PBS a 40 μΐ trypanovej modrej do skúmavky 2, premiešanie buniek v skúmavke 1, odobranie 10 μΐ buniek a prenesenie do skúmavky 2, dobré premiešanie skúmavky 2, odobranie 10 μΐ vyfarbených buniek a prenesenie na hemacytometer, spočítanie počtu buniek v centrálnom štvorci hemacytometra mikroskopom so zväčšením 10 x, výpočet koncentrácie zásobných buniek CEM podľa vzťahu, spočítané bunky x 1 x 105= koncentrácia buniek CEM v bunkách/ml,
c. pridanie 200 μΐ média A do jamiek:
Al dosiek 2-6 (toto sú slepé pokusy)
A4 až H4 dosky 1 (toto sú slepé pokusy)
d. pridanie 5 μΐ média A do všetkých jamiek radov A až D dosiek 2-6 (horná polovica každej dosky)
e. pridanie 50 μΐ média A do jamiek Al až D3 dosky 1 (horná polovica dosky)
f. pridanie 50 μΐ média A s 50 % DMSO do všetkých jamiek stĺpcov 1 - 3 dosky 1
g. pridanie 100 μΐ buniek s koncentráciou 104 buniek/ml do všetkých jamiek stĺpcov 1 - 3 dosky 1 a do všetkých jamiek (okrem Al, ktoráje slepým pokusom) ostatných dosiek (na jamku pripadá 1000 buniek)
h. vloženie dosiek do inkubátora a pripravovanie riedenia liekov
2. Kontrola prípravy a testovanie liekov
a. príprava 35B a A-D sériových zriedení 1 ; 3 na doske so 100 % DMSO (1) pridanie 60 μΐ DMSO do všetkých jamiek stĺpcov 2-12 radov A až E (2) pridanie 70 μΐ 35B (10 mmol/1) v 100 % DMSO do jamky Al (3) pridanie 70 μΐ A(10 mmol/1) v 100 % DMSO do jamky Bl (4) pridanie 70 μΐ B (10 mmol/1) v 100 % DMSO do jamky Cl (5) pridanie 70 μΐ C (10 mmol/1) v 100 % DMSO do jamky Dl (6) pridanie 70 μΐ D (10 mmol/1) v 100 % DMSO do jamky E1 (7) sériové zriedenie 35B a A až D v pomere 1 : 3 smerom nadol až do stĺpca 12 prenesením 30 μΐ zo stĺpca 1 do stĺpca 2, potom zo stĺpca 2 do stĺpca 3 atď., až do stĺpca 12 (meniť špičky pred každým riedením)
b. príprava zrieďovacích dosiek 1 : 10 v médiu A:
(1) v radoch A až E inej dosky vytvoriť rad pre prvé zriedenie 1 : 10 zodpovedajúce radu 100 % DMSO pre každú zlúčeninu
35B do radu A pre prvé riedenie 1:10
A do radu B pre prvé riedenie 1:10
B do radu C pre prvé riedenie 1:10
C do radu D pre prvé riedenie 1:10
D do radu E pre prvé riedenie 1:10 (2) pridanie 180 μΐ média A do všetkých jamiek radov A až E zodpovedajúcich radom 100 % DMSO (na jeden rad je potrebných 2,5 ml), (3) odobranie 20 μΐ zo všetkých jamiek každého radu 100 % DMSO a preniesť do zodpovedajúceho radu 1:10,
c. príprava 1 : 100 zrieďovacích dosiek v médiu A:
(1) príprava dosky pre každú trojicu zlúčenín, ktoré majú byť testované, (2) pridanie 225 μΐ média A do všetkých jamiek radov A, B, D, E, G a H, rady C a F ponechať prázdne (na jednu dosku použiť 20 média A), (3) prenesenie 25 μΐ každej zlúčeniny z radu so zriedením 1 : 10 do zodpovedajúcich dvoch radov na zrieďovacej doske 1 : 100 (meniť špičku pred každým prenosom), rad číslo koncentrácia lieku (nmol/1) množstvo lieku (ul)
1 25 000 25,00000
2 8 333 8,33333
3 2 778 2,77778
4 926 0,92593
5 309 0,30864
6 103 0,10288
7 34 0,03429
8 11 0,01143
9 3,81 0,00381
10 1,27 0,00127
11 0,42 0,00042
12 0,14 0,00014
SK 284116 Β6
3. Pridanie vírusovej SN 123 na dosky:
a. rozohriatie SN 123 vo vodnom kúpeli teplom 37 °C asi 10 minút
b. zriedenie SN 123 pridaním 1 ml SN 123 do 15 ml média A
c. pridanie 50 μΐ SN 123 (zriedenej 16-krát) do jamiek E1 až H12 dosiek 2 - 6 a do jamiek E1 až H3 dosky 1
4. Pridanie lieku na dosky
a. pridanie 50 μΐ kontrolného a testovaného lieku z radov na zried’ovacích doskách 1 : 100 do zodpovedajúcich radov konečných dosiek (meniť špičku pred každým prenosom), jeden rad na doskách 1 : 100 poskytne 4 rady na konečnej doske (jamku Al ponechať ako slepý pokus)
b. inkubácia všetkých dosiek Ί dní pri 37 °C a 5 % CO2
c. tvorba protokolu „XTT“ na siedmy deň takto:
d. príprava roztoku XTT/PMS (20 ml na 4 dosky. 30 ml na 6 dosiek):
(1) návod pre 2 mmol/1 PMS
i. 15,3 mg PMS + 0,5 ml PBS = 100 mmol/1 PMS ii. 100 μΐ 100 mmol/1 PMS + 4,9 ml PBS = 2 mmol/1 PMS (2) zahrievanie 500 ml H2O mikrovlnami 5 minút pri vysokej intenzite (3) pridanie 20, resp. 30 ml fenolovej červene RPMI do 50 ml centrifugačnej skúmavky (4) vloženie RPMI do kadičky s horúcou vodou (5) pridanie 20, resp. 30 mg XTT k zahriatemu RPMI (konečná koncentrácia XTT 1 mg/ml) (6) po rozpustení XTT pridať 200 μΐ 2 mmol/1 PMS na 10 ml roztoku XTT
e. pridanie XTT/PMS na dosku (1) pridanie 50 μΐ roztoku XTT/PMS do všetkých jamiek všetkých dosiek (2) prikrytie dosky a 4-hodinová inkubácia pri 37 °C v 5 % CO2 (3) vybranie dosiek z inkubátora a náhrada viečok plastikovými plničmi dosiek (4) premiešanie obsahu dosiek (5) premeranie dosiek pri testovacej vlnovej dĺžke 450 nm a referenčnej vlnovej dĺžke 650 nm
III. Fluorescenčné stanovenie inhibítoru HIV-1-proteázy na vyšetrenie inhibície HlV-proteázy (výsledky uvedené v Tabuľke 1 sú označené „Pandex (ng/ml)“)
Tu požívané skratky sú definované nasledovne:
BSA hovädzí sérový albumín BOC terc-butyloxykarbonyl
BrZ 2-brómbenzyloxykarbonyl
2-CIZ 2-chlórbenzyloxykarbonyl
DCC dicyklohexylkarbodiimid
DIEA diizopropyletylamin
DTT ditiotreitol EDTA kyselina etyléndiamíntetraoctová FITC izotiokarbamoylfluorescein
HEPES kyselina 4-(2-hydroxyetyl)-1 -piperazínetánsulfónová
MES kyselina 4-morfolínetánsulfónová PAM fenyl acetimidometyl
TAPS kyselina 3-[tris(hydroxymetyl)metyl]amino-l-sulfónová
Tris tris(hydroxymetyl)aminometán TOS p-toluénsuifonyl (tosyl)
A. Príprava proteázy a frakcie Gag
1. Kultivácia e. coli KÍ2 L507/pHP10D
Lyofílizát E. coli K12 L507/pHP10D bol získaný z Northem Research Laboratory, Peoria, Illinois 61604 pod prírastkovým číslom NRRL B-18560 (založené 14. novembra 1989). Lyofilizáty boli dekantované do skúmaviek obsahujúcich 10 ml média LB (10 g „Bacto-tryptone“, 5 g „bacto-yeast extract“ a 10 g vodného chloridu sodného na liter, pH bolo upravené na pH = 7,5 a inkubované pri 32 °C cez noc).
Malá časť kultúry kultivovanej cez noc bola umiestnená na LB-agarové dosky (médium LB s 15 g/1 „Bato-agar“) dosky obsahujúce 12,5 μg/ml tetracyklínu takým spôsobom, aby sa získali jednotlivé izoláty kolónii E. coli K12 L507/pHP10D. Jednotlivé získané kolónie boli inokulované v 10 ml média LB obsahujúceho 12,5 pg/ml tetracyklínu a inkubované cez noc pri 32 °C za intenzívneho trepania. 10 ml kultúry inkubovanej cez noc bolo inokulovaných do média LB obsahujúceho 12,5 pg/ml tetracyklínu a inkubovaných pri 32 °C za intenzívneho trepania, až kultúra dosiahla stred logaritmickej fázy.
2. Kultivácia E. coli KÍ 2 L507/pHGAG
Lyofílizát E. coli K12 L507/pHGAG bol získaný z NRLL pod prírastkovým číslom NRRL B-18561 (založené 14. novembra 1989). Boli izolované čistené kolónie E coli KÍ2 L507/pHGAG a použité ako inokulum na kultiváciu, ktorá rástla do stredu logaritmickej fázy v podstate v súlade s opisom stupňa 1 uvedeným pre E coli KÍ 2 L507/pHP 1 OD.
3. Príprava proteázovej frakcie
Kultúra E. coli KÍ 2 L507(pHP10D bola kultivovaná do stredu logaritmickej fázy pri 32 °C v médiu LB obsahujúcom 12,5 pg/ml tetracyklínu. Kultivačná teplota bola rýchlo zvýšená na 40 °C na indukovanie génovej expresie a bunky rástli 2,5 hodiny pri tejto teplote a potom bola kultúra rýchlo ochladená na ľade. Bunky boli centrifugované a bunkový granulát bol resuspendovaný v 20 ml 50 mmol/1 tlmivého roztoku MES (pH = 6,0) obsahujúcom 1 mmol/1 EDTA, 1 mmol/1 DTT, 10 mmol/IPMSF a 10 % glycerolu (roztok A). Bunky boli lyzované sonifikáciou, na ktorú bol použitý „Fischer Model 300 Dismembrator“ a sonda s mikrošpičkou. Po centrifugácii pri 27 000 x g bol supematant zriedený na celkový objem 60 ml roztokom A a nanesený na 2,0 cm x 19 cm kolónu s QAE-Sepharosou (1 ml/min., 4 °C), ktorá bola ekvilibrovaná roztokom A. Kolóna bola 180 minút premývaná izokratieky a potom eluovaná s gradientom eluentu 0-1,0 mol/1 vodného chloridu sodného v roztoku A počas 120 minút. Enzýmová aktivita bola sledovaná HPLC s použitím syntetického peptidu Ser-GIn-Asn32
-Tyr-Pro-Ilc-Val, ako opísali Margolin a spol., Biochem. Biophys. Res. Commun. 167, 554-560 (1960), a merala sa produkcia peptidu pl (Ser-GIn-Asn-Tyr).
Aktívne frakcie boli spojené, pH upravené na pH 1,2 mol/1 síranom amónnym a frakcie boli nanesené na kolónu 2,0 x 18 cm s hexylagarózou, ktorá bola ekvilibrovaná roztokom A obsahujúcom 1,2 mol/1 síran amónny. Vzorka bola nanesená pri prietoku 1 ml/min., pri 4 °C, premývaná ekvilibračným roztokom 240 minút (1 ml/min.) a potom eluovaná reverzným lineárnym gradientom 1,2-0 mol/1 síranu amónneho v roztoku A počas 2 hodín pri rovnakom prietoku. Kolóna bola potom 2 hodiny premývaná izokraticky roztokom A.
Aktívne frakcie boli spojené, koncentrované na 10 ml v miešanej cele „Amicon“ s membránou YM-10 a potom nanesené na katexovú kolónu „MonoS“ (1,0 cm x 10 cm), ktorá bola ekvilibrovaná roztokom A. Vzorka bola nanesená pri prietoku 1 ml/min. pri 25 °C. Po izokratickom premývaní bola po 30 minútach proteáza eluovaná lineárnym gradientom 0 - 0,45 mol/1 vodného chloridu sodného v roztoku A počas 40 minút. Kolóna bola premývaná izokraticky roztokom A obsahujúcim 0,45 mol/1 vodný chlorid sodný 30 minút.
Aktívne frakcie boli spojené a koncentrované na 200 μΐ v miešanej cele „Amicon“ s membránou YM-10 a potom bola proteáza nanesená na molekulové sito („size exclusion“) „Superose 6“, ktoré bolo ekvilibrované roztokom A obsahujúcim 0,1 mol/1 vodný chlorid sodný. Kolóna bola premývaná izokraticky týmto roztokom pri prietoku 0,5 ml/min., čo viedlo k elúcii HlV-proteázy ako jednotnej frakcie („single peak“).
QAE-Sepharose a hexylagaróza boli zakúpené u Sigma Chemical Company. Superose 6 a MonoS boli zakúpené u firmy Pharmacia. Roztoky a činidlá boli získané od Sigmy.
4. Príprava frakcie Gag
Analogickým spôsobom bola vypestovaná kultúra E. coli K12 L507/pHGAG do stredu logaritmickej fázy pri 32 °C, potom bola teplota zvýšená na 4 - 5 hodín na 40 °C. Kultúra bola ochladená na ľade a centrigovaná. Granulát bol resuspendovaný v 8 ml roztoku pre lýzu, ktorý obsahoval 5 mg/ml lyzozýmu, 50 mmol/1 Triš/HCI (pH = 7,8), 5 mmol/1 EDTA, 1 mmol/1 DTT, 100 mmol/1 NaCl, 1 pg/ml E64 a 2 pg/ml aprotinínu. Kultúra bola inkubovaná 30 - 60 minút pri 4 °C, krátko sonifikovaná v „BransonR Celí Disrupter“ pri 60 % výkone troma 20-sekundovými expozíciami s chladením medzi expozíciami. Kultúra bola potom centrifugovaná pri 15 000 x g. Supematant, ktorý obsahuje nespracovaný gag-proteín, bol čiastočne čistený chromatografiou na molekulovom site (kolóna Sephadex G-50) a skladovaný pri -20 °C v 50 % glycerole a roztoku pre lýzu.
B. Príprava substrátu : Na-biotinyl-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-lle-Val-Gly-Lys(Ne-FITC)-OH (a = alfa, e = epsilon)
1. Príprava peptidu biotinylovaného naN-konci
Chránená peptidová živica Na-Boc-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr(Brz)-Pro-lle-Val-Gly-Lys(2-CIZ)-OCH2-PAM-živica bola syntetizovaná na Advanced Chemtech Model 200 syntetizátore peptidov v 1,5 mmol meradle použitím štandardného protokolu dvojitého spojenia. Aminokoncová skupina BOC bola odstránená 50 % kyselinou trifluóroctovou v dichlórmetáne a vzniknutá živica bola neutralizovaná 5 % diizopropyletylamínu v dichlórmetáne. Potom bolo k peptidovej živici pridaných 1,1 g (4,5 mmol) biotínu v 20 ml dimetylsulfoxidu a potom 4,5 mmol dicyklohexyl karbodiimidu (DCC) v 9 ml dichlórmetánu. Vzniknutá reakčná zmes bola zriedená na celkový objem 40 ml 11 ml dichlórmetánu a potom reagovala zhruba 5 hodín. Reakčná zmes bola koncentrovaná, živica premytá postupne dimetylsulfoxidom, dimetylformamidom, dichlórmetánom a potom neutralizovaná 5 % DIEA v dichlórmetáne. Táto reakcia sa opakovala dvakrát s tým, že reakčná doba bola predĺžená na 12 hodín pre každú reakciu. Ninhydrínová analýza živice ukázala úplnosť reakcie biotínu s aminoskupinou glycínu. Finálna peptidová živica bola premytá postupne dimetylformamidom, dichlórmetánom a sušená. Získal sa výťažok 4,3 g (98 %).
2. Odstránenie chránenia
Peptid bol zbavený chránenia a uvoľnený od živice 50 ml roztoku fluorovodík/m-krezol (0 °C, 1 hodina). Po odstránení fluorovodíka destiláciou pri zníženom tlaku bol m-krezol extrahovaný z reakčnej zmesi 100 ml dietyléteru. Peptid bol potom solubilizovaný v 50 % vodnej kyseliny octovej, zmrazený a lyofllizovaný. Získalo sa 2,14 g.
3. Čistenie
Surový peptid, biotinylovaný na koncovej aminoskupine, bol rozpustený v 200 ml 5 % acetonitrilu vo vodnom roztoku obsahujúcom 0,1 % kyseliny trifluóroctovej a potom filtrovaný na 0,22 pm filtri. Vzniknutý roztok bol nanesený na 2,2 cm x 25 cm kolónu s obrátenou fázou oktadecylsilikagélu (Vydac C-18), ktorá bola ekvilibrovaná rovnakým roztokom. Peptid bol eluovaný 855 minút trvajúcim lineárnym gradientom 7,5 - 25 % acetonitrilu pri prietoku 2 ml/min. a frakcie odoberané. Tieto frakcie boli analyzované analytickou HPLC uskutočnenou na 4,6 mm x x 250 mm kolóne Vydac C-18 za podobných podmienok roztoku. Frakcie obsahujúce žiadaný materiál boli spojené, zmrazené a lyofilizované. Získal sa výťažok 1,206 g (62 %).
Aminokyselinová analýza izolovaného biotinylovaného peptidu poskytla nasledujúce pomery, ktoré súhlasia s teoretickými: Asn 1,1; Ser0,96; Gin 1,1; Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,80; íle 0,78; Tyr 1,1; Lys 1,1. Hmotnostná spektrometria s ionizáciou nárazom rýchlych atómov poskytla molekulový ión m/e 1288 v súlade s teóriou.
4. Značenie
Čistený biotinylovaný peptid bol potom značený fluorescenčnou značkou na C-konci na použitie v stanovení Pandex. Najprv bol biotinylovaný peptid (1,206 g, 0,936 mmol) rozpustený v 100 ml 0,1 mol/1 boritanu sodného (pH = 9,5). Potom bol k reakčnej zmesi pridaný roztok 3 g (7,7 mmol) fluoresceínizotiokyanátu v 15 ml dimetylsulfoxidu v 10 rovnako veľkých dávkach počas 2 hodín. Vzniknutá zmes reagovala 1 hodinu (po poslednom pridaní) a pH roztoku bolo potom upravené na pH = 3 5 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, čo viedlo k vzniku zrazeniny, ktorá bola odstránená centrifugáciou.
pH roztoku peptidu bolo upravené na pH = 7,8 5 mol/1 hydroxidom sodným a potom bol roztok zriedený na 200 ml prídavkom 0,1 mol/1 octanu amónneho (pH = 7,5). Vzniknutý roztok bol potom filtrovaný na 0,22 pm filtri a nanesený na 2,2 cm x 25 cm kolónu Vydac C-18, ktorá bola ekvilibrovaná 5 % acetonitrilu v 0,1 mol/1 octane amónnom (pH = 7,5). Peptid bol eluovaný z kolóny 855minútovým lineárnym gradientom 5 - 25 % acetonitrilu pri prietoku 2 ml/min. za odoberania frakcií. Na analýzu frakcií bola použitá analytická HPLC. Frakcie obsahujúce žiadaný produkt boli spojené, zmrazené a lyofilizované. Získalo sa 190,2 mg (12 %).
Aminokyselinová analýza čisteného peptidu poskytla nasledujúce údaje v súlade s teoretickými: Asn 1,1; Ser 1,0; Gin 1,1; Pro 1,1; Gly 2,1; Val 0,8; íle 0,8; Tyr 1,1; Lys 1,0. Hmotnostná spektrometria s ionizáciou nárazom rýchlych atómov poskytla molekulový ión m/e 1678 v súlade s teóriou.
5. Fluorescenčné stanovenie inhibítoru HIV-1, proteázy Na fluorescenčné stanovenie inhibítoru HlV-l-proteázy sú použité nasledovné roztoky:
roztok MES-ALB roztok TBS A roztok avidínom zmáčaných „guľôčok“ roztok enzýmu
0,05 mol/1 MES (pH = 5,5)
0,02 mol/1 NaCl
0,002 mol/1 EDTA
0,001 mol/1 DTT
1,00 mg/ml BSA
0,02 mol/1 Tris
0,15 mol/1 NaCl
1,00 mg/ml BSA
0,1 % roztok „Fluoricon“ častíc na avidínové stanovenie (avidín naviazaný na pevné polystyrénové guľôčky s priemerom 0,6 - 0,8 pm v roztoku TBSA) 27 IU/ml čistenej HIV-1-proteázy v roztoku MES-ALB (1 IU je množstvo enzýmu potrebného na hydrolýzu pmolu substrátu za minútu pri 37 °C)
Do každej jamky s guľatým dnom na doske s 96 jamkami sa pridá 20 pl roztoku enzýmu a potom 10 μΐ zlúčeniny, ktorá má byť testovaná, v 20 % vodnom dimetylsulfoxide. Čistená HIV-1-proteáza bola získaná, ako je skôr uvedené. Vzniknutý roztok je inkubovaný 1 hodinu pri laboratórnej teplote a potom je do každej jamky pridaných 20 μΐ roztoku obsahujúceho pripravený substrát v roztoku MES-ALB (1,5 μΐ/ml). Roztok sa potom inkubuje 16 hodín pri laboratórnej teplote a potom je obsah každej jamky zriedený 150 μΐ roztoku MES-ALB.
Do každej jamky s guľatým dnom na ďalšej doske s 96 jamkami pre Pandex sa pridá 25 μΐ roztoku avidínom zmáčaných „guľôčok“. Potom sa do každej jamky pridá 25 μΐ pripravených zriedených inkubovaných roztokov. Roztoky sú dôkladne premiešané a dosky sú vložené do zariadenia PandexR, premyté, evakuované a premerané. Detekcia vzoriek sa uskutočnila excitáciou pri 485 nm a záznamom vznikajúcej epifluorescencie pri 535 nm.
Výsledky IC50 získané fluorescenčným stanovením pre zlúčeniny, ktoré sú predmetom predloženého vynálezu, sú uvedené ďalej v uvedených tabuľkách 1, 2 a 3. Všetky hodnoty boli normalizované na pozitívnu kontrolu, ktorou je [lS-(lR*,4R*,5S*)]-N-[l-(2-amino-2-oxoetyl)-2-oxo-3-aza-4-fenylmetyl-5-hydroxy-6-(2-( 1 -terc-butylamino-1 -oxometyl)fenyl)hexyl]-2-chinoh'nkarboxamíd.
Údaje o aktivitách pre príklady zlúčenín obsiahnutých v predloženom vynáleze sú poskytnuté v tabuľkách 1, 2 a 3 uvedených ďalej a v predchádzajúcich príkladoch. Výsledky v zátvorkách sú pre príklad 1 zverejnenej európskej patentovej prihlášky 0 526 009 A1-35B z rovnakého stanovenia.
Tabuľka 3
Inhibičná aktivita - fluorescenčné stanovenie IC50
Príklad IC» (pg/ml)
kontrola 1,0
1 962
2 0,010
3 0,006
4 0,106
5 0,540
6 0,07
7 0,133
8 0,063
9 0,091
10 0,177
11 0,086
12 0,12
13 0,50
14 0,281
15 0,055
16 0,077
17 0,112
Príklad IC™ (pg/ml)
18 0,094
19 0,8
20 0,18
21 0,350
22 0,4
23 1,6
24 0,198
25 0,250
26 0,113
27 0,39
28 0,274
29 0,54310
30 30
31 IC35 (15) 0,105
32 0,18
33 0,63
34 1,94
n. t. netestované * vypočítaný priemer ** koncentrácia inhibítora neprevýšila 15 pg/ml
Príklady štruktúr zlúčenín obsiahnutých v predloženom vynáleze ukazuje tabuľka 4 nižšie.
SK 284116 Β6

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-nafl-2-yItiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(l,2,3,4-tetrahydrochinolin-5-yl)pentyl]benzamid, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  2. 2. [2'R-(2'R*,3 'S *)] -N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3 '-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyI)pentyl]-benzamid, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  3. 3. [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3,5-diaminofenyl)-pentyl]benzamid, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  4. 4. [2'R-(2'R*,3'S*)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3'-naft-2-yltiometyl-4'-aza-5'-oxo-5'-(2-metyl-3-hydroxyfenyl)pentylj-l-naftylamid, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  5. 5. [2'R-(2 'R *, 3 'S *)]-N-terc-Butyl-2-[2'-hydroxy-3 '-naft-2-yltiometyl-4’-aza-5'-oxo-5'-(2-chlór-3-aminofenyl)pentyl]-1 -naftylamid, alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
  6. 6. Zlúčeniny podľa nárokov 1 až 5 na použitie ako liečivá.
  7. 7. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že ako účinnú látku obsahuje v účinnom množstve aspoň jednu karboxamidovú zlúčeninu podľa nároku 1 až 5 v spojení s farmaceutický prijateľným nosičom.
  8. 8. Použitie karboxamidových zlúčenín podľa nároku 1 až 5 na výrobu farmaceutického prostriedku na inhibovanie HlV-proteázy.
SK493-2002A 1993-10-07 1994-10-07 Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ich obsahuje, a ich použitie SK284116B6 (sk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13369693A 1993-10-07 1993-10-07
US13354393A 1993-10-07 1993-10-07
US08/190,764 US5484926A (en) 1993-10-07 1994-02-02 HIV protease inhibitors
PCT/US1994/011307 WO1995009843A1 (en) 1993-10-07 1994-10-07 Hiv protease inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK284116B6 true SK284116B6 (sk) 2004-09-08

Family

ID=27384442

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK493-2002A SK284116B6 (sk) 1993-10-07 1994-10-07 Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ich obsahuje, a ich použitie
SK439-96A SK284115B6 (sk) 1993-10-07 1994-10-07 Karboxamidová zlúčenina, farmaceutický prostriedok, ktorý ju obsahuje, a jej použitie

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK439-96A SK284115B6 (sk) 1993-10-07 1994-10-07 Karboxamidová zlúčenina, farmaceutický prostriedok, ktorý ju obsahuje, a jej použitie

Country Status (36)

Country Link
US (14) US5484926A (sk)
EP (3) EP1340744B1 (sk)
JP (2) JP2951724B2 (sk)
KR (1) KR100190517B1 (sk)
CN (2) CN1046269C (sk)
AP (1) AP600A (sk)
AT (3) ATE286025T1 (sk)
AU (1) AU694746B2 (sk)
BG (1) BG62567B1 (sk)
BR (1) BR9407782A (sk)
CA (2) CA2268709C (sk)
CZ (1) CZ290417B6 (sk)
DE (3) DE69434214T2 (sk)
DK (2) DK0722439T3 (sk)
EE (1) EE05399B1 (sk)
ES (3) ES2236849T3 (sk)
FI (1) FI114794B (sk)
GE (2) GEP20002209B (sk)
HK (3) HK1013650A1 (sk)
HU (2) HU226814B1 (sk)
MD (1) MD1507G2 (sk)
MY (1) MY138860A (sk)
NO (1) NO307050B1 (sk)
NZ (2) NZ275633A (sk)
OA (1) OA10718A (sk)
PL (1) PL185647B1 (sk)
PT (2) PT722439E (sk)
RO (1) RO119363B1 (sk)
RU (1) RU2139280C1 (sk)
SI (2) SI0889036T1 (sk)
SK (2) SK284116B6 (sk)
TJ (1) TJ339B (sk)
TW (1) TW432049B (sk)
UA (1) UA56984C2 (sk)
UY (1) UY23840A1 (sk)
WO (1) WO1995009843A1 (sk)

Families Citing this family (146)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040122000A1 (en) 1981-01-07 2004-06-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated. Inhibitors of aspartyl protease
US6878728B1 (en) 1999-06-11 2005-04-12 Vertex Pharmaceutical Incorporated Inhibitors of aspartyl protease
USH1649H (en) * 1987-07-31 1997-05-06 Barrish; Joel C. HIV protease inhibitor combinations
US7141609B2 (en) 1992-08-25 2006-11-28 G.D. Searle & Co. α- and β-amino acid hydroxyethylamino sulfonamides useful as retroviral protease inhibitors
KR100336699B1 (ko) 1992-08-25 2002-05-13 윌리암스 로저 에이 레트로바이러스 프로테아제 저해제로서 유용한히드록시에틸아미노 술폰아미드
US5484926A (en) 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
US5514801A (en) * 1992-12-29 1996-05-07 Monsanto Company Cyclic sulfone containing retroviral protease inhibitors
IL110255A (en) * 1993-07-16 1998-12-06 Merck & Co Inc Creation and resolution of 2 tert-butylcarboxamidopiprazine
US5461154A (en) * 1994-02-02 1995-10-24 Eli Lilly And Company Intermediate and process for making
CA2182090A1 (en) * 1994-02-02 1995-08-10 William Joseph Hornback Hiv protease inhibitors and intermediates
US5480887A (en) * 1994-02-02 1996-01-02 Eli Lilly And Company Protease inhibitors
US20030207813A1 (en) * 1996-12-09 2003-11-06 G.D. Searle Retroviral protease inhibitor combinations
UA49803C2 (uk) * 1994-06-03 2002-10-15 Дж.Д. Сьорль Енд Ко Спосіб лікування ретровірусних інфекцій
US5831117A (en) * 1995-01-20 1998-11-03 G. D. Searle & Co. Method of preparing retroviral protease inhibitor intermediates
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
WO1997011937A1 (fr) 1995-09-26 1997-04-03 Japan Tobacco Inc. Procede de production de derives amides et de leurs intermediaires
ES2318852T3 (es) * 1995-09-26 2009-05-01 Japan Tobacco Inc. Procedimiento para producir derivados de amida y compuestos intermedios.
US5914332A (en) 1995-12-13 1999-06-22 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
MY126358A (en) * 1996-03-22 2006-09-29 Glaxo Group Ltd Compositions comprising vx478 and a water soluble tocopherol derivative such as vitamin e-tpgs
DE69739609D1 (de) * 1996-06-05 2009-11-12 Sega Kk Dba Sega Corp Grafikverarbeitungsgerät, Grafikverarbeitungsmethode, Spielgerät und Speichermedium
US5962725A (en) 1996-09-05 1999-10-05 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediate compounds useful for making HIV protease inhibitors such as nelfinavir
US5925759A (en) * 1996-09-05 1999-07-20 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making HIV-protease inhibitors and intermediates for making HIV-protease inhibitors
US5705647A (en) * 1996-09-05 1998-01-06 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
UA67727C2 (uk) * 1996-09-05 2004-07-15 Агурон Фармасевтікелс, Інк. Проміжні сполуки для одержання інгібіторів віл-протеази і способи одержання інгібіторів віл-протеази
US6232333B1 (en) * 1996-11-21 2001-05-15 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
DE19704885C1 (de) * 1997-02-11 1998-06-10 Clariant Gmbh Verfahren zur Herstellung von 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure und 3-Acetoxy-2-methylbenzoesäure
US6001851A (en) * 1997-03-13 1999-12-14 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
HRP980112A2 (en) * 1997-03-13 1998-12-31 Agouron Pharma Hiv protease inhibitors
US6130348A (en) 1997-04-10 2000-10-10 Hoffmann-La Roche Inc. Process for a phenylthiobutyl-isoquinoline and intermediates therefor
DK0975601T3 (da) * 1997-04-10 2003-06-16 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til fremstilling af butylthio-isoquinolin og mellemprodukter derfor
US6123694A (en) * 1997-05-09 2000-09-26 Paragon Trade Brands Disposable absorbent article with unitary leg gathers
DE19730602A1 (de) * 1997-07-17 1999-01-21 Clariant Gmbh 3-Acetoxy-2-methylbenzoesäurechlorid und ein Verfahren zu seiner Herstellung
US6084107A (en) * 1997-09-05 2000-07-04 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for making HIV-protease inhibitors
US6436989B1 (en) 1997-12-24 2002-08-20 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Prodrugs of aspartyl protease inhibitors
IN188157B (sk) 1998-01-16 2002-08-24 Japan Tobacco Inc
US6124500A (en) * 1998-03-09 2000-09-26 Rohm And Haas Company Process for synthesizing benzoic acids
FR2776292B1 (fr) * 1998-03-20 2004-09-10 Oncopharm Cephalotaxanes porteurs de chaine laterale et leur procede de synthese
WO1999054297A1 (fr) * 1998-04-16 1999-10-28 Nagase & Company, Ltd. Procede de preparation de chloroalcools et de leurs intermediaires
BR9912169A (pt) 1998-06-19 2001-04-10 Vertex Pharma Inibidores de sulfonamida de protease de aspartil
AU4862799A (en) * 1998-07-08 2000-02-01 G.D. Searle & Co. Retroviral protease inhibitors
US6107511A (en) * 1998-07-29 2000-08-22 Kaneka Corporation Process for the purification or isolation of (2S,3R)-1-halo-2-hydroxy-3-(protected amino)4-phenylthiobutanes or optical antipodes thereof
US7115584B2 (en) * 1999-01-22 2006-10-03 Emory University HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
US7635690B2 (en) * 1999-01-22 2009-12-22 Emory University HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
CO5261510A1 (es) 1999-02-12 2003-03-31 Vertex Pharma Inhibidores de aspartil proteasa
US6566560B2 (en) 1999-03-22 2003-05-20 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Resorcinolic compounds
EP1189603A2 (en) 1999-03-22 2002-03-27 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Treatment of immune diseases like hiv disease and neoplastic disorders
CA2375954A1 (en) * 1999-07-20 2001-01-25 Mark Charest Alpha-hydroxy-gamma-¬¬(carbocyclic-or heterocyclic-substituted)amino|carbonyl|alkanamide derivatives and uses thereof
US6589962B1 (en) 1999-07-20 2003-07-08 Merck & Co., Inc. Alpha-hydroxy-gamma-[[(carbocyclic-or heterocyclic-substituted)amino]carbonyl]alkanamide derivatives and uses thereof
KR100339831B1 (ko) 1999-08-18 2002-06-07 김태성 신규의 에틸 아지리딘 유도체 및 그 제조방법
US6403799B1 (en) 1999-10-21 2002-06-11 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of intermediates in the synthesis of HIV-protease inhibitors
DE60036961T2 (de) 1999-11-24 2008-08-28 Merck & Co., Inc. Gamma-hydroxy-2-(fluoralkylaminocarbonyl)-1-piperazinpentanamide als hiv-proteasehemmer
ES2387579T3 (es) 2000-01-19 2012-09-26 Abbott Laboratories Formulaciones farmacéuticas de inhibidores de proteasa de VIH mejoradas
AU2001252958A1 (en) 2000-03-23 2001-10-03 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods to treat alzheimer's disease
US6992081B2 (en) 2000-03-23 2006-01-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
US6448245B1 (en) 2000-05-04 2002-09-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Methods of and compounds for inhibiting calpains
US20020198207A1 (en) * 2000-05-18 2002-12-26 Kath John Charles Novel Hexanoic acid derivatives
ATE302751T1 (de) 2000-06-30 2005-09-15 Elan Pharm Inc Verbindungen zur behandlung der alzheimerischen krankheit
US20030096864A1 (en) * 2000-06-30 2003-05-22 Fang Lawrence Y. Compounds to treat alzheimer's disease
US6846813B2 (en) * 2000-06-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Compounds to treat alzheimer's disease
PE20020276A1 (es) 2000-06-30 2002-04-06 Elan Pharm Inc COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER
EP1666452A2 (en) 2000-06-30 2006-06-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
US7425537B2 (en) * 2000-08-22 2008-09-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services SH2 domain binding inhibitors
US20020137802A1 (en) * 2000-09-28 2002-09-26 Travis Craig R. Methods and compounds for inhibiting eicosanoid metabolism and platelet aggregation
AU2002213429A1 (en) * 2000-09-28 2002-04-08 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Antiviral methods and compounds
IT1318986B1 (it) * 2000-10-09 2003-09-19 Archimica S P A Ora Clariant L Procedimento per la preparazione di (s)-n-terbutil-1,2,3,4-tetraidroisochinolin-3-carbossiammide.
ATE552348T1 (de) * 2000-10-19 2012-04-15 Target Discovery Inc Massendefektetikettierung zur bestimmung von oligomersequenzen
JPWO2002064553A1 (ja) * 2001-02-14 2004-06-10 呉羽化学工業株式会社 ハロゲノアルコール誘導体の製造方法
HN2002000136A (es) 2001-06-11 2003-07-31 Basf Ag Inhibidores de la proteasa del virus hiv, compuestos que contienen a los mismos, sus usos farmaceuticos y los materiales para su sintesis
CA2452039A1 (en) * 2001-06-27 2003-01-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Beta-hydroxyamine derivatives useful in treatment of alzheimer's disease
US20070213407A1 (en) * 2001-06-29 2007-09-13 Elan Pharmaceuticals And Pharmacia & Upjohn Company Llc Compounds to treat Alzheimer's disease
US20030191121A1 (en) * 2001-08-09 2003-10-09 Miller Ross A. Piperazine carboxamide intermediates of HIV protease inhibitors and processes for their preparation
US20030068655A1 (en) * 2001-09-12 2003-04-10 Protiveris, Inc. Microcantilever apparatus and methods for detection of enzymes
US6696494B2 (en) 2001-10-22 2004-02-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. α-hydroxyarylbutanamine inhibitors of aspartyl protease
EP2316468A1 (en) 2002-02-22 2011-05-04 Shire LLC Delivery system and methods for protecting and administering dextroamphetamine
US20040067216A1 (en) * 2002-02-22 2004-04-08 Karki Shyam B. Hiv protease inhibitors supported on cation exchange resins for oral administration
US7157489B2 (en) * 2002-03-12 2007-01-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois HIV protease inhibitors
AU2003214226A1 (en) * 2002-03-18 2003-10-08 Immugen Pharmaceuticals, Inc. Topical formulations of resorcinols and cannibinoids and methods of use
DE10212885A1 (de) * 2002-03-22 2003-10-02 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von 3-Hydroxy-2-methylbenzoesäure
EP1371626A3 (de) * 2002-06-13 2004-07-21 Bayer Chemicals AG Verfahren zur Herstellung von 3-Alkoxy-2-methylbenzoesäuren
DE10226219A1 (de) * 2002-06-13 2004-01-08 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von 3-Acyloxy-2-methylbenzoesäuren
CA2393720C (en) 2002-07-12 2010-09-14 Eli Lilly And Company Crystalline 2,5-dione-3-(1-methyl-1h-indol-3-yl)-4-[1-(pyridin-2-ylmethyl)piperidin-4-yl]-1h-indol-3-yl]-1h-pyrrole mono-hydrochloride
ATE321059T1 (de) 2002-08-21 2006-04-15 Chirale diphosphorverbindungen und deren übergangsmetallkomplexe
NZ542072A (en) 2003-02-13 2007-11-30 Wellstat Therapeutics Corp Compounds for the treatment of metabolic disorders
KR100695861B1 (ko) * 2003-05-08 2007-03-19 화이자 인코포레이티드 Ｈｉｖ-프로테아제 억제제 합성에 유용한 중간체 및 그의제조 방법
US7495011B2 (en) 2003-07-15 2009-02-24 Arigen Pharmaceuticals, Inc. Anti-coronavirus drug
US7211588B2 (en) * 2003-07-25 2007-05-01 Zentaris Gmbh N-substituted indolyl-3-glyoxylamides, their use as medicaments and process for their preparation
US8025899B2 (en) 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) * 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
ME01945B (me) 2004-07-27 2011-12-31 Gilead Sciences Inc Nukleozid-fosfonatni konjugati kao sredstva protiv hiv-a
SI1814858T1 (sl) * 2004-08-23 2015-10-30 Mylan Laboratories Limited Nove kristalne oblike nelfinavir mesilata
WO2006127133A2 (en) 2005-04-01 2006-11-30 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
WO2007015805A1 (en) 2005-07-20 2007-02-08 Eli Lilly And Company 1-amino linked compounds
US8076514B2 (en) 2005-07-20 2011-12-13 Eli Lilly And Company Phenyl compounds and their use in the treatment of Type II diabetes
JP2009531280A (ja) 2006-01-25 2009-09-03 ウェルスタット セラピューティクス コーポレイション 代謝障害を処置するための化合物
AU2007208125B2 (en) 2006-01-25 2012-04-05 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds for the treatment of metabolic disorders
EP1978948A4 (en) 2006-02-02 2010-06-16 Wellstat Therapeutics Corp COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF METABOLISM DISORDER
JP4788958B2 (ja) * 2006-02-28 2011-10-05 東亞合成株式会社 抗ウイルス性ペプチドおよびその利用
JP4831410B2 (ja) * 2006-02-28 2011-12-07 東亞合成株式会社 抗ウイルス性ペプチドおよび抗ウイルス剤
US8779144B2 (en) * 2006-03-16 2014-07-15 Evotec (Us) Inc. Bicycloheteroaryl compounds as P2X7 modulators and uses thereof
WO2008033466A2 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Combinatorx (Singapore) Pre. Ltd. Compositions and methods for treatment of viral diseases
WO2008041087A1 (en) * 2006-10-06 2008-04-10 Aurobindo Pharma Limited An improved process for preparation of amorphous nelfinavir mesylate
KR101518079B1 (ko) 2007-03-12 2015-05-06 넥타르 테라퓨틱스 올리고머-프로테아제 억제제 컨주게이트
WO2009006203A1 (en) * 2007-06-29 2009-01-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compositions and the use thereof
NZ582086A (en) * 2007-06-29 2012-07-27 Gilead Sciences Inc Therapeutic compositions and the use thereof
US20110105477A1 (en) * 2007-09-14 2011-05-05 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods relating to hiv protease inhibition
US20100093811A1 (en) * 2007-09-25 2010-04-15 Coburn Craig A Hiv protease inhibitors
WO2009114151A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid and olgomer-atazanavir conjugates
WO2009151695A1 (en) 2008-03-13 2009-12-17 Wellstat Therapeutics Corporation Compounds and method for reducing uric acid
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
ES2623794T3 (es) 2008-12-09 2017-07-12 Gilead Sciences, Inc. Intermedios para la preparación de moduladores de receptores tipo toll
CA2744019C (en) * 2008-12-11 2017-03-14 Shionogi & Co., Ltd. Synthesis of carbamoylpyridone hiv integrase inhibitors and intermediates
MX2011006891A (es) 2008-12-23 2011-10-06 Pharmasset Inc Fosforamidatos de nucleosidos.
EA019295B1 (ru) 2008-12-23 2014-02-28 Джилид Фармассет, Ллс. Соединения пуриновых нуклеозидов и способ их получения
WO2010075517A2 (en) * 2008-12-23 2010-07-01 Pharmasset, Inc. Nucleoside analogs
AU2010254415B2 (en) 2009-05-27 2013-07-04 Merck Sharp & Dohme Corp. HIV protease inhibitors
EP2440249A2 (en) 2009-06-12 2012-04-18 Nektar Therapeutics Covalent conjugates comprising a protease inhibitor, a water-soluble, non-peptidic oligomer and a lipophilic moiety
US10640457B2 (en) 2009-12-10 2020-05-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
EP2509590B1 (en) * 2009-12-10 2019-10-30 The Trustees of Columbia University in the City of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
DE102010004957A1 (de) 2010-01-14 2011-07-21 Universitätsklinikum Jena, 07743 Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung
US20110223131A1 (en) 2010-02-24 2011-09-15 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
US8247436B2 (en) 2010-03-19 2012-08-21 Novartis Ag Pyridine and pyrazine derivative for the treatment of CF
HUE034239T2 (en) 2010-03-31 2018-02-28 Gilead Pharmasset Llc Method for Crystallization of (S) -isopropyl 2 - (((S) (perfluorophenoxy) (phenoxy) phosphoryl) amino) propanoate \ t
TWI577377B (zh) 2010-09-16 2017-04-11 Ｖｉｉｖ醫療保健公司 醫藥組合物
EP2632895B1 (en) 2010-10-28 2018-10-03 Merck Canada Inc. Hiv protease inhibitors
EP2771332B1 (en) 2011-10-26 2016-06-29 Merck Canada Inc. Thiophen and thiazol sulfonamid derivatives as HIV protease inhibitors for the treatment of AIDS
JP2015527403A (ja) 2012-09-11 2015-09-17 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． Ｈｉｖプロテアーゼ阻害剤
JP2015536940A (ja) 2012-10-29 2015-12-24 シプラ・リミテッド 抗ウイルス性ホスホネート類似体及びその製造方法
RU2505286C1 (ru) * 2012-12-29 2014-01-27 Открытое Акционерное Общество "Фармасинтез" Фармацевтическая композиция для лечения вич-инфекции, способ ее получения и способ лечения
WO2015013835A1 (en) 2013-07-31 2015-02-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Piperazine derivatives as hiv protease inhibitors
RU2543322C1 (ru) * 2013-09-19 2015-02-27 Открытое Акционерное Общество "Фармасинтез" Фармацевтическая композиция для лечения вич-инфекции, способ ее получения и способ лечения
US9834526B2 (en) 2013-12-19 2017-12-05 Merck Sharp & Dohme Corp. HIV protease inhibitors
WO2015095265A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
EP3113780B1 (en) 2014-03-06 2019-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv protease inhibitors
EP3116862B1 (en) 2014-03-10 2019-04-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Piperazine derivatives as hiv protease inhibitors
WO2016001907A1 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Prendergast Patrick T Mogroside iv and mogroside v as agonist/stimulator/un-blocking agent for toll-like receptor 4 and adjuvant for use in human/animal vaccine and to stimulate immunity against disease agents.
US11116774B2 (en) 2014-07-11 2021-09-14 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptors for the treatment of HIV
US9738664B2 (en) 2014-10-29 2017-08-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Boronic acid inhibitors of HIV protease
JP2018527366A (ja) 2015-09-15 2018-09-20 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ＨＩＶを処置するためのｔｏｌｌ様レセプターのモジュレーター
US10539397B2 (en) 2017-04-12 2020-01-21 Wilcox Industries Corp. Modular underwater torpedo system
RU2764243C2 (ru) 2017-09-22 2022-01-14 ДЖУБИЛАНТ ЭПИПЭД ЭлЭлСи Гетероциклические соединения в качестве ингибиторов PAD
HUE061607T2 (hu) 2017-10-18 2023-07-28 Jubilant Epipad LLC Imidazopiridin vegyületek mint PAD inhibitorok
CA3080677A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Jubilant Prodel LLC Pyrimidine derivatives as inhibitors of pd1/pd-l1 activation
EP3704120B1 (en) 2017-11-24 2024-03-06 Jubilant Episcribe LLC Heterocyclic compounds as prmt5 inhibitors
AU2019234185A1 (en) 2018-03-13 2020-10-01 Jubilant Prodel LLC. Bicyclic compounds as inhibitors of PD1/PD-L1 interaction/activation
EP4114384A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Pfizer Inc. Methods of inhibiting sars-cov-2 replication and treating coronavirus disease 2019
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2448392A1 (fr) * 1979-02-12 1980-09-05 Vilbiss Toussaint De Dispositif automatique pour la projection de produits de revetement
US5142056A (en) * 1989-05-23 1992-08-25 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
IL89900A0 (en) * 1988-04-12 1989-12-15 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids and pharmaceutical compositions containing them
CA1340588C (en) * 1988-06-13 1999-06-08 Balraj Krishan Handa Amino acid derivatives
IL91307A0 (en) * 1988-08-24 1990-03-19 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors and pharmaceutical compositions for the treatment of aids containing them
EP0361341A3 (en) * 1988-09-28 1991-07-03 Miles Inc. Therapeutics for aids based on inhibitors of hiv protease
US5063208A (en) * 1989-07-26 1991-11-05 Abbott Laboratories Peptidyl aminodiol renin inhibitors
WO1991008221A1 (en) * 1989-12-04 1991-06-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Peptide inhibitors of hiv protease
GB8927915D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Novel alcohols
GB8927913D0 (en) * 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
CA2032259A1 (en) * 1989-12-18 1991-06-19 Wayne J. Thompson Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids
CA2056911C (en) * 1990-12-11 1998-09-22 Yuuichi Nagano Hiv protease inhibitors
ZA92913B (en) * 1991-02-08 1993-05-06 Sankyo Co New beta-amino-alpha hydroxycarboxylic acids and ttheir use
US5235039A (en) * 1991-06-10 1993-08-10 Eli Lilly And Company Substrates for hiv protease
US5508407A (en) * 1991-07-10 1996-04-16 Eli Lilly And Company Retroviral protease inhibitors
CN1071930A (zh) * 1991-07-10 1993-05-12 伊莱利利公司 用作治疗艾滋病的人免疫缺陷病毒蛋白酶的抑制剂
US5220796A (en) 1991-07-15 1993-06-22 The Boc Group, Inc. Adsorption condensation solvent recovery system
DE4126482A1 (de) * 1991-08-10 1993-02-11 Bayer Ag (alpha)-trifluormethyl-substituierte, gesaettigt-bicyclische amine und verfahren zu deren herstellung
US5516784A (en) * 1991-08-13 1996-05-14 Schering Corporation Anti-HIV (AIDS) agents
EP0534511A1 (en) * 1991-08-16 1993-03-31 Merck & Co. Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of aids
US5256783A (en) * 1991-09-18 1993-10-26 Hoffmann-La Roche Inc. Method for producing 2-isoquinoline compounds
WO1993008184A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 Merck & Co., Inc. Hiv protease inhibitors
ZA929869B (en) * 1991-12-20 1994-06-20 Syntex Inc Hiv protease inhibitors
DK0560268T3 (da) * 1992-03-13 1995-06-12 Bio Mega Boehringer Ingelheim Substituerede pipecolinsyrederivater som HIV-proteasehæmmere
ES2155069T3 (es) * 1992-05-21 2001-05-01 Monsanto Co Inhibidores de proteasas retrovirales.
KR100336699B1 (ko) * 1992-08-25 2002-05-13 윌리암스 로저 에이 레트로바이러스 프로테아제 저해제로서 유용한히드록시에틸아미노 술폰아미드
IS2334B (is) * 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
US5434265A (en) * 1992-12-22 1995-07-18 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease
US5733906A (en) * 1993-10-12 1998-03-31 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV Protease useful for the treatment of Aids
MX9308025A (es) * 1992-12-22 1994-08-31 Lilly Co Eli Compuestos inhibidores de la proteasa del virus dela inmunodeficiencia humana, procedimiento para supreparacion y formulacion farmaceutica que los contiene.
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
DE69329544T2 (de) 1992-12-22 2001-05-31 Lilly Co Eli HIV Protease hemmende Verbindungen
US5491166A (en) * 1992-12-22 1996-02-13 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
US5554653A (en) * 1992-12-22 1996-09-10 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
US5475136A (en) * 1992-12-22 1995-12-12 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of AIDS
US5846993A (en) * 1992-12-22 1998-12-08 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
MX9308016A (es) 1992-12-22 1994-08-31 Lilly Co Eli Compuestos inhibidores de la proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, procedimiento para su preparacion y formulacion farmaceutica que los contiene.
US5480887A (en) * 1994-02-02 1996-01-02 Eli Lilly And Company Protease inhibitors
US5527829A (en) * 1994-05-23 1996-06-18 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EP0889036A1 (en) 1999-01-07
BG62567B1 (bg) 2000-02-29
OA10718A (en) 2001-11-02
CN1046269C (zh) 1999-11-10
DE69434977T2 (de) 2008-03-13
US6271235B1 (en) 2001-08-07
HK1056172A1 (en) 2004-02-06
US5824688A (en) 1998-10-20
ATE362918T1 (de) 2007-06-15
US5834467A (en) 1998-11-10
HU0900219D0 (en) 2009-06-29
ES2236849T3 (es) 2005-07-16
US5837710A (en) 1998-11-17
WO1995009843A1 (en) 1995-04-13
PT889036E (pt) 2005-05-31
MD1507F2 (en) 2000-07-31
EP1340744A2 (en) 2003-09-03
GEP20002209B (en) 2000-08-25
ATE286025T1 (de) 2005-01-15
JPH09501443A (ja) 1997-02-10
JP3703647B2 (ja) 2005-10-05
SI0889036T1 (en) 2005-04-30
MY138860A (en) 2009-08-28
CZ100496A3 (en) 1996-09-11
CN1195737C (zh) 2005-04-06
SI0722439T1 (en) 2002-10-31
RU2139280C1 (ru) 1999-10-10
EP1340744B1 (en) 2007-05-23
US5827891A (en) 1998-10-27
SK43996A3 (en) 1997-01-08
TJ339B (en) 2002-07-01
US5852043A (en) 1998-12-22
EP0889036B1 (en) 2004-12-29
EE05399B1 (et) 2011-04-15
EP1340744A3 (en) 2003-12-03
CN1131942A (zh) 1996-09-25
CA2173328A1 (en) 1995-04-13
NZ329626A (en) 1999-08-30
US5827858A (en) 1998-10-27
AP9600844A0 (en) 1996-07-31
FI961449A0 (fi) 1996-03-29
DK0889036T3 (da) 2005-02-28
JP2951724B2 (ja) 1999-09-20
DE69431193T2 (de) 2002-12-12
CA2268709A1 (en) 1995-04-13
BR9407782A (pt) 1997-03-18
FI114794B (fi) 2004-12-31
US6693199B2 (en) 2004-02-17
JPH11310573A (ja) 1999-11-09
BG100455A (en) 1997-09-30
CA2268709C (en) 2008-03-25
NZ275633A (en) 1998-03-25
TW432049B (en) 2001-05-01
AU694746B2 (en) 1998-07-30
ES2181725T3 (es) 2003-03-01
HK1014950A1 (en) 1999-10-08
HU226814B1 (en) 2009-11-30
EP0722439A1 (en) 1996-07-24
AU7967494A (en) 1995-05-01
CZ290417B6 (cs) 2002-07-17
HUT75652A (en) 1997-05-28
HK1013650A1 (en) 1999-09-03
SK284115B6 (sk) 2004-09-08
US5859002A (en) 1999-01-12
ES2287387T3 (es) 2007-12-16
HU9600908D0 (en) 1996-05-28
KR100190517B1 (en) 1999-06-01
PT722439E (pt) 2002-12-31
US5484926A (en) 1996-01-16
US5952343A (en) 1999-09-14
DE69434214T2 (de) 2005-06-02
FI961449A (fi) 1996-05-29
PL313871A1 (en) 1996-07-22
NO961382D0 (no) 1996-04-03
US20020077338A1 (en) 2002-06-20
DE69434214D1 (de) 2005-02-03
US6162812A (en) 2000-12-19
AP600A (en) 1997-07-23
RO119363B1 (ro) 2004-08-30
PL185647B1 (pl) 2003-06-30
EP0722439B1 (en) 2002-08-14
US5827859A (en) 1998-10-27
US6525215B2 (en) 2003-02-25
GEP20084497B (en) 2008-09-25
CN1262272A (zh) 2000-08-09
HU227885B1 (en) 2012-05-29
UY23840A1 (es) 1994-10-21
ATE222240T1 (de) 2002-08-15
MD1507G2 (ro) 2001-04-30
UA56984C2 (uk) 2003-06-16
US20030216569A1 (en) 2003-11-20
DE69434977D1 (de) 2007-07-05
EE9600091A (et) 1996-12-16
DE69431193D1 (en) 2002-09-19
CA2173328C (en) 1999-08-31
NO307050B1 (no) 2000-01-31
DK0722439T3 (da) 2002-12-16
NO961382L (no) 1996-04-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK284116B6 (sk) Karboxamidové zlúčeniny, farmaceutický prostriedok, ktorý ich obsahuje, a ich použitie
EP0526009A1 (en) Inhibitors of hiv protease useful for the treatment of aids
US5508407A (en) Retroviral protease inhibitors
US5846993A (en) HIV protease inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20141007