JP6093180B2 - ヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性化剤及びその使用 - Google Patents

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Description

発明の詳細な説明
[0001]本出願は、２００９年１２月１０日に出願された米国特許仮出願６１／２８５，２８７号の出願日、２０１０年３月２６日に出願された米国特許仮出願６１／３１７，７６５号の出願日、２０１０年６月１５日に出願された米国特許仮出願６１／３５４，９６４号の出願日、２０１０年６月１５日に出願された米国特許仮出願６１／３５５，１１０号の出願日、及び２０１０年７月９日に出願された米国特許仮出願６１／３６３，００９号の出願日の恩恵を主張するものである。
[0002]本明細書中に引用される全ての特許、特許出願及び刊行物は、本明細書中に参考文献としてその全てが援用される。その全てにおけるこれらの刊行物の開示は、本明細書中に記載され、そして特許請求される本発明の時点において、その当業者にとって既知の技術の状態を更に詳細に記載するために、本明細書中に参考文献として援用される。
[0003]本特許開示は、著作権保護を受ける題材を含有する。本著作権保有者は、米国特許商標局の特許ファイル又は記録に現れる特許文書或いは特許開示の何人かによるファクシミリ再生に対して異議を申し立てることはないが、しかし他の場合、全ての著作権を留保するものである。
政府の支援
[0004]本発明は、米国神経障害及び発作研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ）（ＮＩＮＤＳ）により授与されたＲ０１−ＮＳ０４９４４２、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）により授与されたＰＯ１ＡＧ１７４９０、ＮＩＨにより授与されたＵ０１ＡＧ０３１２９４、及びＮＩＨにより授与されたＵ０１ＡＧ１４３５１の支援下で行われた。米国政府は、本発明に対する一定の権利を有している。
本発明は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼタンパク質に結合し、そしてこれを調節する化合物を選別するための方法を提供する。本発明は、更に、ＨＡＴ−活性化化合物を患者に投与することによる、蓄積したアミロイド−ベータペプチド沈着物、Ｔａｕタンパク質レベル、及び／又はアルファ−シヌクレインの蓄積に伴う神経変性疾患、症状、並びに癌を治療するための方法を提供する。
[0005]認知性神経変性疾患は、シナプスの機能障害、認知異常、及び／又は例えば、制約されるものではないが、天然のベータ−アミロイド断片、天然の及びリン酸化されたアルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂されたＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＢ−４３）を各種のパーセンテージで、そして特定の疾病に関連して含有するＣＮＳ全体中の封入体の存在によって特徴づけられる。
[0006]アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶力減少、シナプスの機能障害及びアミロイドβ−ペプチド（Ａβ）の蓄積によって特徴づけられる神経変性疾患である。これは、部分的にアミロイド−β−ペプチド１−４２（Ａβ４２）の増加したレベルによって起こる。アルツハイマー病（ＡＤ）は、殆ど一世紀前に記載されたが、その発症に導く分子機構は、なお未知である。神経病理学の観点から、これは、アミロイドプラーク及び神経細胞の分解に伴う神経原線維タングルの存在によって特徴づけられ、一方、臨床的特徴は、多くの精神神経症状に伴う進行性の記憶力減少である。
[0007]ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）は、ヒストンのアセチル化（遺伝子活性化に導く）、染色体脱凝縮、ＤＮＡ修復及び非ヒストン基質修飾に関係する。
[0008]本発明は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）活性、高選択性、及び血管脳関門（ＢＢＢ）透過性を伴う化合物に関する。一つの側面において、この化合物は、以下の式（Ｉ）：
の化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｒ１は、Ｈ、又はＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、又はＣＮであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、Ｓ−エチル、Ｏ−シクロペンチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ４は、Ｈ；Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−フェニルであり、ここにおいて、フェニルは一つ又はそれより多いハロ或いはＣＦ３で置換されている；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｏ−エチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキルであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；そして
Ｘは、ＣＯＮＨ、ＳＯＮＨ、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、又はＮＨＣＯである。
[0009]本発明の一つの側面において、化合物は、以下の式（ＩＩ）：
の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｒ７は、Ｈ又はＣＦ３であり；
Ｒ８は、Ｏ−エチル又はＳ−メチルであり；
Ｒ９は、ブチル又はＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｙは、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−ＣＮ、Ｃ−ＮＯ２、又はＮであり；
Ｗは、ＣＨ又はＮであり；そして
Ｚは、ＣＨ又はＮである。
[0010]一つの側面において、化合物は、以下の式（ＩＩＩ）：
の化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｒ１０は、ＣＦ３であり；
Ｒ１１は、ＣＮであり；そして
Ｒ１２は、Ｏ−エチルある。
[0011]もう一つの側面において、化合物は、以下の式（ＩＶ）：
の化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｘは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、ＮＨ、Ｏ、又はＣであり；
Ｙは、−Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、又はＮＨ−Ｃ（Ｏ）であり；
Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、Ｃ１５Ｈ３２、ＳＲ４、又はＯＲ４であり；
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−ＣＯ２Ｒ６であり；
Ｒ３は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ＣＦ３、ＣＣｌ３、Ｃｌ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２、又はＣＮであり；
Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｎ（Ｒ５）２−、又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；そして
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。
[0012]更なる側面において、化合物は、以下の式（Ｖ）：
の化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｘは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、ＮＨ、Ｏ、又はＣであり；
Ｙは、−Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、又はＮＨ−Ｃ（Ｏ）であり；
ＡＲ１は、５員の芳香族環又は１−２個の窒素を含有する６員の芳香族環であり；
ＡＲ２は、５員の芳香族環、６員の芳香族環又は１−２個の窒素を含有する６員の芳香族環であり；
Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、Ｃ１５Ｈ３２、ＳＲ４、又はＯＲ４であり；
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−ＣＯ２Ｒ６であり；
Ｒ３は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ＣＦ３、ＣＣｌ３、Ｃｌ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２、又はＣＮであり；
Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｎ（Ｒ５）２−又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；そして
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。
[0013]一つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
のＹＦ２化合物である。
[0014]他の態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
の化合物であり、ここにおいて、化合物３のＲは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、又はＣ１５Ｈ３２である。
[0015]幾つかの態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[0016]幾つかの態様において、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
である。
[0017]幾つかの態様において、式（Ｖ）の化合物は、以下の式：
である。
[0018]本発明の一つの側面は、蓄積したアミロイド−ベータペプチド沈着物に伴う症状を治療するための、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物を選別するための方法を提供する。この方法は、（ａ）式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）のＨＡＴ活性化剤化合物を、アミロイド−ベータペプチド沈着物の蓄積の動物モデルに投与し；そして（ｂ）アミロイド−ベータペプチド沈着物蓄積の動物モデルにおけるＨＡＴ活性化剤化合物の投与後のヒストンのアセチル化を調節することができる式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）のＨＡＴ活性化剤化合物を選択すること、を含んでなる。
[0019]本発明の一つの側面は、更に、蓄積したアミロイド−ベータペプチド沈着物に伴う症状を治療するための式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）活性化剤化合物を同定するための方法を提供し、ここにおいて、この方法は、一つ又はそれより多い次の特徴：（ａ）化合物のＥＣ５０が約１０００ｎＭより多くないこと；（ｂ）ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒストンのアセチル化活性がヒストンタンパク質Ｈ２、Ｈ３、及び／又はＨ４を標的とすること；（ｃ）化合物が血液脳関門を透過すること；（ｄ）又はこれらの組合せ、を有する式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）のＨＡＴ活性化剤化合物を選択することを含んでなる。一つの態様において、化合物は、血液脳関門を透過するために、約５００Ｄａより小さい分子量を有するか、約９０Å２より小さい極性表面積を有するか、８個より少ない水素結合又はこれらの組合せを有する。
[0020]本発明の一つの側面は、患者のアミロイドベータ（Ａβ）タンパク質沈着物を減少するための方法を提供し、ここにおいて、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）のＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる有効な量の組成物を患者に投与し、これによって患者のＡβタンパク質沈積物を減少することを含んでなる。一つの態様において、患者は、異常に高いレベルのアミロイドベータタンパク質プラークを示す。もう一つの態様において、患者は、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、封入体筋炎、又は脳アミロイド血管症に罹っている。更なる態様において、Ａβタンパク質沈着物は、Ａβ４０異性体、Ａβ４２異性体、又は異性体の組合せを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0021]本発明の一つの側面は、更に、患者のアルツハイマー病を治療するための方法を提供し、この方法は、ＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を投与することを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0022]本発明の一つの側面は、更に、患者のアルツハイマー病を治療するための方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0023]本発明のもう一つの側面は、神経変性疾患に罹った患者における記憶保持を増加するための方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、神経変性疾患は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病ｓｍ進行性核上性麻痺、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（更にバッテン病としても知られる）、脊髄小脳失調症（各種の特徴を伴う多発性型）、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、脊髄癆、又は中毒性脳症を含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0024]本発明の一つの側面は、更に、神経変性疾患に罹った患者のシナプス可塑性を増加するための方法を提供し、この方法は、患者のヒストンのアセチル化を増加する治療的な量の組成物を患者に投与することを含んでなり、ここにおいて、組成物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物を含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。一つの態様において、神経変性疾患は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病ｓｍ進行性核上性麻痺、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（更にバッテン病としても知られる）、脊髄小脳失調症（各種の特徴を伴う多発性型）、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、脊髄癆、又は中毒性脳症を含んでなる。もう一つの態様において、シナプス可塑性は、学習、記憶、又はこれらの組合せを含んでなる。幾つかの態様において、シナプス可塑性は、長期増強（ＬＴＰ）を含んでなる。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0025]本発明の一つの側面は、更に、患者のアルツハイマー病を治療するための方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0026]本発明の一つの側面は、患者のパーキンソン病の症状を回復するための方法を提供し、この方法は、ＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物であることができる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。一つの態様において、パーキンソン病の症状は、振戦、動作緩慢、運動障害、硬直、姿勢不安定性、筋緊張症、正座不能、認知症、総合運動協調性障害、又は列挙した症状の組合せを含んでなる。もう一つの態様において、姿勢不安定性は、障害性不均衡、障害性協調、又はこれらの組合せを含んでなる。
[0027]本発明の一つの側面は、更に、患者の癌を治療するための方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）の化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。一つの態様において、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、大腸癌、肺癌、腎臓癌、膀胱癌、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、造血器腫瘍、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンスリンパ腫、ホジキンスリンパ腫、子宮癌、腎細胞癌、肝細胞腫、腺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、卵巣癌、原発性又は転移性黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、脳癌、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、精巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、消化器癌、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、気管支原性肺癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、肺癌、上皮癌、子宮頸癌、精巣癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、白血病、黒色腫、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、膀胱癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、又は髄様癌を含んでなる。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。
[0028]本発明の一つの側面は、患者のハンチントン病を治療するための方法を提供し、この方法は、ＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与することを含んでなる。一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物であることができる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0029]本発明の一つの側面は、患者の神経変性疾患を治療するための方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、又は式（Ｖ）の化合物を含んでなる治療的な量の医薬組成物を患者に投与し、これによって患者の神経変性疾患を治療することを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。一つの態様において、神経変性疾患は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病ｓｍ進行性核上性麻痺、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（更にバッテン病としても知られる）、脊髄小脳失調症（各種の特徴を伴う多発性型）、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー病、脊髄癆、又は中毒性脳症を含んでなる。もう一つの態様において、シナプス可塑性は、学習、記憶、又はこれらの組合せを含んでなる。幾つかの態様において、シナプス可塑性は、長期増強（ＬＴＰ）を含んでなる。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0030]本発明の一つの側面は、神経変性疾患に罹った患者の封入体を減少する方法を提供し、この方法は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、又は式（Ｖ）のＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる有効な量の組成物を患者に投与し、これによって患者の封入体を減少することを含んでなる。一つの態様において、封入体は、ベータ−アミロイドペプチド、天然の及びリン酸化されたＴａｕタンパク質、天然の及びリン酸化されたアルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂されたＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＢ−４３）、又はこれらの組合せを含んでなる。もう一つの態様において、患者は、異常に高いレベルのアミロイドベータプラークを示す。更なる態様において、ベータ−アミロイドペプチドは、Ａβ４０異性体、Ａβ４２異性体、又は異性体の組合せを含んでなる。一つの態様において、化合物はＹＦ２である。他の態様において、有効な量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。幾つかの態様において、組成物は血液脳関門を通過する。一つの態様において、神経変性疾患は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病ｓｍ進行性核上性麻痺、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（更にバッテン病としても知られる）、脊髄小脳失調症（各種の特徴を伴う多発性型）、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー病、脊髄癆、又は中毒性脳症を含んでなる。もう一つの態様において、シナプス可塑性は、学習、記憶、又はこれらの組合せを含んでなる。幾つかの態様において、シナプス可塑性は、長期増強（ＬＴＰ）を含んでなる。幾つかの態様において、化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、又は化合物１９である。他の態様において、化合物はヒストンのアセチル化を増加する。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。更なる態様において、ヒストンのアセチル化は、ヒストンリシン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、又はこれらの組合せのアセチル化を含んでなる。
[0031]図１は、マウスの海馬のヒストン３のアセチル化レベルを示すウェスタンブロットの写真である。 [0032]図２は、Ａβ４２を注入された記憶欠損マウスの状況的恐怖条件づけを示す棒グラフである。 [0033]図３は、ＨＡＴアゴニスト／活性化剤のリード化合物ＹＦ２の化学構造である。 [0034]図４は、化合物６Ｊ（ＣＴＢ）、Ｎ−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−エトキシ−ベンズアミドの化学構造である。Ｊ６は、溶解性を有さず、そしてこれをＨ２Ｏ中に入れるとすぐに沈殿する。 [0035]図５は、化合物ＭＯＭ（ＹＦ１）の化学構造である。ＹＦ１は、２５ｍｇ／ｋｇでＷＴマウスに投与（ｉ．ｐ．）された。マウスの肝臓及び海馬を治療の１時間後抽出した。海馬及び肝臓のＡｃＨ３レベルは、増加しなかった。 [0036]図６は、肝臓及び海馬中のＨ３のアセチル化レベルを示すウェスタンブロットの写真である。 [0037]図７は、２５ｍｇ／ｋｇのＨＡＴアゴニストのＭＯＭを強制飼養及びｉ．ｐ．によって投与されたマウスの肝臓、皮質、及び海馬中のＨ３のアセチル化レベルを示すウェスタンブロットの写真である。マウスはその後、学習の導入後薬物が活性であるか否かを見るために、恐怖条件づけ処置にかけられた。 [0038]図８は、皮質及び海馬中のＨ３のアセチル化レベルを示すウェスタンブロットの写真である。マウスにＭＯＭ（片側１００μｇ／μｌ）をカニューレによって投与するか又はマウスにＹＦ２（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与した。 [0039]図９は、海馬中のＨ３のアセチル化レベルを示すウェスタンブロットの写真である。マウスに５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇのＹＦ２（ｉ．ｐ．生理食塩水中に溶解）を投与した。 [0040]図１０は、アミロイド−ベータ（Ａβ又はＡ−ベータ）で治療したマウスへのＨＡＴ活性化剤のＹＦ２の投与後の手懸り付き恐怖条件づけ反応を示す棒グラフである。 [0041]図１１は、アミロイド−ベータ（Ａβ又はＡ−ベータ）で治療されたマウスへのＨＡＴ活性化剤のＹＦ２の投与後の状況的恐怖条件づけ反応を示すグラフである。 [0042]図１２は、ベヒクル、ＹＦ２単独、Ａβ単独、又はＹＦ２プラスＡβで治療されたマウスにおける感覚閾値の評価を示す棒グラフである。 [0043]図１３は、血液中のＨＡＴアゴニストのＹＦ２の動態を示すグラフである。ＹＦ２（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）をマウスに投与し、そして次いで血液を異なった時点で尾部から試料採取した。 [0044]図１４は、ＨＡＴアゴニストのＹＦ２を投与されたマウスに対する放射状アーム水迷路の結果を示すグラフである。 [0045]図１５は、ＨＡＴ活性化剤のＹＦ２を投与されたマウスに対するプラットフォーム試験の結果を示すグラフである。 [0046]図１６は、ＨＡＴ活性化剤のＹＦ２を投与されたマウスの放射状アーム水迷路中の速度を示すグラフである。 [0047]図１７は、ＴＳＡが、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの切片中のＣＡ１−ＬＰＴ障害を逆転することを示すグラフである。要約のグラフは、３０分間のＨＤＡＣ阻害がＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＴＰを回復することを示し、ＷＴ同腹仔には効果がなかった。＊ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１の切片と比較してｐ＜０．０５（双方向ＡＮＯＶＡ）。水平の棒はＴＳＡの適用を表す。三本の矢印はθバーストに対応する。ＴＳＡで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウス（それぞれｎ＝７及びｎ＝８）、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウス（ｎ＝６）。 [0048]図１８は、ＨＤＡＣ阻害が、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの状況的ＦＣを改良することを示すグラフである。（基線）ＴＳＡ又はベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ同腹仔は、訓練室における瞬時竦みにおける差を示さなかった。（２４時間）訓練後２４時間に行われた状況的ＦＣは、ベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔と比較した、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける竦みの減少を示す。 ＴＳＡによる治療は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける竦み反応の欠損を回復し、そしてＷＴマウスには効果がなかった。＊ＡＰＰ／ＰＳ１−ベヒクルに対してｐ＜０．０５（全てのグループでｎ＝１３）。 [0049]図１９は、ＣＢＰ／Ｇａｌ４ハイブリッド及びルシフェラーゼ発現がＧａｌ４酵母プロモーターによって刺激されるレポータープラスミドの略図である。ＣＢＰは、ＣＲＥＢ結合タンパク質である。 [0050]図２０は、ＰＳ１刺激後の転写におけるＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域の役割を示すグラフである。図２０Ａは、ルシフェラーゼ遺伝子の上流のＧａｌ４ＤＮＡ結合部位を含有する２μｇのプロモーター−レポーター構築物及び機能的ＣＢＰ（ＷＴ−ＣＢＰ）又はＧａｌ４のＤＮＡ結合領域に連結するＨＡＴ活性を欠く変異体（ＷＹ−ＣＢＰ）のいずれかを含有する構築物により同時形質移入されたＦ１１細胞中の相対的ルシフェラーゼ活性を示す。細胞を、ＷＴ又は変異ＰＳ１で形質移入した。数値はＧａｌ−ルシフェラーゼ及びＧａｌ−ＣＢＰで形質移入された神経細胞の対照中のルシフェラーゼのレベルに対して表示されている。それぞれのグループ当たりｎ＝３である。対照に対してｔ＝７．７８８、ｐ＝０．００１５である；＊対照に対してｐ＜０・０５である。図２０Ｂは、２μｇのルシフェラーゼ遺伝子の上流のＧａｌ４ＤＮＡ結合部位及びＷＴ−ＣＢＰ又はＧａｌ４のＤＮＡ結合領域に連結したＷＹ−ＣＢＰのいずれかを含有する構築物で同時形質移入されたＦ１１細胞中の基底ルシフェラーゼ活性を示す。有意な差は見いだせなかった。 [0051]図２１は、ＣＢＰ及びＰＣＡＦの内因性発現がＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて減少されることを示すウェスタンブロットの写真を示す。ｐ３００又はＧＣＮ５ではなく、ＰＣＡＦ及びＣＢＰレベルの減少は、Ａβ注入マウスにおいて観察された。生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、ＷＴの対照と比較して減少したＣＢＰレベルを示した。 [0052]図２２は、アセチル化されたＨ４の発現が状況的ＦＣの１時間後のＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて減少されることを示すウェスタンブロットの写真である。訓練の２時間前のＴＳＡによる治療は、Ｔｇマウスのヒストン４アセチル化レベルの障害を救済した。それぞれのグループ当たりｎ＝３であった。 [0053]図２３は、ＣＢＰが、ＤＮＡに結合したリン酸化されたＣＲＥＢ及び転写の出発部位に位置する基底転写装置間の架橋として作用するために補充されることを示す略図である。更に、ＣＢＰは、ＨＡＴとして作用し、クロマチンを記憶関連遺伝子の転写を更に利用可能にし、そして増加する。ＣＢＰとは異なり、ＨＤＡＣは、アセチル基をヒストンから除去し、従ってＤＮＡへの転写装置の接近を制限する（図は、［Ｂ１］から改変）。 [0054]図２４は、ＨＤＡＣ阻害が、背部海馬にオリゴマーのＡβ４２を含有する製剤を注入されたマウスにおける状況的恐怖条件づけを改良することを示す。図２４Ａは、背部海馬の両側に植込まれたカニューレの略図である。図２４Ｂは、非変性／非還元性条件中のＡβ製剤の分析を示すトリス−トリシンＰＡＧＥウェスタンブロットの、単量体（４．５ｋＤａ）、三量体（１３．５ｋＤａ）及び四量体（１８ｋＤａ）に対応する異なったバンドを示す写真である。図２４Ｃは：（基線）訓練の１５分前の背部海馬へのヒトＡβ４２（１μｌの最終体積中の２００ｎＭ、１分かけてゆっくり）の両側注入が、ＴＳＡ又は訓練の２時間前に注射（ｉ．ｐ）されたベヒクルのいずれかとの関連において、訓練室中の瞬時竦みに影響しなかったことを表すグラフである。（２４時間）訓練の２４時間後に行われた状況的恐怖条件づけは、ベヒクルを注射されたベヒクル注入マウスと比較した、ベヒクルを注射されたＡβ注入マウスにおける竦みの減少を示す。ＴＳＡによる治療は、Ａβ注入マウスの竦み反応の欠損を回復し、そしてベヒクル注入マウスにおいて効果を有しない。（ＴＳＡ注射を伴うＡβ注入マウス：ｎ＝１４、ベヒクル注射を伴うＡβ注入マウス：ｎ＝１２、ＴＳＡ注射を伴うベヒクル注入マウス：ｎ＝８及びベヒクル注射を伴うベヒクル注入マウス：ｎ＝１１）。 [0055]図２５は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるヒストンアセチル化の減少を示す。図２５Ａは、ウェスタンブロットの写真（上）及びグラフの形態の正規化された結果（下）である。訓練の２時間前にベヒクル及びＴＳＡを注射され、そして状況的恐怖条件づけの１時間後に安楽死させられたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウスからのタンパク質抽出物のウェスタンブロット。ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、アセチル化されたＨ４レベルの減少を示した。然しながら、ＴＳＡで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、Ｈ４のアセチル化の向上を示し、ＴＳＡで治療されたＷＴマウスのアセチル化と同じレベルに達した。結果をベヒクルで治療したＷＴマウスに対して正規化した。ＴＳＡで治療されたＷＴマウスがｎ＝５であったことを除き、それぞれのグループ当たりｎ＝４であった。図２５Ｂは、ウェスタンブロットの写真（上）及びグラフの形態の正規化された結果（下）である。電気ショックを受けない状況に暴露されたＡＰＰ／ＰＳ１マウス及びＷＴ同腹仔のＨ４の基底アセチル化レベルは同様であり、それぞれのグループ当たりｎ＝３であった。図２５Ａ及び図２５Ｂに示したデータは、全Ｈ４に対するアセチル化されたＨ４の比として与えてある。 [0056]図２６は、アゴニストＭＯＭの合成及びＨＡＴ活性の評価を示す合成スキームである。図２６Ａは、ｏ−エトキシ安息香酸をＳＯＣｌ２（１．６６ｇ、１０ｍｍｏｌ）中で一晩還流することを示す。真空中の有機溶媒の除去により、対応する塩化ベンゾイルを得て、これを２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、続いて４−クロロ−３−トリフルオロメチルアニリン（１．９６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を氷−Ｈ２Ｏ浴中に入れ、そして２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を滴下により加えた。次いで混合物を室温で４時間反応させた。有機相を分離し、そして２ＮのＨＣｌ、Ｈ２Ｏ及び食塩水で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、有機溶媒を真空中で除去して、オフホワイト色の結晶を、所望の生成物として得た（３．１ｇ、収率９０％）。図２６Ｂは、アセチル化されたＨ３の内因性レベルが、アゴニストの投与後２時間で回収されたマウスの海馬中のＭＯＭ（カニューレにより背部海馬に注入された１μｌ中の１００μｇ）によって増加することを示すウェスタンブロットの写真である。 [0057]図２７は、ヒストンのアセチル化が、Ａβ（Ａ−ベータ）を注入されたマウス中で減少することを示すウェスタンブロットの写真である。ベヒクルで治療されたＡ−ベータを注入されたマウスは、連合記録に続く前後の両方のアセチル化Ｈ３／Ｈ４レベルの減少を示した。 [0058]図２８は、ヒストンのアセチル化及びそれにおけるＨＡＴの役割の略図である。ＹＦ２は、ＨＡＴを活性化する化合物の例である。 [0059]図２９は、ＨＡＴ活性化剤化合物のＹＦ２のための合成スキームである。 [0060]図３０は、ヒストンのアセチル化及び脱アセチル化におけるＨＤＡＣ阻害剤（ＨＤＡＣｉ；例えばＴＳＡ）の役割を示す略図である。 [0061]図３１は、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞（図３１Ａ；卵巣癌）、Ｕ２５１細胞（図３１Ｂ；神経膠芽腫細胞）、Ｈｓ５７８Ｔ細胞（図３１Ｃ；乳癌細胞）、及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（図３１Ｄ；白血病細胞）中の癌細胞の生存率に対するＹＦ２の効果を示すグラフである。数値は、３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差を表す。 [0062]図３２Ａ−Ｂは、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞（図３２Ａ；卵巣癌）及びＵ２５１細胞（図３２Ｂ；神経膠芽腫細胞）中の癌細胞増殖に対するＹＦ２の効果を示すグラフである。 [0063]図３２Ｃ−Ｄは、Ｈｓ５７８Ｔ細胞（図３２Ｃ；乳癌細胞）及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（図３２Ｄ；白血病細胞）中の癌細胞増殖に対するＹＦ２の効果を示すグラフである。 [0064]図３３は、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞（卵巣癌）、Ｕ２５１細胞（神経膠芽腫細胞）、Ｈｓ５７８Ｔ細胞（乳癌細胞）、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（白血病細胞）、ＡＣＨＮ細胞（ヒト腎臓癌細胞）、及びＡ５４９細胞（ヒト肺癌細胞）中の細胞生存率（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏカラム）及び細胞増殖（Ｃｙｑｕａｎｔカラム）に対するＹＦ２及びビンブラスチン（ＶＢＬ）のＩＣ５０測定値を示す表である。 [0065]図３４は、ＹＦ２の特異性を示すグラフである。ＹＦ２は、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）及びヒストンアセチルトランスフェラーゼ、ＧＣＮ５を活性化する。 [0066]図３５は、ＡＣＨＮ細胞（図３５Ａ；ヒト腎臓癌細胞）及びＡ５４９細胞（図３５Ｂ；ヒト肺癌細胞）中の癌細胞の生存率に対するＹＦ２の効果を示すグラフである。数値は３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差である。 [0067]図３６は、ＡＣＨＮ細胞（図３６Ａ；ヒト腎臓癌細胞）及びＡ５４９細胞（図３６Ｂ；ヒト肺癌細胞）中の癌細胞の増殖に対するＹＦ２の効果を示すグラフである。 [0068]図３７は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１０の合成スキームである。 [0069]図３８は、ＨＡＴ活性化剤化合物、２０の合成スキームである。 [0070]図３９は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１１の合成スキームである。 [0071]図４０は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１２の合成スキームである。 [0072]図４１は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１４の合成スキームである。 [0073]図４２は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１３の合成スキームである。 [0074]図４３は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１５の合成スキームである。合成スキームは、斜線において二番目のページに続く。 [0074]図４３は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１５の合成スキームである。合成スキームは、斜線において二番目のページに続く。 [0075]図４４は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１６の合成スキームである。 [0076]図４５は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１７の合成スキームである。 [0077]図４６は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１８の合成スキームである。 [0078]図４７は、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞（図４７Ａ；卵巣癌）、Ｕ２５１細胞（図４７Ｂ；神経膠芽腫細胞）、Ｈｓ５７８Ｔ細胞（図４７Ｃ；乳癌細胞）、及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（図４７Ｄ；白血病細胞）中の癌細胞の生存率に対するビンブラスチンの効果を示すグラフである。数値は、３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差を表す。 [0079]図４８は、ＡＣＨＮ細胞（図４８Ａ；ヒト腎臓癌細胞）及びＡ５４９細胞（図４８Ｂ；ヒト肺癌細胞）中の癌細胞の生存率に対するビンブラスチンの効果を示すグラフである。数値は３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差である。 [0080]図４９Ａ−Ｂは、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ細胞（図４９Ａ；卵巣癌）及びＵ２５１細胞（図４９Ｂ；神経膠芽腫細胞）中の癌細胞増殖に対するビンブラスチンの効果を示すグラフである。数値は３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差である。 [0081]図４９Ｃ−Ｄは、Ｈｓ５７８Ｔ細胞（図４９Ｃ；乳癌細胞）及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（図４９Ｄ；白血病細胞）中の癌細胞増殖に対するビンブラスチンの効果を示すグラフである。数値は３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差である。 [0082]図５０は、ＡＣＨＮ細胞（図５０Ａ；ヒト腎臓癌細胞）及びＡ５４９細胞（図５０Ｂ；ヒト肺癌細胞）中の癌細胞の増殖に対するビンブラスチンの効果を示すグラフである。数値は３個のウェルの平均である。エラーバーは、標準偏差である。 [0083]図５１は、ＨＡＴ活性化剤化合物、１９の合成スキームである。 [0084]図５２は、ＨＤＡＣ１活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0085]図５３は、ＨＤＡＣ３／ＮＣＯＲ２活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0086]図５４は、ＨＤＡＣ５ＦＬ活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0087]図５５は、ＨＤＡＣ７活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0088]図５６は、ＨＤＡＣ８活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0089]図５７は、ＨＤＡＣ１０活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0090]図５８は、ＨＤＡＣ１１活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0091]図５９は、サーチュイン１活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0092]図６０は、サーチュイン２活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。 [0093]図６１は、ＨＤＡＣ１活性に対するＨＤＡＣ阻害剤のＳＡＨＡの効果を示すグラフである。 [0094]図６２は、ＨＤＡＣ３／ＮＣＯＲ２活性に対するＨＤＡＣ阻害剤のＳＡＨＡの効果を示すグラフである。 [0095]図６３は、ＨＤＡＣ６活性に対するＨＤＡＣ阻害剤のＳＡＨＡの効果を示すグラフである。 [0096]図６４は、ＹＦ２の急性投与が、海馬溶解物中のＨ３、Ｈ４、及びＨ２Ｂの特異的アセチル化を増加したことを示す。グループ当たりｎ＝３であり、そしてｐ＜０．０５である。 [0097]図６５は、ＹＦ２（ｉ．ｐ．、５ｍｇ／ｋｇ）が、Ｈ３アセチル化のレベルのＡβ−誘導の減少を救済することが可能であることを示すウェスタンブロットの写真である（それぞれのグループ当たりｎ＝３、ｐ＜０．０５である）。Ａβ（１μｌの最終体積中の２００ｎＭを１分かけて、マウスを犠牲にする７５分前に）は、背部海馬にカニューレによって注入された。 [0098]図６６Ａ−Ｂは、Ａβ４２誘導のシナプス及び認知機能障害に対するＹＦ２の有益な効果を示すグラフである。ＹＦ２は、Ａβ４２で治療された切片のＬＴＰ欠損を回復する（図６６Ａ；グラフは強縮の６０分後の記録の最後の５分間の平均を表す）。Ｐ＜０．０５である。ＹＦ２は、Ａβ４２を注入されたマウスの状況的恐怖の記憶欠損を回復する、Ｐ＜０．０１（図６６Ｂ）。 [0099]図６６Ｃは、水迷路／参照記憶試験を使用するＡβ４２誘導の認知機能障害に対するＹＦ２の有益な効果を示すグラフである。ＹＦ２は、Ａβ４２を注入されたマウスの参照記憶欠損を回復する、Ｐ＜０．０１。 [00100]図６７は、恐怖条件づけ又は参照記憶試験を使用する、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの記憶欠損に対するＹＦ２の有益な効果を示すグラフである。ＹＦ２は、ＷＴ同腹仔と比較してＡＰＰ／ＰＳ１マウスの参照（図６７Ａ）及び状況的恐怖（図６７Ｂ）記憶欠損を回復する（両方の試験に対してＰ＜０．０２）。 [00101]図６８Ａ−Ｂは、ＹＦ２が、Ａβ４２の注入後のアセチル化されたＨ３レベルの減少を救済することを示す。 [00102]図６９は、Ａβ４２を注入されたマウスにおける、目視可能なプラットフォームに到達する潜時及び速度並びにＹＦ２のオープンフィールド評価を示すグラフである。 [00103]図７０は、ヒストンのアセチル化レベルがＡＤ患者中で減少されることを示す。対照と比較して、アルツハイマー病の患者は、記憶のために重要なヒストン残基のアセチル化の減少を示した。 [00104]図７１は、ＹＦ２の薬物動態学的特性を示すグラフである。脳中のＹＦ２の量は、血漿中のそれより高い。ＹＦ２は、脳において急速に吸収される（表１４参照）。脳及び血漿中のＹＦ２の排出半減期は、約４０分である。脳へのＹＦ２の分布は速い。ＹＦ２は、急性毒性試験において３００ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）まで、いずれもの副作用を誘発しない。 [00105]図７２Ａは、異なったＹＦ２濃度によるヒトＣＢＰ、ｐ３００、ＰＣＡＦ及びＧＣＮ５活性化に対する用量−反応曲線である。 [00106]図７２Ｂは、ＣＢＰ、ｐ３００、ＰＣＡＦ及びＧＣＮ５のＥＣ５０の計算値を表す表である。 [00106]図７３は、１０μＭのＹＦ２治療に対するＮＩＨ細胞系の増殖阻害値を示すグラフである。 [00107]図７４は、ＨＤＡＣ６活性に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果を示すグラフである。
[00109]アルツハイマー病（ＡＤ）の初期の健忘性変化は、シナプスの機能障害に関連すると考えられる。この疾病において高い量で存在するペプチドであるβ−アミロイド（Ａβ）は、記憶［Ｐ１，Ｐ２］及びその電気生理学的モデルで長期増強（ＬＴＰ）［Ｐ３−Ｐ８］を阻害することが見いだされている。記憶は、遺伝子発現の制御によるエピジェネティクスによって調節されることが知られている。エピジェネティクスは、ＤＮＡ又はその関連タンパク質を、ＤＮＡのメチル化及びヒストン（Ｈ）修飾のような方法で、ＤＮＡ配列そのものを変化することなく［Ｐ９］‘マーキング’することによって遺伝子発現を変化する機構として定義される。例えばアセチル又はメチル官能基の付加或いは除去によるヒストンの修飾は、ＤＮＡ中に含有される情報が、多かれ少なかれ転写因子に接近可能であるようにクロマチン構造が開くか又は閉じることを起こす。従って、後成的機構の一つの変性が記憶の破壊に導くことができることは驚くべきことではない。例えば、ヒストンのアセチル化の減少は、クロマチン構造が閉じることを起こし、従ってＤＮＡ中に含有される情報は、転写因子及び記憶の形成にとってより接近不可能であることができる［Ｐ９］。
[00110]ヒストンのアセチル化を上方制御するために現時点で使用される主要な戦略は、ヒストンからアセチル基を除去する酵素のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害を含む。然しながら、非特異的ＨＤＡＣ阻害の多面的効果は、ＨＤＡＣ阻害剤の治療の可能性を妨害することができる［Ｐ１０−Ｐ１３］。
[00111]ＨＡＴは、アセチル−ＣｏＡ結合部位を含有する高度に保存されたモチーフを共有する。ＨＡＴは、癌、喘息、神経変性疾患及びウイルス感染の病態に関係することができる。これは、特異的ＨＡＴ活性化剤が、薬理学的探求のための潜在的な手段であり、そして治療的適用を見出すことができることを示す。今のところただ一つの群がＨＡＴ活性化剤として報告されている。然しながら、これらの化合物は、可溶性でなく、更に膜浸透性でもなく、これが、これらを先に記載した疾病に対する治療のための良好な薬物候補でなくしている。
[00112]本発明は、良好な効力、優れた溶解性、妥当な薬物動態特性並びに良好な膜及び血液脳関門（ＢＢＢ）透過性を有し、従って神経変性疾患及び癌を持つ患者に最小量の副作用を伴う新しい医薬として使用することができる、ＨＡＴ活性化剤の新しい群の合成に関する。
[00113]本発明は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性、ＨＡＴ活性化効力、高選択性、妥当な薬物動態及び血液脳関門（ＢＢＢ）を通る良好な透過性を持つ化合物を提供する。これらの化合物は、ＡＤ及びアルツハイマー様病態の認知又は記憶を改良することのような、米国で三番目に最も経費のかかるＡＤ患者の副作用を最小にするために、並びに他の神経変性疾患に罹った患者に対する副作用を最小にするために使用することができる。本発明の化合物は、更に抗癌薬物としても開発することができる。
[00114]幾つかの態様において、本発明は、ヒストンタンパク質をアセチル化することができ、従って患者の遺伝子発現を増加し、向上した記憶及び認知をもたらすＨＡＴ活性化剤を同定するための方法を提供する。
[00115]更なる態様において、本発明は、正常な被験者（例えば、神経変性疾患に罹っていない被験者）における記憶向上剤としてのＨＡＴアゴニストの使用を提供する。更なる態様において、本発明は、加齢した被験者（例えば、＞５５歳の被験者）における記憶向上剤としてのＨＡＴアゴニストの使用を提供する。更なる態様において、本発明は、認知減少／障害に伴う他の症状のための記憶向上剤としてのＨＡＴアゴニストの使用を提供する。認知減少／障害に伴う他の症状の非制約的例は、精神遅滞に伴う各種の症候群及び学習障害に伴う各種の症候群、パーキンソン病、ピック病、レビー小体病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ダウン症候群、多系統萎縮症、脳の鉄の蓄積を伴う神経変性Ｉ型（ハラーフォルデン・シュパッツ病）、純粋自律神経失調症、レム睡眠行動障害、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）、軽度認知障害、加齢、アルツハイマー病と混合された血管性認知症、異常なアミロイド沈積によって特徴づけられる神経変性疾患、及びいずれものこれらの組合せを含む。
[00116]高いレベルの封入体を示す動物、例えばＡβ蓄積動物モデル（例えば、ＡＤの動物モデル）のような神経変性疾患の動物モデル、又は例えば、ハンチントン病のマウスモデルにおいて試験されるＨＡＴ活性化剤化合物の候補の集団を縮小するために、ＨＡＴ活性化剤は、最初、一つ又はそれより多い：約１００ｎＭより多くないＥＣ５０；ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒストンアセチル化活性；及びＢＢＢを透過する能力を有するような、そのある種の特徴の保有に基づいて選別又は選択することができる。
[00117]幾つかの態様において、制約されるものではないが、高いレベルの封入体を示す動物、例えばＡβ蓄積動物モデル（例えば、ＡＤの動物モデル）のような神経変性疾患の動物モデル、又は例えば、ハンチントン病のマウスモデルにおいて試験されるＨＡＴ活性化剤の候補の集団は、最初、“医化学”戦略に基づいて選別又は選択される。例えば、報告されたＨＡＴ活性化剤の構造分析に基づいて、一群の構造的に関連するが、しかしやはり式的に独立の骨格を、ＨＡＴ活性化剤の候補とみなされるものとして発生することができる。これらの骨格から誘導される化合物は、先ずコンピューターモデル上で選別され、そして最適化される。最高の得点を持つ化合物が合成され、そして効力を試験されるものである。この段階で、合成の努力は、効力／選択性の試験結果に導かれるものである。満足すべき効力及び選択性を持つ化合物（リード化合物）が、更にＰＫ、生体利用率／脳透過性及び非特異的活性（安全性）に対して研究されるものである。選択された化合物は、制約されるものではないが、高いレベルの封入体を示す動物のような神経変性疾患の動物モデル、例えばＡβ蓄積動物モデル（例えばＡＤの動物モデル）、又はハンチントン病のマウスモデルで、これらが、患者の遺伝子発現を増加し、向上した記憶及び認知をもたらすか否かを決定するために試験することができる。本明細書中で使用する場合、ＨＡＴ活性化剤化合物は、化合物が更に他のＨＡＴを阻害することが可能であることができる可能性を必ずしも妨げない。
[00118]ＤＮＡ及びヒストンのアセチル化並びにメチル化
[00119]真核生物のＤＮＡは、高度に組織化され、そして核中に包装されている。組織化及び包装は、ＤＮＡと一緒に複合構造のクロマチンを形成するコアヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３及びＨ４を含むタンパク質の付加によって達成される（図２８参照）。コアヒストンの修飾は、クロマチンの立体構造変化に対して基本的に重要である。アセチル化のレベルは、転写活性に関連し、そして次いでアセチル化は、開いたクロマチン構造を誘発し、これは、転写装置がプロモーターに接近することを可能にする。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）及びヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）は、コアヒストンタンパク質のアミノ末端の近くに位置するリシンのε−アミノ基を選択的に脱アセチル化又はアセチル化することによって、転写に影響する酵素である。クロマチンのアセチル化は、転写活性（ユークロマチン）と相関し、一方脱アセチル化は、遺伝子発現抑制と相関する。興味あることに、海馬のＣＡ１領域（長期の記憶において重要な役割を演じる脳の領域）中のＨ３のアセチル化の増加が、連合記憶後に起こることが示された。更に、ＨＤＡＣを阻害することによって、これらは、クロマチン中の変化を操作し、そして長期の記憶の形成を向上することが可能である。
[00120]ヒストンのアセチル化及び脱アセチル化は、遺伝子活性化及び発現抑制のそれぞれの厳密な制御に対するこれらの寄与が、徐々に認識されている。従って、これらの機構の調節解除が、記憶に関連する遺伝子の発現の破壊に導き、精神遅滞に伴う多くの症候群をもたらすことができることは驚くべきことではない。
[00121]ヒストン。 ＤＮＡは、最初ヒストン（Ｈ）の八量体複合体で包まれて、ヌクレオソームの単位を形成し、紐上のビーズの外観を与える［Ｂ３１］。次に、これらのヌクレオソーム単位は、高次のクロマチン繊維に折畳まれる［Ｂ３２］。それぞれのヒストンの八量体複合体は、ヒストン２Ａ及び２Ｂの二つのコピーによって隣接するヒストンＨ３及びＨ４の二つのコピーを含有する［Ｂ３２］。Ｈ１及びそのトリの変種Ｈ５は、リンカーヒストンであり、これは、ヌクレオソーム並びにＤＮＡの入口及び出口部位の両方を結合し、従ってＤＮＡをそこに固定し、そして高次構造の形成を可能にする。全てのヒストンは、球状の領域を有し、これは、ヒストン−ヒストンの相互作用、及びＮ−末端の‘尾部’の延長を仲介する。ヒストンのコア、そして特にその尾部は、アセチル化、ユビキチン化、ＳＵＭＯ化、リン酸化、シトルリン化、ＡＤＰ−リボシル化、及びメチル化のような多くの共有修飾のための標的である［Ｂ３３］。Ｈ３ Ｌｙｓ４メチル化及びＨ３ Ｌｙｓ５６アセチル化のような活性遺伝子転写を伴うヒストン修飾は、遺伝子発現に導くことが見いだされた。他方、Ｈ３ Ｌｙｓ２７メチル化及びＨ２Ａ Ｌｙｓ１１９ユビキチン化のような遺伝子転写の不活性化に伴うヒストン修飾は、遺伝子発現抑制を起こすことが見いだされた。この適用に対して特に興味あることは、ヒストン２Ｂ、３及び４であり、これらが記憶過程に関係することが示されているためである［Ｂ１９、Ｂ２５］。
[00122]ＨＡＴ及びＨＤＡＣ。 ヒストンの修飾及びその組合せが、クロマチンの到達性を修飾すること、及び転写因子及び修飾酵素のためのドッキング部位として作用することによる遺伝子制御に関係することが提案されている［Ｂ３４、Ｂ３５］。最も研究されたヒストン修飾の一つは、ヒストンのＮ−末端の進化的に保存されたリシン残基の、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）によるアセチル化である。対照的に、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）によって触媒されるヒストンの脱アセチル化は、ＤＮＡを更に凝縮した形態に包装し、転写因子の接近を制約し、そして従って遺伝子サイレンサーとして作用することが見いだされた［Ｂ３６］。ＨＡＴは、少なくとも三つの群の酵素を含む遺伝子発現の制御に関係していた［Ｂ３７］。一般制御非脱抑制可能５（Ｇｃｎ５）は、Ｇｃｎ５のＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＧＮＡＴ）の創設メンバーである。ＧＮＡＴファミリーのメンバーは、Ｇｃｎ５、ＰＣＡＦ、Ｅｌｐ３、ＨＡＴ１ｍ Ｈｐａ２及びＮｕｔ１を含む。ＭＹＳＴファミリーは、ファミリーの創設メンバー：Ｍｏｒｆ、Ｙｂｆ２、Ｓａｓ２及びＴｉｐ６０に従って命名された。更に、ＣＢＰ／ｐ３００、Ｔａｆ１及び多くの核受容体活性化補助因子を含む他のタンパク質は、固有のＨＡＴ活性を保有することが示されている。然しながら、これらのタンパク質は、コンセンサス領域を含有せず、そして従ってＨＡＴ酵素の‘孤児群’である［Ｂ３７］。
[00123]ＨＤＡＣは、転写活性化剤及び他のＨＤＡＣと共にリプレッサー複合体を形成する［Ｂ３８］。哺乳動物のＨＤＡＣは、古典的及び転写抑制因子（ｓｉｌｅｎｔ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）２（Ｓｉｒ２）関連タンパク質（サーチュイン）ファミリーに分割される［Ｂ３９］。ヒトにおいて、古典的ファミリーのメンバーは、もう一つの下位区分を有し、これは、クラスＩ、ＩＩ及びＩＶを含み、これらは配列類似性を共有し、そしてデアセチラーゼ活性のためにＺｎ＋を必要とする。クラスＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１−３、ＨＤＡＣ８）は、遺伝子リプレッサーＲｐｄ３ｐ酵母に関連し、そして少なくとも二つの別個のコリプレッサー複合体、Ｓｉｎｓ３複合体及びＮｕＲＤ複合体のサブユニットである。クラスＩＩのＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４−７、９及び１０）は、Ｈｄａ１ｐ ＨＤＡＣ酵母に類似であり、これらは、遺伝子リプレッサーとして作用し、そして細胞分化及び発育において各種の役割に関係している。クラスＩＶは、ＨＤＡＣ１１を含んでなり、これは、クラスＩ及びＩＩのＨＤＡＣの両方の幾つかの特徴を有する。サーチュインファミリーは、クラスＩＩＩのＨＤＡＣ（ＳＩＲＴ１−７）を含み、これは、Ｓｉｒ２酵母に類似である。クラスＩＩＩのＨＤＡＣは、生化学的に、そして構造的に古典的ファミリーとは異なり、そして補助因子としてＮＡＤ＋を必要とする。ＨＤＡＣは、セントロメア及びテロメアにおける遺伝子発現抑制及びヘテロクロマチン形成に関係するように見受けられる（総括に対して［Ｂ４０］を参照されたい）。
[00124]ＤＮＡ及びヒストンのアセチル化及びメチル化を含む後成的修飾における変更は、癌及び神経変性疾患における遺伝子発現の変化に寄与することができる。ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）によるヒストン上のアセチル基の付加は、遺伝子発現を向上し、一方ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）によるその除去は、遺伝子発現を減少する。ヒストンのアセチル化の減少は、腫瘍、気分障害、及び神経変性疾患のような各種の病気において見いだされている。ＨＡＴの例は、制約されるものではないが、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、ＨＡＴ１、ＥＬＰ３、ＨＰＡ２、ＥＳＡ１、ＳＡＳ２、ＳＡＳ３、ＴＩＰ６０、ＨＢＯ１、ＭＯＺ、ＭＯＲＦ、ＭＯＦ、ＳＲＣ１、ＳＲＣ３、ＴＩＦ２、ＧＲＩＰ１、ＡＴＦ−２［Ｌｅｅ ａｎｄ Ｗｏｒｋｍａｎ（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，８（４）：２８４−９５，Ｍａｒｍｏｒｓｔｅｉｎ（２００１）Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉｏｌ．３１１：４３３−４４４；及びＫｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３８（６）：６４７−６６２を参照されたく、これらはそれぞれ本明細書中に参考文献としてその全てが援用される］を含む。一つの態様において、本発明のＨＡＴ活性化剤化合物は、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＨＡＴ１、ＰＣＡＦ、又はこれらに組合せに関する。幾つかの態様において、本発明のＨＡＴ活性化剤化合物は、核受容体活性化補助因子（例えば、ＣＢＰ／ｐ３００及びＴａｆ１）のような固有のＨＡＴ活性を保有するタンパク質に関する。もう一つの態様において、Ｈ２、Ｈ３、及び／又はＨ４ヒストンのアセチル化は増加される。幾つかの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、図３に示されるＹＦ２である。
[00125]増加するヒストンのアセチル化は、喘息、感染性疾患及び精神病のような多種多様な幅広い種類の疾病の結果を改良することを示している。幾つかのＨＤＡＣ阻害剤の臨床試験は現時点で進行中であるが、ヒストンのアセチル化がＨＡＴの活性化によって増加されることによる別の戦略は、広範に探求されていない。例えば、米国特許出願公開ＵＳ２００９０７６１５５及びＰＣＴ出願公開ＷＯ２００４０５３１４０中の化合物は、不良な溶解性及び膜透過性を有する。更に、この特許出願中で開示された化合物は、いずれかの疾病のためのいずれものデータも開示していない。
[00126]ＨＡＴ活性化剤は、現時点で薬物試験中ではないが、然しながら、幾つかのＨＤＡＣ阻害剤は、現時点で臨床試験中である。これらのＨＤＡＣ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）の幾つかは、前臨床試験において治療的効力を示している。理論によって束縛されるものではないが、ＨＡＴ活性化剤は、ＨＤＡＣｉと同様な役割を持つ有用な薬物候補であることができる。然しながら、従来使用可能であったＨＡＴ活性化剤は、僅かな溶解度及び膜透過性を有し、これらを薬物として不適当にしていた。
[00127]幾つかのＨＤＡＣｉは、癌に対して試験中であり、その幾つかは、例えば、前臨床段階である４ＳＣ−２０２（Ｎｙｃｏｍｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；前臨床段階であるＡＲ−４２（Ａｒｎｏ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）；大ＩＩ相臨床試験中であるＢｅｌｉｎｏｓｔａｔ（ＴｏｐｏＴａｒｇｅｔ，Ｒｏｃｋａｗａｙ，ＮＪ）；及び第ＩＩ相臨床試験中であるＥｎｔｉｎｏｓｔａｔ（Ｂａｙｅｒ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）である。例えば、Ｌａｎｅ及びＣｈａｂｎｅｒ（２００９，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．，２７（３２）：５４５９−６８；参考文献としてその全てが援用される）の表３中で、ＨＤＡＣ阻害剤の選択された臨床試験が考察され、これは、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ、及びＭＧＣＤ０１０３を含む。Ｌａｎｅ及びＣｈａｂｎｅｒ（２００９，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．，２７（３２）：５４５９−６８；参考文献としてその全てが援用される）の表２中で、臨床使用又は開発中の選択されたＨＤＡＣ阻害剤が考察され、これは、ヒドロキサム酸化合物（例えば、ボリノスタット、トリコスタチンＡ、ＬＡＱ８２４、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ、及びＩＴＦ２３５７）、環式テトラペプチド化合物（例えば、デプシペプチド）、ベンズアミド化合物（例えば、Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ及びＭＧＣＤ０１０３）、及び短鎖脂肪酸化合物（例えば、バルプロ酸、酪酸フェニル、及びｐｉｖａｎｅｘ）を含む。
[00128]幾つかのＨＤＡＣｉは、神経変性疾患の治療のために使用されるＭｅｒｃｋ（Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，ＮＪ）からのＨＤＡＣｉ；及びハンチントン病の治療のために使用され、今や中止されたＴｏｐｏ Ｔａｒｇｅｔ（Ｒｏｃｋａｗａｙ，ＮＪ）からのＨＤＡＣｉ；双極性疾患、癲癇、及び片頭痛のために使用され、今や中止されたイソバレルアミドＮＰＳ−１７７６（ＮＰＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｂｅｄｍｉｎｓｔｅｒ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；及び前臨床段階で中止されたＴｏｐｏ Ｔａｒｇｅｔ Ａ／Ｓ（Ｋｏｂｅｎｈａｖｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）からの癌のためのヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤のような神経疾患のために開発されているか、又は開発された。
[00129]ここに、改良された溶解性及び膜透過性を持つ新しい群のＨＡＴ活性化剤の合成が記載され、そして、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ並びに動物モデルにおけるその効力が示される（実施例を参照されたい）。Ｉｎ ｖｉｔｒｏの及び行動学的データは、本発明のＨＡＴ活性化剤化合物のＹＦ２が、脳中のヒストンＨ３をアセチル化し、そしてアルツハイマー病のマウスモデルにおける記憶欠損を回復することができることを示す。例えば、図３に示すＨＡＴ活性化剤は、幾つかの癌、精神及び神経変性疾患におけるアジュバント療法として使用することができ、そしてこれらの疾患のための治療の効力及び安全性を改良することができる。更に、ＨＡＴ活性化剤化合物のＹＦ２は、先に言及した特許出願中に記述されていない分子を有し、これは、溶解性並びに膜及び血液脳関門（ＢＢＢ）透過性を有意に改良する。Ａｂｅｌ ａｎｄ Ｚｕｋｉｎ（２００８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ８：５７−６４；及びＬｅｅ ａｎｄ Ｗｏｒｋｍａｎ（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８：２８４−２９５を参照されたい。
[00130]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、それを必要とする患者における癌を治療するために使用することができる。癌の非制約的例は、Ｂ細胞リンパ腫、大腸癌、肺癌、腎臓癌、膀胱癌、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、造血器腫瘍、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンスリンパ腫、ホジキンスリンパ腫、子宮癌、腎細胞癌、肝細胞腫、腺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、卵巣癌、原発性又は転移性黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、脳癌、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、精巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、消化器癌、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、気管支原性肺癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、肺癌、上皮癌、子宮頸癌、精巣癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、白血病、黒色腫、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、膀胱癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、及び髄様癌を含む。
[00131]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、それを必要とする患者における神経変性疾患を治療するために使用することができる。神経変性疾患の非制約的例は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病ｓｍ進行性核上性麻痺、レフサム病、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（更にバッテン病としても知られる）、脊髄小脳失調症（各種の特徴を伴う多発性型）、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー病、脊髄癆、及び中毒性脳症を含む。
[00132]遺伝子転写及び記憶
[00133]遺伝子転写及び記憶に関係する過程の略図を図２３に示す。脳において、ＣＲＥＢのリン酸化は、ＣＢＰに結合し、そして記憶関連遺伝子発現を刺激するＣＲＥＢの能力のために必要である。基底転写装置との相互作用を容易にする活性化補助因子としての、そしてそのＨＡＴ活性によるＣＢＰの機能は、ヒストンのアセチル化を触媒し、染色体抑圧の減少を起こし、そして記憶関連遺伝子の転写を増加する。このスキームと一致して、ＨＡＴ領域のＣＢＰの変異は、ＬＴＭの機能障害を起こすことが見いだされた。例えば、Ｋｏｒｚｕｓ等は、ＣＢＰのＨＡＴ活性を持たない誘導型ドミナントネガティブＣＢＰマウスが、正常な短期記憶を示し、一方ＬＴＭは機能障害されことを証明した［Ｂ８］。更に、機能障害されたＬＴＭは、遺伝子導入発現の抑制及びＨＤＡＣ阻害剤の投与によって救済された［Ｂ８］。
[00134]記憶過程におけるヒストンの脱アセチル化の関連性は、Ｌｅｖｅｎｓｏｎ等［Ｂ２６］からの研究によって強調されている。この研究において、海馬のＣＡ１領域（ＬＴＭにおいて重要な役割を演じる脳の領域）におけるＨ３のアセチル化が、マウスが有害な刺激を伴う新規な状況に関係する連合記憶の形態の状況的恐怖条件づけに対する訓練後、増加することが見いだされた。然しながら、ＨＤＡＣ阻害は、ＬＴＭを向上した［Ｂ２６］。この研究と一致して、ＨＤＡＣ阻害は、ハンチントン病、脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、虚血及びルビンシュタイン・テイビ症候群のようなある種の神経変性疾患において有利であることができる［Ｂ１９、Ｂ２５、Ｂ４１、Ｂ４２］。興味あることに、ＨＤＡＣ阻害剤の効果は、ＨＤＡＣ２のニューロン特異的過剰発現が、しかしＨＤＡＣ１のそれではなく、樹状突起スパイン密度、シナプスの数、シナプス可塑性及び記憶形成を減少するために、特異的ＨＤＡＣに依存する可能性がある［Ｂ４３］。逆に、ＨＤＡＣ２の欠損は、マウスにおけるＨＤＡＣ阻害剤による慢性治療と同様に、シナプスの数及び昂進された記憶を増加した［Ｂ４３］。まとめれば、これらの発見は、ＨＤＡＣ阻害が、ＡＤのような認知障害によって特徴づけられる神経変性疾患における記憶機能障害に対する治療手段を提供することができることを示す。
[00135]転写装置及びＡＤ
[00136]最近の研究は、ＣＲＥＢ／ＣＢＰ機能障害をＡＤに結び付けた。ＡＰＰ（Ｋ６７０Ｎ：Ｍ６７１Ｌ）遺伝子導入動物は、α−７−ニコチン受容体（α７−ｎＡＣｈＲ）／ＥＲＫ／ＭＡＰＫカスケードの下流のレベルにおけるＣＲＥＢのリン酸化の減少を示した［Ｂ４４、Ｂ４５］。オリゴマーのＡβ４２を含有する製剤による海馬切片の潅流は、ＬＴＰのＡβ仲介の変化の根底にある機構に対する手がかりを提供する、ＣＲＥＢリン酸化の強縮誘導の増加の減少を明らかにした［Ｂ１２］。これらの結果と一致して、Ａβは、ラットの海馬培養物中のＣＲＥＢリン酸化のグルタミン酸誘導の増加を遮断した［Ｂ１１］。Ｇｏｎｇ等は、更に、ｃＡＭＰレベルを、そして従ってＣＲＥＢリン酸化を増加する選択的ＰＤＥ ＩＶ阻害剤であるロリプラムが、ＡＰＰ／ＰＳ１二重遺伝子導入マウスにおけるＬＴＰ及び状況的学習の両方の欠損を回復することを見出した［Ｂ４６］。この保護的効果は、恐らくＣＢＰ補充、そして従ってヒストンのアセチル化に導くことができるＣＲＥＢ活性化のためである。もう一つの研究は、ＰＳ１及び２において、コンディショナる二重ノックアウト（ＰＳｃＤＫＯ）マウスが、年齢に伴って増幅される障害された記憶及びＬＴＰを示すことを証明した。更に、ＰＳｃＤＫＯマウスは、その後の神経変性に寄与する可能性のある大脳皮質におけるＣＢＰレベル及びＣＲＥ依存性遺伝子発現の減少を示した［Ｂ１５］。更に、最近の研究は、野生型（ＷＴ）のＰＳ１が、ＣＢＰ及びｐ３００の転写能力を刺激し、一方ＰＳ１のＡＤ関連変異体（Ｍ１４６Ｌ）は、この効果を持たないことを証明している［Ｂ１８、Ｂ４７］。これらの実験において、ＷＴのＰＳ１に対する反応が、ＣＢＰアセチルトランスフェラーゼ領域を含有するＣＢＰの７２１−１６７９領域を含有する構築物と共に観察された［Ｂ１８］。更に、ＣＢＰ減少及びヒストンの脱アセチル化がニューロン死中に起こり、これが一次皮質ニューロン中のＡＰＰ指向性抗体によって誘発されることが示された［Ｂ４８］。
[00137]アルツハイマー病−神経変性疾患の一例
[00138]記憶機能障害に関する過程の新たな観点は、脳損傷のいずれもの他の臨床徴候の非存在において起こる初期の健忘性症状の繊細さ及び変動性は、少なくとも部分的にＡβによって産生された単一のシナプスの機能の個別の変化のためであることができることを示す［Ｂ１１、Ｂ２７−２９］。
[00139]幾つかの証拠は、ＬＴＭ及びシナプス可塑性が、多くの経路の活性化によって特徴づけられる初期の導入期の後の遺伝子発現に依存することを示している（総括に対して、［Ｂ３０］を参照されたい）。更に最近になって、記憶関連遺伝子及び長期シナプス可塑性の微細な調節は、後成的因子に関係することが見いだされている［Ｂ６］。実際、ＤＮＡのメチル化及びヒストンの翻訳後修飾のような後成的修飾は、ＤＮＡの翻訳領域と相互作用するポリメラーゼの能力に、ＤＮＡ配列自体を変化することなく深く影響する。従って、後成的機構の調節解除が、ＡＤのような認知性疾患によって特徴づけられる疾病の病変形成に寄与する、記憶関連遺伝子の発現及びシナプス可塑性の破壊［Ｂ６］に導くことができることは驚くことではないものである。
[00140]記憶保存の過程は、遺伝子及びシナプス間の対話として説明されている［Ｂ２］。長期記憶（ＬＴＭ）の形成は、遺伝子転写［Ｂ３］、新しいタンパク質の合成［Ｂ４］及びシナプスの構造の変化［Ｂ５］に依存する。更に、ＬＴＭにおける遺伝子発現の適切な調節は、エピジェネティクスによって調節される［Ｂ６］。エピジェネティクスは、遺伝子発現を、ＤＮＡ又はその関連タンパク質を、ヒストンの修飾及びＤＮＡのメチル化のような過程によって、ＤＮＡ配列自体を変化することなく‘マーキング’することによって変化する機構として定義される［Ｂ７］。ヒストンタンパク質のＮ末端尾部は、転写的に活性な又は転写的にサイレントなクロマチンの状態間の移行を指示することができる、ヒストンのアセチル化、ユビキチン化、ＳＵＭＯ化、リン酸化、シトルリン化、ＡＤＰ−リボシル化、及びメチル化のような翻訳後修飾を受けることが知られている［Ｂ７］。従って、これらの機構の一つの調節解除が、記憶関連遺伝子発現の破壊及び認知障害に導くことができることは驚くことではない。
[00141]アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶減少に導くニューロン減少、細胞外老年性プラーク及び細胞内神経原線維タングルによって特徴づけられる。ＡＤは、恐らく少なくとも部分的にＡβによって産生されるシナプスの疾患として始まる（Ｓｅｌｋｏｅ，Ｄ．Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ａ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．７２９８，７８９−７９１（２００２））。学習及び記憶、並びに記憶転写因子ＣＲＥＢのリン酸化の根底にあると考えられる、シナプス可塑性の生理学的相関である長期増強（ＬＴＰ）におけるＡβ誘導の減少は、酸化窒素（ＮＯ）ドナー及びｃＧＭＰ類似体によって回復される（Ｐｕｚｚｏ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐａｔｈｗａｙ ｄｕｒｉｎｇ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２５，６８８７−６８９７（２００５））。その逆に、ＮＯ−シンターゼ２（ＮＯＳ２）は、変異されたアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を発現するマウス中のＡＤ表現型の悪化をもたらすこともまた真である（Ｃｏｌｔｏｎ，Ｃ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．ＮＯ ｓｙｎｔｈａｓｅ ２（ＮＯＳ２）ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １０３，１２８６７−１２８７２（２００６））。これらの発見は、ＮＯ経路の上方制御が、ＡＤにおいて保護的であることができることを示す。
[00142]アルツハイマー病（ＡＤ）は、慢性の進行性神経変性疾患であり、その中で、初期段階は、記憶障害に導くシナプスの機能障害につながると考えられる。これに関連して、β−アミロイド（Ａβ）は、記憶［Ａ１、Ａ２］及びその細胞モデルの長期増強（ＬＰＴ）［Ａ３−Ａ８］を阻害することが見いだされている。Ａβは、その変異体の形態が家族性ＡＤ（ＦＡＤ）［Ａ９］に関係することが見いだされているアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）である大きい前駆体タンパク質のタンパク質分解産物である。その後、二つのＡＤ関連遺伝子のプレセニリン１（ＰＳ１）及びプレセニリン２（ＰＳ２）［Ａ１０、Ａ１１］が、同様にＦＡＤに関係することが見いだされた［Ａ１２］。プレセニリンは、ＡＰＰを開裂し、そしてＡβ４２ペプチドを産生することの原因であるγ−セクレターゼ複合体の一部である［Ａ１３］。
[00143]ＡＤは、ニューロン減少、細胞外老年性プラーク（ＳＰ）及び細胞内神経原線維タングル（ＮＦＴ）によって神経病理学的に特徴づけられる。ＳＰは、主としてＡβ凝縮物を含んでなる。ＮＦＴの主要成分は、微小管結合タンパク質ｔａｕである。臨床的には、ＡＤは、認知機能障害によって特徴づけられ、そして時間をかけて脳の大きい領域に漸進的に関係するシナプスの疾患として始まる［Ｓ１］。シナプスの機能障害に関係する過程の新しい観点は、脳損傷のいずれもの他の臨床徴候の非存在において起こる初期の健忘性症状の繊細さ及び変動性は、少なくとも部分的にＡβによって産生された単一のシナプスの機能の個別の変化のためであることができることを示す［Ｓ５、Ｓ７、Ｓ１０、Ｓ１１］。
[00144]アルツハイマー病のための原因療法の開発のための重要な標的は、シナプスによって表される。シナプスの変化は、臨床的認知症の重篤度に高度に相関し［Ｓ１、Ｓ２］、一方、老年性プラーク及び神経原線維タングルのような他の重要な可変要素は、より少ない程度に関係する［Ｓ１］。ＡＤにおけるシナプスの変化の重要性は、ＡＤの遺伝子導入（Ｔｇ）マウスモデル［Ｓ３］、並びに切片及びｉｎ ｖｉｖｏの両方におけるアミロイド−β（Ａβ）の適用後に障害された学習及び記憶（Ｌ＆Ｍ）の広く研究された細胞モデル［Ｓ４］の長期増強（ＬＴＰ）の研究によって確認されている［Ｓ３、Ｓ５−Ｓ１２］。Ａβは、ＬＴＰを顕著に阻害することが見いだされている。ヒトＡβを産生するＴｇマウスを使用する電気生理学的研究は、海馬における基底シナプス伝達及び／又はＬＴＰの有意な欠損をしばしば明らかにしている［Ｓ２３−Ｓ３０］。
[00145]長期の記憶における遺伝子発現の制御は、エピジェネティクスによって調節されることが知られている。エピジェネティクスは、遺伝子発現を、ＤＮＡ又はその関連タンパク質を、ＤＮＡのメチル化及びヒストンの修飾のような過程によって、ＤＮＡ配列自体を変化することなく‘マーキング’することによって変化する機構として定義される［Ａ１４］。例えば、アセチル又はメチル官能基の付加或いは除去によるヒストンの修飾は、ＤＮＡ中に含有される情報が、転写因子にとって多かれ少なかれ接近可能であるようにするために、クロマチン構造が開く又は閉じることを起こす。従って、後成的機構の一つの調節解除が、記憶関連遺伝子の発現の破壊に導くことができることは驚くことではない。ＡＤにおけるシナプス及び記憶機能障害の根底にある機構の研究は、転写因子ＣＲＥＢ（ＣＲＥ結合タンパク質）及び活性化補助因子ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）の中心的役割りを示している。
[000146]最近の研究は、転写装置を、深刻な記憶障害によって特徴づけられる病態のアルツハイマー病（ＡＤ）に連結している。クロマチン及び記憶過程と関連する［Ｂ８−Ｂ１０］ことが知られている二つの分子の転写因子ＣＲＥＢ（ＣＲＥ結合タンパク質）及び活性化補助因子ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）の両方は、ＡＤにおけるシナプス及び記憶機能障害の根底にある機構において中心的役割を演じる可能性がある。ＣＲＥＢのリン酸化を促進する薬物は、ＡＤのマウスモデル及びアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解の産物のＡβ４２の致死量以下への暴露後の両方の、学習及び記憶の根底にあると考えられるシナプス可塑性の一つの型である記憶及び長期増強（ＬＴＰ）を回復することを示した［Ｂ１１−Ｂ１４］。更に、脳のＣＢＰレベルは、ＡＤに関係している二つの遺伝子である官能性プレセニリン１（ＰＳ１）及びプレセニリン２（ＰＳ２）を欠損するマウス［Ｂ１５］において減少される［Ｂ１６、Ｂ１７］。更に、野生型（ＷＴ）ＰＳ１は、ＣＢＰ転写能力を刺激し、一方、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）変異は、この効果を持たない［Ｂ１８］。
[00147]致死量以下の投与量のＡβ４２への暴露後、そしてＡＤのマウスモデルにおいて、ＣＲＥＢリン酸化を向上する薬物は、ＬＴＰ及び記憶を回復することを示した［Ａ５、Ａ１５−Ａ１７］。ＣＢＰのヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）活性の調節解除は、記憶関連遺伝子の発現を破壊する［Ａ１８］。更に、脳のＣＢＰレベルは、官能性ＰＳ１及びＰＳ２欠損マウスにおいて減少する［Ａ１９］。更に、野生型（ＷＴ）ＰＳ１は、ＣＢＰ転写能力を刺激し、一方、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）変異は、この効果を持たない［Ａ２０］。
[00148]ＮＯは、細胞の生化学過程における中心的分子である。このガスは、発生からシナプス可塑性並びに学習及び記憶までの脳の生理の各種の段階における重要なメッセンジャー分子として確立されている。ＡＤの研究において、ＮＯは、神経系のＡβ誘導の損傷に対する保護効果を有することが見いだされている［Ｓ３８−Ｓ４０］。交感神経ニューロン及び海馬ニューロンであるＰＣ１２細胞に対して行われた研究は、ＮＯ発生装置のＳ−ニトロソペニシラミンによる治療は、ニトロシル化によるアポトーシス促進因子カスパーゼ２の阻害のために、神経保護的効果を発揮し［Ｓ３９］、一方、Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステルによるＮＯ合成の阻害は、Ａβ誘導の神経毒性に対して保護しないことを示している。Ａβは、ＮＭＤＡ受容体シグナル伝達を減少する［Ｓ３８］か、ＮＯ−合成（ＮＯＳ）に対するＮＡＤＰＨの使用可能性を差引く［Ｓ４１］か、又はセリン−トレオニンキナーゼＡｋｔのリン酸化を阻害する［Ｓ４２］ことによってＮＯ発生を障害することが見いだされている。更に、ｉ−ＮＯＳの削除は、ＡＰＰマウスのＡＤ病態を向上する［Ｓ４３］。従って、ＮＯ−カスケードを向上する薬物は、ＡＤに対して有益な効果を有する［Ｓ４４］。
[00149]ＮＯの神経保護的機能が明白であり、そして疑う余地がないにもかかわらず、このガスは、これが大量に産生された場合、更に神経病理学及び細胞死の主要な薬剤ともみなされている。大量のＮＯは、Ａβ誘導の細胞死における酸化及びニトロソ化のストレスの原因である有意な量の過酸化亜硝酸の発生に導く［Ｓ４５−Ｓ５１］。事実、ニューロン及び内皮のアイソフォームのｎ−ＮＯＳ及びｅ−ＮＯＳの両方を含むＮＯＳの恒常的形態による少量のＮＯの放出は、シナプス可塑性及び学習を促進し、一方、誘導型のＮＯＳ（ｉ−ＮＯＳ）による大量のガスの制御されない産生は、過酸化亜硝酸の産生による酸化及びニトロソ化のストレスを促進する［Ｓ４５−Ｓ５１］。従って、可塑性及び記憶を遮断するＮＯカスケードのＡβ誘導の下方制御及び細胞死に導く過酸化亜硝酸の発生の両方は、ＡＤにおいて役割を演じることができる。これらの発見を開発する薬物探求の現時点の状態は、ＮＯカスケードを上方制御し、そして従って神経保護を発揮するための方法、並びに神経病理を制約するために過酸化亜硝酸の毒性効果を遮断するための方法を見出すことの両方に焦点が当てられている［Ｓ５２］。
[00150]ＣＮＳ疾患及び癌のために最適化されたＨＡＴ活性化剤
[00151]何れもの商業的に入手可能なＨＡＴ活性化剤は、ＣＮＳの慢性疾患、例えば神経変性疾患（ＡＤ、パーキンソン病、ハンチントン病のような）において、或いは癌に対して投与のために必要な特徴を有するように開発されていない。従って、幾つかの態様において、本発明は、神経変性疾患（ＡＤ、ハンチントン病、パーキンソン病、他のＡβの蓄積に関連する神経変性疾患又は高いレベルの封入体によって特徴づけられる疾病のような）の治療のための薬剤又は化合物を同定するための方法を提供し、これは、ＣＮＳ疾患を治療するために最適化された薬剤又は化合物を、ＣＮＳ疾患を治療するために最適化された化合物とする一つ又はそれより多い特徴を有することに基づき選択することを含んでなる。例えば、特徴は：約１００ｎＭより多くないＥＣ５０；ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒストンのアセチル化活性；ＢＢＢを透過する能力；又はこれらの組合せ含んでなることができる。一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、図３に示すＹＦ２である。
[00152]幾つかの態様において、本発明は、神経変性疾患の治療、制約されるものではないが、高い封入体に伴う症状の治療、（例えば、Ａβ、アルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂したＴＡＲＤＢＰ−ＴＤＰ−４３、及び／又はＴａｕタンパク質蓄積に伴う症状）のための薬剤又は化合物を同定又は設計するための方法を提供し、ここで、先に記述した一つ又はそれより多い特徴を満足するために、及び／又は本明細書中に記載される各種の生物検定の強度に適合するために調節された薬剤又は化合物を同定及び／又は設計するために、コンピューター補助医薬品化学的方法が使用される。
[00153]本発明は、一般的に、患者の神経変性疾患を治療するために使用することができる化合物を同定するための方法を提供する。本発明は、異常に高いアミロイドベータプラーク、又は高いＴａｕタンパク質レベル、又は高いアルファ−シヌクレインレベル、又は封入体、或いはリポフスチンレベル又は封入体、或いは開裂したＴＡＲＤＢＰ−ＴＤＰ−４３レベル又は封入体、或いは開裂したＴＡＲＤＢＰ−ＴＤＰ−４３封入体の蓄積を示す患者を治療するために使用することができる化合物を同定するための方法を提供する。更に、本発明は、アルツハイマー病、レビー小体認知症、封入体筋炎、脳アミロイド血管症、ハンチントン病、パーキンソン病、及び癌の治療のために使用することができる化合物を同定するための方法を提供する。この方法は、ＨＡＴポリペプチド分子に結合する及び／又はＨＡＴポリペプチドの生物学的活性、或いはその発現を活性化又は向上することができる試験化合物又は薬剤（例えば、ペプチド（抗体又はその断片のような）、小分子、核酸（ｓｉＲＮＡ又はアンチセンスＲＮＡのような）、又は他の薬剤）の同定を含んでなることができる。一つの態様において、化合物は、ＨＡＴ活性化剤（例えば式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、又は（ＶＩ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物である。もう一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、図３に示すＹＦ２である。
[00154]用語“調節する”は、本明細書中で出現する場合、タンパク質分子の活性又は発現の変化を指す。例えば、調節は、セクレターゼタンパク質分子の、タンパク質の活性、結合特性、或いは他の生物学的、機能的、又は免疫学的特性の増加又は減少を起こすことができる。
[00155]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼタンパク質に結合するＨＡＴタンパク質のペプチド断片であることができる。例えば、ＨＡＴ活性化剤分子は、配列番号：１、３、又は５の少なくとも約８個の連蔵したアミノ酸のいずれもの部分を包含することができる。断片は、少なくとも約１０個のアミノ酸、少なくとも約２０個のアミノ酸、少なくとも約３０個のアミノ酸、少なくとも約４０個のアミノ酸、少なくとも約５０個のアミノ酸、少なくとも約６０個のアミノ酸、又は少なくとも約７５個の配列番号：１、３、又は５のアミノ酸を含んでなることができる。一つの態様において、ペプチド断片は、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＨＡＴｌ、又はＰＣＡＦのようなＨＡＴタンパク質に向けられる。
[00156]ＨＡＴタンパク質のヒトＨＡＴ１のポリペプチド配列を配列番号：１に示す。ヒトＨＡＴ１のヌクレオチド配列を配列番号：２に示す。ＨＡＴ１に関する配列情報は、遺伝子銀行寄託番号ＮＭ＿００３６４２（ｍＲＮＡに対して）及びＮＰ＿００３６３３（タンパク質に対して）によって、公共のデータベース中で入手可能である。ＨＡＴ１は、更にＫＡＴ１（Ｋ（リシン）アセチルトランスフェラーゼ１）としても知られる。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、Ｂ型ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）であり、これは、新しく合成される細胞質ヒストンの急速アセチル化に関係し、これは次に、新生ＤＮＡ鎖上への新規な沈積のために核中に移入される。ヒストン、特にヒストンＨ４のアセチル化は、複製依存性クロマチンの構築において重要な役割を演じる。
[00157]配列番号：１は、ＨＡＴタンパク質のＨＡＴ１酵素（１−４１９残基）に対応するヒト野生型アミノ酸配列である：
[00158]配列番号：２は、ＨＡＴタンパク質のＨＡＴ１酵素（１−１６８２残基）に対応するヒト野生型ヌクレオチド配列であり、ここにおいて、下線を引いたＡＴＧは、翻訳領域の開始点を意味する：
[00159]ＨＡＴタンパク質のヒトＰＣＡＦのポリペプチド配列を、配列番号：３に示す。ヒトＰＣＡＦのヌクレオチド配列を、配列番号：４に示す。ＰＣＡＦに関連する配列情報は、遺伝子銀行寄託番号ＮＭ＿００３８８４（ｍＲＮＡに対して）及びＮＰ＿００３８７５（タンパク質に対して）によって、公共のデータベース中で入手可能である。ＰＣＡＦは、更にＫＡＴ２Ｂ（Ｋ（リシン）アセチルトランスフェラーゼ２Ｂ）としても知られる。ＣＢＰ及びｐ３００は、ｃ−ｊｕｎ及びアデノウイルス癌腫瘍タンパク質Ｅ１Ａを含む細胞増殖及び／又は分化に関係する多くの配列特異的因子に結合する大きい核タンパク質である。この遺伝子によりコードされるタンパク質は、ｐ３００／ＣＢＰに関係する。これは、ＣＢＰ及びｐ３００とのｉｎ ｖｕｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ結合活性を有し、そしてｐ３００／ＣＢＰ中の結合部位に対してＥ１Ａと競合する。これは、コアヒストン及びヌクレオソームコア粒子とのヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性を有し、このタンパク質が、転写調節において直接的役割りを演じることを示す。
[00160]配列番号：３は、ＨＡＴタンパク質のＰＣＡＦ酵素（１−８３２残基）に対応するヒト野生型アミノ酸配列である：
[00161]配列番号：４は、ＨＡＴタンパク質のＰＣＡＦ酵素（１−４８２４残基）に対応するヒト野生型ヌクレオチド配列であり、ここにおいて、下線の引かれたＡＴＧは、翻訳領域の開始点を意味する：
[00162]ＨＡＴタンパク質のヒトＧＣＮ５Ｌのポリペプチド配列を、配列番号：５に示す。ヒトＧＣＮ５Ｌのヌクレオチド配列を、配列番号：６に示す。ＧＮＣ５Ｌに関連する配列情報は、遺伝子銀行寄託番号ＮＭ＿０２１０７８（ｍＲＮＡに対して）及びＮＰ＿０６６５６４．２（タンパク質に対して）によって、公共のデータベース中で入手可能である。ＧＣＮ５Ｌは、更にＫＡＴ２Ａ（Ｋ（リシン）アセチルトランスフェラーゼ２Ａ）としても知られる。ＫＡＴ２Ａ、又はＧＣＮ５は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）であり、これは、主として転写活性化剤として機能する。これは、更にＨＡＴ−非依存性な様式でＮＦ−カッパ−ＢのサブユニットＲＥＬＡのユビキチン化を促進することによって、ＮＦ−カッパ−Ｂのリプレッサーとして機能する（Ｍａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．２００９ Ａｐｒ １；２３（７）：８４９−６１）。
[00163]配列番号：５は、ＨＡＴタンパク質のＧＣＮ５Ｌ酵素（１−８３７残基）に対応するヒト野生型アミノ酸配列である：
[00164]配列番号：６は、ＨＡＴタンパク質のＧＣＮ５Ｌ酵素（１−３１２７残基）に対応するヒト野生型ヌクレオチド配列である：
[00165]断片は、約８ないし約１００アミノ酸間の、そしてこれらを含む全ての可能な長さのアミノ酸、例えば、約１０ないし１００アミノ酸間の長さ、約１５ないし１００アミノ酸間の長さ、約２０ないし１００アミノ酸間の長さ、約３５ないし１００アミノ酸間の長さ、約４０ないし１００アミノ酸間の長さ、約５０ないし１００アミノ酸間の長さ、約７０ないし１００アミノ酸間の長さ、約７５ないし１００アミノ酸間の長さ、又は約８０ないし１００アミノ酸間の長さを含む。これらのペプチド断片は、商業的に入手可能であるか、或いは液相又は固相合成法によって合成される（Ａｔｈｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）。ＨＡＴペプチド断片は、天然の供給源から単離されるか、遺伝子操作されるか、又は化学的に調製することができる。これらの方法は、当技術において公知である。
[00166]ＨＡＴ活性化剤化合物は、更にＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のようなヒストンアセチルトランスフェラーゼ酵素に向けられる、抗体（モノクローナル、ポリクローナル、ヒト化、等）、又はその結合性断片のようなタンパク質であることができる。抗体の断片は、全長の形態以外の抗体の形態であることができ、そして操作された抗体断片に加えて、全長の抗体内に存在する部分又は成分を含む。抗体の断片は、制約されるものではないが、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体、Ｆｖ、及び（Ｆａｂ’）２、三重特異性抗体、Ｆｃ、Ｆａｂ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組合せ、可変領域、四重特異性抗体、二感応性ハイブリッド抗体、フレームワーク領域、定常領域、等を含むことができる(Ｍａｙｎａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．２：３３９−７６；Ｈｕｄｓｏｎ（１９９８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：３９５−４０２を参照されたい)。抗体は、商業的に、注文産生、又は当技術において確立された方法による興味ある抗体を合成することにより得ることができる（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ，（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）。
[00167]ＨＡＴタンパク質をコードするＲＮＡの阻害は、それからＲＮＡが転写されるＨＡＴ遺伝子（例えば、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１）の発現を有効に調節することができる。阻害剤は：ｓｉＲＮＡ、干渉性ＲＮＡ又はＲＮＡｉ；ｄｓＲＮＡ；ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写ＤＮＡ；リボソーム；及びＲＮＡ、ＤＮＡ、又は人工核酸であることができるアンチセンス核酸からなる群から選択される。
[00168]アンチセンスＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＤＮＡ／ＲＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡの翻訳を、標的ｍＲＮＡに結合することによって直接遮断し、そしてタンパク質の翻訳を防止するために作用する。例えば、少なくとも約１５個の塩基の、そしてＨＡＴポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の独特な領域に対して相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、慣用的なリン酸ジエステル化技術によって合成することができる（Ｄａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ，（２００６）Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｍｏｎｉｔ．１２（４）：ＲＡ６７−７４；Ｋａｌｏｔａ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：１７３−９６；Ｌｕｔｚｅｌｂｕｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ，（２００６）Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：２４３−５９）。
[00169]ｓｉＲＮＡは、約１５ないし５０個の塩基対、例えば約２１ないし２５個の塩基対を含有し、そして細胞内に発現した標的遺伝子又はＲＮＡと同一の又は殆ど同一のヌクレオチド配列を有する二本鎖構造を含んでなる。アンチセンスヌクレオチド配列は、制約されるものではないが：モルホリノ、２’−Ｏ−メチルポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ等を含む。ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写ＤＮＡは、Ｕ６プロモーターのようなプロモーターを含有する。これらのＤＮＡは、ｓｉＲＮＡとして機能することができる細胞中の小さいヘアピンＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡとして機能することができる直鎖ＲＮＡを産生するために転写することができる。ＨＡＴ活性化剤化合物は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、合成ヌクレオチド、又は標的ＲＮＡ及び／又は遺伝子が阻害されるようないずれもの適した組合せを含有することができる。更に、これらの形態の核酸は、一本、二本、三本、又は四本鎖であることができる（例えば、Ｂａｓｓ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４２８ ４２９；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４ ４９８；及びＰＣＴ出願公開ＷＯ００／４４８９５、ＷＯ０１／３６６４６、ＷＯ９９／３２６１９、ＷＯ００／０１８４６、ＷＯ０１／２９０５８、ＷＯ９９／０７４０９、ＷＯ００／４４９１４を参照されたい）。
[00170]幾つかの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のようなヒストンアセチルトランスフェラーゼ酵素に結合し、そしてその機能を破壊する小分子であることができる。小分子は、一般的に低分子量を有する合成及び天然の物質の多様な群である。これらは、天然の供給源（例えば、植物、真菌、微生物等）から単離するか、商業的に入手するか、及び／又はライブラリー又はコレクションとして使用可能であるか、或いは合成することができる。ＨＡＴタンパク質と相互作用する候補の小分子は、コンピュータースクリーニング又はコンビナトリアルライブラリーの高容量（ＨＴＰ）スクリーニングによって同定することができる。アスピリン、ペニシリン、及び多くの化学療法剤のような最も慣用的な医薬品は、小分子であり、商業的に入社可能であり、化学的に合成することができ、又は以下に記載するような無作為又はコンビナトリアルライブラリーから得ることができる（Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ，（２００６）Ｂｒｉｅｆ Ｆｕｎｃｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ５（ｌ）：３２−６）。
[00171]ＨＡＴポリペプチドのような興味ある分子の一次配列の知識、及び同じヒストンアセチルトランスフェラーゼファミリー（ＧＮＡＴファミリー、ＭＹＳＴファミリー又はＧＣＮ５ファミリーのような［Ｌｅｅ ａｎｄ Ｏｗｒｋｍａｎ（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，８（４）：２８４−９５，Ｍａｒｍｏｒｓｔｅｉｎ（２００１）Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉｏｌ．３１１：４３３−４４４；及びＫｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，（２００５）Ｊ Ｂｉｏｃｅｈｍ．１３８（６）：６４７−６６２を参照されたい］）の他のタンパク質との配列の類似性は、興味あるタンパク質の阻害剤又はアンタゴニストに関する情報を提供することができる。アンタゴニストの同定及び選別は、タンパク質の構造的特徴を、例えば、Ｘ線結晶学、中性子回折法、核磁気共鳴分光法、及び構造決定のための他に技術を使用して決定することによって更に容易にすることができる。これらの技術は、タンパク質のアゴニストに加えて、アンタゴニストの合理的な設計又は同定を提供する。
[00172]本発明は、患者の神経変性疾患を治療するために有用な化合物を選別及び同定するための方法を提供する。本発明は、例えば、異常に高いアミロイドベータプラーク、又は高いＴａｕタンパク質レベル、又は高いアルファ−シヌクレインレベル、又は封入体、或いはリポフスチンレベル又は封入体、或いは開裂したＴＡＲＤＢＰ−ＴＤＰ−４３レベル又は封入体、或いは開裂したＴＡＲＤＢＰ／ＴＤＰ−４３封入体の蓄積、或いはこれらの組合せを示す患者を治療するために使用することができる化合物を同定するための方法を提供する。一つの態様において、この方法は、一つ又はそれより多い次の特徴：（ａ）化合物のＥＣ５０が約１０００ｎＭより多くないこと；（ｂ）化合物が血液脳関門を透過すること；（ｃ）化合物がヒストンのアセチル化を向上すること（例えばヒストンタンパク質Ｈ３又はＨ４をアセチル化すること）、又はこれらの組合せ、を含んでなるＨＡＴ活性化剤化合物を選択することを含んでなる。更なる態様において、化合物、例えばＨＡＴ活性化剤は、少なくとも約０．１ｎＭ、少なくとも約１ｎＭ、少なくとも約５ｎＭ、少なくとも約１０ｎＭ、少なくとも約２５ｎＭ、少なくとも約５０ｎＭ、少なくとも約１００ｎＭ、少なくとも約２００ｎＭ、少なくとも約３００ｎＭ、少なくとも約４００ｎＭ、少なくとも約５００ｎＭ、少なくとも約６００ｎＭ、少なくとも約７００ｎＭ、少なくとも約８００ｎＭ、又は少なくとも約９００ｎＭのＥＣ５０を有する。幾つかの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、血液脳関門を透過するために、約５００Ｄａより少ない分子質量を有することができる。他の態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、血液脳関門を透過するために、約９０Å２より小さい極性表面積を有することができ、そして８個又はそれより少ない水素結合を有しなければならない。化合物の同定及び選別は、コンピュータースクリーニング、分子ドッキング、ｉｎ ｖｉｖｏスクリーニング、ｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニング、又はこれらの組合せを含んでなることができる。
[00173]ＨＡＴ活性化剤化合物のような試験化合物は、合成又は天然の化合物の大きいライブラリーから選別することができる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，（２００７）Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１４（２）：１３３−５５；Ｍａｎｎｈｏｌｄ（２００６）Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，６（１０）：１０３１−４７；及びＨｅｎｓｅｎ（２００６）Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １３（４）：３６１−７６を参照されたい）。サッカリド、ペプチド、及び核酸ベース化合物の無作為及び指向性合成のために、多くの手段が現時点で使用されている。合成化合物ライブラリーは、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｔｒｅｖｉｌｌｅｔ，Ｃｏｒｎｗａｌｌ，ＵＫ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、Ｂｒａｎｄｏｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ，Ｎ．Ｈ．）、及びＭｉｃｒｏｓｏｕｒｃｅ（Ｎｅｗ Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．）から商業的に入手可能である。稀化合物ライブラリーは、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）から入手可能である。別に、細菌、真菌、植物及び動物抽出物の形態の天然の化合物のライブラリーは、例えば、Ｐａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，Ｗａｓｈ．）又はＭｙｃｏＳｅａｒｃｈ（Ｎ．Ｃ．）から入手可能であるか、又は容易に製造可能である。更に、天然に及び合成的に製造されたライブラリー並びに化合物は、慣用的な化学的、物理的、及び生化学的手段によって容易に修飾される（Ｂｌｏｎｄｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｔｉｂ Ｔｅｃｈ １４：６０）。
[00174]分子のライブラリーを調製するための方法は、当技術において公知であり、そして多くのライブラリーは、商業的に入手可能である。本発明において興味のあるライブラリーは、ペプチドライブラリー、無作為化オリゴヌクレオチドライブラリー、合成有機コンビナトリアルライブラリー、等を含む。縮退ペプチドライブラリーは、溶液中で、細菌鞭毛ペプチドディスプレイライブラリーとして、又はファージディスプレイライブラリーとして不動化された形態で容易に調製することができる。ペプチドのリガンドは、少なくとも一つのアミノ酸を含有するペプチドのコンビナトリアルライブラリーから選択することができる。ライブラリーは、ペプトイド及び非ペプチド合成分子から合成することができる。このようなライブラリーは、更に天然に存在する対応物と比較して酵素的分解を受けにくい非ペプチド合成分子を含有して合成することができる。ライブラリーは、更に、制約されるものではないが、例えば、プラスミド上のペプチドライブラリー、ポリソームライブラリー、アプタマーライブラリー、合成ペプチドライブラリー、合成小分子ライブラリー、神経伝達物質ライブラリー、及び化合物ライブラリーを含むことを意味する。ライブラリーは、更に、本明細書中に記載される一つ又はそれより多い官能基で置換された環式炭素又は複素環式構造及び／又は芳香族又は多環芳香族構造を含んでなることができる。
[00175]小分子のコンビナトリアルライブラリーも、更に作成し、そして選別することができる。小さい有機化合物のコンビナトリアルライブラリーは、一つ又はそれより多い多様性の点で互いに異なり、そして多工程法を使用する有機技術によって合成される、密接に関連する類似体の収集である。コンビナトリアルライブラリーは、莫大な数の小さい有機化合物を含む。コンビナトリアルライブラリーの一つの型は、化合物のアレイを製造するために並行合成法によって調製される。化合物のアレイは、デカルト座標の空間的住所によって同定可能であり、そしてそれぞれの化合物が共通の分子コア及び一つ又はそれより多い可変構造の多様性要素を有するように配列された化合物の収集であることができる。このような化合物アレイ中の化合物は、別個の反応容器中で並行して製造され、それぞれの化合物は、その空間住所によって同定及び追跡される。並行合成混合物の例及び並行合成の方法は、１９９４年１月５日に出願された米国特許出願０８／１７７，４９７及びその対応する１９９５年７月１３日に公開されたＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９５／１８９７２、並びに１９９８年１月２７日に付与された米国特許第５，７１２，１７１号及び死の対応するＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９６／２２５２９中に提供され、これらは、本明細書中に参考文献として援用される。
[00176]化学的に合成されたライブラリーの例は、Ｆｏｄｏｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８４−８６；Ｌａｍ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４；Ｍｅｄｙｎｓｋｉ，（１９９４）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：７０９−７１０；Ｇａｌｌｏｐ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７（９）：１２３３−１２５１；Ｏｈｌｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０９２２−１０９２６；Ｅｒｂ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２−１１４２６；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２；Ｊａｙａｗｉｃｋｒｅｍｅ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１６１４−１６１８；Ｓａｌｍｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１７０８−１１７１２；１９９３年１０月１４日の日付のＰＣＴ出願公開ＷＯ９３／２０２４２；及びＢｒｅｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５３８１−５３８３中に記載されている。
[00177]ファージディスプレイライブラリーの例は、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎ ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：４０４−４０６；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７１１−７１８；Ｌｅｎｓｔｒａ，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５２：１４９−１５７；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，（１９９３）Ｇｅｎｅ １２８：５９−６５；及びＰＣＴ出願公開ＷＯ９４／１８３１８中に記載されている。
[00178]Ｉｎ ｖｉｔｒｏの翻訳ベースのライブラリーは、制約されるものではないが、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９１／０５０５８；及びＭａｔｔｈｅａｋｉｓ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９０２２−９０２６中に記載されているものを含む。
[00179]一つの非制約的例において、ベンゾジアゼピンライブラリーのような非ペプチドライブラリー（例えば、Ｂｕｎｉｎ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：４７０８−４７１２を参照されたい）は、選別することができる。Ｓｉｍｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９３６７−９３７１によって記載されているようなペプトイドライブラリーも、更に使用することができる。ペプチド中のアミド官能基が化学的に転換されたコンビナトリアルライブラリーを作成するために過メチル化されている、使用することができるライブラリーのもう一つの例は、Ｏｓｔｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１１３８−１１１４２によって記載されている。
[00180]活性部位の三次元の幾何構造、例えばＨＡＴペプチドのそれは、Ｘ線結晶学のような当技術において既知の方法によって決定することができ、これは、完全な分子構造を決定することができる。固相又は液相ＮＭＲを、ある種の分子間距離を決定するために使用することができる。構造決定のいずれもの他の実験方法を、部分的又は完全な幾何構造を得るために使用することができる。幾何構造は、天然及び人工の複合リガンドで測定することができ、これは、決定される活性部位構造の精度を増加することができる。一つの態様において、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のようなＨＡＴタンパク質に結合する化合物は：（１）試験化合物の電子ライブラリーを準備し；（２）ＨＡＴタンパク質のアセチルトランスフェラーゼ活性部位（ＨＡＴ領域）に対する少なくとも２０個のアミノ酸残基に対するＰＤＢエントリー番号１ＹＧＨ又は２ＲＣ４に記載された原子座標を準備し、ここにおいて、この座標は、コンピューターによって読取り可能なフォーマット中に、約２Åより大きくない少なくも５０％のＣα原子に対するその自乗平均平方根の偏差を有し；（３）原子座標をコンピューターのプロセッサーによって読取り可能な電気シグナルに転換して、ＨＡＴタンパク質の三次元モデルを作成し；（４）データプロセシング法を行い、ここにおいて、ライブラリーからの電子試験化合物が、ＨＡＴタンパク質に三次元モデルに結合することを確認し；そしてどの試験化合物がＨＡＴタンパク質の三次元モデルの活性部位に適合するかを決定し、これによってどの化合物がＨＡＴタンパク質に結合するものであるかを同定することができる。もう一つの態様において、この方法は、更に：ＨＡＴタンパク質の活性部位に結合することが決定された化合物を合成又は入手し；ＨＡＴタンパク質を化合物と結合のために適した条件下で接触させ；そして化合物がＨＡＴタンパク質の発現又はｍＲＮＡの発現を調節するか否か、或いはＨＡＴタンパク質活性を診断アッセイを使用して決定すること、を含んでなる。
[00181]タンパク質配列の変化のタンパク質の立体構造に対する影響を予測するための方法は、当技術において既知であり、そして従って、当業者は既知の方法によってアンタゴニストとして機能する変種を設計することができる。このような方法の一つの例は、Ｄａｈｉｙａｔ ａｎｄ Ｍａｙｏ ｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）２７８：８２ ８７によって記載され、これは、新規なタンパク質の設計を記載している。この方法は、ペプチド配列の一部のみを変更するために、既知のタンパク質に適用することができる。同様に、Ｂｌａｋｅ（米国特許第５，５６５，３２５号）は、同様な又は修飾された機能を伴う変種を予測し、そして合成するための既知のリガンド構造の使用を教示している。
[00182]標的に結合するペプチドを調製又は同定するための他の方法は、当技術において既知である。例えば、分子インプリンティングは、分子に結合するペプチドのようなマクロ分子構造の新規な構築のために使用することができる。例えば、Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｊ．Ｓｈｅａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｎｅｔｗｏｒｋ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ：Ｔｈｅ Ｄｅ Ｎｏｖｏ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ Ｃａｔａｌｙｔｉｃ Ｓｉｔｅｓ，ＴＲＩＰ Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．５，Ｍａｙ １９９４；Ｍｏｓｂａｃｈ，（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ，１９（９）；及びＷｕｌｆｆ，Ｇ．，ｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃａｔａｌｙｓｔｓ（Ｆｏｒｄ，Ｗ．Ｔ．，Ｅｄ．）ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．３０８，ｐｐ １８６−２３０，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９８６）を参照されたい。ＨＡＴタンパク質の模倣体を調製するための一つの方法は：（ｉ）所望の活性を示す既知の基質（テンプレート）の周囲の反応性モノマーの重合；（ｉｉ）テンプレート分子の除去；そして次いで（ｉｉｉ）テンプレートによって残された空隙中のモノマーの第２群の重合の工程を含んで、テンプレートのそれと同様である一つ又はそれより多い所望の特性を示す新し分子を提供する。多糖、ヌクレオシド、薬物、核タンパク質、リポタンパク質、炭化水素、糖タンパク質、ステロイド、脂質、及び他の生物学的に活性な物質のような他の結合分子も、更に調製することができる。この方法は、これらが反応性モノマーのフリーラジカル重合によって調製され、非生分解性骨格を持つ化合物をもたらすために、その天然の対応物より安定である各種の生物学的模倣体を設計するために有用である。このような分子を設計するための他の方法は、例えば、多くの化合物の合成及び評価並びに分子のモデル化を必要とする、構造活性的関係に基づく薬物設計を含む。
[00183]本発明は、更にＨＡＴタンパク質に結合する化合物を同定するための、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの方法を提供する。一つの態様において、この方法は：（ａ）ＨＡＴタンパク質（ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のような）を発現する組織及び／又は細胞を入手し；（ｂ）組織及び／又は細胞をリガンド供給源と有効な時間接触させ；（ｃ）二次メッセンジャー反応を測定し、ここにおいて、反応はＨＡＴタンパク質へのリガンド結合の表示であり；（ｄ）リガンドをリガンド供給源から単離し；そして（ｅ）ＨＡＴタンパク質を結合するリガンドの構造を同定し、これによってどの化合物がＨＡＴタンパク質に結合するものであるか同定すること、を含んでなる。本明細書中で使用する場合、用語“リガンド供給源”は、本明細書中に記載したいずれもの化合物ライブラリー、又はＨＡＴタンパク質（ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のような）のアンタゴニストとして作用するものである化合物を選別するために使用することができる神経伝達物質のライブラリーであることができる。Ｉｎ ｖｉｖｏの動物研究及び機能アッセイと組合せた本明細書中に記載した化合物ライブラリー［更に本明細書中に参考文献としてその全てが援用される米国特許出願公開２００５／０００９１６３を参照されたい］を選別することは、ＡＤのような異常なＡβ沈積に罹った患者を治療するために、又は癌を治療するために使用することができるＨＡＴ活性化剤化合物を同定するために使用することができる。
[00184]ＨＡＴ活性化剤化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｖｉｔｒｏのＨＡＴ分子（例えば、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１）の活性及び／又は発現を増加する化合物であることができる。ＨＡＴ活性化剤化合物は、ＨＡＴタンパク質の活性に対するその効果を、発現によって、転写後修飾によって、又は他の手段によって発揮する化合物であることができる。一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、ＨＡＴタンパク質又はｍＲＮＡの発現、或いはアセチルトランスフェラーゼ活性を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、又は１００％増加することができる。
[00185]ＨＡＴ分子（ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のような）に結合する、及び／又はＨＡＴ分子の活性又は発現に対する刺激性効果を有する試験化合物又は薬剤は、各種のアッセイによって同定することができる。アッセイは、ＨＡＴタンパク質の活性部位への試験化合物又は既知のＨＡＴリガンドの結合の直接的又は間接的測定を含んでなる結合アッセイであることができる。アッセイは、更に、ＨＡＴ分子の活性の直接的及び間接的測定を含んでなる活性アッセイであることもできる。アッセイは、更に、ＨＡＴのｍＲＮＡ又はタンパク質の発現の直接的及び間接的測定を含んでなる発現アッセイであることもできる。各種の選別アッセイは、制約されるものではないが、ＡＤ又はハンチントン病のような神経変性疾患のための動物モデル中の認知及びシナプス機能に対する試験化合物の効果を測定することを含んでなるｉｎ ｖｉｖｏアッセイと組合せることができる。
[00186]本発明の選別法の診断アッセイは、更にＨＡＴ分子の発現をモニターすることを含むことができる。例えば、ＨＡＴ分子の発現の阻害剤は、ＨＡＴ陽性細胞又は組織を試験化合物と接触させ、そして細胞中のＨＡＴタンパク質又はＨＡＴのｍＲＮＡの発現を決定することによって同定することができる。試験化合物の存在中のＨＡＴ分子のタンパク質又はｍＲＮＡ発現レベルは、試験化合物の非存在中のＨＡＴタンパク質のタンパク質又はｍＲＮＡの発現レベルと比較される。次いで、試験化合物を、この比較に基づいてＨＡＴタンパク質（ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のような）の発現の阻害剤として同定することができる。ＨＡＴ分子の発現の活性化剤は、更に、ＨＡＴ陽性細胞又は組織を試験化合物と接触させ、そして細胞中のＨＴＡタンパク質又はＨＡＴのｍＲＮＡの発現を決定することによって同定することもできる。試験化合物の存在中のＨＡＴ分子のタンパク質又はｍＲＮＡ発現レベルを、試験化合物の非存在中のＨＡＴタンパク質のタンパク質又はｍＲＮＡ発現レベルと比較する。次いで、試験化合物を、この比較に基づいて、ＨＡＴタンパク質（ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のような）の発現の活性化剤として同定することができる。例えば、ＨＡＴタンパク質又はｍＲＮＡの発現が、試験化合物の存在中で、その非存在中より統計的に又は有意に多い場合、化合物は、ＨＡＴタンパク質又はｍＲＮＡの発現の活性化剤として同定される。言い換えれば、試験化合物は、更に、ＨＡＴ活性化剤化合物（アゴニストのような）であると言うことができる。細胞中のＨＡＴタンパク質又はｍＲＮＡの発現レベルは、本明細書中に記載される方法によって決定することができる。
[00187]ＨＡＴ分子又はその変種に結合する試験化合物の能力を決定することは、リアルタイム二分子相互作用分析（ＢＩＡ）［ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ，（１９９２）；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，（１９９１）］を使用して達成することができる。ＢＩＡは、相互作用物質（例えば、ＢＩＡ−ｃｏｒｅＴＭ）のいずれかを標識することなく、リアルタイムで生体特異的相互作用を研究するための技術である。光学的現象の表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）の変化を、生物学的分子間のリアルタイムの反応の表示として使用することができる。
[00188]ＣＮＳ疾患及び癌のために最適化された例示的ＨＡＴ活性化剤化合物
[00189]本発明は、ＧＣＮ５、ＧＣＮ５Ｌ、ＰＣＡＦ、又はＨＡＴ１のようなＨＡＴ活性化剤タンパク質に結合する化合物を提供する。これらの化合物は、本明細書中に記載される選別法及びアッセイによって同定することができ、そしてＨＡＴ活性化剤タンパク質の活性又は発現を向上する。一つの態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
の化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物を包含し、式中：
Ｒ１は、Ｈ、又はＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、又はＣＮであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、Ｓ−エチル、Ｏ−シクロペンチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ４は、Ｈ；Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−フェニルであり、ここにおいて、フェニルは一つ又はそれより多いハロ或いはＣＦ３で置換されている；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｏ−エチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、ＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキルであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；そして
Ｘは、ＣＯＮＨ、ＳＯＮＨ、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、又はＮＨＣＯである。
[00190]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物の一つの態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、又はＣＮであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、Ｏ−（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル−ＣＯ２−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、又はＳ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｓ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、又はＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ６は、Ｈ、又はＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；そして
Ｘ＝ＳＯ２ＮＨ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、又はＮＨＣＯＮＨ、である。
[00191]特別な態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[00192]幾つかの態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[00193]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物のもう一つの態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｃｌであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、Ｏ−（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキル、又はＯ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル−ＣＯ２−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル、ＯＨ、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｓ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、又はＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ６は、Ｈ、又はＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；そして
Ｘは、ＳＯ２ＮＨ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、又はＮＨＣＯＮＨである。
[00194]特別な態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[00195]幾つかの態様において、化合物は、以下の式：
である。
[00196]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物の更なる態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｈ、又はＣＮであり；
Ｒ３は、Ｓ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、又はＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、Ｈ、又は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；
Ｒ６は、Ｈであり；そして
Ｘは、ＣＯＮＨである。
[00197]特別な態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[00198]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物の幾つかの態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｃｌであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ４は、Ｈ；Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（３−ＣＦ３，４−Ｃｌ−フェニル）であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキル、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ６は、Ｈ、又はＯ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキルであり；そして
Ｘ＝ＣＯＮＨである。
[00199]特別な態様において、式（Ｉ）の化合物は、以下の式：
である。
[00200]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物の一つの態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｃｌであり；
Ｒ３は、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；そして
Ｘは、ＣＯＮＨである。
[00201]式（Ｉ）の化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物のもう一つの態様において、
Ｒ１は、ＣＦ３であり；
Ｒ２は、Ｃｌであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２）−アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、ＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ６は、Ｈであり；そして
Ｘ＝ＳＯ２ＮＨである。
[00202]一つの態様において、本発明は、ここにおいて以下の式（ＩＩ）：
のＨＡＴ活性化剤化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物を包含し、式中：
Ｒ７は、Ｈ又はＣＦ３であり；
Ｒ８は、Ｏ−エチル又はＳ−メチルであり；
Ｒ９は、ブチル又はＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｙは、Ｃ−Ｃｌ、Ｃ−ＣＮ、Ｃ−ＮＯ２、又はＮであり；
Ｗは、ＣＨ又はＮであり；そして
Ｚは、ＣＨ又はＮである。
[00203]特別な態様において、式（ＩＩ）の化合物は、以下の式：
である。
[00204]一つの態様において、本発明は、ここにおいて以下の式（ＩＩＩ）：
のＨＡＴ活性化剤化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物を包含し、式中：
Ｒ１０は、ＣＦ３であり；
Ｒ１１は、ＣＮであり；そして
Ｒ１２は、Ｏ−エチルある。
[00205]一つの態様において、本発明は、ここにおいて以下の式（ＩＶ）：
のＨＡＴ活性化剤化合物、或いはその医薬的に受容可能なその塩又は水和物を包含し、
[00206]式中：
Ｘは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、ＮＨ、Ｏ、又はＣであり；
Ｙは、−Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、又はＮＨ−Ｃ（Ｏ）であり；
Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、Ｃ１５Ｈ３２、ＳＲ４、又はＯＲ４であり；
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−ＣＯ２Ｒ６であり；
Ｒ３は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ＣＦ３、ＣＣｌ３、Ｃｌ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２、又はＣＮであり；
Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｎ（Ｒ５）２−、又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；そして
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。
[00207]一つの態様において、ＸはＯであり、一方Ｙは、Ｎ−Ｃ＝Ｏである。もう一つの態様において、ＸはＳであり、一方Ｙは、Ｎ−Ｃ＝Ｏである。
[00208]具体的な態様において、化合物は、以下の式：
のＹＦ２である。
[00209]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物のＹＦ２は、図２９に示すスキームによって合成することができる。式Ｉを有するＨＡＴ活性化剤化合物の他の類似体は、同様に合成することができる。
[00210]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１０は、図３７に示すスキームによって合成することができる。
[00211]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１１は、図３９に示すスキームによって合成することができる。
[00212]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１２は、図４０に示すスキームによって合成することができる。
[00213]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１３は、図４２に示すスキームによって合成することができる。
[00214]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１４は、図４１に示すスキームによって合成することができる。
[00215]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１５は、図４３に示すスキームによって合成することができる。
[00216]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１６は、図４４に示すスキームによって合成することができる。
[00217]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１７は、図４５に示すスキームによって合成することができる。
[00218]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１８は、図４６に示すスキームによって合成することができる。
[00219]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の１９は、図５１に示すスキームによって合成することができる。
[00220]一つの態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物の２０は、図３８に示すスキームによって合成することができる。
[00221]一つの態様において、本発明は、以下の式（Ｖ）：
のＨＡＴ活性化剤化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物を包含し、式中：
Ｘは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、ＮＨ、Ｏ、又はＣであり；
Ｙは、−Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、又はＮＨ−Ｃ（Ｏ）であり；
ＡＲ１は、５員の芳香族環又は１−２個の窒素を含有する６員の芳香族環であり；
ＡＲ２は、５員の芳香族環、６員の芳香族環又は１−２個の窒素を含有する６員の芳香族環であり；
Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、Ｃ１５Ｈ３２、ＳＲ４、又はＯＲ４であり；
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−ＣＯ２Ｒ６であり；
Ｒ３は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ＣＦ３、ＣＣｌ３、Ｃｌ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２、又はＣＮであり；
Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｎ（Ｒ５）２−又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、独立に水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；そして
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。
[00222]一つの態様において、ＸはＯであり、一方Ｙは、Ｎ−Ｃ＝Ｏである。もう一つの態様において、ＸはＳであり、一方Ｙは、Ｎ−Ｃ＝Ｏである。
[00223]特別な態様において、式（Ｖ）の化合物は、以下の式：
である。
[00224]本発明の化合物は、一般的に、図２９に示した図に基づくスキームによって合成することができる。
[00225]医薬的に受容可能な塩は、当技術において既知であり、そしてＢｅｒｇｅ等［“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６（１）：１−１９（Ｊａｎ．１９７７）］中に記載されているものから選択することができる。一つの態様において、式（Ｉ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（Ｉ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。一つの態様において、式（ＩＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（ＩＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。一つの態様において、式（ＩＩＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（ＩＩＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。一つの態様において、式（ＩＶ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（ＩＶ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。一つの態様において、式（Ｖ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（Ｖ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。
[00226]本発明は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、又は式（Ｖ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物のいずれか一つを投与することによる、神経変性疾患（例えばＡＤ、ハンチントン病、又はパーキンソン病）に罹った患者における封入体（例えば、アミロイドベータ（Ａβ）タンパク質沈着物、天然の及びリン酸化されたＴａｕタンパク質、天然の及びリン酸化されたアルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂されたＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＢ−４３）、又はこれらの組合せ）を減少するための方法を提供する。本発明は、更に、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、又は式（Ｖ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物のいずれか一つを投与することによる、患者の神経変性疾患を治療するための方法を提供する。本発明は、更に、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、又は式（Ｖ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物のいずれか一つを投与することによる、患者の癌を治療するための方法を提供する。幾つかの態様において、患者に投与される化合物は、化合物１−９のいずれか一つである。具体的な態様において、ＨＡＴ活性化剤化合物は、図３に示すＹＦ２である。幾つかの態様において、投与される化合物は、以下の式（ＶＩ）：
のＨＡＴ活性化剤化合物、或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物であり、式中：
Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、Ｃ８Ｈ１８、Ｃ１５Ｈ２６、Ｃ１５Ｈ２８、Ｃ１５Ｈ３０、Ｃ１５Ｈ３２、ＳＲ４、又はＯＲ４であり；
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、又は−Ｃ（Ｏ）Ｒ６であり；
Ｒ３は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ＣＦ３、ＣＣｌ３、Ｃｌ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２、又はＣＮであり；
Ｒ４は、−ＮＲ５であり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ７であり；そして
Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。
[00227]一つの態様において、式（ＶＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、又はリン酸塩である。もう一つの態様において、式（ＶＩ）の化合物の医薬的に受容可能な塩は、塩基付加塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、又はアンモニウム塩である。もう一つの態様において、塩基付加塩は、テトラフルオロボロ塩である。
[00228]幾つかの態様において、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物は、先ず次の特徴：約１００ｎＭより大きくないＥＣ５０；ｉｎ ｖｉｔｒｏのヒストンアセチル化活性；ＢＢＢを透過する能力；又はこれらの組合せ、の一つ又はそれより多くを満足するその能力に対して選別される。
[00229]一つの態様において、この方法は、ＨＡＴ活性化剤化合物を含んでなる有効な量の組成物を患者に投与することを含んでなる。もう一つの態様において、患者は、異常に高いアミロイドベータプラーク、又は高いＴａｕタンパク質レベル、又はアルファ−シヌクレインの蓄積、又はリポフスチンの蓄積、又は開裂したＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＰ−４３）レベルの蓄積、或いはこれらの組合せを示す。幾つかの態様において、Ａβタンパク質沈着物は、Ａβ４０異性体、Ａβ４２異性体、又はこれらの組合せを含んでなる。更なる態様において、患者は、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、封入体筋炎、ハンチントン病、パーキンソン病、又は脳アミロイド血管症に罹っている。更なる態様において、患者は、癌に罹っている。
[00230]投与される投与量は、制約されるものではないが、封入体（例えば、アミロイドベータ（Ａβ）タンパク質沈着物、天然の及びリン酸化されたＴａｕタンパク質、天然の及びリン酸化されたアルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂されたＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＢ−４３）、又はこれらの組合せ）を減少する、又は患者の記憶の損失を減少するような神経変性疾患の症状の回復をもたらすために十分な、組成物の治療的に有効な量であることができる。例えば、患者の封入体又は記憶の損失の少なくとも約２５％の減少、少なくとも約３０％の減少、少なくとも約４０％の減少、少なくとも約５０％の減少、少なくとも約６０％の減少、少なくとも約７０％の減少、少なくとも約８０％の減少、少なくとも約８５％の減少、少なくとも約９０％の減少、少なくとも約９５％の減少、少なくとも約９７％の減少、少なくとも約９８％の減少、又は１００％の減少を観察することは、神経変性疾患（例えば、制約されるものではないが、ＡＤ、ハンチントン病、パーキンソン病を含む）の症状の回復の表示である。この封入体の出現を減少することにおける効力は、例えば神経変性疾患の症状を回復することの基準であることができる。
[00231]一つの態様において、治療的に有効な量は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．７５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３５００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約４５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約６５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約８００ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約９００ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約１０００ｍｇ／ｋｇ体重である。
[00232]ＨＡＴ活性化剤化合物は、患者に一度に（例えば、一回の注射又は沈積）投与することができる。別の方法として、本発明のＨＡＴ活性化剤化合物は、それを必要とする患者に、毎日一回又は二回、約２ないし約２８日間、又は約７ないし約１０日間、或いは約７ないし約１５日間投与することができる。これは、更に患者に毎日一回又は二回、１期間を毎年１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２回、またはその組み合わせで投与することもできる。
[00233]投与される投与量は、活性成分の薬力学的特徴並びにその投与の様式及び経路；活性成分の投与の時間；受容者の年齢、性別、健康状態及び体重；症状の性質及び程度；同時治療の種類、治療の頻度及び所望の効果；並びに排出の速度のような既知の因子によって変化することができる。
[00234]本発明の治療的組成物の毒性及び治療効力は、細胞培養物又は実験動物中の、例えばＬＤ５０（集団の５０％に対して致死量である投与量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効である投与量）を決定する標準的な医薬的方法によって決定することができる。毒性及び治療効果間の投与量の比は、治療指数であり、そしてこれは、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表示することができる。大きい治療指数を示す治療剤は、有用である。ある程度の毒性側の効果を示す治療組成物を使用することができる。
[00235]ＨＡＴ活性化剤化合物の治療的に有効な投与量は、当業者にとって既知の多くの因子に依存することができる。ＨＡＴ活性化剤化合物、例えば式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）の化合物の投与量（等）は、例えば、治療される患者又は試料の正体、大きさ、及び症状によって、更に、適用可能な場合、それによって組成物が投与される経路、及び医師が、ＨＡＴ活性剤化合物がＨＡＴタンパク質又はタンパク質に対して本質的なＨＡＴ活性を示すことを有することを所望する効果によって変化することができる。これらの量は、当業者によって容易に決定することができる。
[00236]本発明のＨＡＴ活性化剤化合物は、投与のために適した医薬組成物に組入れることができる。このような組成物は、ＨＡＴ活性化剤化合物（例えば、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、又は式（ＶＩ）を有するＨＡＴ活性化剤化合物の化合物、或いは図３に示した化合物ＹＦ２）及び医薬的に受容可能な担体を含んでなることができる。組成物は、単独で、又は安定化化合物のような少なくとも一つの他の薬剤との組合せで投与することができ、これは、制約されるものではないが、生理食塩水、緩衝された生理食塩水、デキストロース、及び水を含むいずれもの滅菌の生体適合性医薬担体中で投与することができる。組成物は、単独で、或いは他の薬剤、薬物又はホルモンとの組み合わせで患者に投与することができる。
[00237]本発明によれば、医薬的に受容可能な担体は、医薬投与と適合性であるいずれもの、そして全ての溶媒、分散媒体、被覆、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤、等を含んでなることができる。医薬的に活性な物質に対するこのような媒体及び薬剤の使用は、当技術において公知である。活性化合物と適合性であるいずれもの慣用的な媒体又は薬剤を、使用することができる。補充活性化合物も、更に組成物中に組入れることができる。
[00238]本明細書中に記載されるいずれもの治療的適用は、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、ブタ、ヒツジ、ヤギ、又はヒトのような哺乳動物を含むこのような治療を必要とするいずれもの患者に適用することができる。
[00239]本発明の医薬組成物は、その意図する投与の経路と適合性であるように処方される。投与の経路の例は、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び直腸投与を含む。非経口、皮内、又は皮下適用のために使用される溶液又は懸濁液は、次の成分：注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒のような滅菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗細菌剤；アスコルビン酸又は重硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩のような緩衝剤及び塩化ナトリウム又はデキストリンのような等張性の調節のための薬剤を含むことができる。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムのような酸又は塩基で調節することができる。非経口製剤は、ガラス又はプラスチックのアンプル、使い捨てシリンジ又は多数回投与バイアル中に封入することができる。
[00240]注射用の使用のために適した医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散物及び滅菌注射用溶液又は分散物の即時調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与のために、適した担体は、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＭＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合、組成物は、滅菌でなければならず、そして容易に注射可能である程度に流動性でなければならない。これは、製造及び保存の条件下で安定でなければならず、そして細菌及び真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールのような医薬的に受容可能なポリオール、及びこれらの適した混合物を含有する溶媒又は分散媒体であることができる。適当な流動性は、例えば、レシチンのような被覆の使用によって、分散物の場合、必要な粒子の大きさを維持することによって、そして界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、各種の抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、及びチメロサールによって達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、塩化ナトリウムを、組成物中に含むことは有用であることができる。注射用組成物の延長吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによって行うことができる。
[00241]滅菌注射用溶液は、ＨＡＴ活性化剤化合物を、必要な量で適当な溶媒中に、本明細書中に列挙される成分の一つ又は組合せと共に、必要に応じて組入れ、続いて濾過によって滅菌することによって調製することができる。一般的に、分散物は、活性化合物を基本的分散媒体、及び本明細書中に列挙されるものからの必要な他の成分を含有する滅菌ベヒクル中に組込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、有用な調製法の例は、活性成分プラスいずれもの更なる所望の成分の粉末を、事前に滅菌濾過されたその溶液から得る、真空乾燥及び冷凍乾燥である。
[00242]経口組成物は、一般的に不活性希釈剤又は食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入するか、又は錠剤に圧縮することができる。経口の治療的投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と組合され、そして錠剤、トローチ、又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、更に口腔洗浄剤として使用するために流体の担体を使用して調製することもでき、ここにおいて、流体担体中の化合物は、経口的に適用適用され、そしてうがいをされ、そして吐き出すか又は飲み込まれる。
[00243]医薬的に適合性の結合剤、及び／又はアジュバント物質を、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ等は、次の成分又は同様な性質の化合物：微結晶セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンのような結合剤；デンプン又はラクトースのような賦形剤、アルギニン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、又はコーンスターチのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はｓｔｅｒｏｔｅｓのような潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素のような滑剤；スクロース又はサッカリンのような甘味剤；或いはペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジ芳香剤のような芳香剤のいずれかを含有することができる。
[00244]全身性投与は、更に経粘膜的又は経皮的手段であることもできる。経粘膜又は経皮投与のために、透過される関門に対して適当な浸透剤を製剤中に使用することができる。このような浸透剤は、一般的に当技術において既知であり、そして例えば、経粘膜投与のために、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻腔噴霧又は座薬の使用によって達成することができる。経皮投与のために、活性化合物は、一般的に当技術において既知であるように、軟膏、蝋膏、ゲル、又はクリーム中に処方される。
[00245]参考文献
[00246]本発明の更に完全な理解を容易にするために、実施例が以下に提供される。以下の実施例は、本発明を製造し、そして実施する例示的様式を例示する。然しながら、本発明の範囲は、これらの実施例中に開示される具体的な態様に制約されるものではなく、これらは、同様な結果を得るために別の方法を使用することができるため、例示のみの目的である。
実施例１−ＨＡＴ活性化化合物
[00247]本発明のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）活性化剤であるＹＦ２（図３）は、神経変性疾患（即ち、アルツハイマー病及びハンチントン病）の記憶を回復する、そして各種の癌に対する治療のための良好な薬物候補である。ＹＦ２化合物がマウスに投与（ｉ．ｐ．）された場合、ウェスタンブロットは、これが、ＢＢＢを通過するだけでなく、更に海馬のヒストン３アセチル化レベルを増加すること（図１）を示した。行動実験において、表題化合物は、Ａβ４２注入マウスにおける状況的恐怖記憶欠損を回復する（図２）。Ａβ４２は、ＡＤにおいて大量に生産されるタンパク質であり、そしてシナプス機能及び記憶の障害の原因である。
実施例２−ＨＡＴ活性化剤化合物の特徴
[00248]Ｍａｎｔｅｌｉｎｇｕ等からの化合物６Ｊを合成した（図４）。然しながら、化合物６Ｊは、溶解性を持たず、そしてこれをＨ２Ｏに入れるとすぐに沈殿した。然しながら、薬物が（１００％ＤＭＳＯに溶解したとしても）、これが投与されるとすぐに沈殿するものである懸念が存在した。従って、可溶性であった新しい化合物、“ＭＯＭ”を合成した。
[00249]ＭＯＭは、中程度の溶解性を有している（Ｈ２Ｏ中のＤＭＳＯ１０％）。ＭＯＭをＷＴマウスに２５ｍｇ／ｋｇ投与（ｉ．ｐ．）した。マウスの肝臓及び海馬を治療の１時間後抽出した。肝臓は、ＡｃＨ３の非常に僅かな増加を示し、薬物が、非常に僅かな効力を、又は非常に僅かな膜透過性を有するかのいずれかであることを示した（図６）。海馬は、ＡｃＨ３レベルの増加はなく、薬物が、無効であるか、又は血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しないかのいずれかであることを示した（図６）。ＭＯＭは、海馬及び肝臓中のＡｃＨ３レベルを増加することに失敗したが、実験を新しい投与（強制飼養及びｉ．ｐ．で２５ｍｇ／ｋｇ）で繰返した。その後、マウスの恐怖条件づけ処置を行って、学習の導入後、薬物が活性であるか否かを見た。マウスの肝臓及び海馬に加えて、マウスの皮質を更に抽出した。海馬、皮質、及び肝臓の試料は、再びＡｃＨ３の増加を示さず、薬物が、無効であるか又はＢＢＢを通過しないか或いは細胞膜を通過しないかのいずれかであることを示した（図７）。
[00250]ＭＯＭがＡｃＨ３レベルの増加に失敗したが、異なった化学ベヒクル（１０％ＤＭＳＯ及び１０％Ｔｗｅｅｎ８０）で実験を繰り返した。背部海馬に植込んだカニューレによってこれを与えることによって、ＢＢＢをバイパスした。海馬及び皮質の両方を治療後２時間及び４時間後に抽出した。ベヒクルと比較して、カニューレによってＭＯＭを投与された（片側当たり１００μｇ／μｌ）マウスは、ＡｃＨ４の増加を示した（レーン１対レーン２、３）。薬物をｉ．ｐ．で与えられたマウスは、ＡｃＨ３の増加を示さなかった（図８）。このデータは、化合物ＭＯＭが、ＢＢＢを通過しないことを示す。
[00251]新しい化合物ＹＦ２（図３）を合成した。ＹＦ２の調製は、カラム無しで、そして二相：透明及び油状は、目に見えた。その後、ＹＦ２（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を、マウスに投与した。その投与の２及び４時間後、マウスを犠牲にし、そして海馬を抽出した。興味あることに、ＹＦ２は、ＢＢＢを通過することが可能であり、細胞を透過し、そしてＡｃＨ３を増加した（レーン１対レーン９、１０）（図８）。化合物は１００％純粋ではなく、そして更なる精製／検証が必要であったが、本出願人等は、更にＹＦ２を合成し、そしてそれを精製した。純度は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって検証した。マウスにＹＦ２（ｉ．ｐ．生理食塩水中に溶解）を５、１０、２０ｍｇ／ｋｇで投与した。海馬抽出物を、三つの異なった時点で（治療の０．５、１及び２時間後）製造した。次いで本出願人等は、ＡｃＨ３に対してウェスタンブロットを行った。ＹＦ２の１時間−１０ｍｇ／ｋｇ投与を除き、ＹＦ２は、ＡｃＨ３レベルを劇的に増加し（図１０）、ＹＦ２がＢＢＢ及び細胞膜を通過したことを示した。
実施例３−状況的及び手懸り付き恐怖条件づけ実験
[00252]状況的及び手懸り付き恐怖条件づけを、化合物がアミロイド−ベータ（Ａβ）誘導の記憶欠損を回復することが可能であるか否かを評価するために行った。Ａβは、アルツハイマー病において上昇されるペプチドである。海馬は、状況的記憶及びアルツハイマー病において重要な役割を演じる。この種類の認知試験は、訓練及び試験に多くの日数を必要とする他の行動課題よりはるかに速い［Ｑ１、Ｑ２］。本出願人等の条件づけ部屋は、遮音箱中にあった。透明なプレキシガラスの窓が、実験者がマウスの行動を三脚上に置かれ、そしてＦｒｅｅｚｅｆｒａｍｅソフトウェア（ＭＥＤ Ａｓｓ．Ｉｎｃ．）に接続されたカメラで撮影することを可能にした。バックグラウンドのホワイトノイズ（７２ｄＢ）を得るために、一台のコンピューターファンを遮音室の片側に設置した。条件づけ部屋は、３６本の棒の絶縁されたショックグリッドの床を有していた。床は除去可能であり、そしてそれぞれの実験患者後、本出願人等は７５％エタノールで、そして次いで水で洗浄した。一度に一匹のみのマウスが、実験部屋にいた。
[00253]手懸り付き及び状況的条件づけ実験において、マウスを離散純音（ＣＳ）（３０秒間２８００Ｈｚ及び８５ｄＢで継続される音響）の開始の２分前に条件づけ部屋に入れた。ＣＳの最後の２秒に、マウスに０．８ｍＡの２秒間の脚部ショック（ＵＳ）を床の棒を通して与えた。ＣＳ／ＵＳの対の後、マウスを更に３０秒間条件づけ部屋に残し、そして次いでそのホームケージに戻した。呼吸によって必要とされるものを除く全ての動きの非存在として定義される竦み行動を、Ｆｒｅｅｚｅｖｉｅｗソフトウェアを使用して採点した。
[00254]状況的恐怖づけ学習を評価するために、竦みを、マウスが２４時間訓練された部屋で、訓練後５分間（連続的に）測定した。手懸り付き恐怖学習を評価するために、状況的試験に続いて、マウスを新規な状況（滑らかな平らな床を持つ三角のケージ）中に２分間入れ（前−ＣＳ試験）、その後、彼らを３分間ＣＳに暴露し（ＣＳ試験）、そして竦みを測定した。ショックの知覚性認知を、閾値評価によって決定した。一連の一回の脚部ショックを、恐怖条件づけのために使用した同じ感電させるグリッド上に置かれたマウスに供給した。最初、０．１ｍＶのショックを１秒間供給し、そしてマウスの行動を、尻込み、跳躍、及び発声に対して評価した。３０秒間隔で、ショックの強度を０．１ｍＶずつ０．７ｍＶ迄増加し、そして次いで０ｍＶまで、０．１ｍＶ減分で３０秒間隔で戻した。発声、尻込み、そして次いで跳躍に対する閾値を、それぞれにマウスに対して、それぞれのマウスの脚部ショックに対する行動反応を示すショック強度を平均することによって定量化した。
[00255]ＹＦ２を、マウスにｉ．ｐ．投与した（マウスの一つの群は、２０ｍｇ／ｋｇを電気ショックの２時間前に投与され、一方他の群は、５ｍｇ／ｋｇを電気ショックの３０分前に投与された）。両方の投与量のＹＦ２は、化合物が、状況的記憶の障害を救済することを証明する竦み時間を劇的に増加することが可能であった。最高の濃度（２０ｍｇ／ｋｇ）の単独の化合物は、状況的記憶に影響せず（図１０）、化合物自体は記憶に関して毒性ではないことを示した。手懸り付きの記憶は、異なった群において変化せず、ＹＦ２が扁桃体機能に影響しないことを示した（図１１）。最後に、本出願人等が、ベヒクル、単独のＹＦ２、単独のＡβ、又はＹＦ２プラスＡβの存在中の知覚性閾値を評価した実験の異なった組合せ中の異なったマウスの群間に差は観察されなかった（図１２）。
[00256]恐怖条件づけ試験中に得られた結果に基づき、本出願人等は、治療の最良の時点を検証するために、血液中のＹＦ２の動態を決定することに決めた。この目的のために、本出願人等は、化合物（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与し、そして次いで異なった時点で尾部から血液を試料採取した。ＹＦ２の動態は、概略注射の３０分後にピークを示す（図１３）。
[00257]参考文献
実施例４−二日間の放射状アーム水迷路（ＲＡＷＭ）
[00258]課題は、モーリス水迷路（ＭＷＭ）及び放射状アーム陸迷路の複合型である。この課題は、Ａβ注入マウスにおいて変更された。マウスに対する動機づけは水中の浸漬である。マウスは、中心部から放射状に広がる６個のアレイ（アーム）中を、部屋に置かれた目に見える手懸りに基づいてアームの一つの末端の隠された（沈んだ）プラットフォームを見つけるまで泳ぐ必要があった。目的のアームは、学習基準が２日中に達成されるように、一連の試行に異なった出発アームを伴う全ての試行に対して一定に保たれた。プロトコルの最初の日は、訓練日であった。目的のアームを見える及び隠されたプラットフォーム間で変更することによって、プラットフォームの位置を同定するように、マウスを訓練した。１日目の最後の三回の試行及び二日目の全ての１５回の試行は、目的のアームの位置を同定するために空間的手懸りを使用するようにマウスを強制するために隠れた逃避プラットフォームを使用した。
[00259]消耗する実行によって課される学習の制約を回避し、そして連続した試行の結果であることができる疲労を回避するために、４匹のコホートのマウスを試験し、そして毎日の３時間の試験時間をかける１５回の訓練の試行を通して異なったコホートに変更することによる間隔を置いた実行の訓練を確立した。一日目に、目に見えるプラットフォームを目的の位置に置いた。コホート１のマウス１を、一番目の出発アーム（採点表に規定された）の壁の周囲に近いプール中に静かに入れ、そしてプールの中心に向けた。不正なアームへの進入（プラットフォームのないアームへの進入）の回数を数えた。マウスが不正なアームに進入した場合、これは出発アームに静かに引き戻された。それぞれの試行は、１分まで継続した。１５秒後のアームの選択の失敗を、誤りとして数え、そしてマウスを出発アームに戻した。１分後、プラットフォームを見つけられなかった場合、マウスを手をその後ろにおくことによって、これをプラットフォームに向けて水中を静かに案内した。マウスは、プラットフォーム上で１５秒間休憩した。試行を完了した後、マウスをプールから出し、穏やかにタオルで拭き、そして加熱ランプ下のそのケージに戻した。目的のプラットフォームの位置は、それぞれのマウスに対して異なっていた。
[00260]第一のコホートの全てのマウスが、見えるプラットフォームを見つける試行を行った後、プラットフォームを見えるものから隠されたものに取り換えた。コホート１からのそれぞれのマウスが、見える及び隠されたプラットフォームの６回の交互の試行を完了した後、マウスを加熱源下で休憩するままにし、そして第２のコホートのマウスを同じ方法で試験した。６回の交互の試行を完了した後、コホート２のマウスをそのケージに戻して、休憩させた。
[00261]次に、第１のコホートのマウスは、再び見える−隠されたプラットフォームの位置を交互に使用して試行７−１２を完了した。第１のコホートのマウスの休憩時間中に、第２のコホートのマウスが試行７−１２を完了した。この時点で、全てのマウスが３回の隠されたプラットフォームの試行を行った。二日目、隠されたプラットフォームのみを使用する全ての１５回の試行に対して、一日目と同じ方法を繰返した。データ解析のために、それぞれのマウスの平均を、３回の試行のブロックを使用して計算した。図１４に示すように、ベヒクルで治療されたマウスは、二日目の終りに近い３回の試行にわたって約１回の誤りを示した。
[00262]対照的に、Ａβ注入マウス［Ａβ４２の両側注射；１分かけて１μｌの最終体積中の２００ｎＭ；それぞれの試験日に対し二回：１回目試行の１５分前（試験の１番目の群に対して）及び７回目試行の１５分前（試験の２番目の群に対して）背部海馬中に］は、学習に失敗し、訓練期間中３−４回の誤りを起こし、試行を通して改善がなかった。ＹＦ２による治療［（ｉ．ｐ．、５ｍｇ／ｋｇ、１回目試行の３０分前（試験の１番目の群に対して）及び７回目試行の３０分前（試験の２番目の群に対して）］は、Ａβ誘導の記憶障害を救済した。更に、ＹＦ２それ自体は、この種類の試験に伴うマウスの能力に影響しない。二日間のＲＡＷＭによる試験の結果に影響することができるマウスの知覚、運動及び動機的技能の制御は、マウスの四つの異なった群間の見えるプラットフォームに到達するために必要な時間及び泳ぐ速さに、何らの差も示さなかった（図１５及び図１６）。
実施例５−アルツハイマー病におけるヒストンアセチル化の調節不全
[00263]本出願人等は、最近、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）によるヒストンの脱アセチル化の阻害が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスと呼ばれる、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ、ライン６．２）中の変異を伴うＡＰＰ（Ｋ６７０ＭＮ６７１Ｌ）中のスウェーデン変異を発現する遺伝子導入（Ｔｇ）マウスの、アミロイドを沈積する動物モデル中のＬＴＰ及び状況的恐怖条件づけ（ＦＣ）を回復することを示した［Ａ２１，Ａ２２］。更に、ＣＢＰのＨＡＴ活性は、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須であり、そしてＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＣＢＰレベルは、ＷＴマウスより有意に低かった。ＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬は、ＦＣ訓練後、記憶の形成に重要であることを示すアセチル化であるアセチル化ヒストン４レベルの概略５０％の減少を示した［Ａ２３］。これらの発見に基づき、そして理論に束縛されることなく、ヒストンアセチル化を含む後成的変化は、ＡＤに伴うシナプス機能及び記憶のＡβ誘導の損傷において重要な役割を演じる。
[00264]脳において、ＣＲＥＢリン酸化は、ＣＢＰに結合するＣＲＥＢ能力のために、そして記憶関連遺伝子の発現を刺激するために必要である。基底転写装置との相互作用をヒストンのアセチル化を触媒するアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）として働くことによって容易にする活性化補助因子としての、染色体抑圧の減少及び記憶関連遺伝子の転写における増加を起こすＣＢＰは機能する。ＨＡＴと異なり、ＨＤＡＣは、ヒストンからアセチル基を除去し、従ってＤＮＡへの転写装置の接近を制限することが見いだされている。興味あることに、ＨＤＡＣ阻害剤は、ＬＰＴ及びマウスが中性の刺激を有害なものと結合させなければならない連合記憶の形態である状況的恐怖記憶を向上することを示している［Ａ２５］。
[00265]更に、ＣＢＰ＋／−マウスの記憶及びＬＴＰ欠損は、ＨＤＡＣ阻害剤のＳＡＨＡによって逆転され、この群の薬物のルビンシュタイン・テイビ症候群（ＲＴＳ）中の精神的遅滞に対する治療剤としての潜在的使用を支持する［Ａ２４］。ＨＤＡＣ ＩＩＩ阻害剤であるニコチンアミドは、ＡＤの三重Ｔｇマウスモデルにおける認知を、Ｔｈｒ３２１−ホスホｔａｕの減少を含む機構によって回復することが見いだされている［Ａ２６］。更に、ＨＤＡＣ阻害剤は、樹状突起の発芽、シナプスの数の増加、並びに復元された学習及びニューロン減少のＣＫ−ｐ２５Ｔｇマウスモデル中の長期の記憶への接近を誘導した［Ａ２３］。ＨＤＡＣ阻害剤は、後成的及び非後成的変化を含む各種の機構によってニューロン機能に影響することができた［Ａ２７］。Ａβ上昇後の認知障害が、ヒストンアセチル化（クロマチン再構築によって）の後成的修飾によって誘導することができるか否かは、決定されていない。
[00266]ＷＴ−ＰＳ１は、ＣＢＰの転写活性能力を刺激し、一方そのＡＤのＭ１４６Ｌ変異体は、このような効果を産生せず［Ａ２０］、ＡＤのＣＢＰ及びそのＨＡＴ活性が関係することができることを示した。更に、ＨＡＴ活性を欠損するＣＢＰ変異体は、増加した転写活性化能力に関して、ＷＴ−ＰＳ１に反応することが可能ではない。従って、ＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域は、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須であるように見受けられる。本発明人等は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのヒストンのアセチル化レベルがＷＴマウスと異なり、従ってＡＤが後成的病因の疾病として同定されることを見出した。
[00267]有意性。 ＡＤは、殆ど一世紀昔に記載されているが、ニューロンの病態の発症に導く分子機構は、いまだに未知である。理論に束縛されるものでないが、エピジェネティックス及びヒストンアセチル化は、ＡＤにおいて基本的役割を演じることができる。更に、ＨＤＡＣの阻害、又は逆にＨＡＴの活性化は、疾病の進行を効果的に対抗することがっできる。
[00268]Ａβ誘導のシナプス及び記憶機能障害がヒストンの脱アセチル化の阻害によって回復されるか否かを決定すること。
[00269]ＴＡＳがＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＰＴ及び状況的学習の減少を救済することを示すデータに基づいて、本出願人等は、阻害剤が、更にＡβの効果を、ＡＰＰ及びＰＳ１の過剰発現の他の影響から分離するために、Ａβ暴露後のこれらの欠損を救済するか否かを決定するものである。
[00270]ＡＤは、より大きいニューロンの機能障害に漸進的に導き、記憶の減少に導くシナプスの疾患として開始すると考えられる［Ａ２８］。Ａβ誘導のシナプス及び記憶機能障害におけるエピジェネティクスの関与に好ましい証拠を得るために、本出願人等は、ＨＤＡＣ阻害剤のＴＳＡを、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスに対して使用する一連の実験を行った（これらのマウスの特徴を示す実験の詳細な説明については、本出願人等の原稿を参照されたい［Ａ１７，Ａ２９］。
[00271]この年齢で、Ｔｇマウスは、シナプス可塑性及び記憶機能障害を丁度示し始める［Ａ２９］。基礎シナプス伝達（ＢＳＴ）は、ＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウス間で同様である。本出願人等は、以前にこの年齢のマウスにおいて示されたように二つの群間でＢＳＴの差を見いだせなかった［Ａ２９］。次いで海馬の切片を、ＴＳＡ（１．６５μＭ）で３０分間潅流してから、シャファー側枝経路の高頻度反復刺激によってＬＰＴを誘導した。ＴＳＡで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１切片の増強は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１切片におけるものよりはるかに大きかった（図１７）。しかし、ＴＳＡは、ＷＴマウスの海馬切片中のＬＰＴの振幅を、ベヒクル単独で治療されたＷＴ切片と比較して変化しなかった。更に、ＴＳＡ潅流は、強縮を受けなかったＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ切片中の基線伝達に影響しなかった。
[00272]シナプスの機能障害におけるＴＳＡの急性効果に対する実験後、本出願人等は、ＴＳＡが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの状況的ＦＣの障害に対して有益であるか否かを決定した［Ａ１７］。生後４ヶ月のマウスを、四つの群：ＴＳＡを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ベヒクルを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ＴＳＡを伴うＷＴ及びベヒクルを伴うＷＴに分けた。ＴＳＡ及びベヒクル対照溶液を、ｉ．ｐ．で２μｇ／ｇ体重の濃度で投与した。本出願人等は、各種のマウスの群中で同様なショックの閾値を見出した。次いでマウスを、中性の刺激を有害なものと結合するために訓練した。これらを新規な状況（ＦＣ箱）に置き、穏やかな脚部ショックと対になったホワイトノイズの合図に暴露し、そして訓練の２時間前にＴＳＡを注射した。恐怖学習を、状況の提示に反応する竦み行動−呼吸のために必要なものを除くすべての動きの非存在−を測定することによって２４時間後評価した。本出願人等は、ＦＣの訓練中の四つの群のマウス間の竦み行動に差を見出さなかった。２４時間後、竦み行動は、状況的学習の解析において、ベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔と比較して、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて減少した（図１８）。ＴＳＡは、Ｔｇマウスの記憶を改善した。
[00273]将来の実験において、本出願人等は、図１７及び図１８に記載された電気生理学的及び行動的発見を、構造的に異なったヒストンデアセチラーゼの阻害剤である酪酸ナトリウム（ＮａＢ）を使用して同定するものである。ＴＳＡ実験に関して、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの切片を、ＮａＢ（３００μＭ）で３０分間治療してから、シータバースト刺激を適用して、ＬＰＴを誘導するものである。対照は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウス及びＮａＢ又はベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔マウスからの切片で行うものである。ＴＳＡと同様に、本出願人等は、更に、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの正常な状況的恐怖記憶を再確立するか否かを検査するものである。
[00274]ＡＰＰ及びＰＳ１遺伝子導入は、ニューロン機能に、Ａβによる直接的影響を含む異なった機構によって［Ａ３０、Ａ３１］影響することができる。全長のＡＰＰ及びその開裂した産物の輸送及びシグナル伝達特性は、異なっている可能性があり、これらはシナプスの機能の側面に異なって影響することができる。Ａβの影響をＡＰＰ及びＰＳ１過剰発現の他の影響から分離するために、本出願人等は、Ａβ自体が、Ｔｇマウスにおける本出願人等の研究で観察された欠陥の原因であるか否かを決定するものである。ヒトＡβの天然のオリゴマーが、モノマー及び原線維の非存在においてＬＴＰをｉｎ ｖｉｖｏで顕著に阻害することが既に記載されているために、本出願人等は、２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２を、ＴＳＡ（１．６５μＭ）と同時に３０分間ＷＴ切片に、ＬＴＰの誘導の前に適用するものである。更に、本出願人等は、状況的恐怖記憶を、ＦＣに対する訓練の１５分前の背部海馬への２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２の、ＴＳＡ（２μｇｒ／ｇｒ体重、訓練の２時間前、ｉ．ｐ．）と同時の両側注入によって障害するものである。理論に束縛されるものではないが、オリゴマーのＡβ４２は、ＬＴＰ及び恐怖記憶を阻害し、そしてＴＳＡが、Ａβ４２治療後の正常なＬＴＰ及び状況的恐怖記憶を再確立することを証明する筈である。単独のＴＳＡは、何らの効果を持たない筈である。更なる実験において、本出願人等は、ＬＴＰを誘導するためのシータバースト刺激の適用の３０分前に、ＮａＢ（３００μＭ）プラス２００ｎＭのＡβ４２を使用するものである。対照は、ベヒクルで治療された切片で行うものである。ＴＳＡと同様に、本出願人等は、更に、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、Ａβ４２注入マウスの正常な状況的恐怖記憶を再確立するか否かを検査するものである。総括すれば、これらの実験は、ヒストンアセチラーゼの阻害が、オリゴマーのＡβの上昇によって起こされたシナプス及び記憶の機能障害に対して有益であることを証明するものである。
[00275]Ａβ上昇後のＣＢＰの関与の特徴付け
[00276]ｉ）ＷＴ−ＰＳ１が、ＨＡＴ活性を欠損するＣＢＰ構築物で形質転換されたＦ１１細胞の転写をもはや促進せず、そしてｉｉ）ＣＢＰレベルがＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて減少するという観察の基づいて、本出願人等は、ＣＢＰのＨＡＴ活性及びレベルが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて、そしてＡβ上昇後に影響されるか否かを決定するものである。
[00277]本出願人等は、最近、ＣＢＰのＨＡＴ活性が、ＷＴ−ＰＳ１の刺激効果において何らかの役割を有するか否かを、全長のＣＢＰが変異（ＷＹ−アミノ酸１５０３−１５０４がアラニン及びセリンで置換されている）を含有する構築物を使用することによって試験した。そのＨＡＴ活性を完全に無効にするこの変異は［Ａ３２］、Ｇａｌ４のＤＮＡ結合領域に連結している（図１９）。全長のＷＴ−ＣＢＰの向上したプロモーター活性と対照的に、ＷＹ−ＣＢＰに伴う活性は観察されなかった（図２０Ａ）。ＷＴ及びＷＹのＧａｌ−ＣＢＰ間の基礎活性に差はなかった（図２０Ｂ）。従って、ＨＡＴ活性を欠損するＣＢＰ変異体は、増加された転写活性化能力に関してＷＴ−ＰＳ１に反応することが不可能である。従って、ＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域は、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須であるように見受けられる。更に、本出願人等は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの内因性ＣＢＰレベルを測定することを決定した。
[00278]生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの海馬からのウェスタンブロット分析は、ＷＴの対照と比較して、ＣＢＰレベルの有意な減少を明らかにした（図２１）。将来の実験において、本出願人等は、これらの結果を複製するものである。別の戦略は、ＣＢＰ分布（細胞質対核）における変化が、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）の、ＷＴ−ＰＳ１と比較して過剰な発現後のＦ１１細胞中で観察された与えられた核の画分からのＣＢＰの測定を含むものである［Ａ２０］。本出願人等は、更にＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるＣＢＰのＨＡＴ活性を基本的条件及び状況的学習のための訓練の１時間後の両方で、そのＷＴ同腹仔と比較して直接測定するものである。対照は、ＣＢＰのＨＡＴ活性の変化が、新規な状況単独又はこれら間の結合の代わりの電気ショックのためであることを除外するための潜在阻害訓練パラダイムを使用して行われるものである［Ａ２５］。潜在阻害パラダイムにおいて、マウスが連合した状況的恐怖記憶の形成を遮断する空間的記憶を形成するものであるように、電気ショックを受ける前に新規な状況にマウスを予備暴露するものである。最後に、本出願人等は、ＨＡＴアッセイのような実験パラダイムを使用する、海馬に対して新しい蛍光定量的アッセイを使用してＨＤＡＣ活性を測定するものである。理論によって束縛されるものではないが、これらの実験は、ＣＢＰ及び／又はＨＤＡＣが、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現後に変化されるか否かを確立するものである。
[00279]本明細書中に記載された電気生理学的及び行動的実験と同様に、本出願人等は、ＴＳＡの投与が、ＣＢＰレベル及びＣＢＰのＨＡＴ活性の変化を救済するものであるか否かを求めるものである。本出願人等は、本明細書中に記載されたものと同じ実験を、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスから海馬を回収する２時間前のＴＳＡ（２μｇ／ｇ体重；ｉ．ｐ）による治療後に繰り返すものである。ベヒクル及びＴＳＡで治療されたＷＴ同腹仔が対照として役立つ。ＡＰＰ及びＰＳ１過剰発現の影響を、Ａβ自体の影響と区別するために、本明細書中に記載された実験（ＴＳＡを伴う又はベヒクルのみを伴うＣＢＰレベル、ＣＢＰ−ＨＡＴ活性及び全ＨＤＡＣ活性を含む）を、ベヒクル注入マウスと比較するために、ＷＴマウスの背部海馬に注入された２００ｎＭのＡβ４２の存在中で繰返すものである。理論によって束縛されるものではないが、これらに実験は、ＣＢＰ及び／又はＨＤＡＣが、Ａβ上昇後に変化されるか否かを確立するものである。
[00280]Ａβ上昇後、どのヒストンアセチル化レベルが変化するかを決定する。
[00281]データは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの海馬中のアセチル化されたヒストン４レベルの約５０％の減少を示している。将来の実験において、本出願人等は、更に転写及び記憶において重要な役割を演じるヒストン２Ｂ及び３に対する本出願人等の調査を拡大するものである［Ａ２３−Ａ２５］。本出願人等は、最後に、Ａβ上昇がヒストンアセチル化に影響するか否かを検査するものである。
[00282]本出願人等は、更に、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて見られる障害が、ＷＴ同腹仔と比較して、後成的影響か否かを試験するものである。ヒストン２Ｂ、３及び４のアセチル化は、転写及び記憶において重要な役割を演じることが示された［Ａ２３−Ａ２５］。ＷＴ及びＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬中のＨ４のアセチル化を測定した。ベヒクル対照溶液を、ｉ．ｐ．でＦＣ訓練の２時間前に投与した。状況的ＦＣの１時間後、ＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウスを安楽死させ、そして海馬を抽出した。ウェスタンブロット分析は、ＷＴマウスと比較して、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスがアセチル化されたヒストン４レベルの５０％より多い全体的減少を有することを証明した（図２２）。ＨＤＡＣ阻害が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて観察されたヒストン４のアセチルレベルの障害を救済することができるか否かも更に試験した。ＴＳＡ（２μｇ／ｇ体重；ｉ．ｐ）の状況的恐怖条件づけの２時間前の注射は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＨ４アセチル化を向上した（図２２）。理論によって束縛されるものではないが、ＡＤは、後成的モチーフを伴う疾病である可能性があり、そしてＨＤＡＣ阻害剤は、ＡＤマウスモデルのヒストン４の減少したレベルを上昇することができる。
[00283]将来の実験において、本出願人等は、ヒストン４の基礎アセチル化レベル、並びに制御を、本明細書中に記載される潜在阻害パラダイムを使用して測定するものである。更に、本出願人等は、本出願人等の研究を、生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ同腹仔の海馬中のそのアセチル化を、基本条件及びＦＣのための訓練後の両方に、ＴＳＡを伴い又は伴わずヒストン４に対して測定することによって、ヒストン２Ｂ及び３に拡大するものである。対照は、更に本明細書中に記載される潜在阻害訓練パラダイムを使用して行われるものである。最後に、本出願人等は、これらの発見を、ヒストンデアセチラーゼの構造的に異なった阻害剤のＮａＢを使用して同定するものである。ＴＳＡ実験に関して、本出願人等は、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの正常なヒストン／類のアセチル化レベルを再確立するか否かを検査するものである。
[00284]ＡＰＰ及びＰＳ１の過剰発現の影響を、Ａβ自体の影響から分離するために、異なったヒストンのアセチル化レベルの測定に関して本明細書中に記載された実験を、ベヒクル注入のマウスと比較するために、ＷＴマウスの背部海馬に注入された２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２の存在中で繰返すものである。理論によって束縛されるものではないが、オリゴマーのＡβ４２は、ヒストン４のアセチル化レベルに影響するものである。残りのヒストンアセチル化レベルは、遺伝子導入（Ｔｇ）マウスからの発見と一致する筈である。更なる実験は、ＮａＢで行われるものである。ＴＳＡ実験に関して、本出願人等は、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの正常なヒストン／類のアセチル化レベルを再確立するか否かを検査するものである。理論によって束縛されるものではないが、これらに実験は、減少したヒストンアセチル化のような後成的変化が、ＡＤに伴うシナプス機能及び記憶のＡβ誘導の損傷において重要な役割を演じることを証明するものである。
[00285]方法
[00286]動物： 二重Ｔｇマウスを、ＡＰＰ及びＰＳ１マウスを交雑することによって得るものである（ＰＣＲによって遺伝子型が同定された）［Ａ２９］。Ａβ実験のために本出願人等は、Ｃ５７Ｂ１６マウスを使用するものである。
[00287]Ａβ製剤： オリゴマーのＡβ４２は、商業的に入手可能な合成ペプチド（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｃｏ）から、記載されているように［Ａ３３，Ａ３４］調製されるものである。
[00288]電気生理学のために、４００μｍの切片を切断し、そして記録の前に、報告されているように［Ａ５］インターフェースチャンバー中に２９℃で９０分間維持するものである。簡単には、ＣＡ１のｆＥＰＳＰは、ＣＡ１の放射状層に刺激及び記録電極を入れることによって記録されるものである。ＢＳＴ評価後、毎分最大誘発反応の約３５％の反応を誘発する強度で、１５分の基線が記録されるものである。ＬＴＰは、θ−バースト刺激（５Ｈｚで繰返されるバーストを伴う１００Ｈｚの４回のパルス、及びそれぞれの強縮が１５秒離れた３回の１０回バーストの繋がりを含む）を使用して誘導されるものである。
[00289]状況的及び手懸り付き条件づけのために、マウスを条件づけ部屋に離散純音（ＣＳ）（３０秒間、２８００Ｈｚで８５ｄＢの音響）の開始の２分前に、記載されているよう［Ａ１７］に入れられるものである。ＣＳの最後の２秒に、マウスに２秒間、０．６０ｍＡの脚部ショック（ＵＳ）を、床の棒によって与えるものである。ＣＳ／ＵＳ対の後、マウスを３０秒間条件づけ部屋に残すものであり、そして次いでそのホームケージに戻されるものである。竦み行動は、Ｆｒｅｅｚｅｖｉｅｗソフトウェア（ＭＥＤ Ａｓｓ）を使用して採点されるものである。状況的恐怖学習を評価するために、竦みをマウスが２４時間訓練されるものである部屋内で５分間訓練後測定するものである。手懸り付き恐怖学習を評価するために、状況的試験の２４時間後、マウスを新規な状況中に２分間置き（前ＣＳ試験）、その後、マウスをＣＳに３分間暴露するものであり（ＣＳ試験）、そして竦みを測定するものである。
[00290]ショックの知覚性認知を、記載されているように［Ａ１７］、閾値評価によって決定するものである。
[00291]ＣＢＰレベルは、特異的ＣＢＰ抗体を使用するウェスタンブロットで測定するものである。核画分は、７，７００×ｇで１分間遠心された均質な組織から得られたペレット中に含有されるものである。
[00292]ＣＢＰのＨＡＴ活性は、ＣＢＰ抗体を使用する海馬抽出物の溶解からの免疫沈降によって測定されるものである。単離後、ＨＡＴ活性は、アセチル残基を検出する間接的酵素結合免疫吸着測定法キットを、製造業者（Ｕｐｓｔａｔｅ）の説明書に従って使用して評価されるものである。
[00293]ＨＤＡＣ活性アッセイのために、本出願人は、Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ（ＣＡ）からの蛍光定量キットを、製造業者の説明書によって使用するものである。
[00294]ヒストンアセチル化アッセイのために、ウェスタンブロットを、液体窒素で瞬間冷凍された海馬から行うものである。核タンパク質は、酸で抽出され、そして変性７％−１２％アクリルアミドゲル上で、続いてニトロセルロース上のエレクトロブロッティングで分離されるものである。アセチル化されたヒストン（Ｈ３、Ｈ２Ａ及びＨ２Ｂ）は、Ｕｐｓｔａｔｅから購入した抗体及びＡｍｅｒｓｈａｍのＥＣＦキットを、製造業者のプロトコルによって使用して検出するものである。
[00295]統計的解析： 実験は盲検で行われるものである。結果は、主効果として薬物又は遺伝子型による事後補正を伴うＡＮＯＶＡにより解析されるものである。
[00296]参考文献
実施例６−アミロイド上昇後のクロマチン再構築の障害
[00297]ＡＤに対するＣＲＥＢ及びＣＢＰのリンクに加えて、後成的変化も更にＡＤの発症に寄与することができる。記憶の形成において重要なアセチル化である［Ｂ１９］アセチル化ヒストン４の海馬レベルは、恐怖条件づけ訓練後のアミロイドを沈着する動物モデルにおいて顕著に減少される。理論に束縛されるものではないが、ヒストンアセチル化の変化は、ＡＤにおいて重要な役割を演じる。
[00298]更に、恐怖条件づけに対する訓練後、ＡＰＰ／ＰＳ１マウス中の海馬のアセチル化Ｈ４レベルは、野生型の同腹仔より劇的に低く、ヒストンアセチル化の変化が、ＡＤにおける記憶減少に関係することを示した。この観察は、ＨＤＡＣ阻害が、樹状突起の発芽、シナプスの数の増加、及びニューロン減少を伴うＣＫ−ｐ２５遺伝子導入マウスにおける復元された学習及びＬＴＭへの接近を誘発するという発見と一致する［Ｂ１９］。ヒストンアセチル化のレベルは調査されていないが、二つの更なる研究におけるＨＤＡＣ阻害剤の使用は、勇気づけるものである。ＨＤＡＣ ＩＩＩ阻害剤のニコチンアミドは、ＡＤの三重遺伝子導入マウスモデルの認知を、細胞質Ｔｈｒ３２１−ホスホｔａｕの減少に関係する非後成的機構によって回復することが見いだされた［Ｂ４９］。然しながら、回答されるべき多くの質問：ＨＤＡＣ阻害剤による治療は、軽度のプラーク負荷を伴う遺伝子導入マウス及び更に深刻なアミロイド沈着を伴うそれの両方におけるヒストンアセチル化、シナプス可塑性、及び記憶の欠損を救済するか？ＨＤＡＣ阻害剤の有益な効果は、参照記憶のような恐怖記憶に加えて他の顕在記憶の他の形態に拡大することができるか？転写及び記憶において重要な役割を演じることが更に知られているヒストンＨ２Ｂ及び３のような他のヒストンは、ＡＤにおける記憶過程中に異常にアセチル化されるか？実験が、Ａβ上昇とは独立に、各種の影響を起こすことができる変異ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子を過剰発現するマウスに対して行われた場合、ヒストンアセチル化は、Ａβ上昇後に影響されるか？ヒストンアセチルトランスフェラーゼＣＢＰは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるヒストンアセチル化の減少及びその後のＡβ上昇において役割を演じるか？が残っている。
[00299]本発明人等は、更に、この実施例において、ヒストンアセチル化のレベルにおけるクロマチンの変化が、記憶過程中のＡβの上昇後に起こるか否かを考察するものである。理論に束縛されるものではないが、得られた結果は、記憶及びシナプス機能のＡβ誘導の障害に対する新しい種類の機構が提供するものである。
[00300]現時点で使用されているＡＤのための治療は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の使用、又はＮＭＤＡアンタゴニストによるグルタミン酸神経毒性の遮断によるコリン作動性系の増強を含む。これらの薬剤は制約された効力を有する。主要な効果は、炎症及び酸化性損傷と戦う、そしてβ及びγセクレターゼを阻害する又はαセクレターゼを増加する薬剤の使用、或いはＡβオリゴマー化を阻害する薬剤の使用、或いは脳からのＡβの除去を増強するようなＡβによる免疫化のような治療の使用のいずれかによって脳のＡβ負荷を減少するタングル形成を阻害することが進行中である。然しながら、正常な生理学的機能におけるＡＰＰ、Ａβ４０及びセクレターゼの役割は、ＡＤ治療に対する有効なそして安全な方法を提供することにおける問題が存在することができる。転写装置及びヒストンアセチル化に干渉する薬物は、記憶が属すると考えられるそのシナプスの接触を伴う細胞を、Ａβの影響に対して更に頑強で、そして抵抗性にするためのＡＤ治療に対する新しい接近法を表すことができる。
[00301]ＨＤＡＣ阻害は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける海馬の長期増強の欠損を回復する。 これらの研究を鼓舞する観察は、本出願員らが、ＨＤＡＣ阻害剤のＴＳＡの簡単な適用が、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの切片によって示されるＬＴＰの欠損を救済することが可能であるか否かを試験した一連の実験の結果であった（これらのマウスの特徴を示す実験の詳細な記載に対しては［Ｂ５０］）。この年齢において、遺伝子導入マウスは、シナプス可塑性及び記憶障害を丁度示し始めた［Ｂ１４，Ｂ５０］）。以前に示されたように［Ｂ５０］、基礎シナプス伝達（ＢＳＴ）は、ＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴマウス間で同様であった。次いで海馬の切片を、ＴＳＡ（１．６５μＭ）で３０分間潅流してから、シャファー側枝経路の強縮刺激によってＬＰＴを誘導した。ＴＳＡで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１切片の増強は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１切片におけるものよりはるかに大きかった（二変数ＡＮＯＶＡ：Ｆ１，１１＝１３．１６６、ｐ＝０．００４；図１７）。他方、ＴＳＡは、ＷＴマウスからの海馬切片中のＬＰＴの振幅を、ベヒクル単独で治療されたＷＴ切片と比較して変化しなかった（Ｆ１，１２＝０．５１２、ｐ＝０．４８８、図１７）。更に、ＴＳＡ潅流は、強縮を受けなかったＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ切片中の基線伝達に影響しなかった（それぞれの群当たりｎ＝３）。従って、ＨＤＡＣ阻害は、Ａβ沈着のＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデルにおけるＬＴＰの欠損を救済することが可能である。
[00302]ＨＤＡＣ阻害は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの連合記憶の欠損を救済する。 ＡＤに影響されたヒトと同様に［Ｂ５１］、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、連合記憶の欠損を示す［Ｂ４６］。齧歯動物において、連合学習は、状況的恐怖条件づけによって評価することができる。中性刺激の有害なものとの結合に基づくこの行動的課題は、海馬機能に依存する［Ｂ５２］。従って、シナプス機能障害におけるＴＳＡの急性効果に対する実験後、本出願人等は、ＴＳＡが、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの状況的恐怖条件づけの障害に対して有益であるか否かを決定した［Ｂ１４］。マウスを、四つの群：ＴＳＡを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ベヒクルを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ＴＳＡを伴うＷＴ及びベヒクルを伴うＷＴに分けた。ＴＳＡ及びベヒクル対照溶液を、ｉ．ｐ．で２μｇ／ｇ体重の濃度で投与した。本出願人等は、各種のマウスの群間で同様なショックの閾値を見出した。次いでマウスを、中性の刺激を有害なものと結合するために訓練した。これらを、新規な状況（恐怖条件づけ箱）に置き、穏やかな脚部ショックと対になったホワイトノイズの合図に暴露し、そして訓練の２時間前にＴＳＡを注射した。恐怖学習を、状況の提示に反応する竦み行動−呼吸によって必要とされるものを除く全ての動きの非存在−を測定することによって２４時間後評価した。本出願人等は、恐怖条件づけの訓練中の四つの群のマウス間の竦み行動に差を見出さなかった（Ｆ３，４７＝０．０２９９７、ｐ＝０．９９２９、ｎ＝１２−１３／群；図１８）。２４時間後、本出願人等は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて、ベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔と比較して、状況的学習の解析において、減少した竦み行動を見出した（Ｆ３，４７＝０．０５２６、ｐ＝０．０２８０、ｎ＝１２−１３／群；図１８）。
[00303]ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの竦みは、ベヒクルで治療されたＷＴマウスのそれの約４６％であった［ベヒクル治療ＡＰＰ／ＰＳ１マウス：１４．８８±２．９７％対ベヒクル治療ＷＴ同腹仔：３１．６８±５．３２％；それぞれｎ＝１３（メス１１匹プラスオス２匹）及びｎ＝１３（メス１２匹プラスオス２匹）；ｔ＝２．７６、ｐ＝０．０１０９；図１８］。然しながら、竦み時間は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて、ＴＳＡの投与後、ベヒクルで治療したマウスの約２３６．２７％に増加した［ＴＳＡ治療ＡＰＰ／ＰＳ１マウス：３５．１５±６．９９％、ｎ＝１２（メス１０匹プラスオス２匹）；ｔ＝２．７４４、ｐ＝０．０１１６；図１８］。統計的解析は、ＡＰＰ／ＰＳ１における竦みは、ＴＳＡで治療した（ｔ＝０．１９０２、ｐ＝０．８５０８）及びベヒクルで治療したＷＴマウス（ｔ＝０．３９８２、ｐ＝０．６９４１）の両方に関して有意に異ならないことを明らかにした。ＴＳＡで治療したＷＴマウスは、ベヒクルで治療したＷＴマウスと比較して竦みの僅かな非有意な増加を示した［ＴＳＡ治療ＷＴマウス：３６．９５±６．４３％；ｎ＝１３（メス１１匹プラスオス２匹）；ｔ＝０．６３１６、ｐ＝０．５３３６、図１８］。本出願人等は、次に海馬非依存性課題である［Ｂ４６］手懸り付き恐怖条件づけを試験し、そして四つの群間で竦み行動の差を見出さなかった（両方の前ＣＳ群において、Ｆ３，２５＝０．８７６３、ｐ＝０．４６６６、及びＣＳ群においてＦ３，２４＝０．６３９８、ｐ＝０．５９６８）。この結果は、主として手懸り付き条件づけに関係し、そしてＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて正常であることが知られた扁桃体の機能が、以前に証明されたように［Ｂ５３］、ＴＳＡによるＨＤＡＣの阻害によって影響されないことを示す。まとめると、これらのデータは、ヒストンアセチル化の阻害が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける正常な連合記憶を再確立することが可能であり、一方更に正常なシナプス可塑性を回復することを示す。
[00304]ＨＤＡＣ阻害は、Ａβ上昇による連合記憶の欠損を救済する。 ＡＰＰ及びＰＳ１遺伝子導入は、Ａβによる直接的影響を含む異なった機構［Ｂ２３、Ｂ２４］によってニューロン機能に影響することができる。全長のＡＰＰ及びその開裂産物は、Ｈ４アセチル化に異なって影響することができる。Ａβの影響をＡＰＰ及びＰＳ１の過剰発現の他の影響と分離するために、本出願人等は、次にＡβ自体が、遺伝子導入マウスにおける本出願人等の研究において観察された、Ｈ４アセチル化の欠損の原因であるか否かを決定した。ヒトＡβの天然のオリゴマーが、ｉｎ ｖｉｖｏの記憶を顕著に阻害することが既に記載されているため［Ｂ５４、Ｂ５５］、本出願人等は、オリゴマーのＡβ４２含有する製剤（１μｌの体積中の２００ｎＭ、両側的に、１分かけてゆっくり）を、背部海馬に（図２４Ａ−Ｂ）、恐怖条件づけのための訓練の１５分前にＴＳＡ又はベヒクルの注射（２ｍｇ／ｋｇ体重、訓練の２時間前、ｉ．ｐ．）と共に適用した。注入は、背部海馬へのカニューレの植込み後５−７日目に起こった。本出願人等は、恐怖条件づけの訓練期中のマウスの四つの群間で竦み行動の差を見出さなかった（Ｆ３，４１＝０．０４１８８、ｐ＝０．９８８４、ｎ＝８−１４／群；図２４Ｃ）。２４時間後、竦み行動は、状況的学習の解析において、ベヒクル注入マウスと比較して、Ａβ注入マウスにおいて減少した（Ｆ３，４１＝０．０４１８８、ｐ＝０．０２０９、ｎ＝８−１４／群；図２４Ｃ）。Ａβ注入マウスにおける竦みは、ベヒクル注入マウスのそれの約２５％であった［Ａβ注入マウス：８．５８０±２．１１９％対ベヒクル注入マウス：３１．４６±５．３７３％ それぞれｎ＝１２及びオス１１；ｔ＝３．１４７、ｐ＝０．００４９；図２４Ｃ］。然しながら、竦み時間は、ＴＳＡの注射後のＡβ注入マウスにおいて、Ａβ注入マウス（ＴＳＡ＋Ａβで治療されたマウス：２６．１７±４．７４７％ ｎ＝１４オス；ｔ＝３．０６６、ｐ＝０．００５３；図２４）の約３００％に増加した。統計的解析は、ＴＳＡを注射されたＡβ注入マウスにおける竦みが、ＴＳＡを注射された（ｔ＝０．１９０２、ｐ＝０．８５０８）及びベヒクルを注入され、ベヒクルを注射された（ｔ＝０．３９８２、ｐ＝０．６９４１）マウスの両方に関して有意に異ならないことを明らかにした。ＴＳＡで治療されたマウスは、ベヒクルで治療されたマウスと同様な竦みの量を示した［ＴＳＡ治療マウス：２７．０１±７．２４６％；ｎ＝８オス；ｔ＝０．４３３５、ｐ＝０．６７０１、図２４Ｃ］。本出願人等は、次に手懸り付き恐怖条件づけを試験し、そして四つの群間で竦み行動の差を見出さなかった（両方の、前−ＣＳ群において、Ｆ３，５２＝１．５４７、ｐ＝０．２１３５、及びＣＳ群において、Ｆ３，５２＝０．４８３８、ｐ＝０．６９５０）。まとめると、これらのデータは、ヒストン脱アセチル化の阻害は、Ａβ上昇後の正常な連合記憶を再確立することが可能であることを示す。
[00305]ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、学習課題に反応するヒストン４アセチル化の減少した内在性レベルを示す。 ＨＤＡＣ阻害剤が、ヒストン以外の他の分子をアセチル化すること［Ｂ４９］が知られていることを考慮すると、本出願人等の次の目的は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの恐怖記憶に欠損に対するＴＳＡの影響が、少なくとも部分的に、ヒストンアセチル化のレベルにおけるクロマチンの変化に連結しているか否かを決定することであった。Ｈ４のアセチル化は、転写及び記憶において重要な役割を演じることが示された［Ｂ１９］。従って、本出願人等は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて観察された記憶の欠損が、Ｈ４の変化されたアセチル化に伴われるか否かを求めた。本出願人等は、生後３−４ヶ月の野生型（ＷＴ）及びＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの、恐怖条件づけ後の海馬中のＨ４のアセチル化を測定した。ベヒクル対照溶液をｉ．ｐ．で訓練の２時間前に投与し、そしてその１時間後にマウスを安楽死させ、そして海馬を抽出した。ウェスタンブロット分析は、ＷＴマウスと比較して、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、アセチル化Ｈ４レベルの５０％より多い全体的減少を有していたことを示した（ｔ＝２．７０２、ｐ＝０．０３５５；図２５Ａ）。興味あることに、交互的実験において、クラスＩ／ＩＩのＨＤＡＣ阻害剤のＴＳＡの注射（２ｍｇ／ｋｇ体重；ｉ．ｐ、恐怖条件づけのための訓練の２時間前）は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＨ４アセチル化を向上した（ベヒクルで治療したＡＰＰ／ＰＳ１同腹仔と比較してｔ＝３．２８３、ｐ＝０．０１６８；図２５Ａ）。更に、ＴＳＡで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬中のＨ４アセチル化レベルは、ＴＳＡで治療されたＷＴ同腹仔のレベルと同様であった（ｔ＝０．２１１６、ｐ＝０．８３８５；図５Ａ）。最後に、以前に証明されたように［Ｂ２６］、ＴＳＡは、ＷＴマウスのＨ４アセチル化レベルを、ベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔からの海馬と比較して、増加した；図２５Ａ）（ｔ＝７．６５９、ｐ＝０．０００１）。
[00306]本出願人等は、次に、ＡＰＰ／ＰＳ１マウス中のＨ４の基礎アセチル化レベルに、野生型マウスと比較して、何らかの変化があるか否かを決定することを望んだ。従って、本出願人等は、電気ショックを受けない状況に暴露された生後３−４ヶ月のＷＴ及びＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬中のＨ４のアセチル化を測定した。本出願人等は、二つの実験群間に基礎アセチル化Ｈ４の差を見出さなかった（ｔ＝０．０７６、ｐ＝０．９４２７；図２５Ｂ）。これは、ｉ）変異されたＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現が、状況的恐怖学習後のＨ４アセチル化のレベルの後成的変化に影響すること；及びｉｉ）ＴＳＡが、ＡＤのマウスモデルにおけるヒストン４の減少したレベルを上昇することが可能であることを示した。
[00307]ＰＳ１刺激後の転写に対するＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域の役割。 記憶形成の根底にある機構の研究は、転写因子ＣＲＥＢ及び活性化補助因子ＣＢＰによって仲介されるＣＲＥ依存性遺伝子発現に対する中心的役割を規定している。ＣＢＰは、ＣＲＥＢ及び基底転写装置間に架橋を作り、そしてヒストンをアセチル化する。次に、ヒストンアセチル化は、染色体の変化を誘導し、染色体の阻止の減少をもたらす（図２３参照）。これは、記憶の形成の根底にあるタンパク質の合成のために必要な根底にある遺伝子の好結果な転写を可能にする。本出願人等は、最近ＣＢＰのＨＡＴ活性が、ＷＴ−ＰＳ１の刺激効果において、全長のＣＢＰが変異（ＷＹ−アミノ酸１５０３−１５０４がアラニン及びセリンによって置換されている）を含有する構築物を使用することによって何らかの役割を有するか否かを試験した。そのＨＡＴ活性を完全に無効にするこの変異は［Ｂ５６］、Ｇａｌ４のＤＮＡ結合領域に連結している（図１９）。全長のＷＴ−ＣＢＰの向上したプロモーター活性と対照的に、ＷＹ−ＣＢＰに伴う活性は観察されなかった（図２０Ａ）。ＷＴ及びＷＹのＧａｌ−ＣＢＰ間の基礎活性に差はなかった（図２０Ｂ）。従って、これらの発見は、ＨＡＴ活性を欠損するＣＢＰ変異体が、増加された転写活性化能力に関してＷＴ−ＰＳ１に反応することが不可能であることを示す。従って、ＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域は、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須であるように見受けられる。
[00308]ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、減少されたＣＢＰレベルを示す。 本出願人等は、次に、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの内因性ＣＢＰレベルを測定することを決定した。生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの海馬からのウェスタンブロット分析は、脳のＣＢＰレベルが、感応性ＰＳを欠損するマウスにおいて減少される観察［Ｂ１５］と一致して、ＷＴ対照と比較したＣＢＰレベルの有意な減少を明らかにした（図２１）。将来の実験において、本出願人等は、変異されたＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現がＣＢＰレベルに影響することを確実に確立する実験の数を増加するためにこれらの結果を複製するものである。
[00309]目的
[00310]１．ヒストン脱アセチル化の阻害が、Ａβ上昇後のシナプス及び記憶障害を救済するか否かを決定すること。
[00311]トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）によるヒストン脱アセチル化の阻害が、ＡＰＰ（Ｋ６７０ＭＮ６７１Ｌ）中のスウェーデン変異を、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ、ライン６．２）中の変異［Ｂ２２］と一緒に発現する遺伝子導入マウスであるＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＴＰ及び状況的恐怖記憶の欠損を救済する［Ｂ２０，Ｂ２１］。本出願人等は、構造的に異なったヒストン−デアセチラーゼの阻害剤の酪酸ナトリウム（ＮａＢ）が、シナプス及び記憶欠損を救済するか否かを今や試験するものである。これらの観察が、アミロイドプラークが丁度形成し始める生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて得られたことを考慮し、本出願人等は、これらを、更に深刻なＡβ沈着物を有する生後７ヶ月の遺伝子導入マウスに拡大するものである。更に、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子がＡβによる直接的影響を含む異なった機構によって［Ｂ２３、Ｂ２４］ニューロン機能に影響することができることを考慮し、本出願人等は、ヒストン脱アセチル化の阻害が、Ａβ自体によって誘導されたＬＴＰ及び状況的恐怖記憶の欠損を救済するか否かを調査するものである。本出願人等は、更に、これらの発見を顕在学習のもう一つの形態である参照記憶に拡大するものである。
[00312]研究の設計及び方法
[00313]原理。 記憶分野の広く受け入れられた概念は、記憶が、シナプス強度の長持ちする変化として脳中に保存されることである。この概念と一致して、ＡＤは、漸進的により大きいニューロンの機能障害に導き、記憶の減少に導くシナプスの疾患として始まると考えられている［Ｂ５７］。理論に束縛されるものではないが、ＨＤＡＣ阻害は、アミロイド上昇後のシナプス可塑性及び記憶の障害に対抗する。本出願人等は、ＴＳＡに加えて、付加的な、そして構造的に異なった阻害剤であるＮａＢでこれを試験するものである。次に、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子が、異なった機構によりニューロン機能に影響する［Ｂ２３、Ｂ２４］ことができることを考慮し、本出願人等は、Ａβ自体が、遺伝子導入マウスに対する本出願人等の研究において観察されたヒストンアセチル化の欠損の原因であるか否かを決定するものである。更に、本出願人等は、本出願人等の発見を、彼らが重度のプラーク負荷を有する場合［Ｂ５０］、年とったＡＰＰ／ＰＳ１マウスに拡大するものである。最後に、本出願人等は、本出願人等の発見を、恐怖記憶に加えて、顕在学習のもう一つの形態である参照記憶に拡大するものである。理論に束縛されるものではないが、ヒストン脱アセチル化の阻害は、オリゴマーのＡβの上昇によって起こされるシナプス及び記憶の機能障害に対して有益である。
[00314]実験の設計。 本出願人等は、図１７及び図１８に記載された電気生理学的及び行動的発見を、構造的に異なった阻害剤であるＮａＢを使用して確認するものである。ＴＳＡ実験に関して、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの切片を、ＮａＢ（３００μＭ）で３０分間治療してから、ＬＴＰを誘導するためにシータバースト刺激を適用するものである。対照は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウス、及びＮａＢ又はベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔マウスからの切片で行われるものである。ＴＳＡと同様に、本出願人等は、更にＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける正常な状況的恐怖記憶を再確立するか否かを点検するものである。これらの行動実験において、マウスを、四つの群：ＮａＢを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ベヒクルを伴うＡＰＰ／ＰＳ１、ＮａＢを伴うＷＴ及びベヒクルを伴うＷＴに分けた。対照は、更にＨＤＡＣ阻害剤が、新規な状況単独又はこれら間の結合の代わりの電気ショックの影響によって作用することを除外するための潜在阻害訓練パラダイムを使用して行われるものである［Ｂ２６］。潜在阻害パラダイムにおいて、マウスが連合性の状況的恐怖記憶の形成を遮断する空間的記憶を形成するものであるように、電気ショックを受ける前に新規な状況にマウスを予備暴露するものである［Ｂ２６］。
[00315]本出願人等は、ＡＰＰ及びＰＳ１過剰発現の影響を、Ａβ自体の影響から分離するものである。本出願人等は、ＴＳＡが、オリゴマーのＡβ４２を含有する製剤によって誘導された状況的恐怖記憶の欠損を救済することを既に証明した（図２４参照）。従って、本出願人等は、ＴＳＡが、２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２によって誘導されるＬＴＰの欠損を救済するか否かを決定するものである。ヒトＡβの天然のオリゴマーが、モノマー及び原線維の非存在において、ＬＴＰをｉｎ ｖｉｖｏで顕著に阻害することは既に記載されているため、本出願人等は、２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２を、ＴＳＡ（１．６５μＭ）と同時に３０分間ＷＴ切片に適用してから、ＬＴＰを誘導するものである。交互的な対照実験において、本出願人等は、単独のオリゴマーのＡβ４２、又は単独のＴＳＡ、或いはベヒクルを適用するものである。
[00316]本出願人等は、本明細書中に記載された発見を、ＮａＢ（３００μＭ）プラス２００ｎＭのＡβ４２を３０分間、ＬＴＰを誘導するためのシータ−バースト刺激を適用する前に使用して複製するものである。対照は、ベヒクルで治療された切片で行われるものである。ＴＳＡに関して、本出願人等は、更にＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、Ａβ４２注入マウスにおける状況的恐怖記憶の欠損を救済するか否かを点検するものである。これらの行動実験において、対照は、更にＨＤＡＣ阻害剤が、新規な状況単独又はこれら間の結合の代わりの電気ショックの影響によって作用することを除外するための潜在阻害訓練パラダイムを使用して行われるものである［Ｂ２６］。
[00317]本出願人等は、本明細書中に記載された実験の全てを、年取った（７ヶ月）マウスで、更に重度のプラーク負荷が存在する場合繰返すものであり、そしてシナプスの機能障害は、更にＢＳＴを含む［Ｂ５０］。
[00318]本出願人等は、状況的恐怖記憶に対する本出願人等の発見を、顕在記憶のもう一つの形態の参照記憶に拡大するものである。本出願人等は、最近、非常に短時間を要する利益を有する方法を実行した［Ｂ５８］。この方法は、モーリス水迷路及び放射状アーム陸迷路の複合型である。マウスに対する動機づけは水中の浸漬である。マウスは、中心部から放射状に広がる６個のアレイ（アーム）中を、アームの一つの末端の隠された（沈んだ）プラットフォームを見つけるまで泳ぐ必要があった。目的のアームは、学習基準が２日中に達成されるものであるように、一連の試行に異なった出発アームを伴う全ての試行に対して一定に保たれた。不正なアームへの進入の回数は、ものである。課題の終りに、マウスは、視覚、運動及び動機付けの欠損が実験の結果に影響する可能性を排除するために、見えるプラットフォームの試験を行うものである。これらの実験において、生後３−４及び７ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１並びにＷＴ同腹仔に、ＴＳＡ又はＮａＢを、課題を行う２時間前に投与するものである。ベヒクルを対照実験において使用するものである。参照記憶を評価する同様な実験を、更にＡβ４２注入マウスにおいて行った（これらの実験のために、マウスを次の群：Ａβ４２注入マウス＋ＴＳＡ又はＮａＢ或いはベヒクル、ベヒクル注入マウス＋ＴＳＡ又はＮａＢ或いはベヒクルに分けるものである）。
[00319]理論に束縛されるものではないが、本出願人等は、ＨＤＡＣ阻害が、ＬＴＰ及び記憶の欠損を救済することを示すものである。さもなければ、別の戦略として、本出願人等は、より高い濃度のＨＤＡＣ阻害剤を、又は更に血液脳関門を通過することが示されている［Ｂ５９］ＭＳ−２７５のような構造的に異なったＨＤＡＣ阻害剤を試みるものである。次いで、齧歯類は、本明細書中に記載したような電気生理学的及び行動的試験を受けるものである。理論に束縛されるものではないが、オリゴマーのＡβ４２は、ＬＴＰ及び恐怖記憶を阻害し、そしてＴＳＡが、Ａβ４２治療後のＬＴＰ及び状況的恐怖記憶を回復することを証明するするものである。単独のＴＳＡは、何ら効果を有しない筈である。若いマウス又はＡβ注入マウスからの発見は、生後７ヶ月の遺伝子導入において確認されるべきである。さもなければ、別の戦略として、本出願人等は、試験の１又は４週間前に始まるＨＤＡＣ阻害剤によるより長い治療を試みるものである。最後に、理論に束縛されるものではないが、参照記憶課題による発見は、恐怖条件づけにより得られたものと一致する筈である。そうであれば、これらの結果は、ヒストン脱セチル化の阻害が、一般的にＡＤ様の動物モデルにおいて認知減少に対して有益であることを証明する筈である。さもなければ、これは、これが異なった種類の記憶及びＨＤＡＣ阻害剤の使用間の解離を証明するものであるために、同等に興味あることであるものである。
[00320]急性の海馬切片におけるＬＴＰの根底にある機構を調査する研究は、転写が、２時間前に起こる増強のために必要ないことを示す［Ｂ２６］。然しながら、本出願人等は、ＬＴＰの導入の直後にＴＳＡの効果を観察した（図１７）。この発見は、Ｌｅｖｅｎｓｏｎ等［Ｂ２６］の結果と一致する。彼らが適用したＬＴＰ誘導パラダイムは、誘導又は発現のいずれかに対する転写に依存するＬＴＰの形態を誘導する。これは、転写阻害剤である５，６−ジクロロベンゾイミダゾールリボシド（ＤＲＢ）をＷＴマウスにおいて使用することによって証明された。ＤＲＢは、ＴＳＡ誘導のＬＴＰ増加の初期及び後期の両方を遮断することが可能であり、ＴＳＡによるＬＴＰの初期及び後期の向上の両方が転写調節に依存することを示した［Ｂ２６］。
[00321]ＴＳＡ及び他のＨＤＡＣ阻害剤は、シナプスを、Ａβの影響に対して更に頑強に、そして抵抗性にするように見受けられるＡＤの治療の新しい方法である。ＨＤＡＣ阻害剤の使用に関して、ＨＤＡＣの阻害が、遺伝子発現を包括的に変更し、そして従って非特異的様式で記憶過程に影響することができることが批判されている。然しながら、Ｖｅｃｓｅｙ等［Ｂ５３］は、ＴＳＡが遺伝子発現を包括的に変更せず、しかし代わりに、記憶固定中の特異的遺伝子の発現が増加することを示した。彼らは、ＴＳＡを含むＨＤＡＣ阻害剤が、記憶及びシナプス可塑性を、主としてＣＲＥＢ転写活性化に依存性である重要な遺伝子の活性化によって向上することを示すことが可能であった［Ｂ５３］。従って、ＴＳＡが、Ａβ蓄積の存在中の記憶の低下を停止しすること、並びに生後３ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスの事例のように、すでに劣化された脳の機能を改善することが可能であることができる可能性がある。興味あることに、ＨＤＡＣ阻害剤を使用する脳の‘再配線’及び記憶の回復は、最近、ＣＫ−ｐ２５遺伝子導入マウスにおいて報告された［Ｂ１９］。従って、ＨＤＡＣ阻害剤が、ＡＤの脳にニューロンのネットワークを再確立することが可能であることができることは可能である。これは、ＡＤ患者中のＨＤＡＣを標的とする小分子の使用が、長期の記憶に接近することを容易にすることができることを示す。最小化された副作用を持つＨＤＡＣ阻害剤は、医薬工業界によって現時点で開発されつつある。これらの新しい阻害剤が、容易に脳に進入することができ、そしてこれらがＴＳＡと同様に有効であるか否かを見ることが残されている。
[00322]ＨＤＡＣ阻害剤は、後成的及び非後成的変化を含む各種の機構によってニューロンの機能に影響することができる［Ｂ１９、Ｂ６０］。従って、ＨＤＡＣのクラスＩ／ＩＩのブロックは、非ヒストン基質のアセチル化を増加することができ、これは次に、記憶に伴う細胞の過程の増幅に寄与することができる。Ｇｒｅｅｎ等［Ｂ４９］は、クラスＩＩＩのＮＡＤ＋依存性ＨＤＡＣのビタミンＢ３を使用する阻害が、三重遺伝子導入マウスの認知欠損を、細胞質中のＴｈｒ２３１−ホスホｔａｕの減少に関係する機構によって回復することを示した。
[00323]２．ヒストン２Ｂ、３及び４が、Ａβ上昇後異常にアセチル化されるか否かを決定すること。
[00324]生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬は、恐怖条件づけ訓練後、記憶の形成において重要であることが示されているアセチル化である、アセチル化されたヒストン４（Ｈ４）レベルの概略５０％の減少を示した［Ｂ１９］。将来の実験において、本出願人等は、これらが更に転写及び記憶において重要な役割を演じる［Ｂ１９、Ｂ２５、Ｂ２６］ために、本出願人等の調査をヒストン２Ｂ及び３に拡大するものである。更に、本出願人等は、更に重度のプラーク負荷を持つ年取った遺伝子導入マウスを試験するものである（生後７ヶ月）。最後に、Ａβの影響をＡＰＰ及びＰＳ１の過剰発現の他の影響から分離するために、本出願人等は、海馬へのＡβ注入が、ヒストン２Ｂ、３及び４のアセチル化に影響するか否かを検討するものである。
[00325]研究の設計及び方法
[00326]原理。 変異されたＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現は、状況的恐怖学習中に起こったＨ４アセチル化の変化に影響する（図２５参照）。更に、ＴＳＡによるＨＤＡＣ阻害は、ＡＤマウスモデルにおけるＨ４の減少したレベルを、上昇することが可能である。理論に束縛されるものではないが、ヒストンアセチル化のレベルにおける後成的機構は、ＡＤにおける学習及び記憶を障害することができる。学習及び記憶中のアセチル化の変化を受ける更なるヒストンは、Ｈ２Ｂ及びＨ３である［Ｂ１９、Ｂ２５］。従って、将来の実験において、本出願人等は、これらのヒストンに対する本出願人等の研究を拡大するものである。更に、本出願人等は、構造的に異なったヒストン−デアセチラーゼの阻害剤のＮａＢを試験するものである。次に、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子がニューロンの機能に異なった機構によって影響することができる［Ｂ２３、Ｂ２４］ことを考慮し、本出願人等は、Ａβ自体が、本出願人等の遺伝子導入マウスに対する研究において観察されたヒストンアセチル化の欠損の原因であるか否かを決定するものである。最後に、本出願人等は、本出願人等の発見を、年とったＡＰＰ／ＰＳ１マウスに、これらが重度のプラーク負荷を有する場合、拡大するものである［Ｂ５０］。
[00327]実験の設計。 本出願人等は、生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ同腹仔の海馬中のＨ２Ｂ及びＨ３のアセチル化を、基礎条件及び恐怖条件づけのための訓練後の両方で、ＴＳＡ（２ｍｇ／ｋｇ体重；ｉ．ｐ、恐怖条件づけのための訓練の２時間前）又はベヒクルを伴ってＨ４に関して測定するものである。対照は、ヒストン修飾が、新規な状況単独又はこれら間の結合の代わりの電気ショックのためであることを除外するために、潜在阻害訓練パラダイムを使用して行うものである［Ｂ２６］。犠牲の直後に、脳組織を解剖し、そしてそれぞれのマウスからの二つの海馬を集め、そして後刻の均一化及び分析のために瞬間冷凍するものである。更なる対照は、小脳を使用するものである。
[00328]本出願人等は、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、更に、本明細書中の実施例６に記載されるＴＳＡ実験と同じ実験パラダイム及び対照におけるＨ２Ｂ、３及び４のアセチル化を回復することが可能であるか否かを試験するものである。
[00329]本出願人等は、ＷＴマウスの背部海馬へ注入された２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２の存在中のＨ４、２Ａ及び３のアセチル化を、ベヒクル注入マウスと比較して測定するために、本明細書中の実施例６に記載される実験の全てを繰返すものである。対照は、潜在阻害訓練パラダイムを使用して、そして更に小脳を使用して行うものである。
[00330]実施例６における発見は、構造的に異なったＮａＢで確認されるものである。ＴＳＡ実験に関して、本出願人等は、ＮａＢ（１．２ｇ／Ｋｇ）が、Ａβ４２注入マウスの正常なヒストンアセチル化レベルを再確立するか否かを検査するものである。更に、これらの実験のために、対照は、ベヒクル注入マウスで、そして潜在阻害訓練パラダイム、並びに小脳を使用して行うものである。
[00331]本出願人等は、本出願人等が、深刻なアミロイド負荷が起こった場合のヒストンアセチル化のレベルを回復することができるか否かを、更に調査するものである。ＡＤの病態の進行した段階においてＨＤＡＣ阻害剤を使用する治療的可能性に直接関係するこの問題に対処するために、本出願人等は、本明細書中に記載される実験を、年とったＡＰＰ／ＰＳ１マウス（７ヶ月）に対して繰返すものである。
[00332]理論に束縛されるものではないが、オリゴマーのＡβ４２は、Ｈ４アセチル化レベルに影響するものであり、そしてオリゴマーのＡβ４２は、ヒストン２Ｂ及び３のアセチル化レベルに対して遺伝子導入マウスと同じ効果を生じるものである。さもなければ、本出願人等は、Ａｌｚｅｔ浸透圧ミニポンプによる、２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２の更に延長した適用（１日、１週間、１ヶ月）を試みるものである。Ａβ４２を含有する合成製剤の使用に関する問題は、天然の形態のＡβを産生する遺伝子導入マウスに使用によって大きく緩和される。Ｈ２Ｂ及び３に対する研究は、ヒストンアセチル化のレベルにおいて起こる後成的変化の種類の更に完全な概念を提供するものである。最後に、年とったマウスにおける研究は、ＨＤＡＣ阻害剤が、古い疾病の段階において使用することができるか否かを理解することを援助するものである。まとめれば、本明細書中に記載される研究は、Ａβ上昇後に起こる事象としての後成的変化を確立することを援助するものである。
[00333]ヒストンアセチル化に加えて、リン酸化、ＳＵＭＯ化、ユビキチン化、及びメチル化のような他のヒストンの翻訳後修飾（ＰＴＭ）は、転写を制御することが示された［Ｂ７］。例えば、Ｈ３ Ｌｙｓ４メチル化及びＨ３ Ｌｙｓ５６アセチル化のような活性遺伝子転写に伴うヒストン修飾は、遺伝子発現に導くことが見いだされた。然し、Ｈ３ Ｌｙｓ２７メチル化及びＨ２Ａ Ｌｙｓ１１９ユビキチン化のような遺伝子転写の不活性化に伴うヒストン修飾は、遺伝子発現抑制を起こすことが見いだされた。マウスにおいてＡβ４２のオリゴマーの形態への慢性的ニューロンの暴露の結果としてＰＴＭが修飾される。記載される（図２４参照）ように、２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２が、ＷＴマウスの背部海馬に注入されるものである。Ａβ４２注入マウスの海馬を取出し、そしてベヒクル注入マウスのそれと比較されるものである。本出願人等は、質量分光法を、免疫沈降された海馬のＨ２Ｂ、３及び４を使用して実行し、そしてＡβ注入マウス及びベヒクル注入マウス間の異なったヒストンＰＴＭを探求するものである。非特異的効果を制御するために、本出願人等は、ＡＤに直接関係しない十分に研究された神経毒のガンマアセチレン性ＧＡＢＡを、本出願人等が注入した三番目の群のマウスを有するものである。次いで本出願人等は、本出願人等のＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデルにおいて幾つかの最も興味あるヒストンのＰＴＭを試験するものである。これらのマウスは、このヒストンのＰＴＭが起こった場合、生後１ヶ月（プラーク形成の前）、２ヶ月（プラークが形成し始める時）、３−４ヶ月（プラーク形成の初期）、及び７ヶ月（プラーク形成の後期）に犠牲にされるものである。理論に束縛されるものではないが、減少したヒストンアセチル化のような後成的変化は、ＡＤに伴うシナプス機能及び記憶のＡβ誘導の損傷において重要な役割を演じる可能性がある。
[00334]３．ヒストンアセチル−トランスフェラーゼＣＢＰのレベル及び／又は活性が、Ａβ上昇後改変されるか否かを決定すること。
[00335]ＣＢＰのＨＡＴ活性は、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須である。更に、生後３−４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１マウス中のＣＢＰレベルは、ＷＴマウスより低いことが見いだされた。将来の実験において、本出願人等は、この観察を、年とった遺伝子導入マウスに対して、そして海馬のＡβ注入後に拡大するものである。更に、本出願人等は、ＣＢＰのＨＡＴ活性が、若い及び年とったの両方のＡＰＰ／ＰＳ１マウスににおいて、並びにＡβ注入後に影響されるか否かを決定するものである。最後に、本出願人等は、最近合成されたＨＡＴアゴニストのＭＯＭによるＨＡＴ活性の刺激が、Ａβ上昇後のＬＴＰ、記憶、及びヒストンアセチル化の欠損を救済するか否かを決定するものである。
[00336]研究の設計及び方法。
[00337]理論。 内因性ＣＢＰレベルは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて減少される（図２１参照）。これらのデータは、脳のＣＢＰレベルが機能性ＰＳを欠損するマウスにおいて減少するという観察と一致する［Ｂ１５］。更に、ＣＢＰ及びそのＨＡＴ領域が、ＰＳ１刺激後のｉｎ ｖｉｔｒｏの転写を向上するために必須であるように見受けられることを考慮し（図２０参照）、本出願人等は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの基礎条件及び状況的学習のための訓練の１時間後の両方におけるＣＢＰのＨＡＴ活性を、ＷＴ同腹仔と比較して直接測定するものである。本出願人等が、ＣＢＰレベル及び／又はＨＡＴ活性の両方の減少を見出した場合、本出願人等は、更にＨＡＴアゴニスト［Ｂ６１］の使用が、状況的恐怖記憶及びヒストンアセチル化の欠損を救済するか否かを検査するものである。次に、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子が、異なった機構によって［Ｂ２３、Ｂ２４］ニューロンの機能に影響することができることを考慮し、本出願人等は、Ａβ自体が、遺伝子導入マウスにおいて観察されたＣＢＰレベル及び／又は活性の欠損の原因であるか否かを決定するものである。最後に、本出願人等は、本出願人等の発見を年とったＡＰＰ／ＰＳ１マウスに、これらが重度のプラーク負荷を有した場合、拡大するものである［Ｂ５０］。まとめれば、ＣＢＰレベル及び／又は活性が、Ａβ上昇後に変化するか否かに加えて、ＣＢＰレベル及び／又は活性が、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現後に変化されるか否かを評価するものである。研究者は、ＨＡＴアゴニストが、シナプス及び記憶機能、並びにヒストンアセチル化の欠損を救済するか否かを試験するものである。
[00338]実験の設計。 本出願人等は、生後４ヶ月のＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ同腹仔の海馬中のＣＢＰレベルを測定するものである。犠牲の直後に、脳組織を解剖し、そしてそれぞれのマウスからの二つの海馬を集め、そしてその後の均質化及び分析のために瞬間冷凍するものである。更なる対照は、小脳を使用するものである。
[00339]本出願人等は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの基礎条件及び状況的学習のための訓練の１時間後の両方におけるＣＢＰのＨＡＴ活性を、そのＷＴ同腹仔と比較して直接測定するものである。対照は、ＣＢＰのＨＡＴ活性の変化が、新規な状況単独又はこれら間の結合の代わりの電気ショックのためであることを除外するために、潜在阻害訓練パラダイムを使用して行うものである［Ｂ２６］。更なる対照は、小脳を使用するものである。
[00340]Ｎ−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−２−エトキシ−ベンズアミド（ＣＴＢ又は更に化合物６Ｊとも呼ばれる）［Ｂ６１］のようなＨＡＴアゴニストを合成した。もう一つのベンズアミドＨＡＴアゴニストのＭＯＭは、ＨＡＴ活性の上方制御が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＴＰ、状況的恐怖記憶及びヒストンアセチル化の欠損を救済するか否かを検査するために合成された。本出願人等は、化合物を合成し（図２６Ａ）、そしてこれがヒストンアセチル化を誘導することを示した（図２６Ｂ）。本出願人等は、ＭＯＭが、本明細書中に記載されたものと同じ実験パラダイムに従って、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスからの海馬切片中のＬＴＰ欠損を救済するか否かを試験するものである。ＭＯＭ（１０μＭ）又はベヒクルを、θ−バーストによりＬＴＰを誘導する３０分前に適用するものである。ＭＯＭ又はベヒクルで治療されたＷＴ同腹仔の切片を、対照として使用するものである。次に、本出願人等は、アゴニストが、本明細書中に記載したものと同じ実験パラダイムに従ってＡＰＰ／ＰＳ１マウスの状況的恐怖記憶の欠損を救済するか否かを検査するものである。本出願人等は、更にＭＯＭが、正常な参照記憶を再確立するか否かを検査するものである。
[00341]ＭＯＭが、血液脳関門を通過しないことを考慮し、これを海馬中に直接供給するために、カニューレをＡＰＰ／ＰＳ１マウス及びＷＴ同腹仔の背部海馬に植込むものである。本出願人等は、１μｌ中の１００μｇをゆっくりと１分かけて注入するものである。注入は、恐怖条件づけのための脚部ショックを適用する２時間前に起こるものである。本明細書中に記載される実験のように、本出願人等は、２４時間における竦みの量を状況的恐怖記憶を、続いて４８時間における手懸り付き恐怖記憶を評価するために測定するものである。次に、水迷路実験のために、本出願人等は、不正なアームへの進入の回数を測定するものである。最後に、実験の別の組において、海馬及び小脳を、恐怖条件づけのための訓練の１時間後に取出すものであり、そしてヒストンアセチル化のレベルを測定するものである。本出願人等が、ＭＯＭが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＴＰ及び記憶の欠損、並びに海馬のヒストンアセチル化を救済することを見出した場合、本出願人等は、ＨＡＴアゴニストが、ＡＰＰ及びＰＳ１導入遺伝子の過剰発現後のＬＴＰ、記憶及びヒストンアセチル化を回復することができると結論するものである。プロトコルは、更にＨＡＴ活性化剤のＣＴＢの効果を試験するためにも行われるものである。
[00342]ＣＢＰレベル、ＨＡＴ活性、並びにＭＯＭ及びＣＴＢの使用を含む本明細書中に記載される実験の全ては、ＷＴマウスの背部海馬に注入された２００ｎＭのオリゴマーのＡβ４２の存在中で、ベヒクル注入マウスと比較して繰返されるものである。
[00343]本出願人等は、更に本出願人等が、深刻なアミロイド負荷が起こった場合のＣＢＰレベル及び／又はＨＡＴ活性の欠損を回復することができるか否かを調査するものである。この問題に対処するために、本出願人等は、本明細書中の実施例６に記載される実験を年とったＡＰＰ／ＰＳ１マウス（７ヶ月）において繰返すものである。
[00344]Ａβ４２を含有する合成製剤の使用に関する問題は、Ａβの天然の形態を産生する遺伝子導入マウスの使用によって大いに緩和される。ＣＢＰレベルを検査する実験が行われるものである。然しながら、ＣＢＰレベルが影響しない場合、本出願人等は、核画分からのＣＢＰを測定することによる別の戦術を使用するものである。ＣＢＰ分布の変化は、Ｆ１１細胞において観察されている。ＣＢＰは、殆どＷＴ−ＰＳ１を過剰発現している細胞の核中に見出され、一方、ＰＳ１の変異体型を過剰発現している細胞は、細胞質及び核の両方においてＣＢＰを示す［Ｂ１８］。従って、本出願人等は、ＣＢＰ局在化の変化が、ＡＤの発症において役割を演じることができるか否かを決定することが可能である筈である。
[00345]ＣＢＰのＨＡＴ活性が変化するか否かを予測することは困難である。更に、ＣＢＰのＨＡＴ活性の変化が、恐怖条件づけのための訓練後の規定された時間に起こる可能性を除外することはできない。従って、本出願人等は、電気ショック後の異なった時点（１分、５分、２０分及び２時間）における海馬のＨＡＴ活性を更に測定するものである（本明細書中に記載される実験と同様な対照と共に）。従って、Ａβ上昇後の転写装置のレベルにおいて起こる変化の概念を得ることが可能な筈である。
[00346]本出願人等は、ＨＡＴアッセイ（基底、脚部ショックの１分、５分、２０分及び１時間後）のような実験パラダイムを使用して、海馬に対する新しい蛍光定量アッセイによって海馬のＨＤＡＣ活性を測定するものである。更なる別の可能性は、他のＨＡＴが、ヒストンアセチル化の減少に関係することである。これらは、ＧＮＡＴファミリー、ＭＹＳＴファミリー、ｐ３００、及びＡＣＴＲ／ＳＲＣ−１を含む。本出願人等は、これらのＨＡＴのレベル及び活性を測定するものである。
[00347]最後に、ＭＯＭ又はＣＴＢが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウス、並びにＡβ注入マウスにおけるＬＴＰ、記憶及びヒストンアセチル化の欠損を救済しない可能性を排除することはできない。そうであれば、別の戦略として、本出願人等は、試験の１週間前、又はプラーク出現前の生後６週間に始まる、ＨＡＴアゴニストによるより長期の治療を、二重遺伝子導入マウスにおける実験のために試みるものである。
[00348]実施例の一般的方法
[00349]動物。 二重遺伝子導入マウスを、ＡＰＰ及びＰＳ１マウスを交雑することによって得るものである（ＰＣＲによって遺伝子型を同定）［Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ５０］。Ａβ実験のために、本出願人等は、繁殖コロニーから得られるものであるＣ５７Ｂ１６マウスを使用するものである。全てのマウスを、温度及び湿度を調節された部屋内で、１２時間の明／暗サイクル（午前６：００に点灯）に維持するものである。食糧及び水は、自由に使用可能であるものである。
[00350]電気生理学的研究。 本出願人等は、Ｃ５７Ｂ１６マウスから４００μｍの海馬切片を切断し、そしてこれらを、以前に報告されているように［Ｂ１１］記録前に、インターフェースチャンバー中で２９℃で９０分間維持するものである。浴溶液は、１２４．０ｍＭのＮａＣｌ、４．４ｍＭのＫＣｌ、１．０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、２５．０ｍＭのＮａＨＣＯ３、２．０ｍＭのＣａＣｌ２、２．０ｍＭのＭｇＳＯ４、及び１０．０ｍＭのグルコースからなり、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で連続して泡立てられるものである。刺激電極として、本出願人等は、シャファー側枝繊維のレベルに置かれた双極のタングステン電極を使用するものである。記録電極として、本出願人等は、浴溶液で満たされ、そしてＣＡ１の放線状層のレベルに置かれたガラスピペットを使用するものである。本出願人等は、最初ｆＥＰＳＰの傾斜に対する刺激電圧をプロットするために、基礎シナプス伝達（ＢＳＴ）を評価し、そして本出願人等のＬＴＰ実験の刺激の強度を決定するものである（これは最大誘発反応の約３５％の反応を誘発する筈である）。ＬＴＰに対する基線は、１５分間、毎分記録されるものである。ＬＴＰは、θ−バースト刺激を使用して誘発されるものである（５Ｈｚで繰返されるバーストを伴う１００Ｈｚの４回のパルス、及びそれぞれの強縮が１５秒離れた３回の１０回バーストの繋がりを含む）。
[00351]恐怖条件づけ。 状況的恐怖条件づけは、以前に記載されているように［Ｂ１４、Ｂ２１］評価されるものである。マウスは、音（ＣＳ）（３０秒間、２８００Ｈｚで８５ｄＢの音響）の開始の２分前に、条件づけ部屋に入れられるものである。ＣＳの最後の２秒において、マウスは、２秒間、０．４５ｍＡの脚部ショック（ＵＳ）を、床の棒を通して与えられるものである。次いで、マウスは、更に３０秒間条件づけ部屋に放置されるものである。呼吸のために必要あるためを除く動きの非存在として定義される竦み行動は、Ｆｒｅｅｚｅｖｉｅｗソフトウェアを使用して採点されるものである。海馬機能が不可欠である記憶の種類である状況的恐怖学習は、訓練の２４時間後、マウスが訓練されるものである部屋中の５分間の竦みを測定することによって評価されるものである。扁桃体機能に依存する記憶の種類である手懸り付き恐怖学習は、状況的試験の２４時間後に、マウスを新規な状況に２分間置き（前−ＣＳ試験）、その後、彼らをＣＳに３分間暴露するものであり（ＣＳ試験）、そして竦みが測定されるものであることによって評価されるものである。
[00352]ショックの知覚認知は、閾値評価によって決定されるものである。簡単には、電流（１秒間０．１ｍＡ）が、３０秒間隔で０．１ｍＡずつ０．７ｍＡまで増加されるものである。尻込み（ショックに対する最初の可視反応）、跳躍（最初の極端な運動反応）、及び叫び（最初の音声化苦痛）に対する閾値を、脚部ショックに対して、それぞれのマウスがその種類の行動的反応を顕在化するショック強度を平均することによって、それぞれのマウスに対して定量化するものである。知覚閾値評価における差は、実験方法がマウスの知覚閾値に影響しない場合、恐怖条件づけが試験された実験におけるマウスの異なった群間で観察されない筈である。
[00353]更に、マウスの異なった群は、オープンフィールド試験で検査されるものである。オープンフィールドは、７２×７２×３３ｃｍの内部寸法を持つ白色アクリルで製造された競技場であるものである（オープンフィールドの中心の３６×３６ｃｍの寸法の部分は‘中心ゾーン’と定義されるものである）。マウスは、標準オープンフィールドの中心に置かれ、そしてその行動は、１時間モニターされ、そして中心区画対周辺中の時間の部分、及び中心区画への進入の回数を採点されるものである。マウスは、２４時間後の第２の時間ブロックのために戻されるものである。中心区域で過ごした時間の同様なパーセントで示されるような探索的行動、及び中心区域への進入の回数の差は、処置がマウスの探索能力に影響しない場合、観察されない筈である。
[00354]参照記憶。 プロトコルの最初の日は、訓練日であるものである。マウスは、プラットフォームの位置を目的のアームの見える及び隠されたプラットフォームの両方間で変更することによって同定することを訓練されるものである。一日目の最後の３回の試行及び二日目の全ての１５回の試行は、目的のアームの位置を同定するために空間的手懸りを使用するようにマウスを強制するために、隠された逃避プラットフォームを使用するものである。消耗する実行によって課される学習の制約を回避し、そして連続した試行の結果であることができる疲労を回避するために、４匹のコホートのマウスを試験し、そして毎日の３時間の試験時間をかける１５回の訓練の試行を通して異なったコホートに変更することによる間隔を置いた実行の訓練を確立するものである。一日目に、目に見えるプラットフォームを目的の位置に置くものである。コホート１のマウス１を、一番目の出発アーム（採点表に規定された）の壁の周囲に近いプール中に静かに入れ、そしてプールの中心に向けるものである。不正なアームへの進入（プラットフォームのないアームへの進入）の回数を数えるものである。マウスが不正なアームに進入した場合、これは出発アームに静かに引き戻される。それぞれの試行は、１分まで継続するものである。１５秒後のアームの選択の失敗は、誤りとして数えられるものであり、そしてマウスは出発アームに戻されるものである。１分後、プラットフォームを見つけられなかった場合、マウスを、手をその後ろにおくことによって、これをプラットフォームに向けて水中を静かに案内するものである。マウスは、プラットフォーム上で１５秒間休憩するものである。試行を完了した後、マウスをプールから出し、穏やかにタオルで拭き、そして加熱ランプ下のそのケージに戻すものである。目的のプラットフォームの位置は、それぞれのマウスに対して異なっているものである。第一のコホートの全てのマウスが、見えるプラットフォームを見つける試行を行った後、プラットフォームを見えるものから隠されたものに取り換えるものである。コホート１からのそれぞれのマウスが、見える及び隠されたプラットフォーム間の６回の交互の試行を完了した後、マウスを加熱源下で休憩するままにするものであり、そして第２のコホートのマウスを同じ方法で試験するものである。６回の交互の試行を完了した後、コホート２のマウスをそのケージに戻して、休憩させるものである。次に、第１のコホートのマウスは、再び交互の見える−隠されたプラットフォームの位置を使用して試行７−１２を完了するものである。第１のコホートのマウスの休憩時間中に、第２のコホートのマウスが試行７−１２を完了するものである。この時点で、全てのマウスが３回の隠されたプラットフォームの試行を行わなければならないものである。二日目、隠されたプラットフォームのみを使用する全ての１５回の試行に対して、一日目と同じ方法を繰返すものである。データ解析のために、誤りの回数を統計的ソフトウェア（ＳＡＳ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬによるＳｔａｔｖｉｅｗ）にインプットするものであり、そしてそれぞれのマウスの平均を、３回の試行のブロックを使用して計算するものである。記載［Ｂ５８］されるように、本出願人等は、マウスが、二日目の終りに近い３回の試行にわたって１回又はそれより少ない誤りを示すものであることを予測する。学習に失敗したマウスは、訓練セッションを通して３−５回の誤りを犯し、試行による改善がないものである。
[00355]課題の終りに、マウスの視覚、運動及び動機付け技術を試験するために、可視プラットフォーム訓練が使用されるものである。プラットフォームに到達する時間及び泳ぐ速度の両方が記録され、そしてビデオ追跡装置（ＨＶＳ ２０２０，ＨＶＳ Ｉｍａｇｅ，ＵＫ）で分析されるものである。
[00356]注入技術。 ２０ｍｇ／ｋｇのアバチンによる麻酔後、マウスの海馬の背部に２６番ゲージのガイドカニューレを植込むものである（座標：Ｐ＝２．４６ｍｍ、Ｌ＝１．５０ｍｍ、深さ１．３０ｍｍ）［Ｂ６２］。カニューレは、アクリルの歯科用セメント（Ｐａｌａｄｕｒ）で頭蓋骨に固定されるものである。６−８日後、本出願人等は、２００ｐＭのＡβ４２、又はベヒクルを、１μｌの最終体積で１分かけて、ポリエチレン管によってマイクロシリンジに接続されるものである注入カニューレを通して両側的に注射するものである。モーリス水迷路のために、マウスにそれぞれのセッション及び探索試行を行う２０分前に注射するものであり、一方恐怖条件づけのために、マウスは、訓練の２０分前に一回の注射を受けるものである。マウスは、行動実験の前の３日間、一日一回処理されるものである。注入中、マウスは、ストレスを最小にするために静かに処理されるものである。注入後、針は、拡散を可能にするために更に１分その位置に残されるものである。行動試験後、４％のメチレンブルーの溶液がカニューレに注入されるものである。マウスは犠牲にされ、そしてその脳が取出され、冷凍され、そして次いで注入カニューレの組織学的所在のためにクライオスタットにより−２０℃で切断されるものである。
[00357]Ａβの調製。 オリゴマーのＡβ４２は、記載されている［Ｂ６３、Ｂ６４］ように、商業的に入手可能な合成ペプチド（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｃｏ）から調製されるものである。簡単には、凍結乾燥されたペプチドを、冷１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール（ＨＦＩＰ，Ｓｉｇｍａ）中に再懸濁し、そしてポリプロピレンバイアル中にアリコート化するものである。２４時間後、ＨＦＩＰ溶液を、ペプチドの薄いフィルムがバイアルの底に形成されるまでドラフト中で蒸発させるものである。ペプチドのフィルムを、穏やかな真空中で乾燥し、そして密封したバイアル中で−２０℃で保存するものである。使用前に、無水のＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）を加えて、純粋なＡβ／ＤＭＳＯ溶液を得るものであり、これを１０分間超音波処理するものである［Ｂ６３］。オリゴマーのＡβ４２は、滅菌のＰＢＳ中のモノマーのＡβ／ＤＭＳＯ溶液のアリコートを４℃で一晩インキュベートすることによって得られるものである。これらのＡβ製剤の量は、ウェスタンブロット分析を使用して日常的に制御されるものであり、ここにおいて、Ａβ試料は、トリス−トリシンＰＡＧＥによって、非変性／非還元性条件下で溶解され、そして次いでニトロセルロース膜に移されるものである。その後のウェスタンブロットは、抗ヒトＡβモノクローナル抗体６Ｅ１０（Ｓｉｇｎｅｔ Ｌａｂ）との膜のインキュベーション後に行われるものである。免疫染色は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ化学発光によって明らかにされるものである。
[00358]ヒストンアセチル化アッセイ。 ウェスタンブロットは、液体窒素中で瞬間冷凍された海馬及び小脳から行われるものである。組織は、溶解緩衝液（ｐＨ６．８の６２．５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、３％のＳＤＳ、１ｍＭのＤＴＴ）中で均質化され、そして４℃で１０分間インキュベートされ、次いで超音波処理されてから、２，０００ｒｐｍで５分間遠心されるものである。全細胞抽出物を、１０−２０％の勾配のＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で電気泳動し、そして次いで免疫ブロットするものである。抗体は、免疫ブロットのために１：１，０００の濃度で使用されるものである。全ての抗ヒストン抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入されるものである。β−ＩＩＩ−チューブリン抗体は、Ｐｒｏｍｅｇａから購入されるものである。免疫ブロットのデータは、バンド強度を、画像化ソフトウェア（ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪ）を使用して測定することによって定量化されるものである。定量的免疫ブロット分析のために、等量のタンパク質がそれぞれのレーンに付加されるものである。等しい付加を確認するために、ブロットは、対応するｐａｎ−抗体又はβ−ＩＩＩ−チューブリンのようなハウスキーピング抗体と共に再検出されるものである。定量化のために、本出願人等は、常に直線範囲のシグナルを使用する。
[00359]質量分析法。 免疫沈降されたヒストンの修飾の特徴づけは、質量分析によって行われるものである。免疫沈降されたヒストンは、ＰＳＲ中の逆相ＨＰＬＣ又はＳＤＳ−ＰＡＧＥによって精製され、次いで酵素的消化にかけられるものである。得られたペプチドは、Ｄｉｏｎｅｘ ｎａｎｆｌｏｗ ＬＣを備えたＷａｔｅｒｓ Ｑｔｏｆ質量分析器のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析されるものである。トリプシンを使用する標準的な消化プロトコルは、分析するために小さすぎるペプチドをもたらすヒストンのＮ末端部分のＬｙｓ残基の数のために、実行可能ではない。これは、更に修飾に最も富んだ領域であるために、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析のために最適な大きさ（８００−２０００Ｄａ）のペプチドをもたらす消化プロトコルを使用しなければならない。本出願人等は、Ｌｙｓ残基をプロピオン酸無水物で誘導し、従ってトリプシン消化をＡｒｇのみに制約するものである。本出願人等は、既にこの誘導及び消化方法を組換えヒストンＨ３．１の商業的製剤に対して成功裏に行い、そして質量分析によって容易に分析されるＮ末端領域からのトリプシンペプチドを得ている。ヒストン修飾の相対定量化のために、本出願人等は、安定な同位体標識法［Ｂ６５］を使用して、トリプシンペプチドのカルボン酸基を修飾し、続いて質量分光分析を行うものである。
[00360]ＣＢＰレベルは、ウェスタンブロットで特異的ＣＢＰ抗体を使用して測定されるものである。核画分は、７，７００×ｇで１分間遠心された、均質化された組織から得られたペレット中に含有されるものである。
[00361]ＣＢＰのＨＡＴ活性は、ＣＢＰ抗体を使用する海馬抽出物の溶解からの免疫沈降によって測定されるものである。単離後、ＨＡＴ活性は、アセチル残基を検出するための間接的酵素結合免疫吸着測定アッセイキットを、製造業者（Ｕｐｓｔａｔｅ）の説明書により使用して評価されるものである。
[00362]ＨＤＡＣ活性は、Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ（ＣＡ）からの蛍光定量法を、製造業者の説明書によって使用して測定されるものである。
[00363]統計的解析。 実験は、盲検で行われるものである。結果は、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表示されるものである。有意性のレベルは、ｐ＜０．０５に設定されるものである。結果は、スチューデントｔ検定（対比較）又は繰返し測定に対してＡＮＯＶＡ（多重比較）によって主作用として処理条件を伴って解析されるものである。計画的比較が事後分析のために使用されるものである。行動のために、実験は、均衡がとれた様式で設計されるものであり、そしてマウスは、三つ又は四つの別個の実験の異なった条件のそれぞれで訓練及び試験されるものである。実験は、ＡＮＯＶＡで、主作用としての処理を伴って解析されるものである。
[00364]参考文献
実施例７：ＣＨＮ、Ｕ２５１、ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ、Ａ５４９、Ｈｓ５７８Ｔ、ＣＣＲＦ−ＣＥＭに対する細胞生存率アッセイ
[00365]アッセイパラメーター
読取り：Ｃｅｌｌ−ＴｉｔｅｒＧｌｏ及びＣｙｑｕａｎｔによる細胞増殖、
化合物数：１（ＹＦ２）
濃度：１０種（０．０３、０．１、０．２５、０．５、１、２．５、５、１５、４０及び８０μＭ）
参照化合物：ビンブラスチン（ＶＢＬ）
濃度：１０種
（０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３及び１０μＭ）
薬物治療時間：７２時間
複製：３
溶媒：水性媒体。
[00366]物質及び方法
[00367]細胞及び培養培地： 全ての細胞系を、ＡＴＣＣから購入し、そして拡大され、そして低継代アリコートとしてＣＤＡＳにおいて液体窒素下で保存された。細胞を維持し、そして推奨されそして最適な培養培地（ＡＣＨＮ：ＥＭＥＭ、２ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、１０％のＦＢＳ；Ａ５４９：Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２、１０％のＦＢＳ；Ｕ２５１：ＲＰＭＩ １６４０、２ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、１０％のＦＢＳ；Ｈｓ５７８Ｔ：ＤＭＥＭ、４ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、１Ｕ／ｍＬのウシインスリン、１０％のＦＢＳ；ＣＣＲＦ−ＣＥＭ：ＡＴＣＣ ＲＰＭＩ、２ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、１０％のＦＢＳ；ＮＣＩ−ＡＤＲ−ＲＥＳ：ＲＰＭＩ １６４０、２ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、１０％のＦＢＳ）中で継代した。全ての実験を、２０継代より少なく継代された細胞で行った。最適な播種密度を全ての細胞系に対して決定した。全ての細胞を、ウェル当たり６０００細胞でプレートに入れたＣＣＲＦ−ＣＥＭを除き、ウェル当たり１５００細胞でプレートに入れた。
[00368]薬物： ＹＦ２を、１００％ＤＭＳＯ中の８０ｍＭの原液として供給した。ビンブラスチンを、Ｓｉｇｍａ（カタログ番号Ｖ−１３７７）から購入し、そして１００％のＤＭＳＯ中に１×１０−２Ｍで再懸濁した。両方の薬物の全ての希釈は、最終溶媒濃度が、０．１％を決して超えないように０．２％ＤＭＳＯを含有する培養培地中で行った。
[00369]薬物治療： ＹＦ２を、１０種の濃度（０．０３、０．１、０．２５、０．５、１、２．５、５、１５、４０及び８０μＭ）で三重のウェルで試験した。ビンブラスチンを、参照対照として使用し、そして反対数系列の１０種の濃度（０、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、及び１０μＭ）で試験した。細胞を、適当な濃度で培地中に再懸濁し、そして１８０μｌ（１５００又は６０００細胞）を、それぞれのウェルに加え、それに続いて２０μｌの薬物を最終濃度の１０倍で加えて、所望の濃度をことごとくのウェルで得た。薬物治療プレートを３７℃で７２時間インキュベーとし、それに続いて細胞の生存率を、以下に記載するようなＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ又はＣｙｑｕａｎｔによって分析した。
[00370]Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイ： ７２時間の薬物治療期間後、アッセイプレートを遠心し、そして１００μｌの培地を吸引し、そして１００Ｊ．１ＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と、製造業者の推奨するプロトコルによって置換えた。試薬を細胞と混合し、そして蛍光をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ装置を使用して測定した。アッセイ期間の全長の間インキュベートされた非治療の細胞を含有するウェルから得た平均の蛍光シグナルを、１００％生存率の値を設定するために使用した。増殖のパーセントを、（試験シグナル）／（平均プレートバックグラウンドシグナル）×１００として計算した。生存率の％を、薬物濃度に対してグラフ化して、それぞれの薬物に対するＩＣ５０を計算した。
[00371]Ｃｙｑｕａｎｔアッセイ： 薬物治療期間の７２時間後、アッセイプレートを遠心し、培地を廃棄し、そして一晩冷凍した。プレートをＣｙｑｕａｎｔＴＭ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造業者の推奨するプロトコルによって使用して分析した。アッセイ期間の全長の間インキュベートされた非治療の細胞を含有するウェルから得た平均の蛍光シグナルを、１００％増殖の値を設定するために使用した。増殖のパーセントを、（試験シグナル）／（平均プレートバックグラウンドシグナル）×１００として計算した。増殖の％を、薬物濃度に対してグラフ化して、それぞれの薬物に対するＩＣ５０を計算した。
実施例８： ＹＦ２は、ＨＤＡＣ阻害ではなく、ＨＡＴ活性化によって、ヒストンアセチル化を増加する
[00372]ＨＤＡＣ阻害は、ヒストンアセチル化の増加を起こす。本発明人等は、ヒストンアセチル化がＨＤＡＣ阻害によって起こるか否かを試験した。
[00373]結果の要約を表１に示す。化合物の平均ＩＣ５０値を表１に要約する。
[00374]表１．ＨＤＡＣ活性に対する化合物の阻害効果
[00375]実験は、盲検で行われ、ここで、本発明のＹＦ２化合物はＯＡ２に対応する。研究は、ＹＦ２がＨＤＡＣ阻害特性を持たないことを示す。ＹＦ２は、ＨＤＡＣを阻害しない。
[00376]物質及び方法
[00377]物質：
ＨＤＡＣアッセイ緩衝液（ＢＰＳカタログ番号５００３１）
ＨＤＡＣアッセイ展開液（ＢＰＳカタログ番号５００３０）
ＨＤＡＣ基質１（ＢＰＳ番号５００３２）
ＨＤＡＣ基質３（ＢＰＳ番号５００３７）
ＨＤＡＣクラス２ａ基質１（ＢＰＳ番号５００４０）
ＳＡＨＡ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，カタログ番号１０００９９２９）。
[00378]表２．研究に使用された化合物
＊化合物ＯＡ２は、１０％ＤＭＳＯ中の２ｍＭで濁っている（最高の試験点）。
＊＊ＳＡＨＡ及びＨＤＡＣiは、ＨＤＡＣに対する正の対照である。
[00379]実験条件
[00380]表３．酵素及び基質
[00381]アッセイ条件。 試験化合物の一連の希釈物を、アッセイ緩衝液中の１０％ＤＭＳＯ中で調製し、そして全ての反応においてＤＭＳＯの最終濃度が１％であるように、５μｌの希釈物を、５０μｌの反応物に加えた。全ての酵素反応は、ＨＤＡＣ１１の室温で３時間を除き、二重で３７℃で３０分間行った。５０μｌの反応混合物は、ＨＤＡＣアッセイ緩衝液、５μｇのＢＳＡ、ＨＤＡＣ基質、ＨＤＡＣ酵素及び試験化合物を含有している。酵素反応後、５０μｌのＨＤＡＣ展開液をそれぞれのウェルに加え、そしてプレートを室温で更に２０分間インキュベートした。蛍光強度を、３６０ｎｍの励起及び４６０ｎｍの発光で、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００マイクロプレートリーダーを使用して測定した。
[00382]データ解析。 ＨＤＡＣ活性アッセイを、それぞれの濃度で二重で行った。蛍光強度のデータをコンピューターソフトウェア、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して解析した。化合物の非存在において、それぞれのデータの組における蛍光強度（Ｆｔ）を、１００％活性と定義した。ＨＤＡＣの非存在において、それぞれのデータの組の蛍光強度（Ｆｂ）を、０％活性として定義した。化合物ＯＡ２は、アッセイ条件で蛍光を有している；従って、ＯＡ２の異なった濃度における蛍光強度を、バックグラウンド（Ｆｂ）として定義した。それぞれの化合物の存在中の活性のパーセントは、次の等式：活性％＝（Ｆ−Ｆｂ）／（Ｆｔ−Ｆｂ）によって計算し、ここで、Ｆ＝化合物の存在中の蛍光強度である。
[00383]次いで一連の化合物濃度に対する活性％の値を、等式Ｙ＝Ｂ＋（Ｔ−Ｂ）／１＋１０（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）ｘＨｉｌｌ Ｓｌｏｐ）で発生されたシグモイド曲線の用量−反応曲線の非線形回帰分析を使用してプロットし、ここで、Ｙ＝活性のパーセント、Ｂ＝最低活性パーセント、Ｔ＝最大活性パーセント、Ｘ＝化合物の対数及びＨｉｌｌ Ｓｌｏｐｅ＝傾斜係数又はヒル係数である。ＩＣ５０値は、最大の半分の活性を起こす濃度によって決定された。
[00384]ＨＤＡＣ阻害に対するＯＡ２（ＹＦ２化合物）の効果の結果
[00385]表４．ＨＤＡＣ１アッセイ−ＨＤＡＣ１活性に対するＯＡ２の影響に対するデータ
[00386]図５２は、表４に示した結果に対応する。
[00387]表５．ＨＤＡＣ３／ＮＣＯＲ２アッセイ−ＨＤＡＣ３／ＮＣＯＲ２活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00388]図５３は、表５に示した結果に対応する。
[00389]表６．ＨＤＡＣ５ＦＬアッセイ−ＨＤＡＣ５ＦＬ活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00390]図５４は、表６に示した結果に対応する。
[00391]表７．ＨＤＡＣ７アッセイ−ＨＤＡＣ７活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00392]図５５は、表７に示した結果に対応する。
[00393]表８．ＨＤＡＣ８アッセイ−ＨＤＡＣ８活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00394]図５６は、表８に示した結果に対応する。
[00395]表９．ＨＤＡＣ１０アッセイ−ＨＤＡＣ１０活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00396]図５７は、表９に示した結果に対応する。
[00397]表１０．ＨＤＡＣ１１アッセイ−ＨＤＡＣ１１活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00398]図５８は、表１０に示した結果に対応する。
[00399]表１１．サーチュイン１アッセイ−サーチュイン１活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00400]図５９は、表１１に示した結果に対応する。
[00401]表１２．サーチュイン２アッセイ−サーチュイン２活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00402]図６０は、表１２に示した結果に対応する。
[00403]表１３．ＨＤＡＣ６アッセイ−ＨＤＡＣ６活性に対するＯＡ２の効果に対するデータ
[00404]図７４は、表１３に示した結果に対応する。
[00405]ＨＤＡＣ阻害に対するＳＡＨＡの効果の結果
[00406]ＳＡＨＡは、ＨＤＡＣ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）である。これは、ＨＤＡＣに対する正の対照として役立つ。図６１−６３は、ＨＤＡＣのＨＤＡＣｌ、ＨＤＡＣ３／ＮＣＯＲ２、及びＨＤＡＣに対するＳＡＨＡの阻害効果を示す。ＳＡＨＡは、更にＨＤＡＣ５ＦＬ、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ１０、サーチュイン１及びサーチュイン２を阻害した（表１を参照）。
実施例９：選択的ＨＡＴ活性化剤の設計
[00407]アルツハイマー病（ＡＤ）における初期の健忘性の変化は、シナプスの機能障害に関連すると考えられる。これに関して、この疾病において高い量で産生されるペプチドであるβ−アミロイド（Ａβ）は、記憶［１，２］及びその電気生理学的モデルの長期増強（ＬＴＰ）［３−８］を阻害することが見いだされている。記憶は、遺伝子発現の制御によるエピジェネティクスによって調節されているため、ヒストン（Ｈ）アセチル化のような後成的機構の一つの調節解除は、記憶の破壊に導くことができる。ヒストンアセチル化の減少は、クロマチン構造が閉じることを起こし、従って、ＤＮＡ中に含有される情報は、転写因子及び記憶の形成にとって少なく受け入れられることができる［９］。
[00408]ヒストンアセチル化を上方制御するために現時点で使用される主な戦略は、ＨＤＡＣ阻害剤に関係する。然しながら、非特異的ＨＤＡＣ阻害の多面的効果は、その治療的潜在性を妨害することができる［１０−１３］。本出願人等は、二つのＨＡＴであるＣＢＰ及びＰＣＡＦの海馬レベルが、Ａβ上昇後減少されることを示した。従って、本出願人等は、更にヒストンアセチル化を上方制御するもう一つの標的であるＨＡＴに焦点を当てている。この目的のために、本出願人等は、ＨＡＴ活性化剤のＹＦ２を合成している。本出願人等は、Ａβの下流であるＣＢＰ及びＰＣＡＦを特異的に標的とする選択的なＨＡＴ活性化剤を設計することに関係する一連の調査を提案する。本出願人等の提案の目的は：
１）ＡＤのために最適化された新しいＨＡＴ活性化剤を設計及び合成すること；
２）特異的にＣＢＰ及びＰＣＡＦを標的とする選択的ＨＡＴ活性化剤に対する高い親和性及び良好な選択性を伴う化合物を同定すること；
３）新しいＨＡＴ活性化剤が、良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性を有し、そして安全であるか否かを決定すること；
４）ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるシナプスの機能障害を救済するＨＡＴ活性化剤を選択すること；
５）更に、これらが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの認知異常に対して有益であるか否かを決定するためにＨＡＴ活性化剤を選別すること；
である。
[00409]バックグラウンド及び有意性： クロマチンの翻訳後アセチル化状態は、酵素の二つの群であるＨＡＴ及びＨＤＡＣの競合活性によって支配される。ＨＤＡＣ阻害剤は、ＬＴＰ及び動物が中性の刺激を有害なものと結合しなければならない連合記憶の形成である状況的恐怖記憶を向上することが示されている［Ｐ１７］。更に、ＣＢＰ＋／−マウスの記憶及びＬＴＰ欠損は、ＨＤＡＣ阻害によって逆転された［Ｐ１５］。神経変性疾患と対抗するＨＤＡＣを阻害する潜在性は、広く探索されている［１４］。例えば、一組の実験において、Ｔｓａｉ等は、ＨＤＡＣ阻害剤が、神経変性のＣＫ−ｐ２５Ｔｇマウスモデルにおける樹状突起の発芽を誘導し、シナプスの数を増加し、そして学習及び長期記憶への接近を復元することを報告している［１５，１６］。更に、最近の研究において、本出願人等は、ＨＤＡＣ阻害剤のＴＳＡが、アミロイド沈着の二重ＴｇのＡＰＰ（Ｋ６７０Ｍ：Ｎ６７１Ｌ）／ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ，ライン６．２）（ＡＰＰ／ＰＳ１）マウスモデルにおけるＬＴＰ及び状況的恐怖条件づけ（ＦＣ）を回復することを示している。参考文献であるＢｏｌｄｅｎ等（２００６， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，５：７６９−８４）は、ヒストンデアセチラーゼファミリーを記載し、これは本明細書中に参考文献としてその全てが援用される。然しながら、ＨＡＴは、より少ない程度にしか研究されていない。
[00410]ＨＡＴは、二つの主要な群、核ＨＡＴ及び細胞質ＨＡＴに分けることができる［１８］。核Ａ型ＨＡＴは、ＨＡＴ領域の配列保存に基づいて少なくとも四つの異なったファミリー：Ｇｃｎ５及びｐ３００／ＣＢＰ関連因子（ＰＣＡＦ）、ＭＹＳＴ（ＭＯＺ、Ｙｂｆ２／Ｓａｓ３、Ｓａｓ２及びＴｉｐ６０）、ｐ３００及びＣＢＰ（二つのヒトパラログｐ３００及びＣＢＰのために命名）並びにＲｔｔｌ０９に分類することができる。Ｇｃｎ５／ＰＣＡＦ及びＭＹＳＴファミリーは、酵母からヒトへの同族体を有するが、ｐ３００／ＣＢＰは、後生動物特異的であり、そしてＲｔｔｌ０９は、真菌特異的である。ＨＡＴ１のような細胞質Ｂ型ＨＡＴは、ヒストン沈着に関係する［Ｐ２２］。参考文献であるＭａｒｍｏｒｓｔｅｉｎ及びＲｏｔｈ（２００１，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐ．，１１：１５５−１６１）は、その表１にＨＡＴファミリー及びその転写関連機能を列挙し、これは、本明細書中にその全てが参考文献として援用される。
[00411]ステロイド受容体活性化補助因子、ＴＡＦ２５０、ＡＴＦ−２、及びＣＬＯＣＫのような他の核ＨＡＴファミリーが記載されているが、これらのＨＡＴ活性は、主要なＨＡＴ群のようには徹底的に調査されていない［１８］。これらの四つのファミリーは、ファミリー内で高い配列同一性を示すが、しかしファミリー間では配列同一性は、不良ないし無いことを示す。更に、異なったファミリーのＨＡＴ領域の大きさは、異なる［Ｐ２２］。興味あることに、ＨＡＴは、哺乳動物中で高度に保存されている［Ｐ２２］。全てのこれらのＨＡＴの中で、三つ：ＣＢＰ、ｐ３００［１９，２０］、及びＰＣＡＦ［２１］が記憶に関係することが示された。興味あることに、ＣＢＰ及びＰＣＡＦレベルの両方は、Ａβの上昇によって減少される。
[00412]ＨＡＴ活性化剤は、ヒストンアセチル化を向上するための実行可能な方法である。ＨＡＴ活性化剤のための二つの足場が確認されている。一番目のものはＣＴＰＢ及びその誘導体ＣＴＢを含む［２２，２３］。二番目のものは、ただ一つの化合物、ネモロソンを含む［２４］。ＣＴＢＰ／ＣＴＢは、不溶性で、そして膜不透過性であることが見いだされている［２２，２３］。更に、ＣＴＢＰは、ＣＮＳ疾病において使用されるために好ましくない特徴を有し（ＭＷは５５３．２９であり、ｃｌｏｇＰは１２．７０である）、そしてＣＴＢのｃｌｏｇＰは５．１３である。ネモロソンは、５０２のＭＷ及び８．４２のｃｌｏｇＰを有する。要約として、ＡＤを含むＣＮＳ疾患の治療におけるＨＡＴ活性化剤のための有望な治療的役割を支持する多くの証拠が存在する。本出願人等は、特異的にＣＢＰ及びＰＣＡＦを標的とする新しい化学的成分を開発することによって、この可能性を開拓するものである。
[00413]研究の設計及び方法：
[00414]１）ＡＤのために最適化された、新しいＨＡＴ活性化剤を設計及び合成すること。 本出願人等は、ＣＴＰＢ／ＣＴＢ足場のＳＡＲ研究に基づき、ＹＦ２と命名された新しい化合物を設計した。ＹＦ２（ＭＷ４３０．１３、ｃｌｏｇＰ５．１５、ｃｌｏｇＢＢ０．１７）は、増加した溶解性、膜透過性及び血液脳関門透過性を有し、急性毒性試験において安全である。ＹＦ２は、Ａβ上昇後のＨ３アセチル化の海馬レベルの減少を救済し、ＰＣＡＦ、ＣＢＰ及びＧｃｎ５、並びにｐ３００の酵素活性を向上し、ＨＤＡＣに対するよりＰＣＡＦ、ＣＢＰ及びＧｃｎ５に対する優れた選択性を有し、そしてＡβ暴露によって誘導された恐怖及び参照記憶に欠損を救済することが可能であった。本出願人等は、その新薬の開発につながる可能性（ｄｒｕｇｇａｂｉｌｉｔｙ）を、良好なＰＫ及びＡＤＭＥＴ特性を持つ薬物様リード化合物の合成に焦点を当てた、医薬化学（医化学）的方法を使用して改良している。本出願人等は、ＹＦ２の二つの芳香族環の一つの異なった位置に異なった分子を保有するＨＡＴ活性化剤を設計及び合成するものである。特に、本出願人等は、ミクロソームによってアルキル化され、そして芳香族環を酸化性反応から保護する可能性があるジメチルアミノ基を置換するものである。更に、本出願人等は、ＨＡＴ結合部位を、ｉ）二つの芳香族環間のアミト゛基の重要性を評価すること、ｉｉ）分子構造を制約すること、ｉｉｉ）現在ＹＦ２を形成する二つの芳香族環間の距離を改変すること、ｉｖ）二つの芳香族環の一つを複素環によって置換すること、そしてｖ）二つの芳香族環の一つの置換基の障害を増加することによって、探索するものである。本出願人等は、ａ）ＨＡＴ特異性及び効力、ｂ）大きいＣＮＳ透過、並びにｃ）安全性を持つＨＡＴ活性化剤を見出すものである。
[00415]２）ＣＢＰ及びＰＣＡＦを特異的に標的とする選択的ＨＡＴ活性化剤に対して高い親和性及び良好な選択性を持つ化合物の同定。 ＨＡＴ活性化剤の効力（ＥＣ５０）の評価後、本出願人等は、ＣＢＰ及びＰＣＡＦに関する選択性を検査するものである。良好な効力（＜１００ｎＭ）、選択性（ｐ３００、Ｇｃｎ５、ＭＹＳＴファミリー及びＨＤＡＣに対して少なくとも５０倍）及び溶解性を示すことが見いだされたＨＡＴ活性化剤に対して、本出願人等は、これらが、成獣のマウスにおいて海馬のＨ３及びＨ４アセチル化を増加するか否かを決定するための機能アッセイを使用するものである。
[00416]３）新しいＨＡＴ活性化剤が、良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性を有し、そして安全であるか否かを決定すること。 選択されたＨＡＴ活性化剤を、生体利用率、脳取込み、及びＢＢＢ透過を含む好ましくないＰＫ特性に対して選別されるものである。これらの試験を通過した化合物は、急性及び慢性毒性の試験を含む基本的なＡＤＭＥＴ特徴を評価されるものである。
[00417]４）ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおけるＬＴＰを救済するＨＡＴ活性化剤を選択すること。 本出願人等は、選択されたＨＡＴ活性化剤が、ＡＰＰ／ＰＳ１切片のＬＴＰ欠損を回復するか否かを、電気生理学的技術を使用して決定するものである［２５］。
[00418]これらがＡＰＰ／ＰＳ１マウスの認知異常を回復するか否かを試験するためのＨＡＴ活性化剤を更に選別する。 本出願人等は、切片で選別されたＨＡＴ活性化剤が、行動アッセイを使用する状況及び参照記憶の障害に対してＡＰＰ／ＰＳ１マウスを保護することができるか否かを決定するものである［２５］。次に、本出願人等は、ＨＡＴ以外の標的に対するその更に包括的な選択性に対して、本出願人等の化合物を特徴づけするものである。本出願人等は、更に多くの薬物の市場からの撤退をもたらした、二つの領域：薬物−薬物相互作用（肝臓代謝）、ｈＥＲＧチャンネル遮断（心機能不全）に焦点を当てた一連のアッセイによりこれらを選別するものである。
[00419]ＹＦ２、アルツハイマー病、及び薬物発見研究： 現時点で使用されているＡＤ治療は、制約された効力を有する。タングル形成を阻害し、炎症及び酸化性損傷と戦い、そして脳のＡβ負荷を減少するための主要な努力が行われている［２６−２８］。然しながら、正常な生理学的機能におけるＡＰＰ、Ａβ、及びセクレターゼの役割［２９−３１］は、ＡＤ治療に対する有効な、そして安全な方法を提供することに問題を与えることができる。ニューロンの機能障害に導くＡβ標的と相互作用する薬剤を開発することは、多くの研究所によって現時点で試験されているもう一つの方法である。理論に束縛されるものではないが、ＨＡＴ活性化剤は、疾病の進行に有効に対抗することができる化合物の新しい群である。
[00420]参考文献
実施例１０：ＡＤの治療のためのＨＡＴアゴニスト
[00421]本出願人等は、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）及びｐ３００／ＣＢＰ関連因子（ＰＣＡＦ）の海馬レベルが、ヒストンアセチル化を触媒し、そして記憶の形成に関連する二つのアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）が、Ａβ上昇後、減少されることを証明している［Ｐ１４−１６］。
[00422]本出願人等は、ＨＡＴ活性化剤化合物のＹＦ２を設計し、そして合成している（図２９）。ＹＦ２は、２−（ジメチルアミノ）エタノール並びに酸２及び４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）アニリンのＥＤＣの存在中の反応によって得られた３間の光延反応によって調製された。酸は、１のエステル加水分解によって合成された。最後に、ＹＦ２は、水溶性化合物を得るためにＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏで処理された。Ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ＹＦ２は、ＣＢＰ、ＰＣＡＦ、及びＧＣＮ５に対する活性を有する。ＣＢＰ、ＰＣＡＦ、及び、ＧＣＮ５に対するＹＦ２のＥＣ５０は、それぞれ２．７５μＭ、２９．０４μＭ及び４９．３１μＭである。更に、ＹＦ２は、ｐ３００及びＨＤＡＣ活性（ＨＤＡＣ１、３、５、６、７、８、１０、１１、及びｓｉｒｔ１−２）に干渉しなかった。ＹＦ２は、更に図７２に示すようにｐ３００活性を増加する。
[00423]これらの結果に励まされて、本出願人等は、次いでＹＦ２の薬物動力学（ＰＫ）及び血液脳関門（ＢＢＢ）透過能力を調査した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに対する２０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．及びｉ．ｖ．投与後、血漿及び脳濃度をＬＣＭＳ／ＭＳによって決定した。表１４のデータは、ＹＦ２が脳に急速に吸収されることを示す（１５分におけるＴｍａｘ）。
[00424]表１４．ＹＦ２の薬物動力学的特性
＊比＝脳／血漿
ＣＢＰ、ＰＣＡＦ及びＧＣＮ５に対するＹＦ２のＥＣ５０は：それぞれ２．７５μＭ、２９．０４μＭ及び４９．３１μＭである。
[00425]脳中のＹＦ２の量は、ｉ．ｐ．及びｉ．ｖ．投与に対してそれぞれ８．２及び１０．８のＡＵＣ０−ｔ比で血漿中のそれより高かった。脳及び血漿中のＹＦ２の排出半減期は、約４０分であった。脳及び血漿中のＴｍａｘ値は、同様であり、脳に対するＹＦ２の分布も、更に急速であることを示した。更に、急性の毒性実験において、ＹＦ２は、３００ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）迄何らの不都合な影響を誘導しなかった。
[00426]次いで、本出願人等は、ＹＦ２が、マウスの海馬におけるヒストンアセチル化を増加するか否かを試験した。化合物を、２０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．投与し、３０分後マウスを犠牲にし、そして海馬を取出し、そしてＷＢ分析のために急速冷凍した。図６４に示すように、ＹＦ２は、記憶の形成に関係することが示されているヒストンリジンのアセチル化を増加した（Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６、及びＨ２Ｂ）［Ｐ１５，Ｐ３３］。
[00427]次に、本出願人等は、ＹＦ２が、Ａβ上昇後のシナプス及び認知機能障害を弱めることができるか否かを検討した。ＹＦ２は、海馬へのＡβ注入後のＨ３アセチル化レベルの欠損を救済した（図６５）。次に、本出願人等は、ＬＴＰ又は状況的恐怖記憶、並びに参照記憶を、オリゴマーのＡβ４２、又はベヒクルの存在中で誘導した。ＬＴＰ実験において、２００ｎＭのＡβ４２又はベヒクルを、浴溶液を通してθ−バーストの適用の２０分前に潅流した。行動実験において、２００ｎＭのＡβ４２（１μｌの最終体積で１分かけて）又はベヒクルを、脚部ショックの１５分前、又は１回目試行の１５分前（参照記憶を評価する２日間の放射状アーム水迷路（ＲＡＷＭ）試験中の試験の第１群に対して［Ｐ３４］）及び７回目試行の１５分前（ＲＡＷＭの試験の第２群に対して）に、前の週にカニューレを前もって植込まれたマウスの背部海馬に両側的に注入した。Ａβは、ＬＴＰ並びに参照及び状況的恐怖記憶の両方を減少した（図６６）。然しながら、ＹＦ２（１μＭ、ＬＴＰ実験においてθ−バーストの３０分前；５又は２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、行動実験におけるＡβ投与の１５分前）は、電気生理学的及び行動的欠損を回復した（図１６）。
[00428]理論に束縛されるものではないが、これらの実験が、Ａβ４２の合成製剤で得られたことを考慮すれば、これが、ＡＤの脳でシナプスの機能障害を起こすＡβと同じであるか否かを知ることは困難である。従って、本出願人等は、これらの実験を、Ａβを沈積したマウスモデルのＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて検証した［Ｐ３５］。これらのマウスは、ＡＤの病態に関して、十分に特徴づけされている［Ｐ３４−３８］。これらは、生後３ヶ月のように早くからシナプス及び記憶障害を示し始める［Ｐ３４］。二重変異ＡＰＰ（Ｋ６７０Ｍ：Ｎ６７１Ｌ）／ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）（ライン６．２）を持つ遺伝子導入マウスは、生後８−１０週目に皮質及び海馬に大きいプラークを発生し始める。これらは、生後３ヶ月までに、状況的恐怖記憶及び空間作業記憶の障害と一緒にＬＴＰの減少を有する。
[00429]図６７に示すように、ＷＴマウスは、ＲＡＷＭ課題の二日目の終りに近い二回の試行にわたって＜２回の誤りを示した。次に、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、学習に失敗し、そして訓練セッションを通して＞３回の誤りをおかした。然しながら、ＹＦ２（２０ｍｇ／Ｋｇ、ｉ．ｐ．ＦＣのための訓練の３０分前、又はＲＡＷＭに対する試験の一番目及び二番目の群の前に）による治療は、ＷＴマウスの記憶に影響することなく、二重Ｔｇの記憶の欠損を救済した。本出願人等は、二重Ｔｇマウスが、条件的恐怖記憶を評価するためのＦＣを行った場合、同様な結果を得た（図６７）。
[00430]要約として、ヒストン３及び４アセチル化は、Ａβ上昇後に減少する。ＨＡＴレベル（ＣＢＰ及びＰＣＡＦ）は、Ａβ４２上昇後減少する。ＨＤＡＣ阻害は、Ａβ４２上昇後のシナプス機能及び記憶の損傷に対して有益である。ＨＡＴ活性化は、Ａβ４２上昇後の記憶減少に対して有益である。本出願人等は、ヒストン３アセチル化の均衡を変化し、そしてＡβ上昇後の正常な記憶を復元する、ＨＡＴ活性化剤のＹＦ２を設計及び合成した。
実施例１１：ＣＢＰ及び／又はＰＣＡＦ及び／又はＰ３００に対して高い親和性及び良好な選択性を持つＨＡＴ活性化剤
[00431]化合物は、Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ（ＵＳＡ，ＣＡ）からのＨＡＴアッセイキットを使用して、先ずＨＡＴ活性化剤活性に対して試験されるものである。このアッセイのために、本出願人等は、ヒトＣＢＰ、ＰＣＡＦ、ｐ３００及びＧＣＮ５（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，ＵＳＡ）の触媒領域を使用するものである。残りのＨＡＴの触媒領域は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｋ．ｌａｃｔｉｓタンパク質発現キットを使用して製造されるものである。ＣＢＰ及び／又はＰＣＡＦの強力な活性化剤（ＥＣ５０＜１００ｎＭ）であることに加えて、候補化合物は、更に選択的でなければならない。全ての他のＨＡＴに対して分析された場合、これらは、ＣＢＰ及び／又はＰＣＡＦに対して少なくとも５０倍大きい効力を示さなければならない。最後に、実施例１３及び１４に概略記載したシナプス及び記憶の機能障害の試験において効力を示す最も強力／選択的化合物に対して、本出願人等は、ＨＤＡＣに対する選択性を検討するものである。これらの試験を行う一方、本出願人等は、更に溶解性を評価するものである（中性水性緩衝液＞１０μｇ／ｍｌ）。
[00432]本出願人等の次の目的は、ニューロン製剤を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏのデータを確認することであるものである。特に、本出願人等は、新しいＨＡＴ活性化剤を、一次培養物及び成獣のマウス中で試験するものである。本出願人等は、最初、化合物が、生後１０日目の培養された海馬ニューロン（記載されている［Ｐ４７］ように調製）の特異的ヒストンアセチル化を増加することができるか否かを決定するものである。培地を吸引し、そしてＨＡＴ活性化剤を含有する０．５ｍＬのＰＢＳで置換えるものである。３７℃で３０分後、細胞を取出し、そしてＷＢ分析のために溶解するものである。海馬培養物中の試験を通過した化合物は、次に急性毒性の評価後、マウスに投与される化合物の投与量を決定するために、成獣のマウスにおいて試験されるものである（以下の“毒性試験”を参照されたい）。成獣のマウスにおける試験は、細胞培養物が、複雑な細胞−細胞相互作用及びｉｎ ｖｉｖｏの薬物ＰＫ、ＢＢＢ透過、等（更に以下の実施例１２を参照されたい）を伴う全身を再現しないために、必須である。マウスは、ＨＡＴ活性化剤で治療されるものであり、海馬をｉ．ｐ．注射の３０分後に回収し、そしてＷＢ分析のために溶解するものである。全ての実験は、三重で行われるものである。本出願人等が、特異的ヒストンアセチル化の増加を見出した場合、候補化合物は、活性と見做されるものである。
[00433]選択された化合物に対して、本出願人等は、更にチャンネル、受容体、トランスポーターとの相互作用を、実施例１２において考察されるＡＤＭＥＴ／Ｔｏｘ研究に加えて、ＮＩＭＨ ＰＤＳＰプログラム（ＣＮＳ標的の列挙に対してｈｔｔｐ：／／ｐｄｓｐ．ｃｗｒｕ．ｅｄｕを参照されたい）を使用して試験するものである。
実施例１２：新しいＨＡＴ活性化剤が、良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性を有し、そして安全であるか否かを決定すること
[00434]本出願人等は、新規なＨＡＴ活性化剤の基本的なＰＫ特性及び毒性に対処するデータを作成するものである。必要な場合、ＰＫ及び毒性研究によって得られた情報を、改良された生体利用率、脳取込み、及び安全性の最終目的を持つ新しい分子の更なる化学的修飾に導くために使用するものである。行われる必要がある薬物動力学的アッセイは、ａ）生体利用率及びｂ）脳取込みの測定を含むものである。マウスに、活性化剤をｉ．ｐ．注射するものである（最終薬物候補に対して更に、ｐ．ｏ．及びｉ．ｖ．の投与経路を使用して、ＰＫ試験も行われるものである）。５−６匹のマウス／性別を、それぞれの時点に対して使用するものである。生体利用率（投与後の時間の関数としての血液中の化合物の濃度）の評価のために、血液試料を一回の急性投与後に試験動物から得るものである（５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、及び２４時間目に収集）。血液は、後眼窩穿刺によって回収され、ヘパリン処置した試験管中に収集し、そして血漿を遠心によって得るものである。試料を、ＬＣ−ＭＳによって分析して、候補化合物及び可能性のある代謝物の量を測定するものである。脳取込み及びＢＢＢ透過の指標は、脳からの候補化合物の組織抽出によって得るものである。簡単には、脳ホモジネートを１１，０００ｒｐｍで１０分間遠心するものである。試料のアリコートを、アセトニトリルに加え、次いで分析のためにＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注射するものである。脳及び血漿濃度の同様なパターンは、脳取込みが血液中の濃度を反映するという事実の表示であるものである。＞１のピーク脳／血液濃度比は、本出願人等の化合物に対する脳取込みが、臨床使用中の既知のＣＮＳ薬物のそれに匹敵することを示すものである。例えば、６−フェニルアミノピリダジンＣＮＳ薬物であるミナプリンに対する脳／血液比は、＞２である［Ｐ４８］。
[00435]次に、本出願人等は、急性毒性を評価するものである。全ての臨床的徴候、開始の時間、期間、毒性の可逆性及び死亡率を、記録するものである。動物は、最初の２４時間中定期的に観察され、最初の４時間は連続して、次いで少なくとも一日一回で１４日間、又は彼らが死ぬまで、食物及び液体取込み、体重、並びに自発運動及び探索行動を検査するためにモニターされるものである。本出願人等は、更に最大許容投与量（ＭＴＤ）及び慢性毒性を評価するものである。ＭＴＤは、怠惰感又は死に関していずれもの毒性効果を生じない最大の投与される投与量として計算されるものである（体重は時間をかけてモニターされる）。慢性毒性は、ＭＴＤで評価されるものである。全ての臨床的徴候、開始の時間、期間、毒性の可逆性及び死亡率が記録されるものである。可能性のある慢性毒性の徴候の発生は、治療の終りの少なくとも１ヶ月後評価されるものである。
[00436]ＡＤＭＥＴ問題のために、全ての薬物の半分以上が市場に到達することに失敗していると推定されている［Ｐ４９］。従って、経費のかかる動物の毒物学的作業及びその後の効力評価の過程の取り組む前に（実施例１３及び１４を参照されたい）、本出願人等は、本出願人等の三つの最良の化合物を迅速な、経費のかからない一連のアッセイにより選別するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＡＤＭＥＴ試験の最近の進歩を利用するものである。本出願人等は、多くの薬物の市場からの撤退をもたらした二つの分野：薬物−薬物相互作用（肝臓代謝）、ｈＥＲＧチャンネル遮断（心臓機能不全）に焦点を当てるものである。肝毒性に関連する薬物−薬物相互作用を試験するために、本出願人等は、シトクロムＰ４５０阻害アッセイ（ＳＲＩ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって行われる）を使用するものである。ｈＥＲＧチャンネル遮断アッセイを、ＮＩＭＨ ＰＤＳＰプログラムを使用して行うものである。
実施例１３：ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのＬＴＰを救済するＨＡＴ活性化剤を選択すること
[00437]シナプスの機能障害は、ＡＤの主要な特徴である［Ｐ５０］。本出願人等の薬物選別プロトコルの定量的側面は、新しく合成された化合物のシナプス機能に対する効果の測定を含むものである。ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、生後３ヶ月目までにＬＴＰの障害を提示し［Ｐ３４］、そして従って、マウスの加齢を長時間待つことなくシナプス機能の比較的迅速な評価を可能にする。本出願人等は、ＬＴＰを、これが学習及び記憶の根底にあると考えられるシナプス可塑性の種類であるために試験するものである。ＹＦ２が、ＬＴＰのＡβ誘導の減少を救済するという発見に基づいて、本出願人等は、正常なＬＴＰを再確立することができるものを選択するための本出願人等の医化学的研究によって示される化合物を選別するものである。化合物を、図６６Ａのような同じ実験プロトコルを使用して３０分間適用されるものである。対照は、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１マウス、及び化合物又はベヒクルで治療されたＷＴマウスからの切片で行われるものである。化合物が、ＡＰＰ／ＰＳ１切片中の正常なＬＴＰを再確立した場合、本出願人等は、化合物が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのシナプス可塑性の障害を救済することができると結論するものである。本出願人等は、更にもう一つの疾病の重要な側面である認知障害を調査するものである（実施例１４を参照されたい）。
[00438]動物：Ｔｇマウスは、ＡＰＰ（Ｋ６７０Ｍ：Ｎ６７１Ｌ）をＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）（ライン６．２）マウスと交雑することによって得るものである。遺伝子型は、尾部試料のＰＣＲによって同定するものである［Ｐ４１−Ｐ５３］。
[00439]電気生理学は、オスで行うものである（Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌの記載［Ｐ５４］を参照されたい）。
[00440]統計的解析：実施例１４を参照されたい。
実施例１４：ＨＡＴ活性化剤が、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの認知異常を回復することができるか否かを試験するためのＨＡＴ活性化剤を更に選別すること
[00441]理論に束縛されるものではないが、実施例１３によって示された新規なＨＡＴ活性化剤による治療は、生後３及び６ヶ月目のＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける認知欠損を救済することができる。行動課題に関して、本出願人等は、ＡＤ患者において影響される異なった種類の記憶（参照及び連合）を評価する試験の二つの種類である、ＲＡＷＭ及び状況的ＦＣを使用するものである。治療は、同じタイミングで行われるものである（即ち、恐怖条件づけのための訓練の３０分前、又はＲＡＷＭのための試験の一回目及び二回目の群の前）。試験される条件は：ＨＡＴ活性化剤で治療されたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴ、ベヒクルで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１及びＷＴを含む。行動試験後、マウスを犠牲にし、そのその血液及び脳を、Ａβレベル、Ｔａｕタンパク質、ＴＡＲＤＢＰ及びＴＤＢレベル、並びにアルファ−シヌクレイン測定のために使用するものである。ＨＡＴ活性化の有効性の対照として、本出願人等は、海馬のアセチル−Ｈ４レベルを、恐怖条件づけのための訓練の３０分前の化合物の投与後、及び電気ショックの１時間後の海馬の除去後に測定するものである（ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、電気ショック後、アセチル化Ｈ４の減少を有することが示されている［Ｐ２１］）。最後に、本出願人等は、市場からの多くの薬物の撤退をもたらした二つの分野：薬物−薬物相互作用、ｈＥＲＧチャンネル遮断に焦点を当てた一連のアッセイによりこれらを選別するものである（実施例１２を参照されたい）。
[00442]動物：実施例１３を参照されたい。
[00443]行動研究： 実験は、可変性を減少するために、オスの動物のみの盲検で行うものである。Ａ）空間的記憶。この種類の参照記憶は、記載されている［Ｐ５６］ように二日間のＲＡＷＭで研究することができる；更に図６６Ｂを参照されたい）。課題は、モーリス水迷路（ＭＷＭ）及び放射状アーム陸迷路の複合型である。これらの実験のために、記載されている［Ｐ３４］ように、視覚、運動及び動機付けの欠損がマウスの能力に影響することを除外するために、可視プラットフォーム試験を行うものである。Ｂ）状況的及び手懸り付き学習の両方を試験するための恐怖条件づけは、記載されている［Ｐ５７］ように評価されるものである。これらの実験のために、マウスの異なった群の電気ショックを受けた脚部の知覚性認知を検査するために、閾値評価試験を行うものである［Ｐ５７］。更に、記載されている［Ｐ５８，Ｐ５９］ように、探索を評価するために、オープンフィールド試験を行うものである。
[00444]ヒストンアセチル化アッセイ： ウェスタンブロットを、液体窒素で瞬間冷凍された海馬から行うものである。組織を、ＲＩＰＡ緩衝液中で均質化し、次いで超音波処理してから、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心するものである。全細胞の抽出物を、１０−２０％勾配のＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で電気泳動し、そして次いで免疫ブロットするものである。免疫ブロットのために、抗体を１：１，０００の濃度で使用するものである。全ての抗ヒストン抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入されるものである。免疫ブロットデータは、バンド強度を測定することによって、画像ソフトウェア（ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪ）を使用して定量化されるものである。
[00445]Ａβレベルの決定は、以前に記載されている［Ｐ３４］ように冷凍された脳半球及び血漿のホモジネートで行われるものである。
[00446]アルファ−シヌクレインレベルの決定は、α−シヌクレインＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＮＳ４００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用し、製造業者の説明書によって、冷凍された脳半球のホモジネートに対して行われるものである。
[00447]ＴＡＲＤＢＰ／ＴＤＰ−４３レベルの決定は、ヒトＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３、ＴＡＲＤＢＰ／ＴＤＰ−４３のＥＬＩＳＡキット（カタログ番号Ｅ１９５１ｈ；Ｗｕｈａｎ ＥＩＡａｂ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ，Ｗｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ）を使用して、製造業者の説明書によって、冷凍された脳半球のホモジネートに対して行われるものである。
[00448]全Ｔａｕ及びリン酸化されたＴａｕ（Ｔｈｒ２３１）レベルの決定は、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｓｏｓｃａｌｅ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇｓｙｓｔｅｍｗｅｂ／ｗｅｂｒｏｏｔ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ａｓｓａｙｓ／ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ．ａｓｐｘを参照されたい）から入手可能なアッセイ及びキットを、製造業者の説明書によって使用して、冷凍された脳半球のホモジネート及び血漿に対して行われるものである。
[00449]統計： 実験のマウスは、盲検で行われるものである。結果は、平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表示されるものである。有意性のレベルは、ｐ＜０．０５に設定されるものである。結果は、主効果として薬物及び遺伝子型による事後補正を伴うＡＮＯＶＡにより解析されるものである。
[00450]参考文献
実施例１５：これらが、ハンチントン病のマウスモデルにおける認知異常を回復するか否かを試験するためのＨＡＴ活性化剤の更なる選別
[00451]本出願人等は、実施例１３によって示されたＨＡＴ活性化剤化合物による治療が、ハンチントン病のマウスモデル（例えば、ＦＶＢ−Ｔｇ（ＹＡＣ１２８）５３Ｈａｙ／Ｊ及びＦＶＢ／ＮＪ−Ｔｇ（ＹＡＣ７２）２５１ ｌＨａｙ／Ｊマウス、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥから入手可能）の認知欠損を救済することができるか否かを試験するものである。行動課題に関して、本出願人等は、記憶の異なった種類（参照及び連合）を評価する二種類の試験である、ＲＡＷＭ及び状況的ＦＣを使用するものである。治療は、同じタイミングで行われるものである（即ち、恐怖条件づけのための訓練の３０分前、又はＲＡＷＭのための試験の一回目及び二回目の群の前）。試験される条件は：ＨＡＴ活性化剤で治療されたハンチントン病のマウス及びＷＴ、ベヒクルで治療されたハンチントン病のマウス及びＷＴを含む。行動試験後、マウスを犠牲にし、そしてその血液及び脳をハンチンチンタンパク質レベルの測定のために使用するものである。ＨＡＴ活性化の有効性に対する対照として、本出願人等は、恐怖条件づけのための訓練の３０分前の化合物の投与及び電気ショックの１時間後の海馬の除去後の海馬のアセチル−Ｈ４レベルを測定するものである。最後に、本出願人等は、市場からの多くの薬物の撤退をもたらした二つの分野：薬物−薬物相互作用、ｈＥＲＧチャンネル遮断に焦点を当てた一連のアッセイによりこれらを選別するものである（実施例１２を参照されたい）。
[00452]動物： ハンチントン病のマウスモデル（例えば、ＦＶＢ−Ｔｇ（ＹＡＣ１２８）５３Ｈａｙ／Ｊ［ストック番号００４９３８］及びＦＶＢ／ＮＪ−Ｔｇ（ＹＡＣ７２）２５１ １Ｈａｙ／Ｊマウス［ストック番号００３６４０］）は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）から得られるものである。更に、Ｈｏｄｇｓｏｎ ｅｔ ａｌ，（Ｍａｙ １９９９）Ｎｅｕｒｏｎ，Ｖｏｌ．２３，１８１−１９２を参照されたい。
[00453]行動研究： 実験は、可変性を減少するため、オスのマウスのみで盲検で行われるものである。Ａ）空間的記憶。この種類の参照記憶は、記載されている［Ｐ５６］ように二日間のＲＡＷＭ試験で研究することができる。課題は、モーリス水迷路（ＭＷＭ）及び放射状アーム陸迷路の複合型である。これらの実験のために、記載されている［Ｐ３４］ように、視覚、運動及び動機付けの欠損がマウスの能力に影響することを除外するために、可視プラットフォーム試験を行うものである。Ｂ）状況的及び手懸り付き学習の両方を試験するための恐怖条件づけは、記載されている［Ｐ５７］ように評価されるものである。これらの実験のために、マウスの異なった群の電気ショックを受けた脚部の知覚性認知を検査するために、閾値評価試験を行うものである［Ｐ５７］。更に、記載されている［Ｐ５８，Ｐ５９］ように、探索を評価するために、オープンフィールド試験を行うものである。
[00454]ヒストンアセチル化アッセイ： ウェスタンブロットを、液体窒素で瞬間冷凍された海馬から行うものである。組織を、ＲＩＰＡ緩衝液中で均質化し、次いで超音波処理してから、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心するものである。全細胞の抽出物を、１０−２０％勾配のＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で電気泳動し、そして次いで免疫ブロットするものである。免疫ブロットのために、抗体を１：１，０００の濃度で使用するものである。全ての抗ヒストン抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入されるものである。免疫ブロットデータは、バンド強度を測定することによって、画像ソフトウェア（ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪ）を使用して定量化されるものである。
[00455]ハンチンチンレベルの決定は、ハンチンチン（Ｈｔｔ）ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＡＢＩＮ４２３５２６；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ，Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ）を使用し、製造業者の説明書によって、冷凍された脳半球のホモジネート及び血漿に対して行われるものである。
[00456]統計： 実験のマウスは、盲検で行われるものである。結果は、平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表示されるものである。有意性のレベルは、ｐ＜０．０５に設定されるものである。結果は、主効果として薬物及び遺伝子型による事後補正を伴うＡＮＯＶＡにより解析されるものである。
実施例１６：これらが、パーキンソン病のマウスモデルにおける運動活性の異常を回復するか否かを試験するためのＨＡＴ活性化剤の更なる選別
[00457]ＰＤは、黒質核中のドーパミンニューロンの７５−９５％迄のニューロンの死を伴う変性疾患である。本出願人等は、実施例１３によって示されたＨＡＴ活性化剤化合物による治療が、パーキンソン病（ＰＤ）のマウスモデルの異常な運動動作を救済するか否かを試験するものである（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥからｈｔｔｐ：／／ｊａｘｍｉｃｅ．ｊａｘ．ｏｒｇ／ｌｉｓｔ／ ｒａｌ５９４．ｈｔｍｌで入手可能なパーキンソン病のマウスモデルを参照されたい； 更にＥｍｂｏｒｇ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ １３９（２００４）１２１−１４３；Ｌａｎｅ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００８）１９９：３０３−３１２；及びＭｅｒｅｄｉｔｈ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２００８）１１５：３８５−３９８を参照されたい）。行動課題に関して、本出願人等は、例えば、運動障害、動作緩慢、振戦、及び／又は握力を、ＰＤの各種の段階における化合物の効力の評価のために試験するものである。試験される条件は：ＨＡＴ活性化剤で治療されたＰＤマウス及びＷＴ、ベヒクルで治療されたＰＤマウス及びＷＴを含む。行動の評価後、マウスを犠牲にし、そしてその脳を凝集したアルファ−シヌクレインタンパク質の測定のために使用するものである。ＨＡＴ活性化の有効性の対照として、本出願人等は、海馬のアセチル−Ｈ４レベルを測定するものである。
[00458]動物： パーキンソン病のマウスモデルは、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ ＭＥ）から得られるものである。更に、Ｍｅｒｅｄｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２００８）１１５：３８５−３９８を参照されたい。
[00459]行動研究： 実験は、可変性を減少するために、オスのマウスのみで盲検で、Ｆｌｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（（２００４）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２４（４２）：９４３４−９４４０）及びＨｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，（（２００５）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２５（８）：２１３２−２１３７）によって記載されている方法によて行われるものである。
[00460]ヒストンアセチル化アッセイ： ウェスタンブロットを、液体窒素で瞬間冷凍された海馬から行うものである。組織を、ＲＩＰＡ緩衝液中で均質化し、次いで超音波処理してから、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心するものである。全細胞の抽出物を、１０−２０％勾配のＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で電気泳動し、そして次いで免疫ブロットするものである。免疫ブロットのために、抗体を１：１，０００の濃度で使用するものである。全ての抗ヒストン抗体は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入されるものである。免疫ブロットデータは、バンド強度を測定することによって、画像ソフトウェア（ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪ）を使用して定量化されるものである。
[00461]アルファ−シヌクレインレベルの決定は、α−シヌクレインＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＮＳ４００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を使用し、製造業者の説明書によって、又は標準的な神経病理学的方法（脳組織学）によって、冷凍された脳半球のホモジネートに対して行われるものである。
[00462]統計： 実験のマウスは、盲検で行われるものである。結果は、平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表示されるものである。有意性のレベルは、ｐ＜０．０５に設定されるものである。結果は、主効果として薬物及び遺伝子型による事後補正を伴うＡＮＯＶＡにより解析されるものである。
均等物
[00463]当業者は、日常的実験より多くを使用せず、本明細書中に記載される特定の物質及び方法に対する多くの均等物を認識するか、又は確認することが可能であるものである。このような均等物は、本発明の範囲内であり、そして以下の特許請求の範囲によって包含されると考えられるものである。

Claims (30)

  1. 以下の構造：

    を有する化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物。
  2. 患者のアミロイドベータ（Ａβ）タンパク質沈着物を減少するための医薬組成物であって、ＨＡＴ活性化剤である請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の有効量を含む、前記医薬組成物。
  3. 前記患者が、アミロイドベータプラークの異常に高いレベルを示す、請求項２に記載の医薬組成物。
  4. 前記患者が、アルツハイマー病、レビー小体性認知症、封入体筋炎、又は脳アミロイド血管症に罹っている、請求項２に記載の医薬組成物。
  5. 前記Ａβタンパク質沈着物が、Ａβ４０異性体、Ａβ４２異性体、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
  6. アルツハイマー病を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  7. 神経変性疾患に罹った患者の記憶保持を増加するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  8. 神経変性疾患に罹った患者のシナプス可塑性を増加するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  9. 患者の神経変性疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  10. 神経変性疾患に罹った患者の封入体を減少するための医薬組成物であって、ＨＡＴ活性化剤である請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の有効量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  11. 患者における癌を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  12. パーキンソン病の症状を回復するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  13. ハンチントン病を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の化合物或いは医薬的に受容可能なその塩又は水和物の治療的な量を含み、該医薬組成物は患者に投与される、前記医薬組成物。
  14. 前記有効な量が、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項２および６〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  15. 前記組成物が、血液脳関門を通過する、請求項２および６〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  16. 前記神経変性疾患が、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルーゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病（更にシュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディー病、クラッベ病、レビー小体性認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、過眠症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レット症候群、Ｔａｕ陽性前頭側頭葉認知症、Ｔａｕ陰性前頭側頭葉認知症、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血の続発性亜急性脊髄複合変性症、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、脊髄癆、又は中毒性脳症を含んでなる、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  17. シナプス可塑性が、学習、記憶、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項８に記載の医薬組成物。
  18. シナプス可塑性が、長期増強（ＬＴＰ）を含んでなる、請求項８に記載の医薬組成物。
  19. 前記癌が、Ｂ細胞リンパ腫、大腸癌、肺癌、腎臓癌、膀胱癌、Ｔ細胞リンパ腫、骨髄腫、白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、造血器腫瘍、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンスリンパ腫、ホジキンスリンパ腫、子宮癌、腎細胞癌、肝細胞腫、腺癌、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、卵巣癌、原発性又は転移性黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、脳癌、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、精巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、消化器癌、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、気管支原性肺癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、肺癌、上皮癌、子宮頸癌、精巣癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、白血病、黒色腫、神経芽細胞腫、小細胞肺癌、膀胱癌、リンパ腫、多発性骨髄腫、又は髄様癌を含んでなる、請求項１１に記載の医薬組成物。
  20. 前記化合物が、ヒストンアセチル化を増加する、請求項２および６〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  21. ヒストンアセチル化が、ヒストンＨ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４のアセチル化、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. ヒストンアセチル化が、ヒストンリジン残基Ｈ３Ｋ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４、Ｈ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ８、Ｈ４Ｋ１２、Ｈ４Ｋ１６のアセチル化、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項２０に記載の医薬組成物。
  23. 前記封入体が、ベータ−アミロイドペプチド、天然の及びリン酸化されたＴａｕタンパク質、天然の及びリン酸化されたアルファ−シヌクレイン、リポフスチン、開裂されたＴＡＲＤＢＰ（ＴＤＢ−４３）、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項１０に記載の医薬組成物。
  24. 前記パーキンソン病の症状が、振戦、動作緩慢、運動障害、硬直、姿勢不安定性、筋緊張症、正座不能、認知症、全体的運動協調性障害、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項１２に記載の医薬組成物。
  25. 前記姿勢不安定性が、不均衡障害、協調性障害、又はこれらの組合せを含んでなる、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 前記癌が、大腸癌、肺癌、腎臓癌、白血病、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、乳癌、又は前立腺癌である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  27. 前記癌が、大腸癌、腎臓癌、Ｔ細胞白血病、骨髄腫、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、腎細胞癌、腺癌、神経膠芽腫、乳癌、前立腺癌、又は肺癌である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  28. 前記化合物が医薬的に受容可能なその塩である、請求項１に記載の化合物。
  29. 前記化合物がその酸付加塩である、請求項１に記載の化合物。
  30. 前記化合物がその塩酸塩である酸付加塩である、請求項１に記載の化合物。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10640457B2 (en) 2009-12-10 2020-05-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
EP3323813B1 (en) 2010-12-22 2020-08-26 The Trustees of Columbia University in the City of New York Histone acetyltransferase modulators and uses thereof
JP6175054B2 (ja) 2011-06-10 2017-08-02 ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニヴァーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク ヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性剤の使用
WO2013116663A1 (en) 2012-02-01 2013-08-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Novel cysteine protease inhibitors and uses thereof
JP5991837B2 (ja) * 2012-03-30 2016-09-14 日清食品ホールディングス株式会社 薬物代謝酵素の活性誘導方法及び薬物代謝酵素の活性が誘導されたヒト培養細胞
WO2014145485A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Map kinase modulators and uses thereof
ES2776353T3 (es) 2013-07-17 2020-07-30 Univ Columbia Inhibidores de la fosfodiesterasa novedosos y usos de los mismos
CN106604913A (zh) * 2014-03-31 2017-04-26 纽约哥伦比亚大学理事会 组蛋白乙酰基转移酶激活剂及其用途
KR20190030693A (ko) 2016-07-20 2019-03-22 더 트러스티이스 오브 콜롬비아 유니버시티 인 더 시티 오브 뉴욕 히스톤 아세틸트랜스퍼라제 활성화제 및 이의 조성물 및 용도
EP3920900A4 (en) * 2019-02-08 2022-11-16 The Trustees of Columbia University in the City of New York HISTONE ACETYLTRANSFERASE MODULATORS AND COMPOSITIONS AND USES THEREOF
EP3920897A4 (en) * 2019-02-08 2022-11-16 The Trustees of Columbia University in the City of New York REGULATORS OF HISTONACETYL TRANSFERASE (HAT) AND THEIR USES

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE639158A (ja) * 1961-12-05
DE1303920C2 (de) * 1966-01-15 1975-06-26 Farbwerke Hoechst AG vormals Meister Lucius & Biüning, 6000 Frankfurt Gamma-resorcylsaeure-anilide und verfahren zu ihrer herstellung
DE1642224B2 (de) * 1967-04-28 1976-04-29 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verwendung von substituierten benzoesaeureaniliden zur bekaempfung von pilzen aus der klasse der basidiomyceten
US4088770A (en) * 1971-05-04 1978-05-09 Eli Lilly And Company Substituted 2-anilinobenzoxazoles used as immunosuppressive agents
JPS5842812B2 (ja) * 1976-05-14 1983-09-22 三共株式会社 木材防腐剤
JPS5459325A (en) * 1977-10-14 1979-05-12 Nippon Nohyaku Co Ltd Agent for controlling attached aquatic life
US4218438A (en) * 1979-02-14 1980-08-19 Eli Lilly And Company Anticoccidial combinations comprising nicarbazin and the polyether antibiotics
JPS57139053A (en) * 1981-02-24 1982-08-27 Showa Denko Kk Preparation of benzanilide compound
ES2118066T3 (es) 1989-10-05 1998-09-16 Optein Inc Sintesis y aislamiento, exentos de celulas, de nuevos genes y polipeptidos.
US5747334A (en) 1990-02-15 1998-05-05 The University Of North Carolina At Chapel Hill Random peptide library
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US5565325A (en) 1992-10-30 1996-10-15 Bristol-Myers Squibb Company Iterative methods for screening peptide libraries
US5484926A (en) * 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
DK41193D0 (da) * 1993-04-07 1993-04-07 Neurosearch As Ionkanalaabnere
AU704183B2 (en) 1994-01-05 1999-04-15 Arqule, Inc. Systematic modular production of aminimide- and oxazolone-based molecules having selected properties
US5712171A (en) 1995-01-20 1998-01-27 Arqule, Inc. Method of generating a plurality of chemical compounds in a spatially arranged array
JP3160882B2 (ja) * 1996-02-02 2001-04-25 日本製紙株式会社 感熱記録シート
TW589189B (en) 1997-08-04 2004-06-01 Scras Kit containing at least one double-stranded RNA combined with at least one anti-viral agent for therapeutic use in the treatment of a viral disease, notably of viral hepatitis
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
JP2002512997A (ja) * 1998-04-29 2002-05-08 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｍｐｄｈ酵素のインヒビター
GB9827152D0 (en) 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
AU776150B2 (en) 1999-01-28 2004-08-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
WO2001029058A1 (en) 1999-10-15 2001-04-26 University Of Massachusetts Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
JP2001151742A (ja) * 1999-11-26 2001-06-05 Mitsui Chemicals Inc アニリド誘導体及びそれを含有する抗不整脈剤
US20050227915A1 (en) * 2001-05-02 2005-10-13 Steffan Joan S Methods and reagents for treating neurodegenerative diseases and motor deficit disorders
US7429593B2 (en) * 2001-09-14 2008-09-30 Shionogi & Co., Ltd. Utilities of amide compounds
US8829198B2 (en) * 2007-10-31 2014-09-09 Proteotech Inc Compounds, compositions and methods for the treatment of beta-amyloid diseases and synucleinopathies
CN1735603A (zh) * 2002-12-06 2006-02-15 东丽株式会社 苯并吗啉衍生物
AU2003288705A1 (en) 2002-12-12 2004-06-30 Jawaharlal Nehru Centre For Advanced Scientific Research Modulators (inhibitors/activators) of histone acetyltransferases
EP1590318A2 (en) 2002-12-12 2005-11-02 Jawaharlal Nehru Centre For Advanced Scientific Research Modulators (inhibitors/activators) of histone acetyltransferases
WO2004063715A2 (en) 2003-01-10 2004-07-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of using crystal structure of carboxyltransferase domain of acetyl-coa carboxylase, modulators thereof, and computer methods
ATE467616T1 (de) * 2003-04-11 2010-05-15 High Point Pharmaceuticals Llc Verbindungen mit aktivität an der 11beta- hydroxasteroiddehydrogenase
AU2004257528A1 (en) * 2003-07-16 2005-01-27 Institute Of Medicinal Molecular Design. Inc. Medicament for treatment of dermal pigmentation.
US8158828B2 (en) * 2005-11-28 2012-04-17 Gtx, Inc. Nuclear receptor binding agents
WO2008062436A2 (en) * 2006-08-25 2008-05-29 Unichem Laboratories Ltd. Antimicrobial derivatives of anacardic acid and process for preparing the same
JP2010535172A (ja) * 2007-08-02 2010-11-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー Ｃｎｓ障害の処置のためのベンズアミド誘導体の使用
US9034387B2 (en) * 2007-10-03 2015-05-19 Jawaharlal Nehru Centre For Advanced Scientific Research Intrinsically fluorescent carbon nanospheres and a process thereof
WO2009048152A2 (en) * 2007-10-11 2009-04-16 Sumitomo Chemical Company, Limited Unsaturated imine compound and use thereof for pest control
JP2016081709A (ja) * 2014-10-16 2016-05-16 Tdk株式会社 リチウムイオン二次電池用負極活物質、およびそれを含む負極並びにリチウムイオン二次電池

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