DK200401261A - Ekspression af faktor VII og IX aktiviteter i pattedyrceller - Google Patents

Description

Patentkrav: 1. DNA-opbygning, kendetegnet ved, at den indeholder en nukleotid-sekvens, der koder for et protein, som efter aktivering har den samme eller i alt væsentligt den samme biologiske aktivitet med hensyn til blodkoagulation som faktor Vila. 2. DNA-opbygning ifølge krav l.kendetegnet ved at denne nukleotid-sekvens i det mindste delvis koder for faktor VII, hvilken nukleotidsekvens omfatter en første nukleotidsekvens, der koder for et calciumbindende domæne, sammenføjet med en anden nukleotidsekvens, der er beliggende nedstrøms for den første sekvens, og som koder for et katalytisk domæne for serinproteaseaktiviteten af faktor Vila, hvilke sammenføjede sekvenser koder for et protein, som efter aktivering har den samme eller i det væsentligt samme biologiske aktivitet med hensyn til blodkoagulation som faktor Vila. 3. DNA-opbygning ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den første nukleotidsekvens i alt væsentligt er sekvensen for et gen udvalgt fra gruppen bestående af gener, der koder for faktor VII, faktor IX, faktor X, protein C, prothrombin og protein S. 4. DNA-opbygning ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den første nukleotidsekvens også koder for et lederpeptid. 5. DNA-opbygning ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den første nukleotidsekvens omfatter et syntetiseret, dobbeltstrenget oligonukleotid. 6. DNA-opbygning ifølge krav 5, kendetegnet ved, at det syntetiserede, dobbelt-strengede oligonukleotid i alt væsentligt koder for aminoterminalde-len af faktor VII. 7. DNA-opbygning ifølge krav 1, kendetegnet ved, at nukleotidsekven-sen koder for faktor VII. 8. DNA-opbygning ifølge krav 7, kendetegnet ved, at i det mindste en del af nukleotidsekvensen er afledt af en cDNA-klon eller en genomisk klon af faktor VII. 9. DNA-opbygning ifølge krav 7, kendetegnet ved, at den omfatter en første nukleotidsekvens, der er afledt af en cDNA- eller en genomisk klon af faktor VII, sammenføjet med en anden nukleotidsekvens placeret nedstrøms for den første sekvens, og hvor den anden sekvens er afledt af en cDNA-klon af faktor VII, hvilke sammenføjede sekvenser koder for et protein, der efter aktivering har den samme eller i alt væsentligt samme biologiske aktivitet med hensyn til blodkoagulation som faktor Vila. 10. DNA-opbygning ifølge krav 7, kendetegnet ved, at nukleotidsekvensen omfatter cDNA-sekvensen ifølge figur 1b, fra bp 36 til bp 1433. 11. DNA-opbygning ifølge krav 7, kendetegnet ved, at nukleotidsekvensen omfatter cDNA-sekvensen ifølge figur 1b, fra bp 36 til bp 99, efterfulgt nedstrøms af sekvensen fra bp 166 til bp 1433. 12. Rekombinant plasmid, der er i stand til at integrere i mammal værtscelle-DNA, kendetegnet ved, at det omfatter en promotor efterfulgt nedstrøms af en nukleotidsekvens ifølge et hvilket som helst af de foregående krav 1-11, hvilken nukleotid sekvens efterfølges nedstrøms af et polyadenyla-tionssignal. 13. Mammale celler transficeret med et rekombinant plasmid ifølge krav 12. 14. Fremgangsmåde til fremstilling af et protein med biologisk aktivitet med hensyn til blodkoagulation formidlet af faktor Vila, kendetegnet ved, at den omfatter: at der etableres en mammal værtscelle, som indeholder en DNA opbygning ifølge et hvilket som helst af de foregående krav 1-11; at den mammale værtscelle dyrkes i et passende medium; at proteinproduktet, som DNA-opbygningen produceret af den mammale værtscelle koder for, isoleres, og at proteinproduktet aktiveres til frembringelse af et protein, som har den samme eller i alt væsentlig samme biologiske aktivitet med hensyn til blodkoagulation som faktor Vila. 15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, kendetegnet ved, at den omfatter udvidelse af DNA-opbygningen ved co-transficering af værtscellen med et gen, der koder for dihydrofolatreduk tase, hvorhos det passende medium omfatter methotrexat. 16. Fremgangsmåde ifølge krav 14, kendetegnet ved, at proteinproduktet aktiveres ved at omsætte proteinet med et proteolytisk enzym, der er udvalgt fra gruppen bestående af faktor Xlla, faktor IXa, kallikrein, faktor Xa og thrombin. 17. Farmaceutisk sammensætning til behandling af blødningsforstyrrelser, kendetegnet ved, at det indeholder et protein fremstillet ifølge krav 14.