CN110267960A

CN110267960A - 作为RET激酶抑制剂的取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物

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Publication number: CN110267960A
Application number: CN201880007536.2A
Authority: CN
Inventors: S.W.安德鲁斯; J.F.布拉克; J.哈斯; 降于桐; G.R.科拉科夫斯基; D.A.莫雷诺; L.任; S.M.沃尔斯
Original assignee: Array Biopharma Inc
Current assignee: Array Biopharma Inc
Priority date: 2017-01-18
Filing date: 2018-01-18
Publication date: 2019-09-20
Anticipated expiration: 2038-01-18
Also published as: US20200055860A1; CA3049136A1; EP3571203A1; US20220119396A1; EP3571203B1; US11168090B2; ES2948194T3; CA3049136C; CN110267960B; WO2018136661A1; JP6888101B2; JP2020506902A; US11851434B2

Abstract

本文提供的是式I化合物:及其立体异构体和药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A、B、D、E、X¹、X²、X³和X⁴具有说明书中给出的含义，其是RET激酶的抑制剂并可用于治疗和预防可以用RET激酶抑制剂治疗的疾病，包括由RET激酶介导的疾病或病症。

Description

作为RET激酶抑制剂的取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年1月18日提交的U.S.临时申请序列号62/447,862的优先权，以其整体并入本文中作为参考。

背景

本公开涉及在转染(RET)激酶抑制期间表现出重排的新化合物，包含所述化合物的药物组合物，制备所述化合物的方法，以及所述化合物在治疗中的用途。更具体地，其涉及取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物，其可用于治疗和预防可用RET激酶抑制剂治疗的疾病，包括RET相关疾病和病症。

RET是属于酪氨酸激酶超家族的单次跨膜受体，其是几种组织和细胞类型的正常发育、成熟和维持所必需的(Mulligan, L. M., Nature Reviews Cancer, 2014, 14,173-186)。RET激酶的细胞外部分含有四个参与配体结合的钙依赖性钙粘蛋白样重复和RET细胞外结构域的正常折叠所必需的近膜富含半胱氨酸区域，而受体的细胞质部分包括两个酪氨酸激酶亚结构域。

RET信号传递通过神经胶质细胞系衍生的神经营养因子(GDNF)家族配体(GFL)的一组可溶性蛋白质的结合介导，所述GFL还包括Neurturin(NTRN)、Artemin(ARTN)和Persephin(PSPN)(Arighi 等人, Cytokine Growth Factor Rev., 2005, 16, 441-67)。与其它受体酪氨酸激酶不同，RET不直接与GFL结合并且需要另外的共同受体：即四个GDNF家族受体-α(GFRα)家族成员之一，其通过糖基磷脂酰肌醇键连接至细胞表面。GFL和GFRα家族成员形成二元复合物，其接下来与RET结合并将其募集到被称为脂筏的富含胆固醇的膜亚结构域，在其中发生RET信号传导。

在配体-共同受体复合物结合后，细胞内酪氨酸残基上的RET二聚化和自磷酸化募集衔接子和信号传导蛋白以刺激多个下游途径。与这些停靠位点结合的衔接蛋白导致Ras-MAPK和PI3K-Akt/mTOR信号传导途径的活化或泛素连接酶的CBL家族的募集(其在RET介导的功能的RET下调中起作用)。

已经在不同的癌症和胃肠道病症例如肠易激综合征(IBS)中证实了异常的RET表达和/或活性。

发明概述

现已发现取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物为RET激酶的抑制剂，其可用于治疗疾病，诸如癌症等增生性疾病。

因此，本文提供了式I化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A、B、D、E、X¹、X²、X³和X⁴ 如本文所定义。

本文还提供了药物组合物，其包含与药学上可接受的稀释剂或载体混合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本文还提供了在体外或体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞接触有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了在需要这种治疗的患者中治疗RET相关疾病或病症的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了在需要这种治疗的患者中治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了在需要这种治疗的患者中治疗肠易激综合征(IBS)和/或与IBS相关的疼痛的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

还提供了向癌症患者提供支持性护理的方法，包括预防或最小化与治疗，包括化学治疗相关的胃肠病症，例如腹泻，所述方法包括给患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于治疗。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于治疗肠易激综合征(IBS)或与IBS相关的疼痛。

还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于向癌症患者提供支持性护理，包括预防或最小化与治疗，包括化学治疗相关的胃肠病症，例如腹泻。

本文还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其用于抑制RET 激酶活性。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于治疗RET相关的疾病或病症。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制造用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的转移的药物中的用途。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制造用于治疗肠易激综合征(IBS)或与IBS相关的疼痛的药物中的用途。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制造用于向癌症患者提供支持性护理，包括预防或最小化与治疗，包括化学治疗相关的胃肠病症，例如腹泻的药物中的用途。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制造用于抑制RET 激酶活性的药物中的用途。

本文还提供了如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制造用于治疗RET相关的疾病或病症的药物中的用途。

本文还提供了在有需要的患者中治疗癌症的方法，所述方法包括(a)确定癌症是否与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关(例如，RET相关的癌症)；和(b)如果确定癌症与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关(例如，RET相关的癌症)，则给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了用于在有需要的患者中治疗癌症(例如，RET相关的癌症，诸如具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症)的药物组合，其包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)另外的治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的载体，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂被配制成用于同时、单独或依次使用以治疗癌症的单独的组合物或剂量，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对于治疗癌症有效。本文还提供了药物组合物，其包含这样的组合。本文还提供了这样的组合用于制备用于治疗癌症的药物的用途。本文还提供了商业包装或产品，其包含作为用于同时、单独或依次使用的组合制剂的这样的组合；和治疗需要其的患者中的癌症的方法。

本文还提供了用于逆转或预防对抗癌药物的获得性抗性的方法，包括给有发展对抗癌药物的获得性抗性的风险或具有对抗癌药物的获得性抗性的患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，给患者施用一定剂量的抗癌药物(例如，与式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的剂量基本同时施用给患者)。

本文还提供了延迟和/或预防个体中对抗癌药物的癌症抗性的发展的方法，包括在施用有效量的抗癌药物之前、期间或之后给个体施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本文还提供了治疗发展对抗癌药物的抗性的可能性增加的具有癌症的个体的方法，包括在施用(b)有效量的抗癌药物之前、期间或之后给个体施用(a)有效量的式I化合物。

还提供了治疗具有RET相关的癌症的个体的方法，所述个体具有一种或多种增加癌症对第一RET抑制剂的抗性的RET抑制剂抗性突变(例如，以下中的一个或多个氨基酸取代：激酶结构域(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置723-1012)、门卫氨基酸(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置804)、P环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置730-737)、DFG基序(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置892-894)、ATP裂解溶剂前沿氨基酸(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置758、811和892)、激活环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置891-916)、C-螺旋和C-螺旋之前的环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置768-788)和/或ATP结合位点(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置730-733、738、756、758、804、805、807、811、881和892)(例如，在氨基酸位置804，例如，V804M、V804L或V804E的取代，和/或在表3和4中列出的一种或多种RET抑制剂抗性突变)，其包括在施用另一种抗癌药物(例如，第二RET激酶抑制剂)之前、期间或之后施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。也参见J. Kooistra, G. K. Kanev, O. P. J. Van Linden, R. Leurs, I. J. P. De Esch,和C. De Graaf, "KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database,"Nucleic Acids Res., vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, 2016；和O. P. J. VanLinden, A. J. Kooistra, R. Leurs, I. J. P. De Esch, 和C. De Graaf, "KLIFS: Aknowledge-based structural database to navigate kinase-ligand interactionspace," J. Med. Chem., vol. 57, no. 2, pp. 249-277, 2014，这两篇文献都整体并入本文作为参考。在一些实施方案中，野生型RET蛋白是本文所述的示例性野生型RET蛋白。

还提供了治疗具有RET相关的癌症的个体的方法，其包括在施用另一种抗癌药物(例如，第一RET激酶抑制剂)之前、期间或之后施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物,。

本文还提供了在有需要的患者中治疗肠易激综合征(IBS)的方法，所述方法包括(a)确定IBS是否与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关；和(b)如果确定IBS与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关，则给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

本文还提供了用于在有需要的患者中治疗肠易激综合征(IBS)的药物组合，其包括施用(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)另外的治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的载体，用于同时、单独或依次使用以治疗IBS，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对治疗IBS有效。本文还提供了药物组合物，其包含这样的组合。本文还提供了这样的组合用于制备用于治疗IBS的药物的用途。本文还提供了商业包装或产品，其包含作为用于同时、单独或依次使用的组合制剂的这样的组合；和在有需要的患者中治疗IBS的方法。

本文还提供了用于制备式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法。

本文还提供了通过用于制备如本文定义的化合物的方法获得的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

除非另有定义，所有在本文中使用的技术和科学术语具有与由本发明所属的领域的普通技术人员所通常理解的相同含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；另外，也可以使用本领域已知的合适方法和材料。所述材料、方法和实例仅为例示而非意图限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献整体并入本文作为参考。在冲突的情况下，将以包括定义在内的本说明书为准。

本发明的其它特征和优点从以下详述和附图以及权利要求书中将是显而易见的。

发明详述

本文提供了式I化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹是CH、CCH₃、CF、CCl或N；

X²是CH、CF或N；

X³是CH、CF或N；

X⁴是CH、CF或N；

其中X¹、X²、X³和X⁴中的0、1或2个是N；

A是H、Cl、CN、Br、CH₃、CH₂CH₃或环丙基；

B是hetAr¹；

hetAr¹是具有1-3个独立地选自N、S和O的环杂原子的5元杂芳基环，其中杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、氰基C1-C6烷基- (C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，(C1-C4烷氧基)CH₂C(=O)-，(C1-C4烷氧基)C(=O)C1-C3烷基-、C3-C6环烷基、(R^aR^bN)C1-C6烷基-，(R^aR^bN)C(=O)C1-C6烷基-，(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a、hetCyc^aC1-C6烷基-和4-甲氧基苄基；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

hetCyc^a是具有选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中杂环任选地被卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、二(C1-C3烷基)NCH₂C(=O)-，(C1-C6烷氧基)C(=O)-或 (C1-C6烷氧基)CH₂C(=O)-取代；

D是hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹；

hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N和O的环原子的4-6元杂环，其中杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)和OH或所述杂环被C3-C6环烷叉基环取代或所述杂环被氧代基取代；

hetCyc²是具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，其中杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基；

hetCyc³是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-11元杂螺环，其中该环任选地被C1-C3烷基取代；

hetCyc⁹是具有1-3个环氮原子的稠合9-10元杂环，其中杂环任选地被氧代取代；

E是

(a) 氢，

(b) OH，

(c)R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1；

(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，

(f) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，

(h) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(i) (C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基 C1-C6烷基)C(=O)-，

(k) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l) (C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(m) HC(=O)-，

(n) Cyc¹，

(o) Cyc¹C(=O)-，

(p)Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是H或C1-C6烷基，

(q) hetCyc⁴，

(r) hetCyc⁴C(=O)-，

(s) hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，

(t) hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，

(u) hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v) Ar²，

(w) Ar²C(=O)-，

(x) (Ar²)C1-C6烷基-，

(y) (Ar²)羟基 C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基 (任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(aa) hetAr²C(=O)-，

(bb) (hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(cc)hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被苯基取代，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(hh) CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii) (C1-C6烷基)SO₂-，

(jj) (C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk) hetCyc⁵-SO₂-，

(ll) R⁴R⁵NSO₂-，

(mm) R⁶C(=O)NH-，

(nn) hetCyc⁶；

(oo) hetAr²C1-C6烷基-，

(pp) (hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(qq) (C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，其中所述烷氧基部分任选地被1-3个氟取代，

(rr) (C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(ss) (C3-C6环烷基)C1-C6烷基-，其中所述环烷基任选地被1-2个氟取代，

(tt) (R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu) Ar²-O-，

(vv) (C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(xx) (C3-C6环烷氧基)C(=O)-，

(yy) (C3-C6环烷基)SO₂-，其中所述环烷基任选地被C1-C6烷基取代，

(zz) Ar⁴CH₂OC(=O)-，

(aaa) (N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-，

(bbb) (Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-，和

(ccc)(hetAr²)-O-；

Cyc¹是C3-C6环烷基，其中(a)环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基-，(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基或(b)环烷基被苯基取代，其中苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃或(c)环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，其中杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃；

Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、CN、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地选自H和C1-C6烷基；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元单环杂芳基环或具有1-2个环氮原子的9-10元双环杂芳基环，其中hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、CN和R'R''N-，其中R'和R''独立地是H或C1-C3烷基；

hetCyc⁴是(a)具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元杂环，其中所述 S任选地被氧化成SO₂，(b)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，(c)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的6-12元稠合双环杂环，其中杂环任选地被一至两个C1-C6烷基取代基独立地取代，或(d)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-10元螺环杂环，其中每个杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷基)C(=O)-、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；

hetCyc⁵是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环；

hetCyc⁶是具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5元杂环，其中该环被氧代取代并且其中该环进一步任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH和C1-C6烷基；

R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；

R²是H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基- (任选地被1-3个氟取代)、Cyc³、羟基C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C(=O)、hetCyc⁷、Ar³、Ar³C1-C3烷基-、羟基C1-C6烷氧基或(C3-C6环烷基)CH₂O-；

Cyc³是任选地被1-2个基团取代的3-6元碳环，所述基团独立地选自C1-C6烷氧基、OH和卤素；

hetCyc⁷是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环，其中该环任选地被C1-C6烷基取代；

Ar³是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)和C1-C3烷氧基；

R⁴和R⁵独立地是H或C1-C6烷基；

R⁶是C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、苯基或hetCyc⁸；

hetCyc⁸是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代；和

Ar⁴是任选地被一个或多个卤素取代的苯基。

如本文所用，英文原文名词前的单词“a”表示一个或多个所述特定名词。例如，短语“一个细胞”表示“一个或多个细胞”。

对于本文中使用的复杂化学名称，取代基通常在其所连接的基团之前命名。例如，甲氧基乙基包含具有甲氧基取代基的乙基骨架。

术语“卤素”是指-F(本文中有时称为“氟”或“多个氟”)、-Cl、-Br和-I。

本文所用的术语“氮杂环”是指具有一个环氮原子的饱和杂环。

本文所用的术语“C1-C3烷基”和“C1-C6烷基”分别指一至三个或一至六个碳原子的饱和直链或支链一价烃基。实例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、异丙基、1-丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、2-甲基-2-丙基、戊基和己基。任选地被1-3个氟取代的C1-C3烷基或C1-C6烷基包括但不限于氟甲基、3-氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、2,2,氟甲基、1,3-二氟丙-2-基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基和3,3,3-三氟丙基。

本文所用的术语“C1-C3烷氧基”、“C1-C4烷氧基”和“C1-C6烷氧基”分别是指一至三、一至四或一至六个碳原子的饱和直链或支链一价烷氧基，其中基团在氧原子上。实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基。

本文所用的术语“(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-”是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价基团，其中一个碳原子被如本文所定义的(C1-C6烷氧基)基团取代。实例包括甲氧基甲基(CH₃OCH₂-)和甲氧基乙基(CH₃OCH₂CH₂-)。

如本文所用的术语"羟基C1-C6烷基"是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价烷基基团，其中一个碳原子被羟基取代。

如本文所用的术语"羟基C1-C6烷氧基"是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价烷氧基基团，其中一个碳原子被羟基取代。

如本文所用的术语"(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基"指如本文所定义的羟基(C1-C6烷基)基团，其中一个碳原子被如本文所定义的C1-C6烷氧基取代。

如本文所用的术语"Cyc¹(C1-C6烷基)"是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价烷基基团，其中一个碳原子被3-6元环烷基环取代。

如本文所用的术语"Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-"是指(C1-C6烷基)C(=O)-基团，其中C1-C6烷基是具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价基团并且其中C1-C6烷基部分的一个碳原子被C3-C6环烷基取代。

如本文所用的术语"Ar²C1-C6烷基"是指如本文所定义的C1-C6烷基基团，烷基部分的一个碳原子被Ar²取代。

如本文所用的术语"(Ar²)羟基C2-C6烷基"是指如本文所定义的羟基C1-C6烷基基团，其中烷基部分的一个碳原子被Ar²取代。

如本文所用的术语"Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-"是指C1-C6烷基(C=O)-基团，其中C1-C6烷基部分是具有1-3个碳原子的饱和直链或支链一价烷基基团，其中一个碳原子被Ar²取代。

如本文所用的术语"(hetAr²)羟基C2-C6烷基"是指如本文所定义的羟基C2-C6烷基基团，其中一个碳原子被hetAr²取代。

如本文所用的术语"hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-"是指C1-C6烷基(C=O)-基团，其中C1-C6烷基部分是具有1-3个碳原子的饱和直链或支链一价烷基基团，其中一个碳原子被hetAr²取代。

如本文所用的术语"R¹R²NC(=O)C1-C6烷基"是指C1-C6烷基基团，其中一个碳原子被R¹R²NC(=O)-基团取代。

如本文所用的术语"R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-"是指C1-C3烷基(C=O)-基团，其中C1-C6烷基部分是具有1-3个碳原子的饱和直链或支链一价烷基基团，其中一个碳原子被R¹R²N-基团取代，其中R¹和R² 如针对式I所定义。

如本文所用的术语"(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基"是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价基团，其中一个碳原子被(C1-C6烷基)SO₂-基团(例如，(CH₃)₂CH₂SO₂-基团)取代。

如本文所用的术语"(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基"是指具有1-6个碳原子的饱和直链或支链一价基团，其中一个碳原子被(Ar⁴)SO₂-基团取代。

如本文所用的术语“桥连杂环”是指双环杂环，其中环的两个共有的非相邻碳原子通过1、2、3或4个碳原子的亚烷基桥连接。桥联杂环系统的实例包括3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷和7-氮杂双环[2.2.1]庚烷。

如本文所用的术语“螺环”是指具有两个经由共同的单个碳原子通过螺环键结合的环的基团，其中每个环是4-7元环(包括共同的碳原子)。

如本文所用的术语“杂螺环”是指具有两个经由碳原子通过螺环键结合的环的基团，其中每个环具有4-6个环原子(一个环原子对于两个环是共同的)，并且其中1或2个环原子是选自N和O的杂原子，条件是杂原子不相邻。实例包括2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2,5-二氮杂螺[3.4]辛烷、2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷、6-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷、7-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷、7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷、2,6-二氮杂螺[3.5]壬烷、2,5-二氮杂螺[3.5]壬烷、1,6-二氮杂螺[3.4]辛烷、1,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,7-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,6-二氮杂螺[4.5]癸烷、1,7-二氮杂螺[3.5]壬烷、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷、1,6-二氮杂螺[3.5]壬烷、1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,7-二氮杂螺[4.5]癸烷、1,7-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,9-二氮杂螺[5.5]十一烷和7-氮杂螺[3.5]壬烷。

如本文所用，术语“环烷叉基环”是指二价碳环。后缀“叉基”是指通过从相同的碳原子上除去两个氢原子而衍生自饱和烃的二价基团。

如本文所用的术语“化合物”意在包括所描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。除非另有说明，本文中通过名称或结构鉴定为一种特定互变异构形式的化合物旨在包括其它互变异构形式。

如本文所用的术语“互变异构体”是指其结构在原子排列上显著不同但存在容易和快速平衡的化合物，并且应理解本文提供的化合物可描述为不同的互变异构体，并且当化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式都在本发明的范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体。

如本文所用的术语“氧代”是指与碳原子双键连接的氧。例如，被氧代基团取代的杂环的非限制性实例是以下结构：

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本文所用的术语“(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基”是指如本文所定义的C1-C6烷基，其中烷基部分的一个碳原子被2-氧代-1,2-二氢吡啶取代，所述2-氧代-1,2-二氢吡啶在吡啶酮氮上被1-3个碳取代。实例包括1-甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮。

在式I的一个实施方案中，X¹是CH、CCH₃、CF或CCl，X²是CH或CF，X³是CH或CF，和X⁴是CH或CF。在一个实施方案中，X¹是CH或CH₃，X²是CH，X³是CH，和X³是CH。在一个实施方案中，X¹、X²、X³和X⁴中的每一个是CH。

在式I的一个实施方案中，X¹是CH、CCH₃、CF、CCl或N，X²是CH、CF或N，X³是CH、CF或N，和X⁴是CH、CF或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的一个是N。

在一个实施方案中，X¹是N、CH或CH₃，X²是CH或N，X³是CH或N，和X³是CH或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的一个是N。

在式I的某些实施方案中，X¹是N，X²是CH或CF，X³是CH或CF，和X⁴是CH或CF。在一个实施方案中，X¹是N，和X²、X³和X⁴是CH。

在式I的一个实施方案中，X¹是CCH₃，X²是CH、CF或N；X³是CH、CF或N，和X⁴是CH、CF或N；其中X²、X³和X⁴中的一个是N。在一个实施方案中，X¹是CCH₃，X²是N；X³是CH或CF，和X⁴是CH或CF。在一个实施方案中，X¹是CCH₃，X²是N，和X³和X⁴是CH。

在式I的一个实施方案中，X¹是CH、CCH₃、CF、CCl或N；X²是CH、CF或N；X³是CH、CF或N；和X⁴是CH、CF或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的两个是N。

在式I的一个实施方案中，X¹和X²是N，和X³和X⁴是CH或CF。在一个实施方案中，X¹和X²是N，和X³和X⁴是CH。

在一个实施方案中，X¹和X³是N，和X²和X⁴是CH或CF。在一个实施方案中，X¹和X³是N，和X²和X⁴是CH。

在一个实施方案中，A是H。

在一个实施方案中，A是Cl。

在一个实施方案中，A是CN。

在一个实施方案中，A是Br。

在一个实施方案中，A是CH₃。

在一个实施方案中，A是CH₃CH₂-。

在一个实施方案中，A是环丙基。

在一个实施方案中，A是H、Cl或CN。

在一个实施方案中，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基噻唑基、噻二唑基、三唑基或噁二唑基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、氰基C1-C6烷基-(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，(C1-C4烷氧基)CH₂C(=O)-，(C1-C4烷氧基)C(=O)C1-C3烷基-、C3-C6环烷基、(R^aR^bN)C1-C6烷基-，(R^aR^bN)C(=O)C1-C6烷基-，(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a、hetCyc^aC1-C6烷基-和4-甲氧基苄基。

在一个实施方案中，B是hetAr¹，其中hetAr¹是具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子并任选地被一个或多个取代基取代的5元杂芳基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a和hetCyc^aC1-C6烷基。在一个实施方案中，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a和hetCyc^aC1-C6烷基。

在一个实施方案中，B是hetAr¹，其中hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基环，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在一个实施方案中，B是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和羟基C1-C6烷基-。

在一个实施方案中，B是任选地被一个或多个独立地选择的C1-C6烷基取代基取代的吡唑基。

hetAr¹的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹，其中hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N和O的环原子的4-6元杂环，其中杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)和OH或杂环被C3-C6环烷叉基环取代或杂环被氧代基取代。

在一个实施方案中，hetCyc¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或氮杂环丁烷基环，所述取代基独立地选自C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)和OH或hetCyc¹是被C3-C6环烷叉基环取代的哌嗪基环或所述杂环是被氧代基取代的哌嗪基环。

在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的4-6元杂环，其中所述环任选地被C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)或OH取代。非限制性实例包括以下结构:

其中星号表示与E基团的连接点并且波浪线表示与包含X¹、X²、X³和X⁴的环的连接点，其中X¹、X²、X³、X⁴ 和E如针对式I所定义。

在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的4-6元杂环，其中所述环任选地被C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)或OH取代。在一个实施方案中，hetCyc¹ 由以下结构表示:

其中星号表示与E基团的连接点并且波浪线表示与包含X¹、X²、X³和X⁴的环的连接点，其中X¹、X²、X³、X⁴ 和E如针对式I所定义。在一个实施方案中，E是(a) 氢，(b) OH，(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1，(f)任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，(m)HC(=O)-，(r)hetCyc⁴C(=O)-，(u)hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，(v)Ar²，(x)(Ar²)C1-C6烷基-，(dd) R¹R²NC(=O)-，(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，(gg)R¹R²NC(=O)NH-，(ll) R⁴R⁵NSO₂-，(mm)R⁶C(=O)NH-，(nn)hetCyc⁶，(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，(uu)Ar²-O-或(ccc)hetAr²-O-，其中hetCyc⁴、Ar²、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、hetCyc⁶和hetAr² 如针对式I所定义。

在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的4-6元杂环，其中所述环任选地被C3-C6环烷叉基环或氧代取代。在一个实施方案中，hetCyc¹ 由以下结构表示:

其中星号表示与E基团的连接点并且波浪线表示与包含X¹、X²、X³和X⁴的环的连接点，其中E如针对式I所定义。在一个实施方案中，E是(a)氢，(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，(h)(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，(i)(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基，(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，(l)(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，(n)Cyc¹，(o)Cyc¹C(=O)-，(p)Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和 R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是H或C1-C6烷基，(q)hetCyc⁴，(r)hetCyc⁴C(=O)-，(s)hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，(t)hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，(w)Ar²C(=O)-，(x)(Ar²)C1-C6烷基-，(y)(Ar²)羟基C2-C6烷基-，(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，(aa)hetAr²C(=O)-，(bb)(hetAr²)羟基C2-C6烷基-，(cc)hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，(dd)R¹R²NC(=O)-，(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被苯基取代，(ff)R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，(hh)CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，(ii)(C1-C6烷基)SO₂-，(jj)(C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，(kk)hetCyc⁵-SO₂-，(ll)R⁴R⁵NSO₂-，(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，(pp)(hetCyc⁴)C1-C6烷基-，(qq) (C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，其中所述烷氧基部分任选地被1-3个氟取代，(rr)(C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，(ss)(C3-C6环烷基)C1-C6烷基-，(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，(vv)(C1-C6烷基)SO₂C1-C6烷基-，(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，(yy) (C3-C6环烷基)SO₂-，其中所述环烷基任选地被C1-C6烷基取代，(aaa)(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-或(bbb)(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-，其中Cyc¹、hetCyc⁴、Ar²、hetAr²、R¹、R²、R⁴、R⁵和Ar⁴ 如针对式I所定义。

在D-E基团的一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是氢。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有1-2个环氮原子的4-6元杂环，其中该环任选地被C3-C6环烷叉基环取代。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是OH。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的5-6元杂环，其中该环任选地被三氟C1-C3烷基取代。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基、R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6元杂环，其中该环任选地被C1-C3烷基取代。非限制性实例包括以下结构:

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在D-E基团的一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有1-2个环氮原子的6-元杂环，其中杂环任选地被环丙基取代。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环，其中杂环任选地被环丙基取代。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷氧基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有1-2个环氮原子的6-元杂环，其中杂环任选地被环丙基或C1-C3烷基取代。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是HC(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元杂环。非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Cyc¹，其中Cyc¹是C3-C6环烷基，其中环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。在一个实施方案中，Cyc¹是任选地被OH取代的C3-C6环烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是Cyc¹时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Cyc¹C(=O)-，其中Cyc¹如针对式I所定义。在一个实施方案中，Cyc¹是C3-C6环烷基，其中环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、CN、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-或任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基或环烷基被苯基取代，其中苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃或环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，其中杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃。在一个实施方案中，环烷基被苯基取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是Cyc¹C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和 R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是 H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，Cyc¹是任选地被一个或多个取代基取代的C3-C6环烷基，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。在一个实施方案中，Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-的烷基部分是未取代的。在一个实施方案中，Cyc¹是未取代的。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-时的非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴是具有选自O和S的环杂原子的4-6元杂环，其中S任选地被氧化成SO₂，并且其中杂环任选地被OH或C1-C6烷氧基取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C3-C6)环烷基、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一个实施方案中，该环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基和(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的4-6元杂环。在一个实施方案中，hetCyc⁴是未取代的。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。当D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-时的非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴ 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基和(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元杂环。

当D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Ar²，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N和O的环原子的4-6元杂环。当D是hetCyc¹并且E是Ar²时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Ar²C(=O)-，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素或具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(Ar²)C1-C6烷基-，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、CN和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地选自H和C1-C6烷基。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、CN和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地选自H和C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的4-6-元环，其中所述环任选地被氧代或OH取代。当D是hetCyc¹并且E是(Ar²)C1-C6烷基-时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(Ar²)羟基C2-C6烷基-，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个卤素取代的苯基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。当D是hetCyc¹并且E是(Ar²)羟基C2-C6烷基-时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中Ar²如针对式I所定义并且烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是哌嗪基。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中Ar²如针对式I所定义并且烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地为H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。当D是hetCyc¹并且E是Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetAr²C(=O)-，其中hetAr²如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基、(C3-C6)环烷基和(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。当D是hetCyc¹并且E是hetAr²C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(hetAr²)羟基C2-C6烷基-，其中hetAr²如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetAr²是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环，其中所述环是未取代的。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中hetAr²如针对式I所定义并且烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-的烷基部分是未取代的。在一个实施方案中，hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素和C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。其中D是hetCyc¹并且E是hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R¹R²NC(=O)-，其中R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和R²是C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、Cyc³、羟基C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、hetCyc⁷、Ar³、Ar³CH₂-、羟基C1-C6烷氧基或(C3-C6环烷基)CH₂O-。在一个实施方案中，hetCyc¹ 任选地被C1-C3烷基取代。当D是hetCyc¹并且E是R¹R²NC(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中C1-C3烷基部分任选地被苯基取代。在一个实施方案中，R¹是H或C1-C6烷基和R²是H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)或(C1-C6烷氧基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，R¹是H或C1-C6烷基和R²是C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有1-2个环氮原子的4-6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R¹R²NC(=O)NH-，其中R¹是H或C1-C6烷基和R²是C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷基)SO₂-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C3-C6环烷基)CH₂SO₂-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁵-SO₂-，其中hetCyc⁵是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R⁴R⁵NSO₂-，其中R⁴和R⁵独立地是H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是R⁶C(=O)NH-，其中R⁶是C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、苯基或hetCyc⁸。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是hetCyc⁶，其中hetCyc⁶是具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5元杂环，其中该环被氧代取代并且其中该环进一步任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH和C1-6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(hetAr²)C1-C6烷基-，其中hetAr²如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环，其中所述环任选地被OH取代。当D是hetCyc¹并且E是(hetAr²)C1-C6烷基-时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是 (hetCyc⁴)C1-C6烷基-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被(C1-C6烷基)C(=O)-取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环。当D是hetCyc¹并且E是 (hetCyc⁴)C1-C6烷基-时的非限制性实施方案包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，其中所述烷氧基部分任选地被1-3个氟取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C3-C6环烷基)C1-C6烷基-，其中所述环烷基任选地被1-2个氟取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个或两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是Ar²-O-，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是任选地被一个或多个基团取代的苯基，所述基团独立地选自卤素和CN。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有一个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷基)SO₂C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(C3-C6环烷基)SO₂-，其中所述环烷基任选地被C1-C6烷基取代。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-，其中Ar⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc¹并且E是(hetAr²)-O-，其中hetAr²如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一个实施方案中，hetCyc¹是具有两个环氮原子的6-元环。非限制性实例包括以下结构:

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在式I的一个实施方案中，D是hetCyc²，其中hetCyc²是具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，其中杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基。在一个实施方案中，hetCyc²是具有1-2个环氮原子的7-8元桥联杂环，其中该环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基。在一个实施方案中，hetCyc²是未取代的。当由hetCyc²表示时D的非限制性实例包括以下结构:

在一个实施方案中，hetCyc²是:

在式I的一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是(a) 氢，(b) OH，(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1，(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，(f) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，(i) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-，(k) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，(o) Cyc¹C(=O)-，(x) (Ar²)C1-C6烷基-，(y) (Ar²)羟基C2-C6烷基-，(ee) R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被苯基取代，(mm) R⁶C(=O)NH-或(oo)hetAr²C1-C6烷基-，其中Cyc¹、Ar²、R¹、R²、hetAr²和R⁶ 如针对式I所定义。

在式I的一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是(a) 氢，(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1，(mm) R⁶C(=O)NH-或(oo)hetAr²C1-C6烷基-，其中R⁶和hetAr² 如针对式I所定义。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是氢。在一个实施方案中，hetCyc²是具有1-2个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是OH。在一个实施方案中，hetCyc²是具有一个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1。在一个实施方案中，hetCyc²是具有一个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基。在一个实施方案中，hetCyc²是具有一个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是(C1-C6烷氧基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是(Ar²)C1-C6烷基，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是未取代的苯基。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。当D是hetCyc²并且E是(Ar²)C1-C6烷基时的非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是R⁶C(=O)NH-，其中R⁶如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc²并且E是 hetAr²C1-C6烷基-，其中hetAr²如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc²是具有两个环氮原子的7-8元桥联杂环。非限制性实例是以下结构:

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在式I的一个实施方案中，D是hetCyc³，其中hetCyc³是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-11元杂螺环并且其中该环任选地被C1-C3烷基取代。在一个实施方案中，hetCyc³是未取代的。当D由hetCyc³代表时的非限制性实例包括以下结构:

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E选自(a) 氢，(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1，(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基，(i) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-，(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，(o) Cyc¹C(=O)-，(p)Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)，(r)hetCyc⁴C(=O)-，(w) Ar²C(=O)-，(x)(Ar²)C1-C6烷基-，(y) (Ar²)羟基C2-C6烷基-，(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，(dd) R¹R²NC(=O)-，(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，(mm) R⁶C(=O)NH-，(xx)(C3-C6环烷氧基)C(=O)-和(zz)Ar⁴CH₂OC(=O)-。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是氢。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是 R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1。在一个实施方案中，R'和R''是H。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是(C1-C6烷氧基)C(=O)-。非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Cyc¹C(=O)-，其中Cyc¹如针对式I所定义。在一个实施方案中，Cyc¹是未取代的。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是 H或C1-C6烷基和Cyc¹如针对式I所定义。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分是未取代的，并且Cyc¹如针对式I所定义。在一个实施方案中，Cyc¹是未取代的 C3-C6环烷基。

当D是hetCyc³并且E是Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-时的非限制性实例包括以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是hetCyc⁴C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。在一个实施方案中，hetCyc⁴是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中所述环是未取代的。当D是hetCyc³并且E是hetCyc⁴C(=O)-时的非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Ar²C(=O)-，其中Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，Ar²是未取代的。一个非限制性实例是以下结构:

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在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是(Ar²)C1-C6烷基-。在一个实施方案中，Ar²是苯基，其是未取代的。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代和Ar²如针对式I所定义。在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分是未取代的。在一个实施方案中，Ar²是苯基，其是未取代的。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是R¹R²NC(=O)-，其中R¹和R² 如针对式I所定义。在一个实施方案中，R¹是H或C1-C6烷基和 R²是H或任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。非限制性实例包括以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中C1-C3烷基部分任选地被苯基取代，和R¹和R²如针对式I所定义。在一个实施方案中，R¹是H或C1-C6烷基和R²是H或任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是R⁶C(=O)NH-，其中R⁶是C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、苯基或hetCyc⁸。在一个实施方案中，R⁶是C1-C6烷氧基。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是(C3-C6环烷氧基)C(=O)-。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，D是hetCyc³并且E是Ar⁴CH₂OC(=O)-。非限制性实例是以下结构:

。

在一个实施方案中，式I包括式I-A的化合物，其中:

X¹是CH或N，并且X²、X³和X⁴中的每一个是CH；

A是H、Cl或CN；

B是hetAr¹；

hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a和hetCyc^aC1-C6烷基；

D是hetCyc¹或hetCyc²；

hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)或所述杂环被环烷叉基环取代或所述杂环被氧代基取代；

E是

(a) 氢，

(b) OH，

(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1，

(d)任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基，

(f)任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，

(h) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，

(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l)(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(m)HC(=O)-，

(n)Cyc¹，

(o)Cyc¹C(=O)-，

(p)Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和 R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是H或C1-C6烷基，

(q)hetCyc⁴，

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(s)hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，

(t)hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，

(u)hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v)Ar²，

(w)Ar²C(=O)-，

(x)(Ar²)C1-C6烷基)-，

(y)(Ar²)羟基C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(aa)hetAr²C(=O)-，

(bb)(hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(cc)hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被苯基取代，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(hh)CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii)(C1-C6烷基)SO₂-，

(jj)(C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk)hetCyc⁵-SO₂-，

(ll)R⁴R⁵NSO₂-，

(mm)R⁶C(=O)NH-，

(nn)hetCyc⁶，

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，

(pp)(hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(rr) (C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu)Ar²-O-，

(vv)(C1-C6烷基)SO₂C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(aaa)(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-，

(bbb)(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-或

(ccc)hetAr²-O-；

Cyc¹是C3-C6环烷基，其中(a)环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基或(b)环烷基被苯基取代，其中苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃或(c)环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，其中杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃；

Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基 (任选地被1-3个氟取代)、CN、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地选自H和C1-C6烷基；

hetCyc⁴是(a)具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元杂环，其中所述 S任选地被氧化成SO₂，(b)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，(c)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的6-12元稠合双环杂环，其中杂环任选地被一至两个C1-C6烷基取代基独立地取代或(d)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-10元螺环杂环，其中每个杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷基)C(=O)-、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；

R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；

R²是H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、Cyc³、羟基C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C(=O)、hetCyc⁷、Ar³、Ar³C1-C3烷基-、羟基C1-C6烷氧基或(C3-C6环烷基)CH₂O-；

R⁴和R⁵独立地是H或C1-C6烷基；

Ar⁴是任选地被一个或多个卤素取代的苯基。

在一个实施方案中，式I包括式I-B化合物，其中:

X¹是N并且X²、X³和X⁴中的每一个是CH；

A是CN；

B是hetAr¹；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

hetCyc^a是具有选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中杂环任选地被卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、二(C1-C3烷基)NCH₂C(=O)-、(C1-C6烷氧基)C(=O)-或 (C1-C6烷氧基)CH₂C(=O)-取代；

D是hetCyc¹；

hetCyc¹是

其中星号表示与E基团的连接点并且波浪线表示与包含X¹、X²、X³和X⁴的环的连接点；

E是

(a)氢，

(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，

(h)(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，

(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l)(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(n)Cyc¹，

(o)Cyc¹C(=O)-，

(q)hetCyc⁴，

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(s)hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，

(t)hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，

(w)Ar²C(=O)-，

(x)(Ar²)C1-C6烷基-，

(y)(Ar²)羟基C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(aa)hetAr²C(=O)-，

(bb)(hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(dd)R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被苯基取代，

(ff)R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(hh)CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii)(C1-C6烷基)SO₂-，

(jj)(C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk)hetCyc⁵-SO₂-，

(ll)R⁴R⁵NSO₂-，

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，

(pp)(hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(rr)(C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(ss)(C3-C6环烷基)C1-C6烷基-，

(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(vv)(C1-C6烷基)SO₂C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(aaa)(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-或

(bbb)(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-；

并且hetCyc¹、Cyc¹、hetCyc⁴、Ar²、hetAr²、R¹、R²、hetCyc⁵、R⁴、R⁵和Ar⁴ 如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN。

在式I-B的一个实施方案中，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN并且hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-B的一个实施方案中，E是(i) (C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基，(r)hetCyc⁴C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义，(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代和其中Ar²如针对式I所定义或(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，其中hetAr²如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，E是(i) (C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(i) (C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代或所述烷基部分被R'R''N-或R'R''NCH₂-取代，其中R'和R''独立地是H或C1-C6烷基。

在式I-B的一个实施方案中，E是(r)hetCyc⁴C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(r)hetCyc⁴C(=O)-，其中hetCyc⁴如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，E是(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代和其中Ar²如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和 E是(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代和其中Ar²如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，E是(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，其中hetAr²如针对式I所定义。

在式I-B的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，其中hetCyc^a和hetAr² 如针对式I所定义。

在一个实施方案中，式I包括式I-C化合物，其中:

X¹是N并且X²、X³和X⁴中的每一个是CH；

A是CN；

B是hetAr¹；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

D是hetCyc¹；

hetCyc¹是

E是

(a) 氢，

(b) OH，

(f)任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，

(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(m)HC(=O)-，

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(u)hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v)Ar²，

(x)(Ar²)C1-C6烷基-，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(ll) R⁴R⁵NSO₂-，

(mm)R⁶C(=O)NH-，

(nn)hetCyc⁶，

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，

(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu)Ar²-O-或

(ccc)hetAr²-O-，

其中hetCyc⁴、Ar²、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、hetCyc⁶和hetAr² 如针对式I所定义。

在式I-C的一个实施方案中，A是CN。

在式I-C的一个实施方案中，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-C的一个实施方案中，A是CN并且hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-C的一个实施方案中，E是(x)(Ar²)C1-C6烷基-，(mm) R⁶C(=O)NH-或(ccc)hetAr²-O-。

在式I-C的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(x)(Ar²)C1-C6烷基-。

在式I-C的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(mm) R⁶C(=O)NH-。

在式I-C的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)和E是(ccc)hetAr²-O-。

在一个实施方案中，式I包括式I-D化合物，其中:

X¹是N并且X²、X³和X⁴中的每一个是CH；

A是CN；

B是hetAr¹；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

D是hetCyc²；

hetCyc²是:

E是

(a) 氢，

(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1；

(mm) R⁶C(=O)NH-或

(oo) hetAr²C1-C6烷基-；

R⁶是C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、苯基或hetCyc⁸；和

hetCyc⁸是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代。

在式I-D的一个实施方案中，A是CN。

在式I-D的一个实施方案中，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-D的一个实施方案中，A是CN并且hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

在式I-D的一个实施方案中，hetCyc²是:

。

在式I-D的一个实施方案中，A是CN并且hetCyc²是

。

在式I-D的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)；和hetCyc²是

。

在式I-D的一个实施方案中，A是CN，hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)；hetCyc²是

；

并且E是(a) 氢。

；

并且E是(c) R'R''N(CH₂)_n-，其中R'是H或C1-C6烷基，R''是H、C1-C6烷基或苯基，且n是0或1。

；

并且E是(mm) R⁶C(=O)NH-。

；

并且E是(oo) hetAr²C1-C6烷基-。

应理解，本文提供的某些化合物可含有一个或多个不对称中心，因此可以以异构体混合物(例如外消旋混合物)或对映体纯形式制备和分离。

还应理解，式I化合物或其盐可以以溶剂化物的形式分离，因此任何这样的溶剂化物都包括在本发明的范围内。例如，式I化合物及其盐可以非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。

式I化合物包括其药学上可接受的盐。此外，式I化合物还包括这些化合物的其它盐，其不一定是药学上可接受的盐，并且其可以用作制备和/或纯化式I化合物和/或用于分离式I化合物的对映体的中间体。盐的非限制性实例包括式I化合物的一氯化物、二氯化物、三氟乙酸和二-三氟乙酸盐。

在一个实施方案中，式I化合物包括实施例1-121的化合物和其立体异构体和药学上可接受的盐和溶剂化物。在一个实施方案中，实施例1-121的化合物为游离碱形式。在一个实施方案中，实施例1-121的化合物是一氯化物、二氯化物、三氟乙酸或二-三氟乙酸盐。

术语“药学上可接受的”表示该物质或组合物在化学和/或毒理学上与包括制剂的其它成分和/或用其治疗的患者是相容的。

本文提供的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。也就是说，特别是当关于根据式I的化合物提及时，原子包括天然存在或合成产生的该原子的具有天然丰度或同位素富集形式的所有同位素和同位素混合物。例如，当提及氢时，应理解为是指¹H、²H、³H或其混合物；当提及碳时，应理解为是指¹¹C、¹²C、¹³C、¹⁴C或其混合物；当提及氮时，应理解为是指¹³N、¹⁴N、¹⁵N或其混合物；当提及氧时，应理解为是指¹⁴O、¹⁵O、¹⁶O、¹⁷O、¹⁸O或其混合物；和当提及氟时，应理解为是指¹⁸F、¹⁹F或其混合物。因此，本文提供的化合物还包含具有一个或多个原子的一种或多种同位素及其混合物的化合物，包括放射性化合物，其中一种或多种非放射性原子已被其放射性富集的同位素之一代替。放射性标记的化合物可用作治疗剂，例如癌症治疗剂、研究试剂如测定试剂和诊断试剂，例如体内成像试剂。本文中提供的化合物的具有或不具有放射性的所有同位素变体意在被涵盖在本发明的范围内。

为了说明的目的，方案1-4显示了制备本文提供的化合物以及关键中间体的一般方法。有关各个反应步骤的更详细说明，请参阅下面的实施例部分。本领域技术人员将理解，可以使用其它合成途径来合成本发明化合物。尽管在方案中描述了特定的起始原料和试剂并在下面讨论，但是可以容易地取代其它起始原料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，根据本公开内容，使用本领域技术人员熟知的常规化学方法，可以进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。

方案1显示合成化合物13的一般方案，其中A是CN，且B、X¹、X²、X³、X⁴和E如针对式I所定义，且D环如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义，以及合成化合物13a的一般方案，其中A是CN，D如针对式I所定义，条件是D环通过D环中的环氮原子与由X¹、X²、X³和X⁴定义的环偶联，X¹、X²、X³、X⁴ 条件是X¹和X²中的至少一个是氮，并且B、X³、X⁴和E如针对式I所定义。

通过用市售的3-溴-5-甲氧基吡啶处理MSH试剂得到化合物2。胺化试剂O-均三甲苯基磺酰基羟胺(MSH)可如Mendiola, J., 等人, Org. Process Res. Dev. 2009, 13(2), 263-267中所述制备。化合物 2可以与丙炔酸乙酯反应，得到吡唑并[1,5-a]吡嗪，化合物3A和3B的混合物，其通常以约2：1至9：1的比例获得。化合物3A和3B的混合物可以在升高的温度下用48％HBr处理，然后重结晶或色谱纯化以分离作为次要异构体的化合物4A和作为主要异构体的化合物4B。

分离的化合物4B可以使用POCl₃用甲酰基官能化，然后纯化，得到化合物5。可以使用NH₂OH将化合物5的甲酰基转化为肟基，得到化合物6。可以使用乙酸酐将化合物6的肟基转化为腈基，得到化合物7。B基团可以通过使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd₂(dba)₃、X-Phos和Na₂CO₃)用具有式hetAr¹-B(OR^a)(OR^b)的相应硼酸酯处理化合物7来安装，其中hetAr¹如针对式I所定义且R^a和R^b为H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，以提供化合物8，其中B是如针对式I化合物所定义的hetAr¹。化合物8的甲氧基可通过用三氯化铝处理化合物8转化为羟基，以提供化合物9。通过用三氟甲磺酸化试剂，例如1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺处理化合物9，可以将化合物9的游离羟基转化为三氟甲磺酸酯基团，得到化合物10。化合物12可通过使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd₂(dba)₃、X-Phos和Na₂CO₃)使化合物10与相应的硼酸酯化合物11偶联来制备，其中Z为-B(OR^a)(OR^b)且R^a和R^b为H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，其中如果化合物11的D环包含未取代的环氮原子，则在偶联之前用适当的胺保护基保护氮原子。保护基团(如果存在于化合物12的D环上)可以在标准条件下除去(例如，可以通过在酸性条件(例如使用HCl)下处理化合物12除去Boc保护基团)，得到化合物13，其中E是H。或者，可以以在如下所述的标准条件下将去保护的D环官能化以安装E基团，提供化合物13，其中E如针对式I所定义(除了E不是H以外)。

或者，化合物10可以使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如Pd(PPh₃)₄和Na₂CO₃)与化合物14偶联，提供化合物15。化合物15可以在合适的S_NAr条件下(例如，任选地在碱如K₂CO₃存在下和在升高的温度下)与化合物16反应，提供化合物12a，其中如果化合物16的D环包含第二个未取代的环氮原子，则在偶联之前用适当的胺保护基保护第二个氮原子。保护基团(如果存在于化合物12a的D环上)可以在标准条件下除去(例如，可以通过将化合物12a处理至酸性条件，例如HCl除去Boc基团)，得到化合物13a，其中E是H。或者，可以以在如下所述的标准条件下将去保护的D环官能化以安装E基团，提供化合物13a，其中E如针对式I所定义(除了E不是H以外)。

方案2显示合成化合物13的另一种途径，其中A是CN，且B、X¹、X²、X³、X⁴和E如针对式I所定义，且D环如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义。化合物4A(如方案1中制备)可以使用POCl₃用甲酰基官能化以提供化合物17。可以使用NH₂OH将甲酰基转化为肟基，得到化合物18。可以使用乙酸酐将肟基转化为腈基，得到化合物19。通过用三氯化铝处理化合物19，可以将化合物19的甲氧基转化为羟基，得到化合物20。化合物21可通过使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd₂(dba)₃和Na₂CO₃)使化合物20与相应的硼酸酯化合物11偶联来制备，其中Z为-B(OR^a)(OR^b)且R^a和R^b为H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，其中如果化合物11的D环包含未取代的环氮原子，则在偶联之前将氮原子用适当的胺保护基保护。通过用三氟甲磺酸化试剂，例如1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺处理化合物21，可以将化合物21的游离羟基转化为三氟甲磺酸酯基团，得到化合物22。B基团可以通过使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd₂(dba)₃、X-Phos和Na₂CO₃)用具有式hetAr¹-B(OR^a)(OR^b)的相应硼酸酯处理化合物22来安装，其中hetAr¹如针对式I所定义且R^a和R^b为H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，以提供化合物12，其中B是如针对式I化合物所定义的hetAr¹。保护基团(如果存在于化合物12的D环上)可以在标准条件下除去(例如，Boc基团可以通过处理化合物12至酸性条件(例如在丙-2-醇中的HCl)下来除去)，得到化合物13，其中E是H。或者，可以以在如下所述的标准条件下将去保护的D环官能化以安装E基团，提供化合物13，其中E如针对式I所定义(除了E不是H以外)。

方案3显示合成化合物28的一般方案，其中A是Cl，且B、X¹、X²、X³、X⁴和E如针对式I所定义，且D环如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义。可以使用N-氯代琥珀酰亚胺将化合物 4B (如方案1中制备)氯化，得到化合物23。B基团可以通过使用适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd(PPh₃)₄和Na₂CO₃)使化合物23与具有式hetAr¹-B(OR^a)(OR^b)的相应硼酸酯偶联来安装，其中hetAr¹如针对式I所定义且R^a和R^b为H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，以提供化合物24，其中B是如针对式I化合物所定义的hetAr¹。化合物24的甲氧基可在标准条件下，例如通过用BBr₃处理化合物24转化为羟基，得到化合物25。可以通过在碱，例如，1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺和DIEA存在下用适当的三氟甲磺酸化试剂处理化合物 25，可以将化合物 25的游离羟基转化为三氟甲磺酸酯基团，得到化合物 26。化合物27可以通过使用标准偶联条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd(PPh₃)₄和Na₂CO₃)使化合物26与相应的硼酸酯化合物11偶联来制备，其中Z是-B(OR^a)(OR^b)且R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，其中如果化合物11的D环包含未取代的环氮原子，则在偶联之前用适当的胺保护基保护氮原子。保护基团(如果存在于化合物27的D环上)可以在标准条件下除去(例如，Boc基团可以通过用酸(例如，在丙-2-醇中的5-6 N HCl)处理化合物 27来除去)，得到化合物 28，其中E是H。或者，可以以在如下所述的标准条件下将去保护的D环官能化以安装E基团，提供化合物28，其中E如针对式I所定义(除了E不是H以外)。

方案4显示合成化合物33的一般方案，其中A是H，并且B、X¹、X²、X³、X⁴、D和E如针对式I所定义。化合物4B(如方案1中制备)可以在适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd₂(dba)₃和Na₂CO₃)下与具有式hetAr¹-B(OR^a)(OR^b)的合适的硼酸酯偶联，其中hetAr¹如针对式I所定义，R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，以安装B基团以提供化合物29，其中B是如针对式I所定义的hetAr¹。通过用三氯化铝处理化合物29可以将化合物29的甲氧基转化为羟基以提供化合物30。通过在适当的溶剂如THF中在碱如1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺和DIEA存在下用三氟甲磺酸化试剂处理化合物33，可以将化合物30的游离羟基转化为三氟甲磺酸酯基团，得到化合物31。化合物32可以通过在适当的钯催化的交叉偶联反应条件，例如Suzuki偶联反应条件(例如，在升高的温度下在无机碱存在下的钯催化剂和任选的配体，例如在二噁烷中的Pd(PPh₃)₄和Na₂CO₃)下将化合物31与化合物11偶联来制备，其中如果化合物11的D环包含未取代的环氮原子，则在偶联之前用适当的胺保护基保护氮原子。保护基团(如果存在于化合物32的D环上)可以在标准条件下除去(例如，Boc基团可以通过在酸性条件(例如在丙-2-醇中的HCl)下处理化合物32来除去)，得到化合物33，其中E是H。或者，可以以在如下所述的标准条件下将去保护的D环官能化以安装E基团，提供化合物33，其中E如针对式I所定义(除了E不是H以外)。

使用本领域技术人员熟知的标准化学，可以将方案1-4中描述的化合物13、13a、28和33中的任一个的D环官能化以安装E基团，其中E是如针对式I所定义的E基团中的任一种(除了H以外)。

例如，酰胺衍生物(例如，其中D是hetCyc¹，其中hetCyc¹是哌嗪基并且E是任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-；任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-；(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-；Cyc¹C(=O)-；Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-；hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-；Ar²C(=O)-；Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地选自H和C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代；hetAr²C(=O)-；或hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基-、(C1-C6)烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基)或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代)可以通过用羧酸处理具有脱保护的氨基D环的化合物13获得，其使用常规的酰胺键形成条件，例如通过用活化剂(例如HATU)处理羧酸，然后在适当的溶剂(如DMA)中在碱(例如胺碱如DIEA)存在下加入具有脱保护的氨基D环的化合物13，得到官能化的化合物13进行。可以用化合物13a、28和33使用相同的化学方法分别制备官能化的化合物13a、28和33。

作为另一个实例，尿素衍生物(例如，其中D是hetCyc¹，其中hetCyc¹是哌嗪基，E是hetCyc⁴C(=O)-或R¹R²NC(=O)-)可以如下制备：首先在DIEA存在下和在溶剂如DCM中用三光气活化化合物13的D环中的环氮，然后加入伯胺或仲胺试剂，得到官能化的化合物13。可以用化合物13a、28和33使用相同的化学方法分别制备官能化的化合物13a、28和33。

作为另一个实例，N-烷基衍生物(例如，其中D是hetCyc¹，其中hetCyc¹是哌嗪基并且E是任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-；(C1-C6烷氧基)(羟基C1-C6烷基)；(Ar²)C1-C6烷基-；(Ar²)羟基C2-C6烷基-；或(hetAr²)羟基C2-C6烷基-)可以如下制备：在环境温度或升高的温度下在碱(例如DIEA)存在下在溶剂中用烷基溴化物、烷基氯化物或环氧化物处理化合物 13(其中E是H)，得到官能化的化合物 13。可以用化合物13a、28和33使用相同的化学方法分别制备官能化的化合物13a、28和33。

作为另一个实例，磺酰胺衍生物可以通过在适当的溶剂中在碱如胺碱(如三乙胺)存在下用适当的磺酰氯处理化合物 13(其中E是H)来制备提供官能化的化合物13。可以用化合物13a、28和33使用相同的化学方法分别制备官能化的化合物13a、28和33。

本文还提供了用于制备如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐的方法，其包括:

(a) 对于其中E是H并且A、B、X¹、X²、X³、X⁴和D 如针对式I所定义的式I化合物，在钯催化剂和任选的配体存在下并在碱存在下，将具有下式的相应的化合物

其中A和B 如针对式I所定义，与具有式11的相应的化合物偶联

其中Z是-B(OR^a)(OR^b)并且R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，环如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义，并且X¹、X²、X³和X⁴ 如针对式I所定义，然后除去D环上的保护基（如果存在）；或

(b) 对于其中A、B、X¹、X²、X³、X⁴、D 和E如针对式I所定义(除了E不是H以外)的式I化合物，官能化具有下式的相应的化合物

其中基团如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义，并且A、B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对式I所定义；或

(c)对于其中A是CN，D如针对式I所定义，条件是D环通过D环中的环氮原子与X¹、X²、X³和X⁴所定义的环偶联，X¹、X²、X³、X⁴条件是X¹和X²中的至少一个是氮，并且E如针对式I所定义的式I化合物，在碱的存在下，使具有式15的相应的化合物

其中B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对式I所定义，条件是X¹和X²中的至少一个是氮，与具有式17的相应的化合物反应

其中环如针对式I的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义；或

(d)对于其中A是CN，E是H并且B、X¹、X²、X³、X⁴和D 如针对式I所定义的式I化合物，在钯催化剂和任选的配体存在下并在碱存在下，使具有式22的化合物

其中基团如针对权利要求1中的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义并且A、B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对式I所定义，与具有下式的相应的化合物反应

其中hetAr¹如针对式I所定义并且R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环；和

除去任何保护基团并任选地形成其药学上可接受的盐。

对于方法(a)和(d)，合适的钯催化剂包括Pd(PPh₃)₄、Pd₂(dba)₃、Pd(OAc)₂和Pd(PPh₃)₂Cl₂。合适的配体包括X-PHOS (2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯)、DIPHOS(1,2-双(二苯基膦基)乙烷)或rac-BINAP (外消旋-2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘)。碱可以是，例如，碱金属碳酸盐、氢氧化物、醇盐或乙酸盐，例如碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、叔丁醇钠或乙酸钾。方便的溶剂包括非质子溶剂，例如醚(例如四氢呋喃或对二噁烷)、甲苯、DMF或DME。反应可以在环境温度至120℃，例如80至110℃的温度范围内方便地进行。

测试化合物作为RET抑制剂起作用的能力可以通过实施例A中描述的测定证明。IC₅₀值显示在表5中。

在一些实施方案中，本文提供的化合物表现出有效和选择性的RET抑制。例如，本文提供的化合物显示出针对野生型RET和选择的RET突变体，包括例如KIF5B-RET融合物、G810R和G810SATP裂口前端或连接基突变、M918T激酶结构域和V804M、V804L和V804E看门基因突变的纳摩尔效力，且对相关激酶具有最小的活性。

在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地靶向RET激酶。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以相对于另一种激酶或非激酶靶标选择性地靶向RET激酶。

在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物表现出相对于另一种激酶的至少30倍的针对RET激酶的选择性。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物表现出相对于另一种激酶的针对RET激酶的至少40倍选择性；至少50倍选择性；至少60倍选择性；至少70倍选择性；至少80倍选择性；至少90倍选择性；至少100倍选择性；至少200倍选择性；至少300倍选择性；至少400倍选择性；至少500倍选择性；至少600倍选择性；至少700倍选择性；至少800倍选择性；至少900倍选择性；或至少1000倍选择性。在一些实施方案中，相对于另一种激酶的针对RET激酶的选择性在细胞测定(例如，本文提供的细胞测定)中测量。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可以表现出相对于KDR激酶 (例如，VEGFR2)的针对RET激酶的选择性。在一些实施方案中，观察到相对于KDR激酶的针对RET激酶的选择性而不丧失对包括活化突变或RET激酶抑制剂抗性突变(例如，看门基因突变体)的RET基因编码的RET激酶的效力。在一些实施方案中，与对KIF5B-RET的抑制相比，相对于KDR激酶的选择性为至少10倍(例如，至少40倍选择性；至少50倍选择性；至少60倍选择性；至少70倍选择性；至少80倍选择性；至少90倍选择性；至少100倍选择性；至少150倍选择性；至少200倍选择性；至少250倍选择性；至少300倍选择性；至少350倍选择性；或至少400倍选择性)(即化合物对KIF5B-RET比KDR更有效)。在一些实施方案中，相对于KDR激酶的针对RET激酶的选择性为约30倍。在一些实施方案中，相对于KDR激酶的针对RET激酶的选择性为至少100倍。在一些实施方案中，相对于KDR激酶的针对RET激酶的选择性为至少150倍。在一些实施方案中，相对于KDR激酶的针对RET激酶的选择性为至少400倍。不受任何理论的束缚，有效的KDR激酶抑制被认为是靶向RET的多激酶抑制剂(MKI)中的共同特征，并且可能是用这些化合物观察到的剂量限制性毒性的来源。

在一些实施方案中，V804M的抑制与野生型RET观察到的相似。例如，V804M的抑制在野生型RET的抑制的约2倍(例如，约5倍、约7倍、约10倍)内(即，这些化合物对野生型RET和V804M具有类似的效力)。在一些实施方案中，在酶测定(例如，本文提供的酶测定)中测量相对于另一种激酶的针对野生型或V804M RET激酶的选择性。在一些实施方案中，本文提供的化合物对RET突变细胞表现出选择性细胞毒性。

在一些实施方案中，本文提供的化合物表现出脑和/或中枢神经系统(CNS)渗透率。这些化合物能够穿过血脑屏障并抑制脑和/或其它CNS结构中的RET激酶。在一些实施方案中，本文提供的化合物能够以治疗有效量穿过血脑屏障。例如，治疗患有癌症的患者(例如RET相关的癌症，例如RET相关脑或CNS癌症)可以包括向患者施用(例如，口服施用)化合物。在一些这样的实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。

在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物显示出一种或多种高GI吸收、低清除率和低药物-药物相互作用的可能性。

式I化合物可用于治疗可用RET激酶抑制剂治疗的疾病和病症，例如RET相关疾病和病症，例如增殖性病症，例如癌症，包括血液癌症和实体瘤，以及胃肠道病症，例如IBS。

如本文所用，术语“治疗”或“治疗”是指治疗或姑息性措施。有益或期望的临床结果包括但不限于，全部或部分减轻与疾病或病症或病况相关的症状，减轻疾病程度，稳定(即，不恶化)疾病状态，延迟或减缓疾病进展，改善或缓和疾病状态(例如，疾病的一种或多种症状)和消退(无论是部分的还是全部的)，无论是可检测的还是不可检测的。"治疗"也可意指相比于如果未接受治疗的预期存活期的延长的存活期。

如本文所用，术语“对象”、“个体”或“患者”可互换使用，指任何动物，包括哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马、灵长类动物和人类。在一些实施方案中，患者是人。在一些实施方案中，对象已经历和/或表现出待治疗和/或预防的疾病或病症的至少一种症状。在一些实施方案中，所述对象已被鉴定或诊断为具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的癌症(RET相关的癌症)(例如，如使用经管理机构批准的，例如FDA批准的测定或试剂盒确定的)。在一些实施方案中，对象具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调阳性的肿瘤(例如，如使用管理机构批准的测定或试剂盒确定的)。对象可以是具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调阳性的肿瘤的对象(例如，使用管理机构批准的，例如FDA批准的测定或试剂盒鉴定为阳性的)。对象可以是其肿瘤具有RET基因、RET蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的对象(例如，其中肿瘤使用管理机构批准，例如，FDA批准的试剂盒或测定鉴定为这样)。在一些实施方案中，怀疑对象患有RET相关的癌症。在一些实施方案中，对象具有临床记录，其指示对象具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的肿瘤(并且任选地临床记录指示对象应当用本文提供的任何组合物治疗)。在一些实施方案中，患者是儿科患者。

本文所用的术语“儿科患者”是指在诊断或治疗时年龄小于21岁的患者。术语“儿科”可以进一步分为各种亚群，包括：新生儿(从出生到生命的第一个月)；婴儿(1个月至最多2岁龄)；儿童(两岁龄至最多12岁龄)；和青少年(12岁龄至21岁龄(最多，但不包括二十二岁生日))。Berhman RE, Kliegman R, Arvin AM, Nelson WE. Nelson Textbook of Pediatrics, 第15版. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1996;Rudolph AM, 等人Rudolph’s Pediatrics, 第21版. New York: McGraw-Hill, 2002; 和Avery MD,First LR. Pediatric Medicine, 第2版. Baltimore: Williams & Wilkins; 1994.。在一些实施方案中，儿科患者从出生到生命的前28天，从29天龄到小于2岁龄，从2岁龄到小于12岁龄或者12岁龄到21岁龄(最多，但不包括二十二岁生日)。在一些实施方案中，儿科患者从出生到出生的前28天，从29天龄到小于1岁龄，从1个月龄到小于4个月龄，从3个月龄到小于7个月龄，从6个月龄到小于1岁龄，从1岁龄到小于2岁龄，从2岁龄到小于3岁龄，从2岁龄到小于7岁龄，从3岁龄到小于5岁龄，从5岁龄到小于10岁龄，从6岁龄到小于13岁龄，从10岁龄到小于15岁龄或从15岁龄到小于22岁龄。

在某些实施方案中，式I化合物可用于预防本文所定义的疾病和病症(例如，自身免疫疾病、炎性疾病和癌症)。本文所用的术语“预防”是指全部或部分预防本文所述的疾病或病况或其症状的发作、复发或扩散。

本文所用的术语“RET相关疾病或病症”是指与RET基因、RET激酶(在本文中也称为RET激酶蛋白)、或它们中的任一种(例如，一种或多种)的表达或活性或水平的失调有关或具有所述失调的疾病或病症(例如，任何类型的本文所述的RET基因、RET激酶、RET激酶结构域或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调)。RET相关疾病或病症的非限制性实例包括例如癌症和胃肠病症，例如肠易激综合征(IBS)。

如本文所用的术语“RET相关的癌症”是指与RET基因、RET激酶(在本文中也称为RET激酶蛋白)、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调有关或具有所述失调的癌症。RET相关的癌症的非限制性实例如本文所述。

短语“RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括RET激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型RET蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的RET蛋白的表达的RET基因中的突变、导致与野生型RET蛋白相比具有一个或多个点突变的RET蛋白的表达的RET基因中的突变、导致与野生型RET蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的RET蛋白的表达的RET基因中的突变、导致细胞中RET蛋白水平升高的基因复制、或导致细胞中RET蛋白水平升高的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型RET蛋白相比具有RET蛋白中的至少一个氨基酸的缺失的RET蛋白的RET mRNA的替代的剪接形式、或者由于异常细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导(例如，与对照非癌细胞相比)的原因导致哺乳动物细胞中野生型RET激酶的表达增加(例如，水平增加)。作为另一个实例，RET基因、RET蛋白、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以是编码组成型活性或与由不包括该突变的RET基因编码的蛋白相比具有增加的活性的RET蛋白的RET基因中的突变。例如，RET基因、RET蛋白、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以是基因或染色体易位的结果，所述基因或染色体易位导致包含包括功能性激酶结构域的第一部分的RET和第二部分的伴侣蛋白(即，不是RET)的融合蛋白的表达。在一些实例中，RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以是一个RET基因与另一个非RET基因的基因易位的结果。融合蛋白的非限制性实例描述于表1中。RET激酶蛋白点突变/插入/缺失的非限制性实例描述于表2和2a中。RET激酶蛋白突变(例如，点突变)的其它实例是RET抑制剂抗性突变。RET抑制剂抗性突变的非限制性实例描述于表3和4中。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以由RET基因中的活化突变引起(参见例如导致表1中列出的任何融合蛋白的表达的染色体易位)。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以由导致RET激酶表达的基因突变引起，所述RET激酶例如与野生型RET激酶相比具有增加的对RET激酶抑制剂和/或多激酶抑制剂(MKI)抑制的抗性(参见，例如，表3和4中的氨基酸取代)。表2和2a中显示的示例性RET激酶点突变、插入和缺失可以由活化突变引起和/或可以导致对RET激酶抑制剂和/或多激酶抑制剂(MKI)的抑制具有增加的抗性的RET激酶的表达。

术语“活化突变”描述RET激酶基因中的突变，其例如当在相同条件下测定时导致例如与野生型RET激酶相比具有增加的激酶活性的RET激酶的表达。例如，活化突变可导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包括RET激酶结构域和融合伴侣。在另一个实例中，活化突变可以是RET激酶基因中的突变，其导致具有一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)氨基酸取代(例如，本文所述的任何氨基酸取代的任何组合)的RET激酶的表达，所述RET激酶例如当在相同条件下测定时导致例如与野生型RET激酶相比具有增加的激酶活性。在另一个实例中，活化突变可以是RET激酶基因中的突变，其导致例如当在相同条件下测定时例如与野生型RET激酶相比具有一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)缺失的氨基酸的RET激酶的表达。在另一个实例中，活化突变可以是RET激酶基因中的突变，其导致与野生型RET激酶，例如本文所述的示例性野生型RET激酶相比具有至少一个(例如，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或至少20)插入的氨基酸的RET激酶的表达(例如当在相同条件下测定时)。活化激酶的其它实例是本领域中已知的。

术语“野生型”描述了在没有RET相关疾病如RET相关的癌症(并且任选地也没有增加的发生RET相关疾病的风险和/或没有怀疑患有RET相关疾病)的对象中发现的或者在来自没有RET相关疾病如RET相关的癌症(并且任选地也没有增加的发生RET相关疾病的风险和/或没有怀疑患有RET相关疾病)的对象的细胞或组织中发现的核酸(例如，RET基因或RETmRNA)或蛋白(例如，RET蛋白)。

术语“监管机构”是指一个国家批准该国的药剂的医学用途的机构。例如，管理机构的非限制性实例是美国食品和药物管理局(FDA)。

本文提供了在需要这种治疗的患者中治疗癌症(例如，RET相关的癌症)的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。例如，本文提供了用于在需要这种治疗的患者中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括a)在来自患者的样品中检测RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和b)施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调包括一种或多种融合蛋白。RET基因融合蛋白的非限制性实例表述于表1中。在一些实施方案中，融合蛋白是KIF5B-RET。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶、或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入。RET激酶蛋白点突变/插入/缺失的非限制性实例描述于表2和2a。在一些实施方案中，RET激酶蛋白点突变/插入/缺失选自M918T、M918V、C634W、V804L和V804M。在一些实施方案中，式I化合物选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121。

在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)是血液学癌症。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)是实体瘤。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)是实体瘤。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、甲状腺癌(例如乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌或难治性分化型甲状腺癌)、甲状腺腺瘤、内分泌腺肿瘤、肺腺癌、细支气管肺细胞癌、多发性内分泌瘤病2A或2B型(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌(breast cancer)、乳腺癌(mammary cancer)、乳腺癌(mammary carcinoma)、乳腺肿瘤、结肠直肠癌(例如转移性结肠直肠癌)、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节瘤病、炎性肌纤维母细胞瘤或宫颈癌。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)选自: 急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、青少年癌症、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎瘤/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、类癌、未知原发癌、心脏肿瘤、宫颈癌、儿童癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性骨髓增生性肿瘤、局部肿瘤、肿瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、皮肤血管肉瘤、胆管癌、原位导管癌、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、成感觉神经细胞瘤、尤文肉瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、输卵管癌、骨纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞疾病、胶质瘤、毛细胞肿瘤、毛细胞白血病、头颈癌、胸部肿瘤、头颈部肿瘤、中枢神经系统肿瘤、原发性中枢神经系统肿瘤、心脏癌、肝细胞癌、组织细胞增多症、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、卡波西肉瘤、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增多症、喉癌、白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨癌、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、中线癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、局部肿瘤、肿瘤、髓性白血病、髓样白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、肺肿瘤、肺癌、肺肿瘤、呼吸道肿瘤、支气管肺癌、支气管肿瘤、口腔癌(oral cancer)、口腔癌(oral cavity cancer)、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体癌、浆细胞肿瘤、胸膜肺母细胞瘤、妊娠和乳腺癌、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性腹膜癌、前列腺癌、直肠癌、结肠癌、结肠肿瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、Sezary综合征、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状颈癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、未知原发癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌和肾母细胞瘤。

在一些实施方案中，血液学癌症(例如，为RET相关的癌症的血液学癌症)选自白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、慢性粒单核细胞白血病(CMML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、急性未分化白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、幼淋巴细胞白血病(PML)、幼年型骨髓单核细胞白血病(JMML)、成人T细胞ALL、AML伴骨髓三系病态造血 (AML/TMDS)、混合谱系白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDSs)、骨髓增生性疾病(MPD)和多发性骨髓瘤(MM)。血液学癌症的其它实例包括骨髓增生性病症(MPD)例如真性红细胞增多症(PV)、特发性血小板减少症(ET)和特发性原发性骨髓纤维化(IMF/IPF/PMF)。在一个实施方案中，血液学癌症 (例如，为RET相关的癌症的血液学癌症)是AML或CMML。

在一些实施方案中，癌症(例如，RET相关的癌症)是实体瘤。实体瘤(例如，为RET相关的癌症的实体瘤)的实例包括，例如，甲状腺癌(例如乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌)、肺癌(例如，肺腺癌、小细胞肺癌)、胰腺癌、胰腺导管癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、头颈肿瘤、神经母细胞瘤和黑素瘤。参见，例如，Nature Reviews Cancer,2014, 14, 173-186。

在一些实施方案中，癌症选自肺癌、乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌、难治性分化型甲状腺癌、多发性内分泌瘤病2A或2B型(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、结直肠癌、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节瘤病和宫颈癌。

在一些实施方案中，患者是人。

式I化合物和其药学上可接受的盐和溶剂化物也可用于治疗RET相关的癌症。

因此，本文也提供了用于治疗诊断为或鉴定为具有RET相关的癌症的患者，例如，本文公开的任何示例性RET相关的癌症的方法，其包括给患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。

RET激酶、RET基因或它们中的任何一种(例如，一种或多种)的表达或活性或水平的失调可以可促成肿瘤发生。例如，RET激酶、RET基因或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是RET激酶、RET基因或RET激酶结构域的易位、过表达、活化、扩增或突变。易位可包括基因易位，导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包括RET激酶结构域和融合伴侣。例如，与野生型RET蛋白相比，融合蛋白可具有增加的激酶活性。在一些实施方案中，RET基因中的突变可涉及RET配体结合位点、细胞外结构域、激酶结构域中的突变，以及涉及蛋白质：蛋白质相互作用和下游信号传导的区域中的突变。在一些实施方案中，RET基因中的突变(例如，活化突变)可以导致具有一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)氨基酸取代(例如，以下中的一个或多个氨基酸取代：激酶结构域(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置723-1012)、门卫氨基酸(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置804)、P环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置730-737)、DFG基序(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置892-894)、ATP裂解溶剂前沿氨基酸(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置758、811和892)、激活环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置891-916)、C-螺旋和C-螺旋之前的环(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置768-788)和/或ATP结合位点(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置730-733、738、756、758、804、805、807、811、881和892)的RET激酶的表达。在一些实施方案中，突变可以是RET基因的基因扩增。在一些实施方案中，RET基因中的突变(例如，活化突变)可以导致与野生型RET蛋白相比缺少至少一个氨基酸(例如，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少50个氨基酸)的RET激酶的表达。在一些实施方案中，RET激酶的失调可以是由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导(例如，与对照非癌细胞相比)引起的哺乳动物细胞中野生型RET激酶的表达增加(例如，水平增加)。在一些实施方案中，RET基因中的突变(例如，活化突变)可以导致与野生型RET蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸(例如，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少50个氨基酸)的RET激酶的表达。在一些实施方案中，RET激酶的失调可以是哺乳动物细胞中的野生型RET激酶的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)，例如，由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导。其它失调可以包括RET mRNA剪接变体。在一些实施方案中，野生型RET蛋白是本文所述的示例性野生型RET蛋白。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括野生型RET激酶的过表达(例如，导致自分泌激活)。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括在包含RET基因或其部分，包括，例如，激酶结构域部分或能够表现出激酶活性的部分的染色体区段中的过表达、活化、扩增或突变。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括导致RET基因融合的一个或多个染色体易位或反转。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是是遗传易位的结果，其中表达的蛋白是含有来自非RET伴侣蛋白的残基的融合蛋白，并包括最少的功能性RET激酶结构域。

RET 融合蛋白的非限制性实例显示于表1。

表1. 示例性RET融合伴侣和癌症

融合伴侣	非限制性示例性RET-相关的癌症
		BCR	慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)
CLIP1	腺癌
		KIF5B	NSCLC、卵巢癌、Spitzoid 肿瘤；肺腺癌<sup>3, 4, 14, 28</sup>；腺鳞癌<sup>15</sup>
CCDC6 (也称为PTC1、D10S170或H4)	NSCLC、结肠癌、乳头状甲状腺癌；腺癌；肺腺癌；转移性结肠直肠癌<sup>5</sup>；腺鳞癌<sup>15</sup>、乳腺癌<sup>30</sup>
		PTC1ex9 (一种新型的CCDC6重排)	转移性乳头状甲状腺癌<sup>2</sup>
NCOA4 (也称为PTC3、ELE1和RFG)	乳头状甲状腺癌<sup>21</sup>, NSCLC、结肠癌、唾液腺癌、转移性结肠直肠癌<sup>5</sup>；肺腺癌<sup>15</sup>；腺鳞癌<sup>15 </sup>乳头状甲状腺癌的弥漫性致硬化变异<sup>16</sup>、乳腺癌<sup>30</sup>、腺泡细胞癌<sup>32</sup>、乳腺样分泌性癌<sup>33</sup>
		TRIM33 (也称为PTC7和RFG7)	NSCLC、乳头状甲状腺癌
ERC1 (也称为ELKS)	乳头状甲状腺癌、乳腺癌
		FGFR1OP	CMML、原发性骨髓纤维化伴继发性急性髓样白血病
MBD1(也称为PCM1)	乳头状甲状腺癌
		RAB61P2	乳头状甲状腺癌
PRKAR1A (也称为PTC2)	乳头状甲状腺癌
		TRIM24 (也称为PTC6)	乳头状甲状腺癌
KTN1 (也称为 PTC8 )	乳头状甲状腺癌
		GOLGA5 (也称为PTC5)	乳头状甲状腺癌、Spitzoid 肿瘤
HOOK3	乳头状甲状腺癌
		KIAA1468 (也称为PTC9和RFG9)	乳头状甲状腺癌、肺腺癌<sup>8, 12</sup>
TRIM27 (也称为RFP)	乳头状甲状腺癌
		AKAP13	乳头状甲状腺癌
FKBP15	乳头状甲状腺癌
		SPECC1L	乳头状甲状腺癌；甲状腺癌
TBL1XR1	乳头状甲状腺癌；甲状腺癌
		CEP55	弥漫性胃癌<sup>7</sup>
CUX1	肺腺癌

ACBD5	乳头状甲状腺癌
		MYH13	甲状腺髓样癌<sup>1</sup>
非典型性	炎症性肌纤维母细胞瘤<sup>6</sup>
		PIBF1	细支气管肺细胞癌<sup>9</sup>
KIAA1217 (也称为SKT)	乳头状甲状腺癌<sup>10, 13</sup>肺腺癌<sup>14</sup>NSCLC<sup>14</sup>
		MPRIP	NSCLC<sup>11</sup>
HRH4-RET	甲状腺癌和/或乳头状甲状腺癌<sup>17</sup>
		Ria-RET	甲状腺癌和/或乳头状甲状腺癌<sup>17</sup>
RFG8	乳头状甲状腺癌<sup>18</sup>
		FOXP4	肺腺癌<sup>19</sup>
MYH10	婴儿肌纤维瘤病<sup>20</sup>
		HTIF1	各种<sup>22</sup>
TIF1G	各种<sup>22</sup>
		H4L	各种<sup>22</sup>
PTC4 (新型NCO4/ELE1重排)	乳头状甲状腺癌<sup>23</sup>
		FRMD4A	NSCLC<sup>24</sup>
SQSTM1	乳头状甲状腺癌<sup>25</sup>
		AFAP1L2	乳头状甲状腺癌<sup>25</sup>
AFAP1	NSCLC<sup>31</sup>
		PPFIBP2	乳头状甲状腺癌<sup>25</sup>
EML4	乳头状甲状腺癌<sup>26</sup>
		PARD3	NSCLC<sup>27</sup>
UVELD	乳头状甲状腺癌<sup>29</sup>
		RASGEF1A	乳腺癌<sup>30</sup>
TEL	<i>体外</i><sup>34</sup>
		RUFY1	结肠直肠癌<sup>35</sup>
OLFM4	小肠癌<sup>36</sup>
		UEVLD	乳头状甲状腺癌<sup>29</sup>
DLG5	非间变性甲状腺(NAT)癌<sup>37</sup>
		RRBP1	结肠癌<sup>38</sup>
ETV6	分泌癌<sup>39</sup>

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在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括RET激酶中的一个或多个缺失(例如，例如，在第4位缺失氨基酸)、插入或点突变。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括从RET激酶中缺失一个或多个残基，导致RET激酶结构域的组成型活性。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括导致与野生型RET激酶相比具有一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的RET激酶的产生的RET基因中的至少一个点突变(参见，例如，表2中列出的点突变)。

表2. 活化RET激酶蛋白氨基酸取代/插入/ 缺失

示例性RET 氨基酸取代<sup>A</sup>
	氨基酸位置2
氨基酸位置3
	氨基酸位置4
氨基酸位置5
	氨基酸位置6
氨基酸位置7
	氨基酸位置8
氨基酸位置11
	氨基酸位置12
氨基酸位置13
	氨基酸位置20
氨基酸位置32 (例如，S32L)
	氨基酸位置34 (例如，D34S)
氨基酸位置40 (例如，L40P)
	氨基酸位置56 (例如，L56M)<sup>30</sup>
氨基酸位置64 (例如，P64L)
	氨基酸位置67 (例如，R67H)
氨基酸位置114 (例如，R114H)
	氨基酸位置136 (例如，谷氨酸到终止密码子)
氨基酸位置145 (例如，V145G)
	氨基酸位置180 (例如，精氨酸到终止密码子)
氨基酸位置200
	氨基酸位置292 (例如，V292M)
氨基酸位置294
	氨基酸位置321 (例如，G321R)
氨基酸位置330 (例如，R330Q)
	氨基酸位置338 (例如，T338I)
氨基酸位置360 (例如，R360W)
	氨基酸位置373 (例如，丙氨酸到移码)
氨基酸位置393 (例如，F393L)
	氨基酸位置423 (例如，G423R)<sup>27</sup>
氨基酸位置432
	氨基酸位置446 (例如，G446R)<sup>28</sup>
Δ 氨基酸残基 505-506 (外显子7中的6碱基对框内种系缺失)<sup>3</sup>
	氨基酸位置510 (例如，A510V)
氨基酸位置511 (例如，E511K)
	氨基酸位置513 (例如，G513D)<sup>7*</sup>
氨基酸位置515 (例如，C515S, C515W<sup>4</sup>)
	氨基酸位置525 (例如，R525W)<sup>7*</sup>
氨基酸位置531 (例如，C531R或9个碱基对重复<sup>2</sup>)
	氨基酸位置532 (例如，重复)<sup>2</sup>
氨基酸位置533 (例如，G533C、G533S)
	氨基酸位置550 (例如，G550E)
氨基酸位置591 (例如，V591I)
	氨基酸位置593 (例如，G593E)
氨基酸位置595 (例如，E595D和E595A)<sup>18</sup>
	氨基酸位置600 (例如，R600Q)
氨基酸位置602 (例如，I602V)<sup>6</sup>
	氨基酸位置603 (例如，K603Q, K603E<sup>2</sup>)
氨基酸位置606 (例如，Y606C)
	氨基酸位置609 (例如，C609Y、C609S、C609G、C609R、C609F、C609W、C690C<sup>32</sup>)
氨基酸位置611 (例如，C611R、C611S、C611G、C611Y、C611F、C611W)
	氨基酸位置616 (例如，E616Q)<sup>23</sup>
氨基酸位置618 (例如，C618S、C618Y、C618R、C618Y、C618G、C618F、C618W)
	氨基酸位置619 (例如，F619F)
氨基酸位置620 (例如，C620S、C620W、C620R、C620G、C620L、C620Y、C620F)
	氨基酸位置623 (例如，E623K)
氨基酸位置624 (例如，D624N)
	氨基酸位置630 (例如，C630A、C630R、C630S、C630Y、C630F、C630W)
氨基酸位置631 (例如，D631N、D631Y、D631A、D631G、D631V、D631E)
	氨基酸位置632 (例如，E632K、E632G<sup>5, 11</sup>)
Δ 氨基酸残基632-633 (外显子11中的6碱基对框内种系缺失)<sup>9</sup>
	氨基酸位置633 (例如，9个碱基对重复<sup>2</sup>)
氨基酸位置634 (例如，C634W、C634Y、C634S、C634R、C634F、C634G、C634L、C634A或C634T或1个插入ELCR<sup>2</sup>或12个碱基对重复<sup>2</sup>)(例如，导致MTC)
	氨基酸位置635 (例如，R635G)
氨基酸位置636 (例如，T636P<sup>2</sup>、T636M<sup>4</sup>)
	氨基酸位置640 (例如，A640G)
氨基酸位置641 (例如，A641S、A641T<sup>8</sup>)
	氨基酸位置648 (例如，V648I)
氨基酸位置649 (例如，S649L)<sup>28</sup>
	氨基酸位置664 (例如，A664D)
氨基酸位置665 (例如，H665Q)
	氨基酸位置666 (例如，K666E、K666M、K666N、K666R)
氨基酸位置675 (T675T、沉默核苷酸变化)<sup>18</sup>
	氨基酸位置686 (例如，S686N)
氨基酸位置689 (例如，S689T)<sup>18</sup>
	氨基酸位置691 (例如，G691S)
氨基酸位置694 (例如，R694Q)
	氨基酸位置700 (例如，M700L)
氨基酸位置706 (例如，V706M、V706A)
	氨基酸位置713剪接变体(例如，E713K)<sup>6</sup>
氨基酸位置732 (例如，E732K)<sup>20</sup>
	氨基酸位置736 (例如，G736R)<sup>6</sup>
氨基酸位置748 (例如，G748C)
	氨基酸位置750 (例如，A750P)
氨基酸位置765 (例如，S765P)
	氨基酸位置766 (例如，P766S、P766M<sup>6</sup>)
氨基酸位置768 (例如，E768Q、E768D)
	氨基酸位置769 (例如，L769L)
氨基酸位置770 (例如，R770Q)
	氨基酸位置771 (例如，D771N)
氨基酸位置777 (例如，N777S)
	氨基酸位置778 (例如，V778I)
氨基酸位置781 (例如，Q781R)
	氨基酸位置788 (例如，I788I<sup>32</sup>)
氨基酸位置790 (例如，L790F)
	氨基酸位置791 (例如，Y791F、Y791N<sup>24</sup>)
氨基酸位置802
	氨基酸位置804 (例如，V804L<sup>15, 16</sup>、V804M<sup>15, 16</sup>、V804E<sup>12</sup>)(例如，导致MTC)
氨基酸位置805 (例如，E805K)
	氨基酸位置804/805 (例如，V804M/E805K)<sup>17</sup>
氨基酸位置806 (例如，Y806F、Y806S<sup>12</sup>、Y806G、Y806C<sup>2, 12, 14</sup>、Y806E<sup>14</sup>、Y806H<sup>12</sup>、Y806N<sup>12</sup>、Y806Y<sup>32</sup>)
	氨基酸位置810 (例如，G810R<sup>12</sup>、G810S<sup>12</sup>、G810A<sup>13</sup>)
氨基酸位置818 (例如，E818K)
	氨基酸位置819 (例如，S819I)
氨基酸位置823 (例如，G823E)
	氨基酸位置826 (例如，Y826M、Y826S)<sup>10</sup>
氨基酸位置833 (例如，R833C)
	氨基酸位置836 (例如，S836S)<sup>19</sup>
氨基酸位置841 (例如，P841L、P841P)
	氨基酸位置843 (例如，E843D)
氨基酸位置844 (例如，R844W、R844Q、R844L)
	氨基酸位置848 (例如，M848T)
氨基酸位置852 (例如，I852M)
	氨基酸位置865 (例如，L865V)<sup>12</sup>
氨基酸位置866 (例如，A866W)<sup>33</sup>
	氨基酸位置870 (例如，L870F)<sup>12</sup>
氨基酸位置873 (例如，R873W)
	氨基酸位置876 (例如，A876V)
氨基酸位置881 (例如，L881V)
	氨基酸位置882
氨基酸位置883 (例如，A883F、A883S、A883T)
	氨基酸位置884 (例如，E884K)
氨基酸位置886 (例如，R886W)
	氨基酸位置891 (例如，S891A、S891S<sup>32</sup>)
氨基酸位置897 (例如，R897Q)
	氨基酸位置898 (例如，D898V)
氨基酸位置900 (例如，Y900F)<sup>22</sup>
	氨基酸位置901 (例如，E901K)
氨基酸位置904 (例如，S904F、S904S、S904C<sup>2</sup>)
	氨基酸位置905 (例如，Y905F)<sup>22</sup>
氨基酸位置907 (例如，K907E、K907M)
	氨基酸位置908 (例如，R908K)
氨基酸位置911 (例如，G911D)
	氨基酸位置912 (例如，R912P、R912Q)
氨基酸位置918 (例如，M918T<sup>2</sup>、M918V、M918L<sup>6</sup>)(例如，导致MTC)
	氨基酸位置919 (例如，A919V)
氨基酸位置921 (例如，E921K)
	氨基酸位置922 (例如，S922P、S922Y)
氨基酸位置930 (例如，T930M)
	氨基酸位置961 (例如，F961L)
氨基酸位置972 (例如，R972G)
	氨基酸位置981 (例如，Y981F)<sup>22</sup>
氨基酸位置982 (例如，R982C)
	氨基酸位置1009 (例如，M1009V)
氨基酸位置1015 (例如，Y1015F)<sup>22</sup>
	氨基酸位置1017 (例如，D1017N)
氨基酸位置1041 (例如，V1041G)
	氨基酸位置1064 (例如，M1064T)
氨基酸位置1096 (例如，Y1096F)<sup>21</sup>
	氨基酸位置1109 (例如，M1109T)<sup>34</sup>
RET+3<sup>1</sup>
	(外显子6和11中的框内缺失)<sup>25</sup>
(外显子15中的3bp框内缺失)<sup>26</sup>
	核苷酸位置2136+2 (例如，2136+2T>G)<sup>29</sup>
(del632-636 ins6)<sup>31</sup>
	氨基酸位置791和852 (例如，Y791F + I852M)<sup>31</sup>
氨基酸位置634和852 (例如，C634R + I852M)<sup>31</sup>

^A示出的 RET激酶的突变可以是活化突变和/或赋予增加的RET激酶对RET激酶抑制剂和/或多激酶抑制剂(MKI)的抗性(例如，相比于野生型RET激酶)。

¹ 美国专利申请公开号2014/0272951.

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³⁰ Corsello 等人, Endocrine Reviews，(JUN 2014)Vol. 35, No. 3, Suppl. S,pp. SUN-0322, Meeting Info.: 96th Annual Meeting and Expo of the Endocrine-Society, Chicago, IL, USA, June 21-24, 2014.

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³²Sromek 等人, Endocr Pathol., doi: 10.1007/s12022-017-9487-2, 2017.

³³美国专利申请公开号2017/0267661.

³⁴ Davila et. al., Rare Tumors, 2017；9(2): 6834. doi:10.4081/rt.2017.6834。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括导致与野生型RET激酶相比具有一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的RET激酶的产生的RET基因中的至少一个点突变(参见，例如，表2a中列出的点突变)。

表2a 示例性RET激酶蛋白点突变/插入/缺失

示例性RET 点突变<sup>A</sup>
	氨基酸位置20
氨基酸位置32 (例如，S32L)
	氨基酸位置34 (例如，D34S)
氨基酸位置40 (例如，L40P)
	氨基酸位置64 (例如，P64L)
氨基酸位置67 (例如，R67H)
	氨基酸位置114 (例如，R114H)
氨基酸位置145 (例如，V145G)
	氨基酸位置200
氨基酸位置292 (例如，V292M)
	氨基酸位置294
氨基酸位置321 (例如，G321R)
	氨基酸位置330 (例如，R330Q)
氨基酸位置338 (例如，T338I)
	氨基酸位置360 (例如，R360W)
氨基酸位置393 (例如，F393L)
	氨基酸位置432
Δ 氨基酸残基505-506 (外显子7中的6碱基对框内种系缺失)
	氨基酸位置510 (例如，A510V)
氨基酸位置511 (例如，E511K)
	氨基酸位置513 (例如，G513D)
氨基酸位置515 (例如，C515S、C515W<sup>4</sup>)
	氨基酸位置525 (例如，R525W)
氨基酸位置531 (例如，C531R或9个碱基对重复)
	氨基酸位置532 (例如，重复)
氨基酸位置533 (例如，G533C、G533S)
	氨基酸位置550 (例如，G550E)
氨基酸位置591 (例如，V591I)
	氨基酸位置593 (例如，G593E)
氨基酸位置595 (例如，E595D和E595A)
	氨基酸位置600 (例如，R600Q)
氨基酸位置602 (例如，I602V)
	氨基酸位置603 (例如，K603Q、K603E)
氨基酸位置606 (例如，Y606C)
	氨基酸位置609 (例如，C609Y、C609S、C609G、C609R、C609F、C609W)
氨基酸位置611 (例如，C611R、C611S、C611G、C611Y、C611F、C611W)
	氨基酸位置616 (例如，E616Q)
氨基酸位置618 (例如，C618S、C618Y、C618R、C618G、C618F、C618W)
	氨基酸位置620 (例如，C620S、C620W、C620R、C620G、C620L、C620Y、C620F)
氨基酸位置623 (例如，E623K)
	氨基酸位置624 (例如，D624N)
氨基酸位置630 (例如，C630A、C630R、C630S、C630Y、C630F、C630W)
	氨基酸位置631 (例如，D631N、D631Y、D631A、D631G、D631V、D631E、)
氨基酸位置632 (例如，E632K、E632G)
	Δ 氨基酸残基632-633 (外显子11中的6碱基对框内种系缺失)
氨基酸位置633 (例如，9个碱基对重复)
	氨基酸位置634 (例如，C634W、C634Y、C634S、C634R、C634F、C634G、C634L、C634A或C634T或1个插入ELCR或12个碱基对重复)(例如，导致MTC)
氨基酸位置635 (例如，R635G)
	氨基酸位置636 (例如，T636P、T636M)
氨基酸位置640 (例如，A640G)
	氨基酸位置641 (例如，A641S、A641T)
氨基酸位置648 (例如，V648I)
	氨基酸位置649 (例如，S649L)
氨基酸位置664 (例如，A664D)
	氨基酸位置665 (例如，H665Q)
氨基酸位置666 (例如，K666E、K666M、K666N、K666R)
	氨基酸位置686 (例如，S686N)
氨基酸位置689 (例如，S689T)
	氨基酸位置691 (例如，G691S)
氨基酸位置694 (例如，R694Q)
	氨基酸位置700 (例如，M700L)
氨基酸位置706 (例如，V706M、V706A)
	氨基酸位置713剪接变体(例如，E713K)
氨基酸位置732 (例如，E732K)
	氨基酸位置736 (例如，G736R)
氨基酸位置748 (例如，G748C)
	氨基酸位置750 (例如，A750P)
氨基酸位置765 (例如，S765P)
	氨基酸位置766 (例如，P766S、P766M)
氨基酸位置768 (例如，E768Q、E768D)
	氨基酸位置769 (例如，L769L)
氨基酸位置770 (例如，R770Q)
	氨基酸位置771 (例如，D771N)
氨基酸位置777 (例如，N777S)
	氨基酸位置778 (例如，V778I)
氨基酸位置781 (例如，Q781R)
	氨基酸位置790 (例如，L790F)
氨基酸位置791 (例如，Y791F、Y791N)
	氨基酸位置802
氨基酸位置804 (例如，V804L、V804M、V804E)(例如，导致MTC)
	氨基酸位置805 (例如，E805K)
氨基酸位置804/805 (例如，V804M/E805K)
	氨基酸位置806 (例如，Y806F、Y806S、Y806G、Y806C、Y806E、Y806H、Y806N)
氨基酸位置810 (例如，G810R、G810S、G810A)
	氨基酸位置818 (例如，E818K)
氨基酸位置819 (例如，S819I)
	氨基酸位置823 (例如，G823E)
氨基酸位置826 (例如，Y826M、Y826S)
	氨基酸位置833 (例如，R833C)
氨基酸位置836 (例如，S836S)
	氨基酸位置841 (例如，P841L、P841P)
氨基酸位置843 (例如，E843D)
	氨基酸位置844 (例如，R844W、R844Q、R844L)
氨基酸位置848 (例如，M848T)
	氨基酸位置852 (例如，I852M)
氨基酸位置865 (例如，L865V)
	氨基酸位置870 (例如，L870F)
氨基酸位置873 (例如，R873W)
	氨基酸位置876 (例如，A876V)
氨基酸位置881 (例如，L881V)
	氨基酸位置882
氨基酸位置883 (例如，A883F、A883S、A883T)
	氨基酸位置884 (例如，E884K)
氨基酸位置886 (例如，R886W)
	氨基酸位置891 (例如，S891A)
氨基酸位置897 (例如，R897Q)
	氨基酸位置898 (例如，D898V)
氨基酸位置900 (例如，Y900F)
	氨基酸位置901 (例如，E901K)
氨基酸位置904 (例如，S904F、S904S、S904C)
	氨基酸位置907 (例如，K907E、K907M)
氨基酸位置908 (例如，R908K)
	氨基酸位置911 (例如，G911D)
氨基酸位置912 (例如，R912P、R912Q)
	氨基酸位置918 (例如，M918T、M918V、M918L)(例如，导致MTC)
氨基酸位置919 (例如，A919V)
	氨基酸位置921 (例如，E921K)
氨基酸位置922 (例如，S922P、S922Y)
	氨基酸位置930 (例如，T930M)
氨基酸位置961 (例如，F961L)
	氨基酸位置972 (例如，R972G)
氨基酸位置982 (例如，R982C)
	氨基酸位置1009 (例如，M1009V)
氨基酸位置1015 (例如，Y1015F)
	氨基酸位置1017 (例如，D1017N)
氨基酸位置1041 (例如，V1041G)
	氨基酸位置1064 (例如，M1064T)
氨基酸位置1096 (例如，Y1096F)
	RET+3
(外显子6和11中的框内缺失)
	(外显子15中的3bp框内缺失)

^A上文示出的 RET激酶的突变可以是活化突变和/或可以赋予增加的RET激酶对RET抑制剂和/或多激酶抑制剂(MKI)的抗性(例如，相比于野生型RET激酶)。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括RET mRNA中的剪接变体，其导致这样的表达的蛋白质：其是导致RET激酶结构域的组成型活性的具有至少一个缺失的残基(与野生型RET激酶相比)的RET的替代性剪接的变体。

如本文所定义的“RET激酶抑制剂”包括表现出RET抑制活性的任何化合物。在一些实施方案中，RET激酶抑制剂对RET激酶具有选择性。在如本文所述的测定中测量的，示例性的RET激酶抑制剂可以表现出小于约1000 nM、小于约500 nM、小于约200 nM、小于约100nM、小于约50 nM、小于约25 nM、小于约10 nM或小于约1 nM的针对RET激酶的抑制活性(IC₅₀)。在一些实施方案中，如在本文提供的测定中测量的，RET激酶抑制剂可以表现出小于约25 nM、小于约10 nM、小于约5 nM或小于约1 nM的针对RET激酶的抑制活性(IC₅₀)。

如本文所用，“第一RET激酶抑制剂”或“第一RET抑制剂”是如本文所定义的RET激酶抑制剂，但其不包括如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。如本文所用的，“第二RET激酶抑制剂”或“第二RET抑制剂”是如本文所定义的RET激酶抑制剂，但其不包括如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。当第一和第二RET抑制剂都存在于本文提供的方法中时，第一和第二RET激酶抑制剂是不同的。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括RET基因中的至少一个点突变，其导致产生具有一个或多个RET基因中的氨基酸取代或插入或缺失的RET激酶，所述RET基因中的氨基酸取代或插入或缺失导致产生与野生型RET激酶相比具有一个或多个氨基酸插入或移除的RET激酶。在一些情况下，与野生型RET激酶或不包括相同突变的RET激酶相比，所得RET激酶对于一种或多种第一RET激酶抑制剂对其磷酸转移酶活性的抑制更具抗性。任选地，此类突变不会降低具有RET激酶的癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的敏感性(例如，与不包括特定的RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤相比)。在这样的实施方案中，与在相同的第一RET激酶抑制剂存在下的野生型RET激酶或不具有相同的突变的RET激酶相比，当存在第一RET激酶抑制剂时，RET抑制剂抗性突变可导致具有增加的V_max、对ATP的降低的K_m和对第一RET激酶抑制剂具有增加的K_D中的一种或多种的RET激酶。

在其它实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括RET基因中的至少一个点突变，其导致产生与野生型RET激酶相比具有一个或多个氨基酸取代的RET激酶，并且其与野生型RET激酶或不包括相同突变的RET激酶相比具有增加的对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的抗性。在这样的实施方案中，与在相同的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物存在下的野生型RET激酶或不具有相同的突变的RET激酶相比，在式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物存在下，RET抑制剂抗性突变可导致具有增加的V_max、降低的K_m和降低的K_D中的一种或多种的RET激酶。

RET抑制剂抗性突变的实例可以例如包括RET激酶的三级结构中ATP结合位点中和附近的点突变、插入或缺失(例如，野生型RET激酶，例如，本文所述的示例性野生型RET激酶的氨基酸位置730-733、738、756、758、804. 805、807、811、881和892)，包括但不限于门卫残基(例如，野生型RET激酶中的氨基酸位置804)、P环残基(例如，野生型RET激酶中的氨基酸位置730-737)、DFG基序中或附近的残基(例如，野生型RET激酶中的氨基酸位置888-898)和ATP裂解溶剂前沿氨基酸残基(例如，野生型RET激酶的氨基酸位置758、811和892)。这些类型的突变的其它实例包括可能影响酶活性和/或药物结合的残基，包括但不限于活化环中的残基(例如，野生型RET激酶的氨基酸位置891-916)、活化环附近或与活化环相互作用的残基、导致活性或无活性酶构象的残基的变化，包括在C-螺旋之前的环和C-螺旋(例如，野生型RET蛋白中的氨基酸位置768-788)中的突变、缺失和插入的变化。在一些实施方案中，野生型RET蛋白是本文描述的示例性野生型RET激酶。可以改变(并且是RET抑制剂抗性突变)的特定残基或残基区域包括但不限于表3中列出的那些，其编号基于人野生型RET蛋白序列(例如，SEQ ID NO：1)。如本领域技术人员可以理解的，对应于SEQ ID NO：1中的特定氨基酸位置的参考蛋白质序列中的氨基酸位置可以通过将参考蛋白质序列与SEQ ID NO：1比对来确定(例如，使用软件程序，例如ClustalW2)。RET抑制剂抗性突变位置的其它实例显示在表4中。对这些残基的改变可包括单个或多个氨基酸改变，序列内或侧翼的插入，以及序列内或侧翼的缺失。也参见J. Kooistra, G. K. Kanev, O. P. J. Van Linden, R.Leurs, I. J. P. De Esch,和C. De Graaf, “KLIFS: A structural kinase-ligandinteraction database,” Nucleic Acids Res., vol. 44, no. D1, pp. D365–D371,2016，其全部内容并入本文作为参考。

成熟人 RET蛋白的示例性序列(SEQ ID NO: 1)

在一些实施方案中，式I化合物和药学上可接受的盐和溶剂化物可用于通过组合给药或作为对现有药物治疗(例如，其它RET激酶抑制剂；例如，第一和/或第二RET激酶抑制剂)的后续或另外的(例如，随访)疗法治疗发展具有RET抑制剂抗性突变(例如，导致对第一RET抑制剂的抗性增加，例如在氨基酸位置804的取代，例如V804M、V804L或V804E，和/或表3和表4中列出的一种或多种RET抑制剂抗性突变)的癌症的患者。本文描述了示例性的第一和第二RET激酶抑制剂。在一些实施方案中，第一或第二RET激酶抑制剂可选自卡博替尼、凡德他尼、艾乐替尼、阿帕替尼、西拉替尼、索拉非尼、乐伐替尼、泊那替尼、度维替尼、舒尼替尼、foretinib、LOXO-292、BLU667和BLU6864。

在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂化物可用于治疗已经被鉴定为具有一个或多个RET抑制剂抗性突变(导致对第一或第二RET抑制剂的抗性增加，例如在氨基酸位置804的取代，例如V804M、V804L或V804E)的癌症。RET抑制剂抗性突变的非限制性实例列于表3和4中。

表3. RET抑制剂抗性突变

示例性RET 抗性突变
	氨基酸位置732 (例如，E732K)<sup>7</sup>
氨基酸位置788 (例如，I788N)<sup>8</sup>
	氨基酸位置790 (例如，L790F)<sup>9</sup>
氨基酸位置804 (例如，V804M<sup>1, 2</sup>、V804L<sup>1, 2</sup>、V804E<sup>6</sup>)
	氨基酸位置804/805 (例如，V804M/E805K)<sup>3</sup>
氨基酸位置806 (例如，Y806C<sup>4, 6</sup>、Y806E<sup>4</sup>、Y806S<sup>6</sup>、Y806H<sup>6</sup>、Y806N<sup>6</sup>)
	氨基酸位置810 (例如，G810A<sup>5</sup>、G810R<sup>6</sup>、G810S<sup>6</sup>)
氨基酸位置865 (例如，L865V<sup>6</sup>)
	氨基酸位置870 (例如，L870F<sup>6</sup>)

¹ Yoon 等人, J. Med. Chem. 59(1):358-73, 2016.

² 美国专利号8,629,135.

³ Cranston, 等人, Cancer Res. 66(20):10179-87, 2006.

⁴ Carlomagno, 等人, Endocr. Rel. Cancer 16(1):233-41, 2009.

⁵ Huang 等人, Mol. Cancer Ther., 2016 Aug 5. pii: molcanther.0258.2016.[印刷前的电子版].

⁶ PCT专利申请公开号WO 2016/127074.

⁷ Mamedova 等人, Summer Undergraduate Research Programs (SURP)StudentAbstracts, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2016.

⁸ Plenker 等人, Sci. Transl. Med., 9(394), doi: 10.1126/scitranslmed.aah6144, 2017.

⁹ Kraft et al, Cancer Research, 2017, Vol. 77, No. 13, Supp. Supplement1. 摘要号: 4882；American Association for Cancer Research Annual Meeting 2017.Washington, DC, United States. 01 Apr 2017-05 Apr 2017。

表4. RET抑制剂抗性突变的另外的示例性氨基酸位置

RET 氨基酸和位置	示例性突变	机械学抗性基本原理
			L730	P	位阻和/或活性构象效应
G731	V	位阻和/或活性构象效应
			E732	K	位阻和/或活性构象效应
G733	V	位阻和/或活性构象效应
			E734	K	位阻和/或活性构象效应
L760	M	活性构象效应
			K761	E	活性构象效应
E762	K	活性构象效应
			N763	D	活性构象效应
A764	V	活性构象效应
			S765	N	活性构象效应
P766	A	活性构象效应
			S767	C	活性构象效应
E768	K	活性构象效应
			L779	M	位阻和/或活性构象效应
I788	M	位阻和/或活性构象效应
			M868	R	位阻和/或活性构象效应
K869	E	位阻和/或活性构象效应
			L870	Q	位阻和/或活性构象效应
V871	M	位阻和/或活性构象效应
			H872	R	位阻和/或活性构象效应
R873	P	位阻和/或活性构象效应
			D874	Y	位阻和/或活性构象效应
L881	R	位阻和/或活性构象效应
			L895	M	活性构象效应
S896	N	活性构象效应
			R897	C	活性构象效应
D898	Y	活性构象效应
			V899	G	活性构象效应
Y900	D	活性构象效应
			E901	K	活性构象效应
E902	K	活性构象效应
			D903	Y	活性构象效应
S904	C	活性构象效应
			Y905	D	活性构象效应
V906	M	活性构象效应
			K907	E	活性构象效应
R908	P	活性构象效应
			S909	C	活性构象效应
Q910	R	活性构象效应
			G911	C	活性构象效应
R912	P	活性构象效应

RET的致癌作用首先描述于乳头状甲状腺癌(PTC)(Grieco 等人, Cell, 1990,60, 557-63)，其源自滤泡性甲状腺细胞并且是最常见的甲状腺恶性肿瘤。大约20-30％的PTC具有体细胞染色体重排(易位或倒位)，将启动子和组成型表达的无关基因的5'部分连接到RET酪氨酸激酶结构域(Greco 等人, Q. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2009, 53,440-54)，因此推动其在甲状腺细胞中的异位表达。通过这种重排产生的融合蛋白被称为“RET/PTC”蛋白。例如，RET/PTC 1是CCDD6和RET之间的融合，常见于乳头状甲状腺癌。类似地，RET/PTC3和RET/PTC4都是乳头状甲状腺癌中常见的ELE1和RET的融合，尽管导致融合事件的RET/PTC3和RET/PTC4导致具有不同分子量的不同蛋白质(参见例如，Fugazzola 等人,Oncogene, 13(5):1093-7, 1996)。与PTC相关的一些RET融合不被称为“RET/PTC”，而是被称为融合蛋白本身。例如，在PTC中发现RET与ELKS和PCM1两者之间的融合，但融合蛋白被称为ELKS-RET和PCM1-RET(参见例如，Romei和Elisei, Front. Endocrinol. (Lausanne),3:54, doi: 10.3389/fendo.2012.00054, 2012)。已经在转基因小鼠中证实了RET-PTC重排在PTC发病机理中的作用(Santoro 等人, Oncogene, 1996, 12, 1821-6)。迄今为止，已经鉴定了来自PTC和其它癌症类型的多种融合伴侣，它们都提供蛋白/蛋白相互作用结构域，其诱导配体非依赖性RET二聚化和组成型激酶活性(参见，例如，表1)。最近，已经在约2％的肺腺癌患者中鉴定出染色体10(其中存储RET基因)中10.6 Mb的臂间倒位，产生嵌合基因KIF5B-RET的不同变体(Ju 等人, Genome Res., 2012, 22, 436-45；Kohno 等人,2012, Nature Med., 18, 375-7；Takeuchi 等人, Nature Med., 2012, 18, 378-81；Lipson 等人, 2012, Nature Med., 18, 382-4)。融合转录物高度表达，并且所有得到的嵌合蛋白含有介导同源二聚化的KIF5B的卷曲螺旋区的N末端部分和整个RET激酶结构域。RET阳性患者中没有一个具有其它已知的致癌改变(例如EGFR或K-Ras突变、ALK易位)，支持KIF5B-RET融合可能是肺腺癌的驱动突变的可能性。已经通过将融合基因转染到培养的细胞系中证实了KIF5B-RET的致癌潜力：与用RET-PTC融合蛋白观察到的相似，KIF5B-RET被组成型磷酸化并诱导NIH-3T3转化和BA-F3细胞的IL-3独立生长。然而，在肺腺癌患者中已经鉴定出其它RET融合蛋白，例如CCDC6-RET融合蛋白，已发现其在人肺腺癌细胞系LC-2/ad的增殖中起关键作用(Journal of Thoracic Oncology, 2012, 7(12):1872-1876)。RET抑制剂已被证明可用于治疗涉及RET重排的肺癌(Drilon, A.E. 等人 J Clin Oncol 33, 2015(suppl；abstr 8007))。已经在患有结肠直肠癌的患者中鉴定了RET融合蛋白(Song Eun-Kee, 等人 International Journal of Cancer, 2015, 136: 1967-1975)。

如产生于滤泡旁的产生降钙素的细胞的甲状腺髓样癌(MTC)所示，除RET序列的重排外，RET原癌基因的功能点突变的获得也驱动致癌事件(de Groot, 等人, Endocrine Rev., 2006, 27, 535-60；Wells and Santoro, Clin. Cancer Res., 2009, 15, 7119-7122)。大约25％的MTC与多发性内分泌瘤病2型(MEN2)相关，这是一组由RET的种系激活点突变引起的影响神经内分泌器官的遗传性癌症综合征。在MEN2亚型(MEN2A、MEN2B和家族性MTC/FMTC)中，RET基因突变具有强烈的表型-基因型相关性，其定义了该疾病的不同的MTC攻击性和临床表现。在MEN2A综合征中，突变涉及位于富含半胱氨酸的细胞外区域的六个半胱氨酸残基(主要是C634)之一，导致配体非依赖性同源二聚化和组成型RET活化。患者在年轻时(5-25岁发病)发展为MTC，也可能发展为嗜铬细胞瘤(50％)和甲状旁腺功能亢进。MEN2B主要由M918T突变引起，该突变位于激酶结构域中。该突变组成性地激活其单体状态的RET并通过激酶改变底物识别。MEN2B综合征的特征是早期发作(<1年)和极具侵袭性的形式的MTC、嗜铬细胞瘤(50％的患者)和神经节瘤。在FMTC中，唯一的疾病表现是MTC，通常发生在成年时。已经检测到许多不同的突变，跨越整个RET基因。其余75％的MTC病例是散发性的，其中约50％存在RET体细胞突变：最常见的突变是M918T，其与MEN2B一样，与最具攻击性的表型相关。RET的体细胞点突变也已在其它肿瘤中描述，例如结肠直肠癌(Wood 等人,Science, 2007, 318, 1108-13)和小细胞肺癌(Jpn. J. Cancer Res., 1995, 86, 1127-30)。

已经发现RET信号传导组分在原发性乳腺肿瘤中表达并且在乳腺肿瘤细胞系中与雌激素受体-cc途径功能性相互作用(Boulay 等人, Cancer Res. 2008, 68, 3743-51；Plaza-Menacho 等人, Oncogene, 2010, 29, 4648-57)，而RET表达和GDNF家族配体的活化可能在不同类型癌细胞的神经周围侵袭中起重要作用(Ito 等人, Surgery, 2005,138, 788-94；Gil 等人, J. Natl. Cancer Inst., 2010, 102, 107-18；Iwahashi 等人,Cancer, 2002, 94, 167-74)。

RET也在30-70％的浸润性乳腺癌中表达，在雌激素受体阳性肿瘤中表达相对更频繁(Plaza-Menacho, I., 等人, Oncogene, 2010, 29, 4648-4657；Esseghir, S., 等人,Cancer Res., 2007, 67, 11732-11741；Morandi, A., 等人, Cancer Res., 2013, 73,3783-3795；Gattelli, A., EMBO Mol. Med., 2013, 5, 1335-1350)。

已经在由结肠直肠癌建立的(患者衍生的异种移植物)PDX的子集中报道了RET重排的鉴定。尽管结肠直肠癌患者中此类事件的发生频率仍有待确定，但这些数据表明RET作为该适应症的靶标的作用(Gozgit 等人, AACR Annual Meeting 2014)。研究表明RET启动子在结肠直肠癌中经常被甲基化，并且预计会减少RET表达的杂合错义突变在5-10％的病例中被鉴定，这表明RET可能在散发性结肠癌中具有肿瘤抑制因子的一些特征(Luo, Y.,等人, Oncogene, 2013, 32, 2037-2047；Sjoblom, T., 等人, Science, 2006, 268-274；Cancer Genome Atlas Network, Nature, 2012, 487, 330-337)。

现在显示越来越多的肿瘤类型表达大量水平的野生型RET激酶，其可能对肿瘤进展和扩散有影响。RET在50-65％的胰腺导管癌中表达，并且在转移性和更高级别肿瘤中表达更频繁(Ito, Y, 等人, Surgery, 2005, 138, 788-794；Zeng, Q., 等人, J. Int. Med. Res. 2008, 36, 656-664)。

在造血谱系的肿瘤中，RET在具有单核细胞分化的急性髓样白血病(AML)以及CMML中表达(Gattei, V. 等人, Blood, 1997, 89, 2925-2937；Gattei, V., 等人, Ann. Hematol, 1998, 77, 207-210；Camos, M., Cancer Res. 2006, 66, 6947-6954)。最近的研究已经鉴定罕见的染色体重排，其涉及具有慢性粒单核细胞白血病(CMML)的患者中的RET。CMML经常与几种酪氨酸激酶的重排相关，所述重排导致引起RAS途径的活化的嵌合胞质癌基因蛋白的表达(Kohlmann, A., 等人, J. Clin. Oncol. 2010, 28, 2858-2865)。在RET的情况下，将RET与BCR(BCR-RET)或与成纤维细胞生长因子受体1癌基因伴侣(FGFR1OP-RET)连接的基因融合在早期造血祖细胞中转化，并且可以将这些细胞的成熟转向单核细胞途径，这可能通过引发RET介导的RAS信号传导(Ballerini, P., 等人,Leukemia, 2012, 26, 2384-2389)。

RET表达也已显示在其它几种肿瘤类型中发生，包括前列腺癌、小细胞肺癌、黑素瘤、肾细胞癌和头颈部肿瘤(Narita, N., 等人, Oncogene, 2009, 28, 3058-3068；Mulligan, L. M., 等人, Genes Chromosomes Cancer, 1998, 21, 326-332；Flavin,R., 等人, Urol. Oncol., 2012, 30, 900-905；Dawson, D. M., J Natl Cancer Inst,1998, 90, 519-523)。

在神经母细胞瘤中，RET表达和GFL的活化在肿瘤细胞分化中起作用，可能与其它神经营养因子受体联合下调N-Myc，N-Myc的表达是预后不良的标志(Hofstra, R. M., W.,等人, Hum. Genet. 1996, 97, 362-364；Petersen, S. and Bogenmann, E., Oncogene,2004, 23, 213-225；Brodeur, G. M., Nature Ref. Cancer, 2003, 3, 203-216)。

已知与RET交叉反应的多靶点抑制剂(Borrello, M.G., 等人, Expert Opin. Ther. Targets, 2013, 17(4), 403-419；国际专利申请号WO 2014/141187、WO 2014/184069和WO 2015/079251)。此类多靶点抑制剂(或多激酶抑制剂或MKI)也可与RET抑制剂抗性突变的发展相关。参见，例如，Q. Huang 等人, “Preclinical Modeling of KIF5B-RET Fusion Lung Adenocarcinoma.,” Mol. Cancer Ther., no. 18, pp. 2521–2529,2016；Yasuyuki Kaneta 等人, Abstract B173: Preclinical characterization andantitumor efficacy of DS-5010, a highly potent and selective RET inhibitor,Mol Cancer Ther January 1 2018 (17)(1 Supplement)B173；DOI:10.1158/1535-7163.TARG-17-B173，两者均整体并入本文作为参考。

因此，本文提供了用于治疗诊断为具有(或鉴定为具有)癌症的患者的方法，其包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。本文还提供了用于治疗鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者的方法，其包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。在一些实施方案中，患者已经通过使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定患者或来自患者的活组织检查样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的测试或测定或通过进行本文所述的测定的任何非限制性实例被鉴定或诊断为具有RET相关的癌症。在一些实施方案中，测试或测定作为试剂盒提供。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症。例如，RET相关的癌症可以是包括一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌症。

还提供了用于在有需要的患者中治疗癌症的方法，该方法包括: (a)检测患者中的RET相关的癌症；和(b)给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。这些方法的一些实施方案还包括向对象施用另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在一些实施方案中，对象先前用第一RET抑制剂治疗或先前用另一种抗癌治疗，例如，肿瘤切除术或放射疗法治疗。在一些实施方案中，患者通过使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定患者或来自患者的活组织检查样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的测试或测定或通过进行本文所述的测定的任何非限制性实例被确定为具有RET相关的癌症。在一些实施方案中，测试或测定作为试剂盒提供。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症。例如，RET相关的癌症可以是包括一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌症。

还提供了治疗患者的方法，其包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调，并给被确定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的患者施用(例如，具体地或选择地施用)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。这些方法的一些实施方案还包括向对象施用另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在这些方法的一些实施方案中，对象先前用第一RET抑制剂治疗或先前用另一种抗癌治疗，例如，肿瘤切除术或放射疗法治疗。在一些实施方案中，患者是被怀疑具有RET相关的癌症的患者、呈现RET相关的癌症的一种或多种症状的患者或具有发展RET相关的癌症的升高风险的患者。在一些实施方案中，测定利用下一代测序、焦磷酸测序、免疫组织化学或分离FISH分析。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的测定，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。可用于这些方法的另外的非限制性测定如本文所述。另外的测定是本领域已知的。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。

还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物，其用于治疗通过对从患者获得的样品进行测定(例如，体外测定)以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的步骤鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者中的RET相关的癌症，其中RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的存在表明患者具有RET相关的癌症。还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗通过对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的步骤鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者中的RET相关的癌症，其中RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的存在表明患者具有RET相关的癌症。本文描述的任何方法或用途的一些实施方案还包括在患者的临床记录(例如，计算机可读介质)中记录患者通过进行测定被确定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调应当被施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。在一些实施方案中，测定利用下一代测序、焦磷酸测序、免疫组织化学或分离FISH分析。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的测定，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。

还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其用于治疗需要其的患者或鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者中的癌症。还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者中的癌症。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症，例如，具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症。在一些实施方案中，患者通过在患者或来自样品的活组织检查样品中使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的试剂盒被鉴定或诊断为具有RET相关的癌症。如本文提供的，RET相关的癌症包括本文所述和本领域已知的那些。

在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者已经被鉴定或诊断为具有具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者具有对RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者可以是具有对RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤的患者。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者可以是其肿瘤具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的患者。在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者被怀疑具有RET相关的癌症(例如，具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌症)。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的患者中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括a)在来自患者的样品中检测RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和b)施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调包括一种或多种融合蛋白。RET基因融合蛋白的非限制性实例描述于表1中。在一些实施方案中，融合蛋白是KIF5B-RET。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失。RET激酶蛋白点突变/插入/缺失的非限制性实例描述于表2和2a中。在一些实施方案中，RET激酶蛋白点突变/插入/缺失选自M918T、M918V、C634W、V804L和V804M。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。RET抑制剂抗性突变的非限制性实例描述于表3和4中。在一些实施方案中，RET抑制剂抗性突变是V804M。在一些实施方案中，具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的测定或试剂盒确定。在一些实施方案中，对RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤是对一个或多个RET抑制剂抗性突变呈阳性的肿瘤。在一些实施方案中，具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的肿瘤使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的测定或试剂盒确定。

在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，患者具有临床记录表明，患者具有具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的肿瘤(例如，肿瘤具有一个或多个RET抑制剂抗性突变)。在一些实施方案中，临床记录表明患者应当用一种或多种本文提供的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或组合物治疗。在一些实施方案中，具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症是具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌症。在一些实施方案中，具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的测定或试剂盒确定。在一些实施方案中，对RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调呈阳性的肿瘤是对一个或多个RET抑制剂抗性突变呈阳性的肿瘤。在一些实施方案中，具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的肿瘤使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的测定或试剂盒确定。

还提供了治疗患者的方法，其包括给具有指示患者具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的临床记录的患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。还提供了式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗具有指示患者具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的临床记录的患者中的RET相关的癌症。这些方法和用途的一些实施方案还可以包括: 对从患者获得的样品进行测定(例如，体外测定)以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调，和将该患者已经被鉴定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的信息记录在患者的临床档案(例如，计算机可读介质)中的步骤。在一些实施方案中，测定是体外测定。例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分离FISH分析的测定。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。

本文还提供了治疗对象的方法。在一些实施方案中，该方法包括对获自对象的样品进行测定以确定对象是否具有RET基因、RET蛋白或它们中的任何一种的表达或水平的失调。在一些这样的实施方案中，该方法还包括给确定为具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法包括通过在获自对象的样品上进行的测定确定对象具有RET基因、RET蛋白或它们中的任何一种的表达或水平的失调。在这种实施方案中，该方法还包括给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们的表达或活性中的失调是导致RET融合蛋白(例如，本文所述的RET融合蛋白中的任何一种)的表达的基因或染色体易位。在一些实施方案中，RET融合可以选自KIF5B-RET融合和CCDC6-RET融合。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平中的失调是RET基因中的一个或多个点突变(例如，本文所述的一个或多个RET点突变中的任何一个)。RET基因中的一个或多个点突变可以导致，例如，具有一个或多个以下氨基酸取代的RET蛋白的翻译: M918T、M918V、C634W、V804L和V804M。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平中的失调是一个或多个RET抑制剂抗性突变(例如，本文所述的一个或多个RET抑制剂抗性突变的任何组合)。这些方法的一些实施方案还包括向对象施用另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。

在一些实施方案中，本文提供的化合物表现出脑和/或中枢神经系统(CNS)渗透。这些化合物能够穿过血脑屏障并抑制脑和/或其它CNS结构中的RET激酶。在一些实施方案中，本文提供的化合物能够以治疗有效量穿过血脑屏障。例如，治疗具有癌症(例如RET相关的癌症，例如RET相关脑或CNS癌症)的患者可以包括向患者施用(例如，口服施用)化合物。在一些这样的实施方案中，本文提供的化合物可用于治疗原发性脑肿瘤或转移性脑肿瘤。例如，该化合物可用于治疗一种或多种神经胶质瘤，例如胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤和混合胶质瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤、神经节神经胶质瘤、雪旺瘤(神经鞘瘤)和颅咽管瘤(参见，例如，Louis, D.N. 等人Acta Neuropathol 131(6), 803-820 (June 2016)中列出的肿瘤)。在一些实施方案中，脑肿瘤是原发性脑肿瘤。在一些实施方案中，患者先前已经用另一种抗癌剂，例如另一种RET抑制剂(例如，不是通式I化合物的化合物)或多激酶抑制剂治疗。在一些实施方案中，脑肿瘤是转移性脑肿瘤。在一些实施方案中，患者先前已经用另一种抗癌剂，例如另一种RET抑制剂(例如，不是通式I化合物的化合物)或多激酶抑制剂治疗。

还提供了为鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者选择治疗的方法(例如，体外方法)。一些实施方案还可以包括向鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者施用所选的治疗。例如，所选的治疗可以包括施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。一些实施方案还可以包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调，和将确定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的患者鉴定和诊断为具有RET相关的癌症的步骤。在一些实施方案中，癌症是具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症。在一些实施方案中，患者已经通过在患者或来自患者的活组织检查样品中使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调试剂盒被鉴定或诊断为具有RET相关的癌症。在一些实施方案中，RET相关的癌症是本文所述的或本领域已知的癌症。在一些实施方案中，测定是体外测定。例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分离FISH分析的测定。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。

本文还提供了为患者选择治疗的方法，其中方法包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调(例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变)，和将确定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的患者鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的步骤。一些实施方案还包括给鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者施用所选的治疗。例如，所选的治疗可以包括给鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，测定是体外测定。例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分离FISH分析的测定。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。

还提供了选择患者进行治疗的方法，其中方法包括选择、鉴定或诊断具有RET相关的癌症的患者，和选择患者进行包括施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。在一些实施方案中，将患者鉴定或诊断为具有RET相关的癌症可以包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调，和将确定为具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的患者鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的步骤。在一些实施方案中，该选择患者进行治疗的方法可以用作包括施用各种RET相关的癌症的治疗的临床研究的一部分。在一些实施方案中，RET相关的癌症是具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌症。在一些实施方案中，测定是体外测定。例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分离FISH分析的测定。在一些实施方案中，测定是管理机构批准的，例如，FDA-批准的试剂盒。在一些实施方案中，测定是液体活组织检查。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。

在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，使用来自患者的样品的用于确定患者是否具有RET基因、或RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的测定可以包括，例如，下一代测序, 免疫组织化学、荧光显微术、分离FISH分析、Southern印迹、Western印迹、FACS分析、Northern印迹和基于PCR的扩增(例如，RT-PCR和定量实时RT-PCR)。如本领域众所周知的，通常例如用至少一种标记的核酸探针或至少一种标记的抗体或其抗原结合片段进行测定。测定可以利用本领域已知的其它检测方法来检测RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调(参见，例如，本文引用的参考文献)。在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。在一些实施方案中，样品是来自患者的生物样品或活组织检查样品(例如，石蜡包埋的活组织检查样品)。在一些实施方案中，患者是被怀疑具有RET相关的癌症的患者、具有一个或多个RET相关的癌症的症状的患者和/或具有发展RET相关的癌症的增加的风险的患者。

在一些实施方案中，RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以使用液体活组织检查(不同地称为流体活组织检查或流体相活组织检查)鉴定。参见，例如，Karachialiou 等人, “Real-time liquid biopsies become a reality incancer treatment”, Ann. Transl. Med., 3(3):36, 2016。液体活组织检查方法可以用于检测总肿瘤负荷和/或RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调。可以对从对象相对容易地获得的生物样品(例如，通过简单的抽血)进行液体活组织检查，并且通常比用于检测肿瘤负荷和/或RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的传统方法侵袭性更低。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于在比传统方法更早的阶段检测RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的存在。在一些实施方案中，待用于液体活组织检查的生物样品可包括血液、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、痰液、支气管肺泡灌洗、胆汁、淋巴液、囊肿液、粪便、腹水及其组合。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测循环的肿瘤细胞(CTC)。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测无细胞的DNA。在一些实施方案中，使用液体活组织检查检测的无细胞的DNA是来自肿瘤细胞的循环的肿瘤DNA(ctDNA)。ctDNA的分析(例如，使用敏感检测技术，例如但不限于下一代测序(NGS)、传统PCR、数字PCR或微阵列分析)可用于鉴定RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调。

在一些实施方案中，可以使用液体活组织检查来检测来自单个基因的ctDNA。在一些实施方案中，可以使用液体活组织检查检测来自多个基因(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多，或这些数目之间的任何数目的基因)的ctDNA。在一些实施方案中，可以使用多种市售测试组(例如，设计用于检测RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调的市售测试组)中的任何一种来检测来自多个基因的ctDNA。液体活组织检查可用于检测RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调，包括但不限于点突变或单核苷酸变体(SNV)、拷贝数变体(CNV)、基因融合(例如，易位或重排)、插入、缺失或其任何组合。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测种系突变。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测体细胞突变。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测原发性基因突变(例如，与疾病，例如癌症的初始发展相关的原发性突变或原发性融合)。在一些实施方案中，液体活组织检查可用于检测在原发性基因突变发展后发生的基因突变(例如，响应于给对象施用的治疗而产生的抗性突变)。在一些实施方案中，使用液体活组织检查鉴定的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调还存在于对象中存在的癌细胞中(例如，在肿瘤中)。在一些实施方案中，本文所述的任何类型的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可以使用液体活组织检查检测。在一些实施方案中，通过液体活组织检查鉴定的基因突变可用于鉴定对象作为特定治疗的候选者。例如，检测对象中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调可指示对象将对包括施用式I化合物或其药学上可接受的盐的治疗有反应。

液体活组织检查可在诊断过程、监测过程和/或治疗过程中多次进行，以确定一个或多个临床相关参数，包括但不限于疾病进展、治疗效力，或在给对象施用治疗后产生抗性突变。例如，可以在第一时间点执行第一次液体活组织检查，并且可以在诊断过程、监测过程和/或治疗过程期间的第二时间点执行第二次液体活组织检查。在一些实施方案中，第一时间点可以是诊断对象患有疾病之前的时间点(例如，当对象是健康的时)，并且第二时间点可以是对象已经发展疾病之后的时间点(例如，第二时间点可用于诊断对象患有疾病)。在一些实施方案中，第一时间点可以是诊断对象患有疾病之前的时间点(例如，当对象是健康的时)，之后监测对象，并且第二时间点可以是监测对象之后的时间点。在一些实施方案中，第一时间点可以是在诊断对象患有疾病之后的时间点，之后给对象施用治疗，并且第二时间点可以是施用治疗之后的时间点；在这种情况下，第二时间点可用于评估治疗效力(例如，是否在第一时间点检测到的基因突变大量减少或无法检测到)或确定是否存在由于治疗而出现的抗性突变。在一些实施方案中，待施用于对象的治疗可包括式I化合物或其药学上可接受的盐。

在医学肿瘤学领域中，通常的实践是使用不同形式的治疗的组合来治疗每个患有癌症的患者。在医学肿瘤学中，除了本文提供的组合物之外，这种联合治疗或疗法的其它组分可以是例如手术、放射疗法和化学治疗剂，例如其它激酶抑制剂、信号转导抑制剂和/或单克隆抗体。例如，手术可以是开放手术或微创手术。因此，式I化合物也可用作癌症治疗的佐剂，即，它们可以与一种或多种另外的疗法或治疗剂组合使用，例如通过相同或不同的作用机制起作用的化学治疗剂。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，式I化合物(或其药学上可接受的盐或溶剂化物)与治疗有效量的选自一种或多种另外的疗法或治疗(例如，化学治疗)剂的至少一种另外的治疗剂组合施用。

另外的治疗剂的非限制性实例包括: 其它RET靶向治疗剂（即第一或第二RET激酶抑制剂）、受体酪氨酸激酶靶向治疗剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径调节剂（例如奥巴克拉）；细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向治疗剂、免疫靶向药物，包括免疫疗法和放射疗法。在一些实施方案中，其它RET靶向治疗剂是表现出RET抑制活性的多激酶抑制剂。在一些实施方案中，其它RET靶向治疗抑制剂对RET激酶具有选择性。在如本文所述的测定中测量的，示例性RET激酶抑制剂可以表现出小于约1000 nM、小于约500 nM、小于约200 nM、小于约100 nM、小于约50 nM、小于约25 nM、小于约10 nM或小于约1 nM的针对RET激酶的抑制活性(IC₅₀)。在一些实施方案中，如在本文提供的测定中测量的，RET激酶抑制剂可以表现出小于约25 nM、小于约10 nM、小于约5 nM或小于约1 nM的针对RET激酶的抑制活性(IC₅₀)。

RET靶向的治疗剂的非限制性实例(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)包括艾乐替尼(9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氢-5H-苯并[b]咔唑-3-甲腈)；amuvatinib (MP470, HPK56)(N-(1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基甲基)-4-([1]苯并呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-硫代酰胺)；阿帕替尼(YN968D1)(N-[4-(1-氰基环戊基)苯基-2-(4-皮考基)氨基-3-烟酰胺甲磺酸盐)；卡博替尼(Cometriq XL-184)(N-(4-((6,7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)-N'-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；度维替尼(TKI258；GFKI-258；CHIR-258)((3Z)-4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,3-二氢苯并咪唑-2-叉基]喹啉-2-酮)；法米替尼(5-[2-(二乙基氨基)乙基]-2-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-叉基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮)；fedratinib (SAR302503、TG101348)(N-(2-甲基-2-丙烷基)-3-{[5-甲基-2-({4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基}氨基)-4-嘧啶基]氨基}苯磺酰胺)；foretinib (XL880、EXEL-2880、GSK1363089、GSK089)(N1'-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-(3-吗啉代丙氧基)-4-喹啉基]氧基]苯基]-N1-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；fostamantinib (R788)(2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮, 6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-4-[(膦酰基氧基)甲基]-, 钠盐(1:2))；ilorasertib (ABT-348)(1-(4-(4-氨基-7-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲)；乐伐替尼(E7080, Lenvima)(4-[3-氯-4-(环丙基氨基羰基)氨基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲酰胺)；莫替沙尼(AMG 706)(N-(3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基)-2-[(吡啶-4-基甲基)氨基]吡啶-3-甲酰胺)；尼达尼布(3-Z-[1-(4-(N-((4-甲基-哌嗪-1-基)-甲基羰基)-N-甲基-氨基)-苯胺基)-1-苯基-亚甲基]-6-甲氧基羰基-2-吲哚啉酮)；泊那替尼(AP24534)(3-(2-咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺)；PP242 (TORKinib)(2-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]-1H-吲哚-5-醇)；奎扎替尼(1-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲)；瑞格非尼(BAY 73-4506、stivarga)(4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺水合物)；RXDX-105 (CEP-32496, agerafenib)(1-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)异噁唑-3-基)脲)；司马尼布(SU5416)((3Z)-3-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)甲叉基]-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮)；sitravatinib (MGCD516、MG516)(N-(3-氟-4-{[2-(5-{[(2-甲氧基乙基)氨基]甲基}-2-吡啶基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基]氧基}苯基)-N-(4-氟苯基)-1,1-环丙烷二甲酰胺)；索拉非尼(BAY 43-9006)(4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲酰胺)；凡他尼布(N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺)；伐拉尼布(PTK787、PTK/ZK、ZK222584)(N-(4-氯苯基)-4-(吡啶-4-基甲基)酞嗪-1-胺)；AD-57 (N-[4-[4-氨基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基]苯基]-N'-[3-(三氟甲基)苯基]-脲)；AD-80 (1-[4-(4-氨基-1-丙烷-2-基吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基]-3-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]脲)；AD-81 (1-(4-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲)；ALW-II-41-27 (N-(5-((4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)-5-(噻吩-2-基)烟酰胺)；BPR1K871 (1-(3-氯苯基)-3-(5-(2-((7-(3-(二甲基氨基)丙氧基)喹唑啉-4-基)氨基)乙基)噻唑-2-基)脲)；CLM3 (1-苯乙基-N-(1-苯基乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；EBI-907 (N-(2-氯-3-(1-环丙基-8-甲氧基-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-7-基)-4-氟苯基)-3-氟丙烷-1-磺酰胺)；NVP-AST-487 (N-[4-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]-N'-[4-[[6-(甲基氨基)-4-嘧啶基]氧基]苯基]-脲)；NVP-BBT594 (BBT594)(5-((6-乙酰胺基嘧啶-4-基)氧基)-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)吲哚啉-1-甲酰胺)；PD173955 (6-(2,6-二氯苯基)-8-甲基-2-(3-甲基硫烷基苯胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮)；PP2 (4-氨基-5-(4-氯苯基)-7-(二甲基乙基)吡唑并[3,4-d]嘧啶)；PZ-1 (N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺)；RPI-1 (1,3-二氢-5,6-二甲氧基-3-[(4-羟基苯基)亚甲基]-H-吲哚-2-酮；(3E)-3-[(4-羟基苯基)甲叉基]-5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-酮)；SGI-7079 (3-[2-[[3-氟-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]氨基]-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-苯乙腈)；SPP86 (1-异丙基-3-(苯基乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；SU4984 (4-[4-[(E)-(2-氧代-1H-吲哚-3-叉基)甲基]苯基]哌嗪-1-甲醛)；舒尼替你(SU11248)(N-(2-二乙基氨基乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-叉基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)；TG101209 (N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)；醉茄素A ((4β,5β,6β,22R)-4,27-二羟基-5,6:22,26-二环氧基麦角甾-2,24-二烯-1,26-二酮)；XL-999 ((Z)-5-((1-乙基哌啶-4-基)氨基)-3-((3-氟苯基)(5-甲基-1H-咪唑-2-基)亚甲基)吲哚啉-2-酮)；BPR1J373 (5-苯基噻唑-2-基胺-嘧啶(pyriminide)衍生物)；CG-806 (CG'806)；DCC-2157；GTX-186；HG-6-63-01((E)-3-(2-(4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烯基)-N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基苯甲酰胺)；SW-01 (环苯扎林盐酸盐)；XMD15-44 (N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-3-(吡啶-3-基乙炔基)苯甲酰胺(从结构产生))；Y078-DM1 (由连接至细胞毒性剂美坦辛的衍生物的RET抗体(Y078)组成的抗体药物缀合物)；Y078-DM4 (由连接至细胞毒性剂美坦辛的衍生物的RET抗体(Y078)组成的抗体药物缀合物)；ITRI-305 (D0N5TB, DIB003599)；BLU-667；BLU6864；DS-5010；GSK3179106；GSK3352589；和NMS-E668。

RET靶向治疗剂(例如，第一RET激酶抑制剂或第二RET激酶抑制剂)的其它实例包括5-氨基-3-(5-环丙基异噁唑-3-基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-甲酰胺；3-(5-环丙基异噁唑-3-基)-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基)-4-氟-2-甲基苯酚；N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)苯基)乙酰胺；N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基氧基)苯基)乙酰胺；N-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-N'-{4'-[(2''-苯甲酰胺基)吡啶-4''-基氨基]苯基}脲；2-氨基-6-{[2-(4-氯苯基)-2-氧代乙基]硫烷基}-4-(3-噻吩基)吡啶-3,5-二甲腈；和3-芳基脲基苄叉基-吲哚啉-2-酮。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括美国专利号9,150,517和9,149,464和国际公开号WO 2014075035中描述的那些，其全部并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式I化合物:

其中R₁是C₆-C₂₄烷基或聚乙二醇；或其药学上可接受的盐形式。在一些实施方案中，其它RET抑制剂是4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸十二烷基酯。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO 2016127074中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中:

其中环A和B各自独立地选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基；

每个L¹和L²独立地选自键、-(C1-C6亚烷基)-、-(C2-C6亚烯基)-、-(C2-C6 亚炔基)-、-(C1-C6 卤代亚烷基)-、-(C1-C6杂亚烷基)-、-C(O)-、-O-、-S-、-S(O)、-S(O)₂-、-N(R¹)-、-O-(C1-C6亚烷基)-、-(C1-C6亚烷基)-O-、-N(R¹)-C(O)-、-C(O)N(R¹)-、-(C1-C6亚烷基)-N(R¹)-、-N(R¹)-(C1-C6亚烷基)-、-N(R¹)-C(O)-(C1-C6亚烷基)-、-(C1-C6亚烷基)-N(R¹)-C(O)-、-C(O)-N(R¹)-(C1-C6亚烷基)-、-(C1-C6亚烷基)-C(O)-N(R¹)-、-N(R¹)-S(O)₂-、-S(O)₂-N(R¹)-、-N(R¹)-S(O)₂-(C1-C6亚烷基)-和-S(O)₂-N(R¹)-(C1-C6亚烷基)-；其中每个亚烷基、亚烯基、亚炔基、卤代亚烷基和杂亚烷基独立地被0-5次出现的R'取代；

每个R^A和R^B独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、C1-C6 卤代烷基、C1-C6 羟基烷基、C1-C6杂烷基和-N(R¹)(R¹)；其中每个烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基烷基和羟基烷基独立地被0-5次出现的Ra取代；

每个R^C和R^D独立地选自C1-C6烷基、C2-C6 烯基、C2-C6 炔基、C1-C6烷氧基、卤素、C1-C6杂烷基、C1-C6 卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6 羟基烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳基氧基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、硝基、氰基、-C(O)R¹、-OC(O)R¹、-C(O)OR¹、-(C1-C6亚烷基)-C(O)R¹、-SR¹,-S(O)₂R¹、-S(O)₂-N(R¹)(R¹)、-(C1-C6亚烷基)-S(O)₂R¹、-(C1-C6亚烷基)-S(O)₂-N(R¹)(R¹)、-N(R¹)(R¹)-C(O)-N(R¹)(R¹)-N(R¹)-C(O)R¹、-N(R¹)-C(O)OR¹、-(C1-C6亚烷基)-N(R¹)-C(O)R¹、-N(R¹)S(O)₂R¹和-P(O)(R¹)(R¹)；其中每个烷基、烯基、炔基、烷氧基、杂烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳基氧基、芳烷基、杂环基和杂环基烷基独立地被0-5次出现的Ra取代；或2个R^C或2个R^D与它们所连接的一个或多个碳原子一起形成独立地被0-5次出现的Ra取代的环烷基或杂环基环；

每个R¹独立地选自氢、羟基、卤素、巯基、C1-C6烷基、C1-C6 硫烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6 卤代烷基、C1-C6 羟基烷基、C1-C6杂烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基，其中每个烷基、硫烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基烷基、杂烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基、杂环基和杂环基烷基独立地被0-5次出现的R^b取代或2个R¹与它们所连接的一个或多个原子一起形成独立地被0-5次出现的R^b取代的环烷基或杂环基环；

每个R^a和R^b独立地为C1-C6烷基、卤素、羟基、C1-C6 卤代烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6 羟基烷基、C1-C6烷氧基,环烷基、杂环基或氰基，其中每个烷基、卤代烷基、杂烷基、羟基烷基、烷氧基、环烷基和杂环基独立地被0-5次出现的R'取代；

每个R'是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、卤素、羟基、C1-C6 卤代烷基、C1-C6 羟基烷基、环烷基或氰基；或2个R’与它们所连接的一个或多个原子一起形成环烷基或杂环基环；

m是0、1、2或3；

n是0、1或2；和

p和q各自独立地是0、1、2、3或4。例如，RET抑制剂可以选自:

；；

；

；和

或其药学上可接受的盐。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO 2016075224中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R1和R2独立地是氢或选自直链或支链(C₁-C₆)烷基、(C₃-C₆)环烷基和COR'的任选地取代的基团，其中R'是选自直链或支链(C₁-C₆)烷基和(C₃-C₆)环烷基的任选地取代的基团；

R3是氢或选自直链或支链(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₂-C₆)炔基、(C₃-C₆)环烷基、芳基、杂芳基和3-至7-元杂环基环的任选地取代的基团；

R4是氢或选自直链或支链(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、芳基、杂芳基或杂环基的任选地取代的基团；

A是5-或6-元杂芳基环或苯基环；

B是选自杂芳基、(C₅-C₆)环烷基和杂环基环或苯基环的5-或6-元环；其中环A和环B稠合在一起形成双环体系，该体系包含与6-元芳族或5-至6-元杂芳族、(C₅-C₆)环烷基或杂环基环稠合的6-元芳族或5-至6-元杂芳族环；

Y是碳或氮；

X是氢、卤素、羟基、氰基或选自直链或支链(C₁-C₆)烷基和(C₁-C₆)烷氧基的任选地取代的基团；和

R5和R6独立地是氢或选自直链或支链(C₁-C₆)烷基、(C₃-C₆)环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的任选地取代的基团。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO 2015079251中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式(III)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X是NH、NR_x、O或S，其中R_x是(1-3C)烷基；

R₁选自卤素(例如，氟、氯或溴)、三氟甲基、(1-4C)烷基(例如，甲基)、(1-4C)烷氧基或(3-6C)环烷基，其中烷基、烷氧基或环烷基任选地被一个或多个氟取代；

R₂选自氢、卤素(例如，氟、氯或溴)、羟基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(1-6C)烷基(例如，甲基)、(3-8C)环烷基或(1-4C)烷氧基(例如，OMe)，其中烷基、环烷基或烷氧基任选地被一个或多个氟取代；

R₃选自氢、卤素(例如，氟、氯或溴)、羟基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(1-6C)烷基(例如，甲基)、(3-8C)环烷基或(1-4C)烷氧基(例如，OMe)，其中烷基、环烷基或烷氧基任选地被一个或多个氟取代；

R₄选自氢、卤素(例如，氟、氯或溴)、羟基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(1-6C)烷基(例如，甲基)、(3-8C)环烷基或(1-4C)烷氧基(例如，OMe)，其中烷基、环烷基或烷氧基任选地被一个或多个氟取代；

R₅选自氢或由下式定义的基团:

-O-L₅-X₅-Q₅；

其中

L₅为不存在或直链或支链(1-4C)亚烷基；

X₅为不存在或-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-CH(QR_5L)-、-N(R^j)-、-N(R_5L)-C(O)-、-N(R_5L)-C(O)O-、-C(O)-N(R_5L)-、-S-、-SO-、-SO₂-、-S(O)₂N(R_5L)-或-N(R_5L)SO₂-，其中R_5L选自氢或甲基；和

Q₅是(1-6C)烷基、(2-6C)烯基、(2-6C)炔基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烷基-(1-4C)烷基、芳基、芳基-(1-4C)烷基、杂芳基、杂芳基-(1-4C)烷基、杂环基或杂环基-(1-4C)烷基；

R₆选自氢或由下式定义的基团:

-O-L₆-X₆-Q₆

其中

L₆为不存在或为直链或支链(1-4C)亚烷基；

X₆为不存在或选自 -O-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-CH(OR_6L)-、-N(R_6L)、-N(R_6L)-C(O)-、-N(R_6L)-C(O)O-、-C(O)-N(R_6L)-、-S-、-SO-、-SO₂-、-S(O)₂N(R_6L)-或-N(R_6L)SO₂-，其中R_6L选自氢或(1-3C)烷基；

Q₆是氢、(1-8C)烷基、(2-8C)烯基、(2-8C)炔基、(3-8C)环烷基、(3-

8C)环烷基-(1-6C)烷基、芳基、芳基-(1-6C)烷基、杂芳基、杂芳基-(1-

6C)烷基、杂环基、杂环基-(1-6C)烷基，

或Q₆和R_L6连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成杂环；

其中R₆任选地被一个或多个(1-6C)烷基、(1-6C)烷酰基、OR_6X、SR_6X、S(O)R_6X、S(O)₂R_6X、C(O)OR_6X或C(O)NR_6XR'_6X取代(例如在L₆和/或Q₆上被取代)

，其中R_6X和R'_6X独立地是氢，(1-8C)烷基，或

R_6X和R'_6X连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成杂环；和

R₇选自氢、(1-6C)烷氧基或由下式定义的基团:

-O-L₇-X₇-Q₇-

其中

L₇为不存在或为直链或支链(1-4C)亚烷基；

X₇为不存在或选自 -O-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-CH(OR_6L)-、-N(R_7L)-、-N(R_7L)-C(O)-、-N(R_7L)-C(O)O-、-C(O)-N(R_7L)-、-S-、-SO-、-SO₂-、-S(O)₂N(R_7L)-或-N(R_7L)SO₂-，其中R_7L选自氢或(1-3C)烷基；

Q₇是氢、(1-8C)烷基、(2-8C)烯基、(2-8C)炔基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烷基-(1-6C)烷基、芳基、芳基-(1-6C)烷基、杂芳基、杂芳基-(1-6C)烷基、杂环基、杂环基-(1-6C)烷基，

或Q₇和R _7L连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成杂环；

其中R₇任选地被一个或多个卤素、羟基、硝基、氰基、(1-8C)烷基、(1-8C)烷酰基、OR_7X、SR_7X、S(O)R_7X、S(O)₂R_7X、C(O)OR_7X或C(O)NR_7XR'_7X取代(例如，在L₇和/或Q₇上被取代)，其中R_7X和R'_7X独立地是氢、(1-8C)烷基或R_7X和R'_7X连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成杂环；或

R₇ 任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自氧代、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)羟基烷基、C(O)R_7y或NR_7yR'_7y，其中R_7y和R'_7y独立地是氢或(1-8C)烷基。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO2017178845中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式(IV)化合物或其药学上可接受的盐，其中:

HET选自以下中的一种:

其中表示连接点；

R₁选自氢、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基或下式的基团:

-L-Y-Q

其中:

L为不存在或任选地被一个或多个取代基取代的(1-5C)亚烷基，所述取代基选自(1-2C)烷基或氧代；

Y为不存在或O、S、SO、SO₂、N(R_a)、C(O)、C(O)O、OC(O)、C(O)N(R_a)、N(R_a)C(O)、N(R_a)C(O)N(R_b)、N(R_a)C(O)O、OC(O)N(R_a)、S(O)₂N(R_a)或N(R_a)SO₂，其中R_a和R_b各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；和

Q是氢、(1-6C)烷基、(2-6C)烯基、(2-6C)炔基、芳基、(3-10C)环烷基、(3-10C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Q任选地被一个或多个取代基进一步取代，所述取代基独立地选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、(1-4C)氨基烷基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、巯基、脲基、NR_cR_d、OR_c、C(O)R_c、C(O)OR_c、OC(O)R_c、C(O)N(R_d)R_c、N(R_d)C(O)R_c、S(O)_pR_c(其中p是0、1或2)、SO₂N(R_d)R_c、N(R_d)SO₂R_c、Si(R_e)(R_d)R_c或(CH₂)_qNR_cR_d (其中q是1、2或3)；其中R_c, R_d和R_e各自独立地选自氢、(1-6C)烷基或(3-6C)环烷基；或R_c和R_d连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成4-7元杂环，其任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基或羟基；或

Q任选地被下式的基团取代:

-L₁-L_Q1-W₁

其中:

L₁为不存在或任选地被一个或多个取代基取代的(1-3C)亚烷基，所述取代基选自(1-2C)烷基或氧代；

L_Q1为不存在或选自 O、S、SO、SO₂、N(R_f)，C(O)，C(O)O、OC(O)、C(O)N(R_f)、N(R_f)C(O)、N(R_f)C(O)N(R_g)、N(R_f)C(O)O、OC(O)N(R_f)、S(O)₂N(R_f)或N(R_f)SO₂，其中R_f和R_g各自独立地选自氢或(1-2C)烷基；和

W₁是氢、(1-6C)烷基、芳基、芳基(1-2C)烷基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中W₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、巯基、脲基、芳基、杂芳基、杂环基、(3-6C)环烷基、NR_hR_i、OR_h、C(O)R_h、C(O)OR_h、OC(O)R_h、C(O)N(R_i)R_h、N(R_i)C(O)R_h、S(O)_rR_h (其中r是0、1或2)、SO₂N(R_i)R_h、N(R_i)SO₂R_h或(CH₂)_sNR_iR_h (其中s是1、2或3)；其中R_h和R_i各自独立地选自氢、(1-4C)烷基或(3-6C)环烷基；

R_1a和R_1b各自选自H、(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基或巯基；

W选自0、S或NR_W1，其中R_W1选自H或(1-2C)烷基；

X₁、X₂、X₃和X₄独立地选自CH、CR₂或N；

R₂选自氢、卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、氰基、硝基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、(2-4C)炔基、NR_jR_k、OR_j、C(O)R_j、C(O)OR_j、OC(O)R_j、C(O)N(R_k)R_j、N(R_k)C(O)R_j、N(R_k)C(O)N(R_j)、S(O)_r1R_k (其中r₁是0、1或2)、SO₂N(R_j)R_k、N(R_j)SO₂R_k或(CH₂)_vNR_jR_k (其中v是1、2或3)；其中R_j和R_k各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；和其中所述(1-4C)烷基、芳基、杂芳基、杂环基或环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、氰基、硝基、苯基、(2-4C)炔基、NR_j1R_k1、OR_j1、C(O)R_j1、C(O)OR_j1、OC(O)R_j1、C(O)N(R_k1)R_j1、N(R_k1)C(O)R_j1、S(O)_r2R_h (其中r₂是0、1或2)、SO₂N(R_j1)R_k1、N(R_j1)SO₂R_k1或(CH₂)_v1NR_j1R_k1 (其中v₁是1、2或3)；和其中R_j1和R_k1各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；和

R₃选自卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、氰基、硝基、(2-4C)炔基、NR_lR_m、OR_l、C(O)R_l、C(O)OR_l、OC(O)R_l、C(O)N(R_m)R_l、N(R_m)C(O)R_l或(CH₂)_yNR_lR_m (其中y是1、2或3)；其中所述 (1-4C)烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氨基、羟基、(1-2C)烷氧基或卤素；和其中R_l和R_m各自独立地选自氢或(1-4C)烷基。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO2017178844中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET抑制剂是式(V)化合物或其药学上可接受的盐，其中:

HET选自以下中的一种:

其中表示连接点；

R₁选自氢、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基或下式的基团:

-L-Y-Q

其中:

Q是氢、(1-6C)烷基、(2-6C)烯基、(2-6C)炔基、芳基、(3-10C)环烷基、(3-10C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Q任选地被一个或多个取代基进一步取代，所述取代基独立地选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、(1-4C)氨基烷基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、巯基、脲基、NR_cR_d、OR_c、C(O)R_c、C(O)OR_c、OC(O)R_c、C(O)N(R_d)R_c、N(R_d)C(O)R_c、S(O)_yR_c (其中y是0、1或2)、SO₂N(R_d)R_c、N(R_d)SO₂R_c、Si(R_d)(R_c)R_e或(CH₂)_zNR_cR_d (其中Z是1、2或3)；其中R_c、R_d和R_e各自独立地选自氢、(1-6C)烷基或(3-6C)环烷基；或R_c和R_d可以连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成4-7元杂环，其任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基或羟基；或

Q任选地被下式的基团取代:

-L₁-L_Q1-Z₁

其中:

L_Q1为不存在或选自 O、S、SO、SO₂、N(R_f)，C(O)，C(O)O、OC(O)、C(O)N(R_f)、N(R_f)C(O)、N(R_g)C(O)N(R_f)、N(R_f)C(O)O、OC(O)N(R_f)、S(O)₂N(R_f)或N(R_f)SO₂，其中R_f和R_g各自独立地选自氢或(1-2C)烷基；和

Z₁是氢、(1-6C)烷基、芳基、芳基(1-2C)烷基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Z₁任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、巯基、脲基、芳基、杂芳基、杂环基、(3-6C)环烷基、NR_hR_i、OR_h、C(O)R_h、C(O)OR_h、OC(O)R_h、C(O)N(R_i)R_h、N(R_i)C(O)R_h、S(O)_yaR_h (其中y^a是0、1或2)、SO₂N(R_i)R_h、N(R_i)SO₂R_h或(CH₂)_zaNR_iR_h (其中z^a是1、2或3)；其中R_h和R_i各自独立地选自氢、(1-4C)烷基或(3-6C)环烷基；

R_1a和R_1b各自选自氢、(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基或巯基；

W选自O、S或NR_j，其中R_j选自H或(1-2C)烷基；

X₁和X₂各自独立地选自N或CR_k；

其中

R_k选自氢、卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、氨基、(1-4C)烷基氨基、(1-4C)二烷基氨基、氰基、(2C)炔基、C(O)R_k1、C(O)OR_k1、OC(O)R_k1、C(O)N(R_k2)R_k1、N(R_k2)C(O)R_k1、S(O)_ybR_k1(其中y^b是0、1或2)、SO₂N(R_k2)R_k1、N(R_k2)SO₂R_k1或(CH₂)_zbNR_k1R_k2 (其中z^b是1、2或3)；其中所述 (1-4C)烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氨基、羟基、(1-2C)烷氧基或卤素；和

R_k1和R_k2各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；

X₃选自N或CR_m；

其中

R_m选自氢、卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、氨基、(1-4C)烷基氨基、(1-4C)二烷基氨基、氰基、(2C)炔基、C(O)R_m1、C(O)OR_m1、OC(O)R_m1、C(O)N(R_m2)R_m1、N(R_m2)C(O)R_m1、S(O)_ycR_m1(其中y^c是0、1或2)、SO₂N(R_m2)R_m1、N(R_m2)SO₂R_m1或(CH₂)_zcNR_m1 R_m2 (其中zc是1、2或3)；其中所述 (1-4C)烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氨基、羟基、(1-2C)烷氧基或卤素；和

R_m1和R_m2各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；

R_o选自卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、氨基、(1-4C)烷基氨基、(1-4C)二烷基氨基、氰基、(2C)炔基、C(O)R_o1、C(O)OR_o1、OC(O)R_o1、C(O)N(R_o2)R_o1、N(R_o2)C(O)R_o1、S(O)_ydR_o1 (其中y^d是0、1或2)、SO₂N(R_o2)R_o1、N(R_o2)SO₂R_o1或(CH₂)_zdNR_o1R_o2 (其中z^d是1、2或3)；其中所述(1-4C)烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氨基、羟基、(1-2C)烷氧基或卤素；和

R_o1和R_o2各自独立地选自氢或(1-4C)烷基；

R₂选自氢、(1-4C)烷基或下式的基团:

-L₂-Y₂-Q₂

其中:

L₂为不存在或任选地被一个或多个取代基取代的(1-3C)亚烷基，所述取代基选自(1-2C)烷基或氧代；

Y₂为不存在或C(O)、C(O)O、C(O)N(R_p)，其中R_p选自氢或(1-4C)烷基；和

Q₂是氢、(1-6C)烷基、芳基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Q₂任选地被一个或多个取代基进一步取代，所述取代基独立地选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、NR_qR_r、OR_q，其中R_q和R_r各自独立地选自氢、(1-4C)烷基或(3-6C)环烷基；

R₃选自下式的基团:

-Y₃-Q₃

其中:

Y₃是C(O)、C(O)N(R_y)、C(O)N(R_y)O、N(R_y)(O)C、C(O)O、OC(O)、N(R_y)C(O)N(R_y1)、SO₂N(R_y)、N(R_y)SO₂、噁唑基、三唑基、噁二唑基、噻唑基、咪唑基、噻二唑基、吡啶基、吡唑基、吡咯基或四唑基，其中R_y和R_y1独立地选自氢或(1-2C)烷基；和

Q₃是氢、(1-6C)烷基、芳基、芳基(1-2C)烷基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Q₃任选地被一个或多个取代基进一步取代，所述取代基独立地选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、NR_zR_aa、OR_z，其中R_z和R_aa各自独立地选自氢、(1-4C)烷基或(3-6C)环烷基；或Q₃任选地被下式的基团取代:

-L₄-L_Q4-Z₄

其中:

L₄为不存在或任选地被一个或多个取代基取代的(1-3C)亚烷基，所述取代基选自(1-2C)烷基或氧代；

L_Q4为不存在或选自或O、S、SO、SO₂、N(R_ab)、C(O)、C(O)O、OC(O)、C(O)N(R_ab)、N(R_ab)C(O)、N(R_ac)C(O)N(R_ab)、N(R_ab)C(O)O、OC(O)N(R_ab)、S(O)₂N(R_ab)或N(R_ab)SO₂，其中R_ab和R_ac各自独立地选自氢或(1-2C)烷基；和

Z₄是氢、(1-6C)烷基、芳基、芳基(1-2C)烷基、(3-8C)环烷基、(3-8C)环烯基、杂芳基或杂环基；其中Z₄任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨磺酰基、巯基、脲基、芳基、杂芳基、杂环基、(3-6C)环烷基、NR_adR_ae、OR_ad、C(O)R_ad、C(O)OR_ad、OC(O)R_ad、C(O)N(R_ae)R_ad、N(R_ae)C(O)R_ad、S(O)_yeR_ad(其中y^e是0、1或2)、SO₂N(R_ae)R_ad、N(R_ae)SO₂R_ad或(CH₂)_zeNR_adR_ae (其中z^e是1、2或3)；其中R_ad和R_ae各自独立地选自氢、(1-4C)烷基或(3-6C)环烷基；或

Q₃和R_y连接，使得它们与它们所连接的氮原子一起形成4-7元杂环，其任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(1-4C)烷基、卤素、(1-4C)卤代烷基、(1-4C)卤代烷氧基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基、氨基、氰基或羟基；

条件是 X₁、X₂或X₃中的仅有一个或两个可以是N。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO 2017145050中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET具有式(VI)或是其药学上可接受的盐。

其它RET激酶抑制剂的另外的实例包括国际公开号WO 2016038552中描述的那些，其并入本文作为参考。例如，在一些实施方案中，其它RET具有式(VII)或式(VIII)或是其药学上可接受的盐。

其它治疗剂包括RET抑制剂，诸如例如在美国专利号9,738,660；9,801,880；9,682,083；9,789,100；9,550,772；9,493,455；9,758,508；9,604,980；9,321,772；9,522,910；9,669,028；9,186,318；8,933,230；9,505,784；8,754,209；8,895,744；8,629,135；8,815,906；8,354,526；8,741,849；8,461,161；8,524,709；8,129,374；8,686,005；9,006,256；8,399,442；7,795,273；7,863,288；7,465,726；8,552,002；8,067,434；8,198,298；8,106,069；6,861,509；8,299,057；9,150,517；9,149,464；8,299,057；和7,863,288；；美国公开号2018/0009817；2018/0009818；2017/0283404；2017/0267661；2017/0298074；2017/0114032；2016/0009709；2015/0272958；2015/0238477；2015/0099721；2014/0371219；2014/0137274；2013/0079343；2012/0283261；2012/0225057；2012/0065233；2013/0053370；2012/0302567；2011/0189167；2016/0046636；2013/0012703；2011/0281841；2011/0269739；2012/0271048；2012/0277424；2011/0053934；2011/0046370；2010/0280012；2012/0070410；2010/0081675；2010/0075916；2011/0212053；2009/0227556；2009/0209496；2009/0099167；2010/0209488；2009/0012045；2013/0303518；2008/0234267；2008/0199426；2010/0069395；2009/0312321；2010/0173954；2011/0195072；2010/0004239；2007/0149523；2017/0281632；2017/0226100；2017/0121312；2017/0096425；2017/0044106；2015/0065468；2009/0069360；2008/0275054；2007/0117800；2008/0234284；2008/0234276；2009/0048249；2010/0048540；2008/0319005；2009/0215761；2008/0287427；2006/0183900；2005/0222171；2005/0209195；2008/0262021；2008/0312192；2009/0143399；2009/0130229；2007/0265274；2004/0185547；和2016/0176865；和国际公开号WO 2017/145050；WO 2017/097697；WO 2017/049462；WO 2017/043550；WO 2017/027883；WO 2017/013160；WO 2017/009644；WO 2016/168992；WO 2016/137060；WO 2016/127074；WO 2016/075224；WO 2016/038552；WO 2015/079251；WO 2014/086284；WO 2013/042137；WO 2013/036232；WO 2013/016720；WO 2012/053606；WO 2012/047017；WO 2007/109045；WO 2009/042646；WO 2009/023978；WO 2009/017838；WO 2017/178845；WO 2017/178844；WO 2017/146116；WO 2017/026718；WO 2016/096709；WO 2007/057397；WO 2007/057399；WO 2007/054357；WO 2006/130613；WO 2006/089298；WO 2005/070431；WO 2003/020698；WO 2001/062273；WO 2001/016169；WO 1997/044356；WO 2007/087245；WO 2005/044835；WO 2014/075035；和WO 2016/038519；和J. Med.Chem. 2012, 55(10), 4872-4876中描述的那些，其全部以其整体并入本文作为参考。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式II化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹是CH、CCH₃、CF、CCl或N；

X²是CH、CF或N；

X³是CH、CF或N；

X⁴是CH、CF或N；

其中X¹、X²、X³和X⁴中的0、1或2个是N；

A是H、Cl、CN、Br、CH₃、CH₂CH₃或环丙基；

B是hetAr¹；

hetAr¹是具有1-3个独立地选自N、S和O的环杂原子的5元杂芳基环，其中所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、氟C1-C6烷基、二氟C1-C6烷基、三氟C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、(C1-C4烷氧基)CH₂C(=O)-、(C1-C4烷氧基)C(=O)C1-C3烷基、C3-C6环烷基、(R^aR^bN)C1-C6烷基、(R^aR^bN)C(=O)C1-C6烷基、(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基、hetCyc^a和4-甲氧基苄基；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

hetCyc^a是具有选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被卤素、C1-C6烷基、氟C1-C6烷基、二氟C1-C6烷基、三氟C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、二(C1-C3烷基)NCH₂C(=O)、(C1-C6烷氧基)C(=O)或(C1-C6烷氧基)CH₂C(=O)取代；

D是hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹；

hetCyc¹是具有1-2个选自N和O的环原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基、氟C1-C3烷基、二氟C1-C3烷基、三氟C1-C3烷基和OH或所述杂环被C3-C6环烷叉基环取代或所述杂环被氧代基取代；

hetCyc²是具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，其中所述杂环任选地被C1-C3烷基取代；

hetCyc³是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-11元杂螺环，其中所述环任选地被C1-C3烷基取代；

hetCyc⁹是具有1-3个环氮原子并任选地被氧代取代的稠合9-10元杂环；

E是

(a) 氢，

(b) OH，

(c) R^aR^bN-，其中R^a是H或C1-C6烷基和R^b是H、C1-C6烷基或苯基；

(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，

(f) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基(C1-C6烷氧基)，

(h) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(i) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷基)C(=O)-，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，

(k) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l) (C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(m) HC(=O)-，

(n) Cyc¹，

(o) Cyc¹C(=O)-，

(p)Cyc¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自OH、氟、C1-C3烷氧基和R^cR^dN-，其中R^c和R^d独立地是H或C1-C6烷基，

(q) hetCyc⁴，

(r) hetCyc⁴C(=O)-，

(s) hetCyc⁴(C1-C3烷基)C(=O)-，

(t) (hetCyc⁴)C(=O)C1-C2烷基-，

(u) hetCyc⁴C(=O)NH-，

(v) Ar²，

(w) Ar²C(=O)-，

(x) Ar²C1-C6烷基-，

(y) (Ar²)羟基C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C3烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或R^e和R^f与它们所连接的氮一起形成任选地具有选自N和O的另外的环杂原子的5-6元氮杂环，

(aa) hetAr²C(=O)-，

(bb) (hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(cc) hetAr²(C1-C3烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是 H或C1-C6烷基或R^e和R^f与它们所连接的氮一起形成任选地具有选自N和O的另外的环杂原子的5-6元氮杂环，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C3烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被苯基取代，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C2烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(hh) CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii) (C1-C6烷基)SO₂-，

(jj) (C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk) hetCyc⁵-SO₂-，

(ll) R⁴R⁵NSO₂-，

(mm) R⁶C(=O)NH-，

(nn) hetCyc⁶，

(oo) hetAr²C1-C6烷基-，

(pp) (hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(qq) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，

(rr) (C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(tt) (R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu) Ar²-O-，

(vv) (C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(xx) (C3-C6环烷氧基)C(=O)-，

(zz) Ar⁴CH₂OC(=O)-，

(aaa) (N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C3烷基-，和

(bbb) (Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-；

Cyc¹是C3-C6环烷基，其中(a)所述环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基或(b)所述环烷基被苯基取代，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF或(c)所述环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，其中所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃；

Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、氟C1-C6烷基、二氟C1-C6烷基、三氟C1-C6烷基、CN、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地是H或C1-C6烷基；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子并任选地被一个或多个取代基取代的5-6元杂芳基环，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、氟C1-C6烷基、二氟C1-C6烷基、三氟C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、CN、OH和R'R''N-，其中R'和R''独立地是H或C1-C3烷基；

hetCyc⁴是(a)具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元杂环，其中所述S任选地被氧化成SO₂，(b)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，(c)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子并任选地独立地被1-2个C1-C6烷基取代基取代的6-12元稠合双环杂环或(d)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-10元螺环杂环，其中所述杂环中的每一个任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷基)C(=O)-、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；

hetCyc⁵是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环；

hetCyc⁶是具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5元杂环，其中所述环被氧代取代并且其中所述环还任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH和C1-C6烷基；

R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基；

R²是H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、Cyc³、羟基C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C(=O)、hetCyc⁷、Ar³、Ar³C1-C3烷基-、羟基C1-C6烷氧基或(3-6C环烷基)CH₂O-；

hetCyc⁷是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环，其中所述环任选地被C1-C6烷基取代；

Ar³是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟C1-C3烷基、二氟C1-C3烷基和三氟C1-C3烷基；

R⁴和R⁵独立地是H或C1-C6烷基；

R⁶是C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、苯基或hetCyc⁸；

hetCyc⁸是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环，其中所述杂环任选地被C1-C6烷基取代；和

Ar⁴是任选地被一个或多个卤素取代的苯基。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式III化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹是CH或N；

X²是CH或N；

X³是CH或N；

X⁴是CH或N；

其中X¹、X²、X³和X⁴中的一个或两个是N；

A是CN；

B是hetAr¹；

hetAr¹是具有1-3个环氮原子的5-元杂芳基环，其中所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、氟C1-C6烷基、二氟C1-C6烷基、三氟C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基、(C1-C4烷氧基)CH₂C(=O)-、(C1-C4烷氧基)C(=O)C1-C3烷基、C3-C6环烷基、(R^aR^bN)C1-C6烷基、(R^aR^bN)C(=O)C1-C6烷基、(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基和4-甲氧基苄基；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

D是hetCyc¹；

hetCyc¹是具有1-2个环氮原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基、氟C1-C3烷基、二氟C1-C3烷基、三氟C1-C3烷基和OH或所述杂环被C3-C6环烷叉基环取代或所述杂环被氧代基取代；

E是

(w) Ar²C(=O)-，

(x) Ar²C1-C6烷基-，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(oo) hetAr²C1-C6烷基-，

R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基；和

R²是H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C(=O)、羟基C1-C6烷氧基或(3-6C环烷基)CH₂O。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)选自:((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式IV化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹、X²、X³和X⁴独立地是 CH、CF、CCH₃或N，其中0、1或2个X¹、X²、X³ 和X⁴是N；

A是H、CN、Cl、CH₃-、CH₃CH₂-、环丙基、-CH₂CN或-CH(CN)CH₃；

B是

(a) 氢，

(b) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(c) 羟基C2-C6烷基-，其中烷基部分任选地被1-3个氟或C3-C6环烷叉基环取代，

(d) 二羟基C3-C6烷基-，其中烷基部分任选地被C3-C6环烷叉基环取代，

(e) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，

(f) (R¹R²N)C1-C6烷基-，其中所述烷基部分任选地被OH取代并且其中R¹和R²独立地是H或C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)；

(g) hetAr¹C1-C3烷基-，其中hetAr¹是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环并任选地被一个或多个独立地选择的C1-C6烷基取代基取代；

(h) (C3-C6环烷基)C1-C3烷基-，其中所述环烷基任选地被OH取代，

(i) (hetCyc^a)C1-C3烷基-，

(j) hetCyc^a-，

(k)C3-C6环烷基-，其中所述环烷基任选地被OH取代，

(l) (C1-C4烷基)C(=O)O-C1-C6烷基-，其中C1-C4烷基和C1-C6烷基部分中的每一个任选地且独立地被1-3个氟取代，或

(m) (R¹R²N)C(=O)C1-C6烷基-，其中R¹和R²独立地是H或C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)；

hetCyc^a-是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子并任选地被一个或多个取代基取代的4-6元杂环，所述取代基独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)C(=O)-、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和氟或其中hetCyc^a 被氧代取代；

环D是(i)具有两个环氮原子的饱和4-7元杂环，(ii)具有两个环氮原子且任选地具有为氧的第三环杂原子的饱和7-8元桥连杂环，(iii)具有两个环氮原子的饱和7-11元杂螺环或(iv)具有两个环氮原子的饱和9-10元双环稠合杂环，其中所述环中的每一个任选地被(a)1-4个独立地选自卤素、OH、任选地被1-3个氟取代的C1-C3烷基或任选地被1-3个氟取代的C1-C3烷氧基的基团，(b) C3-C6环烷叉基环或(c)氧代基团取代；

E是

(a) 氢，

(b) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(c) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，

(d) (C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟或被R^gR^hN-取代基取代，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C2-C6烷基)C(=O)-，

(f) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(g) (C3-C6环烷基)C(=O)-，其中所述环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、OH和(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-或所述环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，

(h) Ar¹C1-C6烷基-，

(i) Ar¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被OH、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、R^mRⁿN-或R^mRⁿN-CH₂-取代，其中每个R^m和Rⁿ独立地为H或C1-C6烷基，

(j) hetAr²C1-C6烷基-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代，

(k) hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被OH、羟基C1-C6烷基-或C1-C6烷氧基取代，

(l) hetAr²C(=O)-，

(m) hetCyc¹C(=O)-，

(n) hetCyc¹C1-C6烷基-，

(o) R³R⁴NC(=O)-，

(p) Ar¹N(R³)C(=O)-，

(q) hetAr²N(R³)C(=O)-，

(r) (C1-C6烷基)SO₂-，其中烷基部分任选地被1-3个氟取代，

(s) Ar¹SO₂-，

(t) hetAr²SO₂-，

(u ) N-(C1-C6烷基)吡啶酮基，

(v) Ar¹C(=O)-；

(w) Ar¹O-C(=O)-，

(x) (C3-C6环烷基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(y) (C3-C6环烷基)(C1-C6烷基)SO₂-，其中烷基部分任选地被1-3个氟取代，

(z) Ar¹(C1-C6烷基)SO₂-，

(aa) hetCyc¹-O-C(=O)-，

(bb)hetCyc¹CH₂C(=O)-，

(cc) hetAr²，或

(dd) C3-C6环烷基；

Ar¹是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H、C1-C6烷基、(R^pR^qN)C1-C6烷氧基-，其中R^p和R^q独立地是H或C1-C6烷基和(hetAr^a)C1-C6烷基-，其中hetAr^a是具有1-2个环氮原子的5-6元杂芳基环，或Ar¹是稠合至具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环的苯基环；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-3个环氮原子的9-10元双环杂芳基环，其中hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基、OH、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷氧基-和C3-C6环烷基；

hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元饱和杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C6烷氧基和卤素；

R³是H或C1-C6烷基；和

R⁴是C1-C6烷基。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式V化合物:

或其药学上可接受的盐和溶剂化物，其中:

X¹、X²、X³和X⁴独立地是 CH或N，其中0、1或2个X¹、X²、X³ 和X⁴是N；

A是CN；

B是

(b) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，

(g) hetAr¹C1-C3烷基-，其中hetAr¹是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环并任选地被一个或多个独立地选择的C1-C6烷基取代基取代；或

(i) (hetCyc^a)C1-C3烷基-，

环D是(i)具有两个环氮原子的饱和4-7元杂环或(ii) 具有两个环氮原子并任选地具有为氧的第三环杂原子的饱和 7-9元桥联杂环，其中所述环中的每一个任选地被(a)1-4个独立地选自卤素、OH、任选地被1-3个氟取代的C1-C3烷基或任选地被1-3个氟取代的C1-C3烷氧基的基团，(b) C3-C6环烷叉基环或(c)氧代基团取代；

E是

(h) Ar¹C1-C6烷基-，

(j) hetAr²C1-C6烷基-，其中烷基部分任选地被1-3个氟取代，或

(l) hetAr²C(=O)-，

Ar¹是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基、(R^pR^qN)C1-C6烷氧基-，其中R^p和R^q独立地是H或C1-C6烷基和(hetAr^a)C1-C6烷基-，其中hetAr^a是具有1-2个环氮原子的5-6元杂芳基环，或Ar¹是稠合至具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环的苯基环；和

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-3个环氮原子的9-10元双环杂芳基环，其中hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基、OH、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷氧基-和C3-C6环烷基。

在一些实施方案中，非式I化合物的RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式VI化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹、X²、X³和X⁴独立地是CH、CCH₃、CF或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的0、1或2个是N；

A是H、CN、Cl、甲基、乙基或环丙基；

B是:

(a) 氢，

(b) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(c) 羟基C2-C6烷基-，其中烷基部分任选地被C3-C6环烷叉基环取代，

(e) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-，

(f) (R¹R²N)C1-C6烷基-，其中R¹和R²独立地选自H、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C1-C6烷基)C(=O)-和(C1-C6烷氧基)C(=O)-；

(h) (C3-C6环烷基)C1-C3烷基-，其中所述环烷基任选地被OH取代，

(i) (hetCyc^a)C1-C3烷基-，

(j) hetCyc^a，

(k) (R¹R²N)C(=O)C1-C6烷基-，其中R¹和R²独立地选自H和C1-C6烷基；

(l) (R¹R²N)C(=O)-，其中R¹和R²独立地选自H和C1-C6烷基，或

(m)hetCyc^aC(=O)C1-C6烷基-；

hetCyc^a是具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子并任选地被一个或多个取代基取代的4-6元杂环，所述取代基独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、卤素、(C1-C6烷基)C(=O)-、C1-C6烷氧基、氧代和(C1-C6烷氧基)C(=O)-；

环D是(i)具有1个为氮的环杂原子的饱和单环4-7元杂环，(ii)具有1个为氮的环杂原子的饱和7-8元桥联杂环或(iii)具有1个为氮的环杂原子的饱和7-11元杂螺环系统；

每个R^a独立地为C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；

R^b是(a)羟基、(b)环丙基、(c)hetCyc^bCH₂-、(d) RⁱR^jNC(=O)CH₂OCH₂-，其中Rⁱ和R^j独立地是H或C1-C6烷基、(e)R^cR^dN-、(f)R^cR^dNCH₂-、(g) C1-C6烷氧基-、(h) (C1-C4烷基)-C(=O)NH-，其中所述烷基部分任选地被hetCyc^b、hetAr^a、C1-C6烷氧基-或R'R''N-取代或所述烷基部分任选地被两个独立地选自R'R''N-和OH的取代基取代，其中每个R'和R''独立地为氢或C1-C6烷基、(i) (R'R''N)C1-C6烷氧基(CH₂)_n-，其中n是0或1和R'和R''独立地是氢或C1-C6烷基、(j) hetCyc^b(C1-C3烷基)OCH₂-、(k)hetCyc^bC(=O)NH-或(l)hetAr^aC(=O)NH-；

hetCyc^b是4-6元杂环、7-8元桥联杂环或7-10元杂螺环，每个环具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子，其中hetCyc^b 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、氟、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C1-C6烷氧基)C(=O)-、C1-C6烷氧基和R'R''N-，其中R'和R''独立地是氢或C1-C6烷基；

hetAr^a是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环，其中hetAr^a 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、和 C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)，

R^c是氢或C1-C6烷基；

R^d是氢、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C(=O)-、羟基C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(羟基C1-C6烷基)C(=O)-、(C1-C6烷基)C(=O)-、(R^kR^lN)C1-C6烷基-，其中R^k和R^l独立地是H或C1-C6烷基、R^mRⁿNC(=O)C1-C6烷基-，其中R^m和Rⁿ独立地是H或C1-C6烷基、PhCH₂-，其中苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、C3-C6环烷基、羟基C1-C6烷基、(C1-C6烷基)SO₂-、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C6烷基-，其中每个R^e和R^f独立地为H或C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-或hetCyc^c ，其中hetCyc^c是具有选自N和O的环杂原子并任选地被C1-C6烷基取代的4-6元杂环；

n是0、1、2、3、4、5或6；

m是0或1；

E是:

(a) 氢，

(b) 羟基，

(c) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(d) Ar¹C1-C6烷基-，其中所述烷基部分任选地被1-3个氟取代，

(e) hetAr²C1-C6烷基-，

(f) (C1-C6烷氧基)C1-C6烷氧基-，

(g) Ar¹O-,

(h) hetAr²-O-，

(i) Ar¹NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(j) hetAr²NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(k) R³C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基；

(l) Ar¹C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(m) hetAr²C(=O)NR^g(CH₂)_p-，其中p是0或1和R^g是H或C1-C6烷基，

(n) R⁴R⁵NC(=O)-，

(o) Ar¹NR^gC(=O)-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(p) hetAr²NR^gC(=O)-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(q) Ar¹(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被OH、羟基(C1-C6烷基)、C1-C6烷氧基或NH₂取代，

(r) hetCyc⁵C(=O)-，

(s) R⁴R⁵NC(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，或

(t) (C1-C6烷基)SO₂-；

(u) Ar¹(C1-C6烷基)C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v)hetAr⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(w) hetAr²-S(=O)-，

(x) (C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(y) Ar¹(C1-C6烷基)SO₂-，

(z) hetAr²SO₂-，

(aa) Ar¹，

(bb) hetAr²，

(cc) hetCyc⁵，

(dd) C1-C6烷氧基，

(ee) Ar¹(C1-C6烷基)-O-，

(ff) hetAr²(C1-C6烷基)-O-，

(gg) hetAr²-O-C1-C6烷基-，

(hh) Ar¹(C1-C6烷基)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(ii) hetAr²-S-，

(jj) Ar²SO₂NR^g(CH₂)_p-，其中p是0或1和R^g是H或C1-C6烷基，

(kk) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(ll) (C1-C6烷基)NR^gC(=O)O-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(mm) (C1-C6烷基)NR^gSO₂-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(nn) hetCyc⁵C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(oo) Q-NR^h(C1-C3烷基)C(=O)NR^g-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基和Q是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷基)OC(=O)-，

(pp) ，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，Q是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷基)OC(=O)-和r是1、2、3或4，

(qq) ，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基和Q是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷基)OC(=O)-，

(rr) ，其中R^g是H或C1-C6烷基和Q是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷基)OC(=O)-，或

(ss) R^gR^hN-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(tt)(C3-C6环烷基)C(=O)NR^g-，其中环烷基任选地且独立地被一个或多个卤素取代，

(uu)(C1-C6烷基)C(=O)NR^gCH₂-，其中R^g是H或C1-C6烷基，或

(vv) C1-C6烷基)SO₂NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基；

Ar¹是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、C3-C6环烷基、羟基C1-C6烷基、(C1-C6烷基)SO₂-、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C6烷基-，其中每个R^e和R^f独立地为H或C1-C6烷基；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-2个环氮原子的9-10元双环杂芳基，其中hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)和羟基C1-C6烷氧基-；

hetCyc⁵是具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元饱和杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C6烷氧基和氧代；

R³是C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、(C3-C6环烷基)CH₂-、(C3-C6环烷基)O-、(C3-C6环烷基)CH₂O-、hetCyc⁷O-、Ph-O-或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；其中所述C3-C6环烷基基团中的每一个任选地被C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、OH或R'R''N-取代，其中R'和R''独立地是氢或C1-C6烷基；

R⁴是H或C1-C6烷基；

R⁵是Ar²、hetAr³、Ar²CH₂-、hetCyc⁶-CH₂-、羟基C1-C6烷基-、(C3-C6环烷基)CH₂-或任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基；

Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)、C3-C6环烷基和R^gR^hN-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基或Ar²是稠合至具有环氮原子并任选地被C1-C6烷基取代的6元杂环的苯基；

hetAr³是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子并任选地被一个或多个取代基取代的5-6元杂芳基环，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)和(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)；

hetAr⁴是任选地被一个或多个取代基取代的吡啶-4(1H)-酮基或吡啶-2(1H)-酮基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基和卤素；

hetCyc⁶是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-7元杂环；和

hetCyc⁷是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-7元杂环。

在一些实施方案中，RET抑制剂(例如，第一RET抑制剂或第二RET抑制剂)是式VII化合物:

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中:

X¹、X²、X³和X⁴独立地是CH或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的0、1或2个是N；

A是CN；

B是:

(b) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(c) 羟基C2-C6烷基-，其中烷基部分任选地被C3-C6环烷叉基环取代，或

(i) (hetCyc^a)C1-C3烷基-；

环D是具有1个为氮的环杂原子的饱和单环4-7元杂环；

每个R^a独立地为C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)；

R^b是(a)羟基；

n是0或1；

m是0或1；

E是:

(e) hetAr²C1-C6烷基-，

(h) hetAr²-O-，

(k) R³C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(l) Ar¹C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，或

(m) hetAr²C(=O)NR^g(CH₂)_p-，其中p是0或1和R^g是H或C1-C6烷基；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环或具有1-2个环氮原子的9-10元双环杂芳基，其中hetAr² 任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-(任选地被1-3个氟取代)和羟基C1-C6烷氧基-；和

R³是C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、(C3-C6环烷基)CH₂-、(C3-C6环烷基)O-、(C3-C6环烷基)CH₂O-、hetCyc⁷O-、Ph-O-或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；其中所述C3-C6环烷基基团中的每一个任选地被C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、OH或R'R''N-取代，其中R'和R''独立地是氢或C1-C6烷基。

在一些实施方案中，非式I化合物的RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

受体酪氨酸激酶(例如，Trk)靶向治疗剂的非限制性实例包括阿法替尼、卡博替尼、西妥昔单抗、克里唑替尼、达拉非尼、恩曲替尼、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、来妥替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、帕木单抗、培妥珠单抗、舒尼替尼、曲妥珠单抗、l-((3S,4R)-4-(3-氟苯基)-l-(2-甲氧基乙基)吡咯烷-3-基)-3-(4-甲基-3-(2-甲基嘧啶-5-基)-l -苯基-lH-吡唑-5-基)脲、AG 879、AR-772、AR-786、AR-256、AR-618、AZ-23、AZ623、DS-6051、Gö 6976、GNF-5837、GTx-186、GW 441756、LOXO-101、MGCD516、PLX7486、RXDX101、VM-902A、TPX-0005和TSR-011。另外的Trk靶向治疗剂包括美国专利号8,450,322；8,513,263；8,933,084；8,791,123；8,946,226；8,450,322；8,299,057；和8,912,194；美国公开号2016/0137654；2015/0166564；2015/0051222；2015/0283132；和2015/0306086；国际公开号WO 2010/033941；WO 2010/048314；WO 2016/077841；WO 2011/146336；WO 2011/006074；WO2010/033941；WO 2012/158413；WO 2014078454；WO 2014078417；WO 2014078408；WO2014078378；WO 2014078372；WO 2014078331；WO 2014078328；WO 2014078325；WO2014078323；WO 2014078322；WO 2015175788；WO 2009/013126；WO 2013/174876；WO 2015/124697；WO 2010/058006；WO 2015/017533；WO 2015/112806；WO 2013/183578；和WO 2013/074518中描述的那些，其全部以其整体并入本文作为参考。

Trk抑制剂的其它实例可以在美国专利号8,637,516、国际公开号WO 2012/034091、美国专利号9,102,671、国际公开号WO 2012/116217、美国公开号2010/0297115、国际公开号WO 2009/053442、美国专利号8,642,035、国际公开号WO 2009092049、美国专利号8,691,221、国际公开号WO2006131952中找到，其全部整体并入本文作为参考。示例性Trk抑制剂包括描述于Cancer Chemother. Pharmacol. 75(1):131-141, 2015中的GNF-4256；和描述于ACS Med. Chem. Lett. 3(2):140-145, 2012中的GNF-5837 (N-[3-[[2,3-二氢-2-氧代-3-(1H-吡咯-2-基亚甲基)-1H-吲哚-6-基]氨基]-4-甲基苯基]-N′-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-脲)，它们中的每一个整体并入本文作为参考。

Trk抑制剂的另外的实例包括美国公开号2010/0152219、美国专利号8,114,989和国际公开号WO 2006/123113中公开的那些，其全部整体并入本文作为参考。示例性Trk抑制剂包括描述于Cancer 117(6):1321-1391, 2011中的AZ623；描述于Cancer Biol. Ther.16(3):477-483, 2015中的AZD6918；描述于Cancer Chemother. Pharmacol. 70:477-486,2012中的AZ64；描述于Mol. Cancer Ther. 8:1818-1827, 2009中的AZ-23 ((S)-5-氯-N2-(1-(5-氟吡啶-2-基)乙基)-N4-(5-异丙氧基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺)；和AZD7451；它们中的每一个整体并入本文作为参考。

Trk抑制剂可以包括美国专利号7,615,383；7,384,632；6,153,189；6,027,927；6,025,166；5,910,574；5,877,016；和5,844,092中描述的那些,它们中的每一个整体并入本文作为参考。

Trk抑制剂的其它实例包括描述于Int. J. Cancer 72:672-679, 1997中的CEP-751；描述于Acta Derm. Venereol. 95:542-548, 2015中的CT327；描述于国际公开号WO2012/034095中的化合物；描述于美国专利号8,673,347和国际公开号WO 2007/022999中的化合物；描述于美国专利号8,338,417中的化合物；描述于国际公开号WO 2016/027754中的化合物；描述于美国专利号9,242,977中的化合物；描述于美国公开号2016/0000783中的化合物；描述于PLoS One 9:e95628, 2014中的舒尼替尼(N-(2-二乙基氨基乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-叉基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)；描述于国际公开号WO 2011/133637中的化合物；描述于美国专利号8,637,256中的化合物；描述于Expert. Opin. Ther. Pat. 24(7):731-744, 2014中的化合物；描述于Expert Opin. Ther. Pat.19(3):305-319, 2009中的化合物；(R)-2-苯基吡咯烷取代的咪唑并哒嗪类，例如，GNF-8625，如描述于ACS Med. Chem. Lett. 6(5):562-567, 2015中的(R)-1-(6-(6-(2-(3-氟苯基)吡咯烷-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-[2,4'-联吡啶]-2'-基)哌啶-4-醇；如描述于PLoS One 8(12):e83380, 2013中的GTx-186和其它；如描述于Mol. Cell Biochem. 339(1-2):201-213, 2010中的K252a ((9S-(9α,10β,12α))-2,3,9,10,11,12-六氢-10-羟基-10-(甲氧基羰基)-9-甲基-9,12-环氧基-1H-二吲哚并[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]吡咯并[3,4-i][1,6]苯并二氮杂环辛间四烯-1-酮)；如描述于J. Med. Chem. 51(15):4672-4684,2008中的4-氨基吡唑基嘧啶类，例如，AZ-23 (((S)-5-氯-N2-(1-(5-氟吡啶-2-基)乙基)-N4-(5-异丙氧基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺))；如描述于Mol. Cancer Ther. 6:3158,2007中的PHA-739358 (达那色替)；如描述于J. Neurochem. 72:919-924, 1999中的Gö6976 (5,6,7,13-四氢-13-甲基-5-氧代-12H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-12-丙腈)；如描述于IJAE 115:117, 2010中的GW441756 ((3Z)-3-[(1-甲基吲哚-3-基)甲叉基]-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-酮)；描述于J. Carcinog. 12:22, 2013中的milciclib (PHA-848125AC)；AG-879 ((2E)-3-[3,5-双(1,1-二甲基乙基)-4-羟基苯基]-2-氰基-2-丙烯硫代酰胺)；altiratinib (N-(4-((2-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-4-基)氧基)-2,5-二氟苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；卡博替尼(N-(4-((6,7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)-N'-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；来妥替尼((5S,6S,8R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-5-甲基-7,8,14,15-四氢-5H-16-氧杂-4b,8a,14-三氮杂-5,8-甲桥(methano)二苯并[b,h]环辛四烯并[jkl]环戊二烯并[e]-不对称引达省(as-indacen)-13(6H)-酮)；多韦替尼(4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮单2-羟基丙酸盐水合物)；sitravatinib (N-(3-氟-4-((2-(5-(((2-甲氧基乙基)氨基)甲基)吡啶-2-基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)；ONO-5390556；瑞戈非尼(4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺水合物)；和VSR-902A；上述所有参考文献都整体并入本文作为参考。

Trk抑制剂作为TrkA、TrkB和/或Trk C抑制剂的能力可以使用美国专利号8,513,263中实施例A和B中描述的测定进行测试，其并入本文作为参考。

在一些实施方案中，信号转导途径抑制剂包括Ras-Raf-MEK-ERK途径抑制剂(例如，binimetinib、司美替尼、encorafinib、索拉非尼、曲美替尼和维罗非尼)、PI3K-Akt-mTOR-S6K途径抑制剂(例如依维莫司、雷帕霉素、哌立福辛、坦罗莫司)和其它激酶抑制剂，诸如巴瑞替尼、布吉替尼、苯扎米特、达那色替、依鲁替尼、milciclib、槲皮素、瑞戈非尼、鲁索替尼、司马尼布、AP32788、BLU285、BLU554、INCB39110、INCB40093、INCB50465、INCB52793、INCB54828、MGCD265、NMS-088、NMS-1286937、PF 477736 ((R)-氨基-N-[5,6-二氢-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氧代-1H吡咯并[4,3,2-ef][2,3]苯并二氮杂环庚三烯-8-基]-环己烷乙酰胺)、PLX3397、PLX7486、PLX8394、PLX9486、PRN1008、PRN1371、RXDX103、RXDX106、RXDX108和TG101209 (N-叔丁基-3-(5-甲基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺)。

检查点抑制剂的非限制性实例包括伊匹单抗、曲美木单抗、纳武单抗、pidilizumab、MPDL3208A、MEDI4736、MSB0010718C、BMS-936559、BMS-956559、BMS-935559(MDX-1105)、AMP-224和派姆单抗。

在一些实施方案中，细胞毒性化学治疗剂选自三氧化二砷、博来霉素、卡巴他赛、卡培他滨、卡铂、顺铂、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、柔红霉素、多西紫杉醇、多柔比星、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、伊立替康、洛莫司汀、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替莫唑胺和长春新碱。

靶向血管生成的疗法的非限制性实例包括阿柏西普和贝伐单抗。

术语“免疫疗法”是指调节免疫系统的药剂。在一些实施方案中，免疫疗法可以增加免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以降低免疫系统调节剂的表达和/或活性。在一些实施方案中，免疫疗法可以募集和/或增强免疫细胞的活性。

在一些实施方案中，免疫疗法是细胞免疫疗法(例如，过继性T细胞疗法、树突细胞疗法、自然杀伤细胞疗法)。在一些实施方案中，细胞免疫疗法是sipuleucel-T (APC8015；Provenge™；Plosker (2011)Drugs 71(1): 101-108)。在一些实施方案中，细胞免疫疗法包括表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞。在一些实施方案中，细胞免疫疗法是CAR-T细胞疗法。在一些实施方案中，CAR-T细胞疗法是tisagenlecleucel(Kymriah™)。

在一些实施方案中，免疫疗法是抗体疗法(例如，单克隆抗体、缀合的抗体)。在一些实施方案中，抗体疗法是贝伐单抗(Mvasti™、Avastin®)、曲妥珠单抗(Herceptin®)、阿维鲁单抗(Bavencio®)、利妥昔单抗(MabThera™、Rituxan®)、依决洛单抗(Panorex)、daratumuab (Darzalex®)、奥拉单抗 (Lartruvo™)、奥法木单抗(Arzerra®)、阿仑珠单抗(Campath®)、西妥昔单抗(Erbitux®)、oregovomab、派姆单抗(Keytruda®)、dinutiximab (Unituxin®)、阿托珠单抗(Gazyva®)、曲美木单抗(CP-675,206)、雷莫芦单抗(Cyramza®)、ublituximab(TG-1101)、帕木单抗(Vectibix®)、依洛珠单抗(Empliciti™)、阿维鲁单抗(Bavencio®)、奈昔木单抗(Portrazza™)、cirmtuzumab(UC-961)、替伊莫单抗(Zevalin®)、isatuximab(SAR650984)、尼妥珠单抗、夫苏木单抗(GC1008)、lirilumab(INN)、mogamulizumab(Poteligeo®)、ficlatuzumab(AV-299)、地舒单抗(Xgeva®)、盖尼塔单抗、urelumab、pidilizumab或amatuximab。

在一些实施方案中，免疫疗法是抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物是吉姆单抗奥佐米星(Mylotarg™)、伊珠单抗奥加米星(Besponsa®)、brentuximabvedotin (Adcetris®)、ado-trastuzumab emtansine(TDM-1；Kadcyla®)、mirvetuximabsoravtansine (IMGN853)或anetumab ravtansine。

在一些实施方案中，免疫疗法包括兰妥莫单抗(AMG103；Blincyto®)或米哚妥林(Rydapt)。

在一些实施方案中，免疫疗法包括毒素。在一些实施方案中，免疫疗法是地尼白介素2(Ontak®)。

在一些实施方案中，免疫疗法是细胞因子疗法。在一些实施方案中，细胞因子疗法是白细胞介素2(IL-2)疗法、干扰素α(IFNα)疗法、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)疗法、白细胞介素12(IL-12)疗法、白细胞介素15(IL-15)疗法、白细胞介素7(IL-7)疗法或促红细胞生成素-α(EPO)疗法。在一些实施方案中，IL-2疗法是阿地白介素(Proleukin®)。在一些实施方案中，IFNα疗法是IntronA® (Roferon-A®)。在一些实施方案中，G-CSF疗法是非格司亭(Neupogen®)。

在一些实施方案中，免疫疗法是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫疗法包括一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是伊匹单抗(Yervoy®)或曲美木单抗(CP-675,206)。在一些实施方案中，PD-1抑制剂是派姆单抗(Keytruda®)或纳武单抗(Opdivo®)。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是atezolizumab(Tecentriq®)、阿维鲁单抗(Bavencio®)或durvalumab(Imfinzi™)。

在一些实施方案中，免疫疗法是基于mRNA的免疫疗法。在一些实施方案中，基于mRNA的免疫疗法是CV9104 (参见，例如，Rausch 等人 (2014)Human Vaccin Immunother10(11): 3146-52；和Kubler 等人 (2015)J. Immunother Cancer 3:26)。

在一些实施方案中，免疫疗法是卡介苗(BCG)疗法。

在一些实施方案中，免疫疗法是溶瘤病毒疗法。在一些实施方案中，溶瘤病毒疗法是talimogene alherparepvec (T-VEC；Imlygic®)。

在一些实施方案中，免疫疗法是癌症疫苗。在一些实施方案中，癌症疫苗是人乳头瘤病毒(HPV)疫苗。在一些实施方案中，HPV疫苗是Gardasil®、Gardasil9®或Cervarix®。在一些实施方案中，癌症疫苗是乙型肝炎病毒(HBV)疫苗。在一些实施方案中，HBV疫苗是Engerix-B®、Recombivax HB®或GI-13020 (Tarmogen®)。在一些实施方案中，癌症疫苗是Twinrix®或Pediarix®。在一些实施方案中，癌症疫苗是BiovaxID®、Oncophage®、GVAX、ADXS11-001、ALVAC-CEA、PROSTVAC®、Rindopepimut®、CimaVax-EGF、lapuleucel-T(APC8024；Neuvenge™)、GRNVAC1、GRNVAC2、GRN-1201、hepcortespenlisimut-L (Hepko-V5)、DCVAX®、SCIB1、BMT CTN 1401、PrCa VBIR、PANVAC、ProstAtak®、DPX-Survivac或viagenpumatucel-L (HS-110)。

在一些实施方案中，免疫疗法是肽疫苗。在一些实施方案中，肽疫苗是nelipepimut-S (E75)(NeuVax™)、IMA901或SurVaxM (SVN53-67)。在一些实施方案中，癌症疫苗是免疫原性个体新抗原疫苗(参见，例如，Ott 等人 (2017)Nature 547: 217-221；Sahin 等人 (2017)Nature 547: 222-226)。在一些实施方案中，癌症疫苗是RGSH4K或NEO-PV-01。在一些实施方案中，癌症疫苗是基于DNA的疫苗。在一些实施方案中，基于DNA的疫苗是人乳腺珠蛋白-A DNA疫苗 (参见，例如，Kim 等人 (2016)OncoImmunology 5(2):e1069940)。

在一些实施方案中，免疫靶向剂选自阿地白介素、干扰素α-2b、伊匹单抗、lambrolizumab、纳武单抗、泼尼松和sipuleucel-T。

放射疗法的非限制性实例包括放射性碘疗法、外线束辐射和镭223疗法。

另外的激酶抑制剂包括在例如美国专利号7,514,446；7,863,289；8,026,247；8,501,756；8,552,002；8,815,901；8,912,204；9,260,437；9,273,051；美国公开号US 2015/0018336；国际公开号WO 2007/002325；WO 2007/002433；WO 2008/080001；WO 2008/079906；WO 2008/079903；WO 2008/079909；WO 2008/080015；WO 2009/007748；WO 2009/012283；WO 2009/143018；WO 2009/143024；WO WO 2009/014637；2009/152083；WO 2010/111527；WO 2012/109075；WO 2014/194127；WO 2015/112806；WO 2007/110344；WO 2009/071480；WO 2009/118411；WO 2010/031816；WO 2010/145998；WO 2011/092120；WO 2012/101032；WO 2012/139930；WO 2012/143248；WO 2012/152763；WO 2013/014039；WO 2013/102059；WO 2013/050448；WO 2013/050446；WO 2014/019908；WO 2014/072220；WO 2014/184069；和WO 2016/075224中描述的那些，所有这些文献都整体并入本文作为参考。

激酶抑制剂的其它实例包括在例如WO 2016/081450；WO 2016/022569；WO 2016/011141；WO 2016/011144；WO 2016/011147；WO 2015/191667；WO 2012/101029；WO 2012/113774；WO 2015/191666；WO 2015/161277；WO 2015/161274；WO 2015/108992；WO 2015/061572；WO 2015/058129；WO 2015/057873；WO 2015/017528；WO/2015/017533；WO 2014/160521；和WO 2014/011900中描述的那些，其各自整体并入本文作为参考。

激酶抑制剂的其它实例包括luminespib (AUY-922, NVP-AUY922)(5-(2,4-二羟基-5-异丙基苯基)-N-乙基-4-(4-(吗啉代甲基)苯基)异噁唑-3-甲酰胺)和度马莫德(BIRB-796)(1-[5-叔丁基-2-(4-甲基苯基)吡唑-3-基]-3-[4-(2-吗啉-4-基乙氧基)萘-1-基]脲)。

因此，本文还提供了治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用用于治疗癌症的药物组合，所述药物组合包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)另外的治疗剂，和(c)任选地至少一种药学上可接受的载体(用于同时、分别或相继用于治疗癌症)，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对于治疗癌症有效。

在一些实施方案中，另外的治疗剂包括上文列出的是癌症中的护理标准的疗法或治疗剂中的任何一种，其中癌症具有RET基因、RET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调。

根据本领域技术人员已知的标准药学实践，一部分的这些另外的治疗剂可以通过相同或不同的施用途径，和/或根据相同或不同的施用时间表作为相同或单独的剂型与一个或多个剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物一起施用。

本文还提供了(i)用于在有需要的患者中治疗癌症的药物组合，其包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)至少一种另外的治疗剂 (例如，本文所述的或本领域已知的任何一种示例性的另外的治疗剂)，和(c)任选地至少一种药学上可接受的载体(用于同时、分别或相继用于治疗癌症)，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对治疗癌症有效；(ii)包含这样的组合的药物组合物；(iii)这样的组合用于制备用于治疗癌症的药物的用途；和(iv)商业包装或产品，其包含作为用于同时、单独或依次使用的组合制剂的这样的组合；和涉及在有需要的患者中治疗癌症的方法。在一个实施方案中患者是人。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症。例如，具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症。

如本文所用，术语“药物组合”是指由多于一种活性成分的混合或组合产生的药物疗法，包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种另外的治疗剂(例如，化学治疗剂)以单一组合物或剂量的形式同时施用给患者。术语“非固定组合”是指式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种另外的治疗剂(例如化学治疗剂)被配制成单独的组合物或剂量，使得它们可以同时、并行或依次地施用于有需要的患者(具有可变的间隔时间限制)，其中这种施用在患者体内提供有效水平的两种或更多种化合物。这些也适用于混合物疗法，例如三种或更多种活性成分的施用。

因此，本文还提供了治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用用于治疗癌症的药物组合，所述药物组合包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)另外的治疗剂，和(c)任选地至少一种药学上可接受的载体(用于同时、分别或相继用于治疗癌症)，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对于治疗癌症有效。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂作为单独的剂量同时施用。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂作为单独的剂量任何顺序依次施用、以联合治疗有效量施用(例如每日或间歇剂量)。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂作为组合剂量同时施用。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症。例如，具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症。

本文还提供了在需要这种治疗的患者中治疗由RET介导的疾病或病症的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。在一些实施方案中，由RET介导的疾病或病症是RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调。例如RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调包括一个或多个RET抑制剂抗性突变。由RET介导的疾病或病症可包括与RET的表达或活性直接或间接相关的任何疾病、病症或病况，包括过表达和/或异常活性水平。在一个实施方案中，该疾病是癌症(例如，RET相关的癌症)。在一个实施方案中，癌症是本文所述的任何癌症或RET相关的癌症。

虽然肿瘤发生的遗传基础可能因不同的癌症类型而不同，但转移所需的细胞和分子机制似乎对所有实体瘤类型都相似。在转移级联期间，癌细胞丧失生长抑制反应，经历粘附性的改变并产生可降解细胞外基质组分的酶。这导致肿瘤细胞从原始肿瘤脱离，通过新形成的脉管系统渗入循环，肿瘤细胞在有利的远处位点(在那里它们可形成集落)迁移和外渗。已经鉴定出许多基因是转移的启动子或抑制子。例如，神经胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)及其RET受体酪氨酸激酶的过表达与癌症增殖和转移相关。参见，例如，Zeng, Q.等人 J. Int. Med. Res. (2008)36(4): 656-64。

因此，本文还提供了在有此需要的患者中抑制、预防、帮助预防或减轻癌症转移症状的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其药物组合物。此类方法可用于治疗本文所述的一种或多种癌症。参见，例如，美国公开号2013/0029925；国际公开号WO 2014/083567；和美国专利号8,568,998。也参见，例如，Hezam K 等人, Rev Neurosci 2018 Jan 26；29:93-98；Gao L, 等人, Pancreas 2015Jan；44:134-143；Ding K 等人, J Biol Chem 2014 Jun 6；289:16057-71；和Amit M 等人, Oncogene 2017 Jun 8；36:3232-3239。在一些实施方案中，癌症是RET相关的癌症。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与另外的疗法或另一种治疗剂，包括化学治疗剂，例如激酶抑制剂组合使用。例如，第一或第二RET激酶抑制剂。

术语“转移”是本领域已知的术语，意指在远离对象或患者中的原发性肿瘤的位点处形成另外的肿瘤(例如，实体瘤)，其中另外的肿瘤包括与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。

还提供了降低患有RET相关的癌症的患者中发生转移或另外的转移的风险的方法，所述方法包括: 选择、鉴定或诊断具有RET相关的癌症的患者，并给选择、鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。还提供了降低具有RET相关的癌症的患者中发生转移或另外的转移的风险的方法，其包括给具有RET相关的癌症的患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。具有RET相关的癌症的患者中发生转移或另外的转移的风险的降低可以与与治疗前患者发生转移或另外的转移的风险相比较或与未接受治疗或接受不同治疗的具有相似的或相同的RET相关的癌症的患者或患者群体相比较。在一些实施方案中，RET相关的癌症是具有一种或多种RET抑制剂抗性突变的RET相关的癌症。

短语“发生转移的风险”是指患有原发性肿瘤的对象或患者在一段时间内在远离对象或患者的原发性肿瘤的部位处发展另外的肿瘤(例如，实体瘤)的风险，其中另外的肿瘤包括与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了用于降低患有癌症的对象或患者中发生转移的风险的方法。

短语“发生另外的转移的风险”是指具有原发性肿瘤和在远离原发性肿瘤的部位具有一个或多个另外的肿瘤(其中一个或多个另外的肿瘤包括与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞)的对象或患者将发展远离原发性肿瘤的一个或多个其它肿瘤的风险，其中其它肿瘤包括与原发性肿瘤相同或相似的癌细胞。本文描述了用于降低发生另外的转移的风险的方法。

在一些实施方案中，肿瘤中的一个或多个RET抑制剂抗性突变的存在导致肿瘤对用第一RET抑制剂治疗更具抗性。当RET抑制剂抗性突变导致肿瘤对用第一RET抑制剂治疗更具抗性时有用的方法描述如下。例如，本文提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和给所鉴定的对象施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与第一RET抑制剂组合施用。还提供了治疗被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象的方法，所述方法包括给对象施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与第一RET抑制剂组合施用。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

例如，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

作为另一个实例，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

例如，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自:((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

作为另一个实例，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: ((S)-4-(6-(4-(2-羟基-3-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2,6-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐；4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N,N-二乙基哌嗪-1-甲酰胺；1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-N-(2-甲氧基-3-甲基丁基)哌啶-4-甲酰胺；4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)；4-(6-(4-(2,6-二氟苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-(2-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

例如，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自:4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

作为另一个实例，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: 4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(R)-6-(2-羟基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-甲氧基乙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-(6-甲氧基烟酰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(2-吗啉代乙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-((1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和6-乙氧基-4-(5-(6-((5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

例如，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自:N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的第一RET抑制剂，其中第一RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的第一RET抑制剂。

作为另一个实例，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂，其中第二RET抑制剂选自: N-(1-(5-(3-氰基-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；6-乙氧基-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；(S)-6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(3-(吡啶-2-基氧基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)-5-氟-2-甲基苯甲酰胺；3-氯-N-(1-(5-(3-氰基-6-((3-氟-1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-3-甲基丁酰胺；6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈；和3-氯-N-((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-乙氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)吡嗪-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在一些实施方案中，肿瘤中一个或多个RET抑制剂抗性突变的存在导致肿瘤对用多激酶抑制剂治疗更具抗性。当RET抑制剂抗性突变导致肿瘤对用多激酶抑制剂治疗更具抗性时有用的方法如下所述。例如，本文提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和给所鉴定的对象施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与多激酶抑制剂组合施用。还提供了治疗被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象的方法，所述方法包括给对象施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与多激酶抑制剂组合施用。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用多激酶抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

例如，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的多激酶抑制剂，其中多激酶抑制剂选自凡德他尼或卡博替尼；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的多激酶抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的第一多激酶抑制剂，其中多激酶抑制剂选自: 凡德他尼或卡博替尼；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的多激酶抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的多激酶抑制剂，其中多激酶抑制剂选自: 凡德他尼或卡博替尼；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的多激酶抑制剂。

在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的多激酶抑制剂，其中多激酶抑制剂选自凡德他尼或卡博替尼；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的多激酶抑制剂。

作为另一个实例，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的多激酶抑制剂(例如，凡德他尼或卡博替尼)；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的多激酶抑制剂(例如，凡德他尼或卡博替尼)；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的多激酶抑制剂(例如，凡德他尼或卡博替尼)；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的多激酶抑制剂(例如，凡德他尼或卡博替尼)；或(e)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

再者，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105(agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668的第二RET抑制剂在步骤(d)中施用。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有 RET抑制剂抗性突变 V804M；和(d)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105(agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668的第二RET抑制剂在步骤(d)中施用。

再者，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)检测从对象获得的样品中的癌细胞中的至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)检测从对象获得的样品中的癌细胞中的至少一个RET抑制剂抗性突变；和(d)给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的表1的一种或多种融合蛋白和/或表2和2a的一个或多个RET激酶蛋白点突变/插入/缺失；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)检测从对象获得的样品中的癌细胞中的至少一个表3或4的RET抑制剂抗性突变；和(d)给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105 (agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668的第二RET抑制剂在步骤(d)中施用。在一些实施方案中，本文提供了用于在需要这种治疗的对象中治疗RET相关的癌症的方法，所述方法包括(a)检测来自对象的样品中的融合蛋白KIF5B-RET；和(b)给对象施用治疗有效量的选自i)实施例编号1-20；ii)实施例编号21-40；iii)实施例编号41-49；iv)实施例编号50-70；v)实施例编号71-90；vi)实施例编号91-110；vii)实施例编号111-121的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，该方法还包括(在(b)之后)(c)检测从对象获得的样品中的癌细胞中的RET抑制剂抗性突变V804M；和(d)给对象施用另外剂量的作为单一疗法或与另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂、第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或免疫疗法)或抗癌疗法(例如，手术或放射)组合的步骤(b)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，选自艾乐替尼、卡博替尼、乐伐替尼、尼达尼布、泊那替尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、RXDX-105(agerafenib)、LOXO-292、BLU-667、BLU6864、DS-5010、GSK3179106、GSK3352589和NMS-E668的第二RET抑制剂在步骤(d)中施用。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和选择包括施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与第一RET抑制剂组合施用。还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: 为鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象选择包括施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。还提供了选择具有癌症的对象进行不包括作为单一疗法的第一RET抑制剂的治疗的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和选择所鉴定的对象进行包括式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。还提供了选择具有癌症的对象进行不包括作为单一疗法的第一RET抑制剂的治疗的方法，所述方法包括:选择被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象进行包括施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

还提供了确定具有癌症(例如，RET相关的癌症)的对象将会对用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗具有阳性反应的可能性的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象对用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗具有降低的具有阳性反应的可能性(即，具有阴性反应的可能性增加)。还提供了确定具有癌症(例如，RET相关的癌症)的对象将会对用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗具有阳性反应的可能性的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定与具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象相比不具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象对用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗具有增加的具有阳性反应的可能性。还提供了预测用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗在具有癌症的对象中的效力的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗不太可能在从具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的对象获得的样品中对具有癌细胞的对象有效。还提供了预测用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗在具有癌症的对象中的效力的方法，所述方法包括: 确定用作为单一疗法的第一RET抑制剂治疗不太可能在从具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的对象获得的样品中对具有癌细胞的对象有效。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

还提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: (a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(c)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(d)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂时，还可以给对象施用另一种抗癌剂(例如，第二RET抑制剂或式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种 RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在步骤(c)的一些实施方案中，另一种 RET抑制剂可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

还提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: (a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(c)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或(d)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂时，还可以给对象施用另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种 RET抑制剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。

还提供了治疗具有癌症(例如，RET相关的癌症)的对象的方法，所述方法包括:(a)确定从具有癌症和先前施用一个或多个剂量的第一RET抑制剂的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和(b)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(c)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当给对象施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂时，还可以给对象施用另一种抗癌剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种 RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在步骤(b)的一些实施方案中，另一种抗癌剂可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

还提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: (a)确定从具有癌症和先前施用一个或多个剂量的第一RET抑制剂的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和(b)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或(c)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当给对象施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂时，还可以给对象施用另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在(b)的一些实施方案中，另一种抗癌剂可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

用多激酶抑制剂(MKI)或靶特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂或RAS抑制剂)治疗具有癌症的患者可以导致癌症中的RET基因、RET激酶或它们的表达或活性或水平的失调和/或对RET抑制剂的抗性。参见，例如，Bhinge 等人, Oncotarget 8:27155-27165, 2017；Chang 等人, Yonsei Med.J. 58:9-18, 2017；和Lopez-Delisle 等人, doi: 10.1038/s41388-017-0039-5, Oncogene 2018。

与用作为单一疗法的RET抑制剂或作为单一疗法的多激酶抑制剂或靶特异性激酶抑制剂治疗相同的患者或相似的患者相比，用与多激酶抑制剂或靶特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂或RAS抑制剂)组合的RET抑制剂治疗具有癌症的患者可以具有增加的治疗效力。参见，例如，Tang 等人, doi: 10.1038/modpathol.2017.109, Mod. Pathol. 2017；Andreucci 等人, Oncotarget 7:80543-80553, 2017；Nelson-Taylor 等人, Mol. Cancer Ther. 16:1623-1633, 2017；和Kato 等人, Clin. Cancer Res. 23:1988-1997,2017。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)并先前施用多激酶抑制剂(MKI)或靶特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂或RAS抑制剂) (例如，作为单一疗法)的患者的方法，所述方法包括: 给患者施用(i)治疗有效剂量的作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或(ii)治疗有效剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及治疗有效剂量的先前施用的MKI或先前施用的靶特异性激酶抑制剂。

本文提供了治疗先前施用MKI或靶特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂或RAS抑制剂)(例如，作为单一疗法)的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有具有RET基因、RET激酶或它们的表达或活性或水平的失调的癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效剂量的作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或(ii)治疗有效剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及治疗有效剂量的先前施用的MKI或先前施用的靶特异性激酶抑制剂。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 给患者施用治疗有效量的 MKI或靶特异性激酶抑制剂(例如，BRAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ALK抑制剂、ROS1抑制剂、MET抑制剂、芳香酶抑制剂、RAF抑制剂或RAS抑制剂)(例如，作为单一疗法)第一段时间；在该段时间后，鉴定具有RET基因、RET激酶或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效剂量的作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或(ii)治疗有效剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及治疗有效剂量的先前施用的MKI或先前施用的靶特异性激酶抑制剂。

本文提供了治疗具有BRAF基因、BRAF激酶或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 BRAF抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何BRAF抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有BRAF基因、BRAF激酶或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 BRAF抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何BRAF抑制剂)。

本文提供了治疗具有EGFR基因、EGFR蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的EGFR抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何EGFR抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有EGFR基因、EGFR蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的EGFR抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何EGFR抑制剂)。

本文提供了治疗具有MEK基因、MEK蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 MEK抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何MEK抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有MEK基因、MEK蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 MEK抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何MEK抑制剂)。

本文提供了治疗具有ALK基因、ALK蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的ALK抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何ALK抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有ALK基因、ALK蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的ALK抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何ALK抑制剂)。

本文提供了治疗具有ROS基因、ROS蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 ROS抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何ROS抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有ROS基因、ROS蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的ROS抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何ROS抑制剂)。

本文提供了治疗具有MET基因、MET蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 MET抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何MET抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有MET基因、MET蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的MET抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何MET抑制剂)。

本文提供了治疗具有芳香酶基因、芳香酶蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的芳香酶抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何芳香酶抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有芳香酶基因、芳香酶蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的芳香酶抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何芳香酶抑制剂)。

本文提供了治疗具有RAF基因、RAF蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 RAF抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RAF抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有RAF基因、RAF蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的RAF抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RAF抑制剂)。

本文提供了治疗具有RAS基因、RAS蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括给患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的 RAS抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RAS抑制剂)。

本文提供了治疗具有癌症(例如，本文所述的任何癌症)的患者的方法，所述方法包括: 鉴定具有RAS基因、RAS蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的具有癌细胞的患者；和给所鉴定的患者施用(i)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和(ii)治疗有效量的RAS抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RAS抑制剂)。

短语“BRAF基因、BRAF蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括BRAF激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型BRAF蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的BRAF蛋白的表达的BRAF基因中的突变、导致与野生型BRAF蛋白相比具有一个或多个点突变的BRAF蛋白的表达的BRAF基因中的突变、导致与野生型BRAF蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的BRAF蛋白的表达的BRAF基因中的突变、导致细胞中BRAF蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中BRAF蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型BRAF蛋白相比在BRAF蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的BRAF蛋白的BRAF mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型BRAF蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，BRAF基因、BRAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码BRAF蛋白的BRAF基因中的突变，该BRAF蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的BRAF基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，BRAF基因、BRAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的BRAF蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是BRAF)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，BRAF基因、BRAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个BRAF基因与另一个非BRAF基因的基因易位的结果。

BRAF抑制剂的非限制性实例包括达拉非尼、维罗非尼(也称为RG7204或PLX4032)、索拉非尼甲苯磺酸盐、PLX-4720、GDC-0879、BMS-908662 (Bristol-Meyers Squibb)、LGX818 (Novartis)、PLX3603 (Hofmann-LaRoche)、RAF265 (Novartis)、RO5185426(Hofmann-LaRoche)和GSK2118436 (GlaxoSmithKline)。BRAF抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“EGFR基因、EGFR蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括EGFR激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型EGFR蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的EGFR蛋白的表达的EGFR基因中的突变、导致与野生型EGFR蛋白相比具有一个或多个点突变的EGFR蛋白的表达的EGFR基因中的突变、导致与野生型EGFR蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的EGFR蛋白的表达的EGFR基因中的突变、导致细胞中EGFR蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中EGFR蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型EGFR蛋白相比在EGFR蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的EGFR蛋白的EGFR mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型EGFR蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，EGFR基因、EGFR蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码与由不包括该突变的EGFR基因编码的蛋白相比具有组成型活性或具有增加的活性的EGFR蛋白EGFR基因中的突变。例如，EGFR基因、EGFR蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的EGFR蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是EGFR)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，EGFR基因、EGFR蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个EGFR基因与另一个非EGFR基因的基因易位的结果。

EGFR抑制剂的非限制性实例包括吉非替尼、厄洛替尼、布吉替尼、拉帕替尼、奈拉替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、波齐替尼、凡德他尼、阿法替尼、AZD9291、CO-1686、HM61713、AP26113、CI-1033、PKI-166、GW-2016、EKB-569、PDI-168393、AG-1478、CGP-59326A。EGFR抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“MEK基因、MEK蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括MEK激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型MEK蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的MEK蛋白的表达的MEK基因中的突变、导致与野生型MEK蛋白相比具有一个或多个点突变的MEK蛋白的表达的MEK基因中的突变、导致与野生型MEK蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的MEK蛋白的表达的MEK基因中的突变、导致细胞中MEK蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中MEK蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型MEK蛋白相比在MEK蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的MEK蛋白的MEK mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型MEK蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，MEK基因、MEK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码与由不包括该突变的MEK基因编码的蛋白相比具有组成型活性或具有增加的活性的MEK蛋白的MEK基因中的突变。例如，MEK基因、MEK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的MEK蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是MEK)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，MEK基因、MEK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个MEK基因与另一个非MEK基因的基因易位的结果。

MEK抑制剂的非限制性实例包括mekinist、曲美替尼(GSK1120212)、cobimetinib(XL518)、binimetinib (MEK162)、司美替尼、PD-325901、CI-1040、PD035901、TAK-733、PD098059、U0126、AS703026/MSC1935369、XL-518/GDC-0973、BAY869766/RDEA119和GSK1120212。MEK抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“ALK基因、ALK蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括ALK激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型ALK蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的ALK蛋白的表达的ALK基因中的突变、导致与野生型ALK蛋白相比具有一个或多个点突变的ALK蛋白的表达的ALK基因中的突变、导致与野生型ALK蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的ALK蛋白的表达的ALK基因中的突变、导致细胞中ALK蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中ALK蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型ALK蛋白相比在ALK蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的ALK蛋白的ALK mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型ALK蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，ALK基因、ALK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码ALK蛋白的ALK基因中的突变，该ALK蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的ALK基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，ALK基因、ALK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的ALK蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是ALK)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，ALK基因、ALK蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个ALK基因与另一个非ALK基因的基因易位的结果。

ALK抑制剂的非限制性实例包括克里唑替尼(Xalkori)、色瑞替尼(Zykadia)、艾乐替尼(Alecensa)、dalantercept、ACE-041 (布吉替尼)(AP26113)、恩曲替尼(NMS-E628)、PF-06463922 (Pfizer)、TSR-011 (Tesaro)、CEP-37440 (Teva)、CEP-37440 (Teva)、X-396(Xcovery)和ASP-3026 (Astellas)。ALK抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“ROS1基因、ROS1蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括ROS1激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型ROS1蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的 ROS1蛋白的表达的ROS1基因中的突变、导致与野生型ROS1蛋白相比具有一个或多个点突变的ROS1蛋白的表达的ROS1基因中的突变、导致与野生型ROS1蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的ROS1蛋白的表达的ROS1基因中的突变、导致细胞中ROS1蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中ROS1蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型ROS1蛋白相比在ROS1蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的ROS1蛋白的ROS1 mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型ROS1蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，ROS1基因、ROS1蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码ROS1蛋白的ROS1基因中的突变，该ROS1蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的ROS1基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，ROS1基因、ROS1蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的ROS1蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是ROS1)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，ROS1基因、ROS1蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个ROS1基因与另一个非ROS1基因的基因易位的结果。

ROS1抑制剂的非限制性实例包括克里唑替尼、恩曲替尼(RXDX-101)、劳拉替尼(PF-06463922)、色瑞替尼、TPX-0005、DS-605和卡博替尼。ROS1抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“MET基因、MET蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括MET激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型MET蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的MET蛋白的表达的MET基因中的突变、导致与野生型MET蛋白相比具有一个或多个点突变的MET蛋白的表达的MET基因中的突变、导致与野生型MET蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的MET蛋白的表达的MET基因中的突变、导致细胞中MET蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中MET蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型MET蛋白相比在MET蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的MET蛋白的MET mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型MET蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，MET基因、MET蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码MET蛋白的MET基因中的突变，该MET蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的MET基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，MET基因、MET蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的MET蛋白的第一部和伴侣蛋白(即，不是MET)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，MET基因、MET蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个MET基因与另一个非MET基因的基因易位的结果。

MET抑制剂的非限制性实例包括克里唑替尼、卡博替尼、JNJ-38877605、PF-04217903 (Pfizer)、MK-2461、GSK 1363089、AMG 458 (Amgen)、tivantinib、INCB28060(Incyte)、PF-02341066 (Pfizer)、E7050 (Eisai)、BMS-777607 (Bristol-MeyersSquibb)、JNJ-38877605 (Johnson & Johnson)、ARQ197 (ArQule)、GSK/1363089/XL880(GSK/Exeilixis)和XL174 (BMS/Exelixis)。MET抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“芳香酶基因、芳香酶蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致与野生型芳香酶蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的芳香酶蛋白的表达的芳香酶基因中的突变、导致与野生型芳香酶蛋白相比具有一个或多个点突变的芳香酶蛋白的表达的芳香酶基因中的突变、导致与野生型芳香酶蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的芳香酶蛋白的表达的芳香酶基因中的突变、导致细胞中芳香酶蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中芳香酶蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型芳香酶蛋白相比在芳香酶蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的芳香酶蛋白的芳香酶 mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型芳香酶的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，芳香酶基因、芳香酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码芳香酶蛋白的芳香酶基因中的突变，该芳香酶蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的芳香酶基因编码的蛋白相比具有增加的活性。

芳香酶抑制剂的非限制性实例包括Arimidex (阿那曲唑)、Aromasin (依西美坦)、Femara (来曲唑)、Teslac (睾内脂)和福美坦。芳香酶抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“RAF基因、RAF蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括RAF激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型RAF蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的RAF蛋白的表达的RAF基因中的突变、与野生型RAF蛋白相比具有一个或多个点突变的RAF蛋白的表达的RAF基因中的突变导致、导致与野生型RAF蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的RAF蛋白的表达的RAF基因中的突变、导致细胞中RAF蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中RAF蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型RAF蛋白相比在RAF蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的RAF蛋白的RAF mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型RAF蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，RAF基因、RAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码RAF蛋白的RAF基因中的突变，该RAF蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的RAF基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，RAF基因、RAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的RAF蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是RAF)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，RAF基因、RAF蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个RAF基因与另一个非RAF基因的基因易位的结果。

RAF抑制剂的非限制性实例包括索拉非尼、维罗非尼、达拉非尼、BMS-908662/XL281、GSK2118436、RAF265、RO5126766和RO4987655。RAF抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

短语“RAS基因、RAS蛋白或它们中的任一种的表达或活性或水平的失调”是指基因突变(例如，导致包括RAS激酶结构域和融合伴侣的融合蛋白的表达的染色体易位、导致与野生型RAS蛋白相比包括至少一个氨基酸的缺失的RAS蛋白的表达的RAS基因中的突变、导致与野生型RAS蛋白相比具有一个或多个点突变的 RAS蛋白的表达的RAS基因中的突变、导致与野生型RAS蛋白相比具有至少一个插入的氨基酸的RAS蛋白的表达的RAS基因中的突变、导致细胞中RAS蛋白水平增加的基因重复或导致细胞中RAS蛋白水平增加的调节序列(例如，启动子和/或增强子)中的突变)、导致与野生型RAS蛋白相比在RAS蛋白中具有至少一个氨基酸的缺失的RAS蛋白的RAS mRNA的替代性剪接形式)或由于异常的细胞信号传导和/或失调的自分泌/旁分泌信号传导引起的哺乳动物细胞中野生型RAS蛋白的表达增加(例如，水平增加)(例如，与对照非癌细胞相比)。作为另一个实例，RAS基因、RAS蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是编码RAS蛋白的RAS基因中的突变，该RAS蛋白具有组成型活性或与由不包括该突变的RAS基因编码的蛋白相比具有增加的活性。例如，RAS基因、RAS蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是导致含有包括功能性激酶结构域的RAS蛋白的第一部分和伴侣蛋白(即，不是RAS)的第二部分的融合蛋白的表达的基因或染色体易位的结果。在一些实例中，RAS基因、RAS蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调可以是一个RAS基因与另一个非RAS基因的基因易位的结果。

RAS抑制剂的非限制性实例包括Kobe0065和Kobe2602。RAS抑制剂的另外的实例是本领域已知的。

多激酶抑制剂 (MKIs)的非限制性实例包括达沙替尼和舒尼替尼。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括(a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(c)如果对象具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(d)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当为对象选择另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂时，该方法还可以包括为对象选择多个剂量的另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在步骤(c)的一些实施方案中，另一种RET抑制剂可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括(a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个RET抑制剂抗性突变；和(c)如果对象具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或(d)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当为对象选择另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂时，该方法还可以包括为对象选择多个剂量的另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括(a)确定从具有癌症和先前施用一个或多个剂量的第一RET抑制剂的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；(b)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(c)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则选择另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当为对象选择另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂时，该方法还可以包括为对象选择多个剂量的另一种抗癌剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在步骤(c)的一些实施方案中，另一种RET抑制剂可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括(a)确定从具有癌症和先前施用一个或多个剂量的第一RET抑制剂的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；(b)如果对象具有具有至少一个RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或(c)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则选择另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂。在一些实施方案中，当为对象选择另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂时，该方法还可以包括为对象选择多个剂量的另一种抗癌剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或免疫疗法)。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是在步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

还提供了确定对象发展对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的风险的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和将具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的细胞的对象鉴定为具有增加的发展对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的可能性。还提供了确定对象发展对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的风险的方法，所述方法包括: 将具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的细胞的对象鉴定为具有增加的发展对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的可能性。还提供了确定对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的存在的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症。还提供了确定对象中对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症的存在的方法，所述方法包括:确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有对第一RET抑制剂具有一定抗性的癌症。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗增加的抗性。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变包括表3和表4中列出的一个或多个RET抑制剂抗性突变。例如，一个或多个RET抑制剂抗性突变可以包括在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，赋予癌细胞或肿瘤对用第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变可以是表3或4中列出的任何RET抑制剂抗性突变(例如，在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E)。

在一些实施方案中，肿瘤中一个或多个RET抑制剂抗性突变的存在导致肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗更具抗性。当RET抑制剂抗性突变导致肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗更具抗性时有用的方法如下所述。例如，本文提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和给所鉴定的对象施用不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)。还提供了治疗被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象的方法，所述方法包括给对象施用不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和为所鉴定的对象选择不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)。还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: 为被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象选择不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)。还提供了选择具有癌症的对象进行不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)的方法，所述方法包括: 鉴定具有癌细胞的对象，所述癌细胞具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和选择被鉴定的对象进行不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)。还提供了选择具有癌症的对象进行不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗(例如，第二RET激酶抑制剂)的方法，所述方法包括: 选择被鉴定为具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象进行不包括作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。

还提供了确定具有癌症的对象将对用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗呈阳性反应的可能性的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有降低的对用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗具有阳性反应的可能性。还提供了确定具有癌症的对象将对用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗呈阳性反应的可能性的方法，所述方法包括: 确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有降低的对用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗具有阳性反应的可能性。还提供了预测用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗在具有癌症的对象中的效力的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗不太可能在从具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的对象获得的样品中对具有癌细胞的对象有效。还提供了预测用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗在具有癌症的对象中的效力的方法，所述方法包括: 确定用作为单一疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗不太可能在从具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的对象获得的样品中对具有癌细胞的对象有效。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。

还提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: (a)施用一个或多个剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和(c)给具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(d)给具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象施用另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，当给对象施用另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物时，还可以给对象施用另一种抗癌剂或第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是步骤(a)中施用的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

还提供了治疗具有癌症的对象的方法，所述方法包括: (a)确定从具有癌症并先前施用一个或多个剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；(b)给具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(c)施用另外的剂量的先前施用给具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，当给对象施用另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物时，还可以给对象施用另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是步骤(a)中施用的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: (a)将一个或多个剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物施用给对象一段时间；(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和(c)如果对象具有具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(d)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，当为对象选择另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物时，该方法还可以包括进一步选择另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是步骤(a)中施用的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

还提供了为具有癌症的对象选择治疗的方法，所述方法包括: (a)确定从具有癌症并先前施用一个或多个剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；(b)如果对象具有具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则为对象选择作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或(c)如果对象具有不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则选择另外的剂量的先前施用给对象的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，当为对象选择另外的剂量的步骤(a)的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物时，该方法还可以包括进一步选择另一种抗癌剂。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是本领域已知的任何抗癌剂。例如，另外的抗癌剂是另一种RET抑制剂(例如，第二RET抑制剂)。在一些实施方案中，另外的抗癌剂是免疫疗法。在一些实施方案中，另一种RET可以是步骤(a)中施用的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

还提供了确定对象发展对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的风险的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和如果对象具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的细胞，则将对象鉴定为具有增加的发展对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的可能性。还提供了确定对象发展对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的风险的方法，所述方法包括: 将具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的细胞的对象鉴定为具有增加的发展对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的可能性。还提供了确定对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的存在的方法，所述方法包括: 确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个RET抑制剂抗性突变；和确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症。还提供了确定对象中对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症的存在的方法，所述方法包括: 确定具有具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象具有对式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有一定抗性的癌症。在一些实施方案中，一个或多个RET抑制剂抗性突变赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，赋予癌细胞或肿瘤对用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变可以是表3或4中列出的任何RET抑制剂抗性突变。

确定癌细胞或肿瘤对RET抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RET抑制剂)的抗性的水平的方法可以使用本领域已知的方法确定。例如，癌细胞对RET抑制剂的抗性的水平可以通过确定RET抑制剂(例如，本文所述的或本领域已知的任何RET抑制剂)对癌细胞活力的IC₅₀来评估。在其它实例中，癌细胞对RET抑制剂的抗性的水平可以通过确定癌细胞在RET抑制剂(例如，本文所述的任何RET抑制剂)存在下的生长速率来评估。在其它实例中，肿瘤对RET抑制剂的抗性的水平可以通过确定在用RET抑制剂(例如，本文所述的任何RET抑制剂)治疗期间随时间经过的对象中的一个或多个肿瘤的质量或大小来评估。在其它实例中，癌细胞或肿瘤对RET抑制剂的抗性的水平可以通过确定包括一个或多个RET抑制剂抗性突变的RET激酶(即，表达于对象中的癌细胞或肿瘤的相同的RET激酶)的活性来间接评估。具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤对RET抑制剂的抗性的水平是相对于不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤(例如，不具有相同的RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤、不具有任何 RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤或表达野生型RET蛋白的癌细胞或肿瘤)中的抗性水平。例如，具有一个或多个RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤的抗性的确定的水平可以为大于约1%、大于约2%、大于约3% 、大于约4%、大于约5%、大于约6%、大于约7%、大于约8%、大于约9%、大于约10%、大于约11%、大于约12%、大于约13%、大于约14%、大于约15%、大于约20%、大于约25%、大于约30%、大于约35%、大于约40%、大于约45%、大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%、大于约90%、大于约100%、大于约110%、大于约120%、大于约130%、大于约140%、大于约150%、大于约160%、大于约170%、大于约180%、大于约190%、大于约200%、大于约210%、大于约220%、大于约230%、大于约240%、大于约250%、大于约260%、大于约270%、大于约280%、大于约290%或大于约300%的不具有RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤(例如，不具有相同的RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤、不具有任何 RET抑制剂抗性突变的癌细胞或肿瘤或表达野生型RET蛋白的癌细胞或肿瘤)中抗性的水平。

RET被认为在皮肤和肠道中的传入伤害感受器的发育和存活中起重要作用。RET激酶敲除小鼠缺乏肠神经元并且具有其它神经系统异常，表明功能性RET激酶蛋白产物在发育过程中是必需的(Taraviras, S. 等人, Development, 1999, 126:2785-2797)。此外，在具有特征在于由于缺乏正常的结肠神经无力的而导致结肠梗阻的先天性巨结肠症患者的群体研究中，功能性RET突变的家族性和散发性的丧失的比例较高(Butler Tjaden N.,等人, Transl. Res., 2013, 162: 1-15)。肠易激综合征(IBS)是一种常见疾病，影响发达国家10-20％的个体，其特点是排便习惯异常、胃气胀和内脏超敏反应(Camilleri, M., N. Engl. J. Med., 2012, 367: 1626-1635)。虽然IBS的病因尚不清楚，但据认为它是由脑和胃肠道之间的病症、肠道微生物组的紊乱或炎症的增加引起的。由此产生的胃肠道变化会影响正常的肠道运输，导致腹泻或便秘。此外，在许多IBS患者中，周围神经系统的致敏导致内脏超敏反应或异常性疼痛(Keszthelyi, D., Eur. J. Pain, 2012, 16: 1444-1454)。参见，例如，美国公开号2015/0099762。

因此，本文提供了用于治疗诊断为具有(或鉴定为具有)包括以腹泻为主、便秘为主或交替的大便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、未指明的功能性肠病症、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病症、功能性胃十二指肠病症、功能性肛门直肠疼痛和炎性肠病的肠易激综合征(IBS)的患者的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本文还提供了用于治疗鉴定或诊断为具有RET-相关的肠易激综合征(IBS)的患者的方法(例如，患者已经通过使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定患者或来自患者的活组织检查样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调试剂盒被鉴定或诊断为具有RET-相关的肠易激综合征(IBS))，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本文还提供了用于治疗与IBS相关的疼痛的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与可用于治疗IBS的一种或多种症状的另一种治疗剂组合施用。

还提供了用于在有需要的患者中治疗肠易激综合征(IBS)的方法，该方法包括:(a)确定患者中的肠易激综合征(IBS)是否是RET-相关的IBS(例如，使用管理机构批准的，例如，FDA-批准的用于鉴定患者或来自患者的活组织检查样品中的RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的试剂盒或通过进行本文所述的测定的任何非限制性实例)；和(b)如果确定IBS是RET-相关的IBS，则给患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在一些实施方案中，本发明化合物可用于与一种或多种通过相同或不同作用机制起作用的有效治疗肠易激综合征的另外的治疗剂或疗法组合治疗肠易激综合征(IBS)。根据本领域技术人员已知的标准药学实践，所述至少一种另外的治疗剂可以通过相同或不同的施用途径和根据相同或不同的施用时间表作为相同或单独剂型的一部分与式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物一起施用。

用于治疗肠易激综合征(IBS)的另外的治疗剂的非限制性实例包括益生菌、纤维补充剂(例如蚤草、甲基纤维素)、抗腹泻药物(例如洛哌丁胺)、胆汁酸结合剂(例如消胆胺、考来替泊、考来维仑)、抗胆碱能药和解痉药(如莨菪碱、双环维林)、抗抑郁药(如三环类抗抑郁药，如丙咪嗪或去甲替林或选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)如氟西汀或帕罗西汀)、抗生素(如利福昔明)、阿洛司琼和芦比前列酮。

因此，本文还提供了治疗肠易激综合征(IBS)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用用于治疗IBS的药物组合，所述药物组合包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)另外的治疗剂，和(c)任选地至少一种药学上可接受的载体(用于同时、单独或依次使用以治疗IBS)，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对治疗IBS有效。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂作为单独的剂量同时施用。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂以联合治疗有效量(例如以每日或间歇剂量)作为单独的剂量以任何顺序依次施用。在一个实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂以组合剂量同时施用。

本文还提供了(i)用于在有需要的患者中治疗肠易激综合征的药物组合，其包含(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，(b)至少一种另外的治疗剂 (例如，任何本文所述的用于治疗肠易激综合征或本领域已知的示例性的另外的治疗剂)和(c)任选地至少一种药学上可接受的载体(用于同时、单独或依次使用以治疗肠易激综合征)，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和另外的治疗剂的量一起对治疗肠易激综合征有效；(ii)包含这样的组合的药物组合物；(iii)这样的组合用于制备用于治疗肠易激综合征的药物的用途；和(iv)商业包装或产品，其包含作为用于同时、单独或依次使用的组合制剂的这样的组合；和涉及在有需要的患者中治疗肠易激综合征的方法。在一个实施方案中患者是人。

如本文所用，术语“药物组合”是指由多于一种活性成分的混合或组合产生的药物疗法，包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种另外的治疗剂(例如，治疗肠易激综合征有效的药剂)以单一组合物或剂量的形式同时施用给患者。术语“非固定组合”是指式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和至少一种另外的治疗剂(例如，治疗肠易激综合征有效的药剂)被配制成单独的组合物或剂量，使得它们可以同时、并行或依次地施用于需要其的患者(具有可变的间隔时间限制)，其中这种施用在患者体内提供有效水平的两种或更多种化合物。在一个实施方案中，将式I化合物和另外的治疗剂配制成单独的单位剂型，其中单独的剂型适合于顺序或同时施用。这些也适用于混合物疗法，例如三种或更多种活性成分的施用。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可用作经历癌症治疗的患者的支持性护理的药剂。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可用于减少与用一种或多种癌症疗法治疗相关的一种或多种症状(例如腹泻或便秘并发症和/或腹痛)。参见，例如，美国公开号2015/0099762和Hoffman, J.M. 等人 Gastroenterology (2012)142:844-854。因此，本文提供的化合物或其药学上可接受的盐或组合物可以施用于患者以解决与癌症治疗相关的一种或多种并发症(例如，胃肠并发症，例如腹泻、便秘或腹痛)。

在一些实施方案中，治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以施用于正在接受癌症治疗的患者(例如，经历与癌症治疗相关的不良事件，例如免疫-相关不良事件或胃肠道并发症，包括腹泻、便秘和腹痛的患者)。例如，本文提供的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗与施用检查点抑制剂有关的结肠炎或IBS；参见，例如，Postow, M.A. 等人 Journal of Clinical Oncology (2015)33: 1974-1982。在一些这样的实施方案中，可以配制本文提供的化合物或其药学上可接受的盐以显示低生物利用度和/或靶向在胃肠道中递送。参见，例如，美国专利号6,531,152。

还提供了抑制细胞中RET激酶活性的方法，包括使细胞与式I化合物接触。在一个实施方案中，接触是体外的。在一个实施方案中，接触是体内的。在一个实施方案中，接触是体内的，其中该方法包括给具有具有RET 激酶活性的细胞的对象施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，细胞是癌细胞。在一个实施方案中，癌细胞是本文所述的任何癌症。在一些实施方案中，癌细胞是RET相关的癌细胞。在一些实施方案中，细胞是胃肠细胞。

还提供了用于抑制哺乳动物细胞中的RET 激酶活性的方法，包括使细胞与式I化合物接触。在一个实施方案中，接触是体外的。在一个实施方案中，接触是体内的。在一个实施方案中，接触是体内的，其中该方法包括给具有具有RET 激酶活性的细胞的哺乳动物施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。在一个实施方案中，哺乳动物癌细胞是本文所述的任何癌症。在一些实施方案中，哺乳动物癌细胞是RET相关的癌细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是胃肠细胞。

如本文所用，术语"接触"是指在体外系统或体内系统中将指定部分放于一起。例如，使RET激酶"接触"本文提供的化合物包括向具有RET激酶的个体或患者，诸如人施用本文提供的化合物以及例如向含有RET激酶的含有细胞或纯化的制品的样品引入本文提供的化合物。

短语“有效量”是指当施用给需要这种治疗的患者时，足以(i)治疗RET激酶相关疾病或病症，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病况或病症的一种或多种症状，或(iii)延迟本文所述的特定疾病、病况或病症的一种或多种症状的发作的化合物的量。对应于这样的量的式I化合物的量将根据诸如特定化合物、疾病状况及其严重性、需要治疗的患者的身份(例如，体重)等因素而变化，但仍然可以由本领域技术人员常规确定。

当用作药物时，式I化合物可以以药物组合物的形式施用。这些组合物可以以药学领域熟知的方式制备，并且可以通过各种途径施用，这取决于是否需要局部或全身治疗以及待治疗的区域。可局部（包括经皮、表皮、眼科和粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送）、肺（例如，通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内或鼻内）、口服或肠胃外施用。口服施用可包括配制成每日一次或每日两次(BID)施用的剂型。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内肌肉、或注射或输注；或颅内，例如鞘内或脑室内施用。肠胃外施用可以是单次推注剂量的形式，或者可以是例如通过连续灌注泵。用于局部施用的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规药学载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需的或期望的。

本文还提供药物组合物，其含有作为活性成分的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)。在一些实施方案中，组合物适合于局部施用。在制备本文提供的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，用赋形剂稀释或以例如胶囊、小药囊、纸或其它容器的形式包封在这种载体中。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体材料，用作活性成分的媒介物、载体或介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(作为固体或液体介质)、软膏(含有例如最高达10重量％的活性化合物)、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末的形式。在一个实施方案中，所述组合物被配制用于口服施用。在一个实施方案中，该组合物被配制成片剂或胶囊。

包含式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的组合物可以配制成单位剂型，每剂含有约5至约1,000mg (1g)，更通常约100mg至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适于作为人对象和其他患者的单一剂量的物理离散单位，每个单位含有与合适的药用赋形剂结合的经计算用于产生期望的治疗效果的预定量的活性物质（即，如本文所提供的式I化合物）。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约5 mg至约50 mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约5 mg至约10 mg、约10 mg至约15 mg、约15 mg至约20mg、约20 mg至约25 mg、约25 mg至约30 mg、约30 mg至约35 mg、约35 mg至约40 mg、约40mg至约45 mg或约45 mg至约50 mg的活性成分的化合物或组合物。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约50 mg至约500 mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约50 mg至约100 mg、约100 mg至约150 mg、约150mg至约200 mg、约200 mg至约250 mg、约250 mg至约300 mg、约350 mg至约400 mg或约450mg至约500 mg的活性成分的化合物或组合物。

在一些实施方案中，本文提供的组合物含有约500 mg至约1,000 mg的活性成分。本领域普通技术人员将理解，这体现了含有约500 mg至约550 mg、约550 mg至约600 mg、约600 mg至约650 mg、约650 mg至约700 mg、约700 mg至约750 mg、约750 mg至约800 mg、约800 mg至约850 mg、约850 mg至约900 mg、约900 mg至约950 mg或约950 mg至约1,000 mg的活性成分的化合物或组合物。

活性化合物可在宽剂量范围内有效，并且通常以药学有效量施用。然而，将理解的是，实际施用的化合物的量通常由医生根据相关情况，包括要治疗的病况、选择的施用途径、实际施用的化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等确定。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可以以约1 mg/kg至约100 mg/kg范围的量施用。在一些实施方案中，本文提供的化合物可以以约1 mg/kg至约20 mg/kg、约5 mg/kg至约50 mg/kg、约10 mg/kg至约40 mg/kg、约15 mg/kg至约45 mg/kg、约20 mg/kg至约60 mg/kg或约40 mg/kg至约70 mg/kg的量施用。例如，约5 mg/kg、约10 mg/kg、约15 mg/kg、约20mg/kg、约25 mg/kg、约30 mg/kg、约35 mg/kg、约40 mg/kg、约45 mg/kg、约50 mg/kg、约55mg/kg、约60 mg/kg、约65 mg/kg、约70 mg/kg、约75 mg/kg、约80 mg/kg、约85 mg/kg、约90mg/kg、约95 mg/kg或约100 mg/kg。在一些实施方案中，此类施用可以是每日一次或每日两次(BID)施用。

本文提供了药物试剂盒，其可用于例如治疗RET相关疾病或病症，例如癌症或肠易激综合征(IBS)，其包括一个或多个容器，所述容器含有包含治疗有效量的本文提供的化合物的药物组合物。如果需要，这样的试剂盒可以进一步包括各种常规药物试剂盒组分中的一种或多种，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器，另外的容器等，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。试剂盒中还可以包括作为插入物或标签的指示待施用的组分的量、施用指南和/或混合组分的指南的说明书。

本领域技术人员将认识到，使用合适的、已知的和通常接受的细胞和/或动物模型的体内和体外试验均可预测试验化合物治疗或预防给定病症的能力。

本领域技术人员将进一步认识到，可以根据临床和医学领域中众所周知的方法完成在健康患者和/或患有给定病症的那些中的人体临床试验，包括人类首次、剂量范围和效力试验。

实施例

下列实施例例示本发明。

生物学实施例

实施例A

RET酶测定

使用CisBio的HTRF® KinEASE™-TK 测定技术筛选式I化合物抑制野生型和V804M突变型RET激酶的能力。简言之，将来自Eurofins的N端GST标记的重组人RET细胞质结构域(aa658-末端)(0.25nM RET；目录号14-570M)或来自Millipore的N端GST标记的重组人V804M突变型RET细胞质结构域(aa 658-末端)(0.25nM酶；目录号14-760)与250nM TK-底物生物素(CisBio，目录号62TK0PEC的一部分)和1mM ATP以及测试化合物一起在于8微升的体积中的由25mM HEPES pH 7.4、10mM的MgCl₂、0.01％ Triton X-100和2％DMSO组成的缓冲液中温育。通常在DMSO中以三倍连续稀释制备化合物，并将其加入到测定中以得到合适的最终浓度。在22℃温育30分钟后，通过加入8μL在HTRF检测缓冲液中含有31.25nM Sa-XL665和1XTK-ab-Cryptate的淬灭溶液(均来自CisBio, 目录号62TK0PEC的一部分)来淬灭反应。在22℃温育1小时后，使用PerkinElmer EnVision多模式读板器通过HTRF双波长检测确定反应程度，并使用参比发射因子计算对照百分比(POC)。使用无测试化合物测定100 POC，并使用预淬灭的对照反应测定0 POC。将POC值拟合至4参数逻辑斯谛曲线，并且将IC₅₀定义为对拟合曲线而言POC等于50时的抑制剂的浓度。表5中提供了在该测定中测试的化合物的IC₅₀值。

实施例B

RET 细胞测定

在表达Kif5b-RET融合蛋白的HEK-293细胞中测定抑制RET激酶的化合物的细胞效力。简而言之，在测定前一天，将表达Kif5b-RET融合蛋白的HEK-293细胞以50K细胞/孔铺板在96孔聚-D-赖氨酸包被的平板中。将细胞与测试化合物在DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)中温育1小时，最终DMSO浓度为0.5％。通常在DMSO中以三倍连续稀释制备化合物，并将其加入到测定中以得到合适的最终浓度。1小时后，除去培养基，用3.8％甲醛固定细胞20分钟，用PBS洗涤，用100％甲醇透化10分钟。然后将板用PBS-0.05％Tween 20洗涤，并用LI-COR封闭溶液(LI-COR目录号927-40000)封闭1小时。用PBS-0.05％Tween 20洗涤平板，然后与抗磷酸化RET(Tyr1062)(Santa Cruz目录号sc-20252-R)抗体和抗GAPDH(Millipore目录号MAB374)抗体一起温育2小时。用PBS-0.05％Tween 20洗涤平板，并与抗兔680(MolecularProbes目录号A21109)和抗小鼠800(LI-COR目录号926-32210)二级抗体一起温育1小时。将所有抗体稀释在含有0.05％Tween的LI-COR Block中。用PBS-0.05％Tween20洗涤平板，向每个孔中加入100μL PBS，并在LI-COR Aerius荧光读板器上读板。将磷酸化RET信号标准化为GAPDH信号。使用无测试化合物测定100 POC(对照的百分比)，并使用1μM对照抑制剂测定0 POC。将POC值拟合至4参数逻辑斯谛曲线。IC₅₀值是其中曲线跨越50 POC的点。表5中提供了在该测定中测试的化合物的IC₅₀值。

表5. 在实施例A和B的测定中测试的化合物的IC ₅₀

实施例编号	RET 酶(野生型)IC<sub>50</sub>(nM)	RET 酶(V804M)IC<sub>50</sub> (nM)	KIF5B-RET pTYR1062细胞 IC<sub>50</sub> (nM)
				1	368.8	N/A	N/A
2	36.4	N/A	62.7
				3	52.2	N/A	153.1
4	64.5	39.4	209.9
				5	23.7	56.4	35.4
6	42.7	100.6	72.6
				7	141.3	1095.6	N/A
8	144.2	1006.7	N/A
				9	10.1	N/A	27.8
10	35.0	N/A	70.7
				11	18.6	79.9	20.7
12	5.2	17.1	7.0
				13	14.1	N/A	30.0
14	11.2	37.6	8.9
				15	24.9	88.3	24.3
16	70.0	309.5	84.2
				17	30.4	91.7	25.8
18	10.7	56.7	7.3
				19	12.3	117.0	28.5
20	30.2	159.7	27.6
				21	54.6	308.8	74.2
22	73.1	343.8	84.1
				23	5.5	16.6	5.3
24	20.9	67.6	11.0
				25	16.4	83.8	12.9
26	168.0	924.0	N/A
				27	7.1	14.0	7.0
28	13.2	18.5	6.5
				29	16.6	41.3	10.7
30	16.8	164.0	32.0
				31	162.0	927.5	N/A
32	21.6	75.6	7.0
				33	77.2	352.1	52.2
34	138.6	624.2	N/A
				35	25.7	112.8	16.7
36	39.3	179.3	31.0
				37	52.4	435.5	88.2
38	9.0	29.6	7.7
				39	17.0	91.0	14.4
40	4.5	31.8	2.7
				41	142.1	875.2	N/A
42	8.3	16.6	5.2
				43	39.3	208.7	102.1
44	4195.9	10000.0	N/A
				45	53.0	414.6	57.5
46	31.1	335.2	15.4
				47	13.8	58.4	17.6
48	19.0	47.5	21.5
				49	25.5	83.3	9.1
50	7.0	22.4	5.0
				51	26.6	68.6	6.4
52	8.9	29.6	3.8
				53	6.8	28.1	4.0
54	18.9	64.3	6.2
				55	31.5	112.8	16.6
56	26.0	61.9	7.1
				57	40.8	105.1	21.9
58	32.4	47.2	75.4
				59	16.8	29.0	24.4
60	9.9	76.1	21.1

62	13.1	60.7	24.0
				63	2.8	18.0	12.2
64	4.2	20.8	6.9
				65	13.9	66.2	21.4

				67	13.1	190.7	67.9
68	6.6	26.3	69.6
				69	19.4	369.8	146.0
70	292.2	1914.2	N/A
				71	154.2	1324.1	N/A
72	24.8	179.5	778.5
				73	127.1	504.4	N/A
74	31.3	83.7	188.6
				75	11.4	192.3	53.2
76	59.7	500.0	350.7
				77	9.3	46.6	6.2
78	10.5	28.1	4.2
				79	5.7	45.1	22.7
80	23.0	86.5	29.7
				81	223.6	2344.3	N/A
82	29.6	215.8	37.2
				83	34.9	280.0	106.9
84	386.4	2757.1	N/A
				85	284.6	2617.1	N/A
86	43.9	342.7	181.5
				87	123.4	998.6	N/A
88	20.0	104.4	14.1
				89	11.1	55.5	20.7
90	42.5	193.2	79.8
				91	49.7	479.2	20.3
92	17.8	78.1	12.4
				93	28.4	61.3	5.6
94	6.5	13.7	2.7
				95	25.9	152.0	33.9
96	27.5	229.9	25.8
				97	150.8	1382.2	N/A
98	4.4	5.8	2.1
				99	4.8	9.0	2.9
100	7.1	11.7	2.3
				101	3.9	8.7	2.3
102	7.2	20.1	4.8
				103	112.9	2526.4	N/A
104	84.3	711.7	164.1
				105	735.4	10000.0	N/A
106	112.0	957.6	N/A
				107	130.2	420.0	N/A
108	247.9	849.5	N/A
				109	11.0	51.4	7.8
110	85.7	1581.2	302.1
				111	33.3	209.7	131.7
112	30.7	229.3	61.7
				113	224.9	1328.0	N/A
114	68.5	1267.9	198.5
				115	55.1	856.0	79.3
116	223.0	3846.9	1068.7
				117	121.2	699.5	N/A
118	19.8	34.8	6.4
				119	47.7	364.3	83.1
120	57.4	320.9	82.6
				121	31.7	273.4	63.8

合成实施例

合成中间体的合成

中间体P1

4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐

步骤1: 制备1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二乙酯. 在250 mL 乙腈中溶解2-氯-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙酮(18.3 g, 115 mmol)和1H-吡唑-3,5-二甲酸二乙酯(24.5 g, 115 mmol)，然后一次性加入精细研磨的K₂CO₃ (31.9g, 231 mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将反应混合物过滤，并将滤饼用乙腈(100 mL)洗涤。将滤液在真空中浓缩成稠厚的油。将油溶解于EtOAc (80 mL)并在搅拌下缓慢地加入庚烷(200 mL)。将所得固体搅拌2 h，然后过滤并用庚烷洗涤。将固体在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(26.4 g, 67%收率)。

步骤2: 制备4-羟基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸乙酯和4-羟基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸. 在500 mL玻璃压力容器中，在320 mL乙酸中合并1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二乙酯(8.0 g, 23.9 mmol)和NH₄OAc (55.3 g, 718 mmol)。密封容器并将反应混合物加热至120 ℃过夜，随后在160 ℃加热48小时。将反应混合物冷却至环境温度并且然后倒入2 L烧瓶中。缓慢地加入水(960 mL)并将混合物在冷却下搅拌2小时。通过真空过滤收集搅拌过夜后得到的细粉红色悬浮液。收集固体并在真空烘箱中干燥以得到标题化合物4-羟基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(5.45 g, 26%收率)和4-羟基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸(5.45 g, 58%收率)的1:2 混合物。

步骤3: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-氧代-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪- 2-甲酸. 将粗4-羟基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(10.00g, 34.81 mmol)加入到装有机械搅拌、热电偶和装有氮气球的回流冷凝器的500 mL烧瓶。加入6 N HCl (100 mL)，并将反应混合物在65 ℃加热32 h。将反应混合物冷却至环境温度过夜，并加入水(100 mL)。将反应混合物搅拌1 h，并且然后过滤。将所得固体用水冲洗并在真空烘箱中干燥过夜以得到标题化合物(8.8 g, 98%收率)。

步骤4: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮。将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-氧代-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸(10.0 g, 38.6 mmol)加入至装有机械搅拌、热电偶、回流冷凝器和静态氮气压力的500 mL烧瓶。加入Cu(OAc)₂(3.5 g, 19.3 mmol)、1,10-菲咯啉(3.5 g, 19.3 mmol)和N-甲基吡咯烷酮(100 mL)。将反应混合物加热至165 ℃ 过夜。将反应混合物冷却至环境温度，并加入3 M HCl (200 mL)以得到浆液，将其搅拌过夜。通过真空过滤收集产物，用水冲洗，并在真空烘箱中干燥过夜以得到标题化合物(8.0 g, 96%收率)。

步骤5: 制备4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐。向装有磁力搅拌棒、内部温度探针和回流冷凝器的100mL 3-颈烧瓶中加入 6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮 (5.0 g, 23.2 mmol)，随后加入三氯氧磷(34.6mL, 371 mmol)。将反应混合物在氮气下加热至80 ℃保持7 h。将反应混合物冷却至50 ℃，然后加入40 mL 乙腈，并冷却至环境温度。将所得固体过滤，用20 mL 乙腈洗涤，并在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(2.65 g)。将滤液用80 mL甲基叔丁基醚稀释并将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将所得固体过滤并干燥以得到另外的量的标题化合物(2.97 g)。4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐的总产量为4.55 g (16.8mmol, 72.5%收率)。

中间体P2

4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备4-氯-3-碘-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪. 在N_2(g)气氛下，将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (80.2 g, 343 mmol)和NIS(92.7 g, 412 mmol)于DMF (2000 mL)中的混合物在环境温度机械搅拌30 min。引入作为DMF (350 mL)中的溶液的另外的NIS (92.7 g, 412 mmol)。将混合物在环境温度搅拌另外的30 min，然后在50 ℃搅拌90 min，然后历经16 h冷却至环境温度。将所得浆液过滤，并将滤饼用EtOAc (400 mL)冲洗并在40 ℃在真空烘箱中干燥过夜以得到标题化合物(87 g,71%收率)。MS (apci)m/z = 359.96 (M+1), 361.96 (M+2)。

步骤2: 制备4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 在N_2(g)气氛下，将4-氯-3-碘-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (43.0 g, 120mmol)于THF (430 mL)中的冷的(-20至-25 ℃)浆液用1.65 M 于THF中的i-PrMgCl (76.1mL, 125.6 mmol)缓慢地处理，同时在加入过程中将内部温度保持在或低于-19 ℃。在-25℃搅拌20 min后，引入另外的i-PrMgCl (2 mL, 3.3 mmol；1.65 M)，并将反应在-25 ℃搅拌2 min。此后立即以允许内部温度在加入过程中保持在或低于-19 ℃的速率引入1-氰酸根合-4-甲氧基苯(21.65 g, 138.3 mmol)于THF (60 mL)中的溶液。历经16 h使反应温热至20 ℃，并将所得浆液过滤。将滤饼用EtOAc (70 mL)冲洗，然后在40 ℃在真空烘箱中干燥2 h以得到标题化合物(22.2 g, 72%收率)。MS (apci)m/z = 258.8 (M+H)。¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆)δ: 9.41(s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 3.87(s, 3H)。

中间体P3

4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐

步骤1: 制备4-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑. 将4-碘-1H-吡唑(5.0 g, 25.8mmol)溶解于DMF (50 mL)并加入K₂CO₃ (4.27 g, 30.9 mmol)，随后是1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(3.86 mL, 28.4 mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。然后将反应混合物倒入水中并用Et₂O萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到标题化合物(8.3 g,103%收率)

步骤2: 制备2-氯-1-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)乙酮. 将4-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑 (8.1 g, 26 mmol)溶解于THF (50 mL)并在冰浴中冷却。缓慢地加入异丙基氯化镁(2.9 M, 8.9 mL, 26 mmol)。将反应混合物搅拌10 min，并且然后通过注射器缓慢地加入溶解于THF (15 mL)的2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺 (3.5 g, 26 mmol)。将反应混合物温热至环境温度并搅拌1 h。将反应混合物在EtOAc和1N HCl之间分配，并将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩以得到粗标题化合物(7.1 g, 104%收率)，为缓慢固化的琥珀色油。

步骤3: 制备1-(2-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑- 3,5-二甲酸二乙酯. 将粗2-氯-1-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)乙酮(7.1 g, 21mmol)溶解于乙腈 (100 mL)。加入1H-吡唑-3,5-二甲酸二乙酯(4.6 g, 21 mmol)，随后加入K₂CO₃ (5.9 g, 43 mmol)并将反应混合物在45 ℃搅拌1 h。将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，过滤，并浓缩。将残余物经硅胶纯化以得到标题化合物(8.7 g, 92%收率)，为白色固体。

步骤4: 制备4-羟基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 2-甲酸乙酯. 将1-(2-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-3,5-二甲酸二乙酯(8.2 g, 18.6 mmol)溶解于HOAc (100 mL)并加入NH₄OAc (43.1 g, 559mmol)。将反应混合物在密封管中在120 ℃加热48 h。将反应混合物冷却至环境温度，倒入水(200 mL)中，过滤并干燥以得到标题化合物(5.65 g, 77%收率)，为白色固体。

步骤5: 制备4-羟基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 2-甲酸. 将4-羟基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(5.4 g, 14 mmol)悬浮于THF (60 mL)并加入1M氢氧化锂(30 mL, 30 mmol)。将反应混合物加热至50 ℃保持30 min。在剧烈搅拌下将反应混合物通过缓慢加入1M HCl (35 mL)淬灭。加入另外的水(10 mL)以帮助搅拌。将混合物在50 ℃剧烈搅拌15 min，然后冷却并过滤。将分离的固体用水洗涤并在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(4.6 g, 92%收率)，为白色固体。

步骤6: 制备6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-醇.将4-羟基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-甲酸(4.6 g, 13mmol)加入到25 mL烧瓶并加入1,10-菲咯啉(1.00 g, 5.5 mmol)和二乙酰氧基铜(1.0 g,5.5 mmol)。将反应混合物用N-甲基吡咯烷酮(12 mL)稀释并且然后在氮气下加热至165 ℃保持6 h。将反应混合物冷却至环境温度过夜，用1N HCl (20 mL)转移至烧瓶并在50 ℃搅拌45 min。然后将反应混合物过滤，并将分离的固体用水洗涤并在真空烘箱中干燥以得到4.7 g 深棕色固体。将干燥的固体悬浮于1N HCl (60 mL)并加入N-甲基吡咯烷酮(10 mL)以帮助润湿。将混合物在65 ℃搅拌1 h。混合物过滤并将分离的固体用水洗涤，直至所得滤液无色。将分离的固体在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(3.7 g, 91%收率)，为棕色固体。

步骤7: 制备4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐。将6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-醇(3.7 g, 11.5mmol)悬浮于三氯氧磷(10.6 mL, 115 mmol)并在氮气下加热至80 ℃保持3 h。将反应混合物冷却至环境温度并在剧烈搅拌下倒入甲基叔丁基醚(80 mL)中。将混合物搅拌10 min并且然后过滤。将分离的固体用甲基叔丁基醚洗涤并在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(2.7 g)，为黄褐色固体。放置2 d后，滤液含有固体。过滤分离固体并干燥以得到另外的标题化合物(总产量: 3.9 g, 90%收率)。

中间体P4

4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备4-氯-3-碘-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪.在N_2(g)气氛下，将4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (10.0g, 29.4 mmol)和NIS (7.95 g, 35.3 mmol)于DMF (200 mL)中的混合物在环境温度搅拌30 min。引入作为DMF (10 mL)中的溶液的另外的NIS (7.95 g, 35.3 mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌30 min并且然后在50 ℃搅拌16 h，然后过滤所得混悬液。将滤饼用EtOAc (50 mL)冲洗并在40 ℃在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(11.0 g, 80%)。MS(apci)m/z = 465.5 (M+H)。

步骤2: 制备4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3- 甲腈. 在N_2(g)气氛下，将4-氯-3-碘-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (2.0 g, 4.29 mmol)于THF (28 mL)中的冷的(-19至-25 ℃)溶液用1.68 M于THF中的i-PrMgCl (2.8 mL, 4.7 mmol)缓慢地处理，保持在加入过程中内部温度在或低于-19℃。将反应在-25 ℃搅拌20 min，并且然后引入作为THF (2 mL)中的溶液的 1-氰酸根合-4-甲氧基苯(0.77 g, 5.15 mmol)，再次在加入过程中保持内部温度在或低于-19 ℃。使反应混合物历经12 h温热至20 ℃，并且然后将所得浆液真空过滤。将分离的固体通过二氧化硅色谱法纯化(7:3，然后1:1，然后3:7 庚烷-EtOAc的分步梯度洗脱)以得到标题化合物(0.8 g, 52%收率)。MS (apci)m/z = 364.8 (M+H)。

中间体P5

4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪

将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪盐酸盐(中间体P1；3.5 g,13.0 mmol)、(6-氟吡啶-3-基)硼酸(2.28 g, 16.2 mmol)、X-phos (1.24 g, 2.59 mmol)和Pd₂(dba)₃ (0.593 g, 0.648 mmol)于THF (40 mL)中的混合物用Ar_(g)鼓泡30秒，然后加入2 M K₂CO_3(aq)(19.4 mL, 38.9 mmol)。将混合物用Ar_(g)鼓泡另外的5 min，然后密封，并在70 ℃搅拌过夜。将反应混合物用DCM (250 mL)和饱和NaHCO_3(aq)(50 mL)稀释。这样得到乳液，其通过加入10% iPrOH/CHCl₃ (100 mL)破乳(resolved)。将所得两相混合物分离，并保留有机萃取物，同时将含有固体的水性萃取物用DCM (3 x 250 mL)和10% iPrOH/CHCl₃(3x 100 mL)的混合物洗涤。合并所有有机萃取物，然后经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM和MeOH并通过二氧化硅色谱法纯化(使用60-75% 于DCM中的EtOAc(含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(0.800 g, 21%收率)。MS(apci)m/z = 295.1 (M+H)。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 8.95 (m, 1H), 8.56 (m, 1 H),8.50-8.54 (m, 1 H), 8.06 (m, 1 H), 7.94 (s, 2 H), 7.11-7.14 (m, 1 H), 6.92(m, 1 H), 3.98 (s, 3 H)。

中间体P6

3-氯-4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (中间体P5；0.523 g, 1.78 mmol)和NCS (0.237 g, 1.78 mmol)于DMF (20 mL)中的稠混悬液在50 ℃搅拌过夜，然后在60℃搅拌另一天。引入另外的NCS (0.237 g, 1.78 mmol)，并使反应在60℃搅拌5 d。将反应混合物用水淬灭并剧烈地搅拌。将混合物真空过滤。将滤饼风干过夜，然后用Et₂O洗涤。将固体在45 ºC在真空烘箱中干燥2 d，得到标题化合物和4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪 (中间体P5)的混合物(0.554 g, ~1:1比率(通过HPLC))。该混合物不经进一步纯化而直接用于下一步骤中。

中间体P7

4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

在压力容器中，将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈 (中间体P2；0.503 g, 1.94 mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.520 g, 2.33 mmol)和Pd(PPh₃)₄ (0.0674 g, 0.0583 mmol)混悬于2 M Na₂CO_3(aq)(5.83 mL, 11.7 mmol)和1,4-二噁烷(9.72 mL)。将混合物用N_2(g)鼓泡15 min，然后密封并在80℃搅拌过夜。将反应混合物冷却20分钟，然后引入另外的Pd(PPh₃)₄ (0.0674 g,0.0583 mmol)和2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.075g, 0.34 mmol)。将反应混合物再次用N_2(g)鼓泡15 min，然后密封并在80℃搅拌24 h。将反应混合物冷却至室温，然后倒入水(100 mL)中。将所得混悬液过滤，并将滤饼依次用水(2 x5 mL)和己烷(2 x 5 mL)洗涤。将固体风干以干净地得到标题化合物(0.44 g, 71%收率)。MS (apci)m/z = 320.1 (M+H)。

中间体P9

6-溴-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4,6-二溴吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈 (中间体R9；153 mg, 0.507 mmol)、1-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪 (中间体R1；208 mg, 0.507 mmol)、Cs₂CO_3(s)(330 mg, 1.01 mmol)和PdCl₂(dppf)•CH₂Cl₂ (41.4 mg, 0.0507 mmol)于4:1 二噁烷:水(1.5 mL)中的混合物用N_2(g)鼓泡，然后在环境温度搅拌过夜。将反应混合物用DCM 稀释并用饱和NaHCO_3(aq)洗涤_。将有机萃取物用盐水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用1-9% DCM/MeOH(含有1% NH4OH)作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(204 mg, 80%收率)。MS (apci)m/z = 505.1 (M+H)。

中间体R1

1-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪

将1-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪 (5 g,17.3 mmol)和6-甲氧基烟醛(2.85 g, 20.7 mmol)于DCE (85 mL)的混合物用NaBH(AcO)₃(7.3 g, 35 mmol)分批处理。将混合物在环境温度搅拌2.5 h，并且然后在真空中浓缩以减少一半体积。将混合物用EtOAc稀释，并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(4.86 g, 69%收率)。MS(apci)m/z = 411.2 (M+H)。

中间体R2

2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸

将2-氨基-2-(2-氟苯基)乙酸(300 mg, 1.77 mmol)于THF (1.8 mL)中的溶液依次用1M NaOH_(aq)(2.66 mL, 5.32 mmol)和二碳酸二叔丁酯(387 mg, 1.77 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌过夜，然后引入另外的二碳酸二叔丁酯(387 mg, 1.77 mmol)。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物混悬于DCM，并依次用饱和NaHCO_3(aq)、水和盐水(各2 x 2mL)洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在高真空下干燥以得到标题化合物(486 mg, 定量产量)。MS(apci)m/z = 268.1 (M+H)。

中间体R3

2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2,4-二氟苯基)乙酸

将2-氨基-2-(2,4-二氟苯基)乙酸(300 mg, 1.60 mmol)于THF (1.6 mL)中的溶液依次用2 M NaOH_(aq) (2.41 mL, 4.81 mmol)和二碳酸二叔丁酯(385 mg, 1.76 mmol)处理。在环境温度搅拌所得混合物2 h后，引入另外的二碳酸二叔丁酯(387 mg, 1.77 mmol)，并将反应搅拌另外的1.5 h。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物混悬于DCM并依次用饱和NaHCO_3(aq)、水和盐水(各2 x 2 mL)洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨两次并在高真空下干燥以得到标题化合物(383 mg, 83%收率)。MS (apci)m/z = 286.1 (M-H)。

中间体R4

2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酸

将外消旋的2-氨基-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酸(1 g, 4.9 mmol)于THF (50 mL)中的溶液依次用2 M NaOH_(aq) (7 mL, 15 mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.18 g, 5.40 mmol)处理。在环境温度搅拌过夜后，将反应混合物在真空中浓缩成大约10 mL。将浓缩的混合物用1 MHCl_(aq)(15 mL)中和，然后用EtOAc (2 x 50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50 mL)洗涤，经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(383 mg, 83%收率)。MS (apci)m/z = 301.9 (M+H)。

中间体R5

(2S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-苯基乙酸

步骤1: 制备(R)-4-苄基-3-(2-苯基乙酰基)噁唑烷-2-酮。将(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(2.80 g, 15.8 mmol)于THF (100 mL)中的溶液冷却至-78 ℃，然后用1M 于THF中的[(CH₃)₃Si]₂NLi (15.8 mL, 15.8 mmol)处理。将反应混合物在-78 ℃搅拌15 min，然后用(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(2.80 g, 15.8 mmol)处理。使所得混合物历经2 h缓慢地温热至环境温度后，将反应混合物在环境温度搅拌另外的60 h。将反应混合物用饱和NaHCO_3(aq)处理，然后用EtOAc (2x)萃取。将合并的有机萃取物用水(3x)和盐水(1x)萃取，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用5-60% 己烷-EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(3.53 g, 79%收率)。¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆)δ 7.36-7.12 (m, 10H), 4.70-4.65 (m, 1H), 4.36-4.11 (m, 4H),3.01-2.88 (m, 2H)。

步骤2: 制备2-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代-1-苯基乙基) 吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将(R)-4-苄基-3-(2-苯基乙酰基)噁唑烷-2-酮 (步骤1；1.11 g,3.76 mmol)于DCM (38 mL)中的溶液冷却至-78 ℃，并且然后依次用DIEA (786 µL, 4.51mmol)和TiCl₄ (495 µL, 4.51 mmol)处理。在-78 ℃搅拌30 min后，引入2-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.14 g, 5.64 mmol)。移去冷却浴，并将反应混合物在环境温度搅拌 16 h。然后将反应混合物冷却至0 ℃，用饱和NaHCO_3(aq)淬灭并在0 ℃搅拌15 min。将淬灭的混合物用EtOAc (2x)萃取并将合并的有机萃取物用水(2x)和盐水(1x)洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用5-60% 己烷-EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(374.5 mg, 21%收率)。MS (apci)m/z =365.2 (M+H-Boc)。

步骤3: 制备(2S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-苯基乙酸. 将1 MLiOH_(aq)(806.1 µL, 1.612 mmol)于1:1 THF:水(4.0 mL)中的溶液冷却至0 ℃。将所得冷溶液用32 wt% H₂O_{2 (aq)}(205.9 µL, 2.015 mmol)处理。在0 ℃搅拌15 min后，引入2-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代-1-苯基乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤2；374.5 mg, 0.8061 mmol)。将所得混合物在环境温度搅拌16 h。将反应混合物用10%Na₂S₂O_3(aq)淬灭，用Et₂O稀释并用1 M NaOH_(aq)(2x)洗涤。将合并的水性萃取物用Et₂O (2x)反萃取。使用4 M HCl_(aq)将水性萃取物酸化至pH 4 并用4:1 DCM:iPrOH (2x)萃取。将合并的 DCM:iPrOH萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(246.2mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 206.2 (M+H-Boc)。

中间体R6

3-甲基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪

步骤1: 制备4-((6-甲基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯. 在环境温度将4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.22 g, 50.75 mmol)于DMF (56.39 mL)中的溶液用60% w/w NaH(2.165 g, 54.14 mmol)处理并搅拌10 min。将反应混合物用3-氯-6-甲基哒嗪 (4.350 g,33.84 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌10 min并且然后在90 ℃搅拌48 h。将反应混合物冷却至环境温度并用饱和NaHCO_3(aq)(20 mL)和水(20 mL)淬灭。将淬灭的混合物用DCM (3 x 40 mL)萃取并将合并的有机萃取物用水(3 x 100 mL)和盐水(3 x 100 mL)洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(假定定量产量)。MS (apci)m/z = 294.20 (M+H)。

步骤2: 制备3-甲基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪. 将4-((6-甲基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤1；9.93 g, 33.8 mmol)于DCM (10.9 mL)中的溶液用TFA (13.0mL, 169 mmol)处理。在环境温度搅拌20 min后，将反应混合物用另外的TFA (13 mL)处理。将反应混合物在环境温度搅拌另外的1.5 h，然后在真空中浓缩混合物。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用1-9% 于DCM中的MeOH(含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。将含有所需产物的级分合并并在真空中浓缩。将残余物与DCM (10 mL)和己烷(20 mL)研磨并且然后在真空中浓缩以得到标题化合物(5.51 g, 84%收率)。MS (apci)m/z = 194.2 (M+H)。

中间体R7

3-甲氧基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪

步骤1: 制备4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯. 将4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0 g, 9.94 mmol)于DMF (16.6 mL)中的室温溶液用60% w/w NaH (0.437g, 10.9 mmol)处理。在环境温度搅拌15 min后，将反应混合物用3-氯-6-甲氧基哒嗪(1.44 g, 9.94 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌15 min，然后在90 ℃搅拌过夜。此时反应不完全，因此，将反应混合物冷却至0 ℃，并用另外的60% w/w NaH (0.437 g,10.9 mmol)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.0 g, 9.94 mmol)处理。将所得混合物在0 ℃搅拌15 min，然后升至环境温度并最后在90 ℃加热另外的24 h。将该反应冷却以引入补充试剂的过程再重复一次，然后通过加入饱和NaHCO_3(aq)(4 mL)和水(4 mL)将反应混合物在环境温度淬灭。将淬灭的混合物用EtOAc (3 x 8 mL)萃取并将合并的有机萃取物用水(3 x20 mL)和盐水(1 x 20 mL)洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用5-50%于己烷中的EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(1.57 g, 51%收率)。MS (apci)m/z = 310.20 (M+H)。

步骤2: 制备3-甲氧基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪. 将4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤1；0.706 g, 2.28 mmol)于DCM (0.734 mL)中的溶液用TFA(0.879 mL, 11.4 mmol)处理。在环境温度搅拌15 min后，将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用1-9% 于DCM中的MeOH(含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(0.390 g, 82%收率)。MS (apci)m/z = 210.1 (M+H)。

中间体R8

N-(3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺 2,2,2-三氟乙酸盐

步骤1: 制备3-乙酰胺基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯. 将3-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.1091 g, 0.5091 mmol)和TEA (0.1419 mL, 1.018 mmol)于DCM (5.1 mL)中的溶液用乙酸酐(72.05 µL, 0.7636 mmol)处理。通过TLC监测反应完成(EtOAc/二氧化硅，使用茚三酮染色)。完成后，将反应混合物用DCM (40 mL)稀释并用盐水(3 x 20 mL)洗涤。有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用DCM作为洗脱液)以得到标题化合物(0.104 g, 80%收率)。MS (apci)m/z = 157.2(M+H-Boc)。

步骤2: 制备N-(3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺 2,2,2-三氟乙酸盐. 将3-乙酰胺基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(步骤1；0.104 g, 0.407 mmol)于CHCl₃ (0.734 mL)中的溶液用TFA (1.6 mL, 20 mmol)处理。通过TLC监测反应完成(EtOAc/二氧化硅，使用茚三酮染色)。完成后将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(112 mg, 定量产量)。MS =157.2 (M+H-BOC)。

中间体R9

4,6-二溴吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备1-氨基-3,5-二溴吡嗪-1-鎓2,4,6-三甲基苯磺酸盐. 在惰性气氛(N_2(g))下，将O-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺(中间体R10；9.8 g, 45 mmol)于DCM (300mL)中的冷的(0℃)溶液用2,6-二溴吡嗪 (9.0 g, 38 mmol)分批处理。将所得混合物在环境温度搅拌48 h并浓缩至最小DCM，得到标题化合物(17 g, 99 %收率)，将其粗品用于下一步骤。MS (apci)m/z = 235.9.2 (M+H)。

步骤2: 制备4,6-二溴吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将1-氨基-3,5-二溴吡嗪-1-鎓2,4,6-三甲基苯磺酸盐(步骤1；17 g, 37.5 mmol)的DCM 浆液用1,4-二噁烷(200 mL)稀释，然后用丙烯腈(5.65 mL, 86.3 mmol)和DIEA (8.52 mL, 48.8 mmol)处理。在环境温度搅拌所得混合物3 h后，加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)(17.9 g, 78.8 mmol)，并将反应在环境温度搅拌另外的3 h。将反应混合物用EtOAc (500 mL)和水(400 mL)萃取。将有机萃取物用硅胶(40 g)处理。将所得浆液在真空中浓缩，然后加载在硅胶塞(200g)上并用20% 乙酸乙酯/己烷冲洗。将滤液在真空中浓缩并通过二氧化硅色谱法纯化(使用10-40% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(2.3 g, 20%收率)。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d ₆)δ 9.60 (s, 1H), 8.91 (s, 1H)。

中间体R10

O-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺

步骤1: 制备(2,4,6-三甲苯基磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯. 在搅拌下向2,4,6-三甲基苯-1-磺酰基氯(10.0 g, 45.72 mmol)和羟基氨基甲酸叔丁酯(6.088 g, 45.72 mmol)于MTBE (100 mL)中的0 ℃ 溶液中逐滴加入 TEA (14.46 mL, 48.01 mmol)。将所得混悬液在0 ℃搅拌另外的30 min并且然后温热至环境温度。将反应用水(100 mL)稀释，用1 NHCl_(aq)调节至pH 4_。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩以得到标题化合物，其最初为淡黄色油，在高真空下干燥过夜后，变成白色固体(12.89 g, 89%收率)。¹H NMR (CDCl₃)δ 7.66(br s, 1H), 6.98 (s, 2H), 2.67 (s, 6H), 2.32 (s, 3H), 1.31 (s, 9H)。

步骤2: 制备O-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺(中间体R1, MSH)。在0 ℃历经25min向TFA (117 mL, 1521 mmol)中缓慢地加入(2,4,6-三甲苯基磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯(39.0 g, 124 mmol)。将反应混合物在0 ℃搅拌 1.5 h并且然后依次加入碎冰(5 ×200 mL)和水(2 × 125 mL)淬灭。将所得浓稠混悬液在环境温度剧烈地搅拌5 min。在不使滤饼干燥的情况下，通过小心真空过滤收集固体，随后用水(4L)冲洗直至滤液达到pH6(注意：在环境温度下干燥化合物存在爆炸风险)。将湿滤饼溶于DCM (150 mL)并将所得两相溶液分离。DCM层经MgSO干燥30 min并且然后过滤并用DCM (420 mL)冲洗，得到标题化合物，为0.22 M于DCM中的溶液。

中间体R11

(6-(6-(叔丁氧基羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)硼酸

方法 1:

步骤1: 制备3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯.将3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(1.046 g, 5.27 mmol)、5-溴-2-氟吡啶(919mg, 5.22 mmol)和K₂CO_3(s)(3.61 g, 26.1 mmol)于DMSO (5.22 mL)中的混悬液在90℃搅拌1天。冷却至环境温度后，将反应混合物在EtOAc和水之间分配。将有机萃取物用另外的水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过二氧化硅色谱法纯化粗残余物(0-50% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)，得到标题化合物(1.80 g, 97%收率)。MS (apci)m/z= 354.0 (M+1), 356.1 (M+2)。

步骤2: 制备(6-(6-(叔丁氧基羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶- 3-基)硼酸. 将3-(5-溴吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(1.80 g,5.08 mmol)、双(频哪醇合)二硼(3.87 g, 15.2 mmol)、PdCl₂ (dppf)•CH₂Cl₂ (414 mg,0.508 mmol)和KOAc (1.50 g, 15.2 mmol)于二噁烷 (5.75 mL)中的混合物用N_2(g)鼓泡，然后在80 ℃搅拌3 h。冷却至室温后，将反应混合物用DCM稀释并用水洗涤。将水性萃取物用DCM洗涤。将DCM萃取物合并并经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物与己烷(200 mL)和乙醚(50 mL)超声处理5 min，过滤得到的灰色悬浮液。将收集的固体与MeOH研磨并将所得混悬液过滤以得到标题化合物，为白色固体(840 mg, 52%收率)。MS(apci)m/z = 320.2 (M+H)。

方法 2:

将3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(182 mg, 0.918 mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(819 mg, 3.67 mmol)和K₂CO_3(s)(634mg, 4.59 mmol)于DMSO (918 µL)中的混悬液加热至90 ℃，然后用水(5 mL)处理。将所得混合物在90 ℃搅拌1小时，然后冷却至环境温度并过滤以干净地得到标题化合物(1.0 g,41%收率)。MS (apci)m/z = 320.1 (M+H)。

制备合成实施例

实施例1

3,3-二甲基-1-(4-(4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丁烷-1-酮

步骤1: 制备4-(5-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基) 哌嗪-1-甲酸叔丁酯和4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基) 吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪(中间体P5；242 mg, 0.821 mmol)、3-氯-4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪(中间体P6；900 mg, 0.821 mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1530 mg, 8.213 mmol)于二噁烷 (5 mL)中的混合物(1:1)在90 ℃搅拌2 d。将反应冷却至环境温度，然后用饱和NH₄Cl_(aq)(20 mL)和盐水(2 mL)稀释。将混合物用EtOAc (3 x)萃取并将合并的有机萃取物在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-70%ACN/水作为梯度洗脱液)以干净地分离4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(102 mg, 25%收率), MS (apci)m/z =495.0 (M+H), 497.1，(M+H+2)，采用Cl模式，以及两种标题化合物的混合物(1:1)(130 mg,34%收率), MS (apci)m/z = 461.1 (M+H)。

步骤2: 制备3,3-二甲基-1-(4-(4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丁烷-1-酮. 将4-(5-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯和4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(130 mg, 0.282 mmol)于DCM (10mL)中的混合物(1:1)用5 M 于iPrOH中的HCl(135 µL, 0.67 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，然后在真空中浓缩以得到粗产物，为6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐和3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐的混合物(1:1)。将该于DMF (0.5mL)中的粗产物混合物的一部分(40 mg, 0.10 mmol)依次用3,3-二甲基丁酰氯(41 mg,0.30 mmol)和TEA (70 µL, 0.50 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌4 h，然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用0-70% ACN/水作为梯度洗脱液)以分开地(separately)得到标题化合物3,3-二甲基-1-(4-(4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丁烷-1-酮 (6.5 mg, 28%收率), MS (apci)m/z = 459.1 (M+H)。此外，在色谱纯化过程中也分离出化合物1-(4-(4-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3,3-二甲基丁烷-1-酮 (实施例2；8.9 mg, 36%收率)。

实施例2

1-(4-(4-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3,3-二甲基丁烷-1-酮。

在制备实施例1的过程中分离出标题化合物。MS (apci)m/z = 493.1 (M+H),495.1 (M+H+2)，采用Cl模式。

实施例 3

1-(4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐和3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐(实施例1；步骤2；33 mg, 0.083 mmol)于DMF (0.5 mL)中的混合物(1:1)依次用乙酰氯(249 µL, 0.25 mmol)和TEA (58 µL, 0.42 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌2 h，然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用0-70% ACN/水作为梯度洗脱液)以分开地得到标题化合物(8 mg, 44%收率)。MS (apci)m/z = 437.0 (M+H), 439.1 (M+H+2)。

实施例4

1-(4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-(二甲基氨基)乙烷-1-酮

步骤1: 制备3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并 [1,5-a]吡嗪二盐酸盐. 将4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸酯(实施例1, 步骤1；202 mg, 0.408 mmol)于DCM (10 mL)中的溶液用5 M 于iPrOH中的HCl(408 µL, 2.04 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，然后在真空中浓缩以得到标题化合物(177 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 395.0 (M+H), 397.0 (M+H+2)，采用Cl模式。

步骤2: 制备1-(4-(5-(3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-(二甲基氨基)乙烷-1-酮.将3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐(30 mg, 0.070 mmol)于DMF (0.5 mL)中的溶液依次用2-(二甲基氨基)乙酰氯(25 mg, 0.21 mmol)和TEA (48 µL,0.35 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌2 h，然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用0-70% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(26 mg, 78%收率)。MS (apci)m/z =480.1 (M+H), 481.1 (M+H+2)，采用Cl模式。

实施例5

4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪

将被6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐污染的3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐(实施例4, 步骤1；20 mg, 0.043 mmol)于DMF (0.2 mL)中的溶液用(溴甲基)苯(11 mg, 0.064 mmol)和TEA (18 µL, 0.13 mmol)处理。使反应混合物在环境温度搅拌1 h，并且然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(2.9 mg, 14 %收率)。MS (apci)m/z = 485.1 (M+H), 487.1 (M+H+2)，采用Cl模式。

实施例6

3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪

将被6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐污染的3-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪二盐酸盐(实施例4, 步骤1；18.5 mg, 0.0428 mmol于DMF (0.2 mL)中的溶液用2-吡啶甲醛(6.87 mg, 0.0641 mmol)、Me₄N(AcO)₃BH (22.5 mg, 0.0855 mmol)和TEA(17.9 µL, 0.128 mmol)处理。使反应混合物在环境温度搅拌过夜并且然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(14.8 mg, 71%收率)。MS (apci)m/z = 486.1 (M+H), 487.1 (M+H+2)，采用Cl模式。

实施例7

4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

在压力容器中，将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P2；2.85 g, 11.0 mmol)和4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.43 g, 16.5 mmol)于1,4-二噁烷(44.1 mL)和2 NK₂CO_3(aq) (33.1 mL, 66.1 mmol)中的混合物用N_2(g)鼓泡5 min。将混合物用Pd(PPh₃)₄(0.0674 g, 0.0583 mmol)处理，然后密封并在90℃搅拌 30 h。冷却至环境温度后，将所得双相混悬液真空过滤，并将滤饼依次用2 N K₂CO_3(aq)(约20 mL)和水(3 x 20 mL)冲洗。将固体风干4 h，然后在高真空下干燥过夜以干净地得到标题化合物(5.94 g, 定量产量)。MS(apci)m/z = 486.2 (M+H)。

实施例8

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

将4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例7；433 mg, 0.892 mmol)和TFA (687 µL, 8.92 mmol)于DCM (10mL)中的混合物在环境温度搅拌90 min，然后在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% CHCl₃/MeOH (含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(384mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 386.2 (M+H-Boc)。

实施例9

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(3-甲基丁酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；15 mg, 0.039 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液依次用3-甲基丁酰氯(7.0 mg, 0.058 mmol)和TEA (54 µL, 0. 39 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，然后用水淬灭并用DCM (3x)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-70% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(12 mg, 66%收率)。MS (apci)m/z = 470.1 (M+H)。

实施例10

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；10 mg, 0.026 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液依次用2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰氯(6.3 mg, 0.039 mmol)和TEA (36 µL, 0. 26 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，然后用水淬灭，并用DCM (3x)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-70% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(2.6 mg, 20%收率)。MS (apci)m/z = 512.2 (M+H)。

实施例11

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(喹喔啉-6-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；30 mg, 0.078 mmol)、6-喹喔啉羰基氯(30 mg, 0.16 mmol)和DIEA (68 µL, 0.39 mmol)于DMF (156 µL)中的溶液在环境温度搅拌过夜。将混合物在EtOAc和水之间分配。将水性萃取物用EtOAc (3x)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(1x)洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并萃取进EtOAc (2x)中。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(1.0 mg, 2.4%收率)。MS (apci)m/z = 542.2 (M+H)。

实施例12

(R)-4-(6-(4-(2-羟基-2-苯基乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；10 mg, 0.026 mmol)于DCM (2 mL)中的溶液依次用(R)-2-羟基-2-苯基乙酸(5.0 mg, 0.033 mmol)、TEA (30 µL, 0.22 mmol)和HATU (8.3 mg, 0.022mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌1 h，然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-75% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(3.0 mg, 26%收率)。MS(apci)m/z = 520.1 (M+H)。

实施例13

(R)-4-(6-(4-(2-羟基-3-甲基丁酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

使用与在实施例12中所述的类似的程序，用(R)-2-羟基-3-甲基丁酸代替(R)-2-羟基-2-苯基乙酸，并用DMF代替DCM，制备和纯化标题化合物(2.2 mg, 21%收率)。MS (apci)m/z= 520.1 (M+H)。

实施例14

4-(6-(4-(2-(5-氟吡啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；30 mg, 0.078 mmol)于DCM (1 mL)中的溶液依次用DIEA (27 µL,0.16 mmol)、2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸(14 mg, 0.093 mmol)和HATU (30 mg, 0.078 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并随后萃取进DCM中。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。残余物还通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% 于DCM中的MeOH作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(2.6 mg, 6.2%收率)。MS (apci)m/z = 522.8 (M+H)。

实施例15

4-(6-(4-(2-异丙氧基乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；20 mg, 0.0436 mmol)于无水DMA (0.4 mL)中的混悬液依次用DIEA (22.7 µL, 0.131 mmol)、HATU (24.9 mg, 0.0655 mmol)和2-异丙氧基乙酸(7.73mg, 0.0655 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜。历经24 h 的时间两次加入另外的DIEA (15 µL, 0.087 mmol)和HATU (15 mg, 0.040 mmol)，同时在环境温度搅拌。加入于中CHCl₃的水淬灭反应混合物。将淬灭的混合物在室温搅拌30 min，然后用CHCl₃ (3x)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用15-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(3.6 mg, 17%收率)。MS(apci)m/z = 486.2 (M+H)。

使用与对实施例15的合成所述的方法类似的方法，用适当的羧酸代替2-异丙氧基乙酸，制备表A中的化合物。通过LCMS监测反应完成，并相应地调整反应持续时间以及引入另外的DIEA和HATU的时间(和量)。在所有情况下，将反应用水和CHCl₃或DCM淬灭，并在使用适当的梯度的C18 反相色谱法后干净地分离标题化合物。

实施例18

4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-N-异丁基哌嗪-1-甲酰胺

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；0.101 g, 0.220 mmol)于无水DMA (3 mL)中的混悬液用TEA(0.154 mL, 1.10 mmol)和1-异氰酸根合-2-甲基丙烷 (0.0262 g, 0.264 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌4 h，然后加入另外的1-异氰酸根合-2-甲基丙烷液滴。将反应混合物在环境温度搅拌另外的2 h，然后直接通过C18反相色谱法纯化(使用20-80% ACN/水(含有0.1%甲酸)作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(50 mg, 47%收率)。MS (apci)m/z= 485.2 (M+H)。

实施例19

(R)-4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)哌嗪-1-甲酰胺

使用与在实施例18中所述的类似的程序，用(R)-1-氟-4-(1-异氰酸根合乙基)苯代替1-异氰酸根合-2-甲基丙烷，制备和纯化标题化合物(24.2 mg, 59%收率)。随着通过LCMS监测反应完成，省略加入补充的异氰酸酯，并且反应在6小时内完成。MS (apci)m/z = 550.2(M+H)。

实施例20

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；20 mg, 0.044 mmol)和DIEA (38 µL, 0.22 mmol)于DCM (218 µL)中的混悬液用吡咯烷-1-羰基氯(6.4 mg, 0.048 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜，然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并随后萃取进EtOAc中。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。残余物还通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% 于EtOAc中的MeOH作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(2.6 mg, 12%收率)。MS (apci)m/z = 483.2 (M+H)。

实施例21

(S)-4-(6-(4-(3-甲氧基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸4-硝基苯酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；100 mg, 0.218 mmol)于DMA(2.18 mL)中的混悬液依次用DIEA (114 µL, 0.655 mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(48.4 mg,0.240 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌6 h，然后引入另外的氯甲酸4-硝基苯酯(22 mg, 0.109 mmol)。将所得混合物在环境温度搅拌2 h。混合物的LCMS分析表明向标题化合物(120 mg, 假定定量产量)的干净地转化。MS (apci)m/z = 551.2 (M+H)。将混合物分成5等份，立即用于后续反应。

步骤2: 制备(S)-4-(6-(4-(3-甲氧基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(S)-3-甲氧基吡咯烷(5.5 mg,0.054 mmol)和DIEA (19 µL, 0.11 mmol)于DMA (0.1 mL)中的溶液用4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸4-硝基苯酯(实施例21, 步骤1；20 mg, 0.036 mmol)于DIEA (23 µL, 0.13 mmol)和DMA (0.44 mL)中的混悬液处理。将反应混合物在80 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释并用EtOAc (3x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并萃取进EtOAc (3x)中。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100%于DCM中的(20% MeOH/2% NH₄OH/78% DCM)作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(5.6 mg, 29%收率)。MS (apci)m/z = 513.2 (M+H)。

实施例22

(S)-4-(6-(4-(3-氟吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

使用与在实施例21中所述的类似的程序, 用(S)-3-氟吡咯烷代替(S)-3-甲氧基吡咯烷，制备和纯化标题化合物。通过LCMS监测反应完成。引入另外的(S)-3-氟吡咯烷(4.9 mg,0.054 mmol)，并调节反应持续时间以确保反应完成。另外，改变最终二氧化硅色谱中的梯度洗脱液(0-20% 于DCM中的MeOH)以允许干净的分离标题化合物(1 mg, 6%收率)MS(apci)m/z = 501.2 (M+H)。

实施例23

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-(苯基磺酰基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；21 mg, 0.046 mmol)于无水DMA (0.5 mL)中的混悬液用TEA(46.4 µL, 0.458 mmol)和((2-氯乙基)磺酰基)苯(28.1 mg, 0.137 mmol)处理。将混合物在75 ℃搅拌过夜，然后冷却至环境温度。将反应混合物通过C18反相色谱法直接纯化(使用20-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(3.7 mg, 15%收率)。MS (apci)m/z = 554.2 (M+H)。

使用与对实施例23,的合成所述的方法类似的方法，用适当的烷基卤化物代替((2-氯乙基)磺酰基)苯，制备表B中的化合物。反应在70 ℃进行，并通过LCMS监测完成，相应地调节反应持续时间。使用适当的梯度，在C18反相色谱之后干净地分离标题化合物。

实施例27

4-(6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；20 mg, 0.044 mmol)于无水DMF (0.1 mL)中的混悬液用TEA(18.2 µL, 0.131 mmol)和(溴甲基)苯(6.74 µL, 0.0567 mmol)处理。将混合物在RT搅拌1h，然后通过C18反相色谱法直接纯化(使用0-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(10 mg, 48%收率)。MS (apci)m/z = 476.2 (M+H)。

实施例28

4-(6-(4-(2-((4-氟苯基)磺酰基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；19 mg, 0.042 mmol)于无水DMA (0.5 mL)中的混悬液用TEA(57.8 µL, 0.415 mmol)和1-((2-氯乙基)磺酰基)-4-氟苯(27.7 mg, 0.124 mmol)处理。将混合物在70 ℃搅拌，直到LCMS指示甲腈的完全消耗。冷却至环境温度后，通过在水和CHCl₃之间分配将反应混合物淬灭。将淬灭的混合物用CHCl₃ (3x)于PS玻璃料中萃取，并将合并的有机萃取物在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用15-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(18.7 mg, 79%收率)。MS (apci)m/z = 572.2(M+H)。

实施例29

4-(6-(4-(3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；15.3 mg, 0.0334 mmol)于无水DMA (0.4 mL)中的冷(0 ℃)混悬液用TEA (18.6 µL, 0.134 mmol)处理并在0 ℃搅拌4 min。引入1-(溴甲基)-3-甲氧基苯(0.007011 ml, 0.05007 mmol)，并将混合物在环境温度搅拌3 d。通过在水和CHCl₃之间分配将反应混合物淬灭。将淬灭的混合物用CHCl₃ (3x)于PS玻璃料中萃取，并将合并的有机萃取物在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用20-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(5.8 mg, 33%收率)。MS (apci)m/z = 506.2 (M+H)。

实施例30

4-(6-(4-(2-乙氧基乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；30 mg, 0.078 mmol)于DMF (778 µL)中的混悬液用K₂CO_3(s)(32.3mg, 0.234 mmol)和1-溴-2-乙氧基乙烷(10.5 µL, 0.0934 mmol)处理。将反应混合物在50℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用MeOH稀释并过滤。将滤液在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。通过用饱和NaHCO_3(aq)处理将TFA盐中和并随后用EtOAc (3x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(7 mg, 18%收率)。MS (apci)m/z = 458.2 (M+H)。

实施例31

4-(6-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；10 mg, 0.0259 mmol于DMF (259 µL)中的混悬液依次用K₂CO_3(s)(10.8 mg, 0.0778 mmol)和溴乙烷(2.31 µL, 0.0311 mmol)处理。将反应混合物在50 ℃搅拌7 d，然后加入另外的溴乙烷(1.93 µL, 0.0259 mmol)。在50 ℃搅拌另外的4 h后，将反应混合物冷却至环境温度并在DCM (5 mL)和水(5 mL)之间分配。将混合物用DCM (3 x10 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)，得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并随后萃取进EtOAc (3x)中。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100%于DCM中的(20% MeOH/2% NH₄OH/78% DCM)作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(3.9 mg, 36%收率)。MS (apci)m/z = 414.2 (M+H)。

实施例32

4-(6-(4-(2-(叔丁氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；18 mg, 0.039 mmol)于无水DMF (0.4 mL)中的混悬液用甲磺酸2-(叔丁氧基)乙酯(23.1 mg, 0.118 mmol)和TEA (54.7 µL, 0.393 mmol)处理。将混合物在70 ℃搅拌4 d，然后冷却至环境温度并通过C18反相色谱法直接纯化(使用30-85% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(3.6 mg, 19%收率)。MS (apci)m/z = 486.2 (M+H)。

实施例33

(R)-4-(6-(4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；32.5 mg, 0.0709 mmol)于干燥的MeOH (0.35 mL)中的混悬液依次用DIEA (24.8 µL, 0.142 mmol)和(R)-2-甲基环氧乙烷(6 µL, 0.0851 mmol)处理。将混合物首先在75 ℃，然后在环境温度各搅拌20 min。引入另外的DIEA (24.8 µL, 0.142mmol)，(R)-2-甲基环氧乙烷(10 µL, 0.142 mmol)和干燥的MeOH (0.35 mL)。将反应混合物在75 ℃搅拌 3 d，然后冷却至环境温度并在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用10-70% ACN/水(含有0.1%甲酸)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(17 mg,54%收率)。MS (apci)m/z = 444.1 (M+H)。

实施例34

(S)-4-(6-(4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

使用与在实施例33中所述的类似的程序，用(S)-2-甲基环氧乙烷代替(R)-2-甲基环氧乙烷，制备和纯化标题化合物(13 mg, 41%收率)。MS (apci)m/z = 501.2 (M+H)。

实施例35

4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；115 mg, 0.251 mmol)于干燥的DMA (2 mL)中的混悬液用TEA(24.8 µL, 0.142 mmol)、Me₄N(AcO)₃BH (132 mg, 0.502 mmol)和6-甲氧基烟醛(72.4 mg,0.502 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌2 d，然后引入另外的TEA (24.8 µL, 0.142mmol)和Me₄N(AcO)₃BH (132 mg, 0.502 mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌，直到起始原料已经被消耗，如通过LCMS所确定的那样。将反应混合物用水/CHCl₃淬灭并用CHCl₃于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用15-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(6.7 mg, 53%收率)。MS (apci)m/z= 507.2 (M+H)。

使用与对实施例35的合成所述的方法类似的方法，用适当的醛代替6-甲氧基烟醛，制备表C中的化合物。通过LCMS监测反应完成，并相应地调整引入补充试剂量的时间和反应持续时间。使用适当的梯度，在C18反相色谱之后干净地分离标题化合物。

实施例39

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；2.0 g, 4.4 mmol)于干燥的DMA (44 mL)中的混悬液依次用TEA(1.82 mL, 13.1 mmol)和NaBH(AcO)₃ (132 mg, 0.502 mmol)处理。将混合物以逐滴方式用2-吡啶甲醛(0.935 g, 8.73 mmol)处理并在环境温度搅拌4 h。将反应混合物缓慢地倒入冷(0 ℃)DI 水(500 mL)中并将淬灭的混合物在环境温度搅拌过夜，然后真空过滤。将所得滤饼用水(100 mL)和MTBE (100 mL)冲洗。然后将固体溶解于DCM，经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(1.70 g, 82%收率)。MS (apci)m/z =477.2 (M+H)。

实施例40

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg, 0.11 mmol)于干燥的DMA (1.1 mL)中的混悬液依次用TEA(1.82 mL, 13.1 mmol)、6-甲基2-吡啶甲醛 (26.4 mg, 0.218 mmol)和NaBH(AcO)₃ (132mg, 0.502 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌18 h。将反应混合物逐滴倒入快速搅拌的DI 水(20 mL)中并将淬灭的混合物在环境温度搅拌过夜，然后真空过滤。将所得滤饼用水(3 x 5 mL)和MTBE (3 x 5 mL)冲洗。将固体溶解于DCM，经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(43.4 mg, 77%收率)。MS (apci)m/z = 491.3 (M+H)。

实施例41

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg, 0.11 mmol)于DCE (259 µL)中的混悬液依次用四氢-2H-吡喃-4-甲醛(6 μL, 0.052 mmol)和NaBH(AcO)₃ (132 mg, 0.502 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌5 h。将反应混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(2.7 mg, 22%收率)。MS (apci)m/z = 484.2 (M+H)。

实施例42

4-(6-(4-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；30 mg, 0.078 mmol)于DCE (778 µL)中的混悬液依次用1-甲基-1H-苯并咪唑-5-甲醛(25 mg, 0.16 mmol)和NaBH(AcO)₃ (49 mg, 0.23 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，并且然后在真空中浓缩。将残余物首先通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% 于DCM中的MeOH作为梯度洗脱液)并且然后通过C18 反相色谱法纯化(使用5-95% ACN/水(含有0.1% TFA)梯度洗脱液)以干净地得到作为其TFA盐的标题化合物。将TFA盐用饱和NaHCO_3(aq)处理并随后萃取进EtOAc (3x)中。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(1.5 mg, 3.6%收率)。MS(apci)m/z = 529.8 (M+H)。

实施例43

(S)-4-(6-(3-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；50 mg, 0.16 mmol)于DMSO (3.1 mL)中的溶液用(S)-哌啶-3-醇(79 mg, 0.78mmol)和K₂CO_3(s)(87 mg, 0.63 mmol)处理，然后在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM (4 x 10 mL)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(35 mg, 56%收率)。MS (apci)m/z = 401.1 (M+H)。

实施例44

(S)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.100 g, 0.313 mmol)于DMSO (6.26 mL)中的溶液用(S)-甲基(哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.268 g, 1.25 mmol)和K₂CO_3(s)(0.173 g, 1.25 mmol)处理并在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM (4 x 10 mL)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(106 mg, 66%收率)。MS (apci)m/z = 514.2 (M+H)。

实施例45

(S)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(3-(甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

将(S)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(实施例44；100 mg, 0.195 mmol)于CHCl₃ (2 mL)中的溶液用5 M 于iPrOH中的HCl(195 µL, 0.974 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌2h，并且然后在真空中浓缩以得到标题化合物(80 mg, 99%收率)。MS (apci)m/z = 414.2(M+H)。

实施例46

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-((3S,4S)-4-甲基-3-(甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

步骤1: 制备((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.100 g, 0.313 mmol)于DMSO (6.26 mL)中的溶液用甲基((3S,4S)-4-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.100g, 0.438 mmol)和K₂CO_3(s)(0.173 g, 1.25 mmol)处理并在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM (4 x 10 mL)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩并通过C18反相色谱法纯化(使用0-80% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(32 mg, 19%收率)。MS (apci)m/z = 528.3 (M+H)。

步骤2: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-((3S,4S)-4-甲基-3-(甲基氨基) 哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐. 将((3S,4S)-1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(实施例46. 步骤1；10 mg, 0.020 mmol)于CHCl₃ (2 mL)中的溶液用5 M 于iPrOH中的HCl(11 µL, 0.057 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜，并且然后在真空中浓缩。将残余物用Et₂O (2 x 1 mL)洗涤并风干以得到标题化合物(6 mg, 74%收率)。MS (apci)m/z = 414.2 (M+H)。

实施例47

4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐

步骤1: 制备6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基) 甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将4-氯-6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P4；270 mg, 0.740 mmol)、1-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(456 mg, 1.11 mmol)、Na₂CO_3(s)(0.392 g, 3.70 mmol)和Pd(PPh₃)₄ (0.0428g, 0.0370 mmol)的混合物悬浮于1,4-二噁烷(9.72 mL)并用Ar_(g)鼓泡。将混合物在80℃搅拌2 h，然后引入水(0.5 mL)和另外的Pd(PPh₃)₄。将反应混合物再次用Ar_(g)鼓泡并在80 ℃搅拌2 d。将反应混合物冷却至环境温度，然后用DCM稀释并用水洗涤。将有机萃取物通过二氧化硅色谱法纯化(10%至100% 于DCM中的EtOAc)以干净地得到标题化合物(291 mg, 64%收率)。MS (apci)m/z = 612.8 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐. 在N_2(g)下，将6-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(291 mg, 0. 475 mmol)悬浮于TFA (20 mL)，然后在90 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物与甲苯(2 x 5 mL)在真空中共沸。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用2-50% ACN/水(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)并在高真空下干燥过夜以得到标题化合物(296 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 493.2 (M+H)。

实施例48

6-(1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐

将4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐(实施例47；29 mg, 0.059 mmol)于DMA (1mL)中的溶液依次用Cs₂CO_3(s)(58 mg, 0.18 mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20.0mg, 0.0707 mmol)处理。将混合物在80 ℃搅拌1.5 h，然后引入另外的3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(6.7 mg, 0.071 mmol)。将反应在80 ℃搅拌3 d，然后在真空中浓缩并混悬于1:1 DCM: 水(2 mL)。将有机萃取物分离，然后用水(2 x 1 mL)洗涤，经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物溶解于1:1 TFA:DCM (2 mL)，在环境温度搅拌30 min，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(37.2 mg, 96%收率)。MS (apci)m/z = 548.2 (M+H)。

实施例49

4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-(1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐(实施例48；28 mg,0.042 mmol)于MeOH (1.0 mL)和甲醛(6.9 µL, 0.093 mmol)中的溶液在环境温度搅拌30min，然后用NaBH(AcO)₃ (27 mg, 0.13 mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌3 h，然后引入另外的NaBH(AcO)₃ (28 mg, 0.13 mmol)和甲醛(6.9 µL, 0.093 mmol)。将反应在环境温度搅拌18 h，然后在真空中浓缩并混悬于1:1 DCM: 水(2 mL)。将有机萃取物分离，然后用水(2 x 1 mL)洗涤，经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(4.8 mg, 20%收率)。MS (apci)m/z = 562.3 (M+H)。

实施例50

6-(1-(2-(异丙基磺酰基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐(实施例47；29 mg, 0.059 mmol)于DMA (1mL)中的溶液依次用Cs₂CO_3(s)(58 mg, 0.18 mmol)和2-((2-氯乙基)磺酰基)丙烷(12.1 mg,0.0707 mmol)处理。将混合物在80 ℃搅拌1 h，然后在真空中浓缩并混悬于1:1 DCM: 水(2mL)。将有机萃取物分离，然后用水(2 x 1 mL)洗涤，经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(16.4 mg, 44%收率)。MS (apci)m/z = 627.2 (M+H)。

使用与对实施例50的合成所述的方法类似的方法，用适当的烷基卤化物(除了标注*的之外)代替2-((2-氯乙基)磺酰基)丙烷，制备表D中的化合物。通过LCMS监测反应完成，并相应地调整反应持续时间。

* 反应1.5小时后，需要在环境温度下引入补充的烷基化剂(1.2当量)和另外的搅拌(3天)以实现完成。

实施例54

6-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐(实施例47；29 mg, 0.059 mmol)于DMA (1mL)中的溶液依次用Cs₂CO_3(s)(58 mg, 0.18 mmol)和1-氯-2-甲氧基乙烷(6.7 mg, 0.071mmol)处理。将混合物在80 ℃搅拌1.5 h，然后引入另外的1-氯-2-甲氧基乙烷(6.7 mg,0.071 mmol)。将反应在80 ℃搅拌3 d，然后通过制备型薄层二氧化硅色谱法直接纯化(使用1:1:8 MeOH/丙酮/DCM作为洗脱液)以干净地得到标题化合物(7.7 mg, 24%收率)。MS(apci)m/z = 551.3 (M+H)。

使用与对实施例54的合成所述的方法类似的方法，用适当的烷基卤化物代替1-氯-2-甲氧基乙烷，制备表E中的化合物。通过LCMS监测反应完成，并相应地调整反应持续时间。在使用适当的洗脱液的制备型薄层二氧化硅色谱法后干净地分离标题化合物。

实施例58

4-((1-(5-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氧基)苄腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪(中间体P5；14.2 mg, 0. 0482 mmol)于DMA (0.1 mL)中的溶液用TEA (6.72 µL, 0. 0482 mmol)和4-(哌啶-4-基氧基)苄腈(20 mg, 0.0989 mmol)处理，然后在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM (4 x 10 mL)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(3.0 mg, 13.1 %收率)。MS (apci)m/z = 477.2 (M+H)。

实施例59

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪(中间体P5；31.5 mg, 0.107 mmol)于DMA (0.1 mL)中的溶液用TEA (74.5 µL, 0.534 mmol)和2-(哌啶-4-基氧基)吡啶(20 mg, 0.112 mmol)处理，然后在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM (4 x 10 mL)于PS玻璃料中萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩，并通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(8.4 mg, 17%收率)。MS (apci)m/z = 453.3 (M+H)。

实施例60

4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(1-(3-氯苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1, 5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；400 mg,0.802 mmol)、N-Boc-(3'-氯苯基)甘氨酸(229 mg, 0.802 mmol)和HATU (915 mg, 2.41mmol)于无水DCM (0.4 mL)中的混合物依次用DIEA (140 µL, 0.802 mmol)和无水DMF(250 µL)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h并且然后在真空中浓缩。将粗物质通过反相色谱法纯化(5-95%于水中的ACN(含有0.1% TFA))并合并含有所需的产物的级分并用4:1DCM:iPrOH萃取。将有机萃取物在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(524 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 653.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(1-(3-氯苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；1.0 g, 1.5 mmol)于DCM (15 mL)中的溶液用TFA (1.2 mL,15 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌5 h的时间，以1 h和4 h时间间隔引入另外的TFA (5当量)。然后将所得混合物在环境温度搅拌过夜，并在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM: iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物。将半纯的物质与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(435 mg, 51%收率)。MS (apci)m/z = 554.2 (M+H)。

实施例61

4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(1-(4-氯苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1, 5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐(实施例8；60 mg, 0.12 mmol)、(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸(34 mg,0.12 mmol)和HATU (137 mg, 0.36 mmol)于无水DCM (0.6 mL)中的混悬液用4-甲基吗啉(40 µL, 0.36 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜，并且然后过滤。对所得滤液进行C18 反相色谱法(使用5-95% 水:ACN作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(72mg, 92%收率)。MS (apci)m/z = 653.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(1-(4-氯苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；72 mg, 0.11 mmol)于DCM (1.1 mL)中的溶液用TFA (85 µL, 1.1 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌3 h，并且随后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM: iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物。将半纯的物质与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(37 mg, 61%收率)。MS (apci)m/z = 553.2 (M+H)。

实施例62

(R)-4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg, 0.11 mmol)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氟苯基)乙酸(29 mg,0.11 mmol)和HATU (50 mg, 0.13 mmol)于无水DCM (7.0 µL)中的混合物用DIEA (19 µL,0.11 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜，并且然后在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% CHCl₃/MeOH (含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物，将其直接用于步骤2 (75 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 537.2 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3- 基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；75 mg, 0.12 mmol)于DCM (236 µL)中的溶液用TFA (91 µL, 1.2 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌30 min，然后引入另外的TFA(10当量)。将反应混合物在环境温度搅拌1 h，并且然后在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% CHCl₃/MeOH (含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(37 mg, 59%收率)。MS (apci)m/z = 537.2 (M+H)。

实施例63

4-(6-(4-(2-氨基-2-(2-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；100mg, 0.259 mmol)、2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(中间体R2；69.9 mg,0.259 mmol)和HATU (296 mg, 0.778 mmol)于无水DCM (1.3 mL)中的混合物用DIEA (181µL, 1.04 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h。将所得混悬液过滤，并将滤液通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并用盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(165 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 637.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(2-氨基-2-(2-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(2-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；165 mg, 0.259 mmol)溶解于1:1 TFA:DCM (2.6 mL)。将所得混合物在环境温度搅拌过夜并且随后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM: iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物。将半纯的物质与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(46.5 mg, 33.4%收率)。MS (apci)m/z = 537.2 (M+H)。

实施例64

4-(6-(4-(2-氨基-2-(2,4-二氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(2,4-二氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；100 mg, 0.259 mmol)、2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2,4-二氟苯基)乙酸(中间体R3；74.5mg, 0.259 mmol)和HATU (296 mg, 0.778 mmol)于无水DCM (1.3 mL)中的混合物用DIEA(181 µL, 1.04 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h，然后在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(170 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 655.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(2-氨基-2-(2,4-二氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3- 基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将粗(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-(2,4-二氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；170 mg, 0.260 mmol)溶解于1:1 TFA:DCM(2.6 mL)。将所得混合物在环境温度搅拌过夜并且随后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 于水中的ACN(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM: iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物。将半纯的物质与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(89 mg, 62%收率)。MS (apci)m/z = 555.2(M+H)。

实施例65

4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(1-(3-氯-4-氟苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；200 mg, 0.436 mmol)、2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酸(中间体R4；133 mg, 0.436 mmol)和HATU (498 mg, 1.31 mmol)于无水DCM (2.2 mL)中的混合物用DIEA (76.2 µL, 0.436 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将所得混悬液过滤，并将滤液在真空中浓缩，得到所需的化合物(293 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z= 571.2 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3- 基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(1-(3-氯-4-氟苯基)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；293 mg, 0.437 mmol)于DCM (4.4 mL)中的溶液用TFA (336 µL, 4.37 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h，并且然后加入另外的TFA (10当量)。将反应混合物在环境温度搅拌另外的2 h，其中在环境温度搅拌第一个另外的1 h后引入另外的TFA (2 mL)。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。将分离的固体通过二氧化硅色谱法再纯化(使用0-10% DCM/MeOH (含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)并合并含有所需的产物的级分并在真空中浓缩。将残余物与DCM/MeOH (1:10)研磨并在真空中除去溶剂以得到标题化合物(152 mg, 61%收率)。MS (apci)m/z = 571.2 (M+H)。

实施例66

(R)-4-(6-(4-(2-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-(1-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-氧代-2-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；60mg, 0.16 mmol)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-苯基丙酸(41 mg, 0.16 mmol)和HATU(71 mg, 0.19 mmol)于无水DCM (1.6 mL)中的混合物用DIEA (82 µL, 0.47 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将所得混悬液在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(98 mg, 99%收率)。MS (apci)m/z = 633.3 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-4-(6-(4-(2-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-(1-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-1-氧代-2-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；98 mg, 0.15 mmol)于1:1 TFA:DCM (155 µL)中的溶液在环境温度搅拌过夜，并且然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物(79 mg, 96%收率)，其未经进一步纯化而使用。 MS (apci)m/z = 533.2 (M+H)。

实施例67

(R)-4-(6-(4-(3-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-(3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代-2-苯基丙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；40 mg,0.10 mmol)、(R)-3-(Boc-氨基)-2-苯基丙酸(28 mg, 0.10 mmol)和HATU (118 mg, 0.31mmol)于无水DCM (519 µL)中的混悬液用DIEA (73 µL, 0.42 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将所得混悬液过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% DCM/MeOH (含有0.1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(78 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 633.3 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-4-(6-(4-(3-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-(3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代-2-苯基丙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；78 mg, 0.12 mmol)于DCM (7.0 mL)中的溶液用TFA (95 µL,1.2 mmol)处理并在环境温度搅拌过夜。将所得混悬液在真空中浓缩，并将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% DCM/MeOH作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，在真空中浓缩并与DCM/己烷研磨以干净地得到标题化合物(54 mg, 82%收率)。MS (apci)m/z= 533.3 (M+H)。

实施例68

4-(6-(4-(3-氨基-2-(4-氟苯基)丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氟苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；100mg, 0.259 mmol)、3-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-2-(4-氟苯基)丙酸(73.5 mg, 0.259mmol)和HATU (296 mg, 0.778 mmol)于无水DCM (1.3 mL)中的混合物用DIEA (181 µL,1.04 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌1 h。将所得混悬液过滤，并将滤液在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(169 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z =651.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(3-氨基-2-(4-氟苯基)丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氟苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(步骤1；169 mg, 0.260 mmol)于DCM (2.6 mL)中的溶液用TFA (0.2mL, 2.60 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h并且然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM: iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到半纯的标题化合物。将半纯的物质与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(143 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z =551.3 (M+H)。

实施例69

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((2S)-2-苯基-2-(吡咯烷-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备2-((S)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代-1-苯基乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例8；275.0 mg, 0.7135 mmol)于无水DCM (7.0 mL)中的混悬液用(2S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-苯基乙酸(中间体R5；239.7 mg, 0.7848 mmol)、HATU (298.4 mg,0.7848 mmol)和DIEA (497 µL, 2.85 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌 16 h。将所得溶液在真空中浓缩，并将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用5-95% DCM:丙酮作为梯度洗脱液)以得到标题化合物，将其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 573.3 (M+H)。

步骤2: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((2S)-2-苯基-2-(吡咯烷-2- 基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将2-((S)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代-1-苯基乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；0.713 mmol)于1:1 TFA:DCM (7.0 mL)中的溶液在环境温度搅拌30 min，并且随后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物，约97%的单一对映异构体(250.0 mg, 61%收率)。MS (apci)m/z = 573.3 (M+H)。

实施例70

(R)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-甲基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg,0.11 mmol)、R-1-(叔丁氧基羰基)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸(25 mg, 0.11 mmol)和HATU(124 mg, 0.33 mmol)于无水DCM (545 µL)中的混合物用DIEA (19 µL, 0.11 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌过夜。将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% DCM:MeOH(含有0-2% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，浓缩并与DCM/己烷(1:10)研磨以得到标题化合物(65 mg, 定量产量)，其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 597.3 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-甲基吡咯烷-2-羰基) 哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；65 mg, 0.11 mmol)于1:1 TFA:DCM (1.2 mL)中的溶液在环境温度搅拌2 h。将反应混合物用饱和NaHCO_3(aq)淬灭并且然后用水和盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水:ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分并使用二氧化硅色谱法再纯化(0-20% DCM:MeOH(含有0-2% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的化合物的级分并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷1:10研磨并在真空中干燥以干净地得到标题化合物(15 mg, 28%收率)。MS (apci)m/z = 497.3 (M+H)。

实施例71

(S)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-甲基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(S)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg,0.11 mmol)、(S)-1-(叔丁氧基羰基)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸(25 mg, 0.11 mmol)和HATU(124 mg, 0.33 mmol)于无水DCM (545 µL)中的混合物用DIEA (76 µL, 0.44 mmol)处理。在环境温度搅拌反应混合物3 h后，加入DMF (1 mL)和另外的DIEA (76 µL, 0.44 mmol)，并将所得混合物在环境温度搅拌24 h。将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% DCM:MeOH(含有0-1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，浓缩，与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中浓缩以得到标题化合物(65 mg, 定量产量)，其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 597.3 (M+H)。

步骤2: 制备(S)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(2-甲基吡咯烷-2-羰基) 哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(S)-2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；65 mg, 0.11 mmol)于DCM (1.1 mL)中的溶液用TFA (84 µL, 1.1mmol)处理，然后在环境温度搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥以干净地得到标题化合物(17 mg, 31%收率)。MS (apci)m/z = 497.3 (M+H)。

实施例72

(R)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；195 mg,0.425 mmol)、(R)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(91.6 mg, 0.425 mmol)和HATU (485mg, 1.28 mmol)于无水DCM (2.1 mL)中的混合物用DIEA (73.4 µL, 0.425 mmol)处理。在环境温度搅拌2 h后，将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用(0-10% DCM:MeOH(含有0-1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，浓缩并与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥1 h以得到标题化合物(248mg, 定量产量)，其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 583.3 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1- 基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；248 mg, 0.426 mmol)于DCM (4.3 mL)中的溶液用TFA (328 µL, 4.26 mmol)处理并在环境温度搅拌45 min。引入另外的TFA (328 µL, 4.26 mmol)，并将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95%水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥以干净地得到标题化合物(39.1 mg, 19%收率)。MS (apci)m/z = 483.2 (M+H)。

实施例73

(S)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(S)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；50 mg, 0.11mmol)、(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(23 mg, 0.11 mmol)和HATU (124 mg, 0.33mmol)于无水DCM (545 µL)中的混合物用DIEA (76 µL, 0.44 mmol)处理。在环境温度搅拌3 h后，将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用(0-20% DCM:MeOH(含有0-1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，浓缩并与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥1 h以得到标题化合物(64 mg, 定量产量)，其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 583.3 (M+H)。

步骤2: 制备(S)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1- 基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(S)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；64 mg, 0.11 mmol)于DCM (1.1 mL)中的溶液用TFA (85 µL, 1.1 mmol)处理，然后在环境温度搅拌1 h。将反应混合物用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥以干净地得到标题化合物(48 mg, 91%收率)。MS (apci)m/z =483.3 (M+H)。

实施例74

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((反式-(±))-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备反式-(±)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a] 吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；200 mg, 0.436 mmol)、反式-(±)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-3-甲酸(127 mg,0.436 mmol)和HATU (498 mg, 1.31 mmol)于无水DCM (2.2 mL)中的混合物用DIEA (76.2µL, 0.436 mmol)处理。在环境温度搅拌3 h后，将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-20% DCM:MeOH作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，浓缩并与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥1 h以得到标题化合物(287 mg, 定量产量)，其直接用于步骤2。MS (apci)m/z = 659.3 (M+H)。

步骤2: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(-反式-(±)-4-苯基吡咯烷- 3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将反式-(±)-3-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(步骤1；287 mg, 0.436 mmol)于DCM (4.4 mL)中的溶液用TFA(336 µL, 4.36 mmol)处理并在环境温度搅拌过夜。将所得混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)、水和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥过夜以干净地得到标题化合物(242 mg, 99%收率)。MS (apci)m/z= 559.3 (M+H)。

实施例75

4-(6-(4-(D-亮氨酰)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-(1-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；55 mg, 0.120 mmol)、HATU (54.8 mg, 0.144 mmol)和2(叔丁氧基羰基)-D-亮氨酸(30.5 mg, 0.132 mmol)于无水DCM (4 mL)中的混合物用DIEA (83.6 µL, 0.480 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌3 d。将所得混合物通过二氧化硅相色谱法纯化(使用30-100% 于己烷中的乙酸乙酯作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(70 mg, 97%收率)。MS(apci)m/z = 599.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-(D-亮氨酰)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑- 4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-(1-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.070 g, 0.12 mmol)溶解于DCM (4 mL)并用TFA (2 mL)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h并且然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 于水中的ACN(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(43 mg, 74%收率)。MS (apci)m/z= 499.3 (M+H)。

实施例76

(S)-4-(6-(4-(2-(氨基甲基)-4-甲基戊酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(S)-(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-甲基戊基)氨基甲酸叔丁酯. 将6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例8；55 mg,0.120 mmol)、HATU (54.8 mg, 0.144 mmol)和(S)-2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-4-甲基戊酸(32.4 mg, 0.132 mmol)于无水DCM (4 mL)中的混合物用DIEA (83.6 µl, 0.480mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将所得混合物在真空中浓缩以得到纯度足以用于后续使用的标题化合物(73 mg, 99%收率)。MS (apci)m/z = 613.4 (M+H)。

步骤2: 制备(S)-4-(6-(4-(2-(氨基甲基)-4-甲基戊酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3- 基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(S)-(2-(4-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-甲基戊基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；73 mg, 0.12 mmol)溶解于DCM (4 mL)并用TFA (2 mL)处理。将所得混合物在环境温度搅拌30 min并且然后在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 于水中的ACN(含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(43 mg, 70%收率)。MS(apci)m/z = 513.2 (M+H)。

实施例77

4-(6-(4-(2-(4-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例61；37 mg, 0.067 mmol)和甲醛(20 µL,0.27 mmol)于干燥的DCM (669 µL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (132 mg, 0.502 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌2 h。将反应混合物过滤，并将滤液在真空中浓缩。将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)、水和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥以干净地得到标题化合物(27.2 mg, 70%收率)。MS (apci)m/z =581.2 (M+H)。

实施例78

4-(6-(4-(2-(3-氯-4-氟苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯-4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例65；152 mg, 0.266 mmol)和甲醛(79.3µL, 1.06 mmol)于干燥的DCM (2.66 mL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (282 mg, 1.33 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，在真空中浓缩，混悬于DCM并依次用饱和NaHCO_3(aq)、水和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(74.3 mg,47%收率)。MS (apci)m/z = 599.2 (M+H)。

实施例79

4-(6-(4-(2-(2,4-二氟苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-(2-氨基-2-(2,4-二氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例64；89 mg, 0.16 mmol)和甲醛(48 µL,0.64 mmol)于干燥的DCM (1.6 mL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (170 mg, 0.802 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h。将反应混合物在真空中浓缩，并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥过夜以干净地得到标题化合物(56.2 mg, 60%收率)。MS (apci)m/z = 583.3 (M+H)。

使用与对实施例79的合成所述的方法类似的方法，用适当的胺(表中所述的来源)代替4-(6-(4-(2-氨基-2-(2,4-二氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈，制备和纯化表F中的化合物。通过LCMS监测反应完成，并且相应地调整反应持续时间以及甲醛和NaBH(AcO)3（出现时）的量。使用与实施例79的合成中所用的适当梯度和游离碱化萃取顺序，在相似的C18反相色谱后干净地分离标题化合物。

表F

*10当量的甲醛和5当量的NaBH(AcO)₃用于该反应

**5当量的甲醛和5当量的NaBH(AcO)₃用于该反应；该实施例中跳过研磨。

实施例 89和90

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((3S,4R)-1-甲基-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例89)和6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((3R,4S)-1-甲基-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例90)

通过超临界流体色谱法(SFC)将外消旋体6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((反式-(±))-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例88；142 mg, 0.25 mmol)的溶液分离成各自的对映异构体，该超临界流体色谱法(SFC)使用由A: 28% (甲醇: 异丙醇 : 二乙基胺 [80:20:1])和B: 72% (超临界二氧化碳)组成的等度流动相，流速为4 mL/min，在固定相OD-H柱(Chiral Technology, Inc.；纤维素 --α-D 1-4 葡萄糖(三[3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯])；4.6mm X 250 mm, 5u上进行)。用在220nm和254nm的固定波长UV监测注射和色谱法。分离含有每种对映异构体的级分，并独立地在真空中浓缩以干净地得到两种标题化合物: 峰1, 实施例89: 6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((3S,4R)-1-甲基-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈。MS (apci)m/z = 572.3 (M+H)。峰2, 实施例90: 6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((3R,4S)-1-甲基-4-苯基吡咯烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈。MS (apci)m/z = 572.3 (M+H)。

实施例91

(R)-4-(6-(4-(3-(二甲基氨基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将(R)-4-(6-(4-(3-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例67；43 mg, 0.081 mmol)和甲醛(22 µL,0.81 mmol)于干燥的DCM (0.81 mL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (86 mg, 0.40 mmol)处理。搅拌混合物过夜后加入另外的甲醛(22 µL, 0.81 mmol)和NaBH(AcO)₃ (86 mg, 0.40mmol)，并使反应再次在环境温度搅拌过夜。将反应混合物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-10% CHCl₃:MeOH(含有0-1% NH₄OH)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，在真空中浓缩，并与DCM/己烷(1:10)研磨以干净地得到标题化合物(11.6 mg, 26%收率)。MS(apci)m/z = 561.3 (M+H)。

实施例92

(4-(6-(4-(2-(二甲基氨基)-2-(4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

使用与在实施例91中所述的类似的程序，用(R)-4-(6-(4-(2-氨基-2-(4-氟苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例62)代替(R)-4-(6-(4-(3-氨基-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈，制备和纯化标题化合物。MS (apci)m/z = 565.3(M+H)。

实施例93

4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-(2-氨基-2-(3-氯苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例60；430 mg, 0.778 mmol)和甲醛(232 µL,3.11 mmol)于1:1 DCM:MeOH (8 mL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (824 mg, 3.89 mmol)处理。在环境温度搅拌混合物过夜后，将所得混悬液过滤，并将滤液在真空中浓缩。随后将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95% 水:ACN作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，在真空中浓缩，并与DCM/己烷(1:10)研磨，然后在真空中再次干燥5 d 以干净地得到标题化合物(154 mg, 34%收率)。MS (apci)m/z = 581.2 (M+H)。

实施例 94和 95

(R)-4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例94)和(S)-4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例95)

通过超临界流体色谱法(SFC)将外消旋体4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈的溶液(实施例93；147 mg, 0.260 mmol)分离成各自的对映异构体，所述超临界流体色谱法(SFC)使用由A: 28% (甲醇:异丙醇:二乙基胺 [80:20:1])和B: 72% (超临界二氧化碳)组成的等度流动相，流速为4 mL/min，在固定相(Chiral Technology, Inc.,OD-H柱(纤维素--α-D 1-4 葡萄糖(三[3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯]), 4.6 mm X 250 mm, 5u上进行)。用在220nm和254nm的固定波长UV监测注射和色谱法。

分离含有峰1中的对映异构体的级分并独立地在真空中浓缩，得到实施例94:(R)-4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(14.1 mg, 10%回收率)。MS (apci)m/z =581.3 (M+H)。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ 8.76 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H),8.33 (s, 1H), 8.05 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.47(s, 1H), 7.37 – 7.28 (m, 3H), 6.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.98(s, 3H), 3.71 (m, 7H), 3.41 (m, 1H), 2.32 (s, 6H)。

合并含有峰2中的对映异构体的级分，在真空中浓缩但发现是不纯的。将该物质通过C18反相色谱法再纯化(使用5-95% 水: ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物与DCM/己烷(1:10)研磨并在真空中干燥过夜以干净地得到实施例95: (S)-4-(6-(4-(2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(12.7 mg, 9%回收率)。MS (apci)m/z = 581.3 (M+H)。

实施例96

4-(6-(4-(二甲基-D-亮氨酰)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(4-(D-亮氨酰)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例75；37.4 mg, 0.0750 mmol)和甲醛(55.8 µL, 0.750 mmol)于DCM (750 µL)中的溶液用NaBH(AcO)₃ (79.5 mg, 0.375 mmol)处理。在环境温度搅拌混合物3 h后，将反应混合物在真空中浓缩。随后将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用5-95%水:ACN (含有0.1% TFA)作为梯度洗脱液)。合并含有所需的产物的级分，用4:1 DCM:iPrOH稀释并依次用饱和NaHCO_3(aq)和盐水洗涤。将有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(21 mg, 53%收率)。MS (apci)m/z = 527.3 (M+H)。

实施例97

(S)-4-(6-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-4-甲基戊酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

使用与在实施例96中所述的类似的程序，用(S)-4-(6-(4-(2-(氨基甲基)-4-甲基戊酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例76)代替4-(6-(4-(D-亮氨酰)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例75)，制备和纯化标题化合物。MS (apci)m/z = 541.3 (M+H)。

实施例98

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-(吡啶-2-基氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；52.3 mg, 0.208 mmol)于DMSO (1 mL)中的溶液用2-(哌啶-4-基氧基)吡啶二盐酸盐(79 mg, 0.78 mmol)和Cs₂CO_3(s)(280 mg, 0.858 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释，并用DCM (4x)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(19.7 mg, 39%收率)。MS(apci)m/z = 478.2 (M+H)。

实施例99

6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(4-((6-甲基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；26.1 mg, 0.0817 mmol)于DMSO (1 mL)中的溶液用3-甲基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪(中间体R6；39.6 mg, 0.205 mmol)和Cs₂CO_3(s)(266 mg, 0.817 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释，并用DCM (4x)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(15.5 mg, 33%收率)。MS (apci)m/z = 493.2 (M+H)。

实施例100

4-(6-(4-((6-甲氧基哒嗪-3-基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基

1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；25.3 mg, 0.0792 mmol)于DMSO (1 mL)中的溶液用3-甲氧基-6-(哌啶-4-基氧基)哒嗪(中间体R7；33.2 mg, 0.159 mmol)和Cs₂CO_3(s)(258 mg, 0.792 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释并用DCM (4x)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，然后经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(1.9 mg, 4.7%收率)。MS (apci)m/z = 509.2 (M+H)。

实施例101

4-(6-(4-苄基-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；28.5 mg, 0.0893 mmol)于DMSO (0.5 mL)中的溶液用4-苄基哌啶-4-醇(51.2 mg,0.268 mmol)和Cs₂CO_3(s)(174 mg, 0.536 mmol)处理，然后在60℃搅拌过夜。将反应混合物用水稀释，并用DCM (3x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(11.7 mg, 27%收率)。MS (apci)m/z = 491.2 (M+H)。

实施例102

4-(6-(4-羟基-4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；35.6 mg, 0.111 mmol)于DMSO (0.5 mL)中的溶液用4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-醇(64.3 mg, 0.334 mmol)和Cs₂CO_3(s)(218 mg, 0.669 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释并用DCM (3x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(29.8 mg, 45%收率)。MS (apci)m/z =492.2 (M+H)。

实施例103

(R)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；69 mg, 0.20 mmol)于DMA (10 mL)中的溶液用(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(122mg, 0.609 mmol)和TEA (142 µL, 1.02 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌 4 h。冷却至环境温度后，将反应混合物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(38.9 mg, 36%收率)。MS (apci)m/z = 500.2 (M+H)。

实施例104

(R)-4-(6-(3-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐

将(R)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例103；23.7 mg, 0.0474 mmol)于DCM (47.4 µL)中的溶液用TFA (36.5 µL, 0.474 mmol)逐滴处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h并且然后在真空中浓缩过夜以得到标题化合物，为TFA盐(43 mg, 74%收率)。MS (apci)m/z =400.1 (M+H)。

实施例105

(S)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；64 mg, 0.18 mmol)于DMA (10 mL)中的溶液用(S)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(111mg, 0.553 mmol)和TEA (129 µL, 0.922 mmol)处理并在60 ℃搅拌4 h。冷却至环境温度后，将反应混合物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(74.3 mg, 77%收率)。MS (apci)m/z = 500.2 (M+H)。

实施例106

(S)-4-(6-(3-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈2,2,2-三氟乙酸盐

将(S)-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例105；42.8 mg, 0.0857 mmol)于DCM (85.7 µL)中的溶液用TFA (66.0 µL, 0.857 mmol)逐滴处理。将所得混合物在环境温度搅拌1 h并且然后在真空中浓缩过夜以得到标题化合物，为TFA盐(43 mg, 74%收率)。MS (apci)m/z =400.0 (M+H)。

实施例107

(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；252.1 mg, 0.7895 mmol)于DMSO (1 mL)中的溶液用4-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-醇(64.3 mg, 0.334 mmol)和Cs₂CO_3(s)(1.80 g, 5.53 mmol)处理，然后在60 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水稀释，并用DCM (4x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(271.8 mg, 62%收率)。MS (apci)m/z =514.2 (M+H)。

实施例108

4-(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例105；250 mg, 0.487 mmol)于DCM (4 mL)中的溶液用TFA (4 mL, 0.487 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌4 d并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM并用饱和NaHCO_3(aq)洗涤_。将水性萃取物用DCM萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(25.9 mg, 12%收率)。MS (apci)m/z = 414.2 (M+H)。

实施例109

(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸异丙酯

将4-(6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例108；6.5 mg, 0.016 mmol)和DIEA (4.06 mg, 0.0314 mmol)的溶液溶解于DCM (500 µL)并用氯甲酸异丙酯(2.31 mg, 0.0189 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。将残余物用iPrOH处理并在60 ℃搅拌3 h。将反应混合物冷却至环境温度，在真空中浓缩并通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% 己烷/EtOAc作为梯度洗脱液)以得到标题化合物(5.3 mg, 68%收率)。MS (apci)m/z = 500.2 (M+H)。

实施例110

4-(6-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1054 g, 0.3301 mmol)于DMSO (6.6 mL)中的溶液用哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(0.2644 g, 1.320 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1825 g, 1.320mmol)处理，然后在110 ℃搅拌 3 d。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM(2 x 20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)。将含有所需的产物的级分在真空中浓缩，然后混悬于水(以除去残余的DMSO)，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(115.2 mg, 70%收率)。MS (apci)m/z = 500.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.1152 g, 0.2306mmol)溶解于CHCl₃ (3.1 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.23 mL, 1.2 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌8 h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM并用饱和Na₂CO_3(aq)洗涤_。将水性萃取物用DCM(2 x 40 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(20 mg, 22%收率)。MS (apci)m/z = 400.2 (M+H)。

实施例111

(S)-4-(6-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

步骤1: 制备(S)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1007 g, 0.3154 mmol)于DMSO (6.3mL)中的溶液用(R)-(哌啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.2703 g, 1.261 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1743 g, 1.261 mmol)处理并在110 ℃搅拌30 min。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(50 mL)稀释并搅拌1 h，然后过滤以得到标题化合物(0.1527 mg, 94%收率)。MS(apci)m/z = 514.3 (M+H)。

步骤2: 制备(S)-4-(6-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐. 将(S)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.1527 g, 0.2973 mmol)溶解于CHCl₃ (4.0 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.30 mL, 1.5 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩以得到标题化合物(0.1633 g, 定量产量)。MS (apci)m/z = 414.2 (M+H)。

实施例112

(R)-4-(6-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

步骤1: 制备(R)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1003 g, 0.3141 mmol)于DMSO (6.3mL)中的溶液用(S)-(哌啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.2693 g, 1.256 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1737 g, 1.256 mmol)处理，然后在110 ℃搅拌 30 min。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(50 mL)稀释并搅拌1 h ，然后过滤以得到标题化合物(0.1381 mg, 86%收率)。MS(apci)m/z = 514.3 (M+H)。

步骤2: 制备(R)-4-(6-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐. 将(R)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.1381 g, 0.2689 mmol)溶解于CHCl₃ (3.6 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.27 mL, 1.3 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩以得到标题化合物(0.1425 g, 定量产量)。MS (apci)m/z = 414.2 (M+H)。

实施例113

N-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺盐酸盐

步骤1: 制备N-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基) 吡啶-2-基)-3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.0.035 g, 0.110 mmol)于DMSO (2.19 mL)中的溶液用N-(3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺 2,2,2-三氟乙酸盐(中间体R8；68.5 mg, 0.438mmol)和K₂CO_3(s)(0.0606 g, 0.438 mmol)处理并在110 ℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(50 mL)稀释并搅拌1 h ，然后过滤以得到标题化合物(0.0432 mg, 87%收率)。MS (apci)m/z = 456.2 (M+H)。

步骤2: \制备N-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪- 4-基)吡啶-2-基)-3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺盐酸盐。将N-(1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3-甲基哌啶-3-基)乙酰胺的溶液(步骤1；0.0432 g, 0.0948 mmol)溶解于CHCl₃ (1.3 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.09 mL,0.47 mmol)处理。将所得混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩以得到标题化合物(0.043 g, 75%收率)。MS (apci)m/z = 456.2 (M+H)。

实施例114

(R)-4-(6-(3-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(R)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1019 g, 0.3191 mmol)于DMSO(6.4 mL)中的溶液用(S)-(吡咯烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.2557 g, 1.277 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1767 g, 1.277 mmol)处理并在110 ℃搅拌3 d。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM(2 x 20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)。将含有所需的产物的级分在真空中浓缩，然后混悬于水(以除去残余的DMSO)，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(67 mg, 42%收率)。MS (apci)m/z = 500.2(M+H)。

步骤2: 制备(R)-4-(6-(3-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H- 吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(R)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.1019 g, 0.2040 mmol)溶解于CHCl₃ (2.7 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.20 mL,1.0 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM，然后用饱和Na₂CO_3(aq)洗涤。将水性萃取物用DCM(2 x 40 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(5.7 mg, 7%收率)。MS(apci)m/z = 400.2 (M+H)。

实施例115

(S)-4-(6-(3-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备(S)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4- 基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1020 g, 0.3194 mmol)于DMSO(6.4 mL)中的溶液用(R)-(吡咯烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.2559 g, 1.278 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1766 g, 1.278 mmol)处理，然后在110 ℃搅拌3 d。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM(2 x 20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)。将含有所需的产物的级分在真空中浓缩，然后混悬于水(以除去残余的DMSO)，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(76.7 mg, 48%收率)。MS (apci)m/z =500.2 (M+H)。

步骤2: 制备(S)-4-(6-(3-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H- 吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将(S)-((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；0.0767 g, 0.1535 mmol)溶解于CHCl₃ (2.0 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.15 mL,0.77 mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM，然后用饱和Na₂CO_3(aq)洗涤。将水性萃取物用DCM(2 x 40 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(18.9 mg, 31%收率)。MS (apci)m/z = 400.2 (M+H)。

实施例116

4-(6-(3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

步骤1: 制备((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基) 吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯. 将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；0.1014 g, 0.3176 mmol)于DMSO(6.4 mL)中的溶液用(氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.2366 g, 1.270 mmol)和K₂CO_3(s)(0.1756 g, 1.270 mmol)处理并在110 ℃搅拌3 d。冷却至环境温度后，将反应混合物用水(10 mL)稀释并用DCM(2 x 20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-100% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)。将含有所需的产物的级分在真空中浓缩，然后混悬于水(以除去残余的DMSO)，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(97.1 mg, 63%收率)。MS (apci)m/z =486.3 (M+H)。

步骤2: 制备4-(6-(3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H- 吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将((1-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(步骤1；97 mg, 0.2 mmol)溶解于CHCl₃ (2.9 mL)并用5 M 于iPrOH中的HCl(0.21 mL, 1.1mmol)处理。将反应混合物在环境温度搅拌4 h并且然后在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM并用饱和Na₂CO_3(aq)洗涤_。将水性萃取物用DCM(2 x 40 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到标题化合物(82.6 mg, 13%收率)。MS (apci)m/z = 386.2 (M+H)。

实施例117

4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐

步骤1: 制备3-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯. 在压力容器中，将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P2；0.045 g, 0.17 mmol)和(6-(6-(叔丁氧基羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)硼酸(中间体R11；0.06g, 0.19 mmol)于1,4-二噁烷(2 mL)和2 N Na₂CO_3(aq)(0.75 mL, 1.0 mmol)中的混合物用Pd(PPh₃)₄ (6 mg, 0.005 mmol)处理并用N_2(g)鼓泡15 min。密封容器并将混合物在90℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将混合物用水(3 mL)和DCM (8 mL)稀释，然后在环境温度搅拌2 h。将所得两相混合物用另外的DCM (3x)萃取并将合并的有机萃取物经无水MgSO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物混悬于Et₂O (20 mL)并将混悬液在环境温度搅拌30min。将浆液过滤，并将固体溶解于DCM用于通过二氧化硅色谱法纯化(使用50-100% EtOAc/己烷作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(30 mg, 35%收率)。MS (apci)m/z =498.2 (M+H)。

步骤2: 制备6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并 [1,5-a]吡嗪-3-甲腈. 将3-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(步骤1；30 mg, 0.060mmol)于DCM (5 mL)中的溶液用5 M 于iPrOH中的HCl(0.1 mL, 0.30 mmol)处理并在环境温度搅拌过夜。将所得混合物在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(33 mg, 定量产量)。MS (apci)m/z = 398.2 (M+H)。

实施例118

4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将4-(6-(3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈二盐酸盐(实施例117；30 mg, 0.064 mmol)于DMA (1 mL)中的溶液依次用6-甲氧基烟醛(13 mg, 0.096 mmol)和NaBH(AcO)₃ (20 mg, 0.096 mmol)处理。在环境温度搅拌混合物3 d后，引入另外的6-甲氧基烟醛(8.7 mg, 0.064 mmol)和NaBH(AcO)₃ (13.3 mg, 0.064 mmol)以及TEA (30 µL, 0.41 mmol)。将所得混合物搅拌，直到LCMS确认完全，此时将反应混合物用水淬灭并用DCM (3x)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物首先通过C18反相色谱法纯化(使用20-80% ACN/水作为梯度洗脱液)，然后通过二氧化硅色谱法纯化(使用0-25% MeOH/EtOAc作为梯度洗脱液)以干净地得到标题化合物(1.3 mg, 4%收率)。MS (apci)m/z = 519.0 (M+H)。

实施例 119和120

((1R,5S,6r)-3-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例119)和4-(6-((1R,5S,6r)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(实施例120)

将4-(6-氟吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P7；30 mg, 0.094 mmol)、((1R,5S,6r)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(24 mg, 0.11 mmol)和Cs₂CO_3(s)(153 mg, 0.47 mmol)于DMSO (0.5 mL)中的混悬液在90℃在密封的压力容器中搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物倒入2 N NaOH_(aq)(2mL)中并于PS 玻璃料中用10% 于DCM中的iPrOH(2 x 5 mL)萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩并将残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-60% ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物:

峰2: 实施例119: ((1R,5S,6r)-3-(5-(3-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-4-基)吡啶-2-基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(15 mg, 31%收率)。MS (apci)m/z = 512.2 (M+H)。

峰1: 实施例120: 4-(6-((1R,5S,6r)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-基)吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(17 mg, 44%收率)。MS(apci)m/z = 412.2 (M+H)。

实施例121

4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-6-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈

将6-溴-4-(6-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲腈(中间体P9；58 mg, 0.11 mmol)、3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.029 g, 0.14 mmol)、2 M Na₂CO_3(aq) (0.13 mL, 0.25mmol)和Pd(PPh₃)₄ (13 mg, 0.011 mmol)的混合物混悬于1,4-二噁烷(1.1 mL)。将所得混合物用Ar_(g)鼓泡15 min，然后密封并在90℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将反应混合物在DCM和水之间分配，并将合并的有机萃取物依次用水和盐水洗涤。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过C18反相色谱法纯化(使用0-60%ACN/水作为梯度洗脱液)以得到标题化合物的TFA盐。将TFA盐悬浮于DCM并用饱和Na₂CO_3(s)洗涤。将所得有机萃取物经无水Na₂SO_4(s)干燥，过滤，并在真空中浓缩以干净地得到标题化合物(17 mg, 29%收率)。MS (apci)m/z = 507.3 (M+H)。

缩写:

ACN	乙腈
		Boc-酸酐	二碳酸二叔丁酯
Cu(OAc)<sub>2</sub>	双乙酸铜
		d	天
DCE	1,2-二氯乙烷
		DCM	二氯甲烷
DIEA	N,N-二异丙基乙基胺
		DI 水	去离子水
DMA	N,N-二甲基乙酰胺
		DMAP	4-二甲基氨基吡啶
DME	1,2-二甲氧基乙烷
		DMF	N,N-二甲基甲酰胺
DMSO	二甲基亚砜
		EDC-HCl	1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
Et<sub>2</sub>O	乙醚
		EtOAc	乙酸乙酯
EtOH	乙醇
		eq	当量
h	小时
		HATU	1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐或 2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HBTU	3-[双(二甲基氨基)甲基正离子(methyliumyl)]-3<i>H</i>-苯并三唑-1-氧化物六氟磷酸盐或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
		HOAc	乙酸
iPrOH	异丙醇
		<i>i</i>-PrMgCl	异丙基氯化镁
KOAc	乙酸钾
		LCMS	液相色谱-质谱
MeOH	甲醇
		Me<sub>4</sub>N(AcO)<sub>3</sub>BH	四甲基三乙酰氧基硼氢化铵
min	分钟
		MSH	邻-(2,4,6-三甲苯基磺酰基)羟基胺
MTBE	甲基叔丁基醚
		NCS	N-氯琥珀酰亚胺
NBS	N-溴琥珀酰亚胺
		NIS	N-碘琥珀酰亚胺
NaBH(AcO)<sub>3</sub>	三乙酰氧基硼氢化钠
		NH<sub>4</sub>OAc	醋酸铵
Pd(PPh<sub>3</sub>)<sub>4</sub>	四(三苯基膦)钯(0)
		Pd<sub>2</sub>(dba)<sub>3</sub>	三(二苄叉基丙酮)二钯(0)
PdCl<sub>2</sub><i>(</i>dppf<i>)•</i>CH<sub>2</sub>Cl<sub>2</sub>	1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物
		PPTS	吡啶鎓<i>对</i>-甲苯磺酸盐
PS 玻璃料	Biotage<sup>®</sup> “Isolute Phase Separators”
		PS 纸	Whatman<sup>®</sup> 硅酮处理的 Phase Separators滤纸
PVDF (0.45 μm)disc	具有0.45微米孔径的聚偏二氟乙烯膜
		rt	室温
TEA	三乙基胺
		TFA	三氟乙酸
THF	四氢呋喃
		三光气	(双(三氯甲基)碳酸酯
X-phos	二环己基(2’,4’,6’-三异丙基-[1,1’-联苯] -2-基)膦

序列表

<110> Array BioPharma, Inc.

<120> 作为RET激酶抑制剂的取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物

<130> 40449-0033WO1

<150> 62/447,862

<151> 2017-01-18

<160> 1

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 1114

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Met Ala Lys Ala Thr Ser Gly Ala Ala Gly Leu Arg Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Lys Val Ala Leu Gly Leu Tyr Phe Ser

20 25 30

Arg Asp Ala Tyr Trp Glu Lys Leu Tyr Val Asp Gln Ala Ala Gly Thr

35 40 45

Pro Leu Leu Tyr Val His Ala Leu Arg Asp Ala Pro Glu Glu Val Pro

50 55 60

Ser Phe Arg Leu Gly Gln His Leu Tyr Gly Thr Tyr Arg Thr Arg Leu

65 70 75 80

His Glu Asn Asn Trp Ile Cys Ile Gln Glu Asp Thr Gly Leu Leu Tyr

85 90 95

Leu Asn Arg Ser Leu Asp His Ser Ser Trp Glu Lys Leu Ser Val Arg

100 105 110

Asn Arg Gly Phe Pro Leu Leu Thr Val Tyr Leu Lys Val Phe Leu Ser

115 120 125

Pro Thr Ser Leu Arg Glu Gly Glu Cys Gln Trp Pro Gly Cys Ala Arg

130 135 140

Val Tyr Phe Ser Phe Phe Asn Thr Ser Phe Pro Ala Cys Ser Ser Leu

145 150 155 160

Lys Pro Arg Glu Leu Cys Phe Pro Glu Thr Arg Pro Ser Phe Arg Ile

165 170 175

Arg Glu Asn Arg Pro Pro Gly Thr Phe His Gln Phe Arg Leu Leu Pro

180 185 190

Val Gln Phe Leu Cys Pro Asn Ile Ser Val Ala Tyr Arg Leu Leu Glu

195 200 205

Gly Glu Gly Leu Pro Phe Arg Cys Ala Pro Asp Ser Leu Glu Val Ser

210 215 220

Thr Arg Trp Ala Leu Asp Arg Glu Gln Arg Glu Lys Tyr Glu Leu Val

225 230 235 240

Ala Val Cys Thr Val His Ala Gly Ala Arg Glu Glu Val Val Met Val

245 250 255

Pro Phe Pro Val Thr Val Tyr Asp Glu Asp Asp Ser Ala Pro Thr Phe

260 265 270

Pro Ala Gly Val Asp Thr Ala Ser Ala Val Val Glu Phe Lys Arg Lys

275 280 285

Glu Asp Thr Val Val Ala Thr Leu Arg Val Phe Asp Ala Asp Val Val

290 295 300

Pro Ala Ser Gly Glu Leu Val Arg Arg Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Pro

305 310 315 320

Gly Asp Thr Trp Ala Gln Gln Thr Phe Arg Val Glu His Trp Pro Asn

325 330 335

Glu Thr Ser Val Gln Ala Asn Gly Ser Phe Val Arg Ala Thr Val His

340 345 350

Asp Tyr Arg Leu Val Leu Asn Arg Asn Leu Ser Ile Ser Glu Asn Arg

355 360 365

Thr Met Gln Leu Ala Val Leu Val Asn Asp Ser Asp Phe Gln Gly Pro

370 375 380

Gly Ala Gly Val Leu Leu Leu His Phe Asn Val Ser Val Leu Pro Val

385 390 395 400

Ser Leu His Leu Pro Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Val Ser Arg Arg Ala

405 410 415

Arg Arg Phe Ala Gln Ile Gly Lys Val Cys Val Glu Asn Cys Gln Ala

420 425 430

Phe Ser Gly Ile Asn Val Gln Tyr Lys Leu His Ser Ser Gly Ala Asn

435 440 445

Cys Ser Thr Leu Gly Val Val Thr Ser Ala Glu Asp Thr Ser Gly Ile

450 455 460

Leu Phe Val Asn Asp Thr Lys Ala Leu Arg Arg Pro Lys Cys Ala Glu

465 470 475 480

Leu His Tyr Met Val Val Ala Thr Asp Gln Gln Thr Ser Arg Gln Ala

485 490 495

Gln Ala Gln Leu Leu Val Thr Val Glu Gly Ser Tyr Val Ala Glu Glu

500 505 510

Ala Gly Cys Pro Leu Ser Cys Ala Val Ser Lys Arg Arg Leu Glu Cys

515 520 525

Glu Glu Cys Gly Gly Leu Gly Ser Pro Thr Gly Arg Cys Glu Trp Arg

530 535 540

Gln Gly Asp Gly Lys Gly Ile Thr Arg Asn Phe Ser Thr Cys Ser Pro

545 550 555 560

Ser Thr Lys Thr Cys Pro Asp Gly His Cys Asp Val Val Glu Thr Gln

565 570 575

Asp Ile Asn Ile Cys Pro Gln Asp Cys Leu Arg Gly Ser Ile Val Gly

580 585 590

Gly His Glu Pro Gly Glu Pro Arg Gly Ile Lys Ala Gly Tyr Gly Thr

595 600 605

Cys Asn Cys Phe Pro Glu Glu Glu Lys Cys Phe Cys Glu Pro Glu Asp

610 615 620

Ile Gln Asp Pro Leu Cys Asp Glu Leu Cys Arg Thr Val Ile Ala Ala

625 630 635 640

Ala Val Leu Phe Ser Phe Ile Val Ser Val Leu Leu Ser Ala Phe Cys

645 650 655

Ile His Cys Tyr His Lys Phe Ala His Lys Pro Pro Ile Ser Ser Ala

660 665 670

Glu Met Thr Phe Arg Arg Pro Ala Gln Ala Phe Pro Val Ser Tyr Ser

675 680 685

Ser Ser Gly Ala Arg Arg Pro Ser Leu Asp Ser Met Glu Asn Gln Val

690 695 700

Ser Val Asp Ala Phe Lys Ile Leu Glu Asp Pro Lys Trp Glu Phe Pro

705 710 715 720

Arg Lys Asn Leu Val Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu Gly Glu Phe Gly

725 730 735

Lys Val Val Lys Ala Thr Ala Phe His Leu Lys Gly Arg Ala Gly Tyr

740 745 750

Thr Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Asn Ala Ser Pro Ser Glu

755 760 765

Leu Arg Asp Leu Leu Ser Glu Phe Asn Val Leu Lys Gln Val Asn His

770 775 780

Pro His Val Ile Lys Leu Tyr Gly Ala Cys Ser Gln Asp Gly Pro Leu

785 790 795 800

Leu Leu Ile Val Glu Tyr Ala Lys Tyr Gly Ser Leu Arg Gly Phe Leu

805 810 815

Arg Glu Ser Arg Lys Val Gly Pro Gly Tyr Leu Gly Ser Gly Gly Ser

820 825 830

Arg Asn Ser Ser Ser Leu Asp His Pro Asp Glu Arg Ala Leu Thr Met

835 840 845

Gly Asp Leu Ile Ser Phe Ala Trp Gln Ile Ser Gln Gly Met Gln Tyr

850 855 860

Leu Ala Glu Met Lys Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

865 870 875 880

Leu Val Ala Glu Gly Arg Lys Met Lys Ile Ser Asp Phe Gly Leu Ser

885 890 895

Arg Asp Val Tyr Glu Glu Asp Ser Tyr Val Lys Arg Ser Gln Gly Arg

900 905 910

Ile Pro Val Lys Trp Met Ala Ile Glu Ser Leu Phe Asp His Ile Tyr

915 920 925

Thr Thr Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile

930 935 940

Val Thr Leu Gly Gly Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Pro Glu Arg Leu

945 950 955 960

Phe Asn Leu Leu Lys Thr Gly His Arg Met Glu Arg Pro Asp Asn Cys

965 970 975

Ser Glu Glu Met Tyr Arg Leu Met Leu Gln Cys Trp Lys Gln Glu Pro

980 985 990

Asp Lys Arg Pro Val Phe Ala Asp Ile Ser Lys Asp Leu Glu Lys Met

995 1000 1005

Met Val Lys Arg Arg Asp Tyr Leu Asp Leu Ala Ala Ser Thr Pro

1010 1015 1020

Ser Asp Ser Leu Ile Tyr Asp Asp Gly Leu Ser Glu Glu Glu Thr

1025 1030 1035

Pro Leu Val Asp Cys Asn Asn Ala Pro Leu Pro Arg Ala Leu Pro

1040 1045 1050

Ser Thr Trp Ile Glu Asn Lys Leu Tyr Gly Met Ser Asp Pro Asn

1055 1060 1065

Trp Pro Gly Glu Ser Pro Val Pro Leu Thr Arg Ala Asp Gly Thr

1070 1075 1080

Asn Thr Gly Phe Pro Arg Tyr Pro Asn Asp Ser Val Tyr Ala Asn

1085 1090 1095

Trp Met Leu Ser Pro Ser Ala Ala Lys Leu Met Asp Thr Phe Asp

1100 1105 1110

Ser

Claims

1.式I化合物:

及其药学上可接受的盐和溶剂化物，其中:

X¹是CH、CCH₃、CF、CCl或N；

X²是CH、CF或N；

X³是CH、CF或N；

X⁴是CH、CF或N；

其中X¹、X²、X³和X⁴中的0、1或2个是N；

A是H、Cl、CN、Br、CH₃、CH₂CH₃或环丙基；

B是hetAr¹；

hetAr¹是具有1-3个独立地选自N、S和O的环杂原子的5元杂芳基环，其中所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C1-C4烷氧基)CH₂C(=O)-、(C1-C4烷氧基)C(=O)C1-C3烷基、C3-C6环烷基、(R^aR^bN)C1-C6烷基-、(R^aR^bN)C(=O)C1-C6烷基-、(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基、hetCyc^a、hetCyc^aC1-C6烷基-和4-甲氧基苄基；

R^a和R^b独立地是H或C1-C6烷基；

hetCyc^a是具有选自N和O的环杂原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、二(C1-C3烷基)NCH₂C(=O)-、(C1-C6烷氧基)C(=O)-或 (C1-C6烷氧基)CH₂C(=O)-；

D是hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹；

hetCyc¹是具有1-2个独立地选自N和O的环原子的4-6元杂环，其中所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)和OH或所述杂环被C3-C6环烷叉基环取代或所述杂环被氧代基取代；

E是

(a) 氢，

(b) OH，

(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，

(f) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，

(h) 任选地被1-3个氟取代的(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，

(k) (C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l) (C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(m) HC(=O)-，

(n) Cyc¹，

(o) Cyc¹C(=O)-，

(q) hetCyc⁴，

(r) hetCyc⁴C(=O)-，

(s) hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，

(t) hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，

(u) hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v) Ar²，

(w) Ar²C(=O)-，

(x) (Ar²)C1-C6烷基-，

(y) (Ar²)羟基C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、(R^eR^fN)C1-C3烷基-和R^eR^fN-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(aa) hetAr²C(=O)-，

(bb) (hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(cc) hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中所述烷基部分任选地被苯基取代，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(hh) CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii) (C1-C6烷基)SO₂-，

(jj) (C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk) hetCyc⁵-SO₂-，

(ll) R⁴R⁵NSO₂-，

(mm) R⁶C(=O)NH-，

(nn) hetCyc⁶，

(oo) hetAr²C1-C6烷基-，

(pp) (hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(rr) (C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(tt) (R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu) Ar²-O-，

(vv) (C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(xx) (C3-C6环烷氧基)C(=O)-，

(zz) Ar⁴CH₂OC(=O)-，

(aaa) (N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-，

(bbb) (Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-，和

(ccc)(hetAr²)-O-；

Cyc¹是C3-C6环烷基，其中(a)所述环烷基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自OH、卤素、C1-C6烷氧基、CN、羟基C1-C6烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-和任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基或(b)所述环烷基被苯基取代，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃或(c)所述环烷基被具有1-3个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂芳基环取代，其中所述杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和CF₃；

Ar²是任选地被一个或多个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、CN、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和RⁱR^jN-，其中Rⁱ和R^j独立地是H或C1-C6烷基；

hetAr²是具有1-3个独立地选自N、O和S的环杂原子的5-6元杂芳基环，其中杂芳基环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、CN、OH和R'R''N-，其中R'和R''独立地是H或C1-C3烷基；

hetCyc⁴是(a)具有1-2个独立地选自N、O和S的环杂原子的4-6元杂环，其中所述S任选地被氧化成SO₂，(b)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-8元桥联杂环，(c)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的6-12元稠合双环杂环，其中杂环任选地被一至两个C1-C6烷基取代基独立地取代或(d)具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的7-10元螺环杂环，其中所述杂环中的每一个任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、OH、CN、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C3-C6)环烷基、(C1-C6烷基)C(=O)-、具有1-2个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环和苯基，其中所述苯基任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基；

hetCyc⁵是具有选自O和N的环杂原子的5-6元杂环；

R¹是H、C1-C6烷基或(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-；

R⁴和R⁵独立地是H或C1-C6烷基；

Ar⁴是任选地被一个或多个卤素取代的苯基。

2.根据权利要求1的化合物，其中D是hetCyc¹。

3.根据权利要求2的化合物，其中hetCyc¹是具有两个环氮原子的4-6元杂环，其中所述环任选地被C3-C6环烷叉基环或氧代取代。

4.根据权利要求3的化合物，其中hetCyc¹是

，

其中星号表示与E基团的连接点并且波浪线表示与包含X¹、X²、X³和X⁴的环的连接点。

5.根据权利要求4的化合物，其中E是

(a)氢，

(d) 任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷基，

(e) 任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷基-，

(h)(C1-C6烷氧基)羟基C1-C6烷基-，

(j) 任选地被1-3个氟取代的(羟基C1-C6烷基)C(=O)-，

(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(l)(C1-C6烷氧基)(C1-C6烷基)C(=O)-，

(n)Cyc¹，

(o)Cyc¹C(=O)-，

(q)hetCyc⁴，

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(s)hetCyc⁴(C1-C6烷基)C(=O)-，

(t)hetCyc⁴C(=O)C1-C6烷基-，

(w)Ar²C(=O)-，

(x)(Ar²)C1-C6烷基-，

(y)(Ar²)羟基C2-C6烷基-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代，其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(aa)hetAr²C(=O)-，

(bb)(hetAr²)羟基C2-C6烷基-，

(cc)hetAr²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代，

(dd)R¹R²NC(=O)-，

(ee)R¹R²N(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被苯基取代，

(ff)R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(hh)CH₃SO₂(C1-C6烷基)C(=O)-，

(ii)(C1-C6烷基)SO₂-，

(jj)(C3-C6环烷基)CH₂SO₂-，

(kk)hetCyc⁵-SO₂-，

(ll)R⁴R⁵NSO₂-，

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，

(pp)(hetCyc⁴)C1-C6烷基-，

(rr)(C3-C6环烷氧基)C1-C6烷基-，

(ss)(C3-C6环烷基)C1-C6烷基-，其中所述环烷基任选地被1-2个氟取代，

(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(vv)(C1-C6烷基)SO₂C1-C6烷基-，

(ww)(C1-C6烷氧基)C(=O)NHC1-C6烷基-，

(aaa)(N-(C1-C3烷基)吡啶酮基)C1-C6烷基-或

(bbb)(Ar⁴SO₂)C1-C6烷基-。

6.根据权利要求5的化合物，其中E是

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(z) Ar²(C1-C6烷基)C(=O)-，其中烷基部分任选地被一个或两个基团取代，所述基团独立地选自OH、C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、羟基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、R^eR^fN-和(R^eR^fN)C1-C3烷基-，其中R^e和R^f独立地是H或C1-C6烷基或所述烷基部分被具有一个或两个独立地选自N和O的环杂原子的5-6元杂环取代并且其中杂环任选地被C1-C6烷基取代或

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-。

7.根据权利要求2的化合物，其中hetCyc¹是具有一个环氮原子的4-6元杂环，其中所述环任选地被C1-C3烷基(任选地被1-3个氟取代)或OH取代。

8.根据权利要求7的化合物，其中hetCyc¹是

9.根据权利要求8的化合物，其中E是:

(a) 氢，

(b) OH，

(f)任选地被1-3个氟取代的C1-C6烷氧基，

(g)任选地被1-3个氟取代的羟基C1-C6烷氧基-，

(k)(C1-C6烷氧基)C(=O)-，

(m)HC(=O)-，

(r)hetCyc⁴C(=O)-，

(u)hetCyc⁴C(=O)NR^g-，其中R^g是H或C1-C6烷基，

(v)Ar²，

(x)(Ar²)C1-C6烷基-，

(dd) R¹R²NC(=O)-，

(ff) R¹R²NC(=O)C1-C6烷基-，

(gg)R¹R²NC(=O)NH-，

(ll) R⁴R⁵NSO₂-，

(mm)R⁶C(=O)NH-，

(nn)hetCyc⁶，

(oo)(hetAr²)C1-C6烷基-，

(tt)(R^gR^hN)C1-C6烷基-，其中R^g和R^h独立地是H或C1-C6烷基，

(uu)Ar²-O-或

(ccc)hetAr²-O-。

10.根据权利要求9的化合物，其中E是:

(x)(Ar²)C1-C6烷基-，

(mm) R⁶C(=O)NH-或

(ccc)hetAr²-O-。

11.根据权利要求1的化合物，其中D是hetCyc²。

12.根据权利要求11的化合物，其中D是

。

13.根据权利要求12的化合物，其中E是

(a) 氢，

(mm) R⁶C(=O)NH-，或

(oo) hetAr²C1-C6烷基-。

14.根据权利要求1-13中任一项的化合物，其中 hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)、(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-、(C1-C6烷基SO₂)C1-C6烷基-、hetCyc^a和hetCyc^aC1-C6烷基。

15.根据权利要求14的化合物，其中hetAr¹是任选地被一个或多个取代基取代的吡唑基，所述取代基独立地选自C1-C6烷基(任选地被1-3个氟取代)。

16.根据权利要求1-15中任一项的化合物，其中X¹是N、CH或CH₃，X²是CH或N，X³是CH或N和X⁴是CH或N，其中X¹、X²、X³和X⁴中的一个是N。

17.根据权利要求16的化合物，其中

X¹是N，和

X²、X³和X⁴是CH。

18.根据权利要求1-17中任一项的化合物，其中A是H。

19.根据权利要求1-17中任一项的化合物，其中A是Cl。

20.根据权利要求1-17中任一项的化合物，其中A是CN。

21.权利要求1的化合物，选自实施例1-121中的任何一个或其药学上可接受的盐。

22.药物组合物，包含根据权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和药学上可接受的载体或赋形剂。

23.用于制备根据权利要求1的式I化合物的方法，所述方法包括:

(a) 对于其中E是H并且A、B、X¹、X²、X³、X⁴和D如针对权利要求1所定义的权利要求1的化合物，在钯催化剂和任选的配体存在下并在碱存在下，使具有下式的相应的化合物

其中A和B如权利要求1中所定义，与具有式11的化合物偶联

其中Z是-B(OR^a)(OR^b)并且R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环，环如针对权利要求1中的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义，并且X¹、X²、X³和X⁴如式B所定义，然后除去D环上的保护基（如果存在）；或

(b) 对于其中A、B、X¹、X²、X³、X⁴, D 和E如针对权利要求1所定义(除了E不是H以外)的权利要求1的化合物，官能化具有下式的相应的化合物

其中基团如针对权利要求1的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义，并且A、B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对权利要求1所定义；或

(c)对于其中A是CN，D如权利要求1所定义，条件是D环通过D环中的环氮原子与X¹、X²、X³和X⁴所定义的环偶联，X¹、X²、X³、X⁴ 条件是X¹和X²中的至少一个是氮，并且E如针对权利要求1所定义的权利要求1的化合物，在碱的存在下，使具有式15的相应的化合物

其中B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对权利要求1所定义，条件是X¹和X²中的至少一个是氮，与具有式17的相应的化合物反应

其中环如针对权利要求1的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义；或

(d) 对于其中A是CN，E是H并且B、X¹、X²、X³、X⁴和D 如针对权利要求1所定义的权利要求1的化合物，在钯催化剂和任选的配体存在下并在碱存在下，使具有式22的相应的化合物

其中基团如针对权利要求1中的hetCyc¹、hetCyc²、hetCyc³或hetCyc⁹所定义并且A、B、X¹、X²、X³和X⁴ 如针对权利要求1所定义，与具有下式的相应的化合物反应

其中hetAr¹ 如针对权利要求1所定义并且R^a和R^b是H或(1-6C)烷基或R^a和R^b与它们所连接的原子一起形成任选地被1-4个选自(C1-C3烷基)的取代基取代的5-6元环；和

除去任何保护基团并任选地形成其药学上可接受的盐。

24.用于在有需要的患者中治疗癌症的方法，所述方法包括给患者施用有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

25.用于在有需要的患者中治疗癌症的方法，所述方法包括(a)确定癌症是否与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关；和(b)如果确定癌症与RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调相关，则给患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

26.治疗患者中的RET相关的癌症的方法，所述方法包括给鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

27.治疗患者中的RET相关的癌症的方法，该方法包括:

确定患者中的癌症是否是RET相关的癌症；和

给确定为具有RET相关的癌症的患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

28.治疗患者的方法，所述方法包括给具有指示患者具有RET基因、RET激酶或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的临床记录的患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

29.为患者选择治疗的方法，所述方法包括为鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者选择包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗。

30.为具有癌症的患者选择治疗的方法，所述方法包括:

确定患者中的癌症是否是RET相关的癌症；和

为确定为具有RET相关的癌症的患者选择包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗。

31.选择患者进行包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗的方法，所述方法包括:

鉴定具有RET相关的癌症的患者；和

选择患者进行包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗。

32.选择具有癌症的患者进行包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗的方法，所述方法包括:

确定患者中的癌症是否是RET相关的癌症；和

选择确定为具有RET相关的癌症的患者进行包括施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物的治疗。

33.权利要求27、30和32中的任一项的方法，其中确定患者中的癌症是否是RET相关的癌症的步骤包括进行测定以检测来自患者的样品中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调。

34.权利要求33的方法，其还包括:

从患者获得样品。

35.权利要求34的方法，其中样品是活组织检查样品。

36.权利要求33-35中的任一项的方法，其中测定选自测序、免疫组织化学、酶联免疫吸附测定和荧光原位杂交(FISH)。

37.权利要求36的方法，其中FISH是分离FISH分析。

38.权利要求36的方法，其中测序是焦磷酸测序或下一代测序。

39.权利要求33-38中的任一项的方法，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因中的一个或多个点突变。

40.权利要求39的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 2、3、4、5、6、7、8、11、12、13、20、32、34、40、64、67、114、136、145、180、200、292、294、321、330、338、360、373、393、432、505、506、510、511、513、515、525、531、532、533、550、591、593、595、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、633、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、675、686、689、691、694、700、706、713、732、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、802、804、805、806、810、818、819、823、826、833、836、841、843、844、848、852、865、870、873、876、881、882、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041、1062和1064。

41.权利要求40的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 32、34、40、64、67、114、145、292、321、330、338、360、393、510、511、515、531、532、533、550、591、593、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、686、691、694、700、706、713、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、804、805、806、818、819、823、826、833、841、843、844、848、852、873、876、881、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041和1064。

42.权利要求41的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致具有一个或多个以下氨基酸取代的RET蛋白的翻译: S32L、D34S、L40P、P64L、R67H、R114H、V145G、V292M、G321R、R330Q、T338I、R360W、F393L、A510V、E511K、C515S、C531R、G533C、G533S、G550E、V591I、G593E、R600Q、I602V、K603Q、K603E、Y606C、C609Y、C609S、C609G、C609R、C609F、C609W、C611R、C611S、C611G、C611Y、C611F、C611W、C618S、C618Y、C618R、C618Y、C618G、C618F、C618W、F619F、C620S、C620W、C620R、C620G、C620L、C620Y、C620F、E623K、D624N、C630A、C630R、C630S、C630Y、C630F、C630W、D631N、D631Y、D631A、D631G、D631V、D631E、 E632K、E632G、C634W、C634Y、C634S、C634R、C634F、C634G、C634L、C634A、C634T、R635G、T636P、T636M、A640G、A641S、A641T、V648I、S649L、A664D、H665Q、K666E、K666M、K666N、K666R、S686N、G691S、R694Q、M700L、V706M、V706A、E713K、G736R、G748C、A750P、S765P、P766S、P766M、E768Q、E768D、L769L、R770Q、D771N、N777S、V778I、Q781R、L790F、Y791F、V804L、V804M、V804E、E805K、Y806E、Y806F、Y806S、Y806G、Y806C、Y806H、Y806N、E818K、S819I、G823E、Y826M、R833C、P841L、P841P、E843D、R844W、R844Q、R844L、M848T、I852M、R873W、A876V、L881V、A883F、A883S、A883T、E884K、R886W、S891A、R897Q、D898V、E901K、S904F、S904S、S904C、K907E、K907M、R908K、G911D、R912P、R912Q、M918T、M918V、M918L、A919V、E921K、S922P、S922Y、T930M、F961L、R972G、R982C、M1009V、D1017N、V1041G和M1064。

43.权利要求39的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变发生于人RET基因的外显子10、11、13、14、15和16中的一个或多个。

44.权利要求34-38中的任一项的方法，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因融合。

45.权利要求44的方法，其中RET基因融合选自: BCR-RET、CLIP1-RET、KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM33-RET、ERC1-RET、ELKS-RET、RET-ELKS、FGFR1OP-RET、RET-MBD1、RET-RAB61P2、RET-PCM1、RET-PPKAR1A、RET-TRIM24、RET-RFG9、RFP-RET、RET-GOLGA5、HOOK3-RET、KTN1-RET、TRIM27-RET、AKAP13-RET、FKBP15-RET、SPECC1L-RET、TBL1XR1/RET、CEP55-RET、CUX1-RET、KIAA1468-RET、RFG8/RET、RET/RFG8、H4-RET、ACBD5-RET、PTCex9-RET、MYH13-RET、PIBF1-RET、KIAA1217-RET、MPRIP-RET、HRH4-RET和Ria-RET。

46.权利要求26、27和30-45中的任一项的方法，其中RET相关的癌症选自: 肺癌、乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌、难治性分化型甲状腺癌、多发性内分泌瘤病2A或2B型(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、结肠直肠癌、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节瘤病和宫颈癌。

47.权利要求46的方法，其中肺癌是RET融合肺癌或癌症是甲状腺髓样癌。

48.权利要求46的方法，其中肺癌是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、细支气管肺细胞癌或肺腺癌。

49.权利要求24-48中的任一项的方法，其中口服施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

50.权利要求24-49中的任一项的方法，其还包括给患者施用另外的疗法或治疗剂。

51.根据权利要求50的方法，其中所述另外的疗法或治疗剂选自放射疗法、细胞毒性化学疗法、激酶靶向疗法、细胞凋亡调节剂、信号转导抑制剂、免疫靶向疗法和血管生成靶向疗法。

52.根据权利要求51的方法，其中所述另外的治疗剂选自一种或多种激酶靶向疗法。

53.根据权利要求50-52中的任一项的方法，其中权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物和另外的治疗剂作为单独的剂量同时施用。

54.根据权利要求50-52中的任一项的方法，其中权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物和另外的治疗剂作为单独的剂量以任何顺序依次施用。

55.权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制备用于治疗患者中的RET相关的癌症的药物中的用途。

56.权利要求55的用途，其中RET相关的癌症是具有RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症。

57.权利要求56的用途，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因中的一个或多个点突变。

58.权利要求57的用途，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 2、3、4、5、6、7、8、11、12、13、20、32、34、40、64、67、114、136、145、180、200、292、294、321、330、338、360、373、393、432、505、506、510、511、513、515、525、531、532、533、550、591、593、595、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、633、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、675、686、689、691、694、700、706、713、732、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、802、804、805、806、810、818、819、823、826、833、836、841、843、844、848、852、865、870、873、876、881、882、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041、1062和1064。

59.权利要求58的用途，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 32、34、40、64、67、114、145、292、321、330、338、360、393、510、511、515、531、532、533、550、591、593、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、686、691、694、700、706、713、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、804、805、806、818、819、823、826、833、841、843、844、848、852、873、876、881、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041和1064。

60.权利要求59的用途，其中RET基因中的一个或多个点突变导致具有一个或多个以下氨基酸取代的RET蛋白的翻译:

S32L、D34S、L40P、P64L、R67H、R114H、V145G、V292M、G321R、R330Q、T338I、R360W、F393L、A510V、E511K、C515S、C531R、G533C、G533S、G550E、V591I、G593E、R600Q、I602V、K603Q、K603E、Y606C、C609Y、C609S、C609G、C609R、C609F、C609W、C611R、C611S、C611G、C611Y、C611F、C611W、C618S、C618Y、C618R、C618Y、C618G、C618F、C618W、F619F、C620S、C620W、C620R、C620G、C620L、C620Y、C620F、E623K、D624N、C630A、C630R、C630S、C630Y、C630F、C630W、D631N、D631Y、D631A、D631G、D631V、D631E、 E632K、E632G、C634W、C634Y、C634S、C634R、C634F、C634G、C634L、C634A、C634T、R635G、T636P、T636M、A640G、A641S、A641T、V648I、S649L、A664D、H665Q、K666E、K666M、K666N、K666R、S686N、G691S、R694Q、M700L、V706M、V706A、E713K、G736R、G748C、A750P、S765P、P766S、P766M、E768Q、E768D、L769L、R770Q、D771N、N777S、V778I、Q781R、L790F、Y791F、V804L、V804M、V804E、E805K、Y806E、Y806F、Y806S、Y806G、Y806C、Y806H、Y806N、E818K、S819I、G823E、Y826M、R833C、P841L、P841P、E843D、R844W、R844Q、R844L、M848T、I852M、R873W、A876V、L881V、A883F、A883S、A883T、E884K、R886W、S891A、R897Q、D898V、E901K、S904F、S904S、S904C、K907E、K907M、R908K、G911D、R912P、R912Q、M918T、M918V、M918L、A919V、E921K、S922P、S922Y、T930M、F961L、R972G、R982C、M1009V、D1017N、V1041G和M1064T。

61.权利要求57的用途，其中RET基因中的一个或多个点突变发生于人RET基因的外显子10、11、13、14、15和16中的一个或多个。

62.权利要求56的用途，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因融合。

63.权利要求62的用途，其中RET基因融合选自: BCR-RET、CLIP1-RET、KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM33-RET、ERC1-RET、ELKS-RET、RET-ELKS、FGFR1OP-RET、RET-MBD1、RET-RAB61P2、RET-PCM1、RET-PPKAR1A、RET-TRIM24、RET-RFG9、RFP-RET、RET-GOLGA5、HOOK3-RET、KTN1-RET、TRIM27-RET、AKAP13-RET、FKBP15-RET、SPECC1L-RET、TBL1XR1/RET、CEP55-RET、CUX1-RET、KIAA1468-RET、RFG8/RET、RET/RFG8、H4-RET、ACBD5-RET、PTCex9-RET、MYH13-RET、PIBF1-RET、KIAA1217-RET、MPRIP-RET、HRH4-RET和Ria-RET。

64.权利要求55-63中的任一项的用途，其中RET相关的癌症选自: 肺癌、乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌、难治性分化型甲状腺癌、多发性内分泌瘤病2A或2B型(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、结肠直肠癌、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节瘤病和宫颈癌。

65.权利要求64的用途，其中肺癌是RET融合肺癌或癌症是甲状腺髓样癌。

66.权利要求64的用途，其中肺癌是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、细支气管肺细胞癌或肺腺癌。

67.权利要求55-66中的任一项的用途，其中药物被配制用于口服施用。

68.权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物，其用于治疗鉴定或诊断为具有RET相关的癌症的患者。

69.权利要求68的化合物，其中RET相关的癌症是具有RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调的癌症。

70.权利要求69的化合物，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因中的一个或多个点突变。

71.权利要求70的化合物，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 2、3、4、5、6、7、8、11、12、13、20、32、34、40、64、67、114、136、145、180、200、292、294、321、330、338、360、373、393、432、505、506、510、511、513、515、525、531、532、533、550、591、593、595、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、633、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、675、686、689、691、694、700、706、713、732、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、802、804、805、806、810、818、819、823、826、833、836、841、843、844、848、852、865、870、873、876、881、882、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041、1062和1064。

72.权利要求71的化合物，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 32、34、40、64、67、114、145、292、321、330、338、360、393、510、511、515、531、532、533、550、591、593、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、686、691、694、700、706、713、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、804、805、806、818、819、823、826、833、841、843、844、848、852、873、876、881、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041和1064。

73.权利要求72的化合物，其中RET基因中的一个或多个点突变导致具有一个或多个以下氨基酸取代的RET蛋白的翻译:

74.权利要求70的化合物，其中RET基因中的一个或多个点突变发生于人RET基因的外显子10、11、13、14、15和16中的一个或多个。

75.权利要求69的化合物，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因融合。

76.权利要求75的化合物，其中RET基因融合选自: BCR-RET、CLIP1-RET、KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM33-RET、ERC1-RET、ELKS-RET、RET-ELKS、FGFR1OP-RET、RET-MBD1、RET-RAB61P2、RET-PCM1、RET-PPKAR1A、RET-TRIM24、RET-RFG9、RFP-RET、RET-GOLGA5、HOOK3-RET、KTN1-RET、TRIM27-RET、AKAP13-RET、FKBP15-RET、SPECC1L-RET、TBL1XR1/RET、CEP55-RET、CUX1-RET、KIAA1468-RET、RFG8/RET、RET/RFG8、H4-RET、ACBD5-RET、PTCex9-RET、MYH13-RET、PIBF1-RET、KIAA1217-RET、MPRIP-RET、HRH4-RET和Ria-RET。

77.权利要求68-76中的任一项的化合物，其中RET相关的癌症选自: 肺癌、乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌、难治性分化型甲状腺癌、多发性内分泌瘤病2A或2B型(分别为MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳腺癌、结肠直肠癌、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜的神经节瘤病和宫颈癌。

78.权利要求77的化合物，其中肺癌是RET融合肺癌或癌症是甲状腺髓样癌。

79.权利要求77的化合物，其中肺癌是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、细支气管肺细胞癌或肺腺癌。

80.用于抑制哺乳动物细胞中的RET激酶活性的方法，所述方法包括使哺乳动物细胞接触权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

81.权利要求80的方法，其中接触发生于体内。

82.权利要求80的方法，其中接触发生于体外。

83.权利要求80-82中的任一项的方法，其中哺乳动物细胞是哺乳动物癌细胞。

84.权利要求83的方法，其中哺乳动物癌细胞是哺乳动物RET相关的癌细胞。

85.权利要求80-84中的任一项的方法，其中细胞具有RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调。

86.权利要求85的方法，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因中的一个或多个点突变。

87.权利要求86的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 2、3、4、5、6、7、8、11、12、13、20、32、34、40、64、67、114、136、145、180、200、292、294、321、330、338、360、373、393、432、505、506、510、511、513、515、525、531、532、533、550、591、593、595、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、633、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、675、686、689、691、694、700、706、713、732、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、802、804、805、806、810、818、819、823、826、833、836、841、843、844、848、852、865、870、873、876、881、882、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041、1062和1064。

88.权利要求87的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致在一个或多个以下氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代的RET蛋白的翻译: 32、34、40、64、67、114、145、292、321、330、338、360、393、510、511、515、531、532、533、550、591、593、600、602、603、606、609、611、618、619、620、623、624、630、631、632、634、635、636、640、641、648、649、664、665、666、686、691、694、700、706、713、736、748、750、765、766、768、769、770、771、777、778、781、790、791、804、805、806、818、819、823、826、833、841、843、844、848、852、873、876、881、883、884、886、891、897、898、901、904、907、908、911、912、918、919、921、922、930、961、972、982、1009、1017、1041和1064。

89.权利要求88的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变导致具有一个或多个以下氨基酸取代的RET蛋白的翻译:

90.权利要求86的方法，其中RET基因中的一个或多个点突变发生于人RET基因的外显子10、11、13、14、15和16中的一个或多个。

91.权利要求85的方法，其中RET基因、RET激酶蛋白或它们中的任何一种的表达或活性或水平的失调是RET基因融合。

92.权利要求91的方法，其中RET基因融合选自: BCR-RET、CLIP1-RET、KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM33-RET、ERC1-RET、ELKS-RET、RET-ELKS、FGFR1OP-RET、RET-MBD1、RET-RAB61P2、RET-PCM1、RET-PPKAR1A、RET-TRIM24、RET-RFG9、RFP-RET、RET-GOLGA5、HOOK3-RET、KTN1-RET、TRIM27-RET、AKAP13-RET、FKBP15-RET、SPECC1L-RET、TBL1XR1/RET、CEP55-RET、CUX1-RET、KIAA1468-RET、RFG8/RET、RET/RFG8、H4-RET、ACBD5-RET、PTCex9-RET、MYH13-RET、PIBR1-RET、KIAA1217-RET、MPRIP-RET、HRH4-RET和Ria-RET。

93.治疗患者中的肠易激综合征的方法，所述方法包括给鉴定或诊断为具有肠易激综合征的患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

94.用于在有需要的患者中减轻与肠易激综合征相关的疼痛的方法，所述方法包括给鉴定或诊断为具有肠易激综合征的患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

95.用于在有需要的患者中抑制癌症的转移的方法，所述方法包括给患者施用治疗有效量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求22的药物组合物。

96.权利要求95的方法，其中权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与另一种化学治疗剂组合使用。

97.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；

(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有至少一个赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变；和

(c)如果对象具有具有至少一个赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或

(d)如果对象具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂。

98.权利要求97的方法，其中步骤(c)中的抗癌剂是第二RET抑制剂。

99.权利要求97的方法，其中步骤(c)中的抗癌剂是步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

100.权利要求97的方法，其中给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂，并且该方法还包括(e)给对象施用另一种抗癌剂。

101.权利要求100的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

102.权利要求101的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

103.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(a)将一个或多个剂量的第一RET抑制剂给对象施用一段时间；

(c)如果对象具有具有至少一个赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或

(d)如果对象具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂；其中突变是在氨基酸位置804的取代，例如，V804M、V804L或V804E。

104.权利要求103的方法，其中步骤(c)的抗癌剂是步骤(a)中施用的第一RET抑制剂。

105.权利要求103的方法，其中给对象施用另外剂量的步骤(a)的第一RET抑制剂，并且该方法还包括(e)施用另一种抗癌剂。

106.权利要求105的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

107.权利要求105的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

108.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(a)确定从具有癌症和先前施用一个或多个剂量的第一RET抑制剂的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的第一RET抑制剂治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变；和

(b)如果对象具有具有至少一个赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或

(c)如果对象具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用另外剂量的第一RET抑制剂。

109.权利要求108的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

110.权利要求108的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是先前施用给对象的第一RET抑制剂。

111.权利要求110的方法，其中给对象施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂，并且该方法还包括(d)给对象施用另一种抗癌剂。

112.权利要求111的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

113.权利要求111的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

114.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(b)如果对象具有具有至少一个赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则给对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂；或

(c)如果对象具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的第一RET抑制剂治疗的增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞，则施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂。

115.权利要求114的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是先前施用给对象的第一RET抑制剂。

116.权利要求114的方法，其中给对象施用另外剂量的先前施用给对象的第一RET抑制剂，并且该方法还包括(d)给对象施用另一种抗癌剂。

117.权利要求116的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

118.权利要求116的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

119.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(a)施用一个或多个剂量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物一段时间；

(b)在(a)之后，确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变；和

(c)给确定为具有一个或多个赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或

(d)给具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用步骤(a)的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象施用另外剂量的步骤(a)的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

120.权利要求119的方法，其中第二RET抑制剂是在步骤(c)中施用的。

121.权利要求119的方法，其中第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物是在步骤(c)中施用的。

122.权利要求119的方法，其中步骤(c)的抗癌剂是第一RET抑制剂。

123.权利要求119的方法，其中步骤(c)的抗癌剂是不同于步骤(a)中施用的第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

124.权利要求119的方法，其中步骤(c)的抗癌剂是步骤(a)中施用的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

125.权利要求119的方法，其中给对象施用另外剂量的步骤(a)的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物并且该方法还包括(e)给对象施用另一种抗癌剂。

126.权利要求125的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

127.权利要求125的方法，其中步骤(e)的抗癌剂是不同于步骤(a)的化合物的第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

128.治疗具有癌症的对象的方法，其中方法包括:

(a)确定从具有癌症并先前施用一个或多个剂量的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的对象获得的样品中的癌细胞是否具有一个或多个赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变；和

(b)给确定为具有具有一个或多个赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象施用作为单一疗法或与另一种抗癌剂组合的第二RET抑制剂或第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；或

(c)施用另外剂量的先前施用给具有不具有赋予癌细胞或肿瘤对用先前施用给对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗增加的抗性的RET抑制剂抗性突变的癌细胞的对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

129.权利要求128的方法，其中第二RET抑制剂是在步骤(b)中施用。

130.权利要求128的方法，其中第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物是在步骤(b)中施用。

131.权利要求128的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

132.权利要求128的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

133.权利要求128的方法，其中步骤(b)的抗癌剂是先前施用给对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

134.权利要求128的方法，其中给对象施用另外剂量的先前施用给对象的权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，并且该方法还包括(d)给对象施用另一种抗癌剂。

135.权利要求134的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是第二RET抑制剂。

136.权利要求135的方法，其中步骤(d)的抗癌剂是第二种权利要求1-21中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。