CN101932703A - 具有改变的特性的α-淀粉酶变体 - Google Patents

Abstract

公开了包含α-淀粉酶变体的组合物，所述α-淀粉酶变体具有α-淀粉酶活性并且相对于衍生这些变体的亲本AmyS样α-淀粉酶而言展示改变的特性。所述组合物包含额外的酶如植酸酶。也公开了使用所述组合物的方法和与之相关的试剂盒。

Description

具有改变的特性的α-淀粉酶变体

序列表

本文附带包含SEQ ID NO：1-31的序列表，其中所述每个序列通过引用的方式完整并入本文。

本公开的领域

本公开涉及新的α-淀粉酶。特别地，它涉及某些α-淀粉酶变体活性，以及其与一种或多种其他酶如植酸酶的掺合物。

发明背景

α-淀粉酶(α-1，4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组催化淀粉及相关的线型或分支1，4-糖苷寡糖和多糖水解的酶。

α-淀粉酶可以用于各种目的。例如，α-淀粉酶商业地用于淀粉加工的初始阶段(例如，液化)中；湿磨工艺中；和从糖类生产醇中。它们也用作洗涤剂基质中的清洁剂或辅料，在纺织工业中用于淀粉退浆；用在焙烘用途中；用于饮料工业；用于油田的钻井工艺中；用于再循环过程，例如用于纸张脱墨，和用于动物饲料中。

已经试图构建具有针对特定用途如淀粉液化和纺织品退浆的改良特性的α-淀粉酶变体。

需要创造和改善这样的淀粉酶，所述淀粉酶例如为包括谷物商业加工(例如液化过程)在内的多种用途提供了优于工业标准酶(例如来自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis))的制造和/或性能优点。也需要包含改良的淀粉酶和额外的酶如植酸酶的组合物。

发明概述

在一个方面，本公开尤其涉及亲本α-淀粉酶(如AmyS样α-淀粉酶)的新α-淀粉分解酶变体，特别是展示在工业加工淀粉(淀粉液化、糖化等)方面有利的改变特性的变体。

例如，与亲本AmyS样α-淀粉酶或参考α-淀粉酶相比较，该变体在以下一个或多个特性方面改变：净电荷、底物特异性、底物切割、底物结合、热稳定性、在一个或多个pH处的活性、在一个或多个pH处的稳定性[如在特定pH(例如低(例如pH≤6，尤其pH≤5)或高(例如pH≥9)pH值)处提高的稳定性]、氧化条件下的稳定性、金属离子需求[例如Ca²⁺依赖性或Ca²⁺需求]、比活性、催化速率、催化效率、在植酸或另一种植酸盐存在下的活性(即对于植酸盐抑制的易感性)、在植酸或植酸盐存在下的热或pH稳定性、在液化试验中影响峰粘度的能力、在液化试验中影响终末粘度的能力和其他目的特性。例如，一个或多个改变可以产生这样的变体，其与亲本α-淀粉酶(如AmyS样α-淀粉酶)相比较具有降低的Ca²⁺依赖性和/或改变的pH/活性特征和/或改变的热稳定性。

在一个方面，本公开涉及变体α-淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列，并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，并且还包含一项或多项以下对其氨基酸序列的修饰：

a)一个或多个在如下位置处的替换：在第349氨基酸位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸；

b)在与第97、319、349、358、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处的其他序列修饰；

c)在F178、R179、G180、I181、G182或K183位置或其成对位置处的一个或多个氨基酸的缺失；

d)在第178、179、180、181、182或183氨基酸位置的一个或多个位置处的其他序列修饰；

e)N193F或V416G或这两者的替换；

f)在第193、416或这两者位置处的其他序列修饰；

g)用丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸或亮氨酸残基替换在经修饰的α-淀粉酶变体的部分中存在的一个或多个脯氨酸残基；

h)用另一种天然存在的氨基酸残基替换在经修饰的α-淀粉酶变体的部分中存在的一个或多个脯氨酸残基；

i)用丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸残基替换在亲本α-淀粉酶中存在的一个或多个半胱氨酸残基；

j)用另一种天然存在的氨基酸残基替换在亲本α-淀粉酶中存在的一个或多个半胱氨酸残基；

k)在SEQ ID NO：7是用于编号的参考淀粉酶的情况下，任意的以下突变：M15T，L、M15X、V128E、V128X、H133Y、H133X、N188S，T，P、N188X、M197T，L、M197X、A209V、A209X、M197T/W138F、M197T/138Y、M15T/H133Y/N188S、M15N128E/H133Y/N188S、E119C/S130C、D124C/R127C、H133Y/T149I、G475R、H133Y/S187D或H133Y/A209V；

l)在SEQ ID NO：7是参考淀粉酶的情况下，在M15、V128、A111、H133、W138、T149、M197、N188、A209、A210、H405、T412位置的一个或多个位置处的其他修饰；

m)在亲本α-淀粉酶包含SEQ ID NO：7的情况下，当SEQ ID NO：2是参考淀粉酶时，位于任意的M8、M9、M96、M200、M206、M284、M307、M311、M316和M438位置处的一个或多个半胱氨酸残基(C363)或一个或多个甲硫氨酸残基的缺失或替换；

n)在SEQ ID NO：1或2是参考淀粉酶的情况下，与P17、D19、T21、N28、S51、G72、V74、A82、Q86、Q89、A93、G95、Q97、W115、D117、P123、S124、D125、N127、I130、G132、Q135、P145、G146、G148、S153、Y159、W166、S169、K171、R179、G180、I181、G182、K183、W187、P209、N224、S242、P245、G256、D269、N271、T278、N281、G302、A304、R308、T321、Q358、P378、S382、K383、T398、H405、T417、E418、P420、G421、P432、W437、G446、G454、S457、T459、T461、S464、G474或R483相对应的一个或多个氨基酸残基的修饰；或

o)a)Q97E、Q319E、Q358E、Q443E；b)Q97E、Q319R、Q358E、Q443R；c)Q97E、Q319R、Q358E；d)Q97E、Q319R、Q443E；e)Q97E、Q319R、Q443R；f)Q97E、Q358R；g)Q97E、Q443E；h)Q319R、Q358E、Q443E；或i)Q319R、Q358R、Q443E的成组替换。

在目前优选的实施方案中，该α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。

该α-淀粉酶变体优选地从包含任一SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16的亲本AmyS样α-淀粉酶衍生。在某些实施方案中，用于氨基酸残基编号的参考α-淀粉酶优选地是SEQ ID NO：1或2。

在一个实施方案中，该变体的氨基酸序列与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少98％同一。

也提供了包含编码序列的核酸，即多核苷酸，其中所述的编码序列编码a)本文中所述变体的氨基酸序列；或b)任一SEQ ID NO：3、4、16、22、23、24、25、26、27、28、29或30。也提供了载体及包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞。

在多个实施方案中，宿主细胞是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、鼠灰链霉菌(S.murinus)；大肠杆菌(Escherichia coli)或假单胞菌属的物种(Pseudomonas spp.)。

在另一方面，在本文中提供了亲本嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)α-淀粉酶的变体，其中该变体具有与亲本嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶具有至少95％同源性并包含第242位氨基酸替换的氨基酸序列，其中肽序列中的氨基酸位置相对于SEQ ID NO：1或2进行编号，并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。

在另一方面，提供了组合物，其包含：

a)如本文中提供的α-淀粉酶变体，和

b)至少一种额外的酶。

在一个实施方案中，该组合物是一种包含a)至少一种变体淀粉酶和b)至少一种额外的酶的组合物，其中所述的变体淀粉酶包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列，并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，所述变体具有可检测的α-淀粉酶活性。

额外的酶优选地是植酸酶。该组合物中的α-淀粉酶变体优选地是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。

在一个实施方案中，该α-淀粉酶变体还在与参考α-淀粉酶第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。该α-淀粉酶变体也可以包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸。

在一个实施方案中，该α-淀粉酶变体包含N193或V416或这二者的替换，例如，N193F或V416G或这二者的替换。

在其他实施方案中，该α-淀粉酶变体包含第179和180位氨基酸的缺失。在一个实施方案中，组合物包含这样的α-淀粉酶变体，其与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性并且相对于包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的参考α-淀粉酶中的编号而言包含第242位氨基酸替换。如同上文，亲本AmyS样α-淀粉酶优选地是SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

在一个方面，本公开涉及利用α-淀粉酶(AA)活性和植酸盐水解酶(FTU)水解可溶性淀粉底物。例如，其中AAU∶FTU的比率是从约1∶15至约15∶1，优选地是从1∶10至约10∶1。在一个实施方案中，AAU∶FTU的比率是从1∶4至3∶1。在又一个实施方案中AAU∶FTU的比率是1∶1。在一个当前优选的组合物中，植酸酶具有SEQ ID NO：31的序列。

更具体地，提供了用于处理淀粉浆液的方法，包括步骤a)添加至少一种植酸酶和至少一种α-淀粉酶至淀粉浆液；其中在相同时间或大致相同时间或以任意顺序分别添加植酸酶和α-淀粉酶，并且其中该α-淀粉酶是这样的变体淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，所述变体具有可检测的α-淀粉酶活性；和b)在允许植酸酶及α-淀粉酶活性的条件下温育该淀粉浆液。

用于该方法中的α-淀粉酶变体优选地是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。在一个实施方案中，该α-淀粉酶变体还在与参考α-淀粉酶第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。该α-淀粉酶变体可以包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸。在一个实施方案中，该α-淀粉酶变体包含N193或V416或这二者的替换，例如，N193F或V416G或这二者的替换。在其他实施方案中，该α-淀粉酶变体的特征是第179和180位氨基酸的缺失。

在该方法的一个实施方案中，亲本AmyS样α-淀粉酶是SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

植酸酶可以在α-淀粉酶变体之前或之后添加。可以在添加植酸酶之后并且在添加α-淀粉酶变体之前预温育淀粉浆液。在一个实施方案中，植酸酶的纳入相对于不包括淀粉浆液与植酸酶接触的可比较方法而言引起α-淀粉酶变体的热稳定性提高。在该方法的一个实施方案中，植酸酶和α-淀粉酶变体在添加至淀粉浆液之前存在于单一掺合物中。在另一个实施方案中，植酸酶具有SEQ ID NO：31的氨基酸序列。

在又一方面，本公开涉及用于在包含底物的浆液中液化淀粉的方法，所述底物包括植物材料如来自干磨法或湿磨法的颗粒淀粉，该方法包括初级和/或次级液化步骤，所述方法包括在初级和/或次级液化步骤中同时或分别地以任意顺序添加至少一种植酸水解酶和至少一种α-淀粉酶的组合至浆液。该方法可以还包括糖化液化的淀粉以获得可发酵糖；并且回收可发酵糖。在一些实施方案中，该方法还包括在合适的发酵条件下发酵可发酵糖以获得终产物如醇。在一些实施方案中，酶组合物含有至少一种α-淀粉酶和植酸酶。在一些实施方案中，酶组合物为掺合物形式。在又一方面，本公开涉及用于发酵淀粉底物的方法，该方法包括以任意顺序添加单一或分批量的α-淀粉酶和植酸酶的组合。在另一方面，将处理的淀粉底物发酵成乙醇。

在该方法的多个实施方案中，参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2，并且α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242Tα-淀粉酶变体。

在另一方面是获得可发酵底物的方法，所述方法为通过使含有颗粒淀粉的磨碎谷物浆液与植酸水解酶在比淀粉凝胶化温度低约0℃至约30℃的温度接触，使该浆液与α-淀粉酶接触，升高温度高于颗粒淀粉凝胶化温度以引起淀粉凝胶化，通过使凝胶化的淀粉与α-淀粉酶接触足以水解该淀粉的时间而水解凝胶化的淀粉，并且获得可发酵底物。植酸水解酶可以是细菌或真菌植酸酶。真菌植酸酶可以是曲霉属(Aspergillus)植酸酶或布丘氏菌属(Buttiauxella)植酸酶。在一些实施方案中，细菌植酸酶来自大肠杆菌。

随后，提供了从包含磨碎谷物的含淀粉浆液产生可发酵底物的方法，该方法包括步骤：

a)将含淀粉浆液与足以从淀粉产生可发酵底物的量的至少一种植酸酶和至少一种α-淀粉酶接触；

其中在相同时间或大致相同时间或以任意顺序分别启动与植酸酶和α-淀粉酶的接触，并且其中该α-淀粉酶是这样的变体淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，所述变体具有可检测的α-淀粉酶活性；和

b)在允许植酸酶及α-淀粉酶活性的条件下温育该淀粉浆液一段引起可发酵底物产生的时间；其中与植酸酶的接触在该淀粉酶之前启动时，浆液在比该浆液与所述淀粉酶接触之前的凝胶化温度低0-30℃的温度温育，此后升高温度高于凝胶化温度，持续时间为有效水解淀粉的时间。

在一个实施方案中，参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2，并且亲本AmyS样α-淀粉酶包含任一SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。α-淀粉酶变体优选地是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242Tα-淀粉酶变体。

在一个实施方案中，该方法包括使用至少一种额外的酶，所述额外的酶是植酸酶、纤维素酶、蛋白酶、氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、几丁质酶、角质酶、环糊精葡聚糖转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤过氧化物酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、核酸酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、支链淀粉酶、异淀粉酶、角叉菜聚糖酶或两种或更多种前述酶的组合。

该方法优选地是淀粉降解、液化、发酵工艺、醇生产、甜味料生产、可发酵底物生产、清洁、洗涤、污渍去除或焙烘过程等过程的一部分。

在另一方面，本公开涉及用于产生可发酵糖的方法，包括a)将含有磨碎淀粉的材料与水和稀釜馏物混合，其中稀釜馏物占10至70％v/v，并且获得包含淀粉及具有20至50％w/w干固体(ds)含量的浆液，b)用植酸酶在液化淀粉之前或与之同时处理该浆液，c)液化该淀粉，d)在步骤b)期间和/或与液化步骤同时添加α-淀粉酶至所述淀粉和e)糖化液化的淀粉以获得可发酵糖，其中在步骤a)、b)、c)、d)或e)的任意步骤期间不调节pH。在一些实施方案中，将可发酵糖回收和纯化或异构化。在其他实施方案中，在液化步骤之前添加植酸酶。在其他实施方案中，α-淀粉酶随植酸酶一起添加。又在其他实施方案中，在液化步骤期间添加第二份α-淀粉酶剂量。

本文中也提供了用淀粉酶处理含淀粉材料或淀粉的方法。所述方法包括步骤：将含淀粉材料或淀粉与包含本文中所公开的至少一种α-淀粉酶变体的组合物在足以允许α-淀粉酶的可检测活性的条件下接触；其中该变体淀粉酶是本文中公开的任意变体；并且其中该淀粉至少部分地被该变体淀粉酶降解。在优选的实施方案中，该α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体α-淀粉酶。所述方法方便地用作淀粉降解、液化、发酵工艺、醇生产、甜味料生产、可发酵底物生产、清洁、洗涤、污渍去除或焙烘过程等过程的一部分。

附图简述

图1显示用于本文中的几种候选亲本α-淀粉酶(AmyS样淀粉酶)之间氨基酸序列的比对结果。可以轻易地确定与来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的淀粉酶(SEQ ID NO：1)的任意氨基酸位置(例如1至520)相对应的位置。SEQID NO：1，来自嗜热脂肪土芽孢杆菌“BSG”的α-淀粉酶；SEQ ID NO：2，来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的截短淀粉酶(AmyS，SPEZYME XTRA)；SEQID NO：3，嗜热脂肪土芽孢杆菌(S242A变体淀粉酶)；SEQ ID NO：4，嗜热脂肪土芽孢杆菌(S242Q变体淀粉酶)；SEQ ID NO：5，嗜热脂肪土芽孢杆菌(S242E变体淀粉酶)；SEQ ID NO：6，Yamane 707淀粉酶；SEQ ID NO：7，成熟的LAT淀粉酶；SEQ ID NO：8，地衣芽孢杆菌野生型淀粉酶[TERMAMYL(NOVOZYMES)＝WO 02/10355A2中的SEQ ID NO：8]；SEQ ID NO：9，解淀粉芽孢杆菌淀粉酶，BAN；SEQ ID NO：10，STAINZYME＝作为WO 0060060中SEQ ID NO：2或US 6,528,298中SEQID NO：24的AA560；SEQ ID NO：11，盐敏芽孢杆菌(B.halmapalus)淀粉酶(NATALASE)；SEQ ID NO：12，KSM-1378(KAO CORP.，EP1199356中的SEQ ID NO：3)；SEQ ID NO：13，芽孢杆菌属物种KSM-K38(KAOCORP.，US 6,403,355B1中的SEQ ID NO：4)；SEQ ID NO：14，芽孢杆菌属物种KSM-K36(KAO CORP.，US 6,403,355B1中的SEQ ID NO：2)；SEQ ID NO：15，LIQUOZYME SC(NOVOZYMES)；SEQ ID NO：16，亲本α-淀粉酶共有序列#1。

图2显示pHPLT-AmyS质粒。

图3显示S242变体在95℃热应激30分钟后的残余活性百分数。还显示了具有羧基端截短29个氨基酸的Δ179-180的嗜热脂肪土芽孢杆菌阳性对照(即SEQ ID NO：2)。线指示在野生型酶的残余活性百分数的标准差之上2倍和3倍。S242A和S242Q清晰地显示比野生型更高的残余活性。

图4：图4A、B、C、D、E、F、G、H和I分别显示来自图1的几个序列的逐对比对结果和共有序列及特征，分别显示共有序列2、3、4、5、6、7、8、9和10或SEQ ID NO：22、23、24、25、26、27、28、29和30。

图5显示在没有钙添加的情况下野生型和淀粉酶变体的热熔融曲线和熔点。

图6显示在2mM添加的钙存在下野生型和淀粉酶变体的热熔融曲线和熔点。

图7显示Spezyme Xtra和两种变体相对于Liquozyme SC在4、10和20分钟的活性断面图。

图8显示4种变体相对于S242Q变体在3个时间点的活性断面图。

图9显示因30μg剂量的α-淀粉酶Liquozyme SC、Spezyme Ethyl或Spezyme Xtra的作用所致的谷物粉粘度降低。

图10显示因30μg剂量的α-淀粉酶Liquozyme SC或Spezyme Xtra或两种变体(S242A和S242Q)之一的作用所致的谷物粉粘度降低。

图11显示因20μg剂量的α-淀粉酶Liquozyme SC或Spezyme Xtra或两种变体(S242A和S242Q)之一的作用所致的谷物粉粘度降低。

图12显示用Liquozyme SC、Spezyme Xtra或两种变体(S242A和S242Q)之一经过时间(0、30、60和90分钟)处理的全磨谷物的DE进展。喷射之前和之后的液化酶投放量表示为“X+Y”，其中：X和Y分别代表喷射之前和之后添加的酶单位数。

图13显示用Liquozyme SC、Spezyme Xtra或两种变体(S242A和S242Q)之一经过时间(0、30、60和90分钟)处理的全磨谷物的喷射之后粘度。X和Y如图12所示。

图14显示用植酸酶和淀粉酶(Spezyme Xtra或S242Q变体)经过时间(0、30、60和90分钟)处理的全磨谷物的DE进展。MAXALIQ是从Danisco分公司Genencor可获得的植酸酶/淀粉酶掺合物。在全磨谷物(含有30％稀釜馏物的32％ds.谷物)、无喷射蒸煮的低pH(5.2)液化工艺中，在使用242Q AA的初级液化期间观察到植酸酶作用，参考实施例8。

图15显示用植酸酶和淀粉酶(例如，Spezyme Xtra或S242Q变体)经过时间(0、30、60和90分钟)处理的全磨谷物的喷射之后粘度。条件如图14中那样。参考实施例8。

图16显示用S242Q变体和植酸酶处理的全磨谷物的DE进展。条件包括：含有30％稀釜馏物，pH 5.2的32％全磨谷物。在30分钟预温育期间，以0(对照)、1、2、4、6、9和12FTU添加BP-17植酸酶，随后进行初级液化。初级液化期间使用的酶：242Q 4AAU/gm ds谷物，温育时间是在70℃45分钟。次级液化是在90℃90分钟。参考实施例9。

图17显示用S242Q变体和植酸酶处理的全磨谷物的喷射之后粘度。观察到移除植酸盐对于在90℃，pH 5.2分批液化全磨谷物期间粘度降低的影响。与植酸酶的预温育如图16中那样。参考实施例9。

图18显示植酸酶处理全磨谷物对提高S242Q变体的热稳定性和低pH稳定性的影响。观察到低pH对全磨谷物(含有30％稀釜馏物的32％ds.谷物)液化过程的影响。三角形，pH 5.2；正方形，pH 4.8；菱形，pH 4.5；和圆形，pH 4.2。参考实施例9。

图19显示在全磨谷物初级液化期间添加植酸酶对喷射蒸煮后粘度降低的影响。条件如图18中那样。白色，pH 5.2；黑色，pH 4.8；点划线，pH 4.5；并且虚线，pH 4.2。参考实施例9。

图20是这样的图，该图显示观察到BP-17浓度全磨谷物于pH 5.2被S242Q变体AA(4AAU/gds谷物)初级液化期间在90℃对DE进展速率的影响。测量了DE进展的速率(正方形)和植酸作为IP6的降低百分数(菱形)。

图21是显示S242Qα-淀粉酶变体对常规加工条件下DE进展的影响的图。观察了pH对伴有喷射蒸煮的液化(32％DS，30％稀釜馏物，10分钟，浆液在85℃+107℃喷射+3分钟停留时间+在85℃次级分批液化90分钟)中S242Q性能的影响。正方形，pH 5.8；菱形，pH 5.5。参考实施例8。

图22是这样的图，其描述使用S242Q组合电荷文库，在20℃于2倍Tide中清洁稻淀粉微量样品时，S242Q(实心圆圈)及其变体(空心圆)在北美洗衣条件下稻淀粉微量样品测定法中作为电荷之函数的性能。参考实施例16。

图23是这样的图，该图描述了使用TS23t组合电荷文库，在40℃于Persil中清洁稻淀粉微量样品时，具有以下突变：Q98R、M201L、S243Q、R309A、Q320R、Q359E和K444E的芽孢杆菌属物种截短TS-23淀粉酶(实心圆)及其电荷变体(空心圆)(见2008年6月6日提交的共同待决美国专利申请号PCT/US2008/007103)在西欧洗衣条件下稻淀粉微量样品测定法中作为电荷之函数的性能。参考实施例16。

图24是这样的图，该图描述S242Q(实心圆)及其变体(空心圆)在BODIPY-淀粉测定法中作为电荷之函数的性能。S242Q组合电荷文库(CCL)、对BODIPY-淀粉的比活性、标准测试条件参考实施例16。

图25A是描述作为相对振摇管表达之函数的相对BODIPY-淀粉水解作用(即，相对BODIPY-淀粉水解与相对振摇管表达)的图。图25B是描述作为相对振摇管表达之函数的相对微量样品-淀粉水解作用(即，相对微量样品-淀粉水解作用与相对振摇管表达)的图。参考实施例19。

图26A是描述作为电荷之函数的相对振摇管表达的图。图26B是描述作为电荷之函数的相对BODIPY-淀粉水解作用的图。参考实施例19。

图27A是描述作为电荷之函数的相对振摇管表达的图。图27B是描述作为电荷之函数的相对微量样品清洁活性的图。参考实施例19。

发明详述

1.定义和缩写

根据该公开，以下缩写和定义适用。应当指出如本文中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数称谓，除非上下文另外清楚地说明。因此，例如，对“一种多肽”的提及包括多种此类多肽，并且对“该制剂”的提及包括对本领域技术人员已知的一种或多种制剂和其等同物的提及等。

除非另外定义，本文中所用的全部技术及科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的相同意义。下文提供了以下术语。

1.1.缩写

除非另外说明，使用以下缩写：

AATCC  美国纺织化学师与印染师协会；

ADW    自动餐具洗涤；

AE     脂肪醇乙氧基化物；

AEO    脂肪醇乙氧基化物；

AEOS   乙氧基化脂肪醇醚硫酸盐；

AES    氧基化脂肪醇醚硫酸盐；

AFAU   酸性真菌α-淀粉酶单位；

AGU    葡糖淀粉酶活性单位；

AOS    α-烯基磺酸盐；

AS      醇硫酸盐；

BAA     细菌α-淀粉酶；

℃      摄氏度；

CCL     组合电荷文库；

cDNA    互补性DNA；

CMC     羧甲基纤维素；

dE      如CIE-LAB颜色空间所定义的总色差；

dH₂O    去离子水；

dIH₂O   Milli-Q过滤去离子水；

DE      右旋糖等同物；

DNA     脱氧核糖核酸；

dNTP    三磷酸脱氧核糖核苷酸；

DO      溶解氧；

DP3     具有3个亚单元的聚合程度；

DPn     具有n个亚单元的聚合程度；

DS(或ds)干固体含量；

DSC     差示扫描量热法；

DTMPA   二乙三胺五乙酸；

EC      酶分类酶学委员会；

EDTA    乙二胺四乙酸；

EDTMPA  乙二胺四甲叉膦酸；

EO      环氧乙烷；

eq      当量；

ETOH    乙醇；

F&HC    织物和家居用品护理

FTU    “植酸酶(fitase)”单位，植酸盐水解单位；

g(或gm)克；

GAU    葡糖淀粉酶单位；

gpg    格令/加仑；

g/l    克/升；

Genencor Danisco US Inc，Genencor Division，Palo Alto，CA；

H₂O    水；

HDG    重垢颗粒洗涤剂；

HDL    重垢液体洗涤剂；

HFCS   高果糖玉米糖浆；

HFSS   基于高果糖淀粉的糖浆；

HPAEC-PAD  具有脉冲安培检测的高效阴离子交换色谱；

hr     小时；

IKA    北卡莱罗纳州威尔明顿SE North Chase公园大街2635号

       IKA Works Inc；

IPTG   异丙基β-D-硫代半乳糖苷；

JPN    日本；

kg     千克；

LA     Luria琼脂；

LAS    直链烷基苯磺酸盐；

LB     Luria肉汤；

LU     脂肪酶单位；

M      摩尔；

MBD培养基  基于MOPS的定义培养基；

MES    2-(N-吗啉基)乙磺酸

mg     毫克；

min    分钟；

mL(或ml)  毫升；

mm     毫米；

mM     毫摩尔；

MOPS   3-(N-吗啉基)-丙磺酸

MW     分子量；

NA     北美洲；

Ncm    牛顿厘米；

NEO    新霉素；

ng     纳克；

nm     纳米；

NOBS   壬酰氧苯磺酸盐；

N      正常；

NTA    氨三乙酸；

PAHBAH 对羟基苯甲酰肼；

PCR    聚合酶链反应；

PEG    聚乙二醇；

pI     等电点；

ppm    每百万之...份；

PVA    聚(乙烯醇)；

PVP    聚(乙烯吡咯烷酮)；

RAU    参考淀粉酶单位；

RMS    均方根；

RNA    核糖核酸；

rpm    转/分钟

SAPU   分光光度酸性蛋白酶单位；

SAS    仲烷基磺酸盐；

1X SSC 0.15M NaCl，0.015M柠檬酸钠，pH 7.0；

sec    秒；

％SRI  百分污渍去除指数；

SSF    同时糖化和发酵；

TAED   四乙酰乙二胺；

T_m     DSC曲线的热中点或蛋白质的熔融温度；

TNBS      三硝基苯磺酸；

μg       微克；

μl，(μL)微升；

μNm      微牛顿米；

μm       微米；

μM       微摩尔；

U         单位；

V/V       体积比体积；

WE        西欧；

wt％      重量百分数；

w/v(或W/V)重量/体积；

w/v(或W/w)重量/重量；

wt        野生型。

1.2.定义

在一些方面，本公开依赖于遗传工程和分子生物学中使用的常规技术和方法。以下资源包括对根据本文中所公开内容有用的一般方法学的描述：Sambrook等人，MOLECULAR CLONING：A LABORATORYMANUAL(第二版，1989)；Kreigler，GENE TRANSFER ANDEXPRESSION；A LABORATORY MANUAL(1990)和AusubeI等人，编著.CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(1994)。

这些通用参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。除非本文另外定义，本文中所用的全部术语及科学术语具有与本公开所属领域的技术人员通常理解的相同意义。Singleton等人，DICTIONARY OFMICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY，第2版，John Wileyand Sons，New York(1994)和Hale与Markham，THE HARPERCOLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY，Harper Perennial，NY(1991)向技术人员提供了本公开中所使用的众多术语的通用字典。

“分离的”意指分离的物质(例如一种化合物或序列)借助人工相对于如自然界中存在的该化合物或序列而言被修饰。例如，分离的序列至少部分地不含或甚至基本上不含如自然界中存在的与该序列天然关联的至少一种其他组分。

当用来描述材料或物质时，“纯化的”意指该材料或物质处于相对纯的状态，例如，至少约90％纯度，至少约95％纯度、至少约98％纯度或至少约99％纯度。

如本文中所用，术语“淀粉”指包含复杂多糖的任意糖组合物，其包含具有式(C₆H₁₀O₅)_x的直链淀粉和/或支链淀粉，其中X可以是任意数字。优选地，淀粉指在包括但不限于谷粒、牧草、根状茎或根的植物中天然存在并且更具体来自小麦、大麦、谷物、燕麦、稻、高粱、木薯(cassava)、谷子、马铃薯、甘薯和木薯的任意碳水化合物。淀粉也可以指合成性淀粉或改性淀粉，如用作酶测定法的可检测底物的化学改性淀粉或者旨在改善一种或多种使用特性的化学改性或酶改性淀粉。

如本文中所用，“植酸”(或肌醇六磷酸(IP6))是磷在多种植物组织如麸、种子等中的主要贮藏形式。植酸在本文中也称作“植酸盐”，尤其处于盐形式时。多种其他肌醇磷酸如肌醇五磷酸(IP5)、肌醇四磷酸(IP4)和肌醇三磷酸(IP3)在本文中也称作植酸盐。植酸盐通常是人和大多数单胃动物可消化的。

降解植酸盐的酶在本文中称作“植酸酶”或“植酸酶(fytase)”并且一般是六磷酸肌醇磷酸水解酶。植酸酶活性定义为植酸酶单位(FTU或U)，其中一个FTU定义为在pH 5.5和37℃每分钟从0.0015mol/l植酸钠中释放1微摩尔无机磷的酶量。该定义提供了对植酸酶活性量的有用测量并代表一种简单的基准度量。已经鉴定并表征了酵母(例如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)、异常毕赤酵(Pichia anomala)、Arxulaadeninivorans)、革兰氏阴性细菌(例如大肠杆菌(Escherichia coli)、假单胞菌属的物种(Pseudomonas spp.)、克雷伯菌属某些物种(Klebsiella spp.))和革兰氏阳性(例如芽孢杆菌属的某些物种(Bacillus spp.))的植酸盐降解酶。来自许多植物和来自丝状真菌如青霉属某些物种(Penicillium spp.)、曲霉属某些物种(Aspergillus spp.)、木霉属某些物种(Trichoderma spp.)、梨形毛霉(Mucor piriformis)和枝孢霉属某些物种(Cladosporium spp.)的植酸酶也是已知的。已经根据启动水解的位点表征了3-植酸酶(EC 3.1.3.8)和6-植酸酶(EC 3.1.3.26)。另外，植酸酶已经基于它们的“最适pH”表征为酸性(最适pH约5)或碱性(最适pH约9)。多种商业植酸酶是可获得的，包括ROVABIO(Genencor International)。

“淀粉酶”指能够催化淀粉底物的切割，从而导致淀粉降解或部分降解的酶。淀粉酶通常是切割淀粉中糖苷键的水解酶。如本文中所用，淀粉酶包括任意的葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶，例如芽孢杆菌属的某些物种、尤其地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的野生型α-淀粉酶。通常，α-淀粉酶(EC 3.2.1.1；α-D-(1→4)-葡聚糖葡聚糖水解酶)定义为以随机方式切割淀粉分子内部α-D-(1→4)O-糖苷键的内切作用酶。相反，外切作用解淀粉酶，如β-淀粉酶(EC 3.2.1.2；和α-D-(1→4)-葡聚糖麦芽糖水解酶)和一些产物特异性淀粉酶如生麦芽糖α-淀粉酶(EC 3.2.1.133)从非还原末端切割底物淀粉分子。β-淀粉酶、α-葡糖苷酶(EC 3.2.1.20；α-D-葡糖苷葡萄糖水解酶)、葡糖淀粉酶(EC 3.2.1.3；α-D-(1→4)-葡聚糖葡萄糖水解酶)和产物特异性淀粉酶可以从淀粉产生特定长度的麦芽低聚糖。来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的野生型α-淀粉酶或“AmyS”淀粉酶在本文中有时候称作XTRA或SPEZYME XTRA，它们是来自GenencorInternational的商业AmyS产物。

如本文中所用，“AmyS样α-淀粉酶”用作本文中的亲本淀粉酶。AmyS样α-淀粉酶基于它们之间存在的实质同源性而构成本文中的一类α-淀粉酶。“AmyS样α-淀粉酶”意图指在氨基酸水平针对本文中具有SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列的α-淀粉酶显示实质同一性的α-淀粉酶类，特别地指芽孢杆菌属α-淀粉酶，尤其指嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)α-淀粉酶。从Genencor分公司Danisco US Inc可商业地获得Spezyme Xtra。嗜热脂肪土芽孢杆菌已经在文献中称作嗜热脂肪芽孢杆菌并且这二者可以在本文中互换地使用。具有本文中分别作为SEQ IDNO：1、6、7、8、9、10、11、12、15和16所提供的氨基酸序列的全部α-淀粉酶视为AmyS样α-淀粉酶并且因而适合作为亲本α-淀粉酶。AmyS样α-淀粉酶也包括这样α-淀粉酶，其i)具有与SEQ ID NO：1、6、7、8、9、10、11、12、15和16中所示氨基酸序列至少之一具有至少60％同源性(同一性)，如至少70％、至少75％或至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列和/或ii)由这样的DNA序列编码，其中所述DNA序列与编码以上所述任意α-淀粉酶的DNA序列或明显来自WO 06/002643的SEQ ID NO：9(BAN)、5(BSG)、3(SP722)、1(SP690)、7(LAT)、11(AA560)中或本说明书的那些DNA序列杂交，其编码本文分别在SEQ ID NO：1、6、7、8、9、10、11、12、15和16中所示的任意氨基酸序列。用作AmyS样α-淀粉酶并因而用作产生本文变体的亲本酶的其他同源α-淀粉酶还包括由EP0252666中描述的地衣芽孢杆菌菌株产生的α-淀粉酶；在WO 91/00353和WO 94/18314中鉴定的(ATCC 27811)和α-淀粉酶。商业AmyS样α-淀粉酶包含于按以下商品名称出售的产品中：

AA和ULTRAPHLOW(从Danisco US Inc，Genencor Division可获得)和Keistase^TM(从Daiwa可获得)和LIQUEZYME SC(从丹麦Novozymes可获得)。本文以下1.5部分提供了关于AmyS样α-淀粉酶的进一步信息。其中的表A提供了几种有用AmyS样α-淀粉酶的名单以及比较彼此之间氨基酸序列同一性的便利方法。技术人员会理解可以对其他α-淀粉酶构建相似表格以确定它们作为亲本酶在本文中的适用性。

如本文中所用，“分光光度酸性蛋白酶单位”(“SAPU”)是蛋白酶酶活性的单位，其中1SAPU是在测定法的条件下每分钟从酪蛋白底物中释放1微摩尔酪氨酸的蛋白酶酶活性的量。

“葡糖淀粉酶单位”(“GAU”)是解淀粉活性的度量，其定义为在pH 4.2和60℃每小时将从可溶性淀粉底物产生1g还原性糖(计算为葡萄糖)的酶活性的量。

本文中所用，术语“变体”可以与术语“突变体”互换地使用。“变体”可以指多肽或核酸。变体包括一个或多个序列“修饰”，其中如在本文中所用，所述的序列修饰包括相对于参考序列在一个或多个位置处的替换、插入、缺失、截短、颠换和/或倒位。每种修饰可以包括相对于参考序列导致序列中一个或多个氨基酸残基或核苷酸改变的变化。变体核酸包括与能够同本文中所呈现核苷酸序列杂交的序列互补的序列。例如，本文的变体核酸序列可以与能够同本文中所呈现核苷酸序列在严格条件(例如50℃和0.2XSSC(1X SSC＝0.15M NaCl，0.015M柠檬酸钠，pH 7.0))下杂交的序列互补。更优选地，术语“变体”包括与能够在高度严格条件(例如65℃和0.1XSSC)下同本文中所呈现核苷酸序列杂交的序列互补的序列。

当用来描述酶时，“热稳定的”意指该酶比参考酶更为热稳定。在本申请中，如果α-淀粉酶变体在相同实验条件(例如相同的温度、底物浓度等)下特定时间间隔后具有相对更高的酶活性，则该变体比野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶更为热稳定。备选地，与参考酶相比，更为热稳定的酶具有由差示扫描量热法确定的更高热容量。

多肽的“熔融温度”(T_m)是该多肽的构象发生可测量的温度依赖性变化的温度。蛋白质构象和T_m可以例如通过圆二色谱法(一种最通用和最基础的研究蛋白质折叠的工具)分析。圆二色谱测量圆偏振光的吸收。在蛋白质中，结构如α螺旋和β折叠通常具有手性并且因而吸收圆偏振光。光吸收作用提供了蛋白质折叠程度的度量。这种吸收作用的变化作为温度或变性剂浓度的函数可以用来研究蛋白质的平衡解折叠过程。这种类型的光谱学也可以与装置如截流混合仪(stopped flow mixer)组合来测量蛋白质折叠/解折叠的动力学。

“钙依赖的”意指特定酶需要钙以实质地展示出催化活性。一般如本文中所用，”钙依赖的”包括严格要求双价金属离子以展示催化活性的任何酶的特性并且也包括在钙或另一种双价阳离子存在下实质(例如超过20％)提高其催化活性的酶。

如本文中所用，”pH稳定的”就酶而言可以涉及酶活性或酶的蛋白质构象。在第一种意义下，“pH稳定的”意指酶在特定pH或在特定pH范围内保留催化活性。在第二种意义下，酶可以视为在该蛋白质没有不可逆变性的pH处是“稳定的”。在这种情况下，该酶在回转至能够支持催化活性的pH时会变得有催化活性。pH稳定性也可以以相对或比较性方式使用，如相对于参考酶。在本申请中，α-淀粉酶变体可以比野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶更为pH稳定，当该变体比野生型具有相对更高的活性时，例如当维持在给定的pH处或在包括pH在内的相同条件下分析时。最感兴趣的pH一般是实际使用的条件或是处在或接近该酶保持催化活性的天然能力的界限或极限处的pH。

“pH范围”意指pH值的范围，例如，从更酸至更碱或反之亦然。就酶活性而言，pH范围表明该酶展示特定活性水平(例如最小活性、特定百分数的最大活性或特定水平的底物转化或产物形成)的pH值上限和下限。

当涉及细胞、核酸、蛋白质或载体使用时，“重组”是导入异源序列或改变天然序列的结果或已经因导入异源序列或改变天然序列而被修饰的细胞、核酸、蛋白质或载体，或细胞从如此修饰或改变的细胞衍生。因而，例如，重组细胞可以表达在该细胞的天然(非重组)形式中不存在的基因或可以表达本来差异性表达(例如不足表达或过量表达)、异常表达或根本不表达的天然基因。

如本文中所用，“核苷酸序列”或“核酸序列”指两个或更多个核苷酸、核糖核苷酸等或其衍生物的任意序列。核苷酸序列包括寡核苷酸和多核苷酸序列，以及其变体、片段、同源物和衍生物。核苷酸序列可以是单链、双链或多链的。核苷酸序列可以来自任何来源或起源，例如是基因组的、合成的或重组的，并且包括基因组DNA，cDNA、合成DNA和RNA等以及其杂合体。核苷酸序列可以包含一个或多个密码子并且可以编码一种或多种多肽。核苷酸序列可以偏好地采取一种或多种能量优选的三维结构。

“载体”指经常用于体外实验用途或用于将核酸导入一种或多种细胞类型的核苷酸序列。载体包括克隆载体、体内或体外表达载体、穿梭载体、质粒、噬菌粒、粘粒、噬菌体颗粒、盒等。

如本文中所用的“表达载体”意指包含与适宜调控序列有效连接的DNA序列的DNA构建体，其中所述的调控序列能够引起该DNA在合适宿主中的表达。此类调控序列可以包括实施转录的启动子、控制转录的任选操纵基因序列、编码mRNA上的合适核糖体结合位点的序列、增强子和控制转录及翻译终止的序列。

多核苷酸或多肽与另一个序列具有某个序列同一性百分数(例如至少约80％、85％、90％、95％或99％)意指当比对时，在比较的这两个序列中碱基或氨基酸残基是相同的时的百分数。可以使用本领域已知的任意合适软件程序例如CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F.M.等人(编著)1987，附录30，第7.7.18部分)中描述的那些软件程序确定这种比对结果和同源性或同一性百分数。此类程序可以包括GCGPileup程序、FASTA(Pearson等人(1988)Proc.Natl，Acad.Sci USA 85：2444-2448)和BLAST(BLAST Manual，Altschul等人，Natl Cent.Biotechnol.Inf.，Natl Lib.Med.(NCIB NLM NIH)，Bethesda，Md.和Altschul等人，(1997)NAR 25：3389-3402)。另一种比对程序是使用默认参数的ALIGN Plus(Scientific and Educational Software，PA)。可使用的另一种序列软件程序是在序列软件包6.0版(Sequence Software PackageVersion 6.0)(威斯康星州麦迪逊威斯康辛大学Genetics Computer Group)中可获得的TFASTA数据搜索程序。

本领域技术人员会认识到由本公开包括的序列也可以通过严格条件下与所例举的amyS序列(例如WO 06/002643的SEQ ID NO：5)杂交的能力进行定义。当单链形式的核酸可以在适宜的温度和溶液离子强度条件下与另一种核酸复性时，则该核酸可与另一种核酸序列杂交。杂交和洗涤条件是本领域熟知的(见，例如上文的Sambrook(1989)，尤其第9和11章)。在一些实施方案中，严格条件对应于65℃的T_m和0.1×SSC，0.1％SDS。

“基因”指参与产生多肽并包括在编码区之前及之后的区域以及各个编码区段(外显子)之间间插序列(内含子)的DNA区段。

就多核苷酸或蛋白质而言，“异源的”指不天然存在于宿主细胞中的多核苷酸或蛋白质。在一些实施方案中，该蛋白质是商业重要的工业用蛋白质。该术语意图包括由天然存在基因、突变基因和编码异源蛋白质如融合蛋白质的核酸和/或合成基因编码的蛋白质。

就多核苷酸或蛋白质而言，“内源的”指天然存在于宿主细胞中的多核苷酸或蛋白质。

如本文中所用，术语“转化的”、“稳定转化的”和“转基因的”就细胞而言使用时，意指该细胞包含至少一种非天然(例如异源的)核酸序列。稳定转化的细胞包含至少一种这样的核酸序列，所述核酸序列整合到细胞的基因组或整合在经多个世代仍保留的附加型质粒中。

如本文中所用，“表达”指基于基因的核酸序列产生多肽的过程。该过程包括转录和翻译。

“信号序列”意指与蛋白质的氨基端部分共价结合的氨基酸序列，所述氨基酸序列促进该蛋白质的运输，例如促进该蛋白质的成熟形式分泌到细胞外。信号序列的定义是功能性的。胞外蛋白的成熟形式缺少(例如在分泌过程期间)被切除的信号序列。

如本文中所用，术语“衍生的”包括术语“源自”、“从......获得”或“从......可获得”和“从......分离”。

术语“蛋白质”和“多肽”在本文可互换地使用。本文中使用氨基酸残基的常规单字母或三字母代码。

“启动子”是参与结合RNA聚合酶以启动基因转录的调节序列。启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。例如，可以在本文中使用来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的一种诱导型启动子cbh1。

“有效连接的”指这样的接近，其中诸元件处在允许它们功能性地联系的排列中，甚至没有紧密的物理靠近。例如，如果一个启动子能够控制编码序列并且在对于该序列为允许或诱导的条件下控制该序列转录，则该启动子与此编码序列有效连接。

“选择标记”指这样的基因，该基因能够在宿主中表达并允许选择表达该标记基因的那些宿主。选择标记的例子包括但不限于提供对抗微生物物质(例如潮霉素、博来霉素或氯霉素)抗性改变的基因和/或赋予宿主细胞代谢选择性如营养优势(如在作为唯一碳水化合物来源的特定底物上生长)的基因。

在核酸序列插入细胞的上下文中，“导入”意指“转染”、“转化”或“转导”并且包括对核酸序列掺入真核或原核细胞的谈及，其中所述核酸序列可以掺入该细胞的基因组(例如，染色体、质粒、质体或线粒体DNA)，被转化成自主复制子或瞬时表达(例如，转染的mRNA)。

“宿主”、“宿主菌株”或“宿主细胞”意指在其中安置包含多核苷酸(例如编码变体α-淀粉酶的多核苷酸)的表达载体或DNA构建体的合适细胞。宿主菌株优选地是细菌细胞。在一个优选的实施方案中，“宿主细胞”意指从微生物株(例如芽孢杆菌属的某些物种)的细胞产生的细胞和/或原生质体。

术语“培养”指在合适的条件下在能够支持这种生长的培养基中培育微生物细胞群体。在一个实施方案中，培养指将含有颗粒淀粉的淀粉底物发酵性生物转化成终产物(一般在容器或反应器中)。

“发酵”由微生物分解有机物质以产生更简单的有机化合物。尽管发酵一般在主要厌氧的条件下进行，然而意图该术语应当不限于严格厌氧条件，因为发酵也在氧存在下发生。

术语“酶转化”一般指通过酶作用修饰底物。如本文中所用的该术语也指通过酶的作用修饰淀粉底物。

如本文中所用，术语“糖化”指淀粉经酶转化成葡萄糖。

术语“凝胶化”意指至少部分地增溶淀粉颗粒或分子，例如通过蒸煮以形成粘性混悬液。

术语“液化”通常指淀粉转化期间淀粉至少部分地水解以产生低分子量产物例如可溶性糊精的阶段。

术语“聚合程度(DP)”指给定糖中脱水吡喃葡萄糖单元的数目(n)。DP1的例子是单糖类，如葡萄糖和果糖。DP2的例子是二糖类，如麦芽糖和蔗糖。DP＞3指具有大于3的聚合程度的聚合物。技术人员会理解具有更大DE的化合物是更为聚合的。

“终产物”或“所需终产物”指酶反应的任意预期产物，例如从淀粉底物以酶方式转化而来的淀粉衍生分子。

如本文中所用，“干固体含量”(ds)指基于干重量的以％表示的浆液总固体。术语“浆液”指含有不溶性固体的含水混合物。

术语“残余淀粉”指含淀粉的底物发酵后组合物中留下的任何残留(可溶性或不可溶性)淀粉。

“再循环步骤”指糖化醪组分的再循环，所述的糖化醪组分可以包括残余淀粉、发酵包含淀粉的酶和/或微生物。

术语“糖化醪(mash)”指水中用来产生发酵产物如醇的可发酵碳源(碳水化合物)的混合物。在一些实施方案中，术语“发酵醪(beer)”和“糖化醪”可互换地使用。

“釜馏物”意指未发酵的固体与水的混合物，如从发酵的糖化醪去除醇后的残余物。

术语“蒸馏器干酒糟(DDG)”和“具有可溶物的蒸馏器干酒糟(DDGS)”指谷物发酵的有用副产物。

如本文中所用，“产乙醇微生物”指具有将糖(例如单糖、二糖、低聚糖或多糖)转化成乙醇的能力的微生物。产乙醇微生物因其表达单独地或共同将糖转化成乙醇的一种或多种酶的能力而具有产乙醇性。

如本文中所用，“乙醇生产者”或“产乙醇生微生物”指能够从己糖或戊糖产生乙醇的任何生物或细胞。通常，产乙醇细胞含有醇脱氢酶和丙酮酸脱羧酶。产乙醇微生物的例子包括真菌性微生物如酵母。

如本文中所用，“比活性”意指一种酶单位，其定义为在特定条件下每单位时间由酶制剂转换成产物的底物的摩尔数。比活性表示为单位(U)/单位重量的蛋白质，一般是U/mg蛋白质。

“产量”指使用本公开的方法所产生的终产物或所需终产物的量。在一些实施方案中，该产量大于使用本领域已知方法所产生的产量。在一些实施方案中，该术语指终产物的体积，并且在其他实施方案中，该术语指终产物的浓度。

如本文中所用，“生物学活性的”指对生物系统例如细胞、器官或生物具有可测量的影响的化合物或序列。

“ATCC”指位于弗吉尼亚州Manassas 20108的美国典型培养物保藏中心(ATCC)。

“NRRL”指美国伊利诺伊州皮奥里亚县，国家农业应用研究中心，农业研究培养物保藏中心(并且以前称为USDA北部地区研究实验室)。

本文中所用，“食物”意指向包括人在内的动物提供营养价值的任意成分、组分或组合物。

如本文中所用，按惯例，当描述蛋白质和编码它们的基因时，用于该基因的术语一般用斜体(例如，编码amyL(地衣芽孢杆菌AA)的基因可以表示为amyL)。用于蛋白质的术语一般不用斜体并且首字母通常大写(例如，由amyL基因编码的蛋白质可以表示为AmyL或amyL)。除非另外说明，分别将核酸序列从左至右以5’至3’方向显示并将氨基酸序列从左至右以氨基至羧基方向显示。

如本文中所用术语“包含”及其关联词以其包含......在内的意义使用；即，等同于术语“包括”及其对应的关联词。数字范围包括定义该范围的数字在内。

本文中提供的标题不限制所公开的多个方面或实施方案。

尽管可以在实施或检验所公开的内容中使用与本文中所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料，然而描述了某些当前优选的方法和材料而不意图使实施者限于所描述的任何具体方法、方案和试剂，因而这些可以变动。通过引用的方式明确并入本文中所参考的全部专利和出版物，包括此类专利和出版物中公开的全部序列。

2.命名

在本说明书和权利要求书中，使用氨基酸残基的常规单字母或三字母代码。出于引用方便，α-淀粉酶变体通常地由以下命名描述：

原始氨基酸：位置：替换的氨基酸

根据这种命名，例如将第242位置处用丙氨酸替换丝氨酸显示为：

Ser242Ala或S242A

将第30位置处的丙氨酸缺失显示为：

Ala30^＊或A30^＊或ΔA30

并且将额外氨基酸残基如赖氨酸的插入显示为：

Ala30AlaLys或A30AK。

氨基酸残基连续区段(如氨基酸残基30-33)的缺失显示为(30-33)^＊或Δ(A30-N33)。

在特定α-淀粉酶与其他α-淀粉酶相比含有“缺失”并且在该位置内产生插入的情况下，对于在第36位置插入天冬氨酸而言，这表示为

^＊36Asp或^＊36D

多个突变由加号隔开，即：

Ala30Asp+Glu34Ser或A30N+E34S

代表在30和34位置中将丙氨酸和谷氨酸分别替换为天冬氨酸和丝氨酸的突变。

当可以在给定位置插入一个或多个备选氨基酸残基时，它表示为：

A30N，E或备选地，A30N或A30E。

另外，当本文中鉴定到适合修饰的位置而不指出任何具体的修饰时，应当理解任意氨基酸残基可以替换该位置内存在的氨基酸残基。因而，例如，当提到修饰在第30位置处的丙氨酸，但不具体说明时，应当理解该丙氨酸可以缺失或替换为任何其他氨基酸，即，以下任一氨基酸：

R、N、D、A、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V。

另外，“A30X”意指以下的任一替换：A30R、A30N、A30D、A30C、A30Q、A30E、A30G、A30H、A30I、A30L、A30K、A30M、A30F、A30P、A30S、A30T、A30W、A30Y或A30V；或简写为：

A30R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V。

如果用于编号的亲本酶已经在该位置处具有建议替换的所讨论氨基酸残基，则在例如N或V之一存在于野生型中的情况下使用以下命名：

“X30N”或“X30N，V”。这表明其他相应的亲本酶在位置30被替换成“Asn”或“Val”。

3.氨基酸残基的特征

带电荷的氨基酸：

Asp、Glu、Arg、Lys、His

带负电荷的氨基酸(负电荷最多的残基排在首位)：

Asp、Glu

带正电荷的氨基酸(正荷最多的残基排在首位)：

Arg、Lys、His

中性氨基酸：

Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Met、Cys、Asn、Gln、Ser、Thr、Pro

疏水性氨基酸残基(疏水性最强的残基排在最后)：

Gly、Ala、Val、Pro、Met、Leu、Ile、Tyr、Phe、Trp，

亲水性氨基酸(亲水性最强的残基排在最后)：

Thr、Ser、Cys、Gln、Asn。

4.α-淀粉酶和AmyS样淀粉酶

4.1多种α-淀粉酶的氨基酸同一性

由芽孢杆菌属某些物种产生的多种α-淀粉酶在氨基酸水平是高度同源(同一)的并且可以用作本文中的亲本酶。可以在下表A中找到多种已知芽孢杆菌α-淀粉酶相互之间的同一性百分数(基于氨基酸序列)。

表A：几种已知芽孢杆菌α-淀粉酶的氨基酸序列同一性

	707	AP1378	BAN	BSG	SP690	SP722	AA560	LAT
									707	100.0	86.4	66.9	66.5	87.6	86.2	95.5	68.1
AP1378	86.4	100.0	67.1	68.1	95.1	86.6	86.0	69.4
									BAN	66.9	67.1	100.0	65.6	67.1	68.8	66.9	80.7
BSG	66.5	68.1	65.6	100.0	67.9	67.1	66.3	65.4
									SP690	87.6	95.1	67.1	67.9	100.0	87.2	87.0	69.2
SP722	86.2	86.6	68.8	67.1	87.2	100.0	86.8	70.8
									AA560	95.5	86.0	66.9	66.3	87.0	86.8	100.0	68.3
LAT	68.1	69.4	80.7	65.4	69.2	70.8	68.3	100.0

技术人员将理解可以从文献或通过本文中公开的或本领域已知的任意方法确定同一性百分数。例如，已经发现地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(LAT)(SEQ ID NO：7)与解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶(SEQ ID NO：9)约81％同源并且与嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(BSG)(SEQ ID NO：1)约65％同源。其他同源α-淀粉酶包括WO 95/26397中公开的SP690和SP722，以及由Tsukamoto等人，Biochemical and Biophysical Research Communications，151(1988)，第25-31页描述的从芽孢杆菌属某些物种衍生的#707α-淀粉酶(SEQ ID NO：6)。KSM AP1378α-淀粉酶在WO 97/00324中公开(来自KAO公司)。

4.2亲本α-淀粉酶

如上文定义的AmyS样α-淀粉酶可以作为亲本α-淀粉酶使用。在一个优选的实施方案中，亲本α-淀粉酶从嗜热脂肪土芽孢杆菌(例如上文引用的那些嗜热脂肪土芽孢杆菌之一)衍生，如具有SEQ ID NO：1或2中所示氨基酸序列的嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶。

4.3亲本杂合α-淀粉酶

亲本α-淀粉酶(即主链α-淀粉酶)也可以是杂合α-淀粉酶，即包含从至少两种α-淀粉酶衍生的部分氨基酸序列的组合的α-淀粉酶。

亲本杂合α-淀粉酶可以是一种这样的α-淀粉酶，其中可以基于(如上文所定义的)氨基酸同源性(同一性)和/或DNA杂交确定所述α-淀粉酶属于上文描述的AmyS样α-淀粉酶家族。在这种情况下，杂合α-淀粉酶一般由AmyS样α-淀粉酶的至少一个部分和选自微生物(细菌或真菌)和/或哺乳动物来源的AmyS样α-淀粉酶或非AmyS样α-淀粉酶的一种或多种其他α-淀粉酶的部分组成。

因而，亲本杂合α-淀粉酶可以包含从至少两种AmyS样α-淀粉酶或从至少一种AmyS样和至少一种非AmyS样细菌α-淀粉酶或从至少一种AmyS样和至少一种真菌α-淀粉酶衍生的部分氨基酸序列的组合。衍生部分氨基酸序列的AmyS样α-淀粉酶可以是本文中所引用的任意的特定AmyS样α-淀粉酶。

例如，亲本α-淀粉酶可以包含从地衣芽孢杆菌菌株衍生的α-淀粉酶的羧基端部分和从嗜热脂肪土芽孢杆菌菌株或从嗜热脂肪土芽孢杆菌(BSG)菌株衍生的α-淀粉酶的氨基端部分。

5.同源性(同一性)

同源性可以作为两个序列之间的同一性程度确定，表示彼此之间的关系，例如，第一序列从第二序列衍生或反之亦然。同源性可以通过视检或手工计算确定，不过更便利地借助本领域已知的计算机程序如在(上文描述的)GCG程序包中提供的一种程序GAP确定。因而，可以使用Gap GCGv8，例如采用同一性的默认评分矩阵和以下默认参数：对于核酸序列比较而言，空位创建罚分5.0和空位延伸罚分0.3，并且对于蛋白质序列比较而言，空位创建罚分3.0和空位延伸罚分0.1。GAP使用Needleman和Wunsch，(1970)，J.Mol.Biol.48：443-453的方法以产生比对结果并计算同一性。

在Spezyme Xtra(SEQ ID NO：2)与例如另一种α-淀粉酶之间的结构性比对结果可以用来鉴定其他AmyS样α-淀粉酶中的等同/对应位置。获得所述结构性比对结果的一种方法将是使用来自GCG软件包的Pile Up程序，利用空位罚分的默认值，即，空位创建罚分3.0和空位延伸罚分0.1。其他结构性比对方法包括疏水簇分析法(Gaboriaud等人，FEBS Lett.224：149-155，1987)和反向穿线法(reverse threading)(Huber，T；Torda，AE，Protein Sci.7(1)：142-149，1998)。

6.杂交

在表征以上AmyS样α-淀粉酶中使用的寡核苷酸探针可以基于所讨论α-淀粉酶的全部或部分核苷酸或氨基酸序列适宜地制备。

评估杂交的合适条件涉及在5X SSC中预浸泡并在40℃于20％甲酰胺，5X Denhardt溶液，50mM磷酸钠，pH 6.8和50mg超声处理的变性小牛胸腺DNA的溶液中预杂交1小时，随后在40℃于补充有100mMATP的相同溶液中杂交18小时，随后在40℃(低严格性)、优选地在50℃(中等严格性)、更优选地在65℃(高严格性)、甚至更优选地在75℃(非常高严格性)于2X SSC，0.2％SDS中洗涤滤膜3次，30分钟。关于杂交方法的更多细节可以在Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory ManuaL，第2版，Cold Spring Harbor，1989中找到。

在本上下文中，“从......衍生”不仅意图指由所讨论的生物菌株产生或可产生的α-淀粉酶，还指由分离自该菌株的DNA序列编码并在用所述DNA序列转化的宿主生物中产生的α-淀粉酶。最后，该术语意图指由合成和/或cDNA来源的DNA序列编码并具有所讨论α-淀粉酶的鉴别性特征的α-淀粉酶。该术语意图表明亲本α-淀粉酶可以是天然存在α-淀粉酶的变体，即这样的变体，它是修饰(插入、替换、缺失)天然存在α-淀粉酶的一个或多个氨基酸残基的结果。

7.变体α-淀粉酶中的一般突变

在一个实施方案中，除了上文概述的那些修饰之外，本文中所述的变体还可以包含一个或多个修饰。因而，可能有利的是将被修饰的α-淀粉酶变体的部分中存在的一个或多个脯氨酸残基(Pro)替换为非脯氨酸残基，其中所述的非脯氨酸残基可以是可能的、天然存在的非脯氨酸残基中的任一氨基酸残基，并且优选地是丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸或亮氨酸。

类似地，在一个实施方案中，可以将亲本α-淀粉酶中存在的一个或多个半胱氨酸残基替换为非半胱氨酸残基，如丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸。

应当理解所述变体可以掺入两个或更多个上文所概述的修饰。

另外，可能有利的是在一个或多个以下位置(使用SEQ ID NO：7用于编号)导入突变：

M15、V128、A111、H133、W138、T149、M197、N188、A209、A210、H405、T412，尤其以下的单一、二重、三重或多重突变：

M15X，尤其M15T，L；

V128X，尤其V128E；

H133X，尤其H133Y；

N188X，尤其N188S，T，P；

M197X，尤其M197T，L；

A209X，尤其A209V；

M197T/W138F；M197T/138Y；M15T/H133Y/N188S；

M15N128E/H133Y/N188S；E119C/S130C；D124C/R127C；H133Y/T149I；

G475R，H133Y/S187D；H133Y/A209V。

在亲本α-淀粉酶具有SEQ ID No.7中所示氨基酸序列的情况下，可以被缺失或替换以改善氧化稳定性的相关氨基酸残基包括SEQ ID NO：2中的单一半胱氨酸残基(C363)和位于M8、M9、M96、M200、M206、M284、M307、M311、M316和M438位置内的甲硫氨酸残基。

就提高α-淀粉酶变体相对于其亲本α-淀粉酶的热稳定性而言，似乎特别希望在SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列中缺失至少一个并且优选地缺失2个或甚至3个以下氨基酸残基：F178、R179、G180、I181、G182和K183。

特别感兴趣地，这种类型的成对缺失是R179^＊+G180^＊；和I181^＊+G182^＊(分别是SEQ ID No.16或15)(或在满足本公开上下文中亲本α-淀粉酶要求的另一个α-淀粉酶中这些成对缺失的等同物)。

其他目的残基包括SEQ ID No.2中所示氨基酸序列的N193F和V416G。

8.变体的改变特性

8.1概述

以下部分描述突变之间的关系，其中所述突变存在于本文中所述的变体中并且是可以从其产生(相对于亲本AmyS样α-淀粉酶的那些特性而言)想要的特性改变。

本文中描述了具有改变特性的AmyS样α-淀粉酶。本文中具体构思的亲本α-淀粉酶是AmyS样α-淀粉酶和亲本杂合AmyS样α-淀粉酶。

在一个实施方案中，使用嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(SEQ ID NO：2)作为起点，但是在其他实施方案中，可以使用SP722、BLA、BAN、AA560、SP690、KSM AP1378、#707和其他芽孢杆菌属α-淀粉酶。据此轻易地确定与SEQ ID NO：2中的位置相对应的氨基酸位置。

技术人员会了解尽管出于编号/鉴定特定变体中已修饰及待修饰的氨基酸残基的目的，可能使用任意亲本α-淀粉酶作为参考淀粉酶，然而SEQID NO：1是目前为此目的优选序列，因为它是本文目前可获得的最长嗜热脂肪芽孢杆菌序列。

在一个方面，本公开涉及了具有改变特性(例如，如上所述特性)的变体。

在其几个方面之一，本公开提供了亲本嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶的变体，该变体在选自(使用例如SEQ ID NO：1用于氨基酸编号的)以下位置的一个或多个位置处包含改变：

P17、D19、T21、N28、S51、G72、V74、A82、Q86、Q89、A93、G95、Q97、W115、D117、P123、S124、D125、N127、I130、G132、Q135、P145、G146、G148、S153、Y159、W166、S169、K171、W187、P209、N224、S242、G256、D269、N271、T278、N281、G302、A304、R308、T321、Q358、P378、S382、K383、T398、H405、T417、E418、P420、G421、P432、W437、G446、G454、S457、T459、T461、S464、G474、R483，

其中

(a)所述改变独立地是在占据该位置的氨基酸下游插入氨基酸；(ii)缺失占据该位置的氨基酸；或(iii)用不同的氨基酸替换占据该位置的氨基酸，

(b)该变体具有α-淀粉酶活性，并且

(c)每个位置对应于亲本淀粉酶(例如嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(例如具有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列))的氨基酸序列的位置，所述亲本淀粉酶例如是作为来自Genencor的SPEZYME XTRA可商业获得的截短α-淀粉酶。

本文中具体构思了S242A、S242Q、S242N和S242E变体。

额外地，选择残基R179、G180、I181、G182和K183以探索钙-钠结合区中突变的作用并且因为在α-螺旋中央的脯氨酸是不寻常的，故选择P245。

可以通过如上所述的比对，例如，如与图4中比对结果中所示的那些序列比对找到其他亲本AmyS样α-淀粉酶中的对应位置。因而，本文中构思了在以上列举的位置(使用例如SEQ ID NO：1用于比较性氨基酸编号)处包含改变的亲本AmyS样α-淀粉酶的变体。

8.2改变的特性：稳定性

在本文中所述变体的上下文中，就实现改变的稳定性、尤其改善的稳定性(即更高或更低)，在尤其高的温度(即约70-120℃)和/或极端pH(即低或高pH，即分别是pH 4-6或pH 8-11)，尤其在低于60ppm的游离(即未结合的，因而溶液中的)钙浓度而言，重要的突变(包括氨基酸替换和缺失)包括在“改变的特性”部分中所列出的任意突变。可以如下文“方法”部分中所述确定稳定性。

8.3改变的特性：Ca²⁺稳定性

改变的Ca²⁺稳定性意指已经相对于亲本酶而改善酶在Ca²⁺耗竭下的稳定性，即，更高或更低的稳定性。在本文中所述变体的上下文中，就实现改变的Ca²⁺稳定性、尤其改善的Ca²⁺稳定性，即，更高或更低的稳定性，尤其在高pH(即pH 8-10.5)而言，重要的突变(包括氨基酸替换和缺失)包括在“改变的特性”部分中所列出的任意突变。

8.4改变的特性：比活性

在又一方面，就获得变体而言，重要的突变(包括氨基酸替换和缺失)包括在“改变的特性”部分中所列出的任意突变，其中所述的变体展示改变的比活性，尤其提高或降低的比活性，尤其在10-60℃的温度、优选20-50℃、尤其30-40℃。可以如下文“方法”部分中所述确定比活性。

8.5改变的特性：氧化稳定性

与亲本α-淀粉酶相比，所描述的变体可以具有改变的氧化稳定性，尤其是更高的氧化稳定性。提高的氧化稳定性在例如洗涤剂组合物中是有利的，并且降低的氧化稳定性可能在意图用于淀粉液化的组合物中是有利的。可以如下文“方法”部分中所述确定氧化稳定性。

8.6改变的特性：改变的pH谱

就获得变体而言，重要的位置和突变包括靠近活性中心残基存在的氨基酸残基的突变，其中所述变体具有改变的pH谱，特别地在尤其高的pH(即pH 8-10.5)或低的pH(即pH 4-6)时改善的活性。

优选的特定突变/替换包括上文在“改变的特性”部分中对所讨论位置列出的那些突变/替换。在下文“方法”部分中描述合适的测定法。

8.7改变的特性：洗涤性能

就获得变体而言，重要的位置和突变包括上文在“改变的特性”部分中对所讨论位置列出的特定突变/替换，其中所述变体在尤其高的pH(即pH8.5-11)时具有改善的洗涤性能。可以如下文“方法”部分中所述测试洗涤性能。

9.制备α-淀粉酶变体的方法

如用于α-淀粉酶编码性DNA序列的克隆方法那样，用于导入突变至基因中的方法是本领域已知的。将在下文讨论此类方法，包括用于在α-淀粉酶编码序列内部特定位点处产生突变的方法。

9.1克隆编码α-淀粉酶的DNA序列

编码亲本α-淀粉酶的DNA序列可以使用本领域熟知的各种方法从产生所讨论α-淀粉酶的任意细胞或微生物分离。首先，应当使用来自产生待研究α-淀粉酶的生物的染色体DNA或信使RNA构建基因组DNA和/或cDNA文库。如果该α-淀粉酶的氨基酸序列是已知的，则可以合成并使用同源的标记寡核苷酸探针以从基因组文库鉴定编码α-淀粉酶的克隆，其中所述的基因组文库从所讨论生物制备。备选地，可以使用含有与已知α-淀粉酶基因同源的序列的标记寡核苷酸探针作为探针来鉴定编码α-淀粉酶的克隆，例如使用低严格性的杂交和洗涤条件。

用于鉴定编码α-淀粉酶的克隆的另一种方法是基于将基因组DNA片段插入表达载体如质粒，用所得基因组DNA文库转化α-淀粉酶阴性细菌并将转化的细菌涂布在含有α-淀粉酶底物的琼脂上，因而允许轻易地鉴定表达α-淀粉酶的克隆。

备选地，编码所述酶的DNA序列可以通过已建立的标准方法合成地制备，例如S.L.Beaucage和M.H.Caruthers，Tetrahedron Letters 22：1859-1869(1981)描述的亚磷酰胺法或Matthes等人，EMBO J.3：801-895(1984)描述的方法。在亚磷酰胺方法中，将寡核苷酸合成，例如在自动DNA合成仪中，纯化、复性、连接和在适宜载体中克隆。

最后，DNA序列可以是混合来源的，包含例如根据标准技术，通过连接合成的、基因组的或cDNA来源的片段(根据需要，与整个DNA序列的多个部分相对应的片段)制备的基因组序列和合成序列、合成序列和cDNA序列或基因组序列和cDNA序列。DNA序列也可以通过使用特异性引物的聚合酶链反应(PCR)，例如在美国专利号4,683,202或R.K.Saiki等人EMBO J.3：801-895(1988)中所述的PCR制备。

9.2位点定向诱变

一旦已经分离编码α-淀粉酶的DNA序列并鉴定了用于突变的所需位点，则可以使用合成的寡核苷酸导入突变。这些寡核苷酸含有分布在所需突变位点侧翼的核苷酸序列；将突变核苷酸在寡核苷酸合成期间插入。在一个具体方法中，在携带α-淀粉酶基因的载体中产生跨接编码α-淀粉酶的序列的DNA单链缺口。随后，携带所需突变的合成性核苷酸与单链DNA的同源部分复性。剩余缺口随后用DNA聚合酶I(克列诺片段)补平并使用T4连接酶连接构建体。这种方法的具体例子在Morinaga等人Biotechnology 2：636-639(1984)中描述。美国专利号4,760,025公开了通过表达盒的微小改变而导入编码多重突变的寡核苷酸。然而，可以通过Morinaga方法在任一时间导入甚至更多种类的突变，原因在于可以导入长度各异的许多寡核苷酸。

在Nelson和Long，AnalyticalBiochem.，180：147-151(1989)中描述了将突变导入编码α-淀粉酶的DNA序列的另一种方法。该方法涉及含有所需突变的PCR片段的3-步骤生成，其中所需突变通过使用化学合成的DNA链作为PCR反应中的引物之一导入。携带突变的DNA片段可以从PCR生成的片段通过用限制性核酸内切酶切割进行分离并重新插入表达质粒。

技术人员会了解许多备选方法可用于提供或获得本文中的变体。例如，基因改组，例如，如WO 95/22625(来自Affymax Technologies N.V.)或WO 96/00343(来自Novo Nordisk A/S)中所述，或产生包含所讨论突变例如替换和/或缺失的杂合酶的其他相应技术。

9.3α-淀粉酶变体的表达

可以使用表达载体以酶形式表达编码由上文所述方法或由本领域已知的任意备选方法产生的变体的DNA序列，其中所述表达载体一般包括编码启动子、操纵基因、核糖体结合位点、翻译起始信号和任选地阻遏基因或多种激活基因的调控序列。

携带编码用于本文中的α-淀粉酶变体的DNA序列的重组表达载体可以任意载体，其可以便利地经历重组DNA过程，并且载体的选择经常取决于待导入该载体的宿主细胞。因而，载体可以是自主复制型载体，即作为其复制不依赖染色体复制的染色体外实体存在的载体，例如，质粒、噬菌体、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。备选地，载体可以整合到宿主细胞基因组中并随已经整合有该载体的染色体一起复制。

在载体中，所述DNA序列应当有效连接于合适的启动子序列。该启动子可以是在所选宿主细胞中显示转录活性的任意DNA序列并可以从编码与该宿主细胞同源或异源的蛋白质的基因衍生。用于指导编码用于本文中的α-淀粉酶变体的DNA序列转录、尤其在细菌宿主中转录的合适启动子的例子是大肠杆菌lac操纵子的启动子、天蓝色链霉菌琼脂糖酶基因dagA的启动子、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)的启动子、嗜热脂肪土芽孢杆菌生麦芽糖淀粉酶基因(amyM)的启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶(amyQ)的启动子、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因的启动子等。对于真菌宿主中的转录，有用启动子的例子是从编码稻曲霉(A.oryzae)TAKA淀粉酶、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶、黑曲霉(A.niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定的α-淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米黑根毛霉脂肪酶、稻曲霉碱性蛋白酶、稻曲霉磷酸三糖异构酶或构巢曲霉(A.nidulans)乙酰胺酶的基因衍生的那些启动子。

用于本文中的表达载体也可以包含合适的转录终止子和在真核生物中与编码α-淀粉酶变体的DNA序列有效连接的多腺苷酸化序列。终止序列和多腺苷酸化序列可以适宜地从与启动子相同的来源衍生。

载体可以还包含能够使该载体在所讨论的宿主细胞中复制的DNA序列。此类序列的例子是质粒pUC19、pACYC177、pUB110、pE194、pAMB1和pIJ702的复制起点。

载体也可以包含选择标记，例如其产物弥补宿主细胞中缺陷的基因，如来自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的dal基因，或赋予抗生素抗性如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素抗性的基因。另外，该载体可以包含曲霉属选择标记如amdS、argB、niaD和sC、产生潮霉素抗性的标记，或可以通过共转化实现选择，例如，如WO 91/17243中所述。

尽管胞内表达可以在一些方面是有利的，例如当使用某些细菌作为宿主细胞时，然而通常优选表达是胞外的。通常，本文中提到的芽孢杆菌属α-淀粉酶包含允许所表达的蛋白酶分泌到培养基中的前区域。根据需要，这种前区域可以被不同的前区域或信号序列替换，便利地通过替换编码各自前区域的DNA序列实现。

本领域技术人员熟知用来连接分别编码α-淀粉酶变体、启动子、终止子和其他元件的DNA构建体并将这些DNA构建体插入含有复制必需信息的合适载体的方法(参参见例如Sambrook等人，MOLECULARCLONING：A LABORATORY MANUAL，第二版，Cold Spring Harbor，1989)。

用于本文中的细胞，例如包含如上文定义的DNA构建体或表达载体的细胞，可以在α-淀粉酶变体的重组产生中用作宿主细胞。细胞可以用编码变体的DNA构建体转化，便利地通过在宿主染色体中整合(一个或多个拷贝的)DNA构建体。通常认为这种整合是有利的，因为DNA序列更有可能稳定地维持于细胞中。可以根据常规方法例如通过同源或异源重组将DNA构建体整合到宿主染色体中。备选地，细胞可以用与不同类型宿主细胞有关的如上所述表达载体转化。

用于本文中的细胞可以是高等生物如哺乳动物或昆虫的细胞，但优选地是微生物细胞，例如细菌细胞或真菌(包括酵母)细胞。

合适细菌的例子是革兰氏阳性细菌，如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪土芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、环形芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、苏云金芽孢杆菌或变铅青链霉菌或鼠灰色链霉菌；或革兰氏阴性细菌如大肠杆菌。细菌的转化可以例如通过原生质体转化或通过使用感受态细胞以本身已知的方式实施。

在被用于表达的情况下，酵母可以有利地选自酵母属(Saccharomyces)或裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)物种，例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。丝状真菌可以有利地选自曲霉属物种，例如稻曲霉或黑曲霉。真菌细胞可以通过涉及原生质体形成和原生质体转化随后细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属宿主细胞的合适方法在EP238023中描述。

在又一方面，本公开涉及产生α-淀粉酶变体的方法，所述方法包括在促进变体产生的条件下培育如上文所述的宿主细胞并从细胞和/或培养基回收该变体。

用来培育细胞的培养基可以是适于生长所讨论的宿主细胞并获得α-淀粉酶变体表达的任何常规培养基。合适的培养基是从商业供应商可获得的或可以根据公开(例如，如ATCC目录中所述)的配方制备。

从宿主细胞分泌的α-淀粉酶变体可以通过已知方法从培养基回收，所述的已知方法包括通过离心或过滤将细胞与培养基分离并借助盐(如硫酸铵)析出培养基的蛋白质组分，随后使用层析方法如离子交换层析、亲和层析等。

9.4用于表征和筛选变体的方法

9.4.1滤纸筛选测定法

以下测定法可以用来筛选在高或低pH和/或在Ca²⁺耗竭条件下与亲本酶和AmyS样α-淀粉酶相比具有改变的稳定性的AmyS样α-淀粉酶变体。

9.4.2高pH滤纸测定法

将芽孢杆菌文库涂布在含10μg/ml卡那霉素的TY琼脂平板上的乙酸纤维素滤纸(OE 67，Schleicher&Schuell，Dassel，德国)和硝化纤维素滤纸(Protran-Ba 85，Schleicher&Schuell，Dassel，德国)的夹层上，在37℃持续至少21小时。乙酸纤维素层位于TY琼脂平板上面。

在涂布后，但在温育前，用针专门标记每个滤纸夹层，目的在于能够定位滤纸上的阳性变体，并将硝化纤维素滤纸连同结合的变体转移至具有pH 8.6-10.6甘氨酸-NaOH缓冲液的容器并在室温(可以从10-60℃变化)温育15分钟。将带有菌落的乙酸纤维素滤纸在室温贮存于TY-平板上，直至使用。温育后，在pH 8.6-10.6甘氨酸-NaOH缓冲液中含有1％琼脂糖，0.2％淀粉的平板上检测残余活性。将带有硝化纤维素滤纸的测试平板以与滤纸夹层相同的方式标记并在室温温育2小时。在取出滤纸后，测试平板用10％路戈尔碘液染色。检测到淀粉降解变体作为深蓝色背景上的白点并且随后在贮存平板上鉴定它们。阳性变体在与第一次筛选相同的条件下重新筛选2次。

9.4.3低钙滤纸测定法

将芽孢杆菌文库涂布在含相关抗生素例如卡那霉素或氯霉素的TY琼脂平板上的乙酸纤维素滤纸(OE 67，Schleicher&Schuell，Dassel，德国)和硝化纤维素滤纸(Protran-Ba 85，Schleicher&Schuell，Dassel，德国)的夹层上，在37℃持续至少21小时。乙酸纤维素层位于TY琼脂平板上面。

在涂布后，但在温育前，用针专门标记每个滤纸夹层，目的在于能够定位滤纸上的阳性变体，并将硝化纤维素滤纸连同结合的变体转移至具有pH 8.5-10并具有不同EDTA浓度(0.001mM-100mM)的碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液的容器。滤纸在室温温育1小时。将带有菌落的乙酸纤维素滤纸在室温贮存于TY-平板上，直至使用。温育后，在pH 8.5-10碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液中含有1％琼脂糖，0.2％淀粉的平板上检测残余活性。将带有硝化纤维素滤纸的测试平板以与滤纸夹层相同的方式标记并在室温温育2小时。在取出滤纸后，测试平板用10％路戈尔碘液染色。检测到淀粉降解变体作为深蓝色背景上的白点并且随后在贮存平板上鉴定它们。阳性变体在与第一次筛选相同的条件下重新筛选2次。

9.4.4低pH滤纸测定法

将芽孢杆菌文库涂布在含10微克/ml氯霉素的TY琼脂平板上的乙酸纤维素滤纸(OE 67，Schleicher&Schuell，Dassel，德国)和硝化纤维素滤纸(Protran-Ba 85，Schleicher&Schuell，Dasseli，德国)的夹层上，在37℃持续至少21小时。乙酸纤维素层位于TY琼脂平板上面。

在涂布后，但在温育前，用针专门标记每个滤纸夹层，目的在于能够定位滤纸上的阳性变体，并将硝化纤维素滤纸连同结合的变体转移至具有柠檬酸盐缓冲液，pH4.5的容器并在80℃温育20分钟(当筛选野生型主链中的变体时)或在85℃温育60分钟(当筛选亲本α-淀粉酶的变体时)。将带有菌落的乙酸纤维素滤纸在室温贮存于TY-平板上，直至使用。温育后，在pH 6.0柠檬酸盐中含有1％琼脂糖，0.2％淀粉的测试平板上检测残余活性。将带有硝化纤维素滤纸的测试平板以与滤纸夹层相同的方式标记并在50℃温育2小时。在取出滤纸后，测试平板用10％路戈尔碘液染色。检测到淀粉降解变体作为深蓝色背景上的白点并且随后在贮存平板上鉴定它们。阳性变体在与第一次筛选相同的条件下再筛选2次。

9.4.5次筛选

在重新筛选后，将阳性转化体从贮存平板挑出并在二次平板测定法中测试。阳性转化体在37℃于5mL LB+氯霉素中生长22小时。在90℃于pH 4.5柠檬酸盐缓冲液中温育每个阳性转化体和作为对照的表达相应主链的克隆的芽孢杆菌培养物并且在0、10、20、30、40、60和80分钟取得样品。将3μL样品滴在测试平板上。测试平板用10％路戈尔碘液染色。改良变体视为比主链具有更高残余活性的变体(检测为测试平板上的晕圈)。通过核苷酸测序确定改良的变体。

9.4.6未纯化变体的稳定性测定法

变体的稳定性可以如下测试：将表达待分析变体的芽孢杆菌培养物在37℃于含有氯霉素的10mL LB中生长21小时。将800微升培养物与200微升pH 4.5柠檬酸盐缓冲液混合。在PCR管中制得与样品时间点编号相对应的许多70μL等份试样并在PCR仪中在70℃或90℃温育多个时间段(一般5、10、15、20、25和30分钟)。0分钟样品不在高温上温育。如下文“α-淀粉酶活性测定法”中所述，通过转移20微升至200微升α-淀粉酶PNP-G₇底物MPR3((Boehringer Mannheim目录号1660730)测量样品中的活性。结果作为活性(相对于0时间点)百分数对时间作图或表述为温育某段时间后的残余活性百分数。

9.4.7α-淀粉酶变体的发酵和纯化

携带相关表达质粒的枯草芽孢杆菌菌株可以如下发酵和纯化：将菌株从-80℃贮藏物划线于含有10μg/ml卡那霉素的LB-琼脂平板上并在37℃过夜生长。将菌落转移至500mL摇瓶中补充有10μg/ml氯霉素的100mL

PS-1培养基。

PS-1培养基的组成

珍珠糖                100g/l

大豆粕                40g/l

Na₂HPO₄，12H₂O        10g/l

Pluronic ^TM PE 6100   0.1g/l

CaCO₃            5g/l

培养物在37℃以270转/分钟振摇5日。

通过以4500转/分钟离心20-25分钟从发酵肉汤除去细胞和细胞碎片。此后，过滤上清液以获得完全清亮的溶液。将滤液浓缩并在UF-滤器(10000截止值膜)上洗涤并且将缓冲液换成20mM乙酸盐pH 5.5。在S-SEPHAROSE F.F.上施加UF-滤液并通过逐步洗脱法用相同缓冲液中的0.2M NaCl实施洗脱。洗脱液对pH 9.0的10mM Tris透析并施加在Q-SEPHAROSE F.F.上并且用从0-0.3M NaCl的线型梯度经6个柱体积洗脱。汇集含有(由PHADEBAS测定法测量的)活性的级分，将pH调节至pH 7.5并且通过用0.5％w/v活性碳处理5分钟除去剩余颜色。

9.4.8比活性测定

使用

测定法(Magle Life Sciences)，测定比活性为活性/mg酶。遵循制造商说明实施(也见下文“α-淀粉酶活性测定法”)。

9.4.9等电点的确定

pI由等点聚焦法(例如，Pharmacia，Ampholine，pH 3.5-9.3)确定。

9.4.10稳定性的确定

可以使用如下方法测量淀粉酶稳定性：

在相关条件下温育酶。样品在各个时间点取得，例如在0、5、10、15和30分钟后，并在测试缓冲液(50mM Britton缓冲液，pH 7.3)中稀释25倍(相同稀释度用于全部取得的样品)并使用PHADEBAS测定法(MagleLife Sciences)在标准条件pH 7.3，37℃下测量活性。

使用在温育前(0分钟)测量的活性作为参考(100％)。将下降百分数计算为温育时间的函数。表显示了在例如温育30分钟后的残余活性。

9.4.11α-淀粉酶活性测定法

1.PHADEBAS测定法

α-淀粉酶活性由使用

小片作为底物的方法确定。PHADEBAS小片(

淀粉酶试验，由Magle Life Sciences供应)含有交联的不溶性蓝颜色淀粉聚合物，该聚合物已经与牛血清白蛋白和缓冲物质混合并造片。

对于每个单一测量，将一个小片悬浮在含有5mL的50mMBritton-Robinson缓冲液(50mM乙酸，50mM磷酸，50mM硼酸，0.1mMCaCl₂，用NaOH调节pH至目的值)的管中。试验在目的温度的水浴中进行。在50mM Britton-Robinson缓冲液中稀释待测试的α-淀粉酶。将1毫升这种α-淀粉酶溶液添加至5mL的50mM Britton-Robinson缓冲液。淀粉被α-淀粉酶水解，产生可溶性蓝色片段。以分光光度方式在620nm测量的所得蓝色溶液的吸光度是α-淀粉酶活性的函数。

重要的是在温育10或15分钟(测试时间)后测量的620nm吸光度在620nm处的0.2至2.0吸光度单位范围内。在这个吸光度范围内，活性与吸光度之间存在线性关系(Lambert-Beer定律)。因而必须调整的酶的稀释度以符合这个标准。在指定的条件集合(温度、pH、反应时间、缓冲液条件)下，1mg给定的α-淀粉酶会水解某个量的底物，并且蓝颜色会产生。在620nm测量颜色强度。测量的吸光度与给定条件集合下所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg纯α-淀粉酶蛋白)直接成比例。

2.备选方法

α-淀粉酶活性由使用PNP-G₇底物的方法确定。作为对硝基苯基-α，D-麦芽庚糖苷缩写的PNP-G₇是可以被内切淀粉酶切割的嵌段低聚糖。切割后，该试剂盒中包含的α-葡糖苷酶消化此底物以释放具有黄颜色并因而可以通过可见光分光光度法在λ＝405nm(400-420nm)测量的游离PNP分子。含有PNP-G₇底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由Boehringer-Mannheim制造(目录号1054635)。

为制备试剂溶液，如制造商推荐，将10mL底物/缓冲液添加至50mL酶/缓冲液。通过转移20微升样品至96孔微量滴定平板并在25℃温育实施该测定法。添加预平衡至25℃的200μL试剂溶液。将溶液混合并预温育1分钟并且在ELISA读数仪中在OD 405nm在4分钟范围内每隔30秒测量吸收。

时间依赖性吸收曲线的斜率与给定条件集合下所讨论的α-淀粉酶的活性直接成比例。

9.4.12LAS敏感性的确定

变体在40℃与不同浓度的LAS(直链烷基苯磺酸盐；Nansa 1169/P)温育10分钟。

使用

测定法或利用PNP-G₇底物的备选方法确定残余活性。

在0.1M磷酸盐缓冲液pH 7.5中稀释LAS。

使用以下浓度：

500ppm、250ppm、100ppm、50ppm、25ppm和10ppm直至无LAS。

将变体在不同LAS缓冲液中稀释成10mL总体积中的0.01-5mg/l浓度并在温控水浴中温育10分钟。通过转移小等份试样至冷的测试缓冲液中停止温育。重要的是在活性测量期间，LAS浓度低于1ppm，目的是不影响活性测量。使用上文提及的测定法或备选方法一式两份确定残余活性。在扣除空白后测量活性。无LAS的活性是100％。

10.使用淀粉酶变体的方法：工业应用

本文中呈现的α-淀粉酶变体具有允许多种工业应用的有价值特性。本文中所述的一种或多种变体酶或组合物也可以如上所述在洗涤剂、尤其衣物洗涤剂组合物和餐具洗涤剂组合物、硬表面清洁组合物中使用并在用于纺织品、织物或服装退浆的组合物、用于纸浆和纸张生产、发酵醪制备、乙醇生产和淀粉转化工艺的组合物中使用。

一种或多种具有改变特性的变体可以用于淀粉加工，尤其淀粉转化，尤其淀粉的液化(参见例如美国专利号3,912,590、EP专利申请号252,730和63,909、WO 99/19467和WO 96/28567，全部参考文献在此引入作为参考)。也构思了用于淀粉转化目的组合物，所述组合物也可以包含葡糖淀粉酶、支链淀粉酶和/或其他α-淀粉酶。

另外，一种或多种变体特别用于从淀粉或完整谷物产生甜味料和乙醇(参见例如在此引入作为参考的美国专利号5,231,017)，如燃料用、饮用和工业用乙醇。

本文中的变体也可以用于纺织品、织物或服装退浆(参见例如在此引入作为参考的WO 95/21247、美国专利号4,643,736、EP 119,920)、发酵醪制备或酿造、以及用于纸浆和纸张生产或相关工艺中。

10.1天然淀粉的预处理

天然淀粉由室温下在水中不溶解的微小颗粒组成。当加热含水淀粉浆液时，所述颗粒溶胀并最终破裂，淀粉分子分散在溶液中。在这个“凝胶化”过程期间，存在粘度的剧烈增加。由于在常见工业过程中固体水平是30-40％，故不得不将淀粉稀薄化或“液化”，从而可以适当地加工它。这种粘度降低在现行商业实践中主要由酶降解达到。

10.2淀粉转化

例如在美国专利号3,912,590和EP专利公开号252,730和63,909中描述了常规的淀粉转化过程，如液化过程和糖化过程，所述每篇专利在此引入作为参考。

在一个实施方案中，降解淀粉成低分子量碳水化合物组分如糖或脂肪替代物的转化过程包括脱支步骤。

10.3淀粉至糖的转化

在将淀粉转化成糖的情况下，使淀粉解聚。这种解聚过程由例如预处理步骤和2个或3个连续工艺步骤，经过液化过程、糖化过程及(根据所需终产物)任选的异构化过程组成。

10.4异构化

当所需的糖终产物例如是高果糖糖浆时，可以将右旋糖糖浆转化成果糖。在糖化过程后，提高pH至6-8范围内的值，优选地至pH 7.5，并通过离子交换法去除钙。随后，使用例如固化葡萄糖异构酶(如IGI-HF)将右旋糖糖浆转化成高果糖糖浆。

10.5乙醇生产，其他发酵

通常，来自全谷物的醇生产(乙醇)可以是分成4个主要步骤：研磨、液化、糖化、发酵。

10.6研磨

研磨谷粒以打开结构并允许进一步加工。所用两种方法是湿磨法或干磨法。在干磨法中，研磨完整籽粒并用于该方法的其余部分中。湿磨法引起胚芽和粗粉(淀粉颗粒和蛋白质)很好地分离并且在平行地生产糖浆的场所使用，除少数例外之外。

10.7液化

在液化过程中，淀粉颗粒因水解成大部分具有高于4的DP的麦芽糖糊精而增溶。水解可以通过酸处理或由α-淀粉酶以酶方式实施。有限地使用酸水解。原料可以是研磨的完整谷物或来自淀粉加工的侧线馏分。

在典型酶液化期间，长链淀粉由α-淀粉酶降解成支链和直链的更短单位(麦芽糖糊精)。酶液化一般作为一个3步骤热浆液过程实施。将浆液加热至60-95℃之间(优选地77-86℃、80-85℃和83-85℃)并添加酶。液化过程在105-110℃实施5至10分钟，随后在95℃实施1-2小时。pH通常在5.5与6.2之间。为确保在这些条件下的最佳酶稳定性，添加1mM钙(以提供约40ppm游离钙离子)。在如此处理后，液化的淀粉将具有(DE)10-15的“右旋糖当量”。

浆液随后在95-140℃、优选在105-125℃之间进行喷射蒸煮，冷却至60-95℃并添加更多的酶以获得最终水解。液化过程在pH 4.5-6.5、一般在5和6之间的pH处实施。研磨和液化的谷物也称作糖化醪。

10.8糖化和发酵

含有液化淀粉的材料在糖化酶如葡糖淀粉酶存在下糖化。糖化过程可以持续12小时至120小时(例如12至90小时、12至60小时和12至48小时)。然而，常见在30至65℃温度范围并且一般在约60℃实施一个预糖化步骤约30分钟至2小时(例如30至90分钟)，随后是在发酵期间称作同时糖化和发酵(SSF)的完全糖化。pH通常在4.2-4.8之间，优选地是pH4.5。在同时糖化和发酵(SSF)过程中，不存在糖化的持续阶段，而是同时添加酵母和酶。

在一般的糖化过程中，通过添加葡糖淀粉酶(例如，

L-400)和脱支酶如异淀粉酶(美国专利号4,335,208)或支链淀粉酶，将液化期间产生的麦芽糖糊精转化成右旋糖。将温度降低至60℃，之后添加葡糖淀粉酶，并添加脱支酶。糖化过程进行24-72小时。

在添加糖化酶之前，将pH降低至4.5以下，同时维持高温(高于95℃)，以使液化α-淀粉酶失活。该过程减少称作“4-α-葡糖基麦芽糖前体”的短寡糖形成，所述短寡糖不能被脱支酶正确水解。通常地，约0.2-0.5％的糖化产物是不能被支链淀粉酶降解的支化三糖-4-α-葡糖基麦芽糖(Glcpα1-6Glc pα1-4Glc)。如果来自液化过程的活性淀粉酶在糖化期间仍存在(即，没有变性)，则4-α-葡糖基麦芽糖的量可以高达1-2％，这是极不希望的，因为这明显地降低糖化产率。

从酶促糖化产生可发酵糖(例如糊精、单糖，尤其葡萄糖)。可以将这些可发酵糖进一步纯化和/或转化成有用的糖产物。此外，糖可以用作微生物发酵过程中的发酵原料以产生终产物，如醇(例如乙醇和丁醇)、有机酸(例如丁二酸和乳酸)、糖醇(例如甘油)、抗坏血酸中间体(例如葡萄糖酸、2-酮-D-葡萄糖酸、2，5-二酮-D-葡萄糖酸和2-酮-L-古洛糖酸)、氨基酸(例如赖氨酸)、蛋白质(例如抗体及其片段)。

在一个优选的实施方案中，使用在液化过程步骤期间获得的可发酵糖来产生醇并尤其产生乙醇。在乙醇生产中，通常使用其中一同添加糖化酶和发酵生物(例如酵母)的SSF过程并随后在30℃至40℃的温度实施。

发酵中所用的生物将取决于所需的终产物。一般而言，如果乙醇是想要的终产物，将使用酵母作为发酵生物。在一些优选的实施方案中，产乙醇微生物是酵母和特别地是酵母属酵母如酿酒酵母菌株(美国专利号4,316,956)。多种酿酒酵母可商业地获得并且这些酿酒酵母包括但不限于FALI(Fleischmann’s Yeast)、SUPERSTART(Alltech)、FERMIOL(DSMSpecialties)、RED STAR(Lesaffre)和Angel醇酵母(Angel酵母公司，中国)。在该方法中所用起子酵母的量是有效在合适的时间量内产生乙醇的商业显著量的量(例如有效在少于72小时内从具有25-40％之间DS的底物产生至少10％乙醇的量)。酵母细胞一般以每毫升发酵肉汤约10⁴至约10¹²个和优选地从约10⁷至约10¹⁰个活酵母计数的量供应。在添加酵母至糖化醪后，糖化醪一般经历约24-96小时例如35-60小时发酵。温度在约26-34℃之间，一般在约32℃，并且pH是从pH 3-6，优选地是大约pH 4-5。

除了发酵微生物(例如酵母)，发酵可以还包括养分和额外的酶，包括植酸酶。酵母在发酵中的用途是熟知的并参考The Alcohol Textbook，K.Jacques等人编著，1999，Nottingham University Press，UK。

在其他实施方案中，如本领域已知的，适宜发酵微生物的使用可以产生发酵终产物，包括例如甘油、1，3-丙二醇、葡萄糖酸、2-酮-D-葡萄糖酸、2，5-二酮-D-葡萄糖酸、2-酮-L-古洛糖酸、丁二酸、乳酸、氨基酸、及它们的衍生物。更具体地，当乳酸是所需终产物时，可以使用乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)(干酪乳杆菌(L.casei))；当甘油或1，3-丙二醇是所需终产物时，可以使用大肠杆菌；并且当2-酮-D-葡萄糖酸、2，5-二酮-D-葡萄糖酸和2-酮-L-古洛糖酸是所需终产物时，可以使用柠檬泛菌(Pantoea citrea)作为发酵微生物。上文例举的名单仅是例子并且本领域技术人员会知道可用来产生所需终产物的多种发酵微生物。

10.9发酵醪制备

本文中提供的变体α-淀粉酶也可以在发酵醪制备过程和相似的发酵过程中非常有用；一般在芽浆化过程(mashing process)期间添加所述α-淀粉酶。该过程基本上相似于如上所述的研磨、液化、糖化和发酵过程。

10.10使用淀粉酶变体用于带有釜馏物的淀粉浆液加工

含有研磨淀粉的材料与水和再循环的稀釜馏物合并，从而产生含水浆液。该浆液可以包含15至55％ds w/w(例如20至50％，25至50％，25至45％，25至40％，20至35％和30-36％ds)。在一些实施方案中，再循环的稀釜馏物(逆流物)在约10至70％v/v的范围内(如，10至60％、10至50％、10至40％、10至30％、10至20％、20至60％、20至50％、20至40％并且也在20至30％)。

一旦含有研磨淀粉的材料与水和逆流物合并，不调节浆液中的pH。另外，在添加植酸酶和任选地添加α-淀粉酶至浆液后，不调节pH。在一个优选的实施方案中，浆液的pH将在约pH 4.5至小于约6.0的范围(例如，pH 4.5至5.8、pH 4.5至5.6、pH 4.8至5.8、pH 5.0至5.8、pH 5.0至5.4、pH 5.2至5.5和pH 5.2至5.9)。浆液的pH可以在约pH 4.5与5.2之间，这取决于添加至浆液的稀釜馏物的量和包含稀釜馏物的材料的类型。例如，稀釜馏物的pH可以在pH 3.8与pH 4.5之间。作为又一个例子，下表B展示在155°F搅拌2小时后随增加量的稀釜馏物添加至全磨谷物浆液(32％ds)而发生的pH变化。

表B：

稀釜馏物w/w％      终末pH

0                  5.52

20                 5.29

40                 5.16

50                 5.09

60                 5.05

80                 4.98

100                4.94

在乙醇生产期间，可以添加酸以降低发酵醪井中的pH以降低蒸馏前微生物污染的风险。

在一些实施方案中，添加植酸酶至浆液。在其他实施方案中，除植酸酶之外，还添加α-淀粉酶至该浆液。在一些实施方案中，将植酸酶和α-淀粉酶依次添加至浆液。其他实施方案中，同时添加植酸酶和α-淀粉酶。在一些实施方案中，将包含植酸酶和任选包含α-淀粉酶的浆液温育(预处理)约5分钟至约8小时的时间(例如，5分钟至6小时、5分钟至4小时、5分钟至2小时和15分钟至4小时)。在其他实施方案中，浆液在约40至115℃(例如45至80℃、50至70℃、50至75℃、60至110℃、60至95℃、70至110℃、70至85℃和77至86℃)的温度范围内温育。

在其他实施方案中，浆液在含淀粉材料的淀粉凝胶化温度以下约0至约30℃(例如0至25℃、0至20℃、0至15℃、0至10℃和0至5℃)的温度温育。在一些实施方案中，该温度是约68℃以下、约65℃以下、约62℃以下、约60℃和约55℃以下。在一些实施方案中，该温度是约45℃以上、约50℃以上、约55℃以上和约60℃以上。在一些实施方案中，在低于淀粉凝胶化温度的温度温育包含植酸酶和α-淀粉酶的浆液被称作初级(1°)液化。

在一个实施方案中，含有研磨淀粉的材料是谷物或含粗蛋白质的牲畜饲料。该浆液包含25至40％ds，pH在4.8至5.2范围内并且该浆液在60至75℃的温度范围与植酸酶和任选地与α-淀粉酶温育5分钟至2小时。

目前，认为液化过程中所用的市售微生物α-淀粉酶通常没有稳定到足以在约80℃以上的温度、在小于pH 5.6的pH水平从使用全磨谷物的干磨法产生液化的淀粉底物。许多市售α-淀粉酶的稳定性在小于约4.0的pH处降低。

在又一个液化步骤中，含有温育过或预处理的淀粉的材料在约4.0至5.5的pH暴露于温度升高，如在含淀粉材料的淀粉凝胶化温度以上约0至约45℃(例如70℃至120℃、70℃至110℃和70℃至90℃)持续约2分钟至约6小时的时间段(例如2分钟至4小时、90分钟、140分钟和90分钟至140分钟)，更优选地在1小时至2小时之间。温度可以通过常规高温喷射蒸煮系统提高一段短暂时间，例如1至15分钟。随后，淀粉可以在范围从约75℃至95℃(例如80℃至90℃和80℃至85℃)的温度进一步水解约15至150分钟(例如30至120分钟)时间。在一个优选的实施方案中，在这些过程步骤期间不调节pH并且液化的糖化醪的pH在约pH 4.0至pH 5.8(例如pH 4.5至5.8、pH 4.8至5.4和pH 5.0至5.2)的范围内。在一些实施方案中，将第二剂量的热稳定α-淀粉酶添加至次级液化步骤，但是在其他实施方案中，不额外添加α-淀粉酶。

温育和液化步骤可以后续本领域熟知的糖化和发酵步骤。

10.11蒸馏

任选地，在发酵后，可以通过例如蒸馏和任选地一个或多个工艺步骤提取醇(例如乙醇)。

在一些实施方案中，由本文中所提供方法产生的乙醇的产率是至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少15％、至少16％、至少17％和至少18％(v/v)和至少23％v/v。根据本文中所提供方法获得的醇可以用作例如，燃料乙醇、饮用乙醇即可饮用的中度酒，或工业用乙醇。

10.12副产物

从发酵中剩下的是酒糟，其一般以液体或干燥形式用于动物饲料。在其他实施方案中，终产物可以包括发酵联产品如蒸馏器干酒糟(DDG)和蒸馏器干酒糟及可溶物(DDGS)，它们可以例如用作动物饲料。

关于如何实施液化、糖化、发酵、蒸馏和乙醇回收的其他细节是技术人员熟知的。

根据本文中提供的方法，可以同时或分别地实施糖化和发酵。

10.13纸浆和纸张生产

变体碱性α-淀粉酶也可以用在从淀粉强化废纸和纸板产生木素纤维素材料如纸浆、纸张和纸板中，尤其当再浆化在高于7的pH处发生并且淀粉酶通过降解强化淀粉而促进废弃材料分解的情况下。α-淀粉酶变体尤其在从淀粉包层的印刷纸张产生造纸纸浆的方法中有用。方法可以如WO95/14807中所述进行，包括以下步骤：

a)使纸张分解以产生纸浆，

b)在步骤a)之前、期间或之后用淀粉降解酶处理，和

c)在步骤a)和b)之后，将油墨颗粒与纸浆分开。

α-淀粉酶也可以在淀粉改性中非常有用，其中酶改性的淀粉连同碱性填料如碳酸钙、高岭土和粘土一起用于造纸中。采用碱性α-淀粉酶变体，有可能在填料存在下将淀粉改性，从而允许更简单的集成工艺。

10.14纺织品、织物和服装的退浆

α-淀粉酶变体也可以在纺织品、织物或服装退浆中非常有用。在纺织品加工工业中，α-淀粉酶在退浆工艺中常规地用作辅料以促进除去含淀粉的浆料，所述浆料在织造期间在纬纱上起到保护性涂层的作用。在织造后彻底除去浆料涂层对于确保后续工艺中的最佳结果是重要的，在所述后续工艺中将织物洗刷、漂白和染色。酶法淀粉分解是优选的，因为它不涉及对纤维材料的任何有害影响。为降低加工成本并提高研磨通量(millthroughput)，退浆工艺有时候与洗刷和漂白步骤合并。在这类情况下，一般使用非酶助剂如碱或氧化剂来分解淀粉，因为常规的α-淀粉酶非常不兼容于高pH水平和漂白剂。淀粉浆料的非酶分解由于所用的相当具侵入性的化学品而确实造成一些纤维损伤。因而，使用α-淀粉酶变体将是受欢迎的，因为它们具有在碱性溶液中的改良性能。在含有纤维素的织物或纺织品退浆时，α-淀粉酶可以单独使用或与纤维素酶组合使用。

退浆和漂白工艺是本领域熟知的。例如，此类工艺在例如在此引入作为参考的WO 95/21247、美国专利号4,643,736、EP 119,920中描述。

用于退浆的市售产品包括来自Genencor的FLEX。

10.15清洁过程和洗涤剂组合物

本文中所述的变体α-淀粉酶可以添加至用于多种清洁或洗涤过程(包括衣物和餐具洗涤)的洗涤剂组合物中并因而变成其组分。

本文中提供的洗涤剂组合物可以例如配制为手工或机器用衣物洗涤剂组合物，包括适于预处理着色织物的洗衣添加组合物和漂洗添加的织物软化组合物，或配制为用于一般家居硬表面清洁操作的洗涤剂组合物或配制用于手工或机器用餐具洗涤操作。

在一个特定的方面，本文中提供了包含本文中所述变体酶的洗涤剂添加物。该洗涤剂添加物以及洗涤剂组合物可以包含一种或多种其他酶如蛋白酶、脂肪酶、过氧化物酶、另一种淀粉分解酶(例如另一种α-淀粉酶)、葡糖淀粉酶、生麦芽糖淀粉酶、CGTase和/或纤维素酶、甘露聚糖酶(如来自Genencor分公司Danisco US Inc的MANNASTAR^TM))、果胶酶、果胶裂合酶、角质酶和/或漆酶。

通常，所选酶的特性应当兼容于所选择的洗涤剂(即，最适pH，与其他酶成分和非酶成分的兼容性等)并且所述酶应当以有效量存在。

蛋白酶：合适的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些蛋白酶。优选微生物来源。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选地是碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的例子是枯草蛋白酶，尤其从芽孢杆菌属衍生的那些枯草蛋白酶，例如枯草蛋白酶Novo、枯草蛋白酶Carlsberg、枯草蛋白酶309、枯草蛋白酶147和枯草蛋白酶168(在WO 89/06279描述)。胰蛋白酶样蛋白酶的例子是(例如猪或牛来源的)胰蛋白酶和在WO 89/06270与WO94/25583中描述的镰刀菌属(Fusarium)蛋白酶。

优选的市售蛋白酶酶包括

和

(来自Novozymes A/S)、

MAXACAL、

PURAFECT

(GenencorInternational Inc.)。

脂肪酶：合适的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些脂肪酶。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用脂肪酶的例子包括来自腐质霉属(Humicola)(同义词：嗜热真菌(Thermomyces))的脂肪酶，例如，如EP 258068和EP 305 216中所述的来自柔毛腐质霉(H.lanuginosa)(T.lanuginosus)或如WO 96/13580中所述的来自H.insolens的脂肪酶，假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶，例如，来自产碱假单胞菌(P.alcalipenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligene)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP331 376)、斯氏假单胞菌(P.stutzer)(GB 1,372,034)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)、芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人(1993)，Biochemicaet Biophysica Acta，1131，253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumilus)(WO 91/16422)。其他例子是脂肪酶变体，如WO92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260 105、WO 95/35381、WO96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079和WO 97/07202中描述的那些脂肪酶变体。

优选的市售脂肪酶包括LIPOLASE^TM和LIPOLASE ULTRA^TM(Novozymes A/S)。

淀粉酶：也可以包括一种或多种额外的淀粉酶。合适的淀粉酶(α和/或β)包括细菌或真菌来源的那些淀粉酶。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如从GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特定菌株中获得的α-淀粉酶。有用α-淀粉酶的例子是在WO 94/18314、WO 96/39528、WO 94/02597、WO 94/18314、WO96/23873和WO 97/43424中描述的变体、尤其在以下一个或多个位置具有替换的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408和444。

市售的α-淀粉酶是DURAMYL^TM、LlQUEZYME^TM、TERMAMY^TM、NATALASE^TM、FUNGAMYL^TM和BAN^TM(Novozymes A/S)、RAPIDASE^TM和PURASTAR^TM(来自Genencor)。

纤维素酶：合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些纤维素酶。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、木霉属(Trichoderma)、腐质霉属、镰刀菌属、草根霉属(Thielavia)、枝顶孢霉属(Acremonium)的纤维素酶，例如在美国专利号4,435,307、美国专利号5,648,263、美国专利号5,691,178、美国专利号5,776,757和WO 89/09259中公开的从Humicola insolens、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。里氏木霉纤维素酶在美国专利号4,689,297、美国专利号5,814,501、美国专利号5,324,649、WO 92/06221和WO 92/06165中公开。芽孢杆菌属纤维素酶在美国专利号6,562,612中公开。

市售的纤维素酶包括

和

(NovozymesA/S)、

和

(Genencor International Inc.)和

(Kao Corporation)。

过氧化物酶/氧化酶：合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些过氧化物酶/氧化酶。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用过氧化物酶的例子包括来自鬼伞属(Coprinus)，例如，来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶和其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中描述的那些变体。

市售的过氧化物酶包括

(Novozymes A/S)。

洗涤剂酶可以通过添加含有一种或多种酶的独立添加物或通过添加包含全部这些酶的合并添加物被包含于洗涤剂组合物中。洗涤剂添加物(例如独立添加物或合并添加物)可以配制为例如颗粒剂、液体剂、浆液剂等。优选的洗涤剂添加物制剂是颗粒剂，尤其无尘颗粒剂，液体剂，尤其稳定化液体剂或浆液剂。

无尘颗粒剂可以如美国专利号4,106,991和4,661,452中所公开那样产生并且可以任选地由本领域已知的方法包衣。蜡质包衣材料的例子是平均摩尔重量1000至20000的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基苯酚；其中醇含有12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸单酰甘油和二酰甘油和三酰甘油。在GB 1483591中给出适用于流化床技术的成膜包衣材料的例子。液体酶制品可以根据建立的方法例如通过添加多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸稳定化。可以根据EP238,216中所述的方法制备受保护的酶。

洗涤剂组合物可以是任何便利的形式，例如，棒剂、片剂、粉剂、颗粒剂、糊剂或液体剂。液体洗涤剂可以是含水的，一般含有多达约70％的水和0至约30％有机溶剂，或是非含水的。

洗涤剂组合物包含一种或多种表面活性剂，所述表面活性剂可以是非离子的(包括半极性)和/或阴离子和/或阳离子和/或两性离子的。表面活性剂一般以约0.1％至60％重量的水平存在。

当包含于洗涤剂中时，洗涤剂通常将含有从约1％至约40％的阴离子表面活性剂如直链烷基苯磺酸盐、α-烯基磺酸盐、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)、乙氧基化脂肪醇醚硫酸盐、仲烷基磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或链烯基丁二酸或皂。

当包含于洗涤剂中时，洗涤剂通常将含有从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂如脂肪醇乙氧基化物、壬基酚聚氧乙烯醚、烷基多糖苷、烷基二甲胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。

洗涤剂可以含有0至约65％的洗涤剂增效助剂或络合剂，如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、氨三乙酸、乙二胺四乙酸、二乙三胺五乙酸、烷基或链烯基丁二酸、可溶性硅酸盐或分层硅酸盐(例如来自Hoechst的SKS-6)。

洗涤剂可以包含一种或多种聚合物。例子是羧甲基纤维素、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚乙烯醇、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。

洗涤剂可以含有漂白系统，所述漂白系统可以包含H₂O₂源，如可以与形成过酸的漂白激活物如四乙酰乙二胺或壬酰氧苯磺酸盐组合的过硼酸盐或过碳酸盐。备选地，该漂白系统可以包含过氧酸，例如酰胺型、亚酰胺型或砜型过氧酸。

可以使用常规稳定剂，例如，多元醇，如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳族硼酸酯或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯硼酸稳定化洗涤剂组合物的酶，并且该组合物可以如例如，WO 92/19709和WO 92/19708中所述配制。

洗涤剂也可以含有其他常规洗涤剂成分，例如织物调理剂，包括粘土，泡沫促进剂，抑泡剂、抗腐蚀剂、悬污剂、抗污渍再沉积剂、染料、杀菌剂、荧光增白剂、水溶助长剂、晦暗抑制剂或香料。

目前构思的是在洗涤剂组合物中可以按照与每升洗液0.01-100mg酶蛋白、优选每升洗液0.055mg酶蛋白、尤其每升洗液0.1-1mg酶蛋白相对应的量添加任意酶，尤其本文中所述的一种或多种变体酶。

本文中所述的一种或多种变体酶可以额外地掺入在并入本文作为参考的WO 97/07202中公开的洗涤剂制剂。

10.16餐具洗涤用洗涤剂组合物

所述酶也可以用于餐具洗涤用洗涤剂组合物中，所述组合物包括：

1)粉状自动餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂      0.4-2.5％

硅酸钠                0-20％

二硅酸钠              3-20％

三磷酸钠              20-40％

碳酸钠                0-20％

过硼酸钠              2-9％

四乙酰乙二胺(TAED)    1-4％

硫酸钠                5-33％

酶                    0.0001-0.1％

2)粉状自动餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂      1-2％

(例如，脂肪醇乙氧基化物)

二硅酸钠              2-30％

碳酸钠                10-50％

膦酸钠                0-5％

二水合柠檬酸三钠      9-30％

次氮基三乙酸钠(NTA)   0-20％

一水合过硼酸钠        5-10％

四乙酰乙二胺(TAED)    1-2％

聚丙烯酸酯聚合物      6-25％

(例如马来酸/丙烯酸共聚物)

酶                    0.0001-0.1％

香料                  0.1-0.5％

水                    5-10％

3)粉状自动餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂          0.5-2.0％

二硅酸钠                  25-40％

柠檬酸钠                  30-55％

碳酸钠                    0-29％

碳酸氢钠                  0-20％

一水合过硼酸钠            0-15％

四乙酰乙二胺(TAED)        0-6％

马来酸/丙烯酸共聚物       0-5％

粘土                      1-3％

聚氨基酸                  0-20％

聚丙烯酸钠                0-8％

酶                        0.0001-0.1％

4)粉状自动餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂          1-2％

沸石MAP                   15-42％

二硅酸钠                  30-34％

柠檬酸钠                  0-12％

碳酸钠                    0-20％

一水合过硼酸钠            7-15％

四乙酰乙二胺(TAED)聚合物  0-3％

                          0-4％

马来酸/丙烯酸共聚物       0-5％

有机膦酸盐                0-4％

粘土                      1-2％

酶                        0.0001-0.1％

硫酸钠                    平衡

5)粉状自动餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂          1-7％

二硅酸钠                                  18-30％

柠檬酸三钠                                10-24％

碳酸钠                                    12-20％

单过硫酸盐                                15-21％

(2KHSO₅.KHSO₄.K₂SO₄)

漂白稳定剂                                0.1-2％

马来酸/丙烯酸共聚物                       0-6％

二乙烯三胺五乙酸五钠盐                    0-2.5％

酶                                        0.0001-0.1％

硫酸钠，水                                平衡

6)具有清洁表面活性剂系统的粉状和液体餐具洗涤组合物

非离子表面活性剂                          0-1.5％

二水合N-氧化十八烷基二甲胺                0-5％

二水合N-氧化十八烷基二甲胺与二水合N-氧    0-4％

化十六烷基二甲胺的80∶20重量C18/C16掺合

物

无水N-氧化十八烷基二(羟乙基)胺与无水N-氧  0-5％

化十六烷基二(羟乙基)胺的70∶30重量C18/C16

掺合物

具有平均乙氧基化度3的C₁₃-C₁₅烷基乙氧基硫  0-10％

酸酯

具有平均乙氧基化度3的C₁₂-C₁₅烷基乙氧基硫  0-5％

酸酯

具有平均乙氧基化度12的C₁₃-C₁₅乙氧基化醇   0-5％

具有平均乙氧基化度9的C₁₂-C₁₅乙氧基化醇的  0-6.5％

掺合物

具有平均乙氧基化度30的C₁₃-C₁₅乙氧基化醇   0-4％

的掺合物

二硅酸钠                                      0-33％

三聚磷酸钠                                    0-46％

柠檬酸钠                                      0-28％

柠檬酸                                        0-29％

碳酸钠                                        0-20％

一水合过硼酸钠                                0-11.5％

四乙酰乙二胺(TAED)                            0-4％

马来酸/丙烯酸共聚物                           0-7.5％

硫酸钠                                        0-12.5％

酶                                            0.0001-0.1％

7)非含水液体自动餐具洗涤组合物

液体非离子表面活性剂(例如脂肪醇乙氧基化物)    2.0-10.0％

碱金属硅酸盐                                  3.0-15.0％

碱金属磷酸盐                                  20.0-40.0％

选自高级二醇、聚二元醇、多氧化物、二元醇醚    25.0-45.0％

的液体载体

稳定剂(例如，磷酸与C₁₆-C₁₈链烷醇的偏酯)       0.5-7.0％

抑泡剂(例如硅氧烷)                            0-1.5％

酶                                            0.0001-0.1％

8)非含水液体餐具洗涤组合物

液体非离子表面活性剂(例如脂肪醇乙氧基化物)    2.0-10.0％

硅酸钠                                        3.0-15.0％

碱金属碳酸盐                                  7.0-20.0％

柠檬酸钠                                      0.0-1.5％

稳定系统(例如，精细分散的硅氧烷

与低分子量二烷基聚二元醇醚的混合物)           0.5-7.0％

低分子量聚丙烯酸酯聚合物                      5.0-15.0％

粘土凝胶增稠剂(例如膨润土)          0.0-10.0％

羟丙基纤维素聚合物                  0.0-0.6％

酶                                  0.0001-0.1％

选自高级二醇、聚二元醇、多氧化物、

二元醇醚的液体载体                  平衡

9)触变的液体自动餐具洗涤组合物

C₁₂-C₁₄脂肪酸                       0-0.5％

嵌段共聚物表面活性剂                1.5-15.0％

柠檬酸钠                            0-12％

三聚磷酸钠                          0-15％

碳酸钠                              0-8％

三硬脂酸铝                          0-0.1％

枯烯磺酸钠                          0-1.7％

聚丙烯酸酯增稠剂                    1.32-2.5％

聚丙烯酸钠                          2.4-6.0％

硼酸                                0-4.0％

甲酸钠                              0-0.45％

甲酸钙                              0-0.2％

正癸基二苯醚二磺酸钠                0-4.0％

单乙醇胺(MEA)                       0-1.86％

氢氧化钠(50％)                      1.9-9.3％

1，2-丙二醇                         0-9.4％

酶                                  0.0001-0.1％

抑泡剂、染料、香料、水              平衡

10)液体自动餐具洗涤组合物

脂肪醇乙氧基化物                    0-20％

脂肪酸磺酸酯                        0-30％

十二烷基硫酸钠                      0-20％

烷基多苷                        0-21％

油酸                            0-10％

一水合二硅酸钠                  18-33％

二水合柠檬酸钠                  18-33％

硬脂酸钠                        0-2.5％

一水合过硼酸钠                  0-13％

四乙酰乙二胺(TAED)              0-8％

马来酸/丙烯酸共聚物             4-8％

酶                              0.0001-0.1％

11)含有受保护的漂白剂颗粒的液体自动餐具洗涤组合物

硅酸钠                          5-10％

焦磷酸四钾                      15-25％

三磷酸钠                        0-2％

碳酸钾                          4-8％

受保护的漂白剂颗粒，例如，氯    5-10％

高分子型增稠剂                  0.7-1.5％

氢氧化钾                        0-2％

酶                              0.0001-0.1％

水                              平衡

12)如1)、2)、3)、4)、6)中所述的自动餐具洗涤组合物，其中过硼酸盐被过碳酸盐替代。

13)如1)-6)中所述的自动餐具洗涤组合物，其额外地含有锰催化剂。所述锰催化剂可以例如是“用于低温漂白作用的高效锰催化剂”(″Efficientmanganese catalysts for low-temperature bleaching″)，Nature 369：637-39(1994)中所述的化合物之一。

14)高级HDL液体洗涤剂配方

Bio-Soft S-101  直链烷基苯磺酸

Steol CS-330    月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠

Bio-soft N25-7    具有7摩尔EQ的直链烷基乙氧基化物

Stepanate SXS     二甲苯磺酸钠

15)超级液体洗涤剂配方

Tionopal CBS-X    荧光增白剂

Alpha-step MC-48  α-磺基甲酯钠

Makon TD-6        十三烷醇乙氧基化物

10.17  变体与其他酶为植酸酶联合的用途

10.17.1  植酸酶的用途

本文中有用的植酸酶包括能够在使用条件下(例如温育和/或液化步骤)水解植酸盐和/或植酸的酶。在一些实施方案中，植酸酶能够从肌醇六磷酸(例如植酸)释放至少一种无机磷酸盐。植酸酶可以根据它们对植酸盐分子上磷酸酯基团的特定位置起始水解的偏好性分类(例如作为3-植酸酶(EC3.1.3.8)或作为6-植酸酶(EC 3.1.3.26))。植酸酶的常见例子是肌醇六磷酸-3-磷酸水解酶。

植酸酶可以从微生物如真菌生物和细菌生物获得。这些微生物的中的一些微生物包括例如曲霉属(例如黑曲霉、土曲霉(A.terreus)、无花果曲霉(A.ficum)和烟曲霉(A.fumigatus))、毁丝霉属(嗜热毁丝霉(M.thermophila))、踝节菌属(Talaromyces)(嗜热踝节菌(T.thermophilus))、木霉属某些物种(里氏木霉)和嗜热丝孢菌属(Thermomyces)(WO 99/49740)。植酸酶也可从青霉属物种获得，例如大麦青霉(P.hordei)(ATCC No.22053)、桧状青霉(P.piceum)(ATCC No.10519)或短密青霉(P.brevicompactum)(ATCC No.48944)。见，例如USP 6,475,762。另外，植酸酶从芽孢杆菌属(例如枯草芽孢杆菌)、假单胞菌属、隔孢伏革属(Peniophora)、大肠杆菌、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterbacter)和布丘氏菌属(Buttiauxella)(见例如WO2006/043178)可获得。

商业植酸酶是可获得的，如NATUPHOS(BASF)、RONOZYME P(Novozymes A/S)、PHZYME(Danisco A/S，Diversa)和FINASE(ABEnzymes)。用于确定微生物植酸酶活性的方法和植酸酶单位的定义已经由Engelen等人(1994)J.of AOAC International 77：760764公布。植酸酶可以是野生型植酸酶、其活性变体或活性片段。

在一个实施方案中，植酸酶从布丘氏菌属(Buttiauxiella spp.)细菌衍生。布丘氏菌属包括乡间布丘氏菌(B.agrestis)、布里纳氏布丘氏菌(B.brennerase)、费拉格布丘氏菌(B.ferragutiae)、伽瓦尼布丘氏菌(B.gaviniae)、伊查德氏布丘氏菌(B.izardii)、诺基亚布丘氏菌(B.noackiae)，和瓦姆波德布丘氏菌(B.warmboldiae)。布丘氏菌物种的菌株从德国国家生物材料资源中心DSMZ(Inhoffenstrabe 7B，38124Braunschweig，德国)可获得。在保藏号NCIMB 41248下保藏的布丘氏菌菌株P1-29是可以从中获得有用植酸酶的特别有用的菌株的例子。在一些实施方案中，植酸酶是BP-野生型、在WO 06/043178中公开的其变体(如BP-11)或如2007年3月6日提交的美国专利申请11/714,487号中公开的变体。例如，BP-野生型及其变体在WO 06/043178的表1中公开，其中编号参考了已公布的PCT申请的SEQ ID NO：3。

在一个优选实施方案中，有用的植酸酶是与下文显示的SEQ ID NO：31或其活性变体中所述的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少88％、至少90％、至少93％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％和至少99％序列同一性的一种植酸酶。更优选地，该植酸酶将与SEQ ID NO：31或其活性变体中所述的氨基酸序列具有至少95％至99％序列同一性。在一些实施方案中，该植酸酶包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列。仍在其他实施方案中，该植酸酶是SEQ ID NO：31。

布丘氏菌BP-17植酸酶的成熟蛋白质序列(SEQ ID NO：31)

NDTPASGYQV EKVVILSRHG VRAPTKMTQT MRDVTPNTWP

EWPVKLGYIT PRGEHLISLM GGFYRQKFQQ QGILSQGSCP

TPNSIYVWAD VDQRTLKTGE AFLAGLAPQC GLTIHHQQNL

EKADPLFHPV KAGTCSMDKT QVQQAVEKEA QTPIDNLNQH

YIPFLALMNT TLNFSTSAWC QKHSADKSCD LGLSMPSKLS

IKDNGNKVAL DGAIGLSSTL AEIFLLEYAQ GMPQAAWGNI

HSEQEWASLL KLHNVQFDLM ARTPYIARHN GTPLLQAISN

ALNPNATESK LPDISPDNKI LFIAGHDTNI ANIAGMLNMR

WTLPGQPDNT PPGGALVFER LADKSGKQYV SVSMVYQTLE

QLRSQTPLSL NQPAGSVQLK IPGCNDQTAE GYCPLSTFTR

VVSQSVEPGC QLQ

在一些实施方案中，温育和/或液化过程中使用的植酸酶的量(剂量)在约0.001至50FTU/g ds的范围内(例如在约0.01至25FTU/g ds、约0.01至15FTU/g ds、约0.01至10FTU/g ds、约0.05至15FTU/g ds或约0.05至5.0FTU/g ds的范围内)。

10.17.2植酸酶活性(FTU)的确定

通过无机磷酸盐的释放测量“植酸酶活性”(“FTU”)。无机磷酸盐与酸性钼酸盐/钒酸盐试剂形成黄色复合物；并且在分光光度计中在415nm波长处测量这种黄色复合物，并且用磷酸盐标准曲线量化释放的无机磷酸盐。1单位植酸酶(FTU)是在欧洲标准(CEN/TC 327，2005-TC327WI003270XX中给定的反应条件下每分钟从植酸盐释放1微摩尔无机磷酸盐的酶量。

10.17.3植酸含量的确定

植酸含量：通过调节5％浆液(如果它是干样品)的pH至pH 10从样品提取植酸并随后通过使用离子交换柱的HPLC方法确定植酸。使用NaOH梯度系统从该柱子洗脱植酸。随后通过与植酸标准物的比较计算液体中的植酸含量。

11.包含变体α-淀粉酶的组合物(掺合物)

在本公开的几个方面之一，本公开提供了组合物，其包含：

a)至少一种α-淀粉酶变体，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，该变体具有可检测的α-淀粉酶活性，和

b)至少一种额外的酶。

与亲本AmyS样α-淀粉酶或参考α-淀粉酶相比，该变体在一种或多种的任意有用或可测量属性方面被改变，所述属性包括净电荷、底物特异性、底物切割、底物结合、热稳定性、在一个或多个pH处的活性、在一个或多个pH处的稳定性、氧化条件下的稳定性、Ca²⁺需求、比活性、催化速率、催化效率、在植酸盐存在下的活性、在植酸盐存在下的热或pH稳定性、在液化试验中影响峰粘度的能力或在液化试验中影响终末粘度的能力。在优选的实施方案中，与亲本α-淀粉酶例如AmyS样淀粉酶相比，该变体将具有多于一种的改变属性，例如，改善的热稳定性和在液化中降低峰粘度的能力或在液化中降低峰粘度和终末粘度的能力。

在多个实施方案中，参考淀粉酶是SEQ ID NO：1或2。其他α-淀粉酶可以用作参考α-淀粉酶。优选用于本文中的参考α-淀粉酶在第242氨基酸位置处具有丝氨酸残基。

在多个实施方案中，所述额外的酶是植酸酶、蛋白酶、脂肪酶、支链淀粉酶、葡糖淀粉酶、异构酶或在与α-淀粉酶有关的商业加工中有用的其他酶。此类酶是淀粉加工、糖转化、醇和其他有用终产物发酵、商业洗涤剂和清洁助剂、污渍去除、织物处理或退浆等领域中已知的。目前优选的额外的酶是植酸酶。一个实施方案使用了包含SEQ ID NO：17的植酸酶。

在某些实施方案中，所述变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。此类变体在本文所提供的工作实施例中例举并表征。

在一些实施方案中，该变体还在与参考淀粉酶(例如SEQ ID NO：1或2)第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。更具体地，该变体可以包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349氨基酸位置处的半胱氨酸、在第428氨基酸位置处的半胱氨酸、在第97氨基酸位置处的谷氨酸、在第97氨基酸位置处的精氨酸、在第319氨基酸位置处的谷氨酸、在第319氨基酸位置处的精氨酸、在第358氨基酸位置处的谷氨酸、在第358氨基酸位置处的精氨酸、在第443氨基酸位置处的谷氨酸或在第443氨基酸位置处的精氨酸。N193或V416或这二者的替换，如N193F或V416G或这两者的替换在本文中对变体均有用。缺失与第179和180位置相对应的氨基酸也可以在本文中用于任意变体淀粉酶。

在组合物的一个实施方案中，α-淀粉酶变体与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性并且相对于包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的参考淀粉酶中的编号而言包含第242位氨基酸替换。如同上文，该变体优选地在允许此活性的条件下具有可检测的α-淀粉酶活性。

上文讨论了有用的亲本淀粉酶。在一些实施方案中，亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO：1、2、15或16。在其他实施方案中，亲本α-淀粉酶是SEQ IDNO：6、7、8、9、10、11或12。

在多个实施方案中，变体淀粉酶和植酸酶以AAU∶FTU的比率是约1∶15至约15∶1的量存在。优选地，在一些实施方案中，变体淀粉酶和植酸酶以AAU∶FTU的比率是约1∶4至约3∶1的量存在。

12.使用变体与其他酶的方法

在另一方面，本公开提供了使用与其他酶、尤其植酸酶联合的变体α-淀粉酶的方法。在一个实施方案中，提供了用于处理淀粉浆液的方法。该处理方法可以是液化过程、糖化、发酵过程等的部分。该方法通常包括步骤：

a)添加至少一种植酸酶和至少一种α-淀粉酶至淀粉浆液和b)在允许所述植酸酶和所述α-淀粉酶活性的条件下温育淀粉浆液。该方法包括任意一个或多个添加步骤，从而在相同时间或大致相同时间或按任意顺序(即首先添加植酸酶或首先添加淀粉酶)以此类添加步骤之间任意有用的时间间隔量分别添加所述植酸酶和α-淀粉酶。如同组合物那样，该α-淀粉酶是这样的变体淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换。该变体具有可检测的α-淀粉酶活性。

在一个实施方案中，与亲本AmyS样α-淀粉酶或参考淀粉酶相比，该变体在任意一种或多种以下属性方面被改变：净电荷、底物特异性、底物切割、底物结合、热稳定性、在一个或多个pH处的活性、在一个或多个pH处的稳定性、氧化条件下的稳定性、Ca²⁺需求、比活性、催化速率、催化效率、在植酸盐存在下的活性、在植酸盐存在下的热或pH稳定性、在液化试验中影响峰粘度的能力或在液化试验中影响终末粘度的能力。

如上文讨论，植酸酶的使用可以通过缓解对α-淀粉酶活性的一些抑制作用影响α-淀粉酶的稳定性或其他特性，原因在于植物材料例如磨碎谷物中存在一种或多种植酸盐。不受任何具体理论限制，至少部分除去植酸盐似乎改善了淀粉酶的一种或多种特性，从而改善产率或结果。

上文讨论了参考淀粉酶，并且在该方法的一个实施方案中，参考淀粉酶是SEQ ID NO：1或2。

在多个实施方案中，所述变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。在其他实施方案中，该变体还在与参考淀粉酶第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。更具体地，在多个实施方案中，该变体包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸。N193或V416或这二者的替换，如N193F或V416G或这两者的替换也用于某些变体中。如同其他修饰那样，第179和180位氨基酸的缺失也可以单独地或与任意的前述改变组合地使用。

在某些实施方案中，亲本α-淀粉酶便利地是SEQ ID NO：1、2、15或16，而在其他实施方案中，亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO：6、7、8、9、10、11或12。

在一个实施方案中，添加步骤包括在淀粉酶之前添加植酸酶。优选地，当先添加植酸酶时，将浆液在添加植酸酶后并在添加α-淀粉酶之间预温育，例如持续足够时间以可测量地降低植酸盐含量。

在多个实施方案中，植酸酶的包括相对于不包括浆液与植酸酶接触的可比较方法而言引起α-淀粉酶的热稳定性提高。

在其他应用中，植酸酶和淀粉酶在添加至浆液中之前存在于单一掺合物如商业掺合物中。在一个目前优选的实施方案中，植酸酶具有SEQ IDNO：17的氨基酸序列。

在本公开几个方面的另一个方面中，本公开提供了从包含磨碎谷物的含淀粉浆液中产生可发酵底物的方法。该方法包括步骤：

a)将含淀粉浆液与足以从淀粉产生可发酵底物的量的至少一种植酸酶和至少一种α-淀粉酶接触；和

b)在允许植酸酶及α-淀粉酶活性的条件下温育该淀粉浆液一段引起可发酵底物产生的时间；其中在该淀粉酶之前启动与植酸酶接触时，浆液在比该浆液与所述淀粉酶接触之前的凝胶化温度低约0-30℃的温度温育，此后升高温度高于凝胶化温度，持续时间为有效水解淀粉的时间。

在多个实施方案中，在相同时间或大致相同时间或以任意顺序分别地启动与植酸酶和α-淀粉酶的接触。在此类方法中使用的α-淀粉酶是这样的变体淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，该变体具有可检测的α-淀粉酶活性。

在某些实施方案中，该参考淀粉酶是SEQ ID NO：1或2，并且该变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。

本文中还提供了试剂盒，其包含在一个或多个包装物中以单位提供的：

i)至少一种变体淀粉酶，其包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，该变体具有可检测的α-淀粉酶活性，和

ii)至少一种额外的酶。

该试剂盒还包含在涉及酶切割淀粉分子的有用方法中使用所述酶的说明书。试剂盒也可以还包含一种或多种额外的酶、酸化剂或用于调节淀粉浆液pH的其他化合物、养分、辅因子等。

本公开在后续实施例中包括进一步细节，所述实施例不意图以任何方式限制所要求的范围。附图是所提供说明书和描述的必要部分。所引用的全部参考文献通过引用方式在本文中对其中所述的全部那些内容特别地并入。因而提供了以下实施例以说明，但不用于限制所要求保护的内容。

实施例

实施例1-变体的构建

使用位点定向诱变法构建在AmyS的成熟序列第S242位置处的变异。用于诱变的模板是来自New England Biolabs(马萨诸塞州)的使用dam甲基化酶的甲基化pHPLT-AmyS(见图2)。在Operon(Huntsville，AL)合成简并引物(S242F(正向)和S242R(反向)SEQ ID NO：17和18(下文分别给出)并稀释至10μM，互补性正向和反向序列均含有用于反应中连接的5’磷酸酯基团。亲本α-淀粉酶的序列是SEQ ID NO：2。使用在靶位置处以NN(G/C)随机化的寡核苷酸引物，以Stratagene Quik-Change^TM多位点试剂盒(Stratagene，La Jolla CA)创建文库。所选择的氨基酸(即S242)随机地用全部19种可能备选物替换。

用于诱变的S242引物：

S242 F：

5’[Phos]GTCAAGCATATTAAGTTCNNSTTTTTTCCTGATTGGTTG

3’SEQ ID NO：17

S242 R：

5’[Phos]CAACCAATCAGGAAAAAASNNGAACTTAATATGCTTGAC

3’SEQ ID NO：18

反应如下进行：

QUIK-CHANGE反应：

该反应由18μL无菌蒸馏水、2.5μL来自该试剂盒的10x缓冲液、1μL来自该试剂盒的dNTP、1.25μL正向引物(10μM母液)、1.25μL反向引物(10μM母液)、1μL pHPLT-AmyS质粒DNA作为模板(约70ng)和1μL来自该试剂盒的酶掺合物组成，总计26.5μL。

循环条件：

循环条件是95℃1分钟，进行一次，随后95℃1分钟、55℃1分钟、65℃10分钟，25个循环。

将1微升Dpn I(10U/μL)添加至Multi-Site Quik-Change^TM反应混合物并在37℃温育18小时，并随后添加另一份0.5μL Dpn I温育额外3小时。

使用1微升DpnI消化的反应物作为采用TEMPLIPHI扩增试剂盒(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)的滚环复制的模板并且根据Amersham方案进行反应。将1微升滚环DNA转化至100μL枯草芽孢杆菌感受态细胞(2种蛋白酶缺失的枯草芽孢杆菌菌株(ΔaprE，ΔnprE，amyE::xylRPxylAcomK-phleo))并在37℃振摇1小时。随后将全部转化物涂布在LA+10ppm新霉素+1％不溶性淀粉平板(一个平板上涂布25μL，另一个平板上涂布75μL)并在37℃温育过夜。将96个转化体挑入微量滴定平板中150μL的LB+10ppm Neo内并在37℃培育过夜。用96针复制工具将过夜平板印在一个大LA+10ppm Neo+1％不溶性淀粉平板上并提交至Quintara Biosciences(Berkeley，CA)用于菌落PCR和测序。

在确定变体序列后，将变体挑入含有125μL LB+10ppm Neo的96孔微量滴定平板，将所述变体排列成带对照的四重样式(quad format)。排列的微量滴定平板在37℃和250转/分钟培育6小时。利用复制器(荷兰莱顿Enzyscreen)，使用微量滴定培养平板来接种含有150μl用于蛋白质表达的MBD培养基(G.Vogtentanz等人，产生大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的枯草芽孢杆菌融合蛋白系统(A Bacillus subtilis fusion protein systemto produce soybean Bowman-Birk protease inhibitor)，Prot.Expr.&Purif.55(2007)40-52)并补充有用于蛋白质表达的5mM CaCl₂的一个新微量滴定平板(微量滴定平板和平板盖来自荷兰莱顿Enzyscreen)。将表达平板在37℃、250转/分钟和70％湿度培育64小时。随后，表达培养物经微滤板(0.22μm，Millipore，Billerica，MA)过滤并筛选改善的热稳定性(见实施例3)。

实施例2-变体的表达、纯化和表征

将菌落从实施例1的微量滴定平板划线到具有10ppm新霉素的淀粉平板。平板在37℃温育过夜并挑取单菌落并用来接种含有培养基(见下文)和20ppm新霉素的摇瓶(250mL，具有25mL培养基)。培养物在37℃，275转/分钟培育约8小时(至达到OD(600nm)2.0)。将培养物肉汤与50％甘油以2∶1比率混合，置入分别标记的培养小瓶并冷冻于-80℃。随后从这些甘油贮藏物产生所选择的α-淀粉酶。

淀粉酶发酵在500mL摇瓶内37℃培育含有1％(w/v)大豆胨的极限MOPS培养基(Neidhardt等人，J.Bacteriol.119(3)：736-747，1974)60小时实施。使用如下疏水性相互作用层析从发酵肉汤纯化酶：将肉汤浓缩10倍，随后用含有1M硫酸铵的50mM MES，2mM CaCl₂，pH 6.8稀释复原至其原始体积，随后使用玻璃纤维滤器无菌过滤。样品随后上载到用同一种缓冲液预平衡的苯基SEPHAROSE FF高密度柱(20x95mm；Amersham，GE Healthcare Bio-Sciences，Sweden)上。用10个柱体积的无硫酸铵的相同缓冲液，随后用5个柱体积的水除去非淀粉酶蛋白质。用含有40％丙二醇的50mM MES，2mM CaCl₂，pH 6.8洗脱目的酶。

用标准定量SDS PAGE凝胶光密度测定法；或者使用来自Megazyme(Wicklow，Ireland)的标准淀粉酶测定试剂盒，利用活性测定法确定蛋白质浓度。利用纯化淀粉酶(芽孢杆菌属707淀粉酶；SEQ ID NO：6)生成的标准曲线用于比较所测定数据。

实施例3-确定改变的特性：热应激

本实施例显示本文中所述的变体可以相对于亲本α-淀粉酶具有改变的特性。实施嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(AmyS)变体的高通量热稳定性筛选。

在初步研究后，如下选择热应激条件，使得野生型酶在热应激后大致显示40％初始(应激前)活性(即，(热应激后活性)/(热应激前活性)大致是0.4)。一式四份筛选突变体文库并且将潜在胜出者鉴定为热应激后显示比野生型酶的平均残余活性高至少2个标准差的残余活性的那些突变体。

淀粉酶表达在表达平板的培养上清液中是大约100ppm。在37℃于加湿摇床(250转/分钟和70％r相对湿度)中生长60-65小时后，使用滤板澄清培养上清液以除去细胞物质。将澄清的上清液10倍稀释到含有50mMNaOAc/2.6mM CaCl₂/0.002％Tween-20，pH 5.8的缓冲液中，至终浓度大约10ppm。将每种上清液的一个等份试样进一步稀释成0.02ppm，以使用荧光标记的谷物淀粉底物如下文所述确定酶变体的活性。每种上清液的第二等份试样在热循环仪中经历95℃热应激30分钟，随后在50mMNaOAc/2.6mM CaCl₂/0.002％Tween-20，pH 5.8中稀释成0.02ppm，并使用下文所述荧光底物和测定法测定残余活性。

使用淀粉酶ENZCHECK ULTRA AMYLASE测定试剂盒基本上如制造商(Invitrogen，San Diego CA)所述确定淀粉酶活性。该测定法中淀粉酶的终浓度是大约0.02ppm。测试缓冲液是50mM NaOAc/2.6mMCaCl₂/0.002％Tween-20，pH 5.8。底物是BODIPY荧光染料缀合的来自谷物的100μg/mL DQ^TM淀粉(Invitrogen，Eugene，OR)。使用SpectraMAXM2(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)测量表示淀粉酶活性的增加的荧光。用记录动态模式的仪器在室温监测反应5分钟。激发波长是485nm；用515nm的截止滤光片在520nm监测发射。

野生型AmyS(Xtra)在经历95℃热应激30分钟后显示33-43％残余活性。AmyS变体S242A和S242Q在相同热应激条件后仍分别保留55-65％和70-80％残余活性。见图3和表3-1。这些残余活性量值表明这两种变体比野生型α-淀粉酶更热稳定。

表3-1：每种变体的残余活性百分数。野生型(SPEZYME XTRA)。如所示，每块平板包括SPEZYME ETHYL和SPEZYME XTRA作为对照。

实施例4-确定改变的特性：DSC

使用疏水性相互作用层析法从摇瓶发酵肉汤(见实施例2)纯化Spezyme Xtra、S242A、S242E和S242Q。使用含有40％丙二醇和2mMCaCl₂的50mM MES，pH 6.8从该柱以纯化的形式洗脱蛋白质。

使用超敏感扫描高通量微量量热器VP-CAP DSC(MicroCal，Inc.，Northampton，MA)测量过量热容量曲线。已经公开了DSC测量的标准方法和该技术的理论(Freire，E.，“差示扫描量热法(Differential ScanningCalorimetry)，”Methods.Mol.Biol.41，191-218，1995)。在30-120℃温度范围扫描大约500μL的0.5mg/ml野生型嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶或变体S242A、S242E和S242Q(均在2mM氯化钙不存在和存在时)。随后再扫描相同样品以检查该过程的可逆性。对于α-淀粉酶，热解折叠过程是不可逆的。使用的缓冲液是10mM乙酸钠，pH 5.5。使用200℃/小时扫描率来使本来可能因聚集引起的任何人造物最小化。使用DSC曲线的热中点(T_m)作为所测试蛋白质的热稳定性的指示。表4-1显示所测试淀粉酶蛋白质的热熔点。图5中显示野生型和变体淀粉酶的热熔融曲线和熔点。

与野生型的熔点相比时，淀粉酶变体S242A、S242E和S242Q在2mM氯化钙不存在和存在下的热解折叠过程显示变体的熔点明显提高。在不存在添加的氯化钙的情况下，野生型淀粉酶具有100.8℃热熔点，而S242A、S242E和S242Q的T_m分别是106.5℃、107.8℃和110.1℃。因而，S242替换为A引起T_m提高5.7℃，S242替换为E引起T_m提高7℃，并且S242替换为Q引起T_m提高9.3℃。

在2mM氯化钙存在下，野生型淀粉酶显示106.8℃的热熔点，而S242A、S242E和S242Q的T_m分别是111.8℃、112.2℃和113.8℃。因而，相对于钙不存在下的量值，在2mM氯化钙存在下，全部4种蛋白质具有提高的T_m值。野生型和S242A变体在钙存在下的T_m提高分别是6℃和5.3℃。S242E变体的T_m提高是4.4℃。S242Q变体的T_m提高是3.7℃。这提示S242Q变体更少地被钙稳定化，或就稳定性而言，该变体更少依赖于钙。在氯化钙存在下S242A、S242E和S242Q相对于野生型的T_m提高分别是5℃、5.4℃和3℃。这提示所述变体的热动力学特性不同于野生型或Spezyme Xtra的那些热动力学特性。这个观察结果与应用研究中其增强的性能相一致(见实施例5)。

表4-1由DSC确定的多种淀粉酶的T_m(℃)

	Tm(无Ca2+)	ΔT(℃)	Tm(w/2mM Ca2+)	ΔT(℃)
					SpezymeXtra	100.8		106.8
S242A	106.5	5.7	111.8	5.7
					S242E	107.8	7.0	112.2	5.4
S242Q	110.1	9.3	113.8	7.0

实施例5-活性特征

该实施例显示所测试变体不仅相对于亲本α-淀粉酶，还相对于工业标准酶具有改变的活性特征。在纯化样品或平板样品上进行蛋白质确定。基于相等蛋白质浓度分别测试变体和标准α-淀粉酶。

使用pH 5.6苹果缓冲液，将平板变体或纯化变体稀释成大约20ppm。底物由相同50mM苹果酸缓冲液，pH 5.6中的15％谷物淀粉组成。将400微升淀粉混悬液平衡至70℃持续2.5分钟。将7μL稀释的酶以约0.36ppm蛋白质终浓度迅速添加至平衡的淀粉。反应混合物随后置入预热至85℃的振摇加热器并以300转/分钟混合。反应用50μL的125mM NaOH在预定时间间隔猝灭。将反应管离心并将上清液按10倍稀释到10mM NaOH中，以通过HPAEC-PAD分析DP谱。

在4、10和20分钟建立反应。4分钟反应提供产物至底物的酶初始转化过程的指示；10分钟反应提供酶热活性的指示并且20分钟反应提供酶热稳定性的指示。

将从DP2至HPLC运行结束的总面积集成并除以总蛋白质和反应时间。结果在图6和7中提供。

实施例6-粘度计中的液化

该实施例显示S242A和S242Q变体也相对于亲本α-淀粉酶具有改变的性能，其中所述的变体相对野生型亲本显示改变的残余活性。在粘度计中测试之前，将实施例2的变体α-淀粉酶纯化并表征总蛋白和比活性。

使用HAAKE VISCOTESTER 550仪监测玉米粉因α-淀粉酶作用所致的粘度降低。用30％谷物粉干固体以分批模式每日新鲜制备底物浆液。使用硫酸调节pH至5.8。称量出五十(50)g浆液(15g干固体)并预温育10分钟以加温至70℃，伴以搅拌。添加α-淀粉酶后，将温度立即从70℃跃升至85℃，转速75转/分钟。一旦浆液和酶混合物的温度达到85℃，维持温度恒定。监测粘度额外30分钟。在整个运行期间测量粘度并以μNm报告。基于相等的蛋白质在两个蛋白质浓度(20和30μg/50g谷物粉浆液)上分析野生型AmyS、S242A和S242Q。

粘度计应用显示AmyS变体S242A和S242Q二者均比基准α-淀粉酶Liquozyme SC、Ethyl和Xtra具有更好的性能。变体展示作为Xtra特征的低峰粘度以及作为Liquozyme SC与Ethyl特征的低终末粘度。当以较低的蛋白质浓度(20μg总蛋白)上载时，与Liquozyme SC的峰粘度相比，变体的较低峰粘度之间的差异甚至更明显。见图9、10和11。

实施例7-喷射蒸煮锅中的液化

通过对稀釜馏物使用70∶30比率的水，将全磨谷物制成32％(干固体谷物)浆液。用10N NaOH调节浆液pH至pH 5.8。使用水和蒸汽在夹层锅中加热浆液至70℃(158°F)。添加液化酶(SPEZYME Xtra，Liquozyme SC或S242Q)并将浆液加热至85℃(185°F)持续大约10分钟。在浆液达到85℃后，将它在该温度温育额外10分钟。使用实验装置喷射蒸煮锅(配备来自Hydro-Thermal Corp.，Waukesha，Wisconsin的M103水热器)，将浆液通过维持于107℃(225°F)的喷射蒸煮锅，维持时间为3分钟。从喷射蒸煮锅收集液化物并置于85℃水浴中。加压蒸煮后，添加第二剂量的液化酶。连续搅拌液化物并在85℃维持90分钟。在0、30、60和90分钟收集样品。对全部加压蒸煮后样品测试DE(使用Schoorls法)和粘度(Brookfield型粘度计(Lab-Line Instruments Inc.，Melrose Park，IL)，以20转/分钟转动锭子3)。加压蒸煮之前和之后液化酶的投入量在后续图中显示为“X+Y”，其中X代表加压蒸煮之前添加的酶的单位数并且Y代表在液化物通过喷射蒸煮锅后添加至液化物的单位数。结果在图12和13中显示。

实施例8-去除植酸抑制作用对α-淀粉酶热稳定性的影响

研究了去除植酸抑制作用对液化热稳定的α-淀粉酶的热稳定性的影响。

A.无喷射蒸煮(单次酶投配)

用含有30％v/v稀釜馏物的水制备全磨谷物浆液(从Badger StateEthanol，Monroe，WI获得)，终浓度约32％ds。在夹层锅中制备谷物固体。充分混合浆液并测量pH(pH 5.2)。不调整pH。在夹层锅中混合该浆液并使其至预处理温度70℃。正好达到70℃之前添加液化酶，即α-淀粉酶(4AAU每克干固体谷物)。处理相同浆液，一种浆液添加植酸酶(4FTU每克干固体谷物)处理并且另一种浆液不添加植酸酶(4FTU每克干固体谷物)处理，以开始温育或初级液化步骤。浆液在淀粉酶存在下，伴有或不伴有添加的植酸酶时温育30分钟。该实验中使用的植酸酶是BP-17。虽然在本实施例中在与α-淀粉酶相同的时间添加植酸酶，然而植酸酶可以在其他时间添加，如在淀粉酶之前。

处理的浆液随后置于维持在90℃的水浴中，以开始次级液化(2°液化)步骤。在0、30、60和90分钟取得每种已处理浆液(伴有或不伴有植酸酶的淀粉酶)的样品用于粘度(通过Brookfield粘度计)和DE(通过Schoorls法)测试。结果在图14和15中显示。

B.具有喷射蒸煮(分批酶投放)

用含有30％v/v稀釜馏物的水制备全磨谷物浆液(从Badger StateEthanol，Monroe，WI获得)，终浓度约32％ds。在夹层锅中制备谷物固体。充分混合浆液并测量浆液的pH(pH 5.2)。在夹层锅中混合该浆液并使其至70℃。正好达到70℃之前添加液化酶，即S242Qα-淀粉酶变体(3AAU每克干固体谷物)，以开始温育或初级液化步骤。相同浆液在α-淀粉酶存在下，伴有或不伴有添加的植酸酶(4FTU每克干固体谷物)时温育30分钟。

虽然在本实施例中在与α-淀粉酶相同的时间添加植酸酶，然而植酸酶可以在其他时间添加，如在淀粉酶之前。

使每种温育的浆液通过利用蒸汽和水预热至所需温度的喷射蒸煮锅(225°F；107.2℃)。将浆液以约4升/分钟的最大速度(1.5设定)传送经过喷射锅。保持线圈(hold coil)的使用产生刚超过3分钟的保持时间。在置换全部水并维持稳定的所需温度后，收集增溶的谷物糖化醪的等份试样并且置于85℃的次级浴(w/悬臂搅拌)以开始次级液化步骤(2°液化)。添加第二剂量的S242Q(1AAU/gm ds)并且液化继续额外90分钟。在0、30、60和90分钟取得每种浆液(伴有或不伴有植酸酶的淀粉酶)的样品以测试粘度(通过Brookfield粘度计)和DE(通过Schoorls法)。

所得液化物在实施例10B中使用。

C.常规喷射蒸煮

用含有30％v/v稀釜馏物的水制备全磨谷物浆液(从Badger StateEthanol，Monroe，WI获得)，终浓度约32％ds。在夹层锅中制备谷物固体。充分混合浆液并测量浆液的pH(pH 5.2)。用稀的NaOH调节pH至pH 5.8。在夹层锅中混合该浆液并使其直至预处理温度70℃。正好达到70℃之前添加液化酶，即S242Qα-淀粉酶变体(3AAU每克干固体谷物)，以开始温育或初级液化步骤。浆液在α-淀粉酶存在下而无添加的植酸酶时温育30分钟。

使温育的浆液通过利用蒸汽和水预热至所需温度的喷射蒸煮锅(225°F；107.2℃)。将浆液以约4升/分钟的最大速度(1.5设定)传送经过喷射蒸煮锅。保持线圈(hold coil)产生刚超过3分钟的保持时间。在置换全部水并维持稳定的所需温度后，收集增溶的谷物糖化醪的等份试样并且置于85℃的次级浴(悬臂搅拌)以开始次级液化步骤(2°液化)。添加第二剂量的S242Qα-淀粉酶变体(1AAU/gm ds)并且液化继续额外90分钟。在0、30、60和90分钟取得样品以测试粘度(通过Brookfield粘度计)和DE(通过Schoorls法)。对pH 5.5的浆液实施以上实验。见图21。

所得液化物在实施例10A中使用。

D.伴有和不伴有喷射蒸煮的结果

在温育(初级液化)期间添加BP-17植酸酶将全磨谷物的植酸含量从0.60％ds谷物降低至0.09％ds谷物(＞85％降低)(图20)。从图14和图15还显而易见α-淀粉酶在225°F(107℃)喷射蒸煮温度基于DE发展或粘度降低而失活。然而，在喷射蒸煮之间投入植酸酶引起α-淀粉酶的热稳定性明显提高，如次级液化步骤期间在90℃的DE进展和粘度降低所示。随喷射蒸煮观察到相似的结果(数据未显示)，如图14和图15中所示。不受任何具体操作理论限制，认为添加植酸酶有助于最小化、降低或消除对淀粉酶活性的植酸抑制作用。

实施例9-BP-17植酸酶浓度在低pH对α-淀粉酶稳定性的影响

研究了因解除α-淀粉酶的植酸抑制作用所致的α-淀粉酶热稳定性的提高。在次级液化全磨谷物之前使用植酸酶水解植酸并且在低pH确定pH稳定性的改善。

在常见实验中，通过使用70∶30比率的水和稀釜馏物，将全磨谷物制成32％(ds.谷物)浆液。浆液pH是pH 5.2。使用水和蒸汽在夹层锅中加热浆液至70℃。添加液化酶即S242Qα-淀粉酶变体(4AAU/gm ds.谷物)和不同浓度的BP-17(0-12FTU/gm ds.谷物)。通过在70℃保持温度45分钟预处理浆液。浆液随后置于90℃水浴中。连续搅拌液化物并在90℃维持90分钟。在0、30、60和90分钟收集样品。对全部样品测试DE(使用Schoorls法)和粘度(Brookfield粘度计，以20转/分钟转动锭子2)。DE进展和粘度数据汇总于图16-17中。

结果显示添加植酸酶引起对于淀粉酶活性而言的pH稳定性(在低pH)显著提高，如在90℃的DE进展稳定增加，伴以液化物的粘度同时降低所证实(见图16-17)。这可以归因于对α-淀粉酶的植酸抑制作用降低。数据显示S242Qα-淀粉酶变体可以成功地在pH 5.2在添加的植酸酶存在下用于全磨谷物的液化过程中。在图20中，可以见到DE进展的速率随增加的植酸酶添加升高并在4FTU/gm ds上达到最大。这些结果可以表明植酸酶通过从浆液移除植酸提高S242Qα-淀粉酶变体的热稳定性。

实施例10-pH的影响

在本实施例中研究pH对S242Qα-淀粉酶变体的影响。

在常见实验中，通过使用70∶30比率的水和稀釜馏物，将全磨谷物制成32％(ds.谷物)浆液。浆液pH是pH 5.2。使用H₂SO₄降低pH至4.2与4.8之间。使用水和蒸汽在夹层锅中加热浆液至70℃。添加液化酶即S242Q变体(4AAU/gm ds)和BP-17(4FTU/gm ds)并通过在70℃保持温度45分钟来预处理浆液。浆液随后置于90℃水浴中。连续搅拌液化物并在90℃维持90分钟。在0、30、60和90分钟收集样品。对全部样品测试DE(使用Schoorls法)和粘度(Brookfield粘度计，以20转/分钟转动锭子2)。DE进展和粘度数据汇总于图18-19中。

DE随pH从5.2下降至4.5而降低。淀粉酶在pH4.2彻底失活。

实施例11对乙醇生产的影响

使用液化物作为乙醇发酵中用于醇生产的发酵原料。全磨谷物浆液(从Badger State Ethanol，Monroe，WI获得)与含有30％v/v稀釜馏物的水混合至终浓度约32％ds。

A.常规方法

使用来自实施例8的C部分的液化物(液化物A)。

在同时糖化和发酵(SSF)阶段之前使用H₂SO₄调节次级液化物的pH至4.2。

B.低pH，喷射蒸煮(分批投放)

使用来自实施例8B的液化物(液化物B)。在SSF之前不进行pH调节。

C.同时糖化和发酵

在每个实验中，在制备培养基之前获得容器的皮重。将32％ds.谷物液化物(2升)置于2L烧瓶中。通过添加10克酵母和1克葡萄糖至40克水在轻微搅拌下1小时制备红星乙醇红酵母(RED STAR(Lesaffre))接种物。将5毫升的每种接种物添加至平衡的发酵罐，随后以0.4GAU/g ds.谷物添加G Zyme^TM 480Ethanol(Danisco US Inc，Genencor Division)以启动同时糖化和发酵。记录初始毛重并将烧瓶置于维持在32℃的水浴中。以不同时间间隔取得样品并使用HPLC分析其糖及乙醇含量。发酵也使用1公斤每种液化物实施。在不同时间间隔测量发酵期间的重量丢失。基于因丧失二氧化碳所致的重量丢失确定醇。在发酵结束时，获得终末毛重。将肉汤定量地转移到5L圆底容器中。蒸馏在真空下进行直至在含有200ml水的接受器收集大约800ml乙醇。将乙醇稀释至2L并通过HPLC分析。在干燥之前获得釜脚的重量和DS。对DDGS进行残余淀粉分析。基于重量丢失、蒸馏和残余淀粉分析进行化学计量计算。

乙醇计算：使用CO₂重量丢失：

EtOH产生(mmol)＝CO₂丢失(g)/88

EtOH产生(g)＝(CO₂丢失(g)/88)＊92＝＞CO₂丢失(g)＊1.045

EtOH产生(ml)＝((CO₂丢失(g)/88)＊92)/0.789＝＞CO₂丢失(g)x1.325

表11汇总了来自常规方法的DDGS中与来自不调节pH的方法的DDGS中硫酸盐和植酸含量的比较结果。数据显示这两种方法之间游离硫酸盐及植酸含量的主要差异。在温育中随热稳定性α-淀粉酶添加植酸酶产生这样的DDGS，其具有降低的植酸含量、更高的可用(游离)磷酸盐和减少的硫酸盐。因而，不调节pH的方法赋予在淀粉液化中起液化作用的热稳定性α-淀粉酶在低pH处的pH稳定性。

表11：

^＊mg/g干固体

实施例12-额外的方法

在实施例中使用以下测定法。在实施例中通常显示了对下文所提供方案的偏离。在这些实验中，使用分光光度计来测量反应期间所形成产物的吸光度。

A.蛋白质含量确定

BCA(双喹啉-4-羧酸(bicinchoninic acid))测定法

使用BCA(Pierce)测定法在微量滴定平板(MTP)规格上确定样品中的蛋白质浓度。使用的化学品和试剂溶液是：BCA蛋白质测定试剂和Pierce稀释缓冲液(50mM MES，pH 6.5，2mM CaCl₂，0.005％

80)。设备包括SpectraMAX(340型；Molecular Devices)MTP读数仪。MTP从Costar获得(9017型)。

将二百(200)μl BCA试剂移入各孔，随后移入20μl稀释的蛋白质。彻底混合后，MTP在37℃温育30分钟。除去气泡，此后在562nm处读取孔中溶液的光密度(OD)。为确定蛋白质浓度，从样品读数中扣除背景读数。对蛋白质标准物(纯化的酶)标出OD₅₆₂以产生标准曲线。从该标准曲线内推样品的蛋白质浓度。

Bradford测定法

使用Bradford染料试剂(Quick Start)测定法在MTP规格上确定样品中的蛋白质浓度。使用的化学品和试剂溶液是：快速启动Bradford染料试剂(BIO-RAD目录号500-0205)、稀释缓冲液(10mM NaCl，0.1mM CaCI₂，0.005％80)。使用的设备是Biomek FX Robot(Beckman)和SpectraMAX(340型)MTP读数仪。MTP来自Costar(9017型)。

将二百(200)μl Bradford染料试剂移入各孔，随后移入15μl稀释缓冲液。添加10μl滤过的培养肉汤至诸孔。彻底混合后，MTP在室温温育至少10分钟。吹去气泡并且在595nm处读取每孔的OD。为测定蛋白质浓度，从样品读数中扣除背景读数(即来自非温育孔的读数)。所获得的OD₅₉₅值提供了样品中蛋白质含量的相对量值。

B.用于测试酶性能的微量样品测定法

在本测定法中使用的洗涤剂不含酶或已经通过如本文件中其他地方所述的热灭活法摧毁商业洗涤剂中存在的酶。使用的设备包括Eppendorf热混合仪和SpectraMAX(340型)MTP读数仪。MTP从Costar获得(9017型)。

洗涤剂制备(AATCC HDL；美国条件)

将Milli-Q水调节至6gpg水硬度(Ca/Mg＝3/1)，并添加无增白剂的1.5g/l AATCC 2003标准参考液体洗涤剂。剧烈地搅拌洗涤剂溶液至少15分钟。然后，添加5mM HEPES(无酸)并调节pH至8.0。

用于测试淀粉酶性能的稻淀粉微量样品测定法

如本文件中其他地方所述制备试验洗涤剂。使用的设备包括NewBrunswick Innova 4230摇床/恒温箱和SpectraMAX(340型)MTP读数仪。MTP从Corning获得(3641型)。具有橙色色素样品的老化稻淀粉(CS-28)从(荷兰弗拉尔丁恩)试验材料中心(Center for Test Materials)获得。在切成0.25英寸圆形微量样品前，该织物用水洗涤。将两份微量样品置于96孔微量滴定平板的每个孔中。在20℃(北美)或40℃(西欧)平衡试验洗涤剂。将190μL洗涤剂溶液添加至MTP的含有微量样品的每个孔。向该混合物添加10μL稀释的酶溶液。MTP用粘性箔密封并置于恒温箱中1小时，同时在所需的试验温度(通常20℃或40℃)以750转/分钟混合。温育后，从每个孔转移150μL溶液至一个新鲜MTP中并在488nm处使用SpectraMAX MTP读数仪读数以量化清洁作用。还包括空白对照以及含有微量样品和洗涤剂但不含酶的对照。

酶性能的计算

所获得的吸光度值对空白值校正(即在无酶时温育微量样品后获得的吸光度值)。所得吸光度是水解活性的量值。

C.通过抗体滴定确定淀粉酶浓度

在一些情况下，通过用抑制性多克隆抗体滴定确定α-淀粉酶的浓度和比活性。发现针对嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶(AmyS)产生的多克隆抗体强烈地抑制AmyS和来自芽孢杆菌物种TS23的α-淀粉酶(例如，结合牢固足以产生活性丧失的线性滴定)。因而，这种抗体可以用来测量酶浓度，后者转而用来计算比活性。

简而言之，测量了由抗体的几个已知浓度引起的酶抑制作用的量。从这个信息外推出完全抑制作用所需的抗体浓度，该抗体浓度等价于样品中的酶浓度。使用产生荧光的BODIPY-淀粉测定法测量α-淀粉酶活性和抑制作用。缓冲液是含有0.005％Tween-80的pH 7.0的50mM MOPS。

针对纯化AmyS的多克隆抗体在兔中产生并由标准方法纯化。通过测量对比活性已知的AmyS样品的抑制作用，确定了抗体贮存液的经验性“表观浓度”值。抗体样品用来确定AmyS和TS23t变体的浓度和比活性。使用这些值来产生归一化96孔酶贮存平板，其中将全部变体稀释至常见浓度。

D.天然蛋白凝胶电泳

使用PHASTGEL系统(GE Healthcare)在7.5％或12.5％浓度的预制天然聚丙烯酰胺凝胶(PHASTGEL Homogeneous)上测量变体蛋白质样品的电泳迁移率。使用缓冲带(PHASTGEL Native)并且它由0.88M L-丙氨酸，0.25M Tris缓冲液中的pH 8.8组成。一般运行条件由400V持续12.75分钟，阳极至阴极距离3.7cm组成。

备选地，通过选择合适缓冲系统，在多个pH值(即5.8、8.0和10.0)的1mm厚度0.5-1.5％琼脂糖凝胶上测量变体蛋白质样品的电泳迁移率。电泳在非变性条件下实施。阴极-阳极长度是13.9cm。1-2μg蛋白质样品与5％甘油+0.05％溴酚蓝混合并加到每个泳道上。凝胶一般在100V运行1小时。

凝胶用溶解在10％乙酸中的Louisville蓝染料染色并用10％甲醇和10％酸性酸水溶液脱色。根据使用的天然凝胶系统，同时加载12种至20种蛋白质变体。结果，相对于在相同凝胶上加载的电荷标准物梯，可以立即评估蛋白质变体的电泳迁移率。

E.洗涤剂热失活

商业洗涤剂配方的热失活起到摧毁任意蛋白质组分的酶活性而保留非酶组分特性的作用。因而，这种方法适于制备商业购买的洗涤剂或用于测试酶变体。对于北美(NA)和西欧(WE)重垢液体衣物(HDL)洗涤剂，通过将(玻璃瓶子中)预称重的液体洗涤剂置于95℃水浴中2小时进行热失活。用于热失活北美(NA)和日本(JPN)重垢颗粒衣物(HDG)洗涤剂的温育时间是8小时而西欧(WE)HDG洗涤剂的该温育时间是5小时。用于热失活NA和WE自动餐具(ADW)洗涤剂的温育时间是8小时。所述洗涤剂从本地超市商店购买。在溶解洗涤剂至精确测定失活百分数的5分钟范围内测试未加热过和加热过的洗涤剂。酶活性由suc-AAPF-pNA测定法测试。

为在热失活的洗涤剂中测试酶活性，从热失活的母液制备洗涤剂的工作溶液。添加适宜量的水硬度(6gpg或12gpg)和缓冲液至该洗涤剂溶液以匹配想要的条件(表12-1)。通过旋转或颠倒瓶子而混合溶液。

表12-1.衣物和餐具洗涤条件

地区    形式    剂量    洗涤剂^*          缓冲液     Gpg   pH     T(℃)

衣物(重垢液体和颗粒剂)

NA      HDL     0.78g/l P&G

2X  5mM HEPES  6    8.0     20

WE      HDL     5.0g/L  Henkel Persil    5mM HEPES  12    8.2    40

WE      HDG     8.0g/L  P&G Ariel        2mM Na₂CO₃ 12    10.5   40

JPN     HDG     0.7g/L  P&G

2mM Na₂CO₃     6    10.0    20

NA      HDG     1.0g/L  P&G

2mM Na₂CO₃     6    10.0    20

自动餐具洗涤

WE  ADW         3.0g/L  RB Calgonit      2mM Na₂CO₃ 21    10.0   40

NA  ADW         3.0g/L  P&G Cascade      2mM Na₂CO₃ 9     10.0   40

缩写：Procter&Gamble(P&G)和Reckitt Benckiser(RB)。

F.用于清洁性能确定的TERG-O-TOMETER测定法

使用了用于评估蛋白质和糖污渍清洁作用的标准方案，其中在标准条件下清洁之前和之后测量织物样品上的污渍水平。织物样品由以玉米淀粉、稻淀粉或血液、乳和炭黑混合物弄脏的织造棉质织物组成。样品从Testfabrics，Inc.(West Pittiston，PA)购买。玉米淀粉(EMPA 161)和血液、乳及炭黑(EMPA 116)技术性污渍由EMPA试验材料AG(St.Galle，瑞士)产生。稻淀粉(CFT CS-28)污渍由试验材料中心BV(荷兰弗拉尔丁恩)产生。使用设置成D65(6500°K)标准照明的Minolta光反射仪CR-410，通过光反射率在处理之前和之后测量每种污渍。将L、a、b值的差异转化成总色差(dE)，如CIE-LAB颜色空间所定义。通过取得洗涤之前和之后的颜色差异之间的比率并比较该比率与未洗涤过的污渍(洗涤之前)对未弄脏织物的差异，将污渍的清洁作用表述为百分污渍去除指数(％SRI)。

清洁实验在配备6个2L不锈钢罐的TERG-O-TOMETER(UnitedStates Testing Co.，Hoboken，NJ)中实施，其中所述不锈钢罐配有悬臂式搅拌器。每个处理在由6格令/加仑3∶1(钙∶镁)水硬度或12格令/加仑水硬度组成的1L总体积中实施。洗涤实验中使用的洗涤剂是具有pH 8的5mMHEPES缓冲液的1.5g/L AATCC HDL WOB 2003液体洗涤剂、0.7g/LAATCC HDD WOB 1993颗粒洗涤剂、具有过硼酸盐和TAED漂白剂的8g/L IEC A^＊60456颗粒洗涤剂，或5g/L Persil Power凝胶液体洗涤剂。将酶直接添加至洗涤溶液并随后通过添加40g/L或200g/L的脏污织物和陪洗织物(ballast fabric)启动反应。洗涤反应以100转/分钟在20℃、25℃、30℃、40℃或50℃搅拌10、15或40分钟。清洁后，样品在自来水中漂洗3分钟，在滚筒洗衣机中以1000转/分钟甩干以除去多余水并在干燥器中以低热在恒压循环上干燥大约45分钟。污渍去除程度的比较结果由反射测量术评估并表述为％污渍去除指数(％SRI)。对照条件不含有酶并且阳性对照由多种剂量的基准商业酶组成。

G.用于确定淀粉酶活性的Bodipy-淀粉测定法

使用

超级淀粉酶测定试剂盒(E33651，Invitrogen)实施BODIPY-淀粉测定法。通过将含有冻干底物的小瓶的内容物溶解于pH 4.0的100μL 50mM乙酸钠缓冲液中制备DQ淀粉底物的1mg/mL母液。将小瓶涡旋混合约20秒并置于室温黑暗中，偶尔混合直至溶解。添加900μL测试缓冲液(50mM乙酸钠，含2.6mM CaCl₂，pH 5.8)并且将小瓶通过涡旋混合约20秒。该底物溶液贮存在室温于黑暗中直至待用或贮存在4℃。对于该测定法，从测试缓冲液中的1mg/mL底物溶液制备100μg/mL DQ底物工作溶液。将190μL 100μg/mL底物溶液添加至平底96孔微量滴定平板中的各孔。添加10μL的每种酶样品至各孔，使用热混合仪以800转/分钟混合30秒。在测定法中包括仅含有缓冲液和底物的空白样品(无酶空白)。在25℃于荧光微量滴定平板读数仪中测量荧光强度变化率(激发：485nm，发射：520nm)5分钟。

H.用于确定淀粉酶活性的谷物粉水解法

用于酶活性的谷物粉底物测定法的淀粉水解。使用固体撒布装置(V&PScientific)，将有机谷物粉(Azure Farms，批号03227)均匀地铺到聚丙烯黑色平底烟囱状孔Greiner 96孔微量平板(目录号655209)中。将85μL的20mM乙酸钠pH 5.6添加至各孔并混合。将密封箔施加在平板的顶部并将平板在70℃于热混合仪中预温育20-30分钟。酶样品稀释于Agilent聚丙烯平板(5042-1385)内的20mM乙酸钠缓冲液中。将11μL稀释酶样品添加至该底物平板并将平板牢固地用另一张箔密封。随后将平板转移至具有预热至95℃的金属加热器的Labnet VorTemp 56恒温箱/摇床(目录号S2056A)并设定振摇速度至500转/分钟。继续温育30分钟。在温育结束时，在冰桶中迅速冷却平板并通过添加100μL的0.1N H₂SO₄至各孔终止淀粉水解反应。将平板短暂混合并通过PAHBAH测定法或HPLC分析淀粉水解反应产物。

比色检测来自酶水解谷物粉底物的可溶性糖浓度。80μL 0.5N NaOH的等份试样添加至空PCR平板的全部孔，随后添加20μL PAHBAH试剂(5％w/v对羟基苯甲酰肼(PAHBAH，Sigma#H9882，溶解于0.5N HCl中的)并混合(PAHBAH反应平板)。将10μL淀粉水解反应上清液添加至PAHBAH反应平板。将全部平板密封并置于拟定在95℃持续2分钟并随后冷却至20℃的热循环仪(MJ Research Tetrad)中。将已显色的PAHBAH反应混合物中的80μL样品转移至读数板并在分光光度计中于405nm处测定吸光度。

HPLC确定来自酶水解谷物粉底物的可溶性糖浓度。从Sigma(St.Louis，MO)获得的可溶性糖标准物(DP1-DP7)均在Milli-Q水中稀释至100mg/mL并用于将糖的峰面积转化成实际的糖浓度。来自淀粉水解测定法的猝灭的平板在Beckman Coulter Allegra 6R离心机中以3000转/分钟25℃离心5分钟。将上清液从离心过的平板吸出并转移至多重筛选-HV滤板(目录号MAHVN4550)。该滤板在Hettich Rotanta离心机中的Agilent HPLC平板上以6000转/分钟25℃离心10分钟。将50μL的0.01N硫酸流动相(用Milli-Q水稀释10倍的0.1N硫酸)转移至另一块清洁Agilent HPLC平板的各孔。短暂混合过滤的平板并将50μL滤液转移至该平板中的相应孔内，每孔50μL流动相。将稀释的糖标准物添加至平板中的空孔以包括在校准中。在平台摇床上短暂混合内容物并用Nalgene预分隔孔盖覆盖该平板。事先制备HPLC柱(Bio-Rad Aminex HPX-87H柱，目录号125-0140)，用2L流动相以0.6mL/分钟恒定流速运行。平板中的全部样品以20μL注射体积运行并使用AMINEXH.M和RID(折射率)作为检测器进行分析。在运行结束后，将HPLC中的流速降低至0.05mL/分钟。

I.确定因α-淀粉酶所致的淀粉粘度降低

在本测定法中，在粘度计中测量谷物淀粉底物溶液的粘度降低。谷物淀粉底物浆液以分批模式用30％谷物粉干固体在蒸馏水中新鲜制备并使用硫酸调节至pH 5.8。对于每个运行，称量出五十(50)g浆液(15g干固体)并预温育10分钟以升温至70℃。在添加淀粉酶后，将温度立即从70℃跃升至85℃，转速75转/分钟。一旦浆液和淀粉酶混合物的温度达到85℃，维持温度恒定并监测粘度额外30分钟。

J.测量对大分子底物的酶结合作用

实施结合测定法以确定淀粉酶(AmyS)电荷阶梯变体(电荷改变＝相对于野生型AmyS的-12至+12)与谷物秸秆和甘蔗渣的底物结合作用。使用的底物包括甘蔗渣(来自巴西的甘蔗渣，由国家可再生能源实验室(NationalRenewable Energy Laboratory)稀酸预处理、洗涤并缓冲于pH 5)、AFEX(氨纤维膨胀谷物秸秆)和PCS(稀硫酸预处理的谷物秸秆，洗涤并调节至pH 5)。使全部底物在利用前达到想要的固体百分数。

淀粉酶结合作用：将淀粉酶电荷阶梯变体纯化并稀释至200ppm用于测试。在硼酸盐缓冲液(40mM，pH 8.5，0.016％Tween-80)中制备1％纤维素甘蔗渣溶液。将150μL甘蔗渣溶液添加至微量滴定过滤平板中的各孔。将150μL硼酸盐缓冲液添加到充当对照的一组独立的孔中。将10μL淀粉酶电荷阶梯变体添加至过滤板，每种条件一式两份。该平板在室温温育2小时。收集滤液并通过BODIPY-淀粉测定法测量上清液中的淀粉酶活性。

测量对微量样品的酶结合作用：淀粉酶变体在标准洗涤条件下与或不与CS-28稻淀粉微量样品温育30分钟。游离酶的量由BODIPY-淀粉测定法测量。与微量样品结合的酶的部分计算如下：结合的部分＝(样品不存在时的酶活性-样品存在时的酶活性)/(样品不存在时的酶活性)。

实施例13-在枯草芽孢杆菌中的淀粉酶产生

在本实施例中，描述了在枯草芽孢杆菌中产生突变截短形式的嗜热脂肪芽孢杆菌α淀粉酶(具有S242Q突变和从羧基端的29个氨基酸缺失，本文中也称作S242Q)及其变体。转化如本领域已知那样(见，例如WO02/14490)进行。简而言之，将编码亲本淀粉酶的基因克隆到pHPLT表达载体中，其中所述pHPLT表达载体含有LAT启动子(PLAT)、编码LAT信号肽的序列(preLAT)，后接PstI和HpaI限制性位点用于克隆。

下文显示LAT信号肽的编码区：

atgaaacaac aaaaacggct ttacgcccga ttgctgacgc tgttatttgc gctcatcttcttgctgcctc attctgcagc ttcagca(SEQ ID NO：19).

下文显示LAT信号肽的氨基酸序列：

MKQQKRLYAR LLTLLFALIF LLPHSAASA(SEQ ID NO：20)

使用带有以斜体显示的替换氨基酸的成熟截短S242Q淀粉酶的氨基酸序列作为制备本文中所述变体文库的基础：

AAPFNGTMMQ YFEWYLPDDG TLWTKVANEA NNLSSLGITA LWLPPAYKGT

SRSDVGYGVY DLYDLGEFNQ KGTVRTKYGT KAQYLQAIQA AHAAGMQVYA

DVVFDHKGGA DGTEWVDAVE VNPSDRNQEI SGTYQIQAWT KFDFPGRGNT

YSSFKWRWYH FDGVDWDESR KLSRIYKFRG IGKAWDWEVD TENGNYDYLM

YADLDMDHPE VVTELKNWGK WYVNTTNIDG FRLDAVKHIK FQFFPDWLSY

VRSQTGKPLF TVGEYWSYDI NKLHNYITKT NGTMSLFDAP LHNKFYTASK

SGGAFDMRTL MTNTLMKDQP TLAVTFVDNH DTEPGQALQS WVDPWFKPLA

YAFILTRQEG YPCVFYGDYY GIPQYNIPSL KSKIDPLLIA RRDYAYGTQH

DYLDHSDIIG WTREGVTEKP GSGLAALITD GPGGSKWMYV GKQHAGKVFY

DLTGNRSDTV TINSDGWGEF KVNGGSVSVW VPRKTT(SEQ ID NO：21)。

使用来自Qiagen的QIAQUIK柱纯化PCR产物并将该产物重悬于50μL去离子水中。用HpaI(Roche)和PstI(Roche)消化50μL纯化的DNA并将所得DNA重悬于30μL去离子水中。利用PstI和HpaI克隆位点，将10-20ng/μL所述DNA克隆到质粒pHPLT中。连接混合物直接转化至感受态枯草芽孢杆菌细胞(基因型：Δvpr，ΔwprA，Δmpr-ybfJ，ΔnprB)。该枯草芽孢杆菌细胞具有置于木糖诱导型启动子下的能力基因(competencygene)(comK)，从而使用木糖来诱导对DNA结合和摄取的能力(见Hahn等人，Mol.Microbiol.，21：763-775，1996)。

质粒pHPLT-AmyS的元件包括：pUB110＝来自质粒pUB110的DNA片段(McKenzie等人，Plasmid 15：93-103，1986)。质粒特征包括：ori-pUB110＝来自pUB110的复制起点；neo＝来自pUB110的新霉素抗性基因；Plat＝来自地衣芽孢杆菌淀粉酶的转录启动子；Pre LAT＝来自地衣芽孢杆菌淀粉酶的信号肽；SAMY 425ss＝截短AmyE基因序列的编码区(由本研究中所表达的每种截短AmyE变体的编码区替代)；和终止子＝来自地衣芽孢杆菌淀粉酶的转录终止子。

实施例14-酶变体的表达

本实施例描述了用来表达前述实施例的经转化枯草芽孢杆菌的多种重组酶的方法。

淀粉酶表达-2mL规模

含有S242Q(或其变体)表达载体的枯草芽孢杆菌克隆用钢制96孔复制器从甘油贮藏物复制到含有150μl LB培养基+10μg/ml新霉素的96孔培养平板(BD，353075)中，于加湿箱中在37℃，220转/分钟培育过夜。来自过夜培养物的100μL等份样用来接种5mL塑料培养管中的2000μL确定成分培养基+10μg/ml新霉素。该培养基是基于MOPS缓冲液的半定义丰富培养基，以脲作为主要氮源，葡萄糖作为主要碳源并且补充有1％大豆胨和5mM钙，用于稳健细胞生长。培养管在37℃以250转/分钟温育72小时。在这个温育后，培养肉汤以3000xg离心10分钟。将上清液倾析至15mL聚丙烯锥形管并且每个样品80μL分配至96孔平板用于蛋白质定量。

实施例15-酶变体的产生

本实施例描述酶电荷阶梯和组合电荷文库的产生

酶电荷阶梯

涵盖目的物理特性范围的多种蛋白质变体选自现存文库或通过如本领域已知的位点定向诱变技术(见例如授予Genencor International的美国专利申请系列号10/576,331、11/581,102和11/583,334)生成。随后在目的试验中测试这种定义的探针蛋白质集合。

示例性淀粉酶电荷阶梯变体在下表中显示并如本文中所述测试。在这些表格中，电荷改变是相对于亲本酶而言的。

酶组合电荷文库(CCL)

嗜热脂肪芽孢杆菌AmyS-S242Q CCL的生成

AmyS-S242Q质粒DNA从转化的枯草芽孢杆菌菌株(基因型：ΔaprE，ΔnprE，amyE::xylRPxylAcomK-phleo)分离并发送至DNA2.0Inc.作为模板用于CCL构建。要求DNA2.0Inc.(Mountain View，CA)在表15-2中所示AmyS-S242Q(S242Q)淀粉酶中4个位点的每个位点处生成位置文库。变体作为96孔平板中的甘油贮藏物提供。

通过鉴定以下4个残基Gln-97、Gln 319、Gln 358和Gln 443设计出AmyS S242Q组合电荷文库。通过在每个位点处产生三种可能性：野生型、精氨酸或天冬氨酸的全部组合，产生一个4位点、81个成员的CCL。

实施例16-酶洗涤性能

本实施例描述在微量样品测定法中于可变离子强度下的AATCCHDL洗涤剂或5mM HEPES缓冲液中测试1.0μg/ml S242Q变体。使用在实施例12中提供的方法(见，“用于测试淀粉酶性能的稻淀粉微量样品测定法”和“谷物粉水解”)。

对于AATCC HDL洗涤剂中酶的清洁性能，存在最佳净电荷改变。测量性能为稻淀粉微量样品活性测定法中观察到的相对清洁性能。约1的值显示在本测定法中的顶级清洁性能。这是优化蛋白质物理属性(例如净电荷)以改善给定结果或益处(例如在液体衣物洗涤剂中的清洁性能)的例子。用这种有限的探针蛋白集合鉴定的最佳电荷与测量整个电荷组合文库时所观察到的最佳电荷相一致。探针蛋白质的使用因而预测整个文库的特性。

根据Debye-Hückel理论(Israelachivili，Intermolecular and SurfaceForces，第2版：With Applications to Colloidal and Biological Systems，Academic Press第2版[1992])，静电相互作用主要由恒定电势或恒定电荷上的相互作用种类(酶、底、织物和洗涤剂)之间的双层力量强度、这些物质的尺寸和周围介质的介电常数决定。为了表征复杂介质如洗涤剂制剂中粒子的静电特性，这些粒子在拥有相同Debye筛选长度的还原性环境中的相互作用是充分的。这通过选择在洗涤条件下使pH和导电性与洗涤剂的pH和导电性匹配的缓冲液实现。对于这种测试适宜的缓冲液是具有可变量的不同电解质如NaCl的pH 8.0的5mM HEPES缓冲液。添加2.5mMNaCl至这种缓冲液匹配了常见北美洗涤条件的pH和导电性。添加更高浓度的NaCl代表日本和欧洲洗涤条件，所述的日本和欧洲洗涤条件在离子强度上一般因水硬度和洗涤剂浓度提高而更高。

图22显示正电荷S242Q电荷变体对于北美洗衣条件下清洁稻淀粉微量样品是优异的。同样，负电荷TS23t变体对于西欧洗衣条件下清洁稻淀粉微量样品是优异的(图23)。

图24说明正电荷S242Q变体展示出颗粒谷物淀粉底物水解的更高比活性。

实施例17-热稳定性

本实施例描述了确定蛋白质电荷与热稳定性之间的关系。α-淀粉酶测定法基于加热培养上清液之前和之后的BODIPY淀粉水解作用。使用如实施例12中所述的相同化学品和试剂溶液。

α-淀粉酶的热稳定性测定法

过滤的培养上清液在具有002％Tween的50mM乙酸钠+2mMCaCl₂ pH 5.8中连续稀释。测试10μL每种稀释的培养上清液以通过BODIPY淀粉测定法确定初始淀粉酶活性。50μL每种稀释的培养上清液置于VWR低特性的PCR 96孔平板中。将30μL矿物油作为密封剂添加至各孔。平板在BioRad DNA引擎Peltier热循环仪器中在95℃根据亲本酶的稳定性温育30分钟或60分钟。温育后，将平板冷却至4℃持续5分钟并随后保持在室温。添加10μL每份样品至一块新平板并测试，以通过如实施例1中所述的BODIPY淀粉测定法确定最终淀粉酶活性。

热稳定性的计算

样品的残余活性表述为最终吸光度与初始吸光度之比，其中两种吸光度均用空白校正。更高的比数指示热稳定更大的变体。这是优化蛋白质物理属性(在这种情况下，净电荷)以改善液体衣物应用中酶热稳定性的例子。

如上所述评估变体的热稳定性。热稳定性胜出者列于表17-1中。胜出者定义为具有大于1的突变体残余活性对亲本(即S242Q)残余活性比的那些变体。

表17-1：S242Q CCL-热稳定性胜出者

变体#	97	319	358	443	突变体残余活性/野生型残余活性
						2	Q97E	Q319E	Q358E	Q443R	1.12
10	Q97E	Q319R	Q358E	Q443E	1.12

13	Q97E	Q319R	Q358R	Q443E	1.36
						14	Q97E	Q319R	Q358R	Q443R	1.16
15	Q97E	Q319R	Q358R		1.37
						17	Q97E	Q319R		Q443R	1.29
变体#	97	319	358	443	突变体残余活性/野生型残余活性
						18	Q97E	Q319R			1.11
27	Q97E				1.16
						32	Q97R	Q319E	Q358R	Q443R	1.18
37	Q97R	Q319R	Q358E	Q443E	1.29
						38	Q97R	Q319R	Q358E	Q443R	1.22
39	Q97R	Q319R	Q358E		1.21
						40	Q97R	Q319R	Q358R	Q443E	1.20
41	Q97R	Q319R	Q358R	Q443R	1.26
						42	Q97R	Q319R	Q358R		1.48
43	Q97R	Q319R		Q443E	1.21
						44	Q97R	Q319R		Q443R	1.21
45	Q97R	Q319R			1.14
						50	Q97R		Q358R	Q443R	1.14
62		Q319E		Q443R	1.26
						63		Q319E			1.18
64		Q319R	Q358E	Q443E	1.19
						65		Q319R	Q358E	Q443R	1.28
68		Q319R	Q358R	Q443R	1.14

70		Q319R		Q443E	1.22
						73			Q358E	Q443E	1.15
74			Q358E	Q443R	1.15
						75			Q358E		1.18

实施例18-酶性能

本实施例说明酶性能可以受电荷影响。

使用如上文实施例12中描述的热失活洗涤剂评估酶性能。胜出者定义为具有大于1的性能指数(PI)的那些变体。PI是突变体残余活性对亲本(即S242Q)残余活性的比率。结果在图18-1和18-2中显示。

表18-1：S242Q CCL-CS-28稻淀粉微量样品胜出者，2倍Tide(如实施例12中描述的北美条件)

变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
							13	Q97E	Q319R	Q358R	Q443E	0	1.44
14	Q97E	Q319R	Q358R	Q443R	2	1.32
							15	Q97E	Q319R	Q358R		1	1.40
16	Q97E	Q319R		Q443E	-1	1.33
							17	Q97E	Q319R		Q443R	1	1.40
18	Q97E	Q319R			0	1.41
							20	Q97E		Q358E	Q443R	-1	1.15
23	Q97E		Q358R	Q443R	1	1.21
							25	Q97E			Q443E	-2	1.18
26	Q97E			Q443R	0	1.25
							27	Q97E				-1	1.16
28	Q97R	Q319E	Q358E	Q443E	-2	2.32
							29	Q97R	Q319E	Q358E	Q443R	0	2.54

30	Q97R	Q319E	Q358E		-1	2.93
							31	Q97R	Q319E	Q358R	Q443E	0	2.27
32	Q97R	Q319E	Q358R	Q443R	2	2.28
							33	Q97R	Q319E	Q358R		1	2.34
34	Q97R	Q319E		Q443E	-1	2.31
							35	Q97R	Q319E		Q443R	1	2.31
36	Q97R	Q319E			0	2.14
							37	Q97R	Q319R	Q358E	Q443E	0	1.93
变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
							38	Q97R	Q319R	Q358E	Q443R	2	1.85
39	Q97R	Q319R	Q358E		1	2.14
							40	Q97R	Q319R	Q358R	Q443E	2	1.92
41	Q97R	Q319R	Q358R	Q443R	4	1.37
							42	Q97R	Q319R	Q358R		3	1.61
43	Q97R	Q319R		Q443E	1	1.90
							44	Q97R	Q319R		Q443R	3	1.64
45	Q97R	Q319R			2	1.99
							46	Q97R		Q358E	Q443E	-1	1.40
47	Q97R		Q358E	Q443R	1	1.29
							48	Q97R		Q358E		0	1.60
49	Q97R		Q358R	Q443E	1	1.57
							50	Q97R		Q358R	Q443R	3	1.38
51	Q97R		Q358R		2	1.37

52	Q97R			Q443E	0	1.51
							54	Q97R				1	1.51
55		Q319E	Q358E	Q443E	-3	1.14
							56		Q319E	Q358E	Q443R	-1	1.38
57		Q319E	Q358E		-2	1.10
							58		Q319E	Q358R	Q443E	-1	1.25
59		Q319E	Q358R	Q443R	1	1.41
							60		Q319E	Q358R		0	1.49
61		Q319E		Q443E	-2	1.16
							62		Q319E		Q443R	0	1.45
63		Q319E			-1	1.28
							64		Q319R	Q358E	Q443E	-1	1.12
变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
							6 5		Q319R	Q358E	Q443R	1	1.19
66		Q319R	Q358E		0	1.36
							67		Q319R	Q358R	Q443E	1	1.24
69		Q319R	Q358R		2	1.19
							70		Q319R		Q443E	0	1.29
76			Q358R	Q443E	0	1.22
							78			Q358R		1	1.25
79				Q443E	-1	1.24
							80				Q443R	1	1.17

表18-2：S242Q CCL-CS-28稻淀粉微量样品胜出者，Persil(西欧条件)

变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
							2	Q97E	Q319E	Q358E	Q443R	-2	1.41
3	Q97E	Q319E	Q358E		-3	1.94
							4	Q97E	Q319E	Q358R	Q443E	-2	1.61
5	Q97E	Q319E	Q358R	Q443R	0	1.39
							6	Q97E	Q319E	Q358R		-1	2.04
7	Q97E	Q319E		Q443E	-3	2.05
							8	Q97E	Q319E		Q443R	-1	1.84
9	Q97E	Q319E			-2	2.27
							10	Q97E	Q319R	Q358E	Q443E	-2	1.35
13	Q97E	Q319R	Q358R	Q443E	0	1.45
							14	Q97E	Q319R	Q358R	Q443R	2	1.17
15	Q97E	Q319R	Q358R		1	1.22
							16	Q97E	Q319R		Q443E	-1	1.26
17	Q97E	Q319R		Q443R	1	1.29
							变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
18	Q97E	Q319R			0	1.76
							26	Q97E			Q443R	0	1.36
27	Q97E				-1	1.31
							28	Q97R	Q319E	Q358E	Q443E	-2	2.21
29	Q97R	Q319E	Q358E	Q443R	0	1.96
							30	Q97R	Q319E	Q358E		-1	1.94

31	Q97R	Q319E	Q358R	Q443E	0	2.11
							32	Q97R	Q319E	Q358R	Q443R	2	1.87
33	Q97R	Q319E	Q358R		1	2.41
							34	Q97R	Q319E		Q443E	-1	2.20
35	Q97R	Q319E		Q443R	1	2.21
							36	Q97R	Q319E			0	2.07
37	Q97R	Q319R	Q358E	Q443E	0	1.86
							38	Q97R	Q319R	Q358E	Q443R	2	1.83
39	Q97R	Q319R	Q358E		1	1.99
							40	Q97R	Q319R	Q358R	Q443E	2	1.85
41	Q97R	Q319R	Q358R	Q443R	4	1.36
							42	Q97R	Q319R	Q358R		3	1.90
43	Q97R	Q319R		Q443E	1	1.99
							44	Q97R	Q319R		Q443R	3	1.94
45	Q97R	Q319R			2	1.75
							46	Q97R		Q358E	Q443E	-1	1.71
47	Q97R		Q358E	Q443R	1	1.39
							48	Q97R		Q358E		0	1.85
50	Q97R		Q358R	Q443R	3	1.24
							51	Q97R		Q358R		2	1.36
变体#	97	319	358	443	相对电荷	PI
							52	Q97R			Q443E	0	1.25
54	Q97R				1	1.88

55		Q319E	Q358E	Q443E	-3	1.12
							56		Q319E	Q358E	Q443R	-1	1.17
58		Q319E	Q358R	Q443E	-1	1.16
							59		Q319E	Q358R	Q443R	1	1.25
60		Q319E	Q358R		0	1.50
							63		Q319E			-1	1.36
64		Q319R	Q358E	Q443E	-1	1.10
							65		Q319R	Q358E	Q443R	1	1.18
66		Q319R	Q358E		0	1.25
							67		Q319R	Q358R	Q443E	1	1.29
70		Q319R		Q443E	0	1.15

也使用如本文中提供的BODIPY淀粉水解测定法测量了活性。结果在表18-3中显示。对这种淀粉底物(谷物淀粉)的大于1的相对比活性表明该变体比S242Q亲本具有更高的比活性。相对ppm是表现滴度(expressiontiter)，大于1表示比S242Q亲本更高的滴度(在振摇管中)。

表18-3：S242Q CCL-滴度和/或BODIPY-淀粉胜出者

变体#	97	319	358	443	电荷	相对ppm	相对比活性
								1	Q97E	Q319E	Q358E	Q443E	-4	1.27	1.29
2	Q97E	Q319E	Q358E	Q443R	-2	1.19	1.31
								3	Q97E	Q319E	Q358E		-3	1.00	1.43
4	Q97E	Q319E	Q358R	Q443E	-2	1.23	1.43
								5	Q97E	Q319E	Q358R	Q443R	0	0.94	1.78
6	Q97E	Q319E	Q358R		-1	0.89	1.81

变体#	97	319	358	443	电荷	相对ppm	相对比活性
								7	Q97E	Q319E		Q443E	-3	1.40	1.41
8	Q97E	Q319E		Q443R	-1	1.12	1.58
								9	Q97E	Q319E			-2	1.09	1.56
10	Q97E	Q319R	Q358E	Q443E	-2	1.45	1.32
								11	Q97E	Q319R	Q358E	Q443R	0	1.32	1.49
12	Q97E	Q319R	Q358E		-1	1.58	1.27
								13	Q97E	Q319R	Q358R	Q443E	0	0.65	1.44
14	Q97E	Q319R	Q358R	Q443R	2	0.66	1.65
								15	Q97E	Q319R	Q358R		1	0.80	1.64
16	Q97E	Q319R		Q443E	-1	1.09	1.51
								17	Q97E	Q319R		Q443R	1	1.00	1.42
18	Q97E	Q319R			0	0.87	1.78
								19	Q97E		Q358E	Q443E	-3	1.22	0.88
21	Q97E		Q358E		-2	1.12	0.88
								22	Q97E		Q358R	Q443E	-1	0.91	1.16
23	Q97E		Q358R	Q443R	1	0.78	1.25
								24	Q97E		Q358R		0	1.08	1.14
25	Q97E			Q443E	-2	1.12	1.00
								28	Q97R	Q319E	Q358E	Q443E	-2	0.78	1.87
29	Q97R	Q319E	Q358E	Q443R	0	0.80	1.81
								30	Q97R	Q319E	Q358E		-1	0.68	2.21
31	Q97R	Q319E	Q358R	Q443E	0	0.68	1.96

32	Q97R	Q319E	Q358R	Q443R	2	0.70	2.05
								33	Q97R	Q319E	Q358R		1	0.60	2.27
34	Q97R	Q319E		Q443E	-1	0.65	2.25
								变体#	97	319	358	443	电荷	相对ppm	相对比活性
35	Q97R	Q319E		Q443R	1	0.70	2.15
								36	Q97R	Q319E			0	0.73	2.23
37	Q97R	Q319R	Q358E	Q443E	0	0.93	2.11
								38	Q97R	Q319R	Q358E	Q443R	2	0.65	2.21
39	Q97R	Q319R	Q358E		1	0.82	2.22
								40	Q97R	Q319R	Q358R	Q443E	2	0.74	2.28
41	Q97R	Q319R	Q358R	Q443R	4	0.55	2.09
								42	Q97R	Q319R	Q358R		3	0.67	2.48
43	Q97R	Q319R		Q443E	1	0.84	2.35
								44	Q97R	Q319R		Q443R	3	0.73	2.41
45	Q97R	Q319R			2	0.76	2.45
								46	Q97R		Q358E	Q443E	-1	0.79	1.45
47	Q97R		Q358E	Q443R	1	0.75	1.42
								48	Q97R		Q358E		0	0.82	1.46
49	Q97R		Q358R	Q443E	1	0.67	1.69
								50	Q97R		Q358R	Q443R	3	0.60	1.60
51	Q97R		Q358R		2	0.64	1.29
								52	Q97R			Q443E	0	0.83	1.43
54	Q97R				1	0.72	1.49

55		Q319E	Q358E	Q443E	-3	0.99	1.15
								56		Q319E	Q358E	Q443R	-1	0.77	1.40
57		Q319E	Q358E		-2	0.83	1.34
								58		Q319E	Q358R	Q443E	-1	0.73	1.49
59		Q319E	Q358R	Q443R	1	0.67	1.61
								60		Q319E	Q358R		0	0.80	1.67
变体#	97	319	358	443	电荷	相对ppm	相对比活性
								61		Q319E		Q443E	-2	0.91	1.39
62		Q319E		Q443R	0	0.73	1.45
								63		Q319E			-1	0.75	1.41
64		Q319R	Q358E	Q443E	-1	1.05	1.28
								65		Q319R	Q358E	Q443R	1	0.94	1.42
66		Q319R	Q358E		0	0.96	1.39
								67		Q319R	Q358R	Q443E	1	1.02	1.50
68		Q319R	Q358R	Q443R	3	0.71	1.57
								69		Q319R	Q358R		2	0.71	1.58
70		Q319R		Q443E	0	0.91	1.49
								72		Q319R			1	0.95	1.56
77			Q358R	Q443R	2	0.67	1.22
								78			Q358R		1	0.66	1.15

实施例19-平衡对淀粉酶活性和表达的突变影响

本实施例说明可以通过导入多个氨基酸替换同时优化两种独立的酶特性，甚至其中所述特性是负相关的，例如负相关的原因在于对立地关联于蛋白质的电荷特征。

在实验期间确定AmyS-242Q的中位数表达随增加的正电荷而减少。然而，特异性BODIPY淀粉水解作用随增加的正电荷而提高。增强的重组淀粉酶表达和淀粉水解作用在例如适用于燃料乙醇工业中淀粉液化或洗涤剂应用中清洁的AmyS-242Q的工程化变体中是受欢迎的。然而，这些特性明显是冲突的特征。使用本发明中提供的方法，有可能通过选择性组合单一突变来产生更高度表达的淀粉酶变体，同时并不严重损害淀粉水解作用。本文中所述的策略成功地用来产生和选择多重替换的AmyS-242Q变体，其中所述AmyS-242Q变体具有第一特性(例如作为主要特性的表达)上的改良，同时改善了或并未牺牲第二特性(例如作为次要特性的淀粉水解作用)。

此外，与AmyS-242Q变体的中位值表达相反，谷物淀粉微量样品清洁作用随增加的正电荷而提高。增强的重组淀粉酶表达和清洁性能是在AmyS-242Q的工程化变体中受欢迎的。然而，这些特性明显也是冲突的特性。使用本发明中公开的方法，有可能通过选择性组合单一突变来产生更高度表达的淀粉酶变体，同时并不严重损害清洁性能。本文中所述的策略成功地用来产生和选择多重替换的AmyS-242Q变体，所述AmyS-242Q变体具有第一特性(例如作为主要特性的表达)上的改良，同时改善了或并未牺牲第二特性(例如作为次要特性的稻淀粉微量样品清洁作用)。

特别地，测试了含80种成员的一个AmyS-S242Q电荷组合文库(CCL)的振摇管表达、BODIPY-淀粉水解作用和稻淀粉清洁活性，其中所述AmyS-S242Q电荷组合文库包含具有1至4个带电荷残基替换组合的变体。在表7-1和7-1中显示AmyS-S242Q胜出者。重要地，与亲本酶相比，表19-1的多重替换变体具有相等同或改善的表达和相等或改良的BODIPY-淀粉水解作用。类似地，与亲本酶相比，表19-2的多重替换变体具有相等或改善的表达和相等或改良的稻淀粉清洁活性。

表19-2.AmyS-S242Q表达和稻淀粉水解胜出者

变体	97	319	358	443	电荷	表达	CS-28
								1	Q97E	Q319E	Q358E	Q443E	-4	1.27	1.01
11	Q97E	Q319R	Q358E	Q443R	0	1.32	1.18
								12	Q97E	Q319R	Q358E		-1	1.58	1.13
16	Q97E	Q319R		Q443E	-1	1.09	1.43
								17	Q97E	Q319R		Q443R	+1	1.00	1.55
24	Q97E		Q358R		0	1.08	1.15
								25	Q97E			Q443E	-2	1.12	1.09
64		Q319R	Q358E	Q443E	-1	1.05	1.18
								67		Q319R	Q358R	Q443E	+1	1.02	1.15

总之，因为酶活性和酶产生具有不同的电荷依赖性(见图26A、26B、27A和27B)，故它们是负相关的(见图25A和25B)。然而，存在表达和活性方面均改善的众多变体，并且以这种方式对所述文库的分析允许鉴定到这些变体。

尽管以淀粉酶进行了说明，然而本方法可应用于其他酶类，如蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、转移酶和果胶酶。另外，可以同时分析两种或多种特性的任何组合，如表达、活性、结合作用、热稳定性、洗涤剂和螯合剂稳定性。

实施例20：S242变体的进一步表征

进一步表征S242变体的文库(S242A、242A、242C、242D、242E、242F、242G、242H、242I、242K、242L、242M、242N、242P、242Q、242R、242T、242V、242W和242Y)以确定蛋白质表达、在pH 5.8和pH 4的比活性，对谷物粉85的比活性和在温度(也见实施例3)上的％残余活性。与野生型(或S242S亲本淀粉酶)和对照酶(SPEZYME ETHYL)相对比较而显示结果。

数据在表20-1中显示。

使用对麦芽七糖的α-淀粉酶活性测定法(pH稳定性确定)如下测量在pH 5.8和pH 4的比活性。

使用酶偶联的比色动力学测定法，通过监测葡萄糖的产生测量枯草芽孢杆菌AmyS和AmyS变体在pH 5.8和pH 4对麦芽七糖的α-淀粉酶活性。在平底聚苯乙烯96孔微量滴定平板中于室温实施酶反应。对于在pH 5.8实施的测定法，将10μL AmyS和AmyS变体的培养上清液与以如下浓度含有乙酸钠(pH 5.8)、CaCl₂、Tween-20、辣根过氧化物酶(Sigma-Aldrich，目录号8375)和葡萄糖氧化酶(Genencor OxyGo^TM)的40μL缓冲液混合，从而50μL终体积分别含有50mM、2.6mM、0.005％(w/v)、20U/ml和50U/ml的以上各组分。反应通过添加含有50mM乙酸钠(pH 5.8)、5.4mg/mL 2，2’-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(Sigma-Aldrich，目录号A1888)和10mM麦芽七糖(Sigma-Aldrich，目录号M7753)的50μl缓冲液启动并随后混合5秒。使用SpectraMAX 250分光光度计(MolecularDevices)，在405nm以9秒间隔监测反应中的颜色形成240秒。将酶活性报告为在120-240秒监测间隔期间颜色形成的速率。对于在pH 4.0实施的测定法，完全重复如上所述的方法，除了使用在pH 4.0的缓冲液之外。

表20-1：S242变体的表征

变体	蛋白质表达	比活性pH 5.8	比活性pH 4	比活性谷物粉85	残余活性(％)
						242A	133	0.189	0.0540	0.0112	59.5
242C	95	0.193	0.0502	0.0109	29.3
						242D	176	0.140	0.0344	0.0045	41.6
242E	179	0.151	0.0400	0.0145	44.6

242F	116	0.162	0.0441	0.0072	33.8
						242G	172	0.164	0.0444	0.0102	31.6
242H	174	0.145	0.0414	0.0074	19.3
						242I	115	0.154	0.0445	0.0118	27.0
242K	187	0.148	0.0444	0.0083	22.8
						242L	120	0.202	0.0729	0.0114	28.5
242M	95	0.241	0.0735	0.0122	42.9
						242N	170	0.161	0.0419	0.0082	30.2
242P	168	0.149	0.0322	0.0041	6.7
						242Q	142	0.152	0.0374	0.0177	61.3
242R	176	0.154	0.0368	0.0062	13.0
						野生型	135	0.164	0.0367	0.0122	34.0
242T	165	0.145	0.0334	0.0081	24.8
						242V	106	0.168	0.0407	0.0089	22.3
242W	112	0.199	0.0471	0.0083	5.6
						242Y	127	0.189	0.0541	0.0077	15.7
pos	75	0.189	0.0445	0.0311	85.0
						野生型	156	0.153	0.0416	0.0068	32.3

在以上说明书中提到的全部出版物和专利在此引入作为参考。虽然公开的方法和酶已经在一些情况下与具体或优选的实施方案联系加以描述，然而应当理解由所附权利要求书所覆盖的内容将不限于此类具体或优选的实施方案。实际上，所公开方法和酶的多种修改和变化对于本领域技术人员是显而易见的并且用于实施已公开内容的所述方法的多种修改和变化被包含于后续权利要求书的范围内。

序列表

<110>丹尼斯科美国公司

 

<120>具有改变的特性的α-淀粉酶变体

 

<130>48452-0028-00-WO

 

<140>

<141>

 

<150>61/059,411

<151>2008-06-06

 

<150>61/041,075

<151>2008-03-31

 

<150>61/026,579

<151>2008-02-06

 

<150>60/985,619

<151>2007-11-05

 

<160>31

 

<170>PatentIn版本3.5

 

<210>1

<211>515

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)

 

<400>1

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

A1a Trp Pro

        515

 

<210>2

<211>486

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌

<400>2

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr

                485

 

<210>3

<211>515

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌

 

<400>3

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ala Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

 

<210>4

<211>515

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌

 

<400>4

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Gln Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

<210>5

<211>515

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌

 

<400>5

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Glu Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

 

<210>6

<211>485

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种707

 

<400>6

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1               5                   10                  15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Asn Ser Asp Ala Ser

            20                  25                  30

Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Val Thr Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Arg Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Arg Leu Asn Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly His Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr

    210                 215                 220

Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu

            260                 265                 270

Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Gln Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val

        275                 280                 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg

305                 310                 315                 320

His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

                325                 330                 335

Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Arg Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys

385                 390                 395                 400

Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Ala Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly

        435                 440                 445

Gln Val Trp Ser Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Asn Lys

                485

 

<210>7

<211>483

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种707

 

<400>7

Ala Asn Leu Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Met Pro

1               5                   10                  15

Asn Asp Gly Gln His Trp Lys Arg Leu Gln Asn Asp Ser Ala Tyr Leu

            20                  25                  30

Ala Glu His Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly

        35                  40                  45

Thr Ser Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu

    50                  55                  60

Gly Glu Phe His Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Gly Glu Leu Gln Ser Ala Ile Lys Ser Leu His Ser Arg Asp Ile Asn

                85                  90                  95

Val Tyr Gly Asp Val Val Ile Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Ala Thr

            100                 105                 110

Glu Asp Val Thr Ala Val Glu Val Asp Pro Ala Asp Arg Asn Arg Val

        115                 120                 125

Ile Ser Gly Glu His Leu Ile Lys Ala Trp Thr His Phe His Phe Pro

    130                 135                 140

Gly Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp His Trp Tyr His Phe

145                 150                 155                 160

Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr Lys

                165                 170                 175

Phe Gln Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Asn Glu Asn Gly Asn

            180                 185                 190

Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Tyr Asp His Pro Asp Val

        195                 200                 205

Ala Ala Glu Ile Lys Arg Trp Gly Thr Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Gln

210                 215                 220

Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe Ser Phe

225                 230                 235                 240

Leu Arg Asp Trp Val Asn His Val Arg Glu Lys Thr Gly Lys Glu Met

                245                 250                 255

Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Leu Gly Ala Leu Glu Asn

            260                 265                 270

Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Phe Asn His Ser Val Phe Asp Val Pro Leu

        275                 280                 285

His Tyr Gln Phe His Ala Ala Ser Thr Gln Gly Gly Gly Tyr Asp Met

    290                 295                 300

Arg Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Ser Lys His Pro Leu Lys Ser

305                 310                 315                 320

Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu

                325                 330                 335

Ser Thr Val Gln Thr Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu

            340                 345                 350

Thr Arg Glu Ser Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Met Tyr Gly

        355                 360                 365

Thr Lys Gly Asp Ser Gln Arg Glu Ile Pro Ala Leu Lys His Lys Ile

    370                 375                 380

Glu Pro Ile Leu Lys Ala Arg Lys Gln Tyr Ala Tyr Gly Ala Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp

                405                 410                 415

Ser Ser Val Ala Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ala Lys Arg Met Tyr Val Gly Arg Gln Asn Ala Gly Glu Thr

        435                 440                 445

Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Glu Pro Val Val Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Glu Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Tyr

465                 470                 475                 480

Val Gln Arg

<210>8

<211>483

<212>PRT

<213>地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)

 

<400>8

Ala Asn Leu Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Met Pro

1               5                   10                  15

Asn Asp Gly Gln His Trp Arg Arg Leu Gln Asn Asp Ser Ala Tyr Leu

            20                  25                  30

Ala Glu His Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly

        35                  40                  45

Thr Ser Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu

    50                  55                  60

Gly Glu Phe His Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Gly Glu Leu Gln Ser Ala Ile Lys Ser Leu His Ser Arg Asp Ile Asn

                85                  90                  95

Val Tyr Gly Asp Val Val Ile Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Ala Thr

            100                 105                 110

Glu Asp Val Thr Ala Val Glu Val Asp Pro Ala Asp Arg Asn Arg Val

        115                 120                 125

Ile Ser Gly Glu His Leu Ile Lys Ala Trp Thr His Phe His Phe Pro

    130                 135                 140

Gly Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp His Trp Tyr His Phe

145                 150                 155                 160

Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr Lys

                165                 170                 175

Phe Gln Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Asn Glu Asn Gly Asn

            180                 185                 190

Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Tyr Asp His Pro Asp Val

        195                 200                 205

Ala Ala Glu Ile Lys Arg Trp Gly Thr Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Gln

    210                 215                 220

Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe Ser Phe

225                 230                 235                 240

Leu Arg Asp Trp Val Asn His Val Arg Glu Lys Thr Gly Lys Glu Met

                245                 250                 255

Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Leu Gly Ala Leu Glu Asn

            260                 265                 270

Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Phe Asn His Ser Val Phe Asp Val Pro Leu

        275                 280                 285

His Tyr Gln Phe His Ala Ala Ser Thr Gln Gly Gly Gly Tyr Asp Met

    290                 295                 300

Arg Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Ser Lys His Pro Leu Lys Ser

305                 310                 315                 320

Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu

                325                 330                 335

Ser Thr Val Gln Thr Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu

            340                 345                 350

Thr Arg Glu Ser Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Met Tyr Gly

        355                 360                 365

Thr Lys Gly Asp Ser Gln Arg Glu Ile Pro Ala Leu Lys His Lys Ile

    370                 375                 380

Glu Pro Ile Leu Lys Ala Arg Lys Gln Tyr Ala Tyr Gly Ala Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp

                405                 410                 415

Ser Ser Val Ala Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ala Lys Arg Met Tyr Val Gly Arg Gln Asn Ala Gly Glu Thr

        435                 440                 445

Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Glu Pro Val Val Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Glu Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Tyr

465                 470                 475                 480

Val Gln Arg

 

<210>9

<211>483

<212>PRT

<213>解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)

 

<400>9

Val Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Thr Pro Asn Asp

1               5                   10                  15

Gly Gln His Trp Lys Arg Leu Gln Asn Asp Ala Glu His Leu Ser Asp

            20                  25                  30

Ile Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly Leu Ser

        35                  40                  45

Gln Ser Asp Asn Gly Tyr Gly Pro Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly Glu

    50                  55                  60

Phe Gln Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys Ser Glu

65                  70                  75                  80

Leu Gln Asp Ala Ile Gly Ser Leu His Ser Arg Asn Val Gln Val Tyr

                85                  90                  95

Gly Asp Val Val Leu Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Ala Thr Glu Asp

            100                 105                 110

Val Thr Ala Val Glu Val Asn Pro Ala Asn Arg Asn Gln Glu Thr Ser

        115                 120                 125

Glu Glu Tyr Gln Ile Lys Ala Trp Thr Asp Phe Arg Phe Pro Gly Arg

    130                 135                 140

Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp His Trp Tyr His Phe Asp Gly

145                 150                 155                 160

Ala Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Ile Ser Arg Ile Phe Lys Phe Arg

                165                 170                 175

Gly Glu Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Ser Glu Asn Gly Asn

            180                 185                 190

Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Tyr Asp His Pro Asp Val

        195                 200                 205

Val Ala Glu Thr Lys Lys Trp Gly Ile Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Ser

    210                 215                 220

Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Ala Lys His Ile Lys Phe Ser Phe

225                 230                 235                 240

Leu Arg Asp Trp Val Gln Ala Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Glu Met

                245                 250                 255

Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asn Ala Gly Lys Leu Glu Asn

            260                 265                 270

Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Phe Asn Gln Ser Val Phe Asp Val Pro Leu

        275                 280                 285

His Phe Asn Leu Gln Ala Ala Ser Ser Gln Gly Gly Gly Tyr Asp Met

    290                 295                 300

Arg Arg Leu Leu Asp Gly Thr Val Val Ser Arg His Pro Glu Lys Ala

305                 310                 315                 320

Val Thr Phe Val Glu Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu

                325                 330                 335

Ser Thr Val Gln Thr Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu

            340                 345                 350

Thr Arg Glu Ser Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Met Tyr Gly

        355                 360                 365

Thr Lys Gly Thr Ser Pro Lys Glu Ile Pro Ser Leu Lys Asp Asn Ile

    370                 375                 380

Glu Pro Ile Leu Lys Ala Arg Lys Glu Tyr Ala Tyr Gly Pro Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Ile Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp

                405                 410                 415

Ser Ser Ala Ala Lys Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Arg Met Tyr Ala Gly Leu Lys Asn Ala Gly Glu Thr

        435                 440                 445

Trp Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Lys Ile Gly Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Asp Gly Ser Val Ser Ile Tyr

465                 470                 475                 480

Val Gln Lys

 

<210>10

<211>485

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种707

 

<400>10

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1               5                   10                  15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser

            20                  25                  30

Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr

    210                 215                 220

Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu

            260                 265                 270

Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val

        275                 280                 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg

305                 310                 315                 320

His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

                325                 330                 335

Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg

385                 390                 395                 400

Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly

        435                 440                 445

Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Asn Lys

                485

 

<210>11

<211>485

<212>PRT

<213>盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)

 

<400>11

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His

1               5                   10                  15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser

            20                  25                  30

Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly

                85                  90                  95

Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr

    210                 215                 220

Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu

            260                 265                 270

Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val

        275                 280                 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys

305                 310                 315                 320

His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

                325                 330                 335

Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly

        435                 440                 445

Gln Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Lys Arg

                485

 

<210>12

<211>485

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种

 

<400>12

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His

1               5                   10                  15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ala

            20                  25                  30

Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Arg Ser Gln Leu Gln Gly Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Gly Thr Glu Met Val Asn Ala Val Glu Val Asn Arg Ser Asn Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Lys

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Ile Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr

    210                 215                 220

Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Tyr Ser Tyr Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu

            260                 265                 270

Ala Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Trp Asn His Ser Val

        275                 280                 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Tyr Phe Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Ser Val Val Gln Lys

305                 310                 315                 320

His Pro Ile His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

                325                 330                 335

Gly Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Ser Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ser Met Lys Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Leu Leu Gln Ala Arg Gln Thr Tyr Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Asp Ser Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys His Lys Ala Gly

        435                 440                 445

Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Thr Val Asn Gly Gly Ala Val Ser

465                 470                 475                 480

Val Trp Val Lys Gln

                485

 

<210>13

<211>480

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种

 

<400>13

Asp Gly Leu Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Tyr Glu Trp His Leu Glu

1               5                   10                  15

Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asp Asp Ala Ala Ala Leu

            20                  25                  30

Ser Asp Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly

        35                  40                  45

Asn Ser Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu

    50                  55                  60

Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Ala Gln Leu Glu Arg Ala Ile Gly Ser Leu Lys Ser Asn Asp Ile Asn

                85                  90                  95

Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Met Gly Ala Asp Phe Thr

            100                 105                 110

Glu Ala Val Gln Ala Val Gln Val Asn Pro Thr Asn Arg Trp Gln Asp

        115                 120                 125

Ile Ser Gly Ala Tyr Thr Ile Asp Ala Trp Thr Gly Phe Asp Phe Ser

    130                 135                 140

Gly Arg Asn Asn Ala Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Phe His Phe

145                 150                 155                 160

Asn Gly Val Asp Trp Asp Gln Arg Tyr Gln Glu Asn His Ile Phe Arg

                165                 170                 175

Phe Ala Asn Thr Asn Trp Asn Trp Arg Val Asp Glu Glu Asn Gly Asn

            180                 185                 190

Tyr Asp Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Ile Asp Phe Ser His Pro Glu Val

        195                 200                 205

Gln Asp Glu Leu Lys Asp Trp Gly Ser Trp Phe Thr Asp Glu Leu Asp

    210                 215                 220

Leu Asp Gly Tyr Arg Leu Asp Ala Ile Lys His Ile Pro Phe Trp Tyr

225                 230                 235                 240

Thr Ser Asp Trp Val Arg His Gln Arg Asn Glu Ala Asp Gln Asp Leu

                245                 250                 255

Phe Val Val Gly Glu Tyr Trp Lys Asp Asp Val Gly Ala Leu Glu Phe

            260                 265                 270

Tyr Leu Asp Glu Met Asn Trp Glu Met Ser Leu Phe Asp Val Pro Leu

        275                 280                 285

Asn Tyr Asn Phe Tyr Arg Ala Ser Gln Gln Gly Gly Ser Tyr Asp Met

    290                 295                 300

Arg Asn Ile Leu Arg Gly Ser Leu Val Glu Ala His Pro Met His Ala

305                 310                 315                 320

Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu Ser Leu Glu

                325                 330                 335

Ser Trp Val Ala Asp Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Thr Ile Leu

            340                 345                 350

Thr Arg Glu Gly Gly Tyr Pro Asn Val Phe Tyr Gly Asp Tyr Tyr Gly

        355                 360                 365

Ile Pro Asn Asp Asn Ile Ser Ala Lys Lys Asp Met Ile Asp Glu Leu

    370                 375                 380

Leu Asp Ala Arg Gln Asn Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp Tyr Phe

385                 390                 395                 400

Asp His Trp Asp Val Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Ser Ser Ser Arg

                405                 410                 415

Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asn Gly Pro Gly Gly Ser

            420                 425                 430

Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Asn Ala Gly Gln Thr Trp Thr Asp

        435                 440                 445

Leu Thr Gly Asn Asn Gly Ala Ser Val Thr Ile Asn Gly Asp Gly Trp

    450                 455                 460

Gly Glu Phe Phe Thr Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Tyr Val Asn Gln

465                 470                 475                 480

 

<210>14

<211>480

<212>PRT

<213>芽孢杆菌属物种

 

<400>14

Asp Gly Leu Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Tyr Glu Trp His Leu Glu

1               5                   10                  15

Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asp Asp Ala Glu Ala Leu

            20                  25                  30

Ser Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly

        35                  40                  45

Asn Ser Gln Ala Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu

    50                  55                  60

Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Ala Gln Leu Glu Arg Ala Ile Gly Ser Leu Lys Ser Asn Asp Ile Asn

                85                  90                  95

Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Leu Gly Ala Asp Phe Thr

            100                 105                 110

Glu Ala Val Gln Ala Val Gln Val Asn Pro Ser Asn Arg Trp Gln Asp

        115                 120                 125

Ile Ser Gly Val Tyr Thr Ile Asp Ala Trp Thr Gly Phe Asp Phe Pro

    130                 135                 140

Gly Arg Asn Asn Ala Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Phe His Phe

145                 150                 155                 160

Asn Gly Val Asp Trp Asp Gln Arg Tyr Gln Glu Asn His Leu Phe Arg

                165                 170                 175

Phe Ala Asn Thr Asn Trp Asn Trp Arg Val Asp Glu Glu Asn Gly Asn

            180                 185                 190

Tyr Asp Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Ile Asp Phe Ser His Pro Glu Val

        195                 200                 205

Gln Glu Glu Leu Lys Asp Trp Gly Ser Trp Phe Thr Asp Glu Leu Asp

    210                 215                 220

Leu Asp Gly Tyr Arg Leu Asp Ala Ile Lys His Ile Pro Phe Trp Tyr

225                 230                 235                 240

Thr Ser Asp Trp Val Arg His Gln Arg Ser Glu Ala Asp Gln Asp Leu

                245                 250                 255

Phe Val Val Gly Glu Tyr Trp Lys Asp Asp Val Gly Ala Leu Glu Phe

            260                 265                 270

Tyr Leu Asp Glu Met Asn Trp Glu Met Ser Leu Phe Asp Val Pro Leu

        275                 280                 285

Asn Tyr Asn Phe Tyr Arg Ala Ser Lys Gln Gly Gly Ser Tyr Asp Met

    290                 295                 300

Arg Asn Ile Leu Arg Gly Ser Leu Val Glu Ala His Pro Ile His Ala

305                 310                 315                 320

Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu Ser Leu Glu

                325                 330                 335

Ser Trp Val Ala Asp Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Thr Ile Leu

            340                 345                 350

Thr Arg Glu Gly Gly Tyr Pro Asn Val Phe Tyr Gly Asp Tyr Tyr Gly

        355                 360                 365

Ile Pro Asn Asp Asn Ile Ser Ala Lys Lys Asp Met Ile Asp Glu Leu

    370                 375                 380

Leu Asp Ala Arg Gln Asn Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp Tyr Phe

385                 390                 395                 400

Asp His Trp Asp Ile Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Thr Ser Ser Arg

                405                 410                 415

Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asn Gly Pro Gly Gly Ser

            420                 425                 430

Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Gln His Ala Gly Gln Thr Trp Thr Asp

        435                 440                 445

Leu Thr Gly Asn His Ala Ala Ser Val Thr Ile Asn Gly Asp Gly Trp

    450                 455                 460

Gly Glu Phe Phe Thr Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Tyr Val Asn Gln

465                 470                 475                 480

 

<210>15

<211>486

<212>PRT

<213>嗜热脂肪土芽孢杆菌

 

<400>15

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu Phe Gly

            180                 185                 190

Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His Pro Glu

        195                 200                 205

Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn Thr Thr

    210                 215                 220

Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe Ser

225                 230                 235                 240

Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly Lys Pro

                245                 250                 255

Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys Leu His

            260                 265                 270

Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp Ala Pro

        275                 280                 285

Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala Phe Asp

    290                 295                 300

Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro Thr Leu

305                 310                 315                 320

Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln Ala Leu

                325                 330                 335

Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile

            340                 345                 350

Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp Tyr Tyr

        355                 360                 365

Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile Asp Pro

    370                 375                 380

Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp Tyr

385                 390                 395                 400

Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Gly Thr Glu

                405                 410                 415

Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro Gly Gly

            420                 425                 430

Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val Phe Tyr

        435                 440                 445

Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser Asp Gly

    450                 455                 460

Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp Val Pro

465                 470                 475                 480

Arg Lys Thr Thr Val Ser

                485

 

<210>16

<211>520

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″His″或″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Gly″或″Asn″或″″

 

<220>

<221>变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换＝″Thr″或″Leu″或″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(5)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(25)..(25)

<223>/替换＝″Asn″或″Lys″或″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(25)..(25)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Asn″或″Gln″或″Arg″或″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(28)..(28)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ser ″或″Ala″或″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(37)..(37)

<223>/替换＝″Lys″或″His″或″Ile″或″Arg″或″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(37)..(37)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Gln″或″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(87)..(87)

<223>/替换＝″Ala″或″Ser″或″Asp″或″Gly″或″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(86)..(87)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(90)..(90)

<223>/替换＝″Thr″或″Lys″或″Gly″或″Asn″或″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(90)..(90)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asn″或″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(95)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(116)..(116)

<223>/替换＝″Met″或″Asp″或″Asn″或″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(116)..(116)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(118)..(118)

<223>/替换＝″Arg″或″Thr″或″Leu″或″Asn″或″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(118)..(118)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(134)..(134)

<223>/替换＝″Glu″或″Asp″或″Ala″或″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(134)..(134)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(136)..(136)

<223>/替换＝″Thr″或″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(136)..(136)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(138)..(138)

<223>/替换＝″Glu″或″Lys″或″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(138)..(138)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(154)..(154)

<223>/替换＝″Asp″或″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(154)..(154)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(175)..(175)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″His″或″Glu″或″Asp″或″Thr″或″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(183)..(183)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Asn″或″Ala″或″Asp″或″Glu″

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(222)..(222)

<223>/替换＝″Val″或″Thr″或″Ile″或″Glu″或″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(222)..(222)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Thr″或″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(225)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(246)..(246)

<223>/替换＝″Thr″或″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(246)..(246)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(247)..(247)

<223>/替换＝″Pro″或″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Ala″或″Lys″或″Thr″或″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(256)..(256)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(260)..(260)

<223>/替换＝″Asn″或″Glu″或″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(260)..(260)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Lys″或″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(269)..(269)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Tyr″或″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Gln″或″Asn″或″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(280)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(285)..(285)

<223>/替换＝″Thr″或″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(299)..(299)

<223>/替换＝″Asn″或″Ala″或″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(299)..(299)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(311)..(311)

<223>/替换＝″Asn″或″Lys″或″Arg″或″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(311)..(311)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(314)..(314)

<223>/替换＝″Asn″或″Asp″或″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(314)..(314)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″Gln″或″Ser″或″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(320)..(320)

<223>/替换＝″Arg″或″Lys″或″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(319)..(320)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(323)..(323)

<223>/替换＝″Ser″或″Leu″或″Glu″或″Met″或″Ile″

 

<220>

<221>变体

<222>(324)..(324)

<223>/替换＝″His″或″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(323)..(324)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(346)..(346)

<223>/替换＝″Glu″或″Thr″或″Ser″或″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(346)..(346)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(361)..(361)

<223>/替换＝″Gln″或″Ser″或″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(361)..(361)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(365)..(365)

<223>/替换＝″Ser″或″Gln″或″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(365)..(365)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(379)..(379)

<223>/替换＝″Pro″或″″

 

<220>

<221>变体

<222>(380)..(380)

<223>/替换＝″Lys″或″″

 

<220>

<221>变体

<222>(381)..(381)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(394)..(394)

<223>/替换＝″Glu″或″Lys″或″Gln″或″Asp″

<220>

<221>misc_feature

<222>(394)..(394)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(398)..(398)

<223>/替换＝″Lys″或″Gln″或″Glu″或″Asn″或″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(398)..(398)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(411)..(411)

<223>/替换＝″His″或″Pro″或″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(411)..(411)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″Asn″或″Asp″或″Ser″或″Thr″或″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(421)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(449)..(449)

<223>/替换＝″Lys″或″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(449)..(449)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(452)..(452)

<223>/替换＝″Gln″或″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(452)..(452)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(476)..(476)

<223>/替换＝″Ser″或″His″或″Thr″或″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(476)..(476)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(487)

<223>/替换＝″Asn″或″Gln″或″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(487)..(487)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(518)..(518)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(519)..(519)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(520)..(520)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(489)..(520)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>16

His Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1               5                   10                  15

Leu Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Thr Arg Leu Ala Asn Asp Ala Asn

            20                  25                  30

Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Tyr

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Gln Ser Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Lys Ala Gln Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ala Leu His Ala Ala Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Gly Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr

    210                 215                 220

Val Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Phe Ser Phe Phe Arg Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Asn Asp Ile

            260                 265                 270

Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Thr Lys Thr Asn Trp Asn Met Ser Leu

        275                 280                 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Ala Tyr Asp Met Arg Thr Leu Leu Thr Gly Thr Leu Val Lys Asp

305                 310                 315                 320

His Pro Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro

                325                 330                 335

Gly Gln Ala Leu Glu Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg Glu Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Gln Arg Glu Ile Pro Ser

    370                 375                 380

Leu Lys Ser Lys Ile Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala

385                 390                 395                 400

Tyr Gly Thr Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp

                405                 410                 415

Thr Arg Glu Gly Val Thr Ser Lys Pro Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu

            420                 425                 430

Ile Thr Asp Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln

        435                 440                 445

His Ala Gly Lys Val Trp Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr

    450                 455                 460

Val Thr Ile Asn Ser Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly

465                 470                 475                 480

Ser Val Ser Val Trp Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala

                485                 490                 495

Arg Pro Ile Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr

            500                 505                 510

Glu Pro Arg Leu Val Ala Trp Pro

        515                 520

 

<210>17

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的寡核苷酸″

<220>

<221>modified_base

<222>(19)..(20)

<223>a，c，t，g，未知的或其它

 

<400>17

gtcaagcata ttaagttcnn sttttttcct gattggttg                           39

<210>18

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的寡核苷酸″

 

<220>

<221>modified_base

<222>(20)..(21)

<223>a，c，t，g，未知的或其它

 

<400>18

caaccaatca ggaaaaaasn ngaacttaat atgcttgac                           39

 

<210>19

<211>87

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的寡核苷酸″

 

<400>19

atgaaacaac aaaaacggct ttacgcccga ttgctgacgc tgttatttgc gctcatcttc    60

ttgctgcctc attctgcagc ttcagca                                        87

 

<210>20

<211>29

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的肽″

 

<400>20

Met Lys Gln Gln Lys Arg Leu Tyr Ala Arg Leu Leu Thr Leu Leu Phe

1               5                   10                  15

Ala Leu Ile Phe Leu Leu Pro His Ser Ala Ala Ser Ala

            20                  25

 

<210>21

<211>486

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的多肽″

 

<400>21

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe GIu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Gln Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr

                485

 

<210>22

<211>413

<212>PRT

<213>布丘氏菌属物种(Buttiauxella sp.)

 

<400>22

Asn Asp Thr Pro Ala Ser Gly Tyr Gln Val Glu Lys Val Val Ile Leu

1               5                   10                  15

Ser Arg His Gly Val Arg Ala Pro Thr Lys Met Thr Gln Thr Met Arg

            20                  25                  30

Asp Val Thr Pro Asn Thr Trp Pro Glu Trp Pro Val Lys Leu Gly Tyr

        35                  40                  45

Ile Thr Pro Arg Gly Glu His Leu Ile Ser Leu Met Gly Gly Phe Tyr

    50                  55                  60

Arg Gln Lys Phe Gln Gln Gln Gly Ile Leu Ser Gln Gly Ser Cys Pro

65                  70                  75                  80

Thr Pro Asn Ser Ile Tyr Val Trp Ala Asp Val Asp Gln Arg Thr Leu

                85                  90                  95

Lys Thr Gly Glu Ala Phe Leu Ala Gly Leu Ala Pro Gln Cys Gly Leu

            100                 105                 110

Thr Ile His His Gln Gln Asn Leu Glu Lys Ala Asp Pro Leu Phe His

        115                 120                 125

Pro Val Lys Ala Gly Thr Cys Ser Met Asp Lys Thr Gln Val Gln Gln

    130                 135                 140

Ala Val Glu Lys Glu Ala Gln Thr Pro Ile Asp Asn Leu Asn Gln His

145                 150                 155                 160

Tyr Ile Pro Phe Leu Ala Leu Met Asn Thr Thr Leu Asn Phe Ser Thr

                165                 170                 175

Ser Ala Trp Cys Gln Lys His Ser Ala Asp Lys Ser Cys Asp Leu Gly

            180                 185                 190

Leu Ser Met Pro Ser Lys Leu Ser Ile Lys Asp Asn Gly Asn Lys Val

        195                 200                 205

Ala Leu Asp Gly Ala Ile Gly Leu Ser Ser Thr Leu Ala Glu Ile Phe

    210                 215                 220

Leu Leu Glu Tyr Ala Gln Gly Met Pro Gln Ala Ala Trp Gly Asn Ile

225                 230                 235                 240

His Ser Glu Gln Glu Trp Ala Ser Leu Leu Lys Leu His Asn Val Gln

                245                 250                 255

Phe Asp Leu Met Ala Arg Thr Pro Tyr Ile Ala Arg His Asn Gly Thr

            260                 265                 270

Pro Leu Leu Gln Ala Ile Ser Asn Ala Leu Asn Pro Asn Ala Thr Glu

        275                 280                 285

Ser Lys Leu Pro Asp Ile Ser Pro Asp Asn Lys Ile Leu Phe Ile Ala

    290                 295                 300

Gly His Asp Thr Asn Ile Ala Asn Ile Ala Gly Met Leu Asn Met Arg

305                 310                 315                 320

Trp Thr Leu Pro Gly Gln Pro Asp Asn Thr Pro Pro Gly Gly Ala Leu

                325                 330                 335

Val Phe Glu Arg Leu Ala Asp Lys Ser Gly Lys Gln Tyr Val Ser Val

            340                 345                 350

Ser Met Val Tyr Gln Thr Leu Glu Gln Leu Arg Ser Gln Thr Pro Leu

        355                 360                 365

Ser Leu Asn Gln Pro Ala Gly Ser Val Gln Leu Lys Ile Pro Gly Cys

    370                 375                 380

Asn Asp Gln Thr Ala Glu Gly Tyr Cys Pro Leu Ser Thr Phe Thr Arg

385                 390                 395                 400

Val Val Ser Gln Ser Val Glu Pro Gly Cys Gln Leu Gln

                405                 410

 

<210>23

<211>517

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(5)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(19)..(19)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(19)..(19)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(23)..(23)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(22)..(23)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(25)..(25)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(25)..(25)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(29)..(29)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(28)..(29)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(35)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(37)..(37)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(37)..(37)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(51)..(51)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(51)..(51)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(53)..(53)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(54)..(54)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(53)..(54)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(60)..(60)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(60)..(60)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(87)..(87)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(85)..(87)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(90)..(90)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(90)..(90)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(93)..(93)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(95)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(92)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(106)..(106)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(105)..(106)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(116)..(116)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(116)..(116)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(118)..(118)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(118)..(118)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(126)..(126)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(126)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(134)..(134)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(134)..(134)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(136)..(136)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(136)..(136)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(138)..(138)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(138)..(138)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Gln″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(169)..(169)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(175)..(175)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(174)..(175)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(183)..(183)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(222)..(222)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(222)..(222)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(225)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(228)..(228)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(229)..(229)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(228)..(229)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(246)..(246)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(247)..(247)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(246)..(247)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(251)..(251)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(251)..(251)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(256)..(256)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(260)..(260)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(260)..(260)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(263)..(263)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(263)..(263)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(269)..(270)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(273)..(273)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(273)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(276)..(276)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(276)..(276)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(280)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(285)..(285)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(286)..(286)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(284)..(286)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(291)..(291)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(291)..(291)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(295)..(295)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(296)..(296)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(295)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(299)..(299)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(299)..(299)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(306)..(306)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(306)..(306)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(311)..(311)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(311)..(311)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(314)..(314)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(315)..(315)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(313)..(315)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(320)..(320)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(319)..(321)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(324)..(324)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(324)..(324)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(335)..(335)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(335)..(335)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(337)..(337)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(338)..(338)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(337)..(338)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(346)..(346)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(346)..(346)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(355)..(355)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(356)..(356)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(355)..(356)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(360)..(360)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(361)..(361)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(360)..(361)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(365)..(365)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(365)..(365)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(376)..(376)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(391)..(391)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(391)..(391)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(394)..(394)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(395)..(395)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(394)..(395)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(400)..(400)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(400)..(400)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(402)..(402)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(402)..(402)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(408)..(408)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(409)..(409)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(408)..(409)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(420)..(420)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(420)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(423)..(423)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(428)..(428)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(428)..(428)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(434)..(434)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(434)..(434)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(446)..(446)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(446)..(446)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(449)..(449)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(449)..(449)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(452)..(452)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(452)..(452)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(460)..(460)

<223>/替换＝″G1y″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(460)..(460)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(471)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(473)..(473)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(473)..(473)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(484)..(484)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(486)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>misc_feature

<222>(486)..(517)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>23

His Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1               5                   10                  15

Leu Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn

            20                  25                  30

Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr

    210                 215                 220

Val Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Ile Ser His Val Arg Ser Gln

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Ile

            260                 265                 270

Asn Lys Ile His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu

        275                 280                 285

Phe Asp Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Ala Phe Asp Met Arg Thr Ile Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Gln Pro Ser Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Glu Pro

                325                 330                 335

Gly Gln Ala Leu Gln Ser Phe Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln His Asn Ile Pro Ala Leu Lys Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Val Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Lys Asn His Ala Gly

        435                 440                 445

Lys Val Phe Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Pro Lys Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile

                485                 490                 495

Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg

            500                 505                 510

Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>24

<211>518

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Leu″

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(4)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(18)..(18)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(18)..(18)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(21)..(21)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(21)..(22)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(24)..(24)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(24)..(24)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(27)..(27)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(27)..(27)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(31)..(31)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(31)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(36)..(36)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(36)

<223>/注解＝″″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(52)..(52)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(52)..(52)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(59)..(59)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(59)..(59)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(69)..(69)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(69)..(69)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(83)..(83)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(84)..(84)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(83)..(86)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(89)..(89)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(89)..(89)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(91)..(91)

<223>/替换＝″Leu″

<220>

<221>misc_feature

<222>(91)..(91)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(94)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(94)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(104)..(104)

<223>/替换＝″Ile″

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(105)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(115)..(115)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(115)..(115)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(117)..(117)

<223>/替换＝″Thr″

<220>

<221>misc_feature

<222>(117)..(117)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(122)..(122)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(122)..(122)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(128)..(128)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(129)..(129)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(128)..(129)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(133)..(133)

<223>/替换＝″Glu″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(133)..(133)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(135)..(135)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(135)..(135)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(137)..(137)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(137)..(137)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(141)..(141)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(141)..(141)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(143)..(143)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(143)..(143)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(149)..(149)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(149)..(149)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(153)..(153)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(153)..(153)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(157)..(157)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(157)..(157)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(164)..(164)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(164)..(164)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(173)..(173)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(173)..(173)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(179)..(179)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(180)..(180)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(181)..(181)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(179)..(181)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(190)..(190)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(191)..(191)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(190)..(191)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(206)..(206)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(206)..(206)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(212)..(212)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(213)..(213)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(212)..(213)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(217)..(217)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(217)..(217)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(220)..(220)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(220)..(220)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(223)..(223)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(223)..(223)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(226)..(226)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(226)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(244)..(244)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(245)..(245)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(244)..(245)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(249)..(249)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(249)..(249)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(253)..(253)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(254)..(254)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(253)..(254)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(258)..(258)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(258)..(258)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(267)..(267)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(268)..(268)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(267)..(268)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(271)..(271)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(272)..(272)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(271)..(272)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(274)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(278)..(278)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(278)..(278)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(282)..(282)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(283)..(283)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(282)..(284)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(289)..(289)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(289)..(289)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(293)..(293)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(294)..(294)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(293)..(294)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(297)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(300)..(300)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(301)..(301)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(300)..(301)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(309)..(309)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(309)..(309)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(312)..(312)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(312)..(313)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(317)..(317)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(318)..(318)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(317)..(319)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(322)..(322)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(321)..(322)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(333)..(333)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(333)..(333)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(339)..(339)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(339)..(339)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(343)..(343)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(344)..(344)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(343)..(344)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(358)..(358)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(359)..(359)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(358)..(359)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(363)..(363)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(363)..(363)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(369)..(369)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(369)..(369)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(372)..(372)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(373)..(373)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(374)..(374)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(375)..(375)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(379)..(379)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(372)..(379)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(385)..(385)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(385)..(385)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(392)..(392)

<223>/替换＝″Lys″

<220>

<221>misc_feature

<222>(392)..(392)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(396)..(396)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(396)..(396)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(401)..(401)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(401)..(401)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(406)..(406)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(406)..(406)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(409)..(409)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(409)..(409)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(419)..(419)

<223>/替换＝″Asp″

<220>

<221>misc_feature

<222>(419)..(419)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(422)..(422)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(424)..(424)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(421)..(424)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(440)..(440)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(440)..(440)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(447)..(447)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(447)..(447)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(450)..(450)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(451)..(451)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(450)..(451)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(462)..(462)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(462)..(462)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(464)..(464)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(464)..(464)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(474)..(474)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(474)..(474)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(485)..(485)

<223>/替换＝″Gln″

<220>

<221>misc_feature

<222>(485)..(485)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(487)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(488)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(518)..(518)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(487)..(518)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>24

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ala Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Ile

                85                  90                  95

Asn Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Ala

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ala Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr His Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Asp Val Val Thr Glu Ile Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe His Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Leu Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gly Asp Ser Gln Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys

    370                 375                 380

Ser Lys Ile Asp Pro Ile Leu Ile Ala Arg Lys Asp Tyr Ala Tyr Gly

385                 390                 395                 400

Thr Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg

                405                 410                 415

Glu Gly Val Ser Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr

            420                 425                 430

Asp Gly Pro Gly Gly Ala Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala

        435                 440                 445

Gly Lys Val Phe His Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr

    450                 455                 460

Ile Asn Ser Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val

465                 470                 475                 480

Ser Ile Trp Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro

                485                 490                 495

Ile Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro

            500                 505                 510

Arg Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>25

<211>518

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(2)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(4)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(16)..(16)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(16)..(16)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(18)..(18)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(18)..(18)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(21)..(21)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(21)..(22)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(24)..(24)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(24)..(24)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(27)..(27)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_teature

<222>(27)..(27)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(31)..(31)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(31)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(35)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(50)..(50)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(50)..(50)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(52)..(52)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(52)..(52)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(55)..(55)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(55)..(55)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(59)..(59)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(59)..(59)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(83)..(83)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(84)..(84)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(83)..(86)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(89)..(89)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(89)..(89)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(91)..(91)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(91)..(91)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(94)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(94)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(104)..(104)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(105)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(115)..(115)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(115)..(115)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(117)..(117)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(117..(117)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(125)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(130)..(130)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(130)..(130)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(132)..(132)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(133)..(133)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(132)..(133)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(137)..(137)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(137)..(137)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(141)..(141)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(141)..(141)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(143)..(143)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(143)..(143)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(153)..(153)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(153)..(153)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(157)..(157)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(157)..(157)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(164)..(164)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(164)..(164)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(181)..(181)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(181)..(181)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(190)..(190)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(190)..(190)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(206)..(206)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(206)..(206)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(213)..(213)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(213)..(213)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(217)..(217)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(217)..(2l7)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(220)..(220)

<223>/替换＝″Ile″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(220)..(220)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(223)..(223)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(223)..(223)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(226)..(226)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(227)..(227)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(227)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(236)..(236)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(236)..(236)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(244)..(244)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(245)..(245)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(244)..(245)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(249)..(249)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(250)..(250)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(249)..(250)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(253)..(253)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(254)..(254)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(253)..(254)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(258)..(258)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(258)..(258)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(267)..(267)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(268)..(268)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(271)..(271)

<223>/替换＝″Gly″

<220>

<221>misc_feature

<222>(267)..(271)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(274)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(278)..(278)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(278)..(278)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(281)..(281)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(282)..(282)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(283)..(283)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(281)..(284)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(289)..(289)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(289)..(289)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(293)..(293)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(294)..(294)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(295)..(295)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(296)..(296)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(293)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(300)..(300)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(301)..(301)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(300)..(301)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(309)..(309)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(309)..(309)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(312)..(312)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(312)..(313)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(317)..(317)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(318)..(318)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(317)..(319)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(322)..(322)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(321)..(322)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(333)..(333)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(333)..(333)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(339)..(339)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(339)..(339)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(343)..(343)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(344)..(344)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(343)..(344)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(358)..(358)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(359)..(359)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(358)..(359)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(363)..(363)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(363)..(363)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(369)..(369)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(369)..(369)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(372)..(372)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(373)..(373)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(374)..(374)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(375)..(375)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(377)..(377)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(379)..(379)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(372)..(379)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(385)..(385)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(386)..(386)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(385)..(386)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(392)..(392)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(392)..(392)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(401)..(401)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(401)..(401)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(409)..(409)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(409)..(409)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(419)..(419)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(419)..(419)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(422)..(422)

<223>/替换＝″Ala″

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(424)..(424)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(421)..(424)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(440)..(440)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(440)..(440)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(443)..(443)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(443)..(443)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(445)..(445)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(446)..(446)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(447)..(447)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>misc_feature

<222>(445)..(447)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(450)..(450)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(451)..(451)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(450)..(451)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(464)..(464)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(464)..(464)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(466)..(466)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(466)..(466)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(474)..(474)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(474)..(474)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(477)..(477)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(477)..(477)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(485)..(485)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(485)..(485)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(487)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(488)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(518)..(518)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(487)..(518)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>25

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Ile Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Ala Gly Ala Asp Ala

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ala Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Ile Ser Arg Ile Phe

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Asp Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Leu Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Pro Lys Glu Ile Pro Ser Leu Lys

    370                 375                 380

Ser Lys Ile Asp Pro Ile Leu Ile Ala Arg Lys Asp Tyr Ala Tyr Gly

385                 390                 395                 400

Thr Gln His Asp Tyr Ile Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg

                405                 410                 415

Glu Gly Val Ser Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr

            420                 425                 430

Asp Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala

        435                 440                 445

Gly Lys Val Phe Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr

    450                 455                 460

Ile Asn Ser Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val

465                 470                 475                 480

Ser Ile Trp Val Pro Lys Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro

                485                 490                 495

Ile Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro

            500                 505                 510

Arg Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>26

<211>517

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(5)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(19)..(19)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(19)..(19)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(23)..(23)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(22)..(23)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(25)..(25)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(25)..(25)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(29)..(29)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(28)..(29)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(36)..(36)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(37)..(37)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(37)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(51)..(51)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(51)..(51)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(53)..(53)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(54)..(54)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(53)..(54)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(60)..(60)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(60)..(60)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(83)..(83)

<223>/替换＝″Asn ″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(83)..(83)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(87)..(87)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(85)..(87)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(93)..(93)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(92)..(93)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(95)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(106)..(106)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(105)..(106)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(116)..(116)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(116)..(116)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(118)..(118)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(118)..(118)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(126)..(126)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(126)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(134)..(134)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(134)..(134)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(136)..(136)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(136)..(136)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(138)..(138)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(138)..(138)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(154)..(154)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(154)..(154)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(169)..(169)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(175)..(175)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(174)..(175)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(183)..(183)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(222)..(222)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(222)..(222)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(225)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(228)..(228)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(229)..(229)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(228)..(229)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(246)..(246)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(247)..(247)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(246)..(247)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(251)..(251)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(251)..(251)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(256)..(256)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(260)..(260)

<223>/替换＝″Asn ″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(260)..(260)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(263)..(263)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(263)..(263)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(269)..(270)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(273)..(273)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(273)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(276)..(276)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(276)..(276)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(280)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(285)..(285)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(286)..(286)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(284)..(286)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(291)..(291)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(291)..(291)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(295)..(295)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(296)..(296)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(295)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(299)..(299)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(299)..(299)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(306)..(306)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(306)..(306)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(311)..(311)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(311)..(311)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(314)..(314)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(315)..(315)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(313)..(315)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(320)..(320)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(319)..(321)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(323)..(323)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(324)..(324)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(323)..(324)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(335)..(335)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(335)..(335)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(337)..(337)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(338)..(338)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(337)..(338)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(346)..(346)

<223>/替换＝″Glu ″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(346)..(346)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(355)..(355)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(356)..(356)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(355)..(356)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(360)..(360)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(361)..(361)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(360)..(361)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(365)..(365)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(365)..(365)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(376)..(376)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(391)..(391)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(391)..(391)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(394)..(394)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(395)..(395)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(394)..(395)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(400)..(400)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(400)..(400)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(402)..(402)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(402)..(402)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(408)..(408)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(409)..(409)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(408)..(409)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(420)..(420)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(420)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(423)..(423)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(428)..(428)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(428)..(428)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(434)..(434)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(434)..(434)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(437)..(437)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(437)..(437)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(446)..(446)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(446)..(446)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(449)..(449)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(449)..(449)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(452)..(452)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(452)..(452)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(460)..(460)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(460)..(460)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(471)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(473)..(473)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(473)..(473)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>变体

<222>(485)..(485)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(484)..(485)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(486)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>misc_feature

<222>(486)..(517)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>26

His Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1               5                   10                  15

Leu Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn

            20                  25                  30

Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Ser Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Asn Ala Ala His Ala Ala Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Asn Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr

    210                 215                 220

Val Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Ile Ser His Val Arg Ser Gln

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Ile

            260                 265                 270

Asn Lys Ile His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu

        275                 280                 285

Phe Asp Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Ala Phe Asp Met Arg Thr Ile Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Gln Pro Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Glu Pro

                325                 330                 335

Gly Gln Ala Leu Gln Ser Phe Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln His Asn Ile Pro Ala Leu Lys Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Val Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Lys Asn His Ala Gly

        435                 440                 445

Lys Val Phe Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Asp Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Pro Lys Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile

                485                 490                 495

Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg

            500                 505                 510

Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>27

<211>517

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(5)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(19)..(19)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(19)..(19)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(23)..(23)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(22)..(23)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(25)..(25)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(25)..(25)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(29)..(29)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(28)..(29)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(36)..(36)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(37)..(37)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(37)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(53)..(53)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(54)..(54)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>misc_feature

<222>(53)..(54)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(60)..(60)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(60)..(60)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(87)..(87)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(85)..(87)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(90)..(90)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(90)..(90)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Leu″

<220>

<221>变体

<222>(93)..(93)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(95)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(92)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(106)..(106)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(105)..(106)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(116)..(116)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(116)..(116)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(118)..(118)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(118)..(118)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(126)..(126)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(126)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(134)..(134)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(134)..(134)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(136)..(136)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(136)..(136)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(138)..(138)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(138)..(138)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(154)..(154)

<223>/替换＝″Asp″

<220>

<221>misc_feature

<222>(154)..(154)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(169)..(169)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(172)..(172)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(173)..(173)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(175)..(175)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(172)..(175)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(183)..(183)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(219)..(219)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(219)..(219)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(222)..(222)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(222)..(222)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(225)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(228)..(228)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(228)..(228)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(246)..(246)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(247)..(247)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(246)..(247)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(255)..(255)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(255)..(256)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(260)..(260)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(260)..(260)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(263)..(263)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(263)..(263)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(269)..(270)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(273)..(273)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(273)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(276)..(276)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(276)..(276)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(280)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(285)..(285)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(286)..(286)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(284)..(286)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(291)..(291)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(291)..(291)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(295)..(295)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(296)..(296)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(295)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(299)..(299)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(299)..(299)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(302)..(302)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(302)..(302)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(306)..(306)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(306)..(306)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(310)..(310)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(311)..(311)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(310)..(311)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(314)..(314)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>变体

<222>(315)..(315)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(314)..(315)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(320)..(320)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(319)..(321)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(323)..(323)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(324)..(324)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(323)..(324)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(335)..(335)

<223>/替换＝″Gln″

<220>

<221>misc_feature

<222>(335)..(335)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(338)..(338)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(338)..(338)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(345)..(345)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(346)..(346)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(345)..(346)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(355)..(355)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(355)..(355)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(360)..(360)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(361)..(361)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(360)..(361)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(365)..(365)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(365)..(365)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(376)..(376)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(391)..(391)

<223>/替换＝″Glu″

<220>

<221>misc_feature

<222>(391)..(391)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(394)..(394)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(395)..(395)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(394)..(395)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(405)..(405)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(405)..(405)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(408)..(408)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(409)..(409)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(408)..(409)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(420)..(420)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(420)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(423)..(423)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(428)..(428)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(428)..(428)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(437)..(437)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(437)..(437)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(444)..(444)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(444)..(444)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(446)..(446)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(446)..(446)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(449)..(449)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(449)..(449)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(459)..(459)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>变体

<222>(460)..(460)

<223>/替换＝″G1y″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(459)..(460)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(471)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(473)..(473)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(473)..(473)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(484)..(484)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(486)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(486)..(517)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>27

His Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His

1               5                   10                  15

Ieu Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn

            20                  25                  30

Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly

                85                  90                  95

Met Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Ala Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Gln Lys Leu Ser Arg

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr

    210                 215                 220

Val Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Ile

            260                 265                 270

Asn Lys Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu

        275                 280                 285

Phe Asp Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Ala Phe Asp Met Arg Thr Leu Leu Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Gln Pro Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Glu Pro

                325                 330                 335

Gly Gln Ala Leu Gln Ser Phe Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln His Asn Ile Pro Ala Leu Lys Ala

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Ile Ala Arg Arg Asp Phe Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Val Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Asn His Ala Gly

        435                 440                 445

Lys Val Phe His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Ser Asp Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Ala Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465                 470                 475                 480

Ile Trp Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile

                485                 490                 495

Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg

            500                 505                 510

Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>28

<211>517

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(5)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(19)..(19)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(19)..(19)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(23)..(23)

<223>/替换＝″His″

<220>

<221>misc_feature

<222>(22)..(23)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(25)..(25)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(25)..(25)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(29)..(29)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(28)..(29)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(35)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(37)..(37)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(37)..(37)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(53)..(53)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(54)..(54)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(53)..(54)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(60)..(60)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(60)..(60)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(87)..(87)

<223>/替换＝″Gly″

<220>

<221>misc_feature

<222>(85)..(87)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(90)..(90)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(90)..(90)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(93)..(93)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(95)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(92)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(106)..(106)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(105)..(106)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(116)..(116)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(116)..(116)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(118)..(118)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(118)..(118)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(124)..(124)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(124)..(124)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(126)..(126)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(126)..(126)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(134)..(134)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(134)..(134)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(136)..(136)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(136)..(136)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(138)..(138)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(138)..(138)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(154)..(154)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(154)..(154)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(165)..(165)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(165)..(165)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(169)..(169)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(172)..(172)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(173)..(173)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(175)..(175)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(172)..(175)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(183)..(183)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(193)..(193)

<223>/替换＝″Ile″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(193)..(193)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(215)..(215)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>misc_feature

<222>(215)..(215)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(222)..(222)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(222)..(222)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(225)..(225)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(228)..(228)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(228)..(228)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(246)..(246)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(247)..(247)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(246)..(247)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(255)..(255)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(255)..(256)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(263)..(263)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(263)..(263)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(269)..(269)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(270)..(270)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(269)..(270)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(273)..(273)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Ala″

<220>

<221>misc_feature

<222>(273)..(274)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(276)..(276)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(276)..(276)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(280)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(283)..(283)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(284)..(284)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(285)..(285)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(286)..(286)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(283)..(286)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(291)..(291)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(291)..(291)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(295)..(295)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(296)..(296)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(295)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(299)..(299)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(299)..(299)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(302)..(302)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(302)..(302)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(306)..(306)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(306)..(306)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(311)..(311)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(311)..(311)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(314)..(314)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(315)..(315)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(314)..(315)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(320)..(320)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″His″

<220>

<221>misc_feature

<222>(319)..(321)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(323)..(323)

<223>/替换＝″Ile″

 

<220>

<221>变体

<222>(324)..(324)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(323)..(324)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(335)..(335)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(335)..(335)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(338)..(338)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(338)..(338)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(341)..(341)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(341)..(341)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(345)..(345)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(346)..(346)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(345)..(346)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(355)..(355)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(355)..(355)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(360)..(360)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(361)..(361)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(360)..(361)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(365)..(365)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(365)..(365)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(376)..(376)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(376)..(376)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(391)..(391)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(391)..(391)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(394)..(394)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(395)..(395)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(394)..(395)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(405)..(405)

<223>/替换＝″Phe″

<220>

<221>misc_feature

<222>(405)..(405)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(408)..(408)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(408)..(408)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(420)..(420)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(420)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(423)..(423)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(423)..(423)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(428)..(428)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(428)..(428)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(437)..(437)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(437)..(437)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(445)..(445)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(446)..(446)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(445)..(446)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(449)..(449)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(449)..(449)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(452)..(452)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(452)..(452)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(460)..(460)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(460)..(460)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(471)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(473)..(473)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(473)..(473)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(485)..(485)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(486)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(495)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(496)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(516)..(516)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(517)..(517)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(484)..(517)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>28

His Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His

1               5                   10                  15

Leu Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn

            20                  25                  30

Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ile Pro Pro Ala Trp

        35                  40                  45

Lys Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65                  70                  75                  80

Thr Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly

                85                  90                  95

Ile Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp

            100                 105                 110

Gly Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn

        115                 120                 125

Gln Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp

    130                 135                 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145                 150                 155                 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Gln Lys Leu Ser Lys

                165                 170                 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

            180                 185                 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

        195                 200                 205

Asp His Pro Glu Val Ile Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr

    210                 215                 220

Val Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225                 230                 235                 240

Ile Lys Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln

                245                 250                 255

Thr Gly Lys Pro Leu Phe Thr Val Ala Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Ile

            260                 265                 270

Asn Lys Ile His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu

        275                 280                 285

Phe Asp Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly

    290                 295                 300

Gly Ala Phe Asp Met Arg Thr Ile Leu Thr Asn Ser Leu Met Lys Asp

305                 310                 315                 320

Gln Pro Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Glu Pro

                325                 330                 335

Gly Gln Ala Leu Gln Ser Phe Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala

            340                 345                 350

Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr

        355                 360                 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln His Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser

    370                 375                 380

Lys Ile Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr

385                 390                 395                 400

Gln His Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

                405                 410                 415

Gly Val Ser Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp

            420                 425                 430

Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly

        435                 440                 445

Lys Val Phe Tyr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile

    450                 455                 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ala Val Ser

465                 470                 475                 480

Val Trp Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile

                485                 490                 495

Thr Thr Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg

            500                 505                 510

Leu Val Ala Trp Pro

        515

 

<210>29

<211>515

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(4)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(17)..(17)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(18)..(18)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(18)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(21)..(21)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(21)..(22)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(24)..(24)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(24)..(24)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(27)..(27)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(27)..(28)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(31)..(32)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(31)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(36)..(36)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(36)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(50)..(50)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(50)..(50)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(52)..(52)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(52)..(52)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(59)..(59)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(59)..(59)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(84)..(84)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(84)..(86)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(89)..(89)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(89)..(89)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(91)..(91)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(91)..(92)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(94)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(94)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(104)..(104)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(105)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(108)..(108)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(108)..(108)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(112)..(112)

<223>/替换＝″Phe ″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(112)..(112)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(115)..(115)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(115)..(115)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(117)..(117)

<223>/替换＝″Gin″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(117)..(117)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(120)..(120)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(120)..(120)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(125)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(127)..(127)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(127)..(127)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(133)..(133)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(133)..(133)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(135)..(135)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(135)..(135)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(137)..(137)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(137)..(137)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(141)..(141)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(141)..(141)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(145)..(145)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(145)..(145)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(148)..(148)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(148)..(148)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(150)..(150)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(150)..(150)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(153)..(153)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(153)..(153)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(162)..(162)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(162)..(162)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(168)..(168)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Arg″

<220>

<221>变体

<222>(170)..(170)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(171)..(171)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(172)..(172)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(173)..(173)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(168)..(174)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(179)..(179)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(180)..(180)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(181)..(181)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(182)..(182)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(184)..(184)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(179)..(184)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(186)..(186)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(186)..(186)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(188)..(188)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(188)..(188)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(191)..(191)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(191)..(191)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(201)..(201)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(201)..(201)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(203)..(203)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>misc_feature

<222>(203)..(203)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(206)..(206)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(207)..(207)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(206)..(207)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(212)..(212)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(213)..(213)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(212)..(213)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(217)..(217)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(217)..(217)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(220)..(220)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(220)..(220)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(223)..(223)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(224)..(224)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(226)..(226)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(227)..(227)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(223)..(227)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(240)..(240)

<223>/替换＝″Pro″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(240)..(240)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(242)..(242)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(242)..(242)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(244)..(244)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(245)..(245)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(244)..(245)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(249)..(249)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(249)..(249)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(251)..(251)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(251)..(251)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(253)..(253)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(254)..(254)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(255)..(255)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(257)..(257)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(258)..(258)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(253)..(258)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(261)..(261)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(261)..(261)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(267)..(267)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(268)..(268)

<223>/替换＝″Asp″

<220>

<221>misc_feature

<222>(267)..(268)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(271)..(271)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(272)..(272)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(271)..(272)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(275)..(275)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(274)..(275)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(278)..(278)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(279)..(279)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Met″

<220>

<221>misc_feature

<222>(278)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(282)..(282)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(283)..(283)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(282)..(283)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(289)..(289)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(289)..(289)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(292)..(292)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(293)..(293)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(294)..(294)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(292)..(294)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(297)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(300)..(300)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(301)..(301)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(300)..(301)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(309)..(309)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(309)..(309)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(312)..(312)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(312)..(313)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

<220>

<221>变体

<222>(317)..(317)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(318)..(318)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(317)..(319)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(322)..(322)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(321)..(322)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(333)..(333)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(333)..(333)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(336)..(336)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(336)..(336)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(339)..(339)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(339)..(339)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(343)..(343)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(344)..(344)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(343)..(344)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(353)..(353)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(353)..(353)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(358)..(358)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(359)..(359)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(358)..(359)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(363)..(363)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(363)..(363)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(375)..(375)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(375)..(375)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(380)..(380)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(380)..(380)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(382)..(382)

<223>/替换＝″Asp″

<220>

<221>变体

<222>(383)..(383)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(382)..(383)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(386)..(386)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(386)..(386)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(389)..(389)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(389)..(389)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(392)..(392)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(393)..(393)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(392)..(393)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(403)..(403)

<223>/替换＝″Phe″

<220>

<221>misc_feature

<222>(403)..(403)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(406)..(406)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(406)..(406)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(416)..(416)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(416)..(416)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(421)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(426)..(426)

<223>/替换＝″Thr″

<220>

<221>misc_feature

<222>(426)..(426)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(430)..(430)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(430)..(430)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(444)..(444)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(444)..(444)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(447)..(447)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(448)..(448)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(447)..(448)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(450)..(450)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(450)..(450)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(456)..(456)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(457)..(457)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(458)..(458)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(456)..(458)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(464)..(464)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(464)..(464)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(472)..(472)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(472)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(482)..(482)

<223>/替换＝″Asn″

<220>

<221>变体

<222>(483)..(483)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(485)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(487)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(488)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(482)..(515)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>29

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ala Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Ile

                85                  90                  95

Asn Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Asp Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Phe His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Phe

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Phe Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Ile Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Ile Leu Thr Asn Ser Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Ser Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Ser Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

 

<210>30

<211>515

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(2)..(2)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(4)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(17)..(17)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(18)..(18)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(18)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(21)..(21)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(22)..(22)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(21)..(22)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(24)..(24)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(24)..(24)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(27)..(27)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>变体

<222>(28)..(28)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(27)..(28)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(31)..(31)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(32)..(32)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(31)..(32)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(35)..(35)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(36)..(36)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(35)..(36)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(50)..(50)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(50)..(50)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(52)..(52)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(52)..(52)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(59)..(59)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(59)..(59)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(84)..(84)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(85)..(85)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(86)..(86)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(84)..(86)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(89)..(89)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(89)..(89)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(91)..(91)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(92)..(92)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(91)..(92)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(94)..(94)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(95)..(95)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(94)..(95)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(104)..(104)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>变体

<222>(105)..(105)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(105)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(108)..(108)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(108)..(108)   <223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(112)..(112)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(112)..(112)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(115)..(115)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(115)..(115)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(117)..(117)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(117)..(117)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(120)..(120)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(120)..(120)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(125)..(125)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(125)..(125)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(127)..(127)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(127)..(127)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(133)..(133)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(133)..(133)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(135)..(135)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(135)..(135)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(137)..(137)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(137)..(137)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(141)..(141)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(141)..(141)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(148)..(148)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(148)..(148)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(150)..(150)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(150)..(150)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(153)..(153)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(153)..(153)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(162)..(162)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(162)..(162)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(168)..(168)

<223>/替换＝″Gln″

<220>

<221>变体

<222>(169)..(169)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(170)..(170)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(171)..(171)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(172)..(172)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(173)..(173)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(174)..(174)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(168)..(174)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(179)..(179)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(180)..(180)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(181)..(181)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(182)..(182)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(183)..(183)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(184)..(184)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(179)..(184)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(186)..(186)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(186)..(186)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(188)..(188)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(188)..(188)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(191)..(191)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(191)..(191)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(201)..(201)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(201)..(201)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(203)..(203)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(203)..(203)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(206)..(206)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(207)..(207)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(206)..(207)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(212)..(212)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(213)..(213)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(212)..(213)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(217)..(217)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(217)..(217)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(220)..(220)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(220)..(220)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(223)..(223)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(224)..(224)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(225)..(225)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(226)..(226)

<223>/替换＝″Leu″

 

<220>

<221>变体

<222>(227)..(227)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(223)..(227)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(240)..(240)

<223>/替换＝″Pro″

<220>

<221>misc_feature

<222>(240)..(240)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(242)..(242)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(242)..(242)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(244)..(244)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>变体

<222>(245)..(245)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(244)..(245)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(249)..(249)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(249)..(249)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(251)..(251)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(251)..(251)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(254)..(254)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(255)..(255)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(256)..(256)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(257)..(257)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(258)..(258)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(254)..(258)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(261)..(261)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(261)..(261)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(267)..(267)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>变体

<222>(268)..(268)

<223>/替换＝″Asp″

<220>

<221>misc_feature

<222>(267)..(268)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(271)..(271)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>变体

<222>(272)..(272)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(271)..(272)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(274)..(274)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(275)..(275)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(274)..(275)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(278)..(278)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(279)..(279)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(280)..(280)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(278)..(280)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(282)..(282)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>变体

<222>(283)..(283)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(282)..(283)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(289)..(289)

<223>/替换＝″Val″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(289)..(289)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(292)..(292)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(293)..(293)

<223>/替换＝″Tyr″

 

<220>

<221>变体

<222>(294)..(294)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(292)..(294)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(297)..(297)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(297)..(297)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(301)..(301)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(301)..(301)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(309)..(309)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(309)..(309)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(312)..(312)

<223>/替换＝″Arg″

 

<220>

<221>变体

<222>(313)..(313)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(312)..(313)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(317)..(317)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(318)..(318)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(319)..(319)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(317)..(319)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(321)..(321)

<223>/替换＝″Ile″

 

<220>

<221>变体

<222>(322)..(322)

<223>/替换＝″His″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(321)..(322)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(333)..(333)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(333)..(333)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(336)..(336)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(336)..(336)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(339)..(339)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(339)..(339)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(343)..(343)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>变体

<222>(344)..(344)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(343)..(344)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(353)..(353)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(353)..(353)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(358)..(358)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>变体

<222>(359)..(359)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(358)..(359)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(363)..(363)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(363)..(363)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(375)..(375)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(375)..(375)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(378)..(378)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(378)..(378)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(380)..(380)

<223>/替换＝″Lys″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(380)..(380)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(382)..(382)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>变体

<222>(383)..(383)

<223>/替换＝″Met″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(382)..(383)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(386)..(386)

<223>/替换＝″Glu″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(386)..(386)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(389)..(389)

<223>/替换＝″Asp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(389)..(389)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(392)..(392)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(393)..(393)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(392)..(393)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(403)..(403)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(403)..(403)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(406)..(406)

<223>/替换＝″Trp″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(406)..(406)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(416)..(416)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(416)..(416)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(418)..(418)

<223>/替换＝″Ser″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(418)..(418)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(421)..(421)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(421)..(421)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(426)..(426)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(426)..(426)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

<220>

<221>变体

<222>(430)..(430)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(430)..(430)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(442)..(442)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(442)..(442)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(447)..(447)

<223>/替换＝″Gln″

 

<220>

<221>变体

<222>(448)..(448)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(447)..(448)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(450)..(450)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(450)..(450)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(456)..(456)

<223>/替换＝″His″

<220>

<221>misc_feature

<222>(456)..(456)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(458)..(458)

<223>/替换＝″Ala″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(458)..(458)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(464)..(464)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(464)..(464)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(471)..(471)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>变体

<222>(472)..(472)

<223>/替换＝″Thr″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(471)..(472)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(482)..(482)

<223>/替换＝″Asn″

 

<220>

<221>变体

<222>(483)..(483)

<223>/替换＝″Gln″

<220>

<221>变体

<222>(484)..(484)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(485)..(486)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(487)..(487)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(488)..(488)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(495)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(482)..(515)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>30

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Leu Ala Asn Asp Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ala Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Ile

                85                  90                  95

Asn Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Asp Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Phe His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Phe

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Phe Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Ile Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser His Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Ile Leu Thr Asn Ser Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Asn Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Ser Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Ile Ile Ser Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ala Asp Ser Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

 

<210>31

<211>515

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<221>来源

<223>/注解＝″人工序列的描述：合成的共有序列″

 

<220>

<221>变体

<222>(180)..(180)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(181)..(181)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(180)..(181)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<220>

<221>变体

<222>(193)..(193)

<223>/替换＝″Phe″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(193)..(193)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(416)..(416)

<223>/替换＝″Gly″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(416)..(416)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先″

 

<220>

<221>变体

<222>(489)..(489)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>490)..(490)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>491)..(491)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>492)..(492)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(493)..(493)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>494)..(494)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>495)..(496)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>497)..(497)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(498)..(498)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(499)..(499)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(500)..(500)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(501)..(501)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(502)..(502)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(503)..(503)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(504)..(504)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(505)..(505)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(506)..(506)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(507)..(507)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(508)..(508)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(509)..(509)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(510)..(510)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(511)..(511)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(512)..(512)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(513)..(513)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(514)..(514)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>变体

<222>(515)..(515)

<223>/替换＝″″

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(489)..(515)

<223>/注解＝″在序列中给出的残基相对于该位置所注释的残基而言没有优先

 

<400>31

Ala Ala Pro Phe Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu

1               5                   10                  15

Pro Asp Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Ala Asn Glu Ala Asn Asn

            20                  25                  30

Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys

        35                  40                  45

Gly Thr Ser Arg Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Ala Gln Tyr Leu Gln Ala Ile Gln Ala Ala His Ala Ala Gly Met

                85                  90                  95

Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asp His Lys Gly Gly Ala Asp Gly

            100                 105                 110

Thr Glu Trp Val Asp Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asp Arg Asn Gln

        115                 120                 125

Glu Ile Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe

    130                 135                 140

Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His

145                 150                 155                 160

Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Ser Arg Ile Tyr

                165                 170                 175

Lys Phe Arg Gly Ile Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

            180                 185                 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Met Asp His

        195                 200                 205

Pro Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Lys Trp Tyr Val Asn

    210                 215                 220

Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225                 230                 235                 240

Phe Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Ser Tyr Val Arg Ser Gln Thr Gly

                245                 250                 255

Lys Pro Leu Phe Thr Val Gly Glu Tyr Trp Ser Tyr Asp Ile Asn Lys

            260                 265                 270

Leu His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Thr Met Ser Leu Phe Asp

        275                 280                 285

Ala Pro Leu His Asn Lys Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Ala

    290                 295                 300

Phe Asp Met Arg Thr Leu Met Thr Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro

305                 310                 315                 320

Thr Leu Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Glu Pro Gly Gln

                325                 330                 335

Ala Leu Gln Ser Trp Val Asp Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp

        355                 360                 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Gln Tyr Asn Ile Pro Ser Leu Lys Ser Lys Ile

    370                 375                 380

Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln His

385                 390                 395                 400

Asp Tyr Leu Asp His Ser Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Val

                405                 410                 415

Thr Glu Lys Pro Gly Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

            420                 425                 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Gln His Ala Gly Lys Val

        435                 440                 445

Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ser

    450                 455                 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465                 470                 475                 480

Val Pro Arg Lys Thr Thr Val Ser Thr Ile Ala Arg Pro Ile Thr Thr

                485                 490                 495

Arg Pro Trp Thr Gly Glu Phe Val Arg Trp Thr Glu Pro Arg Leu Val

            500                 505                 510

Ala Trp Pro

        515

Claims (49)

1.α-淀粉酶变体，包含与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列并在与参考α-淀粉酶第242位置相对应的氨基酸位置处具有替换，并且还包含以下一项或多项：

a)一个或多个在如下位置处的替换：在第349氨基酸位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸；

b)在与第97、319、349、358、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处的其他序列修饰；

c)在F178、R179、G180、I181、G182或K183位置或其成对位置处的一个或多个氨基酸的缺失；

d)在第178、179、180、181、182或183氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的其他序列修饰；

e)N193F或V416G或这两者的替换；

f)在第193、416或这两个位置处的其他序列修饰；

g)用丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸或亮氨酸残基替换在经修饰的α-淀粉酶变体的部分中存在的一个或多个脯氨酸残基；

h)用另一种天然存在的氨基酸残基替换在经修饰的α-淀粉酶变体的部分中存在的一个或多个脯氨酸残基；

i)用丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸残基替换在亲本AmyS样α-淀粉酶中存在的一个或多个半胱氨酸残基；

j)用另一种天然存在的氨基酸残基替换在亲本AmyS样α-淀粉酶中存在的一个或多个半胱氨酸残基；

k)在SEQ ID NO：7是用于编号的参考α-淀粉酶的情况下，以下任意突变：M15T，L、M15X、V128E、V128X、H133Y、H133X、N188S，T，P、N188X、M197T，L、M197X、A209V、A209X、M197T/W138F、M197T/138Y、M15T/H133Y/N188S、M15N128E/H133Y/N188S、E119C/S130C、D124C/R127C、H133Y/T149I、G475R、H133Y/S187D或H133Y/A209V；

l)在SEQ ID NO：7是参考α-淀粉酶的情况下，在M15、V128、A111、H133、W138、T149、M197、N188、A209、A210、H405、T412位置的一个或多个位置处的其他修饰；

m)在亲本AmyS样α-淀粉酶包含SEQ ID NO：7的情况下，当SEQID NO：2是参考淀粉酶时，位于任意的M8、M9、M96、M200、M206、M284、M307、M311、M316和M438位置处的一个或多个半胱氨酸残基(C363)或一个或多个甲硫氨酸残基的缺失或替换；

n)在SEQ ID NO：1或2是参考α-淀粉酶的情况下，与P17、D19、T21、N28、S51、G72、V74、A82、Q86、Q89、A93、G95、Q97、W115、D117、P123、S124、D125、N127、I130、G132、Q135、P145、G146、G148、S153、Y159、W166、S169、K171、R179、G180、I181、G182、K183、W187、P209、N224、S242、P245、G256、D269、N271、T278、N281、G302、A304、R308、T321、Q358、P378、S382、K383、T398、H405、T417、E418、P420、G421、P432、W437、G446、G454、S457、T459、T461、S464、G474或R483相对应的一个或多个氨基酸残基的修饰；或

n)a)Q97E、Q319E、Q358E、Q443E；b)Q97E、Q319R、Q358E、Q443R；c)Q97E、Q319R、Q358E；d)Q97E、Q319R、Q443E；e)Q97E、Q319R、Q443R；f)Q97E、Q358R；g)Q97E、Q443E；h)Q319R、Q358E、Q443E；或i)Q319R、Q358R、Q443E的成组替换。

2.权利要求1的α-淀粉酶变体，其是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242Tα-淀粉酶变体。

3.权利要求1的α-淀粉酶变体，其具有可检测的α-淀粉酶活性并且相对于亲本AmyS样α-淀粉酶在以下任意一个或多个特征上改变：(a)净电荷、(b)底物特异性、(c)底物切割、(d)底物结合、(e)热稳定性、(f)在一个或多个pH处的活性、(g)在一个或多个pH处的稳定性、(h)氧化条件下的稳定性、(i)Ca²⁺需求、(j)比活性、(k)催化速率、(l)催化效率、(m)在植酸盐存在下的活性、(n)在植酸盐存在下的热或pH稳定性、(o)在液化试验中影响峰粘度的能力、(p)在液化试验中影响终末粘度的能力、(q)在螯合剂存在下的活性、(r)在螯合剂存在下的热或pH稳定性、(s)退浆用途或清洁过程的用途、或(t)在蛋白质表达系统中的表达量。

4.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中亲本AmyS样α-淀粉酶包含任一SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

5.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中用于氨基酸残基编号的参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2。

6.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中该α-淀粉酶变体的氨基酸序列与亲本AmyS样α-淀粉酶的氨基酸序列至少98％同一。

7.分离的多核苷酸，包含编码以下序列的编码序列：

a)权利要求1的α-淀粉酶变体的氨基酸序列；

b)任一SEQ ID NO：3、4、16、22、23、24、25、26、27、28、29或30。

8.分离的多核苷酸，编码权利要求1-6任一项所述的α-淀粉酶变体。

9.载体，包含权利要求7或8的分离的多核苷酸。

10.分离的宿主细胞，包含权利要求7或8的分离的多核苷酸或者权利要求9的载体。

11.权利要求10的分离的宿主细胞，其是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、鼠灰链霉菌(S.murinus)；大肠杆菌(Escherichia coli)或假单胞菌属的物种(Pseudomonas spp.)。

12.组合物，包含：

a)权利要求1至6任一项所述的α-淀粉酶变体，和

b)至少一种额外的酶。

13.权利要求12的组合物，其中额外的酶是植酸酶。

14.权利要求12的组合物，其中α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体。

15.权利要求14的组合物，其中α-淀粉酶变体还在与参考α-淀粉酶第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。

16.权利要求12的组合物，其中α-淀粉酶变体包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸。

17.权利要求12的组合物，其中α-淀粉酶变体包含N193或V416或这二者的替换。

18.权利要求17的组合物，其中α-淀粉酶变体包含N193F或V416G或这二者的替换。

19.权利要求14的组合物，其中α-淀粉酶变体包含氨基酸179和180的缺失。

20.权利要求12的组合物，其中α-淀粉酶变体与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性并且相对于包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的参考α-淀粉酶中的编号而言包含第242位氨基酸替换。

21.权利要求12的组合物，其中亲本AmyS样α-淀粉酶是SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

22.权利要求13的组合物，其中α-淀粉酶变体和植酸酶以AAU∶FTU的比率是约1∶15至约15∶1的量存在。

23.权利要求13的组合物，其中α-淀粉酶变体和植酸酶以AAU∶FTU的比率是约1∶4至约3∶1的量存在。

24.权利要求13的组合物，其中植酸酶具有SEQ ID NO：31的序列。

25.处理淀粉浆液的方法，包括：

a)添加至少一种植酸酶和权利要求1至6任一项所述的至少一种α-淀粉酶变体至淀粉浆液；

其中在相同时间或大致相同时间或以任意顺序分别地添加植酸酶和α-淀粉酶变体；和

b)在允许植酸酶及α-淀粉酶变体活性的条件下温育淀粉浆液。

26.权利要求25的方法，其中α-淀粉酶变体与亲本AmyS样α-淀粉酶或参考α-淀粉酶相比较在以下一个或多个特征上改变：(a)净电荷、(b)底物特异性、(c)底物切割、(d)底物结合、(e)热稳定性、(f)在一个或多个pH处的活性、(g)在一个或多个pH处的稳定性、(h)氧化条件下的稳定性、(i)Ca²⁺需求、(j)比活性、(k)催化速率、(l)催化效率、(m)在植酸盐存在下的活性、(n)在植酸盐存在下的热或pH稳定性、(o)在液化试验中影响峰粘度的能力、或(p)在液化试验中影响终末粘度的能力。

27.权利要求25的方法，其中参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2。

28.权利要求25的方法，其中α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242T变体α-淀粉酶。

29.权利要求28的方法，其中α-淀粉酶变体还在与参考α-淀粉酶第97、179、180、193、319、349、358、416、428或443氨基酸位置相对应的一个或多个氨基酸位置处包含序列修饰。

30.权利要求28的方法，其中α-淀粉酶变体包含一个或多个在如下位置处的替换：在第349位置处的半胱氨酸、在第428位置处的半胱氨酸、在第97位置处的谷氨酸、在第97位置处的精氨酸、在第319位置处的谷氨酸、在第319位置处的精氨酸、在第358位置处的谷氨酸、在第358位置处的精氨酸、在第443位置处的谷氨酸或在第443位置处的精氨酸。

31.权利要求28的方法，其中α-淀粉酶变体包含N193或V416或这二者的替换。

32.权利要求31的方法，其中α-淀粉酶变体包含N193F或V416G或这二者的替换。

33.权利要求28的方法，其中α-淀粉酶变体包含氨基酸179和180的缺失。

34.权利要求25的方法，其中亲本AmyS样α-淀粉酶是SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

35.权利要求25的方法，其中植酸酶在α-淀粉酶变体之前添加。

36.权利要求35的方法，其中在添加植酸酶之后并且在添加α-淀粉酶变体之前预温育淀粉浆液。

37.权利要求25的方法，其中植酸酶的纳入相对于不包括将淀粉浆液与植酸酶接触的可比较方法而言导致α-淀粉酶变体的热稳定性提高。

38.权利要求25的方法，其中植酸酶和α-淀粉酶变体在添加至淀粉浆液之前存在于单一掺合物中。

39.权利要求25的方法，其中植酸酶具有权利要求31的氨基酸序列。

40.从包含磨碎谷物的含淀粉浆液产生可发酵底物的方法，该方法包括：

a)将含淀粉浆液与足以从这种含淀粉浆液产生可发酵底物的量的至少一种植酸酶和权利要求1至6任一项所述的至少一种α-淀粉酶变体接触；

其中在相同时间或大致相同时间或以任意顺序分别地启动与植酸酶和α-淀粉酶变体的接触；和

b)在允许植酸酶及α-淀粉酶变体活性的条件下温育含淀粉浆液一段允许可发酵底物产生的时间；其中与植酸酶的接触在α-淀粉酶变体之前启动时，含淀粉浆液在比该含淀粉浆液与α-淀粉酶变体接触之前的凝胶化温度低0-30℃的温度温育，此后升高温度高于凝胶化温度，持续时间为有效水解淀粉的时间。

41.权利要求40的方法，其中参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2，并且α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242Tα-淀粉酶变体。

42.处理含淀粉材料或淀粉的方法，包括步骤：将含淀粉材料或淀粉与包含权利要求1至6任一项所述的至少一种α-淀粉酶变体的组合物在足以允许α-淀粉酶变体的可检测活性的条件下接触，并且其中含淀粉材料或淀粉至少部分地被α-淀粉酶变体降解。

43.权利要求42的方法，其中参考α-淀粉酶是SEQ ID NO：1或2，并且亲本AmyS样α-淀粉酶包含任一SEQ ID NO：1、2、6、7、8、9、10、11、12、15或16。

44.权利要求42的方法，其中α-淀粉酶变体是S242A、S242D、S242E、S242F、S242G、S242H、S242L、S242M、S242N、S242Q或S242Tα-淀粉酶变体。

45.权利要求42的方法，还包括至少一种额外的酶，所述额外的酶是植酸酶、纤维素酶、蛋白酶、氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、几丁质酶、角质酶、环糊精葡聚糖转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤过氧化物酶、转化酶、异构酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、核酸酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、支链淀粉酶、异淀粉酶、角叉菜聚糖酶或两种或更多种前述酶的组合。

46.权利要求42至45任一项所述的方法，所述方法是用于淀粉降解、液化、发酵、醇生产、甜味料生产、可发酵底物的生产、清洁、洗涤、污渍去除或焙烘过程的一部分。

47.试剂盒，其包含在一个或多个包装物中以单位提供的：

i)根据权利要求1至6任一项所述的至少一种α-淀粉酶变体；和

ii)至少一种额外的酶。

48.权利要求47的试剂盒，还包含在涉及酶切割淀粉分子的有用方法中使用α-淀粉酶变体和至少一种额外的酶的说明书。

49.权利要求47的试剂盒，其中额外的酶是植酸酶。

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