BR112012005017B1 - Formulação farmacêutica estável e uso de uma formulação - Google Patents

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Abstract

formulação farmacêutica estável, formulações de anticorpo anti-cd20 e uso de uma formulação. a presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica estável, altamente concentrada de um anticorpo anti-cd20 farmaceuticamente ativo, como, por exemplo, rituximabe, ocrelizumabe ou humabe<cd20>, ou uma mistura de tais moléculas de anticorpo para injeção subcutânea. em particular, a presente invenção refere-se a formulações que compreendem, em adição a uma quantidade adequada do anticorpo anti-co20, uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase como uma formulação combinada ou para uso na forma de uma co-formulação. as ditas formulações compreendem, ainda, pelo menos um agente tamponante, como, por exemplo, um tampão de histidina, um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes (por exemplo, um sacarídeo, como por exemplo, diidrato de a,a- trealose ou sacarose, e opcionalmente metionina como um segundo estabilizante), um tensoativo não iônico e uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase. métodos para preparar tais formulações e seus usos são também fornecidos.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a formulações farmacêuticas estáveis, altamente concentradas de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou uma mistura de tais moléculas de anticorpo para injeção subcutânea. Tais formulações compreendem, em adição às altas quantidades de anticorpo anti-CD20 ou mistura do mesmo, um agente tamponante, um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais agentes estabilizantes, um tensoativo não-iônico e uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase. A invenção também se refere a um processo para a preparação da dita formulação e para o uso de tal formulação.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] O uso farmacêutico de anticorpos aumentou com o passar dos anos. Em muitos casos tais anticorpos são ou injetados ou introduzidos por meio da via intravenosa (IV). Infelizmente, a quantidade de anticorpo que pode ser administrada por meio da via intravenosa é limitada pelas propriedades fisioquímicas do anticorpo, em particular por sua solubilidade e estabilidade em uma formulação líquida adequada e pelo volume do fluido de infusão. Trajetórias de administração alternativas são injeção subcutânea ou intramuscular. Essas trajetórias de injeção exigem concentração de proteína elevada na solução final a ser injetada [Shire, S.J., Shahrokh, Z. et al, "Challenges in the development of high protein concentration formulations", J. Pharm. Sci. 2004; 93(6): 1.390 a 1.402; Roskos, L.K., Davis C.G. et al, "The clinical pharmacology of therapeutic antibodies", Drug Development Research 2004; 61(3): 108 a 120]. Para aumentar o volume, e assim a dose terapêutica, que pode ser seguramente e confortavelmente administrada de forma subcutânea foi proposta para uso de enzima(s) glicosaminoglicanase para aumentar o espaço intersticial no qual a formulação de anticorpo pode ser injetada [WO2006/091871].
[003] Exemplos de formulações estáveis de anticorpos farmaceuticamente ativos para uso terapêutico atualmente no mercado são como a seguir.
[004] RITUXAN®/MABTHERA® (Rituximabe) é um anticorpo quimérico que liga ao antígeno CD20 em células B. A formulação comercial é um concentrado líquido livre de preservativo, sem cor, claro, estéril para administração intravenosa (IV). Rituximabe é fornecido em uma concentração de 10 mg/mL (10 mL) ou em 100 mg ou 500 mg (50 mL) de receptáculos de uso único. O produto é formulado em 9 mg/mL de cloreto de sódio, 7,35 mg/mL de citrato de sódio desidratado, 0,7mg/mL de polissorbato 80, e água para injeção. O pH é ajustado em 6,5. Uma formulação líquida alternativa para Rituximabe adequado para administração IV é revelada na Patente N° U.S. 6.991.790.
[005] HERCEPTINTM (Trastuzumab) é um anticorpo monoclonal direcionado contra o receptor HER2 (anti-HER2) que é atualmente comercializado na Europa na forma de um pó liofilizado de 150 mg (contendo o anticorpo, α,α-trealose diidratada, L-histidina e Cloridrato de L-histidina e polissorbato 20) que deve ser reconstituído para infusões com água para injeção para render dose de injeção de aproximadamente 21 mg/mL. Nos EUA e muitos outros países, um receptáculo de dosagem múltipla contendo 440 mg de Trastuzumab é comercializado.
[006] AVASTINTM (Bevacizumab) é um anticorpo monoclonal direcionado contra o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) que é atualmente comercializado na Europa como uma formulação líquida em dois tipos de receptáculos: a) 100 mg de Bevacizumab em 4 mL e b) 400 mg de Bevacizumab em 16 mL, respectivamente, proporcionando uma concentração final de 25 mg/mL em água para injeção contendo os seguintes excipientes: trealose diidratada, fosfato de sódio e polissorbato 20.
[007] Embora as formulações de anticorpo acima tenham sido reveladas adequadas para uso em administração intravenosa, existe um desejo de proporcionar formulações farmacêuticas estáveis, altamente concentradas de anticorpos terapeuticamente ativos para injeção subcutânea. A vantagem das injeções subcutâneas é que ela permite que um profissional médico execute a mesma em uma intervenção bastante curta com o paciente. Além disso, o paciente pode ser treinado para executar a injeção subcutânea sozinho. Normalmente, injeções por meio da via subcutânea são limitadas a aproximadamente 2 mL. Para pacientes que exigem doses múltiplas, diversas formulações de dose unitária podem ser injetadas em múltiplos locais da superfície corporal.
[008] Os dois produtos de anticorpo a seguir para administração subcutânea estão prontos no mercado.
[009] HUMIRATM (Adalimumab) é um anticorpo monoclonal direcionado contra o fator de necrose tumoral alfa (TNF alfa) que é atualmente comercializado na Europa na forma de uma dose de 40 mg em volume de injeção de 0,8 mL para aplicação subcutânea (concentração: 50 mg de anticorpo/mL de volume de injeção).
[010] XOLAIRTM (Omalizumab) um anticorpo monoclonal direcionado contra imunoglobulina E (anti-IgE) que é atualmente comercializado na forma de um pó liofilizado de 150 mg (contendo o anticorpo, sacarose, histidina e cloridrato de histidina monoidratado e polissorbato 20) que deve ser reconstituído com água para injeção subcutânea para render uma dose de injeção 125 mg/mL.
[011] Nenhuma formulação adequada de anticorpo anti-CD20 farmacêutico estável altamente concentrado para a administração subcutânea está atualmente disponível no mercado. Existe então um desejo de proporcionar tais formulações farmacêuticas estáveis, altamente concentradas de anticorpos terapeuticamente ativos para injeção subcutânea.
[012] A injeção de fármacos parenterais na hipoderme é geralmente limitada a volumes de menos do que 2 mL devido a essa resistência viscoelástica à condução hidráulica no tecido subcutâneo (SC) e contra-pressão gerada sob injeção [Aukland K. e Reed R., "Intersticial- Lymphatic Mechanisms of the control of Extracellular Fluid Volume", Physiology Reviews", 1993; 73:1 a 78] bem como devido às percepções de dor.
[013] A preparação de formulações de proteína de concentração elevada é muito desafiante e existe uma necessidade de adaptar cada formulação às proteínas particulares usadas porque cada proteína tem a comportamento de agregação diferente. Agregados são suspeitos de causar imunogenicidade de proteínas terapêuticas em pelo menos alguns dos casos. Reação imunogênica contra proteína ou agregados de anticorpo pode levar a anticorpos neutralizantes que podem render a proteína terapêutica ou anticorpo ineficaz. Parece que a imunogenicidade de proteína agregada é mais problemática em conexão com injeções subcutâneas, visto que a administração repetida aumentar o risco de uma resposta imune.
[014] Embora anticorpos tenham uma estrutura geral muito similar, tais anticorpos diferem na composição de aminoácido (em particular, nas regiões CDR responsáveis pela ligação ao antígeno) e o padrão de glicosilação. Além disso, podem existir adicionalmente modificações pós- translacionais tais como alteração e variantes de glicosilação.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[015] A presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica estável, altamente concentrada de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou uma mistura de tais moléculas de anticorpo, preferencialmente, para injeção subcutânea.
[016] Mais particularmente, z formulação farmacêutica estável, altamente concentrada de uma formulação de anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo da presente invenção compreende: - cerca de 20 a 350 mg/mL de anticorpo anti-CD20; - cerca de 1 a 100 mM de um agente tamponante que proporciona um pH de 5,5 ± 2,0; - cerca de 1 a 500 mM de um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes, na qual a metionina é opcionalmente usada como um estabilizante secundário, preferencialmente, em uma concentração de 5 a 25 mM; - 0,01 a 0,1% de um tensoativo não-iônico; e - Preferencialmente, uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[017] O termo "anticorpo" neste documento é usado no sentido amplo e cobre especificamente anticorpos de comprimento total, anticorpos geneticamente projetados como anticorpos monoclonais, ou anticorpos recombinantes, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) formados de pelo menos dois anticorpos de comprimento total, anticorpo quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos completamente humanos, e bem como fragmentos de tais anticorpos enquanto eles exibem a atividade biológica desejada.
[018] O termo "anticorpo monoclonal" como usada neste documento se refere a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos e/ou ligam o mesmo epítopo, exceto para variantes possíveis que podem aparecer durante produção do anticorpo monoclonal, tais variantes geralmente estão presentes em quantidades menores. Em contraste às preparações de anticorpo policlonal que tipicamente incluem anticorpos diferentes direcionados contra determinantes diferentes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. Em adição a sua especificidade, os anticorpos monoclonais são vantajosos visto que eles são não contaminados por outras imunoglobulinas. O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como está sendo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogênea, e não deve ser construído como exigência de produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente invenção podem ser feitos pelo primeiro método de hibridoma descrito por Kohler et al, Nature, 256:495 (1975), ou pode ser feito por métodos de DNA recombinante (consulte, por exemplo, Patente N° U.S. 4.816.567). Os "anticorpos monoclonais" podem também ser isolados das bibliotecas de anticorpos de fagos usando as técnicas descritas em Clarkson et al, Nature, 352:624 a 628 (1991) e Marks et al, J. Mol. Biol, 222:581 a 597 (1991). Os termos "anticorpo monoclonal" ou "composição de anticorpo monoclonal" como usado neste documento se refere a uma preparação de moléculas de anticorpo de uma única composição de aminoácido. Consequentemente, o termo "anticorpo monoclonal humano" se refere a anticorpos que exibem uma única especificidade de ligação que tem regiões constantes de variáveis derivadas de sequências de imunoglobulina germinativa humana. Em uma realização, os anticorpos monoclonais humanos são produzidos por uma hibridoma que inclui uma célula B obtida de um animal transgênico não humano, por exemplo, um rato transgênico, que tem um genoma que compreende um transgene de cadeia pesada humana e um transgene de cadeia humana leve fundida em uma célula imortalizada. O termo "anticorpos monoclonais" neste documento inclui especificamente os chamados anticorpos quiméricos em que uma porção da cadeia leve e/ou pesada é idêntica a ou homóloga a sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencentes a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto que o resíduo de cadeia(s) é idêntico ou homólogo a sequências correspondentes em anticorpos derivados de outras espécies ou pertencentes a outras classes ou subclasses de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, contanto que eles exibam a atividade biológica desejada (Patente N° U.S. 4.816.567; e Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851 a 6855 (1984)). Anticorpos quiméricos de interesse neste documento incluem anticorpos "primatizados" que compreendem sequência de ligação de antígeno de domínio variável derivadas de um primata não humano (por exemplo, Old World Monkey, Ape etc) e sequências de região constante humana.
[019] "Fragmentos de anticorpo" compreendem uma porção de um anticorpo de comprimento completo, geralmente, pelo menos a porção de ligação de antígeno ou a região variável dos mesmos. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem Fab, Fab', F(ab')2, e fragmentos Fv; diacorpos, moléculas de anticorpo de cadeia única, imunotoxinas, e anticorpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticorpo. Além disso, fragmentos de anticorpo compreendem polipeptídeos de cadeia única que têm as características de uma cadeia VH, ou seja, sendo capaz de se juntar com uma cadeia VL que liga ao antígeno CD20. "Fragmentos de anticorpo" também compreendem tais fragmentos que por si só, não são capazes de proporcionar funções efetoras (ADCC/CDC), mas proporcionam essa função em uma maneira de acordo com a invenção após ser combinada com domínio(s) constante de anticorpo apropriado.
[020] Um "anticorpo de comprimento completo" é um que compreende uma região variável de ligação de antígeno bem como um domínio constante de cadeia leve (CL) e domínios constantes de cadeia pesada, CH1, CH2 e CH3. Os domínios constantes podem ser domínios constantes de sequência nativa (por exemplo, domínios constantes de sequência nativa humana) ou variantes de sequência de aminoácido dos mesmos. Preferencialmente, o anticorpo de comprimento completo tem uma ou mais funções efetoras.
[021] Um anticorpo de "variante de sequência de aminoácido"neste documento é um anticorpo com uma sequência de aminoácido que difere de um anticorpo de espécie principal. Geralmente, variantes de sequência de aminoácido processarão pelo menos cerca de 70% de homologia com o anticorpo de espécie principal, e preferencialmente, eles serão pelo menos cerca de 80%, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 90% homólogos com o anticorpo de espécie principal. Os variantes de sequência de aminoácido possuem substituições, deleções, e/ou adições em determinadas posições em ou junto à sequência de aminoácido do anticorpo de espécie principal. Exemplos de variantes de sequência de aminoácido neste documento incluem variante de ácido (por exemplo, variante de anticorpo desamidado), variante básica, o anticorpo com uma extensão líder de terminal amino (por exemplo, VHS-) em uma ou duas cadeias leves do mesmo, anticorpo com um resíduo de lisina de terminal C em uma ou duas cadeias pesadas do mesmo, etc, e incluem combinações de variações nas sequências de aminoácido de cadeias leves e/ou pesadas. A variante de anticorpo de interesse particular neste documento é o anticorpo que compreende uma extensão líder de terminal amino em uma ou duas cadeias leves do mesmo, opcionalmente ainda compreende outra sequência de aminoácido e/ou diferenças de glicosilação em relação ao anticorpo de espécie principal.
[022] Um anticorpo de "variante de glicosilação"neste documento é um anticorpo com uma ou mais porções de carboidrato fixadas ao mesmo que difere de uma ou mais porções de carboidrato fixadas a um anticorpo de espécie principal. Exemplos de variantes de glicosilação neste documento incluem anticorpo com uma estrutura de oligossacárideo G1 e G2, ao invés de estrutura de oligossacarídeo G0, fixada a uma região Fc da mesma, anticorpo com uma ou duas porções de carboidrato fixadas a uma ou duas cadeias leves da mesma, anticorpo com nenhum carboidrato fixado a uma ou duas cadeias pesadas do anticorpo, etc, e combinações de alterações de glicosilação. Além disso, o termo "variante de glicosilação"inclui também anticorpos submetido à glicoengenharia tais como aqueles descritos em WO 1 331 266 e USP 7517670.
[023] "Funções efetoras" de anticorpo se referem a tais atividades biológicas atribuíveis à região Fc (uma região Fc de sequência nativa ou região Fc de variante de sequência de aminoácido) de um anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem ligação C1q; citotoxicidade dependente complementar (CDC); Ligação de receptor Fc; citotoxidade de célula mediada dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; ajuste baixo de receptores de superfície de célula (por exemplo, receptor de célula B; BCR), etc.
[024] Dependendo da sequência de aminoácido do domínio constante de suas cadeias pesadas, anticorpos de comprimento total podem ser assinalados a "classes" diferentes. Existem cinco classes maiores de anticorpos de comprimento total: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, e diversas dessas podem ser ainda divididas em "subclasses"(isótipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, e IgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de anticorpos são chamados de α [alfa], δ [delta], ε [epsílon], Y [gama], e μ [mi], respectivamente. As estruturas de subunidade e configurações de três dimensões de classes diferentes de imunoglobulinas são bem conhecidas.
[025] Neste documento, "atividade biológica" de um anticorpo monoclonal se refere à habilidade do anticorpo ligar um antígeno e resultar em uma resposta biológica moderada que pode ser medida in vitro ou in vivo. Tal atividade pode ser antagônica (por exemplo, onde o anticorpo é um anticorpo CD20) ou agonístico.
[026] O termo "anticorpo humanizado" se refere a anticorpos em que a armação ou "regiões determinantes de complementaridade" (CDR) foram modificadas para compreender a CDR de uma imunoglobulina de especificidade diferente como comparado à imunoglobulina parental. Em uma realização preferida, uma CDR murina é montada na região de armação de um anticorpo humano para preparar o "anticorpo humanizado." Particularmente, CDRs preferidas correspondem àquelas que representam sequências que reconhecem os antígenos notados abaixo para anticorpos bifuncionais e quiméricos. Para a maior parte, anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) em que resíduos de uma região hipervariável do receptor são substituídos por resíduos de uma região hipervariável de uma espécie não humana (anticorpo doador) tais como camundongo, rato, coelho ou primata não humano que tem a especificidade, afinidade, e capacidade desejada. Em alguns casos, resíduos de região de armação (FR) da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Além disso, anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Essas modificações são feitas para adicionalmente refinar o desempenho de anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado irá compreender substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todos os laços hipervariáveis correspondem àqueles da imunoglobulina não humana e todos ou substancialmente todos os FRs são aqueles de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo opcionalmente humanizado também irá compreender a pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana (consulte, por exemplo, Riechmann, L., et al, Nature 332 (1988) 323 a 327; e Neuberger, M.S., et al, Nature 314 (1985) 268 a 270).
[027] O termo "anticorpo quimérico"se refere a um anticorpo monoclonal que compreende uma região variável, ou seja, região de ligação, de uma fonte ou espécie e pelo menos uma porção de uma região constante derivada de uma espécie ou fonte diferente, normalmente preparada por técnicas de DNA recombinante. Anticorpos quiméricos que compreendem uma região variável murina e uma região constante humana são especialmente preferidos. Tais anticorpos quiméricos humanos/murinos são o produto de genes de imunoglobulina expressos que compreendem segmentos de DNA que codificam regiões variáveis de imunoglobulina murina e segmentos de DNA que codificam regiões constantes de imunoglobulina humana. Outras formas de "anticorpos quiméricos"abrangidos pela presente invenção são aqueles em que a classe ou subclasse foi modificada ou alterada a partir do anticorpo original. Tais anticorpos “quiméricos” são também referidos como "anticorpos de classe trocada". Métodos para produzir anticorpos quiméricos envolvem DNA recombinante convencional e técnicas de transfecção de gene agora bem conhecidas na técnica (consulte, por exemplo, Morrison, S.L., et al, Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6.851 a 6.855; U.S. 5.202.238 e U.S. 5.204.244).
[028] O termo "anticorpo humano", como usado neste documento, destina-se a incluir anticorpos que têm regiões constantes de variáveis derivadas de sequências de imunoglobulina germinativa humana. Anticorpos humanos são bem conhecidos no estado da técnica (van Dijk, M.A., e van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368 a 374). Com base em tal tecnologia, anticorpos humanos contra uma grande great variedade de alvos podem ser produzidos. Exemplos de anticorpos humanos são, por exemplo, descritos em Kellermann, S. A., et al, Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593 a 597.
[029] O termo "anticorpo humano recombinante", como usado neste documento, destina-se a incluir todos os anticorpos humanos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meio recombinante, tais como anticorpos isolados de uma célula hospedeira tais como uma célula NS0 ou CHO ou de um animal (por exemplo, um rato) que é transgênico para genes de imunoglobulina humana ou anticorpos expressos usando um vetor de expressão recombinante transfectado em uma célula hospedeira. Tais anticorpos humanos recombinantes têm regiões constantes de variáveis derivadas de sequências de imunoglobulina germinativa humana em uma forma reorganizada. Os anticorpos humanos recombinantes de acordo com a invenção foram submetidos à hipermutação somática in vivo. Então, as sequências de aminoácido das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, enquanto derivadas e relacionadas a sequências VH e VL germinativas humanas, podem não existir naturalmente no repertório germinativo de anticorpo humano in vivo.
[030] Como usado neste documento, "ligação de forma específica"ou "ligar especificamente a" se refere a uma ligação de anticorpo de forma específica ao antígeno CD20. Preferencialmente, a afinidade de ligação é de valor de Kd de 10-9 mol/l ou menor (por exemplo, 10-10 mol/l), preferencialmente, com um valor de Kd de 10-10 mol/l ou menor (por exemplo, 10-12 mol/l). A afinidade de ligação é determinada com um ensaio de ligação padrão, tal como técnica de ressonância de plasma de superfície (BIACORE®).
[031] O termo "molécula de ácido nucleico", como usado neste documento, destina-se a incluir Moléculas de DNA e Moléculas de RNA. Uma molécula de ácido nucleico pode ser de filamento único ou de filamento duplo, mas preferencialmente é de DNA de filamento duplo.
[032] Os "domínios constantes"não são envolvidos diretamente em ligar o anticorpo a um antígeno, mas são envolvidos nas funções efetoras (ADCC, ligação de complemento, e CDC).
[033] A "região variável" (região variável de uma cadeia leve (VL), região variável de uma cadeia pesada (VH)) como usado neste documento, denota cada uma do par de cadeias pesadas e leves que estão envolvidas diretamente em ligar o anticorpo ao antígeno. Os domínios de cadeias pesadas e leves de humano variáveis têm a mesma estrutura geral e cada domínio compreende quatro regiões de armação (FR) cujas sequências são amplamente conservadas, conectadas por três "regiões hipervariáveis"(ou regiões determinantes de complementaridade, CDRs). As regiões de armação adotam uma conformação de folha β e as CDRs podem formar laços que conectam a estrutura de folha-b. As CDRs em cada cadeia são contidas em sua estrutura de três dimensões pelas regiões de armação e formam junto com as CDRs a partir das outras cadeiras, o local de ligação de antígeno. As regiões CDR3 de cadeia leve e pesada de anticorpo representam um papel particularmente importante na especificidade/afinidade de ligação dos anticorpos de acordo com a invenção e então proporcionam um objetivo adicional da invenção.
[034] Os termos "região hipervariável"ou "porção de ligação de antígeno de um anticorpo" quando usados neste documento, se referem aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis por ligação de antígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácido das "regiões determinantes de complementaridade" ou "CDRs". "Armação"ou regiões “FR” são aquelas regiões de domínio variável diferentes dos resíduos de região hipervariável como definido neste documento. Então, as cadeias pesadas e leves de um anticorpo compreendem de término de C- a N- dos domínios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, e FR4. Especialmente, CDR3 da cadeia pesada é a região que mais contribui para ligação de antígeno. Regiões CDR e FR são determinadas de acordo com uma definição padrão de Kabat, et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Edição. Public Health Service, National Institutes of Health, Betesda, MD. (1991) e/ou aqueles resíduos de um "laço hipervariável".
[035] Os termos "CD20" e "antígeno CD20"são usados alternadamente neste documento, e incluem quaisquer variantes, isoformas e espécies homólogas de CD20 humano que são naturalmente expressos por células ou são expressos em células transfectadas com o gene CD20. Ligação de um anticorpo da invenção ao antígeno CD20 media o extermínio de células que expressam CD20 (por exemplo, uma célula de tumor) por inativar CD20. O extermínio das células que expressam CD20 pode ocorrer por um ou mais dos seguintes mecanismos: citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), citotoxicidade dependente de complemento (CDC), induzir morte de célula e/ou apoptose, agregação homotípica, etc.
[036] Sinônimos de CD20, como reconhecido na técnica, incluem antígeno CD20 de linfócitos B, antígeno B1 de superfície de linfócito B, Leu- 16 e Bp35.
[037] O termo "anticorpo anti-CD20" de acordo com a invenção, é um anticorpo que liga especificamente um antígeno CD20. Dependendo das propriedades de ligação e atividades biológicas de anticorpos anti-CD20 para o antígeno CD20, dois tipos de anticorpos anti- CD20 (anticorpos anti-CD20 de tipo I e tipo II) podem ser distinguidos de acordo com Cragg, M.S., et al , Blood 103 (2004) 2.738 a 2.743; e Cragg, M.S., et al Blood 101 (2003) 1 .045 a 1.051, consulte a Tabela 1. TABELA 1: PROPRIEDADES DE ANTICORPOS ANTI-CD20 DE TIPO I E TIPO II
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[038] Uma propriedade essencial anticorpo anti-CD20 de tipo I e tipo II é seu modo de ligação. Assim, o anticorpo anti-CD20 de tipo I e tipo II pode ser classificado pela razão das capacidades de ligar a CD20 em células Raji (ATCC-No. CCL-86) do dito anticorpo anti-CD20 comparado a Rituximabe.
[039] Como usado neste documento, o "anticorpo anti-CD20" pode ser ou um anticorpo de tipo I ou tipo II. Preferencialmente, ele é um anticorpo de tipo I, o mais preferido é Rituximabe.
[040] Os anticorpos anti-CD20 de tipo I têm uma razão das capacidades de ligar a CD20 em células Raji (ATCC No. CCL-86) do dito anticorpo anti-CD20 comparado a Rituximabe de 0,8 a 1,2, preferencialmente de 0,9 a 1,1. Exemplos de tais anticorpos anti-CD20 de tipo I incluem, por exemplo, Rituximabe, em EP2000149B1 (Anderson et. al, consulte, por exemplo, as figuras 4 e 5), 1F5 IgG2a (ECACC, hibridoma; Press et al, Blood 69/2:584 a 591 (1987)), HI47 IgG3 (ECACC, hibridoma), IgG1 2C6 (como revelado em WO2005/103081), 2F2 IgG1 ou ofatumumab (como revelado e WO 2004/035607 e WO2005/103081) e 2H7 IgG1 (como revelado em WO 2004/056312) e WO 2006/084264 (por exemplo, as variantes reveladas nas tabelas 1 e 2). Preferencialmente, o dito anticorpo anti-CD20 de tipo I é um anticorpo monoclonal que liga ao mesmo epítopo como Rituximabe.
[041] Os anticorpos anti-CD20 de tipo II têm uma razão das capacidades de ligar a CD20 em células Raji (ATCC No. CCL-86) do dito anticorpo anti-CD20 comparado a Rituximabe de 0,3 a 0,6, preferencialmente de 0,35 a 0,55, mais preferencialmente 0,4 a 0,5. Exemplos de tais anticorpos anti-CD20 de tipo II incluem, por exemplo, tositumomab (B1 IgG2a), anticorpo IgG1 de B-Ly1 humanizados (um anticorpo IgG1 humanizado quimérico como revelado em WO2005/044859), IgG1 11B8 (como revelado em WO 2004/035607), e AT80 IgG1 . Preferencialmente, o dito anticorpo anti-CD20 de tipo II é um anticorpo monoclonal que liga ao mesmo epítopo como anticorpo B-Ly1 humanizado (como revelado em WO2005/044859).
[042] A "razão das capacidades de ligação a CD20 em células Raji (ATCC-No. CCL-86) de anticorpos anti-CD20 comparada a Rituximabe"é determinada por medição de imunofluorescência direta (as intensidades médias fluorescentes (MFI) é medida) usando o dito anticorpo anti-CD20 conjugado com Cy5 e Rituximabe conjugado com Cy5 em um FACSArray (Becton Dickinson) com células Raji (ATCC-No. CCL-86), e calculados como a seguir: Razão das capacidades de ligar a CD20 em células Raji (ATCC- No. CCL-86) =
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[043] MFI é a intensidade média fluorescente. A "razão de identificação-Cy5"como usado neste documento, significa número de moléculas de identificação Cy-5 por anticorpo de molécula.
[044] Tipicamente, o dito anticorpo anti-CD20 de tipo I tem uma razão das capacidades de ligação a CD20 em células Raji (ATCC-No. CCL-86) do dito primeiro anticorpo anti-CD20 comparado a Rituximabe de 0,8 a 1,2, preferencialmente 0,9 a 1,1.
[045] Tipicamente, o dito anticorpo anti-CD20 de tipo II tem uma razão das capacidades de ligação a CD20 em células Raji (ATCC-No. CCL-86) do dito segundo anticorpo anti-CD20 comparado a Rituximabe de 0,3 a 0,6, preferencialmente 0,35 a 0,55, mais preferencialmente 0,4 a 0,5.
[046] Em uma realização preferida, o dito anticorpo anti-CD20 de tipo II, preferencialmente um anticorpo B-Ly1 humanizado, aumentou a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).
[047] Por "anticorpo que tem citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) aumentada" significa um anticorpo, como o termo é definido neste documento, que tem ADCC aumentado como determinado por qualquer método adequado conhecido a elementos versados na técnica. Um ensaio ADCC in vitro aceito é como a seguir: 1) o ensaio usa células alvo que são conhecidas para expressar o antígeno alvo reconhecido pela região de ligação de antígeno do anticorpo; 2) o ensaio usa células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs), isoladas de sangue de um doador saudável escolhido ao acaso, como células efetoras; 3) o ensaio é executado de acordo com o seguinte protocolo: i) as PBMCs são isoladas usando procedimentos de centrifugação de densidade padrão e são suspensas em 5 X 106células/mL em meio de cultura celular RPMI; ii) as células alvo crescem por métodos de cultura de tecido padrão, ceifadas a partir da fase de crescimento exponencial com uma viabilidade maior do que 90%, lavada em meio de cultura celular RPMI, identificada com 100 microcuries de 51CI lavada duas vezes com meio de cultura celular, e ressuspensas em meio de cultura celular em uma densidade de 105células/mL; iii) 100 microlitros da suspensão de célula alvo final acima são transferidos a cada cavidade de uma placa de microtitulação com 96 cavidades; iv) o anticorpo é seriamente diluído a partir de 4.000 ng/mL a 0,04 ng/mL em meio de cultura celular e 50 microlitros das soluções de anticorpo resultantes são adicionados às células alvo nas placas de microtitulação de 96 cavidades, testando em várias concentrações de anticorpo triplicadas que cobre toda a faixa de concentração acima; v) para os controles de liberação máxima (MR), 3 cavidades adicionais na paca contendo as células alvo identificadas, recebem 50 microlitros de uma solução aquosa de 2% (VN) de detergente não iônico (Nonidet, Sigma, St. Louis), ao invés da solução de anticorpo (ponto iv acima); vi) para os controles de liberação espontânea (SR), 3 cavidades adicionais na paca contendo as células alvo identificadas, recebem 50 microlitros de meio de cultura celular RPMI ao invés da solução de anticorpo (ponto iv acima); vii) a placa de microtitulação com 96 cavidades é então centrifugada em 50 x g por 1 minuto e incubada por 1 hora em 4°C; viii) 50 microlitros da suspensão de PBMC (ponto i acima) são adicionados a cada cavidade para render um efetor para razão de célula alvo de 25:1 e as placas são instaladas em um incubador sob atmosfera de CO2 de 5% em 37°C por 4 horas; ix) o sobrenadante de célula livre de cada cavidade é ceifado e a radioatividade experimentalmente liberada (ER) é quantificada usando um contador gama; x) a porcentagem de lise específica é calculada para cada concentração de anticorpo de acordo com a fórmula (ER-MR)/(MR-SR) x 100, em que ER é a radioatividade média quantificada (consulte, o ponto ix acima) para tal concentração de anticorpo, MR é a radioatividade média quantificada (consulte o ponto ix acima) para os Controles MR (consulte o ponto V acima), e SR é a radioatividade média quantificada (consulte o ponto ix acima) para os controles SR (consulte o ponto vi acima); 4) "ADCC aumentada"é definida como ou um aumentar na porcentagem máxima de lise específica observada na faixa de concentração de anticorpo testada acima, e/ou uma redução na concentração de anticorpo exigida para alcançar uma metade da porcentagem máxima de lise específica observada na faixa de concentração de anticorpo testada acima. O aumento em ADCC relativo a ADCC, medido com o ensaio acima, mediado pelo mesmo anticorpo, produzido pelo mesmo tipo de célula hospedeira, usando a mesma produção padrão, purificação, formulação e métodos de armazenamento, que são conhecidos a elementos versados na técnica, mas que não foram produzidos por células hospedeiras projetadas para superexpressar GnTIII.
[048] A dita "ADCC aumentada" pode ser obtida por submeter à glicoengenharia dos ditos anticorpos, que significa a elevação dita natural, funções efetoras de células mediadas de anticorpos monoclonais por projetar seu componente de oligossacarídeo como descrito em Umana, P. et al, Nature Biotechnol. 17:176 a 180 (1999) e Patente de N° U.S. 6.602.684.
[049] O termo "citotoxicidade dependente de complemento (CDC)" se refere a lise de células alvo de tumor humano pelo anticorpo de acordo com a invenção na presença de complemente. A CDC é medida preferencialmente pelo tratamento de uma preparação de CD20 que expressa células com um anticorpo anti-CD20 de acordo com a invenção na presença do complemente. A CDC é encontrada se o anticorpo induzir em uma concentração de 100 nM, a lise (morte de célula) de 20% ou mais das células de tumor após 4 horas. O ensaio é executado preferencialmente com células de tumor identificadas 51Cr ou Eu e medidas de 51Cr ou Eu liberada. Controles incluem a incubação das células de tumor alvo com complemente, mas sem o anticorpo.
[050] Tipicamente, anticorpos anti-CD20 de tipo I e tipo II do isótipo IgG1 mostram propriedades de CDC características. Anticorpos anti- CD20 de tipo I têm uma CDC aumentada (se isótipo IgG1) e anticorpos anti- CD20 de tipo II têm uma CDC diminuída (se isótipo IgG1) comparados uns aos outros. Preferencialmente, tanto anticorpos anti-CD20 de tipo I quanto de tipo II são anticorpos de isótipo IgG1.
[051] O anticorpo "Rituximabe"é um domínio constante murino de gama 1 humano quimérico geneticamente projetado contendo anticorpo monoclonal direcionado contra o antígeno humano CD20. Esse anticorpo quimérico contém domínios constantes de gama 1 humano e é identificado pelo nome de "C2B8" em EP2000149B1 (Anderson et. al, consulte, por exemplo, as figuras 4 e 5). Rituximabe é aprovado para tratar pacientes com reincidente ou refração de baixo grau ou folicular, CD20 positivo, linfoma não Hodgkin de célula B. Mecanismo in vitro de estudos de ação foram mostrados de forma que Rituximabe exiba citotoxicidade dependente de complemento humano (CDC) (Reff et. al, Blood 83(2): 435 a 445 (1994)). Adicionalmente, isso exibe atividade significante em ensaios que medem citotoxidade celular dependente de anticorpo (ADCC).
[052] O termo "anticorpo B-Ly1 humanizado" se refere a anticorpo B-Ly1 humanizado como revelado em WO2005/044859, que foi obtido do anticorpo anti-CD20 B-Ly1 monoclonal murino (região variável da cadeia pesada murina (VH): SEQ ID NO: 1; região variável da cadeia leve murina (VL): SEQ ID NO: 2; consulte, Poppema, S. e Visser, L., Biotest Bulletin 3: 131 a 139 (1987)) por quimerização com um domínio constante humano de IgG1 e seguinte humanização (consulte, WO2005/044859). Esses "anticorpos B-Ly1 humanizados"são revelados em detalhes em WO2005/ 044859.
[053] Preferencialmente o "anticorpo B-Ly1 humanizado" tem região variável da cadeia pesada (VH) selecionada a partir do grupo de SEQ ID No: 3 a SEQ ID No: 20 (B-HH2 a B-HH9 e B-HL8 a B-HL17 do documento WO2005/044859). Especialmente preferenciais são Seq. ID Nos: 3, 4, 7, 9, 11, 13 e 15 (B-HH2, BHH-3, B-HH6, B-HH8, B-HL8, B-HL11 e B-HL13 do documento WO2005/044859). Com a máxima preferência, a dita VH é BHH6. Preferencialmente o "anticorpo B-Ly1 humanizado" tem região variável da cadeia leve (VL) de SEQ ID No: 20 (B-KV1) do documento WO2005/044859. Além disso, o anticorpo B-Ly1 humanizado é, preferencialmente, um anticorpo IgG1. Preferencialmente, tais anticorpos B-Ly1 humanizados são submetido à glicoengenharia (GE) na região Fc, de acordo com os procedimentos descritos nos documentos WO2005/044859, WO 2004/065540, Umana, P. et al, Nature Biotechnol. 17: 176 a 180 (1999) e WO 99/154342. A maior parte dos anticorpos B-Ly1 humanizados submetidos à glicoengenharia têm um padrão alterado de glicosilação na região Fc, preferencialmente, com um nível reduzido de resíduos de fucose. Preferencialmente, pelo menos 40% ou mais (em uma realização entre 40% e 60% em outra realização, pelo menos 50% e em ainda outra realização pelo menos 70% ou mais) dos oligossacarídeos da região Fc são não fucosilados. Além disso, os oligossacarídeos da região Fc são, preferencialmente, bisseccionados. Com a máxima preferência, o "anticorpo B-Ly1 humanizado" compreende VH B-HH6 e VL B-KV1 do documento WO2005/044859. Conforme usado no presente documento, o dito anticorpo também é chamado de "HuMabe<CD20>". O dito anticorpo foi designado com o Afutuzumab INN. Em outra realização da máxima preferência, o dito anticorpo tem um nível reduzido de resíduos de fucose, conforme definido acima e/ou os oligossacarídeos da região Fc são, com a máxima preferência, bisseccionados. Em ainda outra realização da máxima preferência, o dito anticorpo exibe ADCC aumentada, conforme definido no presente documento.
[054] O componente oligossacarídeo pode afetar significativamente propriedades relevantes para a eficácia de uma glicoproteína terapêutica, incluindo estabilidade física, resistência ao ataque de protease, interações com o sistema imunológico, farmacocinética e atividade biológica específica. Tais propriedades podem depender não apenas da presença ou ausência, mas também das estruturas específicas, de oligossacarídeos. Algumas generalizações entre estrutura de oligossacarídeo e função de glicoproteína podem ser feitas. Por exemplo, certas estruturas de oligossacarídeos medeiam a remoção rápida da glicoproteína da corrente sanguínea através de interações com proteínas que ligam carboidratos específicos enquanto outros podem ser ligados por anticorpos e desencadear reações imunológicas indesejadas. (Jenkins et al, Nature Biotechnol. 14:975 a 81 (1996)).
[055] Células de mamíferos são as hospedeiras preferenciais para a produção de glicoproteínas terapêuticas, devido à capacidade das mesmas para glicosilar proteínas da forma mais compatível para aplicação humana. (Cumming et al, Glicobiology 1: 115 a 30 (1991); Jenkins et al, Nature Biotechnol. 14:975 a 81 (1996)). Bactérias muito raramente glicosilam proteinase, como outros tipos de hospedeiras comuns, como leveduras, fungos filamentosos, células de plantas e insetos, rendem padrões de glicosilação associados com a remoção rápida da corrente sanguínea, interações imunológicas indesejadas e, em alguns casos específicos, atividade biológica reduzida. Dentre as células de mamíferos, células de ovário de hamster chinês (CHO) têm sido mais comumente usadas durante as duas últimas décadas. Adicionalmente à obtenção de padrões de glicosilação adequados, essas células permitem a geração consistente de linhas de células clonais geneticamente estáveis, altamente produtivas. As mesmas podem ser cultivadas em altas densidades em biorreatores simples com o uso de meios livres de soro e permitem o desenvolvimento de bioprocessos seguros e reproduzíveis. Outras células animais comumente usadas incluem células de rim de hamster bebê (BHK), células de mieloma de camundongo NS0 e SP2/0. Mais recentemente, a produção a partir de animais transgênicos também tem sido testada. (Jenkins et al, Nature Biotechnol. 14: 975-981 (1996)).
[056] Todos os anticorpos contêm estruturas de carboidratos em posições conservadas nas regiões constantes da cadeia pesada, sendo que cada isótipo possui um conjunto distinto de estruturas de carboidratos N- ligados, que afetam variavelmente a montagem de proteína, secreção ou atividade funcional (Wright, A. e Morrison, S. L., Trends Biotech. 15: 26 a 32 (1997)). A estrutura do carboidrato N-ligado fixado varia consideravelmente, dependendo do grau de processamento e pode incluir oligossacarídeos complexos biantenários, de alta manose, bem como multiplamente ramificados. Tipicamente, há o processamento heterogêneo das estruturas de oligossacarídeo de núcleo fixados em um sítio de glicosilação particular de modo que mesmo os anticorpos monoclonais existem como múltiplas glicoformas. Do mesmo modo, mostrou-se que grandes diferenças na glicosilação de anticorpos ocorrem entre linhas de células e mesmo pequenas diferenças são observadas para uma dada linha de célula cultivada em diferentes condições de cultura (Lifely, M. R. et al, Glicobiology 5(8):813 a 22 (1995)).
[057] Uma maneira de obter grandes aumentos de potência enquanto se mantém um processo de produção simples e, potencialmente, evitando-se efeitos colaterais indesejados significativos, é elevar as funções efetoras naturais, mediadas por células de anticorpos monoclonais pela engenharia do componente oligossacarídeo das mesmas conforme descrito em Umana, P. et al, Nature Biotechnol. 17: 176 a 180 (1999) e Patente no U.S. 6.602.684. Os anticorpos de tipo IgGl, os anticorpos mais comumente usados na imunoterapia de câncer, são glicoproteínas que têm um sítio de glicosilação N-ligado conservado em Asn297 em cada domínio CH2. Os dois oligossacarídeos complexos biantenários fixados em Asn297 são ocultados entre os domínios CH2, que formam contatos extensivos com a cadeia principal do polipeptídeo e presença dos mesmos é essencial para o anticorpo mediar as funções efetoras como citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) (Lifely, M. R. et al, Glicobiology 5: 813 a 822 (1995); Jefferis, R. et al, Immunol. Rev. 163: 59 a 76 (1998); Wright, A. e Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15: 26 a 32 (1997)).
[058] Foi mostrado anteriormente que a superexpressão em células de ovário de hamster chinês (CHO) de β(1,4)-N- acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII), a glicosiltransferase que catalisa a formação de oligossacarídeos bisseccionados, aumenta significativamente a atividade ADCC in vitro de um anticorpo monoclonal quimérico antineuroblastoma (chCE7) produzido pelas células de CHO submetidas à engenharia. (Consulte Umana, P. et al, Nature Biotechnol. 17: 176 a 180 (1999); e WO 99/154342, cujos conteúdos são integralmente incorporados aqui por referência). O anticorpo chCE7 pertence a uma grande classe de anticorpos monoclonais não conjugados que têm alta afinidade e especificidade para tumor, mas têm muito pouca potência para ser clinicamente útil quando produzido em linhas de células de padrão industrial que carecem da enzima GnTIII (Umana, P. et al, Nature Biotechnol. 17: 176 a 180 (1999)). Esse foi o primeiro a mostrar que grandes aumentos da atividade ADCC poderiam ser obtidos mediante a engenharia das células que produzem anticorpos para expressar GnTIII, que também levou a um aumento na proporção de oligossacarídeos bisseccionados associados à região Fc constantes, incluindo oligossacarídeos bisseccionados, não fucosilados, acima dos níveis encontrados em anticorpos de ocorrência natural.
[059] O termo "expressão do antígeno CD20” se destina a indicar um nível significativo de expressão do antígeno CD20 em uma célula, preferencialmente na superfície da célula de uma célula B, mais preferencialmente, uma Célula B, de um tumor ou câncer, respectivamente, preferencialmente, um tumor não sólido. Pacientes com um "câncer que expressa CD20" podem ser determinados por ensaios padrão conhecidos na técnica. “A expressão do antígeno CD20” também se destina, preferivelmente, a indicar um nível significativo de expressão do antígeno CD20 em uma célula, preferencialmente na superfície da célula de uma Célula B, mais preferencialmente, uma Célula B, em uma doença autoimune. A expressão do antígeno CD20 é medida com o uso de, por exemplo, detecção imuno- histoquímica (ICH), FACS ou através de detecção com base em PCR do mRNA correspondente.
[060] Os "pacientes" ou "sujeitos"são quaisquer mamíferos que sofram das condições ou doenças, de acordo com a invenção e, preferencialmente, são humanos.
[061] O termo "câncer que expressa CD20", conforme usado no presente documento, se refere, preferencialmente, a linfomas (preferencialmente linfomas não Hodgkin de célula B (NHL)) e leucemias linfocíticas. Tais linfomas e leucemias linfocíticas incluem, por exemplo: (a) linfomas foliculares, (b) Linfomas de Células pequenas Não-Clivadas/linfoma de Burkitt (incluindo linfoma de Burkitt endêmico, linfoma de Burkitt esporádico e linfoma não Burkitt), (c) linfomas de zona marginal (incluindo linfoma de célula B de zona marginal extranodal (Linfomas de tecido linfático associado a mucosa, MALT), linfoma de célula B de zona marginal nodal e de zona marginal esplênico), (d) Linfoma de célula do manto (MCL), (e) Linfoma de Célula Grande (incluindo Linfoma difuso de célula grande de célula B (DLBCL), Linfoma Difuso de Célula Mista, Linfoma imunoblástico, Linfoma de Célula B Mediastinal Primária, Linfoma Angiocêntrico - Linfoma de Célula B Pulmonar), (f) leucemia de célula pilosa, (g) linfoma linfocítico, macroglobulinemia de Waldenstrom, (h) leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), leucemia prolinfocítica de célula B, (i) neoplasia de célula plasmática, mieloma de célula plasmática, mieloma múltiplo, plasmacitoma e (j) doença de Hodgkin.
[062] Preferencialmente o câncer que expressa CD20 é um linfoma não Hodgkin de célula B (NHL). Outros exemplos de cânceres que expressam CD20 incluem: Linfoma de célula do manto (MCL), leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfocítica crônica (CLL), Linfoma de célula grande difuso de célula B (DLCL), linfoma de Burkitt, leucemia de célula pilosa, linfoma folicular, mieloma múltiplo, linfoma de zona marginal, desordem linfoproliferativa pós-transplante (PTLD), linfoma associado a HIV, macroglobulinamia de Waldenstrom ou linfoma primário do CNS.
[063] Conforme usado no presente documento, "doença autoimune" se refere a uma doença ou desordem que surge do e é direcionada contra o tecido do próprio indivíduo. Exemplos de doença autoimunes ou desordens incluem, mas não se limitam a artrite (artrite reumatoide, artrite reumatoide juvenil, osteoartrite, artrite psoriática), psoríase, dermatite, polimiosite/dermatomiosite, necrólise epidérmica tóxica, escleroderma sistêmico e esclerose, respostas associadas a doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa, síndrome do desconforto respiratório, síndrome do desconforto respiratório adulto (ARDS), meningite, encefalite, uveíte, colite, glomerulonefrite, condições alérgicas, eczema, asma, condições que envolvem infiltração de células T e respostas inflamatórias crônicas, arteriosclerose, miocardite autoimune, deficiência de adesão de leucócitos, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), diabetes juvenil, esclerose múltipla, encefalomielite alérgica, respostas imunes associadas a hipersensibilidade aguda e tardia mediada por citocinas e linfócitos T, tuberculose, sarcoidose, granulomatose incluindo granulomatose de Wegener, agranulocitose, vasculite (incluindo ANCA), anemia aplástica, anemia de Diamond-Blackfan, anemia hemolítica imune incluindo anemia hemolítica autoimune (AIHA), anemia perniciosa, aplasia pura de células vermelhas (PRCA), deficiência de Fator VIII, hemofilia A, neutropenia autoimune, pancitopenia, leucopenia, doenças que envolvem diapedese de leucócitos, desordens inflamatórias do sistema nervoso central (CNS), Síndrome de disfunção de múltiplos órgãos, miastenia grave, doenças mediadas por complexo antígeno-anticorpo, doença antimembrana basal glomerular, síndrome do anticorpo antifosfolipídeo, neurite alérgica, doença de Bechet, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, Síndrome Miastênica de Lambert-Eaton, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjorgen, síndrome de Stevens Johnson, penfigoide bolhoso, pênfigo, poliendocrinopatias autoimunes, nefropatia, polineuropatias de IgM ou neuropatia mediada por IgM, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), trombocitopenia autoimune, doença autoimune do testículo e ovário incluindo autoimune orquite e oforite, hipotireoidismo primário; doenças endócrinas autoimunes incluindo tireoidite autoimune, tireoidite crônica (Tireoidite de Hashimoto), tireoidite subaguda, hipotireoidismo idiopático, doença de Addison, doença de Grave, síndromes poliglandulares autoimunes (ou síndromes de endocrinopatia poliglandular I), diabetes tipo I também chamada de diabetes mellitus I dependente de insulina (IDDM) e síndrome de Sheehan; hepatite autoimune, pneumonite intersticial linfoide (HIV), bronquiolite obliterante (não transplante) vs NSIP (pneumonia intersticial não específica), síndrome de Guillain-Barre, vasculite de grandes vasos (incluindo polimialgia reumática e arterite de célula gigantes (de Takayasu)), vasculite de vasos médios (incluindo doença de Kawasaki e poliarterite nodosa), espondilite anquilosante, doença de Berger (nefropatia de IgA), glomerulonefrite rapidamente progressiva, cirrose biliar primária, doença celíaca (enteropatia de glúten), crioglobulinamia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença arterial coronariana etc.
[064] Um "agente inibidor de crescimento", quando usado no presente documento, se refere a um composto ou composição que inibe o crescimento de uma célula especialmente um câncer que expressa CD20 célula in vitro ou in vivo. Assim, o agente inibidor de crescimento pode ser um que reduz significativamente a porcentagem de células que expressam CD20 na fase S. Exemplos de agentes inibidores de crescimento incluem agentes que bloqueiam a progressão do ciclo celular (em um lugar diferente da fase S), como agentes que induzem a captura de fase M e a captura de G1. Bloqueadores de fase M clássicos incluem os vincas (vincristina e vimblastina), taxanos e inibidores de topo II como doxorrubicina epirrubicina, daunorrubicina etoposídeo e bleomicina. Aqueles agentes que capturam G1 também se infiltram na captura de fase S, por exemplo, agentes de alquilação de DNA como tamoxifen, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatina, metotrexato, 5-fluorouracil e ara-C. Informações adicionais podem ser encontradas em "The Molecular Basis of Cancer", Mendelsohn e Israel eds., capítulo 1 intitulado "Cell cicle regulation, oncogenes and antinaoplastic drugs" por Murakami et al. (WB Saunders: Filadélfia, 1995) especialmente p. 13.
[065] "Tratamento" se refere a tratamento terapêutico e profilático ou medidas preventivas. Aqueles com necessidade de tratamento incluem aqueles já com a doença, bem como aqueles em que a doença deve ser prevenida. Por isso, o paciente a ser tratado, no presente documento, pode ter sido diagnosticado como tendo a doença ou pode ser predisposto ou suscetível à doença.
[066] O termo "agente citotóxico", conforme usado no presente documento, se refere a uma substância que inibe ou previne a função de células e/ou provoca a destruição de células. O termo se destina a incluir isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 e isótopos radioativos de Lu), agentes quimioterápicos e toxinas como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, de planta ou animal, incluindo fragmentos e/ou variantes dos mesmos.
[067] Um "agente quimioterápico" é um composto químico útil no tratamento de câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos incluem agentes de alquilação como tiotepa e (CYTOXAN™) ciclofosfamida; sulfonatos de alquila como bussulfano, improssulfano e pipossulfano; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa, e uredopa; etileniminas e metilmelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); delta-9-tetraidrocanabinol (dronabinol, MARENOLTM); beta-lapachona; lapachol; colchicinas; ácido betulínico; a camptotecina (incluindo o topotecano análogo sintético (HYCAMTINTM), CPT- 11 (irinotecano, CAMPTOSARTM), acetilcamptotecina, escopoletina e 9-amino camptotecina); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo os análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); podofilotoxina; ácido podofilínico; teniposida; criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; a sarcodictina; espongistatina; mostardas de nitrogênio como clorambucila, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalana, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosureias como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, e ranimustina; antibióticos como o antibiótico enediina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gama1l e caliqueamicina ômega 11 (consulte, por exemplo, Angew, Chemie Intl. Ed. Engl, 33: 183 a 186 (1994)); dinemicina, incluindo dinemicina A; uma esperamicina; bem como cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos de antibiótico enediina relacionados a cromoproteína), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomicinas, cactinomicinas, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinia, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6- diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (incluindo ADRIAMICINATM, morfolino- doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, injeção de lipossomos de doxorrubicina HCl (DOXILTM), doxorrubicina lipossomal TLC D-99 (MYOCETTM), doxorrubicina lipossomal peguilada (CAELYXTM) e desoxidoxorrubicina) epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabólitos como metotrexato, gemcitabina (GEMZARTM), tegafur (UFTORALTM), capecitabina (XELODATM), uma epotilona e 5-fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; antissuprarrenais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; renovador de ácido fólico como ácido frolínico; aceglatona; glicóxido de aldofosfamida; ácido aminolevúlinico; eniluracila; amsacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptínio; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinana; lonidainina; maitansinoides como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; 2-etilidrazida; procarbazina; complexo de polissacarídeos PSKLTM (JHS Natural Products eugene, OR); razoxana; rizoxina; sizofrano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2"- triclorotrietilamina; tricotecenas (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosida ("Ara-C"); tiotepa; taxoides, por exemplo, paclitaxel (TAXOLTM), formulação de paclitaxel de nanopartícula de albumina submetida à engenharia (ABRAXANETM) e docetaxel (TAXOTERETM); cloranbucila; 6-tioguanina; mercaptopurina; metliotrexato; agentes de platina como cisplatina, oxaliplatina e carboplatina; vincas, que evitam que a polimerização de tubulina forma microtúbulos, incluindo vinblastina (VELBANTM), vincristina (ONCOVINTM), vindesina (ELDISINATM), FILDESINTM) e vinorelbina (NAVELBINATM)); etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; leucovovina; novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; ibandronato; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como ácido retinoico, incluindo bexaroteno (TARGRETINTM); bisfosfonatos como clodronato (por exemplo, BONEFOSTM ou OSTACTM) etidronato (DIDROCALTM), NE-58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETATM), alendronato (FOSAMAJXTM), pamidronato (AREDIATM), tiludronato (SKELIDTM), ou risedronato (ACTONELTM); troxacitabina (um análogo do nucleosídeo citosina 1,3- dioxolano); oligonucleotídeos antissentido, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes em trajetórias de sinalização implicadas na proliferação de células aberrantes, como, por exemplo, PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF-R); vacinas como a vacina THERATOPETM e vacinas de terapia de gene, por exemplo, a vacina ALLOVECTINTM, a vacina LEUVECTINTM e a vacina VAXIDTM; inibidor de topoisomerase 1 (por exemplo, LURTOTECANTM); rmRH (por exemplo, ABARELIXTM); BAY439006 (sorafenib; Bayer); SU-11248 (Pfizer); perifosina, inibidor de COX-2 (por exemplo, celecoxib ou etoricoxib), inibidor de proteossomo (por exemplo, PS341); bortezomib (VELCADETM); CCI-779; tipifarnib (Rl 1577); orafenib, ABT510; inibidor de Bcl-2 como sódio oblimersen (GENASENSETM); pixantrona; inibidores de EGFR (consulte definição abaixo); inibidores de tirosina-quinase (consulte definição abaixo); e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um acima; bem como combinações de dois ou mais dos acima como CHOP, uma abreviação para uma terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prednisolona (que opcionalmente ainda compreende interferon-V (CHVP/interferon-V), FOLFOX, uma abreviação para um regime de tratamento com oxaliplatina (ELOXATINTM) combinada com 5-FU e leucovovina, CVP (ciclofosfamida, vincristina e prednisolona), MCP (mitozantrona, clorambucila e prednisolona), FC (fludarabina e ciclofosfamida), ICE (ifosfamida, carboplatina e etoposida) e dexametasona, citarabina e cisplatina (DHAP), dexametasona, doxorrubicina lipossomal e vincristina (DVD) etc.
[068] Um "agente antiangiogênico"se refere a um composto que bloqueia, ou interfere em algum grau, o desenvolvimento de vasos sanguíneos. O fator antiangiogênico pode, por exemplo, ser uma molécula pequena ou anticorpo que se liga ao fator de crescimento ou receptor de fator de crescimento envolvido na promoção de angiogênese. O fator antiangiogênico preferencial, no presente documento, é um anticorpo que se liga ao Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF), como Bevacizumab (AVASTINTM).
[069] O termo "citocina"é um termo genérico para proteínas liberadas por uma população celular que atua sobre outra célula como mediadoras intercelulares. Os exemplos de tais citocinas são linfocinas, monocinas, e hormônios polipeptídicos tradicionais. Dentre as citocinas estão incluídos hormônio de crescimento como hormônio de crescimento humano, hormônio de crescimento humano N-metionil e hormônio de crescimento bovino; hormônio da paratireoide; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormônios de glicoproteína como hormônio estimulante folicular (FSH), hormônio estimulante da tireoide (TSH) e hormônio luteinizante (LH), fator de crescimento hepático; fator de crescimento fibroblástico; prolactina; lactogênio placentário, fator α e β de necrose tumoral; substância inibidora mülleriana; peptídeo associado à gonadotropina de camundongo; inibina; activina; fator de crescimento endotelial vascular; integrina; trombopoietina (TPO); fatores de crescimento neural como NGF-β, fator de crescimento plaquetário; fatores de crescimento de transformação (TGFs) como TGF-α e TGF-beta; fator de crescimento I e II como insulina; eritropoietina (EPO), fatores osteoindutivos; interferons como interferon-α, -β e -y, fatores estimuladores de colônia (CSFs) como macrófago-CSF (M-CSF); granulócito- macrófago-CSF (GM-CSF); e granulócito-CSF (G-CSF); interleucinas (ILs) como IL-1, IL-lα, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, um fator de necrose tumoral como TNF-α ou TNF-β; e outros fatores polipeptídicos incluindo LIF e kit ligante (KL). Conforme usado no presente documento, o termo citocina inclui proteínas de origens naturais ou de cultura celular recombinante e equivalentes biologicamente ativos das citocinas de sequência nativa.
[070] O termo "quantidade eficaz" se refere a uma quantidade que proporciona o efeito desejado. No caso de um ingrediente de formulação como a enzima hialuronidase, de acordo com a presente invenção, uma quantidade eficaz é a quantidade necessária para aumentar a dispersão e absorção do anticorpo anti-CD20 coadministrado de tal forma que o anti-CD20 anticorpo pode agir de um modo terapeuticamente eficaz como mencionado acima. No caso de uma substância de medicamento farmacêutico é a quantidade de ingrediente ativo eficaz para tratar uma doença no paciente. Onde a doença é câncer, a quantidade eficaz do fármaco pode reduzir ó número de células cancerosas; reduzir o tamanho do tumor; inibir (isto é, reduzir até certo ponto e, preferencialmente, parar) a infiltração de célula cancerosa nos órgãos periféricos; inibir (isto é, reduzir até certo ponto e, preferencialmente, parar) a metástase do tumor; inibir, até certo ponto, o crescimento do tumor; e/ou aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas associados com o câncer. Até o ponto em que o fármaco pode evitar crescimento e/ou matar as células cancerosas existentes, pode ser citostático e/ou citotóxico. A quantidade eficaz pode estender a progressão de sobrevivência livre, resultar em uma resposta objetiva (incluindo uma resposta parcial, PR, ou resposta completa, CR), aumentar o tempo total de sobrevivência e/ou melhorar um ou mais sintomas de câncer.
[071] O termo "formulação farmacêutica"se refere a uma preparação de tal forma que permita que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz e que não contenha componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos para um sujeito ao qual a formulação fosse administrada. Tais formulações são estéreis.
[072] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre de todos os micro-organismos vivos e seus esporos.
[073] Uma formulação "estável" é uma em que todas as proteínas da mesma essencialmente retêm a estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica sob armazenamento à temperatura de armazenamento pretendida, por exemplo, 2 a 8 oC. Preferencialmente, a formulação essencialmente retém a e estabilidade química e física da mesma, bem como atividade biológica da mesma sob armazenamento. O período de armazenamento geralmente é selecionado com base na vida de prateleira pretendida da formulação. Além disso, a formulação é, preferencialmente, estável após o congelamento (to, por exemplo, -20o C) e o descongelamento da formulação, por exemplo, seguindo 1 ou mais ciclos de congelamento e descongelamento. Várias técnicas analíticas para medir estabilidade de proteína estão disponíveis na técnica e são revistas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247 a 301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nova York, Nova York, Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29 a 90 (1993), por exemplo. A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada por um período de tempo selecionado. A estabilidade pode ser avaliada qualitativamente e/ou quantitativamente em uma variedade de modos diferentes, incluindo avaliação de formação de agregados (por exemplo, com o uso de cromatografia excludente de tamanho, medindo-se a turvação e/ou por inspeção visual); avaliando-se a heterogeneidade da carga com o uso de cromatografia de troca de cátion ou eletroforese capilar de zona; análise de SDS-PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; avaliar atividade biológica ou função de ligação de antígeno do anticorpo; etc. A instabilidade pode envolver qualquer uma ou mais dentre: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), corte/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação da região de articulação), formação de succinimida, cisteína(s) desemparelhadas etc.
[074] As formulações terapêuticas dos anticorpos usado de acordo com a presente invenção são preparadas para armazenamento misturando-se um anticorpo que tem o grau de pureza desejado com farmaceuticamente aceitáveis carreadores, excipientes ou estabilizantes opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Carreadores excipientes, ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas.
[075] O termo "tensoativo", conforme usado no presente documento, denota a farmaceuticamente aceitável agente ativo em superfície. Na formulação da invenção, a quantidade de tensoativo é descrita como uma porcentagem expressa em peso/volume. A unidade mais comumente usada peso/volume é mg/mL. Exemplos adequados de tensoativos farmaceuticamente aceitáveis incluem ésteres de ácido polioxietilen-sorbitan graxo (Tween), polietileno-polipropileno glicóis, polioxietileno-estearatos, polioxietileno alquil éteres, por exemplo, monolauril éter de polioxietileno, alquilfenilpolioxi-etileno éteres (Triton-X), copolímero polioxietileno- polioxipropileno (Poloxâmero, Plurônico) e dodecil sulfato de sódio (SDS). Os ésteres de ácido polioxietilenossorbitan graxo mais adequados são polissorbato 20, (disponível sob a marca Tween 20TM) e polissorbato 80 (disponível sob a marca Tween 80TM). Os copolímeros polietileno-polipropileno mais adequados são aqueles disponíveis sob as designações comerciais Pluronic® F68 ou Poloxamer 188TM. Os polioxietileno-estearatos preferenciais são aqueles disponíveis sob a marca MyrjTM. Os polioxietileno alquil éteres mais adequados são aqueles disponíveis sob a marca BrijTM. Os alquilfenolpolioxietileno éteres mais adequados estão disponíveis sob a designação comercial Triton-X.
[076] O termo "tampão", conforme usado no presente documento, denota um tampão farmaceuticamente aceitável. Conforme usado no presente documento, o termo "o agente tamponante proporciona um pH de 5,5 a ± 2,0" se refere a um agente que assegura que a solução que o compreende resiste a mudanças em pH pela ação dos componentes conjugados de ácido/base da mesma. Os tampões farmaceuticamente aceitáveis, de acordo com a invenção, compreendem, mas não se limitam a tampões de histidina, tampões de citrato, tampões de gluconato, tampões de succinato, tampões de acetato glicilglicina e outros tampões de ácido orgânico e tampões de fosfato. Os tampões preferenciais compreendem L-histidina ou misturas de L-histidina com cloridrato de L-histidina com agentes de isotonicidade e, potencialmente, ajuste de pH com um ácido ou uma base conhecidos na técnica. L-histidina tem a máxima preferência.
[077] Um "tampão de histidina"é um tampão que compreende o aminoácido histidina. Exemplos de tampões de histidina incluem cloreto de histidina, acetato de histidina, fosfato de histidina, sulfato de histidina. Verificou- se que o tampão de histidina preferencial identificado nos exemplos no presente documento é cloreto de histidina. Na realização preferencial, o tampão de cloreto de histidina é preparado titulando-se a L-histidina (base livre, sólida) com ácido clorídrico diluído ou dissolvendo-se a L-histidina e o cloridrato de L-histidina (por exemplo, como monoidrato) em uma razão e quantidade e definida.
[078] Por "isotônica"entende-se que a formulação de interesse tem essencialmente a mesma pressão osmótica do sangue humano. Formulações isotônicas geralmente terão uma osmolalidade de ~300 mOsm/kg. A isotonicidade pode ser medida com o uso de um osmômetro do tipo pressão de vapor ou depressão de ponto de congelamento.
[079] O termo "agentes de isotonicidade", conforme usado no presente documento, denota agentes de isotonicidade farmaceuticamente aceitáveis. Agentes de isotonicidade são usados para proporcionar uma formulação isotônica. Uma formulação isotônica é líquida ou um líquido reconstituído a partir de uma forma sólida, por exemplo, uma liofilizada, e denota uma solução que tem a mesma tonicidade de outra solução com que é comparada, como uma solução de sal fisiológico e o soro sanguíneo. Os agentes de isotonicidade adequados compreendem, mas não se limitam a sais, incluindo, mas não se limitando a cloreto de sódio (NaCl) ou cloreto de potássio, açúcares e alcoóis de açúcar incluindo mas não se limitando a glicose, sacarose, trealose ou glicerol e qualquer componente do grupo de aminoácidos, açúcares, sais e combinações dos mesmos. Agentes de isotonicidade são geralmente usados em uma quantidade total de cerca de 5 mM a cerca de 350 mM.
[080] O termo "líquida", conforme usado no presente documento, em conexão com a formulação de acordo com a invenção, denota uma formulação que é líquida a uma temperatura de pelo menos cerca de 2 a cerca de 8 oC. O termo "liofilizadas", conforme usado no presente documento, em conexão com a formulação de acordo com a invenção, denota uma formulação que é seca por congelamento da formulação e, subsequentemente, sublima o gelo do conteúdo congelado mediante qualquer método de congelamento conhecido na técnica, por exemplo, dispositivos de secagem por congelamento disponíveis comercialmente.
[081] O termo "sais", conforme usado no presente documento, denota um sal em uma quantidade de cerca de 1 mM a cerca de 500 mM. Exemplos não limitativos de sais incluem sais de quaisquer combinações dos cátions de sódio potássio, cálcio ou magnésio com ânions cloreto, fosfato, citrato, succinato, sulfato ou misturas dos mesmos.
[082] O termo "aminoácido", conforme usado no presente documento, denota um aminoácido em uma quantidade de cerca de 1 a cerca de 100 mg/mL que compreende, mas não se limita a arginina, glicina, ornitina, glutamina, asparagina, lisina, histidina, ácido glutâmico, ácido asparágico, isoleucina, leucina, alanina, fenilalanina, tirosina, triptofano, metionina, serina e prolina.
[083] Um "sacarídeo", no presente documento, compreende a composição geral (CH2O)n e derivados dos mesmos, incluindo monossacarídeos, dissacarídeos, trissacarídeos, polissacarídeos, alcoóis de açúcar, açúcares de redução, açúcares não redutores etc. Exemplos de sacarídeos, no presente documento, incluem glicose, sacarose, trealose, lactose, frutose, maltose, dextrano, glicerina, dextrano eritritol, glicerol, arabitol, silitol, sorbitol, manitol, melibiose, melezitose, rafinose, manotriose, estaquiose, maltose, lactulose, maltulose, glucitol, maltitol, lactitol, isomaltulose etc. Também estão incluídos na definição de acordo com a invenção glucosamina, N-Metilglucosamina (chamada de "Meglumina"), galactosamina e ácido neuramínico e combinações dos sacarídeos de acordo com a invenção. O sacarídeo preferencial, no presente documento, é um dissacarídeo não redutor, como trealose ou sacarose. O sacarídeo mais preferencial, de acordo com a presente invenção, é trealose.
[084] O termo "estabilizante" se refere a estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis, como, por exemplo, mas não se limitando a aminoácidos e açúcares, conforme descrito nas seções acima, bem como dextranos disponíveis comercialmente de qualquer tipo e peso molecular, conforme conhecidos na técnica.
[085] O termo "antioxidante" denota um antioxidante farmaceuticamente aceitável. Podendo incluir excipientes como metionina, benzilálcool ou qualquer outro excipiente usado para minimizar a oxidação.
[086] O termo "um método para tratar", ou um equivalente, quando aplicado a, por exemplo, câncer, se refere a um procedimento ou curso de ação que é projetado para reduzir ou eliminar o número de células cancerosas em um paciente, ou para aliviar os sintomas de um câncer. "Um método para tratar"câncer ou outra desordem proliferativa não significa necessariamente que as células cancerosas ou de outra desordem serão, de fato, eliminadas, que ó número de células ou desordem será, de fato, reduzido, ou que os sintomas de um câncer ou outra desordem serão, de fato, aliviados. Com frequência, um método para tratar câncer será realizado mesmo com uma baixa probabilidade de sucesso, mas que, dado o histórico médico e a expectativa de sobrevivência de um paciente é, entretanto, considerada para induzir um curso de ação geral benéfico.
[087] O problema a ser resolvido pela presente invenção é, portanto, para proporcionar formulações farmacêuticas inovadoras estáveis, altamente concentradas de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou uma mistura de moléculas de tal anticorpo para injeção subcutânea. Tais formulações compreendem, adicionalmente às altas quantidades do anticorpo anti-CD20 ou, misturas do mesmo, um agente tamponante, um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes, um tensoativo não iônico e, preferencialmente, uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase. A preparação de formulações de anticorpo altamente concentradas é desafiadora por causa de um aumento potencial na viscosidade em alta concentração de proteína e um aumento potencial na agregação de proteína, um fenômeno que é, por si, dependente de concentração. Altas viscosidades causam impacto negativo na capacidade do processo (por exemplo, nas etapas de bombeamento e filtração) das formulações de anticorpo e na administração (por exemplo, na capacidade da seringa). Mediante a adição de excipientes as altas viscosidades poderiam ser diminuídas em alguns casos. Controle e análise de agregação de proteína é um desafio crescente. A agregação é potencialmente encontrada durante várias etapas do processo de fabricação, que incluem fermentação, purificação, formulação e durante o armazenamento. Diferentes fatores, como temperatura, concentração de proteína, estresse em agitação, congelamento e descongelamento, efeitos de solvente e tensoativo e modificações químicas, podem influenciar o comportamento da agregação de uma proteína terapêutica. Durante o desenvolvimento de uma formulação de anticorpo altamente concentrada, a tendência de agregação da proteína tem que ser monitorada e controlada mediante a adição de vários excipientes e tensoativos [Kiese S. et al, J. Pharm. Sci., 2008; 97(10); 4347 a 4366].
[088] Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica estável altamente concentrada de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou uma mistura de moléculas de tal anticorpo para aplicação parenteral. Preferencialmente, a via de aplicação é por administração intravenosa como um bolo ou por infusão contínua por um período de tempo, por via intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinhal, subcutânea, intra-articular, intrassinovial, ou intratecal. A administração intravenosa ou subcutânea dos anticorpos é preferencial; a injeção subcutânea é a mais preferencial. Conforme apresentado acima, não é trivial gerar uma formulação farmacêutica estável altamente concentrada de um anticorpo CD20 que seja essencialmente livre de partículas. Se a dita formulação é destinada a aplicação subcutânea, então, na realização preferencial, a dita formulação é combinada com a enzima hialuronidase.
[089] Mais particularmente, a formulação farmacêutica estável altamente concentrada de uma formulação de anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo da presente invenção compreende: cerca de 20 a 350 mg/mL de anticorpo anti-CD20; cerca de 1 a 100 mM de um agente tamponante que proporciona um pH de 5,5 a ± 2,0; cerca de 1 a 500 mM de um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes, em que, opcionalmente, metionina é usada como um estabilizante secundário, preferencialmente, na concentração de 5 a 25 mM; 0,01 a 0,1% de um tensoativo não iônico; e preferencialmente, uma quantidade eficaz de pelo menos uma enzima hialuronidase.
[090] A formulação farmacêutica estável altamente concentrada de uma formulação de anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo pode ser proporcionada em forma líquida ou pode ser proporcionada em forma liofilizada. A concentração de anticorpo na formulação reconstituída pode ser aumentada mediante a reconstituição de uma formulação liofilizada, para proporcionar uma concentração proteína na formulação reconstituída que é de cerca de 2 a 40 vezes maior do que a concentração de proteína na mistura antes da etapa de liofilização.
[091] A concentração de anticorpo anti-CD20 preferencial é de 50 a 150 mg/mL, mais preferencial, é de 75 a 150 mg/mL, ainda mais preferencial, é de 120 a ± 20 mg/mL, com a máxima preferência, é cerca de 120 mg/mL.
[092] A concentração preferencial do agente de tampão é de 1 a 50 mM, mais preferencialmente de 10 a 30 mM; a concentração com a máxima preferência é de cerca de 20 mM. Vários agentes de tampão são conhecidos pela pessoa versada na técnica conforme delineado acima. O agente de tampão preferencial é selecionado a partir do grupo que consiste de um tampão de histidina, tampão de ácido acético, e tampão de ácido cítrico, com a máxima preferência um tampão de L-histidina/HCl. O tampão de histidina de acordo com a invenção is usado em uma quantidade de cerca de lmM a cerca de 50 mM, preferencialmente de cerca de 10 mM a cerca de 30 mM e still mais preferencialmente de cerca de 20 mM. O tampão de ácido acético de acordo com a invenção é preferencialmente de cerca de 10 mM a cerca de 30 mM e com a máxima preferência de cerca de 20 mM. O tampão de ácido cítrico de acordo com a invenção é preferencialmente de cerca de 10 mM a cerca de 30 mM e com a máxima preferência de cerca de 20 mM.
[093] Independente do tampão usado, o pH será ajustado em um valor que compreende cerca de 4,5 a cerca de 7,0 e preferencialmente cerca de 5,5 a cerca de 6,5, também preferencialmente preferencial o mesmo é selecionado a partir do grupo que consiste de 5,5, 6,0, 6.1 e 65. Esse pH pode ser obtido por meio do ajuste com um ácido ou uma base conhecida na técnica ou pelo uso de misturas adequadas de componentes de tampão ou ambos.
[094] O(s) estabilizante(s) (usado como sinônimo do termo "agente estabilizante" no presente relatório descritivo da patente) é/são preferencialmente selecionados a partir do grupo que consiste de um sal, um carboidrato, sacarídeo e aminoácido(s), mais preferencialmente um carboidrato ou sacarídeo, mais preferencialmente um açúcar admitido pelas autoridades como um aditivo ou excipiente adequado em formulações farmacêuticas, com a máxima preferência selecionado a partir do grupo que consiste de diidrato de α,α-trealose, NaCl e metionina. A concentração preferencial do estabilizante é de 15 a 250 mM, ou mais preferencialmente de 150 a 250 mM. Com a máxima preferência está uma concentração de cerca de 210 mM. A formulação pode conter um estabilizante secundário, em que esse estabilizante secundário é preferencialmente metionina, preferencialmente em uma concentração de 5 a 25 mM, mais preferencialmente em uma concentração de 5 a 15 mM. E com a máxima preferência a concentração de metionina é de cerca de 10 mM.
[095] O tensoativo não iônico é preferencialmente um polissorbato, mais preferencialmente é selecionado do grupo de polissorbato 20, polissorbato 80 e copolímero de polietileno-polipropileno. A concentração do tensoativo não iônico é de 0,01 a 0,1% (p/v), ou de 0,02 a 0,08% (p/v) e preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e com a máxima preferência cerca de 0,06% (p/v).
[096] O termo "açúcar"conforme usado neste denota um açúcar faramaceuticamente aceitável usado em uma quantidade de cerca de 25 mM a cerca de 500 mM. É preferencialmente de 100 a 300 mM. É mais preferencialmente de 180 a 240 mM. E com a máxima preferência de 210 mM.
[097] A concentração da enzima hialuronidase depende da enzima hialuronidase atualmente usada na preparação da formulação de acordo com a invenção. Uma quantidade efetiva da enzima hialuronidase pode facilmente ser determinada pela pessoa versada na técnica com base na apresentação adicional abaixo. Deveria ser fornecida em quantidade suficiente de modo que um aumento na dispersão e na absorção do anticorpo co- administrado anti-CD20 seja possível. A quantidade efetiva da enzima hialuronidase é preferencialmente cerca de 1000 a 16000 U/mL, em que a dita quantidade corresponde a cerca de 0,01 mg a 0,15 mg de proteína com base em uma atividade específica presumida de 100000 U/mg. A concentração preferencial da enzima hialuronidase é de cerca de 1500 a 12000 U/mL. Com a máxima preferência, uma concentração de cerca de 2000 U/mL ou cerca de 12000 U/mL. As quantidades especificadas neste anteriormente correspondem à quantidade de enzima hialuronidase adicionada inicialmente à formulação. A enzima hialuronidase está presente ou como uma formulação final combinada ou para o uso em co-administração, por exemplo, as a co-formulação conforme delineado adicionalmente abaixo. A questão importante para a formulação reivindicada é a de que no momento a mesma está pronta para o uso e/ou é injetada como na composição reivindicada.
[098] A enzima hialuronidase pode ser derivada de animais, amostras humanas ou fabricada com base na tecnologia de DNA recombinante conforme descrito adicionalmente abaixo.
[099] Mais particularmente as formulações farmacêuticas estáveis altamente concentradas de acordo com a presente invenção têm uma das seguintes composições preferenciais: a) de 100 a 150 mg/mL de anticorpo anti-CD20, em que esse anticorpo é preferencialmente Rituximabe, Ocrelizumabe ou HuMabe<CD20>; de 1 a 50 mM de um tampão de histidina, preferencialmente L- histidina / HCl em um pH de cerca de 5,5; de 15 a 250 mM de um estabilizante que é preferencialmente diidrato de α,α-trealose e opcionalmente metionina como um segundo estabilizante em uma concentração de 5 a 25 mM; um tensoativo não iônico selecionado a partir do grupo de polissorbato 20 e polissorbato 80, preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e opcionalmente de 1000 a 16000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente rHuPH20, com a máxima preferência em uma concentração de 2000 U/mL ou de 12000 U/mL. b) 120 ± 20 mg/mL de anticorpo anti-CD20, em que esse anticorpo é preferencialmente Rituximabe, Ocrelizumabe ou HuMabe<CD20>; de 10 a 30 mM, preferencialmente 20 mM de um tampão de histidina, preferencialmente L-histidina / HC1 em um pH de cerca de 5,5; de 150 a 250 mM, preferencialmente 210 mM de um estabilizante que é preferencialmente diidrato de α,α-trealose e opcionalmente metionina como um segundo estabilizante em uma concentração de 5 a 25 mM, preferencialmente de 5 a 15 mM, e com a máxima preferência 10 mM; um tensoativo não iônico selecionado a partir do grupo de polissorbato 20 e polissorbato 80, preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e opcionalmente de 1000 a 16000 U/mL, preferencialmente de 1500 a 12000 U/mL, e com a máxima preferência 2000 U/mL ou 12000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente rHuPH20. c) 120 mg/mL de anticorpo anti-CD20, em que esse anticorpo é preferencialmente Rituximabe, Ocrelizumabe ou HuMabe<CD20>; de 10 a 30 mM, preferencialmente 20 mM de um tampão de histidina, preferencialmente L- histidina / HC1 em um pH de cerca de 5,5; 150 a 250 mM, preferencialmente 210 mM de um estabilizante que é preferencialmente diidrato de α,α-trealose e opcionalmente metionina como um segundo estabilizante em uma concentração de 5 a 25 mM, preferencialmente 5 a 15 mM, com a máxima preferência 10 mM; um tensoativo não iônico selecionado a partir do grupo de polissorbato 20 e polissorbato 80, preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e opcionalmente de 1000 a 16000 U/mL, preferencialmente de 1500 a 12000 U/mL, com a máxima preferência de 2000 U/mL ou de 12000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente rHuPH20. d) 120 mg/mL de anticorpo anti-CD20, preferencialmente Rituximabe; 20 mM de um tampão de histidina, preferencialmente L-histidina / HC1 em um pH de cerca de 5,5; 210 mM de diidrato de α,α-trealose e opcionalmente 10 mM de metionina como um segundo estabilizante; um tensoativo não iônico selecionado a partir do grupo de polissorbato 20 e polissorbato 80, preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e opcionalmente 2000 U/mL ou 12000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente rHuPH20. e) Uma formulação liofilizada que compreende 120 mg/mL de anticorpo anti-CD20, preferencialmente Rituximabe; 20 mM de um tampão de histidina, preferencialmente L-histidina /HC1 em um pH de cerca de 5,5; 210 mM de diidrato de α,α-trealose e opcionalmente 10 mM metionina como um segundo estabilizante; um tensoativo não iônico selecionado a partir do grupo de polissorbato 20 e de polissorbato 80, preferencialmente de 0,02 a 0,06% (p/v), e opcionalmente 2000 U/mL ou 12000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente rHuPH20.
[0100] Uma formulação farmacêutica estável de um anticorpo anti- CD20 farmaceuticamente ativo é fornecido que compreende cerca de 30 mg/mL a 350 mg/mL, por exemplo, cerca de 30 mg/mL a 100 mg/mL (incluindo cerca de 30mg/mL, cerca de 50mg/mL ou cerca de 100 mg/mL) Ocrelizumabe (por exemplo, 2H7.vl6 humanizado); cerca de 1 a 100 mM de um agente de tampão (por exemplo, acetato de sódio) que fornece um pH de 5,5 mais ou menos 2,0 (por exemplo, pH 5,3); cerca de 15 a 250 mM de um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes (incluindo trealose, por exemplo cerca de 8% de diidrato de trealose); cerca de 0,01 a 0,1% (p/v) de um tensoativo não iônico; e opcionalmente uma quantidade efetiva de pelo menos uma enzima hialuronidase (por exemplo rhHUPH20), preferencialmente em uma quantidade de cerca de 1,500 U/mL a cerca de 12,000 U/mL.
[0101] Composições alternativas das formulações preferenciais são dadas nos exemplos.
[0102] Foi proposto para facilitar a injeção subcutânea das proteínas e anticorpos terapêuticos o uso de quantidades pequenas de glicoproteínas solúveis de hialuronidase (sHASEGPs); consulte o documento WO2006/091871. Foi mostrado que a adição de tais glicoproteínas solúveis de hialuronidase (ou como uma formulação combinada ou por meio de coadministração) facilita a administração do fármaco terapêutico na hipoderme. Através da polimerização rápida de hialuronano HA no espaço extracelular sHASEGP reduz a viscosidade do interstício, e desse modo aumenta condutância hidráulica e permite que volumes maiores sejam administrados de maneira segura e confortável no tecido subcutâneo. A condutância hidráulica aumentada induzida por sHASEGP através da viscosidade intersticial reduzida permite uma dispersão maior, aumenta potencialmente a biodisponibilidade sistêmica de fármaco terapêutico administrado por SC.
[0103] As formulações farmacêuticas estáveis altamente concentradas da presente invenção que compreende uma glicoproteína de hialuronidase solúvel são, portanto, particularmente adequadas para injeção subcutânea. é claramente entendido pela pessoa versada na técnica que tal formulação que compreende um anticorpo anti-CD20 e uma glicoproteína de hialuronidase solúvel podem ser fornecidos para administração na forma de uma formulação combinada única ou alternativamente na forma de duas formulações separadas que podem ser misturadas momentos antes da injeção subcutânea. Alternativamente o anticorpo anti-CD20 e a glicoproteína de hialuronidase solúvel podem ser administradas como injeções separadas em sítios diferentes do corpo, preferencialmente em sítios que são imediatamente adjacentes um com o outro. Também é possível injetar os agentes terapêuticos presentes na formulação de acordo com a presente invenção como injeções consecutivas, por exemplo, primeiro a glicoproteína de hialuronidase solúvel seguida pela injeção da formulação de anticorpo anti-CD20. Essas injeções também podem ser executadas na ordem inversa, viz. primeiro injetando a formulação de anticorpo anti-CD20 seguida pela injetação de glicoproteína de hialuronidase solúvel. No caso do anticorpo anti-CD20 e da glicoproteína de hialuronidase solúvel serem administradas como injeções separadas, uma ou ambas proteínas têm que ser fornecidas com o agente de tampão, o(s) estabilizante(s) e o tensoativo não iônico nas concentrações conforme especificadas nas reivindicações em anexo porém excluindo a enzima hialuronidase. A enzima hialuronidase pode assim ser fornecida, por exemplo, em um tampão de L-histidina /HC1 no pH de cerca de 6,5, de 100 a 150 mM NaCl e de 0,01 a 0,1% (p/v) de polissorbato 20 ou de polissorbato 80. em uma realização preferencial o anticorpo anti-CD20 é fornecido com o agente de tampão, o(s) estabilizante(s) e o tensoativo não iônico nas concentrações conforme especificadas nas reivindicações em anexo.
[0104] Conforme mencionado acima a glicoproteína de hialuronidase solúvel pode ser considerada como sendo um excipiente adicional na formulação de anti-CD20. A glicoproteína de hialuronidase solúvel pode ser adicionada à formulação anti-CD20 no momento da fabricação da formulação de anti-CD20 ou pode ser adicionada momentos antes da injeção. Alternativamente a glicoproteína de hialuronidase solúvel pode ser fornecida como uma injeção separada. No caso anterior a glicoproteína de hialuronidase solúvel pode ser fornecido em um receptáculo separado ou em forma liofilizada que precisa ser reconstituída com diluentes adequados antes da injeção subcutânea ocorrer, ou pode ser fornecido como uma formulação líquida pelo fabricante. A formulação anti-CD20 e a glicoproteína de hialuronidase solúvel pode ser adquiridas como entidades separadas ou também podem ser fornecidas como kits que compreendem tanto os componentes de injeção e as intruções adequadas para a administração subcutânea. As intruções adequadas para a reconstituição e/ou administração de uma ou de ambas formulações também podem ser fornecidas.
[0105] Portanto a presente invenção também fornece composições farmacêuticas que consistem de uma formulação farmacêutica estável altamente concentrada de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou de uma mistura de tal anticorpo e uma quantidade adequada de pelo menos uma enzima hialuronidase na forma de um kit que compreende tanto os componentes de injeção quanto as intruções adequadas para a administração subcutânea dos mesmos.
[0106] Um aspecto adicional da presente invenção se refere à dispositivos de injeção que compreendem uma formulação farmacêutica estável altamente concentrada de acordo com a presente invenção. Tal formulação pode consistir de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo ou uma mistura de tais moléculas de anticorpo e excipientes adequados conforme delineado abaixo e pode compreeender adicionalmente uma glicoproteína de hialuronidase solúvel ou como uma formulação combinada ou como uma formulação separada para coadministração.
[0107] Uma variedade de anticorpos de anti-CD20 é conhecida na técnica anterior. Tais anticorpos são preferencialmente anticorpos monoclonais. Estes podem ser chamados anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados ou anticorpos totalmente humanos. Estes podem, ou ser anticorpos de anti-CD20 de comprimento total; fragmentos de anticorpo anti-CD20 que têm a mesma atiuvidade biológica; incluindo variantes de sequência de aminoácido e/ou variantes de glicolisação de tais anticorpos ou fragmentos. Exemplos de anticorpos humanizados de anti-CD20 são conhecidos sob os nomes INN Rituximabe, Ocrehzumab e Afutuzumab (HuMabe<CD20>). O anticorpo terapêutico anti-CD20 mais bem sucedido é o Rituximabe vendido por Genentech Inc. e F. Hoffmann-La Roche Ltd sob a designação comercial de MABTHERATM ou RITUXANTM.
[0108] O anticorpo anti-CD20 conforme definido neste é preferencialmente selecionado a partir do grupo de Rituximabe (consulte por exemplo, Patente no US 7,381,560 e EP2000149B1 de Anderson et. al, consulte por exemplo as figuras 4 e 5), Ocrehzumab (conforme apresentado no documento WO 2004/056312) e no documento WO 2006/084264 (por exemplo as variantes apresentadas nas tabelas 1 e 2), preferencialmente a variante v.16 ou v.114 ou v.511 e Afutuzumab (HuMabe<CD20>; consulte o documento WO2005/044859). E com a máxima preferência o anticorpo anti-CD20 é o Rituximabe. Os termos "Rituximabe", "Ocrelizumabe" e "Afutuzumab" (HuMabe<CD20>) abrangem todos os anticorpos correspondentes de anti- CD20 que cumprem os requerimentos necessários para obter uma autorização de comercialização como um produto idêntico ou biosimilar em um país ou território selecionado a partir do grupo de países que consiste dos EUA, Europa e Japão. O Rituximabe tem as regiões CDR definidas na Patente no US 7,381,560 e em EP2000149B1.
[0109] Inúmeras glicoproteínas solúveis de hialuronidase são conhecidas na técnica anterior. com a finalidade de definir adicionalmente a função, o mecanismo de ação e as propriedades de tais glicoproteínas solúveis de hialuronidase a seguinte informação sobre os fundamentos é fornecida.
[0110] A matriz intersticial (hipodérmica) SC é compreendida por uma rede de proteínas fibrosas embutidas dentro de um gel viscoelástico de glicosaminoglicanos. O hialuronano (HA), um dissacarídeo linear de repetição não sulfatado, é o glicosaminoglicano proeminente do tecido SC. O HA é secretado no interstício por meio de fibroblastos como um polímero viscoso em megadalton de alto peso molecular que é subsequentemente degradado localmente, no linfo, e no fígado, através da ação das hialuronidases e exoglicosidases lisossomais. Aproximadamente 50% do hialuronano no corpo é produzido pelo tecido SC, em que é encontrado em aproximadamente 0,8 mg/gm tecido de peso molhado [Aukland K. e Reed R., "Interstitial- Lymphatic Mechanisms in the control of Extracellular Fluid Volume", Physiology Reviews", , 1993; 73: 1 a 78]. É estimado que o adulto médio de 70 kg contém 15 gramas de HA, das quais 30 porcento são transformadas (sintetizadas e degradadas) diariamente [Laurent L.B., et al, "Catabolism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally, in lymph nodes and liver", Exp. Physiol. 1991; 76: 695 a 703]. Como um constituinte majoritário do componente semelhante a gel da matriz hipodérmica, HA contribui significantemente para a viscosidade.
[0111] Os glicosaminoglicanos (GAGs) são polisacarídeos lineares complexos da matriz extracelular (ECM). Os GAGs são caracterizados por estruturas de dissacarídeo de repetição de um hexosamina N-substituída e um ácido urônico (no caso de hialuronano (HA), sulfato de condroitina (CS), condroitina (C), sulfato de dermatano (DS), sulfato de heparano (HS), e heparin (H)), ou uma galactose (no caso de sulfato de queratina (KS)). Exceto por HA, todos existem aglutinados de modo covalente às proteínas de núcleo. Os GAGs com suas proteínas de núcleo são estruturalmente chamados como proteoglicanos (PGs).
[0112] O hialuronano (HA) é encontrado em mamíferos predominantemente em tecidos conectivos, pele, cartilagem, e no fluído sinovial. O hialuronano também é o constituinte principal do vítreo do olho. No tecido conectivo, a água de hidratação associada com hialuronano cria matrizes hidratadas entre os tecidos. O hialuronano desempenha um papel chave nos fenômenos biológicos associados com a motilidade da célula incluindo desenvolvimeto rápido, regeneração, reparo, embriogênese, desenvolvimento lógico do embrião, cura de ferimentos, angiogênese, e tumorigênese [Toole, Cell Biol. Extracell. Matrix, Hay (ed), Plenum Press, Nova York, 1991; pp. 1384 a 1386; Bertrand et al, Int. J. Cancer 1992; 52: 1 a 6; Knudson et al, FASEB J. 1993; 7: 1233 a 1241]. Adicionalmente, os níveis de hialuronano correlacionam à agressividade do tumor [Ozello et al, Cancer Res. 1960; 20:600 a 604; Takeuchi et al, Cancer Res. 1976; 36:2133 a 2139; Kimata et al, Cancer Res. 1983; 43: 1347 a 1354].
[0113] HA é encontrado na matriz extracelular de muitas células, especialmente em tecidos conectivos macios. O HA foi designado para várias funções fisiológicas, tal como na água e homeostase de proteína de plasma [Laurent T.C. et al, FASEB J., 1992; 6: 2397 a 2404]. A produção de HA aumenta nas células de proliferação e pode desempenhar um papel na mitose. Isto também foi implicado na locomoção e migração de células. HA parece desempenhar papeís importantes na regulação, desenvimento e diferenciação de células [Laurent et al, supra].
[0114] O HA foi amplamente usado na medicina clínica. Seu tecido protetor e propriedades reológicas tem se provado úteis em cirurgia oftamológica (por exemplo para proteger o endotélio das córneas durante cirurgia de catarata). O HA de soro é o diagnóstico de doença do fígado e várias condições inflamatórias, tal como artrite reumatóide. O edema intersticial causado pelo acúmulo de HA pode causar disfunção em vários órgãos [Laurent et al, supra].
[0115] As interações de proteína de hialuronano também estão envolvidas na estrutura da matriz extracelular ou "substância de base".
[0116] As hialuronidases são um grupo de enzimas ativas geralmente de ácido ou neutras encontradas por todo o reino animal. As hialuronidases variam com respeito á especificidade do substrato, e o mecanismo de ação (documento WO 2004/078140). Existem três classes gerais de hialuronidases: 1. Hialuronidases de tipo mamífero, (EC 3.2.1.35) que são endo- beta-N-acetilhexosamimdases com tetrasacarídeos e hexasacarídeos como produtos finais principais. Estes têm tanto atividades hidrolíticas e quando de transglicosidase, e podem degradar hialuronano e sulfatos de condroitina (CS), geralmente C4-S e C6-S. 2. Hialuronidases bacterianas (EC 4.2.99.1) degradam hialuronano e, e em vários graus, CS e DS. Estes são endo-beta-N- acetilhexosaminidases que operam por uma reação de eliminação beta que rende primariamente produtos finais de dissacarídeo. 3. Hialuronidases (EC 3.2.1.36) de lesmas, outros parasitas, e crustáceos são endo-beta-glucuronidases que geram produtos finais de tetrasacarídeo e de hexasacarídeo através da hidrólise da ligação 1-3 beta.
[0117] As hialuronidases de mamíferos podem ser adicionalmente divididas em dois grupos: enzimas ativas ácidas e ativas neutras. Existem seis genes semelhantes a hialuronidase no genoma humano, HYAL1, HYAL2, HYAL3, HYAL4, HYALP1 e PH20/SPAM1. HYALP1 é um pseudogene, e HYAL3 não foi mostrado como possuindo atividade de enzima em direção quaisquer substratos conhecidos. HYAL4 é uma condroitinase e exibe pouca atividade em direção ao hialuronano. HYAL1 é a enzima ativa ácida prototípica e PH20 é a enzima ativa neutra prototípica . Hialuronidases ativas ácidas, tais como HYAL1 e HYAL2 geralmente carecem de atividade catalítica em pH neutro (isto é, pH 7). Por exemplo, HYALl tem pouca atividade catalítica in vitro sobre pH 4,5 [Frost I.G. e Stern, R., "A microtiter-based assay for hyaluronidase activity not requiring specialized reagents", Anal. Biochemistry, 1997; 251 :263 a 269]. HYAL2 é uma enzima ácida ativa com uma atividade específica muito baixa in vitro.
[0118] As enzimas semelhantes à hialuronidase também podem ser caracterizadas por aquelas que são geralmente presas à membrana do plasma por meio de uma âncora de glicosilfosfatidil inositol tais como HYAL2 humano e PH20 humano [Danilkovitch-Miagkova et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 2003; 100(8):4580 a 4585; Phelps et al, Science 1988; 240(4860): 1780 a 1782], e os que são geralmente solúveis tal como HYAL1 humano [Frost, I.G. et al, "Purification, cloning, and expression of human plasma hyaluronidase", Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997; 236(1): 10 a 15]. No entanto, existem variações de espécies para espécies: PH20 bovino, por exemplo, é fixado de uma maneira muito frágil à membrana do plasma e não é ancorado por meio de uma âncora sensível a fosfolipase [Lalancette et al, Biol Reprod., 2001; 65(2):628 a 36]. Essa característica única da hialuronidase bovina permitiu o uso das enzimas hialuronidase bovinas de teste solúveis como um extrato para uso clínico (WydaseTM, HyalaseTM). Outras espécies de PH20 são enzimas ancoradas com lipídeos que não são geralmente solúveis sem o uso de detergentes ou lipases. Por exemplo, ancorados humanódes PH20 à membrana do plasma por meio de uma âncora GPI. Tenta-se fazer construtos de DNA humano PH20 que não deveriam introduzir uma âncora de lipídeos no peptídeo resultando ou em uma enzima cataliticamente inativa, ou uma enzima insolúvel [Arming et al, Eur. J. Biochem., 1997; 1; 247(3):810-4]. A hialuronidase de esperma de macaca que ocorre naturalmente é encontrado tanto em uma forma aglutinada e solúvel de membrana. Enquanto forma aglutinada de membrana de 64 kDa possui atividade de enzima no pH 7,0, a forma de 54 kDa é apenas ativa no pH 4,0 [Cherr et al, Dev. Biol, 1996;10; 175(1): 142 a 53]. Assim, as formas solúveis DE PH20 são geralmente carentes de atividade de enzima sob condições neutras.
[0119] Conforme mencionado acima e de acordo com os ensinamentos do documento WO2006/091871 e da Patente no US 7,767,429, quantidades pequenas de glicoproteínas solúveis de hialuronidase (sHASEGPs) podem ser introduzidas em uma formulação com a finalidade de facilitar a administração de fármaco terapêutico na hipoderme. Através de polimerização rápida HA no espaço extracelular sHASEGP reduz a viscosidade do interstício, desse modo aumenta a condutância hidráulica e permite que volumes maiores serem administrados de maneira segura e confortável no tecido SC. A condutância hidráulica aumentada induzida por sHASEGP através da viscosidade intersticial reduzida permite uma dispersão maior, aumenta potencialmente a biodisponibilidade sistêmica do fármaco terapêutico administrado por SC.
[0120] Quando injetada na hipoderme, a polimerização de HA por sHASEGP é localizada no sítio de injeção no tecido SC. Evidência experimental mostrou que a sHASEGP é inativada localmente no espaço intersticial com uma meia vida de 13 a 20 minutos em camundongos, sem absorção sistêmica detectável no sangue em seguida dose intravenosa única em camundongos CD-I. Dentro do compartimento vascular sHASEGP demonstra uma meia vida de 2,3 e 5 minutos em camundongos e macacos Cynomolgus, respectivamente, com doses até 0,5 mg/kg. A remoção rápida de sHASEGP, combinada com a síntese contínua do substrato HA no tecido SC, resulta em um melhoria de permeação ativa localmente e transiente para outras moléculas co-injetadas, os efeitos são totalmente reversíveis dentro de 24 a 48 horas após a administração [Bywaters G.L., et al, "Reconstitution of the dermal barrier to dye spread after hyaluronidase injection", Br. Med. J., 1951; 2 (4741): 1178 a 1183].
[0121] Adicionalmente aos seus efeitos na dispersão de fluído local, sHASEGP também age como melhorador de absorção. As macromoléculas maiores que 16 kilodaltons (kDa) estão amplamente excluídas da absorção através dos capilares por meio de difusão e são absorvidos em sua maioria por meio de dos nodos linfáticos de drenagem. Uma macromolécula administrada subcutaneamente tal como, por exemplo, um anticorpo terapêutico (com peso molecular de aproximadamente 150 kDa) precisa portanto atravessar a matriz intersticial anteriormente alcançando os linfáticos de drenagem para absorção subsequente no compartimento vascular. pela dispersão local aumentada, sHASEGP aumenta a taxa (Ka) de absorção de muitas macromoléculas. Isso leva a níveis de pico de sangue aumentados (Cmax) e potencialmente a biodisponibilidade aumentada relativa à administração SC na ausência de sHASEGP [Bookbinder L.H., et al, "A recombinant human enzyme for enhanced intersticial transport of therapeutics", J. Control. Release 2006; 114: 230 a 241].
[0122] Os produtos de hialuronidase de origem animal tem sido usadas clinicamente por mais de 60 anos, primariamente para aumentar a dispersão e absorção ou dos fármacos co-administrados e para hipodermóclise (SC injeção/infusão de fluído em volume grande) [Frost G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4: 427 a 440]. Os detalhes no mecanismo de ação das hialuronidases foram descritos em detalhes nas seguintes publicações: Duran-Reynolds F., "A spreading factor in certain snake venoms e its relation to their mode of action", CR Soc Biol Paris, 1938; 69 a 81; Chain E., "A mucolytic enzyme in test extracts", Nature 1939; 977 a 978; Em Weissmann B., "The transglicosylative action of testicular hyaluronidase", J. Biol. Chem., 1955; 216: 783 a 94; Tammi, R., Saamanen, A.M., Maibach, H.I., Tamrni M., "Degradation of newly synthesized high molecular mass hyaluronan in the epidermal and dermal compartments of human skin in organ culture", J. Invest. Dermatol. 1991; 97: 126 a 130; Laurent, U.B.G., Dahl, L.B., Reed, R.K., "Catabolism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally, in lymph nodes and liver", Exp. Physiol. 1991; 76: 695 a 703; Laurent, T.C. e Fraser, J.R.E., "Degradation of Biosubstância ativas: Physiology e Pathophysiology", Henriksen, J.H. (Ed) CRC Press, Boca Raton, FL; 1991. pp. 249 a 265; Harris, E.N., et al, "Endocytic function, glycosaminoglycan specificity, and antibody sensitivity of the recombinant human 190-kDa hyaluronan receptor for endocytosis (HARE)", J. Biol. Chem. 2004; 279:36201 a 36209; Frost, G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration ", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4: 427a440, Os produtos de hialuronidase aprovaodos nos países da União Européia incluem Hylase® "Dessau" e Hyalase®. Os produtos de hialuronidase de origem animal aprovados nos EUA incluem VitraseTM, HydaseTM, e AmphadaseTM.
[0123] A segurança e eficácia dos produtos de hialuronidasehave foram amplamente provados. O risco de segurança mais significante identificado é a hipersensibilidade e/ou a alergenicidade, que se supõe que é devido a falta de pureza das preparações derivadas de animais [Frost, G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4 : 427 a 440]. Deveria ser notado que existem diferenças com respeito às dosagens aprovadas de hialuronidases derivadas de animais entre o Reino Unido, Alemanha e os EUA. No Reino Unido, a dose usual como um adjuvante para injeção subcutânea ou intramuscular é de 1500 unidades, adicionadas diretamente à injeção. Nos EUA, a dose usual usada para esse propósito é de 150 unidades. Na hipodermóclise, a hialuronidase é usada para ajudar a administração subcutânea de volumes relativamente grandes de fluídos. No Reino Unido, 1500 unidades de hialuronidase são geralmente aplicadas com 500 a 1000 mL de fluído para o uso subcutâneo. Nos EUA, 150 unidades são consideradas adequadas para cada litro de solução de hipodermóclise. Na Alemanha, 150 a 300 unidades são considerada adequadas para esse propósito. No Reino Unido, a difusão de anestésicos locais é acelerada mediante a adição de 1500 unidades. Na Alemanha e nos EUA 150 unidades são consideradas adequadas para esse propósito. As diferenças de dosagem contudo (a dosagem no Reino Unido é dez vezes maior do que nos EUA), nenhuma diferença aparente nos perfis de segurança de produtos de hialuronidase derivados de animais comercializados nos EUA e no Reino Unido, respectivamente, tem sido relatados.
[0124] Em 2 de Dezembro de 2005, a Halozyme Therapeutics Inc. recebeu a aprovação da FDA para uma formulação injetável de hialuronidase humana recombinante, rHuPH20 (HYLENEXTM). O HYLENEXTM aprovado pelo FDA em uma dose de 150 unidades para a administração SC das seguintes indicações: - como um adjuvante para aumentar a absorção e a dispersão de outros fármacos injetados - para hipodermóclise - como um adjunto na urografia SC para melhorar a reabsorção de agentes radiopacos.
[0125] Como uma parte da revisão regulatória foi estabelecido que rHuPH20 possui as mesmas propriedades de melhoramento da dispersão e da absorção de outros fármacos injetados como as preparações de hialuronidase derivadas de animais aprovadas anteriormente, porém com um perfil de segurança melhorado. Em particular, o uso de hialuronidase humana recombinante (rHuPH20) comparada com hialuronidases derivadas de animais minimizam o risco potencial de contaminação com patógenos animais e encefalopatias espongiformes transmissíveis.
[0126] As glicoproteínas de hialoronidase solúveis (sHASEGP), um processo para preparar as mesmas e o seu uso nas composições farmacêuticas foram descritos no documento WO 2004/078140.
[0127] O trabalho experimental detalhado conforme delineado adicionalmente abaixo mostrou que a formulação reivindicada surpreendentemente tem estabilidade de armazenamento favorável e cumpre todos requirementos os favoráveis para a aprovação pelas autoridades de saúde.
[0128] Acredita-se que enzima hialuronidase na formulação de acordo com a presente invenção melhore a entrega do anticorpo anti-CD20 para a circulação sistêmica, por exemplo, pelo aumento da absorção da substância ativa a mesma age como um melhorador de permeação). Também acredita-se que a enzima hialuronidase aumente a entrega do anticorpo terapêutico anti-CD20 na circulação sistêmica por meio da rota de aplicação subcutânea pela hidrolização reversível de hialuronano, um componente extracelular do tecido intersticial SC. A hidrólise do hialuronano na hipoderme abre temporariamente canais no espaço intersticial do tecido SC e desse modo melhora a entrega do anticorpo terapêutico anti-CD20 na circulação sistêmica. Adicionalmente, a administração mostra dor reduzida em humanos e menos intumescimento derivado do volume do tecido SC.
[0129] A hialuronidase, quando administrada localmente tem todo o seu efeito localmente. Em outras palavras a hialuronidase é inativada e metabolizada localmente em minutos e não foi constatado como tendo efeitos sistêmicos ou de longo termo. A inativação rápida de hialuronidase dentro de minutos quando a mesma entra na corrente sanguínea é oposta a uma habilidade realística de execução comparada à estudos de biodistribuição entre os diferentes produtos de hialuronidase. Essa propriedade também minimiza qualquer preocupação de segurança sistêmica em potencial pois o produto da hialuronidase não pode agir em sítios distantes.
[0130] A característica unificante de todas as enzima hialuronidases de acordo com a presente invenção é a sua habilidade de polimerizar o hialuronano, independente as diferenças na estrutura química, nas fontes das espécies, em fontes de tecido, ou nos lotes de produtos fármaco originaodos das mesmas espécies e tecidos. Estes são não usuais pelo fato de sua atividade ser a mesma (exceto pela potência) a despeito de ter estruturas diferentes.
[0131] A enzima hialuronidase de acordo com a formulação da presente invenção é caracterizada por não ter nenhum efeito adverso na integridade molecular do anticorpo anti-CD20 na formulação farmacêutica estável descrita neste. Ademais, a enzima hialuronidase meramente modifica a entrega do anticorpo anti-CD20 na circulação sistêmica porém, não possui quaisquer propriedades que poderiam fornecer ou contribuir para os efeitos terapêutico do anticorpo anti-CD20 sistemicamente absorvido. A enzima hialuronidase não é biodisponível sistemicamente e não afeta de modo adverso a integridade molecular do anticorpo anti-CD20 em condições de armazenamento recomendadas da formulação farmacêutica estável de acordo com a invenção. Deve portanto, ser considerada como um excipiente na formulação de anticorpo anti-CD20 de acordo com essa invenção. Como esta não exerce efeitoo terapêutico a mesma representa um constituinte da forma farmacêutica além do anticorpo anti-CD20 terapeuticamente ativo.
[0132] Inúmeras enzima hialuronidases adequadas de acordo com a presente invenção são conhecidas da técnica anterior. A enzima preferencial é uma enzima hialuronidase humana, com a máxima preferência para a enzima conhecida como rHuPH20. A rHuPH20 é um membro da família de neutral e β-1 ,4 glicosil hydrolases ativas em ácido que polimerizam o hialuronano pela hidrólise da ligação β -1 ,4 entre a posição C1 de N-acetil glucosamine e a posição C4 do ácido glucorônico. O hialuronano é um polisacarídeo encontrado na substância base intracelular do tecido conectivo, tal como a tecido intersticial subcutâneo, e de certos tecidos especializados, tal como o cordão umbilical e o humor vítreo. A hidrólise de hialuronano diminui temporariamente a viscosidade do tecido intersticial e promove a dispersão de fluídos injetados ou de transudados ou exudados localizados, facilitando assim a absorção. Os efeitos da hyaluronidase são locais e reversíveis com completa reconstituição do tecido hialuronano ocorrendo dentro de 24 a 48 horas [Frost, G.I., " Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration ", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4:427 a 440]. O aumento na permeabilidade do tecido conectivo através da hidrólise de hialuronano se correlaciona com a eficácia da hialuronidase para a capacidade de aumentar a dispersão e absorção de moléculas co- administradas.
[0133] O genoma humano contém diversos genes de hialuronidase. Somente o produto de gene PH20 possui atividade de hialuronidase eficaz sob condições extracelulares e age como um agente dispersante, enquanto que as hialuronidases ativas por ácido não têm essa propriedade.
[0134] A enzima rHuPH20 é a primeira e única enzima hialuronidase humana recombinante disponível atualmente para uso terapêutico. O genoma humano contém diversos genes de hialuronidase; somente o produto de gene PH20 possui atividade de hialuronidase eficaz sob condições extracelulares fisiológicas e age como um agente dispersante. A proteína PH20 humana de ocorrência natural tem uma âncora de lipídeo presa ao aminoácido de terminal carboxi que ancora a mesma à membrana plasmática. A enzima rHuPH20 desenvolvida por Halozyme é uma variante de apagamento truncado que não tem tais aminoácidos no terminal carboxi responsável pela fixação de lipídeos. Isso dá origem a uma enzima ativa por pH neutra e solúvel similar à proteína encontrada em preparações de testículos bovinos. A proteína rHuPH20 é sintetizada com um peptídeo de sinal de aminoácido 35 que é removido do terminal N durante o processo de secreção. A proteína rHuPH20 madura contém uma sequência de aminoácido de terminal N ortóloga a essa encontrada em algumas preparações de hialuronidase bovina.
[0135] As hialuronidases PH20, incluindo a PH20 derivada de animal e a rHuPH20 humana recombinante, despolimerizam hialuronano pela hidrólise da ligação β-1,4 entre a posição C1 da N-acetil glucosamina e a posição C4 do ácido glucurônico. O tetrassacarídeo é o menor produto de digestão [Weissmann, B., "The transglycosylative action of testicular hyaluronidase", J. Biol. Chem., 1955; 216: 783-94]. Essa estrutura de N-acetil glucosamina/ácido glucurônico não é encontrada em glicanos ligados por N de produtos biológicos recombinantes e, portanto, a rHuPH20 não afetará a glicosilação de anticorpos a mesma é formulada com, tal como, por exemplo, Rituximabe. A enzima rHuPH20 em si possui seis glicanos ligados por N por molécula com estruturas de núcleo similares a essas encontradas em anticorpos monoclonais. Conforme antecipado, essas estruturas ligadas por N não mudam ao longo do tempo, confirmando a falta de atividade enzimática de rHuPH20 nessas estruturas de glicano ligadas por N. A meia vida curta da rHuPH20 e a síntese constante de hialuronano leva a uma ação curta e local da enzima nos tecidos.
[0136] A enzima hialuronidase que é um excipiente na formulação subcutânea em concordância com a presente invenção é preferencialmente preparada com o uso de tecnologia de DNA recombinante. Desse modo, assegura-se que a mesma proteína (sequência de aminoácido idêntica) é obtida todas as vezes e que reações alérgicas causadas por proteínas contaminantes copurificadas durante a extração de um tecido sejam evitadas. A enzima hialuronidase usada na formulação em concordância com a presente invenção é preferencialmente uma enzima humana, mais preferencialmente rHuPH20,
[0137] A sequência de aminoácido de rHuPH20 (HYLENEXTM) é bem conhecida e disponível sob Registro CAS no 75971-58-7. O peso molecular aproximado é 61 kDa (consulte também Patente no US 7.767.429).
[0138] As comparações funcionais e estruturais múltiplas foram realizadas entre hialuronidase de mamíferos de origem natural e clones de cDNA PH-20 de humanos e outros mamíferos. O gene PH-20 é o gene usado para o produto recombinante rHuPH20; entretanto, o produto de fármaco recombinante é uma versão truncada de aminoácido 447 da proteína inteira encodificada pelo gene PH-20, As similaridades estruturais com respeito à sequência de aminoácidos raramente excedem 60% em qualquer comparação. As comparações funcionais mostram que a atividade de rHuPH20 é muito similar a essa dos produtos de hialuronidase aprovados anteriormente. Essa informação é consistente com as revelações clínicas durante os últimos 50 anos que, independentemente da fonte da hialuronidase, a eficácia e segurança clínica das unidades de hialuronidase são equivalentes.
[0139] O uso da rHuPH20 na formulação SC de anticorpo anti- CD20 em concordância com a presente invenção permite a administração de volumes maiores de produto de fármaco e melhorar potencialmente a absorção do anticorpo CD20 administrado subcutaneamente, preferencialmente Rituximabe na circulação sistêmica.
[0140] A osmolalidade da formulação farmacêutica estável em concordância com a invenção é 350 ± 50 mOsm/kg.
[0141] A formulação farmacêutica estável em concordância com a invenção é essencialmente livre de partículas visíveis (a inspeção olho humano). As partículas subvisíveis (conforme medidas pelo obscurecimento) devem preferencialmente satisfazer os seguintes critérios: - número máximo de partículas > 10 μm por receptáculo -> 6.000 - número máximo de partículas > 25 μm por receptáculo -> 600
[0142] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um uso de uma formulação para a preparação de um medicamento útil para tratar uma doença ou desordem sensível ao tratamento com um anticorpo anti-CD20 tal como, preferencialmente, câncer ou uma doença não maligna em um individuo que compreende a administração da formulação descrita na presente invenção a um indivíduo em uma quantidade eficaz para tratar a dita doença ou desordem. Preferencialmente, o anticorpo anti-CD20 é coadministrado concomitantemente ou sequencialmente com um agente quimioterápico.
[0143] Em um aspecto adicional a presente invenção fornece um método de tratar uma doença ou desordem que é sensível ao tratamento com um anticorpo anti-CD20 (por exemplo, câncer (preferencial) ou uma doença não maligna) em um indivíduo que compreende administrar a formulação descrita na presente invenção a um indivíduo em uma quantidade eficaz para tratar a dita doença ou desordem. O câncer ou uma doença não maligna envolverá geralmente células que expressam CD20, de tal modo que o anticorpo CD20 na formulação SC farmacêutica terapêutica em concordância com a presente invenção é capaz de ligar-se às células afetadas. O câncer é, preferencialmente, um câncer que expressa CD20, A doença não maligna que pode ser tratada com a composição em concordância com a presente invenção é preferencialmente uma doença autoimune conforme definida na presente invenção. Preferencialmente, o anticorpo anti-CD20 é coadministrado concomitantemente com um agente quimioterápico.
[0144] A adição da hialuronidase à formulação permite o aumento do volume de injeção que pode ser administrado subcutaneamente com segurança e de maneira confortável. O volume de injeção preferencial é 1 a 15 mL. Observou-se que a administração da formulação em concordância com a presente invenção aumenta a dispersão, absorção e a biodisponibilidade anticorpo terapêutico. As moléculas grandes (isto é, > 16 kDa) que são administradas através da trajetória SC são preferencialmente absorvidas no compartimento vascular através dos fluidos linfáticos de drenagem [Supersaxo, A., et al, "Effect of Molecular Weight on the Lymphatic Absorption of WaterSoluble Compounds Following Subcutaneous Administration”, 1990; 2: 167 a 169; Swartz, M. A., "Advanced Drug Delivery Review, The physiology of the lymphatic system", 2001; 50: 3 a 20]. A taxa de introdução dessas moléculas grandes na circulação sistêmica é, dessa forma, relativa à infusão intravenosa, portanto, resultando potencialmente na intensidade/ frequência reduzida das reações relacionadas à infusão.
[0145] Para a produção do anticorpo CD20 subcutâneo (preferencialmente, Rituximabe) a formulação em concordância com a invenção exige altas concentrações de anticorpos (aproximadamente 120 mg/mL) na etapa final de purificação do processo de fabricação. Portanto, uma etapa de processo adicional (ultrafiltração/diafiltração) é adicionada ao processo de fabricação convencional do anticorpo CD20, preferencialmente Rituximabe. A formulação de anticorpo anti-CD20 farmacêutica estável e altamente concentrada em concordância com a presente invenção pode também ser fornecida como uma formulação de proteína estabilizada que pode ser reconstituída com um diluente adequado para gerar uma formulação reconstituída de concentração de anticorpo anti-CD20 alta.
[0146] A formulação SC de anticorpo CD20 em concordância com esta invenção é preferencialmente usada pra tratar câncer, preferencialmente um câncer que expressa CD20,
[0147] O termo "cerca de" conforme usado na presente especificação de patente deve especificar que o valor específico fornecido pode variar a uma certa extensão, tal como, por exemplo, significa que as variações na faixa de ± 10%, preferencialmente ± 5%, mais preferencialmente ± 2% estão incluídas no valor dado.
[0148] Com exceção dos ensaios acima, vários ensaios in vivo estão disponíveis ao versado na técnica. Por exemplo, um versado pode expor as células dentro do corpo do paciente a um anticorpo que é opcionalmente marcado com uma etiqueta detectável, por exemplo, um isótopo radioativo e a ligação do anticorpo às células no paciente pode ser avaliada, por exemplo, por varredura externa por radioatividade ou analisando-se uma biopsia tomada de um paciente exposto anteriormente ao anticorpo.
[0149] É contemplado que a formulação SC de anticorpo CD20 em concordância com esta invenção pode também ser usada para tratar vários desordens ou doenças não malignas, tais incluem a doença autoimune conforme definida na presente invenção; endometriose; esclerodermia; reestenose; pólipos tal como pólipos do cólon, pólipos nasais ou pólipos gastrointestinais; fibroadenoma, doença respiratória; colecistite; neurofibromatose; doença renal policística, doenças inflamatórias, doenças de pele, incluindo psoríase e dermatite, doença vascular; condições envolvendo proliferação anormal de células epiteliais vasculares; úlceras gastrointestinais, doença de Ménétrier, adenomas secretores ou síndrome de perda de proteína, desordens renais, desordens angiogênicos; doença ocular tal como degeneração macular relacionada à idade, síndrome de histoplasmose ocular presumida, neovascularização da retina da retinopatia diabética proliferativa, vascularização da retina, retinopatia diabética ou degeneração macular relacionada à idade; patologias associadas aos ossos tal como osteoartrite, osteoporose e raquitismo; danos na sequência de um evento cerebral isquêmico; doenças fibróticas ou endêmicas tais como cirrose hepática, fibrose pulmonar, carcoidose, tireoidite, síndrome de hiperviscosidade sistêmica, doença de Osler-Weber Rendu, doença pulmonar obstrutiva crônica ou edema na sequência de queimaduras, trauma, hipóxia, radiação, derrame ou isquemia; reação de hipersensibilidade da pele; retinopatia diabética e nefropatia diabética, síndrome de Guillain-Barre; doença de enxerto versus hospedeiro rejeição de transplante, doença de Paget; inflamação das articulações ou dos osssos; fotoenvelhecimento (por exemplo, causado por radiação UV da pele humana); hipertrofia benigna da próstata, certas infecções microbianas, incluindo patógenos microbianos selecionados a partir de adenovírus, hantavírus, Borrelia burgdorferi, Yersinia spp. e Bordetella pertussis; trombos causados pela agregação plaquetária; condições reprodutivas tais como endometriose, síndrome da hiperestimulação ovariana, pré-eclâmpsia, hemorragia uterina disfuncional, ou menometrorragia; sinovite; ateroma; nefropatias agudas e crônicas (incluindo glomerulonefrite proliferativa e diabetes induzida por doença renal); eczema; formação de cicatriz hipertrófica choque endotóxico e infecção fúngica; polipose adenomatosa familiar, doenças neurodedenerativas (por exemplo, doença de Alzheimer, demência relacionada à AIDS, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinal e degeneração cerebelar); síndromes mielodisplásicas; anemia aplástica: lesão isquêmica, fibrose do pulmão, rim ou fígado; doença de hipersensibilidade mediada por célula T, estenose hipertrófica do piloro infantil, síndrome obstrutiva urinária, artrite psoriática; e tireoidite de Hasimoto. As indicações não malignas preferenciais para terapia são conforme definidas na presente invenção.
[0150] Quando a indicação for câncer, o paciente pode ser tratado com uma combinação da formulação de anticorpo e um agente quimioterápico. A administração combinada inclui coadiministração ou administração concomitante, com o uso de formulações separadas ou uma única formulação farmacêutica e administração consecutiva em qualquer ordem, em que preferencialmente há um período de tempo enquanto ambos (ou todos) os agentes ativos exercem simultaneamente suas atividades biológicas. Dessa forma, o agente quimioterápico pode ser administrado antes da ou após a administração da formulação de anticorpo em concordância com a presente invenção. Nesta realização, a sincronização entre pelo menos uma administração do agente quimioterápico e pelo menos um administração a formulação de anticorpo em concordância com a presente invenção é preferencialmente aproximadamente 1 mês ou menos e mais preferencialmente aproximadamente 2 semanas ou menos. Alternativamente, o agente quimioterápico e a formulação de anticorpo em concordância com a presente invenção são administrados ao mesmo tempo ao paciente, em uma única formulação ou formulações separadas.
[0151] O tratamento com a dita formulação de anticorpo resultará em uma melhora nos sinais e sintomas do câncer ou doença. Por exemplo, quando a doença sendo tratada é câncer, tal terapia pode resultar em uma melhora na sobrevida (sobrevida geral e/ u sobrevida livre de progressão) e / ou pode resultar em uma resposta clínica objetiva (parcial ou completa). Além disso, o tratamento com a combinação do agente quimioterápico e a formulação de anticorpo pode resultar em um benefício terapêutico maior que aditivo ou sinérgico ao paciente.
[0152] Preferencialmente, o anticorpo na formulação administrada é um anticorpo recombinante. Entretanto, o anticorpo administrado pode ser conjugado com um agente citotóxico. Preferencialmente, o imunoconjugado e/ou antígeno ao qual é ligado é internalizado pela célula, resultando na eficácia terapêutica aumentada do imunoconjugado em matar a célula de câncer a qual se liga. Em uma realização preferencial, o agente citotóxico direciona ou interfere com o ácido nucléico na célula de câncer. Os exemplos de tais agentes citotóxicos incluem maitansinoides, caliqueamicinas, ribonucleases e DNA endonucleases. Os imunoconjugados preferenciais são imunoconjugado de Rituximabe-maitansinoide similarmente a Trastuzumabe-DM1 (T-DM1) conforme são descritos em WO 2003/037992, mais preferencialmente o imunoconjugado T-MCC-DM1.
[0153] Para entrega subcutânea, a formulação pode ser administrada através de um dispositivo adequado, tal como (mas não limitado a) uma seringa; um dispositivo de injeção (por exemplo, o dispositivo INJECT-EASETM e GENJECTTM); uma rampa de infusão (tal como, por exemplo, Accu-ChekTM); uma caneta injetora (tal como a GENPENTM); um dispositivo sem agulha (por exemplo, MEDDECTORTM e BIOJECTORTM); ou através de um sistema de entrega a batelada subcutânea.
[0154] A quantidade de administração da dita formulação de anticorpo anti-CD20 para a prevenção ou tratamento da doença e a sincronização da administração dependerão do tipo (espécie, gênero, idade, peso, etc.) e da condição do paciente sendo tratado e da severidade da doença ou condição sendo tratada. São também importantes para a determinação de dose apropriada o curso da doença, se o anticorpo é administrado para propósitos terapêuticos ou preventivos, a terapia anterior, o histórico clínico do paciente e sua resposta ao anticorpo. A determinação da dose final fica a critério do médico assistente. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma só vez ou durante uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e severidade da doença, cerca de 1 μg /kg a 50 mg/kg (por exemplo, 0,1 a 20 mg/kg) do dito anticorpo anti-CD20 é uma dosagem candidata inicial para a administração ao paciente.
[0155] A dosagem preferencial do dito anticorpo anti-CD20 estará na faixa de cerca de 0,05mg/kg a cerca de 30mg/kg de peso corporal. Dessa forma, uma ou mais doses de cerca de 0,5mg/kg, 2,0mg/kg, 4,0mg/kg, 10 mg/kg ou 30mg/kg (ou qualquer combinação dos mesmos) podem ser administradas ao paciente. Dependendo do tipo (espécie, gênero, idade, peso, etc.) e da condição do paciente e do tipo de anticorpo anti-CD20, a dosagem do dito primeiro pode ser diferente da dosagem do dito segundo anticorpo anti-CD20. Tais doses podem ser administradas diariamente ou intermitentemente, por exemplo, cada terceiro dia para sexto, ou mesmo a cada uma a três semanas. Uma dose de carregamento maior inicial, seguida por uma ou mais doses menores podem ser administradas. Com base em estudos clínicos (consulte também os Exemplos 3 e 4 para exemplificação não limitante para o Rituximabe), a faixa de dosagem preferencial é 300 mg/m2 a 900 mg/m2. Mais preferencial, a faixa de dosagem preferencial do dito anticorpo anti-CD20 é cerca de 375 mg/m2 a cerca de 800 mg/m2. As dosagens específicas preferenciais do dito anticorpo anti-CD20 são dosagens de cerca de 375 mg/m2, cerca de 625 mg/m2 e cerca de 800 mg/m2. Também são preferenciais as doses fixas do dito anticorpo anti-CD20,
[0156] Em uma realização, as dosagens fixas para linfomas de célula B, preferencialmente não linfoma de Hodgkin, são conforme segue. São preferenciais cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg do dito anticorpo anti-CD20 por dose. São mais preferenciais as dosagens selecionadas a partir do grupo de cerca de 1.300 mg, cerca de 1.500 mg, cerca de 1.600 mg e cerca de 1.700 mg do dito anticorpo anti-CD20 por dose. A mais preferencial, a dosagem fixa para pacientes com linfoma de célula B, preferencialmente pacientes com não linfoma de Hodgkin, é cerca de 1400 mg do dito anticorpo anti-CD20 (por exemplo, Rituximabe) por dose que pode ser administrado de acordo com várias programações incluindo aproximadamente a cada 2 meses (incluindo aproximadamente a cada 8 semanas), aproximadamente a cada 3 meses (incluindo aproximadamente a cada 12 semanas), por cerca de 2 anos (ou mais), etc. (consulte também os Exemplos 3 e 4 para exemplificação não limitante para o Rituximabe).
[0157] Em outra realização, dosagens fixas para pacientes com leucemia, preferencialmente pacientes com leucemia linfocítica crônica (CLL), são conforme segue. São preferenciais cerca de 1.600 mg a cerca de 2.200 mg do dito anticorpo anti-CD20 por dose. São mais preferenciais as dosagens selecionadas a partir do grupo de cerca de cerca de 1.700 mg, cerca de 1.800 mg, cerca de 1.900 mg e cerca de 2.100 mg do dito anticorpo anti-CD20 por dose. Em uma realização, a dosagem fixa para pacientes com leucemia, preferencialmente pacientes com CLL, é cerca de 1.870 mg do dito anticorpo anti-CD20 (por exemplo, Rituximabe) por dose.
[0158] Em ainda outra realização, as dosagens fixas para pacientes com doença autoimune, tal como artrite reumatóide, esclerose múltipla, lúpus nefrite, diabetes, ITP e vasculite são conforme segue. São preferenciais cerca de 1.200 mg a cerca de 2.200 mg do dito anticorpo anti-CD20 por dose, por exemplo, cerca de 1.500 mg do dito anticorpo anti- CD20 (por exemplo, Rituximabe) por dose.
[0159] Se um agente quimioterápico for administrado, o mesmo é usualmente administrado a dosagens conhecidas, portanto, ou opcionalmente reduzida devido à ação combinada dos fármacos ou efeitos colaterais negativos atribuíveis à administração do agente quimioterápico. As programações de dosagem e preparação para tais agentes quimioterápicos podem ser usadas de acordo com as instruções do fabricante ou conforme determinado empiricamente pelo versado na técnica. As programações de dosagem e preparação para tal quimioterapia são também descritos em Chemotherapy Service Ed., M.C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992).
[0160] A formulação farmacêutica estável do anticorpo anti- CD20 farmaceuticamente ativo em concordância com a invenção é preferencialmente administrada como injeção subcutânea, através da qual a administração é preferencialmente repetida diversas vezes com intervalos de tempo de 3 semanas (q3w). Mais preferencialmente o volume total do fluido de injeção é administrado dentro de um período de tempo de 1 a 10 minutos, preferencialmente 2 a 6 minutos, mais preferencialmente 3 ± 1 minutos. Mais preferencialmente, 2 mL/minuto são administrados, isto é, por exemplo, aproximadamente 240 mg/min. Para muitos pacientes quando nenhum outro agente quimioterápico intravenoso (IV) foi dado, tal administração subcutânea leva à conveniência de paciente aumentada com o potencial para auto-administração em casa. Isso leva ao cumprimento melhorado e reduziria/eliminaria custos associados com a administração IV (ou seja, custos de enfermagem para administração IV, aluguel de leitos diários, deslocamento de paciente, etc.). A administração subcutânea em concordância com a presente invenção será mais provavelmente associada com uma frequência reduzida e/ou intensidade de reações relacionadas à infusão.
[0161] Em uma realização preferencial, o medicamento é útil para prevenir ou reduzir a metástase ou disseminação adicional em tal paciente que sofre de câncer que expressa CD20. O medicamento é útil para aumentar a duração de sobrevida de tal paciente, aumentando a sobrevida livre de progressão de tal paciente, aumentando a duração de resposta, resultando em uma melhora estatisticamente significante e clinicamente significativa paciente tratado conforme medida pela duração de sobrevida, sobrevida livre de progressão, taxa de resposta ou duração de resposta. Em uma realização preferencial, o medicamento é útil para aumentar a taxa de resposta em um grupo de pacientes.
[0162] No contexto desta invenção, um ou mais outros agentes ou citocina(s) inibidores de crescimento, citotóxicos, quimioterapêuticos, antiangiogênicos, anticâncer adicionais, ou compostos que acentuam os efeitos de tais agentes podem ser usados no tratamento com anticorpo anti-CD20 de câncer que expressa CD20. Preferencialmente o tratamento com anticorpo anti-CD20 é usado sem tais agentes citotóxicos, quimioterapêuticos ou anticâncer adicionais, ou compostos que acentuem os efeitos de tais agentes.
[0163] Tais agentes incluem, por exemplo: agentes alquilantes ou agentes com uma ação alquilante, tal como ciclofosfamida (CTX; por exemplo, Cytoxan®), clorambucil (CHL; por exemplo, leukeran®), cisplatina (CisP; por exemplo, platinol®) busulfan (por exemplo, myleran®), melfalan, carmustina (BCNU), estreptozotocina, trietilenomelamina (TEM), mitomicina C, e similares; antimetabólitos, tal como metotrexato (MTX), etoposida (VP 16; por exemplo, vepesid®), 6-mercaptopurina (6MP), 6- tiocguanina (6TG), citarabina (Ara-C), 5-fluorouracil (5-FU), capecitabina (por exemplo, Xeloda®), dacarbazina (DTIC), e similares; antibióticos, tal como actinomicina D, doxorubicina (DXR; por exemplo, adriamycin®), daunorubicina (daunomicina), bleomicina, mitramicina e similares; alcaloides, tal como alcaloides vinca tal como vincristina (VCR), vinblastina, e similares; e outros agentes antitumor, tal como paclitaxel (por exemplo, taxol®) e derivados de paclitaxel, os agentes citostáticos, glicocorticoides tal como dexametasona (DEX; por exemplo, decadron®) e corticosteroides tal como prednisona, inibidores de enzima nucleosídea tal como hidroxiureia, enzimas de depleção de aminoácido amino tal como asparaginase, leucovorina e outros derivados de ácido fólico, e agentes antitumor similares e diversos. Os seguintes agentes podem também ser usados como agentes adicionais: arnifostina (por exemplo, ethyol®), dactinomicina, mecloretamina (mostarda de nitrogênio), estreptozocina, ciclofosfamida, lomustina (CCNU), doxorrubicina lipo (por exemplo, doxil®), gemcitabina (por exemplo, gemzar®), daunorubicina lipo (por exemplo, daunoxome®), procarbazina, mitomicina, docetaxel (por exemplo, taxotere®), aldesleucina, carboplatina, oxaliplatina, cladribina, camptotecina, CPT 11 (irinotecan), 10-hidroxi 7-etil-camptotecina (SN38), floxuridina, fludarabina, ifosfamida, idarrubicina, mesna, interferon beta, interferon alfa, mitoxantrona, topotecan, leuprolida, megestrol, melfalan, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargase, pentostatina, pipobromano, plicamicina, tamoxifen, teniposida, testolactona, tioguanina, tiotepa, mostarda de uracila, vinorelbina, clorambucil. Preferencialmente o tratamento com anticorpo anti-CD20 é usado sem agentes adicionais.
[0164] O uso dos agentes citotóxicos e anticâncer descritos acima assim como fármacos anticâncer específicos por alvo antiproliferativos como inibidores de proteína quinase em regimes quimioterapêuticos é de forma geral bem caracterizado nas técnicas de terapia de câncer, e seu uso na presente invenção se encontra sob as mesmas considerações para monitoramento de tolerância e eficácia e para controle de rotas de administração e dosagens, com alguns ajustes. Por exemplo, as dosagens reais dos agentes citotóxicos podem variar dependendo da resposta de célula cultivada do paciente determinada com o uso de métodos de histocultura. De forma geral, a dosagem será reduzida em comparação à quantidade usada na ausência de outros agentes adicionais.
[0165] As dosagens típicas de um agente citotóxico eficaz pode estar nas faixas recomendadas pelo fabricante, e onde indicadas por respostas in vitro ou respostas em modelos animais, podem ser reduzidas em até cerca de uma ordem de concentração ou quantidade de magnitude. Dessa forma, a dosagem real dependera do julgamento do médico, a condição do paciente, e a eficácia do método terapêutico com base na responsividade in vitro das células malignas cultivadas primárias ou amostra de tecido histocultivada, ou as respostas observadas nos modelos animais apropriados.
[0166] No contexto desta invenção, uma quantidade eficaz de radiação ionizante pode ser executada e/ou um radiofarmacêutico pode ser usado adicionalmente ao tratamento por anticorpo anti-CD20 de câncer que expressa CD20. A fonte de radiação pode ser ou externa ou interna ao paciente que é tratado. Quando a fonte é externa ao paciente, a terapia é conhecida como terapia de radiação de feixe externo (EBRT). Quando a fonte de radiação é interna ao paciente, o tratamento é chamado braquiterapia (BT). Os átomos radioativos para uso no contexto desta invenção podem ser selecionados do grupo que inclui, mas não se limita a, rádio, césio-137, irídio-192, amerício-241, ouro-198, cobalto-57, cobre-67, tecnétio-99, iodo-123, iodo-131, e índio-111. É também possível marcar o anticorpo com tais isótopos radioativos. Preferencialmente o tratamento com anticorpo anti-CD20 é usado sem radiação ionizante.
[0167] A terapia de radiação é um tratamento padrão para controlar tumores inoperáveis ou irressecáveis e/ou metástases de tumor. Resultados melhorados foram vistos quando a terapia de radiação foi combinada com quimioterapia. A terapia de radiação é baseada no princípio de que a radiações de dose alta entregue a uma área alvo resultará na morte das células reprodutivas em ambos os tecidos normais e tumorais. O regime de dosagem de radiação é geralmente definido nos termos da dose absorvida de radiação (Gy), tempo e fracionamento e deve ser definido cuidadosamente pelo oncologista. Uma quantidade de radiação que um paciente recebe dependerá de varias considerações, mas as duas mais importantes são a localização do tumor em relação a outras estruturas criticas ou órgãos no corpo e a extensão a qual o tumor se espalhou. Um curso típico de tratamento para um paciente submetido à terapia de radiação será uma programação de tratamento durante um período de 1 a 6 semanas, com uma dose total de entre 10 e 80 Gy administrado ao paciente em uma única fração diária de cerca de 1,8 a 2,0 Gy, 5 dias por semana. Em uma realização preferencial desta invenção há sinergia quando tumores em pacientes humanos são tratados com a combinação dos tratamentos da invenção e radiação. Em outras palavras, a inibição do crescimento de tumor por meio dos agentes compreendendo a formulação de anticorpo CD20 da invenção é elevada quando combinada com radiação, opcionalmente com agentes anticâncer ou quimioterápicos. Os parâmetros das terapias de radiação adjuvantes estão, por exemplo, contidos em WO 99/60023.
[0168] Outros regimes terapêuticos podem ser combinados com o anticorpo incluindo, mas não limitado a um segundo (terceiro, quarto, etc.) agente(s) quimioterápico(s) (em outras palavras, um "coquetel" de diferentes agentes quimioterápicos); outro anticorpo monoclonal; um agente inibidor de crescimento; um agente citotóxico; um agente quimioterápico; um agente anti-angiogênico; e/ou citocina, etc.; ou qualquer combinação adequada dos mesmos.
[0169] Adicionalmente aos regimes terapêuticos, o paciente pode ser submetido à remoção cirúrgica das células de câncer e/ou terapia de radiação.
[0170] Em outra realização da invenção, um artigo de fabricação é fornecido que contém a formulação farmacêutica da presente invenção e fornece instruções para seu uso. Esse artigo de fabricação compreende um recipiente. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, receptáculos (por exemplo, receptáculos de múltiplas câmaras ou câmara dupla), seringas (tal como, seringas de múltiplas câmaras ou câmara dupla) e tubos de teste. O recipiente pode ser formado a partir de uma variedade de materiais tais como vidro e plástico. O recipiente contém a formulação e o rotulo no, ou associado com o, recipiente pode indicar direções para uso. O recipiente que contém a formulação pode ser um receptáculo multi-uso que permite administrações repetidas (por exemplo, de 2 a 6 administrações) da formulação reconstituída. O artigo de fabricação pode incluir adicionalmente outros materiais desejáveis do ponto de vista do usuário ou comercial incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas e insertos de folhetos informativos com instruções de uso.
[0171] O anticorpo que é formulado em concordância com a presente invenção é, de maneira preferencial, essencialmente puro e de maneira desejável essencialmente homogêneo (isto é, livre de proteínas contaminantes, etc., através do qual a enzima hialuronidase na formulação em concordância com esta invenção não é considerada uma proteína contaminante do anticorpo monoclonal anti-CD20 em concordância com a presente invenção).
[0172] A invenção será mais completamente entendida Poe referência aos seguintes Exemplos. Os mesmos não devem, entretanto, ser construídos como limitantes do escopo da invenção. Todas as citações de patente e literatura são incorporadas na presente invenção a título de referência.
EXEMPLOS
[0173] As formulações de anti-CD20 para administração subcutânea de acordo com a invenção foram desenvolvidas com base nos resultados experimentais conforme fornecido abaixo com o uso dos ensaios e métodos analíticos e preparatórios gerais conforme destacados abaixo.
EXEMPLO 1: PREPARAÇÃO DE FORMULAÇÕES LÍQUIDAS ALTAMENTE CONCENTRADAS
[0174] O Rituximabe é fabricado por técnicas geralmente conhecidas a partir da produção de proteínas recombinantes. Uma linha de célula de ovário de hamster chinês (CHO) preparada conforme descrita em EP-B-2000149 é expandida na cultura de célula a partir de um banco de células principal, O anticorpo monoclonal de Rituximabe é colhido a partir do fluido de cultura celular e purificado com o uso de cromatografia de afinidade de Proteína A imobilizada, cromatografia de troca de cátion, uma etapa de filtração para remover contaminações virais, seguida pela cromatografia de troca de anion e uma etapa de ultrafiltração/diafiltração.
[0175] A rHuPH20 é fabricada por técnicas geralmente conhecidas da produção de proteínas recombinantes. O processo começa com o descongelamento das células do banco de células de trabalho (WCB) ou banco de células principal (MCB) e a expansão através de cultura celular em uma série de frascos giratórios. A cultura celular até 6 litros é usada para fornecer uma fonte contínua de células mantida sob pressão seletiva com metotrexato. Quando expandida a aproximadamente 36 litros a cultura é transferida a um bioreator de 400 litros para um volume de batelada final de aproximadamente 300 litros. O bioreator de produção é operado no modo de batelada alimentada, sem nenhuma pressão de seleção e a duração da fase de produção é aproximadamente duas semanas. A rHuPH20 é secretada no fluido de cultura. Um bioreator de 1.000 pode ser também usado para um volume de batelada final de 500 litros. Após a conclusão da fase de produção, a coleta é clarificada por filtração e é, então, tratada com solvente/detergente para inativar vírus. A proteína é, então, purificada por uma série de quatro processos de cromatografia em coluna para remover impurezas relacionadas ao produto e processo. Uma etapa de filtração viral é realizada e a massa filtrada é, então, considerada, formulada no tampão final: 10 mg/mL de rHuPH20 em 20 mM de L-histidina/ tampão HCl, pH 6,5, 130 mM de NaCl, 0,05% (p/v) de polissorbato 80, A massa de rHuPH20 é armazenada abaixo de -70°C.
[0176] Os outros excipientes da formulação em concordância com a presente invenção são amplamente usados na pratica e conhecidos aos versados na técnica. Não há, portanto, nenhuma necessidade de explicar os mesmos aqui em detalhes.
[0177] As Formulações de produto de fármaco líquidas para administração subcutânea de acordo com a invenção foram desenvolvidas conforme segue.
[0178] Para a preparação das formulações líquidas, o Rituximabe teve o tampão trocado por um tampão de diafiltração que contém a composição de tampão antecipada e quando exigido, concentrada pela diafiltração para uma concentração de anticorpo de aproximadamente 200 mg/mL. Após a conclusão do processo de diafiltração, os excipientes (por exemplo, trealose, rHuPH20, tensoativo) foram adicionados como soluções de estoque à solução de anticorpo. Finalmente, a concentração de proteína foi ajustada com um tampão para a concentração de Rituximabe final de aproximadamente 120 mg/mL.
[0179] Todas as formulações foram filtradas de modo estéril através de filtros de ligação de proteína baixa de 0,22 μl e preenchidas assepticamente em receptáculos de vidro de 6 mL estéreis fechados com tamponadores de borracha revestidas com ETFE (Copolímero de etileno e tetrafluoroetileno) e tampas de alumínio frisadas. O volume de preenchimento foi aproximadamente 3,0 mL. Essas formulações foram armazenadas a diferentes condições de clima (5°C, 25°C e 40°C) para diferentes intervalos de tempo e estressadas por agitação (1 semana a uma frequência de agitação de 200 rpm a 5°C e 25°C) e métodos de estresse de congelamento e descongelamento. As amostras foram analisadas antes e depois da aplicação dos testes de estresses pelos seguintes métodos analíticos: 1) Espectrofotometria UV; 2) Cromatografia de exclusão de tamanho (SEC); 3) por Cromatografia de troca iônica (IEC); 4) por turvação da solução; 5) para partículas visíveis; e 6) para atividade de rHuPH20. A espectrofotometria UV, usada para a determinação do teor de proteína, foi realizada em um espectrofotômetro Perkin Elmer À35 UV em uma faixa de comprimento de onda de 240 nm a 400 nm. As amostras de proteína pura foram diluídas a aproximadamente 0,5 mg/mL com o tampão de formulação correspondente. A concentração de proteína foi calculada de acordo com Equação 1. EQUAÇÃO 1:
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[0180] A absorção de luz UV a 280 nm foi corrigida para disseminação de luz a 320 nm e multiplicado com o fator de diluição, que foi determinado a partir das densidades e massas ponderadas da amostra pura e o tampão de diluição. O numerador foi dividido pelo produto do comprimento de trajetória de cuveta d e o coeficiente de extinção .-.
[0181] A Cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) foi usada para detectar espécies de peso molecular alto solúvel (agregados) e produtos de hidrolise de peso molecular baixo (LMW) nas formulações. O método usou um instrumento HPLC adequado equipado com um detector UV (comprimento de onda de detecção 280nm) e uma coluna TosoHaas TSK G3000SWXL (7,8 x 300 mm). Os produtos de hidrolise e agregados e monômero intacto foram separados por um perfil de extração isocrática, com o uso de hidrofosfato de di-potássio a 0,2M, cloreto de potássio a 025 M, pH 7,0 com uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min.
[0182] A Cromatografia de troca iônica (IEC) foi realizada para detectar produtos de degradação química que alteram a carga de rede do of Rituximabe nas formulações. Para esse propósito, o Rituximabe foi digerido com Papaína. O método usou um instrumento HPLC adequado equipado com um detector UV (comprimento de onda de detecção 280nm) e uma coluna de troca de cátion analítica PL-SCX 1000A de Polymer Labs. MES a 10 mM, pH 6,0 e MES a 10 mM, cloreto de potássio a 0,2 M, pH 6,0, foram usados como fases móveis A e B, respectivamente com uma taxa de fluxo de 1 mL/min.
[0183] Para a determinação da turvação, a opalescência foi medida em FTU (unidades de turvação) com o uso de um turbidímetro HACH 2100 AN a temperatura ambiente.
[0184] As amostras foram analisadas para partículas visíveis usando-se um instrumento de inspeção visual Seidenader V90-T.
[0185] Um ensaio in vitro de rHuPH20 como hialuronidase foi usado como ensaio de atividade. O ensaio tem como base a formação de um precipitado insolúvel quando hialuronan (hialuronato de sódio) se aglutina a um precipitante catiônico. A atividade de enzima foi medida através da incubação de rHuPH20 com substrato de hialuronan e então precipitação do hialuronan indigesto com soro de albumina acidificada (soro equino). A turvação foi medida em um comprimento de onda de 640 nm e a diminuição na turvação resultante da atividade de enzima no substrato de hialuronan é uma medida da atividade de enzima. O procedimento é executado com o uso de uma curva padrão gerada com diluições de padrão de referência de ensaio de rHuPH20, e a atividade de amostra é lida a partir da curva.
[0186] Os resultados dos testes de estabilidade para as Formulações A até J são fornecidos nas tabelas adicionadas abaixo.
COMPOSIÇÕES E DADOS DE ESTABILIDADE DE FORMULAÇÕES DE PRODUTO DE FÁRMACO RITUXIMABE LÍQUIDO DE ACORDO COM ESSA INVENÇÃO
[0187] A Formulação A é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 80, 2,000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
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n.d. não determinado
[0188] A Formulação B é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 80, 2,000 U/mL de rHuPH20 em pH 6,1.
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n.d. não determinado
[0189] A Formulação C é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 80, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
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n.d. não determinado
[0190] A Formulação D é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de ácido acético, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 20, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
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n.d. não determinado
[0191] A Formulação E é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 20, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
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n.d. não determinado
[0192] A Formulação F é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 120 mM de cloreto de sódio, 10 mM de metionina, 0,02% de polissorbato 80, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
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n.d. não determinado
[0193] A Formulação G é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de ácido cítrico, 120 mM de cloreto de sódio, 10 mM de metionina, 0,02% de polissorbato 80, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 6,5.
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n.d. não determinado
[0194] A Formulação H é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de ácido cítrico, 210 mM de diidrato de trealose, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 80, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 6,5.
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n.d. não determinado
[0195] A Formulação I é uma formulação líquida com a composição de 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 120 mM de cloreto de sódio, 10 mM de metionina, 0.04% polissorbato 80, 12,000 U/mL de rHuPH20 em pH 6,0.
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n.d. não determinado
[0196] A Formulação J é uma formulação líquida com a composição de 25 mg/mL de GAlO l (HuMabe<CD20>), 20 mM de L-histidina, 240 mM de diidrato de trealose, 0,02% de poloxâmero 188, 2,000 U/mL de rHuPH20 em pH 6,0.
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EXEMPLO 2: PREPARAÇÃO DE FORMULAÇÕES LÍQUIDAS ANTI-CD20 2H7 HUMANIZADAS
[0197] Para a preparação as formulações líquidas, o anticorpo anti-CD20 humanizado recombinante (2H7.vl6 conforme divulgado no documento WO 2006/084264) foi trocado através de tampão em relação a um tampão de diafiltração que contém a composição tampão antecipada e quando exigido, concentrado em uma concentração de anticorpo de aproximadamente 60 e 120 mg/mL. Após alcançar a concentração alvo, os excipientes (por exemplo, trealose, rHuPH20, polissorbato 20) foram então adicionados como soluções de estoque à solução de anticorpo. Finalmente, a concentração de proteína foi ajustada com o tampão de formulação final a uma concentração 2H7 humanizada de aproximadamente 30, 50, e 100 mg/mL.
[0198] Todas as formulações foram esterilizadas por filtração através de 0.22 μm filtros aglutinantes com baixo teor de proteína e preenchido de forma asséptica em receptáculos de vidro estéreis de 3 mL tamponados com tamponamentos de borracha de butila laminados com resina de flúor e terminados com vedações do tipo flip-off de plástico/alumínio. O volume preenchido foi aproximadamente 1,2 mL. Essas formulações foram armazenadas em temperaturas diferentes (5°C, 25°C e 40°C) para diferentes intervalos de tempo. As amostras foram analisadas em cada em cada ponto no tempo de estabilidade através dos seguintes métodos analíticos: 1) Espectrometria UV 2) Cromatografia excludente de tamanho (SEC); 3) Cromatografia de troca de íon (IEC); 4) Ensaio de citotoxicidade dependente de complemento para atividade 2h7 humanizada 5) Ensaio turbidimétrico para atividade de rHuPH20 1) . A concentração de proteína foi determinada através de espectroscopia de absorção ultravioleta com o uso de um espectrofotômetro Agilent 8453 em uma faixa de comprimento de onda desde 240 nm até 400 nm. Amostras foram diluídas através de gravimetria em aproximadamente 0,5 mg/mL com o tampão de formulação correspondente. As concentrações de proteínas foram calculadas com o uso da Equação 1:
[0199] A concentração de proteína= ((Amax - A320) x DF) / (8(cm2/mg) x d(cm)) (Equação 1) em que DF é o fator de diluição, d é o comprimento de trajetória de cadinho e ε é o coeficiente de extinção, que é 1,75 (cm2/mg-1) para 2H7 em Amax. A absorção de luz UV em Amax (tipicamente 278 a 280 nm) foi corrigida para dispersão de luz a 320 nm e multiplicada com o fator de diluição, que foi determinado a partir das massas pesadas e densidades da amostra pura e o tampão de diluição. O numerador foi dividido pelo produto do comprimento de trajetória do cadinho d e o coeficiente de extinção ε. 2) . Cromatografia excludente de tamanho (SEC) foi usada para detectar espécies de peso molecular alto solúvel (agregados) e produtos de hidrólise de peso molecular baixo (fragmentos) nas formulações. SEC foi executado em um HPLC série 1100 de Agilent Technologies, Inc. equipado com um detector UV (comprimento de onda de detecção 280nm) e uma coluna TSK G3000SWXL (7,8x300 mm). Produtos de hidrólise, agregados e monômeros intactos foram separados através de um perfil de eluição isocrático, com o uso de fosfato de potássio 0,20M e cloreto de potássio 0,25M em pH 6,2 com uma taxa de fluxo de 0,3 mL/min. 3) . Cromatografia de troca de íon (IEC) foi desempenhada para detectar produtos de degradação química que alteram a carga líquida do anticorpo anti-CD20 nas formulações. Para este propósito, o anticorpo anti- CD20 é incubado com Carbóxipeptidase B para catalisar a hidrólise de aminoácidos básicos. A cromatografia de troca de íon foi executada em um HPLC série 1100 de Agilent Technologies, Inc. com um detector UV (comprimento de onda de detecção 280nm) e uma coluna Dionex ProPac WCX-10 (4 x 250 mm). Variantes ácidas e básicas foram separadas com o uso de um gradiente linear de 25mM de fosfato de potássio em pH 6,9 (fase móvel A) e 120mM de cloreto de potássio dissolvido em 25mM de fosfato de potássio (fase móvel B) com uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min. 4) . O ensaio de ensaio de citotoxicidade dependente de complemento (CDC) foi desempenhado para determinar a atividade in vitro do anticorpo anti-CD20. O ensaio de potência de citotoxicidade dependente de complemento (CDC) é usado para medir a habilidade do anticorpo para causar a lise de células linfoblastóides B humanas (WIL2-S) na presença do complemento humano. O ensaio é desempenhado em placas de microtitulação de cultura de tecido com 96 cavidades. Nesse ensaio, concentrações variadas do material, controle, ou amostra(s) de referência do anticorpo anti-CD20 diluído em diluente de ensaio são incubados com células WIL2-S (50.000 células/cavidade) na presença de uma quantidade fixa do complemento humano. A placa é incubada a 37°C/5% de CO2 em uma incubadora umidificada durante 1 a 2 horas. No fim do período de incubação, 50μl do corante de oxirredução, ALAMARBLUE™ é adicionado em cada cavidade e a placa é incubada durante 15 a 26 horas. ALAMARBLUE™ é um corante de oxirredução que exibe fluorescência em um comprimento de onda de excitação de 530 nm e um comprimento de onda de emissão de 590 nm quando reduzido por células vivas. Portanto, as mudanças na cor e fluorescência são proporcionais ao número de células viáveis. Os resultados, expressos em unidades de fluorescência relativa (RFU), são plotadas em relação às concentrações de anticorpo anti-CD20 e um programa de linhas paralelas é usado para estimar a atividade de amostras de anticorpos anti-CD20 em relação ao material de referência. 5) . Um ensaio turbidimétrico foi usado para determinar a atividade de hialuronidase e concentração de enzima. Esse método tem como base a formação de um precipitado insolúvel quando ácido hialurônico se aglutina com soro de albumina acidificada. Brevemente, uma série de diluição do padrão de referência de funcionamento de rhuPH20 hialuronidase (Halozyme, Inc.) que varia de 2,5 U/mL a 0,25 U/mL é preparado em diluente de enzima (70 mM de NaCl, 25 mM de PIPES, pH 5,5, 0,66 mg/mL de gelatina hidrolisada, 0,1% de albumina de soro humano). As amostras de teste são diluídas em uma concentração final de 1,5 U/mL em diluente de enzima. 30 μm das diluições padrão e de amostra são transferidas em uma placa com 96 cavidades “de fundo preto e claro” (Nunc). A placa é então coberta e pré-amornada por 5 minutos a 37°C. A reação é então iniciada ao adicionar 30 μm de solução de substrato de ácido hialurônico pré-amornada de 0,25 mg/mL (70 mM de NaCl, 25 mM de PIPES, pH 5,5, 0,25 mg/mL de hialuronato de sódio seco, Lifecore Biomedical). A placa é agitada brevemente e incubada por 10 minutos a 37°C. Após essa etapa de incubação, a reação é interrompida ao adicionar 240 μm de solução de funcionamento de soro (2,5% de soro equino, 500 mM de acetato de potássio, pH 4,25). Após um período de desenvolvimento de 30 minutos em temperatura ambiente, a turvação da reação é medida em um comprimento de onda de 640 nm em um leitor de microplaca. A diminuição na turvação resultante da atividade de enzima no substrato de ácido hialurônico é uma medida da atividade de hialuronidase. A atividade de amostra é determinada em relação à curva de calibração gerada com as diluições do padrão de referência de funcionamento de rhuPH20.
[0200] Os resultados obtidos com as diversas formulações de anticorpo 2H7 humanizadas são mostrados nas tabelas a seguir:
[0201] A Formulação K é uma formulação líquida com a composição de 30 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20,0 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0023
*ND não determinado
[0202] A Formulação L é uma formulação líquida com a composição de 30 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 1500 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0024
*ND não determinado
[0203] A Formulação M é uma formulação líquida com a composição de 30 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 12,000 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0025
Figure img0026
*ND não determinado
[0204] A Formulação N é uma formulação líquida com a composição de 50 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 0 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0027
*ND não determinado
[0205] A Formulação O é uma formulação líquida com a composição de 50 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 1500 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
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Figure img0029
*ND não determinado
[0206] A Formulação P é uma formulação líquida com a composição de 50 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 12,000 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0030
*ND não determinado
[0207] A Formulação Q é uma formulação líquida com a composição de 100 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 0 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
Figure img0031
*ND não determinado
[0208] A Formulação R é uma formulação líquida com a composição de 100 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 1500 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
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*ND não determinado
[0209] A Formulação S é uma formulação líquida com a composição de 100 mg/mL humanizada 2H7, 30 mM de acetato de sódio, 8% de diidrato de trealose, 0,02% de polissorbato 20, 12,000 U/mL de rhuPH20 em pH 5,3.
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*ND não determinado
EXEMPLO 3: TRATAMENTO DE PACIENTES COM A FORMULAÇÃO
[0210] Regimes que contêm Rituximabe têm se tornado o padrão de cuidado para pacientes que sofrem de diversas malignidades de célula B CD20-positivas. Atualmente, Rituximabe é administrado como uma infusão intravenosa (IV) durante diversas horas. Esses longos períodos de infusão e os efeitos colaterais relacionados à infusão foram citados por alguns pacientes como consequências desconfortáveis do tratamento terapêutico atual. Adicionalmente, o procedimento exigido para estabelecer acesso intravenoso é considerado invasivo e pode ser doloroso, particularmente em pacientes com doenças malignas que são tratadas repetidamente. A administração subcutânea (SC) poderia simplificar significativamente o tratamento, encurtando a administração para menos do que 10 minutos e aprimorando a experiência do paciente. A hialuronidase humana recombinante (rHuPH20) foi desenvolvida e aprovada para aprimorar a dispersão e absorção de fármacos coadministrados. A mesma foi combinada com Rituximabe para permitir volumes de injeção maiores do que 10 mL para administração SC segura e confortável. Os objetivos desse tratamento foram selecionar a dose da formulação Rituximabe SC com rHuPH20 preparado conforme descrito no Exemplo 1 (Formulação A) fornecendo exposição comparável à Rituximabe IV e acessar sua segurança e tolerabilidade em pacientes femininos e masculinos com linfoma folicular (FL) durante o tratamento de manutenção.
[0211] Esse exemplo fornece dados de estágio 1 a partir de um estudo de Fase Ib adaptativo multi-central, de marca aberta, aleatorizado. 124 pacientes foram aleatorizados a um de quatro grupos de tratamento de manutenção Rituximabe: 16 pacientes em controle IV, 34 pacientes em dose 1 SC (375 mg/m2), 34 pacientes em dose 2 SC (625 mg/m2) e 40 pacientes em dose 3 SC (800 mg/m2). Antes da aleatorização, pacientes elegíveis foram tratados com pelo menos uma dose IV de Rituximabe em 375 mg/m2 na configuração de manutenção. Para pacientes aleatorizados a um dos coortes SC, uma única dose IV foi substituída por uma dose SC. Pacientes receberam Rituximabe seja em um regime a cada 2 meses (q2m) ou a cada 3 meses (q3m), conforme a prática local. Dados de segurança são disponíveis de um total de 119 pacientes. Rituximabe SC foi geralmente bem tolerado. Nenhuma observação clinicamente significativa ou eventos adversos sérios relacionados ao tratamento foram relatados. Um total de 95 eventos adversos (AEs) foram relatados em 46 pacientes (39%). O AE mais comumente documentado foi "reação associada à administração"(AAR, que inclui irritação, eritema e leve desconforto). Esses AARs foram reversíveis, predominantemente leve em intensidade e apenas 1 evento precisou de qualquer tratamento (metoclopramida para náusea). Em geral, o perfil de AE não é significativamente diferente àquele esperado em pacientes tratados com Rituximabe IV (após AAR, os eventos mais frequentes foram desordens gastrointestinais e infecções leves). Quatro eventos adversos sérios (SAEs) foram relatados em 4 pacientes separados, todos relatados como não relacionados à medicação do estudo. Não houve AEs que levassem à morte, retirada ou descontinuação do tratamento.
[0212] O volume total administrado SC em cada paciente na faixa entre 4,4 a 15,0 mL. A duração de injeção média foi de 2 mL/min. Concentrações de soro Rituximabe máximas nas coortes SC ocorridas entre o Dia 2 e o Dia 8 (48 h e 168 h). Parâmetros farmacocinéticos foram lineares com respeito a doses além da faixa de doses SC administradas (375, 625 e 800 mg/m2). Concentrações de Rituximabe no Dia 28 (C28) e a extensão da exposição de soro (AUCo-57) em pacientes administrados com 625 mg/m2 de Rituximabe SC foram comparáveis àqueles em pacientes administrados com a dose padrão de Rituximabe IV de 375 mg/m2 SC.
[0213] Concluindo, Rituximabe subcutâneo pode ser liberado rápida, confortavelmente e de modo seguro enquanto alcança exposições de soro comparáveis à formulação intravenosa aprovada em pacientes FL durante o tratamento de manutenção. A experiência do paciente foi favorável. Esses resultados suportam testes adicionais de Rituximabe subcutâneo e uma dose fixa de 1400 mg de Rituximabe SC foi selecionada para teste de não inferioridade Ctrough formal no estágio 2 do exame.
EXEMPLO 4: RITUXIMABESQ VS. RITUXIMABEIV EM PACIENTES COM LINFOMA NÃO- HODGKIN FOLICULAR
[0214] Pacientes com linfoma folicular (grau inferior) previamente não tratado são tratados com tratamento de manutenção com tanto: (a) Rituximabe SC Formulação (preparado de acordo com Exemplo 1, Formulação A) em combinação com CHOP ou CVP, ou (b) Rituximabe IV em combinação com CHOP ou CVP.
[0215] Pacientes serão aleatorizados para receber 375 mg/m2 de Rituximabe como infusão intravenosa ou 1400 mg de Rituximabe aplicado subcutaneamente. Em adição, pacientes receberão quimioterapia padrão (CVP ou CHOP). Pacientes que alcançaram uma resposta completa ou parcial após 8 ciclos de tratamento receberão tratamento de manutenção por um número adicional máximo de 12 ciclos. Os ciclos de tratamento de manutenção serão repetidos a cada 8 semanas. O tempo antecipado em tratamento de estudo é de 96 semanas.
[0216] Espera-se que o tratamento com 1400mg de anticorpo anti- CD20 Rituximabe SQ como um tratamento de manutenção a cada 8 semanas por até 12 ciclos seja seguro e eficaz no tratamento de linfoma folicular, opcionalmente em combinação com quimioterapia (que inclui CHOP ou CVP).

Claims (23)

1. FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA ESTÁVEL, altamente concentrada, para administração subcutânea de um anticorpo anti-CD20 farmaceuticamente ativo, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) 50 a 350 mg/mL de anticorpo anti-CD20; (b) 1 a 100 mM de um agente tamponante que proporciona um pH de 5,5 ± 2,0; (c) 1 a 500 mM de um estabilizante ou uma mistura de dois ou mais estabilizantes; (d) 0,01 a 0,1% de um tensoativo não iônico; e (e) 1.000 a 16.000 U/mL de uma enzima hialuronidase, preferencialmente 2.000 U/mL ou 12.000 U/mL.
2. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a concentração de anticorpo anti-CD20 é de 100 a 150 mg/mL, preferencialmente 120 ± 20 mg/mL.
3. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo fato de que o agente tamponante está em uma concentração de 1 a 50 mM.
4. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o agente tamponante proporciona um pH de 5,5 a 6,5, preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em 5,5, 6,0, 6,1 e 6,5.
5. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o agente tamponante é um tampão de histidina.
6. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o estabilizante é um sacarídeo, como, por exemplo, diidrato de α,α-trealose ou sacarose.
7. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o estabilizante está em uma concentração de 15 a 250 mM.
8. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 7, caracterizada pelo fato de que metionina é usada como um segundo estabilizante.
9. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que metionina está presente em uma concentração de 5 a 25 mM.
10. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o tensoativo não iônico é um polissorbato, preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em polissorbato 20, polissorbato 80, e copolímero de polietileno-polipropileno.
11. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que a concentração do polissorbato é 0,02% (p/v) a 0,08% (p/v).
12. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que a enzima hialuronidase é rHuPH20.
13. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD20 é Rituximabe.
14. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD20 é Ocrelizumabe.
15. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD20 é HuMabe<CD20>.
16. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que é estável mediante congelamento e descongelamento.
17. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que é na forma líquida.
18. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que é na forma liofilizada.
19. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que compreende 120 mg/mL de Rituximabe, 20 mM de L-histidina, 210 mM de trealose diidratada, 10 mM de metionina, 0,06% de polissorbato 80, 2.000 U/mL de rHuPH20 em pH 5,5.
20. USO DE UMA FORMULAÇÃO, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de uma doença ou desordem sensível a tratamento com um anticorpo anti-CD20, preferencialmente câncer ou uma doença não maligna.
21. USO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o dito medicamento compreende uma dose fixa de 1200 mg a 2200 mg do anticorpo anti-CD20.
22. USO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o dito medicamento compreende uma dose fixa de 1200 mg a 1800 mg do anticorpo anti-CD20.
23. USO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o dito medicamento compreende uma dose fixa de 1600 mg a 2200 mg do anticorpo anti-CD20.
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