MX2007008218A - Procedimiento de tratamiento. - Google Patents

Abstract

La invencion proporciona metodos para tratar enfermedades autoinmunes usando bajas dosis de anticuerpos anti-CD20 eficaces para reducir las celulas B en el paciente.

Description

PROCEDIMIENTO DE TRATAMIENTO CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención está relacionada con el tratamiento de enfermedades relacionadas con las células B a dosis de anticuerpos particulares. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los linfocitos son una de las diversas poblaciones de glóbulos blancos; reconocen y responden específicamente a antígenos extraños. Las tres clases principales de linfocitos son los linfocitos B (células B) , los linfocitos T (células T) y las células asesinas naturales (NK) . Los linfocitos B son las células responsables de la producción de anticuerpos y de suministrar una inmunidad humoral . Las células B maduran en la médula ósea y abandonan la médula expresando un anticuerpo de unión a antígeno en su superficie celular.

Cuando una célula B natural se encuentra con el antígeno para el cual su anticuerpo de membrana es específico, la célula comienza a dividirse rápidamente y su progenie se diferencia en células B de memoria y células efectoras, llamadas "células plasmáticas" . Las células B de memoria tienen mayor duración y siguen expresando el anticuerpo de membrana con la misma especificidad que la célula progenitora original. Las células plasmáticas no producen anticuerpo de membrana sino una forma de secreción del anticuerpo. Los anticuerpos Ref.183229 secretados son las principales moléculas efectoras de la inmunidad humoral . El antígeno CD20 (también denominado antígeno de diferenciación de linfocitos B humanos, Bp35) es una proteína transmembrana hidrófoba con un peso molecular de aproximadamente 35 kD, localizada en linfocitos pre-B y B maduros (Valentine y col . , J. Biol . Chem . 264 (19) : 11282-11287 (1989); y Einfeld y col . , EMBO J. 7(3):711-717 (1988)). El antígeno también se expresa en más del 90% de los linfomas no Hodgkin (LNH) de células B (Anderson y col . , Blood 63 (6) : 1424-1433 (1984)), pero no aparece en las células madre hematopoyéticas, las células pro-B, las células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder y col . , J. Immunol . 135 (2) :973-979 (1985)). Se cree que el CD20 regula una(s) etapa (s) inicial (es) del proceso de activación de la iniciación y diferenciación del ciclo celular (Tedder y col . , supra) y posiblemente funcione como un canal de iones de calcio (Tedder y col . , J. Cell . Biochem. 14D:195 (1990)). Dada la expresión de CD20 en los linfomas de células B, este antígeno ha sido un objetivo terapéutico útil para tratar tales linfomas. Hay más de 300,000 personas en EE.UU. con LNH de células B y se diagnostican más de 56,000 nuevos casos cada año. El CD20 también es un antígeno objetivo útil para tratar enfermedades autoinmunes. El anticuerpo rituximab (RITUXAN®) , que es un anticuerpo monoclonal quimérico murino/humano diseñado mediante ingeniería genética dirigido contra el anticuerpo humano CD20 (disponible en el mercado a través de Genentech, Inc., South San Francisco, California, EE.UU.), se usa en el tratamiento de pacientes con linfoma no de Hodgkin de células B de grado menor o folicular, recurrente o refractario y CD20 positivo. El rituximab es el anticuerpo denominado "C2B8" en la Patente de EE.UU. n2 5,736,137 concedida el 7 de abril de 1998 (Anderson y col.) en la Patente de EE.UU. n2 5,776,456. El rituximab también ha sido estudiado en varios trastornos autoinmunes no malignos, en los que las células B y los autoanticuerpos parecen desempeñar un papel en la patofisiología de la enfermedad. Edwards y col., Biochem Soc. Trans. 30:824-828 (2002). Se ha descrito que el rituximab alivia potencialmente los signos y síntomas de, por ejemplo, la artritis reumatoide (AR) (Leandro y col., Ann. Rheum. Dis. 61:883-888 (2002); Edwards y col., Arthritis Rheum., 46 (Suplemento 9): S46 (2002); Stahl y col., Ann. Rheum. Dis., 62 (Suplemento 1): OP004 (2003); Emery y col., Arthritis Rheum. 48(9): S439 (2003)), el lupus (Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5:157-159 (2003); Leandro y col., Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002); Gorman y col., Lupus, 13: 312-316 (2004)), la púrpura trombocitopénica inmune (D'Arena y col., Leuk. Lymphoma 44:561-562 (2003); Stasi y col., Blood, 98: 952-957 (2001); Saleh y col., Semin. Oncol., 27 (Suplemento 12): 99-103 (2000); Zaia y col., Haematolgica, 87: 189-195 (2002); Ratanatharathorn y col., Ann. Int. Med., 133: 275-279 (2000)), la aplasia eritrocitaria pura (Auner y col., Br. J.

Haematol . , 116: 725-728 (2002)), la anemia autoinmune (Zaja y col., Haematologica 87:189-195 (2002) (hay un error tipográfico en Haematologica 87:336 (2002)), la enfermedad de aglutininas frías (Layios y col., Leukemia, 15: 187-8 (2001); Berentsen y col., Blood, 103: 2925-2928 (2004); Berentsen y col., Br. J. Haematol., 115: 79-83 (2001); Bauduer, Br . J. Haematol., 112: 1083-1090 (2001); Damiani y col., Br. J. Haematol., 114: 229-234 (2001)), el síndrome de resistencia intensa a la insulina tipo B (Coll y col., N. Engl. J. Med., 350: 310-311 (2004), la crioglobulinemia mixta (DeVita y col., Arthritis Rheum. 46 Suplemento 9:S206/S469 (2002)), la miastenia grave (Zaja y col., Neurology, 55: 1062-63 (2000); Wylam y col., J. Pediatr., 143: 674-677 (2003)), la granulomatosis de Wegener (Specks y col., Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001)), el pénfigo refractario vulgar (Dupuy y col., Arch Dermatol., 140:91-96 (2004)), la dermatomiositis (Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suplemento 9) :S1299 (2002)), el síndrome de Sjogren (Somer y col., Arthritis & Rheumatism, 49: 394-398 (2003)), la crioglobulinemia mixta de tipo II activa (Zaja y col., Blood, 101: 3827-3834 (2003)), el pénfigo vulgar (Dupay y col., Arch. Dermatol., 140: 91-95 (2004)), la neuropatía autoinmune (Pestronk y col . , J. Neurol . Neurosurg. Psychiatry 74:485-489 (2003)), el síndrome paraneoplásico opsoclono-mioclono (Pranzatelli y col . , Neurology 60 (Suplemento 1) P05.128:A395 (2003)) y la esclerosis múltiple recurrente-remitente (EMRR, por sus siglas en inglés). Cross y col . , (resumen) "Resultados preliminares de un ensayo clínico de fase II de Rituximab en MS" Octava Reunión Anual de los Comités Americanos para la Investigación y el Tratamiento de la Esclerosis Múltiple, 20-21 (2003) . Se ha llevado a cabo un ensayo clínico de fase II en pacientes con artritis reumatoide (AR) , proporcionando datos del seguimiento durante 48 semanas de la seguridad y eficacia del Rituximab. Emery y col . , Arthri tis Rheum 48(9):S439 (2003); Szczepanski y col . , Arthri tis Rheum 48(9):S121 (2003). Los pacientes se distribuyeron de modo aleatorio en cuatro grupos de tratamiento: metotrexato, sólo rituximab, rituximab más metotrexato y rituximab más ciclofosfamida (CTX) . El tratamiento de rituximab consistió en un gramo administrado vía intravenosa los días 1 y 15. Las publicaciones relacionadas con la terapia con rituximab incluyen: Perotta y Abuel, "Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab", Resumen n2 3.360 Blood 10(1) (partes 1-2): pagina 88B (1998); Perotta y col . , "Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopaenic purpura (ITP)", Blood, 94: 49 (resumen) (1999); Matthews, R. , "Medical Heretics", New Scientist (7 de abril de 2001); Leandro y col . , "Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion", Ann Rheum Dis, supra ; Leandro y col . , "Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response", Arthri tis and Rheumatism 44(9): S370 (2001); Leandro y col . , "An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus" , Arthri tis and Rheumatism, 46:2673-2677 (2002), en el que durante un periodo de 2 semanas, cada paciente recibió dos infusiones de 500 mg de rituximab, dos infusiones de 750 mg de ciclofosfamida y altas dosis de corticosteroides orales y en el que dos de los pacientes tratados sufrieron recaídas a los 7 y 8 meses, respectivamente, y volvieron a recibir el tratamiento, aunque siguiendo protocolos diferentes; "Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy", Weide y col . , Lupus, 12: 779-782 (2003), en el que se trató un paciente con rituximab (375 mg/m2 x 4, en intervalos semanales) y administraciones adicionales de rituximab cada 5 ó 6 meses y después recibió terapia de mantenimiento con 375 mg/m2 de rituximab cada tres meses, y un segundo paciente con LSE refractario fue tratado con éxito con rituximab y está recibiendo una terapia de mantenimiento cada tres meses, respondiendo bien ambos pacientes a la terapia con rituximab; Edwards y Cambridge, "Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes" , Rheumatology 40:205-211 (2001); Cambridge y col . , "B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters", Arthri tis Rheum. , 46 (Suplemento 9): S1350 (2002); Edwards y col . , "B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders", supra ; Edwards y col . , "Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis", Arthri tis and Rheumatism 46(9): S197 (2002); Levine y Pestronk, "IgM antibody-related polyneuropathies : B-cell depletion chemotherapy using rituximab", Neurology 52: 1701-1704 (1999); DeVita y col . , "Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis", Arthri tis & Rheum 46:2029-2033 (2002); Hidashida y col . , "Treatment of DMARD-refractory rheu atoid arthritis with rituximab" . Presentado en la Reunión Científica Anual del Colegio Americano de Reumatología; 24-29 de octubre; Nueva Orleans, LA 2002; Tuscano, J., "Successful treatment of infliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab" . Presentado en la Reunión Científica Anual del Colegio Americano de Reumatología ; 24-29 de octubre; Nueva Orleans, LA 2002; "Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic", Martin y Chan, Immuni ty 20:517-527 (2004); Silverman y Weisman, "Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy", Arthri tis and Rheumatism, 48: 1484-1492 (2003); Kazkaz y Isenberg, "Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases", Current opinión in pharmacology, 4: 398-402 (2004); Virgolini y Vanda, "Rituximab in autoimmune diseases", Biomedicine & pharmacother apy, 58: 299-309 (2004); Klemmer y col . , "Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with a AntiCD20 monoclonal antibody Rituximab", Arthri tis And Rheumatism , 48: (9) 9,S (SEP), página: S624-S624 (2003); Kneitz y col . , "Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases", Immunobiology, 206: 519-527 (2002); Arzoo y col . , "Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab)", Annals of the Rheumatic Diseases, 61 (10) , páginas 922-4 (2002), Comment in Ann Rheum Dis . 61: 863-866 (2002); "Future Strategies in Immunotherapy" por Lake y Dionne, en Burger ' s Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 por John Wiley & Sons, Inc.) . Fecha de publicación del artículo en Internet: 15 de enero de 2003 (Capítulo 2 "Antibody-Directed Immunotherapy" ) ; Liang y Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine, Sección: "CD20 as an Immunotherapy Target", fecha de publicación del artículo en Internet: 15 de enero de 2002, titulado "CD20"; Apéndice 4A titulado "Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens" por Stockinger y col . , eds: Coligan y col . , en Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley & Sons, Ine) . Fecha de publicación en Internet: mayo de 2003; fecha de publicación impresa: febrero de 2003; Penichet y Morrison, "CD Antibodies/molecules : Definition; Antibody Engineering" en Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine; Sección: "Chimeric, Humanized and Human Antibodies"; publicado en Internet el 15 de enero de 2002; Specks y col . , "Response of Wegener 's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy", Arthri tis & Rheumatism 44:2836-2840 (2001); envío e invitación del resumen en línea Koegh y col . , "Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients", Colegio Americano de Reumatología, Número de sesión: 28-100, Título de la sesión: Vasculitis, Tipo de sesión: Sesión simultánea del ACR, Categoría principal: 28 Vasculitis, Sesión 10/18/2004 (http: //www. abstraetsonline . com/viewer/SearchResults . asp) ; Eriksson, "Short-term outeome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab", Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003); Jayne y col . , "B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis", Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003); Jayne, póster 88 (11° Taller Internacional sobre Vasculitis y ANCA) , 2003 Sociedad Americana de Nefrología; Stone y Specks, "Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis", en el Resumen de Investigación del Ensayo Clínico de la Red de Tolerancia Inmune 2002-2003, http: //www. immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/sto ne.html. Véase también Leandro y col . , "B cell repopulation occurs mainly from na?ve B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus", Arthri tis Rheum . , 48 (Suplemento 9): S1160 (2003). Las patentes y publicaciones de patentes relativas a los anticuerpos CD20 incluyen las Patentes de EE.UU. nos 5,776,456, 5,736,137, 5,843,439, 6,399,061 y 6,682,734, así como las solicitudes de patentes de EE.UU. nos US2002/0197255A1, US2003 /0021781A1 , US2003/0082172 Al, US2003/0095963 Al y US2003 /0147885A1 (Anderson y col . ) ; Patente de EE.UU. n2 6,455,043Bl y documento WO00/09160 (Grillo-López, A.); documento WO00/27428 (Grillo-López y White) ; documento WO00/27433 (Grillo-López y Leonard) ; documento WO00/44788 (Braslawsky y col . ) ; documento WO01/10462 (Rastetter, W. ) ; documento WO01/10461 (Rastetter y White) ; documento WO01/10460 (White y Grillo-López) ; solicitudes de EE.UU. nos US2001/0018041A1 y US2003/0180292A1 y documento WO01/34194 (Hanna y Hariharan) ; solicitud de EE.UU. n2 US2002/0006404 y documento WO02/04021 (Hanna y Hariharan) ; solicitud de EE.UU. n2 US2002/0012665A1 y documento WO01/74388 (Hanna, N. ) ; solicitud de EE.UU. n2 US2002/0058029 Al (Hanna, N.); solicitud de EE.UU. na US2003/0103971 Al (Hariharan y Hanna); solicitud de EE.UU. n2 US2002/0009444A1 y documento WO01/80884 (Grillo-López, A.); documento WO01/97858 (White, C); solicitud de EE.UU. n2 US2002/0128488A1 y documento WO02/34790 (Reff, M. ) ; documento WO02/060955 (Braslawsky y col . ) ; documento WO2/096948 (Braslawsky y col . ) ; documento WO02/079255 (Reff y Davies) ; Patente de EE.UU. n2 6.171.586B1 y documento W098/56418 (Lam y col . ) ; documento W098/58964 (Raju, S.); documento W099/22764 (Raju, S . ) ; documento W099/51642, Patentes de EE.UU. nos 6,194,551B1, 6,242,195B1, 6,528,624Bl y 6,538,124 (Idusogie y col . ) ; documento WO00/42072 (Presta, L.); documento WO00/67796 (Curd y col . ) ; documento WO01/03734 (Grillo-López y col . ) ; solicitud de EE.UU. n2 US2002/0004587A1 y documento WO01/77342 (Miller y Presta); solicitud de EE.UU. n2 US2002/0197256 (Grewal, I.); solicitud de EE.UU. n9 US2003/0157108 Al (Presta, . ) ; Patentes de EE.UU. nos 6,565,827B1, 6,090,365Bl, 6,287,537B1, 6,015,542, 5,843,398 y 5,595,721, (Kaminski y col , ) ; Patentes de EE,UU, nos 5,500,362, 5,677,180, 5,721,108, 6,120,767 y 6,652,852Bl (Robinson y col . ) ; Patente de EE.UU. n2 6.410.391B1 (Raubitschek y col . ) ; Patente de EE.UU. n2 6.224.866B1 y documento WO00/20864 (Barbera-Guillem, E.); documento WO01/13945 (Barbera-Guillem, E.); documento WO00/67795 (Goldenberg) ; solicitud de EE.UU. n2 US2003/0133930A1 y documento WO00/74718 (Goldenberg y Hansen) ; documento WO00/76542 (Golay y col.); documento WO01/72333 (Wolin y Rosenblatt); Patente de EE.UU. n2 6.368.596B1 (Ghetie y col.); Patente de EE.UU. na 6.306.393 y solicitud de EE.UU. n2 US2002/0041847A1, (Goldenberg, D.); solicitud de EE.UU. n2 US2003/0026801A1 (Weiner y Hart ann) ; documento WO02/102312 (Engleman, E.); solicitud de Patente de EE.UU. n2 2003/0068664 (Albitar y col.); documento WO03/002607 (Leung, S.); documento WO 03/049694 y solicitudes de EE.UU. nos US2002/0009427A1 y US 2003 /0185796A1 (Wolin y col.) ; documento WO03/061694 (Sing y Siegall) ; solicitud de EE.UU. ne US2003/0219818A1 (Bohen y col.) ; solicitud de EE.UU. n2 US2003/0219433A1 y documento WO 03/068821 (Hansen y col.) ; solicitud de EE.UU. n2 US2002/0136719A1 (Shenoy y col.); documento WO2004/032828 (Wahl y col.); documento WO2004/035607 (Teeling y col.) ; solicitud de EE.UU. n2 US2004/0093621 (Shitara y col.) . Véase también la Patente de EE.UU. n2 5,849,898 y la solicitud europea n2 EP330,191 (Seed y col,); Patente de EE.UU. n2 4,861,579 y solicitud europea n2 EP332.865A2 (Meyer y Weiss); documento WO95/03770 (Bhat y col.), solicitud de EE.UU. n2 US2001/0056066 (Bugelski y col.) ; documento WO2004/035607 (Teeling y col.) ; documento WO2004/056312 (Low an y col.); solicitud de EE.UU. n2 US2004/0093621 (Shitara y col . ) ; y documento WO2004/103404 (Watkins y col . ) . Las publicaciones relacionadas con el anticuerpo CD20 incluyen: Teeling, J. y col . , "Characterisation of new human CD20 monoclonal antibodies with potent cytolytic activity against non-Hodgkin ' s lymphomas", Blood, Jun 2004 ; 10. 1182. Al tratar una enfermedad, es bueno poder administrar la dosis eficaz más baja del fármaco. Como será evidente a partir de la siguiente descripción detallada, la presente invención cumple con estas necesidades para los tratamientos que emplean anticuerpos anti CD20. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención ofrece un procedimiento para reducir las células B en un paciente con una enfermedad autoinmune que comprende la administración de un anticuerpo que se une al CD20 humano o un antígeno que se une a un fragmento suyo, con una dosis de entre 1 y 250 mg. En una modalidad, las células B del paciente se reducen al menos un 80% en comparación con el control antes de administrar el anticuerpo. La invención también proporciona un procedimiento para aliviar una enfermedad autoinmune, que comprende la administración al paciente con dicha enfermedad de un anticuerpo que se une al CD20 humano con una dosis de entre 1 y 250 mg.

En otras modalidades de los anteriores procedimientos, el anticuerpo que se une al CD20 se administra con una dosis de entre 1 y 100 mg, o una dosis estable de 200 mg, 100 mg, 50 mg, 25 mg, 10 mg o 5 mg. Típicamente se administrarán al paciente al menos 2 dosis del anticuerpo, en algunos casos 3, 4 ó 5 dosis. En una modalidad, las dos dosis se administran con un intervalo de separación de aproximadamente 2 semanas . Tras las primeras dosis, se pueden administrar dosis adicionales cada 3, 6 ó 9 meses según sea necesario para el mantenimiento de la terapia. Más específicamente, en un procedimiento para aliviar la AR, las dos dosis de anticuerpo se administran los días 1 y 15. En los procedimientos de reducción de células B y alivio de la enfermedad autoinmune, se puede administrar una dosis inicial de tolerabilidad antes de administrar la dosis terapéutica, siendo la dosis de tolerabilidad menor que la terapéutica. En las modalidades específicas de cualquiera de los anteriores procedimientos de reducción de las células B o alivio de una enfermedad autoinmune, la formulación del anticuerpo de unión al CD20 se administra por vía intravenosa o subcutánea . En las modalidades específicas de cualquier procedimiento de reducción de células B y tratamientos anteriores, la enfermedad autoinmune se selecciona de entre artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, lupus sistémico eritematoso (LSE) , lupus nefrítico, enfermedad de Wegener, enfermedad inflamatoria intestinal, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), púrpura trombocitopénica trombótica (PTT) , trombocitopenia autoinmune, esclerosis múltiple, neuromielitis óptica (NMO) , psoriasis, nefropatía por IgA, polineuropatías por IgM, miastenia grave, vasculitis asociada a ANCA (VAA) , diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjogren, y glomerulonefritis. En una modalidad más específica, la enfermedad autoinmune es la artritis reumatoide. Para cualquiera de los procedimientos anteriores de reducción de células B o alivio de la enfermedad autoinmune, en una modalidad el anticuerpo de unión al CD20 es un anticuerpo humanizado. En las modalidades preferentes, el anticuerpo humanizado es un anticuerpo 2H7 humanizado, preferentemente una de las siguientes variantes del 2H7, versiones 16, 31, 73, 75, 96, 114, 115, 116, 138, 477, 588, 511 y 375 como se describe en la siguiente tabla 1. En las diferentes modalidades, el anticuerpo humanizado comprende uno de estos pares de regiones de VL y VH: la secuencia de la región de la cadena variable L con SEC ID N0:1 y la secuencia de la región de la cadena variable H con SEC ID NO : 2 ; la secuencia de la región de la cadena variable L con SEC ID NO: 15 y la secuencia de la región de la cadena variable H con SEC ID NO: 12; o la secuencia de la región de la cadena variable L con SEC ID NO: 15 y la secuencia de la región de la cadena variable H con SEC ID NO: 23. Otras modalidades de anticuerpos anti CD20 humanizados son hA20 (también conocido como IMMU-106, o 90Y-hLL2; solicitud de EE.UU. n2 US2003/0219433 , Im unomedics) y AME-133 (solicitud de EE.UU. n2 US2005/0025764 ; Applied Molecular Evolution/Eli Lilly) . En una modalidad diferente, el anticuerpo de unión al CD20 es un anticuerpo humano, preferentemente HUMAX-CD20™ (GenMab) . En otra modalidad distinta, el anticuerpo de unión al CD20 es un anticuerpo quimérico, siendo las modalidades preferentes rituximab (Genentech, Inc.) y el anticuerpo quimérico cA20 (descrito en la solicitud de EE.UU. n2 US2003/0219433 , Immunomedics) . En una modalidad del procedimiento para tratar la AR, el anticuerpo de unión al CD20 se administra junto con una terapia que emplea un fármaco seleccionado de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) , metotrexato, analgésicos, glucocorticosteroides, ciclofosfamida, adalimumab, leflunomida) , infliximab, etanercept, tocilizumab e inhibidores de la COX-2. En una modalidad, el procedimiento para tratar la AR con un anticuerpo CD20 comprende además la administración al paciente de un segundo agente terapéutico. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura ÍA es una alineación de secuencias que compara las secuencias aminoacídicas del dominio de la cadena ligera variable (VL) del 2H7 murino (SEC ID NO:25), del 2H7 humanizado, variante vl6 (SEC ID NO:l), y del subgrupo I de cadenas ligeras kappa humanas (SEC ID NO: 26). Las CDR (regiones de determinación de complementariedad) de la VL de 2H7 y hu2H7.vl6 son las siguientes: CDRl (SEC ID NO:27), CDR2 (SEC ID NO:28) y CDR3 (SEC ID NO:29) La Figura IB es una alineación de secuencias que compara las secuencias VH del 2H7 murino (SEC ID NO:30), del 2H7 humanizado, variante vl6 (SEC ID NO : 2 ) , y de la secuencia consenso humana del subgrupo III de cadenas pesadas (SEC ID NO: 31) . Las CDR (regiones de determinación de complementariedad) de la VH de 2H7 y hu2H7.vl6 son las siguientes: CDRl (SEC ID NO:32), CDR2 (SEC ID NO:33) y CDR3 (SEC ID NO: 34) En la Figura ÍA y la Figura IB, las CDRl, CDR2 y CDR3 de cada cadena están entre paréntesis, flanqueadas por las regiones estructurales, FR1-FR4, según se indica. 2H7 se refiere al anticuerpo murino 2H7. Los asteriscos entre dos columnas de secuencias indican las posiciones que son diferentes entre las dos secuencias. La numeración de los residuos es según Kabat y col . , Sequences of I munological Interest, 5 - edición, Servicio de Salud Pública, Institutos Nacionales de la Salud, Bethesda, Md. (1991), con las inserciones mostradas como a, b, c, d, y e.

La Figura 2 es un resumen del promedio del conteo de células B absoluto [CD3-/CD40+] en todos los grupos (estudio 2H7 y estudio combinado Rituxán) , como se describe en el ejemplo 2. La Figura 3 muestra el esquema de escalado de la dosis para el ensayo clínico en fase I/II sobre la artritis reumatoide, como se describe en el ejemplo 4. La Figura 4 muestra los perfiles de reducción de células B periféricas, basados en el promedio de los conteos absolutos de CD19, de los sujetos de un ensayo clínico en fase I/II sobre la artritis reumatoide, descrito en el ejemplo 4. LLN significa Límite Inferior a lo Normal. ULN significa Límite Superior a lo Normal. N0M_TM_DIA = Número de días desde el tratamiento. La Figura 5 muestra los perfiles de reducción de células B periféricas, basados en el promedio de los conteos de CD19 absolutos, como en la Figura 4, pero con el eje Y ampliado . La Figura 6 muestra los perfiles de reducción de células B periféricas basados en el promedio de conteos de CD19 absolutos del grupo placebo. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se usa en la presente memoria descriptiva, "reducción de células B" se refiere a la reducción de los niveles de células B en un animal o un humano después del tratamiento con el fármaco o el anticuerpo, en comparación con los niveles anteriores al tratamiento. Los niveles de células B se pueden medir usando ensayos muy conocidos como la obtención de un conteo total de células sanguíneas, mediante análisis de tinción FACS para marcadores conocidos de células B y mediante cualquier procedimiento como se describe en los ejemplos experimentales. La reducción de células B puede ser parcial o completa. En una modalidad, la reducción de células B que expresen CD20 es al menos del 25%. En un paciente que esté recibiendo un fármaco para reducir las células B, éstas se reducen generalmente durante el tiempo en que el fármaco esté circulando por el cuerpo del paciente y durante el tiempo de recuperación de las células B. En la presente memoria descriptiva, una "enfermedad autoinmune" es una enfermedad o trastorno que se genera en, y se dirige contra, los propios tejidos de un individuo, o un cosegregado o una manifestación del mismo o un estado resultante de todo ello. Ejemplos de enfermedades o trastornos autoinmunes serían, pero sin limitarse a, la artritis (artritis reumatoide, como artritis aguda, artritis reumatoide crónica, artritis gotosa, artritis gotosa aguda, artritis inflamatoria crónica, artritis degenerativa, artritis infecciosa, artritis de Lyme, artritis proliferativa, artritis psoriática, artritis vertebral, y artritis reumatoide de inicio juvenil, osteoartritis, artritis crónica progrediente, artritis deformante, poliartritis crónica primaria, artritis reactiva, y espondilitis anquilosante) , enfermedades de la piel hiperproliferativas inflamatorias, psoriasis como psoriasis en placa, psoriasis gotosa, psoriasis postulosa, y psoriasis de las uñas, atopía, incluyendo enfermedades atópicas como la fiebre del heno y el síndrome de Job, dermatitis incluyendo dermatitis por contacto, dermatitis por contacto crónica, dermatitis alérgica, dermatitis por contacto alérgica, dermatitis herpetiforme, y dermatitis atópica, síndrome de híper IgM ligado al X, urticaria como urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica , incluyendo urticaria autoinmune crónica, polimiositis/dermatomiositis, dermatomiositis juvenil, necrolisis epidérmica tóxica, escleroderma (incluyendo escleroderma sistémico) , esclerosis como esclerosis sistémica, esclerosis múltiple (EM) como EM espino-óptica, EM progresiva primaria (EMPP) , y EM recurrente remitente (EMRR) , esclerosis sistémica progresiva, ateroesclerosis, arteriosclerosis, esclerosis diseminada, y esclerosis atáxica, enfermedad inflamatoria del intestino (ElI) (por ejemplo, enfermedad de Crohn, enfermedades intestinales de origen autoinmune, colitis como colitis ulcerativa, colitis ulcerosa, colitis microscópica, colitis colagenosa, colitis poliposa, enterocolitis necrotizante, y colitis transmural, y enfermedad inflamatoria del intestino autoinmune) , pioderma gangrenoso, eritema nodoso, colangitis esclerosante primaria, episcleritis) , síndrome de trastorno respiratorio, incluyendo síndrome de trastorno respiratorio adulto o agudo (STRAA) , meningitis, inflamación de toda o parte de la úvea, iritis, coroiditis, un trastorno hematológico autoinmune, espondilitis reumatoide, pérdida auditiva repentina, enfermedades mediadas por IgE como anafilaxia y rinitis alérgica y atópica, encefalitis como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbica y/o encefálica, uveítis, como uveítis anterior, uveítis anterior aguda, uveítis granulomatosa, uveítis no granulomatosa, uveítis facoantigénica, uveítis posterior , o uveítis autoinmune, glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico como glomerulonefritis crónica o aguda como GN primaria, GN de origen inmune, GN membranosa (nefropatía membranosa) , GN membranosa idiopática o nefropatía membranosa idiopática, GN de membrana o membranosa proliferativa (GNMP) , incluyendo de Tipo I y Tipo II, y GN progresiva rápida, afecciones y respuestas alérgicas, reacción alérgica, eccema incluyendo eccema alérgico o atópico, asma como asma bronquial, asma autoinmune, afecciones que implican infiltración de células T y respuestas inflamatorias agudas, reacciones inmunes contra antígenos extraños como grupos sanguíneos fetales A-B-0 durante el embarazo, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, miocarditis autoinmune, deficiencia de adhesión leucocitaria, lupus eritematoso sistémico (LES) como LES cutáneo, lupus eritematoso subcutáneo agudo, síndrome de lupus neonatal (SLN), lupus eritematoso diseminado, lupus (incluyendo nefritis, cerebritis, diabetes mellitus pediátrica, no renal, extra renal, discoide, alopecia), de inicio juvenil (Tipo I), incluyendo diabetes mellitus pediátrica dependiente de insulina (DMDI), diabetes mellitus de inicio en adultos (diabetes Tipo II) , diabetes autoinmune, diabetes insípida idiopática, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad agua y retardada mediada por citocinas y linfocitos T, tuberculosis, sarcoidosis, granulomatosis incluyendo granulomatosis linfomatoide, granulomatosis de Wegener, agranulocitosis, vasculitis (incluyendo vasculitis de vasos grandes (incluyendo polimialgia reumática y de células gigantes (arteritis de Takayasu) , vasculitis de vasos medianos (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa/periarteritis nodosa) , poliarteritis microscópica, vasculitis del CNS, necrotizante, cutánea, o vasculitis por hipersensibilidad, vasculitis necrotizante sistémica, vasculitis asociada a ANCA (VAA) como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (SCS) ) , vasculitis no asociada a ANCA, arteritis temporal, anemia aplásica, anemia aplásica autoinmune, anemia Coombs positiva, anemia de Diamond Blackfan, anemia hemolítica o anemia hemolítica inmune incluyendo anemia hemolítica autoinmune (AHAI) , anemia perniciosa, enfermedad de Addison, anemia o aplasia eritrocitaria pura (AEP) , carencia de factor VIII, hemofilia A, neutropenia autoinmune, pancitopenia, leucopenia, enfermedades que impliquen diapédesis leucocitaria, trastornos inflamatorios del SNC, síndromes de lesiones orgánicas múltiples como los secundarios a septicemias, traumas o hemorragias, enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo, enfermedad de membrana basal antiglomerular, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, neuritis alérgica, enfermedad de Behcet, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjogren, síndrome de Stevens-Johnson, penfigoides como penfigoide bulloso y penfigoide dérmico, pénfigo (incluyendo pénfigo vulgar, pénfigo foliáceo, pénfigo de membrana mucosa penfigoide, y pénfigo eritematoso) , poliendocrinopatías autoinmunes, enfermedad o síndrome de Reiter, nefritis compleja inmune, nefritis mediada por anticuerpos, neuromielitis óptica (NMO; también conocida como síndrome de Devic) , polineuropatías, neuropatía crónica como polineuropatías por IgM o neuropatías mediadas por IgM, trombocitopenia (como se desarrolla en pacientes con infarto de miocardio, por ejemplo) , incluyendo púrpura trombocitopénica trombótica (PTT) , púrpura postransfusional (PTF) , trombocitopenia inducida por heparina, y trombocitopenias inmunes y autoinmunes como púrpura trombocitopénica idiopática (PTI) incluyendo PTI crónica o agua, enfermedad autoinmune de testículos y ovarios incluyendo orquitis autoinmune y ooforitis, hipotiroidismo primario, hipoparatiroidismo, enfermedades endocrinas autoinmunes incluyendo tiroiditis como tiroiditis autoinmune, enfermedad de Hashimoto, tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) , o tiroiditis subaguda, enfermedad tiroidea autoinmune, hipotiroidismo idiopático, enfermedad de Grave, síndromes poliglandulares como síndromes poliglandulares autoinmunes (o síndromes de endocrinopatía poliglandular ) , síndromes paraneoplásicos, incluyendo síndromes paraneoplásicos neurológicos como síndrome miasténico de Lambert-Eaton o síndrome de Eaton-Lambert , síndrome de rigidez muscular, encefalomielitis como encefalomielitis alérgica y encefalomielitis alérgica experimental (EAE) , miastenia grave como miastenia grave asociada a timoma, degeneración cerebelar, neuromiotonía, síndrome de opsoclono u opsoclono mioclono (SOM) , y neuropatía sensorial, neuropatía motora multifocal, síndrome de Sheehan, hepatitis autoinmune, hepatitis crónica, hepatitis lupoidea, hepatitis de células gigantes, hepatitis activa crónica o hepatitis activa crónica autoinmune, neumonitis intersticial linfoide (NIL) , bronquiolitis obliterante (sin trasplante) frente a NSIP, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad de Berger (nefropatía por IgA) , nefropatía por IgA idiopática, dermatosis por IgA lineal, cirrosis biliar primaria, neumonocirrosis, síndrome enteropático autoinmune, enfermedad celíaca, esprue celíaco (enteropatía por gluten) , esprue refractario, esprue idiopático, crioglobulinemia, esclerosis lateral amilotrófica (ELA; enfermedad de Lou Gehrig) , enfermedad arterial coronaria, enfermedad del oído autoinmune como enfermedad del oído interno autoinmune (EOIA) , pérdida auditiva autoinmune, síndrome opsoclono mioclono (SOM) , policondritis como policondritis refractaria o recurrente, proteinosis alveolar pulmonar, amiloidosis, escleritis, una linfocitosis no cancerosa, una linfocitosis primaria, que incluye linfocitosis monoclonal de células B (por ejemplo, gammopatía monoclonal benigna y monoclonal gammopatía monoclonal de significado indeterminado, GMSI) , neuropatía periférica, síndrome paraneoplásico, canalopatías como epilepsia, migraña, arritmia, trastornos musculares, sordera, ceguera, parálisis periódica, y canalopatías del SNC, autismo, miopatía inflamatoria, glomeruloesclerosis focal segmental (GEFS) , oftalmopatía endocrina, uveorretinitis, coriorretinitis , trastorno hepatológico autoinmune, fibromialgia, fallo endocrino múltiple, síndrome de Schmidt, adrenalitis, atrofia gástrica, demencia presenil, desmielinización como desmielinización autoinmune y polineuropatía inflamatoria con desmielinización crónica, nefropatía diabética, síndrome de Dressler, alopecia areata, síndrome CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, atrofia esofágica, esclerodactilia, y telangiectasia) , infertilidad masculina y femenina autoinmune, enfermedad del tejido conectivo mixta, enfermedad de Chagas, fiebre reumática, abortos recurrentes, pulmón del granjero, eritema multiforme, síndrome poscardiotomía, síndrome de Cushing, pulmón del ornitófilo, angiitis granulomatosa alérgica, angiitis linfocítica benigna, síndrome de Alport, alveolitis como alveolitis alérgica y alveolitis fibrosa, enfermedad pulmonar intersticial reacción a transfusiones, lepra, malaria, leishmaniasis, cipanosomiasis, esquistosomiasis, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, síndrome de Caplan, dengue, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, fibrosis pulmonar intersticial difusa, fibrosis pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística, endoftalmitis, eritema elevatum y diutinum, eritroblastosis fetal, fascitis eosinodílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, flariasis, ciclitis como ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis (aguda o crónica) , ciclitis de Fuch, púrpura de Henoch-Schonlein, infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , infección por ecovirus, cardiomiopatía, enfermedad de Alzheimer, infección por parvovirus, infección por virus de la rubéola, síndromes posvacunales, infección por rubéola congénita, infección por virus de Epstein-Barr, paperas, síndrome de Evan, fallo gonadal autoinmune, corea de Sydenham, nefritis posestreptocócica, tromboangitis obliterante, tirotoxicosis, tabes dorsal, corioiditis, polimialgia de células gigantes, oftalmopatía endocrina, neumonitis por hipersensibilidad crónica, queratoconjuntivitis seca, queratoconjuntivitis epidémica, síndrome nefrítico idiopático, nefropatía de cambio mínimo, lesión por reperfusión isquémica benigna familiar, autoinmunidad retiniana, inflamación de las articulaciones, bronquitis, enfermedad respiratoria obstructiva crónica, silicosis, afta, estomatitis aftosa, trastornos arterioescleróticos, aspermiogénesis, hemolisis autoinmune, enfermedad de Boeck, crioglobulinemia, contractura de Dupuytren, endoftalmia facoanafiláctica, enteritis alérgica, eritema nodoso leproso, parálisis facial idiopática, síndrome de fatiga crónica, fiebre reumática, enfermedad de Hamman-Rich, pérdida auditiva sensoneural, hemoglobinuria paroxismática, hipogonadismo, ileítis regional, leucopenia, mononucleosis infecciosa, mielitis transversa, mixedema idiopático primario, nefrosis, oftalmía simpática, orquitis granulomatosa, pancreatitis, polirradiculitis aguda, pioderma gangrenoso, tiroiditis de Quervain, atrofia esplénica adquirida, infertilidad por anticuerpos antiespermatozoos, timoma no maligno, vitíligo, enfermedades asociadas a SCID y virus Epstein-Barr, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , enfermedades parasitarias como Lesihmania, síndrome de choque tóxico, intoxicación alimentaria, afecciones que implican infiltración de células T, deficiencia de adhesión leucocitaria, respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y recurrente mediada por citocinas y linfocitos T, enfermedades que implican diapédesis leucocitaria, síndrome de lesión orgánica múltiple, enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular, neuritis alérgica, poliendocrinopatías autoinmunes, ooforitis, mixedema primario, gastritis atrófica autoinmune, oftalmía simpática, enfermedades reumáticas, enfermedad del tejido conectivo mixta, síndrome nefrótico, insulitis, fallo poliendocrino, neuropatía periférica, síndrome poliglandular autoinmune de tipo I, hipoparatiroidismo de inicio en adultos idiopático (HIAI) , alopecia total, cardiomiopatía dilatada, epidermolisis bullosa adquirida (EBA) , hemocromatosis, miocarditis, síndrome nefrótico, colangitis esclerosante primaria, sinusitis purulenta o no purulenta, sinusitis aguda o crónica, sinusitis etmoidea, frontal, maxilar o esfenoidea, un trastorno relacionado con los eosinófilos como eosinofilia, eosinofilia por infiltración pulmonar, síndrome de eosinofilia-mialgia, síndrome de Loffler, neumonía eosinofílica crónica, eosinofilia pulmonar tropical, aspergilosis bronconeumónica, aspergiloma, o granulomas con eosinófilos, anafilaxia, espondiloartritis seronegativa, enfermedad autoinmune poliendocrina, colangitis esclerosante, esclera, episclera, candidiasis mucocutánea crónica, síndrome de Bruton, hipogammaglobulinemia temporal de la infancia, síndrome de Wiskott-Aldrich, ataxia telangiectasia, trastornos autoinmunes asociados con enfermedades del colágeno, reumatismo, enfermedad neurológica, linfoadenitis, trastorno isquémico por reperfusión, reducción de la respuesta a la presión sanguínea, disfunción vascular, angiectasia, daño tisular, isquemia cardiovascular, hiperalgesia, isquemia cerebral, y enfermedad que acompaña a la vascularización, trastornos . por hipersensibilidad alérgica, glomerulonefritis, lesión por reperfusión, lesión por reperfusión del miocardio u otros tejidos, dermatosis con componentes inflamatorios agudos, meningitis purulenta aguda u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, trastornos inflamatorios oculares y orbitales, síndromes granulocíticos asociados a la transfusión, toxicidad inducida por citocinas, inflamación grave aguda, inflamación aguda sin tratamiento, pielitis, neumonocirrosis, retinopatía diabética, alteración de las arterias grandes diabética, hiperplasia endoarterial , úlcera péptica, valvulitis y endometriosis.

El término "linfoma no de Hodgkin" o "LNH", como se emplea en la presente memoria descriptiva, se refiere a un cáncer del sistema linfático diferente a los linfomas de Hodgkin. Los linfomas de Hodgkin se pueden diferenciar generalmente de los linfomas no Hodgkin por la presencia de células de Reed-Sternberg en los linfomas de Hodgkin y por la ausencia de dichas células en los linfomas no Hodgkin. Los ejemplos de linfomas no Hodgkin englobados por el término según se usa en la presenta memoria descriptiva incluyen cualquiera que un experto en la materia pudiera identificar como tal (por ejemplo, un oncólogo o un patólogo) según los esquemas de clasificación conocidos en la técnica como el esquema REAL (siglas en inglés de Revised European-American Lymphoma [Linfoma revisado europeo-americano] ) según se describe en el Atlas en Color de Hematología Clínica (3a edición), A. Víctor Hoffbrand y John E. Pettit (eds.) (Harcourt Publishers Ltd., 2000). Véase, en particular, las listas en las Figuras 11.57, 11.58 y 11.59. Ejemplos más específicos incluyen, pero no se limitan a, LNH recurrente o refractario, LNH avanzado menor, LNH en etapas 111/IV, LNH resistente a la quimioterapia, leucemia y/o linfoma linfoblásticos de precursores B, linfoma linfocítico pequeño, leucemia y/o leucemia prolinfocítica linfática crónica y/o linfoma linfocítico pequeño, linfoma prolinfocítico de células B, inmunocitoma y/o linfoma linfoplasmático, linfoma linfoplasmático, linfoma de células B de la zona marginal, linfoma de la zona marginal esplénica, linfoma MALT de la zona marginal extranodal, linfoma de la zona marginal nodal, leucemia de células pilosas, plasmacitoma y/o mieloma de células plasmáticas, linfoma folicular menor, LNH folicular intermedio, linfoma de las células de revestimiento, linfoma del centro folicular (folicular) , LNH difuso intermedio, linfoma de células B mayor difuso, LNH agresivo (incluyendo LHN avanzado agresivo y LNH recurrente agresivo) , LNH que recurre tras o refractario a un trasplante de células madre autólogo, linfoma de células B mayor mediastral primario, linfoma de efusión primario, LNH inmunoblástico mayor, LNH linfoblástico mayor, LNH de células pequeñas no escindidas mayor, LNH con masas tumorales sólidas, linfoma de Burkitt, leucemia y/o linfoma linfoblástico de precursores de células T (periféricos), leucemia linfocítica granular mayor, micosis fúngica y/o síndrome de Sezary, linfoma (tipo nasal) de células asesinas naturales y T extranodales, linfoma de células T enteropático, linfoma de células T hepatoesplénico, linfoma de células T similar a paniculitis subcutánea, linfomas de piel (cutáneos) , linfoma de células grandes anaplásico, linfoma angiocéntrico, linfoma de células T intestinales, linfoma de células T periféricas (si no se indica lo contrario) y linfoma de células T angioinmunoblásticas .

"Tratar", "tratamiento" o "alivio" se refiere al tratamiento terapéutico y profiláctico o medidas preventivas, en que el objeto es prevenir o ralentizar (disminuir) la afección o trastorno patológico pertinente. La enfermedad autoinmune o un cáncer de células B CD20 positivo de un sujeto se "trata" con éxito si, tras recibir una cantidad terapéutica de un anticuerpo de unión al CD20 de la invención de acuerdo con los procedimientos de la misma, el sujeto muestra una reducción evidente y mensurable o una ausencia de uno o más signos o síntomas de dicha enfermedad. Por ejemplo, para el cáncer, la reducción del número de células tumorales o ausencia de las mismas, la reducción del tamaño del tumor, inhibición (es decir, ralentización hasta cierto grado o detención preferentemente) de la metástasis tumoral, inhibición, hasta cierto grado, del crecimiento tumoral, aumento de la duración de la remisión, y/o alivio hasta cierto grado de uno o más de los síntomas asociados al cáncer específico, morbilidad y mortalidad reducidas y mejora de la calidad de vida. El paciente también puede sentir la reducción de los signos o síntomas de una enfermedad. El tratamiento puede lograr una respuesta completa, definida como la desaparición de todos los signos del cáncer, o una respuesta parcial, en que el tamaño del tumor disminuye, preferentemente en más del 50 por ciento, más preferentemente en un 75%. También se considera tratado a un paciente si la enfermedad del paciente se estabiliza. En una modalidad preferente, el cáncer de los pacientes no avanza después de un año, preferentemente después de 15 meses. Estos parámetros de valoración del éxito del tratamiento y de la mejora de la enfermedad son fácilmente medibles mediante procedimientos habituales familiares para los médicos de la especialidad apropiada . Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de anticuerpo o de fármaco eficaz para "tratar" una enfermedad y un trastorno en un sujeto. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco puede reducir el número de células cancerosas o el tamaño del tumor, inhibir (es decir, aminorar hasta cierto grado y preferentemente detener) la infiltración de células cancerosas en los órganos periféricos, la metástasis tumoral y, hasta cierto punto, el crecimiento tumoral y/o aliviar en cierta medida uno o más de los síntomas asociados al cáncer. Véase la anterior definición de "tratamiento" . El antígeno "CD20" es una fosfoproteína transmembrana no glicosilada con un peso molecular de aproximadamente 35 kD que se encuentra en la superficie de más del 90% de las células B de la sangre periférica o de los órganos linfoides. CD20 se expresa durante el desarrollo de las células precursoras B tempranas y permanece hasta la diferenciación hasta células plasmáticas, no aparece en las células madre humanas, células progenitoras linfoides o células plasmáticas normales. CD20 se presenta tanto en células B normales como en células B tumorales. Otros nombres para CD20 en la bibliografía incluyen "antígeno de diferenciación restringido a linfocitos B" y "Bp35". El antígeno CD20 se describe por ejemplo, en Clark y Ledbetter, Adv. Can . Res . 52:81-149 (1989) y Valentine y col . , J. Biol . Chem . 264(19) :11282-11287 (1989). El término "anticuerpo" se usa en el más amplio sentido y abarca específicamente los anticuerpos monoclonales (incluyendo los anticuerpos monoclonales de longitud completa) , anticuerpos multiespecífieos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos mientras muestren la actividad o función biológica deseada. La actividad biológica de los anticuerpos de unión al CD20 de la invención incluirán la unión del anticuerpo al CD20 humano, más preferentemente la unión al CD20 humano y de primates (incluyendo el mono cynomolgus, el mono reshus, chimpancés y babuinos) . Los anticuerpos se unirán al CD20 con un valor K no mayor de 1 x 10~8, preferentemente un valor Ka no mayor de aproximadamente 1 x 10~9, y serán capaces de destruir o reducir las células B in vivo, preferentemente en al menos un 20% en comparación con el control negativo apropiado que no se trata con el anticuerpo. La reducción de células B puede ser resultado de uno más, ADCC, CDC, apoptosis, u otros mecanismos. En algunas modalidades del tratamiento de la enfermedad de la presente memoria descriptiva, se pueden desear las funciones o mecanismos del efector específico en otras y determinadas variantes del 2H7 humanizado o se prefieren determinados anticuerpos de unión al CD20 humano para lograr dichas funciones biológicas, como ADCC. Los "fragmentos de anticuerpos" comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, y generalmente la región de unión a antígeno del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos serían los fragmentos Fab, Fab7 F(ab')2 y Fv, los diacuerpos, los anticuerpos lineales, las moléculas anticuerpos de cadena única y los anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. "Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un punto completo de reconocimiento y unión a antígeno. Este fragmento está compuesto por un dímero de una región variable de cadena pesada y otro de cadena ligera en una estrecha asociación no covalente. A partir del plegamiento de estos dos dominios emanan seis bucles hipervariables (tres bucles de cada cadena H y L) que aportan los residuos aminoacídicos para la unión al antígeno y confieren la especificidad de unión del anticuerpo. No obstante, incluso un dominio variable simple (o la mitad de un Fv que comprenda únicamente tres regiones CDR específicas para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer un antígeno y unirse a él, aunque con una afinidad inferior que el punto de unión completo. El término "anticuerpo monoclonal", en el contexto de la presente memoria descriptiva, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, es decir, los anticuerpos individuales que comprende la población son idénticos y/o se unen al mismo epítopo, excepto en el caso de posibles variantes que pudiesen surgir durante la producción del anticuerpo monoclonal, estando dichas variantes, por lo general, presentes en cantidades insignificantes. Dicho anticuerpo monoclonal incluye típicamente un anticuerpo que comprende una secuencia polipeptídica que se une un objetivo, en la que la secuencia polipeptídica de unión a dicha objetivo se obtuvo mediante un procedimiento que incluye la selección de una sola secuencia polipeptídica de unión a la objetivo a partir de muchas secuencias polipeptídicas. Por ejemplo, el procedimiento de selección puede ser una selección de un solo clon a partir de muchos clones, como un conjunto de clones de hibridoma, clones fágicos, y clones de ADN recombinante. Debe saberse que la secuencia de unión a la objetivo elegida puede alterarse adicionalmente, por ejemplo, para mejorar la afinidad por la objetivo, para humanizar la secuencia de unión a la objetivo, para mejorar su producción en cultivos celulares, para reducir su inmunogenicidad in vivo, para crear un anticuerpo multiespecífico, etc., y un anticuerpo que comprenda la secuencia de unión a la objetivo alterada es además un anticuerpo monoclonal de esta invención. En contraste con las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen típicamente diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos) , cada anticuerpo monoclonal de una preparación de anticuerpos monoclonales está dirigido frente a un solo determinante en un antígeno. Además de su especificidad, las preparaciones de anticuerpos monoclonales tienen la ventaja de no suelen estar contaminados por otras inmunoglobulinas. El modificador "monoclonal" indica la característica del anticuerpo que se ha obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, y no debe interpretarse como una indicación de que sea necesario producir el anticuerpo por algún procedimiento en particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se van a usar según la presente invención se pueden producir mediante una variedad de técnicas, incluyendo, por ejemplo el método del hibridoma (por ejemplo, Kohler y col . , Nature, 256:495 (1975); Harlow y col . , Antibodies : A Laboratory Manual , (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a edición 1988); Hammerling y col . , en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, 563-681, (Elsevier, N.Y., 1981)), procedimientos de ADN recombinante (véase por ejemplo, la Patente de EE.UU. n2 4,816,567), tecnologías de presentación de fagos (véase por ejemplo., Clackson y col., Nature, 352:624-628 (1991); Marks y col., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991); Sidhu y col., J. Mol. Biol., 338 (2 ): 299-310 (2004); Lee y col., J. Mol. Biol. , 340 (5 ): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 101 (34) : 12467-12472 (2004) y Lee y col., J. I munol . Methods, 284 (1-2) : 119-132 (2004)) y tecnologías para producir anticuerpos humanos o similares a humanos en animales que tengan parte o todos los loci o genes de inmunoglobulina humana que codifican secuencias de inmunoglobulina humana (véase por ejemplo, los documentos W01998/24893 ; WO1996/34096 ; W01996/33735 y WO1991/10741; Jakobovits y col., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits y col., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann y col., Year in Immuno . , 7:33 (1993); Patentes de EE.UU. nos 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669 (todas de GenPharm) y 5,545,807, documento W01997/17852 , Patentes de EE.UU. nos 5,545,807, 5,545,806, 5,569,825, 5,625,126, 5,633,425 y 5,661,016, Marks y col., Bio / 'Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg y col., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994); Fishwild y col., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996) ; Neuberger, Nature Bi o technol ogy, 14: 826 (1996) y Lonberg y Huszar, Intern. Rev. I munol . , 13: 65-93 (1995)). Los "fragmentos funcionales" de los anticuerpos de unión al CD20 de la invención son aquellos fragmentos que conservan la unión al CD20 intacta sustancialmente con la misma afinidad que la molécula intacta de longitud completa de la que derivan y muestra actividad biológica incluyendo la reducción de células B según medición mediante ensayos in vi tro o in vivo, como los descritos en la presente memoria descriptiva . El término "variable" se refiere al hecho de que las secuencias de ciertos segmentos de los dominios variables difieren enormemente entre los distintos anticuerpos. El dominio V media la unión a antígeno y define la especificidad de un anticuerpo particular para su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no está distribuida uniformemente por todos los 110 aminoácidos de de los dominios variables. De hecho, las regiones V están compuestas por regiones relativamente invariables llamadas regiones estructurales (FR) de 15-30 aminoácidos separados por regiones más cortas de extrema variabilidad llamadas "regiones hipervariables" que tienen cada una 9-12 aminoácidos. Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras naturals comprenden cada una, cuatro FR que adoptan principalmente una configuración en lámina ß, conectadas por tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan, y en algunos casos forman parte de, la estructura en lámina ß. Las FRs mantienen unidas y en estrecha proximidad las regiones hipervariables de cada cadena, las cuales, junto con las de las otras, contribuyen a la formación del punto de unión a antígeno de los anticuerpos (véase Kabat y col . , Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5a edición, Servicio de Salud Pública, Institutos Nacionales de la Salud, Bethesda, MD. (1991) ) . Los dominios constantes no participan directamente en el proceso de unión al antígeno de un anticuerpo, pero desarrollan diversas funciones efectoras, como la participación del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (DAC, por sus siglas en inglés) . El término "región hipervariable" , en el contexto de la presente memoria descriptiva, se refiere a los residuos aminoacídicos de un anticuerpo responsables de la unión al antígeno. La región hipervariable generalmente comprende residuos aminoacídicos de una "región de determinación de complementariedad" o "CDR" (por ejemplo, los residuos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en la VL y 31-35B (Hl) , 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en la VH (Kabat y col . , Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5a edición, Servicio de Salud Pública, Institutos Nacionales de la Salud, Bethesda, MD. (1991) ) y/o aquellos residuos de un "bucle hipervariable" (por ejemplo, los residuos 26-32 (Ll), 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en la VL y 26-32 (Hl), 52A-55 (H2) y 96-101 (H3) en la VH (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . , 196:901-917 (1987)). Como se refiere en la presente memoria descriptiva, la "secuencia consenso" o secuencia del dominio V consenso es una secuencia artificial derivada de la comparación de secuencias aminoacídicas de secuencias de regiones variables conocidas de inmunoglobulinas humanas. Basadas en estas comparaciones, se prepararon las secuencias nucleotídicas recombinantes que codifican los aminoácidos del dominio V que son un consenso de las secuencias derivadas de la cadena humana K y de los dominios de los subgrupos III y V de la cadena H humana. La secuencia consenso V no tiene ninguna especificidad o afinidad de unión a anticuerpo conocida. Los anticuerpos (inmunoglobulinas) "quiméricos" tienen una porción de la cadena pesada y/o ligera idéntica u homologa a las secuencias correspondientes de anticuerpos obtenidos de una especie en particular o pertenecientes a una clase o subclase de anticuerpos en particular, mientras que el resto de la(s) cadena (s) es idéntico u homólogo a las secuencias correspondientes de anticuerpos obtenidos de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpos, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (Patente de EE.UU. n2 4.816.567 y Morrison y col . , Proc . Nati . Acad. Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)). Anticuerpo humanizado como se emplea en la presente memoria descriptiva es un subconjunto de anticuerpos quiméricos . Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murino) son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de una inmunoglobulina no humana. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor o aceptor) en que los residuos de una región hipervariable del receptor son sustituidos por los residuos de la región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) , como el ratón, la rata, el conejo o los primates no humanos, que tenga la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos de la región estructural (FR) Fv de la inmunoglobulina humana se sustituyen por sus correspondientes residuos no humanos. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentren en el anticuerpo receptor o donante. Estas modificaciones se llevan a cabo para refinar aún más el rendimiento del anticuerpo, como la afinidad de la unión. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos, al menos uno y típicamente dos, los dominios variables en los que todos, o sustancialmente todos, los bucles hipervariables correspondan a los de una inmunoglobulina no humana y todas, o sustancialmente todas, las FR sean las de una secuencia de inmunoglobulina humana, aunque las regiones FR puedan incluir una o más sustituciones aminoacídicas que mejoren la afinidad de la unión. El número de estas sustituciones aminoacídicas en la FR no son tipicamente más de 6 en la cadena H, y en la cadena L no más de 3. El anticuerpo humanizado comprenderás además opcionalmente al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para más detalles, véase Jones y col . , Na ture, 321:522-525 (1986), Reichmann y col . , Na ture, 332:323-329 (1988) y Presta, Curr . Op . Struct . Biol . , 2:593-596 (1992) . Las "funciones efectoras" de un anticuerpo hacen referencia a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fe (una región Fe de una secuencia natural o la región Fe variable de una secuencia aminoacídica) de un anticuerpo, y puede variar con el isotipo del anticuerpo. Los ejemplos de funciones efectoras de un anticuerpo incluyen: Unión de Clq y citotoxicidad dependiente de complemento, la unión de receptores de Fe, la citotoxicidad con mediación celular dependiente de anticuerpos (ADCC), la fagocitosis, regulación a la baja de los receptores en la superficie celular (por ejemplo , el receptor de células B) , y la activación de células B . La "citotoxicidad con mediación celular dependiente de anticuerpos" o "ADCC" se refiere a una forma de citotoxicidad en la cual una IgG secretada y unida a los receptores Fe (FcRs) presentes en determinadas células citotóxicas (por ejemplo, células asesinas naturales (NK) , neutrófilos y macrófagos) posibilita que estas células efectoras citotóxicas se unan específicamente a una célula objetivo que porte un antígeno y posteriormente destruyan dicha célula objetivo con citotoxinas. Los anticuerpos "arman" a las células citotóxicas y son absolutamente necesarios para dicha destrucción. Las células primarias para la mediación, ADCC, células NK, expresan sólo Fc?RIII, mientras que los monocitos expresan Fc?RI , Fc?RII y Fc?RIII. La expresión del FcR en células hematopoyéticas se resume en la tabla 3 de la página 464 de Ravetch y Kinet, Annu. .Rev. Immunol , 9:457-92 (1991). A fin de evaluar la actividad de ADCC de una molécula de interés, se puede realizar un ensayo de ADCC in vi tro, como el que se describe en las patentes de EE.UU. nO? 5,500,362 ó 5,821,337. Entre las células efectoras útiles para estos ensayos se encontrarían las células sanguíneas mononucleares periféricas (PBMC) y las asesinas naturales (NK) . Como alternatural , o adicionalmente, la actividad de ADCC de la molécula de interés se puede evaluar in vivo , por ejemplo, en un modelo animal como el que se desvela en Clynes y col . , PNAS (USA) , 95:652-656 (1998). Los términos "receptor de Fe" o "FcR" describen un receptor que se une a la región Fe de un anticuerpo. El FcR preferente es un FcR humano con secuencia natural. Además, un FcR preferente es aquél que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye las subclases de receptores Fc?RI, Fc?RII y FcyRIII, incluyendo las variantes alélicas y las formas de ayuste alternativo de estos receptores. Los receptores Fc?RII incluyen el Fc?RIIA (un "receptor activador") y el Fc?RIIB (un "receptor inhibidor"), los cuales tienen secuencias aminoacídicas similares que difieren principalmente en sus dominios citoplasmáticos . El receptor activador Fc?RIIA contiene en su dominio citoplasmático un motivo activador inmunorreceptor basado en la tirosina (ITAM) . El receptor inhibidor Fc?RIIB contiene en su dominio citoplasmático un motivo inhibidor inmunoreceptor basado en la tirosina (ITIM) (véase una reseña al respecto en Daéron, Annu . Rev. Immunol . , 15:203-234 (1997)). En Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Inmuno 1 , 9:457-92 (1991), Capel y col . , Immunomethods, 4:25-34 (1994) y de Haas y col . , J. Lab . Clin . Med. , 126:330-41 (1995) también se revisan los FcRs . Otros FcRs, incluyendo aquéllos que se identifiquen en el futuro, se engloban bajo el término "FcR" empleado en la presente memoria descriptiva. Este término también incluye el receptor neonatal, FcRn, responsable de la transferencia de los IgGs maternos al feto (Guyer y col . , J. Immunol . , 117:587 (1976) y Kim y col . , J. Immunol . , 24:249 (1994)). Los documentos WO00/42072 (Presta) y WO 2004/056312 (Low an y col . ) describen variantes de anticuerpos con capacidad de unión a los FcRs mejoradas o disminuidas. El contenido de estas publicaciones de patentes se incorpora específicamente en la presente memoria descriptiva a modo de referencia. Véase además, Shields y col . , J. Biol . Chem . , 9(2) : 6591-6604 (2001) . La "citotoxicidad dependiente de complemento" o ("CDC", por sus siglas en inglés) se refiere a la lisis de una célula objetivo en presencia del complemento. La vía clásica de activación del complemento se inicia por la unión del primer componente del sistema del complemento (Clq) a los anticuerpos (de la subclase apropiada) que están unidos a su antígeno cognado. A fin de evaluar la activación del complemento, se puede efectuar un ensayo de CDC, por ejemplo, tal como se describe en Gazzano-Santoro y col . , J. Immunol . Methods , 202:163 (1996) . Las variantes polipeptídicas con secuencias aminoacídicas de la región Fe alteradas y capacidad aumentada o disminuida de unión a Cql se describen en la Patente de EE.UU. n2 6,194,551B1 y el documento W099/51642. El contenido de dichas publicaciones de patentes se incorpora específicamente en la presente memoria descriptiva a modo de referencia. Véase además, Idusogie y col . J. Immunol . 164: 4178-4184 (2000) . Composiciones Los anticuerpos CD20 incluyen: "C2B8, " que ahora se denomina "rituximab" ("RITUXAN®") (Patente de EE.UU. n2 5.736.137); el anticuerpo murino 2B8 etiquetado con itrio-[90] denominado "Y2B8" o "ibritumomab tiuxetán" (ZEVALIN®) disponible en el mercado a través de IDEC Pharmaceuticals, Inc. (Patente de EE.UU. n2 5,736,137; 2B8 depositado con ATCC bajo el número de acceso HB11388 el 22 de junio de 1993); IgG2a murina "Bl," también denominada "tositumomab, " etiquetada opcionalmente con I131 para generar el anticuerpo "131I-B1" o "tositumomab yodo 1131" (BEXXAR™) disponible en el mercado a través de Corixa (véase además la Patente de EE.UU. n2 5,595,721); anticuerpo monoclonal murino "1F5" (Press y col . Blood 69 (2) : 584-591 (1987) y sus variantes, incluyendo el anticuerpo de "estructura parcheada" o humanizada 1F5 (documento WO2003/002607 , Leung, S.; depósito ATCC HB-96450) ; anticuerpo murino 2H7 y quimérico 2H7 (Patente de EE.UU. n2 5.677.180); un 2H7 humanizado (documento WO2004/056312 Low an y col . ) y como se especifica a continuación) ; anticuerpo totalmente humano HUMAX-CD20™ (Genmab, Dinamarca; véase, por ejemplo, Glennie y van de Winkel, Drug Discovery Today, 8: 503-510 (2003) y Cragg y col . , Blood, 101: 1045-1052 (2003)); los anticuerpos monoclonales expuestos en el documento WO2004/035607 (Teeling y col . ) ; los anticuerpos que tienen un complejo de cadenas glucídicas unidas por un enlace N-glicosídico a la región Fe descrita en el documento US2004/0093621 (Shitara y col . ) ; moléculas de unión al CD20 como la serie AME de anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos AME-133™, como se indica en el documento WO2004/103404 (Watkins y col . , Applied Molecular Evolution) ; anticuerpo A20 o sus variantes como un anticuerpo A20 quimérico o humanizado (cA20, hA20, respectivamente) (solicitud de EE.UU. ne US2003/0219433 , Immunomedics) y anticuerpos monoclonales L27, G28-2, 93-1B3, B-Cl o NU-B2 disponibles en el Taller Internacional de Clasificación de Leucocitos (Valentine y col . , en: Leukocyte Typing III, (McMichael, Ed. , página 440, Oxford University Press (1987)). Los anticuerpos preferentes CD20 en la presente memoria descriptiva son anticuerpos CD20 humanizados, quiméricos o humanos, más preferentemente, un anticuerpo 2H7 humanizado, rituximab, un anticuerpo A20 quimérico o humanizado (Immunomedics) , y un anticuerpo CD20 humano HUMAX-CD20™ (Genmab) . Un anticuerpo humanizado que se una al CD20 humano y preferentemente otro CD20 primate también que además comprenda una cadena H pesada que tenga, al menos una, preferentemente dos, o todas las CDR de la cadena H de un anticuerpo anti CD20 humano de especies no humanas (anticuerpo donante) y sustancialmente todos los residuos estructurales de un anticuerpo consenso humano como anticuerpo receptor. El anticuerpo donante puede proceder de varias especies no humanas incluyendo ratón, rata, cobayo, cabra, conejo, caballo, primate, pero más frecuentemente será un anticuerpo murino. La expresión "sustancial ente todos" en este contexto significa que las regiones FR del receptor en el anticuerpo humanizado pueden incluir una o más sustituciones aminoacídicas no presentes originalmente en la secuencia FR consenso humana. Estos cambios en la FR pueden comprender residuos que no se encuentren ni en el anticuerpo receptor ni en el donante. En una modalidad, el anticuerpo donante es el anticuerpo 2H7 murino, la región V que incluye las secuencias CDR y FR de cada cadena H y L, las cuales se muestran en las figuras ÍA y IB. En una modalidad específica, los residuos de la región estructural Fab humana corresponden a la secuencia consenso de la VK humana subgrupo I y de la VH subgrupo III, estas secuencias consenso aparecen en las figuras ÍA y IB, respectivamente. El anticuerpo 2H7 humanizado de la invención tendrá al menos una de las CDR en la cadena H del anticuerpo donante murino. En una modalidad, el anticuerpo 2H7 humanizado que se une al CD20 humano comprende las CDR de ambas cadenas H y L del anticuerpo donante. En un anticuerpo de longitud completa, el anticuerpo de unión al CD20 humanizado de la invención comprenderá un dominio V humanizado unido a un dominio C de una inmunoglobulina humana. En una modalidad preferente, la región C de la cadena H procede de una IgG humana, preferentemente IgGl o IgG3. El dominio C de la cadena L procede preferentemente de un cadena K humana . Para los propósitos de la presente memoria descriptiva "2H7 humanizado" se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento de anticuerpo que comprende la secuencia de la región ligera variable (VL) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (SEC ID NO:l) , y secuencia de cadena pesada variable (VH) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYN QKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS (SEC ID NO: 2) Cuando el anticuerpo 2H7 humanizado es un anticuerpo intacto, preferentemente comprende la secuencia aminoacídica de la cadena ligera vld. DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKA DYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO : 3 ) ; y secuencia aminoacídica de la cadena pesada: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYN QKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 4) . Una variante del anterior mAb 2H7 humanizado es 2H7v.31 que tiene la misma secuencia de la cadena L que el SEC ID NO: 3 anterior, con la secuencia aminoacídica de la cadena H: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAP GKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWY YSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAATI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO : 5 ) . La región V del resto de variantes basadas en esta versión 16 tendrá las secuencias aminoacídicas de la vl6 salvo en las posiciones de las sustituciones aminoacídicas que están indicadas en la siguiente tabla 1. A menos que se indique lo contrario, las variantes 2H7 tendrán la misma cadena L que la de la versión vld. También se conoce al anticuerpo humanizado 2H7 v.16 como rhuMAb2H7 u olizumab.

TABLA 1 TABLA 2 La numeración de los residuos es según Kabat y col . , Sequences of Immunological Interest, 5a edición, Servicio de Salud Pública, Institutos Nacionales de la Salud, Bethesda, Md. (1991) , con las inserciones mostradas como a, b, c, d, y e, y los espacios mostrados como guiones en las figuras de las secuencias . En los anticuerpos de unión al CD20 que comprenden la región Fe, se puede eliminar la lisina del extremo C terminal (residuo 447 según el sistema de numeración EU) de la región Fe, por ejemplo, durante la purificación del Ab o mediante ingeniería genética del ácido nucleico que codifica el polipéptido del anticuerpo. Por consiguiente, la composición de anticuerpos de unión al CD20 útil en esta invención puede comprender un anticuerpo con la K447, con todas las K447 eliminadas o una mezcla de anticuerpos con y sin el residuo K447. El lugar de N-glicosilación en IgG está en Asn297, en el dominio CH2. Los anticuerpos de unión al CD20 útiles en los procedimientos de tratamiento de la presente invención incluyen composiciones de cualquiera de los anticuerpos anti CD20 anteriores con una región Fe, en la que aproximadamente el 80-100% (y preferentemente el 90-99%) de los anticuerpos de la composición comprende una estructura con un carbono central maduro que carece de fucosa, unido a la región Fe de la glicoproteína. En la presente memoria descriptiva se demostró que dichas composiciones mostraban una sorprendente mejora de la unión a Fe (RIIIA(F158) , que no es tan eficaz como Fc(RIIIA (V158) a la hora de unirse a la IgG humana. Fc(RIIIA (F158) es más común que Fc?RIIIA (V158) en africanos, americanos y caucásicos sanos normales. Consultar Lehrnbecher y col . , Blood, 94:4220 (1999). Los anticuerpos de unión al CD20 engloban anticuerpos de unión al CD20 biespecíficos en los que un brazo del anticuerpo tiene una cadena H y L de un anticuerpo de unión al CD20, como una cadena H y L de un anticuerpo 2H7 humanizado de la invención, y el otro brazo tiene una región V que se une específicamente a un segundo antígeno. En modalidades específicas, el segundo antígeno se selecciona del grupo compuesto por CD3 , CD64, CD32A, CD16, NKG2D u otros ligandos de activación de NK. Procedimientos de tratamiento Las investigaciones clínicas de Genentech y Biogen Idee han evaluado la eficacia terapéutica del tratamiento de enfermedades autoinmunes usando dosis de anticuerpos anti CD20 que oscilan entre un mínimo de 10 mg hasta una dosis de 1 g (ver ejemplo 4) . En general, en estas investigaciones clínicas los anticuerpos se administraron en dos dosis, separadas por aproximadamente dos semanas. Los ejemplos de tratamientos estudiados en las investigaciones clínicas incluyen, para el anticuerpo 2H7 anti CD20 humanizado a 2 x 10 mg (dosis total de ~10,lmg/m2 para un paciente de 70 kg y 170,18 cm) , 2 x 50 mg (dosis total de 55 mg/m2 a u paciente de 70 kg y 170,18 cm) , 2 x 200 mg (dosis total de 220 mg/m2 para un paciente de 70 kg y 170,18 cm) , 2 x 500 mg (dosis total de -550 mg/m2 para un paciente de 70 kg y 170,18 cm) y 2 x 1.000 mg (dosis total de -1100 mg/m2 para un paciente de 70 kg, y 170,18 cm) ; y para el Rituxán, 2 x 500 mg (dosis total de -550 mg/m2 para un paciente de 70 kg y 170,18 cm) y 2 x 1000 mg (dosis total de -1100 mg/m2 para un paciente de 70 kg y 170,18 cm) . Con cada una de estas dosis, se observó una reducción sustancial de los linfocitos B circulantes después de administrar la primera dosis de anticuerpo. Actualmente se está investigando con un intervalo de dosis desde 10 mg hasta 2.000 mg o infusiones intravenosas únicas o dobles con un 2H7 vl6 humanizado. La presente invención proporciona métodos para tratar enfermedades autoinmunes y para reducir el número de células B en un paciente con una enfermedad autoinmune administrando a un paciente un anticuerpo de unión al CD20 a una dosis estable de 0. lmg a 1000 mg. Sería beneficioso poder reducir la dosis a una dosis mínima terapéuticamente eficaz. Se ha descubierto que con dosis de menos de 300 mg, incluso de 10 mg, se logra una reducción sustancial de células B. Así, en los presentes procedimientos de reducción de células B y tratamiento en modalidades preferentes, el anticuerpos de unión al CD20 se administra en dosis de 0.1, 0.5, 1, 5, 10, , 20 25, 30, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 200, ó 250mg. La dosificación deseada dependerá de la enfermedad y de su gravedad, su estado, nivel de modulación de células B deseada y otros factores familiares para los médicos expertos en la materia. Se pueden usar dosis más bajas, por ejemplo, de 20 mg, 10 mg o menores si el objetivo es una reducción parcial del número de células B a corto plazo. Se pueden usar además dosis de 50, 75, 100, 125, 150, 200, o 250 mg en terapias de mantenimiento para tumores de células B como en el tratamiento de LNH. El nivel deseado de reducción de células B dependerá de la enfermedad. Para el tratamiento de un cáncer CD20 positivo, puede que sea deseable maximizar la reducción de las células B que son el objetivo de los anticuerpos anti CD20 de la invención. Así, para el tratamiento de un neoplasma de células B CD20 positivo, es deseable que la reducción de células B sea suficiente para evitar al menos la evolución de la enfermedad que puede ser valorada por el médico especialista, por ejemplo, controlando el crecimiento del tamaño (tamaño), la proliferación de tipo celular canceroso, metástasis, otros signos y síntomas del cáncer en cuestión. Preferentemente, la reducción de células B es suficiente para evitar la evolución de la enfermedad durante al menos 2 meses, más preferentemente 3 meses, y más preferentemente aún durante 4 meses, más preferentemente 5 meses, y más preferentemente aún durante 6 meses o más. En modalidades aún más preferentes, la reducción de células B es suficiente para aumentar el tiempo de remisión en al menos 6 meses, más preferentemente 9 meses, más preferentemente un año, más preferentemente 2 años, más preferentemente 3 años y más preferentemente aún durante 5 años o más . En una modalidad más preferente, la reducción de células B es suficiente para curar la enfermedad. En modalidades preferentes, la reducción de células B en un paciente con cáncer es de aproximadamente un 75% y más preferentemente 80%, 85%, 90%, 95%, 99% e incluso 100% del nivel control antes del tratamiento. Para el tratamiento de una enfermedad autoinmune, puede ser deseable modular el grado de reducción de células B dependiendo de la enfermedad y/o gravedad de la afección en un paciente individual, ajustando la dosis de anticuerpo de unión al CD20. Así, la reducción de células B, puede, pero no será total. O, se puede desear una reducción total de células B en un tratamiento inicial pero en posteriores tratamientos, la dosis se puede ajustar para lograr sólo una reducción parcial. En una modalidad, la reducción de células B es de al menos un 20%, es decir, sólo permanecen un 80% de células B CD20 positivas en relación al nivel control anterior al tratamiento. En otras modalidades, la reducción de células B es de un 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% o mayor.

Preferentemente, la reducción de células B es suficiente para detener la evolución de la enfermedad, más preferentemente para aliviar los signos y síntomas de la enfermedad en cuestión, y más preferentemente aún para curar la enfermedad. La frecuencia de dosificación puede variar dependiendo de varios factores . El paciente puede recibir desde 1-5 dosis, preferentemente al menos 2 dosis del anticuerpo de unión al CD20. Por ejemplo, las 2 dosis se administran en un mes, preferentemente la segunda dosis en aproximadamente 2 semanas después de la primera dosis. Dependiendo del nivel de mejora de la enfermedad o de la recurrencia, se pueden administrar dosis adicionales en el transcurso de la enfermedad o como terapia de mantenimiento de la enfermedad. Los pacientes con una enfermedad autoinmune o un cáncer de las células B para quienes una o más terapias actuales hayan resultado ineficaces, poco toleradas o estén contraindicadas, se pueden tratar usando los tratamientos de dosificación de la presente invención. Por ejemplo, la invención contempla los presentes procedimiento de tratamiento para pacientes con AR que haya sufrido una respuesta inadecuada a terapias con inhibidores del factor de necrosis tumoral (TNF) o con terapias con fármacos antirreumáticos moduladores de la enfermedad (DMARD) . En otra modalidad, el tratamiento a dosis bajas de la presente invención es útil en terapias de mantenimiento. Los parámetros para evaluar la eficacia o éxito del tratamiento de un neoplasma son evidentes para aquellos médicos expertos en la enfermedad implicada. Generalmente, el médico especialista intentará reducir los signos y síntomas de la enfermedad en cuestión. Los parámetros pueden incluir la media del tiempo de la evolución de la enfermedad, tiempo de remisión, enfermedad estabilizada. La siguiente bibliografía describe linfomas y LLC, sus diagnósticos, tratamientos y procedimientos médicos habituales para medir la eficacia del tratamiento. Canellos GP, Lister, TA, Sklar, JL: The Lymphomas , W.B.Saunders Company, Filadelfia, 1998; van Besien K y Cabanillas, F: Clinical Manifestations, Staging and Treatment of Non-Hodgkin ' s Lymphoma, capítulo 70, páginas 1293-1338, en: Hematology , Basic Principies and Practice, 3a edición, Hoffman y col . (editores), Churchill Livingstone, Filadelfia, 2000; y Raí , K y Patel , D: Chronic Ly phocytic Leukemia, capítulo 72, páginas 1350-1362, en: Hema tology , Basic Principies and Practice, 3a edición, Hoffman y col . (editores), Churchill Livingstone, Filadelfia, 2000. Los parámetros para evaluar la eficacia o éxito del tratamiento de una enfermedad autoinmune o asociada a un trastorno autoinmune son evidentes para aquellos médicos expertos en la enfermedad implicada. Generalmente, el médico especialista intentará reducir los signos y síntomas de la enfermedad en cuestión. En una modalidad, las presentes dosificaciones y tratamientos de dosificación se usan para tratar la artritis reumatoide (AR) . La AR es una enfermedad autoinmune que afecta a más de un millón de americanos y dificulta las actividades diarias de quienes la padecen. La AR aparece cuando el sistema inmunológico de uno mismo ataca al tejido de las articulaciones por error y provoca una inflamación crónica que destruye el tejido sano y daña las articulaciones. Los síntomas incluyen inflamación de las articulaciones, hinchazón, rigidez y dolor. Adicionalmente, puesto que la AR es una enfermedad sistémica, puede tener efectos en otros tejidos como pulmones, ojos y médula ósea. No tiene una cura conocida. Los tratamientos incluyen varios fármacos antiinflamatorios esteroideos y no esteroideos, agentes inmunosupresores, fármacos antirreumáticos moduladores de la enfermedad (DMARD) y agentes biológicos. Sin embargo, muchos pacientes continúan teniendo una respuesta inadecuada al tratamiento. Los anticuerpos se pueden usar como una terapia de primera línea en pacientes con AR temprana (es decir, metotrexato -MTX- nativo) y una monoterapia, o junto con, por ejemplo, MTX o ciclofosfamida. O, los anticuerpos se pueden usar en el tratamiento de segunda línea para pacientes que fueron refractarios para los DMARD y/o MTX, y una monoterapia o junto con, por ejemplo, MTX. Los anticuerpos de unión al CD20 humanizados son útiles para prevenir y controlar las lesiones en las articulaciones, retrasan el daño estructural, disminuyen el dolor asociado a la inflamación en la AR y reducen, por lo general, los signos y síntomas de la AR moderada y grave. El paciente con AR puede ser tratado con anticuerpos anti CD20 humanizados antes, después o durante el tratamiento con otros fármacos usados para tratar la AR (véase a continuación terapia combinada) . En una modalidad, los pacientes en los que la terapia con fármacos antirreumáticos moduladores de la enfermedad no ha tenido éxito y/o han tenido una respuesta no satisfactoria al metotrexato solo, se tratan con un anticuerpo de unión al CD20 humanizado de la invención. En una modalidad de este tratamiento, los pacientes se someten a un tratamiento de 17 días de duración recibiendo solo anticuerpo de unión al CD20 humanizado (1 g vía intravenosa los días 1 y 15); anticuerpo de unión al CD20 humanizado más ciclofosfamida (750 mg vía intravenosa los días 3 y 17); o anticuerpo de unión al CD20 humanizado más metotrexato. Un método para evaluar la eficacia del tratamiento de la AR se basa en los criterios ACR (siglas en inglés de Instituto Americano de Reumatología) , que miden el porcentaje de mejora de las articulaciones blandas e inflamadas, entre otros. Se puede valorar al paciente con AR por ejemplo, ACR 20 (20 por ciento de mejora) en comparación con un control de tratamiento sin anticuerpo (por ejemplo control antes del tratamiento) o con el tratamiento con placebo. Otros modos de evaluar la eficacia de un tratamiento con anticuerpos incluyen la valoración con rayos X como la valoración con rayos X Sharp usada para evaluar el daño estructural como la erosión ósea y el estrechamiento del espacio de las articulaciones . También se puede valorar en los pacientes la prevención o mejora de la incapacidad en base al sistema de valoración HAQ (por las siglas en inglés de Cuestionario de Valoración Sanitaria), el AIMS, el SF-36, periódicamente durante o después del tratamiento. Los criterios ACR-20 pueden incluir una mejora del 20% tanto articulaciones blandas (dolorosas) como hinchadas y un 20% de mejora en al menos 3 de 5 medidas adicionales. 1. valoración de dolor del paciente a través de una escala visual analógica (EVA) , 2. valoración global del paciente de la actividad de la enfermedad (EVA) , 3. valoración global del médico de la actividad de la enfermedad (EVA) , 4. incapacidad valorada por el propio paciente a través del Cuestionario de Valoración Sanitaria, y . reactivos de fase aguda, CRP (proteína C reactiva) o ESR (VSG) . ACR 50 y 70 se definen análogamente. Preferentemente se administra al paciente una cantidad de anticuerpo de unión al CD20 de la invención, eficaz a la hora de lograr al menos una valoración de ACR 20, preferentemente al menos ACR 30, más preferentemente al menos ACR 50, más preferentemente aún al menos ACR 70, más preferentemente al menos ACR 75 y superior. La artritis psoriática tiene unas características radiográficas distintivas. Para la artritis psoriática, la erosión de las articulaciones y el estrechamiento del espacio articular se puede evaluar además por el sistema de valoración Sharp. Los anticuerpos humanizados CD20 de la invención se pueden usar para prevenir el daño articular así como para reducir los signos y síntomas del trastorno. Otro aspecto de la invención es procedimiento para tratar el lupus o LSE administrando al paciente que padece LSE, una cantidad terapéuticamente eficaz de anticuerpo de unión al CD20 de la invención. Los pacientes con LSE incluyen pacientes con manifestaciones extrarrenales así como nefritis asociada al lupus. Los sistemas de valoración SLEDAI proporcionan una cuantificación numérica de la actividad de la enfermedad. El sistema de valoración SLEDAI es un índice ponderativo de 24 parámetros médicos y de laboratorio que se sabe que están correlacionados con la actividad de la enfermedad, con un intervalo numérico de 0-103. Véase Bryan Gescuk & John Davis, "Novel therapeutic agent for systemic lupus erythematosus" en Current Opinión in Rheumatology, 2002, 14:515-521. Se cree que los anticuerpos frente ADN de doble cadena provocan exacerbaciones renales y otras manifestaciones del lupus. Se puede realizar un seguimiento a los pacientes que se están sometiendo al tratamiento para controlar el tiempo que pasa hasta aparecer la exacerbación renal, que se define como un incremento significativo y reproducible de la creatinina sérica, proteína en orina o sangre en la orina. De modo alternativo o adicional, se pueden controlar los niveles de anticuerpos antinucleares y anticuerpo frente a ADN de doble cadena de los pacientes. Los tratamientos del LSE incluyen altas dosis de corticosteroides y/o ciclofosfamida (HDCC) . Respecto a la vasculitis, aproximadamente el 75% de los pacientes con vasculitis sistémica tiene un anticuerpo citoplasmático antineutrófilo y se agrupa en tres afecciones que afectan a los vasos sanguíneos pequeños y medianos: la granulomatosis de Wegener (GW) , la poliangiitis microscópica (PAM) y el síndrome de Churg Strauss (SCS) , conocidas colectivamente como vasculitis asociada a ANCA (VAA) . Las espondiloartropatías son un grupo de trastornos de las articulaciones, incluyendo la espondilitis anquilosante, la artritis psoriática y la enfermedad de Crohn. El éxito en el tratamiento se puede determinar a través de herramientas validadas de medición y valoración global del paciente y médico. Se usan varios medicamentos para tratar la psoriasis, el tratamiento difiere directamente en relación con la gravedad de la enfermedad. Los pacientes con una forma leve de psoriasis utilizan típicamente tratamientos tópicos, como esteroides tópicos, antralina, calcipotrieno, clobesatol y tazaroteno, para tratar la enfermedad mientras que es más probable que los pacientes con una psoriasis moderada o grave empleen terapias sistémicas (metotrexato, retinoides, ciclosporina, PUVA y UVB) También se emplean aceites. Estas terapias tienen una combinación de preocupaciones de seguridad, tratamientos que necesitan mucho tiempo o procesos de tratamiento inconvenientes. Además, algunos requieren un caro equipamiento y un espacio delicado en el entorno de la oficina. Los medicamentos sistémicos pueden producir graves efectos secundarios, incluyendo hipertensión, hiperlipidemia, supresión de la médula ósea, enfermedad hepática y afecciones gastrointestinales. Además, el uso de fototerapia puede incrementar la incidencia de cáncer de piel . Además de los inconvenientes y molestias asociadas con el uso de terapias tópicas, la fototerapia y los tratamientos sistémicos requieren que los pacientes alternen la aplicación de la terapia y controlen la exposición de por vida debida a sus efectos secundarios. La eficacia del tratamiento para la psoriasis se evalúa controlando los cambios en los signos y síntomas clínicos de la enfermedad incluyendo Valoración Global del Médico (PGA) y Área de Psoriasis e índice de Gravedad (PASI) , Valoración de Síntomas de la Psoriasis (PSA) , en comparación con un estado control . Se puede valorar periódicamente al paciente durante el tratamiento con una escala analógica visual usada para indicar el grado de picor sufrido en momentos específicos. Los pacientes pueden sufrir una reacción a la infusión o síntomas asociados a la infusión en su primera infusión de anticuerpo terapéutico. La gravedad de estos síntomas varía y generalmente son reversibles con intervención médica. Estos síntomas incluyen pero no se limitan a, fiebre tipo gripal, resfriados escalofríos, náuseas, urticaria, dolor de cabeza, broncoespasmos, angioedema . Sería deseable para los procedimientos de tratamiento de la enfermedad de la presente invención minimizar las reacciones ante la infusión. Para aliviar o minimizar tales efectos adversos, el paciente recibe un condicionamiento inicial o una o más dosis de tolerabilidad del anticuerpo seguida de una dosis terapéuticamente eficaz. La(s) dosis de acondicionamiento serán menores que la dosis terapéuticamente eficaz para acondicionar al paciente para que tolere las dosis. Vía de administración Los anticuerpos de unión al CD20 se administran al paciente humano de acuerdo con procedimientos conocidos, como por ejemplo la administración intravenosa, por ejemplo, como un bolo o una infusión continua durante un período de tiempo, mediante vía subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, cefalorraquídea, intraarticular, intrasinovial , intratecal o por inhalación, generalmente por vía intravenosa o subcutánea. En una modalidad, el anticuerpo 2H7 humanizado se administra vía infusión intravenosa con una solución de cloruro sódico al 0.9% como vehículo de infusión. Terapia combinada En el tratamiento de neoplasmas de células B descritos anteriormente, se puede tratar al paciente con los anticuerpos de unión al CD20 de la presente invención junto con uno o más agentes terapéuticos como un quimioterapéutico en un tratamiento multifarmacológico . El anticuerpo de unión al CD20 se puede administrar simultánea, secuencial o alternaturalmente con el agente quimioterapéutico, o después de que no haya respuesta con otra terapia. La quimioterapia habitual para el tratamiento del linfoma puede incluir ciclofosfamida, citarabina, melfalán y mitoxantrona más melfalán. CHOP es uno de los tratamientos quimioterapéuticos más comunes para el tratamiento del linfoma no Hodgkin. Los siguientes agentes son fármacos usados en el tratamiento CHOP: ciclofosfamida (marcas citoxán, neosar) , adriamicina (doxorrubicina/hidroxidoxorrubicina) vincristina (oncovín) y prednisolona (a veces denominada deltasona u orasona) . En modalidades particulares, el anticuerpo de unión al CD20 se administra a un paciente que lo necesite junto con uno o más de los siguientes agentes quimioterapéuticos, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina, y prednisolona. En una modalidad específica, se trata un paciente que padezca un linfoma (como un linfoma no Hodgkin) con un anticuerpo anti CD20 de la presente invención junto con la terapia CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisona) . En otra modalidad, el paciente con cáncer recibe un tratamiento con un anticuerpo de unión al CD20 humanizado de la invención junto con quimioterapia CVP (ciclofosfamida, vincristina y prednisona) . En una modalidad específica, el paciente que padece el LNH CD20 positivo recibe un tratamiento con 2H7 vl6 humanizado junto con CVP. En una modalidad específica del tratamiento de LLC, el anticuerpo de unión al CD20 se administra junto con quimioterapia con fludarabina y citoxán. Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos serían los agentes de alquilación como la tiotepa y la ciclofosfamida CYTOXAN®, los sulfonatos de alquilo como el busulfán, el improsulfán y el piposulfán, las aziridinas como la benzodopa, la carbocuona, la meturedopa y la uredopa, las etiloniminas y metilamelaminas incluyendo la altretamina, la trietilenomelamina, la trietilenofosforamida, la trietilenotiofosforamida y la trimetilolomelamina, el TLK 286 (TELCYTA™) , los acetogeninos (en especial, el bullatacín y la bullatacinona) , el delta-9-tetrahidrocannabinol (dronabinol, MARINOL®) , la beta-lapachona, el lapachol, las colquicinas, el ácido botulínico, una camptotecina (incluyendo el topotecán análogo sintético (HYCAMTIN®) , el CPT-11 (irinotecán, CAMPTOSAR®) , la acetilcamptotecina, la escopolectina y la 9-aminocamptotecina) , la briostatina, la callistatina, el CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adocelesina, carcelesina y bicelesina) , la podofilotoxina, el ácido podofilínico, la teniposida, las criptoficinas (particularmente la criptoficina 1 y la 8), la dolastatina, la duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos KW-2189 y CB1-TM1) , la eleuterobina, la pancratistatina, una sarcodictina, la espongistatina, los gases de nitrógeno como el clorambucil, la clornafacina, la colofosfamida, la estramustina, la ifosfamida, la mecloretamina, el clorhidrato de óxido de mecloretamina, el melfalán, la novembiquina, la fenesterina, la prednimustina, la trofosfamida y la 7 uramustina, las nitrosureas como la carmustina, la clorozotocina, la fotemustina, la lomustina, la nimustina y la ranimustina, los bisfosfonatos como el clodronato, los antibióticos como los de enedina (por ejemplo, la caliqueamicina, especialmente la caliqueamicina gamma II y la caliqueamicina omega II (véase, por ejemplo, Agnew, Chem Intl . Ed. Engl . , 33: 183-186 (1994)) y las antraciclinas como la anamicina, la AD 32, la alcarrubicina, la daunorrubicina, el dexrazoxano, la DX-52-1, la epirrubicina, la GPX-100, la idarrubicina, la KRN5500, el menogaril, la dinemicina, incluyendo la dinemicina A, una esperamicina, el cromóforo de neocarcinostatina y los cromóforos antibióticos de enedina cromoproteína relacionados, las aclacinomisinas, la actinomicina, la autramicina, la azaserina, las bleomicinas, la cactinomicina, la carabicina, la carminomicina, la carcinofilina, las cromomicinas, la dactinomicina, la detorrubicina, la 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, la doxorrubicina ADRIAMYCIN® (incluyendo la morfolino-doxorrubicina, la cianomorfolino-doxorrubicina, la 2-pirrolino-doxorrubicina, la doxorrubicina liposomal y la desoxidoxorrubicina) , la esorrubicina, la marcelomicina, las mitomicinas como la mitomicina C, el ácido micofenólico, la nogalamicina, las olivomicinas, la peplomicina, la potfiromicina, la puromicina, la quelamicina, la rodorrubicina, la estreptonigrina, la estreptozocina, la tubercidina, el ubenimex, la cinostatina y la zorrubicina, los análogos del ácido fólico como la denopterina, la pteropterina y el trimetrexato, los análogos de la purina como la fludarabina, la 6-mercaptopurina, la tiamiprina y la tioguanina, los análogos de la pirimidina como la ancitabina, la azacitidina, la 6-azauridina, el carmofur, la citarabina, la didesoxiuridina, la doxifluridina, la enocitabina y la floxuridina, los andrógenos como la calusterona, el propionato de dromostanolona, el epitiostanol , el mepitíostaño y la testolactona, los antiadrenales como la aminoglutetimida, el mitotano y el trilostano, un abastecedor de ácido fólico como el ácido folínico (leucovorina) , la aceglatona, agentes antineoplásicos antifolatos como el ALIMTA®, el LY231514 pemetrexed, los inhibidores de la reductasa dihidrofolato como el metotrexato, los antimetabolitos como el 5-fluorouracilo (5-FU) y sus profármacos como el UFT, el S-l y la capecitabina, y los inhibidores del timidilato sintasa y la glicinamida ribonucleótida formiltransferasa como el raltitrexed (TOMUDEX™, TDX) , los inhibidores de la dihidropirimidina deshidrogenasa como el eniluracilo, el glucósido aldofosfamida, el ácido aminolevulínico, la amsacrina, el bestrabucil, el bisantreno, el edatraxato, la defofamina, la demecolcina, la diazicuona, la elfornitina, el acetato de eliptinio, una epotilona, el etoglúcido, el nitrato de galio, la hidroxiurea, el lentinán, la lonidainina, los maitansinoides como la maitansina y las ansamitocinas, la mitoguazona, la mitoxantrona, el mopidanmol, la nitraerina, el pentostatín, el fenamet, la pirarrubicina, la losoxantrona, la 2-etilhidracida, la procarbacina, el complejo polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR) , el razoxano, la rizoxina, el sizofirán, el espirogermanio, el ácido tenuazónico, la triacicuona, la 2 , 2 ' , 2 " -triclorotrietilamina, los tricotecenos (especialmente la toxina T-2, el verracurín A, el roridín A y la anguidina) , el uretano, la vindesina (ELDISINE®, FILDESIN®) , la dacarbacina, la manomustina, el mitobronitol, el mitolactol, el pipobromán, la gacitosina, la arabinosida ("Ara-C"), la ciclofosfamida, la tiotepa, los taxoides y los taxanos, por ejemplo, el TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), el ABRAXANE™ sin cremofor, la formulación de nanopartículas de paclitaxel mediante ingeniería de albúmina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) y el TAXOTERE® docetaxel (Rhóne-Poulenc Rorer, Antony, Francia), el clorambucil, la gemcitabina (GEMZAR®) , la 6-tioguanina, la mercaptopurina, el platino, los análogos de platino o los análogos basados en platino como el cisplatino, el oxaliplatino y el carboplatino, la vinblastina (VELBAN®) , el etopósido (VP-16) , la ifosfamida, la mitoxantrona, la vincristina (ONCOVIN®) , el alcaloide de la vinca, la vinorrelbina (NAVELBINE®) , la novantrona, el edatrexato, la daunomicina, la aminopterina, la xeloda, el ibandronato, el inhibidor RFS 2000 de la topoisomerasa, la difluorometilornitina (DMFO) , los retinoides como el ácido retinoico, las sales, los ácidos o los derivados de cualquiera de las sustancias anteriores que sean aceptables para un uso farmacéutico, así como las combinaciones de una o más de las sustancias anteriores como la CHOP, la abreviatura de una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisolona, y el FOLFOX, la abreviatura de un régimen de tratamiento con oxaliplatino (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovorina. En esta definición también se incluyen los agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal en los tumores como los antiestrógenos y los moduladores selectivos de receptores de estrógenos (SERMs) , incluyendo, por ejemplo, el tamoxifeno (incluyendo el tamoxifeno NOLVADEX®) , el raloxifeno, el droloxifeno, el 4-hidroxitamoxifeno, el trioxifeno, el keoxifeno, el LY117018, la onapristona y el toremifeno FARESTON®, los inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, encargada de regular la producción de estrógenos en las glándulas adrenales, como, por ejemplo, los 4 (5) -imidazoles, la aminoglutetimida, el acetato de megestrol MEGASE®, el exemestano AROMASIN®, la formestania, la fadrozola, la vorozola RIVISOR®, la letrozola FEMARA® y la anastrozola ARIMIDEX®, y antiandrógenos como la flutamida, la nilutamida, la bicalutamida, la leuprolida y la goserelina, así como la troxacitabina (un análogo del nucleósido citosinal, 3-dioxolano) , los oligonucleótidos antisentido, particularmente aquéllos que inhiben la expresión génica en rutas de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, como, por ejemplo, el PKC-alfa, el Raf, el H-Ras y el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , las vacunas para terapias génicas como, por ejemplo, la ALLOVECTIN®, la LEUVECTIN® y la VAXID®, el PROLEUKIN® rIL-2 , el inhibidor LURTOTECAN® de la topoisomerasa 1, el ABARELIX® rmRH y las sales, los ácidos o los derivados de cualquiera de las sustancias anteriores que sean aceptables para un uso farmacéutico. Para tratar las enfermedades autoinmunes o afecciones asociadas a problemas autoinmunes anteriormente descritas, se puede tratar al paciente con uno o más anticuerpos de unión al CD20 junto con un segundo agente terapéutico, como un inmunosupresor, como en un tratamiento multifarmacológico . El anticuerpo de unión al CD20 se puede administrar simultánea, secuencial o alternaturalmente con el agente inmunosupresor, o después de que no haya respuesta con otra terapia. El agente inmunosupresor se puede administrar con las misma dosis o inferior que las indicadas en la técnica. El agente inmunosupresor adyuvante preferente dependerá de muchos factores, incluyendo el tipo de trastorno que se esté tratando así como el historial del paciente. "Agente inmunosupresor" como se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a sustancias que actúan para suprimir o enmascarar el sistema inmunológico de un paciente. Tales agentes incluirían sustancias que supriman la producción de citocinas, regulen a la baja o supriman la expresión de autoantígenos, o enmascaren los antígenos del MHC (complejo principal de histocompatibilidad) . Los ejemplos de tales agentes incluyen esteroides como glucocorticosteroides, por ejemplo, prednisona, metilprednisolona y dexametasona, pirimidinas sustituidas en el grupo 2-amino-6-arilo (véase Patente de EE.UU. n2 4,665,077), azatioprina (o ciclofosfamida, si hay una reacción adversa a la azatioprina) , bromocriptina, glutaraldehído (que enmascara los antígenos MHC, como se describe en la Patente de EE.UU. n2 4,120,649), y anticuerpos anti idiotípicos frente antígenos MHC y fragmentos MHC, ciclosporina A, citocinas, o antagonistas de los receptores de citocinas incluyendo anticuerpos anti interferón-?, -ß, o OÍ; OÍ anticuerpos del factor de necrosis anti-tumoral; anticuerpos a del factor de necrosis anti-tumoral; anticuerpos anti-interleucina-2 , y anticuerpos del receptor anti-IL-2; anticuerpos anti-L3T4, globulinas anti-linfocitos heterólogos; anticuerpos pan-T, preferentemente anticuerpos anti-CD3 o anti-CD4/CD4a; péptidos solubles con un dominio de unión a LFA-3 (documento WO90/08187 publicado el 7/26/90) ; estreptocinasa; TGF-a; estreptodornasa; ARN o ADN del huésped; FK506; RS-61443; desoxispergualina; rapamicina; receptor de célula T (Patente de EE.UU. n2 5,114,721); fragmentos de receptores de células T (Offner y col . , Science, 251:430-432 (1991); documentos WO90/11294 y WO91/01133); y anticuerpos del receptor de células T (solicitud de patente europea n2 EP 340,109) como T10B9. Para el tratamiento de la artritis reumatoide, se puede tratar al paciente con un anticuerpo de unión al CD20 (como por ejemplo rituximab u ocrelizumab o sus variantes) junto con uno o más de los siguientes fármacos: DMARDS (fármacos antirreumáticos moduladores de la enfermedad, por ejemplo metotrexato), AINE (fármacos antiinflamatorios no esteroideos) , inmunosupresores (por ejemplo, azatioprina, micofenolato mofetilo (CellCept®; Roche) ) , analgésicos, glucocorticoides, ciclofosfamida, HUMIRA™ (adalimumab; Abbott Laboratories), ARAVA® (leflunomida) , REMICADE® (infliximab; Centocor Inc., de Malvern, Pa) , ENBREL (etanercept; Immunex, WA) , ACTEMRA ( tocilizumab; Roche, Suiza) , inhibidores de la COX-2. Los DMARD usados comúnmente en AR son hidroxicloroquina, sulfasalazina, metotrexato, leflunomida, etanercept, infliximab, azatioprina, penicilamina D, Gold (oral), Gold (intramuscular), minociclina, ciclosporina, inmunoadsorción con proteína A estafilocócica. Adalimumab es un anticuerpo monoclonal humano que se une a TNFV. Infliximab es un anticuerpo monoclonal quimérico que se une a TNFV. Etanercept es una proteína de fusión "inmunoadhesina" compuesta por la porción de unión a ligando extracelular del receptor de factor de necrosis tumoral de 75 kD (p75) humano (TNFR) unido a la porción Fe de una IgGl humana. Actemra ( tocilizumab) es un anticuerpo receptor anti-interleucina 6 (IL-6) humana humanizado. Para un tratamiento convencional de la AR, véase por ejemplo, "Guidelines for the management of rheumatoid arthritis", Arthri tis & Rheumatism, 46(2): 328-346 (Febrero de 2002) . En una modalidad específica, el paciente con AR se trata con un anticuerpo anti CD20 de la invención junto con metotrexato (MTX) . Una dosis ejemplo de MTX es aproximadamente 7.5-25 mg/kg/semana. MTX se puede administrar vía oral o subcutánea. Para el tratamiento de espondilitis anquilosante, artritis psoriática y enfermedad de Crohn, se puede tratar al paciente con el anticuerpo de unión al CD20 de la invención junto con, por ejemplo, Remicade® (infliximab; de Centocor Inc., de Malvern, Pa . ) , ENBREL (etanercept; Immunex, WA) . Los tratamientos del LSE incluyen la combinación del anticuerpo anti CD20 con altas dosis de corticosteroides y/o ciclofosfamida (HDCC) . Los pacientes con LSE, VAA y NMO se pueden tratar con el anticuerpo de unión al CD20 de la invención junto con cualquiera de los siguientes compuestos: corticosteroides, AINE, analgésicos, inhibidores de la COX-2, glucocorticoides, DMARD convencionales (por ejemplo, metotrexato, sulfasalazina, hidroxicloroquina, leflunomida) , DMARD biológicos como por ejemplo, anti Blys (por ejemplo, belimumab) , anti IL6R, por ejemplo, tocilizumab; CTLA4-Ig (abatacept) , (anti CD22 por ejemplo, epratuzumab) , inmunosupresores (por ejemplo, azatioprina; micofenolato mofetilo (CellCept®; Roche) ) , y agentes citotóxicos (por ejemplo, ciclofosfamida) . Para el tratamiento de la psoriasis, se puede administrar a los pacientes el anticuerpo de unión al CD20 junto con tratamientos tópicos, como por ejemplo, esteroides tópicos, antralina, calcipotriol, clobetasol y tazaroteno, o con metotrexato, retinoides, ciclosporina, terapias PUVA y UVB. En una modalidad, el paciente con psoriasis se trata con el anticuerpo de unión al CD20 secuencial o concurrentemente con ciclosporina. Para minimizar la toxicidad, las terapias sistémicas tradicionales se pueden administrar con otros tratamientos rotacional, secuencial, combinatoria o intermitentemente, o con tratamientos combinados con dosis más bajas de composiciones del anticuerpo de unión al CD20 en las dosis actuales.

Formulaciones farmacéuticas Las formulaciones farmacéuticas de los anticuerpos de unión al CD20 utilizados de acuerdo con esta invención se preparan para su almacenamiento mezclando el anticuerpo que tiene el grado de pureza deseado con portadores, excipientes o estabilizadores opcionales que sean aceptables para un uso farmacéutico (Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 16a edición, Osol, A. Ed. (1980)), en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los portadores, excipientes o estabilizadores no son tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen soluciones como el fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos, antioxidantes que incluyen el ácido ascórbico y metionina; conservantes (como por ejemplo el cloruro de octadecildimetilbenzilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol; alcohol butílico o bencílico; alquil parabenos como por ejemplo metil o propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol y m-cresol) ; polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos) ; proteínas, tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos como por ejemplo polivinilpirrolidona; aminoácidos como por ejemplo la glicina, glutamina, asparragina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos incluyendo glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes como por ejemplo EDTA; azúcares como por ejemplo sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones que forman sales como por ejemplo sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteína) ; y/o tensioactivos no iónicos como por ejemplo TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (macrogol, PEG) . Los ejemplos de formulaciones de anticuerpos anti-CD20 se describen en el documento W098/56418, expresamente incorporado a modo de referencia. Otra formulación es una formulación multidosis líquida que comprende el anticuerpo anti CD20 a 40 mg/ml, acetato 25 mM, trehalosa 150 mM, alcohol bencílico al 0.9%, polisorbato 20 al 0.02% a un pH de 5.0 que tiene una vida útil mínima de dos años de almacenamiento a 2-8 °C . Otra formulación anti CD20 de interés comprende 10 mg/ml de anticuerpo en una solución de cloruro de sodio 9.0 mg/ml, citrato de sodio dihidratado 7,35 mg/ml, polisorbato 80 0.7 mg/ml, y agua estéril para inyección, pH 6.5. Otra formulación farmacéutica acuosa adicional comprende acetato de sodio 10-30 mM con un pH de aproximadamente 4.8 hasta aproximadamente pH 5.5 y preferentemente pH 5.5, polisorbato como tensioactivo en una cantidad de aproximadamente 0.01—0.1% v/v, trehalosa en una cantidad de aproximadamente 2-10% p/v, y alcohol bencílico como conservante (Patente de EE.UU. na 6,171,586). Las formulaciones liofilizadas adaptadas para su administración vía subcutánea se describen en el documento WO97/04801. Tales formulaciones liofilizadas se pueden reconstituir con un diluyente adecuado hasta una concentración proteica alta y la formulación reconstituida se puede administrar vía subcutánea al mamífero que se va a tratar en la presente memoria descriptiva. Una formulación para las variantes 2H7 humanizadas es un anticuerpo a 12-14 mg/ml en histidina 10 mM, sacarosa 6%, polisorbato 20 al 0.02%, pH 5.8. En una modalidad específica, las variantes y en particular la variante 2H7 vl6 se formula con 20 mg/ml de anticuerpo en sulfato de histidina 10 mM, sacarosa 60 mg/ml, polisorbato 20 0.2 mg/ml y agua estéril para inyección a pH 5.8. La formulación de la presente memoria descriptiva también contiene más de un compuesto activo tal y como sea necesario para la indicación particular que se esté tratando, preferentemente aquellas con actividades complementarias que no se afectan de manera adversa entre sí. Por ejemplo, puede ser deseable suministrar de modo adicional un agente citotóxico, un agente quimioterapéutico, una citocina o un agente inmunosupresor (por ejemplo, uno que actúe sobre las células T, como por ejemplo, ciclosporina o un anticuerpo que se una a las células T, por ejemplo, LFA-1) . La cantidad eficaz de dichos agentes depende de la cantidad de anticuerpo presente en la formulación, el tipo de enfermedad o trastorno o tratamiento, y otros factores ya abordados con anterioridad. Estos son generalmente usados en las mismas dosis y con las mismas vías de administración descritas en la presente memoria descriptiva o aproximadamente entre 1 y 99% de las dosis empleadas hasta este momento. Los ingredientes activos también se pueden atrapar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial (por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacrilato) , respectivamente) , en sistemas de presentación de fármaco coloidal (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) , o en macroemulsiones . Dichas técnicas se desvelan en Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 16 edición, Oslo, A., Ed. , (1980). Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberación controlada incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en forma de elementos moldeados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Ejemplos de matrices de liberación controlada incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli- (2-hidroxietil-metacrilato) , o poli- (vinilalcohol) ) , poliláctidos (Patente de Estados Unidos n2 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, acetato de etilenvinilo no degradable, copolímeros degradables de ácido glicólico-ácido láctico como por ejemplo LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas por copolímeros de ácido glicólico-ácido láctico y acetato de leuprolida) , y ácido poli-D- (- ) -3-hidroxibutírico . Las formulaciones para utilizar en administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra mediante la filtración a través de membranas de filtración estériles. Ejemplos experimentales Ejemplo 1 Las variantes de anticuerpos 2H7 humanizados se preparan y ensayan para comprobar su función biológica incluyendo al afinidad de unión al CD20 humano, las funciones efectoras y la reducción de células B son como se describe en el documento WO04/056312, incorporado por completo en la presente memoria descriptiva a modo de referencia. Se han descrito las secuencias de la región variable del anticuerpo 2H7 murino y el 2H7 quimérico con la V de ratón y la C humana, véase por ejemplo, las Patentes de EE.UU. 5,846,818 y 6,204,023. Ejemplo 2 Efectos in vivo de las variantes 2H7 en un estudio piloto en monos cynomolgus Las variantes 2H7 , producidas mediante una transfección temporal de células CHO, fueron probadas en monos cynomolgus (Macaca fascicularis) machos normales para evaluar su actividad in vivo . Otros anticuerpos anti CD20, como por ejemplo los C2B8 (Rituxán®) han demostrado una capacidad para reducir las células B en primates normales (Reff y col., Blood 83: 435-445 (1994)). En un estudio, se compararon variantes 2H7 humanizadas. En un estudio paralelo, también se probó Rituxán® en monos cynomolgus. Se usaron cuatro monos en cada uno de los grupos de cinco de dosificación. (1) vehículo, (2) 0.05 mg/kg hu2H7.vl6, (3) 10 mg/kg hu2H7.vl6, (4) 0.05 mg/kg hu2H7.v31, y (5) 10 mg/kg hu2H7.v31. Los anticuerpos se administraron vía intravenosa a un concentración de 0, 0.2 ó 20 mg/ml, para un total de dos dosis, un en el día 1 del estudio y otra en el día 8. El primer día de dosificación se denomina día 1 y el día anterior se denomina día -1, el primer día de recuperación (2 animales de cada grupo) se denomina día 11. Las muestras de sangre se recogieron los días -19, -12, 1 (antes de la primera dosis) y a las 6 h, 24 h y 72 h después de la misma. Se tomaron muestras adicionales el día 8 (antes de la dosis) , día 10 (antes de sacrificar dos animales de cada grupo) y los días 36 y 67 (animales de recuperación) . Las concentraciones de células B periféricas se determinaron mediante el método FACS que recontó células CD3- /CD40+. El porcentaje de células B CD3-CD40+ del total de linfocitos de las muestras de mono se obtuvo mediante la siguiente estrategia de separación. La población de linfocitos se marcó en el diagrama de dispersión de dispersión frontal/dispersión lateral para definir la Región 1 (Rl) . Usando los sucesos en Rl , se mostraron puntos de intensidad fluorescente para los marcadores CD40 y CD3. Los controles de isotipos marcados con fluorescencia se usaron para determinar los puntos de corte respectivos para los CD40 y CD3 positivamente. Los resultados indicaron que tanto 2H7.vl6 como 2H7.v31 fueron capaces de producir una reducción de células B periférica total a la dosis de 10 mg/ml y una reducción de células B periférica parcial a la dosis de 0,05 mg/ml (Figura 2) . El curso temporal y grado de reducción de células B medido durante las primeras 72 h de dosificación fueron similares para los dos anticuerpos. Los análisis posteriores de los animales de recuperación indicaron que los animales tratados con 2H7.v31 mostraban una reducción de células B prolongada en comparación con los que recibieron los 2H7.vl6. En particular, en los animales de recuperación tratados con 10 mg/kg de 2H7.vl6, las células B mostraban una recuperación de células B sustancial en algún momento de la toma de muestras del día 10 y día 36. Sin embargo, en los animales de recuperación tratados con 10 mg/kg de 2H7.v31, las células B no mostraron recuperación hasta algún momento entre el día 36 y el día 67 (Figura 2) . Esto sugiere una mayor duración de la reducción total de aproximadamente de un mes en el caso de los 2H7.v31 en comparación con los 2H7.vl6. No se observó toxicidad en el estudio con monos a dosis bajas o altas y la patología general fue normal. En otros estudios, vld también fue tolerado hasta la mayor dosis evaluada de (100 mg/kg x 2 = 1.200 mg/m2 x2 ) tras la administración intravenosa de 2 dosis administradas con 2 semanas de separación en estos monos. Los datos en monos Cynomolgus con 2H7.vl6 frente a Rituxán® sugieren que una reducción de cinco veces la actividad CDC no afecta de modo adverso a la potencia. Un anticuerpo con una potente actividad ADCC pero reducida actividad CDC puede tener un perfil de seguridad más favorable en relación a las primeras reacciones a la infusión que uno con mayor actividad CDC. Ejemplo 3 Supresión in vivo del crecimiento tumoral Se evaluó la capacidad de rhuMAb 2H7.vl6 para inhibir el crecimiento de células B humanas Raji, una línea celular de linfoma (ATCC CCL 86) , en ratones Balb/c sin pelaje (sin timo) . Las células Raji expresan CD20 y se ha descrito que crecen en ratones sin pelaje (nude) , produciendo metástasis, el crecimiento tumoral es inhibido por Rituxán® (Clynes y col . , Nature Medicine, 6, 443-446 (2000)). Cincuenta y seis ratones sin pelaje (nude) de 8-10 semanas se dividieron en 7 grupos (A-G) de 8 ratones cada uno. Un día 0, cada ratón recibió una inyección subcutánea de 5 x 106 células B de linfoma Raji en el costado. Al inicio del día 0, cada ratón recibió o bien 100 µl de una solución como control negativo (PBS, solución salina de regulador de pH de fosfato), Rituxán® o 2H7.vl6. La dosificación dependió del peso y el fármaco se administró vía intravenosa a través de la vena de la cola. El grupo A de ratones recibió PBS. Los grupos B-D recibieron Rituxán® en concentraciones de 5.0, mg/kg, 0.5 mg/kg, y 0.05 mg/kg respectivamente. Los grupos E-G recibieron 2H7 v.16 en concentraciones de 5.0, mg/kg, 0.5 mg/kg, y 0.05 mg/kg respectivamente. Se repitieron las inyecciones cada semana durante 6 semanas. A intervalos semanales durante el tratamiento, se analizó cada ratón para comprobar la presencia de tumores palpables en el lugar de la inyección, y se midió y registró el volumen de los tumores, en caso de haberlos. Se realizó una inspección final la semana 8 (después de un intervalo de dos semanas sin tratamiento) . Los resultados de este estudio mostraron que tanto rhuMAb 2H7.vl6 como Rituxán® eran eficaces al inhibir el crecimiento tumoral de células Raji subcutáneas en ratones sin pelaje (nude) . Se observó crecimiento tumoral en el grupo control con PBS al inicio de las 4 semanas. Sin embargo, no se observó crecimiento tumoral en los grupos tratados con Rituxán® o 2H7.vl6 en concentraciones de 5 mg/kg o 0.5 mg/kg durante las 8 semanas de duración del estudio. En el grupo con la concentración más baja, 0.05 mg/kg, se observaron tumores en un animal del grupo de 2H7 y en un animal del grupo de Rituxán®. Ejemplo 4 Estudio en fase I/II de rhuMAb 2H7 (2H7.vl6) en casos de artritis reumatoide moderada y grave. Sinopsis del protocolo Un estudio aleatorio, controlado con placebo, desarrollado en varios centros, ciego, de fase I/II sobre la seguridad de dosis escaladas de PRO70769 (rhuMAb 2H7) en sujetos con artritis reumatoide de moderada a grave que están recibiendo dosis estabilizadas de metotrexato concomitante. Objetivos El principal objetivo de este estudio es evaluar la seguridad y tolerabilidad de la escalabilidad de dosis intravenosas (IV) de PRO70769 (rhuMAb 2H7) en sujetos con artritis reumatoide (AR) de moderada a grave. Diseño del estudio Este es un estudio aleatorio, controlado con placebo, desarrollado en varios centros, doble ciego, de fase I/II sobre la seguridad de dosis escaladas de PRO70769 (rhuMAb 2H7) junto con MTX en sujetos con AR de moderada a grave. El estudio está compuesto por una fase de escalado de la dosis y una segunda fase con la participación de un mayor número de sujetos. Participarán sujetos con AR moderada o grave que no han respondido con éxito a cinco fármacos antirreumáticos moduladores de la enfermedad u otros productos biológicos y que simultáneamente no hayan tenido una respuesta satisfactoria al tratamiento con MTX. Se requerirá que los sujetos reciban MTX en el intervalo de 10-25 mg semanalmente durante al menos 12 semanas antes de su entrada y que tengan una dosis estabilizada durante al menos 4 semanas antes de recibir la dosis inicial del fármaco del estudio (PRO70769 o placebo) . Los sujetos también recibirán dosis de corticosteroides orales (hasta 10 mg al día o un equivalente de la prednisona) y dosis estabilizadas de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) . Los sujetos recibirán dos infusiones IV de PRO70769 o placebo equivalente a la dosis indicada los días 1 y 15 según el siguiente plan de escalado de la dosis (ver Figura 3) . El escalado de la dosis se producirá según unos criterios específicos y después de que un comité interno de análisis de datos de seguridad analice los datos de seguridad y valore la toxicidad aguda 72 horas después de la segunda infusión en el último sujeto tratado en cada grupo. Después de la fase de escalado de la dosis, se distribuirán de modo aleatorio otros 40 sujetos (32 activos y 8 placebos) en cada uno de los niveles de dosificación. 2x50 mg, 2x200 mg, 2x500 mg y 2x1000 mg, si los niveles de dosificación han mostrado ser tolerables durante la fase de escalado. Aproximadamente 205 sujetos participarán en el estudio. Se obtendrán y registrarán conteos de células B. Los conteos de células B se evaluarán usando citometría de flujo en un periodo de hasta 48 semanas durante más de 6 meses de evaluación de la eficacia. La reducción de células B no se considerará una toxicidad que límite la dosis (DLC) , sino que más bien se espera un resultado farmacodinámico del tratamiento con PRO70769. En un subestudio opcional, se tomarán muestras de sangre para análisis de suero y ARN, así como muestras de orina de los sujetos en varios momentos determinados. Estas muestras se usarán para identificar biomarcadores que puedan predecir la respuesta al tratamiento con PRO70769 en sujetos con AR moderada o grave . Mediciones de los resultados La medición principal de los resultados de este estudio es la seguridad y la tolerabilidad de PRO70769 en sujetos con AR moderada o grave Tratamiento del estudio Los grupos de sujetos recibirán dos infusiones IV de PRO70769 o placebo equivalente a la dosis indicada los días 1 y 15 según el siguiente plan de escalado. - 10 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 4 sujetos con fármaco activo, 1 control 50 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 8 sujetos con fármaco activo, 2 control 200 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 8 sujetos con fármaco activo, 2 control 500 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 8 sujetos con fármaco activo, 2 control 1.000 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 8 sujetos con fármaco activo, 2 control Eficacia La eficacia de PRO70769 se mediará mediante respuestas ACR. Los porcentajes de sujetos que alcancen una respuesta ACR20, ACR50 y ACR70 se resumirán por grupos y se generarán intervalos de confianza del 95% para cada grupo. Los componentes de estas respuestas y su cambio desde el control de referencia se resumirán por tratamiento y visita. Resultados Los resultados preliminares de los conteos de células B periféricas en los sujetos del estudio se muestran en las Figuras 4 y 6. Los resultados muestran que todas las dosis incluyendo la dosis más baja de 10 mg conducen a una reducción sustancial de las células B iniciales. Las dosis 10 mg x 2 parecen inducir una reducción de células B más corta con tendencia a una lenta recuperación entre los días 28 y 84 y posteriores. Ejemplo 5 Se diseñó un estudio clínico de rhuMab 2H7 en casos de artritis reumatoide moderada o grave esencialmente como se describe en el ejemplo 4. Los grupos de sujetos recibirán dos infusiones IV de PRO70769 o placebo equivalente a la dosis indicada los días 1 y 15 según el siguiente plan de escalado 0.1 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 80 sujetos con fármaco activo, 20 controles, el mismo para cada siguiente dosis - 1 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 10 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 25 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: 100 mg de PRO70769 o equivalente en placebo: La eficacia se valora como se describe con anterioridad. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (36)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. - Un procedimiento para reducir las células B en pacientes con una enfermedad autoinmune caracterizado porque comprende la administración al paciente de un anticuerpo que se una al CD20 humano, en una dosis en el intervalo de 1 mg a 250 mg.
2. 2. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque el anticuerpo se administra en una dosis en el intervalo de lmg a lOOmg.
3. 3. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 100 mg y al menos dos dosis.
4. 4. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 50 mg o 25 mg y al menos dos dosis.
5. 5. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 10 mg y al menos dos dosis.
6. 6.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 5 caracterizado porque el anticuerpo humanizado es hu2H7v.l6 con las secuencias de la cadena ligera y pesada con SEC ID NO : 3 e SEC ID NO: 4, respectivamente .
7. 7. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque las células B del paciente se reducen en al menos un 80% en comparación con el control de referencia antes de administrar el anticuerpo.
8. 8. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque la enfermedad autoinmune se selecciona de entre artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, lupus sistémico eritematoso (LSE) , lupus nefrítico, enfermedad de Wegener, enfermedad inflamatoria intestinal, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), púrpura trombocitopénica trombótica (PTT), trombocitopenia autoinmune, esclerosis múltiple, neuromielitis óptica, psoriasis, nefropatía por IgA, polineuropatías por IgM, miastenia grave, vasculitis asociada a ANCA (VAA), diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjogren, y glomerulonefritis.
9. 9. - El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es la artritis reumatoide.
10. 10.- Un procedimiento para aliviar una enfermedad autoinmune, caracterizado porque comprende la administración al paciente con dicha enfermedad, de un anticuerpo que se una al CD20 humano a una dosis en el intervalo de 1 mg a 250 mg.
11. 11.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 10 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 100 mg y al menos dos dosis.
12. 12.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 10 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 25 mg o 50 mg y al menos dos dosis.
13. 13.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 10 caracterizado porque el anticuerpo se administra en dosis de 10 mg y al menos dos dosis.
14. 14. - El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10-13, caracterizado porque el anticuerpo se administra vía intravenosa.
15. 15.- El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10-13, caracterizado porque el anticuerpo se administra vía subcutánea.
16. 16.- El procedimiento de conformidad con las reivindicaciones 11-15, caracterizado porque la segunda dosis se administra aproximadamente dos semanas después de la primera dosis.
17. 17. - El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-16 caracterizado porque después de la segunda dosis, se administra al paciente una dosis adicional cada 3, 6 ó 9 meses, según sea necesario.
18. 18.- El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.
19. 19. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque el anticuerpo humanizado es un anticuerpo 2H7 humanizado.
20. 20.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo humanizado comprende la secuencia de la región variable de la cadena L con SEC ID N0:1 y la secuencia de la región variable de la cadena H con SEC ID NO : 2.
21. 21.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo humanizado comprende la secuencia de la región variable de la cadena L con SEC ID NO: 15 y la secuencia de la región variable de la cadena H con SEC ID NO: 12.
22. 22.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el anticuerpo humanizado comprende la cadena H de longitud completa con SEC ID NO: 17.
23. 23.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo humanizado comprende la secuencia de la región variable de la cadena L con SEC ID NO: 15 y la secuencia de la región variable de la cadena H con SEC ID NO: 23.
24. 24. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el anticuerpo humanizado comprende la cadena H de longitud completa con SEC ID NO: 24.
25. 25.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo 2H7 humanizado se selecciona de entre el grupo compuesto por 2H7vl6, v31, v73 , v75, v96, vll4, vll5, vll6, vl38, v477, v 588, v511 y v375 de la tabla 1.
26. 26.- El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el anticuerpo de unión al CD20 es un anticuerpo quimérico.
27. 27.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anticuerpo quimérico en Rituximab.
28. 28.- El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el anticuerpo de unión al CD20 es un anticuerpo humano.
29. 29.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el anticuerpo humano en HUMAX-CD20™.
30. 30.- El procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la enfermedad autoinmune se selecciona de entre artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, lupus sistémico eritematoso (LSE) , incluyendo lupus nefrítico, enfermedad de Wegener, enfermedad inflamatoria intestinal, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), púrpura trombocitopénica trombótica (PTT) , trombocitopenia autoinmune, esclerosis múltiple, neuromielitis óptica, psoriasis, nefropatía por IgA, polineuropatías por IgM, miastenia grave, vasculitis asociada a ANCA (VAA) , diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjogren, y glomerulonefritis.
31. 31.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es la artritis reumatoide.
32. 32.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque el anticuerpo de unión al CD20 se administra junto con una terapia que emplea un fármaco seleccionado de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), analgésicos, glucocorticosteroides, ciclofosfamida, adalimumab, leflunomida) , infliximab, etanercept, tocilizumab e inhibidores de la COX-2.
33. 33.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque además comprende la administración al paciente de un segundo agente terapéutico.
34. 34.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es un inmunosupresor.
35. 35.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el paciente se trata además con metotrexato .
36. 36.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 ó 10 caracterizado porque se administra una dosis inicial de tolerabilidad antes de administrar la dosis terapéutica en donde la dosis de tolerabilidad es menor que la dosis terapéutica.