JPH04346934A

JPH04346934A - γ−グロブリンの液状製剤

Info

Publication number: JPH04346934A
Application number: JP3149633A
Authority: JP
Inventors: Yatsuhiro Kamimura; 上村　八尋; Kazuo Takechi; 武智　和男
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1991-05-24
Filing date: 1991-05-24
Publication date: 1992-12-02

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ソルビトール代謝異常
を有する患者に対しても使用し得る、保存安定性の優れ
た、静注可能な非化学修飾完全分子型γ−グロブリンの
液状製剤組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】血漿蛋白
成分である非化学修飾免疫γ−グロブリンのうち、特に
ＩｇＧを主成分とする非化学修飾γ−グロブリン製剤は
これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられ
てきた。ところで、γ−グロブリンは、溶液状態におい
て、その保存中に容易に重合物となり、静注投与による
副作用の原因ともなることから従来まで凍結乾燥の態様
で製剤化されていた。また、非化学修飾完全分子型γ−
グロブリンに溶液状態における不安定性を考慮すれば、
凍結乾燥を施すことが最良の方法であり、凍結乾燥の重
要性は周知のことであった。

【０００３】一方、液状製剤は乾燥製剤に比べると注射
用蒸留水への溶解の必要もなく、簡便に投与できるなど
の利点があるが、上記の如く、安定性に劣ることからそ
の実用化が遅れていた。

【０００４】最近、非化学修飾完全分子型γ−グロブリ
ン含有の低電導度の溶液にソルビトールを含み、約５．
５±０．２のｐＨを有することを特徴とする静脈内投与
可能な液状組成物も提案されている（特開昭６３−１９
２７２４号）。

【０００５】ところが、ソルビトールの代謝異常を有す
る患者においては、ソルビトール含有製剤は重篤な肝・
腎障害等の副作用を起こすとの報告があり〔Ｓｃｈｕｌ
ｔｅ，Ｍ．Ｊ．ら、Ｌａｎｃｅｔ，ｉｉ，１８８，（１
９７７）〕、かかる患者にはソルビトール含有製剤を投
与することは危険である。

【０００６】また、安定な液状製剤として、ｐＨ約３．
５〜５、イオン強度約０．００１未満の条件を有するγ
−グロブリン液状組成物が特開昭５８−４３９１４号に
て提案されている。

【０００７】しかし、このような強酸性の液状製剤を生
体に投与した場合に、ほぼ中性に保たれている生体体液
中では体液自体の緩衝作用により、γ−グロブリンが凝
集（重合）してしまう恐れがあり、必ずしも好ましいと
は言えない。

【０００８】従って、本発明の第一の目的は、保存中お
よび生体投与時のいずれにおいてもγ−グロブリンの重
合体の増加が抑制され、しかも抗補体価の上昇を認めず
、非化学修飾完全分子型γ−グロブリンの活性を損なわ
ないγ−グロブリンの液状組成物（製剤）を提供するこ
とにある。また第２の目的は、ソルビトール代謝異常を
示す患者に対してもソルビトールに起因する副作用を示
さないγ−グロブリンの液状組成物（製剤）を提供する
ことにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】以上の点に鑑み、本発明
者らは鋭意研究を重ねた結果、上記目的は、非化学修飾
完全分子型γ−グロブリン含有の低電導度溶液であって
、実質的にソルビトールを含有せず、約５．５±０．２
のｐＨを有することを特徴とする静脈内投与可能な液状
組成物を提供することによって達成されることを発見し
た。

【００１０】本発明の非化学修飾完全分子型γ−グロブ
リンとは、■　　自然のままで何らの修飾や変化も受け
ておらず、従ってγ−グロブリンのフラグメントである
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２　、ＦＣ　等を含まず、■　　
抗体価の低下が少なく、同時に抗体スペクトルの低下も
なく、■　　抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学
的製剤基準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）
よりも十分に低い、という諸条件を備えたものをいう。

【００１１】本発明において使用する非化学修飾完全分
子型γ−グロブリンは、自然状態のものでしかも抗補体
価の低いものであれば、いかなる方法で得たものであっ
てもよい。特に、既存の設備で製造でき、既に医薬とし
て使用されている筋注用γ−グロブリンを酸性処理して
その凝集体を切り離して得られたものが最も効率的であ
る。もっとも、製造上の複雑さや収量の低下を問題とし
ないならば、非イオン系界面活性剤による処理によって
抗補体作用の原因となるγ−グロブリン凝集体を除去し
、抗補体価の低いγ−グロブリンとしたものを使用する
ことが好ましい。こうして、本発明では非化学修飾完全
分子型γ−グロブリンの単量体濃度が９５％よりも大で
あることが好ましい。

【００１２】かかる非化学修飾完全分子型γ−グロブリ
ンは、例えば、次のようにして製造される。

【００１３】（原料）出発原料としては、免疫グロブリ
ンを含む画分が使用され、これはヒト血漿由来であって
、免疫グロブリン画分を含むものであれば特に限定され
ない。具体的には、コーンのエタノール分画により得ら
れる画分ＩＩ＋ＩＩＩ　、画分ＩＩ及び、免疫グロブリ
ンを含むこれらと同等の画分のペーストが挙げられる。また、この出発原料は、ヒト血液型抗体、カリクレイン
、プレカリクレイン、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体などを含ん
でもいてもよい。

【００１４】（製造法）■　　ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）処理出発原料であるγ−グロブリンを含有画
分を低濃度ＰＥＧで処理し、上清を回収する。

【００１５】まず、出発原料を適当な水性溶媒に懸濁す
る。水性溶媒の溶質として、たとえば塩化ナトリウム、
リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸、酢酸ナトリ
ウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等を含ませてもよ
い。

【００１６】この懸濁液を分子量１，０００〜１０，０
００（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧで
処理する（例えば、両者を混合する）。処理条件として
は、蛋白濃度１〜２０ｗ／ｖ％（特に５〜１５ｗ／ｖ％
）、ＰＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４〜８ｗ／ｖ％
）、ｐＨ４〜６（特に４．５〜５．５）、イオン強度０
．０００１〜０．１Ｍ（特に０．０００１〜０．０１Ｍ
）であることが好ましい。

【００１７】当該処理は、γ−グロブリンを含有画分に
ＰＥＧを添加して、通常約０〜４℃で３０分〜６時間攪
拌することによって行われる。

【００１８】その後、例えば遠心分離（６０００〜８０
００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収する。

【００１９】さらに、この上清を高濃度ＰＥＧで処理し
、沈澱を回収する。

【００２０】即ち、上記上清を分子量１，０００〜１０
，０００（好適には２，０００〜６，０００）のＰＥＧ
にてさらに処理する（たとえば、両者を混合する）。処理条件としては、蛋白濃度１〜２０ｗ／ｖ％（特に５
〜１５ｗ／ｖ％）、ＰＥＧ濃度１０〜１５ｗ／ｖ％（特
に１１〜１３ｗ／ｖ％）、ｐＨ６〜９（特に７．５〜８
．５）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に０．
０００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。当該処
理は、通常約０〜４℃で３０分〜６時間攪拌することに
よって行われる。

【００２１】その後、例えば遠心分離（６０００〜８０
００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して沈澱を回収する。

【００２２】■　　陰イオン交換体処理γ−グロブリン
含有画分を水性溶媒に溶解後、陰イオン交換体で接触処
理して非吸着画分を回収する操作であり、ＩｇＭ、Ｉｇ
Ｇ重合体を除くために行われるものである。

【００２３】（ｉ）陰イオン交換体陰イオン交換体は陰イオン交換基を不溶性担体に結合し
たものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミ
ノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）
基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、
デキストラン、ポリアクリルアミド等が挙げられる。

【００２４】（ｉｉ）　処理方法 γ−グロブリン含有画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒はｐＨ４〜７、好ましくは５〜６、低イオン強
度、好ましくは、０．０００１〜０．１Ｍの水溶液であ
り、前記■のＰＥＧ処理と同様の溶質を含んでいてもよ
い。蛋白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に３〜１０
ｗ／ｖ％）が好ましい。

【００２５】さらに、上記水性溶媒で平衡化した陰イオ
ン交換体と接触処理する。その処理に際してはバッチ法
、カラム法のどちらかを用いてもよい。

【００２６】たとえば、バッチ法では、陰イオン交換体
１ｍｌに対してγ−グロブリン溶液１０〜１００ｍｌ程
度の割合で両者を混合し、０〜４℃で３０分〜２時間程
度攪拌した後、遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、
１０〜３０分間）して上清を回収する。

【００２７】カラム法でも陰イオン交換体１ｍｌに対し
てγ−グロブリン溶液１０〜１００ｍｌ程度の割合で両
者を接触させ、非吸着画分を回収する。

【００２８】■　　固定化ジアミノ化合物による処理γ
−グロブリン含有画分を固定化ジアミノ化合物で接触処
理して非吸着画分を回収する操作であり、プレカリクレ
インまたはカリクレインを除くために行われる。

【００２９】（ｉ）固定化ジアミノ化合物の調製固定化
ジアミノ化合物はジアミノ化合物を不溶性担体に固定化
したものである。

【００３０】ジアミノ化合物としては、アミノベンズア
ミジン、アミノベンズグアニジン、リジン、アルギニン
等を用いることができる。

【００３１】一方、不溶性担体としては、アガロース、
セルロース、デキストラン、シリカゲル、ガラス等が用
いられる。

【００３２】固定化は公知の方法に準じればよい。たと
えば、アガロース、セルロース等は、たとえばＣＮＢｒ
活性化法により、またシリカゲル、ガラス等はオキシラ
ン法により、ジアミノ化合物を固定化することができる
。

【００３３】（ｉｉ）　処理方法 γ−グロブリン含有画分を、蛋白濃度１〜１５ｗ／ｖ％
（特に３〜１０ｗ／ｖ％）とし、ｐＨ５〜８（特に、ｐ
Ｈ６〜７）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に
０．０００１〜０．０１Ｍ）の条件下で固定化ジアミノ
化合物と接触処理する。その際、バッチ法、カラム法の
いずれもが好適に使用される。

【００３４】たとえば、バッチ法では、固定化ジアミノ
化合物１ｍｌに対して画分１０〜１００ｍｌ程度の割合
で両者を混合し、０〜１０℃、好ましくは０〜４℃で３
０分〜４時間、好ましくは４０分〜２時間程度攪拌した
後、遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０
分間）して上清を回収する。

【００３５】カラム法でも固定化ジアミン化合物１ｍｌ
に対して画分１０〜１００ｍｌ程度の割合で両者を接触
させ、非吸着画分を回収する。

【００３６】■　　固定化ヒト血液型物質処理γ−グロ
ブリン含有画分を固定化ヒト血液型物質で接触処理して
、非吸着画分を回収する操作であり、ヒト血液型抗体を
除くために行われる。

【００３７】（ｉ）固定化ヒト血液型物質の調製固定化
ヒト血液型物質はヒト血液型物質を不溶性担体に固定化
したものである。

【００３８】ヒト血液型物質の調製は、公知の方法を用
いればよい。たとえば、ヒトＡ、Ｂ、ＡＢまたはＯ型の
赤血球を低張溶液中で溶血、または超音波処理した後、
硫安分画法またはＰＥＧ分画法により精製すること等に
より得られる。また、シンソルブＡ、シンソルブＢ（Ｃ
ｈｅｍｂｉｏｍｅｄ　　ＬＴＤ社製）等、人工的に合成
された血液型物質を用いてもよい。

【００３９】さらに、このヒト血液型物質は生理的食塩
液に溶解後、夾雑するウィルスの不活性化に有効とされ
ている、例えば、約５０〜７０℃、好ましくは約６０℃
で７〜１３時間、好ましくは約１０時間、または、約８
０〜１３０℃、好ましくは９５〜１２１℃で約１〜４０
分間、好ましくは２〜３０分間加熱処理する。その後、
遠心分離して不要物を除去し、蒸留水に対して透析して
、各ヒト血液型物質を得る。

【００４０】一方、不溶性担体としては、アガロース、
セルロース、デキストラン、シリカゲル、ガラス等が用
いられる。

【００４１】固定化は公知の方法に準じればよい。たと
えば、アガロース、セルロース等はＣＮＢｒ活性化法に
より、シリカゲル、ガラス等はオキシラン法により、ヒ
ト血液型物質を固定化することができる。

【００４２】（ｉｉ）　　処理方法 γ−グロブリン含有画分を、蛋白濃度１〜１５ｗ／ｖ％
（特に３〜１０ｗ／ｖ％）とし、ｐＨ５〜８（特に６〜
７）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に０．０
００１〜０．０１Ｍ）の条件下で上記水性溶媒で平衡化
した固定化ヒト血液型物質と接触処理する。その際、バ
ッチ法、カラム法のどちらを用いてもよい。

【００４３】たとえば、バッチ法では、固定化ヒト血液
型物質１ｍｌに対して溶液１０〜１００ｍｌ程度と混合
させ、０〜１０℃、好ましくは０〜４℃で３０分〜４時
間、好ましくは３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心分
離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して
上清を回収する。

【００４４】カラム法でも固定化ヒト血液型物質１ｍｌ
に対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度の割合で両
者を接触させ、非吸着画分を回収する。

【００４５】■　　加熱処理安定化剤の存在下に免疫グロブリンの抗体活性の減少は
最小限にとどめるが、夾雑するＨＢウィルス、ＡＩＤＳ
ウィルス等は完全に不活性する条件下で加熱処理する。加熱処理は、含湿度３％以下の乾燥状態、（即ち、乾熱
処理）、または溶液状態、即ち免疫グロブリンの水溶液
状態（即ち、液状加熱処理）で行う。

【００４６】加熱処理時の安定化剤としては、いずれの
処理の場合も、二糖類（例、サッカロース、マルトース
）、糖アルコール（例、ソルビトール、マンニトール）
が好適に例示される。

【００４７】安定化剤の添加量は、乾熱処理法では、二
糖類、糖アルコール等を０．５〜５ｗ／ｖ％（好ましく
は１〜３ｗ／ｖ％）、液状加熱処理法では二糖類、糖ア
ルコール等を１０ｗ／ｖ％以上（好ましくは１０〜４０
ｗ／ｖ％）を用いることが好適に呈示される。

【００４８】加熱の対象となる免疫グロブリンの量は、
乾熱処理法では、蛋白量として１〜１０ｗ／ｖ％（好ま
しくは３〜７ｗ／ｖ％）となるように調整することが好
適である。液状加熱処理法では蛋白量として０．１〜３
０ｗ／ｖ％（好ましくは５〜２０ｗ／ｖ％）に調整する
ことが好ましい。

【００４９】加熱処理は、乾熱処理の場合、安定化剤を
添加後、要すれば除菌濾過し、たとえば凍結乾燥などに
よって含水率３％以下、好ましくは１％以下とする。凍
結乾燥の条件としては０．５ｍｍＨｇの真空下、２０〜
４０℃で２４〜９６時間程度が例示される。次いで、た
とえば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０〜
２００時間（好ましくは５０〜１００時間程度）で処理
する。

【００５０】また、本加熱処理工程は不活性ガス雰囲気
下で行うことにより、加熱時の安定性をより高めること
ができる。不活性ガスとしては例えば、窒素ガス、アル
ゴン、ヘリウムなどが挙げられる。

【００５１】液状加熱処理の場合は水溶液のｐＨを４．
５〜６．５、好ましくはｐＨ５〜６に調整し、液状加熱
処理法ではたとえば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程
度）、１０分〜２０時間（好ましくは１０時間程度）で
処理される。

【００５２】上記の操作を目的に応じて、適宜組み合わ
せて当該γ−グロブリンの製造（精製）のために用いる
ことができる。

【００５３】好適な具体例としては、■液状加熱処理→
■ＰＥＧ処理→■陰イオン交換体処理などの処理工程を
用いることができる。

【００５４】（液状組成物の調製）得られた非化学修飾
完全分子型γ−グロブリンを常套手段によって１〜１０
ｗ／ｖ％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）になるように水
溶液を調製し、ｐＨを５．５±０．２（好ましくは約５
．５）、低電導度、好ましくは電導度１ｍｍｈｏ以下（
特に、０．６ｍｍｈｏ以下、共に８℃換算）になるよう
に、自体既知の手段にて調整した後、通常の製剤化技術
に基づいて、除菌濾過、分注等を行う。かくして、静脈
内投与可能な非化学修飾完全分子型γ−グロブリン液状
組成物（製剤）が調製される。

【００５５】本発明において、実質的にソルビトールを
含有せずとは、ソルビトールの代謝異常を有する患者に
対して、ソルビトールに起因する肝・腎障害等の副作用
を起こす量を含有しないという意味である。

【００５６】また、公知の他の添加剤を用いてもよい。例えば、ポリエチレングリコール（分子量１０００〜１
００００）０．１〜１ｗ／ｗ％、ヒト血清アルブミン０
．５〜５ｗ／ｗ％、マンニトール１〜１０ｗ／ｗ％等が
例示される。

【００５７】

【発明の効果】本発明により、長期保存時はもとより生
体内投与時においてもγ−グロブリンの重合体の増加の
ない、しかも抗補体価の上昇を認めず、かつ長期保存時
において外観・性状を良好に保ち得、しかもソルビトー
ル代謝異常患者においても投与可能な安定な非化学修飾
完全分子型γ−グロブリンの液状組成物（製剤）が提供
される。

【００５８】

【実施例】以下の実施例及び試験例によって本発明をよ
り具体的に説明する。なお、試験例において、試験は次
の方法によって行った。

【００５９】（試験方法）外観性状としては、濁りが問
題となることからＯ．Ｄ．６００ｎｍ　の吸光度を測定
した。

【００６０】重合体の定量は高速液体クロマトグラフィ
ーで分析した。

【００６１】抗補体値の測定は、カバットとマイヤーの
方法〔Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｉｍｍｕｎｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ，　２２５　（１９６１）〕および西岡、
岡田の方法〔免疫の生化学、１０３、昭４６（共立出版
）〕に準じた。即ち、１００単位の補体が試料を加える
ことによって何単位に減少するかを測定し、その減少単
位を抗補体価として表した。

【００６２】麻疹抗体価はＨｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔ
ｉｏｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ｔｅｓｔ法により測定
し、国際単位（ＩＵ／１００ｍｇ）で表わした。

【００６３】試験例１非化学修飾完全分子型γ−グロブリンを使用して各種条
件に調製した液状組成物を２５℃で３ヶ月保存し、その
安定性を調べた。

【００６４】（１）ｐＨ γ−グロブリン濃度５ｗ／ｖ％、電導度１ｍｍｈｏ（８
℃換算）、各種ｐＨに調整した液状組成物を２５℃、３
ヶ月保存後、中性に戻し試験に供した。その結果は表１
に示す通りであり、ｐＨ５．５程度において特に安定で
あった。

【００６５】

【表１】

【００６６】（２）電導度 γ−グロブリン濃度５ｗ／ｖ％、ｐＨ５．５、各種電導
度に調整した液状組成物を２５℃、３ヶ月保存後、試験
に供した。その結果は表２に示した通りであり、電導度
１ｍｍｈｏ以下において特に安定であった。

【００６７】

【表２】

【００６８】試験例２非化学修飾完全分子型γ−グロブリン５ｗ／ｖ％、電導
度１ｍｍｈｏ（８℃換算）、ｐＨ５．５した液状組成物
を調製した。この組成物は調製時には次の性状を有する
ものであった。外観性状　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　：無色透明重合体（％）　　　　　　　　　　　　　　　　：０．
００抗補体価（ＣＨ５０／ｍｌ）　　　　：８麻疹抗体
価（ＩＵ）　　　　　　　　　　：３２

【００６９】こ
の組成物について保存安定性を調べた。その結果は表３に示す通りである。

【００７０】

【表３】

【００７１】実施例１コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ　ペースト１ｋｇを蒸留水１０
Ｌにて懸濁し、ｐＨを５．５に調整した後、遠心分離を
行い、上清を回収し、上清１００ｍｌ当たりソルビトー
ル５０ｇ（終濃度３３ｗ／ｖ％）を添加し、６０℃で１
０時間加熱処理を行った。

【００７２】加熱処理後、ｐＨを５．５に調整した後、
ＰＥＧ＃４０００を終濃度が６％になるように添加し、
２℃で遠心分離を行った。

【００７３】得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを
用いｐＨ８．０とした後、ＰＥＧ＃４０００を終濃度が
１２％になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱
画分にＩｇＧ画分を得た。

【００７４】この画分を蒸留水に溶解し、このＩｇＧ溶
液１００ｍｌにＤＥＡＥ−セファデックスを添加（５０
ｍｌ溶液当たり１ｍｌ）し、０〜４℃の条件下、約１時
間接触処理し、超遠心分離（７０００ｒｐｍ，約２０分
間）して上清（ＩｇＧ溶液）を回収した。

【００７５】このＩｇＧ溶液を蒸留水で５％ＩｇＧ溶液
に調整し、酢酸ナトリウムで溶液をｐＨ５．５にし、前
工程で使用したソルビトールはＵＦ膜（アミコン社製）
を用いて除去した。

【００７６】この水溶液（電導度約１ｍｍｈｏ）を除菌
濾過し静注用免疫グロブリン液状製剤とした。

【００７７】実施例２実施例１で得られたＩｇＧ溶液に、それぞれの終濃度が
ポリエチレングリコール＃４０００を０．５％、人血清
アルブミンを１％、Ｄ−マンニトールを２％となるまで
添加し、同様に除菌濾過し静注用免疫グロブリン液状製
剤とした。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　非化学修飾完全分子型γ−グロブリン
含有の低電導度の溶液であって、実質的にソルビトール
を含有せず、約５．５±０．２のｐＨを有することを特
徴とする静脈内投与可能な液状組成物。
【請求項２】　　非化学修飾完全分子型γ−グロブリン
の単量体含量が９５％よりも大である請求項１記載の組
成物。
【請求項３】　　電導度が１ｍｍｈｏ（８℃換算）以下
である請求項１記載の組成物。
【請求項４】　　安定化剤としてポリエチレングリコー
ル、ヒト血清アルブミン、Ｄ−マンニトールから選ばれ
る少なくとも一種の安定化剤を含有することを特徴とす
る請求項１記載の組成物。