JP2012158615A - 還元糖によるタンパク質変性を抑制する方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、還元糖、並びに下記成分(1)及び(2)を含有する組成物における還元糖による成分(2)の変性を抑制する方法であって、当該組成物中の成分(2)の含有量を0.75〜10重量%とし、かつ成分(2)1モルに対する成分(1)の総量を20〜50モルとする、方法を提供する:
(1)分子量75〜68000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の少なくとも一種
(2)分子量75000〜1000000のタンパク質。
【選択図】なし
Description
項1.下記成分(1)及び(2)を含有する組成物であって、組成物中の成分(2)の含有量が0.75〜10重量%であり、かつ成分(2)の総量1モルに対して成分(1)の総量が20〜50モルである組成物:
(1)分子量75〜68000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の少なくとも一種
(2)分子量75000〜1000000のタンパク質。
項A.還元糖、並びに下記成分(1)及び(2)を含有する組成物における還元糖による成分(2)の変性を抑制する方法であって、当該組成物中の成分(2)の含有量を0.75〜10重量%とし、かつ成分(2)の総量1モルに対する成分(1)の総量を20〜50モルとすることを特徴とする、上記方法:
(1)分子量75〜68000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の少なくとも一種
(2)分子量75000〜1000000のタンパク質。
本発明組成物は、下記成分(1)及び(2)を含有し:
(1)分子量75〜68000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の少なくとも一種
(2)分子量75000〜1000000のタンパク質、
組成物中の成分(1)の含有量が0.75〜10重量%であり、かつ成分(1)1モルに対して成分(2)の総量が20〜50モルであることを特徴とする。
本発明においてペプチドには、例えば、モノペプチド、ジペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド等が含まれる。
本発明組成物中に含まれる成分(2)のタンパク質としては、分子量75000〜1000000のものであれば、特に限定されることなく、公知のタンパク質を広く使用することができる。当該成分(2)のタンパク質の分子量は、好ましくは、100000〜1000000であり、より好ましくは、130000〜1000000であり、さらに好ましくは、140000〜200000である。このような成分(2)のタンパク質としては、例えば、ラクトフェリン、トランスフェリン、オボトランスフェリン、βコングリシニン、免疫グロブリン等があげられる。免疫グロブリンとしては、ウシ由来のもの、ヒト由来のもの等が挙げられるがこれらに限定されない。
組成物中の成分(2)のタンパク質の含有量は、通常0.75〜10重量%、好ましくは0.75〜7.5重量%である。例えば、成分(2)のタンパク質としてIgGをこの範囲内で含有する組成物をチュアブル錠やトローチ錠等として摂取した場合、唾液中のIgG濃度を一定レベル以上に維持することができるためウイルス感染予防の点で好ましい。
本発明の組成物中のIgG重量/IgGの分子量 = 物質量(mol)
により算出することができる。
本発明の組成物は、当該分野において通常用いられる方法により製造することができる。例えば、錠剤形態の組成物の場合、上記の成分(1)のアミノ酸類及び成分(2)のタンパク質、ならびに必要に応じて還元糖、任意成分等を前述の配合割合に従って混合し、打錠することにより製造することができる。
下記の手順に従い、実施例及び比較例の組成物を調製した。
(混合物の調製及び打錠)
表1〜7に記載の配合に従い各成分を混合した(実施例1〜58、比較例1〜22)。尚、表1〜7に記載する成分は全て粉末形態を有している。実施例1〜44及び比較例1〜20において、IgGとしては、ウシ由来IgG(Sigma社、分子量15万)を用いた。次いで、混合した粉末を1g秤り取り、造粒することなくそのまま打錠した。打錠は、油圧式打錠機(RikenPower Type SMP-3, CDM-4:RIKEN SEIKI CO.LTD.)、15φの臼杵を使用して、圧力(0.18kgf/cm2)をかけて行った。
SDS−PAGEによる定量を行い分子量に合わせてそれぞれのペプチド数を測定した。SDS−PAGE
アミノ酸類を精製水に溶解し、1mg/mLに調製した(標品溶液)。
下記の手順で、HPLCにより平均分子量を測定した。
インフルエンザのHI試験よりインフルエンザウイルスの感染予防効果を奏する最小のIgG量を評価した。具体的な操作は以下の通りである:
(I)IgGの調製
IgG試料として、(1)ウシ由来IgG(Sigma社)、(2)牛乳から抽出したIgG(以下、牛乳IgGという)、及び(3)ヒトの血液から抽出したIgG(以下、ヒトIgGという)を用いた。
インフルエンザウイルスとしては、発育鶏卵(11日目)の尿膜腔内にて培養増殖させたインフルエンザA型(H1N1)を用いた。当該ウイルスサンプルを、PBSを用いて2倍段階希釈し、種々の濃度のウイルス液を調製した。このように調製した各濃度のウイルス液25μlに、PBS25μl及び50μlの0.5%赤血球PBS溶液を加えて混合し、目視により凝集の有無を確認した。
96穴プレート各穴にPBSを25μlずつ分注した。(I)で調製したIgG試料液25μlを1列目にいれマイクロピペットで数回吸吐出を行った。1列目の混合液25μlを2列目に移し同様の操作を行った。12列まで同じ操作をし2倍希釈系列を作製した。次に各穴に(II)で調製したインフルエンザウイルス液25μlずつ分注する。プレートを軽くゆすり混合させ、室温で1時間静置した。その後各穴に0.5%赤血球を50μlずつ加え、プレートをゆすって混合し、室温で2時間反応させた後、赤血球凝集の有無を目視で確認し、阻害活性を判定した。
阻害活性を示す最小濃度は下記表8の通りであった。
次に、打錠直後の実施例5及び比較例1の錠剤形態の組成物(1.0g)をそれぞれ、10名のモニターに口で噛み砕いてもらい、噛み砕き直後の唾液中のウシ由来IgG濃度をELISA法により測定した。
実施例5及び比較例4の錠剤を各々打錠直後及び40℃で6ヶ月保存後にモニター10名に口で噛み砕いてもらい、直後の唾液中IgG濃度を、上記試験例1と同様にして、ELISA法により測定した。唾液中のIgG量が3.2μg/ml以上を○として判定した。結果を下記の表10に示す。
実施例1〜57、比較例2〜22において、錠剤中のIgG量を打錠直後と40℃6ヶ月保存後で測定した。
×:80%未満
○:80%以上90%未満
◎:90%以上
結果を、上記表1〜7に示す。
実施例1〜7と比較例2〜5の味について「天然感のあるおいしい甘さであるか」という質問を20名に行い、以下の評価の総合点より○以上を合格とした。
1.天然感がありおいしい 5点
2.やや天然感がありおいしい 4点
3.どちらともいえない 3点
4.あまり天然感がない 2点
5.天然感がない 1点
(総合点)
80点以上 ・・・ ◎
60点以上 ・・・ ○
40点以上 ・・・ △
40点未満 ・・・ ×
結果を表1〜7に示す。
表11〜18に記載の処方にしたがって、定法どおり組成物を調製した。
Claims (6)
- 還元糖、並びに下記成分(1)及び(2)を含有する組成物における還元糖による成分(2)の変性を抑制する方法であって、当該組成物中の成分(2)の含有量を0.75〜10重量%とし、かつ成分(2)の総量1モルに対する成分(1)の総量を20〜50モルとすることを特徴とする、上記方法:
(1)分子量75〜68000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の少なくとも一種
(2)分子量75000〜1000000のタンパク質。 - 前記成分(1)中に含まれる分子量75〜35000のアミノ酸、ペプチド及びタンパク質の割合がモル数で95〜100%である、請求項1に記載する方法。
- 還元糖が単糖及び二糖からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項1または2に記載する方法。
- 成分(2)が免疫グロブリンである請求項1〜3のいずれか一項に記載する方法。
- 前記組成物が錠剤形を有するものである請求項1〜4のいずれか一項に記載する方法。
- 前記組成物が、一回摂取量当り成分(2)を7.5〜70mgの割合で含む組成物である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
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