JP4359352B2

JP4359352B2 - 室温保存製剤

Info

Publication number: JP4359352B2
Application number: JP30097298A
Authority: JP
Inventors: 豊平尾; 元範橋本; 妙北村; 八尋上村
Original assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1997-10-23
Filing date: 1998-10-22
Publication date: 2009-11-04
Anticipated expiration: 2018-10-22
Also published as: JPH11199511A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は静注用免疫グロブリン製剤に関するものである。より詳細には室温保存可能な静注用免疫グロブリン液状製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血漿蛋白成分であるγ−グロブリンのうち、特にＩｇＧを主成分とする免疫グロブリン製剤は、これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられてきた。ところで、免疫グロブリンは溶液状態において不安定であり、免疫グロブリンの凝集、即ち重合体や二量体の生成により、特に分別操作の間に生じる変性の結果として、抗補体活性とよばれる免疫グロブリンの補体結合能力が著しく増加し、人体に静脈内投与すると血清補体濃度の低下を生じ、あるいはアナフィラキシーショック等の重篤な副作用を起こすことが知られている。従って、免疫グロブリンは液状製剤ではなく、乾燥製剤、特に凍結乾燥の態様で製剤化されていた。しかし、乾燥製剤は使用時には注射用蒸留水等に溶解する必要があったため、簡単に投与することができないという問題があった。
【０００３】
一方、液状製剤は乾燥製剤に比べると注射用蒸留水等への溶解の必要性もなく、簡単に投与できる等の利点があるが、上記の如く免疫グロブリンの安定性に劣るという欠点があった。従って、溶液状態においても安定性のある静注用免疫グロブリン液状組成物の開発が従来より試みられている。
【０００４】
例えば、特開昭６３−１９２７２４号公報には、低電導度、ｐＨ５．５±０．２、および安定化剤としてのソルビトールの使用を組み合わせることにより、溶液状態においても安定性のある静注用免疫グロブリン液状組成物が提案されている。
【０００５】
特開昭５８−４３９１４号公報においては、免疫グロブリンの凝集物を実質的に含有せず、免疫血清グロブリンの単量体濃度が約９０％よりも大である免疫グロブリン組成物（製剤）を得るために、免疫血清グロブリン溶液のイオン強度を０．００１未満に、ｐＨを３．５〜５．０にする工程が開示されている。
特開平９−１２４５０７号公報には、トリ−ｎ−ブチルホスフェート（ＴＮＢＰ）処理によるウイルス不活化工程後に、抗補体価の低下を目的として、ｐＨ３．５〜５．０の条件下でイオン強度を低下させる工程が開示されている。
【０００６】
また、特開平７−２３８０３６号公報には、安定性を改善するために、酸処理あるいは室温保存により免疫グロブリンの凝集、即ち、重合体だけでなく二量体の増加をも抑制する方法が開示されている。
【０００７】
バクスター特許（特表昭５９−５０１５４６）にはｐＨ５〜５．６、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）０．０５〜２ｗ／ｖ％の存在下に限外濾過処理を行うことが開示されている。
【０００８】
しかしながら、上述の開示は、各工程における効果を示したものにすぎず、未だ室温での保存、特に溶液状態での免疫グロブリン製剤における保存安定性には改善の余地が残されていた。
【０００９】
また一方、特開昭６３−８３４０号公報には後天性免疫不全ウイルスを実質的に含まない免疫血清グロブリンの製造方法、即ち、約５．４に等しいか、またはそれ以下のｐＨにおいて冷エタノール分画法を用いることにより、ヒトの血漿源から免疫血清グロブリンを調製し、次いでこの免疫血清グロブリンを、感染性のレトロウイルスを実質的に含まないよう、約４．２５に等しいかまたはそれ以下のｐＨにおいて少なくとも約３日間貯蔵するか、または約６．８に等しいかまたはそれ以下のｐＨで少なくとも４５℃の温度下に貯蔵する工程を含んでなる製造方法が開示されている。しかし、この発明はレトロウイルスの不活性化を目的としており、調製された免疫グロブリン製剤において免疫グロブリンの凝集が改善されたという報告はされていない。
【００１０】
さらに、特表平９−５００８９４号公報には夾雑するアルブミンを実質的に含まない製剤が開示されているが、当該特許で開示された測定方法の感度では相対比として１％以下の夾雑するアルブミンを検出することはできない。
特開昭６３−１８３５３９号公報には、加熱処理工程とＰＥＧ４〜１０％分画処理による上清画分の回収工程、ＰＥＧ１０〜１５％分画処理による沈澱画分の回収工程を組合わせてなることを特徴とする静注用免疫グロブリン製剤の製造方法を開示している。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
このように、免疫グロブリンは、本来不安定な蛋白質であり、液状組成物を調製した際、その安定性が最も懸念される課題の１つである。本発明はこのような課題を解決するものであり、すなわち本発明の目的は、溶液状態においても保存安定性の良好な免疫グロブリン製剤を提供することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明は以下の特徴を有する。
（１）ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ、分子量１，０００〜１０，０００のポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４℃の条件下で分画処理して上清画分を回収し、該上清画分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で濃縮処理する工程を含んでなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
（２）上記（１）記載の製造方法に、ウイルス不活化処理する工程、陰イオン交換体で処理して非吸着画分を回収する工程、平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過処理する工程、およびコロイド珪酸を用いて接触処理して非吸着画分を回収する工程のすくなくとも１つの工程をさらに含んでなる、就中全工程を含んでなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
（３）上記（１）または（２）記載の製造方法により調製される静注用免疫グロブリン製剤、就中非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを含んでなり、ｐＨ５〜６、電導度１ｍｍｈｏ以下（８℃での換算時）を有する静注用免疫グロブリン製剤であって、製造後から少なくとも１年間は室温保存が可能であり、その期間中は常に抗補体価が２０単位以下、免疫グロブリンのダイマー含量が７％以下を維持可能な静注用免疫グロブリン液状製剤。
（４）液状で室温において少なくとも１年間安定であり、ヒト血清アルブミン含量が５μｇ／ｍｌ以下、ＭＣＰ−１（Human Monocyte Chemotactic Protein-1）含量が１６ｐｇ／ｍｌ以下、補体Ｃ３ａ含量が３μｇ／ｍｌ以下、ポリエチレングリコール含量が１ｍｇ／ｄｌ以下である静注用免疫グロブリン製剤。
【００１３】
【発明の実施の形態】
（１）出発原料
本発明製剤の出発原料としては、免疫グロブリンを含む画分が使用され、これはヒト血漿由来であって、免疫グロブリン画分を含むものであれば特に限定されない。具体的には、コーンのエタノール分画により得られる画分ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＩ、および免疫グロブリンを含むこれらと同等の画分のペースト等が挙げられる。また、この出発原料は、ヒト血液型抗体、カリクレイン、プレカリクレイン、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体等を含んでいてもよい。
【００１４】
（２）製法
本発明製剤を得るための製造方法は、好ましくは以下の処理工程よりなる。
▲１▼ＰＥＧ処理工程
本工程は出発原料をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で処理し、上清を回収する工程である。まず、出発原料を適当な水性溶媒に懸濁して、免疫グロブリンを抽出する。この時当該出発原料の少なくとも２倍容量以上、好ましくは５倍容量以上の水性溶媒が使用される。ここで使用される水性溶媒の溶質としては、例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等が挙げられ、ｐＨは４．５〜６．５、イオン強度は０．０００１〜０．１Ｍが好ましい。
この懸濁液を分子量１，０００〜１０，０００（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧで処理する（例えば両者を混合する）。処理条件としては、ＰＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４〜８ｗ／ｖ％）、ｐＨ４．５〜６．５（特にｐＨ５〜６）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に０．０００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。この際、懸濁液中の蛋白濃度は１〜２０ｗ／ｖ％（特に５〜１５ｗ／ｖ％）であることが好ましい。
当該処理は、０〜４℃程度で通常３０分〜６時間程度攪拌することによって行われる。その後、例えば遠心分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収する。
【００１５】
▲２▼酸性ｐＨでの濃縮工程
本工程は▲１▼の工程で得られた上清画分をｐＨ３．５〜５．０（好ましくはｐＨ４〜４．５）の条件下で濃縮する工程である。具体的には分画分子量１０万程度の限外濾過膜を用いて濃縮処理を行う。加圧条件としては１〜１０ｋｇ／ｍ²が例示される。
【００１６】
▲３▼陰イオン交換体処理工程
本工程は陰イオン交換体で接触処理して非吸着画分を回収する工程である。本工程は、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体を除くために行われる。
(i) 陰イオン交換体の調製
陰イオン交換体は陰イオン交換基を不溶性担体に結合したものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、デキストラン、ポリアクリルアミド等を用いることができる。その結合は公知の方法で行われる。
【００１７】
(ii)処理方法
免疫グロブリンを含有する画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒はｐＨ５〜７（好ましくはｐＨ５．５〜７）、低イオン強度（好ましくは０．０００１〜０．１Ｍ）の水溶液であることが好ましい。当該水性溶媒は▲１▼の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよい。当該溶液中の蛋白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。
さらに、上記の水性溶媒で平衡化した陰イオン交換体と接触処理する。その処理に際してはバッチ法、カラム法のどちらを用いてもよい。例えばバッチ法では、陰イオン交換体１ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度と混合させ、０〜４℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収する。カラム法でも、陰イオン交換体１ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度を接触させ、非吸着画分を回収する。
本発明においては、本▲３▼の工程を所望により省略することもできるが、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体の混入が懸念される場合には行うことが有利である。
【００１８】
▲４▼多孔性膜による濾過処理
本発明の免疫グロブリン製剤は好ましくは、不溶性異物の形成の核となり得る微粒子が除去されたものであり、その除去方法としては、例えば、多孔性膜（例えば、中空糸状、シート状等）等による濾過処理方法等が挙げられる。
【００１９】
本発明に使用される多孔性膜の素材としては、特に制限はないが、好ましくは再生セルロースが挙げられる。またその形状としては、中空糸状、シート状等が挙げられるが、好ましくは中空糸状である。例えば該再生セルロースの多孔性中空糸は、好ましくはセルロース銅アンモニア溶液からのミクロ相分離法〔アメリカン・ケミカル・ソサイアティー（Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．），９，１９７−２２８（１９８５）〕により調製される。
【００２０】
多孔性膜の平均孔径は１〜１００ｎｍ、好ましくは１０〜７５ｎｍ、より好ましくは１０〜５０ｎｍ、特に好ましくは３５±２ｎｍまたは１５±２ｎｍであり、膜厚は好ましくは３５±３．５μｍまたは２７±３μｍであり、その膜は好ましくは多重層構造である。多孔性膜が中空糸状である場合には、内径は好ましくは３３０±３０μｍである。
多孔性膜が中空糸状である場合には、好ましくはモジュールの態様で使用される。該モジュールは、膜面積が好ましくは０．００１〜１．０ｍ²である多孔性中空糸膜とこれを充填するための容器およびこれらを一体化するための接着剤により構成される。
【００２１】
多孔性膜による濾過処理は、例えば以下のようにして行われる。
まず、免疫グロブリンを含有する画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒はｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）、低イオン強度（特に０．０００１〜０．１Ｍ）であることが好ましい。当該水性溶媒は▲１▼の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよい。当該溶液中の蛋白濃度としては０．１〜１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。
【００２２】
当該免疫グロブリン溶液は、本発明の目的に反しない範囲で通常医薬品に用いられる薬理的に許容される添加剤（例えば担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤または製薬上必要な成分を含有していてもよい。
安定化剤としては、グルコース等の単糖類、サッカロース、マルトース等の二糖類、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコール、塩化ナトリウム等の中性塩、グリシン等のアミノ酸、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニック）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（トゥイーン）等の非イオン系界面活性剤等が例示され、１〜１０ｗ／ｖ％程度が添加されていることが好ましい。
【００２３】
上記の免疫グロブリン含有溶液を多孔性膜を用いて濾過処理を行う。この時の濾過圧力は好ましくは０．１〜１ｋｇｆ／ｃｍ²、より好ましくは０．１〜０．５ｋｇｆ／ｃｍ²、特に好ましくは０．１〜０．３ｋｇｆ／ｃｍ²である。また、処理温度は好ましくは４〜５０℃であり、処理時間は１０分〜１０時間、好ましくは１〜５時間である。
濾過処理の態様としては、流体にひずみ速度を与えながら濾過するクロスフロー濾過法（循環式）とひずみ速度を与えずに濾過するデッドエンド法（非循環式）があるが、好ましくは加圧空気によるクロスフロー濾過法が採用される。
また、このような濾過処理は複数回行うことができる。さらに、この濾過処理前に、予め免疫グロブリン含有溶液に、上述の中空糸膜による濾過処理以外の濾過処理を施してもよい。
このようにして調製された免疫グロブリン製剤は、不溶性異物の形成の核となり得る、平均粒径１００ｎｍ以上、好ましくは７５ｎｍ以上、より好ましくは３５ｎｍ以上の不溶性の微粒子や、免疫グロブリンの分子量（約１５万）よりも大きい分子量を有する可溶性の微粒子が除去されているので、このような製剤を２５℃、３０日間保存しても、免疫グロブリンの凝集、即ち、不溶性異物の発生がなく保存安定性が良好となる。
【００２４】
また、免疫グロブリンをさらに精製するために公知の手法を用いてもよい。例えば、固定化ジアミノ化合物を用いた処理（カリクレインまたはプレカリクレインを除去するため）、固定化ヒト血液型物質を用いた処理（ヒト血液型抗体を除去するため）等が例示される（特開平９−１７６０４５号公報参照）。
本発明においては本▲４▼の工程を所望により省略することもできる。
【００２５】
▲５▼コロイド珪酸処理による方法
本工程はコロイド珪酸で接触処理して非吸着画分を回収する工程である。本工程は夾雑する血清アルブミンを除去するために行われる。
(i) 吸着剤
吸着剤として用いられるコロイド珪酸としては、シリカゲル、軽質無水珪酸、ケイソウ土、酸性白土、ベントナイト、カオリン、珪酸アルミン酸マグネシウム等が挙げられる。好適には軽質無水珪酸〔商品名エアロジル（日本エアロジル社製）、商品名デリピト（ゼータ社製）等〕が用いられる。
【００２６】
(ii)処理条件
免疫グロブリンを含有する画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒はｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）、低イオン強度（特に０．０００１〜０．１Ｍ）の水溶液であることが好ましい。当該水性溶媒は▲１▼の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよい。当該溶液中の蛋白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。
当該免疫グロブリン溶液は、▲４▼の工程と同様に、本発明の目的に反しない範囲で通常医薬品に用いられる薬理的に許容される添加剤、安定化剤または製薬上必要な成分を含有していてもよい。
添加剤、安定化剤等は、前述の▲４▼の工程で述べたものと同様のものが同様の量で添加され得る。
【００２７】
次いで、この免疫グロブリン溶液を上記の吸着剤と接触処理する。接触条件としては、免疫グロブリン濃度１〜１００ｇ／リットル（好ましくは１０〜１００ｇ／リットル）に対して吸着剤量１〜３０ｇ／リットルが使用される。本処理はバッチ法、カラム法のどちらでも行われ得るが、好ましくはバッチ法を用いる。バッチ法の条件としては、例えば、５〜２５℃、５分〜１時間程度、混和、攪拌する。その後、濾過または遠心分離により上清（非吸着画分）を回収する。
【００２８】
このように、血清アルブミンを除去する工程を経て調製された免疫グロブリン製剤は、免疫グロブリン５０ｍｇ当たり血清アルブミンの夾雑量が１０μｇ以下、好ましくは５μｇ以下の性状を有するものであり、例えば、免疫グロブリンの５ｗ／ｖ％濃度の溶液状態においては、血清アルブミンの夾雑量が１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは５μｇ／ｍｌ以下の性状を有する。このような性状の免疫グロブリン製剤は従来のものと比較して保存安定性が良好となり、例えば、３７℃、３９日の保存においても、不溶性異物の生成が極めて少ないものとなる。また、免疫グロブリン製剤中の血清アルブミンの定量法としては公知のものが利用でき、例えばＥＬＩＳＡ法、マンシーニー法、比濁法等が採用され得る。
本発明においては▲５▼の工程を所望により省略することもできるが、血清アルブミンの夾雑が懸念される場合には有利に行われ得る。
【００２９】
▲６▼ウイルス不活化処理工程
本工程は、例えば所望の段階で安定化剤の存在下に免疫グロブリンの抗体活性の減少は最小限にとどめるが、夾雑するウイルス、例えばＨＢウイルス、ＡＩＤＳウイルス等は実質的に不活化する条件で加熱処理する工程が例示される。このウイルス不活化処理は、例えば出発原料の段階、各実施工程のいずれかの二工程の間、または各実施工程全てを終了した段階等のいずれの処理段階においても行うことができる。加熱処理は、含湿度３％以下の乾燥状態（即ち、乾熱処理：乾燥状態で十分な時間加熱処理することにより、ウイルスを不活化し得る）、または溶液状態、即ち免疫グロブリンの水溶液状態（即ち、液状加熱処理）で行う。より好ましくは液状加熱処理が推奨される。
【００３０】
安定化剤としては、いずれの処理の場合も、二糖類（例、サッカロース、マルトース）、糖アルコール（例、ソルビトール、マンニトール）が好適に例示される。より好ましくはソルビトールである。安定化剤の添加量は、溶液状態での添加量として、乾熱処理法では、二糖類、糖アルコール等を０．５〜５ｗ／ｖ％（好ましくは、１〜３ｗ／ｖ％）、液状加熱処理法では二糖類、糖アルコール等を１０ｗ／ｖ％以上（好ましくは、１０〜５０ｗ／ｖ％）の添加が好適に例示される。
【００３１】
加熱の対象となる免疫グロブリンの、溶液状態における量としては、乾熱処理では、蛋白量として１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）となるように調整することが好適である。液状加熱処理では、蛋白量として０．１〜３０ｗ／ｖ％（好ましくは５〜２０ｗ／ｖ％）に調整することが好ましい。
【００３２】
加熱処理は、乾熱処理の場合、安定化剤を添加後、要すれば除菌濾過し、例えば凍結乾燥等によって含水率３％以下、好ましくは１％以下とする。凍結乾燥の条件としては０．５ｍｍＨｇの真空下、２０〜４０℃で２４〜９６時間程度が例示される。次いで、例えば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０〜２００時間（好ましくは５０〜１００時間程度）で処理する。
【００３３】
また、本加熱処理工程は不活性ガス雰囲気下で行うことにより、加熱時の安定性をより高めることができる。不活性ガスとしては例えば、窒素ガス、アルゴン、ヘリウム等が挙げられる。
【００３４】
液状加熱処理の場合は水溶液のｐＨを４．５〜６．５、好ましくはｐＨ５〜６に調整し、イオン強度を０．０００１〜０．１Ｍ（好ましくは０．０００１〜０．０１Ｍ）として、５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）で１０分間〜２０時間（好ましくは１０時間程度）処理する。
【００３５】
加熱処理の工程は、乾熱処理の場合は最終工程で行うことが好ましい。液状加熱処理の場合は、出発原料に対して行うのが好適である。
【００３６】
また、免疫グロブリン含有組成物（出発原料や▲２▼の工程を経て得られた濃縮画分等が包含される）をトリアルキルホスフェートに接触させることによってもウイルスを不活化することができる。
本発明のトリアルキルホスフェートとの接触時の免疫グロブリン含有組成物の精製度は、特に限定されるものでなく、任意の精製度のものに適用可能であり、従ってトリアルキルホスフェートとの接触は前述の工程のどの段階に適用してもよいが、好適には溶液状態の免疫グロブリン含有組成物に接触させる。
【００３７】
本発明に使用されるトリアルキルホスフェートは特に限定されないが、好適にはトリ−（ｎ−ブチル）ホスフェート、トリ−（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフェート、トリ−（ｎ−ヘキシル）ホスフェート、トリ−（２−エチルヘキシル）ホスフェート、トリ−（ｎ−デシル）ホスフェート等が挙げられる。特に好ましいトリアルキルホスフェートは、トリ−（ｎ−ブチル）ホスフェート（以下ＴＮＢＰと言う）である。なお、２種類以上の異なるトリアルキルホスフェートの混合物も使用することができる。
免疫グロブリンの量は、蛋白質として０．１〜３０ｗ／ｖ％（好ましくは１〜２０ｗ／ｖ％）に調整することが好適である。
本発明に使用されるトリアルキルホスフェートは、０．０１〜１０ｗ／ｖ％の範囲の量、好ましくは約０．１〜３ｗ／ｖ％の範囲の量において使用される。
当該トリアルキルホスフェートは、０〜６０℃（好ましくは２０〜４０℃）で、３０分間以上（好ましくは１〜３０時間、より好ましくは３〜１０時間）、ｐＨ６〜８程度の条件下で接触させる。
【００３８】
トリアルキルホスフェートは界面活性剤を伴ってまたは伴わないで使用することができる。好ましくは、トリアルキルホスフェートは界面活性剤と組み合わせて使用する。この界面活性剤はトリアルキルホスフェートを免疫グロブリン含有組成物と接触する前、同時、またはその後の任意の段階で添加することができる。界面活性剤の作用は、ウイルスとトリアルキルホスフェートとの接触を強化することである。
界面活性剤としては、脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビトール無水物の部分エステル（例えばトゥイーン８０、トゥイーン２０およびポリソルベート８０等）、および非イオン性Ｏ／Ｗ型界面活性剤（例えばトライトンＸ１００（オキシエチル化アルキルフェノール）等）等が挙げられる。さらにデオキシコール酸ナトリウム、およびスルホベタインとして周知の合成両性界面活性剤であるツブイッタージェント（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔｓ）（例えばＮ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−アンモニオ−１−エタンスルホネート、およびその同族体等）や非イオン性界面活性剤（例えばオクチル−β、Ｄ−グルコピラノシド等）等が挙げられる。
界面活性剤を使用する場合、その量は臨界的ではなく、例えば約０．００１％〜約１０％、好ましくは約０．０１％〜３％の範囲で使用することができる。
【００３９】
トリアルキルホスフェート処理はエンベロープウイルス、例えばＢ型肝炎ウイルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶｅｓｉｃｕｌａｒＳｔｏｍａｔｉｔｉｓＶｉｒｕｓ）、シンドビスウイルス（ＳｉｎｄｂｉｓＶｉｒｕｓ）等の不活化に特に有用である。
【００４０】
（３）最終製剤（特に液状製剤）について
▲１▼液状製剤の調製
上述の本発明の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法を用いることにより、静注用免疫グロブリン製剤が得られる。特に非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを常套手段によって１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）になるように水溶液に調整し、さらに安定化剤、例えばソルビトール１〜２０ｗ／ｖ％（好ましくは２〜１０ｗ／ｖ％）、ｐＨ５．５±０．２（好ましくは約５．５）、低電導度（好ましくは電導度１ｍｍｈｏ以下、特に０．６ｍｍｈｏ以下、共に８℃換算）になるように、自体既知の手段にて調整した後、通常の製剤化技術に基づいて、除菌濾過、分注等を行い、静脈内投与可能な非化学修飾完全分子型免疫ブロブリン液状組成物（製剤）を調製することができる。
かくして調製された製剤は、非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを含有し、ｐＨ５〜６（好ましくは約５．５±０．２程度）、電導度１ｍｍｈｏ以下（好ましくは０．６ｍｍｈｏ以下、ともに８℃での換算時）を有し、製造後から少なくとも１年間は室温保存が可能であり、その期間中は常に抗補体価が２０単位以下、免疫グロブリンのダイマー含量が７％以下を維持可能な静注用免疫グロブリン液状製剤を得ることができる。
【００４１】
本発明の静注用免疫グロブリン含有製剤に含まれ得る非化学修飾完全分子型免疫グロブリンとは；
(i) 自然のままで何らの修飾や変化もうけておらず、従って免疫グロブリンのフラグメントであるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｃ等を含まない、
(ii)抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下もない、
(iii) 抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基準（以下、生基準ともいう）で安全と見なされる２０単位（ＣＨ₅₀値）よりも十分に低い、
という諸性状を備えたものをいう。
【００４２】
非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを含有してなる静注用免疫グロブリン含有製剤について、グロブリン二量体の含有率の安全域を考慮すると、その含有率を７％以下、好ましくは６％以下、最も好ましくは４％以下にする。
【００４３】
さらに本発明の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法を用いることにより、保存安定性のよい、夾雑物の低減された静注用免疫グロブリン製剤、特に液状で室温において少なくとも１年間安定であり、ヒト血清アルブミン含量が５μｇ／ｍｌ以下、ＭＣＰ−１（Human Monocyte Chemotactic Protein-1）含量が１６ｐｇ／ｍｌ以下、補体Ｃ３ａ含量が３μｇ／ｍｌ以下、ポリエチレングリコール含量が１ｍｇ／ｄｌ以下である静注用免疫グロブリン製剤を得ることができる。
【００４４】
本発明の製剤は、免疫グロブリンが実質的に不活化されておらず、しかもＩｇＧ重合体や夾雑物は含まれておらず、溶解性もよく、抗補体活性も十分に低い等の性質を有し、加熱処理等のウイルス不活化を実施することにより、昭和６０年度発行の生基準をパスできる安全な製剤である。
本発明の製剤は、液状製剤の場合はそのままで、あるいは適当な溶媒（例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ぶどう糖液等）で希釈し、乾燥製剤の場合は適当な溶媒（例えば注射用蒸留水）に溶解して、静脈内投与される。
【００４５】
▲２▼適応疾患の具体例
１．低並びに無ガンマグロブリン血症
２．重症感染症
３．続発性血小板減少性紫斑病
４．川崎病の急性期
【００４６】
▲３▼用法・用量
本発明の製剤は点滴注射するか、または直接静注する。直接静注する場合は、極めて徐々に行うことが望ましい。
通常成人に対しては、１回ヒト免疫グロブリンＧとして２，５００〜５，０００ｍｇを、小児に対しては１回ヒト免疫グロブリンＧとして１００〜１５０ｍｇ／ｋｇ体重を使用する。症状によって適宜増減できる。
続発性血小板減少性紫斑病に用いる場合、通常１日に、ヒト免疫グロブリンＧとして２００〜４００ｍｇ／ｋｇ体重を投与する。年齢や症状に応じて適宜増減する。
川崎病に用いる場合、通常１日に、ヒト免疫グロブリンＧとして４００ｍｇ／ｋｇ体重を５日間投与する。なお、年齢や症状に応じて適宜増減する。
【００４７】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００４８】
実施例１
ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ１ｋｇに水１０リットルを加え、さらにこの溶液１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添加し、ｐＨ５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱処理した。その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水にて当該溶液を３倍に希釈し、ｐＨ５．５の条件下で、ポリエチレングリコール（平均分子量４，０００）を終濃度が８％となるように添加し、２℃で遠心分離を行い上清を得た。この上清をｐＨ４に調整した後、分画分子量１０万の限外濾過膜（ペリコン２バイオマックス、ミリポア社製）を用いて注射用水に対して溶液の濃縮を行った。ｐＨ５〜７に調整した当該溶液に水で平衡化したＤＥＡＥ−セファデックスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２ｍｌ）し、０〜４℃の条件下で約１時間接触処理し、処理後濾過することによりＤＥＡＥ−セファデックスを除去して濾過液（免疫グロブリン含有溶液）を回収した。
この免疫グロブリン含有溶液を注射用水で５ｗ／ｖ％に調整し、酢酸ナトリウムでこの溶液のｐＨを約５．５に調整し、さらにソルビトールを終濃度が５％となるように添加した。この水溶液（電導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。
【００４９】
実施例２
実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液を、無水シリカを担持したフィルター（ゼータプラス・デリピド、キュノ社製）に通して非吸着画分を回収した。さらに除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。
このようにして得られた５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液中の混入アルブミンは、マンシーニー法により定量したところ、５μｇ／ｍｌであった。
【００５０】
実施例３
多孔性中空糸として旭化成（株）より購入した、平均孔径３５±２ｎｍ、膜面積０．００１〜１．０ｍ²、中空糸内径３３０±３０μｍ、膜厚３５±３．５μｍ、１５０層以上の多重層構造であり、銅アンモニア法再生セルロースを原料とした多孔性中空糸〔ベンベルグマイクロポーラスメンブラン（ＢｅｍｂｅｒｇＭｉｃｒｏｐｏｒｏｕｓＭｅｍｂｒａｎｅ）以下、ＢＭＭという〕をモジュール化したＢＭＭモジュール（商品名：プラノバ３５）を使用した。このＢＭＭモジュールは、ポリウレタン系接着剤により高圧蒸気滅菌可能なポリカーボネート製のプラスチック容器内に一体化されており、モジュール内には注射用蒸留水が充填されている。プラノバを構成する各種材料の安全性は、日本薬局方の定める方法により確認されている（ＢＭＭ商品説明書より）。
実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液に対して、滅菌濾過（孔径０．２μｍ、メンブラン・フィルターによる濾過）を行った後に５℃、濾過圧力０．２ｋｇｆ／ｃｍ²で１〜５時間の膜濾過処理（空気圧を用いたデッドエンド濾過法）を行った。冷却後に再度滅菌処理を行い、静注用のヒト免疫グロブリン液状製剤を調製した。
【００５１】
実施例４
実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液を、細孔性／低Ａｌ性フィルター（ゼータプラスＬＡ９０、キュノ社製）および無水シリカを担持したフィルター（ゼータプラス・デリピド、キュノ社製）に通して非吸着画分を回収した。さらに除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。
【００５２】
実施例５
実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液を、細孔性／低Ａｌ性フィルター（ゼータプラスＬＡ９０、キュノ社製）および無水シリカを担持したフィルター（ゼータプラス・デリピド、キュノ社製）に通して非吸着画分を回収した。さらに実施例３に準じてＢＭＭ処理を行った後に除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。
【００５３】
実施例６
実施例１において、ｐＨ５．５で６０℃１０時間の液状加熱処理を行う代わりに、ｐＨ７でＴＮＢＰ（トリ−ｎ−ブチルホスフェート）０．３ｗ／ｖ％およびポリオキシエチレンソルビタンオレイン酸モノエステル（トゥイーン８０）１ｗ／ｖ％と３０℃で６時間接触させることによりウイルス不活化処理を行う以外は実施例１に準じて行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を調製した。
【００５４】
実施例７
実施例１において、ｐＨ５．５に調整してソルビトールを配合して液状製剤を調製する代わりに、ｐＨ６．４〜７．２に調整した上で、０．６％塩化ナトリウム、２％マンニトールおよび１％アルブミンを配合して凍結乾燥を行う以外は実施例１に準じて行い、静注用免疫グロブリンの粉末製剤を調製した。
【００５５】
実施例８
実施例１においては、最初の工程でｐＨ５．５での６０℃、１０時間の液状加熱処理を行い、製剤化工程でｐＨ５．５に調整してソルビトールを配合して液状製剤を調製するが、その代わりに最初の工程で液状加熱処理を行わずに、最終工程で、ｐＨ６．４〜７．２に調整した上で０．６％塩化ナトリウム、２％マンニトールおよび１％アルブミンを配合して凍結乾燥を行い、６０℃、７２時間の加熱処理を行う以外は実施例１に準じて行い、静注用免疫グロブリンの粉末製剤を調製した。
【００５６】
実験例１
実施例１〜８で調製した静注用免疫グロブリン製剤についてその性状を調べた。粉末製剤であるものについては注射用水に溶解した状態で測定した。
ｐＨはｐＨメーター、電導度は電導度メーター、ダイマー／ポリマー含量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、カラムはＴＳＫ−Ｇ３０００ＰＷ、展開液は等張化リン酸緩衝液、ＰＢＳ）を用いて測定した。
濁度（ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ）は６００ｎｍの吸光度を測定した。
抗補体価の測定は、カパットとマイヤーの方法〔エクスペリメンタルイムノケミストリー（Experimental Immunochemistry) ，２２５（１９６１）〕および西岡、岡田の方法〔免疫の生化学，１０３，昭４６（共立出版）〕の方法に準じた。すなわち、１００単位の補体が試料を加えることによって何単位に減少するかを測定し、その減少単位を抗補体価として表した。
麻疹抗体価はヘマグルチネーションインヒビションテスト(Hemagglutination Inhibiton test) 法により測定し、国際単位（ＩＵ／１５０ｍｇ）で表した。
【００５７】
実施例１−６で調製された静注用免疫グロブリン液状製剤の性状は以下のとおりである。
性状
ｐＨ５．５
電導度１ｍｍｈｏ以下（８℃での換算時）
ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下
ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下
抗補体価は２０単位／ｍｌ以下
浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）
外観は無色ないし淡黄色で澄明
麻疹抗体価は４０ＩＵ以上
濁度は０．０１以下
本発明の液状製剤（実施例５）を３７℃で４０日間保存した後も当該性状は保存前（調製直後）と同程度であった。故に当該製剤は室温保存においては、少なくとも１年間は安定であるものと推測された。
【００５８】
実施例７または８で調製された静注用免疫グロブリン粉末製剤の性状は以下のとおりである。
性状
ｐＨ６．４〜７．２
ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下
ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下
抗補体価は２０単位／ｍｌ以下
浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）
外観は淡黄色で澄明またはわずかに混濁。肉眼的にはほとんど沈澱を認めない。
麻疹抗体価は４０ＩＵ以上
【００５９】
実施例９
実施例１において、最終製剤のｐＨを５．５に調整する代わりに、ｐＨ４．２５に調整する以外は全て実施例１に準じて行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を調製した。
【００６０】
実験例２
実験例１の方法に準じて、実施例９で調製した静注用免疫グロブリン液状製剤の性状について調べた。性状は以下のとおりである。
性状
ｐＨ４．２５
電導度１〜２ｍｍｈｏ（８℃での換算時）
ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下
ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下
抗補体価は２０単位／ｍｌ以下
浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）
外観は無色澄明
麻疹抗体価は４０ＩＵ以上
濁度は０．０１以下
【００６１】
実施例１０
実施例１において、最終製剤のｐＨを５．５に調整する代わりに、ｐＨ５．２に調整する以外は全て実施例１に準じて行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を調製した。
【００６２】
実験例３
１）性状
実験例１の方法に準じて、実施例１０で調製した静注用免疫グロブリン液状製剤の性状について調べた。性状は以下のとおりである。
性状
ｐＨ５．２
電導度１ｍｍｈｏ（８℃での換算時）
ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下
ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下
抗補体価は２０単位／ｍｌ以下
浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）
外観は無色ないし淡黄色で澄明
麻疹抗体価は４０ＩＵ以上
濁度は０．０１以下
本発明の液状製剤（実施例１０）を３０℃で６カ月保存した後も当該性状は保存前（調製直後）と同程度であった。
【００６３】
２）夾雑物
本発明の液状製剤（実施例１０）に夾雑する物質を定量した。測定方法は以下のとおりである。
ヒト血清アルブミン：比濁法
ＭＣＰ−１（Human Monocyte Chemotactic Protein-1）：ＥＬＩＳＡ法
ヒト補体Ｃ３ａ：¹²⁵Ｉ−アルギニンを用いた放射活性法
ポリエチレングリコール：バリウムおよびヨウ素を用いた比色法〔マイクロケミカル・ジャーナル，２０，１９０〜１９２（１９７５）〕またはゲル濾過クロマト法
結果を表１に示す。
【００６４】
【表１】

【００６５】
【発明の効果】
本発明によれば、免疫グロブリンの収率向上および室温保存時の安定性改善が図られている。また、夾雑するアルブミンの除去あるいは不溶性異物を形成する核となりうる微粒子を除去することにより、不溶性異物の生成を抑えて、溶液状態における免疫グロブリンの安定性をさらに改善した製剤、特に液状製剤を提供することができる。

Claims

ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ、分子量２，０００〜６，０００のポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４℃の条件下で分画処理して上清画分を回収し、該上清画分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で限外濾過膜を用いて濃縮処理する工程を含んでなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
さらにウイルス不活化処理をする工程を含んでなる請求項１記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
さらに陰イオン交換体で処理して非吸着画分を回収する工程を含んでなる請求項１または２記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
さらに平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過処理する工程を含んでなる請求項１〜３のいずれかに記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
さらにコロイド珪酸を用いて接触処理して非吸着画分を回収する工程を含んでなる請求項１〜４のいずれかに記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
ａ）免疫グロブリンを含有する画分をウイルス不活化処理し、ｂ）ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ、分子量２，０００〜６，０００のポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４℃の条件下で分画処理して上清画分を回収し、ｃ）該上清画分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で限外濾過膜を用いて濃縮処理し、ｄ）陰イオン交換体で処理して非吸着画分を回収し、ｅ）コロイド珪酸を用いて接触処理し、ｆ）平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過処理して非吸着画分を回収することからなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。