JPH10265406A - 免疫グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 溶液状態においても、保存安定性の良好な免
疫グロブリン製剤を提供する。 【解決手段】 不溶性異物の核となり得る微粒子が除去
されてなる免疫グロブリン製剤である。この製剤は、平
均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜による濾過処理が施さ
れてなるものであり、２５℃で少なくとも３０日間の振
盪試験において、不溶性異物を生じない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、免疫グロブリン製
剤に関し、より詳しくは、保存安定性に優れた免疫グロ
ブリン製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】血漿蛋白成分であるγ−グロブリンのう
ち、特にＩｇＧを主成分とする免疫グロブリン製剤は、
これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられ
てきた。ところで、免疫グロブリンは溶液状態において
不安定であり、免疫グロブリンの凝集、即ち重合体や二
量体の生成により、特に分別操作の間に生じる変性の結
果として、抗補体活性とよばれる免疫グロブリンの補体
結合能力が著しく増加し、人体に静脈内投与すると血清
補体濃度の低下を生じ、あるいはアナフィラキシーショ
ック等の重篤な副作用を起こすことが知られている。従
って、免疫グロブリンは液状製剤ではなく、乾燥製剤、
特に凍結乾燥の態様で製剤化されていた。しかし、乾燥
製剤は使用時には注射用蒸留水等に溶解する必要があっ
たため、簡単に投与することができないという問題があ
った。

【０００３】一方、液状製剤は乾燥製剤に比べると注射
用蒸留水等の溶解の必要性もなく、簡単に投与できる等
の利点があるが、上記の如く免疫グロブリンの安定性に
劣るという欠点があった。従って、溶液状態においても
安定性のある静注用グロブリンの液状組成物の開発が従
来より試みられている。

【０００４】例えば、特開昭６３−１９２７２４号公報
には、低電導度、ｐＨ５．５±０．２、および安定化剤
としてソルビトール使用の組み合わせにより、溶液状態
においても安定性のある静注用グロブリンの液状組成物
が提案されている。また、特開昭５８−４３９１４号公
報においては、免疫グロブリンの凝集物を実質的に含有
せず、免疫血清グロブリンの単量体濃度が約９０％より
も大である免疫グロブリン組成物を得るために、免疫血
清グロブリン溶液のイオン強度を約０．００１未満に、
ｐＨを３．５〜５．０にすることが開示されている。

【０００５】また、特開昭６３−８３４０号公報は、免
疫血清グロブリンを約５．４に等しいか、またはそれ以
下のｐＨにおいて冷エタノール分画法を用いることによ
り、人間の血漿源から調製し、次いでこの免疫血清グロ
ブリンを、感染性のレトロウィルスを実質的に含まない
よう、少なくとも約３日間、約４．２５に等しいかまた
はそれ以下のｐＨにおいて貯蔵するか、または約６．８
に等しいかまたはそれ以下のｐＨで少なくとも４５℃の
温度下に貯蔵する工程を含んでなる、後天性ウィルスを
実質的に含まない免疫血清グロブリンの製造方法を開示
する。しかし、この発明は、レトロウィルスの不活性化
を目的としており、調製された免疫グロブリン製剤にお
いて免疫グロブリンの凝集が改善されたという報告はさ
れていない。

【０００６】また、特開平７−２３８０３６号公報は、
安定性を改善するために、酸処理あるいは室温保存によ
り免疫グロブリンの凝集、即ち、重合体だけでなく二量
体の増加をも抑制することを開示している。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、このよ
うな事情を考慮して、さらに研究を進めた結果、製剤中
に微粒子が存在し、それが核となって不溶性異物を形成
するのではとの仮説を立てた。そして、この仮説をもと
に、その不溶性異物の形成の核となり得る微粒子を除去
することにより、免疫グロブリン製剤の保存安定性をさ
らに改善できることを見出し、本発明を完成するに至っ
た。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下の特徴を
有する。 (1)不溶性異物の核となり得る微粒子が除去されてなる
免疫グロブリン製剤。 (2)２５℃で少なくとも３０日間の振盪試験において、
不溶性異物が生じないことを特徴とする上記 (1)の免疫
グロブリン製剤。 (3)平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜による濾過処理
が施されてなることを特徴とする上記 (1)の免疫グロブ
リン製剤。

【０００９】

【発明の実施の形態】次に本発明を詳細に説明する。本
発明の免疫グロブリン製剤に使用される免疫グロブリン
の態様としては、特に限定されるものではないが、公知
の手法により調製され得るものを用いることができる。
例えば、出発原料として免疫グロブリンを含む画分から
調製されたもの、具体的には、コーンのエタノール分画
により得られる画分II＋III 、画分IIや、免疫グロブリ
ンを含むこれらと同等の画分のペースト等が挙げられ
る。これらの画分を水性溶媒に懸濁して、免疫グロブリ
ンが抽出される方法が例示される。この時、当該画分の
少なくとも２倍容量以上、好ましくは５倍容量以上の水
性媒体が使用される。ここで使用される水性媒体として
は、水や、塩化ナトリウム、塩酸、酢酸、リン酸または
これらの塩等を含有する水溶液が好ましく、また、ｐＨ
は４〜７、イオン強度０．００１〜０．１Ｍが好まし
い。

【００１０】また、免疫グロブリンは、ポリエチレング
リコール処理型、ｐＨ４処理型、イオン交換樹脂処理型
等の非化学修飾型；アルキル化型、スルホン化型等の化
学修飾型；プラスミン、ペプシン、トリプシン等の酵素
で処理された酵素処理型等であってもよく、中でも非化
学修飾型の免疫グロブリンが好ましく用いられる。

【００１１】本発明において非化学修飾型の免疫グロブ
リンとは、以下の諸性状を有するものをいう。 (1)自然のままで何らの修飾や変化も受けておらず、従
って免疫グロブリンのフラグメントであるFab 、F(ab')
₂ 、Fc等を含まない。 (2)抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もない。 (3)抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。

【００１２】このような非化学修飾型の免疫グロブリン
は、自然状態のもので、しかも抗補体価の低いものであ
れば、いかなる方法にて得たものであってもよい。

【００１３】非化学修飾型の免疫グロブリンの調製方法
は公知の手法により行えばよい。例えば、エタノール分
画、ポリエチレングリコール分画（特開昭５３−４７５
１５号公報）、ポリエチレングリコールとヒドロキシエ
チルスターチの組み合わせによる分画（特開昭５１−９
１３２１号公報）、酸処理（特開昭５７−３２２２８号
公報）、陰イオン交換体処理（特表昭５９−５０１５４
６号公報、特開昭６０−４２３３６号公報）、加熱処理
とポリエチレングリコール分画との組合せ（特開昭６３
−１８３５３９号公報）、液状製剤化（特開昭５８−４
３９１４号公報、特開昭６３−１９７２７４号公報）等
が例示される。

【００１４】また上記方法により得られた免疫グロブリ
ンに加熱処理を施すことが好ましい。例えば、液状加熱
方法としては、安定化剤として高濃度の糖または糖アル
コールを用いる方法（特開昭６１−１９１６２２号公
報）、安定化剤として高濃度のソルビトールを用い、低
イオン強度、酸性ｐＨで行う方法（特開昭６３−１４６
８３２号公報）等が例示される。また、乾燥加熱方法と
しては、安定化剤としてアルブミン、グリシン、ポリエ
チレングリコール、塩化ナトリウム、マンニトール等を
用いる方法（特開昭６１−７８７３０号公報）、安定化
剤として二糖類、糖アルコールを用いる方法（特開昭６
２−２２８０２４号公報、特開昭６３−２８３９３３号
公報）、安定化剤としてアルブミンと二糖類または糖ア
ルコールを併用する方法（特開昭６２−２８９５２３号
公報）等が例示される。

【００１５】本発明で使用される免疫グロブリンの由来
は特に限定されず、具体的にはヒト、マウス、ラット等
が挙げられるが、好ましくはヒトである。このような免
疫グロブリンの具体例として、例えばポリエチレングリ
コール処理ヒト免疫グロブリン等が例示される。

【００１６】本発明の免疫グロブリン製剤は、不溶性異
物の形成の核となり得る微粒子が除去されたものであ
り、その除去方法としては、例えば、多孔性膜（例え
ば、中空糸状、シート状等）等による濾過処理方法等が
挙げられる。

【００１７】本発明に使用される多孔性膜の素材として
は、特に制限はないが、好ましくは再生セルロースが挙
げられる。またその形状としては、中空糸状、シート状
等が挙げられるが、好ましくは中空糸状である。例え
ば、該再生セルロースの多孔性中空糸は、好ましくはセ
ルロース銅アンモニア溶液からのミクロ相分離法〔アメ
リカン・ケミカル・ソサイアティー（Ａｍ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ．），９，１９７−２２８（１９８５）〕により
調製される。

【００１８】多孔性膜の平均孔径は１〜１００ｎｍ、好
ましくは１０〜７５ｎｍ、より好ましくは１０〜５０ｎ
ｍ、特に好ましくは３５±２ｎｍまたは１５±２ｎｍで
あり、膜厚は好ましくは３５±３．５μｍまたは２７±
３μｍであり、その膜は好ましくは多重層構造である。
多孔性膜が中空糸状である場合には、内径は好ましくは
３３０±３０μｍである。

【００１９】多孔性膜が中空糸状の場合には、好ましく
はモジュールの態様で使用される。該モジュールは膜面
積が好ましくは０．００１〜１．０ｍ² である多孔性中
空糸膜とこれを充填するための容器およびこれらを一体
化するための接着剤により構成される。

【００２０】多孔性膜による濾過処理は、例えば以下の
ようにして行われる。まず、免疫グロブリン画分を適当
な水性溶媒に溶解する。水性媒体は、ｐＨ４〜７（特に
ｐＨ５〜６）、低イオン強度（特に０．０００１〜０．
１Ｍ）であることが好ましい。このような水性媒体とし
ては、塩化ナトリウム水溶液、注射用蒸留水、酢酸緩衝
液等が挙げられる。調製された免疫グロブリン溶液は、
その蛋白濃度が０．１〜１５ｗ／ｖ％（特に３〜１０ｗ
／ｖ％）、ｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）となることが
好ましい。

【００２１】この免疫グロブリン溶液は、本発明の目的
に反しない範囲で、通常医薬品に用いられる薬理的に許
容される添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、
安定化剤または製薬上必要な成分を含有してもよい。

【００２２】安定化剤としては、グルコース等の単糖
類、サッカロース、マルトース等の二糖類、マンニトー
ル、ソルビトール等の糖アルコール、塩化ナトリウム等
の中性塩、グリシン等のアミノ酸、アルブミン、ポリエ
チレングリコール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプ
ロピレン共重合体（プルロニック）、ポリオキシエチレ
ンソルビタン脂肪酸エステル（トゥイーン）等の非イオ
ン系界面活性剤等が例示され、１〜１０ｗ／ｖ％程度添
加されていることが好ましい。

【００２３】上記の免疫グロブリン含有溶液を多孔性膜
を用いて濾過処理を行う。この時の濾過圧力は好ましく
は０．１〜１ｋｇｆ／ｃｍ² 、より好ましくは０．１〜
０．５ｋｇｆ／ｃｍ² 、特に好ましくは０．１〜０．３
ｋｇｆ／ｃｍ² である。また、処理温度は好ましくは４
〜５０℃である。

【００２４】濾過処理の態様としては、流体にひずみ速
度を与えながら濾過するクロスフロー濾過法（循環式）
とひずみ速度を与えずに濾過するデッドエンド濾過法
（非循環式）があるが、好ましくは加圧空気によるクロ
スフロー濾過法が採用される。

【００２５】また、このような濾過処理は複数回行うこ
とができる。さらに、この濾過処理前に、予め免疫グロ
ブリン含有溶液に、上述の中空糸膜による濾過処理以外
の濾過処理を施してもよい。

【００２６】このようにして調製された本発明の免疫グ
ロブリン製剤は、不溶性異物の形成の核となり得る、平
均粒径１００ｎｍ以上、好ましくは７５ｎｍ以上、より
好ましくは３５ｎｍ以上の不溶性の微粒子や、免疫グロ
ブリンの分子量（約１５万）よりも大きい分子量を有す
る可溶性の微粒子が除去されているので、このような製
剤を２５℃、３０日間保存しても、免疫グロブリンの凝
集、即ち、不溶性異物の発生がなく保存安定性が良好と
なる。

【００２７】本発明の製剤は、液状製剤の場合はそのま
まで、あるいは適当な溶媒（例えば注射用蒸留水、生理
食塩水、ブドウ糖液等）で希釈し、乾燥製剤の場合は適
当な溶媒（例えば注射用蒸留水等）に溶解して、静脈内
投与される。

【００２８】本発明製剤の投与経路は、通常注射であ
り、特に静脈内投与が好ましい。本発明製剤の投与量
は、体重１ｋｇ当たり免疫グロブリンとして５０〜１０
００ｍｇ／日を、１〜数日間連日静脈内投与することが
標準的であるが、症状、性別、体重等に応じて投与量を
増減すればよい。

【００２９】

【実施例】本発明をさらに詳細に説明するために、実施
例および実験例を挙げるが、本発明はこれらによって何
ら限定されるものではない。 実施例１ コーン氏の冷アルコール分画法で得られた画分II＋III
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解し、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃で
６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分子
量４０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添加し
て溶解しつつ、これに１Ｎ−水酸化ナトリウムを添加し
てｐＨを徐々に上昇させて、最終的にはｐＨ５．０に調
整した。その後直ちに遠心分離により沈殿を除いて澄明
な上清を得た。この上清に平均分子量４０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、緩やかに攪拌しな
がら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整し、沈
殿した免疫グロブリンを遠心分離により回収した。精製
された免疫グロブリンは、生理食塩水または０．０２Ｍ
酢酸緩衝液に０．６％塩化ナトリウム、２％マンニット
および１％アルブミンを添加した溶液に溶解させた。

【００３０】多孔性中空糸として、旭化成（株）より購
入した、平均孔径３５±２ｎｍ、膜面積０．００１〜
１．０ｍ² 、中空糸内径３３０±３０μｍ、膜厚３５±
３．５μｍ、１５０層以上の多重層構造であり、銅アン
モニア法再生セルロースを原料とした多孔性中空糸〔ベ
ンベルグ マイクロポーラス メンブラン（Ｂｅｍｂｅ
ｒｇ Ｍｉｃｒｏｐｏｒｏｕｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ）以
下、ＢＭＭという〕をモジュール化したＢＭＭモジュー
ル（商品名：プラノバ３５）を使用した。このＢＭＭモ
ジュールは、ポリウレタン系接着剤により高圧蒸気滅菌
可能なポリカーボネート製のプラスチック容器内に一体
化されており、モジュール内には注射用蒸留水が充填さ
れている。プラノバを構成する各種材料の安全性は、日
本薬局方の定める方法により確認されている（ＢＭＭ商
品説明書より）。

【００３１】５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液をｐＨ
を６．４〜７．２となるように調整した。滅菌濾過（孔
径０．２μｍ、メンブラン・フィルターによる濾過）を
行った後に５℃、濾過圧力０．２ｋｇｆ／ｃｍ² で１〜
５時間の膜濾過処理（空気圧を用いたデッドエンド濾過
法）を行った。冷却後に再度滅菌処理を行い、分注、凍
結乾燥を施して、静注用のヒト免疫グロブリン製剤を調
製した。

【００３２】実施例２ ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、さらにこの溶
液１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添加し、ｐＨ
５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱処理した。
その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水にてこの液
を３倍に希釈し、ポリエチレングリコール（平均分子量
４０００）を終濃度が６％となるように添加し、２℃で
遠心分離を行い上清を得た。この上清を１Ｎ−水酸化ナ
トリウムを添加してｐＨ８．８に調整した後、ポリエチ
レングリコール（平均分子量４０００）を終濃度が１２
％となるように添加し、２℃で遠心分離を行い、沈殿し
たＩｇＧ画分を得た。このＩｇＧ画分を注射用水に溶解
し、この溶液に、水で平衡化したＤＥＡＥ−セファデッ
クスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２ｍｌ）し、０〜４℃
の条件下で約１時間接触処理し、処理後濾過することに
よりＤＥＡＥ−セファデックスを除去して濾過液（Ｉｇ
Ｇ溶液）を回収した。このＩｇＧ溶液を注射用水で５ｗ
／ｖ％ＩｇＧ溶液に調整し、酢酸ナトリウムでこの溶液
のｐＨを約５．５に調整し、さらにソルビトールを終濃
度が５％となるように添加した。実施例１に準じてＢＭ
Ｍ処理を行った。この水溶液（伝導度約１ｍｍｈｏ）を
除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。

【００３３】実験例 ２５℃での振盪に対する安定性試験をＢＭＭ処理を行っ
た場合と行わなかった場合とで比較した。対象はポリエ
チレングリコール処理した非化学修飾型の静注用免疫グ
ロブリンを用いた。保存時のｐＨ条件は５．５とした。
不溶性異物の発生の度合を目視で観察することにより評
価した。結果を表１に示す。

【００３４】

【表１】

【００３５】以上の結果より、ＢＭＭ処理を行った免疫
グロブリン製剤は３０日後でも不溶性異物が殆ど生じな
かったが、ＢＭＭ処理を行わなかった免疫グロブリン製
剤は２５℃で１５日間には不溶性異物がはっきりと観察
された。

【００３６】

【発明の効果】以上の説明で明らかなように、本発明の
免疫グロブリン製剤は、その不溶性異物の形成の核とな
り得る微粒子が除去されているので、免疫グロブリン製
剤の保存安定性がさらに改善されたものとなる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 上村 八尋 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 不溶性異物の核となり得る微粒子が除去
   されてなる免疫グロブリン製剤。
2. 【請求項２】 ２５℃で少なくとも３０日間の振盪試験
   において、不溶性異物が生じないことを特徴とする請求
   項１に記載の免疫グロブリン製剤。
3. 【請求項３】 平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜によ
   る濾過処理が施されてなることを特徴とする請求項１に
   記載の免疫グロブリン製剤。