CN1198951A - 免疫球蛋白制剂及其制备方法 - Google Patents

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上村八寻
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Ryokugugi K K
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Ryokugugi K K
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Abstract

本发明描述了一种含免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂,其中该制剂包括,作为污染物的血清白蛋白含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg;和/或其中所述制剂不含可能作为不溶外来物的核心的微细颗粒,本发明还涉及制备免疫球蛋白制剂的方法。

Description

免疫球蛋白制剂及其制备方法
本发明涉及免疫球蛋白制剂，特别是涉及具有优良贮藏性的免疫球蛋白制剂。
在作为血浆蛋白组分的γ-球蛋白中，一种包括IgG的免疫球蛋白制剂已被用于预防和处置各种传染性疾病。溶液形式的免疫球蛋白是不稳定的。已知作为免疫球蛋白聚集的结果，换句话说，作为在导致形成免疫球蛋白的多聚体和二聚体的分馏操作中免疫球蛋白变性的结果，在称为抗补体作用的补体固定性上免疫球蛋白表现出显著的提高，导致a)在从静脉向人体给药时降低血清补体浓度或b)导致严重的副作用例如过敏性休克。因此，免疫球蛋白不能制成液体制剂而是制成干制剂，特别是以冷冻干燥形式。但是，干制剂也存在问题，即不易给药，因为在用于注射等时需将其溶解在蒸馏水中。
另一方面，在用于注射等时，液体制剂不需任何溶解在蒸馏水中的操作，并与干制剂相比，可以容易地给药。不过，如上所述，在免疫球蛋白的稳定性上存在这些特别不利之处。因此，照例要努力开发一种用于静脉注射的液体免疫球蛋白组分，该组分甚至以溶液形式也具有稳定性。
例如，JP-A-63-192724(此处术语″JP-A″意思是″未审查的公开日本专利申请″(US专利4,876,088，EP278422))披露了一种用于静脉注射的液体球蛋白组分，该组分甚至以溶液形式也具有稳定性，所述组分具有低的电导率和PH为5.5±0.2和含有山梨糖醇作为稳定剂。此外，JP-A-58-43914(US专利4,396,608和4,499,073，EP73371)披露，为了得到基本排除免疫球蛋白聚集的并具有免疫血清球蛋白单体含量超过90％的免疫球蛋白组分，将免疫血清球蛋白溶液调整到具有离子强度低于0.001和pH为3.5-5.0。
JP-A-63-8340(US专利4,762,714和4,948,877，EP240856)披露了一种基本没有获得性病毒的免疫血清球蛋白的制备方法，该免疫血清球蛋白包括取自于人体血浆，在pH为约5.4或较低，通过冷乙醇分馏法得到的免疫血清球蛋白和在pH约为4.25或较低贮存至少约3天或在pH约为6.8或较低和至少45℃的温度下贮存，使得基本不含有传染性反转录病毒(retrovirus)。不过，上述发明是针对反转录病毒的灭活作用。尚无报导，这样得到的免疫球蛋白制剂在免疫球蛋白的聚集问题上表现出改进。
JP-A-7-238036(EP702960)披露，为了改进稳定性，通过用酸处理或在室温贮存，免疫球蛋白的聚集，换句话说，不仅免疫球蛋白的聚合物而且免疫球蛋白的二聚物的增高都受到抑制。
WO95-3826披露了含有0.1g/L或较少的用于保持溶液状态作为稳定剂的非离子表面活性剂的免疫球蛋白制剂，并基本不含白蛋白。
如上所述，免疫球蛋白基本是不稳定的蛋白质，所以其与液体组分制剂有关的稳定性是最忧虑的问题之一。
本发明的目的就是解决上述问题，并因此提供一种甚至以液体的形式也具有良好的贮存稳定性的免疫球蛋白制剂。
基于前面的考虑，本发明进行了广泛的研究。结果发现，通过把免疫球蛋白成分中作为污染物存在的血清白蛋白降低为痕量，可以改进免疫球蛋白的稳定性，从而完成了本发明。
本发明人建立了一个假设，即免疫球蛋白制剂中存在的微细颗粒是形成不溶外来物的核心。根据该假设，已经发现，通过除去可能成为形成不溶外来物核心的微细颗粒，可以改进免疫球蛋白的稳定性，从而完成了本发明。
本发明的种种目的是由下列完成的：
1)含有免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂(组分)，其中所述制剂含有作为污染物的血清白蛋白的量不多于10μg/50mg免疫球蛋白；
2)含有免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂(组分)，其中所述制剂不含有作为不溶外来物核心的微细颗粒；和
3)制备上述免疫球蛋白制剂1)或2)的方法，该方法包括至少下述一个步骤：
用一阴离子交换器处理含免疫球蛋白的水溶液；
用胶体二氧化硅处理含免疫球蛋白的水溶液；和
用具有平均孔径为1-100nm的多孔膜过滤含免疫球蛋白的水溶液。
下面将对本发明作更具体的描述。对用于本发明免疫球蛋白制剂的免疫球蛋白的状态不加特别的限制；不过，文献中可得到的任何免疫球蛋白的状态都可使用。更明确地说，实施例包括用作为起始物的含免疫球蛋白的成分，成分II+III，成分II可用Cohn’s乙醇分馏得到，和含有免疫球蛋白的相似成分的糊剂来制备。将此成分悬浮在含水溶剂中以萃取免疫球蛋白，这种方法可以用作免疫球蛋白的制备方法。这时，加入相当于所述成分的至少两倍体积的，优选至少5倍体积的一含水介质。此处有用的优选含水介质例子包括水和含有氯化钠，盐酸，醋酸，磷酸，或其盐类的水溶液。此外，优选PH范围为4-7，且离子强度范围为0.001-0.1M。
免疫球蛋白的例子包括无化学修饰的和完整分子的免疫球蛋白(例如，用聚乙二醇，PH约为4，或离子交换树脂处理的免疫球蛋白)；化学修饰的免疫球蛋白(例如，烷基化或磺化免疫球蛋白)；和酶处理的免疫球蛋白(例如，用酶例如纤溶酶，胃蛋白酶，或胰蛋白酶处理的免疫球蛋白)。在这些免疫球蛋白中，无化学修饰的和完整分子的免疫球蛋白是优选使用的。
此处使用的术语″无化学修饰的和完整分子的免疫球蛋白″意思是具有下列各种性质的免疫球蛋白：
1)完整的(天然的)和未受到任何人工修饰或改变的免疫球蛋白，因此不含有免疫球蛋白碎片例如Fab，F(ab’)2和Fc；
2)未产生抗体效价降低并抗体种类也没有减少的免疫球蛋白；和
3)具有抗补体作用(补体稳固性)充分地低于20单位(CH50值)的免疫球蛋白，该值是日本生物学制剂标准中被认为安全的值。
同样地，由任何方法得到的无化学修饰的和完整分子的免疫球蛋白，只要它是完整的(天然的)和具有低的抗补体活性，都可以使用。
无化学修饰  的和完整分子的免疫球蛋白可以用任何方法制备。例子包括乙醇分馏，聚乙二醇分馏(JP-A-53-47515(美国专利4,093,606和4,124,576))，联合使用聚乙二醇和羟乙基淀粉分馏(JP-A-51-91321)，酸处理(JP-A-57-32228(美国专利4,371,520，EP78331))，皂土处理(JP-A-57-77623)，阴离子交换处理[JP-W-59-501546(此处使用的术语″JP-W″意思是″公开而未实审的国际申请″)，JP A-60-42336]，热处理和聚乙二醇分馏结合(JP-A-63-183539(美国专利5,132,406，EP246579))，和形成液体制剂(JP-A-58-43914(美国专利4,396,608和4,499,073，EP73371，JP-A-63-197274(美国专利4,876,088，EP278422))。
优选地，对由上述方法之一得到的免疫球蛋白进行加热处理。以液体形式处理的方法的例子包括一种用高浓度糖或糖醇作为稳定剂的方法(JP-A-61-191622(EP196761))和一种在低离子强度和酸性pH下，用高浓度山梨醇作为稳定剂进行热处理的方法(JP-A-63-146832(美国专利4,845,199，EP253313))。另外，以干燥形式热处理的方法的例子包括一种用甘氨酸，聚乙二醇，氯化钠，甘露醇或类似物作为稳定剂的方法(JP-A-61-78730(US专利4,721,777，EP177836))和一种用双糖或糖醇作为稳定剂的方法(JP-A-62-228024，(JP-A-63-283933)。
免疫球蛋白也可经过病毒灭活处理，而不是加热处理。其例子包括三烷基磷酸盐和/或洗涤剂处理(美国专利4,540,573，EP131740)，膜过滤(WO96-9839)。
本发明中使用的免疫球蛋白的来源没有特别的限制。具体的例子包括人体和鼠体。其中优选人体。免疫球蛋白的具体例子包括用聚乙二醇处理的人体免疫球蛋白。
根据本发明的免疫球蛋白制剂包括一制剂，该制剂中作为污染物的血清白蛋白已经在某种程度上被除去。除去血清白蛋白的方法的例子包括下面将要描述的用阴离子交换剂接触处理方法和用胶体二氧化硅接触处理方法。
A)用阴离子交换剂处理
这是用阴离子交换剂接触处理来回收非吸附成分的方法。
i)阴离子交换剂的制备
阴离子交换剂是一种不溶性载体，该载体上连接有一阴离子交换基团。此处有用的阴离子交换基团的例子包括二乙氨基乙基(DEAE)基团和四价氨基乙基(QAE)基团。不溶性载体的例子包括琼脂糖，纤维素，葡聚糖和聚丙烯酰胺。它们可用文献中已知的方法结合到一起。
ii)处理方法
免疫球蛋白成分溶解在一适合的含水溶剂中。含水介质优选具有pH为4-7(更优选pH为5-6)，和低的离子强度(更优选0.0001-0.1M)。这种含水介质例子包括氯化钠水溶液，注射用蒸馏水和醋酸盐缓冲剂。这样制备的免疫球蛋白溶液具有蛋白质浓度为1-15W/V％(更优选3-10W/V％)和pH为4-7(更优选为5-6)。
这样制备的免疫球蛋白溶液然后可以用经上述含水介质平衡的阴离子交换剂接触处理。这种处理的例子包括批处理法或柱处理法。例如，在批处理法中，约10-100ml的免疫球蛋白溶液与约1ml阴离子交换剂混合，混合物在0-4℃搅拌约30分钟-2小时，然后将反应混合物在6000-8000rpm离心10-30分钟以收取上层清液。另一方面，在柱处理方法中，例如，约10-100ml的免疫球蛋白溶液同1ml的阴离子交换剂接触以回收非吸附成分。
B)用胶体二氧化硅处理
这是用胶体二氧化硅接触处理回收非吸附成分的方法。
i)吸附剂
用作吸附剂的胶体二氧化硅的例子包括硅胶，轻质硅酐，矽藻土，酸性粘土，膨润土，高岭土和硅铝酸镁。优选使用轻质硅酐(商品名″aerosil″；Nippon Aerosil Co.Ltd.的产品和商品名为″Delipid″；Zeta Inc.的产品)。
ii)处理条件
提纯的免疫球蛋白溶解在适当的含水溶剂中。含水介质优选具有pH4-7(更优选5-6)和低的离子强度(更优选0.0001-0.1M)。含水介质的例子包括上述用阴离子交换剂处理的例子。这样制备的免疫球蛋白溶液优选具有蛋白质浓度为1-15W/V％(更优选3-10W/V％)和pH为4-7(更优选为pH5-6)。
这样制备的免疫球蛋白溶液可以包括药学上可接受的添加剂(例如载体，赋形剂，稀释剂)，稳定剂和/或在不损害本发明目的的一定范围内，通常用于制药的药学上的必需成分。
稳定剂的例子包括单糖(例如葡萄糖)，双糖(例如蔗糖，麦芽糖)，糖醇(例如甘露醇，山梨醇)，中性盐(例如氯化钠)，氨基酸(例如甘氨酸)，和非离子表面活性剂(例如聚乙二醇，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(商品名″Pluronic″)，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(商品名″Tween″)。稳定剂优选加入量约1-10W/V％。
然后，用上述吸附剂接触处理免疫蛋白溶液。作为使用的接触处理条件，当免疫球蛋白的浓度为1-100g/升(优选10-100g/升)时，吸附剂用量为1-30g/升。这种处理可以用例如批处理或柱处理法进行。在这些方法中，间歇法是优选的。在间歇法中，在例如5-25℃条件下，混合和搅拌进行5分钟-1小时。然后，上澄清液(非吸附成分)可以用例如过滤或离心回收。
除去血清白蛋白的免疫球蛋白制剂含有血清白蛋白污染物的量按每50mg免疫球蛋白不大于10μg，优选不大于5μg。具体说，当免疫球蛋白制剂以含有5W/V％的免疫球蛋白溶液形式，它含有血清白蛋白污染物的量不大于10μg/ml，优选不大于5μg/ml。具有这种性质的免疫球蛋白制剂显示出比通常该品更优良的储存稳定性。例如，在振荡下25℃贮存至少30天，或在37℃贮存至少39天后，溶液形式的免疫球蛋白制剂也没有不溶性外来物。即，能用肉眼观察不到不溶性外来物。免疫球蛋白制剂中的血清白蛋白的分析，可以使用文献中的已知方法。例子包括ELISA法，Mancini法和比浊法。
C)用多孔膜处理
根据本发明的免疫球蛋白制剂包括一种制剂，其中可以作为形成不溶性外来物核心的微细颗粒已经被除去。除去方法的例子包括通过多孔膜过滤法(例如以空心纱或纸的形式)。
本发明中有用的多孔膜材料不加特别的限制。优选再生纤维素。膜形式的例子包括空心纱或纸，优选空心纱。例如，优选用微相分离法从铜纤维素的铵盐溶液制备再生纤维素构成的多孔空心纱[American Chemical Society，9：197-228(1985)]。
多孔膜的平均孔径为1-100nm，优选10-75nm，更优选10-50nm，和更优选35±2nm。其厚度优选35±3.5μm。膜优选具有多层结构。当多孔膜以空心纱的形式，其内部直径优选为330±30μm。
当多孔膜以空心纱的形式，优选用模块方式。模块由具有优选膜面积为0.001-1.0m2的多孔空心纱膜构成，将膜填满一容器并用粘合剂使它们成为整体。
通过多孔膜进行过滤处理，例如，如下：
将免疫球蛋白成分首先溶解在一适当的含水溶剂中。含水介质优选具有pH为4-7(更优选pH5-6)和低的离子强度(更优选0.0001-0.1M)。含水介质的例子包括氯化钠水溶液，注射用蒸馏水和醋酸缓冲剂。这样制备的免疫球蛋白溶液优选具有蛋白质浓度为1-15W/V％(更优选为3-10W/V％)和pH为4-7(更优选为5-6)。
这样制备的免疫球蛋白溶液可以含有药学上可接受的添加剂(例如，载体，赋形剂，稀释剂)，稳定剂和/或在不损害本发明目的的一定范围内，用于制药的药学上的必需成分。
稳定剂的例子包括单糖(例如葡萄糖)，双糖(例如蔗糖，麦芽糖)，糖醇(例如甘露醇，山梨醇)，中性盐(例如氯化钠)，氨基酸(例如甘氨酸)，和非离子表面活性剂(例如聚乙二醇，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(商品名″Pluronic″)，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(商品名″Tween″)。稳定剂优选加入量约1-10W/V％。
上述含免疫球蛋白溶液通过多孔膜过滤。此时过滤压力或力为0.1-1kgf/cm2，优选0.1-0.5kgf/cm2，更优选0.1-0.3kgf/cm2。处理温度优选4-50℃。
过滤处理的模式的例子包括横向流动过滤法(环流型)，这种过滤方法是在一定过滤率下进行。和死端过滤法(非环流型)，它是在没有给出过滤率时进行过滤的。用压缩空气的横向流动过滤法是优选被采用的。
过滤处理可以进行多次。在上述过滤处理之前，含免疫球蛋白溶液可以经过另一种过滤处理。
这样制备的免疫球蛋白制剂是一种这种的制剂，其中已经除去了可以成为形成不溶性外来物的核心的具有平均粒径不小于100nm，优选不小于75nm，更优选不小于35nm的不溶性颗粒和/或具有分子量大于免疫球蛋白的分子量(约150000)的可溶微细颗粒。所以，即使免疫球蛋白制剂以溶液的形式在振荡下25℃贮存至少30天，或在37℃贮存至少39天，都不会造成免疫球蛋白的聚集，即不会产生不溶性外来物，和显示良好的储存稳定性。这就是说，肉眼不能观察到不溶性外来物。
本发明中，上述用阴离子交换剂或胶体二氧化硅接触处理和通过多孔膜过滤处理可以任何结合的或单独的方式使用，且处理的顺序也无限制。不过，优选按这样的顺序：用阴离子交换剂处理，用胶体二氧化硅处理和用多孔膜处理。
D)最后制剂(特别是液体制剂)
i)液体制剂的制备
通过用上述方法制备根据本发明的用于静脉注射剂的免疫球蛋白制剂，可以得到用于静脉注射剂的免疫球蛋白制剂。在优选的具体例中，可以静脉内给药的无化学改性和整体分子的免疫球蛋白液体组分(制剂)可以这样得到，即用常用方法，通过将无化学修饰和完整的分子免疫球蛋白的含水溶液调整到浓度为1-10W/V％(更优选3-7W/V％)，用已知方法调整所得溶液到含有稳定剂，例如，山梨醇的量为1-20W/V％(更优选2-10W/V％)，pH为5-6(更优选pH5.5±0.2)和具有低的电导率(更优选电导率不高于1mmho，更优选电导率不高于0.6mmho，每个数据均按照8℃计算)，然后将所得溶液灭菌过滤，按普通的制剂工艺分批灌注等。
由这样形成的制剂，可以生产出含有无化学修饰的和完整的分子免疫球蛋白的，具有pH为5-6(更优选pH5.5±0.2)和电导率不高于1mmho(更优选电导率不高于0.6mmho，每个数据均按照8℃计算)，可以在室温下贮存，具有抗补体值不大于20单位和具有免疫球蛋白二聚物含量不大于7％的用于静脉注射的免疫球蛋白液体制剂。
关于由无化学修饰的和完整的分子免疫球蛋白组成的用于静脉注射的含免疫球蛋白制剂，考虑到免疫球蛋白二聚物含量的安全范围，则免疫球蛋白二聚物含量设定在7％或较低，优选6％或较低，和更优选4％或较低。
根据本发明的制剂具有基本不灭活的免疫球蛋白，既不含IgG多聚体，也不含污染物，具有良好溶解性和具有足够低的抗补体作用和当病毒被例如热处理灭活后，是一种可以通过生物学制剂标准的安全制剂。
根据本发明的免疫球蛋白制剂在使用时，当其为一液体制剂时，可以用适当的溶剂(例如，用于注射剂的蒸馏水，生理盐水，葡萄糖溶液)稀释。另一方面，当其为一干制剂时，上述免疫球蛋白溶液被冷冻干燥。使用时，将其溶解在一适当的溶剂中(例如，用于注射的蒸馏水)。
根据本发明的免疫球蛋白制剂的给药途径一般为注射，优选静脉给药。本发明的免疫球蛋白制剂优选静脉给药量为每公斤体重50-1000mg/天，可以给药一天或连续几天。根据病人的症状，性别，体重或其它，可以提高或降低剂量。
根据本发明的免疫球蛋白制剂是一种制剂，其中可能成为形成不溶外来物的核心的微细颗粒已被除去，所以它具有改进的贮存稳定性。
另外，由于作为污染物的血清蛋白量很少，与普通免疫球蛋白制剂相比，根据本发明的免疫球蛋白制剂甚至在溶液形式下也不形成不溶外来物，因此具有改进的贮存稳定性。下面将用实施例和测试对本发明作更明确的描述。但应记住，本发明不受限于这些实施例。
实施例1
由Cohn′s冷乙醇分馏法得到的成分II+III糊剂(1kg)被溶解在10升0.6W/V％的氯化钠中。所得溶液用1N盐酸调整到pH3.8并在4℃下搅拌60分钟，之后进行酸处理。将具有平均分子量为4000的聚乙二醇500g加入其中并溶解，再向其中加入1N的氢氧化钠，逐渐提高其pH值到5.0。此后，立即用离心法除去沉淀物，得到上层清液。具有平均分子量为4000的聚乙二醇(700g)被加入到上层清液中。在轻轻搅拌下，用1N氢氧化钠调整所得混合物pH为8.0。用离心法回收这样沉淀的免疫球蛋白。
这样回收的免疫球蛋白被溶解在a)生理盐水中，或b)含0.6W/V％氯化钠和2W/V％甘露醇的0.02M的醋酸盐缓冲剂中。将5W/V％的免疫球蛋白溶液通过载有无水二氧化硅过滤器(商品名″Zeta Delipid″；Quno Corp.生产)，以回收非吸附成分。非吸附成分经过灭菌过滤和冷冻干燥以得到临床用于静脉给药的免疫球蛋白制剂。
用Mancini′s法化验结果发现，在这样得到的5W/V％免疫球蛋白溶液中，白蛋白含量为10μg/ml或较少。
实施例2
在Cohn′s冷乙醇法从人体血浆得到的1kg成分II+III中，加入10升水，跟着进行IgG萃取。每100ml的所得上层清液加入50g山梨醇后，将其pH调整到5.5，所得混合物在10小时内加热60℃。然后，调整反应混合物pH为5.5和用冷注射用水稀释三倍。向稀释液中加入聚乙二醇(平均分子量：4000)，得到最后浓度为8W/V％。所得混合物在2℃离心得到上层清液。向上层清液中加入1N氢氧化钠，调整其pH为8.8，然后向其中加入聚乙二醇(平均分子量：4000)，达到最后浓度为12W/V％。所得混合物在2℃离心得到IgG组分沉淀。这样得到的IgG组分溶解在注射水中。向所得混合物中加入用注射水平衡的DEAE-交联葡聚糖(每50ml溶液约2ml)。在0-4℃温度下，所得混合物受到接触处理约1小时。处理之后，用过滤回收滤液(IgG溶液)的方式除去DEAE-交联葡聚糖。
这样回收的IgG溶液用注射水稀释成5W/V％的溶液，且用醋酸钠将其pH调整到约5.5。然后向其中加入山梨醇，得到最后浓度为5％。这样得到的溶液(电导率：约1mmho)通过与实施例1相似的载有无水二氧化硅的过滤器，回收非吸附成分。非吸附成分进一步用过滤灭菌以得到用于静脉给药的免疫球蛋白制剂。
用Mancini′s法化验结果发现，在所得5W/V％IgG溶液中混合的白蛋白量为5μg/ml。
测试例1
已经用胶体二氧化硅处理过的和未处理过的本发明免疫球蛋白制剂(5W/V％溶液)，比较免疫球蛋白溶液中的血清白蛋白污染物的量以及在37℃贮存39天后的不溶外来物的形成度。根据用上面实施例中描述的方法进行胶体二氧化硅的处理。用Mancini′s法作血清白蛋白分析和肉眼观察不溶外来物。结果列在表1。
表1
     用胶体二氧化硅处理     未用胶体二氧化硅处理
血清白蛋白含量(μg/ml)        3
不溶外来物贮存前贮存39天 -- -++
-：未观察到不溶外来物。
+：观察到少许不溶外来物。
++：明确地观察到不溶外来物。
上述结果表明，用胶体二氧化硅处理过的免疫球蛋白制剂含有明显少量的血清白蛋白和甚至在37℃下贮存达39天后不存在不溶性外来物。
实施例3
由Cohn′s冷乙醇分馏法得到的成分II+III糊剂(1kg)被溶解在10升0.6W/V％的氯化钠中，且其pH值用1N盐酸调整到3.8。在4℃下将所得溶液进行酸处理60分钟。将具有平均分子量为4000的聚乙二醇500g加入其中并溶解，再向其中加入1N的氢氧化钠，逐渐提高其pH值到5.0。此后，沉淀物被立即用离心法除去，得到上层清液。具有平均分子量为4000的聚乙二醇700g被加入到上层清液中。在轻轻搅拌下，用1N氢氧化钠调整所得混合物pH为8.0。这样沉淀的免疫球蛋白被离心和这样回收的免疫球蛋白被溶解在a)生理盐水中，或b)含0.6W/V％氯化钠和2W/V％甘露醇的0.02M的醋酸盐缓冲剂中。
用作多孔膜的是由Asahi Chemical Industries，Co.，Ltd生产的多孔空心纱BBM组件(商品名为″Planova″)[MembergMicroporous Membrane，以下将其缩写为″BBM″]。组件中所用多孔空心纱具有至少为150层的多层结构，且其孔径为35±2nm，膜面积为0.001-1.0m2，空心纱内径为330±30μm和膜厚度为35±3.5μm，并由通过铜氨液处理得到的再生纤维素所构成。在由聚碳酸酯制的塑料容器中用聚氨基甲酸酯粘合剂将BMM组件做成整体，该塑料容器可用高压蒸汽灭菌。用注射用蒸馏水充满组件。组成″Planova″的各种材料的安全性已经由Japanese Pharmacopoeia建立的方法所确认(根据BMM注解)，该方法本文引用作参考。
将5W/V％的含免疫球蛋白溶液调整到pH为6.4-7.2。灭菌过滤后(孔径0.2μm，通过膜式过滤器过滤)，所得溶液在5℃和过滤压力为0.2kgf/cm2经膜式过滤处理(使用空气的死端过滤法)1-5小时。冷却后，再进行灭菌处理，接着分批灌注，制备出用于静脉注射的人体免疫球蛋白制剂。
实施例4
向由1kgCohn′s冷乙醇分馏法得到的成分II+III中加入10升水。每100ml所得溶液中加入50g山梨醇后，其pH调整到5.5，并将所得混合物在60℃加热10小时。然后，反应混合物被调整到pH为5.5，并用注射冷水稀释三倍。在稀释液中加入聚乙二醇(平均分子量：4000)，得到最后浓度为6W/V％。所得混合物在2℃离心得到上层清液。将1N氢氧化钠加入上层清液中，调整其pH为8.8，并向其中加入聚乙二醇(平均分子量：4000)，达到最后浓度为12W/V％。所得混合物在2℃离心得到IgG成分沉淀。这样沉淀的IgG成分被溶解在注射水中。在所得溶液中加入用注射水平衡的DEAE-交联葡聚糖(每50ml溶液约2ml)。在0-4℃温度下，所得混合物受到接触处理约1小时。处理之后，用过滤回收滤液(IgG溶液)的方式除去DEAE-交联葡聚糖。
这样回收的IgG溶液用注射水稀释成5W/V％的溶液，且用醋酸钠将其pH调整到约5.5。然后向其中加入山梨醇，达到最后浓度为5％。这样得到的水溶液用与实施例3中相同的方法进行BMM处理。水溶液(电导率：约1mmho)经过滤灭菌以得到适于静脉给药的液体免疫球蛋白制剂。
测试例2
在25℃下进行振动稳定性测试，以比较经聚乙二醇处理的，化学修饰的游离和完整的用于静脉给药的并用BMM处理和未用BMM处理的分子免疫球蛋白。贮存期间，pH定为5.5。对不溶外来物的形成度用肉眼观察作出评价。结果列在表2。
表2
 时间(天)  用BMM处理  未用BMM处理
    01530     ---      -++++
-：未观察到不溶外来物。
+/-：在某些例子中观察到不溶外来物。
+：观察到一些不溶外来物。
++：明确地观察到不溶外来物。
上述结果表明，用BMM处理的免疫球蛋白制剂在25℃下甚至30天后也几乎不形成不溶外来物，而未用BMM处理的免疫球蛋白制剂在25℃下贮存15天后明确地观察到不溶外来物。
实施例5
实施例2中得到的IgG溶液用注射水稀释成5W/V％IgG溶液，且其pH用醋酸钠调整到约5.5。向其中加入山梨醇达到最后浓度为5％。然后，所得混合物用与实施例2中相同的方法用无水二氧化硅载体处理，并回收非吸附成分。然后，以实施例4中相同的方法，用BMM处理回收的非吸附成分以回收非吸附成分。所得水溶液(电导率：约1mmho)经灭菌过滤以得到用于静脉注射的免疫球蛋白液体制剂。
尽管本发明已经详细地并参考其特定具体例加以描述，但很明显，对本领域熟知的人可以对其做出各种改变和改进而不偏离本发明的精髓和范围。

Claims (15)

1.一种含免疫球蛋白的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂包括，作为污染物的血清白蛋白，其含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg；和/或其中所述制剂不含可能作为不溶外来物的核心的微细颗粒。
2.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂包括，作为污染物的血清白蛋白，其含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg；和其中所述制剂不含可能作为不溶外来物的核心的微细颗粒。
3.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂即使在37℃以溶液形式贮存至少39天后也没有不溶外来物。
4.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂即使在25℃振动下以溶液形式贮存至少30天后也没有不溶外来物。
5.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂的pH为5-6，电导率不大于1mmho(按照8℃计算)，抗补体值不大于20单位，IgG二聚物含量不高于7％。
6.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述制剂经过病毒灭活处理。
7.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述免疫球蛋白是无化学修饰和完整分子的免疫球蛋白。
8.根据权利要求1的免疫球蛋白制剂，其中所述微细颗粒具有的平均颗粒大小不小于100nm。
9.制备根据权利要求1的免疫球蛋白制剂的方法，该方法包括下述至少步骤之一：
用阴离子交换剂处理含免疫球蛋白的水溶液；
用胶体二氧化硅处理含免疫球蛋白的水溶液；和
通过平均孔径为1-100nm的多孔膜过滤含免疫球蛋白的水溶液。
10.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液用阴离子交换剂在pH4-7和离子强度为0.0001-0.1M条件下处理，以回收非吸附成分。
11.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液用胶体二氧化硅在pH4-7和离子强度为0.0001-0.1M条件下处理，以回收非吸附成分。
12.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液通过平均孔径为1-100nm的多孔膜在pH4-7和离子强度为0.0001-0.1M条件下过滤，以回收非吸附成分。
13.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液按此次序处理：用阴离子交换剂处理，用胶体二氧化硅处理；并通过平均孔径为1-100nm的多孔膜过滤。
14.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液进一步经过病毒灭活处理。
15.根据权利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液进一步经过聚乙二醇分馏。
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