JPH09176045A

JPH09176045A - 静注用免疫グロブリン製剤

Info

Publication number: JPH09176045A
Application number: JP24541996A
Authority: JP
Inventors: Yatsuhiro Kamimura; 八尋上村; Katsuhiro Uryu; 勝寛瓜生; Kazuo Takechi; 和男武智; Yutaka Hirao; 豊平尾; Tadakazu Suyama; 忠和須山
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1996-08-29
Filing date: 1996-08-29
Publication date: 1997-07-08
Anticipated expiration: 2013-07-09
Also published as: JP2775097B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】免疫グロブリンが実質的に不活化されて
おらず、抗ヒト血液型物質抗体等の夾雑物は含まれず、
加熱処理が施されている。【効果】夾雑ウイルスも実質的に不活化され、溶解性
もよく、抗補体活性も充分に低い等の性質を有し、昭和
６０年度発行の日本国生物学的製剤基準をパスできる安
全な製剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は静注用免疫グロブリ
ン製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】静注用免疫グロブリン製剤は、これまで
広く感染症の予防および治療に用いられているが、熱安
定性に欠けるために市販品は加熱処理が行われていない
のが実情である。しかし、肝炎ウイルス等の夾雑ウイル
スの混在は必ずしも否認されていない。そこで、夾雑ウ
イルスの不活化法として液状加熱処理法〔特開昭６１−
１９１６２２号等〕或いは乾熱処理法〔特開昭６１−７
８７３０号、特開昭６２−２２８０９４号等〕が提案さ
れている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、この
加熱処理法を発展させて臨床上適用できる製剤、すなわ
ち、安全性と有効性の高い静注用免疫グロブリン製剤を
提供することにある。本発明者らは、この目的に沿って
工業的な製法について検討し、ポリエチレングリコール
（以下、ＰＥＧという。）分画処理、加熱処理等を組み
合わせ、各工程の処理条件を設定することによって、安
全性と有効性の高い新規な静注用免疫グロブリン製剤を
得ることに成功した。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、実質的にＩｇ
Ｇ単量体のみを含み、かつ変性型の免疫グロブリンおよ
び感染性ウイルスを実質的に含まない静注用免疫グロブ
リン製剤であり、免疫グロブリンを含む画分を出発原料
として、夾雑のおそれのあるウイルスが不活化するのに
充分な条件下で加熱処理することにより製造される静注
用免疫グロブリン製剤である。本発明の静注用免疫グロ
ブリン製剤は、免疫グロブリンを含む画分を出発原料と
する、以下の処理によって製造され得る。

【０００５】（１）出発原料本発明製剤の出発原料としては、免疫グロブリンを含む
画分が使用され、これはヒト血漿由来であって、免疫グ
ロブリン画分を含むものであれば特に限定されない。具
体的には、コーンのエタノール分画により得られる画分
II＋III 、画分II、および免疫グロブリンを含むこれら
と同等の画分のペースト等が挙げられる。また、この出
発原料は、ヒト血液型抗体、カリクレイン、プレカリク
レイン、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体などを含んでいてもよ
い。

【０００６】（２）製法本発明製剤を得るための製造方法は、好ましくは以下の
処理工程よりなる。

【０００７】低濃度ＰＥＧ処理工程本工程は出発原料を低濃度ＰＥＧで処理し、上清を回収
する工程である。出発原料を適当な水性溶媒に懸濁す
る。水性溶媒の溶質として、たとえば塩化ナトリウム、
リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸、酢酸ナトリ
ウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等を含ませてもよ
い。

【０００８】この懸濁液を分子量１，０００〜１０，０
００（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧで
処理する（たとえば、両者を混合する）。処理条件とし
ては、ＰＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４〜８ｗ／ｖ
％）、pH４〜６（特に４．５〜５．５）、イオン強度
０．０００１〜０．１Ｍ（特に、０．０００１〜０．０
１Ｍ）であることが好ましい。この際、蛋白濃度１〜２
０ｗ／ｖ％（特に、５〜１５ｗ／ｖ％）であることが好
ましい。

【０００９】当該処理は、０〜４℃程度で通常３０分〜
６時間程度撹拌することによって行われる。その後、た
とえば遠心分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０
〜３０分間）して上清を回収する。

【００１０】高濃度ＰＥＧ処理工程本工程はの工程で得られた上清を高濃度ＰＥＧで処理
し、沈澱を回収する工程である。

【００１１】上記上清を分子量１，０００〜１０，００
０（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧにて
さらに処理する（たとえば、両者を混合する）。処理条
件としては、ＰＥＧ濃度１０〜１５ｗ／ｖ％（特に、約
１１〜１３ｗ／ｖ％）、pH６〜９（特に７．５〜８．
５）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に、０．
０００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。この
際、蛋白濃度１〜２０ｗ／ｖ％（特に、５〜１５ｗ／ｖ
％）であることが好ましい。

【００１２】当該処理は、０〜４℃程度で通常３０分〜
６時間程度撹拌することによって行われる。その後、た
とえば遠心分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０
〜３０分間）して沈澱を回収する。

【００１３】陰イオン交換体処理工程本工程はの工程で得られた沈澱画分を水性溶媒に溶解
後、または後記の工程の処理後、陰イオン交換体で接
触処理して非吸着画分を回収する工程である。本工程
は、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体を除くために行われる。

【００１４】(i) 陰イオン交換体の調製陰イオン交換体は陰イオン交換基を不溶性担体に結合し
たものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミ
ノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）
基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、
デキストラン、ポリアクリルアミド等を用いることがで
きる。その結合は公知の方法で行われる。

【００１５】(ii)処理方法の工程で得られた沈澱画分を適当な水性溶媒に溶解す
る。水性溶媒はpH５〜７（好ましくはpH５．５〜７）、
低イオン強度（好ましくは０．０００１〜０．１Ｍ）の
水溶液であることが好ましい。の工程と同様の溶質を
含んでいてもよい。蛋白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％
（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。

【００１６】さらに、上記水性溶媒で平衡化した陰イオ
ン交換体と接触処理する。その処理に際してはバッチ
法、カラム法のどちらを用いてもよい。たとえば、バッ
チ法では、陰イオン交換体１mlに対して処理対象溶液１
０〜１００ml程度と混合させ、０〜４℃で３０分〜２時
間程度撹拌した後、遠心分離（６，０００〜８，０００
ｒｐｍ、１０〜３０分間) して上清を回収する。カラム
法でも、陰イオン交換体１mlに対して処理対象溶液１０
〜１００ml程度を接触させ、非吸着画分を回収する。

【００１７】なお、本の工程は所望により省略するこ
ともできる。また、液状加熱処理を行う場合にはの固
定化ヒト血液型物質処理後に当該陰イオン交換体処理を
実施することが好ましい。

【００１８】固定化ジアミノ化合物による処理本工程は、の工程で得られた沈澱画分またはの工程
で得られた非吸着画分を固定化ジアミノ化合物で接触処
理して、非吸着画分を回収する工程である。本工程はプ
レカリクレインまたはカリクレインを除くために行われ
る。

【００１９】(i) 固定化ジアミノ化合物の調製固定化ジアミノ化合物はジアミノ化合物を不溶性担体に
固定化したものである。ジアミノ化合物としては、アミ
ノベンズアミジン、アミノベンズグアニジン、リジン、
アルギニン等を用いることができる。

【００２０】一方、不溶性担体としてはアガロース、セ
ルロース、デキストラン、シリカゲル、ガラス等が用い
られる。固定化は公知の方法に準じればよい。たとえ
ば、アガロース、セルロース等は、たとえばＣＮBr活性
化法により、またシリカゲル、ガラス等はオキシラン法
により、ジアミノ化合物を固定化することができる。

【００２１】(ii)処理方法処理対象物、たとえばの工程の非吸着画分をpH５〜８
（特に、pH６〜７）、イオン強度０．０００１〜０．１
Ｍ（特に０．０００１〜０．０１Ｍ）の条件下で固定化
ジアミノ化合物と接触処理する。その際、蛋白濃度１〜
１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１０ｗ／ｖ％) であることが
好ましく、またバッチ法、カラム法のいずれもが好適に
使用される。

【００２２】たとえばバッチ法では、固定化ジアミノ化
合物１mlに対して上記画分１０〜１００ml程度を混合さ
せ、０〜１０℃、好ましくは０〜４℃で３０分〜４時
間、好ましくは３０分〜２時間程度撹拌した後、遠心分
離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）
して上清を回収する。

【００２３】カラム法でも、固定化ジアミノ化合物１ml
に対して上記画分１０〜１００ml程度を接触させ、非吸
着画分を回収する。本の工程は所望により省略するこ
とも可能である。

【００２４】固定化ヒト血液型物質処理工程本工程はの工程の沈澱画分またはの非吸着画分また
はの非吸着画分を固定化ヒト血液型物質で接触処理し
て、非吸着画分を回収する工程である。本工程はヒト血
液型抗体を除くために行われる。

【００２５】(i) 固定化ヒト血液型物質の調製固定化ヒト血液型物質はヒト血液型物質を不溶性担体に
固定化したものである。また、ヒト血液型物質として合
成抗原（糖質）を用いることもできる〔HumanBlood Gro
ups and Carbohydrate Chemistry (1978) Chem. Soc. R
ev. p423-452〕。

【００２６】ヒト血液型物質の調製は、公知の方法を用
いればよい。たとえば、ヒトＡ、Ｂ、ＡＢまたはＯ型の
赤血球を低張溶液中で溶血、または超音波処理した後、
硫安分画法またはＰＥＧ分画法により精製すること等に
より得られる。

【００２７】さらにこのヒト血液型物質は生理的食塩液
に溶解後、夾雑するウイルスの不活化に有効とされてい
る、たとえば、約５０〜７０℃、好ましくは約６０℃
で、７〜１３時間、好ましくは約１０時間、又は約８０
〜１３０℃、好ましくは９５℃〜１２１℃で約１〜４０
分、好ましくは約２〜３０分間加熱処理する。その後、
遠心分離して不溶物を除去し、蒸留水に対して透析し
て、各ヒト血液型物質を得る。

【００２８】一方、不溶性担体としてはアガロース、セ
ルロース、デキストラン、シリカゲル、ガラス等が用い
られる。固定化は公知の方法に準じればよい。例えば、
アガロース、セルロース等はＣＮＢｒ活性化法により、
シリカゲル、ガラス等はオキシラン法によりヒト血液型
物質を固定化できる。

【００２９】(ii)処理方法処理対象物、たとえばの工程の非吸着画分をpH５〜８
（特にpH６〜７）、イオン濃度０．０００１〜０．１Ｍ
（特に０．０００１〜０．０１Ｍ）の条件下で、上記水
性溶媒で平衡化した固定化ヒト血液型物質と接触処理す
る。その際、蛋白濃度１〜１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１
０ｗ／ｖ％）であることが好ましく、またバッチ法、カ
ラム法のどちらを用いてもよい。

【００３０】たとえばバッチ法では、固定化ヒト血液型
物質１mlに対して処理対象溶液１０〜１００ml程度と混
合させ、０〜１０℃、好ましくは０〜４℃で、３０分〜
４時間、好ましくは３０分〜２時間程度撹拌した後、遠
心分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０〜３０分
間）して上清を回収する。

【００３１】カラム法でも、固定化ヒト血液型物質１ml
に対して処理対象溶液１０〜１００ml程度を接触させ、
非吸着画分を回収する。

【００３２】加熱処理工程本工程は、所望の段階で安定化剤の存在下に免疫グロブ
リンの抗体活性の減少は最小限にとどめるが、夾雑する
ウイルス、例えばＨＢウイルス、ＡＩＤＳウイルス等は
完全に不活化する条件下で加熱処理する工程である。こ
の加熱処理は、たとえば出発原料の段階、前記工程〜
のいずれかの二工程の間、または前記工程〜を終
了した段階等のいずれの処理段階においても行うことが
できる。加熱処理は、含湿度３％以下の乾燥状態（即
ち、乾熱処理）、または溶液状態、即ち免疫グロブリン
の水溶液状態（即ち、液状加熱処理）で行う。より好ま
しくは液状加熱処理が推奨される。

【００３３】安定化剤としては、いずれの処理の場合
も、二糖類（例、サッカロース、マルトース）、糖アル
コール（例、ソルビトール、マンニトール）が好適に例
示される。より好ましくはソルビトールである。安定化
剤の添加量は、乾熱処理法では、二糖類、糖アルコール
等を０．５〜５ｗ／ｖ％（好ましくは、１〜３ｗ／ｖ
％）液状加熱処理法では二糖類、糖アルコール等を１０
ｗ／ｖ％以上（好ましくは１０〜５０ｗ／ｖ％）を用い
ることが好適に例示される。

【００３４】加熱の対象となる免疫グロブリンの量は、
乾熱処理では、蛋白量として１〜１０ｗ／ｖ％（好まし
くは３〜７ｗ／ｖ％）となるように調整することが好適
である。液状加熱処理では、蛋白量として０．１〜３０
ｗ／ｖ％（好ましくは５〜２０ｗ／ｖ％）に調整するこ
とが好ましい。

【００３５】加熱処理は、乾熱処理の場合、安定化剤を
添加後、要すれば除菌濾過し、たとえば凍結乾燥などに
よって含水率３％以下、好ましくは１％以下とする。凍
結乾燥の条件としては０．５mmHgの真空下、２０〜４０
℃で２４〜９６時間程度が例示される。次いで、たとえ
ば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０〜２０
０時間（好ましくは５０〜１００時間程度）で処理す
る。

【００３６】また、本加熱処理工程は不活性ガス雰囲気
下で行うことにより、加熱時の安定性をより高めること
ができる。不活性ガスとしては例えば、窒素ガス、アル
ゴン、ヘリウムなどが挙げられる。

【００３７】液状加熱処理の場合は水溶液のpHを４．５
〜６．５、好ましくはpH５〜６に調整し、液状加熱処理
法ではたとえば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）
で１０分〜２０時間（好ましくは１０時間程度）処理さ
れる。

【００３８】加熱処理の工程は、乾熱処理の場合は最終
工程で行うことが好ましく、たとえばの工程の後に行
うことが好ましい。液状加熱処理の場合は、出発原料に
対して、またはの工程の後に行うのが好適である。な
お、の工程のあとに行う場合は、およびの処理を
再度行うことが夾雑物除去の点でより好ましい。

【００３９】

【作用・効果】本発明の製剤は、免疫グロブリンが実質
的に不活化されておらず、しかも、抗ヒト血液型物質抗
体等の夾雑物は含まれず、加熱処理を施しているので夾
雑ウイルスも実質的に不活化され、溶解性もよく、抗補
体活性も充分に低い等の性質を有し、昭和６０年度発行
の日本国生物学的製剤基準（以下、生基準）をパスでき
る安全な製剤である。

【００４０】本発明の製剤は、用時、適当な溶媒（例え
ば、注射用蒸留水）に溶解して、静脈内投与、点滴など
により、感染症等の予防または治療に用いられる。本発
明製剤を、たとえば感染症の治療に静注する場合、通
常、成人に対して、免疫グロブリン１０００〜１０００
０mg／回が投与され、症状、年令等に応じて適宜増減さ
れる。

【００４１】

【実施例】以下、実施例、実験例を挙げて本発明を具体
的に示す。実施例１コーン画分II＋III １kgに０．００１Ｍの塩化ナトリウ
ム溶液１０Ｌを加え、pHを５．０に調整した後、ＰＥＧ
♯4000（平均分子量試験２６００〜３８００、日本曹達
社製、以下同じ）を終濃度が８％になるように添加し、
２℃で遠心分離を行った。得られた上清を１Ｎ−水酸化
ナトリウムを用いpH８．０とした後、ＰＥＧ♯4000を終
濃度が１２％になるように加え、２℃で遠心分離を行
い、ＩｇＧ画分を集めた。

【００４２】このＩｇＧ画分を０．６％塩化ナトリウム
溶液を用いＩｇＧ濃度が７％になるように溶解せしめ、
pHを６．５に調整した。このＩｇＧ溶液１００mlを別途
調製したベンズアミジンセファロース（登録商標、ファ
ルマシア社製）カラム５ml及びヒト血液型物質フォルミ
ルセルロファイン（登録商標、生化学工業社製、ヒドロ
キシル基にホルミル基を導入して化学修飾したセルロー
ス）カラム３mlを通過させヒト血液型抗体を吸着除去し
た。この工程での吸着により血液型抗体は（１：３２）
から（１：２）に低下した。

【００４３】この未吸着画分にＩｇＧ５ｗ／ｖ％溶液当
りヒトアルブミンを１ｗ／ｖ％、サッカロースを２ｗ／
ｖ％添加し、除菌濾過後、凍結乾燥した。凍結乾燥後、
６０℃で７２時間加熱処理を行い、静注用免疫グロブリ
ン製剤を得た。

【００４４】本製剤は、実質的にＩｇＧ単量体のみを含
み、ヒト血液型抗体量も充分少なく、抗補体価も１０〜
１５ＣＨ₅₀程度であった。また、溶解性も高く、静注用
免疫グロブリンとしての生基準にも合格した。

【００４５】実施例２コーンの画分IIペーストからも同様に処理を行い、同等
の結果を得た。

【００４６】実施例３コーン画分II＋III １kgに０．００１Ｍの塩化ナトリウ
ム溶液１０Ｌを加え、pHを５．０に調整した後、ＰＥＧ
♯4000を終濃度が８％になるように添加し、２℃で遠心
分離を行った。得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウム
を用いpH８．０とした後、ＰＥＧ♯4000を終濃度が１２
％になるように加え、２℃で遠心分離を行い、ＩｇＧ画
分を集めた。

【００４７】このＩｇＧ画分を水を用いＩｇＧ濃度が１
０％になるように溶解せしめ、ＩｇＧ１０ｗ／ｖ％溶液
の１００ml当りソルビトールを５０ｇ添加し、６０℃で
１０時間加熱処理を行った。加熱処理後、pHを６．８に
調整した後、ＰＥＧ♯4000を終濃度が６％になるように
添加し、２℃で遠心分離を行った。得られた上清を１Ｎ
−水酸化ナトリウムを用いpH８．０とした後、ＰＥＧ♯
4000を終濃度が１２％になるように加え、２℃で遠心分
離を行い、沈澱画分にＩｇＧ画分を得た。

【００４８】この沈澱を水又は０．６％塩化ナトリウム
水溶液に溶解した溶液にＤＥＡＥ−セファデックスを添
加（５０ml溶液当り１ml）し、０〜４℃の条件下、約１
時間接触処理し、処理後遠心分離（７，０００ｒｐｍ、
約２０分間）して上清（ＩｇＧ溶液）を回収した。

【００４９】このＩｇＧ溶液１００mlを別途調製したベ
ンズアミジンセファロース（登録商標、ファルマシア社
製）カラム５mlおよびヒト血液型物質フォルミルセルロ
ファインカラム３mlを通過させヒト血液型抗体を吸着除
去した。この工程での吸着により血液型抗体は（１：３
２）から（１：２）に低下した。ＩｇＧ画分を生理的等
張液に対して透析後、除菌濾過し、凍結乾燥して静注用
免疫グロブリン製剤を得た。

【００５０】本製剤は、実質的にＩｇＧ単量体のみを含
み、ヒト血液型抗体量も充分少なく、抗補体価も１０〜
１５ＣＨ₅₀程度であった。また、溶解性も高く、静注用
免疫グロブリンとしての生基準にも合格した。

【００５１】実施例４コーン画分II＋III １kgに０．００１Ｍの塩化ナトリウ
ム溶液１０Ｌを加え、さらに１００ml当たりソルビトー
ルを５０ｇ添加し、pHを５．５に調整した後、６０℃で
１０時間加熱処理を行った。加熱処理後、pHを５．５に
調整し、ＰＥＧ♯4000を終濃度が４％になるように添加
し、２℃で遠心分離を行った。

【００５２】得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを
用いpH８．８とした後、ＰＥＧ♯4000を終濃度が１５％
になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱画分に
ＩｇＧ画分を得た。この沈澱を水又は０．６％塩化ナト
リウム水溶液に溶解した溶液にＤＥＡＥ−セファデック
スを添加（５０ml溶液当り１ml）し、０〜４℃の条件
下、約１時間接触処理し、処理後遠心分離（７，０００
ｒｐｍ、約２０分間）して上清（ＩｇＧ溶液）を回収し
た。

【００５３】このＩｇＧ溶液１００mlを別途調製したベ
ンズアミジンセファロース（登録商標、ファルマシア社
製）カラム５mlおよびヒト血液型物質フォルミルセルロ
ファインカラム３mlを通過させヒト血液型抗体を吸着除
去した。この工程での吸着により血液型抗体は（１：３
２）から（１：２）に低下した。ＩｇＧ画分を生理的等
張液に対して透析後、除菌濾過し、凍結乾燥して静注用
免疫グロブリン製剤を得た。

【００５４】本製剤は、実質的にＩｇＧ単量体のみを含
み、ヒト血液型抗体量も充分少なく、抗補体価も１０〜
１５ＣＨ₅₀程度であった。また、溶解性も高く、静注用
免疫グロブリンとしての生基準にも合格した。

【００５５】実施例５コーン画分II＋III １kgに水１０Ｌを加え、さらに１０
０ml当たりソルビトールを５０ｇ添加し、pHを５．５に
調整した後、６０℃で１０時間加熱処理を行った。加熱
処理後、pHを５．５に調整した後、ＰＥＧ♯4000を終濃
度が４％になるように添加し、２℃で遠心分離を行っ
た。

【００５６】得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを
用いpH８．８とした後、ＰＥＧ♯4000を終濃度が１５％
になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱画分に
ＩｇＧ画分を得た。この沈澱を水性溶媒に溶解し、この
溶液にＤＥＡＥ−セファデックスを添加（５０ml溶液当
り１ml）し、０〜４℃の条件下、約１時間接触処理し、
処理後遠心分離（７，０００ｒｐｍ、約２０分間）して
上清（ＩｇＧ溶液）を回収した。

【００５７】このＩｇＧ溶液１００mlをヒト血液型物質
フォルミルセルロファインカラム３mlを通過させヒト血
液型抗体を吸着除去した。この工程での吸着により血液
型抗体は（１：３２）から（１：２）に低下した。Ｉｇ
Ｇ画分を生理的等張液に対して透析後、除菌濾過し、凍
結乾燥して静注用免疫グロブリン製剤を得た。

【００５８】本製剤は、実質的にＩｇＧ単量体のみを含
み、ヒト血液型抗体量も充分少なく、抗補体価も１０〜
１５ＣＨ₅₀程度であった。また、溶解性も高く、静注用
免疫グロブリンとしての生基準にも合格した。

【００５９】実施例６コーン画分II＋III １kgに水３Ｌを加え、さらに１００
ml当たりソルビトールを５０ｇ添加し、pHを５．５に調
整した後、６０℃で１０時間加熱処理を行った。加熱処
理後、pHを５．５に調整した後、ＰＥＧ♯4000を終濃度
が６％になるように添加し、２℃３時間抽出を行った
後、２℃で遠心分離を行った。

【００６０】得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを
用いpH８．８とした後、ＰＥＧ♯4000を終濃度が１２％
になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱画分に
ＩｇＧ画分を得た。この沈澱を蒸溜水に溶解し、このＩ
ｇＧ溶液１００mlを蒸溜水で平衡化したヒト血液型物質
フォルミルセルロファインカラム３mlを通過させヒト血
液型抗体を吸着除去した。この工程での吸着により血液
型抗体は（１：３２）から（１：２）に低下した。

【００６１】この沈澱に０．４％食塩水で平衡化したＤ
ＥＡＥ−セファデックスを添加（５０ml溶液当り２ml）
し、０〜４℃の条件下、約１時間接触処理し、処理後濾
過にてＤＥＡＥ−セファデックスを除き濾過液（ＩｇＧ
溶液）を回収した。ＩｇＧ画分に２％ソルビトール、
０．５％NaClおよび１％アルブミンを添加溶解し、pH
６．８とした後、除菌濾過し、凍結乾燥して静注用免疫
グロブリン製剤を得た。

【００６２】本製剤は、実質的にＩｇＧ単量体のみを含
み、ヒト血液型抗体量も充分少なく、抗補体価も１０〜
１５ＣＨ₅₀程度であった。また、溶解性も高く、静注用
免疫グロブリンとしての生基準にも合格した。

【００６３】実験例１グロブリン画分を出発原料とし、液状加熱のみを行った
場合（特開昭６１−１９４０３５号公報、特開昭６１−
１９１６２９号公報に記載の方法に準じる。）と、液状
加熱及びＰＥＧ分画を組合せて行った場合とで、調製さ
れたグロブリン製剤中のＩｇＧ単量体の含有率を比較し
た。

【００６４】（実験方法）出発原料であるグロブリン画
分は、コーンの第II画分を用いた。液状加熱の条件は６
０℃１０時間とした、安定化剤として、グロブリン溶液
（５％）１００ml当たりソルビトール５０ｇを用い、ｐ
Ｈは５〜５．５とした。ＰＥＧ分画は本発明の方法に準
じた。

【００６５】（実験結果）コーンの第II画分を液状加熱
した場合、ＩｇＧ単量体の含有率は、製剤中の免疫グロ
ブリン量に対して８６％であった。これに対して、コー
ンの第II画分を液状加熱した後、ＰＥＧ分画を行った場
合、モノマー含有率は製剤中の免疫グロブリン量に対し
て９７％であった。

【００６６】実験例２グロブリン画分を出発原料とし、乾燥加熱のみを行った
場合（特開昭６１−７８７３０号公報、特開昭６１−７
８７３１号公報に記載の方法に準じる。）と乾燥加熱及
びＰＥＧ分画を組合せて行った場合とで、調製されたグ
ロブリン製剤中のＩｇＧ単量体の含有率を比較した。

【００６７】（実験方法）出発原料であるグロブリン画
分は、コーンの第II画分を用いた。乾燥加熱の条件は６
０℃７２時間とした、安定化剤として、グロブリン５％
当たりアルブミン１％及びショ糖２％を用いた。ＰＥＧ
分画は本発明の方法に準じた。

【００６８】（実験結果）コーンの第II画分を乾燥加熱
した場合、ＩｇＧ単量体の含有率は、製剤中の免疫グロ
ブリン量に対して８０％であった。これに対して、コー
ンの第II画分ＰＥＧ分画した後に乾燥加熱を行った場合
では、ＩｇＧ単量体の含有率は製剤中の免疫グロブリン
量に対して９５％であった。

【００６９】実験例３処理前の免疫グロブリン溶液に０．０５Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７．１）のウイルス懸濁液を加え、均一に混和し
た後に、実施例６の方法に準じて、６０℃１０時間の液
状加熱処理またはＰＥＧ分画処理を行った。処理前後の
ウイルス感染性を測定し、その比を消失効率として算出
した。ウイルスの感染性はプラーク形成法にて測定し
た。エコーウイルスはＰＣＲ法にて測定した。結果を表
１及び２に示す。

【００７０】また、各々の処理工程におけるウイルス感
染性の消失効率の積が本発明における免疫グロブリン製
剤中のウイルス感染性の消失効率として表すことができ
る。結果を表３に示す。

【００７１】

【表１】

【００７２】

【表２】

【００７３】

【表３】

【００７４】実験例４６０℃１０時間の液状加熱のみ（特開昭６１−１９１６
２２号公報参照）あるいは６０℃７２時間の乾燥加熱の
み（特開昭６１−７８７３０号公報参照）を行った場合
と比較して、本発明におけるウイルス感染性の消失効率
を確認した。実験方法は実験例１に準じた。結果を表４
に示す。

【００７５】

【表４】

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】実質的にＩｇＧ単量体のみを含み、かつ
変性型の免疫グロブリンおよび感染性ウイルスを実質的
に含まない静注用免疫グロブリン製剤であり、免疫グロ
ブリンを含む画分を出発原料として、夾雑のおそれのあ
るウイルスが不活化するのに充分な条件下で加熱処理す
ることにより製造される静注用免疫グロブリン製剤。