JPS5930686B2 - 免疫制御作用を有するペプタイドの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫制御作用を有するペプタイドを主成分とす
る免疫制御剤の製造方法に関するものである。

血清中における免疫抑制作用物の存在の発見は１９５９
年、Ｂ、 Ｂ、カムリン（Ｂ、 Ｂ、Ｋａｍｒｉｎ）に
よってなされた［Ｂ、Ｂ、カムリン：プロシーデイング
ス オブ ザ ソサイエテイ フォア エキスペリメン
タル バイオロジイ アンド メデイシン（Ｐｒｏｃ
、 ｏｆ ｔｈｅ Ｓ’ｏｃ 、 ｆｏｒＥｘｐｅ
ｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
）第１００巻、第５８ページ、１９５９）。

この報文には、その有効成分がα２−グロブリンの豊富
なコーン画分に含まれること、ヒト血清の有効因子はラ
ットに対しても有効であり、種の区別を越えて作用する
ことが報告されている。

その後、このものは１９７３年にオクチン（０ｃｃｈｉ
ｎｏ ）らによってヒトの血清のコーン■−１から単離
され、グロブリン類との非共有結合が酸によって解かれ
た分子量約５０００のベプタイドであることが判明した
〔ザ ジャーナル オブ インムノロジイ（Ｔｈｅ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ）第１１
０巻第３号、１９７３年〕。

そのペプタイドはＩ ＲＡ （Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌ
ｏｔｏｒｙ α−ｇｌｏｂｕｌ ｉｎ ）とボストン大
学のクーパーバンド（Ｃｏｏｐｅｒｂａｎｄ ）らによ
って呼ばれている。

本明細書においてもこのペプタイドをＩＲＡと略称する
。

オクチンらの用いた方法は、コーンの■画分中に含まれ
るＩＲＡの４５％の活性量を含むコーンのｒｖ−ｉ画分
を出発原料とし、４０％の硫安飽和において沈殿する画
分中のＩＲＡをＤＥＡＥ−セルロースのような強塩基性
陰イオンセルロースに吸着させ、イオン強度０．３の酢
酸ナトリウム水溶液で溶出、次いで溶出液を酸性におい
て透析し、透析液にＩＲＡを集めるという方法である。

この方法によると、ＩＲＡの精製度はよいが、取得率は
低く、画分■からの回収率は０．４％にしか過ぎない。

本発明の目的は、工業的に回収率よくヒトの血液からＩ
ＲＡを製造する方法を提供するにある。

また他の目的はＩＲＡ注射薬の提供にある。

上記の目的は、ヒトの血液又はそのα２−グロブリン含
有画分の水溶液をｐＨ５，０以下において酸で処理し、
処理溶液を限外濾過することによって、分子量１３００
０より小さなペプチド類を濾液中に集め、濾液に含まれ
る不純物を陽イオン交換体に吸着させて除去し、次いで
濾液中のＩＲＡを無機吸着体に吸着させ、これを溶出す
ることからなる注射することのできるＩＲＡの本発明製
造方法によって達成される。

本発明方法に用いられる原料のヒトの血液とは単に通常
の血液のみならず、溶血した血液、例えば胎盤血をも含
むものである。

血液はそのまま用いることもできるが、好ましくは、α
２−グロブリンを含む両分をあらかじめ採取して、これ
を用いる。

このようにして、上記血液のα２−グロブリンを濃縮含
有する血漿画分であって、しかもアルブミンなどの価値
のある血清成分を採取する際に通常、廃棄されるコーン
の■画分、更に好ましくはコーンのＩＶ−１画分は、本
発明方法の原料として好適である。

血液そのものを用いる場合は、これを希釈して用いるの
が好ましい。

例えば、胎盤血を水又は食塩水で抽出して得られる血液
抽出物はそのまま本発明に用いることができる。

原料となる血液又はα２−グロブリン含有画分の水溶液
は、ｐＨ５，０以下において酸で処理される。

用いられる酸は、塩酸、リン酸、硫酸などの鉱酸又は酢
酸、ギ酸などの有機酸であって、原料水溶液を、これら
の酸又は緩衝剤の添加によってｐＨ５，０以下、好まし
くはｐＨ１，５〜５．０、更に好ましくは、２．０〜３
．５に保つ。

処理温度は室温で十分であり、処理時間は３０分ないし
２４時間である。

上記の処理によって、原料水溶液中のＩＲＡはグロブリ
ンとの非共有結合が断たれ遊離の状態となる。

遊離したＩＲＡを分離するために分子量が１３０００よ
り小さい両分を限外濾過によって、選択的に濾過して取
り出す。

このための好ましい方法は、適当な中空（ホロー）ファ
イバーを用いることであり、これによって操作は迅速、
かつ効果的となる。

すなわち、米国、アミコン社製ダイアファイバー■（Ｄ
ｉａｆｉｂｅｒ Ｘ分子量、１００００より小のものの
濾適用）、旭化成社製ウルトラフィルトレージョン（ｇ
＋（分子量１３０００より小のものの濾適用）などで作
られたホローファイバーが用いられる。

この限界濾過によって原料中のタンパク質が除去される
。

濾液として得られたタンパク質を除いた溶液を陽イオン
交換体、例えばＣＭ−セルロース（カルボキシメチルセ
ルロース、生化学工業株式会社販売）、ＣＭ−セファテ
ックス（カルボキシメチル交す結合デキストリン、生化
学工業株式会社販売）、及びＰ−セルロース（ホスホセ
ルロース、生化学工業株式会社販売）のような酸性基含
有多糖質イオン交換体と接触させ、含まれる抗原性の高
い夾雑物質を吸着させて除去する。

この工程で血圧降下性物質も除去され、以後の新たな生
成も最小となる。

この工程の処理条件としては、ｐＨ２〜７、好ましくは
ｐＨ４〜５．５、塩濃度０．１〜０．５Ｍの緩衝液で平
衡させたイオン交換体を用いることが好ましい。

この夾雑物を除いたＩＲＡ溶液を無機吸着体と接触させ
るとＩＲＡは吸着体に吸着される。

無機吸着体によるＩＲＡの収得は発明者らが全く新規に
見いだしたものであり、オクチンらの陰イオン交換体の
使用に比して極めて安価であり、更に効果的であって、
処理が簡単であり、工業的製法として極めて有効な方法
である。

用いられる無機吸着体としては、シリカゲル、ベントナ
イト、酸性白土及び活性炭などが挙げられ、このうち、
無機吸着体の使用量は限定的ではないが、通常ＩＲＡ溶
液１００容量当り、１〜５容量の割合に用いられる。

その時、溶液のｐＨを５．５〜９．０に、好ましくはｐ
Ｈ７，０〜８．０に調整することによって良効果が得ら
れる。

ＩＲＡ溶液と吸着体との混合物を室温で、３０分間かき
まぜることによって、ＩＲＡの約７５〜９５％は吸着体
に吸着される。

夾雑物は水溶液に残り、ＩＲＡは、それを吸着した無機
吸着体から溶出させることによって回収する。

この無機吸着体からのＩＲＡの溶出は、酸性で行う。

溶出液の好ましいｐＨは２〜４であり、その調節には、
塩酸、リン酸、硫酸及びギ酸、酢酸などの無機又は有機
酸が用いられる。

溶出されたＩＲＡ溶液を、要すれば中和した後、通常の
方法に従って減圧乾燥するか、又は凍結乾燥して、粉末
状のＩＲＡを得る。

本方法による場合、コーンの画分■からの回収率は約１
．２％である。

またその精製は、約１日間で行うことができ、従来の３
〜４日間の工程に比して、極めて効率的である。

この得られたＩＲＡの活性は、約１００〜１０００γ（
窒素として）で、ＰＨＡ法〔クーパーバンドＳ、Ｒ，（
Ｃｏｏｐｅｒｂａｎｄ、 Ｓ、Ｒ，）う（ｆ ジャー
ナル オブ インムノロジイ、第１０９巻第１号、第１
５４ページ、１９７２年）〕によって７０〜１００％の
免疫抑制作用を示す。

この結果は、従来提供されているＩＲＡと同程度の活性
を示すものである。

このＩＲＡの性状は５６℃、３０分間の熱処理に対して
安定であり、セルロースアセテート膜電気泳動ではβ−
グロブリン領域にバンドが認められる。

本物質は、セファデックスゲル濾過法による分子量が約
５０００のペプチドである。

このようにして製造されたＩＲＡは原料が血漿、胎盤面
などの人体由来のものを出発物質としているので、抗原
性の心配なく、極めて安全な医薬ということができる。

また補体の存在下で、ヒトのリンパ細胞に対して細胞毒
性をほとんど、あるいは全く示さず、またＥ、ロゼツト
試験〔メンシイアンら（Ｍｅｎｚｏｉａｎ ｅｔ
ａｌ ）ザ ジャーナルオブ インムノロジイ第１１３
巻第２６６ページ（１９７４））では免疫細胞の凝集を
阻止する。

更に純度のよいＩＲＡを望む場合は、無機吸着体からの
溶出液を有機溶媒、例えばクロロホルムなどの塩素化炭
化水素、ジエチルエーテルなどのエーテル類によってＩ
ＲＡを抽出、精製することができる。

この方法によって純度は著しく向上する。

この抽出処理は、無機吸着体からＩＲＡを溶出させる工
程と組み合せることもできる。

すなわち、溶出を上記有機溶媒と溶出液とを混合して行
うことができる。

このような操作においては、水と混合する溶媒、例えば
アセトンやアルコールを混合すべき溶媒として用いるこ
ともできる。

また本発明のＩＲＡは、血圧降下性物質をほとんど含ま
ず、注射に際して安全である。

肝炎ウィルスは通常はほとんどその活性は認められない
が、原料によってはこれの混入は考えられる。

そこで、本発明によって、肝炎ウィルス （ＨＢＶ）の不活化処理を施したＩＲＡをも提供するも
のである。

本発明によって製造したＩＲＡはその水溶液において前
述のようにかなり熱に対して安定であるとはいえ、血漿
タンパク成分のＨＢＶ不活化処理として知られる６０℃
の温度において１０時間の加熱に対してはその活性は減
少する。

本発明者らはＩＲＡ水溶液が中性アミノ酸、単糖類、三
糖類又は糖アルコールなどの存在において熱に対して安
定化され、肝炎ウィルスの不活化に要する、例えば６０
°Ｃにおける１０時間の加熱に対しても、その活性を著
しく失うことがないことを見い出した。

本発明方法における諸工程において、上記の熱安定化加
熱処理は製造中のいかなる工程におけるＩＲＡ水溶液に
も適用できる。

しかしながら、この処理はＩＲＡ水溶液を酸処理する前
の工程に組み入れることが好ましい。

安定剤の例は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン
、イソロイシンなどの中性アミノ酸（モノアミノモノカ
ルボン酸）グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｊ
ＩＪなどの単糖類、ショ糖、麦芽糖、乳糖などの三糖類
、及びマンニット、ソルビット、キシリットなどの糖ア
ルコール類である。

用いられる安定剤の量は水溶液に対して５％（ｗ／ｖ）
以上であるが、好ましくは１５〜２０％である。

肝炎ウィルス不活化のための加熱は、常法によって行わ
れ、最も一般的な６０℃、１０時間の加熱処理において
適量の安定剤の添加によってＩＲＡの活性はなお９５％
保持されている。

ＨＢＶの不活化処理を行った水溶液中に残存する安定剤
はＩＲＡを前記の吸着剤に吸着させて分離するか、又は
透析によって除去することができる。

かくして、本発明によってＨＢＶの不活化処理が施され
血圧降下性物質の含量を最小とした注射することのでき
るヒトの血液由来のＩＲＡ製剤が提供される。

この製剤は移殖性の拒絶反応を抑制することから移殖手
術に際して、拒絶反応の予防、治療及び手術後の良状態
維持に有効に用いることができ、また細胞性免疫疾患の
治療にも用いられる。

このＩＲＡを医薬として治療に用いる時の最も好ましい
形態としては注射薬であり、静脈注射することが最適で
ある。

その投与量としては、１日、５〜４０〜／ｋｇの投与で
十分と考えられる。

ラットの皮膚移殖実験では１日、２０ 即／ｋＰのＩＲ
Ａを静脈注射で２０日連続投与した結果、２０日日の観
察で、８５％の生着が認められた。

更に、このＩＲＡの急性毒性実験をマウスを用いて５０
０■／ｋｇ、１０００〜／ｋｙを投与したが、４８時間
後の観察で死亡例は認められなかった。

実施例 １ コーンのアルコール分画法で得られるＰＨＡ法で、４
ｍｇ／ｍｌで７０％の阻害活性を有するコーンのＩＶ−
１画分のペースト１ｋｇを冷蒸留水４１！に懸濁し、４
℃で２時間かきまぜる。

遠心分離を行って不溶物を除き、得られた上清に氷酢酸
を加えてｐＨ３，５に調整し、１時間、緩やかにかきま
ぜる。

この液をホローファイバー（無化成社製）による濾過に
かけ、分子量１３０００以下の低分子量部分を集める。

この低分子量部分にＣＭ〜セルロース（生化学工業社製
）を１容量％の割合に加え、３０分間かきまぜて、活性
のない夾雑物質を吸着させ、ＩＲＡ活性部分を濾液とし
て得る。

この濾液に活性炭を４容量％の割合に加え、ｐＨを８．
０に調整して活性部分を活性炭に吸着させる。

活性分の溶出には１Ｍ酢酸を用いる。

溶出液を凍結乾燥して精製ＩＲＡ６Ｐを得た。

セルロースアセテート膜電気泳動では、β−グロブリン
領域にバンドが認められ、その分子量は約５０００であ
った。

実施例 ２ 実施例１と同様に操作して得られたＩＲＡを吸着した活
性炭を同容量のクロロホルムと混合し、かきまぜた後ク
ロロホルム層を分取し、これを減圧乾燥法で、クロロホ
ルムを揮散させ、精製ＩＲＡ５．１’を得た。

このＩ ＲＡ ２０１７ｍ１ｌはＰＨＡ法で、６０％、
５００７７ｍｌでほぼ１００％の阻害活性を示した。

実施例 ３ ヒトの胎盤１００個を細断し、０．１Ｍの塩化ナトリウ
ム溶液１０７に懸濁し、少時かきまぜる。

遠心分離を行い、澄明な抽出液約２０１を得る。

抽出液を集め、２Ｎ塩酸を用いてｐＨ２，０に調整し、
室温にて２時間、緩やかにかきまぜる。

ホローファイバー（米国アミコン社製）を用いて分子量
約１ｏｏｏｏより小さい低分子量部分を集める３得られ
た水溶液にＣＭ−セファテックスを１容量％の割合に加
え、３０分間かきまぜ、次いで濾過してＩＲＡ水溶液を
得る。

この水溶液にシリカゲル５容量％を添加しＩＮ水酸化ナ
トリウムでｐＨ９，０に調整する。

約３０分間かきまぜた後、東洋濾紙層２を用いて吸着に
用いたシリカゲルを濾し集める。

０．１Ｍギ酸で溶出後、減圧乾燥すると精製されたＩＲ
Ａ９００ｍＩ？を得た。

このＩＲＡ５００γ／ｍｌはＰＨＡ法で８５％の阻害活
性を示した。

電気泳動的、分子量的分析によってＩＲＡと確認された
。

実施例 ４ 実施例３と同様に操作して得られたＩＲＡを吸着させた
シリカゲルを、約１７２容量のアセトンと混合し、かき
まぜ、ＩＲＡを溶出させ、溶出液を減圧乾燥して、精製
ＩＲＡ７５０■を得た。

こ（７）ＩＲＡは２０１ ／ｍｌで、ＰＨＡ法で約６５
％、５００γ／ｍｌでほぼ完全な阻害活性を示した。

実施例 ５ 実施例１と同じ方法で得られたコーンのＩＶ−１画分ペ
ーストの水抽出液にギ酸を加えて、ｐＨ４，５に調整し
、２時間放置した。

実施例１において用いたのと同じホローファイバー（旭
化成社製）による濾過にかげ低分子量部分（分子量１３
０００以下）を集めＰ−セルロース（生化学工業社製）
を２容量％加え、更にＩＮ水酸化ナトリウムでｐＨ７，
０とした。

夾雑物を吸着したＰ−セルロースを濾別し、濾液に酸性
白土３重量％加えて、ＩＲＡを酸性白土へ吸着させた。

０．５Ｎ酢酸で溶出後戻にクロロホルムで抽出した濃厚
ＩＲＡ溶液を減圧乾燥してＩＲＡ約４．７１を得た。

このものの免疫抑制作用をＰＨＡ法で測定し、５００γ
／ｍｌで８５％の阻害活性を示した。

電気泳動的、分子量的分析によってＩＲＡと確認された
。

実施例 ６ ヒトの胎盤８００個を用い、これを細かく粉砕し、０、
ＩＭの塩化ナトリウム溶液１００１を加え、少時かきま
ぜる。

抽出された胎盤面を遠心分離にかけ澄明な抽出液２００
１を得た。

この胎盤抽出液から硫安５０％飽和によって沈殿する全
タンパクを得た。

この沈殿１ｋｇ当り、４〜６１の蒸留水を加えて溶解し
、この溶解液に少量の塩酸を加えて、ｐＨ５，０に調整
し、室温にて２時間、緩やかにかきまぜた。

ホローファイバー（旭化成社製）を用いて分子量約１３
０００より小さい低分子量部分を集めた。

この集めた溶液をＣＭ−セルロースのｐＨ５，０，０，
１５Ｍのリン酸緩衝液で平衡化したカラムを用いて展開
した。

十分量の水を流して、溶出液を集めた。

この溶出液に酸性白土を４重量％加えて、ＩＲＡを吸着
させた。

この吸着させた酸土白土を取り出し、実施例５に準じて
０．ＩＮ塩酸で溶出させ、減圧乾燥して、精製ＩＲＡ８
グを得た。

コ（Ｄ Ｉ ＲＡ ５００ ｒ／ｍｌはＰＨＡ法で９０
％の阻害活性を示した。

電気泳動的、分子量的分析によってＩＲＡと確認された
。

実施例 ７ コーンのアルコール分画法で得られるＰＨＡ法で４ｍ９
／ｍｅで、７０％の阻害活性を有するｒｖ−ｉ画分ペー
スト１ｋｇを冷蒸留水４１に懸濁し、４℃で、２時間か
きまぜた。

遠心分離して不溶物を除いて、得られた上清に、グリシ
ンを１５％（Ｗ／Ｖ）の濃度に溶解した溶液を６０℃で
、１０時間加熱した。

加熱後、蒸留水で透析し、生じた沈殿を遠心分離して除
去し、澄明な溶液を得た。

その溶液に氷酢酸を加えてｐＨ３，５に調整した。

この液をホローファイバー（旭化成社製）による濾過に
かけ、分子量１３０００より小さい低分子量部分を集め
た。

この低分子量部分にＣＭ−セルロース（生化学工業社製
）を１重量％の割合に加え、かきまぜて活性のない夾雑
物質を吸着させ、ＩＲＡ活性部分を濾液中に得た。

この濾液に活性炭を４重量％の割合に加え、ｐＨを３８
％アンモニア液によって８．０に調整して活性部分を活
性炭に吸着させた。

溶出には、０．ＩＮ塩酸を用いた。得られた溶出液は減
圧乾燥して、精製ＩＲＡ１０．ｌ’を得た。

このＩ ＲＡ ５００７ ／ｍｌはＰＨＡ法で７４％の
阻害活性を示した。

セルロースアセテート膜電気泳動では、β−グロブリン
領域にバンドが認められ、その分子量は約５０００であ
り、ＩＲＡと確認された。

又、ＨＢＶ活性の測定をオウスリア−１２５（Ａｕ５ｒ
ｉａ −１２５１ｇ１） （７ホツ）社製）ニヨルラジ
オインムノアツセイ法（特開昭４８−４９９１９号）で
行った結果は陰性であった。

血圧降下性物質の測定を、成犬を用い、薬液投与前の平
均動脈血圧に対する降下率によって検定の結果、降下率
は約７．５％で陰性と判断された。

実施例 ８ 実施例７と同様にして得られた溶出液に約１／２容量の
エーテルを加え、十分にかきまぜた後、エーテル層を分
取し、減圧乾燥して、精製ＩＲＡ約６１を得た。

この■ＲＡ２０γ／ｍｌはＰＨＡ法で約６５％、５００
γ／ｍｌでほぼ完全な阻害活性を示した。

電気泳動的、分子量分析によってＩＲＡと確認され、又
ＨＢＶ及び血圧降下性物質は陰性であった。

実施例 ９ ヒトの胎盤１００個を細断し、０．１Ｍの塩化ナトリウ
ム溶液１０１に懸濁し、少時かきまぜる。

遠心分離によって澄明な抽出液約２０１を得た。

抽出液を集め、マンニットを約１５％ｗ／ｖの濃度に添
加して、６０℃、１０時間の加熱処理した。

加熱後の溶液を生理食塩液で透析し、生じた沈殿を遠心
分離して除去し、澄明な溶液を得た。

その溶液を２Ｎ塩酸を用いてｐＨ２，０に調整し、室温
にて２時間、緩やかにかきまぜた。

ホローファイバー（アミコン社製）を用いて約１０００
０以下の低分子量部分を集め、実施例１に準じてＣＭ−
セファデックス処理を行った。

次にシリカゲル５重量％を投与し、１Ｎ水酸化ナトリウ
ムでｐＨ９，０に調整した。

約３０分間かきまぜた後、東洋濾紙／ｆ６２を用いて吸
着に用いたシリカゲルを濾葉した。

シリカゲルと同容量のジエチルエーテルとメタノールと
の等景況合液で溶出後、除菌濾過し、濾液を減圧乾燥し
て精製ＩＲＡ９００■を得た。

この■ＲＡ５００γ／ｍｌはＰＨＡ法で１００％の阻害
活性を示した。

電気泳動的、分子量的分析によってＩＲＡと確認された
。

又、ＨＢＶ活性は陰性であり、血圧降下性物質の存在も
陰性であった。

試験例 １ （薬理効果の確認及び安全性） 実施例８及び９で得られた、それぞれ血漿及び胎盤由来
のＩＲＡを用いて動脈試験を行った。

マウス１５匹を用い、その内５例は胎盤血性ＩＲＡ、他
の５例には血漿由来ＩＲＡを、それぞれ２０ ｒｎ９／
ｋｇ／日、２０日間連続静脈投与し、ＩＲＡの皮膚移殖
実験に対する効果をみた。

ＩＲＡは実施例８及び９で得たＩＲＡ粉末をそのまま、
生理食塩水で溶解し、１０重量％ＩＲＡ水溶液を作った
。

移殖実験開始２４時間前にあらかじめ２０■／ｋｇを投
与し、その後１日１回、２０日間投与した。

２０日後の表面観察では、両ＩＲＡ投与群はコントロー
ル００％に対して約８５〜１００％の生着率を示した。

このことは、本ＩＲＡ注射液の免疫抑制剤としての薬理
効果の有効性を示唆するものである。

試験例 ２ （急性毒性） 実施例８及び９で得られたＩＲＡを用いて急性毒性試験
を行った。

マウス２０匹を用いて、１０例に５００■／ｋＰ及び１
０例に１０００〜／に９のＩＲＡをそれぞれ溶かした液
を、静脈投与して４８時間の観察を行ったが、両例共死
亡例は認められなかった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ヒト血液あるいはそのα２−グロブリン含有画分を
   ｐＨ１，５〜５．０で酸処理し、処理液を限外濾過して
   、分子量１３０００以下の両分を濾液中に集め、濾液中
   の不純物を陽イオン交換体上吸着させて除去し、得られ
   る溶液を無機吸着体で処理し、無機吸着体から免疫制御
   α−グロブリンを溶出更に収得することを特徴とする注
   射することのできる免疫抑制α−グロブリン製剤の製造
   方法。 ２ 人血液が血漿である特許請求の範囲第１項による方
   法。 ３ 血漿がコーンの画分■である特許請求の範囲第１項
   による方法。 ４ ヒト血液が胎盤面である特許請求の範囲第１項によ
   る方法。 ５ 酸処理をｐＨ１，５〜５．０で行う特許請求の範囲
   第１項による方法。 ６ 酸処理をｐＨ２，０〜３．５で行う特許請求の範囲
   第１項による方法。 ７ 酸処理を室温で行う特許請求の範囲第１項による方
   法。 ８ 酸処理を３０分〜２４時間行う特許請求の範囲第１
   項による方法。 ９ 酸が有機酸である特許請求の範囲第１項による方法
   。 １０ 有機酸がギ酸又は酢酸である特許請求の範囲第９
   項による方法。 １１ 酸が無機酸である特許請求の範囲第１項による
   方法。 １２ 無機酸が塩酸、リン酸又は硫酸である特許請求
   の範囲第１１項による方法。 １３限外濾過をホローファイバーによって行う特許請求
   の範囲第１項による方法。 １４ 陽イオン交換体への吸着をｐＨ２〜７で行わせ
   る特許請求の範囲第１項による方法。 １５ 吸着を、ｐＨ４〜５．５、塩濃度約０．５Ｍの
   緩衝液で行う特許請求の範囲第１４項による方法。 １６ 陽イオン交換体が、弱酸性基含有イオン交換多
   糖類である特許請求の範囲第１項による方法。 １７ 弱酸性基含有イオン交換多糖類が、カルボキシ
   メチルセルロース、カルボキシメチルクロスリンクドデ
   キストリン、ホスホセルロースから選ばれる特許請求の
   範囲第１６項による方法。 １８ 無機吸着体への吸着を、ｐＨ５，５〜９．０で
   行わせる特許請求の範囲第１項による方法。 １９ 吸着をｐＨ７，０〜８．０で行わせる特許請求
   の範囲第１８項による方法。 ２０ 無機吸着体が、シリカゲル、ベントナイト、酸
   性白土又は活性炭である特許請求の範囲第１項による方
   法。 ２１ 無機吸着体が、活性炭である特許請求の範囲第
   ２０項による方法。 ２２ 無機吸着体からのＩＲＡの溶出をｐＨ２〜４で
   行う特許請求の範囲第１項による方法。 ２３ ｐＨを、塩酸、リン酸、硫酸、ギ酸又は酢酸で
   調整する特許請求の範囲第２２項による方法。 ２４ 無機吸着体からの免疫抑制α−グロブリンの溶
   出又は、無機吸着体から溶出された免疫抑制α−グロブ
   リンの収得を、ハロゲン化炭化水素、エーテル類又はア
   セトンを使用して行う特許請求の範囲第１項による方法
   。 ３ 溶出液を、ハロゲン化炭化水素又はエーテル類で抽
   出処理する特許請求の範囲第１項による方法。 ２６ ハロゲン化炭化水素が、クロロホルムである特
   許請求の範囲第２４項又は第２５項による方法。 ２７ エーテルが、ジエチルエーテルである特許請求
   の範囲第２４項による方法。