NO146818B - Fremgangsmaate for aa danne kanaler med hoey fluidumledningsevne i en formasjon rundt et borehull - Google Patents
Fremgangsmaate for aa danne kanaler med hoey fluidumledningsevne i en formasjon rundt et borehull Download PDFInfo
- Publication number
- NO146818B NO146818B NO79791190A NO791190A NO146818B NO 146818 B NO146818 B NO 146818B NO 79791190 A NO79791190 A NO 79791190A NO 791190 A NO791190 A NO 791190A NO 146818 B NO146818 B NO 146818B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- solution
- molecular weight
- aqueous
- water
- column
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 title 1
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 59
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 49
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 26
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 16
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 claims description 14
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 14
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 11
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 10
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 8
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- -1 alkali metal salt Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 claims 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 76
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 29
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 21
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 16
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 16
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 16
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 14
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 6
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 6
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 235000021336 beef liver Nutrition 0.000 description 3
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YCPXWRQRBFJBPZ-UHFFFAOYSA-N 5-sulfosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C1O YCPXWRQRBFJBPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 2
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Substances [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-2-(hydroxymethyl)-6-[[(2r,3s,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-3-[(2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]methoxy]oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O1 OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101001106523 Homo sapiens Regulator of G-protein signaling 1 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical group [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100021269 Regulator of G-protein signaling 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 206010044541 Traumatic shock Diseases 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L Zinc chloride Inorganic materials [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229910001508 alkali metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008045 alkali metal halides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N anthrone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- ITHZDDVSAWDQPZ-UHFFFAOYSA-L barium acetate Chemical compound [Ba+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O ITHZDDVSAWDQPZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 description 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 1
- LRMHFDNWKCSEQU-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;phenol Chemical compound CCOCC.OC1=CC=CC=C1 LRMHFDNWKCSEQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043351 ethyl-p-hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 150000008273 hexosamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229940046892 lead acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical group COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- SLTJHCABUNGXQE-UHFFFAOYSA-M sodium;carbon dioxide;hydrogen carbonate Chemical compound [Na+].O=C=O.OC([O-])=O SLTJHCABUNGXQE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L tungstic acid Chemical compound O[W](O)(=O)=O CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K8/00—Compositions for drilling of boreholes or wells; Compositions for treating boreholes or wells, e.g. for completion or for remedial operations
- C09K8/60—Compositions for stimulating production by acting on the underground formation
- C09K8/62—Compositions for forming crevices or fractures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K8/00—Compositions for drilling of boreholes or wells; Compositions for treating boreholes or wells, e.g. for completion or for remedial operations
- C09K8/60—Compositions for stimulating production by acting on the underground formation
- C09K8/62—Compositions for forming crevices or fractures
- C09K8/72—Eroding chemicals, e.g. acids
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E21—EARTH OR ROCK DRILLING; MINING
- E21B—EARTH OR ROCK DRILLING; OBTAINING OIL, GAS, WATER, SOLUBLE OR MELTABLE MATERIALS OR A SLURRY OF MINERALS FROM WELLS
- E21B43/00—Methods or apparatus for obtaining oil, gas, water, soluble or meltable materials or a slurry of minerals from wells
- E21B43/25—Methods for stimulating production
- E21B43/26—Methods for stimulating production by forming crevices or fractures
- E21B43/267—Methods for stimulating production by forming crevices or fractures reinforcing fractures by propping
-
- E—FIXED CONSTRUCTIONS
- E21—EARTH OR ROCK DRILLING; MINING
- E21B—EARTH OR ROCK DRILLING; OBTAINING OIL, GAS, WATER, SOLUBLE OR MELTABLE MATERIALS OR A SLURRY OF MINERALS FROM WELLS
- E21B43/00—Methods or apparatus for obtaining oil, gas, water, soluble or meltable materials or a slurry of minerals from wells
- E21B43/25—Methods for stimulating production
- E21B43/26—Methods for stimulating production by forming crevices or fractures
- E21B43/27—Methods for stimulating production by forming crevices or fractures by use of eroding chemicals, e.g. acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mining & Mineral Resources (AREA)
- General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Geology (AREA)
- Fluid Mechanics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Geochemistry & Mineralogy (AREA)
- Consolidation Of Soil By Introduction Of Solidifying Substances Into Soil (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Drilling Tools (AREA)
- Earth Drilling (AREA)
Description
Fremgangsmåte for fremstilling av et polypeptid-materiale med ikke-spesifikk immunitetsvirkning.
Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av et nytt produkt til anvendelse i medisinen for å fremkalle ikke-spisfikk immunitet. •Det er funnet at et produkt kan iso-leres fra ekstrakter av dyreorganer som er i besittelse av den egenskap at de kan fremkalle ikke-spesifikk immunitet, og da de er i alt vesentlig pyrogenfrie og ikke-antigene, kan de administreres f. eks. ved injisering uten merkbar vevreaksjon. Ut-trykket ikke- spesifikk immunitet er anvendt i sin generelt antatte betydning, for å omfatte ikke bare motstandsevne mot både bakterie- og virusinfeksjon, men og-så immunitet mot sjokk, f. eks. kuldesjokk, traumatisk sjokk, endotoksisk sjokk osv. Det er også funnet at produktet er i besittelse av antimitotiske egenskaper mot visse celler, f. eks. Hela- og Chang-celler.
Kjemisk er produktet et polypeptid eller blanding av polypeptider, dette uttrykk anvendes i sin omfattende betydning for å definere stoffer som har basisk polypep-tidstruktur uansett om det også er til stede andre grupper som f. eks. carbohydrater. Ved hydrolyse gir det en rekke aminosyrer og stoffer som gir sakaridreaksjoner. De aminosyrer som kan påvises er glutaminsyre og asparginsyre, arginin, lysin, alanin, serin, valin, leucin, iso-leucin, glycin, fe-nylalanin, histidin, prolin, tyrosin og thre-onin. Produktet gir en positiv biuretreak-sjon, en positiv anthronreaksjon, noe som tyder på at det er til stede hexoser, og en positiv indikasjon på hexosaminer ved en modifisert Elson-Morgan-reaksjon (L. Svennerholm, Uppsala Låkare-fbrenings Forhandlingar, 61, (1956), 287: reagent p-dimethylamino-benzaldehyde in acetyl acetone).
Produktet gir vanligvis en sur reaksjon, med isoelektrisk punkt i området pH 4—5; aminosyrene glutaminsyre og asparginsyre er til stede i molekylet i betrakte-lige mengder og er sannsynligvis årsaken til denne surhet. Nøytrale, aktive polypeptider kan også være til stede.
Molekylvekten av den aktive faktor er minst 1000, og det foretrekkes produkter i hvilke det i alt vesentlig ikke er noe materiale igjen fra dyreorgan-ekstraktet, som har en molekylvekt på mindre enn 8000; generelt inneholder de foretrukne produkter ikke materiale med molekylvekt mindre enn 10 000.
Produktet er i alt vesentlig uten inn-hold av fosfor, noe som tyder på at det nesten ikke er til stede nucleinsyrefor-urensninger, og inneholder 13—15 pst. ni-trogen. Det utfelles ved hjelp av fosforwolframsyre, men ikke ved hjelp av sulfosalicylsyre, og er oppløselig i vann, syrer og baser, f. eks. flytende fenol, 10 pst. natriumhydroxyd osv. oppløselig i 70 pst. vandig ethanol, svakt oppløselig i 96 pst. ethanol og uoppløselig i ether, kloroform og petrolether.
Produktet er varmestabilt opp til minst 100° C, og det er kjent at det har mot-stått oppvarmning ved 100° C i vann i y2 time. I oppløsning i vandige medier oppviser produktet en grønnaktig fluorescens som varierer fra gul-grønn til blå-grønn alt etter renheten.
Som angitt ovenfor er produktet i alt vesentlig ikke-pyrogent og oppviser i alt vesentlig ingen antigen aktivitet. Ved injisering frembringer det immunitet mot koppevirus, E. coli og betraktelig antall andre bakterier og viruser, og er også effektivt til å frembringe motstandsevne mot vanlig forkjølelsesvirus, f. eks. ved at det sprøytes direkte inn i neseslimhinnen.
Det nye produkt fremstilt i henhold til oppfinnelsen kan administreres i for-bindelse med ett eller flere farmasøytiske bæremidler. Arten av det bæremiddel eller de bæremidler som anvendes, vil være av-hengig av den type preparat man ønsker. Preparatene kan hensiktmessig være i form av doseenheter som hver fordelaktig inneholder 5 til 20 mg av det aktive polypetid. Generelt kan preparatet fremstilles for parenteral administrering, i hvilket tilfelle bæremidlet må være en parenteral akseptabel væske, så som sterilt, pyrogen-fritt vann, eller for oraladministrering, hvor ibæremidlene kan omfatte vann, sam-men med ett eller flere smaksstoffer, pre-serveringsmidler, dispergeringsmidler, far-gemidler, søtstoffer og lignende. Preparatene kan også være i form av faste prepa-rater, f. eks. tabletter som inneholder den aktive faktor. Ved en foretrukken fremgangsmåte lyofiliseres den oppløsning man får til slutt, oppløses på nytt i sterilt, pyro-genfritt vann, og steriliseres ved hjelp av gjennomføring gjennom egnede, sintrede glassfiltre.
Den aktive faktor kan også fremstilles for topisk administrering, f. eks. fra vandig oppløsning som en dusj (spray), som også kan inneholde et preserveringsmiddel så som ethanol eller methyl- eller ethyl-p-hydroxybenzoat.
Dusj oppløsningen kan f. eks. inneholde 0,01 til 10 vektprosent, fortrinnsvis 0,05 til 0,5 vektprosent av det aktive materiale.
Det aktive polypeptid-materiale kan fremstilles i henhold til oppfinnelsen fra vandige ekstrakter av dyreorganer ved fraksjoneringsprosesser, idet man benytter seg av foreliggende oppdagelse at materialet er av høy molekylvekt.
I henhold til foreliggende oppfinnelse tilveiebringes således en fremgangsmåte til fremstilling av polypeptid-materiale som har en ikke-spesifikk immunitetsvirkning, bestående i at et vandig dyreorganekstrakt utsettes for fraksjonering for å atskille materiale med høy molekylvekt fra materiale med lav molekylvekt, og derved utvinnes en polypetid-fraksjon som har en molekylvekt på minst 1000.
Det aktive produkte i henhold til oppfinnelsen kan utvinnes fra blod eller for-skjellige dyreorganer, foretrukne eksempler omfatter lever, nyre og milt.
Det vandige organekstrakt som anvendes for foreliggende oppfinnelse, kan f. eks. bare være et vandig ekstrakt av dette or-gan, f. eks. frisk okselever, men det er hensiktsmessig å utsette ekstraktet for ytterligere behandling, hovedsakelig for å fjerne uønsket protein. Oppvarmning av ekstraktet til 90—100° C må foretas, og således f. eks. når det gjelder lever, kan leve-ren finhakkes, og deretter oppvarmes med vann under omrøring ved 100° C og væsken kan atskilles og konsentreres for å få utfelt fast materiale som inneholder den aktive faktor. Den således erholdte pasta kan også eventuelt ekstraheres med alkohol og oppløsningsmidlet kan fjernes, f.
eks. ved destillasjon i vakuum. Det er også
mulig å utfelle uønsket materiale med alkohol, eller å ekstrahere den vandige opp-løsning med fenol, fulgt av utvinning av det aktive materiale f. eks. ved ether-ut-felning.
Vandige ekstrakter av andre faste or-ganer kan fremstilles på lignende måte.
Når det gjelder blod, kan dette oppvarmes for å koagulere det tilstedeværen-de protein, og filtreres. Et selektivt protein-fellemiddel, f. eks. sulfosalicylsyre, kan tilsettes til filtratet for å fjerne gjenvær-ende protein, og blandingen filtreres på nytt. Den resulterende væske er egnet til anvendelse ved foreliggende fremgangsmåte.
Det er også mulig å utsette organ-ekstraktet for ytterligere for-behandling ved å utfelle det aktive materiale ved pH 5 til 10 med et vannoppløselig, flerverdig metallsalt i nærvær av en alkohol som er blandbar med vann. Det vandige organekstrakt, eventuelt etter de ovenfor an-gitte rensningstrinn, kan således behandles med calcium-, barium- eller blyacetat, sink- eller magnesiumklorid osv. i nærvær av ethanol for å utfelle det aktive polypeptid, og metallionene kan deretter fjernes, f. eks. ved å utskille bunnfallet så som ved filtrering, sentrifugering osv., gjen-oppløse dette i vann og føre oppløsningen c gjennom en sur ionebytter-harpiks. Alter- i nativt kan et uoppløselig salt av metallet
utfelles, f. eks. barium kan utfelles som t bariumsulfat med svovelsyre. r
Etter fjerning av metallionene kan be- r handlingen med det flerverdige metallsalt k og alkohol hensiktmessig etterfølges av be- 1 handling med en basisk ionebytter-harpiks for å adsorbere det aktive polypeptid. Ut- p trekning kan utføres med svakt alkaliske r oppløsninger. Denne fremgangsmåte kan p også eventuelt utføres før eller etter frak- r sjonering i henhold til oppfinnelsen. r
En særlig hensiktsmessig fremgangs- f måte til fraksjonering i henhold til opp- c' finnelsen er å bringe ekstraktet i kontakt p med et adsorbsjonsmiddel som tjener til å I adsorbere høymolekylvekt-materiale for å t adsorbere det aktive polypeptid-materialet, c fulgt av uttrekning med en væske utvalgt r fra gruppen bestående av basiske og sure r væsker og oppløsning med høy elektrolyt- t konsentrasjon.
Adsorbsjonsmidler som har en tendens r til fortrinnsvis å adsorbere høymolekyl- r vekt-materialer, er velkjent. Slike stoffer t er vanligvis uorganiske stoffer så som s komplekssilikater som f. eks. bentonit, t montmorrilonit, celit osv. Det er imidlertid funnet at asbest er et særlig effektivt ad- a sorbsjonsmiddel, og foretrekkes av denne grunn. pH-verdien for ekstraktet under ad- s sorberingen er fortrinnsvis mellom 4 og 7, ( hensiktsmessig ca. 5—6. Adsorbsjonen kan r finne sted ved romtemperatur eller ved a høyere eller ved lavere temperaturer. Det a aktive polypeptid synes å være stabilt opp
til minst 100° C. t
Uttrekning av det aktive polypeptid c kan utføres med en basisk eller sur væske i eller en oppløsning med høy elektrolyt- e konsentrasjon. Hvis det anvendes en sur t væske, kan denne være en flytende, svak d syre, f. eks. flytende fenol. Vandige syrer fc kan også anvendes, fortrinnsvis vandige f oppløsninger av svake syrer så som eddik- r. syre eller maursyre som har en pH på min- L dre enn 4. Basiske væsker som er egnet for o uttrekning, omfatter vandig alkali så som r vandig kaustisk soda med f. eks. 0,1 nor- g mal styrke og vandig ammoniakk av 1- n normal styrke. Det er ofte hensiktsmessig e å vaske adsorbatet med fenol, og deretter, s etter utvasking av fenolen, å utføre ut- r trekningen med den vandige alkali. Når r uttrekningsvæsken skal være vannfri, f. h eks. 100 pst. fenol, tørkes asbesten for- f trinnsvis før uttrekning, f. eks. over P20,. e Oppløsninger med høy elektrolytkonsen-trasjon som kan anvendes for uttrekning, g
imfatter vandige saltoppløsninger, så som
-molar vandig NaCl.
Det vandige organpreparat er for-rinnsvis i en forholdsvis konsentrert form lår det 'bringes i kontakt med adsorbsj ons-nidlet i henhold til oppfinnelsen, f. eks. en Lonsentrasjon på ca. 25 gram tørrstoff/ 00 ml.
Det er også funnet at da det ønskede lolypetid har høy molekylvekt, øyensynlig ninst 8000, og således ikke i stand til å lassere igjennom eller inn i molekylsikt-naterialer som er ugjennomtrengelige for nolekyler av denne størrelse eller større,
. eks. et fornettet dextranderivat så som lextran fornettet med ethylenoxyd (f. eks. iroduktet Sephadex G50, solgt av A. B. 'harmacia i Uppsala), som er ugjennom-rengelig for molekyler med molekylvekt iver 8000 til 10 000, er det mulig å fraksjo-iere lavmolekylvekt-forurensninger fra nateriale som inneholder den aktive fak-or ved hjelp av molekylsikt-teknikk, f. eks. red å føre en vandig oppløsning av mate-ialet gjennom en fornettet dextrankolon-ie eller ved dialyse, elektrodialyse eller ul-raf iltrering gj ennom membraner med egnet truktur. Anvendelsen av dextranproduk-er eller molekylsikt-materialer er beskre-ret av Per Flodin i «Dextran gels and their ipplication in gel filtration» Uppsala 1962. ^.ndre molekylsikt-materialer omfatter vis-e fornettede galacto-mannan-produkter Deuel et al — Advances in Chémistry Se-les 1954, 11, 51) og kopolymerer av acryl-imid og methylen-bis-acrylamid (Canadi-m Journal of Chémistry 1962, 40, 159). Det skal legges merke til at med ut-rykket høymolekylvekt-materiale slik som Lette er anvendt her, menes materiale som iar en molekylvekt av størrelsesorden 8000 iller mer, f. eks. ikke under 10 000. Med ut-rykket lavmolekylvekt-materiale slik som let er anvendt her, menes materiale som iar en molekylvekt lavere enn ca. 8000, . eks. under 5000. Selvsagt vil det være lensiktsmessig å fjerne alt det uønskede avmolekylvekt-materialet som er til stede, ig det oppnåes en gunstig virkning selv ned molekylsikter som er ugjennomtren-;elige for molekyler med betraktelig lavere nolekylvekt, f. eks. 1000. For å oppnå så ffektiv atskillelse som mulig, bør molekyl-ikt-materialet imidlertid fortrinnsvis væ-e gjennomtrengelig for molekyler med nolekylvekt på ca. 8000 mens det samtidig tolder tilbake det aktive materialet, og ornettede dextraner som omtalt ovenfor, r særlig effektive.
En ytterligere hensiktsmessig frem-angsmåte til fraksjonering i henhold til oppfinnelsen er således å bringe det vandige ekstrakt i kontakt med et molekylsikt-materiale som er ugjennomtrengelig for molekyler med molekylvekt over 1000, for å atskille molekyler fra stoffer med lavere molekylvekt.
Fornettede dextraner og beslektede molekylsikt-materialer som anvendes i partikkelform ved adsorpsjon av lavmolekylvekt-materiale i deres partikler, anvendes fortrinnsvis i kolonner under anvendelse av kromatografiteknikk. I slike kolonner forblir det aktive polypeptid i væsken som beveger seg nedover i rommet mellom par-tiklene, og som passerer raskt gjennom kolonnen. Kolonnen kan vaskes med vann for å vaske det aktive polypeptid gjennom, og selv om lavmolekylvekt-materialet vil uttrekkes langsomt ved denne prosess, kan det aktive materialet vanligvis fjernes før det uønskede materialet begynner å forlate kolonnen. Generelt kan det aktive polypeptid-materialet påvises ved hjelp av egnede biologiske prøver av fraksjoner uttrukket fra kolonnen,, idet lavmolekylvekt-forurensninger vanligvis er forbundet med brune eller gule stoffer, og bevegelsen av disse stoffer kan følges med øynene.
Molekylsikt-fraksjoneringen i henhold til oppfinnelsen kan utføres ved lav tem-peratur, f. eks. -f- 4° C, for å unngå bak-terievekst. Ved høyere temperaturer er det tilrådelig å inkludere et antibakterielt stoff så som fenol, cresol osv.
Ved fremstilling av den fornettede dextrankolonne, røres det partikkelforme-de materialet fortrinnsvis én eller flere ganger med vandig natriumklorid, f. eks. 0,05N, og vaskes til slutt med vann for å fjerne kloridionene.
Det vandige, organiske ekstrakt som tilføres kolonnen, inneholder fortrinnsvis en elektrolyt, f. eks. et nøytralt salt så som natriumklorid; da det aktive materialet ofte er av sur karakter, kan elektrolyten også være et alkali f. eks. kaustisk soda. Konsenerasjonen av elektrolyten kan vari-ere fra 0,05N til 0,5N, f. eks. 0,1N NaCl eller 0,01N NaOH. Den aktive faktor kan og-så med fordel vaskes gjennom den fornettede dextrankolonne med en alkalisk opp-løsning istedenfor vann, og en 0,05—0,5N-oppløsning, f. eks. en 0,lN-oppløsning av kaustisk soda, er meget tilfredsstillende. Den resulterende oppløsning kan nøytra-liseres ved behandling med en kationebyt-ter-harpiks i hydrogenform f. eks. Amberlite IR20.
En ytterligere hensiktsmessig fremgangsmåte til fraksjonering er utfelling av det ønskede polypeptid-materialet med et inert proteinfellemiddel, d.v.s. et som ikke ødelegger eller skader protein- eller poly-peptidmaterialer, men (bare utfeller disse fra oppløsning.
Proteinfellemidlet kan tilsettes som et fast stoff, så som en vannoppløselig, uorganisk substans, f. eks. et salt så som ammoniumsulfat, ammoniumklorid osv., eller fosforwolframsyre, eller det kan være en væske, f. eks. en konsentrert oppløsning av slike substanser.
Det høymolekylvekt-materialet som inneholder det aktive polypeptid, kan utfelles fra det vandige ekstrakt og atskilles, f. eks. ved filtrering, sentrifugering osv., eller det kan bringes til oppløsning i en separat organisk fase. Den organiske fase kan være en ikke-vannblandbar væske eller, fortrinnsvis, en polar væske som vanligvis er blandbar med vann, men som dan-ner en separat fase når den vandige fase inneholder store mengder oppløst materiale, slik som tilfelle er når det anvendes et uorganisk salt som fellemiddel. Slike polare oppløsningsmidler har en høyere opp-løselighet for faktoren enn ikke-polare oppløsningsmidler.
Ved en hensiktmessig utførelsesform for den foreliggende oppfinnelse, tilsettes fellemidlet til en vandig oppløsning som inneholder det aktive polypeptid og et vannblandbart oppløsningsmiddel, hvorved det dannes to faser, og den organiske fase atskilles og det aktive polypeptid utvinnes fra denne fase.
Generelt vil pH-verdien for det vandige ekstrakt påvirke atskillelsen, og mengden av fellemiddel som anvendes, må av-passes etter pH-verdien. Tilstedeværelsen av andre oppløste stoffer, f. eks. vann-blandbare organiske væsker så som ethanol, aceton osv., påvirker også den konsentrasjon av fellemidlet som gir de optimale resultater.
Når ammoniumsulfat anvendes som fellemiddel, er den optimale konsentrasjon av saltet vanligvis mellom 25 og 60 pst. av den mettede oppløsning, og pH-verdien er fortrinnsvis mellom 5 og 8. Når de anvendes en organisk, vannblandbar væske, så som ethanol, er mengden av denne hensiktsmessig mellom 30 og 60 pst. av den vandige fase, og de nøyaktige mengdefor-hold av ammoniumsulfat og vannblandbar væske velges slik at man får 2 faser. Hvis det f. eks. anvendes en konsentrasjon på 46 pst. ethanol, kan konsentrasjonen av ammoniumsulfat være 25 vektprosent.
Mengden av den organiske væske som tilsettes, er beregnet slik at man får et forholdsvis lite volum i den separate fase, slik at man får en høyere konsentrasjon av det aktive polypeptid. Det skal bemerkes at når ethanol tilsettes, utfelles vanligvis noe uønsket materiale som kan fjernes før fraksjonering med et uorganisk salt.
Denne fraksjonering i henhold til oppfinnelsen utføres fortrinnsvis ved romtemperatur og de foretrukne konsentrasjoner av fellemidlet som angitt ovenfor, kan ikke alltid anvendes ved høyere temperaturer. Den aktive faktor er imidlertid stabil opp til 90° C, og høyere temperaturer kan anvendes uten at det finner sted noen in-aktivering.
Fraksjoneringen i henhold til foreliggende fremgangsmåte kan utføres direkte på det vandige dyreorganekstrakt eller på vandige oppløsninger som er resultatet av andre rensningsprosesser. Videre kan andre rensningsmetoder anvendes på materialet som er resultatet av foreliggende fremgangsmåte, og generelt kan fraksjoneringen utføres på ethvert trinn i den totale rensning av den aktive faktor.
Det er også funnet at aktivt polypeptid kan renses ytterligere på en særlig hensiktmessig måte ved adsorpsjon på et svakt basisk cellulose-ionebyttermateriale, fulgt av uttrekning fra dette med en vandig elektrolyt f. eks. nøytral eller sur eller svak alkalisk oppløsning.
Foreliggende fremgangsmåte er hensiktsmessig å anvende i kombinasjon med én av de ovenfor beskrevne fremgangsmå-ter i henhold til oppfinnelsen, enten før eller etter fraksjonering.
Cellulose-ionebytterharpiksen som anvendes ved den foreliggende fremgangsmåte, kan f. eks. være av den type som er beskrevet av Peterson og Sobers J.A.C.S. 78, 751 (1956); slike materialer omfatter cellulose som er kjemisk modifisert slik at de inneholder svakt basiske grupper så som aminogrupper, dialkylaminogrupper, di-alkylaminoalkylgrupper osv. Ionebyttermaterialet Ecteola er særlig egnet. Ecteola er reaksjonsproduktet av epiklorhydrin, trie-thanolamin og natriumcellulose. Deae-cellulose eller Deae Sephadex kan også anvendes.
Cellulose-ionebyttermaterialet anvendes fortrinnsvis i partikkelform i en kolonne, og puffres fortrinnsvis til en pH mellom 6 og 10, hensiktsmessig ca. 6,5—8,5. En velegnet pufferoppløsning er en 0,1 M am-moniumbicarbonatoppløsning eller 0,005 M natriumbicarbonat-carbondioxyd-puffer med en pH-verdi på 6,8. Det vandige organekstrakt puffres også fortrinnsvis til omtrentlig den samme pH-verdi før det inn-føres i kolonnen, og det er hensiktsmessig
å anvende en puffret oppløsning for å vaske ut de uønskede forurensninger. Det vandige organekstrakt er fortrinnsvis forholdsvis fortynnet, og inneholder hensiktsmessig 1 til 2 vektprosent tørrstoff.
Etter vasking kan det aktive polypeptid uttrekkes fra kolonnen med den svakt alkaliske oppløsning. Fortynnet, vandig natrium-, kalium- eller ammoniumhyd-roxydoppløsning f. eks. med en styrke på 0,05—2N, eller kaliumcarbonat er egnet som uttrekningsmiddel eller en forholdsvis konsentrert oppløsning av ammoniumbicar-bonat f. eks. en omtrentlig 1-molaroppløs-ning. Uttrekning kan også utføres med en sur oppløsning som fortrinnsvis også inneholder et oppløselig salt, en oppløsning av eddiksyre og natriumacetat av henholds-vis IN og 0,2N styrke er tilfredsstillende. Fortrinnsvis anvendes imidlertid en fosfatpuffer ved en pH-verdi på ca. 7,5, eller et alkalimetallhalogenid så som natriumklorid, hensiktsmessig i økende konsentrasjoner.
De uønskede uorganiske ioner som er til stede i uttrekningsmidlet, kan fjernes ved behandling med molekylsiktmaterialer f. eks. ved dialyse eller ved at uttrekningsmidlet bringes i kontakt med slike stoffer som Sephadex G50 (solgt av A.B. Pharmacia i Uppsala) omtalt ovenfor. Kationer kan også fjernes ved behandling med en fornettet kationebytterharpiks Amberlite IR120.
De følgende eksempler skal tjene til å klargjøre oppfinnelsen ytterligere.
Eksempel 1.
(a) Fremstilling av leverpasta.
8 kg fersk okselever ble finhakket, tilsatt 16 1 vann og 108 g fenol (for å hindre bakterieforurensning). Blandingen ble om-rørt i 2 timer, oppvarmet under omrøring til 100° Ci en y2 time og stod til neste dag ved romtemperatur. Den ble deretter oppvarmet til 70° C og filtrert, residuet ble vasket med vann inneholdende 0,5 pst. fenol. Det kombinerte filtrat (17,8 1) inneholdt 2,8 g tørrstoff pr. 100 ml. Oppløsnin-gen ble konsentrert ved 60—70° Ci vakuum til en gul pasta som veide 760 g og inneholdt 65 pst. tørrstoff. Pastaen ble tilsatt til 3,4 1 75 volumprosent ethanol og blandingen ble omrørt i 6 timer ved romtemperatur. Neste dag ble bunnfallet filtrert av, og vasket med 70 volumprosent ethanol. Det kombinerte ethanolfiltrat på 4,6 1 inneholdt 266 g tørrstoff. Det ble konsentrert ved 30—40° C i vakuum til en brunaktig, sort pasta som veide 375 g og inneholdt 71 pst. tørrstoff.
(b) Adsorpsjon på asbest.
800 g leverpasta ble oppløst i 2,8 1 nydestillert vann inneholdende 0,3 pst. tricresol. Oppløsningen hade en pH-verdi på 4,9, og ble tilsatt til 11,2 g asbestpulver. Blandingen ble omrørt i 24 timer ved romtemperatur og stod uten omrøring i ytterligere 24 timer. Asbesten ble vasket med vann inneholdende 0,3 pst. tricresol. De kombinerte væsker (supernatants) ble foe^ handlet på samme måte med ytterligere 11,2 g asbest. Den vaskede asbest ble tørket i vakuum over P2Or> og veide 25,2 g. Asbesten ble utvasket under ett med flytende 100 pst. fenol ved 50—60° C, første gang med 200 g, annen gang med 100 g og tredje gang med 200 g. De kombinerte vaskevæs-ker ble tilsatt til fem ganger sin vekt ether, bunnfallet ble filtrert av og vasket med ether. Det brune materialet var ikke full-stendig oppløselig i vann, men tilsetning av 0,1 N-NaOH slik at man fikk en pH-verdi på 7,5, brakte det uoppløste materialet i oppløsning.
Asbesten ble vasket med ether for å fjerne fenol og deretter utvasket med 200 ml lN-NHg. Vaskevæsken ble konsentrert i vakuum og flet fremkom et bunnfall. Væsken ble anvendt videre.
Både f enol-vaskevæske-f raksj onen og ammoniakk-vaskevæske-f raksj onen ble renset ytterligere på Sephadex G50-kolonner (2,8 cm diameter x 32,5 cm høyde) og den høymolekylære fraksjon ble oppsamlet i hvert tilfelle. De to rensede fraksjoner (12 mg fra f enolf raksj onen og 18 mg fra ammoniakkf raksj onen) var hverken pyro-gene i kaniner eller antigene i mennesker, beskyttet mus mot E.coli-infeksjon og kyl-lingfoster mot koppevirus.
Biologisk aktivitet vaskes således ut både med 100 pst. fenol og lN-ammoniakk. Det er også funnet at biologisk aktivitet ut-vaskes fra asbesten med 0,1 N-NaOH. I vann oppviste de aktive fraksjoner en blå-grønn fluorescense og gav et bunnfall med f osf orwolf ramsyr e.
Eksempel 2.
0,5 liter menneskeblod ble oppvarmet i 30 minutter ved 100° C, og 500 ml av en 0,3 vektprosent vandig oppløsning av tricresol ble tilsatt. Blandingen ble filtrert, 20 ml av en 20 vektprosent vandig oppløsning av sulfosalicylsyre ble tilsatt til filtratet, og det hele ble filtrert igjen. 1,84 g asbest ble tilsatt filtratet og man lot det hele stå ved romtemperatur i 2 dager. Asbesten ble atskilt fra væskefasen ved sentrifugering og utvasket med 90 g (100 pst.) ved 60° C,
450 ml ether ble tilsatt til fenol-vaskevæsken, og det resulterende bunnfall ble filtrert fra. Det erholdte faste stoff ble løst opp på nytt i vann og pH-verdien ble regulert til 7 ved hjelp av vandig kaustisk soda. Den resulterende oppløsning hadde tilsvarende egenskaper til dem man fikk for produktet i eksempel 1.
Eksempel 3.
(a) Fremstilling av Sephadexkolonnen.
Sephadex G50 (A.B. Pharmacia, Uppsala) ble suspendert i 0,05 M natriumklorid og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Etter 10—15 minutters klaringsperiode ble væsken med de finere partikler dekantert fra. Etter at denne væske var erstattet med en frisk oppløsning av 0,05 M natriumklorid, ble hele prosessen gjentatt ytterligere fire ganger. Sephadexen ble deretter sammenpakket ved omrøring under tyng-dekraftens innvirkning i en kolonne (45 cm diameter x 30 cm høyde). Kolonnen ble vasket ved + 4° C med nydestillert vann inntil alle Cl-ioner var utvasket. (b) Fraksjonering av høymolekylær fraksjon fra vandig leverpreparat.
En leverekstrakt (fra 6 kg fersk lever) ble fremstilt på vanlig måte av fersk stor-felever ved proteolyse med papain, utfelling av proteolysatet med alkohol, delvis inndampning av filtratet og ekstrahering av den konsentrerte oppløsning med vann-mettet fenol, fortynning av fenolekstrak-tet med ether og ekstrahering av fenol-etherblandingen med vann. Til 600 ml av dette vandige ekstrakt ble det tilsatt en 5 pst. kaliumhydroxydoppløsning slik at man fikk en pH på 8,2. 7,32 g bariumace-tat Ba (CH3C02)2.H20 ble tilsatt, og man lot oppløsningen stå natten over ved 0° C. Den lille mengde bunnfall som var dannet, ble fjernet ved sentrifugering. Til den væske som var igjen etter sentrifugering, ble det tilsatt 2,8 liter 96 pst. alkohol, og det dannede bunnfall ble neste dag sentrifug-ert fra oppløsningen, vasket med alkohol og deretter med ether, og tørket. Bunnfallet veide 10,95 g.
Bunnfallet ble oppløst i 500 ml vann og man lot oppløsningen dryppe gjennom en kolonne inneholdende 140 ml sur ionebyt-terharpiks. Kolonnen ble vasket med vann inntil oppløsningen som dryppet igjennom, hadde antatt en pH på 5,5—6 og var farge-løs. Til oppløsningen ble det deretter tilsatt 2N NaOH til pH 6,5; den ble konsentrert under vakuum og til slutt frysetørket. Produktet veide i tørr tilstand 2,9 g.
0,5 g av produktet (svarende til 1 kg fersk lever) ble oppløst i 50 ml vann. Til oppløsningen, som hadde en pH på 6,6 ble det tilsatt 1,5 g carbon, som på forhånd var vasket med vann og deretter med alkohol. Etter 19 timers henstand ble carbonet filtrert fra oppløsningen og vasket med vann inntil filtratet var fargeløst. De oppsam-lede filtrater ble konsentrert under vakuum og veiet, etter frysetørking, 0,250 g. 10 g av dette frysetørkede materiale ble oppløst i 40 ml vann og ført gjennom kolonnen, som deretter ble vasket med vann. Det første volum man fikk ut (70 ml) ble kassert, de følgende 200 ml (svakt brunfarget) som inneholdt høymolekylært materiale ble oppsamlet og inndampet i tørrhet i vakuum i frossen tilstand. Frak-sjonen veide 150 mg. Mesteparten av det mørkfargede materiale i leverpreparatet beveget seg meget langsomt nedover i kolonnen, og den hadde derfor lav molekylvekt. I vann oppviste den aktive fraksjon en blågrønn fluorescens og gav bunnfall med fosforwolframsyre.
(c) Antigenitet.
Den høymolekylære, aktive fraksjon oppviste ingen antigen reaksjon, som det fremgikk av hudprøven, når den ble admi-nistrert ved injisering i mennesker i doser på 0,1 mg. (d) Beskyttelse mot E. coliinfeksjon i mus.
Den høymolekylære, aktive fraksjon oppviste en beskyttende virkning som vist ved de følgende tall.
Bakterieinnpodningsdose: 1,25 x IO<8 >organismer pr. mus. 0,1 mg (oppløst i 0,3 pst. tricresolvann) høymolekylær fraksjon ble injisert intravenøst i hver mus. En gruppe på 6 mus ble gitt den høymoleky-lære fraksjon 3 timer før bakterieinnpod-ningen og en annen gruppe 6 timer før innpodningen. 6 mus som bare fikk innpodningen, tjente som kontroll. Resultatene er vist i den følgende tabell:
I et annet eksperiment var innpod-ningsdosen 3,5 x IO<8> organismer pr. mus. Den dose av høymolekylærf raksj onen som ble injisert intramuskulært, var 0,2 mg (oppløst i 0,1 ml saltvann). Ellers ble eks-perimentet utført som ovenfor. Resultatene er vist i den følgende tabell:
(e) Beskyttelse mot koppevirus.
Den høymolekylære fraksjon beskytter kyllingfosteret mot koppeinfeksjon (ved en dosemengde på 2,55 mikrogram). Den høy-molekylære fraksjon i oppløsning i vann ble innført i den choriollantoiske membran i 10—11 dager gamle kyllingfostere. 24 timer senere ble fostrene innpodet med koppevirus. Fostrene ble deretter inkubert i 5 dager. Resultatene fremgår av den følgen-de tabell:
Eksempel 4.
6 1 okseblod ble omrørt for å hindre koagulering, 0,3 pst. tricresol ble tilsatt, og det hele ble oppvarmet til 100° i en time og stod ved romtemperatur natten over. Blan-
dingen ble filtrert, og til filtratet (4 1) ble det tilsatt 25,5 ml 20 pst. sulfosalicylsyre.
Det resulterende bunnfall ble fjernet.
Filtratet ble konsentrert og pH-verdien ble regulert til 8. Materialet ble fraksjonert på Sephadex G50 (4 cm x 32 cm) i 0,01 N-NaOH og den høymolekylære fraksjon ble oppsamlet. Overskudd av NaOH ble fjernet med Amberlite IR 120 (H) til pH 7,0 og den resulterende oppløsning ble frysførket. Utbytte. 481 mg.
Eksempel 5.
Fraksjonering på ECTEOLA
Leverpasta svarende til 0,4 g tørrstoff ble oppløst i 25 ml 0,01 M NH4HCO.,. pH-verdien tole regulert til 8,5 ved tilsetning av sterk ammoniakk. Oppløsningen ble ført gjennom en kolonne av ECTEOLA (1,5 cm diameter x 5 cm høyde) som tidligere var ekvilibrert med 0,01 M NH4CH03 puffer pH 8,5. Uabsorbert materiale ble vasket ut ved hjelp av 30 ml 0.01 M NH4HC03 puffer ved pH 8,5. Kolonnen ble deretter uttrukket med IM NH4HCO:! som fikk ut den biologisk aktive substans, ben aktive substans kunne også uttrekkes fra en slik kolonne med NaOH eller vandig ammoniakk. For NaOH-uttrekningens vedkommende ble pH-verdien brakt til 7 ved hjelp av HC1. NaCl og NH4HC03 kunne fjernes ved behandling med Sephadex G50.
Eksempel 6.
Fraksjonering på ECTEOLA
(a) Behandling av ECTEOLA før bruk. 5 g ECTEOLA stod ved romtemperatur i 2—3 timer med 100 ml lN.NaOH. Væsken ble dekantert av, og ytterligere 100 ml natriumhydroxyd ble tilsatt og blandingen stod i en time. Materialet ble helt oppi en kolonne (1,5 x 7 cm) og natriumhydroxyd ble vasket ut med vann. Kolonnen ble deretter ekvilibrert med 0,005 M NaHCO.,-C02-puffer ved pH 6,8. (b) 25 mg høymolekylær fraksjon fra Sephadex-kolonnen fremstilt i henhold til eksempel 3 fra en utfelt leverf raksj on, ble oppløst i 10 ml 0,005 M NaHC03-C02pH 6,8-puffer, og ført gjennom kolonnen. Kolonnen ble vasket med puffer. Kolonnen ble uttrukket med 2 M NH3 og deretter med 0,5 N NaOH som fjernet den aktive fraksjon. Oppløsningen ble behandlet med Amberlite IR 120 (H) inntil man fikk pH på 6,0. Oppløsningen ble frysetørket og gav 24 mg utbytte, hvorav en del var natriumcar-bonat, som kunne fjernes ytterligere ved behandling med Sephadex.
Eksempel 7.
En kolonne (5 cm x 1 cm) av ECTEOLA fremstilt som i eksempel 6a, ble anvendt. 1,5 mg materiale (fremstilt ved behandling av leverpasta med asbest, uttrekning med NaOH, nøytralisering med HC1 og fjerning av NaCl på Sephadex) ble opp-løst i 10 ml 0,005 M NaHCO:i-C02-puffer, pH 6,7, og ført gjennom kolonnen. Kolonnen ble vasket med pufferen, deretter uttrukket med 40 ml 0,11 N-NaOH. Dette gav en fraksjon som oppviste gul fluorescense. NaOH ble fjernet ved tilsetning av Amberlite Ir 120 (H) inntil man nådde pH 7,0, og oppløsningen ble frysetørket. Det tørre, faste stoff veide 10 mg, hvorav noe var NaHC03.
Eksempel 8.
Til 50 1 omrørt okseblod ble tilsatt 150 ml tricresol, og det hele ble oppvarmet ved 90° C under tilbakeløpskjøling i 2y2 time.
82 1 96 pst. ethylalkohol ble tilsatt til den
varme oppløsning og omrørt i en time uten oppvarmning. Man lot deretter blandingen stå natten over for å avkjøles til romtemperatur, og den ble deretter filtrert slik at man fikk 80 1 filtrat. 43 1 vann ble tilsatt, og til blandingen ble det tilsatt en vandig oppløsning av 20 pst. sulfocalicylsyre til man fikk en pH på 1. Bunnfallet ble fjernet, og pH-verdien for filtratet ble regulert til 8—8,3 ved hjelp av 30 pst. NaOH. 0,25 kg (NH4)2S04 pr. 1 ble tilsatt til oppløsnin-gen under omrøring. Ved henstand atskilte blandingen seg i to lag. Det øvre lag (alko-holiske fase) ble fjernet og konsentrert i vakuum til 5 1 og deretter dialysert natten over. pH-verdien ble regulert til 7,5—8 ved tilsetning av NaOH, og oppløsningen ble filtrert og konsentrert i vakuum til 450 ml.
En kolonne av Sephadex G50 (9,2 x 95 cm, diameter x høyde) ble ekvilibrert med
0,01 N-NaOH og 250 ml av det ovenfor-nevnte konsentrat, regulert til pH 11—12 med 30 pst. NaOH, tilført kolonnen. 0,01 N-NaOH ble anvendt som uttrekningsmiddel. 1 liter av uttrekningsmidlet som først kom igjennom kolonnen, ble kassert, og deretter ble 1,46 1 oppsamlet. Denne opp-løsning inneholdt det høymolekylære materiale og gav et bunnfall med fosforwolframsyre. Oppløsningen ble nøytralisert ved tilsetning av Amberlite IR 120 H (kationebytterharpiks i hydrogenform), har-piksen ble fjernet ved filtrering og filtratet ble frysetørket. Utbyttet varierte fra 0,05 g
—0,1 g pr. 1 blod.
Eksempel 9.
20 kg finhakket okselever ble oppvarmet under omrøring ved 90° C med 50 1 vann. Fenol ble tilsatt til en sluttkonsen-trasjon på 0,5 pst. Blandingen stod natten over og filtratet ble konsentrert i vakuum til 3 1. 53,1 1 96 pst. ethylalkohol ble tilsatt, og blandingen stod natten over ved romtemperatur. Filtratet ble konsentrert i vakuum til 2,6 1, og for å hindre bakterieforurensning ble 8,4 ml tricresol tilsatt.
Til 50 ml av oppløsningen ble tilsatt 750 ml av en oppløsning av mettet (NH4)2S04, og man lot bunnfallet utskilles natten over ved romtemperatur. Bunnfallet ble vasket med mettet (NH4)2S04 og oppløst i vann ved å regulere pH-verdien til 7,0 med NaOH. Oppløsningen ble dialysert, og noe av det fargede materiale ble derved fjernet. Den dialyserte oppløsning ble frysetørket og man fikk et utbytte på 1,53 g.
Biologisk aktivitet.
Produktene beskrevet i disse eksempler oppviser aktivitet mot koppevirus i ka-ninhud og hindrer mitose i HeLa-celler i Pucks medium.
Eksempel 10.
Fraksjonering av materiale på Sephadex G50 i 0, 1 M NaCl.
Oppløsningen inneholdt 0,3 pst. tricresol for å hindre vekst.
0,22 g materiale ble oppløst i 10 ml vann, og 4 ml 20 pst. sulfosalicylsyre ble tilsatt. Filtratet ble nøytralisert med NaOH til en pH-verdi på 7,5, tilført en Sephadex G50-kolonne (35 cm x 3,5 cm, høyde x diameter) og ekvilibrert med 0,1 M NaCl inneholdende 0,3 pst. tricresol. Kolonnen ble uttrukket med den sistnevnte oppløsning. De første 95 ml av uttrekningsmidlet som kom igjennom kolonnen ble kassert. De neste 130 ml som inneholdt det høymolekylære materialet, ble oppsamlet, dialysert og frysetørket. Utbytte 80 mg.
Eksempel 11.
En diethylaminoethyl-cellulose (DE-AE) kolonne (7 x 2,8, høyde x diameter) ble ekvilibrert med 0,005 M-fotfatpuffer, pH 7,5. 200 mg materiale (fra blod) ble opp-løst i 40 ml av pufferen og ført gjennom kolonnen. Kolonnen ble deretter vasket med puffer. Kolonnen ble så uttrukket med 0,005 M fosfatpuffer, pH 7,5, inneholdende 0,08 M NaCl, 0,05 m fosfatpuffer inneholdende 0,1 M NaCl og 0,1 M fosfatpuffer, pH 7,5, inneholdende 0,5 M NaCl. De tre fraksjoner ble dialysert og frysetørket. Den første fraksjon resulterte i et utbytte på 22 mg, den annen 55 mg og den tredje 55 mg. Alle fraksjoner oppviste biologisk aktivitet.
Claims (5)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av et polypeptidmateriale med ikke-spesifikk immunitetsvirkning, som skal tjene til å øke menneskers motstandsevne mot bakterie- og virusinfeksjon og sjokk, karakterisert ved at et vandig medium inneholdende blod eller et dyreorgan, såsom lever, nyre, milt eller et vannoppløselig materiale herav, utsettes for oppvarmning til 90—100° C, fast materiale fjernes, og det erholdte vandige medium utsettes for molekylær fraksjonering, f. eks. selektiv adsorpsjon og uttrekking, kontakt med mo-lekylsiktmateriale for å fjerne molekyler med lav molekylvekt og/eller fraksjonert utfelling med et proteinfellingsmiddel, og man utvelger de fraksjoner som inneholder et fluorescerende polypeptid med en molekylvekt på minst 1000, fortrinnsvis minst 8000.
2. Fremgangsmåte ifølge påstand 1, karakterisert ved at uønskede proteiner fjernes ved hjelp av sulfosalicylsyre.
3. Fremgangsmåte ifølge påstand 1, karakterisert ved at det som ad-sorberende materiale anvendes asbest, fra hvilket de adsorberte produkter uttrekkes ved hjelp av en sur eller basisk væske eller en oppløsning med høy elektrolyttkonsen-trasjon.
4. Fremgangsmåte ifølge påstand 1, karakterisert ved at det som mole-kylsiktmateriale anvendes et med ethylenoxyd fornettet dextran, som før fraksjoneringen behandles med en vandig opp-løsning av et alkalimetallsalt, hvis anioner deretter fjernes ved vasking.
5. Fremgangsmåte ifølge påstand 4, karakterisert ved at oppløsningen av den ønskede polypeptidf raksj on utvas-kes fra det fornettede dextran ved hjelp av en alkalisk oppløsning.
Anførte publikasjoner: Norsk patent nr. 56 894. C. A. 50 8035 e (1956). Alfred Burger: Medicinal Chémistry sec.
ed. side 783.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB13952/78A GB1565637A (en) | 1978-04-10 | 1978-04-10 | Method for froming channels of high fluid conductivity in formation parts around a bore hole |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO791190L NO791190L (no) | 1979-10-11 |
NO146818B true NO146818B (no) | 1982-09-06 |
NO146818C NO146818C (no) | 1982-12-15 |
Family
ID=10032346
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO79791190A NO146818C (no) | 1978-04-10 | 1979-04-09 | Fremgangsmaate for aa danne kanaler med hoey fluidumledningsevne i en formasjon rundt et borehull |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4249609A (no) |
EP (1) | EP0004692B1 (no) |
CA (1) | CA1098440A (no) |
DE (1) | DE2962377D1 (no) |
DK (1) | DK144282C (no) |
GB (1) | GB1565637A (no) |
NO (1) | NO146818C (no) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4867241A (en) * | 1986-11-12 | 1989-09-19 | Mobil Oil Corporation | Limited entry, multiple fracturing from deviated wellbores |
US5238068A (en) * | 1992-07-01 | 1993-08-24 | Halliburton Company | Methods of fracture acidizing subterranean formations |
US5363919A (en) * | 1993-11-15 | 1994-11-15 | Mobil Oil Corporation | Simultaneous hydraulic fracturing using fluids with different densities |
US5411091A (en) * | 1993-12-09 | 1995-05-02 | Mobil Oil Corporation | Use of thin liquid spacer volumes to enhance hydraulic fracturing |
US6192985B1 (en) * | 1998-12-19 | 2001-02-27 | Schlumberger Technology Corporation | Fluids and techniques for maximizing fracture fluid clean-up |
US6207620B1 (en) * | 1999-06-04 | 2001-03-27 | Texaco Inc. | Use of encapsulated acid in acid fracturing treatments |
US20060076134A1 (en) * | 2004-10-12 | 2006-04-13 | Maersk Olie Og Gas A/S | Well stimulation |
US7845409B2 (en) * | 2005-12-28 | 2010-12-07 | 3M Innovative Properties Company | Low density proppant particles and use thereof |
US7650947B2 (en) * | 2007-02-28 | 2010-01-26 | Titan Specialties, Ltd. | One trip system for circulating, perforating and treating |
US7644761B1 (en) * | 2008-07-14 | 2010-01-12 | Schlumberger Technology Corporation | Fracturing method for subterranean reservoirs |
US10253249B2 (en) * | 2014-08-01 | 2019-04-09 | Schlumberger Technology Corporation | Compositions and methods for treating subterranean formations |
CN110359899B (zh) * | 2018-04-11 | 2024-01-30 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种页岩气水平井重复压裂提高有效改造体积的方法 |
CN112211608A (zh) * | 2019-07-09 | 2021-01-12 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种页岩储层微裂缝自支撑的压裂方法 |
CN111456699A (zh) * | 2020-04-08 | 2020-07-28 | 广州海洋地质调查局 | 一种高导流穿层压裂方法 |
CN112727430B (zh) * | 2021-01-12 | 2022-07-26 | 西南石油大学 | 一种导流能力测试装置 |
CN115263266B (zh) * | 2022-07-29 | 2023-02-21 | 西南石油大学 | 一种碳酸盐岩储层的逆序酸压方法 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB672789A (en) * | 1948-05-28 | 1952-05-28 | Stanolind Oil & Gas Co | Improvements in or relating to a method of treatment of wells |
US2689009A (en) * | 1951-04-14 | 1954-09-14 | Stanolind Oil & Gas Co | Acidizing wells |
US3167123A (en) * | 1961-09-07 | 1965-01-26 | Jersey Prod Res Co | Method of acidizing and introducing a corrosion inhibitor into a hydrocarbon producing formation |
US3167124A (en) * | 1961-09-07 | 1965-01-26 | Jersey Prod Res Co | Hydraulic fracturing technique |
US3642068A (en) * | 1968-03-21 | 1972-02-15 | Mobil Oil Corp | Formation fracturing |
US3592266A (en) * | 1969-03-25 | 1971-07-13 | Halliburton Co | Method of fracturing formations in wells |
US3842911A (en) * | 1971-04-26 | 1974-10-22 | Halliburton Co | Method of fracture acidizing a well formation |
US3768564A (en) * | 1971-04-26 | 1973-10-30 | Halliburton Co | Method of fracture acidizing a well formation |
US3727689A (en) * | 1972-02-09 | 1973-04-17 | Phillips Petroleum Co | Hydraulic fracturing |
US3799266A (en) * | 1972-08-18 | 1974-03-26 | Exxon Production Research Co | Fracturing method using acid external emulsions |
US3960736A (en) * | 1974-06-03 | 1976-06-01 | The Dow Chemical Company | Self-breaking viscous aqueous solutions and the use thereof in fracturing subterranean formations |
US3918524A (en) * | 1974-08-21 | 1975-11-11 | Halliburton Co | Fracture acidizing method |
US3934651A (en) * | 1974-10-10 | 1976-01-27 | Exxon Production Research Company | Method of acidizing subterranean formations |
-
1978
- 1978-04-10 GB GB13952/78A patent/GB1565637A/en not_active Expired
-
1979
- 1979-02-14 DK DK61779A patent/DK144282C/da active
- 1979-03-05 CA CA322,749A patent/CA1098440A/en not_active Expired
- 1979-04-02 DE DE7979200157T patent/DE2962377D1/de not_active Expired
- 1979-04-02 EP EP79200157A patent/EP0004692B1/en not_active Expired
- 1979-04-04 US US06/027,052 patent/US4249609A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-04-09 NO NO79791190A patent/NO146818C/no unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB1565637A (en) | 1980-04-23 |
DK144282C (da) | 1982-07-05 |
DE2962377D1 (en) | 1982-05-06 |
DK144282B (da) | 1982-02-01 |
EP0004692B1 (en) | 1982-03-31 |
NO146818C (no) | 1982-12-15 |
US4249609A (en) | 1981-02-10 |
EP0004692A2 (en) | 1979-10-17 |
NO791190L (no) | 1979-10-11 |
EP0004692A3 (en) | 1979-11-28 |
CA1098440A (en) | 1981-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO146818B (no) | Fremgangsmaate for aa danne kanaler med hoey fluidumledningsevne i en formasjon rundt et borehull | |
FI72124B (fi) | Foerfarande foer tillvaratagande av interferon | |
CN112646003B (zh) | 一种方格星虫ace抑制肽及其制备方法和应用 | |
JPS5896025A (ja) | 新規生理活性物質ch−1およびその製造法 | |
CN101584853B (zh) | 一种地龙蛋白多肽制剂 | |
NO178663B (no) | Framgangsmåte for framstilling av et terapeutisk aktivt polypeptid | |
US4104125A (en) | Process for producing human lysozyme | |
CA1283048C (en) | Therapeutic agent for treating hematopoietic diseases | |
CA2035948A1 (en) | Polysaccharides with immunomodulating properties from astragalus membranaceus and pharmaceutical compositions containing them | |
US4390468A (en) | Preparation of antitumor agent from shellfish | |
JP2548822B2 (ja) | マカラスムギ由来の糖タンパク質、その製造法及びそれを含有する免疫調節剤 | |
JPS5930686B2 (ja) | 免疫制御作用を有するペプタイドの製造方法 | |
SU871721A3 (ru) | Способ получени биологически активного вещества,обладающего способностью усиливать секрецию инсулина и улучшать глюкозную толерантность | |
CN106432445A (zh) | 一种鹰嘴豆防御素的制备方法及其应用 | |
GB2042555A (en) | Interferon inducers, methods for their preparation, pharmaceutical compositions containing them and their use as medicaments | |
US4169139A (en) | Glyco/proteinaceous materials derivable from beef liver and other tissues useful for the treatment of toxic and allergic conditions | |
AT253118B (de) | Verfahren zur Herstellung eines Wirkstoffes von Polypeptidnatur mit unspezifischer Immunisierungswirkung | |
DE1492047C (de) | Verfahren zur Gewinnung eines Poly peptids mit immunisierender Wirkung | |
US4524026A (en) | Novel proteinous cancer-cell proliferation inhibitory factors | |
US4166113A (en) | Cardiotonic agent | |
JPS608226A (ja) | 低分子蛋白質を有効成分とする制ガン剤 | |
EP1002803A1 (en) | Method for the isolation of legume lectins and their use as a medicament | |
JPH02124899A (ja) | 新規な蛋白質とその製造法及びこれを有効成分とする免疫抑制剤 | |
US4676983A (en) | Tumor cytostatic-citocidal factor from blood platelets | |
RU2065876C1 (ru) | Способ извлечения ферментного препарата из мышечной ткани рыб |