DK163107B - Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed Download PDFInfo
- Publication number
- DK163107B DK163107B DK450785A DK450785A DK163107B DK 163107 B DK163107 B DK 163107B DK 450785 A DK450785 A DK 450785A DK 450785 A DK450785 A DK 450785A DK 163107 B DK163107 B DK 163107B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- approx
- weight
- precipitate
- solution
- polyethylene glycol
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 65
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 title claims description 23
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 92
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 81
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 81
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 54
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 52
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 33
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 32
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 25
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 22
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 39
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 37
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 31
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 19
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 19
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 19
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 18
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 2
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 claims 3
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims 1
- 239000011369 resultant mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 17
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 8
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 85
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 22
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 22
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 10
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 4
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- YBHYYFYQHRADCQ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YBHYYFYQHRADCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- -1 glycine-polyethylene Chemical group 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 2
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 2
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 1-(2H-benzotriazol-5-yl)-3-methyl-8-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carbonyl]-1,3,8-triazaspiro[4.5]decane-2,4-dione Chemical compound CN1C(=O)N(c2ccc3n[nH]nc3c2)C2(CCN(CC2)C(=O)c2cnc(NCc3cccc(OC(F)(F)F)c3)nc2)C1=O YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWLUPTBKTSQFNA-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;ethanol Chemical compound CCO.NCC(O)=O MWLUPTBKTSQFNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- CBQJSKKFNMDLON-JTQLQIEISA-N N-acetyl-L-phenylalanine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CBQJSKKFNMDLON-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N N-acetyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000272171 Scolopacidae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNKFBZKIIRHPNY-UHFFFAOYSA-M [Na+].[Cl-].NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O Chemical compound [Na+].[Cl-].NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O JNKFBZKIIRHPNY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229940079718 acetyltryptophanate Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012760 heat stabilizer Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 235000014666 liquid concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 238000006068 polycondensation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- RLEFZEWKMQQZOA-UHFFFAOYSA-M potassium;octanoate Chemical compound [K+].CCCCCCCC([O-])=O RLEFZEWKMQQZOA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- ZFEKVFJKFDZSHE-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].NCC(O)=O ZFEKVFJKFDZSHE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
DK 163107 B
i
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af antihæmofilisk faktor (AHF) med høj renhed og forøget specifik aktivitet og nedsat fibrinogen-urenhed ud fra en AHF indeholdende opløsning ved 5 udsættelse af opløsningen for en flertrinsrensning under anvendelse af konventionelle fældningsmidler, herunder alu-miniumhydroxidgel, polyethylenglycol og glycin med natrium-chlorid.
rus patentskrift nr. 3.415.804 er der angivet en 10 firetrinsfremgangsmåde til fraktionering af en blanding af proteinholdige stoffer ved (1) blanding af de proteinholdige stoffer med polyethylenglycol (PEG) i nærværelse af vand til dannelse af en dispersion, idet PEG-vand-dispersionen er den eneste tilste- 15 deværende opløsningsmiddelfase, (2) indstilling af de relative koncentrationer af proteinholdige stoffer og resterende bestanddele i blandingen i trin (1) på en pH-værdi og en temperatur til frembringelse af separation af en proteinfase og en vandig flydende fase 20 indeholdende vand og de resterende bestanddele af blandingen, (3) adskillelse af den nævnte proteinfase og den nævnte vandige flydende fase fra trin (2) og (4) udvinding af et proteinholdigt fraktioneringsprodukt fra i det mindste en af fraktionerne fra trin (3).
25 Den polyethylenglycol, der er egnet til anvendelse ved den ovennævnte fremgangsmåde, har en molekylvægt i området fra 300 til 100.000, fortrinsvis fra 600 til 20.000, navnlig fra 1.500 til 20.000, f.eks. 6.000. I det ovennævnte US patentskrift angives der også en velkendt variation af 30 andre parametre, f.eks. til indstilling af pH-værdien tæt på det isoelektriske punkt for proteinbestanddelen og til nedsættelse af den ioniske koncentration og forøgelse eller formindskelse af temperaturen til forøgelse af adskillelsen af proteinbestanddele, og disse parametre kan anvendes ved 35 metoden til opnåelse af den samme virkning.
I US patentskrift nr. 3.631.018 beskrives der en 2
DK 163107 B
forbedret fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af AHF, idet forbedringen består i fraktionering af et kryo-præcipitat-koncentrat af AHF med både polyethylenglycol og glycin ved en tretrinsfældning, 5 (1) først med ca. 3-4 vægt% polyethylenglycol, efter fulgt af udvinding af den ovenstående væske, (2) dernæst med polyethylenglycol tilsat til ca. 10 vægt%, efterfulgt af udvinding af den resulterende fældning, og 10 (3) til slut med 1,3-1,8 M glycin tilsat til en op løsning af fældningen fra trin (2), efterfulgt af udvinding af den dannede fældning.
Den polyethylenglycol, der er egnet til anvendelse ved den nævnte fremgangsmåde, har en molekylvægt i området 15 fra 200 til 20.000, fortrinsis fra 400 til 6.000, navnlig omkring ca. 4.000. I patentskriftet er der ikke tale om nogen begrænsningsområder med hensyn til temperatur og pH-værdi. I ekempel 4 i patentskriftet illustreres der imidlertid udførelse af fældningerne ved stuetemperatur og ved en 20 pH-værdi på fra 6,5 til 6,88.
I US patentskrift nr. 3.652.530 beskrives der en fremgangsmåde til fremstilling af højrenset AHF ved behandling af en ekstrakt af en fældning opnået ved kryoethanol-fældning med polyethylenglycol ved tre på hinanden følgende 25 fældninger, først med aluminiumhydroxidgel ved en pH-værdi på fra 5,6 til 7,0, dernæst med polyethylenglycol til en koncentration på fra 3,0 til 6,5%, og til slut med tilsat polyethylenglycol til en koncentration på fra 10 til 12% til opnåelse af en fældning indeholdende den højrensede AHF.
30 I US patentskrift nr. 3.682.881 beskrives der en fremgangsmåde til fremstilling af et prothrombin-kompleks og et AHF-koncentrat ud fra citratbehandlet blodplasma behandlet med 1,5-1,8 M glycin. Den fremkomne fældning behandles i rækkefølge med polyethylenglycol, først til en 35 koncentration på fra 3 til 4% og dernæst 10 vægt%, og til slut med 1,8 M glycin.
3
DK 163107 B
I US patentskrift nr. 4.404.131 beskrives der en forbedret fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-koncentrat ved udsættelse af et faktor VIII-koncentrat, der er opnået ved konventionel fraktionering, f.eks. kryofæld-5 ning, for kryoalkohol-fældning.
I US reissue patentskrift nr. 29.698 beskrives der en fremgangsmåde til forbedring af udbyttet af AHF opnået fra blodplasma og blodplasmafraktioner, opnået ved kryo-fældning ved tilsætning af heparin. Det heparin-behandlede 10 kryopræcipitat kan dernæst fraktioneres yderligere under anvendelse af polyethylenglycol og glycin. Når det heparin-behandlede kryopræcipitat fraktioneres yderligere, tilsættes heparin fortrinsvis to gange, én gang til det oprindelige kryopræcipitat og dernæst til det yderligere fraktionerede 15 koncentrat.
I US patentskrift nr. 4.069.216 beskrives der en forbedring af den fremgangsmåde, der er beskrevet i det ovennævnte US patentskrift nr. 3.631.018, hvor forbedringen består i et trin, ved hvilket man holder en pufret opløsning 20 af faktor VIII og 6% polyol ved 0-5°C, indtil der forekommer udfældning.
I US patentskrift nr. 4.386.068 beskrives der en fremgangsmåde til fremstilling af et AHF-koncentrat ved behandling af en vandig suspension af kryopræcipitat-indehol-25 dende AHF-proteiner med aluminiumhydroxidgel, idet den resulterende opløsning underkastes ultrafiltrering, hvorpå opløsningen, der fremkommer efter ultrafiltreringen, konstitueres i puffer og saltopløsning. Eventuelt kan den opløsning, der fremkommer ved ultrafiltreringen, behandles med 30 1,6-2,2 M glycin til yderligere rensning.
I US patentskrift nr. 4.348.315 beskrives der en fremgangsmåde til rensning og/eller koncentrering af faktor VIII-komplekset, idet der gås ud fra kryopræcipitat eller Cohn-fraktion 1-0, ved opløsning af et materiale indeholdende 35 faktor VIII sammen med urenheder i 1,5 M glycinopløsning ved 15°C og en pH-værdi på fra 6,3 til 7,8 til opnåelse af 4
DK 163107 B
en opløsning indeholdende faktor VIII og en fældning indeholdende urenhederne. Om ønsket omfatter den nævnte fremgangsmåde det yderligere trin, der involverer tilsætning af PEG til den resulterende, faktor Vlll-indeholdende glycin-5 opløsning, efterfulgt af udfældning og dernæst koncentrering af renset faktor VIII fra opløsningen.
I US patentskrift nr. 4.203.891 beskrives der en fremgangsmåde til forøgelse af udbyttet af antihæmofilisk faktor VIII (AHF) fra helblod, blodplasma eller blodplas-10 mafraktioner ved opsamling af blodet eller plasma eller en plasmafraktion fra en donor direkte i et antikoagulations-middel valgt blandt heparin, natriumheparin og blandinger deraf, hvilket middel ikke formindsker den fysiologiske koncentration af calcium, hvorefter AHF udvindes. Fortrinsvis 15 anvendes det antikoagulerende middel i området fra 0,1 til 10 enheder pr. ml, beregnet på det totale rumfang af helblod eller blodplasma, og AHF udvindes ved fraktionering under anvendelse af glycin, ethanol, ethanol-glycin, polyethylen-glycol eller glycin-polyethylenglycol-fældning.
20 I US patentskrift nr. 4.289.691 beskrives der en fremgangsmåde til opnåelse af AHF fra frisk blodplasma ved tilsætning af heparin, der anvendes i området fra ca. 1 til ca. 10 enheder pr. ml plasma, til frisk plasma opsamlet ved plasmaferese i et calciumchelerende-antikoagulationsmid-25 del, frysning af plasmaet, gensolubilisering af plasmaet, isolering af et kryopræcipitat fra plasmaet, gensolubilisering af kryopræcipitat, tilsætning af en citrat-saltopløs-ning-heparin-puffer til det gensolubiliserede kryopræcipitat, inkubering af det gensolubiliserede, pufrede kryopræcipitat 30 ved en temperatur på fra ca. 0 til ca. 10°C i et tidsrum på over 1 time i nærværelse af heparin-fældbart, i kulden uopløseligt globulin, fraskillelse af et AHF-rigt præcipitat og isolering af AHF fra præcipitatet.
I US patentskrift nr. 4.210.580 beskrives der en 35 fremgangsmåde til fraskillelse og isolering af AHF og fibro-nectin fra plasma ved kryopræcipitering (0-15°C) i nærværelse 5
DK 163107 B
af et sulfateret mycopolysaccharid, f.eks. heparin, til en koncentration på fra ca. 0,15 til ca. 0,25 mg/ml plasma (ca. 22,5 til ca. 37,5 enheder heparin pr. ml plasma). Den fremkomne fibronectin-fældning renses chromatografisk, og 5 den ovenstående heparinvæske blandes med en anionbytterhar-piks, f.eks. DEAE-cellulose, sammen med Heparasorb, til fjernelse af heparin og tilvejebringelse af en ovenstående væske med 90-95% af den oprindelige prokoagulantaktivitet.
I US patentskrift nr. 4.383.989 beskrives der en 10 fremgangsmåde til opnåelse af AHF ved opsamling af frisk opnået plasma eller plasmafraktioner direkte i heparin, na-triumheparin eller blandinger deraf, i en mængde på fra ca.
6 til ca. 8 enheder heparin pr. ml plasma, i fraværelse af en citratpuffer, og anvendelse af en kold inkubationsteknik 15 (0-10*C) under anvendelse af med heprain fældbart, i kulden uopløseligt globulin.
I ES patentskrift nr. 83.07101 (jfr. Derwent Abstract 84-025300/05) beskrives der en fremgangsmåde til fremstilling af AHF med høj renhed ved kold fældning af kryopræcipitat, 20 ekstraktion af faktor VIII i tris-hydrochloridpuffer, deaktivering af prothrombin-komplekset under anvendelse af heparin og selektiv fældning af fibrinogen med polyethylenglycol.
Den fremkomne opløsning behandles med yderligere polyethylenglycol til opnåelse af faktor VIII-indeholdende kryopræ-25 cipitat ved en temperatur fra ca 0 til ca. 2*C.
Selv om fremgangsmåderne til fremstilling af anti-hæmofilisk faktor (også betegnes som "AHF" og som "faktor VIII") har tilvejebragt nogen forbedring af produktkvaliteten med hensyn til forøget specifik aktivitet og renhed, 30 og tillige med hensyn til udbytte eller udvinding af AHF-produktet, er der et fortsat behov for yderligere forbedring af fremgangsmåden til opnåelse af et AHF-koncentrat i højt udbytte og med høj renhed under nedsættelse til det mindst mulige af den formindskelse i specifik AHF-aktivi-35 tet, der er forbundet med fremgangsmåderne ifølge den kendte teknik.
6
DK 163107 B
Den foreliggende opfindelse bygger på den erkendelse, at man ved kombination af to eller flere protein-fældningsmidler, der hidtil er blevet anvendt alene ved en enkelttrinsproces eller ved særskilte og distinkte trin i en 5 flertrinsfremgangsmåde ved fremstillingen af antihæmofilisk faktor ud fra plasma eller en plasmafraktion, under anvendelse af visse områder af mængder og andele af fældningsmidler og udgangsmaterialer indeholdende udgangs-antihæmofilisk faktor, pH-værdi og temperatur af mediet, kan opnå 10 et antihæmofilisk faktor-produkt med forøget specifik aktivitet på ca. 10 eller mere, fibrinogen-niveauer formindsket til området fra 20 mg fibrinogen eller mindre pr.
1.000 enheder antihæmofilisk faktor samt forbedret udbytte af antihæmofilisk faktor i forhold til det udbytte, der 15 opnås ved de kendte metoder.
Opfindelsen angår således en forbedret fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af antihæmofilisk faktor med høj renhed og forøget specifik aktivitet og nedsat fi-brinogen-urenhed, ved hvilken man 20 (a) isolerer et udgangsmateriale indeholdende an tihæmofilisk faktor, ud fra blodplasma eller en blodplasmafraktion, (b) fremstiller en opløsning af det således isolerede udgangsmateriale indeholdende antihæmofilisk faktor fra 25 trin (a), (c) udfører en første plasmaproteinfældning ved tilsætning til opløsningen af udgangsmateriale indeholdende den antihæmofiliske faktor fra trin (b) af ca. 1 til ca. 4% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning 30 fra trin (b), af polyethylenglycol, og indstillet pH-værdien for den resulterende blanding på fra ca. 6,6 til ca. 6,8 og temperaturen af den resulterende blanding til ca. 5 til ca.
10°C og omrører den fremkomne blanding i ca. 15 minutter.
(d) fraskiller fældningen og udvinder den ovenstående 35 vandige polyethylenglycolopløsning hidrørende fra trin (c), (e) udfører en anden plasmaproteinfældning ved ind- 7
DK 163107 B
stilling af polyethylenglycolkoncentrationen af den vandige polyethylenglycolopløsning fra trin (d) på ca. 9 til ca.
15% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning fra trin (d), og indstiller pH-værdien af den resulterende 5 blanding på fra ca. 5,7 til ca. 6,8 og temperaturen af den resulterende blanding på ca. 5 til ca. 10*C og omrører den resulterende blanding i ca. 15 minutter, og (f) fraskiller den ovenstående vandige polyethylenglycolopløsning og udvinder fældningen fra trin (e), og 10 denne fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man (i) kombinerer polyethylenglycolen i den første fældning i trin (c) med en suspension indeholdende fra ca. l til ca. 3 vægt%, beregnet på den totale vægt af suspensionen, af aluminiumhydroxid i vand, idet aluminiumhydroxidsuspen-15 sionen anvendes i forholdet fra ca. 0,1 til ca. 0,25 g alu-miniumhydroxidsuspension pr. g protein i udgangsmaterialet indeholdende udgangs-antihæmofilisk faktor, og at man (ii) kombinerer polyethylenglycolen i den anden fældning i trin (e) med fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet 20 på det totale rumfang af opløsning i trin (i), af glycin og fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet* på det totale rumfang af opløsning i trin (e), af natriumchlorid.
Det således fremstillede, højrensede koncentrat af antihæmofilisk faktor kan opløses i konventionel, fysiologisk 25 kompatibel vandig pufferopløsning, hvortil der om ønsket kan sættes konventionelle farmaceutiske tilsætninger til tilvejebringelse af farmaceutiske præparater. De omhandlede koncentrater af antihæmofilisk faktor eller farmaceutiske præparater indeholdende disse kan anvendes under benyttelse 30 af konventionelle metoder og fremgangsmåder til formindskelse af antallet af eller elimination af infektiøse mikroorganismer og til at gøre dem ikke-inficerende for patienter, der behandles med koncentraterne eller de farmaceutkske præparater .
35
DK 163107B
δ
Som udgangsmaterialet kan der anvendes plasma eller en plasmafraktion indeholdende antihæmofilisk faktor (AHF) . Udgangsmaterialet vil fortrinsvis være en plasmafraktion, nærmere betegnet et AHF-holdigt kryopræcipitat, f.eks. det, 5 der dannes ifølge de fremgangsmåder, der er beskrevet af Hershgold et al. i J. Lab. & Clin. Med. (Π, 23 (1966),
Hagen et al., US patentskrift nr. 3.973.002, og Liu et al., US patentskrift nr. 4.170.639. Kryopræcipitat fremstilles ved optøning af frosset, frisk plasma ved temperaturer fra 10 ca. 2 til ca. 4°C, centrifugering af det optøede plasma og opsamling af den faste remanens, dvs. kryopræcipitatet. Kryopræcipitatet solubiliseres dernæst ved suspendering deraf i vand, vandig pufferopløsning eller vandig saltopløsning, fortrinsvis i vand til injektionsformål, til op-15 nåelse af en dispersion eller opløsning af kryopracipita-tet. Kryopræcipitatet.kan være til stede i den vandige opløsning i en koncentration på fra 1 til ca. 80% (vægt/rum-fangsenhed), fortrinsvis fra ca. 2 til ca. 50%, navnlig fra ca. 5 til ca. 25% og specielt fra ca. 10 til 20% (vægt/rum- 20 fangsenhed).
I en foretrukken udførelsesfonn kan der ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes tilsætning af heparin i forbindelse med et eller flere af de pågældende trin. I en udførelsesform for denne foretrukne fremgangsmåde kan 25 der til mediet til opløsning af kryopræcipitatet eller til en opløsning eller suspension af kryopræcipitatet sættes heparin eller natriumheparin eller blandinger deraf i et mængdeområde fra 10 til 200 enheder pr. ml udgangsdispersion eller -opløsning, fortrinsvis fra ca. 30 til ca. 165 enheder 30 pr. ml, og navnlig ca. 60 enheder pr. ml. Anvendelsen af heparin som her beskrevet ved den omhandlede fremgangsmåde giver anledning til forøget udbytte og i almindelighed forøget renhed (udtrykt ved den specifikke aktivitet) af produktet AHF.
35 9
DK 163107 B
0
Som ovenfor nævnt er de antihæmofilisk faktor-pro-tein-fældningsmidler, der anvendes ved den forbedrede fremgangsmåde ifølge den foreliggende opfindelse, velkendte og er blevet anvendt konventionelt alene ved enkelt-5 trins- eller flertrinsoperationer til isolering og rensning af plasraaproteiner, herunder antihæmofilisk faktor.
Den aluminiumhydroxid-suspension, som anvendes ved den her omhandlede fremgangsmåde, kan være enhver gelsuspension af reagenskvalitet af aluminiumhydroxid i vand. Al-10 mindeligvis vil den aluminiumhydroxid-suspension, der anvendes, være en suspension af fra ca. 1 til ca. 3%, beregnet på den totale vægt af suspensionen, af aluminiumhydroxid i vand. Den mængde aluminiumhydroxid-suspension, der skal anvendes, vil ligge i området til tilvejebringel-15 se af fra ca. 0,1 til ca. 0,25 g aluminiumhydroxid-suspension pr. g protein indeholdt i udgangsmaterialet.
Det polyethylenglycol-fældningsmiddel, som anvendes, er en polymer med høj molekylvægt, almindeligvis dannet ved omsætning af ethylenoxid med ethylenglycol el-20 ler med vand til opnåelse af polykondensationsproduktet med gentagne oxyethylen-grupper mellem en terminal hy-droxylgruppe og en- terminal hydroxyethylgruppe. Poly- ethylenglycolen, der betegnes som PEG, kan med hensyn til molekylvægten ligge i området fra ca. 200 til ca.
25 20.000, fortrinsvis fra ca. 2.000 til ca. 10.000, navnlig fra ca. 3.000 til ca. 8.000 og specielt fra ca. 3.000 til ca. 4.000. Som et eksempel på et polyethylenglycol--produkt, der er egnet til anvendelse ved den her omhandlede fremgangsmåde, og som er kommercielt tilgængeligt, 30 kan der nævnes produktet PEG 3550, der forhandles af Union Carbide Corporation.
Ved den første fældningsoperation kombineres der med den anvendte 1-3%'s aluminiumhydroxid-suspension ca.
1 til ca. 4 vægt%, beregnet på rumfanget af dispersion 35 eller opløsning indeholdende antihæmofilisk faktor, af polyethylenglycol. Ved den anden fældningsoperation kom- 10
DK 163107 B
bineres der med fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på den totale vægt af resulterende opløsning, af glycin og fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på det totale rumfang af resulterende opløsning, af natriumchlorid, fra 5 ca. 9 til ca. 15 vægt%, beregnet på rumfanget af ovenstående opløsning fra den første fældning, af polyethylen-glycol. Koncentrationen af polyethylenglycol ved den anden fældningsoperation kan indstilles på fra ca. 9 til ca. 15% ved tilsætning til den vandige polyethylenglycol-10 opløsning, der fås fra den første fældningsoperation, af en tilstrækkelig mængde polyethylenglycol til opnåelse af polyethylenglycol-koncentrationen på fra 9 til 15 vægts. Alternativt kan den vandige polyethylenglycolopløsning, der fås fra den første fældningsoperation, underkastes 15 ultrafiltrering til opnåelse af en opløsning indeholdende fra ca. 9 til ca. 15% polyethylenglycol, hvortil der derefter kan sættes glycin og natriumchlorid. Typiske ultrafiltreringsmembraner, som kan anvendes ved denne alternative operation, er Amicon ®PM 10 (10.000 dalton), 20 Romicon® PM 10 (10.000 dalton) og lignende produkter.
(Amicon er et varemærke for Amicon Corporation, Lexington, Massachusetts; Romicon er et varemærke for Romicon Corporation, Woburn, Massachusetts). Egnede recirkulationspumper, der kan anvendes ved ultrafiltreringen, omfatter 25 f.eks. den trykdrevne diaphragmapumpe Amicon LP-20 (Amicon Corporation) og Warren-Rupp Sandpiper-pumpen (model SA1-A--DB-l-SS fra Thomas and Associates, Corte Madera, California) .
Som et eksempel på glycinprodukt, der er egnet til 30 anvendelse ved den omhandlede fremgangsmåde, og som er kommercielt tilgængeligt, kan nævnes det glycin-produkt, der forhandles af Aj inomoto Co., Inc., Tokyo, Japan.
Ethvert natriumchloridprodukt af reagenskvalitet kan anvendes ved den anden fældningsoperation ved fremgangsmåden 35 ifølge opfindelsen i kombination med polyethylenglycol og glycin.
11
DK 163107 B
Den samlede fremgangsmåde ifølge den foreliggende opfindelse omfatter således de følgende trin: (a) isolering af et udgangsmateriale indeholdende antihæmofilisk faktor, hvilket materiale er valgt blandt 5 plasma og en plasmafraktion, (b) fremstilling af en vandig opløsning af materialet indeholdende den isolerede antihæmofiliske faktor fra trin (a), idet der eventuelt og fortrinsvis til denne opløsning yderligere tilsættes heparin eller natriumheparin eller 10 blandinger deraf i mængdeområdet fra 10 til 200 enheder pr. ml, beregnet på det totale rumfang af den resulterende opløsning, fortrinsvis fra 30 til 165 enheder pr. ml og specielt ca. 60 enheder pr. ml, (c) udførelse af en første plasmaproteinfældning 15 ved tilsætning til opløsningen af materiale indeholdende den antihæmofiliske faktor fra trin (b) af en opløsning indeholdende fra ca. 1 til ca. 3 vægt%, fortrinsvis fra ca. 2 til ca. 3 vægt%, beregnet på den totale vægt af suspensionen, af aluminiumhydroxid i vand og fra ca. 1 til 20 ca. 4% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning fra trin (b), af polyethylenglycol, og indstilling af pH-værdien i den fremkomne blanding på fra ca. 6,6 til ca. 6,8 og temperaturen af den fremkomne blanding til fra ca. 5 til ca. 10°C, hvorefter den resulterende blan-25 ding omrøres i ca. 15 minutter, (d) fraskillelse af fældningen og udvinding af den ovenstående, vandige polyethylenglycolopløsning, der fås fra trin (c), f.eks. ved en konventionel centrifugeringsmetode , 30 (e) udførelse af en anden plasmaproteinfældning ved indstilling af polyethylenglycolkoncentrationen af den vandige polyethylenglycolopløsning fra trin (d) på fra ca. 9 til ca. 15% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning fra trin (d), f.eks. ved tilsætning 35 af tilstrækkelig polyethylenglycol eller ved udsættelse af den vandige polyethylenglycolopløsning fra trin (d) 12
DK 163107 B
0 for ultrafiltrering, idet der yderligere til den således indstillede opløsning sættes fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på det totale rumfang af opløsning i trin (e), af glycin,og fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på det 5 totale rumfang af opløsningen i trin (e), af natriumchlo-rid, og indstilling af pH-værdien i den fremkomne blanding på fra ca. 5,7 til ca. 6,8 og temperaturen af den resulterende blanding på fra ca. 5 til ca. 10°C samt omrøring af den resulterende blanding i ca. 15 minutter, 10 (f) fraskillelse af den ovenstående, vandige po- lyethylenglycolopløsning og udvinding af fældningen, der fremkommer i trin (e), f.eks. ved en konventionel centrifugering, (g) vaskning af den således udvundne fældning, 15 f.eks. ved anvendelse af en natriumchlorid-glycin-puf- feropløsning ved ca. 2°C og udvinding af fældningen, (h) opløsning af den vaskede fældning fra trin (g) i et egnet vandigt medium, f.eks. en citrat-natrium-chlorid-glycin-pufferopløsning, 20 (i) underkastelse af den opløsning, der fås i trin (h) for sterilfiltrering og (j) frysetørring af den sterilfiltrerede opløsning fra trin (i) til opnåelse af et tørret, højrenset AHF-produkt .
25 De farmaceutiske præparater, der indeholder det produkt, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan behandles under anvendelse af konventionelle metoder til udryddelse eller inaktivering af infektioner eller mikroorganismer eller til formindskelse og elimina-30 tion af infektiviteten af mikroorganismer og til at gøre præparaterne ikke-viralt, især ikke-hepatitis-infektive.
De farmaceutiske præparater kan sterilfiltreres, varmebehandles, behandles kemisk, underkastes ultraviolet bestråling eller behandles på kolloidt siliciumdioxid.
35 Eksempelvis kan præparaterne i fugtig eller tør tilstand (dvs. som det flydende koncentrat i sig selv el- 13
DK 163107 B
ler i frysetørret tilstand) opvarmes ved temperaturer fra ca. 60 til ca. 85°C i et tidsrum fra nogle minutter til flere dage, alt efter behov, almindeligvis i nærværelse af et varmestabiliserende middel. Egnede stabiliserende 5 midler omfatter ikke-polære anioner med molekylvægt større end 80, sukkerarter, reducerede sukkerarter og aminosyrer .
Eksempler på egnede ikke-polære anioner omfatter salte af carboxylater, hydroxycarboxylater og aminosyrer, 10 f.eks. et natrium- eller kaliumcaprylat, -caprat, -oleat, -laurat, -valerat, -acetylphenylalaninat, -acetylleucinat og -acetyltryptophanat. Eksempler på egnede sukkerarter omfatter glucose, sucrose og maltose, for blot at nævne nogle få, og eksempler på egnede reducerede sukkerarter 15 omfatter erythritol og mannitol. Eksempler på egnede aminosyrer omfatter lysin, glycin, prolin og glutaminsyre, for blot at nævne nogle få.
Som eksempler er egnede konventionelle, kendte processer til formindskelse eller eliminering af infektiøse 20 mikroorganismer og til at gøre præparaterne ikke-viralt infektiøse bl.a. de processer, der er beskrevet i US patentskrifterne nr. 3.041.242, 3.057.781, 3.227.626, 4.061.735, 4.137.307, 4.297.344, 2.705.230, 2.987.123, 3.284.301, 3.454.929, 4.379.085, 4.370.264, 4.440.679 og 4.424.206 25 samt de europæiske patentpublikationer nr. 0058993, 0077870 og 0094611.
Ved en foretrukken udførelsesform kan der anvendes den metode til pasteurisering af et termisk sensitivt, terapeutisk aktivt protein, der er angivet i US patentskrift 30 nr. 4.440.679. Ifølge den ovennævnte fremgangsmåde som anvendt ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse blandes AHF-produktet først i et vandigt medium med fra ca.
0,04 til ca. 0,8 M af mindst én aminosyre, der er valgt blandt glycin, lysin, arginin og alanin, sammen med mindst 35 ca. 30%, fortrinsvis fra ca. 54% til mætning, på vægt/rumfangs-basis af en forbindelse valgt blandt sukkerarter og 14
DK 163107 B
reducerede sukkerarter, f.eks. sucrose og erythritol, for blot at nævne nogle repræsentative eksempler. Blandingen opvarmes derpå ved en temperatur fra ca. 60 ti ca. 75°C og ved en pH-værdi på fra ca. 5,5 til ca. 8,0 i mindst ca. 10 5 timer.
I de følgende udførelseseksempler er alle dele og procentangivelser efter vægt, og temperaturer er angivet i celsiusgrader, medmindre andet er anført.
De i eksemplerne angivne enheder pr. ml af AHF-pro-10 koagulant-aktivitet-protein (faktor VIII:C) er enheder pr. ml opløsning som bestemt ved den APTT-metode, hvortil der er henvist i slutningen af eksempel 4. De i eksemplerne angivne specifikke aktiviteter for faktor VIII er tilsvarende angivet på konventionel måde som internationale aktivitets-15 enheder pr. mg totalt protein, idet én international enhed svarer til den mængde faktor VIII:C-aktivitet, der findes i 1 ml normalt humant plasma. Fibrinogenindhold er angivet på konventionel måde og er målt under anvendelse af cel-luloseacetat-elektroforese (CAE), hvor en blanding af pro-20 teiner får lov at vandre på en speciel strimmel, og de respektive mængder af specifikke proteiner, f.eks. fibrinogen, albumin etc., scannes elektronisk til frembringelse af kurver. Arealet under hver kurve svarer til procentmængden af hvert stof og måles elektronisk. I praksis er mængderne af 25 fibrinogen meget nær mængderne angivet efter vægt/rumfang således, at f.eks. 13,1% fibrinogen svarer til 13,1 gram fibrinogen pr. 100 ml opløsning. 1 35 o
DK 163107B
15
Eksempel 1 400 g frisk kryopræcipitat blandes med fire rumfang vand til injektionsformål ved 20-30°C. Til det opløste kryopræcipitat sættes der 64 ml 2%'s Al(0H)g i vandig sus-5 pension (0,16 ml 2%'s Al(OH)^ pr. g kryopræcipitat) og po-lyethylenglycol med en molekylvægt på 3.350 (PEG 3350,
Union Carbide Corporation, 62 g) til opnåelse af 3% PEG i 4.
opløsningen. pH-Værdien indstilles på 6,7 -0,1 med 1 M eddikesyre. Den fremkomne opløsning afkøles til 9°C og cen-10 trifugeres derpå ved 8.500 omdr./minut i 15 minutter. Fæld ningen kasseres, og der fås ca. 1850 ml ovenstående væske.
PEG 3350 (148 g) sættes til den klarede ovenstående væske til opnåelse af en slut-PEG-koncentration på 11%. Fra denne opløsning fældes faktor VIII ved tilsætning af 13% gly-15 cin (vægt/rumfangsenhed, 240,5 g) og 14% NaCl (vægt/rum-fangsenhed, 259 g), idet pH-værdien holdes på ca. 5,7. Opløsningen afkøles til 6°C og centrifugeres ved 8500 omdr./-minut i 15 minutter. Den fremkomne fældning, ca. 30 g, vaskes med glycin-NaCl-puffer (13% glycin/14% NaCl i vandig 20 opløsning) ved 2°C, centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 15 minutter og opløses i ca. 400 g citrat-NaCl-glycin-puf-fer (vandig opløsning indeholdende 0,005 M natriumcitrat, 0,13 M NaCl og 0,1 M glycin, pH = 7,2-7,4). Produktet kan sterilfiltreres og lyofiliseres på konventionel måde. Ef-25 ter sterilfiltrering fås der således 400 g opløsning af højrenset AHF-produkt i citrat-NaCl-glycin-puffer med en specifik aktivitet på 9 enheder/A2gQ, hvor ^gQ er den ultraviolette absorbans af protein ved 280 cm-7 og er et mål for mængden af tilstedeværende protein, idet enheder 30 pr. ml af AHF-prokoagulant-aktivitet-protein (faktor VIII: C) = 35,0.
Sammenligningseksempel Å
Et sammenlignings-AHF-produkt fremstilles i over-35 ensstemmelse med den metode, der er beskrevet i US 'pa- o 16
DK 163107 B
tentskrift nr. 3.631.018 (eksempel 4) på følgende måde: Reagenser
Citratbehandlet saltopløsning: 1 del 0,1 M natrium-5 citrat til 4 vægtdele 0,9%'s saltopløsning.
Glycin-citratbehandlet saltopløsning: tilstrækkelig glycin sættes til den ovennævnte citratbehandlede saltopløsning til dannelse af en 0,1 M opløsning af glycin.
Pufret vaskevand: til destilleret vand sættes der 10 1/100 rumfang pufret citrat, der fremstilles ved indstil ling af 0,5 M natriumcitrat med 0,5 M citronsyre til en pH-værdi på 6,88.
Eddikesyre: der fremstilles såvel 1,0 N som 0,1 N vandige opløsninger.
15 Glycin: der fremstilles en 1,3 M vandig opløsning.
Fremgangsmåde
Til 120 g kryoprscipitat sættes der glycin-citratbehandlet saltopløsning, idet mængden er 1/10 af det plas-20 marumfang, som kryopræcipitatet repræsenterer. Opløsningsprocessen tilvejebringes ved sammenblanding af kryopræcipitatet og 1500 ml glycin-citratbehandlet saltopløsning i varme omgivelser (stuetemperatur, dog ikke over 30°C).
Det opløste kryopræcipitat indstilles på en pH-25 værdi på 6,5 med 0,1 N eddikesyre. Der sættes polyethylen-glycol 4000 til opløsningen således at PEG-koncentrationen bliver 3,5%. Blandingen omrøres forsigtigt ved stuetemperatur i 10 minutter og centrifugeres derpå i 15 minutter ved 5000 omdr./minut. Den ovenstående væske dekanteres fra og 30 indstilles på en pH-værdi på 6,88 med 0,1 N natriumhydroxidopløsning. Der sættes yderligere polyethylenglycol 4000 til opløsningen således, at den endelige PEG-koncentration bliver 10%. Blandingen omrøres forsigtigt ved stuetemperatur i 30 minutter og centrifugeres ved 5000 omdr./minut i 35 1/2 time. Den ovenstående væske dekanteres fra, og fældnin- 0 17
DK 163107 B
gen vaskes i koldt vand ved en temperatur på 2°C. Der udføres derpå rotationsvask i 5 minutter ved 5000 omdr./minut ved en temperatur på -4°C. Den ovenstående væske dekanteres fra, og fældningen genopløses i citratbehandlet 5 saltopløsning.
Den genopløste fældning indstilles på en pH-værdi på 6,88 med 0,1 N eddikesyre, og der genudfældes dernæst med glycin ved afkøling af opløsningen til en temperatur på 6-10°C og tilsætning af en tilstrækkelig mængde glycin 10 til at gøre opløsningen 1,8 M med hensyn til glycin. Blandingen omrøres i 45-60 minutter ved en temperatur på 2-10°C. Glycin-fældningen vaskes og klares og frysetørres derefter.
Den specifikke aktivitet (enheder/A2gQ) og den re-15 lative procentmængde af forskellige proteinbestanddele, bestemt ved kendte celluloseacetat-elektroforesemetoder, af det højrensede AHF-produkt ifølge eksempel 1 og af AHF--produktet ifølge sammenligningseksempel A bestemmes. Resultaterne fremgår af de følgende tabeller I og II.
20 I tabellerne I og II anvendes følgende forkortelser:
Alb = albumin, = a-1-globulin, a2 = a-2-globulin, β = β-globulin, φ - fibrinogen og γ = γ-globulin.
Tabel I
25 Relativ % (gennemsnit af 2 bestemmelser)
SSiiSt Alb J2_ ±_ _L
Eksempel 1 2,2 68,0 2,9 13,4 8,8 4,2 2,6
Eksempel A 0,8 38,4 0,05 29,0 11,6 16,8 4,4 30
Tabel I viser den relative specifikke aktivitet og proteinfordeling i de intermediære produkter, der fås efter den første fældning i eksempel 1 under anvendelse af kombinationen af Al(OH)^-suspension og PEG 3350 (3%) og i 35 eksempel A under anvendelse af PEG alene (3,5%) . Det be-
DK 163107 B
o 18 mærkes, at intermediatet fra fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i besiddelse af egenskaber, der er signifikant forskellige fra egenskaberne af intermediatet fra sammenligningsprocessen ifølge den kendte teknik.
5
Tabel II
Relativ % (gennemsnit af 2 bestemmelser) ak^viSt Alb !l _^2_ __t J_ 10 Eksempel 1 9 O 0 82,5 14,6 0 3,1
Eksempel A 0,4 0 0 8,4 0 92 0
Tabel II viser den relative specifikke aktivitet og proteinfordeling i slutproduktet efter den anden fældning 15 i eksempel 1 under anvendelse af kombinationen af PEG (11%) og glycin (13%) og NaCl (14%) og efter den anden PEG-(10%) og tredje (endelige) glycin-fældning ifølge eksempel A. Det ses, at produktet ifølge eksempel 1, der er repræsentativt for fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, har 20 mere end 20 gange større specifik aktivitet og en ganske anden proteinfordeling, når der sammenlignes med sammenligningsproduktet ifølge eksempel A, der er repræsentativt for fremgangsmåden ifølge den kendte teknik. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Eksempel 2 2 (a) Et andet præparat af højrenset AHF-produkt frem 3 stilles ved i det væsentlige at følge den fremgangsmåde, 4 der er beskrevet i eksempel 1, dog med den undtagelse, at 5 der anvendes 510 g udgangs-kryopræcipitat. Til en opløs- 6 ning af kryopræcipitatet i fire rumfang vand til injek 7 tionsformål ved 20-30°C sattes der 81,6 ml 2%'s A1(0H)3 8 i vandig suspension og 79 g PEG 3350 til opnåelse af 3% 9 PEG i opløsningen. pH-Værdien indstilles på ca. 6,69 med 10
1 M eddikesyre. Den fremkomne opløsning afkøles til 8°C
11 og filtreres derefter. Fældningen bortkastes, og der ud- 0 19
DK 163107 B
vindes ca. 2365 ml ovenstående opløsning. Det fremkomne intermediat har følgende egenskaber: Å280 = ^'-*-7? enheder pr. ml AHF-prokoagulantaktivi-tet-protein (faktor VIII: c)= 12,2; specifik aktivitet = 5 2,93. Den ovenstående opløsning opdeles i portioner på 880 ml og 1500 ml. Portionen på 1500 ml behandles yderligere som beskrevet i det følgende eksempel 3.
(b) Til 880 ml af den ovenstående opløsning, der fås fra. den første proteinfældning, som er beskrevet oven-10 for, sættes der 70 g PEG 3350 til opnåelse af en PEG-slut-koncentration på 11%. Den fremkomne opløsning opdeles i to portioner på hver 470 ml. Den ene portion på 470 ml behandles yderligere som beskrevet i det følgende sammenligningseksempel B.
15 (c) Til den anden portion på 470 ml af opløsnin gen indeholdende 11% PEG sættes der 61,1 g glycin (13% glycin) og 65,8 g NaCl (14% NaCl). pH-Værdien af den fremkomne blanding indstilles på 6,7, og blandingen afkøles til 6°C og centrifugeres derpå ved 8500 omdr./minut i 15 20 minutter. Den fremkomne fældning vaskes med glycin/NaCl--puffer ved 2°C, centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 15 minutter og opløses i citrat-NaCl-glycin-puffer. Efter sterilfiltrering fås der en opløsning med en vægt på 22,4 g. Det fremkomne produkt har følgende egenskaber: 25 A280 = faktor VIII: C = 128,4 enheder pr. ml; spe cifik aktivitet = 11,8 og fibrinogen = 13,1%.
Sammenligningseksempel B
Portionen på 470 ml af opløsningen indeholdende 30 11% PEG, der blev sat til side til yderligere behandling i eksempel 2, afsnit (b), indstilles på en pH-værdi på 6,7, afkøles til 6°C og centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 15 minutter. Den fremkomne fældning vaskes med glycin--NaCl-puffer ved 2°C, centrifugeres ved 8500 omdr./minut 35 i 15 minutter og opløses i citrat-NaCl-glycin-puffer. Ef- 0 20
DK 163107 B
ter sterilfiltrering fås der en opløsning med en vægt på 22,3 g. Det fremkomne produkt har følgende egenskaber: A280 = 22,0; faktor VIII: C = 46,6 enheder pr. ml; specifik aktivitet = 2,21 og fibrinogen = 19,5%.
5
Eksempel 3 (a) Den portion på 1500 ml af den ovenstående opløsning, der er resultatet af den første fældningsoperation ifølge eksempel 2, afsnit (a), underkastes ultrafil- 10 trering ved 32,5°C til fjernelse af vand og formindskelse af rumfanget med en faktor på 3,6, hvorved der fås 415 ml vandig PEG-opløsning med en PEG-slutkoncentration på 10,5 + + -0,5%. Den resulterende opløsning indeholdende 10,5 -0,5% PEG afkøles til 7°C og opdeles i portioner på 210 ml og 15 200 ml. Portionen på 200 ml behandles yderligere som be skrevet i sammenligningseksempel C.
(b) Til portionen på 210 ml af opløsningen indeholdende 10,5 -0,5% PEG sættes der 27,3 g glycin (13% glycin) og 29,4 g NaCl (14% NaCl). pH-Værdien af den resulterende 20 blanding indstilles på 7,06, og blandingen afkøles til 9°C og centrifugeres derpå ved 8500 omdr./minut i 15 minutter.
Den fremkomne fældning vaskes med glycin-NaCl-puffer ved 2°C, centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 15 minutter og opløses i citrat-NaCl-glycin-puffer. Efter sterilfiltrering 25 fås der en opløsning med en vægt på 23,2 g. Det fremkomne produkt har følgende egenskaber: ^øq = 8,61; faktor VIII: C = 113,6 enheder pr. ml; specifik aktivitet = 13,2 og fibrinogen 27,7%. 1 2 3 4 5 6
Sammenligningseksempel C
2
Portionen på 200 ml af opløsningen indeholdende 10,5 3 -0,5% PEG, der er sat til side til yderligere behandling i 4 eksempel 3, afsnit (a), indstilles på en pH-værdi på 7,06, 5 afkøles til 7-9°C og centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 6 15 minutter. Den fremkomne fældning vaskes med glycin-NaCl- 0 21
DK 163107 B
-puffer ved 2°C, centrifugeres ved 8500 omdr./minut i 15 minutter og opløses i citrat-NaCl-glycin-puffer. Efter sterilfiltrering fås der en opløsning med en vægt på 20,4 g. Det fremkomne produkt har følgende egenskaber: 5 Å280 = faktor VIII: C = 4,4 enheder pr. ml; speci fik aktivitet = 0,4 og fibrinogen = 33,6%.
Eksempel 4
Til ca. 2,75 kg opløsning af ca. 100 g pasta el-10 ler fældning indeholdende AHF udvundet fra et andet fældningstrin ifølge eksempel 1, opløst i citrat-NaCl-glycin--puffer som beskrevet i eksempel 1 ovenfor, sættes der glycin, lycin, CaCl2 og sucrose til opnåelse af en blanding indeholdende 0,8 mol glycin pr. liter, 0,8 mol lysin 15 pr. liter, 2,0 mmol CaCl2 pr. liter og 1,2 g sucrose pr. ml. Blandingen opvarmes til 60°C i 10 timer til pasteurisering, og den diafiltreres derpå mod citrat-NaCl-glycin--puffer. Efter sterilfiltrering fås der 2,55 kg opløsning med følgende egenskaber: A2gQ = 3,91; AHF-prokoagulant-ak-20 tivitet (VIII: C). = 32,2 enheder pr. ml; specifik aktivitet = 8,26 enheder/A2gQ. (Prokoagulant-aktivitet (faktor VIII: C) bestemmes ved APTT-éttrinsmetoden, der er modificeret på basis af metoderne ifølge Langdell et al., J. Lab. Clin. Med. 41, 637 (1953) og Procter et al., 25 Am. J. Clin. Path. 3S_, 212 (1961) .
Eksempel 5
Til ca. 200 ml opløsning af pasta eller fældning indeholdende AHF, der er udvundet fra et andet fældnings-30 trin ifølge eksempel 1, idet der gås ud fra 250 frisk kryopræcipitat under anvendelse af i de tilsvarende forhold nedsatte mængder reagenser, opløst i ca. 250 ml citrat--NaCl-glycin-puffer som beskrevet i eksempel 1 ovenfor, sættes der albumin til opnåelse af en opløsning indehol-35 dende 2,5 mg albumin pr. ml. Blandingen af AHF-koncentrat 0 22
DK 163107 B
og albumin sterilfiltreres, fyldes aseptisk på flasker og frysetørres under anvendelse af konventionelle metoder.
Det frysetørrede AHF-koncentrat, der er indeholdt i flaskerne, opvarmes til 68°C i 72 timer til pasteurisering.
5 Dernæst rekonstitueres det tørrede og varmebehandlede AHF--koncentrat i 10 ml vand til injektionsformål. Det rekonstituerede og varmebehandlede AHF-koncentrat fra en repræsentativ flaske har følgende egenskaber: proteinindhold = 3,00 mg/ml; faktor VIII: C = 23,8 enheder pr. ml; specifik 10 aktivitet = 7,93 enheder pr. mg protein.
Eksempel 6
Dette eksempel illustrerer den yderligere forbedring, der opnås i overensstemmelse med den udførelsesform for den 15 foreliggende opfindelse, ved hvilken der anvendes tilsætning af heparin til opløsningen af udgangsmaterialet. Ved i det væsentlige at følge den i eksempel 1 beskrevene fremgangsmåde fremstilles der et højrenset AHF-produkt med heparin, fremstillet ved inkorporering af heparinet i ud-20 gangsvandet, hvori udgangs-kryopræcipitatet opløses, eller uden heparin under de betingelser, der er angivet i den følgende tabel III.
25 1 35 0 23
DK 163107 B
Tabel III
Specifik
Eksempel Kryo Heparinmængde Aktivitet % Udbytte af nr. (g) (yi/ml) (U/A28q) AHF-produkt 5 a1 ‘ 400 0 12,2 49,92 b1 400 0 18,5 52,20 c2 4.000 0 12,0 41,40 d2 4.200 0 10,0 59,86 e3 310 162 18,2 45,76 10 f4 11.000 162 9,8 53,51 g5 3.000 0 14,2 62,34 h5 3.000 60 9,4 73,16 16 3.500 0 6,7 31,46 j6 3.350 60 12,0 51,17 15 k7 5.000 0 14,0 48,69 17 5.000 60 11,7 66,67 m8 2.300 0 11,3 42,02 n8 2.350 60 16,4 61,76 1
Fodnoter: 1 % udbytte er beregnet på et gennemsnitligt kryo-udbyt-te på 8 g plasma pr. liter.
2 % udbytte er beregnet på faktisk udbytte af kryo bestemt ud fra plasma.
3 Heparin tilsættes efter indstilling af pH på 7.
4 Heparin tilsættes inden tilsætning af Al(OH)^-suspension.
5 Udgangsmateriale er frisk kryo afledt af plasma med en høj titer af CMV.
30 6 Udgangsmateriale er frosset kryo afledt af plasma med en høj titer af rabiesvirus.
7 Udgangsmateriale er frosset kryo afledt af plasma med en høj titer af CMV.
8 Udgangsmateriale er frisk kryo afledt af plasma med en 35 lav titer af Pseudomonas.
0 24
DK 163107 B
De i tabel III angivne data illustrerer, at udover den fordel, der opnås ved flertrinsfremgangsmåden ifølge opfindelsen, hvor det højrensede AHF-produkt giver en formindskelse af fibrinogenniveauet i produktet i forhold til 5 niveauet for fibrinogen i et sammenligneligt produkt, der er fremstillet ved de hidtil kendte fremgangsmåder, kan den samlede udbytteforbedring i overensstemmelse med den her omhandlede flertrinsfremgangsmåde forbedres yderligere ved tilsætning af heparin ved processen, f.eks. i det vandige 10 medium, der anvendes til opløsning af kryopræcipitatet, eller til en opløsning eller suspension af kryopræcipitat.
Skønt de ovenfor angivne data viser variation i specifik aktivitet, som ikke forstås og ikke tillader identifikation af noget mønster, bevirker dog den fordelagtige forøgelse af 15 udbyttet, navnlig ved fremstillinger i større skala, og formindskelsen i fibrinogenniveauer, at den variable, eller endog lavere, specifikke aktivitet er acceptabel.
Det højrensede AHF-produkt, der fremstilles ifølge den udførelsesform for opfindelsen, ved hvilken der anven-20 des tilsætning af heparin, kan behandles som beskrevet i eksempel 5 ("tør" varmebehandling ved 68°C i 72 timer) eller eksempel 4 ("fugtig" varmebehandling ved 60°C i 10 timer) i nærværelse af 0,8 M glycin, 0,8 M lysin, 2,0 mmol CaC^ og 1,2 g sucrose pr. ml til pasteurisering af produktet eller præpa-25 ratet. Repræsentative prøver af AHF, der er fremstillet under anvendelse af tilsat heparin (60 p/ml) som beskrevet ovenfor i eksempel 6h, sterilfiltreres og varmebehandles "tørt" som beskrevet i eksempel 5, hvorved der fås et endeligt gennemsnitligt procentligt udbytte på 80%, bereg-30 net på udgangsmængden af AHF inden opvarmning ved det "tørre" varmebehandlingstrin. Repræsentative prøver af AHF, der er fremstillet ved anvendelse af tilsat heparin (60 p/ml) som beskrevet i eksempel 6h, 6j, 61 og 6n ovenfor, varmebehandles "fugtigt" som beskrevet i eksempel 4, hvorved der 35 fås et endeligt gennemsnitligt udbytte på 72%, beregnet på udgangs-AHF, inden opvarmning ved det "fugtige" varmebehandlingstrin .
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et koncentrat af antihæmofilisk faktor med høj renhed og forøget speci-5 fik aktivitet og nedsat fibrinogen-urenhed, ved hvilken man (a) isolerer et udgangsmateriale indeholdende antihæmofilisk faktor, ud fra blodplasma eller en blodplasmafraktion, 10 (b) fremstiller en opløsning af det således isole rede udgangsmateriale indeholdende antihæmofilisk faktor fra trin (a), (c) udfører en første plasmaproteinfældning ved tilsætning til opløsningen af udgangsmateriale indeholdende 15 den antihæmofiliske faktor fra trin (b) af ca. 1 til ca. 4% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning fra trin (b), af polyethylenglycol, og indstiller pH--værdien for den resulterende blanding på fra ca. 6,6 til ca. 6,8 og temperaturen af den resulterende blanding til 20 ca. 5 til ca. 10°C og omrører den fremkomne blanding i ca. 15 minutter, (d) fraskiller fældningen og udvinder den ovenstående vandige polyethylenglycolopløsning hidrørende fra trin (c), 25 (e) udfører en anden plasmaproteinfældning ved ind stilling af polyethylenglycolkoncentrationen af den vandige polyethylenglycolopløsning fra trin (d) på ca. 9 til ca. 15% (vægt/rumfangsenhed), beregnet på rumfanget af opløsning fra trin (d), og indstiller pH-værdien af den re-30 suiterende blanding på fra ca. 5,7 til ca. 6,8 og..temperaturen af den resulterende blanding på ca. 5 til ca. 10°C og omrører den resulterende blanding i ca. 15 minutter, og (f) fraskiller den ovenstående vandige polyethylenglycolopløsning og udvinder fældningen fra trin (e), k e n-35 detegnet ved, at man 0 DK 163107 B (i) kombinerer polyethylenglycolen i den første fældning i trin (c) med en suspension indeholdende fra ca. 1 til ca. 3 vægt%, beregnet på den totale vægt af suspensionen, af aluminiumhydroxid i vand, idet alumi-5 niumhydroxidsuspensionen anvendes i forholdet fra ca. 0,1 til ca. 0,25 g aluminiumhydroxidsuspension pr. g protein i udgangsmaterialet indeholdende udgangs-anti-hæmofilisk faktor, og at man (ix) kombinerer polyethylenglycolen i den anden 10 fældning i trin (e) med fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på det totale rumfang af opløsning i trin (i), af glycin og fra ca. 10 til ca. 20 vægt%, beregnet på det totale rumfang af opløsning i trin (e)f af natriumchlo-rid. 15
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegne t ved, at den blodplasmafraktion indeholdende anti-hæmofilisk faktor, der isoleres fra blodplasma i trin (a), er et kryopræcipitat. 20
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegne t ved, at (i) den første fældning i trin (c) udføres under anvendelse af fra ca. 2 til ca. 3 vægt% polyethylen-glycol og fra ca. 2 til ca. 3% suspension af aluminiumhy- 25 droxid i vand i forholdet fra ca. 0,15 til ca. 0,2 g aluminiumhydroxidsuspension pr. g protein af udgangs-blod-plasmafraktionen, og at (ii) den anden fældning i trin (e) udføres under anvendelse af polyethylenglycol i en mængde fra ca. 10 til ca. 15 vægt%, ca. 12 til ca. 18 vægt% 30 glycin og ca. 12 til ca. 18 vægt% natriumchlorid, 1 2 3 Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at (i) den første fældning i trin (c) udføres 2 under anvendelse af ca. 2 til ca. 3 vægt% polyethylengly- 3 35 col og ca. 2 til ca. 3% suspension af aluminiumhydroxid i 0 DK 163107 B vand i et forhold fra ca. 0,15 til ca. 0,2 g aluminiumhy-droxidsuspension pr. g protein af udgangs-blodplasmafraktionen, og at (ii) den anden fældning i trin (e) udføres under anvendelse af polyethylenglycol i en mængde fra ca. 5 10 til ca. 15 vægt%, ca. 12 til ca. 18 vægt% glycin og ca. 12 til ca. 18 vægt% natriumchlorid.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegne t ved, at (i) den første fældning i trin (c) udføres 10 under anvendelse af ca. 3 vægt% polyethylenglycol og en ca. 3%'s suspension af aluminiumhydroxid i vand i forholdet ca. 0,16 g aluminiumhydroxidsuspension pr. g protein af udgangs-blodplasmafraktionen, og at (ii) den anden fældning i trin (e) udføres under anvendelse af polyethylen-15 glycol i en mængde på fra ca. 10 til ca. 12 vægt%, ca. 12 til ca. 15 vægt% glycin og ca. 12 til ca. 15 vægt% natriumchlorid.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendeteg-20 net ved, at (i) den første fældning i trin (c) udføres under anvendelse af ca. 3 vægt% polyethylenglycol og en ca. 3%'s suspension af aluminiumhydroxid i vand i forholdet ca. 0,16 g aluminiumhydroxidsuspension pr. g protein af udgangs-blodplasmafraktionen, og at (ii) den anden 25 fældning i trin (e) udføres under anvendelse af polyethylenglycol i en mængde på ca. 11 vægt%, ca. 13 vægt% glycin og ca. 14 vægt% natriumchlorid. 1 2 3 4 5 6 7 Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg- 2 30 net ved, at der i mindst ét af trinene (b) og (c) til 3 sættes i det mindste enten heparin, natriumheparin eller 4 en blanding deraf i mængdeområdet fra 10 til 200 enheder 5 pr. ml opløsning eller suspension, idet man om ønsket yder 6 ligere behandler den sterilfiltrerede, solubiliserede fæld- 7 35 ning til formindskelse eller eliminering af infektiøse mi- DK 163107B 0 kroorganismer og til at gøre den sterilfiltrerede, solubi-liserede fældning ikke-hepatitis-infektiøs.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg-5 net ved, at man yderligere solubiliserer den udvundne fældning fra trin (f), sterilfiltrerer den solubiliserede fældning og dernæst frysetørrer den sterilfiltrerede solubiliserede fældning, idet man om ønsket yderligere behandler den sterilfiltrerede solubiliserede fældning til for-10 mindskelse og eliminering af infektiøse mikroorganismer og til at gøre den sterilfiltrerede, solubiliserede fældning ikke-hepatitis-infektiøs.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendeteg-15 net ved, at der i trin (b) tilsættes ca. 60 enheder pr. ml af i det mindste enten heparin, natriumheparin eller en blanding deraf.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendete g-20 net ved, at der yderligere anvendes et trin til behandling af den sterilfiltrerede, solubiliserede fældning til formindskelse eller eliminering af infektiøse mikroorganismer og til at gøre den sterilfiltrerede, solubiliserede fældning ikke-hepatitis-infektiøs. 25 1 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/658,081 US4543210A (en) | 1984-10-04 | 1984-10-04 | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US65808184 | 1984-10-04 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK450785D0 DK450785D0 (da) | 1985-10-03 |
| DK450785A DK450785A (da) | 1986-04-05 |
| DK163107B true DK163107B (da) | 1992-01-20 |
Family
ID=24639818
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK450785A DK163107B (da) | 1984-10-04 | 1985-10-03 | Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4543210A (da) |
| EP (1) | EP0176926B1 (da) |
| JP (1) | JPH0676337B2 (da) |
| AT (1) | ATE44236T1 (da) |
| CA (1) | CA1243950A (da) |
| DE (1) | DE3571201D1 (da) |
| DK (1) | DK163107B (da) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3481109D1 (de) * | 1983-05-09 | 1990-03-01 | Novo Nordisk As | Antihaemophilie-faktor-viii-konzentrat und dessen herstellungsverfahren. |
| SE8501050D0 (sv) * | 1985-03-05 | 1985-03-05 | Kabivitrum Ab | Biologically active fragments of human antihemophilic factor and method for preparation thereof |
| CA1293941C (en) * | 1985-11-08 | 1992-01-07 | Maria Erlinda Co-Sarno | Method for preparing antihemophilic factor (ahf) by cold precipitation and for improving solubility of recovered ahf product |
| ATE73820T1 (de) * | 1986-03-27 | 1992-04-15 | Octapharma Ag | Verfahren zur herstellung eines hochgereinigten antihaemophilie-faktors. |
| AT391808B (de) * | 1986-11-03 | 1990-12-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion |
| DE3851696T2 (de) * | 1987-12-21 | 1995-02-23 | Miles Inc | Faktor VIII- Gelfiltration. |
| US5177191A (en) * | 1987-12-21 | 1993-01-05 | Miles, Inc. | Gel filtration of factor VIII |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| DK0399321T3 (da) * | 1989-05-24 | 1993-08-09 | Miles Inc | Gelfiltrering af varmebehandlet faktor VIII |
| USH1509H (en) * | 1989-06-09 | 1995-12-05 | Eran; Harutyun | Heparin enhanced process for separating antihemophilic factor (Factor VIII) and fibronectin from cryoprecipitate |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| DK162233C (da) * | 1989-11-09 | 1992-03-16 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til isolering af faktor viii fra blodplasma og pharmaceutisk praeparat indeholdende den saaledes isolerede fator viii |
| IT1248723B (it) * | 1990-06-12 | 1995-01-26 | Scalvo S P A | Processo per la purificazione del fattore viii e fattore viii ottenuto con tale processo |
| FR2664165B1 (fr) * | 1990-07-03 | 1992-10-16 | Lille Transfusion Sanguine | Composition pour stabiliser le plasma sanguin en cours de pasteurisation. |
| US5525519A (en) * | 1992-01-07 | 1996-06-11 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
| DE4202667C1 (da) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| US5288853A (en) * | 1992-04-30 | 1994-02-22 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii purification process |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| DE60035260T2 (de) | 1999-02-22 | 2007-10-18 | The University Of Connecticut, Farmington | Neue albuminfreie faktor viii formulierungen |
| EP1250929A4 (en) * | 1999-12-20 | 2004-12-29 | Mitsubishi Pharma Corp | BY POROUS MEMBRANE-TREATED, VIRUS-FREE PLASMA PROTEIN COMPOUND AND ITS MANUFACTURING PROCESS |
| NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US29698A (en) * | 1860-08-21 | Improvement in harvesters | ||
| NL286954A (da) * | 1962-01-03 | |||
| US3652530A (en) * | 1967-08-28 | 1972-03-28 | American Nat Red Cross | Antihemophilic factor prepared from blood plasma using polyethylene glycol |
| US3631018A (en) * | 1970-05-01 | 1971-12-28 | Baxter Laboratories Inc | Production of stable high-potency human ahf using polyethylene glycol and glycine to fractionate a cryoprecipitate of ahf concentrate |
| US3682881A (en) * | 1970-10-02 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol |
| US3803115A (en) * | 1972-05-17 | 1974-04-09 | Baxter Laboratories Inc | Stabilization of ahf using heparin |
| US4069216A (en) * | 1975-06-16 | 1978-01-17 | Edward Shanbrom, Inc. | Simplified methods for preparation of very high purity Factor VIII concentrate |
| US4188318A (en) * | 1975-06-16 | 1980-02-12 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity Factor VIII concentrate |
| US4104266A (en) * | 1977-04-14 | 1978-08-01 | American National Red Cross | Method for preparation of antihemophilic factor |
| CA1074698A (en) * | 1977-12-19 | 1980-04-01 | Gail A. Rock | Method of collecting anti-hemophilic factor viii from blood and blood plasma |
| US4170639A (en) * | 1978-07-10 | 1979-10-09 | Warner-Lambert Company | Antihemophilic factor concentrate and its production |
| US4210580A (en) * | 1979-06-19 | 1980-07-01 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF and fibronectin from blood plasma |
| FR2460305A2 (fr) * | 1979-06-29 | 1981-01-23 | Merieux Inst | Procede de preparation d'un concentre de facteur viii |
| SE448945B (sv) * | 1979-12-20 | 1987-03-30 | Blombaeck E G B | Forfarande for rening och /eller koncentrering av faktor viii-komplexet |
| US4289691A (en) * | 1980-01-18 | 1981-09-15 | The Canadian Red Cross Society | Method of obtaining intermediate purity factor VIII |
| US4386068A (en) * | 1980-02-26 | 1983-05-31 | Cutter Laboratories, Inc. | Antihemophilic factor concentrate and method for preparation |
| US4294826A (en) * | 1980-05-07 | 1981-10-13 | Armour Pharmaceutical Company | Process for the preparation of highly purified antihemophilic factor |
| AT369263B (de) * | 1980-08-27 | 1982-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf) -hochkonzentrates |
| US4359463A (en) * | 1980-11-26 | 1982-11-16 | Rock Gail A | Stabilization of Factor VIII activity in whole blood or blood plasma |
| US4435318A (en) * | 1981-05-22 | 1984-03-06 | Ionics, Incorporated | Electrodialysis preparation of purified AHF concentrate |
| CA1178887A (en) * | 1981-10-01 | 1984-12-04 | Gail A. Rock | Factor viii concentrates prepared from heparinized plasma by the application of a cold precipitation technique |
| US4495175A (en) * | 1982-08-05 | 1985-01-22 | University Of Rochester | Preparation of highly purified human antihemophilic factor |
| US4486410A (en) * | 1984-02-09 | 1984-12-04 | Armour Pharmaceutical Company | Heat defibrinogenation of AHF preparation |
-
1984
- 1984-10-04 US US06/658,081 patent/US4543210A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-06-28 CA CA000486007A patent/CA1243950A/en not_active Expired
- 1985-07-31 JP JP60167835A patent/JPH0676337B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-24 EP EP85112070A patent/EP0176926B1/en not_active Expired
- 1985-09-24 AT AT85112070T patent/ATE44236T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-09-24 DE DE8585112070T patent/DE3571201D1/de not_active Expired
- 1985-10-03 DK DK450785A patent/DK163107B/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE44236T1 (de) | 1989-07-15 |
| JPH0676337B2 (ja) | 1994-09-28 |
| DE3571201D1 (en) | 1989-08-03 |
| DK450785A (da) | 1986-04-05 |
| EP0176926B1 (en) | 1989-06-28 |
| JPS6187626A (ja) | 1986-05-06 |
| CA1243950A (en) | 1988-11-01 |
| US4543210A (en) | 1985-09-24 |
| DK450785D0 (da) | 1985-10-03 |
| EP0176926A3 (en) | 1987-10-28 |
| EP0176926A2 (en) | 1986-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK163107B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed | |
| EP0037078B1 (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor xiii | |
| US5099003A (en) | Method of preparing a sterile plasma-protein solution containing fibrinogen and factor xiii | |
| US5151499A (en) | Production method for protein-containing composition | |
| DK156698B (da) | Fremgangsmaade til pasteurisering af et materiale indeholdende et termisk foelsomt, terapeutisk aktivtprotein valgt blandt alfa-l-antitrypsin, antithrombin-iii, praekallikrein, antihaemofil faktor (faktorviii) og fibronectin | |
| DK174066B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat | |
| JPH0543688B2 (da) | ||
| AU549584B2 (en) | Heat stabilization of plasma proteins | |
| EP0252392B1 (en) | Viral inactivation and purification of active proteins | |
| US4814435A (en) | Method of producing a factor VIII (AHF) containing fraction | |
| JPH0348888B2 (da) | ||
| DK167900B1 (da) | Middel til behandling og forebyggelse af haemostatiske forstyrrelser indeholdende vaevsprotein pp4 | |
| USH1509H (en) | Heparin enhanced process for separating antihemophilic factor (Factor VIII) and fibronectin from cryoprecipitate | |
| EP0011739B1 (en) | Process for obtaining blood coagulation factor xiii derived from human placenta | |
| WO2007046631A1 (en) | Method for manufacturing high purified factor ix | |
| US5043428A (en) | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| JPS597695B2 (ja) | 免疫制御作用を有するペプタイド製剤 | |
| JPH01305036A (ja) | 血漿蛋白成分の加熱処理方法および血漿蛋白成分製剤 | |
| Ng et al. | Preparation of high purity factor VIII concentrates | |
| JPS62195331A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| JP2678193B2 (ja) | ヒト血漿由来血液凝固第ｘ▲ｉｉｉ▼因子の製造方法 | |
| DK175644B1 (da) | Fremgangsmåde til stabilisering af biologiske og farmaceutiske midler under inaktivering af virale og bakterielle kontaminanter | |
| EP0076870A1 (en) | Process for the preparation of highly purified antihemophilic factor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PRF | Application refused |