DK174066B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat Download PDFInfo
- Publication number
- DK174066B1 DK174066B1 DK198503981A DK398185A DK174066B1 DK 174066 B1 DK174066 B1 DK 174066B1 DK 198503981 A DK198503981 A DK 198503981A DK 398185 A DK398185 A DK 398185A DK 174066 B1 DK174066 B1 DK 174066B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- viii
- solution
- per
- factor viii
- preparation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Conductive Materials (AREA)
- Glass Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
i DK 174066 B1
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne, og opfindelsen angår tillige en sådan fremgangsmåde, der er ejendom-5 melig ved det i krav 2's kendetegnende del angivne. Foretrukne udførelsesformer for disse fremgangsmåder er angivet i krav 3 og 4.
Det omhandlede præparat kan anvendes til behandling af blodkoagulationsforstyrrelser.
10 Blodkoagulationen er en kompleks proces, der forløber over flere reaktionstrin, og ved hvilken der er involveret mindst 13 koagulationsfaktorer (F), der betegnes med romertal. Ved koagulationsfaktorerne er der i overvejende grad tale om proteiner og specielt sådanne, som er 15 udstyret med egenskaberne for proteaser eller acceleratorer.
Det eneste virksomme stof er fibrinogen, som ved beskadigelser af thrombin omdannes til sin uopløselige form, fibrinet, der danner den primære sårtillukning. Når en af de 13 koagulationsfaktorer mangler, udebliver dannelsen af 20 thrombin og fibrin, og følgen er blødninger. Et sådant tilfælde foreligger ved hæmofili A, den mest udbredte blødningssygdom, der er karakteriseret ved en mangel på faktor VIII. Hæmofili A og B (F IX-mangel) kan kun behandles ved virksom terapi ved substitution af den manglende faktor.
25 Udvindingen af faktor F VIII fra humant plasma med godt udbytte og med høj renhed, således som dette specielt er nødvendigt til selvbehandling af patienter, udgør stadig et problem, der endnu ikke er blevet løst optimalt.
Dette gælder først og fremmest for pasteuriserede F Vlll-kon-30 centrater, der har fortrængt den gængse handelsvare i tiltagende grad, fordi man derved kunne eliminere risikoen for en hepatitisoverføring.
Isoleringen af en højrenset F VIII i godt udbytte vanskeliggøres først og fremmest ved, at F VIII ganske 35 vist koncentreres i kryopræcipitatet, men sammen med fibrinogen og fibronectin, der er to forholdsvis højmolekylære og DK 174066 B1 2 tungtopløselige proteiner med lignende fysisk-kemiske egenskaber som de, F VIII er forbundet med.
Et faktor VIII-koncentrat skal være så rent som overhovedet muligt, altså frit for uønskede andre proteiner 5 og specielt frit for immunoglobuliner, herunder isoagglutini-nerne, eftersom det findes angivet, at tilførslen af uspecifikke proteiner fører til for store krav til det retikulo-endotheliale system (RES), og til en forringelse af immunforsvaret, der er karakteriseret ved en ændring i sammensæt-10 ningen af lymfocyt-populationen og immunoglobulinerne. Dette får forøget betydning i forbindelse med den kendsgerning, at hæmofile skal behandles med sådanne F VIII-koncentrater i hele levetiden. Herudfra fremkommer kravet om et nativt, højrenset, pasteuriseret F Ill-koncentrat, dvs. et produkt, 15 som udelukker en overførsel af hepatitisvira og andet infek-tiøst materiale og en sensibilisering overfor alloantigener.
En fremgangsmåde til fremstilling af et sådant præparat, der udelukker en overføring af hepatitis og er isoagglu-tininfrit, er genstand for den foreliggende opfindelse.
20 Det har vist sig, at en F Vlll-holdig opløsning, der er praktisk taget fri for faktorer af prothrombinkom-plekset (F II, VII, IX og X), kan udvindes ved, at man på i og for sig kendt måde efter tilsætning af stabilisatorer til beskyttelse mod en termisk inaktivering, pasteuriserer og 25 behandler den opvarmede opløsning ved en pH-værdi på 5,5 med en anionbytter, vasker den absorberede F VIII fri for ledsageproteiner, især fibrinogen, fibronectin og immu-noglobuliner, herunder isoagglutininer, eluerer med en koncentreret opløsning af Na-, K- eller Ca-salte med et 30 halogen og f.eks. ved udfældning isolerer fra eluatet.
Ecteola-cellulose og en QAE- (Quaternaty Amino Ethyl-) gruppebærende anionbytter er allerede blevet anvendt til F VIII-rensningen, jf. S. van Creveld et al., Thromb.
Diath. Haem., VI, nr. 2/3, 282 (1961), og R. Baugh et al., 35 Bioch. Biophys. Acta, 371, 360 (1974). En overføring til teknisk eller produktionsmålestok var imidlertid ikke mulig.
3 DK 174066 B1
Kun til højrensning af forfraktioneret materiale kunne der anvendes ionbytterchromatografi, jf. Ph. J. Fay et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci., 79, 7200 (1982).
Adsorptionen med højere specificitet finder 5 kun sted ved en pH-værdi omkring 5,5. Herved udfældes imidlertid allerede de fleste af de i kryopræcipitatet indeholdte proteiner, først og fremmest humanfibrinogenet, og specielt ved kontakten med adsorbehset i søjlen. Desuden kræves der ifølge de citerede litteratursteder forholdsvis 10 store mængder adsorbens. Dette synes igen at have haft en enorm indflydelse på udbyttet, som var minimalt, åbenbart betinget af en uspecifik adsorption af F VIII - dens fysiologiske opgave er jo at adhærere til en ufysiologisk overflade - på de store mængder adsorbens. Det er også blevet kon-15 stateret, at det på en QAE-bytter højtrensede materiale hurtigt mister aktivitet, og derfor er anionbyttere ikke blevet anvendt til F VIII-produktionen.
Ifølge opfindelsen har det imidlertid nu overraskende vist sig, at en chromatografi på basiske ionbyttere 20 er særdeles velegnet til produktion af F VHI-præparater.
Det er overraskende, at man ud fra et pasteuriseret kryopræ-cipitat i ét trin ved hjælp af en anionbytterchromatografi kan udvinde et høj renset F VHI-præparat.
Opfindelsen angår således en fremgangsmåde til 25 fremstilling af et faktor VIII-præparat, som angivet i kravene, jf. ovenfor.
Som udgangsmateriale kommer et ifølge Pool et al., Nature, 203, 312 (1964) udvundet kryopræcipitat, Cohn--fraktion I, jfr. G.R. Minot et al., J.Clin. Invest., 2j4, 704 30 (1945), plasma, F VIII: C-holdigt cellekulturmedium samt ud fra dette udvundne F VIII-holdige bifraktioner i betragtning. Fortrinsvis anvender man dog direkte kryopræcipitat eller Cohn I-fraktion.
Som stabilisatorer til beskyttelse mod en termisk 35 inaktivering af F VIII under pasteuriseringen kan der anvendes carbonhydrater og aminosyrer, fortrinsvis 35-60 gram 4 DK 174066 B1 o saccharose pr. 100 gram opløsning og 1-3 mol glycin pr. liter opløsning samt eventuelt calciumioner. Der kan f.eks. gås frem i overensstemmelse med de tyske offentliggørelsesskrifter nr. 2.916.711 og 3.237.512.
5 Som anionbyttere til adsorptionen af F VIII kom mer f.eks. DEAE-, QAE- eller Ecteola-gruppebærende ionbyttere og således især sådanne på basis af cellulose, Sephadex eller Sepharose i betragtning, dog fortrinsvis DEAE-Sepharose.
Til forskel fra van Creveld og Baugh, jf. det 10 foregående, kommer disse ionbyttere dog i betragtning til F VIII-rensningen, men dog under betingelser, der ikke tidligere var kendt og som skal beskrives nærmere i det følgende .
Adsorptionsbetingelserne har vist sig at være 15 væsentlige. Det har nemlig ligeledes overraskende vist sig, at F VIII i fysiologisk saltmiljø, fortrinsvis ved en pH-værdi på 5,5, vidtgående bindes selektivt til DEAE-Sepharose, medens ledsageproteiner såsom fibrinogenet og fibronectinet forbliver i den ovenstående væske (ved batch-metoden) eller 2o passerer en søjle. Endelig har det også overraskende vist sig, at en pasteuriseret opløsning af kryoglobulinerne overhovedet kan chromatograferes ved en pH-værdi på 5,5 i fysiologisk saltmiljø, da der under disse betingelser allerede udfældes bestemte kryoglobuliner, først og fremmest fibri-25 nogenet. Adsorptionen og specielt den specificitet, med hvilken F VIII bindes til anionbytterne, aftager kraftigt til neutralpunktet. Under normale chromatograferingsbetin-gelser belastes DEAE dog først ved en pH-værdi på over 7,0. Udfældningen udebliver imidlertid ved den her beskrevne 30 fremgangsmåde, fordi carbonhydraterne, som fra pasteuriseringen foreligger i kryoopløsningen, holder fibrinogenet og Cig i opløsning i let surt medium.
En fordel ved den beskrevne fremgangsmåde består deri, at ved anionbytteradsorptionen af pasteuriseret 35 kryoglobulin forbliver fibrinogen og fibronectin i den ovenstående væske eller i gennemløbet og kan udvindes derfra o 5 DK 174066 B1 som pasteuriserede produkter. Fibronectin kan f.eks. udvindes ifølge det tyske offentliggørelsesskrift nr. 2.848.529.
Chromatograferingen på f.eks. DEAE- eller QAE--ionbyttere sker i let surt miljø (pH=5,5) og på ionbyttere, 5 der er ækvilibreret tilsvarende, f.eks. med 0,1 mol Na-ace-tat-puffer pr. liter, der indeholder 0,1 mol lysin pr. liter.
Med denne puffer kan også den pasteuriserede F VIII-holdige opløsning fortyndes til det dobbelte rumfang, inden den behandles med ionbytteren ved batch- eller søjlemetoden. Adsorp-10 tionen efter batchmetoden, der fortrinsvis anvendes, har den fordel, at man under adsorptionen kan følge bindingen af F VIII til ionbytteren via den funktionelle bestemmelse af F VIII i den ovenstående væske og efter aktivitetens forsvinden kan adskille de ikke-adsorberede faktorer ved 15 sedimentering eller centrifugering fra ionbytteren og umiddelbart derpå kan påbegynde vaskningen af den med F VIII belastede ionbytter. Medens vaskningen fortrinsvis skal udføres batchvis, f.eks. på et Nutsch-filter, er det til elue-ringen anbefalelsesværdigt at overføre ionbytteren til en 20 søjle, eftersom den søjlechromatografiske eluering har den fordel, at F VIII fremkommer forholdsvis koncentreret, under forsøgsbetingelserne i størrelsesordenen fra 50 til 100 IE F VIII pr. ml.
Til vaskningen af den med F VIII belastede ion-25 bytter egner sig især sådanne puffere, som dels ikke frigør F VIII, men som dels er egnede til en såvidt muligt kvantitativ adskillelse af uspecifikke proteiner såsom imrnu-noglobulinerne og dermed også isoagglutininerne. Som en tilsvarende puffer har overraskende vist sig en puffer, i hvil-30 ken udgangsmaterialet kan opløses til adsorptionen, og som indeholder 0,1 mol Na-acetat pr. liter, 0,1 mol lysin pr. liter og 1 gram NaCl pr. liter ved en pH-værdi på 5,5.
Med denne puffer vaskes den med F VIII belastede ionbytter, indtil eluatet er frit for isoagglutininer. Til afprøvning 35 benyttes den høj følsomme Coombs-test, der også viser inkom-plette antistoffer.
6 DK 174066 B1 o
Til desorptionen af F VIII fra anionbytterne kommer koncentrerede saltopløsninger i betragtning, f.eks. sådanne indeholdende NaCl.
Som fordelagtige har imidlertid vist sig andre salte af halogener med Na, K eller Ca, f.eks. KBr, NaBr
O
og CaCl2· De har den fordel, at F VIII elueres som en forholdsvis skarp spids med en høj aktivitet pr. rumfang, en fordel, der er betydningsfuld for fældningen.
Koncentrationerne ligger i området fra 0,05 mol 10 pr. liter til mætningsgrænsen.
Udbyttet afhænger sluttelig også ganske væsentligt af elueringshastigheden, der skal være af en størrel- 2 sesorden på fra 1 til 10 ml pr. cm pr. time, fortrinsvis 2 fra 5 til 7 ml pr. cm pr. time.
15 Det F Viil-holdige eluat lader sig koncentrere ved anvendelse af de gængse metoder, nemlig ved fældning med neutralsalte, f.eks. ammoniumsulfat eller NaCl, med fordel med NaCl, som i modsætning til ammoniumsulfat hurtigere kan uddialyseres og heller ikke nødvendigvis skal 20 fjernes fuldstændigt.
Videreforarbejdningen af den F VHI-holdige fældning sker på den måde, at fældningsremanensen f.eks. opløses i en puffer med en pH-værdi på 6,9, der indeholder Na-citrat (0,02 mol pr. liter), NaCl (0,06 mol pr. liter), 25 glycin (20 gram pr. liter) og albumin (5 gram pr. liter) (dialysepuffer), og dialyseres mod den samme puffer uden albumin indtil opnåelse af ligevægt. Den dialyserede opløsning indstilles ved fortynding med den albuminholdige dialysepuffer på en aktivitet på 25-30 IE F VIII pr. ml og 30 aftappes efter sterilfiltrering, hvorefter den eventuelt frysetørres. Slutpræparatet er karakteriseret som et hvidt lyofilisat, der opløses i løbet af mindre end 1 minut, har en F Vin-aktivitet på 5-10 IE pr. mg protein, er pasteuriseret og isoagglutininfrit. I forhold til produkter 35 hørende til teknikkens stade har det den fordel, at det er frit for uønskede proteiner og specielt sådanne, der som 7 DK 174066 B1 alloantigener kunne føre til en sensibilisering. Blodgrup-pe-uforeneligheder fremkaldes ikke ved anvendelse af præparatet. En overførsel af virussygdomme, især de forskellige former for hepatitis, synes udelukket. Til fordelene ved 2 fremgangsmåden hører, at den er forholdsvis enkel og derfor problemfrit kan overføres til industriel målestok oq desuden består den af få arbejdstrin. Det ringe antal arbejds-trin dokumenteres i det gode udbytte, idet erfaringsmæssigt ethvert rensningstrin er forbundet med et større eller mindre 10 aktivitetstab.
Der kan ifølge opfindelsen opnås et pasteuriseret, højrenset faktor VIII-præparat, der er praktisk taget frit for immunoglobuliner, isoagglutininer, fibronectin og koa-gulerbart fibrinogen og er karakteriseret ved en specifik 15 clotting (C)-aktivitet (F VIII:C) på ca. 100 E/mg protein og et forhold mellem F VIII:C og F VIII R:Ag (Related Antigen) større end 1.
F VIII kan bestemmes ved den følgende fremgangsmåde: 1 del, f.eks. 0,1 ml partielt thromboplastin, f.eks.
20 fremstillet ifølge det tyske offentliggørelsesfkrift nr. 2.316.430, blandes med 1 del F VIII-mangelplasma og 1 del fortyndet normalplasma. Denne blanding holdes i 6 minutter ved 37°C. Efter tilsætning af 1 del til 37°C forvarmet 0,025 molær calciumchloridopløsning bestemmes den tid, der 25 går fra tilsætningen af calciumchloridopløsningen til fremkomsten af et koagulat. Til kvantitativ bestemmelse anvendes der en med en normalplasma-fortyndingsrække opnået måle- eller kalibreringskurve.
1 international enhed (= 1 IE) af F VIII svarer 30 til F VIII-aktiviteten af 1 ml normalplasma som substandard til den 3. internationale WHO-Standard.
I det følgende eksempel illustreres fremgangsmåden til udvinding af et pasteuriseret og isoagglutininfrit F VIIl-præparat.
35 8 DK 174066 B1 o
Eksempel 1. Udgangsmateriale.
250 gram rå-kryopræcipitat opløses i 750 ml af en NaCl-opløsning (0,08 mol pr. liter), der indeholder 5 glycin (0,25 mol pr. liter) og heparin (1,25 USP-enheder pr. ml), under opvarmning til 30-37°C. Herved fås der 1000 ml opløsning med en koncentration på 0,06 mol NaCl pr. liter, 0,2 mol glycin pr. liter og ca. 1 USP-enhed heparin pr. ml. Opløsningens pH-værdi indstilles på 6,5 10 med 1 N HC1.
2. Aluminiumhydroxid-adsorption.
Til 1000 ml opløsning fra 1. sættes der 80 ml af en suspension indeholdende 10 gram aluminiumhydroxid pr. liter (Behringwerke, Marburg), og der omrøres i 15 15 minutter (temperatur ca. 30°C). Derpå centrifugeres der i 15 minutter ved 3000 G, remanensen bortkastes, og den afhældte væske pasteuriseres efter tilsætning af stabilisatorer.
3. Pasteurisering.
20 1000 ml afhældt væske fra 2, tilsættes følgende stabilisatorer i denne rækkefølge: 5 ml CaCl2“opløsning, 1 mol pr. liter (5 mmol pr. liter) 1000 gram saccharose (500 gram pr. kg. opløsning) 150 gram glycin (2 mol til 1 liter opløsning).
25 pH-værdien indstilles på 7,3 med 2 N NaOH. Ved tilsætningerne forøges rumfanget til 1700 ml. Opløsningen holdes i 10 timer ved 60°C i vandbad.
4. Ionbytter-behandling.
1700 ml opløsning fra 3. fortyndes med 1700 ml 30 af en opløsning, der indeholder 0,2 mol Na-acetat pr.
liter, pH=5,5, og 0,2 mol lysin pr. liter. pH-værdien indstilles på 5,5 med fortyndet eddikesyre, og der tilsættes 70 ml med en opløsning, indeholdende Na-acetat (0,1 mol pr. liter), pH=5,5, lysin (0,1 mol pr. liter) og NaCl 35 (1 gram pr. liter), ækvilibreret DEAE-Sepharose 6B Cl. Der omrøres i 2-3 timer ved stuetemperatur, og bindingen af o 9 DK 174066 B1 F VIII bestemmes ved bestemmelse af aktiviteten i den ovenstående væske. Når F VIII-aktiviteten er faldet fra 4 IE til 0,1 IE pr. ml, fraskilles adsorbensen ved centrifugering.
5 Den ovenstående væske frahældes, og adsorptions midlet skilles fra resten af den ovenstående væske. Ved vaskning med en opløsning indeholdende 0,1 mol Na-acetat pr. liter, pH=5,5, 0,1 mol lysin pr. liter og 1 gram NaCl pr. liter befries Sepharosen for indesluttet protein og 10 opslæmmes derpå med den samme puffer i en søjle (mål: 10 cm x 3 cm).
I søjlen vaskes ionbytteren så længe, at der ikke længere kan måles nogen lysabsorption ved 280 nm, og isoagglutinin-værdierne ved Coombstest ligger ved påvis-15 ningsgrænsen.
5. Eluering.
Ionbytteren fra 4. elueres med en opløsning, pH=5,5, der indeholder 0,1 mol Na-acetat pr. liter, 0,1 mol lysin pr. liter og 0,3 mol CaCl2 pr. liter. Herved frem-20 kommer der en ved en bølgelængde på 280 nm målelig spids.
De tilsvarende fraktioner samles, og der fås et rumfang på 180 ml med 40 IE F VIII pr. ml.
6. Fældning af F VIII.
180 ml eluat fra 5. tilsættes 2,2 mol glycin 25 pr. liter samt 150 gram NaCl pr. liter og omrøres i 30 minutter ved stuetemperatur.
Fældningen kan erkendes ved hjælp af en tydelig uklarhed. Fældningen skilles fra ved 30 minutters centrifugering ved 30.000 G i en ultracentrifuge og holdes efter 30 frahældning af den ovenstående væske natten over ved 4°C.
7. Oparbejdning.
Fældningen fra 6. optages i 145 ml puffer, pH=7,0, der indeholder 0,02 mol tri-Na-citrat pr. liter, 0,06 mol NaCl pr. liter, 10 g glycin pr. liter og 5 g 35 human-albumin (opløsningspuffer) pr. liter. For opløsningen bestemmes der en aktivitet på 40 IE F VIII:C pr. ml. Opløs- DK 174066 B1 o 10 ningen dialyseres i 3 timer ved stuetemperatur mod den ovennævnte puffer, der ikke indeholder noget albumin, og dialysatet opvarmes til 30°C og centrifugeres i 30 minutter ved 30.000 G og 25°C. Efter en P VHI-bestemmelse, der 5 giver et resultat på 36 IE pr. ml, indstilles opløsningen ved hjælp af opløsningspufferen på 30 IE pr. ml, og opløsningen opvarmes til 37°C og sterilfiltreres på et membran-filter .
Der fyldes på småkolber, indfryses og lyofili- 10 seres.
15 20 25 30 35
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat, kendetegnet ved, at en pasteuriseret opløsning indeholdende faktor VIII fra et kryopræcipitat 5 fra humant plasma i nærværelse af et carbonhydrat og en aminosyre behandles med en ionbytter, der bærer DEAE-, QAE-eller Ecteola-grupper, på basis af cellulose, Sephadex® eller Sepharose® ved en pH-værdi på 5,5, ionbytteren vaskes, og faktor VIII elueres med chaotrope opløsninger, fortrinsvis 10 med en opløsning af CaCl2·
2. Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat, kendetegnet ved, at kryopræcipitat opløses under tilsætning af saccharose og glycin, fortrinsvis 35-60 gram saccharose pr. 100 ml og 1-3 mol glycin pr. liter, 15 calciumioner tilsættes, fortrinsvis 1-20 mmol pr. liter, hvorpå der eventuelt pasteuriseres, afkøles og fortyndes, og F VIII :C absorberes ved en pH-værdi på 5,5 på en ionbytter, der bærer DEAE-, QAE- eller Ecteola-grupper, på basis af cellulose, Sephardex® eller Sepharose®, og absorbensen 20 vaskes, indtil den er fri for fremmedproteiner, specielt isoagglutininer, og F VIII:C elueres ved eluering med en pufret koncentreret chaotrop saltopløsning, fortrinsvis med en opløsning af CaCl2, dialyseres og lyofiliseres.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendeteg net ved, at adsorbensen vaskes med en pufret fortyndet saltopløsning.
4. Fremgangsmåde ifølge krav l eller 2, kendeteg-3 0 net ved, at der som ionbytteren anvendes DEAE-Sepharose®.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19843432083 DE3432083A1 (de) | 1984-08-31 | 1984-08-31 | Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung |
DE3432083 | 1984-08-31 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK398185D0 DK398185D0 (da) | 1985-08-30 |
DK398185A DK398185A (da) | 1986-03-01 |
DK174066B1 true DK174066B1 (da) | 2002-05-21 |
Family
ID=6244387
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK198503981A DK174066B1 (da) | 1984-08-31 | 1985-08-30 | Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0173242B2 (da) |
JP (1) | JPS6160614A (da) |
AT (1) | ATE73666T1 (da) |
CA (1) | CA1265051A (da) |
DE (2) | DE3432083A1 (da) |
DK (1) | DK174066B1 (da) |
ES (1) | ES8702146A1 (da) |
IL (1) | IL76260A (da) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
US4847362A (en) * | 1985-02-01 | 1989-07-11 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
CA1339946C (en) * | 1987-03-31 | 1998-07-07 | Michael J. Griffith | Ultrapurification process for polypeptides |
DE3878227D1 (de) * | 1988-05-27 | 1993-03-18 | Centre Regional De Transfusion | Verfahren zur herstellung eines hochreinen, virusfreien antihaemophiliefaktors mittels chromatographie. |
AU2684488A (en) | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
DE3878245D1 (de) * | 1988-11-05 | 1993-03-18 | Octapharma Ag | Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie. |
DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
DE4001451A1 (de) * | 1990-01-19 | 1991-08-01 | Octapharma Ag | Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix |
DE4143678B4 (de) * | 1991-02-27 | 2005-03-10 | Holland Letz Felo Werkzeug | Halter für Schraubendreher-Einsätze |
AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
FR2681867B1 (fr) | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
AU6653094A (en) * | 1992-12-16 | 1994-07-04 | Immuno Aktiengesellschaft | Process for preparing a virus-safe biological composition |
DE4320294A1 (de) * | 1993-06-18 | 1994-12-22 | Immuno Ag | Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen |
DE4337573C1 (de) * | 1993-11-04 | 1995-05-18 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung einer virusinaktivierten Faktor VIII enthaltenden Fraktion mittels chromatographischer Methoden |
DE19802007C1 (de) * | 1998-01-20 | 1999-11-11 | Wacker Werke Kg | Sicherheitsanordnung für die Bedienungselemente einer handgeführten Bodenverdichtungswalze |
DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
CN102295696B (zh) * | 2011-08-16 | 2013-06-26 | 山东泰邦生物制品有限公司 | 由冷沉淀制备凝血因子ⅷ、纤维蛋白原和纤维结合蛋白的方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2653534C2 (de) * | 1975-12-22 | 1986-08-28 | Baxter Travenol Laboratories, Inc., Deerfield, Ill. | Feste Antihämophilen-Faktor-Präparation und Verfahren zu ihrer Herstellung |
DE2635894A1 (de) * | 1976-08-10 | 1978-02-16 | Biotest Serum Institut Gmbh | Verfahren zur herstellung eines antihaemophiles globulin a enthaltenden konzentrats |
JPS57136526A (en) * | 1981-02-17 | 1982-08-23 | Green Cross Corp:The | Preparation of blood coagulation factor 8 |
AU555305B2 (en) * | 1982-09-29 | 1986-09-18 | Bayer Corporation | Antihemophilic factor concentrate |
DE3237512A1 (de) * | 1982-10-09 | 1984-04-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von antihaemophilem kryopraezipitat (ahk) und danach hergestelltes antihaemophiles kryopraezipitat |
US4508709A (en) * | 1983-12-05 | 1985-04-02 | Armour Pharmaceutical Company | Process for purifying factor VIII:C |
-
1984
- 1984-08-31 DE DE19843432083 patent/DE3432083A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-08-21 DE DE8585110499T patent/DE3585649D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-21 EP EP85110499A patent/EP0173242B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-21 AT AT85110499T patent/ATE73666T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-29 ES ES546526A patent/ES8702146A1/es not_active Expired
- 1985-08-30 IL IL76260A patent/IL76260A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 JP JP60189997A patent/JPS6160614A/ja active Granted
- 1985-08-30 DK DK198503981A patent/DK174066B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 CA CA000489738A patent/CA1265051A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0173242A2 (de) | 1986-03-05 |
ES8702146A1 (es) | 1986-12-16 |
DE3585649D1 (de) | 1992-04-23 |
IL76260A (en) | 1992-02-16 |
EP0173242B2 (de) | 1996-07-24 |
JPS6160614A (ja) | 1986-03-28 |
CA1265051A (en) | 1990-01-30 |
EP0173242B1 (de) | 1992-03-18 |
DE3432083A1 (de) | 1986-03-06 |
ATE73666T1 (de) | 1992-04-15 |
DK398185A (da) | 1986-03-01 |
EP0173242A3 (en) | 1987-10-07 |
IL76260A0 (en) | 1986-01-31 |
DK398185D0 (da) | 1985-08-30 |
ES546526A0 (es) | 1986-12-16 |
JPH0580455B2 (da) | 1993-11-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK174066B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat | |
US6239261B1 (en) | Pasteurized, purified von Willebrand factor concentrate and a process for the preparation thereof | |
EP0176926B1 (en) | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate | |
NO177188B (no) | Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner | |
DK155568B (da) | Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering | |
DK162896B (da) | Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne | |
EP0468181A2 (en) | Process for the purification of factor VIII and factor VIII obtained by said process | |
US4562072A (en) | Process for the pasteurization of antihemophilic cryoprecipitate (AHC) and antihemophilic cryoprecipitate prepared thereby | |
Hoffman | Purification and large-scale preparation of antithrombin III | |
EP0252392B1 (en) | Viral inactivation and purification of active proteins | |
US4814435A (en) | Method of producing a factor VIII (AHF) containing fraction | |
US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
JP2511631B2 (ja) | 因子viii製品の製造方法 | |
EP0651770A1 (en) | Antihemophilic factor stabilization | |
EP0600480B1 (en) | Process for the extraction of factor VIII-von willebrand factor (FVIII:C-FVW) complex from total human plasma | |
AU752271B2 (en) | Method for preparing by filtration a virally secure factor VIII solution | |
US5043428A (en) | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production | |
AU635535B2 (en) | Gel filtration of heat treated factor viii | |
EP0221566B1 (en) | Method for preparing antihemophilic factor (ahf) by cold precipitation and for improving solubility of recovered ahf product | |
US4822872A (en) | Method of purifying factor VIII | |
US5006642A (en) | Purification of von Willebrand Factor by affinity chromatography | |
JPS61189228A (ja) | 血液凝固第8因子製剤の製法 | |
US4302445A (en) | Method for concentrating and purifying antihemophilic factor or factor VIII | |
Ng et al. | Preparation of high purity factor VIII concentrates | |
Branović et al. | Characterization of F VIII concentrates produced by two methods incorporating double virus inactivation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
B1 | Patent granted (law 1993) | ||
PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |