NO177188B - Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner - Google Patents
Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner Download PDFInfo
- Publication number
- NO177188B NO177188B NO900529A NO900529A NO177188B NO 177188 B NO177188 B NO 177188B NO 900529 A NO900529 A NO 900529A NO 900529 A NO900529 A NO 900529A NO 177188 B NO177188 B NO 177188B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- factor
- factor viii
- buffer
- fraction
- von willebrand
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 7
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 title claims description 6
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 title claims description 6
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 43
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 43
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 43
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 28
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 21
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 19
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 19
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 8
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 7
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 4
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 4
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 2
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 21
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 3
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229910001679 gibbsite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001470 plasma protein fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229910021426 porous silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner. Dette og andre trekk fremgår av de etterfølgende patentkrav.
Foreliggende oppfinnelse vedrører mer spesifikt separering av proteiner fra en fraksjon av humant eller animalsk plasma ved anionbytterkromatografi under anvendelse av en teknikk som gjør det mulig i et eneste trinn å oppnå en meget høy rensingsgrad, særlig for faktor VIII, for fibrinogen og for von Willebrands faktor.
Tilveiebringelse av blodproteiner for terapeutiske formål nødvendiggjør bruk av rensemetoder som gjør det mulig å oppnå produkter med høy renhet og som er fullstendig fri for for-urensninger, særlig andre proteiner eller substanser av fremmed opprinnelse som f.eks. antistoffer.
Det er for eksempel ved behandling av hemofili A vesentlig å kunne disponere faktor VIII-konsentrater med meget høy renhet. Pasientene gis faktisk tallrike, gjentatte injeksjoner av faktor Vlll-konsentrater og samtidig vesentlige mengder av fibrinogen og immunoglobuliner som kan indusere uønskede immunresponser. Følgelig kan gjentatte injeksjoner av utilstrekkelig renset faktor VIII gjennomføres bare med plasma-konsentrater av den samme gruppe for å unngå typiske trans-fusjonsuhell som skyldes forskjeller i blodgruppe og som bevirkes av nærvær av immunoglobuliner.
Faktor Vlll-konsentrater blir oftest fremstilt fra en fraksjon av kryopresipitert humant plasma. Renheten av faktor VIII-konsentrater, generelt oppnådd fra humanplasma-behandlings-sentre i industriell målestokk, er ofte av størrelsesorden 1 IU/mg og overstiger vanligvis ikke grensene på 10 til
2 0 IU/mg. Konvensjonelle produksjonsmetoder gjør bruk av utfellingstrinn som tar sikte på en ofte utilstrekkelig eliminering av proteinforurensninger som f.eks. fibrinogen, fibronektin og immunoglobuliner. Disse metoder kan anvende eller medanvende utfelling ved lav temperatur (10°C) eller tilsetning av proteinutfellende midler; hydrofile polymerer som PEG (Newman et al, Br. J. Haematol 21:1-20, 1971; Hao et al, i "Methods of Plasma Protein Fractionation" , Academic Press 1980, s. 57-74), polyvinylpyrrolidon (Casillas og Simonetti, Br. J. Haemato, 50:665-672, 1982), dekstran, "Ficoll", "Percoll", hydroksyetylert stivelse og albumin har således vært foreslått som faktor VIII-utfellende midler (Farrugia et al, Thromb Haemostas, 51:338-342, 1984). Det samme vedrører bruken av glycin og natriumklorid anbefalt av Thorell og Blomback. Lignende har andre forfattere (Ng et al, Thrombosis Res., 42:825-834, 1986) lykkes i å kombinere tre utfellingsmidler, nemlig PEG, glycin og natriumklorid for oppnåelse av faktor Vlll-konsentrater med en spesifikk aktivitet på mellom 10 og 16 IU/mg.
Det har også vært anvendt sterisk eksklusjonskromatografi, eller gelfiltrering, som metoder som tar sikte på å utvinne en fraksjon av høy molekylvekt inneholdende faktor VIII.-C - von Willebrands faktorkompleks delvis fritt for fibrinogen. Denne metode tilveiebringer, med liten kapasitet, et produkt med spesifikk aktivitet som ikke overstiger 3 0 IU/mg og som nødvendiggjør tilsetning av albumin som et stabiliseringsmiddel (dette fører til et fall i den spesifikke aktivitet på omtrent 3 til 5 IU/mg). Denne metode frembyr et antall problemer med hensyn til tilpassing til produksjon i stor skala, etter som det er vanskelig å opprettholde den opp-løsende evne for industrielle gelfiltreringskolonner over en tidsperiode.
Faktor Vlll-konsentrater har også vært fremstilt ved at det i produksjonsprogrammet innlemmes kontakt med mikrokuler av porøst silisiumdioksyd som skal innfange proteinforurensninger med lav molekylvekt (Margolis et al, Vox Sang. 46:341-348, 1984). Den spesifikke aktivitet av produktet forblir forholdsvis liten, nemlig 1 IU/mg.
Nye metoder har nylig vært forsøkt ved fremstilling av faktor Vlll-konsentrater med meget høy renhet. Således har for eksempel firmaene Hyland og Travenol foreslått konsentrater oppnådd ved å anvende immun affinitets-kromatografimetoder (Zimmerman og Fulcher, Thrombosis Res., Suppl. VII, s. 58, 1987; Berntorp og Nilsson, Thrombosis Res., Suppl. VII, s. 60, 1987; Levine et al, Thrombosis Res., Suppl. VII, 1987). Disse metoder består i å rense faktor VIII under anvendelse av anti-faktor VIII-C eller anti-von Willebrands faktor-antistoffer immobilisert på et kromatografisk medium. Disse metoder virker bra, men nødvendiggjør bruk av drastiske oppløsninger for å desorbere faktor VIII, enten fra sine antistoffer eller fra von Willebrands faktor. Et ytterligere ultrafiltreringstrinn som tar sikte på å fjerne de uønskede kjemiske midler er således nødvendig, men kan være skadelig for den biologiske aktivitet av faktor VIII. Den spesifikke aktivitet av faktor VIII kan nå 1000 IU/mg til 3000 IU/mg under produksjonsforløpet, men dets ustabilitet nødvendiggjør tilsetning av et stabiliseringsmiddel, som f.eks. albumin, før frysetørkingstrinnet, og dette reduserer den spesifikke aktivitet av faktor VIII til 3 til 5 IU/mg. Den vesentlige ulempe ved rensing ved hjelp av immunaffinitet er likevel nærvær av rest-antistoffer. Da disse er av murin opprinnelse, kan de føre til at det i pasientene opptrer immunresponser mot disse proteiner som er fremmede for den humane organisme.
Ionebytterkromatografimetoder har også vært anvendt, men i betraktning av kompleksiteten av arbeidsprosedyrene og de lave utbytter som oppnås, har disse metoder forblitt begrenset til laboratoriene.
For eksempel drøfter en artikkel av J.J. Morgenthaler (Thromb. Haemostas., Stuttgart, 47 (2) 124-127 (1982)), rensing av faktor VIII:C under anvendelse av et polyetylenglykolpresipi-tat, ved gjennomføring i en modifisert sefaroseharpiks. Ingen indikasjon gis om utbyttet eller reproduserbarheten av de forskjellige testede metoder.
Det er således av absolutt betydning å kunne tilveiebringe nye metoder for oppnåelse av proteinkonsentrater, og særlig faktor
VIII, som kan anvendes i industriell målestokk og gi meget rene produkter som er fullstendig fri for proteiner av fremmed opprinnelse som f.eks. antistoffer av animalsk opprinnelse.
Ved oppfinnelsen er det utviklet en renseprosess under anvendelse av anionbytterkromatografi som takket være det spesielle valg av anvendt harpiks, muliggjør at de proteiner som ettersøkes kan separeres under anvendelse av en enkel kromato-grafikolonne under betingelser som er passende tilpasset til å gjøre det mulig å sløyfe etterfølgende behandling som ultrafiltrering som ellers vil øke kompleksiteten av prosessen og redusere aktiviteten av det rensede protein.
Ved den foreliggende fremgangsmåte separeres plasmaproteiner og mer spesielt faktor VIII, fibrinogen, fibronektin og von Willebrands faktor, idet en solubilisert fraksjon av et kryopresipitat av humanplasma underkastes kromatografisk behandling på en anionbytterharpiks med en forholdsvis moderat ionisk karakter og som også tillater forekomsten av hydrofobe interaksjoner, som ikke adsorberer visse proteiner og som fikserer andre, og som så elueres spesifikt ved å øke ionestyrken av bufferen.
Fremgangsmåten er også anvendelig for et plasma av animalsk opprinnelse, for eksempel porcinplasma, for spesielle til-feller hvor det dreier seg om hemofile pasienter med inhi-berende serum som ikke kan behandles under anvendelse av faktor VIII av human opprinnelse.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører således en fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner,
der det som initial fraksjon anvendes et plasmakryopresipitat inneholdende faktor VIII, von Willebrands faktor, fibrogen og fibronektin, og
hvori den spesifikke aktivitet av faktor VIII:C i den initiale fraksjon er minst 0,1 IU/mg,
idet det anvendes en initial fraksjon som har vært underkastet en for-rensebehandling omfattende:
- behandling med aluminiumhydroksyd,
- avkjøling til 14-16°C,
- sentrifugering og høsting av supernatanten, som er kjennetegnet ved at en solubilisert fraksjon av et plasmakryopresipitat underkastes et enkelt trinn med kromatografi på en moderat ionisk anionbytterharpiks, som tillater retensjon av meget store molekyler og begunstiger at hydrofobe interaksjoner kan foregå, og ved at hvert av proteinene selektivt gjenvinnes ved å øke ionestyrken av elueringsbufferen, omfattende de følgende trinn: a) den solubiliserte fraksjon av kryopresipitåtet føres gjennom en harpiks omfattende DEAE-grupper fiksert på en vinylpolymertypegel, som adsorberer faktor VIII, en stor andel av von Willebrands faktor og fibronektinet og tillater at fibrinogenet passerer inn i eluatet, b) ionestyrken av bufferen økes først for å eluere fibronektinet og en stor del av von Willebrands faktor, og c) ionestyrken av bufferen økes videre for å eluere faktor
VIII,
hvori
bufferen inneholder 2 til 4 g/l lysin og 8 til 11 g/l glycin, og
ionestyrken av bufferen økes under anvendelse av natriumklorid, idet natriumkloridkonsentrasjonen holdes på 0,11 M i tilfellet av trinn a), 0,15 M i tilfellet med trinn b) og 0,25 M i tilfellet av trinn c).
I en utførelsesform av oppfinnelsen gjennomføres en virusinaktiverende behandling i nærvær av kjemiske inaktiverende midler på plasmafraksjonen umiddelbart før denne underkastes det kromatografiske separeringstrinn.
Når de forskjellige harpikser ble testet med hensyn til kromatografisk separering, ble det iakttatt at de mest til-fredsstillende resultater ble oppnådd under anvendelse av DEAE-grupper fiksert på en vinylpolymergel, som f.eks. Fractogel TSK. En harpiks av denne type fås i handelen under betegnelsen Fractogel TSK-DEAE 650 (M) (Merck). Denne kromatografiske medium har gitt langt bedre resultater enn dem som oppnås med andre testede geler, som f.eks. DEAE-sefarose CL-6B, DEAE-sefarose CL-6B Fast-Flow (Pharmacia), DEAE-sefarose 4B eller DEAE-trisakryl LS (IBF).
Bruken av en gel tilsvarende Fractogel-TSK-DEAE (M) er beskrevet av Y. Kato et al (J. Chromato; 245, 1982, 193-211) og anbefalt for en kromatografisk separering i middels industriell målestokk av meget store proteiner. Retensjons-elueringskapasiteten av denne gel er basert på en lav ione-bytterkapasitet og stor porestørrelse.
Det er således påvist at denne type av gel gjorde det mulig å adsorbere foretrukket de meget store komplekser som dannes mellom faktor VIII og von Willebrands faktor. Videre ved valget av påfyllingsbuffere og elueringsbuffere utnyttes ved oppfinnelsen de svakt hydrofobe bindinger som dannes på grunn av den forlengede retensjon av de store komplekser på poly-vinylmediet. Denne fordel som frembys av denne gel var tidligere ikke blitt belyst.
Ved å anvende en slik harpiks for å behandle en fraksjon av plasma inneholdende faktor VIII, for eksempel en for-renset oppløsning av kryopresipitåtet, oppnås under passende buffer-betingelser et faktor Vlll-konsentrat med meget høy renhet og med kvalitet som kan assimileres til kvaliteten av et plasma-konsentrat av en enkelt gruppe, med en konsentrasjon omtrent 50 IU/ml (spesifikk aktivitet høyere enn 100 IU/mg) uten at der er noe behov for et ultrafiltreringstrinn, og med høy stabilitet, dvs. at det ikke er nødvendig med tilsetning av et proteintype-stabiliseringsmiddel. Med den samme kromatografi var det også mulig å oppnå fibrinogen, fibronektin og von Willebrands faktor anrikede fraksjoner i samsvar med de fysikalske kjemi-parametre som tilfredsstiller kravene for terapeutiske formål eller for bruk som et reagens. Dessuten kan fibrinogenet konsentreres videre for bruk som et biologisk lim, i samsvar med europeisk patentsøknad nr. 88 401961.3. Fremgangsmåten i henhold til den foreliggende oppfinnelse gjennomføres som følger. Den for-rensede plasmafraksjon som inneholder de vesentlige proteiner fra kryopresipitåtet, dvs. fibrinogen, faktor VIII, fibronektin og von Willebrands faktor, passerer over en anionbytterharpiks som den som er spesifisert i det foregående. Faktor VIII, von Willebrands faktor (alt eller en vesentlig del, avhengig av kvantiteten av initialt material) og fibronektinet adsorberes på harpiksen, mens fibrinogenet finnes i filtratet av de ikke-adsorberte proteiner.
Ved en første økning i ionestyrken elueres bufferen, fibronektinet og en vesentlig del av von Willebrands faktor.
Ved en ytterligere økning i ionestyrken av bufferen elueres faktor VIII (i nærvær av mindre mengder von Willebrands faktor) og kan frysetørkes direkte, uten at det er behov for å tilsette et stabiliseringsmiddel dertil eller å underkaste den for et ultrafiltreringstrinn.
Den buffer som anvendes inneholder lysin i en mengde på omtrent 2 til 4 g/l, så vel som glycin i en mengde på omtrent 8 til 11 g/l. Bruken av andre aminosyrer, eller endog bruken av bare en av disse to aminosyrer, gir langt mindre tilfreds-stillende resultater.
Ionestyrken av bufferen økes ved å tilsette natriumklorid. Bruken av denne eneste harpiks, moderat ionisk, og svakt hydrofob, gjør det faktisk mulig å anvende dette salt for å desorbere von Willebrands faktoren før faktor VIII elueres, slik at det blir unødvendig å bruke kalsiumklorid, som deretter måtte ha blitt fjernet ved ultrafiltrering, for å dissosiere faktor VIII og von Willebrands faktor.
En virusinaktiverende behandling kan selvfølgelig gjennomføres under anvendelse av en kjent metode ved et hvilket som helst trinn i prosessen. I tilfellet av at det anvendes et kjemisk virusinaktiverende middel, .vil det være passende å gjennomføre denne inaktivering umiddelbart før passeringen av plasmafraksjonen over harpiksen. På denne måte vil det kromatografiske trinn tjene til effektivt å eliminere de inaktiverende midler.
Gode resultater er blitt oppnådd under anvendelse av løsnings-middel-detergent-inaktiveringsmetoden, som beskrevet i europeisk patentsøknad nr. 0 131 740.
For å fremstille faktor VIII kan det kromatografiske trinn gjennomføres med en hvilken som helst proteinfraksjon som inneholder denne, for eksempel med en for-renset kryopresipi-tert plasmafraksjon som er blitt underkastet en behandling med aluminiumoksydgel, eventuelt fulgt av utfelling ved lav temperatur, i samsvar med de konvensjonelle metoder for fremstilling av faktor Vlll-konsentrater, som beskrevet i europeisk patentsøknad nr. 86 104297 6.
Den spesifikke aktivitet av faktor VIII:C i den initiale fraksjon kan være så lav som 0,1 IU/mg. Rensefaktoren som oppnås ved hjelp av et enkelt anionbytterkromatografitrinn i samsvar med oppfinnelsen er omtrent 400 til 700 ganger. Utbyttet ved dette trinn er mellom 75 og 90 %.
Faktor Vlll-konsentratet som oppnås har meget høy renhet, dets spesifikke aktivitet er mer enn 100 IU/mg protein. Det er fritt for fibrinogen og immunoglobuliner G og er betraktelig befridd for fibronektin. Dette produkt er fritt for humane blodgruppeantistoffer, eller inneholder slike bare i meget små mengder og kan således sammenlignes med et konsentrat av enkeltgruppekvalitet i samsvar med de standarder som anbefales av European Pharmacopoeia, selv når det anvendes som et initialt material et plasma som ikke er selektert i henhold til blodgruppe. Det kan således anvendes med stor fordel i terapeutiske midler og ganske spesielt ved behandling av hemofili A, som nødvendiggjør gjentatte rutineinjeksjoner. Det kan også anvendes som et reagens i en hvilken som helst test eller analyse som nødvendiggjør en faktor VIII med meget høy renhet.
De andre fraksjoner som separeres ved hjelp av denne kromato-graf ikolonne er også av interesse på grunn av de proteiner som de inneholder, nemlig på den ene side fibrinogen, som utvinnes i det første filtrat, og på den annen side fibronektin og von Willebrands faktor, som elueres ved den første økning i
ionestyrken av bufferen.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel 1
A) For- rensinq og virusinaktivering
Som et utgangsmaterial anvendes et kryopresipitat av humanplasma resuspendert i en vandig oppløsning av heparinnatrium (med 2 U/ml) og inneholdende faktor VIII med en spesifikk aktivitet på mellom 0,6 og 1,1 IU/mg.
pH av suspensjonen innstilles til 7-7,1 med hjelp av 0,1 M eddiksyre.
Denne suspensjon av kryopresipitåtet underkastes rensing ved behandling med aluminiumoksydgel og kald utfelling. Aluminiumhydroksyd tilsettes til suspensjonen (108 g 2 % Al(OH)3 pr. 1 kg kryopresipitat) under omrøring i 5 minutter ved vanlig temperatur. pH innstilles til 6,5-6,6 med 0,1 M eddiksyre, og suspensjonen avkjøles så til 14-16°C under omrøring. Så snart den ønskede temperatur er nådd, gjennom-føres sentrifugering ved 14-16°C, supernatanten høstes og steriliseres ved filtrering.
Denne for-rensede oppløsning underkastes en virusinaktive-ringsbehandling under anvendelse av løsningsmiddel-detergent,
i nærvær av Tween-TNBP, i samsvar med metoden beskrevet i europeisk patentsøknad nr. 0 131 740.
B) Kromatografisk separering på Fractogel TSK- DEAE
En kromatograferingskolonne fremstilles med Fractogel TSK-DEAE 650 (M) (Merck) harpiks. 0,5 L Fractogel tilveiebringes pr. kg. kryopresipitat. Kolonnen vaskes med 5 volum 0,1 M NaCl oppløsning og likevekt innstilles deretter med en buffer inneholdende: trinatriumcitrat (2,94 g/l), kalsiumklorid (1 mM), natriumklorid (0,11 M), glycin (9 g/l) og lysin (3 g/l).
Den for-rensede kryopresipitatoppløsning beskrevet i A) injiseres i kolonnen.
Det følgende filtrat og eluater samles og deres proteininnhold overvåkes ved hjelp av absorpsjonsmåling ved 2 80 nm (i det følgende betegnet O.D.).
Det første filtrat viser en topp av proteiner som ikke er adsorbert av kolonnen tilsvarende hovedsakelig fibrinogen (se eksempel 3).
Etter at denne topp har passert, når O.D. har falt tilbake til basislinjen, elueres kolonnen med den samme buffer hvis ionestyrke økes først ved tilsetning av NaCl, til en sluttkonsentrasjon på 0,15 M. Denne buffer desorberer en proteintopp inneholdende hovedmengden av von Willebrands faktor og fibronektinet (se eksempel 4).
Etter at denne topp har passert, når O.D. har falt tilbake til basislinjen, økes ionestyrken av bufferen en gang til ved å tilsette en NaCl til en sluttkonsentrasjon på 0,25 M.
Under disse betingelser elueres faktor VIII med en konsentrasjon på omtrent 30 til 40 IU/ml.
Eksempel 2: Fremstilling av faktor VIII-konsentrat
Faktor Vlll-oppløsningen oppnådd ved å anvende den kromatografiske prosessen beskrevet i eksempel 1 er tilstrekkelig ren og konsentrert til å anbringes direkte i flasker og fryse-tørkes, uten noe ytterligere ultrafiltreringstrinn. Konsentrasjonen kan om nødvendig innstilles ved fortynning med samme elueringsbuffer for å instille spesifikk aktivitet pr. flaske i samsvar med de gjeldende lovbestemte standarder.
Den gjennomsnittlige sammensetning av de oppnådde oppløsninger er som følger:
Etter frysetørking er produktet klart og øyeblikkelig oppløse-lig. Mengden av faktor VIII:C er stabil i 24 timer ved vanlig temperatur.
Injeksjoner i mennesker indikerer faktor VIII:C opptagning sammenlignbar med den som oppnås med mindre rene produkter. Lignende er halveringstiden ekvivalent med den for de andre produkter.
Dette konsentrat viser seg å være et produkt med høy terapeu-tisk verdi, særlig egnet for de gjentatte injeksjoner som kreves ved behandling av hemofili A.
Eksempel 3: Rensing av et fibrinogenkonsentrat
Det første filtrat fra kromatografering på DEAE-Fractogel beskrevet i eksempel 1 inneholder hovedsakelig fibrinogen, men også albumin, immunoglobuliner og virusinaktiverende midler (Tween og TNBP).
Fibrinogenet renses fra oppløsningen ved hjelp av et ytterligere kromatografitrinn på en heparin-sefarose harpiks-kolonne.
Dette kromatografitrinn gjennomføres i den samme buffer som den foregående, innstilt til 0,06 M NaCl, slik at det blir mulig å forhindre dialyse mellom de to kromatografitrinn.
Filtratet fra det første kromatografitrinn fortynnes for oppnåelse av en osmolaritet på 280 mOsm ved en pH på 6,5 før det injiseres på den annen kolonne. Det annet filtrat finnes å inneholde albumin, immunoglobuliner, Tween og TNBP. Fibrinogenet adsorberes på kolonnen.
Når O.D. av filtratet er falt tilbake til basisnivå, elueres kolonnen med den samme buffer etter at dens ionestyrke er blitt økt ved tilsetning av NaCl til en sluttkonsentrasjon på 0,16 M.
Fraksjonen av fibrinogen som er samlet blir så konsentrert og dialysert på et kassettsystem. Det konsentrerte produkt anbringes i flasker og frysetørkes.
Dette konsentrerte fibrinogen tilfredsstiller kvalitetsstan-dardene fastsatt av European Pharmacopoeia.
Videre kan det tjene som et substrat for fremstilling av biologisk lim i samsvar med europeisk patentsøknad nr. 88 401961.3.
Eksempel 4: Fremstilling av von Willebrands faktor-konsentrat
Den eluerte fraksjon oppnådd fra kromatografi under anvendelse av DEAE-Fractogel i nærvær av 0,15 M NaCl, beskrevet i eksempel 1, er betraktelig anriket på von Willebrands faktor og fibronektin og inneholder fremdeles noe Tween og TNBP. Denne fraksjon fortynnes for å bringe dens osmolaritet til 385-390 mOsm med basisk kromatografibuffer (trinatriumcitrat, kalsiumklorid, lysin, glycin, pH 7, osmolaritet 18 mOsm).
Den injiseres så på en annen kolonne av DEAE-Fractogel, bragt i likevekt med den samme buffer som tidligere og inneholdende NaCl ved en sluttkonsentrasjon på 0,11 M, innstilt til pH 7 og 387 mOsm.
Under disse betingelser kan Tween og TNBP fjernes meget effektivt.
Da den initiale oppløsning allerede inneholder en meget høy konsentrasjon av von Willebrands faktor, blir den sistnevnte fiksert på kolonnen i en meget større grad enn ved passering gjennom den første kolonne. Fikseringskapasiteten av kolonnen er minst 160 U Ag/ml (antigenenhet av von Willebrands faktor) eller 100 RCO/ml (ristocetin-kofaktorenheter).
Fraksjonen inneholdende von Willebrands faktor elueres ved tilsetning av NaCl til en sluttkonsentrasjon på 0,15 M til bufferen.
Den eluerte von Willebrands faktor er tilstrekkelig konsentrert til at det ikke er nødvendig med ytterligere ultrafiltrering. Den anbringes i flasker og frysetørkes.
Konsentratet som oppnås har meget høy renhet og har en spesifikk aktivitet på mer enn 100 U RCO/mg. Den inneholder fremdeles noe fibronektin, men dette er ikke skadelig for dets aktivitet.
Eksempel 5: Fremstilling av et fibronektinkonsentrat
Et fibronektinkonsentrat kan også fremstilles fra det samme initiale eluat som i eksempel 4.
Von Willebrands-faktoren og fibronektinet kan faktisk separeres på basis av deres forskjell i molekylvekt. Under anvendelse av gelfiltrering på en kolonne av Sephacryl S-400 (R) (Pharmacia), for eksempel, separeres en første fraksjon med høy molekylvekt inneholdende von Willebrands faktor etterfulgt av en fraksjon inneholdende fibronektinet, og som kan direkte fylles på flaske og frysetørkes.
Claims (2)
1. Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner,
der det som initial fraksjon anvendes et plasmakryopresipitat inneholdende faktor VIII, von Willebrands faktor, fibrogen og fibronektin, og
hvori den spesifikke aktivitet av faktor VIII:C i den initiale fraksjon er minst 0,1 IU/mg,
idet det anvendes en initial fraksjon som har vært underkastet en for-rensebehandling omfattende: - behandling med aluminiumhydroksyd, - avkjøling til 14-16°C, - sentrifugering og høsting av supernatanten,
karakterisert ved at en solubilisert fraksjon av et plasmakryopresipitat underkastes et enkelt trinn med kromatografi på en moderat ionisk anionbytterharpiks, som tillater retensjon av meget store molekyler og begunstiger at hydrofobe interaksjoner kan foregå, og ved at hvert av proteinene selektivt gjenvinnes ved å øke ionestyrken av elueringsbufferen,
omfattende de følgende trinn: a) den solubiliserte fraksjon av kryopresipitatet føres gjennom en harpiks omfattende DEAE-grupper fiksert på en vinylpolymertypegel, som adsorberer faktor VIII, en stor andel av von Willebrands faktor og fibronektinet og tillater at fibrinogenet passerer inn i eluatet, b) ionestyrken av bufferen økes først for å eluere fibronektinet og en stor del av von Willebrands faktor, og c) ionestyrken av bufferen økes videre for å eluere faktor
VIII,
hvori
bufferen inneholder 2 til 4 g/l lysin og 8 til 11 g/l glycin, og
ionestyrken av bufferen økes under anvendelse av natriumklorid, idet natriumkloridkonsentrasjonen holdes på 0,11 M i tilfellet av trinn a), 0,15 M i tilfellet med trinn b) og 0,25 M i tilfellet av trinn c).
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at en virusinaktiverende behandling gjennomføres i nærvær av kjemiske inaktiverende midler på plasmafraksjonen umiddelbart før denne underkastes det kromatografiske separeringstrinn.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8807530A FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| PCT/FR1989/000050 WO1989012065A1 (fr) | 1988-06-07 | 1989-02-08 | Separation chromatographique des proteines du plasma |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO900529D0 NO900529D0 (no) | 1990-02-05 |
| NO900529L NO900529L (no) | 1990-04-06 |
| NO177188B true NO177188B (no) | 1995-04-24 |
| NO177188C NO177188C (no) | 1995-08-02 |
Family
ID=9367001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO900529A NO177188C (no) | 1988-06-07 | 1990-02-05 | Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5252709A (no) |
| EP (1) | EP0359593B2 (no) |
| JP (1) | JP2805364B2 (no) |
| KR (1) | KR970010923B1 (no) |
| AT (1) | ATE121750T1 (no) |
| AU (2) | AU622436B2 (no) |
| CA (1) | CA1340742C (no) |
| DE (2) | DE68922358T3 (no) |
| DK (1) | DK175322B1 (no) |
| ES (1) | ES2070919T5 (no) |
| FI (1) | FI96210C (no) |
| FR (1) | FR2632309B1 (no) |
| LT (1) | LT3333B (no) |
| NO (1) | NO177188C (no) |
| RU (1) | RU1837880C (no) |
| UA (1) | UA11061A (no) |
| WO (1) | WO1989012065A1 (no) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8729822D0 (en) * | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Central Blood Lab Authority | Chemical process |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5760183A (en) * | 1989-02-17 | 1998-06-02 | Association D'aquitaine Pour De Developpment De La Transfusion Sanguine Et Des Recherches Hematologiques | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same |
| FR2665449B1 (fr) * | 1990-08-02 | 1995-04-14 | Aquitaine Developp Transf Sang | Procede de fabrication de facteur von willebrand ayant une tres haute purete, depourvu en majeure partie de facteur antihemophilique (fviiic), et facteur von willebrand ainsi obtenu, ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| NL9000090A (nl) * | 1990-01-15 | 1991-08-01 | Harimex Ligos Bv | Werkwijze voor het bereiden van een fibrinogeenconcentraat uit bloedplasma, inrichting voor het uitvoeren van deze werkwijze en werkwijze voor het bereiden van fibrinogeen uit het concentraat. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4202667C1 (no) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| FR2686883B1 (fr) * | 1992-02-04 | 1994-05-13 | Aquitaine Develop Transf Sanguin | Procede de fabrication de fibrinogene de tres haute purete, fibrinogene de tres haute purete obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| CA2195127C (en) † | 1994-07-14 | 2007-06-19 | Ruth Laub | Concentrate of fibrinogene obtained from blood plasma, process and plant for its preparation |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6143179A (en) * | 1996-06-24 | 2000-11-07 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | Method for the affinity-chromatographic purification of factor VIII |
| US6037457A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for recombinant fibrinogen production |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| JP5149470B2 (ja) | 1999-02-22 | 2013-02-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物 |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2857267B1 (fr) | 2003-07-09 | 2006-03-10 | Lab Francais Du Fractionnement | Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables. |
| EP2821135A1 (en) * | 2004-02-05 | 2015-01-07 | EMD Millipore Corporation | Porous adsorptive or chromatographic media |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| FR2885369B1 (fr) * | 2005-05-04 | 2010-11-12 | Lab Francais Du Fractionnement | Materiel infectieux synthetique et standardise de type prion et ses utilisations en tant qu'inoculum infectant. |
| FR2887883B1 (fr) | 2005-06-29 | 2007-08-31 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines |
| US9433922B2 (en) * | 2007-08-14 | 2016-09-06 | Emd Millipore Corporation | Media for membrane ion exchange chromatography based on polymeric primary amines, sorption device containing that media, and chromatography scheme and purification method using the same |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| US20090130738A1 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-21 | Mikhail Kozlov | Media for membrane ion exchange chromatography |
| US20110065900A1 (en) * | 2008-05-30 | 2011-03-17 | Ge Healthcare Bio-Science Ab | Separation method utilizing polyallylamine ligands |
| HUE028626T2 (en) | 2008-06-23 | 2016-12-28 | Bio-Products & Bio-Engineering Ag | Stable, functionally intact, virus-inactivated fibrinogen during storage |
| NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
| IT1396528B1 (it) * | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| EP2499165B1 (en) | 2009-11-13 | 2016-09-14 | Grifols Therapeutics Inc. | Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto |
| FR2952641B1 (fr) | 2009-11-18 | 2012-01-13 | Lfb Biomedicaments | Procede de traitement du plasma sanguin comprenant une etape de lavage par dispersion |
| US9896677B2 (en) | 2010-01-18 | 2018-02-20 | Novo Nordisk Health Care Ag | Purification of blood coagulation factors |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
| US20140154233A1 (en) * | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
| US10188965B2 (en) | 2012-12-05 | 2019-01-29 | Csl Behring Gmbh | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2019050321A1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | (주)프로테옴텍 | 다수의 검사선을 구비한 크로마토그래피용 스트립, 이를 포함하는 진단 키트 및 다수의 경쟁적 반응 측정 단계를 포함하는 정성, 반정량, 정량 분석방법 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4278594A (en) * | 1979-06-19 | 1981-07-14 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma |
| EP0022053A1 (en) * | 1979-06-25 | 1981-01-07 | Rexnord Inc. | Shear bar having notched edge configuration |
| US4341764A (en) * | 1980-03-05 | 1982-07-27 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4508709A (en) * | 1983-12-05 | 1985-04-02 | Armour Pharmaceutical Company | Process for purifying factor VIII:C |
| GB8403473D0 (en) * | 1984-02-09 | 1984-03-14 | Special Trustees For St Thomas | Purification of factor viii |
| FR2570276B1 (fr) * | 1984-09-18 | 1987-09-04 | Immunotech Sa | Procede d'obtention du complexe fviii/vwf a usage therapeutique et produits en resultant |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
| EP0235526A3 (de) * | 1986-01-29 | 1988-03-23 | Leipziger Arzneimittelwerk GmbH | Aktivierte Polymerfestkörper und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE3609431A1 (de) * | 1986-03-20 | 1987-09-24 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines den blutgerinnungsfaktor viii enthaltenden, sterilen praeparates |
| DE3707213A1 (de) * | 1987-03-06 | 1988-09-15 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung von faktor viii:c-mangelplasma und ein so erhaltenes mangelplasma |
| US5043429B1 (en) * | 1987-05-01 | 1997-10-14 | Scripps Research Inst | Protein fragments containing factor VIII binding domain of von willebrand factor |
| US5097018A (en) * | 1988-05-12 | 1992-03-17 | University Of Southern California | Sequential heat treatment of blood-clotting factor products |
| NL8701915A (nl) * | 1987-08-14 | 1989-03-01 | Waander Riethorst | Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren. |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5110907A (en) * | 1989-08-01 | 1992-05-05 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography |
| IT1306645B1 (it) | 1999-04-08 | 2001-10-02 | Challenger Gestao E Consultado | Struttura di sedia, poltroncina o simile ad assemblaggio facilitato. |
-
1988
- 1988-06-07 FR FR8807530A patent/FR2632309B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-02-08 AU AU30682/89A patent/AU622436B2/en not_active Expired
- 1989-02-08 EP EP89400348A patent/EP0359593B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 WO PCT/FR1989/000050 patent/WO1989012065A1/fr active IP Right Grant
- 1989-02-08 ES ES89400348T patent/ES2070919T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 KR KR1019900700239A patent/KR970010923B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 JP JP1502342A patent/JP2805364B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 DE DE68922358T patent/DE68922358T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 AT AT89400348T patent/ATE121750T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 DE DE198989400348T patent/DE359593T1/de active Pending
- 1989-02-08 US US07/460,972 patent/US5252709A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-14 CA CA000590961A patent/CA1340742C/fr not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-01-25 FI FI900397A patent/FI96210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-02-05 NO NO900529A patent/NO177188C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-02-06 RU SU904743107A patent/RU1837880C/ru active
- 1990-02-06 UA UA4743107A patent/UA11061A/uk unknown
- 1990-02-06 DK DK199000299A patent/DK175322B1/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-03-03 AU AU1138392A patent/AU1138392A/en active Pending
- 1992-12-29 LT LTIP262A patent/LT3333B/lt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR970010923B1 (ko) | 1997-07-02 |
| US5252709A (en) | 1993-10-12 |
| RU1837880C (ru) | 1993-08-30 |
| JP2805364B2 (ja) | 1998-09-30 |
| DE68922358D1 (de) | 1995-06-01 |
| NO177188C (no) | 1995-08-02 |
| FI96210B (fi) | 1996-02-15 |
| AU622436B2 (en) | 1992-04-09 |
| NO900529L (no) | 1990-04-06 |
| DK29990A (da) | 1990-03-28 |
| DK175322B1 (da) | 2004-08-23 |
| EP0359593B2 (fr) | 2004-01-07 |
| ES2070919T3 (es) | 1995-06-16 |
| WO1989012065A1 (fr) | 1989-12-14 |
| FR2632309A1 (fr) | 1989-12-08 |
| ES2070919T5 (es) | 2004-07-16 |
| AU1138392A (en) | 1992-05-14 |
| LTIP262A (en) | 1994-10-25 |
| FI96210C (fi) | 1996-05-27 |
| DK29990D0 (da) | 1990-02-06 |
| UA11061A (uk) | 1996-12-25 |
| EP0359593A1 (fr) | 1990-03-21 |
| DE68922358T3 (de) | 2004-08-19 |
| ATE121750T1 (de) | 1995-05-15 |
| KR900701823A (ko) | 1990-12-04 |
| DE359593T1 (de) | 1990-09-27 |
| EP0359593B1 (fr) | 1995-04-26 |
| FR2632309B1 (fr) | 1990-08-24 |
| LT3333B (en) | 1995-07-25 |
| CA1340742C (fr) | 1999-09-14 |
| JPH03501974A (ja) | 1991-05-09 |
| DE68922358T2 (de) | 1995-10-12 |
| AU3068289A (en) | 1990-01-05 |
| NO900529D0 (no) | 1990-02-05 |
| FI900397A0 (fi) | 1990-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO177188B (no) | Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner | |
| RU2088590C1 (ru) | Способ получения стандартизированного концентрата человеческого фактора виллебранда и концентрат, полученный этим способом | |
| US7985846B2 (en) | Hemostatically active vWF-containing preparation and process for the preparation thereof | |
| DK174066B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat | |
| NO178716B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av et stabilt konsentrat av Faktor VIII-von Willebrand faktor kompleks | |
| DK1632501T3 (en) | A process for the preparation of a concentrate of von Willebrand factor (FVW) by means of chromatography, and the concentrate of FVW and may therefore be obtained | |
| US4749783A (en) | Viral inactivation and purification of active proteins | |
| US4075197A (en) | Serum albumin production | |
| JP3471379B2 (ja) | ヒトアンチトロンビン−ｉｉｉの調製方法 | |
| US4097473A (en) | Production of serum albumin | |
| US5760183A (en) | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same | |
| DK176139B1 (da) | Fremgangsmåde til separation af plasmaproteiner og plasmaproteinkoncentrater opnået ved fremgangsmåden | |
| JPH09286797A (ja) | ヘパリンコファクターｉｉ及びその精製方法 | |
| KR0168415B1 (ko) | 전체혈장으로 혈액응고 viii 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법 | |
| LV10193B (en) | Highly clean and therapeutically usable standardized method for producing Willebrand factor concentrate for industrial production | |
| JPH04124199A (ja) | 全血漿から血液疑固８因子―フオン・ビルブラント因子複合体濃縮物の製造方法 | |
| JPH1053534A (ja) | α２プラスミンインヒビターの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |