LT3333B - Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method - Google Patents
Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method Download PDFInfo
- Publication number
- LT3333B LT3333B LTIP262A LTIP262A LT3333B LT 3333 B LT3333 B LT 3333B LT IP262 A LTIP262 A LT IP262A LT IP262 A LTIP262 A LT IP262A LT 3333 B LT3333 B LT 3333B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- factor viii
- factor
- concentrate
- plasma
- buffer
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims description 25
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 title claims description 5
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 title claims description 5
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title claims description 4
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 47
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 46
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 46
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 21
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 20
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 20
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 18
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 18
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims 4
- 241000701370 Plasmavirus Species 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 claims 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 229960000900 human factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 238000001470 plasma protein fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Išradimas apima žmogaus ar gyvulių plazmos baltymų atskyrimą anijonų mainų chromatografijos pagalba, naudojant metodiką, įgalinančią per vieną valymo stadiją gauti aukšto valymo laipsnio VIII faktorių, fibrinogeną ir von Willebrand’o faktorių.
Plazmos baltymų naudojimas terapiniams tikslams reikalauja tokios valymo technikos, kuri leistų gauti aukšto valymo produktus, neturinčius jokių priemaišų, ypač kitų baltymų ar svetimos kilmės komponentų, pav., antikūnių.
Taip, pavyzdžiui, gydant hemofiliją A, svarbu turėti labai aukšto valymo VIII faktoriaus koncentratus; šiais atvejais pacientai gauna daugkartines pakartotines VIII faktoriaus koncentratų injekcijas ir tuo pačiu metu didelius fibrinogeno ir imunoglobulinų kiekius, kurie gali iššaukti nepageidaujamas imunines reakcijas. Ryšium su tuo nepakankamai išvalyto VIII faktoriaus pakartotinės injekcijos gali būti atliekamos tiktai naudojant vienos kraujo grupės plazmos koncentratus, kad išvengti tipiškų kraujo perpylimo priklausančių nuo skirtingų kraujo imunoglobulinų buvimo.
komplikacijų, grupių ir
Dažniausiai VIII faktoriaus koncentratai yra gaunami iš krioprecipituotos žmogaus plazmos. Valymo laipsnis VIII faktoriaus koncentratų, paprastai gaunamų pramoniniuose žmogaus plazmos perdirbimo centruose, dažnai yra 1 tarptautinio vieneto/mg (TV/mg) lygyje ir paprastai neviršija 10-20 TV/mg. Įprastinė gavimo technologija naudoja nusodinimo stadijas, siekiančias eliminuoti, dažnai nepakankamai, tokias baltymų priemaišas, kaip fibrinogenas, fibronektinas ir imunoglobulinai. Ši technologija gali naudoti ar derinti nusodinimą prie žemos temperatūros (10°C) ir baltymus nusodinančių agentų naudojimą, pav., hidrofilinių polimerų, kaip PEG (Newman et. ai., Br.J. Haematol 21:1-20, 1971; Hao et ai., in Methods of Plazma protein Fractionation, Academic Press 1980, PP. 57-74), polivinil-pirolidonas (Casillas and Simonetti, Br.J. Haemato, 50:665-672, 1982), dekstranas, Fikolis, Perkolis, hidroksietilintas krakmolas ar albuminas, kurie yra pasiūlyti kaip VIII Faktorių nusodinantys agentai (Farrugia et ai., Thromb. Haemostas, 51:338-342, 1984). Tas pats liečia gliciną ir natrio chloridą, kurių naudojimą pasiūlė Thorell ir Blomback. Kai kurie autoriai (Ng et ai., Thrombosis Res., 42: 825-834, 1986) pasiekė gerų rezultatų, derindami tris nusodinimo agentus, pav., PEG, gliciną ir natrio chloridą, gaudami VIII faktoriaus koncentratus su 10-16 TV/mg specifiniu aktyvumu.
Norint gauti didelio molekulinio svorio frakciją, turinčią Faktoriaus VIII:C-von Villebrand'o faktoriaus kompleksą (dalinai neturintį fibrinogeno), buvo siūloma naudoti sferinę selektyvinę chromatografiją arba gefiltraciją. Šios metodikos įgalina gauti, nors ir nedidele išeiga, produktą, kurio specifinis aktyvumas neviršija 30 TV/mg ir kuriam reikalingas stabilizatorius - albuminas (dėl ko sumažėja specifinis aktyvumas iki apytiksliai 3-5 TV/mg). Ši technologija kelia eilę problemų, susijusių su metodikos adaptavimu stambiapartijinei gamybai, nes yra sunkumų, palaikant gamybinių gelfiltracijos kolonėlių skiriamąją galią tam tikrą periodą.
VIII faktoriaus koncentratai taip pat gali būti gaunami, įvedant į technologinę schemą adsorbcijos ant poringo silicio dioksido mikrogranulių stadiją, siekiant juos išvalyti nuo žemo molekulinio svorio baltymų priemaišų (Margolis et ai., Vox Sang. 46:341348, 1984) . Produkto specifinis aktyvumas palyginti mažas: 1 TV/mg.
I
Pastaruoju metu pasirodė nauji aukštai valytų VIII faktoriaus koncentratų gavimo metodai. Taip, pav., Hyland ir Travenol firmos koncentratų gavimui pasiūlė panaudoti imunoafininės chromatografijos metodus (Zimmerman and Fulcher, Thrombosis Res., Suppl. VII, p. 58, 1987; Berntorp and Nilsson, Thrombosis Res., Suppl. VII, p. 60, 1987; Levine et ai., Thrombosis Res, Suppl. VII, 1987). Sutinkamai su šiuo metodu VIII faktoriaus valymui naudojami anti-faktoriaus VIII:C arba anti-von Villebrand’o faktoriaus antikūniai, imobilizuoti chromatografinėje terpėje. Šis metodas duoda gerus rezultatus, bet reikalauja stiprių tirpalų, desorbuojant VIII Faktorių nuo jo ar nuo Villebrando faktoriaus antikūnų. Ryšium su tuo reikalinga papildoma uitrafiltracijos stadija, pašalinant nepageidaujamus cheminius agentus, kas gali neigiamai paveikti VIII faktoriaus biologinį aktyvumą.
Gamybos metu šio faktoriaus specifinis aktyvumas gali siekti 1000 ar net 3000 TV/mg, bet jo nestabilumas reikalauja panaudoti stabilizatorių, pav., albuminą, prieš liofilinimo stadiją, kurios metu VIII faktoriaus specifinis aktyvumas sumažėja iki 3-5 TV/mg. Pagrindinis valymo imuninės chromatografijos metodu trūkumas yra liekamųjų antikūnių buvimas preparate; kadangi antikūniai yra gaunami imunizuojant peles, pacientams jie gali iššaukti tokias imunines reakcijas, kaip kad įvedus svetimus organizmui baltymus.
Taip pat buvo naudojama jonų mainų chromatografija, vienok jos pritaikymo sfera apsiribojo laboratoriniais eksperimentais, nes tai susieta su metodikos techniniu sudėtingumu ir žemomis išeigomis.
J.J.Morgenthaler (Thromb. Haemostas., Stuttgart, 47(2) 124-127 (1982)) darbe diskutuojama, pav., apie faktoriaus VIII: C valymą, naudojant glikolio precipitatą, leidžiant jį per modifikuotą sefarozę (Sepharose) . Vienok, nepateikta duomenų apie produkto išeigą ar rezultatų patikimumą, naudojant skirtingus metodus.
Tokiu būdu, svarbu išdirbti naujus baltymų koncentratų gavimo metodus, ypač VIII faktoriaus, kuriuos būtų galima naudoti pramoninėje gamyboje ir gauti aukšto valymo laipsnio produktus, pilnai laisvus nuo svetimų baltymų, pav., nuo gyvulinės kilmės antikūnų.
Pareiškėjas siūlo valymą atlikti anijonų mainų chromatografijos pagalba, kuri leistų, tinkamai parinkus dervą, atskirti reikalingus baltymus, naudojant vieną chromatografinę kolonėlę sąlygomis, leidžiančiomis išvengti sekančios procedūros, pav., ultrafiltracijos, kas daro procesą sudėtingesniu ir mažina valyto baltymo aktyvumą.
Tokiu būdu, išradimas apima plazmos baltymų atskyrimo būdą, konkrečiai - VIII faktoriaus, fibrinogeno, fibronektino ir von Villebrand'o faktoriaus, pasižymintį tuo, kad žmogaus plazmos krioprecipitato soliubilizuota frakcija yra chromatografuojama ant santykinai silpnos joninės jėgos anijonų mainų dervos, užtikrinančios hidrofobines sąveikas, kurios įgalina neadsorbuoti vienų baltymų, o fiksuoti kitus ir kurie tada yra specifiškai eliuuojami didėjančios joninės jėgos buferiui.
Šitas būdas taip pat yra tinkamas ir gyvulinės kilmės plazmai, pav., kiaulių plazmai, kas aktualu kai kuriais atvejais hemofilija sergantiems ligoniams, kurių serumas turi inhibuoj ančių savybių ir kurių gydymui negalime naudoti žmogaus VIII faktorių.
Kaip pradinę frakciją galime naudoti krioprecipituotos plazmos frakciją, kuri prieš valymo procedūrą buvo iš anksto apdorota. Tokiu apdorojimu gali būti, pav., nusodinimas aliuminio geliu ir/ar nusodinimas prie žemų temperatūrų Įprastais metodais, taikomais tokių frakcijų apdorojimui.
Išbandant Įvairias dervas, naudojamas chromatografiniam atskyrimui, pastebėta, kad geriausi rezultatai gauti, naudojant DEAE grupes, fiksuotas ant vinil-polimerinio gelio, pav., ant Fractogel TSK. Rinkoje tokio tipo derva figūruoja pavadinimu Fractogel TSK-DEAE 650 (M) (Merck). Ši chromatografinė terpė duoda žymiai geresnius rezultatus, negu kiti tirti geliai, tokie kaip, pav., DEAE-Sepharose CL-6B, DEAE-Sepharose CL-6B Fast Flow (Pharmacia), DEAE -Sepharose 4B ar DEAETrisacril LS (IBF).
Gelio, panašaus i Fractogel-TSK-DEAE (M), panaudojimas yra aprašytas Y. Kato et ai. (J. Chromato; 245, 1982, 193-211), kurie ji rekomenduoja naudoti pramoniniam didelio molekulinio svorio baltymų chromatografiniam atskyrimui su vidutiniu efektyvumu. Eliuuojamo produkto užsilaikymas ant šio gelio yra sąlygojamas jo žema jonų mainų galia ir dideliu poringumu.
Pareiškėjas parodė, kad tokio tipo gelis įgalina adsorbuoti pirmiausia labai didelio svorio kompleksus, kurie susidaro tarp VIII faktoriaus ir von Villebrand’o faktoriaus. Be to, per nulygsvarinančio ir eliuuojančio buferių parinkimą Pareiškėjas parodė galimybę panaudoti silpnus hidrofobinius ryšius, susidarančius ilgai užsilaikius stambiamolekuliniams kompleksams ant polivinilo gelio. Šis aprašomojo gelio privalumas anksčiau nebuvo pažymėtas.
Taikant tokią dervą darbe su plazmos frakcija, turinčia VIII faktorių, pav., su iš anksto valytu krioprecipitato tirpalu, naudojant atitinkamus buferius, gaunama VIII faktoriaus labai aukšto valymo laipsnio koncentratas su charakteristikomis, būdingomis vienos kraujo grupės plazmos koncentratui. VIII faktoriaus koncentracija tokiuose preparatuose yra 50 TV/ml (specifinis aktyvumas didesnis negu 100 TV/mg), jiems nereiklainga ultrafiltracijos stadija, jie pasižymi aukštu stabilumu, dėl ko jiems nereikalingi baltymų grupės stabilizatoriai. Tos pačios chromatografijos pagalba taip pat galima gauti fibrinogenu, fibronektinu ar von Willebrand'o faktoriumi praturtintas frakcijas su fiziko-cheminėmis savybėmis, kurios patenkintų klinikinius tikslus arba jas naudojant kaip cheminius reagentus. Be to, fibrinogenas gali būti toliau koncentruojamas ir panaudojamas kaip biologiniai klijai, sutinkamai su Europos patento paraiška Nr. 88 401961.3.
Būdas sutinkamai su išradimu įgyvendinamas sekančiai. Iš anksto valytą frakciją, turinčią pagrindinius krioprecipitato baltymus, t. y. fibrinogeną, VIII faktorių, fibronektiną ir von Viillebrand'o faktorių, leidžia per anksčiau aprašytą anijonų mainų dervą. VIII faktorius, von Willebrand'o faktorius (pilnai ar didesnioji jų dalis, priklausomai nuo pradinio produkto kiekio) ir fibronektinas yra adsorbuojami ant dervos, tuo tarpu fibrogenas yra randamas neadsorbuotų proteinų filtrate.
Buferio joninę fėgą padidinus pirmą kartą, yra eliuuojami fibronektinas ir didesnioji von Willebrand'o faktoriaus dalis.
Papildomai padidinus buferio joninę jėgą, yra eliuuojamas VIII faktorius kartu su mažais von Willebrand'o faktoriaus kiekiais, kuris gali būti iš
I karto liofilinamas, nepridedant į jį stabilizatorių ir nenaudojant ultrafiltracijos stadijos.
Geriausius rezultatus galima gauti, naudojant buferį, turintį 2-4 g/ltr lizino ir 8-11 g/ltr glicino. Kitų amino rūgščių ar tik vienos iš šių dviejų paminėtų amino rūgščių panaudojimas duoda žymiai prastesnius rezultatus.
Buferio joninė jėga yra didinama, pridedant natrio chlorido. Panaudojimas anksčiau minėtos dervos, pasižyminčios vidutine jonine jėga ir silpnu hidrofobiškumu, leidžia naudoti šią druską, desorbuojant von Willebrand’o faktorių anksčiau negu VIII faktorių, kas įgalina atsisakyti kalcio chlorido panaudojimo, kurį po to reikia šalinti ultrafiltracijos būdu, disocijuojant VIII faktoriui ir von Willebrand’o faktoriui.
Virusų inaktyvacija, žinoma, gali būti atliekama įprastu metodu bet kokioje proceso stadijoje. Naudojant virusus inaktyvuojantį cheminį agentą, inaktyvaciją geriau atlikti iki plazmos frakcijų užnešimo ant dervos. Šiuo atveju chromatografinis procesas įgalina efektyviai eliminuoti inaktyvuojančius agentus.
Geri rezultatai gaunami inaktyvacijos metodams naudojant tirpiklius - detergentus, kaip aprašyta Europos patento paraiškoje Nr. 0 131 740.
Norint gauti VIII faktorių, galima chromatografuoti bet kokią jį turinčią baltymų frakciją, pav., iš anksto valytą plazmos krioprecipitatą, jį užnešant ant aliuminio gelio, po to nusodinant prie žemos temperatūros, sutinkamai su VIII faktoriaus koncentratų gavimo įprastiniais metodais, kaip aprašyta Europos patento paraiškoje Nr. 86 1042 97 6.
Pradinėje frakcijoje faktoriaus VIII:C specifinis aktyvumas gali būti labai žemas (1.0 TV/mg). Vienastadijinė anijonų mainų chromatografija pagal ši išradimą užtikrina 400-700 kartų išvalymą. Išeiga šioje stadijoje 75-90 %.
VIII faktoriaus koncentratas, gautas šiuo būdu, pasižymi - aukštu išvalymo laipsniu, jo specifinis aktyvumas yra daugiau negu 100 TV/mg baltymo. Preparatas neturi fibrinogeno ir imunoglobulinų G, jis žymia dalimi laisvas nuo fibronektino. Jame nėra žmogaus kraujo grupės antikūnių arba yra labai nežymūs jų kiekiai. Ryšium su tuo jį galima klasifikuoti pagal Europos Farmakopėjos rekomendacijas kaip vienos kraujo grupės plazmos koncentratą netgi tuo atveju, kai pradinė plazma nebuvo atrinkta pagal kraujo grupes. Todėl ji galima sėkmingai naudoti klinikoje, ypač gydant hemofiliją A, kada reikalingos daugkartinės injekcijos. Jį taip pat galima naudoti kaip reagentą įvairiuose testuose ar analizėse, kur reikalingas aukšto valymo laipsnio VIII faktorius.
Kitos šia chromatografine kolonėle gaunamos frakcijos taip pat kelia susidomėjimą dėl savo baltyminės sudėties: iš vienos pusės - fibrinogenas, kuris randamas pirmame filtrate, o iš kitos pusės fibronektinas ir von Willebrand'o faktorius, kurie yra eliujuojami, pirmą kartą padidinus joninę jėgą.
Sekantys pavyzdžiai iliustruoja išradimą, neribodami jo apimties.
Pavyzdys:
A) Išankstinis valymas ir virusų inaktyvacija
Kaip pradinė medžiaga buvo naudojamas žmogaus plazmos krioprecipitatas, resuspenduotas vandeniniame natrio heparino (2 V/ml) tirpale, turintis 0.6-1.1 TV/mg specifinio aktyvumo VIII faktorių.
0.1 M acto rūgštimi suspensijos pH yra nureguliuojamas iki 7-7.1.
Tokia krioprecipitato suspensija yra valoma, naudojant aliuminio gelį ir nusodinimą žemoje temperatūroje. Aliuminio hidroksidas yra sudedamas į suspensiją (108 g 2 % Al(OH)3 1 kg krioprecipitato) maišant kambario temperatūroje per 5 min. 0.1 M acto rūgštimi pH yra nureguliuojamas iki 6.5-6.6 ir suspensija maišant yra atšaldoma iki 14-16°C. Pasiekus nurodytą temperatūrą, centrifuguojama 14-16°C temperatūroje, supernatantas yra surenkamas ir sterilizuojamas filtracijos būdu.
Toks iš anksto valytas tirpalas yra inaktyvuoj amas virusų atžvilgiu, naudojant tirpiklį - detergentą, esant Tween - TNBP, pagal metodą, aprašytą Europos patento paraiškoje Nr. 0 131 740.
B) Chromatografinis atskyrimas ant Fractogel TSK-DEAE
Paruošiama chromatografinė kolonėlė su Fractogel TSKDEAE 650 (M) (Merck) derva, imant 0.5 ltr. Fractogel 1 kg krioprecipitato. Kolonėlė yra plaunama 5 tūriais 0,1 M NaCl tirpalu ir tada nulygsvarinama buferiu, susidedančiu iš:
trinatrio citrato (2.94 g/ltr), kalcio chlorido (1 mM), natrio chlorido (0.11 M), glicino (9 g/ltr) ir lizino (3 g/ltr).
Ant kolonėlės yra užnešamas iš anksto valytas, kaip aprašyta A) pavyzdyje, krioprecipitato tirpalas.
io
Gaunami filtratas ir eliuatai yra surenkami ir juose matuojami baltymų kiekiai pagal absorbciją prie 280 nm (toliau žymima O.T. - optinis tankis).
Pirmas filtratas rodo piką baltymų, neadsorbuotų ant kolonėlės, ir kuris atitinka pagrindinai fibrinogeną (žiūr. 3-pavyzdį).
Išėjus šiam pikui ir O.T. nusileidus iki bazinio lygio, kolonėlė buvo eliuojama tuo pačiu buferiu, padidinus joninę jėgą NaCl pagalba iki galutinės 0.15 M koncentracijos. Šis buferis desorbuoja baltymų piką, kurį sudaro pagrindinis Villebrando faktoriaus kiekis ir fibronektinas (žiūr. 4 pavyzdį).
Išėjus šiam pikui ir O.T. nusileidus iki bazinio lygio, buferio joninė jėga padidinama antrą kartą, pridedant NaCl iki galutinės 0.25 M koncentracijos.
Esant šioms sąlygoms, VIII faktorius eliujuojamas 30-40 TV/ml lygyje.
Pavyzdys: VIII faktoriaus koncentrato paruošimas
VIII faktoriaus tirpalas, gautas chromatografijos procese, aprašytame 1 pavyzdyje, yra pakankamai švarus ir koncentruotas, kas leidžia jį iš karto pilstyti į flakonus ir liofilizuoti, nenaudojant papildomos ultrafiltracijos stadijos.
Esant reikalui, galima gauti Įvairių koncentracijų tirpalus, skiedimui naudojant tą patį buferį, kuris buvo naudojamas eliucijai. Tokiu būdu galima gauti preparato fasuotes su specifiniu aktyvumu, atitinkančiu veikiančius standartus.
n
Gaunamų tirpalų sudėties vidurkis yra sekantis:
Baltymai (g/ltr) 0.16-0.25
Faktorius VIII: C (TV/ml) 30-45
Faktoriaus VIII: C specifinis aktyvumas (TV/mg) 120-250
Fibrinogenas (g/ltr) <0.1 von Willebrand’o faktorius: Ag (V/ml) 11-23 von Willebrand'o faktorius: RCD (V/ml) 10-20
VIII faktorius: Ag (V/ml) 35-60
Ig G (mg/ml) (nefelometrij a) <0.011
Gamtiniai ir imuniniai anti-A-antikūnai 0-2
Fibronektinas (mg/1) 15-40
Po liofilizacijos gaunamas švarus, gerai tirpstantis produktas. Faktoriaus VIII:C kiekis yra stabilus 24 valandas, laikant kambario temperatūroje.
Injekcijos žmonėms rodo faktoriaus VIII:C kompensaciją, palyginamą su tokia, kuri gaunama naudojant mažiau švarius produktus. Taip pat jo gyvenimo pusperiodis yra ekvivalentiškas kitų preparatų pusperiodžiui.
Parodytas koncentrato didelis terapinis efektyvumas, ypač pakartotinų injekcijų atvejais gydant hemofiliją A.
Pavyzdys: Fibrinogeno koncentrato valymas
Pirmas filtratas, gautas chromatografijos ant DEAEFractogel pagalba, aprašytas 1 pavyzdyje, turi fibrinogeną, taip pat albuminą, imunoglobulinus ir antivirusinius agentus (Tween ir TNBP).
Fibrinogenas, esantis šiame tirpale, buvo valomas, naudojant papildomą chromatografijos ant heparinosefarozės dervos stadiją.
Chromatografija buvo atliekama tame pačiame buferyje, kuris buvo naudojamas ankstesnėje stadijoje, pridėjus NaCl iki 0.06 M koncentracijos, kas padėjo išvengti dializės tarp dviejų chromatografijos stadijų.
Filtratas, gautas pirmoje chromatografijos stadijoje, yra praskiedžiamas iki 280 mOsm osmosinio slėgio prie pH 6.5. Po to jis užnešamas ant antros kolonėlės ir gaunamas naujas filtratas, turintis albuminą, imunoglobulinus, tviną ir TNBP. Fibrinogenas yra adsorbuotas ant kolonėlės.
Kada filtrato O.T. sumažėja iki bazinio lygio, kolonėlė yra eliuuojama tuo pačiu buferiu, padidinus joninę jėgą NaCl iki galutinės 0.16 M koncentracijos.
Surinkta fibrinogeno frakcija yra koncentruojama ir dializuojama kasetinėje sistemoje. Koncentruotas produktas yra išpilstomas į flakonus ir liofilinamas.
Tokiu būdu gautas fibrinogeno koncentratas patenkina kokybės standartų reikalavimus, nustatytus Europos Farmakopėjos.
Be to, jį galima naudoti kaip substratą, ruošiant klijus, sutinkamai su Europos patento paraiška Nr. 88 401961.3.
Pavyzdys: von Willebrand'o faktoriaus koncentrato paruošimas
Eliuatas, gautas chromatogfafijos ant DEAE-Fractogel pagalba, naudojant 0.15 M NaCl, kaip aprašyta 1 pavyzdyje, turi didelius von Willebrand'o faktoriaus ir fibronektino kiekius, jame taip pat yra Tween ir TNBP.
ši frakcija praskiedžiama iki 385-390 mOsm osmosinio slėgio, naudojant chromatografinį bazinį buferį (trinatrio citratas, kalcio chloridas, lizinas, glicinas, pH 7, 18 mOsm osmosinis slėgis).
Po to ji užnešama ant antros kolonėlės, užkrautos DEAEFractogel, nulygsvarintos tuo pačiu buferiu kaip anksčiau ir turinčiu 0.11 M galutinę NaCl koncentraciją, pH 7, 387 mOsm osmosini slėgi.
Esant šioms sąlygoms, labai efektyviai pašalinama tvinas ir TNBP.
Kadangi jau pradinis tirpalas turi labai aukštą von Willebrand'o faktoriaus kiekį, jis užsilaiko ant kolonėlės žymiai didesniu laipsniu, negu pirmos kolonėlės atveju. Kolonėlės adsorbcinis talpumas yra mažiausiai 160 V Ag/ml (von Willebrand’o faktoriaus antigeno vienetas) ar 100 RCO/ml (ristocetino kofaktoriaus vienetai).
Frakcija, turinti von Willebrand’o faktorių, yra eliuuojama buferiu, į jį pridėjus NaCl iki 0.15 M galutinės koncentracijos.
Gautas von Willebrand'o faktoriaus eliuatas yra pakankamai koncentruotas, todėl ji galima išpilstyti į flakonus ir liofilizuoti, papildomai neatliekant ultrafiltracijos.
Gautas koncentratas yra labai aukšto valymo laipsnio, jo specifinis aktyvumas viršija 100 RCO vienetų/mg. Jis turi nedideli fibronektino kieki, bet tai nedaro įtakos jo aktyvumui.
Pavyzdys: Fibronektino koncentrato paruošimas
Fibronektino koncentratas gali būti taip pat 5 paruošiamas iš to paties pradinio eliuato, kaip 4 pavyzdyje.
Von Willebrand'o faktorius ir fibronektinas gali būti atskiriami, remiantis jų molekulinių svorių skirtumu.
Naudojant gelfiltraciją ant Sephacryl S-400 (R) (Pharmacia) kolonėlės, pav., galima atskirti pirmą aukšto molekulinio svorio frakciją, turinčią von Willebrand'o faktorių. Sekanti frakcija turi fibronektiną, kurą galima iš karto pilstyti ą flakonus ir liofilinti.
Claims (15)
- IŠRADIMO APIBRĖŽTIS1. Būdas žmogaus ar gyvulių plazmos baltymams atskirti, besiskiriantis tuo, kad plazmos krioprecipitato soliubilizuotą frakciją vienstadijiškai chromatografuoj a ant silpnos joninės jėgos anijonų mainų dervos, sulaikančios labai stambias molekules ir užtikrinančios hidrofobines sąveikas, ir po to kiekvieną baltymą selektyviai atskiria, didinant eliucijos buferio joninę jėgą.
- 2. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad pradinė frakcija yra plazmos krioprecipitatas, turintis VIII faktorių, von Willebrand’o faktorių, fibrinogeną ir fibronektiną.
- 3. Būdas pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad pradinėje frakcijoje faktoriaus VIII: C specifinis aktyvumas yra didesnis arba lygus 0.1 TV/mg.
- 4. Būdas pagal vieną iš 1-3 punktų, besiskiriantis tuo, kad pradinę frakciją iš anksto valo, naudojant:- apdorojimą aliuminio hidroksidu,- atšaldymą iki 14-16°C,- centrifugavimą ir supernatanto surinkimą.
- 5. Būdas pagal vieną iš 1-4 punktų, besiskiriantis tuo, kad jis susideda iš sekančių stadijų:a) soliubilizuotos krioprecipitato frakcijos chromatografija ant dervos, turinčios DEAE grupes, fiksuotas ant vinilo polimero gelio, kuri adsorbuoja VIII faktorių, didelę dali von Willebrand'o faktoriaus ir fibronektino bei užtikrina fibrinogeno perėjimą į eliuatą,b) buferio joninės jėgos didinimas pirmą kartą, norint eliuuoti fibronektiną ir didesniąją dalį von Viillebrand'o faktoriaus, irc) tolimesnis joninės jėgos didinimas, norint eliuuoti VIII faktorių.
- 6. Būdas pagal 5 punktą, besiskiriantis tuo, kad buferis turi liziną ir gliciną.
- 7. Būdas pagal 6 punktą, besiskiriantis tuo, kad buferis turi 2-4 g/1 lizino ir 8-11 g/1 glicino.
- 8. Būdas pagal vieną iš 5-7 punktų, besiskiriantis tuo, kad buferio joninę jėgą didina, pridedant NaCl.
- 9. Būdas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad natrio chlorido koncentracija a) stadijos atveju yra 0.11 M, b) stadijos atveju - 0.15 M ir c) stadijos atveju - 0.25 M.
- 10. Būdas pagal vieną iš 1-9 punktų, besiskiriantis tuo, kad plazmos virusų inaktyvaciją atlieka cheminiais inaktyvuojančiais agentais prieš chromatograf inio atskyrimo stadiją.
- 11. VIII faktoriaus koncentratas, charakterizuojamas kokybe, kuri sulyginama su vienos kraujo grupės plazmos koncentrato kokybe ir kurios specifinis aktyvumas yra didesnis negu 100 TV/mg, besiskiriantis tuo, kad jį gauna būdu pagal vieną iš 2-10 punktų.I
- 12. Fibrinogeno koncentratas, besiskiriantis tuo, kad jį sudaro a) stadijos eliuatas pagal 5 punkto būdą, išvalytas papildomos chromatografijos ant heparino-sefarozės dervos pagalba.
- 13. Von Willebrand’o koncentratas, besiskiriantis tuo, kad jį sudaro b) stadijos eliuatas pagal 5 punkto būdą, išvalytas papildomos chromatografijos ant tos pačios dervos kaip ir a) stadijoje10 pagalba ir eliuuotas tuo pačiu buferiu, pridėjus NaCl iki 0.15 M koncentracijos.
- 14. Fibronektino koncentratas, besiskiriantis tuo, kad jį sudaro b) stadijos eliuatas pagal 5
- 15 punkto būdą, išvalytas papildomos gelfiltracijos pagalba.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8807530A FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LTIP262A LTIP262A (en) | 1994-10-25 |
| LT3333B true LT3333B (en) | 1995-07-25 |
Family
ID=9367001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP262A LT3333B (en) | 1988-06-07 | 1992-12-29 | Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5252709A (lt) |
| EP (1) | EP0359593B2 (lt) |
| JP (1) | JP2805364B2 (lt) |
| KR (1) | KR970010923B1 (lt) |
| AT (1) | ATE121750T1 (lt) |
| AU (2) | AU622436B2 (lt) |
| CA (1) | CA1340742C (lt) |
| DE (2) | DE359593T1 (lt) |
| DK (1) | DK175322B1 (lt) |
| ES (1) | ES2070919T5 (lt) |
| FI (1) | FI96210C (lt) |
| FR (1) | FR2632309B1 (lt) |
| LT (1) | LT3333B (lt) |
| NO (1) | NO177188C (lt) |
| RU (1) | RU1837880C (lt) |
| UA (1) | UA11061A (lt) |
| WO (1) | WO1989012065A1 (lt) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8729822D0 (en) * | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Central Blood Lab Authority | Chemical process |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| FR2665449B1 (fr) * | 1990-08-02 | 1995-04-14 | Aquitaine Developp Transf Sang | Procede de fabrication de facteur von willebrand ayant une tres haute purete, depourvu en majeure partie de facteur antihemophilique (fviiic), et facteur von willebrand ainsi obtenu, ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| US5760183A (en) * | 1989-02-17 | 1998-06-02 | Association D'aquitaine Pour De Developpment De La Transfusion Sanguine Et Des Recherches Hematologiques | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same |
| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
| FR2651437A1 (fr) | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| NL9000090A (nl) * | 1990-01-15 | 1991-08-01 | Harimex Ligos Bv | Werkwijze voor het bereiden van een fibrinogeenconcentraat uit bloedplasma, inrichting voor het uitvoeren van deze werkwijze en werkwijze voor het bereiden van fibrinogeen uit het concentraat. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4202667C1 (lt) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| FR2686883B1 (fr) * | 1992-02-04 | 1994-05-13 | Aquitaine Develop Transf Sanguin | Procede de fabrication de fibrinogene de tres haute purete, fibrinogene de tres haute purete obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| CA2195127C (en) * | 1994-07-14 | 2007-06-19 | Ruth Laub | Concentrate of fibrinogene obtained from blood plasma, process and plant for its preparation |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6143179A (en) * | 1996-06-24 | 2000-11-07 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | Method for the affinity-chromatographic purification of factor VIII |
| US6037457A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for recombinant fibrinogen production |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| BR0008405B1 (pt) | 1999-02-22 | 2014-04-22 | Baxter Int | Composição de fator viii formulada sem a adição de albumina, uso de uma composição de fator viii, e, método de liofilizar uma formulação farmacêutica aquosa |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2857267B1 (fr) | 2003-07-09 | 2006-03-10 | Lab Francais Du Fractionnement | Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables. |
| SG150501A1 (en) * | 2004-02-05 | 2009-03-30 | Millipore Corp | Porous adsorptive or chromatographic media |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| FR2885369B1 (fr) * | 2005-05-04 | 2010-11-12 | Lab Francais Du Fractionnement | Materiel infectieux synthetique et standardise de type prion et ses utilisations en tant qu'inoculum infectant. |
| FR2887883B1 (fr) * | 2005-06-29 | 2007-08-31 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines |
| US9433922B2 (en) * | 2007-08-14 | 2016-09-06 | Emd Millipore Corporation | Media for membrane ion exchange chromatography based on polymeric primary amines, sorption device containing that media, and chromatography scheme and purification method using the same |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| US20090130738A1 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-21 | Mikhail Kozlov | Media for membrane ion exchange chromatography |
| WO2009145722A1 (en) * | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Separation method utilizing polyallylamine ligands |
| US8741846B2 (en) | 2008-06-23 | 2014-06-03 | Bio-Products & Bio-Engineering Ag | Storage-stable, functionally intact fibrinogen |
| JP5779780B2 (ja) * | 2008-11-07 | 2015-09-16 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 第ｖｉｉｉ因子製剤 |
| IT1396528B1 (it) | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| PL2499165T3 (pl) | 2009-11-13 | 2017-04-28 | Grifols Therapeutics Inc. | Preparaty zawierające czynnik von willenbranda (vwf) oraz sposoby, zestawy i zastosowania z nim powiązane |
| FR2952641B1 (fr) | 2009-11-18 | 2012-01-13 | Lfb Biomedicaments | Procede de traitement du plasma sanguin comprenant une etape de lavage par dispersion |
| RU2012133474A (ru) | 2010-01-18 | 2014-02-27 | Ново Нордиск Хелс Кеа Аг | Очистка факторов свертывания крови |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| US9488625B2 (en) | 2010-12-15 | 2016-11-08 | Baxalta GmbH | Purification of factor VIII using a conductivity gradient |
| US20140154233A1 (en) * | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
| US10188965B2 (en) | 2012-12-05 | 2019-01-29 | Csl Behring Gmbh | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2019050321A1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | (주)프로테옴텍 | 다수의 검사선을 구비한 크로마토그래피용 스트립, 이를 포함하는 진단 키트 및 다수의 경쟁적 반응 측정 단계를 포함하는 정성, 반정량, 정량 분석방법 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0131740A2 (en) | 1983-07-14 | 1985-01-23 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| EP1042976A1 (en) | 1999-04-08 | 2000-10-11 | Challenger Gestao E Consultadoria Sociedade Unipessoal Limitada | Chair or the like with facilitated assembly |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4278594A (en) * | 1979-06-19 | 1981-07-14 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma |
| DK269680A (da) * | 1979-06-25 | 1980-12-26 | Rexnord Inc | Knivstangsskaerekant med indsnitskonfiguration |
| US4341764A (en) * | 1980-03-05 | 1982-07-27 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4508709A (en) * | 1983-12-05 | 1985-04-02 | Armour Pharmaceutical Company | Process for purifying factor VIII:C |
| GB8403473D0 (en) * | 1984-02-09 | 1984-03-14 | Special Trustees For St Thomas | Purification of factor viii |
| FR2570276B1 (fr) * | 1984-09-18 | 1987-09-04 | Immunotech Sa | Procede d'obtention du complexe fviii/vwf a usage therapeutique et produits en resultant |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
| EP0235526A3 (de) * | 1986-01-29 | 1988-03-23 | Leipziger Arzneimittelwerk GmbH | Aktivierte Polymerfestkörper und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE3609431A1 (de) * | 1986-03-20 | 1987-09-24 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines den blutgerinnungsfaktor viii enthaltenden, sterilen praeparates |
| DE3707213A1 (de) * | 1987-03-06 | 1988-09-15 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung von faktor viii:c-mangelplasma und ein so erhaltenes mangelplasma |
| US5043429B1 (en) * | 1987-05-01 | 1997-10-14 | Scripps Research Inst | Protein fragments containing factor VIII binding domain of von willebrand factor |
| US5097018A (en) * | 1988-05-12 | 1992-03-17 | University Of Southern California | Sequential heat treatment of blood-clotting factor products |
| NL8701915A (nl) * | 1987-08-14 | 1989-03-01 | Waander Riethorst | Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren. |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5110907A (en) * | 1989-08-01 | 1992-05-05 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography |
-
1988
- 1988-06-07 FR FR8807530A patent/FR2632309B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-02-08 AU AU30682/89A patent/AU622436B2/en not_active Expired
- 1989-02-08 DE DE198989400348T patent/DE359593T1/de active Pending
- 1989-02-08 AT AT89400348T patent/ATE121750T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 EP EP89400348A patent/EP0359593B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 DE DE68922358T patent/DE68922358T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 ES ES89400348T patent/ES2070919T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 KR KR1019900700239A patent/KR970010923B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 US US07/460,972 patent/US5252709A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 JP JP1502342A patent/JP2805364B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 WO PCT/FR1989/000050 patent/WO1989012065A1/fr active IP Right Grant
- 1989-02-14 CA CA000590961A patent/CA1340742C/fr not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-01-25 FI FI900397A patent/FI96210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-02-05 NO NO900529A patent/NO177188C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-02-06 UA UA4743107A patent/UA11061A/uk unknown
- 1990-02-06 DK DK199000299A patent/DK175322B1/da not_active IP Right Cessation
- 1990-02-06 RU SU904743107A patent/RU1837880C/ru active
-
1992
- 1992-03-03 AU AU1138392A patent/AU1138392A/en active Pending
- 1992-12-29 LT LTIP262A patent/LT3333B/lt not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0131740A2 (en) | 1983-07-14 | 1985-01-23 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| EP1042976A1 (en) | 1999-04-08 | 2000-10-11 | Challenger Gestao E Consultadoria Sociedade Unipessoal Limitada | Chair or the like with facilitated assembly |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| E. BERNTORP , I.M. NILSSON: "Biochemical properties of human factor VIII:C (monoclate) purified using monoclonal antibody to VWF", THROMBOSIS RESEARCH, 1987, pages 60, XP022879621, DOI: doi:10.1016/0049-3848(87)90048-X |
| FARRUGIA A, GRIFFIN B, PEPPER D, PROWSE C: "Studies on the procurement of coagulation factor VIII: selective precipitation of factor VIII with hydrophilic polymers", THROMB. HAEMOSTAS, 1984, pages 338 - 342 |
| G. CASILLAS* AND C. SIMONETTI: "Polyvinylpyrrolidone (PVP): a new precipitating agent for human and bovine factor VIII and fibrinogen", BRITISH JOURNAL OF HAEMATOLOGY, 1982, pages 665 - 672 |
| HAO Y-L ET AL.: "Fractional precipitation of proteins with polyethylene glycol", METHODS OF PLASMA PROTEIN FRACTIONATION, 1980, pages 57 - 74 |
| J. MARGOLIS, C.M. GALLOVICH AND P. RHOADES: "A Process for Preparation of ‘High-Purity’ Factor VIII by Controlled Pore Glass Treatment", VOX SANG, 1984, pages 341 - 348 |
| MORGENTHALER JJ: "Chromatography of antihemophilic factor on diaminoalkane- and aminoalkane-derivatized Sepharose", THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS, 1982, pages 124 - 127 |
| NEWMAN J. ET AL.: "Methods for the Production of Clinically Effective Intermediate and High-Purity Factor-VIII Concentrates", BRITISH JOURNAL OF HAEMATOLOGY, 1971, pages 1 - 20 |
| P.K. NG, H.C. EGUIZABAL, G. MITRA: "Preparation of high purity factor VIII concentrates", THROMBOSIS RESEARCH, 1986, pages 825 - 834, XP022880205, DOI: doi:10.1016/0049-3848(86)90119-2 |
| T.S. ZIMMERMAN, C.A. FULCHER: "Purification of factor VIII by monoclonal antibody affinity chromatography", THROMBOSIS RESEARCH, 1987, pages 58, XP022879619, DOI: doi:10.1016/0049-3848(87)90046-6 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE68922358T2 (de) | 1995-10-12 |
| WO1989012065A1 (fr) | 1989-12-14 |
| ATE121750T1 (de) | 1995-05-15 |
| AU1138392A (en) | 1992-05-14 |
| RU1837880C (ru) | 1993-08-30 |
| NO900529D0 (no) | 1990-02-05 |
| US5252709A (en) | 1993-10-12 |
| DE68922358T3 (de) | 2004-08-19 |
| ES2070919T3 (es) | 1995-06-16 |
| FI96210B (fi) | 1996-02-15 |
| DE68922358D1 (de) | 1995-06-01 |
| DK175322B1 (da) | 2004-08-23 |
| AU622436B2 (en) | 1992-04-09 |
| NO177188B (no) | 1995-04-24 |
| DE359593T1 (de) | 1990-09-27 |
| KR970010923B1 (ko) | 1997-07-02 |
| FR2632309A1 (fr) | 1989-12-08 |
| CA1340742C (fr) | 1999-09-14 |
| NO177188C (no) | 1995-08-02 |
| EP0359593B1 (fr) | 1995-04-26 |
| DK29990A (da) | 1990-03-28 |
| EP0359593B2 (fr) | 2004-01-07 |
| ES2070919T5 (es) | 2004-07-16 |
| FI96210C (fi) | 1996-05-27 |
| UA11061A (uk) | 1996-12-25 |
| NO900529L (no) | 1990-04-06 |
| JPH03501974A (ja) | 1991-05-09 |
| FI900397A0 (fi) | 1990-01-25 |
| EP0359593A1 (fr) | 1990-03-21 |
| AU3068289A (en) | 1990-01-05 |
| JP2805364B2 (ja) | 1998-09-30 |
| KR900701823A (ko) | 1990-12-04 |
| DK29990D0 (da) | 1990-02-06 |
| FR2632309B1 (fr) | 1990-08-24 |
| LTIP262A (en) | 1994-10-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LT3333B (en) | Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method | |
| JP3435668B2 (ja) | 高純度で治療用に適した標準化ヒト フオン・ビルブラント因子濃厚液の工業規模製造の方法 | |
| US5880265A (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
| Burnouf et al. | A highly purified factor VIII: c concentrate prepared from cryoprecipitate by ion‐exchange chromatography | |
| US5892005A (en) | High molecular and low molecular fractions of von willebrand factor | |
| PT703922E (pt) | Processo de producao de concentrado de imunoglobulinas g | |
| CA2282843C (en) | Purification of von willebrand factor by cation exchange chromatography | |
| AU744919B2 (en) | Method for purifying factor VIII/VWF complex by cation-exchange chromatography | |
| DK162896B (da) | Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne | |
| US6579723B1 (en) | Method of recovering highly purified vWF or factor VIII/vWF-complex | |
| CZ277939B6 (en) | Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity | |
| JPH0580455B2 (lt) | ||
| AU2005203243A1 (en) | Process for the preparation of a Von Willebrad (FvW) factor concentrate by chromatography and a FvW concentrate thus obtainable | |
| LT3417B (en) | Blood coagulation factor xi concentrate and process for the preparing same | |
| CA2077888A1 (en) | Method for purifying factor viii and preparations obtained | |
| US5760183A (en) | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same | |
| US20020019036A1 (en) | Von willebrand factor derivatives and methods of isolating proteins that bind to von willebrand factor | |
| DK176139B1 (da) | Fremgangsmåde til separation af plasmaproteiner og plasmaproteinkoncentrater opnået ved fremgangsmåden | |
| Ng et al. | Preparation of high purity factor VIII concentrates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC9A | Transfer of patents |
Owner name: THE LABORATOIRE FRANCAIS DU FRACTIONNEMENT ET DES Effective date: 20090511 |
|
| TC9A | Change of representative |
Representative=s name: ZABOLIENE, REDA, LT |
|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20091229 |