KR970010923B1 - 혈장단백질의 크로마토그래피 분리법 - Google Patents
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Abstract
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Description
본 발명은 단일단계에서 특히 제Ⅷ 인자, 피브리노겐 또한 반 빌레브란드 인자에 대한 매우 높은 순도를 얻을 수 있는 기술에 따른 음이온-교환 크로마토그래피로 인체 혹은 동물혈장의 일부인 단백질의 분리에 관한 것이다.
치료목적의 혈액단백질 공급에서 높은 순도와 또한 무오염의, 특히 다른 단백질이나 항체같은 외인성 물질이 전혀 없는 생성물을 수득할 수 있는 정제기술이 필요하다.
예컨대 매우 높은 순도의 제Ⅷ 처리인자 농축물이 있어야 A형 혈우병을 치료할 수 있다 ; 실제로, 수많은 환자들에게 제Ⅷ 인자 농축물과 함께 다량의 피브리노겐, 또한 바람직하지 못한 면역 반응을 유도하는 면역-글로부린을 동시에 반복 주사하였다. 따라서, 불충분하게 정제된 제Ⅷ 인자의 반복주사는 동일한 그룹의 혈장 농축물에서만 실행하며 그 결과, 혈액형의 상이성과 면역글루부린 존재에 의한 전형적인 수혈사고를 피할 수 있다.
제Ⅷ 인자 농축물은 대부분 저온-침전된 인체혈장으로 제조한다. 보통 공업적인 규모의 인체혈장 처리센터에서 얻은 제Ⅷ 인자 농축물의 순도는 1 IU/mg이며 일반적으로 10 내지 20 IU/mg 한도를 초과하지 않는다. 종래의 제조기술에서는 피브리노겐, 피브로넥틴 및 면역글로부린 같은 아주 부적당한 단백질 오염물을 제거하는 침전단계가 이용된다. 이 기술에서 저온(10。C) 침전작업이나 또는 이와 함께 단백질 침전작용제의 첨가법도 이용할 수 있다. PEG(newman et al., Br.J.Haemato1 21:1-20, Hao et al.,in Methods of Plasma Protein Fractionation, Academic Press l980, pp. 57 -74 ), 폴리비닐피롤리돈 (Casillas and Simonett, Br. J. Haemato, 50 ; 665-672, 1982), 덱스트란, 피콜, 페르콜, 히드록시에틸레이트화 전분, 또한 알부민 등이 제Ⅷ 인자 침전 작용제로 제안되었다 (Farrugia et al., Thromb Haemostas, 51 ; 338-342, 1984). Thorell과 Blomback은 글리신과 염화나트륨도 동일하게 사용할 수 있다고 추천하였다. 또한 이와 유사하게, 어떤 발명인은(Ng et al.,Thrombosis Res., 42 ; 825-834, 1986)3가지의 침전작용제, 즉, PEG, 글리신 또한 염화나트륨을 결합시켜 10 내지 16 IU/mg의 비활성으로 된 제Ⅷ 인자 농축물을 수득하는데 성공하였다.
입체 배제 크로마토그래피나 혹은 겔여과법도 사용할 수 있으며, 이러한 기술은 제Ⅷ : C 인자가 함유된 큰 분자량의 성분-반 빌레브란드 인자 복합체를 회수하기 위한 것이다. 비활성이 30 IU/mg를 초과하지 않고 또한 (비활성을 약 3 내지 5 IU/mg으로 감소시키기 위해) 안정제인 알부민을 필요로 하는 생성물을 저배출속도로 제공한다. 이 기술방법은 공업적 겔 여과컬럽의 분해농(resolving power)을 일정시간동안 유지하기 어려운 점과 같이 대규모 생산에 있어서의 적응문제를 내포한다.
제Ⅷ 인자 농축물은 또한 생산공정에서 저분자량의 단백질 오염물을 포위할 수 있는 형태로 된 다공성 이산화규소 마이크로 볼에 접촉시켜 제조할 수도 있다(Margolis et al., Voc Sang. 46 : 341-348, 1984). 생성물의 비활성은 비교적 작은 1 IU/mg이다.
아주 높은 순도의 제Ⅷ 인자 농축물 제조에 관한 새로운 기술이 최근에 나타났다. 예를 들어, 힐란드사와 트라베놀사는 면역친화성 크로마토그래피 방법에 따라 수득한 농축물을 발표하였다(Zimmerman and fulcher, Thrombbsis Res., Supp1. Ⅶ p.58, l987 ; Bentorp and Nilsson, Thrombosis Res., Supp1. Ⅶ p.60, 1987 ; Levine et al., Thrombosis Res, Ⅶ Supp1.,Ⅶ 1987). 이 기술방법은 항-제Ⅷ : C인자 또는 크로마토그래피 매질에 정착된 항-반 빌레브란드 인자항체를 이용하며 제Ⅷ 인자를 정제하는 것이다. 이 방법은 자주 실행되지만 제Ⅷ 인자를 항체나 반 빌레브란드 인자에게 탈착하기 위해 반드시 하제액(drastic solution)을 사용할 필요가 없다. 또한 바람직하지 않은 화학작용제를 제거하기 위하여 부가적인 한외여과 단계가 필요하지만 제Ⅷ 인자의 생물학적 활성도에 불리한 영향을 미칠 수도 있다. 제Ⅷ 인자의 비활성은 생성과정에서 1000 IU/mg 내지 3000 IU/mg에 도달하지만 불안정성 때문에 냉동 건조단계 보다 먼저 알부민 같은 안정제를 첨가하여 제Ⅷ 인자의 비활성을 3 내지 5 IU/mg으로 감소시킬 필요가 있다. 그럼에도 불구하고, 면역 친화성에 의한 정제방법의 주된 결점은 쥐에서 취한 잔유항체가 남아 있다는 것이며 이 때문에, 인체 기관에 대하여 이질적인 이 단백질 (항체)에 대한 환자의 면역반응을 일으킬 수 있다.
또한 이온-교환 크로마토그래피법은 작업하기에 복잡한 방법이며 수득률도 낮기 때문에 연구실에서 사용하는 것으로 제한된다.
J.J 모르젠탈러의 논문에서는(Thromb, Haemostas., Stuttgart, 47(2) 124-127 (1982)), 예컨대, 풀리에틸렌 글리콜 침전물을 사용하여 제Ⅷ : C 인자를 변형 세파로오스 수지에 통과시키는 정제방법에 대해 발표한다. 실행된 여러 기술방법에서의 수득률과 재현성에 대한 아무런 지적도 없었다.
단백질 농축물, 특히 제Ⅷ 인자를 수득하기 위한 새로운 방법에서, 공업적 규모에 적용가능하고 또한 동물에서 취한 항체같은 외부의 단백질 공급원이 전혀없는 고순도 생성물을 제공하는 것이 가장 중요하다.
본 출원인은 적당한 수지를 선택하여 한외여과와 같이 공정을 더 복잡하게 않고 반면에 정제된 단백질의 활성도는 증가시키는 후속적인 공정없이 처리할 수 있게 적절히 디자인된 조건에서 단일 크로마토그래피 칼럼을 이용하여 단백질 분리할 수 있는 음이온-교환 크로마토그래피에 의한 정제방법을 개발하였다.
따라서, 본 발명은 인체 혈강의 저온침전의 용해성분을 비교적 온건한 이온특성의 음이온 교환수지에서 크로마토그래피 처리하기 쉽고 또한 어떤 단백질은 흡수하며 어떤 것은 응고하여 결과적으로 특히 완충액의 이온강도 증가에 따라 용리되는 소수성 상호작용을 일으키는 것을 특징으로 하는 혈장단백질과 더 구체적으로, 제Ⅷ 인자, 피브리노겐, 피브로넥틴 및 반 빌레브란드 인자의 분리방법에 관한 것이다.
이 방법은 또한 인체에서 취한 제Ⅷ 인자로 처리할 수 없는 억제혈청이 들어 있는 혈우병 환자를 포함한 특수한 경우에는 동물에서 취한 혈장, 예컨대 돼지의 혈장에 대하여도 응용할 수 있다.
사전-정제 처리해도 좋은 저온침전 혈장 성분을 출발성분으로 사용할 수 있다. 이 사전-처리 작업은 위의 혈장성분을 처리하는 종래적인 기술방법에 따라 알루미늄겔과 함께 침전하는 방법 또한 저온침전법 등이 될 수 있다.
여러 종류의 크로마토그래피 분리용 수지를 실험할 경우, 프렉트겔 TSK같은 비닐고분자겔에서 응고된 DEAE 그룹을 사용할 때 가장 만족한 결과를 얻을 수 있다. 이런 종류의 수지는 프렉트겔 TSK-DEAE 650 (M)이라는 명칭으로 시판된다(Merck). 이 크로마토그래피 매질을 사용하면 DEAE-세파로오스 CL-6B, DEAE-세파로오스CL-6B 패스트-플로우(Pharmacia),DEAE-세파로오스4B 혹은 DEAE-트리스아크릴 LS(IBF) 같은 다른 겔에서 얻은 것보다 더 좋은 결과를 보여준다.
프렉토겔-TSK-DEAE(M)과 유사한 겔의 사용법을 발표하였으며(Y. Kato et al., J. Chromato ; 245, 1982, 193-211) 대형 단백질을 공업적인 규모로 크로마토그래피 분리하는 중간 작업을 권장하였다. 겔의 보유-용리능력은 저 이온 교환력과 큰 기공 크기에 기초를 두고 있다.
본 발명의 출원인은 위와 같은 종류의 겔이 제Ⅷ 인자와 반 빌레브란드 인자 사이에 형성한 대형 크기의 복합체를 선택적으로 흡수할 수 있는 점을 보여 주었다. 더우기, 공급 및 용리 완충액의 선택에 따라 폴리비닐 매질에서의 대형 복합체 보유량이 증가함에 의하여 형성되는 소수성 결합을 이용하였다. 과거의 경우, 겔에 의한 이와 같은 장점은 중요한 것이 아니었다.
제Ⅷ 인자가 들어 있는 혈장성분, 예컨대 저온 침전물의 사전-정제용액을 수지로 처리하면, 처리한 완충조건에서 50 IU/ml(비활성은 100 IU/mg 이상) 농도이고 또한 단일그룹의 혈장농축물과 융합할 수 있는특성과 고순도로 된 제Ⅷ 인자 농축물이 형성되며 한편, 이 경우에서 한외여과 단계는 뷸필요하고 안전성이 커서 단백질형 안정제를 첨가할 필요가 없다. 동일한 크로마토그래피법으로 피브리노겐, 피브로넥턴 및 반빌레브란드 인자가 풍부한 성분을 얻을 수 있으며 이것들은 치료목적이나 리간드로 사용하기에 충분한 물리화학적 변수로서 적합하다. 더욱더, 피브리노겐을 농축하여 생물학적 접착제로 사용할 수 있다(유럽 특허출원 제 88 4011961.3호).
본 발명의 방법은 다음처럼 실행된다. 사전-정제하고 또한 저온침전물의 주단백질, 즉 피브리노겐, 제Ⅷ 인자, 피브로넥틴 및 반 빌레브란드 인자 같은 것을 함유하는 혈장성분이 위에서 설명한 바와 같은 음이온 교환수지를 통과한다 ; 제Ⅷ 인자, 반 빌레브란드 인자(초기 물질의 양에 따르는 전체 혹은 부분의) 또한 피브로넥틴이 수지에 흡수되고 반면에 피브리노겐은 비-흡수 단백질 여과액속에서 발견된다.
완충액의 1차 이온강도 증가 결과, 완충액, 피브로넥틴 또한 상당량의 반 빌레브란드 인자를 용리한다.
완충액의 부가적인 이온강도 증가결과, 제Ⅷ 인자를 소량의 반 빌레브란드 인자가 있는 곳에서 용리하면 또한 안정제를 첨가하거나 혹은 한외여과 단계를 요구하지 않고 직접 동결건조시킬 수 있다.
사용하는 완충액은 약 2 내지 4g/l 의 리신과 또한 약 8 내지 11g/l의 글리신을 함유하는 것이 바람직하다. 그외의 다른 아미노산이나 또는 위에서 말한 두 가지 아미노산 중의 단 하나만 사용해도 만족한 결과를 얻기 힘들다.
염화나트륨을 첨가하면 완충액의 이온강도가 증가한다. 사실상 적당한 이온성의 또한 다수 소수성인 단일수지를 이용하면 제Ⅷ 인자가 용리되기 전에 반 빌레브란드 인자를 탈착시키기 위해 상기의 염(염화나트륩)을 사용할 수 있고 결과적으로 염화칼슘을 사용하여 제Ⅷ 인자와 반 빌레브란드 인자를 해리한 후 이 염화칼슘을 한외여과법으로 제거하는 작업이 불필요하게 된다.
또한 이 공정의 어느 단계에서나 공지방법에 따라 바이러스 비활성처리 작업을 실행할 수 있다. 화학적바이러스 비활성 작용제를 사용할 경우, 혈장성분이 수지를 통과하기 직전에 비활성 작용이 일어나는 것이 바람직하다. 이 방법에서, 크로마토그래피 단계는 비활성 작용제를 효과적으로 제거하는 데 도움을 준다.
용매-계면 비활성 작용 기술을 이용하면 좋은 결과가 나온다(유럽 특허 출원 제 0 131 740호).
종래의 제Ⅷ 인자 생성법에 따라 단백질이 함유된 성분 예컨대, 알루미늄겔 처리하고 그 후 가능하면 저온침전시킨 사전-정제된 저온침전 혈장성분에 대하여 크로마토그래피 단계를 실행하면 제Ⅷ 인자가 형성된다(유럽 특허출원 제 86 104297.6호).
초기 성분에 들어 있는 제Ⅷ ; C 인자의 비활성은 0.1 IU/mg만큼 낮다. 본 발명에 있어서, 단일 음이온교환 크로마토그래피 단계로부터 수득한 경제인자는 약 400 내지 700배이다. 이 단계에서의 수득률은 75 내지 90% 이다.
수득한 제Ⅷ 인자 농축물의 순도는 매우 크며 비활성은 100 IU/mg 단백질 이상이다. 이 농축물에는 피브리노겐과 면역글로부린 G가 없으며 대부분의 피브로넥틴도 소모되었다. 이 생성물에는 인체 혈액형 항체가 들어있지 않거나 혹은 아주 적은 량만 들어 있으므로 결과적으로 유럽 약전에서 권장한 기준에 따르는 단일형 특성의 농축물이다. 또한 초기물질로서 혈액형에 따라 선택한 것이 아닌 혈장을 사용하는 경우까지도 적합하다. 따라서, 치료학적으로 좋은 장점이 있으며 특히 반복적으로 정기 주사할 필요가 있는 A형 혈우병 치료에 유리하다. 또한, 고순도의 제Ⅷ 인자가 필요한 실험이나 분석에서 시약으로도 사용할 수 있다.
이 크로마토그래피 컬럼에서 분리되는 다른 성분들도 역시 중요하며 그 이유는 이 단백질 속에 1차 여과액에서 회수되는 피브리노겐과 또한 다른 한편, 완충액의 이온강도가 1차적으로 증가함에 따라 용리되는 비브로넥틴 및 반 빌레브란드 인자가 들어있기 때문이다.
다음의 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며 그 범위를 한정하지는 않는다.
A) 사전-정제 및 바이러스 비활성
나트륨을 함유한 헤파린 수성액(2 U/ml)에 재현탁하고 또한 0.6 내지 1.1 IU/mg의 비활성으로 된 제Ⅷ 인자를 함유하는 인체혈장의 저온침전물을 출발물질로 이용한다.
현탄액의 pH를 0.1M 아세트산으로 7-7.1까지 조정한다.
이 저온침전 현탁액을 알루미나겔 처리법으로 정제한 후 냉각 침전시킨다. 수산화 알루미늄을 현탁액에 첨가하고(1kg의 저온 침전물에 대하여 108g의 2% Al(OH)3) 실온에서 5분간 교반한다. 0,1M 아세트산을 사용하여 pH 6.5-6.6으로 조정한 후 교반하면서 14-16。C까지 냉각한다. 원하는 온도에 도달하자마자 14-16。C 에서 원심분리한 후, 상청액을 수득하고 여과법으로 멸균시킨다.
사전-정제 용액은 유럽 특허출원 제 0 131 740호에서 설명한 방법에 따라 트위-TNBP의 존재하에서 용매-계면활성제로 바이러스 비활성 처리한다.
B) 프렉토겔 TSK-DEAE 에서의 크로마토그래피 분리
프렉토겔 TSK-DEAE 650(M) (Merck사) 수지를 채운 크로마토그래피 칼럼을 준비한다. 1kg의 저온침전물에 대하여 0.5리터의 프렉토겔을 제공한다. 0.1M 염화나트륨용액으로 컬럼을 5회 세척한 후 트리소딕시트레이트(2.9g/l), 염화칼슘(1mM),염화나트륨(0.1M), 글리신(9g/1)또한 리신(3g/1)을 함유하는 완충액으로 평형화한다.
A)에서 설명한 사전-정제 저온 침전액을 컬럼속에 주입한다.
여기에서 나오는 여과액과 용출액을 수거하고, 그 단백질 함량은 280nm에서의 흡수를 측정하며 검사하나(이후부터 O.D.로 정의한다).
1차 여과액은 본래의 피브리노겐에 상응하는 컬럼에서 흡수되지 않은 단백질 정점(peak)을 보여준다(실시예 3 참조).
이 정점이 지나간 후, O.D.가 최저선으로 떨어질 때 0.15M의 최종 농도로 된 염화나트륨(NaCl)을 첨가함으로써 이온강도가 1차 증가한 완충액으로 상기외 컬럼을 용리한다. 이 완충액으로 반 빌레브란드 인자와 피브로넥틴을 함유하는 단백질 정점을 탈착한다(실시예 4 참조).
이 정점이 지나간 후, O.D.가 최저선으로 떨어질 때 0.25M의 최종 농도로 된 NaC1을 첨가하면 완충액의 이온강도가 2차 증가한다.
이러한 조건에서, 30 내지 40 IU/m1의 농도로 된 제Ⅷ 인자가 용리된다.
[실시예 2]
제Ⅷ 인자 농축물 제조방법
실시예 1에서 설명한 크로마토그래피 방법을 이용하여 얻은 제Ⅷ 인자 용액은 아주 순수하며 농축되어 있으므로 별도의 한외여과 단계없이 직접 병에 담아 동결건조시킨다.
필요할 경우 법정기준에 따라 각 병의 비활성을 조정하기 위하여 동일한 용리 완충액으로 회석하면 용액의 농도를 조정할 수 있다.
수득용액의 주 조성물은 다음과 같다 :
단백질(g/l) 0.16-0.25
제Ⅷ : C 인자(IU/ml) 30-45
제Ⅷ : C 인자의 비활성(IU/mg) 120-250
피브리노겐(g/l) <0.1
반 빌레브란드 인자 : Ag(U/ml) 11-23
반 빌레브란드 인자 : RCO(U/ml) 10-20
제Ⅷ 인자 : Ag(U/ml) 35-60
IgG(mg/ml)(네펠로 측정기) <0-011
천연 및 면역 항 -A-항체 0-2
피브로넥틴(mg/l) 15-40
동결 건조 후, 생성물을 세척하여 즉시 용해한다. 제Ⅷ : C 인자의 양은 실온에서 24시간 동안 안정하다. 인체 내의 주입액으로 덜 정제된 생성물에서 수득한 것에 상당하는 제Ⅷ : C 인자 회수를 표시한다.
이 농축물은 A형 혈우병 치료에 필요한 반복 주사에 적합한 고단위 치료제로 입증된다.
[실시예 3]
피브리노겐 농축물 정제법
실시예 1에서 설명한 DEAE -프로토겔에서의 1차 크로마토그래피 여과액은 주로 피브리노겐과 알부민, 면역알부민 및 바이러스 비활성 작용제(트윈 및 TNBP)를 함유한다.
이 용액으로부터 또다시 피브리노겐을 정제하기 위해 헤파린-세파토오스 수지 칼럼에서 2차 크로마토그래피 작업단계를 거친다.
0.06M NaCl로 조절된 전술한 바와 같은 완충액에서 크로마토그래피 작업을 실행하여 두 크로마토그래피 단계 사이의 투석 현상을 방지할 수 있다.
1차 크로마토그래피 단계에서 얻은 여과액을 회석하여 pH 6.5에서 280mOsm의 오스몰 농도로 만든 후 2차 컬럼에 주입한다. 2차 여과액은 알부민, 면역글로부린, 트윈 또한 TNBP를 함유하는 것으로 밝혀졌다.
여과액의 O.D.가 최저수준으로 떨어졌을 때 0.16M의 최종농도로 된 NaCl 을 첨가함으로써 그 이온 강도가 증가한 후에 이 완충액으로 컬럼을 세척한다.
수거된 피브리노겐 성분은 농축시킨 후 다시 카세트 시스템에서 투석한다. 농축 생성물을 병에 담고 동결건조시킨다.
이 농축 피브리노겐의 품질기준은 유럽 약전에 규정되어 있다.
더우기, 이것은 유럽 특허 출원 제 88 401961.3호에서의 생물학적 접착제 제조방법의 기초가 된다.
[실시예 4]
반 빌레브란드 인자 농축물 제조방법
용리성분을 실시예 1에서 언급한 대로 0.15M NaCl 존재하에서 DEAE-프렉토겔을 사용하여 크로마토그래피법으로 수득한다. 여기에는 반 빌레브란드 인자와 피브로넥틴이 풍부하며 다소의 트윈 및 TNBP도 함유하고 있다.
크로마토그래피 완충액(트리소딕 시트레이트, 염화칼슘, 리신, 글리신, pH 7, 오스몰 농도=18mOsm)과 함께 성분을 회석하여 385-390mOsm의 오스몰 농도로 만든다.
그 후 DEAE-프렉토겔 2차 컬럼에 주입하고 전술한 바와 같이 0.11M의 최종노도의 NaCl 을 포함하는 완충액으로 평형화하여 pH 7 및 387mOsm이 되도록 조절한다.
이러한 조건에서 트윈과 TNBP를 아주 효과적으로 분리할 수 있다.
이미 고농도의 반 빌레브란드 인자가 들어 있는 초기 용액의 경우 1차 컬럼을 통과하는 시간보다 다소 긴시간동안 상기의 인자가 컬럼 속에 정착되도록 한다. 컬럼 속에 정착된 양은 적어도 160 U Ag/ml(반 빌레브란드 인자의 항원 단위)이거나 100 RCO/ml(리스토세린 보조인자 단위)이다.
반 빌레브란드 인자를 함유하는 성분은 0.15M의 최종 농도로 된 NaC1을 완충액에 첨가하여 용리시킨다.
용리된 반 빌레브란드 인자는 충분히 농축되어 있으므로 반드시 부가적으로 한외여과할 필요가 없다 ; 병에 담아 동결건조시킨다.
수득한 농축물은 고순도의 것으로서 100 U RCO/mg 이상의 비활성으로 되어 있다. 여기에는 아직까지 다소의 피브로넥틴이 함유되어 있으나 활성작용에 불리한 영향을 미치지 않는다.
[실시에 5]
피브로넥틴 농축물 제조법
피브로넥틴 농축물은 또한 실시예 4와 유사한 초기 용리액으로 제조할 수도 있다. 실제로 반 빌레브란드 인자와 피브로넥틴은 분자량의 차이 때문에 분리 가능하다.
세파크릴 S-400(R) (Phamncia) 컬럼에서의 겔여과법으로 예컨대, 반 빌레브란드 인자가 함유된 고분자량의 1차 성분을 분리하고 피브로넥틴이 들어 있는 성분은 직접 병에 담아 동결건조시킨다.
Claims (10)
- 혈장 저온침전물의 용해 성분을 적절히 이온성 음이온 교환 수지의 크로마토그래피 단계로 보내어 대형 크기의 분자를 유지하고 소수성 상호작용을 일으키며 또한 용리 완충액의 이온강도 증가에 따라 각각의 단백질을 선택적으로 회수하는 것을 특징으로 하는 인체 혹은 동물혈장 단백질 분리방법.
- 제 1 항에 있어서, 제Ⅷ 인자, 반 빌레브란드 인자, 피브로겐 및 피브로넥틴을 함유하는 혈장 저온 침전물이 초기 성분인 것을 특징으로 하는 분리방법.
- 제 2 항에 있어서, 초기성분에 들어있는 제Ⅷ : 인자의 비할성이 0.1 IU/mg 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항 내지 3항 중 어느 항에 있어서 초기 성분에 대하여:-수산화 알루미늄으로 처리하고,-14-16 l 로 냉각하며, 또한,-원심분리하여 나온 상충액을 수득하는 것을 된 사전-정제처리 작업을 실행하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서,a) 저온침전물의 용해성분을 제Ⅷ 인자, 다량의 반 빌레브란드 인자 및 피브로넥틴을 흡수하는 비닐고분자형 겔에 정착된 DEAE 그룹의 수지에 통과시키고 또한 피브리노겐을 용리액 속으로 전달하며,b) 완충액의 이온강도를 1차 증가시켜 피브로넥틴 및 다량의 반 빌레브란드 인자가 용리되도록 하고 또한,c) 완충액의 이온강도를 또다시 증가시켜 제Ⅷ 인자가 용리되도록 단계를 특징으로 하는 방법.
- 제 5 항에 있어서, 완충액에 리신과 글리신이 들어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 6 항에 있어서, 완충액에 2 내지 4g/l의 리신과 8 내지 11g/1의 글리신이 들어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 5 항에 있어서, 염화나트륨을 이용하여 완충액의 이온강도를 증가시키는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 염화나트륨의 농도가 a) 단계의 경우 0.11M 이고 b) 단계에서는 0.15M 이며 또한 c)단계의 경우는 0.25M인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 화화적 비활성 작용제의 존재하의 혈장 성분을 크로마토그래피 존재하에 혈장성분을 크로마토그래피 분리단계로 보내기 직전에 바이러스 비활성 처리하는 것을 특징으로 하는 방법.
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| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| NL9000090A (nl) * | 1990-01-15 | 1991-08-01 | Harimex Ligos Bv | Werkwijze voor het bereiden van een fibrinogeenconcentraat uit bloedplasma, inrichting voor het uitvoeren van deze werkwijze en werkwijze voor het bereiden van fibrinogeen uit het concentraat. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4202667C1 (ko) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| FR2686883B1 (fr) * | 1992-02-04 | 1994-05-13 | Aquitaine Develop Transf Sanguin | Procede de fabrication de fibrinogene de tres haute purete, fibrinogene de tres haute purete obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| CA2195127C (en) † | 1994-07-14 | 2007-06-19 | Ruth Laub | Concentrate of fibrinogene obtained from blood plasma, process and plant for its preparation |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6143179A (en) * | 1996-06-24 | 2000-11-07 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | Method for the affinity-chromatographic purification of factor VIII |
| US6037457A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for recombinant fibrinogen production |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| JP5149470B2 (ja) | 1999-02-22 | 2013-02-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物 |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2857267B1 (fr) | 2003-07-09 | 2006-03-10 | Lab Francais Du Fractionnement | Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables. |
| EP2821135A1 (en) * | 2004-02-05 | 2015-01-07 | EMD Millipore Corporation | Porous adsorptive or chromatographic media |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| FR2885369B1 (fr) * | 2005-05-04 | 2010-11-12 | Lab Francais Du Fractionnement | Materiel infectieux synthetique et standardise de type prion et ses utilisations en tant qu'inoculum infectant. |
| FR2887883B1 (fr) | 2005-06-29 | 2007-08-31 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines |
| US9433922B2 (en) * | 2007-08-14 | 2016-09-06 | Emd Millipore Corporation | Media for membrane ion exchange chromatography based on polymeric primary amines, sorption device containing that media, and chromatography scheme and purification method using the same |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| US20090130738A1 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-21 | Mikhail Kozlov | Media for membrane ion exchange chromatography |
| US20110065900A1 (en) * | 2008-05-30 | 2011-03-17 | Ge Healthcare Bio-Science Ab | Separation method utilizing polyallylamine ligands |
| HUE028626T2 (en) | 2008-06-23 | 2016-12-28 | Bio-Products & Bio-Engineering Ag | Stable, functionally intact, virus-inactivated fibrinogen during storage |
| NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
| IT1396528B1 (it) * | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| EP2499165B1 (en) | 2009-11-13 | 2016-09-14 | Grifols Therapeutics Inc. | Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto |
| FR2952641B1 (fr) | 2009-11-18 | 2012-01-13 | Lfb Biomedicaments | Procede de traitement du plasma sanguin comprenant une etape de lavage par dispersion |
| US9896677B2 (en) | 2010-01-18 | 2018-02-20 | Novo Nordisk Health Care Ag | Purification of blood coagulation factors |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
| US20140154233A1 (en) * | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
| US10188965B2 (en) | 2012-12-05 | 2019-01-29 | Csl Behring Gmbh | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2019050321A1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | (주)프로테옴텍 | 다수의 검사선을 구비한 크로마토그래피용 스트립, 이를 포함하는 진단 키트 및 다수의 경쟁적 반응 측정 단계를 포함하는 정성, 반정량, 정량 분석방법 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4278594A (en) * | 1979-06-19 | 1981-07-14 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma |
| EP0022053A1 (en) * | 1979-06-25 | 1981-01-07 | Rexnord Inc. | Shear bar having notched edge configuration |
| US4341764A (en) * | 1980-03-05 | 1982-07-27 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4508709A (en) * | 1983-12-05 | 1985-04-02 | Armour Pharmaceutical Company | Process for purifying factor VIII:C |
| GB8403473D0 (en) * | 1984-02-09 | 1984-03-14 | Special Trustees For St Thomas | Purification of factor viii |
| FR2570276B1 (fr) * | 1984-09-18 | 1987-09-04 | Immunotech Sa | Procede d'obtention du complexe fviii/vwf a usage therapeutique et produits en resultant |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
| EP0235526A3 (de) * | 1986-01-29 | 1988-03-23 | Leipziger Arzneimittelwerk GmbH | Aktivierte Polymerfestkörper und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE3609431A1 (de) * | 1986-03-20 | 1987-09-24 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines den blutgerinnungsfaktor viii enthaltenden, sterilen praeparates |
| DE3707213A1 (de) * | 1987-03-06 | 1988-09-15 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung von faktor viii:c-mangelplasma und ein so erhaltenes mangelplasma |
| US5043429B1 (en) * | 1987-05-01 | 1997-10-14 | Scripps Research Inst | Protein fragments containing factor VIII binding domain of von willebrand factor |
| US5097018A (en) * | 1988-05-12 | 1992-03-17 | University Of Southern California | Sequential heat treatment of blood-clotting factor products |
| NL8701915A (nl) * | 1987-08-14 | 1989-03-01 | Waander Riethorst | Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren. |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5110907A (en) * | 1989-08-01 | 1992-05-05 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography |
| IT1306645B1 (it) | 1999-04-08 | 2001-10-02 | Challenger Gestao E Consultado | Struttura di sedia, poltroncina o simile ad assemblaggio facilitato. |
-
1988
- 1988-06-07 FR FR8807530A patent/FR2632309B1/fr not_active Expired - Lifetime
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