FI96210B - Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen - Google Patents
Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen Download PDFInfo
- Publication number
- FI96210B FI96210B FI900397A FI900397A FI96210B FI 96210 B FI96210 B FI 96210B FI 900397 A FI900397 A FI 900397A FI 900397 A FI900397 A FI 900397A FI 96210 B FI96210 B FI 96210B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- factor
- chromatography
- fibronectin
- proteins
- factor viii
- Prior art date
Links
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title claims description 6
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 title description 5
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 title description 5
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims abstract description 38
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 34
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims abstract description 27
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 24
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 13
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 12
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims 1
- 108010033683 von Willebrand factor drug combination factor VIII Proteins 0.000 claims 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 abstract description 17
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
96210
Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen
Kyseessä oleva keksintö koskee ihmis- tai eläin-plasmafraktion proteiinien erottamista anioninvaihtokroma-5 tografian avulla sellaista tekniikkaa käyttäen, joka mahdollistaa erittäin korkean puhdistusasteen saavuttamisen yhdessä vaiheessa, erityisesti Tekijä VIII:n, fibrino-geenin ja Von Willebrandin tekijän suhteen.
Veriproteiinien toimittaminen terapeuttisiin tar-10 koituksiin vaatii sellaisten puhdistustekniikoiden käyttöä, jotka mahdollistavat sellaisten tuotteiden saamisen, jotka ovat erittäin puhtaita ja täysin kontaminantittomia, erityisesti puhdistettuja muista proteiineista tai vierasta alkuperää olevista aineista, kuten vasta-aineista.
15 Esimerkiksi hemofilia A:n hoitamisessa on olennais ta, että käytettävissä on erittäin puhtaita Tekijä Vili -konsentraatteja; potilaille todella annetaan lukuisia kertoja toistaen Tekijä VIII -konsentraatin injektioita sekä samanaikaisesti merkittäviä määriä fibrinogeeniä ja 20 immunoglobuliineja, jotka voivat indusoida ei-toivottuja immuunivasteita. Näin ollen toistuvia riittämättömästi puhdistetun Tekijä VIII :n injektioita voidaan suorittaa vain saman ryhmän plasmakonsentraateilla, jotta voidaan välttyä tyypillisiltä verensiirto-onnettomuuksilta, jotka 25 johtuvat veriryhmien eroavaisuuksista ja jotka aiheutuvat immunoglubuliinien läsnäolosta.
Tekijä VIII -konsentraatit valmistetaan useimmiten kryosaostetusta ihmisplasmafraktiosta. Tekijä VIII -kon-sentraattien, jotka yleensä saadaan teollisen mittakaavan 30 ihmisplasman prosessointikeskuksista, puhtaus on usein suunnilleen 1 IU/mg eikä yleensä ylitä 10 - 20 IU/mg:n rajoja. Konventionaaliset tuotantotekniikat hyödyntävät saostumisvaiheita, joiden tarkoituksena on eliminoida, usein varsin riittämättömästi, proteiinikontaminantteja, 35 kuten fibrinogeeniä, fibronektiiniä ja immunoglobuliineja.
2 96210 Nämä tekniikat voivat käyttää tai niihin voidaan yhdistää saostus alhaisessa lämpötilassa (10 °C:ssa), tai proteiineja seostavien tekijöiden lisääminen, jollaisia ovat hyd-rofiiliset polymeerit, kuten PEG (Newman et ai., Br. J.
5 Haematol 21:1 - 20, 1971; Hao et ai., teoksessa Methods of Plasma Protein Fractination, Academic Press 1980, ss. 57 -74), polyvinyylipyrrolidoni (Casillas ja Simonetti, Br. J. Haemato, 50:665 - 672, 1982), dekstraani, Ficoll, Percoll, hydroksietyloitu tärkkelys ja albumiini, joita näin on 10 esitetty Tekijä VIII :n saostaviksi tekijöiksi (Farrugia et ai., Thromb Haemostas, 51:338 - 342, 1984). Sama koskee Thorellin ja Blömbackin suosittelemaa glysiinin ja nat-riumkloridin käyttöä. Samoin eräät kirjoittajat (Ng et ai., Thrombosis Res., 42:825 - 834, 1986) ovat onnistuneet 15 yhdistämään kolme saostavaa tekijää, nimittäin: PEG:in, glysiinin ja natriumkloridin, Tekijä VIII -konsentraattien saamiseksi, joiden spesifinen aktiivisuus on välillä 10 -16 IU/mg.
On myös käytetty hyväksi eteeristä ekskluusiokroma-20 tografiaa, tai geelisuodatusta, tekniikoita, joilla pyritään saamaan korkean molekyylipainon omaava fraktio, joka sisältää Tekijä VIII:C - Von Willebrandin tekijä -kompleksin, josta fibrinogeeni puuttuu osaksi. Tämä tekniikka antaa alhaisella tuotantonopeudella tuotteen, jonka spesi-25 finen aktiivisuus ei ylitä 30 IU/mg:a ja joka vaatii albumiinin lisäämistä stabiloijaksi (johtaen spesifisen aktiivisuuden laskemiseen noin 3-5 IU/mg:aan). Tämä tekniikka aiheuttaa useita ongelmia, jotka koskevat mukautumista suuren mittakaavan tuotantoon, jossa on vaikeata säilyttää 30 teollisten geelisuodatuspylväiden erotuskyky tietyn ajan.
Tekijä VIII -konsentraatteja on tuotettu myös sisällyttämällä tuotanto-ohjelmaan kontakti huokoisten piidioksidi-mikropallosten kanssa, joiden tarkoituksena on sulkea sisäänsä alhaisen molekyylipainon omaavat proteii-35 nikontaminantit (Margolis et ai., Vox Sang. 46:341 - 348, 3 96210 1984). Tuotteen spesifinen aktiivisuus jää suhteellisen pieneksi: 1 IU/mg.
Uudet tekniikat ovat alkaneet äskettäin ilmestyä erittäin puhtaiden Tekijä Vili -konsentraattien valmistuk-5 seen. Esimerkiksi yritykset Hyland ja Travenol ovat esittäneet konsentraatteja, jotka on saatu käyttämällä immuu-niaffiniteettikromatografisia menetelmiä (Zimmerman ja Fulcher, Thrombosis Res., täydennys VII, s. 58, 1987;
Berntorp ja Nilsson, Thrombosis Res., täydennys VII, s. 10 60, 1987; Levine et ai., Thrombosis Res., täydennys VII, 1987). Näihin tekniikoihin sisältyy Tekijä VIII :n puhdistaminen käyttämällä anti-Tekijä VIII:C :n tai anti-Von Willebrandin tekijän vasta-aineita, jotka on immobilisoitu kromatografiaväliaineeseen. Nämä tekniikat toimivat hyvin, 15 mutta ne vaativat voimakkaasti vaikuttavien liuosten käyttöä desorboimalla Tekijä VIII joko sen vasta-aineista tai Von Willebrandin tekijästä. Tällöin vaaditaan vielä ultra-suodatusvaihe, jonka tarkoituksena on poistaa ei-toivotut kemialliset tekijät, mutta se voi olla haitallista Tekijä 20 VIII :n biologiselle aktiivisuudelle. Tekijä VIII :n spesifinen aktiivisuus voi tuotannon kulussa saavuttaa 1000-3000 IU/mg:a, mutta sen epästabiilisuus vaatii stabiloi-jan, kuten albumiinin, lisäämisen ennen kylmäkuivausvai-hetta, joka vähentää Tekijä VIII:n spesifisen aktiivisuu-. 25 den 3-5 IU/mg:aan. Immunoaffiniteetin avulla puhdistami sen pääasiallisin haitta on kuitenkin jäljelle jääneiden vasta-aineiden läsnäolo; jos ne ovat muriiniperäisiä, ne voivat johtaa potilaissa immuunivasteiden esiintymiseen näitä ihmisorganismille vieraita proteiineja vastaan.
30 Ioninvaihtokromatografiatekniikoita on myös käy- • tetty, mutta niiden käyttömenetelmien monimutkaisuuden ja saavutettujen saantojen alhaisuuden vuoksi nämä tekniikat ovat rajoittuneet laboratorioihin.
Esimerkiksi eräässä J.J. Morgenthalerin artikke-35 lissa [Thromb. Haemostas., Stuttgart, 47 (2) 124 - 127 - 96210 4 (1982)] käsitellään Tekijä Vili:C :n puhdistamista käyttäen polyetyleeniglykolisakkaa, panemalla sen modifioidun Sepharose-hartsin läpi. Kokeilluista eri tekniikoista ei ole viittauksia niiden saantoon tai uusiraiskykyyn.
5 Näin ollen on aivan oleellista, että on käytettä vissä uusia menetelmiä proteiinikonsentraattien saamiseksi, ja erityisesti Tekijä VIII :n saamiseksi, jota voidaan soveltaa teollisessa mittakaavassa ja joka antaa erittäin puhtaita tuotteita, joissa ei ole lainkaan vierasta alku-10 perää olevia proteiineja, kuten eläimistä peräisin olevia vasta-aineita.
Hakija on näin ollen kehittänyt puhdistusprosessin, joka käyttää anioninvaihtokromatografiaa ja joka, sopivasti valitun käytetyn hartsin ansiosta, mahdollistaa halut-15 tujen proteiinien erottamisen käyttämällä yhtä ainoaa kro- matografiapylvästä olosuhteissa, jotka on sopivasti suunniteltu tekemään mahdolliseksi luopumisen myöhemmästä käsittelystä, kuten ultrasuodatuksesta, mikä lisää prosessin monimutkaisuutta ja vähentää puhdistetun proteiinin aktii-20 visuutta.
Näin ollen keksintö koskee prosessia plasmapro-teiinien erottamiseksi ja, erityisesti, Tekijä VIII :n, fibrinogeenin, fibronektiinin ja Von Willebrandin tekijän erottamiseksi, jotka ovat tunnettuja siitä, että ihmis-25 plasman liuotettu kryosakkafraktio käsitellään kromato- graafisesti anioninvaihtohartsilla, jolla on suhteellisen vaatimaton ioniluonne ja joka myös sallii hydrofobisten vuorovaikutusten esiintymisen ja joka ei adsorboi tiettyjä proteiineja ja sitoo toisia proteiineja, jotka eluoidaan 30 sitten spesifisesti lisäämällä puskurin ionivahvuutta.
Prosessi on myös sovellettavissa eläinperäiseen plasmaan, esimerkiksi sian plasmaan, erikoistapauksissa, käsittäen hemofiliapotilaat, joilla on inhiboiva seerumi ja joita ei voida hoitaa ihmisestä peräisin olevaa Tekijä 35 VIII:tä käyttäen.
5 96210
Aloitusfraktiona voidaan täten käyttää kryosaos-tettua plasmafraktiota, joka on saattanut käydä läpi esi-puhdistuskäsittelyn. Tämä esipuhdistus voi esimerkiksi sisältää saostamisen alumiinioksidigeelillä ja tai saos-5 tamisen alhaisessa lämpötilassa tällaisten fraktioiden käsittelyn konventionaalisten tekniikoiden mukaisesti.
Tutkittaessa eri hartsien soveltuvuutta kromato-graafiseen erottamiseen havaittiin, että tyydyttävimmät tulokset saatiin käyttämällä DEAE-ryhmiä sidottuina vi-10 nyylipolymeerigeeliin, kuten Fractogel TSK:iin. Tämän tyyppinen hartsi on kaupallisesti saatavilla nimellä Fractogel TSK-DEAE 650 (M) (Merck). Tämä kromatograafinen väliaine on antanut paljon parempia tuloksia kuin ne, jotka on saatu muilla tutkituilla hartseilla, kuten DEAE-15 Sepharose CL-6B :llä, DEAE-Sepharose CL-6B Fast Flow :11a (Pharmacia), DEAE-Sepharose 4B:llä tai DEAE-Trisacryl LS:llä (IBF).
Kato et ai. (J. Cromato; 245, 1982, 193 - 211) ovat kuvanneet Fractogel-TSK-DEAE:n (M) kanssa samankaltaisen 20 geelin käyttöä ja sitä suositellaan keskitehokkaaseen teollisen mittakaavan hyvin suurikokoisten proteiinien kromatograafiseen erottamiseen. Tämän geelin retentio-eluutiokapasiteetti perustuu alhaiseen ioninvaihtokapasi-teettiin ja suureen huokoskokoon.
25 Täten Hakija on osoittanut, että tämän tyyppinen geeli teki mahdolliseksi adsorboida etupäässä hyvin suurikokoiset kompleksit, joita muodostuu Tekijä VIII :n ja Von Willebrandin tekijän väliin. Lisäksi Hakija on pakkaus- ja eluusiopuskureiden valinnassa käyttänyt hyväksi 30 jonkin verran hydrofobisia sidoksia, joita muodostuu po-lyvinyyliväliaineeseen suurikokoisten kompleksien pidentyneen retention ansiosta. Tätä geelin tarjoamaa etua ei ole tuotu esiin aiemmin.
Käyttämällä tällaista hartsia Tekijä VIII0:n sisäl-35 tämän plasmafraktion käsittelemiseen, esimerkiksi kryosa- 6 96210 kan esipuhdistettuun liuokseen, saamme puskurille sopivien olosuhteiden vallitessa Tekijä VIII -konsentraatin, joka on erittäin puhdas ja jonka laatua voidaan verrata yksittäisen ryhmän plasmakonsentraatin laatuun, suunnilleen 50 5 IU/ml:n konsentraatiossa (spesifinen aktiivisuus suurempi kuin 100 IU/mg), ilman, että olisi mitään tarvetta ultra-suodatusvaiheeseen, ja joka on erittäin stabiili, mikä tarkoittaa sitä, että se ei vaadi proteiinityyppisen stabiloi jän lisäystä. Samalla kromatografiällä on myös mah-10 dollista saada fibrinogeenin, fibronektiinin ja Von Wille-brandin tekijän rikastettuja fraktioita, jotka ovat yhdenmukaisia fysikaalisen kemian muuttujien kanssa, jotka täyttävät terapeuttisten tarkoitusten tai reagenttina käytön vaatimukset. Lisäksi fibrinogeeniä voidaan edelleen 15 konsentroida biologisena liimana käyttämistä varten EP-patenttihakemuksen nro 88 401 961.3 mukaan.
Kyseessä olevan keksinnön mukainen prosessi toteutetaan seuraavalla tavalla. Plasmafraktio, joka on esi-puhdistettu ja joka sisältää kryosakan pääproteiinit, se 20 on fibrinogeenin, Tekijä VIII :n, fibronektiinin ja Von Willebrandin tekijän, kulkee anioninvaihtohartsin, kuten yllä määritetyn hartsin, läpi; Tekijä Vili, Von Willebrandin tekijä (kaikki tai suurin osa, riippuen aineen alkuperäisestä määrästä) ja fibronektiini adsorboidaan 25 hartsiin, kun taas fibrinogeeni löydetään adsorboitumat-tomien proteiinien suodoksesta.
Lisättäessä ensimmäisen kerran puskurin ionivah-vuutta, fibronektiini ja suurin osa Von Willebrandin tekijästä eluoituvat.
30 Lisättäessä edelleen puskurin ionivahvuutta, Tekijä
Vili eluoituu pienten määrien Von Willebrandin tekijää läsnäollessa ja se voidaan kylmäkuivata heti, ilman että olisi mitään tarvetta lisätä siihen stabiloijaa tai ult-rasuodattaa se.
35 Käytetty puskuri sisältää hyödyllisiä lysiiniä ar violta 2-4 g/l:n osuuden, kuten myös glysiiniä arviolta « 7 96210 8 - 11 g/l:n osuuden. Muiden aminohappojen käytöllä, tai jopa vain yhden aminohapon käytöllä näistä kahdesta, saadaan paljon vähemmän tyydyttäviä tuloksia.
Puskurin ionivahvuutta lisätään lisäämällä nat-5 riumkloridia. Tämän ainoan hartsin, joka on kohtalaisesti ioninen ja jonkin verran hydrofobinen, käyttäminen tosiaan mahdollistaa tämän suolan käyttämisen Von Hillebrandin tekijän desorboimiseen ennen Tekijä Vili :n eluoimista, näin ollen tehden kalsiumkloridin, joka sitten joudut-10 täisiin poistamaan ultrasuodatuksella Tekijä VIII :n ja Von Willebrandin tekijän erottamiseksi, käyttämisen tarpeettomaksi .
Virusten inaktivointikäsittely voidaan tietenkin suorittaa tunnettua tekniikkaa käyttäen missä prosessin 15 vaiheessa tahansa. Käytettäessä kemiallista virusten in-aktivointitekijää, inaktivointi on sopiva suorittaa juuri ennen plasmafraktion menemistä hartsin läpi. Tällä tavoin kromatograafinen vaihe toimii eliminoiden tehokkaasti in-aktivoivat tekijät. Hyviä tuloksia on saatu EP-patenttiha-20 kemuksessa nro 0 131 740 kuvattua liuotin-detergentti -inaktivointitekniikkaa käyttämällä.
Tekijä VIII :n valmistamiseksi kromatografiavaihe voidaan suorittaa millä tahansa proteiinifraktiolla, joka sisältää sen, esimerkiksi esipuhdistetulla kryosaostetulla 25 plasmafraktiolla, joka on käsitelty alumiinioksidigeelis-sä, mitä on mahdollisesti seurannut seostaminen alhaisessa lämpötilassa, konventionaalisten Tekijä VIII -konsentraatin valmistusmenetelmien mukaisesti, kuten EP-patenttiha-kemuksessa 86 104 297 6 on kuvattu.
30 Tekijä VIII:C :n alkuperäisen fraktion spesifinen aktiivisuus voi olla niinkin alhainen kuin 0,1 IU/mg. Yksittäisellä anioninvaihtokromatografiavaiheella saatu puhdistustekijä on keksinnön mukaan suunnilleen 400 - 700 -kertainen. Tämän vaiheen saanto on 75 ja 90 %:n välillä. 35 Saatu Tekijä VIII -konsentraatti on erittäin puh das, sen spesifisen aktiivisuuden ollessa suurempi kuin 8 96210 100 lU/mg proteiineja. Siinä el ole fibrinogeenlä eikä G-inununoglobuliineja, ja fibronektlinlä on hävitetty siltä huomattavasti. Tässä tuotteessa el ole Ihmisen veriryhmävasta-aineita, tai niitä on erittäin pieniä määriä ja näin 5 ollen sitä voidaan verrata Euroopan Farmakopean suosittelemien standardien mukaan yksittäisen ryhmän konsentraatin laatuun, jopa silloin, kun aloltusmateriaalina käytetään plasmaa, jota el ole valittu veriryhmän mukaan. Näin ollen sitä voidaan käyttää suuresti hyödyksi hoito-opissa ja 10 varsinkin hemofilia A :n hoidossa, mikä vaatii toistuvia rutiininomaisia injektioita. Sitä voidaan myös käyttää reagenssina missä tahansa kokeessa tai analyysissä, jossa vaaditaan erittäin puhdasta Tekijä VIII :ta.
Myös muut tällä kromatografiakolonnilla erotetut 15 fraktiot kiinnostavat niiden sisältämien proteiinien johdosta, nimittäin toisaalta fibrinogeeni, joka saadaan ensimmäisestä suodoksesta, ja toisaalta fibronektiini ja Von Willebrandin tekijä, jotka eluoituvat ensimmäisen puskurin ionivahvuuden lisäyksen yhteydessä.
20 Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä rajoittamatta sen mahdollisuuksia.
Esimerkki 1 A) Eslpuhdistus ja virusten inaktivointi
Aloltusmateriaalina hyödynnetään ihmisplasman ,, 25 kryosakkaa, joka on suspendoitu uudelleen natrium- hepariinin vesiliuokseen (2 U/ml) ja joka sisältää Tekijä VIII :n, jonka spesifinen aktiivisuus on välillä 0,6 - 1,1 IU/mg.
Suspension pH säädetään 7 - 7,1:ksi 0,1 M etikkaha- 30 polla.
Tämä kryosakkasuspensio puhdistetaan käsittelemällä alumiinioksidigeelillä ja kylmäsaostuksella. Suspensioon lisätään alumiinihydroksidia (108 g 2 %:sta A1(0H)3 1 kg kryosakkaa kohden) sekoittaen 5 minuuttia vallitsevassa 35 lämpötilassa. pH säädetään 6,5 - 6,6:een 0,1 M etikkaha-
• I : 11 1 MU
9 96210 polla, jonka jälkeen suspensio jäähdytetään 14 - 16 °C:seen sekoittaen. Heti, kun haluttu lämpötila on saavutettu, suoritetaan sentrlfugolntl 14 - 16 °C:ssa, supernatant ti otetan talteen ja se steriloidaan suodattamalla.
5 Tähän esipuhdistettuun liuokseen kohdistetaan vi rusten inaktivointikäsittely liuotin-detergenttiä käyttäen, Tween-TNBP:n läsnäollessa, EP-patenttihakemuksessa nro 0 131 740 kuvatun menetelmän mukaisesti.
B) Kromatograafinen erottaminen Fractogel TSK-DEAE 10 -geelillä
Kromatografiapylväs valmistetaan Fractogel TSK-DEAE 650 -hartsista (M) (Merck). 0,5 L Fractogel:iä tarvitaan kilogrammaa kryosakkaa kohden. Pylväs pestään 5 tilavuudella 0,1 M NaCl-liuosta ja tasapainotetaan sitten 15 puskurilla, joka sisältää: trinatriumsitraattia (2,94 g/1), kalsiumkloridia (ImM), natriumkloridia (0,11 M), glysiiniä (9 g/1) ja ly-siiniä (3 g/1).
A)-kohdassa kuvattu esipuhdistettu kryosaostuma-20 liuos injektoidaan pylvääseen.
Seuraava suodos ja eluaatit kerätään ja niiden proteiinipitoisuutta tarkkaillaan mittaamalla absorptio 280 nm:ssä (merkitään tästä lähtien O.D.:llä).
Ensimmäisestä suodoksesta ilmenee sellaisten pro-25 teiinien huippu, jotka eivät ole adsorboituneet pylvääseen, vastaten pääasiallisesti fibrinogeeniä (katso esimerkkiä 3).
Kun tämä huippu on ohitettu O.D.:n laskettua takaisin perustasolle, pylvästä eluoidaan samalla puskuril-30 la, jonka ionivahvuus lisääntyy ensimmäisen kerran lisät- ;; täessä NaCl:a, loppukonsentraatioon 0,15 M. Tämä puskuri desorboi proteiinihuipun, joka sisältää suuren osan Von Willebrandin tekijästä ja fibronektiinistä (katso esimerkkiä 4).
10 96210
Kun tämä huippu on ohitettu O.D.:n laskettua takaisin perustasolle, puskurin ionivahvuutta lisätään toisen kerran lisäämällä NaCl:a loppukonsentraatioon 0,25 M.
Näissä olsuhteissa eluoidaan Tekijä Vili konsent-5 raation ollessa suunnilleen 30 - 40 IU/ml.
Esimerkki 2
Tekijä VIII -konsentraatin valmistaminen Esimerkissä 1 kuvattua kromatografiaprosessia käyttäen saatu Tekijä VIII -liuos on riittävän puhdasta ja 10 konsentroitua heti pullotettavaksi ja kylmäkuivattavaksi, ilman mitään lisättävää ultrasuodatusvaihetta.
Tarvittaessa konsentraatiota voidaan säätää laimentamalla samalla eluointipuskurilla, jolla säädetään spesifinen aktiivisuus pulloa kohden voimassaolevien la-15 kistandardien mukaisesti.
Saatujen liuosten keskimääräinen koostumus on seuraavanlainen :
Proteiineja (g/1) 0,16 - 0,25
Tekijä VIII:C (IU/ml) 30 - 45 20 Tekijä VIII:C :n spesi- 120 - 250 finen aktiivisuus (IU/mg)
Figrinogeeniä (g/1) < 0,1
Von Willebrandin tekijä: Ag :a (U/ml) 11 - 23
Von Willebrandin tekijä: RCO :a (U/ml) 10 - 20 25 Tekijä VIII: AG :a (U/ml) 35 - 60
IgG (mg/ml) (nefelometria) < 0,011
Luonnolliset ja immuuni- 0-2 anti-A-vasta-aineet
Fibronektiini (mg/1) 15 - 40 30 Kylmäkuivauksen jälkeen tuote on puhdas ja välit tömästi liukeneva. Tekijä VIII:C -määrä on vallitsevassa lämpötilassa stabiili yli 24 tuntia.
Tekijä VIII:C -injektiot ihmiseen osoittavat toipumisen olevan verrattavissa vähemmän puhtailla tuotteilla 35 saatuihin tuloksiin. Samoin puoliintumisaika on muiden tuotteiden kanssa vastaava.
11 96210 Tämä konsentraatti osoittautuu korkean terapeuttisen arvon omaavaksi tuotteeksi, joka soveltuu erityisesti toistuviin injektioihin, joita vaaditaan hemo£ilia A:n hoitamisessa.
5 Esimerkki 3
Fibrinogeenikonsentraatin puhdistaminen
Esimerkissä 1 kuvatun DEAE-Fractogel-kromatografian ensimmäinen suodos sisältää pääasiassa fibrinogeeniä, mutta myös albumiinia, immunoglobuliineja ja virusten inakti-10 vointitekijöitä (Tween ja TNBP).
Fibrinogeeni puhdistetaan tästä liuoksesta lisäämällä kromatografiavaihe hepariini-sefaroosihartsipyl-väässä.
Tämä kromatografiavaihe suoritetaan samaa puskuria 15 käyttäen kuin edellinenkin, säädetään NaCl:lla 0,06 M:ksi, mahdollistaen täten dialyysin estymisen kahden kromatogra-fiavaiheen välillä.
Ensimmäisen kromatografiavaiheen suodos laimennetaan 280 mOsm:n osmolaarisuuden saavuttamiseksi pH:ssa 6,5 20 ennen toiseen pylvääseen injektoimista. Toisen suodoksen havaitaan sisältävän albumiinia, immunoglobuliineja, Tweeniä sekä TNBP:tä. Fibrinogeeni on adsorboituna pylväässä.
Kun suodoksen O.D. on laskenut takaisin perusta-25 solle, pylvästä eluoidaan samalla puskurilla sen jälkeen kun sen ionivahvuus on kasvanut NaCl:a lisäämällä loppu-konsentraatioon 0,16 M.
Sitten kerätty fibrinogeenifraktio konsentroidaan ja dialysoidaan kasettisysteemillä. Konsentroitu tuote 30 pullotetaan ja kylmäkuivataan.
Tämä konsentroitu fibrinogeeni täyttää Euroopan Farmakopian asettamat laatustandardit.
Lisäksi se voi EP-patenttihakemuksen nro 88 401 961.3 mukaan toimia biologisen liimavalmisteen 35 substraattina.
12 962lo
Esimerkki 4
Von Willebrandin tekijä -konsentraatin valmistaminen
Esimerkissä 1 kuvatun DEAE-Fractogel:iä 0,15 M 5 NaClrn läsnäollessa käyttävästä kromatografiästä saatu eluoitu fraktio on huomattavasti rikastettu Von Willebrandin tekijällä ja fibronektiinillä. Edelleen se sisältää jonkin verran Tweeniä ja TNBP:tä.
Tämä fraktio laimennetaan niin, että osmolaarisuu-10 deksi kromatografiän peruspuskurin (trinatriumsitraatti, kaliumkloridi, lysiini, glysiini, pH 7, osmolaarisuus 18 mOsm) kanssa saadaan 385 - 390 mOsm.
Sen jälkeen se injektoidaan toiseen DEAE-Fractogel-pylvääseen, joka on tasapainotettu samalla puskurilla kuin 15 aikaisemminkin, joka sisältää NaCl:a loppukonsentraatiossa 0,11 M, joka säädetään pH 7:ään ja 387 mOsm:iin.
Näissä olosuhteissa Tween ja TNBP voidaan poistaa erittäin tehokkaasti.
Kun jo alkuperäinen liuos sisältää erittäin korkean 20 konsentraation Von Willebrandin tekijää, jälkimmäinen sitoo pylvääseen paljon suuremmassa määrin kuin ensimmäisen pylvään läpi mennessä sidotaan. Pylvään sidontakapasiteetti on vähintään 160 U Ag/ml (Von Willebrandin tekijän antigeeniyksikköä) tai 100 RCO/ml (ristoketiinikofaktoriyk-25 siköitä).
Von Willebrandin tekijää sisältävä fraktio eluoi- daan lisäämällä NaCl:a puskuriin loppukonsentraatioon 0,15 M.
Eluoitunut Von Willebrandin tekijä on riittävän 30 konsentroitu eikä vaadi lisäksi ultrasuodatusta; se pul lotetaan ja kylmäkuivataan.
Saatu konsentraatti on erittäin puhdas ja sen spesifinen aktiivisuus ylittää 100 U RCO/ml. Se sisältää edelleen jonkin verran fibronektiiniä, mutta se ei ole 35 haitallista sen aktiivisuudelle.
· . M»-«- HIK i.UK' . ..
13 96210
Esimerkki 5
Fibronektiinikonsentraatin valmistaminen
Fibronektiinikonsentraatti voidaan myös valmistaa samasta alkueluaatista kuin esimerkissä 4.
5 Von Willebrandin tekijä ja fibronektiini voidaan itse asiassa erottaa niiden molekyylipainoeron perusteella. Käyttäen geelisuodatusta esimerkiksi Sephacryl S-400 (R) (Pharmacia) sisältävässä pylväässä, ensimmäinen korkean molekyylipainon fraktio, joka sisältää Von Wille-10 brandin tekijän, erotetaan, sitä seuraa fibronektiiniä sisältämä fraktio, joka voidaan heti pullottaa ja kylmä-kuivata .
Claims (10)
1. Menetelmä ihmis- tai eläinplasmaproteiinien fib-rinogeeni, fibronektiini, von Willebrandin tekijän ja te- 5 kijä Vili erottamiseksi ja näiden proteiinien tiivisteiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään oleellisesti mainituista proteiineista koostuvan plasman kryosakkafraktiota, vesipitoiseen liuokseen liuotetulle kylmäsakalle 10 suoritetaan yksi erotus kromatografiällä anioninvaihto-hartsilla, jonka anioninvaihto-ominaisuudet ovat peräisin DEAE-tyyppisistä ryhmistä, jotka on siirretty makroretiku-laarivinyylipolymeerityyppiselle geelimatriisille, joka hydrofobisten ja huokoisten ominaisuuksiensa perusteella 15 pystyy pidättämään tekijä VIII-von Willebrandin tekijä -kompleksin, ja erilaiset proteiinit otetaan talteen selektiivisesti lisäämällä perättäin eluointipuskurin ionivahvuutta, jolloin natriumkloridia käytettäessä puskurin natriumklo-20 ridipitoisuus alussa on 0,11 M, mikä mahdollistaa fibro-nektiinin, von Willebrandin tekijän ja tekijän VIII adsorption ja sallii fibrinogeenin läpimenon eluaatissa, nostetaan 0,15 M:ksi fibronektiinin ja suurimman osan von Willebrandin tekijästä eluoimiseksi ja nostetaan 0,25 25 M:ksi tekijän VIII eluoimiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vinyylipolymeerityyppinen geeli on Fractogel* -TSK.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että lähtöfraktio sisältää tekijää VIII, jolla voi olla spesifinen aktiivisuus, joka on 0,1 IU/mg proteiinia tai suurempi.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöfraktiolle on 35 suoritettu esipuhdistuskäsittely, joka käsittää 96210 - käsittelyn alumiinihydroksidilla - jäähdytyksen 14-16 eC:een - sentrifugoinnin ja supernatantin talteenoton.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen me-5 netelmä, tunnettu siitä, että kromatografia suoritetaan puskurilla, joka sisältää lysiiniä ja glysiiniä ja jonka ionivahvuutta lisätään natriumkloridilla kasvavina pitoisuuksina.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että puskuri sisältää 2-4 g/1 lysiiniä ja 8 - 11 g/1 glysiiniä.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että plasmafraktiolle suoritetaan virusinaktivoimiskäsittely kemiallisten inak- 15 tivointiaineiden läsnäollessa välittömästi ennen kromatografista erotusvaihetta.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kromatografian eluaatti otetaan talteen ja kromatografoidaan hepariini-
20 Sepharose-hartsilla fibrinogeenitiivisteen talteenottami- seksi.
9. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ensimmäinen eluaatti otetaan talteen kromatografioinnista ja se viedään toi- ' 25 sen pylvään läpi, joka on samanlainen kuin ensimmäinen pylväs samalla puskurilla, joka on säädetty 0,15 M:ksi natriumkloridin suhteen von Willebrandin tekijän tiivisteen talteenottamiseksi.
10. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen 30 menetelmä, tunnettu siitä, että ensimmäinen eluaatti otetaan talteen kromatografioinnista ja saatetaan molekyyliseulakromatografiaan fibronektiinitiivisteen talteenottamiseksi . 96210
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8807530A FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1988-06-07 | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| FR8807530 | 1988-06-07 | ||
| FR8900050 | 1989-01-04 | ||
| PCT/FR1989/000050 WO1989012065A1 (fr) | 1988-06-07 | 1989-02-08 | Separation chromatographique des proteines du plasma |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI900397A0 FI900397A0 (fi) | 1990-01-25 |
| FI96210B true FI96210B (fi) | 1996-02-15 |
| FI96210C FI96210C (fi) | 1996-05-27 |
Family
ID=9367001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI900397A FI96210C (fi) | 1988-06-07 | 1990-01-25 | Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5252709A (fi) |
| EP (1) | EP0359593B2 (fi) |
| JP (1) | JP2805364B2 (fi) |
| KR (1) | KR970010923B1 (fi) |
| AT (1) | ATE121750T1 (fi) |
| AU (2) | AU622436B2 (fi) |
| CA (1) | CA1340742C (fi) |
| DE (2) | DE68922358T3 (fi) |
| DK (1) | DK175322B1 (fi) |
| ES (1) | ES2070919T5 (fi) |
| FI (1) | FI96210C (fi) |
| FR (1) | FR2632309B1 (fi) |
| LT (1) | LT3333B (fi) |
| NO (1) | NO177188C (fi) |
| RU (1) | RU1837880C (fi) |
| UA (1) | UA11061A (fi) |
| WO (1) | WO1989012065A1 (fi) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8729822D0 (en) * | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Central Blood Lab Authority | Chemical process |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5760183A (en) * | 1989-02-17 | 1998-06-02 | Association D'aquitaine Pour De Developpment De La Transfusion Sanguine Et Des Recherches Hematologiques | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same |
| FR2665449B1 (fr) * | 1990-08-02 | 1995-04-14 | Aquitaine Developp Transf Sang | Procede de fabrication de facteur von willebrand ayant une tres haute purete, depourvu en majeure partie de facteur antihemophilique (fviiic), et facteur von willebrand ainsi obtenu, ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| NL9000090A (nl) * | 1990-01-15 | 1991-08-01 | Harimex Ligos Bv | Werkwijze voor het bereiden van een fibrinogeenconcentraat uit bloedplasma, inrichting voor het uitvoeren van deze werkwijze en werkwijze voor het bereiden van fibrinogeen uit het concentraat. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4202667C1 (fi) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| FR2686883B1 (fr) * | 1992-02-04 | 1994-05-13 | Aquitaine Develop Transf Sanguin | Procede de fabrication de fibrinogene de tres haute purete, fibrinogene de tres haute purete obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| CA2195127C (en) † | 1994-07-14 | 2007-06-19 | Ruth Laub | Concentrate of fibrinogene obtained from blood plasma, process and plant for its preparation |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6143179A (en) * | 1996-06-24 | 2000-11-07 | Kerckhoff-Klinik Gmbh | Method for the affinity-chromatographic purification of factor VIII |
| US6037457A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-14 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method for recombinant fibrinogen production |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| JP5149470B2 (ja) | 1999-02-22 | 2013-02-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規のアルブミンを含有していない第ｖｉｉｉ因子処方物 |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2857267B1 (fr) | 2003-07-09 | 2006-03-10 | Lab Francais Du Fractionnement | Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables. |
| EP2821135A1 (en) * | 2004-02-05 | 2015-01-07 | EMD Millipore Corporation | Porous adsorptive or chromatographic media |
| DE102004009400A1 (de) | 2004-02-24 | 2005-09-08 | Zlb Behring Gmbh | Fibrinogen Reinigung |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| FR2885369B1 (fr) * | 2005-05-04 | 2010-11-12 | Lab Francais Du Fractionnement | Materiel infectieux synthetique et standardise de type prion et ses utilisations en tant qu'inoculum infectant. |
| FR2887883B1 (fr) | 2005-06-29 | 2007-08-31 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines |
| US9433922B2 (en) * | 2007-08-14 | 2016-09-06 | Emd Millipore Corporation | Media for membrane ion exchange chromatography based on polymeric primary amines, sorption device containing that media, and chromatography scheme and purification method using the same |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| US20090130738A1 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-21 | Mikhail Kozlov | Media for membrane ion exchange chromatography |
| US20110065900A1 (en) * | 2008-05-30 | 2011-03-17 | Ge Healthcare Bio-Science Ab | Separation method utilizing polyallylamine ligands |
| HUE028626T2 (en) | 2008-06-23 | 2016-12-28 | Bio-Products & Bio-Engineering Ag | Stable, functionally intact, virus-inactivated fibrinogen during storage |
| NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
| IT1396528B1 (it) * | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| EP2499165B1 (en) | 2009-11-13 | 2016-09-14 | Grifols Therapeutics Inc. | Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto |
| FR2952641B1 (fr) | 2009-11-18 | 2012-01-13 | Lfb Biomedicaments | Procede de traitement du plasma sanguin comprenant une etape de lavage par dispersion |
| US9896677B2 (en) | 2010-01-18 | 2018-02-20 | Novo Nordisk Health Care Ag | Purification of blood coagulation factors |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
| US20140154233A1 (en) * | 2012-12-05 | 2014-06-05 | Csl Limited | Method of purifying therapeutic proteins |
| US10188965B2 (en) | 2012-12-05 | 2019-01-29 | Csl Behring Gmbh | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2019050321A1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | (주)프로테옴텍 | 다수의 검사선을 구비한 크로마토그래피용 스트립, 이를 포함하는 진단 키트 및 다수의 경쟁적 반응 측정 단계를 포함하는 정성, 반정량, 정량 분석방법 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4278594A (en) * | 1979-06-19 | 1981-07-14 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma |
| EP0022053A1 (en) * | 1979-06-25 | 1981-01-07 | Rexnord Inc. | Shear bar having notched edge configuration |
| US4341764A (en) * | 1980-03-05 | 1982-07-27 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4508709A (en) * | 1983-12-05 | 1985-04-02 | Armour Pharmaceutical Company | Process for purifying factor VIII:C |
| GB8403473D0 (en) * | 1984-02-09 | 1984-03-14 | Special Trustees For St Thomas | Purification of factor viii |
| FR2570276B1 (fr) * | 1984-09-18 | 1987-09-04 | Immunotech Sa | Procede d'obtention du complexe fviii/vwf a usage therapeutique et produits en resultant |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| JPS61189228A (ja) * | 1985-02-19 | 1986-08-22 | Nippon Sekijiyuujishiya | 血液凝固第８因子製剤の製法 |
| EP0235526A3 (de) * | 1986-01-29 | 1988-03-23 | Leipziger Arzneimittelwerk GmbH | Aktivierte Polymerfestkörper und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE3609431A1 (de) * | 1986-03-20 | 1987-09-24 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines den blutgerinnungsfaktor viii enthaltenden, sterilen praeparates |
| DE3707213A1 (de) * | 1987-03-06 | 1988-09-15 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung von faktor viii:c-mangelplasma und ein so erhaltenes mangelplasma |
| US5043429B1 (en) * | 1987-05-01 | 1997-10-14 | Scripps Research Inst | Protein fragments containing factor VIII binding domain of von willebrand factor |
| US5097018A (en) * | 1988-05-12 | 1992-03-17 | University Of Southern California | Sequential heat treatment of blood-clotting factor products |
| NL8701915A (nl) * | 1987-08-14 | 1989-03-01 | Waander Riethorst | Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren. |
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| US5110907A (en) * | 1989-08-01 | 1992-05-05 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography |
| IT1306645B1 (it) | 1999-04-08 | 2001-10-02 | Challenger Gestao E Consultado | Struttura di sedia, poltroncina o simile ad assemblaggio facilitato. |
-
1988
- 1988-06-07 FR FR8807530A patent/FR2632309B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-02-08 AU AU30682/89A patent/AU622436B2/en not_active Expired
- 1989-02-08 EP EP89400348A patent/EP0359593B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 WO PCT/FR1989/000050 patent/WO1989012065A1/fr active IP Right Grant
- 1989-02-08 ES ES89400348T patent/ES2070919T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 KR KR1019900700239A patent/KR970010923B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 JP JP1502342A patent/JP2805364B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 DE DE68922358T patent/DE68922358T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-08 AT AT89400348T patent/ATE121750T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-02-08 DE DE198989400348T patent/DE359593T1/de active Pending
- 1989-02-08 US US07/460,972 patent/US5252709A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-02-14 CA CA000590961A patent/CA1340742C/fr not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-01-25 FI FI900397A patent/FI96210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-02-05 NO NO900529A patent/NO177188C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-02-06 RU SU904743107A patent/RU1837880C/ru active
- 1990-02-06 UA UA4743107A patent/UA11061A/uk unknown
- 1990-02-06 DK DK199000299A patent/DK175322B1/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-03-03 AU AU1138392A patent/AU1138392A/en active Pending
- 1992-12-29 LT LTIP262A patent/LT3333B/lt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR970010923B1 (ko) | 1997-07-02 |
| US5252709A (en) | 1993-10-12 |
| RU1837880C (ru) | 1993-08-30 |
| JP2805364B2 (ja) | 1998-09-30 |
| DE68922358D1 (de) | 1995-06-01 |
| NO177188C (no) | 1995-08-02 |
| AU622436B2 (en) | 1992-04-09 |
| NO900529L (no) | 1990-04-06 |
| NO177188B (no) | 1995-04-24 |
| DK29990A (da) | 1990-03-28 |
| DK175322B1 (da) | 2004-08-23 |
| EP0359593B2 (fr) | 2004-01-07 |
| ES2070919T3 (es) | 1995-06-16 |
| WO1989012065A1 (fr) | 1989-12-14 |
| FR2632309A1 (fr) | 1989-12-08 |
| ES2070919T5 (es) | 2004-07-16 |
| AU1138392A (en) | 1992-05-14 |
| LTIP262A (en) | 1994-10-25 |
| FI96210C (fi) | 1996-05-27 |
| DK29990D0 (da) | 1990-02-06 |
| UA11061A (uk) | 1996-12-25 |
| EP0359593A1 (fr) | 1990-03-21 |
| DE68922358T3 (de) | 2004-08-19 |
| ATE121750T1 (de) | 1995-05-15 |
| KR900701823A (ko) | 1990-12-04 |
| DE359593T1 (de) | 1990-09-27 |
| EP0359593B1 (fr) | 1995-04-26 |
| FR2632309B1 (fr) | 1990-08-24 |
| LT3333B (en) | 1995-07-25 |
| CA1340742C (fr) | 1999-09-14 |
| JPH03501974A (ja) | 1991-05-09 |
| DE68922358T2 (de) | 1995-10-12 |
| AU3068289A (en) | 1990-01-05 |
| NO900529D0 (no) | 1990-02-05 |
| FI900397A0 (fi) | 1990-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI96210B (fi) | Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen | |
| RU2088590C1 (ru) | Способ получения стандартизированного концентрата человеческого фактора виллебранда и концентрат, полученный этим способом | |
| AU737986B2 (en) | Purification of von willebrand factor by cation exchange chromatography | |
| JP5704918B2 (ja) | 第ｖｉｉｉ因子およびフォンビルブラント因子の精製方法 | |
| FI95654B (fi) | Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand-tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta | |
| EP0468181A2 (en) | Process for the purification of factor VIII and factor VIII obtained by said process | |
| HU214905B (hu) | Eljárás VIII. faktor izolálására | |
| JP4660048B2 (ja) | 血漿プロテアーゼからのフィブリノゲンの分離 | |
| CN106928344A (zh) | 用于从含有凝血因子的溶液中减少和/或除去FXI和FXIa的方法 | |
| JPH03109400A (ja) | 鉄結合性蛋白質を分離、精製し、採取する方法 | |
| MXPA02010017A (es) | Preparacion activa hemostaticamente, que contiene el factor de von willebrand y metodo para la produccion de la misma. | |
| US20020019036A1 (en) | Von willebrand factor derivatives and methods of isolating proteins that bind to von willebrand factor | |
| DK176139B1 (da) | Fremgangsmåde til separation af plasmaproteiner og plasmaproteinkoncentrater opnået ved fremgangsmåden | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: CENTRE REGIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE DE LILLE |
|
| MA | Patent expired |